EA038796B1 - Индолиноновые соединения и их применение в лечении фиброзных заболеваний - Google Patents

Индолиноновые соединения и их применение в лечении фиброзных заболеваний Download PDF

Info

Publication number
EA038796B1
EA038796B1 EA201891506A EA201891506A EA038796B1 EA 038796 B1 EA038796 B1 EA 038796B1 EA 201891506 A EA201891506 A EA 201891506A EA 201891506 A EA201891506 A EA 201891506A EA 038796 B1 EA038796 B1 EA 038796B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
methyl
phenyl
amino
methylene
carboxylate
Prior art date
Application number
EA201891506A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201891506A1 (ru
Inventor
Иан Уолтерс
Луис Бирч
Джозеф Хилл-Казнс
Стивен Пол Коллингвуд
Кристофер Скотт Стивенсон
Original Assignee
Респиверт Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Респиверт Лимитед filed Critical Респиверт Лимитед
Publication of EA201891506A1 publication Critical patent/EA201891506A1/ru
Publication of EA038796B1 publication Critical patent/EA038796B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A61K31/497—Non-condensed pyrazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C205/00—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton
    • C07C205/49—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
    • C07C205/57—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups having nitro groups and carboxyl groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/30—Indoles; Hydrogenated indoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/32—Oxygen atoms
    • C07D209/34—Oxygen atoms in position 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/08—Bridged systems

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

Изобретение относится inter alia к соединению формулы (I)где R1, R2, R3 и Z определены в описании, к композициям, содержащим их, и к применению соединений и композиций соединений для лечения, например при лечении фиброзных заболеваний или интерстициальных заболеваний легких, в частности идиопатического легочного фиброза.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится inter alia к новым соединениям, которые ингибируют протеинкиназы, и к их применению в терапии, в частности, для лечения фиброзных заболеваний или интерстициальных легочных заболеваний, особенно идиопатического легочного фиброза и респираторных заболеваний. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединения.
Предшествующий уровень техники изобретения
Интерстициальные легочные заболевания (ILD) характеризуются рубцеванием легкого, что приводит к легочной дисфункции, которая, в конечном итоге, вызывает респираторную недостаточность. Существует множество ILD с неизвестной причиной, которые называют идиопатическими. Идиопатический легочный фиброз (IPF) является наиболее распространенным типом ILD. IPF поражает около 170000 человек в Европе и 130000 человек в Соединенных Штатах Америки, при этом каждый год только в США диагностируют приблизительно 48000 новых случаев, и ежегодно в США умирают 40000 человек. Показатели смертности от IPF очень высоки с медианой выживаемости 3-5 лет от постановки диагноза и с зарегистрированной 5-летней выживаемостью менее 30%, что на уровне показателей наиболее летальных злокачественных опухолей. Как показали до настоящего времени, немногие варианты лечения, отличные от трансплантации легкого, являлись эффективными, и лечение для большинства пациентов представляло собой контроль симптомов и паллиативную помощь.
IPF является хроническим и фатальным заболеванием, главным образом характеризуемым прогрессирующим снижением легочной функции, вызванным рубцеванием легочной ткани, что приводи к усугублению одышки. Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), фактор роста фибробластов (FGF) и тромбоцитарный фактор роста (PDGF) являются известными мощными митогенами для фибробластных клеток, которые впоследствии замещают нормальную ткань в легких при возникновении фиброза. Доказательство патогенной роли PDGF, VEGF и FGF в ILD продемонстрировали клинически. Первичным участком поражения является интерстиций, ткань между альвеолярными мешками в легком, но также поражаются легочные ткани, периферические дыхательные пути и сосуды. Считают, что процесс заболевания инициируется рядом микроповреждений альвеолярного эпителия в легком. После повреждения повышенная сосудистая проницаемость приводит к образованию сгустка, и резидентные эпителиальные клетки пролиферируют, пытаясь заменить те клетки, которые погибли в результате повреждения. Этот процесс инициирует высвобождение различных факторов роста (например, PDGF, VEGF, FGF и трансформирующего фактора роста β (TGFe)), что приводит к аберрантной активации эпителиальных клеток, аномальному сосудистому ремоделированию и, что особенно важно, пролиферации и миграции фибробластов в легкое. Факторы роста также индуцируют трансформацию резидентных клеток в миофибробласты, которые вместе с фибробластами организуются в очаги (King Т.Е. Jr. et al., Lancet, 2011, 3; 378(9807):1949-61; Selman M. et al., Ann. Intern. Med., 2001, 16; 134(2):136-51). Такие клеточные изменения приводят к нарушению базальной мембраны и к чрезмерному накоплению белков внеклеточного матрикса в интерстициальном пространстве. Результатом является возможное разрушение нормальной архитектуры альвеолярно-капиллярной единицы и рубцевание легкого. Патологии, которые определяют обычный интерстициальный паттерн (UIP) фиброза, характерный для IPF, представляют собой гетерогенный паттерн чередующихся участков нормального легкого, интерстициального воспаления, плотного фиброза, фибробластических очагов и сотовых структур, особенно в субплевральной области легкого (Du Bois R.M., Nat. Rev. Drug Discov., 2010, 9(2): 129-40; Selman M. et al., Ann. Intern. Med., 2001, 16; 134(2):136-51; King T.E. Jr. et al., Lancet, 2011, 3; 378(9807):1949-61). Потеря нормальной архитектуры и рубцевание интерстициального пространства приводит к значительному снижению способности к газообмену, что вызывает развитие классических симптомов заболевания, а именно одышки, хронического кашля, инспираторных хрипов при аскультации, и к аномальной спирометрии (Castriotta R.J. et al., Chest, 2010, 138(3):693-703). В то время как течение заболевания является неоднородным, медиана выживаемости составляет приблизительно 3-5 лет, и наиболее распространенной причиной смерти является респираторная недостаточность из-за прогрессирующих патологий, которые нарушают нормальное функционирование легких и газообмен.
Для достижения лучшей переносимости, а также лучшей эффективности в лечении легочных нарушений может быть целесообразным доставка лекарственного средства непосредственно на участок действия в легкое. Это позволяет достичь более высоких концентраций лекарственного средства на участке действия, что обеспечивает снижение суммарной дозы, а следовательно, и снижение системных побочных эффектов.
Нинтеданиб, ингибитор протеинкиназы, был одобрен FDA в 2014 году для лечения IPF путем перорального введения. Однако он ассоциируется с существенными системными неблагоприятными событиями, в том числе с абдоминальной болью, рвотой и диарей. В WO 2006/067165 описывают, что ингибиторы VEGFR, FGFR и PDGFR, такие как нинтеданиб, могут быть, как предполагают, применимы в лечении фиброзных заболеваний, таких как IPF. В Fehrenbach H. et al., Virchows Arch., 1999, 435(1):20-31, раскрывается, что VEGFR связывают с причиной легочного фиброза. В Lindroos P., Am. J. Physio Lung Cell Mol. Physiol., 2001, 280:L354-L362, описывается, что активация рецептора PDGF является механизмом гиперплазии миофибробластов при легочном фиброзе. В WO 01/27081 показали, что соединения,
- 1 038796 обладающие ингибирующими эффектами в отношении киназ, в том числе VEGFR, PDGFR и FGFR, являются подходящими для лечения фиброзных заболеваний, и раскрыли ряд замещенных по 6-положению индолинонов. Подобным образом, в WO 2006/067165 и WO 2006/067168 также раскрываются замещенные по 6-положению индолиноны для применения в качестве медицинских препаратов для лечения или предупреждения фиброзных заболеваний.
В уровне техники сохраняется потребность в разработке дополнительных соединений, особенно соединений, которые переносятся лучше, чем нинтеданиб, для лечения фиброзных заболеваний и интерстициальных легочных заболеваний, таких как IPF. Желательно, чтобы такие соединения имели низкую дозу, длительную продолжительность действия, подходящую для введения дозы один раз, два раза или три раза в сутки, а также хорошую эффективность и переносимость при доставке местным путем в легкое. Соединения формулы (I), описываемые в настоящем документе, призваны решить эту задачу.
Краткое описание изобретения
Согласно изобретению представлено соединение формулы (I)
где R1 представляет собой H, Me, Et, CH=CH2, C C-H или C=C-Me;
R2 представляет собой H, C1-C6-алкил, C1-C6-алкокси, Cз-C8-циклоалкил, -CH2-(Cз-C8-циклоалкил), галоген или циано;
R3 представляет собой (i)
или (ii)
или (iii)
Q представляет собой гетероатом, выбранный из O, N и S, и если N, необязательно может быть замещен C1-4αлкилом;
Z представляет собой CO или SO2;
Y1 представляет собой (CH2)n и за исключением случаев, если n равно O, необязательно может быть замещен Me;
X1 представляет собой (CH2)m и за исключением случаев, если m равно O, необязательно может быть замещен Me;
n и m независимо представляют собой 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
Y2 представляет собой (CH2)s и необязательно может быть замещен Me;
s равно 2, 3, 4, 5 или 6;
Y3 представляет собой (CH2)t и необязательно может быть замещен Me;
X2 представляет собой (CH2)v и необязательно может быть замещен Me;
t и v независимо представляют собой 2 или 3 за исключением того, что t + v = 4 или 5;
R4 представляет собой H, OH, NR6R7 или алифатический 4-8-членный гетероцикл, содержащий один или несколько гетероатомов, выбранных из O, N и S, за исключением того, что если R4 представляет собой OH или NR6R7, m равно 2, 3, 4 или 5;
R5 представляет собой H, OH, NR8R9 или алифатический 4-8-членный гетероцикл, содержащий один или несколько гетероатомов, выбранных из O, N и S, за исключением того, что если R5 представляет собой OH или NR8R9, n равно 2, 3, 4 или 5;
причем алифатические гетероциклические группы, которые могут быть представлены при помощи R4 и R5, необязательно могут содержать карбонильную или сульфоновую группу и необязательно могут
- 2 038796 быть замещены одной или несколькими группами, выбранными из -С1-С4-алкила, С1-С4-гидроксиалкил-,
С1-С4-алкокси(С1-С4)алкил-, -C1-C4-алкиленСОNR1oR11, CN, OH и NR12R13;
R6, R7, R8, R9 независимо представляют собой H или С1-С4-алкил, необязательно замещенный OH, оксо, NR14R15 или -С1-С4-алкокси; и
R10, Rn, R12, R13, R14 и R15 независимо представляют собой H или С1-С4-алкил;
или его фармацевтически приемлемая соль (далее соединения по настоящему изобретению или соединения настоящего изобретения).
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 показана проницаемость искусственной мембраны для соединений типичных примеров в соответствии с настоящим изобретением и нинтеданиба (см. результаты анализа проницаемости PAMPA и табл. 8: при повторении эксперимента использовали средние значения для соединений);
на фиг. 2 - общее воздействие на легкое внутривенного и внутритрахеального введения соединений примеров в соответствии с настоящим изобретением или нинтеданиба у крыс (см. результаты фармакокинетических измерений на грызунах);
на фиг. 3 - общее воздействие на легкое внутривенного и внутритрахеального введения соединений примеров в соответствии с настоящим изобретением или нинтеданиба у крыс (см. результаты фармакокинетических измерений на грызунах);
на фиг. 4 - общее воздействие на легкое внутривенного и внутриназального введения соединений примеров в соответствии с настоящим изобретением или нинтеданиба у мышей (см. результаты фармакокинетических измерений на грызунах).
Подробное описание изобретения
Алкильные группы могут быть с разветвленной или неразветвленной цепью. С1-8алкильные группы могут, например, представлять собой С1-6алкил, С1-4алкил или С1.3алкил. Приводимые в качестве примера алкильные группы включают в себя метил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил, трет-бутил и CH2CHMe2. Согласно одному варианту осуществления алкил относится к алкилу с неразветвленной цепью. Алкилен описан таким же образом, что и алкил, за исключением того, что он представляет собой двухвалентную группу.
Используемый в настоящем описании алкокси означает -Оалкил и включает в себя алкокси с неразветвленной или разветвленной цепью, например метокси, этокси, пропокси, бутокси.
Гидроксиалкил означает алкил с гидроксильным заместителем в любом положении. Примеры включают в себя гидроксиметил, 2-гидроксиэтил, 3-гидрокси-н-пропил и 4-гидрокси-н-бутил.
Галогены соответственно могут представлять собой Br, Cl или F, в частности Cl или F, в особенности F.
Примеры алифатических 4-8-членных гетероциклических колец, содержащих один или несколько гетероатомов, выбранных из O, S и N, включают в себя азетидин, пирролидин, пиперидин, пиперазин, морфолин, диоксан, тетрагидрофуран и тиоморфолин. Соответственно, гетероциклическое кольцо включает в себя 1 или 2, в частности 1 гетероатом. Такие кольца могут содержать карбонильную или сульфоновую группу, и примеры включают в себя пирролидинон или пиперидинон.
С3-С8-циклоалкил относится к алифатическому карбоциклическому кольцу, содержащему типично от 3 до 8 кольцевых членов с необязательным разветвлением и содержащему от 3 до 8 атомов углерода в общей сложности. Примеры включают в себя циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, метилциклогексил, циклогептил и циклооктил.
Алифатические 4-8-членные гетероциклические кольца необязательно могут быть замещены. Согласно одному варианту осуществления кольца не являются замещенными. Согласно другому варианту осуществления кольцо несет один заместитель. Заместитель может быть при атоме углерода или азота. Примеры замещенных гетероциклических колец включают в себя N-метилпиперазин, N-метилпиперидин, N-этилпиперазин, 3-(N,N-диметиламин)пирролидин, N-(CH2CH2OH)пиперазин, 4-гидроксипиперидин, 4-цианопиперидин, 2,6-диметилпиперидин, N-метоксиэтилпиперазин, 3-(N,N-диметиламин)пиперидин и 4-метоксипиперидин.
Согласно одному варианту осуществления представлена фармацевтически приемлемая соль соединения по настоящему изобретению.
Соединения настоящего раскрытия включают в себя такие соединения, в которых конкретный атом является изотопом природного происхождения или не природного происхождения. Согласно одному варианту осуществления изотопом является устойчивый изотоп. Таким образом, соединения по настоящему изобретению включают в себя, например, такие соединения, которые содержат один или несколько атомов дейтерия вместо атомов водорода и т.п.
Раскрытие также относится ко всем полиморфным формам определенных в настоящем описании соединений, включающих их соли.
Раскрытие также относится ко всем сольватам определенных в настоящем описании соединений. Примеры сольватов включают в себя гидраты.
Соответственно, R1 представляет собой Me или H, в частности Me.
Соответственно, R2 представляет собой H, С1-С6-алкил, С1-С6-алкокси, С3-С6-циклоалкил, галоген
- 3 038796 или циано, более соответственно H, C1-C4-алкил или галоген, еще более соответственно H, Me или галоген, наиболее соответственно H, Me или F, в частности H.
Согласно предпочтительному варианту осуществления Z представляет собой CO. Согласно альтернативному варианту осуществления Z представляет собой SO2.
Согласно одному предпочтительному варианту осуществления R3 характеризуется формулой (i).
Соответственно, любой из R4 представляет собой NR6R7 или алифатический 4-8-членный гетероцикл, содержащий один или несколько гетероатомов, выбранных из O, N и S, за исключением того, что если R4 представляет собой NR6R7, m равно 2, 3, 4 или 5 и R5 представляет собой H или OH за исключением того, что если R5 представляет собой OH, n равно 2, 3, 4 или 5; или
R5 представляет собой NR8R9 или алифатический 4-8-членный гетероцикл, содержащий один или несколько гетероатомов, выбранных из O, N и S, за исключением того, что если R5 представляет собой NR8R9, n равно 2, 3, 4 или 5 и R4 представляет собой H или OH за исключением того, что если R4 представляет собой OH, m равно 2, 3, 4 или 5.
Соответственно, X1 представляет собой (CH2)m.
Соответственно, X1 представляет собой (CH2)0, CH2, CH(CH3)CH2 или (CH2)2, в частности (CH2)o или CH2, предпочтительно (CH2)0.
Соответственно, R4 представляет собой H, N-метилпиперидин или диметиламин, в частности H.
Соответственно, фрагмент -X1-R4 представляет собой H, Me, CH2CH3, изопропил, 1-метилпиперидин-4-ил или N,N-диметиламин, в частности H или Me, предпочтительно H.
Соответственно, Y 1 представляет собой (CH2)n.
Соответственно, Y1 представляет собой (CH2)0, CH2, (CH2)2 или (CH2)3, в частности (CH2)2.
Соответственно, R5 представляет собой H, диметиламин, N-метилэтаноламин, N-метилпиперазин, N-метилпиперидин, 1,2,6-триметилпиперазин, N-этилпиперазин, 3-(N,N-диметиламин)пирролидин, N(CH2CH2OH)пиперазин, пиперидин, морфолин, 4-гидроксипиперидин, 4-цианопиперидин, 2,6диметилпиперидин, N-метоксиэтилпиперазин, 2-метилпиперазин, N-метил-2-(N-пиперазинил)ацетамид, 4-(N,N-диметиламин)пиперидин, 4-метоксипиперидин, S-диокситиоморфолин, N-пиперазин-3-он, 2,5диазабицикло[2.2.1]гептан или 3,8-диазабицикло[3.2.1]октан, 3,6-диазабицикло[3.1.1]гептанил, в частности диметиламин или N-метилпиперазин, предпочтительно диметиламин.
Соответственно, R5 не представляет собой H, если n представляет собой 0.
Соответственно, фрагмент -Y1-R5 представляет собой Me, -(CH2)2-диметиламино, -(CH2)3-диметиламино, -(CH2)2-(N-метил)этаноламино, -(CH2)2-пиперазин-1-ил, -(CH2)2-(4-метил)пиперазин-1-ил, -(CH2)2(3 -метил)пиперазин-1 -ил, -(CH2)3-(4-метил)пиперазин-1 -ил, -(CH2)2-( 1 -метил)пиперидин-4-ил, N-метилпиперидин-4-ил, -(CH2)2-(4-этил)пиперазин-1 -ил, -(CH2)2-3-(N,N-диметиламино)пирролидин-1 -ил, -(CH2)2-(4-(CH2CH2OH)пиперазин-1 -ил), -(CH2)2-3,4,5-триметилпиперазин-1 -ил, -(CH2)2-пиперидин-1 -ил, -(CH2)3-пиперидин-1-ил, -(СН2)2-морФолин-4-ил, -(CH2)2-(4-гидроксипиперидин-1-ил), -(CH2)2-(4-цианопиперидин-1 -ил), -(CH2)2-(2,6-диметилпиперидин-1 -ил), -(CH2)2-(4-метоксиэтилпиперазин-1 -ил), -(CH2)24-(N,N-диметиламинопиперидин-1-ил), -(CH2)2-(4-метоксипиперидин-1-ил), -(CH2)3-(4-метоксипиперидин-1 -ил), -(CH2)2-4-(N-метилацетамидо)пиперазин-1 -ил)), -(СН2)2-(4-диокситиоморФолин-1 -ил), -(CH2)2(3-оксопиперазин-1-ил), -(CH2)2-(2,5-диазабицикло[2.2.1] гептан-2-ил), -(CH2)2-(3,8-диазабицикло[3.2.1]октан-8-ил), (CH2)2-(3,8-диазабицикло[3.2.1]октан-3-ил), (CH2)2-3,6-дuαзαбuцuкло[3.1.1]гептαн-3ил, в частности -(CH2)2-диметиламин или -(CH2)2-(4-метилпиперазин-1-ил), более предпочтительно -(CH2)2-диметиламино.
Соответственно, формула (i) представляет собой фрагмент, в котором: (a) -X1-R4 представляет собой H и -Y1-R5 представляет собой -(CH2)2-диметиламино, -(CH2)3-диметиламино, -(CH2)2-(N-метил)этаноламино, -(CH2)2-4-метилпиперазин-1-ил, -(CH2)3-(4-метил)пиперазин-1-ил, N-метилпиперидин-4-ил, -(CH2)2-3,4,5-триметилпиперазин-1-ил, -(CH2)2-4-этилпиперазин-N-ил, -(CH2)2-3-(N,N-диметиламино)пирролидин-1 -ил, -(CH2)2-(4-(CH2CH2OH)пиперазин-1 -ил), -(CH2)2-пиперидин-1 -ил, -(CH2)3-пиперидин-1 -ил, -(СН2)2-морФолин-4-ил, -(CH2)2-(4-гидроксипиперидин-1 -ил), -(CH2)2-4-цианопиперидин-1 -ил, -(CH2)2-(2,6-диметилпиперидин-1 -ил), -(CH2)2-4-метоксиэтилпиперазин-1 -ил, (CH2)2-4-(N,N-диметиламино)пиперидин-1 -ил, -(CH2)2-4-метоксипиперидин-1 -ил, -(CH2)3-4-метоксипиперидин-1 -ил, -(CH2)2-4диокситиоморфолин-1-ил, -(CH2)2-(3-оксопиперазин-1-ил), в частности -X1-R4 представляет собой H и -Y1-R5 представляет собой -(CH2)2-диметиламино или -(CH2)2-4-метилпиперазин-1-ил, более предпочтительно -X1-R4 представляет собой H и -Y1-R5 представляет собой -(CH2)2-диметиламино; или (b) -X1-R4 представляет собой Me, и -Y1-R5 представляет собой Me, -(CH2)2-диметиламино, -(CH2)2-(N-метил)этаноламино, -(CH2)2-пиперазин-1 -ил, -(CH2)2-4-метилпиперазин-1 -ил, -(CH2)2-(3 -метил)пиперазин-1 ил, -(CH2)2-(4-(CH2CH2OH)пиперазин-1 -ил), -(CH2)2-(4-(N-метилацетамидо)пиперазин-1 -ил)), -(CH2)2(2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан-2-ил), -(CH2)2-(3,8-диазабицикло[3.2.1]октан-8-ил), (CH2)2-(3,8-диазабицикло[3.2.1]октан-3-ил), (CH2)2-3,6-диазабицикло[3.1.1]гептан-3-ил, в частности -X1-R4 представляет собой Me и -Y1-R5 представляет собой (CH2)2-диметиламино или -(CH2)2-4-метилпиперазин-1-ил, более предпочтительно -X1-R4 представляет собой Me и -Y1-R5 представляет собой -(CH2)2-4-метилпиперазин1-ил; или (c) -X1-R4 представляет собой 1-метилпиперидин-4-ил и -Y1-R5 представляет собой Me; или (d) -X1-R4 представляет собой N,N-диметиламино и -Y1-R5 представляет собой Me; или (e) -X1-R4 представ- 4 038796 ляет собой CH2CH3 и -Y1-R5 представляет собой (CH2)2-пиперазин-1-ил или (f) -X1-R4 представляет собой изопропил и -Y1-R5 представляет собой (CH2)2-пиперазин-1-ил. Фрагмент формулы (i) предпочтительно представлен при помощи (а).
Согласно одному варианту осуществления R3 представляет собой формулу (ii).
Соответственно, Y2 представляет собой (CH2)s.
Соответственно, s равно 2, 3 или 4, более соответственно, 2 или 3, в частности 2.
Соответственно, формула (ii) представляет собой 1,2-оксазетидин.
Согласно одному варианту осуществления R3 представляет собой формулу (iii).
Соответственно, Y3 представляет собой (CH2)t.
Соответственно, X2 представляет собой (CH2)v.
Соответственно, t равно 2 и v равно 2.
Соответственно, Q представляет собой N или O, в частности N. Если Q представляет собой N, он соответственно может быть замещен метилом.
Согласно варианту осуществления формула (iii) представляет собой 5-метил[1,2,5]оксадиазепан.
Соответственно, R6, R7, R8, R9 независимо представляют собой H или C1-C4-алкил, необязательно замещенный OH, оксо, NR14R15 или -OMe.
Соответственно, R6 и R7 независимо представляют собой Me.
Соответственно, R8 представляет собой Me и R9 представляет собой Me или СН2СН2ОН, в частности Me.
Соответственно, R10 представляет собой H и R11 представляет собой Me.
Соответственно, R12 и R13 независимо представляют собой Me.
Соответственно, R14 и R15 независимо выбраны из H и Me.
Соединения формулы (I) в целях удобства могут быть получены способом, включающим в себя осуществление взаимодействия соединения формулы (II), в котором L представляет собой уходящую группу, такую как -OC1-C4-алкил, например -Оэтил
или его защищенного производного с соединением формулы (III)
Как правило, соединения формул (II) и (III) могут взаимодействовать в присутствии растворителя, такого как DMF, и при нагревании до приблизительно 80°C в течение приблизительно 18 ч. После этой стадии проводили стадию снятия защитных групп с удалением защитной группы, ацетила. Для этого реакционная смесь может быть охлаждена до комнатной температуры и нуклеофил, такой как пиперидин, добавляли и перемешивали в течение 1-24 ч.
Соединения формулы (II), в которых L представляет собой -Оэтил, могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (IV)
или его защищенного производного с соединением формулы (V)
Как правило, соединения формул (IV) и (V) могут взаимодействовать в присутствии уксусного ангидрида при температуре приблизительно 110°C в течение приблизительно 4 ч. Другие соединения формулы (II) могут быть получены аналогичным способом.
Соединения формулы (IV) могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (VI)
- 5 038796
с уксусным ангидридом. Как правило, реакцию проводили при приблизительно 110°C. Альтернативно, соединения формулы (II), в которых L представляет собой -Оэтил, могут быть получены прямо из соединений формулы (VI) обработкой соединением формулы (V) в присутствии уксусного ангидрида при температуре приблизительно 110°C в течение приблизительно 4 ч.
Соединения формулы (VI) могут быть получены путем восстановления группы -NO2 соединения формулы (VII) до группы -NH2
с последующей амидобразующей циклизацией, что является хорошо известной процедурой в области техники.
Условия восстановления, как правило, могут включать в себя применение H2-Pd/C при комнатной температуре, давление 5 бар в течение приблизительно 36 ч в растворителе, таком как уксусная кислота, что является хорошо известной процедурой в области техники.
Соединения формулы (VII) могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (VIII)
с метилхлорацетатом. Как правило, реакцию проводили в присутствии полярного органического растворителя, такого как DMF, и основания, такого как KO'Bu, в атмосфере азота от приблизительно -20 до -10°C.
Альтернативно, соединения формулы (Ia), которые являются соединениями формулы (I), в которых Z представляет собой CO и R3 характеризуется формулой (i) или (iii), могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (IX)
или его защищенного производного с соединением формулы (X)
в котором R' может представлять собой Y1-R5 и R может представлять собой X1-R4, или его защищенным производным, или R' и R соединены вместе с атомами N и O с получением предпочтительного гетероциклического кольца изложенных примеров. Соединения, как правило, могут реагировать в течение приблизительно 2-18 ч при комнатной температуре в присутствии связующего вещества, такого как HATU, и основания, такого как основание Хунига (DIPEA), в полярном органическом растворителе, таком как DMF, хотя также могут быть использованы другие полярные органические растворители. За этим способом, при необходимости, может следовать снятие защитных групп.
Соединения формулы (IX) могут быть получены путем снятия защитных групп с соединения формулы (XI)
- 6 038796
Снятие защитных групп может быть проведено с использованием стандартных реагентов области техники, таких как TFA, и соединения, как правило, перемешивали при комнатной температуре в течение приблизительно 16 ч в растворителе, таком как DCM.
Соединения формулы (XI) могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (II) с соединением формулы (XII)
Соединения могут реагировать в присутствии DMF в течение приблизительно 18 ч при 100°C.
Альтернативно, соединения формулы (Ib), которые представляют собой соединения формулы (I), в которых R3 характеризуется формулой (i) и X1-R4 представляет собой H, NR8R9 представляет собой NR8R9, как определено ранее, или алифатический 4-8-членный гетероцикл, содержащий один или несколько гетероатомов, выбранных из O, N и S, как определено ранее
могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (XIII)
с соединением формулы (XIV)
или NR8R9 представляет собой алифатический 4-8-членный гетероцикл, содержащий один или несколько гетероатомов, выбранных из O, N и S, как определено ранее. Типичными реакционными условиями может быть перемешивание смеси при комнатной температуре в течение приблизительно 16 ч. За этим способом, при необходимости, может следовать снятие защитных групп.
Соединения формулы (XIII) могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (IX) с соединением формулы (XV)
- 7 038796
Соединения, как правило, могут реагировать в присутствии HATU, основания Хунига (DIPEA) и
DMF, или в другом полярном органическом растворителе.
Альтернативно, соединения формулы (Ic), которые представляют собой соединения формулы (I), в которых Z представляет собой CO или SO2 и R3 характеризуется формулой (i), X1-R4 представляет собой Me и NR8R9 представляет собой NR8R9, как определено ранее, или алифатический 4-8-членный гетероцикл, содержащий один или несколько гетероатомов, выбранных из O, N и S, как определено ранее
могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (XVI)
с соединением формулы (XIV). Типичными реакционными условиями может быть перемешивание смеси в растворителе, таком как DMF, при приблизительно 60°C в течение приблизительно 5 ч, необязательно в присутствии основания, такого как основание Хунига (DIPEA), с последующей стадией снятия защитных групп, например обработкой нуклеофилом, таким как пиперидин, в растворителе, таком как DMF, при приблизительно 60°C в течение приблизительно 18 ч.
Соединения формулы (XVI) могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (XVII)
с CBr4 и PPh3 при мягких условиях, традиционная реакция, известная из области техники как реакция Аппеля. Как правило, реакционная смесь может перемешиваться в течение от 2 до 16 ч при комнатной температуре в растворителе, таком как DCM.
Соединения формулы (XVII), где Z представляет собой CO, могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (IX) с соединением формулы (XVIII)
Соединения, как правило, могут реагировать в присутствии HATU, основания Хунига (DIPEA) и DMF или другого полярного органического растворителя. Как правило, реакционная смесь может перемешиваться в течение приблизительно 2 ч при комнатной температуре.
Соединения формулы (XVII), где Z представляет собой SO2, могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (II) с соединением формулы (III), в котором Z представляет
- 8 038796 собой SO2 и R3 характеризуется формулой (i), где X1-R4 представляет собой Me и Y1-R5 представляет собой CH2CH2OH. Соединения, как правило, могут реагировать в присутствии основания Хунига (DIPEA) и DMF или другого полярного органического растворителя при температуре, такой как 80°C, в течение приблизительно 18 ч.
Соединения формулы (III) могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (X) с соединением формулы (XIX)
ΛΊ .= к?
(XIX) I f
NHBor.
Соединения, как правило, могут реагировать в присутствии основания Хунига (DIPEA) и DMF в течение приблизительно 16 ч при комнатной температуре с последующей стадией снятия защитных групп с применением стандартных реагентов области техники, таких как TFA.
Соединения формулы (III), где R3 характеризуется формулой (ii) и (iii), могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (X), где R' и R соединены вместе с атомами N и O с получением предпочтительного гетероциклического кольца изложенных примеров, с соединением формулы (XIX). Эти гетероциклические кольца и их способы получения являются общеизвестными в области техники.
Соединения формулы (X), где R представляет собой H, могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения формулы (XX)
О (XX) Η X N-0 о
в основном с гидратом гидразина в присутствии растворителей, как правило, метанола и DCM, в течение приблизительно 18 ч при комнатной температуре.
Соединения формулы (XX) могут быть получены путем осуществления взаимодействия соединения HOR' с соединением 2-гидроксиизоиндолин-1,3-диона. Соединения, как правило, могут реагировать в присутствии трифенилфосфина, азодикарбоксилата, такого как DIAD, и полярного растворителя, такого как THF. Как правило, реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°C, а затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение приблизительно 16 ч.
Соединения формулы (X), где R представляет собой Me, могут быть получены восстановлением соединения формулы (XXI) (XXI)
Φ?’ с применением стандартных способов области техники, например с применением восстановителя, такого как соединение формулы (XXII)
Н Н (XXII; - В ’Ν’ ..
I I
Реакция, как правило, может проходить в присутствии полярного растворителя, такого как THF, кислоты, такой как хлористоводородная кислота, и апротонного растворителя, такого как диоксан.
Соединения формулы (XXI) могут быть получены конденсацией соединения формулы (XXIII) н2ы—о (XXIIII \
R' с, например, формальдегидом. Конденсация, как правило, может проходить с применением параформальдегида в качестве источника формальдегида в присутствии растворителя, такого как этанол, и нагревали с обратным холодильником в течение приблизительно 18 ч.
Новые промежуточные соединения, включая соединения формулы (II), (VII), (IX), (XI) (XIII), (XVI) и (XVII), где R1 представляет собой Me, Et, CH=CH2, C=C-H или C^C-Me, и формулы (VI), где R1 представляет собой Et, CH=CH2, CAC-H или CAC-Me, и их соли заявлены как аспект настоящего изобретения.
Соединения формул (V), (VIII), (X), (XII), (XIV), (XV), (XVIII), (XIX), (XXII) и (XXIII) могут быть получены известными способами или способами, аналогичными описанным в настоящем изобретении.
Соединения формулы (I) могут быть получены или использованы в форме фармацевтически приемлемой соли, включая терапевтически активные нетоксичные кислотно-аддитивные соли, которые соединения формулы (I) способны образовывать. Такие фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли в целях удобства могут быть получены обработкой формы свободного основания соответствующи- 9 038796 ми кислотами в подходящем растворителе или смеси растворителей. Соответствующие кислоты включают в себя, например, этансульфоновую, малеиновую, малоновую, L-виннокаменную, фумаровую, лимонную, янтарную, уксусную, трифенилуксусную, хлористоводородную, серную, фосфорную, 1гидрокси-2-нафтойную, бромистоводородную, метансульфоновую, виннокаменную, пальмитиновую, изэтиновую, памовую, муравьиную, коричную, бензойную, аскорбиновую, галактаровую, молочную, яблочную, щавелевую, пара-толуолсульфоновую, бензолсульфоновую, пропионовую, фуранкарбоновую, фосфорную и глутаровую. В свою очередь указанные солевые формы могут быть превращены обработкой соответствующим основанием в форму свободного основания.
Настоящее изобретение относится к соединению настоящего изобретения для применения в качестве фармацевтического препарата.
Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение по настоящему изобретению необязательно в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями.
Разбавители и носители могут включать в себя такие, которые подходят для парентерального, перорального, местного, включая ингаляцию через рот в легкие или ингаляцию через нос, слизистого и ректального введения, и могут отличаться в зависимости от пути введения.
Согласно одному варианту осуществления композиции могут быть получены, например, для парентерального введения, например подкожного, внутримышечного, внутривенного, внутридермального, внутрисуставного или перисуставного введения, в частности в форме жидких растворов или суспензий; для перорального введения, в частности в форме таблеток, капсул, порошка, гранул, твердых дисперсий или в форме жидких растворов или суспензий, включая наносуспензии; для ингаляции в легкие или нос, например легочное или внутриносовое введение, в частности в форме сухих порошков, растворов, суспензий, включая наносуспензии для распыления, назальные спреи или капли, содержащие растворы или суспензии, или суспензии или растворы в виде герметизированных или не герметизированных аэрозолей; для местного или трансдермального введения, например в виде кремов, спреев, пен, гелей, мазей, жидкостей, пластырей; для введения через слизистую, например в щечную, подъязычную или влагалищную слизистую оболочку, и для ректального введения, например в форме пены или суппозитория.
Композиции в целях удобства могут быть введены в стандартной лекарственной форме и могут быть получены любым из способов, хорошо известных в фармацевтической области, например, как описано в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA., (1985). Композиции также в целях удобства могут быть введены в сложной стандартной лекарственной форме.
Составы для парентерального введения могут содержать в качестве наполнителей стерилизованную воду или солевой раствор, буферы, регулирующие тонус средства, консерванты, антиоксиданты, регулирующие вязкость средства, алкиленгликоли, такие как пропиленгликоль, полиалкиленгликоли, такие как полиэтиленгликоль, масла растительного происхождения, гидрированные нафталины и т.п.
Композиции, подходящие для перорального введения, могут включать в себя один или несколько физиологически совместимых носителей и/или наполнителей и могут быть в твердой или жидкой форме. Таблетки и капсулы могут быть получены со связующими средствами, такими как сироп, аравийская камедь, желатин, сорбит, трагакантовая камедь, целлюлоза или поливинилпирролидон; наполнителями, такими как лактоза, сахароза, кукурузный крахмал, фосфат кальция, сорбит или глицин; смазывающими веществами, такими как стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль или диоксид кремния; и поверхностно-активными веществами, такими как лаурилсульфат натрия. Жидкие композиции могут содержать традиционные добавки, такие как суспендирующие средства, например сорбитный сироп, метилцеллюлоза, сахарный сироп, желатин, карбоксиметилцеллюлоза или пищевые жиры; эмульгаторы и поверхностно-активные вещества, такие как лецитин или аравийская камедь; растительные масла, такие как миндальное масло, кокосовое масло, рыбий жир или арахисовое масло; консерванты, такие как бутилированный гидроксианизол (BHA) и бутилированный гидрокситолуол (BHT). Жидкие композиции могут быть инкапсулированы, например, в желатине с получением стандартной лекарственной формы.
Твердые пероральные лекарственные формы включают в себя таблетки, твердые капсулы из двух частей и мягкие капсулы из гибкого желатина (SEG). Такие твердые капсулы из двух частей могут быть получены, например, из желатина или гидроксипропилметилцеллюлозы (HPMC).
Состав в сухой оболочке, как правило, содержит желатин, по меньшей мере, в концентрации 4060%, пластификатор в приблизительной концентрации 20-30% (такой как глицерин, сорбит или пропиленгликоль) и воду в приблизительной концентрации 30-40%. Также могут присутствовать другие вещества, такие как консерванты, красители, замутнители и ароматизаторы. Жидкий наполнитель включает в себя твердое лекарственное вещество, которое было растворено, солюбилизировано или диспергировано (с суспендирующими средствами, такими как пчелиный воск, гидрированное касторовое масло или полиэтиленгликоль 4000), или жидкое лекарственное вещество в средах или комбинациях сред, таких как минеральное масло, растительные масла, триглицериды, гликоли, полиолы и поверхностно-активные вещества.
Составами для назального введения могут быть порошки, и они могут содержать наполнители, например лактозу или декстран, или могут быть водные или масляные растворы для применения в форме
- 10 038796 назальных капель или дозируемого спрея. Составы для назального введения также могут быть в форме водных суспензий или герметичных неводных растворов или суспензий. Для трансбуккального введения типичные наполнители включают в себя сахара, стеарат кальция, стеарат магния, прежелатинизированный крахмал и т.п.
Соответственно, соединение формулы (I) вводили местно в легкое. Таким образом, согласно одному варианту осуществления представлена фармацевтическая композиция, содержащая соединение по настоящему раскрытию, необязательно в комбинации с одним или несколькими местно приемлемыми разбавителями или носителями.
Местное введение в легкое может быть достигнуто путем применения не находящегося под давлением состава, такого как водные раствор или суспензия. Такие составы могут быть введены посредством небулайзера, который, например, может быть ручным и портативным или может служить для домашнего или больничного применения (т.е. непортативный). Состав может содержать вспомогательные средства, такие как вода, буферы, средства регулирования тоничности, средства регулирования pH, поверхностноактивные средства, консерванты, суспендирующие средства, объемообразующие средства и сорастворители. Суспензионные жидкие и аэрозольные составы (либо находящиеся под давлением, либо не находящиеся под давлением), как правило, будут содержать соединение в соответствии с настоящим изобретением в мелкоизмельченной форме, подходящей для отложения в легком, например с D50 0,5-10 мкм, например приблизительно 1-5 мкм. Порошки в мелкоизмельченной форме могут быть получены с помощью процесса микронизации или помола, с помощью сушки распылением, с помощью замораживания распылением или с помощью влажного помола с последующей сушкой распылением. Микронизация может быть выполнена с использованием струйной мельницы, такой как изготовляемые компанией Hosokawa Alpine. Полученное в результате распределение размеров частиц может быть измерено с использованием лазерной дифракции (например, с прибором Malvern Mastersizer 2000S или Mastersizer 3000). Распределения размеров частиц могут быть представлены с использованием значений D10, D50 и D90. Медианное значение D50 распределений размеров частиц определяют как размер частиц, при котором распределение делится пополам. Измерение, полученное с помощью лазерной дифракции, более точно описывают как объемное распределение, и, следовательно, значение D50, полученное с использованием этой процедуры, правильнее называть значением Dv50 (медианой для объемного распределения). Используемые в настоящем документе значения Dv относятся к распределениям размеров частиц, измеряемым с использованием лазерной дифракции. Подобным образом, значения D10 и D90, используемые в контексте лазерной дифракции, считаются значениями Dv10 и Dv90 и относятся к размеру частиц, при котором 10% распределения лежат ниже значения D10, a 90% распределения лежат ниже значения D90, соответственно. Согласно другому варианту осуществления комбинированные частицы соединения в соответствии с настоящим раскрытием и вспомогательные средства для применения в распылении суспензионного состава могут быть составлены с помощью совместного помола и/или совместной сушки распылением соединения и вспомогательных средств вместе, при этом комбинированные частицы, содержащие и активное и вспомогательные средства, имеют D50 1-10 мкм. Водные суспензионные составы для доставки в легкое также могут содержать наносуспензии или суспензии комбинированных частиц, содержащих наночастицы.
Местное введение в легкое также может быть достигнуто путем применения находящегося под давлением аэрозольного состава. Аэрозольные составы, как правило, содержат активный ингредиент, суспендированный или растворенный в подходящем аэрозольном газе-вытеснителе, таком как хлорфторуглерод (CFC) или гидрофторуглерод (HFC). Подходящие CFC газы-вытеснители включают в себя трихлормонофторметан (газ-вытеснитель 11), дихлортетрафторметан (газ-вытеснитель 114) и дихлордифторметан (газ-вытеснитель 12). Подходящие HFC газы-вытеснители включают в себя тетрафторэтан (HFC-134a) и гептафторапропан (HFC-227). Газ-вытеснитель, как правило, составляет 40-99,5 мас.%, например 40-90 мас.% всей ингаляционной композиции. Состав может содержать вспомогательные средства, в том числе сорастворители (например, этанол) и поверхностно-активные средства или стабилизаторы (например, лецитин, сорбит триолеат и т.п.). Другие возможные вспомогательные средства включают в себя полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон, глицерин и т.п. Аэрозольные составы упаковывают в емкости и подходящую дозу доставляют посредством дозирующего клапана (например, поставляемые компаниями Bespak, Aptar или 3М или, в качестве альтернативы, компанией Coster или Vari). Находящиеся под давлением суспензионные составы для доставки в легкое также могут содержать наносуспензии или суспензии комбинированных частиц, включающих в себя наночастицы.
Местное введение в легкое также может быть достигнуто путем применения состава сухого порошка. Состав сухого порошка будет содержать соединение в соответствии с настоящим раскрытием в мелкоизмельченной форме, как правило, с D50 0,5-10 мкм, например приблизительно 1-5 мкм. Порошки в мелкоизмельченной форме могут быть получены с помощью процесса микронизации или помола, с помощью сушки распылением, с помощью замораживания распылением или с помощью влажного помола с последующей сушкой распылением. Микронизация может быть выполнена с использованием струйной мельницы, такой как изготовляемые компанией Hosokawa Alpine. Полученное в результате распределение размеров частиц может быть измерено с использованием лазерной дифракции (например, с прибо- 11 038796 ром Malvern Mastersizer 2000S или Mastersizer 3000). Состав, как правило, будет содержать один или несколько приемлемых для местного введения разбавителей, таких как лактоза, глюкоза, трегалоза или маннит (предпочтительно лактоза), обычно со сравнительно большим размером частиц, например D50 15250 мкм. Согласно другому варианту осуществления комбинированные частицы соединения в соответствии с настоящим раскрытием и вспомогательные средства также могут быть составлены путем совместного помола и/или совместной сушки распылением соединения и вспомогательных средств вместе, при этом комбинированные частицы, содержащие как активные, так и вспомогательные средства, имеют D50 1-10 мкм. Используемый в настоящем документе термин лактоза относится к содержащему лактозу компоненту, в том числе к α-лактозы моногидрату, β-лактозы моногидрату, безводной α-лактозе, безводной β-лактозе и аморфной лактозе. Лактозные компоненты могут быть обработаны путем микронизации, просеивания, помола, сжатия, агломерирования или сушки распылением. Также предусматриваются коммерчески доступные формы лактозы в разных формах, например продукты Lactohale® (DFE Pharma), InhaLac® (Meggle), Pharmatose® (DFE Pharma) и Respitose® (DFE Pharma). Согласно одному варианту осуществления лактозный компонент выбран из группы, состоящей из α-лактозы моногидрата, безводной α-лактозы и аморфной лактозы. Предпочтительно лактозой является α-лактозы моногидрат.
Составы сухого порошка также могут содержать другие вспомогательные средства, такие как лейцин, стеарат натрия, стеарат калия или стеарат магния. Частицы сухого порошка могут быть комбинированными частицами и могут состоять из наночастиц в комбинированной матрице.
Состав сухого порошка, как правило, доставляют с использованием ингаляторного устройства сухого порошка (DPI). Оно может представлять собой либо устройство с однократной дозой, в котором состав присутствует в отдельных единицах или в виде капсул или блистеров, либо устройство с несколькими дозами, в котором содержатся более чем одна доза состава, или резервуар с нерасфасованным продуктом, или несколько контейнеров (например, несколько блистеров или пакетов). Типичные ингаляторы сухого порошка включают в себя SPINHALER, DISKHALER, TURBOHALER, DISKUS, ELLIPTA, CLICKHALER, ECLIPSE, ROTAHALER, HANDIHALER, AEROLISER, CYCLOHALER, MONODOSE, BREEZHALER/NEOHALER, FLOWCAPS, TWINCAPS, X-CAPS, TWISTER, TURBOSPIN, ELPENHALER, TURBUHALER, MIATHALER, NEXTHaler, TWISTHALER, NOVOLIZER, GENUAIR, SKYEHALER, ингалятор сухого порошка ORIEL, MICRODOSE, ACCUHALER, PULVINAL, EASYHALER, ULTRAHALER, TAIFUN, PULMOJET, OMNIHALER, GYROHALER, TAPER, CONIX, XCELOVAIR и PROHALER.
Предполагают, что соединения в соответствии с настоящим изобретением являются применимыми в лечении фиброзных заболеваний, таких как легочный фиброз и заболевания легких с фиброзным компонентом, например выбранные из IPF, гигантоклеточной интерстициальной пневмонии, саркоидоза, кистозного фиброза, респираторного дистресс-синдрома, индуцированного лекарственным средством легочного фиброза, гранулематоза, силикоза, асбестоза, системной склеродермии, вызванного вирусом цирроза печени, выбранного из вызванного вирусом гепатита C цирроза печени, или заболеваний кожи с фиброзным компонентом, например выбранных из склеродермии, саркоидоза и системной красной волчанки, и особенно IPF. В более широком смысле предполагают, что соединения в соответствии с настоящим изобретением являются применимыми в лечении интерстициальных легочных заболеваний. Кроме того, предполагают, что соединения в соответствии с настоящим изобретением применимы в лечении заболеваний, характеризующихся гиперпролиферацией клеток, например злокачественная опухоль, и при этом соединения доставляют путем ингаляции, в частности, при злокачественной опухоли легкого. Более того, соединения в соответствии с изобретением также могут быть применимы в лечении респираторных нарушений, в том числе COPD (включая хронический бронхит и эмфизему), астмы, астмы у детей, аллергического ринита, ринита, синусита, особенно астмы, хронического бронхита и COPD.
Также предполагают, что соединения в соответствии с настоящим изобретением являются применимыми в лечении других фиброзных заболеваний, таких как легочный фиброз, ассоциированный с ревматоидным артритом, респираторным дистресс-синдромом, в том числе острым респираторным дистресс-синдромом, острым повреждением легкого, вызванным облучением легочным фиброзом или пневмонитом, хроническим пневмонитом гиперчувствительности, системным склерозом, синдромом Шегрена, интерстициальными легочными заболеваниями, легочной артериальной гипертензией (PAH), в том числе сосудистым компонентом PAH, или с заболеваниями кожи с фиброзным компонентом, например, выбранными из гипертрофированного рубцевания и келоидов, или с глазными заболеваниями, компонентом которых является фиброз, включающими в себя глаукому, возрастную дегенерацию желтого пятна, диабетический отек желтого пятна, заболевание сухости глаз и диабетическую ретинопатию, или с фиброзом в кишечнике, например, ассоциированным с воспалительным заболеванием кишечника.
Кроме того, предполагают, что соединения в соответствии с настоящим изобретением являются применимыми в предупреждении заболеваний, характеризующихся гиперпролиферацией клеток, например злокачественная опухоль, например, при которых соединения доставляют путем ингаляции, в частности злокачественная опухоль легкого.
Настоящее изобретение относится к соединению в соответствии с настоящим изобретением для
- 12 038796 применения в лечении одного или нескольких из упомянутых выше заболеваний. Настоящее изобретение также относится к применению соединения в соответствии с настоящим изобретением в изготовлении медикамента для лечения одного или нескольких из упомянутых выше заболеваний.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения одного из упомянутых выше заболеваний, который предусматривает введение субъекту (особенно субъекту-человеку), нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения в соответствии с настоящим изобретением.
Термин лечение означает профилактику, а также терапевтическое лечение.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением могут быть введены один раз, два раза или три раза в сутки, особенно один раз или два раза в сутки. Подходящая величина дозировки может быть определена с учетом тяжести заболевания и размера субъекта. Типичные величины дозировки находятся в диапазоне от 0,01 до 100 мг, например от 0,1 до 10 мг, например от 0,25 до 5 мг, на человеческую дозу, подлежащую доставке один раз, два раза или три раза в сутки, особенно один раз или два раза в сутки.
Соединение в соответствии с настоящим раскрытием также может быть введено в комбинации с одним или несколькими другими активными ингредиентами, например активными ингредиентами, подходящими для лечения упомянутых выше состояний. Например, возможные активные ингредиенты включают в себя нинтеданиб или пирфенидон (они известны для лечения IPF). Другие активные ингредиенты, подлежащие использованию в комбинации, включают в себя вещества с секретолитической, бронхолитической и/или противовоспалительной активностью, такие как антихолинергические средства, β-2 миметики, стероиды, ингибиторы PDE-IV, ингибиторы p38 MAP киназы, ингибиторы MK2, ингибиторы галектина, антагонисты NK1, антагонисты LTD4, ингибиторы EGFR, ингибиторы VEGF, ингибиторы PDGF, ингибиторы FGF, ингибиторы TGFe, антагонисты LPA1, ингибиторы LOXL2, ингибиторы CTGF, пентоксифиллин, N-ацетилцистеин, средства против IL13, средства против IL4, ингибиторы интегрина αΎβ6, ингибиторы IGF, ингибиторы PI3K, ингибиторы mTOR, ингибиторы JNK, пентаксин-2 и антагонисты эндотелина.
Другие активные ингредиенты, подлежащие использованию в комбинации, включают в себя вещества с противофиброзной активностью, такие как ингибиторы PDE-III, комбинированные средства против IL4/13, комбинированные ингибиторы PI3k/mTOR, ингибиторы аутотаксина, антагонисты P2X3, антагонисты CTGF, антагонисты 5-LO, антагонисты лейкотриена и ингибиторы ROCK.
Согласно одному варианту осуществления комбинацию активных ингредиентов составляют совместно.
Согласно одному варианту осуществления комбинацию активных ингредиентов совместно вводят последовательно или одновременно.
Согласно одному варианту осуществления соединения в соответствии с настоящим изобретением доставляют путем ингаляции, а другие возможные активные ингредиенты доставляют перорально или парентерально.
Один вариант осуществления относится к комбинированному продукту, содержащему:
(A) соединение в соответствии с настоящим изобретением; и (B) дополнительный активный ингредиент (упомянутый выше), при этом каждый из компонентов (A) и (B) составляют в смеси с фармацевтически приемлемым разбавителем(ями) или носителем(ями). Комбинация необязательно может содержать дополнительные соответствующие вспомогательные средства.
Один вариант осуществления относится к соединению в соответствии с настоящим изобретением для применения в качестве медицинского препарата, подлежащего введению в комбинации с одним или несколькими дополнительными активными ингредиентами (упомянутыми выше).
Соединения в соответствии с настоящим изобретением, как предполагают, обладают одним или несколькими из следующих полезных свойств:
хорошая ингибиторная активность в отношении киназ, выбранных из VEGFR (например, VEGFR1 и VEGFR2), FGFR и PDGFR;
хорошая противофиброзная активность, например, как определено на in vivo моделях (например, на модели вызванного блеомицином фиброза) при доставке местным путем в легкое;
подходящие физические и химические свойства, а также низкая доза для медицинского продукта, в частности, предназначенного для доставки местным путем в легкое;
хорошее время нахождения в легком или продолжительность действия при введении местным путем в легкое;
низкая проницаемость при анализе проницаемости PAMPA;
хорошая продолжительность действия, например, как измерено с помощью ингибирования индуцированного PDGF-BB фосфорилирования BDGFRP в фибробластных клетках легкого человеческого плода;
хорошая безопасность и переносимость при введении местным путем в легкое;
низкая пероральная биодоступность.
Экспериментальный раздел.
Используемые в настоящем изобретении аббревиатуры определены ниже (табл. 1). Предусмотрено,
- 13 038796 что любые неопределенные аббревиатуры обладают своим общепринятым значением.
АсОН Таблица 1. Аббревиатуры ледяная уксусная кислота
водн. водный
BAL бронхоальвеолярное орошение
br широкий
ВЕН этиленовый мостиковый гибрид
Вос л/реш-бутоксикарбонил
CSH гибрид с заряженной поверхностью
КОНЦ. концентрированный
d дублет
δ химический сдвиг
DCM дихлорметан
DIAD диизопропилазодикарбоксилат
DMF AQV-диметилформамид
DMSO диметилсульфоксид
(ES+) ионизация электрораспылением, режим определения положительных ионов
(ES-) ионизация электрораспылением, режим определения отрицательных ионов
Et этил
EtOAc этилацетат
EtOH этанол
4 час(ы)
HATU 1 -[бис(диметиламино)метилен]-\Н-1,2,3 -триазоло[4,5/>]пиридиний 3-оксид гексафторфосфат
основание Хунига А,А-диизопропилэтиламин
М молярный
m мультиплет
(М+Н)+ протонированный молекулярный ион
(M-H)’ депротонированный молекулярный ион
Me метил
- 14 038796
MeCN ацетонитрил
МеОН метанол
МГц мегагерц
МИН минута(ы)
m/z отношение массы к заряду
ЯМР ядерно-магнитный резонанс (спектроскопия)
Р пентуплет
Ph фенил
Ру пиридин
q квартет
к. т. комнатная температура
HPLC высокоэффективная жидкостная хроматография
S синглет
нас. насыщенный
SAX анионнообменная (смола) с твердой основой
SCX катионнооменная (смола) с твердой основой
t триплет
Ъи /e/7-бутил
THF тетрагидрофуран
TFA трифторуксусная кислота
UV УФ излучение
масс. масса
Химические примеры.
Общие способы.
Все исходные вещества и растворители получали или из коммерческих источников или получали согласно ссылкам из литературы. Если не отмечено иное, все реакционные смеси перемешивали. Органические растворы обычным способом сушили над безводным сульфатом магния. Гидрирование выполняли на проточном реакторе Thales H-cube при установленных условиях или под давлением в газовом автоклаве (сосуд высокого давления).
Колоночную хроматографию выполняли на картриджах с расфасованным диоксидом кремния (230400 меш, 40-63 мкм) с применением указанного количества. SCX закупали у Supelco и обрабатывали 1М хлористоводородной кислотой перед применением. Если не отмечено иное, очищаемую реакционную смесь сначала разбавляли MeOH и делали кислотной при помощи нескольких капель AcOH. Этот раствор загружали сразу в SCX и промывали MeOH. Требуемое вещество затем элюировали промыванием 1% NH3 в MeOH.
Препаративная высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой.
Проводили с применением UV определения при 215 и 254 нм или с Waters X-Select Prep-C18, 5 мкм, 19 χ 50 мм колонкой с элюированием градиентом H2O-MeCN с содержанием 0,1% об./об. муравьиной кислоты в течение 10 мин (способ A), или с Waters X-Bridge Prep-C18, 5 мкм, 19 χ 50 мм с элюированием градиентом H2O-MeCN с содержанием 0,1% бикарбоната аммония в течение 10 мин (способ B).
Аналитические способы.
Высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой.
Способ 1. Waters XSelect CSH C18 2,5 мкм (4,6 χ 30 мм) при 40°C; скорость потока 2,5-4,5 мл мин-1 элюирование с градиентом H2O-MeCN с содержанием 0,1% об./об. муравьиной кислоты в течение 4 мин с применением UV определения при 254 и 215 нм. Информация о градиенте: 0-3,00 мин, с уклоном от 95% H2O-5% MeCN до 5% H2O-95% MeCN; 3,00-3,01 мин, поддерживание при 5% H2O-95% MeCN, скорость потока увеличивалась до 4,5 мл мин-1; 3,01-3,50 мин, поддерживание при 5% H2O-95% MeCN; 3,503,60 мин, с возвратом до 95% H2O-5% MeCN, скорость потока уменьшалась до 3,50 мл мин-1; 3,60-3,90 мин, поддерживание при 95% H2O-5% MeCN; 3,90-4,00 мин, поддерживание при 95% H2O-5% MeCN, скорость потока уменьшалась до 2,5 мл мин-1.
Способ 2. Waters XBridge BEN C18, 2,5 мкм (4,6 χ 30 мм) при 40°C; скорость потока 2,5-4,5 мл мин-1, элюирование с градиентом H2O-MeCN с содержанием 10 мМ бикарбоната аммония в течение 4 мин с применением UV определения при 254 нм. Информация о градиенте: 0-3,00 мин, с уклоном от 95% H2O- 15 038796
5% MeCN до 5% H2O-95% MeCN; 3,00-3,01 мин, поддерживание при 5% H2O-95% MeCN, скорость потока увеличивалась до 4,5 мл мин-1; 3,01- 3,50 мин, поддерживание при 5% H2O-95% MeCN; 3,50-3,60 мин, с возвратом до 95% H2O-5% MeCN, скорость потока уменьшалась до 3,50 мл мин-1; 3,60-3,90 мин, поддерживание при 95% H2O-5% MeCN; 3,90-4,00 мин, поддерживание при 95% H2O-5% MeCN, скорость потока уменьшалась до 2,5 мл мин-1.
Спектроскопия: 1H ЯМР.
Спектры 1H ЯМР получали на спектрометре Bruker Avance III при 400 МГц с применением остаточного недейтерированного растворителя в качестве эталона и, если не отмечено иное, проводили в DMSO-d6.
Все химические названия были образованы с применением CambridgeSoft ENotebook 12.0.
Пример 1. (Z)-Метил-3-(((4-(метокси(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат.
Промежуточное соединение A. (E)-Метил-1-ацетил-3-(этокси(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6карбоксилат
К перемешиваемому раствору метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (1,00 г, 5,23 ммоль) в уксусном ангидриде (10,9 мл, 115 ммоль) добавляли (триэтоксиметил)бензол (3,55 мл, 15,7 ммоль) и смесь перемешивали при 110°C в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до к.т. и полученный осадок собирали фильтрацией. Осадок промывали гексаном (100 мл) и сушили in vacuo с получением указанного соединения (E)-метил-1-ацетил-3-(этокси(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде бежевого твердого вещества (1,66 г, 82%); Rt 2,61 мин (способ 1); m/z 366 (M+H)+ (ES+).
(Z)-Метил-3-(((4-(метокси(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6карбоксилат
Смесь 4-амино-N-метокси-N-метилбензамида (32,6 мг, 0,181 ммоль) и (E)-метил-1-ацетил-3(этокси(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение A) (60 мг, 0,16 ммоль) в DMF (1 мл) нагревали до 80°C в течение 18 ч, затем оставляли охлаждаться до к.т. Добавляли пиперидин (45,0 мкл, 0,455 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 24 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (25 мл) и насыщенным раствором NaHCO3 (25 мл) и слои разделяли. Органический слой промывали солевым раствором (25 мл), а затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный таким образом неочищенный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ A, 30-50% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-3-(((4-(метокси(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (21 мг, 28%); Rt 2,14 мин (способ 1); m/z 458 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 3.19 (3H, s), 3.48 (3H, s), 3.77 (3H, s), 5.87 (1H, d), 6.86 (2H, m), 7.21 (1H, dd), 7.36-7.45 (3H, перекрывающийся m), 7.53 (2H, m), 7.56-7.68 (3H, перекрывающийся m), 11.01 (1H, s), 12.29 (1H, s).
Пример 2. (Z)-Метил-5-метил-3-(((4-(N-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)сульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат.
Промежуточное соединение B. Метил-4-(2-метокси-2-оксоэтил)-2-метил-5-нитробензоат
К перемешиваемому раствору трет-бутилата калия (35,9 г, 320 ммоль) в DMF (350 мл) в атмосфере азота при -20°C по каплям добавляли раствор метил-2-метил-5-нитробензоата (25,0 г, 128 ммоль) и метил 2-хлорацетата (16,9 мл, 192 ммоль) в DMF (300 мл) в течение 40 мин. Реакционную смесь нагревали до
- 16 038796
-10°C в течение 2 ч, а затем выливали во взвесь льда и HCl (900 г льда, 500 мл, 35 мас.% HCl). Смесь экстрагировали при помощи DCM (2 х 600 мл) и объединенные органические слои промывали солевым раствором (2 х 400 мл), а затем выпаривали при пониженном давлении. Полученный таким образом неочищенный продукт очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 330 г, 0-10% EtOAc в DCM, градиентное элюирование) с получением указанного соединения метил-4-(2-метокси-2-оксоэтил)-2метил-5-нитробензоата в виде оранжевого сиропа (31,0 г, 89%); Rt 2,06 мин (способ 1); m/z 266 (M-H) (ES-); 1H ЯМР δ: 2.61 (3H, s), 3.62 (3H, s), 3.88 (3H, s), 4.12 (2H, s), 7.59 (1H, s), 8.51 (1H, s).
Промежуточное соединение C. Метил-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
К раствору метил-4-(2-метокси-2-оксоэтил)-2-метил-5-нитробензоата (промежуточное соединение B) (23,0 г, 86,0 ммоль) в уксусной кислоте (301 мл, 5,25 моль) добавляли палладиевый катализатор на углеродном носителе [5 мас.%, 58% воды, тип 87L] (3,30 г, 1,55 ммоль). Смесь гидрировали при к.т. в атмосфере H2 (5 бар) в течение 36 ч, а затем фильтровали через слой целита. Фильтрационный кек промывали EtOAc (500 мл) и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный остаток растворяли в горячем MeOH с нагреванием с обратным холодильником (200 мл) и смесь охлаждали до к.т. Полученное твердое вещество фильтровали, промывали MeOH (200 мл) и сушили in vacuo с получением указанного соединения метил-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде коричневого порошка (7.00 г, 39%); Rt 1,48 мин (способ 1); m/z 206 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.45 (3H, s), 3.32 (2H, s), 3.81 (3H,
s), 7.17 (1H, s), 7.22 (1H, s), 10.43 (1H, s).
Промежуточное соединение D. индолин-6-карбоксилат (Е)-Метил-1 -ацетил-3 -(этокси(фенил)метилен)-5-метил-2 -оксо-
К перемешиваемому раствору метил-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение C) (5,00 г, 24,4 ммоль) в уксусном ангидриде (50,6 мл, 536 ммоль) добавляли (триэтоксиметил)бензол (22,1 мл, 97,0 ммоль) и смесь перемешивали при 110°C в течение 3 ч. Затем перемешивание продолжали при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток перетирали в порошок с MeOH (50 мл). Полученное твердое вещество фильтровали, промывали MeOH (50 мл) и сушили in vacuo с получением указанного соединения (E)-метил-1-ацетил-3(этокси(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде желтого порошка (4,50 г, 48%); Rt 2,70 мин (способ 1); m/z 380 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 1.35 (3H, t), 2.42 (3H, s), 2.58 (3H, s), 3.84 (3H, s), 4.01 (2H, q), 7.45-7.62 (5H, перекрывающийся m), 7.90 (1H, s), 8.64 (1H, s).
Промежуточное соединение E. 2-(2-(4-Метилпиперазин-1-ил)этокси)изоиндолин-1,3-дион
К раствору 2-гидроксиизоиндолин-1,3-диона (2,04 г, 12,5 ммоль) и трифенилфосфина (3,27 г, 12,5 ммоль) в THF (40 мл) при 0°C по каплям добавляли 2-(4-метилпиперазин-1-ил)этанол (1,50 мл, 10,4 ммоль). Смесь затем перемешивали при 0°C в течение 30 мин перед добавлением по каплям DIAD (2,43 мл, 12,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали еще 30 мин при 0°C перед нагреванием до к.т. и перемешивали в течение 16 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток повторно растворяли в EtOAc (75 мл). Органический слой промывали насыщенным раствором NaHCO3 (2 х 50 мл), а затем сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении до приблизительно 30 мл. Органический слой охлаждали до 0°C и добавляли холодный 1М водный раствор HCl (30 мл). После завершения добавления смесь нагревали до к.т. и перемешивали в течение 20 мин. Слои разделяли и водный слой промывали Et2O (2 х 30 мл). После охлаждения до 0°C водный слой подщелачивали медленным добавлением насыщенного раствора NaHCO3 перед экстрагированием CHCl3 (3 х 50 мл). Органические экстракты объединяли, а затем сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного соединения 2-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)изоиндо- 17 038796 лин-1,3-диона в виде бежевого твердого вещества (1,96 г, 63%); 1H ЯМР δ: 1.84-2.47 (8H, перекрывающийся m), 1.98 (3H, s), 2.65 (2H, t), 4.24 (2H, t), 7.85-7.87 (4H, перекрывающийся m).
Промежуточное соединение F. O-(2-(4-Метилпиперазин-1-ил)этил)гидроксиламин
Π,Ν ΝΗ7
MeOH DCM •L А
К раствору 2-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)изоиндолин-1,3-диона (промежуточное соединение E) (1,88 г, 6,50 ммоль) в MeOH/DCM (2:1, 15 мл) добавляли 25% водный раствор гидразина (2,45 мл, 19,5 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч, затем разбавляли Et2O (100 мл). Осадок удаляли фильтрацией и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток повторно растворяли в DCM (30 мл) и сушили над Na2SO4. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного соединения O-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этил)гидроксuламина в виде бледно-желтого масла (0,902 г, 83%); 1H ЯМР δ: 2.13 (3H, s), 2.18-2.47 (8H, перекрывающийся m), 2.43 (2H, t), 3.60 (2H, t), 5.96 (2H, s).
Промежуточное соединение G. трет-Бутил(4-(N-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)сульфамоил)фенил)карбамат
К суспензии O-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этил)гидроксuламина (промежуточное соединение F) (464 мг, 2,91 ммоль) в DMF (15 мл) добавляли основание Хунига (1,05 мл, 6,00 ммоль), а затем третбутил(4-(хлорсульфонил)фенил)карбамат (500 мг, 1,71 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. всю ночь. Основную часть растворителя удаляли при пониженном давлении. Остаток повторно растворяли в MeOH (50 мл) и фильтровали через колонку SCX (5 г), промывали MeOH (75 мл). Фильтрат удаляли перед тем, как колонку промывали 1% NH3 в MeOH (75 мл). Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного соединения трет-бутил(4-(N-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)сульфамоил)фенил)карбамата в виде бледной бесцветной смолы (552 мг, 70%); Rt 1,77 мин (способ 1); m/z 415 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 1.49 (9H, s), 2.12 (3H, s), 2.16-2.46 (10H, перекрывающийся m), 3.93 (2H, t), 7.64 (2H, m), 7.74 (2H, m), 9.87 (1H, s), 10.19 (1H, br s).
Промежуточное соединение H. 4-Амино-N-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)бензолсульфоамид, дитрифторацетатная соль
К раствору трет-бутил(4-(N-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)сульфамоил)фенил)карбамата (промежуточное соединение G) (334 мг, 0,806 ммоль) в DCM (5 мл) добавляли TFA (1 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 4 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением 4-амино-N-(2(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)бензолсульфоамида, дитрифторацетатной соли в виде прозрачного масла (334 мг, 67%); Rt 1,01 мин (способ 2); m/z 315 (M+H)+ (ES+).
(Z)-Метил-5-метил-3-(((4-(N-(2-(4-метилпиперазин-1-uл)этокси)сульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
(E)-Метил-1-ацетил-3-(этокси(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат (промежуточное соединение D) (100 мг, 0,264 ммоль) и 4-амино-М-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)бензолсульфоа- 18 038796 мид, дитрифторацетатная соль (промежуточное соединение H) (172 мг, 0,316 ммоль) объединяли в DMF (3 мл). Смесь нагревали при 80°C в течение 24 ч. Добавляли больше 4-амино-№(2-(4-метилпиперазин-1ил)этокси)бензолсульфоамида, дитрифторацетатной соли (50 мг) и реакционную смесь повторно нагревали до 80°C в течение 24 ч. Добавляли пиперидин (261 мкл, 2,64 ммоль) и смесь перемешивали в течение 1,5 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Вещество поглощали в 10% MeOH в растворе DCM (20 мл) и промывали водой (20 мл). Фазы разделяли с применением картриджа фазового сепаратора. Неочищенный продукт очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 40 г, 0-10% MeOH в DCM, градиентное элюирование). Колонный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ A, 20-50% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-5-метил-3-(((4-(N-(2-(4метилпиперазин-1-ил)этокси)сульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата, формиата в виде светло-желтого твердого вещества (17,4 мг, 10%); Rt 1,64 мин (способ 1); m/z 606 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.13 (3H, s), 2.15 (3H, s), 2.18-2.36 (8H, перекрывающийся m), 2.42 (2H, t), 3.76 (3H, s), 3.91 (2H, t), 5.63 (1H, s), 6.95 (2H, m), 7.36 (1H, s), 7.53-7.60 (2H, перекрывающийся m), 7.60-7.73 (5H, перекрывающийся m), 8.20 (1H, s), 10.27 (1H, br s), 10.94 (1H, s), 12.28 (1H, s).
Пример 3. (Z)-Метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2оксоиндолин-6-карбоксилат.
Промежуточное соединение I. (Z)-Метил-1-ацетил-3-(((4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Смесь (E)-метил-1-ацетил-3-(этокси(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение A) (4,00 г, 11,0 ммоль) и трет-бутил-4-аминобензоата (2,12 г, 11,0 ммоль) в DMF (20 мл) нагревали при 100°C в течение 16 ч. После охлаждения до к.т. осадок собирали фильтрацией, промывали Et2O (100 мл) и сушили in vacuo с получением указанного соединения (Z)-метил-1-ацетил-3-(((4-(третбутоксикарбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (3,68 г, 59%); Rt 3,17 мин (способ 1); m/z 513 (M+H)+ (ES+).
Промежуточное соединение J. (Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойная кислота, трифторуксусный аддукт
К раствору (Z)-метил-1 -ацетил-3-(((4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение I) (3,67 г, 7,16 ммоль) в DCM (75 мл) добавляли TFA (5,52 мл, 71,6 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение 16 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного соединения (Z)-4-(((1-ацетил-6-(метоксикарбонил)-2оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)бензойной кислоты, трифторуксусного аддукта в виде желтого твердого вещества (3,63 г, 84%); Rt 2,59 мин (способ 1); m/z 457 (M+H)+ (ES+).
Промежуточное соединение K. 2-(2-(Диметиламино)этокси)изоиндолин-1,3-дион
К раствору 2-гидроксиизоиндолин-1,3-диона (2,34 г, 14,3 ммоль) и трифенилфосфина (3,75 г, 14,3
- 19 038796 ммоль) в THF (40 мл) при 0°C по каплям добавляли 2-(диметиламино)этанол (1,20 мл, 11,9 ммоль).
Смесь затем перемешивали при 0°C в течение 30 мин перед тем, как по каплям добавляли DIAD (2,78 мл,
14,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали еще 30 мин при 0°C перед нагреванием до к.т. и перемешивали в течение 16 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток повторно растворяли в EtOAc (75 мл). Органический слой промывали насыщенным раствором NaHCO3 (2 х 50 мл), а затем сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении приблизительно до 30 мл. Органический слой охлаждали до 0°C и добавляли холодный 1М водный раствор HCl (20 мл). После завершения добавления смесь нагревали до к.т. и перемешивали в течение 20 мин. Слои разделяли и водный слой промывали Et2O (2 х 30 мл). Водный слой затем охлаждали до 0°C и подщелачивали медленным добавлением насыщенного раствора NaHCO3 перед экстрагированием CHCl3 (3 х 50 мл). Органические экстракты объединяли, а затем сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного соединения 2-(2-(диметиламино)этокси)изоиндолин-1,3диона в виде желтого масла (2,29 г, 78%); 1H ЯМР (CDCl3) δ: 2.34 (6H, s), 2.76 (2H, t), 4.31 (2H, t), 7.717.77 (2H, перекрывающийся m), 7.80-7.86 (2H, перекрывающийся m).
Промежуточное соединение L 2-(Аминоокси)-N,N-диметилэтанамин, 2HCl
К раствору 2-(2-(диметиламино)этокси)изоиндолин-1,3-диона (промежуточное соединение K) (2,29 г, 9,78 ммоль) в MeOH/DCM (2:1, 30 мл) добавляли 25% водный раствор гидразина (3,68 мл, 29,3 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Смесь разбавляли Et2O (100 мл) и фильтровали через фазовый сепаратор. Фильтрат дегазировали перед добавлением 4М HCl в диоксане (10 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток перетирали в по рошок с Et2O (2 х 50 мл) с получением указанного соединения 2-(аминоокси)-N,N-диметилэтанамина, 2HCl в виде белого твердого вещества (891 мг, 50%); 1H ЯМР δ: 2.79 (6H, s), 3.42 (2H, m), 4.45 (2H, m), 11.13 (4H, br s).
(Z)-Метил-3-(((4-((2-(диметuламино)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
К раствору (Z)-4-(((1-ацетил-6-(метоксикарбонил)-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)ами но)бензойной кислоты, трифторуксусного аддукта (промежуточное соединение J) (0,050 г, 0,088 ммоль), 2-(аминоокси)-N,N-диметилэтанамина, 2 HCl (промежуточное соединение L) (0,031 г, 0,18 ммоль) и HATU (0,067 г, 0,18 ммоль) в DMF (2 мл) по каплям добавляли основание Хунига (0,077 мл, 0,44 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч перед добавлением пиперидина (0,087 мл, 0,876 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч перед тем, как растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток повторно растворяли в MeOH (5 мл) и фильтровали через колонку SCX, промывали MeOH (100 мл). Фильтрат удаляли перед тем, как колонку промывали 1% NH3 в MeOH (100 мл). Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ B, 35-65% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-3-(((4-((2(диметиламино)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (13 мг, 28%); R1 1,80 мин (способ 2); m/z 501 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.20 (6H, s), 2.54 (2H, m), 3.79 (3H, s), 3.94 (2H, t), 5.90 (1H, d), 6.86 (2H, m), 7.20 (1H, dd), 7.45 (1H, d), 7.487.68 (7H, перекрывающийся m), 9.41 (1H, s), 10.73 (1H, s), 12.28 (1h, s).
Пример 4. (Z)-Метил-3-(((4-((2-(4-метилпиперазин-1-uл)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
- 20 038796
К раствору (Z)-4-(((1-ацетил-6-(метоксикαрбонил)-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)безойной кислоты, трифторуксусного аддукта (промежуточное соединение J) (100 мг, 0,18 ммоль), O(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этил)гидроксиламина (промежуточное соединение F) (28 мг, 0,18 ммоль) и HATU (73 мг, 0,19 ммоль) в DMF (3 мл) по каплям добавляли основание Хунига (0,092 мл, 0,53 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Добавляли пиперидин (0,17 мл, 1,75 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 1,5 ч перед тем, как большую часть растворителя удаляли при пониженном давлении. Остаток разделяли между EtOAc (10 мл) и водой/насыщенным раствором NaHCO3 (1:1, 10 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали EtOAc (3 х 10 мл). Органические экстракты объединяли, а затем сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток повторно растворяли в MeOH (10 мл) и фильтровали через колонку SCX, промывали MeOH (100 мл). Фильтрат удаляли перед тем, как колонку промывали 1% NH3 в MeOH (100 мл). Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 24 г, 10% MeOH в DCM, затем 1% NH3 в MeOH) с получением указанного соединения (Z)-метuл-3-(((4-((2(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (64 мг, 64%); R1 1,45 мин (способ 1); m/z 556 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.13 (3H, s), 2.20-2.47 (8H, перекрывающийся m), 2.54 (2H, t), 3.77 (3H, s), 3.92 (2H, t), 5.87 (1H, d), 6.86 (2H, m), 7.21 (1H, dd), 7.42 (1H, d), 7.49-7.56 (4H, перекрывающийся m), 7.57-7.68 (3H, перекрывающийся m), 11.03 (1H, s), 12.28 (1H, s).
Пример 5. (Z)-Метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этокси)карбамоил)-3-метилфенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат.
Промежуточное соединение M. (Z)-Метил-1-ацетил-3-(((4-(трет-бутоксикарбонил)-3-метилфенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Смесь (E)-метил-1 -ацетил-3-(этокси(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение D) (1,11 г, 2,91 ммоль) и трет-бутил-4-амино-2-метилбензоата (604 мг, 2,91 ммоль) в DMF (9 мл) нагревали при 100°C в течение 18 ч. После охлаждения до к.т. осадок собирали фильтрацией, промывали Et2O (10 мл) и сушили in vacuo с получением указанного соединения (Z)-метил1-ацетил-3-(((4-(трет-бутоксикарбонил)-3-метилфенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин6-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (1,05 г, 65%); R1 3,28 мин (способ 1); m/z 541 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 1.49 (9H, s), 2.13 (3H, s), 2.33 (3H, s), 2.73 (3H, s), 3.77 (3H, s), 5.53 (1H, s), 6.74 (1H, dd), 6.92 (1H, m), 7.43-7.56 (3H, перекрывающийся m), 7.57-7.71 (3H, перекрывающийся m), 8.67 (1H, s), 11.87 (1H, s).
Промежуточное соединение N. (Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3илиден)(фенил)метил)амино)-2-метилбнзойная кислота, трифторуксусный аддукт
- 21 038796
К раствору (Z)-метил-1 -ацетил-3 -(((4-(трет-бутоксикарбонил)-3 -метилфенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение M) (1,0 г, 1,85 ммоль) в DCM (14 мл) добавляли TFA (1,42 мл, 18,5 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение 16 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного соединения (Z)-4-(((1-ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)-2-метилбезойной кислоты, трифторуксусного аддукта в виде желтого твердого вещества (1,1 г, 97%); Rt 2,85 мин (способ 1); m/z 485 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.13 (3H, s), 2.36 (3H, s), 2.73 (3H, s), 3.77 (3H, s), 5.53 (1H, s), 6.74 (1H, dd), 6.91 (1H, m), 7.48-7.56 (2H, перекрывающийся m), 7.55-7.73 (4H, перекрывающийся m), 8.68 (1H, s), 11.89 (1H, s).
(Z)-Метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этокси)карбамоил)-3-метилфенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
К раствору (Z)-4-(((1-ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)-2-метилбезойной кислоты, трифторуксусного аддукта (промежуточное соединение N) (400 мг, 0,668 ммоль), 2-(аминоокси)-N,N-диметилэтанамина, 2HCl (166 мг, 0,936 ммоль) (промежуточное соединение L) и HATU (305 мг, 0,802 ммоль) в DMF (20 мл) по каплям добавляли основание Хунига (0,584 мл, 3,34 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Добавляли пиперидин (0,662 мл, 6,68 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 16 ч перед тем, как большую часть растворителя удаляли при пониженном давлении. Остаток разделяли между 10% MeOH в растворе DCM (10 мл) и воде/насыщенном растворе NaHCO3 (1:1, 10 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали 10% MeOH в растворе DCM (3 х 10 мл). Органические экстракты объединяли, а затем фильтровали через колонку SCX, промывали MeOH (50 мл). Фильтрат удаляли перед тем, как колонку промывали 1% NH3 в MeOH (50 мл). Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 24 г, 0-10% MeOH в DCM, затем 1% NH3 в MeOH) с получением указанного соединения (Z)-метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этокси)карбамоuл)-3-метилфенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (100 мг, 28%); R 1,66 мин (способ 1); m/z 529 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.13 (3H, s), 2.17 (9H, s), 2.44-2.48 (2H, перекрывающийся m), 3.75 (3H, s), 3.91 (2H, t), 5.58 (1H, s), 6.59 (1H, dd), 6.78 (1H, m), 7.08 (1H, d), 7.36 (1H, s), 7.53 (2H, m), 7.57-7.71 (3H, перекрывающийся m), 10.86 (1H, s), 12.18 (1H, s).
Пример 6. (Z)-Метил-5-метил-3-(((4-((2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат.
Промежуточное соединение O. (Z)-Метил-1-ацетил-3-(((4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)амино)(фенил)метилен) -5 -метил-2 -оксоиндолин-6 -карбоксилат
Смесь (E)-метил-1-ацетил-3-(этокси(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (про- 22 038796 межуточное соединение D) (1,00 г, 2,64 ммоль) и трет-бутил-4-аминобензоата (509 мг, 2,64 ммоль) в
DMF (9 мл) нагревали при 100°C в течение 18 ч. После охлаждения до к.т. осадок собирали фильтрацией, промывали Et2O (10 мл) и сушили in vacuo с получением указанного соединения (Z)-метил-1-ацетил-3(((4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (1,20 г, 86%); R' 3,23 мин (способ 1); m/z 527 (M+H)+ (ES+).
Промежуточное соединение P. (Z)-4-(((1-Ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3илиден)(фенил)метил)амино)безойная кислота, трифторуксусный аддукт
К раствору (Z)-метил-1 -ацетил-3-(((4-(трет-бутоксикарбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение O) (1,20 г, 2,28 ммоль) в DCM (14 мл) добавляли TFA (1,76 мл, 22,8 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение 72 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного соединения (Z)-4-(((1-ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)безойной кислоты, трифторуксусного аддукта в виде желтого твердого вещества (1,00 г, 72%); Rt 2,72 мин (способ 1); m/z 471 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.13 (3H, s), 2.73 (3H, s), 3.78 (3H, s), 5.54 (1H, s), 7.04 (2H, m), 7.50 (2H, m), 7.57-7.76 (5H, перекрывающийся m), 8.68 (1H, s), 11.89 (1H, s), 12.89 (1H, s).
(Z))-Метил-5-метил-3-(((4-((2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
К раствору (Z)-4-(((1-ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)безойной кислоты, трифторуксусного аддукта (промежуточное соединение P) (57 мг, 0,098 ммоль), O-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этил)гидроксиламина (промежуточное соединение F) (16 мг, 0,098 ммоль) и HATU (41 мг, 0,107 ммоль) в DMF (3 мл) по каплям добавляли основание Хунига (0,051 мл, 0,293 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Добавляли пиперидин (0,097 мл, 0,975 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч перед тем, как большую часть растворителя удаляли при пониженном давлении. Остаток разделяли между EtOAc (10 мл) и водой/насыщенным раствором NaHCO3 (1:1, 10 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали EtOAc (3 х 10 мл). Органические экстракты объединяли, а затем фильтровали через колонку SCX, промывали MeOH (50 мл). Фильтрат удаляли перед тем, как колонку промывали 1% NH3 в MeOH (50 мл). Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 12 г, 0-10% MeOH в DCM, затем 1% NH3 в MeOH) с получением указанного соединения (Z)-метил-5-метил-3-(((4((2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (36 мг, 64%); R1 1,49 мин (способ 1); m/z 570 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.13 (3H, s), 2.13 (3H, s), 2.17-2.35 (4H, перекрывающийся m), 2.34-2.47 (4H, перекрывающийся m), 2.54 (2H, t), 3.75 (3H, s), 3.92 (2H, t), 5.61 (1H, s), 6.87 (2H, m), 7.36 (1H, s), 7.47-7.56 (4H, перекрывающийся m), 7.57-7.71 (3H, перекрывающийся m), 10.88 (1H, s), 11.52 (1H, s), 12.22 (1H, s).
Пример 7. (Z)-Метил-3-(((4-((2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1 -ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат.
Промежуточное соединение Q. 2-(2-Бромэтокси)изоиндолин-1,3-дион
- 23 038796
2-Гидроксиизоиндолин-1,3-дион (5,00 г, 30,7 ммоль), триэтиламин (9,40 мл, 67,4 ммоль) и 1,2дибромэтан (12,4 мл, 144 ммоль) объединяли в DMF (32 мл) и перемешивали при к.т. в течение 16 ч. Осадок удаляли фильтрацией, промывали DMF (3x5 мл) и твердое вещество удаляли. Фильтрат разбавляли водой (250 мл) и продукт экстрагировали при помощи EtOAc (50 мл). Органический слой промывали 1М водным раствором HCl (50 мл) и водой (50 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного соединения 2-(2-бромэтокси)изоиндолин-1,3диона в виде кремового твердого вещества (6,28 г, 68%); 1H ЯМР δ: 3.75 (2H, t), 4.45 (2H, t), 7.82-7.91 (4H, перекрывающийся m).
Промежуточное соединение R. O-(2-Бромэтил)гидроксиламин, HBr
О Вг
АЧуД /—Z HBr, АсОН о χ.
[| J N-O ► Н2М' Вг н2о о
2-(2-Бромэтокси)изоиндолин-1,3-дион (промежуточное соединение Q) (1,00 г, 3,70 ммоль) объединяли с конц. HBr (48 мас.% в воде, 4,5 мл) и уксусной кислотой (3 мл, 52,4 ммоль). Смесь нагревали при 120°C в течение 15 мин. Реакционную смесь охлаждали, осадок удаляли фильтрацией и фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением указанного соединения О-(2-6ромэтил)гидроксиламина, HBr в виде коричневого твердого вещества (550 мг, 74%); 1H ЯМР δ: 3.72 (2H, m), 4.28 (2H, m), 10.70 (3H, br s).
Промежуточное соединение S. (Z))-Метил-1-ацетил-3-(((4-((2-бромэтокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
К раствору (Z)-4-(((1-ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)безойной кислоты, трифторуксусного аддукта (промежуточное соединение P) (300 мг, 0,638 ммоль), HATU (291 мг, 0,765 ммоль) и основания Хунига (334 мкл, 1,91 ммоль) в DMF (2 мл) добавляли O-(2-бромэтил)гидроксиламин, HBr (промежуточное соединение R) (211 мг, 0,956 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 10 мин. Реакционную смесь разбавляли 10% MeOH в DCM и промывали насыщенным водным раствором хлорида аммония. Органический слой сушили над MgSO4 и растворитель выпаривали при пониженном давлении с получением (Z)-метил-1-ацетил-3-(((4-((2-бромэтокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата; Rt 2.67 мин (способ 1); m/z 592/594 (M+H)+ (ES+). Неочищенное вещество использовали сразу на следующей стадии предполагая количественный выход.
(Z)-Метил-3-(((4-((2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
(Z)-Метил-1-ацетил-3-(((4-((2-бромэтокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат (промежуточное соединение S) (100 мг, 0,169 ммоль) объединяли с 2(пиперазин-1-ил)этанолом (659 мг, 5,06 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляли 10% MeOH в DCM (10 мл) и промывали водой (5 мл). Водный слой дополнительно экстрагировали 10% MeOH в DCM (10 мл) и объединенные органические слои концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом препаративной HPLC (способ A, 2050% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата, формиата в виде желтого твердого вещества (25 мг, 23%); Rt 1,86 мин (способ 2); m/z 600 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.13 (3H, s), 2.30-2.50 (8H, перекрывающийся m), 2.36 (2H, t), 2.54 (2H, m), 3.47 (2H, t), 3.75
- 24 038796 (3H, s), 3.92 (2H, t), 5.61 (1H, s), 6.87 (2H, m), 7.36 (1H, s), 7.50-7.56 (4H, перекрывающийся m), 7.57-7.70 (4H, перекрывающийся m), 8.17 (1H, s), 10.89 (1H, s), 12.21 (1H, s).
Пример 8. (Z)-Метил-2-оксо-3-(фенил((4-((2-(пиперидин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)метилен)индолин-6-карбоксилат, 0,7 муравьиной кислоты
К раствору (Z)-4-(((1-ацетил-6-(метоксикарбонил)-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)метил)амино)безойной кислоты, трифторуксусного аддукта (промежуточное соединение J) (100 мг, 0,2 ммоль), HATU (80 мг, 0,21 ммоль) и основания Хунига (0,092 мл, 0,526 ммоль) в DMF (3 мл) добавляли O-(2бромэтил)гидроксиламин, HBr (промежуточное соединение R) (27 мг, 0,123 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Добавляли больше O-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этил)гидроксиламина, HBr (20 мг). Реакционную смесь перемешивали еще один час. Половину реакционной смеси отделяли и добавляли к 0,35 мл пиперидина и реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч. Растворитель выпаривали и остаток очищали методом препаративной HPLC (способ A, 15-70% MeCN в воде) с получением указанного соединения (Z)-метил-2-оксо-3-(фенил((4-((2-(пиперидин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)метилен)индолин-6-карбоксилата, 0,7 муравьиной кислоты (1,6 мг, 2%). R1 1,66 мин (способ 1); m/z 541 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ 1.33-1.42 (2H, перекрывающийся m), 1.45-1.52 (4H, перекрывающийся m), 2.40-2.47 (4H, перекрывающийся m), 2.57 (2H, t), 3.77 (3H, s), 3.94 (2H, t), 5.87 (1H, d), 6.86 (2H, m), 7.21 (1H, dd), 7.42 (1H, d), 7.50-7.56 (4H, перекрывающийся m), 7.57-7.69 (3H, перекрывающийся m), 8.19 (0.7 H, s), 11.04 (1H, s), 12.27 (1H, s).
Пример 9. (Z)-Метил-5-метил-3-(((4-(метил(2-(4-(2-(метиламино)-2-оксоэтил)пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат.
Промежуточное соединение T. Формальдегид-O-(2-гидроксиэтил)оксим параформальдегид
О л EtOH η Λ
Смесь 2-(аминоокси)этанола (3,16 г, 41,0 ммоль) и параформальдегида (1,23 г, 41,0 ммоль) в EtOH (50 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 18 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного соединения формαльдегид-O-(2-гидроксиэтил)оксима в виде бесцветного масла (3,56 г, 97%); 1H ЯМР δ: 3.57 (2H, q), 4.05-3.96 (2H, m), 4.67 (1H, t), 6.57 (1H, d), 7.05 (1H, d).
Промежуточное соединение U. 2-((Метиламино)окси)этанол
Py-BH3, THF
П , HCl в диоксане η Λ ίμ -0Η ------------► ']) 0Η
К раствору формαльдегид-O-(2-гидроксиэтил)оксима (промежуточное соединение T) (3,56 г, 40,0 ммоль) в THF (25 мл) при 0°C добавляли Py-BH3 (6,05 мл, 59,9 ммоль). 4М HCl в диоксане (15 мл) добав ляли в течение 1 ч. Смесь нагревали до к.т. и перемешивали в течение 24 ч, затем медленно разбавляли MeOH (30 мл) и фильтровали через колонку SCX, промывали MeOH (250 мл). Фильтрат удаляли перед тем, как колонку промывали 1% NH3 в MeOH (250 мл). Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного соединения 2-((метиламино)окси)этанола в виде бесцветного масла (0,833 г, 18%); 1H ЯМР δ: 2.51 (3H, m), 3.50 (2H, m), 3.57 (2H, m), 4.53 (1H, s), 6.45 (1H, m).
Промежуточное соединение V. (Z)-Метил-1-ацетил-3-(((4-((2-гидроксиэтокси)(метuл)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
К раствору (Z)-4-(((1-ацетил-6-(метоксикарбонил)-5-метил-2-оксоиндолин-3-илиден)(фенил)ме- 25 038796 тил)амино)безойной кислоты, трифторуксусного аддукта (промежуточное соединение P) (0,528 г, 0,903 ммоль), 2-((метиламино)окси)этанола (промежуточное соединение U) (0,158 г, 1,36 ммоль) и HATU (0,378 г, 0,99 ммоль) в DMF (3 мл) по каплям добавляли основание Хунига (0,47 мл, 2,71 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток разделяли между 10% MeOH в EtOAc (10 мл) и воде (10 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали EtOAc (3 х 10 мл). Органические экстракты объединяли, а затем сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали методом колоночной флешхроматографии (SiO2, 24 г, 0-5% MeOH в DCM, градиентное элюирование) с получением указанного соединения (Z)-метил-1 -ацетил-3 -(((4-((2-гидроксиэтокси)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (0,482 г, 88%); Rt 2,38 мин (способ 1); m/z 544 (M+H)+ (ES+).
Промежуточное соединение W. (Z)-Метил-1-ацетил-3-(((4-((2-бромэтокси)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
К раствору (Z)-метил-1 -ацетил-3 -(((4-((2-гидроксиэтокси)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение V) (0,482 г, 0,887 ммоль) в DCM (10 мл) при 0°C добавляли трифенилфосфин (0,256 г, 0,975 ммоль) и CBr4 (0,323 г, 0,975 ммоль). Смесь нагревали до к.т. и перемешивали в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 24 г, 0-2% MeOH в DCM, градиентное элюирование) с получением указанного соединения (Z)-метил-1-ацетил-3(((4-((2-бромэтокси)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде оранжевого твердого вещества (681 мг, колич.); Rt 2,80 мин (способ 2); m/z 606/608 (M+H)+ (ES+).
(Z))-Метил-5-метил-3-(((4-(метил(2-(4-(2-(метиламино)-2-оксоэтил)пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
К смеси (Z)-метил-1 -ацетил-3 -(((4-((2-бромэтокси)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение W) (75 мг, 0,124 ммоль) и Nметил-2-(пиперазин-1-ил)ацетамида, 2 HCl (142 мг, 0,618 ммоль) в DMF (2 мл) добавляли основание Хунига (0,259 мл, 1,48 ммоль). Смесь нагревали при 60°C в течение 5 ч. После охлаждения до к.т. добавляли пиперидин (0,245 мл, 2,47 ммоль) и смесь нагревали при 60°C в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали до к.т. и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток разделяли между EtOAc (10 мл) и водой/насыщенным водным раствором NaHCO3 (1:1, 10 мл). Слои разделяли и водную фазу экстрагировали при помощи EtOAc (3 х 10 мл). Органические экстракты объединяли и фильтровали сразу через колонку SCX, промывали MeOH (50 мл). Фильтрат удаляли перед тем, как колонку промывали 1% NH3 в MeOH (50 мл). Растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 12 г, 0-10% 0,7 М аммиака в MeOH в DCM, градиентное элюирование) с получением указанного соединения (Z)-метил-5-метил-3-(((4-(метил(2-(4-(2(метиламино)-2-оксоэтил)пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (11 мг, 13%); Rt 1,58 мин (способ 1); m/z 641 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.14 (3H, s), 2.23-2.36 (8H, перекрывающийся m), 2.59 (3H, d), 2.87 (2H, m), 3.21 (3H, s), 3.31 (2H, s), 3.75 (3H, s), 3.78 (2H, t), 5.62 (1H, s), 6.86 (2H, m), 7.36 (1H, s), 7.42 (2H, m), 7.53 (2H, m), 7.58-7.66 (3H, перекрывающийся m), 10.89 (1H, s), 12.22 (1H, s).
Пример 10. (Z)-Метил-5-метил-3 -(((4-(метил(2-(4-(2-(метиламино)-2-оксоэтил)пиперазин-1 -ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
- 26 038796
Промежуточное соединение X. трет-Бутил(4-(№(2-гидроксиэтокси)-№метилсульфамоил)фенил)карбамат
NHBoc
К раствору 2-((метиламино)окси)этанола (промежуточное соединение U) (0,116 г, 1,27 ммоль) в DMF (3 мл) добавляли основание Хунига (0,445 мл, 2,55 ммоль), а затем трет-бутил(4-(хлорсульфонил)фенил)карбамат (0,371 г, 1,27 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 16 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток разделяли между DCM (10 мл) и 1М водным раствором HCl (10 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали DCM (2 х 10 мл). Органические экстракты объединяли и фильтровали через фазовый сепаратор. Растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 24 г, 0-70% EtOAc в гексане, градиентное элюирование) с получением указанного соединения трет-бутил(4-(№(2-гидроксиэтокси)-N-метилсульфамоил)фенил)карбамата в виде розовой смолы, которая затвердевала при отстаивании в течение ночи (246 мг, 41%); R1 1,97 мин (способ 2); m/z 347 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 1.49 (9H, s), 2.71 (3H, s), 3.54 (2H, q), 3.93 (2H, dd), 4.68 (1H, t), 7.69-7.76 (4H, перекрывающийся m), 9.97 (1H, s).
Промежуточное соединение Y. 4-Амино-N-(2-гидроксиэтокси)-N-метилбензолсульфоамид, трифто руксусная соль
К раствору трет-бутил(4-(N-(2-гидроксиэтокси)-N-метuлсульфамоил)фенил)карбамата (промежуточное соединение X) (202 мг, 0,583 ммоль) в DCM (3 мл) добавляли TFA (0,449 мл, 5,83 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 4 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток повторно растворяли в MeOH (3 мл), фильтровали через колонку SAX, промывали MeOH (75 мл). Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного соединения 4-амино-№(2-гидроксиэтокси)N-метилбензолсульфоамида, трифторуксусной соли в виде оранжевой смолы (0,23 г, 95%); R1 1,13 мин (способ 2); m/z 247 (M+H)+ (ES+).
Промежуточное соединение Z. (Z)-Метил-1-ацетил-3-(((4-(N-(2-гидроксиэтокси)-N-метилсульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Смесь (E)-метил-1-ацетил-3-(этокси(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение D) (0,231 г, 0,61 ммоль) и 4-амино-N-(2-гидроксиэтокси)-N-метилбензолсульфоамида, трифторуксусной соли (промежуточное соединение Y) (0,219 г, 0,608 ммоль) в DMF (3 мл) обрабатывали основанием Хунига (0,106 мл, 0,608 ммоль) и нагревали при 80°C в течение 18 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали методом колоночной флешхроматографии (SiO2, 24 г, 0-2% MeOH в DCM, градиентное элюирование) с получением указанного соединения (Z)-метил-1 -ацетил-3-(((4-(N-(2-гидроксиэтокси)-N-метилсульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде оранжевой смолы (226 мг, 63%); Rt 2,58 мин (способ 2); m/z 580 (M+H)+ (ES+).
Промежуточное соединение AA. (Z)-Метил-1-ацетил-3-(((4-(N-(2-бромэтокси)-N-метилсульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
- 27 038796
К раствору (Z)-метил-1-ацетил-3-(((4-(N-(2-гидроксиэтокси)-N-метилсульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (0,226 г, 0,390 ммоль) (промежуточное соединение Z) в DCM (4 мл) добавляли трифенилфосфин (0,112 г, 0,429 ммоль) и CBr4 (41 мкл, 0,429 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 16 ч. Добавляли дополнительные части PPh3 (0,112 г, 0,429 ммоль) и CBr4 (41 мкл, 0,429 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали методом колоночной флешхроматографии (SiO2, 12 г, 0-2% MeOH в DCM, градиентное элюирование) с получением указанного соединения (Z)-метил-1-ацетил-3-(((4-(N-(2-бромэтокси)-N-метилсульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (161 мг, 64%); Rt 3,01 мин (способ 2); m/z 642/644 (M+H)+ (ES+).
(Z)-Метил-3-(((4-(N-(2-((2-гидроксиэтил)(метил)амино)этокси)-N-метилсульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Раствор (Z)-метил-1-ацетил-3-(((4-(N-(2-бромэтокси)-N-метилсульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата (промежуточное соединение AA) (77 мг, 0,120 ммоль) и 2-(метиламино)этанола (0,096 мл, 1,20 ммоль) в DMF (2 мл) нагревали при 60°C в течение 16 ч. После охлаждения до к.т. растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток разделяли между EtOAc (10 мл) и водой/насыщенным водным раствором NaHCO3 (1:1, 10 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали EtOAc (3 х 10 мл). Органические экстракты объединяли и фильтровали через колонку SCX, промывали MeOH (50 мл). Фильтрат удаляли перед тем, как колонку промывали 1% NH3 в MeOH (50 мл). Растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали методом колоночной флеш-хроматографии (SiO2, 12 г, 0-10% 0,7М аммиака в MeOH в DCM) с получением указанного соединения (Z)-метил-3-(((4-(N-(2-((2-гидроксиэтил)(метил)амино)этокси)-N-метилсульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (41 мг, 55%); R 1,72 мин (способ 1); m/z 595 (M+H)+ (ES+); 1H ЯМР δ: 2.14 (3H, s), 2.17-2.30 (4H, перекрывающийся m), 2.68 (3H, s), 3.43-3.54 (2H, перекрывающийся m), 3.76 (3H, s), 3.96-4.08 (2H, перекрывающийся m), 4.40 (1H, m), 5.65 (1H, s), 6.96 (2H, m), 7.36 (1H, s), 7.53-7.75 (7H, перекрывающийся m), 10.96 (1H, s), 12.29 (1H, s), (отсутствие 3H-предполагаемого перекрытия растворителем).
Следующие соединения примеров (табл. 2) могут быть получены способами синтеза, подобными вышеупомянутым в примерах, или способами, описанными в другом месте настоящего описания.
- 28 038796
Таблица 2. Дополнительные соединения примеров изобретения *Индекс кода пути:
Путь 1 А: см. пример 1 или пример 2
Путь 1В: см. пример 3, пример 4, пример 5 или пример 6
Путь 1С: см. пример 7 или пример 8
Путь 1D: см. пример 9
Путь 1Е: см. пример 10 № примера., структура, название, код пути, анализ LC-MS и спектральные данные Ή ЯМР
Пример 11:
-NH (2)-Метил-3-(((4-(А-метокси-Аметилсульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1А
Пример 12:
R1 2.43 мин (способ 1); m/z 494 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.66 (ЗН, s), 3.66 (ЗН, s), 3.78 (ЗН, s), 5.91 (1Н, d), 6.98 (2Н, d), 7.22 (1Н, dd), 7.43 (1Н, d), 7.53-7.60 (4Н, перекрывающийся ш), 7.607.72 (ЗН, перекрывающийся ш), 11.08 (1Н, s), 12.34 (1Н, s).
.и... ..
О II >--N 'Г'
-NH (2)-Метил-3-(((4-((2морфолиноэтокси)карбамоил)фенил)амино)
R1 1.56 мин (способ 1); m/z 543 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.392.46 (4Н, перекрывающийся т), 2.54 (2Н, t), 3.50-3.58 (4Н, перекрывающийся т), 3.77 (ЗН, s), 3.94 (2Н, t), 5.87 (1Н, d), 6.86 (2Н, d), 7.21 (1Н, dd), 7.42 (1Н, d), 7.50-7.56 (4Н, перекрывающийся
ш),
7.57-7.68 (ЗН,
- 29 038796 (фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1В
Пример 13:
(2)-Метил-3-(((4-((2(диметиламино)этокси)карбамоил)-3метилфенил)амино)(фенил)метилен)-2оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1В
Пример 14:
перекрывающийся ш), 11.05 (1Н, s), 11.59 (1Н, s), 12.27 (1Н, s).
R1 1.56 мин (способ 1); m/z 515 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.16 (9Н, s), 2.47 (2Н, т), 3.77 (ЗН, s), 3.90 (2Н, t), 5.84 (1Н, т), 6.57 (1Н, dd), 6.77 (1Н, d), 7.07 (1Н, d), 7.20 (1Н, dd), 7.42 (1Н, d), 7.52 (2Н, т), 7.55-7.68 (ЗН, перекрывающийся т), 11.02 (1Н, s), 12.25 (1Н, s).
(2)-Метил-3-(((4-(метил(2-(4-метилпиперазин-1ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
R1 1.50 мин (способ 1); m/z 570 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 (ЗН, s), 2.15-2.28 (8Н, перекрывающийся т), 2.27 (2Н, t), 3.21 (ЗН, s), 3.75-3.78 (5Н, перекрывающийся т), 5.88 (1Н, d), 6.85 (2Н, т), 7.21 (1Н, dd), 7.35-7.46 (ЗН, перекрывающийся т), 7.49-7.56 (2Н, т), 7.55-7.69 (ЗН, перекрывающийся т), 11.03 (1Н, s), 12.29 (1Н, s).
Код пути*: 1В
Пример 15:
- 30 038796
(2)-Метил-3-(((4-(А-(2R’ 1.66 мин (способ 1); m/z 537 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.12 (6Η, s), 2.38-2.46 (2H, m), 3.78 (ЗН, s), 3.90 (2H, t), 5.89 (1H, d), 6.91-6.99 (2H, перекрывающийся m), 7.22 (1H, dd), 7.42 (1H, d), 7.53-7.71 (7H, m), 10.34 (1H, s), 11.08 (1H, s), 12.31 (1H, s).
(диметиламино)этокси)сульфамоил)фенил)амино) (фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат Код пути*: ΙΑ
Пример 16:
Tr-NH
Τ'
Лх Т Н о (2)-Метил-3-(((3-метил-4-((2морфолиноэтокси)карбамоил)фенил)амино) (фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
R1 1.59 мин (способ 1); m/z 557 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.17 (ЗН, s), 2.40-2.45 (4Н, перекрывающийся т), 2.54 (2Н, t), 3.54-3.56 (4Н, перекрывающийся т), 3.77 (ЗН, s), 3.95 (2Н, t), 5.84 (1Н, d), 6.57 (1Н, dd), 6.78 (1Н, d), 7.08 (1Н, d), 7.20 (1Н, dd), 7.42 (1Н, d), 7.517.53 (2Н, перекрывающийся т), 7.56-7.70 (ЗН, перекрывающийся т), 11.02 (1Н, s), 11.31 (1Н, s), 12.25 (1Н, s).
Код пути*: 1В
Пример 17:
- 31 038796
Rl 1.46 мин (способ 1); m/z 570 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.17 (ЗН, s), 2.18 (ЗН, s), 2.28-2.49 (8Н, перекрывающийся ш), 2.55 (2Н, t), 3.77 (ЗН, s), 3.93 (2Н, t), 5.84 (1Н, d), 6.57 (1Н, dd), 6.78 (1Н, d), 7.08 (1Н, d), 7.20 (1Н, dd), 7.42 (2)-Метил-3 -(((3 -метил-4-((2-(4-метилпиперазин-1 - (1Н,
d), 7.47-7.56 (2Н, ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат перекрывающийся ш), 7.55-7.69 (ЗН, перекрывающийся ш), 11.03 (1Н, s), 11.25 (1Н, s), 12.26 (1Н, s).
Код пути*: 1В
Пример 18:
(2)-Метил-3 -(((3 -метил-4-(метил(2-(4метилпиперазин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат Код пути*: 1В
Пример 19:
R1 1.53 мин (способ 1); m/z 584 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.06 (ЗН, s), 2.11 (ЗН, s), 2.08-2.28 (ЮН, перекрывающийся т), 3.18 (ЗН, s), 3.64-3.72 (2Н, перекрывающийся т), 3.77 (ЗН, s), 5.87 (1Н, d), 6.59 (1Н, dd), 6.79 (1Н, d), 7.02 (1Н, d), 7.20 (1Н, dd), 7.42 (1Н, d), 7.51 (2Н, т), 7.557.68 (ЗН, перекрывающийся т), 11.01 (1Н, s), 12.25 (1Н, s).
Rl 1.54 мин (способ 1); m/z 515 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.69 (2Н, т), 2.11 (6Н, s), 2.31 (2Н, t), 3.77 (ЗН, s), 3.84 (2Н, t), 5.87 (1Н, d), 6.86 (2Н, т), 7.21 (1Н, dd), 7.42 (1Н, d), 7.50-7.55 (4Н, перекрывающийся т), 7.57-7.68
- 32 038796 (2)-Метил-3-(((4-((3(ЗН, перекрывающийся ш), 11.03 (диметиламино)пропокси)карбамоил)фенил)амино) (1Н, s), 12.28 (1Н, s).
(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1В
Пример 20:
О II ’ J . N н
о (2)-Метил-3-(((4-((2(диметиламино)этокси)карбамоил)-3фторфенил)амино)(фенил)метилен)-2оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1В
Пример 21:
.- N
О Г N J 0
Г'” *' /у ,-NH (2)-Метил-3 -(((4-(метокси( 1 -метилпиперидин-4ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2оксоиндолин-6-карбоксилат
R1 1.55 мин (способ 1); m/z 519 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.17 (6Н, s), 2.46-2.48(2Н, перекрывающийся т), 3.78 (ЗН, s), 3.90 (2Н, t), 5.89 (1Н, d), 6.58 (1Н, d), 6.72-6.80(1Н, перекрывающийся т), 7.22 (1Н, dd), 7.35-7.44(2Н, перекрывающийся т), 7.51-7.58 (2Н, перекрывающийся т), 7.597.72 (ЗН, т), 11.06 (1Н, s), 12.21 (1Н, s).
R’ 1.57 мин (способ 1); m/z 541 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.641.69 (2Н, перекрывающийся т), 1.82-1.87 (4Н, перекрывающийся т), 2.14 (ЗН, s), 2.79-2.84 (2Н, перекрывающийся т), 3.45 (ЗН, s), 3.77 (ЗН, s), 3.80-3.90 (1Н, перекрывающийся т), 5.89 (1Н, d), 6.82-6.92 (2Н, перекрывающийся т), 7.21 (1Н, dd), 7.30-7.38 (2Н, перекрывающийся т), 7.42 (1Н, d), 7.50-7.53 (2Н, перекрывающийся т), 7.54-7.67 (ЗН, перекрывающийся т), 11.02 (1Н, s), 12.26 (1Н, s).
- 33 038796
Код пути*: 1В
Пример 22:
(2)-Метил-3-(((4-((2(димeτилaминo)эτoκcи)(мeτил)κapбaмoил)-3метилфенил)амино)(фенил)метилен)-2оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1B
Пример 23:
О (2)-Метил-3 -(((4-((2(диметиламино)этил)(метокси)карбамоил)фенил) амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6карбоксилат
Код пути*: 1B
Пример 24:
R1 1.58 мин (способ 1); m/z 529 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР (главный ротамер) δ: 1.97 (6Н, s), 2.17 (ЗН, s), 3.17 (ЗН, s), 3.72-3.79 (5Н, перекрывающийся т), 5.86 (1Н, d), 6.60 (1Н, dd), 6.80 (1Н, d), 7.03 (1Н, d), 7.20 (1Н, dd), 7.42 (1Н, d), 7.46-7.54 (2Н, перекрывающийся т), 7.55-7.69 (ЗН, перекрывающийся т), 10.99 (1Н, s), 12.23 (1Н, s). (Отсутствие 2Нпредполагаемого перекрытия растворителем).
R' 1.57 мин (способ 1); m/z 515 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР 5: 2.09 (6Н, s), 2.43 (2Н, t), 3.46 (ЗН, s), 3.66 (2Н, t), 3.77 (ЗН, s), 5.87 (1Н, d), 6.86 (2H, m), 7.21 (1H, dd), 7.37 (2H, m), 7.42(1H, d), 7.51 (2H, m), 7.55-7.67 (3H, перекрывающийся m), 11.02 (1H, s), 12.27 (1H, s).
- 34 038796
(2)-Метил-3 -(((4-(5 -метил-1,2,5 -оксадиазепан-2карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1В
R1 1.55 мин (способ 1); m/z 513 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.33 (ЗН, s), 2.59-2.61 (2Н, перекрывающийся ш), 2.68-2.71 (2Н, перекрывающийся ш), 3.77 (ЗН, s), 3.74-3.79 (4Н, перекрывающийся ш), 5.87 (1Н, d), 6.85 (2Н, ш), 7.21 (1Н, dd), 7.37-7.45 (ЗН, перекрывающийся ш), 7.51 (2Н, ш), 7.56-7.70 (ЗН, перекрывающийся т), 11.00 (1Н, s), 12.29 (1Н, s).
Пример 25:
O..s / --о „——Ί*·, .-NH
II и о
(2)-Метил-3-(((4-(А-мегил-А-(2-(4метилпиперазин-1 ил)этокси)сульфамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1А
R1 1.70 мин (способ 1); m/z 606 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.302.48 (6Н, перекрывающийся т), 2.67 (ЗН, s), 3.78 (ЗН, s), 4.00 (2Н, t), 5.90 (1Н, d), 6.96 (2Н, т), 7.23 (1Н, dd), 7.43 (1Н, d), 7.58 (2Н, т), 7.61-7.75 (5Н, перекрывающийся т), 11.09 (1Н, s), 12.37 (1Н, s). (Отсутствие 7Нпредполагаемого перекрытия растворителем).
Пример 26:
- 35 038796
(2)-Метил-3-(((4-((2(диметиламино)этокси)карбамоил)фенил)амино) (фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6карбоксилат
Код пути*: 1В
R1 1.95 мин (способ 1); m/z 515 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 (ЗН, s), 2.13 (ЗН, s), 2.17 (ЗН, s), 2.53 (2Н, т), 3.75 (ЗН, s), 3.93 (2Н, t), 5.58 (1Н, s), 6.58 (1Н, dd), 6.79 (1Н, d), 7.08 (1Н, d), 7.36 (1Н, s), 7.52 (2Н, т), 7.57-7.71 (ЗН, перекрывающийся т), 10.87 (1Н, s), 11.31 (1Н, s), 12.19 (1Н, s).
Пример 27:
(2)-Метил-3-(((4-((3R' 2.00 мин (способ 1); m/z 529 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.70 (2Н, т), 2.09-2.18 (9Н, перекрывающийся т), 2.34 (2Н, t), 3.75 (ЗН, s), 3.84 (2Н, t), 5.61 (1Н, s), 6.88 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.48-7.57 (4Н, перекрывающийся
т), 7.58-7.70 (ЗН, (диметиламино)пропокси)карбамоил)фенил)амино) (фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6 перекрывающийся т), 10.88 (1Н, s), 12.22 (1Н, s).
карбоксилат
Код пути*: 1В
Пример 28:
R1 1.93 мин (способ 1); m/z 584 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 (ЗН, s), 2.18 (6Н, s), 3.75 (ЗН, s), 3.91 (2Н, t), 5.61 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.36 (Ш, s), 7.49-7.57 (4Н, перекрывающийся т), 7.57-7.70 (ЗН, перекрывающийся т), 10.89
- 36 038796 (2)-Метил-5 -метил-3 -(((3 -метил-4-((2-(4метилпиперазин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат Код пути*: 1В (1Н, s), 12.22 (1Н, s), (Отсутствие 1 ОН-предполагаемого перекрытия растворителем).
Пример 29:
(2)-Метил-3-(((4-((3 (диметиламино)пропокси)карбамоил)-3метилфенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1В
R1 2.02 мин (способ 1); m/z 543 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.69 (2Н, т), 2.12 (6Н, s), 2.13 (ЗН, s), 2.16 (ЗН, s), 2.31 (2Н, t), 3.75 (ЗН, s), 3.85 (2Н, t), 5.58 (1Н, s), 6.59 (1Н, dd), 6.79 (1Н, d), 7.07 (1Н, d), 7.36 (1Н, s), 7.52 (2Н, dd), 7.577.71 (ЗН, перекрывающийся ш), 10.87 (1Н, s), 12.18 (1Н, s).
Пример 30:
R1 1.96 мин (способ 1); m/z 541 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.491.61 (2Н, перекрывающийся т), 1.78-1.87 (2Н, перекрывающийся т), 1.96-2.06 (2Н, перекрывающийся т), 2.13 (6Н, s), 2.55-2.64 (2Н, (2)-Метил-5-метил-3-(((4-(((1-метилпиперидин-4ил)окси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)2-оксоиндолин-6-карбоксилат перекрывающийся т), 3.75 (ЗН, s), 3.82 (1Н, т), 5.61 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.50-7.56 (4Н, перекрывающийся т), 7.58-
7.69 (ЗН, перекрывающийся т), 10.89 (1Н, s), 11.36 (1Н, s), 12.22 (1Н, s).
- 37 038796
Код пути*: 1В
Пример 31:
(2)-Метил-5 -метил-3 -(((3 -метил-4-((( 1 метилпиперидин-4ил)окси)карбамоил)фенил)амино)(фен! 2-оксоиндолин-6-карбоксилат
R1 1.99 мин (способ 1); m/z 555 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.501.62 (2Н, перекрывающийся ш),
1.77-1.89 (2Н, перекрывающийся
т), 1.97-2.07 (2Н, перекрывающийся ш), 2.10-2.18 (9Н, перекрывающийся ш), 2.532.63 (2Н, перекрывающийся ш), 3.75 (ЗН, s), 3.82 (1Н, т), 5.58
I- (1Н, s), 6.58 (1Н, dd), 6.79 (1Н, d), 7.08 (1Н, d), 7.36 (1Н, s), 7.52 (2Н, т), 7.57-7.71 (ЗН, перекрывающийся т), 10.87 (1Н, s), 11.13 (1Н, s), 12.19 (1Н, s).
Код пути*: 1В
Пример 32:
R1 1.86 мин (способ 1); m/z 588 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.102.15 (6Н, перекрывающийся т), 2.19-2.46 (8Н, перекрывающийся т), 2.52-2.55 (2Н, перекрывающийся т), 3.76 (ЗН, s), 3.92 (2Н, t), 5.63 (1Н, s), 6.59 (2)-Метил-3 -(((3 -фтор-4-((2-(4-метилпиперазин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1В (1Н, dd), 6.77 (1Н, dd), 7.36 (1Н, s), 7.40 (1Н, t), 7.51-7.59 (2Н, перекрывающийся т), 7.61-7.72 (ЗН, перекрывающийся т), 10.92 (1Н, s), 12.15 (1Н, s).
Пример 33:
- 38 038796
(Z)-Метил-3 -(((3 -фтор-4-((2-(4-метилпиперазин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
R1 1.73 мин (способ 1); m/z 574 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 (ЗН, s), 2.16-2.47 (8Н, перекрывающийся т), 2.51-2.56 (2Н, перекрывающийся т), 3.78 (ЗН, s), 3.92 (2Н, t), 5.89 (1Н, d), 6.57 (1Н, d), 6.76 (1Н, d), 7.22 (1Н, dd), 7.35-7.44 (2Н, перекрывающийся т), 7.51-7.58 (2Н, перекрывающийся т), 7.587.70 (ЗН, перекрывающийся т), 11.06 (1Н, s), 12.21 (1Н, s).
Код пути*: 1В
Пример 34:
(2)-Метил-3-(((4-(метокси(1-метилпиперидин-4ил)карбамоил)-3 метилфенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1В
R1 1.69 мин (способ 1); m/z 569 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.571.69 (2Н, перекрывающийся т), 1.74-1.89 (4Н, перекрывающийся т), 2.06 (ЗН, s), 2.10-2.18 (6Н, перекрывающийся т), 2.73-2.84 (2Н, перекрывающийся т), 3.353.45 (ЗН, br s), 3.75 (ЗН, s), 5.64 (1Н, s), 6.63 (1H, d), 6.83 (1H, s), 7.01 (1H, d), 7.36 (1H, s), 7.49 (2H, m), 7.54-7.67 (3H, перекрывающийся m), 10.85 (1H, s), 12.13 (1H, s). (Отсутствие 1Hпредполагаемого затемнения растворителем).
Пример 35:
- 39 038796
(2)-Метил-3 -(((4-(метокси( 1 -метилпиперидин-4ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1В
R1 1.67 мин (способ 1); m/z 555 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.611.69 (2Н, перекрывающийся т), 1.74-1.89 (4Н, перекрывающийся т), 2.13 (ЗН, s), 2.14 (ЗН, s), 2.742.83 (2Н, перекрывающийся т), 3.45 (ЗН, s), 3.75 (ЗН, s), 3.85 (1Н, т), 5.64 (1Н, s), 6.89 (2Н, d), 7.317.39 (ЗН, перекрывающийся т), 7.51 (2Н, т), 7.56-7.68 (ЗН, перекрывающийся т), 10.87 (1Н, s), 12.20 (1Н, s).
Пример 36:
(2)-Метил-3 -(((4-((2-(4-этилпиперазин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1В
R1 1.54 мин (способ 1); m/z 584 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 0.97 (ЗН, т), 2.13 (ЗН, s), 2.22-2.48 (ЮН, перекрывающийся т), 2.54 (2Н, t), 3.75 (ЗН, s), 3.92 (2Н, t), 5.61 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.49-7.56 (4Н, перекрывающийся т), 7.58-7.69 (ЗН, перекрывающийся т), 10.89 (1Н, s), 11.57 (1Н, br s), 12.22 (1Н, s).
Пример 37:
- 40 038796
(2)-Метил-3 -(((4-(1,2-оксазетидин-2карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1С
R1 2.35 мин (способ 1); m/z 456 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 3.77 (ЗН, s), 4.05-4.12 (2Н, перекрывающийся т), 4.40-4.47 (2Н, перекрывающийся т), 5.88 (1Н, d), 6.85 (2Н, т), 7.21 (1Н, dd), 7.39-7.54 (5Н, перекрывающийся т), 7.55-7.66 (ЗН, перекрывающийся т), 11.02 (1Н, s), 12.26 (1Н, s).
Пример 38:
(ЗД-Метил-3-(((4-((2-(3(диметиламино)пирролидин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
Код пути*: 1С
R' 1.30 мин (способ 1); m/z 570 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.60 (1Н, т), 1.83 (1Н, т), 2.13 (6Н, s), 2.36 (1Н, т), 2.57-2.79 (6Н, перекрывающийся т), 3.77 (ЗН, s), 3.91 (2Н, t), 5.87 (1Н, d), 6.86 (2Н, т), 7.21 (1Н, dd), 7.42 (1Н, d), 7.50-7.56 (4Н, перекрывающийся т), 7.57-7.68 (ЗН, перекрывающийся т), 8.20 (1Н, s), 11.04 (1Н, s), 12.28 (1Н, s).
Пример 39:
О н „-N .U ^’Ά-ΟΗ •А.
--Ν
II
R’ 1.41 мин (способ 1); m/z 586 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.302.47 (8Н, перекрывающийся т), 2.53 (2Н, т), 3.47 (2Н, t), 3.77 (ЗН, s), 3.92 (2Н, t), 5.87 (1Н, d), 6.86 (2Н, т), 7.21 (1Н, dd), 7.42 (1Н, d), 7.50-7.56 (4Н,
- 41 038796 (2)-Метил-3-(((4-((2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазинперекрывающийся m), 7.57-7.70
1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат (ЗН, перекрывающийся т), 8.23 (1Н, s), 11.04 (1Н, s), 12.28 (1Н, s). (Отсутствие 2Нпредполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1С
Пример 40:
(2)-Метил-3-(((4-((2-(4-гидроксипипер идин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
R1 1.59 мин (способ 1); m/z 557 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.271.44 (2Н, перекрывающийся т), 1.60-1.76 (2Н, перекрывающийся т), 2.00-2.19 (2Н, перекрывающийся т), 2,54-2,58 (2Н, перекрывающийся т), 2.712.81 (2Н, перекрывающийся т), 3.43 (1Н, т), 3.61 (1Н, т), 3.77 (ЗН, s), 3.92 (2Н, t), 5.86 (1Н, d), 6.86 (2Н, т), 7.20 (1Н, dd), 7.42 (1Н, d), 7.48-7.56 (4Н, перекрывающийся т), 7.56-7.68 (ЗН, перекрывающийся т), 8.20 (1Н, s), 11.03 (1Н, s), 12.28 (1Н, s).
Код пути*: 1С
Пример 41:
R1 1.75 мин (способ 1); m/z 591 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.822.89 (2Н, т), 3.05-3.17 (8Н, перекрывающийся т), 3.77 (ЗН, s), 3.97 (2Н, t), 5.87 (1Н, d), 6.87 (2Н, т), 7.21 (1Н, dd), 7.42 (1Н, d), 7.50-7.56 (4Н,
- 42 038796 (2)-Метил-3 -(((4-((2-(1,1 диоксидотиоморфолино)этокси)карбамоил)фенил) амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6карбоксилат
Код пути*: 1С
Пример 42:
перекрывающийся ш), 7.57-7.68 (ЗН, перекрывающийся т), 11.03 (1Н, s), 11.63 (1Н, s), 12.28 (1Н, s).
(2)-Метил-2-оксо-3 -(((4-((2-(3 -оксопиперазин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)индолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1С
R1 1.47 мин (способ 1); m/z 556 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.602.67 (4Н, перекрывающийся т), 3.02 (2Н, s), 3.09-3.17 (2Н, перекрывающийся т), 3.77 (ЗН, s), 3.95 (2Н, t), 5.87 (1Н, d), 6.86 (2Н, т), 7.21 (1Н, dd), 7.42 (1Н, d), 7.49-7.56 (4Н, перекрывающийся т), 7.57-7.68 (ЗН, перекрывающийся т), 7.697.75 (1Н, т), 11.03 (1Н, s), 11.58 (1Н, s), 12.28 (1Н, s).
Пример 43:
(Я)-Метил-3-(((4-((2-(4-цианопиперидин-1ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, гемиформиат
R1 1.55 мин (способ 1); m/z 566 (М+Н)+ (ES+); 'Н ЯМР δ: 1.592.00 (4Н, перекрывающийся d), 2.52-2.96 (6Н, перекрывающийся т), 3.77 (ЗН, s), 3.98 (2Н, т), 5.87 (1Н, d), 6.87 (2Н, т), 7.21 (1Н, dd), 7.42 (1Н, d), 7.49-7.57 (4Н, перекрывающийся т), 7.57-7.70 (ЗН, перекрывающийся т), 8.13 (0.5Н, s), 11.02 (1Н, d), 12.28 (1Н, s). (Отсутствие 1Нпредполагаемого затемнения растворителем).
- 43 038796
Код пути*: 1С
Пример 44:
(2)-Метил-3-(((4-((2-((25,67?)-2,6диметилпиперидин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
R1 1.59 мин (способ 1); m/z 569 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ (смесь ротамеров): 0.80 и 0.87 (ЗН, 2 х
d), 0.92-1.67 (9Н, перекрывающийся т), 1.74-1.98 (2Н, перекрывающийся т), 3.77 (ЗН, s), 5.85 и 5.89 (1Н, 2 х d), 6.83 (2Н, d), 6.92-7.19 (1Н, т), 7.06 (1Н, т), 7.43 (2Н, т), 7.52 (2Н, т), 7.54-7.68 (ЗН, перекрывающийся т), 8.45 (1Н, s), 11.03 (1Н, т), 12.28 (1Н, т), (Отсутствие 4Н-предполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1С
Пример 45:
(2)-Метил-3-(((4-((2-((2гидроксиэтил)(метил)амино)этокси)карбамоил) фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6карбоксилат
Код пути*: 1С
R1 1.40 мин (способ 1); m/z 531 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.22 (ЗН, s), 2.45 (2Н, t), 2.62 (2Н, t), 3.45 (2Н, t), 3.77 (ЗН, s), 3.91 (2Н, t), 5.87 (1Н, d), 6.86 (2Н, т), 7.20 (1Н, т), 7.42 (1Н, d), 7.47-7.57 (4Н, перекрывающийся т), 7.577.70 (ЗН, перекрывающийся т), 8.32 (1Н, s), 11.03 (1Н, s), 12.28 (1Н, s).
Пример 46:
- 44 038796
Ο, Η R1 1.44 мин (способ 1); m/z 600
Р °·' (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.31/J 2.47 (8Н, перекрывающийся т), _-NH 2.51-2.56 (2Н, перекрывающийся
-Р т), 3.22 (ЗН, s), 3.40 (2Н, t), 3.77
I У-о
- N (ЗН, s), 3.92 (2Н, t), 5.87 (1Н, d), ' Г и о 6.86 (2Н, т), 7.21 (1Н, dd), 7.42 (2)-Метил-3-(((4-((2-(4-(2-метоксиэтил)пиперазин- (1Н, d),
7.48-7.56 (4Н,
1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат перекрывающийся т), 7.56-7.69 (ЗН, перекрывающийся т), 8.19 (1Н, s), 11.03 (1Н, s), 12.28 (1Н, s). (Отсутствие 2Нпредполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1С
Пример 47:
R' 1.20 мин (способ 1); m/z 584 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.251.45 (2Н, перекрывающийся т), 1.68-1.78 (2Н, перекрывающийся т), 1.88-2.03 (2Н, перекрывающийся т), 2.27 (6Н, s), 2.51-2.59 (ЗН, (2)-Метил-3-(((4-((2-(4-(диметиламино)пиперидин- перекрывающийся т), 2.92-2.99
1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат (2Н, перекрывающийся т), 3.77 (ЗН, s), 3.92 (2Н, t), 5.86 (1Н, d),
6.85 (2Н, т), 7.20 (1Н, dd), 7.42 (1Н, т), 7.49-7.68 (7Н, перекрывающийся т), 8.22 (1Н, s), 11.04(1Н, s), 12.28 (1Н, s).
Код пути*: 1С
Пример 48:
- 45 038796
(7)-Метил-3-(((4-(А-(2(диметиламино)этокси)сульфамоил)фенил)амино)
R’ 1.65 мин (способ 1); m/z 551 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.09 (6Н, s), 2.14 (ЗН, s), 2.39 (2Н, t), 3.76 (ЗН, s), 3.89 (2Н, t), 5.64 (1Н, s), 6.96 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.527.73 (7Н, перекрывающийся т), 8.20 (1Н, s), 10.94 (1Н, s), 12.25 (1Н, s).
(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6карбоксилат
Код пути*: 1А
Пример 49:
(2)-Метил-5-метил-2-оксо-3-(фенил((4-((2(пиперидин-1ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)метилен) индолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1С
Пример 50:
R1 1.73 мин (способ 1); m/z 555 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.331.39 (2Н, перекрывающийся т), 1.42-1.52 (4Н, перекрывающийся т), 2.13 (ЗН, s), 2.34-2.44 (4Н, перекрывающийся т), 2.53 (2Н, т), 3.75 (ЗН, s), 3.92 (2Н, t), 5.61 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.49-7.56 (4Н, перекрывающийся т), 7.57-7.69 (ЗН, перекрывающийся т), 8.20 (1Н, s), 10.89 (1Н, s), 12.21 (1Н, s).
- 46 038796
(2)-Метил-3-(((4-((2-(4-(диметиламино)пиперидин1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
R1 1.33 мин (способ 1); m/z 598 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.301.43 (2Н, перекрывающийся т),
1.68-1.76 (2Н, перекрывающийся
т), 1.89-2.01 (2Н, перекрывающийся т), 2.10-2.19 (5Н, перекрывающийся т), 2.22 (6Н, s), 2.90-2.98 (2Н, перекрывающийся т), 3.75 (ЗН, s), 3.92 (2Н, t), 5.61 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.49-7.57 (4Н, перекрывающийся т), 7.577.68 (ЗН, перекрывающийся т), 8.22 (1Н, s), 10.89 (1Н, s), 12.22 (1Н, s). (Отсутствие 1Нпредполагаемого затемнения растворителем).
Код пути*: 1С
Пример 51:
(S, 7)-Метил-3 -(((4-((2-(3 (диметиламино)пирролидин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
Код пути*: 1С
R' 1.32 мин (способ 1); m/z 584 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.59 (1Н, m), 1.82 (1H, m), 2.08-2.17 (9H, перекрывающийся m), 2.35 (1H, m), 2.55-2.79 (5H, перекрывающийся m), 3.75 (3H, s), 3.91 (2H, t), 5.61 (1H, s), 6.87 (2H, m), 7.36 (1H, s), 7.49-7.56 (4H, перекрывающийся m), 7.577.70 (ЗН, перекрывающийся m), 8.20 (1H, s), 10.89 (1H, s), 12.22 (1H, s). (Отсутствие 1Hпредполагаемого затемнения растворителем).
- 47 038796
Пример 52:
(2)-Метил-3-(((4-((2-(4-метоксипипер идин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
R1 2.05 мин (способ 2); m/z 585 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.301.43 (2Н, перекрывающийся т), 1.75-1.83 (2Н, перекрывающийся т), 2.06-2.16 (5Н, перекрывающийся т), 2.53 (1Н, т), 2.68-2.76 (2Н, перекрывающийся т), 3.07-3.17 (2Н, перекрывающийся т), 3.21 (ЗН, s), 3.75 (ЗН, s), 3.91 (2Н, t), 5.61 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.49-7.57 (4Н, перекрывающийся т), 7.57-7.68 (ЗН, перекрывающийся т), 8.34 (1Н, s), 10.89 (1Н, s), 12.21 (1Н, s).
Код пути*: 1С
Пример 53:
О (2)-Метил-5-метил-2-оксо-3-(фенил((4-((3(пиперидин-1ил)пропокси)карбамоил)фенил)амино)метилен) индолин-6-карбоксилат
R' 1.77 мин (способ 1); m/z 569 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ 1.32-1.41 (2Н, перекрывающийся т), 1.431.53 (4Н, перекрывающийся т), 1.72 (2Н, т), 2.14 (ЗН, s), 2.262.40 (6Н, перекрывающийся т), 3.76 (ЗН, s), 3.85 (2Н, t), 5.62 (1Н, s), 6.88 (2Н, т), 7.37 (1Н, s), 7.487.57 (4Н, перекрывающийся т), 7.59-7.69 (ЗН, перекрывающийся т), 10.89 (1Н, s), 12.22 (1Н, s).
Код пути*: 1В
Пример 54:
- 48 038796
(2)-Метил-3-(((4-((2-(4-гидроксипипер идин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, формиат
R1 1.60 мин (способ 1); m/z 571 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.271.40 (2Н, перекрывающийся т), 1.48 (1Н, т), 1.60-1.70 (2Н, перекрывающийся т), 1.81 (1Н, т), 2.07 (1Н, перекрывающийся т), 2.13 (ЗН, s), 2.70-2.84 (2Н, перекрывающийся т), 3.10 (1Н, т), 3.41 (1Н, т), 3.67 (1Н, т), 3.76 (ЗН, s), 3.91 (2Н, t), 5.61 (1Н, s), 6.85 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.477.56 (4Н, перекрывающийся т), 7.58-7.67 (ЗН, перекрывающийся т), 8.31 (2Н, s), 10.89 (1Н, s), 12.22 (1Н, s).
Код пути*: 1С
Пример 55:
(2)-Метил-3 -(((4-((3 -(4-метоксипипер идин-1 ил)пропокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
R' 1.74 мин (способ 1); m/z 599 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.311.43 (2Н, перекрывающийся т), 1.70 (2Н, т), 1.76-1.83 (2Н, перекрывающийся т), 1.96-2.09 (2Н, перекрывающийся т), 2.14 (ЗН, s), 2.36 (2Н, t), 2.60-2.70 (2Н, перекрывающийся т), 3.14 (1Н, т), 3.22 (ЗН, s), 3.76 (ЗН, s), 3.84 (2Н, t), 5.62 (1Н, s), 6.88 (2Н, т), 7.37 (1Н, s), 7.48-7.57 (4Н, перекрывающийся т), 7.59-7.69 (ЗН, перекрывающийся т), 10.89 (1Н, s), 12.22 (1Н, s).
Код пути*: 1В
- 49 038796
Пример 56:
(2)-Метил-3-(((4-((2-((2гидроксиэтил)(метил)амино)этокси)(метил)
R1 1.61 мин (способ 1); m/z 559 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.06 (ЗН, s), 2.14 (ЗН, s), 2.32-2.38 (4Н, перекрывающийся т), 3.22 (ЗН, s), 3.39 (2Н, т), 3.76 (2Н, т), 3.76 (ЗН, s), 4.26 (1Н, т), 5.62 (1Н, s), 6.86 (2Н, т), 7.37 (1Н, s), 7.44 (2Н, т), 7.52 (2Н, т), 7.57-7.69 (ЗН, перекрывающийся т), 10.84 карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил- (1Н, s), 12.22 (1Н, s).
2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1D
Пример 57:
(2)-Метил-5-метил-3-(((4-(метил(2-(пиперазин-1ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1D
R' 1.51 мин (способ 1); m/z 570 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.14 (ЗН, s), 2.26-2.34 (6Н, перекрывающийся т), 2.77-2.79 (4Н, перекрывающийся т), 3.21 (ЗН, s), 3.75 (ЗН, s), 3.79 (2Н, t), 5.61 (1Н, s), 6.86 (2Н, т), 7.37 (1Н, s), 7.43 (2Н, т), 7.52 (2Н, т), 7.57-7.69 (ЗН, перекрывающийся т), 10.87 (1Н, s), 12.22 (1Н, s).
Пример 58:
...он
R1 1.56 мин (способ 1); m/z 614 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.14 (s, ЗН), 2.17-2.44 (12Н, перекрывающийся т), 3.21 (ЗН, s), 3.48 (2Н, т), 3.70-3.83 (5Н, перекрывающийся т), 4.36 (1Н, т), 5.62 (1Н, s), 6.86 (2Н, т), 7.36
- 50 038796
(2)-Метил-3-(((4-((2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин1-ил)этокси)(метил)карбамоил)фенил)амино) (фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6карбоксилат Код пути*: 1D Пример 59: О / j ° ..A vH .Γν \J ..о. Π η 0 (2)-Метил-3 -(((4-((2-(( 15,45)-2,5 - диазабицикло[2.2.1]гептан-2- ил)этокси)(метил)карбамоил)фенил)амино) (фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6карбоксилат Код пути*: 1D Пример 60: о / X-N г-4 υ ’ -·· V'U i *7 z\.x-:-NH У f V >-nh [ 'е_О «„ L-n II н о (2)-Метил-3 -(((4-((2-(3,8-диазабицикло[3.2.1 ] октан8-ил)этокси)(метил)карбамоил)фенил)амино) (фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6карбоксилат (1Н, s), 7.42 (2Н, ш), 7.52 (2Н, ш), 7.56-7.69 (ЗН, перекрывающийся ш), 10.88 (1Н, s), 12.22 (1Н, s). R1 1.42 мин (способ 1); m/z 582 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.38 (1Н, т), 1.53 (1Н, т), 2.14 (ЗН, s), 2.21 (1Н, т), 2.42-2.54 (2Н, перекрывающийся т), 2.58-2.70 (2Н, перекрывающийся т), 2.85 (1Н, т), 3.18 (1Н, т), 3.21 (ЗН, s), 3.44 (1Н, т), 3.70 (2Н, t), 3.75 (ЗН, s), 5.61 (1Н, s), 6.86 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.45 (2Н, т), 7.53 (2Н, т), 7.57-7.68 (ЗН, перекрывающийся т), 10.87 (1Н, s), 12.22 (1Н, br. s). Rl 1.47 мин (способ 1); m/z 596 (М+Н)+ (ES+); ХН ЯМР δ: 1.561.65 (2Н, перекрывающийся т), 1.66-1.75 (2Н, перекрывающийся т), 2.13 (ЗН, s), 2.22 (2Н, t), 2.642.70 (2Н, перекрывающийся т), 2.89-2.94 (2Н, перекрывающийся т), 3.22 (ЗН, s), 3.72-3.78 (5Н, перекрывающийся т), 5.60 (1Н, s), 6.86 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.45 (2Н, т), 7.53 (2Н, т), 7.57-7.70 (ЗН, перекрывающийся т), 10.88
- 51 038796 (1H, s), 12.23 (1H, s), (Отсутствие
2Н-предполагаемого перекрывания растворителем).
Код пути*: 1D
Пример 61:
R1 1.65 мин (способ 1); m/z 596 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.571.67 (4Н, перекрывающийся т), 2.04-2.10 (2Н, перекрывающийся т), 2.14 (ЗН, s), 2.27 (2Н, t), 2.452.48 (2Н, перекрывающийся т), 3.21 (ЗН, s), 3.39-3.45 (2Н, (2)-Метил-3 -(((4-((2-(3,8-диазабицикло[3.2.1 ] октан3-ил)этокси)(метил)карбамоил)фенил)амино) (фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6перекрывающийся т), 3.74 (2Н, t), 3.75 (ЗН, s), 5.62 (1Н, s), 6.86 (2Н,
т), 7.32-7.42 (ЗН, карбоксилат перекрывающийся т), 7.52 (2Н, т), 7.56-7.70 (ЗН, перекрывающийся т), 10.87 (1Н, s), 12.21 (1Н, s).
Код пути*: 1D
Пример 62:
- 52 038796
(Х^-Метил-б -метил-3 -(((4-(метил(2-(3 метилпиперазин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1D
R1 1.56 мин (способ 1); m/z 584 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 0.88 (ЗН, d), 1.43 (1Н, m), 1.75 (1H, m), 2.13 (3H, s), 2.25 (2H, t), 2.73 (1H, m), 3.21 (3H, s), 3.71-3.83 (5H, перекрывающийся m), 5.61 (1H, s), 6.85 (2H, m), 7.36 (1H, s), 7.44 (2H, m), 7.53 (2H, m), 7.567.69 (ЗН, перекрывающийся m), 10.87 (1H, s), 12.24 (1H, s), (Отсутствие 4Н-предполагаемого перекрывания растворителем).
Пример 63:
(2)-Метил-3-(((4-((2-(4-цианопиперидин-1ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат, 0,4 формиат
R1 1.70 мин (способ 1); m/z 580 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.601.72 (2Н, перекрывающийся т), 1.77-1.87 (2Н, перекрывающийся т), 2.13 (ЗН, s), 2.32 (2Н, т), 2.52-2.63 (4Н, перекрывающийся т), 2.83 (1Н, т), 3.75 (ЗН, s), 3.92 (2Н, t), 5.62 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.49-7.56 (4Н, перекрывающийся т), 7.58-7.68 (ЗН, перекрывающийся т), 8.15 (0.4Н, s), 10.88 (1Н, s), 12.21 (1Н, s).
Код пути*: 1С
Пример 64:
- 53 038796
Rl 1.42 мин (способ 1); m/z 584 (M+H)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.70 (2H, m), 2.13 (6Н, s), 2.21-2.42 (ЮН, перекрывающийся m), 3.75 (ЗН, s), 3.84 (2Н, t), 5.61 (1Н, s), 6.86 (2H, m), 7.36 (1H, s), 7.487.56 (4H, перекрывающийся m), (2)-Метил-5-метил-3-(((4-((3 -(4-метилпиперазин-1 ил)пропокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1В
7.57-7.68 (ЗН, перекрывающийся m), 10.88 (1H, s), 12.22 (1H, s).
Пример 65:
(7?,2)-Метил-5-метил-3 -(((4-(метил(2-(3 метилпиперазин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1D
Пример 66:
R' 1.54 мин (способ 1); m/z 584 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 0.88 (ЗН, d), 1.43 (1Н, т), 1.75 (1Н, т), 2.13 (ЗН, s), 2.24 (2Н, t), 2.512.60 (2Н, перекрывающийся т), 2.72 (1Н, т), 3.21 (ЗН, s), 3.723.83 (5Н, перекрывающийся т), 5.61 (1Н, s), 6.84 (2Н, т), 7.36 (1Н, s), 7.44 (2Н, т), 7.53 (2Н, т), 7.57-7.69 (ЗН, перекрывающийся т), 10.87 (1Н, s), 12.24 (1Н, s), (Отсутствие 2Н-предполагаемого перекрывания растворителем).
- 54 038796
Rl 1.57 мин (способ 1); m/z 582 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.70 (1Η, m), 2.14 (ЗН, s), 2.25 (1H, m),
2.51-2.57 (ЗН, перекрывающийся
m), 2.79-2.87 (2H, перекрывающийся m), 3.23 (3H, s), 3.42-3.48 (2H, перекрывающийся m), 3.75 (3H, s), 3.81 (2H, t), 5.62 (1H, s), 6.83 о / Ύ-Ν ..
г- υ ..-Ν Ζ Ν
,.-ΝΗ (2)-Метил-3 -(((4-((2-(3,6диазабицикло[3.1.1] гептан-3 ил)этокси)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат (2H, m), 7.37 (1H, s), 7.42 (2H, m),
7.53 (2H, m), 7.57-7.69 (3H, перекрывающийся m), 10.87 (1Н, s), 12.17 (1H, br s). (Отсутствие 1H-предполагаемого перекрывания растворителем).
Код пути*: ID
Пример 67:
(2)-Метил-5-метил-2-оксо-3-(фенил((4-((2-((37?,55)3,4,5 -триметилпиперазин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино) метилен)индолин-6-карбоксилат
Код пути*: 1С
R’ 2.05 мин (способ 1); m/z 598 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 0.95 (6Н, d), 1.77 (2Н, t), 2.04-2.17 (8Н, перекрывающийся т), 2.76 (2Н, т), 3.76 (ЗН, s), 3.92 (2Н, t), 5.62 (1Н, s), 6.88 (2Н, т), 7.37 (1Н, s), 7.49-7.58 (4Н, перекрывающийся т), 7.58-7.70 (ЗН, перекрывающийся т), 8.25 (1Н, s), 10.89 (1Н, s), 12.22 (1Н, s), (Отсутствие 2Н-предполагаемого перекрывания растворителем).
Пример 68:
- 55 038796
(2)-Метил-3 -(((4-(этил(2-(пиперазин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
R1 1.57 мин (способ 1); m/z 584 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.13 (ЗН, t), 2.13 (ЗН, s), 2.16-2.24 (4Н, перекрывающийся т), 2.27 (2Н,
t), 2.60-2.68 (4Н, перекрывающийся т), 3.64 (2Н, т), 3.73-3.78 (5Н, перекрывающийся т), 5.61 (1Н, s), 6.86 (2Н, т), 7.37 (1Н, s), 7.41 (2Н, т), 7.52 (2Н, т), 7.57-7.69 (ЗН, перекрывающийся т), 10.87 (1Н, s), 12.24 (1Н, s).
Код пути*: 1В
Пример 69:
(2)-Метил-3-(((4-(изопропил(2-(пиперазин-1ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Путь*: 1В
Пример 70
R' 1.59 мин (способ 1); m/z 598 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 1.18 (6Н, d), 2.14 (ЗН, s), 2.16-2.25 (4Н, перекрывающийся т), 2.26 (2Н, t), 2.60-2.69 (4Н, перекрывающийся т), 3.71 (2Н, t), 3.75 (ЗН, s), 4.30 (1Н, т), 5.61 (1Н, s), 6.87 (2Н, т), 7.29-7.39 (ЗН, перекрывающийся т), 7.53 (2Н, т), 7.56-7.69 (ЗН, перекрывающийся т), 10.87 (1Н, s), 12.23 (1Н, s).
R' 1.61 мин (способ 1); m/z 570 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.13 (ЗН, s), 2.59-2.67 (4Н, перекрывающийся т), 3.02 (2Н,
- 56 038796
br s), 3.13 (2H, m), 3.75 (3H, s), 3.95 (2H, m), 5.62 (1H, s), 6.88 (2H, m), 7.36 (1H, s), 7.51-7.56 (4H, перекрывающийся m), 7.597.69 (ЗН, перекрывающийся m), 7.72 (1H, brs), 10.89 (1H, s), 11.58 (1H, br s), 12.22 (1H, s).
(2)-Метил-5 -метил-2-оксо-З -(((4-((2-(3 оксопиперазин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)индолин-6-карбоксилат
Путь*: 1С
Пример 71:
о / >-NН / °’ N Г1 ... N ч ·, “ -'· :\ d ί' о / fl ' .--J ,Γ-ΝΗ (2)-Метил-3-(((4-(метил(2-(4-(2-(метиламино)-2оксоэтил)пиперазин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Путь*: 1D
Пример 72
О н
-Ν г-. и °' --ν'.,-N _ У ; О ч а г
R1 1.56 мин (способ 1); m/z 627 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.242.36 (ЮН, перекрывающийся т), 2.59 (ЗН, d), 2.87 (2Н, s), 3.21 (ЗН, s), 3.75-3.80 (5Н, перекрывающийся т), 5.87 (1Н, d), 6.85 (2Н, т), 7.21 (1Н, dd), 7.40-7.44 (ЗН, перекрывающийся т), 7.51-7.55 (ЗН, перекрывающийся т), 7.57-7.67 (ЗН, перекрывающийся т), 11.03 (1Н, s), 12.28 (1Н, s).
(2)-Метил-3-(((4-((2-(4-(2-(метиламино)-2R1 1.52 мин (способ 1); m/z 613 (М+Н)+ (ES+); Ή ЯМР δ: 2.352.58 (ЮН, перекрывающийся т), 2.60 (ЗН, d), 2.86 (2Н, br s), 3.77
- 57 038796 оксоэтил)пиперазин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил) метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат Путь*: 1С
Пример 73
(2)-Метил-5-метил-3-(((4-((2-(4-(2-(метиламино)-2оксоэтил)пиперазин-1 ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метиле н)-2-оксоиндолин-6-карбоксилат
Путь*: 1С (ЗН, s), 3.93 (2Н, t), 5.87 (1Н, d), 6.87 (2Н, ш), 7.21 (1Н, dd), 7.42 (1Н, d), 7.51-7.55 (4Н, перекрывающийся ш), 7.57-7.68 (4Н, перекрывающийся ш), 11.04 (1Н, s), 11.56 (1Н, br s), 12.28 (1Н, s).
Rt 1.57 мин (способ 1); m/z 627 (М+Н)+ (ES+); 1Н ЯМР δ: 2.14 (ЗН, s), 2.34-2.54 (8Н, перекрывающийся т), 2.55 (2Н, t), 2.60 (ЗН, s), 2.70 (2Н, s), 3.76 (ЗН, s), 3.94 (2Н, t), 5.62 (1Н, s), 6.38 (2Н, т), 7.37 (1Н, s), 7.507.55 (4Н, перекрывающийся т),
7.57-7.68 (4Н, перекрывающийся т), 10.90 (1Н, s), 11.56 (1Н, br s), 12.22 (1Н, s).
Биологическое тестирование: экспериментальные способы.
Анализы ингибирования ферментов.
Ингибиторные активности в отношении ферментов соединений, раскрываемых в настоящем документе, определяли с использованием анализа ADP-Glo™ (Promega, UK). Анализы для FGFR1, PDGFRa, PDGFRe и VEGFR2 выполняли в буфере, содержащем 40 мМ Tris, pH 7,5, 20 мМ MgCl2, 0,1 мг/мл BSA и 1 мМ DTT; тогда как анализы для FGFR3 и VEGFR1 выполняли в вышеупомянутом буфере, дополненном 2 мМ MnCl2.
Ингибирование фермента FGFR1.
Ингибиторные активности соединений в соответствии с настоящим изобретением в отношении FGFR1 (FGFR1 Kinase Enzyme System: Promega) оценивали путем смешивания белка FGFR1 (3,12 нг/мл, 2 мкл), субстрата (Poly (4:1 Glu4, Tyr1), 100 нг/мл, 2 мкл) с тестируемым соединением (2 мкл либо при 3, 0,67, 0,15, 0,033, 0,0073, 0,0016, 0,0036, либо при 0,00008 мкМ) в течение 90 мин при 25°C. Затем инициировали киназную реакцию путем добавления АТФ (50 мкМ, 2 мкл) и смесь инкубировали в течение 1 ч при 25°C. Добавляли реагент ADP-Glo™ в течение 40 мин (8 мкл), затем добавляли проявляющий реагент (16 мкл) в течение 40 мин перед выявлением на устройстве для считывания микропланшетов (EnVision® Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Ингибирование фермента FGFR3.
Ингибиторные активности соединений в соответствии с настоящим изобретением в отношении FGFR3 (FGFR3 Kinase Enzyme System: Promega) оценивали путем смешивания белка FGFR3 (12,5 нг/мл, 2 мкл), субстрата (Poly (Ala6, Glm, Lys5, Tyr1), 100 нг/мл, 2 мкл) с тестируемым соединением (2 мкл либо при 3, 0,67, 0,15, 0,033, 0,0073, 0,0016, 0,0036, либо при 0,00008 мкМ) в течение 90 мин при 25°C. Затем инициировали киназную реакцию путем добавления АТФ (50 мкМ, 2 мкл) и смесь инкубировали в течение 90 мин при 25°C. Добавляли реагент ADP-Glo™ в течение 40 мин (8 мкл), затем добавляли проявляющий реагент (16 мкл) в течение 40 мин перед выявлением на устройстве для считывания микропланшетов (EnVision® Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Ингибирование фермента PDGFRa.
Ингибиторные активности соединений в соответствии с настоящим изобретением в отношении PDGFRa (PDGFRa Kinase Enzyme System: Promega) оценивали путем смешивания белка PDGFRa (12,5 нг/мл, 2 мкл), субстрата (Poly (4:1 Glu4, Tyr1), 100 нг/мл, 2 мкл) с тестируемым соединением (2 мкл либо при 3, 0,67, 0,15, 0,033, 0,0073, 0,0016, 0,0036, либо при 0,00008 мкМ) в течение 90 мин при 25°C. Затем
- 58 038796 инициировали киназную реакцию путем добавления АТФ (25 мкМ, 2 мкл) и смесь инкубировали в течение 1 ч при 25°C. Добавляли реагент ADP-Glo™ в течение 40 мин (8 мкл), затем добавляли проявляющий реагент (16 мкл) в течение 40 мин перед выявлением на устройстве для считывания микропланшетов (EnVision® Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Ингибирование фермента PDGFRe.
Ингибиторные активности соединений в соответствии с настоящим изобретением в отношении PDGFRe (PDGFRp Kinase Enzyme System: Promega) оценивали путем смешивания белка PDGFRe (6,25 нг/мл, 2 мкл), субстрата (Poly (4:1 Glu4, Tyr1), 100 нг/мл, 2 мкл) с тестируемым соединением (2 мкл либо при 3, 0,67, 0,15, 0,033, 0,0073, 0,0016, 0,0036, либо при 0,00008 мкМ) в течение 90 мин при 25°C. Затем инициировали киназную реакцию путем добавления АТФ (25 мкМ, 2 мкл) и смесь инкубировали в течение 1 ч при 25°C. Добавляли реагент ADP-Glo™ в течение 40 мин (8 мкл), затем добавляли проявляющий реагент (16 мкл) в течение 40 мин перед выявлением на устройстве для считывания микропланшетов (EnVision® Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Ингибирование фермента VEGFR1.
Ингибиторные активности соединений в соответствии с настоящим изобретением в отношении VEGFR1 (VEGFR1 Kinase Enzyme System: Promega) оценивали путем смешивания белка VEGFR1 (12,5 нг/мл, 2 мкл), субстрата (IGFR1Rtide, 100 нг/мл, 2 мкл) с тестируемым соединением (2 мкл либо при 3, 0,67, 0,15, 0,033, 0,0073, 0,0016, 0,0036 мкМ, либо при 0,00008 мкМ) в течение 90 мин при 25°C. Затем инициировали киназную реакцию путем добавления АТФ (50 мкМ, 2 мкл) и смесь инкубировали в течение 90 мин при 25°C. Добавляли реагент ADP-Glo™ в течение 40 мин (8 мкл), затем добавляли проявляющий реагент (16 мкл) в течение 40 мин перед выявлением на устройстве для считывания микропланшетов (EnVision® Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Ингибирование фермента VEGFR2.
Ингибиторные активности соединений в соответствии с настоящим изобретением в отношении VEGFR2 (VEGFR2 Kinase Enzyme System: Promega) оценивали путем смешивания белка VEGFR2 (1,56 нг/мл, 2 мкл), субстрата (Poly (4:1 Glu4, Tyr1), 100 нг/мл, 2 мкл) с тестируемым соединением (2 мкл либо при 3, 0,67, 0,15, 0,033 мкМ, 0,0073, 0,0016, 0,0036, либо при 0,00008 мкМ) в течение 90 мин при 25°C. Затем инициировали киназную реакцию путем добавления АТФ (50 мкМ, 2 мкл) и смесь инкубировали в течение 1 ч при 25°C. Добавляли реагент ADP-Glo™ в течение 40 мин (8 мкл), затем добавляли проявляющий реагент (16 мкл) в течение 40 мин перед выявлением на устройстве для считывания микропланшетов (EnVision® Multilabel Reader, Perkin Elmer).
Во всех случаях киназа превращает АТФ в АДФ, а затем реагент ADP-Glo™ истощает любую оставшуюся АТФ. Реагент для выявления превращает АДФ, которая была получена, обратно в АТФ и создает люциферазу, которая может быть выявлена по люминесценции. Поэтому люминесцентный сигнал прямо пропорционален количеству АДФ, полученной путем ферментативной реакции, и снижение этого сигнала после обработки соединением демонстрирует ингибирование. Процент ингибирования, полученного с помощью каждой концентрации соединения, вычисляли с использованием представленного ниже уравнения:
„ (Среднее^ - Среднеегкг) % ингибирования = 1 — ---------—-------------Ч- X 100.
(Среднее,- Среднее_ )
Затем процент ингибирования наносили на график в зависимости от концентрации соединения и определяли относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) по полученной в результате кривой концентрация-ответ. После ее определения вычисляли Ki с использованием представленного ниже уравнения:
Клеточные и другие in vitro анализы.
Индуцированная PDGF-BB пролиферация нормальных фибробластов легкого человека (NHLF).
NHLF (Lonza group Ltd) размножали до 90% конфлюентности в ростовой среде FGM-2, дополненной 2% FBS (плюс факторы роста SingleQuot™; Lonza). Фибробласты собирали (трипсин/EDTA), суспендировали при 25 х 103 на мл в ростовой среде и добавляли по 200 мкл на лунку (5 х 103 клеток/лунка) 96-луночного планшета для культуры тканей. После 24 ч инкубации (37°C/5% CO2/95% O2) клетки подвергали сывороточному голоданию (24 ч) путем снижения концентрации FBS до 0,1% в культуральной среде. Клетки предварительно инкубировали с тестируемым соединением в течение 1 ч, затем стимулировали с помощью rhuPDGF-BB (100 нг/мл, R&D Systems) в течение 48 ч. Пролиферацию клеток оценивали путем включения BrdU (Cell Proliferation colorimetric ELISA, Roche). Процентное ингибирование индуцированной rhuPDGF-BB пролиферации NHLF тестируемым соединением при каждой концентрации вычисляли как процентное отношение таковой, достигнутой с помощью rhuPDGF-BB, при каждой концентрации тестируемого соединения по сравнению с контролем - средой-носителем (базальная пролиферация). Относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) определяли по полученной в
- 59 038796 результате кривой концентрация-ответ.
Индуцированная PDGF-BB/FGF-Basic пролиферация фибробластов легкого человеческого плода
MRC-5.
Фибробласты MRC-5 (LGC Standards) размножали до 90% конфлюентности в среде DMEM, дополненной 10% FBS. Клетки собирали (трипсин/EDTA), суспендировали при 25 х 103 на мл в ростовой среде и добавляли по 200 мкл на лунку (5 х 103 клеток/лунка) 96-луночного планшета для культуры тканей. После 24 ч инкубации (37°C/5% CO2/95% O2) клетки подвергали сывороточному голоданию (3 ч) путем замещения ростовой среды средой, содержащей 0,1% FBS. Затем клетки предварительно инкубировали с тестируемым соединением в течение 1 ч с последующей стимуляцией с помощью rhuPDGF-BB (100 нг/мл, R&D Systems) или rhuFGF-Basic (5 нг/мл; R&D Systems) в течение 48 ч. Пролиферацию клеток оценивали путем включения BrdU (Cell Proliferation Colorimetric ELISA, Roche). Процентное ингибирование индуцированной rhuPDGF-BB/rhuFGF пролиферации MRC-5 тестируемым соединением при каждой концентрации вычисляли как процентное отношение таковой, достигнутой с помощью rhuPDGFBB/FGF-Basic, при каждой концентрации тестируемого соединения по сравнению с контролем - средойносителем (базальная пролиферация). Относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) определяли по полученной в результате кривой концентрация-ответ.
Индуцированная VEGF165/FGF-Basic пролиферация эндотелиальных клеток.
TeloHAEC (иммортализованные теломеразой эндотелиальные клетки аорты человека; ATCC) высевали в 96-луночные планшеты для культуры тканей при плотности клеток 4000 клеток на лунку (100 мкл) на минимальной среде для эндотелиальных клеток (0,5% FBS, без факторов роста FGF и VEGF) и культивировали в течение 3 ч (37°C/5% CO2/95% O2). Клетки предварительно инкубировали с тестируемым соединением в течение 1 ч, затем стимулировали с помощью rhuVEGF165 (10 нг/мл, R&D Systems) или rhuFGF-Basic (5 нг/мл, R&D Systems) в течение 48 ч. Пролиферацию клеток оценивали путем включения BrdU (Cell Proliferation colorimetric ELISA, Roche). Процентное ингибирование индуцированной rhuVEGF165/rhuFGF-Basic пролиферации TeloHAEC тестируемым соединением при каждой концентрации вычисляли как процентное отношение таковой, достигнутой с помощью rhuVEGF165/FGF-Basic, при каждой концентрации тестируемого соединения по сравнению с контролем - средой-носителем (базальная пролиферация). Относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) определяли по полученной в результате кривой концентрация-ответ.
Индуцированное PDGF-BB фосфорилирование PDGFRe в фибробластах.
Использовали MRC-5/NHLF/NIH-3T3 (фибробласты эмбриона мыши, LGC Standards) для оценивания ингибиторного эффекта тестируемого соединения в отношении фосфорилирования PDGFRe с использованием набора для клеточного анализа (Cisbio) фосфо-PDGFRe (Tyr751) с использованием HTRF (гомогенной флуоресценции с временным разрешением). MRC-5/NHLF высевали в 96-луночные планшеты для культуры тканей при плотности клеток 10000 клеток на лунку в ростовую среду DMEM (10% FBS) или ростовую среду FGM-2 (2% FBS), соответственно, и культивировали в течение 48 ч (37°C/5% CO2/95% O2). NIH-3T3 высевали в 96-луночные планшеты для культуры тканей при плотности клеток 7000 клеток на лунку в ростовую среду DMEM (10% FBS) и культивировали в течение 48 ч (37°C/5% CO2/95% O2). Клеточную среду заменяли на соответствующую минимальную среду, содержащую 0,1% FBS, и планшеты далее инкубировали в течение 24 ч (37°C/5% CO2/95% O2) для MRC-5/NHLF и в течение 3 ч для NIH-3T3. Клетки предварительно инкубировали с тестируемым соединением в течение 1 ч, а затем стимулировали с помощью rhuPDGF-BB (25-50 нг/мл, R&D Systems) в течение 5 мин и с помощью rmPDGF-BB (25 нг/мл, Life Technologies) для NIH-3T3. Среду отсасывали и клетки сразу же лизировали путем добавления 50 мкл буфера для лизиса, представленного в наборе для анализа, с использованием HTRF. Переносили 16 мкл клеточного лизата из каждой лунки в белый мелкообъемный 384-луночный планшет, в который добавляли соответствующие реагенты из набора согласно инструкциям в наборе. Количественно определяли фосфорилирование PDGFRe путем вычисления отношения флуоресценции, считываемой при 665 и 620 нм. Процентное ингибирование индуцированного rPDGF-BB фосфорилирования PDGFRe тестируемым соединением вычисляли как процентное отношение такового, достигнутого с помощью rPDGF-BB, при каждой концентрации тестируемого соединения по сравнению с контролем средой-носителем. Относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) определяли по полученной в результате кривой концентрация-ответ.
Индуцированное VEGF165 фосфорилирование VEGFR2 в эндотелиальных клетках.
TeloHAEC (иммортализованные теломеразой эндотелиальные клетки аорты человека; ATCC) использовали для оценивания ингибиторного эффекта тестируемого соединения в отношении фосфорилирования VEGFR2 с использованием набора для клеточного анализа (Cisbio) фосфо-VEGFR2 (Tyr1175) с использованием HTRF (гомогенной флуоресценции с временным разрешением). TeloHAEC высевали в 96-луночные планшеты для культуры тканей при плотности клеток 12000 клеток на лунку в среду для роста эндотелия (ATCC; 2% FBS) и культивировали в течение 48 ч (37°C/5% CO2/95% O2). Клеточную среду заменяли на минимальную среду (без факторов роста VEGF и FGF), содержащую 0,5% FBS, и планшеты далее инкубировали в течение 24 ч (37°C/5% CO2/95% O2). Клетки предварительно инкубиро- 60 038796 вали с тестируемым соединением в течение 1 ч с последующей стимуляцией с помощью rhuVEGF165 (50 нг/мл, R&D Systems) в течение 5 мин. Среду отсасывали и клетки сразу же лизировали путем добавления 50 мкл буфера для лизиса, представленного в наборе для анализа с использованием HTRF. Переносили 16 мкл клеточного лизата из каждой лунки в белый мелкообъемный 384-луночный планшет, в который добавляли соответствующие реагенты из набора согласно инструкциям в наборе. Количественно определяли фосфорилирование VEGFR2 путем вычисления отношения флуоресценции, считываемой при 665 нм и 620 нм. Процентное ингибирование индуцированного rhuVEGF165 фосфорилирования VEGFR2 тестируемым соединением вычисляли как процентное отношение такового, достигнутого с помощью rhuVEGF165, при каждой концентрации тестируемого соединения по сравнению с контролем - средойносителем. Относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) определяли по полученной в результате кривой концентрация-ответ.
Анализ по индуцированному фибробластами сокращению геля.
NHLF размножали до 90% конфлюентности в ростовой среде FGM-2 (Lonza), дополненной 2% FBS (плюс факторы роста SingleQuot™). Фибробласты собирали (трипсин/EDTA) и суспендировали при 1 х 106 на мл в бессывороточной среде. На основе набора для анализа по индуцированному клетками сокращению (Cell Biolabs) получали клеточный каркас путем смешивания 1 части клеточной суспензии с 4 частями раствора коллагенового геля согласно инструкциям в наборе. Добавляли 0,9-мл аликвоты в 1,5мл центрифужные пробирки и обрабатывали конечными аналитическими концентрациями тестируемого соединения. Затем обработанный 250 мкл соединения каркас пипеткой добавляли в каждую лунку 48луночного планшета для культуры тканей (три повторности на тестируемую концентрацию). Планшет инкубировали в течение 90 мин (37°C/5% CO2/95% O2) для обеспечения полимеризации геля. Затем добавляли 250 мкл бессывороточной среды, содержащей конечные аналитические концентрации тестируемого соединения, в каждый соответствующий гель. После дополнительных 30 мин инкубации гели стимулировали с помощью TGFe1 (10 нг/мл; R&D Systems). После 24-часового (37°C/5% CO2/95% O2) периода инкубации каждый отдельный гель извлекали и взвешивали на прецизионных весах. Эффект тестируемого соединения при каждой концентрации выражали в проценте обращения индуцированного TGFe1 сокращения относительно базального сокращения при обработке средой-носителем.
Анализ по опосредованному фибробластами высвобождению IL-6.
NHLF размножали до 90% конфлюентности в ростовой среде FGM-2 (Lonza), дополненной 2% FBS (плюс факторы роста SingleQuot™). Фибробласты собирали (трипсин/EDTA), суспендировали при 50 х 103 на мл в ростовой среде и добавляли по 200 мкл на лунку (10 х 103 клеток/лунка) 96-луночного планшета для культуры тканей. После 24 ч инкубации (37°C /5% CO2/95% O2) клетки подвергали сывороточному голоданию (24 ч) путем снижения концентрации FBS в среде до 0,1%. Клетки предварительно инкубировали с тестируемым соединением в течение 1 ч, затем стимулировали с помощью TGFe1 (5 нг/мл, R&D Systems) в течение 24 ч. Извлекали бесклеточные супернатанты для определения концентраций IL6 с помощью сэндвич-анализа ELISA (Duo-set, R&D Systems). Ингибирование продуцирования IL-6 вычисляли как процент, который обеспечивали с помощью 5 нг/мл TGFe1, при каждой концентрации тестируемого соединения по сравнению с контролем - средой-носителем. Относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) определяли по полученной в результате кривой концентрация-ответ.
Апоптоз тучных клеток.
Тучные клетки дифференцировали из CD34+ клеток кордовой крови (Lonza) в течение 8 недель в ростовой среде, дополненной 100 SCF и 10 нг/мл IL-6. Тучные клетки высевали в 384-луночные белые планшеты с прозрачным дном от 2500 до 10000 клеток/лунка в ростовой среде, содержащей SCF (100 нг/мл). В качестве положительного контроля для апоптоза инкубировали 8 лунок в ростовой среде без SCF. Клетки инкубировали с тестируемыми соединениями или средой-носителем в течение 24 ч (37°C/5% CO2/95% O2). В клетки добавляли люминогенный субстрат каспазы-3/7 (Caspase-Glo 3/7 Assay, Promega) и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин перед считыванием люминесцентного сигнала. Индуцирование апоптоза тестируемыми соединениями вычисляли как процентное отношение такового, достигнутого с помощью клеток, инкубированных при отсутствии SCF (максимальный апоптический ответ), для каждой концентрации тестируемого соединения по сравнению со средой-носителем (исходный апоптоз). Относительную ингибиторную концентрацию на 50% (RIC50) определяли по полученной в результате кривой концентрация-ответ.
Эффект тестируемых соединений в отношении жизнеспособности клеток.
Клетки MRC-5 высевали в 96-луночные планшеты для культуры тканей с белым прозрачным дном (для считываний флуоресценции/люминесценции) или прозрачные (для колориметрических считываний) при плотности клеток 12 х 103 клеток на лунку в ростовую среду DMEM (10% FBS). После 24 ч инкубации (37°C/5% CO2/95% O2) ростовую среду заменяли содержащей 0,1% FBS плюс тестируемое соединение средой/средой-носителем и инкубировали еще 48 ч. Для колориметрического анализа МТТ (по оцениванию клеточной метаболической активности) отсасывали супернатанты из каждой лунки, заменяли свежей средой по 100 мкл/лунка (0,1% FBS) и 10 мкл/лунка 5 мг/мл МТТ. После 1-часового периода инкубации (37°C/5% CO2/95% O2) среду отсасывали и добавляли 100% DMSO (100 мкл) в каждую лунку.
- 61 038796
Планшеты слегка встряхивали в течение 15 мин перед считыванием поглощения при 550 нм. Процент потери жизнеспособности клеток (представленный уменьшением значений поглощения) вычисляли для каждой концентрации соединения относительно обработанных средой-носителем (0,5% DMSO) клеток.
Использовали анализ MultiTox-Fluor Multiplex Cytotoxicity в сочетании с анализом Caspase-Glo 3/7 (Promega) для измерения клеточной цитотоксичности/жизнеспособности и апоптоза. Анализ MultiToxFluor Multiplex Cytotoxicity представляет собой анализ флуоресценции с добавлением единственного реагента, при котором одновременно измеряют относительное число живых и мертвых клеток в клеточных популяциях. Анализ дает логометрические, находящиеся в обратной зависимости величины клеточной жизнеспособности и цитотоксичности. Отношение жизнеспособных клеток к мертвым клеткам не зависит от числа клеток и поэтому может быть использовано для нормализации данных. Добавление единственного реагента Caspase-Glo® 3/7 в формате добавить-перемешать-измерить (add-mix-measure) приводит к лизису клеток с последующим расщеплением каспазой субстрата и генерацией люминесцентного сигнала типа свечения (glow-type). Для данного анализа Multiplex Cytotoxicity 100 мкл клеточных супернатантов из обрабатываемых соединением в течение 48 ч клеток осторожно удаляли из каждой лунки, затем добавляли 50 мкл реагента MultiTox (рабочий раствор реагентов MultiTox собственного изготовления получали путем разбавления 10 мкл GF-AFC и bis-AAF-R110 в 10 мл аналитического буфера согласно инструкциям в наборе). Клетки инкубировали в темноте в течение 30 мин перед выполнением двух отдельных считываний флуоресценции при 400Ex/505Em (считывание живых клеток) и 485Ex/520Em (считывание мертвых клеток). Затем по 100 мкл супернатанта осторожно удаляли из каждой лунки, добавляли 50 мкл реагента Caspase 3/7 Glo в планшет для клеточной культуры и инкубировали в течение 30 мин в темноте. Определяли количественно активность Caspase 3/7 путем считывания люминесцентного сигнала. Усиление сигнала по сравнению с обработанными средой-носителем контрольными клетками представляет усиление апоптоза клеток.
Анализ перехода фибробластов в миофибробласты.
Для оценивания противофиброзной активности тестируемых соединении использовали два альтернативных протокола. Согласно первому выделенные фибробласты легкого высевали в 96-луночные планшеты при 3000 клеток/лунка. Через пять (5) дней после высевания клеточную среду обновляли и в клетки добавляли тестируемые соединения или среду-носитель. Через один (1) час добавляли TGF-e1 (1,25 нг/мл) для индуцирования перехода фибробластов в миофибробласты. Экспрессию aSMA, маркера перехода в миофибробласты, измеряли через 72 ч с помощью иммуноокрашивания, оцениваемого по высокоинформационной визуализации на IN Cell Analyzer 2200 (GE Healthcare), и определяли количественно с использованием алгоритма собственной разработки (BioFocus) с программным обеспечением разработчика IN Cell (GE Healthcare). Данные алгоритма представляют интенсивность окрашивания, умноженную на окрашенную область (уровни D х A). Выполняли совместное окрашивание клеточных ядер 4',6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI) для определения числа клеток, как меры потенциальной токсичности, и/или для нормализации aSMA по различиям в плотности клеток.
Согласно альтернативному протоколу выделенные фибробласты легкого высевали в 96-луночные планшеты при 5100 клеток/лунка. Через 24 ч клетки обновляли голодной средой еще на 24 ч. В клетки добавляли тестируемые соединения или среду-носитель. Через один (1) час добавляли TGF-e1 TGF-e1 (0,1 нг/мл) для индуцирования перехода фибробластов в миофибробласты. Экспрессию aSMA, маркера перехода в миофибробласты, измеряли через 48 ч с помощью иммуноокрашивания, оцениваемого по высокоинформационной визуализации на ImageXpres Micro (Molecular Devices) и определяли количественно с использованием программного обеспечения MetaXpress (Molecular Devices). Использовали процент положительных клеток для оценивания окрашивания aSMA и, таким образом, степени перехода фибробластов в миофибробласты. Выполняли совместное окрашивание клеточных ядер 4',6-диамидино2-фенилиндолом (DAPI) для определения числа клеток, как меры потенциальной токсичности, и/или для нормализации aSMA по различиям в плотности клеток.
Оценивание продолжительности действия тестируемых соединений на индуцированное PDGF-BB фосфорилирование PDGFRe в человеческих фетальных фибробластных клетках легкого.
Для определения относительной персистенции эффектов воздействия лекарственного средства на индуцированное PDGF-BB фосфорилирование PDGFRe использовали эксперимент промывания с применением человеческих фетальных фибробластных клеток легкого MRC-5 и набор для клеточного анализа (Cisbio) Homogenous HTRF (гомогенная флуоресценция с временным разрешением) фосфо-PDGFRe (Tyr751), с помощью которого выявляли рецепторную модуляцию индуцированного PDGF-BB фосфорилирования PDGFRe.
Протокол промывания.
Сначала клетки MRC-5 отделяли трипсином и нейтрализовали полной средой (ростовой средой DMEM, 10% FBS). 1,2 х 106 клеток помещали в микроцентрифужные пробирки, центрифугировали при 10000 об/мин в течение 30 с с использованием настольной центрифуги, супернатант удаляли, а клетки промывали в 1 мл предварительно нагретого (37°C) буфера для промывания (HBSS, pH 7,4, 0,1% BSA и 0,04% плюрониловой кислоты) для удаления какого-либо остаточного FBS. Затем клетки снова центри- 62 038796 фугировали, супернатант удаляли и инкубировали с 500 мкл среды-носителя, тестируемого контрольного соединения и тестируемого соединения (при концентрации, обеспечивающей 70% ингибирование) в течение 1 ч с осторожным встряхиванием при 37°C. После инкубации клетки равномерно диспергировали и 100-мкл аликвоту извлекали из каждой пробирки для контроля без промывания. Затем остальные клетки подвергали 5 повторяющимся стадиям промывания, при которых клетки центрифугировали, супернатант удаляли и повторно суспендировали в 1 мл свежего предварительно нагретого (37°C) буфера для промывания. Чтобы избежать эффектов переноса соединения из-за прилипания к пластику, клетки переносили в свежие пробирки после каждой стадии промывания и помещали в шейкер (900 об/мин) при 37°C для 10-минутной инкубации между промываниями для обеспечения восстановления равновесия между клетками и буфером. После финальной стадии промывания клетки повторно суспендировали в 360 мкл предварительно нагретого буфера для промывания. По 5 мкл как из пробирок без промывания, так и из пробирок с промыванием помещали в 384-луночный белый полипропиленовый микротитровальный планшет (Greiner) и инкубировали при 37°C в течение 15 мин. Затем клетки стимулировали 5 мкл rhuPDGF-BB (3 нг/мл, R&D Systems) в течение 5 мин, после чего клетки сразу же лизировали путем добавления 10 мкл буфера для лизиса, представленного в аналитическом наборе HTRF. Клетки помещали в шейкер для планшетов (1450 оборотов в минуту) на 1 ч, после чего планшет быстро центрифугировали в течение 30 с (3000 об/мин) и добавляли реагенты из набора HTRF собственного изготовления согласно инструкциям в наборе. Фосфорилирование PDGFRe определяли количественно путем вычисления отношения считывания флуоресценции при 665 и 620 нм. Процент ингибирования индуцированного rhuPDGF-BB фосфорилирования PDGFRe тестируемым соединением вычисляли как процент такового, достигаемого при 3 мкг/мл rhuPDGF-BB, по сравнению с тестовым контролем - средой-носителем. В табл. 7 представлены данные в виде процента фосфорилирования после промывания относительно максимального фосфорилирования контроля (что составляет 100 минус показатель вышеупомянутого процента ингибирования).
Анализ проницаемости PAMPA.
С помощью данного анализа измеряли проницаемость по всей искусственной мембране и выполняли его на Cyprotex с использованием параллельного анализа проницаемости искусственной мембраны. Он представляет собой in vitro модель пассивного, трансцеллюлярного проникновения через искусственную гексадекановую мембрану (Wohnsland F. et al., Med. Chem., 2001 44; 923-930). Соединения могут быть разделены по низкой и высокой проницаемости. Как правило, соединения, которые имеют Papp < 10 х 10-6 см/с, классифицируют как соединения с низкой проницаемостью, а соединения с Papp > 10 х 10-6 см/с, классифицируют как соединения с высокой проницаемостью. Считают, что соединения, имеющие низкую проницаемость, вероятно имеют длительное время нахождения в легком из-за их более медленной абсорбции (Tronde Ann. et al., J. Pharm. Sci., 2003, 92(6), 1216-33).
Краткое описание протокола.
Тестируемое соединение добавляли на донорную сторону фильтра, покрытого искусственной мембраной PAMPA, и проницаемость измеряли с помощью мониторинга появления тестируемого соединения на акцепторной стороне клеточной мембраны с использованием LC-MS/MS.
Экспериментальная процедура.
Готовили раствор гексадекана в гексане (5% об./об.) и добавляли аликвоту на мембрану в каждой лунке фильтровального (донорного) планшета (фильтровального планшета Multiscreen для проницаемости, Millipore). Затем обеспечивали высыхание донорных планшетов для гарантии выпаривания гексана.
Добавляли буфер (pH 7), содержащий DMSO (5%), в каждую лунку акцепторных планшетов. Готовили растворы тестируемых соединений путем разбавления 10 мМ концентратов DMSO буфером с получением финальной концентрации тестируемого соединения 10 мкМ (финальной концентрации DMSO 5%). Также включали флуоресцентный маркер целостности люцифер желтый в раствор тестируемого соединения. Донорный планшет вставляли в акцепторный планшет и затем планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 5 ч. Из растворов тестируемых соединений готовили аналитические стандарты. Проницаемость тестируемого соединения оценивали в четырех повторностях. В каждом планшете в качестве контролей использовали соединения с известными характеристиками проницаемости.
В конце периода инкубации донорный планшет извлекали из акцепторного планшета. Определяли количество в донорных и акцепторных образцах тестируемых и контрольных соединений с помощью кассетного анализа LC-MS/MS с использованием 5-точечной калибровки с соответствующим разбавлением образцов. Экспериментальное восстановление вычисляли по концентрациям как донорного, так и акцепторного компартмента.
Если проникновение люцифера желтого превышало пределы QC для одной, двух или трех отдельных лунок тестируемого соединения, то сообщали результаты n = 3, 2 или 1.
Анализ данных.
Коэффициент эффективной проницаемости (Papp) для каждого соединения вычисляли по следующему уравнению:
- 63 038796 „ ,/, [лекарственное средство] \
Papp = {С X - 1η ί 1 - ------------------------------- I) \ [лекарственное средство] ^яовт/ при этом χ 1
С = ------—---------(% ~ Ki) Площадь X время в котором VD и VA представляют собой объемы донорного и акцепторного компартментов, соответственно, площадь представляет собой площадь поверхности мембраны, умноженную на пористость, а равновесная концентрация лекарственного средства представляет собой концентрацию тестируемого соединения в суммарном объеме донорного и акцепторного компартментов.
In vivo скрининг: фармакодинамические и фармакокинетические показатели.
Индуцированный блеомицином фиброз у мышей (мышиная модель легочного фиброза).
Мышам C57BL6/J внутритрахеальным путем вводили дозу либо среды-носителя, либо блеомицина сульфата (MP Biomedicals, 2 ед./кг) в день 0. Соединения вводили внутриназально (в виде водных растворов или суспензий, 25-50 мкл) один раз в сутки от дня 5 до дня 20. Еще через 24 ч животных анестезировали, канюлировали им трахеи и животных механически вентилировали с использованием управляемого компьютером поршневого вентилятора (FlexiVent, SCIREQ Inc., Montreal, Canada). После измерений функции легких мышей обескровливали и экстрагировали жидкость бронхоальвеолярного лаважа (BALF). Количества суммарных и отдельных видов лейкоцитов в образцах BALF измеряли с использованием гемоцитометра Neubaur. Получали цитоспиновые мазки образцов BALF с помощью центрифугирования и окрашивания с использованием системы окрашивания DiffQuik (Dade Behring). Подсчитывали клетки с использованием масляно-иммерсионной микроскопии. Оставшиеся супернатанты BALF сохраняли для анализа цитокина.
Целые легкие накачиваются под давлением 25 см H2O с 10% нейтральным забуференным формалином через трахеальную канюлю и погружали в формалин по меньшей мере на 24 ч. После запаивания в парафиновые блоки легкие нарезали на срезы (5 мкм) и окрашивали либо гаматоксилином и эозином (Н&Е), либо пикросириусом красным (PSR). Постоянное количество изображений произвольно получали из 4 поперечных срезов. Изображения оценивались в баллах от 0 (отсутствие PF) до 8 (максимальный PF) 2 исследователями слепым методом для оценки фиброзных изменений в легких. Кроме того, выполняли окрашивание по актину α-гладких мышц (Thermo Scientific, Freemont, CA) с использованием стандартных методик. Растворимый коллаген в гомогенате цельного легкого оценивали с помощью анализа коллагена Sircol (Biocolor Ltd, Carrickfergus, UK).
Индуцированное PDGFBB фосфорилирование PDGFRe у мышей.
Мышей C57BL/6 (Charles River) возрастом 7-12 недель размещали при 12-часовом цикле свет/темнота и давали им корм и воду ad libitum. Водные растворы или суспензии соединений готовили для доставки указанных доз (мг/кг) на основе средней массы мышей в группах. Животных анестезировали и вводили соединения или среды-носители внутриназально (50 мкл). После восстановления в указанные моменты времени животных снова анестезировали и внутритрахеально вводили рекомбинантный мышиный PDGF-BB (50 мкг/животное, Cambridge Biosciences) или среду-носитель, а затем через 5-30 мин после вливания PDGF-BB забирали окончательные образцы крови и иссекали цельные легкие. Из крови выделяли плазму путем центрифугирования. Приблизительно половину левых долей гомогенизировали с использованием устройства FastPrep-24 5G в пробирках для лизиса Matrix D (МР Biomedicals). Измеряли уровни фосфорилирования PDGFRe с помощью вестерн-блоттинга с использованием антител против фосфо-PDGFRα(Y849)/β(Y857), против суммарного PDGFRe/α и против GAPDH (Cell Signaling). Уровни фосфорилирования PDGFRe описывали как отношения к суммарному содержанию PDGFRe или к GAPDH. Вычисляли процент ингибирования фосфорилирования PDGFRe для каждой обработки относительно обработки средой-носителем. Осуществляли измерения содержаний соединений в плазме или гомогенатах легких с помощью LC-MS/MS.
Фармакокинетические измерения у грызунов.
Для фармакокинетических исследований использовали самцов крыс CD или C57BL/6J, при этом дозы животным вводили внутритрахеально, перорально или внутривенно для крыс и внутриназально, перорально или внутривенно для мышей.
Животным вводили дозу внутривенно через боковую хвостовую вену. Животных, которым вводили дозу внутритрахеальным или внутриназальным путем, анестезировали перед введением дозы с использованием изофлурана, а также оксида одновалентного азота в исследования на крысах или кислорода в исследования на мышах.
Животных канюлировали в боковую хвостовую вену и помещали в камеру с подогревом (37-40°C) приблизительно на 5 мин перед каждым моментом времени забора образов для расширения хвостовых вен. Соединения составляли в виде растворов для внутривенного введения и в виде растворов или суспензий для всех других способов. Животных взвешивали в день введения дозы и осуществляли однократное введение состава с объемом, регулируемым согласно индивидуальной массе тела (табл. 3). Для серийных образцов брали 150-200-мкл образцы крови крысы или 20-мкл образцы крови мыши (с добав- 64 038796 лением одинакового объема воды) из отверстия канюли в покрытые K2EDTA пробирки Microtainer в предварительно определенные моменты времени на протяжении 24 ч. Плазму выделяли путем центрифугирования (с относительным центробежным ускорением (rcf) 8200 в течение 5 мин), только в исследованиях на крысах.
При завершении образцы крови собирали через нисходящую полую вену в покрытые K2EDTA пробирки Microtainer и получали жидкость BAL путем промывания легких через трахею вливаниями 3 х 4 мл 4% BSA в PBS для крыс и вливаниями 3 х 0,4 мл 4% BSA в PBS для мышей. Легкие иссекали, взвешивали, регистрировали массы и быстро замораживали в жидком азоте.
Измерения содержания соединений в плазме или крови, гомогенатах легких и жидкости BAL осуществляли с помощью LC-MS/MS. Лекарственное средство экстрагировали путем осаждения белка с использованием избытка растворителя, содержащего соответствующий внутренний стандарт. Концентрации лекарственного средства определяли по кривой, построенной по внешнему стандарту, совместимому с матрицей.
Концентрации лекарственного средства наносили на график в полулогарифмическом масштабе в зависимости от времени (см. фиг. 1-3). Стандартные фармакокинетические параметры вычисляли с использованием некомпартментного анализа. Концентрации в легком и жидкости BAL в каждый момент времени выражали как процент вводимой дозы.
Таблица 3. Объем введения
Путь введения Мышь Крыса
Внутриназальный (i.n.) 1,5 мл/кг Не использовали
Внутритрахеальный (i.t.) Не использовали 0,5 мл/кг
Пероральный (р.о.) 10 мл/кг 10 мл/кг
Внутривенный (i.v.) 2 мл/кг 1 мл/кг
Результаты.
Результаты тестирования в анализах ингибирования фермента, а также в клеточных и других in vitro анализах представлены в приведенных ниже табл. 4-10 и на фиг. 1-4.
Таблица 4. Ингибиторные активности соединений в соответствии с изобретением и нинтеданиба в отношении FGFR1, FGFR3, PDGFRa, PDGFRe, VEGFR1 и VEGFR2
Анализы ферментов
Ki (нМ)
Номер примера FGFR1 FGFR3 PDGFRa PDGFRp VEGFR1 VEGFR2
Нинтеданиб* 32 5,9 8,4 8,0 ИЗ 3,8
1 н. о. н. о. н. о. н. о. н. о. н. о.
2 161 22 24,5 19,2 295 36,4
3 84,7 8,32 12,8 И,4 137 37,6
4 80,4 9,94 14,5 9,66 88,9 25,2
5 10,2 6,78 4,57 7,13 30,3 9,88
6 И,7 9,92 8,8 8,31 27,1 9,26
7 30,7 8,85 8,8 6,6 56,1 19,8
8 235 25,4 34,8 27,8 399 219
9 65,7 16,5 13,2 9,95 202 10,7
10 127 26,9 37,7 17,4 258 40
- 65 038796
И 1580 158 н. о. н. О. 1580 794
12 123 21,4 (n=l) 13,6 11,6 186 58,1
13 63,8 8,65 13,4 11,5 152 32,8
14 94,2 И 10,5 H,1 77,7 22,7
15 134 34,2 19 21,7 341 102
16 228 15,7 14,9 14,1 313 83,8
17 75,5 14,6 16 11,7 100 37,4
18 166 7,42 14 И 177 38,6
19 68,7 11,7 15,9 9,62 126 33,7
20 63,7 16,7 15,2 И,1 125 39,8
21 80,8 13,2 13,8 10,2 121 31,7
22 66 8,14 7,54 10 145 29,8
23 49,9 13,3 17,8 12,2 85,7 32
24 67,8 15,2 18,1 15,5 146 51
25 314 16,2 25,5 19,8 304 76,8
26 17,8 12,6 12 8,61 96,3 11,4
27 20 10,2 9,11 4,77 71,5 13,8
28 29,1 10,7 12,4 7,88 125 18,2
29 25 9,56 9,33 7,48 87,8 22,5
30 27,3 9,56 9,37 7,32 49 20,4
31 27 10,7 8,74 6,58 76,5 20
32 28,7 10,7 10,5 4,92 106 19,6
33 94 20,8 14,4 8,47 259 44,5
34 91,9 26,4 19,6 15,8 158 43,9
35 94,2 30,6 39,6 22,1 99,6 58,4
36 52,3 23,7 13,6 8,46 111 37,5
37 1070 347 238 244 1330 (n=l) 661
38 90,7 7,68 13,6 6,91 115 43,3
39 63,9 7,06 6,71 5,39 101 45
40 68,7 17,9 10,6 7,66 123 49,5
41 187 27,6 20 15 270 91,1
42 118 20,2 9,62 7,06 186 49,1
- 66 038796
43 350 50,3 34,6 32,4 329 155
44 858 105 137 103 534 409
45 160 29,4 26,2 14,1 256 73,2
46 346 45,8 53,3 28,1 664 194
47 122 21,9 15,3 10,2 172 42,6
48 53,7 18,3 16,6 18,3 231 70
49 91,6 28 31,3 31,1 206 61,3
50 26,7 9,69 И 9,24 77,7 18,4
51 38,3 9,39 11,3 9,44 72,3 31,6
52 79,2 33 27,3 17 241 52
53 97,3 36,4 33,4 20,3 184 70,3
54 56,7 25,7 20,2 18,1 120 37,4
55 96,5 23,1 30 21,3 166 71,1
56 29,6 12,4 И,4 7,19 66,7 12,8
57 38,4 И,2 И,2 9,84 57,5 5,36
58 53,3 8,96 и,з 8,87 74,8 3,86
59 34,1 И,5 14,7 9,19 44,7 5,43
60 54,2 12,2 16,6 13 63,7 5,24
61 97,5 16,4 27,3 18,3 110 11,8
62 47,7 6,78 11,6 И,2 72,6 5,74
63 67,5 22 16,4 15,7 182 16,7
64 н. О. н. о. н. о. н. о. н. о. н. о.
65 25 7,9 13 13 79 79
66 50 6,3 20 16 100 20
67 н. о. н. о. н. о. Н. О. н. о. н. о.
68 63 63 Н. О. Н. О. 126 32
69 79 32 Н. о. Н. О. 200 40
70 32 13 Н. о. Н. О. 200 25
71 126 25 Н. о. Н. О. 398 100
72 126 16 Н. о. Н. О. 200 79
73 40 7,9 13 7,9 100 16
н. о.: не определяли; n = 2, если не указано иное (среднее); *n = 34.
- 67 038796
Таблица 5. Ингибиторные эффекты соединений в соответствии с изобретением и нинтеданиба в отношении индуцированного PDGFBB фосфорилирования PDGFR3 в фибробластных клетках MRC5 и в отношении индуцированного VEGFigs фосфорилирования VEGFR2 в эндотелиальных клетках
Фосфорилирование рецептора (IC50, нМ)
Номер примера Индуцированное PDGFBB фосфорилирование PDGFRP в клетках MRC5 Индуцированное VEGF 105 фосфорилирование VEGFR2 в клетках НАЕС
Нинтеданиб 7,07 (п = 8) 0,594 (п = 13)
1 и. о. 32,2
2 39,6 и. о.
3 7,14 13,9 (п = 2)
4 15,2 (п = 3) 23,9 (п = 2)
5 7,74 4,17 (п = 2)
6 6,95 (п = 2) 6,58 (п = 6)
7 10,4 (п = 2) 12,5
8 21,5 39,5
9 8,45 и. о.
10 13,6 и. о.
И 15,3 22,6 (п = 2)
12 и. о. 31,1
13 4,4 13,9 (п = 2)
14 и. о. 9,32
15 19,9 30,1 (п = 1)
16 и. о. и. о.
17 и. о. и. о.
18 3,68 4,47
19 5,95 54,7 (п = 2)
20 и. о. и. о.
21 6,79 25
22 6,68 8,26
23 и. о. и. о.
24 и. о. 8,21
25 19,4 52,1
-68038796
26 5,39 5,47 (η = 2)
27 10,4 Η. 0.
28 5,03 5,1
29 3,18 30,7
30 7,43 10,2
31 7,72 46,4
32 3,09 11,4
33 8,99 83,5
34 13,4 24,2
35 26,9 94,2
36 9,44 12,6
37 24,1 71,1
38 14,6 56,7
39 33,8 38,1
40 29,2 157
41 37,4 Η. 0.
42 56,3 103
43 25,7 33,8
44 73,9 Η. 0.
45 27,2 124
46 31,7 128
47 39 371
48 38,8 Η. 0.
49 40,2 23,5
50 9,42 26,8
51 9,39 19,1
52 21,8 17
53 43,8 33,6
54 34,1 38,1
55 17,3 17
56 3,95 7,54
57 5,04 Η. 0.
58 4,06 Η. 0.
59 25,4 Η. 0.
- 69 038796
60 5,6 н. о.
61 7,84 Н. О.
62 4,61 Н. О.
63 4,74 Н. О.
64 н. о. 32,2
65 9,3 15,5
66 15,5 17,8
67 н. о. н. о.
68 16,5 Н. О.
69 14,3 12,9
70 9,98 8,87
71 23,2 102
72 36,7 172
73 12,7 7,83
н. о.: не определяли; n = 1, если не указано иное.
Таблица 6. Эффект соединений в соответствии с изобретением и нинтеданиба в отношении жизнеспособности клеток на клетках MRC5 (анализ MTT)
Анализ жизнеспособности клеток на клетках MRC5 (МТТ)
Номер примера Жизнеспособность клеток при 1000 нМ (%) Жизнеспособность клеток при 300 нМ (%) Жизнеспособность клеток при 100 нМ (%)
Нинтеданиб (п = 30) 92,7 105,6 104,6
1 87 (п = 2) 97 (п = 2) 116,6
2 101,2 104,4 124,5
3 (п = 3) 67,2 85,4 106
4(п = 3) 88,8 94,8 99,2
5 (п = 3) 71,5 92,5 100,6
6 (п = 12) 77 88,5 98,1
7(п = 2) 86,8 98 90,7
8 91 95,7 93,4
9 88,6 96,3 129,9
- 70 038796
10 42 100,9 105,9
и 94,8 (η = 2) 91,5 (η = 2) 104,8
12 (n = 3) 79,4 101,7 104,8
13 (η = 2) 61,2 98,8 110,2
14 (η = 2) 87,5 96,9 110,8
15 (η = 2) 97,5 99 106,9
16 51,9 59,9 79
17 92,5 90,5 83
18 68,7 90,3 104,5
19 76,9 92,7 108,3
20 90,7 81,7 75,5
21 (η = 2) 53 86,6 95,5
22 39,2 74,1 102
23 67,9 85,9 93,1
24 (η = 2) 103,1 104,7 85,4
25 79,3 104,8 108,5
26 88 111,4 111,8
27 (η = 3) 86,4 88,6 94,9
28 104,8 117 110,2
29 91,8 85,8 92
30 26 87,7 96,1
31 95,7 97,3 111,7
32 66,3 82,3 93,5
33 (η = 2) 91,3 101,3 110,7
34 61,5 80 114,8
35 75,7 77,2 92,9
36 65,9 93 108,8
37 106 98,9 95,2
38 93 90,8 89,3
39 90,8 90,1 89,9
40 110,5 103,8 103,8
41 86,8 96,1 112,3
42 118,3 109,6 114,5
43 83,9 91,8 96,5
- 71 038796
44 109,8 105,9 103
45 80,7 104,7 98,9
46 86,3 109,5 120,7
47 93 102,4 112
48 103,5 121 132,6
49 69,4 110,8 124,5
50 69,7 92,6 107,5
51 71,2 85,8 86,5
52 59,8 50,9 62
53 97,8 96,8 124,2
54 92,9 99,8 101
55 92,3 111,1 106,7
56 70,5 121 132
57 91,2 123,2 123,5
58 55,6 116,9 110,2
59 103,8 107,7 123,5
60 0,2 84,4 88,8
61 35,2 86,6 83
62 -0,2 73,8 80,7
63 12,1 116,9 99
64 73,7 88,6 86,5
65 70,5 110,3 118,6
66 53,8 92,9 102,8
67 н. о. н. о. н. о.
68 н. о. н. о. н. о.
69 74,0 93,1 92,5
70 94,0 99,7 91,7
71 н. о. н. о. н. о.
72 н. о. н. о. н. о.
73 96,8 104 82,9
н. о.: не определяли; n = 1, если не указано иное.
- 72 038796
Таблица 7. Продолжительность действия соединений примеров в качестве ингибиторов индуцированного
PDGF-BB фосфорилирования PDGFRe в человеческих фетальных фибробластных клетках легкого. Процент фосфорилирования после промывания относительно максимального фосфорилирования (100%) при 3 мкг/мл rhuPDGF-BB в тестовом контроле - среде-носителе
Группа 1
№ примера % фосфорилирования η SEM
Нинтеданиб 52,4 4 3,1
6 31,6 4 5,4
4 52,3 4 8,3
Группа 2
№ примера % фосфорилирования η SEM
Нинтеданиб 29,5 4 2,2
7 84,7 3 14,6
5 37,3 3 4,6
Группа 3
№ примера % фосфорилирования η SD
Нинтеданиб 33,2 2 2,0
3 34,6 2 5,1
9 56,8 2 3,2
Группа 4
№ примера % фосфорилирования η SD
Нинтеданиб 30,9 2 4,8
57 73,1 2 7,3
73 69,3 2 1,7
4 15,9 1
Поскольку более низкие значения указывают на более высокий процент ингибирования фосфорилирования PDGFRe, данные в табл. 7 показывают, что соединения примеров 4 и 6 имеют более длительную продолжительность действия в качестве ингибиторов PDGFRe, чем нинтеданиб, в данном анализе.
- 73 038796
Таблица 8. Определение Papp для соединений в соответствии с изобретением в анализе проницаемости PAMPA
Данные анализа РАМРА
№ примера* Среднее Рарр (10‘6 см с'1) SD РаРР N Рарр % восстановления
Нинтеданиб 0,277 0,151 4 83,5
Нинтеданиб 0,129 0,0547 4 64
1 н. о. н. о. н. о. н. о.
2 0,0261 0,0119 4 54,1
3 0,0384 0,0164 4 76
3 0,023 0,00388 3 55,3
4 0,00862 0,00122 3 44,9
4 0,0524 0,00825 2 75,6
5 0,0227 0,00987 4 50,4
5 0,0615 0,00588 3 60,9
6 0,00649 0,0019 4 42
7 0,0245 0,00257 4 58,1
8 н. о. н. о. н. о. н. о.
9 0,0761 0,0494 3 82,9
10 24,8 6,61 4 92,6
И н. о. н. о. н. о. н. о.
12 0,564 0,254 3 41
13 0,0138 0,00726 4 91
14 0,434 0,198 4 57,2
15 0,0756 0,0371 2 37,6
16 н. о. н. о. н. о. н. о.
17 0,0142 0,00675 4 91,9
18 0,424 0,138 4 51,5
19 0,00329 0,000375 4 54,6
20 0,0305 0,0153 4 91,7
20 0,0296 0,0159 4 66,5
21 н. о. н. о. н. о. н. о.
- 74 038796
22 н. о. н. о. н. о. н. о.
23 20 2,73 4 51,8
24 44,8 13,6 4 71,8
25 30 6,72 4 41,5
26 0,0156 0,0047 4 40,2
27 0,00146 0,000782 4 61,2
28 0,00407 0,00136 4 69,0
29 0,00415 0,00238 4 65,1
30 0,00225 0,000845 4 87,0
31 н. о. н. о. н. о. н. о.
32 0,0192 0,0103 4 42,8
33 0,00743 0,00316 3 71,9
34 н. о. н. о. н. о. н. о.
35 н. о. н. о. н. о. н. о.
36 0,0301 0,00466 3 53,1
37 н. о. н. о. н. о. н. о.
38 0,00569 0,00194 3 55,4
39 н. о. н. о. н. о. н. о.
40 0,00954 0,00451 4 75,0
41 0,00258 н. о. 1 59,6
42 0,0264 н. о. 1 76,8
43 0,00798 0,00642 4 75,3
44 н. о. н. о. н. о. н. о.
45 н. о. н. о. н. о. н. о.
46 н. о. н. о. н. о. н. о.
47 н. о. н. о. н. о. н. о.
48 0,220 0,107 4 67,4
49 0,0768 0,0158 4 75,2
50 0,0566 0,0253 2 179
51 0,00306 0,00084 4 62
51 0,00474 0,00333 4 74,7
52 0,279 0,0567 4 76,2
53 н. о. н. о. н. о. н. о.
54 н. о. н. о. н. о. н. о.
55 0,154 0,0407 2 59,1
56 0,719 0,154 4 69,7
57 0,688 н. о. 1 50,5
58 0,0296 0,00422 2 49,5
59 0,0364 0,0120 4 69,6
60 0,0503 0,0105 3 69,2
61 0,0205 0,00130 3 64,4
62 0,00628 0,000584 4 72,8
63 н. о. н. о. н. о. н. о.
64 0,0679 0,0169 2 59,4
н. о. - не определяли, *значения от повторения показаны для некоторых соединений.
- 75 038796
Таблица 9. Фармакокинетические измерения за период в 24 ч у крыс, которым внутривенно (i.v.) и внутритрахеально (i.t.) вводили дозу соединений в соответствии с изобретением или нинтеданиба
Номер примера Нинтеданиб 5 6 4 3 15 7
i.v. доза 0,42 0,1 0,5 0,1 0,1 0,1 0,1
CL (мл/минута/кг) 124 48 132 462 285 н. о. н. о.
Vss (л/кг) 28 23 63 39 51 н. о. н. о.
tl/2 (часы) 3,9 7,6 8,1 2,2 3,1 н. о. н. о.
MRT (часы) 3,8 8 7,9 2,4 з,о н. о. н. о.
Концентрация в легком (нМ) на момент времени (часы)
0,1 2304 475 2994 419 719 501 329
1,5 1392 251 1875 266 325 209 172
6 н. о. 92 н. о. н. о. н. о. н. о. 69
24 66 52 173 12 28 66 30
Отношение концентрации в легком/плазме на
- 76 038796
момент времени (часы)
0,1 92 24 103 77 126 55 17
1,5 226 36 315 285 315 62 15
6 н. о. 26 н. о. н. о. н. о. н. о. 10
24 NC 98 198 BLQ NC 103 н. о.
% введенной дозы в BAL на момент времени (часы)
0,1 0,06 0,04 0,06 0,01 0,03 0,09 BLQ
1,5 0,03 0,01 0,03 BLQ 0,02 0,02 BLQ
6 н. о. 0,01 н. о. н. о. н. о. н. о. BLQ
24 BQL 0,01 BQL BLQ BLQ 0,01 BLQ
Исследования с i.t. введением дозы
i.t. доза 0,42 0,1 0,5 0,1 0,1 0,1 0,1
i.t. В AV (%) 43 70 115 67 325 н. о. н. о.
Концентрация в легком (нМ) на момент времени (часы)
0,1 12396 3593 30413 5543 6693 3433 2100
1,5 7699 1710 11876 1538 1684 1370 881
6 н. о. 629 н. о. н. о. н. о. н. о. 1005
24 152 747 4724 218 247 135 519
Отношение концентрации в легком/плазме на момент времени (часы)
0,1 1227 74 288 279 176 177 233
1,5 1607 362 2893 1321 1426 884 114
6 н. о. 461 н. о. н. о. н. о. н. о. 114
24 NC 1519 3282 NC 503 314 н. о.
% введенной дозы в
- 77 038796
BAL на момент времени (часы)
0,1 2 3,1 6 3 3 2,4 5,3
1,5 1 0,6 3 0,3 0,3 0,6 0,2
6 н. о. 0,3 н. о. н. о. н. о. н. о. о,з
24 0,1 0,2 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Отношение концентрации в легком при i.t. введении/i.v. введении на момент времени (часы)
θ,ι 5,4 7,6 10,2 13,2 9,3 6,9 6
1,5 5,5 6,8 6,3 5,8 5,2 6,6 5
6 н. о. 6,8 н. о. н. о. н. о. н. о. 15
24 2,3 14,4 27,3 18,2 8,8 2,0 17
Исследования с пероральным введением дозы
Пероральная доза (мг/кг) - 3 3 - - - 3
BAY перорально (%) - 4 <1 - - - н. о.
н. о.: не определяли.
NC: не вычисляли из-за одного параметра, находящегося BLQ.
BLQ: ниже уровня количественного определения.
Таблица 10. Фармакокинетические измерения за период в 24 ч у мышей, которым внутривенно (i.v.) и внутриназально (i.n.) вводили дозу соединений в соответствии с изобретением или нинтеданиба
Номер примера Нинтеданиб 6 5
Среднее sd Среднее sd Среднее sd
i.v. доза 1 н. о. 0,2 н. о. 0,2 н. о.
CL (мл/минута/кг) 81 6 н. о. н. о. 111 20
Vss (л/кг) 10 2,3 н. о. н. о. 21 4
tl/2 (часы) 2 0,3 н. о. н. о. 2,6 0,2
MRT (часы) 2 0,4 н. о. н. о. 3,2 0,1
- 78 038796
Концентрация в легком (нМ) на момент времени (часы)
0,1 2378 128 580 55 868 и. о.
1,5 1345 430 168 36 416 84
6 и. о. и. о. 46 36 306 202
24 10 9 13 И 20 4
Отношение концентрации в легком/плазме на момент времени (часы)
0,1 7 и. о. И и. о. 13 и. о.
1,5 26 и. о. 40 и. о. 39 и. о.
6 н. о. н. о. 65 н. о. 152 н. о.
24 NC и. о. NC и. о. NC и. о.
% введенной дозы в BAL на момент времени (часы)
0,1 0,3 и. о. 0,1 и. о. 0,07 и. о.
1,5 0,03 и. о. 0,01 и. о. 0,02 и. о.
6 и. о. и. о. NC и. о. 0,01 и. о.
24 NC н. о. NC н. о. 0,02 н. о.
Исследования с i.n. введением дозы
i.n. доза 1 и. о. 0,2 и. о. 0,2 и. о.
BAV (%) 29 6 ~50 н. о. 14 19
Концентрация в легком (нМ) на момент времени (часы)
0,1 2755 4460 1493 2138 3507 и. о.
1,5 804 1006 986 593 1728 и. о.
6 и. о. и. о. 258 219 1322 и. о.
24 15 2 84 17 363 и. о.
Отношение концентрации в легком/плазме на момент времени (часы)
0,1 42 и. о. 79 и. о. 209 и. о.
1,5 27 н. о. 398 н. о. 688 н. о.
6 н. о. н. о. 607 н. о. 1127 н. о.
- 79 038796
24 NC н. о. NC н. о. NC н. о.
% введенной дозы в BAL на момент времени (часы)
0,1 0,5 Н. О. 1 Н. О. 1 Н. О.
1,5 0,1 Н. О. 0,3 Н. О. 0,1 Н. О.
6 н. о. Н. О. 0,1 Н. О. 0,3 Н. О.
24 NC Н. О. 0,04 Н. О. 0,1 Н. О.
Отношение концентрации в легком при i.n. введении/i.v. введении на момент времени (часы)
0,1 1,2 Н. О. 2,6 Н. О. 4,0 Н. О.
1,5 0,6 н. о. 5,9 н. о. 4,2 н. о.
6 н. о. Н. О. 5,6 Н. О. 4,3 Н. О.
24 1,5 Н. О. 6,5 Н. О. 18,2 Н. О.
Исследования с пероральным введением дозы
пероральная доза (мг/кг) 60 Н. О. 10 Н. О. 10 Н. О.
BAV (%) 32 5 < 5 13 5
н. о.: не определяли.
NC: не вычисляли из-за одного параметра, находящегося BLQ.
BLQ: ниже уровня количественного определения.
sd: стандартное отклонение.
Краткое описание результатов.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением, раскрываемые в настоящем документе, демонстрируют ингибиторную активность в отношении FGFR1, FGFR3, PDGFRa, PDGFRe, VEGFR1 и VEGFR2 (табл. 4 и 5) и наномолярную эффективность. Подавляющее большинство тестируемых соединений не оказывают неблагоприятных эффектов в анализах жизнеспособности клеток (табл. 6). Более того, соединения, как правило, обладают низкой проницаемостью сквозь мембраны (табл. 8 и фиг. 1). Некоторые соединения проявляли признаки повышенной продолжительности действия по сравнению с нинтеданибом, как определяли в отношении ингибирования индуцированного PDGF-BB фосфорилирования в человеческих фетальных фибробластных клетках легкого (см. табл. 7). Фармакокинетические измерения показывают, что в целом соединения в соответствии с настоящим изобретением, как выяснилось, имеют более высокое относительное содержание, чем у нинтеданиба, сохраняющееся в легком через 24 ч после того, как субъекту была доставлена доза местным путем (табл. 9 и 10, а также фиг. 2-4). Низкое содержание в BAL, отмеченное вместе с уменьшающимися количествами на протяжении 24часового периода, указывают на то, что происходит быстрое растворение и всасывание в ткань легкого соединений в соответствии с настоящим изобретением.
Данный профиль указывает на то, что соединения в соответствии с настоящим изобретением, как предполагают, подходят в качестве медицинских препаратов inter alia для лечения фиброзных заболеваний или интерстициальных легочных заболеваний, таких как IPF, или респираторных нарушений, особенно при доставке в легкое местным путем.
Ссылки
Castriotta RJ, et al., Chest, 2010, 138(3):693-703
Du Bois RM., Nat Rev Drug Discov., 2010, 9(2):129-40
Fehrenbach. H., etal., Virchows Arch., 1999, 435(1):20-31
King ТЕ Jr, et al., Lancet, 2011, 3;378(9807): 1949-61
Lindroos. P., Am J Physio Lung Cell Mol Physiol., 2001, 280:L354-L362
Tronde Ann et al., JPharm. Sci., 2003, 92(6), 1216-33
Selman M, et al., Ann Intern Med., 2001, 16; 134(2): 136-51
Wohnsland F et al., Med Chem., 2001, 44;923-930
По всему настоящему описанию и следующей формуле изобретения, если контекст не требует иного, слово содержать и вариации, такие как содержит и содержащий, следует понимать как включе- 80 038796 ние указанных целого числа, стадии, группы целых чисел или группы стадий, но не как исключение каких-либо других целого числа, стадии, группы целых чисел или группы стадий.
Все патенты и патентные заявки, упомянутые в документе, включены посредством ссылки во всей своей полноте.

Claims (36)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение формулы (I)
    где R1 представляет собой H, Me, Et, CH=CH2, C=C-H или C=C-Me;
    R2 представляет собой H, C1-C6-алкил, C1-C6-алкокси, C3-Сgциклоалкил, -CH2-(C3-СgЦиклоалкил), галоген или циано;
    R3 представляет собой (i)
    или (ii)
    или (iii)
    Q представляет собой гетероатом, выбранный из O, N и S, и если N, необязательно может быть замещен C1.4алкилом;
    Z представляет собой CO или SO2;
    Y 1 представляет собой (CH2)n и, при условии что n не равно 0, необязательно может быть замещен Me;
    X1 представляет собой (CH2)m и, при условии что m не равно 0, необязательно может быть замещен Me;
    n и m независимо представляют собой 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
    Y2 представляет собой (CH2)s и необязательно может быть замещен Me;
    s равно 2, 3, 4, 5 или 6;
    Y3 представляет собой (CH2)t и необязательно может быть замещен Me;
    X2 представляет собой (CH2)v и необязательно может быть замещен Me;
    t и v независимо представляют собой 2 или 3 при условии, что t + v = 4 или 5;
    R4 представляет собой H, OH, NR6R7 или алифатический 4-8-членный гетероциклил, содержащий один или несколько гетероатомов, выбранных из O, N и S, при условии, что если R4 представляет собой OH или NR6R7, m равно 2, 3, 4 или 5;
    R5 представляет собой H, OH, NR8R9 или алифатический 4-8-членный гетероциклил, содержащий один или несколько гетероатомов, выбранных из O, N и S, при условии, что если R5 представляет собой OH или NR8R9, n равно 2, 3, 4 или 5, причем алифатические гетероциклические группы, которые могут быть представлены при помощи R4 и R5, необязательно могут содержать карбонильную или сульфоновую группу и необязательно могут быть замещены одной или несколькими группами, выбранными из -C1-C4-алкила, C1-C4-гидроксиалкил-, C1-C4-алкокси(C1-C4)алкил-, -C1-C4-алкиленСОNR10R11, CN, OH и NR12R13;
    R6, R7, R8, R9 независимо представляют собой H или C1-C4-алкил, необязательно замещенный ОН, оксо, NR14R15 или -C1-C4-алкокси; и
    R10, R11, R12, R13, R14 и R15 независимо представляют собой H или ^-Сдалкил;
    или его фармацевтически приемлемая соль.
  2. 2. Соединение по п.1, где R1 представляет собой Me или H.
    - 81 038796
  3. 3. Соединение по п.2, где R1 представляет собой Me.
  4. 4. Соединение по любому из пп.1-3, где R2 представляет собой H, Me или F.
  5. 5. Соединение по любому из пп.1-4, где Z представляет собой CO.
  6. 6. Соединение по любому из пп.1-4, где Z представляет собой SO2.
  7. 7. Соединение по любому из пп.1-6, где R3 представлен формулой (i).
  8. 8. Соединение по п.7, где m равно 0, и X1 отсутствует, или m равно 1 или 2, и X1 представляет собой CH2, CH(CH3)CH2 или (CH2)2.
  9. 9. Соединение по п.7 или 8, где R4 представляет собой H, N-метилпиперидинил или диметиламино.
  10. 10. Соединение по любому из пп.7-9, где фрагмент -X1-R4 представляет собой H, Me, CH2CH3, изопропил, 1-метилпиперидин-4-ил или N,N-диметиламино.
  11. 11. Соединение по любому из пп.7-10, где n равно 0, и Y1 отсутствует, или n равно 1, 2 или 3, и Y1 представляет собой, CH2, (CH2)2 или (CH2)3.
  12. 12. Соединение по любому из пп.7-11, где R5 представляет собой H, диметиламино, N-метилэтаноламин, N-метилпиперазинил, N-метилпиперидинил, 1,2,6-триметилпиперазинил, N-этилпиперазинил, 3-(N,N-диметиламин)пирролидинил, N-(CH2CH2OH)пиперазинил, пиперидинил, морфолинил, 4-гидроксипиперидинил, 4-цианопиперидинил, 2,6-диметилпиперидинил, N-метоксиэтилпиперазинил, 2-метилпиперазинил, N-метил-2-(N-пиперазинил)ацетамид, 4-(N,N-диметиламин)пиперидинил, 4-метоксипиперидинил, S-диокситиоморфолинил, N-пиперазин-3-он, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептанил, 3,8-диазабицикло[3.2.1]октанил или 3,6-диазабицикло[3.1.1]гептанилил.
  13. 13. Соединение по любому из пп.7-12, где фрагмент -Y1-R5 представляет собой Me, -(СН2)2-диметиламино, -(СН2)3-диметиламино, -(СН2)2-(М-метил)этаноламино, -(СН2)2-пиперазин-1-ил, -(CH2)2-(4метил)пиперазин-1 -ил, (CH2)2-(3 -метил)пиперазин-1 -ил, -(СН2)3-(4-метил)пиперазин-1 -ил, -(CH2)2-( 1-метил)пиперидин-4-ил, N-метилпиперидин-4-ил, -(СН2)2-(4-этил)пиперазин-1-ил, -(CH2)2-3-(N,N-диметиламино)пирролидин-1 -ил, -(CH2)2-(4-(CH2CH2OH)пиперазин-1 -ил), -(СН2)2-3,4,5-триметилпиперазин-1 ил, -(СН2)2-пиперидин-1-ил, -(СН2)3-пиперидин-1-ил, -(СН2)2-морфолин-4-ил, -(СН2)2-(4-гидроксипиперидин-1 -ил), -(СН2)2-(4-цианопиперидин-1 -ил), -(СН2)2-(2,6-диметилпиперидин-1 -ил), -(СН2)2-(4-метоксиэтилпиперазин-1 -ил), -(CH2)2-4-(N,N-диметиламинопиперидин-1 -ил), -(СН2)2-(4-метоксипиперидин1 -ил), (СН2)3-(4-метоксипиперидин-1 -ил), -(CH2)2-4-(N-метилацетамидо)пиперазин-1 -ил)), -(СН2)2-(4-диокситиоморфолин-1-ил), -(СН2)2-(3-оксопиперазин-1-ил), -(СН2)2-(2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан-2-ил), -(СН2)2-(3,8-диазабицикло[3.2.1]октан-8-ил), (СН2)2-(3,8-диазабицикло[3.2.1]октан-3-ил), (СН2)2-3,6-диазабицикло[3.1.1]гептан-3 -ил.
  14. 14. Соединение по любому из пп.7-13, где формула (i) представляет собой фрагмент, в котором: (a) -X1-R4 представляет собой H и -Yi-R5 представляет собой -(СН2)2-диметиламино, -(СН2)3-диметиламино, -(CH2)2-(N-метил)этаноламино, -(СН2)2-4-метилпиперазин-1 -ил, -(СН2)3-(4-метил)пиперазин-1 -ил, N-метилпиперидин-4-ил, -(СН2)2-3,4,5-триметилпиперазин-1 -ил, -(CH2)2-4-этилпиперазин-N-ил, -(CH2)2-3(N,N-диметиламино)пирролидин-1 -ил, -(CH2)2-(4-(CH2CH2OH)пиперазин-1 -ил), -(СН2)2-пиперидин-1 -ил, -(СН2)3-пиперидин-1-ил, -(СН2)2-морфолин-4-ил, -(СН2)2-(4-гидроксипиперидин-1-ил), -(CH2)2-4цианопиперидин-1 -ил, -(СН2)2-(2,6-диметилпиперидин-1 -ил), -(СН2)2-4-метоксиэтилпиперазин-1 -ил, -(CH2)2-4-(N,N-диметиламино)пиперидин-1-ил, -(СН2)2-4-метоксипиперидин-1-ил, -(СН2)3-4-метоксипиперидин-1 -ил, -(СН2)2-4-диокситиоморфолин-1 -ил, -(CH2)2-(3 -оксопиперазин-1 -ил), предпочтительно -X1-R4 представляет собой H и -Y1-R5 представляет собой -(СН2)2-диметиламино или -(CH2)2-4метилпиперазин-1-ил, более предпочтительно -X1-R представляет собой H и -Y1-R5 представляет собой -(СН2)2-диметиламино; или (b) -X1-R представляет собой Me и -Y1-R5 представляет собой Me, -(CH2)2диметиламино, -(СН2)2-(М-метил)этаноламино, -(СН2)2-пиперазин-1 -ил, (СН2)2-4-метилпиперазин-1 -ил, -(CH2)2-(3 -метил)пиперазин-1 -ил, -(CH2)2-(4-(CH2CH2OH)пиперазин-1 -ил), -(CH2)2-(4-(N-метилацетамидо)пиперазин-1-ил)), -(СН2)2-(2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан-2-ил), -(СН2)2-(3,8-диазабицик- ло[3.2.1]октан-8-ил), (СН2)2-(3,8-диазабицикло[3.2.1]октан-3-ил), (СН2)2-3,6-диазабицикло[3.1.1]гептан-3ил, предпочтительно -X1-R4 представляет собой Me и -Y1-R5 представляет собой (СН2)2-диметиламино или -(СН2)2-4-метилпиперазин-1-ил, более предпочтительно -X1-R представляет собой Me и -Y1-R5 представляет собой -(СН2)2-4-метилпиперазин-1-ил; или (c) -X1-R представляет собой 1-метилпиперидин-4ил и -Y1-R5 представляет собой Me; или (d) -X1-R4 представляет собой N,N-диметиламино и -Y1-R5 представляет собой Me; или (e) -X1-R4 представляет собой CH2CH3 и -Y1-R5 представляет собой (CH2)2пиперазин-1-ил или (f) -X1-R4 представляет собой изопропил и -Y1-R5 представляет собой (CH2)2пиперазин-1-ил.
  15. 15. Соединение по любому из пп.1-6, где R3 представлен формулой (ii).
  16. 16. Соединение по п.15, где s равно 2.
  17. 17. Соединение по любому из пп.1-6, где R3 представлен формулой (iii).
  18. 18. Соединение по п.17, где t равно 2 и v равно 2.
  19. 19. Соединение по любому из пп.16-18, где Q представляет собой N или О.
  20. 20. Соединение по п.1, которое выбрано из (Z)-метил-3-(((4-(метокси(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    - 82 038796 (Z)-метил-5-метил-3-(((4-(N-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)сульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этокси)карбамоил)-3-метилфенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-((2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-2-оксо-3-(фенил((4-((2-(пиперидин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)метилен)индолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-(метил(2-(4-(2-(метиламино)-2-оксоэтил)пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-(метил(2-(4-(2-(метиламино)-2-оксоэтил)пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-(N-метокси-N-метилсульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-морфолиноэтокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этокси)карбамоил)-3-метилфенил)амино)(фенил)метилен)-2оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-(метил(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-(N-(2-(диметиламино)этокси)сульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((3-метил-4-((2-морфолиноэтокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((3-метил-4-((2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((3-метил-4-(метил(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((3-(диметиламино)пропокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этокси)карбамоил)-3-фторфенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3 -(((4-(метокси( 1 -метилпиперидин-4-ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этокси)(метил)карбамоил)-3-метилфенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этил)(метокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (7)-метил-3-(((4-(5-метил-1,2,5-оксадиазепан-2-карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-(N-метил-N-(2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)сульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(диметиламино)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((3-(диметиламино)пропокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((3-метил-4-((2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((3-(диметиламино)пропокси)карбамоил)-3-метилфенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-(((1-метилпиперидин-4-ил)окси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((3-метил-4-(((1-метилпиперидин-4-ил)окси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((3-фтор-4-((2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    - 83 038796 (Z)-метил-3-(((3-фтор-4-((2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3 -(((4-(метокси( 1 -метилпиперидин-4-ил)карбамоил)-3 -метилфенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-(метокси(1-метилпиперидин-4-ил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-этилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-(1,2-оксазетидин-2-карбонил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6карбоксилата;
    (S,Z)-метил-3-(((4-((2-(3-(диметиламино)пирролидин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3 -(((4-((2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1 -ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-гидроксипиперидин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(1,1-диоксидотиоморфолино)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-2-оксо-3-(((4-((2-(3-оксопиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)индолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-цианопиперидин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-((2S,6R)-2,6-диметилпиперидин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-((2-гидроксиэтил)(метил)амино)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-(2-метоксиэтил)пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-(N-(2-(диметиламино)этокси)сульфамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-2-оксо-3-(фенил((4-((2-(пиперидин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)метилен)индолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-(диметиламино)пиперидин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (S,Z)-метил-3-(((4-((2-(3-(диметиламино)пирролидин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-метоксипиперидин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-2-оксо-3-(фенил((4-((3-(пиперидин-1-ил)пропокси)карбамоил)фенил)амино)метилен)индолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-гидроксипиперидин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((3-(4-метоксипиперидин-1-ил)пропокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-((2-гидроксиэтил)(метил)амино)этокси)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-(метил(2-(пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3 -(((4-((2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1 -ил)этокси)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-((1S,4S)-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан-2-ил)этокси)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(3,8-диазабицикло[3.2.1]октан-8-ил)этокси)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(3,8-диазабицикло[3.2.1]октан-3-ил)этокси)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (S,Z)-метил-5-метил-3-(((4-(метил(2-(3-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-цианопиперидин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    - 84 038796 (Z)-метил-5-метил-3-(((4-((3-(4-метилпиперазин-1-ил)пропокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (R,Z)-метил-5-метил-3-(((4-(метил(2-(3-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(3,6-диазабицикло[3.1.1]гептан-3-ил)этокси)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-2-оксо-3-(фенил((4-((2-((3R,5S)-3,4,5-триметилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)метилен)индолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-(этил(2-(пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата; и (Z)-метил-3-(((4-(изопропил(2-(пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (R,Z)-метил-5-метил-3-(((4-(метил(2-(3-метилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(3,6-диазабицикло[3.1.1]гептан-3-ил)этокси)(метил)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-2-оксо-3-(фенил((4-((2-((3R,5S)-3,4,5-триметилпиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)метилен)индолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-(этил(2-(пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5-метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-(изопропил(2-(пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-5метил-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    или их фармацевтически приемлемых солей.
  21. 21. Соединение по п.1, которое выбрано из (Z)-метил-5-метил-2-оксо-3-(((4-((2-(3-оксопиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)индолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-(метил(2-(4-(2-(метиламино)-2-оксоэтил)пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-3-(((4-((2-(4-(2-(метиламино)-2-оксоэтил)пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    (Z)-метил-5-метил-3-(((4-((2-(4-(2-(метиламино)-2-оксоэтил)пиперазин-1-ил)этокси)карбамоил)фенил)амино)(фенил)метилен)-2-оксоиндолин-6-карбоксилата;
    или их фармацевтически приемлемых солей.
  22. 22. Фармацевтическая композиция для лечения фиброзных заболеваний или интерстициальной легочной болезни, содержащая соединение по любому из пп.1-21 в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями.
  23. 23. Способ лечения фиброзного заболевания или интерстициального заболевания легкого, выбранного из идиопатического легочного фиброза (IPF), гигантоклеточной интерстициальной пневмонии, саркоидоза, кистозного фиброза, респираторного дистресс-синдрома, индуцированного лекарственным средством легочного фиброза, гранулематоза, силикоза, асбестоза, системной склеродермии, вызванного вирусом цирроза печени, выбранного из вызванного вирусом гепатита C цирроза печени, или заболеваний кожи с фиброзным компонентом, выбранных из склеродермии и системной красной волчанки, или заболеваний, характеризующихся гиперпролиферацией клеток, выбранных из злокачественной опухоли, или респираторных нарушений, выбранных из хронической обструктивной болезни легких (COPD), хронического бронхита и эмфиземы, астмы, астмы у детей, аллергического ринита, ринита и синусита, который включает введение субъекту эффективного количества соединения по любому из пп.1-21.
  24. 24. Способ по п.23, в котором заболевание представляет собой злокачественную опухоль легкого.
  25. 25. Способ лечения фиброзного заболевания, выбранного из легочного фиброза, ассоциированного с ревматоидным артритом, респираторным дистресс-синдромом, острым респираторным дистресссиндромом, острым повреждением легкого, вызванным облучением легочным фиброзом или пневмонитом, хроническим гиперчувствительным пневмонитом, системным склерозом, синдромом Шегрена, интерстициальными легочными заболеваниями и легочной артериальной гипертензией (PAH), или с заболеваниями кожи с фиброзным компонентом, выбранными из гипертрофированного рубцевания и келоидов, или с глазными заболеваниями, компонентом которых является фиброз, выбранными из глаукомы, возрастной дегенерации желтого пятна, диабетического отека желтого пятна, заболевания сухости глаз и диабетической ретинопатии; или с фиброзом в кишечнике, ассоциированным с воспалительным заболеванием кишечника, который включает введение субъекту эффективного количества соединения по любому из пп.1-21.
  26. 26. Соединение формулы (II)
    - 85 038796
    где R1 представляет собой Me, Et, CH=CH2, C-C-H или C-C-Me; и L представляет собой -O-C1-C4-алкил, или его соль.
  27. 27. Соединение формулы (VI)
    где R1 представляет собой Et, CH=CH2, C-C-Н или C-C-Me; или его соль.
  28. 28. Соединение формулы (VII)
    где R1 представляет собой Me, Et, CH=CH2, C-C-H или C-C-Me; или его соль.
  29. 29. Соединение формулы (IX)
    где R1 представляет собой Me, Et, CH=CH2, C-C-H или C-C-Me; и
    R2 представляет собой H, C1-С6алкил, С1-С6алкокси, С3-С8циклоалкил, -CH2-(C3-C8-циклоалкил), галоген или циано; или его соль.
  30. 30. Соединение формулы (XI)
    где R1 представляет собой Me, Et, CH=CH2, C-C-H или C-C-Me; и
    R2 представляет собой H, C1-C6-алкил, C1-C6-алкокси, C3-C8-циклоалкил, -CH2-(C3-C8-циклоалкил), галоген или циано;
    или его соль.
  31. 31. Соединение формулы (XIII)
    - 86 038796 где R1 представляет собой Me, Et, CH=CH2, C-C-Н или C-C-Me; и
    R2 представляет собой H, C1-C6-алкил, C1-C6-алкокси, C3-C8-циклоαлкил, -CH2-(C3-C8-циклоалкил), галоген или циано;
    или его соль.
  32. 32. Соединение формулы (XVI)
    где Z представляет собой CO или SO2; и
    R1 представляет собой Me, Et, CH=CH2, C-C-H или C-C-Me; и
    R2 представляет собой H, C1-C6-алкил, C1-C6-алкокси, C3-C8-циклоαлкил, -CH2-(C3-C8-циклоалкил), галоген или циано;
    или его соль.
  33. 33. Соединение формулы (XVII)
    и где Z представляет собой CO или SO2;
    R1 представляет собой Me, Et, CH=CH2, C-C-H или C-C-Me; и
    R2 представляет собой H, C1-C6-алкил, C1-C6-алкокси, C3-C8-циклоαлкил, -CH2-(C3-C8-циклоалкил), галоген или циано;
    или его соль.
  34. 34. Способ получения соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-21, который включает осуществление взаимодействия соединения формулы (II)
    где R1 определен в любом из пп.1-21;
    и L представляет собой O-C1-C4-алкил, или его соли; с соединением формулы (III)
    - 87 038796
    где R2, R3 и Z определены в любом из пп. 1-21; или его солью; и удаление защитной ацетильной группы путем добавления нуклеофила.
  35. 35. Способ получения соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-21, где Z представляет собой CO и R3 характеризуется формулой (i), который включает осуществление взаимодействия соединения формулы (IX)
    где R1 и R2 определены в любом из пп.1-21; или его соли;
    с соединением формулы (X)
    где R' представляет собой Y1-R5, как определено в любом из пп.1-21;
    R представляет собой X1-R4, как определено в любом из пп.1-21;
    или его солью; и удаление защитной ацетильной группы путем добавления нуклеофила.
  36. 36. Способ получения соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-21, где R3 характеризуется формулой (i) и Y1-R5 является таким, как определено в любом из пп.13 или 14, X1-R4 представляет собой Me, который включает осуществление взаимодействия соединения формулы (XVI)
    где Z представляет собой CO или SO2; R1 и R2 определены в любом из пп. 1-21; или его соли;
    с соединением формулы (XIV)
    где R8 и R9 определены в любом из пп.1-21 или NR8R9 представляет собой алифатический 4-8членный гетероциклил, содержащий один или несколько гетероатомов, выбранных из O, N и S, как определено в любом из пп.1-21;
    или его солью; и удаление защитной ацетильной группы путем добавления нуклеофила.
EA201891506A 2015-12-24 2016-12-23 Индолиноновые соединения и их применение в лечении фиброзных заболеваний EA038796B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15202764 2015-12-24
PCT/GB2016/054069 WO2017109513A1 (en) 2015-12-24 2016-12-23 Indolinones compounds and their use in the treatment of fibrotic diseases

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201891506A1 EA201891506A1 (ru) 2019-02-28
EA038796B1 true EA038796B1 (ru) 2021-10-20

Family

ID=55068868

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201891506A EA038796B1 (ru) 2015-12-24 2016-12-23 Индолиноновые соединения и их применение в лечении фиброзных заболеваний

Country Status (28)

Country Link
US (1) US11046672B2 (ru)
EP (2) EP3722291B1 (ru)
JP (1) JP7068172B2 (ru)
KR (1) KR20180128390A (ru)
CN (1) CN109302846B (ru)
AU (1) AU2016376011B2 (ru)
BR (1) BR112018013033A2 (ru)
CA (1) CA3009778A1 (ru)
CL (1) CL2018001742A1 (ru)
CO (1) CO2018007663A2 (ru)
DK (1) DK3722291T3 (ru)
EA (1) EA038796B1 (ru)
ES (2) ES2956820T3 (ru)
FI (1) FI3722291T3 (ru)
HR (1) HRP20230833T1 (ru)
HU (1) HUE062784T2 (ru)
IL (1) IL260221A (ru)
LT (1) LT3722291T (ru)
MX (1) MX2018007852A (ru)
MY (1) MY195904A (ru)
PH (1) PH12018501575A1 (ru)
PL (1) PL3722291T3 (ru)
PT (1) PT3722291T (ru)
RS (1) RS64703B1 (ru)
SG (1) SG11201805423TA (ru)
SI (1) SI3722291T1 (ru)
WO (1) WO2017109513A1 (ru)
ZA (1) ZA201804950B (ru)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10604492B2 (en) 2015-12-24 2020-03-31 The Regents Of The Universtiy Of California CFTR regulators and methods of use thereof
EP3426649B1 (en) 2016-03-08 2020-07-22 Respivert Limited Indole derivatives and their use as protein kinase inhibitors
CN111629730A (zh) 2017-08-24 2020-09-04 加利福尼亚大学董事会 眼部药物组合物
CN109678810B (zh) * 2019-01-23 2022-10-28 南京工业大学 一种1,2-氧氮杂环丁烷类化合物及其制备方法与应用
CA3159601A1 (en) * 2019-11-20 2021-05-27 Angion Biomedica Corp. Methods for treating inflammatory bowel disease
CN111789842B (zh) * 2020-08-07 2021-09-21 南开大学 尼达尼布在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用
CN113200936B (zh) * 2021-05-19 2022-10-21 南京工业大学 10-甲基吩噁嗪衍生物、其锆金属有机框架材料及制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006067168A1 (en) * 2004-12-24 2006-06-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Medicaments for the treatment or prevention of fibrotic diseases

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA75054C2 (ru) 1999-10-13 2006-03-15 Бьорінгер Інгельхайм Фарма Гмбх & Ко. Кг Замещенные в положении 6 индолиноны, их получение и их применение как лекарственного средства
DE10117204A1 (de) * 2001-04-06 2002-10-10 Boehringer Ingelheim Pharma In 6-Stellung substituierte Indolinone, ihre Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
JP2004182726A (ja) 2002-11-22 2004-07-02 Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd ２−オキソインドリン誘導体
PE20060777A1 (es) 2004-12-24 2006-10-06 Boehringer Ingelheim Int Derivados de indolinona para el tratamiento o la prevencion de enfermedades fibroticas
EP1902025A1 (en) 2005-07-13 2008-03-26 Allergan, Inc. Kinase inhibitors
US8344018B2 (en) 2008-07-14 2013-01-01 Gilead Sciences, Inc. Oxindolyl inhibitor compounds
EP3426649B1 (en) 2016-03-08 2020-07-22 Respivert Limited Indole derivatives and their use as protein kinase inhibitors

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006067168A1 (en) * 2004-12-24 2006-06-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Medicaments for the treatment or prevention of fibrotic diseases

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GERALD J. ROTH, ARMIN HECKEL, TRIXI BRANDL, MATTHIAS GRAUERT, STEFAN HOERER, JOERG T. KLEY, GISELA SCHNAPP, PATRICK BAUM, DETLEV M: "Design, Synthesis, and Evaluation of Indolinones as Inhibitors of the Transforming Growth Factor β Receptor I (TGFβRI)", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 53, no. 20, 28 October 2010 (2010-10-28), pages 7287 - 7295, XP055079035, ISSN: 00222623, DOI: 10.1021/jm100812a *
ROTH GERALD J ET AL: "Design, Synthesis, and Evaluation of Indolinones as Triple Angiokinase Inhibitors and the Discovery of a Highly Specific 6-Methoxycarbonyl-Substituted Indolinone (BIBF 1120)", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 52, no. 14, 1 July 2009 (2009-07-01), US , pages 4466 - 4480, XP002582395, ISSN: 0022-2623, DOI: 10.1021/JM900431G *

Also Published As

Publication number Publication date
IL260221A (en) 2018-07-31
SG11201805423TA (en) 2018-07-30
MY195904A (en) 2023-02-27
HUE062784T2 (hu) 2023-12-28
CO2018007663A2 (es) 2018-10-10
EP3722291A1 (en) 2020-10-14
EP3722291B1 (en) 2023-07-19
EP3394048A1 (en) 2018-10-31
WO2017109513A1 (en) 2017-06-29
CL2018001742A1 (es) 2018-11-23
JP2019501910A (ja) 2019-01-24
CN109302846A (zh) 2019-02-01
ES2796358T3 (es) 2020-11-26
JP7068172B2 (ja) 2022-05-16
HRP20230833T1 (hr) 2023-11-10
SI3722291T1 (sl) 2023-10-30
LT3722291T (lt) 2023-12-11
MX2018007852A (es) 2018-11-09
CN109302846B (zh) 2021-05-11
AU2016376011A1 (en) 2018-08-09
ZA201804950B (en) 2020-11-25
RS64703B1 (sr) 2023-11-30
DK3722291T3 (da) 2023-09-18
BR112018013033A2 (pt) 2018-12-04
EA201891506A1 (ru) 2019-02-28
PL3722291T3 (pl) 2023-11-27
US20190337929A1 (en) 2019-11-07
PH12018501575A1 (en) 2019-04-15
KR20180128390A (ko) 2018-12-03
US11046672B2 (en) 2021-06-29
FI3722291T3 (fi) 2023-09-05
AU2016376011B2 (en) 2021-02-11
CA3009778A1 (en) 2017-06-29
PT3722291T (pt) 2023-09-22
ES2956820T3 (es) 2023-12-28
EP3394048B1 (en) 2020-03-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA038796B1 (ru) Индолиноновые соединения и их применение в лечении фиброзных заболеваний
KR102083857B1 (ko) 신규 치환된 인다졸, 그의 제조 방법, 상기 신규 치환된 인다졸을 함유하는 제약 제제, 및 약물을 제조하기 위한 상기 신규 치환된 인다졸의 용도
KR101959194B1 (ko) 신규한 피페리디노-디하이드로티에노피리미딘 설폭사이드 및 ｃｏｐｄ 및 천식을 치료하기 위한 이들의 용도
US11208381B2 (en) Indole derivatives and their use as protein kinase inhibitors
ES2448567T3 (es) Derivados de la tienotriazoldiazepina activos en apo A
ES2360933T3 (es) Derivados de heteroarilo condensados.
TWI421077B (zh) 經取代哌啶－二氫噻吩并嘧啶
JP2005089334A (ja) ８−ヒドロキシアデニン化合物
KR20180088462A (ko) 수면-관련 호흡기 장애의 치료를 위한 TASK-1 및 TASK-2 채널의 차단제로서의 2-페닐-3-(피페라지노메틸)이미다조[1,2-a]피리딘 유도체
PT1427730E (pt) Novas di-hidropteridinonas, processo para sua preparação e sua utilização como medicamento
BRPI0908417A2 (pt) composto, pró-droga, agente farmacêutico, método para inibir smo e para a profilacia ou tratamento de câncer em um mamídero, e, uso do composto
TW200948791A (en) Inhibitors of the chemokine receptor CxCR3
KR20170091154A (ko) 섬유증의 소분자 억제제
EP4072670B1 (en) Quinazoline derivatives as lpa receptor 2 inhibitors
US20110039848A1 (en) Five-membered ring compound
ES2371450T3 (es) Dihidropirimidinas heterocíclicas como inhibidores de los canales de potasio.