ES2215187T3 - Utilizacion de 8,9-deshidroestrona para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades provocadas por radicales libres. - Google Patents

Abstract

ESTA INVENCION PROPORCIONA UN METODO PARA UTILIZAR DEHIDROESTRONA 8,9 O UNA SAL ACEPTABLE FARMACEUTICAMENTE DE DEHIDROESTRONA 8,9-3-SULFATO COMO ANTIOXIDANTE.

Description

Utilización de 8,9-deshidroestrona para la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades provocadas por radicales libres.

Antecedentes de la invención

Los radicales libres de origen biológico han sido implicados en un gran número de trastornos patológicos. La supervivencia de organismos aerobios en un ambiente con oxígeno conlleva una complicada interrelación entre la generación biológica de estas especies altamente reactivas y la capacidad del organismo para controlarlas (Del Maestro RF, Acta Phy Scan Suppl. 492:153-68 (1980)). Esta interrelación entre el organismo hospedador y los radicales libres de origen biológico da como resultado profundas alteraciones bioquímicas que culminan en lesiones celulares y en la muerte del organismo. Los productos acumulados de reacciones con radicales libres dan lugar a algunos de los muchos trastornos patológicos que se ha indicado que provienen, en parte, de lesiones celulares provocadas por un aumento en el flujo de radicales libres intracelulares. Dichos trastornos incluyen, sin limitarse a los mismos, cánceres, enfermedades cardiovasculares, trastornos del sistema nervioso central, envejecimiento, enfermedad de Alzheimer, trastornos inflamatorios, artritis reumatoide, enfermedades autoinmunitarias, insuficiencia respiratoria y enfisema.

La asociación entre el daño provocado por radicales libres y muchos trastornos patológicos está bien fundada, y muchos componentes celulares, incluidas enzimas, canales iónicos, proteínas estructurales y lípidos de membrana, son dianas potenciales para especies reactivas de radicales libres (Rice-Evans C, Mol Aspects of Med 13(1):1-111 (1992)). El estado antioxidante en el lugar apropiado limitará el alcance de la lesión. La reacción de radicales libres con estas dianas potenciales puede poner en peligro diversas funciones celulares, dando lugar a cambios patológicos y, finalmente, a la muerte celular. El estado antioxidante en el posible lugar de reacción limitará el alcance de la lesión. Los antioxidantes desempeñan una función importante en la protección del ADN, proteínas (incluidas lipoproteínas) y lípidos de membrana contra el daño oxidativo.

Existen pruebas firmes de que el daño provocado por radicales libres contribuye a la etiología de muchos problemas sanitarios crónicos. En la mayoría de las enfermedades del hombre, la formación de oxidantes a partir de fuentes endógenas es secundaria al proceso patológico inicial, pero el daño oxidativo agrava la lesión primaria. Por ejemplo, la lesión por reperfusión puede definirse como el daño sufrido por un órgano durante la reanudación del flujo sanguíneo tras un episodio de isquemia. El restablecimiento del suministro de oxígeno, aunque necesario, provoca un aumento de la formación de compuestos oxidantes en el tejido dañado y empeora temporalmente la lesión (Uraizee A, Circulation 75(6):1237-1248 (1987)). El declive en las defensas antioxidantes en el miocardio hipóxico tras un aumento en la peroxidación de lípidos debido a la reoxigenación ha sido descrito por Guanieri (Biochim-Biophys-ACTA 718(2):157-164 (1982)). En la lesión por reperfusión, la respuesta inflamatoria en el lugar de la lesión del endotelio tras el trastorno isquémico genera superóxido debido a la adhesión y activación de neutrófilos. En diferentes trastornos clínicos también aumenta la producción de radicales libres del oxígeno en el hígado. En la hepatitis vírica y en la hepatitis crónica activa, se acumula en el hígado un elevado número de macrófagos estimulados, que producen radicales libres. Un gran número de productos químicos tóxicos provocan lesiones hepáticas tóxicas, debido al aumento en la generación de radicales libres en el hígado, frecuentemente mediado por el citocromo P-450. Puede concluirse que la formación de radicales hidroxilo catalizada por el hierro liberado de la ferritina es un mecanismo accesorio en muchas enfermedades hepáticas (Lee WM, N Eng J of Med; Review P. 1118 (1995)).

La oxidación y la utilización de antioxidantes son también importantes para el tratamiento de numerosos trastornos patológicos inflamatorios. La artritis reumatoide (AR) es la enfermedad inflamatoria crónica más común. Los estudios epidemiológicos demuestran una tasa de prevalencia de AR clásica y confirmada de entre 0,3 y 1,5 por ciento. La artropatía con inflamación persistente crónica está acompañada por la formación de H_{2}O_{2} en la articulación reumática inflamada. Durante la inflamación también se producen radicales libres del oxígeno, especialmente por los leucocitos polimorfonucleares (PMN) y macrófagos. En cualquier enfermedad inflamatoria crónica o aguda los PMN y los macrófagos producirán tanto O2^{-} como H_{2}O_{2}. También pueden mencionarse la tuberculosis, psoriasis, lupus eritematoso sistémico, otras enfermedades autoinmunitarias y el síndrome de insuficiencia respiratoria del adulto como enfermedades inflamatorias a las que contribuye la oxidación, y pueden añadirse muchas otras a esta lista.

La generación de radicales del oxígeno y el proceso de peroxidación de lípidos han centrado asimismo la atención de los investigadores en los campos de traumatismo e ictus (por ejemplo, isquemia) del sistema nervioso central (SNC). Numerosos estudios han aportado un considerable apoyo a la idea de que reacciones de radicales libres y peroxidación de lípidos tienen lugar en el SNC lesionado o isquémico (Hall ED, J-Neurotrauma 9(Suppl. 1):S165-S172 (1992)).

Se ha propuesto que los antioxidantes ejercen una acción protectora contra el cáncer de mama y contra otros cánceres, incluidos los del cerebro y del hígado, así como contra la enfermedad cardiovascular y la osteoporosis (Wiseman H, Free Radical Res 21(3):187-94 (1994)). Se ha comprobado que protegen membranas modelo y membranas celulares, incluida la membrana nuclear, contra intermediarios de radicales libres y productos de peroxidación de lípidos, potencialmente carcinógenos. Las graves complicaciones asociadas a la aterosclerosis, así como su frecuencia, han centrado la atención en la prevención y tratamiento de esta vasculopatía, posiblemente por medio de su capacidad de proteger las lipoproteínas de baja densidad (LDL) contra daños oxidativos (Steinberg D, N Engl J of Med 14:915-924 (1989)).

El documento U.S. 5.210.081 describe que una sal de metal alcalino de 8,9- deshidroestrona-3-sulfato es útil para el tratamiento de la osteoporosis senil. La presente invención se distingue por aplicarse el tratamiento a pacientes que no padecen osteoporosis senil.

Descripción de la invención

De acuerdo con la presente invención, se proporciona un método para el tratamiento o la inhibición de trastornos patológicos provocados por radicales libres, mediante la administración de una cantidad antioxidante de 8,9- deshidroestrona o su sal, aceptable desde el punto de vista farmacéutico, del éster 3-sulfato, a un mamífero que lo necesite. Como corolario de dicho procedimiento, la presente invención proporciona un procedimiento para el tratamiento de reacciones de radicales libres con enzimas, canales iónicos, proteínas estructurales y lípidos de membrana en un mamífero, que comprende administrar 8,9-deshidroestrona o una sal, aceptable desde el punto de vista farmacéutico, de su éster sulfato, como sustrato que se va a sacrificar, en una cantidad suficiente para que reaccione selectivamente con radicales libres e inhiba su reacción con las enzimas, canales iónicos, proteínas estructurales o lípidos de membrana del paciente. Situaciones específicas en las que está indicado el tratamiento con antioxidantes son cánceres, trastornos del sistema nervioso central, envejecimiento, trastornos inflamatorios, insuficiencia venosa periférica, artritis reumatoide, enfermedades autoinmunitarias, insuficiencia respiratoria, enfisema, prevención de la lesión por reperfusión, hepatitis vírica, hepatitis crónica activa, tuberculosis, psoriasis, lupus eritematoso sistémico, síndrome de insuficiencia respiratoria del adulto, traumatismo del sistema nervioso central e ictus.

Cuando se utiliza según la presente invención, la terapia cubre el tratamiento de un trastorno existente, la mejora del trastorno o el suministro de cuidados paliativos para el trastorno, y la inhibición incluye la inhibición o la prevención del progreso o el desarrollo del trastorno.

Las sales, aceptables desde el punto de vista farmacéutico, del éster 3-sulfato de 8,9-deshidroestrona incluyen, pero sin limitarse a las mismas, las sales de metales alcalinos, sales de metales alcalinotérreos, sales de amonio, sales de alquilamina que contienen 1-6 átomos de carbono o sales de dialquilamina que contienen 1-6 átomos de carbono en cada grupo alquilo.

Las propiedades antioxidantes de la 8,9-deshidroestrona se comprobaron con un procedimiento estándar de análisis farmacológico que medía su capacidad de inhibir la formación de lipoproteína de baja densidad modificada por oxidación (LDL) provocada por la exposición a iones Cu++ o a células endoteliales cultivadas (Parthasarathy S, Proc Natl Acad Sci USA 86:1046-1050 (1989)) mediante el método TBARS (sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico) de análisis de aldehídos libres (Yagi K., Biochem Med 15:212-216 (1976)).

Los resultados obtenidos con este procedimiento estándar de análisis farmacológico demuestran que la 8,9-deshidroestrona es un potente inhibidor de la oxidación de LDL, que inhibe el proceso hasta un 100%. Se obtuvieron CI_{50} de 0,22 \muM y 0,12 \muM en el caso de oxidaciones mediadas por Cu++ y por células endoteliales aórticas porcinas, respectivamente. En comparación, se obtuvo una CI_{50} de 0,56 \muM para la estrona en el procedimiento de análisis de oxidación mediada por células endoteliales aórticas porcinas.

Para demostrar de modo adicional las propiedades antioxidantes de la 8,9-deshidroestrona se realizaron otros dos procedimientos estándar de análisis farmacológico utilizando células cultivadas. En el primer procedimiento de análisis, se modificó LDL radiomarcada (^{125}I-LDL) (McFarlane AS, En: Munro HN, Allison JB, eds. Mammalian Protein metabolism, Vol. 1, Nueva York: Academic Press 297-341 (1964)) por exposición a Cu++ en presencia y ausencia de 8,9-deshidroestrona. Después se expusieron macrófagos J774, que expresan receptores de lipoproteínas basurero (scavenger) que se unen a la LDL modificada por oxidación, a la ^{125}I-LDL tratada. Los resultados de este experimento demuestran que la unión de la LDL oxidada en presencia de 8,9-deshidroestrona se redujo en un 72% y 56% (2,5 y 0,25 \muM de 8,9-deshidroestrona respectivamente). En comparación, las mismas concentraciones de estrona redujeron la unión de LDL modificada por oxidación en un 39% y 0%, respectivamente. Dado que se cree que la unión y el metabolismo de las LDL oxidadas por macrófagos contribuye claramente al desarrollo de células espumosas y, por tanto, a la formación de placas ateroscleróticas, se cree que este efecto de reducción de la oxidación de LDL y su unión subsiguiente a receptores basurero representa un beneficio significativo.

En el segundo procedimiento de análisis, se expusieron células endoteliales aórticas porcinas (PAEC) a LDL que habían sido modificadas del modo descrito anteriormente, por exposición a Cu++ en presencia y ausencia de 8,9-deshidroestrona. Se ha comprobado que las LDL oxidadas son citotóxicas para las células endoteliales, y este proceso ha sido implicado también de forma clara en el proceso aterógeno. Después de incubar durante 24 h las células con las LDL tratadas, se realizó un ensayo de MTT para evaluar la citotoxicidad (Hansen MB, J Immu Methods 119:203-210 (1989)). Este procedimiento de análisis evalúa el porcentaje de células viables (vivas) en un ensayo dado. En el ensayo, tras la exposición a 25 \mug/ml de LDL oxidadas en ausencia de compuesto, sólo el 2% de las células permanecieron viables. En contraposición, el porcentaje de células vivas tras la exposición a LDL tratadas con Cu++ en presencia de 8,9-deshidroestrona (2,5 \muM) fue 100% o superior. Otros compuestos analizados en este mismo ensayo tuvieron efectos mínimos sobre la protección de PACE (17b-estradiol = 11% de células vivas; Equilina = 4% de células vivas; Estrona = 37% de células vivas. Los resultados de este procedimiento de análisis demuestran que la LDL modificada en presencia de 8,9-deshidroestrona no fue citotóxica, y, por consiguiente, los datos concuerdan con la inhibición de la modificación oxidativa por 8,9-deshidroestrona demostrada por el método TBARS anterior.

Sobre la base de los resultados obtenidos con estos procedimientos de análisis, la 8,9-deshidroestrona y las sales, aceptables desde el punto de vista farmacéutico, de su éster sulfato, tales como las sales de metales alcalinos, sales de metales alcalino-térreos, sales de amonio, sales de alquilamina que contienen 1-6 átomos de carbono, sales de dialquilamina que contienen 1-6 átomos de carbono en cada grupo alquilo, son, por consiguiente, útiles como antioxidantes y para el tratamiento o la inhibición de trastornos patológicos provocados por radicales libres.

Los antioxidantes de la presente invención pueden formularse solos o con un excipiente farmacéutico para su administración, cuya proporción está determinada por la solubilidad y la naturaleza química del compuesto, la vía de administración escogida y las prácticas farmacológicas estándar. El excipiente farmacéutico puede ser sólido o líquido.

Un excipiente sólido puede comprender una o más sustancias, que pueden actuar también como saborizantes, lubricantes, solubilizantes, dispersantes, agentes de relleno, deslizantes, adyuvantes de compresión, aglutinantes o desintegrantes de comprimidos; también puede ser un material de encapsulación. En los polvos, el excipiente es un sólido finamente dividido que está mezclado con el principio activo finamente dividido. En los comprimidos, el principio activo está mezclado, en proporciones adecuadas, con un excipiente que tiene las propiedades de compresión necesarias y se comprime hasta alcanzar la forma y tamaño deseados. Los polvos y los comprimidos contienen preferiblemente hasta 99% de principio activo. Los excipientes sólidos adecuados incluyen, por ejemplo, fosfato de calcio, estearato de magnesio, talco, azúcares, lactosa, dextrina, almidón, gelatina, celulosa, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, polivinilpirrolidina, ceras de bajo punto de fusión y resinas intercambiadoras de iones.

Los excipientes líquidos se utilizan para preparar soluciones, suspensiones, emulsiones, jarabes, elixires y composiciones a presión. El principio activo puede disolverse o suspenderse en un excipiente líquido aceptable desde el punto de vista farmacéutico, tal como agua, un disolvente orgánico, una mezcla de ambos o aceites o grasas aceptables desde el punto de vista farmacéutico. El excipiente líquido puede contener otros aditivos farmacéuticos adecuados como solubilizantes, emulsionantes tampones, conservantes, edulcorantes, saborizantes, dispersantes, espesantes, colorantes, reguladores de la viscosidad, estabilizantes u osmorreguladores. Ejemplos apropiados de excipientes líquidos para la administración oral y parenteral son: agua (que contiene en parte aditivos como los mencionados anteriormente, por ejemplo: derivados de la celulosa, preferiblemente solución de carboximetilcelulosa de sodio), alcoholes (entre ellos alcoholes monohídricos y polihídricos, por ejemplo: glicoles) y sus derivados, lecitinas y aceites (por ejemplo, aceite de coco y aceite de cacahuete, fraccionados). Para la administración parenteral, el excipiente puede ser también un éster oleaginoso tal como oleato de etilo y miristato de isopropilo. Los excipientes líquidos estériles son útiles para las composiciones estériles en forma líquida para la administración parenteral. El excipiente líquido para composiciones a presión puede ser un hidrocarburo halogenado u otro propulsor aceptable desde el punto vista farmacéutico.

Las composiciones farmacéuticas líquidas que son soluciones o suspensiones estériles pueden utilizarse en, por ejemplo, inyección intramuscular, intraperitoneal o subcutánea. Las soluciones estériles también pueden administrarse por vía intravenosa. Los compuestos de la presente invención también puede administrarse por vía oral, ya sea en forma de composición líquida o sólida.

Los antioxidantes de la presente invención pueden administrarse por vía rectal o vaginal, en forma de supositorio convencional. Para la administración por inhalación o insuflación intranasal o intrabronquial, los antioxidantes de la presente invención pueden formularse en una solución acuosa o parcialmente acuosa, que puede entonces utilizarse en forma de aerosol. Los compuestos de la presente invención pueden también administrarse por vía transdérmica por medio de un parche transdérmico que contiene el compuesto activo y un excipiente que es inerte para el compuesto activo, no es tóxico para la piel y permite el suministro del agente por absorción sistémica en el torrente sanguíneo a través de la piel. El excipiente puede adoptar diversas formas tales como cremas y ungüentos, pastas, geles y dispositivos oclusivos. Las cremas y ungüentos pueden ser emulsiones líquidas viscosas o semisólidas del tipo aceite en agua o agua en aceite. También pueden ser adecuadas las pastas que comprenden polvos absorbentes dispersos en petróleo o petróleo hidrófilo, que contienen el principio activo. Pueden usarse diversos dispositivos oclusivos para liberar el principio activo en el torrente sanguíneo, tales como una membrana semipermeable que cubra un reservorio que contiene el principio activo con o sin excipiente, o una matriz que contiene el principio activo. Otros dispositivos oclusivos se conocen por la literatura.

Además, los antioxidantes de la presente invención pueden emplearse en forma de solución, crema o loción por formulación con vehículos aceptables desde el punto de vista farmacéutico que contienen 0,1 - 5 por ciento, preferiblemente 2%, del compuesto activo, que puede administrarse a un área afectada de micosis.

Los requisitos de dosificación varían con las composiciones particulares empleadas, la vía de administración, la intensidad de los síntomas presentes y el individuo particular al que se va a tratar. Sobre la base de los resultados obtenidos con los procedimientos estándar de análisis farmacológico, las dosis diarias previstas del compuesto activo serían 0,02 mg/kg-500 mg/kg. El tratamiento se iniciará generalmente con pequeñas dosis menores que la dosis óptima del compuesto. A partir de ahí se incrementa la dosis hasta alcanzar el efecto óptimo en las circunstancias; las dosis precisas para la administración oral, parenteral, nasal o intrabronquial se determinarán por el médico encargado, basándose en la experiencia con el paciente individual que se va a tratar. Preferiblemente, la composición farmacéutica está en forma de dosis unitaria, por ejemplo, comprimidos o cápsulas. En esa forma, la composición se subdivide en dosis unitarias que contienen cantidades apropiadas del principio activo; las formas de dosis unitarias pueden ser composiciones envasadas, por ejemplo, polvos envasados, viales, ampollas, jeringas precargadas o bolsitas que contienen líquidos. La forma de dosis unitaria puede ser, por ejemplo, una cápsula o comprimido, por sí mismos, o puede ser el número apropiado de cualquiera de dichas composiciones en forma envasada.

Claims (4)

1. Utilización de 8,9-deshidroestrona o una sal, aceptable desde el punto de vista farmacéutico, del éster 3-sulfato de 8,9-deshidroestrona para la preparación de un medicamento para su utilización como antioxidante en la inhibición de las lesiones provocadas por radicales libres como resultado de la participación de radicales libres en el desarrollo patológico de cánceres, trastornos del sistema nervioso central, trastornos inflamatorios, insuficiencia venosa periférica, artritis reumatoide, enfermedades autoinmunitarias, insuficiencia respiratoria, enfisema, hepatitis vírica, hepatitis crónica activa, tuberculosis, psoriasis, lupus eritematoso sistémico, síndrome de insuficiencia respiratoria del adulto, traumatismo del sistema nervioso central e ictus, estando destinado el medicamento para el tratamiento de un paciente que no padece osteoporosis senil.

2. Utilización según la reivindicación 1, en la que la sal, aceptable desde el punto de vista farmacéutico, del éster 3-sulfato es una sal de metal alcalino, sal de metal alcalinotérreo, sal de amonio, sal de alquilamina que contiene 1-6 átomos de carbono o sal de dialquilamina que contiene 1-6 átomos de carbono en cada grupo alquilo.

3. Utilización de 8,9-deshidroestrona o una sal, aceptable desde el punto de vista farmacéutico, del éster 3-sulfato de 8,9-deshidroestrona para la preparación de un medicamento para su utilización como antioxidante en la prevención de la lesión por reperfusión.

4. Utilización según la reivindicación 3, en la que la sal, aceptable desde el punto de vista farmacéutico, del éster 3-sulfato es una sal de metal alcalino, sal de metal alcalinotérreo, sal de amonio, sal de alquilamina que contiene 1-6 átomos de carbono o sal de dialquilamina que contiene 1-6 átomos de carbono en cada grupo alquilo.