ES2245994T3 - Compuestos macro-heterociclicos utilizados como inhibidores de quinasa. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de **Fórmula**, en la cual R4, R2 y R5 son seleccionados dependientemente de: R4 R2 R5 -(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-; -(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2- ; -(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2- ; -(CH2)2- -O-(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-O- -(CH2)2-; -(CH2)2-O-(CH2)2-N(Et)-(CH2)2-O-(CH2)2-; -(CH2)2-O-(CH2)2-N(Me)-(CH2)2-O-(CH2)2-; -(CH2)2-O-(CH2)2-N(i-Pr)-(CH2)2-O-(CH2)2-; -(CH2)2-N(Me)-(CH2)2-N(Me)-(CH2)2-N(Me)- -(CH2)2-; -(CH2)2-O-(CH2)2-N(2-hidroxi-Et)-(CH2)2-O- -(CH2)2-; y, -(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-N(Me)-(CH2)3- y sales del mismo farmacéuticamente aceptables.

Description

Compuestos macroheterocíclicos utilizados como inhibidores de quinasa.

Campo de la invención

Esta invención está dirigida a ciertos compuestos macroheterocíclicos nuevos, a métodos para la producción de tales compuestos y a métodos para tratar o mejorar una enfermedad mediada por quinasas o por quinasas duales. Más particularmente, esta invención está dirigida a compuestos macroheterocíclicos 1H-indol, 1H-pirrolo[2,3-b]piridina, 1H-pirazolo[3,4-b]piridina y 1H-indazol útiles como inhibidores selectivos de quinasas o quinasas duales, a métodos para producir tales compuestos y a métodos para tratar o mejorar una enfermedad mediada por quinasas o quinasas duales.

Antecedentes de la invención

La Patente de Estados Unidos 5.624.949 para Heath, Jr. y col., describe derivados de bis-indolmaleimida de fórmula:

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1

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en la que W es -O-, -S-, -SO-, -SO_{2}-, -CO-, alquileno C_{2}-C_{6}, alquileno sustituido, alquenileno C_{2}-C_{6}, -arilo-, -aril
(CH_{2})_{m}O-, -heterociclo-, -heterociclo-(CH_{2})_{m}O-, -bicíclico fusionado-, -bicíclico fusionado-(CH_{2})_{m}O-, -NR_{3}-,-NO
R_{3}-, -CONH- o -NHCO-; X e Y son independientemente alquileno C_{1}-C_{4}, alquileno sustituido, o juntos, X, Y y W se combinan para formar (CH_{2})_{n}-AA-; R_{1} es independientemente hidrógeno, halo, alquilo C_{1}-C_{4}, hidroxi, alcoxi C_{1}-C_{4}, haloalquilo, nitro, NR_{4}R_{5} o -NHCO(alquilo C_{1}-C_{4}); R_{2} es hidrógeno, CH_{3}CO-, NH_{2}- o hidroxi; R_{3} es hidrógeno, arilo(CH_{2})_{m}, alquilo C_{1}-C_{4}, -COO(alquilo C_{1}-C_{4}), -CONR_{4}R_{5}, -C(C=NH)NH_{2}, -SO(alquilo C_{1}-C_{4}), -SO_{2}(NR_{4}R_{5}) o -SO_{2}(alquilo C_{1}-C_{4}); R_{4} y R_{5} son independientemente hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, fenilo, bencilo, o se combinan con el nitrógeno al que está unidos para formar un anillo de 5 ó 6 miembros saturado o insaturado; AA es un residuo de aminoácido; m es independientemente 0, 1, 2 ó 3 y n es independientemente 2, 3, 4 ó 5, como inhibidores de PKC y como inhibidores selectivos de PKC \beta-I y PKC \beta-II.

Es un objeto de la presente invención proporcionar compuestos macroheterocíclicos 1H-indol, 1H-pirrolo[2,3-b]piridina, 1H-pirazolo[3,4-b]piridina y 1H-indazol útiles como inhibidores de quinasas o de quinasas duales (esto es, compuestos capaces de inhibir dos o más quinasas tales como, por ejemplo, una quinasa seleccionada de entre proteína quinasa C o glucógeno sintasa quinasa-3; y, más particularmente, una quinasa seleccionada de entre proteína quinasa C \alpha, proteína quinasa C \beta-II, proteína quinasa C \gamma o glucógeno sintasa quinasa-3\beta), métodos para su producción y métodos para el tratamiento o la mejora de una enfermedad mediada por quinasas o por quinasas
duales.

Resumen de la invención

La presente invención proporciona un compuesto macroheterocíclico de Fórmula (Ia1):

2

en la que R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

3

y sales del mismo farmacéuticamente aceptables.

La invención proporciona también un compuesto de Fórmula (Ib1):

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en la que R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

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y sales del mismo farmacéuticamente aceptables.

La invención proporciona también un compuesto de Fórmula (If1):

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en la que R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

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y sales del mismo farmacéuticamente aceptables.

La invención proporciona también un compuesto de Fórmula (Ii1):

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en la que R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

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y sales del mismo farmacéuticamente aceptables.

La invención proporciona también un compuesto de Fórmula (Ij1):

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en la que R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

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y sales del mismo farmacéuticamente aceptables.

La presente invención está dirigida a compuestos macroheterocíclicos útiles como inhibidores selectivos de quinasas o de quinasas duales; preferiblemente como inhibidores de quinasas seleccionadas de entre proteína quinasa C o glucógeno sintasa quinasa-3; y, más particularmente, de una quinasa seleccionada de entre proteína quinasa C \alpha, proteína quinasa C \beta-II, proteína quinasa C \gamma o glucógeno sintasa quinasa-3\beta.

La presente invención está dirigida también a métodos para producir los presentes compuestos macroheterocíclicos y composiciones farmacéuticas y medicamentos de los mismos.

La presente invención está dirigida además a métodos para tratar o mejorar una enfermedad mediada por una quinasa o por una quinasa dual. En particular, el método de la presente invención está dirigido al tratamiento o la mejora de una enfermedad mediada por quinasas tal como, pero sin limitarse a, enfermedades cardiovasculares, diabetes, trastornos asociados con la diabetes, enfermedades inflamatorias, trastornos inmunológicos, trastornos dermatológicos, trastornos oncológicos y trastornos del SNC (Sistema Nervioso Central).

Descripción detallada de la invención

Ejemplos de compuestos de la presente invención incluyen un compuesto de Fórmula (Ia) seleccionado de un compuesto de Fórmula (Ia1):

12

en la que R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

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Ejemplos de compuestos de la presente invención incluyen un compuesto de Fórmula (Ib) seleccionado de un compuesto de Fórmula (Ib1):

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en la que R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

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Ejemplos de compuestos de la presente invención incluyen un compuesto de Fórmula (If) seleccionado de un compuesto de Fórmula (If1):

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en la que R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

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Ejemplos de compuestos de la presente invención incluyen un compuesto de Fórmula (Ii) seleccionado de un compuesto de Fórmula (Ii1):

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en la que R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

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Ejemplos de compuestos de la presente invención incluyen un compuesto de Fórmula (Ij) seleccionado de un compuesto de Fórmula (Ij1):

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en la que R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

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Los compuestos de la presente invención pueden estar también presentes en forma de sales farmacéuticamente aceptables. Para su utilización en medicina, las sales de los compuestos de esta invención se refieren a "sales farmacéuticamente aceptables" no tóxicas (Ref. International J. Pharm., 1986, 33, 201-217; J. Pharm. Sci., 1997 (Enero), 66, 1, 1). Otras sales pueden, sin embargo, ser útiles para la preparación de compuestos de acuerdo con esta invención o de sus sales farmacéuticamente aceptables. Ácidos orgánicos o inorgánicos representativos incluyen, pero no se limitan a, ácido clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, perclórico, sulfúrico, nítrico, fosfórico, acético, propiónico, glicólico, láctico, succínico, maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, benzoico, mandélico, metanosulfónico, hidroxietanosulfónico, bencensulfónico, oxálico, pamoico, 2-naftalensulfónico, p-toluensulfónico, ciclohexanosulfámico, salicílico, sacarínico o trifluoroacético. Bases orgánicas o inorgánicas representativas incluyen, pero no se limitan a, sales básicas o catiónicas tales como benzatina, clorprocaína, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumina, procaína, aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y zinc.

La presente invención incluye en su ámbito profármacos de los compuestos de la invención. En general, tales profármacos serán derivados funcionales de los compuestos, que sean fácilmente convertibles in vivo en el compuesto requerido. Por tanto, en los métodos de tratamiento de la presente invención, el término "administración" incluirá el tratamiento de las diferentes enfermedades descritas con el compuesto descrito específicamente o con un compuesto que puede no estar descrito específicamente, pero que se convierte en el compuesto especificado in vivo después de la administración al sujeto. Los procedimientos convencionales para la selección y preparación de derivados profármacos adecuados están descritos en, por ejemplo, "Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985.

Cuando los compuestos de acuerdo con esta invención tengan al menos un centro quiral, podrán existir por consiguiente como enantiómeros. Cuando los compuestos posean dos o más centros quirales, podrán existir adicionalmente como diastereómeros. Cuando los procesos para la preparación de los compuestos de acuerdo con la invención den lugar a una mezcla de estereoisómeros, estos isómeros podrán ser separados mediante técnicas convencionales tales como la cromatografía preparativa. Los compuestos pueden ser preparados en forma racémica o bien pueden prepararse enantiómeros individuales mediante técnicas estándar conocidas por los expertos en el oficio, por ejemplo mediante síntesis o separación enantioespecífica, formación de pares diastereoméricos por la formación de sales con un ácido ópticamente activo, seguido por cristalización fraccionada y regeneración de la base libre. Los compuestos pueden ser también separados mediante la formación de ésteres o amidas diastereoméricos, seguido por separación cromatográfica y eliminación del producto auxiliar quiral. Alternativamente, los compuestos pueden ser separados utilizando una columna de HPLC quiral. Debe comprenderse que todos estos isómeros y las mezclas de los mismos están incluidos dentro del ámbito de la presente invención.

A no ser que se especifique de otro modo, el término "alquilo" se refiere a una cadena saturada lineal o ramificada que consta solamente de 1-8 átomos de carbono sustituidos con hidrógeno; preferiblemente, de 1-6 átomos de carbono sustituidos con hidrógeno y, muy preferiblemente, de 1-4 átomos de carbono sustituidos con hidrógeno. El término "alquenilo" se refiere a una cadena de alquilo lineal o ramificada parcialmente insaturada que contiene al menos un doble enlace. El término "alquinilo" se refiere a una cadena de alquilo lineal o ramificada parcialmente insaturada que contiene al menos un triple enlace. El término "alcoxi" refiere a -O-alquilo, donde alquilo es según se definió supra. El término "alquiltio" se refiere a -S-alquilo, donde alquilo es según se definió supra. Un grupo carboxilo es un carbonilo con un grupo OH terminal.

Cuando la cadena de alquilo lineal o ramificada funciona como grupo de unión y está sustituida opcionalmente con sustituyentes amino, halógeno, hidroxi u oxo, la cadena de alquilo ramificada puede estar sustituida en la cadena de alquilo de unión, en la ramificación de la cadena de alquilo de unión o en ambas.

El término "cicloalquilo" se refiere a un anillo de alquilo cíclico saturado o parcialmente insaturado que consta de 3-8 átomos de carbono sustituidos con hidrógeno. Ejemplos incluyen, y no se limitan a, ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo. El término "espirocicloalquilo" se refiere a un anillo de cicloalquilo que comparte un único carbón del anillo con otro anillo unido.

El término "heterociclilo" se refiere a un anillo saturado o parcialmente insaturado que tiene cinco miembros de los cuales al menos un miembro es un átomo de N, O o S y que contiene opcionalmente un átomo de O adicional o uno, dos o tres átomos de N adicionales, un anillo saturado o parcialmente insaturado que tiene seis miembros de los cuales uno, dos o tres miembros son un átomo de N, un anillo bicíclico saturado o parcialmente insaturado que tiene nueve miembros de los cuales al menos un miembro es un átomo de N, O o S y que contiene opcionalmente uno, dos o tres átomos de N adicionales y un anillo bicíclico saturado o parcialmente insaturado que tiene diez miembros de los cuales uno, dos o tres miembros son un átomo de N. Ejemplos incluyen, y no se limitan a, pirrolinilo, pirrolidinilo, dioxolanilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, piperidinilo, morfolinilo o piperazinilo. El término "espiroheterociclilo" se refiere a un anillo de heterociclilo que comparte un único carbono del anillo con otro anillo unido.

El término "arilo" se refiere a un sistema de anillos monocíclicos aromáticos que contienen 5-6 átomos de carbono sustituidos con hidrógeno o a un sistema de anillos bicíclicos aromáticos que contienen 9-14 átomos de carbono sustituidos con hidrógeno. Ejemplos incluyen, y no se limitan a, fenilo, naftalenilo o antracenilo.

El término "heteroarilo" se refiere a un sistema de anillos monocíclicos aromáticos que contienen cinco miembros de los cuales al menos un miembro es un átomo de N, O o S y que contiene opcionalmente uno, dos o tres átomos de N adicionales, un anillo monocíclico aromático que tiene seis miembros de los cuales uno, dos o tres miembros son un átomo de N, un anillo bicíclico aromático que tiene nueve miembros de los cuales al menos un miembro es un átomo de N, O o S y que opcionalmente contiene uno, dos o tres átomos de N adicionales y un anillo bicíclico aromático que tiene diez miembros de los cuales uno, dos o tres miembros son un átomo de N. Ejemplos incluyen, y no se limitan a, furilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, quinolinilo o isoquinolinilo.

El término "halo" o "halógeno" se refiere a un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo.

"Independientemente" significa que cuando un grupo está sustituido con más de un sustituyente, los sustituyentes pueden ser los mismos o diferentes. "Dependientemente" significa que los sustituyentes están especificados en una combinación indicada de variables estructurales.

Una realización de la invención es una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y cualquiera de los compuestos anteriormente descritos. Es ilustrativa de la invención una composición farmacéutica producida mezclando cualquiera de los compuestos descritos anteriormente y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Otra ilustración de la invención es un proceso para producir una composición farmacéutica que comprende la mezcla de cualquiera de los compuestos anteriormente descritos y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Son además ilustrativas de la presente invención composiciones farmacéuticas que contienen uno o más compuestos de esta invención en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Según se utiliza en la presente, el término "composición" está destinado a incluir un producto que comprenda los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, además de cualquier producto que resulte, directamente o indirectamente, de combinaciones de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.

Los compuestos de la presente invención son inhibidores selectivos de quinasas o de quinasas duales útiles en un método para tratar o mejorar una enfermedad mediada por quinasas o por quinasas duales. En una realización preferida, la quinasa es seleccionada de entre proteína quinasa C o glucógeno sintasa quinasa- 3 y, más preferiblemente, la quinasa es seleccionada de entre proteína quinasa C \alpha, proteína quinasa C \beta- II, proteína quinasa C \gamma o glucógeno sintasa quinasa-3\beta. Sin embargo, según se demuestra en los ejemplos incluidos en la presente, los compuestos de esta invención muestran también actividad inhibidora de otras varias quinasas.

Isoformas de la Proteína Quinasa C

Se sabe que la proteína quinasa C (PKC) desempeña una función clave en la transducción de señales intracelulares (señales célula-célula), en la expresión génica y en el control de la diferenciación y el crecimiento celular. La familia de PKC está compuesta por doce isoformas que se clasifican adicionalmente en 3 subfamilias: las isoformas de PKC clásicas dependientes de calcio alfa (\alpha), beta-I (\beta-I), beta-II (\beta-II) y gamma (\gamma); las isoformas de PKC independientes de calcio delta (\delta), épsilon (\epsilon), eta (\eta), theta (\theta) y mu (\mu) y las isoformas atípicas de la PKC zeta (\zeta), lambda (\lambda) e iota (\iota).

Ciertos estados de enfermedad tienden a estar asociados con la elevación de isoformas particulares de PKC. Las isoformas de PKC presentan una distribución tisular, una localización subcelular y cofactores dependientes de la activación característicos. Por ejemplo, las isoformas \alpha y \beta de PKC son inducidas selectivamente en células vasculares estimuladas con agonistas tales como el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) (P. Xia y col., J. Clin. Invest., 1996, 98, 2018) y han sido implicadas en el crecimiento celular, la diferenciación y la permeabilidad vascular (H. Ishii y col., J. Mol. Med., 1998, 76, 21). Los niveles elevados de glucosa en sangre encontrados en la diabetes dan lugar a una elevación específica de isoforma de la isoforma \beta-II en tejidos vasculares (Inoguchi y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, 89, 11059-11065). Una elevación de la isoforma \beta en plaquetas humanas ligada a la diabetes ha sido correlacionada con la respuesta alterada de las plaquetas a agonistas (Bastyr III, E.J. y Lu, J., Diabetes, 1993, 42, (Suplemento 1) 97A). Se ha demostrado que el receptor de vitamina D humano es fosforilado selectivamente por PKC \beta. Esta fosforilación ha sido ligada a alteraciones del funcionamiento del receptor (Hsieh y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, 88, 9315-9319; Hsieh y col., J. Biol. Chem., 1993, 268, 15118-15126). Además, el trabajo ha demostrado que la isoforma \beta-II es responsable de la proliferación de células eritroleucémicas, mientras que la isoforma \alpha está implicada en la diferenciación megacariocítica en estas mismas células (Murray y col., J. Biol. Chem., 1993, 268, 15847-15853).

Enfermedades Cardiovasculares

La actividad PKC desempeña una función importante en las enfermedades cardiovasculares. Se ha demostrado que una actividad PKC incrementada en la vasculatura produce una vasoconstricción incrementada e hipertensión (Bilder, G.E. y col., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1990, 252, 526-530). Los inhibidores de PKC bloquean la proliferación de células de músculo liso inducida por agonistas (Matsumoto, H. y Sasaki, Y., Biochem. Biophys. Res. Commun., 1989, 158, 105-109). La PKC \beta provoca acontecimientos que dan lugar a la inducción de Egr-1 (Factor de Crecimiento Temprano-1) y de factor tisular bajo condiciones hipóxicas (como parte de la ruta mediada por la privación de oxígeno para desencadenar acontecimientos procoagulantes) (Yan, S-F. y col., J. Biol. Chem., 2000, 275, 16, 11921-11928). Se ha sugerido que la PKC \beta es un mediador para la producción de PAI-1 (Inhibidor del Activador de Plasminógeno-1) y está implicada en el desarrollo de trombosis y ateroesclerosis (Ren, S. y col., Am. J. Physiol., 2000, 278, (4, Pt. 1), E656-E662). Los inhibidores de PKC son útiles para el tratamiento de la isquemia cardiovascular y para mejorar la función cardíaca después de la isquemia (Muid, R.E. y col., FEBS Lett., 1990, 293, 169-172; Sonoki, H. y col., Kokyu-To Junkan, 1989, 37, 669-674). Niveles elevados de PKC han sido correlacionados con un incremento de la función plaquetaria en respuesta a agonistas (Bastyr III, E.J. y Lu, J., Diabetes, 1993, 42, (Suplemento 1) 97A). La PKC ha sido implicada en la ruta bioquímica de la modulación de la permeabilidad microvascular por el factor activador de plaquetas (PAF) (Kobayashi y col., Amer. Phys. Soc., 1994, H1214-H1220). Los inhibidores de la PKC influyen sobre la agregación plaquetaria inducida por agonistas (Toullec, D. y col., J. Biol. Chem., 1991, 266, 15771-15781). Por consiguiente, los inhibidores de PKC pueden estar indicados para ser utilizados en el tratamiento de enfermedades cardiovasculares, isquemia, condiciones trombóticas, ateroesclerosis y restenosis.

Diabetes

Una actividad excesiva de PKC ha sido ligada a defectos en la ruta de señales de la insulina y por tanto a la resistencia a insulina observada en la diabetes de Tipo II (Karasik, A. y col., J. Biol. Chem., 1990, 265, 10226-10231; Chen, K.S. y col., Trans. Assoc. Am. Physicians, 1991, 104, 206-212; Chin, J.E. y col., J. Biol. Chem., 1993, 268, 6338-6347).

Trastornos Asociados a la Diabetes

Hay estudios que han demostrado un incremento de la actividad PKC en tejidos que se sabe que son susceptibles a complicaciones diabéticas cuando son expuestos a condiciones hiperglucémicas (Lee, T-S. y col., J. Clin. Invest., 1989, 83, 90-94; Lee, T-S. y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 5141-5145; Craven, P.A. y DeRubertis, F.R., J. Clin. Invest., 1989, 87, 1667-1675; Wolf, B.A. y col., J. Clin. Invest., 1991, 87, 31-38; Tesfamariam, B. y col., J. Clin. Invest., 1991, 87, 1643-1648). Por ejemplo, la activación de la isoforma PKC \beta-II desempeña una función importante en las complicaciones vasculares diabéticas tales como la retinopatía (Ishii, H. y col., Science, 1996, 272, 728-731) y la PKC \beta ha sido implicada en el desarrolla de la hipertrofia cardíaca asociada con la insuficiencia cardíaca (X. Gu y col., Circ. Res., 1994, 75, 926; R.H. Strasser y col., Circulation, 1996, 94, I551). La sobreexpresión de PKC \beta-II cardíaca en ratones transgénicos produjo una cardiomiopatía que implicaba hipertrofia, fibrosis y una función disminuida del ventrículo izquierdo (H. Wakasaki y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1997, 94, 9320).

Enfermedades Inflamatorias

Los inhibidores de la PKC bloquean respuestas inflamatorias tales como el estallido oxidativo de los neutrófilos, la regulación por disminución de CD3 en linfocitos T y el edema de la pata inducido por forbol (Twoemy, B. y col., Biochem. Biophys. Res. Commun., 1990, 171, 1087-1092; Mulqueen, M.J. y col., Agents Actions, 1992, 37, 85-89). La PKC \beta tiene un papel esencial en la desgranulación de mastocitos derivados de la médula ósea, afectando así a la capacidad de las células para producir IL-6 (Interleuquina-6) (Nechushtan, H. y col., Blood, 2000 (Marzo), 95, 5, 1752-1757). La PKC desempeña una función en el crecimiento incrementado de células ASM (Músculo Liso de las Vías Respiratorias) en modelos en rata de dos riesgos potenciales de asma: hipersensibilidad a los agonistas contráctiles y a estímulos del crecimiento (Ren, S. y col., Am. J. Physiol., 2000, 278, (4, Pt. 1), E656-E662). La sobreexpresión de PKC \beta-1 produce un incremento de la permeabilidad endotelial, sugiriendo una función importante en la regulación de la barrera endotelial (Nagpala, P.G. y col., J. Cell Physiol., 1996, 2, 249-55). La PKC \beta media la activación de la NADPH oxidasa de los neutrófilos por PMA y por la estimulación de receptores Fc\gamma en los neutrófilos (Dekker, L.V. y col., Biochem. J., 2000, 347, 285-289). Por tanto, los inhibidores de PKC pueden estar indicados para ser utilizados en el tratamiento de la inflamación y el asma.

Trastornos Inmunológicos

La PKC puede ser útil para el tratamiento o la mejora de ciertos trastornos inmunológicos. Aunque un estudio sugiere que la inhibición de HCMV (Citomegalovirus Humano) no está correlacionada con la inhibición de PKC (Slater, M.J. y col., Biorg. & Med. Chem., 1999, 7, 1067-1074), otro estudio mostró que la ruta de transducción de señales de PKC interaccionaba sinérgicamente con la ruta de la PKA dependiente de AMPc para activar o incrementar la transcripción del VIH-1, y la replicación vírica fue suprimida con un inhibidor de PKC (Rabbi, M.F. y col., Virology, 1998 (5 de Junio), 245, 2, 257-69). Por tanto, un trastorno inmunológico puede ser tratado o mejorado como función de la respuesta de la ruta subyacente afectada a la regulación por incremento o por disminución de la PKC.

Una deficiencia en PKC \beta tiene también como resultado una inmunodeficiencia caracterizada por respuestas inmunes humorales disminuidas y una respuesta reducida de células B, similar a la inmunodeficiencia ligada a X en ratones, y desempeña una función importante en la transducción de señales mediada por los receptores antigénicos (Leitges, M. y col., Science (Wash., D.C.), 1996, 273, 5276, 788-789). Por consiguiente, el rechazo tisular de trasplantes puede ser mejorado o impedido por la supresión de la respuesta inmune mediante la utilización de un inhibidor de PKC \beta.

Trastornos Dermatológicos

Una actividad anormal de PKC ha sido ligada a trastornos dermatológicos caracterizados por una proliferación anormal de queratinocitos, tales como la psoriasis (Horn, F. y col., J. Invest. Dermatol., 1987, 88, 220-222; Raynaud, F. y Evain-Brion, D., Br. J. Dermatol., 1991, 124, 542-546). Se ha demostrado que inhibidores de PKC inhiben la proliferación de queratinocitos de manera dependiente de la dosis (Hegemann, L. y col., Arch. Dermatol. Res., 1991, 283, 456-460; Bollag, W.B. y col., J. Invest. Dermatol., 1993, 100, 240-246).

Trastornos Oncológicos

La actividad PKC ha sido asociada con el crecimiento celular, la estimulación de tumores, el crecimiento celular incontrolado y el cáncer (Rotenberg, S.A. y Weinstein, I.B., Biochem. Mol. Aspects Sel. Cancer, 1991, 1, 25-73; Ahmad y col., Molecular Pharmacology, 1993, 43, 858-862); se sabe que inhibidores de PKC son eficaces para prevenir el crecimiento de tumores en animales (Meyer, T. y col., Int. J. Cancer, 1989, 43, 851-856; Akinagaka, S. y col., Cancer Res., 1991, 51, 4888-4892). La expresión de PKC \beta-1 y \beta-2 en células de carcinoma de colon HD3 diferenciadas bloqueaba su diferenciación, permitiendo que las mismas proliferaran en respuesta a FGF (Factor de Crecimiento de Fibroblastos) básico como células indiferenciadas, incrementando su tasa de crecimiento y activando varias MBP (Proteína Básica de la Mielina) quinasas, incluyendo la MAP (Proteína Activada por Mitógenos) quinasa p57 (Sauma, S. y col., Cell Growth Differ., 1996, 7, 5, 587-94). Inhibidores de PKC \alpha, que tenían un efecto terapéutico aditivo en combinación con otros agentes anticancerosos, inhibían el crecimiento de células de leucemia linfocítica (Konig, A. y col., Blood, 1997, 10, Suplemento 1, Punto 2). Inhibidores de PKC incrementaban la apoptosis inducida por MMC (Mitomicina-C) de forma dependiente del tiempo en una línea de células de cáncer gástrico, indicando potencialmente su utilización como agentes para la apoptosis inducida por quimioterapia (Danso, D. y col., Proc. Am. Assoc. Cancer Res., 1997, 38, Reunión 88, 92). Por tanto, los inhibidores de PKC pueden estar indicados para ser utilizados en la mejora del crecimiento de células y tumores, en el tratamiento o en la mejora de cánceres (tales como leucemia o cáncer de colon) y como adjuntos a la quimioterapia.

La PKC \alpha (al incrementar la migración celular) puede mediar algunos efectos proangiogénicos de la activación de PKC, mientras que la PKC \delta puede dirigir los efectos antiangiogénicos de la activación global de PKC (al inhibir el crecimiento y la proliferación celular) en células endoteliales capilares, regulando así la proliferación endotelial y la angiogénesis (Harrington, E.O. y col., J. Biol. Chem., 1997, 272, 11, 7390-7397). Los inhibidores de PKC inhiben el crecimiento celular e inducen la apoptosis en líneas celulares de glioblastoma humano, inhiben el crecimiento de xenoinjertos de astrocitoma humano y actúan como sensibilizadores a la radiación en líneas celulares de glioblastoma (Begemann, M. y col., Anticancer Res. (Greece), 1998 (Julio-Agosto), 18, 4A, 2275-82). Los inhibidores de PKC, en combinación con otros agentes anticancerosos, son radiosensibilizadores y quimiosensibilizadores útiles en la terapia contra el cáncer (Teicher, B.A. y col., Proc. Am. Assoc. Cancer Res., 1998, 39, Reunión 89, 384). Los inhibidores de la PKC \beta (mediante el bloqueo de las rutas de transducción de señales de la MAP quinasa para el VEGF (Factor de Crecimiento Endotelial Vascular) y para el bFGF (Factor de Crecimiento de Fibrinógeno básico) en las células endoteliales), en un régimen de combinación con otros agentes anticancerosos, tienen un efecto anti-angiogénico y antitumoral en un modelo de xenoinjerto multiforme de glioblastoma T98G humano (Teicher, B.A. y col., Clinical Cancer Research, 2001 (Marzo), 7, 634-640). Por consiguiente, los inhibidores de PKC pueden estar indicados para utilización en la mejora de la angiogénesis y en el tratamiento o la mejora de cánceres (tales como cáncer de mama, cerebro, riñón, vejiga, ovario o colon) y como adjuntos en quimioterapia y radioterapia.

Trastornos del Sistema Nervioso Central

La actividad PKC desempeña un papel importante en el funcionamiento del SNC (Huang, K.P., Trends Neurosci., 1989, 12, 425-432) y la PKC está implicada en la Enfermedad de Alzheimer (Shimohama, S. y col., Neurology, 1993, 43, 1407-1413), y se ha demostrado que los inhibidores impiden el daño observado en las lesiones cerebrales isquémicas focales y centrales y en el edema cerebral (Hara, H. y col., J. Cereb. Blood Flow Metab., 1990, 10, 646-653; Shibata, S. y col., Brain Res., 1992, 594, 290-294). Por consiguiente, los inhibidores de PKC pueden estar indicados para ser utilizados en el tratamiento de la Enfermedad de Alzheimer y en el tratamiento de enfermedades neurotraumáticas y relacionadas con isquemia.

El incremento de larga duración de PKC \gamma (como componente del sistema de 2º mensajero de fosfoinositida) y la expresión de receptores de acetilcolina muscarínicos en un modelo en rata de activación progresiva de la amígdala han sido asociadas con epilepsia, sirviendo como base del estado permanente de hiperexcitabilidad de la rata (Beldhuis, H.J.A. y col., Neuroscience, 1993, 55, 4, 965-73). Por tanto, los inhibidores de la PKC pueden estar indicados para ser utilizados en el tratamiento de la epilepsia.

Los cambios subcelulares en el contenido de los isoenzimas PKC \gamma y PKC \beta-II en los animales en un modelo in vivo de hiperalgesia térmica, sugieren que la lesión de nervios periféricos contribuye al desarrollo de un dolor persistente (Miletic, V. y col., Neurosci. Lett., 2000, 288, 3, 199-202). Ratones carentes de PKC \gamma presentan respuestas normales a estímulos de dolor agudo, pero casi completamente son incapaces de desarrollar un síndrome de dolor neuropático después de un corte parcial del nervio ciático (Chen, C. y col., Science (Wash., D.C.), 1997, 278, 5336, 279-283). Una modulación de PKC puede por tanto estar indicada para ser utilizada en el tratamiento del dolor crónico y del dolor neuropático.

La PKC ha demostrado tener una función en la patología de condiciones tales como, pero sin limitarse a, enfermedades cardiovasculares, diabetes, trastornos asociados a la diabetes, enfermedades inflamatorias, trastornos inmunológicos, trastornos dermatológicos, trastornos oncológicos y trastornos del sistema nervioso central.

Glucógeno Sintasa Quinasa-3

La glucógeno sintasa quinasa-3 (GSK-3) es una proteína quinasa de serina/treonina compuesta por dos isoformas (\alpha y \beta) que están codificadas por genes distintos. La GSK-3 es una de las diferentes proteína quinasas que fosforilan la sintasa de glucógeno (GS) (Embi y col., Eur. J. Biochem., 1980, 107, 519-527). Las isoformas \alpha y \beta tienen una estructura monomérica de 49 y 47 kD respectivamente, y ambas se encuentran en células de mamífero. Ambas isoformas fosforilan la sintasa de glucógeno muscular (Cross y col., Biochemical Journal, 1994, 303, 21-26) y estas dos isoformas muestran una buena homología entre especies (las GSK-3 \alpha de humano y conejo son un 96% idénticas).

Diabetes

La diabetes de Tipo II (o Diabetes Mellitus No Dependiente de Insulina, NIDDM) es una enfermedad multifactorial. La hiperglucemia es debida a una resistencia a la insulina en el hígado, el músculo y otros tejidos acoplada a una secreción inadecuada o defectuosa de insulina por los islotes pancreáticos. El músculo esquelético es el lugar principal de captación de glucosa estimulada por insulina. En este tejido, la glucosa retirada de la circulación es metabolizada mediante glucolisis y el ciclo de los ATC (ácidos tricarboxílicos) o bien es almacenada como glucógeno. El depósito de glucógeno en el músculo desempeña el papel más importante de la homeostasis de la glucosa y los sujetos con diabetes de Tipo II tienen un almacenamiento defectuoso de glucógeno muscular. La estimulación de la síntesis de glucógeno por insulina en el músculo esquelético es el resultado de la desfosforilación y la activación de la sintasa de glucógeno (Villar-Palasi, C. y Larner, J., Biochim. Biophys. Acta, 1960, 39, 171-173; Parker, P.J. y col., Eur. J. Biochem., 1993, 130, 227-234 y Cohen, P., Biochem. Soc. Trans., 1993, 21, 555-567). La fosforilación y la desfosforilación de la GS están mediadas por quinasas y fosfatasas específicas. La GSK-3 es responsable de la fosforilación y la desactivación de GS, mientras que la proteína fosfatasa 1 unida a glucógeno (PP1G) desfosforila y activa la GS. La insulina inactiva la GSK-3 y activa la PP1G (Srivastava, A.K. y Pandey, S.K., Mol. and Cellular Biochem., 1998, 182, 135-141).

Hay estudios que sugieren que un incremento de la actividad GSK-3 podría ser importante en el músculo de los diabéticos de Tipo II (Chen y col., Diabetes, 1994, 43, 1234-1241). La sobreexpresión de GSK-3 \beta y de mutantes de GSK-3 \beta (S9A, S9e) constitutivamente activos en células HEK-293, tuvo como resultado la supresión de la actividad sintasa de glucógeno (Eldar-Finkelman y col., PNAS, 1996, 93, 10228-10233) y la sobreexpresión de GSK-3 \beta en células CHO, que expresaban el receptor de insulina y el sustrato 1 del receptor de insulina (IRS-1) tuvo como resultado una disminución de la acción de la insulina (Eldar-Finkelman y Krebs, PNAS, 1997, 94, 9660-9664). Han surgido pruebas recientes de la implicación de una actividad GSK-3 elevada y del desarrollo de resistencia a insulina y diabetes de Tipo II en tejido adiposo de estudios llevados a cabo en ratones C57BL/6J diabéticos y propensos a obesidad (Eldar-Finkelman y col., Diabetes, 1999, 48, 1662-1666).

Enfermedades Inflamatorias

Estudios en fibroblastos procedentes de ratones "knockout" carentes de GSK-3\beta indican que la inhibición de GSK-3 puede ser útil para el tratamiento de enfermedades o trastornos inflamatorios a través de la regulación negativa de la actividad NFkB (Hoeflich, K.P. y col., Nature, 2000, 406, 86-90).

Trastornos Dermatológicos

El hallazgo de que la estabilización transitoria de la \beta-catenina puede tener una función en el desarrollo del cabello (Gat y col., Cell, 1998, 95, 605-614) sugiere que los inhibidores de la GSK-3 podrían ser utilizados también en el tratamiento de la calvicie.

Trastornos del Sistema Nervioso Central

Además de la modulación de la actividad glucógeno sintasa, la GSK-3 desempeña también un papel importante en los trastornos del SNC. Los inhibidores de GSK-3 pueden tener valor como neuroprotectores en el tratamiento del derrame cerebral agudo y de otras lesiones neurotraumáticas (Pap y Cooper, J. Biol. Chem., 1998, 273, 19929-19932). Se ha demostrado que el litio, un inhibidor a baja mM de GSK-3, protege de la muerte a las neuronas granulares del cerebelo (D'Mello y col., Exp. Cell Res., 1994, 211, 332-338) y el tratamiento crónico con litio tiene una eficacia demostrable en el modelo de derrame cerebral por oclusión de la arteria cerebral media en roedores (Nonaka y Chuang, Neuroreport, 1998, 9(9), 2081-2084).

La catenina tau y la catenina beta, dos sustratos in vivo conocidos de GSK-3, son de relevancia directa en la consideración de aspectos adicionales del valor de los inhibidores de GSK-3 en relación con el tratamiento de condiciones neurodegenerativas crónicas. La hiperfosforilación de tau es un acontecimiento temprano en condiciones neurodegenerativas tales como la Enfermedad de Alzheimer, y se ha postulado que estimula el desensamblaje de los microtúbulos. Se ha informado que el litio reduce la fosforilación de tau, incrementa la unión de tau a los microtúbulos y estimula el ensamblaje de los microtúbulos mediante inhibición directa y reversible de GSK-3 (Hong M. y col., J. Biol. Chem., 1997, 272(40), 25326-32). La \beta-catenina es fosforilada por GSK-3 como parte de un complejo tripartito de proteínas axinas, teniendo como resultado la degradación de la \beta-catenina (Ikeda y col., EMBO J., 1998, 17, 1371-1384). La inhibición de la actividad GSK-3 está implicada en la estabilización de la catenina y estimula la actividad transcripcional de \beta-catenina-LEF-1/TCF (Eastman, Grosscheld, Curr. Opin. Cell Biol., 1999, 11, 233). Hay estudios que han sugerido también que los inhibidores de GSK-3 pueden ser útiles para el tratamiento de la esquizofrenia (Cotter, D. y col., Neuroreport, 1998, 9, 1379-1383; Lijam, N. y col., Cell, 1997, 90, 895-905) y de la depresión maníaca (Manji y col., J. Clin. Psychiatry, 1990, 60, (Suplemento 2) 27-39 para una revisión).

Por consiguiente, los compuestos encontrados útiles como inhibidores de GSK-3 podrían tener una utilidad terapéutica adicional en el tratamiento de la diabetes, de enfermedades inflamatorias, de trastornos dermatológicos y de trastornos del sistema nervioso central.

Realizaciones de la presente invención incluyen la utilización de un compuesto de las Reivindicaciones 1 a 5 para la preparación de un medicamento para el tratamiento o la mejora de una enfermedad mediada por quinasas o por quinasas duales en un sujeto con necesidad de ello, en las que una etapa de un método preferido comprende la administración del inhibidor de la quinasa o de la quinasa dual a un paciente. La cantidad terapéuticamente eficaz de los compuestos de las Reivindicaciones 1 a 5 ejemplificados en tal método es de 0,001 mg/kg/día aproximadamente a 300 mg/kg/día aproximadamente.

Un compuesto individual de la presente invención o una composición farmacéutica del mismo pueden ser administrados separadamente a diferentes tiempos durante el curso de la terapia o simultáneamente en formas de combinación divididas o individuales. Debe comprenderse por tanto que el término "administración" incluye todos esos regímenes de tratamiento simultáneo o alternante.

Un compuesto o una composición farmacéutica del mismo puede ser coadministrado de manera ventajosa en combinación con otros agentes para tratar, reducir o mejorar los efectos de un trastorno mediado por una quinasa o por una quinasa dual. Por ejemplo, en el tratamiento de la diabetes, especialmente de la diabetes de Tipo II, un compuesto de las Reivindicaciones 1 a 5 o una composición farmacéutica del mismo pueden ser utilizados en combinación con otros agentes, especialmente insulina o agentes antidiabéticos incluyendo, pero sin limitarse a, secretagogos de insulina (tales como las sulfonilureas), sensibilizadores a la insulina incluyendo, pero sin limitarse a, sensibilizadores a la insulina de tipo glitazona (tales como las tioazolidindionas) o biguanidas o inhibidores de la glucosidasa \alpha.

El producto de la combinación es un producto que comprende la coadministración de un compuesto de las Reivindicaciones 1 a 5 o de una composición farmacéutica del mismo y un agente adicional para tratar o mejorar una enfermedad mediada por una quinasa o por una quinasa dual, y el producto de la combinación temporal comprende además un producto que es administrado secuencialmente, donde el producto comprende un compuesto de las Reivindicaciones 1 a 5 o una composición farmacéutica del mismo y un agente adicional para el tratamiento o la mejora de una enfermedad mediada por una quinasa o por una quinasa dual, la administración de una composición farmacéutica que contiene un compuesto de las Reivindicaciones 1 a 5 o una composición farmacéutica del mismo y un agente adicional para el tratamiento o la mejora de una enfermedad mediada por una quinasa o por una quinasa dual o la administración esencialmente simultánea de una composición farmacéutica separada que contiene un compuesto de las Reivindicaciones 1 a 5 o una composición farmacéutica del mismo y una composición farmacéutica separada que contiene un agente adicional para tratar o mejorar una enfermedad mediada por una quinasa o por una quinasa dual.

El término "sujeto", según es utilizado en la presente, se refiere a un animal, preferiblemente un mamífero, muy preferiblemente un humano, que ha sido el objeto del tratamiento, observación o experimento.

El término "cantidad terapéuticamente eficaz" según se utiliza en la presente, indica la cantidad de compuesto activo o de agente farmacéutico que produce la respuesta biológica o medicinal en un sistema tisular, animal o humano, que está siendo buscada por un investigador, por un veterinario, por un doctor en medicina o por otro profesional clínico, que incluye el alivio de los síntomas de la enfermedad o trastorno que están siendo tratados.

La naturaleza ubicua de las isoformas de PKC y GSK y sus importantes funciones en fisiología proporcionan un incentivo para producir inhibidores altamente selectivos de PKC y GSK. Dada la evidencia que demuestra la unión de ciertas isoformas a ciertos estados de enfermedad, es razonable asumir que los compuestos inhibidores que son selectivos para una o dos isoformas de PKC o para una isoforma de GSK con relación a las demás isoformas de PKC y GSK y de otras proteína quinasas son agentes terapéuticos superiores. Tales compuestos deberán demostrar una mayor eficacia y una menor toxicidad en virtud de su especificidad. Por consiguiente, una persona con experiencia en la técnica apreciará que un compuesto particular de las Reivindicaciones 1 a 5 es seleccionado cuando es terapéuticamente eficaz para una enfermedad mediada por una quinasa particular o por una quinasa dual particular, sobre la base de la modulación de la enfermedad a través de la demostración de la inhibición selectiva de una quinasa o de una quinasa dual en respuesta a ese compuesto. En los ejemplos se proporcionan experimentos que ejemplifican la inhibición selectiva de quinasas o de quinasas duales. La utilidad de un compuesto de las Reivindicaciones 1 a 5 como inhibidor selectivo de una quinasa o de una quinasa dual puede ser determinada de acuerdo con los métodos descritos en la presente y sobre la base de los datos obtenidos hasta la fecha; se anticipa que un compuesto particular será útil para inhibir una o más enfermedades mediadas por quinasas o por quinasas duales y será por tanto útil en una o más enfermedades mediadas por quinasas o quinasas duales.

Por tanto, el término "enfermedades mediadas por quinasas o por quinasas duales", según se utiliza en la presente, incluye, y no se limita a, enfermedades cardiovasculares, diabetes, trastornos asociados con la diabetes, enfermedades inflamatorias, trastornos inmunológicos, trastornos dermatológicos, trastornos oncológicos y trastornos del SNC.

La enfermedades cardiovasculares incluyen, y no se limitan a, derrame cerebral agudo, insuficiencia cardíaca, isquemia cardiovascular, trombosis, ateroesclerosis, hipertensión, restenosis, retinopatía del prematuro o degeneración macular relacionada con la edad. La diabetes incluye diabetes dependiente de insulina o diabetes Mellitus de Tipo II no dependiente de insulina. Los trastornos asociados con la diabetes incluyen, y no se limitan a, tolerancia disminuida a la glucosa, retinopatía diabética, retinopatía proliferativa, oclusión de la vena retinal, edema macular, cardiomiopatía, nefropatía o neuropatía. Las enfermedades inflamatorias incluyen, y no se limitan a, permeabilidad vascular, inflamación, asma, artritis reumatoide u osteoartritis. Los trastornos inmunológicos incluyen, y no se limitan a, rechazo tisular de trasplantes, VIH-1 o trastornos inmunológicos tratados o mejorados por la modulación de la PKC. Los trastornos dermatológicos incluyen, y no se limitan a, psoriasis, pérdida del cabello o calvicie. Los trastornos oncológicos incluyen, y no se limitan a, cáncer o crecimiento de tumores (tal como cáncer de mama, cerebro, riñón, vejiga, ovario o colon, o leucemia) y otras enfermedades asociadas con una proliferación celular incontrolada tales como tumores benignos recurrentes, incluyendo también angiopatía proliferativa y angiogénesis; e incluye la utilización de los compuestos de las Reivindicaciones 1 a 5 como adjuntos a la quimioterapia y a la radioterapia. Los trastornos del SNC incluyen, y no se limitan a, dolor crónico, dolor neuropático, epilepsia, condiciones neurodegenerativas crónicas (tales como demencia o Enfermedad de Alzheimer), trastornos del estado de ánimo (tales como la esquizofrenia), depresión maníaca o neurotraumática, disminución cognitiva y enfermedades relacionadas con isquemia (como resultado de un trauma en la cabeza (procedente de un derrame cerebral isquémico agudo, de una lesión o de cirugía) o de un derrame cerebral isquémico transitorio (derivado de cirugía de bypass coronario o de otras condiciones isquémicas transitorias)).

Las composiciones farmacéuticas contempladas en esta invención pueden ser preparadas de acuerdo con las técnicas farmacéuticas convencionales. En la composición de la invención puede utilizarse un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición puede tomar una amplia variedad de formas dependiendo de la manera de preparación deseada para la administración incluyendo, pero sin limitarse a, administración intravenosa (bolo e infusión), oral, nasal, transdérmica, tópica con o sin oclusión, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular o parenteral, utilizando todas ellas formas bien conocidas por las personas con experiencia habitual en las técnicas farmacéuticas. Para preparar las composiciones en forma de dosificación oral, pueden emplearse uno o más de los vehículos farmacéuticos habituales tales como agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes aromatizantes, conservantes, agentes colorantes, jarabe y similares en el caso de preparaciones líquidas orales (por ejemplo, suspensiones, elixires y soluciones), o vehículos tales como almidones, azúcares, diluyentes, agentes para granulación, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares en el caso de preparaciones sólidas orales (por ejemplo, polvos, cápsulas y tabletas).

Como es también conocido en la técnica, los compuestos pueden ser administrados alternativamente de forma parenteral mediante la inyección de una formulación que conste del ingrediente activo disuelto en un vehículo líquido inerte. La formulación inyectable puede incluir el ingrediente activo mezclado con un vehículo líquido inerte apropiado. Los vehículos líquidos aceptables incluyen aceites vegetales tales como aceite de cacahuete, aceite de algodón, aceite de sésamo y similares, así como solventes orgánicos tales como Solketal, glicerol, Formal y similares. Como alternativa, pueden utilizarse también formulaciones parenterales acuosas. Por ejemplo, solventes acuosos aceptables incluyen agua, solución de Ringer y una solución salina acuosa isotónica. Además, un aceite no volátil estéril puede ser empleado normalmente como solvente o agente de suspensión en la formulación acuosa. Las formulaciones son preparadas disolviendo o suspendiendo el ingrediente activo en el vehículo líquido de tal manera que la formulación final contenga del 0,005 al 10% en peso del ingrediente activo. Pueden emplearse adecuadamente otros aditivos incluyendo un conservante, un agente de isotonicidad, un solubilizador, un estabilizante y un agente calmante del dolor.

Además, los compuestos de la presente invención pueden ser administrados en forma intranasal mediante el uso tópico de vehículos intranasales adecuados, o a través de vías transdérmicas, utilizando aquellas formas de parches cutáneos transdérmicos bien conocidas por las personas con experiencia habitual en la técnica. Cuando sean administrados en forma de un sistema de administración transdérmica, la administración de la dosis será, por supuesto, continua en lugar de intermitente a lo largo de todo el régimen de dosificación.

Debido a su facilidad de administración, las tabletas y las cápsulas representan una forma ventajosa de unidad de dosificación oral, en la que se emplean vehículos farmacéuticos sólidos. Si se desea, las tabletas pueden ser revestidas con un azúcar o con un revestimiento entérico mediante técnicas estándar.

Para las formas líquidas, el componente farmacológico activo puede ser combinado en agentes de suspensión o dispersión aromatizados adecuadamente tales como las gomas sintéticas y naturales incluyendo, por ejemplo, tragacanto, acacia, metilcelulosa y similares. Otros agentes de dispersión que pueden ser empleados incluyen glicerina y similares.

Los compuestos de la presente invención pueden ser también administrados en forma de sistemas de administración liposomales, tales como vesículas unilamelares pequeñas, vesículas unilamelares grandes y vesículas multilamelares. Los sistemas de administración que contienen liposomas, según son bien conocidos en la técnica, están formados a partir de una variedad de fosfolípidos tales como colesterol, esterearilamina o fosfatidilcolinas.

La presente composición farmacéutica contendrá generalmente por cada unidad de dosificación (por ejemplo, tableta, cápsula, polvo, inyección, cucharadita y similares) de 0,001 aproximadamente a 100 mg/kg aproximadamente. En una realización, la presente composición farmacéutica contiene por unidad de dosificación de 0,01 aproximadamente a 50 mg/kg aproximadamente de compuesto y, preferiblemente, de 0,05 aproximadamente a 20 mg/kg aproximadamente. En la técnica se conocen métodos para determinar las dosis terapéuticamente eficaces de la presente composición farmacéutica. La cantidad terapéuticamente eficaz para administrar la composición farmacéutica a un humano puede ser determinada, por ejemplo, matemáticamente a partir de los resultados de estudios en animales.

Abreviaturas

"Ph" o "PH"	Fenilo
"Boc"	t-Butoxicarbonilo
"PdCl_{2}(PPh_{3})_{2}"	Diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II)
"TFA"	Ácido trifluoroacético
"DIEA"	N,N-diisopropiletilamina
"HMDS"	Hexametildisilazano
"Comp"	Compuesto
"THF"	Tetrahidrofurano
"DMF"	N,N-Dimetilformamida
"TMSCHN_{2}"	Trimetilsilildiazometano
"DMC"	Diclorometano
"DCC"	Diclorohexano carbodiimida
"HOBT"	Hidroxibencil triazol
ta	Temperatura ambiente

Una línea ondulada indica la unión mediante un enlace a una estructura mayor que no se muestra pero que es por lo demás idéntica al compuesto más grande del que se ha extraído el fragmento del compuesto.

Nomenclatura

Los compuestos son denominados de acuerdo con la nomenclatura bien conocida en la técnica y tal nomenclatura se ejemplifica utilizando la numeración siguiente de los anillos:

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23

Los nombres pueden ser generados utilizando un sistema de nomenclatura basado en estos ejemplos, o bien pueden ser generados utilizando un programa de ordenador de nomenclatura química comercial tal como el ACD/Index Name (Advanced Chemistry Development, Inc., Toronto, Ontario).

Ejemplos

Esta invención será comprendida mejor por referencia a los Detalles Experimentales que siguen, pero los expertos en la técnica apreciarán fácilmente que éstos son solamente ilustrativos de la invención según se describe de manera más completa en las reivindicaciones que siguen posteriormente.

Métodos Sintéticos Generales

Los compuestos representativos de la presente invención pueden ser sintetizados de acuerdo con los métodos sintéticos generales descritos más adelante y que están ilustrados más particularmente en los esquemas siguientes. Como los esquemas son ilustraciones, no debe considerarse la invención como limitada por las reacciones químicas y las condiciones expresadas. La preparación de los diferentes materiales de partida utilizados en los esquemas está dentro de la capacidad de las personas versadas en la técnica.

Esquema A

Preparación de los Compuestos Bis(1H-Pirazolo[3,4-B]Piridina)Maleimida de Fórmula (Ic) y de los Compuestos Bis(1H-Pirrolo[2,3-B]Piridina)Maleimida de Fórmula (Ia)

El compuesto A1 (en el que A es seleccionado de nitrógeno y E es seleccionado de carbono para los compuestos de Fórmula (Ia) y A y E son seleccionados de nitrógeno para los compuestos de Fórmula (Ic)) fue disuelto en un solvente adecuado y luego refrigerado. Se añadió cloruro de trimetilestaño bajo una atmósfera inerte para que reaccionara con el Compuesto A1 (abajo) y posteriormente se añadió BuLi. La reacción fue lavada con un solvente acuoso y se purificó el producto Compuesto A2. El Compuesto A2 se hizo reaccionar con un Compuesto A3 2,3-dicloromaleimida en presencia de PdCl_{2}(PPh_{3})_{2} y LiCl en un solvente adecuado. El producto Compuesto A4 puede ser purificado posteriormente mediante cromatografía en columna.

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Esquema B

Preparación de Compuestos Indolil-(Pirrolo[2,3-B]Piridina)Maleimida de Fórmula (Ig) y de Compuestos Indolil-(1H-Pirazolo[3,4-B]Piridina)Maleimida de Fórmula (Ih)

El Compuesto A2 cloro-indolilmaleimida (en el que A es seleccionado de nitrógeno y E es seleccionado de carbono para los compuestos de Fórmula (Ig) y A y E son seleccionados de nitrógeno para los compuestos de Fórmula (Ih)) y el Compuesto B1 fueron diluidos en un solvente adecuado y se hicieron reaccionar en presencia de LiCl y dicloro-bis(trifenilfosfina)paladio(II) en una atmósfera inerte. El grupo protector del Compuesto A2 fue eliminado de un producto intermedio del Compuesto B1 mediante reacción con TFA en un solvente adecuado para dar el producto Compuesto B2.

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Esquema C

Preparación de Polialcoxi Macrociclos

Un Compuesto C1 de cadena hidroxi polialcoxi puede hacerse reaccionar con TsCl o con MsCl para producir un Compuesto C2 o un Compuesto C3 de cadena polialcoxi, respectivamente (preparado según está descrito en Bender, S.L. y Gauthier, D.R., Tetrahedron Lett., 1996, 39(1), 13-16).

El Compuesto A4 (en el que A y E son seleccionados independientemente del grupo que consta de un átomo de carbono y un átomo de nitrógeno) fue disuelto en un solvente adecuado con Cs_{2}CO_{3} a una temperatura elevada. El Compuesto C2 o el Compuesto C3 de cadena polialcoxi fue disuelto en un solvente adecuado y se añadió lentamente a la mezcla de reacción. La reacción fue posteriormente extraída y purificada para dar lugar al producto Compuesto C4.

Utilizando métodos equivalentes, T_{f}O (CF_{3}SO_{3}) o T_{s}O (toluenoSO_{3}) pueden ser acoplados al nitrógeno del anillo del Compuesto C4. El Compuesto C4 fue disuelto en un alcohol, posteriormente en una base y calentado a reflujo. La reacción fue acidificada para formar un Compuesto C5 precipitado. El Compuesto C5 fue disuelto en un solvente adecuado que contenía HMDS y calentado durante un tiempo y a una temperatura suficientes para producir el Compuesto C6. El producto Compuesto C6 puede ser purificado posteriormente mediante cromatografía en columna.

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Esquema D

Preparación de Alquil-(Heteroaril/Aril)-Alquil Macrociclos

El Compuesto A4 (en el que A y E son seleccionados independientemente del grupo que consta de un átomo de carbono y un átomo de nitrógeno) fue diluido en un solvente adecuado que contenía Cs_{2}CO_{3} y se hizo reaccionar a temperatura elevada con el Compuesto D1 (dibromo alquilo(CH_{2})_{1-4}; donde X es un átomo de carbono o de nitrógeno). Las personas expertas en la técnica de la síntesis orgánica apreciarán que el término "temperatura elevada" es utilizado en la presente para referirse a temperaturas que son preferiblemente mayores de 22ºC y preferiblemente inferiores a la temperatura de reflujo. Se entiende que los expertos en la técnica será capaces de variar el tiempo y la temperatura de estas reacciones con el fin de optimizar la producción de los productos. El producto fue extraído y purificado para dar lugar al Compuesto D2. El producto Compuesto D2 fue disuelto en un alcohol y en una base y fue calentado a reflujo. Posteriormente la reacción fue acidificada para formar un producto intermedio precipitado que fue disuelto en un solvente adecuado que contenía HMDS y fue calentado. El producto Compuesto D3 fue purificado mediante cromatografía en columna.

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Esquema E

Macrociclos Multiheteroatómicos Simétricos

El Compuesto A4 (en el que A y E son seleccionados independientemente del grupo que consta de un átomo de carbono y un átomo de nitrógeno) fue diluido en un solvente adecuado que contenía Cs_{2}CO_{3} y se hizo reaccionar a temperatura elevada con un Compuesto E1 (en el que a es alquilo(CH_{2})_{1-6}). El producto fue extraído y purificado para dar un Compuesto E2. El Compuesto E2 se hizo reaccionar con R_{6}NH_{2} en presencia de DIEA (N,N-diisopropiletilamina) en THF a temperatura elevada, posteriormente fue enfriado y evaporado para dar un Compuesto E3. El Compuesto E3 fue disuelto en un alcohol y en una base y calentado a reflujo. Posteriormente la reacción fue acidificada y evaporada. El sólido resultante fue tratado con acetato de amonio a temperatura elevada, enfriado y extraído para proporcionar el Compuesto E4.

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28

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Esquema F

Macrociclos Simétricos de Polialquilamina

El Compuesto A4 (en el que A y E son seleccionados independientemente del grupo que consta de un átomo de carbono y un átomo de nitrógeno) fue diluido en un solvente adecuado que contenía Cs_{2}CO_{3} y se hizo reaccionar a temperatura elevada con un Compuesto F1 (dihaloalquilo(CH_{2})_{1-6}). El producto fue extraído y purificado para dar un Compuesto F2. El Compuesto F2 se hizo reaccionar con un Compuesto F3 NHR_{6}(CH_{2})_{1-6}NR_{7}(CH_{2})_{1-6}NHR_{8} en presencia de DIEA (N,N-diisopropiletilamina) y KI en THF a temperatura elevada. El producto fue enfriado y evaporado para dar un Compuesto F4. El Compuesto F4 fue disuelto en un alcohol y en una base y calentado a reflujo. La reacción fue posteriormente acidificada y evaporada. El sólido resultante fue tratado con acetato de amonio a temperaturas elevadas, enfriado y extraído para formar el Compuesto F5.

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29

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Alternativamente, el Compuesto F2 se hizo reaccionar con un Compuesto F6 NHR_{6}(CH_{2})_{1-6}NHR_{7} o con un Compuesto F8 NHR_{6} para dar un producto Compuesto F7 que tenía dos átomos de nitrógeno en el anillo macrocíclico, o un producto Compuesto F9 que tenía 1 átomo de nitrógeno en el anillo macrocíclico. Después de los procedimientos previamente descritos pueden obtenerse el Compuesto F10 y el Compuesto F11 que tienen una imida no sustituida a partir del Compuesto F7 y del Compuesto F9, respectivamente.

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Esquema G

Macrociclos Asimétricos

Una mezcla del Compuesto G1 (en el que A y E son seleccionados independientemente del grupo que consta de un átomo de carbono y un átomo de nitrógeno) y del Compuesto G2 (en el que b y c son seleccionados independientemente de alquilo(CH_{2})_{0-5}) fue disuelta en un solvente adecuado y posteriormente se hizo reaccionar a temperatura elevada en presencia de carbonato de cesio. La reacción fue filtrada, evaporada y el residuo fue purificado para dar el Compuesto G3. El Compuesto G4 fue disuelto en un solvente apropiado bajo una atmósfera inerte y se añadieron HOBT y DCC. La reacción fue agitada y se añadió lentamente hidróxido de amonio y la reacción fue agitada de nuevo. La reacción fue filtrada y el filtrado fue recogido y extraído con un solvente acuoso. A la solución acuosa se añadió cloruro de sodio y la solución acuosa fue extraída con acetato de etilo. El extracto de acetato de etilo fue secado y evaporado para proporcionar un sólido. El producto sólido fue triturado con éter dietílico y filtrado para dar un Compuesto G5. Un Compuesto G6 fue añadido al Compuesto G5 con carbonato de cesio y la mezcla fue disuelta en un solvente adecuado y agitada a temperatura elevada. La reacción fue filtrada, el filtrado fue evaporado y el residuo purificado para dar el Compuesto G7.

El éster Compuesto G3 y la amida Compuesto G7 fueron disueltos en un solvente adecuado bajo una atmósfera inerte y luego fueron enfriados. Posteriormente, se añadió lentamente a la mezcla de reacción t-butóxido de potasio 1,0 M en THF. La mezcla resultante fue agitada bajo condiciones de refrigeración, se dejó templar y posteriormente se agitó de nuevo. A continuación se añadió HCl concentrado y la reacción fue agitada de nuevo. La muestra fue repartida entre EtOAc y H_{2}O. Se separaron dos capas y la capa acuosa fue extraída con EtOAc. Los extractos combinados fueron lavados con agua, NaHCO_{3} acuoso saturado y salmuera, posteriormente fueron secados y evaporados para dar un Compuesto G8. El Compuesto G8 fue disuelto en un solvente que contenía piridina y posteriormente se añadió Ms_{2}O. La reacción fue agitada a temperaturas elevadas y posteriormente la mezcla fue enfriada a temperatura ambiente. Se añadieron un solvente y un ácido y la mezcla fue agitada y posteriormente extraída. La fase orgánica fue lavada con ácido, agua y salmuera y posteriormente fue secada y evaporada para dar el Compuesto G9. Una solución de Compuesto G9, DIEA (N,N-diisopropiletilamina) y Compuesto G10 R_{6}NH_{2} fue agitada a temperatura elevada. Los compuestos volátiles fueron eliminados bajo vacío y el residuo fue purificado para dar el producto diana Compuesto G11.

31

Ejemplos Sintéticos Específicos

Compuestos específicos que son representativos de esta invención fueron preparados según los ejemplos y secuencias de reacción siguientes; los ejemplos y los diagramas que representan las secuencias de las reacciones se ofrecen a manera de ilustración para facilitar la comprensión de la invención y no deben ser interpretados de ningún modo como limitantes de la invención descrita en las reivindicaciones que siguen posteriormente. Los productos intermedios representados pueden ser también utilizados en ejemplos posteriores para producir compuestos adicionales de la presente invención. No se ha intentado optimizar los rendimientos obtenidos en ninguna de las reacciones. Una persona con experiencia en la técnica sabrá cómo incrementar tales rendimientos mediante variaciones rutinarias de los tiempos de reacción, las temperaturas, los solventes y/o los reactivos.

Los espectros de RMN ^{1}H fueron medidos en un espectrómetro Bruker AC-300 (300 MHz) utilizando tetrametilsilano como estándar interno. Los análisis elementales fueron obtenidos por Quantitative Technologies Inc. (Whitehouse, New Jersey) y los resultados estaban dentro del 0,4% de los valores calculados a no ser que se mencione de otro modo. Los puntos de fusión fueron determinados en tubos capilares abiertos en un aparato Thomas-Hoover y no fueron corregidos. Las rotaciones ópticas fueron medidas a 25ºC con un polarímetro Autopol III. Los espectros de masas por electropulverización (MS-ES) fueron registrados en un espectrómetro Hewlett Packard 59987A. Los espectros de masas de alta resolución (HRMS) fueron obtenidos en un espectrómetro Micromass Autospec. E.

Ejemplo 1

32

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Se añadió cloruro de trimetil estaño (26,5 ml, 1 M en THF, 26,5 mmoles) a una solución en THF (15 ml) de Compuesto 1a 7-aza-1-(ter-butiloxicarbonil)-3-yodoindol (1,82 g, 5,3 mmoles, Kelly, T.A., J. Med. Chem., 1997, 40, 2430) a -78ºC bajo nitrógeno. Después de 10 minutos, se añadió gota a gota n-BuLi (10 ml, 1,6 M en hexano, 16 mmoles) a -78ºC y la reacción se dejó templar hasta 20ºC durante una noche. Se añadió agua (4 ml) y el solvente fue eliminado bajo vacío. El residuo fue diluido con hexano (250 ml) y la capa orgánica fue lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (SiO_{2}) para dar 1,198 g (60%) del Compuesto 1b de organoestaño como un aceite: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,45 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,13 (dd, J = 7,7, 4,8 Hz, 1H), 1,65 (s, 9H), 0,36 (m, 9H); MS (ES) m/z
405 (M+Na).

Una mezcla de Compuesto 1b (185 mg, 0,486 mmoles), Compuesto 1c 2,3-dicloromaleimida (29 mg, 0,162 mmoles, preparado según está descrito en J. Org. Chem., 1998, 63, 1961), PdCl_{2}(PPh_{3})_{2} (5,4 mg, 0,0077 mmoles) y LiCl (32 mg, 0,77 mmoles) en tolueno anhidro (2 ml) fue agitada a 95ºC durante una noche. El solvente fue eliminado bajo vacío. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (SiO_{2}) para dar 23 mg del Compuesto 1d como un sólido de color rojo anaranjado: RMN ^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,35 (s, 2H), 8,12 (ancho, J = 3,9 Hz, 2H), 7,92 (s, 2H), 7,08 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 6,73 (m, 2H), 3,06 (s, 3H); MS (ES) m/z 344 (M+H^{+}).

Preparación del Compuesto 1

El Compuesto 1f tetraetilénbismesilato (0,252 g, 0,72 mmoles) en DMF (5,4 ml) fue añadido mediante una bomba de jeringa durante 3 horas a una suspensión de Cs_{2}CO_{3} (0,51 g, 1,56 mmoles) y del Compuesto 1d material de partida (0,162 g, 0,48 mmoles) en DMF (24 ml) a 100ºC. Una vez que se completó la adición, la mezcla de reacción fue enfriada a 20ºC y agitada durante 3 horas. La mezcla de reacción fue diluida con NH_{4}Cl_{(acuoso)} y el producto fue extraído en CH_{2}Cl_{2}. La capa orgánica fue lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar 0,075 g (31%) del Compuesto 1i como un sólido naranja rojizo: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,32 (m, 2H), 7,80 (s, 2H), 7,61 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 6,99 (m, 2H), 4,50 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,71 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,22 (m, 11H); MS (ES) m/z
502 (M+H^{+}).

Una mezcla de Compuesto 1i (0,083 g, 0,16 mmoles) en EtOH (1 ml) y KOH 10 N (1,6 mmoles) fue calentada a reflujo suave a 78ºC durante una noche. La mezcla de reacción fue enfriada a 0ºC y acidificada con HCl 1 N. Se añadió CH_{2}Cl_{2} y la capa orgánica fue separada y lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada para proporcionar el producto Compuesto 1m (0,074 g, 81%) como un sólido rojo que fue utilizado directamente. Una solución en MeOH (0,05 ml) que contenía HMDS (0,24 g, 1,5 mmoles) fue añadida a una solución de Compuesto 1m (0,074 g, 0,15 mmoles) en DMF (1,0 ml). La reacción fue calentada a 80ºC durante 6 horas. Después de su finalización, la reacción fue enfriada y el solvente fue evaporado bajo vacío. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar 0,067 g (91%) de Compuesto 1 como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,32 (d, J = 4,3 Hz, 2H), 7,81 (s, 2H), 7,60 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,49 (s, 1H), 7,00 (m, 2H), 4,50 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,71 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,23 (m, 8H); MS (ES) m/z 488 (M+H^{+}).

Preparación del Compuesto 2

El Compuesto 1g pentaetilenbismesilato (0,3 g, 0,76 mmoles) en DMF (6 ml) fue añadido mediante una bomba de jeringa durante 4 horas a una suspensión de Cs_{2}CO_{3} (0,41 g, 1,27 mmoles) y Compuesto 1d material de partida (0,2 g, 0,58 mmoles) en DMF (18 ml) a 100ºC. Una vez que la adición fue completada, la mezcla de reacción fue enfriada a 20ºC y agitada durante 3 horas. La mezcla de reacción fue diluida con NH_{4}Cl_{(acuoso)} después de que fuera enfriada a 0ºC en un baño de hielo. El producto fue extraído en CH_{2}Cl_{2}. La capa orgánica fue lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar 0,126 g (39%) del Compuesto 1j como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,32 (m, 2H), 7,80 (s, 2H), 7,57 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 2H), 7,00 (m, 2H), 4,44 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,77 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,43 (m, 12H), 3,20 (s, H); MS (ES) m/z 546 (M+H^{+}).

Una mezcla de Compuesto 1j (0,094 g, 0,17 mmoles) en EtOH (1 ml) y KOH 10 N (1,7 mmoles) fue calentada a reflujo suave a 78ºC durante una noche. La mezcla de reacción fue enfriada a 0ºC y acidificada con HCl 1 N. Se añadió CH_{2}Cl_{2} y la capa orgánica fue separada y lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. El producto Compuesto 1n (0,075 g, 81%) fue obtenido como un sólido naranja y utilizado directamente. Una solución en MeOH (0,05 ml) que contenía HMDS (0,23 g, 1,4 mmoles) fue añadida a una solución de Compuesto 1n (0,075 g, 0,14 mmoles) en DMF (1,0 ml). La reacción fue calentada a 80ºC durante 5½ horas. Después de su finalización, la reacción fue enfriada y el solvente fue evaporado bajo vacío. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar 0,038 g (51%) de Compuesto 2 como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,32 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 7,83 (s, 2H), 7,66 (s, 1H), 7,57 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 6,99 (m, 2H), 4,45 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 3,77 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 3,45 (m, 12H); MS (ES) m/z 532 (M+H^{+}).

Preparación del Compuesto 3

El Compuesto 1h hexaetilenbismesilato (0,33 g, 0,76 mmoles) en DMF (6 ml) fue añadido mediante una bomba de jeringa durante 3 horas a una suspensión de Cs_{2}CO_{3} (0,41 g, 1,27 mmoles) y Compuesto 1d material de partida (0,2 g, 0,58 mmoles) en DMF (18 ml) a 100ºC. Una vez que la adición fue completada, la mezcla de reacción fue enfriada a 20ºC y agitada durante 3 horas. La mezcla de reacción fue diluida con NH_{4}Cl_{(acuoso)} después de que fuera enfriada a 0ºC en un baño de hielo. El producto fue extraído en CH_{2}Cl_{2}. La capa orgánica fue lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar 0,81 g (24%) del Compuesto 1k como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,27 (m, 2H), 7,89 (s, 2H), 7,42 (dd, J = 9,4, 1,4 Hz, 2H), 6,89 (m, 2H), 4,47 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,80 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,46 (s, 8H), 3,41 (s, 8H), 3,20 (s, 3H); MS (ES) m/z 590 (M+H^{+}).

Una mezcla de Compuesto 1k (0,073 g, 0,12 mmoles) en EtOH (1 ml) y KOH 10 N (1,2 mmoles) fue calentada a reflujo suave a 78ºC durante una noche. La mezcla de reacción fue enfriada a 0ºC y acidificada con HCl 1 N. Se añadió CH_{2}Cl_{2} y la capa orgánica fue separada y lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar el Compuesto 1o (0,05 g, 70%) como un sólido naranja y fue utilizado directamente. Una solución en MeOH (0,05 ml) que contenía HMDS (0,14 g, 0,087 mmoles) fue añadida a una solución de Compuesto 1o (0,05 g, 0,087 mmoles) en DMF (1,0 ml). La reacción fue calentada a 80ºC durante 5 horas. Después de su finalización, la reacción fue enfriada y el solvente fue evaporado bajo vacío. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar 0,044 g (88%) de Compuesto 3 como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,29 (m, 2H), 7,90 (s, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,42 (dd, J = 8,0, 1,4 Hz, 2H), 6,90 (m, 2H), 4,48 (t, J = 4,9 Hz, 4H), 3,81 (t, J = 4,9 Hz, 4H), 3,47 (s, 8H), 3,43 (s, 8H); MS (ES) m/z 576 (M+H^{+}).

Preparación del Compuesto 28

Una solución de tri(etilén glicol) (4,97 g, 33,1 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (40 ml) fue enfriada a -40ºC. Se añadió trietilamina (13,8 ml, 99,3 mmoles), seguido por una solución en CH_{2}Cl_{2} (15 ml) de MsCl (6,4 ml, 82,8 mmoles). La mezcla fue agitada a 0ºC durante 1 hora y vertida en agua de hielo (150 ml). Las capas fueron separadas y la fase acuosa fue extraída con CH_{2}Cl_{2} (3 x 15 ml). Las capas orgánicas fueron combinadas, lavadas secuencialmente con HCl al 5% (15 ml), agua (15 ml), NaHCO_{3} al 5% (15 ml) y agua (15 ml), secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas bajo presión reducida para dar el Compuesto 1e (según el procedimiento descrito en Liebigs Ann. Chem., 1994, 12, 1199-1209) (9,13 g, 90%) como un aceite amarillo: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 4,36-4,39 (m, 4H), 3,76-3,79 (m, 4H), 3,68 (s, 4H),
3,07 (s, 6H).

Una mezcla de Compuesto 1d (40 mg, 71% de pureza, 0,2 mmoles), Cs_{2}CO_{3} (115 mg, 0,35 mmoles) y DMF (6 ml) fue calentada a 100ºC. El Compuesto 1e trietilenbismesilato (54 mg, 0,18 mmoles) en solución con DMF (1,5 ml) fue añadido mediante una bomba de jeringa a lo largo de 0,5 horas. Una vez que se completó la adición, la mezcla fue agitada a 20ºC durante 15 horas, amortiguada con NH_{4}Cl acuoso (6 ml) y extraída con EtOAc (2 x 25 ml). Las capas fueron separadas y la fase orgánica fue lavada con agua (15 ml), secada posteriormente (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. La purificación por cromatografía en columna de gel de sílice (elución con CH_{2}Cl_{2}/Acetona) dio lugar al Compuesto 1l (25 mg, 67%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,35 (dd, J = 4,7, 1,4 Hz, 2H), 8,11 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 2H), 7,63 (s, 2H), 7,12-7,16 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 2H), 4,42 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,77 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,45 (s, 4H), 3,20 (s, 3H); MS (ES) m/z 458 (M+H^{+}).

Una mezcla de Compuesto 1l (47 mg, 0,10 mmoles), etanol (2 ml) y KOH 10 N (0,1 ml) fue calentada a 80ºC durante 15 horas. Después de eliminar el solvente, el residuo fue diluido con agua (2 ml) y se hizo ácido con HCl 1 N a pH 2. La mezcla fue extraída con CH_{2}Cl_{2} (4 x 15 ml) y las capas orgánicas fueron combinadas, secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas para proporcionar el producto Compuesto 1p. El Compuesto 1p fue disuelto en DMF (1 ml) y se añadió una mezcla de HMDS (1,1,1,3,3,3-hexametildisilazano) (0,25 ml, 1,0 mmoles) y metanol (0,06 ml). La mezcla fue calentada a 80ºC durante 5,5 horas, posteriormente enfriada a 20ºC y concentrada bajo presión reducida. La purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice (elución con CH_{2}Cl_{2}/Acetona) produjo el Compuesto 28 (27 mg, 60%) como un sólido rojo: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,35 (dd, J = 4,7, 1,5 Hz, 2H), 8,10 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 2H), 7,65 (s, 2H), 8,12-8,17 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 2H), 4,41 (t, J = 4,9 Hz, 4H), 3,77 (t, J = 4,9 Hz, 4H), 3,44 (s, 4H); MS (ES) m/z 444 (M+H^{+}).

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Ejemplo 2

34

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Preparación del Compuesto 4

El Compuesto 1e trietilenbismetilato (0,58 g, 1,9 mmoles) en DMF (15 ml) fue añadido mediante una bomba de jeringa durante 3 horas a una suspensión de Cs_{2}CO_{3} (1,0 g, 3,2 mmoles) y Compuesto 2a material de partida (0,5 g, 1,5 mmoles, preparado según está descrito en Synthesis, 1995, 1511) en DMF (40 ml) a 100ºC. A continuación, la mezcla de reacción fue enfriada a 20ºC y agitada durante 3 horas. La mezcla de reacción fue diluida con NH_{4}Cl_{(acuoso)} y el producto fue extraído en CH_{2}Cl_{2}. La capa orgánica fue lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar 0,29 g (43%) del Compuesto 2c como un sólido marrón rojizo: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,79 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,41 (s, 2H), 7,23 (m, 6H), 4,20 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,68 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,34 (s, 4H), 3,19 (s, 3H); MS (ES) m/z
456 (M+H^{+}).

Una mezcla de Compuesto 2b (0,1 g, 0,22 mmoles) en EtOH (1 ml) y KOH 10 N (2,2 mmoles) fue calentada a reflujo suave a 78ºC durante una noche. La mezcla de reacción fue enfriada a 0ºC y acidificada con HCl 1 N. Se formó un precipitado de color rojo oscuro. Se añadió CH_{2}Cl_{2} y la capa orgánica fue separada y lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. Se obtuvo el producto Compuesto 2f (0,088 g, 91%) como un sólido rojo oscuro y se utilizó directamente. Una solución en MeOH (0,05 ml) que contenía HMDS (0,32 g, 1,97 mmoles) fue añadida a una solución de Compuesto 2f (0,088 g, 0,2 mmoles) en DMF (1,5 ml). La reacción fue calentada a 80ºC durante 6 horas. Después de su finalización, la reacción fue enfriada y el solvente fue evaporado bajo vacío. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar 0,32 g (36%) de Compuesto 4 como un sólido de color rojo oscuro después de recristalización a partir de (CH_{2}Cl_{2}/Hexano): RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,77 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,43 (s, 2H), 7,26 (m, 6H), 4,20 (m, 4H), 3,69 (m, 4H), 3,34 (s, 4H); MS (ES) m/z
442 (M+H^{+}).

Preparación del Compuesto 5

El Compuesto 1f trietilenbismetilato (1,9 mmoles) en DMF (15 ml) fue añadido mediante una bomba de jeringa durante 3 horas a una suspensión de Cs_{2}CO_{3} (1,0 g, 3,2 mmoles) y Compuesto 2a material de partida (0,5 g, 1,5 mmoles) en DMF (40 ml) a 100ºC. La mezcla de reacción fue enfriada a 20ºC y agitada durante 2 horas. La mezcla de reacción fue diluida con NH_{4}Cl_{(acuoso)} y el producto fue extraído en CH_{2}Cl_{2}. La capa orgánica fue lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar 0,457 g (62%) del Compuesto 2c: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,60 (s, 2H), 7,33 (t ancho, J = 9,3 Hz, 4H), 7,19 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 6,99 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 4,25 (t, J = 4,3 Hz, 4H), 3,66 (m, 4H), 3,18 (m, 11H); MS (ES) m/z 500 (M+H^{+}). Análisis Calculado para C_{29}H_{29}N_{3}O_{5}\cdot0,45H_{2}O: C, 68,61; H, 5,94; N, 8,28. Encontrado: C, 68,86; H, 6,12; N, 7,91.

Una mezcla del Compuesto 2c (0,1 g, 0,2 mmoles) en EtOH (1 ml) y KOH 10 N (2,0 mmoles) fue calentada a reflujo suave a 78ºC durante una noche. La mezcla de reacción fue enfriada a 0ºC y acidificada con HCl 1 N. Se formó un precipitado de color rojo oscuro. Se añadió CH_{2}Cl_{2} y la capa orgánica fue separada y lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. El producto Compuesto 2g (0,097 g, 100%) fue obtenido como un sólido de color rojo oscuro y utilizado directamente. Una solución en MeOH (0,05 ml) que contenía HMDS (0,32 g, 1,97 mmoles) fue añadida a una solución de Compuesto 2g (0,097 g, 0,2 mmoles) en DMF (1,5 ml). La reacción fue calentada a 80ºC durante 6 horas. Después de su finalización, la reacción fue enfriada y el solvente fue evaporado bajo vacío. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar 0,78 g (80%) de Compuesto 5 como un sólido naranja después de recristalización a partir de (CH_{2}Cl_{2}/Hexano): RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,61 (s, 2H), 7,34 (m, 5H), 7,19 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 6,99 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 4,25 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,66 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,18 (s, 8H); MS (ES) m/z 486 (M+H^{+}). Análisis Calculado para C_{28}H_{27}N_{3}O_{5}: C, 69,26; H, 5,60; N, 8,65. Encontrado: C, 69,49; H, 5,86; N, 8,34.

Preparación del Compuesto 6

El Compuesto 1g pentaetilenbismetilato (0,75 g, 1,9 mmoles) en DMF (15 ml) fue añadido mediante una bomba de jeringa durante una noche a una suspensión de Cs_{2}CO_{3} (1,0 g, 3,2 mmoles) y Compuesto 2a material de partida (0,5 g, 1,5 mmoles) en DMF (40 ml) a 100ºC. La mezcla de reacción fue enfriada a 20ºC y agitada durante 2 horas. La mezcla de reacción fue diluida con NH_{4}Cl_{(acuoso)} y el producto fue extraído en CH_{2}Cl_{2}. La capa orgánica fue lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar 0,44 g (56%) del Compuesto 2d: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,56 (s, 2H), 7,32 (t, J = 7,5 Hz, 4H), 7,21 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 7,01 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 4,22 (t, J = 4,9 Hz, 4H), 3,72 (t, J = 4,9 Hz, 4H), 3,47 (s, 4H), 3,42 (m, 4H), 3,34 (m, 4H), 3,20 (s, 3H); MS (ES) m/z 544 (M+H^{+}).

Una mezcla del Compuesto 2d (0,12 g, 0,22 mmoles) en EtOH (1 ml) y KOH 10 N (2,2 mmoles) fue calentada a reflujo suave a 78ºC durante una noche. La mezcla de reacción fue enfriada a 0ºC y acidificada con HCl 1 N. Se formó un precipitado de color rojo oscuro. Se añadió CH_{2}Cl_{2} y la capa orgánica fue separada y lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. Se obtuvo el producto Compuesto 2h (0,12 g, 100%) como un sólido de color rojo oscuro y se utilizó directamente. Una solución en MeOH (0,05 ml) que contenía HMDS (0,36 g, 2,3 mmoles) fue añadida a una solución de Compuesto 2h (0,12 g, 0,23 mmoles) en DMF (1,5 ml). La reacción fue calentada a 80ºC durante 6 horas. Después de su finalización, la reacción fue enfriada y el solvente fue evaporado bajo vacío. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar 0,066 g (55%) de Compuesto 6 como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,58 (s, 2H), 7,42 (s, 1H), 7,33 (m, 4H), 7,23 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 7,02 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 4,22 (t, J = 4,9 Hz, 4H), 3,72 (t, J = 4,9 Hz, 4H), 3,48 (s, 4H), 3,43 (m, 4H), 3,35 (m, 4H); MS (ES) m/z 530 (M+H^{+}). Análisis Calculado para C_{30}H_{31}N_{3}O_{6}\cdot0,7H_{2}O: C, 66,46; H, 6,02; N, 7,75. Encontrado: C, 66,35; H, 6,17; N, 7,50.

Preparación del Compuesto 7

El Compuesto 1h hexaetilenbismetilato (0,84 g, 1,9 mmoles) en DMF (15 ml) fue añadido mediante una bomba de jeringa durante una noche a una suspensión de Cs_{2}CO_{3} (1,0 g, 3,2 mmoles) y Compuesto 2a material de partida (0,5 g, 1,5 mmoles) en DMF (40 ml) a 100ºC. La mezcla de reacción fue enfriada a 20ºC y agitada durante 2 horas. La mezcla de reacción fue diluida con NH_{4}Cl_{(acuoso)} y el producto fue extraído en CH_{2}Cl_{2}. La capa orgánica fue lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar 0,18 g (21%) del Compuesto 2e: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,63 (s, 2H), 7,40 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,17 (m, 4H), 6,92 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 4,25 (t, J = 5,1 Hz, 4H), 3,75 (t, J = 5,1 Hz, 4H), 3,40 (m, 16H), 3,20 (s, 3H); MS (ES) m/z 588 (M+H^{+}).

Una mezcla del Compuesto 2e (0,13 g, 0,22 mmoles) en EtOH (1 ml) y KOH 10 N (2,2 mmoles) fue calentada a reflujo suave a 78ºC durante una noche. La mezcla de reacción fue enfriada a 0ºC y acidificada con HCl 1 N. Se formó un precipitado de color rojo oscuro. Se añadió CH_{2}Cl_{2} y la capa orgánica fue separada y lavada con agua, secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. El producto Compuesto 2i (0,12 g, 92%) fue obtenido como un sólido de color rojo oscuro y se utilizó directamente. Una solución en MeOH (0,05 ml) que contenía HMDS (0,34 g, 2,1 mmoles) fue añadida a una solución de Compuesto 2i (0,12 g, 0,21 mmoles) en DMF (1,5 ml). La reacción fue calentada a 80ºC durante 5 horas. Después de su finalización, la reacción fue enfriada y el solvente fue evaporado bajo vacío. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar 0,096 g (80%) de Compuesto 7 como un sólido de color rojo: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,64 (s, 2H), 7,36 (s, 3H), 7,17 (m, 4H), 6,93 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 4,26 (t, J = 5,1 Hz, 4H), 3,75 (t, J = 5,1 Hz, 4H), 3,43 (m, 16H); MS (ES) m/z 574 (M+H^{+}). Análisis Calculado para C_{32}H_{35}N_{3}O_{7}: C, 67,00; H, 6,15; N, 7,33. Encontrado: C, 66,63; H, 6,26; N, 7,21.

350

Ejemplo 3

36

37

Preparación del Compuesto 8

Una mezcla del Compuesto 3b cloro-indolilmaleimida (0,929 g, 3,57 mmoles, preparado según está descrito en Synthesis, 1995, 1511), el Compuesto 3a de organoestaño (1,59 g, 3,57 mmoles), cloruro de litio (2,06 g, 49 mmoles) y diclorobis(trifenilfosfina)paladio (II) (0,34 g, 0,49 mmoles) en tolueno (45 ml) fue calentada a 95ºC bajo nitrógeno durante una noche. La mezcla de reacción fue concentrada bajo vacío y se añadieron CH_{2}Cl_{2} (7,2 ml) y TFA (2,5 ml). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 2,5 horas y posteriormente concentrada bajo vacío. El residuo fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/Acetona) para dar una mezcla de un producto naranja y un producto intermedio 7-azaindol. El producto bruto fue triturado en éter para eliminar el 7-azaindol y se recogió mediante filtración un sólido naranja de Compuesto 3c (0,376 g, 31%): RMN ^{1}H (300 MHz, Acetona-d_{6}) \delta 8,05 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,35 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,97 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,68 (m, 3H), 3,13 (s, 3H); FAB-HRMS (M+H^{+}): Calculado para C_{20}H_{15}N_{4}O_{2} 343,1195, encontrado 343,1205.

Un Compuesto 3d arilo/heteroarilo dihalo sustituido (tal como \alpha,\alpha'-dibromo-m-xileno; en el que X es un átomo de carbono y halo es un átomo de bromo) (200 mg, 0,756 mmoles) en DMF (10 ml) fue añadido durante un periodo de 2 horas con una bomba de jeringa a una suspensión de Compuesto 3c (246 mg, 0,72 mmoles) y Cs_{2}CO_{3} (394 mg, 1,2 mmoles) en DMF (20 ml) a 100ºC y se mantuvo a 100ºC durante 20 horas. La mezcla fue concentrada bajo vacío. Se añadió agua y se extrajo el residuo con acetato de etilo y luego con CH_{2}Cl_{2}. Los extractos fueron combinados, secados (Na_{2}SO_{4}) y concentrados. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/acetona como solvente) para dar 135 mg (42%) de Compuesto 3e como un sólido de color rojo ladrillo después de recristalización a partir de acetato de etilo/hexanos: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,38 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 8,21 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,25 (m, 6H), 7,09 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,69 (s, 1H), 5,42 (s, 2H), 5,16 (s, 2H), 3,23 (s, 3H); FAB-HRMS (M+H^{+}): Calculado para C_{27}H_{19}N_{4}O_{2} 445,1664, encontrado 445,1660.

Una mezcla de Compuesto 3e (135 mg, 0,304 mmoles) y KOH 10 N (0,85 ml) en etanol (5 ml) fue calentada a reflujo suave durante una noche. La mezcla de reacción fue enfriada en un baño de hielo, se añadió HCl 1 N (10 ml) y la mezcla se agitó a 0ºC durante 1 hora. La mezcla de reacción fue repartida entre CH_{2}Cl_{2} (40 ml) y NaHCO_{3(acuoso)} (40 ml). La capa acuosa separada fue extraída de nuevo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas bajo vacío para dar un Compuesto 3g anhídrido bruto (48 mg). Una solución en MeOH (0,12 ml) que contenía hexametildisilazano (HMDS) (0,68 g, 4,2 mmoles) fue añadida a una solución de Compuesto 3g en DMF (2 ml). La mezcla de reacción fue calentada durante una noche a 80ºC. La mezcla de reacción enfriada fue concentrada bajo vacío, el producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/acetona como solvente) para dar 28 mg (21%) de Compuesto 8 como un sólido de color rojo ladrillo después de recristalización a partir de éter: RMN ^{1}H (300 MHz, Metanol-d_{4}) \delta 8,28 (m, 1H), 8,22 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,18 (m, 9H), 6,68 (s, 1H), 5,35 (s, 2H), 5,19 (s, 2H); FAB-HRMS (M+H^{+}): Calculado para C_{27}H_{19}N_{4}O_{2} 431,1508, encontrado 431,1506.

Preparación del Compuesto 9

Un Compuesto 3d arilo/heteroarilo dihalo sustituido (tal como 2,6-bis(clorometil)piridina; en el que X es un átomo de nitrógeno y halo es un átomo de cloro) (133 mg, 0,756 mmoles) en DMF (20 ml) fue añadido a lo largo de un periodo de 2 horas con una bomba de jeringa a una suspensión de Compuesto 3c (246 mg, 0,72 mmoles) y Cs_{2}CO_{3} (394 mg, 1,2 mmoles) en DMF (20 ml) a 100ºC y se mantuvo a 100ºC durante 20 horas. La mezcla de reacción fue concentrada bajo vacío. Se añadió agua y se extrajo el residuo con acetato de etilo y luego con CH_{2}Cl_{2}. Los extractos fueron combinados, secados (Na_{2}SO_{4}) y concentrados. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/acetona como solvente) para dar 103 mg (32%) de Compuesto 3f como un sólido de color rojo ladrillo después ser recristalizado a partir de acetato de etilo/hexanos: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,30 (m, 2H), 7,94 (d ancho, J = 8,3 Hz, 1H), 7,64 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,27 (m, 7H), 5,56 (s, 2H), 5,28 (s, 2H), 3,25 (s, 3H); FAB-HRMS (M+H^{+}): Calculado para C_{27}H_{20}N_{5}O_{2} 446,1617, encontrado 446,1630.

Una mezcla de Compuesto 3f (87 mg, 0,194 mmoles) y KOH 10 N (0,55 ml) en etanol (3 ml) fue calentada a reflujo suave durante una noche. La mezcla de reacción fue enfriada en un baño de hielo. Se añadieron HCl 12 N (1 ml) y CH_{2}Cl_{2} (6 ml) y se agitó la mezcla de reacción a 0ºC durante 1 hora. La mezcla de reacción fue repartida entre CH_{2}Cl_{2} (40 ml) y NaHCO_{3(acuoso)} (40 ml). La capa acuosa separada fue extraída de nuevo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas bajo vacío para dar un Compuesto 3h anhídrido (66 mg). Una solución en MeOH (0,12 ml) que contenía HMDS (0,678 g, 2,1 mmoles) fue añadida a una solución de Compuesto 3h en DMF (4 ml). La mezcla de reacción fue calentada durante una noche a 80ºC. La mezcla de reacción enfriada fue concentrada bajo vacío, el producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/acetona como solvente) para dar 50 mg (60%) de Compuesto 9 como un sólido de color púrpura: RMN ^{1}H (300 MHz, Acetona-d_{6}) \delta 9,82 (s ancho, 1H), 8,27 (m, 2H), 7,85 (m, 2H), 7,61-7,39 (m, 5H), 7,17 (m, 3H), 5,67 (s, 2H), 5,52 (s, 2H); MS (ES) m/z 432 (M+H^{+}). Análisis Calculado para C_{25}H_{17}N_{5}O_{2}\cdotH_{2}O: C, 69,48; H, 4,26; N, 15,58. Encontrado: C, 69,20; H, 4,04; N, 15,45.

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\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
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Ejemplo 4

39

40

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Preparación del Compuesto 10

El Compuesto 1e bismesilato (220 mg, 0,72 mmoles) en DMF (10 ml) fue añadido durante un periodo de 2 horas con una bomba de jeringa a una suspensión de Compuesto 3c (246 mg, 0,72 mmoles) y Cs_{2}CO_{3} (394 mg, 1,2 mmoles) en DMF (20 ml) a 100ºC y se mantuvo a 100ºC durante 20 horas. La mezcla fue concentrada bajo vacío. Se añadió agua y el residuo fue extraído con CH_{2}Cl_{2}, secado posteriormente (Na_{2}SO_{4}) y concentrado. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/acetona como solvente) para dar 160 mg (49%) de Compuesto 4a como un sólido de color rojo ladrillo: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,33 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,25 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,34 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,26 (m, 1H), 7,16 (m, 2H), 4,37 (t, J = 4,5 Hz, 2H), 4,27 (t, J = 4,7 Hz, 2H), 3,76 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,69 (t, J = 4,5 Hz, 2H), 3,38 (m, 4H), 3,20 (s, 3H); MS (ES) m/z 457 (M+H^{+}). Análisis Calculado para C_{26}H_{24}N_{4}O_{4}\cdot1,5H_{2}O: C, 64,59; H, 5,63; N, 11,59. Encontrado: C, 64,99; H, 5,27; N, 11,44.

Una mezcla de Compuesto 4a (124 mg, 0,271 mmoles) y KOH 10 N (0,77 ml) en etanol (4,2 ml) fue calentada a reflujo suave durante una noche. La mezcla de reacción fue enfriada en un baño de hielo, se añadieron HCl 12 N (2,3 ml) y CH_{2}Cl_{2} (3 ml) y la mezcla de reacción fue agitada a 0ºC durante 20 minutos. La mezcla de reacción fue repartida entre CH_{2}Cl_{2} (40 ml) y NaHCO_{3(acuoso)} (40 ml). La capa acuosa separada fue extraída de nuevo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas bajo vacío para dar un Compuesto 4c anhídrido bruto (120 mg). Una solución en MeOH (0,2 ml) que contenía HMDS (1,19 g, 7,46 mmoles) fue añadida a una solución del anhídrido en DMF (7 ml). La mezcla de reacción fue calentada durante una noche a 80ºC. La mezcla de reacción enfriada fue concentrada bajo vacío y el producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/acetona como solvente) para dar 39 mg (33%) de Compuesto 10 como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 11,05 (s ancho, 1H), 8,29 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,54 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,18 (m, 2H), 7,05 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 4,36 (m, 4H), 3,68 (m, 4H), 3,39 (m, 4H); FAB-HRMS (M+H^{+}): Calculado para C_{25}H_{23}N_{4}O_{4} 443,1719, encontrado 443,1713.

Preparación del Compuesto 11

El Compuesto 1f bismesilato (252 mg, 0,72 mmoles) en DMF (10 ml) fue añadido durante un periodo de 2 horas con una bomba de jeringa a una suspensión de Compuesto 3c (246 mg, 0,72 mmoles) y Cs_{2}CO_{3} (394 mg, 1,2 mmoles) en DMF (20 ml) a 100ºC y se mantuvo a 100ºC durante 20 horas. La mezcla fue concentrada bajo vacío. Se añadió agua y el residuo fue extraído con CH_{2}Cl_{2}, secado (Na_{2}SO_{4}) y concentrado. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/acetona como solvente) para dar 100 mg (27%) de Compuesto 4b como un sólido naranja después de la recristalización a partir de acetato de etilo/hexanos: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,34 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,40 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,14 (m, 2H), 6,90 (m, 2H), 4,44 (m, 2H), 4,35 (m, 2H), 3,77 (m, 2H), 3,60 (m, 2H), 3,38 (m, 4H), 3,20 (s, 3H), 3,02 (m 4H); MS (ES) m/z 501 (M+H^{+}). Análisis Calculado para C_{28}H_{28}N_{4}O_{5}\cdot0,5H_{2}O: C, 66,00; H, 5,74; N, 11,00. Encontrado: C, 65,88; H, 5,75; N, 10,93.

Una mezcla de Compuesto 4b (58 mg, 0,116 mmoles) y KOH 10 N (0,33 ml)en etanol (1,8 ml) fue calentada a reflujo suave durante una noche. La mezcla de reacción fue enfriada en un baño de hielo, se añadieron HCl 12 N (1 ml) y CH_{2}Cl_{2} (6 ml) y la mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 20 minutos. La mezcla de reacción fue repartida entre CH_{2}Cl_{2} (40 ml) y NaHCO_{3(acuoso)} (40 ml). La capa acuosa separada fue extraída de nuevo con CH_{2}Cl_{2} (2 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas bajo vacío para dar un Compuesto 4c anhídrido bruto (60 mg). Una solución en MeOH (0,1 ml) que contenía HMDS (0,51 g, 3,2 mmoles) fue añadida a una solución del anhídrido en DMF (3 ml). La mezcla de reacción fue calentada durante una noche a 80ºC. La mezcla de reacción enfriada fue concentrada bajo vacío y posteriormente el producto fue purificado mediante cromatografía en columna (CH_{2}Cl_{2}/acetona como solvente) para dar 47 mg (83%) de Compuesto 11 como un sólido de color naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, Acetona-d_{6}) \delta 9,66 (s ancho, 1H), 8,31 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,98 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,56 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,12 (m, 2H), 6,87 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 4,43 (m, 4H), 3,83 (m, 2H), 3,61 (m, 2H), 3,33 (m, 4H), 3,07 (s, 4H). Análisis Calculado para C_{27}H_{26}N_{4}O_{5}\cdot0,7H_{2}O: C, 64,97; H, 5,53; N, 11,22. Encontrado: C, 65,40; H, 5,64; N, 10,80; FAB-HRMS (M+H^{+}): Calculado para C_{27}H_{27}N_{4}O_{5} 487,1981, encontrado
487,1964.

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41

Ejemplo 5

42

Preparación del Compuesto 12

Una suspensión de 10,0 g (53 mmoles) de Compuesto 5a en 350 ml de una mezcla diclorometano:metanol 6:1, fue agitada y enfriada en un baño de hielo mientras se añadían 79 ml de una solución 2,0 M de TMSCHN_{2} en hexano gota a gota durante un periodo de 1 hora. La mezcla se dejó templar a temperatura ambiente y continuó la agitación durante una noche. El sólido de color amarillo claro resultante fue filtrado y lavado con éter para dar 7,5 g (70%) del Compuesto 5b: RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,5 (s, 1H), 8,45 (d, 1H), 8,2 (d, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,3 (m, 2H), 3,95 (s, 3H). Se añadió ter-butóxido de potasio 1,0 M (51,6 ml, 51,6 mmoles) gota a gota durante 1 hora a una mezcla de Compuesto 5b (3,84 g, 18,9 mmoles) y Compuesto 5c 3-indolil acetamida (3,00 g, 17,2 mmoles) en THF seco (30 ml) previamente enfriado a 0ºC. A continuación la mezcla de reacción fue agitada a 0ºC durante 15 minutos y posteriormente a temperatura ambiente durante 3 horas. La reacción fue amortiguada con ácido clorhídrico concentrado (24 ml) con agitación vigorosa durante 5 minutos. La mezcla de reacción fue diluida con acetato de etilo y lavada con agua. La capa de acetato de etilo fue lavada con agua, posteriormente con salmuera y luego fue secada (MgSO_{4}) y evaporada in vacuo para dar un Compuesto 5d sólido (6,89 g). El Compuesto 5d (6,79 g) fue disuelto en acetona seca (170 ml) seguido por la adición de carbonato de potasio pulverizado (3,15 g, 22,8 mmoles) y sulfato de dimetilo (2,16 ml, 22,8 mmoles). La reacción fue calentada a reflujo durante 5 horas. La reacción fue enfriada a temperatura ambiente y evaporada in vacuo hasta dar un sólido de color rojo. El sólido rojo fue agitado en acetato de etilo/metanol (10:1, 550 ml), secado (Na_{2}SO_{4}) y evaporado in vacuo. El producto bruto fue sometido a cromatografía (gel de sílice, EtOAc/Hexano, de 1:4 a 2:3) para dar un Compuesto 5e sólido (1,78 g, 30% de rendimiento global a partir del Compuesto 5c): RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 3,04 (s, 3H), 6,60-6,72 (m, 2H), 6,81 (d, J = 10,45 Hz, 2H), 6,95-7,00 (m, 2H), 7,36 (d, J = 7,99 Hz, 2H), 7,75 (d, J = 2,59 Hz, 2H), 11,67 (s, 2H); ES-MS m/z 341 (MH^{+}).

El Compuesto 5e (1,50 g, 4,40 mmoles) fue disuelto en DMF seca (300 ml) seguido por la adición de éter 2-bromoetílico (5,53 ml, 44,0 mmoles) y carbonato de cesio (5,73 g, 17,6 mmoles). La reacción fue agitada a 80ºC durante 8 horas y posteriormente se añadió éter 2-bromoetílico adicional (1,12 ml, 8,80 mmoles) y la reacción se agitó a 80ºC durante 4 horas. La reacción fue enfriada a temperatura ambiente y filtrada a través de Celita. El filtrado fue diluido con acetato de etilo (20 ml), lavado con agua (2x), posteriormente con salmuera (1x) y posteriormente fue secado (Na_{2}SO_{4}) y evaporado in vacuo. El producto bruto fue sometido a cromatografía (gel de sílice, EtOAc/Hexano, de 1:4 a 1:1) para dar el Compuesto 5g (1,06 g, 37%): RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 3,18 (s, 3H), 3,32-3,36 (m, 4H), 3,59-3,66 (m, 4H), 3,81-3,85 (m, 4H), 4,31 (t, J = 5,42 Hz, 4H), 6,73 (t, J = 7,22 Hz, 2H), 6,98 (d, J = 8,02, 2H), 7,07-7,12 (m, 2H), 7,31 (d, J = 8,25 Hz, 2H), 7,72 (s, 2H, H-2); ES-MS m/z 644 (MH^{+}). Una solución de Compuesto 5g (0,40 g, 0,62 mmoles), diisopropiletilamina (1,29 ml, 7,4 mmoles) y etilamina (2,0 M en THF, 1,85 ml, 3,7 mmoles) en THF seco (103 ml) fue agitada a 90ºC durante una noche. La reacción fue enfriada a temperatura ambiente y se añadieron diisopropiletilamina adicional (0,64 ml, 3,7 mmoles) y el Compuesto 5h etilamina 2,0 M en THF (0,92 ml, 1,85 mmoles). La mezcla fue agitada a 90ºC durante una noche. La mezcla de reacción fue enfriada a temperatura ambiente y evaporada in vacuo para dar un Compuesto 5k (0,59 g). El Compuesto 5k bruto (0,59 g) fue suspendido en EtOH (24 ml) seguido por la adición de hidróxido de potasio (0,93 g, 16,5 mmoles). La reacción fue agitada a reflujo durante una noche. La reacción fue enfriada a temperatura ambiente y evaporada in vacuo. El residuo restante fue disuelto en agua (55 ml) y acidificado con ácido cítrico al 10%. La mezcla fue agitada a temperatura ambiente durante 10 minutos y fue evaporada in vacuo. El sólido resultante fue tratado con acetato de amonio puro (60 g) y agitado a 140ºC durante 3 horas. La reacción fue enfriada a temperatura ambiente, diluida con agua, basificada con hidróxido de sodio al 20% hasta pH = 10 y extraída con acetato de etilo (2 x 80 ml). La capa orgánica fue lavada con agua (60 ml), posteriormente con salmuera (60 ml) y luego fue secada (Na_{2}SO_{4}) y evaporada in vacuo. El producto bruto fue sometido a cromatografía (gel de sílice, DCM/MeOH/NH_{4}OH, desde 95:3:2 hasta 93:5:2) para producir el Compuesto 12 diana (38,5 mg): RMN ^{1}H (CD_{3}OD) \delta 0,95-1,00 (m, 3H), 2,42-2,45 (m, 4H), 2,51-2,58 (q, 2H), 3,14-3,18 (m, 4H), 3,61-3,64 (m, 4H), 4,25-4,28 (m, 4H), 6,89-6,94 (m, 2H), 7,10-7,19 (m, 4H), 7,44 (d, J = 8,23 Hz, 2H), 7,61 (s, 2H); ES-MS m/z 513 (MH^{+}).

Preparación del Compuesto 13

Utilizando el procedimiento para la preparación del Compuesto 12 y los reactivos y materiales de partida apropiados conocidos por los expertos en la técnica, se preparó el Compuesto 13: RMN ^{1}H (CD_{3}OD) \delta 2,16 (s, 3H), 2,29-2,32 (m, 4H), 3,10-3,20 (m, 4H), 3,65-3,67 (m, 4H), 4,30-4,33 (m, 4H), 6,93-6,95 (m, 2H), 7,17-7,21 (m, 4H), 7,47 (d, J = 8,29 Hz, 2H), 7,65 (s, 2H); ES-MS m/z 499 (MH^{+}).

Preparación del Compuesto 14

Utilizando el procedimiento para la preparación del Compuesto 12 y los reactivos y materiales de partida apropiados conocidos por los expertos en la técnica, se preparó el Compuesto 14; ES-MS m/z 527 (MH^{+}).

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Ejemplo 6

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Un Compuesto 6a 1-bromo-2-cloroetano (430 mg, 3,0 mmoles) fue añadido a una mezcla de Compuesto 5e (51 mg, 0,15 mmoles) y carbonato de cesio (122 mg, 0,38 mmoles) en DMF (4 ml). La mezcla de reacción fue agitada a 45ºC durante 16 horas y luego enfriada a temperatura ambiente. La mezcla fue diluida con EtOAc (50 ml), lavada con agua, posteriormente con salmuera y luego secada (Na_{2}SO_{4}) y evaporada in vacuo para dar el Compuesto 6b (69 mg); CI-MS m/z 466 (MH^{+}). Una solución del Compuesto 6b bruto (26 mg), el Compuesto 6c 1,4,7-trimetildietilentriamina (10 mg, 0,07 mmoles), KI (28 mg, 0,17 mmoles) y N,N-diisopropiletilamina (44 mg, 0,34 mmoles) en THF (8 ml) fue agitada a 80ºC durante 8 horas, tiempo en el cual la TLC indicaba que la reacción se había completado sólo parcialmente. Se añadió trimetildietilen-triamina adicional (20 mg, 0,14 mmoles) y la agitación continuó a 120ºC durante 42 horas. La mezcla de reacción fue luego diluida con EtOAc (50 ml), lavada con agua, posteriormente con salmuera y luego secada (Na_{2}SO_{4}) y evaporada in vacuo. El Compuesto 6d residual resultante (ES-MS m/z 539 (MH^{+})) fue disuelto en EtOH (4 ml) y tratado con KOH (63 mg, 1,1 mmoles). La mezcla fue agitada a 80ºC durante 40 horas y posteriormente se eliminó el EtOH bajo vacío. El residuo fue disuelto en agua (3 ml) y acidificado con ácido cítrico al 10% (5 ml). La mezcla fue agitada a temperatura ambiente durante 10 minutos y posteriormente secada in vacuo. El sólido resultante fue agitado con acetato de amonio puro (4,0 g) a 140ºC durante 2,5 horas y la mezcla fue enfriada a temperatura ambiente, diluida con H_{2}O (3 ml) y basificada hasta pH = 10 aproximadamente con hidróxido de sodio acuoso al 20%. La solución fue extraída con EtOAc (40 ml x 2). La capa orgánica fue lavada con agua, posteriormente con salmuera y luego fue secada (Na_{2}SO_{4}) y evaporada in vacuo para producir un producto bruto que fue separado mediante TLC preparativa utilizando CH_{2}Cl_{2}/MeOH/NH_{4}OH (85:13:2) para dar el Compuesto 15 como un sólido de color rojo-anaranjado (12 mg, 41% de rendimiento global a partir del Compuesto 5e): RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,52 (s, 2H), 7,34-7,30 (m, 4H), 7,20 (t, J = 7,1, 7,9 Hz, 2H), 7,00 (t, J = 7,0, 7,9 Hz, 2H), 4,08 (m, 4H), 2,67 (m, 4H), 2,32-2,10 (m, 8H), 2,19 (s, 9H); ES-MS m/z
525 (MH^{+}).

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Ejemplo 7

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Preparación del Compuesto 16

Una mezcla de Compuesto 5b (2,03 g, 10,0 mmoles), Compuesto 7a (3,10 g, 13,0 mmoles, preparado a partir de 2-(2-cloroetoxi)etanol y TBDMS-Cl) y carbonato de cesio (4,69 g, 14,4 mmoles) en DMF (40 ml) fue agitada a 70ºC durante 8 horas y luego filtrada. El filtrado fue evaporado in vacuo y el residuo fue separado mediante cromatografía instantánea en columna (hexano/EtOAc, 3:1) para dar el Compuesto 7b como un aceite viscoso de color amarillo claro (1,83 g, 45% de rendimiento): RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,45-8,42 (m, 2H), 7,59-7,30 (m, 3H), 4,34 (t, J = 5,3 Hz, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,87 (t, J = 5,3 Hz, 2H), 3,68 (t, J = 5,3, 4,8 Hz, 2H), 3,47 (t, J = 5,3, 4,8 Hz, 2H), 0,84 (s, 9H), 0,01 (s, 6H); ES-MS m/z 406 (MH^{+}).

Un Compuesto 7c ácido (5,28 g, 30 mmoles, preparado según J. Med. Chem., 1992, 35, 2160) fue disuelto en DCM (120 ml) y se añadieron DMF (30 ml) bajo argón, HOBT (4,45 g, 33 mmoles) y DCC (6,51 g, 32 mmoles) y la reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió hidróxido de amonio (28%, 2,7 g, 44 mmoles) durante 5 minutos y la reacción fue luego agitada a temperatura ambiente durante 16 horas. El sólido blanco fue filtrado y el filtrado diluido con DCM (150 ml) y filtrado de nuevo. La solución en DCM fue extraída cuatro veces con NaHCO_{3} al 5% (150 ml); la solución acuosa combinada fue tratada con cloruro de sodio (190 g) y extraída con acetato de etilo (300 ml) seis veces. El extracto orgánico fue secado (Na_{2}SO_{4}) y evaporado in vacuo para dar un sólido que fue triturado con éter dietílico (100 ml) y filtrado para dar un Compuesto 7d sólido blanco (3,52 g, 67%). Una mezcla de Compuesto 7d (700 mg, 4,0 mmoles), Compuesto 7e 2-(2-cloroetoxi)etanol (997 mg, 8,0 mmoles) y carbonato de cesio (1,56 g, 4,8 mmoles) en DMF (20 ml) fue agitada a 70ºC durante 16 horas y posteriormente filtrada. El filtrado fue evaporado in vacuo y el residuo fue separado mediante cromatografía instantánea en columna (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 9:1) para dar el Compuesto 7f como un sólido de color amarillo claro (495 mg, 47% de rendimiento): RMN ^{1}H (CD_{3}OD) \delta 7,74 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,40 (t, J = 8,2, 7,1 Hz, 1H), 7,14 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 4,56 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 3,92-3,89 (m, 4H), 3,52 (m, 2H), 3,45 (m, 2H); ES-MS m/z 264 (MH^{+}).

Se añadió gota a gota t-butóxido de potasio 1,0 M en THF (4 ml, 4,0 mmoles) a una suspensión de Compuesto 7b éster (487 mg, 1,2 mmoles) y de Compuesto 7f amida (210 mg, 0,8 mmoles) en THF seco (10 ml) bajo argón que había sido enfriado a 0ºC. La mezcla resultante fue agitada a 0ºC durante 10 minutos y luego a temperatura ambiente durante 3 horas, posteriormente se añadió HCl concentrado (5 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante otros 10 minutos. La mezcla fue repartida entre EtOAc (100 ml) y H_{2}O (40 ml). Se separaron dos capas y la capa acuosa fue extraída con EtOAc (50 ml). Los extractos combinados fueron lavados con agua, posteriormente con NaHCO_{3} acuoso saturado, luego con salmuera y posteriormente fueron secados (Na_{2}SO_{4}) y evaporados in vacuo para dar el Compuesto 7g como un sólido de color naranja rojizo oscuro (388 mg); ES-MS m/z 505 (MH^{+}). Se añadió Ms_{2}O (440 mg, 2,5 mmoles) a una solución del Compuesto 7g bruto (255 mg) y piridina (320 mg, 4,40 mmoles) en THF (14 ml). La reacción fue agitada a 50ºC durante 2 horas y posteriormente la mezcla de reacción fue enfriada a temperatura ambiente. Posteriormente se añadieron THF (10 ml) y HCl 1,0 N acuoso (20 ml). La mezcla fue agitada a temperatura ambiente durante 10 minutos y posteriormente extraída con EtOAc (120 ml). La fase orgánica fue lavada con HCl 1,0 N acuoso (20 ml), posteriormente con agua y luego con salmuera, posteriormente fue secada (Na_{2}SO_{4}) evaporada in vacuo para dar el Compuesto 7h como un sólido de color naranja rojizo oscuro (386 mg); ES-MS m/z 661 (MH^{+}). Una solución del Compuesto 7h bruto (76 mg), N,N-diisopropiletilamina (259 mg, 2,0 mmoles) y el Compuesto 7i MeNH_{2} (2,0 M en THF, 0,90 ml, 1,8 mmoles) en THF (10 ml) en un tubo de presión fue agitada a 90ºC durante 22 horas. Los compuestos volátiles fueron eliminados bajo vacío y el residuo fue separado mediante cromatografía instantánea en columna (CH_{2}Cl_{2}/MeOH/NH_{4}OH, 88:12:0,5) para dar el producto Compuesto 16 deseado como un sólido de color naranja rojizo (20 mg, 40% de rendimiento global a partir del Compuesto 7f): RMN ^{1}H (CD_{3}OD) \delta 7,66 (s, 1H), 7,61-7,32 (m, 5H), 7,23-7,20 (m, 1H), 7,07-7,00 (m, 2H), 4,51 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 4,22 (t, J = 4,6 Hz, 2H), 3,64-3,59 (m, 4H), 3,34 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 3,09 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 2,43 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 2,23 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,17 (s, 3H); ES-MS m/z 500 (MH^{+}).

Preparación del Compuesto 17

Utilizando el procedimiento para la preparación del Compuesto 16 y los reactivos y materiales de partida apropiados conocidos por los expertos en la técnica, se preparó el Compuesto 17: RMN ^{1}H (CD_{3}OD) \delta 7,88 (s, 1H), 7,64 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,47 (m, 2H), 7,20-7,13 (m, 2H), 6,86-6,77 (m, 2H), 4,53 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 4,36 (t, J = 4,7 Hz, 2H), 3,75 (t, J = 4,7, 5,0 Hz, 2H), 3,62 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,34 (m, 2H), 3,17 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,77 (m, 4H), 2,63 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 1,08 (t, J = 7,2 Hz, 3H); ES-MS m/z 514 (MH^{+}).

Preparación del Compuesto 29

Utilizando el procedimiento para la preparación del Compuesto 16 y los reactivos y materiales de partida apropiados conocidos por los expertos en la técnica, se preparó el Compuesto 29: RMN ^{1}H (CD_{3}OD) (base libre) \delta 7,86 (s, 1H), 7,55 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,45-7,37 (m, 3H), 7,19 (t, J = 6,8, 8,2 Hz, 1H), 7,11 (t, J = 6,6, 7,9 Hz, 1H), 6,97-6,91 (m, 2H), 4,46 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 4,25 (m, 2H), 3,68-3,31 (m, 10H), 3,27 (s, 3H), 2,95 (m, 2H), 2,77 (m, 2H), 2,68 (m, 2H); ES-MS m/z 544 (MH^{+}).

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Ejemplo 8

51

Se añadió el Compuesto 7f 2-(2-cloroetoxi)etanol (0,35 ml, 3,30 mmoles) a una mezcla de Compuesto 1d (133 mg, 85% de pureza, 0,33 mmoles) y Cs_{2}CO_{3} (1,07 g, 3,30 mmoles) en DMF (1,5 ml). La mezcla fue agitada a 100ºC durante 2,5 horas, enfriada a 20ºC, diluida con EtOAc y filtrada a través de Celita. Los solventes fueron eliminados bajo presión reducida y se aisló el Compuesto 8a diólico deseado (87 mg, 51%) mediante cromatografía en columna (elución con MeOH/CH_{2}Cl_{2}) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,19 (d, J = 4,3 Hz, 2H), 8,01 (s, 1H), 7,18 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 6,72 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 2H), 4,56 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,83 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,67 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,53 (t, J = 3,8 Hz, 4H), 3,18 (s, 3H); MS (ES) m/z 520 (M+H^{+}). Se añadieron trietilamina (0,47 ml, 3,35 mmoles) y MsCl (0,13 ml, 1,67 mmoles) a una solución del Compuesto 8a diólico (87 mg, 0,167 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (1,5 ml) a 0ºC. Después de agitar a 20ºC durante 15 minutos, la mezcla fue amortiguada con agua (0,5 ml) y posteriormente diluida con CH_{2}Cl_{2} (5 ml). Una vez que se separaron las capas, la fase acuosa fue extraída con CH_{2}Cl_{2} (3 x 5 ml) y las capas orgánicas fueron combinadas, secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas. La purificación mediante cromatografía en columna (elución con MeOH/CH_{2}Cl_{2}) dio lugar al Compuesto 8b bismesilato (113 mg, 100%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,21 (dd, J = 4,7, 1,4 Hz, 2H), 7,94 (s, 2H), 7,23 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 6,76 (m, 2H), 4,55 (t, J = 5,0 Hz, 4H), 4,28 (m, 4H), 3,88 (t, J = 5,0 Hz, 4H), 3,67 (m, 4H), 3,18 (s, 3H), 2,90 (s, 6H); MS (ES) m/z 698 (M+Na).

El Compuesto 8d i-Pr_{2}NEt (0,44 ml, 2,51 mmoles) y el Compuesto 8c H_{2}NEt en THF (2 M, 0,84 mmoles) fueron añadidos a una solución de Compuesto 8b (113 mg, 0,167 mmoles) en DMF (17 ml). La mezcla fue agitada a 80ºC durante 2 horas y se añadieron porciones adicionales del Compuesto 8d i-Pr_{2}NEt (0,2 ml, 1,25 mmoles) y del Compuesto 8c H_{2}NEt (0,42 mmoles). Después de que la agitación continuara durante 20 horas, la mezcla fue enfriada a 20ºC y concentrada bajo presión reducida. El producto bruto fue purificado mediante cromatografía en columna (elución con MeOH/CH_{2}Cl_{2}) para dar el Compuesto 8e (59 mg, 67%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,27 (dd, J = 4,7, 1,5 Hz, 2H), 7,82 (s, 2H), 7,58 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 2H), 7,04 (dd, J = 8,0, 4,8 Hz, 2H), 4,47 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,69 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,24 (t, J = 5,0 Hz, 4H), 3,14 (s, 3H), 2,51 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 2,42 (s, ancho, 4H), 0,96 (t, J = 7,1 Hz, 3H); MS (ES) m/z 529 (M+H^{+}). Una mezcla de Compuesto 8e (59 mg, 0,11 mmoles), etanol (4,2 ml) y KOH (196 mg, 3,50 mmoles) fue calentada bajo reflujo durante 22 horas. La mezcla fue concentrada bajo presión reducida y el residuo resultante fue disuelto en agua (10 ml) y acidificado con ácido cítrico al 10% (pH 5). La mezcla fue agitada a 20ºC durante 10 minutos y posteriormente concentrada. El residuo resultante fue mezclado con acetato de amonio sólido (10,0 g, 0,13 moles) y calentado a 140ºC durante 3 horas. La mezcla fue posteriormente enfriada a 20ºC, diluida con agua, y se hizo básica con NaOH acuoso al 20% hasta alcanzar un pH de 10 y se extrajo con EtOAc (3 x 30 ml). Los extractos orgánicos combinados fueron lavados con agua y salmuera, posteriormente secados (Na_{2}SO_{4}) y concentrados. La purificación mediante cromatografía en columna (elución con MeOH/CH_{2}Cl_{2}/NH_{4}OH) produjo el Compuesto 18 (6 mg, 11%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,27 (dd, J = 4,8, 1,7 Hz, 2H), 7,80 (s, 2H), 7,58 (dd, J = 7,9, 1,5 Hz, 2H), 7,03 (dd, J = 8,0, 4,8 Hz, 2H), 4,45 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 3,68 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 3,23 (t, J = 5,0 Hz, 4H), 2,51 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,40 (t, J = 5,1 Hz, 4H), 0,96 (t, J = 7,2 Hz, 3H); MS (ES) m/z 515 (M+H^{+}).

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Ejemplo 9

53

El Compuesto 5f éter 2-bromoetílico (0,2 ml, 1,57 mmoles) fue añadido a una mezcla de Compuesto 1d (54 mg, 0,16 mmoles), Cs_{2}CO_{3} (205 mg, 0,63 mmoles) y DMF (5,0 ml). Después de calentar a 40ºC durante 1,5 horas, la mezcla fue agitada a 20ºC durante 12 horas, posteriormente filtrada a través de Celita y diluida con EtOAc. La capa orgánica fue lavada con agua (3 x 5 ml), secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. La purificación mediante cromatografía en columna (elución con EtOAc/Hexano) proporcionó el Compuesto 9a como un sólido naranja (37 mg, 44%): RMN ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,13 (dd, J = 4,7, 1,4 Hz, 2H), 8,06 (s, 2H), 7,20 (dd, J = 8,0, 1,4 Hz, 2H), 6,74 (dd, J = 8,0, 4,8 Hz, 2H), 4,53 (t, J = 5,0 Hz, 4H), 3,87 (t, J = 5,0 Hz, 4H), 3,71 (t, J = 5,8 Hz, 4H), 3,42 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,14 (s, 3H); MS (ES) m/z 646 (M+H^{+}). Una mezcla de Compuesto 9a dibromuro (37 mg, 0,057 mmoles), EtOH anhidro (240 ml) y disulfuro de sodio nonahidrato (14 mg, 0,057 mmoles) fue calentada bajo reflujo durante 66 horas. Después de retirar el solvente, el residuo fue recogido en EtOAc. La capa orgánica fue lavada con NaOH acuoso al 5% (3 x 5 ml), secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. El residuo fue purificado mediante cromatografía en columna (elución con Acetona/CH_{2}Cl_{2}), proporcionando una mezcla de Compuesto 9a (12 mg) y Compuesto 9b (12 mg, 60%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,27 (dd, J = 4,8, 1,5 Hz, 2H), 7,84 (s, 2H), 7,53 (dd, J = 4,8, 1,5 Hz, 2H), 7,03 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 2H), 4,45 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 3,70 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 3,35 (t, J = 5,6 Hz, 4H), 3,14 (s, 3H), 2,34 (t, J = 5,5 Hz, 4H); MS (ES) m/z 518 (M+H^{+}). Una mezcla de Compuesto 9b (12 mg, 0,023 mmoles), etanol (2,0 ml) y KOH (188 mg, 3,30 mmoles) fue calentada bajo reflujo durante 18 horas. La mezcla fue concentrada bajo presión reducida y el residuo resultante fue disuelto en agua (3,0 ml) y acidificado con ácido cítrico al 10% (pH 5-6). La mezcla fue agitada a 20ºC durante 10 minutos y concentrada. El residuo resultante fue mezclado con acetato de amonio sólido (2,0 g, 26,0 moles) y calentado a 140ºC durante 3 horas. La mezcla fue enfriada a 20ºC, diluida con agua (3,0 ml), se hizo básica con NaOH acuoso al 20% hasta conseguir un pH de 10 y se extrajo con EtOAc (3 x 15 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con agua y salmuera, posteriormente secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas. La purificación mediante cromatografía en columna (elución con Acetona/CH_{2}Cl_{2}) proporcionó el Compuesto 19 (6 mg, 73%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,25 (dd, J = 4,8, 1,5 Hz, 2H), 7,82 (s, 2H), 7,52 (dd, J = 4,8, 1,5 Hz, 2H), 7,03 (dd, J = 8,0, 4,8 Hz, 2H), 4,45 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,70 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,35 (t, J = 5,5 Hz, 4H), 2,34 (t, J = 5,5 Hz, 4H); MS (ES) m/z 504 (M+H^{+}).

54

Ejemplo 10

55

Se añadieron piridina (1,2 ml, 14,6 mmoles) y MsCl (1,1 ml, 14,6 mmoles) a 0ºC a una solución del Compuesto 10a diol carbamato (1,06 g, 3,66 mmoles, preparado según está descrito en MaGee, D.I. y Beck, E.J., Can. J. Chem., 2000, 78, 1060-1066) en CH_{2}Cl_{2} (13 ml). La mezcla fue agitada a 20ºC durante 1,5 horas, diluida con éter dietílico (10 ml) y lavada secuencialmente con HCl acuoso frío (5%), NaOH (5%), agua y salmuera. La solución orgánica fue secada (MgSO_{4}), filtrada y concentrada. La purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice (elución con Hexano/EtOAc) proporcionó el Compuesto 10b como un aceite incoloro (1,20 g, 74%): RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 4,23 (t, J = 6,4 Hz, 4H), 3,16 (s, ancho, 4H), 3,01 (s, 6H), 1,78 (m, 4H), 1,55 (m, 4H), 1,45 (s, 9H), 1,40 (m, 4H); MS (ES) m/z 468 (M+Na). Una mezcla de Compuesto 1d (50 mg, 85% de pureza, 0,12 mmoles) y Cs_{2}CO_{3} (190 mg, 0,58 mmoles) en DMF (20 ml) fue calentada a 100ºC. Una solución en DMF (5 ml) del Compuesto 10b bismesilato (77 mg, 0,17 mmoles) fue añadida mediante una bomba de jeringa a lo largo de 1,5 horas. Una vez que la adición fue completa, la mezcla fue agitada a 20ºC durante 21 horas, amortiguada con cloruro de amonio acuoso (30 ml) y extraída con CH_{2}Cl_{2} (2 x 30 ml). Las fases orgánicas fueron separadas, combinadas y lavadas con agua (3 x 20 ml) y salmuera (15 ml). El producto bruto fue posteriormente secado (Na_{2}SO_{4}), concentrado y cromatografiado en una columna de gel de sílice (elución con Hexano/EtOAc) para dar el Compuesto 10c (36 mg, 50%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,29 (dd, J = 4,7, 1,5 Hz, 2H), 7,66 (s, ancho, 2H), 7,58 (s, 2H), 7,05 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 2H), 4,30 (t, J = 6,5 Hz, 4H), 3,15 (s, 3H), 2,73 (s, ancho, 4H), 1,75 (t, J = 6,6 Hz, 4H), 1,42 (s, 9H), 1,34 (m, 4H), 1,03 (m, 4H); MS (ES) m/z
597 (M+H^{+}).

Se añadió TFA (0,2 ml) a una solución del Compuesto 10c (13 mg, 0,022 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (1,0 ml). Una vez que la mezcla fue agitada a 20ºC durante 1 hora, se eliminó el solvente y el exceso de TFA bajo presión reducida. Se añadió cuidadosamente hidróxido de amonio y los sólidos de color naranja fueron triturados, recogidos por filtración y lavados con agua. Se obtuvo el Compuesto 10d (10 mg, 100%) después de secado bajo vacío: RMN ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,27 (dd, J = 4,7, 1,4 Hz, 2H), 7,66 (s, 2H), 7,56 (dd, J = 8,0, 1,4 Hz, 2H), 7,02 (dd, J = 8,0, 4,8 Hz, 2H), 4,33 (t, J = 5,9 Hz, 4H), 3,14 (s, 3H), 2,26 (t, J = 6,5 Hz, 4H), 1,84 (m, 4H), 1,40 (m, 4H), 0,96 (m, 4H); MS (ES) m/z 497 (M+H^{+}). Una mezcla de Compuesto 10d (10 mg, 0,020 mmoles), etanol (2,0 ml) y KOH (198 mg, 3,53 mmoles) fue calentada bajo reflujo durante 18 horas, enfriada posteriormente a 20ºC y concentrada bajo presión reducida. El residuo fue disuelto en agua (3,0 ml) y acidificado con ácido cítrico al 10% (pH 4). La mezcla fue agitada a 20ºC durante 10 minutos y concentrada. El residuo resultante fue mezclado con acetato de amonio sólido (2,4 g, 31,2 mmoles) y calentado a 140ºC durante 3 horas. La mezcla fue enfriada a 20ºC, diluida con agua (3,0 ml), se hizo básica con NaOH acuoso al 20% hasta conseguir un pH de 10 y se extrajo con EtOAc (3 x 25 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas. La purificación mediante cromatografía en columna (elución con MeOH/CH_{2}Cl_{2}) produjo el Compuesto 20 (4 mg, 42%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,27 (dd, J = 4,7, 1,5 Hz, 2H), 7,65 (s, 2H), 7,55 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 2H), 7,01 (dd, J = 8,0, 4,8 Hz, 2H), 4,32 (t, J = 5,9 Hz, 4H), 2,23 (t, J = 6,3 Hz, 4H), 1,81 (t, J = 5,9 Hz, 4H), 1,40 (m, 4H), 0,94 (t, J = 7,5 Hz, 4H); MS (ES) m/z 483 (M+H^{+}).

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Ejemplo 11

57

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Una mezcla de Compuesto 10d (14 mg, 0,028 mmoles), THF (1,0 ml) y yodoetano (4 \mul, 0,063 mmoles) fue calentada a reflujo durante dos días. El producto fue concentrado y cromatografiado (elución con MeOH/CH_{2}Cl_{2}/NH_{4}OH) para dar el Compuesto 11a (12 mg, 75%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,27 (dd, J = 4,7, 1,6 Hz, 2H), 7,64 (s, 2H), 7,62 (dd, J = 8,0, 1,6 Hz, 2H), 7,03 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 2H), 4,31 (m, 4H), 3,14 (s, 3H), 2,44 (m, 2H), 2,11 (m, 4H), 1,84 (m, 4H), 1,25 (m, 4H), 0,98 (m, 7H); MS (ES) m/z 525 (M+H^{+}). El Compuesto 11a (12 mg, 0,023 mmoles) fue transformado en el Compuesto 21 (6 mg, 50%) utilizando el procedimiento descrito para la obtención del Compuesto 20. El Compuesto 21 fue aislado como un sólido naranja: RMN ^{1}H (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,27 (dd, J = 4,7, 1,4 Hz, 2H), 7,62 (s, 2H), 7,60 (dd, J = 7,7, 1,5 Hz, 2H), 7,03 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 2H), 4,30 (m, 4H), 2,44 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 2,11 (m, 4H), 1,83 (m, 4H), 1,26 (m, 4H), 0,98 (m, 7H); MS (ES) m/z
511 (M+H^{+}).

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Ejemplo 12

59

Una mezcla de Compuesto 12a anhídrido 2,3-dicloromaleico (1,02 g, 6,10 mmoles), Compuesto 12b amina 2,4-dimetoxibencílica (1,02 g, 6,10 mmoles) en ácido acético glacial (18 ml) fue calentada a 80ºC durante 5 horas. La mezcla fue enfriada a 20ºC, concentrada bajo presión reducida y diluida con CH_{2}Cl_{2} (50 ml). La mezcla fue lavada secuencialmente con agua (15 ml) y Na_{2}CO_{3} acuoso 2 M (15 ml), posteriormente con agua (15 ml) y salmuera (15 ml). Después de que las fases orgánicas combinadas fueran concentradas, el residuo fue filtrado a través de una corta almohadilla de SiO_{2} (eluyendo con CH_{2}Cl_{2}) para dar el Compuesto 12c (1,42 g, 74%) como un sólido marrón claro: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,20 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,44 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,42 (s, 1H), 4,72 (s, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,78 (s, 3H). Una mezcla de Compuesto 1b (500 mg, 1,31 mmoles), Compuesto 12c (180 mg, 0,57 mmoles), PdCl_{2}(PPh_{3})_{2} (80 mg, 0,11 mmoles) y LiCl (240 mg, 8,6 mmoles) en tolueno (9,0 ml) fue calentada a 100ºC durante 20 horas. Una vez que el solvente fue eliminado bajo presión reducida, el residuo fue cargado en seco sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc/Hexano) para dar el Compuesto 12d (160 mg, 58%) como un sólido de color rojo anaranjado: RMN ^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,30 (s, 2H), 8,12 (d, J = 4,6 Hz, 2H), 7,93 (d, J = 2,8 Hz, 2H), 7,08 (m, 3H), 6,73 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 2H), 6,58 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 6,48 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,68 (s, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,74 (s, 3H); MS (ES) m/z 480 (M+H^{+}).

Una mezcla de Compuesto 12e \delta-valerolactona (1,7 ml, 18,3 mmoles) y Compuesto 12f 4-amino-1-butanol (1,7 ml, 18,3 mmoles) en m-xileno (50 ml) fue calentada a 120ºC durante 20 horas. La mezcla fue enfriada a 20ºC y la capa inferior fue separada de la capa superior de xileno y concentrada bajo presión reducida para dar el producto Compuesto 12g bruto (3,50 g, 99%). Una solución de Compuesto 12g bruto (1,91 g, 10,1 mmoles) en THF (50 ml) fue calentada a reflujo. Un complejo dimetilsulfuro borano (2 M en THF, 40,0 mmoles) fue añadido gota a gota a través de un embudo de adición. Una vez que la adición fue completa, la mezcla fue sometida a reflujo durante otra hora, posteriormente enfriada a 20ºC y amortiguada con MeOH (4,0 ml). Se añadió cloruro de hidrógeno (1 M en Et_{2}O, 12,0 mmoles). La mezcla fue luego agitada a 20ºC durante 10 minutos y concentrada bajo presión reducida para dar un Compuesto 12h, sal diólica, bruto. El Compuesto 12h fue posteriormente mezclado con MeOH (40 ml), Et_{3}N (5,7 ml, 40,4 mmoles) y Boc_{2}O (2,7 g, 12,1 mmoles). La mezcla fue sometida a reflujo durante 3 horas, posteriormente enfriada a 20ºC, concentrada y recogida en CH_{2}Cl_{2} (40 ml). El producto fue lavado rápidamente con HCl 1 N frío, secado (Na_{2}SO_{4}) y concentrado. La purificación mediante cromatografía en columna (elución con EtOAc) dio lugar al Compuesto 12i (1,90 g, 70%) como un aceite incoloro: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,67 (m, 4H), 3,18 (m, 4H), 1,60 (m, 10H), 1,45 (s, 9H); MS (ES) m/z 298 (M+Na). Una solución del Compuesto 12i (1,90 g, 6,91 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) fue enfriada en un baño de hielo, posteriormente se añadió piridina (2,2 ml, 27,6 mmoles), seguido por MsCl (2,1 ml, 27,6 mmoles). La mezcla fue agitada a 20ºC durante 1,5 horas, diluida con Et_{2}O (15 ml) y lavada con HCl al 5% frío y NaOH al 5%. La fase orgánica fue secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. La purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice (elución con Hexano/EtOAc) produjo el Compuesto 12j bismesilato (2,40 g, 82%) como un aceite incoloro: RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 4,24 (m, 4H), 3,19 (m, 4H), 3,01 (s, 3H), 3,00 (s, 3H), 1,75 (m, 4H), 1,64 (m, 2H), 1,56 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,41 (m, 2H); MS (ES) m/z 454 (M+Na).

Una mezcla de Compuesto 12d (38 mg, 0,079 mmoles) y Cs_{2}CO_{3} (300 mg, 0,92 mmoles) en DMF (12 ml) fue calentada a 70ºC. Una solución en DMF (2 ml) del Compuesto 12j bismesilato (60 mg, 0,14 mmoles) fue añadida mediante una bomba de jeringa durante 1 hora. Una vez que la adición fue completa, la mezcla fue agitada a 70ºC durante 22 horas, enfriada a 20ºC, amortiguada con cloruro de amonio acuoso saturado (30 ml) y diluida con EtOAc (50 ml). La fase orgánica fue separada, lavada con agua (3 x 20 ml) y salmuera (15 ml). El producto bruto fue posteriormente secado (Na_{2}SO_{4}), concentrado y cromatografiado en una columna de gel de sílice (elución con Hexano/EtOAc) para dar el Compuesto 12k (27 mg, 48%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,40 (dd, J = 4,8, 1,5 Hz, 2H), 8,29 (m, 2H), 7,78 (s, 1H), 7,18 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 2H), 7,10 (s, 1H), 6,85 (m, 1H), 6,46 (s, 1H), 6,43 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,85 (s, 2H), 4,44 (m, 2H), 4,14 (m, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,18 (m, 2H), 2,90 (m, 2H), 2,56 (m, 2H), 1,90 (m, 2H), 1,64 (m, 2H), 1,39 (s, 9H), 1,13 (m, 2H), 0,74 (m, 2H); MS (ES) m/z 719 (M+H^{+}). Se añadió TFA (1,0 ml) a una solución del Compuesto 12k (27 mg, 0,037 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (2 ml). La mezcla fue agitada a 20ºC durante 30 minutos. Se añadió cuidadosamente hidróxido de amonio para ajustar el pH de la mezcla a 10. Después de la extracción con EtOAc (3 x 10 ml), las capas orgánicas fueron combinadas, lavadas con agua (10 ml) y salmuera (5 ml), posteriormente secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas para dar el Compuesto 12l (22 mg, 100%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,27 (m, 2H), 7,77 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,13 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,07 (m, 2H), 6,53 (s, 1H), 6,45 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,77 (s, 2H), 4,26 (m, 4H), 3,84 (s, 3H), 3,83 (s, 3H), 2,44 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,15 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,78 (m, 4H), 1,31 (m, 2H), 1,20 (m, 2H), 1,01 (m, 2H); MS (ES) m/z 619 (M+H^{+}).

Se añadió ácido metanosulfónico (0,5 ml) a una solución del Compuesto 12l (5 mg, 0,008 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (1,0 ml). La mezcla fue agitada a 20ºC durante 6 horas, posteriormente se añadió cuidadosamente hidróxido de amonio para hacer básica la mezcla. La mezcla fue extraída con EtOAc (2 x 10 ml) y las capas orgánicas fueron combinadas, lavadas con agua (5 ml) y salmuera (5 ml), posteriormente secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna de gel de sílice (elución con MeOH/CH_{2}Cl_{2}/NH_{4}OH) para dar el Compuesto 22 (5 mg, 100%) como un sólido de color naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,35 (m, 2H), 7,96 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,53 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,09 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 1H), 6,97 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 1H), 4,33 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,22 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 2,45 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,32 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 1,87 (m, 2H), 1,73 (m, 2H), 1,35 (m, 2H), 1,25 (m, 2H), 1,13 (m, 2H); MS (ES) m/z 469 (M+H^{+}).

60

Ejemplo 13

61

Una mezcla de Compuesto 12l (17 mg, 0,027 mmoles), THF (0,8 ml) y yodoetano (5 \mul, 0,062 mmoles) fue sometida a reflujo durante 2 días, posteriormente enfriada y concentrada bajo presión reducida. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (elución con MeOH/CH_{2}Cl_{2}) para dar el Compuesto 13a (6 mg, 35%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,32 (dd, J = 4,7, 1,5 Hz, 1H), 8,25 (m, 2H), 7,85 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,27 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,22 (dd, J = 8,0, 4,8 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,93 (dd, J = 8,0, 4,8 Hz, 1H), 6,54 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,46 (dd, J = 8,4, 2,3 Hz, 1H), 4,79 (s, 2H), 4,45 (m, 2H), 4,15 (m, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 2,83 (m, 4H), 2,27 (m, 2H), 1,99 (m, 2H), 1,65 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 1,27 (m, 4H), 1,15 (m, 2H) 0,88 (t, J = 7,3 Hz, 3H); MS (ES) m/z 647 (M+H^{+}). Se añadió ácido metanosulfónico (0,2 ml) a una solución de Compuesto 13a (6 mg, 0,009 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (1,0 ml). Después de que la mezcla fuera agitada a 20ºC durante 2 horas, se añadió cuidadosamente hidróxido de amonio para hacer básica la mezcla. La mezcla fue extraída posteriormente con EtOAc (2 x 10 ml) y las capas orgánicas fueron combinadas, lavadas con agua (5 ml) y salmuera (5 ml), posteriormente secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna de gel de sílice (elución con MeOH/CH_{2}Cl_{2}/NH_{4}OH) para dar el Compuesto 23 (4 mg, 90%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,35 (m, 2H), 7,90 (m, 1H), 7,71 (m, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,07 (dd, J = 7,8, 4,9 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 7,3, 4,7 Hz, 1H), 4,24 (m, 4H), 2,37 (m, 2H), 2,30 (m, 2H), 2,04 (m, 2H), 1,73 (t, J = 6,2 Hz, 4H), 1,24 (m, 4H), 0,95-1,02 (m, 5H); MS (ES) m/z 497 (M+H^{+}).

62

Ejemplo 14

63

Se añadió BuLi (1,6 M en hexano, 10,3 mmoles) a -78ºC a una solución del Compuesto 14a 2,6-lutidina (0,5 ml, 4,30 mmoles) en THF (15 ml). La solución de color rojo intenso fue mantenida en agitación a -78ºC durante 30 minutos, posteriormente se añadió el Compuesto 14 3-bromo-propoxi-ter-butildimetilsilano (2,4 ml, 10,3 mmoles). La mezcla fue templada a temperatura ambiente durante 18 horas, amortiguada con agua (2 ml) y concentrada bajo presión reducida. El residuo fue diluido con agua (15 ml) y extraído con hexano (3 x 20 ml). Los extractos orgánicos fueron combinados, secados (Na_{2}SO_{4}) y concentrados. La purificación mediante cromatografía en columna (elución con Hexano/EtOAc) produjo el Compuesto 14c (0,55 g, 30%) como un aceite incoloro: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,45 (m, 1H), 6,91 (m, 2H), 3,59 (t, J = 6,4 Hz, 4H), 2,73 (m, 4H), 1,70 (m, 4H), 1,57 (m, 4H), 0,85 (s, 18H), 0,00 (s, 12H); MS (ES) m/z 452 (M+H^{+}). Se añadió TBAF (1 M en THF, 2,60 mmoles) a una mezcla de Compuesto 14c (0,55 g, 1,20 mmoles) en THF (3,0 ml). La mezcla fue agitada a 20ºC durante 3 horas, posteriormente concentrada bajo presión reducida. La purificación mediante cromatografía en gel de sílice (elución con EtOAc (conteniendo un 5% de Et_{3}N)) dio lugar al Compuesto 14d (254 mg, 95%) como un aceite incoloro: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,53 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 3,70 (t, J = 6,0 Hz, 4H), 2,83 (t, J = 7,4 Hz, 4H), 1,85 (m, 4H), 1,64 (m, 4H); MS (ES) m/z 224 (M+H^{+}). Se añadió trietilamina (0,95 ml, 6,84 mmoles) a 0ºC a una solución del Compuesto 14d diólico (254 mg, 1,14 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (4 ml), seguido por MsCl (0,35 ml, 4,56 mmoles). La mezcla fue agitada a 20ºC durante 1,5 horas, diluida con éter dietílico (20 ml) y lavada con HCl al 5% (5 ml). Las capas fueron separadas y se desechó la fase orgánica. La fase acuosa fue diluida con CH_{2}Cl_{2} (10 ml) y se hizo básica con NaOH al 5% (5 ml). La mezcla fue extraída con CH_{2}Cl_{2} (3 x 20 ml) y los extractos orgánicos fueron combinados, lavados con salmuera (10 ml) y posteriormente secados (Na_{2}SO_{4}) y concentrados. La purificación mediante cromatografía (elución con Hexano/EtOAc) dio lugar al Compuesto 14e (162 mg, 38%) como un líquido de color marrón claro; MS (ES) m/z 380 (M+H^{+}).

Una mezcla de Compuesto 1d (74 mg, 0,21 mmoles), Cs_{2}CO_{3} (290 mg, 0,89 mmoles) y DMF (30 ml) fue calentada a 100ºC. Una solución del Compuesto 14e (100 mg, 0,26 mmoles) en DMF (7 ml) fue añadida mediante una bomba de jeringa a lo largo de 2 horas. Una vez que se completó la adición, la mezcla fue agitada a 20ºC durante 18 horas, posteriormente amortiguada con cloruro de amonio saturado y extraída con acetato de etilo (3 x 50 ml). Los extractos orgánicos fueron combinados, lavados con agua (3 x 30 ml) y salmuera (30 ml), posteriormente secados (Na_{2}SO_{4}) y concentrados. El residuo fue purificado mediante cromatografía en columna (elución con Acetona/cloruro de metileno) para recuperar el Compuesto 14e (21 mg) y dar el Compuesto 14f (14 mg, 22%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,14 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 7,54, 7,73 (m, 8H), 6,97 (m, 2H), 4,30 (t, J = 5,6 Hz, 4H), 3,14 (s, 3H), 2,65 (m, 4H), 1,73 (m, 4H), 1,31 (m, 4H); MS (ES) m/z 531 (M+H^{+}). Una mezcla de Compuesto 14f (14 mg, 0,026 mmoles), KOH (360 mg, 6,43 mmoles) y etanol (3 ml) fue sometida a reflujo durante dos días, enfriada a 20ºC y posteriormente el solvente fue eliminado bajo presión reducida. El residuo fue disuelto en agua (5 ml), se hizo ácido con ácido cítrico al 10%, se agitó a 20ºC durante 10 minutos y se extrajo con cloruro de metileno (3 x 20 ml). Los extractos orgánicos fueron combinados, secados (Na_{2}SO_{4}) y concentrados. El residuo fue mezclado con acetato de amonio (2,5 g), calentado a 140ºC durante 3 horas y enfriado a 20ºC. Se añadió agua (10 ml) y posteriormente la solución se hizo básica con NaOH acuoso al 20% y se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml). Los extractos orgánicos fueron combinados, lavados con agua (20 ml) y salmuera (10 ml), posteriormente fueron secados (Na_{2}SO_{4}) y concentrados. El producto fue purificado mediante cromatografía en columna (elución con Acetona/CH_{2}Cl_{2}) para dar el Compuesto 24 (4 mg, 30%) como un sólido amarillo: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,28 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 7,68 (m, 2H), 7,43-7,54 (m, 3H), 6,99 (dd, J = 7,9, 4,7 Hz, 2H), 6,87 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 4,28 (t, J = 6,2 Hz, 4H), 2,65 (m, 4H), 1,81 (m, 4H), 1,46 (m, 4H); MS (ES) m/z 517 (M+H^{+}).

64

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Ejemplo 15

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66

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Una mezcla de Compuesto 15a ácido 4-oxo-1,9-nonanodicarboxílico (240 mg, 1,04 mmoles), etanol absoluto (3,0 ml) y HCl concentrado (1,0 ml) fue calentada bajo reflujo durante 20 horas. La mezcla fue enfriada a 20ºC, diluida con EtOAc (25 ml) y neutralizada con NaHCO_{3} acuoso saturado. La capa orgánica fue separada, lavada con agua (5 ml) y salmuera (5 ml), posteriormente secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada para dar el Compuesto 15b (270 mg, 91%) como un aceite incoloro: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 4,09-4,16 (m, 4H), 2,10-2,50 (m, 10H), 1,89 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 1,54-1,68 (m, 4H), 1,25 (t, J = 7,1 Hz, 6H); MS (ES) m/z 309 (M+Na). Una mezcla de Compuesto 15b (250 mg, 0,94 mmoles), etilén glicol (0,24 ml, 4,30 mmoles), ortoformato de trietilo (0,48 ml, 2,89 mmoles) y TsOH monohidrato (14 mg, 0,074 mmoles) fue sometida a reflujo durante 45 minutos, enfriada a 20ºC, diluida posteriormente con NaHCO_{3} acuoso saturado y extraída con éter dietílico (2 x 20 ml). Las capas orgánicas fueron combinadas, lavadas de nuevo con NaHCO_{3}, secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas para dar el Compuesto 15c (310 mg, 100%) como un aceite incoloro: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 4,08- 4,16 (m, 4H), 3,92 (s, 4H), 2,26-2,33 (m, 4H), 1,58-1,72 (m, 8H), 1,30-1,35 (m, 4H), 1,25 (t, J = 7,2 Hz, 6H); MS (ES) m/z 353 (M+Na). Se añadió el Compuesto 15c (330 mg, 0,94 mmoles) en THF (5,0 ml) a una solución en THF de LiAlH_{4} (1,0 M, 1,50 mmoles). Después de que la mezcla fuera agitada a 20ºC durante 2 horas, amortiguada con agua y extraída con éter dietílico (3 x 20 ml), las capas orgánicas fueron combinadas, secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas para dar el Compuesto 15d (210 mg, 91%) como un líquido incoloro: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,93 (s, 4H), 3,62-3,67 (m, 4H), 1,34-1,67 (m, 16H); MS (ES) m/z 269 (M+Na). Una mezcla de Compuesto 15d (210 mg, 0,85 mmoles), agua (3,4 ml), H_{2}SO_{4} (6 M, 0,5 ml) y acetona (0,3 ml) fue sometida a reflujo durante 1,5 horas. Después de que la mezcla fuera concentrada, el residuo fue extraído con CH_{2}Cl_{2} (3 x 15 ml). Los extractos orgánicos fueron combinados, secados (Na_{2}SO_{4}) y concentrados para dar el Compuesto 15e (121 mg, 71%) como un sólido blanco: RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,64 (s, 2H), 3,63 (t, J = 6,5 Hz, 4H), 2,39-2,46 (m, 4H), 1,25-1,78 (m, 12H); MS (ES) m/z 225 (M+Na). Se añadieron trietilamina (0,41 ml, 2,97 mmoles) y MsCl (0,23 ml, 2,97 mmoles) a 0ºC a una solución en cloruro de metileno (2,5 ml) del Compuesto 15e (120 mg, 0,59 mmoles). La mezcla fue agitada a 20ºC durante 2 horas y amortiguada con agua. Las capas fueron separadas y la fase acuosa fue extraída con CH_{2}Cl_{2} (2 x 20 ml). Las fases orgánicas fueron combinadas, lavadas secuencialmente con 5 ml de HCl al 5%, agua y NaHCO_{3} al 5%, posteriormente fueron secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas para dar el Compuesto 15f (169 mg, 80%): RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 4,20-4,25 (m, 4H), 3,64 (m, 2H), 3,01 (s, 3H), 3,00 (s, 3H), 2,34-2,49 (m, 4H), 1,32-1,78 (m, 10H); MS (ES) m/z
381 (M+Na).

Una mezcla de Compuesto 1d (55 mg, 0,13 mmoles), Cs_{2}CO_{3} (370 mg, 1,13 mmoles) y DMF (25 ml) fue calentada a 100ºC. Se añadió una solución en DMF (5 ml) del Compuesto 15f (84 mg, 0,23 mmoles) mediante una bomba de jeringa a lo largo de 1,5 horas. Una vez que se completó la adición, la mezcla fue agitada a 20ºC durante 2 horas, amortiguada con cloruro de amonio saturado (30 ml) y extraída con cloruro de metileno (2 x 30 ml). Las fases orgánicas fueron combinadas, lavadas con agua (3 x 20 ml) y salmuera (30 ml), posteriormente secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas. La purificación mediante cromatografía en columna (elución con EtOAc/Hexano) dio lugar al Compuesto 15g (11 mg, 16%) como un sólido naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,24-8,30 (ddd, J = 6,0, 4,7, 1,2 Hz, 2H), 7,82-7,85 (dd, J = 8,0, 1,3 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,40 (dd, J = 8,1, 1,3 Hz, 1H), 7,09 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 1H), 6,96 (dd, J = 8,1, 4,8 Hz, 1H), 4,34 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 4,20 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,14 (s, 3H), 2,32 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,11 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,69-1,84 (m, 4H), 1,37-1,41 (m, 2H), 1,18-1,31 (m, 2H), 1,07-1,16 (m, 2H), 0,90-1,04 (m, 2H); MS (ES) m/z 510 (M+H^{+}). El Compuesto 15g (12 mg, 0,023 mmoles) fue convertido en el Compuesto 25 (2 mg, 10%) utilizando el procedimiento descrito para la preparación del Compuesto 24. RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,37 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,32 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,42 (m, 1H), 7,08 (dd, J = 8,0, 4,6 Hz, 1H), 6,95 (dd, J = 8,0, 4,5 Hz, 1H), 4,34 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 4,20 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 2,30 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 2,12 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 1,73-1,84 (m, 4H), 1,34-1,41 (m, 2H), 1,10-1,22 (m, 4H), 0,85-1,08 (m, 2H); MS (ES) m/z 496 (M+H^{+}).

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Ejemplo 16

68

69

Una mezcla de Compuesto 16a 5-oxoazelato de dietilo (318 mg, 1,23 mmoles), TsOH monohidrato (19 mg, 0,10 mmoles), etilén glicol (0,35 ml, 6,20 mmoles) y ortoformato de trietilo (0,62 ml, 3,72 mmoles) fue calentada a reflujo durante 1 hora, enfriada a 20ºC, diluida posteriormente con NaHCO_{3} acuoso saturado (5 ml) y extraída con éter dietílico (3 x 15 ml). Las capas orgánicas fueron combinadas, lavadas con NaHCO_{3} saturado, secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas para dar un producto bruto, el Compuesto 16b (370 mg, 100%); MS (ES) m/z 325 (M+Na). Una solución de Compuesto 16b bruto (370 mg, 1,23 mmoles) en THF (6 ml) fue añadida a LiAlH_{4} (1 M en THF, 2,90 mmoles). La mezcla fue agitada a 20ºC durante 2 horas y se añadió agua para amortiguar el exceso de LiAlH_{4}. La solución fue extraída posteriormente con éter dietílico (3 x 20 ml). Los extractos orgánicos fueron secados sobre Na_{2}SO_{4} y concentrados. El producto bruto fue purificado mediante cromatografía en columna (elución con EtOAc) para dar el Compuesto 16c (168 mg, 63%) como un aceite incoloro: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,94 (s, 4H), 3,65 (t, J = 6,3 Hz, 4H), 1,43-1,67 (m, 12H); MS (ES) m/z 241 (M+Na). Se añadieron trietilamina (0,48 ml, 3,45 mmoles) y MsCl (0,27 ml, 3,45 mmoles) a 0ºC a una solución del Compuesto 16c (151 mg, 0,69 mmoles) en cloruro de metileno (2 ml). La mezcla fue agitada a 20ºC durante 3 horas y amortiguada con agua para dar el Compuesto 16d bismesilato. Las capas fueron separadas y la fase orgánica fue lavada con HCl al 5%, agua, NaHCO_{3} al 5% y salmuera, secuencialmente, posteriormente secadas sobre Na_{2}SO_{4} y concentradas. La purificación mediante cromatografía en columna (elución con EtOAc/Hexano) dio lugar a un Compuesto 16e cetona (192 mg, 84%) como un sólido oleoso de color marrón claro: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 4,21 (m, 4H), 3,01 (s, 6H), 2,48 (m, 2H), 1,43-1,77 (m, 10H); MS (ES) m/z 353 (M+Na).

Una solución del Compuesto 16e cetona bismesilato (24 mg, 0,072 mmoles) en DMF (3 ml) a 70ºC fue añadido gota a gota a una mezcla de Compuesto 12d (19 mg, 0,040 mmoles), Cs_{2}CO_{3} (160 mg, 0,50 mmoles) y DMF (6 ml). Después de agitar a 70ºC durante 4 horas, la mezcla fue enfriada en un baño de hielo, amortiguada con NH_{4}Cl acuoso y extraída con EtOAc (2 x 30 ml). Los extractos orgánicos fueron combinados, lavados con agua (3 x 15 ml) y salmuera (15 ml), posteriormente secados (Na_{2}SO_{4}) y concentrados para dar el Compuesto 16f bruto. El Compuesto 16f bruto fue mezclado con cloruro de metileno (1 ml) y posteriormente se añadió ácido metanosulfónico (0,3 ml). La mezcla fue agitada a 20ºC durante varias horas hasta que no se detectó ya Compuesto 16f por MS. La mezcla fue enfriada en un baño de hielo, amortiguada cuidadosamente con hidróxido de amonio y extraída con EtOAc (3 x 15 ml). Los extractos fueron lavados con agua (10 ml) y salmuera (10 ml), posteriormente secados (Na_{2}SO_{4}) y concentrados. El producto bruto fue purificado mediante cromatografía en columna de gel de sílice (elución con MeOH/CH_{2}Cl_{2}) para dar el Compuesto 26 (12 mg, 67% a partir del Compuesto 16e) como un sólido de color naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,34 (d, J = 3,9 Hz, 2H), 7,80 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,63 (s, 2H), 7,05 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 2H), 4,26 (t, J = 6,0 Hz, 4H), 2,10 (t, J = 7,0 Hz, 4H), 1,71-1,80 (m, 4H), 1,32-1,39 (m, 4H); MS (ES) m/z
468 (M+H^{+}).

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Ejemplo 17

71

Una mezcla de Compuesto 1d (116 mg, 0,34 mmoles), Cs_{2}CO_{3} (554 mg, 1,70 mmoles) y DMF (68 ml) fue calentada a 60ºC y se añadió gota a gota una solución de Compuesto 17a (R,R)-(+)-1,2,9,10-diepoxidecano (0,096 ml,0,54 mmoles) en DMF (2 ml). La mezcla fue agitada a 60ºC durante 5 horas, enfriada a 20ºC, amortiguada con NH_{4}Cl acuoso saturado (20 ml) y extraída con EtOAc (3 x 50 ml). Las capas orgánicas fueron combinadas, lavadas con agua (3 x 15 ml) y salmuera (15 ml), posteriormente secadas (Na_{2}SO_{4}) y concentradas. El residuo fue cromatografiado en gel de sílice (eluyendo con Acetona/Cloruro de metileno) para dar el Compuesto 17b (50 mg, 34%) como un sólido naranja; MS (ES) m/z (M+H^{+}). Se añadió NaH (60% en aceite mineral, 21 mg, 0,52 mmoles) en DMF (10 ml) a una mezcla de Compuesto 17b (47 mg, 0,092 mmoles) en DMF (18 ml). La mezcla fue agitada a 100ºC durante 20 horas, enfriada a 20ºC, amortiguada con NH_{4}Cl acuoso saturado y diluida con EtOAc. Después de que se separaran las capas, la fase orgánica fue lavada con agua (3 x 10 ml) y salmuera (10 ml), posteriormente secada (Na_{2}SO_{4}) y concentrada. El producto bruto fue purificado mediante cromatografía en columna (elución con Acetona/Cloruro de metileno) para dar el Compuesto 17c (11 mg, 23%) como un sólido de color naranja: RMN ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,28 (dd, J = 4,7, 1,5 Hz, 2H), 7,73 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 2H), 7,53 (s, 2H), 7,06 (dd, J = 8,0, 4,7 Hz, 2H), 4,44 (m, 2H), 4,09 (m, 2H), 3,93 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,13 (s, 3H), 1,15-1,28 (m, 8H), 0,87-0,89 (m, 4H); MS (ES) m/z 514 (M+H^{+}). Una mezcla de Compuesto 17c (11 mg, 0,021 mmoles), etanol (2 ml) y KOH 10 N (0,1 ml) fue calentada a 80ºC durante 18 horas. La mezcla fue posteriormente concentrada, diluida con agua (5 ml), se hizo ácida con HCl 1 N hasta un pH de 3 y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos fueron combinados, secados (Na_{2}SO_{4}) y concentrados. El residuo resultante fue mezclado con NH_{4}OAc puro (2 g) y calentado a 140ºC durante 3 horas. La mezcla fue enfriada y diluida con agua (5 ml), se hizo básica con NaOH acuoso al 20% y se extrajo con EtOAc (2 x 15 ml). Los extractos orgánicos fueron lavados con agua (15 ml), posteriormente secados (Na_{2}SO_{4}) y concentrados. La purificación mediante cromatografía en columna (elución con Acetona/Cloruro de metileno) dio lugar al Compuesto 27 (4 mg, 36%) como un sólido de color naranja: RMN ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,32 (dd, J = 4,7, 1,4 Hz, 2H), 7,80 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,39 (s, 2H), 7,08 (dd, J = 8,0, 4,8 Hz, 2H), 4,14-4,27 (m, 4H), 3,94 (s, ancho, 2H), 1,17-1,20 (t, J = 6,6 Hz, 4H), 0,99 (m, 4H), 0,83-0,89 (m, 4H); MS (ES) m/z 500 (M+H^{+}).

72

Ejemplo 18

73

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Una mezcla de Compuesto 5c (3,00 g, 17,2 mmoles), Compuesto 7a (5,35 g, 22,4 mmoles) y carbonato de cesio (8,41 g, 25,8 mmoles) en DMF (70 ml) fue agitada a 70ºC durante 24 horas y posteriormente filtrada. El filtrado fue evaporado in vacuo y el residuo fue separado mediante cromatografía instantánea en columna (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 97:3) para dar el Compuesto 18a como un aceite viscoso (1,72 g, rendimiento 26%): RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,97 (s, 1H), 7,54 (d, J = 7,85 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8,16 Hz, 1H), 7,21 (m, 2H), 4,24 (t, 5,48, 5,50 Hz, 2H), 3,78 (t, J = 5,52, 5,40, 2H), 3,74-3,64 (m, 4H), 3,43 (t, J = 5,29, 4,82 Hz, 2H), 0,97 (s, 9H), 0,1 (s, 6H); ES-MS m/z 377 (MH^{+}). Se añadió gota a gota t-butóxido de potasio 1,0 M en THF (5,2 ml, 5,2 mmoles) a una suspensión del Compuesto 7b éster (771 mg, 1,9 mmoles) y el Compuesto 18a amida (500 mg, 1,3 mmoles) en THF seco (5 ml) bajo nitrógeno que había sido enfriado a 0ºC. La mezcla resultante fue agitada a 0ºC durante 1 hora y a temperatura ambiente durante 3 horas, posteriormente se añadió HCl concentrado (5 ml) y la mezcla fue de nuevo agitada a temperatura ambiente durante otros 10 minutos. La mezcla fue repartida entre EtOAc (100 ml) y H_{2}O (40 ml), se separaron dos capas y la capa acuosa fue extraída con EtOAc (50 ml). Los extractos combinados fueron lavados secuencialmente con agua, NaHCO_{3} acuoso saturado y salmuera, y posteriormente fueron secados (Na_{2}SO_{4}) y evaporados in vacuo para dar el Compuesto 18b como un sólido de color naranja rojizo oscuro (430 mg); ES-MS m/z
504 (MH^{+}).

Se añadió Ms_{2}O (740 mg, 4,25 mmoles) a una solución del Compuesto 18b bruto (430 mg) y Py (piridina) (403 mg, 5,1 mmoles) en THF (17 ml). La reacción fue agitada a 50ºC durante 3 horas y posteriormente la mezcla de reacción fue enfriada a temperatura ambiente. Se añadieron THF (17 ml) y HCl acuoso 1,0 N (39 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos, posteriormente fue extraída con EtOAc (227 ml). La fase orgánica fue lavada secuencialmente con HCl acuoso 1,0 N (39 ml), agua y salmuera, y posteriormente fue secada (Na_{2}SO_{4}) y evaporada in vacuo para dar el Compuesto 18c como un sólido de color naranja rojizo oscuro (500 mg); ES-MS m/z 660 (MH^{+}). Una solución de Compuesto 18c bruto (64 mg), DIEA (N,N- diisopropiletilamina) (50 mg, 0,39 mmoles) y Compuesto 18d (12 mg, 0,2 mmoles) en DMF (13 ml) en un tubo de presión fue agitada a 90ºC durante 5 horas. Los productos volátiles fueron eliminados bajo vacío y el residuo fue separado mediante cromatografía instantánea en columna (CH_{2}Cl_{2}:MeOH:NH_{4}OH, 95:3:2) para dar el producto deseado, Compuesto 30, como un sólido de color naranja rojizo (10 mg): RMN ^{1}H (CD_{3}OD) \delta 7,50 (s, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,08 (m, 4H), 6,83 (m, 2H), 4,27 (m, 4H), 3,77 (m, 8H), 3,21 (m, 2H), 2,83 (m, 4H), 2,69 (m, 2H); ES-MS m/z
529 (MH^{+}).

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Ejemplo 19

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Una mezcla de Compuesto 5b (2,50 g, 12,3 mmoles), Compuesto 19a (6,23 g, 24,6 mmoles) y carbonato de cesio (12,02 g, 36,9 mmoles) en DMF (50 ml) fue agitada a 75ºC durante 2 horas y posteriormente filtrada. El filtrado fue diluido con EtOAc (370 ml). Los extractos combinados fueron lavados secuencialmente con agua y salmuera, posteriormente secados (Na_{2}SO_{4}) y evaporados in vacuo. El residuo fue separado mediante cromatografía instantánea (EtOAc:Hexano, 1:9) para dar el Compuesto 19b (3,14 g, 68%): RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,40-8,36 (m, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,38- 7,19 (m, 3H), 4,27 (t, J = 6,84, 6,82 Hz, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,63-3,50 (m, 2H), 2,04-1,96 (m, 2H), 0,87 (s, 9H), 0,01 (s, 6H); ES-MS m/z 376 (MH^{+}). Una mezcla de Compuesto 5c (2,50 g, 14,3 mmoles), Compuesto 19c 2-[2-(2-cloroetoxil)etoxil]etanol (4,82 g, 28,6 mmoles) y carbonato de cesio (13,98 g, 42,9 mmoles) en DMF (58 ml) fue agitada a 78ºC durante 24 horas. Se añadió Compuesto 19c adicional y la reacción fue agitada durante 24 horas a 78ºC y posteriormente filtrada. El filtrado fue diluido con EtOAc (430 ml) y los extractos combinados fueron lavados secuencialmente con agua y salmuera, posteriormente secados (Na_{2}SO_{4}) y evaporados in vacuo. El residuo fue separado mediante cromatografía instantánea (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 93:7) para dar el Compuesto 19d (2,60 g, 82%): RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,58 (d, J = 7,80 Hz, 1H), 7,36-7,30 (m, 1H), 7,26-7,21 (m, 1H), 7,17-7,11 (m, 2H), 4,29 (t, J = 5,3 Hz, 2H), 3,94-3,79 (m, 2H), 3,69 (s, 2H), 3,59-3,48 (m, 8H); ES-MS m/z
307 (MH^{+}).

Se añadió gota a gota t-butóxido de potasio 1,0 M en THF (6,8 ml, 6,0 mmoles) a una suspensión del Compuesto 19b éster (939 mg, 2,5 mmoles) y el Compuesto 19d amida (520 mg, 1,7 mmoles) en THF seco (7 ml) bajo nitrógeno que había sido enfriado a 0ºC. La mezcla resultante fue agitada a 0ºC durante 1 hora y a temperatura ambiente durante 3 horas y posteriormente se añadió HCl concentrado (7 ml). La mezcla fue luego agitada a temperatura ambiente durante otros 10 minutos y posteriormente repartida entre EtOAc (142 ml) y H_{2}O (57 ml). Se separaron dos capas y la capa acuosa fue extraída con EtOAc (60 ml). Los extractos combinados fueron lavados secuencialmente con agua, NaHCO_{3} acuoso saturado y salmuera, posteriormente fueron secados (Na_{2}SO_{4}) y evaporados in vacuo para dar el Compuesto 19e como un sólido de color naranja rojizo oscuro (703 mg); ES-MS m/z 518 (MH^{+}). Se añadió Ms_{2}O 1,13 g, 6,5 mmoles) a una solución de Compuesto 19e bruto (700 mg) y Py (piridina) (617 mg, 7,8 mmoles) en THF (26 ml). La mezcla de reacción fue agitada a 50ºC durante 2,5 horas y posteriormente enfriada a temperatura ambiente. Posteriormente se añadieron THF (26 ml) y HCl acuoso 1,0 N (43 ml). La mezcla fue agitada a temperatura ambiente durante 10 minutos y posteriormente extraída con EtOAc (347 ml). La fase orgánica fue lavada con HCl acuoso 1,0 N (143 ml), posteriormente con agua, salmuera, y posteriormente fue secada (Na_{2}SO_{4}) y evaporada in vacuo para dar el Compuesto 19f como un sólido de color naranja rojizo oscuro (850 mg); ES-MS m/z 674 (MH^{+}). Una solución de Compuesto 19f bruto (81 mg), DIEA (310 mg, 2,4 mmoles) y MeNH_{2} (2,0 M en THF, 1,1 ml, 2,2 mmoles) en DMF (15 ml) en un tubo de presión fue agitada a 90ºC durante 24 horas. Los productos volátiles fueron eliminados bajo vacío y el residuo fue separado mediante cromatografía instantánea en columna (CH_{2}Cl_{2}:MeOH:NH_{4}OH, 95:3:2) para dar el producto deseado, Compuesto 31, como un sólido de color naranja rojizo (9 mg); ES-MS m/z
513 (MH^{+}).

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Ejemplos Biológicos

Los compuestos de la presente invención fueron analizados para determinar su actividad biológica en los métodos in vitro e in vivo siguientes.

Ejemplo 1 Ensayo de Centelleo por Proximidad (SPA) de Proteína Quinasa C

La actividad de unión de un compuesto a la Proteína Quinasa C (PKC) fue determinada utilizando un Ensayo de Centelleo por Proximidad homogéneo de acuerdo con el procedimiento siguiente.

Procedimiento

Los diferentes isozimas de la PKC humana (fueron obtenidos de Pan Vera, Madison, WI y habían sido preparados como enzimas recombinantes producidos a partir de un vector de expresión baculovírico) fueron añadidos a una mezcla de reacción que contenía un compuesto de ensayo, HEPES 20 mM (pH 7,4), CaCl_{2} 100 \muM, MgCl_{2} 10 mM, 100 \mug/ml de fosfatidilserina, 20 \mug/ml de diacilglicerol, ATP 1 \muM, 0,8 \muCi de (^{33}P)ATP y 5 \mug/ml de sustrato peptídico biotinilado (Jing Zhao y col., J. Bio. Chem., 1998, 273, 23072). La reacción fue incubada durante 15 minutos a 30ºC. Las reacciones fueron finalizadas por la adición de esferas de SPA revestidas con estreptavidina (Amersham) en una solución que contenía EGTA 1 mM, EDTA 10 mM y ATP 100 \muM. Las esferas se dejaron sedimentar durante una noche y las placas fueron leídas en un contador de centelleo Wallac MICROBETA (PerkinElmer Life Sciences, Wellesley, MA).

Ensayo de la Glucógeno Sintasa Quinasa-3\beta

La actividad inhibidora de un compuesto frente a la actividad Glucógeno Sintasa Quinasa-3\beta (GSK-3\beta) fue determinada utilizando una GSK-3\beta recombinante de conejo de acuerdo con el procedimiento siguiente.

Procedimiento

El compuesto de ensayo fue añadido a una mezcla de reacción que contenía inhibidor-2 de fosfatasas de proteínas (PPI-2) (Calbiochem, San Diego, CA) (45 ng), GSK-3\beta de conejo (New England Biolabs, Beverly, MA) (0,75 unidades) y ^{33}P-ATP (1 \muCi) en Tris-HCl 50 mM (pH 8,0), MgCl_{2} 10 mM, BSA 0,1%, DTT 1 mM y vanadato de sodio 100 \muM. La mezcla se hizo reaccionar durante 90 minutos a 30ºC para permitir la fosforilación de la proteína PPI-2 y posteriormente la proteína de la reacción fue precipitada utilizando ácido tricloroacético (TCA) al 10%. La proteína precipitada fue recogida en placas con filtro (MultiScreen-DV, Millipore, Bedford, MA), que fueron posteriormente lavadas. Finalmente, la radiactividad fue cuantificada utilizando un Contador de Centelleo TopCount (Packard, Meridian, CT). Los compuestos inhibidores de la GSK-3 tenían como resultado PPI- 2 menos fosforilada y por tanto una menor señal radiactiva en la proteína precipitada. Se utilizaron Staurosporina o Valproato (ambos disponibles en varias fuentes comerciales), conocidos inhibidores de la GSK-3\beta, como control positivo para los ensayos de
selección.

En la Tabla 1 se muestran los valores de la inhibición de varios isozimas de PKC y de GSK-3\beta por ciertos compuestos de la invención analizados en los ensayos SPA de PKC y de GSK-3\beta.

TABLA 1 Selectividad por PKC y GSK-3

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Ejemplo 2 Ensayo con un Sustrato Peptídico Biotinilado

Los ensayos para analizar la inhibición de otras quinasas por un compuesto se llevaron a cabo utilizando métodos que miden el nivel de fosforilación de un sustrato peptídico biotinilado. Los sustratos peptídicos biotinilados fueron seleccionados de la literatura como apropiados para el enzima que estaba siendo evaluado.

Procedimiento

Se preparó una mezcla de reacción de quinasa en Tris-HCl 50 mM pH=8, MgCl_{2} 10 mM, Na_{3}VO_{4} 0,1 mM, DTT 1 mM, ATP 10 \muM, sustrato peptídico biotinilado 0,25-1 \muM, 0,2-0,8 \muCurios por pocillo de ^{33}P-\gamma-ATP (2000-3000 Ci/mmol). Las condiciones del ensayo variaban ligeramente para cada proteína quinasa; por ejemplo, la quinasa del receptor de insulina requiere MnCl_{2} 10 mM para su actividad y la proteína quinasa dependiente de calmodulina requiere calmodulina y CaCl_{2} 10 mM. La mezcla de reacción fue dispensada en los pocillos de una placa Flashplate revestida con estreptavidina y 1 \mul de solución madre del fármaco en DMSO al 100% fue añadido a un volumen de reacción de 100 \mul, teniendo como resultado una concentración final de DMSO en la reacción del 1%. El enzima fue diluido en Tris-HCl 50 mM pH=8,0, BSA 0,1%, y añadido a cada pocillo. La reacción fue incubada durante una hora a 30ºC en presencia de compuesto. Después de una hora, la mezcla de reacción fue aspirada de la placa y la placa fue lavada con PBS que contenía EDTA 100 mM. La placa fue leída en un contador de centelleo para determinar el ^{33}P-\gamma-ATP incorporado al péptido inmovilizado. Los compuestos de ensayo fueron analizados por duplicado a 8 concentraciones (100 \muM, 10 \muM, 1 \muM, 100 nM, 10 nM, 1 nM, 100 pM, 10 pM). Se determinó una señal máxima y una señal mínima del ensayo en cada placa.

\newpage

La CI_{50} fue calculada a partir de la curva dosis-respuesta del porcentaje de inhibición de la señal máxima en el ensayo de acuerdo con la fórmula:

% Inhibición = ((MS-BS)/(TCS-BS)) X 100%

en la que MS = Señal Máxima, BS = Señal de Fondo, TCS = Señal del Compuesto de Ensayo. El porcentaje de inhibición fue representado gráficamente frente al log de la concentración del compuesto de ensayo. Se incluyeron también en cada placa compuestos inhibidores conocidos como referencias apropiadas para la quinasa que estaba siendo analizada.

Definición y Origen de los Enzimas Quinasa

El VEGF-R (receptor-2 del factor de crecimiento endotelial vascular) es una proteína de fusión que contiene una marca de polihistidina en el extremo N seguida por los aminoácidos 786-1343 del dominio quinasa del VEGF-R2 de rata (# de Acceso del GenBank U93306). La proteína quinasa A es la subunidad catalítica de la proteína quinasa-A dependiente de AMPc purificada de corazón bovino (Upstate Biotech, Lake Placid, NY, # de Cat. 14-114). La CDK1 (quinasa 1 dependiente de ciclina) es aislada de células de insecto que expresan la subunidad catalítica de la CDK1 humana y su subunidad reguladora positiva ciclina B (New England Biolabs, Beverly, MA, # de Cat. 6020). La Quinasa-1 de caseína es una proteína truncada en el aminoácido 318 de la porción C-terminal de la isoforma CK1 delta de rata producida en E. coli (New England Biolabs, Beverly, MA, # de Cat. 6030). La Quinasa del Receptor de Insulina consta de los residuos 941-1313 del dominio citoplásmico de la subunidad beta del receptor de insulina humano (BIOMOL, Plymouth Meeting, PA, # de Cat. SE-195). La Quinasa de Calmodulina (proteína quinasa 2 dependiente de calmodulina) es una versión truncada de la subunidad alfa de la proteína de rata producida en células de insecto (New England Biolabs, Beverly, MA, # de Cat. 6060). La MAP Quinasa es la isoforma ERK-2 de rata que contiene una marca de polihistidina en el extremo N producida en E. coli y activada por fosforilación con MEK1 antes de la purificación (BIOMOL, Plymouth Meeting, PA, # de Cat. SE-137). El EGFR (receptor del factor de crecimiento epidérmico) es purificado a partir de membranas de células A431 humanas (Sigma, St. Louis, MO, # de Cat. E3641).

Sustratos Peptídicos

VEGF-R	(Biotina)KHKKLAEGSAYEEV-Amida
CDK1	(Biotina)KTPKKAKKPKTPKKAKKL-Amida
Quinasa-1 de Caseína	(Biotina)KRRRALS(fosfo)VASLPGL-Amida
EGF-R	(Biotina)Poli GT (4:1)
Quinasa-2 de Calmodulina	(Biotina)KKALRRQETVDAL-Amida
Quinasa ERK-2 de MAP	(Biotina)APRTPGGRR-Amida
Quinasa del Receptor de Insulina	(Biotina)Poli GT (4:1)
Proteína Quinasa A	(Biotina)GRTGRRNSI-Amida

En la Tabla 2 se muestran datos de la CI_{50} para ciertos compuestos de la invención analizados frente a varias quinasas. Para los compuestos en los que un valor de la CI_{50} de la quinasa es >10, no se había observado un 50% de inhibición a la dosis más elevada analizada de esa quinasa, ni tampoco se había observado una inhibición máxima.

TABLA 2 Ensayos de Selectividad Frente a Otras Quinasas

Ensayo de Quinasa (CI_{50} \muM)	Comp 1	Comp 2	Comp 10	Comp 11
VEGF-R	>10	>10	1,199	0,889
CDK1	>10	>10	0,422	0,457
Quinasa-1 de Caseína	>10	>10	>10	>10
EGF-R	>10	>10	>10	>10
Quinasa-2 de Calmodulina	>10	>10	>10	>10
Quinasa ERK-2 de Map	>10	>10	>10	>10
Quinasa del Receptor
de Insulina	>10	>10	>10	>10
PKC\alpha	>10	>10	>10	>10

Ejemplo 3 Ensayo de GSK-3\beta Basado en Células

Se midió el contenido de glucógeno de células musculares L6 de acuerdo con el método descrito en Berger y Hayes, Anal. Biochem., 1998, 261, 159-163.

Procedimiento

Brevemente, células L6 fueron privadas de suero durante una noche en alfa-MEM que contenía un 0,1%. El día siguiente, las células fueron lavadas tres veces con 300 \mul de tampón KRPH (NaCl 150 mM, KCl 5 mM, Na_{2}HPO_{4} 2,9 mM, MgSO_{4} 1,25 mM, CaCl_{2} 1,2 mM, HEPES 10 mM, pH 7,4) y marcadas con 200 \mul de alfa-MEM que contenía ^{14}C-Glucosa 5,5 mM (0,1 \muCi) en presencia de vehículo (DMSO) o de los compuestos. Después de 2 horas, las células fueron lavadas tres veces con PBS enfriado en hielo y el glucógeno fue precipitado durante 2 horas utilizando EtOH al 66% enfriado en hielo. El glucógeno precipitado fue posteriormente lavado tres veces con EtOH al 66% enfriado en hielo y el ^{14}C-glucógeno fue cuantificado utilizando un contador TopCount (Packard).

Según se muestra en la Tabla 3, las células de músculo esquelético L6 demostraron una síntesis de glucógeno incrementada después de la exposición a los Compuestos 1, 2 y 5. Los compuestos fueron ensayados en experimentos separados a los niveles de dosis mostrados. En los que se muestra, se utilizó la dosis de 0,0 \muM como control.

TABLA 3 Incorporación de ^{14}C-Glucosa (dpm)

Dosis (\muM)	Comp 1	Comp 2	Comp 5
0,0	1640	2078	- - -
0,01	- - -	- - -	2884
0,1	- - -	- - -	2988
0,3	- - -	- - -	3339
1	1898	2224	- - -
3	1958	2518	3438
10	2426	2806	4700

Claims (24)

1. Un compuesto de Fórmula (Ia1):

80

en la cual R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

81

y sales del mismo farmacéuticamente aceptables.

2. Un compuesto de Fórmula (Ib1):

82

en la cual R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

83

y sales del mismo farmacéuticamente aceptables.

3. Un compuesto de Fórmula (If1):

84

en la cual R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

85

y sales del mismo farmacéuticamente aceptables.

4. Un compuesto de Fórmula (Ii1):

86

en la que R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

87

y sales del mismo farmacéuticamente aceptables.

5. Un compuesto de Fórmula (Ij1):

88

en la cual R_{4}, R_{2} y R_{5} son seleccionados dependientemente de:

89

y sales del mismo farmacéuticamente aceptables.

6. Una composición farmacéutica que contiene un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

7. Una composición farmacéutica producida mediante la mezcla de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. Un método para preparar una composición farmacéutica que comprende la mezcla de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

9. La utilización de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para la preparación de un medicamento para ser utilizado en el tratamiento de una enfermedad mediada por quinasas.

10. La utilización de la reivindicación 9, en la que la enfermedad mediada por quinasas está asociada con la actividad de la proteína quinasa C y de la glucógeno sintasa quinasa-3.

11. La utilización de la reivindicación 10, en la que la quinasa es seleccionada del grupo que consta de proteína quinasa C \alpha, proteína quinasa C \beta-II, proteína quinasa C \gamma y glucógeno sintasa quinasa-3\beta.

12. La utilización de la reivindicación 9, en la que la enfermedad mediada por quinasas es una enfermedad mediada por quinasas duales y en la que al menos una de las quinasas es seleccionada del grupo que consta de proteína quinasa C y glucógeno sintasa quinasa-3.

13. La utilización de la reivindicación 10, en la que al menos una quinasa es seleccionada del grupo que consta de proteína quinasa C \alpha, proteína quinasa C \beta-II, proteína quinasa C \gamma y glucógeno sintasa quinasa-3\beta.

14. La utilización de la reivindicación 9, en la que la enfermedad mediada por quinasas es seleccionada del grupo que consta de enfermedades cardiovasculares, diabetes, trastornos asociados con la diabetes, enfermedades inflamatorias, trastornos inmunológicos, trastornos dermatológicos, trastornos oncológicos y trastornos del SNC.

15. La utilización de la reivindicación 14, en la que las enfermedades cardiovasculares son seleccionadas del grupo que consta de derrame cerebral agudo, insuficiencia cardíaca, isquemia cardiovascular, trombosis, ateroesclerosis, hipertensión, restenosis, retinopatía del prematuro y degeneración macular relacionada con la edad.

16. La utilización de la reivindicación 14, en la que la diabetes es seleccionada del grupo que consta de diabetes dependiente de insulina y diabetes mellitus de Tipo II no dependiente de insulina.

17. La utilización de la reivindicación 14, en la que los trastornos asociados con la diabetes son seleccionados del grupo que consta de tolerancia disminuida a la glucosa, retinopatía diabética, retinopatía proliferativa, oclusión de la vena retinal, edema macular, cardiomiopatía, nefropatía y neuropatía.

18. La utilización de la reivindicación 14, en la que las enfermedades inflamatorias son seleccionadas del grupo que consta de permeabilidad vascular, inflamación, asma, artritis reumatoide y osteoartritis.

19. La utilización de la reivindicación 14, en la que los trastornos inmunológicos son seleccionados del grupo que consta de rechazo tisular de trasplantes, trastornos inmunológicos modulados por VIH-1 y PKC.

20. La utilización de la reivindicación 14, en la que los trastornos dermatológicos son seleccionados del grupo que consta de psoriasis, pérdida de cabello y calvicie.

21. La utilización de la reivindicación 14, en la que los trastornos oncológicos son seleccionados del grupo que consta de cáncer, crecimiento tumoral, proliferación celular incontrolada, angiopatía proliferativa y angiogénesis.

22. La utilización de la reivindicación 14, en la que los trastornos del sistema nervioso central son seleccionados del grupo que consta de dolor crónico, dolor neuropático, epilepsia, condiciones neurodegenerativas crónicas, demencia, Enfermedad de Alzheimer, trastornos del estado de ánimo, esquizofrenia, depresión maníaca y enfermedades neurotraumáticas, de disminución cognitiva y relacionadas con isquemia.

23. La utilización de la reivindicación 9, en la que dicho tratamiento comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición farmacéutica de 0,001 mg/kg/día a 300 mg/kg/día.

24. Utilización de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para la preparación de un medicamento para ser utilizado como adjunto a la quimioterapia y a la radioterapia.