ES2202723T3 - Microcapsulas que contienen material seminal para la inseminacion artificial de cerdos. - Google Patents
Microcapsulas que contienen material seminal para la inseminacion artificial de cerdos.Info
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Abstract
CON EL FIN DE PROTEGER EL MATERIAL SEMINAL PARA CERDOS, QUE PUEDA UTILIZARSE EN LA INSEMINACION ARTIFICIAL A PARTIR DE DEGRADACION, SE DESCRIBEN A CONTINUACION UNAS MICROCAPSULAS QUE CONTIENEN: A) UN NUCLEO LIQUIDO QUE CONTIENE UNA SUSPENSION DE MATERIAL SEMINAL PORCINO Y UN POLIMERO BIODEGRADABLE Y/O BIOCOMPATIBLE; B) UNA PELICULA QUE CONSTA DE UN ALGINATO O UN METAL BIVALENTE O TRIVALENTE, POSIBLEMENTE POLIMERIZADO O RETICULADO. ESTAS MICROCAPSULAS QUE CONTIENEN LOS ESPERMATOZOOS HACEN POSIBLE OBTENER UNA LIBERACION PROLONGADA Y CONTROLADA DE MATERIAL SEMINAL Y, ADEMAS, UNA PROTECCION DEL MATERIAL CONTRA LA DEGRADACION, PERMITIENDO ASI UNA SIMPLIFICACION EN LOS PROCEDIMIENTOS DE INSEMINACION ARTIFICIAL Y UN AUMENTO DE LA FERTILIDAD DE LOS CERDOS.
Description
Microcápsulas que contienen material seminal para
la inseminación artificial de cerdos.
La presente invención se refiere a unas
microcápsulas que contienen material seminal porcino, que pueden
ser utilizadas para la inseminación artificial en los cerdos, así
como el proceso correspondiente de elaboración.
Dichas cápsulas permiten una liberación
prolongada y controlada del material seminal y además protegen el
material contra su degradación, permitiendo de este modo la
simplificación del procedimiento de inseminación artificial y un
aumento de la fertilidad de las cerdas.
En las últimas décadas, la inseminación
artificial (I.A.) se ha extendido de forma considerable entre
ganaderos y ha permitido realizar la inseminación en base a datos
fisiológicos exactos que posibilitan intervenciones con
considerable precisión y grandes probabilidades de éxito.
Esta técnica implica casi exclusivamente el uso
de semen fresco y/o refrigerado, cuya elaboración se realiza en los
centros I.A. de explotaciones de ganado, junto con el uso de
material seminal procedente de suministros externos.
Numerosas técnicas han sido desarrolladas con el
fin de mejorar la probabilidad de éxito de la inseminación
artificial, sobre todo en el sector del ganado para la producción
láctea.
En algunas especies domésticas, la técnica de
congelar material seminal fresco ha conducido a una estandarización
de los métodos de conservación y buenas probabilidades de éxito de
la inseminación artificial (por ejemplo, en el ganado).
Entre los métodos utilizados para mejorar la
posibilidad de la fertilización en el ganado, se recordará que
Nebel, ya hace 15 años, intentó realizar una serie de
modificaciones de inseminación artificial en el ganado utilizando
material micro-encapsulado en lugar de material
seminal fresco (ver R.L. Nebel et al, J. Anim. Sci., 60, 1631
(1985); R.L. Nebel et al, Reprod. Fértil. Deb., 5, 701 (1993)) y
adoptando una técnica que trataba del uso de alginatos y poliaminas
(poli-l-lisina, sulfato de
protamina, amina de polivinilo) para obtener microcápsulas
compuestas por membranas semi-permeables. Dicho
procedimiento constaba de tres pasos: 1) formación de una matriz de
alginato cálcico que contenía el material seminal; 2) formación de
la membrana semipermeable mediante la reticulación superficial de
la matriz con poliaminas; 3) disolución del núcleo de matriz de
alginato cálcico por sustitución del calcio con sodio. Con este
procedimiento, el material seminal fue inmovilizado inicialmente en
la matriz de alginato cálcico y suspendido posteriormente en
alginato sódico.
Esta técnica de protección de material seminal
bovino tuvo bastante éxito en cuanto dicho material es
especialmente estable y soporta los tratamientos de
micro-encapsulamiento sin una pérdida excesiva de
energía.
Por otra parte, la inseminación artificial (I.A.)
es especialmente problemática en los cerdos en cuanto la técnica de
congelación, que ha significado una buena estandarización de los
métodos de conservación en otras especies domésticas, es
prácticamente inaplicable con el material seminal porcino, puesto
que existen considerables diferencias de eficacia en la conservación
utilizando el proceso de congelación.
Los resultados obtenidos experimentalmente con
semen congelado han permitido demostrar una excesiva variabilidad
de parámetros, como la fertilidad y prolificidad. En concreto, la
reducción de los porcentajes de prolificidad y fertilidad ha sido
identificada en una ralentización y /o incapacidad del crecimiento
del embrión durante los primeros 4-5 días de vida
(ver F. Cairoli et al. Selezion Veterinaria, 32 (1 b) 297 (1991)).
Además las cerdas presentan una duración del estro que varía entre
40 y 48 horas, con una dinámica folicular y ovulatoria influenciada
por varios factores, tanto de tipo endógeno como exógeno. Por este
motivo, los técnicos suelen realizar una intervención I.A. doble a
fin de garantizar la presencia a nivel tubario, de una alta
concentración de espermatozoides con elevada capacidad de
fertilización. Evidentemente, la técnica de intervención doble
representa un inconveniente considerable, tanto por la necesidad de
recurrir a operadores especializados como el elevado consumo de
material seminal.
La reducción de la capacidad de fertilización de
los espermatozoides es probablemente una de las causas que limitan
la prolificidad. Se detecta además una alta incidencia de la
pérdida de capacidad de fertilización a raíz de los aspectos
problemáticos de los procesos de conservación de material seminal
referidos anteriormente. De hecho, mientras en otras especies
domésticas la técnica de congelación ha significado una
estandarización de los procedimientos de conservación, esta técnica
todavía no ha tenido resultados satisfactorios con los cerdos.
Además, a fin de mejorar la productividad en los
cerdos, existe por parte de los operadores la demanda cada vez más
urgente de una solución que les permita realizar una sola
intervención de I.A. para reducir los costes operativos.
Ahora hemos encontrado inesperadamente que es
posible producir microcápsulas que contienen material seminal
activo.
Por consiguiente, la presente invención se
relaciona con microcápsulas compuestas por: a) un núcleo líquido
que contiene una suspensión de material seminal porcino y un
polímero biodegradable y/o biocompatible; b) una película compuesta
por un alginato posiblemente entrecruzado de un metal bivalente o
trivalente, posiblemente reticulado.
Con este tipo de preparaciones es posible tanto
superar las desventajas asociadas con la estabilidad limitada del
material seminal como permitir el uso de una operación única de
inseminación artificial, consiguiendo de este modo considerables
ventajas económicas gracias a la drástica reducción en la
intervención del operador y al uso de una cantidad reducida de
material seminal. Además, el material seminal queda debidamente
protegido y se libera de la formulación que constituye el objeto de
la presente patente durante un tiempo prolongado.
Hay que destacar además que otra complicación más
de la fertilización en las cerdas se asocia con los periodos y
modalidades de ovulación típicos de esta especie. De hecho, el
periodo fértil es muy corto y puede variar de forma estacional,
como ya hemos indicado. Por este motivo, una única intervención de
fertilización con material seminal diluido y refrigerado no
proporciona actualmente suficientes garantías de éxito para una
completa fertilización de las células ovulares.
Ahora hemos detectado y demostrado
experimentalmente que, con el micro- encapsulamiento de material
seminal porcino, en la que no se espera ningún tipo de reacción
dentro del núcleo que contiene el material seminal, es posible
proteger el semen porcino, caracterizado éste por su elevada
inestabilidad.
Por consiguiente, logramos el encapsulamiento del
semen porcino en el polímero biocompatible y biodegradable
indicado, que permite una liberación prolongada y controlada del
material seminal activo. De este modo, es posible mantener elevadas
concentraciones de espermatozoides en el útero durante toda la
duración del estro, y por consiguiente conseguir un aumento de la
fertilidad y prolificidad. Además, el uso de material seminal
porcino micro-encapsulado permite realizar una
única operación de inseminación artificial, ya que los
espermatozoides activos se liberan en un intervalo de tiempo que
abarca toda la duración del estro de la cerda.
La presente invención se relaciona además con una
nueva técnica de elaboración de las microcápsulas de acuerdo con la
presente invención, que se compone concretamente de los siguientes
pasos:
1. El material seminal porcino se suspende en una
cantidad adecuada de solución, que se suele denominar diluidor,
generalmente compuesta de una solución acuosa que contiene: glucosa
en una concentración de entre 0,5 y 10%, bicarbonato sódico en una
concentración de entre 0,02 y 4,0%, cloruro potásico en una
concentración de entre 0,01 y 3,0%, penicilina en una concentración
de entre 10^{2} U.l/l y 10^{10} U.l./l., estreptomicina en una
concentración de entre 0,01 y 2,0%, u otro antibiótico normalmente
utilizado a este efecto en concentraciones adecuadas, de forma que
se obtenga una concentración de espermatozoides de entre 1 x
10^{4} y 5 x 10^{10} células/ ml.
2. Se añade a la suspensión obtenida en la fase
(1) el polímero biocompatible y/o biodegradable y a continuación
una solución acuosa de haluros de metales bivalentes, tales como
sales de calcio, estroncio, cinc o haluros de metales trivalentes,
como aluminio, hierro, cromo, etc..
3. La suspensión obtenida del paso (2) se añade,
gota a gota, a una solución de alginato sódico, manteniendo la
temperatura del sistema entero entre 5ºC y 45ºC y se obtienen
microcápsulas de un tipo gelatinoso, posteriormente dispersadas en
el diluidor de semen porcino anteriormente descrito;
4. Una posibilidad es que las microcápsulas
obtenidas en el paso anterior sean reticuladas por suspensión en
una solución acuosa de un agente entrecruzado de tipo poliamina,
que se mantiene agitada, para conseguir unas microcápsulas
rígidas.
Por consiguiente, las microcápsulas de acuerdo
con la presente invención pueden ser de tipo gelatinoso o de tipo
rígido, según si la película exterior compuesta por una alginato de
un metal bivalente o trivalente se ha sometido a entrecruzamiento o
no.
Las microcápsulas de tipo gelatinoso constan de
un núcleo líquido que contiene la suspensión de material seminal y
un polímero biodegradable, y una película gelatinosa
bio-erosionable de un alginato
no-entrecruzado.
El material biodegradable y/o biocompatible
polimérico según la presente invención contenido en el núcleo
líquido de las microcápsulas que constituyen el objeto de la
presente invención se elige preferentemente entre el grupo
compuesto por glucanos, escleroglucanos, mánanos, galactomananos,
gelanos, carrageninas, chitosanos, pectinas, xantanos,
polanhídridos, ácidos poliamínicos, poli-éteres (metílico, vinílico
/anhídrido maleico) celulosa carboximetílica y derivados, celulosa
carboximetil sódica, alcoholes polivinílicos, celulosa
hidroxipropílica de un peso molecular medio de entre 2,000 y
4,000,000 pero preferentemente de entre 10,000 y 2,000,000,
hidroxipropil metilcelulosa, polímeros de carboxivinilo, ácido
algínico y derivados del mismo, alcoholes polivinílicos,
etilcelulosa, metilcelulosa y derivados de celulosa en general,
almidones, derivados de almidón, así como ciclodextrinas alfa,
beta, gama y derivados de dextrina en general. Existen en el
mercado distintos tipos de todos los polímeros indicados
caracterizados por sus diferentes propiedades
físico-químicas de solubilidad y gelación.
Dichos polímeros suelen estar presentes en
concentraciones de entre 1,0 y 90% del peso total de la
microcápsula, pero preferentemente entre el 20 y el 80%.
Preferentemente se utiliza hidroxipropil
metilcelulosa, con distintos pesos moleculares, en general de entre
1000 y 4,000,000 daltones, y preferentemente entre 10,000 y
1,500,000 y un distinto grado de sustitución de metoxilo, en
general entre 15 y 30%, y un grado de sustitución de
hidroxipropoxilo de entre 4 y 30% como polímero biodegradable y/o
biocompatible para el núcleo líquido de las microcápsulas según la
presente invención. Por consiguiente, este polímero presenta una
naturaleza predominantemente erosionable o gelificable, de acuerdo
con la viscosidad y el grado de sustitución en la cadena
polimérica.
De acuerdo con una solución específicamente
preferente, se utiliza la hidroxipropil metilcelulosa disponible en
el mercado bajo la marca registrada METHOCEL® E 50 con un peso
molecular de 22,000 y un grado de sustitución de metoxilo de 29 y
sustitución de hidroxipropoxilo de 8,5.
Los alginatos de los metales bivalentes que
forman las microcápsulas que constituyen el objeto de la presente
invención son generalmente los de calcio, estroncio y cinc. Los
alginatos de los metales trivalentes son, por ejemplo, los de
aluminio, hierro y cromo.
Preferentemente, la película de las microcápsulas
de acuerdo con la presente invención consta de alginato cálcico o
alginato de cinc.
Los alginatos que constituyen la película de las
microcápsulas de acuerdo con la presente invención suelen
presentar, al 2% en solución acuosa, una viscosidad de entre 200
cps y 20,000 cps a una temperatura de 25ºC.
Las cápsulas obtenidas se suelen caracterizar por
tener unas dimensiones de entre 50 micra y 8 mm, preferentemente
entre 100 micra y 5,0 mm, lo que permite su fácil manipulación,
transporte y conservación, así como el uso de catéteres normales
para la inseminación artificial.
En el paso (1) del proceso de acuerdo con la
presente invención, el diluidor del material seminal de cerdos
contiene glucosa en una concentración de preferentemente entre 1,5
y 5% por peso, bicarbonato sódico en una concentración de entre
0,05 y 0,8%, cloruro potásico en una concentración preferentemente
entre 0,01 y 0,10%, penicilina en una concentración preferentemente
entre 10^{4} U.l/l y 10^{8} U.l/l., estreptomicina en una
concentración de entre 0,04 y 0,90% p.p. u otro antibiótico en
concentraciones adecuadas, con el propósito de obtener una
concentración de entre 2 x 10^{5} y 5 x 10^{8} células/ml.
En el paso (2) del proceso que constituye el
objeto de la presente invención, los haluros de los metales
bivalentes preferentemente utilizados son cloruro de calcio o
cloruro de cinc, utilizados en una solución acuosa en una
concentración de entre 0,001 M y 2,5 M, pero preferentemente entre
0,01 y 1,0 M.
El paso (3) se lleva a cabo preferentemente a una
temperatura de entre 10 y 25ºC y la suspensión se extrusiona por
agujas hipodérmicas de dimensiones y abertura adecuadas mediante
una bomba peristáltica, a una velocidad que produce aproximadamente
20 gotas por minuto. Conforme los iones metálicos se difunden hacia
la superficie exterior, concretamente, de la gota, reaccionan con el
alginato para formar una película de alginato de un metal de
tierra alcalina (por ejemplo, alginato cálcico) que permite obtener
unas microcápsulas suficientemente rígidas. Estas se lavan varias
veces, preferentemente con una solución fisiológica, o
preferentemente con el diluidor. Estas microcápsulas de un "tipo
gelatinoso" pueden constituir ellas mismas, sin someterse a
tratamientos posteriores, un primer tipo de material utilizable
para I.A..
En el paso (4) las cápsulas de "tipo
gelatinoso" preparadas del modo descrito pueden someterse a
entrecruzamiento por la polimerización de interfaz del alginato.
Este procedimiento consigue la conversión de la membrana gelatinosa
en una membrana rígida semi-permeable de
entrecruzamiento de alginato con un agente entrecruzado del tipo de
poliamina. Preferentemente dichos agentes de entrecruzamiento se
seleccionan de: sulfato o fosfato de protamina preferentemente en
forma de una solución acuosa en concentraciones de entre 0,1 y 5,0%
peso/volumen, incluso más preferentemente sulfato de protamina en
una concentración de entre 0,5 y 3,0% p/v, bromohidrato de
polilisina de un peso molecular de entre 1000 y 800,000 en una
solución acuosa a una concentración preferentemente de entre 0,01 y
5,0% p/v, incluso más preferentemente de entre 0,03 y 3,0% p/v y
amina polivinílica en una concentración de entre 0,001 y 5,0% p/v,
incluso más preferentemente de entre 0,01 y 1,0% p/v.
El paso (4) se realiza preferentemente de acuerdo
con el siguiente procedimiento operativo:
Velocidad de agitación: 5-300
rpm
Tiempos de reacción: 2-180
min.
Las cápsulas obtenidas, que pueden ser
clasificadas como de "tipo rígido" se filtran y
respectivamente se lavan y se suspenden en el mismo diluidor para
semen porcino anteriormente descrito.
Se incluyen los siguientes ejemplos como
ilustraciones de la preparación de las cápsulas que constituyen el
objeto de la presente invención.
Se añade hidroxipropil metilcelulosa (Methocel
E50 Premium EP) (4% p/v) y cloruro cálcico (0,3 M) a una suspensión
de material seminal de un cerdo semental Large white con una
concentración de 26 x 10^{6} células/ml (motilidad 90%,
integridad acrosomal superior al 90%) y la suspensión resultante, a
la que se añade el material polimérico, se añade a su vez a una
solución acuosa de alginato sódico (0,5% p/v) mientras se agita
suavemente (30 rpm). Las gotas se producen mediante extrusión por
agujas hipodérmicas (25G x 5/8'') empleando una bomba peristáltica
(Esapump, Advanced Products, Milano, Italia) a una velocidad que
produce aproximadamente 20 gotas por minuto. Conforme los iones
metálicos se difunden hacia la superficie exterior de la gota,
reaccionan con el alginato para formar una película de alginato
cálcico. Las cápsulas obtenidas de este modo se filtran, se lavan
tres veces y se suspenden en una solución fisiológica y se
suspenden en un diluidor para semen porcino compuesto de una
solución acuosa que contiene 2,9% de glucosa, 0,2% bicarbonato
sódico, 0,03% de cloruro potásico, 10^{6} U.l./. de penicilina y
0,1% de estreptomicina.
Las cápsulas constan de un núcleo líquido que
contiene la suspensión de material seminal y metilcelulosa
hidroxipropílico y una membrana gelatinosa bio- erosionable. Dichas
cápsulas (TIPO GELATINOSO) pueden constituir un primer tipo de
material utilizable para I.A..
En relación con la preparación obtenida en el
Ejemplo 1, la Tabla I proporciona los resultados de las
determinaciones del tiempo de supervivencia del material seminal,
integridad acrosomal y motilidad; los últimos dos parámetros se
expresan en porcentajes.
Las cápsulas de TIPO GELATINOSO, elaboradas del
modo descrito en el Ejemplo 1, comenzando a partir de una
suspensión de material seminal (26 x 10^{6} células /ml) se
suspenden en una solución acuosa de sulfato de protamina (1% p/v),
se mantiene agitado (30 rpm) durante 20 min. Mediante este
procedimiento se obtiene la polimerización de interfaz del alginato
cálcico y se preparan cápsulas de TIPO RÍGIDO. Este procedimiento
determina la conversión de la membrana gelatinosa en una membrana
rígida semi-permeable de alginato entrecruzado con
protamina. Las cápsulas se filtran, se lavan tres veces con solución
fisiológica y se suspenden en diluidor para semen porcino.
Los resultados de los controles realizados se
presentan en la Tabla I.
Se utiliza el procedimiento descrito en el
Ejemplo 2 con la única diferencia que se emplea una suspensión de
material seminal con una concentración de 52 x 10^{6} células
/ml.
Los resultados de los controles realizados son
presentados en la Tabla I.
| Código | Tiempo de supervivencia | Integridad acrosomal (%) | Motilidad (%) |
| Material espermático fresco | 96,0 | 90,0 | 60,0 |
| Ejemplo 1 | 72,0 | 35,0 | 5,0 |
| Ejemplo 2 | 96,0 | 68,0 | 20,0 |
| Ejemplo 3 | 48,0 | 40,0 | 10,0 |
De los resultados indicados en la Tabla I, es
evidente que la preparación descrita en el Ejemplo 2 presenta un
tiempo de supervivencia del material seminal idéntico al del
material espermático fresco, una integridad acrosomal de 75%, en
comparación con el material seminal fresco, y una buena motilidad en
comparación con las otras preparaciones.
Claims (22)
1. Microcápsulas compuestas por: a) un núcleo
líquido que contiene una suspensión de material seminal porcino y
un polímero biodegradable y/o biocompatible; b) una película
compuesta por un alginato posiblemente entrecruzado de un metal
bivalente o trivalente.
2. Microcápsulas de acuerdo con la reivindicación
1, caracterizadas porque son gelatinosas y la película de
alginato no es entrecruzado y es
bio-erosionable.
3. Microcápsulas de acuerdo con la reivindicación
1 de un tipo rígido, caracterizadas porque la película de
alginato es entrecruzado.
4. Microcápsulas de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1-3, caracterizadas porque
el polímero biodegradable y/o biocompatible se elige del grupo
compuesto por glucanos, escleroglucanos, mananos, galactomananos,
gelanos, carrageninas, chitosanos, pectinas, xantanos,
polanhídridos, ácidos poliamínicos, poli- éteres
(metílico/vinílico/anhídrido maleico) celulosa carboximetílica y
derivados, celulosa carboximetil sódica, alcoholes polivinílicos,
celulosa hidroxipropílica de un peso molecular medio de entre 2,000
y 4,000,000, hidroxipropil metilcelulosa, polímeros de
carboxivinilo, ácido algínico y derivados del mismo, alcoholes
polivinílicos, etilcelulosa, metilcelulosa y derivados de celulosa
en general, almidones, derivados de almidón, así como
ciclodextrinas alfa, beta, gama y derivados de dextrina.
5. Microcápsulas de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1-5, caracterizadas porque
dicho polímero biodegradable se elige del grupo compuesto por
celulosa hidroxipropílica con un peso molecular medio entre 10,000
y 2,000,000.
6. Microcápsulas de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1-4, caracterizadas porque
se utiliza hidroxipropil metilcelulosa de un peso molecular entre
10,000 y 1,500,000 y un grado de sustitución metoxílica entre 15 y
30% y un grado de sustitución con hidroxipropoxilo de entre 4 y 30%
como polímero biodegradable y/o biocompatible.
7. Microcápsulas de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1-6, caracterizadas porque
dichos polímeros biodegradables y/o biocompatibles están presentes
en concentraciones entre 1,0 y 90% del peso total de la
microcápsula.
8. Composiciones de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1-7, caracterizadas porque
dichos polímeros biodegradables están presentes en concentraciones
entre 20 y 80% del peso total de la microcápsula.
9. Microcápsulas de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1-8, caracterizadas porque
la película de alginato de un metal bivalente se selecciona de
alginato de calcio, estroncio y cinc; los alginatos de los metales
trivalentes se seleccionan de los de aluminio, hierro y cromo.
10. Microcápsulas de acuerdo con cualquiera de
las reivindicaciones 1-9, caracterizadas
porque la película consta de alginato de calcio o de cinc.
11. Microcápsulas de acuerdo con cualquiera de
las reivindicaciones 1-10, caracterizadas
porque presentan, en soluciones acuosas al 2%, una viscosidad de
entre 200 cps y 20,000 cps a una temperatura de 25ºC.
12. Cápsulas de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1-11, caracterizadas porque
tienen dimensiones de entre 50 micra y 8 mm.
13. Microcápsulas de acuerdo con cualquiera de
las reivindicaciones 1-12, caracterizadas
porque tienen dimensiones entre 100 micra y 5,0 mm.
14. Proceso para preparar las microcápsulas según
cualquiera de las reivindicaciones 1-13, compuesto
por los siguientes pasos: 1. El material seminal porcino se
suspende en una cantidad adecuada de solución, compuesta por una
solución acuosa que contiene: glucosa en una concentración entre 0,5
y 10%, bicarbonato sódico en una concentración entre 0,02 y 4,0%,
cloruro potásico en una concentración entre 0,01 y 3,0%, penicilina
en una concentración entre 10^{2} U.l./l y 10^{10} U.I./L,
estreptomicina en una concentración entre 0,01 y 2,0%, u otros
antibióticos normalmente utilizados a este efecto en concentraciones
adecuadas, para obtener una concentración de espermatozoides entre 1
x 10^{4} y 5 x 10^{10} células/ml; 2) el polímero biocompatible
y/o biodegradable y, a continuación, una solución acuosa de haluros
de metales bivalentes o haluros de metales trivalentes se añaden a
la suspensión obtenida en el paso (1); 3) la suspensión resultante
del paso (2) se añade, gota a gota, a una solución de alginato
sódico, manteniendo la temperatura del sistema entero entre 5ºC y
45ºC, para obtener microcápsulas de tipo gelatinoso, que se
dispersan posteriormente en el diluidor para semen porcino descrito
anteriormente; 4) las microcápsulas obtenidas en el paso anterior
posiblemente pueden ser reticuladas mediante una suspensión en una
solución acuosa de un agente entrecruzado de un tipo poliamínico,
que se mantiene agitada, para formar unas microcápsulas
rígidas.
\newpage
15. Proceso de acuerdo con la reivindicación 14,
caracterizado porque en el paso (1), el diluidor para
material seminal porcino contiene glucosa en una concentración de
entre 1,5 y 5% peso, bicarbonato sódico en una concentración de
entre 0,05 y 0,8%, cloruro potásico en una concentración
preferentemente de entre 0,01 y 0,10%, penicilina en una
concentración preferentemente entre 10^{4} U.I./l. y 10^{8}
U.I./l., estreptomicina en una concentración entre 0,04 y 0,90%
peso, con el objeto de obtener una concentración de entre 2 x
10^{5} y 5 x 10^{8} células/ml.
16. Proceso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 14 y 15, caracterizado porque en el paso
(2), los haluros de metales bivalentes son cloruro cálcico o
cloruro de cinc, utilizados en una solución acuosa en una
concentración de entre 0,001 M y 2,5 M.
17. Proceso de acuerdo con la reivindicación 16,
caracterizado porque la concentración de cloruro de calcio y
el cloruro de cinc es entre 0,01 y 1,0 M.
18. Proceso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 14-17, caracterizado porque
el paso (3) se realiza a una temperatura de entre 10 y 25ºC, y la
suspensión se extrusiona entre agujas hipodérmicas de unas
dimensiones y abertura adecuadas.
19. Proceso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 14-18, caracterizado porque
en el paso (4) el agente de entrecruzamiento se selecciona de
sulfato o fosfato de protamina, preferentemente en forma de una
solución acuosa en concentraciones de entre 0,1 y 5,0% p/v,
bromohidrato de polilisina de peso molecular entre 1000 y 800,000
en una solución acuosa a una concentración de entre 0,001 y 5,0%
p/v y amina polivinílica en una concentración entre 0,001 y 5,0%
p/v.
20. Proceso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 14-19, caracterizado porque
en el paso (4), el agente de entrecruzamiento se selecciona de
sulfato o fosfato de protamina en forma de una solución acuosa en
concentraciones entre 0,5 y 3,0% p/v, bromohidrato poli
l-lisina de peso molecular entre 1000 y 800,000 en
una solución acuosa a una concentración de entre 0,03 y 3,0 p/v, y
amina polivinílica en una concentración de entre 0,01 y 1,0%
p/v.
21. Proceso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 14-20, caracterizado porque
se realiza durante un tiempo entre 2 min. y 180 min.
22. Microcápsulas de acuerdo con cualquiera de
las reivindicaciones 1-12 para la inseminación
artificial de cerdos.
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