EP1848411A2 - Copolyhydroxyalkylglutamines fonctionnalises par des groupements hydrophobes et leurs applications notamment therapeutiques - Google Patents

Copolyhydroxyalkylglutamines fonctionnalises par des groupements hydrophobes et leurs applications notamment therapeutiques

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Publication number
EP1848411A2
EP1848411A2 EP06707793A EP06707793A EP1848411A2 EP 1848411 A2 EP1848411 A2 EP 1848411A2 EP 06707793 A EP06707793 A EP 06707793A EP 06707793 A EP06707793 A EP 06707793A EP 1848411 A2 EP1848411 A2 EP 1848411A2
Authority
EP
European Patent Office
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copolyhydroxyalkylglutamine
hydrophobic
group
hydrophobic groups
groups
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP06707793A
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German (de)
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Inventor
Rémi SOULA
You-Ping Chan
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Flamel Technologies SA
Original Assignee
Flamel Technologies SA
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Filing date
Publication date
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Withdrawn legal-status Critical Current

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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C01INORGANIC CHEMISTRY
    • C01GCOMPOUNDS CONTAINING METALS NOT COVERED BY SUBCLASSES C01D OR C01F
    • C01G23/00Compounds of titanium
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/84Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds obtained by reactions otherwise than those involving only carbon-carbon unsaturated bonds
    • A61K8/88Polyamides
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
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    • B82NANOTECHNOLOGY
    • B82BNANOSTRUCTURES FORMED BY MANIPULATION OF INDIVIDUAL ATOMS, MOLECULES, OR LIMITED COLLECTIONS OF ATOMS OR MOLECULES AS DISCRETE UNITS; MANUFACTURE OR TREATMENT THEREOF
    • B82B3/00Manufacture or treatment of nanostructures by manipulation of individual atoms or molecules, or limited collections of atoms or molecules as discrete units
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
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    • C08GMACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G69/00Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain of the macromolecule
    • C08G69/02Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids
    • C08G69/08Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids derived from amino-carboxylic acids
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    • C08G69/00Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain of the macromolecule
    • C08G69/48Polymers modified by chemical after-treatment
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    • C08L77/00Compositions of polyamides obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain; Compositions of derivatives of such polymers
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    • A61K2800/00Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/57Compounds covalently linked to a(n inert) carrier molecule, e.g. conjugates, pro-fragrances

Definitions

  • the present invention relates to novel biodegradable materials based on copolyamino acids, useful in particular for the vectorization of active principle (s) (PA).
  • PA active principle
  • the invention also relates to novel pharmaceutical, cosmetic, dietetic or phytosanitary compositions based on these modified polyamino acids.
  • These compositions may be of the type of those allowing the vectorization of AP and are preferably in the form of emulsions, micelles, particles, gels, implants or films.
  • the PAs considered are, advantageously, biologically active compounds that can be administered to an animal or human organism orally, parenterally, nasally, vaginally, ocularly, subcutaneously, intravenously, intramuscularly, intradermally, intraperitoneally, intracerebrally, orally, etc.
  • PAs more particularly, but not exclusively, concerned by the invention are proteins, glycoproteins, peptides, polysaccharides, lipopolysaccharides, oligo or polynucleotides, and organic molecules. But it can also be cosmetic products or phytosanitary products, such as herbicides, insecticides, fungicides, etc.
  • polymers of the polylactic, polylactic-glycolic, polyoxyethylene-oxypropylene, polyamino acid or polysaccharide type are raw materials for manufacturing, for example, mass implants, microparticles, nanoparticles, vesicles, micelles or gels.
  • these polymers must be suitable for the manufacture of such systems, they must also be biocompatible, non-toxic, non-immunogenic, economical and they must be easily removed from the body and / or be biodegradable. On this last aspect, it is moreover essential that the biodegradation in the organism generates non-toxic products.
  • an associative polymer Another equally important aspect in the development of an associative polymer is its solubility in water.
  • the possibility of solubilizing a high amount of polymer makes it possible to have a polymer / active ingredient ratio adapted to the desired release profile.
  • US-B-4,652,441 discloses polylactide microcapsules encapsulating the hormone LH-RH. These microcapsules are produced by preparing a water-in-oil-in-water emulsion and comprise an aqueous inner layer containing the hormone, a substance (gelatin) fixing the latter, an oily layer of polylactide, and an aqueous outer layer. (polyvinyl alcohol). The release of the AP can be done over a period of more than two weeks after subcutaneous injection.
  • compositions based on amphiphilic poly (oxyethylene) -poly (oxypropylene) micelles for the vectorization of anticancer drugs such as adriamycin.
  • US Pat. No. 4,888,398 describes polymers based on polyglutamate or polyaspartate, and optionally polyleucine, with pendent groups of alkyloxycarbonylmethyl type, randomly placed on the polyamino acid chain. These polyamino acids, grafted with side groups eg methoxycarbonylmethyl, can be used in the form of biodegradable implants containing a sustained release PA.
  • US Pat. No. 5,904,936 describes nanoparticles obtained from a polyleucine-polyglutamate block polymer capable of forming stable colloidal suspensions capable of associating spontaneously with biologically active proteins without denaturing them. These can then be released in vivo in a controlled manner over a long period.
  • the patent application WO-A-99/61512 describes polylysines and polyornithines functionalized with a hydrophobic group (palmitic acid connected to polylysine or ornithine) and a hydrophilic group (polyoxyethylene).
  • These polymers for example polylysine grafted with polyoxyethylene and palmitoyl chains form, in the presence of cholesterol, vesicles capable of encapsulating doxorubicin or DNA.
  • These polymers based on polylysines are cationic in a physiological medium.
  • US-B-6,630,171 of the Applicant describes block polymers or random poly (sodium glutamate) -poly (methyl, ethyl, hexadecyl or dodecyl glutamate), capable of forming stable colloidal suspensions and capable of associating spontaneously with biologically active proteins without denaturing them. These can then be released in vivo in a controlled manner over a long period.
  • These linear amphiphilic copolyamino acids are modified by the presence of a hydrophobic alkyl side chain. These alkyl groups are grafted covalently on the polymer via an ester function.
  • These polymers are anionic in a physiological medium.
  • WO-A-03/104303 discloses anionic polyamino acids functionalized with alpha-tocopherol.
  • the application WO-A-2004/013206 describes anionic polyamino acids having hydrophobic groups and characterized in that these groups are connected to the polymer via a ball joint containing two amide functions, and more specifically via a lysine-type spacer. or ornithine.
  • the application WO-A-2004/060968 describes polyamino acids functionalized with at least one oligoamino acid group based on leucine and / or isoleucine and / or valine and / or phenylalanine.
  • Patent applications WO-A-02/098951 and WO-A-02/098952 disclose polyalkylglutamines having one or two hydrophobic groups at one end of the polymer. These polymers are capable of forming liposomes and encapsulating water-soluble small molecules (active ingredient).
  • PV biocompatible particles for vectorization
  • PA active principles
  • PV are based on a hydrophilic neutral polyamino acid diblock copolymer (polyAANI) / hydrophobic neutral polyamino acid (polyAANO), for example POLY [(LEU) -BLOC- (GLN-N-HYDROXYETHYL)] X #
  • polyAANI / polyAANO particles are capable of associating in a colloidal suspension in the undissolved state, at least one PA and to release it, in particular in vivo, in a prolonged and / or delayed manner.
  • the invention also provides a powdery solid from which the PVs are derived as well as the preparation of this solid and this PV suspension based on polyAANI / polyAANO. These new PVs form spontaneously and without the aid of surfactants or organic solvents, stable aqueous suspensions.
  • the invention also relates to PV in dry form, process for their preparation, and pharmaceutical compositions (dry form or suspension) comprising these PVs associated with an active principle.
  • the invention relates to known biodegradable polyamino acids that can be converted into nano- or micro-colloidal vector particles capable of reversibly associating with active principles.
  • one of the essential objectives of the present invention is to provide novel amphiphilic copolyamino acids, linear or branched and substantially neutral, soluble in a wide pH range
  • These polymers represent an improvement over those described in patents or patent applications cited above, in terms of vectorization of an active ingredient such as a therapeutic protein.
  • Another essential objective of the present invention is that these polymers are capable of being used for the AP vectorization and make it possible to optimally satisfy all the specifications of the specifications, namely in particular: o capacity:
  • the term "multiplicity" means that the copolhydroxyalkylglutamine comprises, on average, at least two pendant GH per molecule. It is possible according to the invention that the copolhydroxyalkylglutamine has, in addition to the pendant GH, GH attached to at least one end of the copolymer chains.
  • this copolhydroxyalkylglutamine comprises on average at least 3 hydrophobic groups (GH) per copolymer chain.
  • Copolyhydroxyalkylglutamine also carries hydroxyalkylamine groups. These hydroxyalkylamine groups are preferably linked to the copolymer via an amide bond. It is the merit of the applicant to have developed a new family of copolymers based on polyhydroxyalkylglutamines "substantially neutral” and functionalized by a multiplicity of hydrophobic groups and capable of forming stable colloidal systems.
  • the ability to modify the number of anionic charges on the surface of a colloid makes it possible to modify, in particular, their interaction with the proteins and / or living cells, thus making it possible to vary their biodisposition (see, for example, the article by Furumoto et al. J. Controlled Release 2004, 97, 133-141).
  • association or “associating” used to qualify the relations between one or more active ingredients and copolyhydroxyalkylglutamines, mean in particular that the active ingredient (s) are related to ( x) copolyhydroxyalkylglutamine (s) in particular by a hydrophobic interaction, and / or are encapsulated by the copolyhydroxyalkylglutamine (s).
  • hydroxyalkylamine groups that can be used to functionalize the glutamate units of the copolyhydroxyalkylglutamine are identical to or different from each other and are, for example, chosen from the following groups: 2-hydroxyethylamine, 3-hydroxypropylamine, 2,3-dihydroxypropylamine, tris (hydroxymethyl) aminomethane and 6-hydroxyhexylamine.
  • At least one of the hydrophobic groups GH is included in a hydrophobic graft comprising at least one spacer (or "spacer") balloon (or pattern) for connecting the hydrophobic group GH to a chain of copolyglutamates (for example a main chain - skeleton-copolyglutamates).
  • This patella may comprise, e.g., at least one direct covalent bond and / or at least one amide bond and / or at least one ester bond.
  • the patella may be of the type belonging to the group comprising in particular: the "amino acid" units different from the constituent monomeric unit of the copolyglutamates, the aminoalcohol derivatives, the polyamine derivatives (for example the diamines), the derivatives of polyols (for example diols) and derivatives of hydroxy acids.
  • the grafting of GH on the chain copolyglutamates or polyalkylglutamine may go through the implementation of GH precursors, able to bind to the chain copolyglutamates or copolyhydroxyalkylglutamines.
  • the precursors of GH are, in practice and without being limited to, selected from the group comprising alcohols and amines, these compounds being easily functionalized by those skilled in the art.
  • the grafting of GH is explained in more detail below in the description of the process for obtaining modified polyamino acids according to the invention.
  • the hydrophobic group GH of the hydrophobic graft comprises from 8 to 30 carbon atoms.
  • Linear or branched C8 to C30 alkyls which may optionally comprise at least one unsaturation and / or at least one heteroatom,
  • the (poly) cyclic C8 to C30 may optionally comprise at least one unsaturation and / or at least one heteroatom.
  • the GH-forming patellae of the hydrophobic grafts may be di-, tri- or tetravalent (or even pentavalent and more).
  • the hydrophobic graft comprises a single GH group
  • a trivalent patella gives the hydrophobic graft a bifid character, that is to say that the graft has two "legs" GH.
  • a trivalent patella mention may be made, inter alia, of "amino acid” units, for example "glutamic acid” or polyol residues, for example glycerol.
  • two advantageous but non-limiting examples of hydrophobic grafts comprising bifid GHs are dialkyl glycerol and dialkyl glutamate.
  • the hydrophobic groups GH can be, for example, derived from groups selected from the group comprising: octanol, dodecanol, tetradecanol, hexadecanol, octadecanol, oleyl alcohol, tocopherol or cholesterol.
  • the backbone of the copolyglutamate according to the present invention comprises alpha-L-glutamate and / or alpha-L-glutamic units.
  • copolyhydroxyalkylglutamines according to the invention correspond to one of the following general formulas (I):
  • R 2 represents an H, a C 2 to C 10 linear or branched C 3 to C 10 alkyl or a benzyl
  • B is a divalent, trivalent or tetravalent linking group, preferably chosen from the following radicals:
  • C is a mono, di or trihydroxy (C 1 -C 6) alkyl group, preferably hydroxyethyl, hydroxypropyl or trishydroxymethylmethane
  • D is H, a linear acyl group of 2 to 6 carbon atoms, ClO or branched in C3 to
  • hydrophobic groups GH each independently represent a radical selected from:
  • linear or branched C8 to C30 alkyls which may optionally comprise at least one unsaturation and / or at least one heteroatom (preferably O and / or N and / or S), or
  • C 8 -C 30 alkylaryls or arylalkyls which may optionally comprise at least one unsaturation and / or at least one heteroatom (preferably O and / or N and / or S), or C8 to C30 (poly) cyclic compounds possibly comprising at least one unsaturation and / or at least one heteroatom (preferably O and / or N and / or S);
  • R represents an H or a cationic entity, preferably selected from the group comprising:
  • metal cations advantageously chosen from the subgroup comprising: sodium, potassium, calcium, magnesium;
  • cations based on amino acid (s) advantageously chosen from the class comprising cations based on lysine or arginine,
  • cationic polyamino acids advantageously chosen from the subgroup comprising polylysine or oligolysine;
  • the hydrophobic groups GH are arranged randomly.
  • the hydrophobic mole ratio of the copolyhydroxyalkylglutamines according to the invention is between 2 and 100%, and preferably between 5 and 50% provided that each polymer chain has on average at least 3 hydrophobic grafts.
  • the (q) / (m + q + n) ratio of the copolyhydroxyalkylglutamines according to the invention means that they may contain from 0 to about 60 mole% of carboxylic or carboxylate functional groups.
  • the polymers according to the invention have a molar mass which is between 2,000 and 200,000 g / mol, and preferably between 5,000 and 100,000 g / mol.
  • the copolyhydroxyalkylglutamine according to the invention may carry at least one graft of polyalkylene (preferably ethylene) glycol type linked to a glutamate unit.
  • copolyhydroxyalkylglutamines of the invention are likely to be used in several ways depending on the nature of the hydrophobic groups and the degree of polymerization of copolyglutamate.
  • Methods for shaping a polymer for the encapsulation of an active ingredient in the various forms contemplated by the invention are known to those skilled in the art. For more details, we can refer, for example to these few particularly relevant references:
  • Microspheres, Microcapsules and Liposomes, vol 1. Preparations and chemical applications Ed R. Arshady, Citus Books 1999. ISBN: 0-9532187-1-6.
  • copolyhydroxyalkylglutamines are also extremely interesting because, depending on the length of the copolymer (degree of polymerization) and the nature of the hydrophobic groups, they are dispersed in water at pH 7.4 (for example with a phosphate buffer) to give colloidal solutions or suspensions or structured or unstructured gels, depending on the concentration of copolymers.
  • copolyhydroxyalkylglutamines in the form of particles or not
  • the preferred shaping is that described in US-B-6,630,171 of the applicant and which consists in dispersing the copolymer in water and incubating the solution in the presence of an active ingredient (PA).
  • PA active ingredient
  • the copolymer can then form microparticles capable of associating or encapsulating PAs.
  • the shaping of the microparticles can be done by co-solubilizing the PA and the polymer in a suitable organic solvent and then the mixture precipitated in water.
  • the particles are then recovered by filtration and can then be used for oral administration (in capsule form, in compacted form and / or coated or even in dispersed form in an oil) or parenterally after redispersion in the water.
  • the copolymer may be solubilized in a biocompatible solvent such as N-methylpyrrolidone ethanol or an appropriate oil such as Mygliol® and then injected intramuscularly or subcutaneously or into a tumor.
  • a biocompatible solvent such as N-methylpyrrolidone ethanol or an appropriate oil such as Mygliol®
  • the diffusion of the solvent or of the oil leads to the precipitation of the copolymer at the injection site and thus forms a deposit.
  • These deposits then provide controlled release by diffusion and / or erosion and / or hydrolytic or enzymatic degradation of the copolymer.
  • the copolymers of the invention in neutral or ionized form, are more generally usable alone or in a liquid, solid or gel composition and in a medium aqueous or organic.
  • the copolymer based on copolyglutamines containing carboxylic residual functions are either neutral (COOH form) or ionized (COO anion "), depending on pH and composition.
  • the counter cation may be a metal cation such as sodium, calcium or magnesium, or an organic cation such as triethanolamine, tris (hydroxymethyl) aminomethane or a polyamine such as polyethyleneimine.
  • the copolymers of the invention are for example obtained by methods known to those skilled in the art.
  • N-carboxy-amino acid anhydrides NCA
  • polymers that can be used according to the invention, for example of the poly (alpha-L-glutamic), poly (alpha-D-glutamic), poly (alpha-D, L-glutamate) and poly (gamma-L) type can be used.
  • -glutamic) of variable masses are commercially available.
  • the copolymers of the invention are synthesized according to 2 routes.
  • the hydroxyalkylamine (e.g. ethanolamine) and B-GH (e.g., dodecylamine) groups are first grafted simultaneously or sequentially onto a poly (L-glutamic acid).
  • This reaction can be carried out in a solvent such as DMF, DMSO or NMP according to the following scheme.
  • the poly (L-glutamic acid) can be synthesized according to the route described in the patent application FR-A-2 801 226.
  • the HB-GH group is linked via an ester function, it is easier to first grafting the B-GH group by a conventional coupling reaction using a carbodiimide before grafting the alkylamine.
  • a poly (alkyl-L-glutamine) is first produced according to a route described in the literature (see, for example, WO-A-02/098951) and the hydrophobic group GH is grafted onto the OH groups of the alkylamide of the polymer.
  • Polymerization chemistry and coupling reactions of conventional groups are well known to those skilled in the art (see for example the patents or patent applications of the applicant mentioned above). These methods will be better understood through the description of the examples.
  • the degree of polymerization is defined by the molar ratio of the initiator to that of the monomer.
  • the coupling of the hydrophobic graft to GH with an acidic function of the polymer is easily achieved by reacting the polyamino acid in the presence of a carbodiimide as a coupling agent and optionally a catalyst such as 4-dimethylaminopyridine and in a suitable solvent such as dimethylformamide. (DMF), N-methyl pyrrolidone (NMP) or dimethylsulfoxide (DMSO).
  • a carbodiimide is, for example, dicyclohexylcarbodiimide or diisopropylcarbodiimide.
  • Coupling reagents such as chloroformates can also be used for the formation of amide bonds (see, for example, Bodanszky's “Principles of Peptide Synthesis” Springer Verlag 1984 for examples of coupling agents).
  • the degree of grafting is chemically controlled by the stoichiometry of the constituents and reactants or the reaction time.
  • Hydrophobic grafts functionalized with an amino acid other than that of the polymer are obtained by conventional peptide coupling or by direct condensation by acid catalysis. These techniques are well known to those skilled in the art.
  • the invention relates to a pharmaceutical, cosmetic, dietetic or phytosanitary composition
  • a pharmaceutical, cosmetic, dietetic or phytosanitary composition comprising at least one copolyhydroxyalkylglutamine as defined above and optionally at least one active ingredient, which may be therapeutic, cosmetic, dietetic or phytosanitary.
  • the active principle is associated with (x) polyamino acid (s) modified by one or more bonds other than (or that) chemical bond (s) covalent (s) ( s).
  • a colloidal suspension of PV particles optionally prepared extemporaneously by the dispersion of dry PV in a suitable solvent, such as water.
  • the active ingredient is a protein, a glycoprotein, a protein linked to one or more polyalkylene glycol chains (preferably polyethylene glycol (PEG): "protein-PEGylated”), a polysaccharide, a liposaccharide, an oligonucleotide, a polynucleotide or a peptide.
  • PEG polyethylene glycol
  • the active principle is a "small" hydrophobic, hydrophilic or amphiphilic organic molecule.
  • a "small" molecule is especially a small nonprotein molecule.
  • PA that may be associated with the polyamino acids according to the invention, whether or not in the form of (nano or micro) particles, mention may be made of: o proteins such as insulin, interferons, hormones growth, interleukins, erythropoietin or cytokines; peptides such as leuprolide or cyclosporine; o small molecules such as those belonging to the family of anthracyclines, taxoids or camptothecins; o and their mixtures.
  • proteins such as insulin, interferons, hormones growth, interleukins, erythropoietin or cytokines
  • peptides such as leuprolide or cyclosporine
  • small molecules such as those belonging to the family of anthracyclines, taxoids or camptothecins
  • o and their mixtures o proteins such as insulin, interferons, hormones growth, interleukins, erythropoietin or cytokines
  • the composition of the invention is in the form of a gel, a solution, a suspension, an emulsion, micelles, nanoparticles, microparticles, an implant, a d a powder or a film.
  • the composition whether loaded or not with active ingredient (s), is a stable colloidal suspension of nanoparticles and / or microparticles and / or polyamino acid micelles, in an aqueous phase.
  • the composition of the invention is in the form of a solution in a biocompatible solvent and can be injected subcutaneously, intramuscularly or into a tumor.
  • the composition according to the invention since it is pharmaceutical, can be administered orally, parenterally, nasally, vaginally, ocularly, subcutaneously, intravenously, intramuscularly, intradermally, intraperitoneally, intracerebrally or buccally.
  • composition is in the form of a solution in a solvent or a mixture of biocompatible solvents that can be injected subcutaneously, intramuscularly or into a tumor.
  • the composition may optionally contain an excipient for adjusting the pH and / or the osmolarity and / or to improve the stability (antioxidants) and / or as anti-microbial agent.
  • excipients are well known to those skilled in the art (see Injectable Drug Development, P.K. Gupta et al., Interpharm Press, Denver, Colorado 1999).
  • the composition according to the invention is formulated so that it is capable of forming a deposit on the injection site.
  • the deposition may, for example, be at least partly caused by a physiological protein present in vivo.
  • compositions which comprise polyamino acids according to the invention and active principles and which may be used for the preparation:
  • Medicaments in particular for oral, nasal, vaginal, ocular, subcutaneous, intravenous, intramuscular, intradermal, intraperitoneal or intracerebral administration, the active principles of these medicinal products being, in particular, proteins, glycoproteins, proteins bound to one or more polyalkylene glycol chains (for example PolyEthyleneGlycol (PEG), referred to as "PEGylated” proteins ⁇ , peptides, polysaccharides, liposaccharides, oligonucleotides, polynucleotides and hydrophobic, hydrophilic or amphiphilic organic small molecules;
  • PEG PolyEthyleneGlycol
  • the invention aims at a method of preparation:
  • Medicaments in particular for oral, nasal, vaginal, ocular, subcutaneous, intravenous, intramuscular, intradermal, intraperitoneal or intracerebral administration, the active principles of these medicinal products being, in particular, proteins, glycoproteins, protein linked to one or more polyalkylene glycol chains (eg PolyEthyleneGlycol (PEG), so-called "PEGylated” proteins ⁇ , peptides, polysaccharides, liposaccharides, oligonucleotides, polynucleotides and hydrophobic, hydrophilic or amphiphilic organic small molecules;
  • PEG PolyEthyleneGlycol
  • the invention also relates to a method of therapeutic treatment consisting essentially of administering the composition as described herein, orally, parenterally, nasally, vaginally, ocularly, subcutaneously, intravenously, intramuscularly, intradermally, intraperitoneally, intracerebrally or oral.
  • this method of therapeutic treatment essentially consists of putting the composition as described above in the form of a solution in a biocompatible solvent and then injecting it subcutaneously, intramuscularly or into a tumor, preferably so that it forms a deposit on the injection site.
  • the reaction medium is stirred for 30 minutes allowing to rise to 0 ° C.
  • the reaction medium is again cooled to -15 ° C. before adding the 9.5 g of ethanolamine.
  • the temperature rises to ambient in 1.5 hours.
  • the reaction medium is diluted in 920 ml of water before proceeding with diafiltration against 5 volumes of salt water (0.9% NaCl) and 8 volumes of water.
  • the polymer solution is then frozen and lyophilized. 5.2 g of the polymer (2) are obtained, ie 68% yield.
  • the percentage of Cl 2 graft determined by 1 H NMR in TFA-d is 14.4%.
  • the percentage of hydroxyethylglutamine determined by 1 H NMR in TFA-d is 86.0%.
  • the Mn (determined by GPC NMP) is 22.7 kg / mol in PMMA equivalents.
  • Comparative polymer C1 was synthesized according to Example 4 of patent application WO-A-02/098952.
  • the polymer contains an end-of-the-chain distearylamine group consisting of 40 units of polyhydroxyethylglutamine.
  • aqueous solution containing 10 mg of polymer per milliliter at pH 7.4 and 200 IU insulin (7.4 mg) is prepared.
  • the solutions are incubated for two hours at room temperature and the free insulin is separated from the associated insulin by ultrafiltration. (threshold at 100 KDa, 15 minutes under 10000G at 18 ° C).
  • the free insulin recovered in the filtrate is then assayed by HPLC (High Performance Liquid Chromatography) and the amount of insulin associated is deduced.
  • HPLC High Performance Liquid Chromatography
  • the polymer C1 having a distearyl hydrophobe at the end of the chain is less effective.
  • the combination capacity of these polymers makes them suitable for use as targeting agents.

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Abstract

La présente invention concerne des nouveaux matériaux à base de polyaminoacides modifiés, biodégradables, utiles notamment pour la vectorisation de principe(s) actif(s) (PA). L'invention vise aussi de nouvelles compositions pharmaceutiques, cosmétiques, diététiques ou phytosanitaires à base de ces polyaminoacides. Le but de l'invention est de fournir une nouvelle matière première polymère, susceptible d'être utilisée pour la vectorisation de PA et permettant de satisfaire de manière optimale à toutes les spécifications requises en l'espèce : biocompatibilité, biodégradabilité, aptitude à s'associer facilement avec de nombreux principes actifs ou à les solubiliser, et à libérer ces principes actifs in vivo. Ce but est atteint par la présente invention qui concerne des nouveaux copolyhydroxyalkylglutamines, comprenant des unités glutamines et éventuellement des unités glutamates, et qui sont porteuses de groupements hydrophobes comportant de 8 à 30 atomes de carbone. Ces copolyhydroxyalkylglutamines sont amphiphiles et sont aptes à se transformer aisément et économiquement en particules de vectorisation de principes actifs, ces particules étant elles même propres à former des suspensions colloïdales aqueuses stables.

Description

COPOLYHYDROXYALKYLGLUTAMINES FONCTIONNALISES PAR DES GROUPEMENTS HYDROPHOBES ET LEURS APPLICATIONS NOTAMMENT
THERAPEUTIQUES
La présente invention concerne des nouveaux matériaux biodégradables à base de copolyaminoacides, utiles notamment pour la vectorisation de principe(s) actif(s) (PA).
L'invention vise aussi de nouvelles compositions pharmaceutiques, cosmétiques, diététiques ou phytosanitaires à base de ces polyaminoacides modifiés. Ces compositions peuvent être du type de celles permettant la vectorisation de PA et se présentant, de préférence, sous forme d'émulsions, de micelles, de particules, de gels, d'implants ou de films.
Les PA considérés sont, avantageusement, des composés biologiquement actifs et qui peuvent être administrés à un organisme animal ou humain par voie orale, parentérale, nasale, vaginale, oculaire, sous-cutanée, intraveineuse, intramusculaire, intradermique, intrapéritonéale, intracérébrale, buccale, etc.
Les PA plus particulièrement, mais non limitativement, concernés par l'invention sont des protéines, des glycoprotéines, des peptides, des polysaccharides, des lipopolysaccharides, des oligo ou des polynucléotides, et des molécules organiques. Mais il peut aussi s'agir de produits cosmétiques ou de produits phytosanitaires, tels que des herbicides, des insecticides, des fongicides, etc.
Dans le domaine de la vectorisation des principes actifs notamment médicamenteux, il existe un besoin, dans beaucoup de cas :
• de les protéger contre la dégradation (hydrolyse, précipitation sur site, digestion enzymatique etc..) jusqu'à ce qu'ils atteignent leur site d'action,
• et/ou de contrôler leur vitesse de libération afin de maintenir un niveau thérapeutique sur une durée définie, soit
• et/ou de les véhiculer (en les protégeant) au site d'action.
A ces fins, plusieurs types de polymères ont été étudiés et certains sont même disponibles commercialement. On peut citer, par exemple, les polymères du type polylactique, polylactique-glycolique, polyoxyéthylène-oxypropylène, polyaminoacide ou encore polysaccharide. Ces polymères constituent des matières premières permettant de fabriquer, par exemple, des implants massiques, des microparticules, des nanoparticules, des vésicules, des micelles ou des gels. Outre le fait que ces polymères doivent être adaptés à la fabrication de tels systèmes, ils doivent également être biocompatibles, non-toxiques, non-immunogènes, économiques et ils doivent pouvoir être facilement éliminés du corps et/ou être biodégradables. Sur ce dernier aspect, il est de surcroît essentiel que la biodégradation dans l'organisme génère des produits non-toxiques.
Un autre aspect aussi important dans le développement d'un polymère associatif est sa solubilité dans l'eau. La possibilité de solubiliser une quantité élevée de polymère permet d'avoir un rapport polymère/principe actif adapté au profil de libération souhaité.
A titre d'illustration de l'art antérieur concernant des polymères employés comme matières premières pour la réalisation de systèmes de vectorisation de PA, divers brevets ou demandes de brevet ou articles scientifiques sont évoqués ci-après.
Le brevet US-B-4,652,441 décrit des microcapsules de polylactide encapsulant l'hormone LH-RH. Ces microcapsules sont produites en préparant une émulsion eau-dans- huile-dans-eau et comprennent une couche interne aqueuse contenant l'hormone, une substance (gélatine) fixant cette dernière, une couche huileuse de polylactide, ainsi qu'une couche externe aqueuse (alcool polyvinylique). La libération du PA peut se faire sur une période de plus de deux semaines après injection sous-cutanée.
Le brevet US-B-6,153,193 décrit des compositions à base de micelles de poly(oxyéthylène)-poly(oxypropylène) amphiphiles, pour la vectorisation d'anti-cancéreux tel que l'adriamycine.
Akiyoshi et al. (J. Controlled Release 1998, 54, 313-320) décrivent des pullulans qui sont rendus hydrophobes par greffage de cholestérol et qui forment des nanoparticules dans l'eau. Ces nanoparticules aptes à se complexer de manière réversible avec l'insuline, forment des suspensions colloïdales stables.
Le brevet US-B-4,351,337 décrit des copolyaminoacides amphiphiles, à base de leucine et de glutamate, utilisables sous forme d'implants ou de microparticules pour la libération contrôlée de principes actifs. La libération de ces derniers peut se faire sur une durée très longue dépendant de la vitesse de dégradation du polymère.
Le brevet US-B-4,888,398 décrit des polymères à base de polyglutamate ou polyaspartate, et éventuellement polyleucine, avec des groupements pendants de type alkyloxycarbonylméthyle, placés de façon aléatoire sur la chaîne polyaminoacide. Ces polyaminoacides, greffés par des groupements latéraux e.g. méthoxycarbonylméthyle, sont utilisables sous forme d'implants biodégradables contenant un PA à libération prolongée. Le brevet US-B-5,904,936 décrit des nanoparticules obtenues à partir d'un polymère bloc polyleucine-polyglutamate, aptes à former des suspensions colloïdales stables et capables de s'associer spontanément avec des protéines biologiquement actives sans les dénaturer. Ces dernières peuvent ensuite être libérées in vivo de manière contrôlée, sur une longue période.
Le brevet US-B-5,449,513 décrit des copolymères bloc amphiphiles comprenant un bloc polyoxyéthylène et un bloc polyaminoacide, par exemple poly(béta-benzyl-L- aspartate). Ces polymères polyoxyéthylène-polybenzylaspartate forment des micelles qui sont aptes à encapsuler des molécules actives hydrophobes telles que l'adryamicine ou l'indométhacine.
La demande de brevet WO-A-99/61512 décrit des polylysines et des polyornithines fonctionnalisées par un groupe hydrophobe (acide palmitique relié à la polylysine ou ornithine) et un groupe hydrophile (polyoxyéthylène). Ces polymères, par exemple la polylysine greffée avec des chaînes polyoxyéthylène et palmitoyle forment, en présence de cholestérol, des vésicules capables d'encapsuler la doxorubicine ou l'ADN. Ces polymères à base de polylysines sont cationiques en milieu physiologique.
Le brevet US-B-6,630,171 de la demanderesse, décrit des polymères blocs ou aléatoires poly(glutamate de sodium)-poly(glutamate de méthyle, d'éthyle, d'hexadécyle ou de dodécyle), aptes à former des suspensions colloïdales stables et capables de s'associer spontanément avec des protéines biologiquement actives sans les dénaturer. Ces dernières peuvent ensuite être libérées in vivo de manière contrôlée, sur une longue période. Ces copolyaminoacides linéaires amphiphiles sont modifiés par la présence d'une chaîne latérale alkyle hydrophobe. Ces groupements alkyles sont greffés de façon covalente sur le polymère via une fonction ester. Ces polymères sont anioniques en milieu physiologique.
Dans le même domaine, la demanderesse a décrit dans plusieurs demandes de brevets, des polymères à base de polyglutamate (anioniques) avec des concepts apparentés.
La demande WO- A-03/104303 décrit des polyaminoacides anioniques fonctionnalisés par de l'alpha-tocophérol.
La demande WO-A-2004/013206 décrit des polyaminoacides anioniques comportant des groupements hydrophobes et caractérisés en ce que ces groupements sont reliés au polymère par l'intermédiaire d'une rotule contenant deux fonctions amides, et plus précisément via un espaceur de type lysine ou ornithine. La demande WO-A-2004/060968 décrit des polyaminoacides fonctionnalisés par au moins un groupement oligoaminoacide à base de leucine et/ou isoleucine et/ou valine et/ou phénylalanine.
La demande de brevet WO-A- 87/03891 décrit des polymères amphiphiles, linéaires, branchés ou en étoile, avec au moins deux groupements hydrophobes liés seulement à leurs extrémités. Cette demande de brevet concerne essentiellement des polymères hydrophiles neutres à base de polyéthylène glycol, comme en témoigne tous les exemples de ce brevet. Or, ce type de polymère n'est pas biodégradable, ce qui constitue un inconvénient majeur.
Les demandes de brevet WO-A-02/098951 et WO-A-02/098952 décrivent des polyalkyleglutamines ayant un ou deux groupements hydrophobes à une extrémité du polymère. Ces polymères sont aptes à former des liposomes et à encapsuler des petites molécules (principe actif) hydrosolubles.
La demande de brevet WO-A-03/002096 décrit des polyhydroxyéthylaspartamide ayant à la fois une chaîne de polyéthylène-glycol à une extrémité du polymère et des groupements hydrophobes pendants. Ces polymères sont aptes à former des nanoparticles et à encapsuler des principes actifs.
La demande de brevet WO-A-02/28521 décrit une suspension de particules biocompatibles de vectorisation (PV) de principes actifs (PA). Ces PV sont à base d'un copolymère dibloc polyaminoacide neutre hydrophile (polyAANI) / polyaminoacide neutre hydrophobe (polyAANO), par exemple POLY[(LEU)-BLOC-(GLN-N- HYDROXYETHYL)]X #Ces particules de polyAANI/polyAANO sont aptes à associer en suspension colloïdale à l'état non dissous, au moins un PA et à libérer celui-ci, notamment in vivo, de manière prolongée et/ou retardée. L'invention vise, également, un solide pulvérulent à partir duquel sont issues les PV ainsi que la préparation de ce solide et de cette suspension de PV à base de polyAANI/polyAANO. Ces nouvelles PV forment spontanément et sans l'aide de tensioactifs ou de solvants organiques, des suspensions aqueuses stables. L'invention concerne également les PV sous forme sèche, leur procédé de préparation, ainsi que des compositions pharmaceutiques (forme sèche ou suspension) comprenant ces PV associés à un principe actif.
Ainsi, même si de très nombreuses solutions techniques sont développées et proposées dans l'art antérieur pour la vectorisation des principes actifs médicamenteux, la réponse à l'ensemble des exigences est difficile à obtenir et demeure perfectible. Plus spécifiquement, l'invention concerne des polyaminoacides biodégradables connus, transformables en nano- ou micro-particules colloïdales de vectorisation aptes à s'associer réversiblement à des principes actifs.
Dans ce contexte, l'un des objectifs essentiels de la présente invention est de fournir de nouveaux copolyaminoacides amphiphiles, linéaires ou branchés et essentiellement neutres, solubles dans une large gamme de pH Ces polymères représentent un perfectionnement par rapport à ceux décrits dans les brevets ou demandes de brevets cités plus haut, en termes de vectorisation d'un principe actif tel qu'une protéine thérapeutique.
Un autre objectif essentiel de la présente invention est que ces polymères soient aptes à être utilisés pour la vectorisation de PA et permettent de satisfaire de manière optimale à toutes les spécifications du cahier des charges, à savoir notamment : o capacité :
• à former aisément et économiquement des suspensions colloïdales aqueuses stables,
• à s'associer facilement avec de nombreux principes actifs, " et à libérer ces principes actifs in vivo, o biocompatibilité, o biodégradabilité, o stabilité à l'hydrolyse.
Cet objectif, parmi d'autres, est atteint par la présente invention qui concerne tout d'abord un copolhydroxyalkylglutamine comprenant une multiplicité de groupements hydrophobes (GH) pendants et identiques ou différents entre eux.
Au sens de l'invention, le terme "multiplicité" signifie que le copolhydroxyalkylglutamine comprend, en moyenne, au moins deux GH pendants par molécule. Il est possible conformément à l'invention que le copolhydroxyalkylglutamine présente, en plus des GH pendants, des GH fixés sur au moins l'une des extrémités des chaînes de copolymère.
Suivant une modalité préférée de l'invention, ce copolhydroxyalkylglutamine comporte en moyenne au moins 3 groupements hydrophobes (GH) par chaîne copolymère.
Le copolyhydroxyalkylglutamine est également porteur de groupements hydroxyalkylamine. Ces groupements hydroxyalkylamine sont de préférence liés au copolymère par l'intermédiaire d'une liaison amide. II est du mérite de la demanderesse d'avoir mis au point une nouvelle famille de copolymères à base de polyhydroxyalkylglutamines "essentiellement neutres" et fonctionnalisés par une multiplicité de groupements hydrophobes et aptes à former des systèmes colloïdaux stables. La capacité de modifier le nombre de charges anioniques sur la surface d'un colloïde permet de modifier notamment leur interaction avec les protéines et/ou des cellules du vivant, permettant ainsi de faire varier leur biodisposition (voir par exemple l'article de Furumoto et al. J. Controlled Release 2004, 97, 133-141).
Ces nouveaux polymères se sont avérés être particulièrement bien adaptés pour la vectorisation des protéines. De plus, ils sont facilement dégradés, en présence d'enzymes, en catabolites/métabolites non toxiques (acides aminés).
Au sens de l'invention et dans tout le présent exposé, les termes "association" ou "associer" employés pour qualifier les relations entre un ou plusieurs principes actifs et les copolyhydroxyalkylglutamines , signifient en particulier que le ou les principes actifs sont liés au(x) copolyhydroxyalkylglutamine(s) notamment par une interaction hydrophobe, et/ou sont encapsulés par le ou les copolyhydroxyalkylglutamine.
Les groupements hydroxyalkylamine utilisables pour fonctionnaliser les unités glutamates du copolyhydroxyalkylglutamine sont identiques ou différents entre eux et sont par exemple choisis parmi les groupements suivants: le 2-hydroxyéthylamine, le 3- hydroxypropylamine, le 2,3-dihydroxypropylamine, le tris(hydroxyméthyl)aminométhane et le 6-hydroxyhexylamine.
Avantageusement, au moins l'un des groupements hydrophobes GH est inclus dans un greffon hydrophobe comprenant au moins une rotule (ou motif) d'espacement ("spacer") permettant de relier le groupement hydrophobe GH à une chaîne de copolyglutamates (par exemple une chaîne principale - squelette-copolyglutamates). Cette rotule peut comprendre, e.g. au moins une liaison covalente directe et/ou au moins une liaison amide et/ou au moins une liaison ester. Par exemple, la rotule peut être du type de celles appartenant au groupe comportant notamment: les unités "acide aminé" différentes de l'unité monomérique constitutive du copolyglutamates , les dérivés des aminoalcools, les dérivés des polyamines (par exemple les diamines), les dérivés des polyols (par exemple les diols) et les dérivés des hydroxyacides.
Le greffage des GH sur la chaîne copolyglutamates ou polyalkylglutamine peut passer par la mise en œuvre de précurseurs de GH, aptes à se lier à la chaîne copolyglutamates ou copolyhydroxyalkylglutamines. Les précurseurs des GH sont, en pratique et sans que cela ne soit limitatif, choisis dans le groupe comprenant les alcools et les aminés, ces composés pouvant être fonctionnalisés facilement par l'homme de l'art. Le greffage des GH est explicité plus en détail ci-après dans la description du procédé d'obtention des polyaminoacides modifiés selon l'invention.
Suivant une caractéristique préférée, le groupement hydrophobe GH du greffon hydrophobe comporte de 8 à 30 atomes de carbone.
-> Ces groupements hydrophobes GH sont avantageusement et judicieusement sélectionnés dans le groupe comprenant :
• les alkyles linéaires ou ramifiés en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome,
• les alkylaryles ou arylalkyles en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome,
• et les (poly)cycliques en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome.
Les rotules formant avec les GH des greffons hydrophobes, peuvent être di-, tri- ou tétravalentes (voire pentavalentes et plus). Dans le cas d'une rotule divalente, le greffon hydrophobe comporte un seul groupement GH, tandis qu'une rotule trivalente confère au greffon hydrophobe un caractère bifide, c'est à dire que le greffon présente deux "pattes" GH. A titre d'exemple de rotule trivalente on peut citer, entre autres, des unités "acide aminé", par exemple "acide glutamique" ou des restes polyols, par exemple glycérol. Ainsi, deux exemples avantageux mais non limitatifs de greffons hydrophobes comprenant des GH bifides sont les dialkyles glycérol et les dialkyles glutamate.
Les groupements hydrophobes GH peuvent être, par exemple, dérivés de groupements choisis dans le groupe comprenant : l'octanol, le dodécanol, le tétradécanol, l'héxadécanol, l'octadécanol, l'oleylalcool, le tocophérol ou le cholestérol.
De préférence, le squelette du copolyglutamate selon la présente invention comprend des unités d'alpha-L-glutamate et/ou d'alpha-L-glutamique.
De manière plus préférée encore, les copolyhydroxyalkylglutamines selon l'invention répondent à l'une des formules générales (I) suivantes:
dans laquelle :
" A représente indépendamment :
- Un groupement NHR2 dans laquelle R2 représente un H, un alkyle linéaire en C2 à ClO ou ramifié en C3 à ClO ou un benzyle,
- Une unité acide aminé terminale liée par l'azote et dont la fonction(s) acide(s) est éventuellement modifié par une aminé ou un alcool répondant aux définitions NHR2 et OR2 respectivement.
• B est un groupement de liaison divalent, trivalent ou tétravalent, de préférence choisi parmi les radicaux suivants:
-O-, -NH-, -N-alkyle- (Cl à C5), un résidu d'acide aminé (de préférence naturel), un diol, un triol, une diamine, une triamine, un aminoalcool ou un hydroxyacide comportant de 1 à 6 atomes de carbone, " C est un groupement mono, di ou trihydroxy(Cl à C6)alkyl, de préférence l'hydroxyéthyle, Fhydroxy-propyle ou le trishydroxyméthylméthane. " D représente un H, un groupe acyle linéaire en C2 à ClO ou ramifié en C3 à
ClO, ou un pyroglutamate; " Les groupements hydrophobes GH représentent chacun indépendamment les uns des autres un radical choisi parmi:
• Les alkyles linéaires ou ramifiés en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S), ou
• Les alkylaryles ou arylalkyle en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S), ou • Les (poly)cycliques en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S);
• R représente un H ou une entité cationique, de préférence sélectionnée dans le groupe comprenant :
- les cations métalliques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : le sodium, le potassium, le calcium, le magnésium ;
- les cations organiques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant :
• les cations à base d'aminé,
• les cations à base d'oligoamine,
• les cations à base de polyamine (la polyéthylèneimine étant particulièrement préférée),
• les cations à base d'acide(s) aminé(s) avantageusement choisis dans la classe comprenant les cations à base de lysine ou d'arginine,
- ou les polyaminoacides cationiques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant la polylysine ou l'oligolysine;
" m, n et q sont des entiers positifs;
• (m)/(m+q+n) est défini comme le taux de greffage molaire des groupements hydrophobes GH et varie de 0,5 à 90 % molaire sous condition que chaque chaîne de copolymère possède en moyenne au moins 3 greffons hydrophobes;
• (m+q+n) varie de 10 à 1000, de préférence entre 30 et 500; " (q)/(m+q+n) varie de 0 à 60 % molaire ;
• p est un entier variant de 1 à 3.
De préférence, les groupements hydrophobes GH sont disposés de façon aléatoire.
Il est par ailleurs préférable que le taux de greffage molaire en motif hydrophobe des copolyhydroxyalkylglutamines selon l'invention, soit compris entre 2 et 100 %, et de préférence entre 5 et 50 % sous condition que chaque chaîne de polymère possède en moyenne au moins 3 greffons hydrophobes.
Le rapport (q)/(m+q+n) des copolyhydroxyalkylglutamines selon l'invention signifient qu'ils peuvent contenir de 0 à environ 60 % molaire de fonctions carboxyliques ou carboxylates. Selon une autre caractéristique remarquable de l'invention, les polymères selon l'invention ont une masse molaire qui se situe entre 2 000 et 200 000 g/mole, et de préférence entre 5 000 et 100 000 g/mole.
Suivant une variante le copolyhydroxyalkylglutamine selon l'invention peut être porteur d'au moins un greffon de type polyalkylène (de préférence éthylène)glycol lié à une unité glutamate.
Naturellement, l'invention couvre également des mélanges de polyaminoacides modifiés tels que définis ci-dessus.
De manière remarquable, les copolyhydroxyalkylglutamines de l'invention sont susceptibles d'être utilisés de plusieurs façons selon la nature des groupements hydrophobes et le degré de polymérisation du copolyglutamate. Les méthodes de mise en forme d'un polymère pour l'encapsulation d'un principe actif sous les diverses formes visées par l'invention sont connues de l'homme de l'art. Pour plus de détails, on peut se référer, par exemple à ces quelques références particulièrement pertinentes :
"Microspheres, Microcapsules and Liposomes ; vol 1. Préparation and chemical applications" Ed. R. Arshady, Citus Books 1999. ISBN : 0-9532187-1-6.
"Sustained-Release Injectable Products" Ed. J. Senior et M. Radomsky, Interpharm
Press 2000. ISBN : 1-57491-101-5.
"Colloïdal Drug Delivery Systems" Ed. J. Kreuter, Marcel Dekker, Inc. 1994. ISBN :
0-8247-9214-9.
"Handbook ofPharmaceutical Controlled Release Technology" Ed. D.L. Wise, Marcel
Dekker, Inc. 2000. ISBN : 0-8247-0369-3.
Ces copolyhydroxyalkylglutamines sont en outre extrêmement intéressants du fait que, selon la longueur du copolymère (degré de polymérisation) et la nature des groupements hydrophobes, ils se dispersent dans l'eau à pH 7,4 (par exemple avec un tampon phosphate) pour donner des solutions ou des suspensions colloïdales ou des gels structurés ou non, en fonction de la concentration en copolymères. De plus, les copolyhydroxyalkylglutamines (sous forme de particules ou non), peuvent encapsuler ou s'associer aisément avec des principes actifs tels que des protéines, peptides ou petites molécules. La mise en forme préférée est celle décrite dans le brevet US-B-6,630,171 de la demanderesse et qui consiste à disperser le copolymère dans l'eau et à incuber la solution en présence d'un principe actif (PA). Cette solution colloïdale de particules de vectorisation constituées des copolyhydroxyalkylglutamines selon l'invention, peut ensuite être filtrée sous 0,2 μm puis directement injectée à un patient.
Quand le rapport hydrophile/hydrophobe diminue, le copolymère peut alors former des microparticules capables d'associer ou d'encapsuler des PA. Dans ce contexte, la mise en forme des microparticules peut se faire en co-solubilisant le PA et le polymère dans un solvant organique approprié puis le mélange précipité dans l'eau. Les particules sont ensuite récupérées par filtration et peuvent ensuite être utilisées pour une administration par voie orale (sous forme de gélule, sous forme compactée et/ou enrobée ou bien encore sous forme dispersée dans une huile) ou par voie parentérale après redispersion dans l'eau.
Selon une variante, le copolymère peut être solubilisé dans un solvant biocompatible tel que la N-méthylpyrrolidone l'éthanol ou une huile appropriée telle que le Mygliol® puis injecté en intramusculaire ou sous-cutanée ou dans une tumeur. La diffusion du solvant ou de l'huile conduit à la précipitation du copolymère sur le site d'injection et forme ainsi un dépôt. Ces dépôts assurent ensuite une libération contrôlée par diffusion et/ou par érosion et/ou par dégradation hydrolytique ou enzymatique du copolymère.
Indépendamment du fait que la forme microparticulaire du polymère selon l'invention est préférée, les copolymères de l'invention, sous forme neutre ou ionisée, sont de façon plus générale, utilisables seuls ou dans une composition liquide, solide ou gel et dans un milieu aqueux ou organique.
Il convient de comprendre que le copolymère à base de copolyglutamines contenant des fonctions résiduelles carboxyliques, sont soit neutres (forme COOH), soit ionisées (anion COO"), selon le pH et la composition. En solution aqueuse, le contre- cation peut être un cation métallique tel que le sodium, le calcium ou le magnésium, ou un cation organique tel que la triéthanolamine, la tris(hydroxyméthyl)-aminométhane ou une polyamine tel que la polyéthylèneimine.
Les copolymères de l'invention sont par exemple obtenus par des méthodes connues de l'homme de l'art. Tout d'abord, rappelons que pour l'obtention de polyaminoacide de type alpha, la technique la plus courante est basée sur la polymérisation d'anhydrides de N-carboxy-aminoacides (NCA), décrites, par exemple, dans l'article "Biopolymers, 1976, 15, 1869 et dans l'ouvrage de H.R. Kricheldorf "alpha- Aminoacid-N-carboxy Anhydride and related Heterocycles" Springer Verlag (1987). Le dérivé de NCA est de préférence NCA-GIu-O-Bz (Bz = Benzyle), car le groupement benzyle peut être sélectivement hydrolyse sans toucher d'autres fonctions chimiques des homopolymères ou du groupement hydrophobe.
Un certain nombre de polymères utilisables selon l'invention, par exemple, de type poly(alpha-L-glutamique), poly(alpha-D-glutamique), poly(alpha-D,L-glutamate) et poly(gamma-L-glutamique) de masses variables sont disponibles commercialement.
De préférence, on synthétise les copolymères de l'invention selon 2 voies. Dans la première; on greffe tout d'abord simultanément ou en séquence le groupement hydroxyalkylamine (par exemple l'éthanolamine) et le groupement B-GH (par exemple le dodecy lamine) sur un poly(acide-L-glutamique). Cette réaction peut se faire dans un solvant tel que le DMF, le DMSO ou la NMP selon le schéma suivant.
Le poly(acide-L-glutamique) peut être synthétisé selon la voie décrite dans la demande de brevet FR- A-2 801 226. Dans le cas où le groupement HB-GH est lié via une fonction ester, il est plus aisé de greffer d'abord le groupement B-GH par une réaction de couplage classique en utilisant un carbodiimide avant de greffer l'alkylamine.
Dans la deuxième, on réalise d'abord un poly(alkyl-L-glutamine) selon une voie décrite dans la littérature (voir par exemple WO-A-02/098951) et on greffe le groupement hydrophobe GH sur les groupements OH de l'alkylamide du polymère. La chimie de polymérisation et les réactions de couplage des groupements sont classiques est bien connue de l'homme de l'art (voir par exemples les brevets ou demandes de brevet de la demanderesse cités précédemment). Ces méthodes seront mieux comprises à travers la description des exemples.
Il doit être observé que le degré de polymérisation est défini par le rapport molaire de l'initiateur sur celle du monomère.
Le couplage du greffon hydrophobe à GH avec une fonction acide du polymère est réalisé aisément par réaction du polyaminoacide en présence d'un carbodiimide comme agent de couplage et optionnellement, un catalyseur tel que le 4-diméthylaminopyridine et dans un solvant approprié tel que la diméthylformamide (DMF), la N-méthyl pyrrolidone (NMP) ou la diméthylsulfoxide (DMSO). Le carbodiimide est par exemple, le dicyclohexylcarbo- diimide ou le diisopropylcarbodiimide. Les réactifs de couplage tels que les chloroformâtes peuvent également être utilisés pour la formation de liaisons amides (voir par exemple l'ouvrage de Bodanszky « Principles of Peptide Synthesis » Springer Verlag 1984 pour des exemples d'agents de couplages). Le taux de greffage est contrôlé chimiquement par la stœchiométrie des constituants et réactifs ou le temps de réaction. Les greffons hydrophobes fonctionnalisés par un acide aminé autre celui du polymère sont obtenus par couplage peptidique classique ou par condensation directe par catalyse acide. Ces techniques sont bien connues de l'homme de l'art.
Selon un autre de ses aspects, l'invention vise une composition pharmaceutique, cosmétique, diététique ou phytosanitaire comprenant au moins un copolyhydroxyalkylglutamine tel que défini ci-dessus et éventuellement au moins un principe actif, qui peut être thérapeutique, cosmétique, diététique ou phytosanitaire.
Suivant une disposition intéressante de l'invention, le principe actif est associé au(x) polyaminoacide(s) modifiés par une ou plusieurs liaisons autre(s) qu'une (ou que des) liaison(s) chimique(s) covalente(s).
Les techniques d'association d'un ou de plusieurs PA aux polyaminoacides modifiés selon l'invention, sont décrites notamment dans le brevet US-B-6,630,171. Elles consistent à incorporer au moins un principe actif dans le milieu liquide contenant des Particules de Vectorisation (PV), de manière à obtenir une suspension colloïdale de PV chargées en ou associées avec un ou plusieurs principe(s) actif(s) PA. Cette incorporation, qui conduit à un piégeage de PA par les PV, peut être réalisée de la manière suivante : • mise en solution aqueuse de PA, puis ajout des PV, soit sous forme de suspension colloïdale, soit sous forme de PV isolées (lyophilisât ou précipité) ;
• ou ajout de PA, soit en solution, soit à l'état pur ou préformulé, à une suspension colloïdale de particules PV, éventuellement préparée extemporanément par la dispersion de PV sèches dans un solvant approprié, tel que l'eau.
De préférence, le principe actif est une protéine, une glycoprotéine, une protéine liée à une ou plusieurs chaînes polyalkylèneglycol (de préférence PolyEthylèneGlycol (PEG) : "protéine-PEGylée"), un polysaccharide, un liposaccharide, un oligonucléotide, un polynucléotide ou un peptide.
Selon une variante, le principe actif est une "petite" molécule organique hydrophobe, hydrophile ou amphiphile.
Au sens du présent exposé, une "petite" molécule est notamment une petite molécule non protéinique.
Comme exemples de PA susceptibles d'être associés aux polyaminoacides selon l'invention, qu'ils soient ou non sous forme de (nano ou micro)particules, on peut citer : o les protéines telles que l'insuline, les interférons, les hormones de croissance, les interleukines, l'érythropoietine ou les cytokines ; o les peptides telles que la leuprolide ou la cyclosporine ; o les petites molécules telles que celles appartenant à la famille des anthracyclines, des taxoïdes ou des camptothécines ; o et leurs mélanges.
Selon un mode de réalisation, la composition de l'invention est sous forme d'un gel, d'une solution, d'une suspension, d'une émulsion, de micelles, de nanoparticules, de microparticules, d'un implant, d'une poudre ou d'un film.
Suivant l'une de ses formes particulièrement préférées, la composition, chargée ou non en principe actif(s), est une suspension colloïdale stable de nanoparticules et/ou de microparticules et/ou de micelles polyaminoacides, dans une phase aqueuse.
Selon une autre mode de réalisation, la composition de l'invention est sous forme de solution dans un solvant biocompatible et peut être injectée par voie sous-cutanée, intramusculaire ou dans une tumeur. La composition selon l'invention, dès lors qu'elle est pharmaceutique, peut être administrée par voie orale, parentérale, nasale, vaginale, oculaire, sous-cutanée, intraveineuse, intramusculaire, intradermique, intrapéritonéale, intracérébrale ou buccale.
Il est également envisageable que la composition soit sous forme de solution dans un solvant ou un mélange de solvants biocompatibles, susceptible d'être injectée en sous- cutané, intramusculaire ou dans une tumeur.
Selon une autre mode de réalisation, la composition peut éventuellement contenir un excipient pour l'ajustement du pH et/ou de l'osmolarité et/ou pour améliorer la stabilité (anti-oxydants) et/ou comme agent anti-microbiens. Ces excipients sont bien connus de l'homme de l'art (se référer à l'ouvrage : Injectable Drug Developement, P.K. Gupta et al. Interpharm Press, Denver, Colorado 1999).
Selon une autre variante, la composition selon l'invention est formulée de telle sorte qu'elle soit apte à former un dépôt sur le site d'injection. Le dépôt peut, par exemple, être au moins en partie provoqué par une protéine physiologique présente in-vivo.
L'invention vise aussi des compositions qui comprennent des polyaminoacides selon l'invention et des principes actifs et qui sont susceptibles d'être utilisées pour la préparation :
• de médicaments, en particulier pour administration orale, nasale, vaginale, oculaire, sous-cutanée, intraveineuse, intramusculaire, intradermique, intrapéritonéale ou intracérébrale, les principes actifs de ces médicaments pouvant être, notamment, des protéines, des glycoprotéines, des protéines liées à une ou plusieurs chaînes polyalkylèneglycol {par exemple PolyEthylèneGlycol (PEG), on parle alors de protéines "PEGylées"}, des peptides, des polysaccharides, des liposaccharides, des oligonucléotides, des polynucléotides et des petites molécules organiques hydrophobes, hydrophiles ou amphiphiles ;
• et/ou des nutriments ;
• et/ou de produits cosmétiques ou phytosanitaires.
Selon encore un autre de ses aspects, l'invention vise un procédé de préparation :
• de médicaments, en particulier pour administration orale, nasale, vaginale, oculaire, sous-cutanée, intraveineuse, intramusculaire, intradermique, intrapérito-néale ou intracérébrale, les principes actifs de ces médicaments pouvant être, notamment, des protéines, des glycoprotéines, des protéines liées à une ou plusieurs chaînes polyalkylèneglycol {par exemple PolyEthylèneGlycol (PEG), on parle alors de protéines "PEGylées"}, des peptides, des polysaccharides, des liposaccharides, des oligonucléotides, des polynucléotides et des petites molécules organiques hydrophobes, hydrophiles ou amphiphiles ;
• et/ou des nutriments ;
• et/ou de produits cosmétiques ou phytosanitaires ; ce procédé étant caractérisé en ce qu'il consiste essentiellement à mettre en œuvre au moins un homopolyaminoacide tel que défini ci-dessus et/ou la composition elle aussi décrite supra.
L'invention concerne également une méthode de traitement thérapeutique consistant essentiellement à administrer la composition telle que décrite dans le présent exposé, par voie orale, parentérale, nasale, vaginale, oculaire, sous-cutanée, intraveineuse, intramusculaire, intradermique, intrapéritonéale, intracérébrale ou buccale.
Suivant une variante particulière de l'invention, cette méthode de traitement thérapeutique consiste essentiellement à mettre la composition telle que décrite supra sous forme de solution dans un solvant biocompatible puis à l'injecter en sous-cutané, intramusculaire ou dans une tumeur, de préférence de manière à ce qu'elle forme un dépôt sur le site d'injection.
L'invention sera mieux comprise et ses avantages et variantes de mise en œuvre ressortiront bien des exemples qui suivent et qui décrivent la synthèse des polymères de l'invention, leur transformation en système de vectorisation de PA (suspension colloïdale aqueuse stable) et la démonstration de la capacité d'un tel système de s'associer à une protéine pour former des compositions pharmaceutiques.
EXEMPLES :
Exemple 1 : synthèse du polymère (1), pHEG C12
Indices et groupements : m = 102, n = 18, L=COCπH23 (lauroyl)
5 g d'un poly(acide glutamique) de degré de polymérisation (DP) 120 sont solubilisés, par chauffage à 80°C, dans 77 ml de DMF dans un ballon tricol de 250 ml. A cette solution refroidie à -15°C, sont ajoutés 6.35 g d'isobutyl chloroformate puis 5.33 g de N-méthyl morpholine. Le milieu réactionnel est agité 15 minutes en laissant remonter la température à 0°C. Le milieu réactionnel est à nouveau refroidi à -15°C avant de procéder à l'ajout d'une solution de sel de tosyle de laurate de 2-aminoéthyle dans le DMF (2.58 g dans 25 ml). Le milieu réactionnel est agité 30 minutes en laissant remonter à 0°C. Le milieu réactionnel est à nouveau refroidi à -15°C avant de procéder à l'ajout des 9.5 g d'éthanol aminé. La température remonte à l'ambiante en 1.5 heure. Au bout de ce temps, le milieu réactionnel est dilué dans 920 ml d'eau avant de procéder à une diafiltration contre 5 volumes d'eau salée (0.9% NaCl) et 8 volumes d'eau. La solution de polymère est ensuite congelée et lyophilisée. 5.2 g du polymère (2) sont obtenus, soit 68% de rendement. Le pourcentage de greffon Cl 2 déterminé par RMN 1H dans le TFA-d est de 14.4%. Le pourcentage d'hydroxyethyl glutamine déterminé par RMN 1H dans le TFA-d est de 86.0%. Le Mn (déterminé par GPC NMP) est de 22.7 kg/mol en équivalents PMMA. Exemple 2 : synthèse du polymère (2), pHEG T
Indices et groupements : m = 211, n = 9, T = D,L-alpha-tocophérol (T)
5 g d'un poly(acide glutamique) de degré de polymérisation (DP) 220 et greffé à 4% molaire de façon statistique avec de l'alpha-tocophérol synthétique (obtenu selon le mode opératoire décrit dans WO-A-03/104303) sont solubilisés, par chauffage à 80°C, dans 77 ml de DMF dans un ballon tricol de 250 mL. A cette solution refroidie à 0°C, sont ajoutés 5,3 ml d'isobutyl chloroformate puis 4,5 ml de N-méthyl morpholine. Le milieu réactionnel est agité 15 minutes avant de procéder à l'ajout des 8,3 ml d'éthanol aminé. La température, maintenue 5 minutes à 0°C, remonte ensuite à l'ambiante et le milieu est agité 2 heures. Au bout de ce temps, le milieu réactionnel est bloqué avec 2 ml de HCl IN et est ensuite dilué dans 600 ml d'eau avant de procéder à une dialyse (tube 1 kD) contre 1 volume d'eau salée (0.9% NaCl) et 3 volumes d'eau. La solution de polymère est ensuite congelée et lyophilisée. 6.1 g du polymère (3) sont obtenus, soit 96% de rendement. Le pourcentage de tocophérol déterminé par RMN 1H dans le TFA-d est de 4.5%. Le pourcentage d'hydroxyethyl glutamine déterminé par RMN 1H dans le TFA-d est de 95%. Le Mn (déterminé par GPC NMP) est de 116 kg/mol en équivalents PMMA.
Exemple 3 : Synthèse du polymère Cl, PHEG -distearylamine
Le polymère comparatif Cl a été synthétisé selon l'exemple 4 de la demande de brevet WO-A-02/098952. Le polymère contient un groupement distearylamine en bout de chaîne constituée de 40 unités de polyhydroxyethylglutamine.
Exemple 4 : Etude d'association avec l'insuline
On prépare une solution aqueuse contenant 10 mg de polymère par millilitre à pH 7,4 et 200 UI d'insuline (7,4 mg). On laisse incuber les solutions pendant deux heures à température ambiante et on sépare l'insuline libre de l'insuline associée par ultrafiltration (seuil à 100 KDa, 15 minutes sous 10000G à 18 °C). L'insuline libre récupérée dans le filtrat est ensuite dosée par CLHP (Chromatographie Liquide Haute Performance) et l'on déduit la quantité d'insuline associée. Les résultats sont donnés dans le tableau 1 ci- dessous.
TABLEAU 1
Les résultats démontrent que les polymères de l'invention sont capables d'associer fortement l'insuline pour donner des suspensions colloïdales de taille supérieure à 100 KDa et les taux d'association avec l'insuline sont très élevés. Le polymère Cl ayant un groupement hydrophobe distéaryl en bout de chaîne est moins efficace. La capacité d'association de ces polymères les rend aptes à être utilisés comme agents de vectorisation.
Exemple 5 : Solubilité du polymère en fonction du pH
La solubilité du polymère 2 a été comparée à celle du polymère de référence, polyglutamate de sodium greffé par de l'alpha-tocophérol à environ 5% molaire, synthétisé comme décrit dans la demande de brevet WO-A-03/104303 (polymère C2). Le résultat est le suivant :
II apparaît que la solubilité du polymère 2 s'étend sur une large gamme de Ph.

Claims

REVENDICATIONS
1. Copolhydroxyalkylglutamine caractérisé en ce qu'il comprend une multiplicité de groupements hydrophobes (GH) pendants et identiques ou différents entre eux.
2. Copolhydroxyalkylglutamine selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comporte en moyenne au moins 3 groupements hydrophobes (GH) par chaîne copolymère.
3. Copolyhydroxyalkylglutamine selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il comprend des groupements hydroxyalkylamine identiques ou différents entre eux et de préférence choisis parmi les groupements suivants: le 2-hydroxyéthylamine, le 3 -hydroxypropy lamine, le
2,3-dihydroxypropylamine, le tris(hydroxyméthyl)aminométhane et le 6-hydroxyhexylamine.
4. Copolyhydroxyalkylglutamine selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le groupement hydrophobe GH comporte de 8 à 30 atomes de carbone.
5. Copolyhydroxyalkylglutamine selon la revendication 4, caractérisé en ce que les groupements hydrophobes GH sont choisis dans le groupe comprenant :
• les alkyles linéaires ou ramifiés en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome,
• les alkylaryles ou arylalkyles en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome,
• et les (poly)cycliques en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome.
6. Copolyhydroxyalkylglutamine selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'au moins l'un des groupements hydrophobes GH est obtenu par greffage, à partir d'un précurseur choisi dans le groupe comprenant: l'octanol, le dodécanol, le tétradécanol, l'héxadécanol, l'octadécanol, l'oleylalcool, le tocophérol ou le cholestérol.
7. Copolyhydroxyalkylglutamine selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend des unités d'alpha-L-glutamate et/ou d'alpha-L-glutamique.
8. Copolyhydroxyalkylglutamine selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il répond à l'une des formules générales (I) suivantes:
dans laquelle :
" A représente indépendamment :
- un groupement NHR2 dans laquelle R2 représente un H, un alkyle linéaire en C2 à ClO ou ramifié en C3 à ClO ou un benzyle,
- une unité acide aminé terminale liée par l'azote et dont la fonction(s) acide(s) est éventuellement modifié par une aminé ou un alcool répondant aux définitions NHR2 et OR2 respectivement.
• B est un groupement de liaison divalent, trivalent ou tétravalent, de préférence choisi parmi les radicaux suivants:
-O-, -NH-, -N-alkyle- (Cl à C5), un résidu d'acide aminé (de préférence naturel), un diol, un triol, une diamine, une triamine, un aminoalcool ou un hydroxyacide comportant de 1 à 6 atomes de carbone, " C est un groupement mono, di ou trihydroxy(Cl à C6)alkyl, de préférence l'hydroxyéthyle, l'hydroxy-propyle ou le trishydroxyméthylméthane. " D représente un H, un groupe acyle linéaire en C2 à ClO ou ramifié en C3 à
ClO, ou un pyroglutamate; " les groupements hydrophobes GH représentent chacun indépendamment les uns des autres un radical choisi parmi:
• les alkyles linéaires ou ramifiés en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S), ou
• les alkylaryles ou arylalkyle en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S), ou
• les (poly)cycliques en C8 à C30 pouvant comporter éventuellement au moins une insaturation et/ou au moins un hétéroatome (de préférence O et/ou N et/ou S);
• R représente un H ou une entité cationique, de préférence sélectionnée dans le groupe comprenant :
- les cations métalliques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant : le sodium, le potassium, le calcium, le magnésium ;
- les cations organiques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant :
• les cations à base d'aminé,
• les cations à base d'oligoamine,
• les cations à base de polyamine (la polyéthylèneimine étant particulièrement préférée),
• les cations à base d'acide(s) aminé(s) avantageusement choisis dans la classe comprenant les cations à base de lysine ou d'arginine,
- ou les polyaminoacides cationiques avantageusement choisis dans le sous-groupe comprenant la polylysine ou l'oligolysine;
" m, n et q sont des entiers positifs;
• (m)/(m+q+n) est défini comme le taux de greffage molaire des groupements hydrophobes GH et varie de 0,5 à 90 % molaire sous condition que chaque chaîne de copolymère possède en moyenne au moins 3 greffons hydrophobes;
• (m+q+n) varie de 10 à 1000, de préférence entre 30 et 500; " (q)/(m+q+n) varie de 0 à 60 % molaire ;
• p est un entier variant de 1 à 3.
9. Copolyhydroxyalkylglutamine selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que les groupements hydrophobes GH sont disposés de façon aléatoire.
10. Copolyhydroxyalkylglutamine selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que sa masse molaire se situe entre 2.000 et 200.000 g/mole, et de préférence entre 5.000 et 100.000 g/mole.
11. Copolyhydroxyalkylglutamine selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il est porteur d'au moins un greffon de type polyalkylène (de préférence éthylène)glycol lié à une unité glutamate.
12. Composition pharmaceutique, cosmétique, diététique ou phytosanitaire comprenant au moins un copolyhydroxyalkylglutamine selon l'une quelconque des revendications 1 à 11.
13. Composition selon la revendication 12, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un principe actif.
14. Composition, notamment selon la revendication 13, caractérisée en ce que le principe actif est associé au(x) copolyhydroxyalkylglutamine(s) par une ou plusieurs liaisons autre(s) qu'une (ou des) liaison(s) chimique(s) covalente(s).
15. Composition selon la revendication 13 ou 14, caractérisée en ce que le principe actif est une protéine, une glycoprotéine, une protéine liée à une ou plusieurs chaînes polyalkylèneglycol, un polysaccharide, un liposaccharide, un oligonucléotide, un polynucléotide ou un peptide.
16. Composition selon la revendication 13 ou 14, caractérisée en ce que le principe actif est une petite molécule organique hydrophobe, hydrophile ou amphiphile.
17. Composition selon l'une quelconque des revendications 12 à 16, caractérisée en ce qu'elle peut être administrée par voie orale, parentérale, nasale, vaginale, oculaire, sous-cutanée, intraveineuse, intramusculaire, intradermique, intrapéritonéale, intracérébrale ou buccale.
18. Composition selon l'une quelconque des revendications 12 à 17, caractérisée en ce qu'elle est sous forme d'un gel, d'une solution, d'une émulsion, de micelles, de nanoparticules, de microparticules, d'une poudre ou d'un film.
19. Composition selon l'une quelconque des revendications 12 à 18, caractérisée en ce qu'elle est une suspension colloïdale de nanoparticules et/ou de microparticules et/ou de micelles de copolyhydroxyalkylglutamines, dans une phase aqueuse.
20. Composition selon l'une quelconque des revendications 12 à 19, caractérisée en ce qu'elle est sous forme de solution dans un solvant biocompatible et en ce qu'elle peut être injectée par voie sous-cutanée, intramusculaire ou dans une tumeur.
21. Composition selon la revendication 20, caractérisée en ce qu'elle est apte à former un dépôt sur le site d'injection.
22. Procédé de préparation de médicaments, en particulier pour administration orale, nasale, vaginale, oculaire, sous-cutanée, intraveineuse, intramusculaire, intradermique, intrapéritonéale ou intracérébrale, les principes actifs de ces médicaments pouvant être, notamment, des protéines, des glycoprotéines, des protéines liées à une ou plusieurs chaînes polyalkylèneglycol, des peptides, des polysaccharides, des liposaccharides, des oligonucléotides, des polynucléo- tides et des petites molécules organiques hydrophobes, hydrophiles ou amphiphiles ; et/ou des nutriments ; et/ou de produits cosmétiques ou phytosanitaires ; caractérisé en ce qu'il consiste essentiellement à mettre en œuvre au moins un copolyhydroxyalkylglutamine selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 et/ou la composition selon l'une quelconque des revendications 12 à 21.
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