ES2237475T3 - Prevencion y tratamiento de una infeccion bacteriana pulmonar o de una exposicion pulmonar sintomatica a endotoxina por inhalacion de farmacos antiendotoxinicos. - Google Patents

Prevencion y tratamiento de una infeccion bacteriana pulmonar o de una exposicion pulmonar sintomatica a endotoxina por inhalacion de farmacos antiendotoxinicos.

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ES2237475T3 ES00980723T ES00980723T ES2237475T3 ES 2237475 T3 ES2237475 T3 ES 2237475T3 ES 00980723 T ES00980723 T ES 00980723T ES 00980723 T ES00980723 T ES 00980723T ES 2237475 T3 ES2237475 T3 ES 2237475T3
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Abstract

Uso de un compuesto antiendotoxínico para la preparación de una composición farmacéutica destinada a la prevención y tratamiento de la infección bacteriana pulmonar o la exposición pulmonar sintomática a endotoxina, en un paciente, en el que dicha composición farmacéutica se administra a dicho paciente mediante inhalación, en el que dicho compuesto antiendotoxínico es un análogo de Lípido A, y en el que dicho análogo de Lípido A tiene la fórmula: en la que R1 se selecciona de entre el grupo que consiste en en las que cada uno de J, K y Q, independientemente, es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado; L es O, NH, o CH2; M es O o NH; y G es NH, O, S, SO, o SO2; R2 es alquilo de C5 a C15 lineal o ramificado; R3 se selecciona de entre el grupo que consiste en alquilo de C5 a C18 lineal o ramificado, y en las que E es NH, O, S, SO, o SO2; cada uno de A, B y D, independientemente, es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado; R4 se selecciona de entre el grupo que consiste en alquilo de C4 a C20lineal o ramificado, y en la que cada uno de U y V, independientemente, es alquilo de C2 a C15 lineal o ramificado, y W es hidrógeno o alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado; RA es R5 o R5-O-CH2-, seleccionándose R5 de entre el grupo que consiste en hidrógeno, J¿, -J¿-OH, -J¿-O-K¿, -J¿-O-K¿-OH, y ¿J¿-O-PO(OH)2, en los que cada uno de J¿ y K¿, independientemente, es alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado; R6 se selecciona de entre el grupo que consiste en hidroxi, halógeno, alcoxi de C1 a C5, y aciloxi de C1 a C5; A1 y A2, independientemente, se seleccionan de entre el grupo que consiste en OH, en las que Z es alquilo de C1 a C10 lineal o ramificado; o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Description

Prevención y tratamiento de una infección bacteriana pulmonar o de una exposición pulmonar sintomática a endotoxina por inhalación de fármacos antiendotoxínicos.
La presente invención se refiere al uso de una antiendotoxina en el tratamiento profiláctico y afirmativo de una infección bacteriana pulmonar o de exposición pulmonar sintomática a endotoxina, mediante inhalación.
Antecedentes de la invención
Se ha estimado que la incidencia de bacteriemia por gram-negativas en los Estados Unidos de América es de aproximadamente 100.000 a 300.000 casos por año, con un índice de mortalidad de 30-60%. Los antibióticos se usan habitualmente como la quimioterapia principal para esta enfermedad. Sin embargo, su acción bactericida puede dar como resultado la destrucción de la bacteria y la liberación concomitante de endotoxina, es decir, el resto lipopolisacárido (LPS) de la membrana externa bacteriana. El LPS liberado induce un número de acontecimientos patofisiológicos en mamíferos (denominados colectivamente como endotoxemia gram-negativa o síndrome septicémico). Estos incluyen fiebre, inflamación generalizada, coagulación intravascular diseminada (DIC), hipotensión, insuficiencia renal aguda, síndrome disneico agudo (ARDS), destrucción hepatocelular, e insuficiencia cardíaca.
Aunque la endotoxina inicia el choque septicémico, presenta un escaso o ningún efecto tóxico directo sobre los tejidos; en su lugar, dispara una respuesta inmunobiológica que conduce a una cascada de liberación de citoquinas, tales como factor de necrosis tumoral (TNF), interleuquina-1, interleuquina-6, e interleuquina-8, y otros mediadores biológicos, tales como óxido nítrico, así como un conjunto de mediadores secundarios (por ejemplo, prostaglandinas, leucotrienos, interferones, factor activador de plaquetas, endorfinas, y factores estimulantes de colonias). La generación de concentraciones patofisiológicas de estas citoquinas y mediadores inflamatorios influye en el tono vasomotor, en la permeabilidad microvascular, y en la agregación de leucocitos y plaquetas, provocando un síndrome denominado "síndrome de respuesta inflamatoria sistémica" (o SIRS) y choque septicémico.
La molécula de lipopolisacárido bacteriano tiene tres regiones principales: un polisacárido de cadena larga (antígeno O), una región central, y una región de lípido A. Toda la molécula de lipopolisacárido, así como algunos de sus componentes individuales, posee efectos tóxicos, como se describen anteriormente. Sin embargo, se cree que la mayoría de estos efectos tóxicos es atribuible a la porción lipídica A. Estructuralmente, el lípido A está compuesto de un disacárido difosforilado, acilado mediante ácidos grasos de cadena larga.
Las terapias para enfermedades relacionadas con endotoxinas se han dirigido generalmente a controlar la respuesta inflamatoria. Tales terapias incluyen tratamiento con corticosteroides, sugerido para mejorar la lesión de la membrana celular mediada por endotoxinas, y para reducir la producción de ciertos mediadores biológicos; la administración de anticuerpos diseñados para neutralizar el LPS bacteriano; el tratamiento con agentes para suprimir la hipotensión, o con naloxona, que bloquea aparentemente los efectos hipotensores asociados con el síndrome séptico; y el tratamiento con fármacos antiinflamatorios no esteroideos, con el que se pretende bloquear las ciclooxigenasas y, de ese modo, disminuir la producción de ciertos mediadores secundarios, tales como prostaglandinas y tromboxano.
Sin embargo, ninguna de estas terapias, hasta la fecha, ha dado como resultado una reducción significativa en la morbilidad y mortalidad que resultan de la septicemia y del síndrome de choque septicémico. De este modo, existe una necesidad largamente sentida de agentes para tratar afirmativamente este trastorno.
Christ et al., "Anti-Endotoxin Compounds", patente U.S. nº 5.530.113, describe ciertos compuestos disacáridos, tales como B531, mostrado a continuación, útil para el tratamiento de endotoxemia.
1
Otras referencias que describen ciertos lipodisacáridos incluyen Macher et al., patente de Gran Bretaña nº
2.179.945; Meyers et al., patente de Gran Bretaña nº 2.220.211; Shiba et al., patente europea nº 172.581, Anderson et al., patente U.S. nº 4.495.346; y Shiba et al., patente nº 5.066.794. El documento WO 96/39411 describe lipopolisacáridos sustituidos, útiles en el tratamiento y prevención de endotoxemia.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a la prevención y tratamiento de una infección bacteriana pulmonar o exposición pulmonar sintomática a endotoxinas, y de trastornos relacionados, usando análogos de polisacáridos que se administran mediante inhalación. Los compuestos usados en la presente invención poseen ventajas para uso farmacéutico, tal como una selectividad farmacológica mejorada, una eficacia, y, en particular, una persistencia de acción aumentada. A continuación se muestra un compuesto representativo de esta invención, compuesto 1 (1287; SGEA):
2
Además, la presente invención se refiere al tratamiento profiláctico y afirmativo de cualquier trastorno mediado por LPS. Estos trastornos incluyen, pero no se limitan a, infección, septicemia (que incluye pero no se limita a endotoxemia), endotoxemia que resulta de bacteriemia por gram-negativas (con sus síntomas concomitantes de fiebre, inflamación generalizada, coagulación intravascular diseminada, hipotensión, insuficiencia renal aguda, síndrome disneico agudo, síndrome disneico agudo del adulto (ARDS), destrucción hepatocelular y/o insuficiencia cardíaca), y diversas formas de choque septicémico (incluyendo pero sin limitarse a choque endotóxico). También, los compuestos de esta invención serán útiles en el tratamiento profiláctico o afirmativo de la respuesta inflamatoria sistémica o localizada a infección por diferentes tipos de organismos, incluyendo bacterias gram-negativas, y en enfermedades relacionadas con la translocación de bacterias gram-negativas o endotoxina del intestino. Todos juntos, estos trastornos se denominan síndrome de respuesta inflamatoria sistémica o SIRS. (Para una discusión de estos términos, véase Bone et al., Chest 101:1644-1655, 1992).
Definiciones
Según la presente invención, y tal como se utilizan en la presente memoria, los siguientes términos se describen con los siguientes significados, excepto que se establezca explícitamente de otro modo.
El término "alquilo" se refiere a grupos orgánicos alifáticos que pueden estar ramificados o pueden ser lineales, y que opcionalmente pueden estar sustituidos con uno o más átomos de halógeno en cualquier posición a lo largo de la cadena alquílica. Los grupos alquilo incluyen tanto grupos que tienen una única valencia no ocupada, por ejemplo, -CH_{2}-CH_{3}-, como grupos alquilénicos que tienen dos valencias no ocupadas, por ejemplo -CH_{2}-CH_{2}-. Como es obvio para los expertos en la técnica, la valencia no ocupada única o doble se usará según sea apropiado para describir compuestos que son químicamente estables.
El término "profármaco", tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a cualquier compuesto que tenga menos actividad intrínseca que el "fármaco" correspondiente, pero que, cuando se administra a un sistema biológico, genera el "fármaco", ya sea como resultado de una reacción química espontánea o por una reacción metabólica o catalizada por enzimas. Se hace referencia a diversos profármacos, tales como los ésteres de acilo, carbonatos, fosfatos, y uretanos, incluidos aquí como ejemplos. Los grupos ilustrados son ejemplares, no exhaustivos, y el experto en la técnica podría preparar otras variedades conocidas de profármacos. Tales profármacos de los compuestos de Fórmula I caen dentro del alcance de la presente invención.
La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" incluye sales de compuestos de Fórmula I derivadas de la combinación de un compuesto de esta invención y de un ácido o base orgánico o inorgánico. Los compuestos de Fórmula I son útiles tanto en forma no ionizada como en forma salina. En la práctica, el uso de una forma salina equivale al uso de una forma de base; ambas formas están dentro del alcance de la invención.
La expresión "isómeros geométricos" se refiere a isómeros "trans" o "cis" (o "entgegen" o "zusammen"), como generalmente lo entienden los expertos en la técnica. Todos los isómeros geométricos están dentro del alcance de la invención.
Además, los compuestos de la presente invención pueden contener átomos de carbono asimétricos, y por tanto pueden existir como estereoisómeros, tanto enantiómeros como diastereómeros. Se considera que todos los estereoisómeros y mezclas de los mismos caen dentro del alcance de la presente invención. Los ejemplos sintéticos citados aquí proporcionan el isómero más preferido. Es evidente que, además del resto de azúcar, pueden estar presentes carbonos asimétricos adicionales en los compuestos de Fórmula I, por ejemplo en las cadenas laterales. En este caso, se considera que todos los diastereómeros resultantes caen dentro del alcance de la presente invención.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 representa la inhibición de liberación de TNF-\alpha mediante el Compuesto 1, que ilustra la inhibición de la inducción, mediada por LPS, del factor de necrosis tumoral (TNF) en sangre completa humana, mediante un compuesto de esta invención.
La Figura 2 representa el esquema general usado para analizar la eficacia antagonista del fármaco después de la incubación en sangre completa durante diversos tiempos.
La Figura 3 representa la relación entre el tiempo frente a la capacidad del compuesto de ensayo para inhibir TNF-\alpha, y demuestra que el Compuesto 1 tiene una duración de acción superior, como antagonista de LPS, que la que tiene B531. Estos datos son la media de 7 experimentos separados, cada experimento por triplicado.
Descripción detallada
La invención proporciona métodos para prevenir y tratar la infección bacteriana pulmonar, la exposición pulmonar sintomática a endotoxina, y patologías relacionadas, en un paciente, mediante la administración al paciente de un compuesto antiendotoxínico mediante inhalación. Estos compuestos y métodos se describen adicionalmente, según lo siguiente.
Liposacáridos
En un aspecto, la presente invención se refiere al uso de liposacáridos sustituidos que incluyen compuestos de fórmula general I.
3
en la que R^{1} se selecciona de entre el grupo que consiste en
\vskip1.000000\baselineskip
4
1000
\vskip1.000000\baselineskip
en las que cada uno de J, K y Q, independientemente, es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado; L es O, NH, o CH_{2}; M es O o NH; y G es NH, O, S, SO, o SO_{2};
R^{2} es alquilo de C5 a C15 lineal o ramificado;
R^{3} se selecciona de entre el grupo que consiste en alquilo de C5 a C18 lineal o ramificado,
5
\vskip1.000000\baselineskip
6
7
8
9
en las que E es NH, O, S, SO, o SO_{2}; cada uno de A, B y D, independientemente, es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado;
R^{4} se selecciona de entre el grupo que consiste en alquilo de C4 a C20 lineal o ramificado, y
10
en la que cada uno de U y V, independientemente, es alquilo de C2 a C15 lineal o ramificado, y W es hidrógeno o alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado;
R_{A} es R^{5} o R^{5}-O-CH_{2}-, seleccionándose R^{5} de entre el grupo que consiste en hidrógeno, J', -J'-OH, -J'-O-K', -J'-P-K'-OH, y -J'-O-PO(OH)_{2}, en los que cada uno de J' y K', independientemente, es alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado;
R^{6} se selecciona de entre el grupo que consiste en hidroxi, halógeno, alcoxi de C1 a C5, y aciloxi de C1 a C5;
A^{1} y A^{2}, independientemente, se seleccionan de entre el grupo que consiste en
OH,
-- O --
\melm{\delm{\para}{OH}}{P}{\uelm{\dpara}{O}}
-- OH,
O -- Z -- O --
\melm{\delm{\para}{OH}}{P}{\uelm{\dpara}{O}}
-- OH,
Z --
\melm{\delm{\para}{OH}}{P}{\uelm{\dpara}{O}}
-- OH,
y
O -- Z -- CO_{2}H
en las que Z es alquilo de C1 a C10 lineal o ramificado;
o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Realizaciones de la fórmula anterior incluyen lo siguiente, o combinaciones de lo siguiente:
R^{2} es alquilo lineal o ramificado de C8 a C15;
R^{2} es alquilo lineal o ramificado de C9 a C12;
R^{2} es alquilo lineal o ramificado de C10;
A^{1} y A^{2}, independientemente, son OH o -O-PO(OH)_{2};
R^{6} es hidroxi;
R^{5} es alquilo lineal o ramificado de C1 a C5;
R^{1} se selecciona de entre el grupo que consiste en
11
12
13
y
14
en las que cada uno de J, K y Q, independientemente, es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado; R^{3} se selecciona de entre el grupo que consiste en
15
y
16
en las que cada uno de A, B y D, independientemente, es alquilo de C1 a C18 lineal o ramificado; los dobles enlaces de R^{3} son cis o zusammen;
los dobles enlaces de R^{3} son trans o entgegen;
R^{4} se selecciona de entre el grupo que consiste en alquilo de C4 a C20 lineal o ramificado, y
17
en la que U es alquilo de C2 a C5 lineal o ramificado, V es alquilo de C5 a C12 lineal o ramificado, y W es hidrógeno o alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado;
R_{A} es R^{5}; y R_{A} es R^{5}-O-CH_{2}-.
En otras realizaciones, cada uno de A^{1} y A^{2}, independientemente, se selecciona de entre el grupo que consiste en OH y -O-PO(OH)_{2};
R^{1} se selecciona de entre el grupo que consiste en
18
\vskip1.000000\baselineskip
19
20
y
21
en las que cada uno de J, K y Q, independientemente, es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado; R^{2} es alquilo de C8 a C15 lineal o ramificado;
R^{3} se selecciona de entre el grupo que consiste en
22
y
23
en la que cada uno de A, B y D, independientemente, es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado;
R^{4} es
24
en la que U es alquilo de C2 a C5 lineal o ramificado, V es alquilo de C5 a C12 lineal o ramificado, y W es hidrógeno o alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado;
y R^{5} es alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado; y
R^{6} es hidroxi.
En otra realización, A^{1} y A^{2} son -O-PO(OH)_{2};
R^{1} se selecciona de entre el grupo que consiste en
25
26
27
y
28
en las que cada uno de J y Q, independientemente, es alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado, y K es alquilo de C8 a C15 lineal o ramificado;
R^{2} es alquilo de C8 a C15 lineal o ramificado;
R^{3} es
29
en la que A es alquilo de C5 a C12 lineal o ramificado, y B es alquilo de C6 a C12 lineal o ramificado;
R^{4} es
30
en la que U es alquilo de C2 a C5 lineal o ramificado, V es alquilo de C5 a C12 lineal o ramificado, y W es hidrógeno o alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado; y
R^{5} es alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado; y
R^{6} es hidroxi.
En otra realización, A^{1} y A^{2} son -O-PO(OH)_{2};
R^{1} se selecciona de entre el grupo que consiste en
31
32
y
33
en las que cada uno de J y Q, independientemente, es alquilo de C1 a C3 lineal o ramificado, y K es alquilo de C10 a C12 lineal o ramificado;
R^{2} es alquilo de C9 a C12 lineal o ramificado;
R^{3} es
34
en la que A es alquilo de C8 a C12 lineal o ramificado, y B es alquilo de C6 a C10 lineal o ramificado;
R^{4} es
35
en la que U es alquilo de C2 a C4 lineal o ramificado, V es alquilo de C5 a C10 lineal o ramificado, y W es hidrógeno o alquilo de C1 a C3 lineal o ramificado; y
R^{5} es alquilo de C1 a C3 lineal o ramificado; y
R^{6} es hidroxi.
En otra realización, A^{1} y A^{2} son -O-PO(OH)_{2};
R^{1} es
36
R^{2} es (CH_{2})_{9}CH_{3};
R^{3} es
37
R^{4} es
38
R^{5} es -CH_{3}; y
R^{6} es hidroxi.
También están dentro del alcance de la invención los compuestos en los que R1 y R3 son grupos sulfonilo, es decir, compuestos en los que el grupo carbonilo, en estas cadenas laterales, está sustituido por SO_{2}. Estos compuestos se podrían preparar tratando al azúcar alcohólico apropiadamente sustituido con el cloruro de alquilsulfonilo apropiado. De este modo, R1 y R3 también se pueden seleccionar a partir de lo siguiente, con A, B, D, E, J, K, L, Q y M como se definen anteriormente:
39
40
41
42
43
44
y
45
Adicionalmente, están dentro del alcance de la invención los compuestos en los que el punto de insaturación, en la cadena lateral R3, no es un doble o un triple enlace carbono-carbono, sino que es un grupo aromático opcionalmente sustituido, es decir, compuestos en los que R3 pueden tener la siguiente estructura:
46
y
47
en las que E es NH, O, S, SO, o SO_{2}; cada A es alquileno de C1 a C15 lineal o ramificado; D es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado; F es H, -OT, NT^{1}T^{2}, -CO_{2}T, fenilo o nada, en los que cada uno de T, T^{1} y T^{2} se selecciona independientemente de hidrógeno o de alquilo de C1 a C5; cuando B está próximo a F, y F es nada, B es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado.
En general, se prefieren compuestos en los que:
R^{1} se selecciona de entre el grupo que consiste en:
48
en las que cada uno de J, K y Q, independientemente, es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado;
R^{2} es alquilo C8 a C12 lineal o ramificado;
R^{3} se selecciona de entre el grupo que consiste en:
49
en las que cada uno de A, B y D, independientemente, es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado;
R^{4} es
50
en la que U es alquilo de C2 a C5 lineal o ramificado, V es alquilo de C4 a C10 lineal o ramificado, y W es hidrógeno o alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado;
R^{5} se selecciona de entre el grupo que consiste en: hidrógeno, -J', y -J'OH, en los que J' es alquilo lineal o ramificado de C1 a C5;
R^{6} se selecciona de entre el grupo que consiste en hidroxi, halógeno, y aciloxi de C1 a C5;
cada uno de A^{1} y A^{2}, independientemente, se selecciona de entre el grupo que consiste en:
OH y
-- O --
\melm{\delm{\para}{OH}}{P}{\uelm{\dpara}{O}}
-- OH;
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Son más preferidos los compuestos de fórmula 1 en los que:
R^{1} se selecciona de entre el grupo que consiste en:
51
en las que J es alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado, y K es alquilo de C9 a C14 lineal o ramificado;
R^{2} es alquilo de C8 a C12 lineal o ramificado;
R^{3} es
52
en la que A es alquilo de C6 a C12 lineal o ramificado, y B es alquilo de C4 a C8 lineal o ramificado;
R^{4} es
53
en la que U es alquilo de C2 a C4 lineal o ramificado, V es alquilo de C5 a C9 lineal o ramificado, y W es hidrógeno o alquilo de C1 a C3 lineal o ramificado;
R^{5} es alquilo lineal o ramificado de C1 a C3;
R^{6} es hidroxi;
A^{1} y A^{3} son
-- O --
\melm{\delm{\para}{OH}}{P}{\uelm{\dpara}{O}}
-- OH;
o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Métodos sintéticos generales
Esta invención también se refiere a procedimientos para preparar compuestos de Fórmula I. Se describen aquí las rutas sintéticas generales para preparar compuestos de esta invención diversamente sustituidos. A continuación se muestra la síntesis para un compuesto de esta invención, el compuesto 1 (1287; SGEA).
La mayoría de los reactivos y materiales de partida son bien conocidos por los expertos en la técnica. Ciertos reactivos y materiales de partida para esta preparación se describen con detalle por Christ et al., patente U.S. nº 5.530.113, cuya descripción se incorpora aquí como referencia.
A continuación se esquematiza una síntesis de los compuestos de esta invención. Aunque este ejemplo describe la preparación del compuesto 1 (1287; SGEA), el uso de materiales de partida alternativos producirá otros análogos de esta invención. De este modo, la síntesis tiene de hecho naturaleza general.
Por ejemplo, el uso de agentes alquilantes alternativos, en la etapa sintética 22, proporcionará análogos con sustituyentes estructuralmente diferentes en R1. El patrón de sustitución en R2 está controlado mediante el uso del agente alquilante apropiado, en la etapa 15. Adicionalmente, la sustitución de compuestos alternativos adecuados, en la etapa 25 en la síntesis, producirá análogos que difieren con respecto a R3.
Los análogos sin la cadena lateral oxigenada en R_{A} se pueden preparar usando ligeras variaciones en el esquema sintético mostrado a continuación, como será conocido por los expertos en la técnica. Para el compuesto en el que R_{A} es metilo, por ejemplo, el producto de la etapa 8 sintética, el tosilato, podría sustituir este grupo por yodo en la reacción de Finkelstein. El compuesto yodado se podría deshalogenar mediante tratamiento con cinc metálico para dar un grupo metilo en la posición R_{A}.
A continuación se esquematiza una síntesis representativa de la cadena lateral de R4. La preparación de variaciones de esta cadena lateral se puede lograr sustituyendo el material de partida por otros materiales de partida adecuados. Por ejemplo, la longitud o ramificación de esta cadena lateral se puede preparar partiendo del material de partida apropiado. De este modo, el uso de tosilatos alternativos, en la etapa 6, producirá la variación en R4.
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De este modo, la síntesis esquematizada brevemente a continuación proporciona rutas versátiles para los compuestos de esta invención. (Para detalles que se refieren a la síntesis, véanse los siguientes ejemplos experimentales).
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Se cree que la ruta mostrada anteriormente, Ruta 1, es el método superior para preparar compuestos de la presente invención. Debido a una variedad de factores, tal como el uso de materiales de partida más baratos, mayores rendimientos, y el uso de agentes químicos menos tóxicos, se puede usar la ruta ilustrada a continuación, Ruta 2, para preparar compuestos de esta invención.
La mayoría de los reactivos y materiales de partida son bien conocidos por los expertos en la técnica. Ciertos reactivos y materiales de partida para esta preparación se describen con detalle por Christ et al., Patente U.S. nº 5.530.113, cuya descripción se incorpora aquí como referencia. Aunque este ejemplo describe la preparación del compuesto 1, el uso de materiales de partida alternativos producirá otros análogos de esta invención. De este modo, la síntesis es ciertamente de naturaleza general.
Por ejemplo, el uso de agentes alquilantes alternativos, en la preparación del intermedio U, proporcionará análogos con sustituyentes estructuralmente diferentes en R1. El patrón de sustitución en R2 se controla mediante el uso del agente alquilante apropiado, en la preparación del intermedio O. Además, la sustitución de compuestos alternativos adecuados para el intermedio E, en la preparación del intermedio G, producirá análogos que difieran con respecto de R3.
A continuación se esquematiza una síntesis representativa de la cadena lateral de R4. La preparación de variaciones de esta cadena lateral se puede lograr sustituyendo el material de partida por otros materiales de partida adecuados. Por ejemplo, la longitud o ramificación de esta cadena lateral se puede preparar partiendo del material de partida apropiado (para detalles que se refieren a la síntesis, véanse los siguientes ejemplos experimentales).
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A continuación se esquematiza una preparación representativa de la porción "izquierda".
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A continuación se muestra una síntesis representativa de la porción "derecha" del compuesto 1.
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Estas dos "mitades" de la molécula se acoplan entonces como se representa a continuación, y se elaboran posteriormente para dar el compuesto 1.
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Formulaciones
Los análogos del lípido A descritos aquí se administran al aparato respiratorio de un paciente humano que tiene, o que está en riesgo de tener, una infección bacteriana pulmonar o una exposición pulmonar sintomática a endotoxina. Dependiendo de las circunstancias, la administración puede ser crónica o aguda. En el caso de la administración crónica, la terapia se mantiene durante un período de tiempo prolongado (en algunos casos, durante el tiempo de vida de la persona), de forma que se mantenga la concentración de fármaco en el fluido o suero de la superficie de las vías respiratorias a un nivel terapéutica o profilácticamente eficaz durante el transcurso del tratamiento. La administración aguda del fármaco se lleva a cabo en circunstancias en las que se ha diagnosticado una exposición pulmonar a corto plazo a bacterias y/o a endotoxina, incluyendo una infección bacteriana recientemente diagnosticada o en riesgo de una infección inminente.
Tratamiento crónico
La administración crónica del análogo del lípido A se puede efectuar mediante una administración periódica de un bolo, mediante inhalación continua y medida, o mediante una combinación de ambas. Se administra una dosis única mediante inhalación de 1 \mug-24 mg, por ejemplo 5-150 \mug, o, preferiblemente, 10-100 \mug, del fármaco. Por supuesto, la enfermedad resistente al tratamiento puede requerir la administración de dosis relativamente elevadas, por ejemplo, 5 mg, cuyas cantidades apropiadas se pueden determinar por la persona experta en esta técnica. La frecuencia apropiada de administración se puede determinar por la persona experta en la técnica, y puede ser, por ejemplo, 1-4, por ejemplo 2-3, veces por día. Preferiblemente, el fármaco se administra una vez por día.
Una de las categorías principales de patologías que requieren la administración crónica es la predisposición innata o adquirida a la infección bacteriana pulmonar. Los ejemplos de patologías en esta categoría son:
Fibrosis cística
Deficiencias inmunitarias que incluyen:
Inmunodepresión debida a terapia anticáncer
Inmunodepresión debida a terapia antirrechazo tras un transplante de órganos
Asplenia
Hipogammaglobulinemia
Disglobulinemias
Deficiencias de componentes de la cascada del complemento
Infección por VIH, u otras infecciones víricas
Defectos de granulocitos polimorfonucleares
Discinesias ciliares (por ejemplo, síndrome de Kartagener)
Trastornos pulmonares obstructivos, que incluyen:
Insuficiencia cardíaca congestiva con edema pulmonar
Enfermedad pulmonar obstructiva crónica
Tumores que conducen a obstrucción bronquial
Bronquiectasia (por ejemplo, como una complicación del asma).
Tratamiento agudo
La administración aguda del análogo del lípido A, al igual que la administración crónica, se puede efectuar mediante administración por bolo o mediante administración continua, o mediante una combinación de ambas. La diferencia estriba en la duración del tratamiento: mientras que el tratamiento crónico se puede llevar a cabo durante semanas, meses, o incluso años, el tratamiento agudo se lleva a cabo típicamente durante períodos de horas o días. Se administra una dosis individual mediante inhalación de 1 \mug-24 mg, por ejemplo 5-150 \mug, o, preferiblemente, 10-100 \mug del fármaco. Por supuesto, la enfermedad resistente al tratamiento puede requerir la administración de dosis relativamente elevadas, por ejemplo, 5 mg, cuyas cantidades apropiadas se pueden determinar por la persona experta en esta técnica. La frecuencia apropiada de administración se puede determinar por la persona experta en esta técnica, y puede ser, por ejemplo, 1-4, por ejemplo 2-3, veces por día. Preferiblemente, el fármaco se administra una vez por día.
La dosis de fármaco suministrado de forma aguda durante un período de 24 horas puede ser mayor que la dosis suministrada de forma crónica. Sin embargo, generalmente, si se emplea la administración discreta de bolos, la administración se lleva a cabo una a seis veces a lo largo de un período de 24 horas. La administración del fármaco puede tener lugar hasta que los síntomas de la infección bacteriana pulmonar o de la exposición pulmonar a endotoxina, en el paciente, hayan disminuido hasta un grado satisfactorio, o, preferiblemente, hayan desaparecido. En algunos casos, puede ser necesario continuar la administración durante varios días, por ejemplo, una, dos, tres o cuatro semanas.
La administración aguda se lleva a cabo generalmente de forma profiláctica o inmediatamente tras el diagnóstico de una exposición a endotoxina o tras la existencia de una patología que podría predisponer a un paciente a una infección bacteriana pulmonar o a exposición a endotoxina. Un conjunto de tales condiciones que predisponen son los empleos que implican predeciblemente inhalación de materia en partículas. El fármaco se puede administrar habitualmente a trabajadores en tales empleos antes de la exposición a la materia en partículas. Estas condiciones incluyen:
Exposición a polvos de productos de plantas (por ejemplo, grano o algodón)
Exposición a aerosoles que portan bacterias (por ejemplo, procedentes de aguas residuales, agua contaminada, basura, o desechos humanos)
Exposición a partículas minerales inhalables que dañan la integridad del pulmón (por ejemplo, sílice).
Otra categoría de condiciones que requieren la administración aguda del fármaco son las lesiones agudas pulmonares que predisponen a infección, aumento de sensibilidad a endotoxina, o capacidad afectada para eliminar la endotoxina. Estas incluyen:
Inhalación de humo o exposición al calor (por ejemplo, lesión térmica; inhalación de aire caliente o de vapor de agua)
Aspiración de contenidos gástricos
Proximidad al ahogamiento
Inhalación de sustancias nocivas.
Los ejemplos de una categoría final de condiciones o circunstancias que pueden predisponer a infección bacteriana pulmonar o a aumento de la sensibilidad a endotoxina se enumeran a continuación; para la mayoría, estos requieren la administración aguda del fármaco, pero, en algunos casos, cuando la condición persiste, se requiere la administración crónica, a largo plazo:
Trauma (por ejemplo, trauma torácico)
Ventilación mecánica
Intubación con un tubo endotraqueal
Tabaquismo (enfisema; tendencia a la bronquitis)
Abuso de sustancias intravenosas
Exposición crónica a aire contaminado
Infección por Bordetella pertussis
Enfermedades de aparición repentina (aumento de riesgo de aspiración, que conduce a, por ejemplo, lesión química mediante el ácido del estómago)
Alcoholismo (aumento del riesgo de aspiración, que conduce a, por ejemplo, lesión química por el ácido del estómago)
Isquemia intestinal y reperfusión
Insuficiencia renal/uremia
Hipotensión y choque
Enfermedad hepática, que incluye cirrosis
Pancreatitis
Malnutrición
Lesiones térmicas
Neumonías víricas, que incluyen las provocadas por Myxovirus (por ejemplo, gripe)
Infecciones intravasculares (por ejemplo, endocarditis infecciosa).
Tanto la administración crónica como la aguda pueden emplear formulaciones estándares de administración pulmonar de fármacos. La administración mediante esta ruta ofrece varias ventajas, por ejemplo un comienzo rápido de acción administrando el fármaco al sitio de acción deseado, a concentraciones locales más elevadas. Las formulaciones pulmonares de fármacos se categorizan generalmente como formulaciones nebulizadas o en aerosol, que se describen individualmente a continuación, según lo siguiente.
Los nebulizadores emplean el fármaco en forma de gotita, en disolución o suspensión, con un vehículo líquido farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de este enfoque, tales como la nebulización por chorro, se describen, por ejemplo, en Flament et al., Drug Development and Industrial Pharmacy 21(20):2263-2285, 1995. De forma breve, en tales métodos, se hace pasar aire rápidamente a través de un orificio estrecho de un tubo, mediante el uso de una bomba, la presión del aire cae, creando un vacío, lo que da como resultado la succión del líquido contenido en un depósito conectado con el tubo. El líquido succionado se reduce de este modo a una pulverización o neblina fina, que se puede inhalar. Los aerosoles son formulaciones en polvo seco que se suministran habitualmente vía inhaladores a presión, de dosis medidas (en inglés pMDI). Las técnicas de formulaciones en aerosol, que se pueden aplicar para uso en la presente invención, se describen, por ejemplo, por Sciarra, "Aerosols", Capítulo 92 en Remington's Pharmaceutical Sciences, 16ª edición (ed. A. Osol), p. 1614-1628. El uso de pMDI tiene algunos inconvenientes, tales como el empleo de propelentes clorofluorocarbonados, que dañan el medioambiente. De este modo, se pueden usar alternativas, tales como inhaladores de polvo seco, dispositivos espaciadores, y cámaras de retención (véase, por ejemplo, Malcolmson et al., PSTT 1(9):394-398, 1998, y Newman et al., "Development of New Inhalers for Aerosol Therapy" en Proceedings of the Second International Conference on the Pharmaceutical Aerosol, p. 1-20).
Sin embargo, se entenderá que la cantidad específica de la dosis, para cualquier paciente particular, dependerá de una variedad de factores, que incluye la actividad del compuesto específico empleado, la edad, peso corporal, salud general, y sexo de la persona tratada, del tiempo y de la ruta de administración, de la velocidad de eliminación, de otros fármacos que se hayan administrado previamente, y de la gravedad de la enfermedad particular sometida a terapia.
Ejemplos
Los ejemplos de uso del método de la invención incluyen los siguientes. Los compuestos de esta invención y su preparación se pueden entender adicionalmente mediante los ejemplos, que ilustran algunos de los procedimientos mediante los cuales se preparan o se usan estos compuestos. Estos ejemplos no se deben considerar como limitantes específicos de la invención, y se considera que las variaciones de la invención, ahora conocida o por desarrollar más tarde, caen dentro del alcance de la presente invención, como se reivindica más adelante.
Los compuestos de la presente invención se citan mediante el número del compuesto según las tablas a continuación.
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Ejemplos químicos
Excepto que se señale de otro modo, todas las reacciones se realizaron en una atmósfera inerte. Los intermedios y productos finales dieron análisis espectrales (por ejemplo, espectroscopía de resonancia magnética nuclear y/o espectroscopía de masas) consistentes con sus estructuras propuestas. Las reacciones se monitorizaron mediante cromatografía de capa fina en gel de sílice. La cromatografía preparativa, excepto que se señale de otro modo, se realizó sobre gel de sílice.
Preparación del Compuesto 1 (1287; SGEA) mediante la Ruta 1
Todas las reacciones sensibles se realizaron en nitrógeno y en equipo seco, y se usó sulfato de sodio anhidro como agente secante, excepto que se especifique de otro modo. Todos los productos dieron espectros de resonancia magnética nuclear satisfactorios.
Purificación de
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El material (5 kg) se cromatografió sobre sílice, y se eluyó con un gradiente de hexano y EtOAc (100% hasta 33% de hexano). Las fracciones puras se combinaron y se destilaron (97-100ºC a 20 Pa). Rendimiento del material purificado: 4.513 g.
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A una disolución enfriada con hielo del éster (4500 g, 22,2 moles), en 12,6 l de THF, se añadió hidróxido sódico (27 moles) en 10,8 l de agua. La mezcla se agitó brevemente, y se añadieron 2,5 l de ácido clorhídrico concentrado. Las capas se separaron, y la capa acuosa se volvió a extraer con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio, y se concentraron. El producto se cristalizó lentamente para dar 2983 g de polvo blanco.
Purificación de
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A una disolución del ácido (15,8 moles), en 33 l de acetonitrilo, se añadió diciclohexilamina (16,7 moles). La disolución se calentó hasta 60ºC, y se dejó enfriar toda la noche. Los cristales se recogieron, se lavaron dos veces con disolvente, y se recristalizaron en acetonitrilo. A una suspensión de Amberlite IR-120 Plus (12 kg) previamente lavada en metanol, en EtOAc (24 l) y agua (24 l), se añadió la sal descrita anteriormente. La mezcla se agitó durante varias horas, y se separó la capa orgánica. La capa acuosa se volvió a extraer con EtOAc (12 l), y las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio) y se concentraron para dar 2.997 g de un sólido blanco.
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A una disolución 1 M caliente (\sim 67ºC) de hidruro de litio y aluminio (8 l), en THF, se añadió lentamente una disolución del ácido (1 kg) en 4 l de THF. La disolución se dejó enfriar toda la noche. La disolución se añadió lentamente a HCl acuoso 1 M (5 l). La mezcla se extrajo con tolueno (12 l). La capa orgánica se lavó con disolución de bicarbonato sódico, se secó (sulfato de sodio), y el disolvente se eliminó a vacío para dar un jarabe, que se destiló (103ºC) para dar 914 g de un aceite amarillo claro.
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A una disolución a 0ºC del diol (913,8 g), en piridina (3 l), se añadieron 3 l de trietilamina, seguido de una disolución de cloruro de tosilo (1 kg), en piridina (1,5 l) y trietilamina (1,5 l). La mezcla se dejó calentar toda la noche y se vertió sobre una disolución fría de HCl acuoso 6 M (16 l) y cloruro de metileno (8 l). La capa orgánica se separó, y la capa acuosa se extrajo con más cloruro de metileno. Las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio), y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió dos veces sobre sílice, y se eluyó con un gradiente de hexano:EtOAc (9:1 hasta 1:6), para dar 642 g de tosilato.
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A una suspensión de dispersión en aceite al 60% de hidruro de sodio (8,68 moles), en 1,15 l de DMF y 1,1 l de THF, se añadió lentamente el tosilato (1,139 kg) y yoduro de metilo (7,7 kg), en 1,15 l de DMF y 1,1 l de THF. La mezcla se agitó toda la noche, después se diluyó con DMF (3 l), y se añadió lentamente a una disolución acuosa saturada de cloruro amónico. La mezcla se extrajo con hexano (8 l), que se secó (sulfato de sodio), y el disolvente se eliminó para dar un aceite naranja/marrón. El aceite se cromatografió sobre sílice y se eluyó con un gradiente (hexano:EtOAc 100:0 hasta 6:1), para dar 940 g de un aceite amarillo claro.
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A una suspensión del aminoazúcar (1019 g), en 5 l de MeOH, se añadió una disolución al 25% de NaOMe en MeOH (1080 ml, 5 moles), seguido de 610 ml de trifluoroacetato de etilo. La mezcla se agitó toda la noche, el disolvente se eliminó a presión reducida, y el residuo se trituró con isopropanol. La mezcla se filtró y el residuo se lavó con isopropanol adicional, para dar 1369 g de producto.
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A una suspensión del hidroxiazúcar (1300 g), en piridina (4 l), se añadió dimetilaminopiridina (79 g), seguido de anhídrido acético (2713 ml). La mezcla se agitó toda la noche. El disolvente se eliminó a presión reducida. Se añadió tolueno (5 x 500 ml), y también se eliminó a presión reducida para dar un sólido, que se cromatografió sobre sílice. La elución con hexano:EtOAc (1:1) dio 1479 g de un sólido blanco.
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A una disolución del azúcar acetilado (1479 g), en 8 l de cloruro de metileno, se añadió alcohol alílico (764 ml), seguido de la adición lenta de tetracloruro de estaño (976 ml). La mezcla se agitó toda la noche y se vertió lentamente sobre agua enfriada con hielo (7,5 l). La capa orgánica se separó, y la capa acuosa se lavó con cloruro de metileno adicional. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato sódico acuoso, se secaron, y se concentraron a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice (7,5 kg) y se eluyó con un gradiente de hexano:EtOAc (4:1 hasta 1:1), para dar 1327 g de un aceite amarillo pálido.
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A una disolución enfriada con hielo del azúcar protegido (1322 g), en 8,5 l de metanol, se añadió una disolución al 25% de NaOMe en metanol (437 ml), durante una hora. A esto se añadieron 1740 g de resina Amberlite IR-120 Plus previamente lavada. La mezcla se filtró, se concentró, y el residuo se cromatografió sobre sílice. La elución con metanol dio 907 g de producto.
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El triol se suspendió en acetona (7,5 l), y se añadió ácido canfosulfónico (85 g), y después se añadió lentamente 2,2-dimetoxipropano (965 ml). La mezcla se agitó toda la noche, seguido de la adición de trietilamina (51 ml). El disolvente se eliminó a presión reducida para dar un sólido marrón, que se cromatografió sobre sílice. La elución con un gradiente de hexano:EtOAc (3:1 hasta 2:1) dio 842 g de una goma semi-blanca.
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A una suspensión de dispersión en aceite al 60% de hidruro de sodio (82 g), en 2,2 l de THF y 580 ml de DMF, se añadió el tosilato (351 g) y una disolución del alcohol libre (400 g) en una mezcla de 1360 ml de THF y 360 ml de DMF. La mezcla se agitó toda la noche. La mezcla se enfrió en hielo, y se añadió metanol seguido de agua (2 l). La mezcla se extrajo tres veces con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron y se concentraron. La mezcla resultante se cromatografió sobre sílice. La elución con gradiente de hexano:EtOAc (19:1 hasta 1:1) dio 711 g.
78
A una mezcla de ácido fluorhídrico acuoso al 48%, en 1500 ml de acetonitrilo en una botella de Teflón, se añadió una disolución del material de partida (613 g) en 750 ml de acetonitrilo y 750 ml de cloruro de metileno. La mezcla se agitó durante una hora y se vertió sobre 8 l de agua. La mezcla se extrajo con cloruro de metileno (4 x 2 l). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución acuosa saturada de bicarbonato sódico, se secaron y se concentraron a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente con cloruro de metileno:metanol (39:1 hasta 9:1) dio 519 g de producto.
79
A una disolución del diol (577 g), en piridina (5 l), se añadió cloruro de tosilo (339 g) y N,N-dimetilaminopiridina (14,5 g). La mezcla se agitó a RT durante dos días, y después se vertió sobre 14 l de ácido clorhídrico 1 M acuoso frío. La mezcla se extrajo (2 x 5 l) con cloruro de metileno. Las capas orgánicas combinadas se secaron y se concentraron. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente (hexano:EtOAc, 6:1 hasta 1:1) dio 632 g de un jarabe amarillo, que cristalizó lentamente al dejar reposar.
80
A una disolución a 85ºC de metóxido sódico al 25% en metanol (1825 ml), en DMF (1365 ml), se añadió el tosilato (714 g) en DMF (1365 ml), durante 1,25 horas. La mezcla se agitó 30 minutos, y se enfrió hasta 4ºC y se vertió sobre una mezcla enfriada en hielo de ácido clorhídrico 1 M acuoso y 4,6 kg de hielo. La mezcla se agitó durante 30 minutos, y se filtró. El filtrado se lavó con 2 l de agua, y las capas acuosas combinadas se extrajeron con 2 x 4 l de EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron y se concentraron. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre sílice. La elución en gradiente (hexano:acetato de etilo, 3:1 hasta 1:1) dio 549 g de un sólido amarillo pálido a blanco.
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81
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Esta reacción se llevó a cabo en argón. A una disolución de t-butóxido de potasio (139 g), en 440 ml de DMSO, se añadió una disolución del azúcar (247 g) en 440 ml de DMSO anhidro. La mezcla se calentó hasta 85ºC durante 1,5 horas, y después se añadieron 250 ml de agua y la mezcla se calentó toda la noche a 85ºC y se enfrió en un baño de hielo. La mezcla se vertió sobre 3,5 l de salmuera, y la mezcla se extrajo con 3 x 750 ml de cloruro de metileno. Las capas orgánicas combinadas se secaron y se concentraron para producir 560 g de un aceite marrón.
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82
A una mezcla de la amina libre (199 g) en 780 ml de THF y 390 ml de bicarbonato sódico acuoso saturado se añadió Troc-Cl (157 g). Después de 1/2 hora, la mezcla se vertió lentamente sobre una disolución de 500 ml de metilamina acuosa al 40% y 3 l de agua. La mezcla se extrajo con 2 x 1750 ml de cloruro de metileno. Las capas orgánicas combinadas se secaron y se concentraron. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente, con hexano: EtOAc (5:1 hasta 1:1), dio un rendimiento cuantitativo de 287 g de un sólido amarillo a blanquecino.
83
A una disolución del hidroxiazúcar, en 2 l de cloruro de metileno, se añadió tetrazol (155,6 g) seguido de dialildiisopropilfosforamidito (182 ml). Después de 1/2 hora, la mezcla se vertió sobre una mezcla enfriada en hielo de Oxone® (peroximonosulfato de potasio) (455,6 g), agua (1,25 l) y THF (2,5 l). Después de 15 minutos, esta mezcla se vertió sobre tiosulfato sódico acuoso al 10% frío. Después de 15 minutos, la mezcla se extrajo con 2 l de cloruro de metileno. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se volvió a extraer con cloruro de metileno, y las capas orgánicas combinadas se secaron y el disolvente se eliminó a vacío. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente, con hexano/acetato de etilo (6:1 hasta 2:1) dio 205,7 g de un jarabe amarillo pálido.
84
A una disolución de ácido fluorhídrico acuoso al 48%, 400 ml, en 1,2 l de acetonitrilo en un recipiente de Teflón, se añadió una disolución del azúcar, 138,8 g, en cloruro de metileno, 500 ml. La mezcla se agitó toda la noche, se diluyó con agua, 3 l, y se extrajo con cloruro de metileno, 2,4 l. La capa orgánica se lavó con disolución acuosa de bicarbonato sódico, se secó, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente (hexano:acetato de etilo, 2:1 hasta 1:1), seguido de la elución con un gradiente de cloruro de metileno:metanol (19:1 hasta 9:1), dio 129,2 g como una goma cerosa.
85
A una disolución enfriada en hielo de 450 g de 1-decanol, en 685 ml de trietilamina y 1125 ml de cloruro de metileno, se añadieron 330 ml de cloruro de mesilo. El baño de enfriamiento se retiró después de 1 hora y media, y el disolvente se eliminó a presión reducida. Al residuo se le añadieron 2,5 l de ácido clorhídrico acuoso 1 M. Esta mezcla se extrajo 3 x 2 l de cloruro de metileno. Las capas orgánicas se combinaron, se secaron, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución con hexano:acetato de etilo 1:1 dio 651 g de producto.
86
A una suspensión de dispersión en aceite al 60% de hidruro de sodio, en 1 l de THF y 470 ml de DMF, se añadió una disolución del alcohol en 280 ml de DMF y 1 l de THF, durante 1 hora. Después se añadió el mesilato, 470 g, durante 15 minutos. Después de 2 días, se añadieron 400 ml de metanol, seguido de 4 kg de hielo y 4 l de agua. Esta mezcla se extrajo con 2 x 4 l de acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se secaron, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente, con hexano:EtOAc (39:1 hasta 2:1), dio 618 g.
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Una disolución del azúcar, 520 g, en 5,2 l de ácido acético glacial y 1,3 l de agua, se agitó toda la noche. Se vertió sobre 7,5 l de agua, y se filtró. El filtrado se secó mediante destilación azeotrópica con tolueno (3 x 500 ml), a presión reducida, para dar 458 g.
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Esta reacción se llevó a cabo en argón. A una suspensión de t-butóxido de potasio, 295 g, en DMSO, 1 l, se añadió una disolución de 340 g del azúcar en 1,5 l de DMSO. La mezcla se calentó hasta 85ºC durante 1 hora y cuarto, y se añadieron 1,4 l de hidróxido potásico acuoso 3 M, y la mezcla se agitó toda la noche a 85ºC. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, y se vertió sobre una mezcla de 3,5 l de salmuera y 3,5 l de agua. La mezcla se extrajo tres veces con cloruro de metileno, se secó, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente, con cloruro de metileno:metanol (19:1 hasta 4:1), dio 740 g de producto.
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Una disolución del aminoazúcar, 740 g, en la imina de la benzofenona, 338 g, se calentó a 45ºC toda la noche. La mezcla se cromatografió sobre sílice y se eluyó con un gradiente de hexano/acetato de etilo (39:1 hasta 1:1) para dar 371 g de un sólido amarillo pálido.
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90
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A una disolución del azúcar diólico, 366 g, en 1,3 l de DMF, se añadió imidazol, 118 g, seguido de cloruro de t-butildimetilsililo, 117 g. Después de 5 minutos, la mezcla se vertió sobre 1,4 l de bicarbonato sódico saturado acuoso. La mezcla se extrajo con acetato de etilo tres veces. Las capas orgánicas se combinaron, el disolvente se eliminó a presión reducida, y el residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente, con hexano/acetato de etilo (49:1 hasta 4:1), dio 446 g de un jarabe.
91
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A una disolución del alcohol, 437 g, en tolueno, 3 l, se añadió piridina, 225 ml, y la disolución se enfrió en un baño de hielo. Se añadió fosgeno, 531 ml de una disolución 1,9 M en tolueno, y la disolución se agitó durante 10 minutos. Se añadió alcohol alílico, 469 ml. Después de 40 minutos, se añadió disolución acuosa saturada de bicarbonato sódico, 2,3 l, y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se separó, se secó, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente, con hexano/acetato de etilo (49:1 hasta 4:1), dio 441 g de un jarabe amarillo.
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92
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A una disolución del azúcar, 431 g, en THF, 200 ml, se añadió ácido acético glacial, 330 ml, y agua, 110 ml. La mezcla se agitó durante tres horas, se enfrió en hielo, y se añadieron 6,6 l de hidróxido sódico acuoso 1 M. La mezcla se extrajo con cloruro de metileno, 2 x 2 l. Las capas orgánicas combinadas se secaron, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente, con cloruro de metileno:metanol (19:1 hasta 4:1), dio la amina, 309 g, como un jarabe.
93
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A una disolución enfriada en hielo del aminoazúcar, 309 g, en 3 l de cloruro de metileno, se añadió hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC), 435 g, seguido en 10 minutos del ácido carboxílico, 275 g. Después de 10 minutos, la mezcla se extrajo con bicarbonato sódico acuoso saturado. La capa orgánica se separó, la capa acuosa se volvió a extraer con cloruro de metileno, y las capas orgánicas combinadas se secaron, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente (hexano:acetato de etilo, 19:1 hasta 3:1) dio 338 g de un jarabe amarillo pálido.
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A una disolución de ácido fluorhídrico acuoso al 48%, 11 ml, en acetonitrilo, 293 ml, se añadieron 4,6 g de gel de sílice, seguido de una disolución del azúcar, 146,7 g, en cloruro de metileno, 147 ml. Después de una media hora, la mezcla se diluyó con agua, 975 ml, y se extrajo con cloruro de metileno. La capa orgánica se separó, y la capa acuosa se volvió a extraer con cloruro de metileno. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con disolución acuosa de bicarbonato sódico, se secaron, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente (hexano:acetato de etilo, 5:1 hasta 0:1) dio 110,4 g de un sólido ceroso blanquecino.
95
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A una disolución del azúcar, 129 g, en 500 g de tricloroacetonitrilo, se añadió carbonato de potasio, 240 g. La mezcla se agitó durante una media hora, y se filtró a través de tierra de diatomeas. La torta del filtro se lavó con cloruro de metileno, y los filtrados se combinaron y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente (hexano:acetato de etilo, 1:1 hasta 0:1) dio 145,7 g de una goma amarilla.
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96
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El azúcar de la izquierda, 145,7 g, y el azúcar de la derecha, 109,2 g, se secaron azeotrópicamente evaporando tolueno (3 x 200 ml). Una disolución de los dos azúcares, en 750 ml de cloruro de metileno, se añadió a una disolución enfriada en hielo de triflato de plata, 62,7 g, en 130 ml de cloruro de metileno. La mezcla se calentó hasta temperatura ambiente, y se agitó toda la noche. La mezcla se vertió sobre una mezcla de disolución de bicarbonato sódico acuosa saturada y de tiosulfato de sodio. La capa orgánica se separó, y la capa acuosa se lavó con cloruro de metileno. Las capas orgánicas combinadas se secaron, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió dos veces sobre sílice. La elución en gradiente, con hexano:acetato de etilo (5:1 hasta 1:1), dio 189,56 g de una espuma pegajosa.
97
A una disolución del disacárido, 188,7 g, en THF, 590 ml, se añadió polvo de cinc, 457,6 g, seguido de ácido acético glacial, 395 ml. Después de una media hora, la mezcla se filtró a través de tierra de diatomeas, y la torta del filtro se lavó con THF. Las capas orgánicas se combinaron, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se secó azeotrópicamente mediante benceno destilado a partir del residuo (4 x 250 ml), para dar 223,1 g de una goma rosa.
98
A una disolución del azúcar, 223,1 g, en 1,3 l de THF, se añadió una disolución de bicarbonato sódico, 37,5 g, en 250 ml de agua. Se añadió cloruro de cis-11-octadecenoilo, 67,4 g. Después de 10 minutos, la mezcla se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se secaron, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente, con hexano:acetato de etilo (2:1 hasta 0:1), dio 160,2 g de una cera amarilla pálida.
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Una disolución del azúcar, 161,3 g, en cloruro de metileno, 215 ml, en una botella de Teflón, se añadió a una disolución de ácido fluorhídrico al 48%, 150 ml, en acetonitrilo, 474 ml. Después de cuatro horas, la mezcla se vertió sobre 500 ml de agua. La mezcla se extrajo dos veces con cloruro de metileno. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con bicarbonato sódico saturado acuoso, se secaron, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió sobre sílice. La elución en gradiente (cloruro de metileno:acetato de etilo:metanol, 500:500:20 hasta 500:500:160) dio una goma cerosa amarilla.
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100
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El azúcar, 719 mg, se disolvió en cloruro de metileno, y se añadió sulfato de sodio (1,4 g). Se añadieron dialildiisopropilfosforamidito (189 \mul) y tetrazol (162 mg), la mezcla se agitó durante 10 minutos, y después se enfrió hasta -78ºC. Se añadió gota a gota una disolución de ácido m-cloroperoxibenzoico (192 mg) en cloruro de metileno (4 ml). La mezcla se lavó con tiosulfato sódico acuoso y con bicarbonato sódico acuoso, se secó (sulfato de sodio), y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió para dar 660 mg.
101
A una disolución de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (166 mg), en 2 ml de una mezcla de tetrahidrofurano:ácido acético (10:1), se añadió una disolución de intermedio Z (660 mg), en 3 ml de la misma mezcla de disolvente. Después de 30 minutos, se añadió tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) adicional. Después de 1 hora y media adicional, se añadió tolueno, y el disolvente se eliminó a presión reducida. La mezcla se purificó mediante cromatografía sobre dietilaminoetilcelulosa. La mezcla purificada se disolvió en hidróxido sódico acuoso 0,1 N, se filtró a través de un filtro estéril de 0,45 \mum, y se purificó mediante HPLC en una columna YMC-Pack ODS-AP, para dar 130 mg de compuesto 1.
A continuación se dan los datos analíticos para el compuesto 1 obtenido mediante los métodos descritos anteriormente:
Compuesto 1: RMN ^{1}H (CD_{3}OD) \delta: 5,3 (1H, m), 4,6 (1, m), 4,0 (m, m), 3,9 (1H, d), 3,7 (1H, t), 3,6 (1H, t), 3,4 (3H, s), 3,3 (3H, t), 2,6 (2H, t), 2,3 (2H; m), 2,0 (2H, m), 1,7 - 1,2 (m, m), 0,9 (6H, t).
RMN ^{31}P (CD_{3}OD) \delta: 4,71, 3,98.
Preparación del Compuesto 1 mediante la Ruta 2 Preparación del Compuesto 1
Ejemplo 1: intermedio B
A una suspensión del intermedio A (15 g), preparado mediante el método de Christ et al., solicitud de patente Europea 92309057.5, en CH_{2}Cl_{2} (150 ml) y HBF_{4} al 48% (29,2 g), enfriada vía un baño de hielo, se añadió TMSCHN_{2} (165 ml como una disolución 2 M en hexano). La mezcla se agitó hasta que la reacción estuvo casi terminada mediante TLC, y después se añadió metanol (20 ml) seguido de ácido acético (10 ml). Se añadió bicarbonato sódico acuoso, y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno. La mezcla se secó (sulfato de sodio), y el disolvente se eliminó a presión reducida. La cromatografía del residuo dio B, 14,9 g.
Ejemplo 2: intermedio C
A una disolución fría (0ºC) de B (14,9 g), en cloruro de metileno (100 ml), se añadió lentamente hidruro de diisobutilaluminio (140 ml como una disolución 1 M en hexanos) hasta que la reacción estuvo terminada, según se determina mediante TLC. La reacción se paralizó mediante adición de ácido clorhídrico 1 N acuoso (100 ml), seguido de ácido clorhídrico concentrado (50 ml). Se dejó que las capas se separaran, y la capa acuosa se volvió a extraer con CH_{2}Cl_{2}. Las capas orgánicas combinadas se lavaron entonces con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio y se concentraron a presión reducida. Después de purificar mediante cromatografía sobre sílice, se obtuvieron 12,06 g del intermedio C.
Ejemplo 3: intermedio D
A una disolución de C (10,64 g), en cloruro de metileno (40 ml), se añadió trietilamina (15,75 ml), cloruro de p-toluenosulfonilo (11,86 g), y dimetilaminopiridina (690 mg). La suspensión resultante se dejó agitar hasta que la reacción estuvo terminada, según se determina mediante TLC, y después se paralizó vía tratamiento con agua con extracción con cloruro de metileno. Después de la purificación mediante cromatografía en sílice, se obtuvieron 18,7 g de D.
Ejemplo 4: intermedio E
A una disolución de D (18,7 g), en 200 ml de acetona, se añadió yoduro de sodio (24,6 g). La mezcla se calentó a reflujo durante 1 hora y media, el disolvente se eliminó a presión reducida, y el residuo se repartió entre agua y hexano. La capa orgánica se separó, se secó (sulfato de sodio), y se eliminó el disolvente. La cromatografía (sílice) dio 15,4 g de E como un líquido incoloro.
Ejemplo 5: intermedio F
Este compuesto se preparó mediante el método de Christ et al., solicitud de patente europea 92309057.5.
Ejemplo 6: intermedio G
A una disolución de 18,6 g de intermedio F y 15,4 g de intermedio E, en hexano, se añadieron 23,9 g de óxido de plata, y la mezcla se puso a reflujo toda la noche. La mezcla se enfrió, se filtró a través de tierra de diatomeas, se eliminó el disolvente, y el residuo se cromatografió (sílice) para dar el intermedio G (21 g) como un jarabe incoloro.
Ejemplo 7: intermedio H
A una disolución fría (0ºC) de intermedio G (21 g), en cloruro de metileno, se añadió gota a gota 3,5 ml de ácido tetrafluorobórico al 48%. Después de 5 minutos, la mezcla se lavó con disolución acuosa de bicarbonato sódico, y con salmuera. La mezcla se concentró a presión reducida, y se cromatografió (sílice) para dar el intermedio H, 18,7 g, como un jarabe incoloro.
Ejemplo 8: intermedio I
A una disolución del intermedio H (17,6 g), en yoduro de metilo puro (105 ml), se añadió óxido de plata (83 g). La mezcla se agitó toda la noche, y después se diluyó con hexano y se filtró a través de tierra de diatomeas. La mezcla se concentró a presión reducida, y el residuo se disolvió en cloruro de metileno (40 ml). La mezcla se enfrió hasta 0ºC, y se le añadió imidazol (2,44 g) y cloruro de t-butildimetilsililo (4,7 ml). Se agitó toda la noche, y se añadieron 150 ml de bicarbonato sódico. La capa orgánica se secó (sulfato de sodio) y se cromatografió (sílice) para dar el intermedio I, 10,5 g, como un jarabe incoloro.
Ejemplo 9: intermedio J
El intermedio I se disolvió en 100 ml de cloruro de metileno al que se añadió dialildiisopropilfosforamidito (7,4 ml), seguido de tetrazol (6,37 g). La mezcla se enfrió y se agitó durante 20 minutos. Se añadió una suspensión de ácido meta-cloroperoxibenzoico (24,2 mmoles), en 50 ml de cloruro de metileno, durante 15 minutos, mientras que la temperatura de la reacción se mantenía por debajo de -60ºC. Se añadió disolución de bicarbonato sódico, la capa orgánica se separó y se secó (sulfato de sodio), y el disolvente se eliminó a presión reducida. La cromatografía (sílice) dio 14 g de un jarabe incoloro del intermedio J.
Ejemplo 10: intermedio K
A una suspensión de 39,5 g de di(tiofenil)estaño (preparado mediante el método de Christ et al., solicitud de patente europea 92309057.5), en 235 ml de cloruro de metileno, se añadió tiofenol (12 ml). A esta mezcla se añadió trietilamina gota a gota durante 15 minutos. Una porción (150 ml) de esta mezcla de "reactivo de estaño" se añadió gota a gota durante 15 minutos a una disolución de intermedio J (12,9 g), en 25 ml de cloruro de metileno. El resto del "reactivo de estaño" se añadió durante 30 minutos para llevar a la reacción hasta la terminación. La mezcla se diluyó con acetato de etilo, y se lavó con hidróxido sódico acuoso 1 N y con salmuera. La capa orgánica se secó (sulfato de sodio), el disolvente se eliminó, y el residuo se cromatografió para dar 11,1 g de un jarabe amarillo, intermedio
K.
Ejemplo 11: intermedio L
A una disolución fría de intermedio K (11,1 g) y piridina (7,1 ml), en 80 ml de cloruro de metileno, se añadió cloroformiato de tricloroetilo (2,9 ml), y la mezcla se agitó toda la noche. Se añadió disolución de bicarbonato sódico acuosa, se separó la capa orgánica, se secó (sulfato de sodio), y el disolvente se eliminó a presión reducida. La cromatografía dio el intermedio L, 12,96 g, como un sólido amarillo claro.
Ejemplo 12: intermedio M
El intermedio L, 12,96 g, se disolvió en cloruro de metileno. A esta mezcla se le añadió una disolución 6 M de fluoruro de hidrógeno en acetonitrilo, y la mezcla se agitó durante 4 horas. Se añadió disolución acuosa de bicarbonato sódico, la capa orgánica se separó, se secó (sulfato de sodio), y el disolvente se eliminó a presión reducida. La cromatografía dio 10,9 g de un jarabe ámbar, el intermedio M.
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Ejemplo 13: intermedio N
A una disolución de intermedio M (9,5 g), en 50 ml de tricloroacetonitrilo, se añadió carbonato potásico (15 g), y la mezcla se agitó durante 10 minutos. La mezcla se filtró a través de tierra de diatomeas, y el disolvente se eliminó a presión reducida. La cromatografía dio 14,5 g de intermedio N, que se usó de inmediato en el Ejemplo 19.
Ejemplo 14: intermedio O
A una disolución de intermedio F (160 g), en hexano (475 ml) y yododecano (474 ml), se añadió óxido de plata (723 g). La mezcla se calentó a 70ºC en la oscuridad durante 2 horas, y se filtró a través de tierra de diatomeas. La disolución se concentró a presión reducida, y el residuo se cromatografió para dar 221 g de intermedio O como un aceite incoloro.
Ejemplo 15: intermedio P
A una disolución de intermedio O (30 g), en cloruro de metileno (90 ml) y acetonitrilo (90 ml), se añadió una disolución de fluoruro de hidrógeno acuoso al 48% (9 l), en acetonitrilo (81 ml). La mezcla se agitó durante 30 minutos, y se añadieron 350 ml de bicarbonato sódico acuoso. La mezcla se extrajo con cloruro de metileno. La capa orgánica se secó (sulfato de sodio), el disolvente se eliminó a presión reducida, y el residuo se cromatografió para producir 30 g de intermedio P como un aceite amarillo.
Ejemplo 16: intermedio Q
A una disolución fría (0ºC) de intermedio P (30 g) e imidazol (10,2 g), en cloruro de metileno (500 ml), se añadió cloruro de t-butildimetilsililo (10,85 g). La mezcla se agitó durante 1 hora y media, y después se vertió sobre 400 ml de cloruro amónico acuoso saturado. La capa orgánica se separó, se secó (sulfato de sodio), el disolvente se eliminó a presión reducida, y el residuo se cromatografió para dar 34,5 g de intermedio Q como un jarabe incoloro.
Ejemplo 17: intermedio R
A una disolución fría (0ºC) de intermedio Q (32,2 g) y piridina (184 ml), en tolueno (213 ml), se añadió una disolución 1,94 M de fosgeno en tolueno. Después de 20 minutos, se añadió alcohol alílico (31 ml), y la mezcla se agitó durante 30 minutos. Se añadió bicarbonato sódico acuoso, la capa orgánica se separó y se secó (sulfato de sodio), y el disolvente se eliminó a presión reducida. La cromatografía dio 36,9 g de intermedio R como un jarabe incolo-
ro.
Ejemplo 18: intermedio S
A una disolución de 2,4 ml de fluoruro de hidrógeno acuoso al 48%, en 48 ml de acetonitrilo, se añadió una disolución de intermedio R (20 g), en cloruro de metileno (24 ml), y la mezcla se agitó toda la noche. Se añadió disolución acuosa de bicarbonato de sodio, la capa orgánica se separó y se secó (sulfato de sodio), y el disolvente se eliminó a presión reducida. La cromatografía produjo 11 g de intermedio S como un jarabe incoloro.
Ejemplo 19: intermedio T
El intermedio S (8,97 g) y el intermedio N (14,5 g) se disolvieron en tolueno (20 ml), y la mezcla se secó mediante eliminación azeotrópica del disolvente. Este procedimiento se repitió tres veces. La mezcla seca se disolvió en 50 ml de cloruro de metileno, que se añadió lentamente a una disolución de triflato de plata (5,8 g) en 50 ml de cloruro de metileno. La mezcla se agitó durante 10 minutos, y se añadieron 250 ml de disolución acuosa de bicarbonato sódico y 250 ml de tiosulfato sódico acuoso al 10%. La capa orgánica se separó, se secó (sulfato de sodio), y el disolvente se eliminó a presión reducida. La cromatografía dio 13 g de intermedio T como un jarabe amarillo pálido.
Ejemplo 20: intermedio U
A una disolución de intermedio T, en cloruro de metileno (10 ml), se añadió lentamente complejo de trisbencenotiolato de estaño (II) con trietilamina (12 ml) de una disolución 0,5 M en cloruro de metileno. Después de 10 minutos, se añadió un equivalente adicional de reactivo de estaño. Después de 15 minutos adicionales, se añadió un equivalente adicional. Después de 15 minutos, se añadió acetato de etilo (250 ml), y la mezcla se extrajo con disolución acuosa 1 N de hidróxido sódico (250 ml). La mezcla se secó (sulfato de sodio) y se concentró a presión reducida. Se añadió tolueno, y el disolvente se eliminó a presión reducida para dar un aceite, el cual se usó en la siguiente transformación sin purificación adicional.
Ejemplo 21: intermedio V
A una disolución enfriada (0ºC) de intermedio U (2 mmoles), en cloruro de metileno (5 ml), se añadió ácido 3-cetotetradecanoico (997 mg), preparado mediante el método de Christ et al., solicitud de patente europea 92309057.5, seguido de hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (1,5 g), y la mezcla se agitó durante aproximadamente 30 minutos. La mezcla se diluyó con cloruro de metileno (150 ml), se lavó con hidróxido sódico acuoso 1 N, se secó (sulfato de sodio), y el disolvente se eliminó a presión reducida. La cromatografía sobre sílice, seguido de cromatografía sobre alúmina básica, dio 1,64 g de intermedio V.
Ejemplo 22: intermedio W
Una disolución de intermedio V (1,45 g), en ácido acético glacial (5 ml), se añadió a una suspensión de par cinc cobre (14 g) bien agitado, en ácido acético (10 ml). La mezcla se agitó durante 15 minutos, y se añadió par cinc/cobre adicional (10 g). Después de 15 minutos adicionales, la mezcla se filtró a través de tierra de diatomeas, que se lavó entonces con acetato de etilo. Los lavados combinados se diluyeron con tolueno, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió en una mezcla de dos capas de alúmina básica y de sílice, para dar el intermedio W, que se usó sin purificación adicional.
Ejemplo 23: intermedio X
Se disolvió una disolución de intermedio W (1,02 mmoles) y ácido cis-vaccénico (575 mg) en tolueno (5 ml) tres veces, y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo seco se disolvió en cloruro de metileno (3 ml), y se añadió hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (780 mg), y la mezcla se agitó durante 3 horas. La mezcla se diluyó con cloruro de metileno y se cromatografió directamente para dar 734 mg de intermedio X. La cromatografía adicional de las fracciones impuras dio 58 mg adicionales de material.
Ejemplo 24: intermedio Y
A una disolución de intermedio X (785 mg), en cloruro de metileno (10 ml), se añadió una disolución de cloruro de hidrógeno acuoso al 48%, en acetonitrilo (15 ml). La mezcla se agitó durante 90 minutos, se diluyó con cloruro de metileno (50 ml), y se lavó con agua y con disolución acuosa de bicarbonato sódico. La mezcla se secó (sulfato de sodio) y se cromatografió para dar el intermedio Y, 719 mg.
Ejemplo 25: intermedio Z
El intermedio Y (719 mg) se disolvió en cloruro de metileno, y se añadió sulfato de sodio (1,4 g). Se añadieron dialildiisopropilfosforamidito (189 \mul) y tetrazol (162 mg), la mezcla se agitó durante 10 minutos, y después se enfrió hasta -78ºC. Se añadió gota a gota una disolución de ácido m-cloroperoxibenzoico (192 mg) en cloruro de metileno (4 ml). La mezcla se lavó con tiosulfato sódico acuoso y con bicarbonato sódico acuoso, se secó (sulfato de sodio), y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se cromatografió para dar 660 mg de intermedio Z.
Ejemplo 26: compuesto 1
A una disolución de tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (166 mg), en 2 ml de una mezcla de tetrahidrofurano:ácido acético (10:1) se añadió una disolución de intermedio Z (660 mg), en 3 ml de la misma mezcla de disolvente. Después de 30 minutos, se añadió tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) adicional. Después de 1 hora y media adicional, se añadió tolueno, y el disolvente se eliminó a presión reducida. La mezcla se purificó mediante cromatografía sobre dietilaminoetilcelulosa. La mezcla purificada se disolvió en hidróxido sódico acuoso 0,1 N, se filtró a través de un filtro estéril de 0,45 \mum, y se purificó mediante HPLC en una columna YMC-Pack ODS-AP para dar 130 mg de compuesto 1.
A continuación se dan datos analíticos para algunos de los compuestos e intermedios obtenidos mediante los métodos descritos anteriormente:
Compuesto 1: RMN ^{1}H (CD_{3}OD) \delta: 5,3 (1H, m), 4,6 (1, m), 4,0 (m, m), 3,9 (1H, d), 3,7 (1H, t), 3,6 (1H, t), 3,4 (3H, s), 3,3 (3H, t), 2,6 (2H, t), 2,3 (2H, m), 2,0 (2H, m), 1,7 - 1,2 (m, m), 0,9 (6H, t).
RMN ^{31}P (CD_{3}OD) \delta: 4,71, 3,98.
Compuesto 1: (M + Na)^{+} = 1333
Compuesto 2: (M + 3 Na)^{+} = 1363
Compuesto 3: (M + 3 Na)^{+} = 1365
Compuesto 5: (M + Na)^{+} = 1303
Compuesto 6: (M + Na)^{+} = 1359
Compuesto 7: (M + Na)^{+} = 1305
Compuesto 8: (M + 3 Na)^{+} = 1393
Compuesto 10: (M + Na)^{+} = 1425
Intermedio G: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: d, (1H), 3,9-3,7 (m, múltiple), 3,65 (t, 1H), 3,37 (s, 3H), 3,2 (m, 2H), 1,75 (q, 2H), 1,52 (s, 3H), 1,4 (s, 3H), 1,3 (m ancho , múltiple), 0,95 (s, 9H), 0,9 (t, 3H), y 0,2 (d, 6H)
Intermedio H: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: 4,58 (d, 1H), 4,09 (m, 2H), 3,9 (dd, 1H), 3,75 (dd, 1H), 3,7 (m, 1H), 3,5 (t, 1H), 3,37 (s, 3H), 3,23 (t, 1H), 3,05 (t, 1H), 1,8 (m, 2H), 1,68 (m, 1H), 1,5 (m, 1H), 1,3 (m ancho, múltiple), 0,95 (s, 9H), 0,9 (t, 3H), 0,2 (d, 6H)
Intermedio I: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: 4,52 (d, 1H), 4,05 (m, 2H), 3,75 (m, 1H), 3,67 (t, 1H), 3,5 (t, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,35 (s, 3H), 3,25 (t, 1H), 3,05 (t, 1H), 1,8 (m, 2H), 1,65 (m, 1H), 1,5 (m, 1H), 1,3 (s ancho, m), 0,95 (s, 9H), 0,9 (t, 3H), 0,2 (s, 6H)
Intermedio J: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: 5,95 (m, 2H), 5,35 (d, 1H), 5,22 (d, 1H), 4,6 (q, 2H), 4,5 (d, 1H), 4,32 (q, 1H), 3,9-3,75 (m, 3H), 3,7 (dd, 1H), 3,65 (dd, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,38 (s, 3H), 3,33 (s, 3H), 3,27 (t, 1H), 3,2 (t, 1H), 1,9-1,75 (m, 3H), 1,5 (m, 1H), 1,3 (m ancho, múltiple), 0,95 (s, 9H), 0,9 (t, 3H), 0,2 (s, 6H)
Intermedio L: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: 5,95 (d, 1H), 5,4 (d, 2H), 5,25 Z(d, 2H), 4,95 (d, 1H), 4,7 (q, 2H), 4,55 (q, 2H), 4,32 (q, 1H), 3,9-3,75 (m, 3H), 3,7 (dd, 1H), 3,65 (dd, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,4 (m, 1H), 3,4 (s, 3H), 3,3 (s, 3H), 3,25 (m, 1H), 1,75 (m, múltiple), 1,5-1,4 (m, 2H), 1,3 (s ancho, múltiple), 0,95-0,9 (s ancho, 12H), 0,2 (d, 6H)
Intermedio M: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: 5,95 (m, 2H), 5,75 (d, 1H), 5,4 (d, 1H), 5,25 (d,2H), 4,75-4,65 (dd, 2H), 4,6 (q, 1H), 4,3 (q, 1H), 4,1 (m, 2H), 3,9 (m, 2H), 3,65 (m, 1H), 3,4 (s, 3H), 3,25 (s, 3H), 1,75 (m ancho, 2H), 1,55-1,4 (m, 2H), 1,3 (s ancho, múltiple), 0,9 (t, 3H)
Intermedio O: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: 4,5 (d, 1H), 3,8 (dd, 1H), 3,78 (m, 2H), 3,6 (m, múltiple), 3,2 (m, 2H), 1,5 (s, 3H), 1,4 (s, 3H), 1,3 (s ancho, múltiple), 0,95 (s, 9H), 0,9 (t, 3H), 0,18 (d, 6H)
Intermedio P: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: 4,5 (d, 1H), 3,75 (dd, 2H), 3,6 (q, 2H), 3,5 (t, 1H), 3,3 (m,1H), 3,2 (t, 1H), 3,0 (t, 1H), 1,6 (m,2H), 1,25 (s ancho, múltiple), 0,95 (s, 9H), 0,9 (t, 3H), 0,18 (d, 6H)
Intermedio Q: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: 4,5 (d, 1H), 3,82 (t, 2H), 3,7 (m,2H), 3,6 (t, 1H), 3,3 (m,1H), 3,2 (t, 1H), 3,05 (q, 2H), 1,6 (m, 2H), 1,3 (s ancho, múltiple), 0,95 (s, 9H), 0,88 (s, 9H), 0,85 (t, 3H), 0,2 (d, 6H), 0,1 (d, 6H)
Intermedio R: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: 5,9 (m, 1H), 5,4-5,25 (dd, 2H), 4,75 (t, 1H), 4,6 (d, 2H), 4,45 (d, 1H), 3,75 (q, 1H), 3,7 (d, 2H), 3,53 (q, 1H), 3,38 (m, 1H), 3,25 (t, 1H), 3,15 (t, 1H), 1,5 (t, 2H), 1,25 (s, múltiple), 0,95 (s, 9H), 0,85 (m, 12H), 0,2 (s, 6H), 0,07 (s, 6H)
Intermedio S: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: 5,9 (m, 1H), 5,4-5,25 (dd, 2H), 4,75 (t, 1H), 4,6 (d, 2H), 4,52 (d, 1H), 3,7 (m, múltiple), 3,65-3,6 (dd, 2H), 3,55 (q, 1H), 3,4 (m, 1H), 3,28 (t, 1H), 3,2 (t, 1H), 1,5 (t, 2H), 1,3 (s, múltiple), 0,9 (s, 9H), 0,85 (t, 3H), 0,2 (s, 6H)
Intermedio T: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: 5,9 (m, 3H), 5,6 (d, 1H), 5,4-5,2 (m, 6H), 4,8 (d, 1H), 4,7-4,6 (m, 2H), 4,55 (q, 1H), 4,5 (d, 1H), 4,3 (q, 1H), 3,8-3,7 (m, múltiple), 3,6 (dd, 1H), 3,5 (m, múltiple), 3,35 (s, 3H), 3,2 (s, 3H), 3,15 (t, 1H), 1,7 (m, 2H), 1,5 (m, 2H), 1,3 (s, múltiple), 0,95 (t, 6H), 0,2 (t, 6H)
Intermedio V: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: 7,3 (d, 1H), 5,95 (m, 3H), 5,6 (d, 1H), 5,4-5,2 (m, 6H), 4,95 (d, 1H), 4,8 (d, 1H), 4,7-4,5 (m, múltiple), 4,3 (q, 1H), 3,9-3,65 (m, múltiple), 3,6 (m, múltiple), 3,45 (t, 1H), 3,4 (t, 3H), 3,35 (s, 2H), 3,28 (3H), 2,5 (t, 2H), 1,8 (m, 2H), 1,6 (m, 2H), 1,45 (m, 2H), 1,3 (s ancho, múltiple), 0,95-0,8 (m, 18H), 0,15 (d, 6H)
Intermedio X: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: 7,3 (d, 1H), 5,95 (m, 4H), 5,4-5,2 (m, 8H), 4,95 (d, 1H), 4,8 (d, 1H), 4,7 (t, 1H), 4,6 (d, 1H), 4,55 (q, 1H), 4,3 (q, 1H), 4,1 (t, 1H), 3,9 (q, 1H), 3,8 (t, 1H), 3,7-3,5 (m, múltiple), 3,45 (t, 1H), 3,35 (s, 3H), 3,3 (s, 2H), 3,28 (s, 3H), 2,5 (t, 2H), 2,2 (t, 1H), 2 (d, 1H), 1,7 (q, 2H), 1,6 (m, 2H), 1,3 (s, múltiple), 0,95-0,8 (m, 21), 0,15 (d,6H)
Intermedio Y: RMN ^{1}H (CDCI_{3}) \delta: 6,65 (d, 1H), 6,55 (d, 1H), 5,905 (m, 5H), 5,7 (m, 1H), 5,4-5,2 (m, 12H), 4,8 (m, 2H), 4,6 (d, 1H), 4,5 (m, 10H), 4,3 (q, 1H), 4,1 (m, 1H), 3,85-3,45 (m, múltiple), 3,4 (s, 3H), 3,35 (s, 3H), 3,25 (s, 3H), 3,2 (t, 1H), 2,5 (dd, 2H), 2,2 (t, 2H), 2 (m, múltiple), 1,7-1,2 (m, múltiple), 0,9 (t, 12H).
Ejemplos biológicos
Tanto el LPS bacteriano como el lípido A bacteriano provocan la producción de factor de necrosis tumoral (TNF), IL-1\beta, IL-6, e IL-8, así como otras citoquinas y mediadores celulares en sangre completa humana y en estirpes celulares de macrófagos humanos. Se ha encontrado que la generación de cantidades patofisiológicas de estas citoquinas desempeña una parte importante en la iniciación del síndrome de respuesta inflamatoria sistémica y de choque septicémico. Los análogos de liposacáridos descritos aquí inhiben tal inducción, mediada por LPS y/o lípido A, de citoquinas, según se demuestra mediante los siguientes experimentos.
Ejemplo A Inhibición in vitro de la producción de citoquinas inducida por LPS
Se preparó sangre completa humana, y se analizó como se describe (Rose et al., Infection and Immunity, 63:833-839, 1995). Se cultivaron células HL-60 en medio RPMI suplementado con 10% de suero fetal de ternera y con antibióticos, y se les indujo a que se diferenciaran en macrófagos mediante tratamiento con 0,1 \muM de 1,25-dihidroxicolecalciferol (vitamina D3; Biomol Research Laboratories, Plymouth Meeting, PA), y se analizaron para determinar la generación, mediada por LPS, de IL-8. De forma breve, se añadió LPS bacteriano (por ejemplo, procedente de E. coli 0111:B4; Sigma Chemicals, St. Louis, MO) a 10 ng/ml, o lípido A (Daiichi Chemicals, Tokio, Japón), como disoluciones concentradas unas 10 veces en disolución salina equilibrada de Hank libre de Ca^{++} y Mg^{++} (CMF-HBSS; Gibco). En los experimentos que implican a los análogos de la presente invención, el análogo se añadió inmediatamente antes de la adición de LPS o de lípido A en CMF-HBSS (por ejemplo, entre 0 y 100 \muM como una alícuota concentrada 10x). Después de la incubación durante tres horas, se preparó plasma a partir de la sangre entera, o el sobrenadante del cultivo se retiró y se analizó para determinar la presencia de la citoquina indicada usando un kit de ensayo ELISA procedente de Genzyme (Cambridge, MA), siguiendo las instrucciones del fabricante; sin embargo, se puede utilizar cualquier otro kit estándar de ELISA. Los experimentos se realizaron por triplicado, al menos dos veces.
Los análogos de lípido A inhibieron la producción, inducida por LPS, de TNF en sangre completa humana, de una manera dependiente de la concentración. De los análogos ensayados, se encontró que el Compuesto 1 era uno de los compuestos más eficaces. En la Figura 1 se muestran los resultados de este ensayo. El Compuesto 1 inhibe la producción, inducida por LPS, de TNF, mostrando una IC_{50} de aproximadamente 1,5 nM. Otros análogos, que se encuentra que inhiben la producción de TNF inducida por LPS, incluyen el compuesto 2, el compuesto 3, el compuesto 4, el compuesto 5, el compuesto 6, el compuesto 7, el compuesto 8, el compuesto 9 y el compuesto 10. Estos compuestos mostraron unas IC_{50} entre 1,5 nM y 159 nM.
El Compuesto 1 también mostró la inducción, mediada por LPS, de IL-8 en células HL-60 (de tipo macrófagos humanos). La inhibición de la generación de IL-8 fue completa a concentraciones de 1 nM y mayores de Compuesto 1 cuando se usó como agonista LPS o lípido A.
Los compuestos de esta invención inhibieron de forma similar la producción, inducida por LPS, de otras citoquinas en sangre completa humana, incluso aunque algunas de estas citoquinas se generaron varias horas después de la adición de LPS. Por ejemplo, la IL-1\beta e IL-6 requieren cuatro o más horas para que se alcancen los niveles máximos, mientras que la IL-8 alcanza niveles máximos diez o más horas después de la adición de LPS. Usando los métodos descritos anteriormente, los compuestos de esta invención se añadieron a concentraciones entre 0 y 10 \muM, y se añadió LPS a 10 ng/ml. La inhibición de la producción de TNF, IL-1\beta, IL-6 e IL-8 se midió como una función del tiempo tras la adición de LPS. Se encontró también que esta inhibición de la generación de citoquinas dependía de la concentración, pero, en todos los casos, la supresión de todas las síntesis de citoquinas fue >90% a concentraciones del compuesto 1 de 10 nM y mayores, durante un tiempo de hasta 24 horas después de la adición de LPS.
Ejemplo B Persistencia de compuestos en sangre completa humana
Aunque algunos de los compuestos de esta invención se eliminan de forma profusamente rápida de la circulación, su actividad disminuye con una semivida de 1-3 horas. Para mantener la eficacia antagonista, esta desactivación rápida puede requerir una administración continua. El estudio de esta desactivación ha conducido al desarrollo de un ensayo para medir in vitro la desactivación de fármacos en sangre completa humana. Esto se realiza preincubando antagonistas de lípido A con sangre durante diversos períodos de tiempo, seguido de la adición de la "exposición" a LPS, como se describe anteriormente, de la incubación durante tres horas, y de un ensayo para determinar las citoquinas liberadas. En la Figura 2 se muestra un esquema para este ensayo.
Mediante el uso de este ensayo, se puede demostrar que B531, como se describe por Christ et al., Patente U.S. nº 5.530.113, "se desactiva" (es decir, pierde actividad al aumentar el tiempo de preincubación). Como se muestra en la Figura 3, el compuesto 1 también se desactiva, pero su actividad superior y su menor velocidad de desactivación lo hacen tan activo, después de 6 horas, como lo era B531 justo después de su adición. Estos datos son la media de 7 experimentos separados, realizados por triplicado.
Ejemplo C Inhibición de la producción de TNF o de IL-6 en sistemas de modelos de animales in vitro
La producción de TNF o de IL-6, inducida por LPS, se inhibió mediante los compuestos de la presente invención, en sangre completa o en macrófagos aislados de cobayas, ratas y ratones. Se aislaron macrófagos de cobaya blanco Hartley (Elm Hill Breeders, Chelmsford, MA) y de ratón C57BU6 (Jackson Labs, Bar Harbor, ME), a partir del abdomen de los animales sensibilizados. La sensibilización se logró mediante inyección intraperitoneal de 2 mg de Bacillus Calmette Guerin (BCG; RIBI Immunochemical Research, Inc., Hamilton, MT) a una concentración de 10 mg/ml en disolución salina fisiológica para ratones, y 2 mg de BCG a una concentración de 2 mg/7 ml, en aceite mineral, para cobayas. Tres días después de la inyección, los macrófagos peritoneales se aislaron del abdomen de los animales mediante técnicas estándares. Se dejó que las células se adhirieran a las placas de cultivo durante dos a tres horas, y después se cultivaron con medio RPMI 1640 que contiene 10% de suero fetal de ternera, y se añadió LPS (concentración final de 10 ng/ml), como se describe anteriormente. Para estudiar la inhibición, los compuestos de esta invención (a una concentración entre 0 y 100 \muM) se añadieron al medio de cultivo justo antes de la adición de LPS. Después de un período de incubación de tres horas, se ensayaron mediante ELISA los niveles de TNF y/o los niveles de IL-6 de cobayas, ratones y ratas, o mediante bioensayo citolítico, descrito en Lymphokines 2:235, 1981, para TNF liberado a partir de macrófagos de cobaya. En macrófagos peritoneales de ratón, el compuesto 1 proporcionó una inhibición eficaz (IC_{50} = 16 nM para IL-6, y 20 nM para TNF, respectivamente), en macrófagos de cobayas, la IC_{50} para la liberación de TNF fue 0,3 nM; y en macrófagos peritoneales de rata, la IC_{50} para la liberación de TNF fue 11 nM.
Ejemplo D Ensayos in vivo
Se utilizaron ratones sensibilizados con BCG (Vogel et al., Immunology 124:2004-2009, 1980) como un sistema de ensayo in vivo para monitorizar los efectos inhibidores de análogos de lípido A sobre (1) la producción de TNF inducida por LPS, y (2) la letalidad inducida por LPS, según lo siguiente.
Se sensibilizaron ratones C57BL/6 (más arriba) machos de cinco semanas mediante inyección intravenosa, en la vena de la cola, con 2 mg de BCG. Diez días después de la inyección, se administró intravenosamente a través de la vena de la cola de los ratones sensibilizados con BCG el LPS (más arriba) de E. coli, en disolución de glucosa al 5% libre de pirógenos (Otsuka Pharmaceuticals Inc. Tokio, Japón). El LPS se administró a 1-3 \mug/ratón tanto para los estudios de la producción de TNF como para los estudios de mortalidad. El compuesto de ensayo se administró como un componente de la disolución de LPS inyectada, a una concentración entre 3 y 300 \mug/ratón. Se obtuvo plasma una hora después de la inyección de LPS, y se ensayó el TNF mediante el ensayo de ELISA descrito anteriormente. La mortalidad que resulta del choque septicémico se registró durante 36 horas después de la inyección de LPS.
Los compuestos de esta invención suprimieron eficazmente la producción de TNF después de la administración de LPS. El compuesto 10 y el compuesto 1 inhibieron eficazmente la producción in vivo de TNF en ratones (ED_{50} = 5 y 10,6 \mug/ratón, respectivamente). El compuesto 2, el compuesto 3, el compuesto 4, el compuesto 5, el compuesto 6, el compuesto 7, el compuesto 8 y el compuesto 9 también inhibieron la producción de TNF, con ED_{50} entre 10 y 200 \mug/ratón, dando los compuestos 5, 6 y 7 valores de ED_{50} >100.
En experimentos paralelos llevados a cabo en cobayas, estos análogos también fueron inhibidores eficaces de la producción in vivo de TNF inducida por LPS (valores de ED_{50} óptimos entre 2,3 y 6,1 \mug/cobaya, para el compuesto 1, el compuesto 7 y el compuesto 10).

Claims (9)

1. Uso de un compuesto antiendotoxínico para la preparación de una composición farmacéutica destinada a la prevención y tratamiento de la infección bacteriana pulmonar o la exposición pulmonar sintomática a endotoxina, en un paciente, en el que dicha composición farmacéutica se administra a dicho paciente mediante inhalación, en el que dicho compuesto antiendotoxínico es un análogo de Lípido A, y en el que dicho análogo de Lípido A tiene la fórmula:
102
en la que R^{1} se selecciona de entre el grupo que consiste en
103
104
105
106
107
108
109
y
110
en las que cada uno de J, K y Q, independientemente, es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado; L es O, NH, o CH_{2}; M es O o NH; y G es NH, O, S, SO, o SO_{2};
R^{2} es alquilo de C5 a C15 lineal o ramificado;
R^{3} se selecciona de entre el grupo que consiste en alquilo de C5 a C18 lineal o ramificado,
111
112
113
114
y
115
en las que E es NH, O, S, SO, o SO_{2}; cada uno de A, B y D, independientemente, es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado;
R^{4} se selecciona de entre el grupo que consiste en alquilo de C4 a C20 lineal o ramificado, y
116
\vskip1.000000\baselineskip
en la que cada uno de U y V, independientemente, es alquilo de C2 a C15 lineal o ramificado, y W es hidrógeno o alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado;
R_{A} es R^{5} o R^{5}-O-CH_{2}-, seleccionándose R^{5} de entre el grupo que consiste en hidrógeno, J', -J'-OH, -J'-O-K', -J'-O-K'-OH, y -J'-O-PO(OH)_{2}, en los que cada uno de J' y K', independientemente, es alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado;
R^{6} se selecciona de entre el grupo que consiste en hidroxi, halógeno, alcoxi de C1 a C5, y aciloxi de C1 a C5;
A^{1} y A^{2}, independientemente, se seleccionan de entre el grupo que consiste en
OH,
-- O --
\melm{\delm{\para}{OH}}{P}{\uelm{\dpara}{O}}
-- OH,
O -- Z -- O --
\melm{\delm{\para}{OH}}{P}{\uelm{\dpara}{O}}
-- OH,
Z --
\melm{\delm{\para}{OH}}{P}{\uelm{\dpara}{O}}
-- OH,
y
O -- Z -- CO_{2}H
en las que Z es alquilo de C1 a C10 lineal o ramificado;
o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
2. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho análogo de Lípido A tiene la estructura:
117
3. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho compuesto antiendotoxínico se administra en una formulación nebulizada.
4. Uso según la reivindicación 1, en el que dicho compuesto antiendotoxínico se administra en una formulación en aerosol.
5. Uso según la reivindicación 1, en el que se administra entre 1 \mug y 24 mg de dicho compuesto antiendotoxínico a dicho paciente, en una dosis única.
6. Uso según la reivindicación 5, en el que se administran entre 5 y 150 \mug de dicho compuesto antiendotoxínico a dicho paciente, en una dosis única.
7. Uso según la reivindicación 6, en el que se administran entre 10 y 100 \mug de dicho compuesto antiendotoxínico a dicho paciente, en una dosis única.
8. Composición farmacéutica que comprende un compuesto antiendotoxínico en una formulación en aerosol o nebulizada, en la que dicho compuesto antiendotoxínico es un análogo de líquido A, y en la que dicho análogo de líquido A tiene la fórmula:
118
en la que R^{1} se selecciona de entre el grupo que consiste en
119
120
121
122
123
124
y
125
en las que cada uno de J, K y Q, independientemente, es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado; L es O, NH, o CH_{2}; M es O o NH; y G es NH, O, S, SO, o SO_{2};
R^{2} es alquilo de C5 a C15 lineal o ramificado;
R^{3} se selecciona de entre el grupo que consiste en alquilo de C5 a C18 lineal o ramificado,
126
127
128
129
y
130
en las que E es NH, O, S, SO, o SO_{2}; cada uno de A, B y D, independientemente, es alquilo de C1 a C15 lineal o ramificado;
R^{4} se selecciona de entre el grupo que consiste en alquilo de C4 a C20 lineal o ramificado, y
131
en la que cada uno de U y V, independientemente, es alquilo de C2 a C15 lineal o ramificado, y W es hidrógeno o alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado;
R_{A} es R^{5} o R^{5}-O-CH_{2}-, seleccionándose R^{5} de entre el grupo que consiste en hidrógeno, J', -J'-OH, -J'-O-K', -J'-O-K'-OH, y -J'-O-PO(OH)_{2}, en los que cada uno de J' y K', independientemente, es alquilo de C1 a C5 lineal o ramificado;
R^{6} se selecciona de entre el grupo que consiste en hidroxi, halógeno, alcoxi de C1 a C5, y aciloxi de C1 a C5;
A^{1} y A^{2}, independientemente, se seleccionan de entre el grupo que consiste en
OH,
-- O --
\melm{\delm{\para}{OH}}{P}{\uelm{\dpara}{O}}
-- OH,
O -- Z -- O --
\melm{\delm{\para}{OH}}{P}{\uelm{\dpara}{O}}
-- OH,
Z --
\melm{\delm{\para}{OH}}{P}{\uelm{\dpara}{O}}
-- OH,
y
O -- Z -- CO_{2} -- H
en las que Z es alquilo de C1 a C10 lineal o ramificado;
o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
9. Composición farmacéutica según la reivindicación 8, en la que dicho análogo de Lípido A tiene la estructura:
132
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5681824A (en) * 1995-06-05 1997-10-28 Eisai Co., Ltd. Substituted liposaccharides useful in the treatment and prevention of endotoxemia
US6417172B1 (en) 1995-06-05 2002-07-09 Eisai Co., Ltd. Prevention and treatment of pulmonary bacterial infection or symptomatic pulmonary exposure to endotoxin by inhalation of antiendotoxin drugs
US20030130212A1 (en) * 1999-01-14 2003-07-10 Rossignol Daniel P. Administration of an anti-endotoxin drug by intravenous infusion
ES2664818T3 (es) 2000-02-18 2018-04-23 Eisai R&D Management Co., Ltd. Micelas
WO2001093921A2 (en) * 2000-06-09 2001-12-13 Eisai Co., Ltd. Administration of an anti-endotoxin drug by bolus or intermittent intravenous infusion
US20030105033A1 (en) 2000-06-09 2003-06-05 Rossignol Daniel P. Administration of an anti-endotoxin drug by bolus or intermittent intravenous infusion
WO2003013440A2 (en) * 2001-08-10 2003-02-20 Eisai Co., Ltd. Treatment and prevention of heat shock protein-associated diseases and conditions
US7727974B2 (en) 2001-08-10 2010-06-01 Eisai R & D Management Co., Ltd. Methods of reducing the severity of mucositis
AU2002950657A0 (en) * 2002-08-08 2002-09-12 Alchemia Limited Derivatives of monosaccharides for drug discovery
AU2002951995A0 (en) * 2002-10-11 2002-10-31 Alchemia Limited Classes of compounds that interact with gpcrs
ES2556970T3 (es) * 2003-01-06 2016-01-21 Corixa Corporation Ciertos compuestos de fosfato de aminoalquil glucosaminida y sus usos
US7906633B2 (en) * 2003-02-20 2011-03-15 Eisai R&D Management Co., Ltd. Reagents and methods for preparing LPS antagonist B1287 and stereoisomers thereof
CA2620027A1 (en) * 2005-08-31 2007-03-08 Eisai R & D Management Co., Ltd. Process for production of lipid a analogue
HUE036180T2 (hu) 2006-09-26 2018-06-28 Infectious Disease Res Inst Szintetikus adjuvánst tartalmazó vakcina készítmény
US20090181078A1 (en) * 2006-09-26 2009-07-16 Infectious Disease Research Institute Vaccine composition containing synthetic adjuvant
HUE031051T2 (en) * 2009-06-05 2017-06-28 Infectious Disease Res Inst Synthetic glycopyranosyl lipid adjuvant and vaccine compositions containing it
WO2012047656A1 (en) * 2010-09-27 2012-04-12 The University Of British Columbia Lipid a analog compositions
EP3632463A1 (en) 2011-04-08 2020-04-08 Immune Design Corp. Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses
SI2850431T1 (en) 2012-05-16 2018-08-31 Immune Design Corp. Vaccines for hsv-2
US9463198B2 (en) 2013-06-04 2016-10-11 Infectious Disease Research Institute Compositions and methods for reducing or preventing metastasis
CN113527396B (zh) * 2020-04-17 2024-02-02 上海医药工业研究院 一种疫苗佐剂mpla的中间体、合成及应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6153295A (ja) * 1984-08-24 1986-03-17 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd ジサツカライド誘導体
US5066794A (en) * 1984-08-24 1991-11-19 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Process for preparing a disaccharide derivative
US5530113A (en) * 1991-10-11 1996-06-25 Eisai Co., Ltd. Anti-endotoxin compounds
AU660325B2 (en) * 1991-10-11 1995-06-22 Eisai Co. Ltd. Anti-endotoxin compounds and related molecules and methods
US5681824A (en) * 1995-06-05 1997-10-28 Eisai Co., Ltd. Substituted liposaccharides useful in the treatment and prevention of endotoxemia
US6417172B1 (en) 1995-06-05 2002-07-09 Eisai Co., Ltd. Prevention and treatment of pulmonary bacterial infection or symptomatic pulmonary exposure to endotoxin by inhalation of antiendotoxin drugs
TW497974B (en) * 1996-07-03 2002-08-11 Res Dev Foundation High dose liposomal aerosol formulations

Also Published As

Publication number Publication date
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WO2001037843A1 (en) 2001-05-31

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