EP0475098A2 - Röntgenmikroskop - Google Patents

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EP0475098A2
EP0475098A2 EP91113635A EP91113635A EP0475098A2 EP 0475098 A2 EP0475098 A2 EP 0475098A2 EP 91113635 A EP91113635 A EP 91113635A EP 91113635 A EP91113635 A EP 91113635A EP 0475098 A2 EP0475098 A2 EP 0475098A2
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ray
microscope according
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condenser
mirror
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Jürgen Dr. Thieme
Günter Prof. Dr. Schmahl
Bastian Dr. Nieman
Dietbert Dr. Rudolph
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Carl Zeiss SMT GmbH
Carl Zeiss AG
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Carl Zeiss SMT GmbH
Carl Zeiss AG
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    • G—PHYSICS
    • G21—NUCLEAR PHYSICS; NUCLEAR ENGINEERING
    • G21K—TECHNIQUES FOR HANDLING PARTICLES OR IONISING RADIATION NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; IRRADIATION DEVICES; GAMMA RAY OR X-RAY MICROSCOPES
    • G21K7/00—Gamma- or X-ray microscopes

Definitions

  • X-ray microscopes which differ more or less in their optical structure with regard to the beam source used, the optics for focusing the X-ray beam on the object to be examined and those for imaging the object on the imaging X-ray detector used.
  • X-ray microscopes have been described in which mirror optics are used to image the object on the detector, for example Wolter optics that image the object with grazing incidence of the X-rays.
  • the quality of the microscopic image generated with such microscopes is not particularly good, since the mirror optics are sometimes subject to considerable image errors.
  • image errors - in the case of mirror optics that work under grazing incidence this is, for example, the so-called angular tangent error - limit the resolution of the optics aperture, which is possible in principle and which can be achieved with the microscope.
  • zone plates are used both for focusing the X-radiation on the object and for imaging the object on the detector. Similar to very thin lenses, these zone plates allow a largely image-free and thus high-resolution image of the object. However, they have a significantly poorer efficiency than mirror optics. In practice, it is between 5% and 15%, i.e. only a maximum of 15% of the X-rays incident on the zone plate are used for the imaging.
  • zone plate used as a condenser not only serves to focus the X-ray radiation on the object, but also acts as a monochromator and separates the monochromatic radiation required for high-resolution imaging from the more or less extensive wavelength range emitted by the X-ray source. This is done simply by means of a suitable pinhole on the optical axis, which has the effect that only one of the monochromatic images resulting from the wavelength dependence of the focal length of the zone plate on the optical axis passes through the diaphragm.
  • the X-ray microscope described is relatively weak due to the use of zone plates with the mentioned low efficiency, so that long exposure times result, which e.g. can cause motion blur during exposure when recording live cells.
  • One is therefore dependent on X-ray sources that are as intensive as possible.
  • synchrotron radiation from electron storage rings is used almost exclusively for X-ray microscopy.
  • this has the disadvantage that the X-ray microscope is not self-sufficient, i.e. the user is bound to one of the few electron storage rings in terms of space and the measurement time available to him.
  • the so-called plasma focus source is also known as the X-ray source.
  • X-ray sources for example described in DE-OS 33 32 711, do not emit X-rays continuously, but instead deliver individual short X-ray pulses which are followed by a relatively long dead time during which the capacitors of the X-ray source have to be recharged.
  • the X-ray energy contained in a pulse is in many cases not sufficient,
  • the available X-ray energy is optimally used.
  • the use of mirror optics on the illumination side does not have a disadvantage, since the image errors of the mirror condenser are significantly less critical when illuminated than on the imaging side of the microscope.
  • 20 to 30 times the light gain is achieved compared to a zone plate on the lighting side.
  • the mirror condenser cannot be used as a monochromator, this is not necessary either, since X-ray sources such as, for example the plasma focus already provides a sufficiently intense monochromatic line radiation.
  • the zone plate with its excellent imaging properties can be retained on the imaging side.
  • the mirror condenser can be a segment of an ellipsoid that focuses the X-ray radiation on the object with grazing incidence. It is expedient if the mirror condenser is coated with a multilayer to increase the reflectivity. In this way, the efficiency of the microscope can be further improved.
  • the zone plate used for imaging the object on the detector is expediently a phase zone plate which has a higher efficiency than an amplitude zone plate.
  • the condenser images the X-ray source directly onto the object in the manner of the so-called “critical lighting”.
  • critical lighting which is usually used in microscopy
  • the mirror condenser is protected by one or more foils through which the X-ray beam passes.
  • the sensitive mirror surfaces can be shielded against dust and dirt from the environment, possibly also against vapors from the plasma focus source, which would otherwise be deposited on the optical surfaces of the condenser and reduce its efficiency.
  • Either a photo plate or an X-ray sensitive CCD camera can be used as the detector.
  • An image memory is expediently connected downstream of the camera, into which the images of the objects to be examined, each generated with an x-ray pulse, are then read and further processed, for example, using the known methods of image processing.
  • (1) denotes the X-ray source.
  • This X-ray source is a plasma focus source of the type as described in DE-OS 33 32 711.
  • This plasma focus source briefly provides a point-like plasma which emits X-rays with a dominant emission wavelength on the Lyman-a line of the six-fold ionized nitrogen.
  • the plasma focus source (1) is operated with a capacitor bank (2) which is electrically charged in the period between the discharges.
  • the X-ray radiation emanating from the plasma focus (1 a) is focused on the object placed on a slide (4) with the aid of a mirror condenser (3).
  • the mirror condenser (3) has the shape of an ellipsoid of revolution and reflects the X-rays striking its mirror surfaces under grazing incidence.
  • the mirror condenser (3) is closed at both ends by a film (15) and (16), which protects the sensitive mirror surfaces against dirt.
  • the foils are made of a material that is as weakly absorbent as possible in the spectral range of the X-rays, e.g. Made polyimide.
  • micro zone plate (5) is arranged above the object level.
  • This micro zone plate represents the actual imaging optics of the X-ray microscope. Its distance from the object plane is greatly exaggerated in the representation. In fact, the micro zone plate has a diameter of approximately 20-50 ⁇ m and is only a few tenths of a millimeter above the object to be examined.
  • the micro zone plate (5) images the object in a greatly enlarged manner on a detector (6).
  • the detector (6) is a solid-state camera, such as that which can be obtained from Valvo under the name NXA 1011, and which is sensitized to X-rays by removing the cover glass and the photosensitive surface with a fluorescent dye such as Gd 2 0 2 S: Tb was occupied.
  • the CCD camera (6) is attached to a carrier (7) which, as indicated by the arrow, can be moved along the optical axis with the aid of an adjusting device (8) for the purpose of focusing.
  • the components of the X-ray microscope described above are located in a cylindrical column (9) built onto the capacitor bank (2), which is under vacuum or with a gas which is only weakly absorbent in the area of the X-ray radiation used, e.g. Helium or hydrogen is filled.
  • a gas which is only weakly absorbent in the area of the X-ray radiation used e.g. Helium or hydrogen is filled.
  • the signal lines of the CCD camera (6) are passed through the setting device (8) and connected to an electronic unit (10), which reads out the image from the CCD camera (6).
  • This camera electronics (10) is synchronized via a control unit (11) with the electronics (not shown) for the operation of the plasma focus source in such a way that after each x-ray pulse emitted by the plasma focus source (1) an image is drawn in and stored in an image memory (13) .
  • the images stored there can then be viewed using a monitor (12) which is also connected to the electronic unit (10).

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Abstract

Das Röntgenmikroskop besitzt eine gepulste Röntgenstrahlquelle (1), die eine intensive Linienstrahlung liefert, wie z.B. eine Plasmafokusquelle, einen Spiegelkondensor (3) der die Strahlung der Röntgenquelle auf das zu untersuchende Objekt (4) fokussiert, und eine als Zonenplatte (5) ausgebildete Röntgenoptik, mit der das Objekt unter hoher Auflösung auf einen Röntgendetektor (6) abgebildet wird. Durch diese Kombination ist es möglich, bei bildfehlerfreier hoher Auflösung auf der Abbildungsseite gleichzeitig noch eine ausreichend hohe Röntgenenergie am Probenort freizusetzen, so daß sich für die Untersuchung lebender Zellen erforderliche kurze Belichtungszeiten ergeben. <IMAGE>

Description

  • Es sind verschiedenartige Röntgenmikroskope bekannt, die sich in ihrem optischen Aufbau hinsichtlich der benutzten Strahlquelle, der Optik zur Fokussierung des Röntgenstrahls auf das zu untersuchende Objekt und die zur Abbildung des Objekts auf den verwendeten bildgebenden Röntgendetektor mehr oder weniger stark unterscheiden.
  • So sind beispielsweise Röntgenmikroskope beschrieben worden, in denen Spiegeloptik für die Abbildung des Objekts auf den Detektor benutzt wird zum Beispiel eine Wolter-Optik, die das Objekt unter streifendem Einfall der Röntgenstrahlung abbildet. Die Qualität des mit solchen Mikroskopen erzeugten mikroskopischen Bildes ist jedoch nicht sonderlich gut, da die Spiegeloptiken zum Teil mit erheblichen Bildfehlern behaftet sind. Diese Bildfehler - bei Spiegeloptiken, die unter streifendem Einfall arbeiten, ist das beispielsweise der sogenannte Winkeltangentenfehler - begrenzen die von der Apertur der Optik vorgegebene, prinzipiell mögliche Auflösung, die sich mit dem Mikroskop erzielen läßt.
  • Es sind auch Röntgenmikroskope beschrieben, in denen sowohl zur Fokussierung der Röntgenstrahlung auf das Objekt als auch zur Abbildung des Objekts auf den Detektor sogenannte Zonenplatten Verwendung finden. Diese Zonenplatten ermöglichen ähnlich sehr dünnen Linsen eine weitgehend bildfehlerfreie und damit hochaufgelöste Abbildung des Objekts. Sie haben jedoch einen bedeutend schlechteren Wirkungsgrad als Spiegeloptiken. Er liegt in der Praxis zwischen 5% und 15%, d.h. es werden nur maximal 15% der auf die Zonenplatte auftreffenden Röntgenstrahlung für die Abbildung benutzt.
  • Eine Übersicht über die verschiedenen Röntgenmikroskope gibt das Buch mit dem Titel "X-ray microscopy", Herausgeber G. Schmahl und D. Rudolph, Springer Series in Optical Science, Band 43, 1984.
  • In diesem Buch ist auf Seite 192 ff ein Röntgenmikroskop beschrieben, bei dem sowohl der Kondensor als auch das Objektiv als Zonenplatte ausgebildet ist. Die als Kondensor verwendete Zonenplatte dient dabei nicht nur zur Fokussierung der Röntgenstrahlung auf das Objekt, sondern wirkt außerdem als Monochromator und sondert die für eine hochauflösende Abbildung erforderliche monochromatische Strahlung aus den von der Röntgenquelle abgegebenen mehr oder weniger ausgedehnten Wellenlängenbereich aus. Dies geschieht einfach durch eine geeignete Lochblende auf der optischen Achse, die bewirkt, daß nur eines der infolge der Wellenlängenabhängigkeit der Brennweite der Zonenplatte auf der optischen Achse entstehenden monochromatischen Bilder durch die Blende hindurchtritt.
  • Das beschriebene Röntgenmikroskop ist wegen der Verwendung von Zonenplatten mit dem genannten niedrigen Wirkungsgrad relativ lichtschwach, so daß sich lange Belichtungszeiten ergeben, was z.B. bei der Aufnahme von lebenden Zellen zu Bewegungsunschärfe während der Belichtung führen kann. Man ist deshalb auf möglichst intensive Röntgenstrahlquellen angewiesen.
  • Für die Röntgenmikroskopie wird deshalb fast ausschließlich Synchrotronstrahlung von Elektronenspeicherringen verwendet. Dies hat jedoch den Nachteil, daß das Röntgenmikroskop nicht autark ist, d.h. der Benutzer ist räumlich und hinsichtlich der ihm zur Verfügung stehenden Meßzeit an einen der wenigen Elektronenspeicherringe gebunden.
  • Als Röntgenstrahlquelle ist weiterhin die sogenannte Plasmafokusquelle bekannt. Solche beispielsweise in der DE-OS 33 32 711 beschriebenen Röntgenquellen geben jedoch Röntgenstrahlung nicht kontinuierlich ab, sondern liefern einzelne kurze Röntgenpulse, denen sich eine relativ lange Totzeit anschließt, während der die Kondensatoren der Röntgenstrahlquelle wieder aufgeladen werden müssen. Die in einem Puls enthaltende Röntgenenergie ist in vielen Fällen nicht ausreichend,
  • Aus dem Vorgesagten ergibt sich, daß ein autarkes, gleichzeitig hochauflösendes und lichtstarkes Röntgenmikroskop bisher nicht existiert. Für biologische Anwendungen wird aber gerade dies u.a. wegen der dabei geforderten kurzen Belichtungszeiten für die Untersuchung von lebenden Zellen gefordert.
  • Gemäß der Erfindung wird nun diese Aufgabe durch die Kombination von den im Anspruch 1 angegebenen Maßnahmen, d.h. durch ein Röntgenmikroskop mit folgendem Aufbau gelöst: Es besitzt
    • - eine gepulste Röntgenquelle, die eine intensive Linienstrahlung liefert,
    • - einen Spiegelkondensor, der die Strahlung der Röntgenquelle auf das zu untersuchende Objekt fokussiert,
    • - eine als Zonenplatte ausgebildete Röntgenoptik, die das Objekt mit hoher Auflösung auf einen Röntgendetektor abbildet.
  • Durch die Kombination der gepulsten Röntgenquelle, die intensive Linienstrahlung liefert, mit einem Spiegelkondensor wird die zur Verfügung stehende Röntgenenergie optimal genutzt. Hierbei wirkt sich die Verwendung von Spiegeloptik auf der Beleuchtungsseite nicht nachteilig aus, da einmal die Bildfehler des Spiegelkondensors bei der Beleuchtung bedeutend weniger kritisch als auf der Abbildungsseite des Mikroskops sind. Hingegen wird im Vergleich zu einer Zonenplatte auf der Beleuchtungsseite ein 20 bis 30facher Lichtgewinn erzielt.
  • Zwar kann der Spiegelkondensor nicht als Monochromator verwendet werden, dies ist jedoch auch nicht erforderlich, da Röntgenquellen wie z.B. der Plasmafokus bereits eine ausreichend intensive monochromatische Linienstrahlung liefern.
  • Aufgrund des genannten beleuchtungsseitig erzielten Lichtgewinns kann auf der Abbildungsseite die Zonenplatte mit ihren ausgezeichneten Abbildungseigenschaften beibehalten werden.
  • Mit der beschriebenen Kombination hat man erstmals genügend Röntgenenergie zur Verfügung, um biologische Objekte sozusagen "mit einem Schuß" abzubilden, d.h. die in einem Röntgenpuls enthaltene Röntgenenergie wird optimal genutzt und reicht zur Aufnahme eines Röntgenbildes von biologischen Objekten aus.
  • Beispielsweise kann der Spiegelkondensor ein Segment eines Ellipsoids sein, das die Röntgenstrahlung unter streifendem Einfall auf das Objekt fokussiert. Es ist zweckmäßig, wenn der Spiegelkondensor zur Erhöhung des Reflektionsvermögens mit einer Vielfachschicht belegt ist. Hierdurch läßt sich der Wirkungsgrad des Mikroskops nochmals verbessern.
  • Die für die Abbildung des Objektes auf den Detektor benutzte Zonenplatte ist zweckmäßig eine Phasenzonenplatte, die einen höheren Wirkungsgrad als eine Amplitudenzonenplatte hat.
  • Es ist weiterhin zweckmäßig, wenn der Kondensor die Röntgenstrahlquelle direkt auf das Objekt abbildet nach Art der sogenannten "kritischen Beleuchtung". Im Gegensatz zu der sonst üblicherweise in der Mikroskopie verwendeten sogenannten "Köhlerschen Beleuchtung" hat das den Vorteil, daß man mit einer einzigen Kondensoroptik auskommt, d.h. der Wirkungsgrad auf der Beleuchtungsseite optimiert ist.
  • Es ist vorteilhaft, wenn der Spiegelkondensor durch eine oder mehrere Folien geschützt ist, durch die der Röntgenstrahl hindurchtritt. Mit diesen Folien lassen sich die empfindlichen Spiegelflächen abschirmen gegen Staub und Schmutz aus der Umgebung, eventuell auch gegen Dämpfe aus der Plasmafokusquelle, die sich andernfalls auf den optischen Flächen des Kondensors niederschlagen und seinen Wirkungsgrad verschlechtern.
  • Als Detektor kann entweder eine Fotoplatte oder eine röntgenempfindliche CCD-Kamera verwendet werden. Der Kamera wird zweckmäßig ein Bildspeicher nachgeschaltet, in den dann die jeweils mit einem Röntgenpuls erzeugten Bilder der zu untersuchenden Objekte eingelesen und beispielsweise mit den bekannten Methoden der Bildverarbeitung weiter verarbeitet werden.
  • Weitere Vorteile der Erfindung werden anhand des nachstehend in der einzigen Figur dargestellten Ausführungsbeispiels der Erfindung beschrieben.
  • In der Figur ist das neue Röntgenmikroskop in einer stark vereinfachten, zum Teil perspektivischen Prinzipskizze dargestellt.
  • In dem Mikroskop ist mit (1) die Röntgenquelle bezeichnet. Bei dieser Röntgenquelle handelt es sich um eine Plasmafokusquelle des Typs wie sie in der DE-OS 33 32 711 beschrieben ist. Diese Plasmafokusquelle liefert kurzzeitig ein punktförmiges Plasma, das Röntgenstrahlung mit einer dominanten Emissionswellenlänge auf der Lyman-a-Linie des sechsfach ionisierten Stickstoffs emittiert. Betrieben wird die Plasmafokusquelle (1) mit einer Kondensatorbank (2), die in der Zeit zwischen den Entladungen elektrisch aufgeladen wird.
  • Die von dem Plasmafokus (1 a) ausgehende Röntgenstrahlung wird mit Hilfe eines Spiegelkondensors (3) auf das auf einen Objektträger (4) aufgelegte Objekt fokussiert. Der Spiegelkondensor (3) hat die Form eines Rotationsellipsoides und reflektiert die auf seine Spiegelflächen auffallende Röntgenstrahlung unter streifendem Einfall. An beiden Enden ist der Spiegelkondensor (3) durch je eine Folie (15) und (16) abgeschlossen, die die empfindlichen Spiegeloberflächen gegen Verschmutzung schützt. Die Folien sind aus einem im Spektralbereich der Röntgenstrahlung möglichst schwach absorbierenden Material wie z.B. Polyimid hergestellt.
  • Über der Objektebene ist eine sogenannte Mikrozonenplatte (5) angeordnet. Diese Mikrozonenplatte stellt die eigentliche Abbildungsoptik des Röntgenmikroskop dar. Ihr Abstand von der Objektebene ist in der Darstellung stark übertrieben. Tatsächlich besitzt die Mikrozonenplatte etwa einen Durchmesser von 20 - 50 um und befindet sich nur wenige zehntel mm über dem zu untersuchenden Objekt.
  • Die Mikrozonenplatte (5) bildet das Objekt stark vergrößert auf einen Detektor (6) ab. Der Detektor (6) ist eine Festkörperkamera wie sie beispielweise unter der Bezeichnung NXA 1011 von der Firma Valvo bezogen werden kann, und die für Röntgenstrahlen sensibilisiert ist, indem das Deckglas entfernt und die photoempfindliche Fläche mit einem Fluoreszenzfarbstoff wie z.B. Gd202S:Tb belegt wurde.
  • Die CCD-Kamera (6) ist an einem Träger (7) befestigt, der wie durch den Pfeil angedeutet entlang der optischen Achse mit Hilfe einer Einstellvorrichtung (8) zum Zwecke der Fokussierung verschoben werden kann.
  • Die vorstehend beschriebenen Bauteile des Röntgenmikroskops befinden sich in einer auf die Kondensatorbank (2) aufgebauten zylindrischen Säule (9), die unter Vakuum steht oder mit einem im Bereich der verwendeten Röntgenstrahlung nur schwach absorbierenden Gas wie z.B. Helium oder Wasserstoff gefüllt ist.
  • Die Signalleitungen der CCD-Kamera (6) sind durch die Einstellvorrichtung (8) hindurchgeführt und an eine Elektronikeinheit (10) angeschlossen, die das Auslesen des Bildes aus der CCD-Kamera (6) besorgt. Diese Kameraelektronik (10) ist über eine Steuereinheit (11) mit der nicht näher dargestellten Elektronik für den Betrieb der Plasmafokusquelle synchronisiert derart, daß nach jedem von der Plasmafokusquelle (1) abgegebenen Röntgenpuls jeweils ein Bild eingezogen und in einem Bildspeicher (13) abgelegt wird. Die dort abgespeicherten Bilder können dann mittels eines ebenfalls an die Elektronikeinheit (10) angeschlossenen Monitors (12) betrachtet werden.
  • Es ist klar, daß im Rahmen der Erfindung Abwandlungen von dem hier im Detail beschriebenen Aufbau möglich sind. So kann anstelle der CCD-Kamera (7) auch eine Röntgenfilmkassette verwendet sein. Weiterhin ist es möglich, anstelle des unter streifendem Einfall arbeitenden Spiegelkondensors in Form eines Rotationsellipsoides andere Spiegeloptiken, beispielsweise eine Spiegelanordnung vom sogenannten Schwarzschildtyp zu verwenden.

Claims (11)

1. Röntgenmikroskop mit folgendem Aufbau:
- einer gepulsten Röntgenquelle, die eine intensive Linienstrahlung liefert,
- einem Spiegelkondensor, der die Strahlung der Röntgenquelle auf das zu untersuchende Objekt fokussiert,
- einer als Zonenplatte ausgebildeten Röntgenoptik, die das Objekt mit hoher Auflösung auf einen Röntgendetektor abbildet.
2. Röntgenmikroskop nach Anspruch 1 wobei die Spiegelfläche des Kondensors (3) mit einer Vielfachschicht zur Erhöhung des Reflexionsvermögens belegt ist.
3. Röntgenmikroskop nach Anspruch 1 wobei der Spiegelkondensor die Röntgenstrahlung unter streifendem Einfall fokussiert.
4. Röntgenmikroskop nach Anspruch 3 wobei der Spiegelkondensor ein Segment eines Ellipsoids ist.
5. Röntgenmikroskop nach Anspruch 1 wobei die Röntgenquelle eine Plasmafokusquelle ist.
6. Röntgenmikroskop nach Anspruch 1 wobei die Zonenplatte eine Phasenzonenplatte ist.
7. Röntgenmikroskop nach Anspruch 1 wobei der Spiegelkondensor durch eine Folie geschützt ist, durch die der Röntgenstrahl hindurchtritt.
8. Röntgenmikroskop nach Anspruch 1 wobei der Spiegelkondensor die Röntgenquelle (1a) direkt auf bzw. in das Objekt (4) abbildet.
9. Röntgenmikroskop nach Anspruch 1 wobei der Detektor (6) eine Halbleiterkamera ist.
10. Röntgenmikroskop nach Anspruch 1 wobei eine Elektronik (11) vorgesehen ist, über die der Detektor (6) und die gepulste Röntgenquelle (1) synchronisiert sind, derart daß jeweils nach einem Röntgenpuls ein Bild aus dem Röntgendetektor (6) ausgelesen wird.
11. Verfahren zur Erzeugung von hochaufgelösten mikroskopischen Bildern im Lichte von Röntgenstrahlung wobei
- die Strahlung einer gepulsten Röntgenstrahlquelle mittels eines Spiegelkondensors auf das Objekt fokussiert wird,
- jeweils ein Bild des Objekts mit einem ausgelösten Röntgenpuls erzeugt wird,
- die Kamera, auf die das mikroskopische Objekt von einer Zonenplatte abgebildet wird, synchron mit der gepulsten Röntgenstrahlquelle jeweils nach einem erzeugten Röntgenpuls ausgelesen wird.
EP91113635A 1990-08-29 1991-08-14 Röntgenmikroskop Expired - Lifetime EP0475098B1 (de)

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EP0475098A3 EP0475098A3 (en) 1992-07-22
EP0475098B1 EP0475098B1 (de) 1996-02-07

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