ES2219672T5

ES2219672T5 - Eritropoyetina secada por atomización.

Info

Publication number: ES2219672T5
Application number: ES95943452T
Authority: ES
Inventors: Deepak B. Mehta; Diane C. Corbo; Khurshid Iqbal
Original assignee: Ortho Pharmaceutical Corp
Current assignee: Ortho Pharmaceutical Corp
Priority date: 1994-12-16
Filing date: 1995-12-15
Publication date: 2011-09-26
Anticipated expiration: 2015-12-15
Also published as: FI119723B; NO972725D0; US6235710B1; PT805822E; AU4471396A; TW425287B; EP0805822A1; WO1996018647A1; JP4039686B2; CN1175261A; NZ298981A; IL116085A0; EP0805822B2; ATE265468T1; JPH10511087A; DE69532970T3; ZA9510708B; DE69532970D1; AU697287B2; CN1117762C

Abstract

LA PRESENTE INVENCION PROPORCIONA UN METODO PARA PREPARAR RHEPO ESTABLE, DESHIDRATADA POR ROCIADO Y EL POLVO DE RHEPO PRODUCIDO MEDIANTE DICHO METODO.

Description

La presente invención se refiere a un procedimiento para la preparación de eritropoyetina secada por atomización y a la eritropoyetina seca en polvo producida de este modo.

Antecedentes de la invención

La eritropoyetina (EPO) es una hormona glucoproteica sintetizada sobre todo en el riñón y es el regulador principal de la producción de eritrocitos en el cuerpo. La EPO humana disponible comercialmente se produce a través de técnicas de ADN recombinante y se conoce como EPO humana recombinante (rhEPO). La rhEPO tiene una masa molecular de aproximadamente 36.000 Da, determinada mediante SDS-PAGE. La masa molecular del núcleo proteico es de 18.398 Da, lo que indica que toda la molécula está fuertemente glucosilada. Los residuos de hidratos de carbono son importantes para la actividad biológica in vivo.

El mantenimiento de las proteínas, tales como la rhEPO, en su estado nativo en disolución acuosa o en fase sólida es un reto principal para los que trabajan en el campo de las formulaciones farmacéuticas. La existencia de una proteína en su estado nativo depende de la concentración de proteína, la temperatura y la naturaleza del disolvente, la fuerza iónica del tampón, etc. Los cambios en cualquiera de estos parámetros pueden afectar a la estabilidad de una proteína en disolución o en fase sólida.

Las preparaciones comerciales de rhEPO se comercializan actualmente tanto como soluciones acuosas diluidas como en forma liofilizada, que se usa para formar una disolución acuosa diluida, y ambas formas se administran al organismo mediante inyección. La concentración de rhEPO en estas preparaciones es muy baja y la rhEPO se elimina del organismo de forma bastante rápida después de la administración. Considerando esta limitación en las preparaciones actuales, son necesarias preparaciones concentradas de rhEPO, por ejemplo aquellas que contengan cantidades elevadas de rhEPO, que se puedan usar en sistemas alternativos de administración de fármacos. Nosotros usamos técnicas de secado por atomización para preparar dichas preparaciones.

El secado por atomización de moléculas farmacéuticas se conoce en la técnica. Por ejemplo, véase Broadhead, J. et al., "The Spray Drying of Pharmaceuticals," en Drug Dev. Ind. Pharm, 18 (11 y 12), 1169-1206 (1992). Además de pequeñas moléculas farmacéuticas, se han secado por atomización una variedad de materiales biológicos y entre estos se incluyen: enzimas, sueros, plasma, microorganismos y levaduras. El secado por atomización es una técnica útil ya que puede convertir una preparación farmacéutica líquida en un polvo fino, que no se levanta o aglomerado, en un proceso de etapa única. La técnica básica comprende las siguientes cuatro etapas:

a) atomización de la solución de alimentación dando un espray;

b) contacto aire-espray;

c) secado del espray; y

d) separación del producto seco del aire secante.

Aunque se conoce en el campo farmacéutico, el secado por atomización no se ha usado mucho para proteínas terapéuticas, tales como la rhEPO. Una aparente razón para esto es la consideración de que dichas proteínas se pueden degradar térmicamente a las elevadas temperaturas utilizadas en el proceso de secado por atomización. Esto es especialmente cierto respecto a las glucoproteínas complejas, tales como la rhEPO, que, además de sus esqueletos polipeptídicos, también tienen complejos fragmentos de hidratos de carbono ramificados que se requieren para la actividad biológica. La disponibilidad de la liofilización como una alternativa al alcance apartó a los trabajadores en este campo del uso del secado por atomización para proteínas terapéuticas. Sin embargo, el secado por atomización proporciona determinadas ventajas sobre la liofilización: es más económica, rápida y fácil de aumentar de escala. También, los polvos secados por atomización son a menudo más tratables que los polvos liofilizados para el procesamiento posterior.

Por lo general es poco práctico diseñar formulaciones basadas simplemente en la liofilización del fármaco a granel. Esto se debe a que muchos polipéptidos son relativamente inestables cuando se liofilizan a bajas concentraciones y pueden adsorberse al contenedor del producto y perder actividad. Con el fin de superar estos problemas, muchas composiciones farmacéuticas liofilizadas cuentan con el uso de diluyentes sólidos, crioprotectores o agentes voluminizadores para aumentar la cantidad de material sólido presente durante el proceso de liofilización. Como resultado, el material final liofilizado contiene un pequeño porcentaje (p/p) de fármaco activo mezclado con un gran porcentaje de otro material sólido.

En contraste, la presente invención proporciona un procedimiento para producir un polvo de rhEPO a partir de rhEPO a granel en el que el polvo producido es rhEPO pura o esencialmente pura o tiene un elevado porcentaje (p/p) de rhEPO que se puede preparar utilizando técnicas de liofilización tradicionales.

Resumen de la invención

La presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de rhEPO estable secado por atomización y el polvo de rhEPO producido de ese modo.

El procedimiento de la presente invención comprende primero el proporcionar una disolución acuosa de rhEPO con un concentración dentro del intervalo desde aproximadamente 20 mg/ml a aproximadamente 100 mg/ml. Esta disolución se atomiza entonces en un atomizador y el atomizador se seca con aire caliente con el fin de evaporar el agua del atomizador. La rhEPO seca producida de este modo se separa después del aire secante.

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La disolución acuosa inicial puede contener, además de rhEPO, excipientes tales como el manitol, la glicina y/o un tensioactivo. La composición de rhEPO seca producida por el procedimiento de la presente invención comprende rhEPO en una concentración dentro del intervalo del 4,0% al 100% (p/p) y tiene un contenido de humedad residual dentro del intervalo de aproximadamente 3,0% a aproximadamente 5,0% (p/p). El tamaño de las partículas de la composición se encuentra dentro del intervalo de aproximadamente 2,0 micrómetros a aproximadamente 6,0 micrómetros.

Descripción detallada de la invención

Se usó una disolución concentrada de rhEPO de al menos 20 mg/ml para su secado por atomización. La disolución acuosa concentrada se atomizó en diminutas gotas mediante bombeo a través de un nebulizador con aire comprimido. Después se introdujeron las gotas en una cámara de secado y se evaporó el agua mediante el aire secante caliente que fluía a co-corriente con la solución de alimentación. Conforme el agua se evaporaba, la rhEPO sólida y los excipientes, si los había, se separaban de las gotas acuosas. La rhEPO seca se transportó mediante la corriente de aire secante hacia un separador de turbulencia para clarificación, es decir, la rhEPO seca se separó del aire secante, y el producto seco se recogió en el recipiente de recolección acoplado al fondo del separador de turbulencia. El aire secante se expulsó después a la atmósfera a través de un purificador adecuado.

Como se usa aquí, la frase "rhEPO" se refiere a cualquier proteína con todo o parte del esqueleto polipeptídico descrito para rhEPO en el documento U.S. 4.703.008 y que posee la propiedad biológica de provocar que las células de la médula ósea aumenten la producción de reticulocitos y eritrocitos y aumenten la síntesis de hemoglobina o la captación de hierro. Se prevé que se pueden usar en la presente invención los fragmentos, los análogos o los derivados sintetizados químicamente de EPO que sean biológicamente activos, en lugar de rhEPO, a condición de que dichos fragmentos o derivados retengan la actividad biológica de rhEPO. Determinados análogos de la EPO se describen en el documento U.S. 4.703.008. Por esto, se considera que el uso de dichos análogos, fragmentos o derivados de la EPO biológicamente activos, se encuentra dentro del alcance de la presente invención.

Los polvos de rhEPO concentrada producidos por la presente invención se pueden usar en sistemas alternativos de administración de fármacos para administrar la rhEPO. Uno de esos sistemas es un sistema de administración de liberación controlada que administra la rhEPO en el cuerpo a una velocidad predeterminada durante un periodo de tiempo definido. De manera alternativa, los polvos de rhEPO concentrada se pueden reconstituir con agua para inyección o con solución salina normal para formar disoluciones acuosas adecuadas para el uso terapéutico humano. Los sistemas de liberación controlada mencionados antes se idean para incluir rhEPO situada dentro de un material polimérico, de vesículas o de una minibomba, así como de conjugados macromoleculares de rhEPO y otros materiales poliméricos. Entonces, estos sistemas se pueden usar como implantes subdérmicos de depósito de rhEPO concentrada. Entre los ejemplos no limitantes de estos sistemas se incluyen las matrices de polímeros hidrofóbicos sólidos que rodean a la rhEPO, tales como los copolímeros no degradables de etileno-acetato de vinilo

o los copolímeros degradables de ácido láctico-ácido glicólico. Tales polímeros hidrofóbicos pueden presentar además la forma de microesferas.

La presente invención proporciona un polvo estable de rhEPO. Como se usa aquí, «estable» significa que la rhEPO mantiene su actividad biológica en el tiempo y su estructura se mantiene en el estado nativo, es decir, no se oxida o se degrada de otra manera hacia otras especies químicas. La estabilidad se puede demostrar mediante RIA, transferencia Western y ensayos biológicos in vivo o in vitro.

Los ejemplos siguientes se presentan para ilustrar la invención propuesta. La invención no se considera limitada por estos ejemplos, sólo por las reivindicaciones adjuntas.

Ejemplo 1

Procedimiento de secado por atomización para rhEPO

Este ejemplo describe un procedimiento de secado por atomización utilizado para producir rhEPO amorfa exclusivamente en forma sólida o en conjunción con excipientes inertes y farmacéuticamente aceptables. La masa amorfa de rhEPO así formulada es estable almacenada durante al menos 6 meses a 5°C (refrigerador). La bibliografía actual que describe el secado por atomización de proteínas terapéuticas es limitada y no plantea la estabilidad de las proteínas terapéuticas en la forma seca a concentraciones elevadas, tales como 25% (p/p) y superiores. Por ejemplo, véase Mumenthaler et al., Pharm. Res. 11:12-20 (1994). Además, la bibliografía actual no proporciona evidencias suficientes de la estabilidad de estas proteínas en la forma sólida. De hecho, parte de la bibliografía muestra una estabilidad insatisfactoria que se puede atribuir a los excipientes o a las condiciones del proceso empleadas. Por ejemplo, se sabe que determinadas sales inorgánicas, aminoácidos, tensioactivos, etc. estabilizan las proteínas en disolución. Sin embargo, la presencia de sales citrato en masa de rhEPO no proporcionó una rhEPO estable secada por atomización. Por lo tanto, se dializó rhEPO a granel en agua para inyección antes del secado por atomización. Con el fin de obtener un rendimiento satisfactorio del producto con el secado por atomización, se continuó la diálisis hasta que la concentración de la rhEPO estaba dentro del intervalo de 20-100 mg/ml. Estas disoluciones concentradas de rhEPO en agua para inyección mostraron una estabilidad satisfactoria, almacenada a 5°C durante al menos 6 meses. Una técn ica alternativa para preparar proteínas secas, denominada liofilización, no era adecuada para rhEPO debido a su baja estabilidad, sin distinción de la presencia de sales citrato (véase el Ejemplo 2).

El procedimiento para preparar rhEPO sólida y rhEPO en polvo con excipientes consta de las dos siguientes etapas:

A. Diálisis y concentración de rhEPO a granel; y

B. Secado por atomización de rhEPO a granel dializado

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A. Diálisis y concentración

rhEPO a granel proporcionado en tampón citrato 20 mM se dializó para eliminar todo el citrato y se repuso con agua para inyección. La diálisis se realizó como sigue:

rhEPO a granel (200 ml) en tampón citrato (concentración aproximada de 2,0 mg/ml) se vertió sobre un dializador Amicon® adaptado con una membrana de diálisis para moléculas con una masa molecular inferior de 10,000. Esta celda de diálisis se acopló a un recipiente de acero inoxidable que contenía agua para inyección y se conectó el recipiente a un tanque de nitrógeno gaseoso. La diálisis se realizó a 206,8 -275,8 kPa y continuó hasta que se recogieron al menos 2000 ml de dializado. La disolución acuosa resultante de rhEPO, carente de cualquier citrato, se concentró después hasta una concentración final de aproximadamente 20 a aproximadamente 100 mg/ml de rhEPO. La disolución acuosa concentrada resultante de rhEPO se almacenó después a 5°C hasta que se secó por atomiz ación. Las disoluciones concentradas de rhEPO también se monitorizaron para la estabilidad de la rhEPO a 5°C.

B. Secado por atomización

El proceso de secado por atomización consta de las siguientes etapas:

1.: Atomización de la solución de alimentación;

2.: Puesta en contacto aire-atomizador;

3.: Evaporación del disolvente;

4.: Clarificación de la forma sólida seca de los gases secantes. En el proceso se usó un atomizador para secado a escala de laboratorio (Buchi®, Modelo 190).

1.: Atomización:

La disolución acuosa de rhEPO se introdujo en la tobera del atomizador (0,5 mm de diámetro interior) a temperatura ambiente utilizando una bomba peristáltica. La alimentación líquida se atomizó en pequeñas gotículas mediante aire a alta presión. Dicha atomización también se puede conseguir utilizando un disco rotatorio.

2.: Contacto aire-atomizador y evaporación:

Conforme las gotículas entraban en la cámara de evaporación (105 mm de diámetro interior x 450 mm de largo), el agua se evaporaba mediante la co-corriente de flujo de aire caliente secante. La temperatura del aire secante variaba entre 64°C -80°C. Mientras que el agua se evaporaba, el sólido se separaba de la disolución acuosa en forma de esferas o semiesferas. El secado también se puede realizar mediante la técnica de contracorriente, en la que el aire secante y la solución de alimentación fluyen en sentidos opuestos.

3.: Clarificación:

Mediante la corriente de aire secante se llevó el polvo secado a un separador de tipo ciclón para la clarificación. En el separador de tipo ciclón, la masa sólida seca se separó del aire secante. El producto secado se recogió en un recipiente de recolección acoplado al fondo del separador de tipo ciclón. El aire secante (sin el producto secado) se expulsó a través de un depurador de finos a la atmósfera.

C. Caracterización química

Una cantidad conocida de la rhEPO secada por atomización se disolvió en agua para inyección. Esta disolución acuosa se analizó entonces como sigue:

1.: Radioinmunoanálisis (RIA):

El procedimiento utilizado fue el de Egrie et al., J Immunol Meth, 99: 235-241 (1987). Este procedimiento consiste en conjugar rhEPO con un anticuerpo policlonal de conejo (formado frente a rhEPO). Esto se consiguió mediante la incubación de rhEPO con el anticuerpo policlonal de conejo durante la noche a temperatura refrigerada. La incubación continuó durante otro día más bajo las mismas condiciones tras añadir EPO marcada con 125I. El complejo antígeno-anticuerpo se precipitó con el anticuerpo anti-conejo de cabra, suero normal de conejo y polietilenglicol. El complejo precipitado se lavó y la cantidad de EPO marcada con 125I unida se determinó mediante un contador gamma. Este procedimiento se repitió para disoluciones estándar de rhEPO de concentraciones conocidas y disoluciones de muestras de análisis. Las concentraciones de rhEPO de las muestras de análisis se calcularon mediante la comparación de las lecturas del contador gamma con las lecturas de las disoluciones estándar de rhEPO.

2.: Transferencia western:

El procedimiento usado fue el descrito en Egrie et al. Immunobiol, 172: 213-224 (1986). Una alícuota de 0,5 µg de rhEPO desnaturalizada se cargó en un gel estándar de poliacrilamida (12,5%) con dodecilsulfato sódico (SDSPAGE). Se realizó la electroforesis y el gel se transfirió a una membrana de nitrocelulosa utilizando un tampón de transferencia constituido por TRIS, glicina y metanol. Esta membrana de nitrocelulosa se bloqueó con 5 % de leche desnatada en solución salina tamponada con TRIS. La transferencia bloqueada de nitrocelulosa que contenía rhEPO se conjugó después con un anticuerpo monoclonal anti-humano de ratón seguido de un anticuerpo policlonal antiratón de cabra. Entonces se realizó la tinción de este complejo utilizando un equipo de reactivos con sustrato conjugado con fosfatasa alcalina. Cada transferencia contenía un patrón de rhEPO, un patrón de rhEPO que contenía una cantidad conocida de agregados de rhEPO, y muestra(s) de análisis. Se comparó la intensidad de la muestra de análisis con la del patrón de rhEPO, y del patrón de agregados.

5 3. Ensayo biológico en ratón:

Una cantidad conocida de rhEPO secada por atomización se reconstituyó en agua para inyección. La actividad biológica de esta solución se midió mediante control de la velocidad de incorporación de hierro en ratones exhipóxicos después de la inyección de la solución de rhEPO. El procedimiento empleado fue el de Cotes et al., Nature, 121:1065-1067 (1961).

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TABLA 1

Ejemplos de formulación:

Nº: Componentes Formulación nº (cantidades en gramos)

I: II III IV V

1.: rhEPO 0,0813 0,162 1,5 25 25

2.: Glicina 1,00 2,00 0 37,5 37,495

3.: Manitol 1,00 2,00 0 37,5 37,495

4.: Tween® 80 0,01 0 0 0 0,01

5.: API (hasta) 100 100 100 2000 2000

Nota: API = Agua para inyección La formulación nº II se secó por atomización a dos temperaturas de entrada diferentes de 64°C y 80°C.

Se prepararon cinco soluciones mediante la disolución uno por uno de excipientes tales como el manitol, la glicina y/o Tween® 80 en una disolución acuosa concentrada de rhEPO, con agitación suave. En el caso de la formulación

15 III, no se añadieron excipientes. Las formulaciones para estas disoluciones se explican en la Tabla 1 anterior. Todas estas disoluciones se secaron por atomización de acuerdo con los parámetros de secado por atomización enumerados a continuación:

Velocidad de alimentación de la solución: 1 ml/min

Velocidad de atomización del aire: 600-700 l/h a condiciones normales de presión y temperatura.

20 Velocidad del aire secante: 32.000 a 45.000 l/h.

Temperatura de entrada: 64 C -80°C

Temperatura de salida: 46 C -65°C

Tras el secado por atomización, el contenido final de rhEPO sólida para las formulaciones I y II era de aproximadamente el 4% (p/p), para la formulación III era del 100% p/p y para las formulaciones IV y V fue del 25%

25 (p/p) de rhEPO. El contenido de humedad residual variaba desde el 3,0% al 5,0% (p/p), determinado mediante el procedimiento Karl-Fisher (USP XXIII-NF XVII, págs. 1840-1843, procedimiento 1a (1995)). El tamaño de partícula fue de 4,1 micras ± 1.89 para la formulación III secada por atomización.

Los experimentos preliminares que utilizan rhEPO a granel conteniendo tampón citrato no proporcionaron rhEPO estable secada por atomización con manitol, glicina y/o Tween® 80. Por lo tanto, la diálisis de rhEPO a granel para

30 eliminar las sales citrato fue esencial para el secado por atomización. Con el fin de obtener un buen rendimiento con el secado por atomización, la solución de alimentación debía tener un contenido de sólidos de al menos 2%. Por consiguiente, la solución dializada de rhEPO se concentró hasta 20-100 mg/ml.

Al comparar los datos de estabilidad de las formulaciones I y II y las formulaciones IV y V se determinó que Tween® 80 no era necesario para producir rhEPO estable secada por atomización. También, los datos de estabilidad a 6 meses sobre la rhEPO pura sugieren que el manitol y/o la glicina pueden no ser necesarios para producir rhEPO estable secada por atomización. De ese modo, si se usan, el manitol y la glicina simplemente parecen tener la

5 función de agentes voluminizadores (como sustancias de ajuste isotónico/isosmótico) que se pueden usar para modificar la concentración de rhEPO en la formulación final de rhEPO secada por atomización.

La rhEPO secada por atomización de la presente invención presenta ventajas sobre la rhEPO liofilizada. A modo de comparación, las formulaciones I, II y III también se liofilizaron (véase el ejemplo 2). Sin embargo, los datos del RIA para las muestras liofilizadas almacenadas durante 2 meses a 5°C están entre el 73-78% de la indicació n de la

10 etiqueta (label claim, LC). Estos valores bajos de potencia de EPO (determinados mediante RIA) indican inestabilidad, a una duración tan corta de almacenamiento. También, las muestras liofilizadas de 6 meses mostraron más del 2% de agregados de EPO en la SDS-PAGE después de la reconstitución. Esto indica inestabilidad de la rhEPO reconstituida. Con esto, las formulaciones secadas por atomización fueron más estables que las formulaciones liofilizadas de la misma composición.

15 Las tablas de estabilidad de las formulaciones secadas por atomización número III y IV mencionadas antes se explican a continuación. En ambos casos, las muestras se almacenaron a 5°C y en cada medida se confirmó la presencia de rhEPO con menos del 2% de agregados mediante análisis por transferencia Western.

TABLA 2

Datos de estabilidad para la formulación nº IV

TIEMPO: Conc. esperada (U/ml) RIA (U/ml) RIA (% LC)

0: 31.500 35.049 111

1: 30.843 34.188 111

2: 30.121 29.646 98

6: 29.250 28.521 97,5

20 TABLA 3

Datos de estabilidad para la formulación nº III

TIEMPO: Conc. esperada (U/ml) RIA (U/ml) RIA (% LC)

0: 142.169 120.339 84

1: 123.614 96.295 78

2: 120.482 106.523 88

3: 125.542 109.520 87

6: 118.554 115.441 97

Ejemplo 2

Proceso de liofilización para EPO

El ejemplo describe un proceso de liofilización utilizado para producir rhEPO seca en forma pura o con una

25 combinación de excipientes farmacéuticamente aceptables. Se determinó la estabilidad de la rhEPO liofilizada y los resultados se presentan a continuación. Todas las preparaciones de rhEPO utilizadas en este ejemplo también se secaron por atomización como se ha descrito antes. Los procedimientos de RIA y de transferencia Western se realizaron esencialmente como se ha descrito antes para el ejemplo de la rhEPO secada por atomización.

Un ciclo típico de liofilización para la liofilización de disoluciones de rhEPO sin excipientes se inició al congelar la

30 disolución a -40 C aproximadamente y mantener esa temperatura durante unas tres horas para asegurarse de que la disolución se congelara completamente. Mientras que la disolución se estaba congelando, se disminuyó la temperatura del condensador hasta aproximadamente -50°C. El secado primario se llevó a cabo mediante un primer descenso de la presión en la cámara de secado hasta aproximadamente 26,66 kPa, y el sistema se dejó estabilizar

durante tres horas aproximadamente. Después se aumentó la temperatura hasta aproximadamente -30°C a la velocidad de aproximadamente 0,1°C por minuto. El se cado (mediante la sublimación del hielo a vapor de agua) continuó durante unas 60 horas. El secado secundario se realizó al aumentar la temperatura del producto hasta aproximadamente 15°C, a la velocidad de aproximadam ente 0,5°C por minuto. La presión en la cámara de s ecado 5 se redujo además de aproximadamente 26,66 kPa a aproximadamente 13,33 kPa. La fase de secado secundario continuó durante unas 16 horas para asegurar un secado completo. Tras el secado secundario, se taparon y se sellaron los viales. Los viales sellados se almacenaron a unos 5°C hasta que se recogieron para el aná lisis de estabilidad descrito a continuación. Para analizar la estabilidad, los contenidos del vial se reconstituyeron con agua, y se analizaron mediante RIA y transferencia Western. Los resultados del análisis de estabilidad se recopilaron como

10 porcentaje de rhEPO restante. Los porcentajes menores de rhEPO restante demostraban una estabilidad escasa. Los resultados de la transferencia Western determinan si la rhEPO está en forma nativa o en una forma agregada desnaturalizada. Las muestras de rhEPO que tienen más de un 2% de agregados, comparado con un patrón de 2% de agregados de rhEPO, se definen por tener una estabilidad escasa. Los resultados de los análisis de estabilidad realizados sobre rhEPO liofilizada en distintas formulaciones se presentan en la Tabla 4.

15 TABLA 4

Estabilidad como porcentaje de indicación de la etiqueta de EPO en una formulación liofilizada a 5°C

Formulación: RIA Transferencia Western

Inicial: 1 mes 2 meses Inicial 1 mes 2 meses 6 meses

I: 93,2 71,5 75,0 Presencia confirmada de EPO menos del 2% de agregados más del 2% de agregados

II: 82,0 76,5 72,9

III: 79,6 69,7 78,1

Los datos mostrados en la tabla 4 demuestran que la rhEPO liofilizada no se mantiene tan estable como la rhEPO secada por atomización. Por lo tanto, el secado por atomización de rhEPO produce un producto más estable comparado con la liofilización. La presente invención proporciona por lo tanto una rhEPO estable, secada por

20 atomización, que se puede preparar sin la adición de ningún excipiente o estabilizador, tales como ciclodextrinas, glicina, manitol o Tween 80. Una preparación sin excipientes de rhEPO es deseable para determinados sistemas de administración de fármacos, tales como la administración por vía pulmonar, que requiere normalmente que el fármaco no contenga excipientes en tanto sea posible.

La invención se ha descrito en la presente con relación a determinados ejemplos y realizaciones preferidos. Dado

25 que surgirán variaciones obvias para aquellos expertos en la técnica, la invención no se considera limitada a ello, sólo por las reivindicaciones que siguen.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un procedimiento para preparar rhEPO secada por atomización, fragmentos, análogos o derivados sintetizados químicamente de la misma, que comprende:

(a) proporcionar una disolución acuosa de rhEPO, fragmentos, análogos o derivados sintetizados 5 químicamente de la misma, con una concentración dentro del intervalo de 20 mg/ml a 100 mg/ml;

(b)

la atomización de dicha solución dando un espray;

(c)

el secado de dicho espray con aire secante caliente con el fin de evaporar el agua del atomizador; y

(d)

la separación del aire secante de la rhEPO, los fragmentos, los análogos o los derivados sintetizados químicamente de la misma, secos,

10 en el que dicha rhEPO, los fragmentos, los análogos o los derivados sintetizados químicamente de la misma, poseen la propiedad biológica de provocar que las células de la médula ósea aumenten la producción de reticulocitos y eritrocitos y aumenten la síntesis de hemoglobina o la captación de hierro.
2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la disolución acuosa de rhEPO, fragmentos, análogos o derivados sintetizados químicamente de la misma, no contiene sales u otros aditivos.

15 3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la disolución acuosa se dializa para eliminar las sales antes de la etapa (b).
4. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la disolución se atomiza introduciéndola a presión en una tobera.
5. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el atomizador y el aire secante pasan a través del secador en 20 la misma dirección.
6.

El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la rhEPO, los fragmentos, los análogos o los derivados sintetizados químicamente de ésta, secos, se separan en un separador de tipo ciclón.
7.

El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el secado se realiza dentro de un intervalo de temperaturas de 60°C a 85°C.

25 8. Una eritropoyetina humana recombinante (rhEPO) secada por atomización que tiene la siguiente formulación:

Componente

% (p/p)

a)

rhEPO 25

b)

Manitol 37,5

c)

Glicina 37,5

habiéndose obtenido la rhEPO secada por atomización por el procedimiento de la reivindicación 1.
9.

La rhEPO de la reivindicación 8, que contiene de manera adicional un tensioactivo.
10.

Una composición de rhEPO secada por atomización, que comprende rhEPO en una concentración dentro del

30 intervalo del 4,0% al 100% (p/p) y con un contenido de humedad residual dentro del intervalo del 3,0% al 5,0% (p/p), habiéndose obtenido dicha composición de rhEPO por el procedimiento de la reivindicación 1.
11. La composición de la reivindicación 10, en la que el tamaño de las partículas está dentro del intervalo de 2,0 micrómetros a 6,0 micrómetros.
12. Un polvo de rhEPO secado por atomización constituído esencialmente por rhEPO, habiéndose obtenido dicho 35 polvo de rhEPO por el procedimiento de la reivindicación 1.