ES2255246T3

ES2255246T3 - Nanoparticulas que comprenden poli(cianoacrilato de isobutilo) y ciclodextrinas.

Info

Publication number: ES2255246T3
Application number: ES99906300T
Authority: ES
Inventors: Airton Monza Da Silveira; Gilles Ponchel; Dominique Duchene; Patrick Couvreur; Francis Puisieux
Original assignee: Bioalliance Pharma SA
Current assignee: Bioalliance Pharma SA
Priority date: 1998-02-27
Filing date: 1999-02-24
Publication date: 2006-06-16
Anticipated expiration: 2019-02-24
Also published as: DK1056477T3; FR2775435B1; IL137882A0; EP1056477B1; WO1999043359A1; FR2775435A1; ATE311906T1; DE69928776T2; IL137882A; AU2628799A; JP2002504526A; CA2320928C; AU753573B2; CA2320928A1; DE69928776D1; EP1056477A1; US6881421B1; JP4651192B2

Abstract

Nanopartículas caracterizadas porque comprenden al menos un polímero, al menos un principio activo y al menos un oligosacárido cíclico.

Description

Nanopartículas que comprenden poli(cianoacrilato de isobutilo) y ciclodextrinas.

La invención se refiere a la liberación de principios activos utilizados particularmente en el campo de los medicamentos con un fin preventivo, curativo o diagnóstico e igualmente a la mejora de su índice terapéutico (mejora de la relación beneficios/riesgos).

Tiene por objeto más particularmente nuevas nanopartículas que comprenden al menos un principio activo.

La puesta a punto de nuevos sistemas de liberación de principios activos tiene como primer objeto la liberación controlada de un agente activo, particularmente farmacológico, en su lugar de acción a una velocidad y a una posología terapéuticamente óptimas (1). La mejora del índice terapéutico puede obtenerse por modulación de la distribución de principio activo en el organismo. La asociación del principio activo al sistema de liberación permite particularmente su liberación específicamente en el lugar de acción o su liberación controlada después de la delimitación del lugar de acción. La reducción de la cantidad de principio activo en los compartimentos en los que no se desea su presencia permite aumentar la eficacia de dicho principio activo, reducir sus efectos secundarios tóxicos, incluso modificar o restaurar su actividad.

Los sistemas coloidales de liberación de los principios activos comprenden lisosomas, micro emulsiones, las nanocápsulas, las nanosferas, las micro partículas y las nanopartículas. Las nanopartículas presentan ventajas de delimitación, de modulación, de distribución y de flexibilidad de formulación y tienen una estructura polímero que puede concebirse y realizarse de forma adaptada al objetivo perseguido. Se han revelado especialmente prometedoras para obtener un mejor índice terapéutico en el sentido definido antes, en razón de su aptitud para asegurar una liberación controlada, una liberación específica en el lugar de la acción o una liberación delimitada, permitiendo a la vez un aumento de la eficacia y una reducción de los efectos secundarios tóxicos al nivel de los otros órganos.

Este tipo de administración necesita la utilización de polímeros biodegradables. Entre ellos, los poli(cianoacrilatos de alquilo) son particularmente interesantes porque su bioerosión se observa rápidamente con respecto a otros polímeros biodegradables y se desarrolla durante periodos compatibles con las aplicaciones terapéuticas o diagnósticas.

A pesar de estas interesantes características, la capacidad de carga de principios activos de las nanopartículas de poli(cianoacrilatos de alquilo), expresada como cantidad de principio activo asociada a una unidad de masa de polímero, está a menudo limitada, particularmente cuando el principio activo es poco soluble en agua porque la fabricación de las nanopartículas utiliza técnicas de polimerización en medio acuoso. Esta limitación importante de la carga de principio activo se observa en particular con los principios activos hidrófobos, anfífilos y/o insolubles.

La capacidad relativamente débil de las nanopartículas convencionales para transportar una cantidad adecuada de principios activos del lugar de administración al lugar delimitado en el organismo tiene el riesgo de conducir a la necesidad de administrar cantidades considerables de polímeros.

Los poli(cianoacrilatos de alquilo) se utilizan para producir nanopartículas en tanto que vectores de principios activos (3). Sin embargo, debido a las razones antes evocadas, las débiles cargas obtenidas, particularmente con los principios activos hidrófobos, anfífilos y/o insolubles en agua limitan su uso terapéutico.

Se ha descubierto ahora de forma sorprendente que era posible aumentar el campo de utilización de los polímeros, en particular de los poli(cianoacrilatos de alquilo), asociando uno o varios compuestos aptos para complejar principios activos y así obtener nuevas nanopartículas que posean propiedades originales.

Por consiguiente, la invención tiene por objeto las nanopartículas que contengan al menos un principio activo, caracterizadas porque comprenden la asociación de al menos un polímero, preferentemente un poli(cianoacrilato de alquilo) en el que el grupo alquilo, lineal o ramificado, comprende de 1 a 12 átomos de carbono y de al menos un compuesto apto para completar dicho principio activo.

El compuesto apto para complejar el principio activo según la presente invención se elige preferentemente entre los oligosacáridos cíclicos, particularmente entre las ciclodextrinas que pueden ser neutras o con carga, nativas (ciclodextrinas \alpha, \beta, \gamma, \delta, \varepsilon) ramificadas o polimerizadas o incluso modificadas químicamente, por ejemplo por sustitución de uno o varios hidroxipropilos por agrupamientos tales como alquilos, arilos, arilalquilos, glicosídicos, o por eterificación, esterificación con alcoholes o ácidos alifáticos. De entre los anteriores agrupamientos se prefiere particularmente los elegidos entre los agrupamientos hidroxipropilo, metilo, sulfobutileter.

De forma inesperada, la presencia de un compuesto apto para complejar el principio activo en la asociación según la invención permite que el principio activo, incluso si es hidrófobo, anfífilo y/o insoluble, penetre en el interior de la estructura polimérica resultante de la asociación del o de los polímeros y del o de dichos compuestos aptos para complejar el principio activo, y esto con un rendimiento de encapsulación en esta estructura significativamente aumentado con respecto a la técnica anterior, rendimiento que parece ligado al equilibrio entre, por una parte, la solubilización resultante de la utilización de compuestos aptos para complejar el principio activo y, por otra parte, la afinidad del principio activo para la nueva estructura polimérica, lo que constituye un progreso importante sobre el plano terapéutico e industrial. Por otra parte, las nanopartículas estabilizan igualmente el complejo formado entre dicho(s) compuesto(s) y dicho(s) polímero(s) en razón de la naturaleza sólida de las nanopartículas.

Gracias a la invención, ahora es posible cargar nanopartículas, por ejemplo de tipo poli(cianoacrilato de alquilo) no solamente con los principios activos hidrófilos sino igualmente con los principios activos hidrófobos, anfífilos y/o insolubles.

La asociación de un polímero y de un compuesto apto para complejar el principio activo permite la creación de nuevos lugares de fijación para el principio activo que no aparecen con los polímeros utilizados solos. La aparición de estos nuevos lugares, y en particular una cavidad hidrófoba con los compuestos aptos para complejar los principios activos, permite aumentar la carga de principio activo manteniendo la capacidad de liberación controlada y retardada de lo que es inexistente cuando se utilizan solo los compuestos aptos para complejar.

Se ha descrito en la técnica anterior la preparación de polímeros a base a base de cianoacrilato, en los que los alquilcianoacrilatos se asocian al dextrano a lo largo de la preparación (Egea, M. A. et al., Fármaco, 1994, 49, 211-17). Ahora bien, en este método el dextrano se utiliza normalmente como agente estabilizador y no permite complejar una molécula activa. Además, el dextrano es un polisacárido lineal de masa molecular elevada y por consiguiente es fundamentalmente diferente de las ciclodextrinas que presentan un débil peso molecular y que son capaces de complejar otras moléculas. Así, las nanopartículas según la presente invención presentan propiedades originales:

- modulación de su tamaño,

- encapsulación aumentada de moléculas activas, particularmente de moléculas hidrófobas, anfífilas y/o insolubles,

- ausencia eventual de estabilizador, como dextrano.

Se ha propuesto igualmente en la Patente de EE.UU. nº 5.641.515, encapsular la insulina con un polímero de policianoacrilato. Esta encapsulación se basa en la formación de enlaces covalentes entre la insulina y el polímero lo cual es diferente de la complejación en la base de las nanopartículas según la presente invención. En efecto, las nanopartículas según la invención se basan en la capacidad de una molécula de un principio activo de asociarse con una o varias moléculas de ciclodextrina para la creación de enlaces químicos de escasa energía, por tanto no covalentes, con el fin de formar un complejo de inclusión. La existencia de este complejo resulta de la formación de un equilibrio entre, por una parte, las formas libres del principio activo y de la ciclodextrina y, por otra parte del complejo de inclusión. Está cuantitativamente caracterizado por su constante de estabilidad. En el marco de la presente invención, el término complejación describe exclusivamente este último fenómeno. Así, la complejación del principio activo se pone en marcha no solamente a lo largo de la preparación de nanopartículas, sino igualmente en las nanopartículas preparadas, en las que representa un medio de asociar una cantidad más importante de principio activo.

Conviene, en efecto, recordar que de forma general la asociación de un principio activo a nanopartículas puede resultar de una simple dispersión del principio activo bajo forma de cristales en el polímero constitutivo de las partículas, de una solubilidad del principio activo en el polímero, de una absorción que haga intervenir enlaces químicos secundarios (escasa energía), o de un enlace covalente (fuerte energía) con el polímero constitutivo de partículas.

Con respecto a esto, es útil indicar que la preparación de nanopartículas necesita la polimerización de monómeros de cianoacrilato de alquilos dispersados en fase acuosa. La síntesis del poli(cianoacrilato de alquilo) permite entonces la formación de nanopartículas. Generalmente, esta etapa se realiza en presencia de los principios activos que encapsular. Puede entonces tener como consecuencia, en ciertos casos, el desarrollo no deseado de enlaces químicos covalentes entre el principio activo y el polímero formado. Este fenómeno se ha descrito para los péptidos (Grangier, J.I., J; Controlled Rel., 15, 3-13, 1991) o para otras moléculas (vinblastine, V. Guise et al., Pharm. Res., 7, 736-741,1990).

Esta invención permite paliar este inconveniente puesto que al enmascarar los agrupamientos químicos potencialmente reactivos, la complejación del principio activo a lo largo de la preparación de las nanopartículas de la invención permite proteger dicho principio activo frente a las reacciones químicas necesarias para la formación de la partícula. Así, el principio activo se asocia ventajosamente de forma no covalente a la partícula.

Además, la asociación del principio activo a las nanopartículas se efectúa generalmente en un medio acuoso ácido. Ahora bien, para ciertos principios activos inestables en estas condiciones, resulta un riesgo de degradación química susceptible de conducir a la encapsulación no deseada de derivados de hidrólisis y, además, perjudicial para la obtención de una tasa elevada de encapsulación del principio activo. En cambio, en esta invención, la complejación de los principios activos a las ciclodextrinas permite paliar estos inconvenientes porque permite proteger los principios activos frente al medio reactivo exterior.

Como principios activos susceptibles de entrar en la composición de las nanopartículas de la invención, se pueden citar los anticancerosos, los antisentido, los antivirales, los antibióticos, las proteínas, polipéptidos, polinucleótidos, nucleótidos antisentido, las sustancias vacunantes, los inmunomoduladores, los esteroides, los analgésicos, los antimorfínicos, los antifúngicos y antiparasitarios. Entre estos, la invención prefiere particularmente el taxol o uno de sus derivados, la doxorubicina o uno de sus derivados, los derivados del platino.

El principio activo está presente en general en una cantidad de 0,01 a 300 mg/g de nanopartículas.

La proporción de compuesto apto para complejar el principio activo es en general de 0,1 a 70% en peso.

La proporción de principio activo y la del compuesto apto para complejar son independientes una de la otra.

La invención se refiere también a las composiciones farmacéuticas o de diagnóstico que comprenden las nanopartículas de la invención y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable y compatible.

La invención tiene igualmente por objeto la preparación de las nanopartículas descritas anteriormente.

Un primer procedimiento de preparación de las nanopartículas a base de un polímero y más particularmente de poli(cianoacrilato de alquilo) definidas anteriormente, se caracteriza porque comprende las etapas que consisten en:

a) preparar un complejo de al menos un principio activo con al menos un compuesto apto para complejarle, en solución en un disolvente acuoso o no acuoso,

b) añadir progresivamente al menos un monómero de polímero, y más particularmente cianoacrilato de alquilo monómero en la solución obtenida en la etapa (a), y

c) efectuar una polimerización preferentemente aniónica pero igualmente inductible por otros agentes particularmente fotoquímicos de este monómero, eventualmente en presencia de uno o varios agentes tensioactivos y/o estabilizador.

Un segundo procedimiento de preparación de las nanopartículas según la invención, que es una alternativa al primer procedimiento, consiste en preparar en primer lugar nanopartículas a base de un polímero y más particularmente de poli(cianoacrilato de alquilo) y de un compuesto apto para complejar un principio activo, llamadas también "nanopartículas blancas", después se asocian dichas nanopartículas blancas al principio activo. Más particularmente, este procedimiento comprende las etapas que consisten en:

a) preparar una solución de al menos un compuesto apto para complejar un principio activo en un disolvente acuoso o no acuoso,

b) añadir progresivamente al menos un monómero del polímero y más particularmente el cianoacrilato de alquilo monómero en la solución de la etapa (a), y

c) efectuar una polimerización preferentemente aniónica pero igualmente inductible por otros agentes particularmente fotoquímicos de este monómero, eventualmente en presencia de uno o varios agentes tensioactivos y/o estabilizante,

d) después de un control y de una purificación eventual de las nanopartículas obtenidas en la etapa (c), incubar dichas partículas en una solución del principio activo en un disolvente acuoso o no acuoso.

Como en el primer procedimiento, la asociación del principio activo a las nanopartículas blancas dependerá de la cantidad de ciclodextrinas asociada a las nanopartículas. Este segundo procedimiento presenta dos ventajas:

- permite evitar el tener que efectuar las etapas de purificación sobre las nanopartículas cargadas de principio activo, pudiendo conducir esto a pérdidas de principio activo,

- permite realizar un sistema susceptible de cargarse extemporáneamente en principio activo, por ejemplo en el caso en el que un principio activo sea muy inestable en solución.

La invención se refiere igualmente a las nanopartículas blancas, es decir, no cargadas, obtenidas después de las etapas (a) a (c) del segundo procedimiento antes descrito. Además estas partículas blancas presentan un interés terapéutico debido a la actividad de las ciclodextrinas particularmente en el campo del cáncer (Grosse, P.Y. et al, British Journal of Cancer, 78 : 9, 1165-1169, 1998).

En las etapas (a) y (b) del primer procedimiento de la invención, el disolvente se elige ventajosamente de forma que, manteniendo las condiciones favorables a la polimerización de los polímeros y más particularmente de los poli(cianoacrilato de alquilo), la solubilidad del principio activo y del compuesto apto para complejarlo sea máxima en el medio definido por este disolvente. Ventajosamente dicho disolvente se elige preferentemente entre los disolventes acuosos o hidroalcohólicos. El disolvente se elige según las etapas (a), (b) y (d) del segundo procedimiento de la invención.

La presencia de una agente tensioactivo o de un agente estabilizante es necesaria para preparar las nanopartículas de la técnica anterior. Como muestran los siguientes ejemplos, dichos agentes ya no son necesarios en el marco de la presente invención. En efecto, el compuesto apto para complejar el principio activo, como las ciclodextrinas, tiene paradójicamente un efecto estabilizador suficiente para que el agente tensioactivo habitualmente utilizado esté ausente. Esto representa, en el plano industrial, un ahorro notable. Igualmente, se observa que el poli(cianoacrilato de alquilo) estabiliza el complejo formado del principio activo y del compuesto apto para complejar el principio activo.

Sin embargo, si el procedimiento de la invención comprende la utilización de un agente estabilizador y/o tensioactivo se prefiere un dextrano o un poloxámero.

Según una forma de realización preferida de la invención, las potencialidades de las ciclodextrinas frente a los principios activos permiten añadir nuevas propiedades a las partículas. En efecto, la presencia de las ciclodextrinas en las partículas permite estabilizar los principios activos que serían inestables en solución o incluso enmascarar ciertas características desfavorables de los principios activos como una acción irritante.

Los procedimientos de fabricación de las nanopartículas conocidos hasta ahora presentan lagunas en lo que concierne a las posibilidades de ajuste del tamaño de las nanopartículas. El procedimiento de la invención permite de forma inesperada y notable ajustar el tamaño de las nanopartículas directamente a lo largo de su fabricación sin ninguna etapa particular suplementaria.

Como demuestran los siguientes ejemplos, el tamaño de las nanopartículas según la invención está relacionado esencialmente con la concentración de compuesto apta para complejar el principio activo. En el caso de las ciclodextrinas, se puede también variar este tamaño en una gama muy amplia de 300 a menos de 50 nm. La invención permite, por tanto, con ayuda de ensayos preliminares simples, ajustar el tamaño de las nanopartículas en las composiciones, particularmente farmacéuticas, de la invención en función del efecto particular buscado. La elección del tamaño a priori permite, si se desea, eliminar ciertas barreras físicas que se oponen a la distribución de las nanopartículas en el organismo o evitar una captura de las nanopartículas de la composición por el sistema retículo-endotelial. Permite también una nueva delimitación de órganos.

En consecuencia en la etapa (a) del procedimiento de la invención la proporción de compuesto apta para complejar el principio activo es en general de 0,1 a 70% en peso con respecto a dicho principio activo. En efecto, como se indicó anteriormente, la elección de la concentración del compuesto apto para complejar el principio activo permite variar el tamaño de las nanopartículas obtenidas por el procedimiento de la invención. Se obtienen así nanopartículas de tamaño comprendido entre 40 y 300 nm.

Los estudios relativos a la liberación del compuesto apto para complejar el principio activo por una parte y el principio activo por otra, muestran que el perfil de liberación del compuesto apto para complejar el principio es muy rápido y que la liberación está próxima al 100%, mientras que la liberación del principio activo comprende una primera fase rápida, seguida de una segunda fase más lenta debida a la bioerosión, clásicamente descrita para los poli(cianoacrilatos).

La utilización en los ensayos de liberación del principio activo, de esterasas que degradan las nanopartículas, muestra que el principio activo está contenido en gran parte en el seno de la red matricial nanoparticular, lo que es importante desde el punto de vista de la actividad esperada (4).

Los diferentes ensayos efectuados sobre una gama de esteroides, del más hidrófilo(hidrocortisona) al más hidrófobo (progesterona) han mostrado que puede haber principios activos muy variados en las nanopartículas según la invención a concentraciones elevadas, dependientes de sus características físico químicas tales como particularmente su grado de hidrofobicidad.

Así, la progesterona utilizada como modelo en los siguientes ejemplos tiene una solubilidad en el agua muy débil (0,01 mg/ml) que, en los procesos clásicos de polimerización en emulsión en agua, no permite más que obtener una carga muy débil de principio activo, desprovista de interés práctico. Así, esta carga es débil cuando se utilizan las técnicas de preparación de la técnica anterior. De forma particularmente sorprendente e interesante, esta carga es más de 50 veces superior en las nanopartículas según la invención. La invención permite por tanto acceder a principios activos hidrófobos, anfífilos y/o insolubles y por tanto una renovación de su índice terapéutico.

La invención tiene por objeto la utilización de los procedimientos descritos antes para la fabricar un medicamento de efecto determinado y de índice terapéutico mejorado.

Otras ventajas y características de la invención se mostrarán en la descripción de los ejemplos siguientes que hacen referencia a los dibujos anejos en los que:

La figura 1 representa las variaciones del tamaño de las partículas o granulometría y del potencial zeta (media de tres ensayos \pm SEM) de nanopartículas de poli(cianoacrilato de isobutilo) (PIBCA) preparadas en presencia de 2-hidroxipropil-\beta-ciclodextrina (HP\betaCD), en función de la concentración inicial en HP\betaCD.

La figura 2 representa las variaciones de la granulometría y del potencial zeta (media de tres ensayos \pm SEM) de nanopartículas de PIBCA preparadas en presencia del complejo progesterona: 2-hidroxipropil-\beta-ciclodextrina (HP\betaCD) en función de la concentración inicial de HP\betaCD.

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La figura 3 representa las variaciones del contenido de HP\betaCD (media de tres ensayos \pm SEM) de nanopartículas de PIBCA preparadas en presencia HP\betaCD, en función de la concentración inicial de HP\betaCD.

La figura 4 representa las variaciones del contenido de HP\betaCD (media de tres ensayos \pm SEM) de nanopartículas de PIBCA preparadas en presencia del complejo progesterona: HP\betaCD, en función de la concentración inicial de HP\betaCD.

La figura 5 representa las variaciones del contenido de progesterona (media de tres ensayos \pm SEM) de nanopartículas de PIBCA/HP\betaCD, en función de la concentración inicial de HP\betaCD.

La figura 6 muestra la influencia del tamaño de las partículas sobre la velocidad de liberación de la progesterona en un tampón de borato alcalino (ABB) (pH 8,4), a partir de nanopartículas de PIBCA/HP\betaCD.

La figura 7 muestra la influencia de la constitución del medio de liberación sobre la velocidad de liberación de la progesterona en un medio ABB (pH 8,4), a partir de nanopartículas de PIBCA/HP\betaCD.

A : ABB:PEG 400 (80:20)

B : ABB:PEG 400 (60:40)

La figura 8 muestra la influencia de la presencia de encimas de tipo esterasa sobre la velocidad de liberación de la progesterona en un medio ABB (pH 8,4), a partir de nanopartículas de PIBCA/HP\betaCD.

A : medio de liberación con esterasa 25 UI

B : medio de liberación con esterasa 100 UI

La figura 9 muestra la velocidad de liberación de la HP\betaCD en un medio ABB a 37ºC.

La figura 10 muestra las curvas de calorimetría por análisis diferencial (DSC) obtenidas a una velocidad de crecimiento de la temperatura de 10ºC/min.

En los ejemplos siguientes el cianoacrilato de isobutilo, la hidrocortisona, la prednisolona y el danazol, la progesterona y las esterasas (19 UI/ml) se han obtenido en Sigma Chemicals (St.Louis, Mo, EUA), la espironolactona, la testosterona, el acetato de megestrol se han obtenido respectivamente en Sophartex, Besin-Iscovexo y Upjohn, las \alpha-, \beta- y \gamma-ciclodextrinas, las 2-hidroxipropil-\alpha, 2-hidroxipropil-\beta- y 2-hidroxipropil-\gamma-ciclodextrinas, cuyos valores de MS medios son respectivamente de 0,9, 0,6 y 0,6, se han obtenido en Wacker Chemie GMBH (Munich, Alemania) y el éter de sulfobutilo y de \beta-ciclodextrina (en adelante SBE\betaCD) ha sido obtenido en CyDex L.C. (Overland Park, Kansas, EUA). El poloxámero 188 (Lutrol F68®) es una donación de BASF (Ludwigshafen, Alemania). Los otros productos químicos y los disolventes son de calidad analítica y HPLC.

Ejemplo 1 Preparación de nanopartículas en presencia de diferentes ciclodextrinas y de poloxámero

Las nanopartículas se preparan por polimerización aniónica (2) de 100 \mul de cianoacrilato de isobutilo en 10 ml de ácido clorhídrico 0,02 M (pH 2,0) que contienen 1% p/v de poloxámero 188 y en presencia de 5 mg/ml de \alpha-, \beta-, \gamma-, 2-hidroxipropil-\alpha-, 2-hidroxipropil-\beta o 2-hidroxipropil-\gamma-ciclodextrina o de sulfobutil éter de \beta-ciclodextrina. La solución de ciclodextrina se agita por medio de un agitador magnético (1000 tr/min) a temperatura ambiente y se añade el monómero gota a gota. Después de agitación durante 6 horas, la suspensión se filtra por medio de un prefiltro de 2,0 \mul (Millex AP 500®) después se vuelve a caracterizar.

Ejemplo 2 Preparación de nanopartículas en presencia de diferentes ciclodextrinas

Las nanopartículas se preparan por polimerización aniónica (2) de 100 \mul de cianoacrilato de isobutilo en 10 ml de ácido clorhídrico 0,01 M (pH 2,0) y en presencia de 5 mg/ml de \alpha-, \beta-, \gamma-, 2-hidroxipropil-\alpha-, 2-hidroxipropil-\beta o 2-hidroxipropil-\gamma-ciclodextrina o de sulfobutil éter de \beta-ciclodextrina. La solución de ciclodextrina se agita por medio de un agitador magnético (1000 tr/min) a temperatura ambiente y se añade el monómero gota a gota. Después de agitación durante 6 horas, la suspensión se filtra por medio de un prefiltro de 2,0 \mul (Millex AP 500®) después se vuelve a caracterizar.

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Ejemplo 3 Preparación de complejos progesterona/hidroxipropil-\beta-ciclodextrinas (HP\betaCD)

Se preparan los complejos progesterona/HP\betaCD mezclando 3,615 g de HP\betaCD con 3,0 g de progesterona en 150 ml de agua bajo agitación por medio de un agitador magnético durante 24 horas a temperatura ambiente. Después de esto se filtra la mezcla (0,45 \mum). La HP\betaCD y la progesterona se dosifican en la solución filtrada antes de ser utilizadas para la preparación de nanopartículas cargadas de progesterona.

Ejemplo 4 Preparación de nanopartículas de poli(cianoacrilato de isobutilo)/HP\betaCD (PIBCA/HP\betaCD) cargadas de progesterona

La solución del complejo progesterona/HP\betaCD obtenido como se describe en el ejemplo 3 se diluye para obtener concentraciones de 2,5, 5,0, 7,5, 10,0, 12,5, 15,0 y 20,0 mg/ml de HP\betaCD en el medio de polimerización. Las nanopartículas se preparan como en el ejemplo 1, en ausencia o en presencia de 1% (p/v) de poloxámero 188.

Ejemplo 5

(Testigo)

Preparación de nanopartículas de poli(cianoacrilato de isobutilo) cargadas de progesterona y desprovistas de HP\betaCD

Se preparan nanopartículas de poli(cianoacrilato de isobutilo) en ausencia de ciclodextrina en el medio de polimerización para servir de testigo. Las nanopartículas cargadas de progesterona se preparan disolviendo el principio activo en ácido clorhídrico diluido (pH 2.0) en presencia de 1% (p/v) de poloxámero 188 (aproximadamente 60 \mug/ml, correspondiente a la solubilidad máxima en este medio). El proceso de polimerización se pone en marcha como se describe el ejemplo 1.

Ejemplo 6 Dosificación de la progesterona y de la HP\betaCD en las nanopartículas obtenidas

Las diferentes suspensiones de las nanopartículas se centrifugan a 82000 g durante 30 a 40 min. a 25ºC (Beckman, L5-65 Ultracentrifuge, rotor de tipo 70,1 Ti) y se ponen en suspensión en 5 ml de agua destilada. Las suspensiones se liofilizan finalmente (Christ HED Freeze Drier, Alemania).

Para dosificar la carga de progesterona en las nanopartículas, se diluyen los productos liofilizados en el acetonitrilo de calidad HPLC y se analizan las soluciones por cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). El sistema de HPLC consiste en una unidad de suministro de disolvente 510 de Waters (Saint-Quentin-en-Yvelines, Francia), un extractor automático de muestras WISP 712, una columna (250 x 4,6 mm) Nova-Pak C18 \mum, un detector de absorbancia 486 que funciona a 245 nm y está en interfaz con un módulo de datos 746. El caudal es de 1,0 ml/min y la fase móvil está formada por agua y acetonitrilo (40:60) siendo la duración de la retención de aproximadamente 12 min. Los resultados se expresan como media de tres dosificaciones.

Para cuantificar la HP\betaCD las nanopartículas se hidrolizan por medio de NaOH 0,2 M durante 12 horas, el pH se ajusta a 7,0 (\pm0,5) y el HP\betaCD se cuantifica por dosificación espectrofotmétrica de la decoloración de soluciones de fenolftaleína en presencia de HP\betaCD. En efecto, la fenolftaleína forma complejos de inclusión estables e incoloros con las ciclodextrinas (CD) (5). Como consecuencia, la intensidad del color de una solución de fenolftaleína en un tampón de borato alcalino disminuye proporcionalmente a la cantidad de CD en solución.

Se preparan soluciones de referencia diluyendo soluciones madre de CD en la solución tampón de borato alcalino de pH 10,0 que contiene 2% de una solución etanólica de fenolftaleína 0,006 M. Las curvas de referencia (\lambda = 550 nm) son lineales para las concentraciones de CD que van de 1 a 100 \mug/ml. Se añaden a las muestras 4 partes de solución tampón que contenga fenolftaleína y se ensayan directamente.

Ejemplo 7 Caracterización de las nanopartículas

La distribución granulométrica, el tamaño medio y la polidispersidad de las nanopartículas se estiman por difusión de la luz láser utilizando un NS Coulter Nanosizer (Coultronics, Margency, Francia). Las muestras se dispersan en el agua MilliQ (resistividad> 18 M\Omega, Millipore, Saint-Quentin-en-Yvelines,Francia). Cada análisis dura 200 s. La temperatura es de 20ºC y el ángulo de análisis es de 90º. El potencial zeta de las partículas en suspensión en el agua MilliQ se determina por velocimetría Doppler con láser (Zetasizer 4, Malvern, Inglaterra).

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Resultados de los ejemplos 1 a 7

Las características de las partículas preparadas en presencia de 5 mg/ml de diferentes ciclodextrinas y 1% de poloxámero 188 (media de 3 preparaciones repetidas \pm SEM) se muestran en la siguiente tabla.

TABLA I

CD	Tamaño	Potencial \xi	Contenido en CD
(5 mg/ml)	(nm) \pm S.D	(mV) \pm S.D	(\mug de CD/mg de nanopartículas)
alfa	228 \pm 69	-34,4 \pm 4,0	ND
beta	369 \pm 7	-24,7 \pm 8,2	360
gamma	286 \pm 9	-22,9 \pm 0,6	240
HPalfa	244 \pm 25	-27,0 \pm 2,2	ND
HPbeta	103 \pm 6	-8,6 \pm 0,9	247
HPgamma	87 \pm 3	-2,6 \pm 2,2	220
SBEbeta	319 \pm 10	-45,4 \pm 2,4	ND
CD = ciclodextrina
HP = hidroxipropil
SBE = éter de sulfobutilo

El tamaño de las partículas, el potencial zeta, el contenido en ciclodextrina y la estabilidad (valores no representados) están condicionados por la naturaleza de la ciclodextrina.

La cantidad de las diferentes ciclodextrinas unidas a las partículas está en la gama de 20 a 35% (p/p) del peso total de las partículas.

Las nanopartículas formuladas con la HP\betaCD son las más interesantes porque presentan una granulometría media inferior a 100 nm y un potencial zeta próximo a cero mV. Además, HP\betaCD presenta una solubilidad muy grande en el medio de polimerización y una excelente tolerabilidad. Permite por otra parte la encapsulación de numerosas sustancias. En consecuencia, los estudios complementarios se han efectuado con la HP\betaCD.

En presencia de HP\betaCD en el medio de polimerización, la adición del agente tensioactivo poloxámero 188 no es esencial para la producción de nanopartículas.

Por una parte, como muestra la Figura 1, el tamaño y el potencial zeta de las partículas no se modifican por la presencia de poloxámero 188.

Por otra parte, la concentración de HP\betaCD influye considerablemente en el tamaño y en el potencial zeta. Un aumento de la concentración de HP\betaCD de 0 a 12,5 mg/ml conduce a una disminución del tamaño de las partículas de 300 nm a menos de 50 nm. Igualmente, el potencial zeta de las partículas disminuye progresivamente de valores fuertemente negativos (-40 mV) a un potencial de superficie próximo a 0 mV. Estas tendencias se mantienen generalmente cuando las nanopartículas se preparan en presencia de progesterona, como muestra la Figura 2. Con respecto a las partículas desprovistas de progesterona, el potencial zeta es ligeramente negativo en la gama de concentración de HP\betaCD en estudio. Además, en ausencia de poloxámero 188, se observa un aumento rápido en el tamaño de las nanopartículas hasta 450 nm, seguido de una disminución rápida cuando la concentración de HP\betaCD es superior a 10 mg/ml. Este fenómeno se suprime en presencia de poloxámero 188. La adición de HP\betaCD en el medio de polimerización conduce a la asociación de grandes cantidades de HP\betaCD a las nanopartículas como muestra la Figura 3. La cantidad de HP\betaCD asociada a las partículas aumenta continuadamente y puede alcanzar el 60% en peso de las partículas. Cuando las masas iniciales de HP\betaCD y de cianoacrilato de isobutilo en el medio de polimerización son iguales, la cantidad de HP\betaCD asociada a las partículas es de aproximadamente 35%. Además, la asociación de HP\betaCD a las partículas no está influenciada por la presencia de poloxámero 188. El contenido de HP\betaCD de las nanopartículas no se ve afectado considerablemente por la presencia de progesterona en el medio de polimerización, como muestra la Figura 4. La carga de progesterona de las partículas aumenta de forma espectacular cuando las partículas se preparan en presencia de HP\betaCD. La carga de progesterona, en ausencia de HP\betaCD es de 0,79 \mug/mg de partículas y aumenta progresivamente hasta multiplicarse por 50, lo que corresponde a 45 \mug/mg de partículas, como muestra la Figura 5. No hay diferencias significativas entre las partículas preparadas con o sin poloxámero 188.

Las características de las nanopartículas utilizadas en los ejemplos 8 a 10 siguientes se describen en las tablas a continuación.

TABLA II

Formulación^{a}	Tamaño	Contenido de	Contenido de
	(nm) \pm SD	HP\betaCD^{b}	principio activo^{c}
2,5	158 \pm 22	64 \pm 5,4	10,9 \pm 3,3
10,0	70 \pm 5	240 \pm 7,6	23,9 \pm 4,4
a = concentración inicial en HP\betaCD en el medio de polimerización (mg/ml)
b = \mug de HP\betaCD por mg de nanopartículas
c = \mug de progesterona por mg de nanopartículas

Ejemplo 8

Liberación de la progesterona in vitro a partir de nanopartículas de PIBCA/HP\betaCD

Una cantidad pesada de nanopartículas liofilizadas (que contienen 1% (p/v) de glucosa) se pone en un frasco que contenga 15 ml de una solución tampón de borato alcalino (ABB) (pH 8,4) o ABB que contenga esterasa (25 y 100 UI) o ABB/poli(etilénglicol) 400 (PEG) a 20 y 40% (v/v). Las muestras se agitan por medio de un agitador magnético a 200 tr/min y 37ºC y se extraen a intervalos predeterminados. Las suspensiones se centrifugan a 82000 g durante 30 minutos a 20ºC y después el contenido en progesterona del sobrenadante se dosifica para todos los medios y el contenido de HP\betaCD para los medios con PEG. El contenido en progesterona se dosifica por HPLC como se describe más arriba, con inyección de 100 \mul para las muestras incubadas en los medios con ABB y 20 \mul para los medios con PEG.

Todos los ensayos se realizan en condiciones tales que la concentración en principio activo en la fase de liberación se mantenga por debajo del 10% de saturación.

Ejemplo 9 Liberación de la HP\betaCD in vitro a partir de nanopartículas de PICBA/HP\betaCD

El estudio de la liberación de la HP\betaCD se efectúa como la de la progesterona en el medio ABB con cuantificación del contenido en CD después de ultracentrifugación, por complejación con la fenolftaleína como se describe más arriba. La concentración de CD a 100% de liberación es de aproximadamente 100 \mug/ml.

Ejemplo 10 Calorimetría por análisis diferencial (DSC)

Los estudios de DSC se efectúan utilizando un calorímetro de análisis diferencial Perkin Elmer DSC-7. La temperatura se calibra utilizando el punto de transición de fusión del indio. Se colocan muestras que pesen aproximadamente 4 mg en cápsulas de aluminio y se calientan de 0 a 250ºC a una velocidad de exploración de 10ºC/min.

Resultados de los ejemplos 8 a 10

La Figura 6 de los dibujos anejos representa el perfil de liberación de la progesterona a partir de nanopartículas combinadas de PIBCA/HP\betaCD en el ABB (pH 8,4). Sobre este gráfico se puede observar una curva de liberación bifásica con una liberación inicial rápida (efecto de explosión) en la primera hora para las dos formulaciones ensayadas (alrededor del 10 y el 34% de las nanopartículas de 150 y 70 nm, respectivamente). Esta liberación rápida podría atribuirse a la fracción de progesterona que se absorbe o se une débilmente a la gran superficie generada por la formación de nanopartículas más que al complejo progesterona (CD incorporado en la red polimérica. La segunda fase corresponde a una liberación exponencial más lenta con aproximadamente 35 y 62% de progesterona liberada a partir de nanopartículas de 150 y 70 nm, respectivamente. La fase de liberación ralentizada puede ser el resultado de una simple difusión hacia el exterior de la progesterona a partir de las nanopartículas o de la penetración de la solución de liberación en las nanopartículas con disolución de la progesterona, seguida de su difusión por el exterior.

Los estudios in vitro demuestran que diferentes factores pueden afectar a la liberación de principios activos a partir de sistemas coloidales. Estos factores comprenden el tamaño y la morfología de las partículas, la carga de principio activo y la solubilidad de este (6, 7, 8). Conforme a lo que se observó en trabajos anteriores, las nanopartículas más pequeñas (70 nm) con una carga superior de principio activo (24 \mug/mg) presentan una liberación más rápida que las partículas más grandes (170 nm) con una carga más débil de progesterona (10,5 \mug/mg). El tamaño medio y la carga media de principio activo de las nanopartículas representan los principales factores de la velocidad de liberación con una reducción de la fase rápida para las nanopartículas más grandes.

La Figura 7 muestra los perfiles de liberación de la progesterona a partir de nanopartículas de PIBCA/HP\betaCD en presencia de PEG 400 (20 y 40%) en tanto que agente solubilizador. La utilización de este tipo de medio permite reducir el volumen del medio de liberación y como consecuencia la concentración de principio activo, lo que permite una mejor detección (9). En un caso como este en el que se utilizan disolventes o agentes solubilizantes no acuosos, se pueden obtener informaciones sobre el mecanismo de liberación. Como muestra la Figura 7, el perfil de liberación no es idéntico para los dos medios, lo que significa que la liberación está fuertemente influida por la concentración de PEG. Como consecuencia, la liberación de la progesterona debe estar determinada por la penetración del disolvente en la matriz polimérica, con disolución y difusión al exterior del principio activo a través de las nanopartículas. Al contrario, cuando la liberación del principio activo resulta de la simple difusión a través de una matriz polimérica, la composición del disolvente de liberación no puede influir en la liberación de principio activo (10).

El procedimiento de preparación de nanopartículas que consiste en añadir el monómero a una solución acuosa de agente tensioactivo y en agitar para obtener micelas (2), puede determinar la distribución del principio activo en las micelas durante la etapa de polimerización.

La liberación rápida observada en las figuras 6 y 7 sugiere que la superficie de las partículas se ha enriquecido con progesterona a lo largo de la etapa de polimerización. Por otra parte, una gran proporción de principio activo ha podido quedar atrapada en la red de polímero que podía tener una estructura interna altamente porosa (11). Este hecho podría explicar el aumento de la velocidad de liberación cuando la concentración de PEG aumenta (Figura 7), penetrando el PEG en la estructura a velocidades diferentes según la constitución del medio de liberación, modificando después la difusión de principio activo hacia el exterior.

A pesar de un aumento muy importante de la velocidad de liberación obtenida gracias a la adición de PEG en el medio de liberación, la liberación de la progesterona no alcanza el 100% (es aproximadamente 75 y 82% respectivamente con 40% de PEG).

Al contrario, la presencia de enzimas de tipo esterasa en el medio de liberación conduce a una liberación más rápida que en una solución de liberación desprovista de esterasa y la cantidad de progesterona liberada está muy cercana al 100% para las dos formulaciones ensayadas y para las dos concentraciones de enzima (Figura 8). Estos hechos pueden sugerir que las moléculas de progesterona están atrapadas, al menos en parte, en estado molecular en la matriz polimérica de la nanopartícula de la invención y/o unidas a la red de cianoacrilato de isobutilo (12). La utilización de enzimas de tipo esterasa en el medio de liberación conduce a una degradación o a una disolución de las cadenas poliméricas de las nanopartículas de poli(cianoacrilato). En este caso, los principios activos inmovilizados en la matriz se liberan con la degradación progresiva de esta.

La bioerosión provocada por la hidrólisis del enlace éster de las cadenas laterales de PIBCA es el mecanismo que permite una aceleración significativa de la liberación de progesterona, lo que corresponde a los resultados proporcionados por otros autores (12, 13). A veces, los estudios de liberación de principios activos efectuados en medios que contienen esterasas no conducen a una liberación del 100% del principio activo incorporado (12, 14, 15). Se sugiere que entonces existe la posibilidad de un enlace entre las cadenas de PIBCA y las moléculas de principio activo (12, 14). Los perfiles de liberación de la ciclodextrina a partir de las nanopartículas representadas en la Figura 9 muestran una liberación muy rápida y muy cercana al 100% en la primera hora, lo que demuestra que estas moléculas no están unidas de forma química al polímero sino probablemente están simplemente absorbidas o atrapadas en el
polímero.

Los perfiles de DSC de las muestras que contienen HP\betaCD muestran una transición endotérmica amplia, reproducible en la gama de 30 a 90ºC con temperaturas de partida comprendidas en esta gama (Figura 10 a, c y d). Este pico asimétrico se ha atribuido a la eliminación de agua. Las muestras que contenían progesterona (mezcla física y progesterona sola) presentan un pico endotérmico pronunciado a aproximadamente 130ºC, lo que corresponde a la temperatura de transición de fusión de la progesterona bajo forma cristalina (Figura 10 b y c). El complejo HP\betaCD: progesterona no presenta más que la transición endotérmica en la gama de 30 a 90ºC descrita antes, con desaparición de la transición de fusión de la forma cristalina de la progesterona (Figura 10 d), lo que sugiere que el principio activo está disperso en estado molecular en la cavidad de las moléculas de ciclodextrina. Bajo la misma forma, las muestras de nanopartículas de PICBA/HP\betaCD cargadas de progesterona no presentan pico endotérmico pronunciado que, en este caso, se sustituye por una transición endotérmica amplia en la gama de 130 a 170ºC (Figura 10 e y f). Este fenómeno sugiere que la progesterona se encuentra en estado molecular ya sea disuelta en el polímero ya sea incluida en las ciclodextrinas asociadas a las nanopartículas según la invención. Bajo esta forma, el conjunto de los resultados que se refieren a la liberación de la ciclodextrina y la progesterona en los diferentes medios y las curvas de DSC, añadido a los datos de la literatura, indican que la morfología de las nanopartículas podría estar representada por un núcleo polímero que contiene una fracción del principio activo en estado molecular, con una superficie enriquecida por complejos ciclodextrina:progesterona. Esta estructura podría explicar la liberación bifásica de la progesterona con una primera fase rápida debida tal vez a la desorción del complejo ciclodextrina:progesterona a partir de la superficie y una segunda fase muy lenta que comprende la difusión de la progesterona hacia el exterior a través de la red
polimérica.

Ejemplo 11 Preparación de nanopartículas de poli(cianoacrilato de isobutilo)/HP\betaCD cargadas con diversos principios activos

Se obtuvieron complejos de prednisolona, espironolactona, testosterona, progesterona, danazol y acetato de megestrol mezclando 300 mg HP\betaCD con 15 mg de esteroides en 15 ml de agua a 37ºC durante 72 horas bajo agitación magnética. Las suspensiones se filtraron (0,45 mm) y las concentraciones en ciclodextrina y en principio activo se dosificaron según el ejemplo 12 siguiente. Se prepararon nanopartículas de poli(cianoacrilato de isobutilo)/HP\betaCD como en el ejemplo 1 añadiendo una solución de complejos formados que contiene 10 mg/ml de HP\betaCD en una solución de poloxámero a 1% p/V.

Ejemplo 12

(Testigo)

Preparación de nanopartículas de poli(cianoacrilato de isobutilo) cargadas con diversos principios activos

Soluciones de hidrocortisona, de prednisolona, de espironolactona, de testosterona, de progesterona, de danazol y de acetato de megestrol a concentraciones correspondientes a la concentración de saturación en poloxámero 188 (1% p/v) se añadieron por separado a los medios de polimerización. Entonces se prepararon nanopartículas de poli(cianoacrilato de isobutilo), cargadas con diversos principios activos, según el ejemplo 1, pero en ausencia de
HP\betaCD.

Ejemplo 13 Dosificación de la hidrocortisona, de la prednisolona, de la espironolactona, de la testosterona, de la progesterona, de danazol, de acetato de megestrol y de HP\betaCD

Los diferentes esteroides se dosificaron según el ejemplo 6 que permite la dosificación de estas diferentes sustancias en las mismas condiciones analíticas.

El HP\betaCD se dosificó igualmente según el ejemplo 6.

Ejemplo 14 Características de tamaño y de potencial zeta de nanopartículas preparadas según la invención en presencia o en ausencia de poloxámero 188

Las nanopartículas preparadas según el ejemplo 11 y el ejemplo 12 se han caracterizado según el ejemplo 7. El tamaño de las partículas cargadas con esteroides era generalmente reducido y próximo a aproximadamente 100 nm cuando las nanopartículas según la invención se preparaban en ausencia de poloxámero 188 y solamente en presencia del HP\betaCD sugerían un enmascaramiento de las cargas por las moléculas de ciclodextrina localizadas en la superficie de las partículas.

La siguiente tabla III informa de la carga del fármaco por nanopartículas de poli(cianoacrilato de alquilo) o por nanopartículas de poli(cianoacrilato de alquilo) e hidroxipropil-b-ciclodextrina y el contenido de ciclodextrina correspondiente (media de 3 valores).

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TABLA III

Muestra		CD (mg/g)	carga del fármaco (mg/g)
PIBCA
PIBCA	hidrocortisona (HD)	-	2,19
	PE	-	0,12
	espirinolactona SP)	-	7,65
	testosterona (TE)	-	2,27
	megestrol	-	0,25
	acetato(AM)	-	0,34
	danazol (DA)	-	0,79
	progesterona (PO)

TABLA III (continuación)

Muestra		CD (mg/g)	carga del fármaco (mg/g)
PIBCA
PIBCA/	HD	180	15,3
HP\betaCD	PE	210	15,5
	SP	230	52,0
	TE	180	19,5
	AM	220	1,4
	DA	280	11,2
	PO		24,0

Resultados de los ejemplos 11 a 14 Aumento de la carga en esteroides de nanopartículas según la invención

Los valores de las cargas en esteroides expresadas en valores absolutos para las nanopartículas según la invención o las partículas testigo se ofrecen en la tabla IV (media de tres preparaciones). El cálculo de los valores de crecimiento de la carga de las partículas muestra que el aumento de la carga puede alcanzar 129 veces, en el caso de las prednisolona.

TABLA IV

Esteroides	Carga de las nanopartículas	Carga de las nanopartículas	Aumento de la carga
	de PICBA sin HP\betaCD	combinadas de PICBA y	(número de veces)
	(mmoles(g))	HP\betaCD (mmoles/g)
hidrocortisona	6,04	42,21	7,0
prednisolona	0,33	43,00	129,2
espirinolactona	18,36	127,23	6,9
testosterona	7,87	67,6	8,6
acetato de megestrol	0,65	3,64	5,6
danazol	1,01	33,19	32,9
progesterona	2,51	69,60	27,7

Referencias

1) J. Kreuter, Colloidal Drug Delivery Systems, Marcel Decker, New York, 1994, 219-342.

2) Brevets EP-B-0 007 895 (US-A-4,489,055) et EP-B-0 064 967 (US-A-4,913,908).

3) C. Cuvier et coll., Biochem. Pharmacol., 44, 509-517 (1992).

4) AC de Verdière et coll., British Journal of Cancer 76(2), 198-205 (1997).

5) M. Vikmon, Proceed, First International Symposium on Cyclodextrins, Budapest, 1981, 69-74.

6) E. Allémann et coll., Pharm. Res., 10, 1732-1737 (1993).

7) J.-C. Leroux et coll., J. Control. Rel., 39, 339-350 (1996).

8) N. Erden et coll., International Journal of Pharmaceutics, 137, 57-66 (1996).

9) J.-P. Benoit et coll., Microspheres and Drug Therapy. Pharmaceutical, Immunological and Medical Aspects, Elsevier, Amsterdam, 1984, 91-102.

10) C. Washington, Int. J. Pharm., 58, 1-12, (1990).

11) P. Couvreur et coll., J. Pharm. Sci., 68, 1521-1524 (1979).

12) F. Fawaz et coll., International Journal of Pharmaceutics, 154, 191-203 (1997).

13) J. L. Grangier et coll., J. Control. Rel., 15, 3-13, (1991).

14) Ch. Tasset et coll., J. Control. Rel. 33, 23-30, (1995).

15) B. Seijo et coll., Int. J. Pharm., 62, 1-7 (1990).

Claims

1. Nanopartículas caracterizadas porque comprenden al menos un polímero, al menos un principio activo y al menos un oligosacárido cíclico.

2. Nanopartículas según la reivindicación 1, caracterizadas porque al menos uno de los polímeros es un poli(cianoacrilato de alquilo) en el que el grupo alquilo, lineal o ramificado, comprende de 1 a 12 átomos de carbono.

3. Nanopartículas según una de las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizadas porque el oligosacárido cíclico es una ciclodextrina neutra o cargada, nativa, ramificada o polimerizada o modificadas químicamente.

4. Nanopartículas según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizadas porque el oligosacárido cíclico es una ciclodextrina modificada químicamente por sustitución de uno o varios hidroxipropilos por grupos alquilo, arilo, arilalquilo, glicosídico o por eterificación, esterificación con alcoholes o ácidos alifáticos.

5. Nanopartículas según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizadas porque presentan un tamaño comprendido entre 300 y menos de 50 NM.

6. Nanopartículas según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizadas porque el principio activo es hidrófilo, hidrófobo, anfífilo y/o insoluble.

7. Nanopartículas según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizadas porque el principio activo se elige de entre los anticancerosos, las moléculas antisentido, los antivirales, los antibióticos, las proteínas, polipéptidos, polinucleótidos, las sustancias vacunantes, los inmunodilatadores, los esteroides, los analgésicos, los antimorfínicos, los antifúngicos y antiparasitarios.

8. Nanopartículas según las reivindicación 7, caracterizadas porque el principio activo es el taxol o uno de sus derivados.

9. Nanopartículas según la reivindicación 7, caracterizadas porque el principio activo es la doxorubicina o uno de sus derivados.

10. Nanopartículas según las reivindicación 7, caracterizadas porque el principio activo es un derivado de platino.

11. Nanopartículas según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizadas porque el principio activo está presente en una cantidad de 0,01 a 300 mg/g de nanopartículas.

12. Nanopartículas según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizadas porque la proporción de oligosacárido cíclico es de 0,1 a 70% en peso.

13. Procedimiento de preparación de nanopartículas a base de un polímero según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque comprende las etapas que consisten en:

a) preparar un complejo de al menos un principio activo con al menos un oligosacárido cíclico en solución en un disolvente acuoso o no acuoso,

b) añadir progresivamente al menos un monómero de polímero en la solución obtenida en la etapa (a), y

c) efectuar una polimerización, por ejemplo aniónica o inductible por otros agentes particularmente fotoquímicos, de este monómero eventualmente en presencia de uno o varios agentes tensioactivos y/o estabilizante.

14. Procedimiento de preparación de nanopartículas a base de un polímero según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque comprende las etapas que consisten en:

- preparar nanopartículas a base de un polímero y más particularmente poli(cianoacrilato de alquilo) y un oligosacárido cíclico,

- asociar a dichas nanopartículas el principio activo.

15. Procedimiento de preparación de nanopartículas a base de un polímero según la reivindicación 14, caracterizado porque comprende las etapas que consisten en:

a) preparar una solución de al menos un oligosacárido cíclico en un disolvente acuoso o no acuoso,

b) añadir progresivamente al menos un monómero de polímero y más particularmente cianoacrilato de alquilo monómero en la solución de la etapa (a), y

d) después de un control y una purificación eventual de las nanopartículas obtenidas en la etapa (c), incubar dichas partículas en una solución del principio activo en un disolvente acuoso o no acuoso.

16. Procedimiento de preparación de nanopartículas a base de poli(cianoacrilato de alquilo) según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15, caracterizado porque en la etapa (b) se añade progresivamente al menos un cianoacrilato de alquilo monómero.

17. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 16, caracterizado porque en las etapas (a), (b) y (d) el disolvente se elige ventajosamente de forma que, manteniendo condiciones favorables a la polimerización de los polímeros y más particularmente de los poli(cianoacrilato de alquilo), la solubilidad del principio activo y del oligosacárido cíclico sea máxima en un medio definido por este disolvente.

18. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 17, caracterizado porque la etapa (c) se efectúa sin agente tensioactivo y/o estabilizante.

19. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 17, caracterizado porque en la etapa (a) la proporción de oligosacárido cíclico es en general de 0,1 a 70% en peso con respecto a dicho principio activo.

20. Utilización del procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 19, para fabricar un medicamento de efecto determinado y de índice terapéutico mejorado.

21. Nanopartícula que comprende la asociación de un polímero y más particularmente de poli(cianoacrilato de alquilo) y de un oligosacárido cíclico susceptible de obtenerse con las etapas (a) a (c) de un procedimiento según la reivindicación 15.

22. Nanopartículas según la reivindicación 21, caracterizadas porque el oligosacárido cíclico es una ciclodextrina neutra o cargada, nativa, ramificada o polimerizada o modificadas químicamente.