ES2201050T3 - Compuestos que presentan una inhibicion selectiva de la acteil-colinesterasa. - Google Patents

Compuestos que presentan una inhibicion selectiva de la acteil-colinesterasa.

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ES2201050T3 ES92921255T ES92921255T ES2201050T3 ES 2201050 T3 ES2201050 T3 ES 2201050T3 ES 92921255 T ES92921255 T ES 92921255T ES 92921255 T ES92921255 T ES 92921255T ES 2201050 T3 ES2201050 T3 ES 2201050T3
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Malgarzota Brzostowska
S. Rapoport
Nigel Greig
Xiao-Shu He
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Abstract

LA PRESENTE INVENCION ES RELATIVA A COMPUESTOS TRICICLICOS DE FENILOCARBAMATO O NAFTILOCARBAMATO DE FORMULA (I), EN DONDE R ES -OO NRI, LA CUAL PROPORCIONA AGONISTA COLINERGICO ALTAMENTE POTENTE Y SELECTIVO, Y ACTIVIDAD DE BLOQUEO Y SU USO COMO AGENTES FARMACEUTICOS. LA INVENCION ADEMAS ES RELATIVA A MEJORAS EN TERAPIA RELATIVA A ENFERMEDADES COLINERGICAS TALES COMO GLAUCOMA, MIASTENIA GRAVE, ENFERMEDAD DE ALZHEIMER Y PARA MEJORAS EN TERAPIA Y ENVENENAMIENTO POR ORGANOFOSFATO. LA INVENCION PROPORCIONA ADEMAS UNOS AGENTES SELECTIVOS DE ACETILOCOLINESTERASA Y BUTIRILOCOLINESTERASA Y UN METODO PARA INHIBIR ESTAS ESTERASAS.

Description

Compuestos que presentan una inhibición selectiva de la acteil-colinesterasa.
La presente invención se refiere a mejoras en el tratamiento de enfermedades, y más concretamente a compuestos que presentan una inhibición selectiva de la acteil-colinesterasa.
La fisostigmina, también denominada eserina, y los derivados particulares de la fisostigmina son inhibidores de la anti-colinesterasa, los cuales son bien conocidos. Dichos compuestos conocidos también resultan útiles en el tratamiento del glaucoma, Miastenia Gravis, enfermedad de Alzheimer y como antídotos contra la intoxicación de organofosfatos.
La fisostigmina la introdujo en Inglaterra Daniell (un médico Británico) en el año 1840 en forma de haba de calabar. El propio compuesto fue aislado en primer lugar por Jobst y Hesse en 1864. La fisostigmina se ha utilizado como tratamiento para el glaucoma, y para invertir el coma inducido por la atropina durante el pasado siglo. Usos recientes para este compuesto y sus derivados han sido como antídotos eficaces para diversos fármacos que tienen propiedades centrales anti-colinérgicas.
Durante las últimas dos décadas, estudios referentes al complejo canal iónico-receptor de acetilcolina (AChR) de la conexión neuromuscular ha proporcionado un aumento significativo en el conocimiento de la función del receptor. Este receptor de membrana ha sido disponible con facilidad para el estudio debido a que los AchRs nicotínicos se producen en densidades muy elevadas en órganos eléctricos del Torpedo y el Electrophorus. Además, la comprensión de la morfología y la función de este receptor ha aumentado de manera significativa a través de investigaciones químicas específicas para los distintos sitios activos del receptor.
Hace casi 20 años hubo un descubrimiento importante que ayudó en el estudio de este AChR. Se obtuvo alfabungarotoxina (Alfa-PGT) de venenos de serpiente que se une de manera reversible y específicamente al sito de reconocimiento de la acetilcolina (ACh) sobre el AchR nicotínico. El Alpha-PGT fue una sonda tan altamente selectiva que los investigadores fueron capaces de aislar y purificar las diferentes subunidades que comprenden el AChR nicotínico. Las subunidades se reconstituyeron funcionalmente en membranas lipídicas artificiales y fueron finalmente clonadas.
Otros sitios sobre el AChR nicotínico se hicieron pronto disponibles por el descubrimiento de otras clases de toxinas. Estas toxinas se denominaron histrionicotoxinas y fueron aisladas de la secreción de la piel de ranas de la familia Dendrobatidae. Se descubrió que los nuevos sitios disponibles debido a las histrionicotoxinas eran responsables de las alteraciones alostéricas o el bloqueo no competitivo de la transmisión neuromuscular. Estos sitios son distintos del sitio de reconocimiento descubierto a través de la sonda Alfa-PGT y se cree que se encuentran situados en el componente del canal iónico del AChR.
Adicionalmente, otros fármacos muestran la capacidad para modificar de manera no competitiva la activación del AChR. Ejemplo de tales fármacos son agentes farmacológicos distintos y bien conocidos que actúan sobre el sistema nervioso periférico así como en el sistema nervioso central. En particular se citan, por nombrar unos pocos, los antidepresivos triciclicos, los antipsicóticos de fenotiazina, el agente alucinógeno fenciclidina (PCP), anestésicos locales, antimuscarincos, agentes de anticolinesterasa y compuestos similares.
Hay disponibles otras maneras adicionales para el estudio del AChR debido a los modelos cinéticos microscópicos y rápidos procedimientos de mezclado bioquímicos para estudiar los cambios de permeabilidad iniciados por el enlace de moléculas agonistas y transiciones conformacionales de moléculas receptoras nicotínicas.
Se sabe que el sitio de reconocimiento agonista en el receptor ACh nicotínico presenta una potente estereo-especificidad. Esta conclusión se basa en el estudio de isómeros ópticos de ciertos agonistas semirrígidos, véase por ejemplo Spivak y otros, Mol. Pharmacol., Vol. 23, páginas 337-343 (1983).
Inversamente, los sitios del canal iónico son aparentemente no estereoespecíficos. Esta conclusión se basa en acciones cuantitativas y cualitativas similares de enantiómeros de perhidrohistrionicotoxina en el AChR nicotínico, véase por ejemplo Spivak y otros, FEBS Lett. Vol. 163, páginas 189-193 (1983).
Se ha descubierto que el isómero natural de la fisostigmina presenta propiedades de bloqueo así como propiedades agonistas en el AChR neuromuscular. En cambio la (+)- fisostigmina muestra solamente una inhibición insignificante de la colinesterasa (ChE). Véase Brossi y otros, FEBS Lett., Vol. 201, páginas 190-192 (1986).
Si bien la (+)- fisostigmina presenta solamente una inhibición insignificante de la actividad inhibidora del ChE resulta muy efectiva como fármaco de tratamiento previo protector contra dosis letales múltiples de sarina, véase Albuquerque y otros, Fundam. Appl. Caltoxicol., Vol. 5, páginas 182-203 (1985). La protección beneficiosa observada parece deberse a las interacciones directas de los carbamatos con el AChR nicotínico postsináptico. La efectividad protectora de los carbamatos contra los organofosfatos parece estar asociada a la capacidad directa de los carbamatos para disminuir la hiperactivación provocada por la acumulación del neurotransmisor.
Helv. Chim. Act. 74(1991), 761-766 describe el (-)-5-O-(fenilcarbamoil) fisovenol y (-)-5-O-(cumilcarbamoil)-fisovenol. El primero de estos compuestos muestra ser mucho más activo contra el AChE que el BChE mientras que el otro compuesto muestra ser mucho más activo contra el BChe que el AChE.
La patente n° EP-A-0154864 describe varios derivados de la fisostigmina que contienen un grupo alquilcarbamoilo. Estos compuestos han mostrado presentar propiedades de inhibición del AChE.
La patente n° EP-A-0253372 describe, entre otras cosas, 3'-clorofenil- carbamoileserolina, 4'-clorofenil carbamoileserolina, 2', 6'-dimetilfenilcarbamoileserolina y 4'-nitrofenilcarbamoileserolina. Estos compuestos están destinados a inhibir la colinesterasa y se aportan datos que muestran que el primero de estos compuestos inhibe de manera selectiva el AChE del cerebro al contrario que el AChE de suero. Sin embargo, no se describen los derivados fenilcarbamoileserolina ni fenilcarbamoil-Ni-noreserolina en los que el anillo fenilo del grupo fenilcarbamoilo es no sustituido, sustituido en la posición 2- solamente o sustituido en las posiciones 2- y 4-. Además, no existe nada en la patente n° Ep-A-0253372 que indique o sugiera que tales compuestos presenten una inhibición selectiva del AChE sobre el BChe.
La información anterior, disponible por la investigación en este campo, es importante en la evaluación del potencial de nuevos agentes farmacológicos para el tratamiento de afecciones colinérgicas, por ejemplo, Miastemia Gravis y la enfermedad de Alzheimer. Puede evaluarse la potencia in vitro de agentes potenciales analizando los agentes contra acetilcolinesterasa del electrophorus electricus (AChE) y butirilcolinesterasa de plasma humano (BChE).
De las dos enzimas que se conoce que hidrolizan la acetilcolina (ACh) in vivo, la AChE, que se encuentra en los glóbulos rojos, en el cerebro y en los tejidos nerviosos, parece ser más específica que la BChE que se encuentra en el suero, el páncreas y en el hígado. Sin embargo, no se ha mostrado previamente en la técnica que compuestos que inhiben de manera selectiva una de las dos enzimas más que la otra pudieran ofrecer una ventaja médica. El alcaloide natural (-)-fisostigmina, su metabolito potencial (-)-(N1)-norfisostigmina, y el alcaloide natural fisovenina que se utilizan como estándares biológicos en esta área de la técnica inhiben el AChE y el BChE in vitro de manera similar en concentraciones similares.
En consecuencia, existe la necesidad en la técnica de unos agentes activos altamente selectivos contra el AChE o BChE y no sean muy potentes uno contra el otro lo cual puede dar lugar a un mejor tratamiento de una afección colinérgica particular y minimizar los efectos secundarios negativos. Dichos compuestos podrían ser de una gran importancia médica en el tratamiento de afecciones colinérgicas.
Un objetivo de la presente invención es superar las dificultades de la técnica anterior tal como se ha expuesto en los antecedentes de la invención.
Otro objetivo de la presente invención es disponer compuestos agonistas colinérgicos selectivos y de bloqueo altamente potentes.
Otro objetivo adicional de la presente invención es disponer unas mejoras en la terapia relativa a enfermedades colinérgicas tales como el glaucoma, Miastenia Gravis, enfermedad de Alzheimer, e intoxicación de organofosfato.
Todavía otro objetivo de la presente invención es disponer compuestos con una actividad de acetilcolinesterasa selectiva.
Todavía otro objetivo de la presente invención es disponer compuestos que presenten la siguiente fórmula:
1
en la que R^{1} es H o un grupo -CH_{3},
R^{2} es C_{1}-C_{3} alquilo de cadena lineal o ramificada,
R^{3} es H o C_{1}-C_{3} alquilo lineal o ramificado, incluyendo formas isoméricas y sales farmacéuticamente aceptables.
La figura n° 1 ilustra la inhibición que depende del tiempo del AChE de plasma en un huésped rata por la fisostigmina y su 2',4'-dimetilfenil carbamato.
De acuerdo con la presente invención, se describen compuestos de la fórmula
1
en la que R^{1} es H o un grupo -CH_{3},
R^{2} es C_{1}-C_{3} alquilo de cadena lineal o ramificada,
R^{3} es H o C_{1}-C_{3} alquilo lineal o ramificado,
y sales farmacéuticamente aceptables.
En un grupo preferido de compuestos, R^{1} es hidrógeno mientras que, en otro grupo preferido de compuestos, R^{1} es -CH_{3}.
Son incluso más preferidos los compuestos en los que R^{3} es hidrógeno y R^{2} es C_{1-2} alquilo. Todavía más preferido es cuando estos dos grupos son independientemente -CH_{3}, -CH_{2}-CH_{3}, -CH_{2}-CH_{2}-CH_{3} y -CH(-CH_{3})_{2}.
Preferiblemente, el compuesto se selecciona de
(-)-2' -metilfenilcarbamoileserolina;
(-)-2', 4' -dimetilfenilcarbamoileserolina;
(-)-2' -etilfenilcarbamoileserolina;
(-)-2' -isopropilfenilcarbamoileserolina;
(-)-2' -metilfenilcarbamoil-Ni-noreserolina;
(-)-2', 4' -dimetilfenilcarbamoil-Nl-noreserolina;
(-)-fenilcarbamoil-Nl-noreserolina;
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Los compuestos anteriores son eserolina y (1) carbamatos de N-noreserolina que presentan una alta potencia en la inhibición de la acetilcolinesterasa y no de la butiril-colinesterasa. En consecuencia, estos carbamatos eran más específicos para el AChE.
Son también preferidos los compuestos de acuerdo con la presente invención en formas isoméricas y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Sales farmacéuticamente aceptables pueden ser, por ejemplo, la sal de metales alcalinos, de tierras alcalinas y de amonio. Pueden utilizarse, además, sales de adición de ácido orgánico e inorgánico farmacéuticamente aceptables. Otros ejemplos de sales aceptables son tartratos, fumaratos, fosfatos, salicilatos, y similares.
Los compuestos de acuerdo con la fórmula I tienen átomos de carbono asimétricos y pueden existir como isómeros ópticos. Para los objetivos de la presente invención, las mezclas racémicas y formas dextro y laevo quedan incluidas en la presente invención. Por lo tanto, la forma rotatoria particular dextro y laevo o un isómero particular es a menudo indicada como isómero óptico preferido en fórmulas particulares de acuerdo con la invención.
Otros inhibidores de la colinesterasa son conocidos en la técnica anterior. La fisostigmina y la fisovenina son alcaloides óptimamente activos con una configuración (3aS)-absoluta en el átomo de carbono quiral C(3a). Ambos componentes son potentes inhibidores de las colinesterasas in vitro e in vivo, bloqueando la conversión de la acetilcolina en la reversibilidad de la colina. Se ha encontrado que la fisostigmina tiene unas aplicaciones médicas útiles en afecciones que producen un fallo en el funcionamiento de este proceso.
\newpage
De manera sorprendente, los carbamatos de acuerdo con la presente invención han mostrado una alta potencia. De este modo, los derivados del fenilcarbamato de acuerdo con la presente invención duran más y parecen ser menos tóxicos que otros carbamatos análogos en esta técnica.
En consecuencia, los presentes compuestos representan un avance significativo en la técnica anterior.
Además, los compuestos anteriores de acuerdo con la presente invención resultan de utilidad como agentes agonistas colinérgicos y farmacéuticos de bloqueo altamente potentes y selectivos. Por lo tanto, los compuestos de la presente invención resultan útiles en composiciones farmacéuticas para una administración sistémica a humanos y animales en formas de dosaje unitario, tal como pastillas, cápsulas, píldoras, polvos, gránulos, supositorios, soluciones o suspensiones parenterales estériles, soluciones o suspensiones no parenterales estériles, soluciones o suspensiones orales, emulsiones aceite y agua o agua en aceite y similares, que contengan cantidades apropiadas del ingrediente activo. Una aplicación tópica puede ser en forma de pomada, cremas, lociones, gelatinas, rociadores, duchas y similares. Para una administración oral pueden prepararse formas de dosaje unitario sólido o bien fluido con los componentes de la fórmula I.
Las composiciones dentro del ámbito de la invención incluyen composiciones en las que el ingrediente activo queda contenido en una cantidad efectiva para conseguir su objetivo previsto. Los compuestos pueden administrarse en cualquier cantidad farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, en cantidades que oscilan de 0,001 gramos a aproximadamente 1 gramo por kilo de peso corporal. En base a la información que se presenta aquí, la determinación de cantidades efectivas es bien conocida para el experto en la materia. Los compuestos resultan generalmente útiles en composiciones farmacéuticas (% peso) del ingrediente activo con un portador o medio en la composición en aproximadamente 0,1 a 99% peso y preferiblemente aproximadamente 25-85% peso.
Pueden prepararse fácilmente formas de dosaje unitario fluido o bien sólido para una administración oral. Por ejemplo, los compuestos de la fórmula I pueden mezclarse con ingredientes convencionales tales como fosfato dicálcico, silicato de mangnesio y aluminio, estearato de magnesio, sulfato cálcico, almidón, talco, lactosa, acacia, metil celulosa y materiales funcionalmente similares como excipientes o portadores farmacéuticos. Los compuestos de acuerdo con la invención también pueden administrarse como sales solubles en agua tales como salicilatos, oxalatos, y similares. Puede utilizarse opcionalmente una formulación de liberación mantenida. Pueden formularse cápsulas mezclando el compuesto con un diluyente farmacéutico que sea inerte e insertando esta mezcla en una cápsula de gelatina dura que tenga un tamaño apropiado. Si se desean cápsulas blandas puede encapsularse una emulsión del compuesto con un vegetal aceptable, petróleo ligero u otro aceite inerte haciéndolo en una cápsula de gelatina.
Pueden utilizarse suspensiones, jarabes y elixires para una administración oral de formas de dosaje unitario fluido. Puede utilizarse una preparación fluida que incluya aceite para formas solubles en aceite. Un aceite vegetal tal como aceite de maíz, aceite de cacahuete o aceite de alazor, por ejemplo, junto con agentes aromatizantes, edulcorantes y cualquier conservante produce una preparación fluida aceptable. Puede añadirse un surfactivo al agua para formar un jarabe para dosajes unitarios fluidos. Pueden utilizarse preparaciones farmacéuticas hidroalcohólicas que tengan un edulcorante aceptable, tal como azúcar, sacarina o un endulzante biológico y un agente aromatizante en forma de elixir.
Pueden obtenerse también composiciones farmacéuticas para administración parenteral y supositoria utilizando procedimientos estándar en la técnica.
Un uso preferido de los compuestos de acuerdo con la invención es como agentes farmacéuticos adecuados para una administración oral. Otro uso preferido de los compuestos es en preparados agonistas colinérgicos parenterales transdérmicos y farmacéuticos de bloqueo, que resultan particularmente útiles en el tratamiento de afecciones colinérgicas tales como el glaucoma, Miastenia Gravis, enfermedad de Alzheimer, e intoxicación de organofosfato. En consecuencia, las composiciones adecuadas para la administración a estas áreas están particularmente incluidas en la invención. Las soluciones o suspensiones parenterales anteriores pueden administrarse por vía transdérmica y, si se desea, puede administrarse una forma de liberación lenta concentrada. Las soluciones o suspensiones parenterales anteriores pueden suministrarse con un parche epidérmico. Si se desea, estas soluciones o suspensiones pueden proporcionarse por inyección en un medio apropiado tal como aceite de sésamo.
En consecuencia, puede implementarse la incorporación de los compuestos activos y una matriz de liberación lenta para administración transdérmica. Los compuestos pueden ser administrados transdérmicamente aproximadamente de 0,01 a 99% de la composición y preferiblemente de 25 a 85% en peso del ingrediente activo en el medio o portador.
Los sistemas terapéuticos transdérmicos son formas de dosaje incorporadas que, cuando se aplican a una piel intacta, suministran fármaco(s) a una velocidad controlada a la circulación sistémica. Las ventajas de utilizar el recorrido transdérmico incluyen: una eficacia terapéutica mejorada, reducción de la frecuencia de dosaje, reducción de efectos secundarios debidos a la optimización de la concentración de la sangre frente al perfil del tiempo, un aumento de la conformidad del paciente debido a la eliminación de programas de dosaje múltiples, evitando el metabolismo hepático "en el primer paso", evitando incompatibilidades gastrointestinales y proporcionando una duración predecible y ampliable de la actividad. Sin embargo, la función principal de la piel es actuar de barrera para entrar los compuestos. Como consecuencia, la terapia transdérmica ha sido preferida por un número limitado de fármacos que tienen las propiedades fisioquímicas deseadas para la difusión a través de la barrera de la piel. Un procedimiento eficaz para solventar la función de barrera de la piel es incluir un intensificador de penetración en la formulación del sistema terapéutico transdérmico.
El intensificador de penetración es un compuesto químico que, cuando se incluye en una formulación, aumenta temporalmente la permeabilidad de la piel a una línea de fármacos permitiendo que más de un fármaco sea absorbido en un período de tiempo más corto. Se han indicado distintos tipos de intensificadores de penetración tales como el dimetilsulfóxido, n-decilmetilsulfóxido, N, N-dimetilacetamida N, N-dimetilformamida, 1-dodecilazacicloheptano-2-ona (Azone), propilenglicol, pirrolidonas tales como N-metil-2-pirrolidona (NMP) y surfactivos.
Los compuestos anteriores pueden estar presentes en el recipiente solos o en combinación con portadores farmacéuticos. Los portadores farmacéuticos aceptables para los objetivos de la presente invención son los portadores conocidos en la técnica que no afectan negativamente al fármaco, el huésped, o el material que comprende el dispositivo de suministro del fármaco. Portadores farmacéuticos adecuados incluyen agua estéril; solución salina; dextrosa; dextrosa en agua o solución salina; productos de condensación de aceite de ricino y óxido de etileno combinándose aproximadamente 30 a 35 moles de óxido de etileno por mol de aceite de ricino; ácido líquido; alcanoles inferiores; aceites tales como aceite de maíz; aceite de cacahuete; aceite de sésamo y similares, con emulgentes tales como mono- o di-glicérido o un ácido grado; o un fosfátido, por ejemplo, lecitina, y similar; glicoles; polialquilenglicoles; un medio acuoso en presencia de un agente de suspensión, por ejemplo, carboximetil celulosa de sodio; alginato de sodio; poli(vinilpirrolidona); y similares, solos o con agentes de suspensión adecuados tales como lecitina; estearato de polioxietileno; y similares. El portador también puede contener adyuvantes tales como agentes conservantes, estabilizantes, humidificantes, emulsionantes y similares junto con el intensificador de penetración y los compuestos de la presente invención.
La dosis efectiva para los mamíferos puede variar debido a factores tales como la edad, el peso, el nivel de actividad o condición del sujeto que se está tratando. Típicamente, una dosis efectiva de un compuesto de acuerdo con la presente invención es aproximadamente 1 a 800 miligramos si se administra por dosis oral o bien rectal de 1 a 3 veces diariamente. Esto es aproximadamente de 0,002 a 50 miligramos por kilo de peso del sujeto administrado por día. Preferiblemente se administran aproximadamente de 10 a aproximadamente 300 miligramos por vía oral o rectal de 1 a 3 veces por día para un humano adulto. La dosis requerida es considerablemente menor si se administra por vía parenteral, preferiblemente pueden administrarse aproximadamente de 0,01 a aproximadamente 150 miligramos por vía intramuscular o transdérmica, una o dos veces por día para un humano adulto.
Los compuestos de la presente invención pueden administrarse tópicamente en aproximadamente de 0,01 a aproximadamente 99% en peso de la composición, y preferiblemente aproximadamente de 25 a 85% en peso.
La presente invención también dispone compuestos tal como se ha definido anteriormente para la inhibición de la actividad de la acetilcolinesterasa, para el tratamiento de afecciones colinérgicas tales como el glaucoma, Miastemia Gravis, enfermedad de Alzheimer, o como antídoto para el tratamiento de la intoxicación de organofosfato en un mamífero.
La invención propone además el uso de un compuesto o una composición tal como se ha definido anteriormente en la preparación de un medicamento para el tratamiento de afecciones colinérgicas, tales como el glaucoma, Miastemia Gravis y la enfermedad de Alzheimer, o para el tratamiento de la intoxicación de organofosfato en un mamífero.
Sorprendentemente, los compuestos de acuerdo con la invención han mostrado una actividad agonista colinérgica selectiva y de bloqueo. De las dos enzimas que se conoce que hidrolizan la acetilcolina in vivo, la acetilcolinesterasa (AChE) que se encuentra en los glóbulos rojos, en el cerebro, y en tejidos nerviosos, parece ser más específica que la butirilcolinesterasa (BChE) que se encuentra en el suero, el páncreas y en el hígado. Sin embargo, nunca se ha demostrado que los compuestos que inhiben de manera selectiva una de las dos enzimas más que la otra proporcionen una ventaja médica.
La presente invención se refiere a la inhibición selectiva tal como sigue. El alacaloide natural (-)-fisostigmina, su metabolito potencial (-)-(N1)-norfisostigmina y el alcaloide natural fisovenina que se utilizaban como estándares biológicos en el AChE y el BChE inhibidos in vitro de manera similar en concentraciones similares.
Estos compuestos estándar biológicos utilizados para fines comparativos y los derivados que tienen grupos protectores presentan las siguientes estructuras.
2
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Las estructuras anteriores se utilizan también como materiales de partida para producir compuestos de acuerdo con la presente invención.
Sin embargo, a través de la experimentación de la presente invención se determinó que el fenilcarbamato de (-)
-eserolina, que se conoce en la literatura como fenserina, inhibe al AChE de eritrocitos humanos in vitro a una concentración 50 veces menor que el BChE del plasma humano. En consecuencia, se produjeron otros derivados y se analizaron.
De acuerdo con la presente invención se ha descubierto que sustituyendo el grupo fenilo en para- posición con un grupo metilo, un átomo de cloro, o un grupo metoxi proporcionaba unos derivados que inhibían ambas enzimas en concentraciones similares pero tales derivados eran considerablemente menos potentes que los estándares biológicos descritos anteriormente. El fenilcarbamato del (-)-fisovenol (22), mostró también una preferencia por el AChE (IC_{50} para el AChE = 11, y para el RChE = 700), mientras que el cumilcarbamato (4'-isopropilfenilcarbamato) (24) mostró una especificad del enzima invertida (AChE = 3800 y para el BChE = 16,5).
Estos descubrimientos anteriores indicaban claramente que la inhibición selectiva del AChE o bien el BChE podría conseguirse substituyendo los hidrógenos del grupo fenilo en fenilcarbamatos con varios sustituyentes e insertando esos fenilcarbamatos modificados en la estructura central básica presente en los tres alcaloides que son los estándares biológicos descritos anteriormente. La mayor posibilidad de diseñar inhibidores de AChE o BChE que actúan específicamente dio lugar a una extensión de estas investigaciones y los resultados son el objeto de la presente invención.
Los fenilcarbamatos que se enumeran a continuación en la Tabla 1 y la Tabla 2 se prepararon a partir de (-) eserolina (4), (-)-(N1)-bencilnoreserolina (5) como el equivalente N-protegido de (2), y a partir de (-)-fisovenol (6) los cuales presentan todos la configuración (3aS)-absoluta natural (estos números para los materiales de partida corresponden a los números de las estructuras comparativas y derivados protegidos, cuyas estructuras se han enumerado anteriormente en la memoria anterior).
La reacción de los fenoles que tienen la configuración (3aS)-absoluta natural, es decir, (-)-(N1)-noreserolina eserolina, o (-)-(N1)-bencilnoreserolina con isocianatos disponibles en el mercado en éter seco y en presencia de una cantidad catalítica de sodio, proporcionó los carbamatos deseados. Véase esquema de reacción 1, a continuación. Se separaron de "dímeros", que se formaron de manera invariable, por medio de cromatografía, y se eliminaron como los materiales de funcionamiento más rápidos. Las estructuras de los carbamatos que a menudo eran amorfas se consiguieron mediante los espectros MS y ^{1}H-RMN, y fueron caracterizadas mediante un análisis TLC y por rotación óptica. Los detalles de la preparación de los carbamatos de acuerdo con la presente invención se muestran en la sección experimental. La conversión de los carbamatos (N1)-protegidos en compuestos de las (N1)-series se realizó mediante hidrogenación catalítica sobre un catalizador de Pd(OH)2 tal como se muestra en el esquema 2 y tal como se describe a continuación.
Los fenilcarbamatos resultantes se enumeran a continuación en las Tablas 1-2, tras la ilustración de los esquemas de reacción 1 y 2. Los fenilcarbamatos, que presentan todos la configuración (3aS)-absoluta natural se enumeran a continuación en la Tabla 2.
ESQUEMA 1
4 
\newpage
ESQUEMA 2
5
Los compuestos de acuerdo con la presente invención, es decir, los compuestos 7-12, se enumeran a continuación en la Tabla 1.
TABLA 1
6
Los compuestos de acuerdo con la presente invención, es decir, los compuestos 13-19 y los compuestos comparativos A', B', y C' se enumeran a continuación en la Tabla 2.
(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA 2
7
Experimental
Puntos de fusión (no corregido): aparato Fisher-Johns; rotaciones ópticas ([\alpha]_{D}, CHCl_{3}: polarímetro automático Perkin-Elmer-241 MC, espectros de infrarrojos (cm^{-1}, CHCl_{3}): instrumento Beckman-IR-4230, instrumento BIO-RAD FTS-45; ^{1}H RMN (en CDCl_{3} con Me_{4}Si como referencia interna, 6 ppm, J Hz): Varian XL-300 MHz, Espectrómetro Gemini 300 MHz, MS (m/z) para ionización química (CI): espectrómetro de masa Finnigan-1015D, para impacto de electrones (EI): espectrómetro de masa V. G. Micromass 7070, para HR MS (FAB): cromatografía de capa fina espectrómetro de masa sector magnético JEOL JMS-SX 102 (gel de sílice GHLF), 250 \mum): Analtech INc.; cromatografía en columna (gel de sílice GHLF, 250 \mum); Merck 60 (malla 230-400); los sistemas disolventes utilizados para el análisis TLC fueron los siguientes: CH_{2}Cl_{2}/5% MeOH; CH_{2}Cl_{2}/10% MeOH; los sistemas disolventes utilizados para la cromatografía en columna: CH_{2}Cl_{2}/5% MeOH (A); CH_{2}Cl_{2}/10% MeOH (B).
(-)-2'-Metilfenilcarbamoileserolina (7)
Se disolvió (-)-Eserolina (4) 0 (0,12 g, 0,55 mmol) en Et_{2}O anhidro (10 ml) y se añadió un trozo pequeño de Na metálico. Tras agitar durante aproximadamente 2 minutos a temperatura ambiente bajo nitrógeno, se añadió 2-metilfenilisocianato (0,09 g, 0,70 mmol) gota a gota. Tras completar la adición el disolvente se evaporó inmediatamente. Al residuo se le aplicó una cromatografía flash sobre una columna de gel de sílice (sistema B) para dar (7) como una espuma (0,88 g, 46%); [\alpha]_{D}-69,6° (c = 0,5, CHCl_{3}), CI MS (m/z): 352 (M^{+}+1); El MS (m/z): 351 (M^{+}), HR MS (FAB) calcd para (M^{+}+1) C_{21}H_{26}N_{3}O_{2} 352,2025, se encontró 352,2020, IR; 3410, 2930, 1745; H RMN 1,46 (s, 3H, C10-CH_{3}), 1,90-2,12 (m 2H, C3-H), 2,32 (s, 3H, Me-Ph), 2,55 (s, 3H, Nl-CH_{3}, 2,58-2,70 (m, 2H, C2-H_{2}), 2,91 (s, 3H, N*-CH_{3}), 4,18 (s, 1H, C9-H), 6,33 (d, J = 8, 4, 1H, C7-H), 6,63 (br s, 1H, N-H), 6,85-6,95 (m, 2H, C4-H, C6-H), 7,05 (t, J = 1H, C5'-H), 7,15-7,23 (m, CH, CH3'-H, C6'-H), 7,85 (br s, 1H, C4'-H). Todos los demás carbamatos (-)-2'-4'-dimetilfenil carbamoileserolina (8), (-)-2'-etilfenilcarbamoileserolina (9) y (-)-2'-isopropilfenilcarbamoileserolina (10) se prepararon de manera similar a partir de (-)-eserolina (4) con los correspondientes isocianatos y presentaron espectros de RI y RMN a (7). Se muestra a continuación en la Tabla 3 los datos importantes para estos compuestos.
Los carbamatos: (-)-2'metilfenilcarbamoil-N1-noreserolina (11) y (-)-2'-4'-dimetilfenilcarbamoil-N1-noreserolina (12) se prepararon de manera similar a partir de (-)-(N1)-bencilnoreserolina (5) en lugar de (4) haciendo reaccionar (5) con los correspondientes isocianatos. El grupo de protección bencilo se eliminó después para producir el compuesto de noreserolina a partir del compuesto bencilnoreserolina. Se muestra a continuación en la Tabla 3 los datos importantes para estos compuestos.
El ejemplo siguiente muestra la eliminación de un grupo de protección bencilo de (-)-2'metilfenilcarbamoil-N1-bencilnoreserolina para producir el compuesto (11).
(-)-2'Metilfenilcarbamoil-N1-noreserolina (11)
Se disolvió (-)-2'-Metilfenilcarbamoil-(N1)-bencilnoreserolina (0,09 g, 0,21 mmol) en MeOH (10 ml), y se añadió hidróxido de paladio en carbono (7 mg). Tras la hidrogenación bajo una presión atmosférica durante 5 h, el catalizador paladio fue filtrado mediante Celite y el disolvente se evaporó in vacuo. El residuo fue cromatografiado mediante una TLC de preparación (placa de gel de sílice 2000 \mum, CH_{2}Cl_{2}/10% MeOH) para dar el compuesto (19) como una espuma (0,04 g, 56%): [\alpha]_{D}-62,4° (c = 0,5, CHCl_{3}), CI MS (m/z): 338 (M^{+}+1); El MS (m/z): 337 (M^{+}), HR MS (EI) (M^{+}) calcd, para C_{20}H_{23}N_{3}O_{2} 337, 1790, se encontró 337, 1776, ^{1}H RMN; 1,42 (s, 3H, C10-CH_{3}), 1,70-1,80 (m, 1H, C3-H), 1,95-2,08 (m. 1H, C2H), 2,29 (s, 3H, C2'-CH_{3}), 2,70-2,80 (m, 1H, C2-H), 2,81 (s, 1H, N8-CH_{3}), 3,01-3,10 (ddd, J = 2,5, 2,5, 2,5, 1H, C2-H), 4,51 (s, 1H, C9-H), 6,25 (d, J = 9, 0, 1H, C7-H), 6,63 (br s, 1H, N-H), 6,83-6,86 (m, 2H, C4-H, C6-H), 7,02 (t, J- 7, 5, 1H, C5'-H), 7,15-7,22 (m, 2H, C3'-H, C6'-H), 7,85 (br s, 1H, C4'-H).
El compuesto (12) mostró espectros IR y RMN similares al compuesto (11), véase Tabla III a continuación.
La Tabla 3 siguiente enumera los datos físicos importantes para los compuestos de acuerdo con la invención. Los números de compuesto de la Tabla 3 corresponden con los números de compuesto de la Tabla 1.
TABLA 3
8
Ejemplo 13 (-)-2'-Metilfenilcarbamoileserolina
Se disolvió (-)-Eserolina 0 (0,12 g, 0,55 mol) en Et_{2}O anhidro (10 ml) y se añadió un trozo pequeño de Na metálico. Tras agitar durante aproximadamente 2 minutos a temperatura ambiente bajo nitrógeno, se añadió 2'-metilfenilisocianato (0,09 g/ 0,70 mmol) gota a gota. Tras completar la adición el disolvente se evaporó inmediatamente. Al residuo se le aplicó una cromatografía flash sobre una columna de gel de sílice (sistema B) para dar (-)-2'-metilfenilcarbamoileserolina como una espuma (0,88 g, 46%); [\alpha]_{D}-69,6° (c = 0,5, CHCl_{3}), CI MS (m/z): 352 (M^{+}+1); EI MS (m/z): 351 (M^{+}), HR MS (FAB) calcd para (M^{+}+1) C_{21}H_{26}N_{3}O_{2} 352, 2025, se encontró 352, 2020, IR; 3410, 2930, 1745; ^{1}H RMN 1,46 (s, 3H, C10-CH_{3}), 1,90-2,12 (m 2H, c3-H), 2, 32 (s, 3H, Me-Ph), 2,55 (s, 3H, Nl-CH_{3}, 2,58-2,70 (m, 2H, C2-H_{2}), 2,91 (s, 3H, N*-CH_{3}), 4,18 (s, 1H, C9-H), 6,33 (d, J = 8, 4, 1H, C7-H), 6,63 (br s, 1H, N-H), 6,85-6,95 (m, 2H, C4-H, C6-H), 7,05 (t, J = 1H, C5'-H), 7,15.7,23 (m, CH, CH3'-H, C6'-H), 7,85 (br s, 1H, C4'-H).
Todos los demás carbamatos (-)-2'-4'-dimetilfenilcarbamoileserolina, 4'-isopropil-carbamoil eserolina, (-)-2'-etilfenilcarbamoileserolina, (-)-2' iso-propilfenilcarbamoileserolina, naftilcarbamoil-eserolina; se prepararon de manera similar a partir de (-)-eserolina con los correspondientes isocianatos y presentaron espectros de RI y RMN a (7). A continuación se muestran los datos físicos importantes para estos compuestos.
Ejemplo 14 (-)-2'-4'-Dimetilfenil-carbamoileserolina
Los datos importantes son como sigue: una espuma, [\alpha]_{D}-79,6° (c = 1, CHCl_{3}) CI MS (m/z) 366 (M^{+} = 1); ^{1}H-RMN 2,28 (s, 3H, C2'-CH_{3}), 2,29 (s, 3H, C4'-CH_{3}).
Ejemplo 15 (-)-2'-Etilfenilcarbamoileserolina
Los datos importantes son como sigue: una espuma, [\alpha]_{D}-62,8° (c = 1, CHCl_{3}) CI MS (m/z) 366 (M^{+} = 1); HR MS (FAB): calcd para (M^{+}+ 1) C_{22}H_{28}N_{3}O_{2}, 366,2182; ^{1}H-RMN: 1,26(t, J = 7,5, 3H, -CH_{2}-CH_{3}), 2,55-2,78 (m, 4H, C2H, -CH_{2}-CH_{3}).
Ejemplo 16 (-)-2'-Isopropilfenilcarbamoileserolina
Los datos importantes son como sigue: una espuma, [\alpha]_{D}-58,8° (c = 1, CHCl_{3}) CI MS (m/z) 380 (M^{+} = 1); HR MS (FAB): calcd para (M^{+}+ 1) C_{23}H_{29}N_{3}O_{2}, 379,2259; ^{1}H-RMN: 1,30 (d, J = 6,8, 6H, -CH-(CH_{3})_{2}).
Ejemplo 17 (-)-2'-Metilfenilcarbamoil-N1-noreserolina (a)(-)-2'-Metilfenilcarbamoil-N1-bencilnoreserolina
Se disolvió (N^{1})-Bencilnoreserolina (2,0 g) en Et_{2}O anhidro (10 ml) y se añadió un trozo pequeño de Na metálico. Tras agitar durante aproximadamente 2 minutos a temperatura ambiente bajo nitrógeno, se añadió 2-metilfenilisocianato (0,04 g). Tras agitar durante 15 minutos, el disolvente se evaporó y el residuo fue cromatografiado para dar el carbamato como una espuma [\alpha]_{D}-62, 0° (c = 0,5, CHCl_{3}), CI MS (m/z): 428 (M^{+}+1).
(b)(-)-2'-Metilfenilcarbamoil-N1-noreserolina
Se disolvió (-)-2'-Metilfenilcarbamoil-N1-bencilnoreserolina (0,09 g, 0,21 mmol) del (a) anterior en MeOH (10 ml), y se añadió hidróxido de paladio sobre carbono (7 mg). Tras la hidrogenación bajo presión atmosférica durante 5h, el paladio catalizador fue filtrado mediante Celite y el disolvente se evaporó in vacuo. El residuo fue cromatografiado mediante una TLC de preparación (placa de gel de sílice 2000 \mum, CH_{2}Cl_{2}/10% MeOH) para dar (-)-2'-metilfenilcarbamoil-N1-noreserolina como una espuma (0,04 g, 56%): [\alpha]_{D}-62,4° (c = 0,5, CHCl_{3}), CI MS (m/z): 338 (M^{+}+1); EI MS (m/z): 337 (M^{+}), HR MS (EI) (M^{+}) calcd, para C_{20}H_{23}N_{3}O_{2} 337,1790, se encontró 337,1776, ^{1}H RMN; 1,42 (s, 3H, C10-CH_{3}), 1,70-1,80 (m, 1H, C3-H), 1,95-2,08 (m, 1H, C2H), 2,29 (s, 3H, C2'-CH_{3}), 2,70-2,80 (m, 1H, C2-H), 2,81 (s, 1H, N8-CH_{3}), 3,01-3,10 (ddd, J= 2,5, 2,5, 2,5, 1H, C2-H), 4,51 (s, 1H, C9-H), 6,25 (d, J= 9,0, 1H, C7-H), 6,63 (br s, 1H, N-H), 6,83-6,86 (m, 2H, C4-H, C6-H), 7,02 (t, J-7,5, 1H, C5'-H), 7,15-7,22 (m, 2H, C3'-H, C6'-H), 7,85 (br s, 1H, C4'-H).
Ejemplos 18 y 19
Los carbamatos de los Ejemplos 18 y 19, que pertenecen a la serie (-)-N^{1}-noreserolina, se prepararon a partir de los Ejemplos, que pertenecen a la serie (-)-N^{1}-bencilnoreserolina, mediante desbencilación tal como se describe en el ejemplo 17. Los datos físicos importantes son como sigue.
Ejemplo 18 (-)-2'-4'-Dimetilfenilcarbamoil-(N1)-noreserolina
Los datos importantes son como sigue: una espuma, [\alpha]_{D}-55,4° (c = 0,5 CHCl_{3}), CI MS (m/z): 352; ^{1}H RMN 2,45 (2s, 6H).
Ejemplo 19 (-)-Fenilcarbamoil-(N1)-noreserolina
Los datos importantes son como sigue: m.p. (°C) 129-131, [\alpha]_{D}-50,4° (c = 0,5 CHCl_{3}) CI MS (m/z): 324 (M^{+}+1); ^{1}H RMN: 7,25-7,52 (m, 5H).
Se proporcionaron los siguientes compuestos inactivos utilizando el procedimiento anterior.
Ejemplo A'
(-)-4'-metilfenílcarbamoileserolina
Los datos importantes son como sigue: m.p. (°C) 143-145 [\alpha]_{D}-74,2° (c = 1 CHCl_{3}) CI MS (m/z): 352 (M^{+} = 1); HR MS (FAB): calcd para (M^{+}+1) C_{21}H_{26}N_{3}O_{2}, 352,2025 ^{1}H-RMN: 2,31-(s, 3H, C4'-CH_{3}).
Ejemplo B' (-)-2', 6'-dimetilfenilcarbamoileserolina
Los datos importantes son como sigue: un aceite, [a] D-36,1° (c = 1, CHCl_{3}) CI MS (m/z): 394 (M^{+} = 1); HR MS (FAB): calcd para (M^{+}+1) C_{24}H_{32}N_{3}O_{2}, 394,2495; ^{1}H-RMN: 1,24-(t, J = 7, 4, 6H, 2-CH_{2}-CH_{3}), 2,68 (m, 6H, C2-H, 2-CH_{2}CH_{3}).
Ejemplo C' (-)-2', -4', 6'-trimetilfenilcarbamoileserolina
Los datos importantes son como sigue: una espuma, [\alpha]_{D}-55,8° (c = 1, CHCl_{3}) CI MS (m/z): 380 (M^{+} = 1); ^{1}H RMN: 2,28(3s, 9H, C2', C4', C6'-CH_{3}).
El compuesto (-)-fenilcarbamoileserolina comparativo ((-)-fenserina) se proporcionó como sigue.
Ejemplo D' (-)-Fenilcarbamoileserolina
Se disolvió (-)-Eserolina 0 (0,12 g, 0,55 mmol) en Et_{2}O anhidro (10 ml) y se añadió un trozo pequeño de Na metálico. Tras agitar durante aproximadamente 2 minutos a temperatura ambiente bajo nitrógeno, se añadió fenilisocianato (0,09 g/ 0,70 mmol) gota a gota. Tras completar la adición el disolvente se evaporó inmediatamente. Al residuo se le aplicó una cromatografía flash sobre una columna de gel de sílice (sistema B) para dar (-)-fenilcarbamoileserolina mp(°C) 142-143 (0,88g, 46%); [\alpha]_{D}-74,2° (c = 1 CHCl_{3}), CI MS (m/z): 338; ^{1}H RMN 7,01 (t = 7,4, 1H, C4'-H), 7,22 (t, J7,4, 2H, C3'-H, C5'-H), 7,34 (d, J = 7,4, 2H, C2'-H, C6'-H). El nombre común para este compuesto es (-)-fenserina.
Los números de compuesto en las Tablas 2 y 4 se corresponden entre sí y a los Ejemplos anteriores. El Ejemplo Comparativo D' es (-)-Fenserina.
La siguiente Tabla 4 muestra los datos físicos importantes para los compuestos de acuerdo con la invención, que corresponden a los números de compuesto de la Tabla 2.
TABLA 4 Valores IC_{50} de Fenilcarbamatos de (-)-Eserolina, (-)-Fisovenol, y (-)-N^{1}-Noreserolina frente a Eritrocito Humano AChE y Plasma Humano BChE
No. \hskip17mm AChE IC_{50} [nmol] BChE
Estándards biológicos
A fisostigmina 27,9 \pm 2,4 16,0 \pm 2,9
B N'norfisostigmina 21,0 \pm 1,0 2,0 \pm 1,0
C fisovenina 27,1 \pm 0,8 3,7 \pm 1,4
D' fenserina 24,0 \pm 6,0 1300 \pm 85,0
TABLA 4 (continuación)
No. \hskip17mm AChE IC_{50} [nmol] BChE
Ejemplos
Ej. 13 10,3 \pm 1,6 1948,5 \pm 245,5
Ej. 14 13,6 \pm 1,0 1817,0 \pm 558,5
Ej. 15 9,7 \pm 0,7 2916,0 \pm 537,0
Ej. 16 15,5 \pm 1,3 647,8 \pm 46,2
Ej. 17 17,0 \pm 0,2 2165,0 \pm 85,0
Ej. 18 17,3 \pm 1,2 1139,0 \pm 26,0
Ej. 19 13,8 \pm 0,7 612,0 \pm 0,4
Compuestos inactivos
Ej. A' 139,2 \pm 3,7 251,1 \pm 8,6
Ej. B' 1493,7 \pm 49,8 1073,5 \pm 48,0
Ej, C' 1291,9 \pm73,8 1817,0 \pm 885,0
Ensayo in vitro de la actividad de anti-AChE y -BChE humano, IC_{50}
Se realizó un ensayo clásico de inhibición de enzima para cuantificar la actividad de los derivados contra el AChE y el BChE. La actividad de la anti-colinesterasa se determinó contra AChE de eritrocito humano y BChE de plasma en 0,1 M de Na_{3}PO_{4} tampón (pH 8,0) utilizando el procedimiento espectrofotométrico de Ellman y otros (Biochem Pharmacol. 7:88, 1961). El plasma recién recogido fue diluido 1,125 con 0,1 M de Na_{3}PO_{4} (pH 7,4) y los eritrocitos lisados fueron diluidos de manera similar a 1:200. Se utilizó acetil-B-metiltiocolina (0,5 mM) y s-butiriltiocolina (0,5 mM) como sustratos específicos para el AChE y el BChE, prespectivamente, 25 \mul de sustrato y 25 \mul de enzima en un volumen total de 0,75 ml.
Los derivados de la fisostigmina, diluidos en medios intervalos log hasta una gama de concentraciones de entre 1x10^{-5} M y 3x10^{-10} M, se preincubaron con enzima (30 minutos a 21°C) antes de la adición de sustratos. Tras la incubación (30 minutos a 37°C), la producción de un anión de tionitrobenzoato amarillo se midió con un espectrómetro ajustado a una longitud de onda de 412 nm. Se determinó hidrólisis de substrato no específico bajo condiciones de inhibición de enzima completa (mediante la adición de fisostigmina 1x10^{-5} M), y el cambio asociado a la absorción sustraída de la que se observa con los compuestos de prueba. Finalmente, la actividad de cada compuesto fue evaluada junto a la de la fisostigmina, como un estándar externo, de cuya actividad ya se ha informado anteriormente (Atack y otros, J. Pharm. Expl. Ther. 249:294, 1989).
La actividad del AChE y el BChE de cada componente se expresó como un IC_{50}r que se define como la concentración en nmoles que se necesita para inhibir un 50% de actividad de enzima (calculada como describe Atack y otros, J. Pharm. Expl. Ther. 249:294, 1989).
Estudios de duración de la actividad in vivo
Se dispusieron catéteres, llenados con una solución salina heparinizada, en la vena femoral derecha y en la arteria de ratas macho anestesiadas, que después se dispusieron en un molde de yeso y se dejaron recuperar de la anestesia en un recinto de temperatura controlada. Se extrajeron muestras de plasma para cuantificar los niveles no tratados de actividad de AChE. A los 90 minutos después de la cirugía se administró bromuro de hexametonio (5 mg/Kg, i. p.), seguido de metilbromuro de atropina (4 mg/Kg, s.c.) 10 minutos más tarde. Estos antagonistas nicotínicos y muscarínicos cuaternarios no entran en el cerebro e inhiben la gran actividad colinérgica periférica asociada a la inhibición de la colinesterasa, que puede ser perjudicial para el animal. Dos horas tras la intervención quirúrgica, la (i) fisostigmina, o bien (ii) los derivados de la fisostigmina, o bien (III) el THA se administró por vía intravenosa. Se extrajeron muestras de plasma a intervalos entre 2 minutos y 8 horas, se congelaron inmediatamente a -70°C y se analizó la inhibición de la colinesterasa. La inhibición del AChE se midió tal como se ha descrito anteriormente, con las modificaciones necesarias para la cuantificación a partir del plasma de rata.
Todos los fármacos se formularon de manera compatible con la administración por vía intravenosa. En particular, los fármacos se disolvieron en Tween 80/EtOH (3:1, V:V), aproximadamente 100 \mul, y después se diluyeron en exceso de 1:9 (V:V) con una solución salina isotónica. El empleo de Tween 80/EtOH no afectó la actividad inhibidora del AChE ni del BChE de los compuestos en los estudios in vitro (Yu y otros, Helv. Chim. Acta 74, páginas 761-766, (119)). Las dosis se determinaron en estudios anteriores que implicaban la medición de la temperatura y el temblor rectal; dos acciones mediadas centralmente de inhibidores de colinesterasa y agonistas colinérgicos.
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La figura n° 1 demuestra la inhibición in vivo de la enzima acetilcolinesterasa (AChE) por la fisostigmina y su derivado 2', 4'-dimetilfenil carbamato, es decir, la actividad que depende del tiempo de estos inhibidores de la colinesterasa en las ratas. Tal como se prevé de los estudios de IC_{50} in vitro, la fisostigmina y los carbamatos fenilo sustituidos a los cuales se refiere esta patente (que se representan en este caso por 2', 4'-dimetilfenil fisostigmina) presentan unas excelentes propiedades inhibidoras de la colinesterasa in vivo. Sin embargo, la duración de la inhibición de la enzima es corta seguida de un bolus intravenoso de fisostigmina. Considerando que se produjo una inhibición máxima de un 46% en dos minutos de administración, ésta disminuyó rápidamente a un 25% en 15 minutos y era insignificante en una hora. Una dosis igual de 2'4'-metilfenil carbamato produjo una inmediata inhibición de un 60% de AChE en dos minutos. Esto se mantuvo en un nivel estacionario durante dos horas y después disminuyó lentamente a una inhibición de un 36% en 8 horas. La elevada actividad, especificidad y persistencia del 2'4'-dimetilfenil fisostigmina, que se consigue sin efectos secundarios o toxicidad, es sorprendente y soporta la discusión de que estos compuestos representan una clase de inhibidores de colinesterasa potentes, nuevos y selectivos.

Claims (20)

1. Compuesto según la fórmula:
1
caracterizado en que R^{1} es H o un grupo -CH_{3},
R^{2} es C_{1}-C_{3} alquil de cadena lineal o ramificada,
R^{3} es H o C_{1}-C_{3} alquil lineal o ramificado,
y sales farmacéuticamente aceptables.
2. Compuesto según la reivindicación 1, caracterizado en que R^{1} es hidrógeno.
3. Compuesto según la reivindicación 1, caracterizado en que R^{1} es -CH_{3}.
4. Compuesto seleccionado de:
(-)-2' -metilfenilcarbamoileserolina;
(-)-2', 4' -dimetilfenilcarbamoileserolina;
(-)-2' -etilfenilcarbamoileserolina;
(-)-2' -isopropilfenilcarbamoileserolina;
(-)-2' -metilfenilcarbamoil-N1-noreserolina;
(-)-2', 4' -dimetilfenilcarbamoil-N1-noreserolina;
(-)-fenilcarbamoil-N1-noreserolina;
y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
5. (-)-2' -metilfenilcarbamoileserolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
6. (-)-2', 4' -dimetilfenilcarbamoileserolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
7. (-)-2' -etilfenilcarbamoileserolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
8. (-)-2' -isopropilfenilcarbamoileserolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
9. (-)-2' -metilfenilcarbamoil-N1-noreserolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
10. (-)-2', 4' -dimetilfenilcarbamoil-N1-noreserolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
11. (-)-fenilcarbamoil-N1-noreserolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
12. Composición farmacéutica que comprende una cantidad farmacéuticamente efectiva de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 y un excipiente.
13. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o composición según la reivindicación 12 para su uso en el tratamiento de afecciones colinérgicas.
\newpage
14. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o composición según la reivindicación 12 para su uso en el tratamiento del glaucoma, Miastemia Gravis o la enfermedad de Alzheimer.
15. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o composición según la reivindicación 12 para la inhibición de la actividad de la acetilcolinesterasa.
16. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o composición según la reivindicación 12 para el tratamiento de la intoxicación de organofosfato en un mamífero.
17. Utilización de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o una composición según la reivindicación 12 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de afecciones colinérgicas.
18. Uso según la reivindicación 17, caracterizado en que el compuesto se administra por vía transdérmica.
19. Utilización de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o una composición según la reivindicación 12 en la preparación de un medicamento para el tratamiento del glaucoma, Miastemia Gravis o la enfermedad de Alzheimer.
20. Utilización de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o una composición según la reivindicación 12 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la intoxicación de organofosfato en un mamífero.
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