TWI281402B - Combinations and kits containing keratinocyte growth factor and epidermal growth factor inhibitor for use in epithelial toxicity - Google Patents

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1281402 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（1 ) 發明領域： 本發明係關於治療上皮毒性之組成物及療法，該上皮 毒性係由於使用上皮生長因子受器（E G F R )抑制劑來 治療癌症患者所造成的。更詳言之，本發明係關於一種組 合有一種上皮生長因子受器（E G F R )抑制劑及角質細 胞生長因子（K G F )之藥學組成物，以及關於一種對投 予E G F R抑制劑之癌症患者治療上皮毒性之療法，其包 含共投予K G F給該患者。 發明背景： 在胸部、肺部、頭部及頸部的癌症經常伴隨有上皮生 長因子受器（EGFR)或其配體TGFa過度表現之現 象，且其被認爲是造成此等腫瘤惡性生長的原因。發展出 能抑制E G F R激酶活性之化合物以及能阻斷E G F R活 化之抗體以作爲抗腫瘤劑爲正被嚴密硏究的領域。 透過受器E G F R來作用之上皮生長因子（E G F ) 爲一種有絲分裂原且爲正常人類角質細胞及其它上皮細胞 之存活因子（Rheinwald，J · G · and Green, Η . , 1 977, Nature 265, 42 1; Rodeck, U . et al ·，1 997，J · Cell Science 110，113 )。所以，有可能在使用E G F R抑制劑 作化學治療時會干擾皮膚及其它上皮組織如角膜及消化（ G I )道內襯的正常更新。對於增殖組織如皮膚及G I道 的毒性常爲細胞毒性劑需限制劑量之負作用。除了其它症 狀以外，此等毒性可能會表現在出現皮疹、腹瀉、角膜變 ^紙^尺度適用中.國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公着) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 、tr 線 1281402 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（2 ) 薄、毛髮萎縮或落髮、毛囊發育異常、退化、壞死或發炎 、毛囊間上皮增生、或受傷後無法癒合或癒合緩慢之現象 〇 使用E G F R抑制劑，〔6 ，7 —二（2 —甲氧基— 乙氧基）—卩奎卩坐啉—4—基〕一（3 —乙炔苯基）胺，來 治療一般的角質細胞及E G F R過度表現型腫瘤會導致細 胞週期受阻，其可由停留在細胞週期之G 1期之細胞累積 現象所顯示（Moyer et al ·，1 997，Cancer Res . 57:4838- 4848 )。細胞從G 1期推進到S期需要成視網膜細胞腫瘤 蛋白質（retinoblastoma protein，pRB )之磷酿化作用，該蛋 白質係由循環素（cyclin ) -依賴型激酶所調制。我們已 觀察到C P - 3 5 8 ’ 7 7 4會造成過—憐酸化成視網膜 .細胞腫瘤蛋白質（P P R B )的減少及造成循環素依賴型 激酶之抑制劑P 2 7 k 1 p 1 / w a f 1的累積，此與其減少S -期細胞比率之能力相符一致。 該角質細胞生長因子（K G F )族係由K G F — 1及 KGF — 2所組成，其分別以FGF — 7及FGF - 1 〇 爲人所知，此名稱反應其與成纖維細胞生長因子超族之蛋 白質的同質性。有多件不同專利文獻描述K G F s及其用 途，包括於1 9 9 4年1 0月1 3日公告之P C T國際專 利公告案W〇 9 4 /23032; 1998年2月19 曰公告之PCT國際專利公告案W〇 98/16243 ;1 9.9 8年4月2 3日公告之P C T國際專利公告案 W098/16642;及1998年6月11曰公告 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）~~ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1281402 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（3 ) 之P C T國際專利公告案W〇 9 8 / 2 4 8 1 3。 在F G F s中該K G F s很特殊，因爲它們僅作用在 上皮細胞上。兩種K G F s係由間質細胞表現且係以當作 上皮細胞增殖的paracrine調節劑來作用（Finch et al ·， 19.89, Science 245:752; Igarishi et al ., 1 998, J . Biol . Chem · 27 3:13230 ) 。KGF — 1 及 KGF — 2 有 5 7% 同質性，且兩者均以極高親和性來結和到FGFRiiib上 (Igarishi et al ·, 1 998，同上；Miceli，R .，et al · 1 999，J • Pharm · Exp · Ther · 290:464 )。由於 K G F s 似乎 爲皮膚的paracnne因子，所以我們硏究是否可用K G F路 徑來作爲組織內有絲分裂訊號傳遞的另一途徑，藉此有效 地減輕在投予E G F R抑制劑時所造成的上皮毒性。 發明目的及槪述： 本發明係針對一種藥學組成物，該組成物可用來治療 在投予患者上皮生長因子受器（E G F R )抑制劑時伴隨 之上皮毒性作用，該藥學組成物於藥學可接受載劑中含有 一種E G F R抑制劑及一種角質細胞生長因子（K G F ) 。在典型的制療計劃中，該E G F R抑制劑係作爲抗腫瘤 劑來投予給有需要的患者。於一較佳具體例中，該 E G F R抑制劑爲一種低分子量抑制劑或抗體，其能專一 地結合到該E G F R上且阻斷其活化作用。 本發明進一步地係針對一種治療上皮毒性的方法，該 毒性係由於投予患者E G F R抑制劑所造成的，該方法包 ί —ί---!-----裝-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X297公釐） 1281402 A7 B7 五、發明説明（4 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 含對該患者共投予治療有效劑量的K G F及該E G F R抑 制劑。於一較佳具體例中，該患者爲正在接受癌症治療的 人類。於另一較佳具體例中，該上皮毒性係表現在皮膚毒 性上。 .本發明進一步地係針對一種製備一種如下藥學組成物 的製法，該藥學組成物可用來治療投予患者E G F R抑制 劑時所造成的上皮毒性，該製法包含將一種E G F R抑制 劑與一種角質細胞生長因子（K G R )組合在一起。於一 較佳具體例中，該製法包含將一種藥學可接受載劑與該 E G F R抑制劑及K G R組合在一起。 本發明進一步提供一種套組，其包括含有E G F R抑 制劑之第一容器及含有K G R之第二容器。在任一容器中 亦可含有一藥學可接受載劑。該套組可進一步包括含有一 無菌稀釋劑之第三容器。該套組可進一步包括含有印刷說 明書之包裝品插頁，該說明書指示利用組合治療來作爲治 療投予患者E G F R抑制劑時所造成的上皮毒性之療法。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 發明詳細說明： 於下文中實施例所顯示的數據顯示在共投予K G F及 E G F R抑制劑時可有效地防止人類上皮角質細胞出現在 單獨使用E G F R抑制劑常造成之細胞週期受阻的現象。 所以，K G F可有利地用來保護正常的上皮細胞，使其免 於受到在單獨投予患者E G F R抑制劑時所造成的毒害。 據此，本發明提供一種藥學組成物，其含有E G F R抑制 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) M規格（210X297公釐 [281402 經濟·部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（5 ) 劑及K G F於藥學可接受載劑中。 在此使用時，術語” E G F R抑制劑”係指任何此技術中 目前所習知或在未來所確定之E G F R抑制劑，且其包括 所有在投予患者時可抑制患者之E G F R活化相關之生物 活性的任何化學實體，其包括E G F R在結合到其天然配 體時所造成之任何一種下游的生物效果。此等E G F R抑 制劑可包括任何一種可阻斷E G F R活化或E G F活化之 任何下游生物效果之化學劑，其與治療患者之癌症有關。 此等抑制劑可藉著直接結合到受器之細胞內區域結構及抑 制其激酶活性來作用。另外地，此等抑制劑可藉著佔據配 體結合位或該E G F R受器之配體結合位的一部份或該受 器之一部份來作用，藉此使得該受器無法接觸到其天然配 體來使得其天然的生物活性被抑制掉或減低。E G F R抑 制劑包括但不限於低分子量抑制劑，抗體或抗體片斷，反 意義結構物及核糖酶。於較佳具體例中，該E G F R抑制 劑爲一種會專一性地結合到該人類E G F R上之有機小分 子或抗體。 根據本發明可使用之E G F R抑制劑包括但不限於在 此技術中被歸類爲D奎唑啉類E G F R抑制劑，吡啶基一喷 啶類E G F R抑制劑，嘧啶基一嘧啶類E G F R抑制劑， 吡咯基一嘧啶類E G F R抑制劑，吡唑基-嘧啶類 E G F R抑制劑，苯胺基一嘧啶類e g F R抑制劑，羥口引 哚類E. G F R抑制劑，吲哚咔唑類E G F R抑制劑，肽哄 類E G F R抑制劑，異黃酮類e G f R抑制劑，喹諾酮類 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

1281402 A7 B7 經濟·部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（6 ) E G F R，及 Tyrphostin EGFR 抑制劑。 可用來施行本發明之低分子量E G F R抑制劑之非限 制性實例包括任何述於如下專利文獻之E G F R抑制劑， 及該E G F R抑制劑之所有藥學可接受鹽類及溶劑合物： 於.1 9 9 2年十二月3 0日公開之歐洲專利申請案E P第 5 2 0 7 2 2號；於1 9 9 3年十月2 0曰公開之歐洲專 利申請案E P第5 6 6 2 2 6號；於1 9 9 6年十月3 1 日公告之PCT國際專利公告案W0 96/33980 號；於1 9 9 8年五月5日核准之美國專利案第 5747498號；於1996年十月3日公告之PC 丁 國際專利公告案W〇 96/30347號；於1997 年八月6日公開之歐洲專利申請案E P 7 8 7 7 7 2號 ;於1 9 9 7年八月2 1日公告之P c τ國際專利公告案 W 0 97/30034號；於1997年8月21日公 告之P C Τ國際專利公告案W〇 9 7 / 3 0 0 4 4號； 於1 9 9 7年1 0月2 3日公告之P CT國際專利公告案 W 0 97/38994 號；於 1997 年 12 月 31 日 公告之PCT國際專利公告案W〇 97/49 688號 ;1 9 9 8年4月2 2日工開之歐洲專利申請案 EP 8370 6 3號；於1998年1月22曰公告之 PCT國際專利公告案W〇 98/02434號；於 1 9 9 7年1 0月2 3日公告之P CT國際專利公告案 W 0 97/38983號；於1995年了月27曰公告 之P C T國際專利公告案W 0 9 5 / 1 9 7 7 4號；於 I 1、--- 1 I an —11 n (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -訂 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -9 - 1281402 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（7 ) 1 9 9 5年7月27日公告之PCT國際專利公告案 W 0 95/1997 0號；於1997年4月17曰公 告之PCT國際專利公告案WO 9 7/1 377 1號；於 1 9 9 8年1月2 2日公告之PC T國際專利公告案 W.0 98/02437 號；於 1998 年 1 月 22 日公 告之P C T國際專利公告案WO 9 8/0 2 4 3 8號； 於1 9 9 7年9月1 2日公告之P CT國際專利公告案 W 0 97/32881號；於1998年1月29曰工開 之德國專利申請案D E 1 9 6 2 9 6 5 2號；於 1 9 9 8年8月6日公告之PCT國際專利公告案 W 0 98/33798號；於1997年9月12曰公告 之P CT國際專利公告案W09 7/3 2 8 8 0號；於 1 9 9 7年9月1 2日公告之P CT國際專利公告案 W 0 97/32880 號·，於 1995 年 11 月 15 日 公開之歐洲專利申請案E P 6 8 2 0 2 7號；於 1 9 9 7年1月2 3日公告之P CT國際專利公告案 W 0 97/02266號；於1997年7月31曰公 告之P CT國際專利公告案W 0 9 7/2 7 1 9 9號；於 1 9 9 8年2月2 6日公告之PCT國際專利公告案 W 0 98/0 7 726號；於1997年9月25日公 告之P C T國際專利公告案W〇 9 7 / 3 4 8 9 5號； 於1 9 9 6年1 0月1 0日公告之PCT國際專利公告案 W〇9 6 / 3 1 5 1〇號；於1 9 9 8年4月9曰公告之 P C T國際專利公告案W〇9 8 / 1 4 4 4 9號；於 本紙張^尺度適用中國國家標準(。奶)八4規格（210\297公釐） _ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

1281402 A7 B7 經濟/部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（8 ) 1 9 9 8年4月9日公告之P CT國際專利公告案 W 0 98/14450號；於1998年4月9曰公告之 P C T國際專利公告案W〇9 8 / 1 4 4 5 1號；於 1 9 9 5年4月1 3日公告之P C T國際專利公告案 W .0 95/09847號；於1997年5月29日公告 之P CT國際專利公告案WO 9 7/1 9 0 6 5號；於 1 9 9 8年4月3 0日公告之P CT國際專利公告案 W098/17762號；於1997年7月22日核准 之美國專利第65650415號；於1997年8月 12日核准之美國專利第5 6 5 6 6 4 3號；於年月日公 告之P C T國際專利公告案W〇號；於1 9 9 9年7月 15日公告之PCT國際專利公告案W099/ 3 5 1 46號；於1 9 99年7月1 5日公告之PCT國 際專利公告案WO 9 9/3 5 1 3 2號；於1 9 9 9年2 月1 8日公告之P C, T國際專利公告案WO 9 9/ 07701號；於1992年11月26日公告之PCT 國際專利公告案W〇9 2 / 2 0 6 4 2號。低分子量 E G F R抑制劑之額外實例可包括述於Traxler, P ·，1 998, Exp · Opin . Ther . Patents 8 ( 1 2): 1 5 99- 1 625 所述之任一 種E G F R抑制劑。 以抗體爲主之E G F R抑制劑可包括任何可部份地或 完全地阻斷E G F R天然配體造成的E G F R活化作用之 抗- E G F R抗體或抗體片段。以抗體爲主之E G F R抑 制劑之非限制性實例包括述於Modjtahedi，Η ·，et al ·， (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝· 訂 線. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX297公釐） 1281402 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（9 ) 1 993，Br · J · Cancer 67 :247 -25 3 ;Teramoto, T . , et al ., 1996，Cancer 77:63 9- 645; Goldstein et al ·，1995，Clin . Cancer Res · 1:1311-1318; Huang, S . M ·，et al .，1 999, Cancer Res 15:59(8):1935-40;及 Yang, X · ， et al ·， 1 999, Cancer Res . 59:1 23 6- 1 243 之抑制劑。所以，該 E G F,R抑制劑可爲單株抗體Mab E7 · 6 · 3(Yang，1999 出處同上），或Mab C225 (ATCC寄存編號第 h b - 8 5 0 8號），或具有其結合之專一性之抗體或抗 體片段。 以抗體爲主之額外的E G F R抑制劑可根據習知方法 藉著對選定的宿主動物如豬、牛、馬、兔、山羊、綿羊及 小鼠等投予適當的抗原或抗原決定基來產生。可使用此技 術已知之不同佐劑來促進抗體的製造。 雖然用來施行本發明之抗體可爲多株抗體，但以單株 抗體爲佳。抗E G F R之單株抗體可藉著以培養之連續細 胞株來製造抗體分子的任何技術來製備及分離。製造及分 離的技術包括但不限於原本由Kohlei* and Milstein(Natui:e， 1 975，256:495-497)說明之融合瘤技術；人類B-細胞融合瘤技 術（Kosbor et al ·，1983, Immunology Today 4:72; Cote et al .,1 983, Proc . Nati · Acad · Sci · USA 80:2026-2030);及 EBV-融合瘤技術（Cole et al，1 9 85，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R . Liss，Inc ·，pp · 77-96 )。 另外，說明單鏈抗體之製造的技術（見例如美國專利 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) ^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝.

、1T 線 1281402 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（10) 第4 9 4 6 7 7 8號）可被用來製造抗EGFR之單鏈抗 體。用來施行本發明之抗體爲主之抑制劑亦可包括抗-EGFR抗體片段，該等片段包括但不限於F (ab’）2 片段及F a b片段，該F ( a b ’）可以係藉著將一完整的 抗體分子以胃蛋白酶消化來製得而該F a b片段可可藉著 還原該F (ab’）片段的二硫化物鍵橋來生成。另外，可 建構F a b及/或s c R v表現文庫（參見例如Huse et al .,1 989，Science 246:1 275- 1 28 1 )來迅速地鑑定具有所需之 抗E G F R專一性之諸片段。 製造及分離單株抗體及抗體片段之技術爲此技術所習 知，且除了在其它地方有所說明外還述於Harlow and Lane, 1 98 8, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory,及於 J · W · Goding, 1 986, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, London 〇 人 型化抗-EGFR抗體及抗體片段亦可根據習知技術來製備，例 如述於 Vaughn，T · J . et al ·，1 998，Nature Biotech · 1 6:535-539及在此引用之參考資料，且此等抗體及其片段亦 可用來實施本發明。 另外用於本發明之E G F R抑制劑亦可本於反意義寡 核苷酸建構物來製造。反意義寡核苷酸，包括反意義 R N A分子及反意義D N A分子，可藉著結合到 EGFR mRNA上來直接阻斷其mRNA之轉譯，且 藉此防止蛋白質之轉譯或增加m R Ν' A之分解。例如可藉 著習知的磷二酯技術來合成至少約1 5個鹼基長且與編碼 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~ ' (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1281402 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（n) E G F R之m R N A轉錄序列的獨特區域互補之反意義寡 核苷酸，且藉著靜脈注射或輸注來投予。 核糖酶亦可用來作爲本發明之E G F R抑制劑。核糖 酶爲可催化R N A特異性切割之酵素性R N A分子。核糖 酶作用的機制涉及該核糖酶分子對互補目標R N A之序列 特異雜交作用，及後續的核內分解性切割作用。所以在本 發明範疇內，能特異且有效催化E G F R m R N A序列 之核內分解切割作用之工程化之鎚頭要區（engineered hammerhead motif)核糖酶分子十分有用。在任何可能的 R N A目標物中特異性的核糖酶切割部位最初係藉著掃瞄 該目標分子來鑑定出該等核糖酶切割部位，其典型地包括 後續序列、G U A、G U U及G U C。一旦被鑑定出來， 可以先評估約1 5到2 0個核苷酸長的短R N A序列所決 定的結構特性，例如其所決定之次級結構是否會使得該寡 核苷酸序列不適用於此，該等約1 5到2 0個核苷酸長的 短R N A序列即相當於該等目標基因中含有切割部位之區 域。候選目標物的適用性亦可藉著使用例如核糖酶保護檢 定來測試該等目標物與互補寡核苷酸雜交的親近性（ accessibility )來評斷。 可用來作爲E G F R抑制劑的反意義寡核苷酸及核糖 酶兩者均可藉已知方法來製備。此等方法包括化學合成的 技術，例如固相磷醯胺酸化學合成法。另外，反意義 R N A分子可藉著在活體外或活體內轉錄編碼該R n A分 子之D N A序列來產生。此等D N A序列可被倂入多種載 本紙張尺度適用I國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~ - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝-

、1T 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -15- 1281402 A7 B7 五、發明説明（12) 體中，該等載體合倂有適當的RNA聚合酶啓動子如T 7 或S P 6聚合酶啓動子。對於本發明寡核苷酸可以導入不 同的修正以作爲增加細胞內安定性及半生期的方式。適當 的修正包括但不限於在該分子的5 ’及/或3 ’端加入核糖核 苷酸或去氧核糖核苷酸的側翼序列，或在該寡核苷酸骨幹 中使用硫代磷酸或2 ’ - -甲基鍵結而非磷二酯鍵結。 在此使用時，"角質細胞生長因子”，或” K G F ”係指 KGF — 1及KGF — 2。KGF - 1的核苷酸及胺基酸 序列係述於 Finch et al ·，1 989，Science 245:752-755 。 KGF-2 之胺基酸序歹(I係述於 Igadshi et al ·，1 998, J · Biol .Chem . 273:13230 。 天然K G F可從天然的人類來源中分離出來或如此技 術所習知般藉著重組D N A技術來製造。人類重組K G F 一 1由大腸桿菌表現出來時爲1 9 kD a之蛋白質，且可 商業購得（Sigma Chemical Co ·，St · Louis, MO )。被 報導具有高出天然K G F更好安定性的K G F類似物則述 於於1 9 9 6年四月2 5日公告之PCT國際專利公告案 W 0 96/1 195 1號，且此等KGF類似物可用來 作爲實施本發明的K G F成份。另外，其整個K G F多肽 的任何片段或其類似物，只要該等片段或類似物保留全部 或甚至部份K G F活性，都可用來實施本發明。另外，揭 示於在1 9 9 8年二月1 9日公告的P C T國際公告案 W 0 98/06844號中之KGF — 2 ，或任何保有全 部或部份K G F -2活性之類似物或肽片段’都可用來作 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1281402 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（13) 爲實施本發明之K G F成份。除非另有說明，所有可用來 實施本發明之其它型式的K G F及K G F類似物在此統稱 爲 ” K G F ”。 本發明進一步地提供一種治療上皮毒性的方法，該毒 性係由於投予患者E G F R抑制劑所造成的，該方法包含 對該患者共投予治療有效劑量的K G F及該E G F R抑制 劑。 除非另有說明，否則在此使用時術語”治療”意指逆轉、 緩解、抑制該上皮毒性的病程，或部份地或完全地防止上 皮毒性，或與該上皮毒性有關的一或多種病況或症狀，該 上皮毒性係由於對患者投予一劑量（單獨一劑或細分成數 劑）或一系列劑量（例如在一療程中）之E G F R抑制劑 來治療癌症所引起。除非另有說明，否則術語”治療”係指如 前文剛定義之”治療”意義來進行治療的行爲。 在此使用時，術語”上皮毒性”係指上皮層的異常或功能 障礙，其在以E G F R抑制劑投藥來治療癌症的患者身上 可以以如下一或多種症狀或病況顯現出來，該等症狀或病 況可爲選自皮疹、皮疹、腹瀉、角膜變薄、毛髮萎縮或落 髮、毛囊發育異常、退化、壞死或發炎、毛囊間上皮增生 、或受傷後無法癒合或癒合緩慢之現象。 於一較佳具體例中，該上皮毒性係以皮膚毒性如痤瘡 樣或巨丘疹狀皮疹來表現。 在此使用時，術語”患者”較佳地係指基於任何目的而需 要用E G F R抑制劑來治療的人類，且更佳地爲需用用此 ^氏張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）~:16猶 ~~ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1281402 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ____B7_ 五、發明説明（14) 治療來治療癌症之人類。然而，該術語”患者”亦可指非人類 之動物，較佳地爲其它生物中的哺乳類動物如狗、貓、馬 、牛、豬、羊，及非人類之靈長類，此等需要以EGFR 抑制劑來治療之動物。 於一較佳具體例中，該患者爲需要治療癌症的患者。 該癌症較佳地爲任何可部份地或完全地藉投予E G F R抑 制劑來治療的癌症。該癌症可選自但不限於肺癌、骨癌、 胰臟癌、皮膚癌、頭部或頸部的癌症、皮膚的或眼內的黑 素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區域的癌症、胃癌 、結腸癌、乳癌、子宮癌、輸卵管惡性腫瘤、子宮內膜惡 性腫瘤、子宮頸惡性腫瘤、陰道惡性腫瘤、外陰惡性腫瘤 、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌症、甲狀腺癌、副甲狀 腺癌、腎上腺癌、軟組織的肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列 腺癌、膀胱癌、腎臟或輸尿管癌症、腎細胞惡性腫瘤、腎 盂惡性腫瘤、中樞神經系統（C N S )瘤、脊髓軸部腫瘤 、腦幹神經膠質瘤、腦下腺腺瘤、或一或多種前述癌症的 組合。 於該方法的另一具體例中，該患者爲需要治療良性細 胞增生疾病之人類，該等疾病包括但不限於牛皮癬、良性 前列腺肥大或再狹窄。 至於本發明的目的，”共投予，，K G F及E G F R抑制劑 (於下文中此兩種成份被稱爲”兩種活性劑”）係指兩種活性 劑，任何投予方式，不論是個別的或共同的投予方式，其中 該兩種活性劑係屬於設計來獲得該組合治療的保護作用之 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝·

、1T 绦 本紙張尺度適财國國家標準（CNS ) M規格（21GX297公楚y -17- 1281402 A7B7 經濟部智M財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（15) 適當的藥品服用法的一部份來投予。所以，此兩種活性劑 可爲同一藥學組成物的一部份或以個別藥學組成物的形式 來投予。只要患者可以獲得K G F對上皮毒性的保護效果 ，該上皮毒性係在單獨投予E G F R抑制劑時可能引起的 作用，K G F可在投予該E G F R抑制劑之前、同時或之 後、或其某些組合下來投予。例如在一個標準療程期間， 該E G F R抑制劑係重複地每隔一段時間來投予時， K G F可在每次投予該E G F R抑制劑之前、同時或之後 、或其某些組合、或以相對於該E G F R抑制劑治療不同 的間隔時間來投藥，或在該E G F R抑制劑之療程之前、 療程中的任何時間、或療程之後單獨投予一劑，只要該患 者可以獲得K G F對上皮毒性的保護效果，該上皮毒性係 在單獨投予E G F R抑制劑時可能引起的作用。 一般地該E G F R抑制劑係於一藥品服用法中被投予 該患者，該藥品服用法可提供此技術所習知且如前文所引 用之文獻所揭示般對該患者最有效的癌症治療作用（從治 療效能及安全性的觀點來看）。在進行本發明之療法時’ 該E G F R抑制劑可用此技術已知的任何有效方式來投予 ，例如藉口服、局部、靜脈、腹腔內、肌肉、動脈內、皮 下、鼻內、眼內、陰道、直腸或真皮內途徑來投予’其視 治療之癌症的型式、所使用E G F R抑制劑的類型（如小 分子、抗體或反意義結構物），及主治醫師基於例如公開 之臨床硏究的結果所作的醫學判斷而定。 所投予之E G F R抑制劑的份量及E G F R抑制劑的 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝·

、1T 漆 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ 18 - 1281402 A7 B7 五、發明説明（16) 投樂時間將視類型（物種、性別、年齡、體重等）及治療 患者之情況、治療疾病或病況的嚴重性、及投藥途徑來決 定。例如，小分子E G F R抑制劑可以單獨一劑或細分數 劑，或藉連續輸注來每天或每週以〇 · 〇 1到1 〇毫克/ 公斤體重之劑量範圍來投藥。抗體型的E G F R抑制劑或 反意義或核糖酶結構物可以單獨一劑或細分數劑，或藉連 續輸注來每天或每週以〇 · 1到1 〇 〇毫克/公斤體重之 劑量範圍來投藥。於某些情況下，比前述範圍之下限更低 的劑量可能更爲適合，不過於其它案例中可能可以採用更 高劑量而不會造成任何有害的副作用，只要此等更高的劑 量係先被細分成小劑量的數劑來整日投予即可。 在此使用時，” K G F之有效治療量”係指可逆轉、緩解 、抑制該上皮毒性的病程，或部份地或完全地防止上皮毒 性，或與該上皮毒性有關的一或多種病況或症狀之K G F 的份量，該上皮毒性係由於對患者投予一標準藥量或一系 列（例如在一標準療程中）之E G F R抑制劑藥劑來治療 癌症或其它疾病、異常或病況所引起。該治療有效量 K G F可以單獨一劑、以細分數劑或以連續輸注來投予。 剛開始時開藥醫師可藉著例如公開的臨床實驗的結果 ，及在含有該兩種活性劑的套組中的包裝品說明插頁所述 之建議劑量來決定” K G F之治療有效劑量”。K G F的劑量 可由該開藥醫師依特定患者對K G F治療的反應性來調高 或調低。該開藥醫師最好要監督該共投予治療的反應，特 別是其對於預防或緩解單獨投予該E G F R抑制劑時伴隨 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 11一---------裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 -染 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1281402 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（17) 之上皮毒性的反應性。於一較佳具體例中，該開藥醫師將 監督該患者皮膚的情況、且特別是預防或改善投予該 E G F R抑制劑時所伴隨之皮疹的情形。於另一個較佳的 具體例中’該開藥醫師藉著眼科檢查來監督患者對於在僅 投予該E G F R抑制劑時所造成之角膜變薄的情形的改善 作用。於另一較佳具體例中，該開藥醫師可監督患者對於 在僅投予該E G F R抑制劑時所造成的腹瀉現象的改善作 一般地K G F將依一藥品服用法來投予該患者，該藥 品服用法能提供對於該E G F R抑制劑引起之上皮毒性， 或與該上皮毒性有關之一或多種病況或症狀最有效及安全 的治療。該K G F可採此技術已知的習知方法來投予，例 如依開藥醫師之決定藉著局部、靜脈、腹腔內、肌肉內、 動脈內、皮下、鼻內、眼內、陰道、直腸或真皮內途徑來 投予。 所投予之K G F的份量及K G F的投藥時間將視類型 (物種、性別、年齢、體重等）及治療患者之情況、 E G F R抑制劑所引起之上皮毒性的嚴重性或潛在的嚴重 性、及投藥途徑、及開藥醫生基於已公開之臨床硏究之結 果作判斷而決定。例如，K G F可每天或有時頻率較低地 例如每週1 — 4次採單獨一劑或細分成數劑以0 · 〇 1到 1 0毫克/公斤體重之劑量範圍非經腸地投予患者。同樣 地，例如，K G F可用含有約〇 · 0 0 1 % ( W / V )到 約1 · 0 % ( W / V )份量的配方每天使用一或多次來投 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 、11 绦 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ 2〇 _ 1281402 A7 B7 五、發明説明（18) 予患者。於某些情況下，比前述範圍之下限更低的劑量可 能更爲適合’不過於其它案例中可能可以採用更高劑量而 不會造成任何有害的副作用，只要此等更高的劑量係先被 細分成小劑量的數劑來整日投予即可。於某些情況下，用 K G F來單毒治療一次或連續治療數次便足以治療使用 E G F R抑制劑所造成的上皮毒性；不過在其它的情形下 ，可能要持續地治療直到參與治療的醫師根據一或多種上 皮毒性的標準指標，例如藉著狹縫燈照測試來測得之角膜 上皮層厚度，來觀察到病況有足夠的改善爲止。 本發明進一步提供一種製備藥學組成物的方法，該藥 學組成物可用來治療對患者投予E G F R抑制劑時所造成 的上皮毒性，該方法包含將K G F與E G F R抑制劑組合 在一起。於一較佳具體例中，該方法進一步包含將藥學可 接受載劑與該E G F R抑制劑及K G F組合在一起。 本發明進一步提供將E G F R抑制劑與K G F組合以 用來製備一種藥劑來治療患者癌症同時治療在單獨投予 E G F R抑制劑時所造成的上皮毒性之用途。本發明進一 步提供共投予E G F R抑制劑及K G F以提供一種具有較 小上皮毒性之抗癌治療的用途。 該E G F R抑制劑及K G F可個別地或共同地以相同 或不同途徑，且以極多種不同的劑型來投予。例如，該 E G F R抑制劑較佳地係經口或非經腸投藥，兒K G F較 佳地細非經腸或局部投藥。 該E G F R抑制劑可與不同的藥學可接受惰性載劑， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） |丨——.---II (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1281402 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（19) 以錠劑、膠囊、糖錠、片劑、硬糖錠、散劑、噴劑、乳膏 劑、油膏劑、栓劑、膠凍劑、凝膠劑、糊劑、洗劑、油膏 劑、酏劑、糖漿等。此等劑型的投藥可用單劑或複劑來進 行。載劑包括固體稀釋劑或塡料，無菌水性基質及不同的 無毒有機溶劑等。口服藥學組成物可適當地增甜及/或加 味。 K G F可與不同藥學可接受載劑以噴劑、乳膏劑、軟 膏劑、栓劑、膠凍劑、凝膠劑、糊劑、洗劑、油膏劑等形 式來投藥。此等劑型的投藥可用單劑或複劑來進行。載劑 包括固體稀釋劑或塡料，無菌水性基質及不同的無毒有機 溶劑等。 該E G F R抑制劑及K G F可與不同藥學可接受載劑 組合成噴劑、乳膏劑、軟膏劑、栓劑、膠凍劑、凝膠劑、 糊劑、洗劑、油膏劑等之形式。此等劑型的投藥可用單劑 或複劑來進行。載劑包括固體稀釋劑或塡料，無菌水性基 質及不同的無毒有機溶劑等。 所有含K G F配方應加以選擇以避免變性及喪失 K G F多肽的生物活性。 製備含E G F R抑制劑之藥學組成物的方法爲此技術 所習知.，且已述於多件前文引用之文獻。製備含K G F之 藥學組成物的方法爲此技術所習知，且已述於多件前文引 用之文獻。在檢視本發明之教示時，根據前文引用之文獻 及其它已知的參考資料如 Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA · ，18 th 本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) A4規格（21 ox297公釐) 22 - " (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1281402 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（20) edithin(1990 )來看，製備含E G厂尺抑制劑及K G F兩者 之藥學組成物的方法係明顯的。 用在口服投予E G F R抑制劑時’含有一或兩種活性 劑之錠劑可組合有任何不同的賦形劑如微晶纖維素、檸檬 酸鈉、碳酸鈣、磷酸二鈣及甘油’以及不同的崩散劑如澱 粉（且較佳地玉米、馬鈴薯或樹薯澱粉）、藻酸及特殊的 複合矽酸鹽，以及造粒結合劑像聚乙烯吡咯啶酮、蔗糖、 明膠及阿拉伯膠。此物，潤滑劑如硬脂酸鎂、硫酸月桂酯 鈉、及滑石極常用自造錠之目的。類似類型的固體組成物 亦可被用來作爲明膠膠囊的塡料；關於此點較佳的材料亦 包括乳糖或牛奶糖以及高分子量的聚以二醇。當口服投藥 需要水性懸浮液或酏劑時，該E G F R抑制劑亦可組合不 同的增甜劑或矯味劑，色料或染料，及若有需要，有乳化 劑及/或懸浮劑以及稀釋劑如水、乙醇、丙二醇、甘油酯 及其不同組合。 當此一或兩種活性劑係採非經腸投藥時，可採用於芝 麻油或花生油內之溶液或丙二醇水溶液，以及含有該活性 劑或期對應的水溶性鹽類之無菌水溶液。此等無菌水溶液 較佳地經適當緩衝，且較佳地用足夠的食鹽水或葡萄糖使 其成爲等張。此等特殊的水溶液特別適用於靜脈、肌肉、 皮下及腹腔內注射的目的。油性溶液適用於動脈內、肌肉 及皮下注射目的。所有此等溶液無菌狀態的製備藉熟悉此 技術者已知的標準藥學技術可輕易地來完成。任何K G F 投藥時所選取的非經腸配方應加以選擇以避免變性及喪失 本紙張尺度適用中國@家標準（CNS )八4規格（2ί〇Χ297公董) _ — (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝‘ 、1Τ 1281402 A7 B7 五、發明説明（21) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 κ G F多肽之生物活性。 此外，還可以局部投予一或兩種此等活性劑，此等投 藥較佳地係根據標準藥學實務藉著乳膏劑、洗劑、膠凍劑 、凝膠劑、糊劑、油膏劑 '軟膏劑等之方式來投予。例如 ’.可以製被含有濃度約0 · 1 % ( w / v )至約5 % ( w / v )之E G F R抑制劑或K G F之局部用配方。於一 較佳具體例中，可以製備K G F之局部用配方且此配方對 於E G F R抑制劑造成之上皮毒性係表線在皮膚毒性的情 形下特別有效。任何K G F選取的局部用配方應加以選擇 以避免變性及喪失K G F多肽之生物活性。 應用在獸醫學上的目的時，該等活係劑可使用任何上 述的劑型及藉著任何途徑來個別地或共同地投藥。於一較 佳具體例中’該E G F R抑制劑係以膠囊、九劑、錠劑、 浸液、藉著注射或當作植入物來投予。另一選擇地，該 E G F R抑制劑可與動物飼料一起來投予，且基於此目的 可以將該抑制劑製備成濃縮的食品添加物或預混物以作爲 尋常的動物飼料。K G F較佳地係以浸液的形式藉注射或 當作植入物來投藥。此等配方可根據標準獸醫學實務以習 知方式來製備。 本發明進一步提供一種套組，其含有包括E G F R抑 制劑及K G F之單一容器。本發明進一步提供一種套組， 其含有包括E G F R抑制劑之第一容器及包括K G F之第 二容器。於一較佳具體例中，該套組容器可進一步含有藥 學可接受載劑。該套組可進一步含有無菌稀釋劑，其較佳 Iί------裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 -染 本紙張尺度適用中周國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -24 - 1281402 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（22) 地係儲存在額外的個別容器中。該套組可進一步含有一包 裝品說明插頁，其包括印刷的說明書以指示利用組合治療 來做爲治療患者投予E G F R抑制劑時所造成的上皮毒性 〇 如下實施例係僅用來顯示本發明，且並不意圖用來限 制本發明之範圍。 實施例1 測量K G F對角質細胞的保護作用 K G F對角質細胞的保護效果係以兩種類型的檢定來 測定，第一種檢定係測定其對於小分子E G F R抑制劑所 造成的細胞週期相分佈作用的保護效果，且第二種檢定係 測定其對於E G F R抑制劑所造成的p p R B削減及 P 2 7 k 1 p 1 / w a f 1調高作用（upregulaUon )的保護效果 。該K G F對於細胞週期相分佈的效果係藉著使用流動細 胞計數法藉D i F i結腸惡性腫瘤細胞對5 -溴去氧尿核 苷的倂入作用及碘化p I* 〇 p i d i u m的攝入作用之二 變數分析來測量。K G F對p p R B削減及 P 2 7 p 1 / w a f 1調高作用的保護效果係藉著分別用對 R B及p 2 7 k 1 T 1 / w a f 1特異之抗體對經處理之 D i F i細胞及對照組D i F i細胞進行離胺酸鹽免疫墨 漬法來測量。該等方法詳細說明.如下。 所有的實驗係用正常的人類新生兒表皮角質細胞’ Ν Η E K ( Clonetics ，聖地牙哥，C A )。細胞係維持在 — I --------裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T ♦ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -25 - 1281402 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（23) 角質細胞生長培養基，K G Μ — 2 ( Clonetics)中。從

Sigma Chemicals Go .(聖路易，M〇）購得於大腸桿菌中 表現成1 9 kD a大之蛋白質之人類重組KGF。 細胞週期受阻之流動細胞計數測量 將NHEK接種在6 0 -釐米大的KGM — 2培養皿 中。當細胞半融合時，用含有如測試劑之新鮮培養基來取 代原培養基：媒劑（〇 · 1 2 5 % 0 M S〇）；媒劑+ 20奈克/毫升KGF ;媒劑+ 0 · 3//Μ C Ρ — 358，774 — 0 1+ / - 20 奈克/毫升 KGF ;或 媒劑 +1//Μ CP — 358，774 — 0 1 + /— 20 奈克/毫升K G F。該等細胞係在5 %二氧化碳之潮溼空 氣中於3 7 °C下培育。於2 4小時後，將溴去氧尿核苷（ B r d U )以終濃度1 〇 # Μ加到培養基中3 0分鐘。然 後此等細胞用0 · 2 5 %胰蛋白酶/ 1 m Μ E D Τ Α來 收穫且使用Cou 1 t e r計數器來計數。藉22〇xg 離心5分鐘來收集2 x 1 0 6細胞之液份，於2毫升含有 2 · 5 %胎小牛血淸之磷酸鹽緩衝之食鹽水（p b s )來 淸洗，懸浮於0 · 2毫升ρ b s中，且加入5 0毫升 - 2 0 °C之乙醇來固定。於冰上培育3 0分鐘後，細胞藉 著用5 0 0 X g離心5分鐘收集起來且再懸浮於2 5微升 PBS中。加入1毫升之〇·2毫克/毫升胃蛋白酶於 2 N H C L且在室溫下培育細胞3 0分鐘。細胞藉著 1 5 0 0 X g離心5分鐘來收集且用1毫升〇 . 1 Μ溴酸 本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) Α4規格（2ιοχ297公着)7^ - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1281402 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（24) 鈉，p Η 8 · 5來淸洗。細胞用1 5 Ο Ο X g離心5分鐘 成爲離心小片，且再懸浮於1毫升螢光素—異硫氰酸鹽（ F I TC)—接合之抗—B r dU ( BectonDickinson，San Jose, CA )中，其稀釋於5 0倍P B S含有Ο · 5 % Tween 2 0及1%牛血淸白蛋白，且於黑暗室溫下培育3 0分鐘。 於最後一次用含有0 · 5 % Tween 20及1 % B S A之 P B S淸洗後，將細胞再懸浮於P B S含有1 0微克/毫 升溴化propidium及1 0微克/毫升R N a s e，濾經3 5 p m篩目且於FACSCalibur流動細胞計數器（Becton Dickinson )來分析，該計數器還配備有放射波長4 8 8奈 米之氬雷射光。於5 1 5 — 5 4 5奈米下獲得F I TC螢 光數據，且於5 6 4 — 6 0 6奈米下獲得碘化PropicHum螢 光數據。每一樣本至少分析2 0 , 0 0 0個細胞。使用 CellQuest軟體（Becton-Dickinson)來分析數據且計算在細胞 週期各相（G 1，S.，G 2 )之細胞的比率。 P P R B及P 2 7 κ 1 P 1 / w A F 1蛋白質量之測量 Ν Η E K細胞係接種在6 -凹孔之平板上且在K G Μ —2中生長到半融合爲止。加入含有媒劑或C Ρ — 3 5 8 ，77 4 — 0 1+ /— 20奈克/毫升KGF之新鮮培養 基，然後將細胞置於5 %二氧化碳之潮濕氣氛下培育2 4 小時。細胞用5〇mM Ύ τ i S'-HCl ρΗ7 · 4 ，14〇111^/1氯化鈉，3.3111^1氯化鉀及5〇〇//1^原 釩酸鈉，且藉著在S D S樣本緩衝液（5 〇❿μ 本紙張尺度適用中.國國家標车（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐了 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝-

、1T ---染_ -27- 1281402 A7 B7 五、發明説明（25)

Tris— HCl，pH6.8，100mM D T T > 2 % S D S ，〇· 1 %溴酚藍，1 0 %甘油）中煮沸1 〇 分鐘來胞溶。該胞溶物之總蛋白質濃度係使用B C Α蛋白 質檢定（Pierce Chemicals，Rockford，IL )來測定。將 1 0 微克的蛋白質用7 · 5% (RB)或4-20% (p27 )聚丙嫌酸胺凝膠（Owl Separation System，Portsmouth, NH )來解析，且用2 5 0 m A經過2小時來轉移到

Immobilon-P 膜（Millipore，Bedford, ΜΑ )上。膜用 4 % 脫脂 奶粉於TBST(50mM Tris-HCl >pH 7 ·4，1 5〇mM NaC 1 ，及 〇 · 1% Tween20) 來阻斷，且用1微克/毫升單株抗體G3 — 2 4 5 (

Pharmingen San Diego, CA )爲探針來檢測R B削減作用或 用0 . 1微克/毫升抗—P27k i p i選殖體57單株 抗體（Transduction Labs, Lexington，KY )接著用稀釋 1 : 1 0 0 0倍之辣根過氧化酶一接合之羊抗一小鼠I g G ( Pharmmgen )處理。藉著使用對此型式具特異性之抗體， 選殖體G9 9 — 549 ( Pharmingen )來確認在RB墨漬 圖中較低譜帶與低磷醯化R B ( p R B )之相同性。 結果 細朐週期相之分佈 在用N— (3 —乙炔基苯胺基）—6，7 —二（2 — 甲氧基乙氧基- 4 -喹唑啉胺鹽酸鹽（化合物A )來處理 角質細胞2 4小時會造成濃度依賴性之細胞累積在細胞週 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I . I , |=1 ·-1! 1 1- I— -- I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T -線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1281402 A7 B7 五、發明説明（26) 期之G 1相及對應地S -相部份減少的現象（表1 )。當 用K G F共處理時會逆轉此一效果’但單獨用K G F處理 時對於細胞週期相的分佈沒有顯著影響。 表1 處理 %GI %S %G2 媒劑 52 34 12 20ng/ml KGF 52 34 13 0.3 # Μ化合物A 75 13 11 0.3 // Μ 化合物 A + 2 0ng/ml KGF 53 34 12 1 # M化合物A 84 6.0 10 1 // Μ 化合物 A + 20mg/ml KGF 50 35 13 ppRB 及 p27kipi/wat 丄量 由於高磷醯化成視網膜細胞瘤（P P R B )及低磷醯 化成視網膜細胞瘤（P R B )在聚丙烯醯胺電泳凝膠上有 不同的移動速度，所以可將高磷醯化成視網膜細胞瘤（ p p R B )及低磷醯化成視網膜細胞瘤（p R B )解析開 來。此蛋白質之此兩種型式都具有約1 0 5 k D a之分子 量，但是P P R B移動得較p R B慢，使得在使用能識別 此兩種型式蛋白質之單株抗體G 3 - 2 4 5作爲探針來探 測時會造成在墨漬圖上有一較高的譜帶（p p R B )及/ 或一較低的譜帶（P R B )。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝·

、1T 飨 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -29- 1281402 Α7 Β7 五、發明説明（27) 在未經處理之增殖性的角質細胞中，所有明顯的R B 免疫活性都存在於高磷醯化R B中（較高譜帶）。在用 〇 · 3 Μ Μ化合物A處理後，p p R B訊號明顯地減少且 出現相當於p R B之較低譜帶。不過，同時用化合物A及 2 .0奈克/毫升K G F處理之細胞則類似對照組細胞且僅 顯示出較高譜帶。所以，雖燃存在有E G F R抑制劑，此 等細胞主要含有高磷醯化R B (即可准許細胞週期向前推 進之R B形式）。此結果係與前述之B r d U標記檢定的 結果一致，其中同時用化合物a及K G F處理的細胞具有 類似於對照組之S -相的比率。在用1 // Μ化合物A處理 之角質細胞中，p p R B譜帶完全被消除掉了，且在較低 化合物A的濃度下，用KG F共處理可將p p RB量完全 恢復到對照組的水準。 p R B係藉著循環素-依賴性激酶（c d k ’ s )來磷 醯化，該激酶係由循環素正調節且藉c d k抑制劑 P 2 1 e 1 p 1 及 p 2 7 k 立 p 1 / w a f 1 來負調節。用 0 · 3 // Μ化合物A來處理的角質細胞胞溶物顯示有3 . 9倍的 p 2 7 k i P i w a f i蛋白質誘導量，其結果與該化合物對 p R B磷醯化的影響一致。用1 // Μ化合物A來處理會造 成有5 · 2倍之p27kipl/wafl誘導量。用KGF共 處理會部份地將P 2 7 k 1 p 1 / w a f 1量恢復到對照組水準 ο 所有在前文引用之專利、專利申請案及文獻完全倂此 以爲參考。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 7〇〇 - 一 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝 *1Τ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1281402 A7 B7 五、發明説明（28) 本發明範圍並不限於前述之特殊具體例，該等具體例 係意圖用來做爲本發明個別態樣的單獨例示。功能相當之 組成物及方法亦包括在本發明的範圍內。的確，除了在此 所顯示及說明之內容外，熟悉此技術者從前述說明將可明 顯了解本發明之不同修正。此等修正亦意圖包括在本發明 後附之申請專利範圍之範疇內。 —ϊ I 1 I..... n - ϋ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 m 鍊· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） _ 31 -

Claims (1)

1. 8888 ABCD 1281402 六、申請專利範圍 附件2 A : (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 第90 1 06475號專利申請案 中文申請專利範圍替換本 民國96年2月8日修正 1 · 一種治療因將E G F R抑制劑施予患者所造成 的上皮毒性之藥學組成物，其包括一上皮生長因子受器（ E G F R )抑制劑及一角質細胞生長因子（K G F )於 藥學可接受載劑中。 2 ·如申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中該 E G F R抑制劑爲小型有機分子，或能專一性地結合到 該E G F R上之抗體或抗體片段。 3 ·如申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中該 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 E G F R抑制劑係選自喹唑啉類E G F R抑制劑，吡啶 基一嘧啶類E G F R抑制劑，嘧啶基一嘧啶類E G F R 抑制劑，吡咯基一嘧啶類E G F R抑制劑，吡唑基-嘧 啶類E G F R抑制劑，苯胺基一嘧啶類E G F R抑制劑 ，羥吲哚類E G F R抑制劑，吲哚咔唑類E G F R抑制 劑，肽畊類E G F R抑制劑，異黃酮類E G F R抑制劑 ’喹諾酮類E G F R抑制劑，及Tyrphostin EGFR抑制劑 所成之群組。 4 ·如申請專利範圍第丨項之藥學組成物，其中該 EGFR抑制劑係選自〔6 ，7 —二（2 —甲氧基乙氧 基）4 一喹唑啉—4 一基〕—（3 -乙炔基苯基）胺， Z D 1 8 3 9 ressa)及 PC183805 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）-1 - 1281402 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 5 ·如申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中該 E G F R抑制劑係爲〔6 ，7 —二（2 -甲氧基乙氧基 )一 4 一喹唑啉一 4 —基〕一（3 -乙炔基苯基）胺。 6 ·如申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中該 E G F R抑制劑爲單株抗體或抗體片段。 7 ·如申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中該 E G F R抑制劑係爲單株抗體μ a b E 7 · 6 · 3或 M a b C 2 2 5 ，或對其具有結合專一性之抗體或抗 體片段。 8 ·如申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中該 KGF爲人類KGF-1 ，或其具有至少部份人類 K G F - 1活性之類似物。 9 ·如申請專利範圍第1項之藥學組成物，其中該 KGF爲人類KGF - 2，或其具有至少部份人類 K G F - 2活性之類似物。 1 〇 ·如申請專利範圍第1項之藥學組成物’其ψ 該患者爲正在治療癌症之人類。 1 1 ·如申請專利範圍第1項之藥學組成物’其Ψ 該上皮毒性爲皮膚毒性。 1 2 ·如申請專利範圍第1 1項之藥學組成物’其 中該皮膚毒性係以皮疹來顯現。 1 3 ·如申請專利範圍第1項之藥學組成物’其中 該上皮毒性係以角膜變薄來顯現。 1 4 ·如申請專利範圍第1項之藥學組成物’其中 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家襟準（CNS ) Α4規格（210X297公釐）-2 - 1281402 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 該上皮毒性係以腹瀉來顯現。 (請先聞脅背面之注意事項再填寫本頁) 1 5 · —種製備用於治療因將£ G F R抑制劑投予 患者所造成之上皮毒性之藥學組成物的方法，其包含將 K G F與該E G F R抑制劑組合在一起，以及進一步將 一藥學可接受載劑與該K G F及E G F R抑制劑組合在 一起。 1 6 · —種治療因將E G F R抑制劑施予患者所造 成的上皮毒性之套組，其含有一包括E G F R抑制劑及 K G F之容器，以及進一步一包括印刷說明之包裝品說 明插頁’其說明指示對患者使用該K G F及e G F R抑 制劑作組合治療以作爲治療因單獨對患者投予該 E G F R抑制劑所造成的上皮毒性的療法。 1 7 ·如申請專利範圍第1 6項之套組，其中該 EGFR抑制劑係爲〔6 ，7 —二（2 -甲氧基乙氧基 )一 4 一喹唑啉一 4 一基〕一（3 -乙炔基苯基）胺。 1 8 ·如申請專利範圍第1 6項之套組，進一步含 有一種無菌稀釋劑。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1 9 · 一種上皮生長因子受器（E G F R )抑制劑及 一角質細胞生長因子（K G F )之組合的用途，其係供製 造用於治療因將E G F R抑制劑施予患者所造成的上皮毒 性之藥劑。 2 0 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該 E G F R抑制劑爲小型有機分子，或能專一性地結合到該 EGFR上之抗體或抗體片段。 本&張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）一— 1281402 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 2 1 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該 E G F R抑制劑係選自喹唑啉類e 〇 F R抑制劑，吡啶基 一嘧H定類E G F R抑制劑，嘧啶基一嘧啶類e G F R抑制 劑’啦略基-嘧啶類E g F R抑制劑，吡唑基-嘧啶類 E G F R抑制劑，苯胺基一嘧啶類e g F R抑制劑，羥口引 口朵類E G F R抑制劑，吲哚咔唑類e g F R抑制劑，肽啡 類E G F R抑制劑，異黃酮類e G F R抑制劑，喹諾酮類 E G F R抑制劑，及Tyrph〇stin EGFR抑制劑所成之群組。 2 2 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該 EGFR抑制劑係選自〔6 ，7 —二（2 —甲氧基乙氧基 )4 —喹u坐啉一 4 一基〕一（3 -乙炔基苯基）胺， ZD1839 (lressa)及 PC183805。 2 3 .如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該 EGFR抑制劑係爲〔6 ，7 —二（2 —甲氧基乙氧基） 一 4 一喹唑啉一 4 一基〕一（3 -乙炔基苯基）胺。 2 4 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該 E G F R抑制劑爲單株抗體或抗體片段。 2 5 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該 E G F R抑制劑係爲單株抗體M a b E 7 · 6 · 3或 M a b C225，或對其具有結合專一性之抗體或抗體 片段。 2 6 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該 KGF爲人類KGF-1 ，或其具有至少部份人類KGF - 1活性之類似物。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐1 ~ ·-I 4! (請先閎·«背面之注意事項再填寫本頁} 訂- # 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1281402 A8 B8 C8 D8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 六、申請專利範圍 2 7 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該 KGF爲人類KGF - 2，或其具有至少部份人類KGF - 2活性之類似物。 2 8 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該患者 爲正在治療癌症之人類。 2 9 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該上皮 毒性爲皮膚毒性。 3 0 ·如申請專利範圍第2 9項之用途，其中該皮膚 毒性係以皮疹來顯現。 3 1 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該上皮 毒性係以角膜變薄來顯現。 3 2 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該上皮 毒性係以腹瀉來顯現。 3 3 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該 E G F R抑制劑及K G F係以同一配方來共投予該患者。 3 4 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該 E G F R抑制劑及K G F係以不同配方來共投予該患者。 3 5 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該 E G F R抑制劑及K G F係用相同途徑來共投予該患者。 3 6 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該 E G F R抑制劑及κ G F係用不同途徑來共投予該患者。 3 7 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該 E G F R抑制劑係藉者非經腸或口服投藥來投予該患者。 3 8 ·如申請專利範圍第1 9項之用途，其中該 I — I - -I ϋ -i— n n n I (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 4 本紙張尺度適用中國國家襟準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -5- 1281402 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 K G F係藉著非經腸或局部投藥來投予該患者。 4— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）-6 -