PT95261A

PT95261A - Processo para a preparacao de derivados de 2'-desoxi-2'-fluoro-ribonucleosidos e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT95261A
Application number: PT95261A
Authority: PT
Inventors: Thomas Anthony Krenitsky; Sylvia Margaret Tisdale; Martin John Slater; Joel Van Tuttle; Susan Mary Daluge; Wayne Howard Miller; George Walter Koszalka
Original assignee: Wellcome Found
Priority date: 1989-09-11
Filing date: 1990-09-10
Publication date: 1991-05-22
Also published as: RU94002475A; DE69025834D1; DD297650A5; JPH03145497A; EP0417999B1; TW246641B; AU644095B2; HUT54704A; ZA907187B; EP0671410A1; ATE135365T1; RU2043361C1; CA2025009A1; GB8920534D0; FI904445A0; EP0417999A1; KR910006293A; TW226333B; NZ235244A; IE903269A1

Description

Descrição da patente de invenção de ®HE WELDCQMB FOONDAMON LIM1TE.D, britânica, industrial e comercial, com sede em 160 Instou Road, London Ml 2BP, Inglaterra, (inventores:

Sylvia Margaret Tisdale e Martin Jhon Slater, residentés era Inglaterra, e uoel Van ^ufcfcle, Susan Mary Daluge,

Wayne Hoisrard Mil ler , Shomas JUstbony Krenifcsky e George Walter Kosalka, residentes nos e,u.a.), para “processo pjm A PSEPmhQAQ m DERIVADOS DE 2 '-DBSGXI- 2 ‘-FLEORO-RIBONUCLEQ-SIDOS δ DE COMPOSIÇÕES FARMA-CEDSíICãS úvb OS GOrnÊU#

Descrição A presente invenção refere*se a compostos químicos que possuem ãetividade antí-in facciosa, aos métodos para a sua preparação, âs composições que os contém e à sua utilização em particular no tratamento de doenças parasiticas e víricas. Mais particalarmante, a presente invenção refere-se a 2 *-âeso5SÍ-2 *-fluoro-ribonueleosidos e seus derivados* 1 HO âmbito da quimioterapia anfci-víriea existem poucos fármacos que combatem eficazmente o virus de per si* devido â dificuldade de atacar o virus sem simultaneamente prejudicar as células hospedeiras nl© infectadas. Recentemente verificou-se que algumas fases de desenvolvimento do ciclo de vida do virus, as quais variam de espécie para espécie, são especificadas do próprio virus* Contudo, devido â grande semelhança entre as funçSes virieas e do hospedeiro, tem sido difícil identificar tratamentos eficazes,

Existe um grupo de agentes patogênicos viricos que tem afligido a humanidade desde tempos imemoriais e que tem. sido responsável peia morte de muitos milhdes de pessoas ao longo dos séculos e que ê constituído pelos, vírus da gripe. Esses virus particularmente os da gripa ã e B, constituem alada hoje um dos principais agentes que provocam doenças respiratórias agudas em todo o mundo.

Os virus da gripe são membros da família dos virus Qrfchomjpcoviridas de cordão negativo* Existe outro vírus de cordão negativo qm possui importante implicação sobre a saúde que ê o virus sincicial respiratório (VSR), o qual ê um pneumovirus, um gênero da família Bara-mixoviridas. O V3R é uma causa essencial das doenças do tracto respiratório inferior durante a infância e adolescência*

Os nueleósidos flucrados tem sido prescritos para o tratamento de. doenças virieas e parasiticas*

Por exemplo, o Pedido de Patente Europeia 3Ρ-Ά-0 287 313 refere-se aos 2',3•-didesoxinucXeosiáos, suhstifcuidos com xluor na posição- 2* para utilização no tratamento dos virus da imunoâe fi ciên cia humana» o Pedido ãe Patente Europeia sp-ã-0 219 S29 descreve 2*-desoxí-2*-fiuoro-p-HD-arabino- -- furanosil-nucleósidos para utilização· como agentes anti--parasíticos, especialmente contra a leisraaniase* Os processos. para a preparação de alguns 2*-£1uoro-2 *~âesoxi-ri- - 2 - Ύ

bonucleosidos foram descritos por wUesugi et ai., (Bu« cleosides and Mueleotides 2, 373-, 1983) e Ikehara et ai. (Chera. Pftarm. Bali. 29, 1034«, 1981)*

DeSôobriu-se agora que,.os compostos de· fórmula (I) e seus sais farmaceuticamsnfce. aceitáveis comãti-tuem agentes anti-infscciosos, partieularmente contra virus. Por exemplo, os compostos de fórmula CD sSo activos contra o virus da gripe, particularmente nos casos da gripe A e B > e infecçSes provocadas pelo ^SR, @ ainda no caso de certos protozoários, por exemplo, SgidtoiBonas vaolnalis e Giardia lambiia, Ma formula (x)í x

t representa H ou Wd^t

pressnta individualmente hidrogénio, alquilo CC^-Cg), aique« nilo (Cg-Cg), ciclo-alquilo, sendo cada grupo facultativo substituído por um ou vários átomos d© hidrogénio, ou

ferenfces, representam indivídualmentes — 3 — - um grupo hidroxi; - um grupo de fórmula -QCGR H em que 6 w R representa um grupo divaleate que pode ser alguileno (Cj-Cç) alquènilenèfêg^Cg)* ou cielo-aiiuilenoCCj-C^) de cadeia linear ou ramificada, sendo cada um deles facultativa-mente substituído por ou ou vários grupos hidroxi; *7 - um grupo de fórmula -gco^R h em gue · r7 representa uma ligaçSo covalente o» possui as signifiea- 6 ções definidas para R * - um grupo “de fórmula -OCOR^-CQOR8 δ Si» em gue R possuí as significações definidas antes a R e seleccionado entre bídroglnio, alquil Ç^-C^) ou alguenilo (Ci-C6> de cadeia linear ou ramificada, sendo qualquer deles facultativamente substituído por um ou vario© grupos bidroxi? *7 - um grupo de fórmula -OCX5R -Z-Ãr em 7 gue R possui as significações definidas antes» % representa alternativamente uma ligaçSo cova lente ou um átomo de oxigénio e Ar representa um anel aromático, por exemplo* um anel arilo monociclico (por exemplo fenilo) ou beteroarilo (por exemplo* píridina), insubstítuido ou substituído por um ou vários átomos de halogénio ou por um grupo alguilo (C^-Cg) ou alcoíci (C-^-Cg) ? um grupo de fórmula »QR% em qua possui as significações definidas antes? - um grupo de fórmula -OR6~2;-Ar em que r6, z e Ar possuem as significações definidas antes? - um grupo de fórmula -οοοοι-ϊι9^10^1 . 10 11 ' em que E e R possuem- as significações definidas antes para R8 e R9 representa - - Mâreginio* - - alquilo (C^-CA) de cadeia linear ou ramificada facultativamente substituído por um vários grupos biclroxi, mercapto, alcoxi ou alquil (C^-G^) -tio, — 4 —

12 ,12 - - um grupo do formula ~E -A em gue R““ representa um grupo alquileno) faeultativamente substituído por um ou vários grupos hidroxl e A representa um grupo de formula -000¾ -coiSíg* ou -SiH-C(NB) NK^ ou A representa um sistema em ánel eíelico ou heterociclico, aromático ou não aromático, possuindo entre 4 e 11 membros e contenj* do entre 3 e 10 átomos de carbono e ainda 0> 1, 2 ou 3 átomos de azoto no anel, sendo os átomos Se carbono e/ou os átomos de azoto do anel f acultativamente substituídos por um ou vários grupos hídroxi? 13 13 - um grupo de fórmula -OCQ-R era que R representa ura mel heterociclico possuindo entre 4 e ? membros e contendo entre 3 e 6 átomos de carbono e õ, 1 ou 2 átomos de azoto, sendo os átomos de carbono e /ou os átomos de azoto do anel facultativamente substituídos por um ou vários grupos hidroxt; ou - um grupo ester mono-, dí- ou tri-f os-fato, A presente invenção engloba adicionalmente os compostos de formula W e os seus sais para utilização em terapia mídia*

Os grupos ester preferenciais de fórmulas -0CQCHR19ml0RX1 e -GCQ-R13 slo esteres de a-aminolcidos que ocorrem naturalmente abrangidos peia definição anterior*

Como grupos ester especialmente preferidos de fórmula 9 lo 11 ~ $ -000CHR NR R' re£ere-ae aqueles em que R representa um 10 11 grupo alquiloe R ’ e E representam ambos átomos de hidrogénio, por exemplo, valina ou alanina*

Faz-se observar que os compostos de fórmula (X) podem existir em diversos formas tautomlricas e que no caso de 2£ representar um gru.po-QH, também pode representar um grupo oxo* Os compostos de fórmula (1) a os eeus sais também podem existir nas formas a- ou ,.j^anomericas* Ba consequência, considera-se englobado no âmbito da presente invenção - 5 -

e correspondentes misturas.

Os compostos de fórmula (I) e seus sais farmaceuticamente aceitáveis serão daqui em diante designados apenas por compostos de acordo com a invenção. O termo “ingrediente activo“ tal como usado daqui em diante# salvo quando especificado de outro modo* refere-se a um composto de acordo com a invenção* k actividade dos ingredientes activos contra as gripes A e B não era previamente conhecida e a presente invenção proporciona também eamposiçSes farmacêuticas que incorpora um composto de fórmula Cl) ou ura seu sal far-maceufeicamente aceitável# especialmente útil para inibir o desenvolvimento da gripe A ou B nos mamíferos e nos seres humanos* Sm consequência proporciona-se formulações solidas que incorporam o ingrediente activo e um veiculo sólido ou uma formulação inalável que incorpora o ingrediente activo e um veiculo fluído inalável* a) um método para o tratamento ou para a profilaxia de uma infecção vírica# particularmente provocada pelo vires da gripe ou uma infecção provocada pelo VSR ou uma infecção provocada por protozoários# por exemplo, Trichomonas vacinalls ou <5iardia lamblia» num determinado hospedeiro# por exemplo um mamífero incluindo os seres humanos e os murganhos# o qual consiste em tratar esses mamífero cerni uma quantidade eficaz não tóxica de um composto de acordo com a invenção* b) a utilização de ura composto de scordo com a invenção para a preparação de um medicamento- para o tratamento ou para a profilaxia de uma infecção incluindo uma *i*juViiiivCti' tiiSUt ví\#u<lειι*iuc#uuc |j/iyvy«gu» Y»afc«» — 6 **

da gripe ou uma infeoçío provocada pelo VSR ou uma infecçSo provocada por protozoários, por exemplo, Trichomonas vaginalis -ou Glardia lambiia*

Alguns dos compostos de formula(I) e seus sais sSo compostos novos pelo que constituem um aspecto adi» cional da presente invenção* Esses compostos novos slo-os anteriormente definidos para a formula Cl) com exeepçSo dos casos em que ΪΓ e R representam individualmente um grupo hidroxi ou R^ representa um ester mono», di- ou tri»fosfato na 2 1 posiçSo 5* e R representa um grupo tiidroxi ou R representa 3 um grupo ftidroxi e R representa um ester mono», di» ou tri» »fosfato na posição 3* e em alternativa Ca) X representa um grupo OH e ϊ representa um grupo ífí2 011 ** OVL x representa um grupo EB2 e 1Γ representa H*

Os compostos preferenciais de acordo com 1 2 a invenção englobara aqueles em que R e R representam ambos o grupo OH ou em alternativa R1 representa um mono» 2 fosfato e R representa ura grupo oh, ir representa E ou 3 á 3 4 Λ e X representa um grupo -KR -R" no qual E e R , os quais podem ser iguais ou diferentes, representam H, alquilo (crc63, ou x representa um grupo z-R no qual 2 representa 0 ou s e R5 representa alquilo Cc^-c^) ou x representa um átomo de balogeneo ou de hidrogénio*

Os compostos parti calarmente preferen» f i 2 ciais de formula (I) englobam aqueles em que R“ e R representam ambos o grupo QHG, 7 representa e X representa 5 * ç H, OH, nh2 ou Z-R em que Z representa o @ R representa alquilo * €omo exemplos de compostos especial-mente preferidos de formula Cl) indica-ses

Cl) 2,6-diamÍn©~9~ ( 2-desox i- 2« f 1 uoro-J3-D-r ifeo f uranosii)»

4

2-amino-9- (2-desoxi- 2~*£1 uoro- β-Β-rí bofur anosil) -9H--purina (3) 9* ( 2-desoxi- 2- £1 uoro- β-D-riho furanosil} guanida (4) 2-amino-9-(2-άθδοχi-2-fluoro- p-D^ribofuranosi1} ~6~ ~metoxÍ-9H~purina* A presente invenção engloba também um processo para a preparação de novos compostos de' formula (I) e seus sais farmaceuticamente aceitáveis* o gual consiste* em alternativas fazer.reagir Uma base de purina de formula PuH em que Pu representa o resíduo purina?

(Fu) j (era gue X e Έ possuem as significaçães definidas antes) * ou um seu sal* com um composto de fórmula

1 2 em gue R e E possuem as" significardes definidas antes e S? representa um ester’ fosfato ou um seu sal ou ere alternativa um radical purina ou pirimidina (diferente de Pu)* para pro-

t J

porcionar um composto a® formula (I); (B> fazer reagir ura composto de formula (ÍXI)

Cem que Xa* Xa, R1 e R2 representam respeetiva- 12

sJ mente os grupos %, Y, R © R anteriormente definidos ou uma forma precursora, por exemplo, protegida, de ura grupo desse tipo desde que pelo menos um dos símbolos X, Tf* R~ e R represente uma forma precursora) cora um agente que sirva para converter a referida forma precursora dois) grupo Cs) no(s) correspondente (s) grupoCs) desejadoCs)?

Ci) por reaeção de um composto de formula (1) era 1 2 que pelo menos dm dos radicais R e R representam um grupo hidroxi com um agente adequado que sirva para converter esse grupo hidroxi num 0ÇUPO alternativa representado pelos radicais r e/ou E . íii) por reactão de ura composto de formula (I) em que e/ou R2 aSo representam hidroxi, com um agente que sirva para converter os referidos 1 2 radicais E e/ou R num grupo hidroxi. - 9 0 processo {A), que ê particularmente adequado para a preparaçto de compostos de formula (I) em 1 2 que R e R representam ambos bidroxi e y representa H ou m2, pode ser realizado enzimaticamente fazendo reagir a base de purina de formula Pu em que X e if possuem as significações definidas antes, ou um seu sal, «asm um composto de formula (XI)

1 ^ (em que R «Γ possuem as significações definidas antês e W representa um ester fosfato ou um seu sal ou um radical purina ou pdrimidiaa (diferentes de Pu)), em presença de pelo menos uma enzima fosforiiase tal como a fosforiiase do; nucleosido da purina e a fosforilase da timidinas um fosfato orgânico ou um seu sal, ou uma enzima transferese, por . exemplo# H-desoxirifeosil-transferase* Para os objectivos desta reacção ê preferível que o radical purina ou pirimidina se encontre na posição β e que o e ster fosfato ou o sal se encontre na posição a. A base de purina adequado de fórmula PuH pode ser obtida comercialmente, por exemplo, em «Pacific Chemical Laboratories ou Sigma Chemical Company" ou pode ser preparada por métodos convencionais bem conhecidos pelos especialistas na matéria ou por processos vulgarmente descritos na literatura química* Por exemplo, as bases de purina em que o stibstituiaie da posiçSo % & amino ou hidrogénio e o substitninte da posição· 6 ê amino ou metil-tio, podem ser obtidas eomereialmentd, as purinas em que os substituin-te da posição t ê amino e o sufosfcituinte da posição 6 ê um: grupo metil-amino podem ser preparados em conformidade com o método de Montgomery e Holum (J.A*G*S* 80 s404, 1958). As pu lo -

rlnas em que o substituinte da posição 2 é amino e o subs-tituinte da posição 6 ê alcoxi, por exemplo, raetoxi* podem ser preparadas pelo método descrito por Belsiger e Hontgomery (J. Org. Chem. 20 t 1573* 1960)*

Os corrpostos de fórmula (II) podem ser preparadas por métodos bem conhecidos por um especialista na matéria ou podem ser facilmente preparados por processos descritos na literatura química. 90r exemplo* é possível preparar 1-(2-desoxi-2-fluoro-p-B-ribofuranosii)uraeil pelo método descrito por Codington et al. <j* Org, Chem* 29 s 558* 1964)* é possível preparar 9- < 2-desox i- 2-fl uoro-β-D-ribofuranosil) adenina pelo método descrito por S, Uesugi et al (Nucleosides und Nucleotides 2, 373-* 1983)*

Mo que dis respeito ao processo (B), o qual ê particularmente adequado para a preparação de compostos de fórmula Cl) a partir de compostos de fórmula (III) em que Ria e R14 representam ambos hidroxi* os grupos protegidos %% ã®# ϊ^δ e R2a dos compostos de fórmula (III) podem ser protegidos com grupos de protecção hidroxi e amino convencionais tais como os grupos acilo» por exemplo, alcanoilo tal como o benzoilo* ou grupos aroilo tais como acetilo? grupos arsXquilo* por exemplo* um gripo foenzilo? ou grupos trialquil-sililo tais como o grupo terc-butil-dimetií--sililo, sendo © tipo particular de grupo de protecção utilizado dependendo da natureza do grupo que se pretende protegér. o grupo de protecção pode ser depois removido enzimaticamente* por Mdrogenoiise ou por hidrólise ácida ou alcalina. Os grupos acilo tipicamente removidos por hidrólise alcalina. Os grupos acilo são tipicamente removidos por hidrólise alcalina e os grupos sililo por hidrólise ácida ou pelo ião fluorefco* Os grupos aralquilo tais como © benzilo são removidos vanfcajosamsnte por hldrogenolise catalítica * tipicamente em presença cie um catalisador tal como o paládio-em-carvão ou por reação redutora* por exemplo* com - 11 - * t

tal cocno a amónia liquida, Descobriu-se que a utilização de um grupo de proteoçSo benzilo, e partieularmente vantajosa para a preparaçSo de conpostos de formula (I) em que X representa um grupo hidroxi ou amino.

Para a preparação de um composto de fórmula (I) na qual R3" e/ou R2 representam um grupo de fórmula ocochr9rr10r11» em que conformidade com o processo (B), os grupos κ 3 e/ou R* podem- ser protegidos* por exemplo, com 9~fluorenil-metil-oxi-carbonil© (FMQC), tero-butil-oxi--carbonilo (tROC) ou carbobenziloxi (GBZ) e'podem ser'des- ’ protegidos por meios convencionais para proporcionar um amino-ácido de fórmula CHR.^RR^R^* O composto inicial de formula (III) pode ser preparado convenientemente fazendo reagir uma base de purina adequada c:e fórmula (IV) ,a

J

em que Xa e Va possuem as s igni ficaçtSes definidas antes# ou o seu sal, com um nucleosido da pirimidina contendo o resi— duo açúcar adequado* por exemplo* 1- (2-desoxi-2- fluoro-p-D--ribofuranosil) uracil era presença de uma ou varias enzimas fosforilase, por exemplo, a fosforilase do nucleosido da pu-rina e a fosforilase da timidina# ou uma enzima transferase, por exemplo, R-desoxiribosil-transferase,

Sm alternativa é possível preparar quimicamente um composto inicial da fórmula (III) anteriormente definida, fazendo reagir um composto de fórmula (IV) em que X e V possuem as significaçdes definidas antes, ou um seu — 12 “ 4

derivado sililado, ou usa seu sal# asm um composto de fórmula (IX) em que R e R possuem as significaçSes definidas antes ou outras formas de hidroxi protegidas e W representa um grupo removível adequado# por exemplo»’ um átomo de halogêneo tal como cloro# um grupo aciloxi tal como o acetoxi* um grupo aleoxi tal como o metoxi, em presença de um catalisador tal como o cloreto de estanho (IV) ou o triflato de trimetil-sill-lo num solvente adequado tal como o acetonitrilo* hs bases de purina de fórmula (IV) podem ser preparadas a partir de uma correspondente base de purina em que o substituinte da posição S é um grupo removível adequado* por exemplo# um átomo de halogêneo tal como o cloro* por deslocamento nucleofílico do referido grupo* Deste modo, é possível preparar uma base de purina de fórmula (iv) em que X representa um grupo bansiloxi* por exemplo# fazendo o tratamento da correspondente 6-eloro-purina com um álcool tal como o álcool benzilico em presença de uma base, por exemplo* o hidreto de sódio num solvente adequado tal como o tetra-hidrofurano (ffíF)* &s bases de purina de fórmula (IV) em que Xa representa um grupo benzil-amino podem ser preparadas por tratamento da correspondente 6- eloro-purina com uma amina# por exemplo* com bensil-amína em presença de uma base, por exemplo, uma amina tal como a trietil-amina num solvente adequado tal como o metanol* Ssses bases de purina utilizadas anteriormente como materiais de partida podem ser obtidas eomercialmante C&ldrieh Chemical Company) ou prepar-das por métodos bem conhecidos pelos especialistas na matéria ou que se encontram araplamente descritos na literatura química#

Os nucleósidos de piritnidiaã utilizados na preparação anterior dos compostos de fórmula (III) podem ser preparados por métodos bem conhecidos pelos especialistas na matéria ou por métodos amplamente descritos na litera-. tura química. Por exemplo* é possível preparar 1- (2-desoxi— ] - 2- f 1 uoro- β-D-ribo furanosil) -pir imádlaas# tal como l-(2- — 13 — -desoxi-2~£luoro-p»D~ribo£uranosil)uracil paio método descrito por Coâington et al (J* Org* Ghem. 29 & 553* 1964)*

Faz-se observar que o & compostos de fórmula (II1} podem representar compostos de acordo com a invencSo pelo que, por exemplo* X3 pode representar ara grupo de fórmula -1SR3R4 em que R3 e R4 possuem as significa-çSes definidas antes# Esses compostos podem ser tratados com uma enzima desaminase tal como a desaminase da adenosina para sarem convertidos num composto de fórmula (I) em que X representa um grupo· hidroxi*

I possível converter um composto de fórmula (X) em que R e/ou R representam um grupo hidroxi, num correspondente ester farmaceuticamente aceitável de fórmula (I), enforme aateriormente definido* por reacção com um agente de esterificação adequado de acordo cora métodos conhecidos na especialidade* por exemplo* recorrendo ao método descrito por Martin et al# -J* Eharm* Sei* (1987) 76* ISO—(* Sendo assim* para a preparação de e steres de ácidos carboxilicos apropriados tal como definido antes* o conposto inicial de fórmula (X) pode reagir com um anidro ácido ou com um halogeneto ácido, por exemplo* o cloreto correspondente a arn ácido carbcxílico de fórmula £CGOOH 6 6 8 7 em que Q representa um grupo -R S* -R COOR , -R -Z-Ar* 9, in ll 13 „7 „8 „9 „10 „11 „13 —CHR SR R ou —R em que R * R * R # R # R * R # R < Z e Ar possuem as significaçSes definidas antes* em presença de Uma base adequada tal como a trietil-amina* Em alternativa* o ácido de fórmula QGOOM pode reagir com um composto de fórmula (I) em que e/ou R3 representam um grupo hidroxi* em presença de um agente de acoplamento tal como a diciclo-hexil-carbo-di-imida* O anterior material de partida de formula (XI) em que R1 e/ou R3 representam hidroxi pode reagir com um agçnte de esterificação e o composto resultante pode reagir cora a base de purina de fórmula Puíi em conformidade - 14 - com o processo íaH . ·' ·.,

Os compostos de acordo com a invenção em que R1 e/ou r2 representara esteres mono», di~, ou tri-fos» fatp podem ser preparados a partir de compostos de formula (x! 1 '2 em que R e/ou R representam hidroxi por sucessivas fosfori» laçBes através de derivados mono», di», e tri-fosfato por meios químicos convencionais ou por meios enzimáfcicos, por exemplo, utilizando uma quinase de m nucleosido ou a fos-fotransferase em presença de um trifosfato de um nucleátído· por exemplo o MP» i possível converter um composto de fórmula (1} em que R3* e/ou R2 representam Mdroxi num corres» pondentô eter farmaceufcicaménte definido, por, reacção com um agente de alquilação adequado por um processo convencional# por exemplo, etíllxatate m composta» <Se fifagula phul em qm G representa um grupo -RH ou -R -z-àr em que, R e.Ar possuem as significações definidas antes e Hal representa um átomo de tiaXagéneo# por exemplo# o iodo#

Sm alternativa* esse agente de alquilaçãc pode reagir com um açúcar de fórmula .

Cem que V representa um grupo aicoxi tal como metoxi, ou um grupo aciloxi tal como acetoxil para proporcionar um correspondente 3*», 5*~ ou 3**5*»di-éte£v (SessodeS U et al, Synthesis (1988)560) e depois faz-se a condensação do éter resultante com uma base de pnrina adequada de fórmula PuH para proporcionar um aueleósido que é segoiclamente desprotegi» - 15 -

No caso de o produto obtido at partir do primeiro passo do processo anterior ser um monoéter* por exemplo* um 5‘-éter# o outro grupo Iiidroxi pode reagir com um ácido carboxílico ou com um seu derivado* por exemplo* um anidrido icádo ou um balogeaefco acido* por exemplo um cloreto correspondente a um ácido carboxilico de 0000

H em que Q possui as significaçdes definidas antes* para proporcionar um açúcar monoéter-monoeater* por exemplo* um açúcar 3*-ester-S*-êter* Sste açúcar pode ser condensado com uma purina adequada para proporcionar um nucleõsido conforme referido antes* ou conforme descrito por Codington J* F» et ai, Garbobjd. Res* (1966) 1*455*

Os compostos da invenção também podem ser obtidos a partir dos compostos de formula I*# em que I* representa um composto correspondente ao composto ete t Λ formula (l) na qual os grupos R e R s3o substituidoa por outros grupos de profcecçlo* Esses grupos de protecçlo diferentes podem ser removidos ou podem reagir para proporcionar 12· grupos R e R conforme definido antes*

Os compostos da invenção* no caso de serem produzidos pelo processo descrito antes* podem ser utilizados para proporcionar compostos da invenção em que R1 e/ou 2 R representam o grupo hidroxi* fazendo a desproteoçSo dos grupos éter e/ou ester*

Consoante as condiçSes de processo e os materiais de partida assim se obtém o produto final de férmula (i) na forma de base livre ou de um sal* Os produtos finais na forma de base livre ou de sal consideram-se englobados no âmbito da invenção, assim* é possível obter sais alcalinos* neutros ou mistos e também sob a forma de fcemi-* mono-* sesgui- ou poli-hidratos, Os sais por adição de ácido destes novos compostos podem ser transformados* por um pro — 16 —

cesso conhecido de per sl, «ama base livre utilizando agentes alcalinos tais como os compostos alcalinos ou por permuta ión L-ca* As bases livres obtidas também podem formar sais com ácidos orgânicos ou inorgânicos* ‘ Os sais de acordo com a invenção que podem . / ser utilizados convenientementè em terapia englobam os sais de bases farraacemti camente aceitáveis, por exemplo* derivados de uma base adequada* tais como os sais de metais alcalinos (por exemplo, o sódio), e de metais alcalino-terrosos (por exemplo* o magnésio)» sais de amónio e {em que x representa alquilo · A presente invenção também engloba os novos intermediários seguintes* 2-amino-6-benzil-amino-(2-desoxi-2-£luoro--p7-D-ribofuranosil)-9H-píirina* 2-amino-6-benzil-oxi~ (2-desoxi-2-fluoro--p-b-ribo furanosil) -9H-purina» e 2-amino-6-benzil-tio- (2*desoxi-2-fluoro--p-D-ribofuranosil)-9H-purina*

Os compostos de acordo com a presente invenção podem ser administrados a pacientes fc ais como os mamíferos incluindo os seres humanos, por qualquer via adequada ao estado que se "pretende tratar* sendo as vias adequadas a oral, pulmonar* rectal, nasal* tópica (incluindo a bucal e a sublingual)* vaginal e parenteral (incluindo a subcutânea* a intramuscular* a intravenosa* a intradermal* a intracecal e epidural)» 5*az-se observar que a Via preferencial variará* por exemplo* com o estado do paciente* h quantidade necessária de ingrediente activo individual para o tratamento de uma infecção virica 17 incluindo as infecçães de ..gripe e de VSR dependerá de nume* rosos facfcores incluindo a gravidade do estado que se pretende tratar e a identidade do paciente e deverá ser prescrita de acordo com o critério do médico assistente» Em geral» considera-se uma dose eficaz adequada a que está compreendida entre 0,1 e loo mg por quilograma de peso corporal de paciente por dia, e de preferencia compreendida entre 5 e 30 mg por quilograma de peso corporal por dia e mais prefe-renclalraente compreendida entre 10e 20 mg por quilograma de peso corporal por dia#· a dose óptima é de 15 mg por quilo- íV ? grama de peso corporal por dia {salvo quando especificado de outro modo todos os pesos de ingrediente aetivo são calasu-lados tomando como referência o composto original? para os correspondentes sais e esteres os námeros serão acrescidos proporcionalmente)» A dose eficaz pode ser apresentada facultativamente sob a forma de duas, três# quatro ou mais sub-—doses administradas a &tervalos de tempo adequados ao. longo do dia» Essas sub-doses .podem ser administradas em formas de dosagem unitárias, por exemplo* contendo entre 1 e 2 000 mg e preferencialmente entre 20 e 500 mg e mais preferencialmente entre 100 e 400 mg de ingrediente activo por forma de dosagem unitária»

Os compostos cie acordo asm a presente Invenção podem ser administrados isoladamente ou em combinação com outros agentes terapêuticos, por exemplo, com a mantida ou com r^avirina, os quais são agentes anti-grip© coube eidos, ou com um analgésico* por exemplo, codeína, paracetamol* aspirina, ábuprofen© ou com um agente anfci--inflamatório tal como a indometacina, o ácido mefenâmico, o naproxeno ou o ibuprofeno ou com quaisquer outros agentes que ao serem combinados com um composto de acordo com a invenção proporcionem ura .efeito terapêutico benefico#

Embora seja possível administrar os compostos da invenção isoladamente torna-se preferível iracorpo-rar-los em formulaçães farmacêuticas* As formulaçães de acordo com a presente invenção incorporam pelo menos um ingrediente — 18 —

aetivo, tal como definido ‘ ant es* em conjunto com um ou vá-rios veiculos farmaceuticamente aceitáveis e facultativamente contenâo também outros agentes terapêuticos» Os veiculos devem ser aceitáveis signi ficativamente isto que devem ser conpatíveis cora os outros ingredientes da formulação e não devem ser nocivos para os pacientes* l

As formulações englobam, todos aqueles que são adequados para a administração oral* pulmonar* rec-tal* nasal* tópica (incluindo a bucal e a subluingual) vaginal ou parenteral (incluindo a subcutânea* a intramuscular* a intravenosa* a intraderrasl* a intracecal e a epidural)* A apresentação das formulações faa-se convenientemente numa forma de dosagem unitária podendo ser preparadas por quaisquer métodos conhecidos na especialidade de farmácia* Esses métodos englobam o passo de misturar o ingrediente activo com o veiculo © qual constitui um ou vários ingredientes acessórios* Era geral* as formulações são preparadas misturando uniforme e intiraaraeatô © ingrediente activo cora veículos líquidos ou com veiculos sólidos finamente divididos ou cora ambos e depois* se necessário* dando uma configuração adequada ao produto.

As formulações de acordo cora a presente invenção adequadas para administração oral podem ser apresentadas sob a forma de unidade discretas tais como as cápsulas* as pirulas ou os comprimidos contendo cada unidade uma quantidade predeterminada de ingrediente activo? sob a forma de pê ou de grânulos? sob a forma de uma solução ou de uma suspensão num líquido aquoso nu num líquido não aquosa? ou sob a forma de uma emulsão de tipo óleo-em-lgua ou de tipo água--em-óleo. O ingrediente activo tambera pode ser apresentado em ampola ou sob a forma de pasta ou pode estar contido ©m llpossomas*

As pastilhas podem ser preparadas por compressão ou por moldagem* opqionalraente com um ou vários in- 19 —

gredientes acessórios» As pastilhas comprimidas podem ser preparadas utilizando urna máquina adequada para comprimir o ingrediente activo sob uma forma que flua livremente tal como o pó ou os grânulos, facultativamente misturados com um ligante {por exemplo, povldona, gelatina, hidroxi--propil-metil—celulose), com ura I ubri ficante, com um diluen-te inerte, um conservante, um agente desintegrador (por exemplo, o glicolato de amido de sódio, povidona reticulada, csrboxi-metil-celulose de sódio- reticulado) , e com um agente tensio-acfcivo ou dispersaste* As pastilhas, moldadas podem ser preparadas faseado s moldagem, numa máquina adequada? de uma mistura de composto pulverizado misturando eom um diluante líquido inerte» Faeultafcivamente as pastilhas podem ser revestidas ©u entalhadas e podem ser formuladas de tal modo que proporcionem a libertação lenta ou controlada do ingrediente astivo nelas contido, por exemplo, hidroxi-propil-metil-celulose era proporções variáveis para proporcionar o perfil de libertação desejado* ê posssível preparar uma cápsula enchendo-a cora um pó solto ou comprimido· utilizando, uma máquina de enchimento adequada, ©pciorialmente com ura ou vários aditivos* Corão exemplas de aditivos adequados refere-se os ligantes tais como a povidona, e a gelatina , os lubrificantes, os diluentes inertes, & gb agentes desintegrantes para as pastilhas* Parabém é possível preparar formulações de cápsulas contendo grânulos ou sub-unidades discretas que proporcionem a libertação lenta ou controlada do ingrediente pretendido. Isto pode ser conseguido fazendo· a extrusão e a esferonisação de uma mistura húmida contendo o fármaco mais ura auxiliar de extrusão (por exemplo* a celulose rai-crocristalioa) e ainda um diluente tal como a lactose:* Os grânulos esferóides assim obtidos podem: ser revestidos com uma membrana serai-perraeável (por exemplo, etil-celulose, Sudragit WE3G©) de modo a conseguir-se propriedades de libertação sustentada* - 20 -

Para administração tópica as formula* çSes são aplicadas prefencialmente como unguentos ou como cremes contendo o ingrediente activo numa quantidade com* preendiâa por exemplo entre 0*Q?5 e 20% p/p, e de prefe* rência entre o,2 e 15% p/p e mais preferencialmente entre 0,5 e 10% p/p. Se a formulação for sob a forma de unguento, os ingredientes aetivos podem ser incorporados numa base parafínica ou de ura unguento miscível com água* Sm alternativa os ingredientes activos podem ser incorporados numa formulação sob a forma de ura creme â base de uma emulsão de tipo óleo-em-água ou água-em-óleo*

Se desejado» a fase aquosa do creme pode incorporar, por exemplo, pelo menos 3o% p/p de um ál-cool poli-hídrico, isto ê, um álcool que possua dois ou vários grupos Mdroxilo tais como o propileno-gli col, butano--1,3-diol, manitol, sorbifcol, glicerol e polietileno-glicol e suas misturas» As formulaçSes para aplicação tópica podem incorporar desejavelmente um composto que melhore a absorção ou a penetração do ingrediente activo através da pele e de outras áreas afectadas* Como exemplos desses agentes que incrementam a penetração dêrmica refere-se o dimetil-sul-fóxido e compostos afins* A fase oleosa das emulsães da presente invenção podem ser constituídas por ingredientes conhecidos e por um processo conhecido* Apesar desta fase poder incorporar apenas um emulsionante Ctambera conhecido por emoliente) é desejável que incorpore uma mistura de pelo menos um emulsionante cora uma gordura ou com um óleo ou simultaneamente com uma gordura e com um óleo* De preferência incorpora-se também um emulsionante hiclrofllico em conjunto com um emulsionante lipofílico que aetua como estabilizador* Também ê preferível incorporar simultaneamente um óleo e uma gordura. Contuntamente, oCs) emulsionante(s) com ou sem estabilizador(s) forma(m> a designada cera emulsio-nante e essa cera em conjunto com o óleo e/ou a gordura cons- i { - 21 - tituem a designada base de unguento emulsionante a qual forma a fase dispersa oleosa das formulações cremosas*

Os emulsionantes e os estabilizadores em emulsão adequados para utilização nas formulações da presente invenção englobam “Tween 60*, "Span 80*** álcool cetostea-rálico* álcool miristilico* monoestearafco de glicerol e lau-ril-sul fato de sedio* A escolha de óleos ou gorduras adequados para a formulação baseia-se nas propriedades cosméticas desejadas uma vez que ê muito baixa a solubilidade do ingrediente aetivo na maior parte dos óleos frequentemente utilizados em formulações de emulsões farmacêuticas* Deste modo* o creme deverá ser preferencialmente ura produto não gorduroso* que não manche e que seja lavável* e com uma consistência adequada para evitar que escape dos tubos ou de outros recipientes* É possível utilizar esteres alquilieos mono- ou dx-básicos de cadeia linear ou ramificada tais como o di-isoadipato* © estearatõ de isocetilo* e diester propileno-glicólico de ácidos gordos de coco* o miristato de isopropilo* o oleato de deciio* o palmitato de isopropilo* o estearatõ de butilo* o palmitato de 2-etil-hexilato ou uma mistura de esteres de cadeia ramificada conhecidos por "Crodamol CAPH* sendo ©s três últimos os esteres preferidos* Podem ser utilizados isoladamente ou em combinação consoante as propriedades pretendidas* Sm alternativa* ê possível utilizar lipidos de elevado ponto de fusão tais com© a parafina macia refinada e/ou a parafina líquida e ainda outros óleos minerais*

As formulações adequadas para administração tópica sobre os olhos englobam também as gotas ou colares em que o ingrediente aetivo se encontra dissolvido ou em suspensão num veículo adequado* especialmente um solvente aquoso para o ingrediente aetivo* O ingrediente aetivo encontra-se presente nessas formulações de preferência numa concentração variável entre 0*5 e 20%, vantajosamente — 22 —

compreendida entre ú, S e tmi e pacticolarmeafce cerca de 1,5% pfp* m focmaiagies adequadas tara administra-ç«o têpica no interior éã mm englobam o» losangos qm incorporam o mMm ««ma base aromatizada* geral- «ante a sacarose e a goma de a cicia ©» a qmm alcSntira# pastilhas qm incorporam o ingrediente actívo numa foase inerte tal com a gelatina & a glicerina,, ou sacarose e goma ia acácia; e ainda líquidos para boeastótar qan incorporai o to» gradiente mtím nem vaíofilô líquido adequado*

Hg- Èormlm&o® para administrais© rec~ tal podem ser apreseataâas so& a forma- de supositlrlos com uma base adequada contendo, pear exemplo* manteiga de cacau ou um álcool gordo superior %©r eEsipie, -cera dura referida «a «Suropsari KharmaeopeiaKl ou fcrlf liciriaos m ácidos gordos saturado» t$or exemplo* ©ifcepsalí* A& fonaulafié© adequadas para administra· gSo nasal em que o veiculo ê m sálido incorporam um pê grosso que possui partículas com dimersSes compreendidas entra ao- « Soo micra m qual ê aMniotraio por aaplrafto* isto 4- por rápida SaalagSo atto&vêé da passagem nasal a partir de um recipiente que contém o fê e # qual ê mantido- pr&cim© do uaris* âs formulações adequadas em gpa o veículo é um líquido, para administraglo de tipo nepsrsS© sasat ou cotão gotas nassift incorporai» soluces aquosas os oleosas contando m ingrediente actlvo. âs fbrsuiagSes adequadas para adsdnia-iragto por zmlmUo englobas m poeiras de partículas finas ou as nlvoas gerada* recorrendo ê utilisagS© de diversos tipo,» de aeressêis* nebuiisaâoms ou insufladores pressurizados d# dosas calibradas* m -

Para administração pulmonar através ' da bõca, as dtmensles das partículas de pé ou das gotíeulas varia tipicamente entre 0,5 e 10 um* e de preferência entre 1 e 5 um, para garantir o seu fornecimento à árvore bronguiea» Para. administração nasal ê preferível gue as partículas tenham diraensães compreendendo entre 10 e SOO um para garantir a retenção m cavidade nasal*

Os inaladores de doses calibradas são distribuidores de tipo aerosol, contendo tipicamente uma formulação do ingrediente activo em suspensão ou solução num líquido propulsor* Durante a utilização destes d ispositi-vos efectua-se uma descarga da formulação através de uma válvula adaptada para fornecer ura volume calibrado* tipicamente compreendido entre 10 e ISO ,ul* proporcionando traia aspersão de partículas finas contendo o ingrediente activo* Os propulsores adequados englobam o propano e o butano* alguns compostos de cloro-f1uoro-carbono* vulgarmente designados por "CFG*** por exemplo, o dicloro-difluoro-metano, o tridclo--fluoro-metano, o dicloro-tetrafIgoro-etano, ou suas misturas* Adicionalmente as formulações podem conter co-solventes, por exemplo*© etaaol e agentes tensio-activos tais como o ácido oleico ou o trioleato de sorbitano* anti-oxidantes e/ou agentes aromatizantes adequados*

Os nebulizadores são dispositivos comer-cialraenfce disponíveis gue transformam soluçães ou suspensães do ingrediente activo numa névoa terapêutica de tipo aerossol acelerando um gás comprimido através de um orificio de Ven-turi estreito, sendo esse gás tipicamente o ar ou o oxigénio, ou ainda recorrendo â agitação ultra-sonica. % formulaçães adequadas para utilização nos nebulizadores são constituídas pelo ingrediente activo num veículo liquido e contém até 40% p/p da formulação e preferencialmente menos do que 20% p/p* tipicamente o veículo ê a água ou uma solução alcoólica aquosa diluída, a qual se tornou preferencialrnanfce isoténica com os fluidos corporais por adição* por exemplo* de cloreto de sédio* Os aditivos facultativos englobara os conservantes - 24 - no caso âe a formulação não ser estéril* por exemplo* o hidroxi-feenzoato de metilo* anti-oxldantes, agentes aroraati-zantes* óleos voláteis* agentes tampão e agentes tensio-ac-tivos.

As formulações adequadas para administração por insuflação englobam os pós finamente triturados que podem ser fornecidos por meio de um insuflador ou introduzidos pela cavidade nasal por aspiração* Para utilização com um insuflador o pó encontra-se contido em cápsulas ou cartuchos, normalmente feitos de gelatina ou de plástico, os quais são perfurados ou abertos in sita sendo o pó exposto ao ar removido por um dispositivo para inalação ou em alternativa fornecido por meio de uma tomba acti.vada manual-mente* o pó utilizado no insuflador ê constituído apenas pelo ingrediente activo ou é uma mistura pulverulenta- que contêm o ingrediente activo* um diluente pulverulento adequado tal como a lactose e facultativamente incorpora tamfoem um agente tensio-aetivo* O ingrediente activo constitui tipicamente entre 0,1 e 3,00% p/p da formulação:* .·

As formulações para aerossóis pressurizados para inalação sSo calculadas de tal modo que cada dose calibrada contenta entre 0*05 @ 5 mg de um composto da invenção* j>e modo idêntico, as formulações em pó para insuflação são calculadas de tal modo que cada dose unitária conte-'' nha entre o*5 e 5o mg* As As formulações em solução ou em. suspensão para nebulísaçã© são calculadas de tal modo que as doses fornecidas variem entre l e 1500 mg* Os compostos de acordo com a presente Invenção ou correspondentes formulações podem ser administradas através desses dispositivos uma ou varias vezes por d ia* aplicando-se em cada ocasião uma ou várias doses* por exemplo* três ou quatro*

As formulações adequadas para administração vaginal podem ser apresentadas sob a forma de pessários, tampões, cremes geles* pastas* espumas ou formulações para aspersão contendo para além do ingrediente activo veiculos — 25 —

bonhecidos na especialidade conforme for apropriado.

As formulações adequadas para administração parenteral englobam as soluções injectlveis estéreis aquosas e não aquosas as quais podem conter anti-oxidantes, tampões* bacteriostatos e soluços que tornam a formulação isoténiea com o sangue do paciente visado? e as suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem conter agentes de suspensão e agentes espessantes* e lipossomas ou outros sistemas constituídos por micropartículas concebidos para dirigir o composto para os componentes sanguíneos ou para um ou vários érgãos. As formulações podem ser apresentadas em recipientes de dose única ou de dose múltipla, por exemplo, ampolas e frascos vedados* e podem ser armazenados no estado de lio-filizadas sendo apenas necessário adicionar o veículo líquido estéril* por exemplo a água para iajecções, imediatamen-te antes da sua utilização* As soluções e as suspensões para injecçlo podem ser preparadas extemporaneamente a partir de pés, grânulos e pastilhas estéreis do tipo descrito antes*

As formulações para dosagem unitária prefenciais são as que ©ntém uma dose ou unidade diária* uma sub-dose dâlria tal como anteriormente referido* ou uma frac-çSo adequada* de um ingrediente activo. faz-se observar que para além dos ingredientes particular i.«ente referidos antes, as formulações da presente invenção podem incorporar outros agentes convencionais utilizados na especialidade tendo em consideração o tipo de formulação em questão* por exemplo, as formulações adequadas para administração orai podem incorporar agentes aromatizastes*

Os execplos que se seguem são proporcionados a título ilustrativo da presente invenção e não devem ser considerados como qualquer limitação* - 2d

Sxamplo 1

Sreparação de 9-(2-desoxi-3*5Hii-Q-prepi©íxil-2-flu0ro-p--D-»ribofurano s il) auan ina ................ k uma solução <3e 9- (2-ciesoxi~2-fluoro-»p-l>-ribofiaraaosiirgaaiiiea (X7G mg; o, 6 ramol), de WB& (4--âimetil-amino-piridina) (8 mg) e de trietil-amina (0*41 ml? 5 equivalentes) em BMP (M-H-dimetil-formamida) (4 ml) à temperatura ambiente adicionou-se anidrido propiónico (0,16 ml? 2*1 equivalentes) sob agitação* Decorridas 20 noras adicionou-se metanol (2 ml)· Decorrida 1 hora evaporou-~se a mistura in vácuo © submeteu-se õ resíduo a croraatogra-fia intermitente sobre sio2· A eluição com caei^/MeOK (10sl) e depois (6$l># proporcionou o composto em epígrafe no estado solido e de cor branca· p.f. 123-200ο0·

Anal· Calc« para 0* 2 hidrato; G, 47* 93; S* 5,13; M, 17*47 * %icontrado; C, 48,22; H* 4,94; Η, 1?«Q

Sxemplo 2

Reparação de 9-(2-desoxi-3,5-di-G-aeetiÍ-2-fluoro-j3-D--ribofuranosilíguanina e de 9- (2-desoxi-2-fluoro-3, 5-di-G- k uma solução de 9-(2-desoxi-2-fluoro-ip-D-ribofuranosil) guanina (160 mg; 0, 56 mraol), de BMAP (8 mg) e de trietil-amina (400 uls 5 equivalentes) em BKP (4 ml) adicionou-se anidrido-acético- (0,16 mi; 2*5 equivalen-tes) sob agitação á temperatura ambiente* Decorridas 22 horas evaporou-se a solução amarela in vacuo, fez-se a evaporação conjunta com etasol e com tolueno e submeteu-se a cromatografia intermitente sobre SiOg e depois fez-se a eluição com CHCl3/feeOH (6:1)* Svaporou~se o primeiro componente eluido e fez-se a evaporação conjunta com tolueno para proporcionar o derivado triacetilico com o aspecto de uma 27 - espuma branca* C, 47,69? Η, 4, 51? Ν, 16,65 C, 47,47? Η, 4,37# Κ, 16,82

Anal* Cale. para 0*1 toluatot %contrado? Ά recolha e a evaporação das fraeçães que continham o segundo componente eluido proporcionou o derivado diacetílice no estado solido e de cor branca» p.f* 232-234°C (dee,)

Anal*Cale*para O, 25 etaoolatet C, 45*73? B, 4* 63? B, 18,39

Sncontrados C, 46*02? B, 4,34? B, 18,19

Exemplo 3 I^eparação de 9- { 2-desoxi-2-£luoro-3-.0~pivaioil-8-B-rifoofura-nosillguanina e de 9- { 2-desq:í £~ 2- fiuoro-3, S-di-G-pivalo i 1-^l^riba^ararKasillmianiBa........—------, -..............-............—................... & uma solução de 9- (2-desoxi-2-£luoro~ -p-D-ribofuranosilJguanina |2O0 mg? 0,70 nsnol), de fíMftP (10 mg) e de tristil-araina (o,5 rol) era DMF (6 rol) a temperatura ambiente adicionou-se anidrido trimetil-acético {160 /ul? 1*l~equivalentes) e agitou-se a solução durante 24 horas* Depois adicionou-se roais 80 ^1 de anidrido trimetil-acético e manteve-se a agitação durante 5 dias* “Temperou-se a reacçSo com metanol (1 ml)* evaporou-se sob pressão reduzida para proporcionar um solido branco e depois submeteu-se a cromato-grafia intermitente sobre Si02* tendo-se feito a eluiçlo com CBOl^-íeOíI {15?1) a depois (10?!)* C6sl),. e finalmente (4sil;* - %r absorção de W verificou-se que a terceira fraeção eluida era o éster 3% 5 4-bis-pivalato cora o aspecto de ura solido ceroso após trituração cola éter* p*f. 250-252°C (dec)*

Anal* 020^28^¾^°*SB2° C, 51, 94?· - B, 6, 32? B, 15,15 - 28

Encontrado; C, 51#99? H# 6,23? N* 14# 83

For absorção da W verificou-se que a quarta fracçâo eluida era o ©ster 3 ‘-pivalato com o espectro de nm pó branco* Verificou-se o seu escurecimento gradual a partir de 250-3 2d°c* Cp. £») *

Anal» c15H20FK5°5 ϋ*7Η2° calculado* ç# 47# 17? H, 3» 65? 1* 18*54 encontrado;G* 47,10? H* 5,36$ M, 17* S 3 E?cgmP,ÍP.,4

Preparação de 9- ( 2-desoxi-2-fluoro~3, S-di-Q-pivaloil-p--D-ribo furanosil) adenina* de 9- ( 2-desosi-2-f 1 uoro-3-G-piva-loil-p-D-ribofuranosil) adenina e de -pivaloil-P-D^ribofuranosílJjadenina. —....., .......... , ,,,. A uma solução de 9- (2-desoxi-2--fluoro-p-D-rlbofuranosil) adenina (250 mg? 0*93 mmol) $ de DMAP (10 mg) e de trietil-amina (0*65 ml) em DMF seco {7 ml) adiclonou-se anidrido trimetil-acstico (225 ul? 1*2 equivalentes) â temperatura ambiente# aob agitação* decorridas 24 horas adicionou-se mais 50 ul de anidrido fcrimetil-acético e decorridas mais 24 horas fez-se nova adição de 20 ui* Deixou-se decorrer mais 1 dia e temperou-se a reaeção com MeOH, evaporou-se ia vácuo. fez-se a evaporação conjunta com efcanol e purificou-se por çromatografia intermitente sobre **102* Bfecfcuou-se a eluição com GHGl^/^eOH nas concentra-çSes ílÔíD* (15*1) e finalmeate (IQsi)* Por absorção de UV verificou-se que a primeira fracção eluida era o 3**5*--bis-ester que se apresentou no.estado- sólido e de cor branca após trituração com éter. p. f. 157-158°C.

Anal.C2oH28í’^5°5*0*calculado? G,54, 24? R, 6# 51? M, 15*82 encontrado# G* 54*40? B* 6,33? B*15,48 '"-"29-'"- «

Por absorção de W verificou-se que a segunda fracção eluida era o ester 3*-pivalafc© o que se apresentou no estado sólido e de cor branca? p.£.204-205°C.

Anal. para cx5H20Fi%°4*0·3 K2° calculados C, 50* 22? H, 5*79? N, 19,53 encontrados C» 50, 25? H, 5, 58? N, 19,31

Sor absorção por W verificou-se que a terceira fracção diluída era o éster 5*-pivalat© que se apressa-to u com o aspecto de uma espuma branca# p*£. 130-134ÔC Anal* ^3,5^20^ ^ calculados C, 50,46? H, 5,76? H, 19,62 encontrados C, 50,57? H, 5,65? H, 19,45

Exemplo 5

Preparação de 9(2-desoxi-2~£luoro-3,5-di-0-valeril-p-D-ribo-furanosil) adenina, de 9 (2-desois:i-2—£1 uaro-3-G-valeril-j3-P--ribofuranosil)adenina © ãe BiS^ãesasí^Z-Slaoro^S-O^valeril-^ -£rl^rlbSÍ£urano^il>Meniii^——___— k uma solução de 9-(2-desoxi-2-£1uoro--β-3-ribofuranosil) adenina (300 mg? 1,11 ramol), de DMAP (10 g) e de trietil-amim (0,9 ml) em DMP seco (8 ml) adicionou--sô anidrido valerico (263 μΐ? 1,2 equivalentes), à temperatura ambiente, sob agitação» sècorridas 24 e 48 noras adicionou-se mais 30 ^ul de anidrido valerico de cada vez. No dia seguindo ao fim da adição temperou-se a mistura com MeGí-í e depois fez-se o processamento e submeteu-se a erwnatografia tal como para a preparação dos esteres plvalato* Por absorção de UV verificou-se que a primeira fraoção eluida era 3*,5»-bls-ester que cristalizou sob a forma de agulhas apos trituração com Iter, p.f. 96-98°C.

Anal. -20^28^5°5 calculados C, 54,91? H. 6,45? H, 16,01 encontradosC, 54,93? H, 6,49? H, 15,89 - 30

Por absorção de W verificou-se que a segunda fraoção eluida era o ester 3*~valerato· p» f* 182-183¾ ' ‘

Anal.calculados €,50,98? H,5,71? N, 19,82 encontrado * €,50,91? H, 5,S2? N, 19,46

Por absorção de W verificou-se que a terceira fracçao eluida era o éster 5‘-valerato o qual cris-taliaou apôs trituração ©ata éter,

p* f* U5-U7°C

Anal^C^gHgQHígO^ , calculados C, 50, 98? íi, 5, 71? N, 19, 82 encontrado s €,50,76? H,5,81? N,19,44

Exemplo 6 2, S-diaraino-9- (2.»deso>;i-2-fluoro~p-E>-ribofuranosil)-9H-pu- rina ...... ............. .. ..................................— -.............

Cem 2,6-diamino-purina (Pacific Chemical Laboratories? 0,8 g? 4,8 ramçl) de 2- (2-desoxi-2-£luoro-p--D-ribofuranosil) uracilo <0,4 g? 1,6 ramal) cuja preparação pode ser efectuada era conformidade com J.F, Godington e outros («X# O^g. Chem# 29s558,t 1964) preparou-se uma suspensão em 50 ml de tampSo de fosfato de potássio 5 mH, pH 7,0, contendo 0,04% (p/v) de as ida de potássio· Adieionou-se fosforilase da timidina (3 85o U,X.) e fosforilase dos nu-cleófeidos da purina <3 760 tí.I.) (T.A* Krenitsky e outros, Siodhemistry 20« 3615, 1981 e Patente Norte Americana ns 4 .381 344) e agitou-se a suspensão à temperatura de 37°C*

Ao 122 dia filtrou-se a reaegão. Aplicou-se o filtrado a una coluna de 1,5 x 15 era de resina de permuta anâónica (Bio-Rad AG 1x2 forraa de hidróxido). Apés a lavagem da coluna com água/metanol <7/3) fez-se a eluição do produto com água/raetanol <1/1)* Combinou-se as fraeçães que continham o produto e removeu-se o solvente no vácuò. l>issolveu-se o - 31 -

resíduo em água e liofilizou-se para proporcionar o composto em epígrafe cuja análise demonstrou ser 1, 2 hidrato* p* £. 124°c m ^ max nm ( £ ac 10-3) ? MCI 0,11¾ 291 (10.2b 252 (11.8)? pH 7, 278,5 (10.3) , 255 (9,69) ? J%GH 0,1», 279 (10,6), 255 (9,69).

Anal.para 2 hjds

Calculado? €, 39,27? H, 5,07? H, 27,48?. P, 6,21 encontrados C, 39,22? H, 5,09? W, 27,39? F, 6,45. KMN-^H (80 nm, Me^SO-dS) ? á 7,94 <s, 1H, 8-8) ? 6,74 e 5. 79 (2 sb, 4K, 2-MH2 o ô-lEg)? 6*04 ($ά, 1H, K-l *, JF, 1* » 16,5 Hz, J * 3,4 Hz); 5,64 (m, 1,5H, 0,5 (H-2*> e 3*-GH) ? 5,25 (t, 1H, 5*-QH, J * 5,5 Hs)? 4,98 (m, 0,58, 0,5 <H-2*))? 4,41 ím, 1H, H-3 *)? 3.93 (m, 18, H-4*)? 3.65 Cm, 2H, H-5* e Hp-5V) .

Exemplo 7 9- (,2-desoxi-2-mpop-p-P-ribo^n?aBioall) gaanina

Dissolvea-se 2, S-dlamino-9- ( 2-desosci--2-fluoro-p-D-ribofuranosil) ~9,i~purina (0,20 g? 0,64 mmoles)? preparada conforme descrito no Exemplo 6, em 15 ml de água* Adicionou-se deeaminase de adenoslna intestinal da vitela (4 u.i., Boehringer samneim) e efectuou-se a incubação da solução â temperatura de 37°0 durante 4 dias» Depois arrefeceu-se a solução para a temperatura de 4°G* Decorridas 3 horas filtrou-se a suspensão para remoção do primeiro lote de cristais de produto* .Reduziu-se © volume do filtrado no vácuo e arrefeceu-se a suspenslo para a temperatura de 4°C* Filtrou-se a suspensão para remoção do segundo lote de cristais de produto. Procedou-se â combinação dos lotes de cristais de produto, preparou-se com eles uma suspensão ©m água e liofilizou-se para proporcionar o composto em epígrafe cuja análise demonstrou ser 1,3 hidrato, - 32 -

p. f* > 250°C (dec*) UV λ max nm ( t n 10-3)8 HCl 0,1 % 257 (12.2), 280 ísh) ? NaOH O, IN, 257-264 (10,9). i * ^nál. Calculado para ^χοΗΐ ^?W5°4 1 2 3 4 520s Calculado; C, 38*91? H, 4,77? N, 22,69? F, 6,16 Encontrado; C, 38,60? H, 4,82? N, 22,51? F, 6,44, (80 mzf He,2S0-d6) ? 5; 10* 63 (sb, 1H, 81-8) ? 7,94 (s, 1H, H-8)? 6,51 (be, 2¾ 6.00 (<gd# 'IS* H-l*» JF,1* * » 16.5 82« 6* * 2*9 mtf 5.59 (m, 1.58, <8*2 *) e 3*-0H)? 5.10 (t, 18, 5*-0H, tf * 4,5 Hz)? 4.90 <m» 0,58, 0.5 . (B-2*)>? 4,37 (ffi, 18, 8-3·»)? 3,90 (ffi, 1H* H-4*)#'3*65' (% 2H, 8-5* ô

Hrt—5 *) « p , , . - , · . /

Exemplo 8 33 1

Btilisard© adeoina (tlaon Research Laboratories, Inc., 0,8 g? 5,9 r,imoles) © 1-(2-desoxi-2-fluoro--β-D-ribofuranosi 1) uracil (0,4 ç? 1,.S mmoles) cuja preparação foi feita em conformidade com J, F„ Codington e outros (J, Org, Chem. 29s558, 1964) preparou-se uma suspensão em- 2 20 ml de tampão de fosfato de potássio 10 a®5, 7*0, contendo 0,04% (p/v) de azida de potássio* Adicionou-se fosforilase da timidina (2 400 U.I.) e fosforilase dos núcleosidos da purina (3 900 ΙΤ,.Ι*) (T«h<, içrenifcs&y e outros, Biodhemistry 3 20í36?3615, X981 e Patente Norte Americana ns 4 381 344) e 4 agitou-se a suspensão â temperatura de 37°C. Ao 6® dia diluiu* -se a reaoção até 100 ml com tampão de fosfato de potássio 5 ml, pM 7,0, contendo 0,04¾ (p/v) de azida de potássio.. Ao 17a dia filtrou-se a suspensão e evaporou-se o filtrado. Com o resíduo preparou-se uma suspensão em água tépida* Filtrou--se a suspensão e aplicou-se o filtrado a uma coluna de 1,5 x 12 cm de resina de permuta eniónica) ((Bio-Rad

AGlX2-forma de hidróxido). Fez-se a eluiçlo do produto com água* Procedeu-se è combinaçSô d as fracçQes que continham o produto e removeu-se o solvente no vácuo, Dissolveu-se o resíduo em água e liofíiizou-se para proporcionar o composto em epígrafe cuja análise demonstrou ser 0*6 hidrato. p.f* 225-22?% mar (dec.) ' ' . 1 i * ’· / * " W ^Vmax nra ( £ 10-3} ; IICP-O, 1M, 257 (14*5) ; HaOH 0,1H, 260 (14,9). i r

Anal.Cale.para 2FK5°3v0 · ! . , . ,

Calculado : C, 42.39; K, 4,57; N, 25.01; P, 6* 78.

Encontrados C, 42.94; H. 4.76; £1, 24.98; F. 6,89. (250 HÊi®. Me^O-dd); . i 8.35 e 8.14 (2s, 2H, ΙΊ-8 e K-2); 7.36 (s. 2H, S-M-I2); 6.21 (dd. 1K, H-l *, JF, 1 ‘ * 16,8 HZ, J * 3,0 !2zb 5,71 (d, 1H, 3*-0H, J * 6,0 Hz); 5,42 (ddcl, 1H, H-a** <JP,2* #· 53,0 1«, Jl% 2‘ » 3.0 Hz, Cra^S* * * 4.5 Hz); 5.25 (t, 1H, 5*-QE, 3" * 5,6 mh 4,47 (fâ, 1H, H-31); 3,97 (m, 1H, H-4 ») ; 3,74 (m, 1H, K-§*)/ 3,56 (m, 1H, 5*) ·

Exemplo,9 2-amlno-9- f 2-áesoxi-2-fluoro-E-D-ribofuranosi1)-9H-purina í&ilizando 2-amino-p urina (Vega Biochemi-cals, 0,4 g; 3,0 mmoles) e 1- {2-desoxi-2-fluóro-p-D-ribofura-nosiDuracilo (0,2 g; 0,71 mmoles) cuja preparação foi feita em conformidade com J* F» Godington e outros (<T. Org* Chem* 29s558, 1964) preparou-se uma suspensão em 35 ml de tampão de fosláto de potássio 5 n$t.‘ pH 7,0, contendo 0,04¾ (p/v) de az ida cte potássio. Adicionou—se fosforilase de timidiaa (1 930 ϋ.Ι.) e fosforilase dos nucleósidos de purina (1 880 U.I.) ('T.A. Kreniisky e outros, Biochemistry 20í3615, 1981 e Patente lorte-Arnericana n* 4 381 344) e agitou- #« 34 **

-se' a suspensa© ê temperatura de 37°c* ao 24® dia diluiu-se a reacçSo até 200 ml utilizando agua e adicionou-se 1 390 u.l. de fosforilase da timidina e 1 880 ÍJ.I. de fosforilase de nucleosidos da purina. Ao 35« dia evaporou-se a suspensão, Dissolveu-se o resíduo em água/metanòl (7/3) e aplicou--se a uma coluna de 1*5 x 15 cm de resina de permuta anioni-ca (Bio-Rad AG1X2-forma de hidroxido). Fez-se a eluição do produto cora agua/metanol (7/3)* Procedeu-se à combinação das fracçdes que continham o produto e removeu-se o solvente no vácuo· Dissolveu-se o resíduo em água e liofilissu-se para proporcionar o composto em epígrafe cuja análise demonstrou ser o# 6 hidrato· p.f, 151-153°C. , . rn /imK nm ( £ x 10-3H SCI 0*1N* 313 <4*00}, 240-245)? pH 7, 304 (7,00), 243? SfaõH 0,11» 304 <7,30}* 243*

Anal. calcul. para 0¾2FK503 H2°*

Calculado? C, 42*89? II* 4*75? E, 25*01? F* S.7S*

Encontrados Ç, 43*02? H* 4*71? 1% 25* 12? P* S, 58 BMU-1» (80 tnHz* Me2S0-d5}?g8*62 e 0*31 <2s* 2H, H-8 e H-6}? 6,62 (sb* 2H* 2-Í3H2)? 6*16 (dd* 1H, H-l** JF-1* « 16*7 Hz* J a 2*7 Hz}? 5*71 (m* 1*5H* 3’-0H e 0*5 (H-2*))? 5,12 (m* 1*5H* 5*—OH e 0*5 (H-2*})? 4.40 (ra, lli, H-3*)? 3*97 (m* 1H* H-4 *) ? 3*66 (m* 2H* K-5* e H0~5*}*

Sxemplo„iO

Cloridrato de 2-amino-6-ciclooronil-atrdno-9H-nurina

Durante 18 horas aqueceu-se à temperatura cj

de 50- c uma solução de 2-amíno-6-cloro~purína (Jlldrich Chemical Coirpany? 4*66 g? 27* 5 mirtoles) e de eiclopropil-amina (Aldrich Chemical Company? 12* 5 g? 220 mtroles) em MeOH (100 ml)* Depois adicionou-se-lhe 2-mstoxi-etanol (50 ml) o e aqueceu-se a reacgão â temperatura de 70 C durante mais 6 - 35 — *

horas. Apés o arrefecimento filtrou-se uma pequena quantidade de material inicial que nlo reagiu e evaporou-se o filtrado e purificou-se em coluna de gel de sílica com CHOl^s 5% até 10% de MeOH* O produto recristalisou depois duas vezes a partir de MeOH e uma vez a partir de BtOH sob a forma de sal cloridrato para proporcionar 1,45 g (23%) de produto* p. f « 253-257¾ ^€¢-½ *' & 6*70-5*82 <m* 4*. CH^y, 3,04. (s* br, 1* |2p), 7,35-7,55 £s* br* 2, m2># 8,3,3· (s, 1, GH), 9,49 (s* br* 1* Hpl), 13*0-13,3 (s,_ br* 2, ifi| )*

Anal, Cale* para Cg^lO^6*K^1* 1» §

Calculado, C* '41* 57; H* 5,01; % 36,35; Cl, 15,34, Encontrado* C, 41,-55; H* 5*01; % 36,28;. 01, 15,4, " 2-amino- 6- (ciclopropil-amino) -9- £ 2-desoai-2- £1 uoro- E-B-ribo-furanosil)-9H-ougina ' _

Dissolveu-se cloridrato de 2-amino-6- - (ciclopropil-amino)-9H-purina (0,3 g? 1*3 mmoles) e l-(2-deso-

J xi-2-£1 uoro-p-D-ribofuranosil) uraeilo (0,4 g; 1,6 mmoles) cuja preparação foi feita era conformidade com J. p. coding-ton e outros (J, 0rS*,%®m* 29s558, 1964) em 20 ml de tara-pão de fosfato de potássio 5 sM* pH 7,0, contendo 0,04% (p/v) de aaida de potássio* Miclonou-ae fosforilase da ti-rnidina (2 000 U.I.) e fosforilase dos nucleosidos da purina (5 540 U.l. ) (T,&. Krenitsky e outros, Siodhemisfcry 20§3615* 1981 e Patente Horte Americana n® 4 381 444) e fes-se s incubação da reaccão à temperatura de 37°0* Ao 5® dia adicionou--se 2 000 U»X. de fosforilase da timidina e 5 54Q U*I, de fosforilase dos nucleosidos da purina. Ao 21® dia aplicou--se a mistura de reacçío a uma coluna de 2*5 x 8 cm de resina de permuta aniônica (Bio-Rad AG IX 2-forma de hidróxido)*

Apôs a lavagem da coluna com agua procedeu-se â eluição do prp-duto com agua/rastanol (7/3), Bfectuou-se a combinação das fracçSes que continham o produto e removeu-se o solvente no - 36 -

vácuo* Dissolveu-se o resíduo a® água e liofilizou-se para proporcionar o composto em epígrafe cuja análise demonstrou ser o,6 hidrato* p,f* I20°c (fusão parcial a so°g) W λ «use nm ( £ 10-3)« mSk 0,1M, 255; S (14,3), 254 (12* 7)? pH 7, 282 (14* 8) 262 (sh>? MáOH O* 1¾ ‘ 232 (15* 2}, 262 (sh)*

Anal* calculada para .0.6 i S-2°* Calculados C, 46,59* H, #7? M, 25. ,08? F, 5,6.7* Encontrado* C, 46,46* I-I, 5, 35? M, ,25 ,03? F, .5,91. R&hAí (200 rtíiz, Me^SO-dô) * .§7,93 (s, 1K, H-8) ? 7,38 (db) IH, 6-MH, J « 4,5 Hz),? 6,04 (dd, 1H, 3-1*, JF* 1 « 16,4 Hz, 7 * 3,3 Hz) i.5*88 ísfo. 2ti, 2—MH) i 5,62' Cd# 1H, 3 ‘-OH, J * 5,9 Hz), ? 5,30 (dt aparente, ih, ; H-2*, JP,2 (53,7Hs, d 3,8 Hz) * 5*; 23 (t, 1H, 5 *-OH , d* 5,4 Hs) ? 4, 38 (m, 1H, 38-3*) í 3,92 (a, 1H, H-4·*)? 3,69 (m* 1H, Ηα-5*)? 3,59 (m. 1H, Hp-S»)? 3> 10 (m, lu, M- Cu) ? 0,62 Cm, 4H, CH2CH2).

P S-fluorô-lg^P-rifcofaranosil^e-c^tcggi—9H-purina

Utilizando 6-rnetcn:i-purina (Sigma Cfce-mical Cocrpany? 0,8 g? 5*3 amoles) e 1~{2-desoxi- 2-f 1 uoro-β--D-ribofuranosi1)uracilo (0*4 g? 1,6 mmoles) cuja preparação pode ser efecfcuada em conformidade com <'/. F, Godington e outros ÍJ» Org* €hem* 23*553, 1964) preparoti-ee uma suspensão em 20 ml de tamp3o de fosfato de potássio 10 mH, pH 7,0* contendo 0,04¾ (p/v) de asida de potássio* Adicionou-se fosforilase de tlmidina (2 400 l“»X.) e fosforilase dos nucleosidos da purina (3 900 t?.I. 5 ίΐ'.Α* Krenitsky e outros* Biochemistry 20:3615, 1981 e Patente Morte Americana ps 4 381 344) e agitou-se a suspensão â temperatura de 37°C*

Ao 62 dia diluiu-se a mistura de reacgHo até 100 ml com tampão de fosfato de potássio 5 tní-2, pH 7,0, contendo 0,04¾ - 37 -

(p/v) de azida de potássio. Ao 162 dia adi eionou-se-lhe 2 640 u,l, de fosforilase da titíiidina e 4 360 U.I. de fosfo-rilase dos nucleôsidos da purina. Ao 452 dia evaporo a-se a mistura de reacção. 0om o resíduo preparou-se uma suspensão em metanol tépido e filtrou-se a suspensão* Evaporou-se o filtrado* Díssolveu-se o resíduo em água tépida e aplicou--se a uma coluna de 2,5 x 7 em de resina de permuta aniónica {Bio-Red AGlx2-forma de hidróxido) * Apôs a lavagem com água fez-se a eluiclo do produto com raetanol/água (9/1)» Procedeu-se à combinação das fracçães que continham o produto e removeu-se o solvente no vácuo* Dissolven-se © resíduo em água e liofilisou-se para proporcionar o composto em épígrafe cuja análise demonstrou ser 0,3 hidrato* p.f, 182°0 W ^ mss nm { í x 10-3) ¾ HCl 0,1¾ 250 {8,72), 259 (sh)? pH 7, 248 ¢8,95), 259 (sh>? HaKO O,IM, 250 {9,14) 259 {sh).

Anal. Calculada para 3 h^Os

Calculados C, 45,61? H, 4,73? K, 19,34? F, 6,56.

Encontrado: C, 45,7,2$ H* 4,66? 1, 19,47? F, 6,72. RKN ^Ίϊ (300 mKz, Me2SO-d6) s 5 8,63 e 8,58 (2s, 2K, E-S e K-2)? 6,34 (dd, 1H, H-l** JF-l* « l?,l Hs, CF a 2,4 ®s)g 5,76 {d, 1H, 3'-OH, tf * 6,1 Ha)? 5,45 (ddd, 1H, H-2*, CFF, 2* * 52,7 Hz, Ji«, 2* « 2,4 Hz, J2*# 3* ~ 4,4 Hz)? 5,17 (t, 1H, 5*-OH, CT « 4,1 Hs)? 4,50 (®, 1H, Η-3 'j? 4,11 {s, 3H- 0-033)? 4*00 (m* 1H, H-4*j? 3,75 (m, 1H, r^-5*)? 3,62 (m, m* Hp-S*)*

Exemplo 12 2-atnino-9- (2-desoxi- 2- £1 uoro-fâ-D-ribo f urano sil) -6-nistoxi--9H-p.urina------------------------------------------------------------ „, ............................

Utilizando 2-aR&no—6-metoxá-purina (0,8 g? 4,8 mrooles) cuja preparação pode ser efectuada em conformidade cora R*M* Baisiger e J. A. Montgomery (J* Org* - 38 -

Chem* 20*1573» 1960) e 1- (2-àesoxi-2~fluoro-p-B-r ibofurano- « <j · silo) uracilo (0,4 g? 1,6 mrnoles) cuja preparação pode ser efectuada em conformidade com <J. F« Godington e outros (θ', Qrg* Chem. 29-553, 1364) preparou-se uma suspensão em 20 ml de tampão de fosfato de potássio 10 mH* pH 7,0, contendo 0*04% (p/v) de az ida de potássio* adiciono u- se-ibe fosforilase da timidina (2 40Q 0*1*) e, fosforilase dos nu-cleotidos da purina (3 900 o»3C*) (t«a» JCrenitslcy e outros* Biocbemistry 20*3615* 1901 e Patente %rte Americana n» 4 381 344) e agitou-se a suspensão à temperatura de 37°C*

Ao 6« dia diluiu-se a reactÇão atê 100 ml cora tampão de fosfato de potássio 5 vM» pH 7,0, contendo 0,04¾ (p/v) de azi-da de potássio*

Ao los dia diluiu-se a. reacção ate 200 ml cora tampão de fosfato de potássio 5 aM# 7*0* contendo 0,04¾ £p/v) de asida de potássio, Ao 16& dia adieionou—se —lhe· 2 640 0*1» de fosforilase da tian&Sina e 4 360 U. X. de fosforilase dos rmcleósidos da purina* Ao ,249 dia filtrou--se a mistura de reacção e evaporou-se o filtrado* Gora o resíduo preparou-se uma suspensão em metanol* Filtrou-se a suspensão e evaporou-se o filtrado. Dissolveu-se o resíduo em água e, aplicou-se, a uma. coluna de 2» 5x7 em de resina de permuta aniónica (Bio-Rad AG13i2-forma de hidroxido) * Apos lavagem da coluna com água procedeu-se â eluiçSo do produto cora metanol/água (9/1)* Apés a remoção âp solvente no vácuo dissolveu-se o resíduo.em agua e Xiofilizou-se para proporcionar o composto em epígrafe cuja análise demonstrou ser 0,5 hidrato* p*f. 200-202°C W ^ max am ( £se 10-3) s SCI 0,1 N, 288 (7,85), 244,5 (6,43)? pH 7, 279,5 (8*09), 248 (8,85)? NâHO 0,10» 280 (8*40), 248,5 (8,59)*

Anal» calculado para «uVVí °*S H20s

Calculado, ; C, 42,86? H, 4, SO? 0* 22*78? P, 6,16

Encontrado; C, 42,81? H, 4,92? K, 22*69? F, 6,29 - 39 -

rmn lm (soo mz, S a, 12 (s, ia* b-s)? 6* $7 (sb)? mt 2-m2); 6*11 m* 1¾ H*I% * 16,6 Ha, 3 * 3,6 Ba)? 5,69 (<3, 1B* 3*-QH* 0 * 6,10-Ha)? 5,31 (<SS<S* IS, H-2% mz* <* 53,0 Ha* 01V 2* * 2,7 Be, 02% 3‘ * 4,4 m}j 5*17 (t, 1H, 5*011, 0 » 4,2 tts); 4,40 <fll, 1H, H-3*)? 3« 95 (m, 4H, Ií-4 * $ CM3B3)f 3*74 {©, 1B* 1^-5'); 3,58 . (m* ia, Hp-5*), * ; 6- cl clonrooi l-amino- 9H-ouri na

Dtaraate· 48 horas aqueceu-se â temperatura de 50°C uma solução de 6- cloro-purina (AXdrich Chemical Gornpany; 4,23 g| 27 ©moles) e de eiclopropil-amina (Aldriékr Chemical Co©pany? 12,5 g? 22 ©moles) em MeOH (100 ml), Reraoveu-se o solvente e purificou-se o produto impuj-ro ém coluna de gel de sílica fazendo a eluiçSo com GhGl^s 5 % de bsoh para propos&onar 5,30 g de um sólido cor de creme* Bste sólido recristalizou a partir de MeGK· para proporcionar duas colheitas, de 2,63 g e de 1,16 g (rendimento total de 81,450? p« £, 237-240¾.. mm ht (MegSO-dô)? 5 0*6-071 <m, 4* 052CKj, 3*03 -(far s* 1, £®I)? 7*73 Cd, 1* HEi), 8*05 (a*'l, CK), 8*18 (s* 1* CS), 12,7 (br), 1, HH}’,

Anal, calculada CgHgí^s 0* 54,85? B, 5í18? M, 39*97,

Encontrado* G* 54,69? H, 5,22? H, 39*87, 6- (ciclopropil-atnino) -9- ( 2-desoxi~ 2«* f 1 uoro-p-B-ribo furano- --------------------------;—

Btiliaando 6- Cciclopropil-ard,no)-9H--purina (0*2 g? 1*1 mmoles) e Z-(2-dese&i-2~fluorcHf3-B--ribofuranosil) uracilo (0,4 gy 1, 5 mmoies) cuja preparação pode ser feita em conformidade com <X. " F, Codington e outros (J, Grg, Chem* 29? 558, 1954) preparou-se uma suspensão em — 40 —

20 tal de tampão de fosfato de potássio 5 mH» pH 7,0, contendo 0,045á (p/v) de azída de potássio, Ajustou-se o pH da sus· pensão para o valor 7,0 utilizando KOH, Mlcionou-se-lhe fosforilas® (2 000 tUl») e fosforiláse dos nucleósidos da purina (5*540 0„1V) (τ*&* Krenlfcsky © outros,. aiochemlstry 20 í 3615, 1931 e Patent® Díforte Americana n® 4 381 344) e Agitou-se a suspensão â" temperatura de 37°c* Ao S® dia adicionou-se 0,2 g de 6- (cíclopropil-amlno)purina e 2 000 tr,I, de fosforilase da timidias e 5 540 u,le de fosforilase dos nucleofeidos da purina* Ao 9S dia adicionou-se 0*2 g de 6-- (cidlopropil-amino)-purina e ajustou-se o pH da reacçSo para o valor 7,0 utilizando KOH* Depois adicionou-se fosforilose da timidina (2 OQO 0,1*) e fosforilase dos nucleotidos da purina (5 54o u*l,), Ao 2Q2 dia ajustou-se o pH da reaeção para o valor 9,4 utilizando HH4GH s aplicou-se a mistura de reaceSo a uma coluna de 2,5 x 8,5 cm de resina e lavagem com água efecfcuou-se a eluiçao do produto cota águs/metanoi (7/3), Procedeu-se â combinação das fracgSes gue continham o produto e removeu-se o solvente no vácuo. Dissolveu-se o resíduo em água e liofilisou-se para proporcionar o composto em epígrafe cuja análise demonstrou ser 0,4 hidrato, p#f* 207-203°C W ^ mas. ηαι {£ x 10-3) t HC1 0,11¾ 264 (19,1)? pK 7, 268 (18,2) j NaOK 0,11¾ 268 (18, 6) ,

Anal, calculada para ·0«4 íl^Qs

Calculados 0,- 49*33; %* 5*35? M» 22,13; F, 6,00*

Encontrados C, 49,33? H» 5,33? N, 22,11; F, 6,14, SSfR *3 (200 ttíHz, Me^OHIôb S 0*35 ® 8,24 <2st 2H,. H-8 e H-2); 7,98 (bd, 1H, 6-KH, J * 4,10 Hz), 6,23 Cdd, 1H, H-1V, JP,1· - 16,8 HZ, j « 2,9 Hz)? 5*68 {d, 1H, 3*«0H, ,T a 5,9 Hz); 5,42 (ddd, 1H, K-2», JF, 2 - 53,0 HZ, CT1*,2* -2,9 Hz, J2*,31 ~ 4,6 Hz)? 5,20 (t, 1H, 5-OH, J - 5,6 Hz); 4,46 Cm, 1H, H-3*)? 3,97 (nt, 1H, H-4*>; 3,73 (m, 1E, 1^-5’); 3,55 (m, 1H, H0—5*); 3,04 (tn, 1H, M-CH); 0,66 (m, 4H, CH2CH2) *

P — 41 —

2*«*iae-0- ÍS-des^si-í-fiíicro-f-l^rióofurar.osil^-C-etOici-^Í··* gp<gfa»................. ..............

Sfeiiieaitóa

Cd#e fi 4#§ mrnmíi m$m pmpmwin® p$m af^ssiê m mm iU£Í»eate£ae* m &&* Mim fô· «*«· «&·*» 2$slS?3* mm m «SâSismâst fô»$ st a»t sítios! m$m p*«paee$8® psá© «·* efsufemtia €© asafacelitiô «e& #· W* Mâ$@fee& · entoe* 1¾ %3* t^s®* SSaSi^ S@S#| p^gfôtssws© «roa mm m asl 4o tasff# *fe faagat®· #0 gro&dbafr» s sss* ge ?*% ce&fcâaâet %imi& Cp/# #g asiia ê® fistêssia» â$eetei»»se # gB 4* *mp sa^Ste 9asa e «ato» f*# «s 1¾¾ âââ0â«ss^s^4&» &eteii««Q #* ttoietea lê eeô s*$*i 0 i^^tètoee ôos umlvêrnâm ifa p«cia» C1& ΰβο 84¾ I fs»A* ãs«aâ.fc*% e outro## Jáocfoawtotry ã&tSâHS* ifôl © 1¾%¾¾¾¾ ss^rtei teartoaea »8 4 381 3441 0 egitoMG a o&etoem ú® mm$Sm ê ««s^rabure <£0 3Λ* &» 4¾ ig&a mê&,e$.m®m*m**%im B em %i# teto* riii«# é» « ê ®ii 0«I* ê® gtotoettfes* Mm «metofr* %%ãm êm $m%m m êâluiii*m % mtmm® #0 rascai» afcê SS?> «A «e® taspl» δ® xoeífcfc» «S© potássio Scas* ρϋ ?*#* «nafeeaâ»

Cg/vl fíft aa&Sft i® $ofc£sal#i» Jfe M® êls wnewsa*» Φ mtmntem m vmm* %s « eeslâa» &tfe$aE4i»»â& «sca sasf3¾¾¾ «» ige* # aâietooa*3e-»lle rnmm®l -pwr« geewsigitor a geot·!* m* fâtotroa»»» a sasfessi» e «vapottMMee © sâaealiMaM· o m êwm qmnm 0 a@&ie»t&»a* m wm mim» Mm I#i % IS cn é® raate ôb gema&a máãn&m

Mm !iJfâ.«Í5íls#l* ãpla m iBmwm- -ia mK&~ m mm Igas pfa^a©#-s» è «lalffe m pBêMm mm mtrnmAm* 1%/U* mmmwm*m m áas fieae^Sit» qm mmíitem ú pmãv&ú m # mtwmtm ao «itsao* ^mmtvrnu^m m zmíãm mm Ê$m m UefUleaoM» para frap»re£©ttar # eo^sefca «1 «aja. mêMm &rnmm*m êm %f litóná;#· 42 *

p.f. 85°C (fusSo parcial a 5Q°C) uv λ rnax nra ( £ x 10-3) ? HC1 0,1N, 288 (8,78), 244,5 (7,19)? pH 7, 280 ¢8,96), 247,5 (9,55)? iSfaOH 0,1K, 280 (9,25), 249 {9,15).

Anal. cale* para 0.7 h^Os

Calculado s C* 44, 23? H, 5,38; % 21,49? F, 5.83.

Encontrados C, 44,30? H, 5,43? N* 21,39? F, 5,81. RM&Al (200 fliHz, Me^SO-dd) 5 & 8,09 (s* 18* H-8) ? 6,49 <sfc>» 2H« 2-HH2) t 6,0© |dd* 1¾ fi-11, JF* 1* «a 16*4 Hz, «J =* 2*7 Hz)? 5*67 íd, 18* 3*-0H* iT a 6*1 Hz)? 5*42 Cm* 0.58* 0*5 (H-2*))? -5,15 («, 1.5K* 0*5 (&»2«)-e δ *-08)? 4*44 (q, 21%. 6-0CH2, 0’ * 7.0 Hz)? 4*40 ím* 1H, H-3*}? 3*92 (m 1H, H-41)? 3,73 (nu 18* H ~5*>y 3| 56 (¾ 18* 1*34 (t* 3H*-€f$3* V* fô 0 * 7*0 Hz), ’

ExempLo^IS 2-atnino-6-cloro-9~ (2-desGxi-2- f 1 uaro-B-D-r iburanosil) -9H--purlna........................„....-__________________ ....—........................... ..................................................

ReaccSo 1 s utilizando 2-amino-6-cloropupira (sigma

Chemical 0otnpany? 0,8 g? 4*7 mmoles) e l-(2-deso-xi-2-fluoro-|?^0-rifoofuranosil) uracilo (0*4 g? 1*6 mmoles) cuja preparação pode ser efectuada m conformidade com J*F* Codington e outros (ã*

Org* Chem* 29s558, 1964) preparou-se uma suspensão em 5o ml de tampão de fosfato de potássio 5 mM* pH 7*0* contendo 0,04¾ (p/v) de asida de potássio* Ajustou-se o pH da suspensão para o valor 7,0 utilizando KOH. Adieionou-se-lhe fosforilase da timidina (3,850 υ.Φ*) e fosfori-lase dos nucleosídos da purina (6 500 U.I,) (Φ.Α. Krenitsky e outros* Sioeheraistry 20?3615* 1981 e patente %rte Americana ns 4 381 344) e agitou-se a suspensão â. temperatura de 37?C,

Ao 222 dia diluiu-se a mistura de reaceãõ^ até 100 ml com taraplo de fosfato de potássio 5 ntfô* ** 43 -

ρΚ 7,ο, contendo 0,04% £ρ/ν) de azida de potássio e adicionou-se-lhe 1 270 tf*X. de fosforilase da tirai- , .· t dina e 2 180 u.i. de fosforilase dos núcleosidos da purina. Ao 32s dia diluiu-se a mistura de reacçSo até 200 ml com tampão de fosfato de potássio 5 «M, pH 7,0, contendo 0*04% (p/v) de azida d® potássio e adicionou-se-lhe 2 54o U, I· de fosforilase da , t < « / . / · tiraidina e 4 360 ϊΙ,ϊ* de fosforilase dos aucleosi-dos da purina. - Ao _6i® dia filtrou-se a mistura ã® ·' reacçSo# -Evaporou-se o filtrado e armazenou-se -, o resíduo à temperatura de 4Ο0*.·

ReacçSo 2sutilizando 2-amino-6~eloropurina (Sigma Chemical' , Companv? O# 8 4, 7 ramoles) e e 1—(2-desafXi-2- -fluoro-p-D-rifeofuranosil)uracilo (0,4 gp 1,6 mmo-les) preparou-se uma suspensão era 25 ml de tampão de fosfato de potássio 10 n&s, pH 7,0, contendo 0,04% (p/v) de azida de potássio* Aaicianou-se-lhe fosforilase da tiraidina (4 000 tf*X*) e fosforilase dos nucleosidos da purina (6 500 u.z.) e agitou-se a suspensão â temperatura de 37°c. Ao !©®dia diluiu-se a mistura de roacção até 100 ral cora tampão de fosfato de potássio 5 rrl-l, pE 7,0, contendo 0,04% (p/v) de azida de potássio* Ao 20® dia diluiu--se a mistura de reacção até 200 ml cora tampão de fosfato de potássio 5 nM, pH 7, contendo 0,04% (p/v) de azida de potássio, e adicionou-se-lhe 2 640 ϋ.Ι. de fosforilase da tiraidina e 4 360 0*1. de fosforilase dos necleofeidos da purina. ao 53® dia filtrou-se a mistura de reacção* Evaporou-se o filtrado e armazenou^se o resíduo â temperatura de 4°C. Utilizando os resíduos das HeaogSes 1 e 2 preparou-se uma suspensão era. água e fez-se a sua combinação* Aqueceu-se a suspensão e' depois filtrou-se* purificou-se o produto que continha o filtrado por cromatografia era coluna de 7,5 x 90 cia dé Biogel P-2 (Bio-Rad) utilizando como solvente n- 44

-propanol/água (3/7), seguindo-se a croraatogra fia @m coluna de 5 x 90 era Sgphadex G-10 (Pharmâcia ΣΚΒ) utilizando como solvente n-propanol/água (3/7) ♦ Pj^ocedeu-se & combinação das fraeçães que continham o produto e removeu-se o eolvnte no vácuo*

Com o resíduo preparou-se uma suspensHo em água e liofilizou-se para'proporcional o composto em epígrafe (lote 11« Procedeu-se & combinação das frac-çSes que continham o produto maia as impurezas cuja eiuiçSo foi feita, era coluna de "Sephadex G~10u e removeu-se o solvente no vácuo# Dissolveu-se o resíduo em água/MeCH (49/1), e depois purificou-se o produto por cromatografia de fase inversa sobre silica G18 ÍHi-Chrom Pre-4-ops, ifcegiô Chemical C®#)* Utilizando como· solvente água/MeCK (49/1)* Procedeu--se â combinação das fraeçães que continham O produto· e filtrou-se através de nylon filtrante com poros de O* 2 um para a remoção da silica residual* Após remoção do solvente no vácuo dissolveu-se o resíduo em água e filtrou-se através de uma membrana filtrante com poros de G, 22 um fóillipore GS) * A liofilização do filtrado proporcionou o composto em epígrafe (lote 2) cuja análise revelou ser O,5 hidrato* p*£* 212°C (fusão parcial , a 205°G) W /) tsa* (£ XlO-3); KC1 Ο,ΙΜ, 309 (6*00), 247 (5,60)? pH 7, 307, 5 (6, 30), 247 (5, 80),* EaQK Ot %l% 307 (6,40), 247 (5,30)*

Anal. Cal cu* para C10%i2Cl FE^O^s

GalC* G, 39,55? E, 3,65? E, 23,06; Cl, 11,67? F, 6, 26*

EjjCont. C, 39,69? H, 3,82? E, 22,84; Cl, 11,64? F, 6,14* 45 -

ΙΒβΛ (300 SÊlz* Me^SO-dô) s 6 8,37 (s, 1H, H~8); 7,07 :{sb# 2H, 2-NH2); 6,12 (dd, 1E, *H~1 «, JF,1* * 16f 6Hz, J « 2,0 Hz); 5,72 (d, 1H, 3'—OH, J » 6,4 Hz); 5,34 (ddd, 1H, H-2», JP, 2* « * 52,9 HZ, Jl*,2* a 2,0 Hz, J2*; 3* * 4,2 Bz>; 5,19 (fc, 1H, 5*—OH, *3f « 5,3 Hz)? 4,42 (m,XH, H-3*); 3,96. (m, 1H, K-4*}; 3,76 ím, 1H, H-5*)f 3,61 (¢, XH, %*5*Κ fô' P , • · p. f, 215°C W /\ max nms HCl# 0,11, 309,5* 246,5; pH 7* 307,5, 247; HaOH 0,11, 307,5, 247*

Anal» Calcul» para C^H^Cl H^Os

Calculado* C, 38,41; E, 3,87; 1, 22,40; Cl, 11,34; "F, 6,08,

Encontrado* C, 33,73; K, 3,79; 1, 22,14; Cl, 11,16; F, 6,10* EI-iEP-^H (80 ttfgiz, MegSO-dô) * £ 8,36 (s, 1H, 14-8); 7,03 (sb, 211, 2—!H 2); 6,13 (dd* IS» tt-lV dP,l* 16*8 Hz, J * 3,2 Hz);* 5,68 ím, 1.5B, 0,5 (H-2*) e 3*~QH); 5,15 (m, 1*5H, 0,5 (H-2*) e S'*-GH>; 4,35 (m, 1H, 14-3*)? 3*90 (m? 1H* Π-4*}; 3,72 Cm, 2H, Ha**-5# e Hp-5*> *

Exemplo 16 2-amino-9-(2-des©2£i—2-Sluoro-p-0-rifeo£uranosil)-6-matil-amino- -9H-nurina . . ........ ............-............................................................ -

Utilizando 2-amino-6-msfcil-atnino-puri-na («7* A* MontfomerY e L*8* Eolvm, u*a*ç*s* 89*404* 1958? 0,51 g; 3,1 tnmoles) e 1- (2-desoxi-2-£Luorο-8-D-ribo£ruanosil) uracilo (o, 52 g; 2,1 tnmoles) cuja preparação pode ser efee«* tuada em conformidade com 0*F* Godington ,e outros (u* Org* Chem* 29*558, 1964} preparou-se uma suspensSo em 50 ml de tarapSío de fosfato de potássio S.trM, pE 7,0, contendo Q,Q4Ç$ (p/v) de azida de potássio* ^icionou-se-líie fosforilase da tiraidina (4 000 U.I*) e fosforilase dos nucleósidas da puri-na (14 ooo u*l») ($.A* Krenitsky e outros, Biochemistry - 46 - 20s3615, 1981 e Patente ®0rfce Americana 4 381 344) a agitou-se a suspensão â temperaturâ de 37°C*'Ao 62 dia diluiu-se a mistura de reacgtó ate 250 itil eôm tamplo de fosfato de potássio 5 mH, pH 7,0, contendo 0,04¾ (p/v) de ãsiãa de potássio e'0,49' g de 2-amino-6-mètil-amiiiG-purina'e adicio-nou-se-lbe 4,000 XI,I» de fósforilase da timidlóa e‘!4 000 0,1, i de fosforilase dos nucleótidos da purinà. Ao 142 dia evaporou--se a mistura de reacção, Com.o resíduo preparou-se uma suspensão em metanol/água e filtrou-se a suspensão. Evaporou-se o filtrado, Dissolveu-se o resíduo em água e-aplicou--sê a uma coluna de 2,5 sc 13 em dè resinã de permuta ánioni- ’ qa (Bio-Rad Ãs313£2«£ormá dé hidróxido), Apôs a lavagem da coluna com água procedeu-se â eluição do produto cora metanol/ /água (1/1), Depois removeu-se o solvente no vácuo, . dissol- veu-se o resíduo em água e filtrou-se através de uma mambra- .· . / / / * na filtrante com poros de 0,22 um* A liofilizaglo do filtrado proporcionou o composto em epígrafe cuja analise revelou ser 0,5 hidrato* ’ fr * / p,f. 172°G W pi raa?i nm ( £ i: 10-3) ς HC1 0,1®, 292,5 (11, 5) , 255 (12,1)? PH 7, 279,5 (13,4), 263 (sll) ? IfâOB 0,1®, 230 (13,7), 263 (sh> *

Anal* Cale, para Cliai5FH6°3 °*S B20s

Calculados C, 43,00? H, 5,25? H, 27,35? F, 6,18*

Encontrados C, 42,99$ H, 5,28? W, 27,33? F, 6,16*

RmJli (200 mas, Me,S0-d6)? & 7,92 (s, 1H, H-8)? 7,28 (sb), 1H, 6-HH) í 6,13 ídd, 1H, H-l*, JF,1» * 16,3 m, J » 3,3 Hz)? 5,91 (sb), 2H, 2-Ki2)? 5,64’ (d, 1H, 3*-0H, O1 * 5,8 Hz), 5, 29 (ddd, 1H, H-2*, JF, 2* « 53,0 Ks, jl», 2* * 3,3 Hz, <72*,3* - 4,4 Hz}? 5,27 (t, 1H, 5*-0H, J * 5,5 Kz)? 4,37 (m, 1H, H-3«)? 3,92 (μ, 1H, K-4*}? 3,72 (m, 1H, 3,60 (m, 1¾ H^-5*)? 2,86 (sb, 3H, B-GB3), - 47 -

Exemplo 17

Kreparou-se 6—amino—9— (2—desoxi— 2— fluoro- · -β-D-r ibof uíranos il)-9H-purina (0,29g? 1*0 mrnoies) conforme descrito no Exemplo 8 e dissolveu-se em loo ml de água* Adiciono u-se desaminase da adenosina intestinal da vitela (4 U.I*, Boéhringer Mannheim) e procedeu-* se à incubação da solução à temperatura de 37°C durante 24 noras* Removeu-se o solvente no vácuo. Dissolveu-se o resíduo em água/n-propanol (7/3) e sudmeteu~se a cromatografia em' coluna de 5 x 90 cm de "Sphadex G-10M {Pharmacia LKB) utilizando como solvente água/ /n-propanol (7/3)* B£ectuou-se a combinação das fracçSes que continham o produto e. removem-se o solvente no vácuo» Dissolveu-se o resíduo em água e lio filizo u-se para proporcionar o composto em epígrafe cuja análise revelou ser um hidrato* p*£« 175°G (fuslo parcial a 125®) WJ J\ max um {£ x 10-3) í

HC1 0 (13*0 ,1¾ 249 (11,8) )* t pH 7, 248,5 > (1 z, o)# HâOH, 0* 11\ í, 253 \**w| v Anal,» Gale* para- C^G .¾¾¾ 1 “*2°* Calculado í C, 41» 6 7; H, 4, , 55; 3S f. 1 9, 44; F, 6,59. %contrados c,, 41,7 2# li, ' 4,| ► 58# E ί,.ι 9,46? F, . 6,37* . RMN-1 E (300 mHz, Meg so-dd) s é 8, 33 e 8,09 (2s, 2íí,. E—S e K-2) 7 δ, 21 (dd, 1H, H—1*, CH ?, 1» a i, 16 » 8 £££3 >, J » 2,4 Hz) ? 5,75 (Sb, 1E, 3 *—OH) , 5,36 i (ddd. 1H, H-2* , dF,2* « 52,7 Hz, dl*. 2* * 2,4 Hz, J1 *,3' « « *#4 Hz) * ’ 5*20 Csb, llã, 5 γ'—ΟΗ) ? 4,43 (d m aparente. ΙΕ, . H-3 3* a la i,9 Hg)? $, 97 (m, 1ΙΊ, H-4») í 3,75 (tn. Ui, & 3,59 (m. XH, EL—5 *) P

Exemplo 18 2-aminQ-9~{2-desoxi~2-£XuorcN<f^D~ribo£ursnosil)-6-pr0poxi--9H-puyina -.....- .._....—............ ............ — 4δ —

Utilizando 2-amino-6-propoxi-purina S (0* 3 g; 1,6 ramoles) cuja preparação pode ser efeetuada em conformidade com R.13, Balsiger e <J*A« Montgomery (J. Qrg* Chem, 25*1573, 1960} e mtilisando l--(2^desoí£Í*-2-flttoro^p*B--ribofuranosil)uracilo (0,52 g; 2,1 mmoles} cuja preparação pode ser efectuada em conformidade com <3* F* Codington e outros (J. Org* Chem. 29s558, 1964} preparou-se uma suspensão em 50 ml de tampão de fosfato de potássio 2 rafei, pl-l 7,0, contenda Q,Q4% (p/v) de- asida de potássio,. Ajustou-se o. pH da suspensão para o valor 7,0 utilisando KOH* Adicionou-se--the fosforilase. da timidina (4 000 UTf,) e fosforilase dos nucteósidos da parias (14 000 0*1*} {£*,&. isrenitski e outros, Biocnemistrj 20*5615, 1981 e Patente Morte Americana n2 4 381 344} e agitou-se a mistura de reacção â temperatura de 37°C* Ao 62 dia diluiu-se a mistura ãe reacção ate 250 ml utilisando tampão de fosfato de potássio 5 raM, pK 7,0, conténdo 0,04% (p/v) de asida de potássio e adieionou-se-lhe 4 000 u*l* de fosforilase de timidina e 14 000 U,X, de fosforilase dos nucleósidos da purinã* Ao 14a dia removeu-se o solvente no vácuo, Com o resíduo preparou-se uma suspensão em metanol/água e depois filtrou-se a suspensão* 3vaporou-se o filtrado* Dissolveu-se o resíduo era água quente e aplicou--se a uma coluna de 2,5 x 13 on de resina de permuta aniónica (Bio-Red ÃG1X2-forma de hidróxido). Após a lavagem da coluna com água prrcedeu-se à eluição do produto com metanol/água (1/1), sfectuou-se a combinação das fracçães que continham o produto e removeu-se o solvente no vácuo* Pissolveu-se o resíduo em água e liofilisou-se para proporcionar o composto em epígrafe cuja análise revelou ser 0,9 hidrato* p.f. 93°C (fusão parcial a 65°C) UV λ max nm ( £ x 10-3) s HC1 0, IN, 289 (9,05), 245. (7,37)? pE 7, 280 (9,28), 24S (9,82)? HaOH 0,1M, 280,5 (9,67), 249,5 (9,55)·

Anal, calculada para 0.9 H^Os

Calculado* C, 45,69; K, 5,7S; H, 20,49; f, 5,56,

Encontrados C, 45,75; H, S, 61; M, 20,51; F, 5,60* - 49 -

RHíA (200 ιmz* Me^SO-dô); $ 8,09 (s, 1H, H-8)? 6,49 (sb), 2B, 2-NH2); 6,08 {dâ, 1H, H-l, JS*,!1 - 16,4 Hz, J * 2,7 Hz)? 5,65 (d, 1H, 3 '~0H, J - 6,0 Hz}? 5,42 (t aparente, 0,5H, 0,5 (li-2*), J « 3,5 Ha)f 5*14 (m, 1,5H, 0,5 (Η-2'j e 5*-0H); 4,36 (m, 3H, H-3V; e 6-OCH2) 3,92 (ta, IH, H-4*)? 3,69 (m, 1H, H-S*)? 3,60 (tn, 1H, 1,75 (sexteto aparente, 2H, CH2, J *» 7,1 Hz) ? 0, 95 (t, 3H, €H3, J * 7,4 Hz)* 2-amino-9- ( 2-desoxi- 2-f 1 uoro- β-23-ribo furanas 11 )-6-iodo-9K- -Btiring .................., .................... - ... ... ..............................................—^r,, ,

Utilizando 2-amino- 6-iodo-purina (o, 8 g? 3,1 mmoles) caia preparagS© pode ser efeetuada era. conformidade com R*3?„ Kocia e ostros (J* Hjarm* Sei, 57; 2056 1968) e utilizando 1- (2-desoKÍ- 2-fluoro-p-D-ribofuran©si 1) uracilo (0,39 g; 1,6 mmoles) cuja preparação pode ser efec-tuada em conformidade com <3*B» Codington e outros (J, org* Chem. 29 s 558, 1964) preparou-se uma suspensão em 20 ml de tampão de fosfato de potássio 10 mM, pH 7*0, contendo 0,04% (p/v) de az ida de potássio* Aj astou-se o valor do pH da suspensão para 7,2 utilizando KQÍL· Adicionou-se-lhe fosfo-rilase da timidina (2 000 U*I*) e fosforilase dos nucleosidos da purina (3 250 U*I,) (TaK* Krenisky e outros, Biochemistri 20;3615, 1981 e Patente Horte Americana n2 4 381 344) e agitou-se a suspensão à temperatura de 37°C. Ao 12s dia ajustou-se o pH da reacçâo para o valor 6,8 utilizando ácido acético @ adicionou-se-lhe 2 ooo u*l* de fosforilase da timidina e 3 250 U,£« de fosforilase dos nucleosidos da purina. Ao 26® dia diluiu-se s mistura de reacçSo até 500 ml cora tampão de fosfato de potássio 5 nti, pH 7, contendo 0,04% (p/v) de as ida de potássio e adicionou-se-lhe 2 000 U.I* de fosforilase da timidina e 3 250 B,I, de fosforilase dos nucleófeidos da purina* Ao 40s dia filtrou-se a mistura de reacção. Bvaporou-se o filtrado* Com o resíduo preparou--se uma suspensão em água/n-propanol (7/3) e filtrou-se* 50

Evaporou-se o filtrado* Com © resíduo preparou-se uma suspensto em metanol @ depois filtrou-se* Purificou-se o produto que continha o filtrado por cromatografià' numa coluna de 5 x 90 cm de “Biogel P-2" (Bio-Rad) utilizando como solvente água/n-propanol {1/3}, e depois submeteu-se a croma— tografia numa soluna de S :r 90 cm de ‘íSephadex G—10** (Pharmacia t&8) utilizando como solvente água/n-propanol (7/3) * pepois removeu-se o solvente no vácuo* e cora o resíduo preparou-se uma suspenslo em água e liofilizou-se para proporcionar o composto em epígrafe cuja anãlisè demonstrou ser 0,6 hidrato. p. f, 135% {fusto parcial a 108-110%) W /\ max { S xXO-3): HC1 0,1H, 318 (7*94) ? pH 7* 315 (8*30)? KhOK 0,11¾ 315 (8*36) ,

Anal, Cale, para ,0*6 H^Os

Calculados, C, 29* 59? K, 3*03? H, 17*25/ F* 4,68# Σ* 31,26,

Encontrados C, 29,69; K, 3,06; 1¾ 17,22? F, 4,44; X, 31,47, RSEíA (300¾¾ Me^S0-d6); S 8,33 <s, 1H, E-8); 6,96 (sb), 2H, 2-S5H2); 6,09 (dd, 1¾ H-1% JF,1* - 16,7 Mz, *7 - 2*4 Hz); 5,69 {d, 1K, 3*—OH, u ¢= 6,3 Hz); 5,33 Cddd, 1H, H-2», JF, 2' 52,8 Hz* Jl%2# - 2,4 Hz, J2%3* « 4,2 Hz)? 5,16 (t, 1H, 5 *—01½ 3 « 5,3 Hz)? 4,42 (m, 1H, H-31)? 3*95 C®, 1H, H-4*); 3,77 Cm* 1H* Ηβ-5*)ί 3,60 (m, 1¾ Hg-5*)*

Exemplo- -20 9-(2-desoxi-2-fluoro-p-S-ribofuranosil}-β-metil-amino-9H--purina ......................-.......... .......................................... ....................... utilizando 6-metiI-amino-purina (Sigma Chemical Compsn^? 0,8 g? 5*4 mmoles) e l-('2-desoxi-2-fiuo-ro- ,3-D-ribofuranosil) uracilo (0,39 g? 1*6 ramoles) cuja pre-paraçto pode ser efectuada em conformidade com J.P* Codington e outros {3* Org» Chem* 29s558, 1964) preparou-se uma sus-pensto em 20 ml de tampto de fosfato de potássio 10 mM, - 51 -

ρΗ 0,7, contendo 0,04% (ρ/ν) <3© as ida d© potássio* Adieionoo--se-lhe fosforilase de timidina (2 400 U.I.} e fosforilase dos núcleo sidos da purina (3 SOO X.) (TvA. Krenitsky e outros, Biochemistri 20s361S, 1981 © Patente %rte Americana ns 4 381 344) ® agitou-se a suspensão â temperatura de 37 C. Ao 6fi dia. diluiu-se a mistura de reaeçSo até .100 ml com tampão d© fosfato de potássio 5 mM, 7,0, contendo 0,04% (p/v>. de as ida de potássio. Ao 37» dia filtrou-se a mistura de reaeção* S^aporou-se o filtrado* Cora o resíduo preparou-~se uma suspensão era metanol e depois filtrou-se. Evaporou-se o filtrado. Dissolveu-se o resíduo era água e aplicou-se a uma coluna de 2,5 x 7 cm de resina de permuta anionica (Sio-Rad AGl3í2-forraa de hidroxido). Procedeu-se à eluieão do produto com água, Sfectuou-se a combinação das fracçães gue continham o produto e removeu-se o solvente no vácuo. Dissolveu-se o resíduo era água e filtrou-se através de uraa membrana filtrante com poros de o., 2 um* A liofiliaaçã© do filtrado proporcionou o composto era epígrafe. p.f. 140°C (retracção a 65°, fusão parcial a 11G°G) UV > msez nra ( l x 10-3)? BGI 0,13* 261,5 (16,2) ? pH 7, 265,5 (15,0) ? HaOH O, IN, 266 (15,3) .

Anal, Cgle* para W5°3'

Calculados c, 46.'64?. H, 4,98? M, 24,72? 7, 6,71.

Encontrados C, 46,48? H, 5,07? H, 24,63? F, 6,93. (300 rnBs, MégSO-dô) s S 8,37 e 8,.25 (2s, 2li, H-8 e K-2)? 7,86 (st>* IS» 6-33)? 6,24 (dd, 1H, 3-1*,. 6P,1* » 16,8 Ils, J a 3,2 Bs)? 8,74 (d, 13, 3'~<S!í, 2 « 6,1 Hs)? 5,44 (ddd, 1H, H-2*, JF,2* * 53,0 Hs, 31*, 2* « 3,2 Hs, J2», 3* » 4,4 lis)? 5,28 (t, 3-¾ 5«~0K* 2 * 5,6 Hs)? 4,49 (ra, 1H, K-3*># 3,99 Cm, !H, 3,75 (ra, 1H, íl^-5*)? 3,58 (m, 13, H^S·)? 2,95 (Sb, 3¾ H-CH3). 52 -

Exemplo 21 utilizando 6-etoxi~purina Chemical Com-pany; O* 2 g? 1, 2 mmoles) e 1- {2-desoxi- 2- fluoro- f3-D-ribof u-rasosiUuracilo (0,4 g? 1*6 esmoles) cuja preparação pode ser efectuada em conformidade com J, F* Oodingtoa e outros (J.

Org. Chem. 29s558, 1964) preparou-se uma suspensão em 20 ml de tampão de fosfato de potássio 5 mM, pH 7,0# contendo 0,04% íp/v) de azida de potássio. Ajustou-se o pH da suspensão para o valor 7,0 utilizando KOH e adicionou-se-lh e fosforilase da timidina (2 000 u,l,) e fosforilase dos nu* eleófeidos da purina £S 540 0,1,) (f.A, Krenitsky e outros, Biochemistry 20s3615, 1981 e Patente Norte Americana na 4 381 344) e depois agitou-se a suspensão â temperatura de 37°C» Ao 52 dia adicionou-se-lhe mais 2 000 U,I« de fosfori-lase da timidina e 2 700 tr.l* de fosforilase dos nucleósidos da purina. Ao 92 dia adicionou-se-lhe 0, 2 g de 6-etoxi-purina * Ajustou-se o pH da reacção para o· valor 7,0 utilizando KOH e adicionou-se-lhe 2 000 U,Z, s de fosforilase da timidina e 5 540 u. I. de fosforilase dos núcleosidos da purina. Ao 282 dia filtrou-se a suspensão» Aplicou-se e filtrado a uraa coluna de 2,5 x 8,5 cm de resina de permuta anionica (Bio--Rad AGlX2-forma de hidróxido). Após a lavagem com água procedeu-se à eleição do produto com metanol/agua (3/7), Efectuou-se a cominação das fraeções que continham o produto e removeu-se o solvente no vácuo, 0 produto contido no resíduo ainda foi purificado por cromatografia numa coluna de 2,5 x 90 cm de "Biogel P-2" (Bio-Rad) utilizando como solvente água/metanol <S/2), recorrendo â cromatografia numa coluna de 2,5 x 50 çm de gel de sílica utilizando como solvente acetonitrilo/água Í49/1), Efectuou-se a combinação das frao-ções que continham o produto e removeu-se o solvente no vácuo# Dissolveu-se o resíduo em água e liofilizou-se para proporcionar o composto em epígrafe cuja análise revelou ser 0,5 hidrato* 53 -

p. f. 85~87°C (fusão parcial a 60°C 13V ^ raax ( £ x 10-3); HC1 0,1N, 249 (11*4)? pH 7, 248 (11,7)? 1%0H 0,113, 249 (12,0).

Anal# Cale. para

Calculados C,. 46,91? H, 5,25; Η, 18,23? F, Encontrados C, 46,30; 1¾ 5,23? H, 18,21? F, RKH-.^K (200 Rfiiz, .Me^SO-dá) *> 8,59 e 8,53 (2s, 2H, © H-2) ? 6, 31 (dd, K-l·, 0'F, 1 · » 17,0 Hz, J » 2*5 Ha)·» 5,70 (d, 1H, 3 '-OH, J « 6,3 m}$ 5,43 (ããã, IR, H-2*, tJF,l* « 52,9 Hz, Jl',2* * 2,5 Ha, J2*,3I = 4,4 Hz); 5,12 (t, 1H, 5*-0H, J « » 5,4 Hz); 4,59 Cg, 2H, 6-QCH2, J· »· 7,0 Hz)? 4,51 Cm, 1H, H-3·>? 3,98 £m, 1H, R-4*)? 3,73- (ra, 1H, H&-4·); 3,61 (m, 1H, Hp-5·)? 1,40 (t, 3H, -CH3, O « 7,0 Hz).

Exemplo 25 2-Amino-9- (2-desoxi- 2-£ 1 uoro-p-D-rifeofuraiiosil) -6-raetil-tio--9H-nurlna ................ * . . títilizando 2-amina-6-metil-tiQ-purina (Sigma Chemical C0&pany? 0, 6 g? 3,3 ramoles) e l- (2-deso5ci-2-- £1 uoro- p-B-ribofurano si 1) uracilo (0,3 g? 1,2 «imoles) cuja preparação, pocle ser efecfcuada em conformidade com <7,P. Coding· ton e outros (d* Org* Cnem. 29?558, 1964) preparou-se uma suspensão em 200 ml de tampão de fosfato de potássb 5 nJM, pH 7,0, contando 0,0450 Cp/V) de aziâa de potássio, âdicionou--se-lfee fosforilase da timidina (4 000 U.J* © fosforilase dos nucleosidos da purina (6 500 U.l.) (5?.A, Krenitsky e outros, Biochemistry 20 s3615, 1981 a Patentes Sorte Americana nfi 4 381 344) e agitou-se a suspensão â temperatura de 37°C* Ao 14a dia diluiu-se a mistura de reacção atê 400 ml com tampão de fosfato de potássio 5 m, pií 7,0, contendo 0.04% (p/v) de azida de potássio e adicionou-selhe 8 ooo 0*1, de fosforilase da timidina e 6 500 U,I, de fosforilase dos nucleósidos da purina, Ao 25a dia ajustou-se o pB da mistura de reacção - 54 -

mistura de reacção. Aplicou-se o filtrado a uma coluna de 2*5 x 13 cm de resina de permuta sniónica (Bio-Raâ AG1X2-- forma de hidróxido) e psocedèu-se â eluiçSo do produto com metanol/Igua (3/7) % Após a. remoção do solvente no vácuo preparou-se com o resíduo uma, suspensão.em água e liofil±2ou** -se para proporcionar o composto em epígrafe cuja análise revelem ser 0*5, hidrato* p*f*.-85-S7°c wr /l-Hpx ¢ ^ x 10-3) ? aei o.in; 327 ,(u,6), 250 (11*2). 263 ÍSh>?,'pH 7* 311 {12,8), 257 (sh), 246 (15,1)? NaOH 0,IN, 311 (13,3), 257 (sh), 246 ,(14,8),

Anal, Cale, para is 0 ,5 H^Os Calculado? Ç, 40,74? H, 4, 66? N* 21* 59? P, 5, 80? S, 9, 39. Encontrados C, 40,79? H* 4, 66? H, 21, 55? F* 5, 89; s. 9,84, RKN-2 H (80 itfrfe* MepS0-d6): < í a ,17 (s, ih, n -8) ? 6, 37 (sb, 2H, 2 WKH2)? 6,14 (dd, 1H, Η—1 JF* 1’ « 16,4 Ha, o* - 3,2 Hz}? 5,64 ím, 1,! 5H, 0,5 (H-2*) e 3*- OH)? 5, 11 (m. 1, 5H, 0, 5 (H-2* ) e 5,< 5H) ? 4,40 (m 1H, H-3 *)? 3,2 S (m. IH, H—4 *) ? 3,65 (m, 1 *V’‘ ãr* e H0-5*) ? 2, 5? P 3 (S * 3» U 6 I-SCH3) *

Exemplo 23 9-(2-desoxl-2-iIuogo-B-B~rihofaranosll)—e-iodo-9H-m?rina

Utilisando 6-iodo-purina (Sigma Chemical Company; 0,7 g? 2,7 mtnoles) © 1-(2-desoxi-2-f 1 uoro-β-D--ribofuranosil)uracilo (0,4 g? 1,7 mmoles) cuja preparação pode ser efeetuada em conformidade com u.F. Codington e outros (J* Org, Chem* 29sS58, 1964) preparou-se ama suspensão em 20 ml de tampão de fosfato de potássio 10 rr£í, pH 7,0, contendo 0,04% (p/v) de asida de potássio* Adi cionou-se-lhe fosforilase da timidina (2 61-0 tl.I.) e fosforilase dos nu-cleásidos da purina (4 360 0*1») (T, A* Krenitsky e outros* Biochemistry 20:3615, 1981 e Patente Norte Americana ns 4 381 344) e agitou-se a suspensão â temperatura de 37°C* Ao - 55

212 dia diluiu-se a mistura de reacção ate 50 ml com tampão de fosfato de potássio 5 mM, pH7, - contendo 0*04%. (p/v) de az ida de potássio, e · adicionou-se-lhe 4 000' o*I* de fosfori-lase da timidina e 6 500 U*l* de fosforilase dos nucleásidos da purina. Ao 432 dia diluiu-se a mistura de reaeeão ate 250 ml com água e adicionou-se-lhe 2 000 H*x. de fosforilase da timinidina e 3 250 - U*I. de fosforilase dos nucleósidos da purina* Ao 5?s dia filtrou-se a teistura de reacção* Evaporou--se o filtrado*· Com resíduo, preparou-seuma .suspensão· em neta-nol têpieo e depois filtrou-se* - Evaporou-se o filtrado* Mssolj* veu-se o resíduo em agua/a-propanól (7/3) e aplicou-sea uma ' coluna 7,5 s 20 -cm de %fogel P-2,s (Bio-Rad) utilizando como solvente água/n-propanol Í7/3)* lfeefcuou-.se a combinação das fracçSes que continham o produto t® removeu-se o solvente no vácuo. Dissolveu-se o resíduo em metanol quente e adicionou» -se-lhe água atê se formar um precipitado* Removeu-se o metanol no vácuo* Depois d® se tér deixado em repouso durante a noite procedeu-se a filtração da suspensão* 0 resíduo da filtração continha a massa principal de produto* Evaporou-se o filtrado e repetiu-se o procedimento anterior ate sé precipitar o produto remanescente. Bfecfcuou-se a combinação dos resíduos de filtração e preparou-se úma suspensão em agua* A liofiii-zação proporcionou o composto em epígrafe* p.f* 198-200¾ (dee*) W Λ max nm ( £ x 10-3); HCX 0,1»* 275 (11* lfy 257 (Eh); pS 7| 275 <11,1), 258 (sh>? NaOK O* IH, 275 <9*f$)# (eh)* 303 (sh).

Anal* Cale. -para Cí0h10 j?ib4q3 .

Calculados C, 31,60; H, 2,65; M, 14*74; E,· 5,00; I, 33,39*

Encontrados C, 31,70; H, 2,70; H, 14,69; E, 4,96; I, 33,48. R&N-^H (80 mliz, Mea8©-d6)s 8,87 é o, 66 (s, 2H, H-8 e H-2); 6,35 (dd, 1H, Η-l*, «JP, 1 * « 17,0 Hz, J * 2,0 Hz); 5,76 (m, 1*5«, 0.5 <Κ-2*> e 3*-0H); '5,14 (m, Í,5H, 0*5 (H-211) e 5*--0H); 4,51 Cm, 1H, H-3*); 3,99 (m, 1H, H-4*}; 3,70 (m, 2rl, ’ V5* e Kp__51). 56 -

Exemplo 24

Preparação de 9- {2-desoxi-2-£luoro-5-Q-L~vali:nil-p-D-rlbo-furanoeiD-adenlna e do seu sal bis-cloridrato A uma solução âe 9-(2-desoxi-2- fl uoro-p--D-rifoofuranasil)adenina (500 mg? 1,86 mmol), de FMQÔ L-va-lina (820 mg? 1,3 equivalentes) e de DMAP (10 mg) em DMF seco (14 ml) â temperatura de G°C adicionou-se uma solução de DGC (diciclohexil-earbo-di-imida) (250 mg? 1,35 equivalentes) em CFlgClg ^ ml) sob agitação* Deixou-se a mistura atingir a temperatura ambiente, agitou-se durante 90 minutos e depois evaporou-se In vaeuo* Apos evaporação conjunta com etanol removeu-se o resíduo com CHCl^/MeOH (9sl) e filtrou-se* A seguir evaporou-se o filtrado e depois submeteu-se a cromato-grafia intermitente sobre Ii02* tendo-se efectuado a eluiçSo com um gradiente de EtOH em GHGl^ (5%-10%)* A fracção cuja eluição ocorreu primeiro era o 3 *, 5 *-bis-ester (230 mg) Nintendo ara pouco de dic-ielo--hexil-ureia. A segunda fracção foi o 3f-monoester e a terceira foi o 5'-raonoester (190 mg)* 0 ester valinato protegido por FMOC na posição 5 * foi depois tratado cora ama solução de piperidina (1 ml) em DMF (4 ml) â temperatura ambiente durante 5 minutos, depois evaporou-se in vacuo* dissolveu-se em agua (25 ml) e lavou-se com CKClg (30 ml)* Evaporou-se a água para proporcionar uma goma incolor a qual foi removida com uma solução aguosade ácido acético e depois evaporaou-se e co-evaporou-se cometanol e éter para proporcionar 0 éster 5'-0-valinato com o aspecto de um solido amorfo higroscópico (100 mg),

Anal. C15H2lFN604. 1*5 CBgCG2B, 1*5 B20

Calculados C 44,53? H, 5,23? 15, 17,32

Encontrados G 44,38? H, 6,32? K, 16,94

O p.f* ; Decompde-se acima de 150 C, • 57 -

Preparou-se o sal bis-cloridrato dissolvendo o éster 5 *-o-valinato em isopropanol ®guindo-se a adição de isopropanol previaraente saturado com ácido clorídrico gasoso e depois evaporou-s© o solvente* Eemoveu-se o solido branco com MeOH e p^ecipitou-se com éter â terrperatura de 0°c, A filtração proporcionou o sal bás-cloridrato*

Anal* €3L5H21FI56p4* 2HC1. 0.5 H^O

Calculados C 40*00? H* 5.37? H* 18*67 Encontrados G 40* 26? H, 5, 19? H, 18* 74 p, f. 210-213° (dac.),

Exemplo 25

Bis-cloridrato d© 2-amino-9- (2-desoxi- 2-fluoro-p-B-ribofu- ranosil)-9H-purina............. .... ..........- ... . , A ama solução de 2-amino-9-(2-desoxi-2--£luoro-í?~D-ribof uranosil) ~9H~purina (300 reg? 1*11 mmol) em MeOH (20 ml) adicionou-se isopropanol (2*5 ml) previamente saturado com acido clorídrico (liçl) gasoso* Adicionou-se-lqe acetona (15 ml) e evaporou-se a solução pratieamente até â secagem no vácuo e à temperatura ambiente. A trituração com acetato de ©tilo (15 ml) proporcionou um solido branco o qual foi filtrado e lavado com éter* p*£» 160-163° (dec)

Anal* ci0H12f W 503.:2HC1 Calculados C, 35,01; H, 4,12? M, 20,42? f, Encontrados C, 34,79? H, 4,23? K, 20,32? F,

Exemplo 26

Bis-cloridrato de 2,6-diaminQ-9-{2-desoxi-2-£luarQ-f3-B-ribs-furanosil)-9H-purina A uma solução de 2,6-diamino~9~(2-desoxi” -2-f 1 uoro-p-D-ribofuranosil) -9H-purina (300 mg? 1,06 mmol) — 58 — .

em MeOH (30 ml) adicionou-se saturado com HC1 gasoso* Evaporou-se a solução até se obter um pequeno volume (5 ml) à temperatura ambiente» e depois adicionou-se-lhe EtOH (15 mi) para precipitar o feis-clori-drfcto no estado sólido e de cor branca* p.f. 165—168°C (dec)

Anal* » *t HÔ1 ‘

Calculado* C, 33* 62? H* 4, 23? H» 23,53? F, 5,32 Encontrados C, 33,54? H, 4,24? 22,98? F* 5*33.

Exemplo 27

Sal sódio de 9- (2-desQxl-2-fItiQro~e-D-r±bQ£uranosil)~cmanina

As composto 9- (2-desGxi~2~£luoro-p-D--ribofuranosí 1)-guanina (50 mg? 0*175 mmol) adicionou-se uma solução de MâOH (7 mg) em água (2 ml) e aqueceu-se a mistura suavemente ate se obter uma solução límpida*. Depois liofilizou-se a solução. para proporcionar o composto em epígrafe no estado· sólido é de cor branca* p*£* 185-190¾ (dec)

Anal. cl0 w4 1/75 calculado* C, 35*45? H, 4*31? M* 20* 67 Encontrado: 0*35*59? H, 4*33? H* 20*64

Exemplo 28

Glorídrato .de . 9- ( 2-clesori- 2- fluoro-S-;D-ribofuranosiDauanina A uma solução de 9-(2-desoxi-2-£luoro--P-D-ribofuranosil)guanina (300 mg? 1*05 mmol) em MeOH (200 ral) adicionou-se uma solução de isopropanol (2 ml) previamente saturado com HG1 gasoso* seguindo-se a adição de acetona (50 ral). Evaporou-se a solução até se obter um pequeno volume (30 rol), adicionou-se acetona (150 ml) © reduziu-se 59 -

novamente o volume da mistura para um valor menor» Repetiu-~se esta operação sendo o volume final de 10 ml1 2 Adieionou--se EtOH (20 ml) e depois adicionou-se EtOAc (40 n&), Deixou--se em repouso tendo-se observado a precipitação de um produto com o aspecto de um sólido branco2 p.f2 192-193¾ Cdec)

Anal2 c10h12FN504 hc1 °24 ll2°

Calculados 0,36,51? H, '4, 23? H,· 21, 29? E, 10,77 Encontrados 0,36,50? E, 4,54? H, 21,36? H, 10,90

Exemplo 29

Otoridrato de 9- (2-desoxl-2-fluoro-fi-D-s±>ofuranosil)adeaina A itBE solução de 9- ( 2-desox i- 2- f 1 uoro— - β-D-ribofuranosil) adenina {500 mg? 1,86 mmol) em MeOH em (40 ml) e água (10 ml) adicionou-se uma solução de Isopropa-nol (15 ml) previamente saturado com HCl gasoso2 Evaporou-se a solução no vácuo ê temperatura ambiente e triturou-se com EtOH (25 ml) para proporcionar o composto em epígrafe no estado solido e de cor branca2 p.f, 205-210° (dec)

Anal. c10h12fm5o3.hci s

Calculados C, 39229? H, 4,29? N, 22,91? CL·, 11,60·

EncontradOí C2 39,36? H, 4,34? E, 22,89? CL·2 11, 52

Exernnlo^30 9-(2-desoxi-2-f1uoro-6-D-ribo furanosil)adenina-5'-monofosfa- 1

Sissolveu-ae 9-(2«desoxi»2~£luoro-p-B-ri-bofuranosil)adenina (do Exemplo 8? 0,47 g? 1,7 mmol) em 7 ml ! de 1,3-dimetil-3,4, 5,6-tetra-hidro-2(1H) -pirimidinona, Após o 1 arrefecimento desta -solução para a temperatura de 8¾ em banho 2 60 -

de gelo/metanol adi cionou-se«lhe O,64 tnX de oxicloreto de fósforo (7 mn©l> sob agitação vigorosa» Decorridos .três minutos interrompeu-se a reacção por adição de 10 ml de' água fria* Manteve-se a mistura de reacção era banha de gelo dormite 15 minutos e depois neutralizou-se para pB 8 utilizando hidróxido de amónio* . Efectuau-se a separação dos produtos de readjão recorrendo â cròmstografia de permuta anionica sobre "DEAE Sephadex A-25“. Diluiu-se. a roistur^ de reacção ate €00 ml com agua e aplicou-se a uma coluna de .croraatografia contendo cerca de 80 ml de "DBMS Sephadex A-25” a qual havia sido previamente equilibrado com bicarbonato de amónio 50 mM. Lavou-se a coluna com 2, 5 litros de bicarbonato de amónio 50 mM para se reroover o fosfato inorgânico* Procedeu-se à elud).-çSo dos aucleótidos eom 2 litros de um gradiente linear de bicarbonato de amónio 50-500 mM* Observou-se primeiro a elui-ção de 9-(2-desoxi*2-fluoro-p-B-ribofuranosil}sdenina-5*--monofosfato e depois observou-se a eluição de 9-<2-desoxi-- 2-f 1 uoro-6-D-ribofuranosil} adenina-3 *, 5 •-bisfosfato* Reuniu-se as fracçães que continham cada um nueleátido e procedeu-se à secagem no vácuo para a remoção da água e do bicarbonato de amónio*

Obteve-se o composto 9-(2-desoxi-2-fluo-ro-8-D-ribofuranosil)adenina-5'-r«mo£os fato sob a forma de sal deamónio em conformidade com o esquema anterior, mas o sal sádico, neste caso, ê o sal farmacologicamenfce desejado* Permutou-se o sal de amónio pelo sal sádico utilizando resina de permuta ionica "Dowex 50". Preparou-se uma solução de 9—(2-desoxi-2-£luoro-p-D-ribofuranosil)adenina-5 *-monofosfato (1, 3 mmol) em 10 ml de água e aplicou-se a uma coluna contendo cerca de XO ml de Bio Ead A650W-K8 (forma sádica) a qual Ijavia sido previamente equilibrada com água* O nucleéti-do foi eluido com água* Procedeu-se â combinação das fraeçães que continham o composto 9- {2-desoxi- 2- £1 uoro- β-D-ribo furanosil) adenina-5 ‘-monofosfato e liofilisou-se para proporcionar — 61 —

KMN-1H d (dg-DMSO) g 8,0 (1H, s, H2),7,7 (1H, „S, H8> 5,7 e 5,9 (1H, aa. Hl», separado por H2;*, F), 4,8 e 5,0 (1M, ààf p», separado, poa |p», F>, 4,1 (1%. % §3»), 3,9 (1K, m, §4*1, 3,6 (2H, ia, JfSl RMlA d, (D20) 8,5 (IH, s, H2), 8,2 (IH* s, H8), 6,3 e 6*5 ílH, d, íp», separado'por §2», F>, 5,3 e 5,6 &H, d, H2», separado por Hl», F), 4>7 (IH, % K3»í, 4,4 (IH, % H4»), 4*1 (2% f% §5*),. . RH» 3lP, 5 CBgO) 1,48 (s)

Sgpecfcro de W* em ΗΟΙ,Ο,ΙΜ, ^ mas a 2S6 nra* emfosfsto de amónio 400 rrM, pH 5,5, ^ «as a 259 ntmem fosfato de potássio 50 mf. 9E 7,0, mas a 259 nm? em Ha OH Ο,ΙΙί, max a 259 nm. 0 espectro de massa proporcionou dois picos principais para os fragmentos iónicos com os pesos moleculares de 270 e 136, correspondentes respectivameate ao composto 9- ( 2--desQxi-2-f luoro^f^D-ribofurancsil) adenina, j & clivagem total que origina o nucleósidc foi observada após incubação com 5*?sueleófcidase (Sigma), r-

Froporçgtes base/fosfato » 1,00/1*03, Dete minou-se a concentração total de fosfato pelo mitodo de âmes, B.H» em "Metbods ia Snsymology” ¥ol? 8 pp, 115.-,118, 1966, Determinou-se a concentração de nucleos-base recorrendo ao coeficiente de extinção dos nueXeasidos por u,¥.

Exemplo 31 9-(2-desoxi-2-fluoro-{3^D-ribofuranosii).-adenina-$»-monofos- ^^jfiBaagL^.............. .

Ifectuou-se a combinação dos compostos 9b· -{2**desoxl-2-£luorô»p-D-ribofursnosíl)adenina (do Exemplo 8? “ 62 -

1,2 mg? 4,3 mmol)? fosfato de p-nitrofenilo (22 umol) (solu-çSo 1M de reserva ajustada para pK 5*4' com ácido acético) e 0*05 ml de fosfotrànsfersse dos nucLaosides provenientes de Ss»rratia marcescens /~A, fyfe? et al«. J* Biol» Chein» 253 8721-8727 (1978) è Patenté Norte Americana n2 4 138 175, 23 de Janeiro, 1979^ com água para proporcionar um volume final de 0,22 d· Efeetuou-se a incubação â temperatura de 37 C durante a noite* Com toda a mistura de reacção produziu-se uma mancha numa placa de celulose para eromatografia d® camada fina preliminar e depois efectuou-se o processamento @m n--propanol/15 íí âe Mi^OH/HgOs 6/3/1* Após a secagem da placa raspou-se a área que continha os nucleotidos e procedeu-se â eluiçcio desses nucleotidos a partir de celulose com água* Obteve-se o composto 9- (2-€lesoí£i~2-fluoro-p-B-ribofuranosil) aden ina-5' -mono fosfato com o rendimento de 25% (1*1 umol).

Espectro UV: em agua, Λ mau a 257 nm.

Este composto foi eorapletamsnte clivado pela fosfatas© alcalina e pela 5"-micleotidase para proporcionar o nucleêsido 9-(2-dôso3£Í-2-flnoro-í0-0-ribofuranosil3ade-

Exemnlo 32 9- ( 2-des oxi- 2- f 1 uoro-p-D-r ibo £ur ano si 1) adenina-35 *-bis~ fosfato..............· .......... .........

Obteve-se o composto 9- (2-<Sesoxi—2-fluoro--β-D-ribafuranosil)adenina-3', 5 ‘-^bifosfato sob a forma de sal de amonio apás evaporação de frâcçSes provenientes de uma coluna de permuta iéniea (do Exemplo 30) (0,35 maiol? 20% de rendimento) * observou-se o diagrama caraerteristico de manchas por CCP apés incubação com nuelease PI (Boehriager * 63 -

Mannheim), fosfatase alcalina (Boehringer Mannheim}, 3-nucleo-tidase (Sigma) e 5 *—nucleoridase. A fosfatase alcalina clivou completamente o composto 9-(2-desoxi-2-f1uoro-8-D-ribofura-nosil)adenina-3*, 3 *-bi fosfato proporcionando o nucleósido original? a nuclease PI e a 3-nucleotidase clivarara-no para proporcionar o composto 9- (2-desoxi-2-f 1 uoro-2-j3-B-ribof urano-sil)adenina-5 ♦-monofosfato m a 5 *-nucleotidase são o clivou# Estes resultados são consistentes com aquilo que se sabe sobre estas enzimas e com o que se sabe de outros análogos de fosfato dos nucleósidos conhecidos.

Espectro de Ws em fosfato de amónio 40o mM, pH 5, 5, máximo a 259 nm* %o cedeu-se à combinação dos compostos 9—(2-desoxi-2-fluoro-β-Β-rÍbofuranosi1)guanina (do Exemplo 7? 0,9 mg? 2, 9 umol), fosfato de p-nitrofenilo (solução 1M de reserva ajustada para pK 5,4 com acido acético) e 0,04 ml de fosfotransferase dos nucleósidos proevenientes de S^rratia marcescens CPyfiS* et al#, J». Biol. Ohem* 253, 8721--8727 (1978) e Patente Morte Americana n- 4 136 175, de 23 de Janeiro# 1979^7 com água para proporcionar um volume final de 0,15 ml» Efeetuou-se a incubação á temperatura de 37°c durante a noite» cQm toda a mistura de reacção produziu-se uma mancha sobre uma placa de celulose para cromatogra-fia de camada fina preliminar e depois efectuou-se o processamento em n-propanol/15 M de ιεϊ4οη/β o s 6/3/1, Após a secagem da placa raspou-se a área que continha os micleótidos e depois e£ectuou-se a eluição desses nucleotidos a partir da celulose com água» Obteve-se o composto 9-(2-desoxi-2-£luoro-p--D-ribofuranosil}guanina-5 f-mono£osfato com um rendimento de . 11% (0,33 umol). Espectro de Ws em água, maxipu a 248 nm» \ pico a 267 nm» 64

Este composto foi totalmente clivado pela fosfatase alcalina e peia 5 *-nuoleotidase para propor cionar o nucledsido 9-(2-desoxi-2-fluoro- Ô -D-ribofurano-sil)guanina.

Proporção base/fosfato = l/50, indicado contaminação por fosfato inorgânicos

Exemplo 34 9-(2-desoxi-2-£luoro- Q -D-ribofurancsil)quaninina-5*-mono-fosfato (FfíMP) __

Dissolveu-se o composto 9-(2-desoxi--2-fluoro- β -D-rMofuranosil)guanina (0,0158 g; 5,2 x 10~^ mol) em 0,2 ml de fosfato de trietilo e arrefeceu-se para a temperatura de -8°0. Adicionou-se-lhe oxicloreto de fos-faro (0,015 ml; 1,6 x 10~^" mol) de uma s<5 vez, sob agitação, e tapou-se o vaso de reaçção com uma folha de alumínio para proteger os reagentes contra a luz. Deixou-se a temperatura variar até 0°C e agitou-se durante 4 horas· Depois temperou-se a reaoção adicionando-lhe gélo e a seguir ajustou-se o valor do pH para 7 utilizando laOH 1H. Extraiu-se esta solução aquosa com CHGl^ (2' x 2 ml)· Registou-se o pH da solução aquosa para o valor 7,5*

Purificou-se este composto por croma-tografia com ηΒΒΑΕ Sephadex” por um processo idêntico ao utilizado eom t,2t-fAMP,t do Exemplo 50, mas .eom um gradiente de bicarbonato de amónio variável entre 50-600 ml* 0 rendimento na obtenção do sal de aménio foi de 40$, 9 mg; 0,02 mmol·

Espectro de OVs em HG1 0,1 Μ, λ max a 254 nm, pico a 275 anu

Este composto foi eompletamente clivado pela fosfatase alcalina e pela 51-núcleotidase para - 65 - proporcionar o nucleósido 9-(2-desoxi-2-fluoro- β -B-ri-furafíosil)gaanina.

Sroporçio fease/fosfato « 1.0/0r9*

Exemplo 35 9-( 2-desoxi-2-fluoro- β -I)-ribofuranosil)guanina-5^trifos-fato (PGíEP) _ · .

Sintetizou-se o trifosfato enzimática-mente, a partir do 5*-monofosf ato. Procedeu-se à incubação d€i 5 mg (12 umol) de 2t-fSMP do Exemplo 34 à temperatura de 37°C num volume final de 2 ml com (concentração final); trifosfato de adenosína, 10 ml, PIPES de potássio#. $0 mH, pH 6*8* MgClg, 10 ml# piruvato de fosfoenol 12,5 ml, 4 El/ml · de d ifosfato-quinase dos nucleásidos (Boehringer Mannheim), 0,77 Ul/ml de guanilato-quinase (Boehringer Mannheim) e 20 Ul/ml de piruvato-quinase (Boehringer Mannheim)* Veri-ficou-se a existência de pequenas quantidades de 9-(2-deso~ xi—2-fluoro— β -D-ribofuranosil)guanina-5*-difosfato (PGDP) por GLBR de permuta iániea analítica, mas o produto predominante foi 9-(2-de soxi-2-fluoro- Q -D-ribufurano sil)guanina-5 *-trifosfato* Procedeu-se ao seu isolamento recorrendo ê GiiSB de permuta idnica preliminar em coluna de Whatman Par-ttsil SAX Magnum 9#- tendo-se feito a eluição com um gradiente de fosfato de potássio variável entre 10 mH - 1 M, pH 5»5. Purificou-se ainda as fracçSes que continham o composto 2f-PG!DP sobre "BEAl Sephadex’* conforme descrito no Exemplo 30. âpás a secagem das fraççSes obteve-se 7 mg de P^FGSJP sob a forma de sal de diamónio (80$$ 10 umol).

Espectro de UV: em H01 0,1M, max a 354 nm, pior-a 275 nm$ em líaOH 0.1M, p\ max a 255-262 nm.

Proporção base/fosfato - 1,0/2,5. 66 —

Exemplo 36 9-.( 2-desoxi-2-flucro- β -B-ribofuranasil)gttanina-5 *-tri-fosfato , ___________

Ineubou-se 50 mg (120 umol) de 2f--PSMP, preparado por um processo análogo ao do Exemplo 34, à temperatura de 37°0 num volume, final de 20 ml de com (concentração final); trifosfato de adenosina 10 ml-í, PIPES de potássio 50 tóM» pH 6,8, MgHlg 10 mlí, piruvato de fosfo-eanol 12,5 raM, 4 ϋ,I»/ml de difosfato-quinase dosnu-cledsidos (Boehringer Mannheim), 0,77 gua&ilato- -quinase (Boeliringer Maanlieim) e 20 U.I./m_lo piruvato-quinase (Boiieringer Mannheim). Verificou-se a existência de pequenas quantidades de 9-(2-desoxi-2-fluoro- β -D-ribofuranosil) guanina-5’-difosfato por CliER de permuta idnioa analítica, mas o produto predominante foi o composto 9-1(2-desoxi-2--fluoro- β -B-ribofarano sil)guanina-51-triflusf ato. Isolou--se este composto recorrendo a CEER de permuta idnica preliminar em coluna de Whatman Partisil SAX Magnum 9 tendo-se feito a eluição com um gradiente de fosfato de potássio variável desde 10 mM a 1 M, pH 3,5* As fracçdes que continham 2*50ΪΡ ainda foram purificados sobre «iDEAD Sephadex1' conforme descrito no Exemplo 30* Apds a s ecãgem das frae-çdes obteve-se 50 mg de 2 *-PGPP na forma de sal de diaménio mas estava contaminado com difosfato de adenosina» 2*-Ρ6Ι)Ρ e trifosfato de adenosina. Repetiu-se depois a purificação por GEER preliminar sobre nPEAB Sepha&ex”. Obteve-se o sal de triamdnio (36 mg; 64 umol, 50$ de rendimento).

Espectro de Wj em H01 0,1 Μ, Λ max a 254 nm, pico 275, nm.

Proporção base/fssfato = 1,0/2,9*

Exemplo 57 2,6-diamino-9-(2-desoxi-2-fluoro-3,5-di-O-pivaloil- & -D--ribofuranosil)~9H-puriBa e 2,6-diamin©-9-(2-desoxi—2-fluoro -5e- plvaloil- O -S-riboi‘uranosil)-9K-purina -67-

A uma solução de 2 # 6-diamino-9-(2--desoxi-2-fluoro- β -B-ribofuranosil)-9H-purina (100 mg| 0,35 mmol) numa solução de DMF (3 ml) e de Et^N (0,3 ml) adicionou-se anidrido trimetil-acético (78 ul) e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante a noite. Dçpois adicionou-se mais 80 μΐ de anidrido trimetil-acético e manteve-se a agitação durante 3 dias* A seguir temperou-se a mistura com MaOH, evanorou-se in vácuo e submeteu-se a ero-matografia intermitente sobre ^iOg» fazendo-se a eluição com 0HG15, OHOl^/MeOH ,(30í1);, (20*1)» (lOsl) (6:1), (4*1) e finalmente ,(3íl).f Deste modo obteve-se o. bis-ester (74 mg) com o aspeoto de um semi-sdlido incolor apés trituração com éter. ' „ . - p.f· 143-145°0 (dee.) -

Espectro d,e massa de alta resolução (1.1,) ϊ.

Encontrados 368,1612 Hg-^ FIg 0^ calculado 368.1608, A recolha e a evaporação das iràeçães apropriadas proporcionou também o ester mono-5 *-pivalato (16 mg). . p.f. 123-125Θ0,

Espectro de alta resolução (I.B.)

Encontrado: 452,2181 OgQ Bg^ EBg 05 calculado: 452.2183*

Exemplo 38 2-Amino-6-benzil-amino-9-(2*-desoxi-2»-flucro- Q -D-ribo-furanosil)-9H-purina

Combinou-se 2-amino-6-benzil-amino--purina (0,2 gj 0,83 mmoles} e 1-(2-desoxi-2-fluoro- β»-D--ribofuranosil)uracilo (0,244 gj 1 mmoles) com 10 ml de tampão de fosfato de potássio 10 ml''!, píl 6,8. Adicionou-se--Ibe 8 200 unidades de fosforilase da timidina e 7 850 unidades de fosforilase dos nuoledsldos da purina (Erenitsky, - 68 -

et ai Biochemiatírv. 20, 5615» 1981 e Patente Horte

Americana nfi 4 381 444) e agitou-se a mistura à temperatura de 45°C durante 40 horas* Efectuou-se o isolamento do pro- * duto adieionaôo-lhe metanol (15 ml), removendo os sólidos por filtração e evaporando o metanol em presença de 10 ml » de gel de sílica, Aplicou-se o gel seco na cabeça de uma coluna de sílica (5 x 25 em) e proeedeu-se à eluição do , * * » produto oom clorofórmio/metanol (99:1)* Efectuou-se a combl-· > f > nação das fracçSes que continham apenas o produto e removeu-se o solvente no vácuo tend®-se obtido 0,087 g de 2--amino-6-benzil-aaiino-9-( 2 *-deso2±-2 * -flúorο- β -D-ribo-f urano sil)-9H-purina.’ (200 mSa) x € 7,95 (s, 1 H, Sg), 7*85 (b, 2H* 1E), 7*2-7*5..(m, 5H» fenilo), 6*04 (dd, 1H, Hg Jt=16,4 H2, 9 3 = 5*1 Hz), 5*93 (b, 2H, 1%), 5*64 {a,-JLH*.0H, 3 * 5,9 Hz] 5,44, 5*17 (dt, 1H, H2,), 5*26 (t, m9 0H^#), 4,64-(br, 2H* 4,38 (m, 1H E5,), .5,9 (br, 1H, H4,), 3*5-3*75 .(ftf* 2H,’H5v)w t possível efeotuar a redução do cot·* posto anterior em conformidade cota os procedimentos' de Y* du Vigneaud e 0*K.· Behrens J* Biol* Ohem* 117 # 27 (1937) *

Exemplo 39 , .· 2-amino-6-benzil-tio-9~(2-desoxi-2-fluaro~ £} -D-ribofurano sil)-9H-purina

Utilizando 2-a®ino-6-benzíi~tio-puri-na (Sigma Chemical Companyj o,8 g; 3,1 amoles) e 1(2--dêsoxi-2-fIuoro- β -D-r.ibofuranosil)uracilo (0,4 gj 1,7 mmoles) cuja preparação pode ser efectuada em conformidade com J. 3?, Codington et al.. (J. Org, Ohem. 29:558» 1964) preparou-se uma suspensão em 20 mí de tampão de fosfato de potássio 10 ®M, pH 7,0, contendo 0,04$ (p/v) de azida de potássio. Adicionou-se-lhe fosforilase da timidina 2 640 U.I.) e fosforilase dos nuoleóeidos da purina (4 360 U.I.) (T.A, Krinitsky e outros, Bioehemistry 20:3615. 1981 β Pa~ - 69 - τ

tente Norte Americana ns 4 38I 344) e agitou-se a suspensão à temperatura de 37°C. Ao 21S dia diluiu-se a mistura de reacçã© até 150 ml com tampão de fosfato de potássio 5 mH, pH 7,0, contendo 0,045» (p/v) de az ida de potássio e adicionou-se-lhe 4 000 0,1* de fosforilase da timidina e 6 500 0,1. de fosforilase dos nucledsidoa da purina. Ao 43a dia diluiu-se a mistura de reacçâo até 250 ml com água e adicionou-se-lhe 2 000 0,1, de fosforilase da timidina e 3 250 U,I, de fosforilase dos nucleésidos da purina* Ao 69a dia ajustou-se 0 pH da mistura de reacção para 0 valor 7,1 utilizando KOH. Ao 77a dia evaporou-se a mistura de reacção. Dissolveu-se o resíduo em metanol/água quente e aplicou-se a uma coluna de 2,5 χ 7 cm de resina de permuta aniéfíica (Bio-Saâ AGlX2-forma de hidróxido) e procedeu-se à eluição do produto como metanol/água (9/1)· Efectuou-se a combinação das fracçães que continham 0 produto e removeu-se 0 solvente no vácuo. Dissolveu-se o resíduo em ace-· tonitrilo/água (49/1) e aplicou-se a uma coluna de 2,5 x 20 cm de gel de sílica 60 (EM Science). Efectuou-se a eluição do produto com aeetonitrilo/água (49/1)· Procedeu-se à combinação das fracçães que continham 0 produto e removeu-se o solvente no vácuo· Com 0 resíduo preparou-se uma suspensão em água e liofilizou-se para proporcionar 0,201 g do composto em epígrafe cuja análise revelou ser 0,1 hidrato» p.f. 180°C. UV )í nax nm { £ X 10_3)j HC1 O.IM, 322,5 (11,8), 250 (10,6) pH 7, 311,5 (14.2), 247 (14,3)s HaOH 0,1H, 312 (14,0), 247 (13,5).

Anal. Cale. para GΊ^E^gEI^O^S.0.1· HgOs

Calculado: C, 51,93? S, 4,665 I, 17,815 E, 4,835 8, 8,15

Encontrado: 0, 51,96; H, '4,665: 1, 1*7,861 E, 4,68; S, 8,15. ®ΐΛ (300 mEz, Me2SQ-d6): é 3*19 (s, Ifi, H-8), 7.47 d--d-aparente, 2H, Ar, J « 7.6Hz), 7,28 (m, 3H, Ar)·, 6,74 (ah, 2H, 2-NE2), 6.10 (dd, 1H, H-1V, %, l?=16.6Hz, J » 2,4 Hz), .5,68 (d, 1$, 3*-0H, 3 - 6,4Hz), 5.32 (ddd, 1H, H-2% - 70 -

tt J

*= 53*0 Hz, = 2,4 Hz, ^2*,3* “ 4*4 ®z* 5.15 (1», IH, 5*-OH, J β 6.0 Hz, 4*35 (quarteto ab, 2H, 6-S0H2, J geminado = 13,7 Hz), 4*41 (m, 1H, H-3*), 3,94 (m, ih, H-4*)« 3.74 (tn, 1H, Ηα-5Μ» 3,58 (m, 1H, Η e -5»). 1 ' '

Exemplo 40 42 f 6-diamino-9-(2-des oxi-2-fluor o- # -D-rib ofurarosil)-®.H~ -purlna_‘ _ ·

Utilizando 2,6-diamino-purina (Pacific Chemical Laboratories: 2,0 g; 12,7 mmoles) e l-(2-deso-xi-2-fluoro- -D-ribofuranosi 1)uracilo (0,8 g? 3,5 mmoles) eu3a preparação pode' ser efectuada em conformidade com J.P. Codington et aí*. (J, Ora* Qhem. 29:558* 1964) preparou--se uma suspensão em 500 ml de tampão de fosfato de potássio 5 mM» pH 7,0, contendo 0,04$ (p/v) de azida, de potássio. Adieionou-se-lhe foiforilase da timidina (41 700 U.I.) e fosforilase dos nueleésidos da purina (83 300 U.I.) (£*.. A. Krenitsky e outros, Bioehemistry 20:3615. 1981 e Patente líorte Americana qS 4 38I 344) cuja absorção havia sido feita sobre 10.5 g de DEAE-celulose (25 ml) e agitou--se a suspensão I temperatura de 37°0* Decorridas 24 horas adicionou-se-lhe 2,0 g de 1,6r-diamino-purina e aumentou--se a temperatura até 50°G. Decorridas maia 24 horas fil-trou-se a mistura de reacção. Lavou-se o resíduo da filtração com água e procedeu-se â combinação. dos filtrados e.à, remoção do solvente no vácuo* Dissolveu-se, o resíduo em, água quente e ajustou-se 0 pH para 0 valorde 9,4 utilizando Aplicou-se a solução a uma coluna de 2,5 x 13 om de resina de permuta aniénica (Bio-Ead A0H2-forma de hidróxido). Após a lavagem da coluna com água procedeu-se à eluição do produto com metanol/água (9/1).· Efectuou-se: a ° combinação das fraeçães que continham o produto e removeu--se o solvente nò vácuo. lratou-se o resíduo conforme s descrito ânteriormente. Procedeu-se à combinação das fracçSe que continham o produto e removeu-se o solvente no vácuo.

Dissolveu-se o resíduo em água e liofilizou-se para proporcionar 0,89 g do composto em epígrafe cuja análise revelou ser 0,5 hidrato*

p.f. 125-127°C W > max nm ( l x 10~3)í pK 7, 279,5 <9,52, 256 (9.06)?

Anal. Cale, para e10H13M6°3-°·5 H20i Calculados C, 40,96; H, 4*81; 3ST, 28,66; E, 6,48 Encontrado: . C, 41*03; H, 4,80; I, 28,69; F, 6,50#

* » lf t t V TA estrutura ainda foi .confirmada por SM- íi.

Exemplo 41 . * . , l „ ,,· I « , 2-amino-9-)24desoxl-2-flucro- β -D-ribofuranosíl)-9H-purina

Utilizando 2-amÍno-puriná (Pacific Chemical Laboratories; 3,9 g; 22,2 iámoles) e l-(2-desoxi--2-fluoro- β -D-rihofuranosiÍ)uraçilo (0,5 g; 2,0 mmoles) cuja preparação pode ser efectuada em conformidade com · J,F, Oodington et al.'« (J. Brg. Chem, 295558,4 1964)' ’ - preparou-se uma suspensão em 25 ml de tampão de, fosfato de potássio 3 km, pH 7,0, contendo 0,04$ (p/v) de ázida de potássio. Adicionou-se-lhe fosforilase da timfdina (41 700 U.I.) e fosforilase dos nuciledèidos dà puríná ('83 300 U.I.) (T*A* Krenitsky e outros, Biochemistry 20i3615. 1981 e ' ! * »

Patente Horte Americana n^ 4 381 344) cuja absorção havia * a i a sido efectuada eobre 10,5. g de DEAE-celulose (25 ml) e agitou-se a suspensão à temperatura dé '37°0. Decorridas 24 horas adicionou-se-lhe 3,0 g de 2,6-diamin’o-puriha e aumentou-se a temperatura até 50°C. Decorridas mais 24 horas filtrou-se a mistura de reacção..Lavou-se 0 resíduo da filtra ção com água e procedeu-se à combinação dos filtrados e removeu-se o solvente no vácuo. Oom ó resíduo preparou--se uma suspensão em água e filtrou-se. Extraiu-se 0 resíduo da filtração com água (25°0) até não ficar nenhum pro- - 72 - t

por mA. duto tio aglomerado da filtração. Procedeu-se·à combinação dos filtrados, ajustou-se o pH para o valor 9,4* utilizando HH^OH e aplicou-se a soàuçio a uma coluna de 2,5 x 20 em de resina de permuta aniónica (Bio-Rad AGlX2-forma de hidróxido). Após a lavagem da coluna com água procedeu-se à eluição do produto com metanol/água (9/1)· Efectuou-se a éombinação das fracçSes que continham o produto e removeu--se 0 solvente no vácuo. Dissolveu-se o resíduo em clorofór-mio/metanol/água (75:25;4) e aplicou-se a uma solana de 5 x 25 cm de gel de sílica 60, Efectuou-se a eluição do produto com clorofórmio/mêtãtiol/água (75:25*4)* Procedeu-se à combi- f , nação das fracçSes que continham o produto e removeu-se o solvente no vácuo, Dissolveu-se o resíduo em água·quente e filtrou-se através de uma membrana filtrante eoá poros de t· ' * « 0,22 um* A liofilização do filtrado proporcionou 0,50 g do composto em epígrafe cuja análisé revelou ser 0,5 hidrato, p.f. 155-155°«* UV 2 max nm ( t x 10”^): pH 7» 504 (6,35), 243,5 (5,95) Anal. calo,; para ^0^12^5¾--0.5H20: , Calculado: 0,-43,17} H, 4,71} 1,25,17? 3?, 6,83 Encontrado: 0, 43,08; H, 4,74; H, 25,11; F, 6,89 A estrutura foi ainda confirmada

Exemplo 42 2-amino-9-(2-desoxi-2-fXuoro- β -D-ribofuranosii)-6-metoxi--9H-purina„

Utilizando 2-amino-6-metoxi-purina (2,0 g; 12 mmoles) cuja preparação pode ser efectuada em conformidade com R.W. Balsiger e J.A. Montgomery (J. Org, Chem. 20:1573, 1960). e utilizando l-(2-desoxi-2-fluoro- β -D--ribofuranosil)uracilo (0,88 g; 3*6 mmoles) cuja prepara- . ção pode ser efectuada em e onforinidaâe com J, P, Godington - 73 -

et ai.» (J# Org. Chem. 29:558, 1964) preparou-*se uma suspensão em 250 ml de tampão de fosfato de potássio 5 mM, pfí 7*Gf contendo 0,04$ (p/v) de azida de potássio» Ajustou-se 0 pH da suspensão para 0 valor de 7*0, utilizando 1C0H·. Adi cionou-se-lhe fosforilase da timidina (4I 700 U.I.) ·β fosforilase dos nueledsidos da purina (83 300 U.I·.) (ϊ.Α, Krenitshy e outros» Bioehemistry 20:3615* 1981 e Patente lorte Americana' ns 4 381 344) cuja absorção havia sido feita sobre 10,5 € de' ‘DIAE-celulose (25 ml) e agitou-se a sus pensão à temperatura de 37°0» Decorridas 24 horas adicio-nou-se-lhe'1,0 g de’ 2-afflino-6-metoxí-purina e 250 ml do tampão anterior è âumêntou-se á temperatura até 50°C. Decorridas'mais 24 horas "filtrou-se a mistura de reacção. La-vou-se 0 resíduo da filtração com água.e procedeu-se à combinação dos filtrados e a remoção do solvente no vácuo. Dissolveu-se o resíduo em água tépioa.e ajustou-se o pH para 0 valor 9,4 com Apllcou-se a solução a uma co luna de 2,5.x 15 cm de resina de permuta aniónica ’(Bio-Had AGlX2~forma de hidróxido). Após a lavagem da coluna com água procedeu-se à eluição do produto com metanol/água ($/l). Efectuou-se a combinação das fraoçães que continham 0 produto e removeu-sè o solvente no vácuo». Dissolveu-se o resíduo numa mistura tépida de água/metanol e filtrou-se através dé uma membrana filtrante de nylon com poros de 0,22 um. A libfilisáção do filtrado proporcionou 0,91 g do composto cuja análise demonstrou ser 0,5 hidrato.

p.f. 200°C m }| max nm ( £, x 10~5)? pH7, 279.5 -(9.24), 247.5 (9.99) ,

Anal. Calo· para CllH14fI504‘0*5H20í

Calculado: 0, 42,86$ H, 4.90; I. 22.72; P, 6,16,

Encontrado: 0, 42.93; Hf. 4.90; I, 22»73| P, 6.15 A estrutura foi confirmada ainda por 1141-½. - 74 -

Exemplo 45 2-amino-6-benzil0xi-9~( 2-desoxi-2-f luorο- β -D-ribofuranosil] -9H-purina

Prooedeu-se à combinação'de 2-amino~6--benzil-oxi-purina (2,5 g; 10,5 mmoles) ψ 2f.*i4e8õxi-2#--fluoro-uridipa (2,64 g; 10,8 mmoles) com 50 ml de tampão de fosfato de potássio 10 mE, pH 6,8. Adicionou-se 8 000 unidades de fosforilase da timidina a 21 60Ò unidades de fosforilase dos nucledtidos da purina e agitou-se a mistura à temperatura de 45°0. Decorridos 5 dias adicionou-se roais 16 000 de fosforilase da timidina e 21 600 unidades de fosforilase dos nueledsidos da purina e agitou-se a mistura de rel.cQáo durante 48 beras ‘à temperatura de 45°0· A maior parte do produto encontrava-se no precipitado que foi^rsoe- .. vi&o por filtração e dissolvido em metanol. Isolou-se o * v * * produto por cromatografia sobre, sílica utilizando eomp fase mdvel uma mistura de acetato de e tllo/clorofdrmio/metanol’ (8:1:1). Procedeu-se â combinação apenas das fracçSes que continham o produto e evaporou-se o solvente para propor-c ionar 1,44 g de 2-asino-6-benzíloxi-9-(2-desoxi-2-fluoro-- 6 -D-ribofuranosil)-9H-purina.

BmA (200 mHz „ero DMSO): 5 8.11 (s, 1H, Hg), 7.3-7.5 (m, 5H, fenilo), 6,59 (br, 2H, IB2), 6,09 <dd, 1Η,Ηχ1ι 3$ Γ·* = 16.5 Ha, J*2,6 Hz), 5.66 (d, 1H, OH, 3 x 6.1 Hz), 5~.48 (s, 2H, 0H2), 5.25. 5.53 (bd, 1H„ Hg,), 5.20 (m, 11, 0^,), 4.3-4.5) (m, 1H, H^*), 3*9 (br, ÍH,^,), 3*5—3*8 (m, 2H, ,), A preparação do composto do Exemplo 7 a partir de 2-amin ο-6-be nz iloxi-9-(2-de soxi-2-fluoro-β --D-riburanosil)-9H-puri»a efectua-se recorrendo ao procedimento .de BI Main et al., 3* Org, Obem., 44, 3442 (1979). - 75

Formulações Farmacêuticas

Nos Exemplos de formulação que se seguem o -termo wingrediente activoH refere-se a qualquer composto de fórmula (1) ou a um seu sal farmaceuticamente aceitável, por exemplo, os compostos dos Exemplos 6, 7* 9 e 12»

Exemolo 44 Formulação para Pastilhas

Procedeu-se à preparação das formulações A, B e 0 que se seguem fazendo a granulação a seco dos ingredientes com uma solução de povidona, seguindo-se a adição de estearato de magnésio e posterior compressão.

Formulação A ms/pastiUia • mg/pastilha (a) Ingrediente activo 1 t * 250 250 (¾) Lactose B.P. 210 26 • 1 (o) Povidona B.P. 15 . 9. (d) Olicolato de amido de sódio 20 12 (e) Estearato de magnésio 5 5 500 500

Formulação B ' mg/pastilha mg/pastilha (a) Ingrediente activo 250 250 M Lactose : 150 - (e) Avicel. PH 101 60 26 (d) Povidona F.P. 15 9 (*) Glicolato de amido de sódio 20 12 W 1 1 Estearato de magnésio 5 5' 500 300 - 76

Formulação 0 mg/naatilha

Ingrediente aotivo 100 lactose 200 Amido 50 Povidona 5 Estearato de magnésio _í 559 As formula ç8es I) e B que’se seguem ram preparadas por compreensão direota dos ingredientes misturados. Formulação 33 mg/cáosula Ingrediente activo 250 Amidó pregelatinizado IF15 150 400 Formulação B mg/cánsula Ingrediente aotivo 250 lactose 150 Avicel 100 500

Formulação ff (Formulação de Libertação Gontraiada)

Preparou-se esta formulação por granulação a Mmido dos ingredientes que se seguem, com uma solução de povidona, seguindo-se a adição de estearato de magnésio e posterior compressão. - 77 - mg/saetilha (a) Ingrediente aetivo 500 (¾) Hidroxipropilmet ilcelulose (Methocel K4M Premium) 112 (o) Lactose B.P. 53 (d) Povidona B.P.O. 28 (e) Estearato de magnésio 7 700 A libertação do fármaeo ocorre durante um período de 6-8 horas e completa-se em 12 horas. r

Exemplo 45 Formulaçãos para Cápsulas Formulação A

Prepara-se uma formulação para cápsulas misturando os ingredientes da Formulação D do Exemplo 4 anterior e procedendo depois ao e nchimento de cápsulas de gelatina dura constituídas por duas peças.

Formulação B ffig/cápsula (a) Ingrediente aotivo 250 (b) Lactose B.P, 143 (o) Glicolato de amido de sddio 25 (d) Estearato de magnésio 2 420

As cápsulas foram preparadas misturando os ingredientes anteriores e procedendo ao enchimento de cápsulas de gelatina dura de duas peças, - 78 -

Formulação 0 mg/cápsula (a) Ingrediente activo 250 (¾) Microgol 4000 BP 350

As cápsulas forma preparadas fundindo o componente "Maerogol 4000 BP", dispersando o ingrediente activo naquele componente fundido e enchendo com a mistura de fusão cápsulas de gelatina dura constituidas por duas peças. mg/cápsula 250

Formulação D Ingrediente activo

Lecitina 100 óleo araquidieo . . 100 450

As cápsulas foram preparadas dispersando o ingrediente activo .na lecitina e no óleo araquidieo e depois, como essa dispersão, procedeu-se ao enchimento de cápsulas de gelatina elástica © macia.

Formulação E (Oácaula de Libertação Controlada)

Procedeu-se k preparação das formu-laçães para cápsulas de libertação controlada que se seguem, fazendo a extrusão dos ingredientes (a), (b) e (o) utilizando uma extrusora, seguindo-se a esterificaçã© do extru-dado e a secagem. A seguir procedeu-se ao revestimento (d) e a seguir procedeu-se ao enchimento de cápsulas de gelatina dura constituidas por duas peças* mg/cápsula (a) Ingrediènte activo 250 W Celulose microcristalina 125 (c) lactose BP 125 (d) Etil-celulose 15 * 513

Exemplo 46 Formulação iniectável

Formulação 1 e

Ingrediente activo 0,200g

Solução de ácido clorídrico 0,1M q*s. para pH entre 4,0 € 7*0

Solução de hidróxido de sódio 0,1M q.«s« para pH entre 4,0 e 7*0

Agua estéril a.s. para 10 ml

Dissolveu-se o ingrediente activo na maior parte da água (35-*40°0) e ajusta-se o pH para um valor entre 4*0 e 7,0 utilizando ácido clorídrico ou hidróxido de sódio, conforme apropriado, Depois ajustou-se o volume do lote com água e filtrou-se através de um filtro micropo-roso e stéril e procedeu-se ao enchimento de frascos de vidro de eor âmbar e estéris 'com a capacidade de 10 ml (tipo 1) e efectuou-se a sua vedação com tampas ® c intas estéreis*

Formulação B

Ingrediente activo 0,125 g

Paapão fosfato com. pH 7 sem pirogénios é estéril, ql.s* até 25 ml.

Exemplo 47 In.iecoão latramusoular - 80 -

Ingrediente activo 0,20 g Álcool benzílico 0.10 g Glíoofurol 75 1.45 g Agua para injecçães q.,s. até 3.00 ml , , , Dissolveu-se o ingrediente activo no glicofurol. Depois adicionou-se-lhe o álcool benzílico e dissolveu-se e adicionou-se água até 3 ml» A seguir filtrou-se a mistura através de um filtro mieroporoso estéril e proceâéu-se ao enchimento de frascos de vidro cor de ambar com a capacidade de 3 ml* estéreis φΐβ foram veda· dos (tipo 1). , r P Exemolo 48 Xarope » I « Ingrediente activo . . 0.25 g . Solução de sorbitol 1.50 g Glieerol 2,00 g Benzoato de sddio 0.005 g Aroma de pêssego 17.42.3169· 0.0125 ml Agua purificada 5.00 ml

Dlssolveu-se o ingrediente activo numa mistura de. glicerol e da maior parte da água purificada» Adicionou-se-lhe uma solução a quosa de benzoato de sddio a essa solução e depois seguiu-se a adição da solução de sorbitol e finaimente adicionou-se o aroma. Ajustou-se o volume com água purificada e misturou-se muito bem. 4 mg 46.0 mg

Exemplo 49 Oápsulàa de Pá para Inalação Ingrediente activo (pá de 0,5-0,7 um) lactose (pd de 30-90 um) - 81

Misturou-se os pés muito bem até se obter homogeneidade e procedeu-se ao enchimento de cápsulas de gelatina dura com as dimensões adequadas contendo cada cápsula 50 mg de mistura*

SsmflgLSfo Aer^sso.1, para , lag&ggãQ

Ingrediente aetivo (po de Q* 5-7*0 um) 200 mg Trioleato de sorbitano 100 mg Sacarina de sódio (pó dé 0*5-0* 7 um) 5 mg Metanol 2 mg Tricloro f1uorometano 4, ,2 q Diclorodif 1 uorometano até 10, .0 ml

Dissolveu-se o trioleato de sorbitano e o metanol no tricloro-f1uoro-metano. Com a. sacarina de sadio e com o ingrediente acfciva preparou-se uma dispersão nessa mistura a qual foi depois transferida para um recipiente de aerossol adequado e Inj ectou-se-lhe o dicloro-metano através de um sistema de válvula, Esta composição proporcionou 2 mg de ingrediente aetivo em cada dose de ICO ul.

J

Procedeu-se ao ensaio de estirpes de gripe A e B em monocamadas de células erabrionérias de pintainhos em tabuleiros de cavidade múltiplas. Determinou-se a actividade dos compostos em função do rendimento de redução ou de acordo com o ensaio de redução em placa* em que se infecta uma monocamada celular com uma suspensão de vírus da gripe e depois cobre-se com meio líquido (redução dô produção) ou com agarose nutriente sob a forma de um gel para garantir que nlo há disseminação do vírus através da cultura (redução em placa), Incorporou-se no meio/cobertura de agarose nutriente uma concentração variável de composto de mo-1aridade conhecida* Exprime-se a produção de vírus ou o ná- - 82 i·

mero de placas para cada concentração pela percentagem de con-> troloe traça-se uma curva dcse/resposta. A partir dessa curva avalia-se a concentração inibidora a 50% (GXS0>· Ensaia--se o Vires Sincieial Respiratório (VSR) em células SS-G-1 (células do rim do Macaco Verde Africano) recorrendo a um ensaio idêntico de redução de foeus/placas* Os resultados encontram-se representados nos Quadros 2 e 22 que se seguem*

Avaliou-se a actividade inibidora in vivo para as estirpes de gripe A e B num modelo de pulmão/ /tecido intranasal do ratinho, Os ratinhos foram infectados com virus através de ura aerossol num compartimento fechado e depois foram tratados cora os compostos de ensaio em diversos momentos após a infecção através de diversas vias* incluindo a oral, a intraperitoneal e por aerossol. Os ratinhos foram sacrificados decorridas 24 horas e procedeu-se â preparação de suspensães de tecidos pulmonar a 10% e efectuou-· -se a sua trituração em presença do vírus, Os resultados foram registados indicando uma redação do desenvolvimento do vírus por comparação com os controlos não tratados*

Referencias

Appleyard, G and Maber* h. b. Plaque Formation by Influenza Vi-ruses in the Presençe of Trypsin, <T, Gen. Virol, 25,351--357* (1974), Coliins, P, and Bauer, B* J, Relatíve Potencies of Anti-Herpes Compoimds. Ann, N,Y, Aead, Sei*284,49-59» (1977), Hayden, F. G« Cotelc. M, and Douglas, E,G,, Plaque Inibition Assay for Drug Susceptibility 'íesting of Influenza Viruses* Antimicro Agents and Chemo. 17* 855-870, (1980). Tisdale, M, and Bauer, D, J* A comparíson of test methods in influenza chemotherapy, J. Antimicrobio, Chemother* 1 suppi* 55-62 (1975),

- 83 -

Quadro X

Ex«Na Composto Vírus aatl-sinciciai respira tório Células BS-C-1

J

Ex. N2 COfflDOStô Actividade anti-ariroe RI R2 X Y - Células de 0I50. /M log^0 da reduçSo no ratinho era titulação viriea (media de 5 ratinhos) 6 OK OH mi2 m 0,6 +(2.1) OH OH oh wa2 0* 8«*2 +(2*4) 3 OK OH MÍ2 Si 4 +(2.3) 9 OH OH H' HH2 - +(1.6) 12 OH 01! OMe KíH2 0*4 +(1*9)

CIcrt «K §0 ✓ 7 OH OH OH HH2 12 OH OH OMe hh2 26* 2 6*3 - 84 -

Claims

i

- 1* - Processo para a preparação de mm composto com a fórmula geral (I) X

em que Y é hidrogénio ou IHg* - J X representa um grupo -IR%^ no gual cada R^ e R^, que 0 podem ser iguais ou d iferentes, representam hidrogénio; alquilo (G^-Cg), alquenilo (Og-Cg).# eiclo-alquilo (0^-0^}, sendo cada grupo opcionalmente substituído por um ou mais halogéneos, ou X é um grupo Z-R-* no qual Z .4 oxigénio ou enxofre e R^ tem a pesma significação que R^, .ou X é halo- géneo ou hidrogénio; e R e R que podem ser iguais ou 0 · - * diferentes, representam cada um; - um grupo hidroxi; - um grupo -0G0R H em que R° 4 um grupo divalente que é um alq uileno (G^-Gg) de cadeia linear ou ramificada, alquenileno (C2-Cg) ou ciclo-alquâleno (0^-0^)s sendo cada um opcionalmente substituído por um ou X

7 7 um grupo -ΟΟΟοΒ,'Η em que R é uma ligação eovalen- & 6 te ou ê como definido para R; um grupo -OCOR^-COOR8 em que R6 é oomo definido S ' anteriormente e R é seleccionado entre hidrogénio» ou alquilo (C-^-Cg) de cadeia linear ou ramificada ou alquenilo (C^-Og) sendo cada um opcionalmente substituído por um ou mais grupos hidroxi5 um grupo -OCOR^-Z-Ar em que R*^ ê como definido an** teriormente, 2 éu é uma ligação covalente ou é oxigénio e Ar é um anel aromático eventual mente substituído por um ou mais halogéneos, alquilo (Ci-Og) ou alooxi (O^Gg)í 6 6 um grupo -0R H em que R ê como definido anterior--mentes £ £ um grupo -0R -Z-Ar em que R , 2. e Ar são como definido anteriormente5 um grupo definido -0C0CER 8 para R %R10111 em que R10 0 R11 são como e R^ 4 hidrogénio, alquilo (Cj-C^) de cadeia linear ou ramificada opcionalms nte subs- J tituido por um ou mais grupos, hidroxi, mércapto, alcoxi -(0-,-0¾) ou alquil-tio (0-,-0¾). um grupo 12 Α ** 12 - j. 2 R -A em que R é um grupo alquiléno (0^-0^) opcio- nalmente substituído por um ou mais grupos hidroxi e A é um grupo -C00H, -COHHg * ~m2 m ~IH“G (ffi) IH2 ou A é um sistema de anéis hetèrocíclicos ou 6 ’ cíclicos não aromáticos ou aromáticos de 4 a 11 membros possuindo entre 3 e 10 átomos de carbono e 0, 1, 2 ou 3 átomos.de azoto no anel, sendo os átomos de carbono e/ou os átomos de azoto do anel opcionalmente substituidos por- um ou má is grupos hidroxi ; um grupo -OCOR^ em que R^ é um anel heteroofolieo de 4 a 7 membros possuindo entre 3 e 6 átomos de carbono e 0, 1 ou 2 átomos de azoto, sendo os átomos —.86 — i

de azoto e/ou o,s átomos de carbono do anel opcio-nalmente substituidos por um ou tnais grupos hidro-xi$ ou um. grupo ester de modo-, di- ou tri-fosfato ou, de » 3 um seu sal'farmacêuticamente aceitável, oaracteri-zado por* A) se fazer reagir uma base de purina de fórmula Puli em Pu representa o resíduo purina; ' 'X ‘ .

J (em què X è Ύ são como definido anteriormente) ou um seu sal# com um composto de fórmula (II):

12 . em que E e 1 são como definido anteriormente e W ou Ó' ura ester de fosfato ou um seu sal ou um radical-de purina ou pirimidina (diferente.de Pu) , para formar'um composto de fórmula, (I): - B) se fazer reagir um composto de fórmula (III) ·.

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(em que Xa.» Xa» Rla e R2a representam respectiva- 12 mente os grupos X, Y, R e 1 cómo definido ante-riormente ou uma forma precursora, por ex.. protegido, de tal grupo desde que pelo menos um de X, Y, J R e R representa uma forma precursora} com um agente que serve para converter a referida forma precursora do grupo(s) no grúpo(e) desejado5 e depois ou simultaneamente se efeetuar uma ou mais das seguintes conversões opeionaiss i) se fazer reagir um composto de fórmula (I) em que pelo menos um de R e R ê um hidroxi com um agente adequado que serve para converter o referido grupo Mdroxi num grupo alternativo representado por R e/ou R . ii) se fazer reagir um composto de fórmula (I) em 12 que R e/ou R n§© s§o Mdroxi, com um agente que serve para converter o referido grupo R, e/ou R2 num grupo Mdroxi. - 88 - Processo de acordo cota a reivindicação 1, caracterizado por se obter um composto de fórmula I em 12 1 2 que R e R ou são ambos OH, ou R é um monofosfato e R é OH, Ϊ é H ou IHg e X 4 um grupo no qual R^ e R^, que podem ser iguais ou diferentes, representam E, alquilo (Gi-Og) ou X é um grupo Z-R*5 no qual Z é 0 ou S e Έ? ê alquilo (0rC6) ou X é halogéneo ou Hidrogénio, ou um seu sal farmaceutioameate aceitável, ** Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caraoterizado por se obter um composto de fórmula (I) em que R1 e R2 são ambos ÓH, X é IH9 e X é H, OH, IH9 J· f*· d. U ou Z-R5 em que Z é 0 e Br é alquilo (G^-Gg), ou um'seu sal farmaceuticãmente aceitável. ' Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se obter 2-amino-9-(2-desoxi-2-fluoro-- β -R-ribofuranosil)-9H-purina e seus sais farmaceutieamen-te aceitáveis. - 5 -â - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se obter 2-amino-9~(2-desox±-2-fluoro-~ *3 -P-ribofuranosil)=9H-purina e seus sais farmacêutica mente aceitáveis. 89 - 6» - 4 h Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se obter 2-arnino-9- (2-desoxi-2-fluoro-- β -j}-ribofuranosil)-6-metoxi-9H-purina e seus sais farma-eeuticamente aceitáveis. - 1- Processo para a preparação de uma composição farmacêutica, caracterizado por se incorporar como ingrediente activo um composto de fórmula X quando preparado de acordo com as reivindicaçães anteriores, em associação oom um veículo farmaceuticamente aceitável. A requerente declara que o primeiro pedido desta patente foi apresentado no Reino Unido em 11 de Setembro de 1989, sob o mímero 8920534.8. Msboa, 10 de Setembro de 1990

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