EA031348B1

EA031348B1 - КРИСТАЛЛИЧЕСКИЙ ИНГИБИТОР β-ЛАКТАМАЗЫ

Info

Publication number: EA031348B1
Application number: EA201690963A
Authority: EA
Inventors: Алессандро Ламоника; Марко Фрозатти; Стефано Бьонди
Original assignee: Аллекра Терапьютикс Сас
Priority date: 2013-11-08
Filing date: 2014-11-07
Publication date: 2018-12-28
Also published as: JP2016535054A; US11124526B2; KR20160081964A; JP7346485B2; AU2014345507A1; CN105873935A; JP7045795B2; CN105873935B; US20190071456A1; GB201408643D0; JP2021102642A; CA2929199C; AU2014345507B2; GB201319776D0; EP3066103A1; MX2016005869A; CL2016001097A1; IL245386A0; PE20160890A1; CA2929199A1

Abstract

Кристаллическое соединение формулы (I)Соединение формулы (I) представляет собой ингибитор β-лактамазы и может вводиться в комбинации с антибактериальным средством для профилактики или лечения бактериальной инфекции.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение касается кристаллического (28,38,5К)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида, способов его получения, фармацевтических композиций, содержащих (28,3Б,5К)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид, и применения данного соединения, включая применение композиций, содержащих данное соединение, в частности применения с антибактериальным средством в лечении и профилактике бактериальной инфекции.

Предшествующий уровень техники

Возникновение и распространение резистентности является неизбежным следствием эволюционной динамики, запускаемой введением антибиотиков, независимо от структурного класса или способа действия (Shapiro S. 2013. Speculative strategies for new antibactedals: all roads should not lead to Rome. J. Antibiot. 66: 371-386). Распространение резистентности среди клинически значимых патогенов оказало особенно сильное влияние на ценность β-лактамных антибиотиков, которые до настоящего момента рассматриваются как очень безопасная и эффективная терапия серьезных бактериальных инфекций. Появление новых и агрессивных β-лактамаз, особенно β-лактамаз расширенного спектра (ESBL) и других ферментов класса А, снизило способность β-лактамов бороться с инфекциями, сделав необходимой разработку новых продуктов (Fisher J.F., Meroueh S.O., Mobashery S. 2005. Bacterial resistance to β-lactam antibiotics: compelling opportunism, compelling opportunity. Chem. Rev. 105: 395-424). В то время как несколько ингибиторов β-лактамазы, которые защищают β-лактамные антибиотики от гидролиза, применялись в комбинации с некоторыми β-лактамами, способность данных ингибиторов β-лактамазы сохранять антибактериальную активность β-лактамов сильно уменьшилась за последнее десятилетие, сделав необходимым поиск новых, более сильных ингибиторов β-лактамазы для восстановления терапевтической ценности их β-лактамных партнеров (Watkins R.R., Papp-Wallace K.M., Drawz S.M., Bonomo R.A. 2013. Novel β-lactamase inhibitors: a therapeutic hope against the scourge of multidrug resistance. Front. Microbiol. 4: 392).

В WO 2008/010048 описан ингибитор β-лактамазы (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (формула I)

^-0(Формула I)

В WO 2008/010048 описано образование аморфного соединения формулы (I), которое было выделено путем фильтрования и лиофилизации.

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что соединение формулы (I), полученное способом по WO 2008/010048, является гигроскопичным и имеет ограниченную устойчивость при хранении при комнатной температуре.

Целью изобретения является получение более устойчивой формы соединения формулы (I).

Другой целью настоящего изобретения является получение формы соединения формулы (I), которая легко поддается очистке.

Другой целью настоящего изобретения является получение формы соединения формулы (I), легко поддающейся обработке.

Сущность изобретения

Авторы изобретения получили кристаллические соединения формулы (I). Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что кристаллические соединения формулы (I) умеют улучшенную термическую устойчивость, менее гигроскопичны и легче в очистке и работе, чем соединение формулы (I) в аморфной форме.

В первом аспекте в настоящем изобретении описано кристаллическое соединение формулы (I)

Формула (I).

В первом варианте осуществления первого аспекта описано кристаллическое соединение формулы (I), далее по тексту именуемое форма А, отличающееся XRPD спектром, содержащим четыре или больше (предпочтительно пять или больше, предпочтительно шесть или больше, предпочтительно семь или больше, предпочтительно восемь или больше, предпочтительно девять или больше, предпочтительно

- 1 031348 все десять) пиков, выбранных из пиков с углами 2θ: 8.82, 12.07, 14.43, 14.92, 16.26, 18.25, 19.06, 19.78, 20.82 и 23.51±0.1 градусов 2θ, опционально ±0.05 градусов 2θ.

Предпочтительно XRPD спектр формы А содержит один, два, три, четыре или все пять пиков, выбранных из пиков с углами 2θ: 8.82, 12.07, 14.43, 18.25 и 19.78±0.1 градусов 2θ.

Предпочтительно XRPD спектр формы А содержит все десять пиков с углами 2θ: 8.82, 12.07, 14.43, 14.92, 16.26, 18.25, 19.06, 19.78, 20.82 и 23.51±0.1 градусов 2θ, опционально ±0.05 градусов 2θ.

Предпочтительно форма А имеет XRPD спектр, практически совпадающий с изображенным на фиг. 1.

Форму А можно дополнительно охарактеризовать кривой ее термогравиметрического анализа (ТГА), имеющей эндотермический пик примерно при 163±2°С. ТГА кривая может показывать потерю веса примерно 6% до 130±2°С вследствие потери воды.

Предпочтительно форма А имеет ТГА кривую, практически совпадающую с изображенной на фиг.

9.

Форму А можно дополнительно охарактеризовать кривой ее ДСК-анализа (дифференциальная сканирующая калориметрия), имеющей эндотермический пик с максимумом примерно при 163±2°С. ДСК кривая может иметь эндотермический пик с началом около 45±2°С вследствие потери воды.

Предпочтительно форма А имеет ДСК кривую, практически совпадающую с изображенной на фиг.

5.

Во втором варианте осуществления первого аспекта описано кристаллическое соединение формулы (I), далее по тексту именуемое форма В, отличающееся XRPD спектром, содержащим четыре или больше (предпочтительно пять или больше, предпочтительно шесть или больше, предпочтительно семь или больше, предпочтительно восемь или больше, предпочтительно девять или больше, предпочтительно все десять) пиков, выбранных из пиков с углами 2θ: 9.37, 10.34, 12.59, 13.17, 15.00, 15.63, 18.51, 19.10, 20.79, 23.93±0.1 градусов 2θ, опционально ±0.05 градусов 2θ.

Предпочтительно XRPD спектр формы В содержит один, два, три, четыре или все пять пиков, выбранных из пиков с углами 2θ: 10.34, 15.00, 15.63, 18.51 и 23.93±0.1 градусов 2θ.

Предпочтительно XRPD спектр формы В содержит все десять пиков с углами 2θ: 9.37, 10.34, 12.59, 13.17, 15.00, 15.63, 18.51, 19.10, 20.79 и 23.93±0.1 градусов 2θ, опционально ±0.05 градусов 2θ.

Предпочтительно форма В имеет XRPD спектр, практически совпадающий с изображенным на фиг. 2.

Форму В можно дополнительно охарактеризовать кривой ее термогравиметрического анализа (ТГА), имеющей эндотермический пик примерно при 155±2°С.

ТГА кривая может показывать потерю веса примерно 8% до 120±2°С, коррелирующую с десорбцией воды.

Предпочтительно, форма В имеет ТГА кривую, практически совпадающую с изображенной на фиг.

10.

Форму В можно дополнительно охарактеризовать кривой ее ДСК-анализа (дифференциальная сканирующая калориметрия), имеющей эндотермический пик с максимумом примерно при 180±2°С. ДСК кривая может иметь эндотермический пик с началом около 50±2°С вследствие потери воды.

Предпочтительно форма В имеет ДСК кривую, практически совпадающую с изображенной на фиг.

6.

В третьем варианте осуществления первого аспекта описано кристаллическое соединение формулы (I), далее по тексту именуемое форма С, отличающееся XRPD спектром, содержащим четыре или больше (предпочтительно пять или больше, предпочтительно шесть или больше, предпочтительно семь или больше, предпочтительно восемь или больше, предпочтительно девять или больше, предпочтительно все десять) пиков, выбранных из пиков с углами 2θ: 9.33, 10.73, 14.85, 15.29, 15.77, 16.16, 18.60,20.12, 21.00 и 23.22±0.1 градусов 2θ, опционально ±0.05 градусов 2θ.

Предпочтительно XRPD спектр формы С содержит один, два, три, четыре или все пять пиков, выбранных из пиков с углами 2θ: 10.73, 14.85, 15.29, 20.12 и 23.22±0.1 градусов 2θ.

Предпочтительно XRPD спектр формы С содержит все десять пиков с углами 2θ: 9.33, 10.73, 14.85, 15.29, 15.77, 16.16, 18.60, 20.12, 21.00 и 23.22±0.1 градусов 2θ, опционально ±0.05 градусов 2θ.

Предпочтительно форма С имеет XRPD спектр, практически совпадающий с изображенным на фиг. 3 или фиг. 20.

Форму С можно дополнительно охарактеризовать кривой ее термогравиметрического анализа (ТГА), имеющей эндотермический пик примерно при 149°С.

ТГА кривая может показывать потерю веса примерно 3% до 120±2°С, коррелирующую с десорбцией воды.

Предпочтительно форма С имеет ТГА кривую, практически совпадающую с изображенной на фиг. 11.

Форму С можно дополнительно охарактеризовать кривой ее ДСК-анализа (дифференциальная сканирующая калориметрия), имеющей эндотермический пик с максимумом примерно при 185±2°С.

- 2 031348

Предпочтительно форма С имеет ДСК кривую, практически совпадающую с изображенной на фиг. 7.

В четвертом варианте осуществления первого аспекта описано кристаллическое соединение формулы (I), далее по тексту именуемое форма D, отличающееся XRPD спектром, содержащим четыре или больше пиков (предпочтительно пять или больше, предпочтительно шесть или больше, предпочтительно семь или больше, предпочтительно восемь или больше, предпочтительно девять или больше, предпочтительно все десять пиков), выбранных из пиков с углами 2θ: 6.78, 15.45, 16.39, 17.10, 20.06, 20.63, 23.23, 23.68, 26.18 и 32.47±0.05 градусов 2Θ.

Предпочтительно XRPD спектр формы D содержит один, два, три, четыре или все пять пиков, выбранных из пиков с углами 2θ: 6.78, 16.39, 17.10, 20.63 и 23.23±0.05 градусов 2Θ.

Предпочтительно XRPD спектр формы D содержит все десять пиков с углами 2Θ 6.78, 15.45, 16.39, 17.10, 20.06, 20.63, 23.23, 23.68, 26.18 и 32.47±0.05 градусов 2Θ.

Предпочтительно форма D имеет XRPD спектр, практически совпадающий с изображенным на фиг. 25.

В пятом варианте осуществления первого аспекта описано кристаллическое соединение формулы (I), далее по тексту именуемое форма Е, отличающееся XRPD спектром, содержащим четыре или больше пиков (предпочтительно пять или больше, предпочтительно шесть или больше, предпочтительно семь или больше, предпочтительно восемь или больше, предпочтительно девять или больше, предпочтительно все десять пиков), выбранных из пиков с углами 2Θ: 6.82, 15.04, 15.68, 16.47, 17.17, 18.44, 20.69, 23.34, 23.88 и 25.38±0.05 градусов 2Θ.

Предпочтительно XRPD спектр формы Е содержит один, два, три, четыре или все пять пиков, выбранных из пиков с углами 2Θ: 15.04, 15.68, 16.47, 20.69 и 23.88±0.05 градусов 2Θ.

Предпочтительно XRPD спектр формы Е содержит все десять пиков с углами 2Θ: 6.82, 15.04, 15.68, 16.47, 17.17, 18.44, 20.69, 23.34, 23.88 и 25.38±0.05 градусов 2Θ.

Предпочтительно форма Е имеет XRPD спектр, практически совпадающий с изображенным на фиг. 27.

В шестом варианте осуществления первого аспекта описано кристаллическое соединение формулы (I), далее по тексту именуемое форма F, отличающееся XRPD спектром, содержащим четыре или больше пиков (предпочтительно пять или больше, предпочтительно шесть или больше, предпочтительно семь или больше, предпочтительно восемь или больше, предпочтительно девять или больше, предпочтительно десять или больше, предпочтительно все одиннадцать пиков), выбранных из пиков с углами 2Θ: 12.73, 15.36, 15.95, 16.42, 18.12, 20.48, 22.85, 23.22, 27.04, 27.69 и 32.47±0.05 градусов 2Θ.

Предпочтительно XRPD спектр формы F содержит один, два, три, четыре или все пять пиков, выбранных из пиков с углами 2Θ: 12.73, 15.36, 15.95, 16.42 и 20.48±0.5 градусов 2Θ.

Предпочтительно XRPD спектр формы F содержит все одиннадцать пиков с углами 2Θ: 12.73, 15.36, 15.95, 16.42, 18.12, 20.48, 22.85, 23.22, 27.04, 27.69 и 32.47±0.05 градусов 2Θ.

Предпочтительно форма F имеет XRPD спектр, практически совпадающий с изображенным на фиг. 29.

Во втором аспекте в настоящем изобретении описан способ получения кристаллического соединения формулы (I)

/-о·

Ο^ζ

Формула (I), включающий следующие стадии:

формирование состава путем растворения или суспендирования аморфного соединения формулы (I) в растворителе или смеси растворителей; и кристаллизация соединения формулы (I) из полученного состава.

Аморфное соединение формулы (I) может быть главным образом растворено в составе; может быть главным образом суспендировано в составе, или может быть частично растворено и частично диспергировано в составе.

Количество аморфного соединения формулы (I), применяемого в способе по второму аспекту настоящего изобретения, может быть ниже предела растворимости аморфного соединения в растворителе или смеси растворителей, и в этом случае состав представляет собой раствор, или оно может быть выше предела растворимости, и в этом случае состав представляет собой суспензию.

Растворители для растворения аморфного соединения формулы (I) могут быть выбраны из растворителей, в которых аморфное соединение формулы (I) имеет растворимость при 20°С более 200 мг/мл, опционально более 400 мг/мл. Растворители могут быть полярными, протонными или диполярными ап

- 3 031348 ротонными растворителями. Примерами полярных, протонных растворителей являются вода; первичные спирты, предпочтительно метанол, этанол и 1-пропанол. Другими примерами диполярных апротонных растворителей являются диметилсульфоксид и N.N-диметилформамид. N-метилпирролидон и т.п. Предпочтительны первичные спирты. Метанол и этанол особенно предпочтительны. Содержание воды в растворителе, представляющем собой первичный спирт, предпочтительно менее 4 вес.%, более предпочтительно менее 2 вес.%. Когда первичный спирт представляет собой метанол, содержание воды предпочтительно составляет менее 1%.

Кристаллизацию кристаллического соединения формулы (I) можно индуцировать добавлением антирастворителя в препарат, содержащий растворенное аморфное соединение формулы (I). Антирастворители могут представлять собой растворители, в которых аморфное соединение формулы (I) имеет растворимость при 20°С менее 50 мг/мл, опционально менее 30 мг/мл.

Антирастворители могут представлять собой апротонные вещества. Примерами антирастворителей являются ацетон, этилацетат, метил-трет-бутиловый эфир, гептан, 2-пропанол, изопропилацетат, диизопропиловый эфир, метилэтилкетон, тетрагидрофуран, анизол и трет-бутилацетат.

В другом варианте осуществления второго аспекта аморфное соединение формулы (I) может иметь низкую или нулевую растворимость в растворителе или смеси растворителей, применяющихся для формирования состава, и в этом случае состав представляет собой суспензию.

В состав можно добавлять затравочный кристалл. Затравочный кристалл может представлять собой кристаллическую затравку соединения формулы (I).

Чистота растворителя может влиять на растворимость соединения формулы (I) в растворителе как в аморфной форме, так и в одной или больше кристаллических формах.

Температуру состава можно понижать после формирования состава. Растворитель или смесь растворителей можно нагревать во время формирования состава и охлаждать после формирования состава.

В третьем аспекте в настоящем изобретении описаны кристаллические соединения формулы (I), полученные способом по второму аспекту настоящего изобретения.

В настоящем изобретении также описаны кристаллические соединения формулы (I), которые можно получить способом по второму аспекту настоящего изобретения.

Для лекарственных средств, в которых действующее вещество может существовать более чем в одной полиморфной форме, могут возникнуть проблемы с растворением и/или биодоступностью фармацевтических композиций, содержащих данное соединение, если способ получения дает полиморф с варьирующейся степенью чистоты и/или когда в данном способе не контролируется взаимопревращение полиморфов.

Если кристаллические формы получены с полиморфными примесями, это может вызвать неустойчивость и может значительно ускорить превращение в другую полиморфную форму. Поэтому предпочтительно получать кристаллические формы с высокой степенью полиморфной чистоты.

Предпочтительно кристаллическое соединение формулы (I) по первому или третьему аспектам настоящего изобретения содержит более 90% единственного кристаллического полиморфа данного соединения, предпочтительно более 95%, более предпочтительно более 99%, еще более предпочтительно более 99.5%, и наиболее предпочтительно более 99.8%, согласно определению методом XRPD или ДСК, предпочтительно методом XRPD. Предпочтительно, единственный полиморф представляет собой один из следующих: форма А, форма В, форма С, форма D, форма Е и форма F.

Предпочтительно кристаллическое соединение формулы (I) по первому или третьему аспекту настоящего изобретения имеет химическую чистоту по меньшей мере 95 вес.%, более предпочтительно по меньшей мере 98%, более предпочтительно по меньшей мере 99%, более предпочтительно по меньшей мере 99.5%, еще более предпочтительно по меньшей мере 99.8%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99.9%, предпочтительно согласно определению методом ВЭЖХ.

Кристаллическое соединение формулы (I) может быть пригодным для разведения фармацевтически приемлемым растворителем для введения.

В четвертом аспекте настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция, содержащая антибиотик и кристаллическое соединение формулы (I) по первому или третьему аспекту настоящего изобретения. Предпочтительно, фармацевтическая композиция дополнительно содержит одно или больше фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.

В пятом аспекте в настоящем изобретении описана фармацевтическая композиция по четвертому аспекту для лечения бактериальной инфекции.

В шестом аспекте в настоящем изобретении описан способ лечения бактериальной инфекции, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по четвертому аспекту настоящего изобретения.

В седьмом аспекте в настоящем изобретении описан способ приготовления фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I), включающий стадию растворения или диспергирования кристаллического соединения формулы (I) в жидком носителе. Опционально, жидкий носитель представляет собой фармацевтически приемлемый носитель для внутривенного введения, такой как декстроза, смесь хлорида натрия и декстрозы 5, хлорид натрия, лактат натрия и т.д. Опционально, жидкий носи- 4 031348 тель представляет собой водный раствор хлорида натрия.

Концентрация соединения формулы (I) в фармацевтической композиции находится в диапазоне от 1 мг/мл до 700 мг/мл, предпочтительно от 100 до 500 мг/мл, более предпочтительно от 150 до 250 мг/мл.

Описание чертежей

Изобретение далее описано более подробно в комплексе с фигурами, где фиг. 1 представляет собой диаграмму порошкового рентгеноструктурного анализа формы А (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1H-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 2 - диаграмму порошкового рентгеноструктурного анализа формы В (2Б,3Б,5В)-3-метил-3-((3метил-1H-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4диоксида;

фиг. 3 - диаграмму порошкового рентгеноструктурного анализа формы С (2Б,3Б,5В)-3-метил-3-((3метил-1H-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4диоксида;

фиг. 4 - диаграмму порошкового рентгеноструктурного анализа аморфной формы (2S,3S,5R)-3метил-3-((3-метил-1H-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 5 - полученную методом дифференциальной сканирующей калориметрии термограмму формы А (2S,3 S,5R)-3 -метил-3 -((3 -метил-Ш-1,2,3-триазол-3 -иум-1 -ил)метил)-7 -оксо-4-тиа-1 -азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 6 - полученную методом дифференциальной сканирующей калориметрии термограмму формы В (2S,3 S,5R)-3 -метил-3 -((3 -метил-Ш-1,2,3-триазол-3 -иум-1 -ил)метил)-7 -оксо-4-тиа-1 -азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 7 - полученную методом дифференциальной сканирующей калориметрии термограмму формы С (2S,3S,5R)-3 -метил-3 -((3 -метил-Ш-1,2,3-триазол-3 -иум-1 -ил)метил)-7 -оксо-4-тиа-1 -азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 8 - полученную методом дифференциальной сканирующей калориметрии термограмму аморфной формы (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 9 - термогравиметрическую кривую формы А (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 10 - термогравиметрическую кривую формы В (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 11 - термогравиметрическую кривую формы С (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 12 - кривую зависимости площади пика в ВЭЖХ хроматограмме от концентрации растворов или суспензий аморфного (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4тиа-1-азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 13 - изображение в 25-кратном оптическом микроскопе формы А (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4диоксида;

фиг. 14 - изображение в 25-кратном оптическом микроскопе формы В (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4диоксида;

фиг. 15 - изображение в 25-кратном оптическом микроскопе формы С (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4диоксида;

фиг. 16 - рамановский спектр формы А (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 17 - FT-ИК спектр формы А (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-пум-1ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 18 - рамановский спектр формы С (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1H-1,2,3-триазол-3-иум-1ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 19 - FT-ИК спектр формы С (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1H-1,2,3-триазол-3-иум-1ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 20 - диаграмму порошкового рентгеноструктурного анализа формы С (2S,3S, 5R)-3-метил-3((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4диоксида, полученной согласно примеру 13;

фиг. 21 - термогравиметрическую кривую формы С (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида, полученной согласно примеру 13;

фиг. 22 - изображение в 25-кратном оптическом микроскопе формы С (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3

- 5 031348 метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4диоксида, полученной согласно примеру 13;

фиг. 23 - ¹И-ЯМР спектр формы С (2Б,3Б,5К)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

на фиг. 24 показаны кривые распределения размеров частиц формы С (2Б,3Б,5К)-3-метил-3-((3метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4диоксида, полученной согласно примеру 13;

фиг. 25 представляет собой диаграмму порошкового рентгеноструктурного анализа формы D (2Б,3Б,5К)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 26 - рамановский спектр формы D (28,38,5К)-3-метил-3-((3-метил-1И-1,2,3-триазол-3-иум-1ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 27 - диаграмму порошкового рентгеноструктурного анализа формы Е (2S,3S, 5И)-3-метил-3((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 28 - рамановский спектр формы Е ^^,5И)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 29 - диаграмму порошкового рентгеноструктурного анализа формы F (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4диоксида;

фиг. 30 и 31 - рамановские спектры трех порций формы F (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 32-39 - полученные методом сканирующей электронной микроскопии изображения образцов первой порции формы F (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1H-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 40-46 - полученные методом сканирующей электронной микроскопии изображения образцов второй порции формы F (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 47-50 - полученные методом сканирующей электронной микроскопии изображения образцов третьей порции формы F (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1H-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 51 - FT-ИК спектр формы F ^^,5К)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 52 - полученную методом дифференциальной сканирующей калориметрии термограмму формы F (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 53 - термогравиметрическую кривую формы F ^^,5К)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 54 - изображение выделения газа в ходе анализа выделяемого газа (EGA) формы F (2S,3S,5R)3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2карбоксилат 4,4-диоксида;

фиг. 55 - график изменения динамической сорбции паров (DVS) в массе формы F (2S,3S,5R)-3метил-3 -((3-метил-1H-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2карбоксилат 4,4-диоксида; и на фиг. 56 показаны изотермы динамической сорбции паров (DVS) для формы F (2S,3S, 5R)-3метил-3 -((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2карбоксилат 4,4-диоксида.

Подробное описание изобретения

В изобретении описан кристаллический (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид, который негигроскопичен, термически устойчив и имеет благоприятные свойства, которые позволяют избежать проблем, присущих формам, описанным в предшествующем уровне техники.

В настоящем изобретении также описан способ получения кристаллического (2S,3S,5R)-3-метил-3((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4диоксида. Данный способ позволяет получать (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид с высокой степенью полиморфной чистоты.

Подходящие методики кристаллизации для формирования кристаллических соединений формулы (I) включают (но не ограничиваются только ими) осаждение и перекристаллизацию (включая кристаллизацию с применением антирастворителя), с внесением или без внесения затравочных кристаллов. В предпочтительном варианте осуществления применяют кристаллизацию с использованием антирастворителя.

- 6 031348

Для кристаллизации можно использовать разбавленные, насыщенные или пересыщенные растворы. Раствор аморфного соединения формулы (I) можно охлаждать для стимулирования кристаллизации кристаллических соединений формулы (I).

Аморфное соединение формулы (I) можно растворять при температуре в диапазоне 20-50°С. Полученный раствор можно охлаждать примерно до 0 или 10°С для стимулирования кристаллизации.

Способы получения кристаллических форм (28,38,5К)-3-метил-3-((3-метил-1И-1,2,3-триазол-3-иум1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида включают (но не ограничиваются только ими) следующие способы.

Форма А. Способ 1.

Перемешивание раствора аморфного соединения формулы (I) в 96%-ном этаноле при 20°С, выделение твердого продукта фильтрованием.

Форма А. Способ 2.

Перемешивание насыщенного раствора аморфного соединения формулы (I) в 96%-ном этаноле при 20°С, добавление метил-трет-бутилового эфира в качестве антирастворителя, перемешивание полученной смеси при комнатной температуре в течение ночи, выделение твердого продукта фильтрованием.

Форма А. Способ 3.

Перемешивание насыщенного раствора аморфного соединения формулы (I) в 96%-ном этаноле при 20°С, внесение затравочного кристалла, добавление гептана в качестве антирастворителя, перемешивание полученной смеси при комнатной температуре в течение ночи, выделение твердого продукта фильтрованием.

Форма А. Способ 4.

Перемешивание насыщенного раствора аморфного соединения формулы (I) в 96%-ном этаноле при 20°С, внесение затравочного кристалла, добавление 2-пропанола в качестве антирастворителя, перемешивание полученной смеси при комнатной температуре в течение ночи, выделение твердого продукта фильтрованием.

Форма А. Способ 5.

Растворение аморфного соединения формулы (I) в 96%-ном этаноле при нагревании до 35 °С, медленное добавление (время: около 1 ч) метил-трет-бутилового эфира в качестве антирастворителя, охлаждение полученной смеси до 10°С, перемешивание полученной смеси при 10°С в течение ночи, выделение твердого продукта фильтрованием.

Форма А. Способ 6.

Перемешивание насыщенного раствора аморфного соединения формулы (I) в 96%-ном этаноле при 35°С, внесение в раствор затравочного кристалла, медленное добавление (время: около 20 мин) метил-трет-бутилового эфира в качестве антирастворителя при 20°С, охлаждение полученной смеси до 20°С в течение ночи, выделение твердого продукта фильтрованием.

Форма А. Способ 7.

Перемешивание насыщенного раствора аморфного соединения формулы (I) в 96%-ном этаноле при 40°С, внесение в раствор затравочного кристалла, охлаждение полученной смеси до 20°С в течение примерно 5 ч, перемешивание полученной смеси при 20°С, выделение твердого продукта фильтрованием.

Форма В. Способ 1.

Перемешивание насыщенного раствора аморфного соединения формулы (I) в ацетоне при 40°С, выделение твердого продукта фильтрованием.

Форма С. Способ 1.

Перемешивание раствора аморфного соединения формулы (I) в 99.8%-ном этаноле при 40°С, внесение в раствор затравочного кристалла при 36°С, охлаждение полученного раствора при 15°С,

- 7 031348 перемешивание полученной смеси в течение ночи.

Формы D, Е и F можно получить кристаллизацией из раствора в диметилформамиде. Авторы изобретения обнаружили, что формы D и Е могут изначально кристаллизоваться из раствора в ДМФА, но не образуются, если образовалась форма F. Без привязки к какому-либо теоретическому обоснованию это может происходить из-за того, что форма F более устойчива, чем форма D или Е.

Неожиданно авторы настоящего изобретения обнаружили, что одна кристаллическая форма (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1H-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида может применяться для формирования другой кристаллической формы данного соединения. Одна из кристаллических форм А, В и С может применяться в качестве затравочного кристалла при кристаллизации других форм А, В и С.

Фармацевтическая композиция, описанная в настоящем тексте, может представлять собой инъецируемую форму для внутривенных инъекций. Композиция может содержать стабилизаторы. Композиция может быть в подходящей стерильной твердой форме, готовой для разведения с формированием инъецируемого раствора.

Фармацевтическая композиция, содержащая кристаллическое соединение формулы (I), описанная в настоящем тексте, может вводиться отдельно или совместно с терапевтически эффективным количеством антибиотика.

Фармацевтическая композиция, описанная в настоящем тексте, может содержать антибиотик и может содержать одно или больше общеупотребимых фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.

Примерами антибиотиков являются β-лактамные антибиотики, в частности пенициллины и цефалоспорины, и они могут быть выбраны из следующих: амоксициллин, ампициллин, апалциллин, азлоциллин, бакампициллин, карбенациллин, клоксациллин, диклоксациллин, флуклоксациллин, ленампициллин, мециллинам, метациллин, мезлоциллин, нафциллин, оксациллин, пенициллин G, пенициллин V, пиперациллин, темоциллин, тикарциллин, азтреонам, BAL30072, карумонам, РТХ2416, тигемонам, цефаклор, цефадроксил, цефалексин, цефалотин, цефамандол, цефапирин, цефазолин, цефбуперазон, цефдинир, цефепим, цефетамет, цефиксим, цефменоксим, цефметазол, цефрнинокс, цефоницид, цефоперазон, цефотаксим, цефотетан, цефотиам, цефтиофур, цефовецин, цефокстин, цефподоксим, цефпрозил, цефхином, цефрадин, цефминокс, цефсулодин, цефтаролин, цефтазидим, цефтезол, цефтибутен, цефтизоксим, цефтобипрол, цефтолозан, цефтриаксон, цефуроксим, цефузонам, цефалексин, фломоксеф, латамоксеф, локаркарбеф имипенем, меропенем, дорипенем, эртапенем, биапенем, панипенем, фаропенем или их производные.

Антибиотик может быть выбран из аминогликозидов: амикацин, арбекацин, апрамицин, дибекацин, гентамицин, изепамицин, канамицин, неомицин, нетилмицин, плазомицин, сисомицин, спектиномицин, стрептомицин, тобрамицин или их производные.

Антибиотик может быть выбран из хинолонов: циноксацин, ципрофлоксацин, энофлоксацин, гатифлоксацин, гемифлоксацин, левофлоксацин, моксифлоксацин, налидиксовая кислота, норфлоксацин, оксафлоксацин или их производные.

Антибиотик может быть выбран из противомикробных пептидов, например колистина, полимиксина В, или их производных.

Фармацевтическая композиция, описанная в настоящем тексте, может содержать один или больше антибиотиков.

Фармацевтическая композиция, содержащая кристаллическое соединение формулы (I), может содержать или вводиться совместно с бактерицидным g-белком, увеличивающим проницаемость клеточной мембраны (BPI), или с ингибитором эффлюксного насоса, для повышения активности в отношении грам-негативных бактерий и бактерий, устойчивых к противомикробным средствам. Также в комбинации с соединениями-ингибиторами можно вводить противовирусные, противопаразитические, противогрибковые средства.

Фармацевтическая композиция может содержать комплексообразователи или антикоагулянты, антиоксиданты, стабилизаторы, аминогликозиды, фармацевтически приемлемые соли и т.п., или их смеси.

В частности, фармацевтическая композиция может содержать β-лактамные антибиотики, предпочтительно пенициллины, цефалоспорины, карбапенем, монобактамы, более предпочтительно пиперациллин, цефепим; цефтриаксон; меропенем, азтреонам.

Фармацевтическая композиция может содержать буферные агенты, например цитрат натрия, ацетат натрия, тартрат натрия, карбонат натрия, бикарбонат натрия, морфолинпропансульфокислоту, другие фосфатные буферные агенты и т.п., и хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА), диэтилентриаминпентауксусная кислота, гидроксиэтилендиаминтетрауксусная кислота, нитрилотриуксусная кислота, 1,2-диаминоциклогексантетрауксусная кислота, бис(2-аминоэтил)этиленгликольтетрауксусная кислота, 1,6-гексаметилендиаминтетрауксусная кислота и т.п., или их фармацевтически приемлемые соли.

Фармацевтическую композицию, описанную в настоящем тексте, можно вводить человеку или теп

- 8 031348 локровному животному любым подходящим способом, предпочтительно путем внутривенной инъекции.

Осуществление изобретения

Примеры

Все описанные в настоящем тексте данные XRPD получали в режиме пропускания на приборе X'pert Pro с детектором X'celerator. Полученные данные обрабатывали с помощью программы Highscore Plus, с применением меди в качестве источника излучения с длиной волны 1.54А.

Анализ методом ДСК проводили на приборе ТА Q2000 MDSC.

Анализ методом ТГА проводили на приборе ТА Q5000. Полученные данные обрабатывали с помощью программы Universal Analysis.

Аморфный (2S,3S,5R)-3 -метил-3 -((3 -метил-1Н-1,2,3-триазол-3 -иум-1 -ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1 -азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид получали согласно примеру 1 из WO 2008010048, содержание которого включено в настоящий текст посредством ссылки.

Пример 1.

Получение (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида, форма А.

Аморфный (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (200 мг) растворяли в 96%-ном этаноле (0.5 мл). Полученный раствор перемешивали при 20°С, через 30 мин образовался твердый осадок. Полученную смесь перемешивали в течение 4 ч при 20°С и твердый продукт выделяли фильтрованием и сушили в течение ночи при комнатной температуре в вакуумной печи. Полученный продукт (30 мг) представлял собой кристаллическую форму А, которая характеризовалась XPRD диаграммой, изображенной на фиг. 1, параметры которой сведены в табл. 1.

Таблица 1

Угол Γ°2Θ1	межатомное расстояние ГА]
8.8223	10.01516
12.0725	7.32517
14.4346	6.13137
14.9183	5.93364
16.2594	5.44711
18.2478	4.85778
19.0618	4.65213
19.7798	4.48485
20.8191	4.26326
23.5119	3.78074

Анализ методом ДСК (фиг. 5) показал, что образец имеет эндотерму плавления с максимумом при 163°С. ТГА кривая изображена на фиг. 9.

Вид формы А в оптическом микроскопе показан на фиг. 13.

Пример 2.

Аморфный (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (1 г) суспендировали в 96%-ном этаноле (3 мл). Полученную смесь фильтровали через фильтровальную насадку на шприце. В полученный насыщенный раствор добавляли метил-трет-бутиловый эфир (0.5 мл) в качестве антирастворителя. Добавление антирастворителя приводило к выпадению твердого осадка. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и твердый продукт выделяли фильтрованием и сушили в течение ночи при комнатной температуре в вакуумной печи. Полученный твердый продукт представлял собой кристаллическую форму А, характеризующуюся XPRD диаграммой, аналогичной приведенной в примере 1.

Пример 3.

Аморфный (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (1 г) суспендировали в 96%-ном этаноле (5 мл). Полученную смесь фильтровали через фильтровальную насадку на шприце. В качестве затравки добавляли форму А на кончике ножа. Затравка не растворялась, и в полученный насыщенный раствор добавляли гептан (0.5 мл) в качестве антирастворителя. Добавление антирастворителя приводило к выпадению твердого осадка. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и твердый продукт выделяли фильтрованием и сушили в течение ночи при комнатной температуре в вакуумной печи. Полученный твердый продукт представлял собой кристаллическую форму А, характеризующуюся XPRD диаграммой, аналогичной приведенной в примере 1.

- 9 031348

Пример 4.

Получение (28,3Б,5К)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида, форма А.

Аморфный (2Б,3Б,5К)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (1 г) суспендировали в 96%-ном этаноле (5 мл). Полученную смесь фильтровали через фильтровальную насадку на шприце. В качестве затравки добавляли форму А на кончике ножа. Затравка не растворялась, и в полученный насыщенный раствор добавляли 2пропанол (0.5 мл) в качестве антирастворителя. Добавление антирастворителя приводило к выпадению твердого осадка. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и твердый продукт выделяли фильтрованием и сушили в течение ночи при комнатной температуре в вакуумной печи. Полученный твердый продукт представлял собой кристаллическую форму А, характеризующуюся XPRD диаграммой, аналогичной приведенной в примере 1.

Пример 5.

Аморфный (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (4 г) отвешивали в колбу, оснащенную лопастной мешалкой. Твердое вещество суспендировали в 96%-ном этаноле (32 мл). Полученную смесь нагревали до 35°С и перемешивали при 800 об/мин. При 35°С исходное вещество зрительно растворялось, но раствор выглядел слегка опалесцирующим. Метил-трет-бутиловый эфир (8 мл) добавляли в опалесцирующий раствор в качестве антирастворителя в течение 1 ч. Добавление антирастворителя приводило к появлению твердого осадка. Полученную смесь охлаждали до 10°С в течение 1 ч. Во время охлаждения вещество становилось липким, и его большая часть прилипала к стенкам колбы. Полученную смесь перемешивали в течение ночи, и полученный твердый продукт извлекали из колбы механическим удалением липкого осадка со стенок колбы. Полученную смесь фильтровали в вакууме; осадок на фильтре сушили при комнатной температуре в вакуумной печи в течение 60 ч, получая 2.75 г белого твердого вещества. Полученный твердый продукт представлял собой кристаллическую форму А, характеризующуюся XPRD диаграммой, аналогичной приведенной в примере 1.

Пример 6.

Аморфный (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (5 г) отвешивали в колбу, оснащенную лопастной мешалкой. Твердое вещество суспендировали в 96%-ном этаноле (30 мл). Полученную смесь нагревали до 35 °С и перемешивали при 800 об/мин. При 35 °С исходное вещество зрительно растворялось, но раствор выглядел слегка опалесцирующим. Опалесцирующий раствор фильтровали через фильтровальную насадку на шприце, получая прозрачный раствор. В качестве затравки добавляли форму А на кончике ножа; затравка не растворялась и смесь охлаждали до 20°С в течение 45 мин. При этой температуре добавляли метил-трет-бутиловый эфир (10 мл) в качестве антирастворителя в течение 20 мин. Добавление антирастворителя приводило к появлению липкого твердого осадка, большая часть вещества прилипла к стенкам колбы. Полученную смесь перемешивали в течение ночи и полученный твердый продукт извлекали из колбы механическим удалением липкого осадка со стенок колбы. Полученную смесь фильтровали в вакууме; осадок на фильтре сушили при комнатной температуре в вакуумной печи в течение 60 ч, получая 3.61 г белого твердого вещества. Полученный твердый продукт представлял собой кристаллическую форму А, характеризующуюся XPRD диаграммой, аналогичной приведенной в примере 1.

Пример 7.

Аморфный (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (7 г) отвешивали в колбу, оснащенную лопастной мешалкой. Твердое вещество суспендировали в 96%-ном этаноле (21 мл). Полученную смесь нагревали до 40°С и перемешивали при 400 об/мин. При 40°С исходное вещество зрительно растворялось, но раствор выглядел слегка опалесцирующим. Опалесцирующий раствор фильтровали через фильтровальную насадку на шприце, получая прозрачный раствор. В качестве затравки добавляли форму А на кончике ножа; затравка не растворялась, и смесь перемешивали при 40°С в течение 1 ч. Полученную смесь затем охлаждали до 10°С в течение 5 ч и перемешивали в течение 60 ч. Полученное вещество прилипало к стенкам колбы, и его извлекали механическим удалением липкого осадка со стенок колбы. Полученную смесь фильтровали в вакууме; осадок на фильтре сушили при комнатной температуре в вакуумной печи 18 ч, получая 5.54 г белого твердого вещества. Полученный твердый продукт представлял собой кристаллическую форму А, характеризующуюся XPRD диаграммой, аналогичной приведенной в примере 1.

- 10 031348

Пример 8.

Получение (28,3Б,5К)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида, форма В.

Аморфный (2Б,3Б,5К)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (200 мг) суспендировали в ацетоне (0.5 мл) и получен ную суспензию перемешивали в течение 4 ч при 40°С. Твердый продукт выделяли фильтрованием и сушили в течение ночи при комнатной температуре в вакуумной печи. Полученный продукт (150 мг) представлял собой кристаллическую форму В, которая характеризовалась XPRD диаграммой, изображенной на фиг. 2, и параметры которой сведены в табл. 2.

Таблица 2

Угол [°201	межатомное расстояние fAl
9.3736	9.42739
10 343	8,54587
12,5922	7.024
13.172	6.71609
14.998	5.90227
15.636	5.66284
18.5083	4.79001
19.1049	4.64175

20.7935	4.26845
23.9264	3.71616

Анализ методом ДСК (фиг. 6) показал, что образец имеет эндотерму плавления с максимумом при 180°С. ТГА кривая изображена на фиг. 10.

Вид формы В в оптическом микроскопе показан на фиг. 14.

Пример 9.

Получение (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида, форма С.

Аморфный (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (5 г) отвешивали в колбу, оснащенную лопастной мешалкой. Твердое вещество суспендировали в этаноле для ВЭЖХ с чистотой 99.8% (20 мл). Полученную смесь нагревали до 40°С и перемешивали при 500 об/мин. При 40°С исходное вещество зрительно растворялось, но раствор выглядел слегка опалесцирующим. Опалесцирующий раствор фильтровали через фильтровальную насадку на шприце, получая прозрачный раствор. Полученный раствор охлаждали до 36°С в течение 15 мин и добавляли форму В (30 мг) в раствор в качестве затравки; затравка не растворялась и стимулировала кристаллизацию продукта. Полученную смесь перемешивали при 36°С в течение 30 мин и затем охлаждали до 15°С в течение 3.5 ч. Суспензию выдерживали в течение ночи и затем фильтровали под вакуумом; осадок на фильтре сушили при комнатной температуре в вакуумной печи 18 ч, получая 3.7 г белого твердого вещества. Полученный продукт представлял собой кристаллическую форму С, которая характеризовалась XPRD диаграммой, изображенной на фиг. 3, и параметры которой сведены в табл. 3.

Таблица 3

Угол Γ2Θ1	межатомное расстояние [А]
9.331	9.47026
10.7259	8.24161
14.8509	5.96039
15.2924	5.7893
15.7717	5.61443
16.1565	5.48158
18.6025	4.76595
20.1156	4,41074
20.9959	4.22776
23.2215	3.82734

Анализ методом ДСК (фиг. 7) показал, что образец имеет эндотерму плавления с максимумом при

185°С.

ТГА кривая изображена на фиг. 11.

Вид формы С в оптическом микроскопе показан на фиг. 15. Сравнительный пример.

XRPD спектр аморфного (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1H-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида, полученного согласно описанию в

- 11 031348

WO 2008/010048, показан на фиг. 4. В данном спектре не обнаружено кристаллического характера. Оценка растворимости.

Значения растворимости в растворителях вычисляли согласно фактору отклика в ВЭЖХ, приведенному на фиг. 12.

Фактор отклика в ВЭЖХ вычисляли для аморфного соединения формулы (I), используя образцы, растворенные в смеси ацетонитрил/вода 9/1, следующим методом.

Колонка: ZORBAX Eclipse XDB-C18 (150x4.6 мм, 5 мкм).

Температура: 25°С.

Подвижная фаза: А: 0.05М ортофосфат натрия/вода, В: ацетонитрил.

Градиент: от 5% В до 95% В в течение 10 мин.

Детектор: УФ λ= 220 нм.

Образец	Концентрация (мг/мл)	Площадь ВЭЖХ пика
1	0.62	333.445
2	1 24	660.935
3	1.68	1219.92
4	2.25	1643.32
5	2.30	1940.44
6	3.10	2830.31

Готовили суспензии аморфного соединения формулы (I) в выбранных растворителях и перемешивали при 20 и 40°С в течение 4 ч.

Образцы каждой суспензии отфильтровывали и вводили маточные растворы в ВЭЖХ прибор.

Твердый остаток отделяли и анализировали методом XRPD.

Результаты просуммированы в табл. 4.

Таблица 4. Растворимость аморфного соединения формулы (I)

Растворитель	Растворимость (мг/мл)
20°С	40°С
Ацетон	0	0
Этанол	420	>420
Этилацетат	0	0
Метил-трет-бутиловый эфир	0	0
Гептан	0	0
Вода	>400	>400
2-пропанол	23	28
Изопропилацетат	0	0
Диизопропиловый эфир	0	0
Метанол	>400	>400
Метилэтилкетон	0	0
Тетрагидрофуран	0	0
Анизол	0	0
Трет-бутилацетат	0	0
Диметилсульфоксид	>400	>400
1-пропанол	295	>400
1-бутанол	97	167
Ацетонитрил	6	не анализировали
Хлорбензол	0	не анализировали
Дихлорметан	0	не анализировали
1,4-диоксан	0	не анализировали
Этанол/метил-трет-бутиловый эфир 20%	52	не анализировали
Этанол/метил-трет-бутиловый эфир 40%	16	не анализировали
Этанол/ацетон 20%	>300	не анализировали
Эганол/ацетон 40%	>300	не анализировали

Анализ формы А методом рамановской спектроскопии и Фурье-инфракрасной спектроскопии (FTИК).

Рамановский спектр формы А показан на фиг. 16, список пиков полос приведен в табл. 5.

- 12 031348

Таблица 5

Положение	Интенсивность
247.89	4066.127
268.70	4076.600
285.77	5666.532
297.80	7186.507
322.04	4385.802
411.78	3861.458
436.26	2433.529
499.66	2023.949
521.68	4054.372
560.04	2419.952
588.92	1163.452
629.52	6647.466
640.58	4792.760
687.14	1836.374
718.78	1714.527
758.37	1345.186
794.58	2302.231
836.54	1806.043
872.19	5315.287

932.18	1889.917
949.44	2637 407
962 31	2419.830
985 74	2736.112
1049.63	5534 104
1074.79	2056.236
1097.28	4171.412
1135.89	5311.271
1148.59	3581.329
1178.28	2121.957
1215.25	2643.923
1239.16	3338.948
1266.18	3677.753
1325.12	8522.793
1368.61	5404.136
1394.52	6973.028
1425.05	4802.836
1457.84	5583.813
1534.20	4855.332
1648.81	3369.165
1773.12	4261.622
2890.60	6428.710
2962.11	19794.615
2986.55	7243.053
3015.84	7382.472
3049.43	4000.206

на фиг. 17 показан FT-ИК спектр формы А, список пиков соответствующих полос приведен в табл.

6.

Таблица 6

Положение	Интенсивность
673.84	0.0846
686.51	0.118
718.98	0.111
756.67	0.0942
781.58	0.0916
797.38	0.100
834 89	0 0756
871 89	0 0672
932.05	0.0646
948.44	0.0932
1025.16	0.0712
1050.31	0.0580
1075.14	0.0752
1094.42	0.113
1134.65	0.124
1148.93	0.106
1204.60	0.0957
1240.06	0.0661

- 13 031348

1235.85	0.0661
1309.76	0.147
1363 83	0 0819
1392.60	0.0512
1425.57	0.0468
1452.48	0.0538
1533.83	0.0601
1622 97	0.119
1766.49	0.109
2890.12	0.0390
2964.73	0.0446
3013.48	0.0440
3049.64	0.0414
3089.32	0.0425
3343.53	0.0427
3530.97	0.0395

Анализ формы С методом рамановской спектроскопии и FT-ИК спектроскопии.

Рамановский спектр формы С показан на фиг. 18, список пиков соответствующих полос приведен в табл. 7.

Таблица 7

Положение	Интенсивность
240.20	4128.340
278.20	10739.558
299.77	10722.921
316.97	8908.874
389.49	3492.405
403.91	5676.352
419.31	6378.482
438.01	3159.695
514.23	9161.536
540.24	2881.736
560.59	5050.867
624.85	13700.852
640.80	5770.215
692.53	7222.112
715.48	2197.299
753.71	2920 133
800.11	2731.873
839.41	3232.516
868.99	6613.900
938.91	4443.281
967.79	3605.101
985.96	4480.407
1033.35	5823.568
1049.82	6638.105
1096.10	10022.146
1141.01	9717.918

1180.11	4361.805
1197.40	3267.057
1235.20	3502.896
1317.60	10464.665
1362.32	6745.435
1395.94	9937.875
1457 27	6235.580
1535.79	4771.901
1640.00	4841.217
1775.78	7336.955
2879.07	5109.468
2909.71	11865.885
2947 89	19208.596
2958.72	17883.816
2983 99	21848.400
2999 93	12395.464
3014.33	15550 745
3084.97	4124.013
3169 92	8548.841

FT-ИК спектр формы С показан на фиг. 19, список пиков соответствующих полос приведен в табл.

8.

- 14 031348

Таблица 8

Положение	Интенсивность
671.04	0.103
691 08	0 151
715.10	0.126
752.68	0.145
780.33	0.117
790.47	0.149
799.40	0 136
838 87	0.0751
868.41	0.0772
939.45	0.111
956.58	0.106
985.83	0.0629
1023.40	0 101
1089.49	0.135
1098.28	0.145
1138.00	0.213
1195.45	0.166
1233.08	0.0960
1269.19	0.142
1309.02	0.208
1361.03	0.114
1387.96	0.0675
1456.72	0 0694
1536.21	0.0645
1637.71	0.174
1770.33	0.174
2972.20	0.0498
3015 04	0.0553
3083 68	0.0481
3168.20	0.0456
3375.47	00422

Проведенные анализы формы А и С, включая информацию о влиянии содержания воды во время кристаллизации, подтверждают гипотезу о том, что форма А является гидратной формой с быстрым обменом воды с окружающей средой, а форма С представляет собой более устойчивую безводную форму. Поэтому форма С была выбрана для дальнейшей оптимизации и масштабирования процесса кристаллизации, и полученные результаты описаны ниже.

Оптимизация кристаллизации формы С.

Пример 10. Методика кристаллизации с применением затравки формы С.

Получение (28,3Б,5К)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида, форма С.

Аморфный (2Б,3Б,5К)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (5 г) отвешивали в колбу объемом 50 мл, оснащенную лопастной мешалкой. Твердое вещество суспендировали в 20 мл этанола для ВЭЖХ с чистотой 99.8%. Полученную смесь нагревали до 40°С и перемешивали при 700 об/мин. При 40°С исходное вещество растворялось. Полученный раствор охлаждали до 36°С в течение 15 мин и добавляли Форму С (27 мг) в раствор в качестве затравки; затравка не растворялась и стимулировала кристаллизацию продукта. Полученную смесь охлаждали до 15°С в течение 3.5 ч. Суспензию выдерживали в течение ночи и затем фильтровали под вакуумом; осадок на фильтре сушили при 30°С в вакуумной печи 40 ч, получая 3.7 г белого твердого вещества. Полученный твердый продукт дал XPRD диаграмму, характерную для формы С.

Качество этанольной системы при получении формы С также было исследовано с применением 96%-ного этанола вместо этанола для ВЭЖХ с чистотой 99.8%, как описано в примере 11.

Пример 11.

Аморфный (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (5 г) отвешивали в колбу объемом 50 мл, оснащенную лопастной мешалкой. Твердое вещество суспендировали в 20 мл 96%-ного этанола. Полученную смесь нагревали до 40°С и перемешивали при 700 об/мин. При 40°С исходное вещество зрительно растворялось, но раствор выглядел слегка опалесцирующим. Опалесцирующий раствор фильтровали через фильтровальную насадку на шприце, получая прозрачный раствор. Полученный раствор охлаждали до 35°С в течение 15 мин и добавляли форму С (28 мг) в раствор в качестве затравки. После 10 мин при 35°С она растворялась. Температуру понижали до 30°С в течение 15 мин и добавляли еще форму С (27 мг) в каче

- 15 031348 стве затравки. Затравка растворилась через 15 мин. Раствор нагревали до 35°С и добавляли в раствор форму В на кончике ножа, но она растворилась через несколько минут. Добавляли форму А на кончике ножа в качестве затравки; на этот раз затравка не растворилась и стимулировала кристаллизацию продукта. Полученную смесь охлаждали до 15°С в течение 3.5 ч. Суспензию выдерживали в течение ночи и затем фильтровали под вакуумом; осадок на фильтре сушили при 30°С в вакуумной печи 18 ч, получая 3.1 г белого твердого вещества. Полученный твердый продукт дал XPRD диаграмму, характерную для формы А.

Методики, описанные в примерах 10 и 11, показали, что содержание воды в этанольной системе может влиять на образование Форм А и С при использовании затравок. Образование формы А возможно в 96%-ном этаноле, в то время как образование кристаллической формы С требует использования этанола для ВЭЖХ с чистотой 99.8%.

Пример 12.

Аморфный (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (8 г) отвешивали в колбу объемом 50 мл, оснащенную лопастной мешалкой. Твердое вещество суспендировали в 20 мл этанола для ВЭЖХ с чистотой 99.8%. Полученную смесь нагревали до 40°С и перемешивали при 800 об/мин. При 40°С исходное вещество растворялось. Полученный раствор охлаждали до 36°С в течение 10 мин и добавляли в раствор форму С (24 мг) в качестве затравки; затравка не растворялась и стимулировала кристаллизацию продукта. После 15 мин перемешивания при 36°С смесь охлаждали до 15°С в течение 3.5 ч. Суспензию выдерживали в течение ночи и затем фильтровали под вакуумом в атмосфере азота (над фильтром была размещена воронка с подсоединенным током азота). Осадок на фильтре промывали 8 мл этанола для ВЭЖХ с чистотой 99.8%. Осадок на фильтре сушили внутри фильтра при 30°С в вакуумной печи 2 ч, затем продукт переносили в кристаллизатор и сушили еще 16 ч. Полученный продукт анализировали методом 'Н-ЯМР. проверяя содержание растворителя, и обнаружили наличие ~1.3% вес./вес. этанола. Осадок на фильтре сушили еще при 35 °С в вакуумной печи 6 ч. Отбирали новый образец и анализировали его методом ¹НЯМР на предмет содержания растворителя. Содержание этанола было сравнимым с первым образцом. Продукт хранили при -20°С в течение выходных и затем помещали в вакуумную печь с температурой 40°С на 24 ч, получая 6 г продукта. Полученный твердый продукт дал XPRD диаграмму, характерную для формы С. ¹Н-ЯМР подтвердил присутствие ~1.3% вес./вес. остаточного этанола в продукте.

Уменьшение загрузки затравки не оказывало негативного эффекта на кристаллизацию продукта и применялось при масштабировании методики, как описано в примере 13.

Пример 13.

Масштабирование получения (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида, форма С, в масштабе 36 г.

Аморфный (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (36.45 г) отвешивали в колбу объемом 250 мл, оснащенную лопастной мешалкой. Твердое вещество суспендировали в 146 мл этанола для ВЭЖХ с чистотой 99.8%. Полученную смесь нагревали до 40°С в течение 20 мин. После 15 мин при 40°С исходное вещество полностью растворялось, раствор охлаждали до 36°С в течение 10 мин и добавляли форму С (110 мг) в раствор в качестве затравки; затравка не растворялась и стимулировала кристаллизацию продукта. После 10 мин перемешивания при 36°С, смесь охлаждали до 15°С в течение 3.5 ч. Полученную смесь выдерживали в течение ночи и затем фильтровали под вакуумом. Осадок на фильтре промывали 40 мл этанола для ВЭЖХ с чистотой 99.8% и трижды по 40 мл метил-трет-бутилового эфира для удаления из продукта остаточного этанола. Из осадка отсасывали маточный раствор в атмосфере азота (над фильтром была размещена воронка с подсоединенным током азота) под вакуумом. Осадок на фильтре сушили в вакуумной печи 24 ч, получая 26.8 г конечного продукта в виде белого твердого вещества.

Полученный твердый продукт анализировали методами XRPD, ТГА, оптической микроскопии (ОМ) и ^!Н-ЯМР.

XRPD анализ продукта показал кристаллическую природу вещества, диаграмма соответствовала форме С (фиг. 20).

ТГА анализ продукта (фиг. 21) показал потерю веса около 2% до 120°С, скорее всего вследствие удаления адсорбированной воды и остаточного растворителя.

Картинка, полученная в ходе анализа методом ОМ, показана на фиг. 22 и демонстрирует кристаллы формы С. При использовании поляризованного света можно увидеть двоякопреломляющие частицы.

'Н-ЯМР спектр (фиг. 23) соответствует структуре (28,38^)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол3-иум-1 -ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1 -азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида. Содержание остаточного этанола вычисляли по сравнению сигнала этанола при 1.06 м.д. и сигнала активного фармацевтического ингредиента при 1.40 м.д. Учитывая значения интегральной интенсивности, число протонов и молекулярный вес для референсного сигнала, оценочное содержание остаточного этанола состав

- 16 031348 ляет 0.4% вес./вес. относительно активного фармацевтического ингредиента.

Определение растворимости в физиологическом растворе.

Растворимость формы С вычисляли методом ВЭЖХ, применяя разработанный метод. Для экспериментов применяли продукт, полученный по масштабированной методике, описанной в примере 13.

1.9 г продукта суспендировали в 1 мл продажного физиологического раствора (0.9% NaCl) при комнатной температуре (~20°С). Суспензия становилась слегка опалесцирующей и очень вязкой через 30 мин. По истечении этого времени отбирали образцы суспензии и вводили в ВЭЖХ в прибор для определения концентрации. После 2 ч перемешивания твердое вещество полностью растворялось. Не добавляли дополнительных порций твердого вещества во избежание желатинизации вязкого раствора. Отбирали образец и вводили в ВЭЖХ в прибор для определения его концентрации. Полученный раствор перемешивали еще 3 ч и снова отбирали образец. Образец после 5 ч перемешивания также вводили в ВЭЖХ в прибор для определения его концентрации. Примеси в ВЭЖХ не показывали образования заметных примесей. В табл. 9 показаны результаты определения растворимости для выбранных моментов времени.

Таблица 9

Физ. раствор	Точка времени	Растворимость (мг/мл) при комнатной температуре
1	30 мин	772
2	2 час	>883
3	5 час	>812

Распределение размеров частиц.

Анализ распределения размеров частиц проводили для продукта, полученного по масштабированной методике, описанной в примере 13, применяя описанную ниже методику. Делали три измерения для каждой суспензии, и полученные результаты показаны на фиг. 24 и в табл. 10.

Таблица 10

Название образца	d(0.1)	d (0.5)	d (0.9)
Суспензия 1, Измерение 1	29.08	129.34	249.92
Суспензия 1, Измерение 2	28.94	128.69	246.31
Суспензия 1, Измерение 3	28.90	128.42	247.37
Суспензия 2, Измерение 1	28.26	130.37	251.74
Суспензия 2, Измерение 2	26.80	125.95	248.77
Суспензия 2, Измерение 3	25.40	119.25	239.11
Суспензия 3, Измерение 1	28.54	133.06	256.35
Суспензия 3, Измерение 2	26.85	128.64	249.66
Суспензия 3, Измерение 3	26.09	126.42	244.15
Среднее	27.65	127.79	248.15

Пример 14.

Получение (28,38,5И)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида, форма D.

Аморфный (28,38,5И)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (30 г) суспендировали в 200 мл N.N-диметилформамида, нагретого до +20/25°С. После 5 мин перемешивания получали раствор, и через несколько мин происходила кристаллизация. Суспензию перемешивали примерно 2 ч. Затем полученную суспензию охлаждали до 0/+5°С и перемешивали примерно 2 ч.

Полученный твердый продукт отфильтровывали и промывали 50 мл Ν,Ν-диметилформамида, охлажденного до 0/+5°С. Влажный продукт затем суспендировали в 300 мл дихлорметана и доводили температуру до +30/32°С. Суспензию перемешивали 45 мин, затем твердый продукт отфильтровывали и промывали 100 мл дихлорметана, нагретого до +30/32°С. Полученный продукт сушили в вакууме при +40°С до постоянного веса. Полученный продукт (19.3 г) представлял собой кристаллическую форму D, которая характеризовалась XPRD диаграммой, изображенной на фиг. 25, и данные для нее просуммированы в табл. 11.

- 17 031348

Таблица 11

№	Угол Γ°2Θ1	Межатомн. расст-е [А1	Высота (имп/сек)	Ширина на полувысоте (град)	Инт.	град	Инт
1	6.7824	13.02204	369.45	0.2491	119.22	0.3227	333.64
2	9.5032	9.29904	105.18	0.2064	26.05	0.2477	403.40
3	104510	8.45774	31.17	0.2565	10.15	0.3256	324.89
4	11.6074	7.61762	109 02	0 2733	31 72	0.2910	305.11
5	12.7850	6.91847	41.58	0.2692	11.91	0.2865	310.18
6	13 4325	6.58642	64.83	0.2025	13.98	0.2156	412.47
7	14.2560	6.20776	275.43	0.2923	86.51	0.3141	286.05
8	15 4567	5.72810	77.92	1.8085	152.28	1.9543	46 30
9	163961	5.40199	835.69	0.4340	388.58	0.4650	193.15
10	17.1082	5.17871	522.62	0.3370	188.77	0.3612	249.00
И	18.2742	4.85081	148 14	0.3388	53,91	0.3639	248.02

12	20.0651	4 42173	194.88	0.5228	109.82	0.5635	161.19
13	20.6373	4.30040	624.11	0.3160	211.90	0.3395	26691
14	22.7520	3.90524	167.10	0.2473	44.02	0.2635	342.21
15	23.2376	3 82472	236.56	0.6238	157.13	0.6642	135.79
16	23.6811	3 75409	198.42	0.5077	107.27	0.5406	167.00
17	25.6817	3.46600	163.48	0.4133	71.93	0.4400	205.89
18	26.1802	3 40112	205.89	0.5004	109.66	0.5326	170.25
19	26.9957	3 30020	138.32	0.4481	65.98	0.4770	190.41
20	27.7606	3.21098	221.24	0.3671	86.44	0.3907	232.85
21	28.7686	3.10073	75.61	0.2697	21.70	0.2870	317.65
22	30.4020	2 93775	125.52	0.3451	46.72	0.3722	249.17
23	31.4633	2.84104	102.42	0.6496	72.49	0.7078	132.70
24	32.4753	2.75478	268.97	0.4635	134.78	0.5011	186.43
25	34.4252	2 60307	21.60	0.6492	14.92	0.6911	133.80
26	34.9492	2.56524	12.83	0.4399	6.01	0.4682	197.76
27	36.0489	2.48946	80.97	0.3230	27.84	0.3438	270.15
28	38.4794	2 33762	119.18	0.6568	83.33	0.6992	133.80
29	40.2292	2.23989	27.09	0.9554	27.55	1.0170	92.49
30	42.6703	2.11723	63.61	0.5331	36.10	0.5675	167.09
31	43.9731	2 05748	22.45	0.4622	11.29	0.5030	193.59
32	53.8897	1.69994	16.28	0.5850	11.95	0.7339	159.10

Рамановский спектр формы D показан на фиг. 26, список соответствующих пиков приведен ниже в табл. 12 (применяли прибор для рамановской спектроскопии Jasco RFT-600, источник света Nd-YAG, 1064 нм: длина волны стимулирующего излучения).

Таблица 12

Пик	Волновое число	Υ	Пик	Волновое число	У
1	3157.83	0.0281958	18	993 13	0.0292598
2	3009.34	0.072899	19	947.811	0.0372661
3	2974.63	0.100304	20	874.529	0.0711543
4	2904.24	0.0444922	21	838.853	0.028534
5	1772.23	0.0339617	22	783.892	0.0241906
6	1663.27	0.0258104	23	688.432	0.0231856
7	1474.28	0.0302334	24	661.434	0.0387182
8	1458.85	0.0264177	25	624.793	0.134281
9	1437.64	0.0373852	26	556.332	0.0499649
10	1400.04	0.0571817	27	514.87	0.0831978
11	1352.79	0.0302512	28	433.875	0.0597285
12	1302.65	0.0862235	29	414.59	0.0366139
13	1195.62	0.0247634	30	340.344	0.0295258
14	1175 37	0 0330307	31	324916	0.058052
15	1138 73	0 0701386	32	287 311	00680197
16	109245	0.11397	33	249706	00476452
17	1031.7	0.0433419

Пример 15.

Получение (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида, форма Е.

Аморфный (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (5 г) суспендировали в 30 мл N.N-диметилформамида. нагретого до +20/25°С. После 5 мин перемешивания получали раствор, и через несколько мин происходила кристаллизация. Суспензию перемешивали примерно 2 ч.

Полученный твердый продукт отфильтровывали и промывали 12.5 мл Ν,Ν-диметилформамида. Влажный продукт затем суспендировали в 100 мл этилацетата и доводили температуру до +40/45°С. Суспензию перемешивали 60 мин, затем твердый продукт отфильтровывали и промывали 50 мл этилаце

- 18 031348 тата, нагретого до +40/45°С. Затем полученный продукт сушили в вакууме при +40°С до постоянного веса.

Полученный продукт (2.4 г) представлял собой кристаллическую форму Е, которая характеризовалась XPRD диаграммой, изображенной на фиг. 27, и данные для нее просуммированы в табл. 13.

Таблица 13

№	Угол [°201	Межатомн. расст-е [А]	Высота (имп/сек)	Ширина на полувысоте (град)	Инт.	град	Инт.
1	6.8269	12.93732	260.98	0.2205	68.42	0.2622	376.99
2	9.5377	9.26545	102.12	0.2256	29 95	0.2933	369.14
3	10.4196	8.48314	117.20	0.2867	38 29	0.3267	290.56
4	11.6525	7.58825	82.26	0.2299	20.13	0.2447	362.76
5	12.6274	7.00451	83.34	0.3681	32 66	0.3919	226.76
6	13.3413	6.63125	95.57	0.3884	39 52	0.4135	215.07
7	14.2802	6.19726	104.47	0.2212	26.92	02577	378.06
8	15.0475	5.88296	494.41	0.3508	199.68	0.4039	238.55
9	15.6848	5.64531	378.40	0.3968	173.35	0.4581	211.11
10	16.4735	5.37678	557.04	0.3770	234.97	0.4218	222.38
И	17.1773	5.15801	229.03	0.3175	81.31	0.3550	264.28
12	18.4488	4.80530	297.04	0.3867	122.28	0.4117	217.36
13	19.0164	4.66312	93.86	0.2902	28.99	0.3089	289.90
14	20.0808	4.41830	143.91	0.4955	75.93	0.5276	170.05
15	20.6999	4.28752	421.62	0.3301	148.17	0.3514	255.52
16	22.2167	3.99811	90 66	0.6225	62 16	06857	135.85
17	22.7863	3.89944	130.42	0.4242	61.57	04721	199.52
18	23.3436	3.80760	273.25	0.4007	120.48	0.4409	211.43
19	23.8843	3.72261	447.75	0.4942	242.53	0.5417	171.61
20	25.3818	3.50627	95.40	1.0693	109.22	1.1449	79.54
21	26.2231	3.39566	113 17	0.5204	63 45	0.5606	163.70
22	27.8574	3.20005	112 17	0.2916	35 41	0.3157	293.14
23	29.9383	2.98219	52.64	0.4091	38.32	0.7279	209.96
24	31.3100	2.85459	70.72	0.3247	40.45	0.5720	265.41
25	33.3041	2.68809	41.89	0.3114	17.99	0.4295	278.15
26	38.5117	2.33574	15.66	1.2693	21.16	1.3512	69.24
27	41.1953	2.18957	21 01	1 1036	24.69	1 1748	80 32
28	49.2559	1.84846	16.52	0.9722	17 90	1.0835	93.88

Рамановский спектр формы Е показан на фиг. 28, список соответствующих пиков приведен ниже в табл. 14 (применяли прибор для рамановской спектроскопии Jasco RFT-600, источник света Nd-YAG, 1064 нм: длина волны стимулирующего излучения).

Таблица 14

Пик	Волновое число	Y	Пик	Волновое число	Y
1	3158.8	0.0221892	18	989.273	0.0474664
2	3051.77	0.0289691	19	949.74	0.0622083
3	3011.27	0.0722239	20	873.565	0.0993489
4	2973.67	0.168653	21	836.924	0.0338838
5	2900.38	0.0707581	22	782.927	0.0376849
6	1772.23	0.0829712	23	715.431	0.0287148
7	1482	0.036189	24	589.397	0.028656
8	1438.61	0.0318463	25	646.006	0.0458421
9	1397.14	0.0563706	26	624.793	0.177092
10	1352.79	0.0498639	27	556.332	0.0561384
11	1302.65	0.120509	28	613.906	0.109643
12	1266.01	0.0335002	29	433.875	0.0568177
13	1202.37	0.0466914	30	407.84	0.0759362
14	1185.01	0.0332323	31	325.881	0.68886
15	1139.69	0.0742465	32	288.276	0.0859623
16	1092.45	0.128341	33	254.527	0.050626
17	1031.7	0.0532132	34	216.922	0.0240766

Пример 16.

Получение (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида, форма F.

Аморфный (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1-ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксид (130 г) суспендировали в 800 мл N.N-диметилформамида, нагретого до +20/25°С. Добавляли 100 мл Ν,Ν-диметилформамида для обмывания стенок колбы. После 5 мин перемешивания получали раствор, и через несколько мин происходила кристаллизация. Суспензию перемешивали примерно 3 ч. Затем суспензию охлаждали до 0/+5°С и перемешивали примерно 3 ч.

- 19 031348

Полученный твердый продукт отфильтровывали и промывали 300 мл N.N-диметилформамида. охлажденного до 0/+5°С. Влажный продукт затем суспендировали в 700 мл этилацетата и доводили температуру до +40/45°С. Суспензию перемешивали 30 мин, затем твердый продукт отфильтровывали и промывали 150 мл этилацетата, нагретого до +40/45°С. Процедуру с суспендированием в этилацетате повторяли дважды. Затем полученный продукт сушили в вакууме при +40°С до постоянного веса.

Полученный продукт (65-66 г, мольный выход около 76%) представлял собой 98-99% кристаллическую форму F, которая характеризовалась XPRD диаграммой, изображенной на фиг. 29, и данные для нее просуммированы ниже в табл. 15.

Таблица15

№	Угол Γ2Θ]	Межатомн. расст-е 1А \|	Высота (имп/сек)	Ширина на полу высоте (град)	Инт	Град	Инт
1	8.5718	10.30725	116.72	0.1981	26.19	0.2244	419.96
2	10.3165	8.56773	182.16	0.2142	42.67	0.2343	388.97
3	12.7398	6.94292	420.49	0.2216	103.83	0.2469	376.75
4	15.3615	5.76339	870.60	0.2471	241.26	0.2771	338.84
5	15.9547	5.55042	1374.98	0.2605	400.47	0.2913	321.60
6	16.4290	5.39123	1343.96	0.2344	352.88	0.2626	357.69
7	17,1990	5.15158	477.25	0.2281	118.86	0.2490	367.89
8	18 1207	4.89155	531.20	0.2398	146 12	0.2751	350.36
9	20.4870	4.33160	915.19	0.2443	275.10	0.3006	345.16
10	21.4040	4.14805	37.20	0.1769	701	0.1884	477.23
11	22.8548	3.88791	528.69	0.2904	164.14	0.3105	291.53
12	23,2204	3.82751	502.41	0.3500	188.64	0.3755	242.00
13	23.4688	3.78756	292.42	0.1501	47.04	0.1609	564.73
14	24.4199	3.64215	132.35	0.2404	34.95	0.2641	353.09
15	25.6394	3.47163	359.02	0.2563	104.03	0.2897	331.96
16	25,9983	3.42450	94.56	0.2531	27.13	0.2869	336.47
17	26,2914	3.38699	134.69	0.2951	45.04	0.3344	288.79
18	27.0457	3.29421	387.38	0.3463	151.47	0.3910	246.47
19	27.6934	3.21862	412.53	0.2941	136.95	0.3320	290.62
20	28.7394	3.10381	190.86	0.2739	56.91	0.2982	312.74
21	29,7603	2.99962	32.77	0.2736	9.54	0.2913	313.76
22	30,3078	2.94667	222.03	0.2854	67.46	0.3038	301.19
23	31.4660	2.84080	125.87	0.5371	71.97	0.5717	160.49
24	32.3054	2.76888	98.55	0.2002	21.00	0.2131	431.51
25	32,4785	2.75451	363.46	0.4069	157.43	0.4331	212.38
26	33.1981	2.69643	37.54	0.2403	9.60	0.2558	360.31
27	33 7446	2.65401	15.05	0.5057	8.10	0.5383	171.46
28	34.3283	2.61020	55.64	0.1955	11.58	0.2081	444.20
29	35.0200	2.56021	21.77	0.6046	14.01	0.6435	143.92
30	35,9880	2.49354	133.13	0.2751	3898	0.2928	317.16
31	38,4256	2.34077	142.45	0.6826	103.50	0.7266	128.73
32	40.2911	2.23659	56.34	0.4183	25.09	0.4453	211.28
33	40.8969	2.20485	33.86	0.3473	12.52	0.3697	254.95
34	42.6047	2.12034	130.78	0.2718	59.44	0.4545	327.66
35	43,7327	2.06823	39.36	0.5339	22.37	0.5684	167.46
36	44 8088	2.02103	29.53	0.2009	6.31	0.2138	446.84
37	53.9562	1.69800	23.47	0.6255	15.68	0.6680	148.86

Рамановские спектры для трех порций формы показаны на фиг. 30 и 31.

И XRPD, и рамановские спектры, полученные для различных порций продукта формы F, совпадают.

Изображения трех порций формы F, полученные методом сканирующей электронной микроскопии (SEM), показаны на фиг. 32-50. SEM изображения указанных образцов получали с применением сканирующего электронного микроскопа JEOL JSM 5500 LV, работающего при 30 кВ в низком вакууме (30 Па) в обратно-рассеянных электронах.

Анализ формы F методами FT-ИК, ДСК, ТГА, EGA.

На фиг. 51 показан FT-ИК спектр формы F, список пиков соответствующих полос приведен в табл. 16.

- 20 031348

Таблица 16

Положение	Интенсивность
502	50.668
514	59.193
538	66 311
554	48.279
586	76.021
623	60.523
635	58.506
675	73.819
688	65.213
711	63.330
752	53.517
783	68.207
808	55.605
826	52.413
872	72.360
908	81.158
928	78.947
948	62.908
953	63.041
989	78.973
1020	62.785
1067	55.907
1088	52.453
1102	46.426
1136	35.517
1186	50.232
1199	50.943
1228	75.847
1266	64.974
1300	44.572
1307	44.644
1351	62.003
1396	78.685
1472	75.504
1525	78.318
1637	36.877
1735	80.927
1771	48.478
1783	51.962

2898	88.274
2972	84.793
3017	86.781
3051	88.751
3156	84.061

ДСК профиль формы F изображен на фиг. 52. ДСК профиль содержит экзотермический пик примерно при 184°С (начало при 175°С), связанный с разложением образца.

ТГА-профиль (термогравиметрический анализ) формы F, представленный на фиг. 53, показывает заметную потерю веса после примерно 160°С, связанную с разложением образца. Это дополнительно подтверждается анализом выделяемого газа (EGA), результаты которого показаны на фиг. 54. EGA доказывает, что событие, наблюдаемое в ТГА анализе, вызвано потерей продуктов разложения (например, диоксида углерода, диоксида серы и т.д.).

Анализ формы F методом динамической сорбции паров (DVS).

Кинетические измерения поглощения влаги проводили при 25 °С и при следующих целевых значения относительной влажности (о.в.%):

от 40 до 90% о.в.;

от 90 до 0% о.в.;

от 0 до 90% о.в.;

от 90 до 0% о.в.

Полученные результаты приведены на фиг. 55, где красная линия показывает процентные изменения массы как функцию от времени, в то время как синяя линия показывает изменения относительной влажности как функцию от времени.

DVS изотермы показаны на фиг. 56, где красная линия отображает первую фазу сорбции, синяя линия отображает первую фазу десорбции, зеленая линия отображает вторую фазу сорбции, и розовая линия отображает вторую фазу десорбции.

DVS анализ показывает, что форма F устойчива примерно при 50% о.в. и что при 90% о.в. образец

- 21 031348 демонстрирует рост веса более 50% вес./вес. После этого события образец высвобождается и поглощает воду обратимо.

Устойчивость формы F.

Образец становится вязкой жидкостью после 1 дня при 25°С и 60% о.в. и после 1 дня при 60°С и 75% о.в.

Гигроскопичность формы F.

Гигроскопичность вычисляли по следующему уравнению:

% изменения веса = [(W2-W1)/W1]-100, где W1 - вес образца при начале эксперимента; и

W2 - вес образца при 25°С и 80% о.в. в первом цикле абсорбции.

Полученные результаты показывают, что образец очень гигроскопичен, рост массы составляет более 15% и становится вязкой жидкостью при высокой влажности. Аналитические методики, применяющиеся для характеристики продуктов, описаны ниже.

Аналитические методики.

Метод ВЭЖХ.

Колонка: ZORBAX Eclipse XDB-C18 (150x4.6 мм, 5 мкм); температура колонки 25°С.

Подвижная фаза: А: 0.05М раствор натрия дигидроортофосфата дигидрата; В: ацетонитрил. Градиент

Время (мин)	%А	%В
0	95	5
10	5	95
10.2	95	5
12	95	5

Поток: 1.0 мл/мин.

Детектор: УФ DAD@220 нм.

Полученные кристаллические продукты (2S,3S,5R)-3-метил-3-((3-метил-1Н-1,2,3-триазол-3-иум-1ил)метил)-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат 4,4-диоксида - форма А, В, С, D, Е и F имеют ВЭЖХ чистоту по меньшей мере 98%, предпочтительно по меньшей мере 99%, предпочтительно по меньшей мере 99.5%, предпочтительно по меньшей мере 99.6%, предпочтительно по меньшей мере 99.7%, предпочтительно по меньшей мере 99.8%, предпочтительно по меньшей мере 99.9%.

ЯМР.

Образцы для ЯМР-анализа готовили полным растворением подходящего количества вещества примерно в 0.75 мл растворителя для ЯМР (ДМСОД₆).

'Н ЯМР спектры записывали при 25°С с применением Varian INOVA 400МГц ЯМР спектрометра, оснащенного датчиком Varian ATB.

Применяли различное число сканов (16-256), используя стандартные параметры накопления. Задержка импульса составляла 10 с при количественных измерениях методом ЯМР. При обработке спектров применяли соответствующую настройку фазы и коррекцию базовой линии.

XRPD.

XRPD спектры записывали в режиме пропускания на аналитическом приборе X'pert Pro с детектором X'celerator, применяя стандартный метод Aptuit. Полученные данные обрабатывали с помощью программы HighScore Plus. Параметры прибора приведены ниже.

- 22 031348

Параметры прибора	Значение
2-тета диапазон	2-45
Размер шага Г°2-тета1	0.0170
Время на шаг [сек1	60.7285 сек
Длина волны [нм]	0 154060 (Си K-Alphal)
Вращение [Да/Нет]	Да
Щель расходимости/ антирассеиватель	Фиксированная маска для падающего луча 10мм; щель расходимости 1/2, щель антирассеивателя 1/2 для падающего луча; 1/32 для отраженного
Рентгеновской зеркало	Падающ.луч Си W/Si фокусир. MPD, Угол приема 0.8°, Длина 55.3 мм
Температура	Комнатная температура
Отн. влажность [% о в ]	Окружающей среды
Фиксированная щель	0.02 рад фиксированная щель Seller на падающем и отраженном луче
Монохроматор	Нет
Тип детектора	X’celerator (активная длина 2 122 2-тета градусов), режим сканирования
Держатель образца	Держатель образца для пропускания. Применялась вставка для сохранения толщины 1 мм, диаметра 5 мм
Конфигурация	Пропускание
Напряжение/сила тока генератора	40 кВ/40 мА

Оптическая микроскопия.

Анализы методом оптической микроскопии проводили на микроскопе Leica DM, оснащенном двойным поляризатором и цифровой камерой. Параметры, применявшиеся в данном методе, приведены ниже

	Значение
Поляризованный свет [Да/Нет1	Да
Увеличение [окуляр]	10х
Объектив	Обычно 5х, 10х, 20х, 40х
Фильтр	Наилучший фильтр для оптимизации изображения

ТГА и ДСК.

ТГА анализы проводили на приборах ТА Q5000 или Mettler Toledo Star System (анализ формы F). ДСК анализы проводили на приборах ТА Q2000 MDSC или DSC 200 F3 Maia (анализ формы F). Детали методики проведения ДСК и ТГ А анализа приведены ниже

ТГА
Параметры прибора	Значение
Продувочный газ баланса [мл/мин1	10
Продувочный газ образца Гмл/мин]	25
Газ	Азот
Скорость изменения температуры	Обычно от комнатной температуры до 250/3 50°С со скоростью 10°С/мин (прибор ТА Q5000); или до 450°С со скоростью 10°К/мин (Mettler Toledo Star System)
Типичное количество образца Гмг]	Обычно от 2 мг до 20 мг
Ячейка fPt/All	Герметично закрытая А1 (пробитая)
ДСК
Параметры прибора	Значение
Охлаждение ГВкл/Выкл]	Вкл
Газ	Азот
Скорость изменения температуры	От 0°С до ~160°С со скоростью 10°С/мин (ТА Q2000 MDSC), или от 25°С до ~35О°С со скоростью 10°К/мин (DSC 200 F3 Maia).
Типичное количество образца Гмг]	Обычно от 0.5 мг до 2.5 мг
Ячейка	Негерметичная А1 (ТА Q2000 MDSC); или герметично закрытая Al ((DSC 200 F3 Maia)

Рамановская спектроскопия.

Анализы методом рамановской спектроскопии проводили с применением прибора Keiser Optical Systems RXN1 MicroRaman с микроскопом Leica и цифровой камерой.

- 23 031348

Параметры прибора	Значение
Датчик	N
Объектив	50х, 50х LWD, 10х
Экспозиция [сек]	Обычно 0.5 - 1
Мощность лазера [мВт]	50 - 400
Автофокус [Да/Нет]	Обычно Нет
Накопление	Обычно 10
Фильтр космических лучей [Да/Нет]	Да
Калибровка интенсивности [Да/Нет]	Да
Темный субстрат [Да/Нет]	Да

FT-ИК.

FT-ИК анализы проводили на FT-ИК приборе Thermo Nicolet Nexus 470 или Thermo Nicolet 6700 (анализ формы F).

Параметры прибора	Значение
Вспомогательная аппаратура	Нарушенное полное внутренне отражение (HTIBO)-ZnSe кристалл
Число сканов	64
Разрешение [см^-1]	4
Усиление	Автоу с иле ние
Детектор	DTGS КВг
Спектральный диапазон [см'¹]	4000 - 650

Распределение размеров частиц.

Анализ распределения размеров частиц методом рассеяния лазерного излучения проводили после разработки метода влажной дисперсии с применением прибора Malvern Mastersizer 2000. Параметры ме тода приведены ниже

Прибор	Malvern Mastersizer 2000
Вспомогательная аппаратура	Hydro2000S+
Параметр	Значение
Скорость перемешивания	1750 об/мин
Дисперсант	0.1% вес/об 8рап85/Циклогексан
Количество образца	Около 100 мг, суспендировано в 5 мл дисперсанта
Модель вычислений	Общие цели - Неупорядоченная
Оптическая модель	Fraunhofer с коэффициентом преломления 1.426 для дисперсанта
Число сканов	15000 фон/ 15000 образец
Снижение потока лазерного излучения [%]	между 5 и 20% (обычно 8-12%)

Эксперименты проводили с применением следующей методики подготовки образцов:

(i) 100 мг вещества отвешивали в виалу объемом 10 мл и суспендировали в 5 мл дисперсанта;

(ii) после того как вещество хорошо смачивалось, суспензию помещали в ячейку и виалу промывали дополнительными 5 мл дисперсанта;

(iii) немедленно проводили исследование суспензии.

EGA.

Анализ выделяемого газа (EGA) проводили с газом, выделяющимся в ходе ТГ А анализа.

Анализ методом динамической сорбции паров (DVS).

Параметры прибора.

Диапазон температур: 20-40°С (стандарт).

Максимальная масса образца: (прибор для низкой/высокой массы) 1 г/4 г.

Изменение массы: +/- 150 мг.

Устойчивость (24 ч, 25°С и 0% о.в.) <5мкг.

Разрешение по массе: +/- 0.1 мкг.

Диапазон влажности: 0-98% о.в.

Точность определения о.в.: +/- 1% о.в.

Стабильность температуры: +/- 0.1°С.

Обычная скорость потока газа: 100/200 см³/мин.

Ячейка для образца: 40 мм ширина х 50 мм глубина х 50 мм высота.

Объем резервуара: вместимость резервуара 100 мл.

- 24 031348

Нагревательная система: Peltier + картриджи.

Кинетические измерения поглощения влаги проводили при 25°С и в следующих диапазонах относительной влажности (о.в.%):

от 40 до 90% о.в.;

от 90до 0% о.в.;

от 0 до 90% о.в.;

от 90 до 0% о.в.

Эксперимент проводили на 10-15 мг образца и критерий равновесия принимали за dm/dt<0.002% вес./вес. за 10 мин, с максимальным временем шага 240 мин.

Тесты на устойчивость.

Образец помещали на держатель для образца и хранили в следующих условиях: 25°С и 60% о.в. в течение 7 дней 60°С и 75% о.в. в течение 3 дней.

После теста образцы исследовали методом XRPD.

Г игроскопичность.

Г игроскопичность образца определяли с помощью метода, описанного в академической статье Efficient throughput method for hygroscopicity classification of an active and inactive pharmaceutical ingredients by water vapor sorption analysis V. Murikipudi et al., Pharmaceutical Development and Technology, 2013, 18(2): 348-358.

% изменения веса = [(W2-W1)/W1]-100, где W1 - вес образца в начале эксперимента; и

Критерии классификации.

Негигроскопичный: увеличение массы менее 0.2%;

немного гигроскопичный: увеличение массы менее 2% и больше или равно 0.2%; гигроскопичный: увеличение массы менее 15% и больше или равно 2%;

очень гигроскопичный: увеличение массы больше или равно 15%; и расплывающийся: поглощается количество воды, достаточное для образования жидкости.

Несмотря на то что настоящее изобретение было описано на примере частных иллюстративных вариантов осуществления, следует понимать, что различные модификации, изменения и/или комбинации отличительных черт, описанных в настоящем тексте, будут очевидны квалифицированным специалистам в данной области, без выхода за рамки объема настоящего изобретения, очерченного в формуле изобретения.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Кристаллическое соединение формулы (I)

Формула (I).

2. Кристаллическое соединение по п.1 в форме А, характеризующееся XRPD спектром, содержащим четыре или больше пиков, выбранных из пиков с углами 2θ: 8.82, 12.07, 14.43, 14.92, 16.26, 18.25, 19.06, 19.78, 20.82 и 23.51±0.1 градусов 2θ.

3. Кристаллическое соединение по п.1, имеющее XRPD спектр, практически совпадающий с изображенным на фиг. 1.

4. Кристаллическое соединение по любому из пп.2 или 3, характеризующееся кривой термогравиметрического (ТГА) анализа, имеющей эндотермический пик примерно при 163±2°С.

5. Кристаллическое соединение по любому из пп.2 или 3, характеризующееся кривой анализа методом дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), имеющей эндотермический пик примерно при 163±2°С.

6. Кристаллическое соединение по п.1 в форме В, характеризующееся XRPD спектром, содержащим четыре или больше пиков, выбранных из пиков с углами 2θ: 9.37, 10.34, 12.59, 13.17, 15.00, 15.63, 18.51, 19.10, 20.79 и 23.93±0.10 градусов 2θ.

7. Кристаллическое соединение по п.1, имеющее XRPD спектр, практически совпадающий с изображенным на фиг. 2.

8. Кристаллическое соединение по любому из пп.6 или 7, характеризующееся кривой термогравиметрического (ТГА) анализа, имеющей эндотермический пик примерно при 155±2°С.

9. Кристаллическое соединение по любому из пп.6 или 7, характеризующееся кривой анализа мето

- 25 031348 дом дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), имеющей эндотермический пик примерно при 180±2°С.

10. Кристаллическое соединение по п.1 в форме С, характеризующееся XRPD спектром, содержащим четыре или больше пиков, выбранных из пиков с углами 2θ: 9.33, 10.73, 14.85, 15.29, 15.77, 16.16, 18.60, 20.12, 21.00 и 23.22±0.1 градусов 2θ.

11. Кристаллическое соединение по п.1, имеющее XRPD спектр, практически совпадающий с изображенным на фиг. 3 или 20.

12. Кристаллическое соединение по любому из пп.10 или 11, характеризующееся кривой термогравиметрического (ТГА) анализа, имеющей эндотермический пик примерно при 149±2°С.

13. Кристаллическое соединение по любому из пп.10 или 11, характеризующееся кривой анализа методом дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), имеющей эндотермический пик примерно при 185±2°С.

14. Кристаллическое соединение по п.1 в форме D, характеризующееся XRPD спектром, содержащим четыре или больше пиков, выбранных из пиков с углами 2θ: 6.7824, 15.4567, 16.3961, 17.1082, 20.0651, 20.6373, 23.2376, 23.6811, 26.1802 и 32.4753±0.05 градусов 2θ.

15. Кристаллическое соединение по п.1, имеющее XRPD спектр, практически совпадающий с изображенным на фиг. 25.

16. Кристаллическое соединение по п.1 в форме Е, характеризующееся XRPD спектром, содержащим четыре или больше пиков, выбранных из пиков с углами 2θ: 6.8269, 15.0475, 15.6848, 16.4735, 17.1773, 18.4488, 20.6999, 23.3436, 23.8843 и 25.3818±0.05 градусов 2θ.

17. Кристаллическое соединение по п.1, имеющее XRPD спектр, практически совпадающий с изображенным на фиг. 27.

18. Кристаллическое соединение по п.1 в форме F, характеризующееся XRPD спектром, содержащим четыре или больше пиков, выбранных из пиков с углами 2θ: 12.7398, 15.3615, 15.9547, 16.4290, 18.1207, 20.4870, 22.8548, 23.2204, 27.0457, 27.6934 и 32.4785±0.05 градусов 2θ.

19. Кристаллическое соединение по п.1, имеющее XRPD спектр, практически совпадающий с изображенным на фиг. 29.

20. Кристаллическое соединение по любому из пп.18 или 19, характеризующееся кривой термогравиметрического (ТГА) анализа, имеющей эндотермический пик примерно при 160°С.

21. Кристаллическое соединение по любому из пп.18 или 19, характеризующееся ДСК профилем, имеющим экзотермический пик примерно при 184°С.

22. Способ получения кристаллического соединения формулы (I) /~-о· О

Формула (I), включающий следующие стадии:

23. Способ по п.22, в котором аморфное соединение формулы (I) растворяют в растворителе или смеси растворителей, в которых аморфное соединение формулы (I) имеет растворимость при 20°С более 200 мг/мл.

24. Способ по п.23, в котором растворитель или смесь растворителей выбраны из воды, метанола, этанола, 1-пропанола, диметилсульфоксида, Ν,Ν-диметилформамида и их смесей.

25. Способ по п.23 или 24, включающий стадию добавления в состав антирастворителя, в котором аморфное соединение формулы (I) имеет растворимость при 20°С менее 50 мг/мл.

26. Способ по п.25, в котором антирастворитель выбран из ацетона, этилацетата, метил-третбутилового эфира, гептана, 2-пропанола, изопропилацетата, диизопропилового эфира, метилэтилкетона, тетрагидрофурана, анизола, трет-бутилацетата и их смесей.

27. Способ по п.22, в котором аморфное соединение формулы (I) суспендируют в растворителе или смеси растворителей.

28. Способ по любому из пп. 22-27, в котором в состав добавляют затравочный кристалл.

29. Способ по п.28, в котором затравочный кристалл представляет собой кристаллическую затравку соединения формулы (I).

30. Способ по любому из пп. 22-29, в котором температуру состава понижают после образования состава.

31. Кристаллическое соединение формулы (I)

- 26 031348 о

Формула (I) получаемое способом по любому из пп.22-30.

32. Кристаллическое соединение формулы (I) по любому из пп.1-21 и 31, содержащее более 90% единственного кристаллического полиморфа данного соединения.

33. Кристаллическое соединение формулы (I) по любому из пп.1-21 и 31, имеющее химическую чистоту по меньшей мере 95 вес.%.

34. Фармацевтическая композиция, содержащая кристаллическое соединение формулы (I) по любому из пп.1-21 и 31-33 для применения в лечении бактериальной инфекции.

35. Фармацевтическая композиция по п.34, дополнительно содержащая антибиотик, выбранный из группы, включающей пиперациллин, цефепим, цефтриаксон, меропенем, азтреонам.

36. Способ лечения бактериальной инфекции, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.34 или 35.

37. Способ лечения бактериальной инфекции, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.34 с терапевтически эффективным количеством антибиотика, выбранного из группы, включающей пиперациллин, цефепим, цефтриаксон, меропенем, азтреонам.

38. Способ приготовления фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I), где способ включает стадию растворения или диспергирования кристаллического соединения формулы (I) в жидком носителе.

39. Способ по п.38, где композиция дополнительно содержит антибиотик, выбранный из группы, включающей пиперациллин, цефепим, цефтриаксон, меропенем, азтреонам.

- 27 031348

Фиг. 3

- 28 031348

Sample Allecra 2A Size 2 9960 mg

Method Ramp Comment Allecra 2A

File Z 030CT2013 ALLECRA 2A 10K 002

DSC Operator Stefano Cagliero

Run Date 03 Oct 2013 1 5 49

Instillment DSC Q2000 V24 4 Build 116

Фиг. 5

Sample Allecra 1В Size 3 3910 mg

Method Ramp Comment Allecra 1B

DSC

File Z 03ОСТ201Э ALLECRA 1B 10KOO1

Operator Stefano Cagliero

Run Date 05 Oct 2013 15 22

Instrument DSC 02000 V24 4 Build 116

Фиг. 6

- 29 031348

Фиг. 7

Фиг. 8

- 30 031348

Фиг. 9

Sample Allecra IB ΤΘΑ Fite Z \07CCT2013_ALLECRA 1B 10K 001 Size 4 4380 mg Operator Stefano Cagitero Method Ramp Run Date 07-0ct-20i3 15 22 Instrument TGAQ5000 V3 10 Build 258

Вес (%)

Температура (°C)

Фиг. 10

- 31 031348

Фиг. 11

Фиг. 12

Фиг. 13

- 32 031348

Фиг. 14

Фиг. 15

Интенсивность 1 Р СЕ X о Ξ Интенсивность Г ..... 03 ⁵ S .Sils о · ·“ S ’ ’ ^Г * ' Т i 1 . _Л' , i & :

Фиг. 16

- 33 031348

ф , s 1 х^г . ΞΓ '! О ’ Е ^! О с. Волновое число (см ¹У ф · » S к ' ! X ‘ г Ф * » 3О № ' , Е. ' ^s О Ϊ. , с ⁰ , Волновое число (см¹) ? ф . , * · S * з X ί * ф 3 3 ^с б/ ^: Q ⁴ ? ‘ ^с : ‘ . Волновое число (см¹) ф 1 s > х , : * ^? ф ¹ 3' * о Е ⁰ < о ^и‘ „ с =· * - Волновое число (см¹)

Фиг. 17

-А . - 1 i •л л 3 о 3 о с I 0 со Ξ X L 3 ’’ с . X ¹ 0 <'* s ф - н С '>- X ¹ S ** ' е-.г ---------------- Сдвиг (см ) ----------- бдвиг^м^) *“ ‘ - * ‘ . * Л х. 5 -0 » — Б ” ,. □ -JX о , . * ' О с X ' ⁰ “ СО , = X 3 ? J ' ^т G , - » с - , X ь _t · и ф г· , ' ® - ·· с ..._ . X _? . - =; - - - - , _г( Ч К Ц. Сдвиг (см ) Сдвиг (см )

Фиг. 18

са ? ф 1 .· й ... S X X ф 3 Ф * S ^г X <= ф о Я £ о о . С Волновое число (см¹) о ^Βϊ с “ Волновое число“(см') “ “ ф Ξ ф / 3 X I ф 6 Ф 3 * 3 ’ о о с с о о , с с . Волновое числовом') ’ ’ ' Волновое число (см’) ’

Фиг. 19

- 34 031348

Импульсы

«ою- 100 GO· ί I 50W- ί ξ , , fl ί I U J IL |j dΙ₍ ι;

ю го зо 40

Положение [°2Тета] (Медь (Си))

Фиг. 20

Фиг. 22

- 35 031348

Фиг. 23

Нормализованная интенсивность

Itaaz. >-Мк‘^л ВйЛыМИкИВ а'зОм ----- 51461-¹--- i '-л· -λλ*·₽α а f*SCSUt ------ : J к JuiP-¹ J МиЖ ?1 3 i_ ί i 3 £ £ : ??·

2тета (град)

Фиг. 25

- 36 031348

Фиг. 26

2тета (град)

Фиг. 27

Фиг. 28

Фиг. 29

- 37 031348

Интенсивность

Фиг. 30

Фиг. 32

- 38 031348

Фиг. 33

Фиг. 34

Фиг. 35

- 39 031348

Фиг. 36

Фиг. 37

Фиг. 38

- 40 031348

Фиг. 39

Фиг. 40

Фиг. 41

- 41 031348

Фиг. 42

Фиг. 43

Фиг. 44

- 42 031348

Фиг. 45

Фиг. 46

Фиг. 47

- 43 031348

Фиг. 48

Фиг. 49

Фиг. 50

- 44 031348

ДСК/(мВт/мг)

Пик комплекса

Пик: 183.8°С •4

Начало: 175.0°С о

-10 ΐ

I

100 linrkineid; МГЙС ЖЙ ΐΖύΓΖ JU Ζ: Й5 L Fl* s VPdM dsSdRAr> IWT KT £Fniu4,*£4C 7ί;: P^Hit kl'iHOy .

ОМ