ES2234206T3 - Composicion antimocrobiana. - Google Patents
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Abstract
SE PRESENTAN UNA COMPOSICION ANTIMICROBIANA DE ACTUACION RAPIDA QUE CONTIENE ALCOHOL Y TRICLOSAN Y UN PROCEDIMIENTO PARA LA UTILIZACION DE LA COMPOSICION EN LA DESINFECCION DE SUPERFICIES TALES COMO LAS MANOS.
Description
Composición antimicrobiana.
Esta solicitud está relacionada con la solicitud
de patente europea EP-A-0 930 066
(que reivindica la prioridad del documento USSN
09/009489-Referencia del agente P020733EP) y la
solicitud de patente europea
EP-A-0930 065 (que reivindica la
prioridad del documento USSN 09/009 491-Referencia
del agente P020734EP)
La presente invención se refiere a composiciones
antimicrobianas que se aplican tópicamente a un sustrato tal como
las manos.
Las composiciones antimicrobianas que contienen
alcohol se han usado en la industria sanitaria durante muchos años.
Más recientemente, se han desarrollado composiciones de alcohol y
gluconato de clorohexidina debido a su eficacia de larga duración y
rápida destrucción de los microorganismos. Sin embargo, la reciente
emergencia de microorganismos resistentes a los fármacos
antibióticos y la resistencia múltiple a una serie de otros
antibióticos restringió el uso de productos tópicos que contienen
antibióticos. El personal hospitalario está buscando productos
multifuncionales que satisfagan sus necesidades en lo que se refiere
a seguridad y resultados contra estos organismos emergentes. También
sería muy deseable ser capaz de proporcionar esta composición
antimicrobiana en una forma farmacéutica conveniente para el entorno
hospitalario.
Un intento de resolver este problema es el uso de
composiciones antimicrobianas múltiples tal como se describe en la
patente de Estados Unidos 5.403.864. Esta patente describe una
solución de base alcohólica que contiene los compuestos
antimicrobianos triclosan y cloroxilenol.
Además de los entornos hospitalarios y de
atención sanitaria, entre los consumidores está aumentando el
conocimiento con respecto a los compuestos antimicrobianos y son
también necesarias composiciones seguras, suaves y eficaces para el
hogar. Preferiblemente, las composiciones antimicrobianas resolverán
estos problemas a la vez que no desequen o preferiblemente que
proporcionen humedad que reduzca los niveles de irritación asociados
a las actuales composiciones antimicrobianas.
En consecuencia, sigue existiendo el deseo de una
composición antimicrobiana que sea eficaz siendo a la vez no
irritante para los usuarios.
Una realización de la presente invención
proporciona una composición antimicrobiana que comprende:
a) un antimicrobiano que se selecciona del grupo
que consiste en más del 30% en volumen de alcohol y una cantidad
eficaz de triclosan; y
b) una cantidad eficaz de fenoxietanol, cloruro
de benzalconio o cloruro de bencetonio, y
c) cloruro de cocofosfatidildiamonio.
Además, la composición antimicrobiana
opcionalmente contiene también una cantidad eficaz de PHOSPHOLIPID
PTC.
Todavía en otra realización de la presente
invención, la composición antimicrobiana también demostró una
actividad bactericida sorprendente contra Staphylococcus
aureus (MRSA). La presente invención también demostró una
actividad bactericida excelente contra Serratia marcescens
ATCC 14756 que ha demostrado una susceptibilidad débil a las
formulaciones con base de triclosan.
El contenido en alcohol de la presente invención
es superior al 30 por ciento en volumen, típicamente del 55 a
aproximadamente el 90 por ciento en volumen, preferiblemente del 60
al 85 y lo más preferiblemente del 60 al 70% en volumen de la
composición. Los alcoholes útiles en la presente invención incluyen,
alcohol etílico, alcohol iso-propílico, alcohol
n-propílico y sus combinaciones. El alcohol etílico puede
usarse como alcohol único en la invención o, en otra realización, el
contenido en alcohol en la invención proporciona alcohol etílico
desde aproximadamente 40 a 70% en volumen, alcohol
iso-propílico desde aproximadamente 5 a 25% en volumen y
alcohol n-propílico desde aproximadamente 5 a 25% en
volumen.
Triclosan se emplea desde aproximadamente 0,1 a
0,5, preferiblemente de aproximadamente 0,2 a 0,4 en peso.
La presente invención preferiblemente contiene
una mezcla de una cantidad eficaz de antimicrobiano que se
selecciona del grupo que consiste en más del 30% en volumen de
alcohol y triclosan, alcohol fenoxietílico, PHOSPHOLIPID CMD,
cloruro de benzalconio y preferiblemente GERMALL PLUS y GERMABEN II.
El fenoxietanol se usa desde aproximadamente 0,25 a 5,0 en peso,
preferiblemente de aproximadamente 0,3 a 0,7. PHOSPHOLIPID CMD se
usa desde aproximadamente 0,1 a 1,0, preferiblemente de
aproximadamente 0,03 a 0,7, lo más preferiblemente 0,5 por ciento en
peso. Cloruro de bencetonio o preferiblemente cloruro de benzalconio
se usa desde aproximadamente 0,02 a 1,0, preferiblemente de
aproximadamente 0,08 a 0,5, lo más preferiblemente de 0,1 a 0,2 por
ciento en peso.
Se ha encontrado que otras composiciones
antimicrobianas son particularmente eficaces para mejorar la
eficacia de la invención. Estas composiciones incluyen triclosan,
PHOSPHOLIPID PTC, GERMALL PLUS y GERMABEN II.
La cantidad de GERMALL PLUS y GERMABEN II,
incluidos de forma independiente en la invención varía desde 0,05 a
0,5, siendo preferido 0,1 por ciento en peso. En la presente
invención, se ha encontrado que el uso de GERMALL PLUS y GERMABEN II
juntos es altamente eficaz. La relación entre los dos materiales
cuando se emplean juntos es desde aproximadamente 0,1:1 a 1:0,1, y
lo más preferiblemente una relación en peso de 1:1.
Además de las composiciones antimicrobianas que
se citan anteriormente, pueden emplearse otros antimicrobianos con
la presente invención que incluyen nisina,
bis-guanidas, gluconato de clorohexidina,
digluconato de clorohexidina, diacetato de clorohexidina,
diclorhidrato de clorohexidina, tricloban, hidroximetilglicinato
sódico, ácido octanoilcolagénico, cloruro de cetilpiridio, fenol,
yodo, paraclorometaxilenol (PCMX), compuestos de amonio cuaternario
poliméricos, sus combinaciones y similares. Las composiciones
antimicrobianas se añaden típicamente con un nivel de 0,1 a 4,0 por
ciento en peso.
Otros ingredientes preferidos empleados en la
invención incluyen PHOSPOLIPID PTC, que se emplea desde 0,01 a 1,0,
preferiblemente de 0,02 a 0,08 y lo más preferiblemente 0,05 por
ciento en peso. El aceite del árbol del té australiano y el aceite
de caña de limón se usan en una relación de 1:1 desde 0,5 a 10,0,
preferiblemente desde 1,0 a 7,0 y lo más preferiblemente 5,0 por
ciento en peso.
Una realización muy preferida de la invención
proporciona más del 40% en peso de alcohol, una cantidad eficaz de
fenoxietanol, una cantidad eficaz de cloruro de benzalconio, una
cantidad eficaz de GERMALL PLUS, una cantidad eficaz de GERMABEN II
y una cantidad eficaz de PHOSPOLIPID CMD. Además, la composición
antimicrobiana opcionalmente contiene también una cantidad eficaz de
PHOSPOLIPID PTC.
En otra realización preferida, la mezcla
antimicrobiana comprende más del 40% en peso de alcohol, una
cantidad eficaz de fenoxietanol, una cantidad eficaz de cloruro de
benzalconio, una cantidad eficaz de triclosan, una cantidad eficaz
de GERMALL PLUS, una cantidad eficaz de y GERMABEN II y una cantidad
eficaz de PHOSPOLIPID CDM.
Todavía en otra realización preferida de la
invención, la mezcla antimicrobiana contiene más de aproximadamente
40% en peso de alcohol, una cantidad eficaz de fenoxietanol, una
cantidad eficaz de cloruro de benzalconio, una cantidad eficaz de
cloruro de bencetonio, una cantidad eficaz de triclosan, una
cantidad eficaz de GERMALL PLUS, una cantidad eficaz de GERMABEN II
y una cantidad eficaz de PHOSPOLIPID CDM.
En otra realización muy preferida de la
invención, la mezcla antimicrobiana contiene más de aproximadamente
40% en peso de una mezcla de alcoholes, tales como alcohol etílico,
alcohol iso-propílico y alcohol n-propílico, una
mezcla de dos aceites esenciales, tales como aceite del árbol del té
australiano y aceite de caña de limón, una cantidad eficaz de
fenoxietanol, una cantidad eficaz de cloruro de benzalconio, una
cantidad eficaz de triclosan, una cantidad eficaz de GERMALL PLUS,
una cantidad eficaz de GERMABEN II y una cantidad eficaz de
PHOSPOLIPID CDM. Además, la composición antimicrobiana opcionalmente
contiene también una cantidad eficaz de linoleato de vitamina E.
Se ha encontrado que las composiciones
antimicrobianas de la presente invención poseen una actividad
inmediata y persistente con el tiempo. Las composiciones de la
presente invención también se comparan favorablemente con las
composiciones antimicrobianas que contienen niveles elevados de
gluconato de clorohexidina o productos comerciales tales como
HIBISTAT e HIBICLENS, disponibles en ZENECA Pharmaceuticals, que se
están usando habitualmente como jabones de desinfección quirúrgicos,
los desinfectantes de manos y en la preparación preoperatoria de los
pacientes.
Es conocido en la técnica que las formulaciones
con gluconato de clorohexidina muestran una gran actividad de
acumulación entre los lavados 1 y 7. Este aumento de la actividad se
cree que está provocado por su estructura polar y su capacidad de
unirse a la piel. Después de diez lavados y de neutralizar con un
inactivador adecuado, la actividad de gluconato de clorohexidina
decae significativamente (aproximadamente 30-50%) en
el lavado 10, cuando se realizan análisis de acuerdo con un
protocolo de lavado de manos de personal sanitario.
Sorprendentemente, las composiciones de la presente invención
proporcionan una actividad antimicrobiana más persistente que estos
otros agentes antimicrobianos notorios.
Otra ventaja de la presente invención es la
actividad residual que proporciona el producto antimicrobiano. La
presente invención proporciona protección eficaz contra un amplio
espectro de organismos, que incluye los gram positivos, gram
negativos, levaduras y hongos, tanto en el momento de la aplicación
inicial como también después de un periodo de tiempo dilatado. Los
presentes inventores han descubierto que, al contrario que otras
composiciones antimicrobianas que son inicialmente eficaces en la
destrucción de microbios pero que rápidamente pierden su eficacia en
aproximadamente una hora, sorprendentemente, la presente invención
es eficaz en la prevención de la aparición de microbios durante
periodos de tiempo dilatados, tales como superiores a dos horas,
preferiblemente durante tres o cuatro horas o más.
Es preferible incluir otros ingredientes en la
formulación para potenciar la eficacia de la composición
antimicrobiana. Incluidos en estos están los aceites esenciales para
mejorar la velocidad a la que trabaja la composición antimicrobiana
así como su actividad residual. Los aceites esenciales adecuados
incluyen, aceite del árbol del té australiano, aceite de caña de
limón, aceite de tomillo, aceite de lavanda y aceite de clavo y sus
combinaciones. Los aceites esenciales se usan para aumentar la
capacidad emoliente, la hidratación, las propiedades emolientes y de
penetración de la presente invención. Típicamente estos aceites se
incorporan en una cantidad de 1 a 10 por ciento en peso y, lo más
preferiblemente, a 5 por ciento en peso basándose en la composición
total.
La presente invención también emplea agentes
espesantes de ácido acrílico que se reticulan con un agente
polifuncional insaturado tal como polialiléter o sacarosa. Estos
polímeros funcionarizados de ácido acrílico, que comúnmente se
conocen como carbómeros, se describen en las patentes de Estados
Unidos nº 2.798.053 y 3.133.865.
La selección del carbómero apropiado proporciona
a la formulación antimicrobiana los valores de viscosidad deseada.
Para que tenga el tacto deseado, la viscosidad de la formulación
debe tener un valor superior a 5 PA.s (5.000 centipoises). Más
preferiblemente, las formulaciones tendrán una viscosidad desde 9
Pa.s (9,000) a 22 Pa.s (2.000) y lo más preferiblemente de 11 Pa.s
(11,000) a 20 Pa.s (20.000 centipoises) medida a 25ºC.
Se emplea un agente espesante, que es un agente
de adición formado por un polímero de ácido acrílico reticulado con
un polialiléter insaturado de sacarosa. Los polímeros se usan en una
cantidad suficiente para obtener composición en gel con viscosidad
en el intervalo deseado.
Un número de estos polímeros, que se conocen en
la técnica como carbómeros son comercializados por B.F. Goodrich,
(Cleveland, Ohio) tales como CARBOPOL® 934, 940 y 941; y por
R.I.T.A. (Cristal Lake, IL) como ACRITAMER® 934, 940 y 941
respectivamente. Típicamente los compuestos de carbómeros se usan
desde 0,2 a 2,0 por ciento en peso y se emplean preferiblemente en
una cantidad de 0,4 a 0,7 en peso de la composición antimicrobiana
total.
Un polímero carbómero preferido, entre varios
carbómeros preferidos es R.I.T.A ACRITAMER® 505E, un polímero de
poli(carboxivinilo) reticulado con éteres de
pentaeritritol.
Se prefiere ACRITAMER® 505E como agente
gelificante o potenciador de la viscosidad porque proporciona un gel
transparente o traslúcido en la presente invención.
El carbómero más preferido es ULTREZ® 10
(disponible en BF Goodrich) un copolímero modificado que tiene una
porción principal de un monómero de ácido carboxílico insaturado
monoolefínicamente o su anhídrido de 3 a 6 átomos de carbono y una
porción menor de un acrilato de cadena larga o monómero de éster de
metacrilato. El polímero es predominantemente ácido acrílico y una
cantidad menor de un acrilato de cadena larga. El polímero se
describe en la patente de Estados Unidos nº 5.004.598.
Otro grupo de ingredientes particularmente
preferido en la presente invención son modificadores de la
pegajosidad tales como ceras de silicona, estearoxitrimetilsilano,
ciclometicona, lactato de cetilo y lactatos de alquilo (típicamente
con longitudes de C_{12}-C_{15}). También son
útiles hidratantes tales como glicerina, agua, lípidos, ceras y
similares cuando se emplean en la presente invención. También se
emplean otros disolventes, tales como propilenglicol, para
proporcionar una formulación más estable.
Otros ingredientes que pueden añadirse a las
composiciones incluyen fragancias, emolientes, ajustadores del pH,
modificadores de la viscosidad tales como polímeros acrílicos,
gomas, gomas de xantán y similares; potenciadores transdérmicos,
tensioactivos, tintes, colorantes y similares. Estos ingredientes
son notorios en la técnica y se describen, por ejemplo en las
patentes de Estados Unidos nº 5.403.864 y 5.403.587. El resto de la
presente formulación está formado por agua, preferiblemente agua
desionizada. El agua típicamente representa desde 10 a
aproximadamente 40% en peso de la composición antimicrobiana.
La siguiente formulación posee propiedades
antimicrobianas muy eficaces.
1. Alcohol etílico (40-70%),
alcohol isopropílico (20-25%), alcohol
n-propílico (5-10%).
2. Cloruro de
diisobutilfenoxietoxietildimetilbencilamonio
(0,05-0,5%), comúnmente conocido como cloruro de
bencetonio.
3. Triclosan, comúnmente conocido como
2,4,4'-tricloro-2-hidroxidifeniléter
(0,2-0,5%).
4.
N,N-Bis(Hidroximetil)urea
(0,08-0,5%), p-hidroxibenzoato
metílico (0,009-0,5%), p-hidroxibenzoato
propílico (0,0025-0,5%),
1,2-propanodiol (0,050-0,056%).
5. Cloruro de
cocofosfatidil-PG-diamonio
(0,05-0,5%).
6. DL- y L-Ofloxacina
(0,01-0,5%).
7. Aceite del árbol del té australiano
(1,0-5,0%).
8. Aceite de caña de limón
(1,0-0,5%).
9. Aceite de tomillo
(1,0-0,5%).
10. Aceite de lavanda
(1,0-0,5%).
11. Aceite de clavo
(1,0-0,5%).
Las composiciones antimicrobianas de la presente
invención son eficaces en el control de microorganismos cuando se
aplica una cantidad eficaz de la composición a un sustrato o
localización, tal como las manos, las zonas de acné o la zona de
inyección para catéteres, etc. La cantidad aplicada para ser eficaz
depende de factores ambientales tales como la duración de la
aplicación, la cantidad de contacto de la composición antimicrobiana
y el sustrato, así como de la temperatura y la velocidad de
evaporación. Los expertos en esta técnica fácilmente serán capaces
de determinar el nivel eficaz necesario para controlar los
microorganismos. Típicamente, se aplican de aproximadamente 0,5 a
aproximadamente 10 mililitros, preferiblemente de 1,0 a 8 y, lo más
preferiblemente, de 2,5 a 5 mililitros de la composición
antimicrobiana. Se ha encontrado que esta cantidad de la composición
antimicrobiana es eficaz, para proporcionar una reducción en
log_{10} de 2 o más de la población microbiana.
La presente invención puede prepararse también en
forma de emulsión usando técnicas notorias en la técnica, véase por
ejemplo la patente de Estados Unidos nº 5.308.890. Los ingredientes
activos, excipientes, etc., pueden emulsionarse con un tensioactivo
aniónico, catiónico o no iónico o con un agente dispersante, o
mezclas compatibles de los mismos, tales como una mezcla de un
tensioactivo aniónico o uno no iónico usando, por ejemplo, de 0,05%
a 5% en peso de un agente tensioactivo o dispersante en base al peso
de los ingredientes a emulsionar. Agentes de dispersión catiónica
adecuados incluyen cloruro de laurilpiridinio, acetato de
cetildimetilamina y cloruro de alquildimetilbencilamonio, en el que
el grupo alquilo tiene de 8 a 18 átomos de carbono. Agentes
dispersantes aniónicos adecuados incluyen, por ejemplo, sulfatos de
alcoholes grasos alcalinos, tales como laurilsulfato sódico y
similares; sulfonatos de arilalquilo y similares; sulfosuccinatos
alquílicos alcalinos, tales como octilsulfosuccinato sódico y
similares; y sulfatos de arilalquilpolietoxietanol alcalinos, tales
como octilfenoxipolietoxietilsulfato sódico, que tiene de 1 a 5
unidades de oxietileno y similares. Agentes dispersantes no iónicos
adecuados incluyen, por ejemplo alquilfenoxipolietoxietanoles que
tienen grupos alquilo de 7 a 18 átomos de carbono y de 6 a 60
unidades de oxietileno tales como, por ejemplo
heptilfenoxipolietoxietanoles, derivados de óxido de etileno de
alcoholes de cadena larga tales como ácido mirístico, ácido
palmítico y similares o mezclas de ácidos tales como las que se
encuentran en los aceites que contienen de 6 a 60 unidades de
oxietileno; condensados de óxido de etileno de alcoholes de cadena
larga tales como alcoholes de octilo, decilo, laurilo o cetilo que
contienen de 6 a 60 unidades de oxietileno; condensados de óxido de
etileno de cadena larga o aminas de cadena ramificada tales como
dodecilamina, hexadecilamina y octadecilamina, que contienen de 6 a
60 unidades de oxietileno; y copolímeros de bloque de secciones de
óxido de etileno combinadas con una o más secciones de óxido de
propileno hidrófobas. Pueden usarse polímeros de peso molecular
elevado, tales como hidroxietilcelulosa, metilcelulosa, ácido
poliacrílico, alcohol polivinílico y similares como estabilizantes
de la emulsión y coloides
protectores.
protectores.
Los siguientes ejemplos son ilustrativos de la
presente invención y no se pretende que limiten la invención a las
siguientes composiciones. A no ser que se exprese lo contrario,
todos los porcentajes que se presentan en esta solicitud de patente
se entiende que son porcentajes en peso.
En esta solicitud de patente se usan las
siguientes composiciones:
APM 95 es una mezcla de
2-amino-2-metil-1-propanol,
2-(metilamino)-2-metil-1-propanol
y agua en una relación de aproximadamente 90:5:5, disponible
comercialmente en Angus Chemical Company.
ACRITAMER® 505E, un polímero de
poli(carboxivinilo) reticulado con éteres de pentaeritritol,
R.I.T.A disponible en Cristal Lake, IL.
ESS 9090IC es una fragancia, disponible en
Givudan-Roure Corporation.
CERAPHYL 28 es principalmente lactato de cetilo,
un sólido cerúleo disponible comercialmente en ISP Van Dyk Inc.
CERAPHYL 41 es una mezcla de lactatos alcohólicos
de C_{12}-C_{15}, disponible en ISP Van Dyk
Inc.
Cera DOW CORNING® 580 es una mezcla de
estaroxitrimetoxisilano y alcohol estearílico.
GERMABEN II es una mezcla compuesta por
diazolidinilurea (aproximadamente 30%) metilparabén (aproximadamente
11%), propilparabén (aproximadamente 3%) y propilenglicol
(aproximadamente 56%), disponible en Sutton Laboratorios.
GERMALL PLUS es una mezcla de diazolidinilurea
(aproximadamente 99%), 3-yodopropinilbutilcarbamato
disponible en Sutton Laboratorios.
LEXOREZ 100 es un poliéster saturado reticulado
con funciones hidroxi, compuesto por glicerina, dietilenglicol,
polímero reticulado de adipato, que es un líquido hidrófobo y
viscoso a temperatura ambiente y puede dispersarse en muchos lípidos
y emolientes.
PHOSPOLIPID CDM es cloruro de cocofosfatidil
(PG)-diamonio, un fosfolípido cosintético disponible
en Mona Industries, Inc.
PHOSPOLIPID PCT es cloruro de
cocoamidopropilfosfatidil (PG)-diamonio, disponible
en Mona Industries.
SILSOFT PEDM feniletildimeticona, disponible en
Witco Corporation, Osi Specialties, Inc.
TRICLOSAN
2,4,4'-tricloro-2-hidroxidifeniléter.
ULTREZ® 10 un polímero de carbómeros, disponible en BF Goodrich,
Cleveland Ohio y descrito en la patente de Estados Unidos
5.004.598.
Se prepararon y analizaron las siguientes
formulaciones y los resultados se presentan a continuación:
Formulación 1: alcohol etílico 43,3;
alcohol isopropílico 25, alcohol n-propílico 5,0; ULTREZ 10
0,6; glicerina 1,5; LEXOREZ 100 0,25; CERAPHYL - 41 0,5; CERAPHYL -
28 0,5; triclosan 0,3; AMP a pH 6,4; ESS 9090IC 0,06; ciclometicona
(245) 2,0; dimeticona (225) 0,5; cera Dow Corning 580 0,1; SILSOFT
PEDM 1,0; agua desionizada 19,0; PHOSPOLIPID CDM 0,2; fenoxietanol
0,2.
Formulación 2: alcohol etílico 75,8;
ULTREZ 10 0,6; glicerina 1,5; LEXOREZ 100 0,25; CERAPHYL - 41 0,5;
CERAPHYL - 28 0,5; cloruro de bencetonio 0,2; AMP - 95 a pH 6,4; ESS
9090IC 0,06; ciclometicona (245) 1,0; dimeticona (225) 0,5; cera Dow
Corning 580 0,1; SILSOFT PEDM 1,0; agua desionizada 17,1;
PHOSPOLIPID CDM 0,2.
Las formulaciones antimicrobianas se evaluaron
para determinar su eficacia clínica ex vivo y los resultados
de los análisis de las composiciones se resumen en las Tablas 1, 2 y
3.
Se usó un modelo de experimentación sobre piel de
cerdo como protocolo para evaluar o seleccionar un número de
composiciones antimicrobianas de muestra. Debido a que la piel de
cerdo es similar a la piel humana en lo que se refiere a los
componentes y comportamiento de la piel, la piel de cerdo es
adecuada para simular las técnicas de lavado de manos que son
realizadas en entornos clínicos por los seres humanos. El
experimento está diseñado basándose en el experimento que se
describe en "Pig Skin as Test Substrate for Evaluating Topical
Antimicrobial Activity." J. Clin. Microbiology, Sept., 1986,
páginas 343-348.
El experimento sobre piel de cerdo consistió en:
a) una preparación de piel de cerdo; b) exposición a microbios; y c)
recuento con controles.
La piel de cerdo se lavó y se le quitaron los
pelos y después se congeló. Después se descongelaron los trozos y se
cortaron en secciones de 3 x 3 cm. La piel se montó sobre un soporte
con un epoxi con el lado de la piel expuesto. Los trozos de piel se
colocaron en placas de Petri que contenían un disco de filtro
humedecido con 1,0 ml de agua para evitar la desecación. Las pieles
se introdujeron en un frigorífico hasta la mañana siguiente.
El mismo día que se preparó la piel, se inoculó
el organismo de experimentación agar inclinado estándar y en placas
de agar estándar por duplicado. La piel de cerdo cortada se analizó
para determinar la presencia de antibióticos residuales cortando
aleatoriamente tiras (tira de biopsia de 8 mm) de la piel y
colocando la tira de piel boca abajo en placas de agar individuales
sembradas con el organismo de experimentación. Al día siguiente se
examinaron las placas para determinar si existía una zona de
inhibición alrededor de la piel de cerdo. Una zona de inhibición
indica la presencia de antibióticos residuales y no se usó la
piel.
Se prepararon suspensiones de los diversos
organismos a partir de los cultivos inclinados de la noche anterior.
Los cultivos se suspendieron con 10 ml de tampón de Butterfield
frotando ligeramente la superficie de agar con un bastoncillo de
algodón. Las suspensiones se mezclaron para proporcionar un inóculo
mezclado de aproximadamente 10^{9} UFC/ml. La valoración de los
organismos se diluyó más para proporcionar aproximadamente 10^{7}
UFC/ml. Se inocularon dos trozos de piel de cerdo con 0,05 ml de
cultivo diluido. Cada par de piel inoculada se emparejaba con una
piel sin inocular. El par de piel inoculada y no inoculada se
frotaban durante aproximadamente 15 segundos y se incubaban durante
aproximadamente 15 minutos a 30ºC con la tapa quitada para dejar que
los organismos se desecaran sobre la piel. Después de la incubación,
se añadieron 0,50 ml de material de experimentación a los trozos de
piel de cada par. La incubación se realizaba a temperatura ambiente
retirando la tapa de la placa de Petri. Un duplicado pareado de cada
conjunto se contaba imprimiendo sobre una placa de agar mientras que
el otro duplicado se contaba enjuagando.
Las impresiones se realizaban invirtiendo el
soporte de montaje y presionando la piel tratada sobre la superficie
de agar estándar con lecitina y polisorbato 80. Las impresiones se
realizaron con intervalos de tiempo especificados y después se
incubaron a aproximadamente 30ºC durante aproximadamente 24
horas.
En cada intervalo de tiempo se añadieron 0,2 ml
de caldo de neutralización de tioglicolato de leten a la superficie
del par de la piel del par. El enjuague de 10 ml que resultaba al
usar ambos trozos de piel se recogió y se usó para contar los
organismos supervivientes. Se realizaron diluciones seriadas de
alícuotas (0,5 ml) del caldo de lavado hasta la extinción en 4,5 ml
de caldo de neutralización de tioglicolato de leten. Las placas se
incubaron a 30ºC durante aproximadamente 48 horas y después se
contaron.
Los resultados se presentan a continuación:
| * Cultivo mixto con cada uno de los materiales cultivados representado de forma igual: |
| Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442. |
| Klebsella pneumoniae ATCC 11296. |
| Micrococcus luteus ATCC 7466. |
| Enterococcus faecalis ATCC 29212. |
Los expertos en la técnica apreciarán que las
composiciones con un valor de reducción en log_{10} mayor indican
una eficacia mejorada. La reducción en log_{10} es la diferencia
entre los recuentos iniciales de bacterias y el recuento recuperado
después de cada tratamiento.
Se analizaron las mismas formulaciones con el
experimento sobre piel de cerdo para determinar los resultados con
Staphylococcus aureus ATCC 33592. Los resultados, expresados
en función del tiempo expresado en minutos, se presentan en la Tabla
2 a continuación:
Los resultados de la Tabla 2 indican que se
obtuvo una actividad bactericida excelente contra Staphylococcus
aureus usando las formulaciones con alcohol
iso-propílico.
Las mismas formulaciones se analizaron usando el
protocolo del experimento sobre piel de cerdo con Serratia
marcescens ATCC 14756. Los resultados se presentan en la Tabla 3
a continuación:
La Tabla 3 indica que las formulaciones
antimicrobianas con alcohol etílico y alcohol isopropílico que
contenían aceites esenciales en particular aceite de caña de limón,
lavanda, tomillo, aceite del árbol de té australiano y aceite de
clavo proporcionaron una actividad excelente contra Serratia
marcescens ATCC 14756.
Basándose en los resultados obtenidos en el
Ejemplo 1 anterior, se prepararon tres formulaciones
(A-C) y se evaluaron para determinar su eficacia
in vivo después de un protocolo modificado de lavado de manos
de personal sanitario. Las tres formulaciones son las
siguientes:
Formulación A: alcohol etílico (92,3% en
peso) 75,8; ULTREZ 10 0,6; glicerina 0,5; LEXOREZ® 100 0,25;
CERAPHYL - 41 0,5; CERAPHYL - 28 0,5; triclosan
(2,4,4'-tricloro-2-hidroxifeniléter)
0,3; fenoxietanol 0,3; cloruro de benzalconio (solución al 50%) 0,2;
PHOSPHOLIPID CDM 0,05; GERMALL PLUS + GERMABEN II (relación en peso
de 1:1) 0,2; linoleato de vitamina E 0,05; AMP a pH 6,4; ESS 9090IC
0,06; agua desionizada 20,5.
Formulación B: la Formulación B es
sustancialmente similar a la Formulación A excepto que no se empleó
triclosan. Alcohol etílico 75,8; ULTREZ 10 0,6; glicerina 0,5;
LEXOREZ® 100 0,25; CERAPHYL - 41 0,5; CERAPHYL - 28 0,5;
fenoxietanol 0,3; cloruro de benzalconio (solución al 50%) 0,2;
PHOSPOLIPID CDM 0,05; GERMALL PLUS + GERMABEN (1:1) 0,2; linoleato
de vitamina E 0,05; AMP a pH 6,4; ESS 9090IC 0,06; agua desionizada
20,5.
Formulación C: alcohol etílico 75,8;
ULTREZ 10 0,6; glicerina 10,5; LEXOREZ 100 0,25; CERAPHYL - 41 0,5;
CERAPHYL - 28 0,5;
2,4,4'-tricloro-2-hidroxifeniléter
0,3; fenoxietanol 0,3; cloruro de bencetonio 0,1; cloruro de
benzalconio (solución al 50%) 0,1; PHOSPOLIPID CDM 0,05; GERMALL
PLUS + GERMABEN (1:1) 0,2; linoleato de vitamina E 0,05; AMP a pH
6,4; ESS 9090IC 0,06; ciclometicona (245) 2,5; dimeticona (225) 0,5;
cera Dow Corning 580 0,1; SILSOFT PEDM 0,5; agua desionizada
15,8.
Estas formulaciones se compararon con productos
de gluconato de clorohexidina disponibles en el mercado tales como
HIBISTAT e HIBICLENS, antimicrobianos disponibles en el mercado en
ICI Americans.
Las tres formulaciones del Ejemplo 1 cumplían los
requisitos de la FDA en el lavado 1 (una reducción en log_{10} de
2) y en el lavado 10 (una reducción en log_{10}de 3). Se observó
que las formulaciones A-C eran más eficaces que los
productos disponibles en el mercado. Las combinaciones de alcohol y
gluconato de clorohexidina muestran una acumulación excelente a los
10 lavados de manos, pero en el 10º lavado, cuando se usa un
neutralizador para inactivar la actividad, se observó un descenso
del valor de reducción logarítmica a partir del 7º lavado, que
variaba entre el 40 y 50%. Sorprendentemente, las tres formulaciones
de la presente invención no replicaron este descenso de la
eficacia.
Se prepararon formulaciones experimentales
adicionales en forma de emulsiones, usando las formulaciones
antimicrobianas que se describen en los Ejemplos 1 y 2 anteriores,
con modificaciones menores. En total se prepararon 8 muestras de las
cuales se evaluaron tres formulaciones de experimentación usando un
experimento bactericida in vitro contra 8 microorganismos
representativos (gram negativos, gram positivos y hongos) con cuatro
intervalos de tiempo y dos concentraciones.
Las formulaciones que se usaron en este Ejemplo
se describen a continuación:
Formulación A': agua 80,32; propilenglicol
4; miristilmiristato 1,5; ácido oleico 1,25; ácido esteárico 1,25;
estearato de glicerilo 1,25; polisorbato 61 1,2; palmitato de
isopropilo 1; dimeticona 1; estearoxitrimetilsilano 1; estearato de
sorbitán 0,8; alcohol cetílico 0,5; alcohol estearílico 0,5; cera de
abeja sintética 0,5; alcohol bencílico 0,8; Carbomer 941 1,0;
fragancia IFF 1906AD 0,2; EDTA disódico + NaOH 0,15 + 0.75;
fenoxietanol 0,4; ácido láctico 0,5; hidroximetilglicinato sódico
(activo al 50%) 0,3; GERMABEN-II 0,25, cloruro de
bencetonio 0,2; acetato de tocoferilo 0,05; linoleato de vitamina E
0,05; PHOSPOLIPID PTC + CDM (1:1) 1; triclosan 0,3;
GS-Liquorices 0,1.
Formulación B': agua 80,32; propilenglicol
4; miristilmiristato 1,5; ácido oleico 1,25; ácido esteárico 1,25;
estearato de glicerilo 1,25; polisorbato 61 1,2; palmitato de
isopropilo 1; dimeticona 1; estearoxitrimetilsilano 1; estearato de
sorbitán 0,8; alcohol cetílico 0,5; alcohol estearílico 0,5; cera de
abeja sintética 0,5; alcohol bencílico 0,3; Carbomer 941 0,8;
fragancia IFF 1906AD 0,2; EDTA disódico + NaOH 0,15 + 0.75;
fenoxietanol 0,4; ácido láctico 0,5; GERMALL PLUS 0,3;
GERMABEN-II 0,25, cloruro de benzalconio (50%) 0,2;
acetato de tocoferilo 0,05; linoleato de vitamina E 0,05;
PHOSPHOLIPID PTC + CDM (1:1) 1; triclosan 0,3.
Formulación C': agua 80,32; propilenglicol
4; miristilmiristato 1,5; ácido oleico 1,25; ácido esteárico 1,25;
estearato de glicerilo 1,25; polisorbato 61 1,2; palmitato de
isopropilo 1; dimeticona 1; estearoxitrimetilsilano 1; estearato de
sorbitán 0,8; alcohol cetílico 0,5; alcohol estearílico 0,5; cera de
abeja sintética 0,5; alcohol bencílico 0,3; Carbomer 941 0,8;
fragancia IFF 1906AD 0,2; EDTA disódico + NaOH 0,15 + 0.75;
fenoxietanol 0,4; ácido láctico 0,5; ácido octanoilcolagénico; 0,3;
GERMABEN-II 0,25, cloruro de cetilpiridinio 0,2;
acetato de tocoferilo 0,05; linoleato de vitamina E 0,05;
PHOSPHOLIPID PTC + CDM (1:1) 1; triclosan 0,3.
| \begin{minipage}{150mm} *Todos los tiempos se expresan en minutos a no ser que se indique lo contrario; seg. se entiende que son segundos.\end{minipage} |
Los datos anteriores indican la eficacia superior
que la Formulación C' tiene en la destrucción de las bacterias gram
positivas y gram negativas que se indican anteriormente.
La mezcla antimicrobiana de la presente invención
ha demostrado una actividad comparable cuando se formula en una base
no acuosa, es decir, cuando se prepara en forma de emulsión. La
Formulación C', presentó resultados prometedores en particular
contra Staphylococcus aureus (MRSA) y Serratia
marcescens (ATTC 14756). La mayoría de las composiciones
antimicrobianas que contienen triclosan tienen una actividad
limitada contra Serratia marcescens (ATTC 14756). Las
composiciones antimicrobianas de la presente invención y en
particular la Formulación C', son de aplicación potencial en
productos para cuidado de la piel, tales como geles alcohólicos,
cremas, lociones, productos de lavado, en preparaciones
preoperatorias, limpiadores, ungüentos, aplicaciones terapéuticas y
otras contra patógenos que provocan enfermedades.
Se analizó una composición de la presente
invención para determinar la irritación y sensibilización. Se
preparó la siguiente formulación:
Formulación 1: agua desionizada 27,7;
alcohol etílico 62; ULTREZ 10 0,55; glicerina 0,5; ciclometicona
1,25; cera Dow Corning 580 0,025; SILSOFT® PEDM 0,2; CERAPHYL® - 28
0,5; CERAPHYL® - 41 1,0; AMP 95 (ajustador del pH) según era
necesario; 1906 AD MOD I 0,06, fenoxietanol 0,5; cloruro de
benzalconio (activo al 50%) 0,16; cloruro de bencetonio 0,08;
PHOSPHOLIPID CDM 0,05; GERMALL PLUS 0,1; GERMABEN II 0,1.
Antes del estudio, se seleccionó a los sujetos
para asegurarse de que cumplían los criterios de
inclusión/exclusión. A cada sujeto se le proporcionó un horario de
las actividades del estudio. La fase de inducción consistía en nueve
(9) aplicaciones consecutivas del material del estudio y
subsiguientes evaluaciones de las zonas de estudio. Antes de las
aplicaciones de los parches, se marcaron las zonas con un rotulador
para la piel, por ejemplo, violeta de genciana. Se pidió a los
sujetos que se quitaran los parches aproximadamente 24 horas después
de la aplicación. Los sujetos volvieron a las instalaciones con
intervalos de 48 horas para evaluar las zonas y se volvieron a
aplicar parches idénticos. Tras la novena evaluación, se dio un
periodo de descanso de 10-14 días a los sujetos.
Después del periodo de descanso, se inició el periodo de exposición
durante la 6ª semana del estudio aplicando parches idénticos a las
zonas que previamente no se habían expuesto al estudio. Estos
parches fueron retirados por los sujetos 24 horas después y las
zonas se evaluaron después de periodos adicionales de 24 y 48 horas.
Las evaluaciones se realizaron 48 y 72 horas después de la
aplicación. Para ser considerado un caso completo, un sujeto debe
realizarse nueve (9) aplicaciones y no menos de ocho (8) lecturas
subsiguientes durante la inducción y una (1) aplicación de producto
y dos (2) lecturas durante la exposición. De los 101 sujetos que
completaron el estudio, no se encontraron indicios de
sensibilización o irritación debida a la formulación.
Se investigó la formulación empleada en el
Ejemplo 4 para determinar su capacidad de hidratación. Quince
sujetos se aplicaron la formulación a la piel seca en la cara
externa de parte baja de la pierna. La hidratación de la piel se
midió usando el hidrómetro para la superficie de la piel SKICON®.
Todos los resultados se expresan en forma de cambios porcentuales
medios a partir de la media en mediciones con el SKICON. Tal como se
usa en la presente memoria los resultados porcentuales medios se
encontraron midiendo los valores de hidratación medios en cuatro
sitios diferentes y comparando el valor medio de la hidratación de
los cuatro sitios con los valores iniciales.
Los resultados indicaron que la Formulación 1 se
comportaba de forma similar cuando se comparaba con el y era mejor
que el control sin tratar. Esto indica que la formulación no
desecaba. Fue sorprendente observar que una formulación que contenía
un nivel alto de alcohol no poseyera efectos de desecación
significativos.
La siguiente formulación de producto se preparó y
se analizó para evaluar las propiedades antimicrobianas usando
diferentes cepas microbiológicas:
agua desionizada 27,8; alcohol etílico 62,0 en
volumen; ULTREZ 10 0,55; glicerina 0,5; ciclometicona (245) 1,25;
cera Dow Corning 580 0,025; SILSOFT PEDM 0,2; CERAPHYL - 28 0,5;
CERAPHYL - 41 1,0; fenoxietanol 0,5; cloruro de benzalconio (activo
al 50%) 0,2; PHOSPHOLIPID CDM 0,05; GERMALL PLUS 0,1; GERMABEN II
0,1; 1906 AD MOD I 0,06 y ajustador del pH.
Se evaluaron las propiedades antimicrobianas de
la formulación con una concentración de 99% (p/v), usando una
exposición de quince segundos, treinta segundos y un minuto. Las
muestras se prepararon usando una alícuota de 0,1 ml de suspensión
de exposición de aproximadamente 1,0 x 10^{9} UFC/ml y se
añadieron a 9,9 ml de producto y se mezclaron cuidadosamente para
lograr una concentración de 99% (p/v). Las exposiciones de 15
segundos, 30 segundos y un minuto se cronometraron con un cronómetro
calibrado de minutos y segundos.
Se introdujo 0,1 ml de cada suspensión de
exposición en un tubo de ensayo estéril que contenía 9,9 ml de
solución de tampón de fosfato de Butterfield. Esta solución se usó
como control. Se realizaron diluciones de factor 10 con solución de
tampón de fosfato de Butterfield. Después de incubar aproximadamente
1-2 días a 35ºC, se contaron las colonias de las
placas usando un contador manual. Los valores en log_{10} se
compararon con la población inicial. Se entiende que los números que
se indican a continuación como 10+7 son 10^{7}. Los resultados son
los siguientes:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
La formulación demuestra una excelente actividad
antimicrobiana, reducción de 99% contra todos los organismos
enumerados. Los organismos anteriores incluyen un amplio espectro de
organismos, incluyendo microbios gram negativos, gram positivos y
hongos.
Se dieron instrucciones a los sujetos de que no
usaran artículos antimicrobianos y/o antisépticos, a excepción de
los artículos de experimentación. Se llenaron placas de Petri con
aproximadamente 11,5 ml de agar con caseína de soja digerida y
fundida. Se dejó solidificar el agar y se introdujo en una
incubadora a 35ºC hasta la mañana siguiente antes de la inoculación.
Las bacterias de experimentación se cultivaron en caldo de soja y
tripticasa y se diluyeron para obtener aproximadamente
200-300 unidades formadoras de colonias (UFC) por 10
microlitros. Se usó un sembrador de 10 microlitros para administrar
10 microlitros de la dilución final sobre la superficie cubierta de
cada placa de agar y se extendió usando el sembrador. Se dejaron
secar las placas en el interior de las placas de Petri durante
15-30 minutos antes de la aplicación a los brazos de
los sujetos. Antes de la aplicación a los brazos de los sujetos se
usó alcohol iso-propílico al 70% durante aproximadamente 10
segundos para reducir la posibilidad de contaminación. Un técnico
aplicó aproximadamente 2,5 ml de la solución de experimentación
sobre la superficie palmar del brazo de los sujetos. El sujeto
después extendió la solución desde la muñeca hasta el codo hasta que
desapareció el artículo de experimentación.
Después de aplicar y secar al aire, se expuso a
los sujetos a la solución antimicrobiana o inmediatamente (en los 5
minutos posteriores al tratamiento), 1 hora, 3 horas, 5 u 8 horas
después del tratamiento. Las soluciones antimicrobianas que se
usaron fueron una disponible en el mercado con un 62% en volumen de
alcohol etílico (denominada A) y una formulación usada en el Ejemplo
6 anterior (denominada B). Los resultados fueron los siguientes:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
(Continuación)
Los datos anteriores indican que la presente
invención fue muy eficaz en la destrucción de gérmenes a los 5
minutos y que también tenía una actividad residual muy eficaz
después de 3 horas para evitar el crecimiento microbiano.
Claims (10)
1. Una composición antimicrobiana que
comprende:
a) un antimicrobiano que se selecciona del grupo
que constituido por más del 30% en volumen de alcohol y una cantidad
eficaz de triclosan; y
b) una cantidad eficaz de fenoxietanol, cloruro
de benzalconio o cloruro de bencetonio; y
c) cloruro de cocofosfatidildiamonio.
2. La composición de la reivindicación 1, en la
que el fenoxietanol varía desde 0,25 a 5,0 por ciento en peso; el
cloruro de benzalconio varía desde 0,02 a 1,0 por ciento en peso; y
el cloruro de cocofosfatidildiamonio varía desde 0,01 a 1,0 por
ciento en peso.
3. La composición de la reivindicación 1 o la
reivindicación 2, en la que el compuesto antimicrobiano de la parte
a) es triclosan.
4. La composición de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3 que además contiene una cantidad eficaz de
diazolidinilurea; y
3-yodopropinilbutilcarbamato.
5. La composición de la reivindicación 4, en la
que la cantidad de diazolidinilurea; y
3-yodopropinilbutilcarbamato varía desde 0,05 a 0,5
por ciento en peso.
6. La composición de una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5 que además contiene una cantidad eficaz de
diazolidinilurea, metilparabén; propilparabén; y propilenglicol.
7. La composición de la reivindicación 6, en la
que la cantidad de diazolidinilurea, metilparabén; propilparabén; y
propilenglicol varía de 0,05 a 0,5 por ciento en peso.
8. El uso de la composición de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7 para la fabricación de un medicamento para
controlar Staphylococcus aureus (MRSA).
9. El uso de la composición de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7 para la fabricación de un medicamento para
controlar Serratia marcescens ATTC 14756.
10. Una emulsión que comprende una cantidad
eficaz de dispersante, alcohol, una cantidad eficaz de fenoxietanol,
cloruro de benzalconio y cloruro de cocofosfatidildiamonio.
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