ES2264580T3 - Dispositivo de recoleccion para el analisis en una sola etapa de fluidos orales. - Google Patents

Dispositivo de recoleccion para el analisis en una sola etapa de fluidos orales.

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ES2264580T3 ES99914312T ES99914312T ES2264580T3 ES 2264580 T3 ES2264580 T3 ES 2264580T3 ES 99914312 T ES99914312 T ES 99914312T ES 99914312 T ES99914312 T ES 99914312T ES 2264580 T3 ES2264580 T3 ES 2264580T3
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Abstract

Un aparato para la recolección y la cromatografía de flujo lateral de un fluido oral, comprendiendo dicho aparato: una matriz capilar que tiene expuesta una superficie para recibir fluido oral; una tira de cromatografía de flujo lateral, estando dicha tira de cromatografía de flujo lateral en combinación con dicha matriz capilar tal que cuando dicha matriz capilar recibe fluido oral, dicha matriz capilar absorbe dicho fluido oral y administra dicho fluido oral en una zona de recepción de dicha tira de cromatografía de flujo lateral; y una tira de bloqueo sustancialmente planar colocada entre la matriz capilar y la tira cromatográfica de flujo lateral.

Description

Dispositivo de recolección para el análisis en una sola etapa de fluidos orales.
Esta invención se refiere al análisis de cromatografía de tira lateral comúnmente para fluidos orales. Se revela un formato de análisis rápido de una sola etapa en línea continua y una única unidad adecuado para la recolección y la prueba de muestras orales. Más concretamente, se revela una matriz capilar hidrófila como un transporte para los fluidos orales a una tira cromatográfica lateral. Esto permite el análisis rápido de fluidos orales mientras se mantiene en la boca del paciente un dispositivo de prueba desechable.
Se han desarrollado numerosos procedimientos analíticos para determinar la presencia o la ausencia y/o cuantificar la cantidad de diversos analitos en tejidos y fluidos de organismos. Actualmente, la mayoría de las pruebas diagnósticas se realizan bien con sangre, orina, materia fecal o biopsia tisular. Sin embargo, las pruebas basadas en estos materiales suponen una invasión sustancial de la privacidad y plantean un riesgo significativo para la seguridad (particularmente, con las pruebas sanguíneas). Por el contrario, la recolección de fluidos orales incluyendo la saliva y/o el transudado de mucosa para pruebas supone una invasión relativamente pequeña de la privacidad, es relativamente segura y puede realizarse rápidamente con relativa facilidad.
La idea de usar fluido oral en un procedimiento de detección se lleva tratando durante algún tiempo en la investigación científica y clínica. Una multitud de investigadores han investigado el uso de fluido oral como una posible muestra clínica para el diagnóstico de estados patológicos específicos o una actividad metabólica alterada (véase, p.ej., Annl. New York Acad. Sci., Vol. 694: "Saliva as a Diagnostic Fluid", Malamud y Tabak, eds., N. Y. Acad. Sci. Pub. (1993)). Hay un predominio de pruebas que sugiere que los fluidos orales podrían ser muestras extremadamente útiles para la detección de ciertos analitos. La premisa tecnológica básica es que los analitos presentes en la sangre pasarán a través de la mucosa oral y/o las glándulas salivales a la cavidad oral en la que pueden ser detectados. Además, se supone que la concentración de analito en el fluido oral será indicativa de la concentración en sangre. Existe, por tanto, un interés considerable en el desarrollo de dispositivos para la recolección, el transporte y el manejo de muestras de fluidos orales, así como en el desarrollo de análisis basados en fluidos; en concreto, análisis para diversos anticuerpos y metabolitos.
Comúnmente, en las pruebas realizadas con muestras tales como la sangre, la orina o el material fecal, hay un abundante suministro de material de prueba, habiendo elevados volúmenes de analitos disponibles para el análisis. Además, como los análisis de tales materiales son realizados fuera del cuerpo, no se da el caso de contaminación del cuerpo con los reactivos de análisis.
Esto se ilustra, por ejemplo, en el dispositivo de análisis descrito por Zoeten et al. en la patente estadounidense 5.611.995 concedida el 18 de marzo de 1997. En este dispositivo, se suministra un cuerpo absorbente con un mango y se mantiene en la corriente de orina que está siendo expulsada del cuerpo. Una vez saturado el cuerpo absorbente, éste es introducido en un dispositivo de sujeción con una tira reactiva. El lecho corto saturado entra en contacto con una tira reactiva y es comprimido, depositándose la orina sobre la tira reactiva para su análisis. Un espacio en el lateral del dispositivo de sujeción que sostiene la tira reactiva garantiza la evaporación del exceso de fluido para evitar un reflujo a lo largo de la tira reactiva.
Los análisis de muestras biológicas previamente descritos, en concreto, los análisis de analitos en fluido oral, por lo común, han requerido al menos dos acciones diferentes. Primero, se recolecta la muestra, p.ej., la sangre o la orina. Luego la muestra recolección es bien almacenada, p.ej., para un análisis posterior en un laboratorio, o es analizada en o mediante un dispositivo de análisis que es, comúnmente, un dispositivo distinto al dispositivo de recolección. Tales análisis, que requieren múltiples componentes, son habitualmente costosos de fabricar e incómodos para un uso doméstico.
Además, particularmente con respecto al análisis de muestras de fluidos orales, el fluido oral es habitualmente escaso, particularmente, en circunstancias en las que el sujeto del análisis está bajo tensión (p.ej., cuando se analizan drogas o enfermedades que suponen una amenaza para la vida) lo que puede dificultar el uso de tales análisis de múltiples componentes. Además, los intentos por estimular la producción de fluidos orales (p.ej., mediante el uso de ácido cítrico u otros agentes de salivación) resultan en un aumento en la producción de saliva, lo que realmente puede diluir la concentración de analito.
Cuando se usan los lechos cortos absorbentes comunes para recuperar fluido oral, éstos, por lo común, deben ser comprimidos para liberar el fluido oral retenido. Las manipulaciones asociadas con la etapa de compresión pueden resultar en la contaminación de la muestra. Además, tales lechos cortos "tradicionales" tienen un volumen hueco significativo, lo que requiere que habitualmente la muestra sea recolección en un volumen significativamente mayor del realmente requerido para el propio análisis de los analitos.
La presente invención es especificada en las reivindicaciones.
Esta invención proporciona mejores dispositivos y procedimientos para una recolección de fluido oral de una etapa, y una detección y/o cuantificación de analitos en el fluido oral. Los dispositivos y los procedimientos requieren volúmenes extremadamente bajos de fluido oral, y no requieren una manipulación posterior de las muestras tras la recolección. La recolección adecuada de la muestra queda inmediatamente verificada y el riesgo de contaminación de la misma es minimizado. Los análisis son directos, rápidos y no requieren etapas complicadas. Los dispositivos y los procedimientos son por tanto idealmente adecuados para su uso en el hogar, en el trabajo o en la oficina, y, generalmente, no requieren la presencia de personal médico cualificado.
A diferencia de los dispositivos de recolección de fluido oral de la técnica anterior que, por lo común, utilizan un lecho corto absorbente de papel, celulosa, algodón o esponja, y que requieren la compresión del lecho corto de recolección para liberar la muestra de fluido oral, los dispositivos de esta invención utilizan una matriz capilar relativamente rígida, también denominada matriz capilar. La matriz capilar, cuando es introducida en la cavidad oral de un mamífero (p.ej., un ser humano) absorbe el fluido oral (p.ej., mediante la acción capilar) y lo administra en la zona receptora de una tira de cromatografía de flujo lateral. El fluido oral es liberado rápidamente de la matriz capilar a la tira de cromatografía de flujo lateral sin ninguna manipulación (p.ej., compresión) de la matriz.
En una realización, esta invención proporciona un aparato para la cromatografía de flujo lateral de un fluido oral. El aparato comprende una matriz capilar que tiene expuesta una superficie para la introducción en una cavidad oral; y una tira de cromatografía de flujo lateral, en la que la tira de cromatografía de flujo lateral está unida a la matriz capilar tal que cuando la matriz capilar entra en contacto con una mucosa oral de una cavidad oral, la matriz capilar absorbe el fluido oral y lo administra en una zona receptora de una tira de cromatografía de flujo lateral. En otra realización, el aparato comprende una matriz capilar que tiene expuesta una superficie para recibir el fluido oral; y una tira de cromatografía de flujo lateral, en la que la tira de cromatografía de flujo lateral está en comunicación con la matriz capilar tal que cuando la matriz capilar recibe el fluido oral, la matriz capilar absorbe el fluido oral y lo administra en una zona de recepción de dicha tira de cromatografía de flujo lateral.
En una realización preferida, la matriz capilar está compuesta de un material diferente del material que comprende la tira de cromatografía de flujo lateral o la zona de recepción o el lecho corto de muestra de tal tira. La matriz capilar está compuesta de un material tal que la saturación de la matriz capilar con un fluido oral no altere sustancialmente la morfología de la matriz capilar. De ese modo, ni el tamaño medio de poro ni el volumen hueco de la matriz capilar es sustancialmente alterado. Además, el volumen de la matriz capilar es sustancialmente constante. La saturación de la matriz capilar, por lo común, ejerce un cambio volumétrico menor del 30%, preferiblemente, menor del 25%, más preferiblemente, menor del 20%, siendo lo más preferible que sea menor del aproximadamente 15%, 10%, 5% o incluso menor de aproximadamente el 1%. La matriz capilar tiene preferiblemente una tamaño medio de poro que varía de aproximadamente 40 \mum a aproximadamente 250 \mum, más preferiblemente, de aproximadamente 60 \mum a aproximadamente 200 \mum, y lo más preferible, de aproximadamente 80 \mum a aproximadamente 120 \mum, y un volumen hueco de menos de aproximadamente 60 \mul/cm^{3}. Los materiales de la matriz porosa particularmente preferidos tienen tamaños de poro que varían de aproximadamente 45 \mum a aproximadamente 90 \mum, de aproximadamente 90 \mum a aproximadamente 130 \mum o de aproximadamente 80 \mum a 120 \mum. Los materiales preferidos de la matriz capilar son plásticos (p.ej., matrices porosas de un polietileno de alta densidad (HDPE), un polietileno de peso molecular ultra elevado (UHMW), un polipropileno (PP), un fluoruro de polivinilideno (PVDF), un politetrafluoroetileno (PTFE), un nailon 6 (N6) o una polietersulfona (PES)). Los plásticos pueden ser hidrófilos o estar tratados (p.ej., con un tensioactivo tal como N-metil-cocoil-taurato de sodio) para que sean hidrófilos.
En una realización preferida, la matriz capilar, cuando entra en contacto con una mucosa oral absorbe el fluido oral desde dicha cavidad oral y libera inmediatamente ese fluido oral en dicha zona de recepción de dicha tira de cromatografía de flujo lateral en menos de aproximadamente 1 minuto sin compresión, alteración de la presión del fluido o del aire u otra manipulación del material de la matriz. La administración comprende aproximadamente de 100 \mul a aproximadamente 200 \mul de fluido oral en dicha tira de cromatografía de flujo lateral en menos de aproximadamente 1 minuto. La matriz capilar, cuando entra en contacto con una mucosa oral, absorbe el fluido oral de la cavidad oral y libera dicho fluido oral en dicha zona de recepción de dicha tira de cromatografía de flujo lateral, preferiblemente, en menos de aproximadamente 30 segundos. En estas condiciones, la matriz capilar es preferiblemente saturada con un fluido oral en menos de aproximadamente 1 minuto, y la saturación comúnmente utiliza menos de aproximadamente 500 \mul de fluido oral. En términos generales, la matriz capilar liberará suficiente fluido oral como para saturar la zona de recepción de la tira cromatográfica.
El aparato puede incluir además opcionalmente una tira de bloqueo colocada entre la matriz capilar y la tira cromatográfica de flujo lateral. La tira de bloqueo puede contener un reactivo de bloqueo (p.ej., BSA, desoxicolato, n-lauroilsarcosina de sodio, etc) y/o uno o más tampones. La tira de bloqueo también puede evitar el reflujo de los reactivos desde la tira de cromatografía de flujo lateral hacia la matriz capilar.
El aparato puede incluir además opcionalmente una tira de conjugado que contiene uno o más reactivos cromatográficos (p.ej., micropartículas marcadas). Además, una única tira puede servir como tira de bloqueo y como tira de conjugado.
El aparato puede comprender además una carcasa que tenga una cavidad, en la que dicha tira cromatográfica de flujo lateral se extienda en la cavidad a lo largo de la carcasa hasta una zona de inspección sobre la carcasa; y al menos una zona de inspección desde un exterior de la carcasa hasta la tira cromatográfica lateral para permitir la inspección visual de los reactivos en los puntos seleccionados sobre la tira cromatográfica lateral. La carcasa puede actuar como un mango para introducir la matriz capilar en la cavidad oral.
En una realización particularmente preferida, se revela un dispositivo de análisis que comprende un formato de análisis rápido de una etapa, en línea continua y de una única unidad adecuado para la recolección y prueba de muestras orales. Más concretamente, se proporciona una matriz capilar hidrófila como un transporte para fluidos orales hasta una tira cromatográfica lateral. La tira cromatográfica lateral es introducida en una cavidad definida en una carcasa y es dispuesta a lo largo de la carcasa hasta una zona de inspección. Una matriz capilar hidrófila sobresale de la carcasa hasta una zona de recolección oral exterior de la carcasa en un extremo y se comunica con la tira cromatográfica lateral por el otro extremo. Esta matriz capilar hidrófila define una matriz de conductos definidos entre los materiales no absorbentes, tales como bien esferas de plástico o espumas. Las superficies exteriores de la matriz son hidrófilas bien por ser naturalmente hidrófilas o por estar tratadas para que sean hidrófilas. La dimensión de la matriz intersticial es tal que las fuerzas de la acción capilar producen la caída inmediata de los materiales en la matriz capilar hidrófila. La matriz capilar hidrófila libera inmediatamente el fluido oral en la tira cromatográfica lateral. La prevención del reflujo hacia la cavidad oral desde la tira cromatográfica lateral ocurre de forma natural debido a los tortuosos conductos del material de absorción poroso. Mediante la observación de la tira cromatográfica lateral cuando todo el dispositivo de prueba está en la boca, se obtienen los resultados inmediatos de la prueba.
En otra realización, esta invención proporciona un procedimiento para la detección o la cuantificación de uno o más analitos en un fluido oral. El procedimiento supone las etapas de: i) introducir en la cavidad oral de un mamífero cualquiera de los aparatos de análisis de fluido oral descritos en la presente memoria, tal que la matriz capilar entre en contacto con una superficie de la mucosa oral, mediante lo cual la matriz capilar absorbe el fluido oral y lo administra en una zona de recepción de una tira de cromatografía de flujo lateral; e ii) leer una señal sobre la tira de cromatografía de flujo lateral que indica la presencia, la ausencia o la cantidad de uno o más analitos.
Esta invención también proporciona equipos para la detección de un analito en un fluido oral. Los equipos incluyen un aparato para la recolección y la cromatografía de flujo lateral de un fluido oral como se describe en la presente memoria, así como los materiales de información que describen el uso del aparato.
Definiciones
Como se usa en la presente memoria, el término "analito" se usa para referirse a un resto que va a ser detectado en un determinado análisis. Los analitos pueden ser átomos (elementos), moléculas o grupos de moléculas. Los analitos comúnmente detectados en los análisis de esta invención incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos, antígenos, factores de crecimiento, enzimas, fármacos terapéuticos, drogas y similares. Los analitos particularmente preferidos incluyen anticuerpos y antígenos relevantes para las enfermedades infecciosas y no infecciosas.
Como se usa en la presente memoria, un "anticuerpo" se refiere a una proteína constituida por uno o más polipéptidos sustancialmente codificados por genes de inmunoglobulina o fragmentos de genes de inmunoglobulina. Los genes de inmunoglobulina reconocidos incluyen los genes de las regiones de las constantes kappa, lambda, alfa, gamma, delta, épsilon y mu, así como los miles de genes de las regiones variables de la inmunoglobulina. Las cadena ligeras se clasifican bien como kappa o como lambda. Las cadenas pesadas se clasifican como gamma, mu, alfa, delta o épsilon, que a su vez definen las clases de inmunoglobulina, IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente.
Se sabe que la unidad estructural básica (del anticuerpo) de inmunoglobulina comprende un tetrámero. Cada tetrámero está compuesto de dos pares idénticos de cadenas de polipéptido, teniendo cada par una cadena "ligera" (de aproximadamente 25 kD) y una cadena "pesada" (de aproximadamente 50-70 kD). El terminal N de cada cadena define una región variable de aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos fundamentalmente responsables del reconocimiento de antígenos. Los términos "cadena ligera variable (V_{L})" y "cadena pesada variable (V_{P})" se refieren a estas cadenas ligera y pesada respectivamente.
Los anticuerpos pueden existir como inmunoglobulinas intactas o como un número de fragmentos bien caracterizados producidos por la digestión con diversas peptidasas. Por lo tanto, por ejemplo, la pepsina digiere un anticuerpo por debajo de los enlaces tipo bisulfuro de la región bisagra para producir F(ab)'_{2}, un dímero de Fab que él mismo es una cadena ligera unida a V_{P}-C_{P}1 mediante un enlace tipo bisulfuro. El F(ab)'_{2} puede ser reducido en condiciones suaves para romper el enlace tipo bisulfuro de la región bisagra, convirtiendo así el dímero F(ab)'_{2} en un monómero Fab'. El monómero Fab' es esencialmente un Fab con parte de la región bisagra (véase, "Fundamental Immunology", W. E. Paul, ed., Raven Press, N. Y. (1993) para una descripción más detallada de otros fragmentos de anticuerpo). Mientras que diversos fragmentos de anticuerpo se definen en términos de la digestión de un anticuerpo intacto, cualquier experto advertirá que tales fragmentos de Fab' pueden ser sintetizados de novo bien químicamente o mediante la utilización de una metodología de ADN recombinante. Por lo tanto, el término "anticuerpo", como se usa en la presente memoria también incluye fragmentos de anticuerpo bien producidos mediante la modificación de anticuerpos enteros o sintetizados de novo usando metodologías de ADN recombinante.
El término "fluido oral", como se usa en la presente memoria, se refiere a uno o más fluidos encontrados en la cavidad oral individualmente o en combinación. Éstos incluyen, pero no se limitan a, la saliva y el transudado de mucosa. Se reconoce que el fluido oral (p.ej., la saliva) puede comprender una combinación de fluidos procedentes de un número de fuentes (p.ej., la glándula parótida, la glándula submandibular, la glándula sublingual, las glándulas accesorias, la mucosa gingival y la mucosa bucal), y el término "fluido oral" incluye fluidos procedentes de cada una de estas fuentes individualmente o en combinación. El término "saliva" se refiere a una combinación de fluidos orales tal como la que se encuentra normalmente en la boca, en concreto, tras la masticación. El término "transudado de mucosa", como se usa en la presente memoria, se refiere al fluido producido mediante la difusión pasiva de los componentes del suero desde los intersticios de la mucosa oral a la cavidad oral. El transudado de mucosa habitualmente forma un componente de la saliva.
Los términos "matriz capilar" y "matriz porosa" se usan en la presente memoria para referirse a un material muy poroso caracterizado por un tamaño de poro suficientemente pequeño como para que el material absorba rápidamente una solución acuosa (p.ej., de fluido oral) predominantemente mediante la acción capilar o la "absorción".
El término "absorción" se usa para referirse a la absorción de un fluido predominantemente por adsorción y la acción capilar.
El término "tira de cromatografía de flujo lateral" se refiere a una tira reactiva utilizada para la cromatografía de flujo lateral. Comúnmente, los análisis (de cromatografía) de flujo lateral suponen la aplicación de una muestra de líquido sospechosa de contener un analito por ser detectado en una zona de aplicación de una tira reactiva (inmunocromatográfica) de flujo lateral. La tira está compuesta de un material matricial (p.ej., papel, nitrocelulosa, etc), véase, p.ej., la patente estadounidense nº: 5569608) a través del cual la muestra de fluido y el analito suspendido o disuelto en la misma puede fluir por acción capilar desde la zona de aplicación hasta una zona de detección en la que una señal visible, o la ausencia de tal señal, revela la presencia o la ausencia del analito. Si la detección del analito utiliza un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo, el análisis puede ser denominado análisis de inmunocromatografía de flujo lateral, y la tira, una tira de inmunocromatografía de flujo lateral.
Una "zona de recepción o el lecho corto para muestras de dicha tira de cromatografía de flujo lateral" se refiere a la zona de la tira de cromatografía de flujo lateral en la que se aplica primero una muestra.
Una "señal sobre dicha tira de cromatografía de flujo lateral" se refiere a una indicación, normalmente, en una determinada región predefinida de la tira de cromatografía que indica la presencia, la ausencia, o una cantidad de analito, o la cantidad suficiente de muestra en la tira de cromatografía. La señal puede ser colorimétrica, fluorescente, electroluminiscente, radiactiva, etc.
Como se usa en la presente memoria, "carcasa" se refiere a cualquier miembro que revista o sostenga, pero que no reaccione con, la tira cromatográfica de flujo lateral.
Como se usa en la presente memoria, "cavidad" se refiere a cualquier volumen de recepción sobre o dentro de la carcasa para sujetar la tira cromatográfica lateral.
La "tira cromatográfica de flujo lateral" es cualquier miembro absorbente capaz de transportar analito y reactivos a la zona de inspección visual. La tira puede ser nitrocelulosa, acetato de celulosa, papel, nailon, celulosa o cualquier otro material altamente absorbente.
Como se usa en la presente memoria, "un inmunoanálisis" es un análisis que utiliza un anticuerpo o un antígeno para unirse específicamente al analito. El inmunoanálisis se caracteriza por el uso de la unión específica a un determinado anticuerpo, a diferencia de otras propiedades físicas o químicas para aislar, dirigirse al y cuantificar el anali-
to.
La frase "que se une específicamente a un analito" o "específicamente inmunoreactivo con", cuando se refiere a un anticuerpo, se refiere a una reacción de unión que determina la presencia del analito en la presencia de una población heterogénea de moléculas tales como proteínas y otros compuestos biológicos (i.e., tales como los que se pueden encontrar en el fluido oral). Por lo tanto, bajo las condiciones de inmunoanálisis designadas, los anticuerpos especificados se unen a un determinado analito y no se unen en una cantidad significativa a otros analitos presentes en la muestra. Se puede usar una variedad de formatos de inmunoanálisis para seleccionar los anticuerpos específicamente inmunoreactivos con un determinado analito. Por ejemplo, los inmunoanálisis ELISA en fase sólida son automáticamente usados para seleccionar anticuerpos monoclonales específicamente inmunoreactivos con una proteína. Véase Harlow y Lane (1988) "Antibodies, A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Publications, Nueva York, para una descripción de los formatos y las condiciones de inmunoanálisis que pueden ser usados para determinar una inmunoreactividad específica.
Una "etiqueta" es una composición detectable mediante medios espectroscópicos, fotoquímicos, bioquímicos, inmunoquímicos, eléctricos, ópticos o químicos. Las etiquetas útiles en la presente invención incluyen perlas magnéticas (p.ej., Dynabeads®), tintes fluorescentes (p.ej., isotiocianato de fluoresceína, rojo texas, rodamina, proteína verde fluorescente y similares), radioetiquetas (p.ej., ^{3}H, ^{125}I, ^{35}S, ^{14}C o ^{32}P), enzimas (p.ej., peroxidasa de rábano picante, fosfatasa alcalina y otras comúnmente usadas en ELISA) y las etiquetas colorimétricas tales como las perlas de oro coloidal, de vidrio coloreado o de plástico (p.ej., poliestireno, polipropileno, látex, etc). Las patentes que enseñan el uso de tales etiquetas incluyen las patentes estadounidenses nº: 3.817.837; 3.850.752; 3.939.350; 3.996.345; 4.277.437; 4.275.149 y 4.366.241. Los medios para detectar tales etiquetas son conocidos por aquellos expertos en la técnica. Así, por ejemplo, es posible detectar las radioetiquetas usando una película fotográfica o contadores de centelleo; los marcadores fluorescentes pueden ser detectados usando un fotodetector para detectar la iluminación emitida. Las etiquetas enzimáticas son normalmente detectadas proporcionando a la enzima un sustrato y detectando el producto de reacción producido por la acción de la enzima sobre el sustrato, y las etiquetas colorimétricas son detectadas simplemente visualizando la etiqueta coloreada.
La fig. 1 es una realización esquemática de un dispositivo de recolección oral de esta revelación que ilustra en general de izquierda a derecha un pabilo para el transporte de fluidos orales, un lecho corto de bloqueo, un lecho corto de conjugado de oro, una tira cromatográfica lateral con una ventana de observación y, finalmente, un lecho corto de absorción final, todo contenido en una carcasa simple;
la fig. 2 es una realización esquemática de un dispositivo de recolección de muestras orales alterno similar al de la fig. 1, que omite el lecho corto de bloqueo y que tiene el conjugado de oro aplicado en el extremo del material del pabilo; y
la fig. 3 es una interpretación tridimensional del dispositivo de prueba con la cubierta del pabilo retirada para su uso en la cavidad oral de un ser humano.
Esta invención proporciona un dispositivo para la recolección y detección rápida de una etapa de analitos en fluido oral. En una realización preferida, el dispositivo es introducido en la cavidad oral (p.ej., preferiblemente yuxtapuesto a la mucosa oral) en la que absorbe fluido oral. Tras un período de tiempo, se separa el dispositivo de la cavidad oral, y se leen uno o más indicadores contenidos en el dispositivo (p.ej., mediante una inspección visual o mediante la detección en un "lector") para proporcionar una indicación de la presencia o la ausencia y/o de la cantidad de uno o más analitos de interés. El dispositivo proporciona de ese modo un análisis rápido de una sola etapa y no invasivo para la detección de uno o más analitos de interés.
Los dispositivos y los procedimientos de análisis de esta invención pueden ser usados para la detección (positiva o negativa, y/o la cuantificación) de casi cualquier analito presente en fluido oral. Además, los dispositivos y los procedimientos pueden ser usados para detectar uno o más analitos simultáneamente. Tales analitos pueden incluir, pero no se limitan a, los anticuerpos del VIH, los anticuerpos del VLTH, los anticuerpos de Helicobacter pylori, los anticuerpos de la hepatitis, los anticuerpos del sarampión, los anticuerpos de las paperas, los anticuerpos de la rubéola, la cotinina, la cocaína, la benzoilecgonina, la benzodizazpina, el tetrahidrocanabinol, la nicotina, la teofilina de etanol, la fenitoína, el acetaminofén, el litio, el diazepam, la nortriptilina, el secobarbital, el fenobarbitol, la teofillina, la testosterona, el estradiol, la 17-hidroxiprogesterona, la progesterona, la tiroxina, la hormona estimulante del tiroides, la hormona estimulante de los folículos, la hormona luteinizante, el factor de crecimiento transformante de tipo alfa, el factor de crecimiento epidérmico, el factor de crecimiento de tipo insulina I y II, el factor de inhibición de la liberación de hormonas de crecimiento, la IgA y la globulina de unión a las hormonas sexuales; y otros analitos que incluyen glucosa, colesterol, cafeína, colesterol, globulina de unión a corticosteroides, AEP o glicoproteína de unión a DHEA, siendo los procedimientos particularmente adecuados para la detección de los anticuerpos del VIH.
El dispositivo de análisis de esta invención se basa en la cooperación exclusiva entre una matriz capilar (W en la figura 1) y una tira cromatográfica de flujo lateral (C en la figura 1). El dispositivo está construido tal que la matriz capilar pueda ser introducida en la cavidad oral y, en una realización preferida, yuxtapuesta a la mucosa oral. La matriz capilar actúa como un cuerpo receptor o un lecho corto que absorbe rápidamente el fluido oral, p.ej., mediante la acción capilar, y administra el fluido oral en una tira de inmunocromatografía de flujo lateral (p.ej., C en la figura 1). La tira de inmunocromatografía proporciona entonces una indicación de la presencia, la ausencia o la cantidad de un o más analitos en el fluido oral.
El dispositivo puede estar convenientemente ensamblado tal que la matriz capilar comprende un lecho corto receptor para su introducción en la cavidad oral, mientras que la tira de inmunocromatografía de flujo lateral comprende el mango del dispositivo. Una o más zonas del mango pueden comprender indicadores para la lectura (p.ej., de una señal colorimétrica) de los resultados del análisis. Por supuesto, hay otros formatos del dispositivo que son adecuados y serán fácilmente reconocidos por aquellos expertos en la técnica.
Matriz capilar
El material de la matriz capilar (la matriz porosa) es preferiblemente seleccionado para proporcionar un número de propiedades únicas al dispositivo de análisis. Tales propiedades incluyen, pero no se limitan a, un volumen hueco relativamente bajo, un tamaño de poro suficiente para proporcionar una administración rápida y eficaz del fluido oral en la tira reactiva, la no reactividad o una reactividad baja con el fluido oral o los analitos, una liberación fácil del fluido oral en la tira reactiva inmunocromatográfica y un lecho corto de recolección no deformable (al humedecerse).
Debido a que el fluido oral puede ser escaso (a los pacientes a menudo se les queda "la boca seca" durante la prueba), es deseable maximizar la cantidad de fluido oral que es transportado desde la cavidad oral (p.ej., la mucosa oral) a la tira de cromatografía de flujo lateral. Esto se consigue mediante el uso de una matriz capilar que tenga un volumen hueco mínimo. La matriz capilar debería tener un volumen hueco de menos del aproximadamente 65%/cm^{3}, preferiblemente, de menos del aproximadamente 57%/cm^{3}, más preferiblemente, de menos del aproximadamente 48%/cm^{3}, siendo lo más preferible que sea de menos del aproximadamente 40%/cm^{3}, 35%/cm^{3} o incluso 25%/cm^{3}. Las matrices capilares que tienen volúmenes huecos tan bajos administran, por lo común, una cantidad significativa de fluido oral absorbido en la tira de cromatografía de flujo lateral.
La propia matriz debe ser de una dimensión relativamente pequeña. Específicamente, es preferible que los intersticios sean de una dimensión en la que las fuerzas capilares hagan que el fluido caiga a la matriz capilar. De ese modo, la matriz capilar también se selecciona para que tenga un tamaño medio de poro lo suficientemente pequeño como para proporcionar una absorción rápida del fluido oral con el que está en contacto (p.ej., mediante la acción capilar). El tamaño de poro pequeño también funciona para excluir el material particulado presente en la muestra de fluido. Sin embargo, también se selecciona el tamaño de poro para que sea lo suficientemente grande como para que el fluido oral viscoso no obstruya la matriz capilar y, en cambio, se transporte rápidamente a través de la matriz hasta el lecho corto de cromatografía de flujo lateral. Los materiales preferidos tienen un tamaño medio de poro que varía de aproximadamente 40 \mum a aproximadamente 250 \mum, más preferiblemente, de aproximadamente 60 \mum a aproximadamente 200 \mum, y lo más preferible, de aproximadamente 80 \mum a aproximadamente 120 \mum.
Además de tener un tamaño de poro (tamaño del canal) que resulte en una absorción rápida del fluido oral, las superficies de la matriz capilar deberían ser químicamente compatibles con la absorción rápida del fluido oral. Por lo tanto, los propios materiales de la matriz capilar son hidrófilos o están tratados para que sean hidrófilos (p.ej., mediante la adición de un tensioactivo también denominado detergente o agente humectante). Es decir, el agua debe fluir por y ser atraído hacia las superficies de estos materiales.
Mientras que hay un número de materiales adecuados que son naturalmente hidrófilos (p.ej., vidrio sinterizado limpio o perlas de vidrio fundido), otros materiales adecuados (p.ej., plásticos) son comúnmente hidrófobos (p.ej., no se humedecen fácilmente). Sin embargo, tales materiales hidrófobos pueden ser rutinariamente tratados con un agente humectante (i.e., tensioactivo/detergente) y de ese modo volverlos hidrófilos (humectantes). Sin embargo, como la matriz capilar se usa en la cavidad oral, se requiere que el detergente de tratamiento sea conocido como no nocivo para el sujeto mamífero (p.ej., al cuerpo humano) y que, preferiblemente, esté aprobado para tal uso por la autoridad reguladora pertinente (p.ej., el Organismo estadounidense para el Control de Alimentos y Medicamentos). En otra realización preferida, es posible volver un material de plástico poroso (p.ej., espuma de polietileno o de polipropileno) hidrófilo, cogiendo el material de la matriz sin tratar y colocándolo en una solución acuosa diluida de un detergente autorizado tal como N-metil-cocoil-taurato de sodio. Después de ello, se seca el material tratado, dejando las superficies de la matriz aparentemente revestidas de una capa fina de detergente.
Aunque se prefiere el N-metil-cocoil-taurato de sodio, se entenderá que también se pueden usar otros detergentes. Sólo se requiere que el detergente, por la seguridad de la exposición oral del mamífero, no interfiera con la prueba sobre la tira cromatográfica lateral C, y produzca las propiedades hidrófilas requeridas sobre las superficies exteriores de la matriz.
Además, para absorber y transportar rápidamente el fluido oral hacia la tira de cromatografía de flujo lateral, el material de la matriz capilar es seleccionado para que preferiblemente libere inmediatamente el fluido en la tira de cromatografía. Esto debería conseguirse rápidamente sin la compresión del propio material de la matriz. Por lo tanto, en una realización preferida, la matriz capilar administra y libera el fluido oral en la tira de cromatografía de flujo lateral sin ninguna manipulación (p.ej., sin apretar ni comprimir la matriz capilar).
A partir de lo anterior, debería resultar claro que los materiales preferidos de la matriz capilar tienen un espaciado intersticial que facilita la absorción del fluido oral a través de la atracción capilar en combinación con la adsorción sobre el material. Esto hace que el fluido oral recogido de la boca sea transportado a la tira cromatográfica lateral en lugar de quedarse en la boca. Al mismo tiempo, cuando el fluido oral llega a la tira cromatográfica lateral, es absorbido por la tira en lugar de permanecer en la matriz capilar.
En una realización preferida, la matriz capilar hidrófila es una matriz esencialmente no absorbente que absorbe el líquido por acción capilar. En tal absorción, el volumen del material no es apreciablemente afectado. Además, el material de la matriz capilar es relativamente rígido tal que su morfología permanece esencialmente invariable durante el análisis (p.ej., cuando se satura con fluido oral). Por lo tanto, la saturación de la matriz con un fluido oral no altera sustancialmente el tamaño medio de poro ni el volumen hueco de la matriz porosa. Además, la saturación de la matriz capilar con un fluido oral resulta en un cambio de volumen de menos del 30%, preferiblemente, de menos del 25%, más preferiblemente, de menos del 20%, siendo lo más preferible que sea de menos de aproximadamente el 15%, 10%, 5% o incluso menos del aproximadamente 1%.
En una realización particularmente preferida, la matriz capilar puede actuar como una barrera frente al reflujo de los reactivos desde la tira de cromatografía de flujo lateral hacia la matriz capilar. Esto se puede conseguir, por ejemplo, cuando la tira cromatográfica tenga un mayor volumen para el almacenamiento de fluido que la matriz capilar. Además, o alternativamente, cuando la tira de cromatografía de flujo lateral es más hidrófila que la matriz capilar, la matriz capilar también puede actuar como una barrera frente al reflujo.
Los materiales de la matriz capilar son seleccionados tal que no sean químicamente reactivos bien con el fluido oral o con los analitos contenidos en el mismo. Los materiales de las matrices compatibles con el fluido oral son conocidos por los expertos en la técnica, e incluyen, pero no se limitan a, vidrio, resinas y diversos plásticos.
En una realización preferida, las propiedades anteriormente descritas se consiguen mediante el uso de materiales plásticos porosos para la matriz capilar. Los materiales plásticos porosos adecuados incluyen, pero no se limitan a, matrices porosas de polietileno de alta densidad (HDPE), polietileno de peso molecular ultra elevado (UHMW), polipropileno (PP), fluoruro de polivinilideno (PVDF), politetrafluoroetileno (PTFE), nailon 6 (N6) y polietersulfona (PES). En una realización preferida, los materiales de la matriz porosa son bien hidrófilos por sí mismos (para absorber fácilmente el fluido oral) o son tratados (p. ej., con un tensioactivo/detergente) para que sean hidrófilos.
Tales plásticos porosos se encuentran comercialmente disponibles (véase, p.ej., Porex Technologies, Fairburn, GA). Los plásticos porosos particularmente preferidos son polietileno y/o polipropileno tratado con detergente (tensioactivo). El tratamiento normalmente supone empapar la matriz capilar en un tensioactivo/detergente y luego, dejarla secar de forma natural o mediante un secado forzado del material.
Los materiales de la matriz porosa particularmente preferidos son Porex X-4588, 80-120 \mum de tamaño de poro a un espesor de 0,061 cm (0,024 pulgadas) de polipropileno. Asimismo, son adecuados el Porex X-4903 a un espesor de 0,159 cm (0,0625 pulgadas), tamaño de poro de 45-90 \mum, y el Porex X-4913 a un espesor de 0,159 cm (0,0625 pulgadas) y un tamaño de poro de 90-130 \mum. En una realización preferida, se tratan estos materiales con N-metil-cocoil-taurato de sodio. Los materiales de la matriz capilar son empapados en el detergente que luego es secado sobre la superficie que comprende la matriz porosa.
Se entenderá que los materiales de Porex7 que son utilizados no conservan grandes volúmenes de fluido oral. Por ejemplo, se consideran los siguientes datos:
TABLA 1
Volumen hueco del Porex® X-4903 Poro medio
Porex X-4903 1 cm x 1 cm x 0,1588 cm
# Peso seco (g) Peso + H_{2}O (g) Peso de H_{2}O (g) % de volumen/cm^{3}
1 0,0791 0,1595 0,0804 50,63
2 0,0745 0,1480 0,0735 6,28
3 0,0746 0,1480 0,0734 46,22
4 0,0767 0,1503 0,0736 46,35
5 0,0762 0,1503 0,0741 46,66
Media 0,0750 47,23 
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 2
Volumen hueco del Porex® X-4913 Poro grueso
Porex X-4913 1 cm x 1 cm x 0,1588 cm
# Peso seco (g) Peso + H_{2}O (g) Peso de H_{2}O (g) % de volumen/cm^{3}
1 0,0782 0,1670 0,0888 55,92
2 0,0803 0,1723 0,0920 57,93
3 0,0806 0,1700 0,0894 56,30
4 0,0851 0,1818 0,0967 60,89
5 0,0747 0,1593 0,0846 53,27
Media 0,0903 56,86
En lo anterior, suponemos que 1 cm^{3} = 1 ml = 1 g de H_{2}O
Al mismo tiempo, la matriz capilar hidrófila W no tiene una retención relativa del fluido oral elevada. Por ejemplo, entrega inmediatamente su fluido a la tira cromatográfica lateral C y al lecho corto absorbente A. Se entenderá que la matriz capilar hidrófila W actúa más como un conducto que como un absorbente; el material es inmediatamente descargado del pabilo.
Identificación de los materiales adecuados para la matriz porosa
Se entenderá que la velocidad de la absorción, del transporte al lecho corto de cromatografía de flujo lateral y de la liberación en el lecho corto del fluido oral es función tanto de la composición de la matriz capilar como de su forma (p.ej., la superficie expuesta a la mucosa oral, la superficie transversal y la superficie en contacto con la tira de cromatografía de flujo lateral). Las velocidades también se ven afectadas por el tamaño medio de poro, la hidrofilidad del material de la matriz capilar y las características de absorbancia relativa de la matriz capilar y el lecho corto de cromatografía de flujo lateral.
Es posible optimizar estos parámetros según procedimientos habituales conocidos por los expertos en la técnica. En una realización, esto se consigue ensamblando un dispositivo de prueba que tenga el material deseado para la matriz capilar y una tira de inmunocromatografía de flujo lateral. Entonces se puede poner en contacto el dispositivo de prueba con una solución de muestra de fluido oral (p.ej., fluido oral natural o fluido oral sintético, véase, la patente estadounidense 5.695.929 y la que está en tramitación junto con la presente USSN 08/608.431).
La puesta en contacto puede realizarse mediante la introducción real de la parte receptora (p.ej., lecho corto/cara receptora) de la matriz capilar en la cavidad oral y la puesta en contacto con una mucosa oral (p.ej., un ser humano o un animal en prueba). Alternativamente, la puesta en contacto puede realizarse tocando la matriz capilar con el fluido de prueba dispuesto sobre una superficie o un bol u otro recipiente, sumergiendo parte de o toda la matriz capilar en el fluido de prueba, o poniendo en contacto la matriz capilar con un cuerpo de prueba (p.ej., una esponja, una tela, un frotis, etc) impregnado con el fluido de prueba.
Normalmente, la muestra de fluido oral estará en contacto con la matriz capilar durante el período de tiempo que se desee ejecutar el análisis (p.ej., menos de 5 minutos), y luego se puede leer la tira de cromatografía de flujo lateral en cuanto a la presencia, la ausencia o la cantidad de analito y/o en cuanto a la cantidad de fluido oral absorbido. De este modo, se determinará si el análisis ofrece una sensibilidad y una especificidad adecuadas.
Además, es posible determinar el período de tiempo para la absorción del fluido oral en la matriz capilar y la tira de cromatografía de flujo lateral. De manera similar, también se puede establecer el volumen total de muestra requerido para saturar adecuadamente la tira de cromatografía de flujo lateral y la cantidad de fluido retenido por la matriz capilar (p.ej., pesando los diversos componentes antes y después del análisis).
En una realización preferida, la matriz capilar, cuando se introduce y se mantiene en la boca es saturada de fluido oral en menos de aproximadamente 5 minutos, preferiblemente, en menos de aproximadamente 3 minutos, más preferiblemente, en menos de aproximadamente 1 minuto, siendo lo más preferible que sea en menos de aproximadamente 30 segundos. De manera similar, la matriz capilar liberará suficiente fluido en la tira de cromatografía para ejecutar apropiadamente el análisis (una ejecución del análisis según las especificaciones de la tira cromatográfica) en menos de aproximadamente 10 minutos, preferiblemente, en menos de aproximadamente 5 minutos, más preferiblemente en menos de aproximadamente 3 minutos y lo más preferible, en menos de aproximadamente 2 minutos o incluso en menos de aproximadamente 1 minuto sin comprimir la matriz porosa.
Se fabricará una matriz porosa que se sature con menos de aproximadamente 500 \mul, más preferiblemente con menos de aproximadamente 300 \mul y lo más preferible, con menos de aproximadamente 100 \mul.
Se reconocerá que cuando sólo se vayan a analizar las propiedades de absorción y de liberación del fluido oral, no hay necesidad de utilizar un análisis cromatográfico completo. El material base de la matriz capilar, la tira de cromatografía de flujo lateral y, si se desea, el lecho corto de bloqueo pueden estar ensamblados. Es posible cuantificar la velocidad de absorción y administración del fluido en el lecho corto sumergiendo o poniendo en contacto el lecho corto de la matriz capilar con una muestra de fluido (p.ej., fluido oral natural o sintético) y cuantificando la velocidad de absorción y administración de fluido en el lecho corto y/o la cantidad retenida en la matriz capilar (p.ej., pesando los diversos elementos tras unos determinados tiempos preseleccionados de exposición al fluido de prueba). Se prefiere una combinación de materiales y elementos con formas que proporcione la administración máxima de un fluido oral desde una mucosa oral a la tira de cromatografía de flujo lateral en el menor tiempo posible.
En una realización particularmente preferida, la tira de cromatografía de flujo lateral es una tira de nitrocelulosa (p.ej., Syntron QuickScan 6, Avitar Visualine II, Avitar Technologies, Cantón, Massachussets). Una tira cromatográfica típica es una membrana de nitrocelulosa SRHF de Millipore (Millipore Corp., Bedford, Massachussets) que tiene unas dimensiones de 4 mm x 50 mm. Un material de matriz porosa mide 7 mm x 52 mm [0,159 cm (0,0625 pulgadas) de espesor] y se solapa con la membrana de nitrocelulosa en aproximadamente 64 mm^{2}. En otra realización, la matriz capilar tiene forma de paleta que tiene una superficie total de aproximadamente 720 mm^{2} y se solapa con la tira cromatográfica en aproximadamente 8 mm^{2}. El pequeño solapamiento es particularmente muy adecuado en realizaciones que contienen un lecho corto de conjugado, que sirve para canalizar eficazmente el fluido oral a través del lecho corto de conjugado.
Tira de cromatografía de flujo lateral
El dispositivo de análisis de esta invención puede utilizar casi cualquier tira de cromatografía de flujo lateral para la detección y/o la cuantificación del analito o los analitos. Los análisis de cromatografía de flujo lateral son conocidos por aquellos expertos en la técnica (véanse, p.ej., las patentes estadounidenses 5.569.608; 5.120.643; 5.656.503; 4.855.240; 5.591.645; la patente británica GB 2204398A y la patente europea EP 0323605 B1), y tales análisis se encuentran comercialmente disponibles al por menor o en fabricantes de equipo original para numerosos analitos.
Los inmunoanálisis de flujo lateral normalmente suponen la aplicación de una muestra de líquido sospechoso de contener un analito por ser detectado en una zona de aplicación de una tira reactiva (inmunocromatográfica) de flujo lateral. La tira está compuesta de un material matricial (p.ej., papel, nitrocelulosa, etc., véase, p.ej., la patente estadounidense nº: 5569608) a través del cual la muestra de fluido y el analito suspendido o disuelto en la misma pueden fluir por capilaridad desde la zona de aplicación a la zona de detección en la que una señal visible, o la ausencia de tal señal, revela la presencia o la ausencia del analito.
Normalmente, la tira incluirá un medio para unir inmunoespecíficamente el analito por ser detectado con su pareja de unión específica (p.ej., cuando el analito es un antígeno, la pareja de unión es un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo, y viceversa) que lleva una etiqueta detectable. En un esquema tal como el revelado en la patente estadounidense nº: 4.446.232, la tira contiene una enzima marcada, una pareja de unión móvil para el analito que está en una zona corriente abajo de la zona de aplicación de la muestra. Si el analito está presente en la muestra, se combinará con su pareja de unión marcada para formar un complejo que fluirá a lo largo de la tira hasta una zona de detección que contenga un sustrato para la etiqueta enzimática capaz de proporcionar una señal (p.ej., una respuesta coloreada) en presencia de la etiqueta enzimática.
La tira comúnmente contiene una zona en la que el analito queda inmovilizado, de manera que la pareja de unión marcada que no se combina con el analito, debido a la ausencia de analito en la muestra, será capturada, inhibiendo, de ese modo, su capacidad de alcanzar la zona de detección. Se han publicado diversas modificaciones de esta técnica, muchas de las cuales suponen algún sistema de unión específica competitiva en el que la presencia o la ausencia del analito en la muestra es determinada por la detección o la falta de pareja de unión marcada en la zona de detección. En la patente estadounidense nº: 4.868.108, se revela un esquema similar con la adición de un reactivo de captura inmovilizado para la pareja de unión marcada enzimáticamente en la zona de detección para concentrar la etiqueta enzimática y aumentar su capacidad de reaccionar con el sustrato enzimático, y hacer de ese modo el análisis más sensible.
No todos los esquemas para la inmunocromatografía se basan en una pareja de unión marcada enzimáticamente/un sustrato enzimático para proporcionar la señal para la detección del analito. En la patente estadounidense nº: 4.806.311, se revela un dispositivo de prueba con múltiples zonas para la determinación mediante un ensayo de unión específica de un analito y una pareja de unión inmovilizada, por lo tanto, junto con una zona de detección para recibir el reactivo marcado que migra hacia la misma desde la zona reactiva. La zona de detección contiene una forma inmovilizada de una sustancia de unión para el reactivo marcado. El reactivo marcado lleva un grupo químico detectable que tiene una propiedad física detectable que es detectable en base a sus propias propiedades físicas, de manera que no requiere una reacción química con otra sustancia. Los ejemplos de tales grupos son especies coloreadas fluorescentes, moléculas fosforescentes, radioisótopos y restos electroactivos. La patente estadounidense nº: 4.313.734 describe el uso de suelas de oro como etiquetas para anticuerpos que son detectables sin un cambio químico.
Muchos sistemas de inmunocromatografía de flujo lateral utilizan marcadores particulados (microparticulados) (p.ej., gelatina, látex teñido u oro coloidal) que están marcados con una pareja de unión (p.ej., un anticuerpo o un antígeno) que se une al analito de interés.
Las micropartículas u otros restos detectables unidos a un resto de unión a analitos (p.ej., un anticuerpo o un antígeno) son secados sobre (o localizados de otro modo en) bien una tira cromatográfica de flujo lateral o sobre un lecho corto de aplicación de muestras (normalmente, una fibra de vidrio) que a su vez está fijado a un extremo de una tira del medio cromatográfico tal como nitrocelulosa. Otro material que se une al analito de interés está fijado al medio cromatográfico en o cerca del extremo opuesto al extremo que tiene el lecho corto de aplicación.
La muestra de líquido por ser analizada es colocada en el lecho corto, provocando la suspensión de las micropartículas en el líquido y permitiendo que cualquier analito de la muestra líquida se una al material de unión a analitos unido a las micropartículas. La muestra líquida abandona el lecho corto de aplicación por difusión y acción capilar, y comienza a migrar a lo largo de la tira de nitrocelulosa transportando las micropartículas hacia abajo por la tira junto con el líquido. Cuando el líquido que contiene las micropartículas suspendidas llega a la región de la tira cromatográfica que lleva el segundo material de unión, el analito (si está presente en la muestra original) formará un enlace molecular entre el material de unión a analitos que está sobre las micropartículas y el material de unión a analitos que se encuentra fijado a la tira, lo que resulta en la inmovilización de las micropartículas en el punto sobre la tira en el que el material de unión a analitos está fijado. Esta inmovilización de las micropartículas resulta en una señal visible (p.ej., una tira coloreada o no) en este punto de la tira. Si el analito no está presente en la muestra, las micropartículas continuarán pasando por este punto de la tira cromatográfica, sin que se produzca ninguna señal
visible.
Se entenderá que es posible utilizar otras etiquetas (p.ej., etiquetas fluorescentes) además de micropartículas. Además, una única tira cromatográfica puede contener reactivos para detectar o cuantificar un número de distintos analitos.
También se entenderá que la tira de flujo lateral puede usar una detección de analitos que no implique el uso de un sistema de reconocimiento anticuerpo-antígeno. Así, por ejemplo, la tira puede ser impregnada en una zona de detección con un producto químico que reaccione con el propio analito para producir una señal.
Los dispositivos de esta invención pueden estar fácilmente ensamblados con cualquiera entre una variedad de análisis de cromatografía de flujo lateral comercialmente disponibles (p.ej., Syntron QuickScan 6, Avitar Visualine II, Avitar Technologies, Cantón, Massachussets, etc).
Tira de bloqueo opcional
Los dispositivos de análisis de esta invención pueden incluir opcionalmente un tira de bloqueo entre la matriz porosa y la tira de cromatografía de flujo lateral. La tira de bloqueo puede estar impregnada de tampones para ajustar el pH (p.ej., hasta un pH 7,5) del fluido oral para que sea compatible con el análisis de cromatografía de flujo lateral. La tira de bloqueo también puede incluir uno o más reactivos de bloqueo que reduzcan la unión inespecífica del analito y/o los reactivos del dispositivo de análisis, reduciendo de ese modo la ocurrencia de falsos positivos. Los reactivos de bloqueo adecuados incluyen, pero no se limitan a, albúmina de suero bovino (ASB), desoxicolato y n-lauroilsarcosina. En una realización particularmente preferida, la solución de bloqueo incluye: alcohol polivinílico al 4% (PM: 10 kd (Aldrich 36.062-2); n-lauroilsarcosina de sodio al 4% (Sigma L5777), pirrolidona polivinílica al 2% (PM: 10 kd, Sigma P2263) en 60 X Tris EDTA (Sigma T9285) o n-lauroilsarcosina de sodio al 7,5% (Sigma L5777), tectronic 1307 al 2,5% (BASF), compuesto de polietilenglicol al 7,5% (Sigma P2263) en 100 x tampón de Tris EDTA (Sigma T9285).
El lecho corto de bloqueo puede estar compuesto de una amplia variedad de materiales siempre y cuando no impidan el flujo del fluido oral desde la matriz capilar a la tira de cromatografía de flujo lateral. Tales materiales incluyen, pero no se limitan a, papel, celulosa, nitrocelulosa y similares. Los materiales particularmente preferidos serán seleccionados para reducir o eliminar el reflujo de los reactivos o del fluido oral desde la tira reactiva cromatográfica a la matriz capilar. En una realización preferida, cuando está presente, el lecho corto de bloqueo es un filtro de celulosa #470 de Schleicher & Schuell (Schleicher & Schuell, GMBH, Alemania).
La tira opcional de conjugado
En una realización, los reactivos de cromatografía de flujo lateral (p.ej., partículas de oro marcadas con anticuerpos, etc) están dispuestos sobre o en la propia tira cromatográfica de flujo lateral. Sin embargo, en otra realización, puede haber uno o más reactivos cromatográficos dispuestos en una tira de conjugado (G), p. ej., para facilitar la fabricación. La tira de conjugado está colocada yuxtapuesta a la tira de cromatografía de flujo lateral tal que el fluido oral deba pasar por o a través de la tira de conjugado con el fin de migrar hacia arriba por la tira cromatográfica. Alternativamente, la tira de conjugado puede estar tejida en la tira de cromatografía de flujo lateral o puede estar alineada, en el mismo plano, que la tira de cromatografía de flujo lateral. Como con la tira de bloqueo, la tira de conjugado puede estar formada de cualquier material conveniente (p.ej., nitrocelulosa, fibra de vidrio, poliéster, etc) que sea compatible con el análisis y que no impida sustancialmente el flujo del fluido oral y de los reactivos. En una realización preferida, el lecho corto de conjugado es un lecho corto de fibra de vidrio de 4 mm x 4 mm o un lecho corto de poliéster (p.ej., Ahlstrom Remay # 2033).
Ensamblaje del dispositivo de análisis
Los componentes (p.ej., la matriz capilar, la tira de cromatografía de flujo lateral, la tira opcional de bloqueo) pueden ser ensamblados mediante cualquiera entre una amplia variedad de medios conocidos por aquellos expertos en la técnica. Así, por ejemplo, los componentes pueden ser soldados o pegados y similares.
En una realización preferida, los componentes están simplemente prensados y sujetos en su sitio por una carcasa (H). La carcasa (H) puede ser de cualquier construcción deseada. Por ejemplo, en una construcción prototípica, se utilizaron pajas de refresco que proporcionaron tanto una estructura como una visibilidad adecuadas para medir la exactitud de la prueba. También se ha usado una tubería acrílica. Se reconocerá que es posible utilizar otros materiales de tubería estándar, o que es posible moldear o extruir personalizadamente carcasas especialmente diseñadas.
Los componentes fueron ensamblados tal que la tira de cromatografía de flujo lateral estaba dispuesta longitudinalmente en la pajita, quedando fija por un extremo a un extremo de la matriz capilar (W). La carcasa H proporcionó así un mango conveniente para la introducción de la matriz capilar en la cavidad oral de un mamífero (p.ej., un ser humano).
Las figuras 1, 2 y 3 ilustran diversas realizaciones del dispositivo de análisis de esta invención. La tira de inmunocromatografía o cromatografía de flujo lateral (C) está dispuesta longitudinalmente en la carcasa (H). Un extremo de la tira cromatográfica está en contacto directo, o por medio del lecho corto de bloqueo (B), con una parte de la matriz capilar (W). La matriz capilar (W) sobresale de la carcasa (H) en la que presenta una cara (3) que actúa como una superficie absorbente para absorber el fluido oral. El fluido oral migra a través de la matriz (W) y a través del lecho corto de bloqueo (B), si está presente, donde es finalmente administrado a una zona de recepción (R) sobre la tira de cromatografía de flujo lateral.
El fluido oral migra entonces a lo largo de la tira de cromatografía de flujo lateral en la que interactúa con diversos reactivos (p.ej., parejas de unión marcadas con anticuerpos o antígenos (p.ej., anticuerpos o antígenos)) que son depositados en la tira cromatográfica y/o en el lecho corto de conjugado (G) opcional que, cuando está presente, está en contacto con la tira cromatográfica.
La combinación de fluido oral/reactivos continúa migrando a lo largo de la tira cromatográfica hasta que alcanza una o más zonas de indicadores (20). Si hay un analito presente, la zona de indicadores inmoviliza el analito marcado unido o, si no, produce una señal detectable. Una o más de las zonas de indicadores pueden indicar también una cantidad suficiente de muestra (p.ej., con un cambio de color) cuando se alcanza el volumen de muestra necesario y/o la concentración de analito necesaria. Los indicadores de una cantidad suficiente de muestra son conocidos por aquellos expertos en la técnica, y en la solicitud en tramitación junto con la presente, USSN 08/456.459, así como en la patente estadounidense nº: 5.479.937, se describen indicadores particularmente ventajosos de la cantidad suficiente de muestra.
Las zonas de indicadores pueden ser leídas (p.ej., mediante una inspección visual o mediante otros medios) a través de ventanas de observación (18). El dispositivo está opcionalmente equipado con un lecho corto de bloqueo (B). Este lecho corto puede estar impregnado de un reactivo de bloqueo (p.ej., n-lauroilsarcosina) y/o un o unos tampones para ajustar el pH de la muestra. Además, el lecho corto de bloqueo puede estar formado de un material semipermeable que permita que el fluido oral fluya hacia la tira cromatográfica, pero que evite el reflujo del fluido oral y/o los reactivos a la matriz capilar. El otro extremo (el lado opuesto de la matriz capilar) de la tira cromatográfica puede llevar fijado un lecho corto absorbente que actúe como un depósito para recibir el fluido oral, y prevenir de ese modo el reflujo hacia la matriz capilar.
Se entenderá que los dispositivos pueden estar ensamblados de una amplia variedad de formas. En la figura 3, se ilustra una realización preferida. En esta realización, la tira de cromatografía de flujo lateral (C) está dispuesta en una carcasa (H) que actúa como un mango para la manipulación del dispositivo. La carcasa/el mango (H) es proporcionado con ventanas de observación (18) para visualizar la cantidad suficiente de muestra y los resultados del análisis. La matriz capilar sobresale de la carcasa para proporcionar una superficie planar para ser introducida en la cavidad oral en la que la cara (3) de la matriz capilar puede ponerse en contacto con la mucosa oral.
Por comodidad, el dispositivo de análisis puede estar óptimamente equipado con una cubierta (22) para la protección de la superficie de la matriz capilar antes y después de su uso. Esto evita la contaminación del dispositivo de análisis y facilita la eliminación sanitaria de los dispositivos usados.
El lector entenderá que con la interacción de la matriz capilar hidrófila W y la tira cromatográfica lateral C, es posible una construcción extremadamente simple. Además, el producto final funciona de una manera similar a la de un termómetro convencional. La prueba es rápida, mostrando los prototipos los resultados completos de la prueba en aproximadamente 2 minutos. Además, la prueba conduce fácilmente a la propia estimulación de la saliva, tal como mediante la colocación de componentes ligeramente ácidos en el extremo del pabilo.
Lo más importante es que la prueba sólo requiere volúmenes mínimos de fluido procedente de la cavidad oral para ser ejecutada. Por ejemplo, en los diseños mostrados, los análisis sólo utilizaron de 100 a 200 \mul de fluido oral. Esto supone una mejora de al menos un factor de 4 con respecto a los requisitos de volumen de muestra de los análisis anteriores.
Uso del dispositivo de análisis
En uso, el dispositivo de análisis de esta invención es introducido en la cavidad oral de un mamífero (p.ej., un ser humano) tal que el mango en el que está dispuesto la tira cromatográfica quede fuera de la boja. La cara de la matriz capilar entra preferiblemente en contacto con la mucosa oral y, en una realización particularmente preferida, es presionada en la mucosa oral, en la cresta gingival, p.ej., presionada entre la mejilla y las encías.
El dispositivo de análisis es mantenido en su lugar, preferiblemente, sin masticar, hasta que se haya recogido una cantidad suficiente de muestra. Esto puede ser durante un intervalo de tiempo predeterminado o hasta que la matriz capilar alcance una cualidad táctil característica, o hasta que un indicador de la cantidad suficiente de muestra (p.ej., un cambio de color) indique una muestra adecuada.
En el tiempo recomendado (tras la finalización del análisis de inmunocromatografía), el dispositivo es leído (p.ej., mediante una inspección visual de la zona o las zonas de indicadores a través de la ventana o las ventanas de observación, para determinar si el sujeto es positivo o negativo para el o los analitos de interés o la cantidad de analito o analitos.
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Equipos para la detección de los analitos en fluidos orales
En otra realización, esta invención proporciona equipos para la detección de uno o más analitos en fluidos orales. Los equipos incluyen uno o más de los dispositivos de análisis descritos en la presente memoria. Además, los equipos pueden incluir materiales informativos que contienen las instrucciones (i.e., los protocolos) para la práctica de los procedimientos de análisis de esta invención. Aunque los materiales informativos comprenden normalmente materiales escritos o impresos, no se limitan a ello. En esta invención, se contempla cualquier medio capaz de almacenar tales instrucciones y comunicarlas al usuario final. Tales medios incluyen, pero no se limitan a, medios de almacenamiento electrónico (p.ej., discos magnéticos, cintas, cartuchos, chips), medios ópticos (p.ej., CD-ROM) y similares. Tales medios pueden incluir direcciones de sitios de Internet que proporcionan tales materiales informativos.
Los equipos pueden contener opcionalmente cualquiera de los tampones, reactivos, reactivos de detección, etcétera, que sean útiles para la práctica de los procedimientos de esta invención.

Claims (83)

1. Un aparato para la recolección y la cromatografía de flujo lateral de un fluido oral, comprendiendo dicho aparato:
una matriz capilar que tiene expuesta una superficie para recibir fluido oral;
una tira de cromatografía de flujo lateral, estando dicha tira de cromatografía de flujo lateral en combinación con dicha matriz capilar tal que cuando dicha matriz capilar recibe fluido oral, dicha matriz capilar absorbe dicho fluido oral y administra dicho fluido oral en una zona de recepción de dicha tira de cromatografía de flujo lateral; y una tira de bloqueo sustancialmente planar colocada entre la matriz capilar y la tira cromatográfica de flujo lateral.
2. El aparato de la reivindicación 1, en el que la saturación de dicha matriz capilar con un fluido oral no altera sustancialmente la morfología de dicha matriz capilar.
3. El aparato de la reivindicación 2, en el que la saturación de dicha matriz capilar con un fluido oral no altera sustancialmente el tamaño medio de poro de dicha matriz capilar.
4. El aparato de la reivindicación 2, en el que la saturación de dicha matriz capilar con un fluido oral no altera sustancialmente el volumen hueco de dicha matriz capilar.
5. El aparato de la reivindicación 2, en el que dicha matriz capilar tiene un tamaño medio de poro que varía de aproximadamente 40 \mum a aproximadamente 250 \mum.
6. El aparato de la reivindicación 2, en el que dicha matriz capilar tiene un volumen hueco de menos del aproximadamente 60%/cm^{3}.
7. El aparato de la reivindicación 1, en el que dicha matriz capilar comprende un plástico.
8. El aparato de la reivindicación 7, en el que dicha matriz capilar comprende un plástico seleccionado del grupo constituido por un polietileno de alta densidad (HDPE), un polietileno de peso molecular ultra elevado (UHMW), un polipropileno (PP), un fluoruro de polivinilideno (PVDF), un politetrafluoroetileno (PTFE), un nailon 6 (N6) y una polietersulfona (PES).
9. El aparato de la reivindicación 7, en el que dicho plástico es hidrófilo o está tratado para que sea hidrófilo.
10. El aparato de la reivindicación 1, en el que dicha matriz capilar, cuando entra en contacto con una mucosa oral absorbe fluido oral de dicha cavidad oral y libera dicho fluido oral en dicha zona de recepción de dicha tira de cromatografía de flujo lateral en menos de aproximadamente 1 minutos.
11. El aparato de la reivindicación 10, en el que dicha matriz capilar, cuando entra en contacto con una mucosa oral absorbe fluido oral de dicha cavidad oral y libera dicho fluido oral en dicha zona de recepción de dicha tira de cromatografía de flujo lateral en menos de aproximadamente 30 segundos.
12. El aparato de la reivindicación 10, en el que dicha matriz capilar es saturada con fluido oral en menos de aproximadamente 1 minuto.
13. El aparato de la reivindicación 1, en el que dicha matriz capilar es saturada por menos de aproximadamente 500 \mul.
14. El aparato de la reivindicación 1, en el que dicha matriz capilar libera dicho fluido oral en dicha zona de recepción de dicha tira de cromatografía de flujo lateral sin la compresión de dicha matriz capilar.
15. El aparato de la reivindicación 14, en el que se libera suficiente fluido oral como para saturar dicha zona de recepción.
16. El aparato de la reivindicación 1, en el que dicha tira de bloqueo comprende un tampón.
17. El aparato de la reivindicación 1, en el que dicha tira de bloqueo evita el reflujo de los reactivos desde dicha tira de cromatografía de flujo lateral hacia dicha matriz capilar.
18. El aparato de la reivindicación 1, que comprende además:
una carcasa que tiene una cavidad, en la que dicha tira de cromatografía de flujo lateral se extiende por el interior de la cavidad a lo largo de la carcasa hasta una zona de inspección sobre la carcasa; y
al menos una zona de inspección desde un exterior de la carcasa hasta la tira de cromatografía lateral que permite la inspección visual de los reactivos en los puntos seleccionados sobre la tira cromatográfica lateral.
19. El aparato de la reivindicación 18, en el que dicha carcasa actúa como un mango para introducir dicha matriz capilar en dicha cavidad oral.
20. Un procedimiento para la detección o la cuantificación de uno o más analitos en un fluido oral, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de:
i) introducir el aparato de la reivindicación 1 en la cavidad oral de un mamífero, tal que dicha matriz capilar entre en contacto con una superficie de mucosa oral, por medio de lo cual dicha matriz capilar absorbe fluido oral y administra dicho fluido oral en una zona de recepción de dicha tira de cromatografía de flujo lateral;
ii) leer una señal sobre dicha tira de cromatografía de flujo lateral que indica la presencia, la ausencia o la cantidad de dicho uno o más analitos.
21. El procedimiento de la reivindicación 20, en el que la saturación de dicha matriz capilar con un fluido oral no altera sustancialmente la morfología de dicha matriz capilar.
22. El procedimiento de la reivindicación 21, en el que la saturación de dicha matriz capilar con un fluido oral no altera sustancialmente el tamaño medio de poro de dicha matriz capilar.
23. El procedimiento de la reivindicación 21, en el que la saturación de dicha matriz capilar con un fluido oral no altera sustancialmente el volumen hueco de dicha matriz capilar.
24. El procedimiento de la reivindicación 21, en el que en el que dicha matriz capilar tiene un tamaño medio de poro que varía de aproximadamente 40 \mum a aproximadamente 250 \mum.
25. El procedimiento de la reivindicación 21, en el que dicha matriz capilar tiene un volumen hueco de menos de aproximadamente 60%/cm^{3}.
26. El procedimiento de la reivindicación 20, en el que dicha matriz capilar comprende un plástico.
27. El procedimiento de la reivindicación 26, en el que dicha matriz capilar comprende un plástico seleccionado del grupo constituido por un polietileno de alta densidad (HDPE), un polietileno de peso molecular ultra elevado (UHMW), un polipropileno (PP), un fluoruro de polivinilideno (PVDF), un politetrafluoroetileno (PTFE), un nailon 6 (N6) y una polietersulfona (PES).
28. El procedimiento de la reivindicación 26, en el que dicho plástico es hidrófilo o está tratado para que sea hidrófilo.
29. El procedimiento de la reivindicación 20, en el que dicha matriz capilar, cuando entra en contacto con una mucosa oral absorbe fluido oral de dicha cavidad oral y libera dicho fluido oral en dicha zona de recepción de dicha tira de cromatografía de flujo lateral en menos de aproximadamente 1 minuto.
30. El procedimiento de la reivindicación 29, en el que dicha matriz capilar, cuando entra en contacto con una mucosa oral absorbe fluido oral de dicha cavidad oral y libera de aproximadamente 100 \mul a aproximadamente 200 \mul de dicho fluido oral en dicha tira de cromatografía de flujo lateral en menos de aproximadamente 1 minuto.
31. El procedimiento de la reivindicación 29, en el que dicha matriz capilar, cuando entra en contacto con una mucosa oral absorbe fluido oral de dicha cavidad oral y libera dicho fluido oral en dicha zona de recepción de dicha tira de cromatografía de flujo lateral en menos de aproximadamente 30 segundos.
32. El procedimiento de la reivindicación 29, en el que dicha matriz capilar es saturada con fluido oral en menos de aproximadamente 1 minuto.
33. El procedimiento de la reivindicación 20, en el que dicha matriz capilar es saturada por menos de aproximadamente 500 \mul.
34. El procedimiento de la reivindicación 20, en el que dicha matriz capilar libera dicho fluido oral en dicha zona de recepción de dicha tira de cromatografía de flujo lateral sin la compresión de dicha matriz capilar.
35. El procedimiento de la reivindicación 34, en el que se libera suficiente fluido oral como para saturar dicha zona de recepción.
36. El procedimiento de la reivindicación 20, en el que dicha tira de bloqueo comprende un tampón.
37. El procedimiento de la reivindicación 20, en el que dicha tira de bloqueo evita el reflujo de los reactivos desde dicha tira de cromatografía de flujo lateral hasta dicha matriz capilar.
38. El procedimiento de la reivindicación 20, en el que dicho aparato comprende además:
una carcasa que tiene una cavidad, en la que dicha tira de cromatografía de flujo lateral se extiende por el interior de la cavidad a lo largo de la carcasa hasta una zona de inspección sobre la carcasa; y
al menos una zona de inspección desde un exterior de la carcasa hasta la tira de cromatografía lateral que permita la inspección visual de los reactivos en los puntos seleccionados situados sobre la tira cromatográfica lateral.
39. El procedimiento de la reivindicación 38, en el que dicha carcasa actúa como un mango para introducir dicha matriz capilar en dicha cavidad oral.
40. Un equipo para la detección de un analito en un fluido oral, comprendiendo dicho equipo:
el aparato de la reivindicación 1 para la recolección y la cromatografía de flujo lateral de un fluido oral; y
materiales informativos para dicho aparato.
41. El aparato de la reivindicación 1, que comprende además:
una carcasa;
una cavidad en la carcasa, en la que la tira de cromatografía lateral se extiende en la cavidad desde la cavidad a lo largo de la carcasa hasta una zona de inspección sobre la carcasa, teniendo la tira de cromatografía lateral reactivos para unirse a analitos de prueba;
al menos una zona de inspección desde un exterior de la carcasa hasta la tira cromatográfica lateral para permitir la inspección visual de los reactivos en los puntos seleccionados sobre la tira cromatográfica lateral;
en el que la matriz capilar se comunica desde la carcasa hasta la cavidad oral por un extremo y tiene comunicación con la tira cromatográfica lateral por el otro extremo, y en el que la matriz capilar es hidrófila.
42. El aparato de la reivindicación 41 que comprende además:
una matriz capilar hidrófila que define una matriz de canales de un material que tiene partículas esféricas.
43. El aparato de la reivindicación 41 que comprende además:
una matriz capilar hidrófila que define una matriz de canales de un material seleccionado del grupo que incluye polímeros plásticos y poliestireno.
44. El aparato de la reivindicación 41, en el que la matriz capilar hidrófila no aumenta su volumen durante el transporte del fluido oral.
45. Un procedimiento de transportar analitos de prueba en fluido oral desde una cavidad oral hasta una tira cromatográfica lateral que comprende las etapas de:
proporcionar una tira cromatográfica lateral;
proporcionar una carcasa con una cavidad en la carcasa;
proporcionar una tira cromatográfica lateral que se extiende por el interior de la cavidad a lo largo de la carcasa hasta una zona de inspección sobre la carcasa;
proporcionar una matriz capilar hidrófila que se comunica desde la carcasa con la cavidad oral por un extremo y que tiene comunicación con la tira cromatográfica lateral por el otro extremo;
proporcionar una tira de bloqueo sustancialmente planar entre la matriz capilar y la tira cromatográfica de flujo lateral;
comunicar la matriz capilar hidrófila por un extremo con la boca de la persona por se analizada; y
observar la tira cromatográfica lateral para la inspección de los reactivos en los puntos seleccionados sobre la tira cromatográfica lateral.
46. Un procedimiento de transporte de fluido acuoso desde la cavidad oral hasta una tira cromatográfica lateral según la reivindicación 45 y que comprende la etapa adicional de:
proporcionar al menos una zona de control desde el exterior de la carcasa hasta la tira cromatográfica lateral para indicar la presencia de un mínimo de fluido por ser muestreado recibido desde el lecho corto absorbente a la tira cromatográfica lateral.
47. Un procedimiento de transporte de fluido acuoso desde la cavidad oral hasta una tira cromatográfica lateral según la reivindicación 45 y que comprende la etapa adicional de:
matriz capilar hidrófila que define una matriz de canales de un material que tiene partículas esféricas.
48. Un procedimiento de transporte de fluido acuoso desde la cavidad oral hasta una tira cromatográfica lateral según la reivindicación 45 y que comprende la etapa adicional de:
matriz capilar hidrófila que define una matriz de canales de un material seleccionado del grupo que incluye polímero plástico y poliestireno.
49. Un procedimiento de transporte de fluido acuoso desde la cavidad oral hasta una tira cromatográfica lateral según la reivindicación 45 y que comprende la etapa adicional de:
la matriz capilar hidrófila proporcionada no aumenta su volumen durante el transporte del fluido acuoso.
50. El aparato de la reivindicación 1, que comprende además una tira de conjugado colocada entre dicha matriz capilar y dicha tira cromatográfica de flujo lateral.
51. El aparato de la reivindicación 50, en el que los reactivos cromatográficos están dispuestos en dicha tira de conjugado.
52. El aparato de la reivindicación 1, en el que dicha tira de bloqueo comprende un detergente.
53. El aparato de la reivindicación 1, en el que dicha tira de bloqueo comprende un reactivo de bloqueo.
54. El aparato de la reivindicación 53, en el que dicha tira de bloqueo se selecciona del grupo constituido por albúmina de suero bovino (ASB), desoxicolato y n-lauroilsarcosina.
55. El procedimiento de la reivindicación 20, en el que dicha tira de bloqueo comprende un detergente.
56. El procedimiento de la reivindicación 20, en el que dicha tira de bloqueo comprende un reactivo de bloqueo.
57. El procedimiento de la reivindicación 56, en el que dichos reactivos de bloqueo se seleccionan del grupo constituido por albúmina de suero bovino (ASB), desoxicolato y n-lauroilsarcosina.
58. El procedimiento de la reivindicación 45, en el que dicha tira de bloqueo comprende un detergente.
59. El procedimiento de la reivindicación 45, en el que dicha tira de bloqueo comprende un reactivo de bloqueo.
60. El procedimiento de la reivindicación 59, en el que dicho reactivo de bloqueo se seleccionan del grupo constituido por albúmina de suero bovino (ASB), desoxicolato y n-lauroilsarcosina.
61. El aparato de la reivindicación 1, en el que dicha tira cromatográfica de flujo lateral contiene al menos un reactivo.
62. El aparato de la reivindicación 61, en el que dicho reactivo es una etiqueta detectable.
63. El aparato de la reivindicación 62, en el que dicha etiqueta detectable se selecciona del grupo constituido por: perlas magnéticas, tintes fluorescentes, enzimas y etiquetas colorimétricas.
64. El aparato de la reivindicación 63, en el que dichos tintes fluorescentes son seleccionados del grupo constituido por: isotiocianato de fluoresceína, rojo texas, rodamina, proteína verde fluorescente.
65. El aparato de la reivindicación 63, en el que una de dichas etiquetas colorimétricas es oro coloidal.
66. El aparato de la reivindicación 20, en el que dichos analitos son anticuerpos seleccionados del grupo constituido por: anticuerpos del VIH, anticuerpos del VLTH, anticuerpos de Helicobacter pylori, anticuerpos de la hepatitis, anticuerpos de las paperas, anticuerpos de la rubéola, cotinina, cocaína, benzoilecgonina, benzodizazpina, tetrahidrocanabinol, nicotina, teofilina de etanol, fenitoína, acetaminofén, litio, diazepam, nortriptilina, secobarbital, fenobarbitol, teofillina, testosterona, estradiol, 17-hidroxiprogesterona, progesterona, tirosina, hormona estimulante del tiroides, hormona estimulante de los folículos, hormona luteinizante, factor de crecimiento transformante de tipo alfa, factor de crecimiento epidérmico, factor de crecimiento de tipo insulina I y II, factor de inhibición de la liberación de hormonas de crecimiento, IgA, glucosa, colesterol, cafeína y globulina de unión a corticosteroides.
67. El aparato de la reivindicación 41, en el que al menos uno de dichos reactivos es una etiqueta detectable.
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68. El aparato de la reivindicación 67, en el que dicha etiqueta detectable se selecciona del grupo constituido por: perlas magnéticas, tintes fluorescentes, enzimas y etiquetas colorimétricas.
69. El aparato de la reivindicación 68, en el que dichos tintes fluorescentes son seleccionados del grupo constituido por: isotiocianato de fluoresceína, rojo texas, rodamina, proteína verde fluorescente.
70. El aparato de la reivindicación 68, en el que una de dichas etiquetas colorimétricas es oro coloidal.
71. El aparato de la reivindicación 41, en el que dichos analitos son anticuerpos seleccionados del grupo constituido por: anticuerpos del VIH, anticuerpos del VLTH, anticuerpos de Helicobacter pylori, anticuerpos de la hepatitis, anticuerpos de las paperas, anticuerpos de la rubéola, cotinina, cocaína, benzoilecgonina, benzodizazpina, tetrahidrocanabinol, nicotina, teofilina de etanol, fenitoína, acetaminofén, litio, diazepam, nortriptilina, secobarbital, fenobarbitol, teofillina, testosterona, estradiol, 17-hidroxiprogesterona, progesterona, tirosina, hormona estimulante del tiroides, hormona estimulante de los folículos, hormona luteinizante, factor de crecimiento transformante de tipo alfa, factor de crecimiento epidérmico, factor de crecimiento de tipo insulina I y II, factor de inhibición de la liberación de hormonas de crecimiento, IgA, glucosa, colesterol, cafeína y globulina de unión a corticosteroides.
72. Un dispositivo para recolectar y analizar fluidos, que comprende:
una carcasa que tiene un extremo de recepción de fluidos y una parte de análisis;
una tira de análisis por flujo lateral sustancialmente contenida en la parte de análisis, conteniendo la tira de análisis al menos un reactivo que es usado para detectar una entre la presencia y la ausencia de al menos un analito en un fluido; y
una tira de recolección para transportar el fluido desde una fuente de fluido hasta la tira de análisis, incluyendo la tira de recolección:
un primer extremo estrecho contenido en la carcasa y en comunicación fluida con la tira de análisis;
un segundo extremo agrandado que sobresale del extremo receptor de fluidos; y
una tira de bloqueo acoplada entre y en comunicación fluida con la tira de análisis de flujo lateral y la tira de recolección.
73. El dispositivo de la reivindicación 72, en el que la tira de recolección comprende una matriz capilar adaptada para una absorción rápida de fluido procedente de una fuente de fluido a la tira de análisis.
74. El dispositivo de la reivindicación 72, en el que la fuente de fluido es una cavidad oral.
75. El dispositivo de la reivindicación 72, en el que el segundo extremo es uno en forma de paleta y tiene una forma sustancialmente bulbosa.
76. Un dispositivo para el análisis de fluido oral, que comprende:
una parte de análisis que alberga una tira de análisis de flujo lateral, conteniendo la tira de análisis al menos un reactivo que es usado para detectar una entre la presencia y la ausencia de al menos un analito en un fluido; y
una parte de cuello que se extiende desde la parte de análisis, formando la parte de cuello un canal para la administración de fluido en la tira de análisis, estando el canal definido por una primera parte estrecha proximal a la parte de análisis y una segunda parte que incluye una abertura para recibir el fluido oral, en la que la segunda parte incluye una anchura del canal que es sustancialmente mayor que la anchura del canal en el extremo estrecho;
una tira de recolección en comunicación fluida con la tira de análisis lateral, teniendo la tira de recolección una primera parte dispuesta en el canal y una segunda parte que sobresale hacia fuera desde la abertura de la parte de cuello; y
una tira de bloqueo acoplada entre y en comunicación fluida con la tira de análisis de flujo lateral y la tira de recolección.
77. El dispositivo de la reivindicación 76, en el que la segunda parte del miembro absorbente tiene forma de paleta.
78. El dispositivo de la reivindicación 76, en el que la anchura de la parte de cuello se afila desde la anchura de la abertura hasta la anchura del extremo estrecho.
79. El dispositivo de la reivindicación 72, en el que la tira de análisis es una tira de inmunocromatografía.
80. El dispositivo de la reivindicación 72, que comprende además un indicador de la idoneidad de la muestra.
81. El dispositivo de la reivindicación 72, en el que el reactivo es una pareja de unión inmunoespecífica que lleva una etiqueta detectable.
82. El dispositivo de la reivindicación 76, en el que el reactivo es una pareja de unión marcada enzimáticamente.
83. El dispositivo de la reivindicación 72, en el que el reactivo comprende uno entre un antígeno y un anticuerpo.
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