CZ17199A3

CZ17199A3 - Antimikrobiální kompozice

Info

Publication number: CZ17199A3
Application number: CZ1999171A
Authority: CZ
Inventors: Hanuman J. Jampani; Jerry L. Newman
Original assignee: Ethicon, Inc.
Priority date: 1999-01-19
Filing date: 1999-01-19
Publication date: 2000-04-12

Abstract

Antimikrobiální kompozice, která obsahuje a) antimikrobiální činidlo zvolené ze souboru sestávajícího z více než 30 % objemových alkoholu a účinného množství triclosanu; a b) účinné množství fenoxyethanolu, benzalkoniumchloridu nebo benzethioniumchloridu; a kokofosfatidyl-dimoniumchloridu.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká antimikrobiální kompozice pro topické podávání na substrát, jako jsou ruce.

Dosavadní stav techniky

Antimikrobiálních kompozic s obsahem alkoholu se ve zdravotnictví využívá řadu let. Nedávno byly, vzhledem k dlouhodobé účinnosti a rychlému usmrcování mikroorganismů, vyvinuty kompozice obsahující alkohol a chlorhexidinglukonát. Nedávný vznik mikroorganismů resistentních vůči antibiotikům a mikroorganismů s multiresistencí vůči řadě jiných produktů pro topické podávání s obsahem antibiotik omezuje. Nemocniční personál postrádá multifukční produkty, které by splňovaly jejich požadavky, co se týče bezpečnosti a účinnosti na tyto nově se objevivší organismy. Vysoce žádoucí by rovněž bylo vyvinout antimikrobiální kompozici v dávkovači formě, která by byla účelná pro nemocniční prostředí.

Jeden z přístupů řešení tohoto problému je založen na použití několikasložkových antimikrobiálních kompozic, které jsou například popsány v US patentu 5 403 864. Předmětem tohoto patentu jsou roztoky na alkoholické bázi, které obsahují antimikrobiální sloučeniny, triclosan a chlorxylenol.

Kromě nemocničních a zdravotnických zařízení stoupá zájem o antimikrobiální sloučeniny u spotřebitelů, což vyvolává potřebu vyvinout bezpečné, nepříliš agresivní a účinné • · · « · · · · · ··« · · · «·>·· • ···· ·· · · · · ·· · • · · » · · · · · • ·· ··· · · ·· kompozice pro domácnost. Tento problém vyřeší přednostně antimikrobiální kompozice, které nebudou vysušovat nebo přednostně budou mít zvlhčovači účinek a které sníží úroveň podráždění spojeného s přítomnosti současných antimikrobiální ch kompozic.

Potřeba antimikrobiální kompozice, která by byla účinná, ale zároveň nedráždivá pro uživatele, tedy přetrvává.

Podstata vynálezu

Podle jednoho provedení je předmětem vynálezu antimikrobiální kompozice, jejíž podstata spočívá v tom, že obsahuje a) antimikrobiální činidlo zvolené z více než 30 % objemových alkoholu a účinného množství triclosanu; a b) účinné množství fenoxyethanolu, účinné množství benzalkoniumchloridu nebo benzethoniumchloridu; a účinné množství činidla Phospolipid CDM.

Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu antimikrobiální kompozice obsahující účinné množství triclosanu, Germall Plus a Germaben II. Kromě toho antimikrobiální kompozice také popřípadě obsahuje účinné množství činidla Phospolipid PTC.

Podle ještě dalšího provedení je předmětem vynálezu antimikrobiální kompozice, která také vykazuje překvapující baktericidní účinnost na Staphylococcus aureus (MRSA). Kompozice podle vynáezu také vykazuje vynikající baktericidní účinnost na Serratia marcescens ATCC 14756, o níž se prokázalo, že je málo citlivá na prostředky na bázi triclosanu.

Následuje podrobný popis vynálezu.

• ·

Φ· • · · φ · · · · · · · • · · · φ · β φ · · · φ ······· φ · · · · φ ·

Φφφ · · · · φ · · φφ · ·· ·«· ·· φφ

Obsah alkoholu v kompozici podle vynálezu je vyšší než asi 30 % objemových; obvykle činí asi 55 až asi 90, přednostně asi 60 až asi 85 a nejvýhodněji asi 60 až asi 70 % objemových. Jako příklady užitečných alkoholů pro kompozice podle vynálezu je možno uvést ethanol, isopropylalkohol, n-propanol a jejich kombinace. V kompozici podle vynálezu lze jako jediného alkoholu použít ethanolu, nebo, podle jiného provedení tohoto vynálezu, je možno použít ethanolu v množství asi 40 až asi 70 % objemových, isoproppylalkoholu v množství asi 5 až asi 25 % objemových a n-propanolu v množství asi 5 až asi 25 % objemových.

Triklosanu se používá v množství od asi 0,1 do asi 0,5, přednostně od asi 0,2 do asi 0,4 % hmotnostního.

Kompozice podle vynálezu obsahuje směs účinného množství antimikrobiálních činidel, fenoxyethylalkoholu, Phospholipid CDM, benzalkoniumchloridu a přednostně Germall Plus a Germaben II. Fenoxyethanolu se používá v množství od asi 0,25 do asi 5,0, přednostně od asi 0,3 do asi 0,7 hmotnostního, nejvýhodněji v množství asi 0,05 % hmotnostního. Benzethoniumchloridu nebo přednostně benzalkoniumchloridu se používá v množství od asi 0,02 do asi 1,0, přednostně od asi 0,08 do asi 0,5, nejvýhodněji asi 0,1 až asi 0,2 % hmotnostního.

Bylo zjištěno, že některá další antimikrobiální činidla významně zlepšují účinnost kompozice podle vynálezu. Takovými činidly jsou triclosan, Phospholipid PTC, Germall Plus a Germaben II.

Množství činidla Germall Plus a Germaben II nezávisle v kompozici podle vynálezu kolísá v rozmezí od asi 0,05 do asi 0,5 % hmotnostního a přednostně činí 0,1 % hmotnostního. 0 kompozici podle vynálezu, v níž se používá • · ·

• · · · « · · Β · · · • ······· · · ·« ·· Β činidel Germall Plus a Germaben II společně, bylo zjištěno, že je vysoce účinná. Hmotnostní poměr těchto dvou činidel, když se jich použije společně, činí asi 0,1 : 1 až asi 1 :

0,1 a nejvýhodněji je 1 : 1.

Kromě antimikrobiálních činidel uvedených výše se může v kompozici podle vynálezu použít i jiných antimikrobiálních činidel, jako nisinu, bis-guanidů, chorhexidinu, glukonátu, chlorhexidin diglukonátu, chlorhexidin diacetátu, chlorhexidin dihydrochloridu, triklobanu, hydroxymethylglycinátu sodného, oktanoylkolagenové kyseliny, cetylpyridiumchloridu, fenolu, jodu, parachlormetaxylenolu (PCMX), polymerních kvarterních amoniových sloučenin, jejich kombinací apod. Antimikrobiální činidla se obvykle přidávají v množství od asi 0,1 do asi 4,0 % hmotnostního.

Další přednostní složkou kompozice podle vynálezu je Phospolipid PTC, kterého se používá v množství od asi 0,01 do asi 1,0, přednostně od asi 0,02 do asi 0,08 % hmotnostního a nejvýhodněji v množství asi 0,05 % hmotnostního. Silice australského čajovníku Leptospermum scoparium (tea tree oil) a lemongrasové silice se používá v poměru 1 : 1 v množství od asi 0,5 do asi 10,0, přednostně od asi 1,0 do asi 7,0 % hmotnostních a nejvýhodněji v množství 5,0 % hmotnostního.

V jednom zvláště výhodném provedení kompozice podle vynálezu obsahuje více než 40 % hmotnostních alkoholu, účinné množství fenoxyethanolu, účinné množství benzalkoniumchloridu, účinné množství činidla Germall Plus, účinné množství činidla Germaben-II a účinné množství činidla Phospolipid CDM. Kromě toho antimikrobiální kompozice popřípadě také obsahuje účinné množství činidla Phospolipid PTC.

• · • · · • · 999 ♦ f

V jiném přednostním provedení antimikrobiální směs obsahuje více než asi 40 % hmotnostních alkoholu, účinné množství fenoxyethanolu, účinné množství benzalkoniumchloridu, účinné množství triclosanu, účinné množství činidla Germall Plus, účinné množství činidla Germaben-II a účinné množství činidla Phospolipid CDM.

V dalším přednostním provedení antimikrobiální směs podle vynálezu obsahuje více než asi 40 % hmotnostních alkoholu, účinné množství fenoxyethanolu, účinné množství benzalkoniumchloridu, účinné množství benzethoniumchloridu, účinné množství triclosanu, účinné množství činidla Germall Plus, účinné množství činidla Germaben-II a účinné množství činidla Phospolipid CDM.

Podle jiného zvláště přednostního provedení vynálezu antimikrobiální směs obsahuje více než 40 % hmotnostních směsi alkoholů, jako ethanolu, isopropylalkoholu a n-propanolu, směs dvou silic, jako silice australského čajovníku a lemongrasové silice, účinné množství fenoxyethanolu, účinné množství benzalkoniumchloridu, účinné množství triclosanu, účinné množství činidla Germall Plus, účinné množství činidla Germaben-II a účinné množství činidla Phospolipid CDM. Kromě toho, antimikrobiální kompozice také popřípadě obsahuje účinné množství vitamin E linoleátu.

Bylo zjištěno, že antimikrobiální kompozice podle vynálezu vykazují okamžitou a dlouhodobě přetrvávající účinnost. Ze srovnání s antimikrobiálními kompozicemi, které obsahují vysoké hladiny chlorhexidin glukonátu nebo produktů dostupných na trhu, jako jsou Hibistat a Hibiclens od firmy Zeneca Pharmaceuticals, jichž se obvykle používá jako předoperačních desinfekčních omývacích prostředků, desinfekčních «· · · ♦ * · · « · « · · · 9 9

9999999 9

9 9 9 9

99

9 9

9 9 9

9 99 prostředků na ruce a prostředků pro předoperační přípravu pacientů, vycházejí kompozice podle vynálezu lépe.

Z dosavadního stavu techniky je známo, že prostředky obsahující chlorhexicin glukonát vykazují velký vzestup účinnosti mezi l. až 7. mytím. Má se za to, že k tomuto zvýšení účinnosti dochází vlivem jeho polární struktury a schopnosti navázat se na kůži. Po 10 mytích a neutralizaci za použití vhodného inaktivátoru se účinnost chlorhexicinglukonátu výrazně snižuje (asi 30 až 50 %) u 10. mytí podle zkoušky provedené v souladu s protokolem Health Care Personel Hand Wash. Kompozice podle vynálezu překvapivě vykazují delší persistenci antimikrobiální účinnosti než jiné prostředky dobře známé z dosavadního stavu techniky.

Další výhodou kompozice podle vynálezu je reziduální účinnost. Kompozice podle vynálezu poskytuje účinnou ochranu před širokým spektrem organismů, včetně gram pozitivních organismů, gram negativních orgamismů, kvasinek a hub, jak na začátku aplikace, tak během prodlouženého období po ní. Na rozdíl od jiných antimikrobiálních kompozic, které zpočátku účinně zabíjejí mikroby, ale rychle ztrácejí svou účinnost v průběhu asi 1 hodiny, kompozice podle tohoto vynálezu s překvapením zabraňují výskytu mikrobů po prodlouženou dobu, jako například déle než 2 hodiny, přednostně po dobu asi 3 nebo 4 hodiny nebo ještě déle.

Pro zvýšení účinnosti antimikrobiální kompozice podle vynálezu se do ní přednostně přidávají ještě další přísady. Jako takové přísady je možno uvést silice pro zlepšení rychlosti působení a pro zvýšení reziduální účinnosti. Jako vhodné silice je možno uvést australský tea tree oil, lemongrasovou silici, thymiánovou silici, levandulovou silici, hřebíčkovou silici a jejich kombinace. Silic se • 9 • 99 ·· 9 99 • 99 < · * · 9*99

9999 9 9 9 «999 *99999« 9 9 «9 99 9 • 9 9 9*9 «999

9 * *9 «:« 9 « 9 « « používá za účelem posílení zvláčňujících, zvlhčovačích a penetračních vlastností kompozice podle vynálezu. Obvykle jsou tyto oleje přítomny v rozmezí od asi 1 do asi 10 % hmotnostních, nejvýhodněji v množství asi 5 % hmotnostních, vztaženo na hmotnost celé kompozice.

V kompozicích podle vynálezu také mohou být přítomna zahuštovadla na bázi kyseliny akrylové zesilované nenasyceným polyfunkčním činidlem, jako polyallyletherem sacharosy. Tyto funkcionalizované polymery kyseliny akrylové známé pod souhrnným názvem karbomery jsou popsány v US patentech č. 2 798 053 a 3 133 865, které jsou zde citovány náhradou na přenesení celého jejich obsahu do tohoto textu.

Zvolením vhodného karbomeru se získá antimikrobiální kompozice s požadovanou viskozitou. Za účelem dosažení žádoucího pocitu musí mít kompozice viskozitu vyšší než asi 5000 mPa.s. Ve výhodnějším provedení budou mít kompozice viskozitu od asi 9000 do asi 22 000 a nejvýhodněji od asi 11 000 do asi 20 000 mPa.s, měřeno při teplotě 25°C.

Jako přídavné látky se používá zahuštovadla skládajícího se z polymeru akrylové kyseliny zesilovaného nenasyceným polyallyletherem sacharosy. Polymerů se používá v množství dostatečném pro získání gelové kompozice s viskozitou v požadovaném rozmezí.

V tomto oboru je známa řada takových polymerů, jako jsou karbomery dostupné na trhu od firmy B. F. Goodrich (Cleveland, Ohio, USA), jako Carbopol^^R^ 934, 940 a 941; nebo od firmy R.I.T.A. (Crystal Lake, IL, USA), jako Acritamer934, 940 a 941. Karbomerových sloučenin se obvykle používá v množství asi 0,2 až asi 2,0 % hmotnostního, přednostně od asi 0,4 do asi 0,7 % hmotnostního, vztaženo na celkovou hmotnost antimikrobiální kompozice.

• 4 * 44 44 • 4 * 4 4 · · · • 4 4 «444 • 4 »44 44 4 • 4 · 4*44

444 «4 44

Z mnoha přednostních karbomerů je přednostním karbomerovým polymerem R.I.T.A. Akritamer^^R^ 505E, což je polyvinylkarboxylový polymer zesilovaný ethery pentaerythritolu. Acritamer(^R) 505 E je přednostním gelotvorným činidlem nebo činidlem zvyšujícím viskozitu, protože se za jeho použití získá kompozice podle vynálezu ve formě průhledného nebo průsvitného gelu.

Karbomerem, jemuž se dává největší přednost je Ultrez(^R) 10 (dostupný od firmy BF Goodrich), modifikovaný kopolymer, jehož hlavní část tvoří monomerní monoolefinicky nenasycená karboxylová kyselina nebo její anhydrid se 3 až 6 atomy uhlíku a menší část tvoří monomer esteru kyseliny akrylové nebo methakrylové s dlouhým řetězcem. Polymer převážně tvoří akrylová kyselina a menší množství tvoří monomerní akrylát s dlouhým řetězcem. Tento polymer je popsán v US patentu č. 5 004 598, který je zde citován náhradou za přenesení celého jeho obsahu do tohoto textu.

Jinou přednostní skupinu složek kompozice podle vynálezu tvoří modifikátory lepivosti, jako jsou silikonové vosky, stearoxytrimethylsilan, cyklomethikon, cetyllaktát a alkyllaktáty (obvykle s 12 až 15 atomy uhlíku). V kompozici podle vynálezu může být rovněž užitečné použít zvlhčovadel, jako glycerolu, vody, lipidů, vosků apod. Za účelem získání stabilnější kompozice lze také použít jiných rozpouštědel, jako propylenglykolu.

Jako příklady jiných složek, které lze přidávat do kompozice podle vynálezu, je možno uvést vonné látky, emolienty, látky pro nastavení pH, modifikátory viskozity, jako polymery akrylové kyseliny, přírodní pryskyřice, xanthanovou pryskyřici apod.; enhancery transdermální absorpce, povrchově aktivní látky, barvicí činidla apod. Tyto složky jsou v daném oboru dobře známy a jsou popsány například v US ·· · 9 99 99

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 • 9 9999 9 9 9 » 99 99 9 *·· « * » « · · « »· · 9 9 t*t 9 9 9 9 patentech č. 5 403 864 a 5 403 587. Zbytek kompozice podle vynálezu tvoří voda, přednostně deionizovaná voda. Voda obvykle tvoří 10 až asi 40 % hmotnostních antimikrobiální kompozice.

Zvláště vysoké antibakteriální vlastnosti vykazuje následující kompozice:

1. ethanol (40 až 70 %), isopropylalkohol (20 až 25 %), n-propanol (5 až 10 %),

2. diisobutylfenoxyethoxyethyldimethylbenzylamonium chlorid (0,05 až 0,5 %), který je znám jako benzethoniumchlorid,

3. triclosan, tj. 2,4,4'-trichlor-2-hydroxydifenylether (0,2 až 0,5 %),

4. N,N-bis(hydroxymethyl)močovina (0,08 až 0,5 %), methyl-p-hydroxybenzoát (0,009 až 0,5 %), propyl-p-hydroxybenzoát (0,0025 až 0,5 %), 1,2-propandiol (0,050 až 0,056 %),

5. Kokofosfotidyl PG-dimonium chlorid (0,05 až

0,5 %),

6. DL- a L-ofloxacin (0,01 až 0,5 %),

7. australský tea tree oil (1,0 až 5,0 %),

8. lemongrasová silice (1,0 - 5,0 %),

9. tymiánová silice (1,0 až 5,0 %),

10. levandulová silice (1,0 až 5,0 %),

11. hřebíčková silice (1,0 až 5,0 %).

Φ 99 ··

9 9 ♦ ·

9 φ · 9

9 9 9 9 9

999 99 99

Antimikrobiální kompozice podle vynálezu je účinná při potlačování mikroorganismů, je-li účinné množství této kompozice topicky podáno na substrát nebo místo, jako na ruce, místa postižená akné nebo místa pro zavedení katétru apod. Podané účinné množství závisí na takových okolnostech, jako je délka aplikace, rozsah kontaktu antimikrobiální kompozice a substrátu, jakož i teplota a rychlost odpařování. Odborník v tomto oboru bude snadno schopen stanovit účinné množství, které je nezbytné pro potlačení mikroorganismů. Toto množství je obvykle od asi 0,5 do asi 10 ml, přednostně od asi 1,0 do asi 8 ml a nejvýhodněji od asi 2,5 do asi 5 ml podané antimikrobiální kompozice. Množství antimikrobiální kompozice, které je považováno za účinné, umožní logaritmické snížení (log_1Q) populace mikroorganismů 2 nebo větší.

Kompozici podle vynálezu lze rovněž za použití o sobě známých postupů připravit ve formě emulze, viz například US patent č. 5 308 890. Účinné složky, excipienty atd. je možno emulgovat pomocí aniontových, kationtových nebo neiontových povrchově aktivních látek nebo dispergačních činidel nebo směsí takových vzájemně kompatibilních látek, jako jsou směsi aniontových neb neiontových povrchově aktivních látek, například za použití asi 0,05 až asi 5 % hmotnostních povrchově aktivní látky nebo dispergačního činidla, vztaženo na hmotnost složek, které mají být emulgovány. Jako vhodná kationtová dispergační činidla lze uvést laurylpiridiniumchlorid, cetyldimethylaminacetát a alkyldimethylbenzylamoniumchlorid s 8 až 18 atomy uhlíku v alkylové části. Jako vhodná aniontová dispergační činidla je možno uvést sulfáty mastných alkoholů s alkalickými kovy, jako je laurylsulfát sodný apod.; arylalkylsulfonáty apod.; soli alkylsulfosukcinátů s alkalickými kovy, jako je oktylsulfosukcinát sodný apod.; arylalkylpolyethoxyethanolsulfáty nebo sulfonáty alkalických kovů, jako je oktylfenoxypolyethoxyethylsulfát sodný s 1 až 5 oxyethylenovými jednotkami

9 * ♦ * 99 9 · • 9 9 9-999 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 ···«··· 9 · 9 9 9 9 9 • 9 · 9 9 9 9 9 9 9 * ·· ··· Μ ·· apod. Jako vhodná neiontová dispergační činidla je možno uvést například alkylfenoxypolyethoxyethanol s asi 7 až 18 atomy uhlíku v alkylové části a asi 6 až asi 60 oxyethylenovými jednotkami, jako například heptylfenoxypolyethoxyethanoly, ethylenoxidové deriváty karboxylových kyselin s dlouhým řetězcem, jako je kyselina laurová, kyselina myristová, kyselina palmitová, kyselina olejová apod., nebo směsi kyselin, jako jsou kyseliny nacházející se v tálovém oleji obsahující asi 6 až 60 oxyethylenových jednotek; ethylenoxidové kondenzáty alkoholů s dlouhým řetězcem, jako je oktyl-, decyl-, lauryl- nebo cetylalkohol obsahující asi 6 až 60 oxyethylenových jednotek; ethylenoxidové kondenzáty aminů s dlouhým nebo rozvětveným řetězcem, jako je dodecylamin, hexadecylamin a oktadecylamin, obsahující od asi 6 do asi 60 oxyethylenových jednotek; a blokové kopolymery ethylenoxidových segmentů s alespoň jedním hydrofobním propylenoxidovým segmentem. Jako stabilizátorů emulze a ochranných koloidů je možno použít vysokomolekulární polymery, jako hydroxyethylcelulosu, methylcelulosu, polyakrylovou kyselinu, polyvinylalkohol apod.

Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují. Procentické údaje uváděné v těchto příkladech provedení jsou procenty hmotnostními, pokud není uvedeno jinak. Používá se následujících látek:

AMP 95, což je směs 2-amino-2-methyl-l-propanolu, 2-(methylamino)-2-methyl-l-propanolu a vody v poměru asi 90 : 5 : 5 dostupná na trhu od firmy Angus Chemical Company

Acritamer^R) 505E, což je poylvinylkarboxylový polymer zesítovaný ethery pentaerythritolu, dostupný od firmy R.I.T.A, Crystal Lake, IL, USA • · ♦ • · ·

Β · » * • · ΒΒΒΒ • 9 · • · 99 9

99

9 9 9

99

ESS 9090IC, což je vonná přísada, dostupná od firmy Givudan-Roure Corporation

Ceraphyl 28, což je převážně cetyllaktát, voskovitá pevná látka dostupná na trhu od ISP Van Dyk lne.

Ceraphyl 41, což je směs laktátů alkoholů s 12 až 15 atomy uhlíku dostupná na trhu od ISP Van Dyk lne.

Dow Corning(^R) 580 wax, což je směs stearoxytrimethoxysilanu a stearylalkoholu.

Germaben II, což je směs sestávající z diazolidinylmočoviny (asi 30 %), methylparabenu (asi 11 %), propylparabenu (asi 3 %) a propylenglykolu (asi 56 %), dostupná od firmy Sutton Laboratories

Germall Plus, což je směs diazolidinylmočoviny (asi 99 %) a 3-jodpropinylbutylkarbamátu, dostupná od firmy Sutton Laboratories

Lexorez 100, což je nasycený zesilovaný hydroxyfunkční polyester, která je reakčním produktem glycerolu, diethylenglykololu a kyseliny adipové, který je při teplotě místnosti viskosní hydrofobní kapalinou a je dispergovatelný v mnoha tucích a emolientech

Phospolipid CDM, což je kokofosfatidyl (PG)-dimoniumchlorid, kosyntetický fosfolipid, dostupný od firmy Mona Industries lne.

Phospolipid PTC, což je kokamidopropylfosfatidyl PG-dimonium chlorid, dostupný od firmy Mona Industries • 9 »· » ♦ · ♦

9 9 9 * ··«» * * · ·· ··

9 9

9 9 • 9 9

99

Silsoft PEDM, fenylethyldimethicon, dostupný od firmy Witco Corporation, Osi Specialties, lne.

Triclosan, což je 2,4,4'-trichlor-2-hydroxydifenylether

Ultrez(^R) 10, což je karbomerový polymer, dostupný od firmy BF Goodrich, Cleveland, Ohio, USA, popsaný v US patentu č.

004 598, který je zde citován náhradou za přenesení celého jeho obsahu do tohoto textu

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Připraví se následující kompozice, které se zkoušejí s dále uvedenými výsledky.

Kompozice 1:

Ethylalkohol (75,8 %), Ultrez 10 (0,6 %), glycerol (1,5 %), Lexorez 100 (0,25 %), Ceraphyl-41 (0,5 %), Ceraphyl 28 (0,5 %), triclosan (0,3 %), AMP-95, pH 6,4, ESS 9090IC (0,06 %), cyklomethikon (245) (1,5 %), dimethicon (225) (0,5 %), vosk Dow Corning 580 (0,20 %), Silsoft PEDM (1,0 %), deionizovaná voda (17,6 %), Phospolipid CDM (0,2 %)

Kompozice 2:

Ethylalkohol (50,0 %), isopropylalkohol (20 %), Ultrez 10 (0,6 %), glycerol (1,5 %), Lexorez 100 (0,25 %), Ceraphyl-41 (0,5 %), Ceraphyl 28 (0,5 %), triclosan (0,3 %), AMP-95, pH 6,4, ESS 9090IC (0,06 %), cyklomethikon (245) (1,0 %), dimethicon (225) (0,5 %), vosk Dow Corning 580 (0,25 %), Silsoft PEDM (1,0 %), deionizovaná voda (23,5 %),

Phospolipid CDM (0,2 %) • 9 « 9

9

9 9

9 9 9 • ♦9999

9 9 ·

99 • 9 9

9 9 »· ·

9 9 9 •·9 · ·

Kompozice 3:

Ethanol (43,3 %), isopropylalkohol (25 %), n-propanol (5,0 %), Ultrez 10 (0,6 %), glycerol (1,5 %), Lexorez 100 (0,25 %), Ceraphyl-41 (0,5 %), Ceraphyl 28 (0,5 %), triclosan (0,3 %), AMP, pH 6,4, ESS 9090IC (0,06 %), cyklomethikon (245) (2,0 %), dimethicon (225) (0,5 %), vosk Dow Corning 580 (0,1 %), Silsoft PEDM (1,0 %), deionizovaná voda (19,0 %), Phospolipid CDM (0,2 %), fenoxyethanol (0,2 %)

Kompozice 4:

Ethylalkohol (75,8 %), Ultrez 10 (0,6 %), glycerol (1,5 %), Lexorez 100 (0,25 %), Ceraphyl-41 (0,5 %), Ceraphyl 28 (0,5 %), triclosan (0,3 %), AMP-95, pH 6,4, ESS 9090IC (0,06 %), cyklomethikon (245) (1,0 %), dimethicon (225) (0,5 %), vosk Dow Corning 580 (0,25 %), Silsoft PEDM (1,0 %), deionizovaná voda (17,5 %), Phospolipid CDM (0,2 %), Germaben-II (0,05 %) konzervační prostředky (0,15 %)

Kompozice 5:

Ethanol (75,8 %), Ultrez 10 (0,6 %), glycerol (1,5 %), Lexorez 100 (0,25 %), Ceraphyl-41 (0,5 %), Ceraphyl 28 (0,5 %), benzethoniumchlorid (0,2 %), AMP-95, pH 6,4, ESS 9090IC (0,06 %), cyklomethikon (245) (1,0 %), dimethicon (225) (0,5 %), vosk Dow Corning 580 (0,25 %), Silsoft PEDM (1,0 %), deionizovaná voda (17,1 %), Phospolipid CDM (0,2 %)

Kompozice 6:

Ethanol (50 %), isopropylalkohol (20 %), Ultrez 10 (0,6 %), glycerol (1,5 %), Lexorez 100 (0,25 %), Ceraphyl-41 (0,5 %), Ceraphyl 28 (0,5 %), 2,4,4-trichlor-2-hydroxydifenylether (0,3 %), AMP-95, pH 6,4, ESS 9090IC (0,06 %), cyklo- 15 • 4 4

4 4

4 4 4

4 4444

4 4

4

44 • 4 methikon (245) (1 %), dimethicon (225) (0,5 %), vosk Dow Corning 580 (0,25 %), Silsoft^^R^ PEDM (1,0 %), deionizovaná voda (23,0 %), Phospolipid CDM (0,2 %), Germaben II (0,2 %), dvojsodná sůl ethylendiamintetraoctové kyseliny (EDTA) (0,1 %)

Kompozice 7:

Ethanol (75,8 %), Ultrez 10 (0,6 %), glycerol (1,5 %), Ceraphyl-41 (0,5 %), Ceraphyl 28 (0,5 %), AMP-95, pH 6,4, ESS 9090IC (0,06 %), cyklomethikon (Dow Corning 245 fluid) (1,5 %), dimethicon (Dow Corning 225 fluid) (0,5 %), vosk Dow Corning 580 (0,1 %), Silsoft^ PEDM (1,0 %), 2,4,4'-trichlor-2-hydroxydifenylether (0,3), DL-Ofloxacin (0,05), deionizovaná voda (17,4 %),

Kompozice 8:

Ethanol (75,8 %), Ultrez 10 (0,6 %), glycerol (1,5 %), Lexorez 100 (0,25 %), Ceraphyl-41 (0,5 %), Ceraphyl 28 (0,5 %), AMP-95, pH 6,4, ESS 9090IC (0,06 %), cyklomethikon 245 (1,5 %), dimethicon 225 (0,5 %), vosk Dow Corning 580 (0,1 %), Silsoft(^R) PEDM (1,0 %), DL-Ofloxacin (0,25), deionizovaná voda (17,4 %),

Kompozice 9

Ethanol (75,8 %), glycerol (1 %), 2,4,4'-trichlor-2-hydroxydifenylether (0,3 %), ESS 9090IC (0,06 %), triethanolamin (pro úpravu pH), dimethicon 225 (1,0 %), australský tea tree oil (1,5 %), deionizovaná voda (19,4 %), Acritamer 505E (0,45 %), PEG-75 Lanolin (0,5 %), levandulová silice (1,5 %) ·· * « · · • · · ♦ • * ···« • t « • · • · • · · • ♦ «· ·· ·· • · « · • · · · • · « · ♦♦ ·»

Kompozice 10:

Ethanol (75,8 %), glycerol (1 %), 2,4,4'-trichlor-2-hydroxydifenylether (0,3 %), ESS 9090IC (0,06 %), triethanolamin (pro úpravu pH), dimethicon 225 (1 %), deionizovaná voda (19,4 %), Acritamer 505E (0,45 %), PEG-75 Lanolin (0,5 %), levandulová silice (1,5 %)

Kompozice 11:

Ethanol (75,8 %), glycerol (1 %), 2,4,4'-trichlor-2-hydroxydifenylether (0,3 %), ESS 9090IC (0,06 %), triethanolamin (pro úpravu pH), dimethicon 225 (1 %), deionizovaná voda (19,4 %), Acritamer 505E (0,45 %), PEG-75 Lanolin (0,5 %), lemongrasová silice (1,0 %)

Kompozice 12:

Ethanol (75,8 %), glycerol (1 %), 2,4,4'-trichlor-2-hydroxydifenylether (0,3 %), ESS 9090IC (0,06 %), triethanolamin (pro úpravu pH), dimethicon 225 (1 %), deionizovaná voda (19,4 %), Acritamer 505E (0,45 %), PEG-75 Lanolin (0,5 %), tymiánová silice (1,0 %)

Kompozice 13:

Ethanol (75,8 %), glycerol (1 %), 2,4,4'-trichlor-2-hydroxydifenylether (0,3 %), ESS 9090IC (0,06 %), triethanolamin (pro úpravu pH), dimethicon 225 (1 %), deionizovaná voda (19,4 %), Acritamer 505E (0,45 %), PEG-75 Lanolin (0,5 %), hřebíčková silice (1,0 %)

Antimikrobiální kompozice se zkoušejí na klinickou účinnost ex-vivo. Výsledky zkoušek jsou souhrnně uvedeny v tabulkách 1, 2 a 3.

• ta ta »· • · · · · * ta · ta · ta ta • *tata·· tata ta * · ta tata • ta ♦ «« ♦ ta* ·· • tata • ta ta • tata ta tata ♦ ♦ ta ta •

Jako protokolu pro hodnocení nebo screening řady vzorků antimikrobiálních kompozic se použije modelu s vepřovou kůží. Jelikož je vepřová kůže podobná kůži lidské, co do složení a projevů, je vhodná pro simulaci postupů mytí rukou, které jsou klinicky prováděny lidmi. Zkouška se provádí podle postupu popsaného v Pig Skin as Test Substráte for Evaluating Topical Antimikrobial Activity, J. Clin. Microbiology, září 1986, str. 343 až 348.

Zkouška na vepřové kůži sestává z následujících etap: a) příprava vepřové kůže, b) antimikrobiální provokace, a c) porovnání s kontrolou.

Vepřová kůže se omyje, zbaví štětin a poté zmrazí. Kusy se poté rozmrazí a nařežou na díly o velikosti 3x3 cm. Kůže se upevní na držák s epoxidovou pryskyřicí, přičemž vrchní strana kůže zůstane exponována. Díly kůže se umístí na Petriho misky, které obsahují kotouč filtračního papíru zvlhčený 1,0 ml vody, aby se zabránilo vyschnutí. Díly kůže se na noc umístí do ledničky.

V ten samý den, kdy se připravují díly kůže, se šikmý agar obvyklým postupem zaočkuje zkušebním organismem (ve dvojím provedení). Díly vepřové kůže se zkoušejí na přítomnost zbytkových množství antibiotik, přičemž se použije válcových výseků (8mm výsek pro biopsii) náhodně odebraných z kůže. Výseky se umístí spodní stranou na jednotlivé misky s agarem zaočkovaným zkušebním organismem. Následující den se zjištuje, zda okolo vepřové kůže je inhibiční zóna. Inhibiční zóna ukazuje na přítomnost zbytkového množství antibiotik, a kůže se nepoužije.

Z nočních kultur na šikmém agaru se připraví suspenze různých organismů. Kultury se suspendují v 10 ml pufru Butterfield tak, že se povrch agaru mírně otírá • 4 ·

·· • 4 4 ·

4 4444 •44

444 44 • 4 4 4

4 4 · • ·4 4

4 4 4

44 chomáčkem sterilní vaty. Suspenze se spolu smísí, čímž se získá inokulační směs o koncentraci přibližně 10⁹ CFU/ml (CFU = počet jednotek vytvářejících kolonie). Koncentrace organismů se dále sníží ředěním, čímž se získá inokulační směs o koncentraci asi 10? CFU/ml. Dva kousky vepřové kůže se zaočkují 0,05 ml zředěné kultury. Vždy dva kousky inokulované kůže se spojí se dvěma kousky neinokulované kůží. Inokulovaná a neinokulovaná kůže v každé dvojici se navzájem otírají po dobu asi 15 sekund a inkubují po dobu asi 15 minut při 30C bez zakrytí, aby aby organismy mohly na kůži vyschnout. Po inkubaci se na kousky kůže z každého páru přidá 0,50 ml zkoušené látky. Inkubace se provádí při teplotě místnosti v nezakrytých Petriho miskách. U jednoho kousku z páru z každé série se mikroorganismy spočítají z otisku na agaru, zatímco u druhého kousku z páru se spočítají z oplachu.

Otisky se získají tak, že se obrátí upevňovací držák a ošetřená kůže se přitiskne na povrch standardního agaru s lecithinem a Polysorbate 80. Otisky se pořizují ve specifických časových intervalech a poté inkubují při asi 30°C po dobu přibližně 24 hodin.

V každém časovém intervalu se povrch každého kousku kůže z páru aplikuje 0,2 ml letheen thioglykolátová neutralizační půda. Shromáždí se výsledných 10 ml oplachovací kapaliny z obou dílů kůže a použije se jich pro spočítání přeživších organismů. Alikvoty (0,5 ml) promývací půdy se za účelem stanovení optické hustoty sériově ředí až na nekonečné zředění ve 4,5 ml letheen thioglykolátové neutralizační půdy. Misky se inkubují při 30°C po dobu asi 48 hodin a poté spočítají. Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce 1.

• · • · ·

999· ·« » 9 9 · » 9 9 9 • 9 9 9 » 9 9 9

9« 99

T a	bulka 1
Zkouška na vepřové	kůži se smíšenou kulturou*
Kompozice Inokulum	Úbytek (Logj θ)
Kontrola	15 min 60 min 120 min
(základní
úroveň)
(Logi₀)

1	7,42	1,8	2,48	1,85
2	5,84	1,1	2,7	2,38
3	7,24	1,7	2,65	0,83
4	7,42	1,78	1,76	3,76
5	5,84	4,1	2,8	2,17
6	5,84	3,55	2,65	2,10
7	5,84	3,82	3,38	3,61
8	5,84	4,14	3,94	4,44
Hibistat	5,84	3,0	3,3	0,62
Ve smíšené	kultuře	je ve stejné míře	zastoupen	každý

z následujících mikroorganismů:

Pseudomonas aeruginosa	ATCC	15442
Klebsiela pneumoniae	ATCC	11296
Micrococcus luteus	ATCC	7468
Enterococcus faecalis	ATCC	29212

Odborníkům v tomto oboru bude zřejmé, že kompozice s vyšší hodnotou dekadického logaritmu úbytku vykazuje zlepšenou účinnost. Dekadický logaritmus úbytku je rozdíl mezi počtem bakterií na počátku a výsledným počtem po každém ošetření.

Stejné kompozice se zkoušejí za použití zkoušky s vepřovou kůží na účinnost proti Staphylococcus aureus ATCC 33592. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 2.

φφ ♦ · φ φφφφφ φφφ φ φφ φ φφ

Tabulka 2

Kompozice	Inoku1um Kontrola (základní úroveň) (Log₁₀)	Úbytek (Log₁₀)
15 min	60 min	120 min
1	7,55	2,28	2,06	1,98
2	4,99	1,37	1,88	0,03
3	7,55	2,45	3,04	2,54
4	7,55	4,2	2,22	1,8
5	4,99	1,74	1,96	2,19
6	4,99	0,15	2,23	2,18
7	4,99	2,58	2,83	3,14
8	4,99	2,84	2,65	2,86
Hibistat	4,99	2,45	1,54	0,85

Výsledky uvedené v tabulce 2 ukazují, že se za použití kompozice obsahující isopropylalkohol dosáhlo vynikající baktericidní účinnosti proti Staphylococcus aureus.

Stejné kompozice se zkoušejí za použití zkoušky vepřovou kůží na účinnost proti Serratia marcescens ATCC 14756. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.

·♦ ·

	- 21 -	• ♦ • · 9 9 9 9 9 9 9 9	• *· 9 99 99 9 9 9 99 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9999 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 • 99 999 99 99
	T a	bulka	3
Kompozice	Inokulum Kontrola (základní úroveň) (Log₁₀)	Úbytek (Log₁₀) 15 min 60 min 120 min
1	7,01	1,93	1,25	1,04
2	5,17	2,32	0,96	0,4
3	7,01	2,1	1,77	1,10
4	7,01	3,53	3,07	0,77
5	5,17	2,64	1,64	1,48
6	5,17	3,32	2,18	0,32
7	5,17	2,18	3,29	2,26
8	5,17	3,52	2,9	1,63
9	7,04	2,12	3,08	2,78
10	7,04	4,52	3,51	2,96
11	7,04	3,76	3,89	2,89
12	7,04	3,23	3,36	3,31
13	7,04	4,11	3,89	1,93
Hibistat	5,17	2,08	2,06	0,03

Z výsledků uvedených v tabulce 3 vyplývá, že ethanolické a isopropylalkoholické antimikrobiální kompozice s obsahem silic, konkrétně lemongrasové silice, levandulové silice, tymiánové silice, australského tea tree oil a hřebíčkové silice vykazují vynikající účinnost proti Serratia marcescens ATCC 14756.

Příklad 2

Na základě výsledků zkoušky popsané v příkladu 1 se připraví čtyři kompozice (A až D), které se zkoušejí na ·· · • · * 9 · ·» 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 · 9999 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 99 999 99 99 účinnost in vivo podle dále popsaného modifikovaného protokolu Health Care Personnel Handwash. Zkoušené kompozice mají následující složení;

Kompozice A:

ethanolu (92,3% hmotnostně) (75,8 %), Ultrez^^R^ 10 (0,6 %), glycerol (0,5 %), Lexorez (^R) 100 (0,25 %), Ceraphyl-41 (0,5 %), Ceraphyl-28 (0,5 %), triclosan (2,4,4-trichlor-2-hydroxydifenylether) (0,3 %), fenoxyethanol (0,3 %), benzalkoniumchlorid (50% roztok) (0,2 %), Phospholipid CDM (0,05 %), Germall Plus + Germaben II (v hmotnostním poměru 1 : 1) (0,2 %), vitamin E linoleát (0,05 %), AMP pH 6,4, ESS 9090IC (0,06 %), deionizovaná voda (20,4 %)

Kompozice B:

Kompozice B se v podstatě podobá kompozici A, ale neobsahuje žádný triclosan.

ethanol (75,8 %), Ultrez^^R^ 10 (0,6 %), glycerol (0,5 %), Lexorez (^R) 100 (0,25 %), Ceraphyl-41 (0,5 %), Ceraphyl-28 (0,5 %), fenoxyethanol (0,3 %), benzalkoniumchlorid (50% roztok) (0,2 %), Phospolipid CDM (0,05 %), Germall Plus + Germaben (1 : 1) (0,2 %), vitamin E linoleát (0,05 %), AMP pH 6,4, ESS 9090IC (0,06 %), deionizovaná voda (20,5 %)

Kompozice C:

ethanol (75,8 %), Ultrez^^R^ 10 (0,6 %), glycerol (1,5 %), Lexorez (^R) 100 (0,25 %), Ceraphyl-41 (0,5 %), Ceraphyl-28 (0,5 %), 2,4,4'-trichlor-2-hydroxydifenylether (0,3 %), fenoxyethanol (0,3 %), benzethoniumchlorid (0,1 %), benzalkoniumchlorid (50% roztok) (0,1 %), Phospolipid CDM (0,05 %), Germall Plus + Germaben (1 : 1) (0,2 %), vitamin E li23

noleát (0,05 %), AMP pH 6,4, ESS 9090IC (0,06 %), cyklomethikon (245) (2,5 %), dimethikon (225) (0,5 %), vosk Dow Corning 580 (0,1 %), Silsoft PEDM (0,5 %), deionizovaná voda (15,8 %)

Kompozice D:

ethanol (43,2 %), isopropylalkohol (25 %), n-propanol (5 %), Ultrez(^R) 10 (0,6 %), glycerol (1,5 %), Lexorez ^^R) 100 (0,25 %), Ceraphyl-41 (0,5 %), Ceraphyl-28 (0,5 %), 2,4,4'-trichlor-2-hydroxydifenylether (0,3 %), fenoxyethanol (0,3 %), benzalkoniumchlorid (50% roztok) (0,2 %), vitamin E linoleát (0,025 %), AMP pH 6,4, ESS 9090IC (0,06 %), cyklomethikon (245) (3,5 %), dimethikon (225) (0,5 %), vosk Dow Corning 580 (0,1 %), Silsoft PEDM (0,5 %), lemongrasová silice (2,5 %), australský tea tree oil (2,5 %), deionizovaná voda (12 %)

Tyto kompozice se porovnají s obchodně dostupnými produkty na bázi chlorhexidinglukonátu, jako je Hibistat a Hibiclens, což jsou antimikrobiální prostředky dostupné na trhu od firmy ICI Americans.

444 • · • · · •···· 4 4 · *4 • 4

4 ·

4

44

4 4 4 • 4 4 4 • 4 4 4 4

4 4 4

94

Tabulka 4

Úbytek (Log^g) vzhledem k základní úrovni za použití protokolu Health Care Personnel Handwash Protocol
Kompozice	Základní úroveň	Mytí
1.	3.	7.	10.
A	8,23	3,55	3,08	3,67	3,03
B	8,56	4,13	3,4	3,92	3,04
C	8,36	3,75	3,15	3,06	3,18
D	8,45	4,26	4,42	4,55	4,57
Hibistat	8,23	3,25	3,94	5,31	2,86
Hibiclens	8,32	2,2	2,6	3,0	2,9

Všechny čtyři kompozice z příkladu 1 splňují požadavky FDA u 1. mytí (log_1Q úbytku =2) a u 10. mytí (log_1Q úbytku =3). Zjistilo se, že kompozice A až D jsou účinnější než produkty dostupné na trhu. Kombinace alkoholu a chlorhexidinglukonátu skutečně vykazují vynikající zlepšení při 10 mytích, ale u 10. mytí, kdy se použije neutralizační látky pro potlačení aktivity, je pozorován pokles v logaritmu úbytku oproti 7. mytí v rozmezí od 40 do 50 %. Při opakování zkoušky však překvapivě žádná ze čtyř kompozic podle vynálezu nevykázala tento úbytek účinnosti.

Příklad 3

Za použití antimikrobiálních kompozic popsaných výše v příkladech 1 a 2 se s malými obměnami připraví další zkoušební prostředky ve formě emulzí. Celkem se připraví 8 vzorků, z nichž se čtyři hodnotí na in vitro baktericidní účinnost proti 8 reprezentativním mikroorganismům (gram »* · • · • · • · ι negativním, gram pozitivním a houbám) ve čtyřech časových intervalech a dvou koncentracích.

Zkoušené prostředky mají následující složení:

Prostředek A':

voda (80,32 %), propylenglykol (4 %), myristylmyristát (1,5 %), kyselina olejová (1,25 %), kyselina stearová (1,25 %), glycerylstearát (1,25 %), Polysorbate 61 (1,2 %), isopropylpalmitát (1 %), dimethicon (1 %), stearoxytrimethylsilan (1 %), sorbitanstearát (0,8 %), cetylalkohol (0,5 %), stearylalkohol (0,5 %), syntetický včelí vosk (0,5 %), benzylalkohol (0,3 %), karbomer 941 (0,8 %), vůně IFF 1906AD (0,2 %), dvojsodná sůl EDTA + NaOH (0,15 % + 0,8 %), fenoxyethanol (0,4 %), kyselina mléčná (0,5 %), Germaben-II (0,25 %), panthenol (0,2 %), tokoferylacetát (0,05 %), vitamin E linoleát (0,05 %), triclosan (0,3 %)

Prostředek B':

voda (80,32 %), propylenglykol (4 %), myristylmyristát (1,5 %), kyselina olejová (1,25 %), kyselina stearová (1,25 %), glycerylstearát (1,25 %), Polysorbate 61 (1,2 %), isopropylpalmitát (1 %), dimethicon (1 %), stearoxytrimethylsilan (1 %), sorbitanstearát (0,8 %), cetylalkohol (0,5 %), stearylalkohol (0,5 %), syntetický včelí vosk (0,5 %), benzylalkohol (0,8 %), karbomer 941 (1,0 %), vůně IFF 1906AD (0,2 %), dvojsodná sůl EDTA + NaOH (0,15 % + 0,75 %), fenoxyethanol (0,4 %), kyselina mléčná (0,5 %), hydroxymethylglycinát sodný (aktivita 50 %) (0,3 %), Germaben-II (0,25 %), benzethoniumchlorid (0,2 %), tokoferylacetát (0,05 %), vitamin E linoleát (0,05 %), Phospholipid PTC+CDM (v poměru 1:1), (1 %), triclosan (0,3 %), GS-Liquorice (0,1 %).

Prostředek C':

voda (80,32 %), propylenglykol (4 %), myristylmyristát (1,5 %), kyselina olejová (1,25 %), kyselina stearová (1,25 %), glycerylstearát (1,25 %), Polysorbate 61 (1,2 %), isopropylpalmitát (1 %), dimethicon (1 %), stearoxytrimethylsilan (1 %), sorbitan stearát (0,8 %), cetylalkohol (0,5 %), stearylalkohol (0,5 %), syntetický včelí vosk (0,5 %), benzylalkohol (0,3 %), karbomer 941 (0,8 %), vůně IFF 1906AD (0,2 %), dvojsodná sůl EDTA + NaOH (0,15 % + 0,75 %), fenoxyethanol (0,4 %), kyselina mléčná (0,5 %), Germall Plus (0,3 %), Germaben-II (0,25 %), benzalkoniumchlorid (50%) (0,2 %), tokoferylacetát (0,05 %), vitamin E linoleát (0,05 %), Phospholipid PTC + CDM (v poměru 1 : 1) (1 %), triclosan (0,3 %)

Prostředek D':

voda (80,32 %), propylenglykol (4 %), myristylmyristát (1,5 %), kyselina olejová (1,25 %), kyselina stearová (1,25 %), glycerylstearát (1,25 %), Polysorbate 61 (1,2 %), isopropylpalmitát (1 %), dimethicon (1 %), stearoxytrimethylsilan (1 %), sorbitan stearát (0,8 %), cetylalkohol (0,5 %), stearylalkohol (0,5 %), syntetický včelí vosk (0,5 %), benzylalkohol (0,3 %), karbomer 941 (0,8 %), vůně IFF 1906AD (0,2 %), dvojsodná sůl EDTA + NaOH (0,15 % + 0,75 %), fenoxyethanol (0,4 %), kyselina mléčná (0,5 %), oktanoylkolagenová kyselina (0,3 %), Germaben-II (0,25 %), cetylpyridiniumchlorid (0,2 %), tokoferylacetát (0,05 %), vitamin E linoleát (0,05 %), Phospholipid PTC + CDM (v poměru 1 : 1) (1 %), triclosan (0,3 %)

Tabulka 5

In vitro bakteriální účinnost emulzí

Mikroorganismus ATCC Doba pro >99,99% usmrcení

A' B' C' D'

Enterococcus

faecalis (MDR)	51299	60 min	60 min	15	min	15	min
Staphyl ococcus aureus (MRSA)	33592	60 min	60 min	15	min	60	s
Staphylococcus aureus	6538	60 min	60 min	15	min	15	min
Serratia marcescens	14756	>60 min	60 min	15	min	60	min
Streptococcus pneumoniae	6303	15 min	15 min	15	min	30	s
Escherichia coli	11229	15 min	15 min	30	s	30	s
Pseudomonas aeruginosa	15442	30 s	30 s	30	s	30	s
Candida albicans	10231	všechny výsledky	více než	60	min

Výše uvedené údaje ukazují, že kompozice D' usmrcovala jak gram pozitivní, tak gram negativní bakterie uvedené výše s výbornou účinností.

Antimikrobiální směs podle vynálezu připravená na nevodné bázi, například jako emulze, vykazuje srovnatelnou účinnost. Kompozice D' vykázala slibné výsledky zejména proti Staphylococcus aureus (MRSA) a Serratia marcescens (ATCC 14756). Většina antimikrobiálních prostředků obsahujících triclosan je proti Serratia marcescens (ATCC 14756) účinná omezeně. Antimikrobiální kompozice podle vynálezu ··· ·· · · · ·· ··· 4 · · 4 ···· • e · · ·· · · · « ·

4 4444 44 4 · 44 44 4 • 44 ··· 4444 •4 4 44 444 44 44 a zejména kompozice D' je možno podávat v topických prostředcích určených pro péči o kůži, jako jsou alkoholické gely, krémy, lotiony, prostředky pro mytí rukou před lékařským výkonem, prostředky pro předoperační přípravu, čisticí prostředky, masti a terapeutické prostředky. Také se jich může použít při jiných aplikacích proti chorobám vyvolaným patogeny.

Příklad 4

Kompozice podle vynálezu se zkoušejí na dráždivost a senzitivitu. Připraví se následující kompozice

Kompozice 1:

deionizovaná voda (28,7 %), ethanol (62 %), Ultrez^^R^ 10 (0,45 %), glycerol (0,5 %), cyklomethikon (1,25 %), vosk Dow Corning(^R) 580 (0,025 %), Silsoft^ PEDM (0,2 %),

Ceraphyl(^R)-28 (0,5 %), Ceraphyl(^R)-41 (1,0 %), AMP 95 (látka pro nastavení pH) dle potřeby, 1906 AD MOD I (0,1 %)

Kompozice 2:

deionizovaná voda (27,7 %), ethanol (62 %), Ultrez^^R^ 10 (0,55 %), glycerol (0,5 %), cyklomethikon (1,25 %), vosk Dow Corning(^R) 580 (0,025 %), Silsoft^ PEDM (0,2 %),

Ceraphyl(^R)-28 (0,5 %), Ceraphyl(^R^-41 (1,0 %), AMP 95 (látka pro nastavení pH) dle potřeby, 1906 AD MOD I (0,06 %), fenoxyethanol (0,5 %), benzalkoniumchlorid (aktivita 50 %) (0,16 %), benzethoniumchlorid (0,08 %), Phospholipid CDM (0,05 %), Germall Plus (0,1 %), Germaben II (0,1 %)

Před zkouškou se subjekty vytřídí, aby se zajistilo, že splňují kritéria pro přijetí. Každý subjekt se seznámí s režimem provádění zkoušky. Indukční fáze sestává ··· · · · · · ·· • · · · · · · · · · · • · · · · · · ···· • · ···· · · · · ·· ·· · • · · · · · · · · · ·· · · · · · · · · ·· z devíti po sobě jdoucích aplikací studovaného materiálu a následného vyhodnocení zkušebních míst. Před aplikací náplastí se místa na kůži vyznačí, například gentiánovou violetí. Subjekty jsou požádány, aby si odstranily náplasti asi 24 hodin po aplikaci. Subjekty se vrací do ústavu ve 48hodinových intervalech, aby si nechaly vyhodnotit místa aplikace a znovu aplikovat stejné náplasti. Po 9. hodnocení se subjekty propustí na dobu 10 až 14 dnů klidového období. Po uplynutí klidového období se během 6. týdne studie zahájí provokační období za použití stejných náplastí, které se aplikují na místa, která předtím nebyla vystavena zkoušení. Tyto náplasti si subjekty odstraní po 24 hodinách a místa se klasifikují po dalších 24hodinových a 48hodinových obdobích. Klasifikace se provádí 48 a 72 hodin po aplikaci. Aby zkoušku bylo možno považovat za úplnou, musí se subjekt během indukční fáze podrobit 9 aplikacím a ne méně než 8 následným hodnocením a během provokační fáze jedné aplikaci produktu a dvěma hodnocením. Ze 101 subjektů, které dokončily zkoušku, žádný nevykázal známky sensitizace nebo podráždění následkem aplikace protředku.

Příklad 6

Dvě kompozice, jichž bylo použito pro zkoušení podle příkladu 5, se zkoušejí na zvlhčovači schopnosti. 15 subjektů si kompozici aplikuje na suchou kůži boční strany dolní části holeně. Zvlhčení kůže se měří za použití hydrometru Skicon^^R^ Skin Surface Hydrometer. Všechny výsledky jsou uvedeny jako střední relativní změny v procentech od základní úrovně při měření Skicon. Střední relativní změny v procentech se stanoví tak, že se naměří hodnoty zvlhčení na čtyřech různých místech a střední hodnota z těchto čtyř míst se porovná se základní úrovní.

• · φ φ φφφφ · • φ*····· minut 1 hodina 2 hodiny

Kompozice 1	4,6	%	16,7	%	19,9	%
Kompozice 2	5,5	%	18,8	%	23,3	%
Kontrola (bez ošetření)	16,5	%	35,3	%	39,7	%

Výsledky ukazují, že se kompozice 1 a 2 chovají podobně a oproti kontrole (bez ošetření) jsou lepší. Z toho vyplývá, že kompozice nemají vysušující účinek. U obou kompozic, které obsahují velký podíl alkoholu, je překvapující, že nevykázaly významný vysušující účinek.

Příklad 7

Připraví se kompozice o následujícím složení a hodnotí se u nich antimikrobiální vlastnosti za použití různých mikrobiálních kmenů.

Složení:

deionizovaná voda (27,8 %), ethanol (62,0 % objemových), Ultrez 10 (0,55 %), glycerol (0,5 %), cyklomethicon (245) (1,25 %), vosk Dow Corning 580 (0,025 %), Silsoft PEDM (0,2 %), Ceraphyl-28 (0,5 %), Ceraphyl-41 (1,0 %), fenoxyethanol (0,5 %), benzalkoniumchlorid (aktivita 50 %) (0,2 %), Phospholipid CDM (0,05 %), Germall Plus (0,1 %), Germaben II (0,1 %), 1906-AD Mod I (0,06 %) a látka pro nastavení pH.

Antimikrobiální vlastnosti kompozice se zkoušejí při koncentraci 99 % (hmotnost/objem) a době expozice 15 s, 30 s a 1 min. Vzorky se připraví za použití 0,1 ml alikvotu zkušební suspenze o koncentraci přibližně 1,0 x 10⁹ CFU/ml a přidají se k 9,9 ml produktu. Vzniklá směs se důkladně promísí, čímž se dosáhne koncentrace 99 % (hmotnost/objem). Expozice se načasuje na 15 sekund, 30 sekund a 1 minutu za použití časového spínače kalibrovaného na minuty/sekundy.

• · · · · · ·· · · • · · « · · * · · · · • · · ♦ · · · ···· • · ···« · · · · · · ·· · • · · ·· ··· · · · ·

0,1 ml každé zkušební suspenze se umístí do sterilní zkumavky, která obsahuje 9,9 ml roztoku Butterfieldova fosfátového pufru. Tohoto roztoku se použije jako kontroly. Pomocí roztoku Butterfieldova fosfátového pufru se připraví vhodná desetinásobná zředění. Po jedno- až dvoudenní inkubaci při 35 °C se za použití ručního mechanického počítače spočítají kolonie na miskách. Hodnoty log₁₀ pro misky se porovnají s počáteční populací. Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce. Rozumí se, že pod číselnou hodnotou uvedenou dále, jako 10+7, se rozumí 10⁷ apod.

• · · · · • · · » · · * · ···· · · · • · · · · • · · · ·

Ή β

Φ >Ν

Ή β

ω

1 £ 19 j Igx IO'* !	«£!£ sč	xp 1x0 :^p ď* 1 <r 0**	χθ J yO sO ‘ θ'	1 · 1 !>9 ( o*» \| θ' · θ'^{1 1}	xP i>O ‘ θ'*	£	To l^p >xg : o, i o· · cr* O) 10) 10): o> ío o 1 O) 10) 0) : συ o) i o) 1
00 100 ICO 1 0) i O) 10) 1 0\|J0)J0)J	00 ICO co · T-‘^-cO 00 ICO co ; τ-J r^j CO ·	O) lO) :O> 0) 20) !O) 0)10)0) 0>J 0)J 0) ·	O) 2 0) 0) 0) 10) 0) 0)10) 0) 0)J0).0r	O) 10)0) 1 O) IO) IO) < 0)10)10)1 συ συ O)j	O) 2 0) O) 2 0) 0)10) 0)J0)^	O) O) O) O).
O)ioroíi 0)10)10)!	οΊ(\Γ f\T 00100 CO	σΓιοΊσί’ 0) <0) í0)	o? oT o? O) IO) 0	o? 1 συ συ o)io);o>i	O) iO) 0)20)	oT O)	συ συ συ συσυσυ

lo'- ‘ θ'* 0)10) :o O) IO) i O) O) 0)10) 0)J0) ÍO) ofi oil o)

O) 10) íO) ’ )

ICO !C0 I 'Ή β

φ >Ν 60 Ή Ο β rH (Λ

CD Ir— <O 0410) CO oí^ m r^jr- ri o“ o“ o“

IBt (O|(O (O (0 1(0 CO co 1 coco CDHCCT <£?

oo:r-~	co 100 ico 1	Tj- >^·	V	CO ICO ICO i	00 :o
«0!<· ·<	OlOiOI	(OiCO	C0	04104 CM	co ICO :co
00 :oo 00	toito KOI	CO ICO	CO	O IO O	m icn iin
Γ- ΙΧ— Ύ—	συο i co i	OJO	0	co icojco	cqj coj co
m7 to7 ío~	<o~íío7<o7	«o7ttT	co“	inTirTirT:	cďicfi co

Ο

Ρ,

Φ /

Ο rH oj a

z) r? P. Pn o o ft

r- · T“ · v- t	Tf- i + 1? +	T— 'T— · i—	T— · T~ · V“ ·	▼ ”T“ ·τ— ;	T— · T“	v ·	T“ 1 V“ · *t“ ·
+ + · + ! o;o:o!	oi± 0 Γ-Ι77 T~ ¹	+ · + ^; + OIOO	+ + · + Oto 0	+ » + ‘ + ¹OIOIOI	+ · + O!O	+ · 0	+·++· OIOÍO
V“ ¹ T™ · T ' X Χ X: OOO, crojcr	•XI χ X °iA 0 miS ir> 'íl “í. oo_	r- ·τ— v XXX O;OO ^θ~ θ	r— · ^- T— XXX ΟΌ O CO -O O	T— ’Ύ— 'V ' X: X: Xi 0:0 O OJ Oj OJ	T“ · t— X: X O Ό 0:0	X O O	r— ’^—Ύ— x i x x oio 0 0:00
t— · t— ¹ v ·	irT''*’ tj·'		C\f	r- · 5~“ t— ·	T--T- T-

+ ’ + · + olo:o r- •t— t-’

X! χ; x 0:00 0:00 ><D N a o μ

• CL, . φ . I

0 o; O O O! 000 OOO;

'tfl β S-i ><u

M O Ph ft

T 104	h*	0 0	0	O) 0	0	Olo 0	OO	O
(O IO	m	0 0	0	0	0	0 Ό O	O:O	O
00 O)	CO	0 0	0	O) 0	0	OIOO	O O	O
	CCJ	0^0 T- v-	^θ-	c\o^ v 5—	CJ V“	OJ 0 0^ T~ ”T— '	OJO^ 'r· 'T“	O^ Ύ“

O ío o o 10 o o;o o 0:00

OiOO O!O O 000 00 o

Τ-

m	tn	in	m m	m
+	+	+	+ +	+
0	0	O	0 0	0
	T“	T“	T— ' T-	T“
X	X	X	X. X	X
0	O	O	O O	O
m	m	in	m ir>	m
v	T“	r-	b- T-
tn	crT	kff	04 c\T	c\T

r^+ o

o* +

o o- r+ + o o r+ o

r·’- h+ + 0:0 r*+ o

X o _ m m in CM CM CM eojco co~ CM* C\T CsT

X X o o co co co m m m

X X 00 _ m in m 0) IO) O) 04 04^ 04 oř CM* oT

X

o.

r*. h-	r*.	(0 co	co	o- 0-
+ +	+	+ +	+	+ · +	+
0 0	0	OO	0	00	O
v“ · V	T“	.	ΊΓ“	T“ ·
X X	X	X· X	X	X X	X
0^0	O	0 ;o	0	00	0
04 CJ	Γ4	m m	m	h* h*	r*.
04_		cqjcq^	co	C4^C4^	CM
v		o* co“	co“	cm“ 04“	cm“

Ι o β Ή 60 O β l^-1 β

Ή u cd β r—I Η β • Φ

U •rl

N

O co 00 co uo* m“ m~

co co	co	^r
0)20)	O)	(0
coco	co	(0
x:'*		CO-
m m	m“	r-

r- rxř

0» o* r’Μ* -’Τ xr co 00 00

V v· r-“ j<“

COCOCO: OO O co:co co co co cq

-5t xt <0(0 co co co co 00 o O-* t<“ o.“ coco 00 CM: CM 04 0:0 O cojco^ co_ co* <cT ccT co:co co m:m m coj cq^ co rC,r>? r<

ΙΛ	CZ)	»rt	CZ) CZ)	CZ)	CZ) IZ)	CZ)	CZ)	CZ)	(Ό	<Z) CZ)	CZ)
m	O	O	m 0	0	m 0	O	m	O	O	rno	0
T—	CO	(O	co	<0	T- co	<0	T“	CO	(0	v- CO	<0

(zj cn cz) m o o T- CO co

CZ) · CZ) CZ) m o o ’Τ- co co

CZ) CZ) CZ) mo o r- CO co

ismus	ω	ω	ΙΛ .2	ω to		TO (Z) O .Ξ &	E. □ 'u. 3 E	CZ) c 0) 0 CZ) CD
rgan	. cere	-Ω ω	Ξ ra	0 0) TO	0 o	u. Φ TO	x: o. >)	0 u. TO E
0	CQ	co	ó	ni	LU.	ď	w	CZ)

*

• · ·

«* • » • ·

Kompozice vykazují vynikající antimikrobiální účinnost (úbytek 99 %) proti všem uvedeným organismům. Tyto organismy zahrnují široké spektrum organismů, jako jsou gram negativní, gram pozitivní a houbové mikroorganismy.

Příklad 8

Subjektům je podána instrukce, aby nepoužívali žádné antimikrobiální nebo antiseptické prostředky, s výjimkou zkoušených látek. Petriho misky se naplní přibližně 11,5 ml sterilizovaného roztaveného agaru s výluhem sojového kaseinu. Agar se nechá ztuhnout a před zaočkováním přes noc ponechá v inkubátoru při 35°C. Zkušební bakterie se pěstují v živné půdě se sojovým výluhem a tryptikasou a zředí tak, aby se dosáhlo koncentrace přibližně 200 až 300 CFU na 10 μΐ. Na zakrytý povrch každého agarového kotoučku se pomocí 10μ1 očka dodá 10 μΐ konečného roztoku, který se pomocí očka rozprostře po povrchu. Kotoučky agaru se uvnitř Petriho misek nechají schnout po dobu 15 až 30 minut před aplikací na paži subjektu. Aby se snížila možnost kontaminace, působí se před aplikací na paži subjektu 70% isopropylalkoholem po dobu asi 10 sekund. Technik nanese asi 2,5 ml zkoušeného roztoku na povrch dlaně zkoušeného subjektu. Subjekt si poté roztírá zkoušený roztok od zápěstí po loket, dokud zkoušený roztok nezmizí.

Po nanesení a vysušení na vzduchu se subjekty provokují antimikrobiálním roztokem bezprostředně (během 5 minut ošetření), 1 hodinu, 3 hodiny, 5 hodin nebo 8 hodin po ošetření. Jako antimikrobiálních roztoků bylo použito 62% (objemově) ethanolu dostupného na trhu (označený jako látka A) a kompozice použité v příkladu 7 (označené jako látka B). Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce.

• ·

Ošetření - Doba expozice

Neošetřené místo • 9

9999

Ošetřené místo • 9 ·

9 ·

9 9

Látka B -	8 hodin	77	83
		118	125
		64	71
		103	115
		88	111
		107	97
Skupinový	průměr	92,8	100
Látka B -	5 hodin	124	125
		84	83
		135	89
		67	93
		87	21
		134	40
Skupinový	průměr	105	76
Látka B -	3 hodiny	132	6
		87	0
		127	3
		107	10
		153	86
		113	48
Skupinový	průměr	120	26
Látka B -	1 hodina	79	63
		100	5
		68	81
		71	2
		127	10
		118	0
Skupinový	průměr	94	27

Látka A - 1 hodina 139 169

130 136

121 164

137 167

135

117

Skupinový průměr 121 148

Látka B - 5 minut 91 0

142 1

116 2

0

Skupinový průměr 104 0,5

Výše uvedené údaje ukazují, že kompozice podle vynálezu je velmi účinná při usmrcování choroboplodných zárodků v době 5 minut a vykazuje také velmi dobrou reziduální účinnost po 3 hodinách při prevenci mikrobiálního růstu.

ta ·

Claims

• ·· · ·· ··

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Antimikrobiální kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje

a) antimikrobiální činidlo zvolené ze souboru sestávajícího z více než 30 % objemových alkoholu a účinného množství triclosanu; a

b) účinné množství fenoxyethanolu, benzalkoniumchloridu nebo benzethoniumchloridu; a kokofosfatidyl-dimoniumchlorid.
2. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že alkohol je zvolen ze skupiny sestávající z ethanolu, isopropylalkoholu, n-propanolu a jejich směsí.
3. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsah fenoxyethanolu je asi 0,25 až asi 5,0 % hmotnostního; obsah benzalkoniumchloridu je asi 0,02 až asi 1,0 % hmotnostního; a obsah kokofosfatidyl-dimoniumchloridu je asi 0,01 až asi 1,0 % hmotnostního.
4. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že antimikrobiální sloučeninou v části a) je triclosan.
5. Kompozice podle nároku 4, vyznačující se tím, že množství triclosanu je v rozmezí od asi 0,1 do asi 0,5 % hmotnostního.
6. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že přídavně obsahuje účinné množství diazolidinylmočoviny a 3-jodpropinylbutylkarbamátu.

ΦΦ · »« • · · · φ φφφφ φ φ • · φφφφ φ φ φ φ φφ φφ φφ φφφφ φ φφφφ φ φ φ φ φ φ
7. Kompozice podle nároku 6, vyznačující se tím, že množství diazolidinylmočoviny a 3jodpropinylbutylkarbamátu je v rozmezí od asi 0,05 do asi 0,5 % hmotnostního.
8. Kompozice podle nároku 6, vyznačující se tím, že přídavně obsahuje účinné množství diazolidinylmočoviny, methylparabenu, propylparabenu a propylenglykolu.
9. Kompozice podle nároku 8, vyznačující se tím, že množství diazolidinylmočoviny, methylparabenu, propylparabenu a propylenglykolu je v rozmezí od asi 0,05 do asi 0,5 % hmotnostního.
10. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že přídavně obsahuje účinné množství kokamidopropylfosfatidyldimoniumchloridu.
11. Kompozice podle nároku 10, vyznačující se tím, že množství kokamidopropylfosfatidyldimoniumchloridu je v rozmezí od asi 0,01 do asi 1,0 % hmotnostního.
12. Způsob desinfekce substrátu, vyznačující se tím, že se použije účinného množství antimikrobiální kompozice podle nároku 1.
13. Způsob podle nároku 12, vyznačující se t í m , že substrátem je ruka.
14. Způsob potlačování Staphylococcus aureus (MRSA), vyznačující se tím, že se na substrát topicky podá antimikrobiálně účinné množství kompozice podle nároku 1.

• · · • ···· ·· *· • * · · • · · · • · · · · • · · · ·· ··
15. Způsob potlačování Staphylococcus aureus (MRSA), vyznačující se tím, že se na sub strát topicky podá antimikrobiálně účinné množství kompozice podle nároku 4.
16. Způsob potlačování Serratia marcescens ATCC 14752, vyznačující se tím, že se na substrát topicky podá antimikrobiálně účinné množství kompozice podle nároku 1.
17. Způsob potlačování Serratia marcescens ATCC 14752, vyznačující se tím, že se na substrát topicky podá antimikrobiálně účinné množství kompozice podle nároku 4.
18. Emulze, vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství dispergačního činidla, alkohol, účinné množství fenoxyethanolu, benzalkoniumchloridu a kokofosfatidyldimoniumchloridu.
19. Způsob dodávání vlhkosti kůži, vyznačující se tím, že se na kůži aplikuje účinné množství kompozice podle nároku 1.
20. Způsob podle nároku 19, vyznačující se t i m , že množství kompozice 1 aplikované na kůži je v rozmezí od asi 0,5 do asi 10 ml.
21. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že přídavně obsahuje účinné množství silice zvolené ze souboru sestávajícího ze silice australského čajovníku, tee tree oil, lemongrasové silice, tymiánové silice, levandulové silice a hřebíčkové silice.

- 39 » · · ► e · ·

I · ···· * · · »· · • ·· ee ·· · · o · • · · · · • <· · · · · • · · · · »·* ·· tt
22. Kompozice podle nároku 2, vyznačující se tím, že přídavně obsahuje účinné množství silice zvolené ze souboru sestávajícího ze silice australského čajovníku, tee tree oil, lemongrasové silice, tymiánové silice, levandulové silice a hřebíčkové silice.
23. Kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že přídavně obsahuje účinné množství oktanoylkolagenové kyseliny a cetylpyridiumchloridu.