EA032582B1 - Библиотека случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости - Google Patents

Библиотека случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости Download PDF

Info

Publication number
EA032582B1
EA032582B1 EA201391378A EA201391378A EA032582B1 EA 032582 B1 EA032582 B1 EA 032582B1 EA 201391378 A EA201391378 A EA 201391378A EA 201391378 A EA201391378 A EA 201391378A EA 032582 B1 EA032582 B1 EA 032582B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
butylamine
methylbenzyl
ethyl
cyclohexyl
piperonyl
Prior art date
Application number
EA201391378A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201391378A1 (ru
Inventor
Муралидхар Редди Моола
Джессика Шилке
Original Assignee
ОПКО ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ЭлЭлСи
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ОПКО ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ЭлЭлСи filed Critical ОПКО ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ЭлЭлСи
Publication of EA201391378A1 publication Critical patent/EA201391378A1/ru
Publication of EA032582B1 publication Critical patent/EA032582B1/ru

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6845—Methods of identifying protein-protein interactions in protein mixtures
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C07K1/047—Simultaneous synthesis of different peptide species; Peptide libraries
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B20/00—Methods specially adapted for identifying library members
    • C40B20/08—Direct analysis of the library members per se by physical methods, e.g. spectroscopy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
    • C40B40/04—Libraries containing only organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
    • C40B40/04—Libraries containing only organic compounds
    • C40B40/10—Libraries containing peptides or polypeptides, or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B60/00—Apparatus specially adapted for use in combinatorial chemistry or with libraries
    • C40B60/12—Apparatus specially adapted for use in combinatorial chemistry or with libraries for screening libraries
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/10—Musculoskeletal or connective tissue disorders
    • G01N2800/101—Diffuse connective tissue disease, e.g. Sjögren, Wegener's granulomatosis
    • G01N2800/104—Lupus erythematosus [SLE]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
    • G01N2800/2821—Alzheimer

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)

Abstract

Изобретение относится к библиотеке случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости, состоящей из множества соединений, по меньшей мере одно из указанных соединений имеет структуру формулы I, на носителе, где Rпредставляет собой -(C-C)SCH; Rвыбран из Н и R-Rнезависимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С-Салкил, -С-Салкил-SCH, -С-Салкил-С-Салкенил, -С-Салкил-С-Салкинил, -C-CСООН, -С-Салкил-ОН, -С-Салкил-NH, -С-Сциклоалкил, -С-Салкиларил, -С-Салкилгетероарил, -С-Салкил-NC(О)С-Салкил, -С-Салкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, Cl, F, Br, -ОСН, -SONHили -О-СН-О; где n составляет 3-11 и указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различающихся лигандов. Библиотеку случайных пептоидных лигандов можно применять для скрининга сложных биологических образцов с целью обнаружения связанных с болезнями биомаркеров.

Description

Изобретение относится к библиотеке случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости, состоящей из множества соединений, по меньшей мере одно из указанных соединений имеет структуру формулы I, на носителе, где Κι представляет собой -(Сг С6)8СН3; К2 выбран из Н и К3-К6 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -Сг С6алкил, -С1-С6алкил-8СН3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -СГС6 СООН, С1-С6алкил-ОН, -С1-С6алкил-?Ш2, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -Сг С6алкил-ХС(О)С1-С6алкил, -С1-С6алкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, С1, Г, Вг, -ОСН3, -8Ο2ΝΗ2 или -О-СН2-О; где η составляет 3-11 и указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различающихся лигандов. Библиотеку случайных пептоидных лигандов можно применять для скрининга сложных биологических образцов с целью обнаружения связанных с болезнями биомаркеров.
Перекрестные ссылки на родственные заявки
Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительных заявок на патент США 61/467256, 61/491717 и 61/583881, поданных 24 марта 2011 г., 31 мая 2011 г. и 6 января 2012 г. соответственно, каждая из которых полностью включена в настоящую заявку путем ссылки.
Область техники
Настоящее изобретение относится к новой методики скрининга, а также к новым диагностическим и терапевтическим продуктам, получаемым на ее основе. В частности, новые большие библиотеки на основе бусин, содержащие широкий ассортимент небольших молекул, пептидов, пептоидов и/или других олигомеров, применяют для скрининга биологических образцов на ассоциированные с заболеванием биомаркеры. Настоящее изобретение обеспечивает возможность одновременно быстрого и прямого скрининга плазмы, сыворотки или другой биологической жидкости с целью обнаружения ассоциированных с болезнью антител в организме носителя болезни и дополнительно позволяет обнаружить специфичные к антителам молекулы, которые могут служить диагностическими средствами или лекарственными средствами для таких заболеваний. Диагностические наборы, содержащие такие специфичные к антителам молекулы, могут быть изготовлены фактически для любого болезненного состояния, которое включает участие антител или иммуногенного компонента, такого как аутоиммунные заболевания, заболевания центральной нервной системы и рак. Такие наборы могут быть изготовлены фактически из любого носителя при условии, что такой носитель может поддерживать или нести на себе специфичную к антителу молекулу, такую как пептоид или другое связывающее соединение. Аналогичным образом, любой известный метод детекции, включая твердофазный иммуноферментный анализ (ЕБ18А) или другие известные средства детекции, могут быть использованы для детектирования антитела после скрининга, выявляющего потенциальные активные соединения, и/или после диагностического скрининга с использованием таких потенциальных активных соединений в диагностическом анализе. Такие способы также можно использовать для скрининга на другие биомаркеры, включая белки и/или другие биомолекулы на поверхности клеток, с целью отличить клетки, экспрессирующие ассоциированные с заболеванием маркеры от здоровых клеток.
Уровень техники
В заявке на патент США 2007/0003954 раскрыт способ получения профиля белков и антител с использованием микроматриц с низкомолекулярными соединениями. В этой заявке раскрыты лиганды, связывающиеся с лиганд-связывающими молекулами, причем лиганды организованы в виде матриц синтетических молекул, используемых для скрининга на биомаркеры молекулярных отпечатков пальцев. Конкретные матрицы, описанные в этой заявке, включают, например, маикроматрицу пептоидов, содержащую 7680 различных соединений, связанных с матрицей. В этом описании библиотеки на основе бусин используются в качестве исходного средства получения пептоидов, которые затем переносят в микроматрицы, содержащие адресуемые положения, для скрининга биологических жидкостей. Результатом скрининга является уникальный паттерн или молекулярный отпечаток пальца для любого конкретного белка в сложной биологической смеси. В заявке на патент США № 2010/0303805, которая полностью включена в настоящее описание путем ссылки, раскрыто несколько пептоидов и диагностические наборы, которые можно применять для скрининга биологических жидкостей на биомаркеры, связанные с заболеваниями центральной нервной системы. Конкретные мономеры, которые согласно этой заявке применяются для формирования матриц, также могут быть использованы в новом способе скрининга согласно настоящему изобретению, при условии увеличения библиотеки до значительно большего количества бусин/пептоидов или бусин/лигандов, например от более чем 100 тысяч до 150 млн.
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что значительно более крупные библиотеки на основе бусин (по сравнению со скрининговыми микроматричными системами скрининга на биомаркерыантитела или системами скрининга на клетки на основе бусин) в соответствующих условиях могут быть непосредственно использованы для скрининга сложных биологических образцов с целью обнаружения связанных с болезнями биомаркеров, а также в качестве значительно более обширного пула лигандов, которые связываются с такими лиганд-связывающими молекулами. Такой значительно более обширный пул включает существенно повышенное число высокоаффинных лигандов, которые служат диагностическими средствами, а также потенциальными терапевтическими средствами. Этот подход также обеспечивает значительно более высокую скорость скрининга для любой данной биологической жидкости, поскольку не исключена необходимость создания микроматриц или аналогичных адресуемых систем на первом этапе. В процессе проведения скрининга могут быть изготовлены микроматрицы или другие носители, включая диагностические матрицы, содержащие активные соединения, обнаруженные при скрининге, которые включены в объем настоящего изобретения.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к композиции или множеству композиций, содержащим обширную случайную библиотеку лигандов на основе бусин. Библиотека или множество библиотек, которые образуют композицию, выбраны для скрининга целевых болезни или состояния, и каждая библиотека может применяться для скрининга отдельной болезни или состояния (т.е. болезни или состояния, отличных от тех, для скрининга которых используются другие библиотеки), или одни и те же библиотеки
- 1 032582 могут применяться для скрининга нескольких болезней или состояний. Термин случайная охватывает библиотеки, которые содержат обширный ассортимент боковых цепей на монозамещенных аминах, которые образуют любой конкретный мономер в олигомерной цепи. Этот ассортимент групп К в исходных материалах - аминах является случайным, даже если некоторые химические и/или физические свойства какого-либо конкретного мономера, такие как функциональная активность/растворимость, составляют часть желаемого свойства или характеристики целевых олигомеров. Для скрининговых тестов на основе плазмы или скриннинговых тестов на основе сыворотки желательно, чтобы каждый конкретный лиганд, связанный с бусиной, имел характеристики растворимости, облегчающие взаимодействие в растворе с молекулой, связывающей лиганд, такой как антитело. Кроме того, размер олигомера также является свойством, принимаемым во внимание при формировании библиотеки лигандов, способных связываться со связывающим лиганд соединением, если таким соединением-мишенью является, например, антитело или белок. Библиотека лигандов на основе бусин содержит бусины или аналогичные структурыносители (т.е. полимерные смолы), с которыми (или с линкером такой смолы) связан лиганд, выбранный из группы, состоящей из небольших молекул, пептидов, пептоидов, полисахаридов или любого олигомерного соединения, включая нуклеиновые кислоты или модифицированные молекулы нуклеиновых кислот. В предпочтительном варианте реализации библиотека на основе бусин содержит пептоиды. Пептоиды представляют собой олигомеры, содержащие мономерные звенья, в которых от 5 до 15 мономеров связаны с образованием олигомера. Олигомер может содержать дополнительные молекулы, связанные с концом олигомера, для связывания с носителем или с линкером, соединяющего олигомер с носителем. Олигомерные пептоиды получают с использованием, например, гибридной комбинации обычного твердофазного синтеза пептидов с суб-мономерным подходом синтеза и содержат глицин или углеродзамещенные глицин-подобные фрагменты, содержащие монозамещенный амид, причем заместитель на атоме азота в амиде или α-углероде глицина выбран из широкого диапазона молекул в зависимости от монозамещенного амина или α-углерода глицина, применяемого в синтезе. В целом, библиотеки пептоидов могут быть приготовлены, как описано, например, в Кобабек апб Веббу, Ргосеебшдк οί 111е Νηΐίοηηΐ Лсабешу οί 8с1епсе5, 8ер. 6, 2005, ν. 102, № 36 или как описано в настоящей заявке. Как было указано выше, пул монозамещенных аминов обычно выбирают из разнообразных мономеров. Размер библиотеки может варьировать от приблизительно 200000 до 150 млн бусин, содержащих указанное число различных лигандов на бусину. В альтернативном варианте и в зависимости от размера бусины или носителя каждый носитель или бусина может содержать больше одного лиганда на бусину/носитель, причем лиганд(ы) может быть одинаковым или различным лигандом.
Далее бусины/носители, содержащие лиганд(ы), который составляет библиотеку, применяют в способе согласно настоящему изобретению. Настоящее изобретение включает способ скрининга биологической жидкости на ассоциированные с болезнью биомаркеры, включающий этапы скрининга контрольного биологического образца и биологического образца субъекта с заболеванием с использованием по меньшей мере одной библиотеки лигандов на основе бусин и обнаружение ассоциированных с болезнью биомаркеров с использованием такого скрининга. Настоящее изобретение включает способ скрининга сложной биологической жидкости на присутствие ассоциированного с болезнью биомаркера, который включает осуществление контакта указанного образца с множеством содержащих лиганд носителей, причем по меньшей мере один лиганд детектируемо связывается с ассоциированным с болезнью биомаркером. Настоящее изобретение также включает способ скрининга сложного биологического образца на ассоциированные с заболеванием биомаркеры, включающий этапы (1) осуществления контакта библиотеки случайных лигандов с контрольным образцом с идентификацией и удалением неспецифичных активных соединений лигандов и (2) осуществления контакта оставшейся библиотеки лигандов с образцом, взятым у больного субъекта, с идентификацией любых лигандов, которые связываются с ассоциированным с болезнью биомаркером в образце, взятом у больного субъекта. В частности, настоящее изобретение включает способ скрининга биологического образца на ассоциированный с болезнью биомаркер, включающий (1) предварительную обработку несущих лиганд бусин (НЛБ, ЬВВ) пригодным растворителем с получением обработанных НЛБ; (2) осуществление контакта обработанных НЛБ с биологическим образцом здорового контроля (ЗК), содержащим связывающие лиганд соединения контрольного образца; (3) осуществление контакта обработанных НЛБ из контрольного образца с панелью ЭупаЬеаб (меченное железом анти-1дО антитело) и удаление активных соединений; (4) промывку оставшейся библиотеки НЛБ и осуществление контакта указанной библиотеки с биологическим образцом ЗК, содержащим какие-либо остатки связывающих соединений контрольного образца, с использованием мечеными квантовыми точками вторичными анти-1дО антителами и удаление активных соединений; (5) промывку оставшейся библиотека НЛБ и осуществление контакта указанной библиотеки с биологическим образцом, взятым у больного пациента; (6) осуществление контакта обработанных НЛБ из образца, взятого у больного пациента, с панелью ЭупаЬеаб и удаление активных соединений; (7) промывку оставшихся НЛБ и осуществление контакта указанной библиотеки с биологическим образцом, взятым у больного пациента; (8) добавление меченых квантовыми точками анти-1дО антител с промытыми НЛБ и идентификацию соединений, связывающих ассоциированные с болезнью лиганды, связавшихся с лиган
- 2 032582 дом на НЛБ и, необязательно, после промывки бусин ЭупаЬеаб из этапа (6), повторение этапа (8) с использованием активных соединений ЭупаЬеаб из этапа (6) и идентификацию активных соединений ЭупаЬеаб Обо1. В предпочтительном варианте реализации в приготовлении НЛБ применяют бусины Тсп1адс1 (содержащие в своей структуре полиэтиленгликолевые линкеры). Также можно применять альтернативные бусины и/или частицы, содержащие другие и/или необязательные линкеры, а также альтернативные средства детектирования. Бусины могут быть выбраны, например, из бусин Ьитшех Ьеабк. В предпочтительном способе этапы ЭупаЬеаб не используют, за исключением начальных этапов валидации для подтверждения активных соединений Обок
Каждый из или все отдельные активные соединения, полученные на описанном выше этапе или этапах, могут быть далее исследованы, химически идентифицированы и синтезированы в виде идентичного соединения или его модифицированного варианта. В частности, предпочтительное исследование заключается в том, что берут лиганды на НЛБ из этапа (8) и секвенируют конкретный олигомер или лиганд, связанный с биомаркером или соединением, связывающим ассоциированный с болезнью лиганд. В предпочтительном варианте реализации лиганд представляет собой пептоид, и этот пептоид секвенируют для идентификации и/или подтверждения и повторной проверки идентичности предполагаемого диагностического зонда, который далее может быть использован в диагностическом наборе или в качестве основы для терапевтического лекарственного средства или кадидатной вакцины в зависимости от конкретной болезни или состояния. В предпочтительном варианте реализации выявленный лиганд секвенируют, идентифицируют и затем повторно синтезируют или синтезируют в более крупном масштабе с использованием метода синтеза на основе бусин или носителей для получения идентифицированного/секвенированного лиганда. В этом случае предпочтительный синтетический лиганд включает, например, аминокислоту цистеин в качестве функционального лиганда, который связан со смолой/бусиной или носителем (или с линкером на указанном носителе), и эту аминокислоту можно далее обработать, например, субмономерами, содержащими бромуксусную кислоту и замещенными аминами, содержащими выбранные группы В для лиганда с конкретной последовательностью (пептоид или α-замещенный пептоид). Остаток цистеина или другой аналогичный остаток аминокислоты обеспечивают сульфгидрильную группу, которая способна к реакции с электрофильными группами на предметных стеклах или носителях. В другом случае, при формировании исходной библиотеки и на бусинах Теп1аде1 или бусинах или смолах без линкеров в качестве первого мономера используют метионин, что обеспечивает возможность отщепления от бусины или смолы после синтеза пептоидного олигомера. При отщеплении от смолы или бусины метионин образует часть олигомера. Смолы Ринка, с другой стороны, содержат расщепляемые линкеры или линкеры, которые в соответствующих условиях облегчают отщепление молекулы от линкера и смолы без расщепления других амидных связей в олигомере.
Настоящее изобретение также включает диагностический набор, содержащий лиганды (или их модифицированные варианты), идентифицированные с использованием способа скрининга биологических образцов. Эффективность конкретного средства скрининга обеспечивает быструю идентификацию значительного числа фактических активных соединений, которые затем используются в диагностических наборах. Термин быстрая в данном случае означает, что предложенный процесс позволяет избежать сложного и ненужного этапа конструирования микрочипа перед необходимым анализом сложной биологической жидкости, что соответственно приводит к значительной экономии времени. Кроме того, предложенный способ позволяет осуществлять скрининг значительного большего числа молекул против сложной биологической жидкости в любое время, не ограничиваясь небольшим числом молекул на микроматрице. В дополнение к выявлению значительного числа активных соединений, обнаруженные лиганды включают значительно большее число высокоафинных связывающих соединений, по сравнению с обнаруженными с использованием известной методики скрининга, в которой не осуществляется прямой скрининг или анализ биологической жидкости (жидкостей) с использованием такой технологии на основе бусин или частиц. Такие лиганды могут применяться в мультиплексных платформах скрининга заболеваний, содержащих первый пептоид для скрининга на болезнь или состояние А и по меньшей мере один дополнительный пептоид для скрининга на болезнь или состояние В.
Спектр болезней, которые можно определять в скрининге по присутствию ассоциированных с болезнью антител или биомаркеров в представляющем интерес организме с использованием способа согласно настоящему изобретению, включает практически все болезни на любой стадии развития. Настоящее изобретение можно применять для диагностики и прогрессирования болезни животного и человека. Диагностические наборы, включающие лиганды, обнаруженные и идентифицированные в ходе скрининга, могут включать диагностические наборы на основе бусин для скрининга по месту нахождения больного и/или могут включать более сложные диагностические системы, основанные на более сложных и/или мультиплексных системах носителей, таких как микроматрицы. Кроме того, диагностические тесты с использованием пептоидов, α-замещенных пептоидов или лигандов, выявленных в первоначальном скрининге, могут быть использованы в клинических испытаниях для идентификации или облегчения идентификации групп пациентов и/или прогрессирования заболевания в любой данной популяции или субпопуляции пациентов. Предполагается, что такие данные, полученные в первичном и/или вторичном
- 3 032582 или третичном скрининге, описанном здесь, могут ускорять разработку лекарственных средств и адаптированного для подгруппы или конкретного пациента лечения с использованием фармацевтических средств, которые специально предназначены для определенной стадии или нескольких стадий заболевания, включая ранние стадии заболевания. Аналогично, диагностические наборы, полученные из раскрытых здесь лигандов, могут быть использованы для определения прогрессирования ранней стадии заболевания и/или любой стадии прогрессирования заболевания на основании профиля биомаркеров. Такая информация может быть использована для помощи врачу в назначении наиболее подходящего лечения для отдельного пациента или группы пациентов.
Другие признаки и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из приведенных ниже подробного описания, примеров и чертежей. Однако следует понимать, что подробное описание и примеры, хотя и указывают предпочтительные варианты реализации изобретения, приведены исключительно для иллюстрации, поскольку для специалиста на основании описания будут очевидны различные изменения и модификации в пределах сущности и объема настоящего изобретения.
Краткое описание чертежей
Настоящая заявка включает следующие чертежи.
На фиг. 1 показана основная химическая схема получения библиотеки бусин Тентагель (Тсн1адс1) (ΚΝ1Β), использованной для скрининга образцов сыворотки больных болезнью Альцгеймера. На фиг. 1А показано начало получения из полистироловых бусин, содержащих аминогруппу, в качестве вещества, участвующего в реакции (между бусинами и концевой аминогруппой может быть сформирован полиэтиленгликолевый или эквивалентный или альтернативный линкер). На фиг. 1В показан в качестве исходной аминокислоты на бусине метионин, который в результате последующей реакции образует соединение, показанное на В. На фиг. 1С показаны субмономеры (мономерные амины и галоуксусные кислоты), использованные для получения библиотеки олигомерных соединений.
На фиг. 2 показана основная химическая схема получения библиотеки бусин Тентагель (Тсп1адс1) (ΙΟ3Β), которую также использовали для скрининга образцов сыворотки больных болезнью Альцгеймера. На фиг. 1А показано начало получения из полистироловых бусин, содержащих аминогруппу, в качестве вещества, участвующего в реакции (между бусинами и концевой аминогруппой может быть сформирован полиэтиленгликолевый или эквивалентный или альтернативный линкер). На фиг. 1В показан в качестве исходной аминокислоты на бусине метионин, который в результате последующей реакции образует соединение, показанное на фиг. В. На фиг. 1С показаны субмономеры (мономерные амины и галоуксусные кислоты), использованные для получения библиотеки олигомерных соединений. ГС3В также использовали для скрининга сыворотки больных раком поджелудочной железы (данные не показаны).
На фиг. 3 показана основная химическая схема получения библиотеки бусин Тентагель (Тсп1адс1) (1С4В), использованной для скрининга образцов сыворотки больных болезнью Альцгеймера. На фиг. 1А показано начало получения из полистироловых бусин, содержащих аминогруппу, в качестве вещества, участвующего в реакции (между бусинами и концевой аминогруппой может быть сформирован полиэтиленгликолевый или эквивалентный или альтернативный линкер). На фиг. 1В показан в качестве исходной аминокислоты на бусине метионин, который в результате последующей реакции образует соединение, показанное на фиг. В. На фиг. 1С показаны субмономеры (мономерные амины и галоуксусные кислоты), использованные для получения библиотеки олигомерных соединений.
На фиг. 4 показана основная химическая схема получения библиотеки бусин Тентагель (Тсп1адс1) (1С5В), использованной для скрининга образцов сыворотки больных болезнью Альцгеймера. На фиг. 1А показано начало получения из полистироловых бусин, содержащих аминогруппу, в качестве вещества, участвующего в реакции (между бусинами и концевой аминогруппой может быть сформирован полиэтиленгликолевый или эквивалентный или альтернативный линкер). На фиг. 1В показан в качестве исходной аминокислоты на бусине метионин, который в результате последующей реакции образует соединение, показанное на В. На фиг. 1С показаны субмономеры (мономерные амины и галоуксусные кислоты), использованные для получения библиотеки олигомерных соединений. Мономеры 1С5В включали изобутиламин, 2-метоксиэтиламин, диаминобутан, фуриламин, циклогексиламин, К-метилбензиламино, пиперониламин и 4-(аминоэтил)бензолсульфонамид.
На фиг. 5 показана основная химическая схема получения библиотеки бусин Тентагель (Тсп1адс1) (1С7В), использованной для скрининга образцов сыворотки. На фиг. 1А показано начало получения из полистироловых бусин, содержащих аминогруппу, в качестве вещества, участвующего в реакции (между бусинами и концевой аминогруппой может быть сформирован полиэтиленгликолевый или эквивалентный или альтернативный линкер). На фиг. 1В показан в качестве исходной аминокислоты на бусине метионин, который в результате последующей реакции образует соединение, показанное на В. На фиг. 1С показаны субмономеры (мономерные амины и галоуксусные кислоты), использованные для получения библиотеки олигомерных соединений.
На фиг. 6 показана схема предложенного согласно настоящему изобретению способа скрининга сложного биологического образца с использованием библиотек пептоидных лигандов на основе бусин.
На фиг. 7 показаны нормальные контроли - активные соединения, полученные с использованием бусин ЭупаЬсаб (ЗК, ΝΟ) после добавления ОЭо1 в библиотеку пептоидов (ЗС3В). приготовленную для
- 4 032582 скрининга против образцов сыворотки не больных болезнью Альцгеймера субъектов (нормальные контроли) и образцов сыворотки больных болезнью Альцгеймера субъектов. Активные соединения были извлечены, а оставшиеся бусины, связанные с лигандами, использовали для скрининга по заболеванию.
На фиг. 8 показан скрининг на бусинах Тсп1адс1 образцов сыворотки крови пациентов с болезнью Альцгеймера после удаления после удаления ЗК. Активные соединения показаны красным, что соответствует вторичному антителу Обок связанному с биомаркером (антителом), ассоциированным с болезнью, в сыворотке, которое связано с пептоидом, соединенным полиэтиленгликолевым линкером с бусиной.
На фиг. 9 показан тест на воспроизводимость с применением нормального контрольного образца (N0 030093) после промывки ДСН и добавления Обо1. Стрелка показывает пептоиды, связывавшиеся с Νί.' и выбранные для секвенирования.
На фиг. 10 показан тест на воспроизводимость с применением нормального контрольного образца ^С 050047) после промывки ДСН и добавления Обо!.
На фиг. 11 показан тест на воспроизводимость с применением образца пациента после промывки ДСН и добавления Обо!.
На фиг. 12 показаны пептоидные последовательности предполагаемых выявленных соединений (активных соединений), выбранных при скрининге на болезнь Альцгеймера из библиотеки 1С3В. Сконец находится на правой стороне листа, а Ν-конец находится на левой стороне.
На фиг. 13 показаны химические структуры предпочтительных высокоаффинных активных соединений (Ы!), полученных при скрининге болезни Альцгеймера с использованием библиотеки 1С3В; показанные в этом примере структуры содержат остаток цистеина и были повторно синтезированы после определения структуры исходного активного соединения при предварительном скрининге. Библиотека 1С3В содержала аналогичный пептоид, но содержавший на С-конце остаток метионина, а не остаток цистеина.
На фиг. 14 показан эксперимент по конкуренции между высокоаффинным лигандом (ΛΌΤΟΙ) в растворе по сравнению с ΛΌΤΟ-1-ΛΌΤΟ-42 на носителе микроматрицы. Указанный эксперимент по конкуренции показывает, что ΛΌΤΟΙ в растворе связывался с тем же антителом, которое связывалось с пептоидами ΛΌΤΟ-1, ΛΌΤΟ14, ΛΌΤΟ24, ΛΌΤΟ25, ΛΌΤΟ3Ι, ΛΌΤΟ35 и ΛΌΤΟ40 на микроматрице. Аналогичные эксперименты выполнили с каждым из пептоидов с целью поиска четырех наборов пептоидов, связанных с четырьмя различными аутоантителами при болезни Альцгеймера.
На фиг. 15 показаны четыре группы различных пептоидов, связывающихся с различными аутоантителами при скрининге болезни Альцгеймера. В верхней части каждой группы на указанном чертеже приведены связывающиеся агенты с более высоким сродством.
На фиг. 16А показаны данные тестирования болезни Альцгеймера (слепое исследование) для пула больных с использованием пептоида Р1аад1 (1С3В-1), а на фиг. 16В показаны данные тестирования (слепое исследование) того же пула пациентов с БА с использованием Р1аад2 (1С3В-21). Каждый пептоид представлен на микроматрице.
На фиг. 17А показаны данные тестирования болезни Альцгеймера (слепое исследование) для пула больных с использованием пептоида Р1аад3 (1С3В-7), на фиг. 17В показаны данные тестирования (слепое исследование) того же пула пациентов с БА с использованием Р1аад4 (3С3В-5). Каждый пептоид представлен на микроматрице.
На фиг. 18А показаны данные теста (слепого) на БА для группы пациентов с использованием пептоида Р1аад5 (1С3В-К8), а на фиг. 18В показаны данные теста (слепого) для той же группы пациентов с использованием Р1аад6 (1С3В-К12). Все пептоиды использовали на микроматрице.
На фиг. 18А показаны данные тестирования болезни Альцгеймера (слепое исследование) для пула больных с использованием пептоида Р1аад5 (1С3В-К8), на фиг. 18В показаны данные тестирования (слепое исследование) того же пула пациентов с БА с использованием Р1аад6 (1С3В-К 12). Каждый пептоид представлен на микроматрице.
На фиг. 20А показаны данные, полученные с использованием микроматриц для Α^Р3 в той же группе пациентов для тестов, выполненных с использованием Р1аад1-6, на фиг. 20В показано сравнение данных, полученных с использованием Р1аад2 и того же набора пациентов. Указанные данные демонстрируют четкую корреляцию между результатами, достигнутыми с ранее выявленным Α^Р3 и вновь выявленным Р1аад2 в одном и той же группе пациентов.
На фиг. 21 показана валидация Р1аад5 (предполагаемое активное соединение 5 или 1С3В-К8) на бусинах Τοηΐηβοί при сравнении сыворотки пациентов с БА с пулом сыворотки здоровых контрольных субъектов при концентрации 40 мкг/мл.
На фиг. 22А показаны пептоиды, связывавшиеся при скрининге рака поджелудочной железы с использованием Обо! 655 и библиотеки 1С5В. На фиг. 22В и 22С показано подтверждение выявленных соединений (активных соединений) с использованием Обо! 655 (стрелки указывают на активные соединения).
На фиг. 23 показана валидация пептоидных выявленных соединений (активных соединений) для скрининга поджелудочной железы и сравнение добавления и детектирования сыворотки при заболевании
- 5 032582 с помощью ΟάοΙ 655 и добавления нормальной сыворотки.
На фиг. 24 показана валидация активного соединения путем смешивания маркеров БА и РС. Полученные данные показывают, что маркер РС обнаруживали при отсутствии обнаруживаемого антитела на бусинах с пептоидами БА в сыворотке при раке поджелудочной железы (сыворотка 1).
На фиг. 25 показаны последовательности соединений из библиотеки 1С3В, подходящих для скрининга рака поджелудочной железы.
На фиг. 26 показаны последовательности соединений из библиотеки 1С5В, подходящих для скрининга рака поджелудочной железы.
На фиг. 27А-27С показаны результаты скрининга СКВ (волчанки). А - нормальный контроль, а В и С - сыворотка при СКВ из двух различных групп 1 и 2. Стрелки указывают на активные соединения.
На фиг. 28 показаны активные соединения СКВ из библиотеки ΚΝ1Β. С-конец находится на правой стороне страницы.
На фиг. 29 показана валидация активных соединений для пептоида ΚΝ1Β-20. Группу 1 составляют объединенные образцы сыворотки от субъектов с заболеванием с концентрацией приблизительно 0,374 мг/мл (картинка слева) (активные соединения показаны красной окраской бусин). Объединенные сыворотки субъектов без заболевания (картинка в центре) использованы в концентрации приблизительно 0,378 мг/мл, а на дальней правой картинке показан контроль без сыворотки.
На фиг. 30 показано связывание/детектирование одного из пептодидов СКВ (волчанки) с планшетами для твердофазного ИФА (ЕЬ18Л) с использованием двух различных способов связывания при различных концентрациях пептоида с использованием флуоресцентной метки.
На фиг. 31 показан конкурентный анализ с иммобилизованным на планшете ΚΝΓΒ-20-биотинфлюоресцеина и свободным КШВ-20-биотином в растворе в различных концентрациях. Сигнал снижается по мере увеличения концентрации свободного КЫ1В-20-биотина, начиная с эквимолярных концентраций свободного и связанного веществ.
На фиг. 32 показан планшет для твердофазного ИФА, содержащий пептоид в различных концентрациях, изображение четко демонстрирует разницу между сывороткой больного субъекта (БА) (Р столбец 1) и сывороткой здорового контроля (ряд 3) [1:200 с удвоением в каждой лунке: 1:400, 1:800, 1:1600, 1:3200, 1:6400, 1:12800]. Стрелки указывают на разведение 1:800 в 1Х буфере ТВ8Т. Концентрация пептоида в лунке составляет 10 мМ. На фиг. 32 также показана валидация платформы на бусинах Тсп1;щс1 по различению между сывороткой больного субъекта и контрольной сывороткой.
На фиг. 33 показан планшет для твердофазного ИФА (ЕЬ18Л) с 10 мМ ΑΌΡ3 и различными разбавлениями сыворотки субъекта с БА против контрольной сыворотки. Стрелка указывает на разбавление 1:800.
На фиг. 34 показан планшет для твердофазного ИФА (ЕЬ18Л) с 10 мМ 8ЬЕ-КШВ-20 и различными разбавлениями сыворотки субъекта с БА против контрольной сыворотки. Стрелка указывает на разбавление 1:800.
На фиг. 35 показан график ИФА-анализа (ЕЬ18Л) сыворотки БА с использованием 10 мМ ЛЭР3. приготовленного в буфере для связывания, при различных разведениях сыворотки. Разделение между сыворотками больных и здоровых субъектов происходило в диапазоне разбавления от 1:200 до приблизительно 1:10000. Начальные разбавления составляли 1:200 (группа 1 - сыворотка БА при 0,394 мг/мл и сыворотка субъектов без заболевания при 0,386 мг/мл).
На фиг. 36 показан график ИФА-анализа (ЕЬ18Л) сыворотки СКВ с использованием 10 мМ ШВ20, приготовленного в буфере для связывания, при различных разведениях сыворотки. Разделение между сыворотками больных и здоровых субъектов происходило в диапазоне разбавления от 1:200 до приблизительно 1:10000. Начальные разбавления составляли 1:200 (группа 1 - сыворотка СКВ при 0,375 мг/мл и сыворотка субъектов без заболевания при 0,396 мг/мл).
На фиг. 37 показан график ИФА-анализа (ЕЬ18Л) сыворотки СКВ с использованием 10 мМ ШВ20, при, приготовленного в ДМСО, при различных разведениях сыворотки. Разделение между сыворотками больных и здоровых субъектов происходило в диапазоне разбавления от 1:200 до приблизительно 1:10000. Начальные разбавления составляли 1:200 (группа 1 - сыворотка СКВ при 0,367 мг/мл и сыворотка субъектов без заболевания при 0,322 мг/мл).
На фиг. 38 показана валидация платформы ГЛС8 для бусин Тсп1адс1.
Фиг. 39 иллюстрирует степень разделение между бусинами, содержащими ацетильную группу, и бусинами, содержащими 2,5-динитрофенильную группу (ΌΝΡ), при различных концентрациях сыворотки (от 100 до 1,000 мкг/мл) и в ответ на обработку вторичным антителом с анти-ΌΝΡ меткой. Разделение по средней интенсивности флюоресценции (ММ) было максимальным при разбавлении сыворотки выше 1000 мкг/мл.
Фиг. 40 демонстрирует, что существует прямая конкуренция между этаноламин-ΌΝΡ и связыванием ΌΝΡ (на планшете) с анти-ΌΝΡ антителом в концентрации 1000 мкг/мл сыворотки.
На фиг. 41 показано, что ΑΌΡ3 связывал антитело к антителу из объединенных сывороток здорового контроля и объединенных сывороток БА. Эти данные демонстрируют хорошее разделение при концентрациях сывороток в диапазоне от 20 до 140 мкг/мл с использованием двух различных вторичных
- 6 032582 антител (антитела козы к АТ человека с Эу1щ111 649, антитела козы к АТ человека с А1еха 647).
На фиг. 42 показано, что ΑΌΡ3 связывал аутоантитело из сывороток здорового контроля и сывороток субъектов с БА после вычитания фоновых значений в различных диапазонах концентрации сыворотки. Имеет место значительная степень разделения в большинстве диапазонов концентраций от меньше чем 20 до 120 мкг/мл или выше.
На фиг. 43 и 44 приведены структуры повторно синтезированных пептоидных лигандов - выявленных соединений (активных соединений) при СКВ (волчанка).
На фиг. 45 показано получение ΑΌΡ3 на 10-мкм бусинах Теи1аде1 и последующее расщепление с помощью СИВг вместе с масс-спектрометрическим считыванием показанного лактона.
На фиг. 46 показано связанное с ΑΌΡ3 аутоантитело из сывороток здорового контроля и сывороток субъектов с болезнью Альцгеймера в различных концентрациях. Бусины предварительно блокировали в течение 3 ч с использованием IX ТВБТ, а затем осуществляли детектирование с использованием вторичного антитела козы к АТ человека с А1еха 647.
На фиг. 47 показано связанное с ΑΌΡ3 аутоантитело из сывороток здорового контроля и сывороток субъектов с болезнью Альцгеймера при различных концентрациях сыворотки, а также показаны значения ΌΝΡ.
На фиг. 48 и 49 - связанное с ΑΌΡ3 аутоантитело из сывороток здоровых контролей в сравнении с сыворотками субъектов с БА с использованием условий предварительного блокирования, таких как лизат Е. со11 и лизин.
На фиг. 50 показана базовая схема приготовления и различения пептоидов, которые используются в микроматрицах в сравнении с пептоидами, которые размещали на планшетах для ИФА (ЕЫБА). Схема получения отдельных пептоидов: отдельные бусины раздельно помещают в лунки микротитрационных планшетов и отщепляют пептоиды от бусин с получением концентрированного исходного раствора. Следует отметить, что в каждой лунке теперь находится единственный вид пептоида. Затем несколько тасыч пептоидов наносят на предметные стекла их химически модифицированного стекла таким образом, что они ковалентно связываются с поверхностью. Из одной синтетической библиотеки можно получить несколько тысяч стекол с высокой степенью воспроизводимости. ИФА получают аналогичным образом, за тем исключением, что на поверхности нет цепи ПЭГ, но плотность пептоидов на планшете для ИФА может отличаться от их плотности на микроматрицах.
На фиг. 51 показаны эксперименты ИФА, которые позволяют четко отличить сыворотку здорового контроля от сыворотки больного пациента при разбавлении сыворотки 1:800 с использованием пероксидазы хрена (ΗΕΡ), связанной со вторичным антителом, для детектирования комплекса, ассоциированного с болезнью антитела с пептоидом. Добавляют бесцветный субстрат, который меняет цвет (на синий) после реакции со связанным ферментом ΗΚΡ.
На фиг. 52 показаны данные по титрованию, сравнивающие различные БА-пептоиды с помощью твердофазного ИФА при различных разведениях сыворотки пациентов (А) по сравнению с нормальной сывороткой (В). В нормальной сыворотке отсутствуют интенсивные сигналы, и имеет место четкое различие интенсивности всех БА-пептоидов по мере увеличения концентрации от 1:12800 до 1:200.
На фиг. 53 приведена диаграмма, подтверждающая корреляцию между клиническим диагнозом для немаскированного набора образцов пациентов болезнью Альцгеймера с различными стадиями (или отсутствием) БА в сравнении с данными, полученными по тем же образцам сыворотки пациента (маскированным) в результате скрининга против пептоида ΛΩΡ3 для детектирования ассоциированных с болезнью антител. Приведенные результаты получены в слепом исследовании образцов плазмы из клиники Мауо в Джексонвилле СаскюпуШе. США). ϋΝΏ = неопределенный. График получали с использованием единственной концентрации разведения сыворотки (1:800). Результат > 1 считали положительным, результат от 1 до 0,7 считали неопределенным, а результат ниже 0,7 считали отрицательным.
На фиг. 54 приведена диаграмма, подтверждающая корреляцию между клиническим диагнозом для немаскированного набора образцов пациентов болезнью Альцгеймера с различными стадиями (или отсутствием) БА в сравнении с данными, полученными по тем же образцам сыворотки пациента (маскированным) в результате скрининга против различных пептоидов БА (график представляет собой среднее значение результатов для 9 пептоидов) согласно настоящему изобретению для детектирования ассоциированных с болезнью антител. Приведенные результаты получены в слепом исследовании образцов плазмы из клиники Мауо в Джексонвилле (1аск8оиуШе, США). υΝΏ = неопределенный. График получали с использованием единственной концентрации разведения сыворотки (1:800). Результат > 1 считали положительным, результат от 1 до 0,7 считали неопределенным, а результат ниже 0,7 считали отрицательным.
На фиг. 55 приведена диаграмма, подтверждающая корреляцию между клиническим диагнозом для немаскированного набора образцов пациентов с болезнью Альцгеймера с различными стадиями (или отсутствием) БА в сравнении с данными, полученными по тем же образцам сыворотки пациента (маскированным) в результате скрининга против различных пептоидов БА согласно настоящему изобретению для детектирования ассоциированных с болезнью антител. Приведенные результаты получены в слепом исследовании образцов плазмы из клиники Мауо в Джексонвилле СаскюпуШе. США). υΝΌ = неопреде
- 7 032582 ленный. График получали с использованием единственной концентрации разведения сыворотки (1:800). Результат > 1 считали положительным, результат от 1 до 0,7 считали неопределенным, а результат ниже 0,7 считали отрицательным. Эти данные также демонстрируют действие для других деменций в случае, когда в исследовании также участвовали маркированные образцы от пациентов с умеренными когнитивными нарушениями (МС1)/депрессией, и также маркированные образцы пациентов с деменцией с тельцами Леви. Эти данные демонстрируют, что по меньшей мере у трех пациентов с МС1 в образцах плазмы были определены антитела, связываемые селективными в отношении БА петоидами согласно настоящему изобретению, в количествах выше 1.
На фиг. 56Α-Ώ представлены данные от подгруппы образцов от тех пациентов, у которых были несовпадения в результатах диагностических тестов на основе пептоидов Орко Неа11й с использованием множества пептоидов БА и клиническим диагнозом после предоставления этой информации в демаскированном виде. На фиг. 56А показаны данные для пептоида ΑΏΡ3 и других в случае пациентов с клиническим диагнозом, у которых, однако, результаты, полученные с пептоидом Р1аад4 (Орко), были ниже 1,0 (υΝΏ в единственной точке; положительное титрование БА). Все другие пептоиды Орко были положительны по БА (т.е. выше 1.0). На фиг. 56В показано, что все пептоиды Орко были положительны в отношении ассоциированных с болезнью антител у пациентов, которые в данный момент имели диагноз здоров (деменция отсутствует), что указывает на предболезнь А. Фиг. 56С демонстрирует, что не один из пептоидов БА Орко не показал интенсивность выше 1 при каком-либо значении разбавления у пациента в клинически диагностированной БА, что указывает на то, что этот пациент страдает какой-то другой формой деменции. Фиг. 56Ώ демонстрирует, что у пациента с положительным клиническим диагнозом БА несколько пептоидов БА Орко не дали положительных результатов по антителам, ассоциированным с болезнью, но два пептоида (Р1аад6 и Р1аад4) дали положительные результаты, т.е. υΝΩ в отдельной точке и υΝΏ даже после титрования.
На фиг. 57 приведена кластерная диаграмма, полученная по предыдущим образцам БА с использованием микроматрицы с нанесенным ΑΏΡ3. Существует явная корреляция между образцами больных по сравнению со здоровым контролем в данных, полученных с использованием микроматрицы, и данных, полученных с использованием платформа ИФА. На фиг. 57 также показано, что пептоид ΑΏΡ3 селективен в отношении антител, ассоциированных с болезнью Альцгеймера, но не для болезни Паркинсона и волчанки (СКВ).
На фиг. 58 приведены обобщенные результаты иммунноферментного анализа (ΕΟδΑ), в котором исследовали всего 106 образцов сыворотки.
На фиг. 59 приведены химические структуры Р1аад7-9.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение представляет значительный шаг вперед в области диагностики и создания лекарственных средств. В частности, авторы настоящего изобретения создали способ скрининга, который затмевает более ранние подходы к скринингу сложных биологических образцов. В частности, существует потребность в улучшенных способах поиска лекарственных ассоциированных с заболеваниями биомаркеров и в создании наборов, содержащих высокоаффинные лиганды к таким биомаркерам. Настоящее изобретение относится к способу скрининга таких биомаркеров и диагностики заболевания или прогрессирования заболевания с применением лигандов для детектирования таких биомаркеров.
Настоящее изобретение включает композиции, содержащие библиотеки на основе бусин, причем указанные библиотеки содержат соединения, выбранные из пептоидов, пептидов, олигомеров, низкомолекулярных соединений и любых молекул природного происхождения или полученных синтетическим путем, которые могут быть размещены на системе носителей, такой как бусины или маленькие частицы. Затем эту библиотеку подвергают предварительной обработке и контакту в соответствующих условиях, и после контакта с образцом плазмы или сыворотки для удаления неселективных лигандов приводят в контакт со сложной биологической жидкостью, такой как плазма или сыворотка, которую скринируют на присутствие или отсутствие связанных с заболеванием биомаркеров, таких как антитела или белки, такие как белки клеточной поверхности. Образцы крови или образцы другой биологической жидкости берут у пациентов, которые могут страдать или не страдать конкретным заболеванием, и результаты скрининга сравнивают с результатами, полученными в популяции здоровых пациентов или контрольных пациентов с заболеванием.
Начальный скрининг дает значительное число высокоаффинных лигандов для любого конкретного ассоциированного с заболеванием биомаркера, такого как антитело. Далее настоящее изобретение включает способ получения высокоаффинных лигандов, которые можно применять либо в средствах для диагностики такого болезненного состояния и/или в качестве самостоятельных лигандов, т.е. в качестве терапевтических вакцин или лекарственных средств, которые могут направленно действовать в конкретной области организма или ткани организма. Такие лекарственные средства могут быть связаны с другими соединениями, такими как химиотерапевтические средства или другие агенты, что позволяет вызывать локальный иммунный ответ для удаления и/или разрушения аутоантител.
Болезнь Альцгеймера (БА) является прогрессирующим и смертельным заболеванием мозга, которым страдают 2,5 млн американцев. БА уничтожает клетки мозга, вызывая проблемы с памятью, мышле
- 8 032582 нием и поведением. Со временем происходит ухудшение симптомов и в конце концов больной умирает. На сегодняшний день она является шестой по распространенности причиной смерти в США и самой частой формой деменции; на БА приходится 50-70% всех случаев деменции. К сожалению, хотя существуют средства лечения симптомов, средства для излечивания БА не существует.
Диагностика болезни Альцгеймера представляет собой эмпирический процесс, включающий несколько типов анализов, выполнение которых может занимать от нескольких дней до недель. Эти анализы включают сбор подробной медицинской истории и физический осмотр. Кроме того, стандартные лабораторные анализы, включая анализ крови, мочи и спинно-мозговой жидкости, направлены в основном на исключение других заболеваний. Также проводят неврологическое и психологическое тестирование с использованием многочисленных инструментов для оценки памяти, способности к решению задач, внимания, визуально-моторной координации и абстрактного мышления. Наконец, рекомендуется проведение томографии мозга для исключения опухолей и тромбов в мозгу как возможных причин проявления симптомов. И в итоге, на сегодняшний день не существует единого теста, который позволяет точно диагностировать болезнь Альцгеймера, категорический диагноз болезни Альцгеймера может быть поставлен только по результатам посмертного исследования мозга.
Болезнь Паркинсона (БП) является другим дегенеративным заболеванием головного мозга (центральной нервной системы), который часто приводит к нарушению двигательных навыков, речи и других функций. Она влияет на движение (двигательный синдром), но другие часто встречающиеся симптомы включают расстройства настроения, поведения, мышления и эмоций (не-двигательные симптомы). Симптомы у индивидуальных пациентов могут сильно различаться, прогрессирование заболевания также очень индивидуально. Симптомы БП обусловлены потерей (идиопатической или вторичной, в результате отравления или травмы) пигментированных допамин-секретирующих (допаминергических) клеток в области компактного вещества и щЬ^апБа шдга (беквально черного вещества). Эти нейроны имеют проекцию в полосатом теле, и их потеря приводит к изменениям активности нейронных цепей в базальных ганглиях, которые управляют движением, по существу, ингибируя прямой путь и возбуждая непрямой путь.
Диагностика БП связана с аналогичными, хотя и несколько отличающимися сложностями. При проведении неврологического исследования для оценки возможных двигательных нарушений у пациента врач должен изучить историю болезни и провести физический осмотр. Кроме того, проводят неврологические исследования для тщательной оценки нервной системы, включая наблюдение за разными аспектами движения пациента, координацией и равновесием. Лабораторный анализ крови пациентов с типичными симптомами болезни Паркинсона лишь в редких случаях обнаруживает какие-либо аномалии. Электроэнцефалограммы (ЭЭГ) регистрируют некоторые аспекты электрической активности мозга, но они не позволяют эффективно установит БП. Процедуры магнитно-резонансной и компьютерной томографии мозга дают исключительные и показательные анатомические изображения мозга, но мозг пациентов с БП выглядит нормальным даже при такой детализации, поскольку изменения, ассоциированные с БП, являются микроскопическими и не выявляются при этих видах томографии. В отсутствие категорических диагностических тестов для получения конкретных ответов врачу приходится ставить диагноз БП на основании суждений.
Таким образом, существует потребность в диагностических процедурах для обоих указанных заболеваний, а также для других неврологических заболеваний, которая была бы (ί) точной и объективной, (ίί) простой и воспроизводимой и (ίίί) применимой и для ранних, и для поздних стадий.
В соответствии с настоящим изобретением предложены композиции, включающие пептоид(ы), связывающие антитела, являющиеся показателем нейродегенеративного заболевания, и способы детектирования антител в образце, содержащем антитела, включающие осуществление контакта антителосодержащего образца с носителем, к которому присоединен пептоид. Библиотеки лигандов могут включать соединения формулы I, где группы В на аминной боковой цепи или при альфа-атоме углерода независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода; алкила; аллила; метила; этила; η-пропила; изопропила; η-бутила; изобутила; η-бутиламина; фтор-бутила; трет-бутила; пентила; гексила; изопентила; арила; гетероарила; фуранила; индолила; тиофенила; тиазолила; имидазолила; изоксазолила; оксазолила; пиперонила; пиразолила; пирролила; пиразинила; пиридила; пиримидила; пиримидинила; пиринила; циннолинила; бензофуранила; бензотиенила; бензтриазолила; бензоксазолила; хинолина; изоксазолила; изохинолина циклоалкила; алкенила; циклоалкенила; фенила; пиридила; метоксиэтила; (В)-метилбензила; С0-6 алкиларила; С0-6 алкилгетероарила; С0-6 алкила, замещенного группой, выбранной из ОН, 8Н, галогена, ОВ15, СООВ15, ΝΒ15 (где В15 выбрана из группы, состоящей из Н или С1-6 алкил или С1-6 алкинила) или В16 (где В16 выбрана из группы, состоящей из Н или С1-6 алкинила); ОС1-6 алкила; С2-6 алкенила; С2-6 алкинила; С2-6 алкенила и С2-6 алкинила, включая одну или более химических групп, описанных в табл. 1 и 2 предварительной патентной заявки США 61/467256, полностью включенной в настоящий документ посредством ссылки.
Предпочтительные библиотеки лигандов согласно настоящему изобретению для целей скрининга болезни Альцгеймера включают случайную библиотеку случайных лигандов для скрининга биологической жидкости, состоящей из множества соединений, по меньшей мере одно из указанных соединений
- 9 032582 имеет структуру формулы I, на носителе
где К1 представляет собой -(С1-С6)8СН3;
К2 выбран из Н;
Κ3-Κ5 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-8СН3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -С1-С6СООН, -С1-С6алкил-ОН, -С|-Сбалкил-\Н2, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -С1-С6алкил-\С(О)С1-С6алкил, -С1-С6алкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, С1, Г, Вг, -ОСН3, -8О2\Н2 или -О-СН2-О;
η составляет 3-11 и указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различающихся лигандов.
Другие библиотеки пептоидов, пригодные для скрининга болезни Альцгеймера, включают библиотеки, содержащие случайную библиотеку случайных лигандов для скрининга биологической жидкости по п.1, состоящую из множества соединений, по меньшей мере одно из соединений имеет структуру формулы I, на носителе
отличающиеся тем, что соединения получают способом, который включает применение участвующих в реакции соединений, выбранных из группы, состоящей из следующего:
(A) фурфуриламин; 3,4-диметоксиэтаноламин; бензиламин; \-(2-аминоэтил)ацетамид; \-(3-аминопропил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин;4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид или циклогексиламин; или (B) метоксиэтиламин; пиперониламин; циклогексиламин; диаминобутан; метилбензиламин; изобутиламин; фурфуриламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или (C) фурфуриламин; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или (Ό) фурфуриламин; \-(2-аминоэтил)ацетамид; \-(3-аминоэтил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или (Е) цистеин; глицин; аллиламин; этаноламин; изобутиламин; метилбензиламин; пиперониламин; метионин, циклогексиламин, 3,4-диметоксифениламин, бензиламин, \-(2-аминоэтил)ацетамид, \-(3-аминопропил)-2-пирролидрн, 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид и фурфуриламин; и при этом К1 выбран из группы, состоящей из -(С1-С6)8СН3;
К2 выбран из Н;
К3 и К5 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-8СН3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -С1-С6 СООН, -С1-С6алкил-ОН, -С1-С6алкил-\Н2, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -С1-С6алкил-\С(О)С1-С6алкил, -С1-С6алкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, С1, Г, Вг, -ОСН3, -8О2\Н2 или -О-СН2-О-;
К4 выбран из группы, состоящей из фурфурила и -(С1-С6алкил)\К7К8;
Кб выбран из группы, состоящей из следующего: 1-ил-аллил, 1-ил-2-гидроксиэтил, изобутил, 1-илη-бутиламин, метилбензил, пиперонил, циклогексил, 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, бензил, 1-ил-2(ацетамид)этил, 1-ил-3-2-пирролидинон, 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил или фурфурил;
η составляет от 3 до 11.
В более предпочтительном варианте реализации такие библиотеки и соединения выбраны из следующего.
Соединение формулы 1а
- 10 032582 где указанное по меньшей мере одно соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы Та, где:
(a) К,у представляет собой η-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Ип представляет собой пиперонил, И12 представляет собой метилбензил, И13 представляет собой пиперонил, И14 представляет собой метилбензил, И15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и И16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(b) К,у представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И10 представляет собой 1-ил-2-(4- бензолсульфонамид)этил, Ип представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой циклогексил, Ку3 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Ку4 представляет собой 1-ил-2,2диметилэтил(изобутил), Ку5 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и И16 представляет собой метилбензил;
(c) К.у представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Ию представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Иц представляет собой пиперонил, Ку2 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Ку3 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой метилбензил, Ку5 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой циклогексил;
(б) И9 представляет собой пиперонил, И10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Ип представляет собой изобутил, И12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И13 представляет собой метилбензил, И14 представляет собой циклогексил, И15 представляет собой изобутил и И16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(е) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Ип представляет собой метилбензил, Ку2 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Ку3 представляет собой циклогексил, Ку4 представляет собой циклогексил, Ку5 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой пиперонил;
(ί) И9 представляет собой пиперонил, Кю представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Иц представляет собой изопропил, Ку2 представляет собой изопропил, Ив представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Ку4 представляет собой циклогексил, И15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и И16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(д) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Ип представляет собой пиперонил, И12 представляет собой метилбензил, И13 представляет собой пиперонил, И14 представляет собой метилбензил, И15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и И16 представляет собой циклогексил;
(11) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кю представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Иц представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой циклогексил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой пиперонил;
(ί) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кю представляет собой метилбензил, Иц представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой циклогексил;
(ί) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И10 представляет собой метилбензил, Ип представляет собой метилбензил, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой 1-илп-бутиламин, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой изобутил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(k) К9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Кю представляет собой изобутил, Иц представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И12 представляет собой пиперонил, И13 представляет собой 1ил-п-бутиламин, Ии представляет собой циклогексил, И15 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(l) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Ию представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Ип представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой циклогексил, И13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И14 представляет собой изобутил, И15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и И16 представляет собой метилбензил;
(т) И9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Ип представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И13 представляет собой метилбензил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой фурфурил и И16 представляет собой фурфурил;
(п) И9 представляет собой циклогексил, И10 представляет собой циклогексил, И11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой фурфурил, Ив представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и И16 представляет собой фурфурил;
(о) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Ию представляет собой пиперонил, Иц представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И13 представляет собой метилбензил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой 1-ил-2
- 11 032582 метоксиэтил и Е16 представляет собой метилбензил;
(р) И9 представляет собой циклогексил, Ею представляет собой циклогексил, Иц представляет собой пиперонил, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и Е13 представляет собой изобутил;
(с.|) И9 представляет собой пиперонил, Е10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Е13 представляет собой пиперонил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой метилбензил и Е16 представляет собой метилбензил;
(г) И9 представляет собой метилбензил, Е10 представляет собой метилбензил, Е11 представляет собой метилбензил, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е13 представляет собой пиперонил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой пиперонил и Е16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(§) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е11 представляет собой метилбензил, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е13 представляет собой метилбензил, И14 представляет собой метилбензил, И15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и Е16 представляет собой пиперонил;
(1) И9 представляет собой метилбензил, Е10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Е11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Е13 представляет собой изобутил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой метилбензил и Е16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(и) И9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Е10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е11 представляет собой изобутил, И12 представляет собой изобутил, Е13 представляет собой циклогексил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и Е16 представляет собой циклогексил;
(ν) И9 представляет собой изобутил, Е10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой метилбензил, Е13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой пиперонил и Е16 представляет собой пиперонил;
(А) И9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Е10 представляет собой изобутил, Е11 представляет собой метилбензил, И12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Е13 представляет собой 1ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И14 представляет собой изобутил, И15 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил и Е16 представляет собой циклогексил;
(x) И9 представляет собой фурфурил, Е10 представляет собой фурфурил, Е11 представляет собой пиперонил, И12 представляет собой циклогексил, Е13 представляет собой пиперонил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и Е16 представляет собой циклогексил;
(y) И9 представляет собой пиперонил, Е10 представляет собой пиперонил, Е11 представляет собой 1ил-2-метоксиэтил, И12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Е13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и Е16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(ζ) И9 представляет собой пиперонил, Е10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е11 представляет собой изобутил, И12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Е13 представляет собой метилбензил, И14 представляет собой циклогексил, И15 представляет собой изобутил и Е16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(аа) И9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Е10 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Е11 представляет собой метилбензил, И12 представляет собой метилбензил, Е13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и Е16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(ЬЬ) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е10 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Е11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой изобутил, Е13 представляет собой циклогексил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и Е16 представляет собой пиперонил;
(сс) И9 представляет собой циклогексил, Е10 представляет собой метилбензил, Е11 представляет собой циклогексил, И12 представляет собой пиперонил, Е13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и Е16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(бб) И9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Е10 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Е11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил, Е13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И14 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил, И15 представляет собой изобутил и Е16 представляет собой циклогексил;
(ее) И9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Е10 представляет собой метилбензил, Е11 представ
- 12 032582 ляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(ίί) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой метилбензил, Кп представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К15 представляет собой 1ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой циклогексил;
(дд) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Кп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К19 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К15 представляет собой
1- ил-п-бутиламин и К16 представляет собой метилбензил;
(1111) К9 представляет собой циклогексил, Кю представляет собой циклогексил, Иц представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой метилбензил, К19 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(ίί) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой фурфурил, Кп представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой фурфурил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой циклогексил;
(ϋ) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К19 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил и К16 представляет собой изобутил;
(кк) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К!0 представляет собой 1-ил-пбутиламин, Кц представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой метилбензил;
(11) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К10 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-пбутиламин, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(тт) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кю представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Кп представляет собой 1-ил-2-(4(бензолсульфоиамид)этил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К19 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой метилбензил;
(пп) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кю представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кп представляет собой пиперонил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой циклогексил;
(оо) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К10 представляет собой метилбензил, Кп представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой пиперонил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(рр) К9 представляет собой пиперонил, Кю представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой метиламин, К13 представляет собой пиперонил, К19 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой пиперонил и К16 представляет собой 1-ил-
2- метоксиэтил;
(с.|С|) К9 представляет собой циклогексил, Кю представляет собой циклогексил, Кп представляет собой фурфурил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой изобутил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой метилбензил;
(гг) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кп представляет собой изобутил, К12 представляет собой изобутил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(88) К9 представляет собой циклогексил, Кю представляет собой циклогексил, Кц представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой циклогексил и К16 представляет собой пиперонил.
В более предпочтительном варианте реализации и для скрининга связанных с болезнью биомаркеров у пациентов, болеющих БА или у которых подозревают болезнь Альцгеймера, с применением наборов и/или средств и/или устройств для диагностики предпочтительны следующие соединения.
- 13 032582
Соединение формулы
η2ν^ причем указанное соединение выбрано из группы, состоящей из соединения формулы II, где:
(a) К9 представляет собой η-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(b) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-(4- бензолсульфонамид)этил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К14 представляет собой 1-ил-2,2диметилэтил(изобутил), К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой метилбензил;
(c) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой циклогексил;
(ά) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой изобутил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(е) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой циклогексил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой пиперонил;
(I) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой изопропил, К12 представляет собой изопропил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой 1 -ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(д) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой циклогексил;
(й) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой циклогексил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой пиперонил;
(1) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К.14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой циклогексил;
(Ϊ) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой 1-илп-бутиламин, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой изобутил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(k) К9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К10 представляет собой изобутил, К11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой 1ил-п-бутиламин, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(l) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой метилбензил;
(т) К9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой фурфурил и К16 представляет собой фурфурил;
(п) К9 представляет собой циклогексил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет со
- 14 032582 бой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой фурфурил, Иц представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Ии представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Я15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой фурфурил;
(o) Иу представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И10 представляет собой пиперонил, К.н представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И13 представляет собой метилбензил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил и И16 представляет собой метилбензил;
(p) Иу представляет собой циклогексил, К10 представляет собой циклогексил, Иц представляет собой пиперонил, К.12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 представляет собой изобутил;
(ф Иу представляет собой пиперонил, Ию представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Иц представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И13 представляет собой пиперонил, К.14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой метилбензил;
(г) Иу представляет собой метилбензил, И10 представляет собой метилбензил, И11 представляет собой метилбензил, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И13 представляет собой пиперонил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой пиперонил и И16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(к) И; представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Иц представляет собой метилбензил, К.12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И13 представляет собой метилбензил, Куу представляет собой метилбензил, Ку5 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и И16 представляет собой пиперонил;
(!) Иу представляет собой метилбензил, И!0 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Иц представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И13 представляет собой изобутил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(и) Иу представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Иц представляет собой изобутил, К.12 представляет собой изобутил, К13 представляет собой циклогексил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и И16 представляет собой циклогексил;
(ν) Ку представляет собой изобутил, Кю представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Иц представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой пиперонил и И16 представляет собой пиперонил;
(А) Ку представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И!0 представляет собой изобутил, Иц представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой 1ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И14 представляет собой изобутил, И15 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил и И16 представляет собой циклогексил;
(x) Иу представляет собой фурфурил, К10 представляет собой фурфурил, Иц представляет собой пиперонил, И12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и И16 представляет собой циклогексил;
(y) Ку представляет собой пиперонил, Кю представляет собой пиперонил, Иц представляет собой 1ил-2-метоксиэтил, И12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(ζ) Иу представляет собой пиперонил, Ию представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Иц представляет собой изобутил, И12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И13 представляет собой метилбензил, И14 представляет собой циклогексил, И15 представляет собой изобутил и И16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(аа) Иу представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И10 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Иц представляет собой метилбензил, И12 представляет собой метилбензил, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и И16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(ЬЬ) Иу представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Ию представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Иц представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой изобутил, Ив представляет собой циклогексил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Иц представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 представляет собой пиперонил;
(сс) Иу представляет собой циклогексил, Ию представляет собой метилбензил, Иц представляет собой циклогексил, И12 представляет собой пиперонил, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 пред
- 15 032582 ставляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(бб) И9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К10 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, И11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил, И13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И14 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил, И15 представляет собой изобутил и И16 представляет собой циклогексил;
(ее) И9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И10 представляет собой метилбензил, И11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И13 представляет собой пиперонил, И14 представляет собой изобутил, И15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и И16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(£Т) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К.ю представляет собой метилбензил, Иц представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К.12 представляет собой метилбензил, К.13, представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Κι4 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И15 представляет собой 1ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и И16 представляет собой циклогексил;
(дд) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К.ю представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Иц представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И15 представляет собой
1- ил-п-бутиламин и И16 представляет собой метилбензил;
(1111) И9 представляет собой циклогексил, И10 представляет собой циклогексил, И11 представляет собой метилбензил, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И13 представляет собой метилбензил, И14 представляет собой циклогексил, И15 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(ίί) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К.ю представляет собой фурфурил, Иц представляет собой метилбензил, И12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И13 представляет собой фурфурил, К.14 представляет собой циклогексил, И15 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой циклогексил;
(р) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И10 представляет собой метилбензил, И11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И14 представляет собой метилбензил, И15 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил и И16 представляет собой изобутил;
(кк) И9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И10 представляет собой 1-ил-пбутиламин, И11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой метилбензил, И13 представляет собой метилбензил, К.19 представляет собой циклогексил, И15 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил и И16 представляет собой метилбензил;
(11) И9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К.ю представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Иц представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Κι2 представляет собой 1-ил-пбутиламин, Κι3 представляет собой метилбензил, К.19 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Κι5 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(тт) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И10 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Кп представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой циклогексил, И15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и И16 представляет собой метилбензил;
(пп) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, КП представляет собой пиперонил, К.12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Κι4 представляет собой метилбензил, И15 представляет собой метилбензил и Κι6 представляет собой циклогексил;
(оо) И9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К.ю представляет собой метилбензил, Иц представляет собой метилбензил, К.12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Κι3 представляет собой метилбензил, К.19 представляет собой пиперонил, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и Κι6 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(рр) И9 представляет собой пиперонил, И10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой метиламин, И13 представляет собой пиперонил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой пиперонил и И16 представляет собой 1-ил-
2- метоксиэтил;
(с.|С|) И9 представляет собой циклогексил, И10 представляет собой циклогексил, Кп представляет собой фурфурил, Κι2 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Κι3 представляет собой изобутил, К.19 представляет собой циклогексил, К.15 представляет собой метилбензил и Κι6 представляет собой метилбензил;
(гг) И9 представляет собой пиперонил, К.ю представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Иц представляет собой изобутил, И12 представляет собой изобутил, И13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И14 представляет собой циклогексил, К.15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и Κι6 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
(88) И9 представляет собой циклогексил, И10 представляет собой циклогексил, Кп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой метилбензил, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин,
- 16 032582
В14 представляет собой метилбензил, В15 представляет собой циклогексил и В16 представляет собой пиперонил.
В более предпочтительном варианте реализации в качестве лигандов для скрининга и/или обнаружения болезни Альцгеймера выбирают следующие соединения.
Соединение, где указанное по меньшей мере одно соединение формулы II выбрано из групп, содержащих следующие В9-В16:
(a) К.9 представляет собой п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В11 представляет собой пиперонил, В12 представляет собой метилбензил, В13 представляет собой пиперонил, В14 представляет собой метилбензил, В15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и В16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(b) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, В11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой циклогексил, К.|3 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В14 представляет собой 1-ил-2,2диметилэтил(изобутил), В15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и В16 представляет собой метилбензил;
(c) К.9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В11 представляет собой пиперонил, В12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В14 представляет собой метилбензил, В15 представляет собой метилбензил и В16 представляет собой циклогексил;
(б) В9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В11 представляет собой изобутил, В12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В13 представляет собой метилбензил, В14 представляет собой циклогексил, В15 представляет собой изобутил и В16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(е) К.9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В11 представляет собой метилбензил, В12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В13 представляет собой циклогексил, В14 представляет собой циклогексил, В15 представляет собой метилбензил и В16 представляет собой пиперонил;
(ί) В9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В11 представляет собой изопропил, В12 представляет собой изопропил, В13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В14 представляет собой циклогексил, В15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и В16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил.
Аутоиммунные заболевания.
Настоящее изобретение также предусматривает идентификацию молекул, которые могут связываться с аутоиммунными Т-клетками и/или антителами при различных аутоиммунных заболеваниях и состояниях. На примере индуцированного экспериментального аутоиммунного энцефалита, животной модели РС, настоящее изобретение должно быть применимо в контексте различных аутоиммунных заболеваний, которые обсуждаются ниже. В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение включает, но не ограничивается, такими заболеваниями, как острый рассеянный энцефаломиелит Бало, болезнь Бехчета, буллезная пузырчатка (ΑΌΕΜ), острый некротический геморрагический лейкоэнцефалит, болезнь Аддисона, агаммаглобулинемия, аллергическая астма, аллергический ринит, гнездная алопеция, амилоидоз, анкилозирующий спондилит, анти-СВМ/анти-ТВМ нефрит, антифосфолипидный синдром (АФС), аутоиммунная апластическая анемия, аутоиммунная вегетативная дистония, аутоиммунный гепатит, аутоиммунная гиперлипидемия, аутоиммунный иммунодефицит, аутоиммунная болезнь внутреннего уха (ΑΙΕΌ), аутоиммунный миокардит, аутоиммунный панкреатит, аутоиммунная ретинопатия, аутоиммунная тромбоцитопеническая пурпура (АТП), аутоиммунная болезнь щитовидной железы, аксональные и нейрональные нейропатии, болезнь Бало, болезнь Бехчета, буллезная пузырчатка, кардиомиопатия, болезнь Каслмена, целиакия (не тропическая), болезнь Шагаса, синдром хронической усталости, хроническая демиелинизирующая воспалительная полинейропатия (СШР), хронический рецидивирующий мультифокальный остеомиелит (СВМО), синдром Чарг-Штраусса, рубцовый пемфигоид/доброкачественная пузырчатка слизистой оболочки, болезнь Крона, синдром Когана, холодная болезнь агглютининов, врожденная блокада сердца, миокардит Коксаки, СКЕ8Т-синдром, эссенциальная смешанная криоглобулинемия, демиелинизирующая невропатия, дерматомиозит, болезнь Девика (нейромиелит зрительного нерва), дискоидная волчанка, синдром Дресслера, эндометриоз, эозинофильный фасциит, узловатая эритема, экспериментальный аллергический энцефаломиелит, синдром Ивана, фибромиалгия, фиброзирующий альвеолит, гартериит гигантских клеток (височный артериит), гломерулонефрит, синдром Гудпасчера, болезнь Граве, синдром Гийена-Барре, энцефалит Хашимото, тириодит Хашимото, гемолитическая анемия, пурпура Г еноха-Шенлейна, гестационный герпес, синдром дефицита антител, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура (ИТП), 1дА-зависимая нефропатия, иммунорегуляторные липопротеины, миозит с тельцами включения, инсулин-зависимый диабет (тип 1), интерстициальный цистит, ювенильный артрит, ювенильный диабет, синдром Кавасаки, синдром Ламберта-Итона, лейкоцитокластический васкулит, красный плоский лишай, лишай склероатрофический, деревянистый конъюнктивит, линейный 1дА зависимый дерматоз (ЛАД), волчанка (СКВ), болезнь Лайма, болезнь Меньера, микроско
- 17 032582 пический полиангиит, смешанное заболевание соединительной ткани (МСТИ), язва Морена, болезнь Мухи-Габерманна, рассеянный склероз, миастения, миозит, нарколепсия, нейромиелит зрительного нерва (болезнь Девика), нейтропения, глазной рубцовый пемфигоид, неврит зрительного нерва, палиндромный ревматизм, ΡΑΝΏΛ8 (детские аутоиммунные невропсихиатрические нарушения, ассоциированные со стрептококком), паранеопластическая мозжечковая дегенерация, пароксизмальная ночная гемоглобинурия (ПНГ), синдром Перри-Ромберга, Персонейджа-Тернера синдром, раг§ р1апй§ (периферический увеит), пузырчатка, периферическая невропатия, перивенозной энцефаломиелит, злокачественная анемия, РОЕМБ-синдром, узелковый полиартериит, аутоиммунные полигландулярные синдромы I, II и III типа, ревматическая полимиалгия, полимиозит, постинфарктный синдром, постперикардиотомический синдром, прогестероновый дерматит, первичный билиарный цирроз, первичный склерозирующий холангит, псориаз, псориатический артрит, идиопатический легочный фиброз, гангренозная пиодермия, чистая красноклеточная аплазия, феномен Рейно, рефлекторная симпатическая дистрофия, синдром Рейтера, рецидивирующий полихондрит, синдром беспокойных ног, забрюшинный фиброз, ревматическая лихорадка, ревматоидный артрит, саркоидоз, синдром Шмидта, склерит, склеродермия, синдром Шегрена, аутоиммунитет к сперме и тестикулярной ткани, синдром скованного человека, подострый бактериальный эндокардит (ПБЭ), симпатическая офтальмия, артериит Такаясу, височный артериит/гигантоклеточный артериит, тромбоцитопеническая пурпура (ТЦП), синдром Толоса-Ханта, поперечный миелит, язвенный колит, недифференцированное заболевание соединительной ткани (НЗСТ), увеит, васкулит, везикулобуллезный дерматоз, витилиго или гранулематоз Вегенера, или хронический активный гепатит, первичный билиарный цирроз, дилатационная кардиомиопатия, миокардит, аутоиммунный полиэндокринный синдром I тина(АР8-!), кистозный фиброз, васкулиты, приобретенный гипопаратиреоз, ишемическая болезнь сердца, пузырчатка эксфолиативная, обыкновенная пузырчатка, энцефалит Расмуссена, аутоиммунный гастрит, гипогликемический инсулиновый синдром (болезнь Хирата), резистентность к инсулину типа В, акантоз, системная красная волчанка (СКВ), злокачественная анемия, резистентный к лечению артрит Лайма, полинейропатии, демиелинизирующие заболевания, атопический дерматит, аутоиммунный гипотиреоз, витилиго, офтальмопатия, ассоциированная с заболеванием щитовидной железы, аутоиммунная целиакия, дефицит АКТГ, дерматомиозит, синдром Шегрена, системный склероз, прогрессирующий системный склероз, кольцевидная склеродермия, первичный антифосфолипидный синдром, хроническая идиопатическая крапивница, синдромы соединительной ткани, некротический и серповидный гломерулонефрит (НСГ), системный васкулит, синдром Рейно, хронические заболевания печени, висцеральный лейшманиоз, аутоиммунный дефицит С1, мембранный пролиферативный гломерулонефрит (ΜΡΘΝ), замедленное свертывание крови, иммунодефицит, атеросклероз, нефропатия, паранеопластическая пузырчатка, паранеоплатический синдром мышечной скованности, паранеопластический энцефаломиелит, подострая автономная нейропатия, ассоциированная с раком ретинопатия, паранеопластическая опсоклонус-миоклонус-атаксия, синдром нижних мотонейронов и миастенический синдром Ламберта-Итона.
Библиотеки пептоидов согласно настоящему изобретению для целей скрининга антител, ассоциированных с волчанкой, включают библиотеку (библиотеки), указанную выше, и дополнительно включают случайную библиотеку лигандов для скрининга сложных биологических жидкостей, содержащую соединение I, на носителе
где В1 представляет собой -(С1-С6)8СН3;
В2 выбран из Н;
В3-В6 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-8СН3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -С1-С6 СООН, -С1-С6алкил-ОН, -СгС6алкил-ЫН2, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -СрСбалкил^С^СгСбалкил, -С1-С6алкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, С1, Г, Вг, -ОСН3, -8Ο2ΝΗ2 или -О-СН2-О;
п составляет 3-11 и указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различающихся лигандов.
- 18 032582
Другие библиотеки пептоидов, пригодные для скрининга на СКВ (волчанку), включают библиотеки, содержащие случайную библиотеку лигандов для скрининга сложных биологических жидкостей, содержащую соединение I, на носителе
где соединения получают способом, который включает применение участвующих в реакции соединений, выбранных из группы, состоящей из следующего:
(A) фурфуриламин; 3,4-диметоксиэтаноламин; бензиламин; №(2-аминоэтил)ацетамид; N-(3аминопропил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид или циклогексиламин; или (B) метоксиэтиламин; пиперониламин; циклогексиламин; диаминобутан; метилбензиламин; изобутиламин; фурфуриламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или (C) фурфуриламин; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или (□) фурфуриламин; №(2-аминоэтил)ацетамид; №(3-аминоэтил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин; 4-(2аминоэтил)бензолсульфонамид; или (Е) цистеин; глицин; аллиламин; этаноламин; изобутиламин; метилбензиламин; пиперониламин; метионин; циклогексиламин; 3,4-диметоксифениламин; бензиламин; №(2-аминоэтил)ацетамид; N-(3аминопропил)-2-пирролидон; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид и фурфуриламин; и при этом К! выбран из группы, состоящей из -(С1-С6)8СН3;
К2 выбран из Н;
К3 и К5 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-8СН3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -С1-С6 СООН, -С1-С6алкил-ОН, -С1-С6алкил^Н2, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -С1-С6алкил^С(О)С1-С6алкил, -С1-С6алкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, С1, Р, Вг, -ОСН3, -8О2№2 или -О-СН2-О-;
К4 выбран из группы, состоящей из фурфурила и -(С1-С6алкил^К7К8;
Кб выбран из группы, состоящей из следующего: 1-ил-аллил, 1-ил-2-гидроксиэтил, изобутил, 1-илη-бутиламин, метилбензил, пиперонил, циклогексил, 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, бензил, 1-ил-2(ацетамид)этил, 1-ил-3-2-пирролидинон, 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил или фурфурил;
η составляет от 3 до 11.
Предпочтительные варианты реализации для целей первичного скрининга включают соединение формулы
причем указанные соединения выбраны из группы, состоящей из соединений, содержащих следующие К9-К16:
(a) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой изобутил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(b) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой циклогексил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-аллил, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой циклогексил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(c) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой циклогексил, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(ά) К9 представляет собой изобутил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4(бензолсульфоиамид)этил, К13 представляет собой 1-ил-аллил,
- 19 032582
К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-аллил и К16 представляет собой пиперонил;
(е) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой изобутил, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-пбутиламин и К16 представляет собой пиперонил;
(ί) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил;
(д) К9 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой циклогексил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-илп-бутиламин;
(11) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой пиперонил;
(ΐ) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-аллил, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой метилбензил;
(Ц К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(k) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой изобутил;
(l) К9 представляет собой 1-ил-аллил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой пиперонил;
(т) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К11 представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-2гидроксиэтил, К14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К15 представляет собой 1-ил-пбутиламин и К16 представляет собой циклогексил;
(п) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К13 представляет собой 1-ил-пбутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой пиперонил и К16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил.
Предпочтительные варианты реализации для наборов и/или других способов диагностики включают соединение формулы
причем указанные соединения выбраны из группы, состоящей из соединений, содержащих следующие К9-К16:
(a) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой изобутил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(b) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой циклогексил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-аллил, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой циклогексил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(c) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой циклогексил, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет
- 20 032582 собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(й) К9 представляет собой изобутил, К10 представляет собой циклогексил, Кп представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой 1-ил-аллил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-аллил и К16 представляет собой пиперонил;
(е) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой изобутил, Кп представляет собой пиперонил, К.|2 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Ки представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-пбутиламин и Κι6 представляет собой пиперонил;
(ί) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кю представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Иц представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой метилбензил, К.14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил;
(д) К9 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К10 представляет собой метилбензил, Кп представляет собой циклогексил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-илп-бутиламин;
(11) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой пиперонил;
(ί) К9 представляет собой метилбензил, Кю представляет собой 1-ил-аллил, Кп представляет собой пиперонил, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой метилбензил;
(ί) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой метилбензил, Кп представляет собой пиперонил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(k) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой изобутил;
(l) К9 представляет собой 1-ил-аллил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой пиперонил;
(т) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, Кп представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-2гидроксиэтил, К14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К15 представляет собой 1-ил-пбутиламин и К16 представляет собой циклогексил;
(п) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кю представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, Кп представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К13 представляет собой 1-ил-пбутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой пиперонил и К16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил.
Рак.
Настоящее изобретение также можно применять для идентификации и/или исследования присутствия или отсутствия биомаркеров, связанных с раком или предраковыми состояниями. Эти виды рака выбраны из группы, включающей, например, следующие: острый лимфобластный лейкоз, острый миелобластный лейкоз, рак коры надпочечников, СПИД-ассоциированные злокачественные опухоли, СПИДассоциированная лимфома, анальный рак, рак аппендикса, астроцитома, опухоли головного мозга или мозжечка у детей, базальноклеточная карцинома, рак желчного протока, внепеченочный, рак мочевого пузыря, рак кости, остеосаркома/злокачественная фиброзная гистиоцитома, глиомы ствола мозга, опухоли мозга, опухоли головного мозга, астроцитома мозжечка, опухоль головного мозга, астроцитома мозга/злокачественная глиома, опухоль головного мозга, эпендимома, опухоль головного мозга, медуллобластома, опухоль головного мозга, супратенториальные примитивные нейроэктодермальные опухоли, опухоль головного мозга, глиомы зрительного пути и гипоталамуса, рак молочной железы, бронхиальная аденома / карциноиды, лимфома Беркитта, карциноидная опухоль, карциноидная опухоль у детей, желудочно-кишечного тракта, рак с неизвестной первичной локализацией, лимфома ЦНС, первичная, астроцитома мозжечка у детей, астроцитома головного мозга/злокачественная глиома у детей, рак шейки матки, рак у детей, хронический лимфолейкоз, хронический миелолейкоз, хронические миелопролифера
- 21 032582 тивные заболевания, рак толстой кишки, кожная Т-клеточная лимфома, десмопластическая мелкокруглоклеточная опухоль эндометрия, эпендимома, рак пищевода, саркома Юинга в семействе серком Юинга, опухоли экстракраниальных зародышевых клеток у детей, опухоль экстрагонадных зародышевых клеток, внепеченочный рак желчных протоков, рак глаза, внутриглазная меланомы, рак глаз, ретинобластому, рак желчного пузыря, рак желудка, карциноидная опухоль желудочно-кишечного тракта, стромальная опухоль желудочно-кишечного тракта (С18Т, СОЖКТ), опухоль зародышевых клеток: экстракраниальная, экстрагонадная или яичника, гестационная трофобластическая опухоль, глиома ствола головного мозга, глиомы, астроцитома головного мозга у детей, глиома, глиома зрительного пути и гипоталамуса, у детей, карциноид желудка, лейкоз волосатых клеток, рак головы и шеи, рак сердца, гепатоцеллюлярный рак (печени), лимфома Ходжкина, рак подглоточника, глиома зрительного пути и гипоталамуса, у детей, внутриглазная меланома, крацинома островковых клеток (эндокринной поджелудочной железы), саркома Капоши, рак почки (почечноклеточный рак), рак гортани, лейкемии, лейкоз, острый лимфобластический лейкоз (также называемый острым лимфоцитарным лейкозом), лейкоз, острый миелоидный лейкоз (также называемый острым миелогенным лейкозом), лейкоз, хронический лимфобластический лейкоз (также называемый хроническим лимфоцитарным лейкозом), лейкоз, хронический миелоидный лейкоз (также называемый хроническим миелогенным лейкозом), лейкоз волосатых клеток, рак губы и ротовой полости, рак печени (первичный), рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточная лимфома, лимфома, связанная с СПИД, лимфома Беркитта, лимфома кожная Т-клеточная, лимфома Ходжкина, лимфомы не-ходжкинские (старая классификация для всех лимфом, кроме лимфомы Ходжкина), лимфома, первичная ЦНС, Муркуса-Уиттла, смертельная болезнь, макроглобулинемия, Вальденстрема, злокачественная фиброзная гистиоцитома кости/остеосаркома, медуллобластома, у детей, меланома, меланома, внутриглазная (глаза), карцинома клеток Меркеля, мезотелиома, у взрослых злокачественная, мехотелиома, у детей, метастазирующий плоскоклеточный рак неидентифицируемого происхождения, рак рта, синдром множественных эндокринных новообразований, у детей, множественная миелома/неоплазия плазматических клеток, грибковый микоз, миелодиспластический синдром, Миелодиспластические / миелопролиферативными заболевания, миелогенный лейкоз, хронический, миелоидный лейкоз, острый миелолейкоз у взрослых, острая, множественная миелома у детей, множественные (рак костного мозга), миелопролиферативные заболевания, хронический рак полости носа и придаточных пазух, рак носоглотки, нейробластома, неходжкинская лимфома, немелкоклеточный рак легкого, рак ротовой полости, рак ротоглотки, остеосаркома/злокачественная фиброзная гистиоцитома кости, рак яичников, эпителиальный рак яичников (поверхностная эпителиально-стромальная опухоль), опухоли зародышевых клеток яичников, опухоли яичников с низким злокачественным потенциалом, рак поджелудочной железы, рак островковых клеток поджелудочной железы, рак придаточных пазух носа и полости носа, рак паращитовидных желез, рак полового члена, рак глотки, феохромоцитома, астроцитома гипофиза, герминома гипофиза и супратенториальная примитивная нейроэктодермальная пинеобластома у детей, аденома гипофиза, плазменная клеточная неоплазия/множественная миелома, плевролегочная бластома, первичная лимфома центральной нервной системы, рак простаты, рак прямой кишки, почечноклеточный рак (рак почки), рак почечной лоханки и мочеточника, переходные опухоли, ретинобластома, рабдомиосаркома у детей, рак слюнных желез, опухоли семейства сарком Юинга, саркомы Капоши, саркома мягких тканей, саркома матки, синдром Сезари, рак кожи (не меланома), рак кожи (меланома), кожный рак клеток Меркеля, мелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточный рак кишечника, саркомы мягких тканей, плоскоклеточный рак - см. рак кожи (не меланомы), плоскоклеточный рак шеи неясного происхождения, метастатический, рак желудка, супратенториальная примитивная нейроэктодермальная опухоль у детей, Т-клеточная лимфома, кожная - см. грибовидный микоз и синдром Сезари, рак яичек, рак горла, тимомы у детей, тимома и карцинома тимуса, рак гипофиза, рак гипофиза у детей, переходные клеточные опухоли почечной лоханки и мочеточника, трофобластическая опухоль, гестационная опухоль неизвестной первичной локализации у взрослых, опухоль с неизвестной первичной локализацией, рак, у детей, уретры и почечной лоханки, рак переходных клеток, рак уретры, рак матки, саркома эндометрия, матки, рак влагалища, глиома зрительного пути и гипоталамуса у детей, рак вульвы, макроглобулинемия Вальденстрема, опухоль Вильмса (рак почки) у детей.
Библиотеки пептоидов согласно настоящему изобретению для целей скрининга на рак поджелудочной железы в дополнение к библиотекам, описанным выше, включают случайную библиотеку лигандов для скрининга сложных биологических жидкостей, включающую соединение формулы I, на носителе
где К! представляет собой -(С1-С6)8СН3; К2 выбран из Н;
- 22 032582 и К3-К6 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-8СН3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -С1-С6 СООН, -С1-С6алкил-ОН, -С1-С6алкил-КН2, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -С|-С6алкил-ЖАЖл-С6алкил, -С1-С6алкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, С1, Р, Вг, -ОСН3, -8Ο2ΝΗ2 или -О-СН2-О;
η составляет 3-11 и указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различающихся лигандов.
Другие библиотеки пептоидов, пригодные для скрининга на рак, включают библиотеки, содержащие случайную библиотеку лигандов для скрининга сложной биологической жидкости, содержащей соединение формулы I, на носителе
где соединения получают способом, который включает применение участвующих:
(A) фурфуриламин; 3,4-диметоксиэтаноламин; бензиламин; №(2-аминоэтил)ацетамид; N-(3аминопропил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид или циклогексиламин; или (B) метоксиэтиламин; пиперониламин; циклогексиламин; диаминобутан; метилбензиламин; изобутиламин; фурфуриламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или (C) фурфуриламин; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или (Ό) фурфуриламин; №(2-аминоэтил)ацетамид; №(3-аминоэтил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин; 4-(2аминоэтил)бензолсульфонамид; или (Е) цистеин; глицин; аллиламин; этаноламин; изобутиламин; метилбензиламин; пиперониламин; метионин; циклогексиламин; 3,4-диметоксифениламин; бензиламин; №(2-аминоэтил)ацетамид; N-(3аминопропил)-2-пирролидон; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид и фурфуриламин; и при этом К1 выбран из группы, состоящей из -(С1-С6)8СН3;
К2 выбран из Н;
К3 и К5 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-8СН3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -С1-С6 СООН, -С1-С6алкил-ОН, -С1-С6алкил-КН2, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -С1-С6алкил^С(О)С1-С6алкил, -С1-С6алкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, С1, Р, Вг, -ОСН3, -8Ο2ΝΗ2 или -О-СН2-О-;
К4 выбран из группы, состоящей из фурфурила и -(С1-С6алкил)КВ.7К8;
Кб выбран из группы, состоящей из следующего: 1-ил-аллил, 1-ил-2-гидроксиэтил, изобутил, 1-илη-бутиламин, метилбензил, пиперонил, циклогексил, 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, бензил, 1-ил-2(ацетамид)этил, 1-ил-3-2-пирролидинон, 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил или фурфурил;
η составляет от 3 до 11.
Предпочтительные варианты реализации для целей предварительного скрининга включают пептоиды, содержащие соединение формулы
причем указанное соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы 11а, где:
(a) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой циклогексил, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(b) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой изобутил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(c) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой
- 23 032582 изобутил, К14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(ά) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой циклогексил и К16 представляет собой изобутил;
(е) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой циклогексил и К16 представляет собой метилбензил;
(ί) К9 представляет собой циклогексил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(д) К9 представляет собой фурфурил, К10 представляет собой фурфурил, К11 представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой метилбензил;
(11) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К11 представляет собой циклогексил, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой 1-ил-пбутиламин, К14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой метилбензил;
(ΐ) К9 представляет собой изобутил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой изобутил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(]) К9 представляет собой изобутил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(k) К9 представляет собой циклогексил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой изобутил;
(l) К9 представляет собой циклогексил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил;
и фармацевтически приемлемые соли указанного соединения.
Предпочтительные варианты реализации для целей скрининга рака поджелудочной железы в наборах включают соединение формулы
причем указанное соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы II, где:
(a) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой циклогексил, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(b) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой изобутил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(c) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой изобутил, К14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
(ά) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой циклогексил и К16 представляет собой изобутил;
(е) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет
- 24 032582 собой метилбензил, В12 представляет собой метилбензил, В13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой циклогексил и В16 представляет собой метилбензил;
(ί) В9 представляет собой циклогексил, В10 представляет собой циклогексил, В11 представляет собой метилбензил, В12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В13 представляет собой метилбензил, В14 представляет собой метилбензил, В15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(д) В9 представляет собой фурфурил, В10 представляет собой фурфурил, В11 представляет собой изобутил, В12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В14 представляет собой метилбензил, В15 представляет собой метилбензил и В16 представляет собой метилбензил;
(Б) В9 представляет собой метилбензил, В10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В11 представляет собой циклогексил, В12 представляет собой циклогексил, В13 представляет собой 1-ил-пбутиламин, В14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В16 представляет собой метилбензил;
(ί) В9 представляет собой изобутил, В10 представляет собой метилбензил, В11 представляет собой метилбензил, В12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В14 представляет собой изобутил, В15 представляет собой изобутил и В16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(ΐ) В9 представляет собой изобутил, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В11 представляет собой метилбензил, В12 представляет собой метилбензил, В13 представляет собой метилбензил, В14 представляет собой циклогексил, В15 представляет собой метилбензил и В16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(k) В9 представляет собой циклогексил, В10 представляет собой циклогексил, В11 представляет собой метилбензил, В12 представляет собой метилбензил, В13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В14 представляет собой изобутил, В15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В16 представляет собой изобутил;
(l) В9 представляет собой циклогексил, В10 представляет собой циклогексил, В11 представляет собой изобутил, В12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В14 представляет собой метилбензил, В15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В16 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил;
и фармацевтически приемлемые соли указанного соединения.
Другие альтернативные варианты реализации для целей предварительного скрининга для обнаружения аутоантител рака поджелудочной железы включают соединение формулы
причем указанные соединения выбраны из группы, состоящей из соединений, содержащей следующие В9-В16:
(a) В9 представляет собой пиперонил, В10 представляет собой циклогексил, В11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В13 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой изобутил и В16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(b) В9 представляет собой пиперонил, В10 представляет собой пиперонил, В11 представляет собой циклогексил, В12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В13 представляет собой 1-ил-аллил, В14 представляет собой изобутил, В15 представляет собой циклогексил и В16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(c) В9 представляет собой метилбензил, В10 представляет собой пиперонил, В11 представляет собой циклогексил, В12 представляет собой пиперонил, В13 представляет собой пиперонил, В14 представляет собой метилбензил, В15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(ά) В9 представляет собой изобутил, В10 представляет собой циклогексил, В11 представляет собой изобутил, В12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В13 представляет собой 1-ил-аллил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой 1-ил-аллил и В16 представляет собой пиперонил;
(е) В9 представляет собой пиперонил, В10 представляет собой изобутил, В11 представляет собой пиперонил, В12 представляет собой циклогексил, В13 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой 1-ил-пбутиламин и В16 представляет собой пиперонил;
(ί) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой пиперонил, В13 представляет собой метилбен- 25 032582 зил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1 -ил-2-гидроксиэтил;
(д) К9 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К.10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой циклогексил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-илп-бутиламин;
(й) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой пиперонил;
(1) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-аллил, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой метилбензил;
(Ϊ) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(k) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой изобутил;
(l) К9 представляет собой 1-ил-аллил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой пиперонил;
(т) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К11 представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-2гидроксиэтил, К14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К15 представляет собой 1-ил-пбутиламин и К16 представляет собой циклогексил;
(п) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К13 представляет собой 1-ил-пбутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой пиперонил и К16 представляет собой 1 -ил-2-гидроксиэтил;
и фармацевтически приемлемые соли указанного соединения.
Предпочтительные варианты реализации для целей наборов и диагностики включают соединение формулы
причем указанные соединения выбраны из группы, состоящей из соединений, содержащих следующие К9-К16:
(a) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой изобутил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(b) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой циклогексил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-аллил, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой циклогексил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
(c) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой циклогексил, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(б) К9 представляет собой изобутил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой 1-ил-аллил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-аллил и К16 представляет собой пиперонил;
(е) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой изобутил, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой 1-ил-2-(4- 26 032582 бензолсульфонамид)этил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-пбутиламин и К16 представляет собой пиперонил;
(ί) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил;
(д) К9 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой циклогексил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-илп-бутиламин;
(11) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой пиперонил;
(ί) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-аллил, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой метилбензил;
(ί) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
(k) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой изобутил;
(l) К9 представляет собой 1-ил-аллил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой пиперонил;
(т) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К11 представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-2гидроксиэтил, К14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К15 представляет собой 1-ил-пбутиламин и К16 представляет собой циклогексил;
(п) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К13 представляет собой 1-ил-пбутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой пиперонил и К16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил;
и фармацевтически приемлемые соли указанного соединения.
Настоящее изобретение также можно применять для скрининга на присутствие биомаркеров, ассоциированных с любыми другими заболеваниями и состояниями. Такие заболевания и состояния включают указанные выше неврологические заболевания, аутоиммунные заболевания и онкологическое заболевания (рак), а также любые другие заболевания и состояния, для которых существует биомаркер, например антитело, или другой характеристический белок или биомолекула, ассоциированные с данным заболеванием или прогрессированием заболевания. Эти заболевания включают, в частности, воспалительные заболевания, инфекционные заболевания, сердечно-сосудистые заболевания и метаболические заболевания. Конкретные инфекционные заболевания включают СПИД, сибирскую язву, бруцеллез, мягкий шанкр, хламидийную инфекцию, холеру, кокцидиоидомикоз, криптоспоридиоз, циклоспорию, дифтерию, эрлихиоз, арбовирусный энцефалит, энтерогеморрагическую ЕзсйепсЫа сой (Е. соП), лямблиоз, гонорею, инфекцию Наеторййиз тПисп/ас. болезнь Хансена (лепре), хантавирусный легочный синдром, гемолитический уремический синдром, гепатит А, гепатит В, гепатит С, вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), легионеллез, листериоз, болезнь Лайма, малярию, корь, менингококковую инфекцию, инфекционный паротит, коклюш, чуму, паралитический полиомиелит, пситтакоз (орнитозе), Ку-лихорадку, бешенство, пятнистую лихорадку Скалистых гор, краснуху, синдром врожденной краснухи, сальмонеллез, тяжелый острый респираторный синдром (ТОРС), шигеллез, оспу, стрептококковые заболевания (инвазивные стрептококки группы А), стрептококковый синдром токсического шока (8Т88), 81гер1ососси8 рпеитошае, сифилис, столбняк, синдром токсического шока, трихинеллез, туберкулез, туляремию, брюшной тиф, ванкомицин-промежуточный/устойчивый 81арйу1ососси8 аигеив, ветряную оспу, желтую лихорадку, болезнь Крейтцфельда-Якоба (уСГО), лихорадку денге, геморрагическую лихорадку Эбола, эхинококкоз (альвеолярный эхинококкоз), инфекцию вирусом Хендра, оспу обезьян, грипп Н5\1 (птичий грипп), лихорадку Ласса, геморрагическую лихорадку Марбург, вирус Нипах, лихорадку о'ньонгньонг, лихорадку долины Рифт, венесуэльской конской энцефалит и вирус Западного Нила.
- 27 032582
Обширные библиотеки лигандов согласно настоящему изобретению можно применять непосредственно при анализе биологической жидкости в соответствующих экспериментальных условиях для выявления биомаркеров, без необходимости использовать меньшее количество опорных элементов (например, примерно 100000 или менее) или переноса таких пептоидов или лигандов на микроматрицу до скрининга биологической жидкости. Кроме того, библиотеки лигандов также можно применять для скрининга рецепторов клеток, которые имеют непосредственное отношение к определенному маркеру поверхности клеток. Настоящее изобретение, в отличие от ранее известных способов, допускает включение большего количества бусин/смол и, таким образом, более крупных библиотек при скрининге агентов, связывающихся с лигандом или скрининге клеточных рецепторов для непосредственного скрининга биологических образцов сложного состава (сложных биологических образцов). Соответственно настоящее изобретение включает также способ мониторинга прогрессирования заболевания, включающий этапы скрининга биологического образца, взятого у пациента, в момент времени 1 с последующим скринингом биологического образца, взятого у пациента, в момент времени 2 или в любой более поздний момент времени и/или мониторинг присутствия или отсутствия ассоциированного с заболевания биомаркера у указанного пациента с использованием набора, устройства или прибора, содержащего по меньшей мере один лиганд, выявленный согласно способу быстрого скрининга, предложенному в настоящему изобретении.
Лиганды.
Как было описано ранее для микроматричных систем, практически любая молекула может использоваться для создания случайной библиотеки на основе смолы или бусин. Эти молекулы или соединения могут включать природные продукты или созданные человеком соединения, или синтетические молекулы. Источником таких молекул могут быть биологические системы, а также источники небиологического происхождения. Предпочтительные лиганды для целей начального скрининга с использованием больших библиотек и в условиях согласно настоящему изобретению получают, частично, из субмономеров, которые выбирают из любых известных галидов уксусной кислоты или замещенных галидов уксусной кислоты. Например, в табл. 1 приведен ряд групп В в составе монозамещенных аминов, которые могут быть выбраны для этой цели.
- 28 032582
Таблица 1 Модификации боковых цепей для пептоидов
Аминная боковая цепь,
ΝΗ2Κ (Ссыл. №) п-Ви1 (Неше, ТейаЬеёгоп 59 (2003) 9919-9930) з-Ви ^СУ
-СН2СН2-СН(РЬ)2
-СН2РЬ
-СН2СН2ОН 'О/.....
-СН2ОС1Р11
-СН2рОСН3РЬ -СНСНзРИ -СН2СН2СН2ЫНВос
- 29 032582
- 30 032582
- 31 032582
- 32 032582
- 33 032582
- 34 032582
Таблица 2
Список аминов, которые могут использоваться в процессе синтеза пептоидов, описанных в настоящей заявке
- 35 032582
- 36 032582
- 37 032582
- 38 032582
- 39 032582
00¾
- 40 032582
- 41 032582
- 42 032582
- 43 032582
- 44 032582
- 45 032582
Предпочтительные мономеры и/или субмономеры для целей скрининга БА, скрининга рака поджелудочной железы и скрининга волчанки (предварительного и/или диагностического) выбраны из группы, состоящей из цистеина, глицина, метионина, аллиламина, этаноламина, изобутиламина, диаминобутана, метилбензиламина (рацемического или энантиомерного), пиперониламина, циклогексиламина, 3,4диметоксифенетиламина, бензиламина, №(2-аминоэтил)ацетамида, №(3-аминопропил)-2-пирролидинона, 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамида или фурфуриламина.
В качестве субмономеров также используют галогениды уксусной кислоты и/или галогениды замещенной группой К уксусной кислоты, где К выбрана из любой боковой цепи аминокислоты или из любой другой группы, включая указанные группы при монозамещенных аминах. В качестве альтернативы можно осуществлять взаимодействие комбинации любого амина и любого галогенида уксусной кислоты с образованием мономера, который затем подвергают взаимодействию с другим реакционноспособным мономером в растущей цепи пептоида с образованием олигомера согласно настоящему изобретению.
Комбинаторные библиотеки пептоидов могут быть приготовлены следующим образом.
Пептоиды, содержащие мономерный цистеин или метионин, присоединенный к носителю или линкеру на носителе или смоле или бусине, можно получить путем первоначального добавления блокированной аминокислоты к носителю или линкеру на носителе. После добавления указанной аминокислоты (или любой желательной аминокислоты, способной служить функциональной группой или использоваться для других целей в составе олигомера или диагностического средства, содержащего указанный олигомер) можно внести оставшиеся мономеры с использованием стандартных реактивов для пептидной химии или с использованием субмономеров бромуксусной кислоты (или α-замещенной бромуксусной кислоты или аналогичного реагента) и монозамещенного амина, причем указанный амин замещен Кгруппой. К-группа может быть выбрана из любого известного замещенного пептоида, в том числе пептоидов, описанных, например, в патентных публикациях США №№ 2010/0303805 или 2010/0303835 и/или в различных публикациях /искегшапп и Кодадек, полностью включенных в настоящий документ посредством ссылок. Предпочтительными аминами являются амины, выбранные из библиотек, упомянутых в настоящем документе, причем определенные мономерные амины добавляют в каждую библиотеку для создания библиотек, содержащих 1-250 млн бусин или частиц смолы. Предпочтительный размер
- 46 032582 библиотеки колеблется от 1 до 50 млн бусин или частиц смолы, содержащих указанное разнообразие соединений.
Процесс изготовления каждого пептоида обычно включает (1) изготовление аминокислотного реагента на носителе (включая необязательный линкер на носителе), (2) взаимодействие аминокислоты на носителе с ацилгалогенидом, например бромуксусной кислотой либо хлоруксусной кислотой, с образованием галогенированного производного, (3) взаимодействие указанного галогенированного производного с монозамещенным амином с образованием амида и (4) повторение этапов (2) и (3) с образованием пептоида. В составе крупных библиотек обычно получают метионинсодержащие пептоиды. Цистеинсодержащие пептоиды, как правило, получают при необходимости синтеза высокоаффинных пептоидов в больших количествах после первоначального скрининга крупных библиотек на основе бусин или частиц смолы. Если для первоначального скрининга сложной биологический жидкости, например сыворотки, используют обширные библиотеки на основе бусин, то необходимость или потребность в длинном полиэтиленгликолевом линкере, который, как правило, необходим для скрининга с помощью микроматриц, отсутствует. Полиэтиленгликолевый линкер может присутствовать на бусине или частице смолы при условии, что он является коротким линкером, содержащим менее приблизительно 10 мономерных звеньев. В диагностических наборах, включающих бусины или бусины ТепТаде1 размером менее приблизительно 50 мкм (например, 10 мкм), можно использовать как короткие линкеры ПЭГ (например, содержащие 2-10 мономеров ПЭГ), так и более длинные олигомеры ПЭГ.
При выполнении каждого этапа в процессе изготовления олигомера применяют растворители, например ДМФ или ацетонитрил или дихлорметан. Трифторуксусную кислоту применяют для целей отщепления, а пиперидин или другое подходящее основание применяют в качестве основания в реакции между бромпроизводным и амином. При получении аминокислотного реагента применяют различные блокирующие группы. В предпочтительном варианте реализации диаминобутан применяют в качестве первого аминного субмономера в цепи, примыкающего к остатку цистеина на С-конце пептоида. На первом этапе указанного процесса выбранные бусины или частицы смолы (в количествах граммов или миллиграммов) подвергают набуханию в подходящем растворителе, например ДМФ. Если бусины блокированы блокирующей группой при реакционноспособном амине на указанной бусине, для деблокирования бусины неоднократно добавляют щелочной раствор, например пиперидин, с последующей промывкой ДМФ. После деблокирования бусин или при первоначальном использовании таких бусин, как бусины ТегИадек их можно подвергать взаимодействию с подходящей аминокислотой, например цистеином или метионином (блокированной Етос или другой подходящей блокирующей группой при атоме азота, блокированной Тг1 (трифенилметилом), при атоме серы и в молярных количествах, достаточных для взаимодействия с каждой бусиной) в подходящем растворителе, например ДМФ. НВТи (гексафторфосфат тетраметилурония (связующий реагент) и 4-метилморфолин (основание) вместе с блокированной аминокислотой добавляют к раствору бусин в химическом стакане (или пробирке или колбе) и встряхивают при комнатной температуре с образованием Етос/Тй-блокированной аминокислоты на частицах смолы (или на линкере на частицах смолы). Затем бусины несколько раз промывают в растворителе, например ДМФ. Затем Етос-группу деблокируют с помощью подходящего реагента, обеспечивая реакцию амина в составе аминокислоты с другим реагентом, например, другой блокированной аминокислотой или субмономером, например бромуксусной кислотой, и активирующим агентом, например ЭЮ (3изопропилкарбодиимидом) в подходящем растворителе при нагревании (СВЧ при перемешивании). Затем полученные бусины промывают несколько раз, а затем обрабатывают желательным мономерным амином (в некотором молярном избытке) в подходящем растворителе при нагревании. Полученные бусины промывают несколько раз, а затем повторно обрабатывают бромуксусной кислотой и выбранным амином, получая олигомер и библиотеку олигомеров. Пептоиды можно отщепить от бусин с помощью трифторуксусной кислоты. Альтернативный или другой подходящий процесс получения пептоидов, включающих предпочтительный вариант реализации, например пептоидов, содержащих цистеин, примыкающий к мономеру, содержащему 1-ил-п-бутиламин, включает получение пептоида, содержащего две аминокислоты на С-конце, посредством процесса, дополнительно включающего добавление любого из мономеров, изготовленных в субмономерном процессе, причем вторая аминокислота представляет собой лизин. Указанное дополнительно включает выбор любого мономера или субмономера с целью изготовления α-замещенных субмономеров бромуксусной кислоты, причем заместители при атоме углерода могут быть выбраны из типичных боковых цепей аминокислот с образованием, после реакции с реагентами, α-замещенных пептоидов, причем И-группа находится при одном или обоих атомах углерода пептоидной цепи или при атоме азота цепи пептоида.
Комбинаторные библиотеки низкомолекулярных соединений можно получить коммерческим путем или изготовить с помощью способов, известных в данной области техники; см., например, ВюЫег е1 а1. 1995; Обо еТ а1., 1999; ЬеР1ае еТ а1., 2002; ОкТегдаагб апб Но1т, 1997; Уапд еТ а1., 1999. Кроме того, источниками таких молекул и библиотек являются патент США № 6344334 и публикациях Са11ор еТ а1. (1994), Согбоп еТ а1. (1994); ТЬотркоп апб Ебтап (1996).
Комбинаторные библиотеки пептидов можно получить коммерческим путем или изготовить с по
- 47 032582 мощью способов, известных в данной области техники; см., например, 81е\\аг1 апб Уоипд (1984); Тагп е1 а1. (1983); МетйеМ (1986) и Вагапу апб Мегп11е1б (1979), каждый из которых включен в настоящий документ посредством ссылки.
Комбинаторные библиотеки нуклеиновых кислот, включая РНК или ДНК, можно получить коммерческим путем или изготовить с помощью способов, известных в данной области техники. Комбинаторные библиотеки олигосахаридов можно получить коммерческим путем или изготовить с помощью способов, известных в данной области техники.
В каждом случае лиганды или случайные лиганды можно добавлять к смоле или бусинам носителя, формируя библиотеки для скрининга, которые можно применять в условиях, описанных в данном описании, для скрининга биомаркеров в сложной биологической жидкости. Предпочтительными лигандами являются пептоидные лиганды.
В дополнение к изготовлению и/или применению таких библиотек может быть необходима или желательна оценка характеристик, очистка и/или синтез или повторный синтез любого из таких лигандов. Такие способы известны в данной области техники и включают весь спектр способов очистки, например ВЭЖХ, с помощью хроматографических средств, или способы очистки с помощью химических средств; способы оценки характеристик, например масс-спектрометрию или ЯМР, или комбинации любых из этих способов. Дополнительное описание таких способов приведено, например, в патентной публикации США 2007/0003954, включенной в настоящий документ посредством ссылки. В таких случаях любой из таких очищенных лигандов можно называть соединением или практически очищенным соединением.
В методике начального скрининга согласно настоящему изобретению бусины и/или частицы смолы применяют в качестве носителей, содержащих олигомер, функционально присоединенный к указанному носителю. В диагностических наборах или других наборах, содержащих активные соединения или предполагаемые активные соединения, полученные в таком начальном скрининге, системы носителей могут быть расширены до практически любой системы носителей, включая микроматрицы или любую другую известную диагностическую платформу. В указанных случаях необходимо обеспечить, чтобы такие наборы или другие системы носителей, содержащие указанные предполагаемые активные соединения, также содержали или были приспособлены к детектору или способу, обеспечивающему обнаружение лигандов, включающему связывающие лиганд молекулы, присоединенные к таким лигандам. Предпочтительные способы детектирования включают, например, твердофазный ИФА или другие способы, включающие применение меченых вторичных антител.
Носители могут быть изготовлены из любого подходящего материала. Материалы, применяемые для изготовления таких носителей, могут включать, например, стекло, пластик, керамические или полимерные смолы или бусины. Носители также могут включать такие материалы, как никель, латунь, сталь или другие металлы или смеси металлов. Носители также можно кондиционировать, присоединяя к ним линкеры и/или другие средства для связывания с или присоединения к или взаимодействия с лигандом или активной группой в составе лиганда. Такие группы также описаны в патентной публикации США № 2007/0003954. В настоящем изобретении количество частиц смолы или бусин, содержащих отдельные лиганды, связанные с ними или с линкером, а затем с указанным носителем, колеблется от более 100000 до приблизительно 150 млн. Предпочтительное количество, применяемое в способах начального скрининга согласно настоящему изобретению, составляет от 1 до 2 млн лигандов/частиц смолы.
Смолы Теп1аде1® являются наиболее предпочтительными для методологии крупномасштабного скрининга лигандов согласно настоящему изобретению. Эти смолы являются привитыми сополимерами, состоящими из слабосшитой полистирольной матрицы, на которую привит полиэтиленгликоль (ПЭГ или РОВ). Смолы Теп1аде1 доступны для приобретения (Варр Ро1утеге СтЬН). Поскольку ПЭГ являются полимером-хамелеоном с гидрофобными и гидрофильными свойствами, привитый сополимер демонстрирует модифицированные химические свойства. По данным производителя, в принципе существуют два способа внедрения ПЭГ на модифицированную полистирольную матрицу. Простейшая процедура иммобилизации представляет собой присоединение ПЭГ через одну из его концевых гидроксильных групп к хлорметилированному полистиролу в соответствии с классической методологией синтеза простых эфиров или применение других бифункциональных ПЭГ для присоединения к твердому носителю. Производитель обнаружил, что посредством последовательного присоединения ПЭГ непосредственно к матриксу путем анионной привитой сополимеризации на функционализированном сшитом полистироле иммобилизовали цепи ПЭГ с молекулярной массой до 20 кДа. Оказалось, что привитые сополимеры с цепями ПЭГ приблизительно 2000-3000 Да оптимальны по отношению к кинетической скорости, подвижности, набуханию и емкости смолы. Поскольку ни одна методика полимеризации не обеспечивает получения монодисперсного ПЭГ, содержащего более 10 этиленоксидных единиц, теоретически не существует способа внедрения монодисперсных цепей ПЭГ, содержащих более 10 этиленоксидных единиц, в смолу, или получения монодисперсного ПЭГ путем прямой полимеризации на полистирольном каркасе (монодисперсность определяется как ПЭГ без распределения по молекулярной массе). Указанные привитые сополимеры стабильны при давлении и могут применяться в периодических процессах, а также в условиях непрерывного потока. Указанный сополимер содержит приблизительно 50-70% ПЭГ (мас./мас.). Свойства указанных полимеров в значительной степени определяются свойствами ПЭГ и
- 48 032582 преобладают над свойствами полистирольной матрицы.
Устройство химической библиотеки или пептидной библиотеки по принципу одна бусина - одно соединение важна для знания количества бусин, доступных при определенном количестве смолы, а также емкости одиночной бусины. В табл. 2 приведены некоторые размеры частиц и их сопоставление с соответствующей емкостью одиночной бусины. Расчеты основаны на типичной загрузке бусин Теп1аде1, которая находится в диапазоне 0,25-0,3 ммоль/г. Для аналитического исследования характеристик и секвенирования на бусине должно быть по меньшей мере 5 пмоль пептида, связанного со смолой. С целью оценки оптимального количества смолы для библиотеки, которое можно обработать экономически, следует учитывать размер бусин и емкость бусин. По отношению к однородности процесса диффузии и кинетической скорости, а также для анализа и количественной оценки одиночной бусины, все бусины, использованные авторами, демонстрировали очень узкое распределение по размеру.
Таблица 3
смола ) размер [мкм] бусин/г емкость/бусину
Теп1аСе1 ΝΗ2 | 750 мкм 4.62 х 103 65 нмоль
Теп1аСте1 ΝΗ2 1 500 мкм 1,5 х 104 19 нмоль
Теп1аОе1 ΝΗ2 | 300 мкм 6,4 х 104 4 нмоль
Теп1аСге1 ΝΗ2 | 200 мкм 2,15 х 105 1,3 нмоль
Теп1а6е1 ΝΗ2 | 130 мкм I 8,87 х 105 280 - 330 пмоль
Теп1аОе1 ΝΗ2 ί 90 мкм ' 2,86x106 80 - 100 пмоль
Теп1аОе1 Μ ΝΗ2 | 35 мкм 4,55 х 107 5,5 пмоль
Теп1аОе1 Μ ΝΗ2 | 20 мкм 2,.4 х 108 1,0 пмоль
ТеЫаОе! Μ ΝΗ2 ί 10 мкм 1,95 хЮ9 0,13 пмоль
Корреляция размера частиц, количества бусин на 1 г смолы и емкости одиночной бусины. Расчет емкости одиночной бусины основан на емкости 0,25-0,3 ммоль/г смолы.
Существует несколько типов смол Теп1аде1, демонстрирующих заданные свойства в зависимости от их применения.
Смолы Теп1аде1 8.
Полиэтиленгликолевый спейсер присоединен к полистирольной цепи через алкильную связь. Указанная связь устойчива к действию кислот или оснований. Указанный тип смолы представляет собой смолу стандартного типа, применяемую при синтезе пептидов, твердофазном органическом синтезе или комбинаторной химии.
Смолы Теп1аде1 ΡΑΡ.
ПЭГ присоединен к полистирольному каркасу через бензильную эфирную связь. Указанная бензильная эфирная связь чувствительна к агрессивным кислотам, например 100% ТФУК или смесям ТФУК/РМЗВг.
Указанные специально разработанные смолы применяют для процедур иммунизации или для синтеза ПЭГ-модифицированных производных (продуктов, присоединенных через ПЭГ); при воздействии агрессивных кислот ПЭГ-спейсер отщепляется вместе с синтезированным соединением от твердого носителя с получением ПЭГ-модифицированных растворимых соединений в условиях твердофазного синтеза (например, ПЭГ-модифицированных пептидов).
Смолы Теп1аде1 Ν.
Полиэтиленгликолевый спейсер присоединен к полистирольному каркасу через бензильную сложноэфирную связь. Указанные специально разработанные смолы применяют в химии олигонуклеотидов для синтеза олигонуклеотидов в небольших и крупных масштабах. По сравнению со стеклом с регулируемой плотностью емкость увеличивается в 10 раз.
Поскольку смолы Теп1аде1 являются сополимерами, состоящими из полистирола и полиэтиленгликоля, следует принимать во внимание химические и физико-химические свойства обоих исходных полимеров.
ПЭГ сам по себе является гигроскопичным полимером. Как известно из литературы, сложные эфиры ПЭГ не очень стабильны и легко гидролизуются. В зависимости от условий хранения и времени хранения, ПЭГ сам по себе можно окислить по полиэфирной цепи с образованием пероксидов или сложных эфиров. Затем обработка кислотой или основанием гидролизует образовавшиеся сложные эфиры ПЭГ, что приводит к небольшой утечке ПЭГ. Указанную утечку можно зарегистрировать с помощью МС или ЯМР как ПЭГ и примеси в конечном продукте. Эти химические свойства присутствуют у всех ПЭГ и полимеров на основе ПЭГ.
- 49 032582
Таблица 4
Теп1аСе1 8 : 8 означает стандартную смолу, пригодную для широкого спектра вариантов применения, используемую в периодических и проточных системах.
Теп1аСе1 К.: Специально разработанная смола для синтеза в исследовательских целях. Смола демонстрирует повышенный объем при набухании, но менее устойчива к давлению. Хорошо подходит для синтеза крупных пептидов и проблемного синтеза.
Теп1аСе1 НЬ: Этот вариант Теп1аОе1 с высокой загрузкой объединяет существенно повышенную емкость с достоинствами смол Теп1аОе1
Теп1аСе1 МВ: Макробусины Теп1аСте1 выделяются необычно большим диаметром и
высокой емкостью частиц, основанной на технологии Теп1аОе1, и предназначены для синтеза на одиночной бусине и анализа одиночных бусин.
Теп1аСе1 N : Смола этого типа предназначена для автоматического крупномасштабного синтеза олигонуклеотидов.
Теп1аСе11: Смола этого типа разработана для полимерных иммуноконъюгатов.
Теп1аСе1 М : Микросферическая форма частиц этой смолы Теп1аОе1 размером 10, 20, 30 мкм и ее монодисперсность обеспечивает применение в автоматических сортировщиках, для создания очень крупных библиотек, высокоскоростного синтеза и т.д.
ТепХаСе! В : Бифункциональные смолы Теп1аОе1, в которых реакционноспособные сайты на внешней поверхности бусин перпендикулярны реакционноспособным сайтам во внутреннем объеме бусин, а также гибридные смолы для последовательного отщепления.
В дополнение к бусинам Теп1аде1, для получения библиотек типа один лиганд на бусину можно применять другие смолы и/или частицы. Например, можно применять слабосшитые полистирольные смолы или полиамидные смолы. Группа, соединяющая носитель с бусиной смолы, может представлять собой неотъемлемую часть твердофазного синтеза. Линкер представляет собой специализированную блокирующую группу, в том смысле, что большую часть времени линкер связывает функциональную группу только для того, чтобы она появилась в конце синтеза. Линкер не должен быть подвержен действию реагентов, применяемых для модификации или удлинения присоединенного соединения. И, наконец, этап отщепления должен протекать быстро и с хорошим выходом. Лучший линкер должен обеспечивать присоединение и отщепление с количественным выходом
В некоторых аспектах носитель может представлять собой бусину, планшет, тест-полоску, фильтр, мембрану, стержень или лунку. Обнаружение может включать РИА, ФИА, твердофазный ИФА, вестернблоттинг, проточную цитометрию, РКЕТ или поверхностный плазмонный резонанс.
Линкеры на основе карбоновых кислот.
Первая линкерная группа, использованная для синтеза пептидов, носит имя родоначальника твердофазного синтеза. Смола Меррифильда представляет собой сшитый полистирол, модифицированный хлорметильной группой. Карбонильная группа присоединена путем нуклеофильного замещения хлорида карбоксилатом цезия в ДМФ. Расщепление для регенерации карбоновой кислоты обычно осуществляют с помощью фтористого водорода.
Второй класс линкеров, применяемых для карбоновой кислоты, представляет собой линкер Ванга. Указанный линкер обычно присоединяют к сшитому полистиролу, Тепкше! и полиакриламиду, получая смолу Ванга, разработанную для синтеза пептидных карбоновых кислот с использованием стратегии Ртос-блокирования, и в связи с принципом использования активированного бензилового спирта продукт - карбоновую кислоту можно отщеплять с помощью ТФУК. Разработана более кислотолабильная форма смолы Ванга. Смола 8Α8ΚΙΝ обладает структурой, аналогичной линкеру Ванга, но с добавлением метоксигруппы для стабилизации иона карбония, образующегося при кислотном отщеплении.
- 50 032582
Карбоксамидные линкеры.
Линкер Ринка обычно предпочтителен для получения первичного карбоксамида при твердофазном синтезе; в настоящем изобретении этот линкер применяют при производстве или повторном синтезе выявленных соединений (активных соединений) или предполагаемых выявленных соединений (активных соединений), полученных при первичном скрининге согласно изобретению. В таких случаях цистеин является первым мономером, взаимодействующим с линкером Ринка, а затем процесс включает либо добавление следующего мономера для получения олигомера, либо последующего субмономерного реактива для получения олигомера. Повышенная чувствительность линкера Ринка к кислоте является следствием двух дополнительных электронодонорных метоксигрупп. При получении первичного карбоксамида исходный материал присоединяют к линкеру в виде карбоновой кислоты и после синтеза отщепляют от смолы с помощью ТФА.
После применения смолы Ринка для получения карбоксамида следует ТФУК-катализируемое от щепление.
Спиртовые линкеры.
Гидроксильный линкер на основе тетрагидропиранильной (ТНР) блокирующей группы разработан Тйошрзоп апд Е11тапп. Все виды спиртов легко присоединяются к дигидропирану, и полученная ТНРблокирующая группа устойчива к действию сильного основания, но легко расщепляется кислотой. Этот линкер присоединяют к смоле Меррифильда. Тритильная группа является хорошей кислотолабильной блокирующей группой для большого количества гетероатомов. Тритильную группу использовали для присоединения спиртов при синтезе библиотеки β-меркаптокетонов.
Карбаматные и аминные линкеры.
Карбаматный линкер использовали для синтеза комбинаторной библиотеки из 576 полиаминов, изготовленной при поиске ингибиторов трипаносомных паразитарных инфекций. Исследовали два линкера. Один из них был основан на гидроксиметилбензойной кислоте 1, а к другому была добавлена электронодонорная группа 2. Последний линкер обеспечивал отщепление с помощью ТФУК, в то время как первый мог расщепляться в агрессивной кислой среде.
о о
О о
Очень полезный линкер разработан недавно для получения третичного амина (третичные амины часто используют в молекулах лекарств). Первичные и вторичные амины внедряют в линкер путем реакции Майкла. Амин можно алкилировать, получая ион четвертичного аммония, связанный со смолой. В умеренно щелочных условиях происходит элиминирование Хоффманна с получением третичных аминов высокой чистоты.
Бесследовые линкеры.
В некоторых случаях исходные материалы загружают на смолу в одной из форм, например в виде карбоновой кислоты, а отщепляют в другой форме, например карбоксамида. Это в особенности приемлемо, если для соединения-мишени требуется функция высвобождения. (Пептиды неизменно содержат карбоновую кислоту или карбоксамид.) В то же время рост интереса к комбинаторным библиотекам низкомолекулярных соединений, не являющихся пептидами, выявил необходимость в линкерах нового типа. Указанные линкеры проявляют неспецифические функции после расщепления. Бесследные линкеры называются так потому, что анализ конечного соединения не обнаруживает следа присоединения к твердой фазе.
Образцы.
Как обсуждалось ранее, биологические жидкости сложного состава, подготовленные для анализа в процессе согласно настоящему изобретению, включают или могут включать множество потенциальных биомаркеров, включая маркеры, экспрессирующиеся на клетках (неадгезивных клетках, в том числе Тклетках или других иммунных эффекторных клетках), микроорганизмы, белки, пептиды, липиды, полисахариды, низкомолекулярные соединения, органические молекулы, неорганические молекулы, биологические молекулы, и в том числе любые обнаруживаемые или регистрируемые молекулы в такой среде
- 51 032582 сложного состава. В предпочтительном варианте реализации такие маркеры представляют собой антитела и, в частности, являются антителами, генерируемыми в результате заболевания или состояния. В предпочтительном варианте реализации источником таких маркеров являются физиологические жидкости, например сыворотка, плазма, слюна или другие жидкости или образцы, полученные от пациента или животного или организма. Каждый образец или ткань или биологический образец или образец, происходящий из окружающей среды, или полученный образец кондиционируют или обрабатывают или разбавляют, или иным способом подготавливают для начального скрининга либо любого последующего скрининга указанного образца с применением предполагаемых выявленных соединений (активных соединений) или лигандов, обладающих сродством к таким биомаркерам. Образцы разбавляют в соответствии со способами, приведенными здесь, с целью обеспечить или допустить достаточное различие между фоновыми уровнями или шумом и сигналами, ассоциированными со связыванием лиганда с связывающей лиганд молекулой.
Время и/или условия, необходимые для воздействия лигандов/носителей на такие образцы, зависят от конкретного образца и других факторов. Предпочтительные условия для процесса согласно настоящему изобретению дополнительно описаны в данном документе. Почти во всех случаях после воздействия биологической жидкости на крупную библиотеку лигандов и/или лиганды или наборы, полученные из такой библиотеки, применяют этапы промывки или элюирования и другие средства кондиционирования. Применяют водные растворы, в том числе буферные растворы, например НЕРЕ8-буфер, Ιήδ-буфер или физиологический раствор с фосфатным буфером. Системы носителя также можно обработать энергопоглощающими материалами для облегчения десорбции или ионизации комплекса с поверхности носителя. Кроме того, применяют химические средства для отсоединения или удаления комплексов лиганд - связывающая лиганд молекула с носителя.
Способы детектирования комплексов лиганд - связывающая лиганд молекула на носителе включают фотометрические и нефотометрические способы. Такие способы включают обеспечение того, что указанный процесс включает способ для детектирования и измерения поглощения, флуоресценции, показателя преломления, поляризации или светорассеяния. Сюда относятся прямые и/или косвенные средства для измерения таких параметров. Способы, использующие флуоресценцию, включают применение флуоресцентных маркеров в иммунологических способах, например твердофазном ИФА или сэндвичанализе. Способы, использующие показатель преломления, включают поверхностный плазмонный резонанс (8РК), способы использования дифракционных решеток (например, сенсоры с однородным решеточным выводом, оптические сенсоры с опросом по длине волны (^108) и дифракционные решетки с линейно меняющимся периодом), резонансное зеркало и интерферометрические методики. Способы, использующие поляризацию, включают эллипсометрию. Кроме того, можно использовать способы на основе светорассеяния. Другие средства для мечения и/или разделения и/или детектирования могут также включать магнитные средства. Можно применять магнитно-резонансную томографию, ионную спектрометрию в газовой фазе, МРТ.
Анализ полученных данных, как правило, включает количественную оценку сигнала, обусловленного обнаруженным биомаркером, по сравнению с контролем или эталоном. Указанные данные можно анализировать с помощью любого подходящего средства. Для сбора и анализа данных можно применять компьютеры и компьютерные программы. Бусины и/или другие носители можно кодировать с помощью компьютера в целях идентификации. Анализ данных включает анализ интенсивности сигнала в условиях данного анализа или способа детектирования. Лиганды, связывающие лиганд молекулы или эталонные молекулы и/или молекулы для вторичного детектирования можно метить радиоактивной меткой или обнаруживаемой молекулой. Специалист в данной области техники может оценить различия и/или отличие между образцами биологической жидкости, содержащими биомаркеры, ассоциированные с заболеванием, и контрольными образцами или образцами от здорового пациента, которые не содержат таких маркеров. Специалист в данной области техники также может определить в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, наличие ложноположительных или других выявленных соединений (активных соединений), которые являются или могут обнаруживаться в контрольных образцах для учета и/или удаления таких активных соединений, и специалист в данной области техники может в соответствии со способами, описанными в настоящем документе, продолжить процесс определения или поиска биомаркеров, ассоциированных с заболеванием, в образцах от пациентов с указанным заболеванием или состоянием. Детектирование таких выявленных соединений (активных соединений) во всех случаях осуществляют с помощью средства для определения связывания лиганд-связывающей молекулы, например биомаркера, ассоциированного с заболеванием, или другого маркера, с лигандами в библиотеке лигандов, например, описанной в настоящем документе.
Биомаркеры, ассоциированные с заболеваниями и/или состояниями, приведенными в настоящем документе, варьируют в зависимости от конкретной стадии заболевания и/или состояния конкретного пациента или животного или другого исследуемого организма. В большинстве случаев ожидается, что лиганды, являющиеся предполагаемыми активными соединениями и соединениями, приведенными здесь, имитируют природный антиген, в первую очередь инициирующий иммунный ответ и/или образование антител или иммунных клеток. Настоящее изобретение и процесс скрининга, приведенные в на
- 52 032582 стоящем документе, не требуют знания конкретного антигена или антитела, генерируемых в ответ на антиген. В то же время лиганды могут быть полезны сами по себе в качестве вакцин или лекарствкандидатов в дополнение к применению при скрининге и в диагностических способах, приведенных в настоящем документе. Таким образом, настоящее изобретение включает соединения и фармацевтические композиции.
Скрининг пептоидов.
Для скрининга пептоидной комбинаторной библиотеки одна бусина - одно соединение (ОВОС) получают от десятков тысяч до миллионов бусин, несущих пептоиды, а затем смешивают их с биологическим образцом сложного состава. Начальный биологический образец сложного состава предпочтительно является контрольным образцом, а последующий биологический образец сложного состава, обработанный библиотекой лигандов после удаления из нее контрольных активных соединений, затем обрабатывают и/или подвергают скринингу с биологическим образцом сложного состава больного. Затем обнаруживают, идентифицируют и выделяют и/или оценивают характеристики лигандов/бусин, взаимодействующих по меньшей мере с одним биомаркером, ассоциированным с заболеванием. В предпочтительном варианте реализации применяют протокол скрининга ТегИадек включающий (1) получение бусин, (2) скрининг сложной биологический жидкости и (3) обнаружение выявленных соединений (активных соединений).
Скрининг пептидов.
Для скрининга пептидной комбинаторной библиотеки одна бусина - одно соединение (ОВОС) получают от десятков тысяч до миллионов бусин, несущих пептиды, а затем смешивают их с биологическим образцом сложного состава согласно процессам, описанным в настоящем документе. Затем идентифицируют и выделяют бусины, взаимодействующие с биомаркером, ассоциированным с заболеванием, для определения структуры соединения. Например, можно выполнить скрининг с помощью ОВОСбиблиотеки пептидов с использованием стрептавидина (БА) в качестве белка-зонда, меченного красным флуоресцентным красителем, и с применением оборудования для проточной сортировки СОРАБ ВЮВЕАЭ для отделения флуоресцентных бусин от нефлуоресцентных; см. Мапт1 е1 а1., 1. СотЬ. СНет., 2009, 11 (1), р. 146-150. Красные красители, которые можно применять, представляют собой АТТО 590 и Техак Кеб. После инкубирования библиотеки с конъюгатом БА-красный флуоресцентный краситель получают положительные бусины, обусловленные взаимодействием пептид-БА. Бусины анализируют времяпролетной масс-спектрометрией с ионизацией лазерной десорбцией и использованием матрицы (МАЬОЬТОЕ МБ). Таким образом, пептидные библиотеки можно использовать аналогично описанному в настоящем документе способу с применением пептоидов, причем первоначальный контроль образцов биологической жидкости используют для удаления лигандов/бусин выявленных соединений (активных соединений) из исходной библиотеки соединений, а затем используют оставшиеся члены библиотеки для скрининга любых активных соединений в образце сложной биологический жидкости, взятой у больного. Указанные активные соединения являются предполагаемыми выявленными соединениями, дальнейшую обработку которых осуществляют с применением любых диагностических наборов.
Аналогичным образом, любой лиганд можно подвергать скринингу с применением бусин или носителей и процессов, описанных в настоящем документе. Указанные лиганды включают, в дополнение к пептоидам или пептидам, нуклеиновые кислоты, олигомеры, полисахариды, низкомолекулярные соединения и/или любую их комбинацию, которую можно встроить в библиотеки и использовать для скрининга сложной биологический жидкости в условиях, приведенных в настоящем документе.
Наборы и средства диагностики.
Любое из соединений или композиций, описанных здесь, можно в дальнейшем применять в диагностических наборах в клинических или лабораторных условиях. Указанные наборы могут варьироваться от простых диагностических анализов, осуществляемых на месте, до сложных и многоканальных инструментов или зондов. Системы носителей и упаковка, окружающая внутреннюю часть системы носитель/лиганд, могут быть выбраны из современных коммерческих наборов, предназначенных для включения предполагаемых выявленных соединений (активных соединений) и/или повторно синтезированных выявленных соединений (активных соединений), установленных на таких подходящих платформах, либо их можно применять в диагностических наборах новой конструкции. Комплекты, как правило, снабжены всеми подходящими реагентами и инструкциями по применению наборов для скрининга и/или диагностики конкретного заболевания или состояния согласно назначению набора. Любой такой набор или способ включает по меньшей мере одно предполагаемое активное соединение или лиганд, идентифицированный в соответствии со способом скрининга, приведенным в настоящем документе. Указанный лиганд или множество лигандов можно выбрать из того же лиганда или смеси лигандов, которые включают соединения согласно настоящему изобретению. Указанные лиганды можно выбрать на основании их сродства к биомаркеру, ассоциированному с одним конкретным болезненным состоянием или группой или категорией заболеваний или состояний. Предпочтительными лигандами являются пептоидные лиганды. Наборы также могут содержать инструкции для врачей, диагностирующих конкретное заболевание или состояние, и специфические этикетки для определенного набора и болезненного состояния. Таким образом, настоящее изобретение включает комбинацию комплекта, включающего все необходи
- 53 032582 мые компоненты, например предполагаемые пептоиды или лиганды, обнаруженные при начальном скрининге с использованием любой из библиотек, описанных в настоящем документе и/или известных в соответствии с конкретными способами, приведенными здесь, и инструкций и этикеток. Кроме того, предполагается, что конкретные процессы, способы и материалы, описанные в настоящем документе, можно применять в клинических и лабораторных условиях под наблюдением квалифицированного оператора. Наборы и/или инструменты или оборудование включают лиганды, например пептоиды, специфические для антител и/или клеток, ассоциированных с заболеванием. Набор может включать полный диагностический набор и/или набор для скрининга, либо набор может включать компоненты или субкомпоненты, содержащие или включающие диагностические пептоиды, антитела, обнаруженные и охарактеризованные посредством таких пептоидов, или нативные антигены, обнаруженные и очищенные и/или охарактеризованные в результате взаимодействия с аутоантителом. Такие антитела и очищенные антигены составляют часть настоящего изобретения.
Способы диагностики.
Библиотеки лигандов согласно настоящему изобретению применяют для поиска и определения лигандов, связывающихся с биомаркерами, ассоциированными с заболеванием. Такие лиганды затем используют в наборах и/или способах, в целом описанных выше, для оценки, скрининга или диагностики болезненных состояний. Указанные диагностические способы обычно включают скрининг и поиск биомаркеров, ассоциированных с заболеванием, которые включают антитела и/или другие биологические маркеры. Как указано выше, эти антитела можно дополнительно идентифицировать и исследовать с использованием лигандов согласно настоящему изобретению на подходящих колонках для выделения или удаления таких антител из образцов крови. Указанные антитела можно, в свою очередь, использовать в качестве зондов для детектирования нативного антигена, связанного с таким антителом. Таким образом, настоящее изобретение включает как антитела, так и очищенные антигены, связанные с такими антителами, и обнаруженные, выделенные и охарактеризованные с применением способов согласно настоящему изобретению.
Наборы и/или другие средства для скрининга и/или диагностики болезненных состояний следует, в первую очередь, оценивать по образцам, взятым у пациентов. Указанные образцы, взятые у пациента, могут происходить от нормальных контрольных образцов или образцов от пациента, где указанный пациент болен или у которого подозревают указанное заболевание или состояние. У пациента могут быть другие симптомы, связанные с заболеванием, кроме присутствия биомаркера, ассоциированного с заболеванием. Пациент может находиться на ранней стадии заболевания, может вообще не страдать заболеванием или состоянием, или может находиться на поздней стадии конкретного заболевания. В любом клиническом контексте и в рамках соответствующих руководств контрольные образцы, образцы от пациента и клинические образцы можно представить в соответствии со слепым принципом, а затем оценить с помощью соединений согласно настоящему изобретению. Данные, полученные в результате скрининга, можно анализировать после раскрытия с целью поиска статистически значимых результатов или корреляций с известными или базовыми данными о любом конкретном пациенте или группе пациентов. Настоящее изобретение включает способ скрининга на присутствие заболевания или состояния, включающий в себя (1) скрининг биологического образца от пациента с применением по меньшей мере одного соединения согласно настоящему изобретению: (2) скрининг контрольного биологического образца при тех же условиях с применением по меньшей мере одного соединения, и (3) сравнение контрольных данных здорового субъекта с данными для пациента с целью определения наличия или отсутствия биомаркера, ассоциированного с заболеванием. Группу пациентов и образцов от пациентов, которые больны или у которых подозревают заболевание X, можно подвергнуть скринингу с применением набора или диагностического зонда, содержащего по меньшей мере одно соединение согласно настоящему изобретению, а данные, полученные по каждому пациенту, можно использовать в зависимости от конкретного случая с целью подтверждения или валидации болезненного состояния или отсутствия такового. Такие данные, полученные согласно настоящему изобретению, можно использовать в сочетании с полной известной информацией о конкретном пациенте с целью оценки состояния пациента, а также обеспечения указаний для врача, назначающего лечение. Информацию, полученную в результате любого такого скрининга, можно использовать при клинических испытаниях для оценки отдельных пациентов, получающих медикаментозное лечение. Таким образом, настоящее изобретение включает способ оценки хода клинических испытаний, включающий применение скрининга, выполненного в соответствии со способами, описанными в настоящем документе. В предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение относится к способу скрининга или диагностики раннего болезненного состояния, включающему использование скрининга или соединения, приведенного в настоящем документе, для детектирования биомаркера, ассоциированного с заболеванием. Настоящее изобретение особенно полезно в контексте раннего вмешательства в ход заболевания, причем обнаружение таких биомаркеров, как ожидается, станет возможным задолго до агрессивного прогрессирования заболевания. В еще одном контексте ожидается, что раннее вмешательство в ход сердечно-сосудистого заболевания и/или метаболического заболевания, а также неврологического заболевания спасет жизни и предотвратит или сможет использоваться для предотвращения дальнейшего развития таких заболеваний без раннего медицинского вмешательства
- 54 032582 или лечения.
Настоящее изобретение также включает способы повышения разрешения или эффективности различий между контрольным или стандартным раствором и биологической жидкостью сложного состава, содержащей биомаркер, ассоциированный с заболеванием. Например, способы включают в себя предварительную подготовку или предобработку или предварительное блокирование системы/сыворотки буферами и/или кондиционирующими агентами, например лизатом Е. со11 и/или лизином.
В еще одном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает способ лечения субъекта, предположительно страдающего от заболевания, включающий (а) обеспечение контакта образца, содержащего антитело, от указанного субъекта с одним или более носителями, присоединяющими к нему пептоид, включающий пептоид формул, приведенных в настоящем документе, (Ь) обнаружение антител, связанных с указанными пептоидами, и (с) формирование решения по лечению на основании результатов шага (Ь). Способ может дополнительно включать получение указанного образца от субъекта. Способ может также дополнительно включать постановку диагноза заболевания для субъекта, от которого получен указанный образец, если уровень антитела, связывающегося с пептоидом, больше, чем уровень антитела, наблюдаемый для контрольных здоровых пациентов. Способ может также дополнительно включать формирование решения по лечению для указанного субъекта. Образец можно приводить в контакт более чем с одним пептоидом формул, приведенных в настоящем документе. Образец можно приводить в контакт с многоканальной платформой для целей диагностики множественных болезненных состояний. Носитель может представлять собой бусину, планшет, тест-полоску, фильтр, мембрану, стержень или лунку. Образец может представлять собой кровь, сыворотку, слюну или ЦСЖ. Обнаружение может включать РИА, ФИА, твердофазный ИФА, вестерн-блоттинг, проточную цитометрию, ЕКЕТ или поверхностный плазмонный резонанс.
Еще один вариант реализации направлен на композицию антител, выделенных из биологической жидкости, являющихся показателем заболевания; в некоторых вариантах реализации указанные антитела выделены путем контакта образца, содержащего такие антитела, с пептоидной композицией, специфически связывающейся с антителами, являющимися показателем заболевания или ассоциированными с заболеванием. Антитела можно удалить, выделить или очистить от других компонентов, не являющихся антителами, и не-0 специфических компонентов. Затем антитела можно промыть и/или отделить от агентов, захватывающих пептоиды.
В некоторых вариантах реализации матрицу с пептоидами, изготовленную из пептоидов, обнаруженных с применением способа, описанного здесь, гибридизуют с биологическим образцом, включающим добавку бактериального лизата, например лизата Е. со11. Биологический образец включает контрольный образец и образец, содержащий маркер расстройства центральной нервной системы. Например, стекла микроматриц покрывают камерой для гибридизации и уравновешивают 1ХТВЗТ (50 мМ Трис, рН 8,0; 150 мМ №С1. 0,1% Твин-20) в течение приблизительно 15 мин. Затем стекла блокируют бактериальным лизатом при концентрации, по меньшей мере, не превышающей или приблизительно равной 0,5, 1, 1,5, 2 мг/мл лизата. Лизат удаляют, а предметные стекла инкубируют приблизительно с 1 мл биологического образца (содержащим приблизительную концентрацию белка 5, 10, 15, 20 или 25 дг/мл, включая все диапазоны и значения между ними) в бактериальном лизате при осторожном встряхивании. Затем микроматрицы промывают 1ХТВЗТ и гибридизуют с меченым антителом против 1дС (например, при разведении 1:400). Затем стекла промывают соответствующим буфером. Стекла высушивают с использованием центрифуги (например, 5-мин центрифугирование при 1500 об/мин) и сканируют на сканере микроматриц, например, с использованием 635-нм лазера при 100% мощности и усилении трубки фотоумножителя 600 или 650. Таким образом, настоящее изобретение также относится к способу снижения фонового шума антисывороток в диагностическом тесте, включающему обработку контрольного образца плазмы и образца от больного лизатом Е.со11 и обеспечение контакта указанных образцов с матрицей пептоидов или лигандов. Считается, что этот процесс можно использовать для обработки носителя любой матрицы, используемой для детектирования и различения антител в сыворотках в контексте сравнения контрольного образца и образца от больного.
Предполагается, что любой способ или композицию, описанные в настоящем документе, можно осуществить по отношению к любому другому способу или композиции, описанным в настоящем документе.
Использование форм единственного числа в сочетании с термином включающий в формуле изобретения и/или описании может означать один, но также согласуется со значением один или более, по меньшей мере один и один или более одного.
Предполагается, что любые варианты реализации, рассмотренные в данном описании, можно осуществить по отношению к любому способу или композиции согласно настоящему изобретению, и наоборот. Кроме того, композиции и наборы согласно настоящему изобретению можно применять для осуществления способов согласно настоящему изобретению.
В данной заявке термин приблизительно используется для указания того, что значение включает изменения, обусловленные внутренней ошибкой устройства, способа, используемого для определения указанного значения, или изменчивость, существующую среди подопытных субъектов.
- 55 032582
Вакцины и лекарственные средства
Понятно, что любое из предполагаемых выявленных соединений (активных соединений) или пептоидов, обнаруженных в ходе процесса, приведенного в настоящем документе, также может являться терапевтическим лекарственным средством или вакциной-кандидатом. Таким образом, настоящее изобретение относится к способу для детектирования лекарств-кандидатов или вакцин, включающему использование скрининга в соответствии со способами, описанными в настоящем документе.
Пример 1. Получение библиотеки.
Протокол синтеза пептоидов (цистеин-пептоидов или метионин-пептоидов).
В следующем примере продемонстрировано получение библиотек пептоидов согласно настоящему изобретению. Материалы, используемые в примере, включали химические колбы или стаканы, пластиковые пробирки, 10-15 3-мл шприцов с иглами. Латексные перчатки, 10-15 15-мл полипропиленовых пробирок и микропипетки с наконечниками, устойчивыми к действию растворителей (1000 мкл), стеклянные пипетки и бусины из смолы. Использованные химические вещества и/или реагенты включали Ν,Ν-диметилформамид, бромуксусную кислоту (ВМА), безводный диметилформамид, пиперидин, ацетонитрил, 3-диизопропилкарбодиимид (О1С). трифторуксусную кислоту, 5(6)-карбоксифлуоресцеин, дихлорметан (ДХМ) и 4-метилморфолин (ΝΜΜ). При изготовлении каждой библиотеки также применяли различные амины, а также НВТи (гексафторфосфат тетраметилурония) и триэтилсилан.
Получение пептоидов.
Концентрацию каждого амина, используемого в процессе, вычисляли с использованием следующей формулы: ν-Ε\ν/6/1000/2Μ/5 мл.
Процедура.
Этап 1. Набухание бусин смолы.
250 мг бусин смолы помещали в чистую сухую реакционную колбу, добавляли к бусинам 5 мл водного ДМФ и оставляли набухать в течение 1 ч или менее. Затем бусины несколько раз (2 или 3 раза) промывали ДМФ в вакууме.
Этап 2.
Этапы (Ь)-(б) пропускали с использованием неблокированных бусин (например, Тета-Се1).
20% раствор пиперидина (основание) с использованием безводного ДМФ в качестве растворителя использовали в следующем процессе.
Следующий способ, включающий этапы (Ь)-(б), осуществляли 2 раза с использованием защищенных бусин.
(b) К защищенным бусинам добавляли 2,5 мл 20% раствора пиперидина.
(c) После добавления пиперидина реакционную колбу помещали на качалку/инкубатор в течение 20 мин при 200 об/мин и 25°С.
(б) Реакционную колбу промывали 8-10 раз 5 мл водного ДМФ.
Кроме того, получали следующие растворы:
1) 468 мг Ешос-Су5(Тг1)-ОН в безводном ДМФ (объем 2 мл) (раствор А),
2) 161,6 мг ΝΜΜ в 2 мл безводного ДМФ,
3) 303,2 мг НВТи добавляли во флакон с ΝΜΜ (раствор В).
Добавление НВТи/ΗΜΜ и Ттос-Сук.
мл раствора А и раствора 8 добавляли к бусинам - (НВТи/ΝΜΜ) и Ртос-Су (Тй)-ОН) и встряхивали в течение 1 ч.
Бусины промывали в ДМФ 5-10 раз.
К бусинам добавляли оставшийся 1 мл раствора растворов А и В, встряхивали в течение 1 ч и затем снова промывали в ДМФ 5-10 раз.
Кроме того, получали следующие растворы:
20% пиперидин (в безводном ДМФ),
М бромуксусную кислоту,
50% О1С/А. ДМФ,
М раствор каждого амина.
Следующие этапы (а)-(с) выполняли 2 раза, добавляли 2,5 мл 20% раствора пиперидина; (Ь) реакционную колбу встряхивали при 200 об/мин и 25°С, а затем (с) промывали бусины ДМФ от 8 до 10 раз.
Получали 10 мл раствора 2 М бромуксусной кислоты.
Также получали 10 мл раствора 50% 3,2 О1С/безводного ДМФ (об./об.).
Для каждого амина и каждой библиотеки получали 2 М растворы аминов. Для синтеза пептоида каждый раз при добавлении амина к цепи пептоида использовали 1 мл 2 М рабочего раствора.
Этап 3.
мл бромуксусной кислоты добавляли в реакционный сосуд.
(Ь) затем добавляли 1 мл 50% раствора Э1С/ДМФ и полученный раствор подвергали (с) действию СВЧ в течение 15 с при 10% мощности.
Этап (с) проводили два раза, вращая колбу из стороны в сторону между этапами СВЧ-обработки.
- 56 032582
После каждого этапа СВЧ-обработки выпадал белый осадок. Затем бусины промывали ДМФ 8-10 раз.
Этап 4.
мл первого амина в последовательности добавляли в реакционную колбу, содержащую бронированный интермедиат предыдущего этапа, и встряхивали сосуд для равномерного распределения амина по бусинам. Затем инициировали реакцию с помощью 2-кратной обработки СВЧ в течение 15 с при 10% мощности. Затем прореагировавшие бусины промывали водным ДМФ 8-10 раз.
Этапы 3 и 4 повторяли до добавления всех аминов, получая целевые пептоиды.
Этап 5.
Затем промывали бусины дихлорметаном (ДХМ) 3 раза и позволяли им высохнуть.
Этап 6.
Затем отщепляли пептоиды от бусин с помощью 95% раствора ТФУК (5 мл). Затем отделяли пептоиды от бусин, промытых растворителем (СН3СЫ и вода) для удаления остаточных пептоидов. Для удаления остаточной ТФУК использовали газообразный аргон. Затем пептоиды при необходимости лиофилизировали, исследовали и очищали.
Вышеуказанные условия реакции можно изменить в соответствии с необходимостью в зависимости от необходимых количеств конкретной композиции бусин.
На фиг. 1-5 в целом продемонстрировано получение библиотеки согласно настоящему изобретению для заболевания, например диагностики БА, диагностики рака поджелудочной железы и волчанки. В целом, бусины, несущие аминогруппу, присоединяют к аминокислотному остатку путем осуществления ряда этапов, применяя стандартные реагенты в области химии пептидов, взаимодействующие с активированной карбонильной группой, несущей галогенидную группу, которая затем взаимодействовала с мономерным амином, несущим группу В. Этапы цикла 2 и 3 повторяли, как показано на фиг., получая обширные библиотеки пептоидов, содержащие от 1 до 2 млн различных лигандов. Библиотека для начального скрининга, полученная на смоле или бусинах Теп1аде1. обычно содержала аминокислоту метионин в качестве первого мономера в цепи. Автор настоящего изобретения использовал такую аминокислоту для облегчения отщепления от бусин или смолы в отсутствие расщепляемого линкера. Для получения цистеинсодержащих пептоидов с линкерами, не нуждающихся или не требующих использования метионина в качестве первой аминокислоты, использовали смолу Ринка. Цистеинсодержащие пептоиды обычно повторно синтезировали после детектирования предполагаемых выявленных соединений (активных соединений) начальном скрининге. Сульфогруппа цистеина обеспечивала реакцию пептоидной цепи, например, с другой реакционноспособной группой на носителе диагностической платформы. Повторно синтезированные пептоиды также содержали 1-ил-п-бутиламиногруппу в качестве первой боковой цепи после амина аминокислоты. Считается, что эта группа необходима для экспонирования пептоида и солюбилизации пептоида в водных растворах.
Пример 2. Общая методика скрининга.
160-мкм бусины Теп1аде1 с присоединенными выбранными пептоидами оставляли набухать в течение ночи в ДМФ. Затем бусины десять раз промывали водой М1Шроге в реакционном сосуде при энергичном встряхивании. Каждый раз добавляли свежую воду М1Шроге, а при 10-й промывке бусины оставляли на ночь при встряхивании (150-200 об/мин). На следующий день бусины аналогичным образом промывали 1Х ТВ8Т и оставляли при встряхивании (150-200 об/мин) по меньшей мере на 3 ч.
Затем бусины равномерно распределяли по 15-мл коническим пробиркам из расчета приблизительно 0,5 г на пробирку в 1Х ТВ8Т. ТВ8Т удаляли и в каждую пробирку добавляли 4 мл разбавленной нормальной сыворотки человека. Рабочую сыворотку в 1Х ТВ8Т распределяли нано-раскапыванием, получая желательную концентрацию 20 мкг/мл. Пробирки, содержащие сыворотку и бусины, затем оставляли перемешиваться на ночь при 4°С в темноте. Затем сыворотку удаляли из пробирок пипеткой и заменяли 4 мл 1Х ТВ8Т. Затем пробирки медленно переворачивали для повторного суспендирования бусин, а затем оставляли осаждаться. ТВ8Т дважды удаляли и вновь добавляли, т.е. в общей сложности осуществляли три промывки с использованием ТВ8Т.
Затем получали раствор вторичного антитела путем изготовления раствора 5 мкл антитела козы против 1дС человека Цбо1 655 в 1 мл 1Х ТВ8Т. После удаления последнего добавленного ТВ8Т от бусин добавляли 4 мл раствора Цбо1 и оставляли бусины перемешиваться на 2 ч при 4°С в темноте. Затем бусинам позволяли осесть и удаляли раствор Цбок Затем бусины трижды промывали 4 мл 1Х ТВ8Т. Затем бусины переносили в чистую чашку Петри и рассматривали под УФ-микроскопом с фильтром ΌΑΡ I. Удаляли все бусины, окрашенные красным.
После завершения первого скрининга бусины вновь переносили в 15-мл конические пробирки и перемешивали при 4°С по меньшей мере в течение 4 ч, до добавления следующего образца сыворотки. Затем к бусинам добавляли сыворотку от больных аналогично добавлению нормальной сыворотки, за исключением того, что сыворотку разбавляли §1агйпдВ1оск РВ8, а не 1Х ТВ8Т. Однако исходный рабочий раствор разбавляли 1Х ТВ8Т для получения необходимой концентрации с помощью нанокапельницы. Добавление сыворотки и вторичного антитела осуществляли аналогично тому, как это делали для нор- 57 032582 мальной сыворотки.
После удаления активных соединений, характерных для заболевания, их объединяли в 1,5-мл пробирке Эппендорфа и нагревали при 95°С в течение 25-30 мин в 1% ДСН. Затем ДСН удаляли из пробирки и заменяли водой М1Шроге. Затем бусины перемешивали в течение 15 мин при 4°С. Затем воду заменяли свежей водой и перемешивали бусины в течение еще 15 мин. Затем воду удаляли, заменяли 50/50 раствором ацетонитрил/вода и оставляли перемешиваться в течение еще 15 мин. Затем бусины распределяли по отдельным лункам 96-луночного планшета и оставляли сушиться.
Получали раствор 20-30 мг бромистого цианогена, 500 мкл ацетонитрила, 400 мкл ледяной уксусной кислоты и 100 мкл воды М1Шроге. 20 мкл указанного раствора добавляли в каждую лунку, содержавшую бусины с выявленными соединениями. Планшет закрывали и оставляли на 16 ч при встряхивании (100 об/мин). Затем снимали крышку и выпаривали раствор для отщепления из лунок. Затем соединения-активные соединения по каплям переносили на планшет для МС секвенирования с помощью анализатора 4800 ΜΑΒΌΙ/ТОЕ/ЕОЕ.
На фиг. 6 приведена общая схема методики скрининга, описанная в настоящем документе.
Пример 3. Скрининг болезни Альцгеймера.
Скрининг на магнитных бусинах Теп!аде1.
500 мг 160-микронных бусин Теп1аде1 (библиотека 1С3В) добавляли в 15-мл коническую пробирку. В пробирку добавляли 5 мл ДМФ и оставляли бусины набухать в течение ночи. Затем ДМФ удаляли из пробирки с использованием пипетки и заменяли на 5 мл 1Х ТВ8Т. Пробирки переворачивали, чтобы перемешать, а потом позволяли постоять дном вниз и удаляли 1Х ТВ8Т. Еще пять раз добавляли по 5 мл 1Х ТВ8Т и удаляли.
Образцы нормальной по БА сыворотки готовили путем добавления 4 мл блокирующего раствора ФБР в пробирку с последующим добавлением 7 мкл каждого из четырех отдельных образцов АБ в ту же пробирку. Сыворотку добавляли к промытым бусинам и оставляли бусины и сыворотку перемешиваться в течение ночи при 4°С в темноте. На следующее утро бусины снимали с устройства для перемешивания и позволяли осесть, а затем удаляли сыворотку из пробирки. В пробирку добавляли 4 мл 1Х ТВ8Т и переворачивали пробирку для перемешивания. Затем ТВ8Т удаляли из пробирки пипеткой, заменяли на 4 мл свежего 1Х ТВ8Т и снова удаляли.
Затем получали раствор бусин ΌΥΝΑ, добавляя 50 мкл перемешанных бусин ΌΥΝΑ с антителами козы против 1§С человека в 4 мл 1Х ТВ8Т. Затем указанную смесь добавляли к промытым бусинам. Затем бусины оставляли перемешиваться на 2 ч при 4°С в темноте.
Скрининг бусин ΌΥΝΑ выполняли без промывки бусин. Пробирку помещали в магнитный держатель и заполняли до краев 1Х ТВ8Т. Магнит и пробирку медленно взбалтывали в течение 2 мин и позволяли бусинам осесть в магнитный держатель. ТВ8Т и свободные бусины, осевшие на дно, тщательно удаляли, не касаясь бусин с выявленными соединениями, прикрепленных к боковым стенкам за счет магнита, и заменяли свежим 1Х ТВ8Т. Указанный процесс повторяли два-три раза, пока не становились видны бусины, присоединенные к боковым стенкам пробирки. Затем бусины с лигандами- активными соединениями объединяли в одной пробирке.
Оставшиеся бусины, не содержавшие выявленных соединений (активных соединений), распределяли по 1,5-мл пробиркам, переворачивали и подвергали быстрому импульсному центрифугированию. Супернатант удаляли и заменяли свежим 1Х ТВ8Т. Указанный процесс повторяли 6-8 раз, пока видимые бусины ΌΥΝΑ не исчезали из раствора бусин/ТВ8Т. Бусины с выявленными соединениями промывали аналогичным образом
Бусины вновь объединяли в 15-мл пробирке, добавляли к бусинам нормальную сыворотку аналогично предыдущему описанию и оставляли оседать в течение ночи при 4°С в темноте. Кроме того, 3 мл каждого из четырех нормальных образцов добавляли к 1 мл 8!апшдВ1оск РВ8 и полученный раствор добавляли к бусинам ΌΥΝΑ и бусинам с выявленными соединениями в пробирке. На следующий день бусины промывали аналогично промывке для нормальной сыворотки.
мкл антитела козы против 1§С человека, конъюгированного с квантовой точкой 655, разбавляли в 4 мл 1Х ТВ8Т (20 мкл О4о1 в 1 мл 1Х ТВ8Т на пробирку с выявленными соединениями) и добавляли к бусинам. Раствор перемешивали в течение 2 ч при 4°С в темноте. Пробирки, содержавшие и не содержавшие выявленных соединений (активных соединений), четырежды промывали 1Х ТВ8Т и выполняли скрининг ярко-красных бусин под УФ-микроскопом. Остальные бусины перемешивали в 4 мл 1Х ТВ8Т в течение 1 ч и добавляли образец сыворотки больного или после обработки лекарственным средством аналогично образцу нормальной сыворотки. Магнитный скрининг и добавление 04о1 выполняли аналогично описанному выше. Затем активные соединения секвенировали на масс-спектрометре ΜΑΌΌΙТОЕ/ТОЕ.
На фиг. 7 показаны объединенные нормальные контрольные образцы сыворотки, которые в течение ночи инкубировали с бусинами из библиотеки пептоидов (ГС3В). Осуществляли первичный скрининг с вторичными антителами на бусинах ΌΥΝΑ с использованием антителами козы к 1§С. меченых бусинами ΌΥΝΑ, чтобы удалить неспецифические активные соединения. Эти неспецифические активные соедине
- 58 032582 ния затем повторно подтверждали с использованием другого вторичного антитела. В этом случае антитело козы к 1дС человека, меченое Оиайит Όοί 655 (1пу11годеп), детектировали с использованием УФмикроскопа с фильтром ΌΑΡΙ. Активные соединения, на которые указывали окрашенные красным бусины, затем снова подтверждали, синие бусины указывают на бусины, которые не были подтверждены. Процент бусин, прошедших подтверждение, был постоянно низким, поэтому скрининг с бусинами ΌΥΝΑ в итоге прекратили.
На фиг. 8 показана библиотека пептоидов, которую инкубировали с сывороткой пациентов с БА. Затем библиотеку инкубировали с вторичным детектирующим антителом (антитела козы к 1дС человека, меченые квантовой точкой Оиайит άοΐ 655 (ЧпуЦгодеп). Бусины с активными соединениями детектировали при помощи УФ-микроскопа с фильтром ΌΑΡΙ, и бусины, окрашенные красным, отбирали как активные соединения для дальнейшего секвенирования для дальнейшего исследования.
Фиг. 9-11 демонстрируют, что после удаления активных соединений болезни из библиотеки пептоидов, осуществляли промывку 1% 8Ό8, чтобы отсоединить активные соединения от всех оставшихся антител. Затем бусины инкубировали с отдельными образцами сыворотки субъекта с заболеванием, а затем антитело козы к 1дС человека с Онан1нт άοΐ 655. Затем бусины визуализировали с использованием УФ-микроскопа, чтобы определить, пройдут ли активные соединения повторное подтверждение с отдельными образцами. Активные соединения, прошедшие повторное подтверждение, были выбраны для секвенирования.
На фиг. 12 показаны последовательности всех активных соединений, выбранных при скрининге на болезнь Альцгеймера из библиотеки 1С3В.
На фиг. 13 показаны химические структуры предпочтительных высокоаффинных выявленных соединений (активных соединений), полученных в скрининге болезни Альцгеймера.
На фиг. 14 показан конкурентный анализ с использованием пептоида ΑΌΤΟ1, который сравнивали с пептоидами ΑΌΤΟ1-42 на микроматрице. Эти данные демонстрируют, что пептоиды ΑΌΤΟ1, 14, 24, 25, 31, 35 и 40 связываются с одним антителом. Проводили одинаковые эксперименты для каждого из пептоидов на матрице, этот процесс позволил установить, что пептоиды связываются с семью различными аутоантителами к антигенам болезни Альцгеймера.
На фиг. 15 показаны последовательности 41 из этих пептоидов, которые расположены, начиная сверху, от более активных к менее активным, и которые разделены на четыре различные группы на основании результатов конкурентного анализа, в котором было обнаружено, что лиганды связываются с четырьмя различными антителами - биомаркерами БА. ΑΌΡ1-3 были изначально выявлены в микроматричном скрининге (данные не показаны, но они были ранее описаны в патентной публикации США № 2010/0303805). Было обнаружено, что они связываются с двумя различными биомаркерами БА. Было обнаружено, что ΑΌΡ1 ΑΌΡ3 связываются с одним антителом, в то время как ΑΌΡ2 связывался с другим антителом. Новые лиганды, обнаруженные с применением новой методики скрининга согласно настоящему изобретению (все другие лиганды на фиг. 15 и показанные на фиг. 13), также образуют группы, связывающиеся с различными антителами. Были обнаружены два новых биомаркера-антитетела и несколько новых лигандов, связывающихся с одним из антител, включающих антитело, с которым связываются ΑΌΡ1 и ΑΌΡ3, и антитело, с которым связываются ΑΌΡ2.
Результаты анализа БА.
Данные микроматричного анализа с единственным измерением.
Микроматрицы изготовили, как описано в патентной публикации США № 2010/0303805, включенной в настоящий документ посредством ссылки. Стекла микроматриц накрывали камерой для гибридизации и уравновешивали 1Х ΤΒ8Τ (50 мМ Ιπ5. рН 8,0, 150 мМ ЫаС1, 0,1% Твин-20) в течение 15 мин. Затем стекла блокировали 1 мл блокирующего буфера в течение 1 ч при 4°С. Блокирующий буфер удаляли и инкубировали стекла с 1 мл сыворотки (20 мг/мл) в течение 16 ч при 4°С и аккуратном встряхивании. В альтернативном способе стекла блокировали 1 мл лизата Е. со11 (1,5 мг/мл) в течение 1 ч при 4°С. Лизат Е. со11 удаляли и инкубировали стекла с 1 мл сыворотки (15 мг/мл) в лизате Е. со11 (1,5 мг/мл) в течение 18 ч при 4°С и аккуратном встряхивании. Затем микроматрицы трижды промывали 1Х ΤΒ8Τ и гибридизовали с антителом против 1дС, меченным Α1еxа-647 (5 мг/мл), в течение 2 ч на орбитальном шейкере при 4°С. Камеры кассеты снимали со стекол микроматриц и промывали 1Х ΤΒ8Τ (3x15 мин), а затем 0,1Х ΤΒ8Τ (1x10). Затем стекла высушивали на центрифуге (5 мин при 1500 об/мин) и сканировали на сканере для микроматриц (Сепе Ρίχ Лн1о1оайег 4200), используя 635-нм лазер при 100% мощности и усиление трубки фотоумножителя 600 или 650. Все отсканированные изображения анализировали с помощью программного обеспечения Сепе Είχ Ριό 6.0 и Сепехрппд.
Новые пептоиды или лиганды, выстроенные на микроматрицах и протестированные с взятыми у пациентов образцами в соответствии со способом, описанным выше, в слепом исследовании.
На фиг. 16-20 приведены результаты этих скрининговых тестов. Образцы сыворотки брали из группы, включающей 34 пациентов. Результатом для каждого образца было наличие или отсутствие интенсивности, как показано на фиг. 16-18. Два из новых пептоидов (Т1аад4 и Ρ1аад2) сравнивали с известными пептоидами ΑΌΡ3 и ΑΌΡ2 в той же группе пациентов. Эти результаты демонстрируют прямую кор
- 59 032582 реляцию между новыми пептоидами и ставшими известными ранее пептоидами, которые валидировали в немаскированном исследовании, которое подтвердило прямую корреляцию между присутствием ассоциированного с БА антителом и клиническими симптомами заболевания.
На фиг. 16А показаны данные для группы образцов плазмы (20 мкг/мл) от 34 субъектов, которые исследовали в скрининговом тесте с пептоидом Р1аад1 на микроматрице. На фиг. 16В показаны данные для группы образцов плазмы от 34 субъектов, которые исследовали в скрининговом тесте с пептоидом Р1аад2 на микроматрице.
На фиг. 17А показаны данные для группы образцов плазмы от 34 субъектов, которые исследовали в скрининговом тесте с пептоидом Р1аад3 на микроматрице. На фиг. 17В показаны данные для группы образцов плазмы от 34 субъектов, которые исследовали в скрининговом тесте с пептоидом Р4аад1 на микроматрице.
На фиг. 18А показаны данные для группы образцов плазмы от 34 субъектов, которые исследовали в скрининговом тесте с пептоидом Р1аад5 на микроматрице. На фиг. 18В показаны данные для группы образцов плазмы от 34 субъектов, которые исследовали в скрининговом тесте с пептоидом Р1аад6 на микроматрице.
Каждый из этих пептоидов показан также на фиг. 13. Р1аад1 - это 1С3В-1; Р1аад2 - это 1С3В-21; Р1аад3 - это 1С3В-7; Р1аад4 - это 1С3В-5; Р1аад5 - это 1С3В-К8 и Р1аад6-это 1С3В-К12.
На фиг. 19А показаны данные микроматричного теста ΛΟΓ2. На фиг. 19В показаны данные микроматричного теста Р1аад4 с использованием сыворотки пациента из той же группы пациентов. Имеет место по меньшей мере 90% корреляция между набором данных для ΛΟΓ2 слева и набором данных для Р1аад4 справа.
На фиг. 20А показаны данные, полученные с использованием микроматриц для ΛΟΓ3. На фиг. 20В показаны данные, полученные с использованием микроматриц для Р1аад2 с использованием сыворотки пациента из той же группы пациентов. Имеет место по меньшей мере 90% корреляция между набором данных для ΛΟΓ3 слева и набором данных для Р1аад2 справа.
На фиг. 21 показана валидация применения пептоида (1С3В-К8) в скрининге болезни Альцгеймера на основе бусин. Использовали бусины диаметром 140 мкм и сыворотку в концентрации 40 мкг/мл. Имело место четкое различие между бусинами с заболеванием и без заболевания (нормальный контроль).
На фиг. 50 показана простая схема приготовления и различения пептоидов, которые используются в микроматрицах в сравнении с пептоидами, которые размещали на планшетах для ИФА (ΕΠδΛ). Схема получения отдельных пептоидов: отдельные бусины раздельно помещают в лунки микротитрационных планшетов и отщепляют пептоиды от бусин с получением концентрированного исходного раствора. Следует отметить, что в каждой лунке теперь расходится единственный вид пептоида. Затем несколько тысяч пептоидов наносят на предметные стекла их химически модифицированного стекла таким образом, что они ковалентно связываются с поверхностью. Из одной синтетической библиотеки можно получить несколько тысяч стекол с высокой степенью воспроизводимости. ИФА получают аналогичным образом за тем исключением, что на поверхности нет цепи ПЭГ, но плотность пептоидов на планшете для ИФА может отличаться от их плотности на микроматрицах.
На фиг. 51 показаны эксперименты ИФА, которые позволяют четко отличить сыворотку здорового контроля от сыворотки больного пациента при разбавлении сыворотки 1:800 с использованием пероксидазы хрена (НКР), связанной со вторичным антителом, для детектирования комплекса ассоциированного с болезнью антитела с пептоидом. Добавляют бесцветный субстрат, который меняет цвет (на синий) после реакции со связанным ферментом НКР.
На фиг. 52 показаны данные по титрованию, сравнивающие различные БА-пептоиды с помощью твердофазного ИФА при различных разведениях сыворотки пациентов (А) по сравнению с нормальной сывороткой (В). В нормальной сыворотке отсутствуют интенсивные сигналы, и имеет место четкое различие интенсивности всех БА-пептоидов по мере увеличения концентрации от 1:12800 до 1:200.
На фиг. 53 приведена диаграмма, подтверждающая корреляцию между клиническим диагнозом для немаскированного набора образцов пациентов с болезнью Альцгеймера с различными стадиями (или отсутствием) БА в сравнении с данными, полученными по тем же образцам сыворотки пациента (маскированным) в результате скрининга против пептоида Α^Р3 для детектирования ассоциированных с болезнью антител. Приведенные результаты получены в слепом исследовании образцов плазмы из клиники Мауо в Джексонвилле (1аск§опуШе, США). ϋΝΌ = неопределенный. График получали с использованием единственной концентрации разведения сыворотки (1:800). Результат > 1 считали положительным, результат от 1 до 0,7 считали неопределенным, а результат ниже 0,7 считали отрицательным.
На фиг. 54 приведена диаграмма, подтверждающая корреляцию между клиническим диагнозом для немаскированного набора образцов пациентов с болезнью Альцгеймера с различными стадиями (или отсутствием) БА в сравнении с данными, полученными по тем же образцам сыворотки пациента (маскированным) в результате скрининга против различных пептоидов БА (график представляет собой среднее значение результатов для 9 пептоидов) согласно настоящему изобретению для детектирования ассоциированных с болезнью антител. Приведенные результаты получены в слепом исследовании образцов плазмы из клиники Мауо в Джексонвилле (1аск§опуШе, США). ϋΝΏ = неопределенный. График получа
- 60 032582 ли с использованием единственной концентрации разведения сыворотки (1:800). Результат > 1 считали положительным, результат от 1 до 0,7 считали неопределенным, а результат ниже 0,7 считали отрицательным.
На фиг. 55 приведена диаграмма, подтверждающая корреляцию между клиническим диагнозом для немаскированного набора образцов пациентов с болезнью Альцгеймера с различными стадиями (или отсутствием) БА в сравнении с данными, полученными по тем же образцам сыворотки пациента (маскированным) в результате скрининга против различных пептоидов БА согласно настоящему изобретению для детектирования ассоциированных с болезнью антител. Приведенные результаты получены в слепом исследовании образцов плазмы из клиники Мауо в Джексонвилле (.ТасккопуШе, США). υΝΏ = неопределенный. График получали с использованием единственной концентрации разведения сыворотки (1:800). Результат > 1 считали положительным, результат от 1 до 0,7 считали неопределенным, а результат ниже 0,7 считали отрицательным. Эти данные также демонстрируют действие для других деменций в случае, когда в исследовании также участвовали маркированные образцы от пациентов с умеренными когнитивными нарушениями (МС1)/депрессией, и также маркированные образцы пациентов с деменцией с тельцами Леви. Эти данные демонстрируют, что по меньшей мере у трех пациентов с МС1 в образцах плазмы были определены антитела, связываемые селективными в отношении БА петоидами согласно настоящему изобретению, в количествах выше 1.
На фиг. 56Α-Ώ представлены данные от подгруппы образцов от тех пациентов, у которых были несовпадения в результатах диагностических тестов на основе пептоидов Орко Неа1(П с использованием множества пептоидов БА и клиническим диагнозом после предоставления этой информации в демаскированном виде. На фиг. 56А показаны данные для пептоида ΑΏΡ3 и других в случае пациентов с клиническим диагнозом, у которых, однако, результаты, полученные с пептоидом Р1аад4 (Орко), были ниже 1,0 (υΝΏ в единственной точке; положительное титрование БА). Все другие пептоиды Орко были положительны по БА (т.е. выше 1.0). На фиг. 56В показано, что все пептоиды Орко были положительны в отношении ассоциированных с болезнью антител у пациентов, которые в данный момент имели диагноз здоров (деменция отсутствует), что указывает на предболезнь А. Фиг. 56С демонстрирует, что не один из пептоидов БА Орко не показал интенсивность выше 1 при каком-либо значении разбавления у пациента в клинически диагностированной БА, что указывает на то, что этот пациент страдает какой-то другой формой деменции. Фиг. 56Ώ демонстрирует, что у пациента с положительным клиническим диагнозом БА несколько пептоидов БА Орко не дали положительных результатов по антителам, ассоциированным с болезнью, но два пептоида (Р1аад6 и Р1аад4) дали положительные результаты, т.е. υΝΏ в отдельной точке и υΝΏ даже после титрования.
На фиг. 57 приведена кластерная диаграмма, полученная по предыдущим образцам БА с использованием микроматрицы с нанесенным ΑΏΡ3. Существует явная корреляция между образцами больных по сравнению со здоровым контролем в данных, полученных с использованием микроматрицы, и данных, полученных с использованием платформа ИФА. На фиг. 57 также показано, что пептоид ΑΏΡ3 селективен в отношении антител, ассоциированных с болезнью Альцгеймера, но не для болезни Паркинсона и волчанки (СКВ).
На фиг. 58 приведены обобщенные результаты иммунно-ферментного анализа (ЕЫ8А), в котором исследовали всего 106 образцов сыворотки. Согласно этим данным 9 образцов нельзя определить (4 с клиническим диагнозом АБ, 5 здоровых) по одной точке данных. По результатам исследования 3 кривых титрования из этих 9 соответствовали клиническим данным. Для 6 результат был неясным (расхождение результатов по различным пептоидам).
На фиг. 59 приведены химические структуры Р1аад7-9.
Данные, представленные на описанных выше чертежах для диагностического метода Орко для детектирования антител, ассоциированных с болезнью Альцгеймера, подтверждают, что раскрытые и описанные здесь способы представляют собой эффективные инструменты для подтверждения и/или предсказания начала болезни Альцгеймера и/или подтверждения того, что неврологическое расстройство является каким-либо другим неврологическим нарушением, таким как мягкое когнитивное нарушение. Эти данные явно согласуются с поданными ранее патентными заявками, в которых заявлены некоторые пептоиды и способы детектирования антител, ассоциированных с заболеваниями. Здесь совершенные новые пептоиды, обнаруженные посредством нового и более быстрого способа скрининга, валидировали с использованием множества платформ, включая микроматрицы и твердофазный ИФА, сопоставляя с клиническими результатами для пациентов с различными стадиями симптомов болезни Альцгеймера, после демаскирования полученные результаты в значительной степени коррелировали с фактическими клиническими данными.
Пример 4. Скрининг рака поджелудочной железы.
Получали библиотеки пептоидов для проведения скрининга сыворотки пациентов с раком поджелудочной железы. Синтезировали две библиотеки (1С3В и 1С5В). В этих скринингах против биомаркеров рака поджелудочной железы выявили в общей сложности 26 активных соединений. Библиотека 1С3В содержала амины, выбранные из диаминобутана; И-метилбензиламина; изобутиламина; циклогексиламина; пиперониламина; 4-(аминоэтил)бензолсульфонамида; фурфуриламина и 2-метоксиэтиламина.
- 61 032582
Библиотека 1С5В состояла из аминов, выбранных из изобутиламина; 2-метоксиэтиламина; диаминобутана; фурфуриламина; циклогексиламина; К-метилбензиламина; пиперониламина и 4(аминоэтил)бензолсульфонамида. Для скрининга использовали пулы из 6 образцов каждой сыворотки субъекта с заболеванием и контрольной 6 сыворотки. Условия для 1С3В: использовали 5 мкл каждого образца сыворотки субъекта с заболеванием в 4 мл блокирующего буфера ФБР и использовали 5 мкл каждого образца нормальной сыворотки в 4 мл 1Х ТВБТ. Условия для 1С5В: использовали 10 мг/мл сыворотки больного в 4 мл блокирующего буфера ФБР и использовали 150 мг/мл контрольной сыворотки в 4 мл 1Х ТВ8Т. Скрининг на бусинах ΌΥΝΆ: в 1 мл 1Х ТВ8Т добавляли 50 мкл бусин ΌΥΝΆ с антителом козы к 1дС человека. Проводили скрининг на бусинах ΌΥΝΆ для удаления неспецифических активных соединений. Скрининг с Онап1нт: в 1Х ТВ8Т добавляли 10 мкл/мд антитела козы к 1дС человека с ОнапΙιιιη Όοΐ 655; осуществляли скрининг с использованием УФ-микроскопа, чтобы удалить активные соединения. Валидация активных соединений: 1С3В: в 1 мл 1Х ТВ8Т добавляли 2 мкл каждого контрольного образца РПЖ для скрининга активных соединений; удаляли красные (неспецифические) бусины; добавляли 2 мкл каждого образца от больного РПЖ в 1 мл блокирующего буфера для скрининга активных соединений; удаляли считанные бусины (фактические активные соединения) и расщепляли для секвенирования. Эту процедуру осуществляли как с активными соединениями, выявленными с использованием бусин ΌΥΝΆ, так и с активными соединениями О άοΐ. 12 активных соединений были подтверждены. 1С5В: Добавляли 50 мг/мл объединенных образцов субъектов с заболеванием в 1 мл блокирующего буфера для скрининга активных соединений; добавляли 15 мг/мл объединенных контрольных образцов в 1Х ТВ8Т для скрининга активных соединений; удаляли красные бусины (фактические активные соединения) и отщепляли для секвенирования. Эту процедуру осуществляли как с активными соединениями, выявленными с использованием бусин ΌΥΝΆ, так и с активными соединениями О άοΐ. Было подтверждено 14 активных соединений.
На фиг. 22 (картинка слева): библиотеку пептоидов инкубировали с сывороткой пациентов с раком поджелудочной железы. Затем библиотеку инкубировали с вторичным детектирующим антителом (антитело козы к 1дС человека, меченное ОнапЦнп άοΐ 655 (1пуЦгодеп). Бусины с активными соединениями детектировали с использованием УФ-микроскопа с фильтром ΌΛΡΙ и бусины, которые имели красную окраску, отбирали как активные соединения для секвенирования и последующего исследования.
На фиг. 22 (картинка справа): после выделения активных соединений для рака поджелудочной железы из библиотеки пептоидов осуществляли промывку 1% 8Ό8 для отделения активных соединений от оставшихся антител. Затем бусины инкубировали с отдельными образцами сывороток пациентов с раком поджелудочной железы, а затем с антителом козы к 1дС человека с ОнапЦнп Οοΐ 655. Затем бусины визуализировали с использованием УФ-микроскопа, чтобы определить, будут ли активные соединения подтверждены в анализе с отдельными образцами. Для секвенирования отбирали стабильно подтверждаемые активные соединения.
На фиг. 23 (слева): картины валидации активных соединений демонстрируют эффективность скрининга Теп1аде1. После выделения активных соединений для рака поджелудочной железы из библиотеки пептоидов осуществляли промывку 1% 8Ό8 для отделения активных соединений от оставшихся антител. Затем бусины инкубировали с отдельными образцами сывороток пациентов с раком поджелудочной железы, а затем с антителом козы к 1дС человека с Онап1нт Οοΐ 655. Затем бусины визуализировали с использованием УФ-микроскопа, чтобы определить, будут ли активные соединения подтверждены в анализе с отдельными образцами. Для секвенирования отбирали стабильно подтверждаемые активные соединения.
На фиг. 23 (справа): осуществляли еще одну промывку бусин с активными соединениями 8Ό8 (додецилсульфатом натрия), затем бусины инкубировали с контрольной сывороткой и с антителом козы к 1дО человека, меченым ОнапЦнп Οοΐ 655. Затем бусины визуализировали с использованием УФмикроскопа, чтобы определить, будут ли активные соединения подтверждены в анализе с отдельными образцами. Для секвенирования отбирали стабильно подтверждаемые активные соединения.
На фиг. 24 показана валидация активных соединений в скрининге рака поджелудочной железы путем смешивания. Эти данные демонстрируют, что маркеры специфичны в отношении определенного заболевания (РПЖ против БА).
На фиг. 25 показаны лиганды рака поджелудочной железы (возможные активные соединения) из библиотеки 1С3В.
На фиг. 26 показаны лиганды рака поджелудочной железы (возможные активные соединения) из библиотеки 1С5В.
Пример 5. Скрининг волчанки.
На фиг. 27 показаны активные соединения СКВ в скрининге библиотеки СКВ против нормального контроля. Использовали библиотеку ΚΝ1Ε и обнаружили ее пригодность для этого конкретного скрининга. Для скрининга волчанки использовали тот же самый протокол, который описан выше для скрининга рака поджелудочной железы и для скрининга БА, за исключением используемой библиотеки и образцов сыворотки.
На фиг. 28 показаны возможные активные соединения СКВ.
- 62 032582
На фиг. 29 показана валидация активных соединений.
Диагностические наборы и методы.
На фиг. 30 показано связывание одного из пептоидов СКВ (волчанки) с планшетами для твердофазного ИФА с использование двух различных методов связывания. В первом случае биотин использовали в качестве молекулы, которая связывается с планшетом для ИФА, обработанным стрептавидином (нековалентное связывание). Пептоид содержал флюоресцентную метку. Во втором случае цистеин в составе пептоида ковалентно связывается с планшетом для ИФА, обработанным малеимидом. В обоих случаях результаты показывают, что в миллимолярных концентрациях выше 3 мМ наблюдается значительный флюоресцентный сигнал.
На фиг. 31 показан конкурентный анализ с иммобилизованным на планшете КШВ-20-биотинфлюоресцеином и свободным КЫ1В-20-биотином в растворе в различных концентрациях. Сигнал снижается по мере увеличения концентрации свободного КЫ1В-20-биотина, начиная с эквимолярных концентраций свободного и связанного веществ.
На фиг. 32 показан планшет для ИФА (ЕЫ8А), содержащий 10 мМ пептоида, явно видны различия между сывороткой субъекта с заболеванием (столбец 1) (БА) и сывороткой нормального (столбец 3) при различных разбавлениях сыворотки [двукратные разведения 1:200 до 1:400, 1:800, 1:1,600, 1:3,200, 1:6,400, 1:12800]. Концентрация пептоида БА ΑΌΡ3 в лунках с пептоидом составляет 10 мМ. Аналогичным образом, на фиг. 32 показано четкое различие между сывороткой субъекта с заболеванием и образцами нормального контроля для платформы с Теп1аде1 при концентрации 40 мг/мл разбавленной сыворотки на бусинах размером 140 мкм.
На фиг. 33 показан планшет для твердофазного ИФА (ЕЫ8А), содержащий пептоид в различных концентрациях, четко видны различия между сывороткой субъекта с заболеванием (БА) и сывороткой здорового контроля в различных концентрациях [от 1:200 до 1: 12,800]. Стрелки указывают на результаты для 10 мМ ΑΌΡ3 при разбавлении сыворотки 1:800.
На фиг. 34 показан планшет для ИФА (ЕЫ8А), содержащий 10 мМ пептоида, четко видны различия между сывороткой субъекта с заболеванием (СКВ) и сывороткой здорового контроля в различных концентрациях [1:200-1:12,800]. Эти данные демонстрируют четкое различение сыворотки больного и контрольной сыворотки с использованием 8ЬЕ-КШВ-20 (10 мМ). Во всех способах скрининга можно также использовать плазму при условии, что будет учитываться присутствие белков.
На фиг. 35 показан график ИФА-анализа (ЕЫ8А) сыворотки БА с использованием 10 мМ ΑΌΡ3, приготовленного в буфере для связывания, при различных разведениях сыворотки. Разделение между сыворотками больных и здоровых субъектов происходило в диапазоне разбавления от 1:200 до приблизительно 1:10,000. Начальные разбавления составляли 1:200 (группа 1 - сыворотка БА 0,394 мг/мл и сыворотка субъектов без заболевания при 386 мг/мл).
На фиг. 36 показан график ИФА-анализа (ЕЫ8А) сыворотки СКВ с использованием 10 мМ КМВ20, приготовленного в буфере для связывания, при различных разведениях сыворотки. Разделение между сыворотками больных и здоровых субъектов происходило в диапазоне разбавления от 1:200 до приблизительно 1:10,000. Начальные разбавления составляли 1:200 (группа 1 - сыворотка СКВ 0,375 мг/мл и сыворотка субъектов без заболевания при 396 мг/мл).
На фиг. 37 показан график ИФА-анализа (ЕЫ8А) сыворотки СКВ с использованием 10 мМ КМВ20, приготовленного в ДМСО, при различных разведениях сыворотки. Разделение между сыворотками больных и здоровых субъектов происходило в диапазоне разбавления от 1:200 до приблизительно 1:10,000. Начальные разбавления составляли 1:200 (группа 1 - сыворотка СКВ 367 мг/мл и сыворотка субъектов без заболевания при 322 мг/мл).
На фиг. 38 показана валидация платформы РАС8 для бусин ТеШаде1.
Фиг. 39 иллюстрирует степень разделения между бусинами, содержащими ацетильную группу, и бусинами, содержащими 2,5-динитрофенильную группу (ΌΝΡ), при различных концентрациях сыворотки (от 100 до 1,000 мкг/мл) и в ответ на обработку вторичным антителом с анти-ΌΝΡ меткой. Разделение по средней интенсивности флюоресценции (МР1) было максимальным при разбавлении сыворотки выше 1,000 мкг/мл.
Фиг. 40 демонстрирует, что существует прямая конкуренция между этаноламин-ΌΝΡ и связыванием ΌΝΡ (на планшете) с анти-ΌΝΡ антителом в концентрации 1000 мкг/мл сыворотки.
На фиг. 41 показано, что ΆΌΡ3 связывал антитело к антителу из объединенных сывороток здорового контроля и объединенных сывороток БА. Эти данные демонстрируют хорошее разделение при концентрациях сывороток в диапазоне от 20 до 140 мкг/мл с использованием двух различных вторичных антител (антитела козы к АТ человека с ΌγΙί^Ρΐ 649 антитела козы к АТ человека с А1еха 647).
На фиг. 42 показано, что ΑΌΡ3 связывал аутоантитело из сывороток здорового контроля и сывороток субъектов с БА после вычитания фоновых значений в различных диапазонах концентрации сыворотки. Имеет место значительная степень разделения в большинстве диапазонов концентраций от меньше чем 20 до 120 мкг/мл или выше.
На фиг. 43 и 44 приведены структуры повторно синтезированных пептоидных лигандов - выявленных соединений (активных соединений) при СКВ (волчанка).
- 63 032582
На фиг. 45 показано получение ΑΌΡ3 на 10-мкм бусинах Теп1аде1 и последующее расщепление с помощью С\Вг вместе с масс-спектрометрическим считыванием показанного лактона.
На фиг. 46 показано связанное с ΑΌΡ3 аутоантитело из сывороток здорового контроля и сывороток субъектов с болезнью Альцгеймера в различных концентрациях. Бусины предварительно блокировали в течение 3 ч с использованием 1Х ТВ8Т, а затем осуществляли детектирование с использованием вторичного антитела козы к АТ человека с А1еха 647.
На фиг. 47 показано связанное с ΑΌΡ3 аутоантитело из сывороток здорового контроля и сывороток субъектов с болезнью Альцгеймера при различных концентрациях сыворотки, а также показаны значения Ό\Ρ.
На фиг. 48 и 49 - связанное с ΑΌΡ3 аутоантитело из сывороток здоровых контролей в сравнении с сыворотками субъектов с БА с использованием условий предварительного блокирования, таких как лизат Е. сой и лизин.
Протокол твердофазного ИФА (ЕБ18А).
96-луночные малеимид-активированные планшеты получили из Тйегто 8с1еп1гйс, трижды промывали с использованием 400 мкл/лунку буфера для промывки (0,1 М фосфата натрия, 0,15 М хлорида натрия, 0,05% Твин-20, рН 7,2) с помощью устройства для промывки планшетов от Весктап СоиЙег. Исследуемый пептоид разбавляли до 10 мМ в ЙВЗ-буфере для связывания (0,1 М фосфата натрия, 0,15 М хлорида натрия, 10 мМ ЭДТА, рН 7,2) и 200 мкл раствора пептоида добавляли в соответствующие лунки. Затем планшет оставляли для инкубирования в темноте на 2 ч при комнатной температуре и встряхивании (500 об/мин). Затем раствор пептоида удаляли из лунок с помощью устройства для промывки планшетов и вновь трижды промывали 400 мкл/лунку буфера для промывки. Ь-цистеин НС1:Н2О (Тйегто 8с1епййс) разбавляли буфером для связывания до 10 мкг/мл и добавляли по 200 мкл на лунку. Затем планшет инкубировали в течение 1 ч в темноте при комнатной температуре и встряхивании при 500 об/мин и трижды промывали. 200 мкл блокирующего буфера 81агйпдВ1оск™ (ΡΕ8) (Тйегто 8с1епййс) добавляли в лунки и инкубировали планшет в течение 1 ч при 4°С в темноте при встряхивании (500 об/мин). Планшет трижды промывали с помощью устройства для промывки планшетов и получали образцы сыворотки путем серийного разведения в буфере для связывания, начиная от 1:200. Концентрации 1:200 рабочих образцов получали путем нанораскапывания (Тйегто 8с1епййс), обеспечивая их сходство. Каждый разбавленный образец встряхивали на вортексе до получения следующего разведения. 200 мкл соответствующего разведения сыворотки (больных и здоровых субъектов), а также буфер для связывания без сыворотки в качестве контроля добавляли в лунки планшета. Сыворотку оставляли для инкубирования в течение 2 ч при комнатной температуре в темноте при встряхивании (500 об/мин). Планшет повторно промывали и добавляли в соответствующие лунки 200 мкл 1:30000 разведения антитела козы, меченного ПХ, против 1дС человека (Мййроге) в буфере для связывания и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин при встряхивании (500 об/мин) в темноте. Планшет трижды промывали, в каждую лунку добавляли 100 мкл раствора ТМБ (3,3',5,5'-тетраметилбензидина) и оставляли для развития окраски на 30 мин на лабораторном столе в темноте. Для остановки реакции добавляли 100 мкл 2 М стоп-раствора серной кислоты и считывали поглощение в лунках при 450 нм с помощью планшетного считывающего устройства.
Таким образом, в каждом конкретном случае и в отношении каждого варианта лечения с помощью лекарственного средства можно применять процесс согласно настоящему изобретению для быстрого детектирования биомаркеров, ассоциированных с вызванной лекарственным средством реакцией (например, неблагоприятной реакцией, устойчивостью к лекарству и эффективности терапевтической дозы), и лигандов, связывающихся с такими маркерами. Указанный крупный пул лигандов затем можно использовать в различных диагностических или терапевтических целях. Диагностические платформы включают микроматрицы, средства на основе бусин и системы для твердофазного ИФА. Условия, использованные выше, составляют важный аспект изобретения. Указанные условия включают диапазоны разбавления сыворотки, а также концентрацию конкретного пептоида на бусине или в лунке, и способы детектирования. Количество бусин, содержащих пептоид, может варьироваться в зависимости от конкретного диагностического набора или набора для скрининга. Указанные количества также могут варьировать в зависимости от применения бусин/лигандов согласно протоколу начального скрининга и способу, приведенному в настоящем документе, и/или их применения в составе диагностического набора, основанного на обнаружении высокоаффинного лиганда.
Специалист в данной области техники поймет, что в вышеописанные варианты реализации можно внести изменения без отхода от расширенной сущности изобретения. Таким образом, следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается описанными конкретными вариантами реализации; подразумевается, что оно охватывает модификации, входящие в объем изобретения, определенный прилагаемой формулой изобретения.
- 64 032582

Claims (16)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Библиотека случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости, состоящая из множества соединений, по меньшей мере одно из указанных соединений имеет структуру формулы I, на носителе где И1 представляет собой -(С1-С6)8СН3;
    И2 выбран из Н;
    И3-И6 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-8СН3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -С1-С6 СООН, -С1-С6алкил-ОН, -С1-С6алкил-ХИ2, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -С1-С6алкил-ХС(О)С1-С6алкил, -С1-С6алкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, С1, Е, Вг, -ОСН3, -8Ο2ΝΗ2 или -О-СН2-О;
    п составляет 3-11 и указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различающихся лигандов.
  2. 2. Библиотека случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости по п.1, состоящая из множества соединений, по меньшей мере одно из соединений имеет структуру формулы I, на носителе отличающаяся тем, что соединения получают способом, который включает применение участвующих в реакции соединений, выбранных из группы, состоящей из следующего:
    (A) фурфуриламин; 3,4-диметоксиэтаноламин; бензиламин; ^(2-аминоэтил)ацетамид; Ν-β-аминопропил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид или циклогексиламин; или (B) метоксиэтиламин; пиперониламин; циклогексиламин; диаминобутан; метилбензиламин; изобутиламин; фурфуриламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или (C) фурфуриламин; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин или 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или (Ό) фурфуриламин; ^(2-аминоэтил)ацетамид; ^(3-аминоэтил)-2-пирролидинон; этаноламин; глицин; диаминобутан; аллиламин; пиперониламин; метилбензиламин; изобутиламин; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид; или (Е) цистеин; глицин; аллиламин; этаноламин; изобутиламин; метилбензиламин; пиперониламин; метионин; циклогексиламин; 3,4-диметоксифениламин; бензиламин; ^(2-аминоэтил)ацетамид; N-(3аминопропил)-2-пирролидон; 4-(2-аминоэтил)бензолсульфонамид и фурфуриламин; и при этом И1 выбран из группы, состоящей из -(С1-С6)8СН3;
    И2 выбран из Н;
    И3 и И5 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-8СН3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкил-С2-С6алкинил, -С1-С6 СООН, -С1-С6алкил-ОН, -СгС6алкил-КН2, -С3-С8циклоалкил, -С1-С6алкиларил, -С1-С6алкилгетероарил, -С^С^лкил^^О^-Сдакил, -С1-С6алкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, С1, Е, Вг, -ОСН3, -8О2ЯН2 или -О-СН2-О-;
    И4 выбран из группы, состоящей из фурфурила и -(СгС6алкил^И7И8;
    И6 выбран из группы, состоящей из следующего: Н, 1 -ил-аллил, 1-ил-2-гидроксиэтил, изобутил, 1ил-п-бутиламин, метилбензил, пиперонил, циклогексил, 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, бензил, 1-ил2-(ацетамид)этил, 1-ил-3-2-пирролидинон, 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил или фурфурил;
    п составляет от 3 до 11.
  3. 3. Библиотека лигандов по п.2, отличающаяся тем, что носитель выбран из бусины или смолы.
  4. 4. Библиотека лигандов по п.3, отличающаяся тем, что указанная бусина или смола содержит полиэтиленгликолевый линкер, содержащий менее 10 мономерных звеньев.
  5. 5. Библиотека случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости, состоящая
    - 65 032582 из множества соединений, по меньшей мере одно из указанных соединений имеет структуру формулы X где К! представляет собой -(С1-С6)8СН3;
    К2 выбран из Н;
    К3-К5 независимо выбраны из групп, состоящих из следующего: Н, -С1-С6алкил, -С1-С6алкил-8СН3, -С0-С6алкил-С2-С6алкенил, -С0-С6алкнл-С2-С6алкнннл, -С1-С6 СООН, -С1-С6алкил-ОН, -СгС^алкил-^ 12, -С3-С8циклоалкил, -С^С^лкиларил, -С^^алкилгетероарил, -С^^алкил-Н^О^-^алкил, -С1-С6алкилциклоамид, причем каждая из арильных и гетероарильных групп независимо может содержать в качестве заместителя -ОН, С1, Е, Вг, -ОСН3, -8ϋ2ΝΗ2 или -О-СН2-О-;
    п составляет от 3 до 10 и указанная библиотека содержит от приблизительно 200000 до приблизительно 150 млн различающихся лигандов.
  6. 6. Библиотека лигандов по п.5, где Кд выбран из -п-бутиламина.
  7. 7. Библиотека лигандов по п.6, где К! выбран из -СН2СН28СН3 или -СН28Н.
  8. 8. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу 1а причем указанное по меньшей мере одно соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы 1а, где:
    (a) К9 представляет собой п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кп представляет собой пиперонил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
    (b) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-(4- бензолсульфонамид)этил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К14 представляет собой 1-ил-2,2диметилэтил(изобутил), К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой метилбензил;
    (c) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой циклогексил;
    (ά) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой изобутил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (е) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой циклогексил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой пиперонил;
    (ί) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой изопропил, К12 представляет собой изопропил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
    (д) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой циклогексил;
    (1) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой циклогексил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой пиперонил;
    - 66 032582 (ΐ) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кю представляет собой метилбензил, Иц представляет собой метилбензил, К.12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой циклогексил;
    (ί) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К10 представляет собой метилбензил, Кп представляет собой метилбензил, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой 1-илп-бутиламин, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой изобутил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (k) К9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Кю представляет собой изобутил, Кп представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой 1ил-п-бутиламин, Ки представляет собой циклогексил, К.15 представляет собой метилбензил и Кю представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
    (l) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кю представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Кп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой метилбензил;
    (т) К9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой фурфурил и К16 представляет собой фурфурил;
    (п) К9 представляет собой циклогексил, Кю представляет собой циклогексил, Кп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой фурфурил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К.14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой фурфурил;
    (о) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кю представляет собой пиперонил, Кц представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил и К16 представляет собой метилбензил;
    (р) К9 представляет собой циклогексил, К10 представляет собой циклогексил, Кп представляет собой пиперонил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К13 представляет собой изобутил;
    (ф К9 представляет собой пиперонил, Кю представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кц представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К.13 представляет собой пиперонил, Ки представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой метилбензил и Кю представляет собой метилбензил;
    (г) К9 представляет собой метилбензил, Кю представляет собой метилбензил, Кц представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой пиперонил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (к) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кп представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и Кю представляет собой пиперонил;
    (ΐ) К9 представляет собой метилбензил, Кю представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Кц представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой изобутил, Ки представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой метилбензил и Кю представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
    (и) К9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кп представляет собой изобутил, К12 представляет собой изобутил, К13 представляет собой циклогексил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой циклогексил;
    (ν) К9 представляет собой изобутил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой пиперонил и К16 представляет собой пиперонил;
    (X) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Кю представляет собой изобутил, Кц представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Ки представляет собой изобутил, К15 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил и К16 представляет собой циклогексил;
    (х) К9 представляет собой фурфурил, К10 представляет собой фурфурил, Кп представляет собой пиперонил, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой
    - 67 032582
    1-ил-п-бутиламин, К.|3 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К.|6 представляет собой циклогексил;
    (у) В9 представляет собой пиперонил, В10 представляет собой пиперонил, В|| представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В13 представляет собой 1-ил-пбутиламин, К.|4 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
    (ζ) В9 представляет собой пиперонил, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вп представляет собой изобутил, В12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В13 представляет собой метилбензил, В14 представляет собой циклогексил, В15 представляет собой изобутил и В16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (аа) В9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В!0 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, В11 представляет собой метилбензил, В12 представляет собой метилбензил, В13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и В|6 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
    (ЬЬ) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Вп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой изобутил, В13 представляет собой циклогексил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В16 представляет собой пиперонил;
    (сс) В9 представляет собой циклогексил, В10 представляет собой метилбензил, Вп представляет собой циклогексил, В12 представляет собой пиперонил, В13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
    (бб) В9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Вю представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Вп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил, К.|3 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Ви представляет собой 1-ил-2метоксиэтил, В15 представляет собой изобутил и В16 представляет собой циклогексил;
    (ее) В9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В10 представляет собой метилбензил, В11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В13 представляет собой пиперонил, В14 представляет собой изобутил, В15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и В16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (В) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой метилбензил, Вп представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В12 представляет собой метилбензил, К.|3 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Ви представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и В16 представляет собой циклогексил;
    (дд) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вю представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Вп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К.|3 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Ви представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В16 представляет собой метилбензил;
    (1111) В9 представляет собой циклогексил, В10 представляет собой циклогексил, Вп представляет собой метилбензил, В12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В13 представляет собой метилбензил, В14 представляет собой циклогексил, В15 представляет собой метилбензил и В16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (ίί) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вю представляет собой фурфурил, Вц представляет собой метилбензил, В12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В13 представляет собой фурфурил, В14 представляет собой циклогексил, В|5 представляет собой метилбензил и В|6 представляет собой циклогексил;
    ())) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вю представляет собой метилбензил, Вц представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В14 представляет собой метилбензил, В15 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил и В16 представляет собой изобутил;
    (кк) В9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В10 представляет собой 1-ил-пбутиламин, В11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой метилбензил, В13 представляет собой метилбензил, В14 представляет собой циклогексил, В15 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил и В16 представляет собой метилбензил;
    (11) В9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Вю представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, В11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой 1-ил-пбутиламин, В13 представляет собой метилбензил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой метилбензил и В16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (тт) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вю представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Вц представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В|2 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В14 представляет собой циклогексил, В15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и В16 представляет собой метилбензил;
    - 68 032582 (пп) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, ВП представляет собой пиперонил, В12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В(4 представляет собой метилбензил, В(5 представляет собой метилбензил и В(6 представляет собой циклогексил;
    (оо) В9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В10 представляет собой метилбензил, Вц представляет собой метилбензил, В(2 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В(3 представляет собой метилбензил, В(4 представляет собой пиперонил, В(5 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В(6 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
    (рр) В9 представляет собой пиперонил, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой метиламин, В13 представляет собой пиперонил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В(5 представляет собой пиперонил и В(6 представляет собой 1-ил2-метоксиэтил;
    (ςς) В9 представляет собой циклогексил, В10 представляет собой циклогексил, Вц представляет собой фурфурил, В12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Вп представляет собой изобутил, Ви представляет собой циклогексил, В15 представляет собой метилбензил и В16 представляет собой метилбензил;
    (гг) В9 представляет собой пиперонил, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вп представляет собой изобутил, В12 представляет собой изобутил, В13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В14 представляет собой циклогексил, В15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и В16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
    (δδ) В9 представляет собой циклогексил, В10 представляет собой циклогексил, Вп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вп представляет собой метилбензил, Вп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В14 представляет собой метилбензил, В15 представляет собой циклогексил и В16 представляет собой пиперонил.
  9. 9. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу причем указанное по меньшей мере одно соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы II, где:
    (a) В9 представляет собой п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вп представляет собой пиперонил, Вп представляет собой метилбензил, Вп представляет собой пиперонил, Ви представляет собой метилбензил, В(5 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и В(6 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
    (b) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-2-(4- бензолсульфонамид)этил, Вп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой циклогексил, В13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В14 представляет собой 1-ил-2,2диметилэтил(изобутил), В(5 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и В(6 представляет собой метилбензил;
    (c) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вп представляет собой пиперонил, В(2 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Вп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Ви представляет собой метилбензил, В(5 представляет собой метилбензил и В(6 представляет собой циклогексил;
    (ά) В9 представляет собой пиперонил, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вп представляет собой изобутил, В(2 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Вп представляет собой метилбензил, В(4 представляет собой циклогексил, В(5 представляет собой изобутил и В(6 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (е) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вц представляет собой метилбензил, Вп представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Вп представляет собой циклогексил, В14 представляет собой циклогексил, В15 представляет собой метилбензил и В16 представляет собой пиперонил;
    (ί) В9 представляет собой пиперонил, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вп представляет собой изопропил, В12 представляет собой изопропил, В13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, В14 представляет собой циклогексил, В15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и В16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
    (д) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вц представляет собой пиперонил, Вп представляет собой метилбензил, Вп представляет собой пиперонил, Ви представляет собой метилбензил, В15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и В16 представляет собой циклогексил;
    (Б) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Вп пред
    - 69 032582 ставляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой циклогексил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой пиперонил;
    (ί) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой циклогексил;
    (ί) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой 1-илп-бутиламин, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой изобутил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (k) К9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К10 представляет собой изобутил, К11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
    (l) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой циклогексил, К|3 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой метилбензил;
    (т) К9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой фурфурил и К16 представляет собой фурфурил;
    (п) К9 представляет собой циклогексил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой фурфурил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой фурфурил;
    (о) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил и К16 представляет собой метилбензил;
    (р) К9 представляет собой циклогексил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой изобутил;
    (ф К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой метилбензил;
    (г) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой пиперонил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (§) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил и К16 представляет собой пиперонил;
    (1) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой изобутил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
    (и) К9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой изобутил, К12 представляет собой изобутил, К13 представляет собой циклогексил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой циклогексил;
    (ν) К9 представляет собой изобутил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой пиперонил и К16 представляет собой пиперонил;
    (те) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К10 представляет собой изобутил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой 1-ил-2
    - 70 032582 метоксиэтил и К.16 представляет собой циклогексил;
    (x) К9 представляет собой фурфурил, Кю представляет собой фурфурил, Кц представляет собой пиперонил, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой циклогексил;
    (y) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой пиперонил, Кп представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой 1-ил-пбутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
    (ζ) К9 представляет собой пиперонил, Кю представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кп представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой изобутил и Кю представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (аа) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Кю представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Кп представляет собой метилбензил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
    (ЬЬ) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Кп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой изобутил, К13 представляет собой циклогексил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой пиперонил;
    (сс) К9 представляет собой циклогексил, Кю представляет собой метилбензил, Кп представляет собой циклогексил, К.12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К34 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и Кю представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
    (бб) К9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К10 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Кп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил, К13 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К14 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил, К15 представляет собой изобутил и К16 представляет собой циклогексил;
    (ее) К9 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К10 представляет собой метилбензил, Кп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой изобутил, К!5 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и Кю представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (ίί) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кю представляет собой метилбензил, Кц представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К34 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К35 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и Кю представляет собой циклогексил;
    (дд) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Кп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой метилбензил;
    (1111) К9 представляет собой циклогексил, К10 представляет собой циклогексил, Кп представляет собой метилбензил, К.12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой метилбензил, К34 представляет собой циклогексил, К35 представляет собой метилбензил и Кю представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (ίί) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Кю представляет собой фурфурил, Кц представляет собой метилбензил, К.12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой фурфурил, К14 представляет собой циклогексил, К!5 представляет собой метилбензил и Кю представляет собой циклогексил;
    ())) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой метилбензил, Кп представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил и К16 представляет собой изобутил;
    (кк) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К10 представляет собой 1-ил-пбутиламин, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой метилбензил, К34 представляет собой циклогексил, К35 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил и К16 представляет собой метилбензил;
    (11) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Кю представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Кц представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой 1-ил-пбутиламин, К13 представляет собой метилбензил, К34 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К35 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (тт) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-(4
    - 71 032582 бензолсульфонамид)этил, Е11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Е12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Е13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е14 представляет собой циклогексил, Е15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и Е16 представляет собой метилбензил;
    (пп) Е9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е11 представляет собой пиперонил, Е12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Е13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е14 представляет собой метилбензил, Е15 представляет собой метилбензил и Е16 представляет собой циклогексил;
    (оо) Е9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Е10 представляет собой метилбензил, Е11 представляет собой метилбензил, Е12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е13 представляет собой метилбензил, Е14 представляет собой пиперонил, Е15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и Е16 представляет собой 1 -ил-2-метоксиэтил;
    (рр) Е9 представляет собой пиперонил, Е10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е12 представляет собой метиламин, Е13 представляет собой пиперонил, Е14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е15 представляет собой пиперонил и Е16 представляет собой 1-ил2-метоксиэтил;
    (ςς) Е9 представляет собой циклогексил, Е10 представляет собой циклогексил, Е11 представляет собой фурфурил, Е12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Е13 представляет собой изобутил, Е14 представляет собой циклогексил, Е15 представляет собой метилбензил и Е16 представляет собой метилбензил;
    (гг) Е9 представляет собой пиперонил, Е10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е11 представляет собой изобутил, Е12 представляет собой изобутил, Е13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Е14 представляет собой циклогексил, Е15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и Е16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
    (зз) И9 представляет собой циклогексил, Е10 представляет собой циклогексил, Е11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е12 представляет собой метилбензил, Е13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е14 представляет собой метилбензил, Е15 представляет собой циклогексил и Е16 представляет собой пиперонил.
  10. 10. Библиотека лигандов по п.8, где указанное по меньшей мере одно соединение формулы II выбрано из групп, содержащих следующие К9-К16:
    (a) Е9 представляет собой п-бутиламин, Е10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е11 представляет собой пиперонил, Е12 представляет собой метилбензил, Е13 представляет собой пиперонил, Е14 представляет собой метилбензил, Е15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и Е16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
    (b) Е9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е10 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, Е11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е12 представляет собой циклогексил, Е13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Е14 представляет собой 1-ил-2,2-диметилэтил(изобутил), Е15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и Е16 представляет собой метилбензил;
    (c) Е9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е11 представляет собой пиперонил, Е12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Е13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е14 представляет собой метилбензил, Е15 представляет собой метилбензил и Е16 представляет собой циклогексил;
    (б) Е9 представляет собой пиперонил, Е10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е11 представляет собой изобутил, Е12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Е13 представляет собой метилбензил, Е14 представляет собой циклогексил, Е15 представляет собой изобутил и Е16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (е) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е11 представляет собой метилбензил, Е12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Е13 представляет собой циклогексил, Е14 представляет собой циклогексил, Е15 представляет собой метилбензил и Е16 представляет собой пиперонил;
    (I) Е9 представляет собой пиперонил, Е10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Е11 представляет собой изопропил, Е12 представляет собой изопропил, Е13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, Е14 представляет собой циклогексил, Е15 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил и Е16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил.
  11. 11. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу причем по меньшей мере одно соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы 11а, где:
    - 72 032582 (a) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой циклогексил, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (b) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой изобутил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (c) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой изобутил, К14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1 -ил-2-метоксиэтил;
    (ά) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой циклогексил и К16 представляет собой изобутил;
    (е) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой циклогексил и К16 представляет собой метилбензил;
    (ί) К9 представляет собой циклогексил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (]) К9 представляет собой фурфурил, К10 представляет собой фурфурил, К11 представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой метилбензил;
    (й) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К11 представляет собой циклогексил, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой 1-ил-пбутиламин, К14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой метилбензил;
    (ΐ) К9 представляет собой изобутил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой изобутил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (]) К9 представляет собой изобутил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой циклогексил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (k) К9 представляет собой циклогексил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой изобутил;
    (l) К9 представляет собой циклогексил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-2метоксиэтил.
  12. 12. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу причем указанное одно соединение выбрано из группы, состоящей из соединений формулы II, где:
    (т) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой циклогексил, К14 представляет собой изобутил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (п) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13
    - 73 032582 представляет собой изобутил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (o) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И11 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И13 представляет собой изобутил, И14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил;
    (p) И9 представляет собой метилбензил, И10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И11 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И12 представляет собой метилбензил, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой циклогексил и И16 представляет собой изобутил;
    (ς) И9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И10 представляет собой метилбензил, И11 представляет собой метилбензил, И12 представляет собой метилбензил, И13 представляет собой 1 -ил-2-метоксиэтил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой циклогексил и И16 представляет собой метилбензил;
    (г) И9 представляет собой циклогексил, И10 представляет собой циклогексил, И11 представляет собой метилбензил, И12 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И13 представляет собой метилбензил, И14 представляет собой метилбензил, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (§) И9 представляет собой фурфурил, И10 представляет собой фурфурил, И11 представляет собой изобутил, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой метилбензил, И15 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой метилбензил;
    (Т) И9 представляет собой метилбензил, И10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И11 представляет собой циклогексил, И12 представляет собой циклогексил, И13 представляет собой 1-ил-пбутиламин, И14 представляет собой 1-ил-2-метоксиэтил, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 представляет собой метилбензил;
    (и) И9 представляет собой изобутил, И10 представляет собой метилбензил, И11 представляет собой метилбензил, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой изобутил, И15 представляет собой изобутил и И16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (ν) И9 представляет собой изобутил, И10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И11 представляет собой метилбензил, И12 представляет собой метилбензил, И13 представляет собой метилбензил, И14 представляет собой циклогексил, И15 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (\\) И9 представляет собой циклогексил, И10 представляет собой циклогексил, И11 представляет собой метилбензил, И12 представляет собой метилбензил, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой изобутил, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 представляет собой изобутил;
    (х) И9 представляет собой циклогексил, И10 представляет собой циклогексил, И11 представляет собой изобутил, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой метилбензил, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 представляет собой 1 -ил-2-метоксиэтил.
  13. 13. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу причем указанные соединения выбраны из группы, состоящей из соединений, содержащих следующие И9-И16:
    (a) И9 представляет собой пиперонил, И10 представляет собой циклогексил, И11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И13 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой изобутил и И16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (b) И9 представляет собой пиперонил, И10 представляет собой пиперонил, И11 представляет собой циклогексил, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И13 представляет собой 1-ил-аллил, И14 представляет собой изобутил, И15 представляет собой циклогексил и И16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (c) И9 представляет собой метилбензил, И10 представляет собой пиперонил, И11 представляет собой циклогексил, И12 представляет собой пиперонил, И13 представляет собой пиперонил, И14 представляет собой метилбензил, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 представляет собой 1-ил-п
    - 74 032582 бутиламин;
    (б) В9 представляет собой изобутил, В10 представляет собой циклогексил, В11 представляет собой изобутил, В12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В13 представляет собой 1-ил-аллил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой 1-ил-аллил и В16 представляет собой пиперонил;
    (е) В9 представляет собой пиперонил, В10 представляет собой изобутил, В11 представляет собой пиперонил, В12 представляет собой циклогексил, В13 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой 1-ил-пбутиламин и В16 представляет собой пиперонил;
    (ί) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой пиперонил, В13 представляет собой метилбензил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил;
    (Ϊ) В9 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, В10 представляет собой метилбензил, В11 представляет собой циклогексил, В12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В13 представляет собой пиперонил, В14 представляет собой метилбензил, В15 представляет собой метилбензил и В16 представляет собой 1-илп-бутиламин;
    (H) В9 представляет собой метилбензил, В10 представляет собой пиперонил, В11 представляет собой метилбензил, В12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В13 представляет собой метилбензил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В16 представляет собой пиперонил;
    (I) В9 представляет собой метилбензил, В10 представляет собой 1-ил-аллил, В11 представляет собой пиперонил, В12 представляет собой пиперонил, В13 представляет собой 1 -ил-п-бутиламин, В14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В16 представляет собой метилбензил;
    (Ϊ) В9 представляет собой метилбензил, В10 представляет собой метилбензил, В11 представляет собой пиперонил, В12 представляет собой метилбензил, В13 представляет собой пиперонил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой метилбензил и В16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (k) В9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В10 представляет собой метилбензил, В11 представляет собой метилбензил, В12 представляет собой метилбензил, В13 представляет собой пиперонил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В16 представляет собой изобутил;
    (l) В9 представляет собой 1-ил-аллил, В10 представляет собой метилбензил, В11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой циклогексил, В13 представляет собой пиперонил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и В16 представляет собой пиперонил;
    (т) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, В11 представляет собой изобутил, В12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В13 представляет собой 1-ил-2гидроксиэтил, В14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, В15 представляет собой 1-ил-пбутиламин и В16 представляет собой циклогексил;
    (п) В9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, В11 представляет собой метилбензил, В12 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, В13 представляет собой 1-ил-пбутиламин, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой пиперонил и В16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил.
  14. 14. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу η2ν^/ причем указанные соединения выбраны из группы, состоящей из соединений, содержащих следующие К9-В16:
    (a) В9 представляет собой пиперонил, В10 представляет собой циклогексил, В11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В13 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, В14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В15 представляет собой изобутил и В16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (b) В9 представляет собой пиперонил, В10 представляет собой пиперонил, В11 представляет собой циклогексил, В12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, В13 представляет собой 1-ил-аллил, В14 представляет собой изобутил, В15 представляет собой циклогексил и В16 представляет собой 1-ил-п
    - 75 032582 бутиламин;
    (с) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой циклогексил, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (й) К9 представляет собой изобутил, К10 представляет собой циклогексил, К11 представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой 1-ил-аллил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-аллил и К16 представляет собой пиперонил;
    (е) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой изобутил, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-пбутиламин и К16 представляет собой пиперонил;
    (ί) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил;
    (д) К9 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой циклогексил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-илп-бутиламин;
    (1) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой пиперонил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой пиперонил;
    (1) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-аллил, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой пиперонил, К13 представляет собой 1 -ил-п-бутиламин, К14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой метилбензил;
    (Ϊ) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой метилбензил и К16 представляет собой 1-ил-пбутиламин;
    (k) К9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой метилбензил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой изобутил;
    (l) К9 представляет собой 1-ил-аллил, К10 представляет собой метилбензил, К11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К12 представляет собой циклогексил, К13 представляет собой пиперонил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и К16 представляет собой пиперонил;
    (т) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К11 представляет собой изобутил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой 1-ил-2гидроксиэтил, К14 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К15 представляет собой 1-ил-пбутиламин и К16 представляет собой циклогексил;
    (п) К9 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К10 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил, К13 представляет собой 1-ил-пбутиламин, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой пиперонил и К16 представляет собой 1-ил-2-гидроксиэтил.
  15. 15. Библиотека лигандов по п.5, где по меньшей мере одно из указанных соединений имеет формулу где по меньшей мере в одном соединении формулы 111а К9-К16 выбраны из:
    (а) К9 представляет собой 1-ил-аллил, К10 представляет собой 1-ил-3№(2-пирролидинон)пропил, К11 представляет собой уксусную кислоту, К12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К13 представляет собой бензил, К14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К15 представляет собой изобутил и
    - 76 032582
    И16 представляет собой 1-ил-аллил;
    (b) И9 представляет собой циклогексил, И10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Ип представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, И13 представляет собой бензил, И14 представляет собой пиперонил, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 представляет собой 1 -ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
    (c) И9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И10 представляет собой 1-ил-аллил, Ип представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой бензил, И13 представляет собой метилбензил, И14 представляет собой бензил, И15 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой 1ил-п-бутиламин;
    (б) И9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И10 представляет собой 1-ил-2-(3,4диметоксифенил)этил, Ип представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой бензил, И15 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой бензил;
    (е) И9 представляет собой пиперонил, К.10 представляет собой пиперонил, Иц представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой циклогексил, И13 представляет собой бензил, И14 представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 представляет собой метилбензил;
    (1) И9 представляет собой 1-ил-аллил, И10 представляет собой метилбензил, Ип представляет собой метилбензил, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И13 представляет собой пиперонил, И14 представляет собой бензил, И15 представляет собой пиперонил и И16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (д) И9 представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, И10 представляет собой изобутил, Ип представляет собой метилбензил, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И13 представляет собой метилбензил, И14 представляет собой бензил, И15 представляет собой пиперонил и И16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    (1) И9 представляет собой метилбензил, И10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, Ип представляет собой метилбензил, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И13 представляет собой метилбензил, И14 представляет собой метилбензил, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 представляет собой метилбензил;
    (1) И9 представляет собой пиперонил, И10 представляет собой бензил, Ип представляет собой пиперонил, И12 представляет собой бензил, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой бензил, И15 представляет собой циклогексил и К.16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин.
  16. 16. Библиотека лигандов по п.5, где библиотека содержит соединение формулы где в соединении формулы II И9-И16 выбраны из:
    (a) И9 представляет собой 1-ил-аллил, И10 представляет собой 1-ил-3№(2-пирролидинон)пропил, Иц представляет собой уксусную кислоту, И12 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И13 представляет собой бензил, И14 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И15 представляет собой изобутил и И16 представляет собой 1-ил-аллил;
    (b) И9 представляет собой циклогексил, И10 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, Ип представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, И13 представляет собой бензил, И14 представляет собой пиперонил, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил;
    (c) И9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И10 представляет собой 1-ил-аллил, И11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой бензил, И13 представляет собой метилбензил, И14 представляет собой бензил, И15 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой 1ил-п-бутиламин;
    (б) И9 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, И10 представляет собой 1-ил-2-(3,4диметоксифенил)этил, И11 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой 1-ил-2-(4бензолсульфонамид)этил, И13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И14 представляет собой бензил, И15 представляет собой метилбензил и И16 представляет собой бензил;
    (е) И9 представляет собой пиперонил, К.10 представляет собой пиперонил, Иц представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И12 представляет собой циклогексил, И13 представляет собой бензил, И14 представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, И15 представляет собой 1-ил-п-бутиламин и И16 представляет собой метилбензил;
    (1) И9 представляет собой 1-ил-аллил, И10 представляет собой метилбензил, И11 представляет собой метилбензил, И12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, И13 представляет собой пиперонил, И14 представляет собой бензил, И15 представляет собой пиперонил и И16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин;
    - 77 032582 (д) К9 представляет собой 1-ил-2-(3,4-диметоксифенил)этил, К10 представляет собой изобутил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой бензил, К15 представляет собой пиперонил и К16 представляет собой 1 -ил-п-бутиламин;
    (й) К9 представляет собой метилбензил, К10 представляет собой 1-ил-2-(4-бензолсульфонамид)этил, К11 представляет собой метилбензил, К12 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К13 представляет собой метилбензил, К14 представляет собой метилбензил, К15 представляет собой 1 -ил-п-бутиламин и К16 представляет собой метилбензил;
    (1) К9 представляет собой пиперонил, К10 представляет собой бензил, К11 представляет собой пиперонил, К12 представляет собой бензил, К13 представляет собой 1-ил-п-бутиламин, К14 представляет собой бензил, К15 представляет собой циклогексил и К16 представляет собой 1-ил-п-бутиламин.
EA201391378A 2011-03-24 2012-03-22 Библиотека случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости EA032582B1 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161467256P 2011-03-24 2011-03-24
US201161491717P 2011-05-31 2011-05-31
US201261583881P 2012-01-06 2012-01-06
PCT/US2012/030161 WO2012129423A2 (en) 2011-03-24 2012-03-22 Biomarker discovery in complex biological fluid using bead or particle based libraries and diagnostic kits and therapeutics

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201391378A1 EA201391378A1 (ru) 2014-09-30
EA032582B1 true EA032582B1 (ru) 2019-06-28

Family

ID=46880042

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201391378A EA032582B1 (ru) 2011-03-24 2012-03-22 Библиотека случайных пептоидных лигандов для скрининга биологической жидкости
EA201391382A EA037648B1 (ru) 2011-03-24 2012-03-23 Способ диагностики с использованием библиотеки пептоидных лигандов

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201391382A EA037648B1 (ru) 2011-03-24 2012-03-23 Способ диагностики с использованием библиотеки пептоидных лигандов

Country Status (14)

Country Link
US (2) US20120269799A1 (ru)
EP (2) EP2688911B1 (ru)
JP (2) JP6153921B2 (ru)
KR (2) KR20140027174A (ru)
CN (2) CN103748270B (ru)
AU (2) AU2012230880B2 (ru)
BR (2) BR112013024453A2 (ru)
CL (2) CL2013002732A1 (ru)
CO (2) CO6870002A2 (ru)
EA (2) EA032582B1 (ru)
HK (1) HK1197088A1 (ru)
MX (2) MX2013011000A (ru)
TW (2) TWI630389B (ru)
WO (2) WO2012129423A2 (ru)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101694336B1 (ko) * 2012-08-03 2017-01-09 티엔진 폴리테크닉 유니버시티 리튬 동위원소 분리 효과를 나타내는 벤조크라운 에테르 그래프트 폴리머 및 그 제조 방법
US10677795B2 (en) 2014-05-09 2020-06-09 Protagen Ag Marker sequences for the diagnosis and stratification of systemic sclerosis patients
WO2017015644A1 (en) * 2015-07-23 2017-01-26 University Of Houston System Cancer specific lipid targeted peptidomimetics
SG11201802777XA (en) 2015-10-14 2018-05-30 X Therma Inc Compositions and methods for reducing ice crystal formation
US11053282B2 (en) 2016-03-09 2021-07-06 Mike-Ann, Llc Peptoid affinity ligands
EP3433262A4 (en) * 2016-03-25 2019-11-20 Muralidhar Reddy Moola COMBINATORY SYNTHESIS AND DEVELOPMENT OF BIOMARKERS
CN106854233B (zh) * 2017-03-03 2020-07-17 国家纳米科学中心 一种类肽及其制备方法和应用
WO2023014666A1 (en) * 2021-08-04 2023-02-09 University Of Houston System Vimentin targeted peptoids for early diagnosis and treatment of cancer

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060121489A1 (en) * 2003-05-23 2006-06-08 Board Of Regents, The University Of Texas System High throughput screening of aptamer libraries for specific binding to proteins on viruses and other pathogens
US20070054847A1 (en) * 2003-03-12 2007-03-08 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Use of adnf polypeptides for treating anxiety and depression
US20070111322A1 (en) * 2005-11-15 2007-05-17 Lin-Cheng Yang Novel method of using inject printing for creating microarrays
US7354584B2 (en) * 2003-04-11 2008-04-08 Medimmune, Inc. Recombinant IL-9 antibodies
US20090246124A1 (en) * 2007-07-10 2009-10-01 Thomas Kodadek High affinity vegf-receptor antagonists
US20100303805A1 (en) * 2009-06-02 2010-12-02 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Identification of small molecules recognized by antibodies in subjects with neurodegenerative diseases
US20110092384A1 (en) * 2009-10-16 2011-04-21 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for producing coded peptoid libraries

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5834318A (en) 1995-05-10 1998-11-10 Bayer Corporation Screening of combinatorial peptide libraries for selection of peptide ligand useful in affinity purification of target proteins
GB9712818D0 (en) * 1996-07-08 1997-08-20 Cambridge Antibody Tech Labelling and selection of specific binding molecules
US20040241759A1 (en) 1997-06-16 2004-12-02 Eileen Tozer High throughput screening of libraries
US6344330B1 (en) 1998-03-27 2002-02-05 The Regents Of The University Of California Pharmacophore recombination for the identification of small molecule drug lead compounds
WO2000009464A1 (en) 1998-08-17 2000-02-24 Phylos, Inc. Identification of compound-protein interactions using libraries of protein-nucleic acid fusion molecules
US6329510B1 (en) 1999-01-29 2001-12-11 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Anti-CCR1 antibodies and methods of use therefor
WO2001039799A2 (en) * 1999-12-06 2001-06-07 Panacea Pharmaceuticals, Llc. Passive desensitization
US7153682B2 (en) 2000-06-05 2006-12-26 Chiron Corporation Microarrays on mirrored substrates for performing proteomic analyses
US7083945B1 (en) 2000-10-27 2006-08-01 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Isolation of binding proteins with high affinity to ligands
US20030165873A1 (en) * 2001-03-02 2003-09-04 Come Jon H. Three hybrid assay system
TW573125B (en) 2001-08-29 2004-01-21 Combinatorx Inc A screening system for identifying drug-drug interactions and methods of use thereof
US20060275829A1 (en) 2002-04-15 2006-12-07 Hammond David J Combinatorial library for proteomic investigations
US20060275753A1 (en) 2002-04-15 2006-12-07 Hammond David J Recovery of analytes using combinatorial libraries
WO2004037848A2 (en) 2002-05-17 2004-05-06 Slanetz Alfred E Process for determining target function and identifying drug leads
AU2003245612A1 (en) 2002-07-11 2004-02-02 The American National Red Cross Method for identifying individual active entities from complex mixtures
JP5072901B2 (ja) 2003-02-24 2012-11-14 譲治 稲澤 薬剤耐性マーカーおよびその利用
CA2817265A1 (en) * 2003-04-11 2004-10-28 Medimmune, Llc Recombinant il-9 antibodies and uses thereof
US20070026402A1 (en) 2003-07-08 2007-02-01 Noble Ernest P Genetic marker of response to atypical antipsychotics and antidepressants methods for use thereof
AU2003287040A1 (en) * 2003-10-08 2005-05-26 The Regents Of The University Of California Screening combinatorial bead libraries for cancer ligands
JP2006025069A (ja) * 2004-07-07 2006-01-26 Hitachi Ltd 機器制御装置及び電気機器
TW200616604A (en) 2004-08-26 2006-06-01 Nicholas Piramal India Ltd Nitric oxide releasing prodrugs containing bio-cleavable linker
ES2572811T3 (es) 2004-09-09 2016-06-02 Yeda Research And Development Co., Ltd. Mezclas de polipéptidos, composiciones que las contienen y procedimientos para obtener los mismos, y usos de los mismos
US20060234299A1 (en) 2004-11-16 2006-10-19 Avidia Research Institute Protein scaffolds and uses thereof
US20060199206A1 (en) * 2005-03-01 2006-09-07 Hong Wang Method for identifying skin care composition-resistant skin-binding peptides
US20070003954A1 (en) 2005-05-12 2007-01-04 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Protein and antibody profiling using small molecule microarrays
US8119572B2 (en) * 2005-10-24 2012-02-21 Wisconsin Alumni Research Foundation Methods for determining protein binding specificity using peptide libraries
CA2650706C (en) * 2006-05-25 2016-11-08 University Health Network Methods of diagnosing and treating rheumatoid arthritis and osteoarthritis
BRPI0807635A2 (pt) * 2007-02-22 2014-06-03 Genentech Inc Métodos para detecção de doença inflamatória intestinal
US20100266610A1 (en) * 2007-05-03 2010-10-21 Medimmune, Llc Auto-antibody markers of autoimmune disease
TWM333876U (en) 2007-09-21 2008-06-11 Jer-Yuan Jang Device of auxiliary bathing tool
GB0724735D0 (en) 2007-12-19 2008-01-30 Psynova Neurotech Ltd Methods and biomarkers for diagnosing and monitoring psychotic disorders
WO2010014651A1 (en) 2008-07-31 2010-02-04 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Pharmacogenetic markers for susceptibility to drug-induced pancreatic toxicity
JP2010071744A (ja) 2008-09-17 2010-04-02 Sekisui Chem Co Ltd 化合物のスクリーニング方法、並びに、スクリーニング用キット
CA2763685A1 (en) 2009-05-29 2010-12-02 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Peptoid ligands for isolation and treatment of autoimmune t-cells
JP2011004743A (ja) 2009-06-26 2011-01-13 Dna Chip Research Inc 関節リウマチ患者におけるインフリキシマブ薬効の有効性を判別する方法
JP5953232B2 (ja) 2009-10-06 2016-07-20 ウィスコンシン・アルムニ・リサーチ・ファウンデーションＷｉｓｃｏｎｓｉｎ Ａｌｕｍｎｉ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ 薬物誘導性の心毒性の代謝バイオマーカー

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070054847A1 (en) * 2003-03-12 2007-03-08 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Use of adnf polypeptides for treating anxiety and depression
US7354584B2 (en) * 2003-04-11 2008-04-08 Medimmune, Inc. Recombinant IL-9 antibodies
US20060121489A1 (en) * 2003-05-23 2006-06-08 Board Of Regents, The University Of Texas System High throughput screening of aptamer libraries for specific binding to proteins on viruses and other pathogens
US20070111322A1 (en) * 2005-11-15 2007-05-17 Lin-Cheng Yang Novel method of using inject printing for creating microarrays
US20090246124A1 (en) * 2007-07-10 2009-10-01 Thomas Kodadek High affinity vegf-receptor antagonists
US20100303805A1 (en) * 2009-06-02 2010-12-02 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Identification of small molecules recognized by antibodies in subjects with neurodegenerative diseases
US20110092384A1 (en) * 2009-10-16 2011-04-21 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for producing coded peptoid libraries

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LIU et al. "A Potent Transactivation Domain Mimic with Activity in Living Cells", Journal of the American Chemical Society, 18 May 2005 (18.05.2005), Vol. 127, p. 8254-8255, entire document *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2012129423A2 (en) 2012-09-27
JP6412798B2 (ja) 2018-10-24
CN103562444A (zh) 2014-02-05
AU2012230880B2 (en) 2017-04-13
EP2689053A2 (en) 2014-01-29
EA201391378A1 (ru) 2014-09-30
AU2012230880A1 (en) 2013-10-24
HK1197088A1 (en) 2015-01-02
CN103748270A (zh) 2014-04-23
EP2689053A4 (en) 2015-05-06
TW201300591A (zh) 2013-01-01
EP2688911A2 (en) 2014-01-29
BR112013024453A2 (pt) 2016-09-06
TWI630389B (zh) 2018-07-21
WO2012129457A3 (en) 2013-12-12
BR112013024454A2 (pt) 2017-09-19
AU2012230818B2 (en) 2016-12-08
AU2012230818A1 (en) 2013-10-24
EA201391382A1 (ru) 2014-09-30
US20120269799A1 (en) 2012-10-25
CL2013002732A1 (es) 2014-04-04
EP2689053B1 (en) 2018-11-14
EA037648B1 (ru) 2021-04-27
KR20140027174A (ko) 2014-03-06
CO6870002A2 (es) 2014-02-20
CO6870029A2 (es) 2014-02-20
CN103562444B (zh) 2017-08-25
MX351228B (es) 2017-09-06
MX2013010999A (es) 2014-03-27
EP2688911A4 (en) 2015-08-26
JP2014510919A (ja) 2014-05-01
US20120270741A1 (en) 2012-10-25
WO2012129423A3 (en) 2012-11-22
JP2014515739A (ja) 2014-07-03
WO2012129457A2 (en) 2012-09-27
TW201310033A (zh) 2013-03-01
CN103748270B (zh) 2018-04-24
KR20140029411A (ko) 2014-03-10
JP6153921B2 (ja) 2017-06-28
CL2013002731A1 (es) 2014-04-04
EP2688911B1 (en) 2017-08-02
US9804168B2 (en) 2017-10-31
MX2013011000A (es) 2014-03-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6153921B2 (ja) ビーズまたは粒子ベースのライブラリーを用いた液体生体試料中でのバイオマーカー発見、並びに診断キットおよび治療法
CN102159949B (zh) 多配位体捕获剂及相关组合物,方法和系统
JP2002508507A (ja) 新規な生物学的標的および創薬リード構造体の同時同定方法
US20200124618A1 (en) Combinatorial synthesis and biomarker development
Huang et al. Initiator integrated poly (dimethysiloxane)-based microarray as a tool for revealing the relationship between nonspecific interactions and irreproducibility
Doran et al. A liquid array platform for the multiplexed analysis of synthetic molecule–protein interactions
US20150377879A1 (en) Peptoids that bind specific antigens
US20120220482A1 (en) Compositions and methods for screening peptoid libraries
Hinson et al. Studies of surface preparation for the fluorosequencing of peptides
JP4616194B2 (ja) ビオチン化合物