CN107088225A

CN107088225A - 治疗法布里病的给药方案

Info

Publication number: CN107088225A
Application number: CN201611235913.7A
Authority: CN
Inventors: D.S.格林; K.J.瓦伦扎诺
Original assignee: Amicus Therapeutics Inc
Current assignee: Amicus Therapeutics Inc
Priority date: 2011-03-11
Filing date: 2012-03-08
Publication date: 2017-08-25
Also published as: AU2018201637A1; AU2012229330A1; AU2022203011A1; TW201740945A; EP2683382A4; AU2016204445A1; CA2829947A1; ES2807502T3; HK1242998A1; US20180153999A1; EP2683382A2; JP2021098697A; JP2014528901A; EA201301018A1; AU2012229330B2; TWI624259B; ZA201306735B; SG193379A1; AU2016204445B2; WO2012125402A3

Abstract

目前披露的主题提供了一种使用1‑脱氧半乳糖野尻霉素和酶替代疗法用于治疗法布里病的给药方案和给药计划。目前披露的主题进一步提供了一种使用米加司他盐酸盐和阿加糖酶用于治疗法布里病的给药方案和给药计划。

Description

治疗法布里病的给药方案

相关申请的交叉引用

本申请要求以下美国临时申请序列号的优先权：2011年3月11日提交的61/451,798；2011年12月20日提交的61/578,201以及2012年2月7日提交的61/596,165，在此将它们披露的全部内容通过引用作为参考。

技术领域

本申请提供了一种使用1-脱氧半乳糖野尻霉素和酶替代疗法用于治疗法布里病的给药方案和给药计划。

背景技术

法布里病是一种进行性的X-相关的先天性糖鞘脂(glycospingolipid)代谢缺陷，是由α-Gal A基因(GLA)突变导致的溶酶体酶α半乳糖苷酶A(α-Gal A)的缺乏引起的。

尽管是X-相关病症，女性也可表现出不同程度的临床表现。法布里病是一种罕见疾病，具有估计在40,000分之一的男性至117,000分之一的一般人群之间的发病率。而且，存在着可能不能诊断的法布里病的迟发表型变体，因为它们没有呈现出典型的体征和症状。这种情况以及新生儿筛查法布里病的研究表明法布里病的实际发病率可能高于目前估计。

这种疾病的临床表现可能与残留α-Gal A水平相关。如果不治疗，法布里病患者的预期寿命缩短，并且通常在四十岁或五十岁左右由于影响肾脏、心脏和/或中枢神经系统的血管疾病而死亡。酶缺乏导致底物球形三酰神经酰胺(GL-3)在全身血管内皮和内脏组织中的细胞内积累。由于糖鞘脂沉积，肾功能逐步衰退和氮质血症的产生通常在生命的三十岁至五十岁时发生，但是也可能早在二十岁就发生。肾损伤在半合子(男性)和杂合子(女性)患者中都有发现。

心脏疾病出现在大部分男性和许多女性中。早期的心脏所见包括左心室增大、心瓣膜病变以及传导异常。二尖瓣关闭不全是典型存在于儿童或青少年中的最常见的瓣膜损伤。脑血管表现主要来自多病灶小血管病变并且可能包括血栓、短暂脑缺血发作、基底动脉缺血和动脉瘤、癫痫发作、偏瘫、偏身麻木、失语症、迷路疾患或脑出血。脑血管表现的平均发作年龄为33.8岁。可能随着年龄增长而表现出人格改变和精神病行为。

目前认可的法布里病的治疗方法为酶替代疗法(“ERT”)。两种α-Gal A产品目前可用于治疗法布里病：阿加糖酶α(Shire Human Genetic Therapies)和阿加糖酶β(Genzyme Corporation)。这两种形式的ERT旨在用静脉内给药的重组形式的酶来补偿患者不足的α-Gal A活性。虽然ERT在许多情况下有效，但是这种治疗也有局限性。尚未证明ERT降低中风的风险，心肌反应缓慢，并且GL-3从一些肾脏细胞类型中消除受到限制。一些患者对ERT产生免疫反应。

1-脱氧半乳糖野尻霉素及其盐，1-脱氧半乳糖野尻霉素盐酸盐(United StatesAdopted Name(USAN)也称为米加司他盐酸盐)通过选择性地与酶结合而作为突变体α-GalA的药理学分子伴侣，由此增加其稳定性并且帮助酶折叠成正确的三维形状。α-Gal A的这种稳定作用允许细胞质量控制机制识别正确折叠的酶以便增加该酶运输到溶酶体，从而允许它实现其预期的生物功能，即GL-3的代谢。作为恢复正确运输α-Gal A从ER到溶酶体的结果，米加司他盐酸盐还降低了ER中错误折叠的蛋白质的积累，这可以减轻细胞应激和一些炎症样反应(它们可能是法布里病的促成因素)。已经进行了米加司他盐酸盐的多个体外和体内临床前研究，以及临床研究。米加司他盐酸盐已经显示出增加细胞内α-Gal A蛋白的量并且增强突变体酶向溶酶体的转运。

发明内容

本申请提供了一种使用1-脱氧半乳糖野尻霉素和酶替代疗法用于治疗法布里病的给药方案和给药计划。在一些实施方案中，本申请提供了一种使用米加司他盐酸盐和阿加糖酶(例如阿加糖酶α或阿加糖酶β)治疗法布里病的给药方案和给药计划。

在一个实施方案中，该方法包括将50mg至600mg的1-脱氧半乳糖野尻霉素和有效量的α-Gal A酶替代疗法给药对其有需要的患者。1-脱氧半乳糖野尻霉素可以在α-Gal A酶替代疗法之前、之后或同时给药。在一个实施方案中，患者禁食一段时间，该段时间开始于1-脱氧半乳糖野尻霉素的给药之前0.5至4小时并且结束于给药之后0.5至4小时。在另一个实施方案中，患者在1-脱氧半乳糖野尻霉素的给药之前至少2小时并在给药之后至少2小时禁食。

在另一个实施方案中，在与α-Gal A酶替代疗法的给药同时至其之前4小时之间(从T＝-4小时至T＝0小时)给药1-脱氧半乳糖野尻霉素。在另一个实施方案中，在α-Gal A酶替代疗法的给药之前2小时给药1-脱氧半乳糖野尻霉素。

在一个具体的实施方案中，1-脱氧半乳糖野尻霉素是米加司他盐酸盐。在一个实施方案中，α-Gal A酶替代疗法是阿加糖酶α或阿加糖酶β。

在一个实施方案中，1-脱氧半乳糖野尻霉素是作为对于α-Gal A酶替代疗法的佐剂来给药的。在另一个实施方案中，1-脱氧半乳糖野尻霉素和α-Gal A酶替代疗法是作为联合治疗给药的。

在一个具体的实施方案中，根据以上描述的方法所给药的1-脱氧半乳糖野尻霉素的量是从150mg至450mg。在一个实施方案中，所给药的1-脱氧半乳糖野尻霉素的量选自150mg、300mg以及450mg。

在一个具体的实施方案中，1-脱氧半乳糖野尻霉素刚好在α-Gal A酶替代疗法之前或同时使用。在一个替代性实施方案中，在a-Gal A酶替代疗法的给药与其后4小时之间给药第二剂量的1-脱氧半乳糖野尻霉素。

在一些实施方案中，对同样正在接受a-Gal A酶替代疗法的患者每1至4周给药一次1-脱氧半乳糖野尻霉素。在一个另外的实施方案中，对同样正在接受a-Gal A酶替代疗法的患者每12至16天给药一次1-脱氧半乳糖野尻霉素。在一个另外的实施方案中，对同样正在接受a-Gal A酶替代疗法的患者每14天给药一次1-脱氧半乳糖野尻霉素。在一些实施方案中，对还给药1-脱氧半乳糖野尻霉素作为联合治疗或辅助治疗的患者每14天给药一次a-Gal A酶替代疗法。

本申请还提供了用于在法布里病的治疗中使用的1-脱氧半乳糖野尻霉素，其中该治疗包括向对其有需要的人类受试者给药从50mg至600mg的1-脱氧半乳糖野尻霉素和有效量的a-Gal A酶替代疗法。

本申请还提供了1-脱氧半乳糖野尻霉素在制备用于治疗法布里病的药物中的用途，其中该治疗包括向对其有需要的人类受试者给药从50mg至600mg的1-脱氧半乳糖野尻霉素和有效量的a-Gal A酶替代疗法。

本申请还提供了一种用于在受试者中治疗法布里病的试剂盒，该试剂盒包括从50mg至600mg的1-脱氧半乳糖野尻霉素和有效量的a-Gal A酶替代疗法。在一些实施方案中，试剂盒中的1-脱氧半乳糖野尻霉素的量选自150mg、300mg以及450mg。

附图说明

图1显示了在时期1和时期2期间单独用0.5mg/kg或1.0mg/kg的阿加糖酶β治疗(时期1)或与150mg米加司他联合治疗(时期2)的患者的血浆α-Gal A复合活性。

图2显示了与米加司他共同给药后的所有患者的血浆α-Gal A活性AUC增加。

图3显示了各取样时间的部分AUC，其显示了共同给药0.5mg/kg或1.0mg/kg阿加糖酶β和150mg米加司他的血浆α-Gal A活性的增加。

图4A-4B显示了在共同给药0.5mg/kg阿加糖酶β与150mg米加司他后的两位患者中的皮肤α-Gal A活性的增加。

图5A-5B显示了在共同给药0.5mg/kg阿加糖酶β与150mg米加司他后的两位患者中的皮肤α-Gal A活性的增加。图5A显示了在时期2过程中接受了40分钟更长的ERT输注的患者中共同给药0.5mg/kg阿加糖酶β与150mg米加司他之后的皮肤α-Gal A活性的增加。

图6A-6B显示了在1.0mg/kg阿加糖酶β与150mg米加司他共同给药后的两位患者中的皮肤α-Gal A活性的增加。

图7A-7B显示了在0.5mg/kg阿加糖酶β与150mg米加司他共同给药后的两位患者中的PBMCα-Gal A活性的增加。

图8A-8B显示了在0.5mg/kg阿加糖酶β与150mg米加司他共同给药后的两位患者中的PBMCα-Gal A活性的增加。

图9A-9B显示了在1.0mg/kg阿加糖酶β与150mg米加司他共同给药后的两位患者中的PBMCα-Gal A活性的增加。

图10显示的表总结了在0.5mg/kg或1.0mg/kg阿加糖酶β与150mg米加司他共同给药后的血浆、皮肤以及PMBC中的α-Gal A活性的增加。

图11显示了实施例2和3的每个研究受试者的基因型。

图12显示了对比用1.0mg/kg阿加糖酶β治疗以及用1.0mg/kg阿加糖酶β和150mg米加司他盐酸盐联合治疗的血浆AUCα-Gal A活性(具有插入均值和标准偏差)。

图13显示了对比用0.5mg/kg阿加糖酶β治疗以及用0.5mg/kg阿加糖酶β和150mg米加司他盐酸盐联合治疗的血浆AUCα-Gal A活性(具有插入均值和标准偏差)。

图14显示了单独用阿加糖酶β治疗或者与150mg米加司他盐酸盐联合治疗后的第2天的皮肤α-Gal A活性(具有从单独用阿加糖酶β的基线扣除比率)。

图15显示了单独用阿加糖酶β治疗或者与150mg米加司他盐酸盐联合治疗后的第7天的皮肤α-Gal A活性(具有从单独用阿加糖酶β的基线扣除比率)。

具体实施方式

本申请提供了一种使用1-脱氧半乳糖野尻霉素和阿加糖酶治疗法布里病的给药方案和给药计划。

定义

“法布里病”是指典型的法布里病、迟发型法布里病、以及具有在编码α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)的基因中的突变的半合子女性。术语“法布里病”，如在此所使用的，进一步包括受试者显示出低于正常内源α-Gal A活性的任何病症。

术语“AUC”代表评估人体随时间对给定药物的总暴露的数学计算。在绘制给药后血液中的浓度如何变化的图中，药物浓度变量位于y轴上，并且时间位于x轴上。在指定的时间间隔之内，在药物浓度曲线与x轴之间的面积是AUC。AUC被用作给药方案和比较体内不同药物的利用度的指导。

术语“Cmax”代表给药后达到的最大血浆浓度。

术语“治疗有效剂量”和“有效量”是指足以带来有益的治疗反应的具体药用化合物或组合物的量。有益的治疗反应可以是使用者(例如临床医师)将识别为对治疗的有效反应的任何反应，包括先前症状和替代临床标记。因此，治疗反应通常是一种疾病或病症(例如法布里病)的一种或多种症状的改善，如本领域中对于该疾病或病症(例如对于法布里病)已知的那些。

在法布里病的替代标记方面改善的非限制性实例包括在细胞(例如成纤维细胞)和组织中的a-GAL水平或活性的增加；使用组织学、通过在肾脏间质毛细血管活组织检查中的变化被测量为GL-3累积方面的减少；尿GL-3水平的降低；肾功能的评定(包括肾小球滤过率(GFR)和24小时尿蛋白)；高半胱氨酸和血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)的血浆浓度的降低；在心肌细胞和瓣膜纤维细胞内的GL-3积累的减少；心脏(尤其是左心室)肥大的减轻、瓣膜关闭不全以及心律失常的改善；蛋白尿的减轻；脂质(例如CTH、乳糖神经酰胺、神经酰胺)的尿浓度的降低以及葡萄糖神经酰胺和鞘磷脂的尿浓度的增加(Fuller等人，ClinicalChemistry，2005；51:688-694)；肾小球上皮细胞中层状包涵体(斑马小体)的缺乏；肾功能的改善；少汗症的缓解；血管角化瘤的缺乏；以及听力异常(如高频感音神经性耳聋、进行性耳聋、突发性耳聋、或耳鸣)的改善。神经症状的改善包括短暂性脑缺血发作(TIA)或中风的预防；以及自身表现为肢端感觉异常(肢端烧灼感或麻剌感)的神经性疼痛的改善。

短语“药学上可接受”是指生理上可耐受的并且当给药人时不会典型地产生不良反应的分子实体和组合物。优选地，如在此所使用的，术语“药学上可接受”表示由联邦或州政府的管理机构批准的或者在美国药典或其他普遍认可的药典中列出的在动物体内并且更特别地在人体内的使用。术语“载体”是指与被给药的化合物一起使用的稀释剂、助剂、赋形剂或媒介物。这些药用载体可以是无菌液体，如水和油类。水或水溶液盐水溶液和含水葡萄糖和甘油溶液优选被用作载体，特别是针对注射溶液而言。适合的药用载体在E.W.马丁(E.W.Martin)编写的第18版或其他版的“Remington's Pharmaceutical Sciences”中进行了描述，在此通过引用作为参考。

“1-脱氧半乳糖野尻霉素”(DGJ)是指(2R,3S,4R,5S)-2-(羟甲基)哌啶-3,4,5-三醇。如在此使用，全篇对“1-脱氧半乳糖野尻霉素”或“DGJ”的引用包括游离碱以及任何其药学上可接受的盐形式。DGJ的盐酸盐已知为米加司他盐酸盐。

术语“佐剂”或“辅助疗法”是指用于增加主要物质、治疗或过程的疗效、安全性或以其他方式促进或增强其性能的任何另外的物质、治疗或过程。

术语“联合治疗”是指与每种疗法单独进行时的效果相比其结果被增强的任何治疗。在联合治疗中的单独疗法可以同时给药或连续给药。

增强可以包括，与单独进行这些疗法时达到的结果相比，可能带来有利结果的不同疗法的任何效果改进。增强的效果和增强的效果的确定可以通过不同的参数来测量，例如但不限于：时间参数(例如治疗的长度、恢复时间、治疗的长期效果或治疗的可逆性)；生物学参数(例如细胞数、细胞体积、细胞组成、组织体积、组织大小、组织组成)；空间参数(例如组织强度、组织大小或组织可及性)，以及生理参数(例如身体轮廓、疼痛、不适、恢复时间或可见标记)。增强效果可以包括协同增强，其中增强效果高于当单独进行每种疗法时的相加效果。增强效果可以包括相加增强，其中增强效果基本上等于当单独进行每种疗法时的相加效果。增强效果可以包括小于协同效应，其中增强效果低于当单独进行每种疗法时的相加效果，但是仍然好于当单独进行每种疗法时的效果。

术语“”和“大致”一般表示在给定的测量的性质或准确性下测得的数量的可接受的误差程度。典型地，示例性的误差程度是在给定的数值或数值范围的20％以内、优选在10％以内、并且更优选在5％以内。可替代地，并且特别是在生物系统中，术语“”和“大致”表示在一个数量级之内的平均值、优选在一个给定数值的5倍并且更优选在2倍之内。在此给出的数值的数量是近似值，除非另外说明。

配制和给药

1-脱氧半乳糖野尻霉素可以作为游离碱或作为药理学上可接受的盐形式给药，包括1-脱氧半乳糖野尻霉素盐酸盐(另外的名字是米加司他盐酸盐)。可以以适合于任何给药途径的形式给药，包括例如以口服片剂、胶囊、或液体、或无菌注射水溶液的形式。可以以片剂、胶囊、胚珠制剂(ovule)、酏剂、溶液或混悬液、凝胶类、糖浆类、口腔洗剂、或使用之前用水或其他适合的媒介物构造的干粉的形式给药，任选地用调味剂和着色剂用于即时、延迟、改进、持续、脉冲或控制释放应用。还可以使用固体组合物，如片剂、胶囊、锭剂、软锭剂、丸剂、推注剂(bolus)、粉末、糊剂、颗粒剂、栓剂(bullet)、或预混制剂。口服使用的固体和液体组合物可以根据本领域熟知的方法制备。这些组合物还可以含有一种或多种药学上可接受的可处于固体或液体形式的载体和赋形剂。当化合物被配制为供口服给药时，可以通过常规手段制备片剂或胶囊，其中使用药学上可接受的赋形剂，如粘合剂(例如预胶凝淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或淀粉羟乙酸钠)；或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠)。可以通过本领域熟知的方法将片剂包衣。

药学上可接受的赋形剂还包括但不限于：微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙和甘氨酸，崩解剂如淀粉(优选玉米、马铃薯或木薯淀粉)、淀粉羟乙酸钠、交联羧甲基纤维素钠和某些复合硅酸盐类，以及颗粒粘合剂如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基乙基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶、以及阿拉伯胶。另外，可以包括润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸、山嵛酸甘油酯、以及滑石。

在一个具体的实施方案中，用硬脂酸镁和预胶凝淀粉将米加司他盐酸盐配制在白色的硬明胶胶囊中。在另一个实施方案中，固体剂型包括75％-80％的米加司他盐酸盐、0.1％-2％的硬脂酸镁、以及20％-25％的预胶凝淀粉。在另一个具体的实施方案中，胶囊包括76.5％的米加司他盐酸盐、0.5％的硬脂酸镁、以及23％的预胶凝淀粉。

酶替代疗法

目前认可的法布里病的治疗方法为酶替代疗法。目前有两种产品用于治疗法布里病：阿加糖酶α(Shire Human Genetic Therapies)和阿加糖酶β(Genzyme Corporation)，全球都已上市。这两种形式的ERT旨在用静脉内给药的重组形式的酶来补偿患者不足的α-Gal A活性。已经证实ERT能减少在肾脏的毛细血管内皮和某些其他细胞类型中的GL-3沉积。虽然ERT在许多情况下有效，但是这种治疗还存在局限性。尚未证明ERT能减少中风的风险，心肌反应缓慢，并且GL-3从肾脏的一些细胞类型中的消除受到限制。一些患者对ERT产生免疫反应。

阿加糖酶α的推荐剂量是0.2mg/kg体重，作为静脉输注每2周输注一次。在未使用过ERT的成年男性法布里病患者中进行了一个10周的研究来评估阿加糖酶α的药代动力学和药效学。给药从0.1至0.4mg/kg剂量范围的阿加糖酶α之后的平均半衰期是56-76分钟，在剂量与半衰期、清除率或分布容积之间没有显著的关联。在这个剂量范围内AUC与剂量成线性比例。在所有剂量组中的血浆GL-3水平降低50％；该降低不依赖于剂量和给药频率。在本研究过程中，18位患者中的两位成为IgG阳性。在本研究过程中，在任何患者中均未检测到IgE抗体。

阿加糖酶β的推荐剂量是1mg/kg体重，作为静脉输注每2周输注一次。阿加糖酶β的生产商已经宣布了药品短缺，这是唯一在美国批准用于法布里病的ERT。作为结果，阿加糖酶β目前被定量配给并且患者典型地接受减少的酶剂量和/或延长的给药间隔(即，剂量之间超过2周)。阿加糖酶β显示出非线性药代动力学，其中随着剂量的增加，暴露(AUC)值增加并且清除率不成比例地降低。当剂量分别从0.3mg/kg增加至1mg/kg以及从1mg/kg增加至3mg/kg时，AUC值分别增加6倍和8倍。在从0.3mg/kg至3mg/kg范围内给药之后，成年患者中的阿加糖酶β的消除半衰期是剂量依赖性的并且在从45至100分钟的范围。

在临床研究中，用阿加糖酶治疗的79％的成年患者和69％的儿科患者产生了针对阿加糖酶β的IgG抗体；产生了IgG抗体的大多数患者在暴露的前3个月之内如此。男性，特别是那些具有低残留a-Gal A水平的男性，比那些具有更高残留水平的男性或比女性更有可能产生IgG抗体。儿科患者中的IgG血清转化与延长的阿加糖酶半衰期有关。然而，在成年患者中，在一个试验中在血清转化之前和之后观察到相同的阿加糖酶药代动力学性质；在另一个试验中，在具有最高IgG滴度的患者中，最大阿加糖酶浓度和AUC值降低达基线值的26％。已经报道针对阿加糖酶的IgG抗体的存在会降低酶的活性。

在体外以及在体内，米加司他盐酸盐使野生型a-Gal A稳定。已经在体外证明米加司他盐酸盐结合至rha-Gal A导致对在中性pH的rha-Gal A的稳定产生显著的时间和浓度依赖性增加，正如通过热变性和通过活性所测量的。在一种中性pH缓冲剂中，rha-Gal A显示出活性损失，具有大致3小时的半衰期；与米加司他盐酸盐共孵育将rhα-Gal A活性损失的半衰期增加至大致40小时。

在大鼠中，口服给药3mg/kg米加司他盐酸盐、随后在30分钟后注射10mg/kg阿加糖酶β，导致rha-Gal A的血浆半衰期增加2.6倍，并且在60和240分钟时血浆α-Gal A水平分别增加2.5和1.5倍。在GLA缺乏的小鼠中，在注射rha-Gal A之前30分钟和注射rha-Gal A之后2小时口服给药30、100或300mg/kg剂量的米加司他盐酸盐，与单独给药rha-Gal A相比，导致在组织a-Gal A水平上的剂量依赖性增加以及在皮肤、心脏、肾脏和血浆中的GL-3水平的剂量依赖性降低。

在体外和在体内都已经显示米加司他盐酸盐使阿加糖酶α稳定。用在体外热变性测定评估了米加司他盐酸盐对阿加糖酶α的物理稳定性的作用。使用这个测定，在pH 7.4时阿加糖酶α显示出大致51℃的熔化温度(Tm)。然而，当在变性反应中包括10μM的米加司他盐酸盐时，阿加糖酶α的Tm大幅增加至59℃。如针对溶酶体酶所预期的，阿加糖酶α在低pH时更加稳定(Tm在pH 5.2时为58℃)并且在10μM米加司他盐酸盐存在时显示出对热变性的进一步抵抗(Tm为68℃)。这些数据表明米加司他盐酸盐的结合赋予了阿加糖酶α高水平的物理稳定性。

还研究了米加司他盐酸盐对阿加糖酶α从雄性Sprague-Dawley大鼠血液中的清除率的作用。动物接受媒介物(水)或单一口服管饲的1、3、10或30mg/kg米加司他盐酸盐，接着在30分钟后通过尾静脉推注注射而静脉给药0.2mg/kg阿加糖酶α。作为时间的函数收集血液，并测量在血浆中的α-Gal A活性。在缺乏米加司他盐酸盐时，α-Gal A活性迅速下降；预先给药米加司他盐酸盐，在给药3mg/kg和30mg/kg米加司他盐酸盐之后，导致阿加糖酶α的半衰期的分别大致2倍和3倍的剂量依赖性增加(如通过α-Gal A活性测量的)，在60和240分钟时血浆α-Gal A水平分别增加大致2.5倍和1.5倍。米加司他盐酸盐对于阿加糖酶α的体外和体内作用都与观察到的米加司他盐酸盐对阿加糖酶β的作用相当。

已经在GLA缺乏的小鼠中进行了一项初步研究来评估共同给药米加司他盐酸盐和的安全性。米加司他盐酸盐一周给药三次，共给药四周，剂量为3和30mg/kg，与一周一次的剂量为1mg/kg的静脉给药的联合给药。在共同给药米加司他盐酸盐和的雄性GLA-缺乏的大鼠中所观察的在存活、临床状况或血液学以及在临床化学参数方面没有显示出直接的药物相关变化。

实施例

实施例1：使用米加司他盐酸盐和阿加糖酶治疗法布里病的给药方案

本研究的一个目的是评估包括共同给药米加司他盐酸盐和阿加糖酶的给药方案在患有法布里病的患者中的安全性、有效性以及药效学。

本研究的另一个目的是评定150mg和450mg剂量的米加司他盐酸盐对α-Gal A分布的影响。这将通过单独给药阿加糖酶以及阿加糖酶与米加司他盐酸盐联合给药之后，在给药之后24小时和7天通过测量α-Gal A水平和蛋白质水平来测量皮肤中的阿加糖酶分布来进行评价。

将要评估的其他测量为：

·在每次给药阿加糖酶之前和之后14天的尿GL-3排泄；

·在单独给药阿加糖酶和阿加糖酶与米加司他盐酸盐联合给药之后，在给药之后24小时和7天在皮肤中的GL-3；

·在阿加糖酶开始输注之前以及在给药之后2、4和24小时以及7天和14天测定的WBCα-Gal A酶水平；

·在开始输注阿加糖酶之前的抗体滴度(IgG)；

·在每次给药阿加糖酶之前和每次给药阿加糖酶之后14天的血浆球丙糖酰基鞘氨醇(globotriaosyisphingosine)(溶解-GB3)浓度和溶解-GB3的尿排泄。

所有的α-Gal A酶水平的血浆、WBC以及皮肤测量在有和没有Con A捕获下进行并且通过蛋白质印迹法测定蛋白质水平。

研究设计。这是一个2期临床、两阶段、开放标签研究，用来评定共同给药米加司他盐酸盐和阿加糖酶的安全性和有效性。本研究将在18和65岁之间的男性受试者中进行，他们在纳入研究之前至少一个月已经接受稳定剂量(0.3-1.0mg/kg)的阿加糖酶β或(≥0.2mg/kg)的阿加糖酶α大致将纳入18位受试者。

这个标签开放研究将由两个阶段组成。阶段1将由筛选和一个三时期研究组成，以评估150mg的米加司他盐酸盐对阿加糖酶的药代动力学和安全性的影响以及阿加糖酶对150mg米加司他盐酸盐的药代动力学和安全性的影响。阶段2将由筛选和一个两时期研究组成，以评估450mg的米加司他盐酸盐对阿加糖酶的药代动力学和安全性的影响。在阶段2中，将不评估阿加糖酶对450mg剂量的米加司他盐酸盐的药代动力学和安全性的影响。当米加司他盐酸盐与阿加糖酶一起给药仅仅为了证实达到足够的米加司他盐酸盐血浆浓度时，将表征米加司他盐酸盐的血浆暴露。

每个受试者将接受按以下顺序描述的下列治疗中的每一种。阶段1将由以下时期组成：

时期1：阿加糖酶单独静脉输注；

时期2：在开始静脉输注阿加糖酶之前两个小时口服150mg剂量的米加司他盐酸盐；

时期3：口服150mg剂量的米加司他盐酸盐。

在时期1和2中给药的阿加糖酶的剂量将是相等的。阿加糖酶α将以40分钟静脉输注给药，而阿加糖酶β以2小时静脉输注给药。

对于时期1，在下次计划的阿加糖酶输注之前，将对受试者进行以下评定：不良事件评定、伴随用药、体格检查、体重、生命体征、12-导联ECG、临床实验室试验(血清化学、血液学以及尿分析)、皮肤活组织检查(钻取活组织检查，用于测量α-Gal A酶水平；如果有足够的样品可用，还将测定皮肤GL-3)。

在第1天的早晨，收集尿液用于尿GL-3和溶解-GB3测定，之后使用输注泵以输注的形式对受试者给药目前的阿加糖酶剂量。刚好在开始输注阿加糖酶之前以及在开始输注阿加糖酶之后24小时期间收集用于药代动力学和药效学分析的血样。在表2中总结的阿加糖酶β和在表4中总结的阿加糖酶α的时间点从收集的血样测定血浆和WBCα-Gal A酶水平、血浆溶解-GB3以及血浆抗体滴度。在输注阿加糖酶结束时，在输注后血样收集之后立即进行12-导联ECG。

在第2天，在前一天的输注开始之后24小时收集钻取皮肤活组织检查切片，由此测定α-Gal A酶水平；如果有足够的样品可用，还将测定皮肤GL-3。在收集最后的药代动力学样品之后，进行以下评定：不良事件评定、伴随用药、体格检查、体重、生命体征以及临床实验室试验(血清化学、血液学以及尿分析)。

在第7天，对受试者进行以下评定：体格检查、生命体征、伴随用药以及不良事件评定。收集皮肤活组织检查切片，由此测定α-Gal A酶水平；如果有足够的样品可用，还将测定皮肤GL-3。还收集用于WBCα-Gal A和血浆酶水平测定的血样。在第14天，收集用于尿GL-3和溶解-GB3排泄测定的尿样。还收集用于WBCα-Gal A和血浆酶水平测定的血样并且评定生命体征。

对于时期2，在下次计划的阿加糖酶输注之前，将对受试者进行以下评定：不良事件评定、伴随用药、体格检查、体重、生命体征、12-导联ECG、临床实验室试验(血清化学、血液学以及尿分析)。

在第1天的早晨，收集尿液用于尿GL-3和溶解-GB3测定，之后在计划的阿加糖酶输注之前2小时口服给药剂量为150mg的米加司他盐酸盐。受试者在给药米加司他盐酸盐之前至少2小时和之后2小时禁食。在时期2中，每位受试者将接受与时期1中使用输注泵以输注的形式给药的相等剂量的阿加糖酶。在给药该米加司他盐酸盐剂量之后2小时开始输注阿加糖酶。

在给药米加司他盐酸盐之前和给药米加司他盐酸盐之后1小时收集用于药代动力学和药效学分析的血样。刚好在开始输注阿加糖酶之前和输注阿加糖酶开始之后24小时期间收集另外的血样。在表2中总结的阿加糖酶β和在表4中总结的阿加糖酶α的时间点从收集的血样测定血浆和WBCα-Gal A酶水平、血浆溶解-GB3以及血浆抗体滴度。在输注阿加糖酶结束时，在输注后血样收集之后立即进行12-导联ECG。

在第2天，在前一天的输注开始之后24小时收集钻取皮肤活组织检查切片，由此测定α-Gal A酶水平；如果有足够的样品可用，还可以测定皮肤GL-3。在收集最后的药代动力学样品之后，进行以下评定：不良事件评定、伴随用药、体格检查、体重、生命体征以及临床实验室试验(血清化学、血液学以及尿分析)。

在第7天，对受试者进行以下评定：体格检查、生命体征、伴随用药以及不良事件评定。收集皮肤活组织检查切片，由此测定α-Gal A酶水平；如果有足够的样品可用，还可以测定皮肤GL-3。还收集用于WBCα-Gal A和血浆酶水平测量的血样。

在第14天，收集用于尿GL-3和溶解-GB3排泄测定的尿样。还收集用于WBCα-Gal A和血浆酶水平测定的血样并且评定生命体征。

在时期2之后完成所有评定之后，受试者开始时期3。所有的受试者在通常的给药计划之后的第1天接受下一次阿加糖酶输注。在第6天，对所有受试者进行以下评定：不良事件评定、伴随用药、体格检查、体重、生命体征、12-导联ECG、以及临床实验室试验(血清化学、血液学以及尿分析)。

在第7天，给药口服剂量为150mg的米加司他盐酸盐。受试者在米加司他盐酸盐给药之前至少2小时和之后2小时禁食。在给药之前和给药米加司他盐酸盐之后24小时期间收集血样。测量所有血浆样品中的米加司他盐酸盐浓度(参见表2的接受阿加糖酶β的受试者和表4的接受阿加糖酶α的受试者的样品收集时间)。

在第8天，在收集最后的药代动力学样品之后，进行以下评定：不良事件评定、伴随用药、体格检查、生命体征以及临床实验室试验(血清化学、血液学以及尿分析)。

时期3的随访在时期3之后的28天通过电话联系。进行以下评定：伴随用药以及不良事件。

对于阶段2，每位受试者接受按以下描述顺序的下列治疗中的每一种：

时期1：阿加糖酶单独输注；

时期2：在开始静脉输注阿加糖酶之前两个小时口服450mg剂量的米加司他盐酸盐。

在时期1和2中给药的阿加糖酶的剂量是相等的。阿加糖酶α将以40分钟静脉输注给药，而阿加糖酶β将以2小时静脉输注给药。

对于时期1，满足所有合格标准的受试者，在下次计划的阿加糖酶输注之前，将进行以下评定：不良事件评定、伴随用药、体格检查、体重、生命体征、12-导联ECG、临床实验室试验(血清化学、血液学以及尿分析)、皮肤活组织检查(钻取活组织检查，用于测量α-Gal A酶水平；如果有足够的样品可用，还将测定皮肤GL-3)。

在第1天的早晨，收集尿液用于尿GL-3和溶解-GB3测定，之后使用输注泵以输注的形式对受试者给药目前的阿加糖酶剂量。刚好在开始输注阿加糖酶之前以及在开始输注阿加糖酶之后24小时期间收集用于药代动力学和药效学分析的血样。在表3中总结的阿加糖酶β和在表5中总结的阿加糖酶α的时间点从收集的血样测定血浆和WBCα-Gal A酶水平、血浆溶解-GB3以及血浆抗体滴度。在输注阿加糖酶结束时，刚好在收集输注后血样之后进行12-导联ECG。

在第7天，对受试者进行以下评定：生命体征、伴随用药以及不良事件评定。收集皮肤活组织检查切片，由此测定α-Gal A酶水平；如果有足够的样品可用，还可以测定皮肤GL-3。还收集用于WBCα-Gal A和血浆酶水平测量的血样。

对于时期2，在下次计划的输注阿加糖酶之前，对受试者进行以下评定：不良事件评定、伴随用药、体格检查、体重、生命体征、12-导联ECG、临床实验室试验(血清化学、血液学以及尿分析)。

在第1天的早晨，收集尿液用于尿GL-3和溶解-GB3测定，之后在计划的阿加糖酶输注之前2小时口服给药剂量为450mg的米加司他盐酸盐。受试者在米加司他盐酸盐给药之前至少2小时和之后2小时禁食。在时期2中，每位受试者将接受与时期1中使用输注泵以输注的形式给药的相等剂量的阿加糖酶。在给药米加司他盐酸盐剂量之后2小时开始输注阿加糖酶。

在给药米加司他盐酸盐剂量之前和给药米加司他盐酸盐之后1小时收集用于药代动力学和药效学分析的血样。刚好在开始输注阿加糖酶之前和输注阿加糖酶开始后24小时期间收集另外的血样。在表3中总结的阿加糖酶β和在表5中总结的阿加糖酶α的时间点从收集的血样测定血浆和WBCα-Gal A酶水平、血浆溶解-GB3以及血浆抗体滴度。在输注阿加糖酶结束时，刚好在收集输注后血样之后进行12-导联ECG。

在第7天，对受试者进行以下评定：生命体征、伴随用药以及不良事件评定。收集皮肤活组织检查切片，由此测定α-Gal A酶水平。还收集用于WBCα-Gal A和血浆酶水平测量的血样。

随访在时期2之后的28天进行。进行以下评定：伴随用药以及不良事件。

评定和样品收集的计划。表1显示了阶段1和2的评定计划。用于米加司他盐酸盐与共同给药的样品收集时间和分析物显示在表2和3中。用于米加司他盐酸盐与共同给药的样品收集时间和分析物显示在表4和5中。

表1：评定计划(阶段1和2)

¹所给药的药物：阿加糖酶(时期1和2)，米加司他盐酸盐(时期2)

²门诊患者给药或

³所给药的药物：米加司他盐酸盐

⁴对于(阿加糖酶β)的样品收集时间和分析物总结在表2和3中，而对于(阿加糖酶α)的样品收集时间和分析物总结在表4和5中。

⁵仅时期1。

⁶生命体征包括体温、血压、心率以及呼吸。

表2：FABRAZYME(阿加糖酶β)——阶段1：血液、尿液以及皮肤收集

时间和样品分析

样品分析

*如果有足够的样品可用，还将测定皮肤GL-3。

表3：FABRAZYME(阿加糖酶β)——阶段2：血液、尿液以及皮肤收集

时间和样品分析

样品分析

*如果有足够的样品可用，还将测定皮肤GL-3。

表4：REPLAGAL(阿加糖酶α)——阶段1：血液、尿液以及皮肤收集

时间和样品分析

样品分析

*如果有足够的样品，还将测定皮肤GL-3。

表5：REPLAGAL(阿加糖酶α)——阶段2：血液、尿液以及皮肤收集

时间和样品分析

样品分析

*如果有足够的样品可用，还将测定皮肤GL-3。

米加司他盐酸盐以及rhα-Gal A药代动力学。使用有效的LC-MS/MS测定以在血浆中测量血样中的米加司他盐酸盐的浓度。通过使用4-MUG测量酶活性的有效测定(有和没有Con A)来测定血浆中的α-Gal A水平。通过使用抗人Gal A抗体的蛋白质印迹法来测量α-Gal A蛋白水平。

皮肤中的α-Gal A酶水平。检查在皮肤活组织检查样品中的α-Gal A酶水平。使用“钻取”装置来进行皮肤活组织检查。每次操作(visit)取出一片。通过使用4-MUG测量酶活性的有效测定(有和没有Con A)来测定皮肤中的α-Gal A水平。通过使用抗人Gal A抗体的蛋白质印迹法来测量α-Gal A蛋白水平。

WBCα-Gal A水平。通过使用4-MUG测量酶活性的有效测定(有和没有Con A)以在血样中测定WBC中的α-Gal A水平。通过使用抗人Gal A抗体的蛋白质印迹法来测量α-Gal A蛋白水平。

血浆溶解-GB3。血浆溶解-GB3的测量在探索基础上进行，从而获得仅接受ERT以及ERT与米加司他盐酸盐共同给药的患者的数据。使用有效的测定来测量血浆中的溶解-GB3的浓度。

尿GL-3和溶解-GB3。在时期1和2的第1天和第14天从每位受试者收集早晨排空尿样以用于分析尿GL-3和溶解-GB3排泄。受试者在第1天和第14天的早晨收集尿液。将尿GL-3和尿溶解-GB3表示为尿肌酐浓度的函数。

抗体滴度。收集血样，并测量每个血样中的IgG抗体滴度。

安全性参数。通过评述体格检查结果、生命体征、ECG随时间的变化、临床实验室和不良事件方面的变化来评定安全性参数。

生命体征、体重以及身高。在筛查和登记时测量体温和呼吸。为了监测安全性，在给药阿加糖酶(时期1)或米加司他盐酸盐(时期2和3)之前和之后1、2、3、4和6小时以及在第2、7和14天，测量体温、呼吸、坐位血压以及心率。在生命体征监测的时间与抽血时间相同的情况下，抽血优先并且相应地调整生命体征。

ECG监测。用标准的12-导联ECG进行ECG监测。

临床实验室试验。在每次就诊时收集用于临床实验室试验(血液学、血清化学)以及尿分析的血样并且在中心实验室进行分析。血液学试验包括总血红蛋白、血细胞比容、红细胞、血小板以及白细胞分类计数。

·血凝固(仅筛查)包括INR和aPTT。

·血清化学包括测量AST、ALT、碱性磷酸酶、总胆红素、肌酐、尿素、葡萄糖、钙、钠、钾、镁、总蛋白、白蛋白、碳酸氢盐、LDH、血尿素氮、氯化物以及磷酸盐。使用已经校准至同位素稀释质谱法(IDMS)参考方法的试剂来进行血清肌酐的测量。

·尿分析包括颜色、外观、比重、pH、蛋白质、葡萄糖、酮类、血、白细胞酯酶、亚硝酸盐、胆红素、尿胆素原以及沉渣显微镜检。

药代动力学参数。根据血浆米加司他盐酸盐浓度和α-Gal A酶水平来计算AUC_0-t、AUC_无限、C_max、t_max、k_el以及半衰期等非房室(non-compartmental)药代动力学参数。使用描述性统计、按照治疗总结药代动力学参数。计算单独的每种化合物相对于相应的化合物组合的AUC_0-t、AUC_无限比率。单独分析接受阿加糖酶α和阿加糖酶β的那些受试者的药代动力学和药效学数据。

统计分析。适当时将提供描述性统计(N、均值、标准偏差、变异系数、标准误差、中位数、最小值和最大值)。通过计算个体(按照受试者)AUC和C_max比率来评估化合物对共同给药的化合物的影响，如下：

AUC比率＝AUC_{无限(组合)}/AUC_{无限(单独)}

Cmax比率＝C_max(组合)/C_max(单独)

AUC比率和C_max比率表示为个体比率的均值和均值的90％置信区间。单独分析接受阿加糖酶α和阿加糖酶β的那些受试者的药代动力学和药效学数据。适当时以列表和图形形式来表示结果。将给药研究药物并且具有产生可靠药代动力学参数的足够数据的所有受试者纳入安全性和药代动力学分析中。

实施例2：使用米加司他盐酸盐和阿加糖酶治疗法布里病的给药方案

米加司他盐酸盐是α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)的药理学分子伴侣，它增加了酶的稳定性和正确折叠。米加司他通过在血液的pH/温度条件下稳定酶来预防α-Gal A失活而起作用。本研究的目的是表征给药阿加糖酶之前2小时给药的150mg和450mg米加司他对法布里病受试者的安全性和阿加糖酶的血浆药代动力学的影响。本研究的目的还在于：表征150mg和450mg米加司他对患有法布里病患者中的血浆、皮肤以及阿加糖酶的PBMC药代动力学的影响；表征血浆阿加糖酶对米加司他的血浆药代动力学的影响；评估输注阿加糖酶之前和之后14天的尿GL-3以及血浆和尿溶解-GB3；以及评定输注阿加糖酶之前的抗体滴度。

方法。根据实施例1中描述的方法来进行本研究。具体地，这是一个开放标签、单剂量、非随机、固定顺序、两阶段的研究。阶段1包括3个时期：

(1)阿加糖酶β0.5mg/kg或1.0mg/kg(输注2小时)或阿加糖酶α0.2mg/kg(输注40分钟)酶替代单一疗法(ERT)；

(2)ERT+150mg米加司他口服片剂(单一剂量)共同给药，在ERT之前2小时给药米加司他；以及

(3)150mg米加司他单一疗法。

阶段2包括与阶段1相同顺序的2个时期(即，时期(1)和(2))，但是在时期2中与3×150mg米加司他口服片剂共同给药(即，450mg米加司他)。阶段2包括以下2个时期：

(1)阿加糖酶β0.5mg/kg或1.0mg/kg(输注2小时)或阿加糖酶α0.2mg/kg(输注40分钟)酶替代单一疗法(ERT)；以及

(2)ERT+450mg米加司他口服片剂共同给药。在ERT之前2小时给药米加司他。

治疗时期用最少14天洗脱期分开。

α-Gal A催化体内底物GL-3的分解中的第一步。α-Gal A还以相同的α-键对其他底物(如人工低分子量荧光底物，4-MUG)起作用。在连续稀释以解离米加司他之后，从血浆、皮肤以及PBMC样品中在体外测量了α-Gal A对4-MUG的活性。

评估了具有来自阶段1时期1和2的血浆、皮肤以及PMBC的α-半乳糖苷酶A活性的6位患者。在时期1中四位患者接受了0.5mg/kg阿加糖酶βERT，而两位患者接受了1.0mg/kg阿加糖酶βERT，并且在时期2中在开始相同剂量的ERT之前2小时共同给药150mg米加司他。两个时期中的输注持续时间都是2个小时，只有一个例外：接受0.5mg/kg阿加糖酶β的一位患者具有不平衡的输注，其中该患者在时期2过程中输注了2小时40分钟，但是在时期1过程中仅输注了2小时。

结果：

血浆α-Gal-A活性随着米加司他的共同给药而增加

相对于单独的ERT(时期1)而言共同给药米加司他(时期2)，观察到以下的在血浆α-Gal A活性AUC(曲线下面积)方面的均值增加：

针对0.5mg/kg阿加糖酶β输注的均值增加：

·针对0.5mg/kg阿加糖酶β的3.0倍(N＝4)

■个体患者增加：2.0、2.2、3.4和4.2倍

■排除具有不平衡的输注持续时间的2.0倍的患者的均值增加：3.3倍

针对1.0mg/kg阿加糖酶β输注的均值增加：

·针对1.0mg/kg阿加糖酶β的1.9倍(N＝2)

■个体患者增加：1.6倍和2.2倍

针对时期1和时期2的六位患者的血浆α-Gal A复合活性显示于图1中。共同给药米加司他之后所有患者的血浆α-Gal A活性AUC增加显示于图2中。图3显示了每次取样时间的部分AUC，其显示了共同给药0.5mg/kg或1.0mg/kg阿加糖酶β和150mg米加司他后增加的血浆α-Gal A活性。

皮肤α-Gal-A活性随着米加司他而增加

相对于单独的ERT(时期1)而言共同给药米加司他(时期2)，观察到以下的在皮肤α-Gal A活性方面的均值增加：

针对0.5mg/kg阿加糖酶β输注的均值增加：

·在第2天针对0.5mg/kg阿加糖酶β的2.6倍(N＝3，1位患者有一份样品损失)

■个体患者增加：2.8、3.9和1.1倍

■从时期1在第7天皮肤活性没有变化

针对1.0mg/kg阿加糖酶β输注的均值增加：

·在第2天和第7天针对1.0mg/kg阿加糖酶β分别是1.9倍和1.5倍(N＝2)

■个体患者增加：在第2天1.6倍和2.1倍，在第7天1.7倍和1.2倍

共同给药0.5mg/kg或1.0mg/kg阿加糖酶β和150mg米加司他之后皮肤α-Gal A活性的增加显示于图4-图6中。图5A显示了在时期2过程中接受比其他患者长40分钟ERT输注的患者中共同给药0.5mg/kg阿加糖酶β与150mg米加司他之后皮肤α-Gal A活性的增加。

PBMCα-Gal-A活性随着米加司他而增加

相对于单独的ERT(时期1)而言共同给药米加司他(时期2)，观察到以下的在PBMCα-Gal A活性方面的均值增加：

针对0.5mg/kg阿加糖酶β输注的均值增加：

·在第2、7和14天针对0.5mg/kg阿加糖酶β分别为2.3、2.0和2.2倍(N＝4)

■个体患者增加范围：在第2、7和14天分别为1.4-3.1、1.4-2.3和1.7-2.8倍

■从时期1在第7天皮肤活性没有变化

针对1.0mg/kg阿加糖酶β输注的均值增加：

·在第2、7和14天针对1.0mg/kg阿加糖酶β分别为1.8、4.8和3.5倍(N＝2)

■个体患者增加：在第2、7和14天分别为1.1和2.5、3.6和6.0以及1.7和5.4倍

共同给药0.5mg/kg或1.0mg/kg阿加糖酶β和150mg米加司他之后的PMBCα-Gal A活性的增加显示于图7-图9中。

结论：

150mg米加司他与0.5mg/kg和1.0mg/kg阿加糖酶β的相互作用导致以下α-Gal A活性增加：

所有患者的血浆α-Gal A AUC(N＝6)

在第2天所有患者的皮肤α-Gal A(N＝5)，但是在第7天5位患者中仅有3位

在第2、7和14天所有患者的PBMCα-Gal A(N＝6)

相对于单独的阿加糖酶β，150mg米加司他与0.5mg/kg或1.0mg/kg阿加糖酶β的相互作用导致α-半乳糖苷酶A活性AUC增加2至4倍、在第2天皮肤α-半乳糖苷酶A活性增加1.1至3.9倍、以及在第2、7和14天PBMCα-半乳糖苷酶A活性增加1.1至6.0倍。在第7天，共同给药之后四位患者在皮肤中具有增加的α-半乳糖苷酶A活性。

150mg米加司他剂量增加了血浆、皮肤和PBMC中的酶活性，对于半剂量的阿加糖酶β(0.5mg/kg)优于全剂量(1.0mg/kg)直至给药后24小时；但是在皮肤和PBMC中的酶活性在给药后第7和14天的相反情况也是真实的(1.0mg/kg>0.5mg/kg)。总结这些结果的表显示在图10中。

对于单独使用阿加糖酶β，在所有时间点，所有患者相对于基线都具有PBMCα-GalA活性的增加，但是在0.5mg/kg输注之后，在第2天有2位患者相对于基线具有皮肤α-Gal A活性的下降。

实施例3：使用米加司他盐酸盐和阿加糖酶治疗法布里病的给药方案

下列实施例是在实施例2中描述的研究的改进。本实施例包括一位另外的受试者，共七位受试者。

本实施例的目的是评估在诊断为法布里病的男性中与ERT(阿加糖酶)共同给药的两个剂量的米加司他盐酸盐(150mg和450mg)的安全性和PK。

方法。这是一项正在进行的、开放标签的、非随机的、两阶段的、固定顺序的研究。阶段1包括3个时期。

·时期1：单独静脉输注ERT。

·时期2：静脉输注ERT(以与时期1相同的剂量)之前2小时口服给药米加司他盐酸盐(150mg)。

·时期3：单独口服给药米加司他盐酸盐150mg。

适宜患者：18至65岁的患有法布里病的男性。

纳入标准：

·身体质量指数(BMI)在18-35之间。

·在给药之前至少1个月开始用阿加糖酶治疗。

·在筛查时估计的肌酸酐清除率(CLcr)≥50mL/min。

排除标准：

·在筛查之前3个月之内记载有短暂性缺血性发作、缺血性发作、不稳定性心肌梗死。

·临床显著不稳定心脏疾病。

·对亚氨糖类(例如麦格司他，米格列醇)敏感或与之进行伴随治疗。

受试者接受他们的一次输注单独的阿加糖酶β的当前剂量和方案(0.5或1.0mg/kg，2小时)，之后在下次输注阿加糖酶β之前2小时给药口服米加司他盐酸盐150mg。

当前的七位受试者中的五位接受每两周一次0.5mg/kg，而七位受试者中的两位接受每四周一次1.0mg/kg的剂量。

在阶段2，研究了450mg剂量的米加司他盐酸盐。

阶段1和2将在具有阿加糖酶α的ERT输注(0.2mg/kg持续40分钟)的独特受试者中进行重复。

样品：

采取系列血样直至给药后24小时，用于测定每个时期的血浆α-Gal A活性和蛋白水平。在给药前和每个时期的第1、2、7和14天采取了用于外周血单核细胞(PBMC)中的α-GalA活性的血样。在时期1给药前以及在时期1和时期2过程中的第2天和第7天进行皮肤α-GalA活性的钻取活组织检查。血浆α-Gal A活性PK参数包括C_max、T_max、AUC_0-t、AUC_0-inf以及t1/2。使用标准非房室程序(WINNONLIN版本5.0或更高)计算药代动力学参数。

通过使用4-甲基伞形酮基-α-D-吡喃半乳糖苷(4-MUG)的荧光酶测定来测量血浆、皮肤和PBMC溶解物中的α-Gal A活性。在连续稀释以解离米加司他之后，在体外测量了α-Gal A对4MUG的活性。

使用抗人α-Gal A抗体在血浆样品上进行α-Gal A蛋白的蛋白质印迹法分析。描绘rhα-Gal A(阿加糖酶)标准曲线来计算每个样品中的α-Gal蛋白的适当浓度。

安全性参数包括不良事件(AE)、生命体征、临床实验室试验(血液学、血清化学以及尿分析)、心电图(ECG)、体格检查、以及伴随用药的使用。

结果：得到了针对阶段1的时期1和2的初步结果。

患者处置和人口统计数据：评估了具有来自阶段1时期1和2的血浆、皮肤和PMBC的α-GalA活性的七位患者。

·所有七位患者在时期1过程中接受了单独的阿加糖酶β；所有患者在时期2过程中在开始给药阿加糖酶β之前2小时共同给药150mg的米加司他盐酸盐。

·两位患者(标识为受试者A和B)接受了2个小时持续时间的1.0mg/kg阿加糖酶β的静脉输注。

·五位患者(标识为受试者C、D、E、F和G)接受了2个小时持续时间的0.5mg/kg阿加糖酶β的静脉输注，有1位例外：受试者E在时期2过程中输注了2小时40分钟，但是在时期1过程中输注了2小时。

·所有的受试者均是年龄44-61岁的患有法布里病的男性，身体质量指数(BMI)在20.9-29.1kg/m²范围内，并且估计的CLcr在54-88mL/min的范围内。每位受试者的基因型示于图11中。

安全性：

迄今为止，已经报道了12个不良事件(AE)，其中一个是严重的。该严重的AE是短暂性缺血性发作(TIA)，发生在筛查随访之后，但是在给药之前，其严重性为中等，需要住院治疗，并且研究者认为与研究药物无关。该TIA已经消退，没有后遗症。所有其他AE的严重性是轻微的，均被认为与研究药物无关，并且大部分没经治疗而消退。三位不同受试者中的三个AE还在持续：房性期前收缩、心房扑动以及下肢浮肿，均与研究药物无关。

血浆α-Gal A活性：

相比单独用1.0mg/kg阿加糖酶β治疗以及用1.0mg/kg阿加糖酶β与150mg米加司他盐酸盐联合治疗的α-Gal A活性的血浆AUC(曲线下面积)(具有插入均值和标准偏差)，针对受试者A和B的活性-时间曲线显示于图12中。与用1.0mg/kg阿加糖酶β单一疗法治疗相比，1.0mg/kg阿加糖酶β与150mg米加司他盐酸盐联合治疗针对受试者A和B分别导致α-Gal A活性增加2.2倍和1.6倍。

相对于单独用0.5mg/kg阿加糖酶β治疗以及用0.5mg/kg阿加糖酶β与150mg米加司他盐酸盐联合治疗的α-Gal A活性的血浆AUC(曲线下面积)(具有插入均值和标准偏差)，针对受试者C-G的活性-时间曲线显示于图13中。与用0.5mg/kg阿加糖酶β单一疗法的治疗相比，0.5mg/kg阿加糖酶β与150mg米加司他盐酸盐联合治疗导致α-Gal A活性增加2.0倍至4.2倍。

相对于单独的酶替代疗法(ERT)，共同给药的大部分受试者在所有时间点的血浆α-Gal A活性都增加了，除了一个例外。受试者E接受了不平衡的输注，时期2过程中延长了40分钟，引起输注过程中酶活性相对降低。然而，相对于单独的ERT，受试者E的所有时间点的峰后活性都增加了。另外，与Eng等人，Am.J.Hum.Genet.68:711-722(2001)中的描述一致，对于α-Gal A活性，暴露以非线性方式增加。

相对于单独的ERT(时期1)，对于与米加司他盐酸盐共同给药(时期2)，所有受试者具有血浆α-Gal A活性AUC的增加，如在图12和图13中所示。对于0.5mg/kg阿加糖酶β，在血浆α-Gal A活性AUC方面的均值增加为3.0倍。排除具有不平衡的输注持续时间的2.0倍的患者，均值增加是3.2倍。对于1.0mg/kg阿加糖酶β，在血浆α-Gal A活性AUC方面的均值增加为1.9倍。

皮肤α-Gal A活性：

图14显示了与单独的酶单一疗法治疗相比，用0.5mg/kg或1.0mg/kg阿加糖酶β联合150mg米加司他盐酸盐治疗的受试者在第2天的皮肤样品中的α-Gal A活性增加了。图15显示了在单一疗法和用阿加糖酶β与150mg米加司他盐酸盐联合治疗之后在第7天的皮肤样品中的α-Gal A活性。观察到以下的在皮肤α-Gal A活性方面的均值增加：对于0.5mg/kg阿加糖酶β在第2天和第7天分别为2.6倍和1.4倍(N＝5)，以及对于1.0mg/kg阿加糖酶β在第2天和第7天分别为1.9倍和1.5倍(N＝2)。

PMBCα-Gal A活性

观察到以下的在PMBCα-Gal A活性方面的均值增加：对于0.5mg/kg阿加糖酶β在第2、7和14天分别为2.4、1.9和2.1倍(N＝5)，以及对于1.0mg/kg阿加糖酶β在第2、7和14天分别为1.8、4.8和3.5倍(N＝2)。

蛋白质印迹分析

通过蛋白质印迹法分析7位患者中的5位的时期2(共同给药)/时期1(单独的ERT)AUC比率，观察到血浆α-Gal A蛋白没有变化。然而，相对于单独的ERT，2位受试者(接受了0.5mg/kg阿加糖酶β的受试者C，以及接受了1.0mg/kg阿加糖酶β的受试者G)在共同给药之后的蛋白质的量增加了20％(数据未显示)。

结论

150mg米加司他与0.5mg/kg和1.0mg/kg阿加糖酶β的相互作用导致血浆、皮肤以及PBMC中的α-Gal A活性增加。150mg米加司他盐酸盐与阿加糖酶β共同给药通常是安全的和良好耐受的。

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本申请并不限于在此说明的具体实施方案的范围。实际上，除了在此说明的那些以外，根据前述说明书和附图对本申请的各种修改对于本领域的技术人员而言是显而易见的。这样的修改预期在所附的权利要求书的范围之内。

应当进一步理解的是，所有的数值都是近似值，并且是为了描述而提供。

贯穿本申请引用了专利、专利申请、出版物、产品描述以及方案，出于所有的目的，它们的披露内容通过以其整体引用作为参考。

Claims

1.一种在受试者中治疗法布里病的方法，该方法包括将从大约50mg到大约600mg的1-脱氧半乳糖野尻霉素以及有效量的α-Gal A酶替代疗法给药对其有需要的患者。

2.如权利要求1所述的方法，其中所给药的1-脱氧半乳糖野尻霉素的量是大约150mg至大约450mg。

3.如权利要求1所述的方法，其中所给药的1-脱氧半乳糖野尻霉素的量选自大约150mg、大约300mg以及大约450mg。

4.如权利要求1所述的方法，其中患者禁食一段时间，该段时间开始于1-脱氧半乳糖野尻霉素的给药之前大约0.5至大约4小时并且结束于给药之后大约0.5至大约4小时。

5.如权利要求4所述的方法，其中患者在1-脱氧半乳糖野尻霉素的给药之前至少大约2小时并在给药之后至少大约2小时禁食。

6.如权利要求1所述的方法，其中该1-脱氧半乳糖野尻霉素与该α-Gal A酶替代疗法的给药同时至该α-Gal A酶替代疗法给药之前大约4小时给药。

7.如权利要求6所述的方法，其中该1-脱氧半乳糖野尻霉素在该α-Gal A酶替代疗法的给药之前大约2小时给药。

8.如权利要求1所述的方法，其中该1-脱氧半乳糖野尻霉素是米加司他盐酸盐。

9.如权利要求1所述的方法，其中该α-Gal A酶替代疗法选自阿加糖酶α和阿加糖酶β。

10.如权利要求1所述的方法，其中该1-脱氧半乳糖野尻霉素是作为对于该α-Gal A酶替代疗法的佐剂而给药的。