ES2204130T3 - Agentes anti-trombosis. - Google Patents
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Abstract
El uso de un extracto de fruta o una de sus fracciones activas, en la fabricación de una composición de administración oral para uso en la profilaxis o tratamiento de un estado de enfermedad en un ser humano, iniciado o caracterizado por aglutinación de plaquetas, derivándose el extracto o fracción activa de una fruta elegida entre frutas o plantas de las familias Solnaceae, Rutaceae, Cucurbitaceae, Rosaceae, Musaceae, Anacardiaceae, Vitaceae, Arecaceae, Ercaceae y Lauraceae.
Description
Agentes anti-trombosis.
Esta invención se refiere a agentes
anti-trombosis y más particularmente a composiciones
preparadas a partir de extractos de frutas.
Es conocido que un alto consumo de frutas y
verduras es una importante medida preventiva, por la que se puede
reducir el peligro de enfermedades cardiovasculares y ciertos
cánceres ligados con la nutrición, que incluyen cáncer de estómago,
colon, pecho y próstata. Un factor involucrado en la iniciación y
desarrollo de enfermedades cardiovasculares y cánceres es la
ocurrencia de procesos oxidativos anormales que conducen a la
generación de radicales o compuestos hidroxi y peroxi. En parte, el
efecto beneficioso de comer frutas y verduras se explica por los
antioxidantes contenidos en ellas, los cuales inhiben reacciones
oxidativas. Antioxidantes específicos conocidos que dan razón de la
inhibición incluyen vitamina C, vitamina E y carotenos, que
incluyen alfa y beta carotenos, licopeno, luteína, zeantina,
critoxantina y xantofilas.
Se han dedicado considerables esfuerzos a
identificar compuestos alimenticios derivados del tomate que tienen
un papel en la prevención de enfermedades del corazón y algunos
cánceres. Tales compuestos están descritos en Ebushita et al., Food
Chemistry, 1997, 60(2), 207-212 en el que se
fraccionó un extracto de caroteno de tomate y el componente
principal se identificó como licopeno, beta-caroteno
y luteína.
Estudios sobre el tomate se han concentrado en el
papel de carotenos, en particular licopeno, en la defensa
antioxidante contra la oxidación de lipoproteína de baja densidad
(LBD). En Oshima et al., J. Agricultural and Food Chemistry 1996,
44(8), 2306-2309, se describe que LBD
complementada con licopeno acumula hidroperóxidos más lentamente
que LBD no complementada, cuando se excita con oxígeno singlete,
proporcionando evidencia, por ello, para soportar la teoría de que
los antioxidantes tienen la posibilidad de atrapar radicales
hidroxi/peroxi. Además, en Fuhrman et al., Nutrition Metabolism and
Cardiovascular Diseases, 1997, 7(6), 433-443,
se describe que licopeno complementado en la dieta reduce
significativamente los niveles de oxidación de LBD humana.
En Wisburger, Proceedings for the Society for
Experimental Biology and Medicine, 1998, 218(2),
140-143, se sugiere que la absorción óptima de
carotenos, que son compuestos químicos solubles en lípidos, se
mejora en presencia de algo de aceite o grasa en la dieta. La
investigación en el campo de la nutrición y de la salud ha
demostrado que aceites monosaturados, tales como aceite de oliva,
son los más deseables, ya que tales aceites no incrementan el
peligro de arterioesclerosis, enfermedad coronaria del corazón o
cánceres relacionados con la alimentación.
El documento US 4.507.286 describe la preparación
de polisacárido a partir de zumos de las raíces y frutos de una
especie de Bromeliaceae, y por tratamiento de bromelaína, teniendo
el polisacárido actividad anti-inflamatoria y
actividad inhibidora de la aglutinación de plaquetas.
Altman et al. [Thrombosis and Haemostasis,
53(3), 312-313 (1985)] describe el
aislamiento de una fracción activa a partir de melón (C. Cucumis
melo) que inhibe la aglutinación de plaquetas in vitro. Sin
embargo, la actividad inhibidora de aglutinación de plaquetas de la
fracción desaparece por tratamiento con adenosina desaminasa, que
es una enzima que es ubícua en los seres humanos.
Los Solicitantes han comprobado que extractos a
partir de muchas frutas exhiben la capacidad de inhibir la
aglutinación de plaquetas. Los resultados obtenidos hasta la fecha
sugieren que las composiciones que contienen extractos de estas
frutas pueden ser, por tanto, de uso en prevenir enfermedades
coronarias, por ejemplo, infartos de miocardio y apoplejía y en
prevenir incidentes trombo-embólicos adicionales en
pacientes que han sufrido infarto de miocardio, apoplejía o angina
inestable. Además, tales composiciones pueden ser de uso en
prevenir restenosis después de procedimientos de angioplastia y de
lo que en inglés se denomina "bypass" (en lo sucesivo
traducido por derivación). Además, composiciones que comprenden
extractos de frutas pueden ser de uso en el tratamiento de
enfermedad coronaria que resulta de trastornos
trombo-embólicos tales como infarto de miocardio en
conjunción con terapia trombolítica.
Resultados obtenidos hasta la fecha indican que
los compuestos responsables de la actividad de antiaglutinación de
plaquetas son compuestos solubles en agua que tienen una estructura
muy diferente a los compuestos solubles en lípidos, tales como
licopeno identificado en las publicaciones referidas más arriba.
Existen muchos agentes conocidos de
antiaglutinación de plaquetas que actúan en diferentes etapas de
producción y acción de plaquetas. La aspirina (ácido
acetilsalicílico) es la más ampliamente usada y estudiada. También
se han usado dipiridamol y ticlopidina. La actividad antiplaquetas
de la aspirina se debe a la inhibición irreversible de
ciclo-oxigenasa de plaquetas, evitando así la
síntesis de tromboxano A_{2}, que es un compuesto que causa la
aglutinación de plaquetas. Indobufen es un inhibidor reversible de
ciclo-oxigenasa de plaquetas. Algunos compuestos son
inhibidores directos de tromboxano A_{2} sintasa, por ejemplo
pirmagrel, o actúa como antagonista en receptores de tromboxano,
por ejemplo sulotroban.
Los resultados obtenidos hasta la fecha sugieren
que los componentes activos en extractos de frutas pueden afectar a
una o más etapas del camino que conduce a la producción de
tromboxano A_{2} aguas arriba del de la aspirina y los otros
medicamentos anti-plaquetas corrientemente
disponibles. Es bien conocido que efectos adversos son incidencias
corrientes con dosis terapéuticas de aspirina, siendo el principal
efecto alteraciones gastro-intestinales tales como
náuseas, dispepsia y vómitos. Se anticipa, por tanto, que los
compuestos inhibidores de aglutinación de plaquetas aisladas en
extractos de frutas encontrarán uso como alternativa deseable de la
aspirina y otros medicamentos antiplaquetas en la prevención de
incidentes trombo-embólicos y enfermedades
coronarias.
Por consiguiente, en un aspecto, la invención
proporciona el uso de un extracto de fruta o una de sus fracciones
activas para la fabricación de una composición para administración
oral para uso en la profilaxis o tratamiento de un estado de
enfermedad en un ser humano, iniciado o caracterizado por
aglutinación de plaquetas, derivándose el extracto o fracción
activa de una fruta elegida entre frutas de plantas de las familias
Solnaceae, Rutaceae, Cucurbitaceae, Rosaceae, Musaceae,
Anacardiaceae, Vitaceae, Arecaceae, Ericaceae y
Lauraceae.
En otro aspecto, la invención proporciona el uso
de un extracto de frutas o una fracción activa de ellas para la
fabricación de una composición para administración oral para uso
inhibidor de aglutinación de plaquetas humanas en seres humanos,
derivándose el extracto o fracción activa de una fruta elegida entre
frutas de plantas de las familias Solnaceae, Rutaceae,
Cucurbitaceae, Rosaceae, Musaceae, Anacardiaceae, Vitaceae,
Arecaceae, Ericaceae y Lauraceae.
En aún otro aspecto, la invención proporciona una
fracción activa de un extracto de frutas para uso inhibidor de
aglutinación de plaquetas humanas en un ser humano por
administración oral, siendo la fracción activa capaz de pasar a
través de un filtro de ultrafiltración que tiene un peso molecular
inferior a 1.000 y que contiene un compuesto o compuestos
incoloros o de color pajizo solubles en agua y sustancialmente
estables al calor, que tienen un peso molecular inferior a
1.000.
Realizaciones particulares y preferidas de la
invención son las que se establecen en las reivindicaciones anexas
a la presente memoria descriptiva.
Se prefiere que los extractos de frutas usados de
acuerdo con la invención sean los que no son tóxicos para los seres
humanos, y típicamente las frutas son las que usualmente se
consideran que son frutas comestibles. Por tanto, las frutas pueden
contener o no pepitas o huesos, pero contienen una pulpa comestible
esencialmente no oleosa. Típicamente las frutas pueden tener una
corteza, cáscara o piel rodeando la pulpa que opcionalmente puede
ser comestible.
Ejemplos de frutas que se pueden usar de acuerdo
con la presente invención son las elegidas entre las familias
Solnaceae, Rutceae, Cucurbitaceae, Rosaceae, Musaceae,
Anacerdiaceae, Bromeliaceae, Vitaceae, Arecaceae, Ericaceae y
Lauracea.
Ejemplos de Solneceae incluyen el tomate,
por ejemplo la variedad de tomate Inglés. Ejemplos de
Rutaceae incluye la especie Citrus, tal como
Citrus paradisi (pomelo), Citrus sinensis (naranja),
Citrus lemon (limón) y Citrus aurantifolia (lima).
Ejemplos de Cucurbitaceae incluye Cucumis melo
(melón), por ejemplo, melón muy dulce. Ejemplos de
Anacardiaceae incluyen Mangifera índica (mango).
Ejemplos de Rosaceae incluyen Pyrus malus o Pyrus
silvestris (manzana), Pyrus communis (pera),
Amygdalus persica o Prunus persica Var.
Nectarina (nectarina), Prunus armeniaca
(albaricoque), Prunus domestica (ciruela), Prunus
avium (cerezas), Prunus persica (melocotón), la fresa y
la mora. Ejemplos de Bromeliaceae incluyen Ananas
sativus (piña). Ejemplos de Lauraceae incluyen Persea
gratissima o Persea americana (aguacate). Ejemplos de
Vitaceae incluyen Vitis vinifera (uva). Ejemplos de
Arecaceae incluyen Phoenix dactylifera (dátil).
Ejemplos de Ericaceae incluyen arándano.
Ejemplos particulares de frutas, de cuyos
extractos o fracciones activas se ha descubierto que tienen
actividad inhibidora de aglutinación de plaquetas son el tomate,
pomelo, melón, mango, piña, nectarina, fresa, ciruela, plátano,
ráspano, uva, pera, manzana y aguacate.
Los extractos de la invención se pueden preparar
homogenizando la pulpa de una fruta, preferiblemente pelada, y
luego separando los sólidos de ella, por ejemplo por
centrifugación. Así, el extracto es típicamente un extracto acuoso
que puede comprender esencialmente el zumo de la fruta,
opcionalmente con la adición de agua extra añadida durante la etapa
de homogenización. Tales extractos acuosos se pueden concentrar,
enriquecer o condensar mediante, por ejemplo, técnicas estándar, por
ejemplo, evaporación a presión reducida. Ejemplos de concentrados
son los que se han concentrado a la mitad, más usualmente al menos a
la cuarta parte, por ejemplo, al menos a la octava parte, o sal
menos a la cuadragésima parte, o al menos a la centésima parte o al
menos a la duocentésima parte o al menos a la milésima parte.
Los extractos se pueden fraccionar para aislar
una o más fracciones activas en ese respecto, por ejemplo, por
filtración de pesos moleculares o cromatografía sobre un soporte
sólido apropiado tal como gel de sefarosa (para cromatografía de
penetrabilidad) o columna de intercambio iónico usando cromatografía
líquida de alta presión (HPLC) sobre una sílice o alúmina tratada
apropiadamente, por ejemplo sílice revestida de ODS, o mediante
extracción con disolvente.
Experimentos llevados a cabo sobre extractos de
tomate han revelado que el componente o componentes activos del
extracto pasan a través de un filtro de ultrafiltración que tiene un
peso molecular inferior a 1.000, es incoloro o de color pajizo, y
soluble en agua y no pierde actividad significativa cuando se
hierve.
Los extractos de tomate y, en particular,
extractos acuosos de tomate representan un aspecto preferido de la
invención. Una fracción activa del extracto de tomate se ha
descubierto que contiene una mezcla de nucleosidos que incluyen
citidina.
La fracción activa se ha comprobado que está
primariamente asociada con, o que se puede extraer de, el zumo, la
pulpa que rodea las pepitas, y las pepitas del tomate. Por tanto,
el uso de composiciones preparadas a partir de una fracción activa
que comprende esencialmente un producto homogeneizado o su extracto
derivado de la pulpa de un tomate pelado o que comprende
esencialmente el zumo y/o la pulpa que rodea las pepitas y/o las
pepitas, representa una realización preferida de la invención.
El componente activo del extracto de tomate se ha
analizado por espectroscopia de masas (ME) y espectroscopia de
resonancia magnética nuclear (NMR) y se ha descubierto que comprende
una mezcla de nucleosidos. La fracción activa se caracteriza
porque:
- (a)
- es sustancialmente estable al calor;
- (b)
- es incolora o de color pajizo;
- (c)
- es un compuesto soluble en agua;
- (d)
- comprende componentes que tienen un peso molecular inferior a 1.000;
- (e)
- comprende uno o más nucleosidos que contienen actividad inhibidora de aglutinación de plaquetas; y preferiblemente
- (f)
- tiene un espectro de masas cuando se somete a espectrometría de masas por desorción/ionización de láser con asistencia matricial-tiempo de vuelo (DILAM-TDV), tal como se presenta en la Figura 7 anexa a la presente memoria descriptiva; y preferiblemente
- (g)
- exhibe un espectro de NMR de ^{1}H sustancialmente como se representa en la Figura 6 anexa a la presente memoria descriptiva.
Los extractos o sus fracciones activas se
formulan para administración oral. Como tales, se pueden formular
en forma de disoluciones, suspensiones, jarabes, comprimidos,
cápsulas, tabletas y barras de comida ligera, guarniciones y
aperitivos, a título de ejemplos. Tales formulaciones se pueden
preparar de acuerdo con métodos bien conocidos per se. Se
prefiere que las formulaciones tengan un contenido bajo o están
exentas de materiales lípidos.
Por ejemplo, los extractos o fracciones activas
se pueden transformar en jarabes u otras disoluciones para
administrar oralmente, por ejemplo bebidas medicinales, en
presencia de uno o más excipientes elegidos entre azúcares,
vitaminas, agentes de sabores, agentes colorantes, conservantes y
espesantes.
Agentes de ajuste de la tonicidad, tales como
cloruro sódico o azúcares, se pueden añadir para proporcionar una
disolución de un particular poder osmótico, por ejemplo una
disolución isotónica. Uno o más agentes reguladores del pH, tales
como tampones, también se pueden usar para ajustar el pH a un valor
particular, y preferiblemente mantenerlo en ese valor. Ejemplos de
tampones incluyen tampones de citrato sódico/ácido cítrico y
tampones de fosfatos.
Alternativamente, los extractos o sus fracciones
activas pueden estar secos, por ejemplo, secando por pulverización
o secando por congelación, y el producto secado se puede formular
en forma de dosis sólidas o semi-sólidas, por
ejemplo, en forma de comprimidos, tabletas, cápsulas, polvos,
granulados o gel.
En cambio, extractos secos simples se pueden
preparar sin ningún componente adicional. Alternativamente,
extractos secos se pueden preparar adsorbiendo sobre un soporte
sólido; por ejemplo, un azúcar tal como sacarosa, lactosa, glucosa,
fructosa, manosa o un alcohol de azúcares tales como xilitol,
sorbitol o manitol; o un derivado de celulosa. Otros adsorbentes
particularmente útiles incluyen adsorbentes a base de almidón tales
como harinas de cereales, por ejemplo harina de trigo y harina de
maíz. Para la formación de comprimidos, el extracto seco típicamente
se mezcla con un diluyente, tal como un azúcar, por ejemplo,
sacarosa y lactosa, y alcoholes de azúcares tales como xilitol,
sorbitol y manitol; o celulosa modificada o derivado de celulosa
tal como celulosa en polvo o celulosa microcristalina o
carboximetilcelulosa. Los comprimidos pueden contener, también,
típicamente uno o más excipientes elegidos entre agentes de
granulación, aglutinantes, lubricantes y agentes disgregantes.
Ejemplos de agentes disgregantes incluyen almidón y derivados de
almidón, y otros polímeros hinchables, por ejemplo disgregantes
polímeros reticulados tales como carboximetilcelulosa reticulada,
polivinilpirrolidona reticulada y glicolatos de almidón. Ejemplos de
lubricantes incluyen estearatos tales como estearato magnésico y
ácido esteárico. Ejemplos de aglutinantes y agentes de granulación
incluyen polivinilpirrolidona. Cuando el diluyente no es
naturalmente muy dulce, se puede añadir un edulcorante, por ejemplo
glicirrizinato de amonio o un edulcorante artificial tal como
aspartamo o sacarinato sódico.
Extractos secos también se pueden formular en
forma de polvos, gránulos o semisólidos para incorporación en
cápsulas. Cuando se usan en forma de polvos, los extractos se
pueden formular junto con uno cualquiera o más de los excipientes
definidos más arriba en relación con comprimidos, o se pueden
presentar en forma no diluida. Para presentación en forma de
semisólido, los extractos secos se pueden disolver o poner en
suspensión en un líquido viscoso o vehículo semisólido, tal como
polietilenglicol, o un vehículo líquido tal como un glicol, por
ejemplo propilenglicol, o glicerol o un aceite vegetal o de
pescado, por ejemplo un aceite elegido entre aceite de oliva,
aceite de girasol, aceite de cártamo, aceite de hierba del asno,
aceite de soja, aceite de hígado de bacalao, aceite de arenque,
etc. Tales extractos se pueden incluir en cápsulas dl tipo de
gelatina dura o gelatina blanda o fabricadas a partir de
equivalentes a gelatina dura o blanda, prefiriéndose cápsulas
equivalentes a gelatina para líquidos viscosos o rellenos de
semisólidos.
Extractos secos se pueden proporcionar, también,
en forma de polvos para incorporación en barras de comida rápida,
por ejemplo barras de frutas, barras de nuez, y barras de cereales.
Para la presentación en forma de barras de comida rápida, los
extractos secos se pueden mezclar con uno cualquiera o más
ingredientes elegidos entre frutos secos tales como tomates secados
al sol, pasas y pasas de Esmirna, nueces o cereales molidos, tales
como avenas y trigo.
Extractos secos se pueden proporcionar en forma
de polvo para reconstitución en forma de disolución. Como tales,
también pueden contener excipientes solubles tales como azúcares,
tampones tales como tampones de citrato y fosfato, y agentes
efervescentes formados a partir de carbonatos, por ejemplo,
bicarbonatos tales como bicarbonato sódico o amónico y un ácido
sólido, por ejemplo ácido cítrico o una sal citrato ácida.
En una realización preferida, extracto seco se
proporciona en forma de polvo opcionalmente junto con un excipiente
sólido (por ejemplo, en polvo) preferido, para incorporación en
cápsulas, por ejemplo una cápsula de gelatina dura.
Una forma de dosis sólida o semisólida de la
presente invención puede contener hasta aproximadamente 1.000 mg de
extracto seco y, por ejemplo hasta aproximadamente 800 mg.
Los extractos se pueden presentar en forma de
complementos de alimentos o como aditivos de alimentos, o se pueden
incorporar a alimentos, por ejemplo alimentos funcionales o
productos nutrimentales.
Las composiciones de la invención se pueden
presentar como formas de dosis unitarias que contienen una
concentración definida de extracto o de su fracción activa. Tales
formas de dosis unitarias se pueden elegir con el objeto de alcanzar
un nivel deseado de actividad biológica.
La invención también proporciona un método para
la profilaxis o tratamiento de un estado o trastorno provocado por
aglutinación de plaquetas, comprendiendo el método administrar a un
paciente (tal como a un ser humano u otro mamífero) en su
nenecesidad, una cantidad inhibidora de aglutinación de plaquetas
eficaz y preferiblemente no tóxico, de una fruta o un extracto o su
fracción activa tal como se define más arriba en la presente
memoria descriptiva.
Para el tratamiento de enfermedades
caracterizadas por aglutinación de plaquetas, la cantidad de
extracto o fracción activa administrada diariamente a un paciente
dependerá de la potencia del extracto, el estado o enfermedad
particular bajo tratamiento y su severidad, y finalmente quedará a
la discreción del médico. Sin embargo, la cantidad administrada
típicamente será una cantidad no tóxica eficaz para tratar el
estado en cuestión.
La cantidad de extracto o fracción activa
administrada a un paciente típicamente variará de acuerdo con la
concentración del ingrediente o ingredientes activos en el
extracto. Sin embargo, un régimen de dosis diaria típico para un
paciente humano que sufre de una enfermedad provocada por
aglutinación de plaquetas puede ser de 0,0001 a 0,1, y
preferiblemente de 0,001 a 0,05 g/kg de peso del cuerpo. Cuando una
fracción activa está sola y se administra, la cantidad de material
sólido administrado se puede reducir en una cantidad consistente
con la pureza creciente de la fracción. Típicamente, la
administración de al menos 100 mg, y preferiblemente 200 mg de la
fracción activa, por día, a un paciente humano que sufre una
enfermedad provocada por aglutinación de plaquetas, inhibirá
significativamente la aglutinación de plaquetas.
Las composiciones se pueden administrar en una
sola o múltiples unidades de dosis por día, por ejemplo de una a
cuatro veces al día, y preferiblemente una o dos veces al día.
Los extractos de la invención se pueden
administrar en forma sólida, líquida o semi-sólida.
Por ejemplo, los extractos se pueden administrar en forma de zumos
de frutas, concentrados de los extractos acuosos o fracciones
activas purificadas de los extractos en forma sólida, líquida o
semi-sólida. Cuando se administran en estado no
concentrado, se pueden administrar en forma de zumo preparado a
partir de 100% de la fruta. Sin embargo, preferiblemente los
extractos se administran en forma de concentrados y más
preferiblemente en forma de concentrados en forma sólida, por
ejemplo en forma de comprimidos, cápsulas de gelatina dura o barras
de comida rápida, tal como se define más arriba en la presente
memoria descriptiva.
En una realización de la invención, al menos 300
mL de zumo 100% de fruta (por ejemplo, 600 mL de zumo 100% de
fruta) pueden comprender un típico régimen de dosis diaria para un
paciente humano que sufre de una enfermedad asociada con
aglutinación de plaquetas. En otra realización de la invención, al
menos 300 mL de zumo 100% de frutas se puede administrar en dosis
múltiples por día, por ejemplo al menos dos veces por día, y
preferiblemente tres veces al día. Sin embargo, los regímenes de
dosis antes mencionados suponen el consumo de volúmenes
relativamente grandes de líquidos que pueden ser inaceptables para
el paciente. Por tanto, en una realización adicional, concentrados
tal como se definen más arriba en la presente memoria descriptiva,
se pueden administrar, por ejemplo, en dosis múltiples al día.
Los extractos de la invención se pueden
administrar en conjunción con otros agentes terapéuticos, por
ejemplo uno o más agentes terapéuticos elegidos entre agentes
cardíacos o contra la trombosis, agentes contra la arritmia,
inhibidores de ACE, bloqueadores beta, vasodilatadores, otros
inhibidores de aglutinación de plaquetas, inhibidores de
fosfodiesterasa, activadores de plasminógeno e hipolipidémicos, a
título de ejemplo. Los extractos se pueden formular separadamente de
los otros agentes terapéuticos o se pueden formular juntos.
Las composiciones de la invención tienen
actividad inhibidora de aglutinación de plaquetas. Como tales, las
composiciones de la invención son útiles en el tratamiento de
estados y trastornos en los que la aglutinación de plaquetas de la
sangre juegan una parte, o en los que está implicada la
hiperactividad de las plaquetas. Composiciones de la presente
invención se pueden usar terapéuticamente en diversos estados en los
que la hiperactividad de las plaquetas es una característica
primaria o secundaria, tal como enfermedades del corazón, cánceres
y obesidad. Ejemplos de indicaciones clínicas en las que las
composiciones de la presente invención serán de interés particular
incluyen el tratamiento o control del post-infarto
de miocardio, trombosis coronaria, injertos de derivaciones de la
arteria coronaria, sustitución de válvulas cardíacas e injertos
periféricos y vasculares.
Los extractos de la invención se pueden usar
solos o en combinación con otros agentes terapéuticos. En una
realización preferida, extractos de la invención se administran en
combinación con uno o más de entre estreptoquinasa, heparina,
insulina, medicamentos contra la obesidad e inhibidores de HMGCoA
reductasa.
La invención se ilustrará, pero no se limitará,
por los ejemplos siguientes y con referencia a las Figuras anexas,
de las que:
La Figura 1 representa de forma esquemática un
procedimiento típico para fraccionamiento parcial de extractos de
tomate;
La Figura 2 es un cromatograma de filtración en
gel de un ultrafiltrado de extracto de tomate acuoso;
La Figura 3 es un cromatograma de intercambio
iónico por cromatografía de líquidos a alta presión (HPLC) de un
extracto de tomate desalado acuoso filtrado de gel;
La Figura 4 es un gráfico que representa la
actividad de aglutinación de plaquetas en fracciones desaladas,
Fracción 1 y Fracción 2, recogidas después de cromatografía de
intercambio iónico por HPLC;
La Figura 5 es un espectro de NMR de ^{1}H de
citidina;
La Figura 6 es un espectro de NMR de ^{1}H de
la Fracción activa F2 desalada de un extracto de tomate acuoso;
La Figura 7 es un espectro de masas de
DILAM-TDV de la fracción activa F2;
La Figura 8 es un cromatograma de cromatografía
de gases-espectroscopia de masas por ionización
química (CG-EMIQ) de la Fracción F2 derivada; y
La Figura 9 es un gráfico que representa los
resultados de ensayo de aglutinación de plaquetas, obtenidos usando
extractos de diferentes partes del tomate.
Extractos que consisten en zumo 100% de fruta o
zumos de fruta diluidos se prepararon recientes en el día del ensayo
a partir de los frutos establecidos en la Tabla 1 de más abajo.
Para preparar zumo 100% de fruta, la fruta se peló y la pulpa se
homogeneizó. El producto homogeneizado resultante se hizo girar a
3.000 x G durante 10 min en una centrífuga en tubos Eppendorf de
1,5 mL, después de lo cual, el zumo sobrenadante se separó y el pH
del zumo se ajustó a 7,4 con hidróxido sódico 1M o 0,1M, según el
pH inicial del extracto de frutas. Para frutas relativamente
fibrosas (manzana, mango, aguacate), un extracto de 20% o 50%
peso/volumen se preparó homogeneizando el fruto de 20% o de 50% con
solución salina tamponada con fosfato (STF) a pH 7,4, elaborándose
el producto homogeneizado según se describe más arriba en relación
con los extractos 100% de fruta.
El efecto de los extractos de fruta sobre las
propiedades de aglutinación de plaquetas humanas se investigó en
jóvenes voluntarios. Sangre venosa se extrajo de los voluntarios
que no habían tenido ninguna medicación durante, al menos 14 días
antes de la donación. Se extrajo sangre (20 mL) usando una aguja de
mariposa 19G y se evitó la coagulación mezclando las muestras de
sangre con Acid Citrate (135 mM) en la proporción de 9 partes, en
volumen, de sangre a 1 parte, en volumen, de ACD). Plasma rico en
plaquetas (PRP) se preparó a partir de las muestras centrifugando la
sangre a 200 x G durante 15 minutos.
El zumo de la fruta (50 \muL), cuyo pH se
ajustó a 7,4 cuando necesario con hidróxido sódico 1M o 0,1M, que
depende del pH inicial del extracto de la fruta, se mezcló con el
PRP (450 \muL) y se incubó a 37ºC durante 15 minutos, después de
lo cual, el efecto del extracto de fruta sobre la aglutinación de
plaquetas inducida por ADP se controló con la adición de ADP a una
concentración final de 10 \muM. Se realizaron controles en
paralelo usando 50 \muL de STF, pH 7,4 en lugar del zumo de
fruta.
La aglutinación de plaquetas en PRP se controló
usando un aglutinómetro Packs-4 (Helena Labs, USA)
a la velocidad de agitación constante de 1.000 rpm a 37ºC. El
recuento de plaquetas se llevó a cabo usando un contador de células
Coulter.
La Tabla 1 presenta las propiedades de
anti-aglutinación de diversos extractos de frutas
con plaquetas humanas. Los resultados se expresaron en forma de % de
inhibición de respuesta de aglutinación a ADP, para un número de
voluntarios (n). En la Tabla, los extractos marcados con asterisco
se hirvieron durante 10 minutos y luego se centrifugaron a 113.000 x
G durante 30 minutos.
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
Extractos de tomate se fraccionaron de acuerdo
con el esquema general establecido en la Figura 1 y la actividad
inhibidora de agregación de plaquetas se midió a diversas etapas.
Así, zumo de tomate recién preparado, preparado a partir de 100%
del fruto se hirvió durante 10 minutos y después se centrifugó a
113.000 x G durante 30 minutos. La actividad inhibidora de
agregación de plaquetas del extracto está representada en la Tabla 1
de más arriba.
Después de centrifugación, una porción del
extracto sobrenadante se sometió a ultrafiltración haciéndola pasar
a través de una membrana de filtración Amicon YM1 con un peso
molecular inferior a 1.000, bajo presión de nitrógeno a 4ºC. El
material ultrafiltrado se recogió como lo fue cualquier zumo del
fruto retenido que permanecía encima del filtro (lo que en inglés
se denomina "retentate" en lo sucesivo traducido por
"material retenido"), y el material ultrafiltrado y el material
retenido se sometieron, luego, al ensayo de sus actividades de
inhibición de la aglutinación de plaquetas inducida por ADP o
colágeno. Las actividades anti-plaquetas del
material ultrafiltrado y material retenido fueron las mismas,
indicando que el componente activo del extracto comprende un
compuesto o compuestos que tiene(n) un peso molecular
inferior a 1.000.
A fin de determinar si la actividad
anti-aglutinación de plaquetas era debida a
componentes solubles en lípidos o solubles en agua en el material
ultrafiltrado del tomate (peso molecular inferior a 1.000), el
componente lípido del material ultrafiltrado se extrajo con
cloroformo y metanol de acuerdo con el método de Bligh y Dyer. Así,
2 mL del material ultrafiltrado se mezclaron con 2,5 mL de metanol
seguido por 1,25 mL de cloroformo para dar una sola fase, y una
relación de cloroformo:metanol:agua de 1:2:0,8. No se formó ningún
precipitado. Cloroformo (1,25 mL) y agua (1,25 mL) se añadieron
luego para llevar la relación a 2:2:1,8 y, después de mezclar
suavemente, la mezcla se permitió separarse en dos capas. La capa
superior (metanol/agua) se separó y el metanol se separó por
soplado con nitrógeno a 55ºC. El volumen se llevó luego a 2 mL,
después de ajuste a pH 7,4. La actividad de
anti-aglutinación de plaquetas de esta fase acuosa
se comparó con 50 \muL de PBS como control.
La fase de cloroformo se evaporó bajo nitrógeno y
se volvió a poner en suspensión en etanol (50 \muL). Una muestra
(10 \muL) de la fase de etanol se sometió, luego, a ensayo en su
actividad de anti-aglutinación de plaquetas versus
un control de 10 \muL de etanol.
El material ultrafiltrado (MWCO 1000) y la
fracción acuosa deslipidada, ambos a pH 7,4, tenían una actividad
similar frente a la aglutinación de plaquetas inducida por ADP y
colágeno. Esto se pensó que era debido a efectos de lípidos no
específicos sobre las plaquetas.
En conclusión, experimentos de fraccionamiento
sugerían que la actividad inhibidora de aglutinación de plaquetas
está asociada con componentes solubles en agua de un peso molecular
inferior a 1.000. El componente o componentes es o son estables al
calor e incoloro o de color pajizo.
Extractos de tomates se fraccionaron de acuerdo
con el esquema general establecido en la Figura 1 y la actividad
inhibidora de aglutinación de plaquetas se midió en diversas
etapas. Así, zumo de tomate reciente, preparado a partir de fruto a
100%, se hirvió durante 10 minutos y luego se centrifugó a 113.000 x
G durante 30 minutos. Después de centrifugación, una porción del
extracto sobrenadante se sometió a ultrafiltración haciéndole pasar
a través de una membrana de filtración Amicon YM1 con un peso
molecular inferior a 1.000, bajo presión de nitrógeno a 4ºC. Se
recogió el material ultrafiltrado, (PMI 1000), y una muestra se
sometió a ensayo en cuanto a su actividad de inhibir la
aglutinación de plaquetas inducida por ADP o colágeno. El material
ultrafiltrado se secó por congelación para posterior
purificación.
La muestra seca por congelación se puso en
suspensión en 2 mL de agua. La actividad de
anti-aglutinación de plaquetas de esta fase acuosa
se comparó con 50 \muL de PBS como control. Puesto que sólo la
fracción acuosa de la muestra secada por congelación tiene la
actividad inhibidora de aglutinación de plaquetas (véase Ejemplo
2), la posterior purificación del componente activo se llevó a cabo
usando la fracción acuosa.
Posterior fraccionamiento se llevó a cabo en una
columna de sefarosa que separa de acuerdo con el tamaño molecular.
Así, cromatografía de columna de filtración en gel de la muestra
secada por congelación vuelta a poner en suspensión se llevó a cabo
usando P2 Biogel. Una columna de P2 Biogel se equilibró con tampón
de ácido acético 0,01 M, pH 3,3 que contenía cloruro sódico 0,15 M.
Se cargó la muestra en la columna y se eluyó con un tampón de ácido
acético 0,01 M, pH 3,3, que contenía cloruro sódico 0,15 M. La
aglutinación de plaquetas se sometió a ensayo en cada una de las
fracciones recogidas (designadas No. 1 a 8) que correspondía a los
picos del espectro representado en la traza de cromatografía en la
Figura 2.
La actividad inhibidora de aglutinación de
plaquetas se descubrió que estaba concentrada en una de las
fracciones recogidas, que correspondía al Pico 4. Esta fracción, con
la referencia de Fracción 4, se secó por congelación antes de la
posterior purificación. La muestra secada por congelación se volvió
a poner en suspensión en agua para dar una disolución de 20 mg/mL.
La desalación de la fracción recogida se llevó a cabo cargando la
muestra en una columna P2 Biogel y eluyendo con tampón de ácido
acético 0,01 M, pH 3,3. El eluato se secó por congelación y se
volvió a poner en suspensión como antes.
La posterior purificación se consiguió mediante
cromatografía de intercambio iónico en cromatografía de líquidos a
alta presión (HPLC) sobre gel de sílice Nucleosil. La muestra se
aplicó en una columna de Nucleosil 5 \muM con una columna de
guarda rellena con Persorb A C18. La muestra se concentró en la
columna lavando la columna con disolvente A (acetato sódico 10 mM
ajustado a pH 4 con ácido acético glacial). Para elución, un
gradiente lineal de 100% de disolvente A a 100% de disolvente B
(acetato sódico 10 mM y cloruro sódico 1 M, pH 4) a lo largo de un
lapso de tiempo de 30 minutos y un caudal de 1 mL/min.
Se recogieron dos fracciones: la fracción 1 que
correspondía al material eluido a lo largo de los picos 1 a 11
(entre 2,3 y 8,1 minutos después de la inyección de la muestra) y
la Fracción 2 que correspondía al material eluido en el pico 5. La
desalación de las fracciones recogidas se llevó a cabo cargando la
muestra en la columna P2 Biogel y eluyendo con tampón de ácido
acético 0,01 M, pH 3,3. El eluato se secó con congelación y se
volvió a poner en suspensión en agua como anteriormente.
La actividad de aglutinación de plaquetas
inducidas por ADP medida en las fracciones desaladas, Fracción 1
(F1) y Fracción 2 (F2) se representa en la figura 4. La actividad
inhibidora de aglutinación de plaquetas se comprobó que se
concentraba en una de las fracciones, Fracción 2, que correspondía
al pico 15 (Figura 3). Después, la fracción 2 se secó por
congelación antes de posterior análisis. La muestra secada por
congelación se volvió a poner en suspensión en agua para dar una
concentración de 20 mg/mL y se retuvo para análisis estructural del
componente o componentes activo(s).
Los componentes activos presentes en la fracción
activa se caracterizaron usando espectroscopia de masas y
resonancia magnética nuclear (NMR), tal como se describe más
abajo.
Una porción de la muestra de fracción activa F2
se sometió a análisis de NMR de ^{1}H y el espectro de NMR
resultante está representado en la Figura 6. El espectro de la
fracción activa se comparó con el espectro de una muestra pura del
compuesto
4-amino-1-B-D-ribofuranosil-2-(1H)-piridiminona
(citidina), véase Figura 5, a partir del cual se puede comprobar
que hay considerables similitudes, pero claramente la fracción
activa no contiene citidina pura. Los datos de NMR para la muestra
F2 sugería la presencia de ribosa. Las diferencias secundarias en
los datos de NMR sugerían un pH diferente o una sal diferente.
La fracción activa desalada, Fracción 2 (F2) se
sometió a un número de técnicas analíticas de espectroscopia de
masas. Los datos obtenidos de los diversos espectros de masas
sugerían que la muestra F2 contiene diversas especies de
nucleosidos, de los que el componente principal es citidina.
Una porción de muestra F2 (42480) se examinó por
sonda de EMIE usando un intervalo de temperaturas desde la ambiente
a aproximadamente 550ºC, a 50ºC/min. Se usó un espectrómetro de
masas VG AutoSpecE, barriendo desde 950 a 25 amu a aproximadamente
cinco segundos por barrido. Los datos de EMIE para F2 presentaban un
ion potencialmente diagnóstico a m/z 111 que parecía corresponder a
4-aminopirimidinona (citosina) formada por
fragmentación térmica/inducida por IE de un nucleosido, por
comparación con un espectro de masas de IE de bibliografía NIST de
citosina. Hubo también clara evidencia de la presencia de HCl, que
sugería un hidrocloruro. La muestra aparecía estar contaminada con
oligómertos ramificados de octilfenol-etoxilatos,
que dan iones a m/z 45, 135, 267, 311, 355, 382, 399, 426, 443, 470
y 487.
Porciones de muestra F2 (42480) y diversos
estándares, que incluían citidina, se disolvieron en agua y se
mezclaron con matriz (9:1 de ácido
5-hidroxipicolínico/50 mM citrato amónico). Se usó
un espectrómetro de masas PE Biosystems Voyager-STR.
También se analizó una matriz en blanco. El espectro
DILAM-TDV de la muestra F2 (Figura 7) era muy
similar a la de citidina y
arabinofuranosil-citosina. Las tres muestras
presentaban claramente iones a m/z 244 (MH^{+}), m/z 266
(MNa^{+}), m/z 487 (2MH^{+}), y m/z 509 (2Mna+), sugiriendo que
el principal componente de F2 es citidina o un isómero de citidina.
Ciclocitidina tenía un peso molecular más bajo, tal como se
esperaba, y mostraba iones a m/z 266 (MH^{+}), m/z 451
(2MH^{+}) y m/z 473 (2Mna^{+}).
Porciones de muestra F2 (42480) y diversos
estándares que incluían citidina se disolvieron en agua y se
mezclaron con estándar interno (arabitol). Las disoluciones
resultantes y una muestra en blanco se liofilizaron y
N-acetilaron usando anhídrido acético/piridina y se
trimetilsililaron usando Tri-Sil-Z.
Los productos resultantes se disolvieron en hexano y partes
alícuotas (aproximadamente 1 \muL) se analizaron por
CG-EMIE (cromatografía de
gases-espectroscopia de masas por ionización
electrónica) en un espectrómetro de masas de banco superior VG
TRIO-1. Las muestras se inyectaron vía un inyector
para columna en frío, en la columna de CG capilar
DB-5. Los datos de CG-EMIE de la
muestra derivada F2 una muestra de control de citidina derivada
sugerían que el componente principal en la muestra F2 es muy similar
a citidina derivada, pero imperceptiblemente diferente de la
arabinofuranosil-citosina derivada.
Porciones de muestra F2 (42480) y el estándar de
citidina se disolvieron en agua y se liofilizaron. Se derivaron de
la misma manera que más arriba y partes alícuotas (aproximadamente
1 \muL) de las disoluciones en hexano resultantes se analizaron
por CG-EMIQ (cromatografía de
gases-espectroscopia de masas de ionización
química) en un espectrómetro de masas de banco superior PE
TurboMass. Las muestras se inyectaron vía un inyector PSS en una
columna capilar de CG DB-5MS. Los datos de
CG-EMIQ para F2 derivada y citidina derivada
confirmaron que uno de los picos en la muestra F2 es citidina. El
examen del espectro de CI reveló también la presencia de iones a
m/z 259 y 348, que se puede asociar con la unidad de
ribofuranosilo.
Es conocido que después de una herida, las
plaquetas se adhieren al endotelio vascular dañado facilitando con
ello que plaquetas adicionales se adhieren entre sí, se aglutinan,
llegan a activarse y forman un tapón de plaquetas. La aglutinación
de plaquetas es arbitrada vía factores que se producen en el sitio
de la herida y reaccionan con receptores en la superficie de las
plaquetas. Algunos de estos factores, por ejemplo ADP, serotonina y
tromboxano A_{2} son ellos mismos desprendidos por plaquetas
activadas, produciendo un bucle de retroalimentación positivo.
Durante el proceso de aglutinación y activación
de plaquetas, ligandos tales como ADP, o colágeno en dosis
pequeñas, se unen a receptores específicos. Esto conduce a la
activación de fosfolipasas de membrana y el desprendimiento de ácido
araquidónico de los fosfolípidos de membrana de plaquetas por la
actividad de la enzima fosfolipasa A_{2}. Una proporción de ácido
araquidónico se metaboliza, luego, rápidamente, por diversas
endoperoxidasas cíclicas, siendo las principales,
ciclo-oxigenasa y lipoxigenasa, a prostaglandinas y
finalmente a tromboxano A_{2} vía la enzima tromboxano sintasa.
Tromboxano A_{2} es altamente activa desde el punto de vista
biológico y arbitra una subida en los iones calcio intracelulares y
desprendimiento de gránulos de plaquetas, que promueve la posterior
aglutinación de plaquetas. El tromboxano A_{2} es químicamente
inestable y se descompone a tromboxano B_{2} y, por tanto, la
medición de niveles de tromboxano se realiza midiendo tromboxano
B_{2}.
La actividad inhibidora de aglutinación de
plaquetas de extractos de tomate semi-purificados
se sometió a ensayo midiendo la producción de tromboxano B_{2}
producido por plaquetas en presencia de agonistas ADP o colágeno o
cuando se añade ácido araquidónico exógeno.
Extractos de tomate
semi-purificados se prepararon de acuerdo con los
Ejemplos 2 y 3. Por tanto, 40 \muL de la fracción de filtración en
gel que correspondía al Pico 4 (véase Figura 2) o la Fracción 2
purificada por HPLC (véase Figura 3) se añadieron a 50 \muL de
tampón de PBS y se incubaron con 450 \muL de plasma rico en
plaquetas durante 15 min a 37ºC. Después de la incubación, se
añadieron los agonistas en la concentración deseada. La mezcla de
ensayo se centrifugó, luego, y se midieron los niveles de tromboxano
B2 en el material sobrenadante. Alternativamente, las muestras de
ensayo centrifugadas se enfriaron rápidamente para el análisis de
tromboxano B_{2} en fecha posterior.
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
La Tabla 2 presenta el efecto de la fracción de
filtración en gel que corresponde al Pico 4 y la fracción de HPLC,
Fracción F2, sobre la producción de tromboxano B_{2} en plaquetas
por ADP, colágeno y ácido araquidónico. Los resultados se expresaron
en forma de nanogramo/mL de tromboxano B_{2} producido en
respuesta al ADP, colágeno o ácido araquidónico en presencia del
extracto de tomate semi-purificado.
La fracción de filtración en gel que corresponde
al Pico 4, Fracción 4, y la Fracción de HPLC, Fracción 2, tenían
similar potencia frente a la producción de tromboxano B_{2}
inducido por ADP. Similarmente, la Fracción 2 inhibía la producción
de tromboxano B_{2} inducida por colágeno cuando se comparaba con
la muestra de control. La Fracción 2, por otro lado, no inhibía la
producción de tromboxano B_{2} en presencia de ácido
araquidónico.
Estos experimentos demostraban que los
componentes activos del extracto de zumo de tomate inhibe la
producción de tromboxano B_{2} inducido por ADP y colágeno, pero
no impide el metabolismo de ácido araquidónico a tromboxano B_{2}.
Los resultados sugieren que la actividad inhibidora de aglutinación
de plaquetas no bloquea la conversión de ácido araquidónico a
tromboxano B_{2} y como tal, no inhibe la actividad de la enzima
ciclo-oxigenasa que cataliza esta conversión.
En conclusión, los resultados de este experimento
sugieren que la actividad del componente activo de
anti-aglutinación de plaquetas en extractos de
tomate es diferente del de aspirina.
Se pelaron cuatro tomates para obtener
preparaciones que comprendían lo siguiente:
i) el zumo que rodeaba las semillas; referencia
T1;
ii) pulpa de tomate solamente; referencia T2;
iii) los tomates completos, incluidas las
semillas; referencia T3.
Extractos de las preparaciones T1 a T3 se
prepararon tal como se describe en el Ejemplo 1 y en cada una de
ellas se midió la actividad de aglutinación de plaquetas inducida
por ADP.
La Figura 9 representa la actividad de
anti-aglutinación de plaquetas de las preparaciones
de tomate T1 a T3 sobre plaquetas humanas. Las preparaciones T1 y
T3 tenían una potencia similar frente a la aglutinación de plaquetas
inducida por ADP. Además, la actividad de aglutinación de plaquetas
medida en T1 y T3 era mucho más reducida en comparación con T2, que
sugería que el componente activo de
anti-aglutinación de plaquetas está localizado en
mayor grado en el zumo y semillas del tomate.
Estudios preliminares sobre la
bio-disponibilidad del componente activo inhibidor
de agregación de plaquetas en extractos de tomate se realizaron
sobre cuatro voluntarios. Dosis de 300 mL de zumo de tomate al 100%
preparado tal como se describe en los Ejemplos 1 y 2 se alimentaron
a cada uno de los cuatro voluntarios. La actividad de aglutinación
de plaquetas se midió en muestras de sangre venosa extraidas a los
voluntarios inmediatamente antes (tiempo 0) y una hora después
(tiempo 1) del consumo del zumo.
La Tabla 3 presenta el porcentaje de reducción de
actividad de aglutinación de plaquetas inducida por ADP e inducida
por colágeno en muestras de sangre tomadas de cada uno de los
cuatro individuos una hora después del consumo de la preparación
del zumo de tomate. Los resultados sugieren que el consumo de 300 mL
de zumo de tomate es suficiente para reducir significativamente la
aglutinación de plaquetas.
300 mL de zumo de tomate preparado de acuerdo con
el Ejemplo 6 se dieron en alimentación diariamente a dos individuos
durante un período de dos semanas. Las mediciones de la actividad de
aglutinación de plaquetas revelaron que había aproximadamente 12% de
inhibición de aglutinación de plaquetas al comparar con el día 0 y
la actividad no se retenía, es decir, no se acumulaba en el
cuerpo.
Una formulación para cápsulas se preparó secando
por congelación un extracto de frutas (por ejemplo, extracto de
tomate tal como se describe en los Ejemplos 2 y/o 3) y cargando el
polvo seco por congelación resultante en una cápsula dura para dar
un contenido de la cápsula de 800 mg.
\newpage
Una barra de alimento de masticar se prepara
combinando polvo de extracto de tomate seco por congelación con
harina de avena y mezclándolo junto con otros ingredientes en una
mezcladora, comprimiéndolos en forma de barra y horneando.
La invención se ha ilustrado haciendo referencia
a ejemplos particulares pero se comprenderá fácilmente que se
pueden hacer numerosas modificaciones y alteraciones sin apartarse
del alcance de las reivindicaciones anexas a la presente memoria
descriptiva.
Claims (17)
1. El uso de un extracto de fruta o una de sus
fracciones activas, en la fabricación de una composición de
administración oral para uso en la profilaxis o tratamiento de un
estado de enfermedad en un ser humano, iniciado o
caracterizado por aglutinación de plaquetas, derivándose el
extracto o fracción activa de una fruta elegida entre frutas o
plantas de las familias Solnaceae, Rutaceae, Cucurbitaceae,
Rosaceae, Musaceae, Anacardiaceae, Vitaceae, Arecaceae, Ercaceae y
Lauraceae.
2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1,
para uso de inhibidor de aglutinación de plaquetas humanas en seres
humanos, derivándose el extracto o fracción activa de una fruta
elegida entre frutas y plantas de las familias Solnaceae,
Rutaceae, Cucurbitaceae, Rosaceae, Musaceae, Anacardiaceae,
Vitaceae, Arecaceae, Ericaceae y Lauraceae.
3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó
reivindicación 2, en el que la fruta se elige entre tomate, pomelo,
melón, mango, nectarina, fresa, ciruela, plátano, ráspano, uva,
pera, manzana y aguacate.
4. El uso de acuerdo con la reivindicación 3, en
el que la fruta es tomate.
5. El uso de acuerdo con la reivindicación 4, en
el que la composición comprende una fracción activa de tomate, en
el que la fracción activa contiene un compuesto o compuestos
solubles en agua, incoloros o de color pajizo y sustancialmente
estables al calor, que tienen un peso molecular inferior a
1.000.
6. El uso de acuerdo con la reivindicación 3, en
el que la fruta es pomelo.
7. El uso de acuerdo con la reivindicación 3, en
el que la fruta es melón.
8. El uso de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que el extracto de fruta es un
extracto acuoso.
9. El uso de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que la composición comprende
esencialmente el zumo de la fruta.
10. El uso de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que el extracto de fruta deriva
de la pulpa de una fruta pelada.
11. El uso de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que el extracto de la fruta o
su fracción activa se ha deshidratado para dar un extracto
seco.
12. El uso de acuerdo con la reivindicación 11,
en el que la composición está en forma de una forma de dosis sólida
o semisólida que contiene el extracto seco.
13. El uso de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en el que el extracto de fruta o
fracción activa contiene un compuesto o compuestos solubles en
agua, incoloros o de color pajizo y sustancialmente estables al
calor, que tienen un peso molecular inferior a 1.000.
14. El uso de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 13, en el que el estado de enfermedad se elige
entre infartos de miocardio, apoplejía, enfermedad cardiovascular,
y estados de enfermedad asociados con hiperactividad de
plaquetas.
15. Una fracción activa de un extracto de fruta
para uso de inhibidor de aglutinación de plaquetas humanas en un ser
humano por administración oral, siendo la fracción activa capaz de
pasar a través de un filtro de ultrafiltración que tiene un peso
molecular inferior a 1.000 y que contiene un compuesto o compuestos
solubles en agua, incoloros o de color pajiza sustancialmente
estables al calor, que tienen un peso molecular inferior a
1.000.
16. Una fracción activa para uso de acuerdo con
la reivindicación 15, en la que la fruta es tomate.
17. Una fracción activa para uso de acuerdo con
la reivindicación 15 o reivindicación 16, que está en forma
seca.
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