EA031874B1

EA031874B1 - Способ лечения болезни фабри

Info

Publication number: EA031874B1
Application number: EA201301018A
Authority: EA
Inventors: Дуглас Стюарт Грин; Кеннет Джозеф Валензано
Original assignee: Амикус Терапьютикс, Инк.
Priority date: 2011-03-11
Filing date: 2012-03-08
Publication date: 2019-03-29
Also published as: AU2020201715A1; US20180153999A1; KR20140011367A; JP2020033360A; AU2022203011A1; TWI624259B; EP3698792A1; CN103974619B; AU2012229330B2; EA201301018A1; US20240115708A1; ZA201306735B; CN103974619A; SG10201604757RA; JP2021098697A; NZ615726A; US20140219986A1; TW201634048A; EP2683382A4; ES2807502T3

Abstract

Изобретение предусматривает способ лечения болезни Фабри у субъекта, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту от примерно 50 до примерно 600 мг 1-дезоксигалактоноджиримицина и эффективного количества терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal А фермента, в котором 1-дезоксигалактоноджиримицин вводят за время от примерно 2 ч до примерно 30 мин до введения терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal A фермента, при этом введение терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal А фермента следует за введением 1-дезоксигалактоноджиримицина.

Description

Настоящая заявка предусматривает способ лечения болезни Фабри с применением 1-дезоксигалактоноджиримицина и заместительной ферментной терапии.

Предпосылки

Болезнь Фабри является прогрессирующим сцепленным с Х-хромосомой врожденным нарушением обмена веществ, вызываемым дефицитом лизосомального фермента α-галактозидазы A (α-Gal А) в результате мутаций в гене α-Gal A (GLA). Несмотря на то что нарушение является связанным с Ххромосомой, у женщин могут выражаться различные степени клинических проявлений. Болезнь Фабри является редким заболеванием с числом случаев, оцениваемым от 1 на 40000 мужчин до 1 на 117000 населения в целом. Кроме того, существуют варианты фенотипа болезни Фабри с поздним началом, которые могут плохо диагностироваться, поскольку они не проявляются классическими признаками и симптомами. Это, а также изучение скрининга новорожденных на болезнь Фабри, говорит о том, что фактическая заболеваемость болезнью Фабри может быть выше, чем оценена на данный момент.

Клиническое проявление заболевания может коррелировать с остаточными уровнями α-Gal А. Без лечения ожидаемая продолжительность жизни пациентов с болезнью Фабри уменьшается, и смерть обычно наступает в 40-50 лет в связи с сосудистыми заболеваниями, поражающими почки, сердце и/или центральную нервную систему. Дефицит фермента приводит к внутриклеточному накоплению субстрата глоботриаозилцерамида (GL-3) в эндотелии сосудов и висцеральных тканях по всему телу. Постепенное ухудшение функции почек и развитие азотемии в связи с накоплением гликоспинголипида обычно происходит в 30-50 лет, но может происходить уже в 20 лет. Поражения почек обнаруживаются как у гемизиготных (мужчины), так и у гетерозиготных (женщины) пациентов.

Заболевание сердца возникает у большинства мужчин и многих женщин. Ранние сердечные нарушения включают расширение левого желудочка, поражение клапанов и нарушение проводимости. Недостаточность митрального клапана является наиболее частым поражением клапанов, обычно проявляющимся в детском или подростковом возрасте. Цереброваскулярные проявления являются, прежде всего, результатом многоочагового поражения мелких сосудов и могут включать тромбозы, преходящие нарушения мозгового кровообращения, ишемию и аневризму базилярной артерии, судороги, гемиплегию, гемианестезию, афазию, лабиринтные нарушения или внутримозговые кровоизлияния. Средний возраст начала цереброваскулярных проявлений составляет 33,8 лет. Изменение личности и психотическое поведение могут проявляться по мере увеличения возраста.

Современным утвержденным способом лечения болезни Фабри является заместительная ферментная терапия (ERT). В настоящее время для лечения болезни Фабри доступны два продукта α-Gal А: агалсидаза альфа (Replagal®, Shire Human Genetic Therapies) и агалсидаза бета (Fabrazyme®; Genzyme Corporation). Эти две формы ERT предназначены для компенсации у пациента недостаточной активности α-Gal А с помощью рекомбинантной формы фермента, вводимой внутривенно. Хотя ERT является эффективной во многих ситуациях, лечение также имеет ограничения. ERT не продемонстрировала уменьшение риска инсульта, сердечная мышца реагирует медленно, и выведение GL-3 из некоторых типов клеток почек является ограниченным. У некоторых пациентов развивается иммунная реакция на ERT.

1-дезоксигалактоноджиримицин и его соль, 1-дезоксигалактоноджиримицина гидрохлорид (также известный под названием согласно Номенклатуре лекарственных средств, принятых в США, как мигаластата гидрохлорид), действуют в качестве фармакологического шаперона для мутантного α-Gal А путем селективного связывания с ферментом, таким образом повышая его стабильность и способствуя укладке фермента в его правильную трехмерную конфигурацию. Такая стабилизация α-Gal А позволяет клеточным механизмам контроля качества распознавать фермент как правильно уложенный, вследствие чего перенос фермента к лизосоме увеличивается, позволяя ему выполнять свою заданную биологическую функцию, метаболизм GL-3. В результате восстановления правильного переноса α-Gal А из ER к лизосоме мигаластата гидрохлорид также снижает накопление неправильно свернутого белка в ER, что может облегчить нагрузку на клетки и некоторые реакции, подобные воспалению, которые могут являться факторами, способствующими болезни Фабри. Было проведено множество in vitro и in vivo доклинических исследований, а также клинические исследования мигаластата гидрохлорида. Мигаластата гидрохлорид, как было показано, увеличивает количество внутриклеточного белка α-Gal А и усиливает транспортировку мутантного фермента к лизосоме.

Краткое описание

Настоящая заявка предусматривает способ лечения болезни Фабри у субъекта, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту от примерно 50 до примерно 600 мг 1-дезоксигалактоноджиримицина и эффективного количества терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal А фер- 1 031874 мента, в котором 1-дезоксигалактоноджиримицин вводят за время от примерно 2 ч до примерно 30 мин до введения терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal A фермента, при этом введение терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal А фермента следует за введением 1дезоксигалактоноджиримицина.

В конкретном варианте осуществления пациент воздерживается от приема пищи в течение периода времени, который начинается за примерно 0,5-примерно 4 ч до введения 1-дезоксигалактоноджиримицина и заканчивается через примерно 0,5-примерно 4 ч после введения 1-дезоксигалактоноджиримицина.

В другом конкретном варианте осуществления пациент воздерживается от приема пищи в течение по меньшей мере примерно 2 ч до введения 1-дезоксигалактоноджиримицина и по меньшей мере примерно 2 ч после введения 1-дезоксигалактоноджиримицина.

В другом конкретном варианте осуществления 1-дезоксигалактоноджиримицин вводят примерно за 2 ч до введения терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal А фермента.

В другом конкретном варианте осуществления 1-дезоксигалактоноджиримицин является мигаластата гидрохлоридом.

В другом конкретном варианте осуществления терапевтическое средство для замещения недостатка α-Gal А фермента выбирают из агалсидазы альфа и агалсидазы бета.

В другом конкретном варианте осуществления 1-дезоксигалактоноджиримицин вводят в качестве вспомогательного средства для терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal А фермента.

В другом конкретном варианте осуществления 1-дезоксигалактоноджиримицин и терапевтическое средство для замещения недостатка α-Gal А фермента вводят в качестве комбинированного терапевтического средства.

В другом конкретном варианте осуществления количество вводимого 1-дезоксигалактоноджиримицина составляет от примерно 150 до примерно 450 мг.

В другом конкретном варианте осуществления количество вводимого 1-дезоксигалактоноджиримицина выбирают из примерно 150 мг, примерно 300 мг и примерно 450 мг.

В другом конкретном варианте осуществления дополнительно вводят вторую дозу 1дезоксигалактоноджиримицина в промежутке времени от момента введения терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal А фермента до примерно 4 ч после этого.

В другом конкретном варианте осуществления 1-дезоксигалактоноджиримицин и терапевтическое средство для замещения недостатка α-Gal А фермента вводят каждые 1 -4 недели.

В другом конкретном варианте осуществления 1-дезоксигалактоноджиримицин и терапевтическое средство для замещения недостатка α-Gal А фермента вводят каждые 2 недели.

Краткое описание графических материалов

На фиг. 1 показана совокупность активностей α-Gal А в плазме у пациентов, которых лечили в течение периодов 1 и 2 при помощи 0,5 или 1,0 мг/кг агалсидазы бета отдельно (период 1) или в комбинации со 150 мг мигаластата (период 2).

На фиг. 2 показаны увеличения AUC активности α-Gal А в плазме для всех пациентов после совместного введения с мигаластатом.

На фиг. 3 показаны частичные AUC для каждого времени отбора проб, которые показали повышенную активность α-Gal А в плазме при совместном введении 0,5 или 1,0 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата.

На фиг. 4A-B показано увеличение активности α-Gal А в коже у двух пациентов после совместного введения 0,5 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата.

На фиг. 5A-B показано увеличение активности α-Gal А в коже у двух пациентов после совместного введения 0,5 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата. На фиг. 5А показано увеличение активности αGal А в коже после совместного введения 0,5 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата у пациента, который получил более долгую инфузию ERT, на 40 мин в течение периода 2.

На фиг. 6A-B показано увеличение активности α-Gal А в коже у двух пациентов после совместного введения 1,0 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата.

На фиг. 7A-B показано увеличение активности α-Gal А в РВМС у двух пациентов после совместного введения 0,5 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата.

На фиг. 8A-B показано увеличение активности α-Gal А в РВМС у двух пациентов после совместного введения 0,5 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата.

На фиг. 9A-B показано увеличение активности α-Gal А в РВМС у двух пациентов после совместного введения 1,0 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата.

На фиг. 10 показана сводная таблица увеличения активности α-Gal А в плазме, коже и РВМС после совместного введения 0,5 или 1,0 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата.

На фиг. 11 показан генотип каждого исследуемого субъекта из примеров 2 и 3.

На фиг. 12 показана AUC активности α-Gal А в плазме в зависимости от лечения с помощью 1,0

- 2 031874 мг/кг агалсидазы бета и лечения с помощью комбинации 1,0 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата

HCl (с включенными средними значениями и стандартными отклонениями).

На фиг. 13 показана AUC активности α-Gal А в плазме в зависимости от лечения с помощью 0,5 мг/кг агалсидазы бета и лечения с помощью комбинации 0,5 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата HCl (с включенными средними значениями и стандартными отклонениями).

На фиг. 14 показана активность α-Gal А в коже в день 2 после лечения при помощи агалсидазы бета отдельно или в комбинации со 150 мг мигаластата HCl (с коэффициентами, полученными вычитанием исходного значения для агалсидазы бета отдельно).

На фиг. 15 показана активность α-Gal А в коже в день 7 после лечения при помощи агалсидазы бета отдельно или в комбинации со 150 мг мигаластата HCl (с коэффициентами, полученными вычитанием исходного значения для агалсидазы бета отдельно).

Подробное описание

Настоящая заявка предусматривает режим дозирования и схему введения для применения 1-дезоксигалактоноджиримицина и агалсидазы для лечения болезни Фабри.

Определения

Болезнь Фабри относится к классической болезни Фабри, болезни Фабри с поздним началом и гемизиготным женщинам с мутациями в гене, кодирующем α-галактозидазу A (α-Gal А). Термин болезнь Фабри, применяемый в данном документе, дополнительно включает любое состояние, при котором у субъекта проявляется активность эндогенной α-Gal А ниже нормальной.

Термин AUC представляет математический расчет для оценки общего воздействия заданного лекарственного средства с течением времени на организм. На графике, представляющем концентрацию в крови после введения дозы, переменная концентрации лекарственного средства находится на оси у, а время находится на оси х. Площадь между кривой концентрации лекарственного средства и осью х для заданного временного интервала является AUC. AUC применяются в качестве ориентира для схем дозирования и для сравнения доступности различных лекарственных средств в организме.

Термин Cmax представляет максимальную концентрацию в плазме, достигаемую после дозирования.

Термины терапевтически эффективная доза и эффективное количество относятся к количеству конкретного фармацевтического соединения или композиции, которое достаточно для получения полезного терапевтического ответа. Полезным терапевтическим ответом может являться любой ответ, который распознает пользователь (например, клинический врач) как эффективный ответ на терапию, включая вышеупомянутые симптомы и суррогатные клинические маркеры. Таким образом, терапевтическим ответом обычно будет ослабление одного или нескольких симптомов заболевания или расстройства, например болезни Фабри, таких как те, что известны в данной области для заболевания или расстройства, например для болезни Фабри.

Неограничивающие примеры улучшений суррогатных маркеров болезни Фабри включают увеличения уровней α-GAL или активности в клетках (например, фибробластах) и тканях; сокращения накопления GL-3, измеряемые посредством изменения в интерстициальных капиллярных биопсиях почек с применением гистологии; уменьшенные уровни GL-3 в моче; оценку почечной функции (включая скорость клубочковой фильтрации (GFR) и белок в моче за 24 ч); уменьшенные концентрации в плазме гомоцистеина и молекул адгезии сосудистого эндотелия 1 типа (VCAM-1); уменьшенное накопление GL-3 в клетках миокарда и фиброцитах клапанов; уменьшение гипертрофии сердца (особенно левого желудочка), ослабление недостаточности клапана и аритмий; ослабление протеинурии; уменьшенные концентрации липидов в моче, таких как СТН, лактозилцерамида, церамида, и увеличенные концентрации в моче глюкозилцерамида и сфингомиелина (Fuller et al., Clinical Chemistry. 2005; 51: 688-694); отсутствие слоистых телец включений (зебровидных телец) в эпителиальных клетках клубочков; улучшения почечной функции; ослабление гипогидроза; отсутствие ангиокератом и ослабления нарушений слуха, такие как высокочастотная нейросенсорная тугоухость, прогрессирующая тугоухость, внезапная глухота или звон в ушах. Ослабления неврологических симптомов включают предотвращение преходящего нарушения мозгового кровообращения (TIA) или инсульта и уменьшение нейропатической боли, проявляющейся как акропарестезия (чувство жжения или покалывания в конечностях).

Фраза фармацевтически приемлемый относится к молекулярным единицам и композициям, которые являются физиологически переносимыми и обычно не приводят к нежелательным реакциям при введении человеку. Предпочтительно применяемый в данном документе термин фармацевтически приемлемый означает одобренный регулирующим ведомством федерального правительства или правительства штата или включенный в список Фармакопеи США или другой общепризнанной фармакопеи для применения на животных и, более конкретно, на людях. Термин носитель относится к разбавителю, вспомогательному средству, наполнителю или носителю, с которым вводят соединение. Такими фармацевтическими носителями могут являться стерильные жидкости, такие как вода и масла. В качестве носителей, в частности, для инъецируемых растворов, предпочтительно используют воду или водные солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерина. Подходящие фармацевтические носители опи- 3 031874 саны в Remington's Pharmaceutical Sciences, E.W. Martin, 18th Edition или других изданиях, что включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

1-дезоксигалактоноджиримицин (DGJ) относится к (2R,3S,4R,5S)-2-(гидроксиметил)пипердин3,4,5-триолу. Применяемая в данном документе ссылка на 1-дезоксигалактоноджиримицин или DGJ повсеместно включает и свободное основание, и любые формы фармацевтически приемлемых солей того же. Хлористо-водородная соль DGJ известна как мигаластата гидрохлорид.

Термин вспомогательное средство или вспомогательная терапия относится к любому дополнительному веществу, лечению или процедуре, применяемым для повышения эффективности, безопасности или иным образом содействия или улучшения характеристик первичного вещества, способа лечения или процедуры.

Термин комбинированное терапевтическое средство относится к любому терапевтическому средству, где результаты улучшаются по сравнению с эффектом от каждого терапевтического средства, введенного отдельно. Отдельные терапевтические средства в комбинированном терапевтическом средстве могут вводиться одновременно или последовательно.

Усиление может включать любое улучшение эффекта различных терапий, что может приводить к благоприятному результату по сравнению с результатами, достигаемыми с помощью терапий, проводимых отдельно. Усиленный эффект и определение усиленного эффекта можно измерять с помощью различных параметров, таких как, но без ограничений: временные параметры (например, продолжительность лечения, время восстановления, долгосрочный эффект лечения или обратимость лечения); биологические параметры (например, число клеток, клеточный объем, строение клетки, объем ткани, размер ткани, строение ткани); пространственные параметры (например, прочность ткани, размер ткани или доступность ткани) и физиологические параметры (например, изменение очертаний тела, боль, дискомфорт, время восстановления или видимые признаки). Усиленный эффект может включать синергичное усиление, где усиленный эффект превосходит аддитивные эффекты каждой терапии, проводимой отдельно. Усиленный эффект может включать аддитивное усиление, где усиленный эффект, по существу, равен аддитивному эффекту каждой терапии, проводимой отдельно. Усиленный эффект может включать в себя меньше синергичного эффекта, где усиленный эффект ниже аддитивного эффекта каждой терапии, проводимой отдельно, но все же лучше эффекта каждой терапии, проводимой отдельно.

Термины примерно и приблизительно, в целом, должны означать приемлемую степень отклонения для измеряемой величины с учетом природы или точности измерений. Обычно примерные степени отклонения находятся в пределах 20%, предпочтительно в пределах 10% и более предпочтительно в пределах 5% от заданного значения или диапазона значений. Альтернативно и, в частности, в биологических системах термины примерно и приблизительно могут означать значения, которые находятся в пределах порядка величины, предпочтительно в пределах 5-кратного и более предпочтительно в пределах 2кратного значения от заданного. Численные величины, приведенные в данном документе, являются приблизительными, если не указано иное.

Состав и введение.

1-Дезоксигалактоноджиримицин можно вводить в виде свободного основания или в форме фармакологически приемлемой соли, включая 1-дезоксигалактоноджиримицина гидрохлорид (иначе называемый мигаластата гидрохлоридом). Его можно вводить в форме, подходящей для любого пути введения, включая, например, перорально в форме таблеток, капсул или жидкости или в форме стерильного водного раствора для инъекций. Его можно вводить перорально в форме таблеток, капсул, влагалищных овул, эликсиров, растворов или суспензий, гелей, сиропов, жидкостей для полоскания рта или сухого порошка для смешивания с водой или другим подходящим носителем перед использованием, необязательно с вкусовыми добавками и красителями, для применений с немедленным, замедленным, измененным, пролонгированным, прерывистым или контролируемым высвобождением. Также можно применять твердые композиции, такие как таблетки, капсулы, леденцы, пастилки, драже, болюсы, порошки, пасты, гранулы, пилюли или препараты предварительно приготовленных смесей. Твердые и жидкие композиции для перорального применения можно получить в соответствии со способами, хорошо известными в данной области. Такие композиции могут также содержать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей и наполнителей, которые могут находиться в твердой или жидкой форме. Если соединение составляется для перорального введения, таблетки или капсулы можно получить обычными способами с фармацевтически приемлемыми наполнителями, такими как связующие средства (например, прежелатинизированный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза); заполнители (например, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза или гидроортофосфат кальция); смазывающие вещества (например, стеарат магния, тальк или диоксид кремния); разрыхлители (например, картофельный крахмал или натрия крахмалгликолат); или увлажняющие средства (например, лаурилсульфат натрия). Таблетки можно покрывать с помощью способов, хорошо известных в данной области.

Фармацевтически приемлемые наполнители также включают без ограничения микрокристаллическую целлюлозу, лактозу, цитрат натрия, карбонат кальция, двухосновный фосфат кальция и глицин, разрыхлители, такие как крахмал (предпочтительно кукурузный, картофельный или тапиоковый крахмал), натрия крахмалгликолат, кроскармеллоза натрия и определенные комплексные силикаты, и грану- 4 031874 лирующие связующие, такие как поливинилпирролидон, гидроксипропилэтилцеллюлоза (НРМС), гидроксипропилцеллюлоза (НРС), сахароза, желатин и аравийская камедь. Дополнительно, могут быть включены смазывающие средства, такие как стеарат магния, стеариновая кислота, глицерилбегенат и тальк.

В конкретном варианте осуществления составляют смесь из мигаластата гидрохлорида, стеарата магния и прежелатинизированного крахмала в белой твердой желатиновой капсуле. В другом варианте осуществления твердая лекарственная форма содержит примерно 75-80% мигаластата гидрохлорида, примерно 0,1-2% стеарата магния и примерно 20-25% прежелатинизированного крахмала. В другом конкретном варианте осуществления капсула содержит примерно 76,5% мигаластата гидрохлорида, примерно 0,5% стеарата магния и примерно 23% прежелатинизированного крахмала.

Заместительная ферментная терапия.

Утвержденным в настоящее время лечением болезни Фабри является заместительная ферментная терапия. Для лечения болезни Фабри в настоящее время доступны два продукта: агалсидаза альфа (Replagal®, Shire Human Genetic Therapies) и агалсидаза бета (Fabrazyme®; Genzyme Corporation), которые продаются по всему миру. Эти две формы ERT предназначены для компенсации у пациента недостаточной активности a-Gal А с помощью рекомбинантной формы фермента, вводимой внутривенно. Было продемонстрировано, что ERT уменьшает накопление GL-3 в эндотелии капилляров почек и определенных других типах клеток. Хотя ERT является эффективной во многих ситуациях, лечение также имеет ограничения. ERT не продемонстрировала уменьшение риска инсульта, сердечная мышца реагирует медленно, и выведение GL-3 из некоторых типов клеток почек является ограниченным. У некоторых пациентов развивается иммунная реакция на ERT.

Рекомендуемая дозировка агалсидазы альфа составляет 0,2 мг/кг массы тела, что вводят инфузией каждые 2 недели в виде внутривенной инфузии. 10-Недельное исследование провели на взрослых пациентах с болезнью Фабри, ранее не подверженных ERT, для оценки фармакокинетики и фармакодинамики агалсидазы альфа. Средний период полувыведения после введения доз в диапазоне от 0,1 до 0,4 мг/кг агалсидазы альфа составлял 56-76 мин без существенной взаимосвязи между дозой и периодом полувыведения, клиренсом или объемом распределения. AUC являлась линейно пропорциональной дозе в данном диапазоне доз. Уровни GL-3 в плазме снизились в группах со всеми дозами приблизительно на 50%; данное снижение не зависело от дозы и частоты дозирования. Во время исследования двое из 18 пациентов стали IgG-позитивными. Во время исследования ни у одного пациента не обнаружили антитела IgE.

Рекомендуемая дозировка агалсидазы бета составляет 1 мг/кг массы тела, что вводят каждые 2 недели в виде внутривенной инфузии. Производитель агалсидазы бета сообщает о дефиците лекарственного средства, при этом в случае болезни Фабри в США одобрена только ERT. Вследствие этого агалсидаза бета в настоящее время нормирована, и пациенты обычно получают уменьшенную дозу фермента и/или имеют увеличенный интервал дозирования (т.е. больше 2 недель между дозами). Агалсидаза бета показывает нелинейную фармакокинетику с увеличивающимися значениями экспозиции (AUC) и уменьшающимся клиренсом непропорционально с увеличением дозы. Значения AUC увеличивались приблизительно в 6 раз и в 8 раз при увеличении дозы от 0,3 до 1 мг/кг и от 1 до 3 мг/кг соответственно. Период полувыведения агалсидазы бета у взрослых пациентов после применения доз, изменяющихся от 0,3 до 3 мг/кг, зависел от дозы и изменялся от 45 до 100 мин.

Антитела IgG к агалсидазе бета появлялись у 79% взрослых пациентов и 69% педиатрических пациентов, получавших лечение агалсидазой в клинических исследованиях; при этом у большинства пациентов, у которых появлялись антитела IgG, это происходило в течение первых 3 месяцев воздействия. Пациенты мужского пола, особенно с низкими остаточными уровнями α-Gal А, были более склонны к появлению антител IgG, чем пациенты мужского пола с более высокими остаточными уровнями или пациенты женского пола. Сероконверсия IgG у педиатрических пациентов была связана с пролонгированным периодом полувыведения агалсидазы. Однако у взрослых пациентов идентичные фармакокинетические профили агалсидазы наблюдали до и после сероконверсии в одном испытании; в другом испытании максимальные концентрации агалсидазы и значения AUC уменьшались до 26% от исходных значений у пациентов с наивысшими титрами IgG. Наличие антител IgG к агалсидазе, как сообщалось, снижает активность фермента.

Мигаластата гидрохлорид стабилизирует in vitro α-Gal А дикого типа, а также in vivo. In vitro было продемонстрировано, что связывание мигаластата гидрохлорида с rha-Gal А приводит к значительному зависимому от времени и концентрации увеличению стабилизации rha-Gal А при нейтральном pH, как измерили с помощью тепловой денатурации и по активности. В буфере с нейтральным pH rha-Gal А показал потерю активности с периодом полувыведения приблизительно 3 ч; совместное инкубирование с мигаластата гидрохлоридом увеличило период полувыведения ввиду потери активности rha-Gal А до приблизительно 40 ч.

У крыс пероральное введение 3 мг/кг мигаластата гидрохлорида с последующей инъекцией спустя 30 мин 10 мг/кг агалсидазы бета привело к 2,6-кратному увеличению периода полувыведения rha-Gal А из плазмы и 2,5- и 1,5-кратному увеличению уровней a-Gal А в плазме через 60 и 240 мин соответственно. У мышей с дефицитом GLA пероральное введение доз 30, 100 или 300 мг/кг мигаластата гидрохло- 5 031874 рида за 30 мин до и через 2 ч после инъекции rha-Gal А привело к дозозависимому увеличению уровней α-Gal А в тканях и дозозависимому снижению уровней GL-3 в коже, сердце, почках и плазме по сравнению с введением только rha-Gal A.

Мигаластата гидрохлорид, как было показано, стабилизирует агалсидазу альфа как in vitro, так и in vivo. Эффект мигаластата гидрохлорида на физическую стабильность агалсидазы альфа оценивали с помощью in vitro анализа тепловой денатурации. С применением данного анализа агалсидаза альфа показала температуру плавления (Tm) приблизительно 51°C при pH 7,4. Однако при включении в реакцию денатурации 10 мкМ мигаластата гидрохлорида Tm агалсидазы альфа существенно увеличилась до 59°C. Как и ожидалось для лизосомального фермента, агалсидаза альфа была более стабильной при низком pH (Tm 58°C при pH 5,2) и проявляла дополнительную устойчивость к тепловой денатурации в присутствии 10 мкМ мигаластата гидрохлорида (Tm 68°C). Эти данные показывают, что связывание мигаластата гидрохлорида придает агалсидазе альфа высокий уровень физической стабильности.

Также исследовали эффект мигаластата гидрохлорида на скорость клиренса агалсидазы альфа из крови самцов крыс Sprague-Dawley. Животные получали носитель (воду) или однократное пероральное введение через зонд 1, 3, 10 или 30 мг/кг мигаластата гидрохлорида, а затем через 30 мин внутривенное введение 0,2 мг/кг агалсидазы альфа с помощью внутривенной болюсной инъекции в хвостовую вену. Кровь собирали в зависимости от времени и измеряли активность α-Gal А в плазме. При отсутствии мигаластата гидрохлорида активность α-Gal А быстро снижалась; предварительное введение мигаластата гидрохлорида приводило к дозозависимому увеличению периода полувыведения агалсидазы альфа (как измерили по активности α-Gal A) приблизительно в 2 раза и 3 раза после введения 3 и 30 мг/кг мигаластата гидрохлорида соответственно с приблизительно 2,5- и 1,5-кратным увеличением уровней α-Gal А в плазме через 60 и 240 мин соответственно. Эффект мигаластата гидрохлорида на агалсидазу альфа как in vitro, так и in vivo сопоставим с наблюдаемым эффектом мигаластата гидрохлорида на агалсидазу бета.

Предварительное исследование на мышах с дефицитом GLA проводили с оценкой безопасности совместно вводимых мигаластата гидрохлорида и Fabrazyme®. Мигаластата гидрохлорид вводили три раза в неделю в течение четырех недель при дозах 3 и 30 мг/кг в комбинации с Fabrazyme®, вводимым внутривенно один раз в неделю при дозе 1 мг/кг. По видимому, нет никаких прямых, связанных с лекарственными средствами изменений в выживаемости, клиническом состоянии или гематологии и показателях клинической химии, наблюдаемых у самцов мышей с дефицитом GLA при совместном введении мигаластата гидрохлорида и Fabrazyme®.

Примеры

Пример 1. Режим дозирования для лечения болезни Фабри с применением мигаластата гидрохлорида и агалсидазы.

Одной целью исследования является оценка безопасности, эффективности и фармакодинамики режимов дозирования, включающих совместное введение мигаластата гидрохлорида и агалсидазы у пациентов с болезнью Фабри.

Другой целью исследования является оценка эффектов доз мигаластата гидрохлорида в 150 и 450 мг на распределение α-Gal А. Оно будет оцениваться путем измерения распределения агалсидазы в коже после введения дозы агалсидазы отдельно и агалсидазы в комбинации с мигаластата гидрохлоридом через 24 ч и 7 дней после введения дозы, путем измерения уровней α-Gal А и уровней белка.

Другие измерения, которые будут оцениваться, представляют собой:

выделение GL-3 с мочой перед каждой дозой агалсидазы и через 14 дней после нее;

GL-3 в коже после введения дозы агалсидазы отдельно и агалсидазы в комбинации с мигаластата гидрохлоридом через 24 ч и 7 дней после введения дозы;

уровни фермента α-Gal А в WBC, определяемые перед началом инфузии агалсидазы и через 2, 4 и 24 ч, и 7 и 14 дней после введения дозы;

титр антител (IgG) до начала инфузии агалсидазы;

концентрации глоботриаозилсфингозина (lyso-GB3) в плазме и выделение lyso-GB3 с мочой перед каждой дозой агалсидазы и через 14 дней после каждой дозы агалсидазы.

Все измерения уровней фермента α-Gal А в плазме, WBC и коже проводят с захватом конканавалина A (Con А) и без него, и определение уровней белка осуществляют с помощью вестерн-блоттинга.

Дизайн исследования.

Это фаза 2 клинического, двухэтапного, открытого исследования для оценки безопасности и эффективности совместного введения мигаластата гидрохлорида и агалсидазы. Исследование проведут на субъектах мужского пола от 18 до 65 лет, которые получали стабильные дозы (0,3-1,0 мг/кг) агалсидазы бета (Fabrazyme®) или (>0,2 мг/кг) агалсидазы альфа (Replagal®) по меньшей мере за один месяц до начала исследования. Будут включены приблизительно 18 субъектов.

Данное открытое исследование будет состоять из двух этапов. Этап 1 будет состоять из скрининга и исследования с тремя периодами для оценки эффекта 150 мг мигаластата гидрохлорида на фармакокинетику и безопасность агалсидазы и эффекта агалсидазы на фармакокинетику и безопасность 150 мг мигаластата гидрохлорида. Этап 2 будет состоять из скрининга и исследования с двумя периодами для оцен- 6 031874 ки эффекта 450 мг мигаластата гидрохлорида на фармакокинетику и безопасность агалсидазы. На этапе 2 эффект агалсидазы на фармакокинетику и безопасность дозы 450 мг мигаластата гидрохлорида оценивать не будут. Содержание мигаластата гидрохлорида в плазме при введении мигаластата гидрохлорида с агалсидазой будут определять исключительно для подтверждения достижения адекватных концентраций мигаластата гидрохлорид в плазме.

Каждый субъект получит каждый из следующих видов лечения в описанном ниже порядке. Этап 1 будет состоять из следующих периодов:

Период 1: агалсидаза отдельно в виде внутривенной инфузии.

Период 2: пероральная доза 150 мг мигаластата гидрохлорида за два часа до начала внутривенной инфузии агалсидазы.

Период 3: пероральная доза 150 мг мигаластата гидрохлорида. Доза агалсидазы, вводимая в периоды 1 и 2, будет идентичной. Агалсидазу альфа будут вводить в виде 40-минутной внутривенной инфузии, а агалсидазу бета будут вводить в виде 2-часовой внутривенной инфузии.

Что касается периода 1, перед следующей запланированной инфузией агалсидазы у субъектов произведут следующие оценки: оценку побочных явлений, прием дополнительных лекарственных средств, врачебное обследование, измерение веса, показатели жизненно важных функций, ЭКГ в 12 отведениях, клинические лабораторные исследования (биохимический анализ сыворотки, гематологический анализ и общий анализ мочи), биопсию кожи (пункционную биопсию для измерения уровней фермента α-Gal А; если будет доступен соответствующий образец, также определят GL-3 в коже).

Утром в день 1 соберут мочу для определения GL-3 и lyso-GB3 в моче, а затем введут текущую дозу агалсидазы для субъекта, которая дается в виде инфузии с применением инфузионного насоса. Пробы крови для фармакокинетического и фармакодинамического анализа отберут непосредственно перед началом инфузии агалсидазы и в течение 24-часового периода после начала инфузии агалсидазы. Уровни фермента α-Gal А в плазме и WBC, lyso-GB3 в плазме и титр антител в плазме определят в собранных пробах крови для периодов времени, приведенных в табл. 2 для агалсидазы бета и в табл. 4 для агалсидазы альфа. ЭКГ в 12 отведениях проведут в конце инфузии агалсидазы, сразу же после отбора после инфузионной пробы крови.

В день 2 через 24 ч после начала инфузии предыдущего дня отберут пункционную биопсию кожи, в которой определят уровни фермента α-Gal А; если будет доступен соответствующий образец, также определят GL-3 в коже. После отбора последней фармакокинетической пробы произведут следующие оценки: оценку побочных явлений, прием дополнительных лекарственных средств, врачебное обследование, измерение веса, показатели жизненно важных функций, а также клинические лабораторные исследования (биохимический анализ сыворотки, гематологический анализ и общий анализ мочи).

В день 7 у субъектов произведут следующие оценки: врачебное обследование, оценку основных физиологических показателей, прием дополнительных лекарственных средств и оценку побочных явлений. Отберут биопсию кожи, в которой определят уровни фермента α-Gal А; если будет доступен соответствующий образец, также определят GL-3 в коже. Также отберут пробу крови для определения уровней фермента α-Gal А в плазме и WBC. В день 14 отберут пробу мочи для определения выделения GL-3 и lyso-GB3 с мочой. Также отберут пробу крови для определения уровней фермента α-Gal А в плазме и WBC, и оценят показатели жизненно важных функций.

Что касается периода 2, перед следующей запланированной инфузией агалсидазы у субъектов произведут следующие оценки: оценку побочных явлений, прием дополнительных лекарственных средств, врачебное обследование, измерение веса, показатели жизненно важных функций, ЭКГ в 12 отведениях, клинические лабораторные исследования (биохимический анализ сыворотки, гематологический анализ и общий анализ мочи).

Утром в день 1 соберут мочу для определения GL-3 и lyso-GB3 в моче, а затем введут пероральную дозу 150 мг мигаластата гидрохлорида за 2 ч до запланированной инфузии агалсидазы. Субъекты будут воздерживаться от приема пищи по меньшей мере в течение 2 ч перед и 2 ч после введения мигаластата гидрохлорида. В периоде 2 каждый субъект получит дозу агалсидазы, идентичную вводимой в периоде 1, в виде инфузии с применением инфузионного насоса. Инфузию агалсидазы начнут через 2 ч после введения дозы мигаластата гидрохлорида.

Пробы крови для фармакокинетического и фармакодинамического анализа отберут перед введением дозы мигаластата гидрохлорида и через 1 ч после введения мигаластата гидрохлорида. Дополнительные пробы крови отберут непосредственно перед началом инфузии агалсидазы и в течение 24-часового периода после начала инфузии агалсидазы. Уровни фермента α-Gal А в плазме и WBC, lyso-GB3 в плазме и титр антител в плазме определят в собранных пробах крови для периодов времени, приведенных в табл. 2 для агалсидазы бета и в табл. 4 для агалсидазы альфа. ЭКГ в 12 отведениях проведут в конце инфузии агалсидазы, сразу же после отбора после инфузионных проб крови.

В день 2 через 24 ч после начала инфузии предыдущего дня отберут пункционную биопсию кожи, в которой определят уровни фермента α-Gal А; если будет доступен соответствующий образец, также определят GL-3 в коже. После отбора последней фармакокинетической пробы произведут следующие

- 7 031874 оценки: оценку побочных явлений, прием дополнительных лекарственных средств, врачебное обследование, измерение веса, показатели жизненно важных функций, а также клинические лабораторные исследования (биохимический анализ сыворотки, гематологический анализ и общий анализ мочи).

В день 7 у субъектов произведут следующие оценки: врачебное обследование, оценку основных физиологических показателей, прием дополнительных лекарственных средств и оценку побочных явлений. Отберут биопсию кожи, в которой определят уровни фермента α-Gal А; если будет доступен соответствующий образец, также определят GL-3 в коже. Также отберут пробу крови для определения уровней фермента α-Gal А в плазме и WBC.

В день 14 отберут пробу мочи для определения выделения GL-3 и lyso-GB3 с мочой. Также отберут пробу крови для определения уровней фермента α-Gal А в плазме и WBC, и оценят показатели жизненно важных функций.

После завершения всех оценок после периода 2 у субъектов начинается период 3. Все субъекты получат следующую инфузию агалсидазы в день 1 исходя из их обычной схемы дозирования. В день 6 у всех субъектов произведут следующие оценки: оценку побочных явлений, прием дополнительных лекарственных средств, врачебное обследование, измерение веса, показатели жизненно важных функций, ЭКГ в 12 отведениях, а также клинические лабораторные исследования (биохимический анализ сыворотки, гематологический анализ и общий анализ мочи).

В день 7 введут пероральную дозу 150 мг мигаластата гидрохлорида. Субъекты будут воздерживаться от приема пищи по меньшей мере в течение 2 ч перед и 2 ч после введения мигаластата гидрохлорида. Пробы крови отберут перед введением дозы и в течение 24-часового периода после введения мигаластата гидрохлорида. Концентрации мигаластата гидрохлорида измерят во всех пробах плазмы (см. время отбора проб в табл. 2 для агалсидазы бета и в табл. 4 для субъектов, получающих агалсидазу альфа).

В день 8 после отбора последней фармакокинетической пробы произведут следующие оценки: оценку побочных явлений, прием дополнительных лекарственных средств, врачебное обследование, основные жизненно важные функции, а также клинические лабораторные исследования (биохимический анализ сыворотки, гематологический анализ и общий анализ мочи).

Наблюдение после периода 3 будет осуществляться путем телефонного контакта 28 дней после периода 3. Произведут следующие оценки: прием дополнительных лекарственных средств и побочные явления.

Что касается этапа 2, каждый субъект получит каждый из следующих видов лечения в описанном ниже порядке:

Период 1: агалсидаза отдельно в виде инфузии.

Период 2: пероральная доза 450 мг мигаластата гидрохлорида за два часа до начала внутривенной инфузии агалсидазы.

Доза агалсидазы, вводимая в периоды 1 и 2, будет идентичной. Агалсидазу альфа будут вводить в виде 40-минутной внутривенной инфузии, а агалсидазу бета будут вводить в виде 2-часовой внутривенной инфузии.

Что касается периода 1, у субъектов, отвечающих всем критериям отбора, перед следующей запланированной инфузией агалсидазы произведут следующие оценки: оценку побочных явлений, прием дополнительных лекарственных средств, врачебное обследование, измерение веса, показатели жизненно важных функций, ЭКГ в 12 отведениях, клинические лабораторные исследования (биохимический анализ сыворотки, гематологический анализ и общий анализ мочи), биопсию кожи (пункционная биопсия для измерения уровней фермента α-Gal А; если будет доступен соответствующий образец, также определят GL-3 в коже).

Утром в день 1 соберут мочу для определения GL-3 и lyso-GB3 в моче, а затем введут текущую дозу агалсидазы для субъекта, которая дается в виде инфузии с применением инфузионного насоса. Пробы крови для фармакокинетического и фармакодинамического анализа отберут непосредственно перед началом инфузии агалсидазы и в течение 24-часового периода после начала инфузии агалсидазы. Уровни фермента α-Gal А в плазме и WBC, lyso-GB3 в плазме и титр антител в плазме определят в собранных пробах крови для периодов времени, приведенных в табл. 3 для агалсидазы бета и в табл. 5 для агалсидазы альфа. ЭКГ в 12 отведениях проведут в конце инфузии агалсидазы, сразу же после отбора после инфузионной пробы крови.

В день 7 у субъектов произведут следующие оценки: показатели жизненно важных функций, прием дополнительных лекарственных средств и оценку побочных явлений. Отберут биопсию кожи, в которой

- 8 031874 определят уровни фермента α-Gal А; если будет доступен соответствующий образец, также определят

GL-3 в коже. Также отберут пробу крови для определения уровня фермента α-Gal А в плазме и WBC.

В день 14 произведут отбор пробы мочи для определения выделения GL-3 и lyso-GB3 с мочой.

Также отберут пробу крови для определения уровней фермента α-Gal А в плазме и WBC, и оценят показатели жизненно важных функций.

Утром в день 1, соберут мочу для определения GL-3 и lyso-GB3 в моче, а затем введут пероральную дозу 450 мг мигаластата гидрохлорида за 2 ч до запланированной инфузии агалсидазы. Субъекты будут воздерживаться от приема пищи по меньшей мере в течение 2 ч перед и 2 ч после введения мигаластата гидрохлорида. В периоде 2 каждый субъект получит дозу агалсидазы, идентичную вводимой в периоде 1, в виде инфузии с применением инфузионного насоса. Инфузию агалсидазы начнут через 2 ч после введения дозы мигаластата гидрохлорида.

Пробы крови для фармакокинетического и фармакодинамического анализа отберут перед введением дозы мигаластата гидрохлорида и через 1 ч после введения мигаластата гидрохлорида. Дополнительные пробы крови отберут непосредственно перед началом инфузии агалсидазы и в течение 24-часового периода после начала инфузии агалсидазы. Уровни фермента α-Gal А в плазме и WBC, lyso-GB3 в плазме и титр антител в плазме определят в собранных пробах крови для периодов времени, приведенных в табл. 3 для агалсидазы бета и в табл. 5 для агалсидазы альфа. ЭКГ в 12 отведениях проведут в конце инфузии агалсидазы, сразу же после отбора после инфузионной пробы крови.

В день 7 у субъектов произведут следующие оценки: показатели жизненно важных функций, прием дополнительных лекарственных препаратов и оценку побочных явлений. Отберут биопсию кожи, в которой определят уровни фермента α-Gal А. Также отберут пробу крови для измерения уровня фермента α-Gal A в плазме и WBC.

В день 14 произведут отбор пробы мочи для определения выделения GL-3 и lyso-GB3 с мочой. Также отберут пробу крови для определения уровня фермента α-Gal А в плазме и WBC, и оценят показатели жизненно важных функций.

Последующее наблюдение составит 28 дней после периода 2. Произведут следующие оценки: прием дополнительных лекарственных средств и побочные явления.

Схемы оценок и отбора проб.

В табл. 1 показана схема оценок на этапах 1 и 2. Время отбора проб и анализируемые образцы для совместного введения мигаластата гидрохлорида с Fabrazyme® приведены в табл. 2 и 3. Время отбора проб и анализируемые образцы для совместного введения мигаластата гидрохлорида с Replagal® приведены в табл. 4 и 5.

- 9 031874

Таблица 1

Схема оценок (этапы 1 и 2)

Действие Информированное согласие История болезни и демографические данные	Скрининг В течение 28 дней после отбора X X	Пе День -1	риод 1 и День 1	2 (эта День 2	ты 11 День 7	2) День 14	Пер\| День 1	иод 3 ( эта г День 6	только ia 1) День 7	' ДЛЯ День 8	Последующе е наблюдение (этапы 1 и 2) Телефонный контакт
Врачебное обследование	X	X		X	X			X		X
ЭКГ (в 12 отведениях)	X	X	X					X	X
Показатели жизненно важных функций⁶	X	X	X	X	X	X		X	X	X
Г ематологический анализ	X	X		X				X		X
Общий анализ мочи	X	X		X				X		X
Биохимический анализ сыворотки	X	X		X				X		X
Данные о приеме дополнительных лекарственных препаратов	X	X	X	X	X	X	X		X	X	X
eGFR	X
GL-3/LysoGB3 в моче		X				X
Процедура регистрации		X						X
Доза лекарственного средства			X¹				X²		X³
РК отбор проб крови⁴			X	X	X	X			X	X
Биопсия кожи⁴		х⁶		X	X
Отбор WBC			X	X	X	X
Титр антител⁴			X
Побочные явления		X	X	X	X	X		X	X	X	X

¹ - вводимые лекарственные средства: агалсидаза (периоды 1 и 2), мигаластата Ж^период 2);

² - амбулаторное введение Fabrazyme® или Replagal®;

³ - вводимое лекарственное средство: мигаластата HCl;

⁴ - время отбора проб и анализируемые образцы приведены в табл. 2 и 3 для Fabrazyme® (агалсидаза бета) и в табл. 4 и 5 для Replagal® (агалсидаза альфа);

⁵ - только для периода 1;

⁶ - показатели жизненно важных функций включают температуру, артериальное давление, частоту сердечных сокращений и дыхания.

Таблица 2

FABRAZYME (агалсидаза бета) - этап 1: отбор крови, мочи и кожи.

Моменты времени и анализ проб.

Период 1 Схема отбора ___________После начала инфузии Fabrazyme ® (ч)___________ День

Отобранная проба 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 4 5 6 7 8 12 24 7 14

Кровь

X

Кожа

X

Моча

X

Инфузия Fabrazyme®

Анализ проб ^Плюма|^‘ I^х! ^ΧΓΙΊ^ΧΙ^ΧΙ^х! ^ΧΓΙ^ΧΓΙΊ^ΧΙ^Х114^х

- 10 031874

Антитело

X

α-Gal А в WBC

X

Lyso-GB3

X

Кожа

α-Gal А’

X

Моча

GL-3

X

Lyso-GB3

X

Период 2	После мигал астата на	Схема отбора
После начала инфузии Fabrazyme ® (ч)	День
Отобранная проба	0 1 0 0,5	1 1,5 2 2,5 3 4 5 6 7 8 10 12 24	7 14

Кровь

х | х

X

Кожа

X

Моча

X 1

Введение мигаластата X HCl

Инфузия Fabrazyme ® (стрелка)

После дозы мигаластата HCI

Отобранная проба 01 2 3 4 5 6 7 810 12 24

Кровь

X

Кожа

Моча

Введение мигаластата HCI

	Анализ п	роб
\|Плазма	Мигаластата \| _{х х х х х}	Х Х Х Х Х Х Х

Если будет доступен соответствующий образец, также измерят GL-3 в коже

Таблица 3

FABRAZYME (агалсидаза бета) - этап 2 - отбор крови, мочи и кожи. Моменты времени и анализ проб.

Схема отбора

Период 1 ___________После начала инфузии Fabrazyme ® (ч)__________

Отобранная проба 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 4 5 6 7 8 12 24

Кровь

X

Кожа

X

Моча

X

Инфузия Fabrazyme®

Анализ проб

Плазма

б-Gal А в плазме

X

Антитело

X

б-Gal А в WBC

X

Lyso-GB3

X

Кожа

б-Gal А’

X

Моча

GL-3

X

Lyso-GB3

X

Период 2

После мигаластата HCI

Схема отбора

После начала инфузии Fabrazyme ® (ч)

0,5 1 1,5 2 2,5 3 4 5 6 7 8 10 12 24

День

14

Отобранная θ

Кровь

X

х | х

X

Кожа

X

Моча

X

Введение мигаластата X HCI

Инфузия

Fabrazyme ® (стрелка)

Анализ проб

Плазма

б-Gal А в плазме

X

Мигал аста та НО

X

Антитело

X

б-Gal А в WBC

X

Lyso-GB3

X

Кожа

б-Gal А'

X

Моча

GL-3

X

Lyso-GB3

X

- 11 031874

Таблица 4

REPLAGAL (агалсидаза альфа) - этап 1: отбор крови, мочи и кожи. Моменты времени и анализ проб.

Схема отбора

Период 1

После начала инфузии Replagal® (ч)

День

12 24

Отобранная _Q πηηηα ’ ’

I Кровь	X	х \| х \|х\|х\|х\|х\|х\|х\|х	X	X 1 X 1 X 1
1 Кожа	X	Ί 1 J		1 1 х 1

I Моча Инфузия Replagal®

Анализ проб

Плазма

б-Gal А в плазме

X

Антитело

X

б-Gal А в WBC

X

Lyso-GB3

X

Кожа

б-Gal А*

X

Моча

GL-3

X

Lyso-GB3

X

Период 2

Схема отбора

После начала инфузии Replagal® (ч)

6 7 8 10 12 24

День

0,33 0,66 1 1,5

После мигаластата НС1 Отобранна θ я проба

Кровь

X

Кожа

X

Моча

X

Введение мигаласта та НС1 Инфузия Replagal® (стрелка)

Анализ проб

Плазма

б-Gal А в плазме

X

Мигаластата НС1

X

Антитело

X

б-Gal А в WBC

X

Lyso-GB3

X

Кожа

б-Gal А’

X

Моча

GL-3

X

Lyso-GB3

X

Период 3

Схема отбора )анная проба

После дозы мигаластата НС1___________

10 12 24

Кровь

X

Кожа

Моча

Анализ проб

Введение мигаластата HCl X | Плазма | Мигаластата НС1 |х|х|х|х|х|х|х|х|х|х|х[х|

Если будет доступен соответствующий образец, также измеряют GL-3 в коже

- 12 031874

4 5

Таблица 5

REPLAGAL (агалсидаза альфа) - этап 2: отбор крови, мочи и кожи. Моменты времени и анализ проб.

Период 1 Схема отбора ________________После начала инфузии Replagal® (ч)_______________

Отобранная 1 1 S 2 3 4 S 6 7 8 12 24 проба , , ’

Кровь

X

Кожа

X

Моча

X

—

Replagal®

Анализ ш

Плазма

б-Gal А в плазме

X

Антитело

X

б-Gal А в WBC

X

Lyso-GB3

X

Кожа

б-Gal А’

X

Моча

GL-3

X

Lyso-GB3

X

Период 2

Схема отбора

Отобранная проба

После мигаластата

НС1 ________После начала инфузии Replagal® (ч)________

1 0 0,33 0,66 1 1,5 2 3 4 5 6 7 8 10 12 24

Кровь

X

Кожа

X

Моча

X

Введение мигаластата X

НС1

Инфузия

Fabrazyme® (стрелка)

Дни

Анализ проб

Плазма

б-Gal А в плазме

X

Мигаластата НС1

X

Антитело

X

б-Gal А в WBC

X

Lyso-GB3

X

Кожа

б-Gal А’

X

Моча

GL-3

X

Lyso-GB3

X

*Если будет доступен соответствующий образец, также измеряют GL-3 в коже

Фармакокинетика мигаластата HCl и rha-Gal A.

Концентрации мигаластата HCl в пробах крови измерят в плазме с применением провалидированного анализа LC- MS/MS. Уровни α-Gal А в плазме определят с помощью провалидированного анализа, измеряющего активность фермента с использованием 4-MUG с конканавалином A (Con А) и без него. Уровни белка α-Gal А измерят с помощью вестерн-блоттинга с применением антитела к Gal А человека.

Уровни фермента α-Gal А в коже.

Уровни фермента α-Gal A исследуют в образцах биопсии кожи. Биопсии кожи будут получать с применением пункционного устройства. При каждом визите будут извлекать по одному фрагменту. Уровни α-Gal А в коже определяют с помощью провалидированного анализа, измеряющего активность фермента с использованием 4-MUG с конканавалинома A (Con А) и без него. Уровни белка α-Gal А измерят с помощью вестерн-блоттинга с применением антитела к Gal А человека.

Уровни α-Gal А в WBC.

Уровни α-Gal А в WBC определят в пробах крови с помощью провалидированного анализа, измеряющего активность фермента с использованием 4-MUG с конканавалином A (Con А) и без него. Уровни белка α-Gal А измерят с помощью вестерн-блоттинга с применением антитела к Gal A человека.

Lyso-GB3 в плазме.

Измерения lyso-GB3 в плазме осуществят на основе эксплоративного подхода для получения данных у пациентов, получающих только ERT и ERT с совместным введением мигаластата гидрохлорида. Концентрации lyso-GB3 измерят в плазме с применением провалидированного анализа.

GL-3 и Lyso-GB3 в моче.

Пробу первой утренней мочи отберут у каждого субъекта для анализа на выделение GL-3 и lysoGB3 с мочой в день 1 и день 14 периодов 1 и 2. Субъекты собирают мочу утром в дни 1 и 14. GL-3 в моче и Lyso-GB3 в моче будут выражаться как функция от концентрации креатинина в моче.

Титр антител.

Отберут пробы крови и измерят титры антител IgG в каждой пробе крови.

Параметры безопасности.

Параметры безопасности оценят с помощью рассмотрения изменений в данных медицинского ос- 13 031874 мотра, показателей жизненно важных функций, изменений на ЭКГ с течением времени, клинических лабораторных анализов и побочных явлений.

Показатели жизненно важных функций, вес и рост.

При скрининге и регистрации будут измеряться температура тела и дыхание. Для контроля безопасности температура тела, дыхание, давление крови в положении сидя и частота сердечных сокращений будут измеряться перед введением дозы и приблизительно через 1, 2, 3, 4 и 6 ч после введения агалсидазы (период 1) или мигаластата гидрохлорида (периоды 2 и 3) в дни 2, 7 и 14. Если время контроля показателей жизненно важных функций совпадет с забором крови, забор крови будет обладать приоритетом, и соответствующим образом корректируют контроль показателей жизненно важных функций.

Контроль ЭКГ.

Контроль ЭКГ будет осуществляться с помощью стандартной ЭКГ в 12 отведениях.

Клинические лабораторные исследования.

Пробы крови для клинических лабораторных исследований (гематологический анализ, биохимический анализ сыворотки) и общий анализ мочи отберут при каждом визите и проанализируют в центральной лаборатории. Гематологические исследования включают исследования общего гемоглобина, гематокрита, количества эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов и лейкоцитарную формулу.

Коагуляция (только скрининг) включает INR и аРТТ.

Биохимический анализ сыворотки включает измерение AST, ALT, щелочной фосфатазы, общего билирубина, креатинина, мочевины, глюкозы, кальция, натрия, калия, магния, общего белка, альбумина, бикарбоната, LDH, азота мочевины крови, хлорида и фосфата. Измерения сывороточного креатинина произведут с использованием реагентов, которые были откалиброваны с помощью референс-метода масс-спектрометрии с изотопным разбавлением (IDMS).

Общий анализ мочи включает определение цвета, внешнего вида, удельного веса, pH, белка, глюкозы, кетонов, крови, лейкоцитарной эстеразы, нитритов, билирубина, уробилиногена, а также микроско пию осадка.

Фармакокинетические параметры.

Фармакокинетические параметры AUC_o-t, AUC _{бесконе}чн_ость, C_max, t_max, k_cl, рассчитываемые некомпартментными методами, и период полувыведения рассчитают из концентраций мигаластата гидрохлорида в плазме и уровней фермента α-Gal А. Фармакокинетические параметры обобщат с помощью обработки с применением описательной статистики. Рассчитают отношения AUC_o-t, AUC _{бесконе}чн_ость для каждого соединения отдельно к соответствующему соединению в комбинации. Фармакокинетические и фармакодинамические данные для субъектов, получающих агалсидазу альфа и агалсидазу бета, проанализируют отдельно.

Статистический анализ.

В зависимости от конкретного случая будут предусматриваться описательные статистики (N, среднее, стандартное отклонение и коэффициент вариации, среднеквадратическая ошибка, медиана, минимум и максимум). Эффект соединения на совместно вводимое соединение оценят путем подсчета индивидуальных (в отношении субъекта) отношений AUC и C_max следующим образом:

Отношение AUC= AUC

AUC бесконечность!комбинация) бесконечность(отдельно)

Отношение С_тах Стах (комбинация) Стах (отдельно)

Отношения AUC и C_max будут выражать как среднее индивидуальных отношений с 90%-ным доверительным интервалом для среднего. Фармакокинетические и фармакодинамические данные для субъектов, получающих агалсидазу альфа и агалсидазу бета, проанализируют отдельно. В зависимости от конкретного случая результаты будут представлены в табличной и графической форме. Всех субъектов, которые будут получать исследуемое лекарственное средство и имеют достаточные для получения достоверных фармакокинетических параметров данные, включают в анализ безопасности и фармакокинетический анализ.

Пример 2. Режим дозирования для лечения болезни Фабри с применением мигаластата гидрохлорида и агалсидазы.

Мигаластата HCl является фармакологическим шапероном для α-галактозидазы A (α-Gal А), который повышает стабильность и правильное укладку фермента. Мигаластат может действовать путем предотвращения инактивации α-Gal A посредством стабилизации фермента в условия pH/температуры крови. Целью данного исследования являлось изучение эффектов 150 и 450 мг мигаластата, вводимого за 2 ч перед введением агалсидазы, на безопасность и фармакокинетику агалсидазы в плазме у субъектов с болезнью Фабри. Целью данного исследования также являлось изучение эффектов 150 и 450 мг мигаластата на фармакокинетику агалсидазы в плазме, коже и РВМС у пациентов с болезнью Фабри; изучение эффекта агалсидазы в плазме на фармакокинетику мигаластата в плазме; оценка GL-3 в моче и lyso-GB3 в плазме и моче перед и через 14 дней после инфузии агалсидазы и оценка титра антител перед инфузией

- 14 031874 агалсидазы.

Способы.

Исследование проводили в соответствии со способами, описанными в примере 1. В частности, это было открытое с однократным введением дозы нерандомизированное с фиксированной последовательностью 2-этапное исследование.

Этап 1 включал 3 периода:

(1) заместительная ферментная монотерапия (ERT) 0,5 или 1,0 мг/кг агалсидазы бета (инфузия в течение примерно 2 ч) или 0,2 мг/кг агалсидазой альфа (инфузия в течение примерно 40 мин);

(2) совместное введение ERT+150 мг таблетки мигаластата для перорального приема (однократная доза), при этом мигаластат вводили за 2 ч до ERT; и (3) монотерапия 150 мг мигаластата.

Этап 2 включал 2 периода в той же последовательности, что и этап 1 (т.е. периоды (1) и (2)), но с совместным введением 3x150 мг таблеток мигаластата для перорального приема в период 2 (т.е. 450 мг мигаластата).

Этап 2 включал следующие 2 периода:

(1) заместительная ферментная монотерапия (ERT) 0,5 или 1,0 мг/кг агалсидазы бета (инфузия в течение примерно 2 ч) или 0,2 мг/кг агалсидазой альфа (инфузия в течение примерно 40 мин); и (2) совместное введение ERT+450 мг таблеток мигаластата для перорального приема. Мигаластат вводили за 2 ч до ERT.

Периоды лечения разделяли минимум 14-дневным периодом вымывания.

α-Gal А катализирует начальный этап в расщеплении субстрата GL-3 in vivo. α-Gal А также действует на другие субстраты с такой же α-связью, например искусственный низкомолекулярный флуоресцентный субстрат 4-MUG. Действие α-Gal А на 4-MUG измеряли in vitro в пробах плазмы, кожи и РВМС после серийных разведений для диссоциации мигаластата.

Оценивали активность α-галактозидазы А в плазме, коже и РВМС 6 пациентов на этапе 1, периоды 1 и 2. Четыре пациента получали ERT 0,5 мг/кг агалсидазы бета, а 2 пациента получали ERT 1,0 мг/кг агалсидазы бета во время периода 1, и совместное введение 150 мг мигаластата за 2 ч до начала введения такой же дозы ERT во время периода 2. Продолжительность инфузии составляла 2 ч для обоих периодов, за исключением одного: один пациент, получающий 0,5 мг/кг агалсидазы бета, имел несбалансированную инфузию, где пациенту проводили инфузию в течение 2 ч и 40 мин во время периода 2, но во время периода 1 проводили инфузию в течение только 2 ч.

Результаты.

Увеличения активности α-Gal-A в плазме при совместном введении мигаластата.

Касательно совместного введения с мигаластатом (период 2) относительно только ERT (период 1) наблюдали следующие средние увеличения AUC (площади под кривой) активности α-Gal А в плазме:

Средние увеличения для инфузии 0,5 мг/кг агалсидазы бета:

3,0-кратное для 0.5 мг/кг агалсидазы бета (N=4), увеличения у отдельных пациентов: 2,0-, 2,2-, 3,4- и 4,2-кратное, среднее увеличение, за исключением пациента с 2,0-кратным увеличением в случае несбалансированной продолжительности инфузии: 3,3-кратное.

Средние увеличения для инфузии 1,0 мг/кг агалсидазы бета:

1.9- кратное для 1,0 мг/кг агалсидазы бета (N=2), увеличения у отдельных пациентов: 1,6- и 2,2-кратное.

На фиг. 1 показана совокупность активностей α-Gal А в плазме шести пациентов для периодов 1 и

2. Увеличения AUC активности α-Gal А в плазме для всех пациентов после совместного введения с мигаластатом показаны на фиг. 2. На фиг. 3 показаны частичные AUC для каждого времени отбора проб, которые показывают повышенную активность α-Gal А в плазме при совместном введении 0,5 или 1,0 мг/кг агалсидазы бета со 150 мг мигаластата.

Увеличения активности α-Gal-A в коже в случае с мигаластатом.

Касательно совместного введения с мигаластатом (период 2) относительно только ERT (период 1) наблюдали следующие средние увеличения активности α-Gal А в коже:

2,6-кратное для 0,5 мг/кг агалсидазы бета в день 2 (N=3, проба 1 пациента потеряна), увеличения у отдельных пациентов: 2,8-, 3,9- и 1,1-кратное, отсутствие изменения активности в коже периода 1 в день 7.

1.9- и 1,5-кратное для 1,0 мг/кг агалсидазы бета в дни 2 и 7 соответственно (N=2), увеличения у отдельных пациентов: 1,6- и 2,1-кратное в день 2, 1,7- и 1,2-кратное в день 7.

Увеличение активности α-Gal А в коже после совместного введения 0,5 или 1,0 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата показано на фиг. 4-6. На фиг. 5А показано увеличение активности α-Gal А в коже после совместного введения 0,5 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата у пациента, который во

- 15 031874 время периода 2 получил инфузию ERT на 40 мин дольше, чем другие пациенты.

Увеличения активности α-Gal-A в РВМС в случае с мигаластатом.

Касательно совместного введения с мигаластатом (период 2) относительно только ERT (период 1) наблюдали следующие средние увеличения активности α-Gal А в РВМС:

2,3-, 2,0- и 2,2-кратное для 0,5 мг/кг агалсидазы бета (N=4) в дни 2, 7 и 14 соответственно, диапазоны увеличений у отдельных пациентов: 1,4-3,1-, 1,4-2,3- и 1,7-2,8-кратное в дни 2, 7 и 14 соответственно, отсутствие изменений активности в коже периода 1 в день 7.

1,8-, 4,8- и 3,5-кратное для 1,0 мг/кг агалсидазы бета (N=2) в дни 2, 7 и 14 соответственно, увеличения у отдельных пациентов: 1,1- и 2,5-, 3,6- и 6,0- и 1,7- и 5,4-кратное в дни 2, 7 и 14 соответственно, увеличение активности α-Gal А в РВМС после совместного введения 0,5 или 1,0 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата показано на фиг. 7-9.

Вывод.

Взаимодействие 150 мг мигаластата с 0,5 и 1,0 мг/кг агалсидазы бета привело к увеличению активности α-Gal А касательно:

AUC α-Gal А в плазме у всех пациентов (N=6), α-Gal А в коже у всех пациентов в день 2 (N=5), но только у 3 из 5 пациентов в день 7, α-Gal А в РВМС у всех пациентов в дни 2, 7 и 14 (N=6).

Взаимодействие 150 мг мигаластата с 0,5 или 1,0 мг/кг агалсидазы бета привело к 2-4-кратным увеличениям AUC активности α-галактозидазы А, 1,1-3,9-кратным увеличениям активности αгалактозидазы А в коже в день 2 и 1,1-6,0-кратным увеличениям активности α-галактозидазы А в РВМС в дни 2, 7 и 14 по сравнению с агалсидазой бета отдельно. В день 7 после совместного введения четыре пациента обладали повышенной активностью α-галактозидазы А в коже.

Доза мигаластата 150 мг повышала ферментативную активность половины дозы агалсидазы бета (0,5 мг/кг) лучше, чем полной дозы (1,0 мг/кг) вплоть до 24 ч после введения дозы в плазме, коже и РВМС; однако обратное являлось верным (1,0 мг/кг > 0,5 мг/кг) в 7 и 14 дни после введения дозы в коже и РВМС. Сводная таблица результатов показана на фиг. 10.

Касательно агалсидазы бета отдельно все пациенты во все моменты времени обладали повышенной активностью α-Gal А в РВМС относительно исходного уровня, однако 2 пациента обладали пониженной активностью α-Gal А в коже в день 2 относительно исходного уровня после инфузии 0,5 мг/кг.

Пример 3. Режим дозирования для лечения болезни Фабри с применением мигаластата гидрохлорида и агалсидазы.

Следующий пример является обновлением исследования, описанного в примере 2. Настоящий пример включает дополнительный субъект для общего количества из семи субъектов.

Целью данного примера является оценка безопасности и РК двух доз мигаластата HCl (150 и 450 мг), совместно вводимых с ERT (агалсидазой), у мужчин с диагнозом болезни Фабри.

Способы.

Это продолжающееся открытое нерандомизированное 2-этапное с фиксированной последовательностью исследование.

Этап 1 включает 3 периода.

Период 1: внутривенная инфузия ERT отдельно.

Период 2: пероральное введение мигаластата HCL (150 мг) за 2 ч до внутривенной инфузии ERT (в той же дозе, что и в период 1).

Период 3: пероральное введение только 150 мг мигаластата HCl. Пациенты, подходящие для участия в исследовании: мужского пола в возрасте от 18 до 65 лет с болезнью Фабри.

Критерии включения.

Индекс массы тела (BMI) составляет 18-35.

Начало лечения агалсидазой по меньшей мере за 1 месяц до введения дозы.

Оцененный клиренс креатинина (CLcr)>50 мл/мин при скрининге.

Критерии исключения.

Документально подтвержденное преходящее нарушение мозгового кровообращения, ишемический инсульт, нестабильный инфаркт миокарда в пределах 3 месяцев до скрининга.

Клинически значимое нестабильное заболевание сердца.

Чувствительность к или сопутствующая терапия иминосахарами (например, миглустатом, миглитолом).

Субъекты получали их текущую дозу и режим приема только агалсидазы бета одной инфузией (0,5 или 1,0 мг/кг в течение около 2 ч) с последующим пероральным введением 150 мг мигаластата HCl за 2 ч до агалсидазы бета следующей инфузии.

- 16 031874

Пять из данных семи субъектов получали 0,5 мг/кг каждые две недели, и два из семи субъектов получали дозу 1,0 мг/кг каждые четыре недели.

На этапе 2 будут изучать 450 мг дозу мигаластата HCl.

Этапы 1 и 2 будут повторять с отдельными субъектами с ERT инфузией агалсидазы альфа (0,2 мг/кг в течение примерно 40 мин).

Пробы.

Серийные пробы крови отбирали вплоть до 24 ч после введения дозы для определения активности α-Gal А в плазме и уровней белка в каждый период. Пробы крови на активность α-Gal А в мононуклеарных клетках периферической крови (РВМС) отбирали до введения дозы и в дни 1, 2, 7 и 14 каждого периода. Пункционную биопсию на активность α-Gal А в коже отбирали до введения дозы в период 1 и в дни 2 и 7 в течение периодов 1 и 2. РК параметры активности α-Gal А в плазме включают Стах, T_max, AUC_o-t, AUC_o-inf и t¹/₂. Фармакокинетические параметры рассчитывали с применением стандартных некомпартментных процедур (WINNONLIN версии 5.0 или выше).

Активность α-Gal А в плазме, коже и лизатах РВМС измеряли с помощью флуоресцентного ферментного анализа, применяя 4-метилумбеллиферил-α-D-галактопиранозид (4-MUG). Действие α-Gal А на 4-MUG измеряли in vitro после серийных разведений для диссоциации мигаластата.

Вестерн-блот анализ белка α-Gal А проводили с пробами плазмы с применением антител к человеческой α-Gal А. Для расчета соответствующей концентрации белка α-Gal в каждой пробе подготавливали калибровочную кривую rhα-Gal А (агалсидазы).

Параметры безопасности включали побочные явления (АЕ), показатели жизненно важных функций, клинические лабораторные исследования (гематологический анализ, биохимический анализ сыворотки и общий анализ мочи), электрокардиограммы (ЭКГ), врачебные обследования и применение дополнительных лекарственных средств.

Результаты: имеются предварительные результаты для этапа 1, периодов 1 и 2.

Распределение и демографические данные пациентов: оценивали активность α-Gal А в плазме, коже и РВМС семи пациентов из этапа 1, периодов 1 и 2.

Все 7 пациентов получали отдельно агалсидазу бета в течение периода 1; всем пациентам совместно вводили 150 мг мигаластата HCl за 2 ч до начала введения агалсидазы бета во время периода 2.

Два пациента (идентифицируемые как субъекты А и В) получали внутривенные инфузии 1,0 мг/кг агалсидазы бета продолжительностью 2 ч.

Пять пациентов (идентифицируемые как субъекты С, D, Е, F и G) получали внутривенные инфузии 0,5 мг/кг агалсидазы бета продолжительностью 2 ч, за исключением 1: субъекту Е проводили инфузию 2 ч и 40 мин в течение периода 2, но в течение периода 1 проводили инфузию 2 ч.

Все субъекты являлись мужского пола в возрасте 44-61 года с болезнью Фабри, индекс массы тела (BMl) составлял в диапазоне 20,9-29,1 кг/м² и оцененный CLcr находился в диапазоне 54-88 мл/мин. Генотип каждого субъекта представлен на фиг. 11.

Безопасность.

К настоящему времени зарегистрировано 12 побочных явлений (АЕ), одно из которых являлось серьезным. Серьезное АЕ представляло собой преходящее нарушение мозгового кровообращения (TIA), которое происходило после скринингового визита, но перед введением дозы, и являлось средней степени тяжести, требовало госпитализации и рассматривалось исследователем как не связанное с исследуемым лекарственным средством. TIA устранялось без осложнений. Все другие АЕ были легкой степени тяжести, при этом все рассматривались как не связанные с исследуемым лекарственным средством и большинство устранялось без лечения. Три АЕ у трех разных субъектов постоянные: предсердная экстрасистола, трепетание предсердий и отек нижних конечностей, все не связанные с исследуемым лекарственным средством. Активность α-Gal А в плазме AUC (площадь под кривой) активности α-Gal А в плазме в зависимости от профилей активность-время в отношении лечения при помощи 1,0 мг/кг агалсидазы бета отдельно и лечения при помощи 1,0 мг/кг агалсидазы бета в комбинации со 150 мг мигаластата HCl (с включенными средними значениями и стандартными отклонениями) показана на фиг. 12 для субъектов А и В. Комбинированное лечение 1,0 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата HCl привело к 2,2- и 1,6-кратным увеличениям активности α-Gal А у субъектов А и В соответственно по сравнению с лечением при помощи монотерапии 1,0 мг/кг агалсидазы бета.

AUC (площадь под кривой) активности α-Gal А в плазме в зависимости от профилей активностьвремя в отношении лечения при помощи 0,5 мг/кг агалсидазы бета отдельно и лечения при помощи 0,5 мг/кг агалсидазы бета в комбинации со 150 мг мигаластата HCl (с включенными средними значениями и стандартными отклонениями) показана на фиг. 13 для субъектов C-G. Комбинированное лечение 0,5 мг/кг агалсидазы бета и 150 мг мигаластата HCl привело к 2,0-4,2-кратным увеличениям активности αGal А по сравнению с лечением при помощи монотерапии 0,5 мг/кг агалсидазы бета.

Активность α-Gal А в плазме при совместном введении во все моменты времени у большинства субъектов увеличилась по отношению к заместительной ферментной терапии (ERT) отдельно, за исключением одного. Субъект Е получил несбалансированную инфузию, на 40 мин дольше во время периода 2,

- 17 031874 что вызвало относительное снижение активности фермента во время фазы инфузии. Однако у субъекта Е активности во все моменты времени после пика активности были увеличенными по отношению к ERT отдельно. Дополнительно в соответствии с Eng et al., Am.J. Hum. Genet. 68:711-722 (2001) касательно активности α-Gal A экспозиции возрастали нелинейным образом.

Касательно совместного введения с мигаластата HCl (период 2) по сравнению с ERT отдельно (период 1) все субъекты обладали увеличенной AUC активности α-Gal A в плазме, как это показано на фиг. 12 и 13. Среднее увеличение AUC активности α-Gal А в плазме являлось 3,0-кратным для 0,5 мг/кг агалсидазы бета. Исключая 2,0-кратное увеличение у пациента с несбалансированной продолжительностью инфузии, среднее увеличение было в 3,2 раза. Среднее увеличение AUC активности α-Gal А в плазме являлось 1,9-кратным для 1,0 мг/кг агалсидазы бета.

Активность α-Gal А в коже.

На фиг. 14 показано, что лечение субъектов при помощи 0,5 или 1,0 мг/кг агалсидазы бета в комбинации со 150 мг мигаластата HCl увеличило активность α-Gal А в пробах кожи в день 2 по сравнению с лечением только ферментной монотерапией. На фиг. 15 показана активность α-Gal А в пробах кожи в день 7 после монотерапии и комбинированной терапии при помощи агалсидазы бета и 150 мг мигаластата HCl. Наблюдали следующие средние увеличения активности α-Gal А в коже: 2,6-кратное и 1,4кратное в дни 2 и 7 соответственно для 0,5 мг/кг агалсидазы бета (N=5) и 1,9- и 1,5-кратное в дни 2 и 7 соответственно для 1,0 мг/кг агалсидазы бета (N=2).

Активность α-Gal А в РМВС.

Наблюдали следующие средние увеличения активности α-Gal А в РВМС: 2,4-, 1,9- и 2,1-кратное в дни 2, 7 и 14 соответственно для 0,5 мг/кг агалсидазы бета (N=5) и 1,8-, 4,8- и 3,5-кратное для 1,0 мг/кг (N=2) агалсидазы бета в дни 2, 7 и 14 соответственно.

Вестерн-блот анализ.

Для 5 из 7 субъектов изменений в белке α-Gal А плазмы с помощью вестерн-блот анализа отношения AUC период 2 (совместное введение)/период 1 (ERT отдельно) не наблюдали. Однако 2 субъекта (субъект С, который получал 0,5 мг/кг агалсидазы бета, и субъект G, который получал 1,0 мг/кг агалсидазы бета) обладали 20% увеличением количества белка после совместного введения по сравнению с ERT отдельно (данные не показаны).

Вывод.

Взаимодействие 150 мг мигаластата с 0,5 и 1,0 мг/кг агалсидазы бета привело к увеличениям активности α-Gal А в плазме, коже и РВМС. Совместное введение 150 мг мигаластата HCl и агалсидазы бета в целом являлось безопасным и хорошо переносимым.

Объем настоящей заявки не ограничивается конкретными вариантами осуществления, описанными в данном документе. Различные модификации заявки в дополнение к описанным в данном документе, безусловно, станут очевидными специалистам в данной области из вышеизложенного описания и сопровождающих фигур. Такие модификации подпадают под объем прилагаемой формулы изобретения.

Дополнительно следует понимать, что все значения являются приблизительными и предназначены для описания.

В настоящей заявке приведены патенты, заявки на патенты, публикации, описания продуктов и протоколы, раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки во всей их полноте для любых целей.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ лечения болезни Фабри у субъекта, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту от примерно 50 до примерно 600 мг 1-дезоксигалактоноджиримицина и эффективного количества терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal А фермента, отличающийся тем, что 1дезоксигалактоноджиримицин вводят за время от примерно 2 ч до примерно 30 мин до введения терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal А фермента, при этом введение терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal А фермента следует за введением 1дезоксигалактоноджиримицина.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что количество вводимого 1-дезоксигалактоноджиримицина составляет от примерно 150 до примерно 450 мг.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что количество вводимого 1-дезоксигалактоноджиримицина выбирают из примерно 150 мг, примерно 300 мг и примерно 450 мг.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что пациент воздерживается от приема пищи в течение периода времени, который начинается за примерно 0,5-4 ч до введения 1-дезоксигалактоноджиримицина и заканчивается через примерно 0,5-4 ч после введения 1-дезоксигалактоноджиримицина.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что пациент воздерживается от приема пищи в течение по меньшей мере примерно 2 ч до введения 1-дезоксигалактоноджиримицина и по меньшей мере примерно 2 ч после введения 1-дезоксигалактоноджиримицина.

- 18 031874
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что 1-дезоксигалактоноджиримицин вводят примерно за 2 ч до введения терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal А фермента.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что 1-дезоксигалактоноджиримицин является мигаластата гидрохлоридом.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что терапевтическое средство для замещения недостатка αGal А фермента выбирают из агалсидазы альфа и агалсидазы бета.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что 1-дезоксигалактоноджиримицин вводят в качестве вспомогательного средства для терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal А фермента.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что 1-дезоксигалактоноджиримицин и терапевтическое средство для замещения недостатка α-Gal А фермента вводят в качестве комбинированного терапевтического средства.
11. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно вводят вторую дозу 1дезоксигалактоноджиримицина в промежутке времени от момента введения терапевтического средства для замещения недостатка α-Gal А фермента до примерно 4 ч после этого.
12. Способ по п.6, отличающийся тем, что 1-дезоксигалактоноджиримицин и терапевтическое средство для замещения недостатка α-Gal А фермента вводят каждые 1-4 недели.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что 1-дезоксигалактоноджиримицин и терапевтическое средство для замещения недостатка α-Gal А фермента вводят каждые 2 недели.