ES2230089T3 - Dimeros de catequina y epicatequina 8-8, 6-6 y 6-8 y metodos para su preparacion. - Google Patents
Dimeros de catequina y epicatequina 8-8, 6-6 y 6-8 y metodos para su preparacion.Info
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Abstract
Grupos protectores adecuados para los grupos hidroxilo fenólicos de los monómeros para uso en esta memoria incluyen aquellos grupos protectores que pueden introducirse en los monómeros y eliminarse sin racemización o degradación de los monómeros y que son estables en las condiciones utilizadas para la reacción de acoplamiento oxidante o reductora. Métodos para protección y desprotección de grupos hidroxilo son bien conocidos por los expertos en la técnica, y se describen en ¿Protective Groups in Organic Synthesis¿, T.W. Greene, John Wiley & Sons. Preferiblemente, los grupos protectores son grupos bencilo, todos los cuales se eliminan fácilmente en un solo paso. Grupos protectores adecuados para los grupos 3-hidroxilo incluyen bencilo, tetrahidropiranilo, y análogos. Referencias que describen el uso de cloruro férrico (FeCl3) en el acoplamiento oxidante de 2-arilo a aril-2: C.A. Broka, Tetrahedron Lett. 32, 859 (1991).
Description
Dímeros de catequina y epicatequina
8-8, 6-6 y 6-8 y
métodos para su preparación.
Esta invención se refiere a dímeros sintéticos de
catequina y epicatequina, derivados de los mismos, y métodos para
fabricación y utilización de los mismos.
Los polifenoles son un grupo muy diverso de
compuestos (Ferreira, D., Steynberg, J.P., Roux, D.G. y Brandt,
E.V., Tetrahedron, 48, (10), 1743-1803
(1992)) que existen de forma generalizada en una diversidad de
plantas, algunas de las cuales intervienen en la cadena
alimentaria. En muchos casos, aquéllos representan una clase
importante de compuestos presentes en la dieta humana. Aunque
algunos de los polifenoles están considerados como no nutritivos, ha
surgido interés por estos compuestos debido a sus posibles efectos
beneficiosos sobre la salud.
Por ejemplo, se ha demostrado que la quercetina
(un flavonoide), posee actividad anticancerígena en estudios
experimentales en animales (Deschner, E.E., Ruperto, J. Wong, G. y
Newmark, H.L. Carcinogenesis, 7, 1190-1196
(1991) y Kato, R., Nakadate, T., Yamamoto, S. y Sugimura, T.,
Carcinogenesis, 4, 1301-1305 (1983)). Se ha
demostrado que (+)-catequina y
(-)-epicatequina
(flavan-3-oles) inhiben la
actividad de la transcriptasa inversa del virus de la leucemia (Chu
S.C., Hsieh, Y.S. y Lim, J.Y., J. Nat. Prod., 55, (2)
179-183 (1992)). Se ha demostrado también que la
nobotanina (un tanino oligómero hidrolizable) posee actividad
antitumoral (Okuda, T., Yoshira, T. Hatano, T., Molecular Structures
and Pharmacological Activities of Polyphenols - Oligomeric
Hydrolyzable Tannins and Others - Presentado en la XVIª Conferencia
Internacional del Grupo Polifenoles, Lisboa, Portugal,
13-16 de Julio de 1992).
Se ha demostrado que las catequinas monómeras
encontradas en el té verde, que incluyen epigalocatequina y galato
de epigalocatequina, poseen actividad inhibidora contra líneas de
células tumorales humanas in vitro (véase, por ejemplo
Valcic et al en AntiCancer Drugs, vol. 7, 1996, páginas
461-468). Estudios estadísticos han demostrado
también que la mortalidad por cáncer de estómago es
significativamente menor en los distritos de Japón productores de
té. Se ha comunicado que el galato de epigalocatequina es el
material farmacológicamente activo en el té verde que inhibe los
tumores de la piel en el ratón (Okuda et al., ibid.). Se ha
demostrado también que el ácido elágico posee actividad
anticancerígena en diversos modelos de tumores animales (Boukharta
M., Jalbert, G. y Castonguay, A., Efficacy of Ellagitannins and
Ellagic Acid as Cancer Chemopreventive Agents - Presentado en la
XVIª Conferencia Internacional del Grupo Polifenoles, Lisboa,
Portugal, 13-16 de Julio de 1992). Una combinación
de una catequina monómera o derivado de la misma y una composición
de testosterona para el tratamiento de trastornos asociados con la
actividad andrógena se expone en el documento WO 96/37201.
Se han descrito oligómeros de proantocianidina
(documento JP 4-190774) por la Kikkoman Corporation
para uso como antimutágenos. El uso de compuestos fenólicos en
alimentos y la modulación del desarrollo de tumores por los mismos
en modelos animales experimentales ha sido presentado recientemente
en la 202ª Asamblea Nacional de la American Chemical Society
(Phenolic Compounds in Foods and Their Effects on Health I,
Analysis, Occurrence & Chemistry, Ho, C.T., Lee, C.Y., and
Huang, M.T. compiladores, ACS Symposium Series 506, American
Chemical Society, Washington D.C.
(1992); Phenolic Compounds in Foods and Their
Effects on Health II, Antioxidants and Cancer Prevention, Huang,
M.T., Ho, C.T., and Lee, C.Y. compiladores, ACS Symposium Series
507, American Chemical Society, Washington D.C. (1992)).
Se ha encontrado recientemente que las
procianidinas, y particularmente los oligómeros superiores de
procianidina, poseen un amplio espectro de actividad biológica. Por
ejemplo, el documento WO 97/36597 expone que oligómeros de
procianidina compuestos de 3 a 12 unidades monómeras de catequina
y/o epicatequina poseen una diversidad de propiedades
farmacológicas que incluyen propiedades antioxidantes,
antitumorales, antimicrobianas, moduladoras de las ciclooxigenasas,
moduladoras de las lipoxigenasas y moduladoras de NO o de
NO-sintasa.
En TRIP vol. 3, nº. 4, abril de 1995, páginas
117-123, Heifer y Mattice informan de estudios sobre
la estereoquímica, regioquímica y conformación de taninos
condensados que poseen el enlace interflavano. Para determinar las
relaciones estructura-actividad entre muchos regio-
y estereoisómeros posibles que comprenden cualesquiera oligómeros
dados, se han desarrollado métodos de síntesis. Dichos métodos se
concentran en los enlaces típicos (4\rightarrow6),
(4\rightarrow8), (6\rightarrow4) y (8\rightarrow4) que
comprenden oligómeros de procianidina lineales y ramificados.
Además de estos enlaces, la estereoquímica de los enlaces en la
posición C-4 depende del monómero que comprende
estas posiciones de enlace.
Por ejemplo, cuando la
(+)-catequina, designada en esta memoria como C,
está enlazada a otra C o a (-)-epicatequina,
designada en esta memoria como EC, los enlaces son ventajosamente
(4\rightarrow6) o (4\rightarrow8). Cuando EC está enlazada a C
o a otra EC, los enlaces son ventajosamente
(4\beta\rightarrow6) o (4\beta\rightarrow8). Para enlaces de
un oligómero ramificado, los enlaces estereoquímicos son
(6\rightarrow4\alpha), (6\rightarrow4\beta),
(8\rightarrow4\alpha), y (8\rightarrowa\beta).
Sin embargo, son posibles otras posiciones de
enlace entre los monómeros que constituyen un oligómero. Estos son
los enlaces (8\leftrightarrow8), (6\leftrightarrow6) y
(6\leftrightarrow8) con estructuras representativas que se
muestran a continuación. Dado que los oligómeros constituidos por
estos enlaces inusuales son raros o desconocidos en la naturaleza,
pueden obtenerse usos similares o nuevos para estos compuestos y sus
derivados por evaluación biológica.
De ahí el interés en la síntesis de estos
oligómeros que comprenden dichos enlaces.
Esta invención está dirigida a nuevos dímeros y
dímeros con ácido gálico 8\leftrightarrow8, 6\leftrightarrow6,
8\leftrightarrow6 de catequina y epicatequina y a procesos para
su preparación. Los compuestos preparados por los procesos de esta
invención pueden purificarse, por ejemplo, por HPLC. Los compuestos
de esta invención pueden utilizarse como agentes
anti-cáncer.
Los dímeros (8\leftrightarrow8),
(6\leftrightarrow6), (8\leftrightarrow6) de catequina y/o
epicatequina tienen las estructuras siguientes:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los dímeros (8\leftrightarrow8),
(6\leftrightarrow6), (8\leftrightarrow6) de digalato de
catequina y/o epicatequina tienen las estructuras siguientes:
Los dímeros (8\leftrightarrow8) se prepararon
por un proceso que comprende los pasos de: (a) proteger los grupos
hidroxilo fenólicos de un monómero de epicatequina y/o catequina
con un primer grupo protector; (b) proteger los grupos
3-hidroxilo de los monómeros con un segundo grupo
protector; (c) halogenar la posición C-8, v.g., con
N-bromosuccinimida, para producir un compuesto
formado en posición 8; (d) hacer reaccionar los compuestos bromados
en posición 8 con un alquil-litio, v.g.,
terc-butil-litio o
butil-litio para producir compuestos de
aril-litio; (e) realizar un acoplamiento oxidante o
reductor de los compuestos de aril-litio efectuando
un intercambio halógeno-metal en el cual se añade
el aril-litio para formar un compuesto litiado en
posición 8 seguido por la adición de cloruro férrico para efectuar
el acoplamiento (8\leftrightarrow8); y (f) desproteger los
compuestos (8\leftrightarrow8).
Un proceso alternativo comprende realizar los
pasos anteriores (a) a (c), y efectuar luego un acoplamiento
reductor de los compuestos halogenados, v.g., por utilización de un
reactivo de níquel con valencia cero en asociación con el polvo
metálico correspondiente seguido por desprotección.
Cuando se utilizan grupos bencilo para protección
de los grupos hidroxi fenólicos o los grupos hidroxilados en
posición 3, la desprotección se lleva a cabo por hidrogenólisis.
Cuando se utiliza tetrahidropiranilo para la protección de los
grupos 3-hidroxilo, se separan primeramente los
grupos protectores tetrahidropiranilo y se eliminan después los
grupos protectores bencilo.
Un proceso para preparar el digalato del dímero
(6\rightarrow6) de catequina y/o epicatequina comprende los pasos
de:
- (a)
- proteger los grupos hidroxilo fenólicos de los monómeros de epicatequina o catequina con un primer grupo protector; (b) halogenar las posiciones C-6 y C-8; (c)proteger los grupos 3-hidroxilo con un segundo grupo protector, v.g., utilizando terc-butildimetilsililo; (d) eliminar selectivamente los grupos halo de la posición 8; v.g., grupos bromo; (e) efectuar un acoplamiento en condiciones oxidantes o reductoras de los compuestos halogenados en posición 6; (f) desproteger los grupos 3-hidroxilo; (g) esterificar las posiciones 3 con cloruro de tri-O-bencilgaloílo; y (h) en la posición C-3; y (g) desproteger los grupos hidroxilo fenólicos para formar el digalato dímero (6\leftrightarrow6) libre.
Los dímeros (6\leftrightarrow8) se preparan a
partir de catequina y/o epicatequina por un proceso que comprende
los pasos de: (a) efectuar un acoplamiento oxidante de una mezcla
de monómeros de 6-bromo y
8-bromo-catequina y/o epicatequina
para producir una mezcla de dímeros (8\leftrightarrow8),
(6\leftrightarrow8), (8\leftrightarrow8); y (b) separar la
mezcla por HPLC. Alternativamente, los dímeros
(6\leftrightarrow8) se preparan por un proceso que comprende los
pasos de: (a) formar un ácido aril-borónico a partir
de los monómeros de 6-bromo u
8-bromo-catequina y/o epicatequina
utilizando una reacción de intercambio
halógeno-metal apagada por borato de trimetilo
seguido por un tratamiento acuoso-ácido para producir el ácido
libre; y (b) exponer la mezcla a un catalizador de paladio para
efectuar el acoplamiento.
Grupos protectores adecuados para los grupos
hidroxilo fenólicos de los monómeros para uso en esta memoria
incluyen aquellos grupos protectores que pueden introducirse en los
monómeros y eliminarse sin racemización o degradación de los
monómeros y que son estables en las condiciones utilizadas para la
reacción de acoplamiento oxidante o reductora. Métodos para
protección y desprotección de grupos hidroxilo son bien conocidos
por los expertos en la técnica, y se describen en "Protective
Groups in Organic Synthesis", T.W. Greene, John Wiley &
Sons. Preferiblemente, los grupos protectores son grupos bencilo,
todos los cuales se eliminan fácilmente en un solo paso.
Grupos protectores adecuados para los grupos
3-hidroxilo incluyen bencilo, tetrahidropiranilo, y
análogos. Referencias que describen el uso de cloruro férrico
(FeCl_{3}) en el acoplamiento oxidante de 2-arilo
a aril-2: C.A. Broka, Tetrahedron Lett. 32,859
(1991).
Referencias que describen el acoplamiento
reductor de 2-arilo a aril-2 por
medio de reactivos de níquel con valencia cero (en la mayoría de los
casos, el níquel con valencia cero se genera in situ a
partir de sales/complejos de Ni(II) y un agente reductor)
incluyen las siguientes:
- R.H. Mitchell et al., J. Am.Chem. Soc. 106, 7776 (1984); H. Matsumoto et al., J. Org. Chem. 48, 840 (1983); S. Inaba et al., Tetrahedron Lett. 23, 4215 (1982); S. Knapp et al., J. Org. Chem. 58, 997 (1993); K. Takagi et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 57, 1887 (1984); M. Iyoda et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 63, 80 (1990) (la referencia más importante) K. Takagi et al., Chem. Lett., 917 (1979); M. A. Fox et al., J. Org. Chem. 56, 3246 (1991); Y. Rollin et al., J. Organomet. Chem. 303, 131 (1986); R. Vanderesse et al., J. Organomet. Chem. 264, 263 (1984); B. Loubinoux et al., Tetrahedron Lett., 3951 (1977);
- Referencias que describen el acoplamiento de Suzuki para la síntesis de biarilos asimétricos (arilBr + aril'B(OH)2 a ArAr' en presencia de un compuesto de paladio (Pd) como catalizador incluyen las siguientes:
- R.B. Miller y S. Dugar, Organometallics 3, 1261 (1984); M.A.F. Brandao et al., Tetrahedron Lett. 34, 2437 (1993); M. Sato et al., Chem. Lett., 1405 (1989); S.P. Maddaford y B.A. Keay, J. Org. Chem. 59, 6501-3 (1994) (una referencia clave); M.J. Burk et al., J. Am. Chem. Soc. 116, 10847-8 (1994); S.W. Wright et al., J. Org. Chem. 59, 6095-7 (1994) (una referencia clave); G.B. Smith et al., J. Org. Chem. 59, 8151-6 (1994); T.I. Wallow y B.M. Novak, J. Org. Chem. 59, 5034-7 (1994) (una referencia clave); X. Yue et al., Tetrahedron Lett. 37, 8213-6 (1996); J. W. Benbow y B.L. Martínez, Tetrahedron Lett. 37, 8829-32 (1996); M. Beller et al., Angew. Chem. 107, 1992-3 (1995), (a veces se utilizan ésteres boronato en lugar de los ácidos borónicos libres).
Los estereoisómeros de los dímeros están
abarcados dentro del alcance de la invención. La estereoquímica de
los sustituyentes en una unidad monómera de polifenol del dímero
puede describirse en términos de su estereoquímica relativa,
"alfa/beta" o "cis/trans", o en términos de estereoquímica
absoluta, "R/S". El término "alfa" (\alpha) indica que
el sustituyente está orientado por debajo del plano del anillo de
flavano, mientras que "beta" (\beta) indica que el
sustituyente está orientado por encima del plano del anillo. El
término "cis" indica que dos sustituyentes están orientados en
la misma cara del anillo, mientras que "trans" indica que dos
sustituyentes están orientados en caras opuestas del anillo. Los
términos R y S se utilizan para designar la configuración de los
sustituyentes alrededor de un centro de quiralidad, basada en la
clasificación de los grupos unidos directamente a dicho centro. El
enlace interflavano entre los anillos aromáticos sustituidos
constituye un eje quiral a partir del cual podrían presentarse dos
atropoisómeros.
Una solución de (+)-catequina
(65,8 g, 226,7 mmol, anhidra), disuelta en dimetilformamida (DMF,
720 ml) anhidra, se añadió gota a gota, a la temperatura ambiente
durante un periodo de 80 min, a una suspensión agitada de hidruro de
sodio, al 60% en aceite (39 g, 975 mmol, 4,3 eq.) en DMF (180 ml).
(S. Miura et al., Radioisotopes, 32,
225-230, 1993). Después de agitar durante 50 min,
el matraz se puso en un baño de NaCl/hielo a -10ºC. Se añadió
bromuro de bencilo (121 ml, 1,02 mol, 4,5 eq.) gota a gota en el
transcurso de 80 min, y la mezcla de reacción parda se dejó
calentar a la temperatura ambiente, con agitación, durante una
noche. La mezcla de reacción resultante se evaporó y el sólido
resultante semejante a un caramelo se disolvió, con calentamiento y
agitación, en dos porciones de disolvente, cada una de las cuales
estaba constituida por 200 ml de cloroformo (CHCl_{3}) y 100 ml
de agua. Se separaron las fases, y la fase acuosa se extrajo con
cloroformo (20 ml), y las fases orgánicas reunidas se lavaron con
agua (100 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio (MgSO_{4}) y
se evaporaron. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de
sílice (42 x 10 ml; acetato de etilo/cloroformo/hexano 1:12:7) para
proporcionar, después de evaporación y secado a vacío, 85 g de
producto bruto, que se recristalizó en tricloroetileno (1,3 l) para
proporcionar 35,1 g (24%) de un polvo blanquecino. ^{1}H NMR
(CDCl_{3}) \delta 7,47, 7,25 (m, 20H), 7,03 (s, 1H), 6,95 (s,
2H), 6,27, 6,21 (ABq, 2H, J = 2 Hz), 5,18 (s, 2H), 5,17 (ABq
estrecho, 2H), 5,03 (s, 2H), 4,99 (s, 2H), 4,63 (d, 1H, J = 8,5
Hz), 4,00 (m, 1H), 3,11, 2,65 (ABq, 2H, J = 16,5 Hz, ambas partes d
con J = 5,5 y 9 Hz, respect.), 1,59 (d, 1H, J = 3,5 Hz); IR
(película) 3440 (br), 1618, 1593, 1513, 1499, 1144, 1116, 733, 696
cm^{-1}; MS m/z 650 (M+, 0,5%), 319, 181, 91.
Alternativamente, la
tetra-O-bencil-(+)-catequina puede prepararse
utilizando el método descrito por H. Kawamoto et al,
Mokazai Gakkaishi, 37, (5) 488-493 (1991),
empleando carbonato de potasio y bromuro de bencilo en DMF. Se
observó racemización parcial de la catequina, en ambas posiciones 2
y 3, por M.-C. Pierre et al., Tetrahedron Letters,
38, (32) 5639-5643 (1997).
Se añadió yodinano Dess-Martin
recién preparado (39,0 g, 92 mmol, preparado por el método de D.B.
Dess y J.C. Martin, J. Am. Chem. Soc. 113,
7277-7287 (1991) y R.E. Ireland y L. Liu, J.
Org. Chem. 58, 2899 (1993)), a la temperatura ambiente, todo de
una vez, a una solución agitada de
tetra-O-bencil-catequina
de acuerdo con el ejemplo anterior (54,4 g, 83,8 mmol) en cloruro
de metileno (420 ml). En el transcurso de 1,5 horas, se añadieron
gota a gota a la mezcla de reacción aproximadamente 30 ml de cloruro
de metileno saturado con agua para formar una solución turbia de
color ambarino. (S.D. Meyer y S.L. Schreiber, J. Org. Chem.,
59, 7549-7552 (1994)). Veinte minutos después, la
mezcla de reacción se diluyó con una solución saturada de carbonato
de sodio (NaHCO_{3}, 500 ml) y una solución acuosa al 10% de
Na_{2}SO_{2}O_{3}\cdot5H_{2}O (200 ml). Se separaron las
fases y la fase acuosa se extrajo con 50 ml de cloruro de metileno.
Las fases orgánicas reunidas se filtraron sobre gel de sílice (24 x
9 cm, cloroformo/acetato de etilo/9:1). El producto eluido se
evaporó y se secó a vacío para obtener 50,1 g (92%) de la cetona,
que se purificó por recristalización en cloroformo/éter: pf
144-144,5ºC; [\alpha]_{D} +38,5º,
[\alpha]_{546} +48,7º (cloroformo, c 20,8 g/l); ^{1}H
NMR (CDCl_{3}) \delta 7,45-7,26 (m, 20H), 6,96
(s, 1H), 6,88, 6,86 (ABq 2H, J = 8 Hz, parte B, d con J = 1,5 Hz),
6,35 (Abq estrecho, 2H), 5,24 (s, 1H), 5,14 (s, 2H), 5,10 (ABq
estrecho, 2H), 5,02 (s, 2H), 5,01 (s, 2H), 3,61, 3,45 (ABq, 2H, J =
21,5 Hz).
Método
A
A una solución de 116 mg (176 mol) de
tetra-O-bencilepicatequina en 4 ml
de CH_{2}Cl_{2} anhidro se añadieron, enfriando con hielo y con
agitación, 32 mg (180 mol) de N-bromosuccinimida
(NBS). Se continuó agitando a 0ºC durante 100 min, se concentró la
solución, y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de
sílice (15 x 1,8 cm) con cloroformo/acetato de etilo
(CHCl_{3}/EtOAc) (25:1). La cristalización en CHCl_{3}/etanol
dio 110 mg (85%) de un sólido incoloro semejante a algodón. Pf
137,5ºC; \alpha_{D} -50,4º, \alpha_{546} -60,7º (c 17,3
g/l, EtOAc); ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}, TMS) \delta
7,5-7,25 (m, 20H), 7,23 (d, 1H, J = 1,5 Hz), 7,03,
6,98 (ABq, 2H, J = 8,5 Hz, parte A, d con J = 1 Hz), 6,25 (s, 1H),
5,22 (s, 2H), 5,19 (s, 2H), 5,11 (s, 2H), 5,02, 4,96 (ABq, 2H, J =
9 Hz), 4,98 (s, 1H, J = 9 Hz), 4,27 (br s, 1H), 3,04, 2,90 (ABq,
2H, J = 17,5 Hz, ambas partes d con J = 1,5 y 4 Hz, respect.), 1,58
(d, 1H, J = 4,5 Hz); ^{13}C NMR (75 MHz, CDCl_{3}) \delta
156,86, 154,69, 151,65, 149,09, 148,73, 137,31, 137,15, 136,77,
136,72, 130,82, 128,67, 128,65, 128,58, 128,56, 128,09, 127,98,
127,87, 127,50, 127,31, 127,25, 127,13, 118,91, 115,17, 113,07,
102,85, 93,07, 78,62, 71,35, 71,20, 70,31, 65,92, 28,00; IR
(suspensión en aceite mineral) 3571, 1606, 1581, 1518, 1184, 1129,
771, 732, 694, cm^{-1}; MS m/z 399/397 (1/1%), 332 (1%),
181 (8%), 91 (100%). Anal. calc. para C_{47}H_{37}O_{6}Br: C,
70,78; H, 5,11. Encontrado C, 70,47; H, 5,10.
Método
B
A 563 mg (771 \mumol) de
5,7,3',4-tetra-O-bencil-8-bromocatequina,
preparada por el método descrito en el Ejemplo 1, en 5 ml de
CH_{2}Cl_{2} se añadieron a la temperatura ambiente, todo de
una vez, 425 mg (1,00 mmol) de peryodinano
Dess-Martin. Se añadió gota a gota CH_{2}Cl_{2}
saturado con agua en el transcurso de 45 min para producir una
ligera turbidez. Después de otros 20 min, se añadieron 20 ml de
cada uno de una solución saturada de NaHCO_{3} y una solución
acuosa al 10% de Na_{2}S_{2}O_{3}\cdot5H_{2}O. Se
separaron las fases y la fase acuosa se extrajo con 3 x 15 ml de
éter. Las fases orgánicas reunidas se concentraron y el residuo se
filtró sobre gel de sílice (20 x 2,5 cm, éter/hexano 1:1). El
producto eluido se evaporó y se secó a vacío para obtener 522 mg
(93%) de la cetona como una espuma incolora: ^{1}H NMR
(CDCl_{3}) 7,47-7,25 (m, 20H), 7,04 (d, 1H, J = 1
Hz), 6,85, 6,81 (Abq 2H, J = 8,5 Hz, parte B d con J = 8,5 Hz),
3,52, 3,48 (ABq, 2H, J = 21,5 Hz); ^{13}C NMR (CDCl_{3})
203,99, 155,55, 155,40, 150,68, 148,98, 137,06, 136,90, 136,28,
136,04, 128,64, 128,62, 128,46, 128,41, 128,22, 128,05, 127,78,
127,76, 127,35, 127,17, 127,13, 127,08, 126,99, 118,86, 114,59,
112,43, 103,54, 93,96, 93,87, 82,91, 71,25, 71,04, 70,98, 70,38,
33,30; IR (película) 1734, 1605, 1513, 1099, 737, 696
cm^{-1}.
4 598 mg (822 \mumol) de la cetona bruta
anterior en 8,2 ml de THF anhidro se añadieron gota a gota en el
transcurso de 10 min 1,23 ml de una solución 1M de
tri-sec-butilborohidruro de litio
(L-Selectride®). Después de agitar a -78ºC durante
3 horas, el material de partida era todavía detectable en la mezcla
de reacción por cromatografía en capa delgada ("TLC"),
(SiO_{2}, EtOAc/hexano, 1:3), y se añadieron 1,23 ml más del
agente reductor. Se continuóó agitando durante 4 horas más mientras
se dejaba que la temperatura se elevara gradualmente a -4ºC. Se
añadieron hidróxido de sodio acuoso (NaOH) (2,5M, 6 ml) y 4 ml de
peróxido de hidrógeno (H_{2}O_{2}) acuoso al 35% y se continuó
enfriando; la exotermia resultante elevó la temperatura del baño
hasta +12ºC. Se continuó agitando en el baño de agua durante una
noche, después de lo cual se evaporó parcialmente la mezcla, y se
añadieron 20 ml de éter y 10 ml de acetato de etilo (EtOAc). Se
separaron las fases, y la fase acuosa se extrajo con 50 ml de
EtOAc. Se evaporaron las fases orgánicas reunidas, y el residuo se
purificó por cromatografía sobre gel de sílice (23 x 2,5 cm) con
EtOAc/hexano 1:3 para obtener 327 mg (55%) del producto como una
espuma de color amarillo claro.
A una solución de 297 mg (407 \mumol) de
5,7,3',4'-tetra-O-bencil-8-bromoepicatequina
en 2 ml de cloruro de metileno (CH_{2}Cl_{2}) anhidro se
añadieron a la temperatura ambiente 56 \mul (0,61 \mumol) de
dihidropirano seguidos por 2,6 \mul (40 \mumol) de ácido
metanosulfónico. La solución, que se oscurecía gradualmente, se
agitó a la temperatura ambiente durante 25 min, después de cuyo
periodo se añadieron 0,15 ml de carbonato de sodio
(Na_{2}CO_{3}) acuoso saturado. Después de la evaporación, el
residuo se cromatografió sobre gel de sílice (SiO_{2}) con acetato
de etilo/hexano. Una fracción inicial se eluyó con una relación de
mezcla de 1:4, el producto (215 mg, 65%) con una relación de 1:3, y
el material de partida que no había reaccionado (97 mg, 33%) con
una relación de 1:2. Producto: ^{1}H NMR (CDCl_{3})
7,50-7,25 (m, 20H), 7,10 (s) y 7,08 (d, J = 1 Hz)
(1H, dos epímeros), 6,94, 6,91 (ABq, 2H, J = 8,5 Hz), 6,22
(s, 1H), 5,40-4,97 (m, 8H), 4,88 (s) y 4,86 (s)
(1H, dos epímeros), 4,13-3,80 (m, 3H),
3,42-2,87 (m, 3H), 2,78 (dd, J = 16,5, 8,5
Hz) y 2,61 (dd, J = 16,5, 7 Hz) (1H, dos epímeros),
1,77-1,18 (m, 5H); IR (película) 1605, 1121, 1031,
735, 696 cm^{-1}.
A una solución de 527 mg (648 mol) del
tetrahidropiranil-éter del Ejemplo 4 en 6,5 ml de THF anhidro se
añadieron gota a gota a -78ºC en el transcurso de 5 min 0,91 ml
(1,55 mmol) de terc-butil-litio (1,7M en
pentano). La solución resultante se agitó a -78ºC durante 5 minutos
mientras se añadían 1,5 ml de tetrahidrofurano (THF) anhidro a 147
mg (0,91 mmol) de cloruro férrico (FeCl_{3}) anhidro (reacción
exotérmica enérgica). La solución/suspensión resultante se añadió
en el transcurso de 2 minutos al reactivo de
organo-litio, dando como resultado una solución de
color pardo-negro. La mezcla de reacción se mantuvo
durante 5 minutos a -78ºC, y se descongeló luego a 0ºC en el
transcurso de una hora. Después de la adición de 1 ml de HCl al 5%
y evaporación parcial, el producto se extrajo en 15 ml de
cloroformo (CHCl_{3}), y la fase orgánica se lavó con 2 x 5 ml de
ácido clorhídrico (HCl) al 5% y se secó sobre sulfato de magnesio
(MgSO_{4}). Se evaporó el disolvente y se reemplazó con 4 ml de
THF al que se habían añadido 0,4 ml de HCl al 5%. Después de 65
minutos a la temperatura ambiente, la mezcla de reacción se evaporó
y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice (SiO_{2}) con
mezclas acetato de etilo/hexano. La elución inicial con una
relación de 2:5 condujo a la recuperación de 64 mg (15%) de
5,7,3',4'-tetra-O-bencilcatequina. La elución
ulterior con una relación de 1:2 dio dos subproductos no
identificados, y finalmente se fluyeron 94 mg (22%) del dímero
deseado con una relación de 2:3. Una muestra de 92 mg se purificó
ulteriormente por HPLC preparativa (Waters \muPorasil 125
\ring{A}, tamaño de partícula 10 \mum, 30 x 5 cm, EtOAc/hexano
2:3, 80 ml/min, detección UV a 280 nm) para proporcionar 65 mg
(16%) del producto puro como una película incolora; \alphaD
-75,2º, \alpha_{546} -91,4º (EtOAc, c 18,3 gl^{-1}); ^{1}H
NMR (CDCl_{3}) \delta 7,42-7,20 (m, 40H), 6,90
(d, 2H, J = 1 Hz), 6,75, 6,67 (ABq, 4H, J = 8 Hz),
6,28 (s, 2H), 5,03 (s, 4H), 5,00-4,85 (m, 12H), 4,59
(d, 2H, J = 8,5 Hz), 3,84 (m, 2H), 2,95, 2,66 (ABq, 4H,
J = 16,5 Hz, ambas partes d con J = 5,5 y 8Hz,
respect.), 1,67 (br, 2H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta
156,64, 156,45, 153,02, 148,78, 148,68, 137,85, 137,22, 137,05,
131,80, 128,38, 128,31, 128,22, 127,71, 127,67, 127,58, 127,26,
127,17, 127,09, 126,58, 119,88, 114,44, 113,19, 105,46, 102,61,
92,51, 80,64, 71,14, 71,10, 69,78, 68,11, 27,20; IR (película)
3563, 3440 (br), 1602, 1264, 1120, 736, 697 cm^{-1}; MS
(pulverización electrónica, HCOOH al 0,1% en CH_{3}CN) m/z
1123,1/1123,0 (M+Na)^{+}; calculado para
^{13}C^{12}C_{85}H_{74}O_{12}Na/^{12}C_{86}H_{74}O_{12}Na:
1322,5/1321,5), 968,8/967,8 (M+H^{+}), seguido por
retro-reacción de Diels-Alder;
calculado para
^{13}C^{12}C_{63}H_{55}O_{9}/^{12}C_{64}H_{55}O_{9}:
968,4/967,4).
A una solución de 63,5 mg (144 mol, 5 eq.) de
ácido tri-O-bencilgálico y 1,5 \mul de dimetilformamida
(DMF) en 1 ml de cloruro de metileno (CH_{2}Cl_{2}) se
añadieron 25 \mul (0,29 \mumol, 10 eq.) de cloruro de oxalilo.
Después de agitar a la temperatura ambiente bajo un tubo de cloruro
de calcio (CaCl_{2}) durante 35 min, se evaporó la mezcla y se
secó a vacío. Se añadió al cloruro de ácido bruto una solución de
37,5 mg (28,9 \mumol) del dímero 8,8'' del Ejemplo 7 en 0,8 ml de
piridina anhidra y 17,6 mg (144 \mumol, 5 eq.) de
4-di(metilamino)piridina (DMAP). La
mezcla se agitó a la temperatura ambiente en un vial cerrado
durante 24,5 horas. Después de adición de 50 \mul de agua, se
continuó agitando a la temperatura ambiente durante 4 horas. Se
añadieron luego 15 ml de ácido clorhídrico (HCl) al 5%, y el
producto se extrajo en 3 x 5 ml de cloruro de metileno
(CH_{2}Cl_{2}). Las fases orgánicas se secaron sobre sulfato de
magnesio (MgSO_{4}) y se evaporaron, y el material bruto se
purificó por filtración sobre gel de sílice (SiO_{2}) (15 x 1,8
cm) con acetato de etilo (EtOAc)/CHCl_{3}/hexano 1:9:10. La
evaporación y el secado a vacío dieron 58,2 mg de una película
incolora que se purificó ulteriormente por TLC preparativa
(SiO_{2}, 200 x 2 mm, EtOAc/hexano 1:2) para dar 55,0 mg (89%)
del producto: \delta_{D}-31,4,
\delta_{546}-36,9 (EtOAc, c 15,4
gl^{-1});^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta
7,40-7,15 (m, 70 H), 6,85 (s, 2H), 6,68, 6,36 (ABq,
4H, J = 8,5 Hz), 6,34 (s, 2H), 5,25 (m, 2H), 5,05 (s, 4H),
5,03-4,92 (m, 10H), 4,84 (s, 8H), 4,83 (s, 4H),
4,77, 4,71 (ABq, 4H, J = 11,5 Hz) 2,87, 2,78 (ABq, 4H,
J = 16,5 Hz, ambas partes d con J = 5,5 y 4,5 Hz,
respect.); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 164,84, 156,63,
156,46, 153,16, 152,24, 148,65, 148,41, 142,52, 137,82, 137,64,
137,30, 137,06, 137,02, 136,69, 131,90, 128,46, 128,39, 128,31,
128,20, 128,11, 127,80, 127,74, 127,60, 127,53, 127,31, 127,13,
127,06, 126,47, 124,99, 119,19, 114,34, 112,39, 109,08, 105,40,
102,00, 91,93, 75,06, 70,98, 70,89, 70,02, 69,94, 23,02; IR
(película) 1714, 1596, 1428, 1125, 735, 696 cm^{-1}. Análisis,
calculado para C_{142}H_{118}O_{20}: C, 79,42; H, 5,81.
Encontrado: C, 79,53; H, 5,55.
Una solución de 29,2 mg (13,6 \mumol) del
compuesto que antecede en 2 ml de THF y 2 ml de MeOH se hidrogenó a
la presión atmosférica (matraz) sobre 34,5 mg de
Pd(OH)_{2}/C al 20% comercial (húmedo) durante 105
min. El catalizador se separó por filtración sobre algodón y se
lavó con 2 ml de MeOH. Después de la evaporación, el producto bruto
se purificó por HPLC preparativa (Waters Bondapak C_{18}, 300 x
19 mm, caudal 9 ml/min, detección UV a 280 nm) utilizando el
siguiente gradiente de disolvente B (AcOH al 0,5% en EtOH
desnaturalizado) en disolvente A (AcOH al 0,5% en H_{2}O):
0-1 min, 15% B; 1 a 15 min, 15 a 26% B; 15 a 16
min, 26 a 80% B; 16 a 20 min, 80% B. Los productos eluidos reunidos
que contenían el componente principal se evaporaron y se secaron a
vacío para dar 6,7 mg (56%) del producto como una película de color
púrpura: ^{1}H NMR (acetona-d_{6}/D_{2}O 3:1
v/v) 7,06 (s, 4H), 7,03 (d, 2H, J = 2 Hz), 6,86, 6,76 (ABq,
4H, J = 8 Hz, parte A d con J = 1,5 Hz), 6,19 (s, 2H),
5,23 (m, 2H), 4,99 (d, 2H, J = 8 Hz), 3,05, 2,64 (ABq, 4H,
J = 16 Hz, ambas partes d con J = 5,5 y 8 Hz,
respect.); ^{13}C NMR (acetona-d_{6}/D_{2}O
3:1 v/v) 166,59, 155,92, 155,69, 154,26, 145,81, 145,27, 145,19,
139,00, 131,30, 121,08, 119,58, 115,74, 114,76, 109,95, 100,89,
99,41, 96,08, 78,69, 71,36, 25,97; MS (pulverización electrónica,
MeOH/CH_{3}CN) m/z 906,4/905,4 (M+Na^{+}); calculado para
^{13}C^{12}C_{43}H_{34}O_{20}Na/-^{12}C_{44}H_{34}O_{20}Na:
906,2/905,2), 735,6 (M+Na^{+}) - ácido gálico; calculado para
^{12}C_{37}H_{28}O_{15}Na: 735,1), 601,7 (M+Na^{+}),
seguido por retro-reacción de
Diels-Alder; calculado para
^{12}C_{29}H_{22}O_{13}Na: 601,1).
Una solución de (+)-catequina
(65,8 g, 226,7 mmol, anhidra, disuelta en dimetilformamida (DMF, 720
ml) anhidra, se añadió gota a gota, a la temperatura ambiente y
durante un periodo de 80 minutos, a una suspensión agitada de
hidruro de sodio (60% en aceite, 39 g, 975 mmol, 4,3 eq.) en
dimetilformamida (DMF) (180 ml), (S. Miura, et al.,
Radioisotopes, 32, 225-230 (1983)). Después
de agitar durante 50 minutos, el matraz se puso en un baño de
NaCl/hielo a -0ºC. Se añadió gota a gota bromuro de bencilo (121
ml, 1,02 mol, 4,5 eq.) en el transcurso de 80 min, y la mezcla de
reacción parda se calentó a la temperatura ambiente, con agitación,
durante una noche. La mezcla de reacción resultante se evaporó y el
sólido resultante semejante a un caramelo se disolvió, con
calentamiento y agitación, en dos porciones de disolvente,
constituida cada una por 200 ml de cloroformo (CHCl_{3}) y 100 ml
de agua. Se separaron las fases, se extrajo la fase acuosa con
CHCl_{3} (20 ml), y las fases orgánicas reunidas se lavaron con
agua (100 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio (MgSO_{4}) y
se evaporaron. El residuo se purificó por cromatografía en gel de
sílice (42 x 10 cm; acetato de etilo/cloroformo/hexano 1:12:7) para
proporcionar, después de evaporación y secado a vacío, 85 g del
producto bruto, que se recristalizó en dicloroetileno (1,3 l) para
proporcionar 35,1 g (24%) de un polvo blanquecino. ^{1}H NMR
(CDCl_{3}) 7,47-7,25 (m, 20H), 7,03 (s, 1H), 6,95
(s, 2H), 6,27, 6,21 (ABq, 2H, J = 2 Hz), 5,18 (s, 2H), 5,17
(ABq estrecho, 2H), 5,03 (s, 2H), 4,99 (s, 2H), 4,63 (d, 1H,
J = 8,5 Hz), 4,00 (m, 1H), 3,11, 2,65 (ABq, 2H, J =
16,5 Hz, ambas partes d con J = 5,5 y 9 Hz, respect.), 1,59
(d, 1H, J = 3,5 Hz); IR (película) 3440 (br), 1618, 1593,
1513, 1499, 1144, 1116, 733, 696 cm^{-1}. MS m/z 650 (M^{+},
0,5%), 319, 181,91.
Alternativamente, se puede preparar la
tetra-O-bencil-(+)-catequina
utilizando el método descrito por H. Kawamoto et al.,
Mokuzai Gakkaishi, 37, (5) 488-493 (1991),
utilizando carbonato de potasio y bromuro de bencilo en
dimetilformamida (DMF). La racemización parcial de la catequina, en
ambas posiciones 2 y 3, fue observada por M.-C. Pierre et
al., Tetrahedron Letters, 38 (32)
5639-5642 (1997).
Una solución 1M de
tri-sec-butilborohidruro de litio en
tetrahidrofurano (THF) (100 ml, L-Selectride®,
vendida por la Aldrich Chemical Co, Inc., Milwaukee, WI) se añadió,
en atmósfera de argón, a una solución agitada a 0ºC de bromuro de
litio (LiBr) anhidro (34,9 g, 402 mmol) en 100 ml de THF anhidro. La
mezcla resultante se enfrió a -78ºC, utilizando un baño de
acetona/CO_{2}, seguido por adición gota a gota de una solución
de la epicatequina protegida (50,1 g, 77,2 mmol) en 400 ml de THF
anhidro, durante un periodo de 50 min. Se continuó agitando a -78ºC
durante 135 minutos. Se retiró el baño de enfriamiento y se
añadieron 360 ml de hidróxido de sodio (NaOH) acuoso 2,5M a la
mezcla de reacción. El matraz de reacción se puso en un baño de
agua a la temperatura ambiente y se añadió una mezcla de peróxido
de hidrógeno (H_{2}O_{2}) acuoso al 35% (90 ml) y etanol (270
ml) durante un periodo de 130 min. Se continuó agitando durante una
noche. Se añadió cloroformo (700 ml) para disolver el producto
cristalizado, se separaron las fases, se extrajo la fase acuosa con
cloroformo (CHCl_{3}) (50 ml), se secaron las fases orgánicas
reunidas sobre sulfato de magnesio (MgSO_{4}), se evaporaron y se
secaron a vacío para proporcionar 56,6 g del producto bruto. Este
material se disolvió en 600 ml de una mezcla hirviente de acetato
de etilo (EtOAc) y etanol (EtOH) (2:3) y se dejó cristalizar a la
temperatura ambiente y luego en el frigorífico. El producto se
aisló por filtración con succión, se lavó con 2 x 50 ml de
EtOAc/EtOH (1:3) frío (-20ºC), y se secó a vacío primeramente a la
temperatura ambiente, y luego a 80ºC para obtener 35,4 g (70%) de
un sólido amarillo claro. Las aguas madres evaporadas se filtraron
sobre gel de sílice (SiO_{2}), (14 x 6,5 cm, cloroformo
(CHCl_{3}), y luego CHCl_{3}/EtOAc 12:1), se concentró el
producto de elución a 40 ml, y el residuo se diluyó con 60 ml de
etanol, para obtener 5,5 g (11%) adicional de la
O-bencilepicatequina como un sólido amarillo: pf
128,5-130ºC (a partir de EtOAc/EtOH); \alpha_{D}
-27,7º, _{546} -33,4º (EtOAc, c 21,6 g/l); ^{1}H NMR
(CDCl_{3}) 7,48-7,25 (m, 20H), 7,14 (s, 1H), 7,00,
6,97 (ABq, 2H, J = 8,5 Hz, parte A d con J = 1,5 Hz),
6,27 (s, 2H), 5,19 (s, 2H), 5,18 (s, 2H), 5,02 (s, 2H), 5,01 (s,
2H), 4,91 (s, 1H), 4,21 (br s, 1H), 3,00, 2,92 (ABq, 2H, J =
17,5 Hz, ambas partes d con J = 1,5 y 4 Hz, respect.), 1,66
(d, 1H, J = 5,5 Hz); análisis, calculado para
C_{43}H_{48}O_{6}: C, 79,36; H, 5,89. Encontrado: C, 79,12; H,
5,99.
A una solución de 334 mg (914 mol) de
5,7,3',4'-tetra-O-bencilepicatequina
en 10 ml de CH_{2}Cl_{2} anhidro se añadieron, enfriando con
hielo y todo de una vez, 192 mg (1,08 mmol) de
N-bromosuccinimida (NBS) recristalizada. La mezcla
de reacción se agitó a 0ºC durante 45 min y a la temperatura
ambiente durante 17 h. Se añadió una solución de 200 mg de
Na_{2}S_{2}O_{3}\cdot5H_{2}O en 5 ml de agua. Después de
agitación breve, se separaron las fases, se extrajo la fase acuosa
con 5 ml de CH_{2}Cl_{2}, y las fases orgánicas reunidas se
secaron sobre MgSO_{4} y se evaporaron. La cromatografía sobre
gel de sílice (30 x 2,6 cm) con EtOAc/CHCl_{3}/hexano 1:12:7
(para eliminar una traza de subproducto) y luego 3:12:7, fue
seguida por evaporación y secado a vacío para dar 362 mg (87%) del
dibromuro como una espuma incolora: [ ]_{546} -58,2º (EtOAc, c
13,5 gl^{-1}); ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,64 (d, 2H,
J = 7 Hz), 7,52-7,26 (m, 18 H), 7,17 (s, 1H),
7,03, 6,97 (s, 2H), 5,20 (s, 2H), 5,17 (s, 2H), 5,03 (s, 2H), 5,01,
4,97 (ABq, 2H, J = 11 Hz), 4,99 (s, 1H), 4,19 (m estrecho,
1H), 3,04, 2,87 (ABq, J = 17,5 Hz, ambas partes d con
J = 1,5 y 3,5 Hz, respect.), 1,55 (d, 1H, J = 3,5
Hz); ^{13}C NMR (CDCl_{3}) \delta 154,43, 152,57, 151,09,
149,03, 148,82, 137,10, 136,94, 136,50, 136,37, 130,13, 128,52,
128,50, 128,48, 128,47, 128,43, 128,35, 128,32, 128,16, 127,82,
127,81, 127,36, 127,20, 118,81, 115,06, 112,91, 112,30, 105,23,
103,25, 78,80, 74,61, 74,55, 71,24, 71,14, 65,33, 28,75; IR
(película) 1734, 1606, 1513, 1369, 1266, 1184, 1113, 1083, 735, 697
cm^{-1}. Análisis, calculado para
C_{43}H_{36}O_{6}Br_{2}: C, 63,88; H, 4,49. Encontrado C,
64,17; H, 4,45.
A una solución de 297 mg (497 \mumol) de
5,7,3',4'-tetra-O-bencil-6-bromoepicatequina
en 2 ml de CH_{2}Cl_{2} anhidro se añadieron a la temperatura
ambiente 56 \mul (0,61 mmol) de dihidropirano seguido por 2,6
\mul (40 \mumol) de ácido metanosulfónico. La solución se agita
a la temperatura ambiente durante 25 min, después de cuyo periodo
se añaden 0,15 ml de solución acuosa saturada de Na_{2}CO_{3}.
Después de la evaporación, el residuo se cromatografía sobre
SiO_{2} con EtOAc/hexano.
A una solución de 527 mg (648 \mumol) del
compuesto (tetrahidropiranil-éter) del Ejemplo 9 en 6,5 ml de THF
anhidro se añaden gota a gota a -78ºC en el transcurso de 5 min 0,91
ml (1,55 mmol) de terc-butil-litio (1,7M en
pentano). La solución resultante se agita a -78ºC durante 5 min
mientras se añaden 1,5 ml de THF anhidro a 147 mg (0,91 mmol) de
FeCl_{3} anhidro (reacción exotérmica enérgica). La
solución/suspensión resultante se añade en el transcurso de 2 min
al reactivo de organo-litio. La mezcla de reacción
se mantiene durante 5 min a -78ºC, y se descongela luego a 0ºC en
el transcurso de una hora. Después de adición de 1 ml de HCl al 5%
y evaporación parcial, el producto se extrae en 15 ml de
CHCl_{3}, y la fase orgánica se lava con 2 x 5 ml de HCl al 5% y
se seca sobre MgSO_{4}. Se evapora el disolvente y se reemplaza
con 4 ml de THF al que se añaden 0,4 ml de HCl al 5%, y se purifica
el residuo.
A una solución de 63,5 mg (144 \mumol, 5 eq.)
de ácido tri-O-bencilgálico y 1,5 \mul de DMF en 1 ml de
CH_{2}Cl_{2} se añaden 25 \mul (0,29 mmol, 10 eq.) de cloruro
de oxalilo. Después de agitar a la temperatura ambiente bajo un
tubo de CaCl_{2} durante 35 min, la mezcla se evapora y se seca a
vacío. Al cloruro de ácido bruto se añade una solución de 37,5 mg
(28,9 \mumol) del dímero 6,6'' del Ejemplo 10, en 0,8 ml de
piridina anhidra y 17,6 mg (144 \mumol, 5 eq.) de DMAP. La mezcla
se agita a la temperatura ambiente en un vial cerrado durante 24,5
horas. Después de adición de 50 \mul de agua, se continúa
agitando a la temperatura ambiente durante 4 horas. Se añaden luego
15 ml de HCl al 5%, y el producto se extrae en 3 x 5 ml de
CH_{2}Cl_{2}. Las fases orgánicas se secan sobre MgSO_{4} y se
evaporan, y el material bruto se purifica por filtración sobre
SiO_{2} (15 x 1,8 cm) con EtOAc/CHCl_{3}/hexano 1:9:10. La
evaporación y secado a vacío proporciona una película que se
purifica ulteriormente por cromatografía para dar el producto.
Una solución de 29,2 mg (13,6 \mumol) del
compuesto del Ejemplo 13 en 2 ml de THF y 2 ml de MeOH se hidrogena
a la presión atmosférica (matraz) sobre 34,5 mg de
Pd(OH)_{2}/C al 20% comercial (húmedo) durante 105
min. Se separa el catalizador por filtración sobre algodón y se
lava con 2 ml de MeOH. Después de la evaporación, el producto bruto
se purifica por HPLC preparativa.
Claims (17)
1. Dímero de catequina y/o epicatequina
(8\rightarrow8).
2. Un dímero de catequina y/o epicatequina
(6\rightarrow6).
3. Un dímero de catequina y/o epicatequina
(6\rightarrow8).
4. Un digalato dímero de catequina y/o
epicatequina (8\rightarrow8), que tiene la estructura
siguiente:
5. Un digalato dímero de catequina y/o
epicatequina (6-6), que tiene la estructura
siguiente:
6. Un digalato dímero de catequina y/o
epicatequina (6\rightarrow8), que tiene la estructura
siguiente:
7. Un proceso para preparar el dímero de
catequina y/o epicatequina (8-8) de la
reivindicación 1, que comprende los pasos de:
- a.
- proteger los grupos hidroxilo fenólicos de un monómero de epicatequina y/o catequina con un primer grupo protector;
- b.
- proteger los grupos hidroxilo C-3 de los compuestos del paso (a) con un segundo grupo protector;
- c.
- halogenar las posiciones C-8 de los compuestos del paso (b);
- d.
- hacer reaccionar los compuestos del paso (c) con un compuesto de alquil- litio para introducir litio en las posiciones C-8;
- e.
- acoplar en condiciones oxidantes o reductoras los compuestos del paso (d) para formar un dímero protegido; y
- f.
- desproteger el compuesto del paso (e) para formar el dímero (8\leftrightarrow8).
8. Un proceso para preparar el dímero de
catequina y/o epicatequina (6\leftrightarrow6) de la
reivindicación 2, que comprende los pasos de:
- a.
- proteger los grupos hidroxilo fenólicos de un monómero de catequina y/o epicatequina con un primer grupo protector;
- b.
- halogenar los compuestos del paso (a) para introducir grupos halo en las posiciones C-6 y C-8;
- c.
- proteger los grupos hidroxilo C-3 de los compuestos del paso (b) con un segundo grupo protector;
- d.
- separar selectivamente de los compuestos del paso (c) los grupos halo en las posiciones C-8;
- e.
- hacer reaccionar los compuestos del paso (d) con un compuesto de alquil-litio para introducir litio en las posiciones C-6;
- f.
- acoplar en condiciones oxidantes o reductoras los compuestos del paso (e) para formar un dímero protegido; y
- g.
- desproteger el compuesto del paso (f) para formar el dímero (6\leftrightarrow6).
9. Un proceso para preparar el dímero de
catequina y/o epicatequina (6\leftrightarrow8) de la
reivindicación 3, que comprende los pasos de:
- a.
- halogenar un primer monómero de catequina o epicatequina para formar el compuesto 8-halo;
- b.
- halogenar un segundo monómero de catequina o epicatequina para formar los compuestos 6-halo;
- c.
- acoplar en condiciones oxidantes o reductoras los compuestos del paso (a) y el paso (b); y
- d.
- separar los dímeros 8\leftrightarrow8, 6\leftrightarrow6, y (6\leftrightarrow8).
10. Un proceso para preparar el digalato dímero
de catequina y/o epicatequina (8\leftrightarrow8) de la
reivindicación 4, que comprende los pasos de:
- a.
- proteger los grupos hidroxilo C-3 de un primer y un segundo monómeros de catequina y/o epicatequina con un primer grupo protector;
- b.
- proteger los grupos hidroxilo fenólicos de los compuestos del paso (a) con un segundo grupo protector;
- c.
- halogenar los compuestos del paso (b) para introducir un grupo halo en las posiciones C-8;
- d.
- hacer reaccionar los compuestos del paso (c) con un compuesto de alquil-litio para introducir litio en la posición C-8;
- e.
- acoplar en condiciones oxidantes o reductoras los compuestos del paso (d);
- f.
- desproteger las posiciones 3-hidroxilo del compuesto del paso (e);
- g.
- esterificar el compuesto del paso (f) con un haluro de tri-O-bencilgaloílo para formar el digalato dímero protegido; y
- h.
- desproteger el compuesto del paso (g) para formar el digalato dímero (8\leftrightarrow8).
11. Un proceso para preparar el digalato dímero
de catequina y/o epicatequina (6\leftrightarrow6) de la
reivindicación 5, que comprende los pasos de:
- a.
- proteger los grupos hidroxilo C-3 de un primer y un segundo monómeros de catequina y/o epicatequina con un primer grupo protector;
- b.
- proteger los grupos hidroxilo fenólicos de los compuestos del paso (a) con un segundo grupo protector;
- c.
- halogenar los compuestos del paso (b) para introducir un grupo halo en las posiciones C-6;
- d.
- hacer reaccionar los compuestos del paso (c) con un compuesto de alquil-litio para introducir litio en la posición C-6;
- e.
- acoplar en condiciones oxidantes o reductoras los compuestos del paso (d);
- f.
- desproteger las posiciones 3-hidroxilo de los compuestos del paso (e);
- g.
- esterificar el compuesto del paso (f) con un haluro de tri-O-bencilgaloílo para formar el digalato dímero protegido; y
- h.
- desproteger el compuesto del paso (g) para formar el digalato dímero (6\leftrightarrow6).
12. Un proceso para preparar el digalato dímero
de catequina y/o epicatequina (6\leftrightarrow8) de la
reivindicación 6, que comprende los pasos de:
- (a)
- halogenar un primer monómero de catequina o epicatequina para formar un compuesto 8-halo;
- (b)
- halogenar un segundo monómero de catequina o epicatequina para formar un compuesto 6-halo;
- (c)
- acoplar en condiciones oxidantes o reductoras los compuestos del paso (a) y el paso (b);
- (d)
- separar los dímeros 8\leftrightarrow8, 6\leftrightarrow6, y (6\leftrightarrow8);
- (e)
- proteger los grupos hidroxilo fenólicos del dímero (6\rightarrow8) separado del paso (d);
- (f)
- esterificar el compuesto del paso (e) con un haluro de tri-O- bencilgaloílo para formar el digalato dímero protegido; y
- (g)
- desproteger el compuesto de (f) para formar el digalato dímero (6\leftrightarrow8).
13. El proceso de las reivindicaciones 7, 8, 9,
10, 11 ó 12 en el cual el acoplamiento es un acoplamiento
oxidante.
14. El proceso de la reivindicación 9 ó 12, en el
cual los grupos protectores primero y segundo son bencilo o bencilo
y tetrahidropiranilo o terc-butildimetilsililo.
15. El proceso de las reivindicaciones 7, 8, 9,
10, 11 ó 12, en el cual el agente de halogenación es
N-bromosuccinimida; en el cual el
alquil-litio es
terc-butil-litio o
n-butil-litio; y en el cual el paso
de desprotección se lleva a cabo por hidrogenólisis catalítica.
16. El proceso de la reivindicación 13, en el
cual el acoplamiento oxidante se efectúa mediante cloruro
férrico.
17. El proceso de las reivindicaciones 10, 11 ó
12, en el cual el haluro de
tri-O-bencilgaloílo es un cloruro de
tri-O-bencilgaloílo.
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