EA033751B1 - Композиция масла семян коикса, способ ее получения и применение - Google Patents

Композиция масла семян коикса, способ ее получения и применение Download PDF

Info

Publication number
EA033751B1
EA033751B1 EA201790116A EA201790116A EA033751B1 EA 033751 B1 EA033751 B1 EA 033751B1 EA 201790116 A EA201790116 A EA 201790116A EA 201790116 A EA201790116 A EA 201790116A EA 033751 B1 EA033751 B1 EA 033751B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
injection
oil
linolein
coix seed
seed oil
Prior art date
Application number
EA201790116A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201790116A1 (ru
Inventor
Dapeng Li
Original Assignee
Zhejiang Kanglaite Group Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from CN201410342342.1A external-priority patent/CN105267776B/zh
Application filed by Zhejiang Kanglaite Group Co Ltd filed Critical Zhejiang Kanglaite Group Co Ltd
Publication of EA201790116A1 publication Critical patent/EA201790116A1/ru
Publication of EA033751B1 publication Critical patent/EA033751B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/23—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms
    • A61K31/231—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms having one or two double bonds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/23—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms
    • A61K31/232—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms having three or more double bonds, e.g. etretinate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/899—Poaceae or Gramineae (Grass family), e.g. bamboo, corn or sugar cane
    • A61K36/8994—Coix (Job's tears)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/54—Improvements relating to the production of bulk chemicals using solvents, e.g. supercritical solvents or ionic liquids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Fats And Perfumes (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение предусматривает композицию масла семян коикса, имеющую противоопухолевую и противовоспалительную активности, содержащую 5 диглицеридных и 8 триглицеридных ингредиентов, массовое процентное содержание которых составляет 0,40-0,58% 1,3-диолеина, 0,91-1,31% 1-линолеин-3-олеина, 0,24-0,35% 1,2-диолеина, 0,66-0,95% 1-олеин-2-линолеина, 0,33-0,47% 1,2-дилинолеина, 4,87-6,99% трилинолеина, 13,00-18,69% 1-олеин-2,3-дилинолеина, 5,25-7,54% 1-пальмитин-2,3-дилилолеина, 13,23-19,02% 1,3-диолеин-2-линолеина, 10,26-14,75% 1-пальмитин-2-линолеин-3-олеина, 2,28-3,28% 1,3-дипальмитин-2-линолеина, 14,44-20,76% триолеина и 8,06-11,58% 1-пальмитин-2,3-диолеина. Изобретение также предусматривает способ получения предложенной композиции масла семян коикса и ее применение для изготовления противоопухолевого лекарственного средства для лечения злокачественного новообразования, выбранного из рака легкого, рака печени, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака яичника, рака молочной железы, саркоматоидной карциномы или злокачественной саркомы, в ранней, средней или поздней стадии.

Description

Область изобретения
Настоящее изобретение относится к области фармацевтики, в частности настоящее изобретение относится к композиции масла семян коикса, ее фармацевтическим препаратам, способу их получения и их применению в лечении опухолей.
Область техники
Семена коикса представляют собой высушенные спелые семена Coix lacryma-jobi L. var ma-yuen (Roman.), Stapf, рода растений семейства злаковых. Это мочегонное лекарственное средство, которое использовалось в качестве лекарства и в качестве съедобного растения на протяжении долгого времени. Современные исследования показали, что для семян коикса характерно множество фармакологических эффектов, таких как анальгетический противовоспалительный, иммуномодулирующий, противоязвенный, гиполипидемический эффект и эффект против ожирения. В последние несколько лет исследователи во всем мире изучали химический состав семян коикса с использованием ТСХ, ВЭЖХ-МС, ГХ и т.д. и обнаружили в нем множество активных ингредиентов, включая коиксенолид, триглицериды, жирные кислоты, лактамы, коикс лактоны, сахариды, стеролы и тритерпеноиды. Среди них первыми обнаруженными компонентами, обладающими противоопухолевыми активностями и наиболее изученным химическим составом, привлекающими больше всего внимания, являются сложные эфиры. Инъекция Канглайта, в которой активный ингредиент представляет собой композицию масла семян коикса, широко используется в клинических применениях в настоящее время в Китае, однако композиция масла семян коикса, используемая в инъекции Канглайта, содержит сложные компоненты. В дополнение к триглицеридам она также содержит моноглицериды, диглицериды и эфиры жирных кислот и т.д. Это неизбежно будет являться серьезной проблемой с точки зрения контроля качества в практическом производственном процессе и безопасности в клинических применениях.
В настоящем изобретении сырьевой материал порошка семян коикса подвергали сверхкритической экстракции диоксидом углерода, базификации, очистке нейтральным оксидом алюминия и очистке каолином и т.д. для получения эффективной части - композиции масла семян коикса. После выделения и идентификации активных ингредиентов было установлено, что композиция масла семян коикса содержит, главным образом, 8 триглицеридных компонентов и 5 диглицеридных компонентов.
Дальнейшее определение физико-химических констант позволило установить оптимальное кислотное число, йодное число, число омыления, показатель преломления и удельный вес и т.д. Использование композиции масла семян коикса согласно изобретению в лекарственных средствах имеет такие преимущества, как подтвержденный состав ингредиентов, обеспечивающий стабильность качества каждой партии в условиях промышленного производства.
Краткое описание изобретения
Один аспект настоящего изобретения предусматривает композицию масла семян коикса, имеющую противоопухолевую и противовоспалительную активности, содержащую 5 диглицеридных и 8 триглицеридных ингредиентов, массовое процентное содержание которых составляет 0,40-0,58% 1,3-диолеина, 0,91-1,31% 1-линолеин-3-олеина, 0,24-0,35% 1,2-диолеина, 0,66-0,95% 1-олеин-2-линолеина, 0,33-0,47%
1.2- дилинолеина, 4,87-6,99% трилинолеина, 13,00-18,69% 1-олеин-2,3-дилинолеина, 5,25-7,54% 1пальмитин-2,3-дилилолеина, 13,23-19,02% 1,3-диолеин-2-линолеина, 10,26-14,75% 1-пальмитин-2линолеин-3-олеина, 2,28-3,28% 1,3-дипальмитин-2-линолеина, 14,44-20,76% триолеина и 8,06-11,58% 1пальмитин-2,3-диолеина.
Согласно изобретению противоопухолевая активность представляет собой активность для лечения гиперплазии предстательной железы.
Согласно изобретению предложенная композиция масла семян коикса имеет следующие физикохимические константы, основанные на обнаружении жирного масла: удельный вес при 20°С составляет 0,916-0,920, показатель преломления при 20°С - 1,471-1,474, кислотное число - менее 0,2, йодное число 100-106, число омыления - 186-195; где массовое процентное содержание дигрицеридных и триглицеридных ингредиентов составляет 0,45-0,55% 1,3-диолеина, 1,03-1,25% 1-линолеин-3-олеина, 0,27-0,33%
1.2- диолеина, 0,75-0,91% 1-олеин-2-линолеина, 0,37-0,45% 1,2-дилинолеина, 5,47-6,69% трилинолеина, 14,63-17,88% 1-олеин-2,3-дилилолеина, 5,90-7,21% 1-пальмитин-2,3-дилинолеина, 14,88-18,19% 1,3диолеин-2-линолеина, 11,55-14,11% 1-пальмитин-2-линолеин-3-олеина, 2,57-3,14% 1,3-дипальмитин-2линолеина, 16,25-19,86% триолеина и 9,07-11,08% 1-пальмитин-2,3-диолеина.
Согласно изобретению массовое процентное содержание дигрицеридных и триглицеридных ингредиентов составляет 0,49-0,51% 1,3-диолеина, 1,12-1,16% 1-линолеин-3-олеина, 0,29-0,31% 1,2-диолеина, 0,81-0,85% 1-олеин-2-линолеина, 0,40-0,42% 1,2-дилинолеина, 5,96-6,20% трилинолеина, 15,93-16,58% 1олеин-2,3-дилилолеина, 6,43-6,69% 1-пальмитин-2,3-дилинолеина, 16,20-16,87% 1,3-диолеин-2линолеина, 12,57-13,09% 1-пальмитин-2-линолеин-3-олеина, 2,79-2,91% 1,3-дипальмитин-2-линолеина, 17,69-18,42% триолеина и 9,87-10,27% 1-пальмитин-2,3-диолеина.
Другой аспект настоящего изобретения предусматривает способ получения композиции масла семян коикса, включающий следующие стадии:
(1) сверхкритическая экстракция диоксидом углерода:
a) измельчение семян коикса в порошок с размером частиц 10-80 меш и помещение порошка в два
- 1 033751
600-л экстрактора;
b) нагревание подогревателя CO2, экстрактора и разделительной колонки горячей водой, циркулирующей в рубашке, для достижения температуры экстракции и температуры разделения 33-45°С и 3045°С соответственно; и поддержание температуры на выходе сепаратора I и сепаратора II на уровне 2050°С и 15-35°С соответственно;
c) подача под давлением жидкого CO2 при расходе 1-3 т/ч в подогреватель CO2 через насос высокого давления, превращая его в флюид в сверхкритическом состоянии;
d) экстракция масла флюидом CO2 в экстракторе под давлением 19-23 МПа;
e) подача флюида CO2 с этим маслом в разделительную колонку, в которой давление поддерживают на уровне 7-10 МПа для отделения этого масла;
f) подача газообразного CO2 из разделительной колонки последовательно в сепаратор I и сепаратор II, в которых давление поддерживают на уровне 5-7 и 4-6 МПа соответственно; удаление отделившихся примесей, таких как вода;
g) превращение газообразного CO2 посредством конденсатора в жидкий CO2 для повторного использования; и
h) непрерывная экстракция в течение 2-3 ч для получения неочищенного масла коикса; и (2) процесс очистки:
a) добавление 60%-го петролейного эфира (температура кипения 60-90°С) относительно массы масла в неочищенное масло семян коикса, полученное сверхкритической экстракцией CO2, и добавление 2%-ного водного раствора NaOH в количестве от 36 до 56% относительно массы масла в соответствии с кислотным числом; после перемешивания смеси в течение 10 мин и выдерживания в течение 18-24 ч удаление нижнего грязного слоя;
b) промывание верхнего слоя очищенной водой и выдерживание в течение 18-24 ч затем удаление нижнего слоя отработанной воды;
c) повторное промывание верхнего слоя очищенной водой; выдерживание в течение еще 40-50 ч, затем удаление нижнего слоя отработанной воды;
d) деэмульгирование верхнего слоя ацетоном в количестве 70-90% относительно массы масла; выдерживание в течение 2-4 ч, затем удаление нижнего слоя отработанного ацетона;
e) добавление от 3 до 8% активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы неочищенного масла в верхнем масляном слое, перемешивание смеси в течение 30 мин, затем фильтрование осадка;
f) нагревание фильтрата и добавление от 2 до 6% активированного каолина относительно массы неочищенного масла; перемешивание смеси в течение 30 мин при 40-50°С и последующее фильтрование осадка;
g) концентрирование фильтрата при пониженном давлении для удаления растворителя и промывание концентрата очищенной водой; после выдерживания в течение 1-2 ч удаление нижнего слоя отработанной воды, нагревание верхнего масляного слоя и его вакуумная сушка в атмосфере азота;
h) добавление 8-12%-го активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы неочищенного масла, перемешивание смеси и поддержание в холодном состоянии; после фильтрования концентрирование отфильтрованного масла путем нагревания в вакууме в атмосфере азота;
i) стерилизация масла путем стерилизации сухим теплом в вакууме при 160-170°С в течение 1-2 ч; после охлаждения фильтрование масла через 0,2-мкм микропористую мембрану; затем раздельная загрузка полученного масла семян коикса в 500-мл стеклянные инфузионные флаконы, обработка азотом и герметизация флаконов.
Согласно изобретению процесс очистки включает следующие стадии:
a) добавление 60%-го петролейного эфира (температура кипения 60-90°С) относительно массы масла в неочищенное масло семян коикса, полученное сверхкритической экстракцией CO2, и добавление 2%-го водного раствора NaOH в количестве от 36 до 56% относительно массы масла в соответствии с кислотным числом; после перемешивания смеси в течение 10 мин и выдерживания в течение 20 ч - удаление нижнего грязного слоя;
b) промывание верхнего слоя очищенной водой, выдерживание в течение 22 ч, затем удаление нижнего слоя отработанной воды;
c) повторное промывание верхнего слоя очищенной водой, выдерживание в течение еще 46 ч, затем удаление нижнего слоя отработанной воды;
d) деэмульгирование верхнего слоя ацетоном в количестве 70-90% относительно массы неочищенного масла и выдерживание в течение 3 ч; затем удаление нижнего слоя отработанного ацетона;
e) добавление 5%-го активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы неочищенного масла в верхний масляный слой, перемешивание смеси в течение 30 мин, затем фильтрование осадка;
f) нагревание фильтрата и добавление 4%-го активированного каолина относительно массы неочищенного масла, перемешивание смеси в течение 30 мин при 40-50°С и последующее фильтрование осадка;
- 2 033751
g) концентрирование фильтрата при пониженном давлении для удаления растворителя и промывание концентрата очищенной водой; после выдерживания в течение 1 ч - удаление нижнего слоя отработанной воды и нагревание верхнего масляного слоя и его вакуумная сушка в атмосфере азота;
h) добавление 8-12%-го активированного нейтрального оксида алюминия, перемешивание смеси и поддержание в холодном состоянии - концентрирование отфильтрованного масла путем нагревания в вакууме в атмосфере азота;
i) стерилизация масла путем сухого нагревания в вакууме при 160-170°С в течение 2 ч; после охлаждения - фильтрование масла через 0,2-мкм микропористую мембрану; затем раздельная загрузка полученного масла семян коикса в 500-мл стеклянные инфузионные флаконы, обработка азотом и герметизация флаконов.
Другой аспект настоящего изобретения предусматривает фармацевтический препарат, содержащий терапевтически эффективное количество предложенной композиции масла семян коикса и один или более фармацевтически приемлемых носителей, выбранных из фармацевтических разбавителей, эксципиентов, наполнителей, эмульгаторов, связующих веществ, смазывающих веществ, ускорителей абсорбции, поверхностно-активных веществ, разрыхлителей, смазывающих веществ, антиоксидантов, ароматизаторов, подсластителей, консервантов и красителей.
Согласно изобретению фармацевтически приемлемые носители выбирают из одного или более из группы, состоящей из маннита, сорбита, метабисульфита натрия, бисульфита натрия, тиосульфата натрия, цистеина гидрохлорида, тиогликолевой кислоты, метионина, соевого лецитина, витамина C, витамина E, динатриевой ЭДТА, кальций натриевой ЭДТА, карбоната одновалентного щелочного металла, ацетата, фосфата или его водного раствора, соляной кислоты, уксусной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, аминокислот, хлорида натрия, хлорида калия, лактата натрия, раствора этилпарабена, бензойной кислоты, сорбата калия, хлоргексидина ацетата, ксилита, мальтозы, глюкозы, фруктозы, декстрана, глицина, крахмала, сахарозы, лактозы, маннита, кремневых, целлюлозы, альгинатов, желатина, поливинилпирролидона, глицерина, Твин 80, агар-агара, карбоната кальция, бикарбоната кальция, поверхностно-активного вещества, полиэтиленгликоля, циклодекстрина, Р-циклодекстрина, фосфолипидного материала, каолина, талька и стеарата кальция или стеарата магния.
Согласно изобретению предложенный фармацевтический препарат представляет собой пероральный твердый препарат, выбранный из любого из капсул, таблеток, микропилюль, гранул и концентрированных пилюль; пероральный жидкий препарат, выбранный из любого из водных или масляных суспензий, растворов, эмульсий, сиропов или эликсиров, и жидкий препарат может быть в сухой форме, и восстановлен водой или другим подходящим носителем перед применением; или инъекцию, выбранную из любой из наносуспензий, липосом, эмульсий, лиофилизированного порошка для инъекций и водной инъекции.
Согласно изобретению инъекция содержит следующие компоненты:
Композиция масла семян коикса 50-350 г
Соевый лецитин для инъекции 10-40 г
или соевый лецитин, пригодный для инъекции
Глицерин для инъекции или 15-50 г
глицерин, пригодный для инъекции
Воду для инъекции добавляют до 1000 мл.
Другой аспект настоящего изобретения предусматривает способ получения фармацевтического препарата, изготовленного в форме инъекции, включающий следующие стадии:
добавление соответствующего количества воды для инъекции к рецептурному количеству соевого лецитина для инъекции или соевого лецитина, пригодного для инъекции; диспергирование смеси диспергирующим эмульгатором с высоким усилием сдвига с получением дисперсии без крупных гранул; добавление рецептурного количества глицерина для инъекции или глицерина, пригодного для инъекции; затем добавление воды для инъекции до указанного количества и перемешивание смеси с получением водной фазы;
взвешивание рецептурного количества композиции масла семян коикса; раздельное нагревание навески масла и водной фазы до 60-70°С, затем их смешивание и эмульгирование смеси в гомогенизаторе высокого давления, в котором низкое давление составляет 5-12 МПа, а высокое давление составляет 2550 МПа; повторение цикла гомогенизации 3-6 раз до тех пор, пока количество частиц размером менее 2 мкм будет составлять не менее чем 95%, а частицы размером более 5 мкм не будут обнаруживаться; и фильтрование полученной гомогенной эмульсии под давлением азота через микропористый фильтр 3 мкм или менее; обработка эмульсии азотом, стерилизация и охлаждение с получением инъекции.
Согласно изобретению капсула содержит следующие компоненты:
200-800 г
0,20-0,60 г
1000 капсул.
Композиция масла семян коикса
Антиоксидант (-ы) и/или эмульгатор (-ы) для получения
- 3 033751
Другой аспект настоящего изобретения предусматривает способ получения предложенного фармацевтического препарата, изготовленного в форме капсулы, включающий следующие стадии:
получение раствора клея: взвешивание желатина, очищенной воды, глицерина и консерванта в массовом соотношении 1:(0,6-1,2):(0,3-0,8):(0,0001-0,01); последовательное добавление глицерина, очищенной воды и консерванта в резервуар для плавления клея; нагревание до 70-90°С; затем добавление желатина и постоянное перемешивание смеси в вакууме до полного растворения желатина; фильтрация раствора клея и хранение отфильтрованного раствора клея при 56-62°С перед использованием;
получение лекарственной жидкости: добавление рецептурного количества композиции масла семян коикса, антиоксиданта(-ов) и/или эмульгатора(-ов) в дозатор и постоянное перемешивание смеси до достижения гомогенности; и прессование капсул: выбор подходящих пресс-форм в зависимости от размера капсулы; прессование капсул при температуре 15-30°С и относительной влажности менее 35%; сушка прессованных и формованных капсул; после удаления капсул неподходящего размера - промывание капсул нормального размера 95% медицинским этанолом и непрерывная сушка до достижения содержания влаги менее 12%; визуальный контроль и удаление неподходящих капсул; затем нанесение печати и упаковка с получением фармацевтического препарата; где консервант выбирают из любого из 10%-го раствора этилпарабена, бензойной кислоты, сорбата калия и хлоргексидина ацетата;
антиоксидант представляет собой витамин E; и эмульгатор представляет собой Твин 80.
Другой аспект настоящего изобретения предусматривает применение предложенной композиции масла семян коикса для изготовления противоопухолевого лекарственного средства для лечения злокачественного новообразования, выбранного из рака легкого, рака печени, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака яичника, рака молочной железы, саркоматоидной карциномы или злокачественной саркомы, в ранней, средней или поздней стадии.
Согласно изобретению противоопухолевое лекарственное средство используют для лечения простатита или простатической гиперплазии.
Согласно изобретению противоопухолевое лекарственное средство применяют в комбинации с химиотерапевтическим лекарственным средством, выбранным из одного или более из цисплатины, карбоплатины, циклофосфамида, гемцитабина гидрохлорида, митоксантрона, митомицина, лейпрорелина ацетата, доцетакселя и/или паклитакселя.
Другой аспект настоящего изобретения предусматривает применение предложенной композиции масла семян коикса для изготовления противовоспалительных лекарственных средств.
Следующие экспериментальные данные приведены для иллюстрации благоприятных противоопухолевых или противовоспалительных эффектов композиции масла семян коикса согласно изобретению и ее фармацевтических препаратов.
1. Ингибирование композицией масла семян коикса и ее препаратами 8 линий опухолевых клеток человека в МТТ методе in vitro.
А. Материалы эксперимента и их подготовка.
(1) Линии клеток: PANC-1 (панкреатические раковые клетки человека), SKOV3 (раковые клетки яичника человека), MCF-7 (раковые клетки молочной железы человека), Bcap-37 (раковые клетки молочной железы человека), SMMC-7721 (раковые клетки печени человека), HepG-2 (раковые клетки печени человека), A549 (раковые клетки легкого человека) и H460 (раковые клетки легкого человека), хранящиеся и пассированные в научно-исследовательском фармакологическом центре Шанхайского института фармацевтической промышленности;
(2) полная DMEM среда (среда Игла в модификации Дульбекко), поставляемая с 10%-й сывороткой новорожденного теленка (GIBCO BRL), 1% пенициллина (100 ед./мл) плюс стрептомицина (100 мкг/мл);
(3) 0,25%-й раствор трипсина, приобретенный у Invitrogen Corp. и хранящийся при -20°С;
(4) фосфатный буфер (PBS): 8 г NaCl, 0,2 г KCl, 1,15 г Na2HPO4 и 0,2 г KH2PO4, растворенные в 1 л дважды дистиллированной воды и стерилизованные в автоклаве при 121°С в течение 20 мин, а затем хранящиеся при 4°С;
(5) раствор МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолий бромид) (AMRESCO): 5 мг/мл в PBS;
(6) раствор для растворения кристаллов формазана: 10 г SDS (додецилсульфат натрия), 5 мл изобутанола и 0,1 мл концентрированной соляной кислоты, растворенные в 100 мл деионизированной дважды дистиллированной воды.
Б. Экспериментальный метод.
Эффекты ингибирования образцов в отношении вышеуказанных линий клеток определяли с помощью метода МТТ. Конкретные процедуры были следующими:
1) Культура клеток: (а) хранящиеся клетки вынимали из жидкого азота, быстро размораживали на водяной бане при 37°С и в стерильных условиях переносили в 6 мл клеточной среды в 10 мл центрифужную пробирку, которую центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин. Супернатант удаляли, за- 4 033751 тем осажденные клетки ресуспендировали в 5-6 мл клеточных сред путем пипетирования и переносили в колбу в инкубаторе при 37°С для клеточной культуры; (б) на следующие сутки колбу вынимали из инкубатора, и отработанную среду удаляли, затем клетки инкубировали в 5-6 мл свежей среды в инкубаторе при 37°С; (в) на третьи сутки колбу вынимали из инкубатора, и отработанную среду удаляли, затем в колбу добавляли 2-3 мл PBS (pH7,4) при взбалтывании для очистки, и отработанный PBS удаляли. Такую стадию клеточной очистки повторяли еще раз. В колбу добавляли 3-5 капель 0,25%-го раствора трипсина при взбалтывании, тем самым хорошо их распределяя. Колбу закрывали и помещали в инкубатор при 37°С на приблизительно 3 мин и под микроскопом наблюдали отделение клеток от стенок колбы. Добавляли 2 мл клеточной среды, и клетки полностью отделяли от стенок колбы пипетированием, затем клеточную суспензию переносили в 2 отдельные чистые колбы, каждая из которых содержала 5-6 мл среды. Клеточную суспензию распределяли с помощью пипетирования, затем колбу помещали в инкубатор при 37°С, (г) стадию (в) повторяли каждый следующий день. В ходе всего процесса культивирования прилипающим клеткам не позволяли расти слишком густо, и суспензионные клетки всегда поддерживали в логарифмической стадии роста.
(2) Приготовление образца и контроля: надлежащее количество образца композиции масла семян коикса (масло семян слез Иова) растворяли в ДМСО с получением раствора концентрации 10 мг/мл. Этот раствор разбавляли в градиентном разбавлении PBS для получения набора растворов образцов в концентрациях 10 мг/мл, 5000, 2500, 1250, 625 и 312,5 мкг/мл соответственно.
(3) Каждый разбавленный раствор образца добавляли в дублированные лунки 96-луночного плоскодонного микропланшета (10 мкл/лунку). Соответствующим образом разбавленные растворы ДМСО в качестве контролей добавляли в лунки микропланшета.
(4) Клетки в логарифмической стадии роста трипсинизировали и промывали, затем ресуспендировали в среде, содержащей 10%-ную телячью сыворотку. Количество живых клеток подсчитывали методом исключения красителя трипанового синего, и суспензии клеток доводили до плотности 2х105 клеток/мл.
(5) Клеточный 96-луночный плоскодонный микропланшет помещали в инкубатор при 37°С, и клетки инкубировали в условиях 5% CO2 в течение 48 ч.
(6) 20 мкл 5 мг/мл раствора МТТ добавляли в каждую лунку, и клетки непрерывно инкубировали в инкубаторе в течение 3-4 ч.
(7) В каждую лунку добавляли 100 мкл раствора для растворения кристаллов, и клетки непрерывно инкубировали в инкубаторе в течение ночи для растворения образующихся кристаллов формазана в достаточной степени. Затем значение оптической плотности измеряли при 570 нм для каждой лунки.
(8) На основании значений оптической плотности были рассчитаны степени ингибирования роста клеток для групп образцов различных концентраций. Формула расчета была следующей:
(1-средняя оптическая плотность экспериментальных лунок/средняя оптическая плотность контрольных лунок)х100%
В. Результаты экспериментов.
Таблица 1
Степени ингибирования образцов различных концентраций в , отношении роста клеток 8 линий клеток (%)
Линия клеток Концентрация образца
1000 мкг/мл 500 мкг/мл 250 мкг/мл 125 мкг/мл 62,5 мкг/мл 31,25 мкг/мл
PANC-1 98,77 73,83 26,24 18,93 15,96 2,95
SKOV3 98,85 59,52 26,70 16,43 3,43 1,31
MCF-7 98,47 65,68 23,29 11,85 7,02 0,42
Всар-37 99,63 73,03 36,34 17,34 2,29 1,40
SMMC-7721 98,54 70,73 39,44 22,37 14,70 3,12
HepG-2 98,47 65,35 38,30 26,22 16,02 1,07
А549 99,02 74,97 56,85 42,61 22,00 1,48
Н460 97,16 73,47 56,36 44,13 18,45 7,14
Таблица 2
Значения IC5o образцов для 8 линий клеток in vitro (мкг/мл)
Образец Линия клет’оК>-^_ Масло семян коикса Положительный контроль (таксол)
PANC-1 213,1 0,44
SKOV3 262,8 0,22
MCF-7 275,5 0,18
Всар-37 220,7 0,28
SMMC-7721 205,9 0,41
HepG-2 222,5 0,45
А549 173,2 0,46
Н460 166,9 0,49
- 5 033751
Г. Заключение.
Композиция масла семян коикса согласно изобретению в различных концентрациях обладает ингибирующим эффектом различной степени в отношении 8 линий опухолевых клеток человека.
2. Степень ингибирования инъекции согласно изобретению в отношении роста рака легкого человека A549, пересаженного голым мышам.
A. Материалы эксперимента.
Инъекция согласно изобретению (10 г/100 мл), цисплатин (Qilu Pharmaceutical Co., Ltd), пустая жировая эмульсия и физиологический раствор.
Б. Экспериментальный метод.
Клетки рака легкого человека A549, криоконсервированные в жидком азоте, восстанавливали и инкубировали при 37°С в условиях 5% CO2. После субкультивирования клетки в логарифмической стадии роста смешивали с физиологическим раствором для получения клеточной суспензии в концентрации 12х107 клеток/мл. Клеточную суспензию инокулировали голым мышам линии BALB/C (класс свободных от специфической патогенной микрофлоры, 18-20 г, возраст 6 недель, самцы) подкожно в правую подмышечную область. Опухолевые ткани в стерильных условиях брали из 2-го поколения модели ксенотрансплантата рака легкого человека A549 в стадии интенсивного роста и резали на маленькие однородные фрагменты размером 1-2 мм3. Правую подмышечную область каждой голой мыши инокулировали подкожно одним фрагментом с помощью троакара. Когда инокулированная опухоль прощупывалась, мышей в случайном порядке группировали и вводили в эксперимент в соответствии с программой эксперимента. Корм, наполнитель, клетки и оборудование и т.д. стерилизовали автоклавом перед использованием. Голых мышей кормили в стойке ламинарного потока. Размеры опухолей и массу животных наблюдали и оценивали динамически. Мышей в каждой группе умерщвляли через 3 недели или около того, и опухоли удаляли хирургическим путем и взвешивали. Степень ингибирования опухоли рассчитывали согласно следующей формуле:
Степень ингибирования %=[(средняя масса опухоли в контрольной группе-средняя масса опухоли в группе, получающей лечение)/средняя масса опухоли в контрольной группе] х 100%;
Значение Q противоопухолевого эффекта комбинации лекарственных средств рассчитывали согласно формуле Джина
Q = Еа+ь/(Еа+ Еь- ЕахЕь) где Ea+b представляет собой степень ингибирования опухоли комбинацией лекарственных средств, Ea или Eb представляет собой степень ингибирования опухоли лекарственным средством A или B соответственно. Если значение Q составляло 0,85-1,15, проявлялся аддитивный эффект (+), если значение Q составляло более 1,15, проявлялся синергический эффект (++).
B. Результаты эксперимента.
Таблица 3
Эффективность противоопухолевой терапии в отношении ксенотрансплантатной модели рака легкого человека A549, подкожно инокулированной голым мышам
Группа образца Доза Режим дозирования Число животных начало/кон ец Масса животны х(г) начало/к онец Масса опухоли (г) ?±SD (стандартное отклонение) Степень ингибиро вания (%) Q
Инъекция 25 мл/кг W х 1Oqd 6/6 20,2/24,3 0,62310,19 52,87
Инъекция 12,5 мл/кг iv х 1Oqd 6/6 20,1/25,2 0,78810,19 40,39
Инъекция 6,25 мл/кг iv x 10qd 6/6 20,6/25,3 0,84510,15 36,08
Инъекция плюс цисплатин (25 мл плюс 1 мг)/кг iv x 10qd плюс ipx 7qd 6/6 20,1/25,3 0,45810,10 65,36 0,8987
Инъекция плюс цисплатин (12,5 мл плюс 1 мг)/кг iv x 10qd плюс ip X 7qd 6/6 20,2/24,5 0,50110,11 62,10 0,9480
Инъекция плюс цисплатин (6,25 мл плюс 1 мг)/кг iv x 10qd плюс ip X 7qd 6/6 20,1/25,4 0,55810,11 57,79 0,9172
Цисплатин 1 мг/кг ipx 7qd 6/6 20.2/24.0 0,76510,11 42,13
Цисплатин 2 мг/кг . ipx7qd 6/6 20,4/23,1 0,18110,06 86,31
Пустая жировая эмульсия 25 мл/кг iv x 1Oqd 6/6 20,1/26,5 1,32510,34 —-
Контроль (NS) 25 мл/кг iv x 10qd 6/6 20,3/26,6 1,32210,32 —
* - p менее 0,05;
** - p менее 0,01 по сравнению с группой отрицательного контроля NS.
- 6 033751
Г. Экспериментальное заключение.
Доказано, что инъекция согласно изобретению (25, 12,5 и 6,25 мл/кг iv х10 qd) обладает значительным эффектом ингибирования опухоли в отношении роста рака легкого человека A549, пересаженного голым мышам.
Доказано, что эффект ингибирования опухоли совместного введения инъекции согласно изобретению с цисплатином в отношении рака легкого человека A549, пересаженного голым мышам, значительно более выражен по сравнению с эффектом инъекции согласно изобретению или цисплатина отдельно, т.е. для совместного введения характерен значительный аддитивный эффект.
3. Степень ингибирования опухоли инъекции согласно изобретению в отношении роста гепатомы человека QGY, пересаженной голым мышам.
A. Материалы эксперимента.
Инъекция согласно изобретению (10 г/100 мл), адриамицин (Pfizer Italia S.r.l), пустая жировая эмульсия и физиологический раствор.
Б. Экспериментальный метод.
Клетки гепатомы человека QGY, криоконсервированные в жидком азоте, восстанавливали и инкубировали при 37°С в условиях 5% CO2. Остальные стадии были аналогичны стадиям, описанным в 2Б.
B. Результаты эксперимента.
Таблица 4
Эффективность противоопухолевой терапии в отношении ксенотрансплантатной модели гепатомы человека QGY, подкожно инокулированной голым мышам
Группа образца Доза Режим дозирования Число животных начало/ конец Масса животных (Г) начало/ конец Масса опухоли (г) x±SD Степень ингибирования (%) Q
Инъекция 25 мл/кг iv х 10qd 6/6 21,4/25,6 0,680+0,18** 41,18
Инъекция 12,5 мл/кг iv х 10qd 6/6 21,4/25,2 0,787+0,15** 31,92
Инъекция 6,25 мл/кг iv x lOqd 6/6 21,5/24,9 0,790+0,18* 31,66
Инъекция плюс адриамицин (25 мл плюс 1 мг)/кг iv x lOqd плюс ip x 7qd 6/6 21,8/24,9 0,502+0,16** 56,57 0,8870
Инъекция плюс адриамицин (12,5 мл плюс 1 мг)/кг iv x lOqd плюс ip x 7qd 6/6 21,5/24,7 0,598+0,15** 48,27 0,8312
Инъекция плюс адриамицин (6,25 мл плюс 1 мг)/кг iv x lOqd плюс ip x 7qd 6/6 21,8/24,7 0,627+0,12** 45,76 0,7902
Адриамицин 1 мг/кг ip x 7qd 6/6 21,3/24,6 0,712+0,18** 38,41
Адриамицин 2 мг/кг ip x 7qd 6/6 21,8/23,1 0,338+0,17** 70,76
Пустая жировая эмульсия 25 мл/кг iv x lOqd 6/6 21,6/26,9 1,125+0,15 —
NS 25 мл/кг iv x lOqd 6/6 21,5/26,7 1,156+0,24 —
* - p менее 0,05;
** - p менее 0,01 по сравнению с группой отрицательного контроля (NS).
Г. Экспериментальное заключение.
Доказано, что инъекция согласно изобретению (25, 12,5 и 6,25 мл/кг, iv х10 qd) обладает значительным эффектом ингибирования опухоли в отношении роста гепатомы человека QGY, пересаженной голым мышам.
Доказано, что эффект ингибирования опухоли совместного введения инъекции согласно изобретению с адриамицином значительно более выражен по сравнению с эффектом инъекции согласно изобретению или адриамицина по отдельности в отношении гепатомы человека QGY, пересаженной голым мышам.
4. Степень ингибирования опухоли инъекции согласно изобретению в отношении гепатомы человека LM-3, пересаженной голым мышам.
A. Материалы эксперимента.
Инъекция согласно изобретению (10 г/100 мл), циклофосфамид (Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd), пустая жировая эмульсия и физиологический раствор.
Б. Экспериментальный метод.
Клетки гепатомы человека LM-3, криоконсервированные в жидком азоте, восстанавливали и инкубировали при 37°С в условиях 5% CO2. Остальные стадии были аналогичны стадиям, описанным в 2Б.
B. Результаты эксперимента.
- 7 033751
Таблица 5 Эффективность противоопухолевой терапии в отношении ксенотрансплантатной модели гепатомы человека LM-3, подкожно инокулированной голым мышам
Группа образца Доза Режим дозирования Число животных начало/ конец Масса животных (Г) начало/ конец Масса опухоли (г) ?±SD Степень ингибирования (%) Q
Инъекция 25 мл/кг iv х 10qd 6/6 20,2/26,3 1,043±0,16** 32,05
Инъекция 12,5 мл/кг iv х 10qd 6/6 20,3/26,2 1,092±0,28** 28,86
Инъекция 6,25 мл/кг iv x lOqd 6/6 20,4/27,0 1,251±0,27* 18,50
Инъекция плюс циклофосфамид (25 мл плюс 15 мг)/кг iv x lOqd плюс ip x 7qd 6/6 20,4/26,6 0,755±0,13** 50,81 0,9972
Инъекция плюс циклофосфамид (12,5 мл плюс 15 мг)/кг iv x lOqd плюс ip x 7qd 6/6 20,3/28,1 0,778±0,17** 49,32 1,0137
Инъекция плюс циклофосфамид (6,25 мл плюс 15 мг)/кг iv x lOqd плюс ip x 7qd 6/6 20,4/25,8 0,862±0,19** 43,84 1,0648
Циклофосфа- мид 15 мг/кг ip x 7qd 6/6 20,7/24,8 1,108±0,09** 27,82
Циклофосфа- мид 30 мг/кг ip x 7qd 6/6 20,5/25,0 0,265±0,12** 82,74
Пустая жировая эмульсия 25 мл/кг iv x lOqd 6/6 20,4/27,8 1,557±0,30 —
NS 25 мл/кг iv x lOqd 6/6 20,6/28,0 1,535±0,28 —
* - p менее 0,05;
** - p менее 0,01 по сравнению с группой отрицательного контроля (NS).
Г. Экспериментальное заключение.
Доказано, что инъекция согласно изобретению (25, 12,5 и 6,25 мл/кг, iv х10 qd) обладает значительным эффектом ингибирования опухоли в отношении роста гепатомы человека LM-3, пересаженной голым мышам.
Доказано, что эффект ингибирования опухоли совместного введения инъекции согласно изобретению с циклофосфамидом значительно более выражен по сравнению с эффектом инъекции согласно изобретению или циклофосфамида по отдельности в отношении гепатомы человека LM-3, пересаженной голым мышам, т.е. для совместного введения характерен значительный аддитивный эффект.
5. Степень ингибирования опухоли инъекции согласно изобретению в отношении роста гепатомы человека SMMC-7721, пересаженной голым мышам.
A. Материалы эксперимента.
Инъекция согласно изобретению (10 г/100 мл), гемцитабина гидрохлорид (LILLY FRANCE), пустая жировая эмульсия и физиологический раствор
Б. Экспериментальный метод.
Клетки гепатомы человека SMMC-7721, криоконсервированные в жидком азоте, восстанавливали и инкубировали при 37°С в условиях 5% CO2. Остальные стадии были аналогичны стадиям, описанным в 2Б.
B. Результаты эксперимента.
- 8 033751
Таблица 6
Эффективность противоопухолевой терапии в отношении ксенотрансплантатной модели гепатомы человека SMMC-7721, подкожно инокулированной голым мышам
Группа образца Доза Режим дозирования Число животных начало/ конец Масса животных (Г) начало/ конец Масса опухоли (г) х± SD Степень ингибирования (%) Q
Инъекция 25 мл/кг iv х 10qd 6/6 20,4/25,1 0,876±0,13** 49,71
Инъекция 12,5 мл/кг iv х 10qd 6/6 20,4/25,6 0,942±0,21** 45,92
Инъекция 6,25 мл/кг iv x lOqd 6/6 20,1/24,8 1,041±0,23* 40,24
Инъекция плюс гемцитабин (25 мл плюс 25 мг)/кг iv x lOqd плюс iv x 3q3d 6/6 20,5/26,1 0,610±0,09** 64,98 0,8731
Инъекция плюс гемцитабин (12,5 мл плюс 25 мг)/кг iv x lOqd плюс iv x 3q3d 6/6 20,9/26,5 0,632±0,14** 63,72 0,8790
Инъекция плюс гемцитабин (6,25 мл плюс 25 мг)/кг iv x lOqd плюс iv x 3q3d 6/6 20,4/26,4 0,661±0,16** 62,06 0,8916
Гемцитабин 25 мг/кг iv x 3q3d 6/6 20,1/25,1 0,886±0,24** 49,14
Гемцитабин 50 мг/кг iv x 3q3d 6/6 20,4/24,2 0,215±0,11** 87,66
Пустая жировая эмульсия 25 мл/кг iv x lOqd 6/6 20,2/26,1 1,765±0,19
NS 25 мл/кг iv x lOqd 6/6 20,8/26,9 1,742±0,24
* - p менее 0,05;
** - p менее 0,01 по сравнению с группой отрицательного контроля (NS).
Г. Экспериментальное заключение.
Доказано, что инъекция согласно изобретению (25, 12,5 и 6,25 мл/кг, iv х10 qd) обладает значительным эффектом ингибирования опухоли в отношении роста гепатомы человека SMMC-7721, пересаженной голым мышам.
Доказано, что эффект ингибирования опухоли совместного введения инъекции согласно изобретению с гемцитабина гидрохлоридом значительно более выражен по сравнению с эффектом инъекции согласно изобретению или гемцитабина гидрохлорида по отдельности в отношении гепатомы человека SMMC-7721, пересаженной голым мышам, т.е. для совместного введения характерен значительный аддитивный эффект.
6. Степень ингибирования инъекции согласно изобретению в отношении саркомы S180, пересаженной голым мышам.
A. Материалы эксперимента.
Инъекция согласно изобретению (10 г/100 мл), циклофосфамид (СТХ), митоксантрон (DHAD), митомицин (ММС) и физиологический раствор.
Саркома S180: инокулированная мышам линии Кунминг, 19-21 г, самки.
Б. Экспериментальный метод.
Асцитическую жидкость мышей, имеющих крупную саркому S180, разбавляли физиологическим раствором (1:4) для получения клеточной суспензии концентрации приблизительно 1-2х107 клеток/мл. Каждой мыши инокулировали 0,2 мл суспензии подкожно в правую подмышечную область, и мышей случайным образом группировали. Введение начинали со следующих суток в соответствии с программой дозирования в табл. 7. На десятые сутки после инокуляции S180 животных умерщвляли путем цервикальной дислокации и вскрывали для извлечения опухоли. Сравнивали массы опухоли и рассчитывали степени ингибирования для каждой группы.
B. Результаты эксперимента.
Таблица 7
Эффективность противоопухолевой терапии в отношении модели саркомы S180 у мышей
Группа образца Доза Режим дозирования Число животных начало/ конец Масса опухоли (г) x±SD Степень ингибирования (%) Q
Инъекция 25 мл/кг ivx7 10/10 1,18±0,23 25,32*
Инъекция плюс СТХ 25 мл/кг плюс 30 мг/кг ivx7 плюс ip х 2(1,3) 10/10 0,79±0,14 50,00** 0,8847
СТХ 30 мг/кг ip х 2(1,3) 10/10 0,92±0,21 41,77**
Инъекция плюс DHAD 25 мл/кг плюс 2 мг/кг iv х 7 плюс ip x 2(1,3) 10/10 0,52±0,13 67,09** 1,0627
DHAD 2 мг/кг ip x 2(1,3) 10/10 0,78±0,20 50,63**
- 9 033751
Инъекция плюс ММС 25 мл/кг плюс 1,5 мг/кг iv х 7 плюс ip х 2 (1,3) 10/10 0,62±0,12 60,76** 1,1220
ММС 1,5 мг/кг ip х 2 (1,3) 10/10 0,97±0,19 38,61*
Контроль (NS) 25 мл/кг iv х 7 10/10 1,58±0,36 —
* - p менее 0,05;
** - p менее 0,01 по сравнению с группой отрицательного контроля (NS).
Г. Экспериментальное заключение.
Результаты демонстрируют, что инъекция согласно изобретению в комбинации с СТХ, DHAD или ММС обладает значительно более сильным эффектом ингибирования опухоли по сравнению с эффектом инъекции согласно изобретению или химиотерапевтического лекарственного средства отдельно, т.е. для совместного введения характерен значительный аддитивный эффект.
7. Степень ингибирования инъекции согласно изобретению в отношении раковой саркомы W256, пересаженной крысам.
А. Материалы эксперимента.
Инъекция согласно изобретению (10 г/100 мл), циклофосфамид (СТХ) и физиологический раствор. Раковая саркома W256: инокулированная крысам линии Вистар, 50-60 г, самки.
Б. Экспериментальный метод.
Асцитическую жидкость крыс, имеющих крупную раковую саркому W256, разбавляли физиологическим раствором для получения клеточной суспензии концентрации приблизительно 1-2х107 клеток/мл. Каждой крысе инокулировали 0,2 мл суспензии подкожно в правую подмышечную область. Крыс случайным образом группировали на следующий день и начинали введение. Через две недели животных умерщвляли и вскрывали для извлечения опухоли. Сравнивали массы опухоли каждой экспериментальной группы и контрольной группы, и рассчитывали степени ингибирования опухоли.
8. Результаты эксперимента.
Таблица 8 Эффективность противоопухолевой терапии в отношении модели раковой саркомы W256 у крыс
Группа образца Доза Режим дозирования Число животных начало/конец Масса опухоли (г) r±SD Степень ингибирования (%) Q
СТХ 30 мг/кг iv х 7 10/8 0,42±0,85 87,68**
СТХ 10 мг/кг iv х 2 (3,5) 10/10 2,12±1,22 37,83*
Инъекция 20 мл/кг ivx 10 10/10 1,44±0,72 57,78**
Инъекция плюс СТХ 20 мл/кг плюсЮ мг/кг ivx 10 + ivx 2 (3,5) 10/10 0,94±0,32 72,43** 0,9821
Инъекция 10 мл/кг iv x 10 10/10 1,88±0,71 44,87**
Инъекция плюс СТХ 10 мл/кг плюсЮ мг/кг iv x 10 + ivx2 (3,5) 10/10 1,02±0,58 70,09** 1,0664
Инъекция 5 мл/кг iv x 10 10/9 2,13±1,19 37,54*
Инъекция плюс СТХ 5 мл/кг плюсЮ мг/кг iv x 10 + iv x 2 (3,5) 10/10 1,68±0,98 50,73** 0,8293
Контроль (NS) 20 мл/кг ivx 10 10/10 3,41±1,16 —
* - p менее 0,05;
** - p менее 0,01 по сравнению с группой отрицательного контроля (NS).
Г. Экспериментальное заключение.
Результаты демонстрируют, что инъекция согласно изобретению в комбинации с СТХ обладает значительно более выраженным эффектом ингибирования опухоли по сравнению с эффектом инъекции согласно изобретению или химиотерапевтического лекарственного средства отдельно, т.е. для совместного введения характерен значительный аддитивный эффект.
8. Степень ингибирования инъекции согласно изобретению в отношении рака поджелудочной железы человека PANC-1, пересаженного голым мышам.
А. Материалы эксперимента.
Инъекция согласно изобретению (10 г/100л), гемцитабина гидрохлорид и физиологический раствор.
Рак поджелудочной железы человека PANC-1: инокулированный голым мышам линии BALB/С, 1618 г, самки.
Б. Экспериментальный метод.
Крупные опухоли рака поджелудочной железы человека PANC-1 подкожно инокулировали самкам голых мышей линии BALB/C возраста 4 недели. Голых мышей группировали случайным образом и начинали введение. Через неделю после окончания введения мышей умерщвляли и вскрывали. Опухоли извлекали и взвешивали. Различия масс опухолей экспериментальных групп и контрольной группы сравнивали, и рассчитывали степени ингибирования опухоли.
- 10 033751
В. Результаты эксперимента.
Таблица 9
Эффективность противоопухолевой терапии в отношении модели рака поджелудочной железы человека PANC-1 у голых мышей
Группа образца Доза Режим дозирования Число животных начало/ конец Масса опухоли (г) х± SD Степень ингибирования (%) Q
Гемцитабин 60 мг/кг iv х 1 6/6 0,1443±0,081 24,61
Инъекция 50 мл/кг ivx 10 6/6 0,1491±0,013 22,10
Инъекция плюс гемцитабин 50 мл/кг плюс 60 мг/кг ivx 10 + ivx 1 6/6 0,092 НО, 043 51,88 1,2570
Контроль (NS) 50 мл/кг ivx 10 6/6 0,1914±0,087 —
Результаты демонстрируют, что инъекция согласно изобретению в комбинации с гемцитабина гидрохлоридом обладает значительно более сильным эффектом ингибирования опухоли по сравнению с эффектом инъекции согласно изобретению или химиотерапевтического лекарственного средства отдельно, т.е. для совместного введения характерен значительный аддитивный эффект.
9. Степень ингибирования инъекции согласно изобретению в отношении рака предстательной железы человека FC-3M, пересаженного голым мышам.
A. Материалы эксперимента.
Инъекция согласно изобретению (10 г/100 мл), лейпролида ацетат (Люпрон) и физиологический раствор (NS).
Рак предстательной железы человека FC-3M: инокулированный голым мышам линии BALB/С, 1721 г, самцы.
Б. Экспериментальный метод.
Крупные опухоли рака предстательной железы человека FC-3M гомогенизировали в физиологическом растворе (1:4). Каждой голой мыши инокулировали 0,2 мл суспензии в правую подмышечную область подкожно и мышей случайным образом группировали. Введение начинали со следующих суток. Через 21 сутки после инокуляции мышей умерщвляли. Опухоли извлекали и взвешивали. Различия масс опухолей экспериментальных групп и контрольной группы сравнивали, и рассчитывали степени ингибирования опухоли.
B. Результаты эксперимента.
Таблица 10
Эффективность противоопухолевой терапии в отношении модели рака предстательной железы человека FC-3M у голых мышей
Группа образца Доза Режим дозирования Число животных начало/ конец Масса опухоли (г) х ± SD Степень ингибирования (%) Q
Люпрон 0,75 мл/кг ivx 1 6/6 0,98±0,23 36,36**
Люпрон 1,5 мл/кг iv х 1 6/6 0,76±0,14 50,65**
нъекция 12,5 мл/кг ivx 10 6/6 1,12±0,24 27,27
Инъекция плюс Люпрон 12,5 мл/кг плюс 0,75 мл/кг ivx 10 + iv х 1 6/6 0,52±0,13 66,23** 1,2330
Инъекция 25 мл/кг ivx 10 6/6 0,77±0,15 50,00**
Инъекция плюс Люпрон 25 мл/кг плюс 1,5 мл/кг ivx 10 + ivx 1 6/6 0,45±0,16 70,78** 0,9397
Контроль (NS) 25 мл/кг ivx 10 6/6 0,54±0,20 —
* - p менее 0,05;
** - p менее 0,01 по сравнению с группой отрицательного контроля (NS).
Результаты демонстрируют, что инъекция согласно изобретению в комбинации с Люпроном обладает значительно более сильным эффектом ингибирования опухоли по сравнению с эффектом инъекции согласно изобретению или химиотерапевтического лекарственного средства отдельно, т.е. для совместного введения характерен значительный аддитивный эффект.
10. Степень ингибирования инъекции согласно изобретению в отношении рака молочной железы человека Bcap37, пересаженного голым мышам.
А. Материалы эксперимента.
Инъекция согласно изобретению (10 г/100 мл), инъекция доцетакселя (таксотер, 20 мг/флакон) и физиологический раствор.
Рак молочной железы человека Bcap37: инокулированный голым мышам линии BALB/C (класса свободных от патогенной микрофлоры), 18-20 г, самки.
Б. Экспериментальный метод.
- 11 033751
Крупные опухоли рака молочной железы человека Bcap37 гомогенизировали в физиологическом растворе для получения клеточной суспензий в концентрации 1-2х107 клеток/мл. Каждой голой мыши инокулировали 0,2 мл суспензии подкожно в правую подмышечную область и мышей случайным образом группировали. Введение начинали с 7 суток после инокуляции. Через 20 суток после инокуляции мышей умерщвляли. Опухоли извлекали и взвешивали. Различия масс опухолей экспериментальных групп и контрольной группы сравнивали и рассчитывали степени ингибирования опухоли и значения Q.
В. Результаты эксперимента.
Таблица 11
Эффективность противоопухолевой терапии в отношении модели рака молочной железы человека Bcap37 у голых мышей
Группа образца Доза Режим дозирован ИЯ Число животных начало/ конец Масса опухоли (г) ?±SD Степень ингибирования (%) Q
Контроль (NS) 25 мл/кг ivx 10 10/10 2,94+0,81
Доцетаксель 25 мг/кг ipx 1 6/6 1,27+0,88** 56,80
Инъекция 6,25 мл/кг ivx 10 6/6 1,86+0,32** 36,73
12,5 мл/кг ivx 10 6/6 1,41+0,65** 52,04
25 мл/кг iv x 10 6/6 1,18+0,59** 59,86
Инъекция плюс доцетаксель 6,25 мл/кг + 25 мг/кг ivx 10 плюс ipxl 6/6 0,87+0,45** 70,41 0,9689
Инъекция плюс доцетаксель 12,5 мл/кг + 25 мг/кг ivx 10 плюс ip x 1 6/6 0,94+0,98** 68,03 0,8581
Инъекция плюс доцетаксель 25 мл/кг + 25 мг/кг ivx 10 плюс ip x 1 6/6 0,72+0,36** 75,51 0,9135
* - p менее 0,05;
** - p менее 0,01 по сравнению с группой отрицательного контроля (NS).
Эффекты ингибирования опухоли инъекции согласно изобретению в комбинации с инъекцией доцетакселя были значительно более выраженными по сравнению с эффектом инъекции согласно изобретению или доцетакселя по отдельности в отношении рака молочной железы человека Bcap37, пересаженного голым мышам. В данном эксперименте было продемонстрировано, что для комбинации инъекции согласно изобретению с доцетакселем характерен значительный аддитивный эффект.
11. Степень ингибирования инъекции согласно изобретению в отношении рака молочной железы человека MDA-MB-435, пересаженного голым мышам.
A. Материалы эксперимента.
Инъекция согласно изобретению (10 г/100 мл), инъекция паклитакселя (30 мг/5 мл) и физиологический раствор
Рак молочной железы человека MDA-MB-435: инокулированный голым мышам линии BALB/C (класса свободных от патогенной микрофлоры), 18-20 г, самки
Б. Экспериментальный метод.
Крупные опухоли рака молочной железы человека MDA-MB-435 гомогенизировали в физиологическом растворе для получения клеточной суспензий в концентрации 1-2 х107 клеток/мл. Каждой голой мыши инокулировали 0,2 мл суспензии подкожно в правую подмышечную область и мышей случайным образом группировали. Введение начинали с 7 суток после инокуляции. Через 18 суток после инокуляции мышей умерщвляли. Опухоли извлекали и взвешивали. Различия масс опухолей экспериментальных групп и контрольной группы сравнивали и рассчитывали степени ингибирования опухоли и значения Q.
B. Результаты эксперимента.
- 12 033751
Таблица 12
Эффективность противоопухолевой терапии в отношении модели рака молочной железы человека MDA-MB-435 у голых мышей
Группа образца Доза Режим дозирован ИЯ Число животных начало/ конец Масса опухоли (г) х± SD Степень ингибирования (%) Q
Контроль (NS) 25 мл/кг iv х 10 12/12 2,72±0,39
Паклитаксель 50 мг/кг ipx 1 6/6 1,ОНО,33** 62,87
Инъекция 6,25 мл/кг iv х 10 6/6 1,53±0,26** 43,75
12,5 мл/кг iv x 10 6/6 1,22±0,25** 55,15
25 мл/кг iv x 10 6/6 0,66±0,07** 75,74
Инъекция плюс паклитаксель 6,25 мл/кг плюс 50 мг/кг iv x 10 плюс ipx 1 6/6 0,93±0,48** 65,81 0,8318
Инъекция плюс паклитаксель 12,5 мл/кг плюс 50 мг/кг ivx 10 плюс ipxl 6/6 0,76±0,45** 72,06 0,8646
Инъекция плюс паклитаксель 25 мл/кг плюс 50 мг/кг iv x 10 плюс ipxl 6/6 0,48±0,32** 82,35 0,9050
* - p менее 0,05;
** - p менее 0,01 по сравнению с группой отрицательного контроля.
Эффекты ингибирования опухоли инъекции согласно изобретению в комбинации с инъекцией паклитакселя были значительно более выраженными по сравнению с эффектом инъекции согласно изобретению или инъекции паклитакселя по отдельности в отношении рака молочной железы человека MDAМВ-435, пересаженного голым мышам. В данном эксперименте было продемонстрировано, что для комбинации инъекции согласно изобретению с паклитакселем характерен значительный аддитивный эффект.
12. Клиническая эффективность капсул согласно изобретению в комбинации с химиотерапией при лечении рака яичника.
A. Клинические данные и способ лечения.
пациентов, страдающих раком яичника на поздней стадии, были случайным образом разделены на две группы: группа I, получающая капсулы согласно изобретению, и контрольная группа II. В 30 случаях в Группе I использовали программу ТК (таксол+карбоплатин) в комбинации с капсулой согласно изобретению; в 28 случаях в контрольной группе использовали только программу ТК. Исходные данные обеих групп были сопоставимы (р более 0,05). Таксол (175 мг/м2) вводили на 1-е сутки, а карбоплатин (AUC составляет 5) вводили на 1-е сутки и повторяли введение каждые 3 недели. Проводили 4-6 циклов химиотерапии исходя из благоприятной ситуации для пациента. Капсулу согласно изобретению (6 капсул, 3 р/сутки) вводили непрерывно до проявления прогрессирования заболевания или недопустимых токсических и побочных эффектов.
Б. Терапевтическая оценка.
(1) Частота ответа и частота контроля заболевания: краткосрочные эффекты оценивали и анализировали каждые 2 цикла химиотерапии с использованием критериев RECIST (критерии оценки ответа в твердых опухолях), а результаты оценки классифицировали на 4 степени: полный ответ (CR), частичный ответ (PR), стабилизация заболевания (SD) и прогрессирование заболевания (PD). Степень реакции (RR) рассчитывали с использованием CR плюс PR; и степень контроля заболевания (DCR) рассчитывали с использованием CR плюс PR плюс SD. Через четыре недели терапевтические эффекты были подтверждены для всех пациентов с CR и PR.
(2) Токсические и побочные эффекты: Общие терминологические критерии (Nd-СТС АЕ) версии 3.0 были использованы для анализа неблагоприятных эффектов. Токсические реакции оценивались от 0 до V степени.
B. Результаты.
(1) Кратковременные эффекты: Группа I, частота ответа составила 46,7% (0 случаев для степени CR, 14 случаев для степени PR, 8 случаев для степени SD и 8 случаев для степени PD), а частота контроля заболевания составила 73,3%; Группа II, частота ответа составила 39,3% (0 случаев для степени CR, 11 случаев для степени PR, 6 случаев для степени SD и 11 случаев для класса PD), а частота контроля заболевания составила 60,7%. Как частота ответа, так и частота контроля заболевания в Группе I были значительно выше, чем в Группе II.
(2) Токсические и побочные эффекты: оценка 58 пациентов показала, что наиболее частыми токсическими и побочными эффектами были желудочно-кишечные реакции, миелосупрессия, нейротоксичность, миальгия и артральгия и т.д. Уровни миелосупрессии степени 3/4 в группе согласно изобретению (группа I) и контрольной группе (группа II) составили 42,5 и 54% соответственно; уровни лихорадочной нейтропении/инфекции степени 3/4 в группе согласно изобретению (группа I) и контрольной группе
- 13 033751 (группа II) составили 12 и 19% соответственно. Смертельных случаев не было в обеих группах. Тошнота, рвота, нейротоксичность, миальгия и артральгия были более распространены в контрольной группе.
Уровень усталости в группе согласно изобретению был значительно ниже, чем в контрольной группе.
Таким образом, можно видеть, что комбинация капсулы согласно изобретению с таксолом и карбоплатином имеет более высокую частоту ответа при лечении рака яичника на поздней стадии и более низкую токсическую реакцию, связанную с химиотерапией, и может эффективно улучшать качество жизни пациентов.
13. Эффект капсулы согласно изобретению на гиперплазию предстательной железы, вызванную имплантацией урогенитального синуса у мышей.
A. Материалы эксперимента.
Капсула согласно изобретению, таблетка для лечения предстательной железы (цернилтон®, PuShiTaiPian) (экстракты пыльцы P5 70 мг, EA10 4 мг), инъекция NaCl (2,25 г/250 мл, 250 мл/флакон), пентобарбитал натрия, оливковое масло, пенициллин натрия для инъекции (800 000 единиц/флакон)
Животное: мыши линии ICR чистого класса, голодающие в течение ночи перед введением в эксперимент.
B. Экспериментальный метод.
Подготовка урогенитального синуса: мышей линии ICR в половой зрелости, 20 самок и 10 самцов, 25-30 г, содержали в клетке в соотношении самка:еамец, составляющем 2:1. Каждое утро вульву каждой мыши исследовали с использованием пинцета для обнаружения появления копулятивной пробки. Феномен появления белой эмболии во влагалище, образующейся за счет затвердевшей спермы, указывает на то, что произошло совокупление. Сутки, когда появилась копулятивная пробка, рассматривались как первые сутки беременности. Самку мыши на 16-ые сутки после оплодотворения умерщвляли, а 16дневного эмбриона асептически вынимали. Урогенитальный синус помещали в стеклянную закрытую чашку Петри, наполненную физиологическим раствором.
Моделирование: Шестьдесят самцов мышей линии ICR (25-30 г) в половой зрелости анестезировали пентобарбиталом натрия путем внутрибрюшинной инъекции. Брюшную полость каждой мыши асептически надрезали, а вентральную предстательную железу аккуратно отделяли. Ткани урогенитального синуса трех 16-дневных плодов мышей той же линии пересаживали в вентральную предстательную железу. 10 мышам в группе ложной операции делали прокол в брюшной полости, но не имплантировали ткани урогенитального синуса. Все мыши получали пенициллин (20000 единиц, внутрибрюшинно) в течение трех дней после операции.
Группирование и введение: Мышей без аномалий через трое суток после операции делили на следующие группы: группа ложной операции, модельная группа, группа положительного контроля (цернилтон 60 мг/кг) и группы, получающие капсулу согласно изобретению (высокой дозы 9 г/кг, средней дозы 3 г/кг и низкой дозы 1 г/кг). Внутрижелудочное введение (0,1 мл/10 г) проводили в течение 28 суток и мышам в группе ложной операции и модельной группе давали тот же объем оливкового масла.
Индексы обнаружения: (1) масса тела, (2) влажная масса вентральной предстательной железы и индекс предстательной железы (влажная масса предстательной железы/масса тела); (3) патологические изменения тканей вентральной предстательной железы (критерии оценки приведены в табл. 13).
- 14 033751
Таблица 13
Критерии оценки гиперплазии ткани предстательной железы в патологическом исследовании
(1) На основании размера простатического ацинарного просвета и количества выделений в просвете
Простатический ацинарный просвет различных размеров и неправильных форм с окрашенными в розовый выделениями;
+: Часть простатического ацинарного просвета, расширенная и плотно упакованная, с увеличивающимися и углубляющимися выделениями;
++: Простатический ацинарный просвет, явно расширенный и плотно упакованный, с явно увеличивающимися и углубляющимися выделениями;
(2) На основании степени пролиферации фибробласта в мезенхиме предстательной железы
Отсутствие или случайный гиперпластический фибробласт в мезенхиме;
+ : Мало гиперпластических фибробластов в мезенхиме, находящихся на большом расстоянии друг от друга;
++ : Много гиперпластических фибробластов в мезенхиме;
+++: Большое количество гиперпластических фибробластов в мезенхиме, в кластерах или связках.
(3) На основании морфологии, нормальности конфигурации и степени гиперплазии железистого эпителия
Столбчатый или кубовидный однослойный железистый эпителий, выступающий в направлении ацинарного просвета с образованием складки, с клеточными ядрами, расположенными в основании, нормальная конфигурация;
+ : В основном нормальная морфология эпителия, но конфигурация менее нормальная;
++ : Часть эпителия разрослась из монослоя в бислой, ненормальная конфигурация;
+++: Большая часть эпителия разрослась из монослоя в бислой или даже 3-4 слоя, явно ненормальная конфигурация.
В. Результаты эксперимента.
Таблица 14
Эффекты на вентральную предстательную железу в модели гиперплазии предстательной железы, вызванной имплантацией урогенитального синуса у мышей (XiS, n равно 10)
Группа Доза Влажная масса вентральной предстательной железы (мг) Индекс вентральной предстательной железы (мг/10 г массы тела)
Ложная операция - 17,8±7,0 4,16±1,60
Модельная группа - 50,1±14,0### 12,18±3,74###
Цернилтон 60 мг/кг 30,7±9,0** 7,30±2,11**
Капсула согласно изобретению 9 г/кг 30,9±14,2* 7,25±3,25*
Капсула согласно изобретению 3 г/кг 32,3±6,2** 7,47±2,42**
Капсула согласно изобретению 1 г/кг 36,5±8,8* 8,50±2,08*
т - p менее 0,001 по сравнению с группой ложной операции;
* - p менее 0,05;
** - p менее 0,01 по сравнению с модельной группой, t-критерий.
- 15 033751
Таблица 15
Эффекты на вентральную предстательную железу и выделения в просвете вентральной предстательной железы в модели гиперплазии предстательной железы, вызванной имплантацией урогенитального синуса у мышей (n=10)
Размер простатического ацинарного просвета и Группа Доза количество выделений в · просвете*
— + ++
Ложная операция — 10 0 0
Модельная группа - 1 5 4
Цернилтон 60 мг/кг 4 5 1 .
Капсула согласно изобретению 9 г/кг 4 5 0
Капсула согласно изобретению 3 г/кг 3 4 2
Капсула согласно изобретению 1 г/кг 2 3 2
* - число животных в соответствующем классе патологических изменений.
Таблица 16
Эффект на пролиферацию фибробласта в мезенхиме вентральной предстательной железы в модели гиперплазии предстательной железы, вызванной имплантацией урогенитального синуса у мышей (n=10)
Степень пролиферации фибробласта в мезенхиме Группа Доза предстательной железы*
— + ++ +++
Ложная операция — 5 4 1 0
Модельная группа - 0 5 3 2
Цернилтон 60 мг/кг 2 8 0 0
Капсула согласно изобретению 9 г/кг 8 4 0 0
Капсула согласно изобретению 3 г/кг 2 6 0 0
Капсула согласно изобретению 1 г/кг 2 6 1 2
* - число животных в соответствующем классе патологических изменений.
Таблица 17
Эффекты на морфологию и конфигурацию железистого эпителия вентральной предстательной железы в модели гиперплазии предстательной железы, вызванной имплантацией урогенитального синуса у мышей (n=10) ” Морфология, нормальность конфигурации и степень пролиферации Группа Доза железистого эпителия *
— + ++ +++
Ложная операция — 6 3 1 0
Модельная группа - 0 1 6 3
Цернилтон 60 мг/кг 2 6 2 0
Капсула согласно изобретению 9 г/кг 4 3 3 0
Капсула согласно изобретению 3 г/кг 0 8 4 0
Капсула согласно изобретению 1 г/кг 0 0 9 2
* - число животных в соответствующем классе патологических изменений.
- 16 033751
Таблица 18
Эффекты на область простатического ацинарного просвета и толщины железистого эпителия вентральной предстательной железы в модели гиперплазии предстательной железы, вызванной имплантацией урогенитального синуса у мышей (XiS, n=10)
Группа Доза Область простатического ацинарного просвета (х104мкм2) Толщина железистого эпителия (мкм)
Ложная операция — 2,53 ± 1,11 11,70 + 3,17
Модельная группа - 6,46 ± 3,40 22,44 ± 4,46 т
Цернилтон 60 мг/кг 2,72 + 0,92 ** 15,19 ± 4,18 ***
Капсула согласно изобретению 9 г/кг 2,12 ±1,11 ** 13,25 ±3,24 ***
Капсула согласно изобретению 3 г/кг 2,29 ± 1,04 ** 15,12 + 3,32 ***
Капсула согласно изобретению 1 г/кг 3,63 ±1,26* 18,52 ±5,22 ***
## - p менее 0,01;
### - менее 0,001 по сравнению с группой ложной операции;
* - p менее 0,05; ** - p менее 0,01; *** - p менее 0,001 по сравнению с модельной группой, t-критерий.
У мышей с гиперплазией предстательной железы, вызванной имплантацией урогенитального синуса, внутрижелудочное введение 1-9 г/кг капсулы согласно изобретению в течение 28 суток значительно уменьшило увеличение влажной массы вентральной предстательной железы и индекса предстательной железы; явно улучшило патологические изменения, например пролиферацию фибробласта в мезенхиме простаты, увеличение простатического ацинарного просвета, пролиферацию железистого эпителия и увеличение выделений в просвете и т.д.; и значительно уменьшило области простатического ацинарного просвета и толщину железистого эпителия. Очевидно, что капсула согласно изобретению оказывает значительные терапевтические эффекты на гиперплазию предстательной железы, вызванную имплантацией урогенитального синуса у мышей.
Суммируя вышеизложенное, композиция масла семян коикса согласно изобретению обладает определенными ингибирующими эффектами в отношении рака легкого человека A549, рака печени человека QGY, LM-3 и SMMC-7721, саркомы S180, раковой саркомы W256 и т.д., пересаженных голым мышам. Комбинация инъекции или капсулы согласно изобретению с маленькими дозами цисплатина, циклофосфамида, гемцитабина гидрохлорида, митоксантрона, митомицина, люпрона, доцетакселя, паклитакселя (Таксола) или карбоплатина оказывает значительный аддитивный эффект в отношении роста рака легкого человека A549, рака печени человека LM-3 и SMMC-7721, саркомы S180, раковой саркомы W256, рака поджелудочной железы человека, рака предстательной железы, рака молочной железы, рака яичника. Капсула согласно изобретению обладает значительным терапевтическим эффектом в отношении гиперплазии предстательной железы у мышей.
Дальнейшие эксперименты подтвердили, что композиция масла семян коикса согласно изобретению и ее препараты могут достигать желаемых эффектов, описанных выше в экспериментальных примерах.
Следующие примеры дополнительно иллюстрируют изобретение, но не являются ограничением изобретения.
Подробное описание предпочтительных воплощений
Пример 1. Получение композиции масла семян коикса.
Сверхкритическая экстракция диоксидом углерода.
Семена коикса измельчали в порошок с размером частиц 60 меш и экстрагировали с использованием двух 600-л экстракторов для сверхкритической экстракции CO2. Порошок семян коикса помещали в экстрактор. Подогреватель CO2, экстрактор и разделительную колонку нагревали с помощью горячей воды, циркулирующей в рубашке, так чтобы температура экстракции и температура разделения составляли 40 и 45°С соответственно, а температуры на выходе из сепаратора I и сепаратора II поддерживались на отметке 50 и 35°С соответственно. Жидкий CO2 подавали под давлением в подогреватель CO2 с помощью насоса высокого давления с расходом 2 т/ч, превращая его во флюид в сверхкритическом состоянии. В экстракторе масло экстрагировали флюидом CO2 под давлением 20 МПа. Затем флюид CO2 с этим маслом подавали на разделительную колонку, а давление разделительной колонки поддерживали на уровне 7 МПа для отделения масла. Газообразный CO2 из разделительной колонки последовательно поступал в сепаратор I и сепаратор II, давление в которых поддерживалось на уровне 7 и 6 МПа соответственно. Отделенные примеси, такие как вода, удаляли. Газообразный CO2, проходя через конденсатор, переходил в жидкое состояние для повторного использования. Непрерывная экстракция в течение 2,5 ч приводила к образованию неочищенной композиции масла семян коикса.
Очистка.
- 17 033751
К неочищенной композиции масла семян коикса, полученной сверхкритической экстракцией CO2, добавляли 60% петролейного эфира (60°С) относительно массы масла. 45% водного раствора NaOH (2%) относительно массы масла добавляли в соответствии с кислотным числом. После перемешивания в течение 10 мин и выдерживания в течение 20 ч нижний грязный слой удаляли. Верхний слой промывали очищенной водой и выдерживали 22 ч. После удаления нижнего слоя отработанной воды верхний слой повторно промывали. После выдерживания в течение еще 46 ч нижний слой отработанной воды удаляли, а верхний слой деэмульгировали путем добавления 80% ацетона относительно массы масла. После выдерживания в течение 3 ч нижний слой отработанного ацетона удаляли. К верхнему масляному слою добавляли 5% активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы неочищенного масла, перемешивали 30 мин и фильтровали. Фильтрат нагревали, добавляли 4% активированного каолина относительно массы неочищенного масла, перемешивали 30 мин при 45°С и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя и повторно промывали очищенной водой. После выдерживания в течение 1 ч нижний слой отработанной воды удаляли. Верхний масляный слой нагревали и сушили в вакууме в атмосфере азота. Затем добавляли 10% активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы масла. Смесь перемешивали и выдерживали в холодном месте. После фильтрации отфильтрованное масло концентрировали в атмосфере азота путем нагревания в вакууме и затем стерилизовали путем сухого нагревания в вакууме при 165°С в течение 1,5 ч. После охлаждения масло фильтровали через 0,2-мкм микропористую мембрану и раздельно загружали в 500-мл стеклянные инфузионные флаконы в атмосфере азота, а затем флаконы герметизировали. Таким образом получали композицию масла семян коикса с выходом 4,5%. Были определены следующие физико-химические константы: удельный вес при 20°С - 0,915; показатель преломления при 20°С - 1,471; кислотное число -0,18; йодное число - 102; число омыления - 190.
Пример 2. Получение композиции масла семян коикса.
Сверхкритическая экстракция диоксидом углерода.
Семена коикса измельчали в порошок с размером частиц 80 меш и экстрагировали с использованием двух 600-л экстракторов для сверхкритической экстракции CO2. Порошок семян коикса помещали в экстрактор. Подогреватель CO2, экстрактор и разделительную колонку нагревали с помощью горячей воды, циркулирующей в рубашке, так, чтобы температура экстракции и температура разделения составляли 40 и 40°С соответственно, а температуры на выходе из сепаратора I и сепаратора II поддерживались на уровне 20 и 15°С соответственно. Жидкий CO2 подавали под давлением в подогреватель CO2 с помощью насоса высокого давления с расходом 1 т/ч, превращая его во флюид в сверхкритическом состоянии. В экстракторе масло экстрагировали флюидом CO2 под давлением 22 МПа. Затем флюид CO2 с этим маслом подавали на разделительную колонку, а давление разделительной колонки поддерживали на уровне 8 МПа для отделения масла. Газообразный CO2 из разделительной колонки последовательно поступал в сепаратор I и сепаратор II, давление в которых поддерживалось на уровне 6 и 5 МПа соответственно. Отделенные примеси, такие как вода, удаляли. Газообразный CO2, проходя через конденсатор, переходил в жидкое состояние для повторного использования. Непрерывная экстракция в течение 2 ч приводила к образованию неочищенной композиции масла семян коикса.
Очистка.
К неочищенной композиции масла семян коикса, полученной сверхкритической экстракцией CO2, добавляли 60% петролейного эфира (90°С) относительно массы масла. 56% водного раствора NaOH (2%) относительно массы масла добавляли в соответствии с кислотным числом. После перемешивания в течение 10 мин и, выдерживания в течение 22 ч, нижний грязный слой удаляли. Верхний слой промывали очищенной водой и выдерживали 20 ч. После удаления нижнего слоя отработанной воды верхний слой подвергали повторному промыванию. После выдерживания в течение еще 48 ч нижний слой отработанной воды удаляли, а верхний слой деэмульгировали путем добавления 90% ацетона относительно массы масла. После выдерживания в течение 2 ч нижний слой отработанного ацетона удаляли. К верхнему масляному слою добавляли 8% активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы неочищенного масла, перемешивали 30 мин и фильтровали. Фильтрат нагревали, добавляли 6% активированного каолина относительно массы неочищенного масла, перемешивали 30 мин при 42°С и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя и повторно промывали очищенной водой. После выдерживания в течение 2 ч нижний слой отработанной воды удаляли. Верхний масляный слой нагревали и сушили в вакууме в атмосфере азота. Затем добавляли 8% активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы масла. Смесь перемешивали и выдерживали в холодном месте. После фильтрации отфильтрованное масло концентрировали в атмосфере азота путем нагревания в вакууме и затем стерилизовали путем сухого нагревания в вакууме при 170°С в течение 1,5 ч. После охлаждения масло фильтровали через 0,2-мкм микропористую мембрану и раздельно загружали в 500-мл стеклянные инфузионные флаконы в атмосфере азота, а затем флаконы герметизировали. Таким образом получали композицию масла семян коикса с выходом 4,9%. Были определены следующие физико-химические константы: удельный вес при 20°С - 0,920; показатель преломления при 20°С - 1,473; кислотное число - 0,19; йодное число - 104; число омыления - 186.
Пример 3. Получение композиции масла семян коикса.
- 18 033751
Сверхкритическая экстракция диоксидом углерода.
Семена коикса измельчали в порошок с размером частиц 10 меш и экстрагировали с использованием двух 600-л экстракторов для сверхкритической экстракции CO2. Порошок семян коикса помещали в экстрактор. Подогреватель CO2, экстрактор и разделительную колонку нагревали с помощью горячей воды, циркулирующей в рубашке, так, чтобы температура экстракции и температура разделения составляли 33 и 39°С соответственно, а температуры на выходе из сепаратора I и сепаратора II поддерживались на уровне 30 и 20°С соответственно. Жидкий CO2 подавали под давлением в подогреватель CO2 с помощью насоса высокого давления с расходом 3 т/ч, превращая его во флюид в сверхкритическом состоянии. В экстракторе масло экстрагировали флюидом CO2 под давлением 19 МПа. Затем флюид CO2 с этим маслом подавали на разделительную колонку, а давление разделительной колонки поддерживали на уровне 9 МПа для отделения масла. Газообразный CO2 из разделительной колонки последовательно поступал в сепаратор I и сепаратор II, давление в которых поддерживалось на уровне 5 и 4 МПа соответственно. Отделенные примеси, такие как вода, удаляли. Газообразный CO2, проходя через конденсатор, переходил в жидкое состояние для повторного использования. Непрерывная экстракция в течение 3 ч приводила к образованию неочищенной композиции масла семян коикса.
Очистка.
К неочищенной композиции масла семян коикса, полученной сверхкритической экстракцией CO2, добавляли 60% петролейного эфира (80°С) относительно массы масла. 36% водного раствора NaOH (2%) относительно массы масла добавляли в соответствии с кислотным числом. После перемешивания в течение 10 мин и выдерживания в течение 18 ч нижний грязный слой удаляли. Верхний слой промывали очищенной водой и выдерживали 18 ч. После удаления нижнего слоя отработанной воды верхний слой подвергали повторному промыванию. После выдерживания в течение еще 42 ч нижний слой отработанной воды удаляли, а верхний слой деэмульгировали путем добавления 75% ацетона относительно массы масла. После выдерживания в течение 2 ч нижний слой отработанного ацетона удаляли. К верхнему масляному слою добавляли 3% активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы неочищенного масла, перемешивали 30 мин и фильтровали. Фильтрат нагревали, добавляли 2% активированного каолина относительно массы неочищенного масла, перемешивали 30 мин при 47°С и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя и повторно промывали очищенной водой. После выдерживания в течение 1 ч нижний слой отработанной воды удаляли. Верхний масляный слой нагревали и сушили в вакууме в атмосфере азота. Затем добавляли 12% активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы масла. Смесь перемешивали и выдерживали в холодном месте. После фильтрации отфильтрованное масло концентрировали в атмосфере азота путем нагревания в вакууме и затем стерилизовали путем сухого нагревания в вакууме при 160°С в течение 2 ч. После охлаждения масло фильтровали через 0,2-мкм микропористую мембрану и раздельно загружали в 500-мл стеклянные инфузионные флаконы в атмосфере азота, а затем флаконы герметизировали. Таким образом получали композицию масла семян коикса с выходом 4,7%. Были определены следующие физико-химические константы: удельный вес при 20°С - 0,918; показатель преломления при 20°С - 1,474; кислотное число - 0,15; йодное число - 100; число омыления - 194.
Пример 4. Получение композиции масла семян коикса.
Сверхкритическая экстракция диоксидом углерода.
Семена коикса измельчали в порошок с размером частиц 50 меш и экстрагировали с использованием двух 600-л экстракторов для сверхкритической экстракции CO2. Порошок семян коикса помещали в экстрактор. Подогреватель CO2, экстрактор и разделительную колонку нагревали с помощью горячей воды, циркулирующей в рубашке, так, чтобы температура экстракции и температура разделения составляли 35 и 42°С соответственно, а температуры на выходе из сепаратора I и сепаратора II поддерживались на уровне 40 и 30°С соответственно. Жидкий CO2 подавали под давлением в подогреватель CO2 с помощью насоса высокого давления с расходом 1,5 т/ч, превращая его во флюид в сверхкритическом состоянии. В экстракторе масло экстрагировали флюидом CO2 под давлением 21 МПа. Затем флюид CO2 с этим маслом подавали на разделительную колонку, а давление разделительной колонки поддерживали на уровне 10 МПа для отделения масла. Газообразный CO2 из разделительной колонки последовательно поступал в сепаратор I и сепаратор II, давление в которых поддерживалось на уровне 7 и 5 МПа соответственно. Отделенные примеси, такие как вода, удаляли. Газообразный CO2, проходя через конденсатор, переходил в жидкое состояние для повторного использования. Непрерывная экстракция в течение 2 ч приводила к образованию неочищенной композиции масла семян коикса.
Очистка.
К неочищенной композиции масла семян коикса, полученной сверхкритической экстракцией CO2, добавляли 60% петролейного эфира (70°С) относительно массы масла. 50% водного раствора NaOH (2%) относительно массы масла добавляли в соответствии с кислотным числом. После перемешивания в течение 10 мин и выдерживания в течение 19 ч нижний грязный слой удаляли. Верхний слой промывали очищенной водой и выдерживали 21 ч. После удаления нижнего слоя отработанной воды верхний слой подвергали повторному промыванию. После выдерживания в течение еще 50 ч нижний слой отработанной воды удаляли, а верхний слой деэмульгировали путем добавления 85% ацетона относительно массы
- 19 033751 масла. После выдерживания в течение 4 ч нижний слой отработанного ацетона удаляли. К верхнему масляному слою добавляли 6% активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы неочищенного масла, перемешивали 30 мин и фильтровали. Фильтрат нагревали, добавляли 5% активированного каолина относительно массы неочищенного масла, перемешивали 30 мин при 50°С и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя и повторно промывали очищенной водой. После выдерживания в течение 1 ч нижний слой отработанной воды удаляли. Верхний масляный слой нагревали и сушили в вакууме в атмосфере азота. Затем добавляли 11% активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы масла. Смесь перемешивали и выдерживали в холодном месте. После фильтрации отфильтрованное масло концентрировали в атмосфере азота путем нагревания в вакууме и затем стерилизовали путем сухого нагревания в вакууме при 162°С в течение 2 ч. После охлаждения масло фильтровали через 0,2-мкм микропористую мембрану и раздельно загружали в 500-мл стеклянные инфузионные флаконы в атмосфере азота, а флаконы герметизировали. Таким образом получали композицию масла семян коикса с выходом 4,0%. Были определены следующие физико-химические константы: удельный вес при 20°С - 0,920; показатель преломления при 20°С - 1,471; кислотное число - 0,16; йодное число - 105; число омыления - 192.
Пример 5. Получение композиции масла семян коикса.
Сверхкритическая экстракция диоксидом углерода.
Семена коикса измельчали в порошок с размером частиц 30 меш и экстрагировали с использованием двух 600-л экстракторов для сверхкритической экстракции CO2. Порошок семян коикса помещали в экстрактор. Подогреватель CO2, экстрактор и разделительную колонку нагревали с помощью горячей воды, циркулирующей в рубашке, так, чтобы температура экстракции и температура разделения составляли 42 и 45°С соответственно, а температуры на выходе из сепаратора I и сепаратора II поддерживались на уровне 35 и 25°С соответственно. Жидкий CO2 подавали под давлением в подогреватель CO2 с помощью насоса высокого давления с расходом 2,5 т/ч, превращая его во флюид в сверхкритическом состоянии. В экстракторе масло экстрагировали флюидом CO2 под давлением 23 МПа. Затем флюид CO2 с этим маслом подавали на разделительную колонку, а давление разделительной колонки поддерживали на уровне 8 МПа для отделения масла. Газообразный CO2 из разделительной колонки последовательно поступал в сепаратор I и сепаратор II, давление в которых поддерживалось на уровне 6 и 4 МПа соответственно. Отделенные примеси, такие как вода, удаляли. Газообразный CO2, проходя через конденсатор, переходил в жидкое состояние для повторного использования. Непрерывная экстракция в течение 2,5 ч приводила к образованию неочищенной композиции масла семян коикса.
Очистка.
К неочищенной композиции масла семян коикса, полученной сверхкритической экстракцией CO2, добавляли 60% петролейного эфира (80°С) относительно массы масла. 40% водного раствора NaOH (2%) относительно массы масла добавляли в соответствии с кислотным числом. После перемешивания в течение 10 мин и выдерживания в течение 24 ч нижний грязный слой удаляли. Верхний слой промывали очищенной водой и выдерживали 24 ч. После удаления нижнего слоя отработанной воды верхний слой подвергали повторному промыванию. После выдерживания в течение еще 44 ч нижний слой отработанной воды удаляли, а верхний слой деэмульгировали путем добавления 70% ацетона относительно массы масла. После выдерживания в течение 3 ч нижний слой отработанного ацетона удаляли. К верхнему масляному слою добавляли 4% активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы неочищенного масла, перемешивали 30 мин и фильтровали. Фильтрат нагревали, добавляли 3% активированного каолина относительно массы неочищенного масла, перемешивали 30 мин при 40°С и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя и повторно промывали очищенной водой. После выдерживания в течение 1,5 ч нижний слой отработанной воды удаляли. Верхний масляный слой нагревали и сушили в вакууме в атмосфере азота. Затем добавляли 9% активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы масла. Смесь перемешивали и выдерживали в холодном месте. После фильтрации отфильтрованное масло концентрировали в атмосфере азота путем нагревания в вакууме и затем стерилизовали путем сухого нагревания в вакууме при 165°С в течение 1,5 ч. После охлаждения масло фильтровали через 0,2-мкм микропористую мембрану и раздельно загружали в 500-мл стеклянные инфузионные флаконы в атмосфере азота, а затем флаконы герметизировали. Таким образом получали композицию масла семян коикса с выходом 4,3%. Были определены следующие физико-химические константы: удельный вес при 20°С - 0,916; показатель преломления при 20°С - 1,473; кислотное число - 0,14; йодное число -101; число омыления - 192.
Пример 6.
8000 мг композиции масла семян коикса растворяли в 10 мл н-гексана с использованием ультразвукового способа растворения и готовили в виде раствора композиции масла семян коикса в ацетоне (50 мг/мл). Этот раствор разделяли на устройстве для препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии CHEETAH-HP100 (колонка: Venusil XBP silica, 20x250 мм, 10 мкм, подвижная фаза: нгексан/ацетон 94:6 (об./об.); объем вводимой пробы 15 мл; расход: 18 мл/мин; испарительный детектор светорассеяния: температура дрейфовой трубки 45°С, расход газа-носителя 2,0 л/мин). Пиковую фракцию при времени выхода пика 15,8 мин собирали и концентрировали в вакууме при 30°С. Концентриро- 20 033751 ванную фракцию переносили в 10 мл пробирку для образцов и продували азотом при температуре окружающей среды с получением бесцветного масла 1,3-диолеина.
Q-TOF/MS (квадрупольная время-пролетная масс-спектрометрия): пики квазимолекулярных ионов [M+Na]+ m/z 643,5277 (рассчитано 643,5272, C39H72O5Na), степень ненасыщенности составляла 4.
Данные Ή-ЯМР и 13С-ЯМР приведены в табл. 3
Т аблица 3
Пример 7.
8000 мг композиции масла семян коикса растворяли в 10 мл н-гексана с использованием ультразвукового способа растворения и готовили в виде раствора композиции масла семян коикса в ацетоне (50 мг/мл). Этот раствор разделяли на устройстве для препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии CHEETAH-HP100 (колонка: Venusil XBP silica, 20x250 мм, 10 мкм, подвижная фаза: нгексан/ацетон 94:6 (об./об.); объем вводимой пробы 15 мл; расход: 18 мл/мин; испарительный детектор светорассеяния: температура дрейфовой трубки 45°С, расход газа-носителя 2,0 л/мин). Пиковую фракцию при времени выхода пика 17 мин собирали и концентрировали в вакууме при 30°С. Концентрированную фракцию переносили в 10 мл пробирку для образцов и продували азотом при температуре окружающей среды с получением бесцветного масла 1-линолеин-3-олеина.
Q-TOF/MS: пики квазимолекулярных ионов [M+Na]+ m/z 641,5121 (рассчитано 641,5115, C39H70O5Na), степень ненасыщенности составляла 5.
Данные Ή-ЯМР и 13С-ЯМР приведены в табл. 4.
- 21 033751
Данные ’И-ЯМР и 13С-ЯМР (CDCI3)
Таблица 4
Полож ение 1Н-ЯМР 13С-ЯМР
С-1’ 174,8
С-2’ 2,35 (4Н, t, J = 7,6 Гц) 35,1
С-3' 25,9
С-4' 30,1
С-5' 30,1
С-6' 30,1
С-7' 30,7
С-8’ 28,2
С-9’ 5,39 (1Н, т) 131,0
С-10’ 5,39 (1Н, т) 129,1
C-1T 2,80 (2H,t,2 = 6,6 Гц) 26,6
С-12’ 5,39 (1Н, т) 128,9
С-13' 5,39 (1Н, т) 131,2
С-14' 28,2
С-15' 30,5
С-16' 32,5
С-17' 23,6
С-18' 0,91 (ЗНД 2 = 5,0 Гц) 15,0
ί С-1 4,21 (2Н, dd, 2= 11,5, 4,3 Гц) 4,16 (2Н, dd, 2= 11,5, 5,7 Гц) 66,0
С-2 4,11 (1Н, т) 69,4
С-3 4,21 (2Н, dd, 2= 11,5, 4,3 Гц) 4,16 (2Н, dd, 2= 11,5, 5,7 Гц) 66,0
Положе ние 1Н-ЯМР 13С-ЯМР
С-1 174,8
С-2 2,35 (4H,t, 2 = 7,6 ГЦ) 35,1
С-3 25,9
С-4 30,1
С-5 30,1
С-6 30,1
С-7 30,7
С-8 28,2
С-9 5,39 (1Н, т) 130,7
С-10 5,39 (1Н, т) 131,0
С-11 28,2
С-12 30,8
С-13 30,3
С-14' 30,6
С-15 30,3
С-16 32,9
С-17 23,7
С-18 0,92 (ЗНД 2 = 5,0 Гц) 15,1
Пример 8.
8000 мг композиции масла семян коикса растворяли в 10 мл н-гексана с использованием ультразвукового способа растворения и готовили в виде раствора композиции масла семян коикса в ацетоне (50 мг/мл). Этот раствор разделяли на устройстве для препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии CHEETAH-HP100 (колонка: Venusil XBP silica, 20x250 мм, 10 мкм, подвижная фаза: нгексан/ацетон 94:6 (об./об.); объем вводимой пробы 15 мл; расход: 18 мл/мин; испарительный детектор светорассеяния: температура дрейфовой трубки 45°С, расход газа-носителя 2,0 л/мин). Пиковую фракцию при времени выхода пика 23 мин собирали и концентрировали в вакууме при 30°С. Концентрированную фракцию переносили в 10 мл пробирку для образцов и продували азотом при температуре окружающей среды с получением бесцветного масла 1,2-диолеина.
Q-TOF/MS: пики квазимолекулярных ионов [M+Na]+ m/z 643,5277 (рассчитано 643,5272, C39H72O5Na), степень ненасыщенности составляла 4.
Данные Ή-ЯМР и 13С-ЯМР приведены в табл. 5.
- 22 033751
Таблица 5
Пример 9.
8000 мг композиции масла семян коикса растворяли в 10 мл н-гексана с использованием ультразвукового способа растворения и готовили в виде раствора композиции масла семян коикса в ацетоне (50 мг/мл). Этот раствор разделяли на устройстве для препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии CHEETAH-HP100 (колонка: Venusil XBP silica, 20x250 мм, 10 мкм, подвижная фаза: нгексан/ацетон 94:6 (об./об.); объем вводимой пробы 15 мл; расход 18 мл/мин; испарительный детектор светорассеяния: температура дрейфовой трубки 45°С, расход газа-носителя 2,0 л/мин). Пиковую фракцию при времени выхода пика 24,5 мин собирали и концентрировали в вакууме при 30°С. Концентрированную фракцию переносили в 10 мл пробирку для образцов и продували азотом при температуре окружающей среды с получением бесцветного масла 1-олеин-2-линолеина.
Q-TOF/MS: пики квазимолекулярных ионов [M+Na]+ m/z 641,5121 (рассчитано 641,5115, C39H70O5Na), степень ненасыщенности составляла 5.
Данные Ή-ЯМР и 13С-ЯМР приведены в табл. 6.
- 23 033751
Таблица 6
Данные 1Н-ЯМР и 13С-ЯМР (CDCI3)
Пример 10.
8000 мг композиции масла семян коикса растворяли в 10 мл н-гексана с использованием ультразвукового способа растворения и готовили в виде раствора композиции масла семян коикса в ацетоне (50 мг/мл). Этот раствор разделяли на устройстве для препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии CHEETAH-HP100 (колонка: Venusil XBP silica, 20x250 мм, 10 мкм, подвижная фаза: нгексан/ацетон 94:6 (об./об.); объем вводимой пробы 15 мл; расход 18 мл/мин; испарительный детектор светорассеяния: температура дрейфовой трубки 45°С, расход газа-носителя 2,0 л/мин). Пиковую фракцию при времени выхода пика 27 мин собирали и концентрировали в вакууме при 30°С. Концентрированную фракцию переносили в 10 мл пробирку для образцов и продували азотом при температуре окружающей среды с получением бесцветного масла 1,2-дилилолеина.
Q-TOF/MS: пики квазимолекулярных ионов [M+Na]+ m/z 639,4964 (рассчитано 639,4959, C39H68O5Na), степень ненасыщенности составляла 6.
Данные Ή-ЯМР и 13С-ЯМР приведены в табл. 7.
Таблица 7
Данные 1Н-ЯМР и 13С-ЯМР (CDCI3)
Положение 1Н-ЯМР чз q ЯМР Положен ие 1Н-ЯМР 13С- ЯМР
С-Т 173,9 С-Т' 173,5
С-2' 2,32 (4Н, t, 4 = 5,0 ГЦ) 34,2 С-2 2,35 (2Н, t, J = 5,0 Гц) 34,4
С-3' 25,0 С-3 25,1
С-4' 29,3 С-4 29,3
- 24 033751
С-5' 29,5 С-5 29,5
С-61 29,3 С-6 29,3
С-71 29,9 С-7 29,9
С-81 27,4 С-8 27,4
С-9' 5,37 (1Н, т) 130,2 С-9 5.37 <1Н, т) 130,2
С-10’ 5,37 (1Н, т) 128,2 С-10 5,37 (1Н, т) 128,2
С-1 Г 2,77 (4НД, 7=6,5 ГЦ) 25,8 С-11 2,77 (2H,t, 7 = 6,5 ГЦ) 25,8 '
С-12' 5,37 (1Н, т) 128,0 С-12 5,37 (1Н, т) 128,0
С-13' 5,37 (1Н, т) 130,4 С-13 5,37 (1Н, т) 130, 4
С-14' 27,4 С-14 27,4
С-151 29,8 С-15 29,8
С-16' 31,7 С-16 31,7
С-17* 22,7 С-17 22,7
С-18’ 0,89 (3H,t, 7 = 6,8 ГЦ) 14,2 С-18 0,89 (ЗН, t, 7 = 6,8 ГЦ) 14,2
С-1 4,32 (1H,dd, 7 = 11,9,4,6 Гц) 4,24 (1Н, dd, 7 = 12,0, 5,6 Гц) 62,1
С-2 5,08 (1Н, т) 72,3
С-3 3,73 (2Н, d, 7= 3,2 Гц) 61,8
Пример 11. Выделение и определение триолеина.
Выделение проводили на устройстве для препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии Р3000А (колонка: Superstar Benetnach™ C18, 20x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза А: ацетонитрил, подвижная фаза В: ацетонитрил/тетрагидрофуран (1:1)). Раствор композиции масла семян коикса (50 мг/мл) был получен с подвижной фазой В, а объем вводимой пробы для каждого отделения составлял 1,5 мл. Условия градиента были следующими: подвижная фаза В 0-27 мин: 50-60%, 27-35 мин: 90%, 35-45 мин: 100% и расход 18 мл/мин. УФ-детектирование проводили при 208 нм. Пиковые фракции при времени выхода пика 12,6-14,2 мин собирали и концентрировали с помощью роторного испарителя в вакууме в атмосфере азота. Остатки переносили хлороформом в 10 мл флакон и сушили в вакуумной печи при 35°С в течение 6 ч. После обработки азотом высушенные образцы замораживали в холодильнике с полу чением триолеина.
HR-EI-MS (масс-спектрометрия высокого разрешения с ионизацией электронным ударом): m/z составляло 878,7344 (рассчитано 878,7363, С57Н98О6), степень ненасыщенности составляла 9.
ИК (пленка KBr): 1746, 1170, 1098; 2928, 2856, 724; 3008, 1655 см-1 (слабое).
Данные Ή-ЯМР показаны в табл. 8.
Данные 13С-ЯМР показаны в табл. 9.
Таблица 8 Спектральные данные Ή-ЯМР соединений примеров 11-18.
A - трилинолеин, B - 1-олеин-2,3-дилинолеин, C - 1-пальмитин-2,3-дилинолеин,
D - 1,3-диолеин-2-линолеин, E - 1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин,
F - 1,3-дипальмитин-2-линолеин, G - триолеин, H - 1-пальмитин-2,3-диолеин
No. G-Η Η 2-Н 3-Н 4-Н 5-Н 6-Н 7-Н 8-Н 9-Н 10-Н 11-Н 12-Н 13-Н 14-Н 15-Н 16-Н 17-Н 18-Н
А LLL В OLL С PLL D OLO Е PLO F PLP G ООО Н РОО а 4,30 β 5,27 2,32 1,61 а' 4,15 а 4,29 β 5,27 2,32 1,61 а' 4,14 а 4,30 β 5,27 2,31 1,61 а' 4,15 а 4,30 β 5,27 2,32 1,61 а' 4,15 а 4,15 β 5,27 2,31 1,61 а' 4,30 а 4,15 β 5,27 2,31 1,61 а' 4,30 а 4,15 β 5,27 2,31 1,61 а' 4,30 а 4,15 β 5,27 2,31 1,61 а 4,30 1.32 1.33 1.31 1.32 1,28 1,28 1,28 1,28 2,05 5,36 2,77 5,36 2,05 2,77 2,04 2,04 5,37 5,37 2,04 1,33 2,05 5,36 2,77 5,36 2,05 1,31 1,31 2,05 1,32 2,05 5,36 2,77 5,36 2,05 2,04 1,28 2,04 5,35 2,77 5,35 2,04 1,28 2,05 5,36 2,77 5,36 2,05 1,28 2,00 2,00 1,28 5,34 2,04 5,34 2,04 1,27 1,27 1.32 1.33 1.31 0.88 1.32 1,28 1,28 0,88 0,88 0,89 0,88 0,88 0,89 0,88 0,88 0,88 0,88
- 25 033751
Таблица 9
Спектральные данные 13С-ЯМР соединений примеров 11-18.
A - трилинолеин, B - 1-олеин-2,3-дилинолеин, C - 1-пальмитин-2,3-дилинолеин,
B - 1,3-диолеин-2-линолеин, E - 1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин,
F - 1,3-дипальмитин-2-линолеин, G - триолеин, H - 1-пальмитин-2,3-диолеин линолеин
Abb. стс С-1 С-1 С-3 С 4 С-? С-6 С-7 С-8 С-9 С-10 С-11 С-12 С-13 С-14 С-1? С-16 С-17 С-18
А а 6Ζ.12 173.28 34.05 24.86 130.01 118.08 117,91
. 1 Э£1 Ч* и г 1 -о 1А Л7
Γ’ιΟ-r --“ι UT -eJ'Oi Л .ГД
т.н. β 68.91 171.87 34.21 24.9« 119.98 128.09 127.90
а 61.11 173.18 34.04 24.86 -1·? Ϊ-Ι 130.03 118.08 127,91
ϋ jC-Σ - 130.24 ТО CV7 >0 40 ΙΊ » Ч Ч £Л 1 i 1 й
Е Л 14,11
β 68.89 171.87 34.21 14.90 29.07-19.79 27.19 136.00 118.10 127,90
OLL
а1 173.29 129.73 130.03 17.12 29,07 -19.79 31.93 12.71 14.14
а 61.11 173.ЗА 34.04 24.89 130.02 118.08 117.909 130.236
с — 29.06-29,71 27.21- — 25.64 19.06-29.71 31,54 22.59 14,09
β 68.9« 171.88 34.28 14.8? 129.99 118.09 117,898 130.136
PLL
a 173.34 34.07 24.88 29.06-19.72 31.9? 22.71 14.14
D а 62.12 173.29 34.05 14.86 27ЛО 129.73 130.03 27.24 19.07 -19.79 3L93 12.71 14.14
19.07-29.79
OLD β 68.89 171.87 34.21 24.90 27.22 130.00 128.10 25.65 11790 130.24 27.24 29,07-29.79 31.5? 22.60 14.10
а 61.11 173.28 34.04 24.8? 17.18 129.71 130.01 17.21 29.06-29.78 3L91 12.69 14.11
Е 19.06-29,78
β 68.91 171.86 34.2« 24.87 17.21 129.98 128.09 15,64 127.90 130.22 27.23 29.06-29.78 31 .54 21.58 14.07
PLO
а' 173.31 34.06 24.88 29,06-19,78 31.94 22.71 14.12
F а 61.09 173.32 34.05 14.86 29.06-29.70 31,93 21.69 14.11
29.0S-29.70
PLP β 68.89 171.86 34.19 24.88 17.20 119.97 128.08 25.63 127,89 130.22 27.10 19.05-29.70 31.?3 11.58 14.07
G а 61.11 173.29 34.04 24.86 17.19 129.72 130.02 27.24
29.07-9.78 29.07 -29.78 31.92 11.70 14.11
ООО β 68.9« 171.87 34.21 24.90 129.69 130.03
а 61.11 173.31 34.04 24.88 129.72 130.02
Е 27.19 27.24 19,06-29.78 31.92
β 68.9« 171.90 34.11 14.86 19.06-29.78 119.69 130.03 21.70 14.12
РОЛ
а' 173.30 34.06 14.90 29.06-29.78 31.94 21.70 14.12
Пример 12. Выделение и определение 1-олеин-2,3-дилинолеина.
Выделение проводили на устройстве для препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии Р3000А (колонка: Superstar Benetnach™ C18, 20x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза А: ацетонитрил, подвижная фаза В: ацетонитрил/тетрагидрофуран (1:1)). Раствор композиции масла семян коикса (50 мг/мл) был получен с подвижной фазой В, а объем вводимой пробы для каждого отделения составлял 1,5 мл. Условия градиента были следующими: подвижная фаза В: 0-27 мин: 50-60%, 27-35 мин: 90%, 35-45 мин: 100% и расход: 18 мл/мин. УФ-детектирование проводили при 208 нм. Пиковые фракции при времени выхода пика 15,4-17,3 мин собирали и концентрировали с помощью роторного испарителя в вакууме в атмосфере азота. Остатки переносили хлороформом в 10 мл флакон и сушили в вакуумной печи при 35°С в течение 6 ч. После обработки азотом высушенные образцы замораживали в холодильнике с получением 1-олеин-2,3-дилинолеина.
HR-EI-MS: m/z составляло 880,7518 (рассчитано 880,7520, C55H98O6), степень ненасыщенности составляла 7.
ИК (пленка KBr): 1747, 1164, 1098; 2925, 2854, 723; 3008, 1655 см-1 (слабое).
Данные Ή-ЯМР показаны в табл. 8.
Данные 13С-ЯМР показаны в табл. 9.
Пример 13. Выделение и определение 1-пальмитин-2,3-дилинолеина.
Предварительное выделение проводили на устройстве для препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии Р3000А (колонка: Superstar Benetnach™ С18, 20x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза А: ацетонитрил, подвижная фаза В: ацетонитрил/тетрагидрофуран (1:1)). Раствор композиции масла семян коикса (50 мг/мл) был получен с подвижной фазой В, а объем вводимой пробы для каждого отделения составлял 1,5 мл. Условия градиента были следующими: подвижная фаза В: 0-27 мин: 50-60%, 2735 мин: 90%, 35-45 мин: 100% и расход: 18 мл/мин. УФ-детектирование проводили при 208 нм. Пиковые фракции при времени выхода пика 17,4-18,1 мин собирали и концентрировали с помощью роторного испарителя в вакууме в атмосфере азота с получением неочищенного продукта.
Вторичную очистку осуществляли на колонке Superstar Benetnach™ Cis (10x250 мм, 5 мкм) с подвижной фазой А: ацетонитрил и подвижной фазой В: ацетонитрил/тетрагидрофуран (1:1). Раствор полученного ранее неочищенного продукта (20 мг/мл) получали с подвижной фазой В, а объем вводимой пробы для каждого отделения составлял 1,5 мл. Условия градиента были следующими: подвижная фаза В: 0-23 мин: 50-60%, 32-43 мин: 60-90%, 43-60 мин: 100% и расход 3 мл/мин. УФ-детектирование проводили при 208 нм. Пиковые фракции при времени выхода пика 31,2-34,7 мин собирали и концентрировали с помощью роторного испарителя в вакууме в атмосфере азота. Остатки переносили хлороформом в 10 мл флакон и сушили в вакуумной печи при 35°С в течение 6 ч. После обработки азотом высушенные образцы замораживали в холодильнике с получением 1-пальмитин-2,3-дилинолеина.
HR-EI-MS: m/z составляло 854,7370 (рассчитано 854,7363, С55Н98О6), степень ненасыщенности составляла 7.
ИК (пленка KBr): 1746, 1165, 1095; 2926, 2854, 722; 3009,1648 см-1 (слабое).
Данные Ή-ЯМР показаны в табл. 8.
- 26 033751
Данные 13С-ЯМР показаны в табл. 9.
Пример 14. Выделение и определение 1,3-диолеин-2-линолеина.
Выделение проводили на устройстве для препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии Р3000А (колонка: Superstar Benetnach™ C18, 20x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза А: ацетонитрил, подвижная фаза В: ацетонитрил/тетрагидрофуран (1:1)). Раствор композиции масла семян коикса (50 мг/мл) был получен с подвижной фазой В, а объем вводимой пробы для каждого отделения составлял 1,5 мл. Условия градиента были следующими: подвижная фаза В: 0-27 мин: 50-60%, 27-35 мин: 90%, 35-45 мин: 100% и расход: 18 мл/мин. УФ-детектирование проводили при 208 нм. Пиковые фракции при времени выхода пика 18,4-20,2 мин собирали и концентрировали с помощью роторного испарителя в вакууме в атмосфере азота. Остатки переносили хлороформом в 10 мл флакон и сушили в вакуумной печи при 35°С в течение 6 ч. После обработки азотом высушенные образцы замораживали в холодильнике с получением 1,3-диолеин-2-линолеина.
HR-EI-MS: m/z составляло 882,7678 (рассчитано 882,7672, С57Н102О6), степень ненасыщенности составляла 7.
ИК (пленка KBr): 1747, 1163, 1097; 2925, 2855, 723; 3007,1655 см-1 (слабое).
Данные Ή-ЯМР показаны в табл. 8.
Данные 13С-ЯМР показаны в табл. 9.
Пример 15. Выделение и определение 1-пальмитин-2-линолеин-3-олеина.
Выделение проводили на устройстве для препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии Р3000А (колонка: Superstar Benetnach™ C18, 20x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза А: ацетонитрил, подвижная фаза В: ацетонитрил/тетрагидрофуран (1:1)). Раствор композиции масла семян коикса (50 мг/мл) был получен с подвижной фазой В, а объем вводимой пробы для каждого отделения составлял 1,5 мл. Условия градиента были следующими: подвижная фаза В: 0-27 мин: 50-60%, 27-35 мин: 90%, 35-45 мин: 100% и расход: 18 мл/мин. УФ-детектирование проводили при 208 нм. Пиковые фракции при времени выхода пика 20,3-21,4 мин собирали и концентрировали с помощью роторного испарителя в вакууме в атмосфере азота. Остатки переносили хлороформом в 10 мл флакон и сушили в вакуумной печи при 35°С в течение 6 ч. После обработки азотом высушенные образцы замораживали в холодильнике с получением 1 -пальмитин-2-линолеин-3 -олеина.
HR-EI-MS: m/z составляло 856,7519 (рассчитано 856,7513, С55Н100О6), степень ненасыщенности составляла 6.
ИК (пленка KBr): 1747, 1164, 1098; 2925, 2854, 723; 3008,1655 см-1 (слабое).
Данные Ή-ЯМР показаны в табл. 8.
Данные 13С-ЯМР показаны в табл. 9.
Пример 16. Выделение и определение 1,3-дипальмитин-2-линолеина.
Выделение проводили на устройстве для препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии Р3000А (колонка: Superstar Benetnach™ C18, 20x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза А: ацетонитрил, подвижная фаза В: ацетонитрил/тетрагидрофуран (1:1)). Раствор композиции масла семян коикса (50 мг/мл) был получен с подвижной фазой В, а объем вводимой пробы для каждого отделения составлял 1,5 мл. Условия градиента были следующими: подвижная фаза В: 0-27 мин: 50-60%, 27-35 мин: 90%, 35-45 мин: 100% и расход: 18 мл/мин. УФ-детектирование проводили при 208 нм. Пиковые фракции при времени выхода пика 25,7-26,2 мин собирали и концентрировали с помощью роторного испарителя в вакууме в атмосфере азота. Остатки переносили хлороформом в 10 мл флакон и сушили в вакуумной печи при 35°С в течение 6 ч. После обработки азотом высушенные образцы замораживали в холодильнике с получением 1,3-дипальмитин-2 -линолеина.
HR-EI-MS: m/z составляло 830,7371 (рассчитано 830,7363, С53Н98О6), степень ненасыщенности составляла 5.
ИК (пленка KBr): 1747, 1164, 1098; 2925, 2854, 723; 3008,1655 см-1 (слабое).
Данные Ή-ЯМР показаны в табл. 8.
Данные 13С-ЯМР показаны в табл. 9.
Пример 17. Выделение и определение триолеина.
Выделение проводили на устройстве для препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии Р3000А (колонка: Superstar Benetnach™ C18, 20x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза А: ацетонитрил, подвижная фаза В: ацетонитрил/тетрагидрофуран (1:1)). Раствор композиции масла семян коикса (50 мг/мл) был получен с подвижной фазой В, а объем вводимой пробы для каждого отделения составлял 1,5 мл. Условия градиента были следующими: подвижная фаза В: 0-27 мин: 50-60%, 27-35 мин: 90%, 35-45 мин: 100% и расход: 18 мл/мин. УФ-детектирование проводили при 208 нм. Пиковые фракции при времени выхода пика 26,6-27,7 мин собирали и концентрировали с помощью роторного испарителя в вакууме в атмосфере азота. Остатки переносили хлороформом в 10 мл флакон и сушили в вакуумной печи при 35°С в течение 6 ч. После обработки азотом высушенные образцы замораживали в холодильнике с получением триолеина.
HR-EI-MS: m/z составляло 884,7851 (рассчитано 884,7833, С57Н104О6), степень ненасыщенности со
- 27 033751 ставляла 6.
ИК (пленка KBr): 1749, 1165, 1095; 2925, 2854, 723; 3004,1654 см-1 (слабое).
Данные 1И-ЯМР показаны в табл. 8.
Данные 13С-ЯМР показаны в табл. 9.
Пример 18. Выделение и определение 1-пальмитин-2,3-диолеина.
Предварительное выделение проводили на устройстве для препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии Р3000А (колонка: Superstar Benetnach™ С18, 20x150 мм, 5 мкм; подвижная фаза А: ацетонитрил, подвижная фаза В: ацетонитрил/тетрагидрофуран (1:1)). Раствор композиции масла семян коикса (50 мг/мл) был получен с подвижной фазой В, а объем вводимой пробы для каждого отделения составлял 1,5 мл. Условия градиента были следующими: подвижная фаза В: 0-27 мин: 50-60%, 2735 мин: 90%, 35-45 мин: 100% и расход: 18 мл/мин. УФ-детектирование проводили при 208 нм. Пиковые фракции при времени выхода пика 28,2-29,3 мин собирали и концентрировали с помощью роторного испарителя в вакууме в атмосфере азота с получением неочищенного продукта.
Вторичную очистку осуществляли на колонке Superstar Benetnach™ C18 (10x250 мм, 5 мкм) с подвижной фазой А: ацетонитрил и подвижной фазой В: ацетонитрил/тетрагидрофуран (1:1). Раствор полученного выше неочищенного продукта (20 мг/мл) получали с подвижной фазой В, а объем вводимой пробы для каждого отделения составлял 1,5 мл. Условия градиента были следующими: подвижная фаза В: 0-23 мин: 50-60%, 32-43 мин: 60-90%, 43-60 мин: 100% и расход: 3 мл/мин. УФ-детектирование проводили при 208 нм. Пиковые фракции при времени выхода пика 32,9-35,1 мин собирали и концентрировали с помощью роторного испарителя в вакууме в атмосфере азота. Остатки переносили хлороформом в 10 мл флакон и сушили в вакуумной печи при 35°С в течение 6 ч. После обработки азотом высушенные образцы замораживали в холодильнике с получением 1-пальмитин-2,3-диолеина.
HR-EI-MS: m/z составляло 858,7672 (рассчитано 858,7676, С55Н102О6), степень ненасыщенности составляла 5.
ИК (пленка KBr): 1747, 1166, 1095; 2926, 2854, 722; 3003,1654 см-1 (слабое).
Данные 'H-ЯМР показаны в табл. 8.
Данные 13С-ЯМР показаны в табл. 9.
Пример 19. Получение инъекции с композицией масла семян коикса согласно изобретению.
Композиция.
Композиция масла семян коикса - 100 г, соевый лецитин для инъекции - 10 г, глицерин для инъекции - 15 г, воду для инъекции добавляли до 1000 мл, где композиция масла семян коикса содержит следующие ингредиенты:
1,3-диолеин - 0,50%, 1-линолеин-3-олеин - 1,31%,
1.2- диолеин - 0,30%,
1-олеин-2-линолеин - 0,95%,
1.2- дилинолеин - 0,41%, трилинолеин - 6,10%, 1-олеин-2,3-дилинолеин - 16,18%, 1-пальмитин-2,3-дилинолеин - 6,56%,
1.3- диолеин-2-линолеин - 16,69%, 1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин - 12,96%,
1.3- дипальмитин-2-линолеин - 2,88%, триолеин - 18,30%,
1-пальмитин-2,3-диолеин - 10,18%.
Способ.
К рецептурному количеству соевого лецитина для инъекции добавляли соответствующее количество воды для инъекции. Смесь диспергировали с помощью диспергирующего эмульгатора с высоким усилием сдвига в дисперсию, не содержащую крупных фрагментов или гранул. Добавляли рецептурное количество глицерина для инъекции. Затем добавляли воду для инъекции до указанного количества, и смесь перемешивали с получением водной фазы.
Рецептурное количество композиции масла семян коикса взвешивали. Навеску масла и водную фазу, полученную ранее, отдельно нагревали до 60°С, затем смешивали и эмульгировали в гомогенизаторе высокого давления, в котором низкое давление составляло 6 МПа, а высокое давление составляло 30 МПа. Гомогенизацию повторяли 4 раза до тех пор, пока количество частиц размером менее 2 мкм становилось не менее чем 95%, а частицы размером более 5 мкм не определялись. При необходимости для доведения pH до 8,5 использовали NaOH или HCl.
Полученную гомогенную эмульсию фильтровали под давлением азота через микропористый фильтр с размером пор 3 мкм или менее, затем обрабатывали азотом и, наконец, стерилизовали и охлаж- 28 033751 дали с получением инъекции.
Пример 20. Получение инъекции с композицией масла семян коикса согласно изобретению.
Композиция.
Композиция масла семян коикса - 300 г, соевый лецитин, пригодный для инъекции - 40 г, глицерин, пригодный для инъекции - 50 г, воду для инъекции добавляли до 1000 мл, где композиция масла семян коикса содержит следующие ингредиенты:
1,3-диолеин - 0,40%,
1-линолеин-3-олеин - 1,05%,
1.2- диолеин - 0,24%,
1-олеин-2-линолеин - 0,76%,
1.2- дилинолеин - 0,33%, трилинолеин - 4,87%,
1-олеин-2,3-дилинолеин - 13,00%,
1-пальмитин-2,3-дилинолеин - 5,25%,
1.3- диолеин-2-линолеин - 15,13%,
1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин - 10,26%,
1.3- дипальмитин-2-линолеин - 3,05%, триолеин - 20,46%,
1-пальмитин-2,3-диолеин - 11,50%.
Способ.
К рецептурному количеству соевого лецитина, пригодного для инъекции, добавляли соответствующее количество воды для инъекции. Смесь диспергировали с помощью диспергирующего эмульгатора с высоким усилием сдвига в дисперсию, не содержащую крупных фрагментов или гранул. Добавляли рецептурное количество глицерина для инъекции. Затем добавляли воду для инъекции до указанного количества, и смесь перемешивали с получением водной фазы.
Рецептурное количество композиции масла семян коикса взвешивали. Навеску масла и водную фазу, полученную ранее, отдельно нагревали до 70°С, затем смешивали и эмульгировали в гомогенизаторе высокого давления, в котором низкое давление составляло 12 МПа, а высокое давление составляло 45 МПа. Гомогенизацию повторяли 3 раза до тех пор, пока количество частиц размером менее 2 мкм становилось не менее чем 95%, а частицы размером более 5 мкм не определялись. При необходимости для доведения pH до 7,1 использовали NaOH или HCl.
Полученную гомогенную эмульсию фильтровали под давлением азота через микропористый фильтр с размером пор 3 мкм или менее, затем обрабатывали азотом и, наконец, стерилизовали и охлаждали с получением инъекции.
Пример 21. Получение инъекции с композицией масла семян коикса согласно изобретению.
Композиция.
Композиция масла семян коикса - 200 г, соевый лецитин для инъекции - 25 г, глицерин, пригодный для инъекции - 30 г, воду для инъекции добавляли до 1000 мл, где композиция масла семян коикса содержит следующие ингредиенты:
1.3- диолеин - 0,45%,
1-линолеин-3-олеин - 1,18%,
1.2- диолеин - 0,27%,
1-олеин-2-линолеин - 0,86%,
1.2- дилинолеин - 0,37%, трилинолеин - 5,47%,
1-олеин-2,3-дилинолеин - 14,75%,
1-пальмитин-2,3-дилинолеин - 6,01%,
1.3- диолеин-2-линолеин - 18,19%,
1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин - 14,11 %,
1.3- дипальмитин-2-линолеин - 2,60%, триолеин - 16,25%,
1-пальмитин-2,3-диолеин - 9,11%.
Способ.
К рецептурному количеству соевого лецитина для инъекции добавляли соответствующее количество воды для инъекции. Смесь диспергировали с помощью диспергирующего эмульгатора с высоким усилием сдвига в дисперсию, не содержащую крупных фрагментов или гранул. Добавляли рецептурное количество глицерина для инъекции. Затем добавляли воду для инъекции до указанного количества, и смесь перемешивали с получением водной фазы.
- 29 033751
Рецептурное количество композиции масла семян коикса взвешивали. Навеску масла и водную фазу, полученную ранее, нагревали отдельно до 65°С, затем смешивали и эмульгировали в гомогенизаторе высокого давления, в котором низкое давление составляло 10 МПа, а высокое давление составляло 30 МПа. Гомогенизацию повторяли 5 раз до тех пор, пока количество частиц размером менее 2 мкм становилось не менее чем 95%, а частицы размером более 5 мкм не определялись. При необходимости для доведения pH до 4,8 использовали NaOH или HCl.
Полученную гомогенную эмульсию фильтровали под давлением азота через микропористый фильтр с размером пор 3 мкм или менее, затем обрабатывали азотом и, наконец, стерилизовали и охлаждали с получением инъекции.
Пример 22. Получение инъекции с композицией масла семян коикса согласно изобретению.
Композиция.
Композиция масла семян коикса - 150 г, соевый лецитин, пригодный для инъекции - 35 г, глицерин для инъекции - 30 г, воду для инъекции добавляли до 1000 мл, где композиция масла семян коикса содержит следующие ингредиенты:
1,3-диолеин - 0,49%,
1-линолеин-3-олеин - 1,28%,
1.2- диолеин - 0,29%,
1-олеин-2-линолеин - 0,93%,
1.2- дилинолеин - 0,40%, трилинолеин - 5,96%,
1-олеин-2,3-дилинолеин - 15,93%,
1-пальмитин-2,3-дилинолеин - 6,43%,
1.3- диолеин-2-линолеин - 16,20%,
1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин - 12,57%,
1.3- дипальмитин-2-линолеин - 2,79%, триолеин - 17,69%,
1-пальмитин-2,3-диолеин - 9,87%.
Способ.
К рецептурному количеству соевого лецитина, пригодного для инъекции, добавляли соответствующее количество воды для инъекции. Смесь диспергировали с помощью диспергирующего эмульгатора с высоким усилием сдвига в дисперсию, не содержащую крупных фрагментов или гранул. Добавляли рецептурное количество глицерина для инъекции. Затем добавляли воду для инъекции до указанного количества, и смесь перемешивали с получением водной фазы.
Рецептурное количество композиции масла семян коикса взвешивали. Навеску масла и водную фазу, полученную ранее, нагревали отдельно до 68°С, затем смешивали и эмульгировали в гомогенизаторе высокого давления, в котором низкое давление составляло 7 МПа, а высокое давление составляло 35 МПа. Гомогенизацию повторяли 3 раза до тех пор, пока количество частиц размером менее 2 мкм становилось не менее чем 95%, а частицы размером более 5 мкм не определялись. При необходимости для доведения pH до 6,8 использовали NaOH или HCl.
Полученную гомогенную эмульсию фильтровали под давлением азота через микропористый фильтр с размером пор 3 мкм или менее, затем обрабатывали азотом и, наконец, стерилизовали и охлаждали с получением инъекции.
Пример 23. Получение капсулы с композицией масла семян коикса согласно изобретению.
Композиция.
Композиция масла семян коикса - 200 г, витамин Е - 0,20 г для получения 1000 капсул, где композиция масла семян коикса содержит следующие ингредиенты:
1.3- диолеин - 0,51%,
1-линолеин-3-олеин - 1,34%,
1.2- диолеин - 0,31%,
1-олеин-2-линолеин - 0,97%,
1.2- дилинолеин - 0,42%, трилинолеин - 6,20%,
1-олеин-2,3-дилинолеин - 16,58%,
1-пальмитин-2,3-дилинолеин - 6,69%,
1.3- диолеин-2-линолеин - 16,87%,
1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин - 13,09%,
1.3- дипальмитин-2-линолеин - 2,91%, триолеин - 18,42%,
- 30 033751
1-пальмитин-2,3-диолеин - 10,27%.
Способ.
Композиция клея: желатин, очищенную воду, глицерин, 10%-ный раствор этилпарабена взвешивали в массовом соотношении 1:1,2:0,8:0,01. Глицерин, очищенную воду и 10%-ный раствор этилпарабена последовательно добавляли в резервуар для плавления клея и нагревали до 70°С. Затем добавляли желатин и постоянно перемешивали в вакууме до его полного растворения. Клей фильтровали и хранили при 60°С перед использованием.
Композиция лекарственной жидкости: рецептурное количество композиции масла семян коикса и витамина Е добавляли в резервуар для ингредиентов и непрерывно перемешивали до полного смешивания.
Прессование капсул: подходящие пресс-формы подбирали в зависимости от размера капсулы. Капсулы прессовали при температуре 18°С и относительной влажности менее чем 35%, затем формовали и сушили. После удаления капсул ненормального размера капсулы нормального размера промывали 95%ным медицинским этанолом и непрерывно сушили до достижения содержания влаги менее чем 12%. Непригодные капсулы удаляли в результате визуального контроля, а на конечные продукты наносили печать и упаковывали.
Пример 24. Получение капсулы с композицией масла семян коикса согласно изобретению.
Композиция.
Композиция масла семян коикса - 800 г,
Твин 80 - 0,60 г для получения 1000 капсул, где композиция масла семян коикса содержит следующие ингредиенты:
1,3-диолеин - 0,55%,
1-линолеин-3-олеин - 1,44%,
1.2- диолеин - 0,33%,
1-олеин-2-линолеин - 1,05%,
1.2- дилинолеин - 0,45%,
Трилинолеин - 6,69%,
1-олеин-2,3-дилинолеин - 17,88%,
1-пальмитин-2,3-дилинолеин - 7,21%,
1.3- диолеин-2-линолеин - 14,92%,
1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин - 11,55%,
1.3- дипальмитин-2-линолеин - 3,14%, триолеин - 19,86%,
1-пальмитин-2,3-диолеин - 11,08%.
Способ.
Композиция клея: желатин, очищенную воду, глицерин, бензойную кислоту взвешивали в массовом соотношении 1:1,2:0,8:0,01. Глицерин, очищенную воду и бензойную кислоту последовательно добавляли в резервуар для плавления клея и нагревали до 90°С. Затем добавляли желатин и постоянно перемешивали в вакууме до его полного растворения. Клей фильтровали и хранили при 56°С перед использованием.
Композиция лекарственной жидкости: рецептурное количество композиции масла семян коикса и Твин 80 добавляли в резервуар для ингредиентов и непрерывно перемешивали до полного смешивания.
Прессование капсул: подходящие пресс-формы подбирали в зависимости от размера капсулы. Капсулы прессовали при температуре 26°С и относительной влажности менее чем 35%, затем формовали и сушили. После удаления капсул ненормального размера капсулы нормального размера промывали 95%ным медицинским этанолом и непрерывно сушили до достижения содержания влаги менее чем 12%. Непригодные капсулы удаляли в результате визуального контроля, а на конечные продукты наносили печать и упаковывали.
Пример 25. Получение капсулы с композицией масла семян коикса согласно изобретению.
Композиция.
Композиция масла семян коикса - 500 г, витамин Е - 0,40 г для получения 1000 капсул, где композиция масла семян коикса содержит следующие ингредиенты:
1.3- диолеин - 0,58%,
1-линолеин-3-олеин - 1,14%,
1.2- диолеин - 0,35%,
1-олеин-2-линолеин - 0,83%,
1.2- дилинолеин - 0,47%, трилинолеин - 6,99%,
1-олеин-2,3-дилинолеин - 18,69%,
- 31 033751
1-пальмитин-2,3-дилинолеин - 7,54%,
1.3- диолеин-2-линолеин - 19,02%,
1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин - 14,75%,
1.3- дипальмитин-2-линолеин - 3,28%, триолеин - 15,96%,
1-пальмитин-2,3-диолеин - 9,70%.
Способ.
Композиция клея: желатин, очищенную воду, глицерин сорбат калия взвешивали в массовом соотношении 1:0,9:0,6:0,005. Глицерин, очищенную воду и сорбат калия последовательно добавляли в резервуар для плавления клея и нагревали до 80°С. Затем желатин добавляли и постоянно перемешивали в вакууме до полного растворения желатина. Клей фильтровали и хранили при 62°С перед использованием.
Композиция лекарственной жидкости: рецептурное количество композиции масла семян коикса и витамина Е добавляли в резервуар для ингредиентов и постоянно перемешивали до полного смешивания.
Прессование капсул: подходящие пресс-формы подбирали в зависимости от размера капсулы. Капсулы прессовали при температуре 28°С и относительной влажности менее чем 35%, затем формовали и сушили. После удаления капсул ненормального размера капсулы нормального размера промывали 95%ным медицинским этанолом и непрерывно сушили до достижения содержания влаги менее чем 12%. Непригодные капсулы удаляли в результате визуального контроля, а на конечные продукты наносили печать и упаковывали.
Пример 26. Получение капсулы с композицией масла семян коикса согласно изобретению.
Композиция.
Композиция масла семян коикса - 600 г,
Твин 80 - 0,3 г для получения 1000 капсул, где композиция масла семян коикса содержит следующие ингредиенты:
1.3- диолеин - 0,45%,
1-линолеин-3-олеин - 1,26%,
1.2- диолеин - 0,27%,
1-олеин-2-линолеин - 0,88%,
1.2- дилинолеин - 0,36%, трилинолеин - 6,15%,
1-олеин-2,3-дилинолеин - 16,31%,
1-пальмитин-2,3-дилинолеин - 6,66%,
1.3- диолеин-2-линолеин - 16,77%,
1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин - 12,89%,
1.3- дипальмитин-2-линолеин - 2,88%, триолеин - 18,30%,
1-пальмитин-2,3-диолеин - 10,18%.
Способ.
Композиция клея: желатин, очищенную воду, глицерин и хлоргексидина ацетат взвешивали в массовом соотношении 1:1,0:0,5:0,008. Глицерин, очищенную воду и хлоргексидина ацетат последовательно добавляли в резервуар для плавления клея и нагревали до 85°С. Затем желатин добавляли и постоянно перемешивали в вакууме до полного растворения желатина. Клей фильтровали и хранили при 56°С перед использованием.
Композиция лекарственной жидкости: рецептурное количество композиции масла семян коикса и Твин 80 добавляли в резервуар для ингредиентов и постоянно перемешивали до полного смешивания.
Прессование капсул: подходящие пресс-формы подбирали в зависимости от размера капсулы. Капсулы прессовали при температуре 30°С и относительной влажности менее чем 35%, затем формовали и сушили. После удаления капсул ненормального размера капсулы нормального размера промывали 95%ным медицинским этанолом и непрерывно сушили до достижения содержания влаги менее чем 12%. Непригодные капсулы удаляли в результате визуального контроля, а на конечные продукты наносили печать и упаковывали.
Пример 27. Получение инъекции с композицией масла семян коикса согласно изобретению.
Композиция.
Композиция масла семян коикса - 100 г, соевый лецитин для инъекции - 10 г, глицерин для инъекции - 15 г, воду для инъекции добавляли до 1000 мл, где композиция масла семян коикса содержит следующие ингредиенты:
1.3- диолеин - 0,42%,
1-линолеин-3-олеин - 1,25%,
- 32 033751
1.2- диолеин - 0,25%,
1-олеин-2-линолеин - 0,81%,
1.2- дилинолеин - 0,35%, трилинолеин - 5,13%,
1-олеин-2,3-дилинолеин - 14,09%,
1-пальмитин-2,3-дилинолеин - 5,74%,
1.3- диолеин-2-линолеин - 15,01%,
1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин - 10,95%,
1.3- дипальмитин-2-линолеин - 2,88%, триолеин - 20,75%,
1-пальмитин-2,3-диолеин - 8,69%,
Способ.
К рецептурному количеству соевого лецитина для инъекции добавляли соответствующее количество воды для инъекции. Смесь диспергировали с помощью диспергирующего эмульгатора с высоким усилием сдвига в дисперсию, не содержащую крупных фрагментов или гранул. Добавляли рецептурное количество глицерина для инъекции. Затем добавляли воду для инъекции до указанного количества, и смесь перемешивали с получением водной фазы.
Рецептурное количество композиции масла семян коикса взвешивали. Навеску масла и водную фазу, полученную ранее, нагревали отдельно до 60°С, затем смешивали и эмульгировали в гомогенизаторе высокого давления, в котором низкое давление составляло 7 МПа, а высокое давление составляло 26 МПа. Гомогенизацию повторяли 5 раз до тех пор, пока количество частиц размером менее 2 мкм становилось не менее чем 95%, а частицы размером более 5 мкм не определялись. При необходимости для доведения pH до 6,8 использовали NaOH или HCl.
Полученную гомогенную эмульсию фильтровали под давлением азота через микропористый фильтр с размером пор 3 мкм или менее, затем обрабатывали азотом и, наконец, стерилизовали и охлаждали с получением инъекции.
Пример 28. Получение инъекции с композицией масла семян коикса согласно изобретению.
Композиция.
Композиция масла семян коикса - 300 г, соевый лецитин, пригодный для инъекции - 40 г, глицерин, пригодный для инъекции - 50 г, воду для инъекции добавляли до 1000 мл, где композиция масла семян коикса содержит следующие ингредиенты:
1.3- диолеин - 0,46%,
1-линолеин-3-олеин - 1,20%,
1.2- диолеин - 0,28%,
1-олеин-2-линолеин - 0,90%,
1.2- дилинолеин - 0,38%, трилинолеин - 5,71%,
1-олеин-2,3-дилинолеин - 15,11%,
1-пальмитин-2,3-дилинолеин - 6,02%,
1.3- диолеин-2-линолеин - 15,45%,
1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин - 14,20%,
1.3- дипальмитин-2-линолеин - 3,20%, триолеин - 17,14%,
1-пальмитин-2,3-диолеин - 9,22%.
Способ.
К рецептурному количеству соевого лецитина, пригодного для инъекции, добавляли соответствующее количество воды для инъекции. Смесь диспергировали с помощью диспергирующего эмульгатора с высоким усилием сдвига в дисперсию, не содержащую крупных фрагментов или гранул. Добавляли рецептурное количество глицерина, пригодного для инъекции. Затем добавляли воду для инъекции до указанного количества, и смесь перемешивали с получением водной фазы.
Рецептурное количество композиции масла семян коикса взвешивали. Навеску масла и водную фазу, полученную ранее, нагревали отдельно до 70°С, затем смешивали и эмульгировали в гомогенизаторе высокого давления, в котором низкое давление составляло 11 МПа, а высокое давление составляло 48 МПа. Гомогенизацию повторяли 6 раз до тех пор, пока количество частиц размером менее 2 мкм становилось не менее чем 95%, а частицы размером более 5 мкм не определялись. При необходимости для доведения pH до 7,5 использовали NaOH или HCl.
Полученную гомогенную эмульсию фильтровали под давлением азота через микропористый фильтр с размером пор 3 мкм или менее, затем обрабатывали азотом и, наконец, стерилизовали и охлаждали с получением инъекции.
Пример 29. Получение инъекции с композицией масла семян коикса согласно изобретению.
- 33 033751
Композиция.
Композиция масла семян коикса - 200 г, соевый лецитин для инъекции - 25 г, глицерин, пригодный для инъекции - 30 г, воду для инъекции добавляли до 1000 мл, где композиция масла семян коикса содержит следующие ингредиенты:
1,3-диолеин - 0,50%, 1-линолеин-3-олеин - 1,31%,
1.2- диолеин - 0,30%, 1-олеин-2-линолеин - 0,95%,
1.2- дилинолеин - 0,41%, трилинолеин - 6,18%, 1-олеин-2,3-дилинолеин - 16,03%, 1-пальмитин-2,3-дилинолеин - 6,51%,
1.3- диолеин-2-линолеин- 16,30%, 1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин - 12,83%,
1.3- дипальмитин-2-линолеин - 2,81%, триолеин - 18,10%, 1-пальмитин-2,3-диолеин - 9,95%.
Способ.
К рецептурному количеству соевого лецитина для инъекции добавляли соответствующее количество воды для инъекции. Смесь диспергировали с помощью диспергирующего эмульгатора с высоким усилием сдвига в дисперсию, не содержащую крупных фрагментов или гранул. Добавляли рецептурное количество глицерина, пригодного для инъекции. Затем добавляли воду для инъекции до указанного количества, и смесь перемешивали с получением водной фазы.
Рецептурное количество композиции масла семян коикса взвешивали. Навеску масла и водную фазу, полученную ранее, нагревали отдельно до 65°С, затем смешивали и эмульгировали в гомогенизаторе высокого давления, в котором низкое давление составляло 8 МПа, а высокое давление составляло 40 МПа. Гомогенизацию повторяли 4 раза до тех пор, пока количество частиц размером менее 2 мкм становилось не менее чем 95%, а частицы размером более 5 мкм не определялись. При необходимости для доведения pH до 6,5 использовали NaOH или HCl.
Полученную гомогенную эмульсию фильтровали под давлением азота через микропористый фильтр с размером пор 3 мкм или менее, затем обрабатывали азотом и, наконец, стерилизовали и охлаждали с получением инъекции.
Пример 30. Получение капсулы с композицией масла семян коикса по изобретению. Композиция.
Композиция масла семян коикса - 200 г, витамин Е - 0,20 г для получения 1000 капсул, где композиция масла семян коикса содержит следующие ингредиенты:
1.3- диолеин - 0,52%, 1-линолеин-3-олеин - 1,40%,
1.2- диолеин - 0,32%, 1-олеин-2-линолеин - 1,01%,
1.2- дилинолеин - 0,43%, трилинолеин - 6,51%, 1-олеин-2,3-дилинолеин - 17,26%, 1-пальмитин-2,3-дилинолеин - 6,84%,
1.3- диолеин-2-линолеин - 17,56%, 1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин - 13,56%,
1.3- дипальмитин-2-линолеин - 3,07%, триолеин - 19,33%, 1-пальмитин-2,3-диолеин - 1,80%.
Способ.
Композиция клея: желатин, очищенную воду, глицерин и 10%-ный раствор этилпарабена взвешивали в массовом соотношении 1:1,2:0,8:0,01. Глицерин, очищенную воду и 10%-ный раствор этилпарабена последовательно добавляли в резервуар для плавления клея и нагревали до 70°С. Затем желатин добавляли и постоянно перемешивали в вакууме до полного растворения желатина. Клей фильтровали и хранили при 59°С перед использованием.
Композиция лекарственной жидкости: рецептурное количество композиции масла семян коикса и витамина Е добавляли в резервуар для ингредиентов и постоянно перемешивали до полного смешивания.
Прессование капсул: подходящие пресс-формы подбирали в зависимости от размера капсулы. Кап- 34 033751 сулы прессовали при температуре 16°С и относительной влажности менее чем 35%, затем формовали и сушили. После удаления капсул ненормального размера капсулы нормального размера промывали 95%ным медицинским этанолом и непрерывно сушили до достижения содержания влаги менее чем 12%. Непригодные капсулы удаляли в результате визуального контроля, а на конечные продукты наносили печать и упаковывали.
Пример 31. Получение капсулы с композицией масла семян коикса по изобретению.
Композиция.
Композиция масла семян коикса - 800 г,
Твин 80 - 0,60 г для получения 1000 капсул, где композиция масла семян коикса содержит следующие ингредиенты:
1,3-диолеин - 0,56%,
1-линолеин-3-олеин - 1,11%,
1.2- диолеин - 0,34%,
1-олеин-2-линолеин - 0,91%,
1.2- дилинолеин - 0,46%, трилинолеин - 6,71%,
1-олеин-2,3-дилинолеин - 18,01%,
1-пальмитин-2,3-дилинолеин - 7,25%,
1.3- диолеин-2-линолеин - 18,50%,
1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин - 11,90%,
1.3- дипальмитин-2-линолеин - 2,63%, триолеин - 19,91%,
1-пальмитин-2,3-диолеин - 11,21%.
Способ.
Композиция клея: желатин, очищенную воду, глицерин и бензойную кислоту взвешивали в массовом соотношении 1:1,2:0,8:0,01. Глицерин, очищенную воду и бензойную кислоту последовательно добавляли в резервуар для плавления клея и нагревали до 90°С. Затем желатин добавляли и постоянно перемешивали в вакууме до полного растворения желатина. Клей фильтровали и хранили при 60°С перед использованием.
Композиция лекарственной жидкости: рецептурное количество композиции масла семян коикса и Твин 80 добавляли в резервуар для ингредиентов и постоянно перемешивали до полного смешивания.
Прессование капсул: подходящие пресс-формы подбирали в зависимости от размера капсулы. Капсулы прессовали при температуре 26°С и относительной влажности менее чем 35%, затем формовали и сушили. После удаления капсул ненормального размера капсулы нормального размера промывали 95%ным медицинским этанолом и непрерывно сушили до достижения содержания влаги менее чем 12%. Непригодные капсулы удаляли в результате визуального контроля, а на конечные продукты наносили печать и упаковывали.
Пример 32. Получение капсулы с композицией масла семян коикса согласно изобретению.
Композиция.
Композиция масла семян коикса - 500 г, витамин Е - 0,40 г для получения 1000 капсул, где композиция масла семян коикса содержит следующие ингредиенты:
1.3- диолеин - 0,57%,
1-линолеин-3-олеин - 1,21%,
1.2- диолеин - 0,34%,
1-олеин-2-линолеин - 0,86%,
1.2- дилинолеин - 0,46%, трилинолеин - 6,85%,
1-олеин-2,3-дилинолеин - 18,24%,
1-пальмитин-2,3-дилинолеин - 7,25%,
1.3- диолеин-2-линолеин - 18,61%,
1-пальмитин-2-линолеин-3-олеин - 12,03%,
1.3- дипальмитин-2-линолеин - 3,01%, триолеин - 18,60%,
1-пальмитин-2,3-диолеин - 11,21%.
Способ.
Композиция клея: желатин, очищенную воду, глицерин и сорбат калия взвешивали в массовом соотношении 1:0,9:0,6:0,005. Глицерин, очищенную воду и сорбат калия последовательно добавляли в резервуар для плавления клея и нагревали до 80°С. Затем желатин добавляли и постоянное перемешивали в вакууме до полного растворения желатина. Клей фильтровали и хранили при 62°С перед использовани- 35 033751 ем.
Композиция лекарственной жидкости: рецептурное количество композиции масла семян коикса и витамина Е добавляли в резервуар для ингредиентов и постоянно перемешивали до полного смешивания.
Прессование капсул: подходящие пресс-формы подбирали в зависимости от размера капсулы. Капсула прессовали при температуре 20°С и относительной влажности менее чем 35%, затем формовали и сушили. После удаления капсул ненормального размера капсулы нормального размера промывали 95%ным медицинским этанолом и непрерывно сушили до достижения содержания влаги менее чем 12%. Непригодные капсулы удаляли в результате визуального контроля, а на конечные продукты наносили печать и упаковывали.

Claims (17)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Композиция масла семян коикса, имеющая противоопухолевую и противовоспалительную активности, содержащая 5 диглицеридных и 8 триглицеридных ингредиентов, массовое процентное содержание которых составляет 0,40-0,58% 1,3-диолеина, 0,91-1,31% 1-линолеин-3-олеина, 0,24-0,35% 1,2диолеина, 0,66-0,95% 1-олеин-2-линолеина, 0,33-0,47% 1,2-дилинолеина, 4,87-6,99% трилинолеина, 13,00-18,69% 1-олеин-2,3-дилинолеина, 5,25-7,54% 1-пальмитин-2,3-дилилолеина, 13,23-19,02% 1,3диолеин-2-линолеина, 10,26-14,75% 1-пальмитин-2-линолеин-3-олеина, 2,28-3,28% 1,3-дипальмитин-2линолеина, 14,44-20,76% триолеина и 8,06-11,58% 1-пальмитин-2,3-диолеина.
  2. 2. Композиция масла семян коикса по п.1, в которой противоопухолевая активность представляет собой активность для лечения гиперплазии предстательной железы.
  3. 3. Композиция масла семян коикса по п.1, имеющая следующие физико-химические константы, основанные на обнаружении жирного масла: удельный вес при 20°С составляет 0,916-0,920, показатель преломления при 20°С составляет 1,471-1,474, кислотное число составляет менее 0,2, йодное число составляет 100-106, число омыления составляет 186-195; где массовое процентное содержание указанных диглицеридных и триглицеридных ингредиентов составляет 0,45-0,55% 1,3-диолеина, 1,03-1,25% 1линолеин-3-олеина, 0,27-0,33% 1,2-диолеина, 0,75-0,91% 1-олеин-2-линолеина, 0,37-0,45% 1,2дилинолеина, 5,47-6,69% трилинолеина, 14,63-17,88% 1-олеин-2,3-дилилолеина, 5,90-7,21% 1пальмитин-2,3-дилинолеина, 14,88-18,19% 1,3-диолеин-2-линолеина, 11,55-14,11% 1-пальмитин-2линолеин-3-олеина, 2,57-3,14% 1,3-дипальмитин-2-линолеина, 16,25-19,86% триолеина и 9,07-11,08% 1пальмитин-2,3-диолеина.
  4. 4. Композиция масла семян коикса по п.3, в которой массовое процентное содержание указанных диглицеридных и триглицеридных ингредиентов составляет 0,49-0,51% 1,3-диолеина, 1,12-1,16% 1линолеин-3-олеина, 0,29-0,31% 1,2-диолеина, 0,81-0,85% 1-олеин-2-линолеина, 0,40-0,42% 1,2дилинолеина, 5,96-6,20% трилинолеина, 15,93-16,58% 1-олеин-2,3-дилилолеина, 6,43-6,69% 1пальмитин-2,3-дилинолеина, 16,20-16,87% 1,3-диолеин-2-линолеина, 12,57-13,09% 1-пальмитин-2линолеин-3-олеина, 2,79-2,91% 1,3-дипальмитин-2-линолеина, 17,69-18,42% триолеина и 9,87-10,27% 1пальмитин-2,3-диолеина.
  5. 5. Способ получения композиции масла семян коикса по п.1, включающий следующие стадии:
    (1) сверхкритическая экстракция диоксидом углерода:
    a) измельчение семян коикса в порошок с размером частиц 10-80 меш и помещение указанного порошка в два 600-л экстрактора;
    b) нагревание подогревателя CO2, экстрактора и разделительной колонки горячей водой, циркулирующей в рубашке, для достижения температуры экстракции и температуры разделения 33-45°С и 3045°С соответственно; и поддержание температуры на выходе сепаратора I и сепаратора II на уровне 2050°С и 15-35°С соответственно;
    c) подача под давлением жидкого CO2 при расходе 1-3 т/ч в подогреватель CO2 через насос высокого давления, превращая его в флюид в сверхкритическом состоянии;
    d) экстракция масла флюидом CO2 в экстракторе под давлением 19-23 МПа;
    e) подача флюида CO2 с этим маслом в разделительную колонку, в которой давление поддерживают на уровне 7-10 МПа для отделения этого масла;
    f) подача газообразного CO2 из разделительной колонки последовательно в сепаратор I и сепаратор II, в которых давление поддерживают на уровне 5-7 и 4-6 МПа соответственно; удаление отделившихся примесей, таких как вода;
    g) превращение газообразного CO2 посредством конденсатора в жидкий CO2 для повторного использования; и
    h) непрерывная экстракция в течение 2-3 ч для получения неочищенного масла коикса; и (2) процесс очистки:
    a) добавление 60%-го петролейного эфира (температура кипения 60-90°С) относительно массы масла в неочищенное масло семян коикса, полученное сверхкритической экстракцией CO2, и добавление 2%го водного раствора NaOH в количестве от 36 до 56% относительно массы масла в соответствии с кислотным числом; после перемешивания смеси в течение 10 мин и выдерживания в течение 18-24 ч - уда
    - 36 033751 ление нижнего грязного слоя;
    b) промывание верхнего слоя очищенной водой и выдерживание в течение 18-24 ч, затем удаление нижнего слоя отработанной воды;
    c) повторное промывание верхнего слоя очищенной водой; выдерживание в течение еще 40-50 ч, затем удаление нижнего слоя отработанной воды;
    d) деэмульгирование верхнего слоя ацетоном в количестве 70-90% относительно массы масла; выдерживание в течение 2-4 ч, затем удаление нижнего слоя отработанного ацетона;
    e) добавление от 3 до 8%-го активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы неочищенного масла в верхнем масляном слое, перемешивание смеси в течение 30 мин, затем фильтрование осадка;
    f) нагревание фильтрата и добавление от 2 до 6%-го активированного каолина относительно массы неочищенного масла; перемешивание смеси в течение 30 мин при 40-50°С и последующее фильтрование осадка;
    g) концентрирование фильтрата при пониженном давлении для удаления растворителя и промывание концентрата очищенной водой; после выдерживания в течение 1-2 ч - удаление нижнего слоя отработанной воды, нагревание верхнего масляного слоя и его вакуумная сушка в атмосфере азота;
    h) добавление 8-12%-активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы неочищенного масла, перемешивание смеси и поддержание в холодном состоянии; после фильтрования - концентрирование отфильтрованного масла путем нагревания в вакууме в атмосфере азота;
    i) стерилизация масла путем стерилизации сухим теплом в вакууме при 160-170°С в течение 1-2 ч; после охлаждения - фильтрование масла через 0,2-мкм микропористую мембрану; затем раздельная загрузка полученного масла семян коикса в 500-мл стеклянные инфузионные флаконы, обработка азотом и герметизация флаконов.
  6. 6. Способ по п.5, где указанный процесс очистки включает следующие стадии:
    a) добавление 60%-го петролейного эфира (температура кипения 60-90°С) относительно массы масла в неочищенное масло семян коикса, полученное сверхкритической экстракцией CO2, и добавление 2%-го водного раствора NaOH в количестве от 36 до 56% относительно массы масла в соответствии с кислотным числом; после перемешивания смеси в течение 10 мин и выдерживания в течение 20 ч - удаление нижнего грязного слоя;
    b) промывание верхнего слоя очищенной водой, выдерживание в течение 22 ч, затем удаление нижнего слоя отработанной воды;
    c) повторное промывание верхнего слоя очищенной водой, выдерживание в течение еще 46 ч, затем удаление нижнего слоя отработанной воды;
    d) деэмульгирование верхнего слоя ацетоном в количестве 70-90% относительно массы неочищенного масла и выдерживание в течение 3 ч; затем удаление нижнего слоя отработанного ацетона;
    e) добавление 5%-го активированного нейтрального оксида алюминия относительно массы неочищенного масла в верхний масляный слой, перемешивание смеси в течение 30 мин, затем фильтрование осадка;
    f) нагревание фильтрата и добавление 4%-го активированного каолина относительно массы неочищенного масла, перемешивание смеси в течение 30 мин при 40-50°С и последующее фильтрование осадка;
    g) концентрирование фильтрата при пониженном давлении для удаления растворителя и промывание концентрата очищенной водой; после выдерживания в течение 1 ч - удаление нижнего слоя отработанной воды и нагревание верхнего масляного слоя и его вакуумная сушка в атмосфере азота;
    h) добавление 8-12%-го активированного нейтрального оксида алюминия, перемешивание смеси и поддержание в холодном состоянии; после фильтрования - концентрирование отфильтрованного масла путем нагревания в вакууме в атмосфере азота;
    i) стерилизация масла путем сухого нагревания в вакууме при 160-170°С в течение 2 ч; после охлаждения - фильтрование масла через 0,2-мкм микропористую мембрану; затем раздельная загрузка полученного масла семян коикса в 500-мл стеклянные инфузионные флаконы, обработка азотом и герметизация флаконов.
  7. 7. Фармацевтический препарат, содержащий терапевтически эффективное количество композиции масла семян коикса по любому из пп.1-4 и один или более фармацевтически приемлемых носителей, выбранных из фармацевтических разбавителей, эксципиентов, наполнителей, эмульгаторов, связующих веществ, смазывающих веществ, ускорителей абсорбции, поверхностно-активных веществ, разрыхлителей, смазывающих веществ, антиоксидантов, ароматизаторов, подсластителей, консервантов и красителей.
  8. 8. Фармацевтический препарат по п.7, в котором указанные фармацевтически приемлемые носители выбирают из одного или более из группы, состоящей из маннита, сорбита, метабисульфита натрия, бисульфита натрия, тиосульфата натрия, цистеина гидрохлорида, тиогликолевой кислоты, метионина, соевого лецитина, витамина С, витамина Е, динатриевой ЭДТА, кальций натриевой ЭДТА, карбоната одновалентного щелочного металла, ацетата, фосфата или его водного раствора, соляной кислоты, ук
    - 37 033751 сусной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, аминокислот, хлорида натрия, хлорида калия, лактата натрия, раствора этилпарабена, бензойной кислоты, сорбата калия, хлоргексидина ацетата, ксилита, мальтозы, глюкозы, фруктозы, декстрана, глицина, крахмала, сахарозы, лактозы, маннита, кремневых, целлюлозы, альгинатов, желатина, поливинилпирролидона, глицерина, Твин 80, агар-агара, карбоната кальция, бикарбоната кальция, поверхностно-активного вещества, полиэтиленгликоля, циклодекстрина, Р-циклодекстрина, фосфолипидного материала, каолина, талька и стеарата кальция или стеарата магния.
  9. 9. Фармацевтический препарат по п.7, который представляет собой пероральный твердый препарат, выбранный из любого из капсул, таблеток, микропилюль, гранул и концентрированных пилюль; пероральный жидкий препарат, выбранный из любого из водных или масляных суспензий, растворов, эмульсий, сиропов или эликсиров, и указанный жидкий препарат может быть в сухой форме и восстановлен водой или другим подходящим носителем перед применением; или инъекцию, выбранную из любой из наносуспензий, липосом, эмульсий, лиофилизированного порошка для инъекции и водной инъекции.
  10. 10. Фармацевтический препарат по п.9, где указанная инъекция содержит следующие компоненты: композиция масла семян коикса - 50-350 г, соевый лецитин для инъекции или соевый лецитин, пригодный для инъекции - 10-40 г, глицерин для инъекции или глицерин, пригодный для инъекции - 15-50 г, воду для инъекции добавляют до 1000 мл.
  11. 11. Способ получения фармацевтического препарата по п.10, включающий следующие стадии: добавление соответствующего количества воды для инъекции к рецептурному количеству соевого лецитина для инъекции или соевого лецитина, пригодного для инъекции; диспергирование смеси диспергирующим эмульгатором с высоким усилием сдвига с получением дисперсии без крупных гранул; добавление рецептурного количества глицерина для инъекции или глицерина, пригодного для инъекции; затем добавление воды для инъекции до указанного количества и перемешивание смеси с получением водной фазы;
    взвешивание рецептурного количества композиции масла семян коикса; раздельное нагревание навески масла и водной фазы до 60-70°С, затем их смешивание и эмульгирование смеси в гомогенизаторе высокого давления, в котором низкое давление составляет 5-12 МПа, а высокое давление составляет 2550 МПа; повторение цикла гомогенизации 3-6 раз до тех пор, пока количество частиц размером менее 2 мкм будет составлять не менее чем 95%, а частицы размером более 5 мкм не будут обнаруживаться; и фильтрование полученной гомогенной эмульсии под давлением азота через микропористый фильтр 3 мкм или менее; обработка эмульсии азотом, стерилизация и охлаждение с получением инъекции.
  12. 12. Фармацевтический препарат по п.9, где указанная капсула содержит следующие компоненты: композиция масла семян коикса - 200-800 г, антиоксидант(ы) и/или эмульгатор(ы) - 0,20-0,60 г для получения 1000 капсул.
  13. 13. Способ получения фармацевтического препарата по п.12, включающий следующие стадии: получение раствора клея: взвешивание желатина, очищенной воды, глицерина и консерванта в массовом соотношении 1:(0,6-1,2):(0,3-0,8):(0,0001-0,01); последовательное добавление глицерина, очищенной воды и консерванта в резервуар для плавления клея; нагревание до 70-90°С; затем добавление желатина и постоянное перемешивание смеси в вакууме до полного растворения желатина; фильтрация раствора клея и хранение отфильтрованного раствора клея при 56-62°С перед использованием;
    получение лекарственной жидкости: добавление рецептурного количества композиции масла семян коикса, антиоксиданта(ов) и/или эмульгатора(ов) в дозатор и постоянное перемешивание смеси до достижения гомогенности; и прессование капсул: выбор подходящих пресс-форм в зависимости от размера капсулы; прессование капсул при температуре 15-30°С и относительной влажности менее 35%; сушка прессованных и формованных капсул; после удаления капсул неподходящего размера промывание капсул нормального размера 95%-м медицинским этанолом и непрерывная сушка до достижения содержания влаги менее 12%; визуальный контроль и удаление неподходящих капсул; затем нанесение печати и упаковка с получением фармацевтического препарата; где указанный консервант выбирают из любого из 10%-го раствора этилпарабена, бензойной кислоты, сорбата калия и хлоргексидина ацетата;
    указанный антиоксидант представляет собой витамин Е и указанный эмульгатор представляет собой Твин 80.
  14. 14. Применение композиции масла семян коикса по п.1 для изготовления противоопухолевого лекарственного средства для лечения злокачественного новообразования, выбранного из рака легкого, рака печени, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака яичника, рака молочной железы, саркоматоидной карциномы или злокачественной саркомы, в ранней, средней или поздней стадиях.
  15. 15. Применение по п.14, где указанное противоопухолевое лекарственное средство используют для лечения простатита или простатической гиперплазии.
    - 38 033751
  16. 16. Применение по п.14, где указанное противоопухолевое лекарственное средство применяют в комбинации с химиотерапевтическим лекарственным средством, выбранным из одного или более из цисплатины, карбоплатины, циклофосфамида, гемцитабина гидрохлорида, митоксантрона, митомицина, лейпрорелина ацетата, доцетакселя и/или паклитакселя.
  17. 17. Применение композиции масла семян коикса по п.1 для изготовления противовоспалительных лекарственных средств.
EA201790116A 2014-07-18 2015-07-17 Композиция масла семян коикса, способ ее получения и применение EA033751B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410342342.1A CN105267776B (zh) 2014-07-18 含有13种甘油酯的薏苡仁油、制剂及其应用
PCT/CN2015/084294 WO2016008440A1 (zh) 2014-07-18 2015-07-17 含有13种甘油酯的薏苡仁油、制剂及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201790116A1 EA201790116A1 (ru) 2017-07-31
EA033751B1 true EA033751B1 (ru) 2019-11-21

Family

ID=55073657

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790116A EA033751B1 (ru) 2014-07-18 2015-07-17 Композиция масла семян коикса, способ ее получения и применение

Country Status (13)

Country Link
US (1) US9585929B2 (ru)
EP (1) EP3153164B1 (ru)
JP (1) JP6473802B2 (ru)
KR (1) KR101893812B1 (ru)
AP (1) AP2017009705A0 (ru)
AU (1) AU2015291529B2 (ru)
CA (1) CA2954688C (ru)
DK (1) DK3153164T3 (ru)
EA (1) EA033751B1 (ru)
NZ (1) NZ726577A (ru)
PL (1) PL3153164T3 (ru)
SG (1) SG11201700120XA (ru)
WO (1) WO2016008440A1 (ru)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102015113855A1 (de) 2015-08-20 2017-02-23 Andreas Hettich Gmbh & Co. Kg Rotor einer Zentrifuge
CN106390942A (zh) * 2016-11-07 2017-02-15 郑州圣莱特空心微珠新材料有限公司 一种用于印染废水的污水处理剂及其制备方法
CN108624403A (zh) * 2018-04-28 2018-10-09 武汉工程大学 一种低温非有机溶剂提取能源昆虫油脂的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1080176A (zh) * 1993-01-01 1994-01-05 浙江省中医院 薏苡仁中性油脂乳剂
CN1485072A (zh) * 2002-09-28 2004-03-31 治疗前列腺疾病的薏苡仁油软胶囊及其应用
CN1485418A (zh) * 2002-09-28 2004-03-31 李大鹏 超临界二氧化碳提取薏苡仁粗油方法
CN104173824A (zh) * 2014-07-18 2014-12-03 浙江康莱特集团有限公司 含有8种甘油三酯的薏苡仁油、制剂及其应用
US20140370129A1 (en) * 2013-06-14 2014-12-18 Zhejiang Kanglaite Group Co., Ltd. Dosing regimen and method for treating cancer using a coix seed oil emulsion

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PH30249A (en) * 1992-09-16 1997-02-05 Zhejiang Provincial Hospital O Neutral lipids from endosperm of job's tears
CN1029662C (zh) * 1992-09-17 1995-09-06 李大鹏 薏苡仁中性油脂及其提取方法
KR100382259B1 (ko) * 1994-07-11 2004-08-30 스미또모 가가꾸 고오교오 가부시끼가이샤 열가소성수지성형체의제조방법및성형장치
JP2002212586A (ja) * 2001-01-19 2002-07-31 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd 油脂の精製方法
JP4167849B2 (ja) * 2002-04-15 2008-10-22 大鵬 李 植物の果実から抽出した果実油、その抽出方法、医薬組成物およびその用途
CN1234828C (zh) * 2002-11-21 2006-01-04 上海高科联合生物技术研发有限公司 超临界二氧化碳萃取薏苡仁油的方法
CN100485072C (zh) * 2004-03-31 2009-05-06 杰富意钢铁株式会社 高刚度高强度薄板钢及其制备方法
CN1778380A (zh) * 2004-11-23 2006-05-31 乔志亚生技股份有限公司 薏仁油萃取的方法及组成分及其疗效
CN100485418C (zh) * 2006-12-21 2009-05-06 哈尔滨工业大学 机器人的三角形阵列红外传感器
CN101036761B (zh) * 2007-04-23 2010-05-19 肖志勇 一种薏苡仁油的制备方法
CN101940738A (zh) * 2010-07-27 2011-01-12 辽宁中医药大学 薏苡仁抗癌中药及其制备方法
CN102177978B (zh) * 2011-04-14 2013-01-30 西南大学 薏苡仁米糠及其运用
TWI541017B (zh) * 2012-12-20 2016-07-11 喬本生醫股份有限公司 薏苡子麩皮之萃取物及其應用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1080176A (zh) * 1993-01-01 1994-01-05 浙江省中医院 薏苡仁中性油脂乳剂
CN1485072A (zh) * 2002-09-28 2004-03-31 治疗前列腺疾病的薏苡仁油软胶囊及其应用
CN1485418A (zh) * 2002-09-28 2004-03-31 李大鹏 超临界二氧化碳提取薏苡仁粗油方法
US20140370129A1 (en) * 2013-06-14 2014-12-18 Zhejiang Kanglaite Group Co., Ltd. Dosing regimen and method for treating cancer using a coix seed oil emulsion
CN104173824A (zh) * 2014-07-18 2014-12-03 浙江康莱特集团有限公司 含有8种甘油三酯的薏苡仁油、制剂及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
XIANG, Zhimin et al., Identification of Triacylglycerols in Coix Oil by High Performance Liquid Chromatography-Atmospheric Pressure Chemical Ionization-Mass Spectrometry, China Journal of Chinese Materia Medica, 30 September 2005 (30.09.2005), vol. 33, no. 18, pages 1436 to 1438 *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20170014005A (ko) 2017-02-07
CN105267776A (zh) 2016-01-27
EP3153164B1 (en) 2019-05-22
EP3153164A1 (en) 2017-04-12
WO2016008440A1 (zh) 2016-01-21
JP6473802B2 (ja) 2019-02-20
EA201790116A1 (ru) 2017-07-31
CA2954688A1 (en) 2016-01-21
AU2015291529B2 (en) 2018-04-19
DK3153164T3 (da) 2019-08-26
KR101893812B1 (ko) 2018-09-04
PL3153164T3 (pl) 2019-11-29
AP2017009705A0 (en) 2017-01-31
US20160015769A1 (en) 2016-01-21
NZ726577A (en) 2018-06-29
US9585929B2 (en) 2017-03-07
SG11201700120XA (en) 2017-02-27
JP2017524047A (ja) 2017-08-24
CA2954688C (en) 2019-10-29
AU2015291529A1 (en) 2016-12-08
EP3153164A4 (en) 2017-05-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9855310B2 (en) Coix seed oil containing 8 triglycerides, and pharmaceutical preparation and use thereof
US10314878B2 (en) Coix seed oil containing 11 triglycerides, and pharmaceutical preparation and use thereof
EA033751B1 (ru) Композиция масла семян коикса, способ ее получения и применение
US10596218B2 (en) Coix seed oil containing 16 glycerides, and pharmaceutical preparation and use thereof
US9585858B2 (en) Pharmaceutical composition containing 13 triglycerides, and preparations and use thereof
CN105267776B (zh) 含有13种甘油酯的薏苡仁油、制剂及其应用
US9884037B2 (en) Pharmaceutical composition containing 8 triglycerides, and preparations and use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KZ KG TJ TM