ES2215293T3 - Composiciones de protectores solares que contienen fragmentos de arn dañado. - Google Patents

Abstract

LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE A UNA CANTIDAD EFECTIVA PARA PROTECCION DE LOS FRAGMENTOS DE ARN DAÑADOS POR LOS RAYOS ULTRAVIOLETA, EN COMBINACION CON UN SOPORTE COSMETICA O FARMACEUTICAMENTE ACEPTABLE. LAS COMPOSICIONES SON UTILES EN LA PREVENCION DE LAS LESIONES DE LA PIEL POR CAUSA DE LA RADIACION UV Y PARA EVITAR EL ENVEJECIMIENTO POR EL SOL.

Description

Composiciones de protectores solares que contienen fragmentos de ARN dañado.

Campo de la invención

La presente invención se refiere al campo de los protectores solares. Más específicamente, la invención se refiere a protectores solares y a composiciones cosméticas que contienen ARN, que proporciona protección frente a la radiación solar dañina.

Antecedentes de la invención

Ahora se ha demostrado fehacientemente que la exposición al sol durante largos periodos de tiempo aumenta el riesgo de una serie de condiciones de la piel no deseadas. No solo se ha implicado a la radiación solar como agente causante de una serie de cánceres de piel, sino que también se ha demostrado que acelera el proceso de envejecimiento, causando una variedad de efectos, tales como líneas, arrugas, puntos, y pérdida del tono de la piel. Irónicamente, la creciente atención del público acerca de la importancia del ejercicio y de la actividad atlética para tener una vida saludable probablemente ha conducido a un incremento de las actividades al aire libre, y por consiguiente, a que haya más gente expuesta a mayores dosis de luz solar de lo que de otro modo sería recomendable, a pesar del amplio conocimiento que se tiene del peligro de la exposición solar. Por lo tanto, el desarrollo de protectores solares que proporcionen un nivel adecuado de protección contra los efectos dañinos del sol se ha convertido en una prioridad.

Ahora existe disponibilidad de una serie de protectores solares y de productos cosméticos que proporcionan una protección significativa contra los efectos de los rayos solares. Muchos de protectores solares usados más comúnmente, por ejemplo el ácido para-aminobenzoico (PABA) y sus ésteres, las benzofenonas, y los cinnamatos son protectores solares químicos, es decir, productos químicos sintéticos que no se encuentran en la naturaleza. Aunque muchos de estos materiales son bastante protectores, y pueden ser usados por una amplia proporción de la población afectada, existe un segmento significativo de la población que no usará o, por razones de sensibilidad o de reacción alérgica, no podrá usar protectores solares químicos. Estos individuos demandan un protector solar que sea natural, es decir, que se encuentre de forma rutinaria en la naturaleza. Por lo tanto, recientemente ha surgido una tendencia dirigida a la búsqueda de protectores solares naturales.

Entre los materiales que existen en la naturaleza que han recibido atención están los ácidos nucleicos, en particular el ADN y el ARN. Por ejemplo, las Patentes de EE.UU. Nº 5.470.577 y 5.532.001 describen el uso de fragmentos de ADN, en particular de fragmentos de ADN de cadena sencilla, de fragmentos de ADN de cadena doble, o de mezclas suyas, de desoxinucleótidos, de dinucleótidos y de dímeros de dinucleótido para la estimulación de la síntesis de melanina en las células de la epidermis, que, de acuerdo con la patente citada, proporcionan protección contra la radiación UV. Además, el documento WO 9601617 establece que los ácidos nucleicos pueden proporcionar una barrera frente a la radiación UV, y sugiere que pueden ser usados en composiciones tópicas. El documento GB 2233557 también describe un agente citoprotector que contiene ARN, ribonucleótidos o ribonucleótidos, y sales u otros derivados suyos, se dice que el agente proporciona protección a la piel frente a los efectos de la luz.

No se ha publicado previamente el uso de fragmentos irradiados de ARN para proporcionar protección a las células expuestas a radiación UV. Se ha descubierto ahora que, de forma inesperada, los fragmentos de ARN dañados por radiación UV añadidos a las células de la piel pueden inducir la reparación o una resistencia frente a radiación UV en estas células cuando son expuestas a una agresión de radiación UV posterior. Como tales, los fragmentos de ARN dañados son un componente útil de las composiciones de protector solar y de otros productos para la piel en los que es deseable la provisión de alguna medida de protección frente a radiación UV.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a composiciones cosméticas o farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz para la protección de fragmentos de ARN dañados por radiación UV, en combinación con un vehículo cosméticamente o farmacéuticamente aceptable. La invención además se refiere a un método para proteger células de la piel frente al daño por radiación UV que comprende aplicar a las células de la piel una cantidad eficaz para la protección de fragmentos de ARN dañados por radiación UV. Además, la invención se refiere a un método para la prevención del fotoenvejecimiento de la piel, que comprende aplicar a la piel una cantidad eficaz de fragmentos de ARN dañados por radiación UV.

Descripción detallada de la invención

La invención está basada en el descubrimiento de que los fragmentos de ARN dañados por radiación UV, cuando se aplican a células de piel vivas, incrementan la tasa de supervivencia de las células tratadas, en comparación con las células sin tratar, cuando las células son expuestas posteriormente a radiación UV. En particular, se ha descubierto que el ARN dañado generado mediante el tratamiento de ARN completo con radiación UV ofrece a las células tratadas una protección considerable frente a los efectos citotóxicos de la radiación UVB. El nivel de protección proporcionado es mayor que el proporcionado por el ARN sin radiar.

El ARN usado en la invención puede proceder de cualquier fuente y puede ser de cualquier tipo. Por ejemplo, puede ser obtenido a partir de una planta, un animal, o de fuentes microbianas, y puede ser un ARN mensajero (mARN), un ARN de transferencia (tARN), un ARN mitocondrial (mtARN), un ARN vírico, o un ARN sintético. En una realización preferida, el ARN completo es irradiado con radiación UVC (longitud de onda de aproximadamente 254 nm) durante un periodo de tiempo de al menos aproximadamente 3 minutos, y preferiblemente de al menos 5 minutos. También se pueden usar otras longitudes de onda de radiación UV en la irradiación del ARN, pero la dosis será mayor. En una realización particularmente preferida, el ARN empleado es sustancialmente puro, es decir, al menos tiene un 90% libre de material que no es ARN. El tratamiento de radiación UV da como resultado una fragmentación del ARN.

Los fragmentos preparados como se ha descrito anteriormente fueron aplicados a células de epidermis de piel colocadas en placa en una cantidad de aproximadamente 1 \mug/ml, usando como control ARN sin irradiar, y, a continuación, las placas fueron expuestas a radiación UVB en un nivel de 0 a 75 mJ en intervalos de 15 mJ. Después de una incubación de una noche, se descubrió que las células tratadas con el ARN irradiado habían protegido a las células de piel de los efectos dañinos de la radiación UV. Aunque el ARN sin irradiar también proporcionó una evidente medida de protección, la protección proporcionada por el ARN irradiado es significativamente mayor.

Los fragmentos de la presente invención pueden ser incorporados en una variedad de productos cosméticos y farmacéuticos. Por ejemplo, los fragmentos pueden ser añadidos como componente protector solar para composiciones de maquillaje, tales como pintalabios, sombras de ojos, bases, o cualquier otro tipo de composición pensada para ser llevada sobre la piel al aire libre, por ejemplo, un bálsamo hidratante o de labios, en el que la protección frente a la radiación UV es deseable. Los fragmentos también son útiles como componente activo de composiciones de protectores solares. Los fragmentos son solubles en agua, y pueden ser incorporados de forma rutinaria en la formulación de interés en cualquier modo conocido en la técnica. En una realización preferida, los fragmentos, cuando se usan en una forma purificada, son añadidos en una cantidad de aproximadamente 0,001-5%, preferiblemente de aproximadamente 0,5-3%, en peso de la composición total.

Los fragmentos de la invención también pueden ser usados en combinación con otros materiales de protección frente al sol. De este modo, en otra realización, los fragmentos son combinados con uno o más protectores solares de cualquier tipo. El segundo protector solar puede ser del tipo de barrera física, por ejemplo, dióxido de titanio u óxido de cinc, o del tipo químico, por ejemplo, benzofenonas; ácido para-aminobenzoico (PABA) y sus derivados; salicilato de fenilo o de homomentilo; o cinnamatos. La combinación es útil en cualquier situación en la que se podrían usar los fragmentos por sí solos, por ejemplo, en una formulación de maquillaje, en una formulación de protector solar o en una formulación de autobronceado. El protector solar adicional puede ser incorporado en la formulación en una cantidad determinada según su uso habitual.

En una realización más, los fragmentos también pueden ser combinados con antioxidantes o con cazadores de radicales libres, que proporcionan una protección complementaria frente al daño en la piel inducido por la radiación UV.

Ejemplos de dichos materiales incluyen la Vitamina E y sus derivados, la Vitamina C y sus derivados, el extracto de té verde, las proantocianidinas, el \beta-caroteno y otros parecidos.

En una realización adicional, los fragmentos de ARN también son útiles en la prevención del fotoenvejecimiento. Como se ha resaltado anteriormente, la exposición repetida y/o prolongada a la radiación UV del sol contribuye sustancialmente al declive prematuro de la calidad y la cantidad de elastina y de colágeno en la piel. Estos cambios se manifiestan externamente mediante las señales típicas de envejecimiento, tales como líneas marcadas y arrugas, pérdida de elasticidad, sequedad e irregularidad de la piel, y una mayor frecuencia de manchas o de puntos pigmentados. La protección frente a la radiación UV proporcionada por los fragmentos de la invención también puede proporcionar la protección deseada frente al fotoenvejecimiento. De este modo, además del uso como protector solar en los productos indicados anteriormente, los fragmentos por sí solos pueden ser usados para prevenir el fotoenvejecimiento cuando se usan en una variedad de productos de la piel, tales como aquellos descritos anteriormente.

A este respecto, los fragmentos irradiados también pueden ser combinados con otros agentes antienvejecimiento o de potenciación de la piel. Para este propósito, los fragmentos pueden ser combinados con uno o más de los siguientes productos: ácidos alfa- o beta-hidroxi, tales como el ácido láctico, el ácido glicólico, el ácido cítrico, el ácido alfa-hidroxioctanoico, el ácido alfa-hidroxidecanoico, el ácido alfa-hidroxilaúrico, el ácido tartárico, el ácido glucourónico, el ácido galactourónico, el ácido alfa-hidroxilaúrico, el ácido alfa-hidroxibutírico, el ácido alfa-hidroxiisobutírico, el ácido málico, el ácido mandélico, el ácido pirúvico, el ácido tartrónico, y el ácido salicílico; retinoides, tales como el retinol, el acetato de retinilo, el palmitato de retinilo, el butirato de retinilo, el oleato de retinilo, el linoleato de retinilo, y ácido retinoico; DHEA y sus derivados.

La invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos no limitantes.

Ejemplos I. Mejora de la viabilidad de células irradiadas A. Materiales y métodos 1. Preparación de los fragmentos de ARN

Se solubilizan 20 microgramos de ARN mensajero (mARN) comprado a Sigma en un ml de PBS. El ARN solubilizado es dividido en 2 alícuotas de 0,5 ml, cada una de las cuales es colocada en una placa petri de 35 mm. Una alícuota es irradiada con radiación UVC a 254 nm durante un periodo de cinco minutos, mientras que la otra muestra permanece sin ser expuesta a la radiación UV. A continuación, cada muestra es diluida nuevamente ajustando el volumen a 10 ml en DMEM al 10%, para dar lugar a una concentración final de 1 \mug/ml. Las disoluciones almacenadas son añadidas a continuación solas, o son diluidas nuevamente para dar lugar a concentraciones finales de 0,1, 0,5 ó
1 \mug/ml por ml.

2. Tratamiento de las células de la piel

Se cultivan células de piel hacat (queratinocitos humanos transformados) en dos placas de 96 pocillos, y se las deja alcanzar aproximadamente el 75% de confluencia antes del tratamiento. Se añaden las disoluciones de ARN preparadas a pocillos individuales, y son incubadas a lo largo de la noche, son humidificadas, a 37ºC, y con un 5% de dióxido de carbono. A continuación, las placas son aclaradas tres veces con 180 \mul de PBS, y son irrigadas con 100 \mul de PBS durante la irradiación. Las placas son irradiadas con radiación UVB, de 0 a 75 mJ/cm^{2} y en intervalos de 15 mJ. Después de la irradiación, el PBS es aspirado, y la disolución de mARN es añadida como se ha descrito anteriormente. Después de una incubación de una noche a 37ºC, se evalúa la viabilidad de célula de las placas usando el ensayo de colorante rojo neutro.

B. Resultados

Las Tablas 1a y 2a muestran los resultados obtenidos usando mARN sin irradiar (1) e irradiado (2) como protector, estando expresados los resultados como el porcentaje de supervivencia después de la irradiación. Las Tablas 1b y 2b muestran el porcentaje de cambio en la tasa de supervivencia para cada tratamiento en relación al control sin irradiar.

TABLA 1a

1

TABLA 1b

2

TABLA 2a

3

TABLA 2b

4

Estos resultados muestran una diferencia significativa en la tasa de supervivencia de las células tratadas con fragmentos de ARN irradiados en comparación con las células tratadas solamente con ARN sin irradiar, y por lo tanto, demuestran el efecto protector de los fragmentos de ARN irradiados.

II. Preparación de una formulación que contiene fragmentos de ARN

El siguiente ejemplo es un ejemplo de una formulación que contiene fragmentos de ARN de la invención:

Material	% En peso
Ácido esteárico	2,4
Monoestearato de glicerilo	2,2
Parabeno de butilo	0,1
Aceite mineral/alcohol de lanolina (Amerchol)	9,5
Petrolato/alcohol de lanolina	2,0
Aceite de sésamo	4,3
Parabeno de propilo	0,1
Agua desionizada	CS
Trietanolamina 99%	0,82

Material	% En peso
Parabeno de metilo	0,3
EDTA trisódico	0,1
Propilenglicol	4,3
mARN purificado	0,001

Claims (22)

1. Una composición cosmética o farmacéutica que comprende una cantidad de fragmentos de ARN dañados por radiación UV eficaz para la protección, en combinación con un vehículo cosméticamente o farmacéuticamente aceptable.

2. La composición de la reivindicación 1, en la que los fragmentos son dañados con radiación UVC.

3. La composición de la reivindicación 1, en la que el ARN es ARN mensajero.

4. La composición de la reivindicación 2, en la que los fragmentos están presentes en una cantidad de aproximadamente 0,001 a 5% en peso.

5. La composición de la reivindicación 4, en la que los fragmentos están presentes en una cantidad de aproximadamente 0,5-3%.

6. La composición de la reivindicación 1, en la que la composición es un protector solar.

7. La composición de la reivindicación 1, que además comprende al menos otro agente protector solar adicional.

8. La composición de la reivindicación 1, en la que la composición es un maquillaje seleccionado del grupo que consiste en pintalabios, base, polvo, o sombra de ojos.

9. La composición de la reivindicación 1, en la que la composición es un hidratante o un bálsamo de labios.

10. La composición de la reivindicación 1, que además comprende un antioxidante.

11. El uso de fragmentos de ARN dañados por radiación UV en la preparación de un medicamento para proteger las células de la piel del daño por radiación UV.

12. El uso de la reivindicación 10, en el que los fragmentos son dañados por radiación UVC.

13. El uso de la reivindicación 1, en el que el ARN es un ARN mensajero.

14. El uso de la reivindicación 12, en el que los fragmentos están presentes en una cantidad de aproximadamente 0,001 a 5%.

15. El uso de la reivindicación 14, en el que los fragmentos están presentes en una cantidad de aproximadamente 0,5 a 3%.

16. El uso de la reivindicación 11, en el que los fragmentos son combinados con un agente protector solar.

17. El uso de la reivindicación 11, en el que los fragmentos son combinados con un antioxidante.

18. El uso de fragmentos de ARN dañados por UV en la preparación de un medicamento para la prevención del fotoenvejecimiento de la piel.

19. El uso de la reivindicación 18, en el que los fragmentos son dañados con radiación UVC.

20. El uso de la reivindicación 18, en el que el ARN es ARN mensajero.

21. El uso de la reivindicación 19, en el que los fragmentos están presentes en la composición en una cantidad de aproximadamente 0,001 a 5% en peso.

22. El uso de la reivindicación 21, en el que los fragmentos están presentes en una cantidad de aproximadamente 0,5 a 3%.