ES2222975T3

ES2222975T3 - Uso de antagonistas de pirimidina endotelina en animales de compañia.

Info

Publication number: ES2222975T3
Application number: ES01902578T
Authority: ES
Inventors: Bernard J. Pfizer Global Research and Dev. BANKS; Adrian P. Pfizer Global Research and Dev. FOSTER; Stephen P Pfizer Global Research and Dev. GIBSON
Original assignee: Pfizer Inc
Current assignee: Pfizer Inc
Priority date: 2000-02-11
Filing date: 2001-02-06
Publication date: 2005-02-16
Anticipated expiration: 2021-02-06
Also published as: HUP0204370A2; HUP0204370A3; DE60104283D1; WO2001058882A1; DK1254120T3; ATE271042T1; CA2398007A1; AU3043601A; DE60104283T2; PT1254120E; JP2003528050A; EP1254120A1; NZ519002A; KR20020075791A; EP1254120B1; ZA200206343B; TR200401815T4; GB0003234D0; IL150488A0

Abstract

El uso de un compuesto de **fórmula**, en la que R1 y R2 representan cada uno H, o representan conjuntamente un segundo enlace carbono-carbono entre los átomos de carbono a los que están unidos; cuando R1 y R2 representan cada uno H, entonces R3 y R4 también representan H; cuando R1 y R2 representan conjuntamente un segundo enlace carbono-carbono entre los átomos de carbono a los que están unidos, entonces R3 y R4 representan independientemente H o alquilo C1-6; Ar representa: fenilo o naftilo, cuyos grupos están opcionalmente sustituidos por uno o más grupos seleccionados entre alquilo C1-6 [que puede estar el mismo sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo, alcoxi C1-6, CO2H, NH2, NH(alquilo C1-6) y N(alquilo C1-6)2], halo, alcoxi C1-6, CO2H, alcoxi C1-6-carbonilo, NO2, CN, NH2, NH(alquilo C1-6), N(alquilo C1-6)2, OH y alquilen C1-3-dioxi, o un anillo heteroarilo de 5 a 6 miembros que contiene hasta 4 heteroátomos seleccionados entre N, O y S, cuyo grupo está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados entre alquilo C1-6 [que puede estar el mismo sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo, alcoxi C1-6, CO2H, NH2, NH(alquilo C1-6) y N(alquilo C1-6)2], halo, alcoxi C1-6, CO2H, alcoxi C1-6-carbonilo, NO2, CN, NH2, NH(alquilo C1-6) y N(alquilo C1-6)2; o una sal veterinariamente aceptable del mismo; en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de un trastorno mediado por la endotelina en un animal de compañía, en donde el animal de compañía es un gato, un perro o un caballo.

Description

Uso de antagonistas de pirimidina endotelina en animales de compañía.

Esta invención se refiere al uso de ciertos antagonistas de endotelina en el tratamiento de animales de compañía que sufren de afecciones mediadas por la endotelina.

La endotelina (ET) es un potente vasoconstrictor sintetizado y liberado por las células del endotelio. Hay tres isoformas distintas de la ET: ET-1, ET-2 y ET-3, siendo todas ellas péptidos de 21 aminoácidos y en la presente invención el término "endotelina" se refiere a cualquiera de todas las isoformas. Se han definido farmacológicamente dos subtipos de receptor, ET_{A} y ET_{B} (véase por ejemplo H. Arai y col., Nature, 348, 730, 1990) y se han comunicado recientemente más subtipos. La estimulación del ET_{A} promueve la vasoconstricción, y la estimulación de los receptores ET_{B} provoca tanto vasodilatación como vasoconstricción. Los principales efectos de la ET se observan en el sistema cardiovascular, de forma particular en la circulación coronaria, renal, cerebral y mesentérica, y los efectos de la endotelina son frecuentemente de larga duración. La estimulación de los receptores de la ET también media en otras respuestas biológicas en tejidos cardiovasculares y no cardiovasculares tales como la proliferación celular y la formación de matriz.

Se han observado mayores niveles en circulación de endotelina en pacientes que han sufrido angioplastia coronaria transluminal percutánea (PCTA) (A. Tahara y col., Metab. Clin. Exp. 40, 1235, 1991) y se ha encontrado que la ET-1 induce a la formación neoíntima en ratas tras angioplastia con balón (S. Douglas y col, J. Cardiovasc. Pharm., 22 (Supl. 8), 371, 1993). Los mismos investigadores han encontrado que un antagonista de endotelina, documento SB-209670, provoca una reducción del 50% en la formación neoíntima respecto a los animales de control (S. Douglas y col., Circ Res, 75, 1994). Por tanto, los antagonistas del receptor de la endotelina pueden ser útiles en la prevención de la restenosis tras PTCA. El antagonista del recetor ET_{A/B}, bosentan, disminuyó la presión sanguínea en pacientes hipertensos (New Eng. J. Med. (1998) 338, 784-790). Los antagonistas de los receptores ET_{B}, tal como el BQ-788, han demostrado que aumentan la resistencia periférica en el hombre (Hypertension (1999) 33, 581-585). Así pues, los antagonistas del receptor selectivo ET_{A} son probablemente beneficiosos en la hipertensión.

La endotelina-1 se produce en la glándula de la próstata humana y se han identificado receptores de la endotelina en este tejido (Eur. J. Pharmacol. (1988) 349, 123-128). Debido a que la endotelina es un agente contráctil y proliferativo, los antagonistas de endotelina podrían ser útiles en el tratamiento de la hipertrofia de próstata benigna.

Hay una amplia localización de la endotelina y sus receptores en el sistema nervioso central y en el sistema cerebrovascular (R. K. Nikolov y col., Drugs of Today, 28(5), 303, 1992) estando la ET implicada en el vasospasmo cerebral, los infartos cerebrales, el choque séptico, el infarto de miocardio y la muerte neuronal.

Se han observado también niveles elevados de endotelina en pacientes con:

- obstrucción recurrente de las vías respiratorias (Pulm. Pharm. Ther. (1998) 11:231-235);

- asma (Am. J. Resp. Crit. Care Med. (1995) 151:1034-1039);

- insuficiencia renal aguda (K. Tomita y col, Med. Philos. (1994) 13(1), 64-66);

- insuficiencia renal crónica (F. Stockenhuber y col., Clin Sci (Lond.) 82, 255, 1992);

- enfermedad cardiaca isquémica (M. Yasuda, Am. Herat J., 119, 801, 1990);

- angina estable e inestable (J. T. Stewart, Br. Heart J. 66, 7 1991);

- hipertensión pulmonar (D. J. Stewart y col., Ann. Internal Medicine, 114, 464, 1991);

- insuficiencia cardiaca congestiva (R. J. Rodeheffer y col., Am. J. Hypertension, 4, 9A, 1991);

- preeclampsia (B.A. Clark y col., Am. J. Obstet. Gynecol., 166, 962, 1992);

- diabetes (A. Collier y col., Diabetes Care, 15(8), 1038, 1992);

- enfermedad de Crohn (S. H. Murch y col, Lancet, 339, 381, 1992); y

- arterosclerosis (A. Lerman y col., New Eng. J. Med., 325, 997, 1991).

A tales enfermedades se puede hacer referencia como "trastornos mediados por la endotelina". Aunque la anterior discusión se refiere principalmente a humanos, se pueden encontrar estados de enfermedad correspondientes en animales de compañía tales como perros, gatos y caballos. En todos los casos el estado de enfermedad asociado con niveles fisiológicamente elevados de endotelina es potencialmente tratable con una sustancia que disminuye el efecto de la endotelina, tal como un antagonista del receptor de la endotelina o un compuesto que se una a la endotelina, de modo tal que reduzca la concentración efectiva de la misma en los receptores de la endotelina.

Se ha encontrado ahora que un pequeño grupo de compuestos antagonistas del receptor de la endotelina son de utilidad particular en el tratamiento de trastornos mediados por la endotelina en animales de compañía (tales como perros, gatos y caballos).

Así pues, de acuerdo con la presente invención se proporciona el uso de un compuesto de fórmula I

1

en la que R^{1} y R^{2} representan cada uno H, o representan conjuntamente un segundo enlace carbono-carbono entre los átomos de carbono a los que están unidos;

: cuando R^{1} y R^{2} representan cada uno H, entonces R^{3} y R^{4} también representan H;

: cuando R^{1} y R^{2} representan conjuntamente un segundo enlace carbono-carbono entre los átomos de carbono a los que están unidos, entonces R^{3} y R^{4} representan independientemente H o alquilo C_{1-6};

Ar representa:

: fenilo o naftilo, cuyos grupos están opcionalmente sustituidos por uno o más grupos seleccionados entre alquilo C_{1-6} [que puede estar el mismo sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo, alcoxi C_{1-6}, CO_{2}H, NH_{2}, NH(alquilo C_{1-6}) y N(alquilo C_{1-6})_{2}], halo, alcoxi C_{1-6}, CO_{2}H, alcoxi C_{1-6}-carbonilo, NO_{2}, CN, NH_{2}, NH(alquilo C_{1-6}), N(alquilo C_{1-6})_{2}, OH y alquilen C_{1-3}-dioxi, o

: un anillo heteroarilo de 5 a 6 miembros que contiene hasta 4 heteroátomos seleccionados entre N, O y S, cuyo grupo está opcionalmente sustituido por uno o más grupos seleccionados entre alquilo C_{1-6} [que puede estar el mismo sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados entre halo, alcoxi C_{1-6}, CO_{2}H, NH_{2}, NH(alquilo C_{1-6}) y N(alquilo C_{1-6})_{2}], halo, alcoxi C_{1-6}, CO_{2}H, alcoxi C_{1-6}-carbonilo, NO_{2}, CN, NH_{2}, NH(alquilo C_{1-6}) y N(alquilo C_{1-6})_{2};

o una sal veterinariamente aceptable del mismo;

en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de un trastorno mediado por la endotelina en un animal de compañía.

Las sales veterinariamente aceptables incluyen sales de metales alcalinos y alcalinotérreos (por ejemplo sales de sodio y de potasio) y sales formadas con aminas básicas (por ejemplo, aminas sustituidas con tri(alquilo C_{1-6})).

Las características preferidas de la invención incluyen:

a): el animal de compañía es un gato, un perro o un caballo (más preferiblemente, un perro o un gato; lo más preferible, un perro);

b): el trastorno mediado por la endotelina es la hipertensión, insuficiencia cardiaca congestiva o la insuficiencia renal crónica;

c): R^{1} y R^{2} representan cada uno H;

d): R^{3} y R^{4} representan cada uno H; y

e): Ar representa fenilo, naftilo o tienilo, cuyos grupos están opcionalmente sustituidos por uno o más grupos seleccionados entre alquilo C_{1-6}, halo, CF_{3}, alcoxi C_{1-6}, CO_{2}H y alcoxi C_{1-6}-carbonilo, lo más preferible es que Ar sea fenilo.

Es de interés especial el tratamiento de la insuficiencia cardiaca congestiva en perros.

Es de interés especial adicional el tratamiento de la insuficiencia renal crónica en gatos.

Se describen compuestos de fórmula I en la que R^{1} y R^{2} representan cada uno H en la solicitud de patente internacional WO 98/57938. Se describen compuestos de fórmula I en la que R^{1} y R^{2} representan conjuntamente un segundo enlace carbono-carbono entre los átomos de carbono a los que están unidos en la solicitud de patente europea 882719. Ambas publicaciones se incorporan a la presente invención como referencia.

El compuesto de fórmula I en donde R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} representan cada uno H, y Ar es fenilo, es N-[6-metoxi-5-(2-metoxifenoxi)-2-(2-pirimidinil)-4-pirimidinil]-2-feniletansulfonamida. Se describe en el ejemplo 1 de la solicitud de patente internacional WO 98/57938, y se hace referencia al mismo en la presente invención como "compuesto X" y es de interés particular.

El compuesto de fórmula I en donde R^{1} y R^{2} representan conjuntamente un segundo enlace carbono-carbono entre los átomos de carbono a que están unidos, R^{3} y R^{4} representan cada uno H, y Ar es fenilo, es N-[6-metoxi-5-(2-metoxifenoxi)-2-(2-pirimidinil)-4-pirimidinil]-2-feniletensulfonamida. Se describe en el ejemplo 2 de la solicitud de patente europea 882719, se hace referencia al mismo en la presente invención como "COMPUESTO Y" y es de interés particular.

La invención presenta la ventaja de que los compuestos de fórmula I presentan una mayor duración de acción que los compuestos de la técnica anterior. Esto significa que la frecuencia con la que estos se deben administrar deberá reducirse. Esto es particularmente importante con las medicinas veterinarias, debido a que los animales a menudo se resisten a la administración frecuente de medicamentos. Por lo tanto, la frecuencia de administración reducida llevará a un tratamiento más regular (mejorando el control de la enfermedad) y a una conveniencia mayor (mejor complacencia del paciente). La actividad biológica de los compuestos de fórmula I (y algunos compuestos comparativos) se analiza en los siguientes ensayos.

Ensayo A

Inhibición de la contracción inducida por la ET-1 en tiras de arteria renal de perro para generar valores K_{b}

Un valor K_{b} es una medida de la actividad funcional, y esta se considera que es concentración en plasma libre de un compuesto de ensayo requerida para proporcionar eficacia.

Se cortan en espirales arterias renales procedentes de perros sabuesos (de 9-15 kg de peso corporal) y se dividen en tiras de 5 mm de largo. El lado de cada tira que era adyacente al lumen del vaso se fricciona generosamente para eliminar el endotelio. Cada tira se coloca bajo una tensión de restitución de 1,2 g en un baño de órgano que contiene solución de Krebs-Henseleit a 37ºC gasificado con CO_{2} al 5% en O_{2} al 95%. Se registra isométricamente la tensión generada por cada tira. Después de la incubación de los tejidos con el compuesto de ensayo durante 75 minutos, se construyeron curvas de respuesta a la concentración acumulativas de ET-1 en presencia de bestatina 10 \muM, captoprilo 10 \muM, tiorfano 10 \muM, indometacina 50 \muM y BSA al 0,001%. Solamente se construye una curva de ET-1 única en cada tejido y se expresan los aumentos de tensión como un porcentaje de la respuesta a KCl 120 mM determinado antes de la adición del compuesto de ensayo. Se determina la actividad antagonística del compuesto de ensayo mediante el cálculo de la K_{b} aparente para una concentración única de cada compuesto usando el procedimiento descrito por MacKay (J. Pharm. Pharmac. 30, 321-313, 1978). Se calcula la concentración de ET-1 que provoca el 50% de la respuesta máxima (EC_{50}) y, a partir de esta, la relación de dosis (DR). Esta es la relación de EC_{50} en presencia del compuesto de ensayo dividida por la EC50 en su ausencia. La DR se lleva luego a la siguiente
ecuación:

pK_{b} aparente = log (DR-1) - log [B] (en la que B = concentración molar de compuesto de ensayo)

K_{b} aparente = antilog pK_{b}

Resultados

2

(1) La estructura de LU 135.252 (compuesto comparativo) es:

3

(2) La estructura del ejemplo 2, documento WO 98/57938 (compuesto comparativo) es:

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Ensayo B

Estudios farmacocinéticos

Con el fin de analizar el potencial de los antagonistas de la ET de ensayo para proporcionar eficacia, se lleva a cabo un estudio farmacocinético en perro.

Se supone en general que la fracción de fármaco que está libre (es decir, no unida) en plasma está en equilibrio con el fármaco libre en otros compartimentos acuosos del cuerpo, procurando que el fármaco sea capaz de cruzar las barreras membrana. De ahí que aunque que la cantidad exacta de fármaco en plasma puede representar una pequeña proporción del fármaco en el cuerpo, esta proporciona información de valor sobre la concentración libre de fármaco en todo el cuerpo. Suponiendo que solo se encuentra disponible fármaco libre para ejercer un efecto farmacológico, entonces la determinación de la concentración de fármaco libre en plasma y la combinación de este con el conocimiento de la potencia del fármaco, proporciona una medida de la eficacia potencial de ese compuesto in vivo [véase William J. Jusko y Mark Gretch, "Plasma and tissue protein binding of drugs in pharmacokinetics", Drug Metabolism Reviews, 5(1), 43-140 (1976)].

(a) Análisis de muestras de plasma

Se administraron los compuestos de ensayo a un perro mediante infusión intravenosa durante 10 minutos para dar una dosis de 0,5 mg/kg. Se tomaron muestras sanguíneas en distintos momentos y se centrifugaron para dar lugar a muestras de plasma. Estas muestras se analizan usando espectrometría de masas para proporcionar concentraciones en plasma total.

Se prepararon de forma típica muestras y patrones de plasma (preparados usando blanco de plasma con trazas de compuesto en la concentración apropiada) mediante precipitación de proteína con acetonitrilo (MeCN) [MeCN/plasma 2:1], se centrifuga y se inyecta el sobrenadante en un sistema cromatografía líquida/espectro de masas/espectro de masas (LC/MS/MS) (PE Sciex API 365) que funciona en las siguientes condiciones:

Caudal:	1,0 ml/min
Columna:	Hypersil^{TM} BDS C18, 5 \mum, 4,6 mm diámetro interior x 50 mm
Fase móvil:	(A) acetato de amonio 5 mM en MeCN al 2%, H_{2}O al 98%
	(B) acetato de amonio 5 mM en MeCN al 90%, H_{2}O al 10%

Gradiente:

\hskip1cm 0,0 min	95% (A)	5% (B)
\hskip1cm 1,0 min	95% (A)	5% (B)
\hskip1cm 2,0 min	5% (A)	95% (B)
\hskip1cm 4,0 min	5% (A)	95% (B)
\hskip1cm 6,5 min	95% (A)	5% (B) Primeros 2,5 minutos desviados a residuos, el resto a MS

Volumen de inyección del sobrenadante preparado anteriormente: 150 \mul

Modo de EM: pulverización iónica, ion positivo, MRM

Tiempo de toma de muestras: 500 mseg	Tiempo de pausa: 50 mseg
Ajuste de gas de colisión: 1	Energía del ion: optimizada para cada compuesto.

Se determinaron las concentraciones en plasma total en el perro mediante comparación con la línea patrón construida (usando las muestras de plasma con trazas) para cubrir el intervalo de concentración esperado.

Resultados

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(b) Determinación de la unión de proteína en plasma mediante diálisis en equilibrio

Los procedimientos usados se basan en los principios descritos por Pacifici y Viani ["Methods of determining plasma and tissue binding of drugs", Clinical Pharmacokinetic Concepts 23(6), 449-468 (1992)]. Se describe a continuación un ejemplo de un procedimiento usado.

Se colocó plasma que contiene el compuesto de ensayo en una cámara (semicelda) separada por medio de una membrana semi-permeable (Spectra/Por^{TM} 1 47 mm diam MWCO 6-8000) de tampón isotónico a pH fisiológico en la otra semicelda. Se dejó que el sistema se equilibrase, de modo que los compuestos de bajo peso molecular se distribuyeron entre las dos cámaras (plasma y tampón), mientras que las moléculas de peso molecular alto quedaban restringidas en la cámara de plasma. En el equilibrio la concentración del compuesto de ensayo no unido es la misma a cualquier lado de la membrana. Se determinó entonces la concentración de compuesto de ensayo total en cada semicelda (usando esencialmente lo descrito anteriormente) y se calcula la extensión de unión de proteína en plasma.

El dializador Spectra/Por^{TM} Equilibrium Dyalizer usado para determinar la unión de la proteína fue suministrado por NBS Biologicals.

Resultados

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(c) Cálculo de las concentraciones en plasma libres

Fracción no unida (Fu) = concentración en tampón/concentración en plasma

o, proteína unida en % = (1-Fu) x 100

Se pueden determinar luego las concentraciones en plasma libre del compuesto.

Concentración en plasma libre = concentración en plasma total (a partir del procedimiento (a)) x fracción no unida (a partir del procedimiento (b))

Resultados

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A partir de los datos anteriores se puede expresar la concentración en plasma libre encontrada como un porcentaje de la concentración en plasma libre del compuesto de ensayo requerida para proporcionar eficacia (valor K_{b}, a partir del ensayo A anterior), y mediante multiplicación por 4, se puede estimar el porcentaje de K_{t} para una dosis de 2,0 mg/kg (una dosis probable a usar en la práctica):

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A partir de la tabla anterior se puede ver que únicamente el COMPUESTO Y y el compuesto X serían aún eficaces después de 24 horas tras una dosis intravenosa de 2,0 mg/kg (debido a que estarían presentes a un 100% del valor K_{b} o más).

Ensayo C

Inhibición de la respuesta presora inducida por la ET-1 en perros sabueso conscientes

Se llevaron a cabo estudios en perros sabueso conscientes preparados quirúrgicamente (13-17 kg) que se adaptaron bien al ambiente del laboratorio. La preparación quirúrgica se llevó a cabo bajo recuperación anestésica para insertar un catéter aórtico permanente con acceso externo entre las escápulas y los botones del ECG (electrocardiograma) subcutáneos que sobresalen, posicionados para el registro de electrocardiogramas. Durante los estudios se colocaron los perros, sin restricción al movimiento, en eslingas tipo "Pavlov". Se conectó el catéter aórtico a un transductor de presión para la medida de la presión arterial sistémica y los botones del ECG, vía cables al paciente, a un bio-amplificador para el registro de los electrocardiogramas. Se administró ET-1 como una infusión durante 15 minutos (25 pmoles/kg/min) mediante un catéter temporal insertado en la vena safena. Se administró compuesto de ensayo o placebo por toma oral (0,5 ó 2,0 mg/g) a 1 y 24 horas antes de la infusión de la ET-1. Los estudios individuales se experimentaron con no más de una dosis única de compuesto de ensayo o placebo en momento alguno. Se registraron la presión arterial sistémica y los electrocardiogramas durante una hora antes y una hora después del comienzo de la infusión de la ET-1. Se evaluaron los compuestos de ensayo mediante comparación de los efectos del placebo o compuesto de ensayo sobre la magnitud de la respuesta presora educida por la ET-1.

La administración oral de los compuestos de ensayo mostró una acción supresora excelente sobre las respuestas presora inducidas por la ET-1 en perros conscientes. Se muestran en las siguientes tablas los cambios en la presión arterial (\Delta mmHg):

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Se describe adicionalmente a continuación el tratamiento de perros con insuficiencia cardiaca congestiva.

La insuficiencia cardiaca congestiva (CHF) es un síndrome clínico complejo caracterizado por anormalidades de la función ventricular y cambios neurohumorales, acompañados por intolerancia al ejercicio, retención de fluidos y supervivencia reducida. Las principales causas de la CHF en animales de compañía (CA) son la hipertensión, miopatía de distintas etiologías y disfunción valvular, mientras que la enfermedad de la arteria coronaria, la principal causa en humanos, juega un papel menor [1]. La CHF es una enfermedad común con una prevalencia dependiente de la edad de 1-10% [2]. En la CHF debería determinarse siempre la presencia de una afección corregible. Desafortunadamente, sin embargo, el trastorno patofisiológico subyacente no es normalmente reversible mediante tratamiento específico, y solo se puede esperar que un enfoque preventivo presente un mayor impacto sobre el resultado de esta enfermedad. No obstante, debido a que el tratamiento específico no es posible en la mayoría de los pacientes con CHF clínicamente enfermos, el fin de la terapia vislumbrada en la presente invención es aminorar los síntomas y retardar el daño al miocardio progresivo para reducir la mortalidad y para mejorar la calidad de vida del animal de compañía y de su propietario.

El síndrome clínico de la CHF está dominado por la disfunción ventricular izquierda y la terapia con fármaco se enfoca frecuentemente a si la reversión de la disfunción ventricular izquierda puede mejorar tanto los síntomas como la prognosis.

La terapia actual se basa en gran medida en diuréticos (aproximadamente el 70% de los casos con cardiomiopatía dilatada) y digoxina (aproximadamente el 61% de los casos). Este régimen de terapia dual no mejora de forma significativa el resultado clínico de perros con enfermedad cardiaca ya que el tratamiento está aún asociado con una prognosis pobre en general (tasas de supervivencia de aproximadamente 17,5% en un año y aproximadamente 7,5% en dos años [3]). Los veterinarios, por tanto, emplean a veces la inhibición con ACE para tratar la enfermedad coronaria en perros (< 10% de los casos, referencia 3) y un ensayo clínico veterinario reciente reveló una ralentización significativa en la progresión de la enfermedad mediante el enalaprilo [4], pero no mejoraba la función cardiaca. Por lo tanto, hay necesidad de un mejor tratamiento que mejore la función cardiaca.

La endotelina (ET)-1, un péptido derivado del endotelio, puede provocar no sólo una vasoconstricción potente y prologada sino también la retención del sodio y activación de a catecolamina, angiotensina II y secreción de aldosterona. Estos efectos pueden contribuir de forma significativa al desarrollo y progresión de la CHF [5]. Se observan aumentos significativos de los niveles de ET-1 en plasma en CHF humana y estos valores se relacionan fuertemente con la supervivencia en pacientes con CHF [6]. El estudio llevado a cabo incluyó tanto puntos finales hemodinámicas como clínicos y se diseñó para asemejarse a la situación clínica tanto como sea posible. Un grupo de animales que recibió el tratamiento con inhibidor con ACE sirvió como control positivo.

Se indujo la insuficiencia cardiaca mediante estimulación ventricular rápida, que es un modelo bien establecido y documentado de forma extensiva [2, 9]. Es el único modelo de insuficiencia cardiaca que permite el control del grado de insuficiencia cardiaca mediante el ajuste de la velocidad de los estímulos por pulsos. Este ha mostrado ser adecuado para los experimentos planificados en trabajos farmacológicos previos en muchos estudios por parte de otros grupos usando clases de sustancias estrechamente relacionadas [7, 10].

Se miden en reposo los efectos de los fármacos durante los estados de insuficiencia cardiaca que preceden a la enfermedad clínica grave. De acuerdo con la clasificación de New York Heart Association (NYHA), que se usa comúnmente en la práctica veterinaria [4], la CHF se subdivide en 4 etapas clínicos de acuerdo con los siguientes criterios:

Etapa I

La actividad normal no produce fatiga, disnea o tos excesivas (únicamente perros). Se reduce la capacidad de ejercicio.

Etapa II

El perro/gato está cómodo en reposo pero la actividad física ordinaria provoca fatiga, disnea o tos (véase anteriormente).

Etapa III

El perro/gato está cómodo en reposo, pero el mínimo ejercicio produce fatiga o disnea.

Etapa IV

Insuficiencia cardiaca descompensada. La disnea está presente incluso en reposo, EI absoluto.

Durante el estudio los perros se estimularon por pulsos a velocidades de estimulación de hasta 220-240 bpm lo que lleva a una CHF que progresa de forma constante.

Se inicia el tratamiento con:

Grupo 1: placebo (Furosemida 4 mg/kg/día, dos veces al día per os, n = 6)

Grupo 2: antagonista del receptor de la ET (2 mg/kg/día, varias veces al día + Furosemida como anteriormente,
n = 6)

Grupo 3: maleato de enalaprilo (1 mg/kg/día dos veces al día per os + Furosemida como anteriormente) ( n = 6, control positivo)

2 semanas después del comienzo de la estimulación y se continúa durante 3 semanas. Durante el estudio se midieron tanto los parámetros clínicos (murmullos cardiacos, formación de edema, disnea) como también los hemodinámicos (CO, presión sanguínea, contractibilidad cardiaca y ritmo cardiaco) como los parámetros humorales (catecolaminas en plasma, ANF, ET-1) para determinar la morbilidad y calidad de vida de los animales.

Referencias

1: Detweiler D. K. y Patterson D. F. (\underline{1986}) The prevalence and types of cardiovascular disease in dogs. Ann. N. Y. Acad. Sci. 481-516.

2: Pensinger R. R. (\underline{1986}) Comparative aspects of congestive heart failure in dogs 335-345.

3: Tilholm A., Svensson H. y Sylven C. (\underline{1997}) Survival and prognostic factors in 189 dogs with dilated cardiomyopathy. J. Am. An. Hosp. Assoc. 33, 364-368.

4: Ettinger, S. J. y col. (\underline{1998}) Effects of enalapril maleate on survival of dogs with naturally acquired heart failure. JAVMA 213, 1573-1577.

5: Miller, WL y col. (\underline{1989}) Integrated cardiac, renal and endocrine actions of endothelin, J. Clin. Invest. 83, 317-320.

6: Pacher, R. y col. (\underline{1996}) Prognostic impact of big endothelin-1 plasma concentrations compared with invasive hemodynamic evaluation in severe heart failure. Am. J. Coll. Cardiol. 27, 633-641.

7: Moe, GW y col. (\underline{1998})Beneficial effects of long-term selective endothelin type A receptor blockade in canine experimental heart failure. Cardiovasc Res 39, 571-579.

8: Coleman, H.N. y col. (\underline{1971}) Congestive heart failure following chronic tachycardia. Am. Heart J 81: 790:798.

9: Hasenfuss, G. (\underline{1998})Animal models of cardiovascular disease, heart failure and hypertrophy Cardiovasc. Res 39: 60-76

10: Sato, N y col. (\underline{1999}) Mechanisms of desensitization to a PDE-inhibitor (milrinone) in conscious dogs with heart failure Am. J. Physiol 276: H1699-H1705.

Protocolo 1. Entrenamiento con cinta rodante

Durante los experimentos los perros tuvieron que correr (trotar) de forma voluntaria (durante más de 20 minutos) sobre una cinta rodante durante la medida continua de los parámetros hemodinámicos (cables conectados a los implantes).

Para asegurar el éxito del entrenamiento, solo se seleccionaron perros que mostraron que corrían 3 veces durante al menos cinco minutos de forma satisfactoria sobre la cinta rodante. Por el contrario, los animales que no corren sobre la cinte rodante después de 3 sesiones se consideraron como no válidos y se excluyeron del estudio.

Todos los perros que completaban de forma satisfactoria el entrenamiento se volvieron a examinar por parte de un cirujano veterinario y se declararon adecuados para el uso. El examen incluyó, a juicio del cirujano veterinario, una toma de muestra sanguínea repetida para hematología y analítica clínica.

Los perros entrenados (3 x 2/semanas = 6 primeros animales) se sometieron a un periodo prequirúrgico de 2 semanas. Durante este tiempo los animales se familiarizaron con los experimentadores y el laboratorio. Se llevaron a cabo otras sesiones de entrenamiento en la cinta rodante (mínimo 2) para asegurar la aptitud para el estudio.

2. Cirugía

Se colocan los instrumentos a los perros con las siguiente técnicas quirúrgicas de uso convencional:

- sonda de flujo arterial pulmonar (Triton)

- transductor de presión en la aorta (Konigsberg)

- cordón de estimulación (epicardial) + marcapasos

- cordón de ECG conectado a un transductor Konigsberg

- transductor de presión en el ventrículo izquierdo (Konigsberg)

3. Inspecciones diarias

Se llevaron a cabo inspecciones de salud diarias durante todo el estudio. Las inspecciones incluyeron: prueba cutánea, peso corporal, contorno, ritmo respiratorio (medidas cualitativas).

4. Inspecciones semanales

Se llevaron a cabo inspecciones de salud veterinarias adicionales de forma semanal (estado general, valoración cardiovascular y respiratoria, prueba cutánea)

4. Estudios de laboratorio

Durante el estudio se comprueban los perros de forma rutinaria en las siguientes ocasiones:

- Tras un periodo de recuperación post-quirúrgico antes de la estimulación (1x)

- Durante la estimulación antes del tratamiento con fármaco (1 x semana = 2 x)

- Durante el tratamiento (2 x/semana = 6 x en 3 semanas)

El protocolo llevó aproximadamente 90 minutos e incluyó

- Transporte de los animales hasta el laboratorio

- Medidas del basal tras desconexión del marcapasos y toma de muestra sanguínea (30 minutos)

- Ejercicio en cinta rodante (20 minutos)

- Recuperación (10 minutos)

- Retorno con el marcapasos conectado

5. Dosificación

La dosificación de los animales durante el periodo de tratamiento de 3 semanas tuvo lugar dos veces al día @ 8 am y 4 pm:

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La mejora en la función cardiaca se ilustra mediante el efecto del compuesto X sobre la presión diastólica final ventricular izquierda (LVEDP) en perros en reposo antes y durante la CHF progresiva inducida por estimulación a 210-240 bpm. Se administran los compuestos de ensayo durante 3 semanas mientras se continúa la estimulación. En el gráfico siguiente el eje Y es la LVEDP en mm y el eje X es el tiempo en semanas. Se observaron mejoras significativas tanto con placebo como con enalaprilo [en el estudio se trataron 5 perros con placebo, se trataron 3 perros con enalaprilo y se trataron 5 perros con compuesto X].

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Se estimulan con pulsos los perros durante 2 semanas para desarrollar CHF y luego se asignaron a tratamiento por toma oral bien con placebo (vehículo), compuesto X (2 mg/kg/día, varias veces al día) o enalaprilo (1 mg/kg/día, dos veces al día). Además, todos los animales recibieron la furosemida diurética (4 mg/kg/día, dos veces al día) durante todo el periodo de tratamiento. Durante periodo de tratamiento de 3 semanas, se continúa con la estimulación ventricular rápida. La estimulación llevó a un deterioro de la función del miocardio y circulatoria con progreso de la CHF como se indica mediante el aumento en la presión diastólica final ventricular (LVEDP) y reducciones de la contractilidad y salida cardiaca. Además, se analizaron todos los animales en cuanto a los parámetros clínicos de CHF por parte de un veterinario independiente. Todos los perros mostraron signos de insuficiencia ventricular izquierda y derecha como se indica mediante el edema pulmonar y ascitis suave a moderada, acompañados respectivamente por pérdidas de peso compensatorias.

Durante el estudio se estudiaron los perros dos veces a la semana en reposo y durante ejercicio estandarizado en una cinta rodante a dos velocidades diferentes. El compuesto X mejoró de forma significativa la LVEDP no solo en las condiciones de reposo sino incluso más aún durante el ejercicio en la cinta rodante. El compuesto X disminuyó la LVEDP por debajo de los valores de pre-tratamiento. Esto indica que este antagonista del receptor de la endotelina presenta el potencial para mejorar el estado de enfermedad de perros con CHF. Los efectos del compuesto X sobre la función circulatoria sistémica se manifestaron por medio de una menor presión sanguínea arterial (PA) y salida cardiaca mantenida o incluso incrementada.

Los efectos beneficiosos del compuesto X sobre las funciones hemodinámicas se evidenciaron en la observación clínica de los animales. Mientras que en el grupo del placebo tres de los seis animales desarrollaron intolerancia al ejercicio y por tanto alcanzaron insuficiencia cardiaca de clase III en la escala NYHA (I-IV), todos los animales tratados con compuesto X mantuvieron la tolerancia al ejercicio durante todo el estudio y se podrían asignar mejor por tanto a la clase II de la insuficiencia cardiaca.

En lo referente al tratamiento de gatos, se dosificaron oralmente tres gatos con insuficiencia clase IV con 2 mg/kg. La vida media medida fue de aproximadamente 4,5 horas en los gatos. La concentración total a las 24 horas tras una dosis oral de 2 mg/kg administrada a gatos fue de aproximadamente 232 ng/ml.

Los compuestos de fórmula I se administraran normalmente de forma oral o mediante cualquier ruta parenteral en forma de una preparación farmacéutica que comprende el ingrediente activo, de forma opcional en forma de un ácido orgánico, o inorgánico no tóxico, o base, sal de adición, en una forma de dosificación farmacéuticamente aceptable. Dependiendo del trastorno y del paciente a tratar, así como también de la ruta de administración, las composiciones se pueden administrar a dosis variables (véase más adelante).

Se pretende que los términos "farmacéutico", farmacéuticamente aceptable etc., incluyan los equivalentes veterinarios correspondientes cuando sea apropiado.

Si bien es posible administrar un compuesto de la invención directamente sin formulación alguna, los compuestos se emplean preferiblemente en forma de una formulación farmacéutica, o veterinaria, que comprende un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente o veterinariamente aceptable y un compuesto de la invención. El vehículo, diluyente o excipiente se puede seleccionar de acuerdo con la ruta pretendida de administración y la práctica farmacéutica y/o veterinaria convencional. Las composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la invención pueden contener del 0,1 por ciento en peso al 90,0 por ciento en peso del ingrediente activo.

Los procedimientos por los que se pueden administrar los compuestos para uso veterinario incluyen la administración oral de una cápsula, bolo, comprimido, polvo, poción, elixir, solución, pasta, suspensión, alimento o bebida medicinal tal como agua potable o formulaciones bucales o sublinguales, que pueden contener agentes aromatizantes, agentes de sabor y/o colorantes, que pueden incluir agentes para la liberación inmediata, retardada, modificada, sostenida, por pulsos o controlada, administración tópica como un ungüento, formulación para aplicación por vertido, formulación para aplicación por contacto directo sobre el punto de aplicación, inmersión, pulverización, mousse, champú, collar, etiqueta para la oreja o formulación en polvo, o, de forma alternativa, se pueden administrar por inyección (por ejemplo, subcutánea, intramuscular o intravenosa), o como un implante. Otras rutas posibles de administración son la intranasal, inhalaciones y supositoria. Tales formulaciones se pueden preparar de forma convencional de acuerdo con la práctica veterinaria convencional.

Para el tratamiento de animales de compañía tales como gatos, perros y caballos, los compuestos de fórmula I, o sus sales veterinariamente aceptables, se pueden administrar solos pero por lo general se administrarán en mezcla con un vehículo farmacéutico/veterinario seleccionado respecto a la ruta pretendida de administración y la práctica farmacéutica/veterinaria convencional. Por ejemplo, se pueden administrar de forma oral en forma de comprimidos que contengan excipientes tales como almidón o lactosa o en cápsulas u óvulos bien solos o en mezcla con excipientes o en la forma de elixires, soluciones o suspensiones que contienen la sustancia en un vehículo líquido, por ejemplo un aceite vegetal, glicerina o agua con un agente aromatizante o colorante. Estos se pueden inyectar de forma parenteral, por ejemplo de forma intravenosa, intramuscular o subcutánea. Para la administración parenteral, se usan mejor como soluciones acuosas estériles que pueden contener otras sustancias, por ejemplo, suficiente glucosa o sales para hacer la solución isotónica con la sangre. Para la administración parenteral la sustancia también se puede administrar como una solución o suspensión en un aceite adecuado, por ejemplo polietilenglicol, lecitina o aceite de sésamo.

Las sustancias se pueden administrar también mediante inhalación de una solución, suspensión o emulsión que se puede administrar como un polvo seco o en forma de un aerosol usando un propelente convencional tal como el diclorodifluorometano.

De forma alternativa, las sustancias se pueden administrar en forma de un supositorio o pesario, o se pueden aplicar de forma tópica en forma de una loción, solución, crema, ungüento o polvo pulverulento o en la forma de un emplaste, parche o membrana médica. Por ejemplo, se pueden incorporar en una crema que contenga una emulsión acuosa o polietilenglicoles o parafina líquida. Los compuestos se pueden administrar también de forma intranasal.

Las formulaciones variarán con respecto al peso del compuesto activo contenido en las mismas, dependiendo de la especie de animal que ha de tratarse, la gravedad y el tipo de infección y el peso corporal del animal. Para la administración parenteral, tópica y oral, los intervalos de dosis típicos del ingrediente activo son 0,01 a 100 mg por kg de peso corporal del animal. Preferiblemente el intervalo es de 0,1 a 10 mg por kg.

En cualquier caso, el practicante veterinario, o la persona especialista, será capaz de determinar la dosificación exacta que será la más adecuada para un paciente determinado, que puede variar con la especie, la edad, peso y respuesta del paciente determinado. Las anteriores dosificaciones son ejemplares del caso medio; por supuesto, pueden darse situaciones determinadas en las que se consideren intervalos de dosificación superiores o inferiores, y estos se encuentran dentro del alcance de esta invención.

Como una alternativa para el tratamiento de animales, los compuestos se pueden administrar con el pienso del animal y para este fin se puede preparar un aditivo alimenticio concentrado o una premezcla para la mezcla con el alimento normal del animal.

Los compuestos de fórmula I se pueden administrar bien solos o en combinación con uno o más agentes usados en el tratamiento o profilaxis de la enfermedad o en la reducción o supresión de los síntomas. Ejemplos de tales agentes (que se proporcionan a modo de ilustración y no se deberían entender como limitantes) incluyen antiparasitarios, por ejemplo, arilpirazoles tales como fipronilo, lufenurona, imidacloprida, avermectinas (por ejemplo, abamectina, ivermectina, doramectina, selamectina), milbemicinas, organofosfatos, piretroides, antihistaminas, por ejemplo clorofeniramina, trimeprazina, difenhidramina, doxilamina, antifungicidas, por ejemplo fluconazol, cetoconazol, itraconazol, griseofulvina, amfotericina B; antibacterianos, por ejemplo, enroflaxacina, marbofloxacina, ampicilina, amoxicilina; antiinflamatorios, por ejemplo, prednisolona, betametasona, dexametasona, carprofeno, cetoprofeno, suplementos dietéticos, por ejemplo ácido gamma-linoleico; agentes inotrópicos (por ejemplo digoxina), agentes diuréticos (por ejemplo furosemida) y emolientes. Por tanto, la invención proporciona además un producto que contiene un compuesto de la invención y uno o más compuestos seleccionados de la lista anterior como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento de enfermedades moduladas mediante receptores de la endotelina.

El especialista en la técnica también apreciará que los compuestos de la invención se pueden tomar como una dosis única o en una base "como se requiera" (es decir, como se necesite o se desee).

Tales formulaciones se preparan de manera convencional de acuerdo con la práctica farmacéutica o veterinaria convencional. Por tanto, se pueden preparar cápsulas, bolos o comprimidos mediante mezcla del ingrediente activo con un diluyente o vehículo finamente dividido adecuado que contenga adicionalmente un agente disgregante y/o aglutinante tal como el almidón, lactosa, talco o estearato de magnesio etc. Se preparan pociones orales mediante disolución o suspensión del ingrediente activo en un medio adecuado. Se puede preparar formulaciones de aplicación por vertido o de aplicación por contacto directo sobre el punto de aplicación mediante disolución del ingrediente activo en un vehículo portador líquido aceptable tal como el butildigol, parafina líquida o un éster no volátil, opcionalmente con la adición de un componente volátil tal como el propan-2-ol.

De forma alternativa, se pueden preparar formulaciones de aplicación por vertido, de aplicación por contacto directo sobre el punto de aplicación o de pulverización mediante encapsulado, para dejar un residuo del agente activo sobre la superficie del animal. Se pueden preparar formulaciones inyectables en forma de una solución estéril que puede contener otras sustancias, por ejemplo suficientes sales o glucosa para hacer la solución isotónica con la sangre. Vehículos líquidos aceptables incluyen aceites vegetales tales como aceite de sésamo, glicéridos tales como triacetina, ésteres tales como benzoato de bencilo, miristato de isoproprilo y derivados de ácido graso de propilenglicol, así como también disolventes orgánicos tales como pirrolidin-2-ona y glicerolformal. Las formulaciones se preparan mediante disolución o suspensión del ingrediente activo en el vehículo líquido, de modo que la formulación final contenga de 0,1 a 10% en peso del ingrediente activo.

Estas formulaciones variarán respecto al peso de la sustancia activa contenida en su interior, dependiendo de la especie de animal que ha de tratarse, la gravedad y tipo de infección y el peso corporal del animal. Para la administración parenteral, tópica y oral, los intervalos de dosis típicos de ingrediente activo son de 0,01 a 100 mg por kg de peso corporal del animal. Preferiblemente el intervalo es de 0,1 a 10 mg por kg, más preferiblemente de 0,5 a 5 mg por kg, lo más preferiblemente de 2 a 4 mg/kg, por ejemplo de aproximadamente 2 mg por kg o 4 mg por kg.

Las composiciones se formulan preferiblemente en una forma de dosificación unitaria, conteniendo cada dosificación de aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg, más usualmente de aproximadamente 5 a aproximadamente 300 mg del ingrediente activo. El término "forma de dosificación unitaria" se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para sujetos humanos y otros mamíferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, junto con un vehículo farmacéutico adecuado.

Como una alternativa para el uso veterinario las sustancias se pueden administrar con el pienso del animal y para este fin se puede preparar un aditivo alimenticio concentrado o una premezcla para la mezcla con el alimento normal del animal.

Así pues, la invención proporciona adicionalmente una formulación que contiene un compuesto de fórmula I, tal como se definió anteriormente, o una sal veterinariamente aceptable del mismo, caracterizada porque se adapta para la administración a un animal de compañía. Las formulaciones adecuadas incluyen aquellas adaptadas para la administración oral, que presentan un gusto atractivo para el animal de compañía (por ejemplo, contiene un agente aromatizante adecuado).

Preferiblemente, la ruta de administración es oral.

Preferiblemente, la formulación es un comprimido aromatizado o no aromatizado.

Preferiblemente, la dosificación administrada al animal de compañía es de aproximadamente 2 a aproximadamente 4 mg/kg, es decir, para un animal de 10 kg la dosificación unitaria contiene aproximadamente de 20 a aproximadamente 40 mg del compuesto de fórmula I.

Una realización preferida es aquella en la que el compuesto de fórmula I se administra con un agente activo adicional seleccionado entre un agente inotrópico (por ejemplo digoxina), y un agente diurético (por ejemplo furosemida). La co-administración puede ser secuencial o simultánea y las rutas de administración de los agentes activos separados pueden ser diferentes o pueden ser las mismas.

Claims

1. El uso de un compuesto de fórmula I,

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Ar representa:

o una sal veterinariamente aceptable del mismo;

en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de un trastorno mediado por la endotelina en un animal de compañía,

en donde el animal de compañía es un gato, un perro o un caballo.

2. El uso según la reivindicación 1, en el que el trastorno mediado por la endotelina es la hipertensión, la insuficiencia cardiaca congestiva o la insuficiencia renal crónica.

3. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que R^{1} y R^{2} representan cada uno H.

4. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que R^{3} y R^{4} representan cada uno H.

5. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que Ar representa fenilo, naftilo o tienilo, cuyos grupos están opcionalmente sustituidos por uno o más grupos seleccionados entre alquilo C_{1-6}, halo, CF_{3}, alcoxi C_{1-6}, CO_{2}H y alcoxi C_{1-6}-carbonilo.

6. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que Ar es fenilo.

7. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el uso es para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la insuficiencia cardiaca congestiva en un perro.

8. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el uso es para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la insuficiencia renal crónica en un gato.

9. Una formulación que contiene un compuesto de fórmula I, como se define en la reivindicación 1, o una sal veterinariamente aceptable del mismo, caracterizada porque se adapta para la administración a un gato, un perro o un caballo.

10. Una formulación según la reivindicación 9, que se adapta a la administración oral y presenta un gusto atractivo para el gato, perro o caballo.

11. Un paquete farmacéutico que comprende una formulación de acuerdo con la reivindicación 9 ó 10 e instrucciones que describen el tratamiento de la insuficiencia cardiaca congestiva en un perro.

12. Un paquete farmacéutico que comprende una formulación de acuerdo con la reivindicación 9 ó 10 e instrucciones que describen el tratamiento de la insuficiencia renal crónica en un gato.