EP2197437A1 - Utilisation de l'oleocanthal pour le traitement des troubles du metabolisme lipidique - Google Patents

Utilisation de l'oleocanthal pour le traitement des troubles du metabolisme lipidique

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Publication number
EP2197437A1
EP2197437A1 EP08851263A EP08851263A EP2197437A1 EP 2197437 A1 EP2197437 A1 EP 2197437A1 EP 08851263 A EP08851263 A EP 08851263A EP 08851263 A EP08851263 A EP 08851263A EP 2197437 A1 EP2197437 A1 EP 2197437A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
oleocanthal
treatment
olive oil
extract
derivative
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP08851263A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Cyril Estanove
François PRUVOST
Jean-Claude Allart
Frédéric SALDMANN
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Bc Development Sa
Sprim
Original Assignee
Bc Development Sa
Sprim
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Filing date
Publication date
Application filed by Bc Development Sa, Sprim filed Critical Bc Development Sa
Publication of EP2197437A1 publication Critical patent/EP2197437A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/216—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acids having aromatic rings, e.g. benactizyne, clofibrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism

Definitions

  • the present invention relates to a new use of oleocanthal, more particularly olive oil extracts containing oleocanthal and derivatives, for the preparation of a medicament useful in therapeutics and nutraceuticals for the treatment of disorders of lipid metabolism.
  • Obesity is now a major public health problem worldwide, particularly in North America, due to genetic predisposing factors, sedentary lifestyles and unbalanced diets. According to the World Health Organization (WHO, 2002) one billion people worldwide are overweight, including 300 million in obesity, and these numbers are increasing in many countries. Obesity is known to significantly increase the risk of type 2 diabetes, hyperlipidemia, insulin resistance, osteoarthritis and cardiovascular disease, including high blood pressure and atherosclerosis. Overweight can lead to the same risks, although they are lower, but can also escalate into obesity. It is also known that overeating in obese or overweight people can lead to significant lipid and protein damage. Obesity and overweight also have a negative impact on the psychological behavior of those who are affected.
  • the prescription of physical exercises and appropriate dietary regimes is generally the first way to combat obesity and overweight.
  • Various drugs have also been proposed to treat obesity, for example anorectics such as sibutamine hydrochloride and rimonabant, or gastrointestinal lipase inhibitors. These drugs, however, have side effects that limit its use.
  • Olive oil especially virgin olive oil, contains especially monounsaturated fatty acids
  • phenolic acid as well as phenolic compounds with antioxidant properties which have the effect of retarding the oxidation of LDL lipoproteins.
  • phenolic compounds there are phenolic alcohols such as tyrosol and hydroxytyrosol, benzoic acids, caffeic and elenolic acids esterified with tyrosol and hydroxytyrosol, as well as flavonoids such as flavones and flavonols.
  • Epidemiological studies have shown the health benefits of mediterranean dietary regimes. containing a high intake of fiber, fruit, vegetables, and olive oil which is the main source of fat. For example, RW Owen et al., Lancet Oncol. (Oct. 2000) 107-12.
  • Andrewes et al. J. Agric. Food Chem. 51: 5, 1415-1420
  • deacetoxy ligstroside aglycone also called oleocanthal
  • deacetoxy ligstroside aglycone also called oleocanthal
  • COX1 and COX2 enzymes that is to say anti-inflammatory properties similar to those of ibuprofen, a molecule used for many years as a non-steroidal anti-inflammatory drug.
  • oleocanthal are also described in WO 2006/122128 which contemplates a variety of conditions that can be treated, given these anti-inflammatory properties.
  • oleocanthal could be considered in the indications of ibuprofen, that is to say as a general anti-inflammatory, orally, likely to be useful in rheumatology.
  • WO 2007/081808 also contemplates a large number of conditions where isolated and purified oleocanthal, as well as certain derivatives, could be useful because of this anti-HSL property, by Examples include osteoarthritis, hypercholesterolemia, heart failure, thrombosis, hyperglycemia, prostate cancer, seborrheic dermatitis, etc. These hypotheses, however, remain to be verified.
  • Oleocanthal or deacetoxy-ligstroside aglycone, has been detected in olive oils of various origins, especially in virgin olive oil obtained by first cold pressing, at very low concentrations which generally vary from at 200 ppm (mass), ie from 0.002 to 0.02% by weight, depending on the source of the olive oil.
  • Oleocanthal may be represented by the following general formula (I):
  • Oleuropein which is found in fruits and mainly in olive leaves, is a glycoside represented by the following general formula (II):
  • oleuropein in food or pharmaceutical compositions for stimulating bone mineralization in humans or animals has been proposed in WO 2004091591.
  • the antiviral activity of certain oleuropein derivatives has also been described in US Pat. US Patent 6,455,580.
  • Derivatives such as oleuropein aglycone, having antioxidant properties, and its dialdehyde form can also be extracted from olive oil.
  • R is a hydrogen atom or a hydroxy group
  • oleocanthal is a very fragile product, easily destroyed by heat and oxidation, as are most of the other polyphenolic compounds naturally present in vegetable oils.
  • the subject of the present invention is therefore the use of olive oil extracts containing derivatives of general formula (A) below.
  • R represents a hydrogen atom or a hydroxy group, as well as extracts containing them, for the preparation of a medicament for the treatment of disorders of lipid metabolism.
  • the invention more particularly relates to the use of the oleocanthal represented by the general formula (A) above, wherein R is a hydrogen atom.
  • the subject of the invention is also the use of an olive oil extract containing a derivative of general formula (A) above, more particularly the use of an extract enriched in oleocanthal, for the preparation of a drug or a drug, especially for the treatment of overweight and obesity.
  • the extract used in the invention may contain not only oleocanthal but also an oleuropein derivative, especially the dialdehyde form of decarboxymethyl oleuropein aglycone represented by formula (A) above where R is a hydroxy group.
  • Oleocanthal containing extracts are particularly useful in the treatment of overweight and resulting metabolic disorders, including conditions such as obesity and related diseases, particularly type 2 diabetes mellitus, insulin resistance, atherosclerosis.
  • the studies conducted by the applicant showed that the compositions based on 1 oleocanthal the present invention exert a direct action on lipid metabolism, resulting in a decreased uptake of fats, more particularly circulating fatty acids, by the adipocytes.
  • oleocanthal at concentrations of 0.3 and 1.0 ⁇ g / ml in the extract of the invention, over a period of 24 hours, has the effect of reducing the release of the oleate on the lower side of the intestinal barrier, with an inhibition rate of 43% and 45% respectively. This shows that oleocanthal, in vivo, could decrease the passage of lipids ingested in the blood.
  • oleocanthal enriched extract does not cause inhibition of the formation of new adipocytes, nor the neosynthesis of lipids by these cells.
  • concentrations of 0.3 and 1.0 ⁇ g / ml it limits the storage of lipids by decreasing the incorporation of circulating fatty acids into the adipocytes. Since this phenomenon is the major mechanism of accumulation of subcutaneous fat, it appears that oleocanthal can be effective as a component of drug or food administered as part of a slimming treatment.
  • the oleocanthal of the invention may be used in the form of olive oil extract with a high oleocanthal content, for example of the order of 10% to 30% by weight, as a diet dietary supplement intended for subjects who are overweight. Extracts with a higher concentration of oleocanthal, of the order of 50 to 90% by weight, can be prepared for specific applications.
  • the dialdehyde concentration of the decarboxymethyl oleuropein aglycone, when the extract contains, is generally between 1 and 15%.
  • the present invention also has the advantage of allowing an effective treatment of the lipid metabolism disorders mentioned above by means of an oleocanthal enriched extract whose preparation cost is considerably lower than that of the isolated and purified oleocanthal obtained by synthesis.
  • the oleocanthal compositions according to the present invention can be administered orally using suitable formulations, and more particularly by means of drops, capsules or soft capsules.
  • the capsules or capsules may be gelatin-based, prepared according to conventional techniques.
  • the unit doses used may be of the order of 0.1 to 50 mg, and preferably between 1 and 25 mg of derivative of formula (A), especially oleocanthal.
  • the dosage is chosen by the practitioner according to the condition of the patient and the intended purpose, but is generally between 5 and 25 mg of oleocanthal per day for an adult.
  • a treatment adapted to an average case may consist in administering one to three capsules of 25 mg of 10% oleocanthal extract per day.
  • the duration of the treatment is adapted to the state of the patient and for example, for a patient having an established overweight with tendency to obesity, the treatment may consist in administering a capsule of 25 mg of 10% extract.
  • the treatment can be strengthened and extended for an obese patient, and it can be for example 2 or 3 capsules
  • the treatment is usually one capsule per day with no time limit. In the latter case, such treatment with oleochal may limit or delay or even avoid conventional insulin treatment.
  • a 10% oleocanthal extract is prepared from a virgin olive oil, first cold pressed, of Pietra Pinta origin whose oleocanthal content is about 48 mg / kg.
  • the oil is extracted with an ethanol / water mixture, the hydroalcoholic phase is washed with hexane, preconcentrated and extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate phase is then concentrated to dryness.
  • An extract containing approximately 10% oleocanthal in the oily phase comprising in particular:
  • the oleuropein derivative indicated above is constituted by the dialdehyde form of decarboxymethyl oleuropein aglycone.
  • the extract still contains a few percent of oleocanthal (molecular weight 362) and oleuropein derivatives.
  • This extract is packaged in gelatin-based soft-walled capsules according to a conventional technique, each capsule containing 25 mg of extract.
  • a 30% oleocanthal extract is prepared from a first cold pressed virgin olive oil of Campione origin with an oleocanthal content of about 212 mg / kg.
  • the oleuropein derivative indicated above is the same as in Example 1.
  • the extract still contains a few percent of derivatives of oleocanthal (molecular weight 362) and oleuropein (molecular weight 378).
  • a sample to 50% 1 oleocanthal is prepared from the extract of Example 2, and purified by preparative chromatography.
  • This extract which contains about 10% of oleuropein derivative and less than 10% of pinoresinols, is packaged in soft capsules according to the same technique as in Example 1, in order to prepare capsules with a high oleocanthal content, intended for treatment of obese patients.
  • oleocanthal extracts according to the invention were studied on the differentiation of adipocytes, on lipogenesis and on the storage of circulating lipids.
  • the tests were carried out using three extracts whose oleocanthal content was respectively 1 ⁇ g / ml, 0.3 ⁇ g / ml and 0.1 ⁇ g / ml.
  • the reference molecules used are TNF ⁇ , which is an inhibitor of adipocyte differentiation, and cerulenin, which is an inhibitor of lipogenesis.
  • the cells used are pre-adipocytes of mouse of line 3T3-L1 grown at confluence in DMEM growth medium. At high confluence, the culture medium was replaced by differentiation medium (DMEM containing differentiating molecules). Control cultures were carried out throughout the duration of the experiment (undifferentiated controls). After differentiation, the cells were transferred to post-differentiation medium (growth medium + insulin) and then incubated for 48 h at 37 ° C. and 5% CO 2 .
  • adipocyte differentiation For the measurement of adipocyte differentiation, after incubation, the post-differentiation medium was removed, and the cells were incubated in DMEM growth medium for 24 h and 5% CO 2 . After removal of the culture supernatants, the cells were rinsed in PBS and intracellular lipids were stained by Adipored (BioWhittaker PT-7009).
  • the same manipulations are performed but after incubation, the post-differentiation medium was removed, and the cells were incubated in the DMEM growth medium supplemented with the [ 14 C] oleate radioactive marker. (Biotrend CFA243) for 48 hours and 5% CO 2 .
  • the adipocytes were washed and the lipids were extracted according to the Bligh and Dyer protocol, dried under nitrogen, and the radioactivity was measured by liquid scintillation (LKB Rackbeta counter).
  • Inv. oleocanthal of the invention.
  • the study was made by measuring the passage kinetics of oleic acid in the presence of Oleocanthal of the invention in the intestinal epithelial barrier model reconstructed from cells of Caco2 line.
  • Caco2 cells were seeded on Millicell 24 inserts (Millipore) in MEM culture medium. At nearly two weeks of culture, by renewing the inserts and the culture medium daily, the integrity of the epithelial barrier obtained was verified by electrical resistance measurements. A solution of [ 14 C] oleate at 2 ⁇ Ci / ml in a 10 mM taurocholate buffer in PBS at pH 7.4 was deposited at the surface of the inserts in the presence of oleocanthal of the invention. The same test without oleocanthal is carried out as a control.
  • the oleocanthal according to the invention was tested at concentrations of 0.1 ⁇ g / ml, 0.3 ⁇ g / ml and 1 ⁇ g / ml, as indicated in the table above.
  • the percentage indicated is calculated relative to the witness.

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Abstract

L'invention concerne une nouvelle utilisation d'extraits d'huile d'olive comprenant des dérivés de formule (A), dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, dans la préparation d'un médicament ou d'un alicament pour le traitement d'affections du métabolisme lipidique telles que surcharge pondérale et obésité.

Description

UTILISATION DE L ' OLEOCANTHAL POUR LE TRAITEMENT DES TROUBLES DU METABOLISME LIPIDIQUE
La présente invention concerne une nouvelle utilisation de 1 ' oléocanthal, plus particulièrement d'extraits de l'huile d'olive contenant de l ' oléocanthal et des dérivés, pour la préparation d'un médicament utile en thérapeutique et en nutraceutique pour le traitement de troubles du métabolisme lipidique .
L'obésité constitue aujourd'hui un problème majeur de santé publique dans le monde, en particulier en Amérique du Nord, en raison de facteurs de prédisposition génétiques, des modes de vie sédentarisés et de régimes nutritionnels déséquilibrés. Selon l'Organisation Mondiale de la Santé (OMS, 2002) un milliard de personnes dans le monde seraient en surpoids dont 300 millions en état d'obésité, et ces chiffres sont en augmentation dans de nombreux pays. On sait que l'obésité augmente de manière significative les risques de diabète de type 2, d' hyperlipidémie, de résistance à l'insuline, d'arthrose et de maladies cardiovasculaires, notamment d'hypertension artérielle et d'athérosclérose. La surcharge pondérale peut entraîner les mêmes risques, bien qu'ils soient moins élevés, mais elle peut aussi dégénérer en obésité. On sait aussi qu'une alimentation excessive, chez les personnes obèses ou présentant une surcharge pondérale établie, peut entraîner des dommages lipidiques et protéiques importants. L'obésité et la surcharge pondérale ont aussi des conséquences néfastes sur le comportement psychologique des personnes qui en sont affectées.
Les liens entre l'obésité et la réponse inflammatoire ont fait l'objet de nombreuses études. Ainsi, on a constaté qu'une alimentation excessive et la consommation de certains nutri- ments peut déclencher des médiateurs impliqués dans le mécanisme de l'inflammation. L'obésité, la résistance à l'insuline et le diabète de type 2 sont liés à une inflam- mation chronique caractérisée par une production anormale de cytokines proinflairanatoires comme le TNFα qui est présent à un taux élevé dans les tissus adipeux des obèses. Un signal métabolique tel qu'un excès alimentaire lipidique provoque la mise en éveil des adipocytes, entraînant une augmentation de la masse graisseuse, qui déclenche une réponse inflammatoire au niveau du réticulum endoplasmique et la production de TNFα qui, après infiltration macrophagique, entraîne une pertur¬ bation des mécanismes de régulation de l'organisme et une augmentation du stress métabolique, qui à son tour entraîne une réaction inflammatoire chronique. Une prise en charge thérapeutique de ces troubles doit tenir compte de ces mécanismes .
La prescription d'exercices physiques et de régimes diététiques appropriés est généralement le premier moyen de lutte contre l'obésité et la surcharge pondérale. Divers médicaments ont aussi été proposés pour traiter l'obésité, par exemple des anorexigènes tels que le chlorhydrate de sibu- tramine et le rimonabant, ou encore des inhibiteurs de lipases gastro-intestinales. Ces médicaments présentent cependant des effets secondaires qui en limitent l'utilisation.
Il est donc souhaitable de mettre au point de nouveaux médicaments et alicaments susceptibles de participer au traitement de la surcharge pondérale et de l'obésité. L'huile d'olive, et en particulier l'huile d'olive vierge, contient notamment des acides gras mono-insaturés
(acide oléique) ainsi que des composés phénoliques à propriétés anti-oxydantes qui ont pour effet de retarder l'oxydation des lipoprotéines LDL. Parmi ces composés phéno- liques, on distingue des alcools phénoliques tels que le tyrosol et l ' hydroxytyrosol, des acides benzoïques, des acides caféique et élénolique estérifiés par le tyrosol et 1 ' hydroxytyrosol, ainsi que des flavonoïdes tels que des flavones et flavonols. Des études épidémiologiques ont montré les effets bénéfiques pour la santé des régimes diététiques méditerra- néens comprenant un apport élevé en fibres, fruits, légumes, et en huile d'olive qui constitue la source principale de matière grasse. On peut se référer par exemple à RW Owen et al., Lancet Oncol. (Oct. 2000) 107-12. P. Andrewes et al., J. Agric. Food Chem. 51:5, 1415-1420
(2003), ont montré que l'huile d'olive contient un dérivé phénolique particulier, à savoir la deacetoxy ligstroside aglycone, qui est responsable de son goût typique. G. K.
Beauchamp et al. Nature, vol. 437, 45-46 (Sept. 2005), ont montré que la deacetoxy ligstroside aglycone, aussi dénommée oléocanthal, contenue dans l'huile d'olive vierge obtenue par première pression à froid, présente des propriétés inhibi- trices des enzymes COXl et COX2, c'est-à-dire des propriétés anti-inflammatoires voisines de celles de l' ibuprofène, molécule utilisée depuis de nombreuses années comme médicament anti-inflammatoire non-stéroidien. Ces propriétés de 1 'oléocanthal sont aussi décrites dans WO 2006/122128 qui envisage un diverses affections susceptibles d'être traitées, compte tenu de ces propriétés anti-inflammatoires. Ces propriétés montrent essentiellement que l ' oléocanthal pourrait être envisagé dans les indications de l ' ibuprofène, c'est-à-dire comme anti-inflammatoire général, par voie orale, susceptible d'être utile en rhumatologie.
Ces propriétés ont suscité des recherches pour préparer de 1 ' oléocanthal par synthèse afin d'obtenir un produit isolé et purifié exempt de tout produit secondaire. Ainsi, la demande WO 2007/081808 décrit des schémas de synthèse de 1 ' oléocanthal obtenu sous forme d' énantiomère isolé et purifié dont l'activité inhibitrice de la lipase sensible aux hormones (anti-HSL) est mise en évidence et comparée à celle de l'insuline, ce qui devrait permettre une utilisation dans le traitement du diabète non insulino-dépendant . La demande WO 2007/081808 envisage aussi un grand nombre d'affections où 1 Oléocanthal isolé et purifié, ainsi que certains dérivés, pourrait être utile en raison de cette propriété anti-HSL, par exemple l'arthrose, l ' hypercholestérolémie, l'insuffisance cardiaque, les thromboses, l'hyperglycémie, le cancer de la prostate, la dermite séborrhéique, etc. Ces hypothèses restent cependant à vérifier.
L'oléocanthal, ou deacetoxy-ligstroside aglycone, a été détecté dans des huiles d'olive de diverses provenances, plus particulièrement dans l'huile d'olive vierge obtenue par première pression à froid, à des concentrations très faibles qui varient généralement de 20 à 200 ppm (masse) , soit de 0,002 à 0,02% en poids, en fonction de la provenance de l'huile d'olive.
L'oléocanthal peut être représenté par la formule générale (I) suivante :
L 'oleuropéine, que l'on trouve dans les fruits et principalement dans les feuilles de l'olivier, est un glyco- side représenté par la formule générale (II) ci-dessous :
)
L'utilisation de 1 ' oleuropéine dans des compositions alimentaires ou pharmaceutiques afin de stimuler la minéralisation osseuse chez l'homme ou l'animal a été proposée dans WO 2004091591. L'activité antivirale de certains dérivés d'oleuropéine a aussi été décrite dans le brevet US 6.455.580. Des dérivés tels que 1 ' oleuropéine aglycone, présentant des propriétés anti-oxydantes, et sa forme dialdéhydique peuvent aussi être extraits de l'huile d'olive.
Parmi les autres dérivés d'intérêt que contient l'huile d'olive, on peut citer les formes aldéhyde de 1 ' oleuropéine aglycone et du ligstroside aglycone, représentées par la formule (III) ci-dessous,
dans laquelle R est un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, et la forme dialdéhyde de la décarboxyméthyl oleuropéine agly- cône représentée par la formule (IV) .
Une utilisation pharmaceutique de ces composés requiert l'obtention de fractions relativement concentrées. De plus, l'oléocanthal est un produit très fragile, facilement détruit par la chaleur et par oxydation, comme le sont d'ailleurs la plupart des autres composés polyphénoliques naturellement présents dans les huiles végétales.
Ces dérivés, ainsi que l'oléocanthal, participent aux propriétés utiles de l'huile d'olive et pour cette raison divers procédés d'extraction ont été mis au point pour les isoler ou pour produire des extraits enrichis en l'un ou l'autre ou plusieurs de ces dérivés.
Les études effectuées par la demanderesse ont montré de manière étonnante que des extraits d'huile d'olive contenant ces dérivés, et tout particulièrement l'oléocanthal et certains dérivés, présentent des propriétés intéressantes permettant de les utiliser en thérapeutique et en nutra- ceutique pour réguler ou restaurer le métabolisme lipidique.
La présente invention a donc pour objet l'utilisation d'extraits d'huile d'olive contenant des dérivés de formule générale (A) ci-après
dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, ainsi que des extraits les contenant, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des troubles du métabolisme lipidique.
L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation de 1 'oléocanthal représenté par la formule générale (A) ci- dessus, où R est un atome d'hydrogène.
L'invention a également pour objet l'utilisation d'un extrait d'huile d'olive contenant un dérivé de formule générale (A) ci-dessus, plus particulièrement l'utilisation d'un extrait enrichi en oléocanthal, pour la préparation d'un médicament ou d'un alicament, notamment pour le traitement des surcharges pondérales et de l'obésité. L'extrait utilisé dans l'invention peut contenir non seulement 1 ' oléocanthal mais aussi un dérivé d' oleuropéine, notamment la forme dialdéhyde de la décarboxyméthyl oleuropéine aglycone représentée par la formule (A) ci-dessus où R est un groupe hydroxy.
Les extraits contenant 1 Oléocanthal sont plus particu- lièrement indiqués dans le traitement de la surcharge pondérale et des troubles métaboliques en résultant, notamment des affections telles que l'obésité et les maladies qui lui sont liées, en particulier le diabète de type 2, la résistance à l'insuline, l'athérosclérose. Comme indiqué plus en détail ci-dessous, les études effectuées par le demandeur ont montré que les compositions à base d1 oléocanthal suivant la présente invention exercent une action directe sur le métabolisme lipidique, se traduisant par une diminution de la captation des lipides, plus particulièrement des acides gras circulants, par les adipocytes.
Les études effectuées ont montré que l ' oléocanthal, aux concentrations de 0,3 et 1,0 μg/ml dans l'extrait de l'invention, sur une durée de 24 h, a pour effet de diminuer le relargage de l'oléate à la face inférieure de la barrière intestinale, avec un taux d'inhibition de 43% et 45% respectivement. Ceci montre que 1 ' oléocanthal, in vivo, pourrait diminuer le passage des lipides ingérés dans le sang.
De plus, les études ont montré que l'extrait enrichi en oléocanthal ne provoque pas d'inhibition de la formation de nouveaux adipocytes, ni la néosynthèse de lipides par ces cellules. Par contre, aux concentrations de 0,3 et 1,0 μg/ml, il limite le stockage des lipides en diminuant l'incorporation des acides gras circulants dans les adipocytes. Etant donné que ce phénomène est le mécanisme majeur d'accumulation des graisses sous-cutanées, il apparaît que l ' oléocanthal peut être efficace comme composant de médicament ou d'alicament administré dans le cadre d'un traitement amincissant.
Enfin, les études ont mis en évidence une action de 1 ' oléocanthal sur les mécanismes inflammatoires impliqués dans les troubles métaboliques caractéristiques de l'obésité, de 1 ' insulino-résistance et du diabète de type 2.
Ces études démontrent donc l'intérêt de l'action de l' oléocanthal sur les gènes induits par le TNFα, permettant d'en limiter les effets néfastes par une modulation du système des kinases dont le rôle est crucial dans l'action de l'insuline et la capture du glucose. Ces résultats montrent que 1 Oléocanthal peut être utilisé avantageusement dans des traitements destinés à maîtriser les conséquences des troubles nutritionnels chez les sujets obèses ou ayant tendance à le devenir .
L ' oléocanthal de l'invention peut être utilisé sous forme d'extrait d'huile d'olive à teneur élevée en oléocanthal, par exemple de l'ordre de 10% à 30% en poids, en complément alimentaire de régime diététique destiné à des sujets présentant une surcharge pondérale. Des extraits à plus forte concentration en oléocanthal, de l'ordre de 50 à 90% en poids, peuvent être préparés pour des applications spécifiques. La concentration en forme dialdéhyde de la décarboxyméthyl oleuropéine aglycone, quand l'extrait en contient, est généralement comprise entre 1 et 15% environ.
Les études effectuées ont aussi mis en évidence l'absence d'influence du taux d'humidité relative sur la stabilité dans le temps de l'extrait d'huile d'olive enrichi en oléocanthal de 1 ' invention et une influence modérée de la température selon la composition de l'extrait, ce qui facilite sa conservation et celle des compositions le contenant.
La présente invention présente aussi l'avantage de permettre un traitement efficace des troubles du métabolisme lipidique mentionnés ci-dessus au moyen d'un extrait enrichi en oléocanthal dont le coût de préparation est considérablement moins élevé que celui de 1 ' oléocanthal isolé et purifié obtenu par synthèse. Les compositions à base d' oléocanthal suivant la présente invention peuvent être administrées par voie orale en utilisant des formulations adaptées, et plus particulièrement au moyen de gouttes, gélules ou capsules molles. Les capsules ou gélules peuvent être à base de gélatine, préparées suivant les techniques classiques.
Les doses unitaires utilisées peuvent être de l'ordre de 0,1 à 50 mg, et de préférence entre 1 et 25 mg de dérivé de formule (A), notamment d Oléocanthal .
La posologie est choisie par le praticien en fonction de l'état du patient et de l'objectif visé, mais elle est généra- lement comprise entre 5 et 25 mg d'oléocanthal par jour pour un adulte. Ainsi, un traitement adapté à un cas moyen peut consister à administrer une à trois capsules de 25 mg d'extrait à 10% d'oléocanthal par jour. La durée du traitement est adaptée à l'état du patient et par exemple, pour un patient présentant , une surcharge pondérale établie avec tendance à l'obésité, le traitement peut consister à administrer une capsule de 25 mg d'extrait à 10% d'oléocanthal par jour pendant 1 à 2 mois, suivi d'un traitement d'entretien à raison de 1 à 3 capsules par semaine pendant 2 à 3 mois. Le traitement peut être renforcé et prolongé pour un patient obèse, et il peut être par exemple de 2 ou 3 capsules
(contenant des extraits à 10 ou 30% selon l'état du patient) par jour pendant 2 à 3 mois, suivi d'une capsule par jour pendant 3 à 6 mois. Pour un patient diabétique, le traitement est généralement d'une capsule par jour sans limitation de durée. Dans ce dernier cas, un tel traitement par l ' oléo- canthal peut limiter ou retarder, voire éviter un traitement classique à l'insuline. Plusieurs exemples de formulations adaptées à l'invention et des résultats expérimentaux sont indiqués ci-après à titre non limitatif.
Exemple 1
Un extrait à 10% d'oléocanthal est préparé à partir d'une huile d'olive vierge, première pression à froid, d'origine Pietra Pinta dont la teneur en oléocanthal est d'environ 48 mg/kg.
L'huile est extraite par un mélange éthanol/eau, la phase hydro-alcoolique est lavée à l'hexane, préconcentrée et extraite à l'acétate d'éthyle. La phase acétate d'éthyle est ensuite concentrée à sec.
On obtient ainsi un extrait contenant environ 10% d'oléocanthal en phase huileuse, comprenant notamment :
- oléocanthal env. 10% - dérivé d'oleuropéine env. 15%
- pinorésinols env. 10%
Le dérivé d'oleuropéine indiqué ci-dessus est constitué par la forme dialdéhyde de la décarboxyméthyl oleuropéine aglycone. L'extrait contient encore quelques pourcents de dérivés d' oléocanthal (masse moléculaire 362) et d'oleuropéine
(masse moléculaire 378) .
Cet extrait est conditionné en capsules molles à paroi à base de gélatine suivant une technique classique, chaque capsule contenant 25 mg d'extrait.
Exemple 2
Un extrait à 30% d' oléocanthal est préparé à partir d'une huile d'olive vierge, première pression à froid, d'origine Campione, dont la teneur en oléocanthal est d'environ 212 mg/kg.
L'huile est extraite par un mélange éthanol/eau, la phase hydro-alcoolique est lavée à l'hexane, préconcentrée et extraite à l'acétate d'éthyle. La phase acétate d'éthyle est ensuite concentrée à sec. On obtient ainsi un extrait contenant environ 30% d ' oléocanthal en phase huileuse, comprenant notamment :
- oléocanthal env. 30%
- dérivé d'oleuropéine env. 10%
- pinorésinols env. 12% Le dérivé d'oleuropéine indiqué ci-dessus est le même que dans l'Exemple 1. L'extrait contient encore quelques pourcents de dérivés d' oléocanthal (masse moléculaire 362) et d'oleuropéine (masse moléculaire 378) .
Cet extrait est conditionné en capsules de 25 mg comme dans l'Exemplel. Exemple 3
Un extrait à 50% d1 oléocanthal est préparé à partir de l'extrait de l'Exemple 2, et purifié par chromatographie préparative. Cet extrait , qui contient environ 10% de dérivé d'oleuropéine et moins de 10% de pinorésinols, est conditionné en capsules molles suivant la même technique que dans l'Exemple 1, afin de préparer des capsules à forte teneur en oléocanthal, destinées à des traitements de patients obèses.
Exemple 4
Les effets des extraits d' oléocanthal suivant l'invention ont été étudiés sur la différenciation des adipocytes, sur la lipogenèse et sur le stockage des lipides circulants.
Les essais ont été effectués en utilisant trois extraits dont la teneur en oléocanthal était respectivement de 1 μg/ml, 0,3 μg/ml et 0,1 μg/ml.
Les molécules de référence utilisées sont le TNFα, qui est un inhibiteur de la différenciation des adipocytes, et la cérulénine qui est un inhibiteur de la lipogenèse. Les cellules utilisées sont des pré-adipocytes de souris de lignée 3T3-L1 cultivées à confluence en milieu de croissance DMEM. A forte confluence, le milieu de culture a été remplacé par du milieu de différenciation (DMEM contenant des molécules différenciantes). Des cultures contrôles ont été réalisées pendant toute la durée de l'expérience (contrôles non différenciés). Après différenciation, les cellules ont été transférées en milieu post-différenciation (milieu de croissance + insuline) puis incubées pendant 48 h à 370C et 5% de CO2.
Pour la mesure de la différenciation d' adipocytes, après incubation, le milieu de post-différenciation a été éliminé, et les cellules ont été incubées dans le milieu de croissance DMEM pendant 24 h et 5% de CO2. Après élimination des surnageants de culture, les cellules ont été rincées en PBS et les lipides intracellulaires ont été colorés par l 'Adipored (BioWhittaker PT-7009) .
Pour la mesure du stockage des lipides circulants, les mêmes manipulations sont effectuées mais après incubation, le milieu de post-différenciation a été éliminé, et les cellules ont été incubées dans le milieu de croissance DMEM supplémenté avec le marqueur radioactif [14C] oléate (Biotrend CFA243) pendant 48 h et 5% de CO2. En fin d'incubation, les adipocytes ont été lavés et les lipides ont été extraits selon le proto- cole de Bligh et Dyer, séchés sous azote, et la radioactivité a été mesurée en scintillation liquide (compteur LKB Rackbeta) .
Les mesures ont aussi été faites simultanément sur un témoin (sans oléocanthal) . On a constaté que les cellules non différenciées étaient faiblement marquées, au contraire des cellules différenciées colorées par l 'Adipored. De nombreuses vésicules graisseuses caractéristiques de la différenciation des adipocytes étaient présentes. Les effets sur le stockage des lipides circulants ont été évalués en mesurant l'incorporation du [14C] oléate dans les adipocytes différenciés.
Comme le montrent les résultats du Tableau 1 ci-dessous, le traitement par le produit de référence, la céruline à 20 μM, a diminué significativement l'incorporation d Oléate dans les adipocytes. On constate aussi que 1 ' oléocanthal, à 1 et 0,3 μg/ml, a inhibé significativement l'incorporation d' oléate de manière dose-dépendante.
Tableau 1
Inv. = oléocanthal de l'invention.
Ces résultats montrent que 1 ' oléocanthal suivant la présente invention n'inhibe pas la formation de nouveaux adipocytes ni, de façon significative, la synthèse de lipides par ces cellules. Par contre, aux concentrations de 0,3 et 1 μg/ml il limite significativement le stockage des lipides dans les adipocytes. Etant donné que ce phénomène est le mécanisme majeur d'accumulation des graisses sous-cutanées, ces résultats démontrent l'intérêt de l ' oléocanthal de l'invention dans des traitements amincissants.
Exemple 5
Les effets des extraits d' oléocanthal de l'invention sur le passage des lipides à travers la barrière épithéliale intestinale ont été étudiés comme indiqué ci-après.
L'étude a été faite par mesure de la cinétique de passage de l'acide oléique en présence de 1 Oléocanthal de l'invention dans le modèle de barrière épithéliale intestinale recons- truite à partir de cellules de lignée Caco2.
Des cellules Caco2 ont été ensemencées sur des inserts Millicell 24 (Millipore) en milieu de culture MEM. A près deux semaines de culture, en renouvelant les inserts et le milieu de culture tous les jours, l'intégrité de la barrière épithé- liale obtenue a été vérifiée par des mesures de résistance électrique. Une solution de [14C] oléate à 2 μCi/ml dans un tampon taurocholate 10 mM dans le PBS à pH 7,4 a été déposée à la surface des inserts en présence d' oléocanthal de l'invention. Un même essai sans oléocanthal est effectué comme témoin.
On a prélevé 50 μl du compartiment apical (compartiment donneur) et 50 μl du compartiment basai (compartiment récepteur) à intervalles de temps réguliers (0, 30 min, I h, 2 h, 4 h, 6 h et 24 h) et la radioactivité présente a été mesurée en scintillation liquide.
Les résultats sont indiqués au Tableau 2 ci-après.
Tableau 2
30 min. 1 h 2 h
Cpm % Cpm % Cpm %
Témoin 2555 100 8525 100 12006 100
1 μg/ml 4624 181 7008 82 10555 88
0,3 μg/ml 4672 183 9015 106 9934 83
0, 1 μg/ml 9045 354 10675 125 13769 115
4 h 6 h 24 h
Cpm % Cpm % Cpm %
Témoin 19763 100 20657 100 47413 100
1 μg/ml 18714 95 18697 91 27178 57
0,3 μg/ml 17642 89 16503 80 26058 55
0, 1 μg/ml 17479 88 23739 115 44878 95
L 'oléocanthal selon l'invention a été testé aux concentrations de 0,lμg/ml, 0,3 μg/ml et 1 μg/ml, comme indiqué au tableau ci-dessus.
Le pourcentage indiqué est calculé par rapport au témoin.
Ces résultats montrent une diminution au cours du temps de la quantité de [14C] oléate présente au niveau du compartiment apical, parallèlement à une augmentation de la quantité de [14C] oléate dans le compartiment basai des inserts de culture. Cependant, il apparaît que la majorité de 1 ' oléate pénétrant dans les cellules se trouve métabolisée et ne ressort pas dans le compartiment basai. On constate que, dans les conditions de l'expérimentation, 1 ' oléocanthal de l'inven- tion, à la concentration de 0,1 μg/ml, ne modifie pas la pénétration de l'oléate dans la barrière Caco2. Par contre, aux concentrations de 0,3 et 1 μg/ml, il tend à diminuer le relargage de l'oléate du côté du compartiment basai de la barrière après 6 heures de culture.

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation d'un extrait d'huile d'olive comprenant au moins un dérivé de formule générale (A) ci-après
dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des troubles du métabolisme lipidique.
2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le dérivé est 1 ' oléocanthal représenté par la formule (A) où R est un atome d'hydrogène.
3. Utilisation selon la revendication 2, caractérisée en ce que l'extrait d'huile d'olive contient 10 à 30% en poids d' oléocanthal .
4. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que l'extrait contient en outre la forme dialdéhyde de la décarboxyméthyl oleuropéine aglycone .
5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'on utilise des doses unitaires comprises entre 1 et 25 mg de dérivé de formule (A) .
6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le médicament est destiné au traitement des surcharges pondérales et de l'obésité.
7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le médicament est destiné au traitement du diabète de type 2, de la résistance à l'insuline, et de l'athérosclérose.
8. Utilisation d'un extrait d'huile d'olive comprenant un dérivé de formule générale (A) suivant la revendication 1, pour la préparation d'un alicament pour le traitement des surcharges pondérales.
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