EA029410B1 - Пролекарство адреномедуллина на основе полиэтиленгликоля и его применение - Google Patents

Пролекарство адреномедуллина на основе полиэтиленгликоля и его применение Download PDF

Info

Publication number
EA029410B1
EA029410B1 EA201600495A EA201600495A EA029410B1 EA 029410 B1 EA029410 B1 EA 029410B1 EA 201600495 A EA201600495 A EA 201600495A EA 201600495 A EA201600495 A EA 201600495A EA 029410 B1 EA029410 B1 EA 029410B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
acute
pulmonary
compounds
ards
chronic
Prior art date
Application number
EA201600495A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201600495A1 (ru
Inventor
Инго Фламме
Иоганнес Кёбберлинг
Ханс-Георг Лерхен
Нильс Грибенов
Рудольф Шоэ-Лоп
Свен Виттрок
Мария Кёлльнбергер
Франк Вундер
Горден Редлих
Андреас Кнорр
Джули Марли
Айан Притчард
Original Assignee
Байер Фарма Акциенгезельшафт
Байер Интеллектчуал Проперти Гмбх
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Байер Фарма Акциенгезельшафт, Байер Интеллектчуал Проперти Гмбх filed Critical Байер Фарма Акциенгезельшафт
Publication of EA201600495A1 publication Critical patent/EA201600495A1/ru
Publication of EA029410B1 publication Critical patent/EA029410B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/36—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/40—2,5-Pyrrolidine-diones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/23—Calcitonins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A61K9/0075—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy for inhalation via a dry powder inhaler [DPI], e.g. comprising micronized drug mixed with lactose carrier particles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy
    • A61K9/0078—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy for inhalation via a nebulizer such as a jet nebulizer, ultrasonic nebulizer, e.g. in the form of aqueous drug solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Obesity (AREA)

Abstract

Изобретение относится к новому пролекарству адреномедуллина на основе полиетиленгликоля (ПЭГ), к способам его получения, к его применению для лечения и/или профилактики заболеваний и к его применению для получения лекарственных средств для лечения и/или профилактики заболеваний, особенно сердечно-сосудистых, отечных и/или воспалительных заболеваний.

Description

Изобретение относится к новому пролекарству адреномедуллина на основе полиетиленгликоля (ПЭГ), к способам его получения, к его применению для лечения и/или профилактики заболеваний и к его применению для получения лекарственных средств для лечения и/или профилактики заболеваний, особенно сердечно-сосудистых, отечных и/или воспалительных заболеваний.
029410
Изобретение относится к новому пролекарству адреномедуллина на основе полиетиленгликоля (ПЭГ), к способам его получения, к его применению для лечения и/или профилактики заболеваний, и к его применению для получения лекарственных средств для лечения и/или профилактики заболеваний, особенно сердечнососудистых, отечных и/или воспалительных заболеваний.
52-аминокислотный пептидный гормон адреномедуллин (ΑΌΜ) вырабатывается в надпочечникам, легких, почках, сердечной мышце и других органах. Уровни в плазме ΑΌΜ находятся в нижнем пикомолярном диапазоне. ΑΌΜ является членом кальцитонина ген-связанного пептида (СОКР) семьи пептидов и как таковой связывается с гетеродимерным рецептором О-белка, который состоит из СКЬК и КАМР 2 или 3 (рецептор подобный рецептору кальцитонина и рецептор, модифицирующий активность белка 2 или 3).
Активация рецептора ΑΌΜ приводит к внутриклеточному повышению аденозин-3',5'-циклического монофосфата (цАМФ) в клетках, несущих рецептор. Рецепторы ΑΌΜ присутствуют на различных типах клеток в практически всех органах, включая эндотелиальные клетки. ΑΌΜ, как полагают, метаболизируется нейтральной эндопептидазой и преимущественно очищается в легких, где ΑΌΜ-рецепторы экспрессируются на высоком уровне [см. ОФЪоик С., Оаскот К., Όιιη\\ΌΓΐ1ι Ρτίΐζ-8ίχ К., Сагоп Κ.Μ., Μοί Еийостшо1 21(4), 783-796 (2007)].
Экспериментальные данные из литературы показывают, что ΑΌΜ участвует в различных функциональных ролях, которые включают, в частности, регулирование кровяного давления, бронходилатацию, функции почек, секрецию гормона, рост клеток, дифференцировку, нейротрансмиссию, и модуляцию иммунной реакции. Кроме того, ΑΌΜ играет важную роль в качестве аутокринного фактора во время: пролиферации и регенерации эндотелиальных клеток [см. Оатша Μ.Α., Μа^ιίи-8аиΐата^ίа 8., йе Раксиа1Тегека В., Каток Α., 1и11ап Μ., Μа^ιίпеζ Α., Ехрег! Θρίη ТЬег Тагде!к, 10(2), 303-317 (2006)].
Существует обширная совокупность доказательств из литературы, что показывает, что ΑΌΜ является необходимым условием для функции невредимости эндотелиального барьера и, что введение ΑΌΜ сверх физиологическим уровням оказывает сильное противоотечное и противовоспалительное действие при различных воспалительных заболеваниях у экспериментальных животных, включая сепсис, острое повреждение легких и воспаление кишечника [см. ТеттекГе1й-\7о11Ъгиск В., Носке А.С., 8иЬогр Ν., Ηίρреи5Йе1 8., ТЬготЪ Наеток!; 98, 944-951 (2007)].
Клинические испытания ΑΌΜ до сих пор проводились при сердечно-сосудистых показаниях с измеримой гемодинамической конечной точкой, такой как легочная гипертензия, гипертензия, сердечная недостаточность и острый инфаркт миокарда. ΑΌΜ продемонстрировал гемодинамическое действие в несколько исследованиях у пациентов, страдающих от вышеупомянутых состояний. Тем не менее, эффект был только краткосрочным и сразу заканчивался после окончания введения. Эти выводы хорошо коррелируют с известным фармакокинетическим профилем ΑΌΜ. Фармакодинамическое действие включало, среди прочего, понижение системного и легочного артериального давления и увеличение минутного объема сердца [ТтоидИои Р.\7.. Ье^к Ь.К., Уаий1е Т.О., КюЬатйк Α.Μ., №сЬо11к Μ.Ο., Нурейеикюи, 36(4), 588-93 (2000); №щауа N.. Каидата К., Рерййек, 25(11), 2013-8 (2004); Ка!аока Υ., Μ^уаζак^ 8., Уакийа 8., №щауа Ν., ШдисЫ Т., Υатайа Ν., Μο^^^ I., Кататита Α., Оо1 К., Μ^уаΐаке К., Тото1ке Н., Каидата К., 1 Сагйюуакс РЬагтасо1, 56(4), 413-9 (2010)].
Таким образом, на основе полученных из обилия экспериментальных данных при клинических испытаниях с животными и первых клинических испытаниях с повышением человеческого ΑΌΜ дя сверхфизиологических уровней может рассматриваться как целевой механизм для лечения различных болезненных состояний у людей и животных. Тем не менее, основные ограничения применения ΑΌΜ в качестве терапевтического средства являются неудобной применимостью непрерывной инфузионной терапии, что исключает возможность его использования для большинства потенциальных показаний и потенциально ограниченных пределов безопасности по отношению к гипотонии, которые могут возникнуть в результате болюсных введений ΑΌΜ.
Заданием настоящего изобретения является обеспечение новых соединений, которые могут быть использованы для лечения заболеваний, в частности, сердечно-сосудистых, отечных и воспалительных заболеваний.
Многие терапевтически активные пептиды или белки страдают от высокого клиренса в естественных условиях. Существуют несколько подходов для формирования инъекционных депо таких препаратов, которые предусматривают использование макромолекул.
Полимерные матрицы, которые содержат молекулу лекарства в не ковалентно-связанном состоянии являются хорошо известными. Они также могут быть введены, как гидрогели, микрочастицы или мицеллы. Кинетики высвобождения таких лекарственных средств могут быть весьма ненадежными с высокой изменчивостью среди пациентов. Производство таких полимеров может нанести вред чувствительному веществу лекарства или может подвергаться побочным реакциям с полимером во время его деградации (Ό.Η. Ьее е! а1., 1. Сои!г. Ке1., 2003, 92, 291-299).
Постоянное ПЭГилирование пептидов или белков для повышения их растворимости, снижения иммуногенности и увеличения периода полураспада и за счет снижения почечного клиренса является хорошо известной концепцией с начала 1980-х гг. (СаЬсеО Р.,Уетоиеке Ρ.Μ., Αйν. Огид ОеЬу. Кеу. 2003, 55,
- 1 029410
1261-1277). Для нескольких препаратов это использовалось с успехом, но с большим количеством примеров ПЭГилирование снижает эффективность лекарственного вещества до такой степени, что это понятие больше не является пригодным (Т. Ре1ед-Зйи1тап е! а1., 1. Меб. Сйет., 2004, 47, 4897-4904).
Подходящей альтернативой являются пролекарства на основе полимера. Нынешние определения для пролекарств в соответствии с МСТПХ (ШРАС) утверждены следующими терминами (1п1егпа0опа1 υηίοη οί Риге апб Аррйеб СйетМгу апб 1п!етпайопа1 Ипюи οί ВюсйетМгу: ОЬОЗЗАКУ ОР ТЕРМ8 υδΕΌ в МЕИ1СШАЬ СНЕМ1ЗТКУ (Кесоттепбайопк 1998); в Риге & Арр1. Сйет. Уо1 70, № 5, 1998, р. 1129-1143):
Пролекарство
Пролекарство является любым соединением, которое подвергается биотрансформации перед проявлением его фармакологических эффектов. Пролекарства, таким образом, можно рассматривать как лекарственные средства, содержащие специализированные нетоксичные защитные группы, используемые переходным образом для изменения или устранения нежелательных свойств в исходной молекуле.
Пролекарство, связанное с носителем (пролекарство носитель): связанное с носителем пролекарство является пролекарством, которое содержит временную связь заданного активного вещества с переходной группой носителя, которая производит улучшенные физико-химические или фармакокинетические свойства и которые могут быть легко удалены в естественных условиях, как правило, путем гидролитического расщепления.
Каскадное пролекарство
Каскадное пролекарство является пролекарством, для которого расщепление группы носителя становится эффективным только после демаскирования активирующей группы.
Некоторые примеры пролекарств носителя на основе ПЭГ существуют, большинство из них с необходимостью ферментативной активации линкера между активным лекарственным средством и носителем, в основном, инициированной посредством ферментативного гидролиза. Поскольку сложные эфиры расщепляются очень легко и непредсказуемо в естественных условиях, прямые эфирные линкеры для лекарства носителя имеют ограничения к их применимости (1. Каийо е! а1., №!ите Ве\ае\У5 Эгид б18соуету, 2008, 7 255-270).
Часто используемые альтернативные подходы представляют собой каскадные линкеры, присоединенные к функциональности амина в пептиде или белке. В каскадных линкерах маскирующая группа должна быть удалена, как стадия ограничения скорости в каскаде. Это активизирует разложение линкера во втором положении, чтобы освободить пептид или белок. Обычно маскирующая группа может быть удалена с помощью ферментативного механизма (К.В. Огеепуа1б е! а1. в ШО 2002/089789, ОгеепуаМ, е! а1., ί. Меб. Сйет. 1999, 42, 3657-3667, Р.М.Н. ИеОтоо! е! а1. в ШО 2002/083180 и ШО 2004/043493, и И. Зйайа! е! а1. в ШО 2004/019993).
Альтернатива, которая не полагается на ферментативную активацию, является концепцией У. Херсель и соавт. в ШО 2005/099768, в их подходе маскирующая группа на феноле удаляется чисто рНзависимым образом путем атаки внутреннего нуклеофила. Это активизирует линкер для дальнейшего разложения.
Как отмечено У. Херселем и соавт. в ШО 2005/099768, "Недостаток в вышеуказанных системах пролекарств, описанный Гринвальдом, ДеГрутом и Шабатом является высвобождением потенциально токсичных ароматических малых молекул боковых продуктов, таких как хинонметиды, после расщепления временной связи. Потенциально токсичные вещества высвобождаются в 1:1 стехиометрии с лекарством и могут предполагать высокие концентрации в естественных условиях". Та же проблема также относится и к системе по У. Херсель и соавт.
Для небольших органических молекул существует множество различных подходов пролекарственных (1. Каийо е! а1., №Ииге Кеу1еУ8 Эгид б18соуету, 2008, 7 255-270). Подход, используемый У. Херселем и соавт. как механизм высвобождения для их маскировочной группы был использован в качестве пролекарственного подхода для фенольных групп малых молекул, начиная с конца 1980-х годов. (Ш.8. Заай в ЕР 0296 811 и Ш.З. Заай е! а1., ί. Меб. Сйет. 1990, Уо1. 33, № 1, р. 97-101).
Альтернативная пролекарственная система на основе амина базируется на медленном гидролизе бис-гидроксиэтил глицина в качестве каскадного пролекарства. Гидрокси группы бис-гидроксиэтил глицина замаскированы с помощью сложных эфиров, которые склонны к гидролизу эстераз (К. Сгеепуа1б е! а1., ί. Меб. Сйет. 2004, 47, 726-734 и И. Уе!!ет е! а1. в ШО 2006/136586).
Меченые производные адреномедуллина для использования в качестве изображения, а также терапевтического агента, являются известными (1. Иершк е! а1. в СА 2567478 и ШО 2008/138141). В этих производных АИМ комплексообразующая клетка, как молекулярная структура, способная связывать радиоактивные изотопы была присоединена к Ν-концу АИМ непосредственным образом или через спейсерсную область потенциально также короткие ПЭГ спейсеры. Диагностическая или терапевтическая ценность этих лекарств возникает из целевой доставки радиоактивной молекулы.
В отличие от пролекарственных подходов, перечисленных выше, которые все основываются на маскировке функциональных аминов, настоящее изобретение основано на маскировке фенольной группы тирозина в АИМ. Используется связанное с носителем пролекарство, основанное на поддержке внут- 2 029410
реннего нуклеофила расщепления карбамата на этой фенольной группе. Ключевым преимуществом других классов пролекарств упомянутых выше является токсикологическая безвредность линкерного продукта разложения, циклической мочевины, прочно прикрепленной к носителю. Кроме того, разложение пролекарства не зависит от ферментативных механизмов, которые могут вызвать высокую изменчивость кинетики расщепления среди пациентов. Механизм расщепления исключительно зависит от рН в качестве внутреннего амина, который протонируется когда кислый рН активируется, когда более высокий (нейтральный) рН действует в качестве нуклеофила, атакующего фенольный карбамат на основе тирозина.
В контексте настоящего изобретения, соединения описаны как те, которые действуют как ΆΌΜпролекарства медленного высвобождения с расширенной продолжительностью фармакологического действия по сравнению с ΆΌΜ, и которые на основании этого конкретного механизма действия - после парентерального введения - в естественных условиях демонстрируют устойчивые анти-воспалительные и гемодинамические эффекты, такие как стабилизация функции эндотелиального барьера, и снижение артериального давления, соответственно.
Настоящее изобретение обеспечивает соединения формулы
где
η представляет собой число 0, 1, 2 или 3,
К1 представляет собой водород, метил, этил, н-пропил или изопропил,
К2 представляет собой линейный или разветвленный ПЭГ 20кДа-80кДа, эндкепированный метоксигруппой,
и их соли, их сольваты и их сольваты солей.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением представляют собой соединения формулы (I) и их соли, их сольваты и их сольваты солей, соединения которые охватывает формула (I) и являются соединениями формул, которые указаны ниже, и их солями, сольватами и сольватами солей, и соединения которые охватывает формула (I) и которые указаны ниже в качестве рабочих примеров и их соли, сольваты и сольваты солей, если соединения, которые охватывает формула (I) и которые указаны ниже не являются еще солями, сольватами, и сольватами солей.
В зависимости от их структуры соединения в соответствии с настоящим изобретением могут существовать в стереоизомерных формах (энантиомеры, диастереомеры). Таким образом, изобретение охватывает энантиомеры или диастереомеры и их особые смеси. Стереоизомерно однородные компоненты могут быть выделены известным способом из таких смесей энантиомеров и/или диастереомеров.
Если соединения в соответствии с настоящим изобретением могут существовать в таутомерных формах, настоящее изобретение охватывает все таутомерные формы.
В контексте настоящего изобретения предпочтительными солями являются физиологически приемлемые соли соединений в соответствии с настоящим изобретением. Также включены соли, которые не подходят как таковые для фармацевтической промышленности, но, например, могут быть использованы для выделения или очистки соединений в соответствии с настоящим изобретением.
Физиологически приемлемые соли соединений в соответствии с настоящим изобретением включают кислотно-аддитивные соли минеральных кислот, карбоновые кислоты и сульфоновые кислоты, например соли соляной кислоты, бромисто-водородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, толуолсульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, нафталиндисульфоновой кислоты, уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты, пропионовой кислоты, молочной кислоты, винной кислоты, малеиновой кислоты, лимонной кислоты, фумаровой кислоты, малеиновой кислоты и бензойной кислоты.
Физиологически приемлемые соли соединений в соответствии с настоящим изобретением также включают соли стандартных оснований, например и предпочтительно соли щелочных металлов (например, соли натрия и калия), соли щелочно-земельных металлов (например, соли магния и кальция) и соли аммония, полученные из аммиака или органических аминов, содержащих от 1 до 16 атомов углерода, например и предпочтительно этиламин, триэтиламин, диэтиламин, этилдиизопропиламин, моноэтаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, дициклогексиламин, диметиламиноетанол, прокаин, дибензиламин, Ν-метилморфолин, аргинин, лизин, этилендиамин и Ν-метилпиперидин.
В контексте данного изобретения сольваты относятся к тем формам соединений в соответствии с настоящим изобретением, которые в твердом или жидком состоянии образуют комплекс по координации с молекулами растворителя. Гидраты представляют собой специфическую форму сольватов, где проис- 3 029410
ходит координация с водой. Предпочтительными сольватами в контексте настоящего изобретения являются гидраты.
В контексте данного изобретения эндкепированная указанная в К2 метоксигруппа значит, что полиэтиленгликоль (ПЭГ) является замещенным с помощью метоксигруппы на конце, который не присоединен к кислороду, то есть - ПЭГ 40кДа-ОМе.
Предпочтение отдается соединениям формулы (I), в которой η представляет собой число 1 или 2,
К1 представляет собой водород или метил,
К2 представляет собой линейный ПЭГ 40кДа, эндкепированный метоксигруппой.
Предпочтение также отдается соединениям формулы (I), в которой η представляет собой число 1 или 2,
К1 представляет собой водород,
К2 представляет собой линейный ПЭГ 40кДа, эндкепированный метоксигруппой.
Предпочтение также отдается соединениям формулы (I), в которой η представляет собой число 1.
Предпочтение также отдается соединениям формулы (I), в которой К1 представляет собой водород.
Предпочтение также отдается соединениям формулы (I), в которой атом углерода, к которому заместитель -ΝΗΚ1 присоединен, имеет δ конфигурацию.
Предпочтение также отдается соединениям формулы (I), в которой К2 представляет собой линейный ПЭГ 40кДа, эндкепированный метоксигруппой.
Предпочтение также отдается соединениям формулы (I), которые имеют структуру формулы ^а)
где
η, К1 и К2 каждый имеет значение, указанное выше, и их соли, их сольваты и их сольваты солей.
Конкретные определения радикалов, приведенные в конкретных комбинациях или предпочтительных комбинациях радикалов, независимо от конкретной комбинации указанного радикала, также являются замененными каким-либо из определений радикала других комбинаций.
Особое предпочтение отдается комбинациям двух или более из вышеуказанных предпочтительных диапазонов.
Изобретение также обеспечивает способ получения соединений формулы (I), или их солей, их сольватов или их сольватов солей, где соединения формулы (II)
в которой
η и К1, каждый, имеет значение, указанное выше, подают реакции с соединениями формулы (III)
в которой
К2
имеет значение, указанное выше.
Реакцию обычно осуществляют в инертных растворителях, предпочтительно в диапазоне температур от 0 до 50°С при нормальном давлении.
Инертные растворители представляют собой, например, цитратные буферы, глицингидрохлоридные буферы, фталатовые буферы или ацетатные буферы со значением рН от 3 до 5, предпочтение отдается цитратному буферу со значением рН 4.
Соединение формулы (III) является известным и может быть синтезировано с помощью известных методик из соответствующих исходных соединений.
Соединения формулы (II) являются известными или могут быть получены с помощью реакции с соединениями формулы (IV)
- 4 029410
в которой
η и К1, каждый, имеет значение, указанное выше, на первой стадии с соединением формулы (V)
и на второй стадии с кислотой.
Реакцию на первой стадии, как правило, осуществляют в среде инертных растворителей, в присутствии дегидратирующего реагента, необязательно в присутствии основания, предпочтительно в диапазоне температур от комнатной температуры до 70°С при нормальном давлении.
Инертные растворители представляют собой, например, галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, трихлорметан или 1,2-дихлорэтан, простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран или 1,2-диметоксиэтан, или другие растворители, такие как ацетон, диметилформамид, диметилацетамид, 2-бутанон или ацетонитрил. В равной степени возможно использовать смеси растворителей. Предпочтение отдается диметилформамиду.
Пригодными дегидратирующими реагентами в данном контексте являются, например, карбодиимиды, например, Ν,Ν'-диэтил-, Ν,Ν'-дипропил-, Ν,Ν'-диизопропил, Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид, N-(3диметиламиноизопропил)-К'-этилкарбодиимид гидрохлорид (БИС), ^циклогексилкарбодиимид-^пропилоксиметилполистирол (Ρδ- карбодиимид), или карбонильные соединения, такие как карбонилдиимидазол, или 1,2-оксазолийные соединения, такие как 2-этил-5-фенил-1,2-оксазолий 3-сульфат или 2трет-бутил-5-метилизоксазолий перхлорат, или соединения ациламино, такие как 2-этокси-1этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин, или пропанфосфорный ангидрид, или изобутил хлорформиата, или бис-(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфорилхлорид или бензотриазолилокситри (диметиламино)фосфоний, или О-(бензотриазол-1-ил)-^^^^'-тетраметилуроний гексафторфосфат (НВТИ), бензотриазол-Бил-Νтетраметилуроний тетрафторборат (ТВТИ), 2-(2-оксо-1-(2Н)-пиридил)-1,1,3,3-тетраметилуроний тетрафторборат (ТРТи) или О-(7-азабензотриазол-1-ил)-^^^,^-тетраметилуроний гексафторфосфат (НЛТИ), или 1-гидроксибензотриазол (ΗΟΒί), или бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфоний гексафторфосфат (ВОР), или бензотриазол-1-илокситрис (пирролидино)фосфоний гексафторфосфат (ΡΥΒΟΡ), или Ν-гидроксисукцинимид, или их смеси с основаниями.
Основаниями являются, например, карбонаты щелочных металлов, например, карбонат натрия или карбонат калия, углеводороды натрия или калия, или органические основания, таких как триалкиламины, например, триэтиламин, Ν-метилморфолин, Ν-метилпиперидин, 4-диметиламинопиридин или Ν,Νдиизопропилэтиламин, предпочтение отдается Ν,Ν-диизопропилэтиламину.
Предпочтительно конденсацию осуществляют с ТВТИ в присутствии Ν,Ν-диизопропилэтиламина.
Реакцию второй стадии необязательно осуществляют в среде инертных растворителей, предпочтительно в диапазоне температур от комнатной температуры до 60°С при нормальном давлении.
Инертные растворители представляют собой, например, галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, трихлорметан, тетрахлорид углерода или 1,2-дихлорэтан, или простые эфиры, такие как тетрагидрофуран или диоксан, предпочтение отдается дихлорметану.
Кислоты представляют собой, например, трифторуксусную кислоту или водород хлорид в диоксане, предпочтение отдается концентрированной трифторуксусной кислоте. Концентрированная трифторуксусная кислота может быть использована с добавлением очистителей, таких как вода, фенол, тиоанизол и 1,2-этандиол. Предпочтение отдается 1 до 5% каждого из этих очистителей.
Соединение формулы (V) является известным и может быть синтезировано с помощью известных методик из соответствующих исходных соединений (пример 14 А).
Соединения формулы (IV) являются известными и могут быть получены посредством реакции с соединениями формулы (VI)
- 5 029410
в которой
η и К1, каждый, имеет значение, указанное выше, с источником палладия(0) восстанавливающего агента.
Реакцию обычно осуществляют в инертных растворителях, необязательно в присутствии слабого основания, предпочтительно в диапазоне температур от 0 до 50°С при нормальном давлении.
Инертные растворители представляют собой, например, галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, трихлорметан или 1,2-дихлорэтан, простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран или 1,2-диметоксиэтан, или другие растворители, такие как ацетон, диметилформамид, диметилацетамид, 2-бутанон или ацетонитрил. В равной степени возможно использовать смеси растворителей. Предпочтение отдается тетрагидрофурану.
Источники палладия(0), например, представляют собой тетракис(трифенилфосфин)палладий(0), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) или источники палладия(11), которые восстанавливаются ίη зйи, до палладия(0) в процессе реакции, предпочтение отдается тетракис(трифенилфосфин)палладию(0).
Восстановителями являются, например, муравьиная кислота или триэтилсилан, предпочтение отдается муравьиной кислоте.
Основами являются, например, триэтиламин, Ν,Ν-диизопропилэтиламин или раствор фосфата калия, предпочтение отдается триэтиламину.
Соединения формулы (VI) являются известными и могут быть получены с помощью реакции соединений формулы (VII)
в которой
η и К1 каждый имеет значение, указанное выше, с соединением формулы (VIII)
Реакцию обычно осуществляют в инертных растворителях, в присутствии дегидратирующего реагента, необязательно в присутствии основания, предпочтительно в диапазоне температур от комнатной температуры до 70°С при нормальном давлении.
Инертные растворители представляют собой, например, галогенированные углеводороды, такие как дихлорметан, трихлорметан или 1,2-дихлорэтан, простые эфиры, такие как диоксан, тетрагидрофуран или 1,2-диметоксиэтан, или другие растворители, такие как ацетон, диметилформамид, диметилацетамид, 2-бутанон или ацетонитрил. В равной степени возможно использовать смеси растворителей. Предпочтение отдается дихлорметану.
Пригодными дегидратирующие агенты в данном контексте являются, например, карбодиимиды, например Ν,Ν'-диэтил-, Ν,Ν'-дипропил-, Ν,Ν'-диизопропил, Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид, N-(3диметиламиноизопропил)-^-этилкарбодиимид гидрохлорид (БИС), ^циклогексилкарбодиимид-^пропилоксиметилполистирол (Ρδ-карбодиимид), или карбонильные соединения, такие как карбонилдиимидазол, или 1,2-оксазолийные соединения, такие как 2-этил-5-фенил-1,2-оксазолий 3-сульфат или 2трет-бутил-5-метилизоксазолий перхлорат, или ациламиносоединения, такие как 2-этокси-1этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин, или пропанфосфоновый ангидрид или изобутил хлорформиат, или
- 6 029410
бис-(2-оксо-3 -оксазолидинил)фосфорилхлорид или бензотриазолилокситри(диметиламино)фосфоний гексафторфосфат, или О-(бензотриазол-1-ил-Ы,Ы,Ы',Ы'-тетраметилуроний гексафторфосфат (НВТИ), бензотриазол-1-ил-Ы-тетраметилуроний тетрафторборат (ТВТИ), 2-(2-оксо-1-(2Н)-пиридил)-1,1,3,3тетраметилуроний тетрафторборат (ТРТИ) или О-(7-азабензотриазол-1-ил)-Ы,Ы, Ν',Ν'-тетраметилуроний гексафторфосфат (НАТИ), или 1-гидроксибензотриазол (ΗΟΒΐ), или бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфоний гексафторфосфат (ВОР), или бензотриазол-1-илокситрис(пирролидино)фосфоний гексафторфосфат (ΡΥΒΟΡ), или Ν-гидроксисукцинимид, или их смеси с основаниями.
Основаниями являются, например, карбонаты щелочных металлов, например карбонат натрия или карбонат калия, или гидрокарбонат натрия или калия, или органические основания, такие как триалкиламины, например триэтиламин, Ν-метилморфолин, Ν-метилпиперидин, 4-диметиламинопиридин или Ν,Ν-диизопропилэтиламин, предпочтение отдается Ν,Ν-диизопропилэтиламину.
Предпочтительно конденсацию осуществляют с НАТИ в присутствии Ν,Ν-диизопропилэтиламина.
Соединения формулы (VII) и (VIII) являются известными или могут быть синтезированы известными методиками из соответствующих исходных соединений.
Получение соединений в соответствии с настоящим изобретением можно проиллюстрировать следующей схемой синтеза:
Соединения в соответствии с настоящим изобретением демонстрируют непредвиденный полезный спектр фармакологической активности.
Соответственно, они являются пригодными для использования в качестве лекарственных средств для лечения и/или профилактики заболеваний, в организме человека и животных.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением отличаются как специфические пролекарства, которые выделяют адреномедуллин (АБМ).
Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает способ использования соединений в соответствии с настоящим изобретением для лечения и/или профилактики заболеваний, особенно сердечнососудистых, отечных и/или воспалительных заболеваний.
Для настоящего изобретения, термин "лечение" или "терапия" включает ингибирование, задержку, освобождение, смягчение, прекращение, уменьшение, или вызов регрессии болезни, расстройства, заболевания, или состояния, их развития и/или прогрессирования, и/или их симптомов. Термин "предупреждение" или "предотвращение" включает снижение риска иметь, заразиться или испытывать, болезнь, расстройство, заболевание, или состояние, их развитие и/или прогрессирование, и/или их симптомы. Термин предупреждение включает профилактику. Лечение или предупреждение болезни, расстройства, заболевания, или состояния может быть частичным или полным.
На основе их фармакологических свойств, соединения в соответствии с настоящим изобретением могут быть использованы для лечения и/или профилактики сердечно-сосудистых заболеваний, в частности сердечной недостаточности, особенно хронической и острой сердечной недостаточности, диастолической и систолической (застойная) сердечной недостаточности, острой декомпенсированной сердечной недостаточности, сердечной слабости, ишемической болезни сердца, стенокардии, инфаркта миокарда, травмы ишемии/реперфузии, ишемического и геморрагического инсульта, артериосклероза, атеросклероза, гипертензии, особенно гипертонической гипертензии, злокачественной гипертонической гипертензии, вторичной гипертензии, вазоренальной артериальной гипертензии и гипертензии вторичной по отношению к почечным и эндокринным расстройствам, гипертонической болезни сердца, гипертонического заболевания почек, легочной гипертензии, в особенности вторичной легочной гипертензии, легочной гипертензии следующей за легочной эмболией с и без острого легочного сердца, первичной легочной
- 7 029410
гипертензии и окклюзионного заболевания периферических артерий.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением являются, кроме того, пригодными для лечения и/или профилактики гестационного [вызванного беременностью] отека и протеинурии с и без гипертонии (преэклампсии).
Соединения в соответствии с настоящим изобретением являются, кроме того, пригодными для лечения и/или профилактики заболеваний легких, таких как хроническая обструктивная болезнь легких, бронхиальная астма, острый и хронический отек легких, аллергический альвеолит и пневмонит, вызванный вдыхаемыми органической пыли и частицами грибков актиномицетного или иного происхождения, острый химический бронхит, острый и хронический химический отек легких (например, после вдыхания фосгена, окиси азота), нейрогенный отек легких, острые и хронические легочные проявления, вызванные радиацией, острые и хронические межтканевые болезни легких (например, но не ограничиваясь ими, межтканевые болезни легких, вызванные наркотиками, например, вторичные по отношению к лечению с помощью блеомицина), острое повреждение легких/острый респираторный дистресс-синдром (ОПЛ/ОРДС) у взрослого или ребенка, включая новорожденных. ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к пневмонии и сепсису, аспирационная пневмония и ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к аспирации (например, но не ограничиваясь, аспирационная пневмония из-за выплюнутого содержимого желудка), ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к вдыханию коптильного газа, синдром острого посттрансфузионного повреждения легких (СОППЛ), ОПЛ/ОРДС или острая легочная недостаточность после операции, травмы или ожогов, вентиляторное повреждение легких (ИВЛ), повреждение легких следующее за аспирацией мекония, легочный фиброз и горная болезнь.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением являются, кроме того, пригодными для лечения и/или профилактики хронического заболевания почек (этапы 1-5), почечной недостаточности, диабетической нефропатии, гипертонического хронического заболевания почек, гломерулонефрита, быстро прогрессирующего и хронического почечного синдрома, неспецифического почечного синдрома, нефротического синдрома, наследственной нефропатии, острого и хронического тубуло-интерстициального нефрита, острого повреждения почек, острой почечной недостаточности, посттравматической почечной недостаточности, травматического и послеоперационного повреждения почек, кардиоренального синдрома, и для защиты и улучшения функции трансплантатов почек.
Соединения являются также пригодными для лечения и/или профилактики сахарного диабета и его последовательных симптомов, таких как, например, диабетическая макро- и микроангиопатия, диабетическая нефропатия и нейропатия.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением могут также быть использованы для лечения и/или профилактики заболеваний центральной и периферической нервной системы, таких как вирусный и бактериальный менингит и энцефалит (например, лишайный энцефалит), черепно-мозговая травма, первичные или вторичные [метастазы] злокачественные новообразования головного мозга и спинного мозга, радикулит и полирадикулит, синдром Гийена-Барре [острый (пост-) инфекционный полиневрит, синдром Миллера-Фишера], боковой амиотрофический склероз [прогрессивная спинная атрофия мышц], болезнь Паркинсона, острые и хронические полиневропатии, боль, отек мозга, болезнь Альцгеймера, дегенеративные заболевания нервной системы и демиелинизирующие заболевания центральной нервной системы, такие как, но не ограничиваясь, рассеянный склероз.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением являются, кроме того, пригодными для лечения и/или профилактики портальной гипертензии и фиброза печени [цирроз] и его осложнений, таких как варикозное расширение вен пищевода и асцит, для лечения и/или профилактики плевральных выпотов вторичных по отношению к злокачественным опухолям или воспалений и для лечения и/или профилактики лимфедемы и отека, вторичного по отношению к варикозному расширению вен.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением являются, кроме того, пригодными для лечения и/или профилактики воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта, таких как воспалительные заболевания кишечника, болезнь Крона, язвенный колит и токсичные расстройства кишок.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением являются, кроме того, пригодными для лечения и/или профилактики сепсиса, септического шока, синдрома системной воспалительной реакции (ССВР) неинфекционного происхождения, геморрагического шока, сепсиса или ССВР с органной дисфункцией или полиорганной недостаточностью (МОР), травматического шока, токсического шока, анафилактического шока, крапивницы, аллергий, связанных с кусающими и жалящими насекомыми, отека Квинке [гигантская крапивница, отек Квинке], острого ларингита и трахеита, и острого обструктивного ларингита [круп] и эпиглоттита.
Соединения являются, кроме того, пригодными для лечения и/или профилактики заболеваний ревматического типа и других форм болезни, которые считаются аутоиммунными заболеваниями, таких как, но не ограничиваясь, полиартрит, красная волчанка, склеродермия, пурпура и васкулит.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением являются, кроме того, пригодными для лечения глазной гипертензии (глаукома), диабетической ретинопатии и макулярного отека.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением могут кроме того быть использованы для лечения и/или профилактики связанных с операциями состояний ишемии и его последовательных сим- 8 029410
птомов после хирургических вмешательств, в частности вмешательств на сердце с использованием аппарата искусственного кровообращения (например, операции с отключением, имплантаты клапана сердца), вмешательств на сонных артериях, вмешательств на аорте и вмешательств с инструментным открытием или проникновением черепного свода.
Соединения являются, кроме того, пригодными для общего лечения и/или профилактики в случае хирургических вмешательств с целью ускорения заживления раны и сокращения времени реконвалесценции. Они также подходят для улучшения заживления ран.
Соединения являются, кроме того, пригодными для лечения и/или профилактики расстройств плотности костной ткани и структуры, таких как, но не ограничиваясь, остеопороз, остеомаляция и болезни костей, связанные с гиперпаратиреозом.
Соединения являются, кроме того, пригодными для лечения и/или профилактики сексуальных дисфункций, в частности эректильной дисфункции у мужчин.
Предпочтительные соединения являются пригодными для лечения и/или профилактики сердечной недостаточности, ишемической болезни сердца, ишемического и/или геморрагического инсульта, гипертонии, легочной гипертензии, окклюзионного заболевания периферических артерий, преэклампсии, хронической обструктивной болезни легких, астмы, острого и/или хронического отека легких, аллергического альвеолита и/или пневмонита, вызванного вдыханием органической пыли или частиц грибков актиномицетного или иного происхождения, и/или острого химического бронхита, острого и/или хронического химического отека легких, нейрогенного отека легких, острых и/или хронических легочных проявлений, вызванных радиацией, острых и/или хронических интерстициальных заболеваний легких, острого повреждения легких/острого респираторного дистресс-синдрома (ОПЛ/ОРДС) у взрослого или ребенка, включая новорожденных, ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к пневмонии и сепсису, аспирационной пневмонии и ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к аспирации, ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к вдыханию коптильного газа, синдрома острого посттрансфузионного повреждения легких (СОППЛ), ОПЛ/ОРДС или острой легочной недостаточности после операции, травмы и/или ожогов, вентиляторного повреждения легких (ИВЛ), повреждения легких следующего за аспирацией мекония, легочного фиброза и горной болезни, хронических заболеваний почек, гломерулонефрита, острого повреждения почек, кардиоренального синдрома, лимфедемы, воспалительного заболевания кишечника, сепсиса, септического шока, синдрома системной воспалительной реакции (ССВР) неинфекционного происхождения, анафилактического шока, воспалительного заболевания кишечника и/или крапивницы.
Более предпочтительные соединения являются пригодными для лечения и/или профилактики сердечной недостаточности, гипертонии, легочной гипертензии, астмы, острого и/или хронического химического отека легких, острого повреждения легких/острого респираторного дистресс-синдрома (ОПЛ/ОРДС) у взрослых или детей, включая новорожденных, ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к пневмонии и сепсису, аспирационной пневмонии и ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к аспирации, ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к вдыханию коптильного газа, синдрома острого посттрансфузионного повреждения легких (СОППЛ), ОПЛ/ОРДС и/или острой легочной недостаточности после операции, травмы и или ожогов, и/или вентиляторного повреждения легких (ИВЛ), повреждения легких, следующего за аспирацией мекония, сепсиса, септического шока, синдрома системной воспалительной реакции (ССВР) неинфекционного происхождения, анафилактического шока, воспалительного заболевания кишечника и/или крапивницы.
Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает способ использования соединений в соответствии с настоящим изобретением для лечения и/или профилактики заболеваний, в частности нарушений, упомянутых выше.
Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает способ использования соединений в соответствии с настоящим изобретением для приготовления лекарственного средства для лечения и/или профилактики заболеваний, в частности, нарушений, упомянутых выше.
Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает способ для лечения и/или профилактики заболеваний, в частности, нарушений, упомянутых выше, с использованием активного количество соединений, в соответствии с настоящим изобретением.
Кроме того, изобретение обеспечивает лекарственные средства, содержащие соединение в соответствии с изобретением и один или более дополнительный активный компонент, в частности, для лечения и/или профилактики расстройств, указанных выше. Примерными и предпочтительными комбинациями активных компонентов являются ингибиторы АПФ, антагонисты рецепторов ангиотензина, агонисты рецептора бета-2, ингибиторы фосфодиэстеразы, агонисты рецептора глюкокортикоидов, диуретики, или рекомбинантный ангиотензин, превращающий энзим-2 или ацетилсалициловую кислоту (аспирин).
В предпочтительном варианте осуществления изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением вводят в комбинации с ингибитором АПФ, таким как, в качестве приведения примера и для выражения предпочтения, эналаприл, хинаприл, каптоприл, лизиноприл, рамиприл, делаприл, фозиноприл, периндоприл, цилазаприл, имидаприл, беназеприл, моэксиприл, спираприл или трандоприл.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением вводят в комбинации с антагонистом рецепторов ангиотензина, таким как, в качестве при- 9 029410
ведения примера и для выражения предпочтения, лозартан, кандесартан, валсартан, телмисартан или эмбусартан.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением вводят в комбинации с агонистом бета-2 рецепторов, таким как, в качестве приведения примера и для выражения предпочтения, сальбутамол, пирбутерол, сальметерол, тербуталин, фенотерол, тулобутерол, кленбутерол, репротерол или формотерол.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением вводят в комбинации с ингибитором фосфодиэстеразы (ФДЭ), таким как, в качестве приведения примера и для выражения предпочтения, милринон, амринон, пимобендан, цилостазол, силденафил, варденафил или тадалафил.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением вводят в комбинации с агонистом рецепторов глюкокортикоидов, таким как, в качестве приведения примера и для выражения предпочтения, кортиозол, кортизон, гидрокортизон, преднизон, преднизолон метилпреднилиден, дефлазакорт, флуокортолон, триамцинолон, дексаметазон или бетаметазон.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением вводят в комбинации с диуретиками, такими как, в качестве приведения примера и для выражения предпочтения, фуросемид, торасемид и гидрохлортиазид.
Настоящее изобретение также относится к лекарственным средствам, которые содержат по меньшей мере одно соединение в соответствии с изобретением, обычно вместе с одним или более инертным, нетоксичным, фармацевтически пригодным носителем, и к их применению для вышеуказанных целей.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением могут действовать системно и/или местно. Для этой цели они могут быть введены подходящим образом, например, парентеральным, легочным, назальным, подъязычным, язычным, буккальным, кожным, трансдермальным, конъюнктивальным, глазным путем, или в виде имплантата или стента.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением могут быть введены в лекарственных формах, пригодных для этих путей введения.
Парентеральное введение может происходить с избеганием стадии абсорбции (например, внутривенно, внутриартериально, внутрисердечно, интраспинально или интралюмбально) или с включением абсорбции (например, внутримышечно, подкожно, внутрикожно, чрескожно или внутрибрюшинно). Лекарственные формы, подходящие для парентерального введения, включают препараты для инъекций и инфузий в виде растворов, суспензий, эмульсий, лиофилизатов или стерильных порошков.
Пригодными для других путей введения являются, например, лекарственные формы для ингаляции (в том числе порошковые ингаляторы, распылители), капли в нос, глазные капли, растворы или спреи; пленки/брикеты или водные суспензии (лосьоны, встряхиваемые смеси), липофильные суспензии, мази, кремы, трансдермальные терапевтические системы (например, пластыри), молоко, пасты, пены, присыпки, имплантаты или стенты.
Парентеральное введение является предпочтительным, особенно внутривенное введение.
Соединения в соответствии с настоящим изобретением могут быть превращены в указанные лекарственные формы. Это может осуществляться известным способом путем смешивания с инертными, нетоксичными, фармацевтически пригодными наполнителями. Эти наполнители включают носители (например, микрокристаллическая целлюлоза, лактоза, маннит), растворители (например, жидкие полиэтилен гликоли), эмульгаторы и диспергаторы или смачиватели (например, додецилсульфата натрия, полиоксисорбитан олеат), связующие вещества (например, поливинилпирролидон), синтетические и природные полимеры (например, альбумин), стабилизаторы (например, антиоксиданты, например, аскорбиновая кислота), красители (например, неорганические пигменты, например, оксиды железа) и маскирующие ароматы и/или запахи вещества.
Оказалось выгодным, в случае парентерального введения, введение количеств, примерно от 0,001 до 5 мг/кг, предпочтительно примерно от 0,01 до 1 мг/кг веса тела для достижения эффективных результатов.
Тем не менее, в некоторых случаях может быть необходимо отклоняться от указанных количеств, в частности, в зависимости от веса тела, пути введения, индивидуальной реакции на активный компонент, характера получения и времени или интервала, за который осуществляется введение. Например, меньше указанного выше минимального количества может быть недостаточно в некоторых случаях, причем в других случаях заявленный верхний предел должен быть превышен. В случае введения больших количеств, может быть желательно разделить эти на множество индивидуальных доз в течение дня.
Следующие рабочие примеры иллюстрируют изобретение. Изобретение не ограничивается этими примерами.
Проценты в следующих тестах и примерах представляют собой, если не указано иное, проценты по весу; части представляют собой части по весу. Соотношения растворителей, коэффициенты разбавления и данные концентрации для жидкости/жидких растворов - все зависят от объема.
- 10 029410
А. Примеры
Сокращения
АА - аминокислота
Аст - ацетамидометил
АЭМ - адреномедуллин (человека)
АОМ(2-52) - пептидная последовательность АЭМ АА 2 - АА 52, включая дисульфидную связь и Сконцевой амид
прибл. - приблизительно
Вос - трет-бутилоксикарбонил
СЭ1 - карбонилдиимидазол д/й - день(дни), дуплет (в ЯМР)
ТСХ - тонкослойная хроматография
Όί'.Ί - прямая химическая ионизация (в МС)
йй - дуплет дуплетов (в ЯМР)
ΌΙΕΑ - Ν,Ν-диизопропилэтиламин ЭМАР - 4-диметиламинопиридин ДМФА - Ν,Ν-диметилформамид ДМСО - диметилсульфоксид от теор. - от теории (выход) экв. - эквивалент(ы)
Ε8Ι - ионизация электрораспылением (в МС)
Ртос - (9Н-флуорен-9-илметокси)карбонил ч - час(ы)
НАТИ - О-(7-азабензотриазол-1-ил)-Л,^№,№-тетраметилуроний гексафторфосфат
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография при высоком давлении
ЖХ-МС - жидкостная хроматография с масс-спектрометрией т - мультиплет (в ЯМР) мин - минута(ы)
МС - масс-спектрометрия
ЯМР - спектроскопия ядерного магнитного резонанса рЫ - 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил ПЭГ - полиэтиленгликоль
ΡΡ - обращенная фаза (в ВЭЖХ)
КТ - комнатная температура
К* - время удерживания (вВЭЖХ) к - синглет (в ЯМР)
ТВТи - бензотриазол-1-ил-Л-тетраметилуроний тетрафторборат
(Ви - трет-бутил
ТФУ - трифторуксусная кислота
ТГФ - тетрагидрофуран
Тг1 - тритил
Номенклатура аминокислот и пептидных последовательностей в соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии и Международным союзом биохимии: Котспс1а1игс апй ЗутЬойкт Гог Атто Аайк апй Рерййек (Кесоттепйайопк 1983). В: Риге & Арр1. СНст. 56, Уо1. 5, 1984, р. 595-624
- 11 029410
Тривиальное название Символ Однобуквенный символ
Аланин А1а А
Аргинин Агд К
Аспарагин Азп N
Аспарагиновая Азр ϋ
кислота
Цистеин Суз С
Глутаминовая О1и Е
кислота
Глутамин О1п Ω
Глицин О1у о
Гистидин ΗΪ3 н
Изолейцин Не I
Лейцин Ьеи ь
Лизин Ьуз к
Метионин Ме1 м
Фенилаланин РЬе Р
Пролин Рго Р
Серин 8ег 8
Треонин Тйг т
Триптофан Тгр Ψ
Тирозин Туг Υ
Валин Уа1 V
ЖХ-МС и МС способы
Способ 1 (ЖХ-МС): Тип устройства: \\'а1етз ЛСРШТУ ЙРЙС 8уз!ет; колонка: \\'а1егз Асцийу
ЙРЙС Н88 Т3 1.8 мк 50 ммх1 мм; мобильная фаза А: 1 л воды + 0.25 мл 99%-ой муравьиной кислоты, мобильная фаза Б: 1 л ацетонитрила + 0.25 мл 99%-ой муравьиной кислоты; градиент: 0.0 мин 90% А
1.2 мин 5% А 2.0 мин 5% А; печь: 50°С; поток: 0.40 мл/мин; УФ-детектирование: 210 - 400 нм.
Способ 2 (ЖХ-МС): МС тип устройства: \\'а!етз (Мюготазз) ОнаИго МКго; ВЭЖХ тип устройства: Адйеп! 1100 зепез; колонка: Тйегто Нурегзй ООЙЭ 3 мк 20 ммх4 мм; мобильная фаза А: 1 л воды + 0.5 мл 50%-ой муравьиной кислоты, мобильная фаза Б: 1 л ацетонитрила + 0.5 мл 50%-ой муравьиной кислоты; градиент: 0.0 мин 100% А3.0 мин 10% А^-4.0 мин 10% А; печь: 50°С; поток: 2.0 мл/мин; УФдетектирование: 210 нм.
Способ 3 (ВЭЖХ): Тип устройства: НР 1200 8епез; УФ ΌΑΌ; колонка: Рйепотепех Йипа 5 мкм С5 100А, 150 ммх4.6 мм; мобильная фаза А: 1 л воды + 0.5 мл 50%-ой муравьиной кислоты, мобильная фаза Б: 1 л ацетонитрила + 0.5 мл 50%-ой муравьиной кислоты; градиент: 0.0 мин 95%А 5 мин 5% А; 5.8
мин 95% А 6.2 мин 95% А; скорость потока: 2.5 мл/мин; печь: КТ; УФ-детектирование: 210 нм.
Способ 4 (ВЭЖХ): Тип устройства: НР 1200 8епез; УФ ΌΑΌ; колонка: Мегск Сйготой!й Раз! градиент КР18 50 ммх2 мм; мобильная фаза А: 1 л воды + 0.5 мл 50%-ой муравьиной кислоты, мобильная фаза Б: 1 л ацетонитрила + 0.5 мл 50%-ой муравьиной кислоты; градиент: 0.0 мин 95%А 2.9 мин 5% А
3.2 мин 5% А; скорость потока: 3 мл/мин; печь: КТ; УФ-детектирование: 210 нм.
Способ 5 (ДХИ МС): Тип устройства: Тйегто Р1зйег-8с1епййс 1)80; химическая ионизация; реагент газообразный аммиак; температура источника: 200°С; энергия ионизации 70 эВ.
Способ 6 (МАЛДИ МС): Тип устройства Кга!оз РС-Котрас! 8ЕР У1.2.2 МАРШ ТОР М8, режим положительной ионизации, линейный высокий, мощность: 75.
Микроволновой синтезатор: Вкладе Етгуз 1тйа!ог II синтезатор, с переменным размером флакона до 20 мл объема реакции и "Койо! 60" процессор образца рН 4 цитратный буфер: Р1ика Νθ 82566; цитратный буфер рН 4, стабилизированный с композицией азида натрия : лимонная кислота, -0.056 М; азид натрия, -0.05%; хлорид натрия, -0.044 М; гидроксид натрия, -0.068 М.
40кДа метокси поли(этиленгликоль)малеимидо пропионамид (линейный 40к мПЭГ малеимид);
СА8 Νθ 724722-89-8; фирмы 1)г. Кеббуз 1пс., Йо! Νθ 233101301; вес - средняя молекулярная масса, Мк (ОРС) 40500 Да; полидисперсность (ОРС) 1.08.
- 12 029410
Исходные соединения
Пример 1А. Аллил-Ы-(трет-бутоксикарбонил)-О-[(4-нитрофенокси)карбонил]-Ь-тирозинат
36.7 г (114.3 ммоль) сложного эфира Ν-Вос-Ь-тирозиналлила, 23.0 г (114.3 ммоль) 4-нитрофенил хлорформиата, 17.5 мл (125.7 ммоль) триэтиламина и 1.40 г (11.4 ммоль) 4-диметиламинопиридина объединяли в 1000 мл дихлорметана и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь выделяли с помощью приблизительно 500 мл воды и с помощью приблизительно 250 мл солевого раствора и сушили над приблизительно 100 г сульфата натрия. Растворитель удаляли с помощью роторного упаривания (приблизительно 40°С, приблизительно 200 мбар, приблизительно 30 мин) и продукт растворяли в теплом диэтиловом эфире и кристаллизировали в течение ночи при 4°С. Кристаллы отфильтровывали, промывали с помощью холодного диэтилового эфира и сушили в высоком вакууме (приблизительно 0.1 мбар, 18 ч). Выход составил 29.86 г, (59.6 ммоль, 52% от теории) желаемого вещества.
ЖХ-МС (способ 1): К = 1.23 мин, т/ζ = 487 (М+Н)+
Пример 2А. (28)-4-{[(4-{(28)-3-(аллилокси)-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-3-оксопропил} фенокси)карбонил]амино}-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]бутановая кислота
4.0 г (8.22 ммоль) соединения из примера 1А растворяли в 60 мл дихлорметана. 1.795 (8.22 ммоль) (28)-4-амино-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]бутановой кислоты и 1.43 мл (8.22 ммоль) Ν,Νдиизопропилэтиламина добавляли. Реакционную смесь разделяли на 3 порции. Порции нагревали в течение 30 мин в закупоренной трубке при 75°С в микроволновом синтезаторе. Из объединенной реакционной смеси растворитель удаляли с помощью роторного упаривания (приблизительно 40°С, приблизительно 200 мбар, приблизительно 30 мин). Неочищенный продукт растворяли в дихлорметане и хроматографировали над приблизительно 600 мл силикагеля. Используемыми растворителями были дихлорметан/этилацетат 4/1, дихлорметан/этилацетат 1/1, дихлорметан/метанол 4/1 и дихлорметан/ метанол 1/1. Фракции, содержащие продукт обьединяли и концентрировали досуха при сниженном давлении. Это обеспечило 4.02 г (6.54 ммоль, 80% от теории) желаемого вещества.
ЖХ-МС (способ 1): К = 1.07 мин., т/ζ = 564 (М-Н)-
Пример 3А. Аллил О-({(38)-4-{[(2К)-1-амино-1-оксо-3-(тритилсульфанил)пропан-2-ил]амино}-3[(трет-бутоксикарбонил)амино]-4-оксобутил}карбамоил)-Ы-(трет-бутоксикарбонил)-Ь-тирозинат
2.50 г (4.42 ммоль) соединения из примера 2А растворяли в 100 мл дихлорметана. 1.602 г (4.42 ммоль) δ-тритил-Ь-цистеинамида, 0.77 мл (4.42 ммоль) Ν,Ν-диизопропилэтиламина и 1.68 г (4.42 ммоль) НАТИ добавляли. Реакционную смесь разделяли на 5 порций. Порции нагревали в течение 30 мин в закупоренной трубке при 60°С в микроволновом синтезаторе. Из объединенной реакционной смеси растворитель удаляли с помощью роторного упаривания (приблизительно 40°С, приблизительно 200 мбар,
- 13 029410
приблизительно 30 мин). Неочищенный продукт растворяли в дихлорметане и хроматографировали над приблизительно 600 мл силикагеля. Используемыми растворителями были дихлорметан/этилацетат 2/1, дихлорметан/этилацетат 1/1, дихлорметан/метанол 20/1 и дихлорметан/метанол 10/1. Фракции, содержащие продукт объединяли и концентрировали досуха при сниженном давлении. Это обеспечило 4.12 г (3.30 ммоль, 75% от теории, 73% чистоты) желаемого вещества.
ЖХ-МС (способ 1): К = 1.36 мин, т/ζ = 911 (М+Н)+
Пример 4А. О-( {(3 δ)-4- {[(2К)-1 -амино-1 -оксо-3 -(тритилсульфанил)пропан-2-ил] амино }-3- [(третбутоксикарбонил)амино]-4-оксобутил}карбамоил)-Ы-(трет-бутоксикарбонил)-Е-тирозин
4.14 г (4.55 ммоль) соединения из примера 3А растворяли в 90 мл тетрагидрофурана. 3.17 мл (22.8 ммоль) триэтиламина, 0.86 мл (22.8 ммоль) муравьиной кислоты и 0.526 г (0.455 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) добавляли. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакцию разбавляли с помощью приблизительно 100 мл воды и дважды выделяли с помощью приблизительно 100 мл дихлорметана. Объединенные органические фазы выделяли с помощью солевого раствора, сушили над сульфатом натрия и концентрировали досуха при сниженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в дихлорметане и хроматографировали над приблизительно 500 мл силикагеля. Используемыми растворителями были дихлорметан, дихлорметан/метанол 20/1 и дихлорметан/метанол 1/1. Фракции, содержащие продукт объединяли и концентрировали досуха при сниженном давлении. Это обеспечило 2.62 г неочищенного продукта с чистотой 94.5%. Продукт далее был очищен с помощью препаративной ОФ-ВЭЖХ на С18 с помощью градиента вода/метанол с выходом 2.35 г (2.70 ммоль, 59% от теории) чистого продукта.
ЖХ-МС (способ 1): К = 1.22 мин., т/ζ = 871 (М+Н)+
1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-йб, δ/м.д.): δ=7.92 (й, 1Н), 7.65 (I, 1Н), 7.28-7.35 (т, 12Н), 7.25-7.28 (I, 3Н), 7.15-7.20 (т, 4Н), 6.95 (й, 2Н), 4.29 (ц, 1Н), 4.00 (т, 1Н), 3.92 (т, 1Н), 3.11 (т, 3Н), 2.90 (т, 1Н), 2.36 (т, 2Н), 1.84 (т, 1Н), 1.68 (т, 1Н), 1.34 (й, 18Н).
Пример 5А. Трет-бутил-метил(2-оксотетрагидрофуран-3-ил)карбамат
Соединение синтезировали в соответствии с Л1Ъепсо, Όΐηο; Рацит, 1еаи-Ргаисо1з; Ьаи1еиз, Магк; Те1гайейгои, 2005, νοί. 61, р. 6283-6297.
5.18 г (25.7 ммоль) трет-бутил(тетерагидро-2-оксо-3-фуранил)карбамата, 4.81 мл (77.2 ммоль) йодметана растворяли в 100 мл сухого диметилформамида. Раствор охлаждали до 0°С и 1.34 г (60% в минеральном масле, 33.5 ммоль) гидрид натрия добавляли. Реакцию нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь добавляли к приблизительно 400 мл воды и смесь выделяли три раза с помощью приблизительно 300 мл этилацетата. Объединенные органические фазы сушили над сульфатом натрия и концентрировали досуха при сниженном давлении. Это обеспечило 8.70 г (25.7 ммоль, 100% от теории, 63% чистоты) желаемого вещества.
Аналитические данные были в соответствии с литературой. Продукт был использован в следующей стадии синтеза без дополнительной очистки.
Пример 6А. 2-[(трет-бутоксикарбонил)(метил)амино]-4-(1,3-диоксо-1,3-дигидро-2Н-изоиндол-2ил)бутановая кислота
8.70 г (приблизительно, 25 ммоль, приблизительно, 63% чистоты) соединения из примера 5А растворяли в 560 мл диметилформамиде. 8.23 г (44.4 ммоль) калий офталимида добавляли и реакционную смесь нагревали до 150°С в течение 7 ч. Приблизительно 400 мл растворителя удаляли с помощью ро- 14 029410
торного упаривания (приблизительно 60°С, приблизительно 10 мбар, приблизительно 30 мин). Реакционную смесь выливали в смесь, приблизительно 100 мл воды, 200 г льда и 15 мл уксусной кислоты. После того, как оставшийся лед растаял, реакционную смесь фильтровали и фильтрат выделяли 3 раза с помощью приблизительно 100 мл дихлорметана. Объединенные органические фазы сушили над сульфатом натрия и концентрировали досуха при сниженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в дихлорметане и хроматографировали над приблизительно 70 мл силикагеля. Используемыми растворителями были от дихлорметан/этилацетат 9/1 до дихлорметан/этилацетат 6/4. Фракции, содержащие продукт обьединяли и концентрировали досуха при сниженном давлении. Это обеспечило 2.39 г (6.04 ммоль, 24% от теории) продукта.
ЖХ-МС (способ 1): К = 0.92 мин., т/ζ = 363 (М+Н)+
Пример 7А. 4-Амино-2-[(трет-бутоксикарбонил)(метил)амино]бутановая кислота
11.8 г (32.6 ммоль) соединения из примера 6А растворяли приблизительно в 640 мл этанола и 23.8 мл (488 ммоль) гидразин гидрата добавляли к реакционной смеси. После перемешивания в течение ночи реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали досуха при сниженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в этаноле и приблизительно 50 г силикагеля добавляли, растворитель удаляли при сниженном давлении. Оставшееся твердое вещество добавляли на колонку с, приблизительно, 500 г силикагеля и хроматографировали. Используемыми растворителями были от дихлорметан/метанол 9/1 до дихлорметан/метанол 1/1. Фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали досуха при сниженном давлении. Это обеспечило 2.98 г (12.8 ммоль, 39% от теории) продукта.
ЖХ-МС (способ 2): К = 0.21 мин., т/ζ = 233 (М+Н)+
ДХИ МС (способ 5): т/ζ = 233 (М+Н)+
Пример 8А. 4-{[(4-{(28)-3-(аллилокси)-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-3-оксопропил}фенокси)карбонил] амино} -2-[(трет-бутоксикарбонил)(метил)амино] бутановая кислота
0.931 г (1.92 ммоль) соединения из примера 1А растворяли в 30 мл дихлорметана. 0.455 г (1.92 ммоль) соединения из примера 7А добавляли. Реакционную смесь разделяли на 2 порции. Порции нагревали в течение 30 мин в закупоренной трубке при 80°С в микроволновом синтезаторе. Из объединенной реакционной смеси растворитель удаляли при сниженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ОФ-ВЭЖХ на С18 колонке с градиентом вода/метанол от 9/1 до 1/9. Фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали досуха при сниженном давлении. Это обеспечило 0.523 г (0.85 ммоль, 44% от теории) желаемого вещества в виде смеси двух диастереомеров.
ЖХ-МС (способ 1): К = 1.08 и 1.11 мин, т/ζ = 578 (М-Н)-
Пример 9А. Аллил О-[(4-{[(2К)-1-амино-1-оксо-3-(тритилсульфанил)пропан-2-ил]амино}-3-[(третбутоксикарбонил)-(метил)амино]-4-оксобутил)карбамоил]-К-(трет-бутоксикарбонил)-Ь-тирозинат
2.24 г (3.86 ммоль) соединения из примера 8А растворяли в 100 мл дихлорметана. 1.401 г (3.86 ммоль) δ-тритил-Ь-цистеинамида, 0.67 мл (3.86 ммоль) Ν,Ν-диизопропилэтиламина и 1.47 г (3.86 ммоль) НАТи добавляли. Реакционную смесь разделяли на 5 порции. Порции нагревали в течение 30 мин в за- 15 029410
купоренной трубке при 60°С в микроволновом синтезаторе. Из объединенной реакционной смеси растворитель удаляли с помощью роторного упаривания (приблизительно 40°С, приблизительно 200 мбар, приблизительно 30 мин). Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ОФ-ВЭЖХ на С18 колонке с градиентом вода/метанол от 9/1 до 1/9. Фракции, содержащие продукт объединяли и концентрировали досуха при сниженном давлении. Это обеспечило 3.26 г (2.75 ммоль, 71% от теории, 78% чистоты) желаемого вещества в виде смеси диастереомеров.
ЖХ-МС (способ 1): = 1.41 и 1.43 мин., т/ζ = 924 (М+Н)+
Пример 10А. О- [(4- {[(2К)-1 -амино-1 -оксо-3 -(тритилсульфанил)пропан-2-ил] амино }-3- [(третбутоксикарбонил)-(метил)амино]-4-оксобутил)карбамоил]^-(трет-бутоксикарбонил)-Ь-тирозин
2.2 г (2.38 ммоль) соединения из примера 9А растворяли в 48 мл тетрагидрофурана. 1.66 мл (11.9 ммоль) триэтиламина, 0.45 мл (11.9 ммоль) муравьиной кислоты и 0.275 г (0.238 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) добавляли. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакцию разбавляли с помощью приблизительно 50 мл воды и дважды выделяли с помощью приблизительно 50 мл дихлорметана. Объединенные органические фазы выделяли с помощью солевого раствора, сушили над сульфатом натрия и концентрировали досуха при сниженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в дихлорметане и хроматографировали над приблизительно 100 г силикагеля. Используемыми растворителями были дихлорметан, дихлорметан/метанол 50/1 и дихлорметан/метанол 4/1. Фракции, содержащие продукт объединяли и концентрировали досуха при сниженном давлении. Это обеспечило 1.44 г (1.61 ммоль, 68% от теории) продукта в виде смеси диастереомеров.
ЖХ-МС (способ 1): = 1.20 и 1.24 мин, т/ζ = 884 (М+Н)+
ХН-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06, δ/м.д.): δ=8.00 (т, 1Η), 7.65-7.90 (т, 4Η), 7.18-7.35 (т, 18Η), 7.10 (т, 2Η), 6.96 (т, 4Η), 4.60 (т, 1Η), 4.46 (т, 1Η), 4.30 (т, 2Η), 4.05 (т, 2Η), 3.00 (т, 4Η), 2.75 (т, 6Η), 2.36 (т, 3Η), 2.00 (т, 2Η), 1.82 (т, 2Η), 1.40 (т, 3Η), 1.35 (δ, 18Η).
Пример 11А. ^-[(4-{(28)-3-(аллилокси)-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-3-оксопропил}фенокси)карбонил]-^-(трет-бутоксикарбонил)-Ь-орнитин
6.00 г (12.33 ммоль) соединения из примера 1А растворяли в 120 мл дихлорметана. 2.57 г (12.33 ммоль) ^-(трет-бутоксикарбонил)-Ь-орнитина добавляли. Реакционную смесь разделяли на 6 порции. Порции нагревали в течение 90 мин в закупоренной трубке при 75°С в микроволновом синтезаторе. Объединенную реакционную смесь выделяли с помощью приблизительно 100 мл насыщенного раствора хлорида аммония. Водную фазу дважды снова выделяли с помощью приблизительно 30 мл дихлорметана каждый раз. Объединенные органические фазы выделяли с помощью приблизительно 50 мл солевого раствора и сушили над сульфатом натрия. Растворитель удаляли при сниженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в дихлорметане и хроматографировали над приблизительно 600 мл силикагеля. Используемыми растворителями были дихлорметан, дихлорметан/метанол 40/1 - дихлорметан/метанол 1/1. Фракции, содержащие продукт объединяли и концентрировали досуха при сниженном давлении. Это обеспечило 2.63 г (4.06 ммоль, 33% от теории, 89% чистоты) желаемого вещества.
ЖХ-МС (способ 1): К, = 1.03 мин, т/ζ = 578 (М-Н)-
Пример 12А. Ν5-[(4-{ (2δ)-3 -(аллилокси)-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино] -3 -оксопропил} фенокси)карбонил]-^-(трет-бутоксикарбонил)-Ь-орнитил^-тритил-Е-цистеинамид
- 16 029410
1.20 г (2.07 ммоль) соединения из примера 11А растворяли в 48 мл дихлорметана. 0.750 г (2.07 ммоль) δ-тритил-Ь-цистеинамида, 0.36 мл (2.07 ммоль) Ν,Ν-диизопропилэтиламина и 0.787 г (2.07 ммоль) НАТИ добавляли. Реакционную смесь разделяли на 3 порции. Порции нагревали в течение 30 мин в закупоренной трубке при 60°С в микроволновом синтезаторе. Из объединенной реакционной смеси растворитель удаляли с помощью роторного упаривания (приблизительно 40°С, приблизительно 200 мбар, приблизительно 30 мин). Неочищенный продукт растворяли в дихлорметане и хроматографировали над приблизительно 400 мл силикагеля. Используемыми растворителями были дихлорметан/этилацетат 2/1, дихлорметан/этилацетат 1/1. Фракции, содержащие продукт объединяли и концентрировали досуха при сниженном давлении. Это обеспечило 1.30 г (1.5 ммоль, 56% от теории, 82% чистоты) желаемого вещества.
ЖХ-МС (способ 1): =1.35 мин, т/ζ = 924 (М+Н)+
Пример 13А. ^-(трет-бутоксикарбонил)-^-[(4- {(28)-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино] -2карбоксиэтил}фенокси)карбонил]-Ь-орнитил-8-тритил-Ь-цистеинамид
3.06 г (2.33 ммоль) соединения из примера 12А растворяли в 46 мл тетрагидрофурана. 1.63 мл (11.6 ммоль) триэтиламина, 0.44 мл (11.6 ммоль) муравьиной кислоты и 0.265 г (0.233 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) добавляли. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Реакцию разбавляли с помощью приблизительно 50 мл воды и дважды выделяли с помощью приблизительно 50 мл дихлорметана. Объединенные органические фазы выделяли с помощью солевого раствора, сушили над сульфатом натрия и концентрировали досуха при сниженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в дихлорметане и хроматографировали над, приблизительно, 500 мл силикагеля. Используемыми растворителями были дихлорметан, дихлорметан/метанол 40/1 и дихлорметан/метанол 1/1. Фракции, содержащие продукт объединяли и концентрировали досуха при сниженном давлении. Это обеспечило 1.40 г неочищенного продукта 86% чистоты. Продукт далее был очищен с помощью препаративной ОФ-ВЭЖХ на С18 колонке с помощью градиента вода/метанол с выходом в 2 фракции: 0.93 г продукта (45% от теории).
ЖХ-МС (способ 1): = 1.18 мин., т/ζ = 885 (М+Н)+
1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-йб, δ/м.д.): δ=7.89 (ά, 1Н), 7.65 (ΐ, 1Н), 7.25-7.35 (т, 12Н), 7.20-7.25 (т, 6Н), 7.10-7.20 (т, 3Н), 6.95 (ά, 2Н), 4.29 (т, 1Н), 4.05 (т, 1Н), 3.88 (т, 1Н), 3.11 (ά, 1Н), 3.00 (т, 4Н), 2.75 (т, 2Н), 2.36 (т, 3Н), 1.64 (т, 1Н), 1.51 (т, 3Н), 1.36 (8, 9Н), 1.32 (8, 9Н).
Пример 14А. Связывание ΑΌΜ и амидной смолы на основе тентагеля ΑΌΜ (2-52)
Пептид собирали ступенчато на амидной смоле на основе тентагеля на автоматическом пептидном синтезаторе (Рго1ет Тесйпо1о§1е8 1пс. 8утрйопу). 8 полипропиленовых реакционных сосудов использовали, параллельно осуществляя одинаковую химическую реакцию. В каждый сосуд загружали 0.05 ммоль смолы Ринка на основе тентагеля для общего размера партии 0.4 ммоль.
Каждую аминокислоту добавляли в 8-кратном молярном подходе в отношении загрузки смолы. Аминокислоты были защищены Ртос как Ν-концевой защитной группой и защитные группы указанные ниже были использованы для боковой цепи функциональных возможностей. Также 188 мг (0.59 ммоль,
7.8 экв.) ТВТи и 0.21 мл (1.2 ммоль, 16 экв.) ΌΙΕΑ добавляли. Реакции проводили в ДМФА в качестве растворителя, причем ДМФА использовали в количестве, достаточном для набухания смолы и ее свободного взбалтывания. Время реакции для аминокислоты составило приблизительно 1 ч. Расщепление защитных групп Ртос было достигнуто с помощью 20% пиперидина/ДМФА, причем 20% пиперидин/ДМФА использовали в количестве, достаточном для набухания смолы и ее свободного взбалтывания.
Последовательность сочетания была следующей:
- 17 029410
1. Туг(ГВи) (Туг = У = АА 52 человеческого ΑϋΜ)
2. О1у (О1у = О = А А 51 человеческого ΑϋΜ)
3. О1п(Тг1) (О1п = <5 = А А 50 человеческого ΑϋΜ)
4. Рго (Рго = Р = АА 49 человеческого ΑϋΜ)
5. 8ег(1Ви) (8ег = 8 = АА 48 человеческого ΑϋΜ)
6. Не (Не = I = АА 47 человеческого ΑϋΜ)
7. Ьуз(Вос) (Ьуз = К = АА 46 человеческого ΑϋΜ)
8. ЗегЦВи) (Бег = 8 = АА 45 человеческого ΑϋΜ)
9. Аг§(рЬ1) (Аг§ = К. = АА 44 человеческого ΑϋΜ)
10. Рго (Рго - Р = АА 43 человеческого ΑϋΜ)
11. А1а (А1а == А = АА 42 человеческого ΑϋΜ)
12. Уа1 (Уа1 ~ V = АА 41 человеческого ΑϋΜ)
13. Азп(Тй) (Азп = N = АА 40 человеческого ΑϋΜ)
14. Азр(О1Ви) (Азр = ϋ = АА 39 человеческого ΑϋΜ)
15. Ьуз(Вос) (Ьуз == К = АА 38 человеческого ΑϋΜ)
16. Азр(О1Ви) (Азр = ϋ = АА 37 человеческого ΑϋΜ)
17. Ьуз(Вос) (Ьуз == К = АА 36 человеческого ΑϋΜ)
18. Азр(О1Ви) (Азр = ϋ = АА 35 человеческого ΑϋΜ)
19. ТЬгЦВи) (ТЬг =- Т = А А 34 человеческого ΑϋΜ)
20. РЬе (РЬе == ρ = АА 33 человеческого ΑϋΜ)
21. О1п(Тг1) (О1п == <3 = АА 32 человеческого ΑϋΜ)
22. Туг(Ши) (Туг = Υ = А А 31 человеческого ΑϋΜ)
23. Не (11е = I = А А 30 человеческого ΑϋΜ)
24. О1п(Тг1) (О1п == (3 = АА 29 человеческого ΑϋΜ)
25. Н1з(ТЛ) (ΗΪ8 = Η - АА 28 человеческого ΑϋΜ)
26. А1а (А1а -· А = АА 27 человеческого ΑϋΜ)
27. Ьеи (Ьеи == Ь = АА 26 человеческого ΑϋΜ)
28. Ьуз(Вос) (Ьуз =: К = АА 25 человеческого ΑϋΜ)
29. О1п(Тг1) (С1п = (3 = АА 24 человеческого ΑϋΜ)
30. Уа1 (Уа1 = V = А А 23 человеческого ΑϋΜ)
31. ТЬг(Ши) (ТЬг = Т = АА 22 человеческого ΑϋΜ)
32. Суз(Тй) (Суз = С = АА 21 человеческого ΑϋΜ)
33. ТЬг (1Ви) (ТЬг = Т = АА 20 человеческого ΑϋΜ)
34. О1у (О1у = г = А А 19 человеческого ΑϋΜ)
35. РЬе (РЬе = Ρ = АА 18 человеческого ΑϋΜ)
36. Аге(рЫ) (Аг£ = К = АА 17 человеческого ΑϋΜ)
37. Суз(Аст) (Суз = С = АА 16 человеческого ΑϋΜ)
38. О1у (СНу = г = АА 15 человеческого ΑϋΜ)
39. РЬе (РЬе = Р = АА 14 человеческого ΑϋΜ)
40. 8ег(Ши) (8ег = 8 = АА 13 человеческого ΑϋΜ)
41. Агя(рЫ) (Аг§ = К. = АА 12 человеческого ΑϋΜ)
- 18 029410
42. Ьеи
43. О1у
44. ΟΙπ(Τγϊ)
45. РЬе
46. Αδη(Τιΐ)
47. Азп(ТП)
48. Ме!
49. 8ег(!Ви)
50. О1п(Тг!)
51. Агё(рЫ)
(Ьеи = Ь = АА 11 человеческого ΑϋΜ) (О1у == г = АА 10 человеческого ΑϋΜ) (О1п -= <3 = АА 9 человеческого ΑϋΜ) (РЬе -= р = АА 8 человеческого ΑϋΜ) (Азп = Ν = АА 7 человеческого ΑϋΜ) (Αδη = Ν = АА 6 человеческого ΑϋΜ) (Ме! = Μ = АА 5 человеческого ΑϋΜ) (8ег =: 8 - АА 4 человеческого ΑϋΜ) (Οΐη ζ) = АА 3 человеческого ΑϋΜ) (Ατβ ϊ= К. = АА 2 человеческого ΑϋΜ)
Окисление на смоле было достигнуто с помощью Суз(Тг!) и Суз(Асш) защиты с сопутствующим расщеплением защитных групп и окисления до дисульфидной связи, используя йод (8 эквивалентов йода плюс 8 эквивалентов ΌΙΕΑ, с временем реакции 30 мин). Окисление было подтверждено образцом расщепления и анализом с использованием ВЭЖХ и МАЛДИ-МС.
8 партий были объединены для дальнейшего использования.
Пример 15А. О-{[(3 8)-3 -амино-4- {[(2К)-1 -амино-1 -оксо-3 -сульфанилпропан-2-ил] амино } -4-оксобутил]карбамоил}-Ь-тирозиладреномедуллин(2-52)
К 0.075 ммоль соединения примера 14А 520 мг (0.6 ммоль, 8 экв.) соединения примера 4А добавляли. Также 188 мг (0.59 ммоль, 7.8 экв.) ТВТи и 0.21 мл (1.2 ммоль, 16 экв.) ΌΙΕΑ добавляли. Реакцию осуществляли с помощью ДМФА в качестве растворителя, причем ДМФА использовали в количестве достаточном для набухания смолы и ее свободного взбалтывания. Время реакции представляло собой приблизительно 1 ч при комнатной температуре. Пептид отщепляли от смолы с сопутствующим глобальным снятием защиты с использованием концентрированного ТФУ в количестве, достаточном для набухания смолы и ее свободного взбалтывания, причем ТФУ содержит акцепторы (1-5% каждого из воды, фенола, тиоанизола и 1,2-этандиола), со временем реакции, которое составляет 2 1/2 ч. Твердый продукт лиофилизировали и очищали с помощью ОФ-хроматографии, используя 0.1% ТФУ в воде и 0.1% ТФУ в ацетонитриле в качестве мобильных фаз для того, чтобы обеспечить, чтобы значение рН оставалось ниже 4 каждый раз во время процесса очистки или лиофилизации. Все фракции, содержащие нужный ион по анализу МАЛДИ-МС объединяли. Выход составил 44.0 мг частично очищенного пептида (приблизительно 0.0035 ммоль, приблизительно 4.7% от теории; оцененная чистота: приблизительно 50%, основная примесь: ΑΌΜ (2-52)).
МАЛДИ МС (способ 6): т/ζ = 6275(М+Н)+ и 5866 (примесь: (ΑΌΜ(2-52)+Η)+)
Пример 16А. О- {[4- {[(2К)-1 -амино-1 -оксо-3 -сульфанилпропан-2-ил] амино } -3 -(метиламино)-4оксобутил]карбамоил}-Ь-тирозиладреномедуллин(2-52)
К 0.075 ммоль соединения примера 14А 530 мг (0.6 ммоль, 8 экв.) соединения примера 10А добавляли. Также 188 мг (0.59 ммоль, 7.8 экв.) ТВТи и 0.21 мл (1.2 ммоль, 16 экв.) ΌΙΕΑ добавляли. Реакцию осуществляли с помощью ДМФА в качестве растворителя, причем ДМФА использовали в количестве, достаточном для набухания смолы и ее свободного взбалтывания. Время реакции представляло собой приблизительно 1 ч при комнатной температуре. Пептид отщепляли от смолы с сопутствующим глобальным снятием защиты с использованием концентрированного ТФУ в количестве, достаточном для набухания смолы и ее свободного взбалтывания, причем ТФУ содержит акцепторы (1-5% каждого из воды, фенола, тиоанизола и 1,2-этандиола), со временем реакции, которое составляет 2 1/2 ч. Твердый продукт лиофилизировали и очищали с помощью ОФ-хроматографии используя 0.1% ТФУ в воде и 0.1% ТФУ в ацетонитриле в качестве мобильных фаз для того, чтобы обеспечить, чтобы значение рН оставалось ниже 4 каждый раз во время процесса очистки или лиофилизации. Все фракции, содержащие нуж- 19 029410
ный ион по анализу МАЛДИ-МС объединяли. Выход составил 34.0 мг частично очищенного пептида (приблизительно 0.0026 ммоль, приблизительно 3.5% от теории; оцененная чистота: приблизительно 50%, основная примесь: ΑΌΜ (2-52)).
МАЛДИ МС (способ 6): т/ζ = 6289(Μ+Η)+ и 5866 (примесь: (АОМ(2-52)+Н)+)
Пример 17А. О-{ [(4К)-4-амино-5- {[(2К)-1 -амино-1 -оксо-3 -сульфанилпропан-2-ил] амино }-5 оксопентил]карбамоил}-Ь-тирозиладреномедуллин (2-52)
К 0.075 ммоль соединения примера 14А 530 мг (0.6 ммоль, 8 экв.) соединения примера 13А добавляли. Также 188 мг (0.59 ммоль, 7.8 экв.) ΤΒΤϋ и 0.21 мл (1.2 ммоль, 16 экв.) ΙΧΕΑ добавляли. Реакцию осуществляли с помощью ДМФА в качестве растворителя, причем ДМФА использовали в количестве достаточном для набухания смолы и ее свободного взбалтывания. Время реакции представляло собой приблизительно 1 ч при комнатной температуре. Пептид отщепляли от смолы с сопутствующим глобальным снятием защиты с использованием концентрированного ТФУ в количестве достаточном для набухания смолы и ее свободного взбалтывания, причем ТФУ содержит акцепторы (1-5% каждого из воды, фенола, тиоанизола и 1,2-этандиола), со временем реакции, которое составляет 2 1/2 ч. Твердый продукт лиофилизировали и очищали с помощью ОФ-хроматографии используя 0,1% ТФУ в воде и 0,1% ТФУ в ацетонитриле в качестве мобильных фаз для того, чтобы обеспечить, чтобы значение рН оставалось ниже 4 каждый раз во время процесса очистки или лиофилизации. Все фракции, содержащие нужный ион по анализу МАЛДИ-МС, объединяли. Выход составил 47 мг частично очищенного пептида (приблизительно 0.0037 ммоль, приблизительно 5.0% от теории; оцененная чистота: приблизительно 50%, основная примесь: ΑΌΜ (2-52)).
МАЛДИ МС (способ 6): т/ζ = 6289(Μ+Η)+ и 5866 (примесь: (ΑΌΜ^^^^)
Рабочие примеры
Пример 1. О-{ [(3 8)-3-амино-4-( {(2К)-1 -амино-3 - [(2,5-диоксо-1 -{3 -оксо-3 - [(2- { ω-метоксиполиоксиэтилен[40кДа]}этил)амино]пропил}пирролидин-3-ил)сульфанил]-1-оксопропан-2-ил}амино)-4оксобутил]карбамоил}-Ь-тирозил-адреномедуллин(2-52)
44 мг неочищенного пептида примера 15А перемешивали с 426 мг (10.5 мкмоль, 1.5 экв, полученные от Эг. Кеддуз) 40 кДа метоксиполи(этилен гликоль) малеимидо пропионамида в 9 мл цитратного буфера рН 4 в течение ночи при комнатной температуре. Неочищенную реакционную смесь вводили в две порциях на препаративную ВЭЖХ систему с РНепотепех Ьипа 10 мк 100А Рго1ео С5 АХ!А 250 ммх21.2 мм колонка и хроматографировали с помощью градиента вода/ацетонитрил (оба с 0.1% ТФУ). Фракции собирали в пробирки по 20 мл на автоматизированном коллекторе фракций. Для обеспечения достаточной кислотности каждый флакон был заполнен 0.5 мл уксусной кислоты до сбора.
ΑΌΜ (2-52), который является побочным продуктом примера 15А и который не подвергали ПЭГилированию в этой реакции, а также непрореагировавший ПЭГ были удалены полностью.
Все фракции, содержащие пример 1, объединяли. Ацетонитрил частично удаляли на роторном испарителе при температуре воды в ванне 30°С и, приблизительно, 50 мбар в течение приблизительно 30 мин.
После добавления 0.5 мл уксусной кислоты, полученный раствор лиофилизовали. Общий выход примера 1 составил 109 мг (2.35 мкмоль, 33% от теории).
ВЭЖХ (способ 3): = 4.23-4.30 мин
Пример 2. Ο-{[(3-Ν-Метиламино-4-( {(2К)-1 -амино -3 -[(2,5 -диоксо -1-{3 -оксо-3 - [(2- { ω-метоксиполиоксиэтилен [40кДа]}этил)амино]пропил}пирролидин-3-ил)сульфанил]-1-оксопропан-2-ил}амино)-4оксобутил]карбамоил}-Ь-тирозиладреномедуллин(2-52)
- 20 029410
15 мг неочищенного пептида примера 16А перемешивали с 145 мг (3.58 мкмоль, 1.5 экв, полученные от Όγ. Кеббуз) 40 кДа метоксиполи(этиленгликоль)малеимидопропионамида в 5 мл цитратного буфера рН 4 в течение ночи при комнатной температуре. Неочищенную реакционную смесь вводили на препаративную ВЭЖХ систему с Рйепотепех Бипа 10 мк С18 300А 250 ммх21.2 мм колонка и хроматографировали с помощью градиента вода/ацетонитрил (оба с 0.1% ТФУ). Фракции собирали в пробирки по 20 мл на автоматизированном коллекторе фракций. Для обеспечения достаточной кислотности каждый флакон был заполнен 0.5 мл уксусной кислоты до сбора.
ΛΌΜ (2-52), который является побочным продуктом примера 16А и который не подвергали ПЭГилированию в этой реакции, а также непрореагировавший ПЭГ были удалены полностью.
Все фракции, содержащие пример 2, объединяли. Ацетонитрил частично удаляли на роторном испарителе при температуре воды в ванне 30°С и приблизительно 50 мбар в течение приблизительно 30 мин.
После добавления 0.5 мл уксусной кислоты полученный раствор лиофилизовали. Общий выход примера 2 составил 50 мг (1.08 мкмоль, 43% от теории).
ВЭЖХ (способ 3): К = 2.02-2.08 мин
Пример 3. О-{[(48)-4-амино-5-({(2К)-1-амино-3-[(2,5-диоксо-1-{3-оксо-3-[(2-{ш-метоксиполиоксиэтилен[40кДа]}этил)амино]пропил}пирролидин-3-ил)сульфанил]-1-оксопропан-2-ил}амино)-5оксопентил]карбамоил}-Б-тирозиладреномедуллин(2-52)
15 мг неочищенного пептида примера 17А перемешивали с 145 мг (3.58 мкмоль, 1.5 экв, полученные от Όγ. Кеббуз) 40 кДа метоксиполи(этиленгликоль) малеимидопропионамида в 5 мл цитратного буфера рН 4 в течение ночи при комнатной температуре. Неочищенную реакционную смесь вводили на препаративную ВЭЖХ систему с Рйепотепех Бипа 10мк Рго!ео 90А АХ!А 250 мм х21.2 мм колонка и хроматографировали с помощью градиента вода/ацетонитрил (оба с 0.1% ТФУ). Фракции собирали в пробирки по 20 мл на автоматизированном коллекторе фракций. Для обеспечения достаточной кислотности каждый флакон был заполнен 0.5 мл уксусной кислоты до сбора.
АГ)М (2-52), который является побочным продуктом примера 17А и который не подвергали ПЭГилированию в этой реакции, а также непрореагировавший ПЭГ были удалены полностью.
Все фракции, содержащие пример 3 объединяли. Ацетонитрил частично удаляли на роторном испарителе при температуре воды в ванне 30°С и приблизительно 50 мбар в течение приблизительно 30 мин.
После добавления 0.5 мл уксусной кислоты, полученный раствор лиофилизовали. Общий выход примера 3 составил 19.5 мг (0.42 мкмоль, 17% от теории).
ВЭЖХ (способ 3): К = 2.02-2.08 мин
Б. Оценка фармакологической активности
Пригодность соединений в соответствии с настоящим изобретением для лечения заболеваний может быть продемонстрирована с использованием следующих систем анализа:
1) Описание испытаний (1п уйго)
1а) Испытания на рекомбинантной клетке репортера рецептора адреномедуллина
Активность соединений в соответствии с настоящим изобретением количественно оценивали с помощью рекомбинантной клеточной линии яичника китайского хомячка (СНО), которая несет адреномедуллин - рецептор человека. Активация рецептора лигандами может быть измерена экворин люминесценцией. Конструкция клеточной линии и процедура измерения были описаны в деталях [Жтбег Б., КеЬшапп А., Оеейз А, апб КаЙйоГ В., Мо1 Рйагтасо1, 73, 1235-1243 (2008)]. Вкратце: клетки высевали на непрозрачные 384-луночные планшеты для микротитрования при плотности 4000 клеток/лунка и выращивали в течение 24 ч. После удаления культуральной среды клетки загружали в течение 3 ч с 0.6 мкг/мл коэлентеразина в раствор Тироде без Са2+ (130 мМ хлорида натрия, 5 мМ хлорида калия, 20 мМ НЕРЕ8 (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота), 1 мМ хлорида магния и 4.8 мМ гидрокарбо- 21 029410
ната натрия, рН 7.4) с добавлением 0.2 мМ 3-изобутил-1-метилксантина (ΙΒΜΧ) в инкубаторе для клеточных культур. Соединения добавляли в течение к 6 мин в раствор Тироде без Са2+, содержащий 0.1% бычьего сывороточного альбумина. Непосредственно перед добавлением Са2+ в конечной концентрации 3 мМ измерение экворин люминесценцией запускали с использованием подходящего люминометра. Свечение измеряли в течение 60 с. В типичном эксперименте соединения тестируют в концентрации в диапазоне от 1 х 10-13 до 3х10-6 М.
Для того, чтобы определить высвобождение активного адреномедуллина из соединений в соответствии с настоящим изобретением, соединения инкубировали при различных концентрациях для различных промежутков времени до 24 ч в растворе Тироде, дополненным фетальной телячьей сывороткой, клеточной культуральной средой или плазмой из различных видов при рН 7.4. Содержание Са2+ в соответствующей инкубационной среде буферизировали добавлением 4 мМ ЭДТА (этилендиамин тетрауксусной кислоты) перед добавлением образцов к клетке репортера рецептора адреномедуллина.
После соответствующей предварительной инкубации, примеры осуществления активируют клеткурепортер рецептора адреномедуллина более сильно, чем перед предварительной инкубацией. На это указывает тот факт, что значения ЕС50 определяются с коэффициентом до 10 меньше после предварительной инкубации, чем раньше и объясняется высвобождением активного адреномедуллина из соединений.
Типичные значения ЕС50 для примеров осуществления перед и после инкубации в течение 24 ч в буфере с добавлением 2.5% фетальной телячьей сыворотки приведены в следующей табл. 1.
Таблица 1
Пример № ЕС50 т = 0 ч [нМ1 ЕС50 Т = 24 ч [нМ1
АБМ 0.5 2.5
1 110 8.4
2 > 1000 161
3 124 12.3
1б) Анализы трансцеллюлярного электрического сопротивления в эндотелиальных клетках
Активность соединений в соответствии с настоящим изобретением характеризуется в т \д!го тестах на проницаемость в клетках пупочной вены человека (НИУЕС, Ьопга). За счет использования аппарата ЕС15 (ЕС15: Е1ес1пс СеП-зиЬзТгаТе 1трейапсе Зепктд; АррНей ВюрРучск 1пс; Тгоу, ΝΥ) изменения трансэндотелиального электрического сопротивления (ТЕЕК) над эндотелиальным монослоем, постоянно измеряются с использованием небольшого золотого электрода, на который клетки были высеяны. НиУЕС выращивали на 96-луночных сенсорных электродных планшетах (96^1Е, ΙΜάΐ ИтЬН, Магйпкпей) для сливания монослоев и проницаемость может быть вызвана воспалительными стимулами, такими как тромбин, Ί'ΝΡ-α, ΙΌ-β, УЕИР, гистамин и водород пероксид, которые были продемонстрированы, как те, что вызывают разрыв контактов эндотелиальных клеток и сокращение ТЕЕК. Тромбин использовали в конечной концентрации 0.5 ед/мл. Испытуемые соединения добавляли до или после добавления тромбина. В типичном эксперименте соединения тестируют в концентрации в диапазоне от 1 х 10-10 до 1 х 10-6 М.
Примеры осуществления ингибируют тромбин индуцированную проницаемость в этом испытании при концентрациях < 10-6 М.
1 в) Анализ проницаемости т уйго в эндотелиальных клетках
В другой модели т уйго эндотелиальной проницаемости активность соединений в соответствии с настоящим изобретением рассматривается в отношению к модуляции макромолекулярной проницаемости. Эндотелиальные клетки пупочной вены человека (НИУЕС5) выращивают до сливания на покрытых фибронектином фильтр мембранах ТгапкмеИ® (24-луночные планшеты, 6.5 мм - вставки с 0.4 мкМ поликарбонагной мембраны; Сок1аг #3413), которые отделяют верхний из нижней камеры культуры ткани с эндотелиальные клетки, растущими на нижней части верхней камеры. Среда верхней камеры дополняется 250 мкг/мл 40 кДа РП'С-декстрана (инвитроген, Ό1844). Повышенную проницаемость монослоя индуцировали с добавлением тромбина до конечной концентрации 0.5 ед/мл. Образцы среды собирали из нижней камеры каждые 30 мин и относительную флуоресцентность в качестве параметра для изменения макромолекулярной проницаемости с течением времени измеряют в подходящем флуориметре. Стимулирование тромбином вызывает почти удвоение перехода РРГС-декстрана через эндотелиальные монослои. В типичном эксперименте соединения тестируют в концентрации в диапазоне от 1 х 10-10 до 1 х 10-6 М.
Примеры осуществления ингибируют тромбин индуцированную проницаемость в этом испытании при концентрациях < 10-6 М.
2) Описание испытаний (!п У1уо)
2а) Измерение кровяного давления и сердечного ритма у телеметрических крыс Вистар с нормальным артериальным давлением
Сердечно-сосудистые эффекты, вызванные соединениями в соответствии с настоящим изобретением исследуются у свободно двигающихся самок крыс Вистар в сознании (масса тела > 200 г) путем радиотелеметрических измерений кровяного давления и частоты сердечных сокращений. Вкратце, телеметрическая система (Ό5Ι Иа1а Зсгепсе ОЩегпаНопаР ΜΝ, И5А) состоит из 3 основных элементов: им- 22 029410
плантируемые передатчики (ТА11РА-С40), приемники (КА1010) и программное обеспечение на основе компьютера для сбора данных (ОаЫсщсЧ™ А.К.Т. 4.1 для ^ίηάο^δ). Крыс оснащали имплантатами давления для постоянного использования, по крайней мере за 14 дней до экспериментов. Сенсорный катетер связан с 4-0 швом несколько раз, чтобы получить пробку 0.5 см от кончика катетера. Во время имплантации катетера крыс анестезировали с помощью пентобабитала (нембутал, санофи: 50 мг/кг внутрибрюшинно). После бритья кожи с брюшка, по средней линии живота делали разрез, и заполненный жидкостью сенсорный катетер вставляли вверх по потоку в открытую нисходящую аорту между подвздошной бифуркацией и почечными артериями. Катетер связывали несколько раз возле пробки. Кончик телеметрического катетера находится именно каудально в отношении почечных артерий и закреплен с помощью тканевого клея. Корпус передатчика прикреплен к внутренней стенке брюшины перед закрытием брюшной полости. Двухслойная укупорка брюшного разреза используется с индивидуальным сшиванием брюшины и мышечной стенки с последующим закрытием внешней обшивки. Для послеоперационной защиты от инфекций и боли вводили одну дозу антибиотика (окситетрациклин 10% К, 5.0 мл/кг подкожно, Ьс1а-рНагта ОтЬН&Со, Оегтапу) и обезболивающего (римадил К, 5.0 мл/кг подкожно, РП/сг, Оегтапу). Аппаратная конфигурация была оборудована для 24 животных. Каждая клетка с крысой находилась на верхней части индивидуальной принимающей платформы. После активации имплантированных передатчиков, система сбора данных он-лайн отбирает образцы и преобразует телеметрические сигналы давления в мм рт. Показатель атмосферного давления необходим в связи с отношением абсолютного давления (по отношению к вакууму) к окружающему атмосферному давлению. Программное обеспечение сбора данных предопределено, чтобы отбирать гемодинамические данные в течение 10-ти интервалов с интервалом каждые 5 мин. Сбор данных в файл запускают за 2 ч до введения испытуемых соединений и заканчивают после завершения 24-часовых циклов. В типичном эксперименте тестируемые соединения вводят в виде болюса или подкожно или внутривенно в дозе от 1 до 1000 мкг/кг веса тела (как указано для пептидного компонента).
Дикий тип адреномедуллина (ВасЬет, Н-2932) индуцирует снижение кровяного давления в этом исследовании с длительностью < 4 ч при испытании при дозах < 300 мкг/кг веса тела [Рисунок 1].
Рисунок 1: 24-часовые профили среднего артериального кровяного давления (САКД), записывали у телеметрических нормотензивных самок крыс Вистар после подкожного введения ΛΌΜ или наполнителя, как указанно (пунктирная линия). Точки данных были построены в качестве среднего значения ± РЭМ усредненных 30 мин интервалов от 4 животных на группу. Через час после введения животным, получавшим ΛΌΜ было показано среднее снижение САКД почти на 20% на пике (зарисованные кружки). Примерно через 3.5 ч САКД вернулись к уровням базовой линии и были в диапазоне, как у животных, которым вводили наполнитель (незарисованные кружки).
В этом тесте вещества в соответствии с настоящим изобретением вызывают снижение кровяного давления до 10 ч в дозах < 500 мкг/кг массы тела (в отношении пептидного компонента) [Рисунок 2].
Рисунок 2: 24-часовые профили среднего артериального кровяного давления (САКД), записывали у телеметрических нормотензивных самок крыс Вистар после подкожного введения примера 1 или наполнителя, как указанно (пунктирная линия). Точки данных были построены в качестве среднего значения ± РЭМ усредненных 30 мин интервалов от 6 животных на группу. Введение примера 1 в дозе 150 мкг/кг (в отношении пептидного компонента) снизило САКД примерно на от 15 до 19% до 6 ч после введения (зарисованные кружки). Между 6 и 14 ч после введения САКД постепенно вернулось к исходным значениям и, наконец, было в диапазоне, как у животных, которым вводили наполнитель (незарисованные кружки).
2б) Пропотевание жидкости из сосудов через кожу у крыс
Внутрикожно тест со стимулированием гистамином используется для оценки влияния соединений в соответствии с настоящим изобретением на барьерную функцию сосудов у здоровых животных. Самцов крыс Спрага-Доули (масса тела > 200 г) анестезировали с помощью изофлурана (2-3% в атмосферном воздухе) и приводили в положение лежа на спине. Брюшки брили и вставляли катетер в бедренную вену. Только наполнитель (0.5 мл РВ8 + 0.1% бычий сывороточный альбумин) или тестируемые соединения в соответствующих дозах вводили внутривенно в качестве болюсных инъекций. После 15 мин вторую инъекцию 100 мкл/кг 2% раствора голубого Эванса (81дта) вводили и сразу же после этого 100 мкл раствора гистамина соответствующих концентраций (например для 0-2.5-5 - 10-20-40 мкг/мл) вводили внутрикожно в кожу живота. Эванс голубой является сильным красителем связи белка плазмы и поэтому используется в качестве индикатора для богатой белком экстравазационной жидкости и утечки сосудов. Через 30 мин после этой процедуры крыс умерщвляли передозировкой изофлурана и последовательной дислокацией шеи и кожу живота вырезали. Волдыри вырезали путем использования 8 мм дерматома, образцы тканей взвешивали и передавали к формамиду в течение 48 ч в целях извлечения Эванса голубого. Образцы оценивали при 620 и 750 нМ длине волны на подходящем фотометре и содержание голубого Эванса в образцах корректировали для гема пигментов в соответствии с формулой А620 (исправлено) = А620 - (1.426 X А750 + 0.030), и рассчитывали по стандартной кривой. [способ адаптирован из ^апд Ь.Р., Ра1е1 М., Ρ;·ιζ;·ινί Н.М., ХУеюкег 8., 1о8ерЬ М.О., МсСогтаск Ό.Ο., МеШа 8., Ат. Кезри СгП Саге Мей,
- 23 029410
165(12), 1634-9 (2002)].
Вещества в соответствии с настоящим изобретением снижают экстравазацию плазменной жидкости, обогащенной белком, вызванную гистамином в этом тесте.
2в) Введение ЛПС в трахею у мышей
Тест со стимулированием липополисахаридом (ЛПС) внутри трахеи использовали для изучения влияния соединений в соответствии с настоящим изобретением на острое повреждение легких. Самцы популяции мышей ВАЬВ/с (средний вес животных 20-23 г) анестезировали изофлураном (7%) и ЛПС от Е. соН (например, серотип 055:В5; §1§та) вводили в 100 мкл физиологического раствора путем использования микропипетки. Типичные дозы ЛПС, используемые для теста, находятся в диапазоне от 1 до 10 мг/кг массы тела. В разные моменты времени до и после испытания испытуемые соединения вводили подкожно. Типичные дозы находились в диапазоне от 1 до 300 мкг/кг массы тела. В этом тесте типичными временными точками введения испытуемых соединений являлись 15 мин до или через 1 ч после инъекции ЛПС. Через 48 ч после введения ЛПС мышей глубоко анестезировали изофлураном и умерщвляли путем дислокации шеи. После пункции осуществляли лаваж трахеи бронхоальвеолярного пространства с помощью 0.5 мл ледяного солевого раствора. Легкие были подготовлены и взвешены. Клетки в ЖБЛ (жидкость бронхоальвеолярного лаважа) подсчитывали на цитометре (Се11 Όγη 3700, АЬЬой). В этом тесте вес легких в качестве меры отека легких воспроизводимо установлен, как увеличенный примерно на 50% или более по сравнению с фиктивными контролями через 48 ч после инъекции ЛПС. Поскольку вес легких показывает только очень низкую изменчивость в самих группах, абсолютный вес легких используется в качестве параметра. Счетчики для белых кровяных клеток всегда установлены, как значительно увеличенные по контролю ЖБЛ после ЛПС.
Введение веществ в соответствии с настоящим изобретением привело к значительно сниженному весу легких и количеству белых кровяных клеток в ЖБЛ после 48 ч при болюсном введении в дозах < 300 мкг/кг массы тела (в отношении пептидного компонента).
2г) Индукция острого повреждения легких у мини-свиней
Острое повреждение легких индуцируется у анестезированных мини свиней с использованием липополисахарида (ЛПС) или олеиновой кислоты в качестве стимула. В деталях: самки минипигов Геттинген от 3.5 до 5.5 кг массы тела (Е11едаагй, Эептагк) держали под наркозом с помощью непрерывной внутривенной инфузии летаветом®, дормикумом® и панкуронием® после премедикации с помощью внутримышечной инъекцией кетавета®/стреснила®. После внутритрахеальные интубации животным искусственно насыщали кровь кислородом с помощью педиатрического респиратора (8и11а 808ν; Игадег, Сегтапу) с помощью воздушной смеси кислорода дыхательным объемом от 30 до 50 мл и постоянной частоте 25 мин-1. Артериальное РаСО2 доводят до около 40 мм ртутного столба, регулируя часть вдыхаемого кислорода (ΡίΟ2) через отношение кислорода воздушной смеси. По стандартной методике следующие сердечно-сосудистые и респираторные параметры измеряли после размещения необходимых зондов и катетеров, установленные на соответствующих датчиков давления и записывающем оборудовании: центральное венозное давление (через левую яремную вену), артериальное кровяное давление и частота сердечных сокращений (АКД и ЧСС; через левую сонную артерию), давление в левом желудочке (ДЛЖ; используя катетер Миллара [ЕМС Мой.:8РС-340§, КЕЕ: 800-2019-1, 4Р], введенный в левый желудочек через правую сонную артерию), давление в легочной артерии (ДЛА; с помощью ангиографического баллонного катетера АККО\У Вегтап [КЕЕ.: АЕ07134 4 Ег. 50 см] помещенного в легочную артерию через левую яремную вену), минутный обьем сердца (МОС) и индекс внесосудистой воды легких (ИВВЛ) с применением системы Р1ССО (РиИюп, Сегтапу), подсоединенной к РиИюп 4Е- катетеру термодилюции (Ρν2014Ε08Ν), помещенному в правую бедренную артерию. Катетеры для измерения ЦВД, АКД, ЧСС, ДЛЖ и ДЛА установлены на системы записи Ропетай. Анализ газа артериальной крови выполняется для определения РаО2/ЕЮ2. В соответствии с Американо-Европейской конценсусной конференцией по ОРДС РаО2/ЕЮ2 < 300 мм рт.ст. рассматривается как указывающий на наличие острого повреждения легких. В зависимости от длительности задействованного протокола длительность экспериментов варьировалась от 4 и 5 ч после введения стимула, вызывающего травму легких. В конце эксперимента свиней умерщвляют путем обескровливания и жидкость бронхоальвеолярного лаважа (ЖБЛ) собирали из легких. Клеточное содержание ЖБЛ определяли с использованием цитометра клеток крови (Се11 ΌΥΝ 3700).
В типичной установке острое повреждение легких индуцируется введением в трахею липополисахарида (ЛПС; Е.соН 0111 :В4; §1§та Ь2630) в солевом растворе в дозе 5 мг/кг массы тела в каждое легкое через интубационную трубку. ДЛА и ИВВЛ увеличились, а РаО2/ЕЮ2 снизились ниже 300 мм рт.ст. в ответ на стимулирующее вещество. Клеточное содержание ЖБЛ значительно увеличилось. Введение соединения 1 по данному изобретению в качестве внутривенной инъекции болюса за 15 мин до введения ЛПС уменьшило или помешало изменениям, вызванных ЛПС.
В другом протоколе олеиновую кислоту (ОК; Зщта-АИпсй. 01008), разбавленную с помощью этанола (1:1) вводили внутривенно в течение более 15 мин в конечной дозе 100 мг/кг массы тела. Стимулирование с помощью ОК привело к увеличению ДЛА и ИВВЛ и снижению РаО2/ЕЮ2 ниже 300 мм ртутного столба. Изменения уменьшили или предотвратили путем введения соединения 1 по настоящему
- 24 029410
изобретению за 15 мин до начала инфузии ОК.
Дозы примера 1 < 30 мкг/кг массы тела (в отношении пептидного компонента) оказались активными в описанных тест-системах.
В. Примеры осуществления фармацевтических композиций
Соединения в соответствии с настоящим изобретением могут быть превращены в фармацевтические препараты посредством следующих способов:
Раствор для введения внутривенно:
Соединение в соответствии с настоящим изобретением растворяли в концентрации ниже растворимости насыщения в физиологически приемлемом растворителе (например, буферы с от рН 4 до рН 7, изотонический раствор хлорида натрия, раствор глюкозы 5% и/или ПЭГ 400 раствор 30%). Раствор стерилизовали с помощью фильтрации и заполняли стерильные и апирогенные контейнеры инъекций.
Раствор для введения подкожно:
Соединение в соответствии с настоящим изобретением растворяли в концентрации ниже растворимости насыщения в физиологически приемлемом растворителе (например, буферы с от рН 4 до рН 7, изотонический раствор хлорида натрия, раствор глюкозы 5% и/или ПЭГ 400 раствор 30%). Раствор стерилизовали с помощью фильтрации и заполняли стерильные и апирогенные контейнеры инъекций.

Claims (8)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Лекарственное средство, обладающее активностью адреномедуллина, содержащее соединение формулы (I)
    в которой
    η представляет собой число 0, 1, 2 или 3,
    К1 представляет собой водород, метил, этил, н-пропил или изопропил,
    К2 представляет собой линейный или разветвленный ПЭГ 40 кДа с концевой метоксигруппой, или одну из его солей, его сольватов или сольватов солей, в сочетании с инертным нетоксичным
    фармацевтически пригодным эксципиентом, где лекарственное средство в виде лекарственной формы для ингаляции.
  2. 2. Лекарственное средство по п.1, которое отличается тем, что соединение формулы (I) определено следующим образом:
    η представляет собой число 1 или 2,
    К1 представляет собой водород или метил,
    К2 представляет собой линейный ПЭГ 40 кДа с концевой метоксигруппой.
  3. 3. Лекарственное средство по любому из пп.1 и 2, которое отличается тем, что соединение формулы (I) определено следующим образом:
    η представляет собой число 1 или 2,
    К1 представляет собой водород,
    К2 представляет собой линейный ПЭГ 40 кДа с концевой метоксигруппой.
  4. 4. Лекарственное средство по любому из пп.1-3, где лекарственная форма для ингаляции выбрана из группы, включающей порошковый ингалятор и распылитель.
  5. 5. Применение лекарственного средства по любому из пп.1-4 для лечения и/или профилактики сердечно-сосудистых, отечных и/или воспалительных нарушений, выбранных из группы, состоящей из сердечной недостаточности, ишемической болезни сердца, ишемического и/или геморрагического инсульта, гипертонии, легочной гипертензии, окклюзионного заболевания периферических артерий, преэклампсии, хронической обструктивной болезни легких, астмы, острого и/или хронического отека легких, аллергического альвеолита и/или пневмонита, вызванного вдыханием органической пыли или частиц грибков актиномицетного или иного происхождения, и/или острого химического бронхита, острого и/или хронического химического отека легких, нейрогенного отека легких, острых и/или хронических легочных проявлений, вызванных радиацией, острых и/или хронических интерстициальных заболеваний легких, острого повреждения легких/острого респираторного дистресс-синдрома (ОПЛ/ОРДС) у взрослого или ребенка, включая новорожденных, ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к пневмонии и сепсису, аспирационной пневмонии и ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к аспирации, ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к вдыханию коптильного газа, синдрому острого посттрансфузионного повреждения легких (СОППЛ), ОПЛ/ОРДС или острой легочной недостаточности после операции, травмы и/или ожогов
    - 25 029410
    и/или вентиляторного повреждения легких (ИВЛ), повреждения легких следующего за аспирацией мекония, легочного фиброза, горной болезни, гломерулонефрита, острого повреждения почек, кардиоренального синдрома, лимфедемы, воспалительного заболевания кишечника, сепсиса, септического шока, синдрома системной воспалительной реакции (ССВР) неинфекционного происхождения, воспалительного заболевания кишечника и крапивницы, включающее введение человеку или животному активного количества лекарственного средства по любому из пп.1-4.
  6. 6. Применение по п.5, где сердечно-сосудистые, отечные и/или воспалительные нарушения выбраны из группы, состоящей из легочной гипертензии, хронической обструктивной болезни легких, астмы, острого и/или хронического отека легких, аллергического альвеолита и/или пневмонита, вызванного вдыханием органической пыли или частиц грибков актиномицетного или иного происхождения, и/или острого химического бронхита, острого и/или хронического химического отека легких, нейрогенного отека легких, острых и/или хронических легочных проявлений, вызванных радиацией, острых и/или хронических интерстициальных заболеваний легких, острого повреждения легких/острого респираторного дистресс-синдрома (ОПЛ/ОРДС) у взрослого или ребенка, включая новорожденных, ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к пневмонии и сепсису, аспирационной пневмонии и ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к аспирации, ОПЛ/ОРДС вторично по отношению к вдыханию коптильного газа, синдрому острого посттрансфузионного повреждения легких (СОППЛ), ОПЛ/ОРДС или острой легочной недостаточности после операции, травмы и/или ожогов и/или вентиляторного повреждения легких (ИВЛ), повреждения легких следующего за аспирацией мекония, легочного фиброза, горной болезни, включающее введение человеку или животному активного количества лекарственного средства по любому из пп.1-4.
  7. 7. Соединение формулы
    или одна из его солей, его сольватов или сольватов солей.
  8. 8. Соединение формулы
    - 26 029410
EA201600495A 2011-11-03 2012-10-30 Пролекарство адреномедуллина на основе полиэтиленгликоля и его применение EA029410B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP11187735 2011-11-03

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201600495A1 EA201600495A1 (ru) 2016-10-31
EA029410B1 true EA029410B1 (ru) 2018-03-30

Family

ID=47146369

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201400528A EA025631B1 (ru) 2011-11-03 2012-10-30 Пролекарство адреномедуллина на основе полиэтиленгликоля и его применение
EA201600495A EA029410B1 (ru) 2011-11-03 2012-10-30 Пролекарство адреномедуллина на основе полиэтиленгликоля и его применение

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201400528A EA025631B1 (ru) 2011-11-03 2012-10-30 Пролекарство адреномедуллина на основе полиэтиленгликоля и его применение

Country Status (45)

Country Link
US (3) US9603936B2 (ru)
EP (2) EP2773376B1 (ru)
JP (2) JP5995984B2 (ru)
KR (2) KR102004668B1 (ru)
CN (2) CN103998063B (ru)
AR (2) AR088582A1 (ru)
AU (2) AU2012331244B2 (ru)
BR (1) BR112014010708B1 (ru)
CA (1) CA2854134C (ru)
CL (1) CL2014000948A1 (ru)
CO (1) CO7020863A2 (ru)
CR (1) CR20140184A (ru)
CU (1) CU24184B1 (ru)
CY (2) CY1117354T1 (ru)
DK (2) DK3075395T3 (ru)
DO (2) DOP2014000078A (ru)
EA (2) EA025631B1 (ru)
EC (2) ECSP14013326A (ru)
ES (2) ES2568063T3 (ru)
GT (1) GT201400085A (ru)
HK (1) HK1246147A1 (ru)
HR (2) HRP20160285T1 (ru)
HU (2) HUE027333T2 (ru)
IL (3) IL232037B (ru)
IN (1) IN2014CN03290A (ru)
JO (2) JOP20190001B1 (ru)
LT (1) LT3075395T (ru)
MA (1) MA35618B1 (ru)
ME (1) ME02379B (ru)
MX (2) MX361287B (ru)
MY (2) MY194197A (ru)
NO (1) NO3075395T3 (ru)
PE (2) PE20181493A1 (ru)
PL (2) PL2773376T3 (ru)
PT (1) PT3075395T (ru)
RS (2) RS56819B1 (ru)
SG (2) SG10201607516SA (ru)
SI (2) SI3075395T1 (ru)
TN (1) TN2014000185A1 (ru)
TR (1) TR201802124T4 (ru)
TW (2) TWI653051B (ru)
UA (1) UA111098C2 (ru)
UY (2) UY34419A (ru)
WO (1) WO2013064508A1 (ru)
ZA (1) ZA201600434B (ru)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2012331279A1 (en) * 2011-11-03 2014-05-08 Bayer Intellectual Property Gmbh Tyrosine based linkers for the releasable connection of peptides
EP2896400A1 (en) * 2014-01-17 2015-07-22 Université Catholique De Louvain Method for increasing the bioavailability of inhaled compounds
US11414474B2 (en) 2014-03-20 2022-08-16 University Of Miyazaki Long-acting adrenomedullin derivatives
JP2018500272A (ja) 2014-09-26 2018-01-11 バイエル ファーマ アクチエンゲゼルシャフト 安定化アドレノメデュリン誘導体およびその使用
US10842879B2 (en) 2015-09-18 2020-11-24 University Of Miyazaki Long-acting adrenomedullin derivative
EP3604538A4 (en) * 2017-03-29 2020-12-30 University of Miyazaki LONG-ACTING ADRENOMEDULLINE DERIVATIVE
GB201707938D0 (en) * 2017-05-17 2017-06-28 Univ Sheffield Compounds
JP2022537369A (ja) 2019-06-18 2022-08-25 バイエル アクチェンゲゼルシャフト 長期安定化のためのアドレノメデュリン－類似体およびその使用
WO2021112220A1 (ja) * 2019-12-05 2021-06-10 国立大学法人 宮崎大学 異常タンパク質蓄積性神経変性疾患の治療剤
CN115666654A (zh) 2020-04-03 2023-01-31 拜耳公司 药物制剂聚乙二醇基肾上腺髓质素前药和用途
CR20220499A (es) * 2020-04-03 2022-11-18 Bayer Ag Formulaciones farmacéuticas líquidas de profármacos a base de polietilenglicol de adrenomedulina y su uso
IL301285A (en) 2020-09-10 2023-05-01 Precirix N V A portion of an antibody against FAP
CN112457218B (zh) * 2020-11-05 2022-08-09 宁夏医科大学 2,4-二氨基丁酸衍生物的合成方法
CN117957021A (zh) 2021-08-20 2024-04-30 拜耳公司 用于制备聚乙二醇化肾上腺髓质素的方法、它的中间体及其用途
WO2023203135A1 (en) 2022-04-22 2023-10-26 Precirix N.V. Improved radiolabelled antibody
WO2023213801A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Precirix N.V. Pre-targeting

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0296811A2 (en) * 1987-06-25 1988-12-28 Merck & Co. Inc. Carbamates of 4-hydroxyanisole as prodrugs for chemotherapy of melanoma

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5020040A (en) * 1987-06-24 1991-05-28 Digital Equipment Corporation Overwriting system for magneto-optical recording with self timing track
US6090800A (en) 1997-05-06 2000-07-18 Imarx Pharmaceutical Corp. Lipid soluble steroid prodrugs
US6624142B2 (en) 1997-12-30 2003-09-23 Enzon, Inc. Trimethyl lock based tetrapartate prodrugs
CA2292902C (en) 1999-12-24 2012-12-18 Alain Cadieux Use of calcitonin gene-related peptide in the prevention and alleviation of asthma and related bronchospastic pulmonary diseases
EP1243276A1 (en) 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
WO2004019993A1 (en) 2002-08-30 2004-03-11 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Self-immolative dendrimers releasing many active moieties upon a single activating event
EP1560599A1 (en) 2002-11-14 2005-08-10 Syntarga B.V. Prodrugs built as multiple self-elimination-release spacers
WO2005009768A1 (en) 2003-07-23 2005-02-03 Meggitt Aerospace Equipment Composite seal
DK1732607T3 (da) 2004-03-23 2019-07-22 Ascendis Pharma Gmbh Polymer-prodrug med en selvofrende linker
DK1749026T3 (da) 2004-05-24 2012-02-27 Inst Cardiologie Montreal Mærkede adrenomedullinderivater og deres anvendelse til billeddannelse og terapi
GB2427360A (en) 2005-06-22 2006-12-27 Complex Biosystems Gmbh Aliphatic prodrug linker
JP2010513476A (ja) * 2006-12-20 2010-04-30 ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ 造影剤
DK2155781T3 (da) 2007-05-11 2013-06-17 Inst Cardiologie Montreal Mærkede adrenomedullinderivater og deres anvendelse til visualisering og terapi
EP2525831B1 (en) 2010-01-22 2019-05-15 Ascendis Pharma A/S Carrier-linked carbamate prodrug linkers
AU2012331279A1 (en) * 2011-11-03 2014-05-08 Bayer Intellectual Property Gmbh Tyrosine based linkers for the releasable connection of peptides

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0296811A2 (en) * 1987-06-25 1988-12-28 Merck & Co. Inc. Carbamates of 4-hydroxyanisole as prodrugs for chemotherapy of melanoma

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CALICETI P, VERONESE F M: "Pharmacokinetic and Biodistribution Properties of Poly(ethylene glycol)-Protein Conjugates", ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 55, 1 January 2003 (2003-01-01), AMSTERDAM, NL, pages 1261 - 1277, XP003001867, ISSN: 0169-409X, DOI: 10.1016/S0169-409X(03)00108-X *
NAGAYA, N. KANGAWA, K.: "Adrenomedullin in the treatment of pulmonary hypertension", PEPTIDES, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 25, no. 11, 1 November 2004 (2004-11-01), AMSTERDAM, NL, pages 2013 - 2018, XP004610743, ISSN: 0196-9781, DOI: 10.1016/j.peptides.2004.07.007 *

Also Published As

Publication number Publication date
HRP20180319T1 (hr) 2018-03-23
EA025631B1 (ru) 2017-01-30
HRP20160285T1 (hr) 2016-04-22
AU2017203423A1 (en) 2017-06-08
CR20140184A (es) 2014-05-27
JO3385B1 (ar) 2019-03-13
DOP2018000203A (es) 2018-10-15
CY1119897T1 (el) 2018-06-27
US20140287984A1 (en) 2014-09-25
PT3075395T (pt) 2018-02-13
LT3075395T (lt) 2018-02-26
BR112014010708B1 (pt) 2021-03-02
PL2773376T3 (pl) 2016-07-29
DK3075395T3 (en) 2018-02-19
EA201400528A1 (ru) 2014-10-30
AU2012331244B2 (en) 2017-06-15
CU20140051A7 (es) 2014-10-02
DOP2014000078A (es) 2014-07-15
SI2773376T1 (sl) 2016-05-31
IL252281A0 (en) 2017-08-31
ECSP18071104A (es) 2018-10-31
MY173372A (en) 2020-01-21
UY37922A (es) 2018-11-30
ES2659195T3 (es) 2018-03-14
US9649363B2 (en) 2017-05-16
IL258229A (en) 2018-06-28
EP3075395B1 (en) 2017-11-22
HUE036535T2 (hu) 2018-07-30
MX361287B (es) 2018-12-03
TN2014000185A1 (en) 2015-09-30
BR112014010708A2 (pt) 2017-04-25
DK2773376T3 (en) 2016-04-18
MX350341B (es) 2017-09-04
AR113830A2 (es) 2020-06-17
US10035818B2 (en) 2018-07-31
PE20181493A1 (es) 2018-09-18
JP2017014264A (ja) 2017-01-19
JOP20190001A1 (ar) 2017-06-16
NZ622997A (en) 2015-12-24
TWI583396B (zh) 2017-05-21
AU2012331244A1 (en) 2014-04-17
IL232037A0 (en) 2014-05-28
TR201802124T4 (tr) 2018-03-21
IN2014CN03290A (ru) 2015-07-03
MX2014004384A (es) 2014-04-30
CL2014000948A1 (es) 2014-09-05
AU2017203423B2 (en) 2019-01-31
UY34419A (es) 2013-05-31
NO3075395T3 (ru) 2018-04-21
PL3075395T3 (pl) 2018-04-30
KR20180108892A (ko) 2018-10-04
PE20141219A1 (es) 2014-09-13
CA2854134C (en) 2020-04-21
JP2014532682A (ja) 2014-12-08
EP3075395A1 (en) 2016-10-05
KR102004668B1 (ko) 2019-07-26
JOP20190001B1 (ar) 2022-03-14
HK1246147A1 (zh) 2018-09-07
MA35618B1 (fr) 2014-11-01
EP2773376B1 (en) 2016-01-13
EP2773376A1 (en) 2014-09-10
RS56819B1 (sr) 2018-04-30
RS54623B1 (en) 2016-08-31
CA2854134A1 (en) 2013-05-10
UA111098C2 (uk) 2016-03-25
US20170204137A1 (en) 2017-07-20
NZ714621A (en) 2017-10-27
SG10201607516SA (en) 2016-10-28
US9603936B2 (en) 2017-03-28
CO7020863A2 (es) 2014-08-11
KR101965467B1 (ko) 2019-04-03
TW201332573A (zh) 2013-08-16
MY194197A (en) 2022-11-21
CN103998063A (zh) 2014-08-20
CU24184B1 (es) 2016-07-29
ECSP14013326A (es) 2014-05-31
WO2013064508A1 (en) 2013-05-10
CN103998063B (zh) 2016-09-21
CY1117354T1 (el) 2017-04-26
IL232037B (en) 2018-12-31
ZA201600434B (en) 2017-05-31
HUE027333T2 (en) 2016-09-28
TWI653051B (zh) 2019-03-11
TW201720467A (zh) 2017-06-16
IL258229B (en) 2020-02-27
US20160367636A1 (en) 2016-12-22
SG11201400924TA (en) 2014-09-26
JP6177975B2 (ja) 2017-08-09
KR20150000462A (ko) 2015-01-02
ME02379B (me) 2016-06-20
ES2568063T3 (es) 2016-04-27
AR088582A1 (es) 2014-06-18
CN107412740B (zh) 2021-02-09
CN107412740A (zh) 2017-12-01
GT201400085A (es) 2015-03-05
SI3075395T1 (en) 2018-03-30
EA201600495A1 (ru) 2016-10-31
IL252281B (en) 2021-01-31
JP5995984B2 (ja) 2016-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA029410B1 (ru) Пролекарство адреномедуллина на основе полиэтиленгликоля и его применение
KR20150000464A (ko) 펩티드의 방출가능한 연결을 위한 티로신 기재의 링커
NZ622997B2 (en) Polyethylene glycol based prodrug of adrenomedullin and use thereof
NZ714621B2 (en) Polyethylene glycol based prodrug of adrenomedullin and use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AZ KG TJ TM