BR112020015880A2

BR112020015880A2 - Uso de um anticorpo monoclonal ghr-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo como um antagonista de gnrh.

Info

Publication number: BR112020015880A2
Application number: BR112020015880-1A
Authority: BR
Inventors: Gregory Lee
Original assignee: Vancouver Biotech Ltd.
Priority date: 2018-02-06
Filing date: 2019-02-05
Publication date: 2020-12-08
Also published as: CN111727055A; US11021541B2; EP3749367A4; CA3090335A1; JP2021512957A; US20200354462A1; EP3749367A1; KR20200118092A; WO2019153075A1

Abstract

um antagonista do receptor de gnrh com base em anticorpo e métodos de fabricar e usar o mesmo são descritos. o antagonista do receptor de gnrh com base em anticorpo é um anticorpo monoclonal ghr-106 (ghr-106) ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. ghr-106 ou seus fragmentos de igg podem ser utilizados para aplicações terapêuticas no tratamento de câncer e uma faixa de distúrbios ou condições relacionados com o hormônio sexual em sujeitos do sexo masculino ou feminino para os quais antagonistas decapeptídicos de gnrh são correntemente usados.

Description

1 / 25 ANTICORPO MONOCLONAL GHR-106 OU UM FRAGMENTO DE

LIGAÇÃO AO ANTÍGENO DO MESMO Campo Técnico

[001] Algumas modalidades da presente invenção se referem ao campo da imunologia e medicina, incluindo medicina para o tratamento de câncer e condições de saúde ou doenças relacionadas com hormônio sexual. Algumas modalidades da presente invenção se referem ao campo de anticorpos monoclonais ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que alvejam o receptor do hormônio liberador de gonadotropina (GnRH) e atuam como antagonistas de GnRH e métodos de fabricar e usar os mesmos. Fundamentos

[002] O hormônio liberador de gonadotropina (GnRH) é um hormônio decapeptídico que estimula a liberação de gonadotropina, hormônio luteinizante (LH) e hormônio estimulante de folículo (FSH) a partir da pituitária anterior através da ligação específica ao receptor de GnRH. O receptor de GnRH está localizado na membrana externa de muitos tipos de célula e tecidos, primariamente nas células cancerosas, na pituitária anterior e órgãos ou tecidos reprodutivos. Embora a função do receptor GnRH nas células cancerosas seja diferente da função do receptor de GnRH nas células da pituitária anterior, a sequência e estrutura do receptor de GnRH são as mesmas entre estes tipos diferentes de células.

[003] A administração de análogos de GnRH que são antagonísticos para a função normal de GnRH foi usada para o tratamento de uma variedade de condições ou distúrbios relacionados com hormônio sexual tais como doenças reprodutivas (tanto em homens quanto em mulheres), infertilidade, terapia reprodutiva assistida tal como fertilização in vitro (IVF) ou doação de óvulo (por exemplo para controlar a estimulação ovariana), contracepção incluindo inibição de ovulação, transição médica para transexuais ou terapia

2 / 25 de redesignação sexual, seja de homem para mulher ou de mulher para homem e se em conjunção com cirurgia de redesignação sexual ou não, endometriose, afinamento endometrial, adenomiose, hiperplasia endometrial, leiomioma uterino (fibróides uterinos), síndrome pré-menstrual, hipertrofia prostática benigna, distúrbios ovarianos, doença do ovário policístico, puberdade precoce e similares.

[004] Os análogos de GnRH também foram usados no tratamento de alguns tipos de cânceres incluindo cânceres da próstata, mama e ovário, assim como cânceres do endométrio, colo do útero, placenta, pâncreas, cólon, pulmão, fígado, rim ou cérebro ou glioblastoma, linfoma, leucemia, melanoma ou neuroblastoma. Foi estabelecido que o GnRH é um marcador de pan câncer, sendo altamente expresso na superfície da célula de muitos tipos diferentes de cânceres, particularmente nos estágios mais avançados de tais cânceres (ver por exemplo a patente US No. 8163283, que é aqui incorporada por referência na sua totalidade para todos os propósitos). Também foi estabelecido que análogos de GnRH (tanto agonistas quanto antagonistas) podem induzir apoptose nas células cancerosas.

[005] Os exemplos de antagonistas de GnRH sintéticos incluem, entre outros, antide, cetrorelix, abarelix, degarelix, ganirelix e elagolix.

[006] Alguns análogos de GnRH sintéticos que são habitualmente usados como antagonistas de GnRH são análogos decapeptídicos estruturalmente modificados de GnRH. As estruturas de alguns análogos decapeptídicos de GnRH substancialmente diferem daquelas de GnRH onde cinco dos dez aminoácidos não são naturais e de configuração D. Os análogos decapeptídicos de GnRH que atuam como antagonistas de GnRH competem diretamente com o GnRH endógeno quanto à ligação ao receptor de GnRH, com uma diminuição rápida no LH e FSH na administração. Os análogos decapeptídicos de GnRH são assim conhecidos produzir efeito imediato e direto. Os análogos decapeptídicos de GnRH são habitualmente usados em

3 / 25 aplicações clínicas para o tratamento de problemas de fertilidade pelo menos por esta razão.

[007] O GnRH tem uma meia-vida curta na circulação humana de cerca de 2 a 4 minutos. No geral, os análogos decapeptídicos de GnRH têm uma meia-vida curta na circulação humana, por exemplo variando de aproximadamente 3 a 63 horas. Portanto, os análogos decapeptídicos de GnRH são úteis para tratar condições que requeiram apenas tratamentos de curta duração. De modo a efetuar um tratamento de longa duração, a administração diária de análogos decapeptídicos de GnRH seria necessária.

[008] GHR-106 é um anticorpo monoclonal que se liga ao receptor de GnRH. O GHR-106 foi originalmente gerado em camundongos que foram imunizados contra um oligopeptídeo sintético correspondendo ao epítopo presente nos resíduos de aminoácido 1 a 29 nos domínios extracelulares do receptor de GnRH humano. O mGHR-106 de murino original foi modificado em formas humanizadas para a administração nos seres humanos. O anticorpo monoclonal GHR-106 humanizado (hGHR-106) foi mostrado ser bioequivalente ao GHR-106 monoclonal de murino (mGHR-106). O mGHR- 106 de murino e o hGHR-106 humanizado, incluindo a sequência de aminoácidos das suas regiões variáveis, foram descritos no documento WO 2011/026242 e US 9273138, que são por meio deste aqui incorporadas por referência para todos os propósitos.

[009] As patentes US Nos. 8163283, 8361793 e 9273138 concedidas a Lee anteriores, que são todas aqui incorporadas por referência em suas totalidades para todos os propósitos, estão relacionadas com as aplicações clínicas potenciais do GHR-106 e as suas formas humanizadas no tratamento de câncer humano e condições ou distúrbios relacionados com hormônio sexual. Os anticorpos monoclonais têm uma meia-vida relativamente longa na circulação humana, por exemplo a meia-vida do GHR-106 monoclonal na circulação é estimada ser de cerca de 5 dias a cerca de 22 dias.

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[0010] Permanece uma necessidade quanto a antagonistas de GnRH melhorados e em particular, antagonistas de GnRH com base em anticorpo, para o uso como uma alternativa aos análogos decapeptídicos de GnRH. Permanece uma necessidade quanto a antagonistas de GnRH melhorados adequados para o uso no tratamento de câncer e condições ou distúrbios relacionados com hormônio sexual.

[0011] Os exemplos precedentes da técnica relacionada e limitações inerentemente relacionadas são intencionados ser ilustrativos e não exclusivos. Outras limitações da técnica relacionada tornar-se-ão evidentes para aqueles de habilidade na técnica em uma leitura do relatório descritivo e um estudo dos desenhos. Sumário

[0012] As seguintes modalidades e aspectos das mesmas são descritos e ilustrados em conjunção com sistemas, ferramentas e métodos que são intencionados serem exemplares e ilustrativos, não limitantes no escopo. Em várias modalidades, um ou mais dos problemas descritos acima foram reduzidos ou eliminados, enquanto outras modalidades são direcionadas a outras melhorias.

[0013] Um aspecto da invenção provê um método de usar um anticorpo monoclonal de GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo como um antagonista de GnRH com base em anticorpo para tratar câncer ou uma condição ou distúrbio relacionados com o hormônio sexual.

[0014] Um aspecto da invenção provê um método de tratar câncer ou uma condição ou distúrbio relacionados com o hormônio sexual em um sujeito pela administração ao sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo como um antagonista de GnRH. Em alguns aspectos, o sujeito é um humano. Em alguns aspectos, o anticorpo monoclonal GHR-106 é um anticorpo monoclonal GHR-106 humanizado. Em alguns aspectos, o

5 / 25 fragmento de ligação ao antígeno do anticorpo monoclonal GHR-106 é derivado de um anticorpo monoclonal GHR-106 humanizado.

[0015] Em alguns aspectos, o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem funções efetoras, por exemplo pode ativar a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) ou citotoxicidade dependente de complemento (CDC). Em alguns tais aspectos, o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem um subtipo IgG1, IgG2 ou IgG3. Em alguns aspectos, o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tendo funções efetoras é usado para tratar câncer. Em alguns aspectos, o câncer é um no qual o receptor de GnRH nas células cancerosas deste tipo é superexpresso em relação às células saudáveis deste tipo.

[0016] Em alguns aspectos, o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo não ativa funções efetoras, por exemplo não pode ativar a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) ou citotoxicidade dependente de complemento (CDC). Em alguns aspectos, o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo inibe a ativação de complemento. Em alguns aspectos, o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um subtipo IgG4. Em alguns aspectos, o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo tem uma mutação S228P ou equivalente em uma cadeia pesada do anticorpo monoclonal GHR- 106 para inibir a troca de braço Fab de IgG4.

[0017] Em alguns aspectos, o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é usado para tratar uma condição ou distúrbio relacionados com o hormônio sexual. Em alguns aspectos, a condição ou distúrbio relacionados com o hormônio sexual é uma condição que é conhecida ser tratável pela administração de antagonistas de GnRH conhecidos, por exemplo, antagonistas decapeptídicos de GnRH tais como

6 / 25 antide ou cetrorelix. Em alguns aspectos, o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é usado para tratar uma condição ou distúrbio nos quais uma meia-vida mais longa em circulação do agente de tratamento ativo é desejável. Em alguns aspectos, o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é usado para controlar ovulação.

[0018] Em alguns aspectos o fragmento de ligação ao antígeno do anticorpo monoclonal GHR-106 é um fragmento de anticorpo de IgG. Em alguns aspectos, o fragmento de anticorpo de IgG é um F(ab’)2, Fab, scFab ou scFv. Em alguns aspectos, o fragmento de ligação ao antígeno tem uma meia- vida na circulação humana na faixa de aproximadamente 12 a 20 horas. Em alguns aspectos, o anticorpo monoclonal GHR-106 tem uma meia-vida na circulação humana na faixa de aproximadamente 5 a 22 dias.

[0019] Além dos aspectos e modalidades exemplares descritos acima, aspectos e modalidades adicionais tornar-se-ão evidentes por referência aos desenhos e pelo estudo das seguintes descrições detalhadas. Breve Descrição dos Desenhos

[0020] As modalidades exemplares são ilustradas nas figuras referenciadas dos desenhos. É intencionado que as modalidades e figuras aqui descritas sejam consideradas ilustrativas ao invés de restritivas.

[0021] A FIG. 1A mostra competição de peptídeos sintéticos hGHR106 ou N1-29 dos domínios extracelulares dos receptores de GnRH de humano (Hu-P), macaco (Mo-P) ou camundongo (Mu-P) com mGHR106 quanto à ligação aos micropoços revestidos com células cancerosas OC-3- VGH. As barras brancas e as barras pretas na FIG. 1A representa as concentrações diferentes de mGHR106 (0,50 µg/ml e 0,25 µg/ml, respectivamente) usadas em cada ensaio. A FIG. 1B mostra a competição de Hu-P, Mo-P ou Mu-P com hGHR106 quanto à ligação aos micropoços revestidos com células cancerosas OC-3-VGH.

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[0022] A FIG. 2A mostra aumentos percentuais na apoptose de células cancerosas em resposta aos tratamentos de células cancerosas OC-3- VGH com mGHR-106, hGHR-106 ou antide. A FIG. 2B mostra aumentos percentuais na apoptose de células cancerosas em resposta ao tratamento de células cancerosas prostáticas PC-3, células cancerosas pulmonares A549 e células cancerosas mamárias MDA-MB-435 com mGHR-106 e para o tratamento de células cancerosas prostáticas PC-3 com antide. As barras pretas mostram os resultados de ensaio; as barras brancas mostram os resultados para o controle negativo.

[0023] A FIG. 3 é uma análise comparativa das sequências de aminoácidos dos domínios extracelulares dos receptores de GnRH das espécies de humano, macaco e camundongo. As sequências de aminoácidos nas posições de aminoácido 1 a 30 das porções extracelulares de terminal N do receptor de GnRH (GnRHR) de cada uma das espécies são listadas, mostrando as substituições de aminoácido em negrito. O número de substituições de aminoácido dentro das sequências de aminoácidos nas posições de peptídeo de 1 a 30 das porções extracelulares de terminal N de GnRHR comparadas entre as três espécies também é resumido.

[0024] A FIG. 4 mostra os efeitos sobre a expressão de certos genes envolvidos na proliferação celular, síntese de proteína e regulagem do ciclo celular em resposta aos tratamentos de células cancerosas OC-3-VGH com GHR-106 ou antide.

[0025] A FIG. 5 mostra as sequências de DNA e aminoácidos de construção GHR106-hIgG4 H7824 humanizada.

[0026] A FIG. 6 mostra as sequências de DNA e aminoácidos da construção GHR106-hkapa humanizada L7824. Descrição

[0027] Por toda a descrição seguinte detalhes específicos são apresentados de modo a prover um entendimento mais completo para as

8 / 25 pessoas versadas na técnica. Entretanto, elementos bem conhecidos podem não ter sido mostrado ou descrito em detalhes para evitar obscurecimento desnecessário da descrição. Consequentemente, a descrição e desenhos devem ser considerados em um sentido ilustrativo, ao invés de um restritivo.

[0028] Como aqui usado, o termo “GHR-106” abrange um anticorpo GHR-106 derivado de qualquer espécie e inclui tanto GHR-106 de murino (mGHR-106) quanto GHR-106 humanizado (hGHR-106).

[0029] Algumas modalidades da invenção se referem ao campo de um anticorpo GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. GHR-106 se liga aos domínios extracelulares do receptor de GnRH humano, em particular, aos aminoácidos do terminal N nas posições 1 a 29. O anticorpo mGHR-106 ou hGHR-106 tem uma afinidade para o receptor de GnRH com uma constante de afinidade (KD) de aproximadamente 2 a 4 nM. GHR-106 compete com o GnRH endógeno quanto à ligação ao receptor de GnRH e é demonstrado nesta descrição atuar como um antagonista de GnRH.

[0030] Algumas modalidades da invenção se referem à verificação de que o anticorpo monoclonal GHR-106 atua como um antagonista de GnRH, similar no efeito biológico aos análogos decapeptídicos de GnRH que foram usados como antagonistas de GnRH. Os antagonistas decapeptídicos de GnRH tais como antide e cetrorelix foram usados para o tratamento de câncer humano e condições ou distúrbios relacionados com hormônio sexual e com base nos dados neste relatório descritivo, pode ser solidamente prognosticado que o anticorpo GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga aos aminoácidos extracelulares no terminal N do receptor de GnRH pode similarmente ser usado no tratamento de câncer humano e condições ou distúrbios relacionados com hormônio sexual. Em algumas modalidades, mGHR-106 ou hGHR-106 exibe afinidade de ligação e especificidade similares a um receptor de GnRH como o faz um análogo decapeptídico de GnRH que seja um antagonista de GnRH.

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[0031] Em algumas modalidades, GHR-106 se liga ao receptor de GnRH expresso na superfície de uma célula cancerosa para induzir apoptose e o extermínio citotóxico relacionado da célula cancerosa. Em algumas modalidades, mGHR-106 e hGHR-106 exibem eficácia similar nas suas ações biológicas como análogos decapeptídicos de GnRH que atuam como antagonistas de GnRH. Isto sugere que mGHR-106 e hGHR-106 são pelo menos igualmente tão eficazes, se não mais eficazes, no alvejamento de células cancerosas como os análogos decapeptídicos de GnRH que atuam como antagonistas de GnRH.

[0032] Em algumas modalidades, GHR-106 exibe mecanismos moleculares idênticos ou muito similares de ação como os análogos decapeptídicos de GnRH que são antagonistas de GnRH na ligação a um receptor de GnRH. Em algumas modalidades, hGHR-106 e análogos decapeptídicos de GnRH que são antagonistas de GnRH exibem padrões de regulagem de gene de idênticos a muito similares na sua respectiva interação com as células cancerosas. Em algumas modalidades, os níveis de expressão dos genes que estão envolvidos na proliferação ou sobrevivência de células cancerosas são substancialmente idênticos na respectiva interação de hGHR- 106 ou um análogo decapeptídico de GnRH com células cancerosas. Em uma modalidade exemplar, o análogo decapeptídico de GnRH ao qual o hGHR- 106 exibe efeitos biológicos substancialmente idênticos na interação com células cancerosas é o antide.

[0033] Alguns aspectos da invenção se referem ao uso de GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo para tratar câncer. Em algumas modalidades, a região cristalizável do fragmento (região Fc) do anticorpo GHR-106 é qualquer um de um subtipo IgG1, IgG2 ou IgG3. Com base no fato que estes subtipos de IgG são conhecidos ativar processos tais como citotoxicidade dependente de complemento (CDC) ou citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC), pode ser solidamente prognosticado

10 / 25 que anticorpos GHR-106 destes subtipos terão utilidade no extermínio de células cancerosas. Em algumas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz de GHR-106, incluindo hGHR-106, tendo um subtipo IgG1, IgG2 ou IgG3 é usado clinicamente para tratamentos de câncer em um mamífero, incluindo um humano.

[0034] Em algumas modalidades, o câncer tratado pelo anticorpo GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é um câncer no qual o receptor de GnRH é superexpresso nas células cancerosas deste tipo quando comparadas com as células saudáveis deste tipo. Em algumas modalidades, o nível de expressão ou superexpressão do receptor de GnRH nas células cancerosas aumenta conforme o câncer avança através dos seus vários estágios. Em algumas modalidades, o câncer tratado pelo anticorpo GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é câncer da próstata, mama, ovário, endométrio, colo do útero, placenta, pâncreas, cólon, pulmão, fígado, rim ou cérebro ou é glioblastoma, linfoma, leucemia, melanoma ou neuroblastoma. Ver por exemplo Nagy et al., Biol. Reprod. 73(5): 851-859 (2005), que é aqui incorporada por referência na sua totalidade para todos os propósitos.

[0035] Em algumas modalidades, o subtipo do anticorpo GHR-106 é selecionado para modular as funções efetoras do anticorpo. Em algumas modalidades, o anticorpo GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é estruturalmente modificado para modular adicionalmente as funções efetoras do anticorpo, por exemplo usando-se um fragmento de ligação ao antígeno do anticorpo que não possua nenhuma das funções efetoras. Em algumas modalidades, a região Fc do anticorpo GHR-106 é do subtipo IgG4. Em algumas modalidades, o anticorpo GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que não possui nenhuma das funções efetoras é usado para o tratamento de uma condição de saúde ou distúrbio relacionados com o hormônio sexual. Em algumas modalidades, o anticorpo GHR-106 tendo um

11 / 25 subtipo IgG4 é usado para o tratamento de condições de saúde ou distúrbios relacionados com o hormônio sexual.

[0036] Sem estar ligado pela teoria, é acreditado que porque o subtipo de anticorpo IgG4 não ativa a citotoxicidade dependente de complemento (CDC) ou citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC), o uso do subtipo de anticorpo IgG4 para o tratamento de condições de saúde ou distúrbios relacionados com o hormônio sexual, incluindo distúrbios de fertilidade, minimizará ou eliminará a possibilidade de reações CDC e ADCC na ligação do anticorpo GHR-106 à pituitária anterior. Ver por exemplo Vidarsson et al., Front. Immunol., 2014, 5: 520, que é aqui incorporada por referência para todos os propósitos.

[0037] Adicionalmente, foi demonstrado que os anticorpos IgG4 podem de fato inibir a ativação de complemento (ver por exemplo van der Zee et al., Clin. Exp. Immunol., 1986, 64(2): 415-422, que é aqui incorporada por referência para todos os propósitos). Assim, em algumas modalidades, o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é selecionado para inibir a ativação de complemento. Em algumas modalidades, o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que inibe a ativação de complemento é usado para tratar uma condição ou distúrbio relacionados com o hormônio sexual.

[0038] Em algumas modalidades, o polinucleotídeo codificando a cadeia pesada do hGHR-106 tendo um subtipo IgG4 tem uma região Fc tendo uma sequência de nucleotídeo com pelo menos 90% de identidade de sequência com a sequência como apresentada como a SEQ ID NO: 4 mostrada na FIG. 5, incluindo qualquer grau mais alto de similaridade por exemplo pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99%, 99,5%, 99,7% ou 99,9% de similaridade de sequência. Em algumas modalidades, a cadeia pesada do hGHR-106 tendo um subtipo IgG4 tem uma sequência de aminoácidos tendo pelo menos 90% de identidade de

12 / 25 sequência com a sequência de aminoácidos apresentada como SEQ ID NO: 5 mostrada na FIG. 5, incluindo qualquer grau mais alto de similaridade por exemplo pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99%, 99,5%, 99,7% ou 99,9% de similaridade de sequência.

[0039] Em algumas modalidades, o polinucleotídeo codificando a cadeia leve do anticorpo hGHR-106 tem uma sequência de nucleotídeos da cadeia leve tendo pelo menos 90% de identidade de sequência com a sequência como apresentada na SEQ ID NO: 6 mostrada na FIG. 6, incluindo qualquer grau mais alto de similaridade por exemplo pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99%, 99,5%, 99,7% ou 99,9% de similaridade de sequência. Em algumas modalidades, a cadeia leve do hGHR-106 tendo um subtipo IgG4 tem uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresentada como SEQ ID NO: 7 na FIG. 6, incluindo qualquer grau mais alto de similaridade por exemplo pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99%, 99,5%, 99,7% ou 99,9% de similaridade de sequência.

[0040] Em uma modalidade exemplar, uma S228P ou outra mutação similar é engenheirada dentro da cadeia pesada do anticorpo IgG4. Sem estar ligado pela teoria, é acreditado que a mutação S228P ou outra mutação equivalente impede o anticorpo de passar por um processo recombinante conhecido como troca de braço Fab de IgG4. A troca de braço Fab resulta na formação de anticorpos biespecíficos não desejados, que é conhecida ter um efeito indesejável sobre a especificidade do anticorpo para o receptor alvo. Ver, por exemplo, Silva et al., JBC, 2015, 290(9): 5462-5469, que é aqui incorporada por referência para todos os propósitos. Uma modalidade exemplar de uma cadeia pesada de IgG4 tendo uma mutação S228P é mostrada na FIG. 5 como a SEQ ID NO: 4 (sequência de nucleotídeos) e SEQ ID NO: 5 (sequência de aminoácidos, observe que S228 de acordo com o

13 / 25 sistema de numeração EU está na posição 250 no aminoácido da SEQ ID NO: 5).

[0041] Sem estar ligado pela teoria, é acreditado pelo inventor que a modificação na região Fc do anticorpo GHR-106 para evitar a ativação de CDC e/ou ADCC resulta na eliminação de funções efetoras indesejadas do anticorpo na ligação ao receptor de GnRH na pituitária anterior. Algumas das funções efetoras indesejadas incluem citotoxicidade dependente de complemento (CDC) e citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC). Estas funções efetoras são úteis no tratamento de câncer para exterminar células cancerosas, mas pode não ser desejável nos tratamentos tipo fertilidade ou relacionados com o hormônio sexual.

[0042] Em algumas modalidades, a meia-vida do anticorpo GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é ajustada modificando-se estruturalmente e/ou reduzindo-se o tamanho do anticorpo. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo é provido como um fragmento F(ab’)2, que tem uma meia-vida na faixa de cerca de 12 a cerca de 20 horas. Em algumas modalidades, o anticorpo é provido como um fragmento Fab, que tem uma meia-vida na faixa de cerca de 12 a cerca de 20 horas. Em algumas modalidades, o anticorpo é provido como um fragmento scFab, que tem uma meia-vida na faixa de pelo menos cerca de 12 horas. Em algumas modalidades, o anticorpo é provido como um fragmento scFv.

[0043] A provisão de fragmentos de ligação ao antígeno diferentes do anticorpo GHR-106 permite a geração de uma série de antagonistas de GnRH com base em anticorpos para o uso como fármacos com meias-vidas diferentes para o uso no tratamento clínico de muitas indicações de fertilidade ou relacionados com o hormônio sexual. Adicionalmente, porque os análogos decapeptídicos de GnRH são conhecidos ser capazes de induzir apoptose de células cancerosas por intermédio de sua ligação ao receptor de GnRH, pode ser prognosticado que tais fragmentos de anticorpo como F(ab’)2, Fab, scFab,

14 / 25 ScFv ou similares também podem induzir apoptose de células cancerosas por intermédio da ligação ao receptor de GnRH e portanto podem ser úteis no tratamento de câncer.

[0044] Em algumas modalidades, o anticorpo GHR-106 é provido como um ou mais fragmentos de ligação ao antígeno ativos de GHR-106 para o uso no tratamento de condições de saúde ou distúrbios relacionados com o hormônio sexual. Em algumas modalidades, os fragmentos são fragmentos de cadeia única das regiões variáveis de GHR-106. Em algumas modalidades, os fragmentos são fragmentos de GHR-106 do isótipo IgG. Em algumas modalidades, o fragmento é um fragmento F(ab’)2. Em algumas modalidades, o fragmento F(ab’)2 tem um peso molecular de 110 KDa. Em algumas modalidades, o fragmento é um fragmento Fab. Em algumas modalidades, o fragmento Fab tem um peso molecular de 55 KDa. Em algumas modalidades, o fragmento é um fragmento scFab. Em algumas modalidades, o fragmento scFab tem um peso molecular de 25 KDa. Em algumas modalidades, o fragmento é um fragmento scFv. Em algumas modalidades, o fragmento scFv tem um peso molecular de 25 KDa. Em algumas modalidades, combinações de fragmentos de ligação ao antígeno diferentes por exemplo dois ou mais dos fragmentos como descritos acima, podem ser usadas como um fármaco para o tratamento de câncer ou uma condição ou distúrbio relacionados com o hormônio sexual.

[0045] Em algumas modalidades, a meia-vida em circulação do anticorpo GHR-106 é de aproximadamente 5 a 21 dias, incluindo qualquer valor entre estes por exemplo 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 17, 17, 18, 19 ou 20 dias ou 120 a 500 horas, incluindo qualquer valor entre estes, por exemplo 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450 ou 475 horas. Ao contrário, a meia-vida em circulação do cetrorelix está em uma faixa de aproximadamente 10 a 63 horas. O GHR-106 tem uma meia-vida muito mais longa comparado ao antagonista decapeptídico de GnRH

15 / 25 cetrorelix e, portanto, pode requerer administração menos frequente, o que pode melhorar a adesão do paciente e/ou a praticabilidade de um regime de tratamento proposto.

[0046] Em algumas modalidades, os fragmentos de ligação ao antígeno de IgG que são derivados de GHR106, por exemplo F(ab’)2, Fab, ScFab ou ScFv, cada um tem uma meia-vida em circulação de aproximadamente 12 a 20 horas, incluindo qualquer valor entre estes por exemplo 13, 14, 15, 16, 17, 18 ou 19 horas. Os fragmentos de ligação ao antígeno de mGHR-106 ou hGHR-106 têm uma meia-vida mais curta comparada aos anticorpos mGHR-106 ou hGHR106. Em algumas modalidades, o engendramento de proteína é usado para prover anticorpos GHR-106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que tenham uma meia-vida dentro de uma faixa desejada.

[0047] Em algumas modalidades, a afinidade e/ou especificidade de ligação dos anticorpos GHR-106 monoclonais ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos são engenheirados usando qualquer método adequado para provê-los com propriedades desejadas, por exemplo um nível modificado desejado de afinidade e/ou especificidade de ligação. Por exemplo, anticorpos podem ser engenheirados usando-se sistemas artificiais tais como bibliotecas de anticorpo sintéticas ou usando-se métodos computacionais ou metodologias de projeto de proteína para alterar a afinidade e/ou especificidade de ligação do anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Ver por exemplo Kuroda et al., Protein Engineering, Design and Selection 25(10): 507-522 (2012), que é aqui incorporada por referência na sua totalidade para todos os propósitos. Em algumas modalidades, uma ou mais das regiões determinantes de complementaridade (CDRs) dos anticorpos GHR-106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos são modificadas usando tais métodos para modificar as suas propriedades de ligação.

16 / 25

[0048] Os anticorpos monoclonais ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui descritos podem ser produzidos em qualquer maneira adequada, por exemplo por intermédio da produção recombinante e expressão em células hospedeiras adequadas, incluindo células hospedeiras microbianas, células de mamífero, células vegetais ou células de inseto.

[0049] Os anticorpos GHR-106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui descritos podem ser formulados em qualquer maneira adequada para a administração como um medicamento. Assim, eles podem ser combinados com excipientes farmaceuticamente aceitáveis ou outros compostos farmaceuticamente adequados para prover composições farmacêuticas úteis para o tratamento de câncer ou condições de saúde ou distúrbios relacionados com o hormônio sexual.

[0050] Em algumas modalidades, os anticorpos GHR-106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui descritos são administrados em uma quantidade terapeuticamente eficaz a um mamífero, incluindo um humano, para o tratamento de câncer. Em algumas modalidades, o câncer é câncer da próstata, mama, ovário, endométrio, colo do útero, placenta, pâncreas, cólon, pulmão, fígado, rim ou cérebro. Em algumas modalidades, o câncer é glioblastoma, linfoma, leucemia, melanoma ou neuroblastoma. Em algumas modalidades, o câncer é um no qual o receptor de GnRH é superexpresso em relação às células saudáveis. Em algumas modalidades, o anticorpo GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é derivado de hGHR-106.

[0051] Em algumas modalidades, os anticorpos GHR-106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que são administrados para o tratamento de câncer possuem funções efetoras. Um anticorpo que possui funções efetoras pode ativar, por exemplo, a citotoxicidade dependente de complemento (CDC) e/ou citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) para realçar o extermínio de células cancerosas. Em algumas

17 / 25 modalidades, os anticorpos GHR-106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que possuem funções efetoras têm um isótipo IgG1, IgG2 ou IgG3.

[0052] Em algumas modalidades, os anticorpos GHR-106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos são administrados em uma quantidade terapeuticamente eficaz para o tratamento de condições de saúde ou distúrbios relacionados com o hormônio sexual em um mamífero, incluindo um humano. O humano pode ser um homem ou uma mulher. Em algumas modalidades, a condição de saúde ou distúrbio relacionados com o hormônio sexual é uma doença reprodutiva (em um sujeito do sexo masculino ou feminino), transição médica para transexuais incluindo a terapia de redesignação sexual de homem para mulher (MTF) ou de mulher para homem (FTM), seja ou não acompanhada pela cirurgia de redesignação sexual, fertilização in vitro (IVF) ou doação de óvulo (por exemplo para controlar a estimulação ovariana), contracepção incluindo inibição de ovulação, endometriose, afinamento endometrial, adenomiose, hiperplasia endometrial, leiomioma uterino (fibróides uterinos), síndrome pré-menstrual, hipertrofia prostática benigna, distúrbios ovarianos, doença do ovário policístico, puberdade precoce e similares e alguns tipos de cânceres incluindo cânceres da próstata, mama e ovário.

[0053] Em algumas modalidades, os anticorpos GHR-106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos atuam como antagonistas de GnRH no tratamento de qualquer condição que possa ser tratada pelos antagonistas de GnRH conhecidos incluindo antide ou cetrorelix. Em algumas modalidades, os anticorpos GHR-106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos são usados no tratamento de uma condição na qual uma meia- vida mais longa do que aquela dos antagonistas de GnRH conhecidos, incluindo antide ou cetrorelix, é desejável.

[0054] Em algumas modalidades, os anticorpos GHR-106 ou

18 / 25 fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que são administrados para o tratamento de condições de saúde ou distúrbios relacionados com o hormônio sexual não possuem funções efetoras. Um anticorpo que não possui funções efetoras não pode ativar, por exemplo, os caminhos da citotoxicidade dependente de complemento (CDC) ou da citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC). Em algumas modalidades, os anticorpos GHR-106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que não possuem funções efetoras têm um subtipo IgG4. Em algumas modalidades, os anticorpos GHR- 106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos inibem a ativação de complemento. Em algumas modalidades, a cadeia pesada do anticorpo tendo o subtipo IgG4 tem uma mutação S228P ou uma mutação equivalente, para impedir a troca de braço Fab. Em algumas modalidades, os anticorpos GHR- 106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que não possuem funções efetoras são fragmentos de ligação ao antígeno de IgG dos anticorpos GHR-106. Em algumas modalidades, os fragmentos de ligação ao antígeno que não possuem funções efetoras são os fragmentos de IgG F(ab’)2, Fab, scFab ou scFv dos anticorpos GHR-106. Em algumas modalidades, os anticorpos GHR-106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos são derivados de hGHR-106.

[0055] Em algumas modalidades, os anticorpos GHR-106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos são administrados em níveis de dosagem de 0,01 a 20 mg/kg a um sujeito humano ou em quantidades na faixa de 0,01 a 5 mg/kg ou qualquer valor intermediário dentro destas faixas, por exemplo 0,05, 0,10, 0,15, 0,20, 0,50, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5, 10,0, 10,5, 11,0, 11,5, 12,0, 12,5, 13,0, 13,5, 14,0, 14,5, 15,0, 15,5, 16,0, 16,5, 17,0, 17,5, 18,0, 18,5, 19,0, 19,5 ou mg/kg. A dosagem apropriada para se obter um efeito terapêutico desejado pode ser selecionada por uma pessoa versada na técnica e pode ser mais alta ou mais baixa do que as faixas estabelecidas. Em algumas modalidades nas

19 / 25 quais a afinidade e/ou especificidade de ligação do anticorpo GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo foram modificadas, o nível de dosagem do anticorpo modificado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é apropriadamente modificado.

[0056] Em algumas modalidades, os anticorpos GHR-106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos são administrados em intervalos repetidos espaçados, por exemplo a cada 5 a 30 dias ou qualquer valore entre eles, por exemplo a cada 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 ou 29 dias; a cada 2 a 8 semanas ou qualquer valor entre elas, por exemplo a cada 3, 4, 5, 6 ou 7 semanas ou a cada 2 a 6 meses ou qualquer valor entre eles, por exemplo a cada 3, 4 ou 5 meses. Em algumas modalidades, os anticorpos GHR-106 ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos que são administrados a um humano são anticorpos GHR-106 humanizados ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos.

[0057] Uma via típica de administração das composições farmacêuticas compreendendo anticorpos é por intermédio de injeção, tipicamente intravenosa. Entretanto, qualquer modo adequado de administração pode ser usado em várias modalidades. Exemplos

[0058] As modalidades da invenção são descritas adicionalmente com referência aos seguintes exemplos, que são ilustrativos e não limitantes por natureza. Exemplo 1.0 – Ensaio de Ligação Competitiva

[0059] Os ensaios de ligação competitivos foram realizados de acordo com protocolos aceitos, por exemplo como descrito na US 8361793. Na FIG. 1A, micropoços revestidos com células cancerosas OC-3-VGH foram usados para comparar a especificidade de ligação entre mGHR-106 e hGHR-106, assim como entre mGHR-106 e oligopeptídeos N1-29 derivados

20 / 25 separadamente a partir do receptor de GnRH de humano (Hu-P), de macaco (Mo-P) e de camundongo (Mu-P). Os oligopeptídeos N1-29 são derivados dos domínios extracelulares de terminal N dos receptores de GnRH de cada espécie. As sequências de aminoácidos de cada um de Hu-P, Mo-P e Mu-P são mostradas como SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 3 respectivamente na FIG. 3. Na FIG. 1B, micropoços revestidos com células cancerosas OC-3-VGH foram usados para comparar a especificidade de ligação entre hGHR-106 e cada um dos peptídeos de Hu-P, Mo-P e Mu-P.

[0060] Com referência à FIG. 1A, a inibição percentual do anticorpo mGHR106 ligando aos micropoços revestidos com células cancerosas OC-3- VGH pelo anticorpo hGHR106, peptídeos Hu-P, Mo-P e Mu-P é mostrada. As barras brancas e as barras pretas na FIG. 1A representam as concentrações diferentes de mGHR106 (0,50 µg/ml e 0,25 µg/ml, respectivamente) usadas em cada ensaio. Com referência à FIG. 1B, a inibição percentual da ligação de hGHR106 aos micropoços revestidos com células cancerosas OC-3-VGH pelo Hu-P, Mo-P e Mu-P (cada um a 1 µg/mL) é mostrada. IgG anti-humano de cabra-ALP (rotulada com fosfatase alcalina) foi usada como a sonda, com as barras de erro para ensaios em duplicata indicadas.

[0061] Como mostrado nas FIGs. 1A e 1B, mGHR106 e hGHR106 são mutuamente competitivos na ligação aos receptores de GnRH expressos na superfície de células cancerosas cultivadas (OC-3-VGH) assim como aos peptídeos sintéticos. Os peptídeos sintéticos N1-29 dos domínios extracelulares de receptores de GnRH de seres humanos e macacos foram também achados competir com a ligação de mGHR106 e hGHR106 aos receptores de GnRH humano expressos na superfície de células cancerosas cultivadas, mas não com o peptídeo sintético derivado de camundongo. Sem estar ligado pela teoria, é acreditado que tal ligação diferencial possa ser explicada pelo fato de que um alto grau de homologia de sequência foi observado entre os peptídeos N1-29 de humano e macaco (homologia ≥ 94%),

21 / 25 mas não entre os peptídeos N1-29 de humano e camundongo (homologia ≤ 79%) como mostrado na FIG. 3. Exemplo 2.0 – Indução da Apoptose de Células Cancerosas

[0062] De modo a comparar os efeitos antiproliferativos (ou apoptose) entre mGHR106 ou hGHR106 e antide nas células cancerosas, o Kit de Detecção da Morte de Célula In Situ, POD (Roche, Canadá) foi utilizada para a detecção e quantificação da apoptose de células cancerosas cultivadas e tratadas in vitro. Em resumo, as células cancerosas foram cultivadas em meio RPMI-1640 a 37°C em um incubador de CO2 (5%) durante 24 e/ou 48 horas até que todas as células cancerosas estivessem fixadas aos micropoços. A seguir da remoção do meio de cultura de célula, meio livre de soro fresco foi adicionado durante uma incubação de 3 horas adicionais em um incubador de CO2.

[0063] Depois do período de inanição sem soro, as células foram incubadas em meio fresco contendo 10% de soro de bezerro fetal e hGHR106, mGHR106 ou antide de concentração conhecida foi adicionado para coincubação de 24 a 72 horas. Como o controle negativo, IgG de camundongo normal ou IgG de humano normal da mesma concentração foi usada durante o mesmo período de incubação.

[0064] No final da incubação, as células fixadas foram removidas dos poços de cultura de tecido pela solução de desprendimento de célula apropriada. A apoptose das células cancerosas tratadas foi quantitativamente determinada pelo ensaio TUNEL com as instruções providas pelo Kit de Detecção da Morte de Célula, POD (Roche, Canadá). Os aumentos percentuais de células com apoptose depois dos tratamentos com qualquer um de hGHR106, mGHR106 e antide foram obtidos subtraindo-se a apoptose espontânea a partir do controle negativo.

[0065] As FIGs. 2A e 2B mostram os resultados dos ensaios de apoptose TUNEL comparativos. As barras pretas nas FIGs. 2A e 2B

22 / 25 representam o aumento percentual das células com apoptose depois do tratamento com mGHR-106, hGHR-106 ou antide. As barras brancas representam o controle negativo, que foi 10 µg/mL de IgG de camundongo normal ou 10 µg/mL de IgG de humano para cada conjunto correspondente de experimentos. Todos os resultados apresentados foram estatisticamente significantes, com p<0,01 ou p<0,001.

[0066] Com referência às FIGs. 2A e 2B, mGHR-106 ou hGHR-106 e antide exibem graus muito similares de apoptose induzida em uma base molar (os pesos moleculares de GHR-106 e antide são 80 KDa e 1,5 KDa respectivamente). Estes resultados demonstram que mGHR-106 ou hGHR- 106 atua de modo similar ao antagonista de GnRH conhecido antide em termos de suas propriedades funcionais. Exemplo 3.0 – Estudos Comparativos da Regulagem de Gene

[0067] A regulagem comparativa de gene na administração de hGHR106 ou do análogo decapeptídico de GnRH antide foi examinada usando protocolos convencionais, por exemplo como descrito na US

8361793. A FIG. 4 mostra uma comparação dos padrões de regulagem de gene de hGHR-106 e antide na ligação ao receptor de GnRH humano nas células cancerosas. As expressões de vários genes selecionados envolvidos na proliferação ou sobrevivência de células cancerosas foram comparadas. Os genes selecionados incluem: GnRH, GnRHR, P0, P1, P2, L37 e EGF, c-fos, P21 e ciclina D1. P0, P1, P2 e L37 são proteínas ribossômicas.

[0068] Com referência à FIG. 4, a expressão dos genes examinados foi achada mudar significantemente a seguir da ligação de hGHR-106 ou antide. Nos respectivos tratamentos de ligante, hGHR-106 e antide foram achados suprarregular a expressão de GnRH (≥ 50%), enquanto a expressão do receptor de GnRH (GnRHR) permaneceu inalterada. O EGF (fator de crescimento epidérmico) e Ciclina D1 (regulador do ciclo celular) foram ambos infrarregulados no tratamento de células cancerosas com cada ligante.

23 / 25 Como mostrado na FIG. 4, hGHR-106 e antide foram achados ter mudanças idênticas nos padrões de regulagem de gene para os genes listados na ligação ao receptor de GnRH nas células cancerosas.

[0069] Os resultados deste estudo comparativo de regulagem de gene demonstram que hGHR-106 atua similarmente ao antagonista decapeptídico de GnRH exemplar, antide. Estes resultados também sustentam que os dois ligantes têm mecanismos moleculares similares de ação, isto é, como antagonistas de GnRH, na interação com células cancerosas. Exemplo 4.0 – Comparação de meias-vidas

[0070] A Tabela 1 é uma comparação das meias-vidas estimadas de hGHR-106 e seus fragmentos de IgG, assim como análogos decapeptídicos de GnRH selecionados e fármacos de anticorpo humano clinicamente usados. TABELA 1 – Comparação da meia-vida em circulação estimada de hGHR106 e seus fragmentos de IgG, análogos decapeptídicos de GnRH e anticorpos monoclonais clinicamente usados Candidatos a Fármaco Espécie Molecular (Peso Meia-Vida Estimada Molecular) Receptor Anti-GnRH de GHR106 IgG4 (humanizado) (160 KDa) 5 a 21 dias de Mab (IgG4) (Fab’) (110 KDa) 12 a 20 horas Fab (55 KDa) 12 a 20 horas ScFab (25 KDa) ≤ 12 horas Trastuzumab Humanizado (160 KDa) 24,2 horas Beracizumab Humanizado (160 KDa) 480 horas Panitumumab Humano (160 KDa) 180 horas Análogos decapeptídico de GnRH Cetrorelix (Antagonista) (1,5 KDa) 10 a 63 horas Luprorelin (Agonista) (1,5 KDa) 3 horas GnRH Nativa (1,5 KDa) 2 a 4 min

[0071] Como mostrado na Tabela 1, as séries de fragmentos com base em anticorpo diferentes que atuam como antagonistas de GnRH foram mostrados inibir uma faixa de meias-vidas em circulação diferentes. O inventor hipotetizou que o anticorpo hGHR-106 pode ser particularmente útil no tratamento de câncer visto que hGHR-106 tem uma meia-vida em circulação mais longa e estimula funções efetoras tais como as reações de CDC e ADCC na ligação de ligante à pituitária anterior. Ao contrário, a meia- vida moderada dos fragmentos de IgG de hGHR-106 podem ter aplicação

24 / 25 particular nos tratamentos de curta duração tais como para o tratamento de várias condições relacionadas com o hormônio sexual, incluindo condições relacionadas com fertilidade. Um exemplo de tal é a inibição de ovulação para bloquear a liberação de LH/FSH na pituitária anterior.

[0072] Embora vários aspectos e modalidades exemplares tenham sido debatidos acima, aqueles versados na técnica reconhecerão certas modificações, permutas, adições e subcombinações dos mesmos. É, portanto, pretendido que as seguintes reivindicações anexas e reivindicações futuramente introduzidas sejam interpretadas como incluindo todas de tais modificações, permutas, adições e subcombinações conforme forem compatíveis com a interpretação mais ampla do relatório descritivo como um todo.

[0073] Sem limitação, tais aspectos incluem o seguinte: • um primeiro aspecto compreendendo um antagonista do receptor do hormônio liberador de gonadotropina (GnRH) compreendendo um anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

[0074] • Um segundo aspecto compreendendo o antagonista do primeiro aspecto, em que a região cristalizável do fragmento (Fc) do anticorpo GHR-106 compreende qualquer um de um subtipo IgG1, IgG2 ou IgG3.

[0075] • Um terceiro aspecto compreendendo o antagonista do primeiro aspecto, em que a região Fc do anticorpo GHR-106 compreende um subtipo IgG4.

[0076] • Um quarto aspecto compreendendo o antagonista do primeiro aspecto, em que o fragmento de ligação ao antígeno do anticorpo GHR-106 é um de um fragmento IgG F(ab’)2, um Fab, um scFab ou um scFv.

[0077] • Um quinto aspecto compreendendo o antagonista do primeiro aspecto, em que o anticorpo GHR-106 compreende um anticorpo GHR-106

25 / 25 humanizado tendo uma cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5.

[0078] • Um sexto aspecto compreendendo o antagonista do quinto aspecto, em que o anticorpo GHR-106 humanizado tem cadeia leve tendo uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7.

[0079] • Um sétimo aspecto compreendendo o antagonista do terceiro aspecto, em que a região cristalizável do fragmento (Fc) de uma cadeia pesada do anticorpo de IgG4 compreende uma mutação de S para P na posição 228 (de acordo com a convenção de numeração EU para anticorpos) ou uma mutação equivalente que inibe a troca de braço Fab.

[0080] • Um oitavo aspecto compreendendo o antagonista do primeiro aspecto, em que uma ou mais das regiões de CDR do anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo são engenheiradas para modificar a afinidade e/ou especificidade de ligação do mesmo.

[0081] • Um nono aspecto compreendendo o uso de um anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo como definido em qualquer um dos aspectos precedentes no uso como definido em qualquer uma das reivindicações anexas.

[0082] • Um décimo aspecto compreendendo um método de administrar a um sujeito uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo como definido em qualquer um dos aspectos precedentes para realizar um uso como definido em qualquer uma das reivindicações anexas.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para uso como um antagonista de GnRH no tratamento de câncer ou uma condição ou distúrbio relacionados com o hormônio sexual em um sujeito.

2. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o anticorpo GHR-106 atua similarmente aos antagonistas decapeptídicos de GnRH conhecidos para tratar câncer ou uma condição ou distúrbio relacionados com o hormônio sexual.

3. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o antagonista decapeptídico de GnRH conhecido compreende antide ou cetrorelix.

4. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo não possui funções efetoras.

5. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo inibe a ativação de complemento.

6. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende um subtipo IgG4.

7. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma mutação S228P em uma cadeia pesada do anticorpo monoclonal GHR-106 ou uma mutação equivalente para inibir a troca de braço Fab de IgG4.

8. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a condição ou distúrbio relacionados com o hormônio sexual é uma doença reprodutiva, transição médica para transexuais, infertilidade, terapia reprodutiva assistida, contracepção, endometriose, afinamento endometrial, adenomiose, hiperplasia endometrial, leiomioma uterino, síndrome pré-menstrual, hipertrofia prostática benigna, distúrbios ovarianos, doença do ovário policístico ou puberdade precoce.

9. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a condição ou distúrbio relacionados com o hormônio sexual é uma condição que é conhecida ser tratável pela administração de antagonistas de GnRH conhecidos, em que os antagonistas de GnRH conhecidos opcionalmente compreendem antide ou cetrorelix.

10. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o câncer ou a condição ou distúrbio relacionados com hormônio sexual é um em que uma meia-vida mais longa de um agente de tratamento ativo na circulação do que os antagonistas decapeptídicos de GnRH conhecidos é desejável.

11. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é usado para controlar a ovulação.

12. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o fragmento de ligação ao antígeno do anticorpo monoclonal GHR-106 compreende um fragmento de anticorpo de IgG, em que o fragmento de anticorpo de IgG opcionalmente compreende um F(ab’)2, Fab, scFab ou scFv.

13. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o sujeito é um humano, opcionalmente um homem ou uma mulher, e em que o anticorpo monoclonal GHR-106 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende um anticorpo monoclonal GHR-106 humanizado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo.

14. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o anticorpo monoclonal GHR-106 tem uma meia-vida na circulação humana dentre 5 e 22 dias.

15. Anticorpo monoclonal GHR-106 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o anticorpo GHR-106 compreende um anticorpo GHR-106 humanizado tendo uma cadeia pesada tendo uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5; e/ou em que o anticorpo GHR-106 humanizado tem cadeia leve tendo uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7.