BR112021003137A2

BR112021003137A2 - métodos de tratamento de doença de fabry em pacientes com uma mutação no gene gla

Info

Publication number: BR112021003137A2
Application number: BR112021003137-5A
Authority: BR
Inventors: Elfrida Benjamin
Original assignee: Amicus Therapeutics, Inc.
Priority date: 2018-08-20
Filing date: 2019-01-16
Publication date: 2021-05-11
Also published as: AU2019326252A1; EP4289476A3; EP4289475A2; IL280961A; WO2020040806A1; EP4282472A2; MX2021002070A; CA3110065A1; CN112888439A; EP4299117A3; JP2021535107A; CL2021000435A1; EP4299117A2; EP4285991A2; KR20240017128A; EP4282472A3; SG11202101117QA; KR20210046729A; EP4285991A3; EP4285990A3

Abstract

MÉTODOS DE TRATAMENTO DE DOENÇA DE FABRY EM PACIENTES COM UMA MUTAÇÃO NO GENE GLA. São providos métodos de tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry e métodos de intensificação de a-galactosidase A em um paciente com diagnóstico ou suspeita de doença de Fabry. Certos métodos compreendem a administração a um paciente de uma dose terapeuticamente eficaz de uma chaperona farmacológica para a-galactosidase A, em que o paciente tem uma mutação na sequência de ácido nucleico que codifica a-galactosidase A. Também são descritos os usos de chaperonas farmacológicas para o tratamento de doença de Fabry e composições para uso no tratamento da doença de Fabry.

Description

Relatório descritivo da patente de invenção para “MÉTODOS DE TRATAMENTO DE DOENÇA DE FABRY EM PACIENTES COM UMA MUTAÇÃO NO GENE GLA”

ÁREA TÉCNICA

[001] Os princípios e modalidades da presente invenção se referem, geralmente, ao uso de chaperonas farmacológicas para o tratamento da doença de Fabry, particularmente em pacientes com mutações ou variantes no gene α-galactosidase (GLA).

ANTECEDENTES

[002] Muitas doenças humanas resultam de mutações que causam alterações na sequência de aminoácidos de uma proteína, que reduzem a sua estabilidade e podem evitar que a mesma se dobre apropriadamente. Em geral, as proteínas se dobram em uma região específica da célula conhecida como retículo endoplasmático ou RE. A célula tem mecanismos de controle de qualidade que asseguram que as proteínas se dobram na sua forma tridimensional correta antes de se poderem mover do RE para o destino apropriado na célula, um processo geralmente referido como tráfego de proteínas. As proteínas com dobramento defeituoso são frequentemente eliminadas pelos mecanismos de controle de qualidade depois de estarem inicialmente retidas no RE. Em alguns casos, as proteínas com dobramento defeituoso se podem acumular no RE antes de serem eliminadas. A retenção de proteínas com dobramento defeituoso no RE interrompe o seu tráfego apropriado, e a atividade biológica reduzida resultante pode levar a função celular comprometida e, em última análise, a doença. Adicionalmente, a acumulação de proteínas com dobramento defeituoso no RE pode levar a vários tipos de estresse nas células, o que também pode contribuir para disfunção celular e doença.

[003] Tais mutações podem levar a distúrbios do armazenamento lisossômico (DAL) os quais são caracterizados por deficiências de enzimas lisossômicas devido a mutações nos genes codificando as enzimas lisossômicas. A doença resultante causa a acumulação patológica de substratos dessas enzimas, as quais incluem lipídios, carboidratos e polissacarídeos. Embora existam muitos genótipos mutantes diferentes associados a cada DAL, muitas das mutações são mutações de sentido trocado que podem levar à produção de uma enzima menos estável. Essas enzimas menos estáveis são por vezes degradadas de forma prematura pela via de degradação associada ao RE. Isso resulta na deficiência enzimática no lisossomo, e na acumulação patológica de substrato. Tais enzimas mutantes são por vezes referidas na técnica pertinente como "mutantes de dobramento" ou "mutantes conformacionais".

[004] A Doença de Fabry é um DAL causado por uma mutação no gene GLA, o qual codifica a enzima α-galactosidase

A (α-Gal A). A α-Gal A é necessária para o metabolismo dos glicoesfingolipídios. A mutação faz com que o substrato globotriaosilceramida (GL-3) se acumule em vários tecidos e órgãos. Indivíduos do sexo masculino com doença de Fabry são hemizigóticos porque os genes da doença são codificados no cromossomo X. Se estima que a doença de Fabry afete 1 em

40.000 e 60.000 indivíduos do sexo masculino, e ocorre menos frequentemente em indivíduos do sexo feminino.

[005] Tem havido várias abordagens ao tratamento da doença de Fabry. Uma terapia aprovada para tratar a doença de Fabry é a terapia de reposição enzimática (TRE), que tipicamente envolve a infusão intravenosa de uma forma purificada da correspondente proteína de tipo selvagem. Dois produtos de α-Gal A estão atualmente disponíveis para o tratamento da doença de Fabry: a agalsidase alfa (Replagal ®, Shire Human Genetic Therapies) e a agalsidase beta (Fabrazyme®; Sanofi Genzyme Corporation). No entanto, a TRE tem várias desvantagens. Uma das principais complicações com a TRE é a rápida degradação da proteína infundida, o que leva à necessidade de numerosas infusões de doses elevadas dispendiosas. A TRE tem várias advertências adicionais, tais como dificuldades com a geração, purificação e armazenamento de proteínas de dobramento adequado em grande escala; obtenção de proteína nativa glicosilada; geração de uma resposta imune antiproteína; e incapacidade da proteína para atravessar a barreira hematoencefálica de modo a mitigar patologias do sistema nervoso central (isto é, baixa biodisponibilidade). Adicionalmente, a enzima de substituição não consegue penetrar no coração ou nos rins em quantidades suficientes para reduzir a acumulação de substrato nos podócitos renais ou miócitos cardíacos, que figuram proeminentemente na patologia de Fabry.

[006] Uma outra abordagem para tratar algumas deficiências enzimáticas envolve o uso de inibidores de moléculas pequenas para reduzir a produção do substrato natural de proteínas enzimáticas deficientes, melhorando desse modo a patologia. Esta abordagem de "redução de substrato" foi especificamente descrita para uma classe de cerca de 40 DAL que incluem distúrbios de armazenamento de glicoesfingolipídios. Os inibidores de moléculas pequenas propostos para uso como terapia são específicos para inibir as enzimas envolvidas na síntese de glicolipídios, reduzindo a quantidade de glicolipídeo celular que necessita de ser quebrado pela enzima deficiente.

[007] Uma terceira abordagem para o tratamento da doença de Fabry foi o tratamento com as chamadas chaperonas farmacológicas (CF). Tais CF incluem inibidores de moléculas pequenas da α-Gal A, que podem-se ligar à α-Gal A para aumentar a estabilidade tanto da enzima mutante como da enzima do correspondente tipo selvagem. No entanto, os pacientes para terapia com CF devem ter uma mutação ou variante suscetível de resposta que resulte na produção de uma enzima que tem o potencial de ser estabilizada e dobrada em uma conformação que permite o tráfego para fora do ER.

[008] Desse modo, mesmo quando a doença de Fabry é diagnosticada ao detectar atividade deficiente de α-Gal A no plasma ou nos leucócitos periféricos (WBC), é muito difícil, senão impossível, prever se um determinado paciente com Fabry responderá ao tratamento com uma CF. Desse modo, permanece a necessidade de identificar novas mutações ou variantes de GLA que responderão a uma CF e disponibilizarão novos métodos de tratamento para pacientes com Fabry com essas mutações ou variantes.

SUMÁRIO

[009] Um aspeto da invenção se refere a um método de tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry.

O método compreende a administração ao paciente de uma dose terapeuticamente eficaz de uma chaperona farmacológica para α-Gal A, em que o paciente tem uma mutação de sentido trocado da sequência de ácido nucleico codificando α-Gal A. Em uma ou mais modalidades, a mutação é D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K ou R392T. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E ou N408Y. Em uma ou mais modalidades, a mutação é V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F,

W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, ou T412P. Em várias modalidades, essas mutações são relativas à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é D33H em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é G35A em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Y88S em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é T194A em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é W204G em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Y216S em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q250K em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é R392T em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N53K em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q57R em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é S62delinsLA em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é M96V em relação à SEQ ID NO:

2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é R112L em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é D155E em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N228D em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q330P em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é V339A em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é K391E em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N408Y em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades,

a mutação é V22G em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N34H em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é G80V em relação à SEQ

ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q107R em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Y152D em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades,

a mutação é A156S em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é L189F em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é W204L em relação à SEQ

ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é S238G em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é I239M em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades,

a mutação é A257V em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é P259Q em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N320H em relação à SEQ

ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é P323T em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é E338V em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades,

a mutação é P380L em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é T412P em relação à SEQ ID NO: 2. Em algumas modalidades, a chaperona farmacológica compreende migalastate ou um seu sal.

Em uma ou mais modalidades, a dose de migalastate ou seu sal é de cerca de 100 mg a cerca de 150 mg de equivalente de base livre (FBE). Em algumas modalidades, o sal de migalastate é cloridrato de migalastate. Em uma ou mais modalidades, a dose é de cerca de 150 mg a cada dois dias de cloridrato de migalastate ou uma dose equivalente de migalastate ou de um seu sal diferente do sal de cloridrato. Em algumas modalidades, o migalastate ou um seu sal é administrado oralmente ou por injeção. Essas modalidades podem ser combinadas umas com as outras ou com outras modalidades da invenção, por exemplo, modalidades relacionadas a um método de intensificação de α- Gal A em um paciente com diagnóstico ou suspeito de ter a doença de Fabry, uso de uma chaperona farmacológica para α- Gal A para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry ou a uma chaperona farmacológica para α-Gal A para uso no tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry, bem como modalidades relacionadas a mutações suscetíveis, CF adequadas e dosagens, formulações e rotas de administração das mesmas.

[0010] Outro aspeto da invenção se refere a intensificação de α-Gal A em um paciente com diagnóstico ou suspeito de ter a doença de Fabry. O método compreende a administração a um paciente de uma dose terapeuticamente eficaz de uma chaperona farmacológica para α-Gal A, em que o paciente tem uma mutação de sentido trocado da sequência de ácido nucleico codificando α-Gal A. Em uma ou mais modalidades, a mutação é D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K ou R392T. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E ou N408Y. Em uma ou mais modalidades, a mutação é V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, ou T412P.

Em várias modalidades, essas mutações são relativas à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é D33H em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é G35A em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Y88S em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é T194A em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é W204G em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Y216S em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q250K em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é R392T em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N53K em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q57R em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é S62delinsLA em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é M96V em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é R112L em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é D155E em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N228D em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q330P em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades,

a mutação é V339A em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é K391E em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N408Y em relação à SEQ

ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é V22G em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N34H em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades,

a mutação é G80V em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q107R em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Y152D em relação à SEQ

ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é A156S em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é L189F em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades,

a mutação é W204L em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é S238G em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é I239M em relação à SEQ

ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é A257V em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é P259Q em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades,

a mutação é N320H em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é P323T em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é E338V em relação à SEQ

ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é P380L em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é T412P em relação à SEQ ID NO: 2. Em algumas modalidades, a chaperona farmacológica compreende migalastate ou um seu sal. Em uma ou mais modalidades, a dose de migalastate ou seu sal é de cerca de 100 mg a cerca de 150 mg de FBE. Em algumas modalidades, o sal de migalastate é cloridrato de migalastate. Em uma ou mais modalidades, a dose é de cerca de 150 mg a cada dois dias de cloridrato de migalastate ou uma dose equivalente de migalastate ou de um seu sal diferente do sal de cloridrato. Em algumas modalidades, o migalastate ou um seu sal é administrado oralmente ou por injeção. Essas modalidades podem ser combinadas umas com as outras ou com outras modalidades da invenção, por exemplo, modalidades relacionadas a um método de tratamento de um paciente com doença de Fabry, uso de uma chaperona farmacológica para α-Gal A para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry ou a uma chaperona farmacológica para α- Gal A para uso no tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry, bem como modalidades relacionadas a mutações suscetíveis, CF adequadas e dosagens, formulações e rotas de administração das mesmas.

[0011] Outro aspeto da invenção se refere ao uso de uma chaperona farmacológica para α-Gal A para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry, em que o paciente tem uma mutação de sentido trocado na sequência de ácido nucleico codificando α-Gal A. Em uma ou mais modalidades, a mutação é D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, ou R392T. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, ou N408Y. Em uma ou mais modalidades, a mutação é V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, ou T412P. Em várias modalidades, essas mutações são relativas à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é D33H em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é G35A em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Y88S em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é T194A em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é W204G em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Y216S em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q250K em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é R392T em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N53K em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q57R em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é S62delinsLA em relação à SEQ ID NO:

2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é M96V em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é R112L em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é D155E em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N228D em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q330P em relação à SEQ

ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é V339A em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é K391E em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades,

a mutação é N408Y em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é V22G em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N34H em relação à SEQ

ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é G80V em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q107R em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades,

a mutação é Y152D em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é A156S em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é L189F em relação à SEQ

ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é W204L em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é S238G em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades,

a mutação é I239M em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é A257V em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é P259Q em relação à SEQ

ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N320H em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é P323T em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades,

a mutação é E338V em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é P380L em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é T412P em relação à SEQ ID NO: 2. Em algumas modalidades, a chaperona farmacológica compreende migalastate ou um seu sal. Em uma ou mais modalidades, a dose de migalastate ou seu sal é de cerca de 100 mg a cerca de 150 mg de FBE. Em algumas modalidades, o sal de migalastate é cloridrato de migalastate. Em uma ou mais modalidades, a dose é de cerca de 150 mg a cada dois dias de cloridrato de migalastate ou uma dose equivalente de migalastate ou de um seu sal diferente do sal de cloridrato.

Em algumas modalidades, o migalastate ou um seu sal é administrado oralmente ou por injeção. Essas modalidades podem ser combinadas umas com as outras ou com outras modalidades da invenção, por exemplo, modalidades relacionadas a um método de tratamento de um paciente com doença de Fabry, um método de intensificação de α-Gal A em um paciente com diagnóstico ou suspeito de ter doença de Fabry ou a uma chaperona farmacológica para α-Gal A para uso no tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry, bem como modalidades relacionadas a mutações suscetíveis, CF adequadas e dosagens, formulações e rotas de administração das mesmas.

[0012] Outro aspeto da invenção se refere ao uso de uma chaperona farmacológica para α-Gal A para uso no tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry, em que o paciente tem uma mutação de sentido trocado na sequência de ácido nucleico codificando α-Gal A. Em uma ou mais modalidades, a mutação é D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, ou R392T. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, ou N408Y. Em uma ou mais modalidades, a mutação é V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, ou T412P.

Em várias modalidades, essas mutações são relativas à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é D33H em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é G35A em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Y88S em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é T194A em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é W204G em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Y216S em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q250K em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é R392T em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N53K em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q57R em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é S62delinsLA em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é M96V em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é R112L em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é D155E em relação à SEQ

ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é N228D em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é Q330P em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades,

ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é P380L em relação à SEQ ID NO: 2. Em uma ou mais modalidades, a mutação é T412P em relação à SEQ ID NO: 2. Em algumas modalidades, a chaperona farmacológica compreende migalastate ou um seu sal. Em uma ou mais modalidades, a dose de migalastate ou seu sal é de cerca de 100 mg a cerca de 150 mg de FBE. Em algumas modalidades, o sal de migalastate é cloridrato de migalastate. Em uma ou mais modalidades, a dose é de cerca de 150 mg a cada dois dias de cloridrato de migalastate ou uma dose equivalente de migalastate ou de um seu sal diferente do sal de cloridrato. Em algumas modalidades, o migalastate ou um seu sal é administrado oralmente ou por injeção. Essas modalidades podem ser combinadas umas com as outras ou com outras modalidades da invenção, por exemplo, modalidades relacionadas a um método de tratamento de um paciente com doença de Fabry, um método de intensificação de α-Gal A em um paciente com diagnóstico ou suspeito de ter doença de Fabry ou ao uso de uma chaperona farmacológica para α-Gal A para a fabricação de um medicamento para tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry, bem como modalidades relacionadas a mutações suscetíveis, CF adequadas e dosagens, formulações e rotas de administração das mesmas.

[0013] Várias modalidades são listadas abaixo. Será entendido que as modalidades listadas em baixo podem ser combinadas não só como listadas em baixo, mas em outras combinações adequadas de acordo com o escopo da invenção.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0014] As FIGs. 1A-E mostram a sequência completa de DNA do gene GLA humano de tipo selvagem (SEQ ID NO: 1);

[0015] A FIG. 2 mostra a proteína α-Gal A de tipo selvagem (SEQ ID NO: 2); e

[0016] A FIG. 3 mostra a sequência de ácido nucleico codificando a proteína α-Gal A de tipo selvagem (SEQ ID NO: 3).

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0017] Antes da descrição de várias modalidades exemplificativas da invenção, é para ser entendido que a invenção não está limitada aos detalhes de realização ou passos processuais estabelecidos na descrição que se segue.

A invenção é apta para outras modalidades e para ser praticada ou ser levada a cabo em vários modos.

[0018] Vários aspetos da invenção se referem à identificação de novas mutações GLA em pacientes Fabry que responderão ao tratamento com chaperonas farmacológicas.

Outros aspetos da invenção também se referem ao tratamento desses pacientes Fabry. Por exemplo, foi descoberto inesperadamente que a baixa atividade α-Gal A resultante das mutações de sentido trocado D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, R392T, N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L,

D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, N408Y, V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, ou T412P em α-Gal a pode ser aumentada quando exposta a chaperonas farmacológicas.

Por extensão, os pacientes com essas mutações responderão ao tratamento com chaperonas farmacológicas.

Definições

[0019] Os termos usados neste relatório descritivo têm em geral os seus significados habituais na técnica, dentro do contexto da presente invenção e no contexto específico onde cada termo é usado. Certos termos são discutidos abaixo, ou em outro sítio no relatório descritivo, para proporcionar orientação adicional ao médico na descrição das composições e métodos da invenção e sobre como preparar e usar os mesmos.

[0020] O termo "doença de Fabry" se refere a um erro congênito ligado ao X do catabolismo de glicoesfingolipídios devido a deficiência da atividade de α-Gal A lisossômica.

Esse defeito causa acumulação do substrato globotriaosilceramida ("GL-3", também conhecida como Gb3 ou tri-hexósido de ceramida) e glicoesfingolipídios relacionados em lisossomos endoteliais vasculares do coração, rins, pele e outros tecidos. Um outro substrato da enzima é a globotriaosilesfingosina no plasma ("lyso-Gb3 no plasma").

[0021] Um "portador" é um indivíduo do sexo feminino que tem um cromossomo X com um gene α-Gal A defeituoso e um cromossomo X com um gene normal e em cujo cromossomo X a inativação do alelo normal está presente em um ou mais tipos de células. Um portador é frequentemente diagnosticado com a doença de Fabry.

[0022] Um "paciente" se refere a um sujeito que foi diagnosticado com, ou se suspeita ter, uma doença particular.

O paciente pode ser um ser humano ou um animal.

[0023] Um "paciente com Fabry" se refere a um indivíduo que foi diagnosticado com, ou se suspeita ter, doença de Fabry e tem uma α-Gal A mutada tal como definido mais abaixo.

Marcadores característicos da doença de Fabry podem ocorrer em hemizigotos masculinos e portadores femininos com a mesma prevalência, embora os indivíduos do sexo feminino sejam tipicamente menos gravemente afetados.

[0024] A α-galactosidase A (α-Gal A) humana se refere a uma enzima codificada pelo gene GLA humano. A sequência completa de DNA da α-Gal A, incluindo íntrons e éxons, está disponível no GenBank com o N.º de Acesso X14448.1 e é mostrada nas FIGS. 1A-E (SEQ ID NO: 1). A enzima α-Gal A humana consiste em 429 aminoácidos e está disponível no GenBank com os N.os de Acesso X14448.1 e U78027, e é mostrada na FIG. 2 (SEQ ID NO: 2). A sequência de ácido nucleico que inclui apenas as regiões de codificação (isto é, exóns) de SEQ ID NO: 1 é mostrada na FIG. 3 (SEQ ID NO: 3).

[0025] O termo "proteína mutante" inclui uma proteína que tem uma mutação no gene codificando a proteína, que resulta na incapacidade de a proteína alcançar uma conformação estável sob as condições normalmente presentes no RE. A impossibilidade de se alcançar uma conformação estável resulta em uma quantidade substancial de degradação da enzima, em vez de ser transportada para o lisossomo. Uma tal mutação é por vezes denominada um "mutante conformacional". Tais mutações incluem, mas não estão limitadas a, mutações de sentido trocado e pequenas deleções e inserções na matriz. Conforme usado no presente documento, as deleções são indicadas pela abreviatura "del" e as inserções são indicadas pela abreviatura "ins". Desse modo, a alteração de nucleotídeo "c.184_185insTAG" se refere a uma inserção da sequência de nucleotídeos TAG entre os nucleotídeos 184 e 185 e a alteração da sequência de proteína "S62delinsLA" se refere a uma deleção do aminoácido S (serina) na posição 62 e uma inserção da sequência de aminoácidos LA (leucina e alanina).

[0026] Conforme usado no presente documento em uma modalidade, o termo "α-Gal A mutante" inclui uma α-Gal A que tem uma mutação no gene codificando a α-Gal A, a qual resulta na incapacidade de a enzima alcançar uma conformação estável sob as condições normalmente presentes no RE. A impossibilidade de se alcançar uma conformação estável resulta em uma quantidade substancial de degradação da enzima, em vez de ser transportada para o lisossomo.

[0027] Conforme usado no presente documento, o termo "chaperona farmacológica específica" ("CFE") ou "chaperona farmacológica" ("CF") se refere a qualquer molécula incluindo uma pequena molécula, proteína, peptídeo, ácido nucleico, carboidrato, etc. que se liga especificamente a uma proteína e tem um ou mais dos seguintes efeitos: (i) intensifica a formação de uma conformação molecular estável da proteína; (ii) induz o tráfego da proteína a partir do RE para uma outra localização celular, preferencialmente uma localização celular nativa, isto é, evita a degradação da proteína associada ao RE; (iii) previne a agregação de proteínas de dobramento defeituoso; e/ou (iv) restabelece ou intensifica a função e/ou atividade de tipo selvagem pelo menos parcial da proteína. Um composto que se liga especificamente p. ex. à α-Gal A, significa que se liga e exerce um efeito de chaperona na enzima e não em um grupo genérico de enzimas relacionadas ou não relacionadas. Mais especificamente, esse termo não se refere a chaperonas endógenas, tais como BiP, ou a agentes não específicos que demonstraram atividade não específica de chaperona contra várias proteínas, tais como glicerol, DMSO ou água deuterada,

isto é, chaperonas químicas. Em uma ou mais modalidades da presente invenção, a CF pode ser um inibidor competitivo reversível. Em uma modalidade, a CF é migalastate ou um seu sal. Em outra modalidade, a CF é a base livre de migalastate (por ex., 123 mg de base livre de migalastate). Em ainda outra modalidade, a CF é um sal de migalastate (por ex., 150 mg de migalastate HCl).

[0028] Um "inibidor competitivo" de uma enzima pode se referir a um composto que se assemelha estruturalmente à estrutura química e geometria molecular do substrato enzimático para se ligar à enzima aproximadamente na mesma localização que o substrato. Assim, o inibidor compete pelo mesmo sítio ativo que a molécula de substrato, aumentando dessa forma a Km. A inibição competitiva é normalmente reversível se estiverem disponíveis moléculas de substrato suficientes para deslocar o inibidor, isto é, os inibidores competitivos se podem ligar reversivelmente. Por conseguinte, a quantidade de inibição de enzima depende da concentração do inibidor, concentração do substrato, e das afinidades relativas do inibidor e substrato para com o sítio ativo.

[0029] Conforme usado no presente documento, o termo "se liga especificamente" se refere à interação de uma chaperona farmacológica com uma proteína tal como a α-Gal A, especificamente, uma interação com resíduos de aminoácidos da proteína que participa diretamente no contato com a chaperona farmacológica. Uma chaperona farmacológica se liga especificamente a uma proteína-alvo, p. ex., α-Gal A, para exercer um efeito de chaperona na proteína e não em um grupo genérico de proteínas relacionadas ou não relacionadas. Os resíduos de aminoácidos de uma proteína que interagem com qualquer dada chaperona farmacológica podem ou não estar dentro do "sítio ativo" da proteína. A ligação específica pode ser avaliada através de ensaios de ligação de rotina ou através de estudos estruturais, p. ex., cocristalização, RMN e semelhantes. O sítio ativo para a α-Gal A é o sítio de ligação ao substrato.

[0030] "Atividade de α-Gal A deficiente" se refere a atividade de α-Gal A em células a partir de um paciente que está abaixo da gama normal em comparação (usando os mesmos métodos) com a atividade em indivíduos normais não tendo ou suspeitos de terem Fabry ou qualquer outra doença (especialmente uma doença do sangue).

[0031] Conforme usado no presente documento, os termos "intensificar a atividade de α-Gal A" ou "aumentar a atividade de α-Gal A" se refere ao aumento da quantidade de α-Gal A que adota uma conformação estável em uma célula contatada com uma chaperona farmacológica específica para a α-Gal A, em relação à quantidade em uma célula (preferencialmente do mesmo tipo celular ou na mesma célula,

p. ex., em um momento anterior) não contatada com a chaperona farmacológica específica para a α-Gal A. Esse termo também se refere ao aumento do tráfego de α-Gal A para o lisossomo em uma célula contatada com uma chaperona farmacológica específica para a α-Gal A, em relação ao tráfego de α-Gal A não contatada com a chaperona farmacológica específica para a proteína. Esses termos se referem à α-Gal A tanto de tipo selvagem como mutante. Em uma modalidade, o aumento na quantidade de α-Gal A na célula é medido por medição da hidrólise de um substrato artificial em lisados a partir de células que foram tratadas com a CF. Um aumento na hidrólise é indicativo de atividade de α-Gal A aumentada.

[0032] O termo "atividade de α-Gal A" se refere à função fisiológica normal de uma α-Gal A de tipo selvagem em uma célula. Por exemplo, a atividade de α-Gal A inclui a hidrólise de GL-3.

[0033] Um "respondedor" é um indivíduo diagnosticado com, ou suspeito de ter, um distúrbio de armazenamento lisossômico, tal como, por exemplo, doença de Fabry, cujas células exibem atividade de α-Gal A suficientemente aumentada, respectivamente, e/ou melhoria de sintomas ou intensificação em marcadores substitutos, em resposta a contato com uma CF. Exemplos não limitativos de intensificadores em marcadores substitutos para Fabry são a lyso-GB3 e os divulgados na Publicação do Pedido de Patente dos E.U.A. N.º US 2010/-0113517, que é incorporada neste documento como referência na sua totalidade.

[0034] Exemplos não limitativos de melhorias em marcadores substitutos para a doença de Fabry divulgados em US 2010/0113517 incluem aumentos nos níveis ou atividade de α-Gal A nas células (p. ex., fibroblastos) e tecido; reduções na acumulação de GL-3; concentrações plasmáticas diminuídas de homocisteína e da molécula 1 de adesão celular vascular (VCAM-1); acumulação de GL-3 reduzida dentro de células do miocárdio e fibrócitos valvulares; redução na lyso-Gb3 no plasma; redução na hipertrofia cardíaca (especialmente do ventrículo esquerdo), melhoria da insuficiência valvular, e arritmias; melhoria da proteinúria; concentrações urinárias reduzidas de lipídios tais como CTH, lactosilceramida, ceramida, e concentrações urinárias aumentadas de glicosilceramida e esfingomielina; a ausência de corpos de inclusão laminados (corpos de Zebra) em células epiteliais glomerulares; melhorias na função renal; mitigação da hipo- hidrose; a ausência de angioceratomas; e melhorias nas anormalidades auditivas tais como perda de audição neurossensorial de alta frequência, perda progressiva de audição, surdez súbita, ou zumbido. Melhorias em sintomas neurológicos incluem a prevenção do ataque isquêmico transitório (TIA) ou acidente vascular cerebral; e a melhoria da dor neuropática que se manifesta como acroparestesia

(sensação de ardor ou de formigueiro nas extremidades). Um outro tipo de marcador clínico que pode ser avaliado para a doença de Fabry é a prevalência de manifestações cardiovasculares negativas. Sinais e sintomas comuns, relacionados com o coração, da doença de Fabry incluem hipertrofia ventricular esquerda, doença valvular (especialmente prolapso e/ou regurgitação da válvula mitral), doença prematura da artéria coronariana, angina, infarto do miocárdio, anormalidades de condução, arritmias, insuficiência cardíaca congestiva.

[0035] A dose que alcança uma ou mais das respostas supracitadas é uma "dose terapeuticamente eficaz".

[0036] A frase "farmaceuticamente aceitável" se refere a entidades moleculares e composições que são fisiologicamente toleráveis e que tipicamente não produzem reações indesejadas quando administradas a um ser humano. Em algumas modalidades, conforme usado neste documento, o termo "farmaceuticamente aceitável" significa aprovado por uma agência reguladora do Governo federal ou estatal, ou listado na Farmacopeia dos E.U.A. ou outra farmacopeia geralmente reconhecida para uso em animais, e mais particularmente em seres humanos. O termo "portador", em referência a um portador farmacêutico, se refere a um diluente, adjuvante, excipiente ou veículo com o qual o composto é administrado.

Esses portadores farmacêuticos podem ser líquidos estéreis,

tais como água e óleos. De preferência, água ou soluções aquosas, soluções salinas e soluções aquosas de dextrose e glicerol são empregues como portadores, particularmente para soluções injetáveis. Portadores farmacêuticos adequados são descritos em "Remington's Pharmaceutical Sciences" de E. W.

Martin, 18ª Edição, ou outras edições.

[0037] Conforme usado no presente documento, o termo "isolado" significa que o material referenciado é removido a partir do ambiente no qual ele é normalmente encontrado.

Assim, um material biológico isolado pode estar isento de componentes celulares, isto é, componentes das células nas quais o material é encontrado ou produzido. No caso de moléculas de ácidos nucleicos, um ácido nucleico isolado inclui um produto de PCR, uma banda de mRNA em um gel, um cDNA, ou um fragmento de restrição. Em uma outra modalidade, um ácido nucleico isolado é preferencialmente excisado a partir do cromossomo no qual ele pode ser encontrado, e mais preferencialmente não está mais associado a genes não regulatórios, regiões não codificadoras, ou a outros genes, localizados a montante ou jusante do gene contido na molécula de ácido nucleico isolada quando encontrada no cromossomo.

Em uma outra modalidade ainda, o ácido nucleico isolado carece de um ou mais íntrons. Ácidos nucleicos isolados incluem sequências inseridas em plasmídeos, cosmídeos, cromossomos artificiais, e semelhantes. Assim, em uma modalidade específica, um ácido nucleico recombinante é um ácido nucleico isolado. Uma proteína isolada pode estar associada a outras proteínas ou ácidos nucleicos, ou ambos, com as/os quais se associa na célula, ou com membranas celulares se for uma proteína associada a membrana. Uma organela, célula, ou tecido isolado, é removido a partir do sítio anatômico no qual é encontrado em um organismo. Um material isolado pode estar, mas não tem que estar, purificado.

[0038] Os termos "cerca de" e "aproximadamente" devem geralmente designar um grau aceitável de erro para a quantidade medida, dada a natureza ou precisão das medições.

Graus de erro exemplificativos e típicos estão dentro de 20 por cento (%), preferencialmente dentro de 10%, e mais preferencialmente dentro de 5% de um dado valor ou gama de valores. Alternativamente, e em particular em sistemas biológicos, os termos "cerca de" e "aproximadamente" podem designar valores que estão dentro de uma ordem de magnitude, preferencialmente dentro de 10 ou 5 vezes, e mais preferencialmente dentro de 2 vezes de um dado valor. As quantidades numéricas dadas no presente documento são aproximadas a menos que declarado de outro modo, significando que o termo "cerca de" ou "aproximadamente" pode ser inferido quando não expressamente declarado.

[0039] O termo "terapia de reposição enzimática" ou "TRE" se refere à introdução de uma enzima purificada, não nativa, em um indivíduo tendo uma deficiência em tal enzima.

A proteína administrada pode ser obtida a partir de fontes naturais ou por expressão recombinante (conforme descrita mais em detalhe abaixo). O termo também se refere à introdução de uma enzima purificada em um indivíduo que necessite ou beneficie de outro modo da administração de uma enzima purificada, p. ex., que sofra de insuficiência enzimática. A enzima introduzida pode ser uma enzima recombinante, purificada, produzida in vitro, ou proteína purificada a partir de tecido ou fluido isolado, tal como, p. ex., de placenta ou leite animal, ou a partir de plantas.

[0040] Conforme usado no presente documento, o termo "equivalente de base livre" ou "FBE" se refere à quantidade de migalastate presente no migalastate ou no seu sal. Por outras palavras, o termo "FBE" significa tanto uma quantidade de base livre de migalastate, como a quantidade equivalente de base livre de migalastate que é fornecida por um sal de migalastate. Por exemplo, devido ao peso do sal de cloridrato, 150 mg de cloridrato de migalastate apenas fornece tanto migalastate quanto 123 mg da forma de base livre de migalastate. Se espera que outros sais tenham diferentes fatores de conversão, dependendo do peso molecular do sal.

[0041] O termo "migalastate" engloba a base livre de migalastate ou um seu sal farmaceuticamente aceitável (p.

ex., migalastate HCl), salvo especificamente indicado em contrário.

[0042] Os termos "mutação" e "variante" (por ex., como em "mutação suscetível ou variante") se referem a uma alteração na sequência de nucleotídeos de um gene ou de um cromossomo. Os dois termos referidos no presente documento são normalmente usados em conjunto - por ex., como em "mutação ou variante" - se referindo à mudança na sequência de nucleotídeos declarada na frase anterior. Se apenas um dos dois termos for recitado por algum motivo, o termo que faltava deveria ser incluído e se deve entender como tal.

Além disso, os termos "mutação suscetível" e "variante suscetível de tratamento" se referem a uma mutação ou variante que é suscetível de terapia com CF, por exemplo, uma mutação que é suscetível de terapia com migalastate. Um tipo particular de mutação ou variante suscetível é uma "mutação ou variante suscetível de ensaio HEK", que é uma mutação ou variante que é determinada como suscetível de terapia com migalastate de acordo com os critérios no ensaio HEK in vitro descrito no presente documento.

Doença de Fabry

[0043] A doença de Fabry é um distúrbio de armazenamento lisossômico ligado ao X, raro, progressivo e devastador.

Mutações no gene GLA resultam em uma deficiência da enzima lisossômica, α-Gal A, que é necessária para o metabolismo de glicoesfingolipídios. Começando cedo na vida, a redução da atividade de α-Gal A resulta em uma acumulação de glicoesfingolipídios, incluindo a GL-3 e a lyso-Gb3 no plasma, e leva aos sintomas e sequelas limitativas da vida da doença de Fabry, incluindo dor, sintomas gastrointestinais, falência renal, cardiomiopatia, eventos cerebrais vasculares, e mortalidade precoce. O início precoce da terapia e o tratamento ao longo da vida proporcionam uma oportunidade para retardar a progressão da doença e prolongar a esperança de vida.

[0044] A doença de Fabry engloba um espectro de gravidade da doença e idade de início, embora tenha sido tradicionalmente dividida em 2 fenótipos principais, "clássico" e "início tardio". O fenótipo clássico foi atribuído principalmente a indivíduos do sexo masculino com atividade de α-Gal A não detectável a baixa e início mais precoce de manifestações renais, cardíacas e/ou vasculares cerebrais. O fenótipo de início tardio foi atribuído principalmente a indivíduos do sexo masculino com atividade de α-Gal A residual mais elevada e início mais tardio dessas manifestações patológicas. Portadores do sexo feminino heterozigóticos expressam tipicamente o fenótipo de início tardio, mas dependendo do padrão de inativação do cromossomo X podem também apresentar o fenótipo clássico.

[0045] Foram identificadas mais de 1.000 mutações de GLA causadoras de doença de Fabry. Aproximadamente 60% são mutações de sentido trocado, resultando em substituições de aminoácidos simples na enzima α-Gal A. As mutações de GLA de sentido trocado resultam frequentemente na produção de formas anormalmente dobradas e instáveis da α‑Gal A e a maioria está associada ao fenótipo clássico. Mecanismos de controle de qualidade celular normais no retículo endoplasmático bloqueiam o trânsito dessas proteínas anormais para os lisossomos e as alvejam para degradação e eliminação prematura. Muitas formas mutantes de sentido trocado são alvos para o migalastate, uma chaperona farmacológica específica da α‑Gal A.

[0046] As manifestações clínicas da doença de Fabry abarcam um amplo espectro de gravidade e se correlacionam de certo modo com os níveis residuais de α-GAL de um paciente.

A maior parte dos pacientes atualmente tratados são referidos como pacientes com doença de Fabry clássica, e na sua maioria são indivíduos do sexo masculino. Esses pacientes experienciam doença em vários órgãos, incluindo os rins, coração e cérebro, aparecendo os sintomas de doença primeiramente na adolescência e progredindo tipicamente a gravidade até à morte na quarta ou quinta década de vida. Um certo número de estudos recentes sugere que há um grande número de indivíduos do sexo masculino e feminino não diagnosticados que têm uma variedade de sintomas da doença de Fabry, tais como função cardíaca ou renal comprometida e acidentes vasculares cerebrais, que habitualmente surgem pela primeira vez na idade adulta. Os indivíduos com esse tipo de doença de Fabry, chamada de doença de Fabry de início tardio, tendem a ter níveis residuais de α-GAL mais elevados do que os pacientes com a doença de Fabry clássica. Os indivíduos com a doença de Fabry de início tardio tipicamente experienciam pela primeira vez sintomas de doença na idade adulta, e frequentemente têm sintomas da doença centrados em um único órgão, tal como dilatação do ventrículo esquerdo ou falência renal progressiva. Para além disso, a doença de Fabry de início tardio também pode surgir na forma de acidentes vasculares cerebrais de causa desconhecida.

[0047] Pacientes portadores de Fabry têm insuficiência renal progressiva, e pacientes não tratados apresentam insuficiência renal em estágio terminal na quinta década de vida. Deficiência na atividade da α-Gal A leva a acumulação de GL-3 e glicoesfingolipídios relacionados em muitos tipos de células, incluindo células nos rins. A GL-3 se acumula em podócitos, células epiteliais e células tubulares do túbulo distal e loop de Henle. A insuficiência na função renal pode se manifestar como proteinúria e taxa de filtração glomerular reduzida.

[0048] Dado que a doença de Fabry é rara, envolve múltiplos órgãos, tem uma ampla gama de idades de início, e é heterogênea, o diagnóstico adequado é um desafio. O conhecimento é reduzido entre os profissionais de cuidados de saúde e os erros de diagnóstico são frequentes. O diagnóstico da doença de Fabry é mais frequentemente confirmado com base na atividade de α-Gal A diminuída no plasma ou leucócitos periféricos (WBC) uma vez que o paciente fique sintomático, acoplada a análise mutacional. Nos indivíduos do sexo feminino, o diagnóstico é ainda mais desafiador uma vez que a identificação enzimática de indivíduos do sexo feminino portadores é menos fidedigna devido a inativação aleatória do cromossomo X em algumas células do portador. Por exemplo, alguns portadores obrigatórios (filhas de indivíduos do sexo masculino classicamente afetados) têm atividades de enzima α-Gal A variando desde atividades normais até muito baixas. Uma vez que os portadores podem ter atividade de enzima α-Gal A normal nos leucócitos, apenas a identificação de uma mutação da α-Gal A por teste genético fornece a identificação e/ou diagnóstico precisos do portador.

[0049] Além disso, conforme descrito acima, a idade de início, progressão e gravidade da doença de Fabry é pelo menos parcialmente dependente da taxa de acumulação de substrato, o que se correlaciona com a atividade enzimática nos lisossomos. Desse modo, uma ausência completa de atividade residual pode corresponder ao rápido acúmulo de substrato e, portanto, a uma forma mais grave da doença (tendo início precoce e rápida progressão). No entanto, mesmo pequenas quantidades de atividade residual podem ser suficientes para degradar uma grande quantidade de substrato. Isso, por sua vez, levaria a uma doença mais branda com início tardio e progressão mais lenta devido ao acúmulo mais lento de substrato. Considerando esses fatores, se acredita que mesmo aumentos modestos na atividade enzimática podem reduzir o efeito de um fenótipo clínico grave. Os dados sugerem que, para a maioria dos DAL, apenas 1% a 6% da atividade normal foi estimada como suficiente para atrasar ou prevenir o início da doença ou produzir uma forma mais branda da doença. Ou seja, apenas pequenos aumentos na atividade poderiam ter um impacto significativo nos níveis de substrato e, desse modo, na gravidade da doença e na taxa de progressão da doença. Por outro lado, se espera que uma enzima lisossomal mutante que não apresente resposta in vitro também não responda in vivo.

[0050] Em uma ou mais modalidades, as formas mutantes ou variantes da α-Gal A consideradas favoráveis para o migalastate são definidas como mostrando um aumento relativo

(migalastate +10 µM) de ≥1,20 vezes e um aumento absoluto (migalastate +10 µM) de ≥ 3,0% do tipo selvagem quando a forma mutante da α-Gal A é expressa em células HEK-293 (referido como o "ensaio HEK") de acordo com o ensaio in vitro validado pelas Boas Práticas Laboratoriais (GLP) (Ensaio GLP HEK ou Favorável para o Migalastate). Tais mutações ou variantes são também referidas no presente documento como mutações ou variantes "favoráveis para o ensaio HEK".

[0051] Foram fornecidos métodos de triagem anteriores que avaliam o impulso enzimático antes do início do tratamento. Por exemplo, foi utilizado um ensaio usando células HEK-293 em ensaios clínicos para prever se uma dada mutação será responsiva a tratamento com chaperonas farmacológicas (p. ex., migalastate). Nesse ensaio, são criados construtos de cDNA. As correspondentes formas mutantes da α-Gal A são transitoriamente expressas em células HEK-293. As células são então incubadas ± migalastate (17 nM a 1 mM) durante 4 a 5 dias. Em seguida, os níveis de α-Gal A são medidos em lisados celulares usando um substrato fluorogênico sintético (4-MU-α-Gal) ou por western blot.

Isso foi feito para mutações por mutações de inserção/deleção pequena na matriz ou de sentido trocado conhecidas, causadoras de doenças. As mutações que foram anteriormente identificadas como responsivas a uma CF (p. ex. migalastate)

usando esses métodos estão listadas na Pat. dos E.U.A. N.º 8,592,362, que é incorporada neste documento como referência na sua totalidade.

[0052] As mutações susceptíveis ao ensaio HEK incluem, pelo menos, aquelas mutações listadas em uma tabela de referência farmacológica (por exemplo, aquelas recitados nos rótulos de Produtos norte-americanos ou Internacionais para um produto de migalastate tal como GALAFOLD ®). Conforme usado neste documento, "tabela de referência farmacológica" se refere a qualquer registro escrito ou eletrônico acessível ao público, incluído no rótulo do produto dentro da embalagem de um produto de migalastate (por exemplo, GALAFOLD ®) ou em um sitio da internet acessível por prestadores de cuidados de saúde, que transmite se uma mutação ou variante em particular é responsiva à terapia de CF com migalastate (por exemplo, GALAFOLD®) e não está necessariamente limitada a registros escritos apresentados em forma de tabela. Em uma modalidade da presente invenção, uma "tabela de referência farmacológica" se refere, desse modo, a qualquer depósito de informação que inclui uma ou mais mutações ou variantes suscetíveis. Em outra modalidade, uma "tabela de referência farmacológica" se refere a um depositário atualizado de mutações ou variantes suscetíveis que inclui as novas mutações ou variantes divulgadas neste documento (ou seja, D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, R392T, N53K,

Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, N408Y, V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, ou T412P). Uma tabela de referência farmacológica exemplar para mutações suscetíveis de ensaio HEK pode ser encontrada no resumo das características do produto e/ou informações de prescrição para GALAFOLD ® em vários países nos quais GALAFOLD® está aprovado para uso, ou em um sítio da internet tal como www.galafoldamenabilitytable.com ou www.fabrygenevariantsearch.com, cada um dos quais é incorporado no presente documento por referência na sua totalidade.

[0053] No entanto, uma vez que apenas certas mutações são suscetíveis ao tratamento com migalastate, existe uma necessidade para identificar novas mutações e determinar se tais mutações são suscetíveis à terapia com migalastate.

Conforme descrito no Exemplo abaixo, várias novas mutações foram identificadas e determinadas como sendo mutações suscetíveis à terapia com migalastate. Essas mutações incluem D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, R392T, N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, N408Y, V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, e T412P.

[0054] Por conseguinte, em uma ou mais modalidades, o migalastate é usado para tratar a doença de Fabry e/ou melhorar a atividade da α-Gal A em um paciente tendo uma mutação α-Gal A selecionada a partir do grupo consistindo em: D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, e R392T.

Em uma ou mais modalidades, o migalastate é usado para tratar a doença de Fabry e/ou melhorar a atividade da α-Gal A em um paciente tendo uma mutação α-Gal A selecionada a partir do grupo consistindo em: N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, e N408Y. Em uma ou mais modalidades, o migalastate é usado para tratar a doença de Fabry e/ou melhorar a atividade da α-Gal A em um paciente tendo uma mutação α-Gal A selecionada a partir do grupo consistindo em: V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, e T412P. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação D33H. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação G35A. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação Y88S. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação T194A. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação W204G. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação Y216S. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação Q250K. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação R392T. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação N53K. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação Q57R.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação S62delinsLA.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação M96V.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação R112L.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação D155E.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação N228D.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação Q330P.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação V339A.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação K391E.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação N408Y.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação V22G.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação N34H.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação G80V.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação Q107R.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação Y152D.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação A156S.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação L189F.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação W204L.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação S238G.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação I239M.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação A257V.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação P259Q.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação N320H.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação P323T.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação E338V. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação P380L. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação T412P. Em várias modalidades, essas mutações α-Gal A são relativas à sequência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 2.

[0055] Alterações de nucleotídeos exemplificativas associadas com essas novas mutações são mostradas na Tabela 1 abaixo: Tabela 1: Novas mutações Suscetíveis a Migalastate

Alteração Alteração Alteração da nucleotídica nucleotídica sequência proteica c.97G>C c.G97C D33H c.104G>C c.G104C G35A c.263A>C c.A263C Y88S c.580A>G c.A580G T194A c.610T>G c.T610G W204G c.647A>C c.A647C Y216S c.748C>A c.C748A Q250K c.1175G>C c.G1175C R392T c.159C>G ou c.C159G ou c.C159A N53K c.159C>A c.170A>G c.A170G Q57R c.184_185insTAG c.184_185insTAG S62delinsLA c.286A>G c.A286G M96V c.335G>T c.G335T R112L c.465T>A ou c.T465A ou c.T465G D155E c.465T>G c.682A>G c.A682G N228D c.989A>C c.A989C Q330P c.1016T>C c.T1016C V339A c.1171A>G c.A1171G K391E c.1222A>T c.A1222T N408Y c.65T>G c.T65G V22G c.100A>C c.A100C N34H c.239G>T c.G239T G80V c.320A>G c.A320G Q107R c.454T>G c.T454G Y152D c.466G>T c.G466T A156S c.567G>C ou c.G567C ou c.G567T L189F c.567G>T c.611G>T c.G611T W204L c.712A>G c.A712G S238G c.717A>G c.A717G I239M c.770C>T c.C770T A257V c.776C>A c.C776A P259Q c.958A>C c.A958C N320H c.967C>A c.C967A P323T c.1013A>T c.A1013T E338V c.1139C>T c.C1139T P380L c.1234A>C c.A1234C T412P

[0056] Por conseguinte, em várias modalidades, o migalastate é usado para tratar a doença de Fabry e/ou melhorar a atividade de α-Gal A em um paciente tendo uma mutação GLA selecionada a partir do grupo consistindo em: c.97G>C, c.104G>C, c.263A>C, c.580A>G, c.610T>G, c.647A>C, c.748C>A e c.1175G>C. Em algumas modalidades, o migalastate é usado para tratar a doença de Fabry e/ou melhorar a atividade de α-Gal A em um paciente tendo uma mutação GLA selecionada a partir do grupo consistindo em: c.159C>G de c.159C>A, c.170A>G, c.184_185insTAG, c.286A>G, c.335G>T, c.465T>A de c.465T>G, c.682A>G, c.989A>C, c.1016T>C, c.1171A>G, e c.1222A>T. Em algumas modalidades, o migalastate é usado para tratar a doença de Fabry e/ou melhorar a atividade da α-Gal A em um paciente tendo uma mutação GLA selecionada a partir do grupo consistindo em: c.65T>G, c.100A>C, c.239G>T, c.320A>G, c.454T>G, c.466G>T, c.567G>C ou c.567G>T, c.611G>T, c.712A>G, c.717A>G,

c.770C>T, c.776C>A, c.958A>C, c.967C>A, c.1013A>T, c.1139C>T, e c.1234A>C. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.97G>C. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.104G>C. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.263A>C.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.580A>G. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.610T>G. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.647A>C. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.748C>A. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.1175G>C. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.159C>G ou c.159C>A. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.170A>G. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.184_185insTAG. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.286A>G. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.335G>T.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.465T>A ou c.465T>G. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.682A>G. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.989A>C. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.1016T>C. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.1171A>G.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.1222A>T. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.65T>G. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.100A>C. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.239G>T. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.320A>G. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.454T>G.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.466G>T. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.567G>C ou c.567G>T. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.611G>T. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.712A>G. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.717A>G.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.770C>T. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.776C>A. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.958A>C. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.967C>A. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.1013A>T. Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.1139C>T.

Em uma ou mais modalidades, o paciente tem a mutação GLA c.1234A>C. Em várias modalidades, essas mutações GLA são relativas à sequência nucleica mostrada na SEQ ID NO: 3.

[0057] Além disso, várias modalidades da presente invenção conferem CF para o tratamento da doença de Fabry em um paciente tendo uma mutação no gene codificando α-Gal A, em que o paciente é identificado como tendo uma mutação de sentido trocado em uma α-Gal humana A codificada por uma sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID NO: 1 e/ou SEQ ID NO: 3. Outro aspeto da invenção se refere a um método de tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry. Em uma ou mais modalidades, o método compreende a administração a um paciente de uma dose terapeuticamente eficaz de uma CF de α-Gal A. Em modalidades adicionais, o paciente tem uma mutação de sentido trocado na sequência de ácido nucleico codificando α-Gal A. Outro aspeto da invenção se refere a um método para intensificar a α-Gal A em um paciente com diagnóstico ou suspeito de ter doença de Fabry.

Em uma ou mais modalidades, o método compreende a administração a um paciente de uma dose terapeuticamente eficaz de uma CF de α-Gal A, em que o paciente tem um α-Gal A mutante codificada por uma sequência de ácido nucleico tendo uma mutação de sentido trocado em relação à SEQ ID NO: 1 e/ou SEQ ID NO: 3. Detalhes e modalidades adicionais desses usos e métodos seguem abaixo. Qualquer uma das modalidades relacionadas com um método de tratamento de um paciente com doença de Fabry, um método de intensificar α-Gal A em um paciente com diagnóstico ou suspeita de ter doença de Fabry, uso de uma chaperona farmacológica para α-Gal A para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um paciente diagnosticado com doença de Fabry ou para uma chaperona farmacológica para α-Gal A para uso no tratamento de um paciente diagnosticado com doença de Fabry, em que o paciente é identificado como tendo uma mutação de sentido trocado em uma α-Gal A humana codificada por uma sequência de ácido nucleico estabelecida na SEQ ID NO: 1 e/ou SEQ ID NO: 3 pode ser combinada com qualquer uma das outras modalidades da invenção, por exemplo, modalidades relacionadas às CF e suas dosagens adequadas.

[0058] Em uma ou mais modalidades, o paciente pode ter outras mutações em seu gene GLA. Por exemplo, pode haver mutações na região do íntron que podem ou não afetar a enzima α-Gal A resultante. Desse modo, em uma ou mais modalidades, o paciente tem α-Gal A mutante codificada por uma sequência de ácido nucleico tendo pelo menos 95, 96, 97, 98, 99, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4, 99,5, 99,6, 99,7, 99,8 ou 99,9% de identidade com a SEQ ID NO: 1. Além disso, o paciente pode ter uma ou mais mutações adicionais na região codificadora do gene GLA. Desse modo, em uma ou mais modalidades, o paciente tem α-Gal A mutante codificada por uma sequência de ácido nucleico tendo pelo menos 95, 96, 97, 98, 99, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4, 99,5, 99,6, 99,7, 99,8 ou 99,9% de identidade com a SEQ ID NO: 3. Além disso, em uma ou mais modalidades, o paciente tem 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20 ou 30 mutações em relação à SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 3. É também notado que algumas mutações de ácido nucleico na SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 3 podem resultar em nenhuma alteração no aminoácido para a proteína resultante, uma vez que vários aminoácidos são codificados por múltiplas sequências de ácido nucleico. Uma vez mais, qualquer uma dessas modalidades pode ser combinada com qualquer uma das outras modalidades da invenção, por exemplo, modalidades relacionadas a mutações suscetíveis, as CF e as suas dosagens adequadas.

Chaperonas farmacológicas

[0059] A ligação de inibidores de moléculas pequenas de enzimas associadas a DAL pode aumentar a estabilidade tanto da enzima mutante como da correspondente enzima de tipo selvagem (ver Pat. dos E.U.A. N. os 6,274,597; 6,583,158; 6,589,964; 6,599,919; 6,916,829 e 7,141,582, todas incorporadas neste documento como referência). Em particular, a administração de derivados de moléculas pequenas de glicose e galactose, que são inibidores competitivos específicos e seletivos para várias enzimas lisossômicas alvo, aumentou eficazmente a estabilidade das enzimas em células in vitro e, desse modo, aumentou o tráfego das enzimas para o lisossomo. Desse modo, ao aumentar a quantidade de enzima no lisossomo, é de esperar que aumente a hidrólise dos substratos enzimáticos. A teoria original por trás dessa estratégia foi tal como se segue: uma vez que a proteína enzimática mutante é instável no RE (Ishii et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 1996; 220: 812-815), a proteína enzimática é retardada na via de transporte normal (RE -> aparelho de Golgi -> endossomos -> lisossomo) e é degradada de forma prematura. Por conseguinte, um composto que se liga e aumenta a estabilidade de uma enzima mutante pode servir como uma "chaperona" para a enzima e aumentar a quantidade que pode sair do RE e se mover para os lisossomos.

Adicionalmente, uma vez que o dobramento e tráfego de algumas proteínas de tipo selvagem são incompletos, com até 70% de algumas proteínas de tipo selvagem a serem degradadas em alguns casos antes de atingirem a sua localização celular final, as "chaperonas" podem ser usadas para estabilizar enzimas de tipo selvagem e aumentar a quantidade de enzima que consegue sair do RE e prosseguir o tráfego para os lisossomos.

[0060] Em uma ou mais modalidades, a chaperona farmacológica compreende o migalastate ou um seu sal. O composto migalastate, também conhecido como 1- desoxigalactonojirimicina (1-DGJ) ou (2R,3S,4R,5S)-2- (hidroximetil)piperidino-3,4,5-triol é um composto tendo a seguinte fórmula química: e

Base livre de migalastate

[0061] Tal como discutido neste documento, sais farmaceuticamente aceitáveis de migalastate também podem ser usados na presente invenção. Quando é usado um sal de migalastate, a dosagem do sal será ajustada de forma a que a dose de migalastate recebida pelo paciente seja equivalente à quantidade que teria sido recebida se a base livre de migalastate tivesse sido usada. Um exemplo de um sal farmaceuticamente aceitável do migalastate é o migalastate HCl: Migalastate HCl

[0062] O migalastate é um iminoaçúcar de baixo peso molecular e é um análogo da galactose terminal da GL-3.

Estudos farmacológicos in vitro e in vivo demonstraram que o migalastate atua como uma chaperona farmacológica, se ligando seletivamente e reversivelmente, com elevada afinidade, ao sítio ativo de α-Gal A de tipo selvagem e formas mutantes específicas de α-Gal A. A ligação de Migalastate estabiliza essas formas mutantes de α-Gal A no retículo endoplasmático, facilitando o seu tráfego adequado para os lisossomos, onde a dissociação do migalastate permite que a α-Gal A reduza o nível de GL-3 e outros substratos.

[0063] Em uma modalidade específica, a CF compreende migalastate ou um seu sal. Em modalidades adicionais, a CF compreende cloridrato de migalastate.

[0064] Qualquer uma dessas CF para α-Gal A pode ser usada em combinação com qualquer uma das outras modalidades da invenção, por exemplo, modalidades relacionadas a um método de tratamento de um paciente com doença de Fabry, um método de intensificação de α-Gal A em um paciente com diagnóstico ou suspeito de ter a doença de Fabry, uso de uma chaperona farmacológica para α-Gal A para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry ou a uma chaperona farmacológica para α- Gal A para uso no tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry, bem como modalidades relacionadas a doses adequadas de CF, mutações suscetíveis e para o tratamento de um paciente de Fabry tendo certas mutações na sequência de ácido nucleico codificando α-Gal A.

Dosagem, Formulação e Administração

[0065] Em uma ou mais modalidades, o paciente de Fabry é administrado com migalastate ou um seu sal a uma frequência de uma vez de dois em dois dias (também referida como "QOD").

Em várias modalidades, as doses descritas neste documento se referem a cloridrato de migalastate ou a uma dose equivalente de migalastate ou de um seu sal diferente do sal de cloridrato. Em algumas modalidades, essas doses se referem à base livre de migalastate. Em modalidades alternativas, essas doses se referem a um sal de migalastate. Em modalidades adicionais, o sal de migalastate é cloridrato de migalastate. A administração de migalastate ou de um sal de migalastate é referida neste documento como "terapia com migalastate".

[0066] A quantidade eficaz de migalastate ou do seu sal pode estar na gama de cerca de 100 mg de FBE a cerca de 150 mg de FBE. Doses exemplificativas incluem cerca de 100 mg de FBE, cerca de 105 mg de FBE, cerca de 110 mg de FBE, cerca de 115 mg de FBE, cerca de 120 mg de FBE, cerca de 123 mg de FBE, cerca de 125 mg de FBE, cerca de 130 mg de FBE, cerca de 135 mg de FBE, cerca de 140 mg de FBE, cerca de 145 mg de FBE ou cerca de 150 mg de FBE.

[0067] Novamente, se percebe que 150 mg de cloridrato de migalastate é equivalente a 123 mg da forma de base livre de migalastate. Desse modo, em uma ou mais modalidades, a dose é de 150 mg de cloridrato de migalastate ou uma dose equivalente de migalastate ou de um seu sal diferente do sal de cloridrato, administrada a uma frequência de uma vez de dois em dois dias. Tal como estabelecido acima, essa dose é referida como 123 mg de FBE de migalastate. Em modalidades adicionais, a dose é de 150 mg de cloridrato de migalastate administrada a uma frequência de uma vez de dois em dois dias. Em outras modalidades, a dose é de 123 mg de base livre de migalastate administrada a uma frequência de uma vez de dois em dois dias.

[0068] Em várias modalidades, a quantidade eficaz é de cerca de 122 mg, cerca de 128 mg, cerca de 134 mg, cerca de 140 mg, cerca de 146 mg, cerca de 150 mg, cerca de 152 mg, cerca de 159 mg, cerca de 165 mg, cerca de 171 mg, cerca de 177 mg ou cerca de 183 mg de cloridrato de migalastate.

[0069] Consequentemente, em várias modalidades, a terapia com migalastate inclui a administração de 123 mg de FBE a uma frequência de uma vez de dois em dois dias, tal como 150 mg de cloridrato de migalastate de dois em dois dias.

[0070] A administração de migalastate ou de um seu sal pode ocorrer por um certo período de tempo. Em uma ou mais modalidades, o migalastate ou o seu sal é administrado durante uma duração de pelo menos 28 dias, tal como pelo menos 30, 60 ou 90 dias ou pelo menos 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 16, 20, 24, 30 ou 36 meses ou pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 anos. Em várias modalidades, a terapia com migalastate é uma terapia com migalastate de longo prazo de pelo menos 6 meses, tal como pelo menos 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 16, 20, 24, 30 ou 36 meses ou pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 anos.

[0071] A administração de migalastate ou de um seu sal de acordo com a presente invenção pode ser em uma formulação adequada para qualquer via de administração, mas é preferencialmente administrado em uma forma de dosagem oral tal como um comprimido, cápsula ou solução. Como exemplo, são administradas oralmente ao paciente cápsulas contendo, cada uma delas, 150 mg de cloridrato de migalastate ou uma dose equivalente de migalastate ou de um seu sal diferente do sal de cloridrato.

[0072] Em algumas modalidades, a CF (p. ex., migalastate ou um seu sal) é administrada oralmente. Em uma ou mais modalidades, a CF (p. ex., migalastate ou um seu sal) é administrada por injeção. A CF pode ser acompanhada por um portador farmaceuticamente aceitável, o qual pode depender do método de administração.

[0073] Em uma ou mais modalidades, a CF (p. ex., migalastate ou um seu sal) é administrada como monoterapia, e pode estar em uma forma adequada para qualquer via de administração, incluindo p. ex., oralmente na forma de comprimidos ou cápsulas ou líquido, ou em solução aquosa estéril para injeção. Em outras modalidades, a CF é fornecida em um pó seco liofilizado a ser adicionado à formulação da enzima de reposição durante, ou imediatamente após reconstituição para evitar agregação da enzima in vitro antes da administração.

[0074] Quando a CF (p. ex., migalastate ou um seu sal) é formulada para administração oral, os comprimidos ou cápsulas podem ser preparados por meios convencionais com excipientes farmaceuticamente aceitáveis tais como agentes de ligação (p. ex., amido de milho pré-gelatinizado, polivinilpirrolidona ou hidroxipropilmetilcelulose); agentes de enchimento (p. ex., lactose, celulose microcristalina ou hidrogenofosfato de cálcio); lubrificantes (p. ex., estearato de magnésio, talco ou sílica); agentes de desintegração (p. ex., amido de batata ou glicolato de amido sódico); ou agentes umectantes (p.

ex., laurilsulfato de sódio). Os comprimidos podem ser revestidos por métodos bem conhecidos na técnica. As preparações líquidas para administração oral podem tomar a forma de, por exemplo, soluções, xaropes ou suspensões, ou podem ser apresentadas como um produto seco para constituição com água ou um outro veículo adequado antes do uso. Tais preparações líquidas podem ser preparadas por meios convencionais com aditivos farmaceuticamente aceitáveis tais como agentes de suspensão (p. ex., xarope de sorbitol, derivados da celulose ou gorduras hidrogenadas comestíveis); agentes emulsionantes (p. ex., lecitina ou acácia); veículos não aquosos (p. ex., óleo de amêndoas, ésteres oleosos, álcool etílico ou óleos vegetais fracionados); e conservantes (p. ex., p-hidroxibenzoatos de metila ou propila ou ácido sórbico). As preparações também podem conter sais tamponantes, agentes aromatizantes, corantes e edulcorantes, conforme apropriado. As preparações para administração oral podem ser adequadamente formuladas para proporcionarem liberação controlada do composto de chaperona ativo.

[0075] As formulações farmacêuticas da CF (p. ex., migalastate ou um seu sal) adequadas para uso parenteral/injetável incluem geralmente soluções aquosas estéreis (quando solúveis em água), ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis estéreis. Em todos os casos, a forma tem de ser estéril e tem de ser fluida de modo a existir fácil seringabilidade. Ela deve ser estável sob as condições de fabricação e armazenamento, e tem de ser preservada contra a ação contaminante de microrganismos tais como bactérias e fungos. O portador pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propilenoglicol, e polietilenoglicol, e semelhantes), suas misturas adequadas, ou óleos vegetais. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento tal como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessário no caso de dispersão, e pelo uso de tensoativos. A prevenção da ação de microrganismos pode ser alcançada por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, álcool benzílico, ácido sórbico, e semelhantes. Em muitos casos, será razoável incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares ou cloreto de sódio. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser alcançada usando nas composições agentes que retardam a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina.

[0076] Soluções injetáveis estéreis são preparadas incorporando a enzima purificada (se alguma) e a CF (p. ex., migalastate ou um seu sal) na quantidade requerida no solvente apropriado com vários dos outros ingredientes enumerados acima, conforme necessário, seguido de esterilização por filtração ou terminal. Geralmente, as dispersões são preparadas incorporando os vários ingredientes ativos esterilizados em um veículo estéril que contém o meio de dispersão básico e os outros ingredientes requeridos, a partir dos enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação preferidos são a secagem sob vácuo e a técnica de liofilização, as quais originam um pó do princípio ativo mais qualquer ingrediente adicional desejado a partir da sua solução previamente esterilizada por filtração.

[0077] A formulação pode conter um excipiente.

Excipientes farmaceuticamente aceitáveis que podem ser incluídos na formulação são tampões tais como tampão citrato, tampão fosfato, tampão acetato, e tampão bicarbonato, aminoácidos, ureia, álcoois, ácido ascórbico, e fosfolipídios; proteínas, tais como albumina sérica, colágeno e gelatina; sais tais como EDTA ou EGTA, e cloreto de sódio; lipossomos; polivinilpirrolidona; açúcares, tais como dextrano, manitol, sorbitol, e glicerol; propilenoglicol e polietilenoglicol (p. ex., PEG-4000, PEG- 6000); glicerol; glicina ou outros aminoácidos; e lipídios.

Sistemas tamponantes para uso com as formulações incluem tampões citrato; acetato; bicarbonato; e fosfato. O tampão fosfato é uma modalidade preferida.

[0078] A via de administração do composto de chaperona pode ser oral ou parenteral, incluindo intravenosa, subcutânea, intra-arterial, intraperitoneal, oftálmica, intramuscular, bucal, retal, vaginal, intraorbital, intracerebral, intradérmica, intracraniana, intraespinhal, intraventricular, intratecal, intracisternal, intracapsular, intrapulmonar, intranasal, transmucosal, transdérmica, ou através de inalação.

[0079] A administração das formulações parenterais acima descritas do composto de chaperona pode ser feita por injeções periódicas de um bólus da preparação, ou pode ser administrada por administração intravenosa ou intraperitoneal a partir de um reservatório que é externo

(p. ex., um saco i.v.) ou interno (p. ex., um implante bioerodível).

[0080] As modalidades relacionadas a formulações farmacêuticas e administração podem ser combinadas com qualquer uma das outras modalidades da invenção, por exemplo, modalidades relacionadas a métodos de tratamento de pacientes com doença de Fabry, uso de uma chaperona farmacológica para α-Gal A para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry ou a uma chaperona farmacológica para α- Gal A para uso no tratamento de um paciente com diagnóstico de doença de Fabry, bem como modalidades relacionadas a mutações suscetíveis, as CF adequadas e suas dosagens.

[0081] Em uma ou mais modalidades, a CF (p. ex., migalastate ou um seu sal) é administrada em combinação com TRE. A TRE aumenta a quantidade de proteína introduzindo exogenamente uma enzima de tipo selvagem ou biologicamente funcional por meio de infusão. Essa terapia foi desenvolvida para muitos distúrbios genéticos, incluindo DAL tais como a doença de Fabry, conforme mencionado acima. Após a infusão, se espera que a enzima exógena seja absorvida por tecidos através de um mecanismo não específico ou específico do receptor. Em geral, a eficácia de absorção não é elevada, e o tempo de circulação da proteína exógena é curto. Para além disso, a proteína exógena é instável e sujeita a degradação intracelular rápida, bem como a ter potencial para reações imunológicas adversas com tratamentos posteriores. Em uma ou mais modalidades, a chaperona é administrada ao mesmo tempo que a enzima de reposição (p. ex., reposição de α-Gal A). Em algumas modalidades, a chaperona é coformulada com a enzima de reposição (p. ex., α-Gal A de reposição).

[0082] A referência ao longo do presente relatório descritivo a "uma modalidade", "certas modalidades", "várias modalidades", "uma ou mais modalidades" ou "uma modalidade" significa que uma característica, estrutura, material ou aspecto particular descrito em conexão com a modalidade está incluído em, pelo menos, uma modalidade da invenção. Desse modo, os aparecimentos das frases tais como "em uma ou mais modalidades", "em certas modalidades", "em várias modalidades", "em uma modalidade" ou "em uma modalidade" em vários lugares ao longo do presente relatório descritivo não estão se referindo necessariamente à mesma modalidade da invenção. Além do mais, as características, estruturas, materiais ou aspectos particulares podem ser combinados de qualquer modo adequado em uma ou mais modalidades.

[0083] Embora a invenção tenha sido descrita no presente documento com referência a modalidades particulares, se deve entender que essas modalidades são meramente ilustrativas dos princípios e aplicações da presente invenção. Será evidente para os peritos na técnica que podem ser feitas várias modificações e variações ao método e dispositivo da presente invenção sem nos afastarmos do espírito e escopo da invenção. Assim, se pretende que a presente invenção inclua modificações e variações que estão dentro do escopo das reivindicações em anexo e seus equivalentes.

EXEMPLO: Efeito de Migalastate em Mutações de α-Gal A

[0084] A atividade de α-Gal A foi medida em lisados preparados a partir de células HEK-293 transfectadas transitoriamente com a forma mutante de α-Gal A indicada e incubadas na ausência ou na presença de migalastate a 10 uM por 5 dias. A atividade de α-Gal A é expressa como nmoles de 4-MU livre liberado por miligrama de proteína por hora (nmol/mg/h). A atividade de α-Gal A de linha de base e a atividade de α-Gal A após incubação com migalastate a l0 uM, foram adicionalmente expressas como uma porcentagem da atividade de α-Gal A de tipo selvagem (% WT) de linha de base. A atividade de α-Gal A de tipo selvagem que foi usada para calcular essas porcentagens foi a atividade média medida em lisados a partir de células transfectadas de tipo selvagem, incubadas na ausência de migalastate, medida em paralelo.

[0085] Os resultados do teste de atividade e3 α-Gal A para as novas mutações D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, e R392T são mostrados na Tabela 2 abaixo:

Tabela 2: Efeito de Migalastate na atividade de α-Gal

A Forma D33H G35A Y88S T194A W204G Y216S Q250K R392T mutante de α-Gal

A Atividad 1292 19688 1510 3751 BLD 635 ± 4389 30058 e de α- 5 ± ± ± 52 ± 287 64 ± 500 ± Gal A de 915 1062 1487 linha de base (nmol/mg /h) Atividad 2490 31694 5542 10315 1695 ± 11238 11325 36679 e de α- 8 ± ± ± ± 459 198 ± 751 ± ± Gal A de 1775 1949 376 1111 1896 migalast ate a 10 μM (nmol/mg /h) Valor de 0,00 0,000 0,00 0,000 0,0001 0,000 0,000 0,001 p de 01 1 01 1 1 1 4 Mann- Whitney

U Atividad 36,1 51,1 3,8 10,8 N/A 2,0 ± 16,1 104,6 e de α- ± ± 3,2 ± ± 0,7 0,2 ± 1,5 ± 6,8 Gal A de 2,4 0,2 linha de base (%WT)

Atividad 68,8 82,1 14,1 30,5 6,5 ± 34,7 41,6 125,9 e de α- ± ± 5,6 ± ± 2,0 0,7 ± 1,8 ± 3,1 ± 6,2 Gal A de 4,3 1,3 migalast ate a 10 μM (%WT) Aumento 32,7 31,0 10,3 19,7 6,5 32,7 25,5 21,3 absoluto (% WT) Aumento 1,93 1,61 3,67 2,75 NC 17,70 2,58 1,22 relativo

[0086] Os resultados do teste de atividade de α-Gal A para as novas mutações N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, e N408Y são mostrados na Tabela 3 abaixo: Tabela 3: Efeito de Migalastate na atividade de α-Gal

A Ativi- Ativi- Ativi- dade Ativi- dade de dade de α- Valor dade de Au- Forma α-Gal A de α- Gal A de p α-Gal A mento Au- mut- de Gal A de de de abso- mento ante migala- de linha Mann- migalas luto rela- de α- state a linha de Whitne tate a (% tivo Gal A 10 μM de base y U 10 μM WT) (nmol/m base (nmol/ (%WT) g/h) (%WT) mg/h) 5143 ± 13895 ± 14,6 ± 38,6 ± N53K 0,0001 24,0 2,70 419 1270 1,0 2,5

20289 26357 ± 80,9 ± 105,0 ± Q57R 0,0001 24,0 1,30 ± 995 916 3,8 3,0 S62de 159 ± 8115 ± 0,4 ± 21,3 ± linsL 0,0001 20,9 50,92 27 810 0,1 1,7

A 5458 ± 14612 ± 14,0 ± 38,1 ± M96V 0,0001 24,2 2,68 489 1009 1,2 2,4 2364 ± 7,5 ± R112L BLD 0,0001 N/A 7,5 NC 296 1,1 1738 ± 6619 ± 5,3 ± 19,8 ± D155E 0,0001 14,5 3,81 78 337 0,3 1,0 6264 ± 25816 ± 15,0 ± 63,2 ± N228D 0,0001 48,2 4,12 654 2273 1,5 5,4 5593 ± 12375 ± 21,5 ± 45,8 ± Q330P 0,0001 24,4 2,21 320 664 1,6 1,9 18918 25174±2 48,8 ± 65,6 ± V339A 0,0339 16,8 1,33 ± 2287 895 3,3 4,2 7853 ± 15979 ± 20,4 ± 40,4 ± K391E 0,0001 20,0 2,03 735 1367 2,0 2,9 11158 23273 ± 40,9 ± 85,5 ± N408Y 0,0001 44,6 2,09 ± 1707 2965 4,9 7,7

[0087] Os resultados do teste de atividade de α-Gal A para as novas mutações V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, e T412P são mostrados na Tabela 4 abaixo: Tabela 4: Efeito de Migalastate na atividade de α-Gal

A Forma Ativi- Ativi- Valor Ativi- Ativi- Au- Au- mutan dade de dade de de p dade dade de mento mento te de α-Gal A α-Gal A de de α- α-Gal A abso-

α-Gal de de Mann- Gal A de luto rela- A linha migalas Whitne de migala- (% tivo de base tate a y U linha state a WT) (nmol/m 10 μM de 10 μM g/h) (nmol/m base (%WT) g/h) (%WT) 4663 ± 7150 ± 15,5 ± 24,6 ± V22G 0,0067 9,0 1,53 557 700 1,8 2,8 1414 ± 3,6 ± N34H BLD 0,0001 N/A 3,6 NC 100 0,2 765 ± 2434 ± 2,1 6,4 ± G80V 0,0001 4,3 3,18 56 333 ±0.l 0,6 24590 ± 31193 ± 88,3 ± 109,8 ± Q107R 0,0206 21,5 1,27 1705 2248 7,0 8,4 2397 ± 6594 ± 6,0 ± 16,7 ± Y152D 0,0001 10,7 2,75 346 294 0,9 1,1 24479 ± 31597 ± 66,7 ± 85,1 ± A156S 0,0111 18,4 1,29 1666 2293 5,0 5,3 22405 ± 27388 ± 69,3 84,6 L189F 0,0266 15,3 1,22 1496 1605 ±3,9 ±3,8 16126 ± 32649 ± 36,9 ± 84,3 ± W204L 0,0002 47,4 2,02 2360 3037 3,8 5,9 5898 25106 ± 18,7 86,4 S238G 0,0001 67,7 4,26 ±877 161 1 ±2,1 ±7,2 4849 ± 24827 ± 13,9 ± 69,3 ± I239M 0,0001 55,5 5,12 622 3056 1,7 6,9 16412 ± 30313 ± 55,5 ± 99,9 ± A257V 0,0001 44,4 1,85 1096 1981 3,3 4,6 13658 ± 25935 ± 37,6 73,6 P259Q 0,0001 36,1 1,90 1388 2020 ±3,4 ±5,0 8554 ± 22149 ± 20,6 ± 52,9 ± N320H 0,0001 32,2 2,59 344 1050 1,3 3,1

24566 ± 29631 ± 59,0 ± 71,3 ± P323T 0,0008 12,3 1,21 1350 1144 4,2 4,1 11903 21807 30,1 54,8 E338V 0,0001 24,7 1,83 ±541 ±845 ±1,7 ±2,2 1424 ± 4248 ± 3,4 ± 10,6 ± P380L 0,0001 7,1 2,98 60 369 0,2 1,0 639 ± 7159 ± 1,7 ± 18,6 ± T412P 0,0001 16,9 11,21 25 459 0,2 1,2

[0088] Nas Tabelas 2-4, os valores para a média ± erro padrão da média (SEM) foram calculados. nmol/mg/h indica "nmoles de 4-MU livre liberado por mg de proteína por hora".

WT indica "tipo selvagem". NC indica "não calculável". N/A indica "não aplicável".

[0089] Atividade de α-Gal A de linha de base e de migalastate a 10 μM As diferenças na atividade de α-Gal A entre os lisados incubados na ausência e presença de migalastate a 10 μM foram determinados usando um teste de Mann Whitney U de uma via; um aumento de migalastate a 10 μM com um p <0,05 foi considerado significativo. "BLD" indica que a atividade de α-Gal A média estava abaixo do limite de detecção (<142 nmol/mg/h).

[0090] Atividade de α-Gal A de linha de base (% WT) = (atividade de α-Gal A nos lisados de células transfectadas mutantes sem migalastate ÷ atividade de α-Gal A nos lisados de células transfectadas sem migalastate de tipo selvagem) * 100.

[0091] Atividade de α-Gal A de migalastate a 10 μM (% WT) = (atividade de α-Gal A nos lisados de células transfectadas mutantes incubados com migalastate a 10 μM ÷ atividade de α-Gal A nos lisados de células transfectadas sem migalastate de tipo selvagem) * 100.

[0092] Aumento absoluto (% WT) = é a atividade de α-Gal A de migalastate a 10 μM (% WT) menos a atividade de α-Gal A de linha de base (% WT).

[0093] Aumento Relativo é a atividade de α-Gal A de migalastate a 10 μM nos lisados de célula transfectada mutante ÷ atividade de α-Gal A de linha de base nos lisados de células transfectadas mutantes incubados sem migalastate.

[0094] Como pode ser visto a partir da Tabela 2, as novas mutações de α-Gal A D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, e R392T demonstraram uma resposta in vitro à incubação com migalastate que atendeu aos critérios de amenidade. Consequentemente, se espera que os pacientes com essas mutações sejam tratáveis com terapia com migalastate conforme descrito no presente documento.

[0095] Como pode ser visto a partir da Tabela 3, as novas mutações de α-Gal A D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, e R392T demonstraram uma resposta in vitro à incubação com migalastate que atendeu aos critérios de amenidade. Consequentemente, se espera que os pacientes com essas mutações sejam tratáveis com terapia com migalastate conforme descrito no presente documento.

[0096] Como pode ser visto a partir da Tabela 4, as novas mutações de α-Gal A V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, e T412P demonstraram uma resposta in vitro à incubação com migalastate que atendeu aos critérios de amenidade. Consequentemente, se espera que os pacientes com essas mutações sejam tratáveis com terapia com migalastate conforme descrito no presente documento.

[0097] A literatura de patentes e científica referida neste documento estabelece o conhecimento que está disponível para os peritos na técnica. Todas as patentes dos Estados Unidos e pedidos de patentes dos Estados Unidos publicados ou não publicados citados neste documento são incorporados como referência. Todas as patentes estrangeiras publicadas e pedidos de patente citados neste documento são por este meio incorporados como referência. Todas as outras referências publicadas, documentos, manuscritos e literatura científica citados neste documento são por este meio incorporadas como referência.

[0098] Embora a presente invenção tenha sido apresentada e descrita em particular com referências a modalidades preferidas da mesma, os peritos na técnica compreenderão que podem ser feitas várias alterações na sua forma e detalhes sem que nos afastemos do escopo da invenção abrangido pelas reivindicações em anexo.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método de tratamento da doença de Fabry em um paciente humano em necessidade do mesmo, o método caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao paciente de uma dose terapeuticamente eficaz de migalastate ou um sal do mesmo, em que o paciente tem uma mutação de a- galactosidase A selecionada do grupo que consiste em: D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, e R392T.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado ao paciente em dias alternados.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 100 a cerca de 150 mg de base livre equivalente do migalastate ou sal do mesmo em dias alternados.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 123 mg de base livre equivalente do migalastate ou sal do mesmo em dias alternados.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 123 mg de base livre de migalastate em dias alternados.

6. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 150 mg de cloridrato de migalastate em dias alternados.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado por via oral.

8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado por injeção.

9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo intensifica a atividade de a-galactosidase A.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o paciente é homem.

11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o paciente é mulher.

12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a mutação é D33H.

13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a mutação é G35A.

14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a mutação é Y88S.

15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a mutação é T194A.

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a mutação é W204G.

17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a mutação é Y216S.

18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a mutação é Q250K.

19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que a mutação é R392T.

20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que a mutação é descrita em uma tabela de referência farmacológica.

21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um rótulo de produto para um produto de migalastate aprovado para o tratamento da doença de Fabry.

22. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um rótulo de produto para GALAFOLD®.

23. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um site da Internet.

24. Método, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que o site da Internet é um ou mais de www.galafoldamenabilitytable.com ou www.fabrygenevariantsearch.com.

25. Método de intensificação de a-galactosidase A em um paciente diagnosticado com ou com suspeita de doença de Fabry, o método caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao paciente de uma dose terapeuticamente eficaz de migalastate ou um sal do mesmo, em que o paciente tem uma mutação de a-galactosidase A selecionada do grupo que consiste em: D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, e R392T.

26. Método, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado ao paciente em dias alternados.

27. Método, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 100 a cerca de 150 mg de base livre equivalente do migalastate ou sal do mesmo em dias alternados.

28. Método, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 123 mg de base livre equivalente do migalastate ou sal do mesmo em dias alternados.

29. Método, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 123 mg de base livre de migalastate em dias alternados.

30. Método, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 150 mg de cloridrato de migalastate em dias alternados.

31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 30, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado por via oral.

32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 30, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado por injeção.

33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 32, caracterizado pelo fato de que o paciente é homem.

34. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 32, caracterizado pelo fato de que o paciente é mulher.

35. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 34, caracterizado pelo fato de que a mutação é D33H.

36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 34, caracterizado pelo fato de que a mutação é G35A.

37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 34, caracterizado pelo fato de que a mutação é Y88S.

38. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 34, caracterizado pelo fato de que a mutação é T194A.

39. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 34, caracterizado pelo fato de que a mutação é W204G.

40. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 34, caracterizado pelo fato de que a mutação é Y216S.

41. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 34, caracterizado pelo fato de que a mutação é Q250K.

42. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 34, caracterizado pelo fato de que a mutação é R392T.

43. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 42, caracterizado pelo fato de que a mutação é descrita em uma tabela de referência farmacológica.

44. Método, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um rótulo de produto para um produto de migalastate aprovado para o tratamento da doença de Fabry.

45. Método, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um rótulo de produto para GALAFOLD®.

46. Método, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um site da Internet.

47. Método, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de que o site da Internet é um ou mais de www.galafoldamenabilitytable.com ou www.fabrygenevariantsearch.com.

48. Método de tratamento da doença de Fabry em um paciente humano em necessidade do mesmo, o método caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao paciente de uma dose terapeuticamente eficaz de migalastate ou um sal do mesmo, em que o paciente tem uma mutação de a- galactosidase A selecionada do grupo que consiste em: N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, e N408Y.

49. Método, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado ao paciente em dias alternados.

50. Método, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 100 a cerca de 150 mg de base livre equivalente do migalastate ou sal do mesmo em dias alternados.

51. Método, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 123 mg de base livre equivalente do migalastate ou sal do mesmo em dias alternados.

52. Método, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 123 mg de base livre de migalastate em dias alternados.

53. Método, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 150 mg de cloridrato de migalastate em dias alternados.

54. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 53, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado por via oral.

55. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 53, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado por injeção.

56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 55, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo intensifica a atividade de a- galactosidase A.

57. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 56, caracterizado pelo fato de que o paciente é homem.

58. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 56, caracterizado pelo fato de que o paciente é mulher.

59. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 58, caracterizado pelo fato de que a mutação é N53K.

60. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 58, caracterizado pelo fato de que a mutação é Q57R.

61. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 58, caracterizado pelo fato de que a mutação é S62delinsLA.

62. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 58, caracterizado pelo fato de que a mutação é M96V.

63. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 58, caracterizado pelo fato de que a mutação é R112L.

64. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 58, caracterizado pelo fato de que a mutação é D155E.

65. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 58, caracterizado pelo fato de que a mutação é N228D.

66. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 58, caracterizado pelo fato de que a mutação é Q330P.

67. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 58, caracterizado pelo fato de que a mutação é V339A.

68. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 58, caracterizado pelo fato de que a mutação é K391E.

69. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 58, caracterizado pelo fato de que a mutação é N408Y.

70. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 69, caracterizado pelo fato de que a mutação é descrita em uma tabela de referência farmacológica.

71. Método, de acordo com a reivindicação 70, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um rótulo de produto para um produto de migalastate aprovado para o tratamento da doença de Fabry.

72. Método, de acordo com a reivindicação 70, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um rótulo de produto para GALAFOLD®.

73. Método, de acordo com a reivindicação 70, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um site da Internet.

74. Método, de acordo com a reivindicação 73, caracterizado pelo fato de que o site da Internet é um ou mais de www.galafoldamenabilitytable.com ou www.fabrygenevariantsearch.com.

75. Método de intensificação de a-galactosidase A em um paciente diagnosticado com ou com suspeita de doença de Fabry, o método caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao paciente de uma dose terapeuticamente eficaz de migalastate ou um sal do mesmo, em que o paciente tem uma mutação de a-galactosidase A selecionada do grupo que consiste em: N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, e N408Y.

76. Método, de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado ao paciente em dias alternados.

77. Método, de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 100 a cerca de 150 mg de base livre equivalente do migalastate ou sal do mesmo em dias alternados.

78. Método, de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 123 mg de base livre equivalente do migalastate ou sal do mesmo em dias alternados.

79. Método, de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 123 mg de base livre de migalastate em dias alternados.

80. Método, de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 150 mg de cloridrato de migalastate em dias alternados.

81. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 80, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado por via oral.

82. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 80, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado por injeção.

83. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 82, caracterizado pelo fato de que o paciente é homem.

84. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 82, caracterizado pelo fato de que o paciente é mulher.

85. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 84, caracterizado pelo fato de que a mutação é N53K.

86. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 84, caracterizado pelo fato de que a mutação é Q57R.

87. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 84, caracterizado pelo fato de que a mutação é S62delinsLA.

88. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 84, caracterizado pelo fato de que a mutação é M96V.

89. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 84, caracterizado pelo fato de que a mutação é R112L.

90. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 84, caracterizado pelo fato de que a mutação é D155E.

91. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 84, caracterizado pelo fato de que a mutação é N228D.

92. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 84, caracterizado pelo fato de que a mutação é Q330P.

93. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 84, caracterizado pelo fato de que a mutação é V339A.

94. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 84, caracterizado pelo fato de que a mutação é K391E.

95. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 84, caracterizado pelo fato de que a mutação é N408Y.

96. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 95, caracterizado pelo fato de que a mutação é descrita em uma tabela de referência farmacológica.

97. Método, de acordo com a reivindicação 96, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um rótulo de produto para um produto de migalastate aprovado para o tratamento da doença de Fabry.

98. Método, de acordo com a reivindicação 96, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um rótulo de produto para GALAFOLD®.

99. Método, de acordo com a reivindicação 96, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um site da Internet.

100. Método, de acordo com a reivindicação 99, caracterizado pelo fato de que o site da Internet é um ou mais de www.galafoldamenabilitytable.com ou www.fabrygenevariantsearch.com.

101. Método de tratamento da doença de Fabry em um paciente humano em necessidade do mesmo, o método caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao paciente de uma dose terapeuticamente eficaz de migalastate ou um sal do mesmo, em que o paciente tem uma mutação de a- galactosidase A selecionada do grupo que consiste em: V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, e T412P.

102. Método, de acordo com a reivindicação 101, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado ao paciente em dias alternados.

103. Método, de acordo com a reivindicação 101, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 100 a cerca de 150 mg de base livre equivalente do migalastate ou sal do mesmo em dias alternados.

104. Método, de acordo com a reivindicação 101, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 123 mg de base livre equivalente do migalastate ou sal do mesmo em dias alternados.

105. Método, de acordo com a reivindicação 101, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 123 mg de base livre de migalastate em dias alternados.

106. Método, de acordo com a reivindicação 101, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 150 mg de cloridrato de migalastate em dias alternados.

107. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 106, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado por via oral.

108. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 106, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado por injeção.

109. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 108, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo intensifica a atividade de a- galactosidase A.

110. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 109, caracterizado pelo fato de que o paciente é homem.

111. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 109, caracterizado pelo fato de que o paciente é mulher.

112. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é V22G.

113. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é N34H.

114. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é G80V.

115. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é Q107R.

116. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é Y152D.

117. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é A156S.

118. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é L189F.

119. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é W204L.

120. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é S238G.

121. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é I239M.

122. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é A257V.

123. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é P259Q.

124. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é N320H.

125. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é P323T.

126. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é E338V.

127. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é P380L.

128. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 111, caracterizado pelo fato de que a mutação é T412P.

129. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 128, caracterizado pelo fato de que a mutação é descrita em uma tabela de referência farmacológica.

130. Método, de acordo com a reivindicação 129, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um rótulo de produto para um produto de migalastate aprovado para o tratamento da doença de Fabry.

131. Método, de acordo com a reivindicação 129, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um rótulo de produto para GALAFOLD®.

132. Método, de acordo com a reivindicação 129, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um site da Internet.

133. Método, de acordo com a reivindicação 132, caracterizado pelo fato de que o site da Internet é um ou mais de www.galafoldamenabilitytable.com ou www.fabrygenevariantsearch.com.

134. Método de intensificação de a-galactosidase A em um paciente diagnosticado com ou com suspeita de doença de Fabry, o método caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao paciente de uma dose terapeuticamente eficaz de migalastate ou um sal do mesmo, em que o paciente tem uma mutação de a-galactosidase A selecionada do grupo que consiste em: V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, e T412P.

135. Método, de acordo com a reivindicação 134, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado ao paciente em dias alternados.

136. Método, de acordo com a reivindicação 134, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 100 a cerca de 150 mg de base livre equivalente do migalastate ou sal do mesmo em dias alternados.

137. Método, de acordo com a reivindicação 134, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 123 mg de base livre equivalente do migalastate ou sal do mesmo em dias alternados.

138. Método, de acordo com a reivindicação 134, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 123 mg de base livre de migalastate em dias alternados.

139. Método, de acordo com a reivindicação 134, caracterizado pelo fato de que administra-se ao paciente cerca de 150 mg de cloridrato de migalastate em dias alternados.

140. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 139, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado por via oral.

141. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 139, caracterizado pelo fato de que o migalastate ou sal do mesmo é administrado por injeção.

142. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 141, caracterizado pelo fato de que o paciente é homem.

143. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 141, caracterizado pelo fato de que o paciente é mulher.

144. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é V22G.

145. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é N34H.

146. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é G80V.

147. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é Q107R.

148. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é Y152D.

149. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é A156S.

150. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é L189F.

151. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é W204L.

152. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é S238G.

153. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é I239M.

154. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é A257V.

155. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é P259Q.

156. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é N320H.

157. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é P323T.

158. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é E338V.

159. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é P380L.

160. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 143, caracterizado pelo fato de que a mutação é T412P.

161. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 134 a 160, caracterizado pelo fato de que a mutação é descrita em uma tabela de referência farmacológica.

162. Método, de acordo com a reivindicação 161, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um rótulo de produto para um produto de migalastate aprovado para o tratamento da doença de Fabry.

163. Método, de acordo com a reivindicação 161, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um rótulo de produto para GALAFOLD®.

164. Método, de acordo com a reivindicação 161, caracterizado pelo fato de que a tabela de referência farmacológica é provida em um site da Internet.

165. Método, de acordo com a reivindicação 164, caracterizado pelo fato de que o site da Internet é um ou mais de www.galafoldamenabilitytable.com ou www.fabrygenevariantsearch.com.