KR20240017127A - Gla 유전자에 돌연변이를 갖는 환자에서 파브리 질병을 치료하는 방법 - Google Patents

Abstract

파브리 질병으로 진단된 환자를 치료하는 방법 및 파브리 질병으로 진단된 또는 이를 갖는 것으로 추정되는 환자에서 α-갈락토시다제 A를 증강시키는 방법이 제공된다. 소정 방법은 α-갈락토시다제 A에 대한 치료 유효 용량의 약리학적 샤페론을 환자에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 환자는 α-갈락토시다제 A를 인코딩하는 핵산 서열에 돌연변이를 갖는다. 또한, 파브리 질병의 치료를 위한 약리학적 샤페론의 용도 및 파브리 질병의 치료에 사용하기 위한 조성물이 기재된다.

Description

GLA 유전자에 돌연변이를 갖는 환자에서 파브리 질병을 치료하는 방법{METHODS OF TREATING FABRY DISEASE IN PATIENTS HAVING A MUTATION IN THE GLA GENE}

본 발명의 원리 및 구현예는 일반적으로 파브리 질병의 치료를 위한 약리학적 샤페론의 용도, 특히 α-갈락토시다제(GLA) 유전자에 돌연변이 또는 변이형을 갖는 환자에서의 샤페론의 용도에 대한 것이다.

여러 인간 질병은 그 안정성을 감소시키고 이것이 적절히 폴딩되는 것을 방지할 수 있는 단백질의 아미노산 서열에 변화를 유도하는 돌연변이로 일어난다. 단백질은 일반적으로 소포체, 또는 ER로 알려져 있는 세포의 특정 영역에서 폴딩된다. 세포는 단백질이 일반적으로 단백질 수송으로 언급되는 공정인 ER로부터 세포 내 적절한 목적지로 이동할 수 있기 전에 이의 정확한 3차원 형태로 폴딩되도록 보장하는 품질 제어 기전을 갖는다. 잘못 폴딩된 단백질은 종종 ER에서 최초 보유된 후 품질 제어 기전에 의해 제거된다. 소정 경우에서, 잘못 폴딩된 단백질은 제거되기 전에 ER에 축적될 수 있다. ER 내 잘못 폴딩된 단백질의 보유는 이의 적절한 수송을 방해하고, 생성되는 감소된 생물학적 활성은 손상된 세포 기능 및 궁극적으로 질병으로 이어질 수 있다. 또한, ER 내 잘못 폴딩된 단백질의 축적은 세포 상에서 다양한 유형의 스트레스를 야기할 수 있고, 이는 또한 세포 기능부전 및 질병에 기여할 수 있다.

이러한 돌연변이는 리소좀 저장 장애(LSD)를 야기할 수 있고, 이는 리소좀 효소를 인코딩하는 유전자에서의 돌연변이로 인한 리소좀 효소의 결핍을 특징으로 한다. 생성되는 질병은 지질, 탄수화물 및 다당류를 포함하는 이들 효소 기질의 병리적 축적을 유도한다. 각각의 LSD와 연관된 여러 상이한 돌연변이체 유전형이 존재하지만, 다수의 돌연변이는 덜 안정한 효소의 생성을 야기할 수 있는 미스센스 돌연변이이다. 이들 덜 안정한 효소는 때때로 ER-연관된 분해 경로에 의해 조기 분해된다. 이는 리소좀에서 효소 결핍 및 기질의 병리적 축적을 일으킨다. 이러한 돌연변이체 효소는 때때로 관련 분야에서 "폴딩 돌연변이체" 또는 "입체형태 돌연변이체"로서 언급된다.

파브리 질병은 효소 α-갈락토시다제 A(α-Gal A)를 인코딩하는 GLA 유전자에 대한 돌연변이에 의해 유도되는 LSD이다. α-Gal A는 글리코스핑고지질 대사를 위해 요구된다. 이 돌연변이는 기질 글로보트리아오실세라마이드(GL-3)가 다양한 조직 및 기관에서 축적되도록 유도한다. 질병 유전자가 X 염색체 상에서 인코딩되므로 파브리 질병을 갖는 남성은 반접합체이다. 파브리 질병은 40,000명 내지 60,000명의 남성 중 1명에 영향을 미치는 것으로 추산되며, 여성에서는 덜 빈번하게 일어난다.

파브리 질병의 치료에 대한 몇몇 접근법이 존재해왔다. 파브리 질병을 치료하기 위한 하나의 승인된 치료법은 효소 대체 치료법(ERT)으로, 여기에는 전형적으로 정제된 형태의 대응 야생형 단백질의 정맥내 주입이 수반된다. 2개의 α-Gal A 제품: 아갈시다제 알파(Replagal®, Shire Human Genetic Therapies) 및 아갈시다제 베타(Fabrazyme®; Sanofi Genzyme Corporation)가 파브리 질병의 치료를 위해 현재 이용 가능하다. 그러나 ERT는 몇몇 단점을 갖는다. ERT로의 주요 합병증 중 하나는 주입된 단백질의 신속한 분해로, 이는 여러 고가의 고용량 주입에 대한 필요성을 야기한다. ERT는 적절히 폴딩된 단백질의 대규모 생성, 정제 및 보관의 어려움; 글리코실화된 원상태 단백질의 수득; 항-단백질 면역 반응 생성; 및 중추 신경계 병리를 경감시키기 위한 단백질의 혈액-뇌 장벽의 통과 불능(즉, 낮은 생체이용률)과 같은 몇몇 추가 위험부담을 갖는다. 또한, 대체 효소는 파브리 병리에서 현저히 나타나는, 신장 발세포 또는 심장 근세포에서의 기질 축적을 감소시키기 위한 충분한 양으로 심장 또는 신장에 침투할 수 없다.

일부 효소 결핍을 치료하기 위한 또 다른 접근법에는 결핍 효소 단백질의 천연 기질 생성을 감소시켜 병리를 완화시키기 위한 소분자 억제제의 사용이 관여된다. 상기 "기질 감소" 접근법은 글리코스핑고지질 저장 장애를 포함하는 약 40여 LSD 클래스에 대해 구체적으로 설명되었다. 치료법으로 사용하기 위해 제안된 소분자 억제제는 당지질의 합성에 관여되는 효소의 억제에 특이적으로, 결핍 효소에 의해 분해될 필요가 있는 세포 당지질의 양을 감소시킨다.

파브리 질병을 치료하는 세 번째 접근법은 약리학적 샤페론(PC)으로 불리는 치료였다. 이러한 PC에는 α-Gal A의 소분자 억제제가 포함되며, 이는 α-Gal A에 결합하여 돌연변이체 효소 및 대응 야생형 둘 모두의 안정성을 증가시킬 수 있다. 그러나, PC 치료법의 경우 환자는 ER의 외부로 수송을 가능하게 하는 입체형태로 안정화되고 폴딩될 잠재력을 갖는 효소의 생산을 야기하는 적합한 돌연변이 또는 변이형을 가져야 한다.

따라서, 파브리 질병이 혈장 또는 말초 백혈구(WBC)에서 결핍 α-Gal A 활성을 검출함으로써 진단되는 경우에도, 특정 파브리 환자가 PC로의 치료에 반응할 지의 여부를 예측하는 것은, 불가능하지는 않지만, 매우 어렵다. 따라서, PC에 반응할 신규한 GLA 돌연변이 또는 변이형을 확인하고 이들 돌연변이 또는 변이형으로 파브리 환자에 이용 가능한 신규한 치료 방법을 제공할 필요성이 여전히 존재한다.

본 발명의 하나의 양태는 파브리 질병으로 진단된 환자를 치료하는 방법에 관한 것이다. 방법은 환자에게 α-Gal A에 대한 치료 유효 용량의 약리학적 샤페론을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 환자는 α-Gal A를 인코딩하는 핵산 서열의 미스센스 돌연변이를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, 또는 R392T이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, 또는 N408Y이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, 또는 T412P이다. 다양한 구현예에서, 이들 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해서이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 D33H이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 G35A이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Y88S이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 T194A이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 W204G이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Y216S이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q250K이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 R392T이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N53K이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q57R이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 S62delinsLA이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 M96V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 R112L이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 D155E이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N228D이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q330P이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 V339A이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 K391E이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N408Y이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 V22G이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N34H이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 G80V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q107R이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Y152D이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 A156S이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 L189F이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 W204L이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 S238G이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 I239M이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 A257V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 P259Q이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N320H이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 P323T이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 E338V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 P380L이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 T412P이다. 일부 구현예에서, 약리학적 샤페론은 미갈라스타트 또는 이의 염을 포함한다. 하나 이상의 구현예에서, 미갈라스타트 또는 이의 염의 용량은 약 100 mg 내지 약 150 mg 자유 염기 등가물(FBE)이다. 일부 구현예에서, 미갈라스타트의 염은 미갈라스타트 하이드로클로라이드이다. 하나 이상의 구현예에서, 용량은 2일마다 약 150 mg의 미갈라스타트 하이드로클로라이드 또는 동등 용량의 미갈라스타트 또는 하이드로클로라이드 염 이외의 이의 염이다. 일부 구현예에서, 미갈라스타트 또는 이의 염은 경구로 또는 주사에 의해 투여된다. 이들 구현예는 서로 또는 본 발명의 다른 구현예, 예를 들어, 파브리 질병으로 진단된 또는 이를 갖는 것으로 추정되는 환자에서 α-Gal A를 증강시키는 방법, 파브리 질병으로 진단된 환자 치료용 약제의 제조를 위한 α-Gal A에 대한 약리학적 샤페론의 용도 또는 파브리 질병으로 진단된 환자를 치료하는 데 사용하기 위한 α-Gal A에 대한 약리학적 샤페론에 관한 구현예뿐만 아니라 적합한 돌연변이, 적합한 PC 및 이의 투여량, 제형 및 투여 경로에 관한 구현예와 조합될 수 있다.

본 발명의 또 다른 구현예는 파브리 질병으로 진단된 또는 이를 갖는 것으로 추정되는 환자에서 α-Gal A를 증강시키는 방법에 관한 것이다. 방법은 환자에게 α-Gal A에 대한 치료 유효 용량의 약리학적 샤페론을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 환자는 α-Gal A를 인코딩하는 핵산 서열에 미스센스 돌연변이를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, 또는 R392T이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, 또는 N408Y이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, 또는 T412P이다. 다양한 구현예에서, 이들 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해서이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 D33H이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 G35A이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Y88S이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 T194A이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 W204G이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Y216S이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q250K이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 R392T이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N53K이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q57R이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 S62delinsLA이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 M96V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 R112L이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 D155E이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N228D이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q330P이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 V339A이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 K391E이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N408Y이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 V22G이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N34H이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 G80V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q107R이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Y152D이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 A156S이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 L189F이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 W204L이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 S238G이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 I239M이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 A257V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 P259Q이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N320H이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 P323T이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 E338V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 P380L이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 T412P이다. 일부 구현예에서, 약리학적 샤페론은 미갈라스타트 또는 이의 염을 포함한다. 하나 이상의 구현예에서, 미갈라스타트 또는 이의 염의 용량은 약 100 mg 내지 약 150 mg FBE이다. 일부 구현예에서, 미갈라스타트의 염은 미갈라스타트 하이드로클로라이드이다. 하나 이상의 구현예에서, 용량은 2일마다 약 150 mg의 미갈라스타트 하이드로클로라이드 또는 동등 용량의 미갈라스타트 또는 하이드로클로라이드 염 이외의 이의 염이다. 일부 구현예에서, 미갈라스타트 또는 이의 염은 경구로 또는 주사에 의해 투여된다. 이들 구현예는 서로 또는 본 발명의 다른 구현예, 예를 들어, 파브리 질병을 갖는 환자를 치료하는 방법, 파브리 질병으로 진단된 환자 치료용 약제의 제조를 위한 α-Gal A에 대한 약리학적 샤페론의 용도 또는 파브리 질병으로 진단된 환자를 치료하는 데 사용하기 위한 α-Gal A에 대한 약리학적 샤페론에 관한 구현예뿐만 아니라 적합한 돌연변이, 적합한 PC 및 이의 투여량, 제형 및 투여 경로에 관한 구현예와 조합될 수 있다.

본 발명의 또 다른 양태는 파브리 질병으로 진단된 환자 치료용 약제의 제조를 위한 α-Gal A에 대한 약리학적 샤페론의 용도에 관한 것이고, 여기서 환자는 α-Gal A를 인코딩하는 핵산 서열에 미스센스 돌연변이를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, 또는 R392T이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, 또는 N408Y이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, 또는 T412P이다. 다양한 구현예에서, 이들 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해서이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 D33H이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 G35A이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Y88S이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 T194A이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 W204G이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Y216S이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q250K이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 R392T이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N53K이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q57R이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 S62delinsLA이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 M96V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 R112L이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 D155E이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N228D이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q330P이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 V339A이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 K391E이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N408Y이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 V22G이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N34H이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 G80V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q107R이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Y152D이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 A156S이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 L189F이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 W204L이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 S238G이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 I239M이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 A257V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 P259Q이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N320H이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 P323T이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 E338V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 P380L이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 T412P이다. 일부 구현예에서, 약리학적 샤페론은 미갈라스타트 또는 이의 염을 포함한다. 하나 이상의 구현예에서, 미갈라스타트 또는 이의 염의 용량은 약 100 mg 내지 약 150 mg FBE이다. 일부 구현예에서, 미갈라스타트의 염은 미갈라스타트 하이드로클로라이드이다. 하나 이상의 구현예에서, 용량은 2일마다 약 150 mg의 미갈라스타트 하이드로클로라이드 또는 동등 용량의 미갈라스타트 또는 하이드로클로라이드 염 이외의 이의 염이다. 일부 구현예에서, 미갈라스타트 또는 이의 염은 경구로 또는 주사에 의해 투여된다. 이들 구현예는 서로 또는 본 발명의 다른 구현예, 예를 들어, 파브리 질병을 갖는 환자를 치료하는 방법, 파브리 질병으로 진단된 또는 이를 갖는 것으로 추정되는 환자에서 α-Gal A를 증강시키는 방법, 또는 파브리 질병으로 진단된 환자를 치료하는 데 사용하기 위한 α-Gal A에 대한 약리학적 샤페론에 관한 구현예뿐만 아니라 적합한 돌연변이, 적합한 PC 및 이의 투여량, 제형 및 투여 경로에 관한 구현예와 조합될 수 있다.

본 발명의 또 다른 양태는 파브리 질병으로 진단된 환자를 치료하는 데 사용하기 위한 α-Gal A에 대한 약리학적 샤페론에 관한 것이고, 여기서 환자는 α-Gal A를 인코딩하는 핵산 서열에 미스센스 돌연변이를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, 또는 R392T이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, 또는 N408Y이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, 또는 T412P이다. 다양한 구현예에서, 이들 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해서이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 D33H이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 G35A이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Y88S이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 T194A이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 W204G이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Y216S이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q250K이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 R392T이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N53K이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q57R이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 S62delinsLA이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 M96V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 R112L이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 D155E이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N228D이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q330P이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 V339A이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 K391E이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N408Y이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 V22G이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N34H이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 G80V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Q107R이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 Y152D이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 A156S이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 L189F이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 W204L이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 S238G이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 I239M이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 A257V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 P259Q이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 N320H이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 P323T이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 E338V이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 P380L이다. 하나 이상의 구현예에서, 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 대해 T412P이다. 일부 구현예에서, 약리학적 샤페론은 미갈라스타트 또는 이의 염을 포함한다. 하나 이상의 구현예에서, 미갈라스타트 또는 이의 염의 용량은 약 100 mg 내지 약 150 mg FBE이다. 일부 구현예에서, 미갈라스타트의 염은 미갈라스타트 하이드로클로라이드이다. 하나 이상의 구현예에서, 용량은 2일마다 약 150 mg의 미갈라스타트 하이드로클로라이드 또는 동등 용량의 미갈라스타트 또는 하이드로클로라이드 염 이외의 이의 염이다. 일부 구현예에서, 미갈라스타트 또는 이의 염은 경구로 또는 주사에 의해 투여된다. 이들 구현예는 서로 또는 본 발명의 다른 구현예, 예를 들어, 파브리 질병을 갖는 환자를 치료하는 방법, 파브리 질병으로 진단된 또는 이를 갖는 것으로 추정되는 환자에서 α-Gal A를 증강시키는 방법, 또는 파브리 질병으로 진단된 환자 치료용 약제의 제조를 위한 α-Gal A에 대한 약리학적 샤페론의 용도에 관한 구현예뿐만 아니라 적합한 돌연변이, 적합한 PC 및 이의 투여량, 제형 및 투여 경로에 관한 구현예와 조합될 수 있다.

다양한 구현예가 아래에 기재된다. 아래에 기재된 구현예는 아래에 기재된 바와 같이 뿐만 아니라, 본 발명의 범위에 따른 다른 적합한 조합으로 조합될 수 있음이 이해될 것이다.

도 1a 내지 도 1e는 인간 야생형 GLA 유전자의 전장 DNA 서열(SEQ ID NO: 1)을 나타낸다;
도 2는 야생형 α-Gal A 단백질(SEQ ID NO: 2)을 나타낸다;
도 3은 야생형 α-Gal A 단백질을 인코딩하는 핵산 서열(SEQ ID NO: 3)을 나타낸다.

본 발명의 몇몇 예시적인 구현예를 기재하기 전에, 본 발명이 하기 설명에 나타낸 구성 또는 공정 단계의 상세사항에 제한되지 않음이 이해되어야 한다. 본 발명은 다른 구현예가 가능하며, 다양한 방식으로 실시되거나 수행될 수 있다.

본 발명의 다양한 양태는 약리학적 샤페론으로의 치료에 반응할 파브리 환자에서 신규한 GLA 돌연변이의 확인에 관한 것이다. 본 발명의 다른 양태는 또한 이들 파브리 환자의 치료에 관한 것이다. 예를 들어, α-Gal A에서 미스센스 돌연변이 D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, R392T, N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, N408Y, V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, 또는 T412P로부터 생성된 낮은 α-Gal A 활성은 약리학적 샤페론에 노출될 때 증가될 수 있다는 것이 예기치 않게 발견되었다. 나아가, 이들 돌연변이를 갖는 환자는 약리학적 샤페론으로의 치료에 반응할 것이다.

정의

본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명의 맥락 내에서 그리고 각각의 용어가 사용되는 특정한 맥락에서, 일반적으로 당분야에서의 이의 일반적 의미를 갖는다. 소정 용어는 아래에서 또는 명세서 내 다른 곳에서 논의되어 실시자에게 본 발명의 조성물 및 방법을 설명하고 이를 어떻게 제조하고 사용하는지에 대한 추가 지침을 제공한다.

용어 "파브리 질병"은 결핍 리소좀 α-Gal A 활성으로 인한 글리코스핑고지질 이화작용의 X-연관 선천성 오류를 나타낸다. 상기 결함은 심장, 신장, 피부 및 다른 조직의 혈관 내피 리소좀에서 기질 글로보트리아오실세라마이드(("GL-3", Gb₃ 또는 세라마이드 트리헥소사이드로도 알려져 있음) 및 관련 글리코스핑고지질의 축적을 유도한다. 효소의 또 다른 기질은 혈장 글로보트리아오실스핑고신("혈장 라이소-Gb₃")이다.

"보인자"는 결함 α-Gal A 유전자를 갖는 하나의 X 염색체 및 정상 유전자를 갖는 하나의 X 염색체를 가지며, 그에서의 정상 대립유전자의 X 염색체 불활성화가 하나 이상의 세포 유형에 존재하는 여성이다. 보인자는 종종 파브리 질병으로 진단된다.

"환자"는 특정 질병으로 진단된 또는 이를 갖는 것으로 추정되는 대상체를 나타낸다. 환자는 인간 또는 동물일 수 있다.

"파브리 환자"는 파브리 질병으로 진단되거나 이를 갖는 것으로 추정되며 아래에 추가 정의된 바와 같은 돌연변이된 α-Gal A를 갖는 개체를 나타낸다. 파브리 질병의 특징적 마커는 남성 반접합체 및 여성 보인자에서 동일한 유병률로 일어날 수 있지만, 여성이 전형적으로 덜 심하게 영향받는다.

인간 α-갈락토시다제 A(α-Gal A)는 인간 GLA 유전자에 의해 인코딩되는 효소를 나타낸다. 인트론 및 엑손을 포함하는, α-Gal A의 전장 DNA 서열은 GenBank Accession No. X14448.1에서 이용 가능하며 도 1a 내지 도 1e에 나타낸다(SEQ ID NO: 1). 인간 α-Gal A 효소는 429개 아미노산으로 구성되며 GenBank Accession No. X14448.1 및 U78027.1에서 이용 가능하고 도 2에 나타낸다(SEQ ID NO: 2). SEQ ID NO: 1의 코딩 영역(즉, 엑손)만 포함하는 핵산 서열은 도 3에 나타낸다(SEQ ID NO: 3).

용어 "돌연변이체 단백질"에는 통상 ER에 존재하는 조건 하에서 단백질의 안정한 입체형태의 달성 불능을 일으키는 단백질을 인코딩하는 유전자에 돌연변이를 갖는 단백질이 포함된다. 안정한 입체형태의 달성 실패는 상당한 양의 효소가 리소좀으로 수송되기보다는 분해되도록 한다. 이러한 돌연변이는 때때로 "입체형태 돌연변이체"로 불린다. 이러한 돌연변이에는 비제한적으로 미스센스 돌연변이 및 프레임-내 소규모 결실 및 삽입이 포함된다. 본원에서 사용되는 결실은 약어 "del"로 표시되고, 삽입은 약어 "ins"로 표시된다. 따라서, 뉴클레오타이드 변화 "c.184_185insTAG"는 뉴클레오타이드 184와 뉴클레오타이드 185 사이에 뉴클레오타이드 서열 TAG의 삽입을 나타내고, 단백질 서열 변화 "S62delinsLA"는 62 번 위치에서 아미노산 S(세린)의 결실 및 아미노산 서열 LA(류신 및 알라닌)의 삽입을 나타낸다.

하나의 구현예에서 본원에서 사용되는 용어 "돌연변이체 α-Gal A"에는 통상 ER에 존재하는 조건 하에 효소의 안정한 입체형태의 달성 불능을 일으키는 α-Gal A를 인코딩하는 유전자에 돌연변이를 갖는 α-Gal A가 포함된다. 안정한 입체형태의 달성 실패는 상당한 양의 효소가 리소좀으로 수송되기보다는 분해되도록 한다.

본원에서 사용되는 용어 "특이적인 약리학적 샤페론"("SPC") 또는 "약리학적 샤페론"("PC")은 단백질에 특이적으로 결합하며 다음 효과 중 하나 이상을 갖는 소분자, 단백질, 펩타이드, 핵산, 탄수화물 등을 포함하는 임의의 분자를 나타낸다: (i) 단백질의 안정한 분자 입체형태의 형성을 증강시킴; (ii) ER로부터 또 다른 세포 위치, 바람직하게는 원상태 세포 위치로의 단백질 수송을 유도함, 즉 단백질의 ER-연관 분해를 방지함; (iii) 잘못 폴딩된 단백질의 응집을 방지함; 및/또는 (iv) 단백질에 적어도 부분적인 야생형 기능 및/또는 활성을 복원하거나 증강시킴. 예컨대, α-Gal A에 특이적으로 결합하는 화합물은 이것이 효소에 결합하며 관련 또는 미관련 효소의 일반 그룹에서가 아니라 효소 상에서 샤페론 효과를 발휘함을 의미한다. 보다 구체적으로, 상기 용어는 내인성 샤페론, 예컨대 BiP 또는 다양한 단백질, 예컨대 글리세롤, DMSO 또는 중수소화수에 대해 비-특이적 샤페론 활성을 실증한 비-특이적 제제, 즉 화학적 샤페론을 나타내지 않는다. 본 발명의 하나 이상의 구현예에서, PC는 가역적인 경쟁적 억제제일 수 있다. 하나의 구현예에서, PC는 미갈라스타트 또는 이의 염이다. 또 다른 구현예에서, PC는 미갈라스타트 자유 염기(예를 들어, 123 mg의 미갈라스타트 자유 염기)이다. 추가의 또 다른 구현예에서, PC는 미갈라스타트의 염(예를 들어, 150 mg의 미갈라스타트 HCl)이다.

효소의 "경쟁적 억제제"는 기질과 대략 동일한 위치에서 효소에 결합하기 위해 효소 기질의 화학적 구조 및 분자 기하구조와 구조적으로 유사한 화합물을 나타낼 수 있다. 따라서, 억제제는 기질 분자와 동일한 활성 부위에 대해 경쟁하여, Km을 증가시킨다. 경쟁적 억제는 충분한 기질 분자가 억제제를 변위하기 위해 이용 가능한 경우, 즉 경쟁적 억제제가 가역적으로 결합할 수 있는 경우 통상 가역적이다. 따라서, 효소 억제량은 억제제 농도, 기질 농도, 및 활성 부위에 대한 억제제 및 기질의 상대 친화도에 의존한다.

본원에서 사용되는 용어 "특이적으로 결합하는"은 약리학적 샤페론과 단백질, 예컨대 α-Gal A의 상호작용, 구체적으로 약리학적 샤페론과의 접촉에 직접 참여하는 단백질의 아미노산 잔기와의 상호작용을 나타낸다. 약리학적 샤페론은 표적 단백질, 예컨대 α-Gal A에 특이적으로 결합하여, 관련 또는 미관련 단백질의 일반 그룹이 아니라 단백질 상에서 샤페론 효과를 발휘한다. 임의의 주어진 약리학적 샤페론과 상호작용하는 단백질의 아미노산 잔기는 단백질의 "활성 부위" 내에 있을 수도 있거나 없을 수도 있다. 특이적 결합은 일상적인 결합 검정을 통해 또는 구조 연구, 예컨대 공동-결정화, NMR 등을 통해 평가될 수 있다. α-Gal A에 대한 활성 부위는 기질 결합 부위이다.

"결핍 α-Gal A 활성"은 파브리 또는 임의의 다른 질병(특히 혈액 질병)을 갖지 않거나 갖는 것으로 추정되는 정상 개체에서의 활성에 비해(동일한 방법을 사용하여) 정상 범위 미만인 환자로부터의 세포 내 α-Gal A 활성을 나타낸다.

본원에서 사용되는 용어 "α-Gal A 활성을 증강시키는" 또는 "α-Gal A 활성을 증가시키는"은 α-Gal A에 대해 특이적인 약리학적 샤페론과 접촉되지 않은 세포에서의 양(바람직하게는 동일한 세포-유형 또는 동일한 세포의, 예컨대, 더 이른 시기의 양)에 비해, α-Gal A에 대해 특이적인 약리학적 샤페론과 접촉된 세포에서 안정한 입체형태를 채택하는 α-Gal A의 양 증가를 나타낸다. 상기 용어는 또한 단백질에 특이적인 약리학적 샤페론과 접촉되지 않은 α-Gal A의 수송에 비해, α-Gal A에 대해 특이적인 약리학적 샤페론과 접촉된 세포에서 리소좀으로의 α-Gal A의 수송 증가를 나타낸다. 이들 용어는 야생형 및 돌연변이체 α-Gal A 둘 모두를 나타낸다. 하나의 구현예에서, 세포 내 α-Gal A의 양 증가는 PC로 처리된 세포로부터 용해액 중 인공 지질의 가수분해를 측정함으로써 측정된다. 가수분해의 증가는 증가된 α-Gal A 활성을 시사한다.

용어 "α-Gal A 활성"은 세포에서 야생형 α-Gal A의 정상적인 생리적 기능을 나타낸다. 예를 들어, α-Gal A 활성에는 GL-3의 가수분해가 포함된다.

"반응체"는 리소좀 저장 질병, 예컨대 파브리 질병으로 진단된 또는 이를 갖는 것으로 추정되는 개체이며, 그 세포는 PC와의 접촉에 반응하여 각각 충분히 증가된 α-Gal A 활성 및/또는 증상의 완화 또는 대리 마커의 증강을 나타낸다. 파브리에 대한 대리 마커 증강의 비제한적 예는 리소-GB3 및 본원에 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 공개 제US 2010-0113517호에 개시된 것들이다.

US 2010/0113517에 개시된 파브리 질병에 대한 대리 마커 개선의 비제한적 예에는 세포(예컨대, 섬유아세포) 및 조직 내 α-Gal A 수준 또는 활성의 증가; GL-3 축적 감소; 호모시스테인 및 VCAM-1(혈관 세포 접착 분자-1)의 감소된 혈장 농도; 심근 세포 및 판막 섬유세포 내 감소된 GL-3의 축적; 혈장 라이소-Gb₃의 감소; 심장 비대(특히 좌심실)의 감소, 판막 기능부전 및 부정맥의 완화; 단백뇨의 완화; 지질, 예컨대 CTH, 락토실세라마이드, 세라마이드의 감소된 소변 농도 및 글루코실세라마이드 및 스핑고미엘린의 증가된 소변 농도; 사구체 상피 세포 내 라미네이트된 봉입체(제브라 바디)의 부재; 신장 기능의 개선; 땀감소증의 경감; 혈관각화종의 부재; 및 청각 이상, 예컨대 고주파수 감각신경 청각 손실 진행성 청각 손실, 돌발 난청 또는 이명의 개선이 포함된다. 신경학적 증상 개선에는 일시적 허혈성 발작(TIA) 또는 뇌졸중의 방지; 및 말단감각이상(화상 또는 사지 저림)으로서 자체 발현되는 신경병 통증의 완화가 포함된다. 파브리 질병에 대해 평가될 수 있는 또 다른 유형의 임상 마커는 유해한 심혈관 발현의 유병률이다. 파브리 질병의 일반적인 심장-관련 징후 및 증상에는 좌심실 비대, 판막 질병(특히 승모판 탈출증 및/또는 역류), 조기 관상 동맥 질병, 협심증, 심근 경색, 전도 이상, 부정맥, 울혈성 심부전이 포함된다.

하나 이상의 상기 언급된 반응을 달성하는 용량은 "치료 유효 용량"이다.

어구 "약학적으로 허용 가능한"은 인간에게 투여되는 경우 생리적으로 관용 가능하며 전형적으로 원치 않는 반응을 생성하지 않는 분자적 실체 및 조성물을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용 가능한"은 동물, 보다 구체적으로 인간에서의 사용을 위해 연방 정부 또는 주 정부의 규제 당국에 의해 승인되거나 U.S. 약전 또는 다른 일반적으로 인식되는 약전에 등재됨을 의미한다. 약제학적 담체에 대한 용어 "담체"는 화합물과 함께 투여되는 희석제, 애쥬번트, 부형제 또는 비히클을 나타낸다. 이러한 약제학적 담체는 멸균 액체, 예컨대 물 및 오일일 수 있다. 물 또는 수용액 염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액이 특히, 주사용 용액을 위해, 담체로서 바람직하게 채택된다. 적합한 약제학적 담체는 문헌["Remington's Pharmaceutical Sciences" by E. W. Martin, 18th Edition, 또는 다른 편집판]에 기재되어 있다.

본원에서 사용되는 용어 "단리된"은 언급되는 물질이 통상 확인되는 환경으로부터 제거되어 있음을 의미한다. 따라서, 단리된 생물학적 물질에는 세포 성분, 즉 물질이 확인되거나 생성되는 세포 성분이 없을 수 있다. 핵산 분자의 경우, 단리된 핵산에는 PCR 산물, 겔 상의 mRNA 밴드, cDNA 또는 제한효소 단편이 포함된다. 또 다른 구현예에서, 단리된 핵산은 바람직하게는 확인될 수 있는 염색체로부터 절제되며, 보다 바람직하게는 염색체에서 확인되는 경우 단리된 핵산 분자에 의해 함유되는 유전자의 상류 또는 하류에 위치하는 비-조절, 비-코딩 영역, 또는 다른 유전자에 더 이상 연결되지 않는다. 또 다른 구현예에서, 단리된 핵산에는 하나 이상의 인트론이 없다. 단리된 핵산에는 플라스미드, 코스미드, 인공 염색체 등으로 삽입된 서열이 포함된다. 따라서, 특정 구현예에서, 재조합 핵산은 단리된 핵산이다. 단리된 단백질은 다른 단백질 또는 핵산 또는 둘 모두와 연관될 수 있고, 이는 세포에서 연관되거나, 막-연관된 단백질인 경우 세포막과 연관된다. 단리된 소기관, 세포 또는 조직은 유기체에서 확인되는 해부학적 부위로부터 제거된다. 단리된 물질은 정제될 수 있으나 반드시 그러할 필요는 없다.

용어 "약" 및 "대략"은 일반적으로 측정의 성질 또는 정밀도에 따라 측정되는 양에 대해 허용 가능한 오차 범위를 의미한다. 전형적인, 예시적인 오차 정도는 주어진 값 또는 값의 범위의 20퍼센트(%) 이내, 바람직하게는 10% 이내, 보다 바람직하게는 5% 이내이다. 대안적으로 그리고 특히 생물학적 시스템에서, 용어 "약" 및 "대략"은 주어진 값의 10-배 수준 이내, 바람직하게는 10-배 또는 5-배 이내, 보다 바람직하게는 2-배 이내인 평균 값일 수 있다. 본원에서 주어지는 수치량은 달리 언급되지 않는 한 근사치로서, 명시적으로 언급되지 않는 경우 용어 "약" 또는 "대략"이 추정될 수 있음을 의미한다.

용어 "효소 대체 치료법" 또는 "ERT"는 이러한 효소 결핍을 갖는 개체 내로의 비-원상태, 정제 효소의 도입을 나타낸다. 투여되는 단백질은 천연 원천으로부터 또는 재조합 발현에 의해(아래에서 더 상세히 기재됨) 수득될 수 있다. 이 용어는 또한 다른 경우 정제된 효소의 투여를 필요로 하거나 이로부터 이익을 얻을, 예컨대 효소 부족을 겪는 개체에서의 정제된 효소의 도입을 나타낸다. 도입된 효소는 시험관내 생성된 정제된 재조합 효소, 또는 단리된 조직 또는 유체, 예컨대 태반 또는 동물 모유로부터, 또는 식물로부터 정제된 단백질일 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "자유 염기 등가물" 또는 "FBE"는 미갈라스타트 또는 이의 염에 존재하는 미갈라스타트의 양을 나타낸다. 달리 말하면, 용어 "FBE"는 미갈라스타트 자유 염기의 양, 또는 미갈라스타트 염에 의해 제공되는 미갈라스타트 자유 염기의 동등량을 의미한다. 예를 들어, 하이드로클로라이드 염의 중량으로 인해, 150 ㎎의 미갈라스타트 하이드로클로라이드는 123 ㎎의 미갈라스타트의 자유 염기 형태만큼의 미갈라스타트만을 제공한다. 다른 염은 염의 분자량에 따라 상이한 전환 인자를 가질 것으로 예상된다.

용어 "미갈라스타트"는 구체적으로 반대로 나타내지 않는 한, 미갈라스타트 자유 염기 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염(예컨대, 미갈라스타트 HCl)을 포괄한다.

용어 "돌연변이" 및 "변이형"(예를 들어, "적합한 돌연변이 또는 변이형"에서와 같이)은 유전자 또는 염색체의 뉴클레오타이드 서열의 변화를 나타낸다. 본원에서 지칭되는 두 용어들은 전형적으로 예를 들어, 이전 문장에서 명시된 뉴클레오타이드 서열의 변화를 나타내는 "돌연변이 또는 변이형"에서와 같이 함께 사용된다. 두 용어 중 하나만 어떤 이유로 기재된 경우, 누락된 용어는 포함되는 것으로 의도된 것이고 하나는 그러한 것으로 이해되어야 한다. 또한, 용어 "적합한 돌연변이" 및 "적합한 변이형"은 PC 치료법에 적합한 돌연변이 또는 변이형, 예를 들어, 미갈라스타트 치료법에 적합한 돌연변이를 나타낸다. 특정 유형의 적합한 돌연변이 또는 변이형은 "HEK 검정에 적합한 돌연변이 또는 변이형"으로서, 본원에 기재된 시험관내 HEK 검정의 기준에 따라 미갈라스타트 치료법에 적합한 것으로 결정된 돌연변이 또는 변이형이다.

파브리 질병

파브리 질병은 희귀하고, 진행성이며, 파괴적인 X-연관 리소좀 저장 장애이다. GLA 유전자의 돌연변이는 글리코스핑고지질 대사에 요구되는 리소좀 효소, α-Gal A의 결핍을 일으킨다. 생애 초기에 시작되며, α-Gal A 활성의 감소는 GL-3 및 혈장 라이소-Gb₃을 포함하는 글리코스핑고지질의 축적을 일으키고, 통증, 위장관 증상, 신장 부전, 심근병증, 뇌혈관 이벤트, 및 조기 사망을 포함하는 파브리 질병의 증상 및 생명을 위협하는 후유증을 야기한다. 치료법의 조기 개시 및 일생 동안의 치료는 질병 진행을 늦추고 예상 수명을 연장할 기회를 제공한다.

파브리 질병은 질병 중증도 스펙트럼 및 개시 연령을 포괄하지만, 전통적으로는 2개의 주요 표현형인 "전통적" 및 "후기-개시"로 구분되었다. 전통적 표현형은 검출 불가능 내지 낮은 α-Gal A 활성 및 신장, 심장 및/또는 뇌혈관 발현의 더 이른 개시를 갖는 남성이 주로 부여받았다. 후기-개시 표현형은 더 높은 잔여 α-Gal A 활성 및 이러한 질병 발현의 더 후기 개시를 갖는 남성이 주로 부여받았다. 이형접합성 여성 보인자는 전형적으로 후기-개시 표현형을 발현하지만 X-염색체 불활성화 패턴에 따라 전통적 표현형을 나타낼 수도 있다.

1,000개를 초과하는 파브리 질병-유도 GLA 돌연변이가 확인되었다. 대략 60%는 미스센스 돌연변이로, α-Gal A 효소의 단일 아미노산 치환을 일으킨다. 미스센스 GLA 돌연변이는 종종 비정상적으로 폴딩되고 불안정한 형태의 α-Gal A의 생성을 일으키며, 대부분 전통적 표현형과 연관된다. 소포체에서 정상 세포 품질 제어 기전이 이들 비정상 단백질의 리소좀으로의 이동을 차단하며 이들을 조기 분해 및 제거를 위해 표적화한다. 여러 미스센스 돌연변이체 형태가 α-Gal A-특이적 약리학적 샤페론인 미갈라스타트에 대한 표적이다.

파브리 질병의 임상적 발현은 광범위한 중증도 스펙트럼에 걸쳐 있고 환자의 잔여 α-GAL 수준과 대략적으로 관련된다. 대부분의 현재 치료받고 있는 환자는 전통적 파브리 질병 환자로 언급되며, 이들 대부분이 남성이다. 이들 환자는 신장, 심장 및 뇌를 포함하는 다양한 기관의 질병을 경험하며, 질병 증상은 사춘기에 처음 나타나고 전형적으로 40대 또는 50대에 사망 전까지 중증도가 증가한다. 여러 최근 연구에서 보통 사춘기에 처음 나타나는 다양한 파브리 질병 증상, 예컨대 손상된 심장 또는 신장 기능 및 뇌졸중을 갖는 진단되지 않은 남성 및 여성이 다수 존재함을 제시한다. 후기-개시 파브리 질병으로 언급되는, 상기 유형의 파브리 질병을 갖는 개체는 전통적 파브리 질병 환자보다 높은 잔여 α-GAL 수준을 갖는 경향성이 있다. 후기-개시 파브리 질병을 갖는 개체는 전형적으로 사춘기에 처음 질병 증상을 경험하며, 종종 단일 기관, 예컨대 좌심실 확대 또는 진행성 신장 부전에 집중된 질병 증상을 갖는다. 또한, 후기-개시 파브리 질병은 또한 원인이 알려지지 않은 뇌졸중 형태로도 존재할 수 있다.

파브리 환자는 진행성 신장 손상을 가지며, 미치료 환자는 50대 경 최종-단계 신장 손상을 나타낸다. α-Gal A 활성의 결핍은 신장 내 세포를 포함하는 여러 세포 유형에서 GL-3 및 관련된 글리코스핑고지질의 축적을 야기한다. GL-3은 발세포, 상피 세포, 그리고 원위 세관 및 헨레 고리의 관상 세포에 축적된다. 신장 기능의 손상은 단백뇨 및 감소된 사구체 여과율로 발현될 수 있다.

파브리 질병은 희귀하고, 여러 기관이 관여되며, 개시의 연령 범위가 넓고, 반접합성이므로, 적절한 진단이 난제이다. 헬스 케어 전문가 간의 인식이 낮고 오진단이 빈번하다. 환자가 증상성이고 돌연변이 분석과 커플링되면, 파브리 질병의 진단은 혈장 또는 말초 백혈구(WBC)에서 감소된 α-Gal A 활성에 기반하여 가장 자주 확인된다. 여성에서, 보인자 여성의 효소 확인은 보인자의 일부 세포에서 무작위 X-염색체 불활성화로 인해 신뢰도가 덜하므로, 진단이 더욱 더 어렵다. 예를 들어, 일부 절대 보인자(전통적으로 영향 받는 남성의 딸)는 정상 내지 매우 낮은 활성 범위의 α-Gal A 효소 활성을 갖는다. 보인자는 백혈구에서 정상 α-Gal A 효소 활성을 가질 수 있으므로, 유전 평가에 의한 α-Gal A 돌연변이의 확인만이 정확한 보인자 확인 및/또는 진단을 제공한다.

또한, 상술된 바와 같이, 파브리 질병의 개시 연령, 진행, 및 중증도는 리소좀에서 효소 활성과 상관관계가 있는 기질 축적의 속도에 적어도 부분적으로 의존한다. 따라서, 잔여 활성의 완전 결여는 빠른 기질 축적, 및 이에 따른 더 중증 형태의 질병(조기 발병 및 빠른 진행을 갖는)에 상응할 수 있다. 그러나, 심지어 소량의 잔여 활성이 다량의 기질을 분해하기에 충분할 수 있다. 이는 결과적으로 늦춰진 기질 축적 때문에 더 후기 개시 및 더 느린 진행을 갖는 더 경도의 질병을 야기할 것이다. 이들 요인들을 고려할 때, 효소 활성의 중등도 증가도 중증 임상 표현형의 영향을 감소시킬 수 있는 것으로 사료된다. 데이터는 대부분의 LSD의 경우 정상 활성의 단 1% 내지 6%만이 질병 개시를 지연 또는 예방하거나 더 경도 형태의 질병을 야기하기에 충분한 것으로 추정되었다는 것을 시사한다. 즉, 활성의 단지 적은 증가가 기질 수준, 및 이에 따라 질병 중증도 및 질병 진행 속도에 유의한 영향을 미칠 수 있다. 반대로, 시험관내에서 반응을 보이지 않은 돌연변이체 리소좀 효소가 또한 생체내에서 반응하지 않을 것으로 예상된다.

하나 이상의 구현예에서, 미갈라스타트에 적합한 것으로 간주되는 α-Gal A의 돌연변이체 또는 변이형 형태는 α-Gal A의 돌연변이체 형태가 의약품 임상시험 관리기준(GLP)-검증된 시험관내 검정(GLP HEK 또는 미갈라스타트 적합성 검정)에 따라 HEK-293 세포에서 발현되는 경우("HEK 검정"으로 언급됨) 1.20배 이상의 상대 증가(+10 μM 미갈라스타트) 및 야생형의 3.0% 이상의 절대 증가(+ 10 μM 미갈라스타트)를 나타내는 것으로 정의된다. 이러한 돌연변이 또는 변이형은 본원에서 또한 "HEK 검정에 적합한" 돌연변이 또는 변이형으로 언급된다.

치료 개시 전에 효소 증강을 평가하는 사전 스크리닝 방법이 제공되었다. 예를 들어, 주어진 돌연변이가 약리학적 샤페론(예컨대 미갈라스타트) 치료에 반응성일 것인지 여부를 예측하기 위해 HEK-293 세포를 사용하는 검정이 임상 시험에서 사용되었다. 상기 검정에서, cDNA 작제물이 생성된다. 대응 α-Gal A 돌연변이체 형태가 HEK-293 세포에서 일시적으로 발현된다. 이어서 세포는 4일 내지 5일 동안 미갈라스타트(17 nM 내지 1 mM)를 포함하거나 포함하지 않고 인큐베이션된다. 이후, α-Gal A 수준이 합성 형광발생 기질(4-MU-α-Gal)을 사용하여 또는 웨스턴 블롯에 의해 세포 용해액에서 측정된다. 이는 공지된 질병-유도 미스센스 또는 소규모 프레임-내 삽입/결실 돌연변이에 대해 수행되었다. 이러한 방법을 사용하여 PC(예컨대 미갈라스타트)에 반응성인 것으로 이전에 확인된 돌연변이는 본원에 그 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 제8,592,362호에 기재되어 있다.

HEK 검정에 적합한 돌연변이는 적어도 약리학적 참조 표에 열거된 돌연변이(예를 들어, GALAFOLD^®와 같이 미갈라스타트 제품에 대하여 미국 또는 국제 제품 라벨에 기재된 것)를 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 "약리학적 참조 표"는 특정 돌연변이 또는 변이형이 미갈라스타트(예를 들어, GALAFOLD^®) PC 치료법에 반응하는지의 여부를 전하며 반드시 표 형태로 제시된 서면 기록으로 제한되지 않는, 헬쓰 케어 제공업체에 의해 접근 가능한 웹사이트에서 또는 미갈라스타트 제품(예를 들어, GALAFOLD^®)의 패키징 내에 제품 라벨에 포함된 임의의 공개적으로 접근 가능한 서면 또는 전자 기록을 나타낸다. 본 발명의 하나의 구현예에서, "약리학적 참조 표"는 따라서 하나 이상의 적합한 돌연변이 또는 변이형을 포함하는 정보의 임의의 저장소를 나타낸다. 또 다른 구현예에서, "약리학적 참조 표"는 본원에 개시된 신규한 돌연변이 또는 변이형(즉, D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, R392T, N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, N408Y, V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, 또는 T412P)을 포함하는 적합한 돌연변이 또는 변이형의 업데이트된 저장소를 나타낸다. HEK 검정에 적합한 돌연변이에 대한 예시적인 약리학적 참조 표는 그 각각의 전문이 본원에 참조로 포함되는, GALAFOLD^®가 사용 승인된 다양한 국가에서 GALAFOLD^®에 대한 제품 특징 및/또는 처방 정보의 요약에서 또는 www.galafoldamenabilitytable.com 또는 www.fabrygenevariantsearch.com과 같은 웹사이트에서 확인될 수 있다.

그러나, 소정의 돌연변이만이 미갈라스타트로의 치료에 적합하기 때문에, 신규한 돌연변이를 확인하고 그러한 돌연변이가 미갈라스타트 치료법에 적합한지의 여부를 결정할 필요가 있다. 하기 실시예에 기재된 바와 같이, 여러 신규한 돌연변이가 확인되고, 미갈라스타트 치료법에 적합한 돌연변이로 결정되었다. 이들 돌연변이는 D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, R392T, N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, N408Y, V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, 및 T412P를 포함한다.

따라서, 하나 이상의 구현예에서, 미갈라스타트는 D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, 및 R392T로 이루어진 군으로부터 선택된 α-Gal A 돌연변이를 갖는 환자에서 α-Gal A 활성을 증강시키고/증강시키거나 파브리 질병을 치료하기 위해 사용된다. 하나 이상의 구현예에서, 미갈라스타트는 N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, 및 N408Y로 이루어진 군으로부터 선택된 α-Gal A 돌연변이를 갖는 환자에서 α-Gal A 활성을 증강시키고/증강시키거나 파브리 질병을 치료하기 위해 사용된다. 하나 이상의 구현예에서, 미갈라스타트는 V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, 및 T412P로 이루어진 군으로부터 선택된 α-Gal A 돌연변이를 갖는 환자에서 α-Gal A 활성을 증강시키고/증강시키거나 파브리 질병을 치료하기 위해 사용된다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 D33H를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 G35A를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 Y88S를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 T194A를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 W204G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 Y216S를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 Q250K를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 R392T를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 N53K를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 Q57R을 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 S62delinsLA를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 M96V를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 R112L을 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 D155E를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 N228D를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 Q330P를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 V339A를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 V339A를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 K391E를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 N408Y를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 V22G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 N34H를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 G80V를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 Q107R을 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 Y152D를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 A156S를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 L189F를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 W204L을 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 S238G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 I239M을 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 A257V를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 P259Q를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 N320H를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 P323T를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 E338V를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 P380L을 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 돌연변이 T412P를 갖는다. 다양한 구현예에서, 이들 α-Gal A 돌연변이는 SEQ ID NO: 2에 나타나 있는 아미노산 서열에 대해서이다.

이들 신규한 돌연변이와 관련된 예시적인 뉴클레오타이드 변화는 하기 표 1에 나타나 있다:

따라서, 다양한 구현예에서, 미갈라스타트는 c.97G>C, c.104G>C, c.263A>C, c.580A>G, c.610T>G, c.647A>C, c.748C>A 및 c.1175G>C로 이루어진 군으로부터 선택된 GLA 돌연변이를 갖는 환자에서 α-Gal A 활성을 증강시키고/증강시키거나 파브리 질병을 치료하기 위해 사용된다. 일부 구현예에서, 미갈라스타트는 c.159C>G 또는 c.159C>A, c.170A>G, c.184_185insTAG, c.286A>G, c.335G>T, c.465T>A 또는 c.465T>G, c.682A>G, c.989A>C, c.1016T>C, c.1171A>G, 및 c.1222A>T로 이루어진 군으로부터 선택된 GLA 돌연변이를 갖는 환자에서 α-Gal A 활성을 증강시키고/증강시키거나 파브리 질병을 치료하기 위해 사용된다. 일부 구현예에서, 미갈라스타트는 c.65T>G, c.100A>C, c.239G>T, c.320A>G, c.454T>G, c.466G>T, c.567G>C 또는 c.567G>T, c.611G>T, c.712A>G, c.717A>G, c.770C>T, c.776C>A, c.958A>C, c.967C>A, c.1013A>T, c.1139C>T, 및 c.1234A>C로 이루어진 군으로부터 선택된 GLA 돌연변이를 갖는 환자에서 α-Gal A 활성을 증강시키고/증강시키거나 파브리 질병을 치료하기 위해 사용된다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.97G>C를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.104G>C를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.263A>C를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.580A>G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.610T>G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.647A>C를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.748C>A를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.1175G>C를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.159C>G 또는 c.159C>A를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.170A>G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.184_185insTAG를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.286A>G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.335G>T를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.465T>A 또는 c.465T>G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.682A>G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.989A>C를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.1016T>C를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.1171A>G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.1222A>T를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.65T>G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.100A>C를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.239G>T를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.320A>G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.454T>G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.466G>T를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.567G>C 또는 c.567G>T를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.611G>T를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.712A>G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.717A>G를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.770C>T를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.776C>A를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.958A>C를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.967C>A를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.1013A>T를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.1139C>T를 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 환자는 GLA 돌연변이 c.1234A>C를 갖는다. 다양한 구현예에서, 이들 GLA 돌연변이는 SEQ ID NO: 3에 나타나 있는 핵산 서열에 대해서이다.

또한, 본 발명의 다양한 구현예는 α-Gal A를 인코딩하는 유전자에 돌연변이를 갖는 환자에서 파브리 질병의 치료를 위한 PC를 제공하고, 여기서 환자는 SEQ ID NO: 1 및/또는 SEQ ID NO: 3에 기재된 핵산 서열에 의해 인코딩된 인간 α-Gal A에서 미스센스 돌연변이를 갖는 것으로 확인된다. 본 발명의 또 다른 양태는 파브리 질병으로 진단된 환자를 치료하는 방법에 관한 것이다. 하나 이상의 구현예에서, 방법은 환자에게 α-Gal A의 치료적 유효 용량의 PC를 투여하는 단계를 포함한다. 추가의 구현예에서, 환자는 α-Gal A를 인코딩하는 핵산 서열에서 미스센스 돌연변이를 갖는다. 본 발명의 또 다른 구현예는 파브리 질병으로 진단된 또는 이를 갖는 것으로 추정되는 환자에서 α-Gal A를 증강시키는 방법에 관한 것이다. 하나 이상의 구현예에서, 방법은 환자에게 α-Gal A의 치료적 유효 용량의 PC를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 환자는 SEQ ID NO: 1 및/또는 SEQ ID NO: 3에 대해 미스센스 돌연변이를 갖는 핵산 서열에 의해 인코딩된 돌연변이체 α-Gal A를 갖는다. 이들 사용 및 방법의 세부 사항 및 추가 구현예는 다음을 따른다. 파브리 질병을 갖는 환자를 치료하는 방법, 파브리 질병으로 진단된 또는 이를 갖는 것으로 추정되는 환자에서 α-Gal A를 증강시키는 방법, 파브리 질병으로 진단된 환자 치료용 약제의 제조를 위한 α-Gal A에 대한 약리학적 샤페론의 용도 또는 파브리 질병으로 진단된 환자를 치료하는 데 사용하기 위한 α-Gal A에 대한 약리학적 샤페론(여기서, 환자는 SEQ ID NO: 1 및/또는 SEQ ID NO: 3에 기재된 핵산 서열에 의해 인코딩된 인간 α-Gal A에서 미스센스 돌연변이를 갖는 것으로 확인됨)에 관한 임의의 구현예는 본 발명의 임의의 다른 구현예, 예를 들어, PC 및 이의 적합한 투여량에 관한 구현예와 조합될 수 있다.

하나 이상의 구현예에서, 환자는 이들의 GLA 유전자에 다른 돌연변이를 가질 수 있다. 예를 들어, 생성된 α-Gal A 효소에 영향을 미칠 수 있거나 영향을 미치지 않을 수 있는 인트론 영역에 돌연변이가 있을 수 있다. 따라서, 하나 이상의 구현예에서, 환자는 SEQ ID NO: 1에 대해 적어도 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8% 또는 99.9% 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 인코딩된 돌연변이체 α-Gal A를 갖는다. 또한, 환자는 GLA 유전자의 코딩 영역에서 하나 이상의 추가 돌연변이를 가질 수 있다. 따라서, 하나 이상의 구현예에서, 환자는 SEQ ID NO: 3에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8% 또는 99.9% 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 인코딩된 돌연변이체 α-Gal A를 갖는다. 더욱이, 하나 이상의 구현예에서, 환자는 SEQ ID NO: 1 또는 SEQ ID NO: 3에 대해 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개, 20개 또는 30개의 돌연변이를 갖는다. 또한, 다양한 아미노산이 다중 핵산 서열에 의해 인코딩되기 때문에, SEQ ID NO: 1 또는 SEQ ID NO: 3에서 일부 핵산 돌연변이는 생성된 단백질에 대한 아미노산에 변화를 초래하지 않을 수 있다는 점이 주지된다. 또한, 임의의 이들 구현예는 본 발명의 임의의 다른 구현예, 예를 들어, 적합한 돌연변이, PC 및 이의 적합한 투여량에 관한 구현예와 조합될 수 있다.

약리학적 샤페론

LSD와 연관된 효소의 소분자 억제제의 결합은 돌연변이체 효소 및 대응하는 야생형 효소 둘 다의 안정성을 증가시킬 수 있다(모두 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제6,274,597호; 제6,583,158호; 제6,589,964호; 제6,599,919호; 제6,916,829호, 및 제7,141,582호 참고). 특히, 몇몇 표적 리소좀 효소에 대한 특이적이고 선택적인 경쟁적 억제제인 글루코스 및 갈락토스의 소분자 유도체의 투여는 시험관내 세포에서 효소의 안정성을 효과적으로 증가시키며, 이에 따라 리소좀으로의 효소 수송을 증가시켰다. 따라서, 리소좀에서 효소의 양을 증가시킴으로써, 효소 기질의 가수분해가 증가할 것으로 예상된다. 상기 전략 배후의 원래의 이론은 하기와 같았다: 돌연변이체 효소 단백질이 ER에서 불안정하므로(Ishii et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 1996; 220: 812-815), 효소 단백질은 정상 수송 경로(ER→골지 기구→엔도좀→리소좀)에서 지연되며 조기 분해된다. 따라서, 돌연변이체 효소에 결합하고 그 안정성을 증가시키는 화합물은 효소에 대한 "샤페론"으로서 작용하고 ER에서 배출되어 리소좀으로 이동할 수 있는 양을 증가시킬 수 있다. 또한, 일부 야생형 단백질의 폴딩 및 수송이 불완전하므로, 최대 70%의 일부 야생형 단백질은 일부 경우 이의 최종 세포 위치에 도달하기 전에 분해되고, 샤페론은 야생형 효소를 안정화하고 ER에서 배출되어 리소좀으로 이동할 수 있는 효소의 양을 증가시키기 위해 사용될 수 있다.

하나 이상의 구현예에서, 약리학적 샤페론은 미갈라스타트 또는 이의 염을 포함한다. 1-데옥시갈락토노지리마이신(1-DGJ) 또는 (2R,3S,4R,5S)-2-(하이드록시메틸)피페리딘-3,4,5-트리올로도 알려져 있는 화합물 미갈라스타트는 하기 화학식을 갖는 화합물이다:

본원에서 논의된 바와 같이, 미갈라스타트의 약학적으로 허용 가능한 염이 또한 본 발명에서 사용될 수 있다. 미갈라스타트의 염이 사용되는 경우, 염의 투여량은 환자가 수여받는 미갈라스타트의 용량이 미갈라스타트 자유 염기가 사용되었을 때 수여받았을 양과 동등하도록 조정될 것이다. 미갈라스타트의 약학적으로 허용 가능한 염의 하나의 예는 미갈라스타트 HCl이다:

미갈라스타트는 저분자량 이미노당이며 GL-3의 말단 갈락토스의 유사체이다. 시험관내 및 생체내 약리학적 연구는 미갈라스타트가 약리학적 샤페론으로 작용하여, 야생형 α-Gal A 및 α-Gal A의 특정 돌연변이체 형태의 활성 부위에 대해 고친화도로 선택적이고 가역적으로 결합함을 실증하였다. 미갈라스타트 결합은 소포체에서 α-Gal A의 이러한 돌연변이체 형태를 안정화하여 미갈라스타트의 해리가 α-Gal A로 하여금 GL-3 및 다른 기질의 수준을 감소시킬 수 있도록 하는 리소좀으로의 이의 적절한 수송을 촉진한다.

특정 구현예에서, PC는 미갈라스타트 또는 이의 염을 포함한다. 추가의 구현예에서, PC는 미갈라스타트 하이드로클로라이드를 포함한다.

α-Gal A에 대한 임의의 이들 PC는 본 발명의 임의의 다른 구현예, 예를 들어, 파브리 질병을 갖는 환자를 치료하는 방법, 파브리 질병으로 진단된 또는 이를 갖는 것으로 추정되는 환자에서 α-Gal A를 증강시키는 방법, 파브리 질병으로 진단된 환자 치료용 약제의 제조를 위한 α-Gal A에 대한 약리학적 샤페론의 용도 또는 파브리 질병으로 진단된 환자를 치료하는 데 사용하기 위한 α-Gal A에 대한 약리학적 샤페론에 관한 구현예뿐만 아니라 PC의 적합한 용량, 적합한 돌연변이 및 α-Gal A를 인코딩하는 핵산 서열에서 특정 돌연변이를 갖는 파브리 환자의 치료에 관한 구현예와 조합하여 사용될 수 있다.

투약, 제형화 및 투여

하나 이상의 구현예에서, 파브리 환자에 2일 1회의 빈도로("QOD"로도 언급됨) 미갈라스타트 또는 이의 염이 투여된다. 다양한 구현예에서, 본원에 기재된 용량은 미갈라스타트 하이드로클로라이드 또는 동등 용량의 미갈라스타트 또는 하이드로클로라이드 염 이외의 이의 염에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 이들 용량은 미갈라스타트의 자유 염기에 관한 것이다. 대안적인 구현예에서, 이들 용량은 미갈라스타트의 염에 관한 것이다. 추가 구현예에서, 미갈라스타트의 염은 미갈라스타트 하이드로클로라이드이다. 미갈라스타트 또는 미갈라스타트의 염의 투여는 본원에서 "미갈라스타트 치료법"으로 언급된다.

미갈라스타트 또는 이의 염의 유효량은 약 100 ㎎ FBE 내지 약 150 ㎎ FBE의 범위일 수 있다. 예시적인 용량에는 약 100 ㎎ FBE, 약 105 ㎎ FBE, 약 110 ㎎ FBE, 약 115 ㎎ FBE, 약 120 ㎎ FBE, 약 123 ㎎ FBE, 약 125 ㎎ FBE, 약 130 ㎎ FBE, 약 135 ㎎ FBE, 약 140 ㎎ FBE, 약 145 ㎎ FBE 또는 약 150 ㎎ FBE가 포함된다.

또한, 150 ㎎의 미갈라스타트 하이드로클로라이드는 123 ㎎의 미갈라스타트의 자유 염기 형태와 동등한 것임이 주지된다. 따라서 하나 이상의 구현예에서, 용량은 2일 1회의 빈도로 투여되는 150 ㎎의 미갈라스타트 하이드로클로라이드 또는 동등 용량의 미갈라스타트 또는 하이드로클로라이드 염 이외의 이의 염이다. 상기 나타낸 바와 같이, 상기 용량은 123 ㎎ FBE의 미갈라스타트로 언급된다. 추가 구현예에서, 용량은 2일 1회의 빈도로 투여되는 150 ㎎의 미갈라스타트 하이드로클로라이드이다. 다른 구현예에서, 용량은 2일 1회의 빈도로 투여되는 123 ㎎의 미갈라스타트 자유 염기이다.

다양한 구현예에서, 유효량은 약 122 mg, 약 128 mg, 약 134 mg, 약 140 mg, 약 146 mg, 약 150 mg, 약 152 mg, 약 159 mg, 약 165 mg, 약 171 mg, 약 177 ㎎ 또는 약 183 ㎎의 미갈라스타트 하이드로클로라이드이다.

따라서 다양한 구현예에서, 미갈라스타트 치료법에는 2일 1회의 빈도로 123 ㎎ FBE, 예컨대 2일마다 150 ㎎의 미갈라스타트 하이드로클로라이드를 투여하는 단계가 포함된다.

미갈라스타트 또는 이의 염의 투여는 소정 시기 동안일 수 있다. 하나 이상의 구현예에서, 미갈라스타트 또는 이의 염은 적어도 28일의 기간, 예컨대 적어도 30일, 60일 또는 90일 또는 적어도 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 16개월, 20개월, 24개월, 30개월 또는 36개월 또는 적어도 1년, 2년, 3년, 4년 또는 5년 동안 투여된다. 다양한 구현예에서, 미갈라스타트 치료법은 적어도 6개월, 예컨대 적어도 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 16개월, 20개월, 24개월, 30개월 또는 36개월 또는 적어도 1년, 2년, 3년, 4년 또는 5년의 장기 미갈라스타트 치료법이다.

본 발명에 따른 미갈라스타트 또는 이의 염의 투여는 임의의 투여 경로를 위해 적합한 제형물로일 수 있으나, 바람직하게는 경구 투여량 형태, 예컨대 정제, 캡슐 또는 용액으로 투여된다. 일 실시예로서, 환자에게는 각각 150 ㎎ 미갈라스타트 하이드로클로라이드 또는 동등 용량의 미갈라스타트 또는 하이드로클로라이드 염 이외의 이의 염을 함유하는 캡슐이 경구 투여된다.

일부 구현예에서, PC(예컨대, 미갈라스타트 또는 이의 염)는 경구 투여된다. 하나 이상의 구현예에서, PC(예컨대, 미갈라스타트 또는 이의 염)는 주사에 의해 투여된다. PC는 약학적으로 허용 가능한 담체가 수반될 수 있으며, 이는 투여 방법에 의존할 수 있다.

하나 이상의 구현예에서, PC(예컨대, 미갈라스타트 또는 이의 염)은 단독치료법으로서 투여되며, 예컨대 경구로 정제 또는 캡슐 또는 액체 형태, 또는 주사용 멸균 수용액을 포함하는 임의의 투여 경로에 적합한 형태일 수 있다. 다른 구현예에서, PC는 투여 전 시험관내 효소 응집을 방지하기 위해 재구성 동안 또는 직후 대체 효소의 제형물에 첨가될 건조 동결건조된 분말로 제공된다.

PC(예컨대, 미갈라스타트 또는 이의 염)가 경구 투여를 위해 제형화되는 경우, 정제 또는 캡슐은 약학적으로 허용 가능한 부형제, 예컨대 결합제(예컨대, 사전젤라틴화 옥수수 전분, 폴리비닐피롤리돈 또는 하이드록시프로필 메틸셀룰로스); 충전제(예컨대, 락토스, 미세결정형 셀룰로스 또는 칼슘 하이드로겐 포스페이트); 윤활제(예컨대, 마그네슘 스테아레이트, 활석 또는 실리카); 붕해제(예컨대, 감자 전분 또는 나트륨 전분 글리콜레이트); 또는 수화제(예컨대, 나트륨 라우릴 설페이트)와 함께 통상적 수단에 의해 제조될 수 있다. 정제는 당분야에 널리 공지된 방법에 의해 코팅될 수 있다. 경구 투여용 액체 조제물은, 예를 들어, 용액, 시럽 또는 현탁액의 형태를 취할 수도 있고, 또는 이들은 사용 전에 물 또는 또 다른 적합한 비히클로의 구성을 위한 건조 제품으로서 제공될 수도 있다. 이러한 액체 조제물은 약학적으로 허용 가능한 첨가제, 예컨대 현탁화제(예컨대, 소르비톨 시럽, 셀룰로스 유도체 또는 수소화 식용 지방); 유화제(예컨대, 레시틴 또는 아카시아); 비-수성 비히클(예컨대, 아몬드 오일, 유성 에스테르, 에틸 알코올 또는 분획화된 식물성 오일); 및 보존제(예컨대, 메틸-p-하이드록시벤조에이트 또는 프로필-p-하이드록시벤조에이트 또는 소르브산)와 함께 통상적 수단에 의해 제조될 수 있다. 조제물은 또한 적절한 바에 따라 완충 염, 풍미제, 착색제 및 감미제를 함유할 수 있다. 경구 투여용 조제물은 활성 샤페론 화합물의 제어 방출을 제공하기 위해 적합하게 제형화될 수 있다.

비경구/주사용 용도에 적합한 PC(예컨대, 미갈라스타트 또는 이의 염)의 약학 제형물에는 일반적으로 멸균 수용액(수용성인 경우), 또는 멸균 주사 용액 또는 분산액의 체외 제조를 위한 분산액 및 멸균 분말이 포함된다. 모든 경우에서, 형태는 멸균성이어야 하며, 용이한 주사 가능성이 존재하는 정도까지 유체여야 한다. 제조 및 보관 조건 하에 안정해야 하며 미생물, 예컨대 박테리아 및 진균의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 담체는, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜 등), 이의 적합한 혼합물 및 식물성 오일을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유체성은, 예를 들어, 코팅, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물의 작용 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 벤질 알코올, 소르브산 등에 의해 일으킬 수 있다. 여러 경우에서, 등장성 제제, 예를 들어, 당 또는 나트륨 클로라이드를 포함시키는 것이 합리적일 것이다. 주사용 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 조성물 중 사용에 의해 일으킬 수 있다.

멸균 주사 용액은 필요한 바에 따라, 상기 열거된 다양한 다른 성분과 함께 적절한 용매 중에 요구되는 양으로 정제된 효소(존재하는 경우) 및 PC(예컨대, 미갈라스타트 또는 이의 염)을 혼입한 후 필터 또는 말기 멸균화에 의해 제조된다. 일반적으로, 분산액은 기본 분산 매질 및 상기 열거된 것들로부터 요구되는 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 다양한 멸균화 활성 성분을 혼입하여 제조된다. 멸균 주사 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 이의 사전 멸균-여과된 용액으로부터 활성 성분과 임의의 추가적인 요망되는 성분의 분말을 산출하는 진공 건조 및 냉동-건조 기법이다.

제형물은 부형제를 함유할 수 있다. 제형물에 포함될 수 있는 약학적으로 허용 가능한 부형제는 완충제, 예컨대 시트레이트 완충제, 포스페이트 완충제, 아세테이트 완충제, 바이카보네이트 완충제, 아미노산, 요소, 알코올, 아스코르브산 및 인지질; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 콜라겐 및 젤라틴; 염, 예컨대 EDTA 또는 EGTA, 및 나트륨 클로라이드; 리포좀; 폴리비닐피롤리돈; 당, 예컨대 덱스트란, 만니톨, 소르비톨 및 글리세롤; 프로필렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜(예컨대, PEG-4000, PEG-6000); 글리세롤; 글리신 또는 다른 아미노산; 및 지질이다. 제형물과 함께 사용하기 위한 완충제 시스템에는 시트레이트; 아세테이트; 바이카보네이트; 및 포스페이트 완충제가 포함된다. 포스페이트 완충제가 바람직한 구현예이다.

샤페론 화합물의 투여 경로는 정맥내, 피하, 동맥내, 복강내, 안구, 근육내, 협측, 직장, 질, 안와내, 뇌내, 피내, 두개내, 척추내, 심실내, 경막내, 수조내, 관절낭내, 폐내, 비강내, 경점막, 경피부, 또는 흡입을 통하는 것을 포함하는 경구 또는 비경구일 수 있다.

샤페론 화합물의 상술된 비경구 제형물의 투여는 조제물 볼루스의 주기적 주사에 의할 수도 있고, 또는 외부 저장소(예컨대 i.v. 백) 또는 내부 저장소(예컨대, 생체식용 임플란트)로부터의 정맥내 또는 복강내 투여에 의해 투여될 수도 있다.

약학 제형물 및 투여에 관한 구현예는 본 발명의 임의의 다른 구현예, 예컨대 파브리 질병을 갖는 환자를 치료하는 방법, 파브리 질병으로 진단된 환자 치료용 약제의 제조를 위한 α-Gal A에 대한 약리학적 샤페론의 용도 또는 파브리 질병으로 진단된 환자를 치료하는 데 사용하기 위한 α-Gal A에 대한 약리학적 샤페론에 관한 구현예뿐만 아니라 적합한 돌연변이, PC 및 이의 적합한 투여량에 관한 구현예와 조합될 수 있다.

하나 이상의 구현예에서, PC(예컨대, 미갈라스타트 또는 이의 염)는 ERT와의 조합으로 투여된다. ERT는 야생형 또는 생물학적으로 기능적인 효소를 주입에 의해 외인성으로 도입함으로써 단백질의 양을 증가시킨다. 상기 치료법은 상기 언급된 바와 같이, LSD, 예컨대 파브리 질병을 포함하는 여러 유전 장애를 위해 개발되었다. 주입 후, 외인성 효소는 비-특이적이거나 수용체-특이적인 기전을 통해 조직에 의해 섭취될 것으로 예상된다. 일반적으로, 섭취 효율은 높지 않으며, 외인성 단백질의 순환 시간은 짧다. 또한, 외인성 단백질은 불안정하며, 신속한 세포내 분해를 거칠뿐만 아니라 후속 치료로 유해한 면역학적 반응 가능성을 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, 샤페론은 대체 효소(예컨대, 대체 α-Gal A)와 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 샤페론은 대체 효소(예컨대, 대체 α-Gal A)와 공동-제형화된다.

본 명세서에 걸쳐 "하나의 구현예", "소정 구현예", "다양한 구현예", "하나 이상의 구현예" 또는 "구현예"에 대한 언급은 구현예에 관해 기재되는 특정한 특성, 구조, 물질 또는 특징이 본 발명의 적어도 하나의 구현예에 포함됨을 의미한다. 따라서, 본 명세서를 통해 다양한 위치에서 "하나 이상의 구현예에서", "소정 구현예에서", "다양한 구현예에서", "하나의 구현예에서" 또는 "구현예에서"와 같은 어구의 출현이 반드시 본 발명의 동일한 구현예를 언급하는 것은 아니다. 또한, 특정한 특성, 구조, 물질 또는 특징은 하나 이상의 구현예에서 임의의 적합한 방식으로 조합될 수 있다.

본원에서의 발명은 특정한 구현예에 대해 기재되었으나, 이들 구현예는 본 발명의 원리 및 적용을 단순히 예시하는 것임이 이해되어야 한다. 당업자에게는 다양한 변형 및 변이가 본 발명의 정신 및 범위에서 벗어나지 않고 본 발명의 방법 및 장치에 수행될 수 있음이 자명할 것이다. 따라서, 본 발명에는 첨부되는 청구범위 및 이의 균등부의 범위 내인 변형 및 변이가 포함되는 것이다.

실시예: α-Gal A의 돌연변이에 대한 미갈라스타트의 효과

α-Gal A의 지시된 돌연변이체 형태로 일시적으로 형질감염되고 10 μM 미갈라스타트의 부재 또는 존재에서 5일 동안 인큐베이션된 HEK-293 세포로부터 제조된 용해액에서 α-Gal A 활성을 측정하였다. α-Gal A 활성은 시간 당 1 밀리그램의 단백질 당 방출되는 자유 4-MU의 nmol(nmol/mg/hr)로 표현된다. l0 μM 미갈라스타트와 인큐베이션 후 기준선 α-Gal A 활성 및 α-Gal A 활성은 추가로 기준선 야생형 α-Gal A 활성의 백분율(% WT)로 표현되었다. 이러한 백분율을 계산하는 데 사용된 야생형 α-Gal A 활성은 미갈라스타트의 부재에서 인큐베이션되고 동시에 측정된 야생형 형질감염 세포로부터의 용해액에서 측정된 평균 활성이었다.

신규한 돌연변이 D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, 및 R392T에 대한 α-Gal A 활성 시험의 결과는 하기 표 2에 나타나 있다:

신규한 돌연변이 N53K, Q57R, S62delinsLA, M96V, R112L, D155E, N228D, Q330P, V339A, K391E, 및 N408Y에 대한 α-Gal A 활성 시험의 결과는 하기 표 3에 나타나 있다:

신규한 돌연변이 V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, 및 T412P에 대한 α-Gal A 활성 시험의 결과는 하기 표 4에 나타나 있다:

표 2 내지 표 4에서, 평균 ± 평균의 표준 오차(SEM)에 대한 값을 계산하였다. nmol/mg/hr은 "시간 당 1 mg의 단백질 당 방출된 자유 4-MU의 nmol"을 나타낸다. WT는 "야생형"을 나타낸다. NC는 "계산 불가"를 나타낸다. N/A는 "해당되지 않음"을 나타낸다.

기준선 및 10 μM 미갈라스타트 α-Gal A 활성: 10 μM 미갈라스타트의 부재 및 존재에서 인큐베이션된 용해액들 간의 α-Gal A 활성의 차이는 단측 맨 휘트니 U 검정을 이용하여 결정되었고; p<0.05로 10 μM 미갈라스타트의 증가는 유의한 것으로 간주되었다. "BLD"는 평균 α-Gal A 활성이 검출 한계(<142 nmol/mg/hr)보다 낮았다는 것을 지시한다.

기준선 α-Gal A 활성(% WT) = (미갈라스타트가 없는 돌연변이체 형질감염 세포 용해액에서 α-Gal A 활성 ÷ 미갈라스타트가 없는 야생형 형질감염 세포 용해액에서 α-Gal A 활성) * 100.

10 μM 미갈라스타트 α-Gal A 활성(% WT) = (10 μM 미갈라스타트와 인큐베이션된 돌연변이체 형질감염 세포 용해액에서 α-Gal A 활성 ÷ 미갈라스타트가 없는 야생형 형질감염 세포 용해액에서 α-Gal A 활성) * 100.

절대 증가(% WT) = 10 μM 미갈라스타트 α-Gal A 활성(% WT) - 기준선 α-Gal A 활성(% WT).

상대 증가 는 돌연변이체 형질감염 세포 용해액에서 10 μM 미갈라스타트 α-Gal A 활성 ÷ 미갈라스타트 없이 인큐베이션된 돌연변이체 형질감염 세포 용해액에서 기준선 α-Gal A 활성이다.

표 2로부터 알 수 있듯이, 신규한 α-Gal A 돌연변이 D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, 및 R392T는 적합성 기준을 충족한 미갈라스타트와의 인큐베이션에 시험관내 반응을 입증하였다. 따라서, 이들 돌연변이를 갖는 환자는 본원에 기재된 바와 같은 미갈라스타트 치료법으로 치료 가능한 것으로 예상된다.

표 3으로부터 알 수 있듯이, 신규한 α-Gal A 돌연변이 D33H, G35A, Y88S, T194A, W204G, Y216S, Q250K, 및 R392T는 적합성 기준을 충족한 미갈라스타트와의 인큐베이션에 시험관내 반응을 입증하였다. 따라서, 이들 돌연변이를 갖는 환자는 본원에 기재된 바와 같은 미갈라스타트 치료법으로 치료 가능한 것으로 예상된다.

도 4로부터 알 수 있듯이, 신규한 α-Gal A 돌연변이 V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L, 및 T412P는 적합성 기준을 충족한 미갈라스타트와의 인큐베이션에 시험관내 반응을 입증하였다. 따라서, 이들 돌연변이를 갖는 환자는 본원에 기재된 바와 같은 미갈라스타트 치료법으로 치료 가능한 것으로 예상된다.

본원에서 언급되는 특허 및 과학 문헌은 당업자가 이용 가능한 지식을 확립한다. 본원에서 인용되는 모든 미국 특허 및 공개 또는 미공개 미국 특허 출원이 참조로 포함된다. 본원에서 인용되는 모든 공개된 외국 특허 및 외국 출원이 본원에 참조로 포함된다. 본원에서 인용되는 모든 다른 공개 참고문헌, 문서, 원고 및 과학 문헌이 본원에 참조로 포함된다

본 발명을 이의 바람직한 구현예를 참조하여 구체적으로 나타내고 기재하였으나, 형태 및 상세사항의 다양한 변화가 첨부된 청구범위에 의해 포괄되는 본 발명의 범위에서 벗어나지 않고 제조될 수 있음이 당업자에게 이해될 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> AMICUS THERAPEUTICS, INC. <120> METHODS OF TREATING FABRY DISEASE IN PATIENTS HAVING A MUTATION IN THE GLA GENE <130> AT18-005-PCT <150> US 62/719,962 <151> 2018-08-20 <160> 3 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 12436 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 cccttctgta ggggcagaga ggttctactt cattactgcg tctcctggga aggccatcag 60 gactgctggc taaagtggga accaggactc tttgtgagtt aagaatttgt gtatttatat 120 gtgtgttata cacatttttt aaaaaactgt aacgacatca ggttgagcag tcgtctccgg 180 gtggtgaatt atgtgtattt ttaaatttta tactatattg ttatttttca aatgttcgaa 240 attgaatatg tagattgttg ttatcagcag aaaaataaac attattcaaa tactctattc 300 agtaaagtaa tttattgggc gcctttgtca agcacgcatt tgcctagatg tgactctaca 360 gataaaattc acttggggcc tccccttaca gacaatcagg cagtggagac tgagtgcctg 420 aatggataga ccagcactca gaccactatt ttcagtatct gtttttctta actcagggcc 480 gtggttttca aacgtttttc gccttacggt cacccttagg gtcccccgag accggcccag 540 acagacagat atacaaaaac acatacacag tcatgagcgt ccaccatttc cccaccaggc 600 gcagcacagg 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agttttggat actacgacat tgatgcccag acctttgctg 7380 actggggagt agatctgcta aaatttgatg gttgttactg tgacagtttg gaaaatttgg 7440 cagatggtaa tgtttcattc cagagattta gccacaaagg aaagaacttt gaggccatgg 7500 tagctgagcc aaagaaccaa tcttcagaat tttaaatacc ctgtcacaat actggaaata 7560 attattctcc atgtgccaga gctcccatct cttctctttc agttcattaa ttaattaatt 7620 aattcatgta aaatccatgc atacctaacc atagctaata ttgtgcactt ataattcaag 7680 agggctctaa gagttaatta gtaattgtaa ctctctataa catcatttag gggagtccag 7740 gttgtcaatc ggtcacagag aaagaagcat cttcattcct gcctttcctc aatatacaca 7800 ccatctctgc actacttcct cagaacaatc ccagcagtct gggaggtact ttacacaatt 7860 taagcacaga gcaactgcct gtccctgctg ctagtttaaa catgaacctt ccaggtagcc 7920 tcttcttaaa atatacagcc ccagctgggc atgatggctc atgcctgtaa tcctagcact 7980 ttgggaggct gaggcgggtg gattacttga ggtcaggagt tcgagaccac cctggccaac 8040 atggtgaaac cccatctcta gtaaaaatac aaaaattagc tgactttggt ggcacatgcc 8100 tgtaatccca gctacttggg aagctgagac agaagagtca cttgaacctg ggaaacagag 8160 gttgcagtga gccaagatcg caccactgca ctccaccctg gatgacagac tgaaccccat 8220 ctcaaaaaat taaaataaaa taaaataaaa taactatata tatagcccca gctggaaatt 8280 catttctttc ccttatttta cccattgttt tctcatacag gttataagca catgtccttg 8340 gccctgaata ggactggcag aagcattgtg tactcctgtg agtggcctct ttatatgtgg 8400 ccctttcaaa aggtgagata gtgagcccag aatccaatag aactgtactg atagatagaa 8460 cttgacaaca aaggaaacca aggtctcctt caaagtccaa cgttacttac tatcatccta 8520 ccatctctcc caggttccaa ccacttctca ccatccccac tgctgtaatt atagcctaag 8580 ctaccatcac ctggaaagtc atccttgtgt cttccccttt atttcaccat tcatgtcctg 8640 tctatcaaca gtccttccac cagtatctct aaaatatctc ctgaatcagc ccacttcctt 8700 ccatcttcac tacatgcacc ctggccttcc aagctactat cggctctcaa ccagactgct 8760 gggaccacct gatctctctg cttccactct gtctcaaccc ccatctattt tccaagcagc 8820 actagagtta tcatattaaa atgtaaatat cagttttttt tttaaagaaa aaaaccctga 8880 gacttaacag agttataaaa aatataaatg tcatcatcag ttccctgctt aaaaccctta 8940 actcgcttcc aattgcactt ggaatgaaac caaactgcac tgatccagcc cttgcctgcc 9000 tccccaaagt ccaaggggtc atggctcttt ccctggctac actggttttc tttctgtccc 9060 tcaacactgc aagcctattg ctgccccagg gcctttacac ttgctttttt tctgcctaga 9120 acagttcttc cccaaagatt tttaaagggc cgggctcctt aacattgaag tcgcagacca 9180 aacgccacat atgcagacag ttcttctcta actactttaa aatagccctc tgtccattca 9240 ttcttcatca cattaacctg tttaattttc ttctcagagc tccacactat ttggaagtat 9300 ttgttgactt gttaccatgt ctccccacta gagtgtaagt ttcatgaggg cagggacctt 9360 gtctgacttt gactgtatct ctcgcatatg gttaagtgtt aaatagttat ttatggaatg 9420 aatccctatt attccctcat tatctctgca aaatagtctt ttttctcaac atcttaaacc 9480 tgatatccca cctgcctatc tacaaacttt ttttttgcga cagagtctca ctgtcaccca 9540 ggctagagtg cagtggcgcc atctcggctc actgcaacct ccgcctcccg ggtttaagcg 9600 attctcttgc ctcagcctcc cagtagctgg gattataggc gtgcgctacc acatctggct 9660 aatttttgta tttttagtag agatggtttc accatgttgg ccaggcttgt ctcgaactcc 9720 tgacctcaga tgatccacct gcctcggcct cccaaagtgc tgggattaca ggcatgagcc 9780 accgtgccca gcctctacaa actttttatt ccattaacaa actatatgct gggatttaag 9840 ttttcttaat acttgatgga gtcctatgta attttcgagc ttttaatttt actaagacca 9900 ttttagttct gattatagaa gtaaattaac tttaagggat ttcaagttat atggcctact 9960 tctgaagcaa acttcttaca gtgaaaattc attataaggg tttagacctc cttatggaga 10020 cgttcaatct gtaaactcaa gagaaggcta caagtgcctc ctttaaactg ttttcatctc 10080 acaaggatgt tagtagaaag taaacagaag agtcatatct gttttcacag cccaattata 10140 cagaaatccg acagtactgc aatcactggc gaaattttgc tgacattgat gattcctgga 10200 aaagtataaa gagtatcttg gactggacat cttttaacca ggagagaatt gttgatgttg 10260 ctggaccagg gggttggaat gacccagata tggtaaaaac ttgagccctc cttgttcaag 10320 accctgcggt aggcttgttt cctattttga cattcaaggt aaatacaggt aaagttcctg 10380 ggaggaggct ttatgtgaga gtacttagag caggatgctg tggaaagtgg tttctccata 10440 tgggtcatct aggtaacttt aagaatgttt cctcctctct tgtttgaatt atttcattct 10500 ttttctcagt tagtgattgg caactttggc ctcagctgga atcagcaagt aactcagatg 10560 gccctctggg ctatcatggc tgctccttta ttcatgtcta atgacctccg acacatcagc 10620 cctcaagcca aagctctcct tcaggataag gacgtaattg ccatcaatca ggaccccttg 10680 ggcaagcaag ggtaccagct tagacaggta aataagagta tatattttaa gatggcttta 10740 tatacccaat accaactttg tcttgggcct aaatctattt ttttcccttg ctcttgatgt 10800 tactatcagt aataaagctt cttgctagaa acattacttt atttccaaaa taatgctaca 10860 ggatcatttt aatttttcct acaagtgctt gatagttctg acattaagaa tgaatgccaa 10920 actaacaggg ccacttatca ctagttgcta agcaaccaca ctttcttggt ttttcaggga 10980 gacaactttg aagtgtggga acgacctctc tcaggcttag cctgggctgt agctatgata 11040 aaccggcagg agattggtgg acctcgctct tataccatcg cagttgcttc cctgggtaaa 11100 ggagtggcct gtaatcctgc ctgcttcatc acacagctcc tccctgtgaa aaggaagcta 11160 gggttctatg aatggacttc aaggttaaga agtcacataa atcccacagg cactgttttg 11220 cttcagctag aaaatacaat gcagatgtca ttaaaagact tactttaaaa tgtttatttt 11280 attgccaact actacttcct gtccaccttt ttctccattc actttaaaag ctcaaggcta 11340 ggtggctcat gcctgtaatc ccagcacttt gggaggctga ggcgggcaga tcacctgagg 11400 tcgggacttt gagacccgcc tggacaacat ggtgaaaccc catttctaat aaaaatataa 11460 aaattagcca ggtgtggtgg cgcacctgtg gtcccagcta ctctgggggc tgaggcatga 11520 gaatcgcttg aacccgggag tggaggttgc attgagctga gatcatgcca cctcactcca 11580 gcctgggcaa caaagattcc atctcaaaaa aaaaaaaaaa gccaggcaca gtggctcatg 11640 cctggaatcc cagcactttt ggaagctgag gcaggcagat cacttgaggt taggatttca 11700 agaccagcct ggctaacata gtaaagccct gtctctacta aaaatacaaa aattagccag 11760 gtatggtggc gagcttctgt agccccagct actcaggaga ctgaggcagg agaatcactt 11820 gaacccggga agtggggggg tgcagtgacc caagatcacg ccactgcatt ccagcctggg 11880 caacagagca agactccatc tcaaaaaaaa aagttctatt tccttgaata aaattttccg 11940 aagtttaaac tttaggaata aaactattaa acccgtattt actcatccag atacccaccc 12000 cccttgttga gattctctcc caattatcaa aatgtgtagc atatttaact accaagagct 12060 aaacatcatt aagactgaaa tgtattaaga aggatgtata ggccaggcac ggtgtctcac 12120 gcctgtaatc ccaacacttt gggaggccaa gtcgggcgga tcacgaggtc aggagatgga 12180 gaccatcctg gccaacatgg tgaaaccccc tctctactaa aaatacaaaa attagccagg 12240 caggtggcag gcacctgtaa tcccagctac tccagaggct gaggcaggac aatcacttga 12300 acctgggagg cagaggctgc agtgagctga ggttgtacca attgcactcc 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Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu Asn 180 185 190 Arg Thr Gly Arg Ser Ile Val Tyr Ser Cys Glu Trp Pro Leu Tyr Met 195 200 205 Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys Asn 210 215 220 His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Lys Ser Ile Lys 225 230 235 240 Ser Ile Leu Asp Trp Thr Ser Phe Asn Gln Glu Arg Ile Val Asp Val 245 250 255 Ala Gly Pro Gly Gly Trp Asn Asp Pro Asp Met Leu Val Ile Gly Asn 260 265 270 Phe Gly Leu Ser Trp Asn Gln Gln Val Thr Gln Met Ala Leu Trp Ala 275 280 285 Ile Met Ala Ala Pro Leu Phe Met Ser Asn Asp Leu Arg His Ile Ser 290 295 300 Pro Gln Ala Lys Ala Leu Leu Gln Asp Lys Asp Val Ile Ala Ile Asn 305 310 315 320 Gln Asp Pro Leu Gly Lys Gln Gly Tyr Gln Leu Arg Gln Gly Asp Asn 325 330 335 Phe Glu Val Trp Glu Arg Pro Leu Ser Gly Leu Ala Trp Ala Val Ala 340 345 350 Met Ile Asn Arg Gln Glu Ile Gly Gly Pro Arg Ser Tyr Thr Ile Ala 355 360 365 Val Ala Ser Leu Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Pro Ala Cys Phe Ile 370 375 380 Thr Gln Leu Leu Pro Val Lys Arg Lys Leu Gly Phe Tyr Glu Trp Thr 385 390 395 400 Ser Arg Leu Arg Ser His Ile Asn Pro Thr Gly Thr Val Leu Leu Gln 405 410 415 Leu Glu Asn Thr Met Gln Met Ser Leu Lys Asp Leu Leu 420 425 <210> 3 <211> 1290 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 atgcagctga ggaatcccga gctccacctg ggctgtgctc tggctctgcg gttcctggcc 60 ctcgtgtcct gggacatccc tggcgctagg gccctcgata acggactggc ccggaccccc 120 acaatgggat ggctccactg ggaaaggttc atgtgcaatc tggactgtca ggaggaaccc 180 gactcctgca tcagcgaaaa gctcttcatg gagatggccg agctgatggt gagcgagggc 240 tggaaggacg ccggctacga gtatctgtgc atcgatgact gctggatggc ccctcaaagg 300 gactccgaag gcaggctgca ggctgatccc caaaggtttc cccacggaat ccggcagctc 360 gccaactacg tgcattccaa gggcctcaag ctcggcatct acgccgacgt gggcaacaaa 420 acatgcgccg gattccccgg cagcttcggc tactacgaca tcgacgccca gacattcgct 480 gattggggag tggacctgct gaagttcgac ggctgttact gcgattccct ggaaaacctg 540 gccgacggct acaaacacat gtccctcgcc ctgaaccgga caggcaggtc catcgtgtac 600 agctgcgagt ggcccctgta catgtggcct ttccagaagc ccaactacac agagatcagg 660 cagtactgca accactggag gaacttcgct gacatcgacg actcctggaa gagcatcaag 720 agcatcctgg actggaccag cttcaaccag gagaggatcg tggacgtggc tggacccgga 780 ggctggaacg accccgatat gctggtgatt ggcaacttcg gactgagctg gaaccagcag 840 gtgacccaga tggccctgtg ggccattatg gccgctcccc tgttcatgtc caacgacctg 900 aggcacatca gcccccaggc caaggctctg ctgcaggaca aggatgtgat cgccatcaac 960 caggaccccc tgggcaagca gggctaccag ctgaggcaag gagataactt cgaggtgtgg 1020 gagaggcccc tgtccggact ggcttgggcc gtggccatga tcaatcggca ggagatcggc 1080 ggaccccggt cctacaccat tgctgtggcc agcctgggaa aaggagtcgc ctgcaacccc 1140 gcctgcttca ttacccagct gctccccgtg aagcggaagc tgggcttcta tgagtggacc 1200 agcaggctga ggtcccatat caatcctacc ggcaccgtcc tcctccagct cgagaatacc 1260 atgcagatga gcctcaagga tctgctgtga 1290

Claims (14)

1. 미갈라스타트 또는 이의 염을 포함하는 파브리 질병 치료가 필요한 환자의 파브리 질병 치료를 위한 약학 조성물로서,
   상기 환자는 V22G, N34H, G80V, Q107R, Y152D, A156S, L189F, W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q, N320H, P323T, E338V, P380L 및 T412P로 구성된 군으로부터 선택되는 α-갈락토시다제 A 돌연변이를 갖는 파브리 질병 치료가 필요한 환자의 파브리 질병 치료를 위한 약학 조성물.
   
2. 제1항에 있어서, 상기 환자는 V22G, Q107R, L189F, W204L 및 P380L로 구성된 군으로부터 선택되는 α-갈락토시다제 A 돌연변이를 갖는 것인 약학 조성물.
   
3. 제1항에 있어서, 상기 환자는 W204L, S238G, I239M, A257V, P259Q 및 N320H로 구성된 군으로부터 선택되는 α-갈락토시다제 A 돌연변이를 갖는 것인 약학 조성물.
   
4. 제1항에 있어서, 상기 환자는 α-갈락토시다제 A 돌연변이 T412P를 갖는 것인 약학 조성물.
   
5. 제1항에 있어서, 미갈라스타트 또는 이의 염은 환자에게 2일마다 투여되는 것인 약학 조성물.
   
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 약 100 mg 내지 약 150 mg의 미갈라스타트 또는 이의 염의 자유 염기 등가물을 2일마다 투여받는 것인 약학 조성물.
   
7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 약 123 mg의 미갈라스타트 또는 이의 염의 자유 염기 등가물을 2일마다 투여받거나, 또는 상기 환자는 약 123 mg의 미갈라스타트 자유 염기를 2일마다 투여받거나, 또는 상기 환자는 약 150 mg의 미갈라스타트 하이드로클로라이드를 2일마다 투여받는 것인 약학 조성물.
   
8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 미갈라스타트 또는 이의 염은 경구로 투여되거나 주사로 투여되는 것인 약학 조성물.
   
9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 미갈라스타트 또는 이의 염은 α-갈락토시다제 A 활성을 증강시키는 것인 약학 조성물.
   
10. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 미갈라스타트 또는 이의 염은 글로보트리아오실세라마이드 (GL-3) 축적을 감소시키는 것인 약학 조성물.
    
11. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 미갈라스타트 또는 이의 염은 혈장 글로보트리아오실스핑고신 (혈장 라이소-Gb₃)을 감소시키는 것인 약학 조성물.
    
12. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 미갈라스타트 또는 이의 염은 좌심실의 심장 비대를 감소시키는 것인 약학 조성물.
    
13. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 미갈라스타트 또는 이의 염은 신장 기능을 개선시키는 것인 약학 조성물.
    
14. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 남성 또는 여성인 약학 조성물.