ES2219672T3 - Eritropoyetina secada por atomizacion. - Google Patents
Eritropoyetina secada por atomizacion.Info
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Abstract
LA PRESENTE INVENCION PROPORCIONA UN METODO PARA PREPARAR RHEPO ESTABLE, DESHIDRATADA POR ROCIADO Y EL POLVO DE RHEPO PRODUCIDO MEDIANTE DICHO METODO.
Description
Eritropoyetina secada por atomización.
Esta invención se refiere a un procedimiento para
la preparación de eritropoyetina secada por atomización y a la
eritropoyetina seca en polvo producida de este modo.
La eritropoyetina (EPO) es una hormona
glucoproteica sintetizada sobre todo en el riñón y es el regulador
principal de la producción de eritrocitos en el cuerpo. La EPO
humana disponible comercialmente se produce a través de técnicas de
ADN recombinante y se conoce como EPO humana recombinante (rhEPO).
La rhEPO tiene una masa molecular de aproximadamente 36 kDa,
determinada mediante electroforesis en gel de poliacrilamida en
presencia de SDS. La masa molecular del núcleo proteico es de
18.398 Da, lo que indica que toda la molécula está fuertemente
glucosilada. Los residuos de hidratos de carbono son importantes
para la actividad biológica in vivo.
El mantenimiento de las proteínas, tales como la
rhEPO, en su estado nativo en disolución acuosa o en fase sólida es
un reto principal para los que trabajan en el campo de las
formulaciones farmacéuticas. La existencia de una proteína en su
estado nativo depende de la concentración, la temperatura y la
naturaleza del disolvente, la fuerza iónica del tampón, etc. Los
cambios en cualquiera de estos parámetros pueden afectar a la
estabilidad de una proteína en disolución o en fase sólida.
Las preparaciones comerciales de rhEPO se
comercializan actualmente tanto como soluciones acuosas diluidas
como en forma liofilizada, que se usa para formar una disolución
acuosa diluida, y ambas formas se administran al organismo mediante
inyección. La concentración de rhEPO en estas preparaciones es muy
baja y la rhEPO se elimina del organismo de forma bastante rápida
después de la administración. Considerando esta limitación en las
preparaciones actuales, son necesarias preparaciones concentradas de
rhEPO, por ejemplo aquellas que contengan cantidades elevadas de
rhEPO, que se puedan usar en sistemas alternativos de administración
de fármacos. Nosotros usamos técnicas de secado por atomización para
preparar dichas preparaciones.
El secado por atomización de moléculas
farmacéuticas se conoce en la técnica. Por ejemplo, véase
Broadhead, J. et al., "The Spray Drying of
Pharmaceuticals," en Drug Dev. Ind. Pharm, 18 (11 y 12),
1169-1206 (1992). Además de pequeñas moléculas
farmacéuticas, se han secado por atomización una variedad de
materiales biológicos y entre estos se incluyen: enzimas, sueros,
plasma, microorganismos y levaduras. El secado por atomización es
una técnica útil ya que puede convertir una preparación
farmacéutica líquida en un polvo fino, que no se levanta ni está o
aglomerado, en un proceso de etapa única. La técnica básica
comprende las siguientes cuatro etapas:
a) atomización de la solución de alimentación en
un atomizador;
b) contacto aire-atomizador;
c) secado del atomizador; y
d) separación del producto seco del aire
secante.
Aunque se conoce en el campo farmacéutico, el
secado por atomización no se ha usado mucho para proteínas
terapéuticas, tales como la rhEPO. Una aparente razón para esto es
la consideración de que dichas proteínas se pueden degradar
térmicamente a las elevadas temperaturas utilizadas en el proceso de
secado por atomización. Esto es especialmente cierto respecto a las
glucoproteínas complejas, tales como la rhEPO, que, además de sus
esqueletos polipeptídicos, también tienen complejos fragmentos de
hidratos de carbono ramificados que se requieren para la actividad
biológica. Además, la posibilidad de la liofilización como una
alternativa al alcance apartó a los trabajadores en este campo del
uso del secado por atomización para proteínas terapéuticas. Sin
embargo, el secado por atomización proporciona determinadas ventajas
sobre la liofilización: es más económica, rápida y fácil de
aumentar de escala. También, los polvos secados por atomización son
a menudo más tratables que los polvos liofilizados para el
procesamiento posterior.
Por lo general es poco práctico diseñar
formulaciones basadas simplemente en la liofilización del fármaco a
granel. Esto se debe a que muchos polipéptidos son relativamente
inestables cuando se liofilizan a bajas concentraciones y pueden
adsorber produciendo agregación y pérdida de actividad. Con el fin
de superar estos problemas, muchas composiciones farmacéuticas
liofilizadas cuentan con el uso de diluyentes sólidos,
crioprotectores o esponjantes para aumentar la cantidad de material
sólido presente durante el proceso de liofilización. Como resultado,
el material final liofilizado contiene un pequeño porcentaje (p/p)
de fármaco activo mezclado con un gran porcentaje de otro material
sólido.
En contraste, la presente invención proporciona
un procedimiento para producir un polvo de rhEPO a partir de rhEPO
a granel en el que el polvo producido es rhEPO pura o esencialmente
pura o tiene un elevado porcentaje (p/p) de rhEPO que se puede
preparar utilizando técnicas de liofilización tradicionales.
La presente invención proporciona un
procedimiento para la preparación de rhEPO estable secado por
atomización y el polvo de rhEPO producido de ese modo.
El procedimiento de la presente invención
comprende primero el proporcionar una disolución acuosa de rhEPO con
un concentración dentro del intervalo desde aproximadamente 20 mg/ml
a aproximadamente 100 mg/ml. Esta disolución se atomiza entonces en
un atomizador y el atomizador se seca con aire caliente con el fin
de evaporar el agua del atomizador. La rhEPO seca producida de este
modo se separa después del aire secante.
La disolución acuosa inicial puede contener,
además de rhEPO, excipientes tales como el manitol, la glicina y/o
un tensioactivo. La composición de rhEPO seca producida por el
procedimiento de la presente invención comprende rhEPO en una
concentración dentro del intervalo del 4,0% al 100% (p/p) y tiene un
contenido de humedad residual dentro del intervalo de
aproximadamente 3,0% a aproximadamente 5,0% (p/p). El tamaño de las
partículas de la composición se encuentra dentro del intervalo de
aproximadamente 2,0 \mum a aproximadamente 6,0 \mum.
Se usó una disolución concentrada de rhEPO de al
menos 20 mg/ml para su secado por atomización. La disolución acuosa
concentrada se atomizó en diminutas gotas mediante bombeo a través
de un nebulizador con aire comprimido. Después se introdujeron las
gotas en una cámara de secado y se evaporó el agua mediante el aire
secante caliente que fluía a co-corriente con la
solución de alimentación. Conforme el agua se evaporaba, la rhEPO
sólida y los excipientes, si los había, se separaban de las gotas
acuosas. La rhEPO seca se transportó mediante la corriente de aire
secante hacia un separador de turbulencia para clarificación, es
decir, la rhEPO seca se separó del aire secante, y el producto seco
se recogió en el recipiente de recolección acoplado al fondo del
separador de turbulencia. El aire secante se expulsó después a la
atmósfera a través de purificador adecuado.
Como se usa aquí, la frase "rhEPO" se
refiere a cualquier proteína con todo o parte del esqueleto
polipeptídico descrito para rhEPO en el documento U.S. 4.703.008 y
que posee la propiedad biológica de provocar que las células de la
médula ósea aumenten la producción de reticulocitos y eritrocitos y
aumenten la síntesis de hemoglobina o la captación de hierro. Se
prevé que se pueden usar en la presente invención los fragmentos,
los análogos o los derivados sintetizados químicamente de EPO que
sean biológicamente activos, en lugar de rhEPO, a condición de que
dichos fragmentos o derivados retengan la actividad biológica de
rhEPO. Determinados análogos de la EPO se describen en el documento
U.S. 4.703.008. Por esto, se considera que el uso de dichos
análogos, fragmentos o derivados de la EPO biológicamente activos,
se encuentra dentro del alcance de la presente invención.
Los polvos de rhEPO concentrada producidos por la
presente invención se pueden usar en sistemas alternativos de
administración de fármacos para administrar la rhEPO. Uno de esos
sistemas es un sistema de administración de liberación controlada
que administra la rhEPO en el cuerpo a una velocidad predeterminada
durante un periodo de tiempo definido. De manera alternativa, los
polvos de rhEPO concentrada se pueden reconstituir con agua para
inyección o con solución salina normal para formar disoluciones
acuosas adecuadas para el uso terapéutico humano. Los sistemas de
liberación controlada mencionados antes se idean para incluir rhEPO
situada dentro de un material polimérico, de vesículas o de una
minibomba, así como de conjugados macromoleculares de rhEPO y otros
materiales poliméricos. Entonces, estos sistemas se pueden usar como
implantes subdérmicos de depósito de rhEPO concentrada. Entre los
ejemplos no limitantes de estos sistemas se incluyen las matrices de
polímeros hidrofóbicos sólidos que rodean a la rhEPO, tales como los
copolímeros no degradables de etileno-lacetato de
vinilo o los copolímeros degradables de ácido láctico-ácido
glicólico. Tales polímeros hidrofóbicos pueden presentar además la
forma de microsferas.
La presente invención proporciona un polvo
estable de rhEPO. Como se usa aquí, "estable" significa que la
rhEPO mantiene su actividad biológica en el tiempo y su estructura
se mantiene en el estado nativo, es decir, no se oxida o se degrada
de otra manera hacia otras especies químicas. La estabilidad se
puede demostrar mediante RIA, transferencia Western y ensayos
biológicos in vivo o in vitro.
Los ejemplos siguientes se presentan para
ilustrar la invención propuesta. La invención no se considera
limitada por estos ejemplos, sólo por la reivindicaciones
adjuntas.
Este ejemplo describe un proceso de secado por
atomización utilizado para producir rhEPO amorfa exclusivamente en
forma sólida o en conjunción con excipientes inertes y
farmacéuticamente aceptables. La masa amorfa de rhEPO así formulada
es estable almacenada durante al menos 6 meses a 5ºC (refrigerador).
La bibliografía actual que describe el secado por atomización de
proteínas terapéuticas es limitada y no plantea la estabilidad de
las proteínas terapéuticas en la forma seca a concentraciones
elevadas, tales como 25% (p/p) y superiores. Por ejemplo, véase
Mumenthaler et al., Pharm. Res. 11:12-20
(1994). Además, la bibliografía actual no proporciona evidencias
suficientes de la estabilidad de estas proteínas en la forma
sólida. De hecho, parte de la bibliografía muestra una estabilidad
insatisfactoria que se puede atribuir a los excipientes o a las
condiciones del proceso empleadas. Por ejemplo, se sabe que
determinadas sales inorgánicas, aminoácidos, tensioactivos, etc.
estabilizan las proteínas en disolución. Sin embargo, la presencia
de sales citrato en masa de rhEPO no proporcionó una rhEPO estable
secada por atomización. Por lo tanto, se dializó rhEPO a granel en
agua para inyección antes del secado por atomización. Con el fin de
obtener un rendimiento satisfactorio del producto con el secado por
atomización, se continuó la diálisis hasta que la concentración de
la rhEPO estaba dentro del intervalo de 20-100
mg/ml. Estas disoluciones concentradas de rhEPO en agua para
inyección mostraron una estabilidad satisfactoria, almacenada a 5ºC
durante al menos 6 meses. Una técnica alternativa para preparar
proteínas secas, denominada liofilización, no era adecuada para
rhEPO debido a su baja estabilidad, sin distinción de la presencia
de sales citrato (véase el Ejemplo 2).
El proceso para preparar rhEPO sólida y rhEPO en
polvo con excipientes consta de las dos siguientes etapas:
A. Diálisis y concentración de rhEPO a
granel; y
B. Secado por atomización de rhEPO a
granel dializado
rhEPO a granel proporcionado en tampón citrato 20
mM se dializó para eliminar todo el citrato y se repuso con agua
para inyección. La diálisis se realizó como sigue:
rhEPO a granel (200 ml) en tampón citrato
(concentración aproximada de 2,0 mg/ml) se vertió sobre un
dializador Amicon® adaptado con una membrana de diálisis para
moléculas con una masa molecular inferior de 10,000. Esta celda de
diálisis se acopló a un recipiente de acero inoxidable que contenía
agua para inyección y se conectó el recipiente a un tanque de
nitrógeno gaseoso. La diálisis se realizó a 206,8 - 275,8 kPa y
continuó hasta que se recogieron al menos 2000 ml de dializado. La
disolución acuosa resultante de rhEPO, carente de cualquier
citrato, se concentró después hasta una concentración final de
aproximadamente 20 mg/ml a aproximadamente 100 mg/ml de rhEPO. La
disolución acuosa concentrada resultante de rhEPO se almacenó
después a 5ºC hasta que se secó por atomización. Las disoluciones
concentradas de rhEPO también se monitorizaron para la estabilidad
de la rhEPO a 5ºC.
El proceso de secado por atomización consta de
las siguientes etapas:
1. Atomización de la solución de
alimentación;
2. Contacto aire-atomizador;
3. Evaporación del disolvente;
4. Clarificación de la forma sólida seca de los
gases secantes.
En el proceso se usó un atomizador para secado a
escala de laboratorio (Buchi®, Modelo 190).
La disolución acuosa de rhEPO se introdujo en la
tobera del atomizador (0,5 mm de diámetro interior) a temperatura
ambiente utilizando una bomba peristáltica. La alimentación líquida
se atomizó en pequeñas gotículas mediante aire a alta presión. Dicha
atomización también se puede conseguir utilizando un disco
rotatorio.
Conforme las gotículas entraban en la cámara de
evaporación (105 mm de diámetro interior x 450 mm de largo), el agua
se evaporaba mediante la co-corriente de flujo de
aire caliente secante. La temperatura del aire secante variaba
entre 64ºC - 80ºC. Mientras que el agua se evaporaba, el sólido se
separaba de la disolución acuosa en forma de esferas o semiesferas.
El secado también se puede realizar mediante la técnica de
contracorriente, en la que el aire secante y la solución de
alimentación fluyen en sentidos opuestos.
Mediante la corriente de aire secante se llevó el
polvo secado a un separador de tipo ciclón para la clarificación. En
el separador de tipo ciclón, la masa sólida seca se separó del aire
secante. El producto secado se recogió en un recipiente de
recolección acoplado al fondo del separador de tipo ciclón. El aire
secante (sin el producto secado) se expulsó a través de un depurador
de finos a la atmósfera.
Una cantidad conocida de la rhEPO secada por
atomización se disolvió en agua para inyección. Esta disolución
acuosa se analizó entonces como sigue:
El procedimiento utilizado fue el de Egrie et
al., J Immunol Meth, 99: 235-241 (1987). Este
procedimiento consiste en conjugar rhEPO con un anticuerpo
policlonal de conejo (formado frente a rhEPO). Esto se consiguió
mediante la incubación de rhEPO con el anticuerpo policlonal de
conejo durante la noche a temperatura refrigerada. La incubación
continuó durante otro día más bajo las mismas condiciones tras
añadir EPO marcada con^{125}I. El complejo
antígeno-anticuerpo se precipitó con el anticuerpo
anti-conejo de cabra, suero normal de conejo y
polietilenglicol. El complejo precipitado se lavó y la cantidad de
EPO marcada con^{125}I unida se determinó mediante un contador
gamma. Este procedimiento se repitió para disoluciones estándar de
rhEPO de concentraciones conocidas y disoluciones de muestras de
análisis. Las concentraciones de rhEPO de las muestras de análisis
se calcularon mediante la comparación de las lecturas del contador
gamma con las lecturas de las disoluciones estándar de rhEPO.
El procedimiento usado fue el descrito en Egrie
et al. Immunobiol, 172: 213-224
(1986). Una alícuota de 0,5 \mug de rhEPO desnaturalizada se
cargó en un gel estándar de poliacrilamida (12,5%) con
dodecilsulfato sódico (SDS-PAGE). Se realizó la
electroforesis y el gel se transfirió a una membrana de
nitrocelulosa utilizando un tampón de transferencia constituido por
TRIS, glicina y metanol. Esta membrana de nitrocelulosa se bloqueó
con 5% de leche desnatada en solución salina tamponada con TRIS. La
transferencia bloqueada de nitrocelulosa que contenía rhEPO se
conjugó después con un anticuerpo monoclonal
anti-humano de ratón seguido de un anticuerpo
policlonal anti-ratón de cabra. Entonces se realizó
la tinción de este complejo utilizando un equipo de reactivos con
sustrato conjugado con fosfatasa alcalina. Cada transferencia
contenía un patrón de rhEPO, un patrón de rhEPO que contenía una
cantidad conocida de agregados de rhEPO, y muestra(s) de
análisis. Se comparó la intensidad de la muestra de análisis con la
del patrón de rhEPO, y del patrón de agregados.
Una cantidad conocida de rhEPO secada por
atomización se reconstituyó en agua para inyección. La actividad
biológica de esta solución se midió mediante control de la velocidad
de incorporación de hierro en ratones exhipóxicos después de la
inyección de la solución de rhEPO. El procedimiento empleado fue el
de Cotes et al., Nature, 121:1065-1067
(1961).
| Nota: | API = Agua para inyección | |
| La formulación nº II se secó por atomización a dos temperaturas de entrada diferentes de 64ºC | ||
| y 80ºC. |
Se prepararon cinco soluciones mediante la
disolución uno por uno de excipientes tales como el manitol, la
glicina y/o Tween® 80 en una disolución acuosa concentrada de rhEPO,
con agitación suave. En el caso de la formulación III, no se
añadieron excipientes. Las formulaciones para estas disoluciones se
explican en la Tabla 1 anterior. Todas estas disoluciones se secaron
por atomización de acuerdo con los parámetros de secado por
atomización enumerados a continuación:
| Velocidad de alimentación de la solución: | 1 ml/min |
| Velocidad de atomización del aire: | 600-700 l/h a condiciones normales de presión y temperatura. |
| Velocidad del aire secante: | 32.000 a 45.000 l/h. |
\newpage
| Temperatura de entrada: | 64ºC - 80ºC |
| Temperatura de salida: | 46ºC - 65ºC |
Tras el secado por atomización, el contenido
final de rhEPO sólida para las formulaciones I y II era de
aproximadamente el 4% (p/p), para la formulación III era del 100%
p/p y para las formulaciones IV y V fue del 25% (p/p) de rhEPO. El
contenido de humedad residual variaba desde el 3,0% al 5,0% (p/p),
determinado mediante el procedimiento Karl-Fisher
(USP XXIII-NF XVII, pp. 1840-1843,
procedimiento 1a (1995)). El tamaño de partícula fue de 4,1 \mum
\pm 1.89 \mum para la formulación III secada por
atomización.
Los experimentos preliminares que utilizan rhEPO
a granel conteniendo tampón citrato no proporcionaron rhEPO estable
secada por atomización con manitol, glicina y/o Tween® 80. Por lo
tanto, la diálisis de rhEPO a granel para eliminar las sales
citrato fue esencial para el secado por atomización. Con el fin de
obtener un buen rendimiento con el secado por atomización, la
solución de alimentación debía tener un contenido de sólidos de al
menos 2%. Por consiguiente, la solución dializada de rhEPO se
concentró hasta 20-100 mg/ml.
Al comparar los datos de estabilidad de las
formulaciones I y II y las formulaciones IV y V se determinó que
Tween® 80 no era necesario para producir rhEPO estable secada por
atomización. También, los datos de estabilidad a 6 meses sobre la
rhEPO pura sugieren que el manitol y/o la glicina pueden no ser
necesarios para producir rhEPO estable secada por atomización. De
ese modo, si se usan, el manitol y la glicina simplemente parecen
tener la función de esponjantes (como sustancias de ajuste
isotónico/isosmótico) que se pueden usar para modificar la
concentración de rhEPO en la formulación final de rhEPO secada por
atomización.
La rhEPO secada por atomización de la presente
invención presenta ventajas sobre la rhEPO liofilizada. A modo de
comparación, las formulaciones I, II y III también se liofilizaron
(véase el ejemplo 2). Sin embargo, los datos del RIA para las
muestras liofilizadas almacenadas durante 2 meses a 5ºC están entre
el 73% - 78% de la indicación de la etiqueta (label claim,
LC). Estos valores bajos de potencia de EPO (determinados mediante
RIA) indican inestabilidad, a una duración tan corta de
almacenamiento. También, las muestras liofilizadas de 6 meses
mostraron más del 2% de agregados de EPO en la
SDS-PAGE después de la reconstitución. Esto indica
inestabilidad de la rhEPO reconstituida. Con esto, las
formulaciones secadas por atomización fueron más estables que las
formulaciones liofilizadas de la misma composición.
Las tablas de estabilidad de las formulaciones
secadas por atomización número III y IV mencionadas antes se
explican a continuación. En ambos casos, las muestras se
almacenaron a 5ºC y en cada medida se confirmó la presencia de rhEPO
con menos del 2% de agregados mediante análisis por transferencia
Western.
El ejemplo describe un proceso de liofilización
utilizado para producir rhEPO seca en forma pura o con una
combinación de excipientes farmacéuticamente aceptables. Se
determinó la estabilidad de la rhEPO liofilizada y los resultados
se presentan a continuación. Todas las preparaciones de rhEPO
utilizadas en este ejemplo también se secaron por atomización como
se ha descrito antes. Los procedimientos de RIA y de transferencia
Western se realizaron esencialmente como se ha descrito antes para
el ejemplo de la rhEPO secada por atomización.
Un ciclo típico de liofilización para la
liofilización de disoluciones de rhEPO sin excipientes se inició al
congelar la disolución a -40ºC aproximadamente y mantener esa
temperatura durante unas tres horas para asegurarse de que la
disolución se congelara completamente. Mientras que la disolución
se estaba congelando, se disminuyó la temperatura del condensador
hasta aproximadamente -50ºC. El secado primario se llevó a cabo
mediante un primer descenso de la presión en la cámara de secado
hasta aproximadamente 26,66 kPa, y el sistema se dejó estabilizar
durante tres horas aproximadamente. Después se aumentó la
temperatura hasta aproximadamente -30ºC a la velocidad de
aproximadamente 0,1ºC por minuto. El secado (mediante la sublimación
del hielo a vapor de agua) continuó durante unas 60 horas. El secado
secundario se realizó al aumentar la temperatura del producto hasta
aproximadamente 15ºC, a la velocidad de aproximadamente 0,5ºC por
minuto. La presión en la cámara de secado se redujo además de
aproximadamente 26,66 kPa a aproximadamente 13,33 kPa. La fase de
secado secundario continuó durante unas 16 horas para asegurar un
secado completo. Tras el secado secundario, se taparon y se
sellaron los viales. Los viales sellados se almacenaron a unos 5ºC
que se recogieron para el análisis de estabilidad descrito a
continuación. Para analizar la estabilidad, los contenidos del vial
se reconstituyeron con agua, y se analizaron mediante RIA y
transferencia Western. Los resultados del análisis de estabilidad
se recopilaron como porcentaje de rhEPO restante. Los porcentajes
menores de rhEPO restante demostraban una estabilidad escasa. Los
resultados de la transferencia Western determinan si la rhEPO está
en forma nativa o en una forma agregada desnaturalizada. Las
muestras de rhEPO que tienen más de un 2% de agregados, comparado
con un patrón de 2% de agregados de rhEPO, se definen por tener una
estabilidad escasa. Los resultados de los análisis de estabilidad
realizados sobre rhEPO liofilizada en distintas formulaciones se
presentan en la Tabla 4.
Los datos mostrados en la tabla 4 demuestran que
la rhEPO liofilizada no se mantiene tan estable como la rhEPO
secada por atomización. Por lo tanto, el secado por atomización de
rhEPO produce un producto más estable comparado con la
liofilización. La presente invención proporciona por lo tanto una
rhEPO estable, secada por atomización, que se puede preparar sin la
adición de ningún excipiente o estabilizador, tales como
ciclodextrinas, glicina, manitol o Tween 80. Una preparación sin
excipientes de rhEPO es deseable para determinados sistemas de
administración de fármacos, tales como la administración por vía
pulmonar, que requiere normalmente que el fármaco no contenga
excipientes en tanto sea posible.
La invención se ha descrito aquí con relación a
determinados ejemplos y realizaciones preferidos. Dado que surgirán
variaciones obvias para aquellos expertos en la técnica, la
invención no se considera limitada a ello, sólo por las
reivindicaciones que siguen.
Claims (14)
1. Un procedimiento para preparar rhEPO,
fragmentos, análogos o derivados sintetizados químicamente de ésta,
secados por atomización, que comprende:
(a) proporcionar una disolución acuosa de rhEPO,
fragmentos, análogos o derivados sintetizados químicamente de ésta,
con una concentración dentro del intervalo de 20 mg/ml a 100
mg/ml;
(b) la atomización de dicha solución en un
atomizador;
(c) el secado de dicho atomizador con aire
secante caliente con el fin de evaporar el agua del atomizador;
y
(d) la separación del aire secante de la rhEPO,
los fragmentos, los análogos o los derivados sintetizados
químicamente de ésta, secos,
en el que dicha rhEPO, los fragmentos, los
análogos o los derivados sintetizados químicamente de ésta, poseen
la propiedad biológica de provocar que las células de la médula ósea
aumenten la producción de reticulocitos y eritrocitos y aumenten la
síntesis de hemoglobina o la captación de hierro.
2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el
que la disolución acuosa de rhEPO, fragmentos, análogos o derivados
sintetizados químicamente de ésta, no contiene sales u otros
aditivos.
3. El procedimiento de la reivindicación 1, en
el que la disolución acuosa se dializa para eliminar las sales
antes de la etapa (b).
4. El procedimiento de la reivindicación 1, en el
que la disolución se atomiza introduciéndola a presión en una
tobera.
5. El procedimiento de la reivindicación 1, en el
que el atomizador y el aire secante pasan a través del secador en la
misma dirección.
6. El procedimiento de la reivindicación 1, en el
que la rhEPO, los fragmentos, los análogos o los derivados
sintetizados químicamente de ésta, secos, se separan en un
separador de tipo ciclón.
7. El procedimiento de la reivindicación 1, en el
que el secado se realiza dentro de un intervalo de temperaturas de
60ºC a 85ºC.
8. rhEPO seca, comprendiendo la rhEPO seca menos
del 2 por ciento de agregados después de 6 meses de almacenamiento a
5ºC.
9. La rhEPO de la reivindicación 8 que es 100%
EPO (p/p).
10. Una eritropoyetina humana recombinante
(rhEPO) secada por atomización que tiene la siguiente
formulación:
habiéndose obtenido la rhEPO secada por
atomización por el procedimiento de la reivindicación
1.
11. La rhEPO de la reivindicación 10, que
contiene de manera adicional un tensioactivo.
12. Una composición de rhEPO secada por
atomización, que comprende rhEPO en una concentración dentro del
intervalo del 4,0% al 100% (p/p) y con un contenido de humedad
residual dentro del intervalo del 3,0% al 5,0% (p/p), habiéndose
obtenido dicha composición de rhEPO por el procedimiento de la
reivindicación 1.
13. La composición de la reivindicación 12, en la
que el tamaño de las partículas está dentro del intervalo de 2,0
\mum a 6,0 \mum.
14. Un polvo de rhEPO secada por atomización
constituido esencialmente por rhEPO, habiéndose obtenido dicho polvo
de rhEPO por el procedimiento de la reivindicación 1.
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