ES2240430T3 - Tratamiento combinado con factor de crecimiento de queratinocitos e inhibidor del factor de crecimiento epidermico. - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende un inhibidor del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), y un factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), en un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Description

Tratamiento combinado con factor de crecimiento de queratinocitos e inhibidor del factor de crecimiento epidérmico.

La presente invención se refiere a composiciones y a su uso en la fabricación de un medicamento, para tratar la toxicidad epitelial que resulta del tratamiento con inhibidores de EGFR a pacientes con cáncer. Más particularmente, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden un inhibidor del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), en combinación con un factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), y a su uso en la fabricación de un medicamento para tratar la toxicidad epitelial de los inhibidores de EGFR administrados a pacientes con cáncer, que comprende la administración conjunta de KGF a dichos pacientes.

Antecedentes de la invención

La sobreexpresión de los receptores del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), o de su ligando TGF\alpha, se asocia frecuentemente con el cáncer de mama, pulmón y cuello, y se cree que contribuye al crecimiento maligno de estos tumores. El desarrollo de compuestos que inhiben la actividad quinasa del EGFR, así como de anticuerpos que bloquean la activación de EGFR, para su utilización como agentes antitumorales, es un área de gran esfuerzo de intensa investigación.

El factor de crecimiento epidérmico (EGF), actuando a través de su receptor EGFR, es un factor mitógeno y de supervivencia para queratinocitos humanos normales, así como para otras células epiteliales (Rheinwald, J.G. y Green, H., 1977, Nature 265, 421; Rodeck, U., et al., 1997, J. Cell Science 110, 113). Por eso, existe la posibilidad de que el uso de los inhibidores de EGFR en quimioterapia, pudiera interferir con la renovación normal de la piel y de otros tejidos epiteliales tales como la córnea y el epitelio del tracto gastrointestinal. La toxicidad en tejidos que proliferan, tales como la piel y el tracto GI es frecuentemente un efecto adverso dosis-limitante de los agentes citotóxicos. Dicha toxicidad puede manifestarse, entre otros síntomas, como erupciones cutáneas, diarrea, adelgazamiento de la córnea, atrofia o pérdida de pelo, displasia, degeneración, necrosis o inflamación de los folículos pilosos, hiperplasia epidérmica interfolicular, o una insuficiencia para la cicatrización o un retraso en la cicatrización tras una lesión.

El tratamiento de los queratinocitos normales y de las células que sobre-expresan EGFR con el inhibidor de EGFR, [6,7-bis(2-metoxi-etoxi)-quinazolin-4-il]-(3-etilfenil)amina, produce una detención del ciclo celular, como indica la acumulación de células en la fase G1 del ciclo celular (Moyer et al., 1997, Cancer Res. 57:4838-4848). La progresión de las células desde la fase G1 a la fase S requiere la fosforilación de la proteína de retinoblastoma pRB, que está mediada por quinasas dependientes de ciclina. Consistente con su capacidad de reducir el porcentaje de células en fase S, hemos observado que el CP-358.774 produce depleción de la proteína de retinoblastoma hiperfosforilada (ppRB), y acumulación del inhibidor de quinasa dependiente de ciclina, p27^{kip1/waf1} (Moyer et al., arriba).

La familia de factores de crecimiento de queratinocitos (KGF) consiste en KGF-1 y KGF-2, también conocidos como FGF-7 y FGF-10, respectivamente, lo que refleja su homología con proteínas de la superfamilia de factores de crecimiento de fibroblastos. Varias publicaciones de patentes describen los KGF y sus usos, incluyendo la Publicación Internacional PCT WO 94/23032, publicada el 13 de octubre de 1994; la Publicación Internacional PCT WO 98/06844, publicada el 19 de febrero de 1998; la Publicación Internacional PCT WO 98/16243, publicada el 23 de abril de 1998; la Publicación Internacional PCT WO 98/16642, publicada el 23 de abril de 1998; y la Publicación Internacional PCT 98/24813, publicada el 11 de junio de 1998.

Los KGF son únicos entre los FGF en que actúan exclusivamente sobre células epiteliales. Ambos KGF son expresados por las células del estroma y actúan como mediadores paracrinos de la proliferación celular epitelial (Finch et al., 1989, Science 245:752; Igarishi et al., 1998, J. Biol. Chem. 273:13230). El KGF-1 y el KGF-2 son homólogos en un 75%, y ambos se unen al receptor FGFR1iiib con una afinidad alta (Igarishi et al., arriba; Miceli, R., et al. 1999, J. Pharm. Exp. Ther. 290:464). Como los KGF parecen ser factores paracrinos en la piel (Marchese, C., et al., 1990, J. Cell Phys. 144:326; Igarishi, M., et al., 1998, arriba), investigamos si la vía del KGF puede servir como un medio alternativo de señalización mitogénica en este tejido, aliviando de este modo potencialmente la toxicidad epitelial causada por la administración de un inhibidor de EGFR.

Sumario de la invención

La presente invención está dirigida a una composición farmacéutica útil para tratar la toxicidad epitelial asociada con la administración al paciente de un inhibidor del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), comprendiendo dicha composición farmacéutica, un inhibidor de EGFR y un factor de crecimiento de queratinocitos (KGF) en un vehículo farmacéuticamente aceptable. En un escenario de tratamiento típico, el inhibidor del EGFR debe administrarse como un agente anti-canceroso a un paciente que lo necesita. En una realización preferida, el inhibidor de EGFR es un inhibidor de bajo peso molecular o un anticuerpo que se une específicamente al EGFR y bloquea su activación.

La presente invención está dirigida además a la utilización de una cantidad terapéuticamente efectiva de KGF, para la fabricación de un medicamento para la toxicidad epitelial que resulta de la administración a un paciente de un inhibidor de EGFR, en el que una cantidad terapéuticamente efectiva de KGF, se administra conjuntamente al paciente con el inhibidor de EGFR. En una realización preferida, el paciente es un ser humano que está siendo tratado por cáncer. En una realización aún más preferida, la toxicidad epitelial se manifiesta como toxicidad de la piel.

La presente invención se dirige además a un método de preparar una composición farmacéutica útil para tratar la toxicidad epitelial que resulta de la administración a un paciente de un inhibidor de EGFR, que comprende combinar un inhibidor de EGFR con un factor de crecimiento de queratinocitos (KGF). En una realización preferida, el método comprende además combinar un vehículo farmacéuticamente aceptable con el inhibidor de EGFR y el KGF.

La presente invención además proporciona un kit que comprende un primer envase que contiene un inhibidor de EGFR, y un segundo envase que contiene un KGF. También puede haber un vehículo farmacéuticamente aceptable en cada envase. El kit puede además comprender un tercer envase que contenga un diluyente estéril. El kit además puede comprender un prospecto con las instrucciones impresas dirigidas a la utilización del tratamiento combinado, como un método para tratar la toxicidad epitelial que resulta de la administración a un paciente de un inhibidor de EGFR.

Descripción detallada de la invención

Los datos presentados en los Ejemplos que se exponen más adelante, demuestran que la administración conjunta de un KGF con un inhibidor de EGFR, es eficaz para proteger los queratinocitos epiteliales humanos de la detención del ciclo celular inducida normalmente por un inhibidor de EGFR solo. De este modo, puede utilizarse de forma ventajosa el KGF para proteger las células epiteliales normales, de la toxicidad causada de otra manera por la administración a un paciente de un inhibidor de EGFR solo. Según esto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de EGFR y un KGF en un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Como aquí se utiliza, la expresión "inhibidor de EGFR" se refiere a cualquier inhibidor de EGFR, e incluye cualquier entidad química que, mediante su administración a un paciente, da como resultado la inhibición de una actividad biológica asociada con la activación de los EGFR en el paciente, incluyendo cualquiera de los efectos biológicos aguas abajo que resultan de la unión a un EGFR de su ligando natural. Tales inhibidores de EGFR incluyen cualquier agente que pueda bloquear la activación de EGFR o cualquiera de los efectos biológicos aguas abajo de la activación de EGFR, que son relevantes para tratar el cáncer en un paciente. Dicho inhibidor puede actuar uniéndose directamente al dominio intracelular del receptor, e inhibiendo su actividad quinasa. Alternativamente, dicho inhibidor puede actuar ocupando el lugar de unión del ligando, o una de sus partes, en el receptor EGFR o en una de sus partes, haciendo así al receptor inaccesible a su ligando natural, de tal forma que se prevenga o se reduzca su actividad biológica normal. Los inhibidores de EGFR incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de bajo peso molecular, anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, construcciones antisentido y ribozimas. En una realización preferida, el inhibidor de EGFR es una molécula orgánica pequeña, o un anticuerpo que se une específicamente al EGFR humano.

Los inhibidores de EGFR que pueden utilizarse según la presente invención, incluyen, pero no se limitan, a aquellos clasificados en la técnica como inhibidores de EGFR de quinazolina, inhibidores de EGFR de pirido-pirimidina, inhibidores de EGFR de dirimido-pirimidina, inhibidores de EGFR de pirrolo-pirimidina, inhibidores de EGFR de pirazolo-pirimidina, inhibidores de EGFR de fenilamina-pirimidina, inhibidores de EGFR de oxindol, inhibidores de EGFR de indolocarbazol, inhibidores de EGFR ftalazenina, inhibidores de EGFR de isoflavona, inhibidores de EGFR de quinalona, e inhibidores de EGFR de tirfostina.

Ejemplos no limitantes de inhibidores de EGFR de bajo peso molecular útiles para la práctica de la presente invención, incluyen cualquiera de los inhibidores de EGFR descritos en las siguientes publicaciones de patentes, y todas las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de dichos inhibidores de EGFR: Solicitud de Patente Europea EP 520722, publicada el 30 de diciembre de 1992; Solicitud de Patente Europea EP 566226, publicada el 20 de octubre de 1993; Publicación Internacional PCT WO 96/33980, publicada el 31 de octubre de 1996; Patente de Estados Unidos Nº 5.747.498, publicada el 5 de mayo de 1998; Publicación Internacional PCT WO 96/30347, publicada el 3 de octubre de 1996; Solicitud de Patente Europea EP 787772, publicada el 6 de agosto de 1997; Publicación Internacional PCT WO 97/30034, publicada el 21 de agosto de 1997; Publicación Internacional PCT WO 97/30044, publicada el 21 de agosto de 1997; Publicación Internacional PCT WO 97/38994, publicada el 23 de octubre de 1997; Publicación Internacional PCT WO 97/49688, publicada el 31 de diciembre de 1997; Solicitud de Patente Europea EP 837063, publicada el 22 de abril de 1998; Publicación Internacional PCT WO 98/02434, publicada el 22 de enero de 1998; Publicación Internacional PCT WO 97/38983, publicada el 23 de octubre de 1997; Publicación Internacional PCT WO 95/19774, publicada el 27 de julio de 1995; Publicación Internacional PCT WO 95/19970, publicada el 27 de julio de 1995; Publicación Internacional PCT WO 97/13771, publicada el 17 de abril de 1997; Publicación Internacional PCT WO 98/02437, publicada el 22 de enero de 1998; Publicación Internacional PCT WO 97/32881, publicada el 12 de septiembre de 1997; la Solicitud Alemana DE 19629652, publicada el 29 de enero de 1998; Publicación Internacional PCT WO 98/33798, publicada el 6 de agosto de 1998; Publicación Internacional PCT WO 97/32880, publicada el 12 de septiembre de 1997; Solicitud de Patente Europea EP 682027, publicada el 15 de noviembre de 1995; Publicación Internacional PCT WO 97/02266, publicada el 23 de enero de 1997; Publicación Internacional PCT WO 97/27199, publicada el 31 de julio de 1997; Publicación Internacional PCT WO 98/07726, publicada el 26 de febrero de 1998; Publicación Internacional PCT WO 97/34895, publicada el 25 de septiembre de 1997; Publicación Internacional PCT WO 96/31510, publicada el 10 de octubre de 1996; Publicación Internacional PCT WO 98/14449, publicada el 9 de abril de 1998; Publicación Internacional PCT WO 98/14450, publicada el 9 de abril de 1998; Publicación Internacional PCT WO 98/14451, publicada el 9 de abril de 1998; Publicación Internacional PCT WO 95/09847, publicada el 13 de abril de 1995; Publicación Internacional PCT WO 97/19065, publicada el 29 de mayo de 1997; Publicación Internacional PCT WO 98/17662, publicada el 30 de abril de 1998; Patente de Estados Unidos Nº 5.789.427, publicada el 4 de agosto de 1998; Patente de Estados Unidos Nº 5.650.415, publicada el 22 de julio de 1997; Patente de Estados Unidos Nº 5.656.643, publicada el 12 de agosto de 1997; Publicación Internacional PCT WO 99/35146, publicada el 15 de julio de 1999; Publicación Internacional PCT WO 99/35132, publicada el 15 de julio de 1999; Publicación Internacional PCT WO 99/07701, publicada el 18 de febrero de 1999; y Publicación Internacional PCT WO 92/20642, publicada el 26 de noviembre de 1992. Ejemplos adicionales no limitantes de inhibidores de EGFR de bajo peso molecular incluyen cualquiera de los inhibidores de EGFR descritos en Traxler, P., 1998, Exp. Opin. Ther. Patents 8 (12):1599-1625.

Ejemplos preferidos específicos de inhibidores de EGFR de bajo peso molecular, que pueden utilizarse según la presente invención, incluyen la [6,7-bis(2-metoxietoxi)-4-quinazolin-4-il]-(3-etinilfenil)amina (Patente de EE. UU. Nº 5.747.498, publicada el 5 de mayo de 1999, arriba); C1-1033 y PD183805 (Sherwood et al., 1999, Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 40:723); y ZD1839 (Woodburn et al., 1997, Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 38:633).

Los inhibidores de EGFR basados en anticuerpos incluyen anticuerpos anti-EGFR o fragmentos de anticuerpos que pueden bloquear parcial o completamente la activación de EGFR por su ligando natural. Ejemplos no limitantes de inhibidores de EGFR basados en anticuerpos, incluyen los descritos en Modjtahedi, H., et al., 1993, Br. J. Cancer 67:247-253; Teramoto, T., et al., 1996, Cancer 77:639-645; Goldstein et al., 1995, Clin. Cancer Res 1:1311-1318; Huang, S.M., et al., 1999, Cancer Res 15:59(8):1935-40; y Yang, X., et al., 1999, Cancer Res 59:1236-1243. De esta forma, el inhibidor de EGFR puede ser el anticuerpo monoclonal Mab E7.6.3 (Yang, 1999, arriba), o el Mab C225 (Número de acceso ATCC HB-8508), o un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo que tiene su especificidad de unión.

Inhibidores de EGFR adicionales basados en anticuerpos, pueden producirse según métodos conocidos, mediante la administración del antígeno o del epítopo apropiado a un animal hospedante, seleccionado, por ejemplo, de cerdos, vacas, caballos, conejos, cabras, ovejas y ratones, entre otros. Pueden utilizarse varios adyuvantes conocidos en la técnica, para incrementar la producción de anticuerpos.

Aunque los anticuerpos útiles en la práctica de la invención pueden ser policlonales, se prefieren los anticuerpos monoclonales. Los anticuerpos monoclonales contra el EGFR pueden prepararse y aislarse utilizando cualquier técnica que proporcione la producción de moléculas de anticuerpo a partir de líneas celulares continuas en cultivo. Técnicas para la producción y aislamiento incluyen, pero no se limitan a la técnica de hibridoma descrita originalmente por Kohler y Milstein (Nature, 1975, 256: 495-497); la técnica de hibridoma de células B humanas (Kosbor et al., 1983, Immunology Today 4:72; Cote et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 2026-2030), y la técnica de hibridoma EBV (Cole et al., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R, Inc., pags.77-96).

Alternativamente, pueden adaptarse las técnicas descritas para la producción de anticuerpos de cadena sencilla (véase por ejemplo, la Patente de EE. UU. Nº 4.946.778), para producir anticuerpos de cadena sencilla anti-EGFR. Los inhibidores de EGFR basados en anticuerpos, útiles para la práctica de la presente invención también incluyen fragmentos de anticuerpos anti-EGFR, incluyendo, pero no limitándose a fragmentos F(ab')_{2}, que pueden generarse mediante digestión con pepsina de una molécula de anticuerpo intacta, y fragmentos Fab, que pueden generarse mediante reducción de los puentes disulfuro de los fragmentos F(ab')_{2}. Alternativamente, pueden construirse bibliotecas de expresión Fab y/o scFv (véase, por ejemplo, Huse et al., 1989, Science 246: 1275-1281), para permitir la rápida identificación de fragmentos que tengan la especificidad deseada anti-EGFR.

Las técnicas para la producción y el aislamiento de anticuerpos monoclonales y fragmentos de anticuerpos son bien conocidas en la técnica, y se describen adicionalmente, entre otros lugares, en Harlow y Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, y en J. W. Goding, 1986, Monoclonal Anti-bodies: Principles and Practice, Academic Press, London. También pueden prepararse anticuerpos y fragmentos de anticuerpos anti-EGFR humanizados, según técnicas conocidas, tal como las descritas en Vaughn, T.J. et al., 1998, Nature Biotech. 16:535-539, y en las referencias allí citadas, y tales anticuerpos y sus fragmentos son también útiles para la práctica de la presente invención.

Los inhibidores de EGFR para utilizar en la presente invención pueden estar basados, alternativamente, en construcciones de oligonucleótidos antisentido. Los oligonucleótidos antisentido, incluyendo moléculas de RNA antisentido, podrían actuar para bloquear directamente la traslación de mRNA de EGFR, mediante su unión al mismo, previniendo así la traslación de proteína o el aumento de la degradación de mRNA. Por ejemplo, pueden sintetizarse oligonucleótidos antisentido de alrededor de al menos 15 bases, y complementarios a regiones únicas de la secuencia trascrita de mRNA que codifica EGFR, por ejemplo, mediante técnicas fosfodiéster convencionales, y administrarse mediante, por ejemplo, inyección intravenosa o infusión.

Los ribozimas también pueden funcionar como inhibidores de EGFR para utilizar en la presente invención. Los ribozimas son moléculas de RNA enzimáticas capaces de catalizar la escisión específica de RNA. El mecanismo de acción de la ribozima incluye hibridación de la molécula de ribozima a una secuencia específica del RNA diana complementario, seguida de escisión endonucleolítica. Las moléculas de ribozima con motivo de cabeza de martillo manipuladas, que catalizan específicamente y eficazmente la escisión endonucleolítica de las secuencias de mRNA de EGFR, son por lo tanto útiles dentro del alcance de la presente invención. Lugares de escisión de ribozimas específicos dentro de cualquier RNA diana potencial, son identificados inicialmente mediante escaneo de la molécula diana para lugares de escisión de ribozimas, que incluyen típicamente las siguientes secuencias, GUA, GUU, y GUC. Una vez identificados, pueden evaluarse secuencias de RNA cortas de entre alrededor de 15 y 20 ribonucleótidos, correspondientes a la región del gen diana que contiene el lugar de escisión, para hechos estructurales predichos, tales como estructura secundaria, que pueden convertir a las secuencias de oligonucleótidos en no adecuadas. La adecuación de las dianas candidatas puede también evaluarse analizando su accesibilidad para la hibridación con oligonucleótidos complementarios, utilizando, por ejemplo, ensayos de protección de ribonucleasa.

Tanto los oligonucleótidos antisentido como los ribozimas útiles como inhibidores de EGFR, pueden prepararse con métodos conocidos. Estos incluyen técnicas para la síntesis química tales como, por ejemplo, la síntesis química de fosforamadita de fase sólida. Alternativamente, pueden generarse moléculas de RNA antisentido mediante trascripción in vitro o in vivo de secuencias de DNA que codifican la molécula de RNA. Tales secuencias de DNA pueden ser incorporadas en una amplia variedad de vectores que incorporan promotores de polimerasa de RNA adecuados, tales como los promotores de polimerasa T7 o SP6. Pueden introducirse diversas modificaciones a los oligonucleótidos de la invención, como medio para aumentar la estabilidad intracelular y la vida media. Modificaciones posibles incluyen, pero no se limitan a, la adición de secuencias flanqueantes de ribonucleótidos o desoxirribonucleótidos a los extremos 5' y 3' de la molécula, o la utilización de uniones fosforotioato o 2'-O-metilo en vez de fosfodiesterasa, en la estructura del oligonucleótido.

Como aquí se utiliza, la expresión "factor de crecimiento de queratinocitos" o "KGF" se refiere a KGF-1 y KGF-2. Las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de KGF-1 están descritas en Finch et al., 1989, Science 245:752-755. La secuencia de aminoácidos de KGF-2 se describe en Igarishi et al., 1998, J. Biol. Chem. 273:13230.

El KGF natural puede aislarse de fuentes humanas naturales, o producirse mediante técnicas de DNA recombinante, bien conocidas en la técnica. El KGF-1 recombinante humano, como se expresa en E. coli, es una proteína de 19 kDa, y está disponible comercialmente (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO). Análogos de KGF caracterizados por tener una estabilidad aumentada con respecto al KGF natural, están descritos en la Publicación Internacional PCT WO 96/11951, publicada el 25 de abril de 1996, y dichos análogos de KGF pueden utilizarse como el componente KGF en la práctica de la presente invención. Alternativamente, cualquier fragmento del polipéptido KGF entero o uno de sus análogos, siempre que el fragmento o el análogo retengan completa o incluso parcialmente la actividad KGF, pueden utilizarse en la práctica de la presente invención. Alternativamente, el KGF-2, como se describe en la Publicación Internacional PCT WO 98/06844, publicada el 19 de febrero de 1998, o uno cualquiera de sus análogos o sus fragmentos peptídicos, que retengan completa o parcialmente la actividad KGF-2, pueden utilizarse como el componente KGF en la práctica de la presente invención. A no ser que se indique otra cosa, todas las formas alternativas de KGF y análogos de KGF útiles en la práctica de la presente invención se denominan colectivamente de aquí en adelante como "KGF".

La presente invención además proporciona la utilización de una cantidad terapéuticamente efectiva de KGF, para la fabricación de un medicamento para tratar la toxicidad epitelial que resulta de la administración a un paciente de un inhibidor de EGFR, en la que la cantidad terapéuticamente efectiva de KGF se administra conjuntamente al paciente con el inhibidor de EGFR.

El término "tratar" como aquí se utiliza, a no ser que se especifique otra cosa, significa revertir, aliviar, inhibir la progresión de, o prevenir, parcial o completamente, la toxicidad epitelial, o una o más condiciones o síntomas asociados con la toxicidad epitelial, causada por la administración a un paciente de una dosis (única o dividida) o una serie de dosis (por ejemplo, un ciclo de tratamiento), de un inhibidor de EGFR útil para tratar el cáncer. El término "tratamiento" como aquí se utiliza, a no ser que se especifique otra cosa, se refiere al acto de tratar, siempre que "tratar" se defina como se ha descrito anteriormente.

Como aquí se utiliza, la expresión "toxicidad epitelial" se refiere a una anormalidad o una disfunción del epitelio, y puede manifestarse en un paciente que está siendo tratado por cáncer, mediante la administración de un inhibidor de EGFR, por uno o más síntomas o condiciones seleccionadas entre erupción dérmica, diarrea, adelgazamiento corneal, pérdida o atrofia de pelo, displasia, degeneración, necrosis o inflamación de folículos pilosos, hiperplasia epidérmica intefolicular, o una insuficiencia en la cicatrización o una cicatrización retardada tras una lesión, entre otros síntomas.

En una realización preferida, la toxicidad epitelial se manifiesta como toxicidad dérmica tal como una erupción de tipo acné o macro-papular.

Como aquí se utiliza, el término "paciente", preferiblemente se refiere a un ser humano con necesidad de tratamiento con un inhibidor de EGFR con cualquier propósito, y más preferiblemente, un ser humano con necesidad de dicho tratamiento para tratar cáncer. Sin embargo, el término "paciente" puede también referirse a animales no humanos, preferiblemente mamíferos tales como perros, gatos, caballos, vacas, cerdos, ovejas y primates no humanos, entre otros, que tengan necesidad de tratamiento con un inhibidor de EGFR.

En una realización preferida, el paciente es un ser humano con necesidad de tratamiento para cáncer. El cáncer es preferiblemente cualquier cáncer tratable, parcial o completamente, mediante la administración de un inhibidor de EGFR. El cáncer puede seleccionarse de, pero no se limita a, el grupo consistente en cáncer de pulmón, cáncer de hueso, cáncer de páncreas, cáncer de piel, cáncer de cabeza y cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer de útero, cáncer de ovario, cáncer de recto, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de útero, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma de endometrio, carcinoma de cerviz, carcinoma de vagina, carcinoma de vulva, cáncer de esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroidea, cáncer de la glándula paratifoidea, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de uretra, cáncer de pene, cáncer de próstata, cáncer de vejiga, cáncer de riñón o de uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, neoplasias del sistema nervioso central (CNS), tumores del eje espinal, glioma de origen cerebral, adenoma pituitario, o una combinación de uno o más de los cánceres anteriores.

En otra realización de dicho método, el paciente es un ser humano que tiene necesidad de tratamiento para una enfermedad proliferativa benigna, incluyendo, pero no limitándose a, psoriasis, hipertrofia prostática benigna o reestenosis.

Para el propósito de la presente invención, "administración conjunta de" y "administrar conjuntamente" KGF con un inhibidor de EGFR (ambos componentes denominados de aquí en adelante como los "dos agentes activos"), se refiere a cualquier administración de los dos agentes activos, juntos o separados, donde los dos agentes activos se administran como parte de un régimen de dosis apropiado, diseñado para obtener un beneficio protector de la terapia de combinación. Así, los dos agentes activos pueden administrarse bien como parte de la misma composición farmacéutica o en composiciones farmacéuticas separadas. El KGF puede administrarse antes de, al mismo tiempo que, o después de la administración del inhibidor de EGFR, o en algunas de sus combinaciones, siempre que el paciente obtenga el efecto protector del KGF contra la toxicidad epitelial que podría ocasionarse de otra manera, por la administración al paciente del inhibidor de EGFR solo. Cuando el inhibidor de EGFR se administra al paciente a intervalos repetidos, por ejemplo, durante un ciclo estándar de tratamiento, el KGF puede administrarse antes de, al mismo tiempo que, o después de, cada administración del inhibidor de EGFR, o alguna de sus combinaciones, o a diferentes intervalos en relación con el tratamiento con inhibidor de EGFR, o en una dosis única antes de, en cualquier momento durante, o después del ciclo de tratamiento con el inhibidor de EGFR, siempre que el paciente obtenga el efecto protector de KGF contra la toxicidad epitelial, que podría de otra manera ser causada por la administración del inhibidor de EGFR solo.

El inhibidor de EGFR se administrará típicamente a un paciente en un régimen de dosis que proporcione el tratamiento más efectivo del cáncer (tanto desde la perspectiva de la eficacia como de la seguridad), por el que el paciente está siendo tratado, como se conoce en la técnica, y como se describe, por ejemplo, en las publicaciones previamente citadas. En la práctica de la presente invención, el inhibidor de EGFR puede administrarse de cualquier manera eficaz conocida en la técnica, tal como por vía oral, tópica, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intraarticular, subcutánea, intranasal, intraocular, vaginal, rectal o intradérmica, dependiendo del tipo de cáncer que esté siendo tratado, el tipo de inhibidor de EGFR que esté siendo usado (por ejemplo pequeña molécula, anticuerpo o construcción antisentido), y el juicio clínico del médico que lo prescribe, basado, por ejemplo, sobre los resultados de estudios clínicos publicados.

La cantidad de inhibidor de EGFR administrada y el tiempo de administración del inhibidor de EGFR dependerá del tipo (especie, género, edad, peso, etc.) y de la condición del paciente que está siendo tratado, la gravedad de la enfermedad o la condición que está siendo tratada, y de la vía de administración. Por ejemplo, las pequeñas moléculas inhibidoras de EGFR pueden administrarse a un paciente en dosis en el intervalo entre 0,01 y 10 mg/kg de peso corporal por día o por semana, en dosis única o dividida, o mediante infusión continua. Los inhibidores de EGFR basados en anticuerpos, o en construcciones de ribozima o antisentido, pueden administrarse a un paciente en dosis en el intervalo entre 0,1 y 100 mg/kg de peso corporal por día o por semana en dosis única o dividida, o mediante infusión continua. En algunos casos, límites de dosificación por debajo del límite inferior del intervalo mencionado arriba, pueden ser más adecuados, mientras que en otros casos pueden emplearse todavía dosis mayores sin causar ningún efecto secundario peligroso, siempre que tales dosis mayores se dividan primero en varias dosis pequeñas para administrarlas a lo largo del día.

Como aquí se utiliza, una "cantidad de KGF terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad de KGF capaz de revertir, aliviar, inhibir la progresión de, o prevenir, completa o parcialmente, uno o más síntomas o condiciones en un paciente que resultan de la toxicidad epitelial causada por la administración al paciente de una dosis estándar o una serie de dosis (por ejemplo, un ciclo estándar de tratamiento), de un inhibidor de EGFR administrado al paciente para el tratamiento de cáncer o de otra enfermedad, alteración o condición. La cantidad de KGF terapéuticamente efectiva puede administrarse como una dosis única, como varias dosis divididas, o puede administrarse mediante infusión continua.

El médico que lo prescribe puede determinar cual constituye una "cantidad de KGF terapéuticamente efectiva", basado, inicialmente, por ejemplo, en los resultados de los ensayos clínicos publicados, y en las dosis recomendadas descritas en las instrucciones incluidas en un kit que comprenda los dos agentes activos. La dosis de KGF puede ajustarse hacia arriba o hacia abajo por el médico que lo prescribe, dependiendo del grado de respuesta al tratamiento con KGF de cada paciente particular. El médico que lo prescribe preferiblemente monitorizará la respuesta de la administración conjunta del tratamiento, particularmente en aquellas respuestas relacionadas con la prevención o el alivio de la toxicidad epitelial de otra manera asociada con la administración de un inhibidor del EGFR solo. Preferiblemente, el médico que lo prescribe, monitorizará la condición de la piel del paciente, y particularmente la prevención o la mejoría de cualquier erupción cutánea causada por o asociada con la administración del inhibidor de EGFR. Preferiblemente, el médico que lo prescribe, mediante examen oftalmológico, monitorizará el adelgazamiento de la córnea en el paciente, causado por, o asociado con la administración del inhibidor de EGFR. El médico que lo prescribe, puede también monitorizar la diarrea en el paciente, causada por, o asociada con la administración del inhibidor de EGFR.

El KGF debe administrarse típicamente al paciente en un régimen de dosis que proporcione el tratamiento más eficaz y más seguro de la toxicidad epitelial causada por el inhibidor de EGFR, o de una o más condiciones o síntomas asociados con la toxicidad epitelial. El KGF puede administrarse de una forma conveniente como se conoce en la técnica, tal como por vía tópica, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intraarticular, subcutánea, intranasal, intraocular, vaginal, rectal o intradérmica, como lo determine el médico que lo prescribe.

La cantidad de KGF que debe administrarse y el tiempo de administración de KGF dependerán del tipo (especie, sexo, edad, peso, etc.) y de la condición del paciente que está siendo tratado, la gravedad o potencial gravedad de la toxicidad epitelial causada por el inhibidor de EGFR, la vía de administración, y el juicio del médico que lo prescribe, basado, por ejemplo, en los resultados de los estudios clínicos publicados. Por ejemplo, el KGF puede administrarse parenteralmente a un paciente, en dosis en el intervalo entre 0,01 y 10 mg/kg de peso corporal por día, o algo menos frecuentemente, tal como 1-4 veces por semana, en dosis única o dividida. También, por ejemplo, el KGF puede administrarse tópicamente a un paciente una vez o más por día, en formulaciones que contienen desde alrededor de 0,001% (p/v) hasta alrededor de 1,0% (p/v). En algunos casos, niveles de dosis y de concentración por debajo del límite inferior del intervalo mencionado previamente, pueden ser más que adecuados, mientras que en otros casos pueden emplearse dosis todavía mayores sin causar ningún efecto secundario perjudicial, siempre que dichas dosis mayores se dividan primero en varias dosis pequeñas para administrar a lo largo del día. En algunas circunstancias, un tratamiento único o una serie de tratamientos con KGF será suficiente para tratar la toxicidad epitelial causada por el inhibidor de EGFR, mientras que en otras circunstancias el tratamiento continuará hasta que se observe suficiente mejoría en la condición por el médico encargado, como se determina por uno o más índices estándar de toxicidad epitelial, tales como el grosor del epitelio corneal determinado, por ejemplo, mediante examen con lámpara de hendidura.

La presente invención proporciona además, un método para preparar una composición farmacéutica útil para tratar la toxicidad epitelial que resulta de la administración a un paciente de un inhibidor de EGFR, que comprende combinar un inhibidor de EGFR con KGF. En una realización preferida, el método comprende además combinar un vehículo farmacéuticamente aceptable con el inhibidor de EGFR y el KGF.

La presente invención proporciona además la utilización de un inhibidor de EGFR combinado con KGF, para preparar un medicamento para tratar cáncer en un paciente, a la vez que también se trata la toxicidad epitelial que resulta de la administración a un paciente del inhibidor de EGFR solo. La presente invención proporciona la posibilidad de administración conjunta del inhibidor de EGFR y el KGF, para preparar un tratamiento anti-cáncer que tiene una toxicidad epitelial reducida.

Los inhibidores de EGFR y el KGF pueden administrarse con diversos vehículos inertes farmacéuticamente aceptables, en forma de tabletas, cápsulas, pastillas, caramelos duros, polvos, pulverizadores, cremas, salvas, supositorios, gelatinas, geles, pastas, lociones, ungüentos y similares. La administración de tales formas de dosificación puede realizarse en una dosis única o en múltiples dosis. Los vehículos incluyen diluyentes sólidos o rellenadotes, medios acuosos estériles, disolventes orgánicos no tóxicos diversos, etc.

Todas las formulaciones que comprenden KGF deberían seleccionarse para evitar su desnaturalización y pérdida de actividad biológica del polipéptido KGF.

Métodos para preparar composiciones farmacéuticas que comprenden un inhibidor de EGFR son conocidos en la técnica, y se describen, por ejemplo, en varias de las publicaciones previamente citadas. Métodos para preparar composiciones farmacéuticas que comprenden KGF son también conocidas en al técnica, y están descritas, por ejemplo, en varias de las publicaciones previamente citadas. A la vista de las enseñanzas de la presente invención, métodos para preparar composiciones farmacéuticas que comprenden tanto un inhibidor de EGFR como KGF, serán aparentes a partir de las publicaciones previamente citadas, y de otras referencias conocidas, tales como Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, 18^{th} edition (1990).

Para administración oral de un inhibidor de EGFR, comprimidos que contienen uno o más de los agentes activos, se combinan con cualquiera de varios excipientes, tales como celulosa microcristalina, citrato sódico, carbonato cálcico, fosfato dicálcico y glicina, junto con varios desintegrantes tales como almidón (y preferiblemente almidón de maíz, patata o tapioca), ácido algínico y ciertos silicatos complejos, junto con ligadores de granulación, como polivinilpirrolidona, sacarosa, gelatina y acacia. Adicionalmente, agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, lauril-sulfato sódico y talco, son frecuentemente muy útiles para el propósito de comprimirlo. Composiciones sólidas de un tipo similar pueden también emplearse como relleno en cápsulas de gelatina; los materiales preferidos en esta conexión también incluyen lactosa o azúcar de leche, así como polietilén-glicoles de alto peso molecular. Cuando se desean suspensiones acuosas y/o elixires para administración oral, el inhibidor de EGFR puede combinarse con varios agentes edulcorantes o aromatizantes, agentes colorantes o tintes, y, si se desea, también agentes emulsionantes y/o suspensores, junto con diluyentes tales como agua, etanol, propilén-glicol, glicerina y sus diversas combinaciones.

Para administración parenteral de uno cualquiera o ambos agentes activos, pueden emplearse soluciones en aceite de sésamo o cacahuete o en propilén-glicol acuoso, así como soluciones acuosas estériles que contienen el agente activo o su correspondiente sal soluble en agua. Dichas soluciones acuosas estériles son preferiblemente adecuadamente tamponadas, y también son preferiblemente isotónicas, por ejemplo, con suficiente solución salina o glucosa. Estas particulares soluciones acuosas son especialmente adecuadas para el propósito de inyección intravenosa, intramuscular, subcutánea e intraperitoneal. Las soluciones oleosas son adecuadas para el propósito de inyección intraarticular, intramuscular y subcutánea. La preparación de todas estas soluciones bajo condiciones estériles es llevada a cabo fácilmente mediante técnicas farmacéuticas estándar, bien conocidas para los expertos en la técnica. Cualquier formulación parenteral seleccionada para administración de KGF debería seleccionarse para evitar la desnaturalización y la pérdida de actividad biológica del polipéptido KGF.

Adicionalmente, es posible administrar tópicamente cada uno o ambos agentes activos, y esto puede hacerse preferiblemente a través de cremas, lociones, gelatinas, geles, pastas, ungüentos, salvas y similares, de acuerdo con la práctica farmacéutica estándar. Por ejemplo, puede prepararse una formulación tópica que contiene tanto un inhibidor de EGFR como un KGF a una concentración de desde alrededor del 0,1% (p/v) hasta alrededor de 5% (p/v). En una realización preferida, puede prepararse una formulación tópica de KGF, que será particularmente efectiva donde la toxicidad epitelial causada por el inhibidor de EGFR se manifiesta como toxicidad de la piel. Cualquier formulación tópica seleccionada para KGF debería seleccionarse para evitar la desnaturalización y la pérdida de actividad biológica del polipéptido KGF.

Para propósitos de veterinaria, los agentes activos pueden administrarse separados o juntos a animales, utilizando cualquiera de las formas y cualquiera de las vías descritas anteriormente. En una realización preferida, el inhibidor de EGFR se administra en forma de una cápsula, bola, tableta, jarabe líquido, mediante inyección o como un implante. Como alternativa, el inhibidor de EGFR puede administrarse con la comida de los animales, y para este propósito puede prepararse un aditivo alimentario concentrado para la comida normal del animal. El KGF se administra preferiblemente en forma de jarabe líquido, mediante inyección o como un implante. Tales formulaciones se preparan de una manera convencional, de acuerdo con la práctica veterinaria estándar.

La presente invención además proporciona un kit que comprende un único envase que contiene tanto un inhibidor de EGFR y el KGF. La presente invención además proporciona un kit que comprende un primer envase que contiene un inhibidor de EGFR y un segundo envase que contiene KGF. En una realización preferida, el envase del kit puede contener además un vehículo farmacéuticamente aceptable. El kit puede además contener un diluyente estéril, que se almacena preferiblemente en un envase separado adicional. El kit puede además contener un prospecto insertado en el envase, que contiene las instrucciones impresas.

Los siguientes ejemplos son solo ilustrativos, y no pretenden limitar el alcance de la presente invención.

Ejemplo 1 Medida de la protección de queratinocitos por KGF

El efecto protector de KGF sobre los queratinocitos se midió en dos tipos de ensayo, el primero para determinar su efecto protector sobre la distribución de las fases del ciclo celular, contra una pequeña molécula de inhibidor de EGFR, y la segunda para determinar su efecto protector contra la depleción de ppRB y la sobrerregulación de p27^{kip1/waf1} causada por el inhibidor de EGFR. El efecto de KGF sobre la distribución de las fases del ciclo celular, se midió mediante análisis bivariante de la incorporación de bromodesoxiuridina y la incorporación de yoduro de propidio por células de carcinoma de colon DiFi, utilizando citometría de flujo. El efecto protector de KGF contra la depleción de ppRB y la sobrerregulación de p27^{kip1/waf1}, se midió mediante inmunoblotting de los lisados de células DiFi tratadas y no tratadas (testigos), con anticuerpos específicos para RB y p27^{kip1/waf1}, respectivamente. Los métodos se describen con detalle más adelante.

Todos los experimentos se llevaron a cabo con queratinocitos epidérmicos neonatales humanos normales, NHEK (Clonetics, San Diego, CA). Las células se mantuvieron en Medio de Crecimiento de Queratinocitos, KGM-2 (Clonetics). El KGF recombinante humano, expresado en E. coli, como una proteína de 19 kDa, se obtuvo de Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO).

Medida de citometria de flujo de la detención del ciclo celular

Se sembraron células NHEK en platos de 60 mm en KGM-2. Cuando las células estaban semiconfluentes, el medio se reemplazó con medio fresco que contenía los agentes de ensayo: vehículo (DMSO al 0,125%); vehículo + 20 ng/ml de KGF; vehículo + 0.3 \muM CP-358, 774-01 +/- 20 ng/ml de KGF; o vehículo + 1 \muM CP-358, 774-01 +/- 20 ng/ml de KGF. Las células se incubaron a 37ºC en una atmósfera con CO al 5%, humidificada. Después de 24 horas, se añadió bromodesoxiuiridina (BrdU) al medio, a una concentración de 10 \muM durante 30 minutos. Las células después se recolectaron utilizando tripsina al 0,25%/EDTA 1 mM, y se contaron utilizando un contador Coulter. Se recogieron partes alícuotas de 2 x 10^{6} células, mediante centrifugación a 220 x g durante 5 minutos, se lavaron en 2 ml de solución salina tamponada con fosfato (PBS), que contenía suero de ternera fetal al 2,5%, se resuspendieron en 0,2 ml de PBS y se fijaron mediante la adición de 5 ml de etanol al 70% a -20ºC. Después de 30 minutos de incubación en hielo, las células se recolectaron mediante centrifugación a 500 x g durante 5 minutos, y se resuspendieron en 25 \mul de PBS. Se añadió 1 ml de pepsina 0,2 mg/ml en HCl 2 N, y las células se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente. Las células se recolectaron mediante centrifugación a 1500 x g durante 5 minutos, se resuspendieron en 1 ml de isotiocianato de fluoresceína (FICT) conjugado con anti-BrdU (Becton Dickinson, San Jose, CA), diluido cincuenta veces en PBS que contenía Tween 20 al 0,5% y albúmina sérica bovina al 1%, y se incubaron a temperatura ambiente en oscuridad durante 30 minutos. Después de un lavado final con PBS con Tween 20 al 0,5% y BSA al 1%, las células se resuspendieron en PBS que contenía 10 \mug/ml de yoduro de propidio y 10 \mug/ml de RNAsa, se filtraron a través de una red de 35 prn, y se analizaron en un citómetro de flujo FACSCalibur (Becton Dickinson), equipado con un láser de argón con una longitud de onda de emisión de 488 nm. Los datos de fluorescencia FICT se adquirieron a 515-545 nm, y los datos de fluorescencia de yoduro de propidio se adquirieron a 488 nm. Se analizaron un mínimo de 20.000 células por muestra. Los datos se analizaron utilizando el programa CellOuest (Becton-Dickinson), y se calculó el porcentaje de células en cada fase (G1, S, G2) del ciclo celular.

Medida de los niveles de proteínas ppRB y p27^{kip1/waf1}

Se sembraron células NHEK en placas de 6 pocillos, y se cultivaron hasta que estuvieron semiconfluentes en KGM-2. Se añadió medio fresco que contenía vehículo o CP-358, 774-01 +/- 20 ng/ml de KGF, y las células se incubaron durante 24 horas en una atmósfera con CO al 5%, humidificada. Las células se lavaron con Tris-HCl pH 7,4 50 mM, cloruro sódico 140 mM, cloruro potásico 3,3 mM y ortovanodato sódico 500 \muM, y se lisaron, hirviéndolas durante 10 minutos en solución de tampón de muestra SDS (Tris-HCl, pH 6,8, 50 mM, DTT 100 mM, 2% SDS, 0,1% azul de bromofenol, 10% glicerol). La concentración total de proteína de los lisados se determinó utilizando el ensayo de proteína BCA (Pierce Chemicals, Rockford, IL). Diez \mug de proteína se resolvieron en un gel de poliacrilamida (Owl Seaparation Systems, Portsmouth, NH) al 7.5% (RB) o al 4-20% (p27), y se transfirieron a una membrana Immobilon-P (Millipore, Bedford, MA), durante 2 horas a 250 mA. Las membranas se bloquearon durante la noche en leche desnatada al 4% en TBST (Tris-HCl, pH 7,4, 50 mM, NaCl 150 mM, y 0,1% Tween 20) y se sondaron con 1 \mug/ml de anticuerpo monoclonal G3-245 (Pharmington, San Diego, CA), para la detección de RB, o con 0,1 \mug/ml del anticuerpo monoclonal anti-p27kip1 clon 57 (Transduction Labs, Lexington, KY), seguido de adición de peroxidasa de rábano picante conjugada con IgG de cabra anti-ratón (Pharmingen), diluido 1:1000. La identidad de la banda más baja en los blots RB, se confirmó como RB fosforilada (pRB), mediante la utilización de un anticuerpo, el Clon G99-549 (Pharmingen), específico para esta forma.

Resultados Distribución de las fases del ciclo celular

El tratamiento de los queratinocitos durante 24 horas con la sal hidrocloruro de N-(3-etinilfenilamino)-6,7-bis(2-metoxietoxi-4-quinazolnearmina (Compuesto A), causó una acumulación de células concentración dependiente en la fase G1 del ciclo celular, y una disminución correspondiente en la fracción de la fase S (Tabla 1). El tratamiento conjunto con KGF revirtió este efecto, mientras que el tratamiento con KGF solo no tuvo efectos significativos sobre la distribución de las fases del ciclo celular.

TABLA 1

Tratamiento	%G1	%S	%G2
Vehículo	52	34	12
20 ng/ml de KGF	52	34	13
Compuesto A 0,3 \muM	75	13	11
Compuesto A 0,3 \muM + 20 ng/ml de KGF	53	34	12
Compuesto A 1 \muM	84	6,0	10
Compuesto A 1 \muM + 20 ng/ml de KGF	50	35	13

Niveles de ppRB y p27^{kip1/waf1}

La proteína de retinoblastoma hiperfosforilada (ppRB) y fosforilada (pRB), pueden resolverse debido a sus diferentes tasas de migración en geles de electroforesis de poliacrilamida. Ambas formas de proteínas tienen un peso molecular de \sim 105 kDa, pero la ppRB migra más lentamente que la pBR, lo que da como resultado la apariencia de una banda superior (ppBR) y/o una banda inferior (pBR), en los blots que se han sondado con el anticuerpo monoclonal G3-245, que reconoce ambas formas de la proteína.

En queratinocitos proliferantes no tratados, toda la inmunorreactividad aparente de RB estaba en la RB hiperfosforilada (banda superior). Después del tratamiento con el Compuesto A 0,3 \muM, la señal de ppBR se reducía dramáticamente y aparecía la banda inferior correspondiente a pRB. Sin embargo, las células tratadas simultáneamente con Compuesto A 0,3 \muM y 20 ng/ml de KGF, se asemejaban a las células de control, y exhibían solo la banda superior. Así, a pesar de la presencia de inhibidor de EGFR, estas células contenían predominantemente la RB hiperfosforilada (es decir, la forma de RB que permite la progresión del ciclo celular). Esto es consistente con el ensayo de marcaje de BrdU descrito anteriormente, en el que las células tratadas simultáneamente con Compuesto A y KGF tienen un fracción S similar a la de los testigos. En queratinocitos tratados con Compuesto A 1 \muM, la banda de ppBR estaba completamente abolida, y como ocurría a la menor concentración de Compuesto A, el tratamiento conjunto con KGF restauraba completamente los niveles de ppBR, haciéndolos similares a los de los testigos.

La pRB es fosforilada por quinasas dependientes de ciclina (cdk), que están reguladas positivamente por ciclinas, y reguladas negativamente por los inhibidores de cdk p21^{cip1} y p27^{kip1/waf1}. Los lisados de queratinocitos tratados con Compuesto A 0,3 \muM exhibían una inducción de niveles de proteína p27^{kip1/waf1} 3,9 veces mayor. Consistente con el efecto del compuesto en la fosforilación de pRB. El tratamiento con Compuesto A 1 \muM daba como resultado una inducción de p27^{kip1/waf1} 5,2 veces mayor. El tratamiento conjunto con KGF restauraba parcialmente los niveles de p27^{kip1/waf1}, haciéndolos similares a los de los testigos.

La presente invención no está limitada en su extensión por las realizaciones específicas descritas, que se entienden como simples ilustraciones de aspectos individuales de la invención. Es más, diversas modificaciones de la invención, además de las mostradas y descritas aquí, serán aparentes para los expertos en la técnica a partir de las descripciones anteriores. Dichas modificaciones pretenden estar incluidas en el alcance de las reivindicaciones anejas.

Claims (35)

1. Una composición farmacéutica que comprende un inhibidor del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), y un factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), en un vehículo farmacéuticamente aceptable.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el inhibidor de EGFR es una molécula orgánica pequeña, un anticuerpo, o un fragmento de anticuerpo que se une específicamente al EGFR.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el inhibidor de EGFR se selecciona del grupo que consiste en inhibidores de EGFR de quinazolina, inhibidores de EGFR de pirido-pirimidina, inhibidores de EGFR de pirimido-pirimidina, inhibidores de EGFR de pirrolo-pirimidina, inhibidores de EGFR de pirazolo-pirimidina, inhibidores de EGFR de fenilamina-pirimidina, inhibidores de EGFR de oxindol, inhibidores de EGFR de indolocarbazol, inhibidores de EGFR de ftalazenina, inhibidores de EGFR de isoflavona, inhibidores de EGFR de quinalona, e inhibidores de EGFR de tirfostina.

4. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el inhibidor de EGFR se selecciona del grupo que consiste en [6,7-bis (2-metoxietoxi)-quinozolin-4-il]-(3-etinilfenil)amina, ZD1839 (Iressa) y PC183805.

5. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el inhibidor de EGFR es un anticuerpo monoclonal o un fragmento de anticuerpo.

6. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el inhibidor de EGFR es el anticuerpo monoclonal Mab E7.6.3, o el Mab C255, o un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que tiene su especificidad de unión.

7. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el KGF es KGF-1 humano, o uno de sus análogos, que tiene al menos actividad parcial de KGF-1 humano.

8. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el KGF es KGF-2 humano, o uno de sus análogos, que tiene al menos actividad parcial de KGF-2 humano.

9. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el inhibidor de EGFR es [6,7-bis (2-metoxietoxi)-quinolin-4-il]-(3-etilfenil)amina.

10. La utilización de KGF para la producción de un medicamento, para tratar la toxicidad epitelial que resulta de la administración conjunta de un inhibidor de EGFR.

11. La utilización de la reivindicación 10, en la que el paciente es un ser humano que está siendo tratado por cáncer.

12. La utilización de la reivindicación 10, en la que la toxicidad epitelial es una toxicidad de la piel.

13. La utilización de la reivindicación 12, en la que la toxicidad de la piel se manifiesta como una erupción.

14. La utilización de la reivindicación 10, en la que la toxicidad epitelial se manifiesta como adelgazamiento de la córnea.

15. La utilización de la reivindicación 10, en la que la toxicidad epitelial se manifiesta como diarrea.

16. La utilización de la reivindicación 10, en la que el inhibidor de EGFR y el KGF se administran conjuntamente a un paciente en la misma formulación.

17. La utilización de la reivindicación 10, en la que el inhibidor de EGFR y el KGF se administran conjuntamente a un paciente en diferentes formulaciones.

18. La utilización de la reivindicación 10, en la que el inhibidor de EGFR y el KGF se administran conjuntamente a un paciente por la misma vía.

19. La utilización de la reivindicación 10, en la que el inhibidor de EGFR y el KGF se administran conjuntamente a un paciente por vías diferentes.

20. La utilización de la reivindicación 10, en la que el inhibidor de EGFR se administra al paciente mediante administración parenteral u oral.

21. La utilización de la reivindicación 10, en la que el KGF se administra al paciente mediante administración parenteral o tópica.

22. La utilización de la reivindicación 10, en la que el inhibidor de EGFR es una molécula orgánica pequeña, un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo que se une específicamente al EGFR.

23. La utilización de la reivindicación 10, en la que el inhibidor de EGFR se selecciona del grupo que consiste en inhibidores de EGFR de quinazolina, inhibidores de EGFR de pirido-pirimidina, inhibidores de EGFR de pirimido-pirimidina, inhibidores de EGFR de pirrolo-pirimidina, inhibidores de EGFR de pirazolo-pirimidina, inhibidores de EGFR de fenilamina-pirimidina, inhibidores de EGFR de oxindol, inhibidores de EGFR de indolocarbazol, inhibidores de EGFR de ftalazenina, inhibidores de EGFR de isoflavona, inhibidores de EGFR de quinalona, e inhibidores de EGFR de tirfostina.

24. La utilización de la reivindicación 10, en la que el inhibidor de EGFR se selecciona del grupo que consiste en [6,7-bis(2-metoxietoxi)-4-quinozolin-4-il]- (3-etinilfenil)amina, ZD1839 (Iressa) y PC183805.

25. La utilización de la reivindicación 10, en la que el inhibidor de EGFR es un anticuerpo monoclonal o un fragmento de anticuerpo.

26. La utilización de la reivindicación 10, en la que el KGF es KGF-1 humano, o uno de sus análogos, que tiene al menos actividad parcial de KGF-1 humano.

27. La utilización de la reivindicación 10, en la el KGF es KGF-2 humano, o uno de sus análogos, que tiene al menos actividad parcial de KGF-2 humano.

28. La utilización de la reivindicación 10, en la que el inhibidor de EGFR es [6,7-bis (2-metoxietoxi)-quinazolin-4-il]-(3-etinilfenil)amina.

29. Un método de preparar una composición farmacéutica útil para tratar la toxicidad epitelial que resulta de la administración a un paciente de un inhibidor de EGFR, que comprende combinar un KGF con el inhibidor de EGFR.

30. El método de la reivindicación 29, que comprende además combinar un vehículo farmacéuticamente aceptable con el KGF y el inhibidor de EGFR.

31. El método de la reivindicación 29, en el que el inhibidor de EGFR es [6,7-bis (2-metoxietoxi)-quinazolin-4-il]-(3-etinilfenil)amina.

32. Un kit que comprende un envase que contiene un inhibidor de EGFR y KGF.

33. El kit de la reivindicación 32, que además contiene un diluyente estéril.

34. El kit de la reivindicación 32, que además contiene un prospecto insertado en el envase, que contiene las instrucciones impresas.

35. El kit de la reivindicación 32, en el que el inhibidor de EGFR es [6,7-bis (2-metoxietoxi)-quinazolin-4-il]-(3-etinilfenil)amina.