ES2399933B1

ES2399933B1 - Diluyente para suspension seminal

Info

Publication number: ES2399933B1
Application number: ES201130842A
Authority: ES
Inventors: Javier Gil Pascual
Original assignee: Iberica de Reproduccion Asistida SL
Current assignee: Tecnovet SL
Priority date: 2011-05-24
Filing date: 2011-05-24
Publication date: 2014-03-26
Anticipated expiration: 2031-05-24
Also published as: US20120301868A1; ES2399933A2; ES2399933R1; EP2526768A1

Abstract

Diluyente para suspensión seminal.#La presente invención pertenece al campo de la veterinaria, y en particular a la reproducción asistida. Más concretamente, la invención consiste en un diluyente de semen que comprende alginato y su utilización para la conservación de esperma y para el aumento del porcentaje de progenie con un sexo determinado.

Description

DILUYENTE PARA SUSPENSiÓN SEMINAL

CAMPO DE LA INVENCiÓN

La presente invención pertenece al campo de la inseminación artificial de animales. Más concretamente, la invención consiste en un diluyente de semen que comprende alginato y su utilización para la conservación de esperma y para el aumento del porcentaje de progenie con un sexo determinado.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

En la actualidad, uno de los mayores problemas planteados en las técnicas de inseminación artificial es la conservación del esperma (o semen) y de su poder fecundante hasta que llega el momento de la inseminación. Para solucionar este problema, habitualmente se utiliza un medio denominado "diluyente" en el cual se diluye el esperma inmediatamente después de su recogida. De esta manera, se conserva hasta el momento de la inseminación.

El tiempo de conservación que se puede obtener en presencia de diluyente depende de la especie en cuestión y de las condiciones de conservación, y en particular del tipo de diluyente escogido; dicho tiempo varía generalmente de unas horas a unos días. En algunas especies, se puede prolongar este tiempo mediante la congelación del esperma; sin embargo, esta técnica produce igualmente la destrucción o la inactivación de un número importante de espermatozoides, y por consiguiente una baja de la fertilidad del esperma. Además, existen considerables diferencias de eficacia en la conservación al utilizar el proceso de congelación segun la especie animal de que se trate. A este respecto, es especialmente problemática la inseminación artificial en los cerdos ya que aunque la técnica de congelación ha significado una buena estandarización de los métodos de conservación en otras especies domesticas, es prácticamente inaplicable con el material seminal porcino. Las peculiares particularidades que presenta el espermatozoide porcino hace que sea muy sensible al shock por frio, que produce una alteración de la viabilidad espermática. Esta susceptibilidad al choque por frío, supone en la práctica que las muestras seminales deban ser conservadas a 15-20°C, ya que una reducción en la temperatura de almacenamiento limita la viabilidad de las muestras seminales (Paulenz el al., 2000).

La presente invención se refiere a la adición de alginato a entre 0,25 giL Y 10 gIL, en diluyentes de semen convencionales (tanto de verracos como de otras especies de animales), para mejorar la supervivencia de los espermatozoides y su comportamiento en la fecundación con miras a la inseminación artificial o cualquier otra práctica de reproducción asistida.

Son muchos los estudios que divulgan la utilización del alginato como diluyente de semen, por ejemplo en las especies caprina, ovina, bovina, y equina. Sin embargo, todos ellos requieren del proceso de encapsulación para conseguir la conservación del semen (ES2202723; EP0922451; Herrler el al., 2006). Sorprendentemente, en la presente invención se describe el uso de alginato en solución a una concentración entre 0,25 gIL Y 10 gIL que permite conservar el esperma sin necesidad de llevar a cabo el proceso de encapsulación. En el diluyente con alginato de la presente invención, no se produce o se reduce el contacto entre las células espermáticas por lo que en parte o en su totalidad éstas se mantienen en suspensión favoreciendo el contacto con el diluyente y con ello su conservación, viabilidad y capacidad fecundante, todo ello sin someterlas a las reacciones químicas requerídas para la encapsulación.

Por esperma, o semen, se entiende, en los términos de la presente invención, al conjunto de espermatozoides y sustancias fluidas que se producen en el aparato genital masculino de los animales y de la especie humana. Por diluyente de semen convencional se entiende, en los términos de esta invención, la solución acuosa que permite aumentar el volumen seminal (mayor número de dosis seminales por eyaculado) y preservar las características funcionales de las células espermáticas y mantener el nivel de fertilidad adecuado. Los espermatozoides se encuentran en el plasma seminal que suministra los nutrientes necesarios para mantener una elevada actividad metabólica necesaria para el proceso de transporte espermático a través del tracto genital femenino. Para llevar a cabo su función, el diluyente debe aportar los nutrientes necesarios para el mantenimiento metabólico de la célula espermática, controlar el pH del medio, la presión osmótica y la inhibición del desarrollo microbiano. Por ello, la mayoría de diluyentes comprenden azúcares, como la glucosa, galactosa, fructosa, ribosa o trehalosa; sales de NaCI o KCI; bicarbonato, TRIS y/o HEPES. Adicionalmente, pueden contener agentes quelantes, como el EDTA, antibióticos y/o BSA.

Así, los diluyentes convencionales para semen de verraco y conejo son mezclas de productos químicos encaminadas a producir un ambiente en el que los espermatozoides puedan encontrar la energía y las condiciones de presión osmótica, fuerza iónica y pH que les permita mantener su capacidad fecundante durante un determinado lapso de tiempo.

En la siguiente tabla (Tabla 1) se muestra la composición publicada de varios diluyentes clásicos para semen porcino (Gadea J., 2003).

Tabla 1.-Composición (en gIL) de varios diluyentes clásicos para semen porcino para un litro de agua destilada.

IVT: Kiev BTS Zarles co MRA ZORP VA Readin 9 Modena Androhep

Glucosa: 3 60 37 11.5 + 11.5 11 .5 25' 26

C itrato sódico: 24.3 3.7 6.0 11.7 + 11.65 11.65 6.90 8.0

EDTA: 3.7 1.25 2.3 + 2.35 2.35 2.25 2.4

Bicarbonato sódico: 2.4 1.2 1.25 1.25 + 1.75 1.75 1.00 1.2

Cloruro potásico: 0.4 0.75 - 0.75

Acelilcisleina: 0.05

HEPES: 9.0

BSA: 5.0 + 3.00 2.5

TRIS: 6.5 - 5.5 5.5 5.65

Acido Cítrico: 4.1 - 4.1 4.1 2.00

C isleina: 0.1 + 0.7 0.7 0.05

Treha losa: 1

PVA: 1 1

Acetato potásico: +

MOPS: +

Presión osmótica (mOsm): 290 380 330 240 290 275 300 282 309

pH: 7.2 7.2 6.9 6.9 6.8

-a: glucosa monohidrato

Asimismo, en la siguiente tabla (Tabla 2) se muestra la composición publicada del diluyente DLBR para semen de conejo (ES2190723).

Tabla 2.-Composición del diluyente DLBR para semen de conejo por litro de agua destilada.

Compuesto: Concentración

Tris(hidroximetil)amino metano: 0,250 M

Acido Cítrico: 0.0828 M

Glucosa: 0,050 M

EOTA: 0,100 mM

Dihidroestretomicina sulfato: 1,250 mg

Penicilina G sódica: 300.000 UI

Penicilina G procaina: 700.000 UI

En el mercado existen distintos diluyentes de semen convencionales, entre ellos,

5 Import-Vet S.A. comercializa dos tipos de diluyente para semen de verraco (ND-4 y NO5) y uno para semen de conejo (NO-e7). El ND-4 de porcino es un diluyente apto para el mantenimiento del esperma de 3 a 4 días, el ND-5 de porcino lo es para el mantenimiento de 6 a 7 días y el NO-e? para cunicultura lo es para 1 a 2 días.

La siguiente tabla (Tabla 3) muestra la composición cualitativa de los tres diluyentes

10 comercializados por Import-Vet S.A. (ND-4, NO-S, NO-C?), donde el simbolo (+) indica la presencia en el diluyente del compuesto en cuestión (Gil Pascual J., resultados no publicados).

Tabla 3.-Composición cualitativa de los diluyentes NO-4, NO-5 y NO-C7.

N0-4: NO-5 NO-Cl

Glucosa: + + +

Citrato sódico: + + +

EOTA: + +

Bicarbonato sódico: + + +

Cloruro potásico: + + +

Acetilcisteina: + +

MOPS: + +

Presión Osmótica (mOsm): 300 293 276

pH: 7,20 6.90 6.40

Cuando se utilizan diluyentes convencionales (sin alginato), los espermatozoides, con el paso del tiempo, se depositan en el fondo del recipiente utilizado para contener la dosis seminal, ya sea una botella, un tubo lermosellado o un blísler. La compactación generada reduce el contacto de los espermatozoides con el diluyente, dificulta el transporte de nutrientes al interior de la célula, altera el metabolismo y favorece la formación de aglutinaciones lo que en su conjunto altera el estado de la membrana espermática y reduce el mantenimiento del poder fecundanle de los espermatozoides a lo largo del tiempo.

Cualquier diluyente convencional, entre otros los fabricados por Import-Vet S.A. (ND-4, NO-5, ND-e7), al que se ha añadido alginato en una concentración entre 0,25 y 10 gIL, objeto de la presente invención, mejora la conservación del esperma y de su poder fecundante. El diluyente de la presente invención tiene una mayor densidad, la cual varía según la concentracíón de algínato (mayor densídad cuanto más concentracíón de algínato). De esta manera, reduce o impide la decantacíón de los espermatozoides que al mantenerse separados los unos de los otros mantienen el contacto con el diluyente, permitiendo el intercambio metabólico con el medio y reduciendo o impidiendo la formación de aglutinaciones a través del tiempo. Así, las características de la membrana espermática se mantienen durante más tiempo mejorando la capacidad de conservación y de fecundación del esperma. Entre otras características mejoradas por el uso del diluyente de la presente invención se encuentran la motilidad (Figura 2) y la agregación de los espermatozoides (Figuras 3).

Por último, diversos estudios demuestran que la segregación normal de sexos tanto en monta natural como en inseminación artificial está próxima al 50/50 (Soede et al., 2000). Sin embargo, utilizando el diluyente objeto de la presente invención el porcentaje en la progenie de un sexo u otro se puede aumentar, según se deseen más machos o más hembras. Los espermatozoides machos, portadores de cromosomas Y, Y los espermatozoides hembra, portadores de cromosomas X, presentan ciertas características diferentes, como por ejemplo en cuanto a su peso y capacidad de movimiento (Tabla 4).

Tabla 4.-Diferentes parámetros entre espermatozoides X e Y.

Parámetro: Diferencia

DNA: X mayor que Y

Tamaño: X mayor que Y

Molilidad: Y más rápido que X

F-Body: He1erocromatina en Y

Carga superficial: X migra hacía el cátodo

El diluyente de la presente invención permite que, con el paso del tiempo, los espermatozoides se segreguen parcialmente en diferentes estratos. Debido a las características diferenciales de los espermatozoides hembra y macho, más espermatozoides hembras quedan en el estrato superior y más espermatozoides

5 machos en el estrato inferior. Seleccionando uno u otro estrato se favorece que el porcentaje de progenie sea mayor para un sexo u otro. Se obtienen más crías hembras con los espermatozoides tomados del estrato superior y más crías machos con los espermatozoides del estrato inferior.

10 OBJETO DE LA INVENCIÓN

Un objeto de la presente invención consiste en un diluyente de semen que comprende alginato. Asimismo, es objeto de la presente invención la aplicación de dicha solución para la mejor conservación del esperma a lo largo del tiempo y para el aumento del porcentaje de la progenie con un sexo determinado.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Figura 1: Se muestran varias botellas con una misma cantidad de semen diluido en distintos diluyentes: una con diluyente convencional (N) (en este caso el diluyente ND-5 de Import-Vet S.A.) y cuatro en las que al diluyente ND-5 de Import-Vet se le ha añadido 20 diferentes concentraciones de alginato, denominadas de aquí en adelante: SO, PO, XPD y MPD. SO hace referencia a Semi Denso y contiene entre 5.00 y 10,00 gIL de alginato; PD a Poco Denso y contiene entre 2,5 y 4,9 giL de alginato; MPD a Muy Poco Denso y contiene entre 1,25 Y 2,4 gIL de alginato; y XPD: Extra Poco Denso y contiene entre 0,75 y 1,24 giL de alginato. Asimismo, hay una botella con diluyente convencional 25 y sin semen (SD sin S). A mayor concentración de alginato se produce una menor decantación. En SD y PD se observa como la inmensa mayoría de los espermatozoides, a pesar de haber transcurrido un mes desde la fabricación de las dosis, se mantienen en flotación. En XPD y MPD aunque los espermatozoides han decantado, el pellet formado es mucho menos denso, es más ancho, que en la dosis

30 fabricada con el diluyente convencional (N).

Figura 2.-Representación gráfica del porcentaje de motilidad (%) del esperma frente al tiempo (días). El esperma se encuentra diluido en diluyente convencional (NO-5), diluyente poco denso (PO, diluyente ND-5 con alginato en una concentración entre 2,5 y 4,9 gIL) Y diluyente extra poco denso (XPD, diluyente ND-5 con alginato en una concentración entre 0,75 y 1,24 gIL). Se observa que la adición de alginato mantiene la motilidad de los espermatozoides más elevada a lo largo del tiempo que el diluyente convencional.

Figura 3.-Representación gráfica del porcentaje de aglutinación (%) del esperma frente al tiempo (días). El esperma está diluido en diluyente convencional (NO-5), diluyente poco denso (PO) y diluyente extra poco denso (XPO). Se observa que la adición de alginato retarda la aglutinación de los espermatozoides hasta el sexto día de conservación, a diferencia del diluyente convencional, donde se aprecia un aumento de la aglutinación desde el segundo día de almacenamiento. Por tanto, la aglutinación se ve reducida por la adición de alginato frente a la aglutinación observada con el diluyente convencional.

Figura 4.-Representación gráfica del porcentaje de acrosomas normales (%) en los espermatozoides frente al tiempo (dias), estando el esperma diluido en diluyente convencional (NO-5) y en diluyente poco denso (PO). Se observa que la adición de la composición objeto de esta invención mantiene el porcentaje de acrosomas normales en los espermatozoides más elevado a lo largo del tiempo.

Figura 5.-Dibujo que representa el enriquecimiento de espermatozoides hembra (H) en el estrato superior y de espermatozoide macho (M) en el estrato inferior conseguido tras dejar en reposo durante entre 10 y 20 horas el semen diluido en diluyente con alginato, en bolsas con forma de tubo.

DESCRIPCiÓN DETALLADA DE LA INVENCiÓN El objeto técnico de la presente invención es un diluyente de semen caracterizado por que comprende alginato en una concentración de 0,25 a 10 giL, Y donde los espermatozoides se encuentran en suspensión. En el contexto de la presente invención, se entiende que los espermatozoides se encuentran en suspensión cuando se mantienen dentro de un fluido, en este caso el diluyente con alginato de la invención, sin precipitarse al fondo.

•

En una realización particular de la presente invención, el diluyente comprende alginato de sodio, de bario o de calcio. En una realización más particular, el diluyente comprende alginato sódico.

La concentración de alginato en el diluyente de la invención varia entre 0,25 y 10 gIL de diluyente. En una realización particular, el diluyente comprende entre 5,00 y 10,00 giL de alginato resultando en un diluyente Semi-Denso (SO). En otra realización particular, el diluyente comprende entre 2,5 y 4,9 gIL de alginato resultando en un diluyente PocoDenso (PO). En otra realización particular, el diluyente comprende entre 1,25 Y 2,40 gIL de alginato resultando en un diluyente Muy Poco Denso (MPD). En otra realización particular, el diluyente comprende entre 0,75 y 1,24 gIL de alginato resultando en un diluyente Extra Poco Denso (XPD).

En una realización particular de la presente invención el alginato se añade a un diluyente de semen convencional, como puede ser MR-A (Tabla 1), Acromax (fabricado por GVP-Gestión Veterinaria Porcina), Duragen (fabricado por Magapor), Diluyente Esperma Porcino SP Veterinaria (fabricado por SP Veterinaria), Safe-cell (fabricado por IMV-Technologies), Androhep (Tabla 1), ND-4, ND-5 Y ND-e7 (Tabla 3). En una realización preferida, el alginato se añade a NO-4, NO-5 o NO-e7,

Asimismo, es objeto de la presente invención el uso del diluyente de la invención para reducir la aglutinación y favorecer la conservación de esperma, así como para mejorar los resultados reproductivos en la inseminación artificial de ganado y de manera más particular de cerdos y conejos. En otra realización particular, es objeto de la presente invención el uso del diluyente de la invención para la segregación de espermatozoides de distinto sexo (Y o X), así como para aumentar el porcentaje de progenie con un determinado sexo.

Por último, también es objeto de la presente invención un método para aumentar el porcentaje de espermatozoides hembra o macho caracterizado por que comprende las siguientes etapas:

a) obtener semen del animal macho,

b) diluir dicho semen en el diluyente objeto de la invención hasta alcanzar un

ratio de dilución de entre 1/2 y 1/10 eyaculado/diluyente de la invención,

c) llenar con dicho semen diluido bolsas de plástico con forma de tubo de entre

35 a 45 mm de ancho y 350 Y 450 mm de largo, d) dejar la bolsa en reposo en posición vertical durante 10 y 20 horas, a entre

19 y 25°C, para que se separen los espermatozoides en distintos estratos,

e) pinzar los tubos separando los distintos estratos,

f) obtener espermatozoides del estrato superior para aumentar el número de

crias hembra y del estrato inferior para aumentar el número de crías macho.

Por último, es objeto de la presente invención un método de aumento del porcentaje de un sexo en la progenie caracterizado por que comprende las siguientes etapas:

i) llevar a cabo el método de aumento del porcentaje de espermatozoides machos o hembras anteriormente descrito,

ii) inseminación artificial con el semen obtenido en la etapa i).

A continuación se describen una serie de ejemplos que ilustran la presente invención, pero no limitan su alcance en modo alguno.

EJEMPLO 1.-Conservación y mantenimiento del potencial fecundante de los espermatozoides.

Se llevaron a cabo estudios de motilidad, agregación y acrosomas del esperma diluido en distintos diluyentes (sin y con alginato sódico en distintas concentraciones), como sigue:

Motilidad: Dos operarios diferentes en dos laboratorios diferentes recibieron las mismas muestras de semen. Sobre una placa calentable a 39 oC se disponen portaobjetos sobre los que se deposita una gota de semen diluido en los distintos diluyentes (sin y con alginato), pasados unos segundos la muestra se cubre con un cubreobjetos también atemperado y se observa al microscopio a 200 y 400 aumentos. Subjetivamente se calcula el porcentaje de espermatozoides con movimiento.

Aglutinación: Siguiendo el mismo procedimiento que para el estudio de la motilidad, se valora el grado de aglutinación de O a 3.

Acrosomas: Se mezcla 1 mi de semen diluido en cada uno de los distintos diluyentes con 1 mi de una solución salina formolada que mata y fija los espermatozoides. En frio y sobre un portaobjetos se deposita una pequeña gota de esta mezcla, se cubre con un cubreobjetos y usando aceite de inmersión se observa a 1500 aumentos en un microscopio de contraste de fases el porcentaje de acrosomas normales.

Los resultados obtenidos aparecen representados en las figuras 2, 3 Y 4, en las que se aprecia como la motilidad de los espermatozoides se mantiene más elevada a lo largo del tiempo en los diluyentes con alginato de la presente invención. Igualmente, se observa cómo prácticamente no aumenta la aglutinación hasta el día sexto de

5 conservación en los diluyentes densos cuando en el diluyente convencional lo hace a partir del segundo día. Por último, se aprecia que el porcentaje de acrosomas normales se mantiene más elevado en los espermatozoides diluidos en diluyente con alginato de la presente invención que en aquellos con diluyente convencional.

Con el esperma así conservado se realizaron inseminaciones artificiales (Manual de

10 inseminación Artificial, Kubu5 S.A.) y se analizaron los resultados en base a la progenie obtenida. Se cuantificaron los Nacidos Totales (NT), Nacidos Vivos (NV), Nacidos Muertos (NM) y el Diagnóstico de gestación positivo mediante ecografía (Eco+). La "Media" hace referencia a la media por camada, es decir, número total de nacidos vivos/número de partos (Tabla 5).

Tabla 5.-Fertilidad y prolificidad tras inseminación artificial (lA).

SEMANA cubrición: NOS XPO

N° IA: Eco + % N° lA Eco + %

32: 8 5 62,50 12 10 83,33

33: 8 8 100,00 11 10 90,91

34: 9 9 100,00 8 8 100,00

35: 8 7 87,50 10 10 100,00

36: 5 3 60,00 7 7 100,00

37: 9 6 66,67 12 11 91,67

Total: 47 38 80,85 60 56 93,33

SEMANA cubrición: NOS XPO

Partos: N.V N.M. N.T. Partos N.V. N.M . N.T.

32: 4 37 4 41 10 112 10 122

33: 8 86 6 92 9 101 8 109

34: 9 97 10 107 8 88 10 98

35: 7 82 8 90 9 100 11 111

36: 3 32 4 36 6 64 7 71

37: 4 48 3 51 8 93 6 99

Total: 35 382 35 417 50 558 52 610

Media: 10,91 1,00 11,91 11,16 1,04 12,20

En esta tabla se puede observar que la fertilidad y la prolificidad son mayores cuando se utiliza un diluyente denso, en este caso extra-poco denso, es decir, con una concentración de alginato sódico entre 0,75 y 1,24 gIL (XPD, Tabla 5).

Por su lado, en cunicultura los resultados también demuestran el buen comportamiento reproductivo obtenido con dosis en las que se ha utilizado el diluyente semi-denso (NOe7 con alginato en una concentración entre 5,00 y 10,00 gIL) frente al diluyente convencional (NO-el) (Tabla 6).

Tabla 6.-Prolificidad tras inseminación artificial de conejas.

Diluyente Semi-Denso: Diluyente Convencional

lA: Positivas % Paren % lA Positivas % Paren %

Conejas: 21 18 85,71 17 80,95 40 33 82,50 32 80,00

Conejas: 20 20 100 19 95,00 44 38 86,36 38 86,36

Total: 41 38 92,68 36 87,80 84 71 84,52 70 83,33

En las conejas testigo inseminadas con diluyente convencional (No-C7 , sin alginato) la

fertilidad a la confirmación de la gestación por palpación (Positivas) es

considerablemente inferior 84,52 % frente a 92,68 % que se obtienen con el diluyente

15 Semi-Denso. Asimismo, la tasa de partos con el diluyente convencional también es menor 83,33% frente a 87,80 % de las conejas inseminadas con el diluyente SemiDenso (con alginalo sódico entre 5,00 y 10,00 gi L).

EJEMPLO 2.-Aumento del porcentaje de la progenie con un sexo determinado

20 Cuando se suspende semen de verraco en el diluyente Semi-Denso (SO) objeto de la presente invención, con el paso del tiempo los espermatozoides se segregan parcialmente en diferentes estratos quedando más espermatozoides hembras en el estrato superior y más espermatozoides machos en el estrato inferior (Figura 5).

El semen se recoge sobre una pequeña cantidad de diluyente denso, se contrasta para

25 determinar su calidad y conocer cuantas dosis se pueden realizar, se añade más diluyente denso hasta conseguir un nivel suficiente de dilución que garantice la conservación del semen durante al menos 24 horas (dilución entre 1/2 Y 1110 eyaculado/diluyente de la invención. Se llenan con dicho semen diluido bolsas de

plástico con forma de tubo de entre 35 a 45 mm de ancho y de entre 350 a 450 mm de largo (bolsa de decantación). Se dejan las bolsas en reposos, en posición vertical de 10 a 20 horas, a una temperatura de entre 19 y 25 oC, para que se separen los espermatozoides hembra y macho en distintos estratos (fracciones). Tras la separación

5 clara de las fracciones, se pinzan los tubos para separar su contenido en una fracción enriquecida en espermatozoides hembra (estrato superior), otra mixto (estrato medio) y otra enriquecido en espermatozoides macho (estrato inferior). Cada fracción se pesa y se rediluyen con diluyente convencional, hasta alcanzar el volumen necesario para poder fabricar el total de las dosis calculadas durante la contrastaciÓn.

10 Una vez en la granja las dosis se conservan a 15 oC, hasta un máximo de 6 días. Las cerdas se inseminan 2 ó 3 veces cada 12 ó 24 horas y segun la longitud del celo, con el diluyente obtenido de los distintos estratos superior, medio o, inferior. Resultados representativos se muestran en la Tabla 7.

15 Tabla 7.-Aumento del porcentaje de un sexo determinado en la progenie.

Fracción IA Paren MACHOS IHEMBRAS I Total IMedia N.T I

Diferencia

Superior 14 12 64 96 160 13,33

70 85,7 40,0 60,0 20,0

Media 5 4 23 31 54 13,50

70 80,0 42,6 57,4 14,8

Inferior 14 14 100 90 190 13,57

70 lOO 52,6 47,4 -5,3

Todas 33 30 187 217 404 13,47

70 90,9 46,3 53,7 7,4

Los resultados globales, al consolidar los tres grupos, muestran que la media de las 30 cerdas que paren es de 46,3 % de machos y 53,7 % de hembras por lo que entre ambos grupos solo hay un 7,4 % de diferencia entre la cantidad de machos y de hembras.

Sin embargo en el grupo inseminado con la fracción superior, el porcentaje de machos es del 40 % Y de hembras del 60 % por lo que la diferencia entre sexos aumenta hasta

el 20 %. También se observa una reducción progresiva del porcentaje de hembras de la fracción superior a la media e inferior con un 60 %, 57,4 % Y 47,4%, respectivamente.

Por tanto, la segregación del número de espermatozoides machos y hembras en las diferentes fracciones de la bolsa de decantación es progresiva y real y por tanto, la 5 utilización del alginato en los diluyentes convencionales permite favorecer la obtención de machos o hembras según la fracción tomada para la inseminación.

BIBLIOGRAFíA EP0922451 (16/06/1999)

10 ES2190723 (01/08/2003) Gadea J., 200 3. Los diluyentes de inseminación artificial porcina. Revisión. Spanish Joumal ofAgricultural Research.1 (2): 17-27. Herrler A. , Eisner S, Bach V, Weissenborn U, Beier HM., 2006. Cryopreservation of spermatozoa in alginic acid capsules. Fertil. Steril. 85( 1 ):208-13.

15 Kubu5 S.A. (Depósito legal: M 8929-1999), Manual de inseminación artificial. Paulenz H., Kommisrud E., Hofmo P.O., 2000. Effect of Long-Term storage at different temperatures on quality of liquid boar semen. Reprod. Dom. Anim. 35, 83-85. Soede NM, Nissen AK, Kemp B. Timing of insemination relative lo ovulation in pigs: effecls on sex ratio of offspring. Theriogenology, 2000 Mar 1 ;53(4):1003-11.

Claims

REIVINDICACIONES

1.-Diluyente de semen no humano caracterizado por que comprende alginato en una concentración de 0,25 a 10 gIL, Y donde los espermatozoides se encuentran en suspensión.
2.-Diluyente según la reivindicación anterior caracterizada por que el alginato es de bario, de calcio o de sodio.
3.-Diluyente según la reivindicación anterior caracterizada por que el alginato es alginato sódico.
4.-Diluyente según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 caracterizada por que comprende entre 5 y 10 giL de alginato.
5.-Diluyente según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 caracterizada por que comprende entre 2,5 y 4,90 giL de alginato.
6.-Diluyente según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 caracterizada por que comprende entre 1,25 Y 2,40 gIL de alginato.
7.-Diluyente según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 caracterizada por que comprende entre 0,75 y 1 ,24 gIL de alginato.
8.-Uso del diluyente según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para reducir la aglutinación y favorecer la conservación del esperma.
9.-Uso del diluyente según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para la preparación de una composición veterinaria para la inseminación artificial de ganado.
10.· Uso según la reivindicación 9 para la preparación de una composición veterinaria para inseminación artificial de cerdos y conejos.
11.-Uso del diluyente según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para la segregación de espermatozoides de distinto sexo.
12.-Uso del diluyente según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para la preparación de una composición veterinaria para aumentar el porcentaje de progenie con un determinado sexo.
13.-Procedimiento para aumentar el porcentaje de espermatozoides hembra o macho caracterizado por que comprende las siguientes etapas:

a) obtener semen de un animal no humano macho, b) dilución del eyaculado a entre 1/2 y l /la eyaculado/diluyente de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7,

e)

llenar con dicho semen diluido bolsas de plástico con forma de tubo de 35 a 45

mm de ancho y de 350 a 450 mm de largo,

d)

dejar la bolsa en reposo , en posición vertical, de 10 a 20 horas, a una

temperatura

entre 19 y 25°C, para que se separen los espermatozoides en

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distintos estratos,

e)

pinzar las bolsas separando los distintos estratos superior, medio e inferior,

f)

obtener espermatozoides del estrato superior para aumentar el número de crías

hembra y del estrato inferior para aumentar el número de crías macho .