ES2243095T3 - Receptores acoplados a proteina g humanos huerfanos. - Google Patents
Receptores acoplados a proteina g humanos huerfanos.Info
- Publication number
- ES2243095T3 ES2243095T3 ES99972682T ES99972682T ES2243095T3 ES 2243095 T3 ES2243095 T3 ES 2243095T3 ES 99972682 T ES99972682 T ES 99972682T ES 99972682 T ES99972682 T ES 99972682T ES 2243095 T3 ES2243095 T3 ES 2243095T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- baselineskip
- sec
- type
- sequence
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 title 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 claims abstract description 77
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 claims abstract description 77
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 70
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 70
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 64
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 60
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 60
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 claims description 25
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 claims description 25
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 claims description 25
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 21
- 239000006274 endogenous ligand Substances 0.000 claims description 21
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 20
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 13
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 6
- 229940125425 inverse agonist Drugs 0.000 claims description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 5
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000004031 partial agonist Substances 0.000 claims description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 claims description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims 2
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 claims 1
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 claims 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 abstract description 2
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 abstract description 2
- 241000237955 Nassarius Species 0.000 description 74
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 71
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 41
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 39
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 39
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 34
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 21
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 21
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 20
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 13
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 12
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 9
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 9
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 8
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 8
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 7
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 6
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- XOFLBQFBSOEHOG-UUOKFMHZSA-N γS-GTP Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=S)[C@@H](O)[C@H]1O XOFLBQFBSOEHOG-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 5
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 108091008880 orphan GPCRs Proteins 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 4
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000033458 reproduction Effects 0.000 description 4
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 4
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010005415 G2A receptor Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000887490 Homo sapiens Guanine nucleotide-binding protein G(z) subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 101001017968 Homo sapiens Leukotriene B4 receptor 1 Proteins 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 102100033374 Leukotriene B4 receptor 1 Human genes 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 description 2
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 2
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 210000001159 caudate nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000006552 constitutive activation Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 102000052301 human GNAZ Human genes 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 210000002637 putamen Anatomy 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 230000005062 synaptic transmission Effects 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000005636 Cyclic AMP Response Element-Binding Protein Human genes 0.000 description 1
- 108010045171 Cyclic AMP Response Element-Binding Protein Proteins 0.000 description 1
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102000052510 DNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710096438 DNA-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000013446 GTP Phosphohydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108091006109 GTPases Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108091006065 Gs proteins Proteins 0.000 description 1
- 101001024391 Homo sapiens Neuromedin-U receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000743541 Homo sapiens Vomeronasal type-1 receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035314 Neuromedin-U receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000016978 Orphan receptors Human genes 0.000 description 1
- 108070000031 Orphan receptors Proteins 0.000 description 1
- 101150037263 PIP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100033838 Probable G-protein coupled receptor 132 Human genes 0.000 description 1
- 238000012356 Product development Methods 0.000 description 1
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 101100262439 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) UBA2 gene Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N UNPD107823 Natural products O1C2COP(O)(=O)OC2C(O)C1N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038327 Vomeronasal type-1 receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 229940095074 cyclic amp Drugs 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000008303 genetic mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003093 intracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- PWPJGUXAGUPAHP-UHFFFAOYSA-N lufenuron Chemical compound C1=C(Cl)C(OC(F)(F)C(C(F)(F)F)F)=CC(Cl)=C1NC(=O)NC(=O)C1=C(F)C=CC=C1F PWPJGUXAGUPAHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001525 receptor binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000009962 secretion pathway Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002356 skeleton Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009452 underexpressoin Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/72—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for hormones
- C07K14/723—G protein coupled receptor, e.g. TSHR-thyrotropin-receptor, LH/hCG receptor, FSH receptor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Uso de un receptor acoplado a proteína G para rastrear compuestos candidatos a agentes farmacéuticos para una enfermedad o estado de desorden relacionado con el páncreas, donde el receptor acoplado a proteína G comprende una versión activa independiente del ligando de un receptor que tiene la SEQ ID NO. 8.
Description
Receptores acoplados a proteína G humanos
huérfanos.
La invención descrita en este documento de
patente se relaciona con los receptores transmembrana, y más
particularmente con los receptores acoplados a proteína G humanos,
huérfanos, endógenos, ("GPCRs", G
protein-coupled receptors).
Aunque existen varias clases de receptores en los
humanos, con diferencia la más abundante y terapéuticamente
relevante es la representada por los receptores acoplados a
proteína G (GPCR o GPCRs). Se estima que hay unos 100.000 genes en
el genoma humano, y de estos, aproximadamente el 2%, o 2.000 genes,
se estima que codifican para GPCRs. Los receptores, incluyendo los
GPCRs, para los cuales ha sido identificado su ligando endógeno son
referidos como receptores "conocidos", mientras que los
receptores para los cuales no se ha identificado el ligando
endógeno son referidos como receptores "huérfanos". Los GPCRs
representan una importante área para el desarrollo de productos
farmacéuticos: a partir de aproximadamente 20 de los 100 GPCRs
conocidos se han desarrollado el 60% de todos los fármacos de
prescripción. Esta distinción no es sólo semántica,
particularmente en el caso de los GPCRs. Así, los GPCRs huérfanos
son a la industria farmacéutica lo que fue el oro para California a
finales del siglo XIX- una oportunidad de crecimiento, expansión,
mejora y desarrollo.
Los GPCRs comparten un motivo estructural común.
Todos estos receptores tienen siete secuencias de entre 22 y 24
aminoácidos hidrofóbicos que forman siete hélices alfa, cada una de
las cuales atraviesa la membrana (cada región transmembrana se
identifica con un número, es decir, transmembrana-1
(TM-1), transmembrana-2
(TM-2), etc.). Las hélices transmembrana están
unidas mediante cadenas de aminoácidos entre la
transmembrana-2 y la
transmembrana-3, la transmembrana-4
y la transmembrana-5, y la
transmembrana-6 y la transmembrana-7
en el exterior, o lado "extracelular", de la membrana celular
(llamadas regiones "extracelulares" 1, 2 y 3
(EC-1, EC-2 y EC-3),
respectivamente). Las hélices transmembrana también están unidas por
cadenas de aminoácidos entre la transmembrana-1 y
la transmembrana-2, la
transmembrana-3 y la
transmembrana-4, y la
transmembrana-5 y la transmembrana-6
en el interior, o lado "intracelular", de la membrana celular
(llamadas regiones "intracelulares" 1, 2 y 3
(IC-1, IC-2 y IC-3)
respectivamente). El "carboxi" ("C") terminal del receptor
se localiza en el espacio intracelular en la célula, y el
"amino" ("N") terminal del receptor se localiza en el
espacio extracelular fuera de la célula.
Generalmente, cuando un ligando endógeno se une
con el receptor (a menudo referido como "activación" del
receptor), hay un cambio en la conformación de la región
intracelular que permite el acoplamiento entre la región
intracelular y una "proteína-G" intracelular.
Se ha descrito que los GPCRs son "promiscuos" respecto a las
proteínas G, es decir, que un GPCR puede interactuar con más de una
proteína G. Ver, Kenakin, T., 43 Life Sciences 1095
(1988). Aunque existen otras proteínas G, actualmente, Gq, Gs, Gi y
Go son proteínas G que han sido identificadas. El acoplamiento de
GPCR activado por ligando endógeno con la proteína G, inicia un
proceso en cascada de señalización (llamado "transducción de
señal"). Bajo condiciones normales, la transducción de señal
resulta en último término en la activación celular o la inhibición
celular. Se piensa que el bucle IC-3, así como el
carboxi terminal del receptor interactúan con la proteína G.
Bajo condiciones fisiológicas, los GPCRs existen
en la membrana celular en equilibrio entre 2 conformaciones
diferentes: un estado "inactivo" y un estado "activo". Un
receptor en un estado inactivo es incapaz de enlazar el circuito de
transducción de señal intracelular para producir una respuesta
biológica. Cambiando la conformación del receptor al estado activo
se permite el enlace al circuito de transducción (vía la proteína G)
y se produce una respuesta biológica. Un receptor puede
estabilizarse en un estado activo mediante un ligando endógeno o un
compuesto tal como un fármaco.
Se describen aquí receptores acoplados a proteína
G humanos huérfanos endógenos. La invención se refiere a Rup3: otros
GPRCs se discuten sólo como referencia.
Las Figuras 1A y 1B proporcionan "tablas" de
referencia para ciertos dot-blots proporcionados
aquí (ver también, Figuras 2A y 2B, respectivamente).
Las Figuras 2A y 2B proporcionan reproducciones
de los resultados de ciertos análisis de dot-blot
resultantes de hCHN3 y hCHN8, respectivamente (ver también,
Figuras 1A y 1B, respectivamente).
La Figura 3 proporciona una reproducción de los
resultados del análisis de hRUP3 por RT-PCR.
La Figura 4 proporciona una reproducción de los
resultados del análisis de hRUP4 por RT-PCR.
La Figura 5 proporciona una reproducción de los
resultados del análisis de hRUP6 por RT-PCR.
La literatura científica que se ha desarrollado
en torno a receptores ha adoptado un número de términos para
referirse a ligandos con diferentes efectos sobre los receptores.
Para la claridad y consistencia, se usarán las siguientes
definiciones a lo largo de este documento de patente. En el caso de
que estas definiciones entren en conflicto con otras definiciones
para estos términos, las siguientes definiciones prevalecerán:
Las Abreviaturas de aminoácidos usadas
aquí se definen en la Tabla 1:
\vskip1.000000\baselineskip
| Alanina | ALA | A |
| Arginina | ARG | R |
| Asparagina | ASN | N |
| Ácido aspártico | ASP | D |
| Cisteína | CYS | C |
| Ácido glutámico | GLU | E |
| Glutamina | GLN | Q |
| Glicina | GLY | G |
| Histidina | HIS | H |
| Isoleucina | ILE | I |
| Leucina | LEU | L |
| Lisina | LYS | K |
| Metionina | MET | M |
| Fenilalanina | PHE | F |
| Prolina | PRO | P |
| Serina | SER | S |
| Treonina | THR | T |
| Triptófano | TRP | W |
| Tirosina | TYR | Y |
| Valina | VAL | V |
Composición significa un material que
comprende al menos un componente.
Endógeno significará un material que un
mamífero produce naturalmente. Por ejemplo, y sin ser una
limitación, ENDÓGENO en relación al término "receptor",
significará aquél que es producido naturalmente por un mamífero (por
ejemplo, y sin ser una limitación, un humano) o un virus. En
contraste, el término NO ENDÓGENO en este contexto significará aquél
que no es producido naturalmente por un mamífero (por ejemplo, y sin
ser una limitación, un humano) o un virus.
Célula hospedadora significará una célula
capaz de tener incorporado un Plásmido y/o un Vector en su interior.
En el caso de una Célula Hospedadora procariota, un Plásmido se
replica típicamente como una molécula autónoma mientras la Célula
Hospedadora se replica (generalmente, el Plásmido se aísla entonces
para su introducción en una Célula Hospedadora eucariota); en el
caso de una Célula Hospedadora eucariota, un Plásmido se integra en
el ADN celular de la Célula Hospedadora de manera que cuando la
Célula Hospedadora se replica, se replica el Plásmido.
Preferiblemente, para el propósito de la invención descrita aquí, la
Célula Hospedadora es eucariota, y más preferiblemente, de mamífero,
y más preferiblemente seleccionada del grupo que consiste en las
células 293, 293T y COS-7.
Ligando significará una molécula de origen
natural, endógena, específica para un receptor de origen natural y
endógeno.
Receptor no huérfano significará una
molécula de origen natural, endógena, específica para un ligando de
origen natural y endógeno, en el que la unión de un ligando a un
receptor activa un circuito de señalización intracelular.
Receptor huérfano significará un receptor
endógeno para el cual el ligando endógeno específico para ese
receptor no ha sido identificado o no es conocido.
Plásmido significará la combinación de un
vector y ADNc. Generalmente, un Plásmido es introducido en una
Célula Hospedadora con el propósito de la replicación y/o la
expresión del ADNc como una proteína.
Vector, en referencia a ADNc, significará
un ADN circular capaz de incorporar al menos un ADNc y capaz de
incorporarse en una Célula Hospedadora.
El orden de las siguientes secciones está pensado
para una mejor eficiencia en la descripción y no se pretende, ni
debe interpretarse, como una limitación en la descripción o en las
reivindicaciones que le siguen.
Los esfuerzos del proyecto Genoma Humano han
llevado a la identificación de una plétora de información respecto a
secuencias de ácido nucleico localizadas en el genoma humano; en
este esfuerzo se ha dado el caso de que la información de secuencia
genética se ha hecho disponible sin una comprensión o reconocimiento
de si alguna secuencia genómica en particular contiene o podría
contener información de marco abierto de lectura que traduzca
proteínas humanas o no. Varios métodos de identificación de
secuencias de ácido nucleico dentro del genoma humano están dentro
del ámbito de conocimiento de aquéllos expertos en la materia. Por
ejemplo, y sin suponer una limitación, una variedad de GPRCs,
descritos aquí, fueron descubiertos revisando la base de datos
GenBank^{TM}, mientras que otros GPRCs fueron descubiertos usando
una secuencia de ácido nucleico de un GPRC, previamente secuenciado,
para llevar a cabo una búsqueda BLAST^{TM} en la base de datos
EST. La Tabla A, a continuación, lista los GPRCs huérfanos
endógenos, descritos con un GPCR homólogo respectivo de GPCR:
La homología del receptor es útil en términos de
conseguir una apreciación del papel de los receptores descritos en
el cuerpo humano. Adicionalmente, esta homología puede proporcionar
ideas de posibles ligando(s) endógenos que puedan ser
activadores naturales para los GPRCs huérfanos descritos.
Las técnicas se han vuelto más fácilmente
accesibles durante los últimos años para la identificación de
ligandos endógenos (esto, en principio, con el propósito de
proporcionar una manera de llevar a cabo ensayos de unión de
receptor que requieren un ligando endógeno del receptor) porque el
estudio tradicional de receptores siempre se ha basado en el
supuesto a priori (basado históricamente) de que el ligando
endógeno debe ser identificado en primer lugar antes de que el
descubrimiento pueda continuar buscando antagonistas y otras
moléculas que puedan afectar al receptor. Incluso en casos donde un
antagonista pudiera ser conocido previamente, la búsqueda se
extendería inmediatamente a buscar el ligando endógeno. Este modo de
pensar ha perdurado en la investigación de receptores incluso
después del descubrimiento de receptores activados
constitutivamente. Lo que no había sido reconocido hasta ahora es
que es el estado activado del receptor el más útil para el
descubrimiento de agonistas, agonistas parciales y agonistas
inversos del receptor. Para aquellas enfermedades que resultan de un
receptor demasiado activado o de un receptor infraactivado, lo
deseado en un fármaco terapéutico es un compuesto que actúe
reduciendo el estado activo del receptor o aumentando la actividad
del receptor, respectivamente, no necesariamente un fármaco que sea
un antagonista del ligando endógeno. Esto es debido a que un
compuesto que reduce o aumenta la actividad del estado activo del
receptor no necesita unirse en el mismo sitio que el ligando
endógeno. Así, como enseña un método de esta invención, cualquier
búsqueda de compuestos terapéuticos debería comenzar rastreando
compuestos contra el estado activo independiente de ligando.
Como es conocido en el estado de la técnica, los
GPCRs pueden ser "activos" en su estado endógeno incluso sin la
unión del ligando endógeno del receptor. Tales receptores
naturalmente activos pueden ser probados para identificación directa
(es decir, sin la necesidad del ligando endógeno del receptor) de,
en particular, agonistas inversos. Alternativamente, el receptor
puede ser "activado" vía, por ejemplo, mutación del receptor
para establecer una versión no endógena del receptor que será activa
en ausencia del ligando endógeno del receptor.
Rastreando compuestos candidatos contra una
versión endógena o no endógena activada constitutivamente de los
GPCRs humanos huérfanos descritos aquí, se pueden proporcionar para
la identificación directa de compuestos candidatos que actúan en
este receptor de la superficie celular, sin necesitar el uso del
ligando endógeno del receptor. Mediante la determinación de las
áreas del cuerpo donde se expresa y/o se sobreexpresa la versión
endógena de los GPCRs humanos descritos aquí, es posible determinar
estados de enfermedad/desorden relacionados que estén
asociados
con la expresión y/o sobreexpresión del receptor; en este documento de patente se describe una aproximación a ello.
con la expresión y/o sobreexpresión del receptor; en este documento de patente se describe una aproximación a ello.
En relación a la creación de una mutación que
pueda probar la activación constitutiva de los GPCRs humanos
huérfanos descritos aquí, se basa en la distancia del residuo de
prolina donde se presume que está localizada dentro del TM6 del GPCR
típicamente cercano a la interfaz TM6/IC3 (tal residuo de prolina
parece estar bastante conservado). Mutando el residuo de aminoácido
localizado a 16 residuos de este residuo (presumiblemente localizado
en la región IC3 del receptor) a, preferiblemente, un residuo de
lisina, se puede obtener tal activación. Otros residuos de
aminoácido pueden ser útiles en la mutación de esta posición para
conseguir este objetivo.
Preferiblemente, la secuencia de ADN del GPCR
humano huérfano se puede usar para hacer una sonda para (a) análisis
dot-blot contra ARNm tisular, y/o (b) identificación
por RT-PCR de la expresión del receptor en muestras
de tejido. La presencia de un receptor en un tejido, o en un tejido
enfermo, o la presencia del receptor en concentraciones elevadas en
tejido enfermo comparado con un tejido normal, puede ser
preferiblemente utilizada para identificar una correlación con un
régimen de tratamiento, incluyendo pero no limitado a, una
enfermedad asociada a esa enfermedad. Mediante esta técnica los
receptores pueden igualmente ser localizados en regiones de órganos.
Basándose en las funciones conocidas de los tejidos específicos
donde el receptor está localizado, se puede deducir el rol funcional
putativo del receptor.
Cuando un receptor de proteína G se vuelve
constitutivamente activo (es decir, activo en ausencia de unión con
ligando endógeno), se une a una proteína G (por ejemplo, Gq, Gs, Gi,
Go) y estimula la unión de GTP a la proteína G. Entonces la proteína
G actúa como una GTPasa e hidroliza lentamente el GTP a GDP, por lo
cual el receptor, bajo condiciones normales, queda desactivado. Sin
embargo, los receptores activados constitutivamente continúan
cambiando GDP a GTP. Un análogo no hidrolizable de GTP,
[^{35}S]GTP\gammaS, puede usarse para monitorizar uniones
mejoradas a membranas que expresan receptores activados
constitutivamente. Se ha descrito que [^{35}S]GTP\gammaS
puede ser usado para monitorizar acoplamiento de proteína G a
membranas en ausencia y presencia de ligando. Un ejemplo de esta
monitorización, entre otros ejemplos bien conocidos y disponibles
para los expertos en la materia, fue descrito por Traynor y Nahorski
en 1995. El uso preferido de este sistema de ensayo es para el
rastreo inicial de compuestos candidatos ya que el sistema es
genéricamente aplicable a todos los receptores acoplados a proteína
G, cual sea la proteína G en particular que interacciona con el
dominio intracelular del receptor.
Una vez los compuestos candidatos están
identificados usando el ensayo "genérico" de receptores
acoplados a proteína G (es decir, un ensayo para seleccionar
compuestos que son agonistas, agonistas parciales, o agonistas
inversos), es preferible rastrear más para confirmar que los
compuestos han interactuado en el sitio del receptor. Por ejemplo,
un compuesto identificado mediante el ensayo "genérico" podría
no unirse con el receptor, pero en cambio podría simplemente
"desacoplar" la proteína G del dominio intracelular.
Gs estimula la enzima adenilil ciclasa. Gi (y
Go), al contrario, inhiben esta enzima. La adenilil ciclasa cataliza
la conversión de ATP en AMPc; así, los GPCRs activados
constitutivamente que acoplan la proteína Gs están asociados a
niveles celulares incrementados de AMPc. Por otra parte, GPCRs
activados constitutivamente que acoplan la proteína Gi (o Go) están
asociados a niveles celulares reducidos de AMPc. Ver, en
general, "Indirect Mechanisms of Synaptic Transmission,"
Chpt. 8, From Neuron To Brain (3ª Ed.) Nichols, J.G. et
al eds. Sinauer Associates, Inc. (1992). De esta manera, se
pueden utilizar ensayos que detectan AMPc para determinar si un
compuesto candidato es, por ejemplo, un agonista inverso al receptor
(es decir, un compuesto así descendería los niveles de AMPc). Se
pueden utilizar varias aproximaciones para medir AMPc conocidas en
el estado de la técnica; una aproximación más preferida radica en el
uso de anticuerpos antiAMPc en un formato basado en ELISA. Otro tipo
de ensayo que puede ser utilizado es un ensayo de sistema de
detección de segundo mensajero de la célula entera. Los promotores
en los genes dirigen la expresión de las proteínas que un gen en
particular codifica. El AMP cíclico dirige la expresión génica
promoviendo la unión de una proteína de unión a ADN sensible a AMPc
o un factor de transcripción (CREB) que se une al promotor en sitios
específicos llamados elementos de respuesta a AMPc, y lleva a la
expresión del gen. Se pueden construir sistemas de detección que
tengan un promotor que contenga múltiples elementos de respuesta a
AMPc antes del gen de detección, p. ej.,
\beta-galactosidasa o luciferasa. Así, un receptor
activado constitutivamente unido a Gs causa la acumulación de AMPc,
el cual activa el gen y la expresión de la proteína de detección.
De esta manera, la proteína de detección como la
\beta-galactosidasa o la luciferasa pueden ser
detectadas usando ensayos bioquímicos estándares (Chen et al.
1995).
Gq y Go están asociadas a la activación de la
enzima fosfolipasa C, que, a su vez, hidroliza al fosfolípido
PIP_{2}, liberando dos mensajeros intracelulares:
diacicloglicerol (DAG) e inistol 1,4,5-trifosfato
(IP_{3}). La acumulación creciente de IP_{3} está asociada a la
activación de los receptores asociados a Gq y Go. Ver, en
general, "Indirect Mechanisms of Synaptic Transmission,"
Chpt. 8, From Neuron To Brain (3ª Ed.) Nichols, J.G. et
al eds. Sinauer Associates, inc. (1992). Los ensayos que
detectan la acumulación de IP_{3} pueden ser utilizados para
determinar si un compuesto candidato es, p. ej., un agonista
inverso de un receptor asociado a Gq o Go (es decir, un compuesto
así disminuiría los niveles de IP_{3}). Los receptores asociados
a Gq también pueden ser examinados utilizando un ensayo de detección
AP1 en el cual la fosfolipasa C dependiente de Gq provoca la
activación de genes que contienen elementos AP1; así, los
receptores asociados a Gq activados provocarán un aumento en la
expresión de dichos genes, por lo que los agonistas inversos
provocarán un descenso de tal expresión, y los agonistas provocarán
un aumento de tal expresión. Se encuentran disponibles
comercialmente ensayos para tal detección.
El uso de un GPCR endógeno huérfano activado
constitutivamente, o de un GPCR no endógeno huérfano activado
constitutivamente, para el rastreo de compuestos candidatos para la
identificación directa de agonistas inversos, agonistas y agonistas
parciales tiene la dificultad única de que, por definición, el
receptor sea activo incluso en ausencia de unión con un ligando
endógeno. Así, a menudo es útil utilizar una aproximación que mejore
la señal obtenida por el receptor activado. Una aproximación
preferida es el uso de una Proteína de Fusión GPCR.
En general, una vez se determina que un GPCR está
o ha estado constitutivamente activado, utilizando las técnicas de
ensayo descritas anteriormente (así como otras), es posible
determinar la proteína G predominante que se acopla con el GPCR
endógeno. El acoplamiento de la proteína G al GPCR proporciona un
circuito de señalización que puede ser analizado. Debido que es más
preferido que el rastreo se lleve a cabo usando un sistema de
expresión mamífero, se espera que tal sistema tenga proteína G
endógena. De esta manera, por definición, en un sistema así, el GPCR
huérfano activado constitutivamente dará señal continuamente. En
relación a esto, es preferido que esta señal sea mejorada, de manera
que en presencia de, p. ej., un agonista inverso al receptor, es más
probable que permita diferenciar más fácilmente, particularmente en
el contexto de rastreo, entre el receptor cuando está en contacto
con el agonista inverso.
Se pretende que la Proteína de Fusión GPCR mejore
la eficacia del acoplamiento de la proteína G con el GPCR. La
Proteína de Fusión GPCR se prefiere para rastreos con un GPCR no
endógeno activado constitutivamente, ya que esa aproximación
incrementa la señal que se utiliza más preferentemente en este tipo
de técnicas de rastreo, aunque la Proteína de Fusión GPCR también
puede ser (y preferiblemente lo es) utilizada con un GPCR endógeno
activado constitutivamente. Esto es importante para dar una relación
"señal-ruido" significativa; tal relación
significativa es preferible para el rastreo de los compuestos
candidatos como se describe aquí.
La realización de una construcción útil para la
expresión de una Proteína de Fusión GPCR está dentro del ámbito del
experto en la materia. Los vectores de expresión y sistemas
disponibles comercialmente ofrecen una variedad de aproximaciones
que se pueden ajustar a las necesidades particulares de un
investigador. El criterio de importancia para tal construcción de
una Proteínas de Fusión GPCR es que la secuencia del GPCR y la
secuencia de la proteína G sean ambas de marco interno
(preferentemente, la secuencia para el GPCR esta más arriba
(upstream) de la secuencia de la proteína G) y que el codón de
"terminación" del GPCR debe ser eliminado o sustituido de tal
manera que tras la expresión del GPCR, la proteína G también pueda
ser expresada. El GPCR puede estar enlazado directamente a la
proteína G, o pueden haber residuos espaciadores entre los dos
(preferiblemente, no más de unos 12, aunque este número puede ser
fácilmente determinado por el experto en la materia). Tenemos una
preferencia (basada en la conveniencia) del uso de un espaciador en
algunos de aquellos sitios de restricción que no son usados
efectivamente y que bajo expresión se convierten en espaciadores.
Más preferiblemente, la proteína G que se acopla al GPCR habrá sido
identificada previamente a la creación de la construcción de la
Proteína de Fusión GPCR. Ya que sólo unas pocas proteínas G han sido
identificadas, es preferible que una construcción que comprende la
secuencia de la proteína G (es decir, una construcción de proteína G
universal) sea válida para la inserción de una secuencia de un GPCR
endógeno; esto proporciona eficiencia en el contexto de rastreos a
gran escala de varios GPCRs diferentes con diferentes
secuencias.
Aunque un uso preferido de los GPCRs humanos
huérfanos descritos puede ser para la identificación directa de
compuestos candidatos como agonistas inversos, agonistas, o
agonistas parciales (preferiblemente para uso como agentes
farmacéuticos), estas versiones de GPCRs humanos también pueden ser
utilizadas en investigación. Por ejemplo, sistemas in vitro
e in vivo que incorporen GPCRs pueden utilizarse tanto para
descubrir además y comprender el papel que estos receptores juegan
en la condición humana, sana o patológica, como para entender el
papel de la activación constitutiva como aplica en la cascada de
señalización. El valor de los GPCRs humanos huérfanos es que su
utilidad como herramienta de investigación se puede mejorar
determinando la localización(es) de esos receptores en el
cuerpo, los GPCRs se pueden usar para entender el papel de estos
receptores en el cuerpo humano antes de que se identifique el
ligando endógeno.
Otros usos de los receptores descritos serán
evidentes para los expertos en la materia basándose en, inter
alia, el análisis de este documento de patente.
Los siguientes ejemplos se presentan con el
propósito de aclarar, y no limitar, la presente invención y para
proporcionar información de referencia. Aunque se describen
secuencias específicas de ácido nucleico y aminoácido, se considera
al experto en la materia con la capacidad de hacer pequeñas
modificaciones a estas secuencias mientras consiga los mismos
resultados u otros sustancialmente similares a los proporcionados a
continuación. Excepto cuando se especifica lo contrario, todas las
secuencias de ácido nucleico para los GPCRs humanos huérfanos
endógenos han sido secuenciadas y verificadas. En relación a
receptores equivalentes, el experto en la materia apreciará
fácilmente que pueden llevarse a cabo sustituciones conservativas a
las secuencias descritas con el objetivo de obtener receptores
funcionalmente equivalentes.
Varios de los GPCRs humanos endógenos descritos
fueron identificados en base a la revisión de la información de la
base de datos GenBank.
Buscando en la base de datos, fueron
identificados los siguientes clones de ADNc según se describe a
continuación:
Otros GPCRs humanos endógenos fueron
identificados mediante una búsqueda BLAST de la base de datos EST
(dbest), utilizando los siguientes clones EST como secuencias de
búsqueda. Fueron identificados los siguientes clones EST y usados a
continuación como sonda para rastrear una librería genómica
humana.
Se usó el clon EST de ratón 1179426 para obtener
un clon genómico humano que contuviera las tres secuencias
codificantes de aminoácidos hG2A. El extremo 5' de esta secuencia
codificante se obtuvo mediante 5'RACE^{TM}, y el molde para PCR
fue ADNc de bazo humano Marathon-ready^{TM} de
Clontech. El G2A humano descrito se amplificó mediante PCR
utilizando, durante el primer y segundo ciclo de PCR, los cebadores
específicos para ADNc de G2A como se muestran en las SEQ.ID.NO.:39 y
SEQ.ID.NO.:40:
- 5'-CTGTGTACAGCAGTTCGCAGAGTG-3' (SEQ.ID.NO.:39; 1^{r} ciclo PCR)
- 5'-GAGTGCCAGGCAGAGCAGGTAGAC-3' (SEQ.ID.NO.:40; 2º ciclo PCR)
La PCR se llevó a cabo usando el kit
Advantage^{TM} GC Polymerase (Clontech; se seguirán las
instrucciones de fabricación), a 94ºC durante 30 seg. seguido de 5
ciclos a 94ºC durante 5 seg. y 72ºC durante 4 min.; y 30 ciclos a
94º durante 5 seg. y 70º durante 4 min. Se purificó un fragmento de
aproximadamente 1,3 kb mediante gel de agarosa, se digirió con Hind
III y Xba I y se clonó en el vector de expresión pRC/CMV2
(Invitrogen). El inserto clonado se secuenció mediante el kit T7
Sequenase^{TM} (USB Amersham; se seguirán las instrucciones del
fabricante) y la secuencia se comparó con la secuencia presentada.
Se detectará la expresión de G2A humano sondeando un
dot-blot de ARN (Clontech; se seguirán las
instrucciones del fabricante) con el fragmento marcado con
P^{32}.
La secuenciación del clon EST 1541536 indicó que
hCHN9 es un clon parcial de ADNc que sólo tiene un codón de
iniciación; es decir, el codón de terminación se perdió. Cuando se
utilizó hCHN9 para lanzarlo contra la base de datos (nr), la
secuencia 3' de hCHN9 fue 100% homóloga a la región 5' no traducida
del ADNc del receptor luecotrieno B4, que contenía un codón de
terminación en el marco con secuencia codificante de hCHN9. Para
determinar si la región 5' no traducida del ADNc de LTB4R era la
secuencia 3' de hCHN9, se realizó un PCR usando cebadores basados en
la secuencia 5' que flanquea el codón de iniciación encontrado en
hCHN9 y la secuencia 3' alrededor del codón de terminación
encontrado en la región 5' no traducida de LTB4R. La secuencia del
cebador 5' fue la siguiente:
- 5'-CCCGAATTCCTGCTTGCTCCCAGCTTGGCCC-3' (SEQ.ID.NO.:41; sentido).
- 5'-TGTGGATCCTGCTGTCAAAGGTCCCATTCCGG-3' (SEQ.ID.NO.:42; antisentido).
La PCR se realizó usando ADNc de timo como molde
y polimerasa rTth (Perkin Elmer) con el sistema tampón proporcionado
por el fabricante, 0,25 FM de cada cebador, y 0,2 mM de cada uno de
los 4 nucleótidos. Las condiciones de ciclado fueron 30 ciclos a
94ºC durante 1 min., 65ºC durante 1 min. y 72ºC durante 1 min. y 10
seg. De la PCR se obtuvo un fragmento de 1,1 kb coherente con el
tamaño esperado. Este fragmento de PCR se subclonó en pCMV
(ver a continuación) y se secuenció (ver,
SEQ.ID.NO.:33).
Se clonó la longitud total de hRUP4 mediante
RT-PCR con ADNc de cerebro humano (Clontech) como
molde:
- 5'-TCACAATGCTAGGTGTGGTC-3' (SEQ.ID.NO.:43; sentido) y
- 5'-TGCATAGACAATGGGATTACAG-3' (SEQ.ID.NO.:44; antisentido)
La PCR se realizó usando TaqPlus^{TM}
Precisión^{TM} polimerasa (Stratagene; se seguirán las
instrucciones de fabricación) con los siguientes ciclos: 94ºC
durante 2 min.; 94ºC 30 seg.; 55ºC durante 30 seg., 72ºC durante 45
seg., y 72ºC durante 10 min. Los ciclos del 2 al 4 se repitieron 30
veces.
Los productos de PCR se separaron en un gel de
agarosa al 1% y se aisló un fragmento de PCR de 500 pb que fue
clonado en el vector pCRII-TOPO (Invitrogen) y
secuenciado mediante el kit T7 DNA Sequenase^{TM} (Amsham) y los
cebadores SP6/T7 (Stratagene). El análisis de la secuencia reveló
que el fragmento de PCR era de hecho una forma de AI307658 empalmada
alternativamente que tenía un marco abierto de lectura continuo con
similitud a otros GPRCs. La secuencia completa de este fragmento de
PCR era la siguiente:
Basándose en la secuencia anterior, se utilizaron
como cebadores dos conjuntos de oligonucleótidos sentido, con las
siguientes secuencias:
- 5'-CTGCTTAGAAGAGTGGACCAG-3' (SEQ.ID.NO.:46; oligo 1)
- 5'-CTGTGCACCAGAAGATCTACAC-3' (SEQ.ID.NO.:47; oligo 2)
y dos conjuntos de oligonucleótidos antisentido,
con las secuencias siguientes:
- 5'-CAAGGATGAAGGTGGTGTAGA-3' (SEQ.ID.NO.:48; oligo 3)
- 5'-GTGTAGATCTTCTGGTGCACAGG-3' (SEQ.ID.NO.:49; oligo 4)
para la PCR 3'- y 5-RACE con ADNc
de cerebro humano Marathon-Ready^{TM} (Clontech,
Cat# 7400-1) como molde, según las instrucciones del
fabricante. Los fragmentos de ADN generados por la RACE PCR se
clonaron en el vector pCRII-TOPO^{TM} (Invitrogen)
y se secuenciaron utilizando los cebadores SP6/T7 (Stratagene) y
algunos cebadores internos. El producto 3' RACE contenía una cola
poli(A) y un marco abierto de lectura completo finalizando en
un codón de terminación TAA. El producto 5' RACE contenía un final
5' incompleto; es decir, el codón de iniciación ATG no estaba
presente.
Basándose en la nueva secuencia 5', el oligo 3 y
el siguiente cebador:
- 5'-GCAATGCAGGTCATAGTGAGC-3' (SEQ.ID.NO.:50; oligo 5)
fueron utilizados para un segundo proceso 5' RACE
PCR y los productos de PCR se analizaron como antes. Un tercer
proceso de 5' RACE PCR se llevó a cabo usando los cebadores
antisentido:
- 5'-TGGAGCATGGTGACGGGAATGCAGAAG-3' (SEQ.ID.NO.:51; oligo 6) y,
- 5'-GTGATGAGCAGGTCACTGAGCGCCAAG-3' (SEQ.ID.NO.:52; oligo7).
La secuencia de los productos 5' RACE PCR reveló
la presencia del codón de iniciación ATG, y un proceso más de 5'
RACE PCR no generó más secuencia 5'. La secuencia 5' completada se
confirmó por RT-PCR utilizando el cebador
sentido:
- 5'-GCAATGCAGGCGCTTAACATTAC-3' (SEQ.ID.NO.: 53; oligo 8)
y oligo 4 como cebadores y el análisis de
secuencia del producto de PCR de 650 pb generado a partir de moldes
de ADNc de corazón y cerebro humano (Clontech, Cat#
7404-1). La secuencia 3' completada fue confirmada
mediante RT-PCR utilizando oligo 2 y el siguiente
cebador antisentido:
- 5'-TTGGGTTACAATCTGAAGGGCA-3' (SEQ.ID.NO.: 54; oligo 9)
y el análisis de secuencia del producto de PCR de
670 pb generado a partir de moldes de ADNc de cerebro y corazón
humano (Clontech, Cat# 7404-1).
La longitud total de hRUP5 se clonó mediante
RT-PCR usando un cebador sentido más arriba,
upstream, de ATG, el codón de iniciación (SEQ.ID.NO.:55), y un
cebador antisentido que contenía TCA como codón de terminación
(SEQ.ID:NO.:56), el cual tenía las siguientes secuencias:
- 5'-ACTCCGTGTCCAGCAGGACTCTG-3' (SEQ.ID.NO.:55)
- 5'-TGCGTGTTCCTGGACCCTCACGTG-3' (SEQ.ID.NO.:56)
y un ADNc de leucocito periférico humano
(Clontech) como molde. Para la amplificación se usó Advantage cDNA
polimerasa (Clontech) en una reacción de 50 \muL mediante los
siguientes ciclos, repitiendo 30 veces desde el paso 2 al 4: 94ºC
durante 30 seg.; 94ºC durante 15 seg.; 69º durante 40 seg.; 72ºC
durante 3 min.; 72ºC durante 6 min. Se aisló un fragmento de PCR de
1,4 kb, se clonó con el vector pCRII-TOPO^{TM}
(Invitrogen) y se secuenció completamente utilizando el kit T7 ADN
Sequenase^{TM} (Amsham). Ver, SEQ.ID.NO.:9
La longitud total de hRUP6 se clonó mediante
RT-PCR utilizando los cebadores:
- 5'-CAGGCCTTGGATTTTAATGTCAGGGATGG-3' (SEQ.ID.NO.: 57) y
- 5'-GGAGAGTCAGCTCTGAAAGAATTCAGG-3' (SEQ.ID.NO.: 58);
y ADNc de timo humano
Marathon-Ready^{TM} (Clontech) como molde. Para la
amplificación se usó Advantage cDNA polimerasa (Clontech, de acuerdo
con las instrucciones del fabricante) en una reacción de 50 \mul
con los siguientes ciclos: 94ºC durante 30 seg.; 94ºC durante 5
seg.; 66ºC durante 40 seg.; 72ºC durante 2,5 seg. y 72ºC durante 7
min. Los ciclos del 2 hasta el 4 se repitieron 30 veces. Se aisló un
fragmento de PCR de 1,3 kb y se clonó en el vector
pCRII-TOPO^{TM} (Invitrogen) y se secuenció
completamente (ver, SEQ.ID.NO.: 11) utilizando el kit ABI Big
Dye Terminator^{TM} (P.E. Biosystem).
La longitud total de hRUP7 se clonó mediante
RT-PCR usando los cebadores:
- 5'-TGATGTGATGCCAGATACTAATAGCAC-3' (SEQ.IDNO.: 59; sentido) y
- 5'-CCTGATTCATTTAGGTGAGATTGAGAC-3' (SEQ.ID.NO.:60; antisentido)
y ADNc de leucocito periférico humano (Clontech)
como molde. Para la amplificación se usó Advantage^{TM} cDNA
polimerasa (Clontech) en una reacción de 50 \mul con los
siguientes ciclos, repitiendo 30 veces desde el paso 2 al 4: 94ºC
durante 2 min.; 94ºC durante 15 seg.; 60ºC durante 20 seg.; 72ºC
durante 2 min.; 72ºC durante 10 min. Se aisló un fragmento de PCR de
1,25 kb y se clonó en el vector pCRII-TOPO^{TM}
(Invitrogen) y se secuenció completamente utilizando el kit ABI Big
Dye Terminator^{TM} (P.E. Biosystem). Ver,
SEQ.ID.NO.:13.
La longitud total de hARE-5 se
clonó mediante PCR utilizando los cebadores específicos para hARE5
5'-CAGC
GCAGGGTGAAGCCTGAGAGC-3' SEQ.ID.NO.:69 (sentido, 5' del codón de iniciación ATG) y 5'-GGCACCTG
CTGTGACCTGTGCAGG-3' SEQ.ID.NO.:70 (antisentido, 3' del codón de terminación TGA) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó TaqPlus Precisión^{TM} DNA polimerasa (Stratagene) con el siguientes ciclos, con los pasos de 2 a 4 repetidos 35 veces: 96ºC, 2 minutos; 96ºC, 20 segundos; 58ºC, 30 segundos; 72ºC, 2 minutos; y 72ºC, 10 minutos.
GCAGGGTGAAGCCTGAGAGC-3' SEQ.ID.NO.:69 (sentido, 5' del codón de iniciación ATG) y 5'-GGCACCTG
CTGTGACCTGTGCAGG-3' SEQ.ID.NO.:70 (antisentido, 3' del codón de terminación TGA) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó TaqPlus Precisión^{TM} DNA polimerasa (Stratagene) con el siguientes ciclos, con los pasos de 2 a 4 repetidos 35 veces: 96ºC, 2 minutos; 96ºC, 20 segundos; 58ºC, 30 segundos; 72ºC, 2 minutos; y 72ºC, 10 minutos.
Se aisló un fragmento de PCR de 1,1 kb del tamaño
predicho y se clonó en el vector pCRII-TOPO^{TM}
(Invitrogen) y se secuenció completamente (SEQ.ID.NO.:5) utilizando
el kit T7 DNA Sequenase^{TM} (Amsham).
La longitud total de hARE-4 se
clonó mediante PCR utilizando los cebadores específicos de
hARE-4
5'-CTGGT
GTGCTCCATGGCATCCC-3' SEQ.ID.NO.:67 (sentido, 5' del codón de iniciación ATG) y 5'-GTAAGCCTCC
CAGAACGAGAGG-3' SEQ.ID.NO.:68 (antisentido, 3' del codón de terminación TGA) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó Taq DNA polimerasa (Stratagene) y 5% DMSO mediante los siguientes ciclos, con los pasos de 2 al paso 3 repetidos 35 veces: 94ºC, 3 minutos; 94ºC, 30 segundos; 59ºC, 2 minutos; 72ºC, 10 minutos.
GTGCTCCATGGCATCCC-3' SEQ.ID.NO.:67 (sentido, 5' del codón de iniciación ATG) y 5'-GTAAGCCTCC
CAGAACGAGAGG-3' SEQ.ID.NO.:68 (antisentido, 3' del codón de terminación TGA) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó Taq DNA polimerasa (Stratagene) y 5% DMSO mediante los siguientes ciclos, con los pasos de 2 al paso 3 repetidos 35 veces: 94ºC, 3 minutos; 94ºC, 30 segundos; 59ºC, 2 minutos; 72ºC, 10 minutos.
Se aisló un fragmento PCR de 1,12 kb del tamaño
predicho y se clonó en el vector pCRII-TOPO^{TM}
(Invitrogen) y se secuenció completamente (SEQ.ID.NO.:3) utilizando
el kit T7 DNA Sequenase^{TM} (Amsham).
La longitud total de hARE-3 se
clonó mediante PCR utilizando los cebadores específicos de
hARE-3
5'-gat
caagcttCCATCCTACTGAAACCATGGTC-3' SEQ.ID.NO.:65 (sentido, los nucleótidos en minúscula representan
Hind III saliente, ATG como codón de iniciación) y 5'-gatcagatctCAGTTCCAATATTCACACCACCGTC-3' SEQ.
ID.NO.:66 (antisentido, los nucleótidos en minúscula representan Xba I saliente, TCA como codón de terminación) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó ADN polimerasa TaqPlus Precisión^{TM} con los siguientes ciclos, los pasos del 2 al 4 repetidos 35 veces: 94ºC, 3 minutos; 94ºC, 1 minuto; 55ºC, 1 minuto; 72ºC, 2 minutos; 72ºC, 10 minutos.
caagcttCCATCCTACTGAAACCATGGTC-3' SEQ.ID.NO.:65 (sentido, los nucleótidos en minúscula representan
Hind III saliente, ATG como codón de iniciación) y 5'-gatcagatctCAGTTCCAATATTCACACCACCGTC-3' SEQ.
ID.NO.:66 (antisentido, los nucleótidos en minúscula representan Xba I saliente, TCA como codón de terminación) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó ADN polimerasa TaqPlus Precisión^{TM} con los siguientes ciclos, los pasos del 2 al 4 repetidos 35 veces: 94ºC, 3 minutos; 94ºC, 1 minuto; 55ºC, 1 minuto; 72ºC, 2 minutos; 72ºC, 10 minutos.
Se aisló un fragmento PCR de 1,3 kb del tamaño
predicho, se digirió con Hind III y Xba I, se clonó en el vector
pRC/CMV2 (Invitrogen) en los sitios Hind III y Xba I y se secuenció
completamente (SEQ.ID.NO.:1) utilizando el kit T7 DNA
Sequenase^{TM} (Amsham).
La longitud total de hRUP3 se clonó mediante PCR
utilizando los cebadores específicos de hRUP3
5'-GTCCTG
CCACTTCGAGACATGG-3' SEQ.ID.NO.:71 (sentido, ATG como codón de iniciación) y 5'-GAAACTTCTCTGCC
CTTACCGTC-3' SEQ.ID.NO.:72 (antisentido, 3' del codón de terminación TAA) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó TaqPlus Precisión^{TM} DNA polimerasa (Stratagene) mediante los siguientes ciclos, los pasos del 2 al 4 repetidos 35 veces: 94ºC, 3 minutos; 94ºC, 1 minuto; 58ºC, 1 minuto; 72ºC, 2 minutos;72ºC, 10 minutos.
CCACTTCGAGACATGG-3' SEQ.ID.NO.:71 (sentido, ATG como codón de iniciación) y 5'-GAAACTTCTCTGCC
CTTACCGTC-3' SEQ.ID.NO.:72 (antisentido, 3' del codón de terminación TAA) y ADN genómico humano como molde. Para la amplificación se usó TaqPlus Precisión^{TM} DNA polimerasa (Stratagene) mediante los siguientes ciclos, los pasos del 2 al 4 repetidos 35 veces: 94ºC, 3 minutos; 94ºC, 1 minuto; 58ºC, 1 minuto; 72ºC, 2 minutos;72ºC, 10 minutos.
Se aisló un fragmento PCR de 1,0 kb del tamaño
predicho y se clonó en el vector pCRII-TOPO^{TM}
(Invitrogen) y se secuenció completamente (SEQ.ID.NO.:7) utilizando
el kit T7 DNA Sequenase^{TM} (Amsham).
Aunque está disponible una variedad de células
para la expresión de proteínas, es más preferible que se utilicen
células mamíferas. La razón principal para ello es práctica, es
decir, la utilización de, p. ej., células de levadura para la
expresión de un GPCR, cuando es posible, introduce en el protocolo
una célula no mamífera la cual puede no (de hecho, en el caso de
levadura, no lo hace) incluir el acoplamiento de receptor, el
mecanismo genético y las rutas de secreción que han evolucionado en
sistemas mamíferos - así, los resultados obtenidos en células no
mamíferas, respecto al uso potencial, no son tan preferidos como
aquéllos obtenidos a partir células mamíferas. De las células
mamíferas, las células COS-7, 293 y 293T son
particularmente preferidas, aunque la célula mamífera específica
utilizada puede ser predicha en base a las necesidades particulares
del artesano. El procedimiento general para la expresión de los
GPCRs descritos es como sigue.
En el día uno, se cultivaron en placa 1X10^{7}
células 293T por placa de 150 mm. En el día dos, se prepararán dos
tubos de reacción (las proporciones a seguir para cada tubo son por
placa): el tubo A se preparará mezclando 20 \mug de ADN (p. ej.,
vector pCMV; vector pCMV con ADNc de receptor, etc.) en 1,2 ml de
DMEM libre de suero (Irvine Scientific, Irvine, CA); el tubo B se
preparará mezclando 120 \mul de lipofectamine (Gibco BRL) en 1,2
ml de DMEM libre de suero. Los tubos A y B son mezclados mediante
inversiones (varias veces), seguido de incubación a temperatura
ambiente durante 30-45 min. La mezcla puede ser
referida como la "mezcla de transfección". Se lavan las células
cultivadas 293T con 1XPBS, seguido por la adición de 10 ml de DMEM
libre de suero. Se añadirán entonces a las células 2,4 ml de la
mezcla de transfección, seguido de incubación durante 4 h a 37ºC/5%
de CO_{2}. Entonces, se eliminó por aspiración la mezcla de
transfección, seguido de la adición de 25 ml de DMEM/10% de Suero
Fetal Bovino. Entonces, las células serán incubadas a 37ºC/5% de
CO_{2}. Después de 72 h de incubación, las células entonces pueden
ser recolectadas y utilizadas para análisis.
Se pueden utilizar varias aproximaciones para la
determinación de la distribución tisular de los GPCRs aquí
descritos.
Usando un formato de dot-blot
para tejidos humanos disponible comercialmente, se sondearon GPCRs
huérfanos endógenos para una determinación de las áreas donde se
localizan tales receptores. Los fragmentos de ADNc de los GPCRs del
Ejemplo 1 (marcados radioactivamente) fueron (o pueden ser)
utilizados como sonda: la sonda marcada radioactivamente fue o
(puede ser) generada utilizando el ADNc completo del receptor
(escindido del vector) usando un kit Prime-It
II^{TM} Random Primer Labelling (Stratagene, #300385); según las
instrucciones del fabricante. Se hibridizó un RNA Master Blot^{TM}
humano (Clontech, #7770-1) con la sonda marcada
radioactivamente de GPCR humano endógeno y se lavó bajo condiciones
severas según instrucciones del fabricante. El blot se expuso al
Kodak BioMax^{TM} Autoradiography film durante la noche a -80ºC.
Los resultados están resumidos para varios receptores en la Tabla B
y C (ver Figuras 1 A y 1 B para una tabla identificando los
varios tejidos y sus localizaciones, respectivamente). Se
proporcionan dot-blots ejemplares en la Figura 2A y
2B para resultados derivados usando hCHN3 y hCHN8,
respectivamente.
| GPCR huérfano | Distribución tisular |
| (niveles más elevados, relativos a otros tejidos en el dot-blot) | |
| hGPCR27 | Cerebro fetal, putamen, glándula pituitaria, caudate nucleus |
| hARE-1 | Bazo, leucocitos periféricos, bazo fetal |
| hPPR1 | Glándula pituitaria, corazón, glándula salival, intestino delgado, testículos |
| hRUP3 | Páncreas |
| hCHN3 | Cerebro fetal, putamen, cortex occipital |
| hCHN9 | Páncreas, intestino delgado, hígado |
| hCHN 10 | Riñón, tiroides |
\vskip1.000000\baselineskip
| GPCR huérfano | Distribución tisular |
| (niveles más elevados, relativos a otros tejidos en el dot-blot) | |
| hARE-3 | Cerebelo izquierdo, cerebelo derecho, testículos, accumbens |
| hGPCR3 | Corpus collusum, caudate nucleus, hígado, corazón, septum interventricular |
| hARE-2 | Cerebelo izquierdo, cerebelo derecho, Substantia |
| hCHN8 | Cerebelo izquierdo, cerebelo derecho, hígado, pulmón |
Para averiguar la distribución tisular de ARNm
hRUP3, se realizó una RT-PCR usando cebadores
específicos para hRUP3 y paneles de ADNc de múltiples tejidos
humanos (MTC, Clonetech) como moldes. Se utilizó Taq DNA polimerasa
(Stratagene) para la reacción de PCR, utilizando los siguientes
ciclos de reacción en una reacción de 40 \mul: 94ºC durante 2
min.; 94ºC durante 15 seg.; 55ºC durante 30 seg.; 72ºC durante 1
min.; 72ºC durante 10 min. Los cebadores fueron como sigue:
- 5'-GACAGGTACCTTGCCATCAAG-3' (SEQ.ID.NO.:61; sentido)
- 5'-CTGCACAATGCCAGTGATAAGG-3' (SEQ.ID.NO.:62; antisentido)
Se cargaron 20 \mul de la reacción en un gel de
agarosa al 1%; los resultados se presentan en la Figura 3.
Como se soporta por los datos de la Figura 3, de
los 16 tejidos humanos del panel de ADNc utilizado (cerebro, colon,
corazón, riñón, ovario, páncreas, placenta, próstata, esqueleto,
intestino delgado, bazo, testículos, leucocito de timo, e hígado)
sólo en el páncreas se evidencia una banda simple hRUP3. Análisis
comparativos adicionales de la secuencia de proteínas de hRUP3 con
otros GPCRs sugieren que hRUP3 está relacionado con GPCRs que tienen
moléculas pequeñas como ligandos endógenos así que se predijo que el
ligando endógeno para hRUP3 es una molécula pequeña.
Se realizó una RT-PCR usando los
oligo 8 y 4 de hRUP4 como cebadores y los paneles de ADNc de
múltiples tejidos humanos (MTC, Clontech) como moldes. Para la
amplificación se usó Taq DNA polimerasa (Stratagene) en una reacción
de 40 \mul mediante los siguientes ciclos: 94ºC durante 30
segundos, 94ºC durante 10 segundos, 55ºC durante 30 segundos, 72ºC
durante 2 minutos, y 72ºC durante 5 minutos con los ciclos del 2 al
4 repetidos 30 veces.
Para analizar los productos
RT-PCR se cargaron 20 \mul de la reacción en un
gel de agarosa al 1%, y se encontró ARNm de hRUP4 expresado en
muchos tejidos humanos, con la expresión más fuerte en corazón y
riñón. (ver, Figura 4). Para confirmar la autenticidad de los
fragmentos de PCR, se usó como sonda para el análisis Southern Blot
un fragmento de 300 pb derivado del extremo 5' de hRUP4. La sonda se
marcó con ^{32}P-dCTP usando el kit
Prime-It II^{TM} Random Primer Labeling
(Stratagene) y se purificó utilizando las microcolumnas
ProbeQuant^{TM} G-50 (Amersham). La hibridación se
hizo durante la noche a 42ºC después de 12 horas de prehibridación.
Finalmente, se lavó el blot a 65ºC con 0,1 x SCC. El Southern blot
confirmó los fragmentos de PCR como hRUP4.
Se realizó una RT-PCR usando los
siguientes cebadores específicos para hRUP5:
- 5'-CTGACTTCTTGTTCCTGGCAGCAGCGG-3' (SEQ.ID.NO.:63; sentido)
- 5'-AGACCAGCCAGGGCACGCTGAAGAGTG-3' (SEQ.ID.NO.:64; antisentido)
y los paneles de ADNc de múltiples tejidos
humanos (MTC, Clontech) como moldes. Para la amplificación se usó
Taq DNA polimerasa (Stratagene) en una reacción de 40 \mul
mediante los siguientes ciclos: 94ºC durante 30 segundos, 94ºC
durante 10 segundos, 62ºC durante 1,5 minutos, 72ºC durante 5
minutos, y con los ciclos del 2 al 3 repetidos 30 veces. Se cargaron
20 \mul de la reacción en un gel de agarosa al 1,5% para analizar
los productos de RT-PCR, y el ARNm hRUP5 se encontró
expresado sólo en los leucocitos de sangre periférica (datos no
facilitados).
Se aplicó RT-PCR para confirmar
la expresión y para determinar la distribución tisular de hRUP6. Los
oligonucleótidos usados, basados en un alineamiento de los segmentos
AC005871 y GPR66, tenían las siguientes secuencias:
- 5'-CCAACACCAGCATCCATGGCATCAAG-3' (SEQ.ID.NO.:73; sentido),
- 5'-GGAGAGTCAGCTCTGAAAGAATTCAGG-3' (SEQ.ID.NO.:74; antisentido).
Se utilizaron los paneles de ADNc de múltiples
tejidos humanos (MTC, Clontech) como moldes. La PCR se realizó
utilizando TaqPlus Precisión^{TM} polimerasa (Stratagene; se
seguirán las instrucciones de fabricación) en una reacción de 40
\mul mediante los siguientes ciclos: 94ºC durante 30 segundos,
94ºC durante 5 segundos, 66ºC durante 40 segundos, 72ºC durante 2,5
minutos, y 72ºC durante 7 min. Los ciclos del 2 al 4 se repitieron
30 veces.
Se cargaron 20 \mul de la reacción en un gel de
agarosa al 1,2% para analizar los productos de
RT-PCR, y un fragmento específico de ADN de 760 pb
que representaba hRUP6 se expresó predominantemente en el timo y con
menos expresión en el corazón, riñón, pulmón, próstata, intestino
delgado y testículos. (ver, Figura 5).
Aunque está disponible una variedad de Vectores
para aquéllos en la materia, con el objetivo de la utilización para
GPCRs humanos, tanto endógenos como no endógenos, es más preferido
que el Vector utilizado sea pCMV. Este vector se depositó con la
Colección de Cultivos Tipo Americana (American Type to Culture
Collection, ATCC) el 13 de Octubre de 1998 (10801 University Blvd.,
Manassas, VA 20110-2209 USA) bajo las condiciones
del Tratado de Budapest para el Reconocimiento Internacional del
Depósito de Microorganismos a los Fines del Procedimiento en Materia
de Patentes. El ADN fue probado por la ATCC y determinado el serlo.
La ATCC ha asignado el siguiente número de depósito a pCMV: ATCC
#203351.
(1) INFORMACIÓN GENERAL
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE: Chen, Ruoping
\hskip3.9cmDang, Huong T,
\hskip3.9cmLiaw, Chen W.
\hskip3.9cmLin, I-Lin
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TITULO DE LA INVENCIÓN: Receptores acoplados a Proteína G humanos huérfanos
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 74
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- DIRECCION DE CORRESPONDENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- DESTINATARIO: Arena Pharmaceuticals, Inc.
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- DIRECCIÓN: 6166 Nancy Ridge Drive
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: San Diego
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: California
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Estados Unidos de América
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- (ZIP): 92121
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- FORMATO LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE MEDIO: disquette
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- (B) ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- PROGRAMA: PatentIn Release #1.0, Versión #1.30
\vskip0.800000\baselineskip
- (vi)
- DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE LA SOLICITUD: US
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE REGISTRO:
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CLASIFICACIÓN:
\vskip0.800000\baselineskip
- (viii)
- INFORMACIÓN DEL ABOGADO/AGENTE:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Burgoon, Richard P.
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- MUMERO DE REGISTRO: 34.787
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- INFORMACIÓN PARA TELECOMUNICACIÓN:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TELÉFONO: (858) 453-7200
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TELEFAX: (858) 453-7210
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1260 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(3) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1260 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(4) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 3:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1119 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
(5) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 4:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 372 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
(6) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1107 base de pares
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 5:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(7) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 6:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 368 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(8) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 7:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1008 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 7:
\vskip1.000000\baselineskip
(9) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 8:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1008 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 8:
\vskip1.000000\baselineskip
(10) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 9:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1413 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 9:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(11) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 10:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 468 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ Nº ID: 10:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(12) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 11:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1248 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 11:
\vskip1.000000\baselineskip
(13) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 12:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 415 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 12:
\vskip1.000000\baselineskip
(14) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 13:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1173 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 13:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(15) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 14:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 390 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 14:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(16) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 15:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1128 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: DNA (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 15:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(17) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 16:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 375 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 16:
\vskip1.000000\baselineskip
(18) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 17:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1002 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 17:
\vskip1.000000\baselineskip
(19) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 18:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 333 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 18:
\vskip1.000000\baselineskip
(20) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 19:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1122 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 19:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(21) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 20:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 373 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 20:
\vskip1.000000\baselineskip
(22) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 21:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1053 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 21:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(23) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 22:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 350 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 22:
\vskip1.000000\baselineskip
(24) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 23:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1116 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 23:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(25) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 24:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 371 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 24:
\vskip1.000000\baselineskip
(26) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 25:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1113 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 25:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(27) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 26:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 370 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 26:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(28) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 27:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1080 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 27:
\vskip1.000000\baselineskip
(29) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 28:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 359 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 28:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(30) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 29:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1503 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 29:
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(31) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 30:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 500 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 30:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(32) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 31:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1029 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 31:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(33) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 32:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 342 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 32:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(34) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 33:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1077 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 33:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(35) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 34:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 358 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 34:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(36) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 35:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1005 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 35:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(37) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 36:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 334 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 36:
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(38) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 37:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1296 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 37:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(39) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 38:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 431 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: no relevante
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: proteína
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 38:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(40) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 39:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 39:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGTGTACAG CAGTTCGCAG AGTG
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(41) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 40:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 40:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGAGTGCCAGG CAGAGCAGGT AGAC
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(42) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 41:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 31 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 41:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCCGAATTCC TGCTTGCTCC CAGCTTGGCC C
\hfill31
\vskip1.000000\baselineskip
(43) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 42:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 32 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 42:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTGGATCCT GCTGTCAAAG GTCCCATTCC GG
\hfill32
\vskip1.000000\baselineskip
(44) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 43:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 43:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCACAATGCT AGGTGTGGTC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(45) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 44:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 44:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGCATAGACA ATGGGATTAC AG
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(46) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 45:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 511 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 45:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(47) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 46:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 46:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGCTTAGAA GAGTGGACCA G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(48) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 47:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 47:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGTGCACCA GAAGATCTAC AC
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(49) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 48:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 48:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAAGGATGAA GGTGGTGTAG A
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(50) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 49:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 23 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 49:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTGTAGATCT TCTGGTGCAC AGG
\hfill23
\vskip1.000000\baselineskip
(51) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 50:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 50:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCAATGCAGG TCATAGTGAG C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(52) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 51:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 51:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGAGCATGG TGACGGGAAT GCAGAAG
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(53) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 52:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 52:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTGATGAGCA GGTCACTGAG CGCCAAG
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(54) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 53:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 23 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 53:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCAATGCAGG CGCTTAACAT TAC
\hfill23
\vskip1.000000\baselineskip
(55) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 54:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (vi)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 54:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGGGTTACA ATCTGAAGGG CA
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(56) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 55:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 23 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (vii)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 55:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACTCCGTGTC CAGCAGGACT CTG
\hfill23
\vskip1.000000\baselineskip
(57) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 56:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (viii)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 56:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGCGTGTTCC TGGACCCTCA CGTG
\hfill24
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(58) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 57:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 29 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (ix)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 57:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAGGCCTTGG ATTTTAATGT CAGGGATGG
\hfill29
\vskip1.000000\baselineskip
(59) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 58:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (x)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 58:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGAGCGTCAG CTCTGAAAGA ATTCAGG
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(60) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 59:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 59:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGATGTGATG CCAGATACTA ATAGCAC
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(61) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 60:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xii)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 60:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCTGATTCAT TTAGGTGAGA TTGAGAC
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(62) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 61:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xiii)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 61:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGACAGGTACC TTGCCATCAA G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(63) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 62:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xiv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 62:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGCACAATG CCAGTGATAA GG
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(64) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 63:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 63:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGACTTCTT GTTCCTGGCA GCAGCGG
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(65) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 64:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xvi)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 64:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGACCAGCCA GGGCACGCTG AAGAGTG
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(66) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 65:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 32 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xvii)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 65:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGATCAAGCTT CCATCCTACT GAAACCATGG TC
\hfill32
\vskip1.000000\baselineskip
(67) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 66:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xviii)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 66:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGATCAGATCT CAGTTCCAAT ATTCACACCA CCGTC
\hfill35
\vskip1.000000\baselineskip
(68) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 67:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xix)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 67:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGGTGTGCT CCATGGCATC CC
\hfill22
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(69) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 68:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xx)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 68:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTAAGCCTCC CAGAACGAGA GG
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(70) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 69:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xxi)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 69:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAGCGCAGGG TGAAGCCTGA GAGC
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(71) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 70:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 24 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xxii)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 70:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGCACCTGCT GTGACCTGTG CAGG
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
(72) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 71:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xxiii)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 71:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTCCTGCCAC TTCGAGACAT GG
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(73) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 72:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 23 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xxiv)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 72:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGAAACTTCTC TGCCCTTACC GTC
\hfill23
\vskip1.000000\baselineskip
(74) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 73:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xxv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 73:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCAACACCAG CATCCATGGC ATCAAG
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(75) INFORMACIÓN PARA LA SEC. Nº ID: 74:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de base
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucléico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE HEBRA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genomic)
\vskip0.800000\baselineskip
- (xxvi)
- ANTISENTIDO: SI
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC. Nº ID: 74:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGAGAGTCAG CTCTGAAAGA ATTCAGG
\hfill27
Claims (13)
1. Uso de un receptor acoplado a proteína G para
rastrear compuestos candidatos a agentes farmacéuticos para una
enfermedad o estado de desorden relacionado con el páncreas, donde
el receptor acoplado a proteína G comprende una versión activa
independiente del ligando de un receptor que tiene la SEQ ID NO.
8.
2. El uso de la reivindicación 1, donde la
versión activa independiente de ligando del receptor es una versión
activa independiente de ligando no endógena que tiene una mutación
localizada 16 residuos de aminoácido N-terminal
desde el residuo conservado de prolina dentro del dominio TM6 de la
SEQ ID NO. 8.
3. El uso de la reivindicación 2, donde el
residuo mutado ha sido mutado a un residuo de lisina.
4. El uso de la reivindicación 1, donde la
versión activa independiente de ligando del receptor es una versión
activa independiente de ligando endógena con secuencia SEQ ID NO.
8.
5. El uso de cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, donde el receptor acoplado a proteína G forma parte de
una proteína de fusión con una proteína G.
6. El uso de cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, donde el rastreo es para un agonista del receptor.
7. El uso de cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, donde el rastreo es para un agonista parcial del
receptor.
8. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1
a 5, donde el rastreo es para un agonista inverso del receptor.
9. Un receptor acoplado a proteína G que es una
versión activa independiente de ligando no endógena de un receptor
que comprende la SEQ ID NO. 8, que tiene una mutación localizada 16
residuos de aminoácido N-terminal desde el residuo
conservado de prolina dentro del dominio TM6 de la SEQ ID NO. 8.
10. El receptor acoplado a proteína G de la
reivindicación 9, donde el residuo mutado ha sido mutado a un
residuo de lisina.
11. Un ácido nucleico aislado que codifica un
receptor acoplado a proteína G o una proteína de fusión según la
reivindicación 9 o la reivindicación 10.
12. Un vector que comprende un ácido nucleico
según la reivindicación 11.
13. Una célula hospedadora que comprende un
vector según reivindicación 12.
Applications Claiming Priority (47)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US10921398P | 1998-11-20 | 1998-11-20 | |
| US109213P | 1998-11-20 | ||
| US12041699P | 1999-02-16 | 1999-02-16 | |
| US120416P | 1999-02-16 | ||
| US12185299P | 1999-02-26 | 1999-02-26 | |
| US121852P | 1999-02-26 | ||
| US12394999P | 1999-03-12 | 1999-03-12 | |
| US12394699P | 1999-03-12 | 1999-03-12 | |
| US123949P | 1999-03-12 | ||
| US123946P | 1999-03-12 | ||
| US13713199P | 1999-05-28 | 1999-05-28 | |
| US13643999P | 1999-05-28 | 1999-05-28 | |
| US13643799P | 1999-05-28 | 1999-05-28 | |
| US13643699P | 1999-05-28 | 1999-05-28 | |
| US13656799P | 1999-05-28 | 1999-05-28 | |
| US13712799P | 1999-05-28 | 1999-05-28 | |
| US137131P | 1999-05-28 | ||
| US136439P | 1999-05-28 | ||
| US137127P | 1999-05-28 | ||
| US136567P | 1999-05-28 | ||
| US136436P | 1999-05-28 | ||
| US136437P | 1999-05-28 | ||
| US14144899P | 1999-06-29 | 1999-06-29 | |
| US141448P | 1999-06-30 | ||
| US15655599P | 1999-09-29 | 1999-09-29 | |
| US15663399P | 1999-09-29 | 1999-09-29 | |
| US15663499P | 1999-09-29 | 1999-09-29 | |
| US15665399P | 1999-09-29 | 1999-09-29 | |
| US156555P | 1999-09-29 | ||
| US156633P | 1999-09-29 | ||
| US156653P | 1999-09-29 | ||
| US156634P | 1999-09-29 | ||
| US15728299P | 1999-10-01 | 1999-10-01 | |
| US15728099P | 1999-10-01 | 1999-10-01 | |
| US15729399P | 1999-10-01 | 1999-10-01 | |
| US15728199P | 1999-10-01 | 1999-10-01 | |
| US15729499P | 1999-10-01 | 1999-10-01 | |
| US157282P | 1999-10-01 | ||
| US157281P | 1999-10-01 | ||
| US157293P | 1999-10-01 | ||
| US157294P | 1999-10-01 | ||
| US157280P | 1999-10-01 | ||
| US41676099A | 1999-10-12 | 1999-10-12 | |
| US41704499A | 1999-10-12 | 1999-10-12 | |
| US416760 | 1999-10-12 | ||
| US417044 | 1999-10-12 | ||
| PCT/US1999/023687 WO2000031258A2 (en) | 1998-11-20 | 1999-10-13 | Human orphan g protein-coupled receptors |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2243095T3 true ES2243095T3 (es) | 2005-11-16 |
Family
ID=27586698
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES05003040T Expired - Lifetime ES2289610T3 (es) | 1998-11-20 | 1999-10-13 | Receptor acoplado a proteina g humano huerfano rup3. |
| ES07008841T Expired - Lifetime ES2308759T3 (es) | 1998-11-20 | 1999-10-13 | Receptores acoplados a proteina g humanos huerfanos. |
| ES99972682T Expired - Lifetime ES2243095T3 (es) | 1998-11-20 | 1999-10-13 | Receptores acoplados a proteina g humanos huerfanos. |
Family Applications Before (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES05003040T Expired - Lifetime ES2289610T3 (es) | 1998-11-20 | 1999-10-13 | Receptor acoplado a proteina g humano huerfano rup3. |
| ES07008841T Expired - Lifetime ES2308759T3 (es) | 1998-11-20 | 1999-10-13 | Receptores acoplados a proteina g humanos huerfanos. |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (8) | EP2295572A1 (es) |
| JP (5) | JP2003534767A (es) |
| KR (5) | KR20080104062A (es) |
| AT (3) | ATE301673T1 (es) |
| AU (2) | AU770056B2 (es) |
| CA (2) | CA2348377C (es) |
| DK (3) | DK1133559T3 (es) |
| ES (3) | ES2289610T3 (es) |
| IL (2) | IL142538A0 (es) |
| NZ (3) | NZ511087A (es) |
| PT (3) | PT1584683E (es) |
| WO (1) | WO2000031258A2 (es) |
Families Citing this family (92)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2300074T3 (es) | 1998-03-12 | 2008-06-01 | Astellas Pharma Inc. | Nuevas proteinas de receptores copulados a proteina g. |
| WO1999055733A1 (en) * | 1998-04-24 | 1999-11-04 | Smithkline Beecham Corporation | Cloning of a novel 7tm receptor axor-2 |
| US6071722A (en) * | 1998-04-24 | 2000-06-06 | Smithkline Beecham Corporation | Nucleic acids encoding a G-protein coupled 7TM receptor (AXOR-1) |
| WO2000026339A2 (en) * | 1998-11-03 | 2000-05-11 | Smithkline Beecham Corporation | Axor14, a g-protein coupled receptor |
| US7816492B2 (en) | 1998-11-20 | 2010-10-19 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Human G protein-coupled receptors |
| USRE42190E1 (en) | 1998-11-20 | 2011-03-01 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Method of identifying a compound for inhibiting or stimulating human G protein-coupled receptors |
| US20030017528A1 (en) | 1998-11-20 | 2003-01-23 | Ruoping Chen | Human orphan G protein-coupled receptors |
| US6221660B1 (en) | 1999-02-22 | 2001-04-24 | Synaptic Pharmaceutical Corporation | DNA encoding SNORF25 receptor |
| EP1157038A4 (en) * | 1999-02-26 | 2005-01-19 | Smithkline Beecham Corp | CLONING OF A P2Y-LIKE 7TM RECEPTOR (AXOR17) |
| US6620615B1 (en) * | 1999-04-23 | 2003-09-16 | Curagen Corporation | G-protein coupled receptor—encoding nucleic acids |
| EP1189944A4 (en) * | 1999-06-21 | 2002-09-11 | Smithkline Beecham Corp | AXOR16, R CEPTEUR COUPL UNE PROT INE G |
| EP1194551A1 (en) * | 1999-07-13 | 2002-04-10 | MERCK PATENT GmbH | G-protein coupled receptor and dna sequences thereof |
| EP1198569A1 (en) * | 1999-07-30 | 2002-04-24 | MERCK PATENT GmbH | G-protein coupled receptor and dna sequences thereof |
| AU6727800A (en) * | 1999-08-27 | 2001-03-26 | Takeda Chemical Industries Ltd. | Novel g protein-coupled receptor protein and dna thereof |
| US6998255B1 (en) | 1999-09-24 | 2006-02-14 | Solvay Pharmaceuticals B.V. | Human G-protein coupled receptor |
| GB9923177D0 (en) * | 1999-09-30 | 1999-12-01 | Pfizer Ltd | Novel polypeptide |
| US6204017B1 (en) | 1999-10-07 | 2001-03-20 | Schering Corporation | Polynucleotide encoding a histamine receptor |
| GB9923890D0 (en) * | 1999-10-08 | 1999-12-08 | Pfizer Ltd | Novel polypeptide |
| GB9923893D0 (en) * | 1999-10-08 | 1999-12-08 | Pfizer Ltd | Novel polypeptide |
| GB9924956D0 (en) * | 1999-10-21 | 1999-12-22 | Pfizer Ltd | Novel polypeptide |
| GB9924960D0 (en) * | 1999-10-21 | 1999-12-22 | Pfizer Ltd | Novel polypeptide |
| CA2386509A1 (en) * | 1999-10-27 | 2001-05-03 | Pharmacia & Upjohn Company | G protein-coupled receptors expressed in human brain |
| ATE375390T1 (de) * | 1999-10-29 | 2007-10-15 | Pfizer | G-protein-gekoppelter rezeptor-ähnliche proteine |
| WO2001032864A2 (en) * | 1999-11-03 | 2001-05-10 | Merck Patent Gmbh | Gpcr-kd5 polypeptides and dna sequences thereof |
| US6461836B1 (en) | 1999-11-05 | 2002-10-08 | Smithkline Beecham Corporation | Molecular cloning of a 7TM receptor (AxOR34) and screening methods thereof |
| AU784543B2 (en) * | 1999-11-16 | 2006-04-27 | Pharmacia & Upjohn Company | Novel G protein-coupled receptors |
| US7029857B1 (en) | 1999-12-17 | 2006-04-18 | H. Lundbeck A/S | Processes for obtaining compounds employing SNORF72 receptors |
| WO2001046414A1 (fr) * | 1999-12-20 | 2001-06-28 | Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. | Nouvelle proteine receptrice couplee a la proteine de fixation de guanosine triphosphate, bg26 |
| AU2288601A (en) | 1999-12-23 | 2001-07-03 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | P2Y12 receptor |
| AU2230401A (en) * | 1999-12-28 | 2001-07-09 | Helix Research Institute | Novel guanosine triphosphate-binding protein-coupled receptors, genes thereof and production and use of the same |
| GB0001700D0 (en) * | 2000-01-25 | 2000-03-15 | Glaxo Group Ltd | Novel protein |
| AU3222701A (en) | 2000-02-04 | 2001-08-14 | Takeda Chemical Industries Ltd. | Screening method |
| ATE356208T1 (de) * | 2000-03-14 | 2007-03-15 | Bayer Healthcare Ag | Regulation des menschliches lipoxin a4 rezeptor- ähnliches protein |
| AU3930201A (en) * | 2000-03-17 | 2001-09-24 | Bayer Aktiengesellschaft | Regulation of human leukotriene B4-like G protein-coupled receptor |
| US20030077709A1 (en) * | 2000-03-21 | 2003-04-24 | Masazumi Kamohara | Novel leukotriene B4 receptor |
| WO2001073021A1 (fr) * | 2000-03-28 | 2001-10-04 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Nouvelle proteine receptrice couplee a une proteine g et adn associe |
| WO2001073023A1 (fr) * | 2000-03-31 | 2001-10-04 | Helix Research Institute | Nouveau recepteur gprv53 couple a une proteine se liant a la guanosine-triphosphate, gene correspondant et procede de production et d'utilisation associe |
| WO2001077326A1 (fr) * | 2000-04-12 | 2001-10-18 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Proteine receptrice couplee a la proteine g et son adn |
| EP1178110A1 (en) * | 2000-08-01 | 2002-02-06 | Aventis Pharma Deutschland GmbH | EDG8 receptor for sphingosine 1-phosphate , its preparation and use |
| ATE348162T1 (de) * | 2000-05-18 | 2007-01-15 | Bayer Healthcare Ag | Regulation eines menschlichen dopamine-ähnlichen g-protein gekoppelten rezeptor. |
| AU2001276837A1 (en) * | 2000-06-23 | 2002-01-08 | Tularik, Inc. | Human and mouse g-protein couipled receptors |
| AU2001281862A1 (en) * | 2000-06-26 | 2002-01-08 | Akzo Nobel N.V. | G-protein coupled receptor org10 |
| AU2001281933A1 (en) * | 2000-06-30 | 2002-01-14 | Ingenium Pharmaceuticals Ag | Human g protein-coupled receptor igpcr17, and uses therof |
| US6927041B2 (en) | 2000-07-06 | 2005-08-09 | Bayer Corporation | Human neuropeptide Y-like G protein-coupled receptor |
| AU2001279232A1 (en) * | 2000-08-09 | 2002-02-18 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Methods for using 14266, a human g protein-coupled receptor |
| US6790608B2 (en) * | 2000-09-20 | 2004-09-14 | The Regents Of The University Of California | Methods of identifying and ADP-glucose receptor ligand, agonist or antagonist |
| DE60127435T2 (de) * | 2000-11-01 | 2007-11-29 | Astellas Pharma Inc. | VERFAHREN ZUM SCREENEN EINES PLäTTCHENHEMMERS |
| CA2426037A1 (en) * | 2000-11-07 | 2002-05-16 | Paradigm Therapeutics Limited | A "bach" g protein coupled receptor polypeptide and polynucleotide encoding this receptor |
| AU2002219890B2 (en) * | 2000-11-27 | 2007-06-14 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Endogenous and non-endogenous versions of human G protein-coupled receptors |
| DE60125227T2 (de) | 2000-12-01 | 2007-09-20 | Astellas Pharma Inc. | Verfahren zum screening von diabetes-heilverfahren |
| US7220580B2 (en) | 2000-12-22 | 2007-05-22 | University Of South Florida | Sphingosine 1-phosphate receptor gene, sppr |
| US20020155473A1 (en) * | 2000-12-22 | 2002-10-24 | Zaoyuan Peng | Methods for identifying G-protein coupled receptors associated with diseases |
| GB0100782D0 (en) * | 2001-01-11 | 2001-02-21 | Glaxo Group Ltd | Assay |
| WO2002088355A1 (fr) * | 2001-04-25 | 2002-11-07 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | Recepteur couple a la proteine fixant la guanosine triphosphate, place 6002312, gene correspondant, production et utilisation |
| US20030096299A1 (en) | 2001-07-09 | 2003-05-22 | Valerie Wittamer | Natural ligand of G protein coupled receptor ChemR23 and uses thereof |
| US7419658B2 (en) | 2001-07-09 | 2008-09-02 | Euroscreen S.A. | Isolated ligand of ChemerinR |
| US7858755B2 (en) | 2001-07-09 | 2010-12-28 | Euroscreen S.A. | Monoclonal antibodies that bind Chemerin polypeptide |
| US6946244B2 (en) * | 2001-08-07 | 2005-09-20 | Euroscreen, S.A. | Methods of identifying a ligand, an agonist, and an antagonist of G protein coupled receptor GPR86 (P2Y13) |
| WO2003087134A2 (en) | 2002-04-12 | 2003-10-23 | Schering Corporation | G-protein coupled receptor ligands and methods |
| WO2004022086A1 (ja) * | 2002-09-02 | 2004-03-18 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | 副腎皮質ホルモン分泌調節剤 |
| WO2004033687A1 (ja) * | 2002-10-11 | 2004-04-22 | Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. | 腎不全治療薬をスクリーニングする方法 |
| US7056685B1 (en) | 2002-11-05 | 2006-06-06 | Amgen Inc. | Receptor ligands and methods of modulating receptors |
| CA2509218C (en) | 2002-12-20 | 2010-09-07 | Merck & Co., Inc. | 1-(amino)indanes and (1,2-dihydro-3-amino)-benzofurans, benzothiophenes and indoles as edg receptor agonists |
| KR101078098B1 (ko) | 2003-01-14 | 2011-10-28 | 아레나 파마슈티칼스, 인크. | 대사 조절제로서의 １,２,３-삼치환된 아릴 및 헤테로아릴유도체, 및 당뇨병 및 고혈당증을 비롯한 이에 관련된장애의 예방 및 치료 |
| US7083933B1 (en) | 2003-05-09 | 2006-08-01 | Prosidion Limited | Methods for identification of modulators of OSGPR116 activity |
| WO2005010152A2 (en) * | 2003-06-27 | 2005-02-03 | Tanox, Inc. | Human mast cell-expressed membrane protein |
| US7524638B1 (en) | 2003-06-27 | 2009-04-28 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Methods for identification of modulators of OSGPR114 or OSGPR78 activity, and their use in the treatment of disease |
| DOP2006000008A (es) * | 2005-01-10 | 2006-08-31 | Arena Pharm Inc | Terapia combinada para el tratamiento de la diabetes y afecciones relacionadas y para el tratamiento de afecciones que mejoran mediante un incremento de la concentración sanguínea de glp-1 |
| GB0508990D0 (en) * | 2005-05-03 | 2005-06-08 | Novartis Ag | Organic compounds |
| BRPI0710597A2 (pt) | 2006-04-11 | 2012-06-19 | Arena Pharm Inc | método de uso do receptor gpr119 para identificar compostos úteis para aumento da massa óssea em um indivìduo |
| US7638541B2 (en) | 2006-12-28 | 2009-12-29 | Metabolex Inc. | 5-ethyl-2-{4-[4-(4-tetrazol-1-yl-phenoxymethyl)-thiazol-2-yl]-piperidin-1-yl}-pyrimidine |
| CA2693169C (en) | 2007-07-19 | 2016-01-12 | Metabolex, Inc. | N-linked heterocyclic receptor agonists for the treatment of diabetes and metabolic disorders |
| AU2008302570B2 (en) | 2007-09-20 | 2012-05-31 | Irm Llc | Compounds and compositions as modulators of GPR119 activity |
| EP2108960A1 (en) | 2008-04-07 | 2009-10-14 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Methods of using A G protein-coupled receptor to identify peptide YY (PYY) secretagogues and compounds useful in the treatment of conditons modulated by PYY |
| AR077642A1 (es) | 2009-07-09 | 2011-09-14 | Arena Pharm Inc | Moduladores del metabolismo y el tratamiento de trastornos relacionados con el mismo |
| CN102666553B (zh) | 2009-10-01 | 2015-05-06 | 赛马拜制药公司 | 取代的四唑-1-基-苯氧基甲基-噻唑-2-基-哌啶基-嘧啶盐 |
| US8791100B2 (en) | 2010-02-02 | 2014-07-29 | Novartis Ag | Aryl benzylamine compounds |
| WO2011127051A1 (en) | 2010-04-06 | 2011-10-13 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of the gpr119 receptor and the treatment of disorders related thereto |
| ES2676209T3 (es) | 2010-06-23 | 2018-07-17 | Metabolex Inc. | Composiciones de 5-etil-2-{4-[4-(4-tetrazol-1-il-fenoximetil)-tiazol-2-il]-piperidin-1-il}-pirimidina |
| SG188548A1 (en) | 2010-09-22 | 2013-04-30 | Arena Pharm Inc | Modulators of the gpr119 receptor and the treatment of disorders related thereto |
| WO2012135570A1 (en) | 2011-04-01 | 2012-10-04 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of the gpr119 receptor and the treatment of disorders related thereto |
| US20140066369A1 (en) | 2011-04-19 | 2014-03-06 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Modulators Of The GPR119 Receptor And The Treatment Of Disorders Related Thereto |
| US20140038889A1 (en) | 2011-04-22 | 2014-02-06 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Modulators Of The GPR119 Receptor And The Treatment Of Disorders Related Thereto |
| US20140051714A1 (en) | 2011-04-22 | 2014-02-20 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Modulators Of The GPR119 Receptor And The Treatment Of Disorders Related Thereto |
| WO2012170702A1 (en) | 2011-06-08 | 2012-12-13 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of the gpr119 receptor and the treatment of disorders related thereto |
| WO2013055910A1 (en) | 2011-10-12 | 2013-04-18 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of the gpr119 receptor and the treatment of disorders related thereto |
| WO2014074668A1 (en) | 2012-11-08 | 2014-05-15 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of gpr119 and the treatment of disorders related thereto |
| PL3242666T3 (pl) | 2015-01-06 | 2025-02-17 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Związek do zastosowania w leczeniu dolegliwości związanych z receptorem s1p1 |
| HUE060476T2 (hu) | 2015-06-22 | 2023-03-28 | Arena Pharm Inc | (R)-2-(7-(4-ciklopentil-3-(trifluormetil)benziloxi)-1,2,3,4- tetrahidrociklopenta[B]indol-3-il)ecetsav kristályos L-arginin-sója S1P1 receptorral kapcsolatos rendellenességek esetén való alkalmazásra |
| JP2019527693A (ja) | 2016-08-03 | 2019-10-03 | サイマベイ・セラピューティクス・インコーポレイテッドＣｙｍａＢａｙ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． | 炎症性胃腸疾患または胃腸状態を治療するためのオキシメチレンアリール化合物 |
| MA49456A (fr) | 2017-06-19 | 2020-04-29 | Arena Pharm Inc | Composés et procédés pour le traitement de nafld et de nash |
| US12156866B2 (en) | 2018-06-06 | 2024-12-03 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating conditions related to the S1P1 receptor |
Family Cites Families (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU729875B2 (en) * | 1995-11-15 | 2001-02-15 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | P2u2 purinergic receptor |
| JP2000505644A (ja) * | 1996-01-11 | 2000-05-16 | ヒューマン ジノーム サイエンシーズ，インコーポレイテッド | ヒトｇタンパク質結合レセプター |
| AU6017098A (en) * | 1997-01-21 | 1998-08-07 | Schering Corporation | Mammalian chemokines; receptors; reagents; uses |
| US6221627B1 (en) * | 1997-02-24 | 2001-04-24 | Smithkline Beecham Corporation | cDNA clone HDPB130 that encodes a novel human 7-transmembrane receptor |
| US5955303A (en) * | 1997-03-06 | 1999-09-21 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Human chemokine receptor-like protein |
| US6555339B1 (en) * | 1997-04-14 | 2003-04-29 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Non-endogenous, constitutively activated human protein-coupled receptors |
| US6060272A (en) * | 1997-05-07 | 2000-05-09 | Human Genome Sciences, Inc. | Human G-protein coupled receptors |
| EP0899332A3 (en) * | 1997-08-15 | 2000-07-05 | Smithkline Beecham Corporation | The G-protein coupled receptor HFIAO41 |
| CA2239255A1 (en) * | 1997-10-23 | 1999-04-23 | Smithkline Beecham Corporation | Cdna clone hneaa81 that encodes a human 7-transmembrane receptor |
| US5932445A (en) * | 1997-11-07 | 1999-08-03 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Signal peptide-containing proteins |
| WO1999024569A1 (fr) * | 1997-11-11 | 1999-05-20 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Recepteur d'acide lysophosphatidique humain et utilisation dudit recepteur |
| US6207412B1 (en) * | 1997-11-13 | 2001-03-27 | The Regents Of The University Of California | Identification of a G protein-coupled receptor transcriptionally regulated by protein tyrosine kinase signaling in hematopoietic cells |
| JP2002504492A (ja) * | 1998-02-20 | 2002-02-12 | スミスクライン ビーチャム コーポレーション | Ｇタンパク質共役型受容体Ｆｉｓｈｂｏｙ |
| ES2300074T3 (es) * | 1998-03-12 | 2008-06-01 | Astellas Pharma Inc. | Nuevas proteinas de receptores copulados a proteina g. |
| AU3749499A (en) * | 1998-04-16 | 1999-11-01 | Millenium Pharmaceuticals, Inc. | Novel molecules of the bgckr-related protein family and uses thereof |
| WO1999055733A1 (en) * | 1998-04-24 | 1999-11-04 | Smithkline Beecham Corporation | Cloning of a novel 7tm receptor axor-2 |
| US6071722A (en) * | 1998-04-24 | 2000-06-06 | Smithkline Beecham Corporation | Nucleic acids encoding a G-protein coupled 7TM receptor (AXOR-1) |
| SE9801455D0 (sv) * | 1998-04-24 | 1998-04-24 | Astra Pharma Inc | New receptor |
| JP2002531057A (ja) * | 1998-08-19 | 2002-09-24 | ミレニアム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | Ｅｄｇ受容体ファミリーに関連したｇタンパク質結合受容体である１４２７４受容体 |
| CA2340457A1 (en) * | 1998-08-20 | 2000-03-02 | Millenium Pharmaceuticals, Inc. | 14400 receptor, a g-protein coupled receptor |
| AU5784799A (en) * | 1998-08-24 | 2000-03-14 | Alphagene, Inc. | Secreted proteins and polynucleotides encoding them |
| AU5801099A (en) * | 1998-09-02 | 2000-03-21 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | 14926 receptor, a novel g-protein coupled receptor |
| WO2000022131A2 (en) * | 1998-10-13 | 2000-04-20 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Non-endogenous, constitutively activated human g protein-coupled receptors |
| JP2004500013A (ja) * | 1998-10-16 | 2004-01-08 | ミレニアム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 新規ｇタンパク質共役受容体 |
| AU1242800A (en) * | 1998-11-04 | 2000-05-22 | Chiron Corporation | Isolated vshk-1 receptor polypeptides and methods of use thereof |
| DE69933688T2 (de) * | 1998-11-06 | 2007-08-23 | Bayer Healthcare Ag | G-protein-gekoppelter rezeptoren, die holomog zu ebv-induzierter gpcr (ebi-2) sind, verfahren zur identifizierung von ihren entsprechenden liganden |
| US6221660B1 (en) * | 1999-02-22 | 2001-04-24 | Synaptic Pharmaceutical Corporation | DNA encoding SNORF25 receptor |
| US6689866B1 (en) * | 1999-03-09 | 2004-02-10 | Curagen Corporation | Polynucleotides and proteins encoded thereby |
| GB9923177D0 (en) * | 1999-09-30 | 1999-12-01 | Pfizer Ltd | Novel polypeptide |
| US6590938B1 (en) * | 1999-09-30 | 2003-07-08 | Conexant Systems, Inc. | DCT domain conversion of a higher definition signal to lower definition signal |
-
1999
- 1999-10-13 KR KR1020087024998A patent/KR20080104062A/ko not_active Withdrawn
- 1999-10-13 KR KR1020087003578A patent/KR100963367B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-13 PT PT05003040T patent/PT1584683E/pt unknown
- 1999-10-13 PT PT99972682T patent/PT1133559E/pt unknown
- 1999-10-13 CA CA002348377A patent/CA2348377C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-13 JP JP2000584067A patent/JP2003534767A/ja not_active Withdrawn
- 1999-10-13 KR KR1020077018185A patent/KR100926208B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-13 CA CA002645717A patent/CA2645717A1/en not_active Withdrawn
- 1999-10-13 EP EP10008862A patent/EP2295572A1/en not_active Withdrawn
- 1999-10-13 DK DK99972682T patent/DK1133559T3/da active
- 1999-10-13 DK DK05003040T patent/DK1584683T3/da active
- 1999-10-13 AT AT99972682T patent/ATE301673T1/de active
- 1999-10-13 KR KR1020087003575A patent/KR100926209B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-13 NZ NZ511087A patent/NZ511087A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-10-13 ES ES05003040T patent/ES2289610T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-13 DK DK07008841T patent/DK1849866T3/da active
- 1999-10-13 AT AT07008841T patent/ATE396400T1/de active
- 1999-10-13 ES ES07008841T patent/ES2308759T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-13 WO PCT/US1999/023687 patent/WO2000031258A2/en not_active Ceased
- 1999-10-13 IL IL14253899A patent/IL142538A0/xx unknown
- 1999-10-13 EP EP07001452A patent/EP1780280A1/en not_active Ceased
- 1999-10-13 EP EP05003040A patent/EP1584683B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-13 KR KR1020017006279A patent/KR100765039B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-13 EP EP99972682A patent/EP1133559B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-13 AT AT05003040T patent/ATE366815T1/de active
- 1999-10-13 EP EP10010303A patent/EP2295573A1/en not_active Withdrawn
- 1999-10-13 ES ES99972682T patent/ES2243095T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-13 EP EP10010658A patent/EP2295574A1/en not_active Withdrawn
- 1999-10-13 AU AU37904/00A patent/AU770056B2/en not_active Ceased
- 1999-10-13 PT PT07008841T patent/PT1849866E/pt unknown
- 1999-10-13 EP EP07008841A patent/EP1849866B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-13 NZ NZ537625A patent/NZ537625A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-10-13 NZ NZ527622A patent/NZ527622A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-10-13 EP EP05005946A patent/EP1580271A3/en not_active Ceased
-
2001
- 2001-04-11 IL IL142538A patent/IL142538A/en not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-04-28 JP JP2004132989A patent/JP2004267216A/ja not_active Withdrawn
- 2004-05-12 AU AU2004202147A patent/AU2004202147A1/en not_active Abandoned
-
2007
- 2007-05-15 JP JP2007129923A patent/JP2007209352A/ja active Pending
-
2008
- 2008-02-14 JP JP2008033839A patent/JP2008133300A/ja active Pending
-
2009
- 2009-07-03 JP JP2009159339A patent/JP2009298791A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2243095T3 (es) | Receptores acoplados a proteina g humanos huerfanos. | |
| US8097452B2 (en) | Human orphan G protein-coupled receptors | |
| US8198049B2 (en) | Nucleic acids encoding RUP3 and methods of using same | |
| USRE42190E1 (en) | Method of identifying a compound for inhibiting or stimulating human G protein-coupled receptors | |
| AU2007202139B8 (en) | Human Orphan G protein-coupled receptor hRUP3 | |
| US8440391B2 (en) | Constitutively activated human G protein coupled receptors | |
| HK1077081B (en) | Human orphan g protein-coupled receptor rup3 | |
| HK1077082A (en) | Human orphan g protein-coupled receptors | |
| HK1077081A1 (en) | Human orphan g protein-coupled receptor rup3 | |
| HK1037675B (en) | Human orphan g protein-coupled receptor rup3 | |
| HK1103763B (en) | Human orphan g protein-coupled receptor rup3 | |
| HK1098510A (en) | Human orphan g protein-coupled receptors | |
| HK1155771A (en) | Human orphan g protein-coupled receptors | |
| US20070072248A1 (en) | Constitutively activated human G protein coupled receptors |