EA027900B1 - Связывающие антиген cd27l белки - Google Patents

Связывающие антиген cd27l белки Download PDF

Info

Publication number
EA027900B1
EA027900B1 EA201490677A EA201490677A EA027900B1 EA 027900 B1 EA027900 B1 EA 027900B1 EA 201490677 A EA201490677 A EA 201490677A EA 201490677 A EA201490677 A EA 201490677A EA 027900 B1 EA027900 B1 EA 027900B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antibody
variable region
protein
antigen
co27b
Prior art date
Application number
EA201490677A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201490677A1 (ru
Inventor
Джон М. Делейни
Уилльям Кристиан Фэнслоу Iii
Чэдвик Теренс Кинг
Original Assignee
Эмджен Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=46964100&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA027900(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Эмджен Инк. filed Critical Эмджен Инк.
Publication of EA201490677A1 publication Critical patent/EA201490677A1/ru
Publication of EA027900B1 publication Critical patent/EA027900B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)

Abstract

Изобретение относится к связывающим антиген CD27L белкам, таким как антитела, полинуклеотидам, кодирующим указанные связывающие антиген CD27L белки, композициям конъюгатов лекарственное соединение-антитело и способам диагностики и лечения заболеваний, связанных с экспрессией CD27L.

Description

Изобретение принадлежит к области композиций антигенсвязывающих белков, способных связывать СО27Ь, а также к связанным с ними способам.
Предпосылки создания
СО27Ь (СЭ70. ΤΝΡ8Ρ7) представляет собой интегральный мембранный белок II типа, экспрессия которого в нормальных тканях строго ограничена субпопуляцией активированных Т- и В-лимфоцитов, дендритными клетками и небольшой субпопуляцией клеток в эпителии тимуса. Биологические функции СО27Ь, которые включают повышение или регуляцию иммунного ответа, осуществляются посредством связывания с его рецептором, СО27, который экспрессируется в основном на лимфоидных клетках. Взаимодействия СО27Ь/СО27 регулируют пролиферацию и дифференцировку В-лимфоцитов и костимуляцию/активацию Т-лимфоцитов. Нарушение взаимодействия СО27Ь/С027 у мышей с дефицитом СО27 в отсутствие иммунной стимуляции не дает никакого фенотипа. (Стс№а1, Ехрег! Ορίη. Ткет. Тат§е!8. 12, 341-351 (2008)).
Помимо очень ограниченной экспрессии в нормальных тканях СО27Б на довольно высоком уровне экспрессируется в некоторых подтипах В-клеточных неходжкинских лимфом (Β-ΝΗΕ), при пре-Вклеточном остром лимфоцитарном лейкозе (ОЛЛ) и при хронических лимфоцитарных лейкозах Вклеточного типа (В-ХЛЛ). Аберрантная экспрессия СО27Б также наблюдается в почечно-клеточной карциноме (ПКК), но не в нормальных тканях почки или других нормальных тканях. Соответственно, СО27Б во многом проявляет свойства, характерные для опухолеспецифичного антигена (Сге\уак Ехрег! Ορίη. Ткег. ТатдеК 12, 341-351 (2008)).
Каждый год из примерно 49000 пациентов в США, у которых развивается ПКК, у немногим более чем 40000 диагностируют прозрачно-клеточную ПКК (Данные Американского онкологического общества: Атепсап Сапсег 8ос1е1у: Сапсег Рас!з апй Идитек йпа1 (2008). Несмотря на то что за последние 4 года некоторые новые терапевтические средства были одобрены для лечения ПКК, показатели 5-летней выживаемости для пациентов с метастатической ПКК остаются низкими на уровне приблизительно 10-20% (Данные Национального Онкологического Института: №-10опа1 Сапег 1п8Й!и!е. 8ЕЕК сапсег 81аЙ8Йс8 Гас! зкее!: сапсег оГ 1ке кзйпеу апй гепа1 реМз - доступ 2008), и существует значительная нерешенная медицинская задача. Предполагаемое ежегодное количество пациентов с вновь поставленным диагнозом пкПКК (Соединенные Штаты), в которой, как ожидают, будет экспрессироваться СО27Ь, составляет приблизительно 36000. По оценкам, число пациентов с активной пкПКК в настоящее время составляет 64000.
Среди В-клеточных злокачественных заболеваний с аберрантной экспрессией СО27Е подтипы ВНХЛ диффузной В-крупноклеточной лимфомы (ОЕВСЬ) и фолликулярной лимфомы (РЬ, ФЛ) демонстрируют самую высокую частоту экспрессии, варьирующую от 33% для РЬ до 71% для ОЬВСЬ по оценкам, сделанным иммуногистохимическими методами на замороженных срезах с использованием валидированного антитела (Ьепз е! а1., Βτίΐ. I. Нета!о1. 106, 491-503 (1999). 50-89% опухолей В-ХЛЛ также экспрессируют СО27Б согласно оценкам, сделанным иммуногистохимическими методами на замороженных срезах, или методом поточной цитометрии на циркулирующих опухолевых клетках (Рапкеип е! а1., В1оой 85, 3556-3565 (1965); Ттепкп е! а1., Сапсег Кез. 57, 4940-4947 (1997)).
Из 127000 пациентов в США, у которых в настоящее время активна В-НХЛ, приблизительно у 50% опухоль принадлежит к подтипу ОЕВСЬ (средняя степень) (Мойоп е! а1., В1оой 107, 265-276 (2002)). Несмотря на применение стандартной терапии с использованием ритуксана с циклофосфамидом, адриамуцином, винкристином, преднизоном (СНОР) для пациентов с ОЕВСЬ, приблизительно у 50% происходят рецидивы. Соответственно, для этой болезни также существуют нерешенные медицинские задачи.
Краткое изложение сущности изобретения
Изобретение обеспечивает антигенсвязывающие белки к СО27Ь, например антитела и их функциональные фрагменты. Указанные антигенсвязывающие белки к СО27Ь особенно полезны в способах лечения заболеваний и нарушений, связанных с аберрантной пролиферацией клеток, например рака, и/или с воспалением.
В первом аспекте связывающий антиген СО27Ь белок содержит а) вариабельную область легкой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90% идентичностью, по меньшей мере 95% идентичностью или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8ЕС ГО N0:63, 5ЕС ГО N0:64, 8ЕС ГО N0:65, 8ЕС ГО N0:66, 8ЕС ГО N0:67, 8ЕС ГО N0:68, 8ЕС ГО N0:69 или 8ЕС ГО
- 1 027900
N0:70; Ь) вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90% идентичностью, по меньшей мере 95% идентичностью или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8ЕЦ ГО N0:17, 8ЕЦ ГО N0:18, 8ЕЦ ГО N0:19, 8ЕЦ ГО N0:20, 8ЕЦ ГО N0:21, 8Е0 ГО N0:22, 8Е0 ГО N0:23 или 8Е0 ГО N0:24; или с) вариабельную область легкой цепи из а) и вариабельную область тяжелой цепи из Ь).
Предпочтительные антигенсвязывающие белки согласно первому аспекту включают белки, включающие вариабельную область легкой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:63, и вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:17; белки, включающие вариабельную область легкой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:64, и вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:18; белки, включающие вариабельную область легкой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:65, и вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:19; белки, включающие вариабельную область легкой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:66, и вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:20; белки, включающие вариабельную область легкой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:67, и вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:21; белки, включающие вариабельную область легкой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:68, и вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:22; белки, включающие вариабельную область легкой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:69, и вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:23; и белки, включающие вариабельную область легкой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:70, и вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или полной идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:24.
Во втором аспекте связывающий антиген СО27Ь белок содержит а) вариабельную область легкой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:63, 8Е0 ГО N0:64, 8ЕЦ ГО N0:65, 8ЕЦ ГО N0:66, 8ЕЦ ГО N0:67, 8ЕЦ ГО N0:68, 8ЕЦ ГО N0:69 или 8ЕЦ ГО N0:70; Ь) вариабельную область тяжелой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в 8ЕЦ ГО N0:17, 8ЕЦ ГО N0:18, 8ЕЦ ГО N0:19, 8ЕЦ ГО N0:20, 8ЕЦ ГО N0:21, 8ЕЦ ГО N0:22, 8ЕЦ ГО N0:23 или 8Е0 ГО N0:24; или с) вариабельную область легкой цепи из а) и вариабельную область тяжелой цепи из Ь).
Предпочтительные антигенсвязывающие белки согласно второму аспекту включают белки, включающие вариабельную область легкой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:63, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:17; белки, включающие вариабельную область легкой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:64, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:18; белки, включающие вариабельную область легкой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:65, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую не
- 2 027900 более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в §Е0 ГО N0:19, белки, включающие вариабельную область легкой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в §Е0 ГО N0:66, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в §Е0 ГО N0:20; белки, включающие вариабельную область легкой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в §Е0 ГО N0:67, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в §Е0 ГО N0:21; белки, включающие вариабельную область легкой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в §Е0 ГО N0:68, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в §Е0 ГО N0:22; белки, включающие вариабельную область легкой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в §Е0 ГО N0:69, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в §Е0 ГО N0:23; и белки, включающие вариабельную область легкой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в §Е0 ГО N0:70, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую не более десяти или не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в §Е0 ГО N0:24.
В третьем аспекте связывающий антиген СГО27Й белок включает вариабельную область легкой цепи, включающую а) ЬСГОГО. содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.1, представленной в §Е0 ГО N0:71; ЬСПК.2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.2, представленной в §Е0 ГО N0:79; и БСГОВЗ, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью БСГОВЗ, представленной в §Е0 ГО N0:87; Ь) ЬСПК.1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.1, представленной в §Е0 ГО N0:72; ЬСПК.2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК2, представленной в §Е0 ГО N0:80; и БСГОВЗ, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью БСГОВЗ, представленной в §Е0 ГО N0:88; с) ЬСПК.1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.1, представленной в §Е0 ГО N0:73; ЬСПК.2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.2, представленной в §Е0 ГО N0:81; и ЬСОКЗ, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСОКЗ, представленной в §Е0 ГО N0:89; ά) ЬСПК.1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.1, представленной в §Е0 ГО N0:74; ЬСПК2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.2, представленной в §Е0 ГО N0:82; и БСГОВЗ, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСОКЗ, представленной в §Е0 ГО N0:90; е) ЬСПК.1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.1, представленной в §Е0 ГО N0:75; ЬСПК.2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.2, представленной в §Е0 ГО N0:8°,; и БСГОВЗ, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью БСГОВЗ, представленной в §Е0 ГО N0:91; Г) ЬСПК.1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.1, представленной в §Е0 ГО N0:76; ЬСПК.2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.2, представленной в §Е0 ГО N0:84; и БСГОВЗ, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСОКЗ, представленной в §Е0 ГО N0:92; д) ЬСПК.1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.1, представленной в §Е0 ГО N0:77; ЬСПК.2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.2, представленной в §Е0 ГО N0:85; и БСГОВЗ, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью БСГОВЗ, представленной в §Е0 ГО Н0:9З; или й) ЬСПК.1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.1, представленной в §Е0 ГО N0:78; ЬСПК.2,
- З 027900 содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСГОК2. представленной в §Еф ГО N0:86; и ЬСГОЕЗ. содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСГОЕЗ. представленной в 5>Е0 ГО N0:94; и вариабельную область тяжелой цепи, включающую ί) Η0ΌΚ1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ1, представленной в §Еф ГО N0:25; Η0ΌΚ2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ2, представленной в §Еф ГО N0:33; и Η0ΌΚ3, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ3, представленной в §Еф ГО N0:41; _)) Η0ΌΚ1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ1, представленной в 5>Е0 ГО N0:26; Η0ΌΚ2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ2, представленной в §Еф ГО N0:34; и Η0ΌΚ3, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ3, представленной в §Еф ГО N0:42; к) Η0ΌΚ1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ1, представленной в §Еф ГО N0:27; Η0ΌΚ2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ2, представленной в §Еф ГО N0:35; и Η0ΌΚ3, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ3, представленной в §Еф ГО N0:43; 1) Η0ΌΚ1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ1, представленной в §Еф ГО N0:28; Η0ΌΚ2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ2, представленной в §Еф ГО N0:36; и Η0ΌΚ3, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ3, представленной в 5>Е0 ГО N0:44; т) Η0ΌΚ1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ1, представленной в §Еф ГО N0:29; Η0ΌΚ2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ2, представленной в §Еф ГО N0:37; и Η0ΌΚ3, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ3, представленной в 5>Е0 ГО N0:45; η) Η0ΌΚ1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ1, представленной в §Еф ГО N0:30; Η0ΌΚ2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ2, представленной в §Еф ГО N0:38; и Η0ΌΚ3, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ3, представленной в §Еф ГО N0:46; о) Η0ΌΚ1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ1, представленной в §Еф ГО N0:31; Η0ΌΚ2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ2, представленной в 5>Е0 ГО N0:39; и Η0ΌΚ3, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ3, представленной в §Еф ГО N0:47; или р) Η0ΌΚ1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ1, представленной в §Еф ГО N0:32; Η0ΌΚ2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ2, представленной в 5>Е0 ГО N0:40; и Η0ΌΚ3, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Η0ΌΚ3, представленной в §Еф ГО N0:48.
Предпочтительные связывающие антиген СГО27Е белки согласно третьему аспекту включают белки, включающие вариабельную область легкой цепи из а) и вариабельную область тяжелой цепи из ί); белки, включающие вариабельную область легкой цепи из Ь) и вариабельную область тяжелой цепи из _)); белки, включающие вариабельную область легкой цепи из с) и вариабельную область тяжелой цепи из к); белки, включающие вариабельную область легкой цепи из ά) и вариабельную область тяжелой цепи из 1); белки, включающие вариабельную область легкой цепи из е) и вариабельную область тяжелой цепи из т); белки, включающие вариабельную область легкой цепи из ί) и вариабельную область тяжелой цепи из η); белки, включающие вариабельную область легкой цепи из д) и вариабельную область тяжелой цепи из о); и белки, включающие вариабельную область легкой цепи из Ь) и вариабельную область тяжелой цепи из р).
В четвертом аспекте изобретения связывающий антиген СГО27Е белок согласно первому, второму или третьему аспекту связывается с человеческим СО27Ь с аффинностью, меньшей или равной 2х10-11 М.
В пятом аспекте настоящего изобретения связывающий антиген СГО27Е белок согласно первому, второму, третьему или четвертому аспекту ингибирует связывание СГО27Е с СГО27.
В шестом аспекте настоящего изобретения связывающий антиген СГО27Е белок согласно первому, второму, третьему, четвертому или пятому аспекту представляет собой антитело, такое как антитело человека (человеческое антитело). Предпочтительные антитела включают те антитела, которые содержат легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в §Еф ГО:56, и тяжелую
- 4 027900 цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в 8ЕО ГО N0:10; те, которые содержат легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в 8Е0 ГО:57, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в 8Е0 ГО N0:11; те, которые содержат легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в 8Е0 ГО:58, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в 8Е0 ГО N0:12; те, которые содержат легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в 5>Е0 ГО:59, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в 5>Е0 ГО N0:13; те, которые содержат легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в 8Е0 ГО:60, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в 5>Е0 ГО N0:14; те, которые содержат легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в 8Е0 ГО:61, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в 8Е0 ГО N0:15; и те, которые содержат легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в 8Е0 ГО:62, и тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в 8Е0 ГО N0:16.
В седьмом аспекте связывающий антиген СО27Ь белок согласно первому, второму, третьему, четвертому, пятому или шестому аспекту конъюгирован с лекарственным соединением или химиотерапевтическим агентом. В предпочтительных вариантах реализации лекарственное соединение или химиотерапевтический агент конъюгированы с антигенсвязывающим белком, например антителом, с использованием линкера. Предпочтительные линкеры включают нерасщепляемые линкеры, такие как МСС.
Предпочтительным химиотерапевтическим агентом является ΌΜ1. Соответственно, в особенно предпочтительных вариантах реализации седьмой аспект обеспечивает связывающий антиген СО27Ь белок согласно первому, второму, третьему, четвертому, пятому или шестому аспекту, конъюгированный с ΌΜ1 линкером МСС, присоединенным к одному или большему числу остатков лизина.
Процесс конъюгирования ΌΜ1 со связывающим антиген СО27Ь белком, например антителом, обеспечит получение композиции, содержащей популяцию ОМ1-конъюгированных антител с различным числом молекул ΌΜ1 на антитело. Можно измерить среднее число для популяции. В предпочтительных вариантах реализации среднее число молекул ΌΜ1 на связывающий антиген СО27Ь белок, например антитело, составляет от 1 до 10, от 3 до 7 или от 4 до 6. В предпочтительных вариантах реализации композиция связывающих антиген СО27Ь белков согласно первому, второму, третьему, четвертому, пятому, шестому или седьмому аспекту настоящего изобретения характеризуется средним числом молекул ΌΜ1 на связывающий антиген СО27Ь белок, равным приблизительно 4,0, приблизительно 4,1, приблизительно 4,2, приблизительно 4,3, приблизительно 4,4, приблизительно 4,5, приблизительно 4,6, приблизительно 4,7, приблизительно 4,8, приблизительно 4,9, приблизительно 5,0, приблизительно 5,1, приблизительно 5,2, приблизительно 5,3, приблизительно 5,4, приблизительно 5,5, приблизительно 5,6, приблизительно 5,7, приблизительно 5,8, приблизительно 5,9 или приблизительно 6,0. Такие композиции могут содержать терапевтически эффективное количество связывающего антиген СГО27Е белка и могут быть лиофилизированы.
В восьмом аспекте изобретение обеспечивает выделенные нуклеиновые кислоты, кодирующие один или более полипептидных компонентов связывающего антиген СГО27Е белка, например, легкую цепь антитела и тяжелую цепь антитела. В предпочтительных вариантах реализации нуклеиновая кислота кодирует полипептид, включающий:
a) вариабельную область легкой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:63, 8Е0 ГО N0:64, 8Е0 ГО N0:65, 8ЕО ГО N0:66, 8ЕО ГО N0:67, 8ЕО ГО N0:68, 8ЕО ГО N0:69 или 8ЕО ГО N0:70;
b) вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:17, 8Е0 ГО N0:18, 8Е0 ГО N0:19, 8ЕО ГО N0:20, 8ЕО ГО N0:21, 8ЕО ГО N0:22, 8ЕО ГО N0:23 или 8ЕО ГО N0:24;
c) вариабельную область легкой цепи, включающую не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:63, 8Е0 ГО N0:64, 8ЕО ГО N0:65, 8ЕО ГО N0:66, 8ЕО ГО N0:67, 8ЕО ГО N0:68, 8ЕО ГО N0:69 или 8ЕО ГО N0:70;
б) вариабельную область тяжелой цепи, включающую не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:17, 8Е0 ГО N0:18, 8ЕО ГО N0:19, 8ЕО ГО N0:20, 8ЕО ГО N0:21, 8ЕО ГО N0:22, 8ЕО ГО N0:23 или 8ЕО ГО N0:24;
е) вариабельную область легкой цепи, включающую:
ί) ЬСЭК.1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСЭК.1, представленной в 8Е0 ГО N0:71; ЬСОК2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК.2, представленной в 8Е0 ГО N0:79; и ЬСПК3, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК3, представленной в 8Е0 ГО N0:87;
ίί) ЬСПК1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью Б-СПКЕ представленной в 8Е0 ГО N0:72; ЬСОК2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПК2,
- 5 027900 представленной в 8ЕО ГО N0:80; и БСГОРЗ. содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСОРЗ. представленной в §ЕЦ ГО N0:88;
ίίί) ЕСЭР1. содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСОР!. представленной в §ЕЦ ГО N0:73; ЕСГОР2. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЕСГОР2. представленной в §ЕЦ ГО N0:81; и ЬСОКЗ. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью БСГОРЗ. представленной в §ЕЦ ГО N0:89;
ίν) БСГОРЕ содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью БСГОРЕ представленной в §ЕЦ ГО N0:74; ЕСГОР2. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЕСГОР2. представленной в §ЕЦ ГО N0:82; и БСГОРЗ. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью БСГОРЗ. представленной в §ЕЦ ГО N0:90;
ν) БСГОРЕ содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПР1. представленной в §ЕЦ ГО N0:75; ЕСГОР2. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЕСГОР2. представленной в §ЕЦ ГО N0:83; и БСГОРЗ. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью БСГОРЗ. представленной в §ЕЦ ГО N0:91;
νί) БСГОР Е содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПР1. представленной в §ЕЦ ГО N0:76; ЕСГОР2. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЕСГОР2. представленной в §ЕЦ ГО N0:84; и БСГОРЗ. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью БСГОРЗ. представленной в §ЕЦ ГО N0:92;
νίί) БСГОРЕ содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПР1. представленной в §ЕЦ ГО N0:77; ЕСГОР2. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЕСГОР2. представленной в §ЕЦ ГО N0:85; и БСГОРЗ. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью БСГОРЗ. представленной в §ЕЦ ГО Н0:9З; или νίίί) БСГОРЕ содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСПР1. представленной в §ЕЦ ГО N0:78; ЕСГОР2. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЕСГОР2. представленной в §ЕЦ ГО N0:86; и БСГОРЗ. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью БСГОРЗ. представленной в §ЕЦ ГО N0:94; или
£) вариабельную область тяжелой цепи. включающую:
ί) НСОК1. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОРЕ представленной в §ЕЦ ГО N0:25; НСГОР2. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОР2. представленной в §ЕЦ ГО Н0:ЗЗ; и НСГОРЗ. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОРЗ. представленной в §ЕЦ ГО N0:41;
ίί) НСГОРЕ содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОРЕ представленной в §ЕЦ ГО N0:26; НСГОР2. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОР2. представленной в §ЕЦ ГО N034; и НСГОРЗ. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОРЗ. представленной в §ЕЦ ГО N0:42;
ίίί) НСОР1. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОРЕ представленной в §ЕЦ ГО N0:27; НСГОР2. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОР2. представленной в §ЕЦ ГО N035; и НСГОРЗ. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОРЗ. представленной в §ЕЦ ГО Н0:4З;
ίν) НСГОРЕ содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОРЕ представленной в §ЕЦ ГО N0:28; НСГОР2. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОР2. представленной в §ЕЦ ГО N036; и НСГОРЗ. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОРЗ. представленной в §ЕЦ ГО N0:44;
ν) НСОР1. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОРЕ представленной в §ЕЦ ГО N0:29; НСГОР2. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОР2. представленной в §ЕЦ ГО N037; и НСГОРЗ. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОРЗ. представленной в §ЕЦ ГО N0:45;
νί) НСГОРЕ содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОРЕ представленной в §ЕЦ ГО N030; НСГОР2. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОР2. представленной в §ЕЦ ГО N038; и НСГОРЗ. содержащий не более трех присоединений. делеций или за- 6 027900 мен аминокислот по сравнению с последовательностью НСЭК3. представленной в §Еф ГО N0:46;
νίί) НСГОР1. содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСЭК1. представленной в §Еф ГО N0:31; НСЭК.2. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСЭК2. представленной в §Еф ГО N0:39; и НСЭК.3. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСЭК.3. представленной в §Еф ГО N0:47; или νίίί) НСГОР1. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСГОР1. представленной в §Еф ГО N0:32; НСБК2. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСЭК2. представленной в §Еф ГО N0:40; и НСЭК.3. содержащий не более трех присоединений. делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСЭК3. представленной в §Еф ГО N0:48.
В некоторых вариантах реализации восьмого аспекта полипептид кодирует легкую цепь антитела. которая по меньшей мере 80%. по меньшей мере 90%. по меньшей мере 95% или на 100% идентична нуклеотидной последовательности. представленной в §Еф ГО N0:49. §Еф ГО N0:50. §Еф ГО N0:51. §Еф ГО N0:52. 8Е0 ГО N0:53. §Еф ГО N0:54 или §Еф ГО N0:55. В других вариантах реализации восьмого аспекта полипептид кодирует тяжелую цепь антитела. которая по меньшей мере 80%. по меньшей мере 90%. по меньшей мере 95% или на 100% идентична нуклеотидной последовательности. представленной в 8Еф ГО N0:3. 8Еф ГО N0:4. 8Еф ГО N0:5. 8Еф ГО N0:6. 8Еф ГО N0:7. 8Еф ГО N0:8 или 8Еф ГО N0:9.
В девятом аспекте настоящее изобретение обеспечивает экспрессионный вектор. который содержит одну или более нуклеиновых кислот согласно восьмому аспекту. В некоторых вариантах реализации экспрессионный вектор кодирует легкую цепь антитела. тяжелую цепь антитела или и легкую. и тяжелую цепи антитела.
В десятом аспекте настоящее изобретение обеспечивает рекомбинантную клетку-хозяина. содержащую одну или более нуклеиновых кислот согласно восьмому аспекту. функционально связанных с промотором. включая рекомбинантные клетки-хозяева. содержащие один или более экспрессионных векторов согласно девятому аспекту настоящего изобретения. В предпочтительных вариантах реализации рекомбинантная клетка-хозяин секретирует антитело. которое связывает СБ27Ь. Предпочтительными клетками-хозяевами являются линии клеток млекопитающих. включая клеточные линии СНО.
В одиннадцатом аспекте изобретение обеспечивает способы получения конъюгата антитела к ΟΟ27Σ с лекарственным соединением согласно седьмому аспекту путем конъюгирования линкера и лекарственного средства. например химиотерапевтического агента. с любыми связывающими антиген ΟΟ27Σ белками согласно первому. второму. третьему. четвертому. пятому или шестому аспектам. Возможно вначале соединить линкер и лекарственное средство. а затем конъюгировать их со связывающим антиген ΟΟ27Σ белком. или линкер может быть вначале конъюгирован со связывающим антиген ΟΟ27Σ белком. а затем соединен с лекарственным соединением. В предпочтительных вариантах реализации линкер представляет собой МСС. и ΌΜ1. В особенно предпочтительных вариантах реализации связывающий антиген ΟΟ27Σ белок представляет собой антитело. включающее последовательность вариабельной области легкой цепи. представленную в §Еф ГО N0:63. и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи. представленную в §Еф ГО N0:17 (например. ЛЫ). антитело. включающее последовательность вариабельной области легкой цепи. представленную в §Еф ГО N0:64. и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи. представленную в §Еф ГО N0:18 (например. ЛЬ2). антитело. включающее последовательность вариабельной области легкой цепи. представленную в §Еф ГО N0:65. и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи. представленную в §Еф ГО N0:19 (например. АЬ3). антитело. включающее последовательность вариабельной области легкой цепи. представленную в §Еф ГО N0:66. и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи. представленную в §Еф ГО N0:20 (например. АЬ4). антитело. включающее последовательность вариабельной области легкой цепи. представленную в §Еф ГО N0:67. и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи. представленную в §Еф ГО N0:21 (например. АЬ5). антитело. включающее последовательность вариабельной области легкой цепи. представленную в §Еф ГО N0:68. и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи. представленную в §Еф ГО N0:22 (например. АЬ6). антитело. включающее последовательность вариабельной области легкой цепи. представленную в §Еф ГО N0:69. и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи. представленную в §Еф ГО N0:23 (например. АЬ7). или антитело. включающее последовательность вариабельной области легкой цепи. представленную в §Еф ГО N0:70. и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи. представленную в §Еф ГО N0:24 (например. АЬ8). конъюгированное с ΌΜ1 посредством МСС путем осуществления химической реакции одного или более остатков лизина в антителе с МСС или МССГОМ1.
В двенадцатом аспекте изобретение обеспечивает способы лечения рака. включающие введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции. содержащей терапевтически эффективное количества связывающего антиген ΟΟ27Σ белка согласно первому. второму. третьему. четвертому. пятому или шестому аспектам. В предпочтительных вариантах реализации связывающий антиген ΟΟ27Σ белок представляет собой антитело. включающее последовательность вариабельной области легкой це- 7 027900 пи, представленную в 8ЕО ГО N0:63, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:17 (например, ЛЫ), антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:64, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:18 (например, ЛЬ2), антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:65, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:19 (например, АЬ3), антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:66, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:20 (например, АЬ4), антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:67, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:21 (например, АЬ5), антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:68, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:22 (например, АЬ6), антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:69, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:23 (например, АЬ7), или антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:70, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:24 (например, АЬ8). В особенно предпочтительных вариантах реализации связывающий антиген СО27Ь белок конъюгирован с химиотерапевтическим агентом (например, ΌΜ1) посредством линкера (МСС). В других предпочтительных вариантах реализации двенадцатого аспекта антитело имеет повышенную эффекторную функцию.
В некоторых вариантах реализации связывающий антиген СЭ27Б белок вводят пациенту, страдающего от одного из следующих заболеваний почечно-клеточные карциномы (ПКК), светлоклеточную ПКК, рак головы и шеи, глиобластому, рак молочной железы, опухоль мозга, назофарингеальную карциному, неходжкинскую лимфому (НХЛ), острый лимфоцитарный лейкоз (ОЛЛ), хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), лимфому Беркитта, анапластические крупноклеточные лимфомы (АЬСЬ), множественные миеломы, Т-клеточные лимфомы кожи, узелковые мелкоклеточные лимфомы с рассеченными ядрами, лимфоцитарные лимфомы, периферические Т-клеточные лимфомы, Лимфомы Ленерта, иммунобластную лимфому, Т-клеточный лейкоз/лимфому (АТЬЬ), Т-клеточный лейкоз взрослых (Т-АГЬ), энтробластную/центроцитарную (сЬ/сс) фолликулярную злокачественную лимфому диффузную Вкрупноклеточную лимфому, Т-клеточную лимфому по типу ангиоиммунобластной лимфаденопатии (АГОИ), Ассоциированную с ВИЧ лимфому брюшной полости, эмбриональную карциному, недифференцированную карциному носоглотки, болезнь Кастлемана, саркому Капоши, множественные миеломы, макроглобулинемию Вальденстрема или другие В-клеточные лимфомы.
В некоторых вариантах реализации взятый у пациента образец исследуют на экспрессию СГО27Е до введения связывающего антиген СЭ27Б белка. Экспрессия СЭ27Б может быть определена путем исследования присутствия кодирующей СГО27Е РНК или присутствия белка СЭ27Б в образце. Образец может представлять собой образец крови или биоптат.
В тринадцатом аспекте изобретение обеспечивает способы лечения аутоиммунного или воспалительного нарушения, причем указанный способ включает введение терапевтически эффективного количества связывающего антиген СГО27Е белка согласно первому, второму, третьему, четвертому, пятому или шестому аспектам нуждающемуся в этом пациенту. В предпочтительных вариантах реализации связывающий антиген СЭ27Б белок представляет собой антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:63, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:17 (например, АЬ1), антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:64, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:18 (например, АЬ2), антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:65, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:19 (например, АЬ3), антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:66, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:20 (например, АЬ4), антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:67, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:21 (например, АЬ5), антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:68, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:22 (например, АЬ6), антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:69, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:23 (например, АЬ7), или антитело, включающее последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:70, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в
- 8 027900
ЗЕО ΙΌ N0:24 (например, ЛЬ8). В предпочтительных вариантах реализации связывающий антиген СО27Ь белок ингибирует связывание СГО27 с СО27Ь. В особенно предпочтительных вариантах реализации аутоиммунное или воспалительное нарушение представляет собой системную красную волчанку (СКВ), инсулинзависимый сахарный диабет (ΙΌΌΜ), воспалительную болезнь кишечника (ВБК, ΙΒΌ), рассеянный склероз (РС), псориаз, аутоиммунный тироидит, ревматоидный артрит (РА) или гломерулонефрит. В других вариантах реализации лечение подавляет или предотвращает отторжение трансплантата или болезнь трансплантат против хозяина у пациента.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1 - сводная информация по функциональным и физическим характеристикам типичных вариантов реализации связывающих антиген СО27Ь белков;
фиг. 2 - измерение уровня и скорости интернализации АЬ4 (А4) и АЬ8 (А8) и их конъюгированных аналогов в клетки 786-0 от времени (А);
фиг. 3 - клетки 786-0 культивировали в течение 4 дней в присутствии возрастающих концентраций стрептавидина-МСС-ЭМ1, АЬ4-МСС-ЭМ1 и АЬ8-МСС-ЭМ1. Влияние на рост клеток измеряли с использованием реагента СЕЕЕ-Т1ТЕК-0Ь0, который позволяет измерять число клеток путем регистрации люминесценции;
фиг. 4 - ответ на дозу АЬ4-МСС-ЭМ1 и АЬ8-МСС-ЭМ1 в модели с ксенографтом 786-0. Внутривенное введение дозы в день 24 обозначено стрелкой около соответствующих доз;
фиг. 5 - ответ на дозу АЬ4-МСС-ЭМ1 и АЬ8-МСС-ЭМ1 в модели с ксенографтом СакЫ. График внутривенного введения доз обозначен стрелками;
фиг. 6 - ответ на дозу АЬ4-МСС-ЭМ1 в модели с ксенографтом Кар. График внутривенного введения доз обозначен стрелками;
фиг. 7 - ответ на различные дозы АЬ4-МСС-ЭМ1 в модели с ксенографтом 786-0;
фиг. 8 - анализ антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ) АЬ4-МСС-ЭМ1 в отношении опухолевых клеток Кар;
фиг. 9 - анализ антителозависимого клеточного фагоцитоза (АЗКФ) АЬ4-МСС-ЭМ1 (АЭСР) в отношении опухолевых клеток Ка_р и 786-0;
фиг. 10 - сравнение экспрессии СО27Ь в предварительно замороженных образцах опухолей, которые были определены как положительные в маскированном иммуногистохимическом анализе. Результаты указывают на то, что общая экспрессия белка СЭ27Ь наиболее высока в образцах пациентов с пкПКК, затем следуют образцы ПЬВСЬ (диффузной В-крупноклеточной лимфомы); В-ХЛЛ и РЬ;
фиг. 11 - результаты анализа экспрессии мРНК и белка СЭ27Ь. Результаты указывают на высокое преобладание экспрессии СО27Ь в клетках ПКК, В-НХЛ и ХЛЛ;
на фиг. 12 показана структура конъюгатов АЬ-МСС-ЭМ1 АЭС. описанных в настоящей заявке в примере 2.
Подробное описание предпочтительных вариантов реализации изобретения
Используемые здесь названия разделов предназначены исключительно для целей структурирования, их не следует воспринимать как ограничение раскрываемого изобретения. Все цитируемые в тексте описания источники явным образом полностью включены в описание путем ссылки.
Стандартные методики могут быть использованы для синтеза рекомбинантных ДНК, олигонуклеотидов, культивирования и трансформирования тканей, очистки белков и т. п. Ферментативные реакции и методики очистки могут осуществляться в соответствии с инструкциями производителя, либо так, как это обычно делается в данной области, либо как описано здесь. Описанные ниже процедуры и методики могут в целом быть осуществлены как известно в данной области или как описано в различных общих или более специальных источниках, цитируемых и обсуждаемых в данном описании. См., например, ЗатЬгоок с( а1., 2001, Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬогаФту Мапие1, 3'1 еб., Со1б Зрппд НагЬог ЬаЬогаФту Рте88, со1б δρτίη§ НагЬог, Ν.Υ., которая включена в настоящее описание посредством ссылки для любых целей. Если не даны конкретные определения, применяемая номенклатура, связанная с методами, а также лабораторные процедуры аналитической химии, органической химии, а также медицинской и фармацевтической химии, описанные здесь, хорошо известны и широко применяются в данной области. Для химического синтеза, химического анализа, изготовления фармацевтических препаратов, лекарственных форм, доставки и лечения пациентов могут использоваться стандартные методики.
СО27Ь.
Антигенсвязывающие белки связываются с ί'.Ό27Ε также известным как СЭ70 и ΤΝΡ3Ρ7. СО27Ь был впервые описан в патенте США № 5573924. Пример аминокислотной последовательности СО27Ь человека приведен здесь как ЗЕО ГО N0:1, что соответствует эталонной последовательности ΝΟΒΙ ΝΡ_001423,1 (01:4507605). В некоторых вариантах реализации антигенсвязывающий белок блокирует взаимодействие СО27Ь с его рецептором СГО27. Пример аминокислотной последовательности СГО27 приведен как ЗЕО ГО N0:2, что соответствует последовательности в базе 3\уЫ-Рго1: Р26842,2 (01:269849546). Зрелая аминокислотная последовательность СГО27 соответствует аминокислотам 20-260 последовательности ЗЕО ГО N0:2.
Связывающие антиген СО27Ь белки.
- 9 027900
Изобретение обеспечивает антигенсвязывающие белки, которые специфично связывают СО27Е Варианты реализации антигенсвязывающих белков включают пептиды и/или полипептиды, которые специфично связывают СО27Ь. Такие пептиды или полипептиды могут необязательно включать одну или более посттрансляционных модификаций. Варианты антигенсвязывающих белков включают антитела и их фрагменты, различным образом определенные в данном тексте, которые специфично связывают СО27Ь. К ним относятся антитела, которые специфично связывают СО27Ь человека, включая антитела, ингибирующие связывание или активацию СО27 антигеном СО27Ь.
Антигенсвязывающие белки согласно настоящему изобретению специфично связываются с СО27Ь. Специфично связываются в настоящем тексте обозначает, что антигенсвязывающий белок связывается с СО27Ь предпочтительно по сравнению с другими белками. В некоторых вариантах реализации специфически связывается означает, что связывающий антиген СО27Ь белок обладает более высокой аффинностью к СО27Ь, чем к другим белкам. Связывающие антиген СО27Ь белки, которые специфично связывают СО27Ь, могут обладать аффинностью связывания в отношении СО27Ь человека, меньшей или равной 1х10-7 М, меньшей или равной 2х10-7 М, меньшей или равной 3х10-7 М, меньшей или равной 4х10-7 М, меньшей или равной 5х10-7 М, меньшей или равной 6х10-7 М, меньшей или равной 7х10-7 М, меньшей или равной 8х10-7 М, меньшей или равной 9х10-7 М, меньшей или равной 1х10-8 М, меньшей или равной 2х10-8 М, меньшей или равной 3х10-8 М, меньшей или равной 4х10-8 М, меньшей или равной 5х10-8 М, меньшей или равной 6х10-8 М, меньшей или равной 7х10-8 М, меньшей или равной 8х10-8 М, меньшей или равной 9х10-8 М, меньшей или равной 1х10-9 М, меньшей или равной 2х10-9 М, меньшей или равной 3х10-9 М, меньшей или равной 4х10-9 М, меньшей или равной 5х10-9 М, меньшей или равной 6х10-9 М, меньшей или равной 7х10-9 М, меньшей или равной 8х10-9 М, меньшей или равной 9х10-9 М, меньшей или равной 1х10-10 М, меньшей или равной 2х10 -10 М, меньшей или равной 3х10-10 М, меньшей или равной 4х10-10 М, меньшей или равной 5х10-10 М, меньшей или равной 6х10-10 М, меньшей или равной 7х1010 М, меньшей или равной 8х10-10 М, меньшей или равной 9х10-10 М, меньшей или равной 1х10-11 М, меньшей или равной 2х10-11 М, меньшей или равной 3х10-11 М, меньшей или равной 4х10-11 М, меньшей или равной 5х10-11 М, меньшей или равной 6х10-11 М, меньшей или равной 7х10-11 М, меньшей или равной 8х10-п М, меньшей или равной 9х10-11 М, меньшей или равной 1х10-12 М, меньшей или равной 2х10 М, меньшей или равной 3х10- М, меньшей или равной 4х10- М, меньшей или равной 5х10- М, меньшей или равной 6х10-12 М, меньшей или равной 7х10-12 М, меньшей или равной 8х10-12 М или меньшей или равной 9х10-12 М. Методы измерения аффинности антигенсвязывающего белка хорошо известны в данной области. В примере 1 приведен пример такого метода.
Подразумевается, что, если в настоящем тексте упоминаются различные варианты реализации СО27Ь-связывающих антител, это также относится к их СО27Ь-связывающим фрагментам. СО27Ьзвязывающий фрагмент включает любой фрагмент антитела, способный специфично связываться с СО27Ь. СО27Ь-связывающий фрагмент может быть в любом описанном здесь каркасе.
В некоторых терапевтических вариантах связывающий антиген СО27Ь белок ингибирует связывание СО27Ь с СО27 и/или ингибирует один или более видов биологической активности, ассоциированных со связыванием СО27Ь с СО27, например СО27-опосредуемую передачу сигнала. Такие антигенсвязывающие белки называют нейтрализующими. В некоторых вариантах реализации нейтрализующий Связывающий антиген СО27Ь белок специфично связывает СО27Ь и ингибирует связывание СО27Ь с СО27 в любом диапазоне от 10% до 100%, например, на по меньшей мере приблизительно 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или больше. Например, связывающие антиген СО27Ь белки могут быть исследованы на нейтрализующую способность путем определения способности антигенсвязывающего белка блокировать связывание СЭ27-ЕС с клетками МР-1 (§1аск с1 а1., Ιηί. 1ттипо1. (1995) 7(7): 1087-1092)).
Варианты реализации антигенсвязывающих белков включают каркасную структуру (остов), которая различными путями определена здесь, с одним или более определяющими комплиментарность (гипервариабельными) участками (СОК).
Варианты реализации дополнительно включают антигенсвязывающие белки, включающие каркасную структуру с одной или большим числом вариабельных областей антитела, тяжелой или легкой цепи. Варианты реализации включают антитела, которые включают вариабельную область легкой цепи антитела, выбранную из группы, состоящей из вариабельной области легкой цепи антитела АЫ (ЬСу), ЬСу антитела АЬ2, ЬСу антитела АЬ3, ЬСу антитела АЬ4, ЬСу антитела АЬ5, ЬСу антитела АЬ6, ЬСу антитела АЬ7 и ЬСу антитела АЬ8 (8ЕЦ ГО N0:63-70 соответственно) и/или вариабельную область тяжелой цепи антитела, выбранную из группы, состоящей АЬ1 Неауу СНаш УапаЫс Ооташ (НСу), НСу антитела АЬ2, НСу антитела АЬ3, НСу антитела АЬ4, НСу антитела АЬ5, НСу антитела АЬ6, НСу антитела АЬ7 и НСу антитела АЬ8 (8ЕЦ ГО N0:17-24 соответственно), а также их фрагменты, производные, мутеины и варианты.
Примером легкой цепи, содержащей ЬСу антитела АЬ1, является легкая цепь, содержащая амино- 10 027900 кислотную последовательность, представленную в 8Εφ ГО N0:56.
Примером легкой цепи, содержащей ЬСу антитела ЛЬ2, является легкая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную в 8Εφ ГО N0:57.
Примером легкой цепи, содержащей ЬСу антитела АЬ4, является легкая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную в 8Εφ ГО N0:58.
Примером легкой цепи, содержащей ЬСу антитела АЬ5, является легкая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную в 8Εφ ГО N0:59.
Примером легкой цепи, содержащей ЬСу антитела АЬ6, является легкая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную в 8Εφ ГО N0:60.
Примером легкой цепи, содержащей ЬСу антитела АЬ7, является легкая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную в 8Εφ ГО N0:61.
Примером легкой цепи, содержащей ЬСу антитела АЬ8, является легкая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную в 8Εφ ГО N0:62.
Примером тяжелой цепи, содержащей ΗΟν антитела АЫ, является тяжелая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную в 8Εφ ГО N0:10.
Примером тяжелой цепи, содержащей НСу антитела АЬ2, является тяжелая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную в 8Εφ ГО N0:11.
Примером тяжелой цепи, содержащей НСу антитела АЬ4, является тяжелая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную в 8Εφ ГО N0:12.
Примером тяжелой цепи, содержащей НСу антитела АЬ5, является тяжелая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную в 8Εφ ГО N0:13.
Примером тяжелой цепи, содержащей НСу антитела АЬ6, является тяжелая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную в 8Εφ ГО N0:14.
Примером тяжелой цепи, содержащей НСу антитела АЬ7, является тяжелая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную в 8Εφ ГО N0:15.
Примером тяжелой цепи, содержащей НСу антитела АЬ8, является тяжелая цепь, содержащая аминокислотную последовательность, представленную в 8Εφ ГО N0:16.
Дополнительные примеры предусмотренных каркасов включают: фибронектин, неокарциностатин СВМ4-2, липокалины, Т-клеточный рецептор, домен белка-А (белок Ζ), 1т9, ТРК-белки, домены цинковые пальцы, рУШ, панкреатический полипептид птиц, ССШ. \У\У-домен гомологии 8гс 3, ΡΌΖ-домены, бета-лактамаза ТЕМ-1, тиреодоксин, стафилококковая нуклеаза, ΡΗΌ-пальцевые домены СЬ-2, ВРТ1, АРР1, ΗΡ8ΤΙ, экотин, ЬАС1-О1, ΕΌΤΙ, ΜΤΙ-ΙΙ, токсины скорпионов, пептид дефенсина-А насекомых, ΕΕΤΙ-ΙΙ, Μίη-23, СВЭ, РВР, цитохром Ь-562, домены рецептора Ь41, гамма-кристаллин, убиквитин, трансферрин, и лектин-подобные домены С-типа. Каркасы неантительного происхождения и их применение в терапевтических целях описано в ОеЬаиет и 8кегга, Сигг. 0ρίη. СНет. Вю1., 13:245-255 (2009) и Βίηζ е1 а1., №ц. Вю1есЬ., 23(10):1257-1268 (2005), которые полностью включены в настоящее описание посредством ссылки.
Аспекты настоящего изобретения включают антитела, содержащие следующие вариабельные области: ЬСу антитела АЬ1/НСу антитела АЬ1 (8Εφ ГО N0:637^0 ГО N0:17), ЬСу антитела АЬ2/НСу антитела АЬ2 (81+) ГО \0:64/8НО ГО N0:18), ЬСу антитела АЬ3/НСу антитела АЬ3 (8Εφ ГО \0:65/8НО Ц) N0:19), ЬСу антитела АЬ4/НСу антитела АЬ4 (8Εφ ГО Н0:66/8РО ГО N0:20), ЬСу антитела АЬ5/НСу антитела АЬ5 (8Εφ ГО Н0:67/8РО ГО N0:21), ЬСу антитела АЬ6/НСу антитела АЬ6 (8Εφ ГО Н0:68/8РО ГО N0:22), ЬСу антитела АЬ7/НСу антитела АЬ7 (8Εφ ГО Н0:69/8РО ГО N0:23), ЬСу антитела АЬ8/НСу антитела АЬ8 (8Εφ ГО Н0:70/8РО ГО N0:24) и их комбинации, а также их фрагменты, производные, мутеины и варианты.
Примеры антител согласно настоящему изобретению включают АЬ1 (8Εφ ГО Н0:56/8РО ГО N0:10), АЬ2 (81+) ГО N0:57/8^ ГО N0:11), АЬ4 (81+) ГО N0:58/8^ ГО N0:12), АЬ5 (81+) ГО N0:59/8^ ГО N0:13), АЬ6 (81+) ГО N0:60/8^ ГО N0:14), АЬ7 (81+) ГО N0:61^0 ГО N0:15), АЬ8 (81+) ГО N0:62/8^ ГО N0:16).
Обычно каждая вариабельная область легкой или тяжелой цепи антитела содержит три участка СГОК. Вариабельная область тяжелой цепи включает СЭК1 (НСГОК1) тяжелой цепи, СЭК2 (НСЭК2) тяжелой цепи и СГОК3 (НСЭК3) тяжелой цепи. Вариабельная область легкой цепи включает СГОК1 (ЬСОК1) легкой цепи, СГОК2 (ЬСОК2) легкой цепи и СГОК3 (ЬСПК3) легкой цепи. В некоторых вариантах реализации антигенсвязывающий белок включает один или более СГОК содержащихся в описанных здесь предпочтительных вариабельных областях.
Примеры таких участков СОК включают следующие, но не ограничены ими:
участки СОК вариабельной области легкой цепи антитела АЬ1: ЬСОК1 (8Εφ ГО N0:71), ССГОК2 (81+) ГО N0:79) и ЬСОК3 (81+) ГО N0:87);
участки СОК вариабельной области легкой цепи антитела АЬ2: ЬСГОГО (8Εφ ГО N0:72), ЬСОК2 (81+) ГО N0:80) и ЬСОК3 (81+) ГО N0:88);
участки СОК вариабельной области легкой цепи антитела АЬ3: ЬСГОГО (8Εφ ГО N0:73), ЬСОК2 (81+) ГО N0:81) и ЬСОК3 (81+) ГО N0:89);
- 11 027900 участки СГОР вариабельной области легкой цепи антитела ЛЬ4: ЕСГОР1 (8ЕЦ ГО N0:74), ЕСГОР2 (81 ГО) ГО N0:82) и ЕСГОР.З (81 ГО) ГО N0:90);
участки СГОР вариабельной области легкой цепи антитела АЬ5: ЕСЭР1 (8Е0 ГО N0:75), ЕСГОР2 (81 ГО) ГО N0:83) и ЕСГОР.З (81 ГО) ГО N0:91);
участки СГОР вариабельной области легкой цепи антитела АЬ6: ЕСЭР1 (8ЕЦ ГО N0:76), ЕСГОР2 (81 ГО) ГО N0:84) и ЕСГОР.З (81 ГО) ГО N0:92);
участки СГОР вариабельной области легкой цепи антитела АЬ7: ЕСГОР1 (8ЕЦ ГО N0:77), ЕСГОР2 (81 ГО) ГО N0:85) и ЕСГОР.З (81 ГО) ГО N0:93);
участки СГОР вариабельной области легкой цепи антитела АЬ8: ЕСГОР1 (8ЕЦ ГО N0:78), ЕСГОР2 (81 ГО) ГО N0:86) и ЕСГОР.З (81 ГО) ГО N0:94);
участки СГОР вариабельной области тяжелой цепи антитела АЬ1: НСГОР1 (8ЕЦ ГО N0:25), НСГОР2 (81 ГО) ГО N0^) и НСГОРЗ (81 ГО) ГО N0:41);
участки СГОР вариабельной области тяжелой цепи антитела АЬ2: НСГОР1 (8ЕЦ ГО N0:26), НСГОР2 (81 ГО) ГО N034) и НСГОРЗ (81 ГО) ГО N0:42);
участки СГОР вариабельной области тяжелой цепи антитела АЬЗ: НСГОР1 (8ЕЦ ГО N0:27), НСГОР2 (81 ГО) ГО N035), и НСОР.З (81 ГО) ГО Ы0:4З);
участки СЭР вариабельной области тяжелой цепи антитела АЬ4: НСГОР1 (8ЕЦ ГО N0:28), НСГОР2 (81 ГО) ГО N036) и НСОР.З (81 ГО) ГО N0:44);
участки СЭР вариабельной области тяжелой цепи антитела АЬ5: НСГОР1 (8ЕЦ ГО N0:29), НСГОР2 (81 ГО) ГО N037) и НСОР.З (81 ГО) ГО N0:45);
участки СЭР вариабельной области тяжелой цепи антитела АЬ6: НСГОР1 (8ЕЦ ГО N030), НСГОР2 (81 ГО) ГО N038) и НСОР.З (81 ГО) ГО N0:46);
участки СЭР вариабельной области тяжелой цепи антитела АЬ7: НСГОР1 (8ЕЦ ГО N031), НСГОР2 (81 ГО) ГО N039) и НСОР.З (81 ГО) ГО N0:47); и участки СЭР вариабельной области тяжелой цепи антитела АЬ8: НСГОР1 (8ЕЦ ГО N032), НСГОР2 (81 ГО) ГО N0:40) и НСГОРЗ (81 ГО) ГО N0:48).
В некоторых вариантах реализации антигенсвязывающий белок включает: А) полипептид, например, легкую цепь, который включает ЕСГОРЕ имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N08: 71, 72, 7З, 74, 75, 76, 77 и 78; ЕС0Р.2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N08: 79, 80, 81, 82, 8З, 84, 85 и 86; и/или ЬСОЮ, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N08: 87, 88, 89, 90, 91, 92, 9З и 94; и/или В) полипептид, например тяжелую цепь, которая содержит НСГОРЕ имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N08:25, 26, 27, 28, 29, З0, З1 и З2; НС0Р.2, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N08: ЗЗ, З4, З5, З6, З7, З8, З9 и 40; и/или НСОРЗ, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N08: 41, 42, 4З, 44, 45, 46, 47 и 48.
В других вариантах реализации антигенсвязывающий белок содержит А) аминокислотную последовательность легкой цепи, которая включает ЕСГОРЕ ЕСГОР2 и ЕСГОРЗ любой из ЬСу антитела АЬ1, ЬСу антитела АЬ2, ЬСу антитела АЬЗ, ЬСу антитела АЬ4, ЬСу антитела АЬ5, ЬСу антитела АЬ6, ЬСу антитела АЬ7 и ЬСу антитела АЬ8, и В) аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая включает НСГОРЕ НСГОР2 и НСГОРЗ любой из НСу антитела АЬ1, НСу антитела АЬ2, НСу антитела АЬЗ, НСу антитела АЬ4, НСу антитела АЬ5, НСу антитела АЬ6, НСу антитела АЬ7 и НСу антитела АЬ8.
В некоторых вариантах реализации участки СОК. включают не более одной, не более двух, не более трех, не более четырех, не более пяти или не более шести присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с примером СОР, приведенным здесь.
Аспекты настоящего изобретения включают антитела, содержащие вариабельную область легкой цепи антитела, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N08: 6З, 64, 65, 66, 67, 68, 69 и 70. Аспекты настоящего изобретения включают антитела, содержащие вариабельную область тяжелой цепи антитела, выбранную из группы, состоящей 8Е0 ГО N08: 17, 18, 19, 20, 21, 22, 2З и 24. Дополнительные аспекты настоящего изобретения включают антитела, содержащие А) вариабельную область легкой цепи антитела, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N08: 6З, 64, 65, 66, 67, 68, 69 и 70, и В) вариабельную область тяжелой цепи антитела, выбранную из группы, состоящей 8Е0 ГО N08: 17, 18, 19, 20, 21, 22, 2З и 24.
Антитела согласно настоящему изобретению могут содержать любую константную область, известную в данной области техники. Константная область легкой цепи может представлять собой, например, константную область легкой цепи типа каппа или лямбда, например человеческую константную область легкой цепи типа каппа или лямбда. Константная область тяжелой цепи может представлять собой, например, константную область тяжелой цепи типа альфа-, дельта-, эпсилон-, гамма- или мю-, например, человеческую константную область тяжелой цепи типа альфа-, дельта-, эпсилон-, гамма- или мю-. В одном варианте реализации константная область легкой или тяжелой цепи представляет собой фрагмент, производное, мутеин, вариант или природную константную область.
- 12 027900
Аспекты настоящего изобретения включают антитела, содержащие вариабельную область легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из 8ЕО ГО N08: 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 и 70, включающую не более одной, не более двух, не более трех, не более четырех, не более пяти, не более шести, не более семи, не более восьми, не более девяти или не более десяти присоединений, делеций или замен аминокислот. Аспекты настоящего изобретения включают антитела, содержащие вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N08:17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 и 24, включающую не более одной, не более двух, не более трех, не более четырех, не более пяти, не более шести, не более семи, не более восьми, не более девяти или не более десяти присоединений, делеций или замен аминокислот. Другие аспекты настоящего изобретения включают антитела, содержащие А) содержащие вариабельную область легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N08: 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 и 70, содержащей не более одной, не более двух, не более трех, не более четырех, не более пяти, не более шести, не более семи, не более восьми, не более девяти или не более десяти присоединений, делеций или замен аминокислот и В) вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N08: 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 и 24, содержащей не более одной, не более двух, не более трех, не более четырех, не более пяти, не более шести, не более семи, не более восьми, не более девяти или не более десяти присоединений, делеций или замен аминокислот. Например, в некоторых примерах реализации, антитело содержит 1) вариант вариабельной области легкой цепи, показанной в 8Е0 ГО N0:66, в котором фенилаланин в положении 51 заменен на лейцин, и/или пролин в положении 105 заменен на глицин или глютамин; 2) вариант вариабельной области тяжелой цепи, показанной в 8Е0 ГО N0:20, в котором глютамин в положении 1 заменен на глютаминовую кислоту, и/или аргинин в положении 16 заменен на глицин; или вариант вариабельной области легкой цепи, показанной в 8Е0 ГО N0:66, в котором фенилаланин в положении 51 заменен на лейцин, и/или пролин в положении 105 заменен на глицин или глютамин, и вариант вариабельной области тяжелой цепи, показанной в 8Е0 ГО N0:20, в котором глютамин в положении 1 заменен на глютаминовую кислоту, и/или аргинин в положении 16 заменен на глицин.
В одном варианте антигенсвязывающий белок содержит аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 81%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 83%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 8 8%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентична аминокислотной последовательности легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО N08: 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 и 70. В другом варианте антигенсвязывающий белок содержит аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 81%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 83%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентична аминокислотной последовательности тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО N08: 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 и 24. В еще одном варианте реализации антигенсвязывающий белок содержит А) аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 81%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 83%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентична аминокислотной последовательности легкой цепи, выбранной из группы, состоящей из 8Е0 ГО N08: 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 и 70, и В) аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 81%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 83%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентична аминокислотной последовательности тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из 8ЕО ГО N08: 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 и 24.
В некоторых вариантах реализации антигенсвязывающий белок содержит СЭК3 легкой цепи и/или тяжелой цепи. В некоторых вариантах реализации антигенсвязывающий белок включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы последовательностей, обозначенных 8Е0 ГО N08: 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 и 48. В некоторых вариантах реализации аминокислотная последовательность содержит не более одной, не более двух, не более трех, не более четырех, не более пяти или не более шести присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с примером последовательности, обозначенным 8Е0 ГО N08: 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 и 48. Соответственно, варианты реализации настоящего изобретения включают антигенсвязывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 81%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 83%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 85%,
- 13 027900 по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы последовательностей, обозначенных 8ЕЦ ГО N08: 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 и 48.
В некоторых вариантах реализации антигенсвязывающий белок содержит СЭК2 легкой цепи и/или тяжелой цепи. В некоторых вариантах реализации антигенсвязывающий белок включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы последовательностей, обозначенных 8ЕЦ ГО N08: 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 и 40. В некоторых вариантах реализации аминокислотная последовательность содержит не более одной, не более двух, не более трех, не более четырех, не более пяти или не более шести присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с примером последовательности, обозначенным 8ЕЦ ГО N08: 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, и 40. Соответственно, варианты реализации настоящего изобретения включают антигенсвязывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 81%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 83%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 8 6%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы последовательностей, обозначенных 8ЕЦ ГО N08: 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 и 40.
В некоторых вариантах реализации антигенсвязывающий белок содержит СЭК1 легкой цепи и/или тяжелой цепи. В некоторых вариантах реализации антигенсвязывающий белок включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы последовательностей, обозначенных 8ЕЦ ГО N08: 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 и 32. В некоторых вариантах реализации аминокислотная последовательность содержит не более одной, не более двух, не более трех, не более четырех, не более пяти или не более шести присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с примером последовательности, обозначенным 8ЕЦ ГО N08: 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 и 32. Соответственно, варианты реализации настоящего изобретения включают антигенсвязывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 81%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 83%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 8 6%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 8 8%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы последовательностей, обозначенных 81 ГО ГО N08: 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 и 32.
Антигенсвязывающие белки согласно настоящему изобретению включают каркасы обычных антител, включая антитела человека и моноклональные антитела, биспецифичные антитела, диатела, минитела, доменные антитела, синтетические антитела (иногда называемые здесь миметиками антител), химерные антитела, гибриды антител (иногда называемые здесь конъюгаты антител) и фрагменты каждого из них, соответственно. Описанные выше СГОК включая различные комбинации СОК, могут быть привиты на любой из следующих каркасов.
В настоящем тексте термин антитело относится к различным формам мономерных или мультимерных белков, содержащих одну или более полипептидных цепей, которые специфично связываются с антигеном, различными способами описанным здесь. В некоторых вариантах реализации антитела получены по технологии рекомбинантной ДНК. В дополнительных вариантах реализации антитела получены путем ферментативного или химического расщепления природных антител. В другом аспекте антитело выбрано из группы, состоящей из: а) антитела человека; Ь) гуманизированного антитела; с) химерного антитела; б) моноклонального антитела; е) поликлонального антитела; Г) рекомбинантного антитела; д) антигенсвязывающего фрагмента; П) одноцепочечного антитела; ί) диатела; _)) триатела, к) тетратела, 1) РаЬ-фрагмента; т) Р (аЬ')2-фрагмента, п) антитела 1дА, о) антитела 1дЭ. р) антитела 1дЕ, ср антитела 1дС1, г) антитела 1дС2, 8) антитела 1дС3, I) антитела 1дС4 и и) антитела 1дМ.
Вариабельная область включает по меньшей мере три гипервариабельных участка (СОК) легкой или тяжелой цепи, расположенных между каркасными участками (обозначаемыми как каркасные участки РК1, РК2, РК3 и РК4). КаЬа! с1 а1., 1991, 8сциспсс5 оГ Рго1еш8 оГ 1ттипо1од1са1 1п1еге81, РиЬбс НеаКЬ 8ету1се КЕН., ВеШе8ба, ΜΌ. Структурные блоки обычного антитела обычно содержат тетрамер. Каждый тетрамер обычно состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, где каждая пара содержит одну легкую и одну тяжелую цепь. Амино-концевые части каждой цепи включают вариабельную область размером приблизительно от 100 до 110 или более аминокислот, которая в основном отвечает за распознавание антигена. Карбокси-концевая часть каждой цепи определяет константную область, которая отвечает в основном за эффекторную функцию. У человека вариабельные области делятся на каппа и лямбда легкие цепи. Тяжелые цепи делятся на типы мю, дельта, гамма, альфа или эпсилон и определяют изотип антитела: 1дМ, ТдО, 1дС, 1дА и 1дЕ соответственно. 1дС включает несколько подклассов, включая,
- 14 027900 но не ограничиваясь перечисленными: Ι§01, Ι§02, Ι§03 и Ι§04. 1дМ делится на подклассы, включая, но не ограничиваясь перечисленными: 1дМ1 и 1дМ2. Варианты реализации настоящего изобретения включают все такие классы и подклассы антител, которые содержат вариабельную область или СОК антигенсвязывающих белков, описанные в настоящем тексте.
Некоторые природные антитела, такие как антитела, встречающиеся у верблюдов и лам, представляют собой димеры, состоящие из двух тяжелых цепей, и не содержат легких цепей. Настоящее изобретение включает димерные антитела из двух тяжелых цепей или их фрагменты, способные связывать СО27Ь.
Вариабельные области тяжелой и легкой цепей обычно демонстрируют общую структуру, состоящую из сравнительно консервативных каркасных участков (РК), соединенных тремя гипервариабельными участками, т.е. участками, определяющими комплиментарность или СОК. Участки СОК в первую очередь отвечают за распознавание и связывание антигенов. СОК из двух цепей каждой пары выравниваются каркасными участками, что обеспечивает связывание конкретного эпитопа. От Оконца к Сконцу, и легкая, и тяжелая цепи содержат домены РК1, СЭК1. РК2, СЭК2. РК3, СЭК3 и РК4. Отнесение аминокислот к каждому домену осуществляется в соответствии с системой КаЬаЕ
СОК составляют основные поверхностные контактные точки для связывания антигена. СЭК3 легкой цепи, и, особенно, СЭК3 тяжелой цепи могут образовывать наиболее важные детерминанты для связывания антигена в вариабельных областях легкой и тяжелой цепей. В некоторых антителах тяжелая цепь СЭК3 по-видимому образует основную зону контакта между антигеном и антителом. Схемы селекции ίη νίίΓο, в которых меняется только СОК3, можно использовать для изменения свойств связывания антитела или определения, какие остатки участвуют в связывании с антигеном.
Природные антитела обычно включают сигнальную последовательность, которая направляет антитело в клеточный аппарат секреции белков и которая обычно не присутствует в зрелых антителах. Полинуклеотид, кодирующий антитело согласно настоящему изобретению, могут кодировать присутствующую в естественных условиях сигнальную последовательность или гетерологичную сигнальную последовательность, описанные ниже.
В одном варианте реализации антигенсвязывающий белок представляет собой антитело, содержащее от одного до шести типичных СОК, описанных здесь. Антитела согласно настоящему изобретению могут принадлежать к любому типу, включая антитела 1дМ, 1§О (включая Ι§01, 1дО2, Ι§03, Ι§04), Ι§Ό, 1дА или 1дЕ. В одном конкретном варианте реализации антигенсвязывающий белок представляет собой антитело типа 1§О, например, антитело Ι§01.
В некоторых вариантах реализации, например, когда антигенсвязывающий белок представляет собой антитело с полными легкой и тяжелой цепью, все СОК получены из одного вида, например человека. В альтернативном варианте, например в тех вариантах реализации, где антигенсвязывающий белок содержит меньше шести СОК из приведенных выше последовательностей, дополнительные СОК могут быть либо из другого вида, либо могут представлять собой человеческие СОК, отличные от охарактеризованных в примерах последовательностей. Например, участки НСЭК3 и ЬСОК3 из соответствующих последовательностей, идентифицированных здесь, можно применять с НСОК1, НСОК2, ЬСОК1 и ЬСОК2, которые необязательно могут быть выбраны из последовательностей другого вида или последовательностей других антител человека, или их комбинаций. Например, участками СОК согласно изобретению можно заменить участки СОК коммерческих химерных или гуманизированных антител.
В конкретных вариантах реализации используются каркасные компоненты антигенсвязывающих белков, которые являются человеческими компонентами. В некоторых вариантах реализации, однако, каркасные компоненты могут представлять собой смесь из разных видов. Соответственно, если антигенсвязывающий белок представляет собой антитело, такое антитело может быть химерным антителом и/или гуманизированным антителом. Обычно и химерные антитела, и гуманизированные антитела относятся к антителам, в которых совмещены области из более чем одного вида. Например, химерные антитела обычно содержат вариабельную область (области) мыши (или, в некоторых случаях, крысы) и константную область (области) человека.
Гуманизированные антитела - это обычно антитела нечеловеческого происхождения, у которых каркасные участки вариабельных областей были заменены на последовательности из человеческих антител. Обычно в случае гуманизированного антитела все антитело, за исключением одного или более СОК, кодируется полинуклеотидом человеческого происхождения или идентично такому антителу за исключением одного или более СОК. Участки СОК, некоторые или все из которых кодируются нуклеиновыми кислотами, происходящими из организма, отличного от человека, прививают на бета-складчатый каркас вариабельной области антитела человека, специфичность которого определяется привитыми СОК. Создание таких антител описано в, например, А0 92/11018, 1опс8 1986, №1игс 321:522-525, Усгкосусп с1 а1., 1988, 8сюпсс 239:1534-1536. Гуманизированные антитела также могут быть получены с использованием мышей с генетически модифицированной иммунной системой. Коцис с! а1., 2004, Вю1сс1то1. Ргод. 20:639-654. В описанных здесь типичных примерах реализации идентифицированные СОК являются человеческими, и, соответственно, и гуманизированные, и химерные антитела в этом контексте включают некоторые СОК, не являющиеся человеческими; например могут быть получены гуманизированные
- 15 027900 антитела, которые содержат участки НСЭВ3 и ЬСОК3, причем один или более из других участков СЭВ происходят из других видов.
В одном варианте реализации связывающий антиген СО27Ь белок представляет собой мультиспецифичное антитело, в частности биспецифичное антитело, которое иногда называют также диателом. Они представляют собой антитела, которые связываются с двумя или более различными эпитопами одного антигена. В некоторых вариантах реализации биспецифичное антитело связывает СО27Ь и какойлибо антиген на человеческой эффекторной клетке (например, Т-клетке). Такие антитела можно использовать для нацеливания ответа эффекторных клеток против клеток, экспрессирующих СО27Ь, таких как опухолевые клетки. В предпочтительных вариантах реализации антиген эффекторной клетки человека представляет собой СЭ3. Патент США № 7235641. Способы получения биспецифичных антител известны в данной области. Один из таких способов включает конструирование Рс-части тяжелых цепей таким образом, чтобы образовывались выступы и впадины, которые облегчают образование гетеродимеров тяжелых цепей при совместной экспрессии в клетке. США 7695963. Другой способ также включает модификацию Рс-части тяжелой цепи, но с использованием электростатического управления для стимуляции образования гетеродимеров и подавления образования гомодимеров при совместной экспрессии в клетке. \Υ0 09/089004, каковой источник полностью включен в настоящее описание путем ссылки.
В одном варианте реализации связывающий антиген СО27Ь белок представляет собой минитело. Минитела представляют собой минимизированные антитело-подобные белки, содержащие κσΡν, связанный с доменом СН3. Ни е! а1., 1996, Сапсег Кек. 56:3055-3061.
В одном варианте реализации связывающий антиген СО27Ь белок доменное антитело; см., например, патент США № 6248516. Доменные антитела (бАЬк) представляют собой функциональные связывающие домены антител, соответствующие вариабельным областям легкой (УН) или тяжелой (УЬ) цепи человеческого антитела. Молекулярная масса бАВ составляет приблизительно 13 кДА или меньше одной десятой размера полного антитела. бАВк хорошо экспрессируются в различных хозяевах, включая системы на основе клеток бактерий, дрожжей и млекопитающих. Кроме того, бАЬк обладают высокой стабильностью и сохраняют активность даже после помещения в жесткие условия, такие как сушка замораживанием или тепловая денатурация. См., например, патенты США 6291158; 6582915; 6593081; 6172197; Заявка США № 2004/0110941; Европейский патент № 0368684; патент США № 6696245, публикации \Υ0 04/058821, \Υ0 04/003019 \Υ0 03/002609.
В одном варианте реализации связывающий антиген СО27Ь белок представляет собой фрагмент антитела, т.е. фрагмент любого из антител, описанных в настоящем тексте, который сохраняет специфичность связывания с ί'.Ό27Ε В различных вариантах реализации антителосвязывающие белки включают, но не ограничены перечисленными: фрагменты Р(аЬ), Р(АЬ'), Р(аЬ')2 или одноцепочечный Ρν. Как минимум антитело в контексте настоящего изобретения включает полипептид, который способен специфично связываться с СО27Ь, содержащий вариабельные области легкой и тяжелой цепей антитела полностью или их части, например, один или более СОК.
Другие примеры фрагментов СВ27Ь-связывающих антител включают, но не ограничены перечисленными: (ί) РаЬ-фрагмент, состоящий из доменов УЬ, УН, СЬ и СН1, (ίί) Рб-фрагмент, состоящий их доменов УН и СН1, (ίίί) Ρν-фрагмент, состоящий из доменов УЬ и УН одного антитела; (ίν) бАЬфрагмент (\Уагб е! а1., 1989, №Чиге 341:544-546), который состоит из единственной вариабельной цепи, (ν) выделенные участки СОК, (νί) Р(аЬ')2 -фрагменты, бивалентные фрагменты, содержащие два связанных РаЬ-фрагмента (νίί) одноцепочечные молекулы Ρν (ксРУ), в которых домены а УН и УЬ связаны пептидным линкером, который позволяет этим двум доменам ассоциировать с сайтом связывания антитела (Биб е! а1., 1988, 8с1епсе 242:423-426, Ник!оп е! а1., 1988, Ргос. №41. Асаб. 8с1. И.8.А. 85:5879-5883), (νίίί) биспецифичные одноцепочечные димеры Ρν (РСТ/и892/09965) и (ίχ) диатела или триатела, мультивалентные или мультиспецифичные фрагменты, полученные путем гибридизации генов (ТошПпкоп е! а1., 2000, Мебюбк Епгуто1. 326:461-479; \Υ0 94/13804; НоШдег е! а1., 1993, Ргос. №6. Асаб. 8οΐ. И.8.А. 90:6444-6448). Фрагменты антител могут быть модифицированы. Например, молекулы могут быть стабилизированы путем внедрения дисульфидных мостиков, связывающих домены УН и УЬ (Кебег е! а1., 1996, Манге Вю!есб. 14:1239-1245). Аспекты настоящего изобретения включают варианты реализации, в которых отличные СОК компоненты этих фрагментов представляют собой человеческие последовательности.
В одном варианте реализации связывающий антиген СО27Ь белок представляет собой полностью человеческое антитело. В этом варианте реализации, как описано выше, конкретные структуры содержат полные указанные тяжелые и легкие цепи, содержащие участки СОК. В дополнительных вариантах реализации применяют один или больше СОК согласно настоящему изобретению, с другими СОК, каркасными участками, участками 1 и Ό, константными областями и т.д., полученными из других антител человека. Например, участками СОК согласно настоящему изобретению можно заменить участки СОК любого числа антител человека, в частности коммерческих антител.
Одноцепочечные антитела могут быть образованы путем соединения фрагментов вариабельных доменов тяжелой и легкой цепи (Ρν-участок) аминокислотным мостиком (короткий пептидный линкер), с получением единой пептидной цепи. Такие одноцепочечные Ρν (κοΡν) получают путем гибридизации
- 16 027900
ДНК, кодирующей пептидный линкер между ДНК, кодирующими полипептиды двух вариабельных областей (Уь и УН). Получаемые в результате полипептиды могут укладываться с образованием антигенсвязывающих мономеров (например, димеров, тримеров или тетрамеров), в зависимости от длины гибкого линкера между двумя вариабельными областями (Когй е! а1., 1997, Рго!. Епд. 10:423; Когй е! а1., 2001, Вюто1. Епд. 18:95-108). Объединяя разные Уь- и УН-содержащие полипептиды можно получить мультимерные зсРу, которые связываются с различными эпитопами (Кпапдкит е! а1., 2001, Вюто1. Епд. 18:3140). Методики, разработанные для получения одноцепочечных антител, включают методики, описанные в патенте США № 4946778; Вий, 1988, 5с1епсе 242:423; Низ!оп е! а1., 1988, Ргос. №й1. Асай. 5сЕ И5А 85:5879; \Уагй е! а1., 1989, №Лиге 334:544, йе ОгааГ е! а1., 2002, МеШойз Мо1 Вю1. 178:379-87. Одноцепочечные антитела, полученные из раскрытых здесь антител (включая зсРуз, содержащие комбинации вариабельных областей ЬСу антитела АЫ /НСу антитела АЫ (5ЕО ГО Н0:63/5ЕО ГО N0:17), ЬСу антитела АЬ2 /НСу антитела АЬ2 (5ЕО ГО N0:64/5+0 ГО N0:18), ΕΟν антитела АЬ3 /ΗΟν антитела АЬ3 (5Е0 ГО Н0:65/5ЕО ГО N0:19), ЬСу антитела АЬ4 / НС\ антитела АЬ4 (5ЕО ГО \0:66/5ЕО ГО N0:20), ЬСу антитела АЬ5 /НСу антитела АЬ5 (5Е0 ГО Н0:67/5ЕО ГО N0:21), БСу антитела АЬ6 /НСу антитела АЬ6 (5Е0 ГО NΟ:68/5Е^ ГО N0:22), ЬСу антитела АЬ7/ΗСν антитела АЬ7 (5ЕО ГО \0:69/5ЕО ГО N0:23), ЬСу антитела АЬ8/ НСу антитела АЬ8 (5Е0 ГО Н0:70/5ЕО ГО N0:24, но не ограничиваясь ими) и их комбинации включены в настоящее изобретение.
В одном варианте реализации связывающий антиген СО27Ь белок представляет собой гибридный белок антитела (иногда называемый здесь конъюгатом антитела). Партнером для образования конъюгата может быть белковым или небелковым соединением; причем последние получают с использованием функциональных групп на антигенсвязывающем белке и на партнере по образованию конъюгата. В некоторых вариантах реализации антитело конъюгированной с небелковым химическим (лекарственным средством) с образованием конъюгата антитело-лекарственное соединение. Примеры конъюгатов антитело-лекарственное соединение и способов их получения обсуждаются ниже.
В одном варианте реализации связывающий антиген СО27Ь белок представляет собой аналог антитела, которые иногда называют синтетическими антителами. Например, в различных работах применяют альтернативные белковые каркасы или искусственные каркасы с привитыми участками СОК. Такие каркасы включают, но не ограничиваются перечисленными: мутации, введенные для стабилизации трехмерной структуры связывающего белка, а также полностью синтетические каркасы, состоящие, например, из биосовместимых полимеров. См., например, КогпйогГег е! а1., 2003, Рго!ешз: 5Ггис!иге, Рипс!юп, апй ВюшГогтайсз, Уо1ите 53, 1ззие 1:121-129. Косще е! а1., 2004, Вю!ескпо1. Ргод. 20:639-654. Кроме того, могут применяться пептидные миметики антител (РАМз), а также конструкции на основе миметиков антител, содержащие фибронектиновые компоненты каркаса.
Под белком в настоящем тексте понимают по меньшей мере две ковалентно связанные аминокислоты, включая белки, полипептиды, олигопептиды и пептиды. В некоторых вариантах реализации две или более ковалентно связанных аминокислот связаны пептидной связью. Белок может состоять из природных аминокислот и пептидных связей, например когда белок получают рекомбинантным способом с использованием системы экспрессии и клеток-хозяев, как описано ниже. В альтернативном варианте белок может включать синтетические аминокислоты (например, гомофенилаланин, цитрулин орнитин и норлейцин) или структуры - пептидомиметики, т.е. аналоги белков или пептидов, такие как пептоиды (см., 51топ е! а1., 1992, Ргос. №л1. Асай. 5сЕ И.5.А. 89:9367, данный источник включен в настоящий текст путем ссылки), которые могут быть устойчивы к действию протеаз или другим физиологическим условиям и/или условиям хранения. Такие синтетические аминокислоты могут быть включены. В частности, в случае когда антигенсвязывающий белок синтезируется ш ν 11го обычными способами, известными в технике. Кроме того, может быть использована любая комбинация пептидомиметиков, синтетических и природных остатков/структур. Термин аминокислота также включает остатки аминокислот, таких как пролин и гидроксипролин. К-группа или боковая цепь аминокислоты могут присутствовать в любой из конфигураций (Ь)-и (5)-. В конкретном варианте реализации аминокислоты могут быть в конфигурации (Ь)- или (5)-.
В некоторых аспектах настоящее изобретение обеспечивает рекомбинантные антигенсвязывающие белки, которые связывают СО27Ь, и в некоторых вариантах реализации рекомбинантный человеческий СО27Ь или его часть. В этом контексте рекомбинантный белок представляет собой белок, полученный с использованием рекомбинантных методик и известных в технике способов, т.е. путем экспрессии рекомбинантной нуклеиновой кислоты, как описано здесь. Способы и методики получения рекомбинантных белков хорошо известны в технике. Варианты реализации настоящего изобретения включают рекомбинантные антигенсвязывающие белки, которые связывают СО27Ь дикого типа и его варианты.
Состоящий, по существу, из означает, что аминокислотная последовательность может отличаться на приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15% относительно указанной последовательности 5Е0 ГО N0: и будет сохранять описанную здесь биологическую активность.
В некоторых вариантах реализации антигенсвязывающие белки согласно настоящему изобретению представляют собой выделенные (изолированные белки) или по существу чистые белки. Выделенный белок свободен от по меньшей мере части материала, с которым он обычно ассоциирован в природном
- 17 027900 состоянии, например, составляя по меньшей мере приблизительно 5% или по меньшей мере приблизительно 50% от массы общего белка в данном образце. Предполагается, что выделенный белок может составлять от 5 до 99,9% по масса общего содержания белка в зависимости от условий. Например, белок может быть получен в значительно повышенной концентрации за счет применения индуцибельного промотора или промотора, обеспечивающего высокий уровень экспрессии, что обеспечивает повышение уровня концентрации получаемого белка. Это определение включает продукцию антигенсвязывающего белка в различных организмах и/или клетках-хозяевах, которые известны в технике.
Для аминокислотных последовательностей идентичность и/или близость последовательности определяется с использованием стандартных известных в технике методик, включая, но не ограничиваясь перечисленными: алгоритм определения локальной идентичности, описанный в διηίΐΐι и Аа1сгтап. 1981, Абу. Арр1. Мабг 2:482, (Не кесщепсе 1бепйу аПдптеп1 а1догННт оГ №сб1стап и АипксН, 1970, 1. Μοί. ΒίοΙ. 48:443, метод поиска близости Реагкоп и Ыртап, 1988, Ргос. №1. Асаб. δα. υ.δ.Λ. 85:2444, и компьютерные реализации этих алгоритмов (ОАР, ΒΕδΤΡΙΤ, ΡАδТА и ТΡАδТА в программном пакете (Не Аюсопкш Оепебск δοΓ(\γа^е Раскаде, Оепебск Сотри(ег Огоир, 575 δ^ι^ Опус, Маб1коп, А1к., США), программу Век! РН, описанную у Эеуегеих е( а1., 1984, Ииск Ааб Кек. 12:387-395, предпочтительно с использованием настроек по умолчанию, или путем изучения. В предпочтительном случае процент идентичности рассчитывается с использованием БД РакГОВ на основании следующих параметров: штраф за несовпадение 1; штраф за пробел 1; штраф за размер пробела 0,33; и шраф за соединение 30, Сиггеп( Мебюбк ш δе^иеисе Сотрапкоп апб Апа1ук1к, Масгото1еси1е δе^иеис^ид апб δуиιНек^к, δе1есΐеб Мебюбк апб Аррбсабопк, рр 127-149 (1988), А1ап К. Ыкк, 1пс.
Примером полезного алгоритма является РШЕИР. РШЕИР генерирует множество выравниваний последовательностей по группе связанных последовательностей с использованием прогрессивных парных выравниваний. Он также может нарисовать дерево, демонстрирующее кластерные связи, использованные для выравнивания. В РШЕИР используется упрощенный метод прогрессивного выравнивания Репд & Иоо1Нбе, 1987, 1. Мо1. Еуо1. 35:351-360; метода, аналогичного описанному авторами Шддтк и δίκιη}, 1989, СΛΒI0δ 5:151-153. Подходящие параметры РШЕИР, включают вес пробела по умолчанию 3,00, вес длины пробела по умолчанию 0,10 и взвешенные концы пробелов.
Другим примером полезных алгоритмов является алгоритм Β^δΤ: АНксНи1 е( а1., 1990, 1. Мо1. Вю1. 215:403-410; АНксНи1 е( а1., 1997, Кис1ею Аабк Кек. 25:3389-3402; и Капп е( а1., 1993, Ргос. №·ι(1. Асаб. δα. ИША. 90:5873-5787. Особенно полезной программой Β^δΤ является программа ΑΡ-Β^δΤ^, полученная в АНксНи1 е( а1., 1996, Мебюбк ш Еп/уто1оду 266:460-480. В Αυ-Β^АδΤ-2 используется несколько параметров поиска, большинству из которых заданы значения по умолчанию. Настраиваемым параметрам заданы следующие значения:: оуег1ар крап (промежуток перекрывания) = 1, оуег1ар Егасбои (доля перекрывания) = 0,125, \уогб (Нгек1ю1б (порог слова) (Т)=11. Параметры Ηδ6 δ и Ηδ6 δ2 представляют собой динамические значения, задаваемые самой программой в зависимости от состава конкретной последовательности и конкретной базы, по которой проводят поиск представляющей интерес последовательности; однако, эти значения можно настраивать для повышения чувствительности.
Дополнительным полезным алгоритмом является Β^АδΤ с пробелами, описанный как геройеб Ьу АНксНи1 е( а1., 1993, №с1. Аабк Кек. 25:3389-3402. В алгоритме Β^АδΤ с пробелами используется оценка замен ΒΡ0δΉΜ-62; параметр порога Т установлен на 9; парный метод триггерного удлинения без пробелов, штрафов за пробел длиной к, равный 10+к; Хи=16, Хд=40 для стадии поиска в базе данных и =67 для стадии вывода результатов. Выравнивания с пробелами запускаются при оценке, соответствующей приблизительно 22 битам.
Обычно аминокислотная гомология, схожесть или идентичность между отдельными вариантами СИК составляет по меньшей мере 80% относительно приведенных здесь последовательностей, предпочтительны повышенные значения гомологии или идентичности, составляющие по меньшей мере 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% и наиболее предпочтительно 100%. Аналогичным образом процентная (%) идентичность последовательностей нуклеиновой кислоты применительно к последовательности нуклеиновой кислоты идентифицированных здесь связывающих белков определяется как процентная доля нуклеотидных остатков в кандидатной последовательности, идентичных нуклеотидным остаткам в кодирующей последовательности антигенсвязывающего белка. Конкретные методы включают модуль Β^АδΤN пакета Αυ-Β^АδΤ-2 с параметрами по умолчанию, с параметрами промежутка перекрывания и доли перекрывания установленными на значения 1 и 0,125 соответственно.
Обычно гомология, сходство или близость нуклеотидной последовательности между нуклеотидными последовательностями, кодирующими отдельные варианты СИК, и приведенными здесь нуклеотидными последовательностями составляет по меньшей мере 80%, и более типично предпочтительны более высокие значения гомологии или идентичности, составляющие по меньшей мере 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% и наиболее предпочтительно 100%.
Соответственно, вариант СИК - это СИК, характеризующийся указанной гомологией, сходством или идентичностью с исходным СИК согласно настоящему изобретению, который имеет ту же биологическую функцию, включая по меньшей мере 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% специфичности и/или активности исходного СИК, но не ограничиваясь этими значения- 18 027900 ми.
Хотя сайты или области введения изменений аминокислотной последовательности определяются заранее, мутация рег зе необязательно определена заранее. Например, для оптимизации эффективности мутации в данном сайте может быть осуществлен случайный мутагенез целевого кодона или области, после чего проводят скрининг экспрессированных вариантов СОК антигенсвязывающих белков для поиска оптимальной для желаемой активности комбинации. Методики осуществления замен-мутаций в заданных сайтах ДНК, имеющих известную последовательность, известны, например, мутагенез с использованием праймера М13 и ПЦР-мутагенез. Скрининг мутантов осуществляют с использованием тестов на активность антигенсвязывающих белков, например на связывание СЭ27Т.
Аминокислотные замены обычно относятся к единственному остатку; вставки обычно затрагивают порядка одного (1) до приблизительно двадцати (20) аминокислотных остатков, хотя также приемлемы значительно более крупные вставки. Размер делеции варьирует от приблизительно одного (1) до приблизительно двадцати (20) аминокислотных остатков, хотя в некоторых случаях размер делеций может быть значительно больше.
Замены, делеции, вставки или любые их комбинации можно использовать для получения конечного производного или варианта. Обычно эти изменения вводят для небольшого числа аминокислот, чтобы минимизировать изменение молекулы, в частности иммуногенность и специфичность антигенсвязывающего белка. Однако в некоторых обстоятельствах допустимы более обширные изменения, консервативные замены обычно осуществляют в соответствии с представленной ниже табл. 1.
Таблица 1
Исходный остаток Примеры замен
А1а Зег
Агд Ьуз
Азп 61η, Ыз
Азр С1и
Суз Зег
61п Азп
С1и Азр
61у Рго
Н1з Азп, С1п
Не Ьеи, Уа1
Ьеи 11е, Уа1
Ьуз Агд, С1п, С1и
МеЬ Ьеи, 11е
РЬе МеЬ, Ьеи, Туг
Зег ТЬг
ТЬг Зег
Тгр Туг
Туг Тгр, РЬе
Уа1 11е, Ьеи
Существенных изменений функции или иммунологической идентичности достигают, выбирая замены менее консервативные, чем замены, показанные в табл. 1. Например, могут быть сделаны замены, которые более значительно влияют на: структуру полипептидного остова в зоне изменения, например, структуру альфа-спирали или бета-слоя, заряд или гидрофобность молекулы в целевом сайте или объем боковой цепи. Заменами, от которых обычно ожидают наиболее значительных изменений в свойствах полипептида, являются такие, при которых (а) гидрофильный остаток, например серил или треонил, заменяют на гидрофобный остаток, например лейцил, изолейцил, фенилаланил, валил или аланил (или гидрофобный остаток заменяют на гидрофильный остаток); (Ь) цистеин или пролин заменяют на другой остаток (или другой остаток заменяют на цистеин или пролин); (с) остаток с электроположительной боковой цепью, например лизил, аргинил или гистидил, заменяют на электроотрицательный остаток, например глутамил или аспартил (или электроотрицательный остаток заменяют на электроположительный остаток); или (ά) остаток с объемной боковой цепью, например, фенилаланин, заменяют на остаток без боковой цепи, например, глицин (или остаток без боковой цепи заменяют на остаток с объемной боковой цепью).
Варианты обычно демонстрируют качественно такую же биологическую активность и вызывают
- 19 027900 тот же иммунный ответ. что и природный аналог. хотя в то же время варианты выбирают для изменения характеристик антигенсвязывающих белков в зависимости от необходимости. В альтернативном варианте. может быть сконструирован такой вариант. который приводит к изменениям биологической активности антигенсвязывающего белка. Например. могут изменяться или удаляться сайты гликозилирования. описанные здесь.
Другие производные антител к СБ27Ь в объеме настоящего изобретения включают ковалентные или агрегатные конъюгаты антител СБ27Ь. или их фрагментов. с другими белками или полипептидами. полученные. например. в результате экспрессии рекомбинантных гибридных белков. содержащих гетерологичные полипептиды. слитые с ^концом или С-концом полипептида антитела СБ27Ь. Например. конъюгированный полипептид может представлять собой гетерологичный сигнальный (или лидерный) полипептид. например лидер дрожжевого альфа-фактора. или пептид. такой как эпитопная метка. Гибридные (слитые) белки. включающие СБ27Ь. могут содержать пептиды. добавленные для облегчения очистки или идентификации антитела СБ27Ь (например. поли-гистидиновая метка). Полипептид антитела к СБ27Ь может также быть связан с пептидом РЬАО. как описано у Норр с1 а1.. Вю/ТесЬпо1о§у 6:1204. 1988 и в патенте США № 5011912. Пептид РЬАО обладает высокой антигенностью и создает эпитоп. обратимо связываемый специфичным моноклональным антителом (тАЬ). обеспечивающий возможность быстрого анализа и облегчая очистку рекомбинантного белка. Реагенты. пригодные для получения гибридных белков. в которых пептид РЬАО гибридизован с данным полипептидом. доступны для приобретения (§1дта. δΐ. Ьошк. МО. США).
Олигомеры. которые содержат один или более полипептидов антитела к СП27Ь. могут использоваться в качестве антагонистов СБ27Ь. Олигомеры могут быть представлены в форме ковалентно связанных или нековалентно связанных димеров. тримеров или олигомеров более высокого порядка. Предусмотрено применение олигомеров. включающих один или более полипептдов антитела к СП27Ь. одним из примеров является гомодимер. Другие олигомеры включают гетеродимеры. гомотримеры. гетеротримеры. гомотетрамеры. гетеротетрамеры и т. д.
Один вариант реализации относится к олигомерам. содержащим несколько полипептидов антитела к СП27Ь. связанных ковалентными или нековалентными взаимодействиями между пептидными фрагментами. связанными с полипептидами антитела к СБ27Ь. Такие пептиды могут представлять собой пептидные линкеры (спейсеры) или пептиды. обладающие способностью стимулировать олигомеризацию. Лейциновые молнии и некоторые полипептиды - производные антител. входят в число пептидов. которые способны стимулировать олигомеризацию полипептидов антитела к СП27Ь. присоединенных к ним. как более подробно описано ниже.
В конкретных вариантах реализации олигомеры содержат от двух до четырех полипептидов антитела к СБ27Т. Фрагменты антитела СБ27Р в составе олигомеров могут быть в любой из описанных выше форм. например могут представлять собой варианты или фрагменты. В предпочтительном варианте олигомеры включают полипептиды антитела СП27Ь. которые обладают связывающей активностью в отношении СБ27Т.
В одном варианте реализации олигомер получают с использованием полипептидов. полученных из иммуноглобулинов. Получение гибридных пептидов. включающих определенные гетерологичные пептиды. связанные с различными частями полипептидов-производных антител (включая Рс-домен) описано. например. у А^Нкепа/! е1 а1.. 1991. ΡNАδ И8А 88:10535; Вугп е1 а1.. 1990. №1иге 344:677; и Но11еиЬаидк е1 а1.. 1992 СопЧшсИоп о£ 1ттипод1оЬи1ш Рикюп РгоГетк. у Сиггей РгоЮсок ίη 1ттипо1оду. 8ирр1. 4. стрю 10.19.1-10.19.11.
Один из вариантов реализации настоящего изобретения относится к димеру. содержащему два гибридных белка. полученных путем гибридизации СП27Ь-связывающего фрагмента антитела к СБ27Т с Рс-областью антитела. Димер может быть образован. например. путем встраивания гибридного гена. кодирующего гибридный белок. в подходящий экспрессионный вектор. экспрессии этого гена в клеткехозяине. трансформированной рекомбинантным экспрессионным вектором. и обеспечения возможности для сборки экспрессированного гибридного белка подобно молекулам антитела. после чего образуются межцепные дисульфидные связи между Рс-фрагментами. за счет чего образуется димер.
Термин Рс-полипептид в настоящем описании включает нативные и мутантные формы полипептидов. полученных из Рс-области антитела. Также включены укороченные формы таких полипептидов. содержащие шарнирный участок. который стимулирует димеризацию. Гибридные белки. включающие Рс-фрагменты (и образованные из них олигомеры) обеспечивают преимущество более легкой очистки методом аффинной хроматографии на колонках с белком А или белком О.
Один подходящий полипептид Рс. описанный в заявке РСТ \У0 93/10151 (включенной в настоящее описание путем ссылки). представляет собой одноцепочечный полипептид. расположенный на участке от ^концевого шарнирного участка до нативного С-конца Рс-области человеческого антитела 1дО. Другой пригодный Рс-полипептид представляет собой мутантный Рс. описанный в патенте США № 5457035 и у Вайт е1 а1.. 1994. ЕМВ0 ί. 13:3992-4001. Аминокислотная последовательность этого мутеина идентична нативной последовательности Рс. описанной в \У0 93/10151. за тем исключением. что аминокислота 19 изменена с Ьеи на А1а. аминокислота 20 изменена с Ьеи на О1и. и аминокислота 22 изменена с
- 20 027900
01у на А1а. Данный мутеин проявляет пониженную аффинность в отношении рецепторов Рс.
В других вариантах реализации вариабельной частью тяжелой и/или легкой цепей антитела СО27Ь может быть заменена вариабельная часть легкой и/или тяжелой цепи некоторого антитела.
В альтернативном варианте олигомер представляет собой гибридный белок, включающий несколько полипептидов антитела к СО27Ь, с пептидными линкерами (спейсерными пептидами) или без них. К подходящим пептидным линкерам относятся линкеры, описанные в патентах США № 4751180 и 4935233.
Другой способ получения олигомерных производных антитела к СО27Ь включает использование лейциновой молнии. Домены типа лейциновой молнии представляют собой пептиды, которые стимулируют олигомеризацию белков, в которых они расположены. Лейциновые молнии были впервые обнаружены в нескольких ДНК-связывающих белках (ЬапбксЬик е1 а1., 1988, 8с1еисе 240:1759), а затем были обнаружены в различных других белках. К известным лейциновым молниям принадлежат природные пептиды и их производные, которые димеризуются или тримеризуются. Примеры доменов лейциновых молний, пригодных для получения растворимых олигомерных белков, описаны в заявке РСТ \У0 94/10308, и лейциновая молния из белка Ό сурфактанта легких (8ΡΌ) описана у Норре е1 а1., 1994, РЕВ8 Ьейег8 344:191. Указанные источники включены в данное описание путем ссылки. Применение модифицированной лейциновой молнии, которая обеспечивает стабильную тримеризацию гетерологичного белка, гибридизованного с ней, описано в Рап§1о№ е1 а1., 1994, §еш1и. 1ттипо1. 6:267-78. В одном подходе рекомбинантные гибридные белки, включающие фрагмент или производное антитела к СО27Ь, гибридизованное с пептидом лейциновой молнии, экспрессируют в подходящей клетке-хозяине, и образующиеся растворимые олигомерные фрагменты или производные антитела к СО27Ь выделяют из супернатанта культуры.
Ковалентные модификации антигенсвязывающих белков включены в объем настоящего изобретения и обычно, но не всегда выполняются после трансляции. Например, несколько типов ковалентных модификаций антигенсвязывающего белка вводят в молекулу путем осуществления остатков аминокислот антигенсвязывающего белка с органическими дериватизирующими агентами, которые способны реагировать с выбранными боковыми цепями или остатками на N или С-конце.
Остатки цистеинилы наиболее часто используют в реакции с α-галоацетатами (и соответствующими аминами), такими как хлоруксусная кислота или хлорацетамид, для получения карбоксиметильных или карбоксиамидометильных производных. Цистеиниловые остатки также дериватизируют путем осуществления реакции с бромтрифторацетоном, а-бром-Р-(5-имидозоил)пропионовой кислотой, хлорацетилфосфатом, ^алкилмалеимидами, 3-нитро-2-пиридилдисульфидом, метил 2-пиридилдисульфидом, рхлор-ртуть-бензоат, 2-хлор-ртуть-4-нитрофенол или хлор-7-нитробензо-2-окса-1,3-диазол.
Остатки гистидилы дериватизируют путем осуществления реакции с диэтилкарбонатом при рН 5,57,0, поскольку этот агент обладает относительной специфичностью в отношении боковой цепи гистидила. Также можно применять пара-бромфенацил; в предпочтительном случае реакцию проводят в 0,1М какодилате натрия при рН 6,0.
Лизинил и амино-концевые остатки используют в реакции с ангидратами янтарной или карбоновой кислот. Дериватизация этими агентами меняет знак заряда остатков лизинилов. Другие подходящие реагенты для дериватизации содержащих альфа-амины остатков включают имидоэфиры, такие как метилпиколинимидат, пиридоксал фосфат, хлорборогидрид, тринитробензолсульфоновая кислота, Ометилизомочевина, 2,4-пентандион и катализируемые трасаминазой реакции с глиоксилатом.
Остатки аргинилы модифицируют путем осуществления реакции с одним или несколькими обычными реагентами, включая фенилглиоксаль, 2,3-бутандион, 1,2-циклоександион и нингидрин. Дериватизация остатков аргинина требует осуществления реакции в щелочной среде из-за высокой рКа гуанидиновой функциональной группы. Кроме того, эти реагенты могут реагировать с группами лизина, а также с эпсилон-аминогруппами аргинина.
Могут быть осуществлены определенные модификации остатков тиорзилов, при этом особый интерес представляет введение спектральных меток в остатки тирозилы за счет реакции с ароматическими соединениями диазония или тетранитрометаном. Чаще всего используют ^ацетилимидизол и тринитрометан для образования О-айетилтирозилов и 3-нитропроизводных соответственно. Остатки тирозилы йодинируют с использованием 1251 или 1311 для получения меченых белков для применения в радиоиммуноанализе, для чего подходит метод с использованием хлорамина Т, описанный выше.
Карбоксильные боковые группы (аспартила или глютамила) селективно модифицируют за счет реакции с карбодиимидами (Д-^ОМ-К.'), где К и К' - возможно различные алкильные группы, такие как 1-циклогексил-3-(2-морфолинил-4-этил) карбодиимид или 1-этил-3-(4-азоний-4,4-диметилфенил) карбодиимид. Кроме того, остатки аспартил или глютамил превращают в остатки аспарагинил и глютаминил путем осуществления реакции с ионами аммония.
Дериватизацию бифункциональными агентами можно применять для поперечного связывания антигенсвязывающих белков с нерастворимой в воде подложкой: матрицей или поверхностью, для разнообразных применений. Широко применяемые агенты для поперечного сшивания включают, например,
- 21 027900
1,1-бис(диазоацетил)-2-фенилэтан глютаральдегид, Ν-гидроксисукцинимидные эфиры, например эфиры с 4-азидосалициловой кислотой, гомофункциональными имидоэфирами, включая дисукцинимидиовые эфиры, такие как 3,3'-дитиобис(сукцинимидилпропионат) и бифунциональные малеимиды, такие как бис-^малеимидо-1,8-октан. Дериватизирующие агенты, такие как метил-3-[(р-азидофенил)дитио]пропиомидат, дают фотоактивируемые промежуточные соединения, которые способны к образованию поперечных сшивок в присутствии света. В альтернативном варианте реактивные нерастворимые в воде матрицы, такие как активируемые цианоген бромидом углеводороды и реактивные субстраты, описанные в патентах США № 3969287; 3691016; 4195128; 4247642; 4229537 и 4330440, применяют для иммобилизации белков.
Остатки глютаминил и аспарагинид часто деамидируют до соответствующих остатков глютамила и аспартила соответственно. В альтернативном варианте эти остатки дезамидируют в слабокислой среде. Любая форма этих остатков входит в объем настоящего изобретения.
Другие модификации включают гидроксиирование пролина и лизина, фосфорилирование гидроксильных групп остатков серила и треонила, метилирование α-аминогрупп боковых цепей лизина, аргинина и гистидина (Т.Е.ОшдШоп, РгоЮиш: §1гис1иге апб Мо1еси1аг Ргорегбек, ^.Н.Ргеетап & Со., 8ап Ргапс18со, 1983, рр. 79-86), ацетилирование Ν-концевого амина и амидирование любой С-концевой карбоксильной группы.
Другой тип ковалентной модификации антигенсвязывающего белка, включенный в объем настоящего изобретения, включает изменение паттерна гликозилирования белка. Как известно в данной области, паттерны гликозилирования могут зависеть как от последовательности белка (например, присутствия или отсутствия конкретных гликозилируемых аминокислотных остатков, обсуждаемых ниже), так и от клетки-хозяина организма в котором белок продуцируется. Конкретные системы экспрессии обсуждаются ниже.
Гликозилирование полипептидов обычно бывает либо Ν-связанным, либо О-связанным. Νсвязанное обозначает присоединение углеводного фрагмента к боковой цепи остатка аспарагина. Трипептидные последовательности аспарагин -Х-серин и аспарагин -Х-треонин, где X обозначает любую аминокислоту, кроме пролина, являются распознаваемыми последовательностями для ферментативного присоединения углеводного фрагмента к боковой цепи аспарагина. Соответственно, присутствие любой из этих трипептидных последовательностей в полипептиде создает потенциальный сайт гликозилирования. О-связанное гликозилирование относится к присоединению одного из сахаров: Νацетилгалактозамина, галактозы или ксилозы, к гидроксиаминокислоте, чаще всего к серину или треонину, хотя также могут быть задействованы 5-гидроксипролин или 5-гидроксилизин.
Добавление сайтов гликозилирования в антигенсвязывающий белок удобно осуществлять путем изменений аминокислотной последовательности таким образом, чтобы она содержала одну или более из описанных выше трипептидных последовательностей (для сайтов Ν-связанного гликозилирования). Изменения также могут быть осуществлены путем присоединения одного или более остатков треонина или серина или введения или заменой в исходную последовательность (для сайтов О-связанного гликозилирования). Для облегчения процесса аминокислотную последовательность антигенсвязывающего белка предпочтительно изменяют путем введения изменений на уровне ДНК, в частности путем осуществления мутаций ДНК, кодирующей целевой полипептид, в результате которых образуются кодоны, транслируемые в желаемые аминокислоты.
Другим средством повышения числа углеводных фрагментов на антигенсвязывающий белок является повышения путем химического или ферментативного присоединения гликозидов к белку. Эти процедуры имеют то преимущество, что они не требуют продуцирования белка в клетке-хозяине, которая обладает способностью к гликозилированию по механизму Ν- и О-связанного гликозилирования. В зависимости от используемого пути присоединения сахар (сахара) могут быть присоединены к (а) аргинину и гистидину, (Ь) свободным карбоксильным группам, (с) свободным сульфгидрильным группам, таким как группы серина, треонин или гидроксипролина, (б) свободным гидроксильным группам, таким как группы серина, треонина или гидроксипролина, (е) ароматическим остаткам, таким как остатки фенилаланина, тирозина и триптофана, или (£) к амидной группе глютамина. Эти способы описаны в документе \У0 87/05330, опубликованном 11 сентября 1987 г, и в Ар1ш и ХУпШоп. 1981, СКС СгЪ. Кеу. ВюсЬет., рр. 259306.
Удаление углеводных фрагментов, присутствующих в исходном антигенсвязывающем белке, может быть выполнено химическим или ферментативным путем. Химическое дегликозилирование требует обработки белка соединением трифторуксусной кислотой или эквивалентным соединением. Эта обработка приводит к отщеплению большинства сахаров за исключением связывающего сахара (Νацетилглюкозамин или Ν-ацетилгалактозамин), а остающийся пептид при том не повреждается. Химическое дегликозилирование описано в Накшиббш е1 а1., 1987, АгсЬ. ВюсЬет. ВюрЬук. 259:52 и Ебде е1 а1., 1981, Апа1. ВюсЬет. 118:131. Ферментативное отщепление углеводных фрагментов на полипептидах может быть осуществлено с использованием различных эндо- и экзо-гликозидаз, описанных в ТЬо1акига е1 а1., 1987, Ме1Ь. Еп/уто1. 138:350. Предотвращение гликозилирования в потенциальных сайтах гликозилирования может быть достигнуто путем применения туникамицина, как описано в Эиббп е1 а1., 1982,
- 22 027900
1. ΒίοΙ. СИет. 257:З105. Туникамицин блокирует образование связей белок -Ы-гликозид.
Другой тип ковалентной модификации антигенсвязывающего белка включает связывание антигенсвязывающего белка с различными небелковыми полимерами, включая, но не ограничиваясь перечисленными: различные полиспирты, такие как полиэтиленгликоль, пропиленгликоль или полиоксиалкилены, путем, описанным в патентах США № 46408З5; 4496689; 4З01144; 4670417; 4791192 или 4179ЗЗ7. Дополнительно, известно, могут быть выполнены аминокислотные замены в различных положениях белка, облегчающие присоединения полимеров, таких как ПЭГ.
В некоторых вариантах реализации ковалентные модификации антигенсвязывающих белков согласно настоящему изобретению включают присоединение одной или более меток.
Термин группа-метка обозначает любую детектируемую метку. Примеры пригодных групп-меток включают, но не ограничиваются перечисленными: радиоизотопы или радионуклиды (например, ЗН, 14С, 15К, З58, 90Υ, 99Тс, 1111п, 1251, 1З11), флюоресцентные группы (например, Р1ТС, родамин, лантанитные люминоформы), ферментативные группы (например, пероксидаза хрена, β-галактозидаза, люцифераза, щелочная фосфатаза), хемилюминесцентные группы, биотинильные группы или определенные полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичным репортером (например, парные последовательности лейциновых молний, сайты связывания вторичных антител, доменты связывания металлов, эпитопные метки). В некоторых вариантах реализации группы-метки присоединены к антигенсвязывающему белку через спейсерные фрагменты различной длины, что позволяет уменьшить возможные стерические помехи. В данной области известны различные способы мечения белков, которые могут быть использованы для реализации настоящего изобретения.
В целом метки делятся на различные классы в зависимости от анализа, в котором осуществляется и детектирование: а) изотопные метки, которые могут быть радиоактивными или тяжелыми изотопами; Ь) магнитные метки (например, магнитные частицы); с) редокс-активные группы; ά) оптические красители; ферментативные группы (например, пероксидаза хрена, β-галактозидаза, люцифераза, щелочная фосфатаза); е) биотинилированные группы; и Г) заранее определенные полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичным репортером (например, парные последовательности лейциновых молний, сайты связывания вторичных антител, домены связывания металлов, эпитопные метки и т.д.). В некоторых вариантах реализации группы-метки присоединены к антигенсвязывающему белку через спейсерные фрагменты различной длины, что позволяет уменьшить возможные стерические помехи. В данной области известны различные способы мечения белков, которые могут быть использованы для реализации настоящего изобретения.
Конкретные метки включают оптические красители, включая, но не ограничиваясь перечисленными: хромофоры, люминофоры или флюорофоры, причем последние специфичны для многих случаев. Флюорофоры могут либо низкомолекулярными флюоресцирующими агентами, либо белковыми флюоресцирующими агентами.
Под флюоресцентной меткой понимают любую молекулу, которую можно обнаруживать за счет присущих ей флюоресцентных свойств. Подходящие флюоресцентные метки включают, но не ограничены перечисленными: флуоресцеин, родамин, тетраметилродамин, эозин, эритрозин, кумарин, метилкумарины, пирен, Ма1асйе дгееп (зеленый), стильбен, ЬисГег Υе11ο\γ (желтый), Саксайе В1ие1 (синий), Техак Кей (красный), ТАБОА^, ΗΙ)Ά\Υ В0Э1РУ РЬ, ЬС Кей 640, Су 5, Су 5,5, ЬС Кей 705, 0гедоп дгееп (зеленый), красители А1еха-Р1иог (А1еха Р1иог З50, А1еха Р1иог 4З0, А1еха Р1иог 488, А1еха Р1иог 546, А1еха Р1иог 568, А1еха Р1иог 594, А1еха Р1иог 6ЗЗ, А1еха Р1иог 660, А1еха Р1иог 680), Саксайе В1ие, Саксайе Υе11ο№ и К-фикожритрин (РЕ) (Мо1еси1аг РгоЬек, Еидепе, 0К, США), Р1ТС, родамин и Техак Кей (Техасский красный Р1егсе, КоскГогй, 1Ь, США), Су5, Су5,5, Су7 (АтегкИат ЫГе 8аепсе, РШкЬигдй, РА, США) . Подходящие оптические красители, включая флюороформы, описаны в справочнике Мо1еси1аг РгоЬек НапйЬоок, Кюйагй Р. Наид1апй, который прямо включен в настоящий текст путем ссылки.
Пригодные белковые флюоресцентные метки также включают, но не ограничены перечисленными: зеленый флюоресцентный белок (СРР), включая виды Кеш11а, РШокагсик или Аесцюгеа белка СРР (Сйа1йе е! а1., 1994, §аепсе 26З:802-805), ЕСРР (С1оп!есй ЬаЬогаФйек, 1пс., номер доступа в СепЬапк И55762), синий флюоресцентный белок (ВРР, ОиаШит Вю!есйпо1од1ек, 1пс. 1801 йе МаНоппеиуе В1уй. \УекВ 81И Р1оог, Мопйеа1, ОиеЬес, Сапайа НЗН П9; §!аиЬег, 1998, ВюЮсйпкщек 24:462-471; Нет е! а1., 1996, Сигг. Вю1. 6:178-182), улучшенный желтый, флуоресцентный белок (ЕΥРΡ, С1оп1есй ЬаЬогаФйек, 1пс.), 1исГегаке (1сЬткт е! а1., 199З, 1. 1ттипо1. 150:5408-5417), β-галактозидазу (Яо1ап е! а1., 1988, Ргос. N11. Асай. 8с1. И.8.А. 85:260З-2607) и Кеш11а (№0 92/1567З, \У0 95/0746З, \У0 98/14605, \У0 98/26277, \У0 99/49019, патенты США № 5292658, 5418155, 568З888, 5741668, 5777079, 5804З87, 5874З04, 5876995, 5925558). Все цитируемые выше источники прямо включены в настоящий текст путем ссылки.
Полинуклеотиды, кодирующие связывающие антиген СО27Ь белки.
В настоящее изобретение включены нуклеиновые кислоты, кодирующие связывающие антиген СО27Ь белки, включая антитела, определенные в настоящем тексте. Предпочтительные нуклеиновые кислоты включают нуклеиновые кислоты, кодирующие примеры легкой цепи и тяжелой цепи, описанные здесь.
- 2З 027900
Примером нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь АЬ1, является нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в ЗЕО ГО N0:49.
Примером нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь АЬ2, является нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в ЗЕО ГО N0:50.
Примером нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь АЬ4, является нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в ЗЕО ГО N0:51.
Примером нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь АЬ5, является нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в ЗЕО ГО N0:52.
Примером нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь АЬ6, является нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в ЗЕО ГО N0:53.
Примером нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь АЬ7, является нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в ЗЕО ГО N0:54.
Примером нуклеиновой кислоты, кодирующей легкую цепь АЬ8, является нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в ЗЕО ГО N0:55.
Примером нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь АЬ1, является нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в ЗЕО ГО N0:3.
Примером нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь АЬ2, является нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в ЗЕО ГО N0:4.
Примером нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь АЬ4, является нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в ЗЕО ГО N0:5.
Примером нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь АЬ5, является нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в ЗЕО ГО N0:6.
Примером нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь АЬ6, является нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в ЗЕО ГО N0:7.
Примером нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь АЬ7, является нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в ЗЕО ГО N0:8.
Примером нуклеиновой кислоты, кодирующей тяжелую цепь АЬ8, является нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в ЗЕО ГО N0:9.
Аспекты изобретения включают варианты полинуклеотида (например, связанные с вырожденностью), которые кодируют аминокислотные последовательности, описанные в настоящей заявке.
Аспекты настоящего изобретения включают различные варианты, включая, приведенные ниже примеры, но не ограничиваясь ими.
Выделенный полинуклеотид, где указанный полинуклеотид кодирует один или более полипептидов, содержащих аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
A. 1. последовательности вариабельной области легкой цепи, которая на по меньшей мере 90% идентична последовательности вариабельной области легкой цепи, представленной в ЗЕО ГО N0:63-70;
2. последовательности вариабельной области тяжелой цепи, которая на по меньшей мере 90% идентична последовательности вариабельной области тяжелой цепи, представленной в ЗЕО ГО N0:17-24;
3. вариабельной области легкой цепи (1) и вариабельной области тяжелой цепи (2); и
B. вариабельной области легкой цепи, содержащей 0ΌΚ1, 0ΌΚ2, 0ΌΚ3, и/или вариабельной области тяжелой цепи, содержащей 0ΌΚ1, 0ΌΚ2, 0ΌΚ3, которые отличаются в общей сложности не более чем тремя присоединениями, заменами и/или делециями в каждой ΟΌΚ от следующих последовательностей:
1. 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:71), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:79), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:87) легкой цепи или 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:25), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:33), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:41) тяжелой цепи антитела АЬ1;
2. 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:72), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:80), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:88) легкой цепи или 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:26), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:34), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:42) антитела АЬ2;
3. 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:73), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:81), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:89) легкой цепи или 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:27), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:35), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:43) тяжелой цепи антитела АЬ3;
4. 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:74), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:82), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:90) легкой цепи или 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:28), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:36), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:44) тяжелой цепи антитела АЬ4;
5. 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:75), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:83), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:91) легкой цепи или 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:29), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:37), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:45) тяжелой цепи антитела АЬ5;
6. 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:76), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:84), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:92) легкой цепи или 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:30), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:38), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:46) тяжелой цепи антитела АЬ6;
7. 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:77), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:85), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:93) легкой цепи или 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:31), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:39), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:47) тяжелой цепи антитела АЬ7; и
8. 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:78), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:86), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:94) легкой цепи или 0ΌΚ1 (ЗЕО ГО N0:32), 0ΌΚ2 (ЗЕО ГО N0:40), 0ΌΚ3 (ЗЕО ГО N0:48) тяжелой цепи антитела АЬ8.
В предпочтительных вариантах реализации полипептид, кодируемый выделенной нуклеиновой кислотой, является компонентом антигенсвязывающего белка, который связывает СГО27Е.
Нуклеотидные последовательности, соответствующие описанным здесь аминокислотным последовательностям, для применения в качестве зондов или праймеров для выделения нуклеиновых кислот или
- 24 027900 искомых последовательностей для поиска в базах данных могут быть получены путем обратной трансляции из аминокислотных последовательностей или путем идентификации областей идентичности аминокислот полипептидам, для которых установлены кодирующие последовательности ДНК. Хорошо известную процедуру полимеразной цепной реакции (ПЦР) можно применять для выделения и амплификации последовательности ДНК, кодирующей связывающие антиген СО27Ь белки или желаемые комбинации полипептидных фрагментов связывающего антиген СО27Ь белка. Олигонуклеотиды, которые определяют желаемые концы комбинаций фрагментов ДНК, используют в качестве 5'- и 3'-праймеров. Олигонуклеотиды могут дополнительно содержать сайты распознавания для рестрикционных эндонуклеаз, что облегчает встраивание амплифицированной комбинации фрагментов ДНК в экспрессионный вектор. Методики ПЦР описаны у 8а1к1 е! а1., 8с1епсе 239:487 (1988); КесотЬшап! ЭНЛ МеШобо1оду, Щи е! а1., ебк., Асабетю Ргекк, 1пс., 8ап О1едо (1989), рр. 189-196; и РСК Рго1осо1к: А Сшбе !о МеШобк апб Аррйсайопк, 1пшк е!. а1., ебк., Асабетю Ргекк, 1пс. (1990).
Молекулы нуклеиновых кислот согласно настоящему изобретению включают ДНУ и РНК, как в одноцепочечной, так и в двухцепочечной форме, а также соответствующие комплементарные последовательности. ДНК включает, например, кДНК, геномную ДНК, химически синтезированную ДНК, ДНК, амплифицированную путем ПЦР, и их комбинации. Молекулы нуклеиновых кислот согласно настоящему изобретению включают полноразмерные гены или молекулы кДНК, а также их фрагменты. Нуклеиновые кислоты согласно настоящему изобретению в предпочтительном варианте получены из организма человека, но настоящее изобретение включает также нуклеиновые кислоты, полученные из видов, отличных от человека.
Выделенная (изолированная) нуклеиновая кислота представляет собой нуклеиновую кислоту, отделенную от соседних генетических последовательностей, присутствующих в геноме организма, из которого выделена указанная нуклеиновая кислота, в случае если нуклеиновая кислота выделена из природного источника. В случае ферментативного синтеза нуклеиновых кислот с матрицы или химического синтеза, например, для продуктов ПЦР, молекул кДНК или олигонуклеотидов, например, нуклеиновые кислоты, полученные в результате такого процесса считаются выделенными нуклеиновыми кислотами. Выделенные нуклеиновые кислоты - это молекулы нуклеиновой кислоты в форме отдельного фрагмента или в виде компоненты более крупной нуклеотидной конструкции. В одном предпочтительном варианте реализации нуклеиновые кислоты, по существу, не содержат примесей эндогенного материала. В предпочтительном варианте молекула нуклеиновой кислоты получена из ДНК или РНК, по меньшей мере один раз выделенной в, по существу, чистой форме и в количестве или концентрации, допускающих идентификацию, осуществление манипуляций и выделение составляющих нуклеотидных последовательностей стандартными биохимическими методами (такими как описаны в 8атЬгоок е! а1., Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬота!огу Мапиа1, 2пб еб., Со1б 8ртшд НагЬог ЬаЬота!оту, Со1б 8ртшд НагЬог, ΚΥ (1989)). В предпочтительном варианте такие последовательности представлены и/или сконструированы в форме открытой рамки считывания, содержащей внутренние нетранслируемые последовательности, или интроны, обычно присутствующие в генах эукариот. Последовательности нетранслируемой ДНК могут располагаться в направлении 5'- или 3'- от открытой рамки считывания, если это не препятствует проведению манипуляций или экспрессии кодирующей области.
Настоящее изобретение также включает нуклеиновые кислоты, которые гибридизуются в условиях умеренной жесткости, а более предпочтительно в условиях высокой жесткости, с нуклеиновыми кислотами, кодирующими связывающие антиген СО27Ь белки, описанные в настоящем тексте. Основные параметры, влияющие на выбор условий гибридизации, и руководство по созданию соответствующих условий можно найти у 8атЬгоок, РгПкск Машабк (1989, Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬота!огу Мапиа1, Со1б 8ртшд НагЬог ЬаЬота!огу Ргекк, Со1б 8ртшд НагЬог, ΝΥ., гдавы 9 и 11; и в СиггеШ Рго!осо1к ш Мо1еси1аг Вю1оду, 1995, АикиЬе1 е! а1., ебк., 1оЬп Щйеу & 8опк, 1пс., разделы 2,10 и 6,3-6,4), а также могут быть легко определены средним специалистом на основании, например, длины и/или состава основания ДНК. Один из способов обеспечения условий умеренной жесткости включает использование раствора для предварительной промывки, содержащего 5х88С, 0,5% 8Ό8, 1,0 мМ ЭДТА (рН 8,0), гибридизационного буфера, содержащего приблизительно 50% формамида, 6х88С, и температуры гибридизации приблизительно 55 °С (или аналогичных гибридизационных растворов, например, содержащих приблизительно 50% формамида, при температуре гибридизации приблизительно 42°С), и условий промывки, включающих температуру приблизительно 60°С, в 0,5х88С, 0,1% 8Ό8. Обычно условия высокой жесткости определяются как описанные выше условия, но с промывкой при температуре приблизительно 68°С 0,2х88С, 0,1% 8Ό8. 88РЕ (1х88РЕ представляет собой 0,15М №С1, 10 мМ NаН2Р04 и 1,25 мМ ЭДТА, рН 7,4) можно использовать вместо 88С (1х88С: 0,15М КаС1 и 15 мМ цитрата натрия) в гибридизационном и промывочном буферах; промывки осуществляют в течение 15 мин после завершения гибридизации. Предполагается, что температуру промывки и концентрацию соли при промывке можно регулировать по необходимости для достижения желаемой степени жесткости на основании основных принципов реакции гибридизации и стабильности дуплексов, которые известны специалисту и описаны ниже в настоящем тексте (см., например, 8атЬгоок е! а1., 1989). При гибридизации нуклеиновой кислоты с целевой
- 25 027900 нуклеиновой кислотой неизвестной последовательности длину гибрида определяют по гибридизующейся нуклеиновой кислоте. При гибридизации нуклеиновых кислот с известными последовательностями длина гибрида может быть определена путем сопоставления (выравнивания) последовательностей нуклеиновых кислот и идентификации области или областей оптимальной комплементарности последовательностей. Температура гибридизации для гибридов с ожидаемой длиной меньше 50 пар оснований должна быть на 5-10°С ниже температуры плавления (Тт) гибрида. где Тт определяется по следующим формулам. Для гибридов длиной меньше 18 пар оснований
Тт (°С)=2(# оснований А+Т)+4(# оснований #О+С).
Для гибридов длиной более 18 пар оснований
Тт (°С)=81.5+16.6(1о§ю [№+])+0.41(% О+С)-(600/Ы).
где N - это число оснований в гибриде. а |№ι'| - это концентрация ионов натрия в гибридизационном буфере ([Ыа+] для 1х§§С=0.165М). В предпочтительном случае каждая такая гибридизующаяся нуклеиновая кислота имеет длину. равную по меньшей мере 15 нуклеотидов (или более предпочтительно по меньшей мере 18 нуклеотидов. или по меньшей мере 20 нуклеотидов. или по меньшей мере 25 нуклеотидов. или по меньшей мере З0 нуклеотидов. или по меньшей мере 40 нуклеотидов. или наиболее предпочтительно по меньшей мере 50 нуклеотидов) или по меньшей мере 25% (более предпочтительно по меньшей мере 50%. или по меньшей мере 60%. или по меньшей мере 70%. и наиболее предпочтительно по меньшей мере 80%) длины нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению. с которой она гибридизуется. и характеризуется по меньшей мере 60% идентичностью последовательности (более предпочтительно по меньшей мере 70%. по меньшей мере 75%. по меньшей мере 80%. по меньшей мере 81%. по меньшей мере 82%. по меньшей мере 8З%. по меньшей мере 84%. по меньшей мере 85%. по меньшей мере 86%. по меньшей мере 87%. по меньшей мере 88%. по меньшей мере 89%. по меньшей мере 90%. по меньшей мере 91%. по меньшей мере 92%. по меньшей мере 9З%. по меньшей мере 94%. по меньшей мере 95%. по меньшей мере 96%. по меньшей мере 97%. по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99%. и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99.5%) с нуклеиновой кислотой согласно настоящему изобретению. с которой она гибридизуется. где идентичность последовательности определяется путем сравнения гибридизующихся нуклеиновых кислот при выравнивании с максимизацией перекрывания и идентичности и минимизацией пробелов в последовательности. как подробно описано выше.
Варианты согласно настоящему изобретению обычно получают путем сайт-специфичного мутагенеза нуклеотидов в ДНК. кодирующей антигенсвязывающий белок. с использованием кассетного мутагенеза или ПЦР-мутагенеза или других известных в технике методик для получения ДНК. кодирующий вариант. с последующей экспрессией этой рекомбинантной ДНК в культуре клеток. как описано в данном тексте. Однако фрагменты антигенсвязывающего белка. содержащие варианты участков СОК. содержащие до приблизительно 100-150 остатков. могут быть получены путем синтеза ίη νίΐΓΟ с использованием стандартных методик. Варианты обычно демонстрируют качественно такую же биологическую активность. что и природный аналог. например связывание СП27Ь. хотя в то же время могут быть выбраны варианты. обладающие измененными характеристиками. как более полно описано ниже.
Специалисту понятно. что вследствие вырожденности генетического кода может быть получено крайне большое количество нуклеиновых кислот. каждая из которых кодирует участки СОР (а также тяжелые или легкие цепи или другие компоненты антигенсвязывающего белка) согласно настоящему изобретению. Соответственно. после идентификации конкретной аминокислотной последовательности. специалист сможет получить любое число различных нуклеиновых кислот просто путем модификации последовательности одного или более кодонов. так. что при этом аминокислотная последовательность кодируемого белка не изменится.
Настоящее изобретение также обеспечивает экспрессионные системы и конструкции в форме плазмид. экспрессионные векторы. транскрипционные или экспрессионные кассеты. которые включают по меньшей мере один полинуклеотид из описанных выше. Кроме того. настоящее изобретение обеспечивает клетку-хозяин. содержащую такую экспрессионную систему или конструкцию.
Обычно экспрессионные векторы. применяемые в любой клетке-хозяине. содержат последовательности для поддержания плазмиды и для клонирования и экспрессии экзогенных нуклеотидных последовательностей. Такие последовательности. называемые совместно фланкирующими последовательностями в некоторых вариантах реализации обычно включают одну или более из следующих нуклеотидных последовательностей: промотор. одну или более энхансерных последовательностей. ориджин репликации. последовательность терминации транскрипции. полную интронную последовательность. включающую донорный и акцепторный сайт сплайсинга. последовательность. кодирующую лидерную последовательность для секреции полипептида. сайт связывания рибосомы. последовательность полиаденилирования. полилинкерный участок для встраивания нуклеиновой кислоты. кодирующей экспрессируемый полипептид. и элемент селективного маркера. Каждая из этих последовательностей обсуждается ниже.
Вектор необязательно может содержать последовательность. кодирующую тэг (метку). т.е. олигонуклеотидную молекулу. расположенную на 5'- или З'-конце последовательности. кодирующей связывающий антиген СО27Ь белок; олигонуклеотидная последовательность кодирует полигистидин (напри- 26 027900 мер, гексаН18) или другой тэг, такой как РЬАО, НА (гемаглютинин вируса гриппа), или туе, к которому существуют коммерчески доступные антитела. Этот тэг обычно присоединяется к полипептиду после экспрессии полипептида и может служить средством для аффинной очистки или детектирования связывающего антиген СЭ27Ь белка из клетки-хозяина. Аффинная очистка может осуществляться, например, путем колоночной хроматографии с использо ванием антител к тэгу в качестве аффинной матрицы. Позже тэг может быть отделен от очищенного связывающего антиген СО27Ь белка различными средствами, такими как некоторые расщепляющие пептидазы.
Фланкирующие последовательности могут быть гомологичными (т.е. из того же вида и/или штамма, что и клетка-хозяин), гетерологичными (т.е. из вида, отличного от вида или штамма клетки-хозяина), гибридными (т.е. представлять собой комбинацию фланкирующих последовательностей или более чем одного источника), синтетическими или нативными.
Соответственно, источником фланкирующих последовательностей может быть прокариотический или эукариотический организм, любой беспозвоночный или позвоночный организм, или любое растение, при условии, что фланкирующие последовательности функциональны в органеллах клетки-хозяина или могут быть активированы в ней.
Фланкирующие последовательности, которые можно применять в векторах согласно настоящему изобретению, могут быть получены любым из известных в технике способов. Обычно фланкирующие последовательности, которые можно применять в настоящем изобретении, сначала идентифицируют путем картирования и/или расщепления рестрикционной эндонуклеазой, после чего они могут быть выделены из соответствующего тканевого источника с использованием подходящих рестрикционных эндонуклеаз. В некоторых случаях может быть известна полная нуклеотидная последовательность фланкирующей последовательности. В этом случае фланкирующая последовательность может быть синтезирована способами, описанными здесь для синтеза и клонирования нуклеиновых кислот.
Если известна вся или только часть фланкирующей последовательности, она может быть получена с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР) и/или путем скрининга геномной библиотеки с использованием соответствующего зонда, такого как фрагмент олигонуклеотида и/или фланкирующей последовательности из того же или другого вида. Если фланкирующая последовательность неизвестна, фрагмент ДНК, содержащий фланкирующую последовательность, может быть выделен из более крупного куска ДНК, который может содержать, например, кодирующую последовательность или даже другой ген или гены. Выделение может быть выполнено путем расщепления рестрикционной эндонуклеазой с получением соответствующего фрагмента ДНК с последующим выделением путем очистки на агарозном геле, методом колоночной хроматографии Ц1адеп® (СЬа1з№0г1Ь, СА) или другим известным специалисту способом. Средний специалист сможет легко выбрать ферменты для этой цели.
Ориджин репликации обычно является частью коммерческих прокариотических экспрессионных векторов, ориджин помогает амплификации вектора в клетке-хозяине. Если выбранный вектор не содержит сайта ориджина репликации, его можно синтезировать химическим путем на основании известной последовательности и лигировать в вектор. Например, ориджин репликации из плазмиды рВК322 (N0» Епд1апб Вю1аЬ§, Веуег1у, МА, США) подходит для большинства грамотрицательных бактерий, а различные вирусные ориджины (например, §У40, полиомы, аденовируса, вируса везикулярного стоматита (У8У) или папилломавируса, такого как ВПЧ (ИРУ) или БПВ (ВРУ)) можно применять для клонирования векторов в клетки млекопитающих. В целом, компонент ориджина репликации не является необходимым для экспрессионных векторов млекопитающих (например, ориджин 8У40 часто используется только поскольку он содержит ранний промотор вируса).
Последовательность терминатора транскрипции обычно расположена в направлении 3' относительно кодирующего участка полипептида и служит для терминации транскрипции. Обычно последовательность терминации транскрипции в прокариотических клетках представляет собой О-С-богатый фрагмент и следующую за ним поли-Т последовательность. Хотя эту последовательность можно легко клонировать из библиотеки или даже приобрести как часть вектора, ее также легко можно синтезировать с использованием описанных здесь способов синтеза нуклеиновых кислот.
Ген селективного маркера кодирует белок, необходимый для выживания и роста клеток-хозяев, выращиваемых в селективной культуральной среде. Обычные гены селективных маркеров кодируют белки, которые (а) сообщают прокариотическим клеткам-хозяевам устойчивость к антибиотикам и другим токсинам, например, ампицилину, тетрациклину или канамицину; (Ь) восполняют ауксотрофные дефициты клетки; или (с) обеспечивают важное питательное соединение, которое невозможно получить из комплексной среды или среды определенного состава. Примерами селективных маркеров являются ген устойчивости к канамицину, ген устойчивости к ампицилину и ген устойчивости к тетрациклину. Ген устойчивости к неомицину обладает тем преимуществом, что его можно также использовать для селекции и в прокариотических, и в эукариотеческих клетках-хозяевах.
Другие селективные гены можно использовать для амплификации экспрессируемого гена. Амплификация - это процесс, в котором гены, необходимые для продукции белка, критически важного для роста или выживания клеток, воспроизводятся в хромосомах последовательных поколений рекомбинантных клеток. Примеры подходящих селективных для клеток млекопитающих включают дигидрофолатредук- 27 027900 тазу (ЭНРК) и не включающие промоторов гены тимидинкиназы. Трансформированные клетки млекопитающих помещают в условия давления отбора, в которых приспособление трансформантов для выживания обеспечивает исключительно присутствием в векторе селективного гена. Давление отбора создают путем культивирования трансформированных клеток в условиях, в которых концентрация агента селекции в среде последовательно повышается, что приводит к амплификации как селективного гена, так и ДНК, кодирующей другой ген, например, антигенсвязывающего белка-антитела, которое связывается с полипептидом антигена СЭ27Е. Результатом является повышение количества синтезируемого с амиплифицированной ДНК полипептида, такого как вызывающий антиген СП27Ь белок.
Сайт связывания рибосом обычно необходим для инициации трансляции мРНК и характеризуется последовательностью Шайно-Дальгарно (прокариоты) или последовательностью Козака (эукариоты). Этот элемент обычно расположен в направлении 3' от промотора и в направлении 5' от кодирующей последовательности экспрессируемого полипептида. В некоторых вариантах реализации один или более кодирующих участков могут быть функционально связаны с внутренним сайтом связывания рибосом (1КЕ8), что обеспечивает возможность трансляции двух открытых рамок считывания с одного транскрипта РНК.
В некоторых случаях, например таких, когда желательно гликозилирование в системе экспрессии эукариотических клеток-хозяев, можно осуществлять с манипуляции с различными пре- или пропоследовательностями для улучшения гликозирования или выхода. Например, можно изменить сайт отщепления пептидазой конкретного сигнального пептида или добавить пропоследовательности, что может оказать влияние на гликозилирование. Конечный белковый продукт может содержать в положении -1 (относительно первой аминокислоты в зрелом белке) одну или более дополнительных аминокислот, связанных с экспрессией, которые, возможно, не были полностью удалены. Например, конечный белковый продукт может содержать один или два аминокислотных остатка, характерных для сайта расщепления пептидазой, присоединенных к амино-концу. В альтернативном варианте, применение некоторых ферментов может привести к образованию несколько укороченной формы целевого полипептида, если фермент отщепляет такую область в зрелом белке.
Векторы экспрессии и клонирования согласно настоящему изобретению обычно содержат промотор, распознаваемый организмом-хозяином, функционально связанный с молекулой, кодирующей связывающий антиген СЭ27Ь белок. Промоторы - это нетранскрибируемые последовательности, расположенные выше (т.е. в направлении 5') старт-кодона структурного гена (обычно в пределах приблизительно от 100 до 1000 п.о.), который контролирует транскрипцию структурного гена. Промоторы обычно относят к одному из двух классов: индуцибельные промоторы и конститутивные промоторы. Индуцибельные промоторы инициируют повышенные уровни транскрипции с ДНК, находящейся под их контролем, в ответ на изменение условий культивирования, таких как присутствие или отсутствие питательных веществ или изменение температуры. Конститутивные промоторы, с одной стороны, обеспечивают постоянную транскрипцию гена, с которым они функционально связаны, т.е. почти или совсем не влияют на экспрессию гена. Хорошо известно большое число промоторов, распознаваемых различными потенциальными клетками-хозяевами. Подходящие промоторы функционально связывают с ДНК, кодирующую содержащий тяжелую цепь или легкую цепь связывающий антиген СЭ27Ь белок согласно настоящему изобретению, путем выделения промотора из ДНК-источника путем расщепления ферментами рестрикции и встраивания целевой последовательности промотора в вектор.
Подходящие промоторы для применения с дрожжевыми хозяевами хорошо известны в технике. Дрожжевые энхансеры предпочтительно использовать с дрожжевыми промоторами. Подходящие промоторы для применения хозяевами, являющимися клетками млекопитающих, включают, но не ограничены перечисленными: промоторы, полученные из геномов вирусов, таких как вирус полиомы, вирус оспы кур, аденовирус (такой как аденовирус 2), вирус папилломы крупного рогатого скота, вирус саркомы птиц, цитомегаловирус, ретровирусы, вирус гепатита В и, наиболее предпочтительно, вирус обезьян 40 (8У40). Другие предпочтительные промоторы млекопитающих включают гетерологичные промоторы млекопитающих, например, промоторы теплового шока и промотор актина.
Дополнительные промоторы, которые могут представлять интерес, включают, но не ограничены следующими: ранний промотор 8У40 (ВспоА апй СЬатЬоп, 1981, №!игс 290:304-310); промотор ЦМВ (Тйогпзсп с! а1., 1984, Ргос. №!1. Асай. И.8.А. 81:659-663); промотор длинного 3'-концевого повтора вируса саркомы Рауса (УататоЮ с! а1., 1980, Сс11 22:787-797); промотор тимидинкиназы вируса герпеса (ХУадпсг с! а1., 1981, Ргос. №!1. Асай. 8а. И.8.А. 78:1444-1445); промотор и регуляторные последовательности гена металлотионина РгнъЮг с! а1., 1982, №!игс 296:39-42); и прокариотические промоторы, такие как промотор бета-лактамазы (Уй1а-Катаго££ с! а1., 1978, Ргос. №·ιΐ1. Асай. 8а. И.8.А. 75:3727-3731); или промотор !ас (ЭсВосг с! а1., 1983, Ргос. №·ιΐ1. Асай. 8а. И.8.А. 80:21-25). Также интерес представляют следующие области контроля транскрипции животных, которые демонстрируют тканевую специфичность и используются в тренсгенных животных: контрольная область гена эластазы Ι, активная в ацинарных клетках поджелудочной железы (8\νίίΓ с! а1., 1984, Сс11 38:639-646; 0гпй/ с! а1., 1986, Со1й 8рпп§ НагЬог 8утр. Циап!. Вю1. 50:399-409; МасЭопа1й, 1987, Нсра!о1оду 7:425-515); контрольная область гена инсулина, которая активна в бета-клетках поджелудочной железы (Напайап, 1985, №!игс 315:115-122);
- 28 027900 контрольная область гена иммуноглобулина, которая активна в лимфоидных клетках (СгоззсЬей1 е! а1., 1984, Се11 38:647-658; Айатез е! а1., 1985, ХаПие 318:533-538; А1ехапйег е! а1., 1987, Мо1. Се11. Вю1. 7:1436-1444); контрольная область мышиного вируса опухоли молочной железы, которая активна в клетках яичек, молочной железы и тучных клетках (Ьейег е! а1., 1986, Се11 45:485-495); контрольная область гена альбумина, которая активна в печени (Р1пкег1 е! а1., 1987, Сепез апй Эеуе1. 1 :268-276); контрольная область гена альфа-фетопротеина, которая активна в печени (Кгит1аи£ е! а1., 1985, Мо1. Се11. Βίο1. 5:16391648; Наттег е! а1., 1987, 8с1епсе 253:53-58); контрольная область гена альфа 1-антитрипсина, которая активна в печени (Ке1зеу е! а1., 1987, Сепез апй Эеуе1. 1:161-171); контрольная область гена бета-глобина, которая активна в миелоидных клетках (Модгат е! а1., 1985, №аиге 315:338-340; КоШаз е! а1., 1986, Се11 46:89-94); контрольная область гена основного белка миелина, которая активна в олигодендроцитах мозга (КеайЬеай е! а1., 1987, Се11 48:703-712); контрольная область гена легкой цепи-2 миозина, которая активна в скелетных мышцах (8аш, 1985, №!иге 314:283-286); и контрольная область гена гонадотропного рилизинг-гормона, которая активна в гипоталамусе (Мазоп е! а1., 1986, 8аепсе 234:1372-1378).
В вектор может быть включена энхансерная последовательность для повышения транскрипции ДНК, кодирующей содержащий легкую цепь или тяжелую цепь связывающий антиген СЭ27Ь белок согласно настоящему изобретению у высших эукариот. Энхансеры представляют собой цис-действующие элементы ДНК, длиной обычно приблизительно 10-300 п.о., которые воздействуют на промотор, усиливая транскрипцию. Энхансеры относительно независимы в отношении ориентации и положения, они были обнаружены как в положении 5', так и в положении 3' относительно единицы транскрипции. Известно несколько доступных последовательностей энхансеров из генов млекопитающих (например, глобина, эластазы, альбумина, альфа-фетопротеина и инсульина). Однако обычно используются энхансеры из вируса. Энхансер 8У40, ранний промотор цитомегаловируса, энхансер полиомы и энхансеры аденовируса, известные в данной области, являются примерами элементов-энхансеров для активации эукариотических промоторов. Хотя энхансеры могут быть расположены в векторе либо в направлении 5', либо в направлении 3' от кодирующей последовательности, обычно они расположены в участке 5' относительно промотора. Последовательность, кодирующая соответствующую нативную или гетерологичную сигнальную последовательность (лидерную последовательность или сигнальный пептид) может быть встроена в экспрессионный вектор для стимуляции внеклеточной секреции антитела. Выбор сигнальной последовательности и лидера зависит от типа клетки-хозяина, в котором антитело будет продуцироваться, гетерологичная сигнальная последовательность может заменить нативную сигнальную последовательность. Примеры сигнальных пептидов, которые функционируют в клетках-хозяевах, являющихся клетками млекопитающих, включают следующие: сигнальная последовательность для интерлейкина-7 (ΙΗ-7), описанная в патенте США № 4965195; сигнальная последовательность для рецептора интерлейкина-2, описанная в Созтап е! а1., 1984, 312:768; сигнальный пептид рецептора интерлейкина-4, описанный в Европейском патенте № 0367566; сигнальный пептид рецептора интерлейкина-1 типа Ι, описанный в патенте США № 4968607; сигнальный пептид рецептора интерлейкина-1 типа ΙΙ, описанный в Европейском патенте № 0460846.
Вектор может включать один или более элементов, облегчающих экспрессию при интегрировании вектора в геном клетки-хозяина. Примеры включают элемент ΕА8Ε (А1йг1сН е! а1. 2003 Вю!ес1то1 Ргод. 19:1433-38) и участок связывания с матриксом (МАК). Участки МАК опосредуют структурную организацию хроматина и могут защитить интегрированный вектор от эффекта положения. Соответственно, участки МАК особенно полезны в случае использования вектора для получения стабильных трансфектантов. В данной области известен ряд природных и синтетических МАК-содержащих нуклеиновых кислот, например, патенты США № 6239328; 7326567; 6177612; 6388066; 6245974; 7259010; 6037525; 7422874; 7129062.
Экспрессионные векторы согласно настоящему изобретению могут быть сконструированы на основе исходного вектора, такого как коммерчески доступные векторы. Такие векторы могут содержать или не содержать все желательные фланкирующие последовательности. В случае если одна или более фланкирующих последовательностей, описанных здесь, не еще не присутствуют в векторе, они могут быть получены отдельно и лигированы в вектор. Способы получения каждой фланкирующей последовательности хорошо известны специалистам.
После конструирования вектора и встраивания молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей содержащую легкую цепь и связывающую антиген СЭ27Ь последовательность, в соответствующий сайт вектора, полный вектор может быть введен в подходящую клетку-хозяина для амплификации и/или экспрессии полипептида. Трансформация экспрессионного вектора для связывающего антиген СЭ27Ь белка в выбранную клетку-хозяина может быть выполнена известными способами, включая трансфекцию, инфицирование, кальций-фосфатную совместную преципитацию, электропорацию, микроинъекции, липофекцию, опосредуемую ΩΕΛΕ-декстраном трансфекцию или другие известные методики. Выбранный способ будет отчасти зависеть от типа используемой клетки-хозяина. Эти способы и другие подходящие способы хорошо известны специалистам и описаны, например, в 8атЬгоок е! а1., 2001, см. выше.
Клетка-хозяин, при культивировании в подходящих условиях, синтезирует связывающий антиген СЭ27Ь белок, который затем можно собрать из культуральной среды (если клетка-хозяин секретирует
- 29 027900 его в среду) или непосредственно из продуцирующей его клетки-хозяина (если он не секретируется). Секреция в соответствующей клетке-хозяине зависит от различных факторов, таких как желаемые уровни экспрессии, модификации полипептида, которые желательны или необходимы для его активности (такие как гликозилирование и фосфорилирование) и легкость укладки в биологически активную форму. Клетка-хозяин может быть эукариотической или прокариотической.
Линии клеток млекопитающих, доступные в качестве хозяев для экспрессии, хорошо известны в данной области и включают, но не ограничиваются перечисленными: иммортализованные линии клеток, доступные в Американской коллекции стандартных культур (АТСС), и любые линии клеток, используемые в известных в данной области системах экспрессии, могут быть использованы для получения рекомбинантных полипептидов согласно настоящему изобретению. Обычно клетки-хозяева трансформируют рекомбинантным экспрессионным вектором, который содержит ДНК, кодирующую полипептид целевого анти-СИ27Ь антитела. К пригодным клеткам-хозяевам относятся клетки прокариот, дрожжей или высших эукариот. Прокариоты включают грамотрицательные или грамположительные организмы, например Е.сой или бациллы. Высшие эукариоты включают клетки насекомых и устойчивые линии клеток млекопитающих. Примеры подходящих линий клеток-хозяев, являющихся клетками млекопитающих, включают линию клеток почки обезьяны С08-7 (АТСС СКЬ 1651) (С1и/тап е! а1., 1981, Се11 23:175), клетки Ь, клетки 293, клетки С127, клетки 3Т3 (АТСС ССЬ 163), клетки яичника китайского хомячка (СНО) или их производные, такие как Уедще СНО и родственные клеточные линии, которые растут в бессывороточной среде (Кактиккеп е! а1., 1998, Су1о1есйпо1о§у 28: 31), клетки НеЬа, линии клеток ВНК (АТСС СКЬ 10) и линия клеток СVI/ЕВNА, полученная из линии клеток почки африканской зеленой мартышки СУ1 (АТСС ССЬ 70), как описано в ΜсΜайаη е! а1., 1991, ΕΜΒ0 ί. 10: 2821, клетки почки эмбриона человека 293, 293 ЕΒNА или ΜδК 293, эпидермальные клетки человека А431, человеческие клетки Со1о205, другие трансформированные линии клеток приматов, нормальные диплоидные клетки, штаммы клеток, полученные из ίη νίΐΐΌ культуры первичной ткани, в основном, эксплантаты, НЬ-60, И937, клетки НаК или Лика!. Необязательно, линии клеток млекопитающих, такие как НерО2/3В, КВ, N14 3Т3 или 849, например, можно использовать для экспрессии полипептида, если желательно использовать этот полипептид в различных анализах передачи сигнала или в репортерных анализах. В альтернативном варианте возможно продуцировать полипептид в низших эукариотах, таких как дрожжи, или в прокариотах, таких как бактерии. Пригодные дрожжи включают 8ассйаготусек сенл/лае, 8с1и/окассйаготусек ротЬе, штаммы К1и^еготусек, Сапб1ба или любые дрожжи, способные экспрессировать гетерологичные полипептиды. Пригодные штаммы бактерий включают Ексйепсййа сой, ВасШик киЬййк, 8а1топе11а ДрЫтшгит или любые штаммы бактерий, способные экспрессировать гетерологичные полипептиды. Если полипептид получен в дрожжах или бактериях, может быть желательным модифицировать продуцируемый ими полипептид, например, путем фосфорилирования или гликозилирования соответствующих сайтов для получения функционального полипептида. Такие ковалентные присоединения могут быть осуществлены с использованием известных химических или ферментативных методов. Полипептид может также быть получен путем функционального связывания выделенной нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению с подходящими контрольными последовательностями в одном или большем количестве экспрессионных векторов и применения системы экспрессии с использованием насекомых. Материалы и методы для экспрессионных систем бакуловирус/клетка насекомого доступны для приобретения в форме наборов, в, например, йийгодеп. 8ап И1едо, СайГ.. США. (набор МахВас® кй), также такие методы хорошо известны в данной области, например, описанные в 8иттегк апб 8тйй, Техак АдпсиЙига1 Ехрептеп! 81айоп Ви11ейп №. 1555 (1987), и Ьискоте апб 8иттегк, Вю/Тесйпо1о§у 6:47 (1988). Бесклеточные системы трансляции также можно применять для получения полипептидов с использованием молекул РНК, полученных из конструкций нуклеиновых кислот, раскрытых в настоящем описании. Соответствующие векторы клонирования и экспрессии для применения с клетками-хозяевам бактериального, грибного, дрожжевого происхождения и полученными из организма млекопитающих, описаны в Рои\уе1к е! а1. (С1отп§ УесЮгк: А ЬаЬогаШгу Μаηиа1, Е1ке\лег №\ν Уогк, 1985). Клетка-хозяин, содержащая выделенную нуклеиновую кислоту согласно настоящему изобретению, предпочтительно функционально связанную с по меньшей мере одной последовательностью контроля экспрессии, является рекомбинантной клеткой-хозяином.
В некоторых вариантах реализации линии клеток могут быть выбраны путем определения, какие линии клеток обеспечивают высокий уровень экспрессии и конститутивно продуцируют антигенсвязывающие белки, способные связывать СО27Б. В другом варианте реализации может быть выбрана линия клеток из линии В-клеток, которые сами не продуцируют антител, но способны продуцировать и секретировать гетерологичное антитело.
Конъюгаты антитело-лекарственное соединение (АПС).
Варианты реализации настоящего изобретения включают конъюгаты антитело-лекарственное соединение (АЭС). Обычно АЭС включает антитело, конъюгированное с химиотерапевтическим агентом, например цитотоксическим агентов, цитостатическим агентом, токсином или радиоактивным агентом. Молекула линкера может использоваться для конъюгирования лекарственного средства с антителом. Известны различные линкеры и лекарственные средства, которые могут использоваться в методике АЭС,
- 30 027900 которые можно применять в вариантах реализации настоящего изобретения. (См. И8 20090028856; И8 2009/027471З; И8 2007/00З1402; \\'0 2005/084З90; \\'0 2009/099728; И8 5208020; И8 5416064; И8 5475092; 5585499; 64З69З1; 6З727З8 и 6З40701, все источники включены в данный текст путем ссылки).
Конъюгаты антитело-лекарственное соединение могут быть получены ίη νίίΓΟ методами. Для того чтобы связать лекарственное соединение или пролекарство с антителом, используют связывающую группу. Подходящие связывающие группы хорошо известны и включают кислоточувствительные группы, фоточувтствительные группы, чувствительные к действию пептидаз группы и чувствительные к действию эстераз группы. Предпочтительными связывающими группами являются дисульфидные группы. Например, конъюгаты могут быть сконструированы с использованием реакции дисульфидного обмена между антителом и лекарственным соединением или пролекарством. Молекулы лекарственного средства также могут быть связаны с агентом, связывающим клетки, с использованием промежуточной молекулыносителя, такой как альбумин.
В некоторых вариантах реализации агент, связывающий клетки, модифицируют путем проведения реакции бифункционального сшивающего реагента с агентом, связывающим клетки, которая приводит к ковалентному присоединению молекулы линкера к агенту, связывающему клетки. В настоящем описании бифункциональный сшивающий реагент или линкер представляет собой любой химический фрагмент, который ковалентно связывает агент, связывающий клетки, с лекарственным соединением, таким как описанные здесь лекарственные средства. В конкретном варианте реализации настоящего изобретения часть связывающего фрагмента представлена лекарственным соединением. В этом случае лекарственное соединение содержит связывающий фрагмент, который является частью более крупной линкерной молекулы, используемой для соединения агента, связывающего клетки, с лекарственным соединением. Например, для образования майтансиноида ΌΜ1, боковую цепь на С-З гидроксильной группе майтансина модифицируют с образованием на ней свободной сульфгидрильной группы (8Н) . Эту тиолированную форму майтансина можно использовать в реакции с модифицированным агентом, связывающим клетки, с получением конъюгата. Соответственно, конечный линкер образуется из двух компонентов, один из которых обеспечивается сшивающим реагентом, а второй обеспечивается боковой группой ΌΜ1.
Любой подходящий бифункциональный сшивающий реагент можно использовать в контексте настоящего изобретения при условии, что линкерный реагент обеспечивает сохранение терапевтических (например, цитотоксичность) и нацеливающих характеристик лекарственного средства и агента, связывающего клетки, соответственно. В предпочтительном варианте линкерная молекула соединяет лекарственное соединение с агентом, связывающим клетки, химическими связями (как описано выше), за счет чего лекарственное соединение и агент, связывающий клетки, химически соединяются (например, ковалентно связываются) друг с другом.
Линкеры.
В некоторых вариантах реализации АЭС включает линкер, образованный из одного или более линкерных компонентов. В предпочтительном варианте лекарственное соединение связано с агентом, связывающим клетки, дисульфидной связью. Линкерная молекула содержит реактивную химическую группу, которая способна реагировать с агентом, связывающим клетки. Предпочтительными реактивными химическими группами для реакции с агентом, связывающим клетки, являются ^сукцинимидиловые эфиры и ^сульфосукцинимидиловые эфиры. Дополнительно линкерная молекула включает реактивную химическую группу, предпочтительно дитиопиридиловую группу, которая способна реагировать с лекарственным соединением с образованием дисульфидной связи. Примеры линкерных молекул включают, например, ^сукцинимидил З-(2-пиридилдитио)пропионат(8РОР) (см., например, СагПкоп с1 а1., ВюсЬет. ί., 17З, 72З-7З7 (1978)), ^сукцинимидил 4-(2-пиридилдитио)бутаноат (8РЭВ) (см., например, и.8. Ра1. N0. 456ЗЗ04) и ^сукцинимидил 4-(2-пиридилдитио)пентаноат (8РР) (см., например, регистрационный номер СА8 З41498-08-6). Дополнительные примеры линкерных компонентов включают 6малеимидокапроил, малеимидопропаноил, валин-цитрулин, аланин-фенилаланин, раминобензилоксикарбонил и линкеры, полученные в результате конъюгирования со связывающими реагентами, включая, но не ограничиваясь перечисленными: ^сукцинимидил 4-(2-пиридилтио)пентаноат (8РР), ^сукцинимидил 4-Щ-малеимидометил)циклогексан-1 карбоксилат (8МСС, также называемый здесь МСС) и №сукцинимидил(4-иодоацетил)аминобензоат (81АВ).
Линкеры могут представлять собой расщепляемые линкеры или нерасщепляемые линкеры (Писгу апй 81итр, Вюсоп)ида1е Сйет. 2010, 21, 5-1З; источник полностью включен в настоящее описание путем ссылки). Расщепляемые линкеры предназначены для высвобождения лекарственного средства под воздействием определенных факторов среды, например при интернализации в клетку-мишень. Расщепляемые линкеры включают кислоточувствительные линкеры, линкеры, чувствительные к действию протеаз, фоточувствительные линкеры, диметиловые линкеры или дисульфидсодержащие линкеры. Нерасщепляемые линкеры склонны сохранять ковалентную связь с по меньшей мере одной аминокислотой антитела и лекарственного средства после интернализации и разрушения в клетке-мишени. Нерасщепляемый линкер представляет собой любой химический фрагмент, способный связывать лекарственное соединение, такое как майтансиноид (например, ΌΜ1 и подобные), таксан или аналог СС-1065, с аген- З1 027900 том, связывающим клетки, с обеспечением стабильной ковалентной связи. Соответственно, нерасщепляемые линкеры, по существу, устойчивы к расщеплению под действием кислот, расщеплению под действием света, расщеплению под действием пептидаз, расщеплению под действием эстераз и расщеплению дисульфидных связей в условиях, в которых лекарственное соединение или агент, связывающий клетки, сохраняют активность. Стабильные сшивающие реагенты, которые образуют нерасщепляемые линкеры между лекарственным соединением и агентом, связывающим клетки, хорошо известны. Примеры нерасщепляемых линкеров включают линкеры, содержащие фрагмент Х-сукцинимидилового эфира Х-сульфосукцинимидилового эфира, а также фрагменты на основе малеимидо- или галоацетила- для реакций с лекарственными средствами. Сшивающие линкерные реагенты, содержащие фрагмент на основе малеимидо-, включают ^сукцинимидил 4-(малеимидометил)циклогексанкарбоксилат (8МСС), Ксукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1 -карбокси-(6-амидокапроат), который представляет собой длинноцепочечный аналог 8МСС (ЬС--8МСС), х-малеимидоундекановой кислоты N сукцинимидиловый эфир (КМИА), гамма-малеимидомасляной кислоты N-сукцинимидиловый эфир(СМВ8), ε-малеимидокапроновой кислоты N-гидроксисукцинимидный эфир (ЕМС8), тмалеимидобензоил-Ы-гидроксисукцинимидный эфир (МВ8), N-(α-малеимидоацетокси)сукцинимидный эфир (АМА8), сукцинимидил-6-(3-малеимидопропионамидо)гексаноат (8МРН), N-сукцинимидил 4-(рмалеимидофенил)бутират (8МРВ) и N-(р-малеимидофенил)изоцианат (РМР1). Сшивающие реагенты, содержащие группу на основе галоацетила, включают N-сукцинимидил-4-(иодоацетил)аминобензоата (81АВ), N-сукцинимидил йодоацетат (81А), N-сукцинимидил бромоацетат (8ВА) и N-сукцинимидил 3(бромацетамидо)пропионат(8ВАР). Примером предпочтительных нерасщепляемых линкеров является МСС.
Другие сшивающие реагенты-линкеры, в которых отсутствует атом серы, образующий нерасщепляемые линкеры, также могут быть получены из групп на основе дикарбоновых кислот. Подходящие фрагменты на основе дикарбоновых кислот включают, но не ограничены указанными: альфа, омегадикарбоновые кислоты общей формулы (IX) ноос—Χι—γη—гт—соон (ίχ) где X представляет собой линейную или разветвленную алкильную, алкенильную или алкинильную группу, содержащую от 2 до 20 атомов углерода, Υ представляет собой циклоалкильную или циклоалкенильную группу, содержащую от 3 до 10 атомов углерода, Ζ представляет сбой замещенную или незамещенную ароматическую группу, содержащую от 6 до 10 атомов углерода, или замещенную или незамещенную гетероциклическую группу, в которой гетероатом выбран из N О и 8 и где 1, т и п каждый равен 0 или 1, при условии, что 1, т и п не равны нулю все одновременно.
Многие раскрытые здесь нерасщепляемые линкеры подробно описаны в публикации заявки на патент США 2005/0169933 А1.
Примеры подходящих расщепляемых линкеров включают дисульфидные линкеры, чувствительные к действию кислот линкеры, фоточувствительные линкеры, чувствительные к действию пептидаз линкеры и чувствительные к действию эстераз линкеры. Содержащие дисульфид линкеры представляют собой линкеры, расщепляемые в результате дисульфидного обмена, который может происходить в физиологических условиях. Чувствительные к действию кислот линкеры расщепляются при кислом рН. Например, некоторые внутриклеточные компартменты, такие как эндосомы и дизосомы, имеют кислый рН (рН 4-5), что обеспечивает условия, подходящие для расщепления чувствительных к действию кислоты линкеров. Фоточувствительные линкеры можно применять на поверхности тела и во многих углублениях тела, в которые возможен доступ света. Кроме того, инфракрасный свет может проникать в ткани. Чувствительные к действию пептидаз линкеры можно применять для расщепления некоторых пептидов внути или вне клеток (см., например, Тгоие! е! а1., Ргос. \ай. Асаб. 8ск И8А, 79, 626-629 (1982) и Цтето!о е! а1., 1п!. I. Сапсег, 43, 677-684 (1989)).
Лекарственные средства.
В некоторых вариантах реализации антитело конъюгировано с химиотерапевтическим агентом. Примеры химиотерапевтических агентов включают алкилирующие агенты, такие как тиотепа и циклофосфамид (СΥТ0XАN.ТМ.); алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквуон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфаорамид и триметилоломеламин; ацетогенины (в частности, буллатацин и буллатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; каллистатин; СС-1065 (включая его синтетические аналоги адозелезин, карцелезин и бицелезин); криптофицин (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги, КА-2189 и СВ1-ТМ1); элеутеробин; панкретистатин; саркодиктиина; спонгистатин; производные азотистого иприта такие, как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, мехлоретамина оксида гидрохлорид, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, уромустин; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорзотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин; антибиотики, такие как енидииновые антибиотики (например калихимицин, в частности калихимицин гамма 1 и калихимицин тета I, см., на- 32 027900 пример, Апдете СЬет. 1пб. Еб. Епд1. 33:183-186 (1994); динемицин, включая динемицин А; эсперамицин; а также неокарциностатиновый хромофор и аналогичные хромопротеиновые хромофорные антибиотики енедиинового ряда, аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, каминомицин, карцинофилин; хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6диазо-5-оксо-Ь-норлейцин, доксорубицин (включая морфолино-доксорубицин, цианоморфолинодоксорубицин, 2-пирролино-доксорубицин и дезоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, нитомицины, микофенолокислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-РИ); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурина, такие как флюдарабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; аналоги пиримидина, такие как, анцитабин, азацитидина, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин, 5-РИ; андрогены, такие как калустерон, дромостанолон пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антагонисты адреналина, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; агонисты фолиевой кислоты, такие как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамидные гликозиды; аминолевулиновой кислоты; амсакрин; бестарубицил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; эльфомитин; эллиптиния ацетат; эпотилон; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидамин; майтансиноиды: такие как майтансин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопидамол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; подофилиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; Р8К.КТМ.; разоксан; ризоксин; сизофуран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазикон; 2,2',2''трхлортриэтиламин; трихотецены (в частности, токсин Т-2, верракурин А, роридин А и ангуидин); уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид (Ага-С); циклофосфамид; тиотепа; таксоиды, например паклитаксел (ТАХОЬ.ТМ., Вп51о1-Муег5 8цшЬЬ 0псо1оду, РппсеЮп, Ν.Ρ, США) доцетаксель (ТАХ0ТЕКЕ.КТМ., КЬопе-Рои1епс Когег, Ап1опу, Франция); хлорамбуцил; гемцитабин; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; платина; этопозид (УР-16); ифосфамид; митомицин С; митоксантрон; винкристин; винорелбин; навелбин; новантрон; тенипозид; дауномицин; аминоптерин; кселода; ибандронат; СРТ-11; ингибитор топоизомеразы КР§ 2000; дифторметиломитин (ЭМР0); ретиноевая кислота, капецитабин и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из перечисленных выше средств. Также в это определение включены антигормональные средства, которые регулируют или ингибируют воздействие гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены, включая, например, тамоксифен, ралоксифен, ингибирующие ароматазу 4(5)-имидазолы, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, ЬУ117018, онапристон и торемифен (Фарестон, РагеШоп); и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, леупролид и гозерелин; миРНК и и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из перечисленных выше средств. Другие химиотерапевтические агенты, пригодные для применения в настоящем изобретении, раскрыты в патентной публикации США № 20080171040 или патентной публикации США 20080305044, которые полностью включены в настоящее описание путем ссылки.
Предполагается, что антитело может быть конъюгировано с двумя или более различными химиотерапевтическими агентами или фармацевтическая композиция может содержать смесь антител, в антительные компоненты идентичны, за тем исключением, что они конъюгированы с различными химиотерапевтическими агентами. Такие варианты реализации могут быть полезны для нацеливания на несколько биологических каскадов с клетке-мишени.
В предпочтительных вариантах реализации АЭС (конъюгат антитело-лекарственное соединение) включает антитело, конъюгированное с одной или более молекулами майтансиноидов, которые являются ингибиторами митоза, действующими за счет ингибирования полимеризации тубулина. Майтансиноиды, включая различные модифицированные формы, описаны в патентах США № 3896111; 4151042; 4137230; 4248870; 4256746; 4260608; 4265814; 4294757; 4307016; 4308268; 4309428; 4313946; 4315929; 4317821; 4322348; 4331598; 4361650; 4364866; 4424219; 4450254; 4362663; 4371533; а также в \Υ0 2009/099728. Майтансиноиды в качестве лекарственных фрагментов могут быть выделены из природных источников, получены с использованием рекомбинантной технологии или получены синтетическим путем. Примеры майтансиноидов включают С-19-делхор (патент США № 4256746), С-20-гидрокси (или С-20-диметил) ± С-19-делхор (патенты США № 4307016 и 4361650), С-20-деметокси (или С-20-ацилокси (-0С0К), ± дехлор (патент США № 4294757), С-9-8Н (патент США № 4424219), С-14-алкоксиметил (деметокси/СН20К) (патент США № 4331598), С-14-гидроксиметил или ацилоксиметил (СН2ОН или СН2ОАс) (патент США № 4450254), С-15-гидрокси/ацилокси (патент США № 4364866), С-15-метокси (патенты США № 4313946 и 4315929), С-18-№-деметил (патенты США № 4362663 и 4322348) и 4,5деокси (патент США № 4371533).
Различные положения в молекулах маутансиноидах могут быть использованы в качестве положений связи, в зависимости от желаемого типа связи. Например, для образования сложноэфирной связи подходящими будет любая группа из следующих: положение С-3 с гидроксильной группой, положение
- 33 027900
С-14. модифицированное гидрозиметилом. положение С-15. модифицированное деоксильной группой и положение С-20. содержащее гидроксильную группу (патенты США № 5208020. КЕ39151 и 6913748; публикации заявок на патент США № 20060167245 и 20070037972 и \У0 2009099728).
Предпочтительные майтансиноиды включают соединения. известные как ΌΜ1. ΌΜ3 и ΌΜ4 (публикации заявок на патент США № 2009030924 и 20050276812. включенные в настоящей текст путем ссылки).
АБС. содержащие майтансиноиды. способы получения таких конъюгатов (АБС) и их терапевтическое применение раскрыто в патентах США № 5208020 и 5416064. заявке на патента США 20050276812. и в публикации \У0 2009099728 (все указанные источники включены в настоящий текст путем ссылки). Линкеры. которые можно применять для получения АБС с майтансиноидами известны (патент США № 5208020 и публикации заявок на патент США № 2005016993 и 20090274713; все источники включены в данный текст путем ссылки). Конъюгаты (АБС) с майтансиноидами. содержащие линкер δΜСС могут быть получены. как описано в патентной публикации США № 2005/0276812.
В некоторых вариантах реализации АБС включает антитело. конъюгированное ΩΜ1 при помощи линкера δΜΟ’. Предпочтительные варианты реализации включают АЬ1-δΜСС-^Μ 1. АЬ2-δΜСС-^Μ 1. АЬ3-δΜСС-^Μ1. АЬ5-δΜСС-^Μ1. АЬ6-δΜСС-^Μ1. АЬ7-δΜСС-^Μ1 и ΆΜ-δΜϋϋΏΜ1.
Нагрузка лекарственным соединением.
Конъюгат (АБС) может содержать от 1 до 20 химиотерапевтических агентов на антитело. Композиции АБС могут быть охарактеризованы средним числом фрагментов лекарственного средства на молекулу антитела в композиции. Среднее число фрагментов лекарственного средства может быть определено с использованием обычных средств. таких как масс-спектрометрия. иммуноанализ и ВЭЖХ. В некоторых случаях гомогенная популяция конъюгатов (АБС) может быть выделена и очищена посредством обращеннофазовой ВЭЖХ или электрофореза. Соответственно. фармацевтические композиции конъюгатов АБС могут содержать гетерогенную или гомогенную популяцию антител. связанных 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7 или большим числом фрагментов лекарственных средств.
В предпочтительных вариантах реализации АБС содержит антитело. конъюгированное с одной или более молекулами ΩΜ1. Варианты реализации настоящего изобретения включают композиции. содержащие в среднем приблизительно 1. приблизительно 2. приблизительно 3. приблизительно 4. приблизительно 5. приблизительно 6. приблизительно 7. приблизительно 8. приблизительно 9. приблизительно 10. приблизительно 11. приблизительно 12. приблизительно 13. приблизительно 14. приблизительно 15. приблизительно 16. приблизительно 17. приблизительно 18. приблизительно 19. или приблизительно 20 молекул ΩΜ1 на антитело. Предпочтительными являются композиции АБС. включающие АЬ1. АЬ2. АЬ3. АЬ4. АЬ5. АЬ6. АЬ7 или АЬ8. содержащие в среднем от 1 до 10 молекул ΩΜ1 на антитело. композиции. содержащие антитела и в среднем от 3 до 7 молекул ΩΜ1 на антитело. и содержащие антитела и в среднем от 4 до 6 молекул ΩΜΕ включая среднее число молекул ΩΜ1 на антитело. составляющее приблизительно 4.0. приблизительно 4.1. приблизительно 4.2. приблизительно 4.3. приблизительно 4.4. приблизительно 4.5. приблизительно 4.6. приблизительно 4.7. приблизительно 4.8. приблизительно 4.9. приблизительно 5.0. приблизительно 5.1. приблизительно 5.2. приблизительно 5.3. приблизительно 5.4. приблизительно 5.5. приблизительно 5.6. приблизительно 5.7. приблизительно 5.8. приблизительно 5.9 и приблизительно 6.0.
Антитела с повышенной эффекторной функцией.
Одна из функций Рс-части антитела заключается во взаимодействии с иммунной системой при связывании антитела с его мишенью. Это считается эффекторной функцией.
Взаимодействие приводит к антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ). антителозависимому клеточному (АЗКФ). и/или комплементзависимой цитотоксичности (КЗЦ). АЗКЦ и АЗКФ осуществляются за счет связывания Рс с рецепторами к Рс на поверхности клеток иммунной системы. КЗЦ осуществляется за счет связывания Рс с белками системы комплемента. например С1с|.
Подклассы 1дО обладают различной способностью к осуществлению эффекторных функций. Например. 1дО1 значительно превосходит 1дО2 и 1дО4 в осуществлении АЗКЦ и КЗЦ. Соответственно. в тех вариантах реализации. в которых происходит нацеливание на клетки. экспрессирующие СБ27Ь. для их разрушения. предпочтительным будет анти-СБ27Ь антитело типа 1дО1.
Эффекторную функцию антитела можно повысить или понизить путем введения одной или более мутаций в Рс. Варианты реализации настоящего изобретения включают антигенсвязывающие белки. например. антитела. с Рс. модифицированным с целью повышения эффекторной функции (США 7317091 и δΙίΌΐιΕ Сигг. 0рш. Вю1есй.. 20:685-691. 2009; оба источника включены в данный текст путем ссылки). Примеры молекул Рс 1дО1 с повышенной эффекторной функцией включают (на основе схемы нумерации КаЬаЕ) те. которые содержат следующие замены:
- 34 027900
3239Ό/Α3303/Ι332Ε 3239ϋ/Α330Σ/ΐ332Ε 3298Α/Ό333Α/Κ334Α Ρ247Ι/Α339Ό Ρ247ΐ/Α339ζ)
Ρ280Η/Κ2903
Ρ280Η/Κ2903/3298Ό ϋ280Η/Κ2903/3298ν
Е243Ь/Р292Р/У300Ь
Е243Ь/Н292Р/У300Ь/Р396Ь
Е243Ь/К292Р/У300Ь/У3051/Р396Ь
Ο236Α/3239Ό/Ι332Ε
Κ326Α/Ε333Α
Κ326Ν/Ε3333
К290Е/3298С/Т299А
Κ290Ν/3298Ο/Τ299Α
К290Е/3298С/Т299А/К326Е
Κ290Ν/32983/Τ299Α/Κ326Ε
Другие варианты реализации настоящего изобретения включают антигенсвязывающие белки, например антитела, с Рс, модифицированным с целью снижения эффекторной функции. Примеры молекул Рс с пониженной эффекторной функцией включают (на основе схемы нумерации КаЬа!) те, которые содержат следующие замены:
Ν297Α (1д61)
Ъ234А/Ъ235А (1дС1)
У234А/С237А (1дС2)
Ъ235А/6237А/Е318А (1дС4)
Н2 68<2/У309Ъ/А3305/А3315 (1дС2)
С2205/С2265/С2295/Р2383 (1дС1)
С2265/С2293/Е2ЗЗР/Ъ234У/Ъ235А (1дС1)
Ъ234Е/Ъ235Е/Р3313 (1дС1)
3267Е/Ъ328Е (1дС1)
Другой способ снижения эффекторной функции содержащих Рс иммуноглобулина 1дО белков основан на уменьшении фукозилирования -Рс. Удаление основной фукозы из олигосахаридов комплексного типа с двумя боковыми цепями, присоединенных к Рс приводит к значительному повышению АЗКЦ. Известно настолько способов снижения или устранения фукозилирования содержащих Рс молекул, например антител. Эти способы включают рекомбинантную экспрессию в некоторых линиях клеток млекопитающих, включая клеточную линию с нокаутом РИТ8, вариант Ьес13 линии СНО, линию клеток гибридомы крысы УВ2/0, линию клеток, содержащих малую интерферирующую РНК, специфичную к гену РИТ8, и линию клеток, экспрессирующую В-1,4-И-ацетилглюкозаминилтрансферазу III и аманнозидазу II комплекса Гольджи. В альтернативном варианте содержащая Рс молекула может экспрессироваться в клетках, не являющихся клетками млекопитающих, таких как клетка растения, дрожжевая клетка или прокариотическая клетка, например Е.соН. Соответственно, в некоторых вариантах реализации настоящего изобретения композиция включает антитело, например, АЬ1, АЬ2, АЬ3, АЬ4, АЬ5, АЬ6, АЬ7 или АЬ8 с пониженным фукозилированием или с полным отсутствием фукозилирования.
Фармацевтические композиции.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество одного или нескольких антигенсвязывающих белков согласно настоящему изобретению вместе с фармацевтически эффективными разбавителями, носителем, растворителем, эмульгатором, консервантом, и/или адъювантом. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антиген-связывающий белок представляет собой антитело, в том числе конъюгат антитела с лекарством или биспецифическое антитело. Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению включают жидкие, замороженные и лиофилизированные композиции, но не ограничиваются ими.
Предпочтительно вещества препарата являются нетоксичными для реципиентов в применяемых дозах и концентрациях. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения обеспечены фар- 35 027900 мацевтические композиции, содержащие терапевтически эффективное количество связывающего антиген СО27Ь белка, например, связывающий СО27Ь конъюгат (АЭС).
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения указанная фармацевтическая композиция может содержать вещества для модификации, поддержания или сохранения, например, рН, осмолярности, вязкости, прозрачности, цвета, изотоничности, запаха, стерильности, стабильности, скорости растворения или высвобождения, адсорбции или проникновения композиции. В таких вариантах осуществления пригодные вещества композиции включают аминокислоты (например, глицин, глютамин, аспарагин, аргинин, пролин, или лизин); противомикробные препараты; антиоксиданты (такие как аскорбиновая кислота, сульфит натрия или гидросульфит натрия); буферные соединения (такие как бораты, бикарбонаты, Трис-НС1, цитраты, фосфаты или другие органические кислоты); наполнители (такие как маннитол или глицин); хелатирующие агенты (такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА)); комплексообразующие агенты (такие как кофеин, поливинилпирролидон, бета-циклодекстрин или гидроксипропил-бета-циклодекстрин); наполнители; моносахариды; дисахариды; и другие углеводы (такие как глюкоза, манноза или декстрины); белки (такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины); красители, вкусовые добавки и разбавители; эмульгаторы; гидрофильные полимеры (такие как поливинилпирролидон); низкомолекулярные полипептиды; солеобразующие противоионы (например, натрия); консерванты (такие как хлорид бензалкония, бензойная кислота, салициловая кислота, тимеросал, фенетиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен, хлоргексидин, сорбиновая кислота или пероксид водорода); растворители (такие как глицерин, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль); сахарные спирты (такие как маннитол или сорбит); суспендирующие агенты; поверхностно-активные вещества или смачивающие агенты (например, плюроники®, ПЭГ, сложные эфиры сорбитана, полисорбаты, такие как полисорбат 20, полисорбат, Тритон, трометамин, лецитин, холестерин, тилоксапал); агенты, усиливающие стабильность (например, сахароза или сорбит); агенты, усиливающие тоничность (например, галогениды щелочных металлов, предпочтительно хлорид натрия или калия, маннитол, сорбит); средства доставки; разбавители; наполнители и/или фармацевтические адъюванты, но не ограничиваются ими. См., ΚΕΜΙΝΟΤΟΝ'δ РНАКМАСЕиТ1САЬ δΟΕΝΟΕδ, 18-е издание (под редакцией А.К. Оепгто), 1990, Маек РиЪЛЫпд Сотрапу.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения оптимальная фармацевтическая композиция будет определяться специалистом в данной области техники в зависимости от, например, предполагаемого пути введения, формата доставки и желаемой дозы. См., например, ΚΕΜΙΝΟΤΟΝ'δ РНАКМАСЕиТЮАЬ δСIΕNСΕδ, выше. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения такие композиции могут влиять на физическое состояние, стабильность, скорость высвобождения ίη νίνο и скорости клиренса ίη νίνο антиген-связывающих белков согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения первичный носитель в фармацевтической композиции может быть либо водным, либо неводным по природе. Например, подходящим носителем может быть вода для инъекций, физиологический солевой раствор или искусственная спинномозговая жидкость, возможно с добавлением других материалов, обычно использующихся в композициях для парентерального введения. Нейтральный буферный солевой раствор или солевой раствор, смешанный с сывороточным альбумином, также являются примерами носителей. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции содержат Трис-буфер с рН приблизительно 7,08,5, или ацетатный буфер с рН приблизительно 4,0-5,5, и могут дополнительно включать сорбит или его подходящий заменитель. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения композиции со связывающим антиген СО27Ь белком могут быть приготовлены для хранения смешиванием выбранной композиции, имеющей желаемую степень чистоты, с необязательным использованием дополнительных реагентов (ΚΕΜΙΝΟΤΟΝ'δ РНАКМАСЕиТКАЕ δСIΕNСΕδ, выше) в виде лиофилизированного остатка или водного раствора. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения продукт со связывающим антиген СО27Ь белком может быть приготовлен в виде лиофилизата с использованием соответствующих наполнителей, таких как сахароза.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть подобраны для парентеральной доставки. Альтернативно, указанные композиции могут быть подобраны для ингаляции или для доставки через пищеварительный тракт, например перорально. Получение таких фармацевтически приемлемых композиций известно в данной области техники. Компоненты указанной композиции присутствуют предпочтительно в концентрациях, которые приемлемы в месте введения. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения используются буферы для поддержания композиции при физиологическом значении рН или при слегка более низком рН, как правило, в диапазоне рН от приблизительно 5 до приблизительно 8.
Когда предполагается парентеральное введение, терапевтические композиции для применения согласно настоящему изобретению могут быть представлены в виде апирогенного, пригодного для парентерального введения водного раствора, содержащего желаемый СО27Ь антиген-связывающий белок с фармацевтически приемлемым носителем. Наиболее подходящим средством для парентерального введения является стерильная дистиллированная вода, в котором СО27Ь антиген-связывающий белок приготовлен в виде стерильного изотонического раствора, хранящегося должным образом. В некоторых вари- 36 027900 антах осуществления настоящего изобретения препарат может включать в себя композицию необходимой молекулы с агентом. например инъецируемыми микросферами. биодеградируемыми частицами. полимерными соединениями (такими как полимолочная кислота или полигликолевая кислота). бусами или липосомами. которые могут обеспечить контролируемое или продолжительное высвобождение продукта. который может быть доставлен путем инъекции с замедленным всасыванием. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения также может быть использована гиалуроновая кислота. обладающая эффектом содействия продолжительной циркуляции. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения могут быть использованы имплантируемые устройства доставки лекарственных средств для введения желаемого антигенсвязывающего белка.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены для ингаляции. В этих вариантах связывающие антиген СО27Ь белки готовят предпочтительно в виде сухого порошка для ингаляции. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения растворы для ингаляции Связывающего антиген СО27Ь белка также могут быть приготовлены с пропеллентом для аэрозольной доставки. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения растворы могут распыляться. Введение в легкие и способ получения таких композиций далее описаны в международной патентной заявке РСТ/И894/001875. которая включена в настоящее описание посредством ссылки и которая описывает доставку химически модифицированных белков в легкие.
Также предполагается. что композиции могут быть введены перорально. Связывающие антиген СО27Ь белки. которые вводят таким образом. могут быть приготовлены с носителями. обычно используемыми в рецептуре твердых лекарственных форм. таких как таблетки и капсулы. или без таких носителей. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения капсулы могут быть предназначены для высвобождения активного компонента композиции в определенной точке в желудочно-кишечном тракте. когда биодоступность является максимальной. а предшествующая системная деградация сведена к минимуму. Дополнительные средства могут быть добавлены. чтобы облегчить абсорбцию Связывающего антиген СО27Ь белка. Также могут быть использованы разбавители. красители. воски с низкой температурой плавления. растительные масла. смазывающие вещества. суспендирующие агенты. агенты. разрыхляющие таблетки. и связующие вещества.
Другие фармацевтические композиции будут очевидны специалистам в данной области техники. в том числе композиции. включающие связывающие антиген СО27Ь белки в препаратах с замедленным или контролируемым высвобождением. Методы получения множества других средств доставки с замедленным или контролируемым высвобождением. таких как липосомы. биологически деградируемые микрочастицы или пористые гранулы и инъекции с замедленным высвобождением. также известны специалистам в данной области. См.. например. международную патентную заявку РСТ/и89З/00829. которая включена в настоящее описание посредством ссылки и описывает регулируемое высвобождение из пористых полимерных микрочастиц для доставки фармацевтических композиций. Препараты с замедленным высвобождением могут включать в себя полупроницаемые полимерные матрицы в виде формованных изделий. например пленок или микрокапсул. Матрицы с замедленным высвобождением могут включать сложные полиэфиры. гидрогели. полилактиды (как описано в патенте США № З77З919 и публикации Европейской патентной заявки ЕР 058481. каждая из которых включена в настоящее описание посредством ссылки). сополимеры Ь-глютаминовой кислоты и гамма-этил-Ь-глютамата (8Штап и др.. 198З. Вюро1утег8 2:547-556). поли(2-гидроксиэтилметакрилат) (Ьапдег и др.. 1981. ί. Вютеб. Ма1сг. Рек. 15:167-277 и Ьапдег. 1982. СНет. ТесН. 12:98-105). этиленвинилацетат (Ьапдег е1 а1.. 1981. выше) или поли-Э(-)-З-гидроксимасляную кислоту (публикация Европейской патентной заявки ЕР 1ЗЗ988). Композиции с замедленным высвобождением могут также включать липосомы. которые могут быть получены любым из нескольких способов. известных в данной области техники. См.. например. ЕррЦет и др.. 1985. Ргос. N11. Асаб. δα. υ.δ.Α. 82:З688-З692; публикации Европейских патентных заявок ЕР 0З6676; ЕР 088046 и ЕР 14З949. включенные в настоящее описание посредством ссылки.
Фармацевтические композиции. используемые для введения ίη νίνο. как правило. представлены в виде стерильных препаратов. Стерилизация может быть выполнена путем фильтрации через стерильные фильтрационные мембраны. Когда композицию лиофилизируют. стерилизацию с помощью этого метода можно проводить либо до лиофилизации и восстановления. либо после них. Композиции для парентерального введения могут храниться в лиофилизированной форме или в растворе. Парентеральные композиции обычно помещают в контейнер. имеющий стерильный порт доступа. например. пакет для внутривенного раствора или флакон. имеющий пробку. прокалываемую иглой для подкожной инъекции.
Аспекты настоящего изобретения включают в себя самобуферизующиеся композиции со связывающим антиген СО27Ь белком. которые могут быть использованы в виде фармацевтических композиций. как описано в международной патентной заявке XV0 061З8181А2 (РСТ/^2006/022599). которая включена в настоящий документ в полном объеме посредством ссылки.
Как обсуждалось выше. некоторые варианты осуществления настоящего изобретения обеспечивают белковые композиции со связывающим антиген СО27Ь белком. в частности фармацевтические композиции со связывающим антиген СО27Ь белком. которые содержат. в дополнение к связывающему антиген СО27Ь белку. один или несколько наполнителей. таких как описанные в целях иллюстрации в этом раз- З7 027900 деле и в других местах настоящего описания. В этой связи вспомогательные вещества могут использоваться в настоящем изобретении для самых различных целей, таких как корректировка физических, химических или биологических свойств композиций, таких как корректировка вязкости, и в способе осуществления настоящего изобретения для повышения эффективности и для стабилизации таких композиций и процессов против деградации и порчи из-за, например, внешних воздействий, которые возникают в процессе производства, отгрузки, хранения, предпродажной подготовке, введении и в последующем.
Доступно множество примеров стабилизации белка и разработки материалов и методов, используемых в этой области, таких как описанные Агака^а и др., 8о1уеп1 Негасйопз ίη рЬагтасеийса1 Гогти1аΐΐοηδ, РЬагт Кез. 8(3): 285-91 (1991); КепЬпск и др., РЬузюа1 зШЫН/айоп оГ ргоЮтз ш ациеоиз 8о1ийоп, в: КАТЮИЛЬ 1)1ЫО\ 0Р 8ТАВЬЕ РК0ТЕП\Т ΙΌΚ\Η/Ι.ΆΤΙ0\5: ТШЫА АМ) РКАСТ1СЕ, Сагрейег, Мапптд, еЬз. РЬагтасеийса1 Вю1есЬпо1оду. 13: 61-84 (2002), и Капбо1рЬ и др., 5>игГас1ап1-рго1ет иНегасЬопз, РЬагт В1о1есЬпо1. 13: 159-75 (2002), каждый из которых включен в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме, особенно в частях, имеющих отношение к наполнителям и процессам с участием самобуферизующихся белковых композиций в соответствии с настоящим изобретением, особенно что касается белковых фармацевтических продуктов и процессов для ветеринарии и/или применения в медицинских целях для человека.
Соли могут использоваться в соответствии с некоторыми вариантами настоящего изобретения для того, чтобы, например, регулировать ионную силу и/или изотоничность композиции, и/или улучшить растворимость и/или физическую стабильность белка или другого ингредиента композиции в соответствии с настоящим изобретением.
Как известно, ионы могут стабилизировать нативное состояние белков путем связывания с заряженными остатками на поверхности белка и экранированием заряженных и полярных групп в белке, а также уменьшая силу их электростатических взаимодействий, притяжения и отталкивания. Ионы также могут стабилизировать состояние денатурированного белка путем связывания, в частности, с денатурированными пептидными связями (-^0X4) белка. Кроме того, ионное взаимодействие с заряженными и полярными группами в белке может также уменьшать межмолекулярные электростатические взаимодействия и тем самым предотвращать или уменьшать агрегацию белка и нерастворимость.
Виды ионов существенно различаются по их влиянию на белки. Был разработан ряд категориальных рейтингов ионов и их влияния на белки, которые могут быть использованы в фармацевтических композициях в соответствии с изобретением. Одним из примеров являются ряды Гофмейстера (лиотропные ряды), которые ранжируют ионные и полярные неионные растворенные вещества по их влиянию на конформационную стабильность белков в растворе. Стабилизирующие растворенные вещества называют космотропными. Дестабилизирующие растворенные вещества называют хаотропными. Космотропные вещества обычно используются при высоких концентрациях (например, >1 моль сульфата аммония), чтобы осадить белки из раствора (высаливание). Хаотропные вещества обычно используются для денатурирования и/или для растворения белков (всаливание). Относительная эффективность ионов в эффектах высаливания и всаливания определяет их положение в рядах Гофмейстера.
Свободные аминокислоты могут быть использованы в композициях связывающих антиген СИ27Ь белков в соответствии с различными вариантами осуществления настоящего изобретения как наполнители, стабилизаторы и антиоксиданты, а также для других стандартных применений. Лизин, пролин, серии и аланин и могут быть использованы для стабилизации белков в композиции. Глицин полезен при лиофилизации для обеспечения правильной структуры и свойств сухого остатка. Аргинин может быть полезен для ингибирования агрегации белка как в жидких, так и в лиофилизированных композициях. Метионин является полезным в качестве антиоксиданта.
Полиолы включают сахара, например маннитол, сахарозу и сорбит, а также многоатомные спирты, такие как, например, глицерин и пропиленгликоль, и, для целей обсуждения в данном описании, полиэтиленгликоль (ПЭГ) и производные вещества. Полиолы являются космотропными веществами. Они являются полезными стабилизирующими агентами как в о жидких, так и в лиофилизированных композициях для защиты белки от физико-химических процессов деградации. Полиолы также полезны для регулирования тоничности композиций.
Среди полиолов маннитол является полезным в некоторых вариантах осуществления изобретения и обычно используется, чтобы обеспечить структурную стабильность сухого остатка в лиофилизированных композициях. Это обеспечивает структурную устойчивость сухого остатка. Он обычно используется с лиопротекторами, например с сахарозой. Сорбит и сахароза являются предпочтительными агентами для корректировки тоничности и в качестве стабилизаторов для защиты от воздействий при процессах замораживания-оттаивания во время транспортировки или при подготовке больших объемов во время производственного процесса. Восстанавливающие сахара (которые содержат свободные альдегидные или кетонные группы), такие как глюкоза и лактоза, могут связываться с остатками лизина и аргинина на поверхности белка. Таким образом, они обычно не входят в круг предпочтительных полиолов для использования в соответствии с настоящим изобретением. Кроме того, сахара, которые образуют такие активные формы, такие как сахароза, и которые подвергаются гидролизу на фруктозу и глюкозу в кислых условиях, и, следовательно, приводят к образованию ковалентной связи, также не входят в круг
- 38 027900 предпочтительных полиолов согласно настоящему изобретению. ПЭГ полезен для стабилизации белков и как криопротектор и может быть использован в настоящем изобретении в качестве полиола.
Варианты композиций связывающего антиген СО27Ь белка могут дополнительно содержать поверхностно-активные вещества. Молекулы белка могут быть восприимчивы к адсорбции на поверхности, а также к денатурации и последующему агрегированию на границе раздела фаз воздух-жидкость, твердой и жидкой фаз и жидкость-жидкость. Эти эффекты обычно проявляются в зависимости, обратной от концентрации белка. Эти нежелательные взаимодействия обычно проявляются в зависимости, обратной от концентрации белка, и, как правило, усугубляются физическим перемешиванием, например, происходящим во время доставки и обработки продукта.
Поверхностно-активные вещества обычно используются для предотвращения, минимизации или снижения поверхностной адсорбции. Полезные в этом отношении поверхностно-активные вещества согласно настоящему изобретению включают полисорбат 20, полисорбат 80, другие сложные эфиры жирных кислот и полиэтоксилатов сорбитана, а также полоксамер 188.
Поверхностно-активные вещества также широко используются для контроля за конформационной стабильностью белка. Использование поверхностно-активных веществ в этом отношении является белокспецифичным, поскольку любое поверхностно-активное вещество обычно стабилизирует одни белки и дестабилизирует другие.
Полисорбаты чувствительны к окислительной деградации и часто в том виде, в котором поставляются, содержат значительное количество пероксидов, что может вызывать окисление белковых остатков боковых цепей, особенно метионина. Следовательно, полисорбаты следует использовать осторожно, и если они используются, должны быть использованы их наиболее низкие эффективные концентрации. В связи с этим полисорбаты иллюстрируют общее правило, что следует использовать наиболее низкие эффективные концентрации наполнителей.
Варианты осуществления композиций связывающих антиген СО27Ь белков могут дополнительно содержать один или более антиоксидантов. В некоторой степени нежелательное окисление белков может быть предотвращено в фармацевтических препаратах путем поддержания надлежащего уровня окружающего кислорода и температуры, а также защитой от воздействия света. Также для предотвращения окислительной деградации белков могут быть использованы антиоксидантные наполнители. Среди пригодных в этом отношении антиоксидантов являются восстановители, ловушки кислорода/свободных радикалов, а также хелатирующие агенты. Антиоксиданты для применения в терапевтических препаратах белка в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно являются водорастворимыми и поддерживают свою активность в течение всего срока годности продукта. ЭДТА является предпочтительным в этом отношении антиоксидантом в соответствии с настоящим изобретением.
Антиоксиданты могут повреждать белки. Например, восстанавливающие агенты, такие как в частности глутатион, могут разрушать внутримолекулярные дисульфидные связи. Таким образом, антиоксиданты для применения в настоящем изобретении выбирают так, чтобы, среди прочего, устранить или значительно уменьшить возможность повреждения самих белков в указанной композиции.
Композиции в соответствии с настоящим изобретением могут включать ионы металла, которые являются кофакторами белков и которые необходимы для образования координационных комплексы белков, например ионы цинка, необходимого для формирования определенных суспензий инсулина. Ионы металлов также могут ингибировать некоторые процессы, которые приводят к деградации белков. Тем не менее, ионы металлов также катализируют физические и химические процессы, которые приводят к деградации белков.
Ионы магния (10-120 мМ) могут быть использованы для ингибирования изомеризации аспарагиновой кислоты в изоаспарагиновую кислоту. Ионы Са '2 (до 100 мМ) могут повышать устойчивость дезоксирибонуклеазы человека. Однако Мд+2, Мп+2, Ζη'2 могут дестабилизировать рчДНаза. Аналогичным образом, Са'2 и Зг+2 могут стабилизировать фактор VIII, но он может быть дестабилизирован Мд+2, Мп'2 и Ζπ'2, Си'2 и Ре'2, а его агрегация может быть усилена присутствием ионов А1+3.
Варианты реализации композиций связывающих антиген СО27Ь белков дополнительно могут содержать один или несколько консервантов. Консерванты необходимы при разработке парентеральных препаратов с несколькими дозами композиции, которые подразумевают извлечение более чем одной дозы из того же контейнера. Их основная функция заключается в подавлении роста микроорганизмов и обеспечении стерильности продукта на протяжении всего срока годности или срока использования лекарственного продукта. Обычно используемые консерванты включают бензиловый спирт, фенол и мкрезол. Хотя консерванты имеют долгую историю использования с парентеральными препаратами низкомолекулярных соединений, разработка композиций белков, включающих в себя консерванты, может оказаться непростой задачей. Консерванты почти всегда оказывают дестабилизирующее воздействие (агрегация) на белки, и это стало одним из основных факторов, который ограничивает их использование в композициях белков с несколькими дозами. На сегодняшний день большинство препаратов белков готовят только для одноразового использования. Однако, когда возможно получение композиции с множеством доз, такие композиции имеют дополнительное преимущество, обеспечивая определенное удобство для пациента и обладая повышенной конкурентоспособностью. Хорошим примером является гормон
- 39 027900 роста человека (ХГч), когда разработка композиций с консервантами привело к коммерциализации более удобных лекарственных форм для инъекций для многократного использования в виде ручки. По крайней мере четыре вида таких устройств в виде ручки, содержащих композиции ХГч с консервантом, в настоящее время доступны на рынке. Нордитропин (жидкость, №уо ^гб^к), №Цгорт АО (жидкость, Сепеп!есП) и Генотропин (лиофилизат - картридж с двумя отсеками, РПагтааа & ир]оПп) содержат фенол, в то время как 8ота!горе (ЕбЫИу) приготавливается с метакрезолом.
Некоторые аспекты должны быть учтены при приготовлении и разработке лекарственных форм с консервантами. Эффективная концентрация консерванта в лекарственном продукте должна быть оптимизирована. Это требует тестирования данного консерванта в лекарственной форме в диапазонах концентраций, которые придают антимикробную эффективность без ущерба для стабильности белка.
Как и следовало ожидать, разработка жидких композиций, содержащих консерванты, является более сложной, чем разработка лиофилизированных композиций. Сублимированные продукты могут быть лиофилизированы без консерванта и восстановлены во время использования разбавителем, содержащим консервант. Это сокращает время, в течение которого консервант находится в контакте с белком, существенно минимизирует риски, связанные со стабильностью. В жидких составах эффективность и стабильность консерванта должна поддерживаться в течение всего срока хранения продукта (от около 18 до 24 месяцев). Важно отметить, что эффективность консерванта должна быть продемонстрирована в конечной композиции, содержащей активный препарат и все компоненты наполнителя.
Композиции связывающих антиген СО27Ь белков будут главным образом предназначены для конкретных путей и способов введения, для конкретных дозировок и частоты введения, для конкретных терапий конкретных заболеваний с диапазонами биодоступности и персистенции, среди прочего. Таким образом, могут быть разработаны композиции в соответствии с настоящим изобретением для доставки любым подходящим способом, включая оральный, через уши, глаза, ректальный, вагинальный и парентеральный путь, включая внутривенные и внутриартериальные инъекции, внутримышечные инъекции и подкожные инъекции, но не ограничиваются ими.
После того как фармацевтическая композиция составлена, ее можно хранить в стерильных флаконах в виде раствора, суспензии, геля, эмульсии, твердого вещества, кристалла, либо в виде дегидратированного или лиофилизированного порошка. Такие препараты могут храниться либо в готовой к употреблению форме, либо в форме (например, лиофилизированной), которая восстанавливается перед введением. Настоящее изобретение также относится к наборам для получения дозы для однократного приема. Каждый из наборов согласно настоящему изобретению может содержать первый контейнер, содержащий сухой белок, и второй контейнер, содержащий водную композицию. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложены наборы, содержащие одно- и многокамерные предварительно заполненные шприцы (например, шприцы с жидкостями и шприцы с лиофилизатом).
Фармацевтические композиции, содержащие терапевтически эффективное количество связывающего антиген СО27Ь белка, будут зависеть, например, от терапевтического контекста и целей. Специалисту в данной области техники будет понятно, что соответствующие уровни доз для лечения могут варьироваться, частично, в зависимости от вводимой молекулы, указание на которую используется в отношении связывающего антиген СО27Ь белка, пути введения, а также размера (массы тела, поверхности тела или размера орган) и/или состояния (возраст и общее состояние здоровья) пациента. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, клиницист может титровать дозу и модифицировать способ введения для получения оптимального терапевтического эффекта. Обычная доза может варьироваться от приблизительно 0,1 мкг/кг до приблизительно 30 мг/кг или более в зависимости от вышеупомянутых факторов. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения доза может варьироваться от 1,0 мкг/кг до приблизительно 20 мг/кг, необязательно от 10 мкг/кг до приблизительно 10 мг/кг или от 100 мкг/кг до приблизительно 5 мг/кг.
Терапевтически эффективное количество связывающего антиген СО27Ь белка предпочтительно приводит к уменьшению выраженности симптомов заболевания, в увеличении частоты или продолжительности бессимптомных периодов заболевания или профилактики нарушений или инвалидности в результате угнетения заболевания. Для лечения опухолей, экспрессирующих СО27Ь, терапевтически эффективное количество связывающего антиген СО27Ь белка, например анти-СО27Ь конъюгат, предпочтительно ингибирует рост клеток или роста опухоли по меньшей мере на приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80% или по крайней мере приблизительно на 90% по сравнению с пациентами, не подвергавшимися лечению. Способность соединения по ингибированию роста опухоли может быть оценена на животных в модели, прогнозирующей эффективность в опухолях человека.
Фармацевтические композиции могут быть введены с помощью медицинского устройства. Примеры медицинских устройств для введения фармацевтических композиций описаны в патентах США № 4475196; 4439196; 4447224; 4447233; 4486194; 4487603; 4596556; 4790824; 4941880; 5064413; 5312335; 5312335; 5383851; и 5399163, включенных в настоящее описание посредством ссылки.
Способы диагностики или лечения ассоциированных с СО27Ь заболеваний или нарушений.
- 40 027900
Связывающие антиген СО27Ь белки согласно настоящему изобретению особенно полезны для детектирования СО27Ь в биологическом образце. В некоторых вариантах реализации биологический образец, взятый у пациента, приводят в контакт со связывающим антиген СО27Ь белком. Затем детектируют связывание связывающего антиген СО27Ь белка с СО27Ь для определения присутствия относительного количества СО27Ь в образце. Такие способы можно применять для диагностики или определения пациентов, подлежащих лечению связывающим антиген СО27Ь белком, например, анти-СО27Ь конъюгатом антитело-лекарственное соединение (АЭС).
В некоторых вариантах реализации связывающий антиген СО27Ь белок согласно настоящему изобретению используют для диагностики, выявления или лечения аутоиммунного или воспалительного нарушения. При лечении аутоиммунных или воспалительных нарушений связывающий антиген СО27Ь белок может быть нацелен на экспрессирующие СО27Ь клетки иммунной системы для их разрушения и/или может блокировать взаимодействие СО27Ь с рецептором СЭ27.
Считается, что взаимодействие СО27Ь с СЭ27 играет некоторую роль в клеточных аутоиммунных заболеваниях, таких как экспериментальный аутоиммунный энцефалоимиелит (ЕАЕ) (Шкафта е( а1. (2000) 1. №игоиптипо1. 109:188-96). Считается, что этот эффект осуществляется частично за счет ингибирования продукции ФНО-альфа. Кроме того, блокирование передачи сигнала СО27Ь ингибирует СЭ40-опосредуемое клональное размножение СЭ8+ Т-клеток и снижает выработку СЭ8+ Т-мимфоцитов памяти (Τ3Γ3Η31ι е( а1. (2004) 1. 1ттипо1. 173:6542-6). Соответственно, связывающие антиген СО27Ь белки можно применять для лечения субъекта с аутоиммунным нарушением, например с нарушением, характеризующимся присутствием В-клеток, экспрессирующих СП27Ь, включая, например, экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит. Дополнительные аутоиммунные нарушения. При которых можно применять раскрытые здесь антител, включают, но не ограничиваются перечисленными: системную красную волчанку (СКВ), инсулинзависимый сахарный диабет (ΙΌΌΜ), воспалительную болезнь кишечника (ВБК, ΙΒΌ) (включая болезнь Крона, язвенный колит и целиакию), рассеянный склероз (РС), псориаз, аутоиммунный тироидит, ревматоидный артрит (РА) и гломерулонефрит. Кроме того, композиции связывающего антиген СО27Ь белка согласно настоящему описанию могут применяться для подавления или предотвращения отторжения трансплантата или в лечении болезни трансплантат против хозяина (ΟνΗΌ).
Дополнительно, было высказано предположение, что взаимодействие СО27Ь с СЭ27 играет роль в передаче сигнала СЭ4+ Т-клетки. Показано, что некоторые вирусы осуществляют сигналлинг по пути СЭ27, вызывая нарушение ответа нейтрализующих антител. (Майег е( а1. (2006) 1. Ехр. Меб. 203:214555). Соответственно, композиции связывающего антиген СО27Ь белка и способы согласно настоящему описанию можно применять для лечения субъекта с вирусной инфекцией, включая, например, ифекции, вызванные вирусом иммунодефицита человека (Вич), гепатита (А, В, & С), герпесвирусами, (например, νζν, Ηδν-1, ΗАV-6, Ηδν-ΙΙ и СΜV (ЦМВ), вирус Эпштейна-Барра), аденовирусом, вирусом гриппа, флавивирусами, кишечными ЕСН0-вирусами, риновирусами, вирусом Коксаки, кроновирусом, респираторно-синцитиальным вирусом, вирусом эпидемического паротита, ротавирусом, вирусом кори, вирусом краснухи, парвовирусом, вирусом коровьей оспы, Т-лимфотропным вирусом человека (ΗΊΈν), вирусом денге, папилломавирусом, вирусом моллюска, полиовирусом, вирусом бешенства, полиомавирусом (1С) и вирусом арбовирусного энцефалита и вирусом лимфоцитарного хориоменингита (ЬСМУ), или в лечении ВИЧ-инфекции/СПИД. Дополнительно, человеческие антитела, композиции антител и способы согласно настоящему изобретению можно применять для ингибирования продукции ФНО-а.
В некоторых вариантах реализации связывающий антиген СО27Ь белок согласно настоящему изобретению применяют для диагностики, выявления или лечения рака или опухолевого заболевания. Опухоли и рак, подлежащие лечению согласно настоящему изобретению, где клетки опухоли или раковые клетки возможно экспрессируют СО27Ь включают, но не ограничиваются перечисленными: почечноклеточные карциномы (ПКК), такие как светлоклеточная ПКК, папиллярная ПКК, хромофобная ПКК и т.п., глиобластому, карциномы головы и шеи (например, плоскоклеточные карциномы Щ№СС) и т.п.), рак молочной железы, опухоли мозга, назофарингеальные карциномы, неходжкинскую лимфому (НХЛ), такую как НХЛ низкой степени, диффузная крупноклеточная НХЛ и т. п., острый лимфоцитарный лейкоз (ОЛЛ, АВЬ), такой как пре-В острый лимфобластный лейкоз, хронический лимфоцитраный лейкоз (ХЛЛ, СЬЬ или Β-СЬЬ), Лимфому Беркитта, анапластические крупноклеточные лимфомы (4606), множественные миеломы, Т-клеточные лимфомы кожи, узелковые мелкоклеточные лимфомы с рассеченными ядрами, лимфоцитарные лимфомы, периферические Т-клеточные лимфомы, лимфомы Ленерта, иммунобластные лимфомы, Т-клеточный лейкоз/лимфому (АШЬ), Т-клеточный лейкоз взрослых 4466), энтробластную/центроцитарную (сЬ/сс) фолликулярную злокачественную лимфому, диффузные крупноклеточные лимфомы В-клеток, Т-клеточную лимфому по типу ангиоиммунобластной лимфаденопатии (АШО), ассоциированные с ВИЧ лимфомы брюшной полости, эмбриональные карциномы, недифференцированные карциномы носоглотки (например, опухоль Шминке), болезнь Кастлемана, саркому Капоши, множественные миеломы, макроглобулинемию Вальденстрема и другие В-клеточные лимфомы. Дополнительные типы опухолей, подходящие для лечения согласно настоящему изобретению, включают опухоли почки, поджелудочной железы, глотки или гортани, меланомы, опухоли яичника, аденокарциному
- 41 027900 легкого, опухоли толстой кишки, молочной железы, мозга и т. п.
Примеры
Приведенные ниже примеры, как практические, так и теоретические, приведены с целью иллюстрации конкретных вариантов реализации и признаков изобретения и предназначены для ограничения объема.
Пример 1. Полностью человеческие моноклональные антитела против СЭ27Ь.
Получение полностью человеческих антител, направленных против СЭ27Ь человека, осуществляли с использованием технологии XЕN0М0υδЕ® (патенты США № 6114598; 616296З; 68ЗЗ268; 7049426; 7064244, которые полностью включены в настоящее описание по ссылке; Огееп е! а1., 1994, №1иге Оепе!1ск 7:1З-21; Мепйе/ е! а1., 1997, №1иге Оепейск 15:146-156; Огееп и ОкойоуШк, 1998, 1. Ех. Мей. 188:48З495).
Мышей XЕN0М0υδЕ®, продуцирующих 1дО1, 1дО2 и 1дО4, иммунизировали/стимулировали растворимым человеческим п СЭ27Ь или человеческим СЭ27Ь, рекомбинантно экспрессируемым на поверхности клеток яичника китайского хомячка (СНО). Из иммунизированных мышей получали гибридомы. Супернатанты гибридом подвергали скринингу на связывания с клетками 29З, экспрессирующими СЭ27Ь человека. Более 260 продемонстрировали положительный результат по связыванию.
Положительные супернатаны скринировали на связывание с нативным СЭ27Ь на поверхности клеток Ка_р и/или 786-0. В анализе связывания с нативным СЭ27Ь выявили 161 положительный супернатант.
Эти супернатанты исследовали на перекрестную реактивность с СЭ27Ь яванского макака. Двадцать пять супернатантов были положительными по перекрестной реактивности с СЭ27Ь яванского макака. Эти двадцать пять супернатантов исследовали на активность КЗЦ и способность блокировать связывание человеческого СЭ27 с человеческим СЭ27Ь. Девятнадцать супернатантов были положительными по активности и по ингибированию связывания СО27 с СЭ27Ь. Субклонирование и секвенирование 1З линий 1дО1 и 6 линий 1дО4 выявило 7 уникальных антител 1дО1 (АЬ1-АЬ7) и 1 уникальное антитело 1дО4 (АЬ8).
Резюме характеристик этих восьми антител, а также химерных вариантов коммерческих антител мыши к человеческому СЭ27Ь приведены на фиг. 1.
Аффинность.
Аффинность к рекомбинантному растворимому СЭ27Ь человека определяли с использованием чипа СМ5 на приборе В1АС0КЕ З000. Антитело козы к 1дО человека использовали для иммобилизации исследуемого антитела. Связывание и диссоциацию меченого гистидином растворимого СЭ27Ь человека измеряли для определения Ка, Кй и Кс. Использовали следующие условия:
температура = 25°С; скорость потока = 50 мкл/мин; подвижный буфер = НВ8-ЕР;
регенерация с использованием 10 мМ глицина, рН 1,5;
диапазон концентрации Ни СЭ27Ь-Ык составлял 200 нМ 0,217 нМ;
модель аппроксимации (8сгиЬЬег2): 1:1 связывание + локальный Ктах;
5-минутная ассоциация и 25-минутная диссоциация.
Активность АЗКЦ.
Анализ АЗКЦ осуществляли в стерильных 96-луночных круглодонных планшетах для культур тканей (Согтпд). Антитела титровали от 20 до 0,0002 мкг/мл путем внесения 10 мкл в 100 мкл полной среды КРМ1, содержащей 10% ФБС (разведение 1:10). Добавляли мечение кальцеином мишени, 50 мкл из расчета 10000 клеток. Клетки-мишени и различные концентрации антитела инкубировали в течение 40 мин при 4°С, затем добавляли эффекторные НК-клетки, 50 мкл, содержащих 200000 клеток. Культуры инкубировали в течение 4 ч при З7°С, после чего объединяли супернатанты и исследовали на высвобождение кальцеина путем измерения флюоресценции на длине волны 485-5З5 на приборе \Уа11ас Ую1ог II 1420 МиШ1аЬ1е НТ§. Значения 100% лизиса определяли по лизису в шести лунках содержащих меченые кальцеином мишени Ка_р с детергеном 1дера1 6З0 (З мкл на лунку), а значения спонтанного лизиса определяли путем измерения флюоресценции в лунках, содержащих только мишень.
Процент (%) специфичного лизиса определяли как (флюоресценция образца) - (флюоресценция спонтанного лизиса)/(100% лизис - флюоресценция спонтанного лизиса). Необработанные данные вводили в таблицу Ехсе1 с формулой для расчета % специфичного лизиса и полученные значения переносили в графическую программу (ОгарйРай Рпкт), которая преобразовывала эти данные в график аппроксимирующей сигмоидной кривой. Последующий анализ (расчета по модели линейной регрессии) осуществляли в программе ОгарйРай, в результате получали значения ЕС50.
Активность АЗКФ.
Моноциты путем отрицательной селекции выделяли из периферической крови человека и выдерживали в холодном помещении при 4°С в течение ночи со средой КРМ1 1640, содержащей 10% ФБС. Затем моноциты высевали в 48-луночные планшеты для культур тканей в количестве 200000 клеток на
- 42 027900 лунку с 200 мкл ростовой среды (КРМ1 1640, содержащая 10% ФБС и 40 нг/мл Ни М-С8Р (колониестимулирующего фактора макрофагов человека)) и инкубировали при 37°С с 5% СО2 в течение 6 дней, чтобы дать возможность моноцитам дифференцироваться в макрофаги.
В день 6 проводили анализ АЗКФ следующим образом.
1. Метят клетки-мишени зеленым красителем РКН67 в конечной концентрации 2х10-6 М красителя РКН67.
Клетки опухоли собирают и промывают один раз ФБР путем центрифугирования клеток (400'д) в течение 5 мин.
После центрифугирования клеток аккуратно удаляют супернатант аспирацией, оставляя не более 25 мл супернатанта.
мкл раствора красителя РКН67 в этаноле в исходной концентрации 4х10-6 М добавляют к 1 мл разбавителя ППисп! С из набора в полиэтиленовой пробирке и хорошо перемешивают.
Клеточные осадки ресуспендируют в 1 мл разбавителя ЭПист С при плотности 20х106 в полиэтиленовой пробирке.
Клетки быстро переносят в рабочий раствор красителя, аккуратно пипетируя для обеспечения полного диспергирования.
Смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 4 мин, периодически перемешивая.
К клеткам добавляли два миллилитра цельной активированной ФБС для остановки окрашивания и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 мин, чтобы обеспечить связывание избытка.
В клетки добавляли 40 мл КРМ1, содержащей 10% ФБС, и один раз промывали путем центрифугирования клеток (400'д) в течение 10 мин.
Клеточные осадки снова суспендировали в 40 мл среды и переносили в новую пробирку.
Клетки снова промывали трижды средой КРМ1 +10% ФБС и один раз полной ростовой средой 1х (КРМ1 1640, содержащая 10% ФБС и 40 нг/мл Ни М-С8Р).
Клетки подсчитывали и суспендировали ростовой средой в количестве 1х106 клеток на мл с получением отношения Т:Е (мишень:эффектор) 1:2.
2. Обработка клеток опухоли антителами для антителозависимого клеточного фагоцитоза (АЗКФ).
Готовили разбавления антител в среде для выращивания макрофагов. Эти разбавления концентрировали до 4х конечной концентрации.
К преинкубированной смеси клеток, меченых РКН67 зеленым, с антителами 280 мкл 4х концентрированных антител смешивали с 280 мкл меченых зеленым опухолевых клеток и инкубировали при 4°С в течение 30 мин.
Смесь меченых зеленым опухолевых клеток с противоопухолевыми антителами добавляли к макрофагам в 48-луночном планшете в количестве 200 мкл на каждую лунку согласно схеме эксперимента, описанной ниже. Конечный объем составляет 0,4 мл на лунку. Соотношение клеток-мишеней к эффекторным клеткам (макрофагам) составляет 1:2.
Клетки инкубировали при 37°С, 5% СО2 в течение одного часа.
3. Противоокрашивание макрофагов маркером макрофагов.
Клетки-мишени и макрофаги в 48-луночном планшете открепляли смесью трипсин-версен.
Клетки переносили в 96-луночный блок в объеме 2,2 мл на лунку и однократно промывали подогретым промывочным раствором для РА8С путем кручения блоков при 400'д в течение 5 мин, после чего супернатанты выбрасывали.
Макрофаги окрашивали маркером, СО11Ь-биотин в разведении 1:200 в блокирующем растворе со 100 мкл на лунку в течение 10 мин на льду.
После однократной промывки клеток макрофаги детектировали стрептавидином А1сха 568 в разведениях 1:1000 в течение 10 мин на льду.
После однократной промывки клеток фосфатно-буферным раствором клетки фиксировали в 4% формальдегиде-ФБР при комнатной температуре в течение 20 мин. Затем клетки однократно промывали дистиллированной водой.
Клеточные осадки ресуспендировали водой в количестве 200 мкл на лунку и переносили в 96луночный планшет в объеме 100 мкл на лунку.
4. Количественное измерение активности фагоцитоза на ридере Аггау8сап νΤΙ НС8 (версия 6, Сс11отю8 1пс. Тксгто РЕНсг 8сюпЕйс, РйЕЬигдБ, РА, США) с приложением Тагдс! Ас!щаЕоп ВюАррБса!юп с применением 20х объектива. Настройки фильтра показаны в табл. 2. В каждой лунке было выявлено по меньшей мере 200 клеток.
- 43 027900
Таблица 2
Канал Мишень Метка Флюоресценция
1 Макрофаги Мз-анти-Ни СОНЬ Биотин^-стрептавидин А1еха 568 красная
2 Опухолевые клетки РНК67 зеленая
Статистический анализ осуществляли с использованием программы Рпкт 4.01 (СгарНРаб, 8ап Э1едо, СА, США). На графике показан % фагоцитоза опухолевых клеток от логарифма концентрации антитела в нг/мл. Процент фагоцитоза опухолевых клеток представлен как процент опухолевых клеток, перекрывавшихся с макрофагами, к общему количеству макрофагов в выбранном поле и получен по функции измерений ридера Аггау8сап геабег % 0Ь)ес!Соип!з. Значения в % выражены как среднее ± стандартная ошибка среднего (8ЕМ) для измерения в двух повторах (п=2). ЕС50 определяли с использованием нелинейной регрессии (аппроксимация криво) с последующим применением уравнения сигмоидной кривой доза-ответ. Данные нормировали по максимальному и минимальному сигналу и аппроксимировали симоидной кривой доза-ответ.
Активность КЗЦ.
Пролиферация опухолевых клеток. Клетки Кар один раз промывали аналитической средой и ресуспендировали в аналитической среде (КРМ1 1640 плюс 1% ФБС). Клетки высевали в 96-луночный планшет для культур тканей в объеме 50 мкл на лунку при двух значениях плотности клеток для человеческого и кроличьего комплементов. Для комплемента кролика плотность клеток составляла 5х104 клеток на лунку. Для комплемента человека плотность клеток составляла 2х105 клеток на лунку.
Обработка клеток комплементом и исследуемым: 3х концентрированный комплемент готовили в аналитической среде, как показано в табл. 3. Затем их добавляли к клеткам в планшетах в объеме 50 мкл на лунку. Для клеток, обрабатываемых комплементов кролика, концентрация комплемента кролика составляла 10%; для клеток, обрабатываемых комплементом человека, концентрация комплемента человека составляла 20%.
Таблица 3
Приготовление 3х концентрированного комплемента в аналитической среде (КРМ1 1640+1%ФБС)
Зх Комплемент Комплемент (мл) Аналитическая среда (мл) Общий объем (мл)
30% ΗΙ С' кролика (неактивный) 0,5 1,16 1, 66
30% без ΗΙ С' кролика (активный) 2,5 5, 83 8,33
60% ΗΙ С' человека (неактивнй) 0, 5 0, 33 0, 83
60% без ΗΙ С' человека (активный) 3 2,0 5, 0
Исследуемые антитела в концентрации 10 мкг/мл добавляли к клеткам в объеме 50 мкл на лунку. Общий объем в каждой лунке в начале культивирования составлял 150 мкл. Клетки непрерывно инкубировали при 37°С, 5% СО2 в течение одного часа для клеток, обрабатываемых комплементом кролика и 6 ч для клеток, обрабатываемых комплементом человека.
Измерение цитотоксичности на планшетном ридере Аггау8сап. После инкубации удаляли 50 мкл среды из каждой лунки. Смесь НоесНк! 33342 и пропидия йодида (Р1), которую готовили при разбавлении 1:1000 в растворе ФБР, содержащем 2% ФБС, добавляли к клеткам в объеме 100 мкл на лунку. Клетки, обработанные комплементом человека, переносили в новый 96-луночный планшет в объеме 40 мкл на лунку после аккуратного перемешивания. Образцы исследовали на ридере Аггау8сап УТ1 НС8 (версия 6, Се11от1сз, ТИегто ПкНег 8с1еп!И1с, РФкЬигдИ, РА, США) с ВюАррНсаРоп Тагде! АсРуаРоп с 20х объективом. Настройки фильтра указаны в табл. 4. В каждой лунке насчитывали по меньшей мере 200 клеток.
- 44 027900
Таблица 4
Канал Мишень Метка Флюоресценция Фильтр
1 Нуклеиновая кислота для всех клеток НоесНзН 33342 УФ/460 нм ΏΑΡΙ
2 Нуклеиновая кислота для всех клеток Пропидия иодид 488/>575 нм ТН1ТС
Статистический анализ. Статистический анализ осуществляли с использованием ПО Рпзт 4.01 (ОгарЬРаб, Зап Э1е§о, СА, США).
Время интернализации.
Посев клеток. Клетки 786-0 высевали на 96-луночный планшет в количестве 10000 клеток на лунку со 100 мкл ростовой среды (КРМ1, содержащая 10% ФБС) и инкубировали при 37°С, 5% СО2 в течение 2 дней до достижения 100% конфлюентности клеток в день проведения анализа. Клетки в планшете исследовали на 1) интернализацию и 2) эндосомальную ко-локализацию.
Окрашивание клеток для определения динамики интернализациии. Планшеты промывали 1х аналитической средой (ФБР, содержащий 2% ФБС). В лунки добавляли антитела в количестве 2 мкг/лунку (100 мкл на лунку) в аналитической среде. Антителам человека позволяли связаться с клетками при 4°С в течение 30 мин, а затем промывали 1х аналитической средой. РаЬ' к человеческому 1дО А1еха 488 (1:100) и НоесЬз! 33342 (1:2000) добавляли к клеткам в аналитической среде при 4°С в течение 20 мин. Затем клетки промывали 1х аналитической средой. Затем клетки фиксировали и пермеабилизовывали, начиная со времени ноль, и инкубировали 37°С, 5% СО2 в течение 1, 3 или 5 ч. После инкубации клетки фиксировали и пермеабилизовывали в соответствии со следующей процедурой. Клетки промывали 1х промывочным буфером ΒΏ, а затем в лунки добавляли раствор в количестве 100 мкл на лунку. Анализ образцов проводили на ридере ТЬегто Р1зЬег Зс1епЬйс, Рй1зЬиг§Ь, РА, США) с приложением ВюАррЬсаЬоп Зро! Пе1ес1ог с использованием 40х объектива. Настройки фильтра для интернализации приведены в табл. 5. В каждой лунке насчитывали по меньшей мере 400 клеток.
Таблица 5
Канал Мишень Метка Фильтр
1 Нуклеиновые кислоты для всех клеток НоесНзН 33342 ϋΑΡI (синий)
2 Пятна интернализации А1еха 488 К1ТС (зеленый)
Подсчет и окрашивание клеток на со-локализацию интернализованных пятен в раннем эндосомном компартменте. После анализа интернализации клетки 786-0 промывали 1х буфером ΒΏ. Клетки обрабатывали раствором Ρίχ/регт при КТ в течение 20 мин. После двух этапов промывки клетки инкубировали с ЕЕА-1 в буфере ΒΓ) при концентрации 0,5 мкг/мл (100 мкл/лунку) при КТ в течение 20 мин. Клетки промывали 1х буфером ΒΏ, к ним добавляли анти-мышиные А1еха 568 в разведении 1:1000. Клетки инкубировали при КТ в течение 20 мин, после чего проводили два этапа промывки буфера раствором ΒΏ.
Фотовизуализация. Изображения клеток для исследования интернализации и со-локализации получали с использованием флюоресцентного микроскопа Ье1са, присоединенного к цифровой камере Натати1зи с ПО 0реп1аЬ 1таде Апа1уз13 (1тргоу1зюп 1пс., Ьехт§1оп, МА, США) или ридера АггауЗсап νΤΙ НСЗ.
Статистический анализ. Статистический анализ осуществляли с использованием ПО Рпзт 4.01 (ОгарЬРаб, Зап Эхедо, СА). Количества пятен выражали как среднее + стандартная ошибка среднего (ЗЕМ) для измерений в двух повторах (п=2). С использованием аналитического инструмента число пятен в единицу времени (скорость аппроксимации) аппроксимировали уравнением однофазной экспоненциальной ассоциации.
Пример 2. Оценка антител, конъюгированных с МСС-ЭМ1.
АЬ1, АЬ2, АЬ4, АЬ7 и АЬ8 конъюгировали с МСС-ЭМ1 (см. фиг. 12). Целевой уровень нагрузки составлял 4,5-5 единиц лекарственного средства на антитело. Вкратце, лизины антитела конъюгировали со сложным МНЗ-эфиром гетеробифункционального сшивающего агента сукцинимидил 4-[Лмалеимидометил]циклогексан-1-карбоксилата (ЗМСС), который содержит сложный МНЗ-эфир и малеимид. Затем модифицированное сшивающим агентом (линкером) антитело очищали от избытка линкера и конъюгировали с головной частью ЭМ1 через присутствующий на ЭМ1 сульфгидрил. Затем на втором этапе очистки избыток ЭМ1 удаляли с получением готового конъюгата АЬ-МСС-ЭМ1.
- 45 027900
В частности, антитело СО27Ь, транзиентно экспрессируемое в культуре клеток млекопитающих клетками 2936-Е, загружали на колонку МаЬ8е1ес! 8иКе (СБ НеаИЬсаге), уравновешенную 25мМ Трис, 150 мМ хлоридом натрия, рН 7,4. Затем колонку со связанным антителом СО27Б промывали в 3 этапа: сначала осуществляли промывку равновесным буфером; затем 25 мМ Тпз, 500 мМ Ь-аргинином, рН 7,5; и последнюю промывку проводили равновесным буфером. Антитело СО27Б элюировали 100 мМ ацетатом натрия, рН 3,5. Фракции, содержащие указанное антитело, объединяли и рН доводили до конечного значения 5,0 с применением 1М Тпз, рН 8,0. Затем антитело очищали на колонке Ргас!оде1® НМЭ 803(М) ЩМО СЬет1са1з Шс.), уравновешенной 30 мМ ацетатом натрия, рН 5,0. Связанное антитело элюировали градиентом 8 СУ от 0 до 0,8М хлорида натрия в 30 мМ ацетате натрия, рН 5,0. Содержащие антитело фракции объединяли и диализовали против конъюгирующего буфера (2 мМ ЭДТК, 50 мМ хлорид натрия, 50 мМ фосфат калия, рН 6,5).
Очищенное антитело СО27Б модифицировали аминореактивным линкером сукцинимидил-4-Щмалеимидометил)циклогексан-1-карбоксилатом (8МСС) (ТЬегто 8с1епййс) для введения тиолреактивных малеимидных групп. Указанное антитело в концентрации 55 мкМ обрабатывали 20 молярными эквивалентами 8МСС в конъюгирующем буфере, доведенном до 10% диметилацетамида (в объемном отношении) в готовой реакционной смеси. После инкубирования на протяжении 90 мин при комнатной температуре реакционную смесь обессоливали на колонке для обессоливания Н1Ргер 26/10, содержащей смолу 8ерЬайех С-25 йпе (СН НеаИЬсаге), уравновешенной 2 мМ ЭДТК, 150 мМ хлоридом натрия, 35 мМ цитратом натрия, рН 5,0. Содержащие антитело фракции объединяли и анализировали степень модификации линкером с применением реактива Элмана (5,5'-дитио-бис-[2-нитробензойной кислоты]) согласно приведенному ниже описанию. Обнаружено, что в среднем антитело было модифицировано 7,5 малеимидными группами на антитело.
Реактив Элмана расщепляется тиолами с образованием продукта желтого цвета с поглощением при 412 нм. Для определения числа малеимидных групп на антителе СО27Б после реакции с 8МСС использовали субтрактивный анализ по методу Эллмана. Антитело СО27Ь, модифицированное 8МСС, или контрольный образец буфера без антитела инкубировали с эквивалентной концентрацией тиолов, 0,4 мМ ДТТ (дитиотреитол). Любые малеимиды, присутствующие в образце антитела, будут реагировать с тиолами ЭТТ, обуславливая его недоступность для дальнейшей реакции с реактивом Элмана. Затем в оба образца добавляли реактив Элмана и проводили количественную колориметрию при 412 нм для определения концентрации прореагировавшего реактива Элмана. Уменьшение концентрации тиолов в образце антитела по сравнению с контрольным образцом пропорционально количеству малеимидов, присутствующих в образце антитела. Указанное значение использовали для определения числа связанных малеимидных групп на модифицированное антитело СО27Б.
Модифицированное 8МСС антитело СО27Б (7,5 малеимидных групп на антитело) в концентрации от 17 до 27 мкМ обрабатывали 1,7 молярными эквивалентами ЭМ1 Цттиподеп) на малеимидную группу, забуференными 2 мМ ЭДТК, 150 мМ №С1, 35 мМ цитратом натрия, рН 5,0, доведенном до 3% ДМА (по объему) в готовой реакционной смеси. Реакционные смеси инкубировали при комнатной температуре в течение ночи на протяжении периода продолжительностью до 20 ч. Реакционную смесь загружали на гель-фильтрационную колонку 8ирегйех 200 ^Ε НеаИЬсаге), уравновешенную 20 мМ фосфатом натрия, 150 мМ хлоридом натрия, рН 6,5. Собирали фракции; содержащие мономерное антитело фракции объединяли и анализировали. Молярную концентрацию связанных с антителом молекул ЭМ1 определяли путем измерения поглощения при 252 и 280 нм и было обнаружено, что она составляет 4,5-5,0 молекул ЭМ1 на антитело.
Фармакология ш νί!ΐΌ.
Конъюгаты лекарственного средства и антитела (АЭС) АЬ4- и АЬ8-МСС-ЭМ1 демонстрировали сопоставимое связывание нативного СО27Б по сравнению с неконъюгированными вариантами по оценке с помощью проточной цитометрии. При связывании АЬ4 и АЬ4-МСС-ЭМ1 наблюдались равные ЕС50, тогда как для АЬ8-МСС-ЭМ1 по сравнению с АЬ8 происходило умеренное 4-кратное снижение ЕС50 (табл. 6). Более точное измерение сродства к связыванию проводили для АЬ4, АЬ8 и их конъюгированных вариантов путем измерения их способности связывать нативный СО27Б человека, экспрессируемый на клетках Кар, с применением технологии Сугоз. Результаты свидетельствуют, что оба конъюгата проявляли субнаномолярное сродство к СО27Б в пределах 2-кратного отличия от наблюдаемого для неконъюгированных АЬ4 и АЬ8 (табл. 6). И неконъюгированные, и конъюгированные АЬ4 и АЬ8 также демонстрировали сродство к связыванию с растворимым СО27Ь-Ыз человека в пределах 2-кратного отличия друг от друга, согласно оценке с применением ΒIАС0КΕ.
- 46 027900
Таблица 6
Сравнение связывания АЬ4 и АЬ8 и их конъюгированных с МСС-ЭМ1 вариантов
Измерение АЪ4 АЬ4-МСС-ОМ1 АЪ8 АЬ8-МСС- ИМ1
бугоз КЕ-нативные СО27Ъ-Ка31 0,014 нМ 0,023 нМ 0,078 нМ 0,077 нМ
Сортировка клеток с активацией флуоресценции (ГАС5) (ЕС50) - клетки 786-0 0, 1 нМ 0, 1 нМ 0,02 нМ 0,08 нМ
Оценивали интернализацию АЬ4-МСС-ЭМ1, АЬ8-МСС-ЭМ1, АЬ4 и АЬ8 клетками СО27Ьэкспрессирующей линии светлоклеточного рака почки (ссКСС) человека 786-0. Экспрессирующие СЭ27Ь клетки 786-0 подвергали воздействию неконъюгированного антитела человека против СЭ27Ь АЬ4 и АЬ8, АЬ4-МСС-ЭМ1, АЬ8-МСС-ЭМ1, контрольного Ни1дС1 или контрольного аЗА-МСС-ЭМ1, и оставляли для связывания при 4°С. Интернализацию тестируемых образцов оценивали с применением РаЬ'-фрагмента козы против 1дС человека А1еха 488 РкюгоШподоИ Клетки фиксировали и пермеабилизировали в определенные моменты времени после инкубирования с тестируемыми образцами (время =0, 1, 3 и 5 ч) и визуализировали с применением ридера АггауЗсап УТ1 НСЗ. Колокализацию интернализированных тестируемых образцов в эндосомы определяли с применением антител против ЕЕА-1, маркера эндосом. Времязависимую интернализацию антител, в том числе АЬ4-МСС-ЭМ1, наблюдали с применением анализа изображений во флуоресцентной микроскопии по образованию точечных пятен в цитоплазме клеток при 37°С при сравнении с локализацией в клеточной мембране в нулевой момент времени при 4°С. АЬ4-МСС-ЭМ1 колокализуется с маркером эндосом ЕЕА-1 через 5 ч инкубирования при 37°С, что указывает на интернализацию АЬ4-МСС-ЭМ1 в эндосомный субклеточный компартмент клеток 7860. Уровень и скорость интернализации АЬ4, АЬ8 и их конъюгированных вариантов находились в пределах аналогичных диапазонов (фиг. 2).
И АЬ4-МСС-ЭМ1, и АЬ8-МСС-ЭМ1 демонстрировали мощное специфичное подавление роста СО27Ь-экспрессирующих опухолевых клеток т νΐΐΐΌ. При анализе антипролиферации (подавления роста опухоли), АЬ4-МСС-ЭМ1, АЬ8-МСС-ЭМ1 или не-конъюгированные АЬ4 или АЬ8 против СЭ27Е инкубировали с клетками-мишенями, СП27Ь-экспрессирующими 786-0/люцифераза или СП27Ь-негативными Н1650 в присутствии/в отсутствие неконъюгированных (пакеб) АЬ4 или АЬ8 соответственно, или контрольного Ни1дС1 в течение 4 дней. Обе клеточные линии, 786-0/люцифераза и Н1650, высевали в 96луночные планшеты для тканевых культур, содержащие 100 мкл ростовой среды в каждой лунке, по 500 клеток 786-0/люцифераза на лунку и 1000 клеток Н1650 на лунку. Все планшеты инкубировали при 37°С, 5% СО2 в течение 4 ч. После 4 ч инкубирования к клеткам добавляли неконъюгированные антитела и конъюгаты по 100 мкл на лунку в различных титрах. Общий объем в каждой лунке в начале культивирования составлял 200 мкл. Клетки непрерывно инкубировали при 37°С, 5% СО2 на протяжении 4 дней до измерения клеточных уровней АТФ. Для оценки подавления роста клеток измеряли уровни АТФ (в качестве показателя числа клеток) с помощью анализа люминесценции с применением набора Се11Ткег-С1о.
И АЬ4-МСС-ЭМ1, и АЬ8-МСС-ЭМ1 подавляли рост СП27Ь-экспрессирующих клеток 786-0 в концентрации 50% ингибирования (1С50) согласно представленным в табл. 7 данным. Подавление роста СП27Ь-негативных клеток Н1650 при воздействии АЬ4-МСС-ЭМ1 и АЬ8-МСС-ЭМ1 не наблюдалось. Добавление избытка неконъюгированного исходного антитела против СЭ27Е позволяло блокировать опосредованное АЬ4-МСС-ЭМ1 подавление роста, подтверждая необходимость связывания СЭ27Е АЬ4МСС-ЭМ1 для обеспечения активности. Неконъюгированное исходное антитело против СЭ27Е не подавляло рост СП27Ь-экспрессирующих клеток 786-0. Контрольный конъюгат, антистрептавидин-МССЭМ1 (аЗА-МСС-ЭМ1), не демонстрировал какого-либо подавления роста клеток ни СП27Ь-позитивной, ни СП27Ь-негативной линии. Эти результаты свидетельствуют, что и АЬ4-МСС-ЭМ1, и АЬ8-МСС-ЭМ1 являются мощными ингибиторами роста клеток 786-0 по сравнению с контрольным конъюгатом (фиг. 3). У АЬ4-МСС-ЭМп1 роявлялась тенденция к незначительно большей эффективности по сравнению с АЬ8МСС-ОМ1 (табл. 7).
- 47 027900
Таблица 7
Эффективность конъюгатов аНТН-СВ27Ь-МСС-ВМ1 в отношении клеток
7 8 6- 0 — 1с5о АЪ4-МСС-ОМ1 АЪ8-МСС-ОМ1
Концентрация лекарственного средства (нМ) 0,34 0,54
Концентрация антитела (нМ) 0, 07 0, 11
Опосредованная АЪ4-МСС-ОМ1 антителозависимая клеточная цитотоксичность (АЗКЦ). направленная против клеток Рар с аналогичной эффективностью (ЕС50=0.006 мкг/мл). и ее интенсивность по сравнению с наблюдаемой для неконъюгированного исходного антитела против СО27Ь АЪ4 (ЕС50=0.01 мкг/мл). Вкратце. естественные киллеры (НК-клетки). выделенные из МКПК. полученных из крови здорового донора-человека. инкубировали с мечеными кальцеином клетками-мишенями лимфомы В-клеток человека линии Рад (экспрессируют СО27Ь) в присутствии АЪ4-МСС-БМ1 или контрольных антител согласно описанию выше. Процент (%) специфической цитотоксичности определяли путем измерения высвобождения кальцеина из экспрессирующих СО27Ь клеток-мишеней. лизированных в присутствии АЪ4-МСС-БМ1. по сравнению с контрольными лунками. Результаты. представленные на фиг. 8. свидетельствуют. что АЪ4-МСС-ОМ1 обеспечивает аналогичный опосредованному антителом АЪ4 (значения ЕС50: 0.006 и 0.01 мкг/мл соответственно) уровень АЗКЦ. Контрольный Ни1§О1 не обеспечивал какоголибо измеримого лизиса экспрессирующих СО27Ь клеток-мишеней. Как АЪ4-МСС-БМ1. так и неконъюгированные антитела АЪ4 способны индуцировать сходные уровни опосредованной НК-клетками АЗКЦ для СО27Ь-специфичных мишеней. Аналогичные результаты наблюдались для АЪ8-МСС-ОМ1 и неконъюгированного антитела АЪ8.
Измеряли активность ιη νΐίΓΟ антителозависимого клеточного фагоцитоза (АЗКФ) АЪ4-МСС-БМ1 или неконъюгированного исходного антитела АЪ4 в отношении как опухолевых клеток Рар. так и 786-0. Антитело АЪ4-МСС-ОМ1 обеспечивало сходный с наблюдаемым для неконъюгированного исходного антитела АЪ4 уровень комплемент-опосредованного лизиса. Вкратце. макрофаги дифференцировали из моноцитов. выделенных из периферической крови человека. полученной от здоровых доноров-людей. Макрофаги инкубировали с мечеными зеленым флуорохромом РНК67 экспрессирующими СО27Ь клетками линий 786-0 и Рар в качестве клеток-мишеней в присутствии неконъюгированного антитела против СО27Ь АЪ4. Ни1§О1. АЪ4-МСС-БМ1. или контрольных антител ((7ХЛ-МСС-1)М1). согласно описанию выше. Процент (%) фагоцитоза опухолевых клеток определяли. исходя из процента опухолевых клеток. которые были поглощены макрофагами. от общего числа макрофагов в выбранных полях. Результаты представлены на фиг. 9 и свидетельствуют о том. что АЪ4-МСС-ОМ1 обеспечивает аналогичную эффективность АЗКФ в экспрессирующих СО27Ь клеточных линиях 786-0 и Рар. Значения ЕС50 для неконъюгированного АЪ4 находились в пределах 10-кратных значений. наблюдаемых для АЪ4-МСС-ОМ1 (см. табл. 8).
Таблица 8
786-0 Каз ί
АЪ ЕС50 (пМ) ЕС50 (пМ)
АЪ4 0, 008 0, 008
АЪ4-МСС-ОМ1 0, 087 1,421
Учитывая. что для построения кривой разведения использовали интервалы разведения 1:40. наблюдаемые концентрации ЕС50 и для АЪ4-МСС-ОМ1. и для неконъюгированного АЪ4 обеспечивают сходную эффективность (в пределах коэффициента разведения). Соответственно. и конъюгированные АЪ4МСС-БМ1. и неконъюгированные антитела АЪ4 дикого типа способны индуцировать сходные уровни АЗКФ макрофагов человека в отношении экспрессирующих СО27Е клеток. Аналогичные результаты наблюдались для АЪ8-МСС-БМ1 и неконъюгированного антитела АЪ8.
Активность комплементзависимой цитотоксичности (КЗЦ) АЪ4-МСС-БМ1 ιη νΐίΓΟ оценивали с применением комплемента человека и кролика и СО27Ь-экспрессирующих опухолевых клеток Нар. В концентрации 10 мкг/мл АЪ4-МСС-БМ1 обеспечивало сходный с наблюдаемым для неконъюгированного исходного антитела АЪ4 уровень комплемент-опосредованного лизиса (комплемент кролика: 72% лизис. комплемент человека: 17% лизис). Вкратце. активированные комплементы кролика или человека инкубировали с экспрессирующими СО27Ь клетками-мишенями Рар в присутствии антител против СО27Ь или контрольных антител согласно описанию выше. Опосредованный КЗЦ киллинг измеряли с применением выходной функции ридера А^^ауδсаη % выбранных объектов для обнаружения % окрашивания РI:НοесНδί для % цитотоксичности. Результаты свидетельствуют о том. что АЪ4-МСС-БМ1 обеспечивает уровни КЗЦ. сходные с опосредованными антителом АЪ4 дикого типа. при инкубировании опухолевых клеток Рар с 10% комплементом детеныша кролика или 20% комплементом человека. Термоинактивированные комплементы кролика или человека не обнаруживали способности к опосредованному КЗЦ киллингу клеток Рар. Соответственно. как АЪ4-МСС-БМ1. так и неконъюгированное АЪ4 индуцируют сходный уровень КЗЦ-активности в отношении экспрессирующих СО27Ь опухолевых клеток- 48 027900 мишеней. Аналогичные результаты наблюдались для ^8-1^+-01^ и неконъюгированного антитела АЬ8.
Фармакология ш νί\Ό.
Пассажированные ш νί\Ό ссКСС-клетки 786-0 (786-0 54) имплантировали самкам мышей СВ17/5СГО с применением ΜΆТКIОЕ^ с пониженным содержанием факторов роста с получением опухолевых ксенотрансплантатов для исследований эффективности. Клетки 786-0 54 экспрессируют в среднем приблизительно 180000 антигенов СО27Ь на клетку. Лечение АЬ4-ΜСС-^Μ1 или АЬ8-ΜСС-^Μ1 начинали. когда размер опухолей достигал в среднем приблизительно 250 мм3. Животных с опухолями рандомизировали по размеру опухолей в группы. включавшие по десять животных каждая. и дозировали один раз внутривенно. На указанной модели развившейся опухоли проводили заслепленное исследование зависимости доза-эффект для ^4-1^+-01^ и АЬ8-ΜСС-^Μ1 с применением дозировок в диапазоне 7-64 мкг/кг ΌΜ1 (0.3-2.5 мг/кг АЬ). Устойчивый регресс опухолей наблюдался при низкой дозировке ΌΜ17 мкг/кг. средней дозировке ΌΜ1 25 мкг/кг и высокой дозировке ΌΜ164 мкг/кг. При средней и высокой дозировках полный регресс сохранялся на протяжении по меньшей мере 28 дней после введения одной дозы (фиг. 4). Ни в одной из дозируемых групп не наблюдалось потери массы тела в течение исследования.
В еще одной демонстрации эффективности ш νί\Ό клетки ссКСС Сак1-1. которые экспрессируют в среднем 59000 СО27Ь на клетку (в 3 раза меньше. чем клетки 786-0) имплантировали мышам СВ17/5СГО согласно описанию выше. Когда ксенотрансплантаты Сак1-1 достигали размера в среднем 250 мм3. животных с опухолями рандомизировали в группы по размеру опухолей по 10 животных каждая и дозировали внутривенно один раз в неделю на протяжении 3 недель (для более точной имитации режима еженедельного клинического дозирования). На указанной модели развившейся опухоли проводили заслепленное исследование зависимости доза-эффект для ^4-1^+-01^ и АЬ8-ΜСС-^Μ1 с применением дозировок в диапазоне 60-270 мкг/кг ΌΜ1 (2.4-11 мг/кг АЬ). Регресс опухоли впервые наблюдался при средней дозировке ΌΜ1 120 мкг/кг и высокой дозировке ΌΜ1 270 мкг/кг. тогда как подавление роста опухоли наблюдалось при низкой дозировке ΌΜ1 60 мкг/кг по сравнению с контрольным конъюгатом или основой. С течением времени в пределах 7 дней после введения последней дозы регресс опухоли в двух получавших более высокие дозы группах начинает уменьшаться (фиг. 5).
Как и клетки ссКСС. клетки В-клеточной лимфомы Кар экспрессируют СО27Ь (приблизительно 200000 эпитопов на клетку) и интернализируют конъюгат лекарственного средства с антителом против СО27Ь. что приводит к митотическому блоку и клеточной смерти ш уйго. Эффективность АЬ4^ССΌΜ1 оценивали в подкожного ксенотрансплантата Кар. Когда ксенотрансплантаты Кар достигали размера в среднем 250 мм3. животных с опухолями рандомизировали по размеру опухолей в группы по десять животных каждая и дозировали внутривенно каждые 4 дня х2 и затем в течение дополнительной недели однократно. в общей сложности 3 дозы (для более точной имитации режима еженедельного клинического дозирования). На указанной модели развившейся опухоли проводили заслепленное исследование зависимости доза-эффект для ^4-1^+-01^ с применением дозировок в диапазоне от 60-270 мкг/кг ΌΜ1 (2.4-11 мг/кг АЬ). Подавление роста опухоли наблюдалось при всех уровнях доз. с >90% подавлением роста опухоли. наблюдаемым при средней дозировке ΌΜ1 120 мкг/кг и высокой дозировке ΌΜ1 270 мкг/кг во время периода активного дозирования с умеренным противоопухолевым ответом. наблюдаемым при низкой дозировке ΌΜ1 60 мкг/кг по сравнению с контрольным конъюгатом (фиг. 6). В конце периода измерения опухолей а у незначительного большинства животных в группах. получавшихсредние и высокие дозы. наблюдался регресс опухоли. указывая на то. что дальнейшая оптимизация доз и режима может улучшить отклик.
Эффективность при различных интервалах дозирования контрольным конъюгатом (/5^1^+-01^ или ^4-1^+-01^ оценивали на модели с ксенотрансплантатом 786-0. Мышам СВ-17/5СГО имплантировали опухолевые клетки 786-0. На 13-й день 50 животных рандомизировали в когорты по 10 животных в каждой со средним объемом опухоли 200 мм3. В каждой когорте внутрибрюшинно вводили дозу либо контрольного конъюгата αδА-ΜСС-^Μ1. либо АЬ4-ΜСС-^Μ1. Объем опухоли представлен в виде среднего значения для группы ± стандартная погрешность среднего (δЕΜ). Оценивали статистическую значимость наблюдаемых различий между кривыми роста с 13-го по 59-й день с применением ковариационного анализа повторных измерений (КΜАN0VА) логарифмизированных данных по объемам опухолей путем множественных сравнений с применением критерия Дуннетта. Значимость достигается при р<0.05. Вводили три уровня дозы АЬ4-ΜСС-^Μ1 (1.0; 2.0; или 2.9 мг/кг АЬ4-МСС-^Μ1 на основе антитела. или 25. 50 или 75 мкг/кг на основе эквивалентов ΌΜ1 соответственно). Дозу 1.0 мг/кг вводили один раз в неделю или однократно каждые 2 недели на протяжении 6 недель. дозу 2.0 мг/кг вводили однократно каждые 2 недели на протяжении 6 недель. а 2.9 мг/кг дозу вводили однократно каждые 3 три недели на протяжении 6 недель. Животных дозировали внутрибрюшинно. начиная с 13-го дня после инокуляции опухоли. К 59-му дню проводили эвтаназию животных получавшей лечение (/5^1^+-01^ группы ввиду больших объемов опухолей. На 59-й день средний объем опухолей у мышей. получавших лечение введением ^4-1^+-01^ согласно каждому из режимов дозирования был значимо меньшим. чем в
- 49 027900 группе, получавшей контрольный конъюгат а8А-МСС-ОМ1 (р<0,0001) (фиг. 7). АЬ4-МСС-ОМ1 обеспечивает длительный регресс опухоли при каждом из режимов дозирования. Ни в одной из получавших лечение АЬ4-МСС-ОМ1 групп не наблюдалось потери массы тела в течение исследования.
Фармакокинетика.
Конъюгаты лекарственного средства и антител АЬ4 и АЬ8 оценивали после внутривенного введения самкам мышей СВ-17/8СГО с СВ27Е-экспрессирующими ксенотрансплантатами 786-0 в контексте исследований эффективности и последующего исследования конечных параметров ФК. Суммарная экспозиция и значения клиренса молекул АЬ4-МСС-ОМ1 и АЬ8-МСС-ОМ1 отличались в 1,ЗЗ-1,4 раза, и время полужизни обоих типов ЛЕС у мышей составляло приблизительно 12 дней.
Характеризовали стабильность и параметры ФК конъюгатов лекарственного средства и антител АЬ4-МСС-ОМ1 и АЬ8-МСС-ОМ1 ίη νίνο после введения одной внутривенной (в/в) дозы мышам СВ17/8СГО с ксенотрансплантатами 786-0. Наблюдалась очень сходная экспозиция двух конъюгатов лекарственного средства с антителом, но АЬ4-МСС-ОМ1 демонстрировали большую стабильность степени конъюгации лекарства/антитела на протяжении 96-часового периода исследования, согласно оценке при помощи аффинной МС, по сравнению с молекулой АЬ8-МСС-ОМ1. Конъюгат АЬ4-МСС-ОМ1 не проявлял детектируемой потери целостности в моменты времени через З0 мин или 24 ч после инъецирования; тогда как для АЬ8-МСС-ОМ1 наблюдались изменения в момент времени З0 мин и значимое уменьшение конъюгатов во всех образцах через 24 ч после инъецирования.
Пример З. Картирование паратопов.
Модификации АЬ4 тестировали на связывание с СО27Б с применением ИФА ЕЫ8А. СИ27Ь связывали в планшетах Мах1§огр при комнатной температуре на протяжении более 2 ч, при встряхивании, 1 мкг/мл в 100 мкл. Затем планшеты блокировали 250 мкл 10% обезжиренного сухого молока в ФСБ+0,05% Твин 20 на протяжении 2 ч. После промывки 4хЗ00 мкл ФСБ+0,05% Твин 20 (ФСБ/ТВИН) разведения модифицированного антитела и очищенного исходного контроля в диапазоне от 0,045 до 100 нг/мл вносили в планшеты и инкубировали на протяжении 1 ч. После еще одной отмывки ФСБ/ТВИН в планшеты вносили конъюгированное с пероксидазой хрена детекторное антитело айиРс (1аск§оп) в разведении 1:7000 и инкубировали на протяжении 1 ч.
Проводили последнюю промывку, субстрат ТМБ-субстрат инкубировали на протяжении 10 мин и останавливали фосфорной кислотой. Проводили регистрацию оптической плотности при 450 нм и строили график зависимости от концентрации. Затем указанные кривые анализировали с использованием трехпараметрической нелинейной аппроксимации; сравнивали ЕС50 и максимальный рассчитанный сигнал с очищенным контролем. Связывание считали аналогичным связыванию исходного антитела в том случае, если ЕС50 находилась в пределах 2-кратного интервала, а максимальный сигнал превышал 50%. Связывание уменьшалось в том случае, если ЕС50 уменьшалась более чем в 2 раза и/или максимальный сигнал составлял менее чем 50%. Связывание прекращалось, если построение кривой было невозможно, или при максимальном сигнале менее чем 5%.
Таблица 8
Приведены комбинации модификаций тяжелой и легкой цепей с уровнями экспрессии в мкг/мл (определенной методом РоДеВю Рго1ет А) и их влиянием на связывание
Комбинации Экспрессия бвязывание
Ν31Η-Υ58Ν + Ν313-Ι34Μ 30,3 Пониж.
Ν31Η-Υ58Ν + 6333-134Ь 46, 7 Нет связ.
Ν31Η-Υ58Ν + Ώ54Ε-6553 9, 91 Нет связ.
Ν31Η-Υ58Ν + 31036-61043 14, 6 Нет связ.
Ν31Η-Υ58Ν + Родительская Н6 10,4 Пониж.
К24К-3266 + Ν313-Ι34Μ 13, 8 бход.
К24К-3266 + 6333-134Ъ 16, 9 Нет связ.
К24К-3266 + Ώ54Ε-6553 1,87 Пониж.
К24К-3266 + 31036-61043 3,76 Пониж.
К24К-3266 + Рагепб Н6 3,43 бход.
Ε55Ι-Υ58Ε + Ν313-Ι34Μ 9, 53 Пониж.
Ь551-У58Е + 6333-134Ь 11, 6 Нет связ.
Ь551-У58Е + Ώ54Ε-6553 1,26 Пониж.
Ь551-У58Е + 31036-61043 2, 61 Пониж.
Ь551-У58Е + Родительская Н6 2,72 бход.
095Ν-Τ963 + Ν313-Ι34Μ 24, 6 бход.
- 50 027900
095Ν-Τ963 + 6333-134Ь 32,7 Нет связ.
095Ν-Τ963 + Ώ54Ε-6553 1,89 Пониж.
095Ν-Τ963 + 31036-61043 4,99 Нет связ.
095Ν-Τ963 + Родительская Н6 5, 85 бход.
Родительская Ь6 + Ν313-Ι34Μ 31, б Пониж.
Родительская Ь6 + 6333-Ι34Σ 51,2 Нет связ.
Родительская Ь6 + Ώ54Ε-6553 7,03 Пониж.
Родительская Ь6 + 31036-61043 10,7 Нет связ.
Родительская Ь6 + Родительская Н6 9, 25 бход.
При 13 из 24 комбинаций модификаций, сделанных в АЪ4, сохранялся некоторый уровень связывания СИ27Ь. У 9, которые не связывались с СИ27Ь, присутствовало по меньшей мере одно из следующих: модификации тяжелой цепи О333-134Ь и 3103О-О1043 или модификации легкой цепи Ν31Η-Υ58Ν. Из антител сходных на 97% антител (2 аминокислотные модификации) 75% (6 из 8) сохраняли некоторый уровень связывания, и 56% (7 из 16) антител с 94% сходством (4 модификации аминокислот) сохраняли некоторый уровень связывания, причем у 2 из них уровень связывания близок к исходному контролю. Это показывает, что антитело с пониженным до 94% сходством с АЪ4 сохраняет способность связывать СБ27Ь.
Перечень последовательностей δΕΟ ΙΌ ΝΟ:1
Аминокислотная последовательность СБ27Ь человека
МРЕЕС5СС5УР,Р,ИР¥ССУЬР.ААЬУРЬ\/АСЬУ1СЬ'-Л/С1СР,ГА0АаС0ЬРЬЕЗЬСтА'В\/А
ЕЬ0ЬЫНТСР00ОРКЬУ№0ССРАЬСКЗЕЬНСРЕЪВКС0ЬК1НКВС1УМУНЮУТЪА1СЗЗТТАЗ
ИННРТТЬАУС1СЗРАЗИ313ЬЬИЬЗЕНаССТ1АЗаИЬТРЪАИСРТЬСТМЬТеТЪЬРЗКЫТЕЕТ
ЕЕСУ0№УКР δΕΟ ΙΌ ΝΟ:2
Аминокислотная последовательность предшественника СИ27 человека
МАРРНРШЬСУЬСТЬУСЬЗАТРАРКЗСРЕРНУ№А0СКЬСС0МСЕРСТЕЬУКЕСЕ0ННК ΑΑΟΟϋΡΟΙРСУЗЕЗРРННТКРНСЕЗСКНСЫЗСЬЬУНЫСТIТАЯАЕСАСК№3№ОСКРКЕСТЕСР РЬРЫР8ЪТАК550АЬ5РНРаРТНЬРУУ5ЕМЬЕАКТАСНМ0ТЬАОЕК<2ЬРАКТЪ5ТН№РРаК5Ь СЗЗЕЕ1Н1ЪУ1ЕЗСМЕЬУЕТЬАСАЬЕЬН0НККУНЗЫКСЕЗРУЕРАЕРСНУЗСРКЕЕЕСЗТ1Р1 0ΕϋΥΗΚΡΕΡΑΟ3Ρ δΕΟ ΙΌ ΝΟ:3
Нуклеотидная последовательность, кодирующая тяжелую цепь АЪ1
- 51 027900
САСАТССАССТССАССАСТСССССССАССАСТССТСААССССТСАСАСАСССТСТССС
ТСАССТССАСТСТСТСТСАТСССТССАТСАТСАСТССТСТТТАСТАСТССАССТССАТССССС
АССАСССАСССААСССССТССА6ТССАТТССАТАСАТСТАТТАСАСТСССАССАССТССТАСА
АССССТСССТСААСАСТССАСТТАССАТСТСАСТАСАСАССТСТААСААССАСТТСТСССТСА
АССТСАССТСТСТСАСТССССС6САСАССССССТСТАТТАСТСТСССАССАСТССАТАСАССТ
АТССССТСТТТСАСТАСТССССССАСССААСССТССТСАСССТСТССТСАССТАССАССААСС
6СССАТСС6ТСТТСССССТ66САСССТССТССААСАССАССТСТС6666САСА6С66СССТС6
ССТСССТССТСААССАСТАСТТСССССААССССТСАСССТСТССТССААСТСАСССССССТСА
ССАССССССТССАСАССТТССССССТСТССТАСАСТССТСАССАСТСТАСТСССТСАССАССС
ТССТСАСССТССССТССАССАССТТССССАСССАСАССТАСАТСТССААССТСААТСАСААСС
ССАССААСАССААССТССАСАА6АСАСТТСАССССАААТСТТСТСАСААААСТСАСАСАТССС
САСССТССССАССАССТСААСТССТССССССАСССТСАСТСТТССТСТТССССССААААСССА
АССАСАСССТСАТСАТСТСССССАССССТСАССТСАСАТСССТССТССТССАССТСАСССАСС
ААСАСссССАССТСААСТТСАас-ЬССТАССТССАСССССТССАССТССАТААТСССААСАСАА
АССССССССАССАССАСТАСААСАССАССТАСССТСТССТСАСССТССТСАСССТССТССАСС
АССАСТСССТСААТСССААССАСТАСААСТССААССТСТССААСАААССССТСССАССССССА
ТССАСААААССАТСТССАААСССАААССССАССССССАСААССАСАССТСТАСАСССТССССС
САТССССССАССАСАТСАССАА6ААССАССТСАСССТСАССТСССТССТСАААСССТТСТАТС
ССАСССАСАТСССССТССАСТСССАСАССААТССССАСССССАСААСААСТАСААСАССАССС
СТССССТССТССАСТСССАССССТССТТСТТССТСТАТАССААССТСАСССТССАСААСАССА
ССТСССАССАССССААССТСТТСТСАТССТСССТСАТССАТСАСССТСТССАСААССАСТАСА
СССАСААСАСССТСТСССТСТСТСССССТААА
Τ.) ΙΌ N0:4
Нуклеотидная последовательность, кодирующая тяжелую цепь АЬ2
САССТССАССТССАССАСТСССССССАССАСТССТСААСССТТСАСАСАСССТСТССС
ТСАССТССАСТСТСТСТССТСАСТССАТСАТСАСТССТССТТАСТАСТССАССТССАТССССС
АССАСССАСССААСССССТССАСТССАТТСС6ТАСАТСТТТТАСАСТСССАССАСССАСТАСА
АССССТСССТСААСАСТССАСΤТАССАТАТСАСТАСАСАССТСТААСААССАСΤТСТСССТСА
АССТСАССТСТСТСАСТСССССССАСАССССССТАТАТТАСТСТСССАССАСТССАТАСАССТ
АТССССТСТТТСАССАСТССССССАСССААСССТССТСАСССТСТССТСАССТАССАССААСС
ССССАТСССТСТТСССССТСССАСССТССТССААСАССАССТСТССССССАСАСССССССТСС
ССТСССТССТСААССАСТАСТТСССССААССССТСАСССТСТССТССААСТСАСССССССТСА
ССАССССССТССАСАССТТССССССТСТССТАСАСТССТСАССАСТСТАСТСССТСАССАССС
ТССТСАСССТССССТССАССАССТТССССАСССАСАССТАСАТСТССААССТСААТСАСААСС
ССАССААСАССААССТССАСААСАСАСТТСАССССАААТСТТСТСАСААААСТСАСАСАТССС
САссетесссАссАсстеААстсстееееееАссетсАетсттсстсттссссссААААсссА
АССАСАСССТСАТСАТСТСССССАССССТСАССТСАСАТСССТССТССТССАССТСАСССАСС
ААСАСССТСАССТСААСТТСААСТССТАССТССАСССССТССАССТССАТАаСдССААСАСАА адссдССССАССАССАСТАСааСАССАССТАСССТСТССТСАСССТССТСАСССТССТССАСС
АССАСТСССТСААТСССААССАСТАСААСТССААССТСТССААСАААССССТСССАССССССА
ТССАСААААССАТСТССАААСССАААССССАССССССАСААССАСАССТСТАСАСССТССССС
САТССССССАССАСАТСАССААСААССАССТСАСССТСАССТСССТССТСАААСССТТСТАТС
ССАСССАСАТСССССТССАСТСССАСАССААТССССАСССССАСААСААСТАСААСАССАССС
СТССССТССТССАСТСССАССССТССТТСТТССТСТАТАССААССТСАСССТССАСААСАССА
ССТСССАССАССССААССТСТТСТСАТССТСССТСАТССАТСАСССТСТСсАСААССАСТАСА
СССАСААСАСССТСТСССТСТСТСССССТААА
81Т/ ГО N0:5
Нуклеотидная последовательность, кодирующая тяжелую цепь АЬ4
- 52 027900
САССТССАССТССТССАСТСТСССССАССССТССТССАСССТСССАССТСССТСАСАС
ТСТССТСТССАСССТСТССАТТСАССТТСАСТААСТАТСССАТАСАСТСССТСССССАСССТС
САСССААСССССТССАСТСССТСССАСТТАТАТССТАТСАТССААСТААТАААТАСТАТССАС
АСТСССТСААССССССАТТСАССАТСТССАСАСАСААТТССААСААСАСССТСТАТСТССААА
ТСААСАСССТСАСАССССАССАСАССССТСТСТАТТАСТСТСССАСАСАТССАССАТАТАСТС
ССТАССАТТСССССТТТСАСТАСТССССССАСССААСССТССТСАСССТСТССТСАССТАССА
ССААССССССАТСССТСТТСССССТСССАСССТССТССААСАССАССТСТССССССАСАСССС
СССТССССТСССТССТСААССАСТАСТТСССССААССССТСАСССТСТССТССААСТСАСССС
СССТСАССАССССССТССАСАССТТССССССТСТССТАСАСТССТСАССАСТСТАСТСССТСА
ССАСССТССТСАСССТССССТССАССАССТТССССАСССАСАССТАСАТСТССААССТСААТС
АСААССССАССААСАССААССТССАСААСАААСТТСАССССАААТСТТСТСАСААААСТСАСА
САТССССАСССТССССАССАССТСААСТССТССССССАСССТСАСТСТТССТСТТССССССАА
ААСССААССАСАСССТСАТСАТСТСССССАССССТСАССТСАСАТСССТССТССТССАССТСА
СССАССААСАСССТСАССТСААСТТСААСТССТАССТССАСССССТССАССТССАТААТСССА
АСАСАААССССССССАССАССАСТАСААСАССАССТАСССТСТССТСАСССТССТСАСССТСС
ТССАССАССАСТСССТСААТСССААССАСТАСААСТССААССТСТССААСАААССССТСССАС
СССССАТС6АСААААССАТСТССААА6ССААА666СА6СССС6А6ААССАСА66ТСТАСАССС
ТССССССАТССССССАССАСАТСАССААСААССАССТСАСССТСАССТСССТССТСАААСССТ
ТСТАТСССА6С6АСАТС6СС6Т66АСТ666А6А6СААТ66ССА6СС66А6ААСААСТАСАА6А
ССАССССТССССТССТССАСТСССАССССТССТТСТТССТСТАТАССААССТСАСССТССАСА
АСАССАССТСССАССАССССААССТСТТСТСАТССТСССТСАТССАТСАСССТСТССАСААСС
АСТАСАСССАСААСАСССТСТСССТСТСТСССССТАААТСА
8Е(.) ΙΌ N0:6
Нуклеотидная последовательность, кодирующая тяжелую цепь АЬ5
САССТССАССТССТССАСТСТСССССТСАССТСААСААСССТССССССТСАСТСААСС
ТСТССТССААСССТТСТССАТАСАССТТСАССАСТТАТСАТАТСААСТСССТСССАСАС6ССА
СТССАСААССССТТСАСТССАТСССАТССАТСААСССТААСАСТССТААСАСАСССТАТССАС
АСААСТТССАССССАСАСТСАССАТСАССАССААСАССТССАТААССАСАСССТАСАТС6АСС
ТСАССАСССТСАСАТСТСАССАСАССССССТСТАТТАСТСТСССАСАСССТАССАТТТТТССА
СТеСТТАТТАСТАСТАСТАСТАССеТАТеСАССТСТееССССААСССАССАСССТСАССеТСТ
ССТСАССТАССАССААССССССАТСССТСТТСССССТСССАСССТССТССААСАССАССТСТС еееесАСАесеессстееестесстеетсААееАстАсттссссеААссеетеАсеететсет
ССААСТСАСССССССТСАССАССС6ССТССАСАССТТССССССТСТССТАСАСТССТСА6САС
ТСТАСТСССТСАССАСССТеСТСАСССТеСССТССАССАССТТеСССАСССАСАССТАСАТСТ
ССААССТСААТСАСААССССАССААСАССААССТССАСААСАСАСТТСАССССАААТСТТСТС
АСААААСТСАСАСАТССССАСССТССССАССАССТСААСТССТеСССССАСССТСАСТСТТСС
ТСТТССССССААААСССААС6АСАСССТСАТСАТСТСССССАССССТ6А66ТСАСАТСС6Т66
ТССТССАССТСАСССАССААСАСССТСАССТСААСТТСААСТССТАССТССАСССССТС6АСС
ТССАТААТСССААСАСАААССССС6ССАССАССАСТАСААСАССАССТАСССТСТССТСАССС
ТССТСАСССТССТССАССАССАСТСССТСААТСССААССАСТАСААСТССААССТСТССААСА
ААССССТСССА6СССССАТС6АСААААССАТСТССААА6ССААА6С6СА6СССССА6ААССАС
АССТСТАСАСССТССССССАТССССССАССАСАТСАССААСААССАССТСАСССТСАССТССС
ТССТСАААСССТТСТАТСССАСССАСАТСССССТССАСТСССАСАССААТССССАСССССАСА
АСААСТАСААСАССАССССТССССТССТССАСТСССАССССТССТТСТТССТСТАТАССААСС
ТСАСССТССАСААСАССАССТСССАССАССССААССТСТТСТСАТССТСССТСАТССАТ6АСС
СТСТССАСААССАСТАСАСССАСААСАСССТСТСССТСТСТСССССТАААТСА
8Е(.) ΙΌ N0:7
Нуклеотидная последовательность, кодирующая тяжелую цепь АЬ6
- 53 027900
САССТТСАССТССТССАСТСТССАССТСАССТСААСААСССТССССССТСАСТСААСС
ТСТССТССААСССТТСТССТТАСАССТТТАССАССТАТССТАТСАССТСССТСССАСАССССС
СТССАСААССССТТСАСТССАТСССАТССАТСАССССТТАСААТССТТАСАСАСАСТАТССАС
А6ААССТССАССССАСАСТСАССАТСАССАСАСАСАСАТССАССАССАСАСССТАСАТССАСС
Т6АССАСССТСАСАТСТСАССАСАССССССТСТАТТАСТСТСССАСАСАСТАСССТССТААСС
АСТАСТАСССТАТССАССТСТССССССААСССАССАСССТСАСССТСТССТСАССТАССАССА
АССССССАТСССТСТТСССССТСССАСССТССТССААСАССАССТСТССССССАСАССССССС
ТССССТСССТССТСААССАСТАСТТСССССААССССТСАСССТСТССТССААСТСАССССССС
ТСАССАССССССТССАСАССТТССССССТСТССТАСАСТССТСАССАСТСТАСТСССТСАССА
СССТ6СТСАСССТССССТССАССАССТТССССАСССАСАССТАСАТСТССААССТСААТСАСА
АССССАССААСАССААССТССАСААСАСАСТТСАССССАААТСТТСТСАСААААСТСАСАСАТ
6СССАСС6ТССССА6САССТСААСТССТ666666АСССТСА6ТСТТССТСТТССССССААААС
ССАА6САСАСССТСАТСАТСТСССССАССССТСАССТСАСАТСССТССТССТССАССТСАССС
АС6АА6АСССТ6А66ТСАА6ТТСААСТ66ТАС6Т66АС66С6Т06А66Т6САТААТ6ССАА6А
СААА6СССССССАССАССАСТАСААСАССАССТАСССТСТССТСАСССТССТСАСССТССТСС
АССА6САСТСССТСААТСССААССАСТАСААСТССААССТСТССААСАААССССТСССАСССС
ССАТССАСААААССАТСТССАААСССАААССССАССССССАСААССАСАССТСТАСАСССТСС
ССССАТССССССАССАСАТСАССААСААССАССТСАСССТСАССТСССТССТСАААСССТТСТ
АТСССАСССАСАТСССССТССАСТСССАСАССААТССССАСССССАСААСААСТАСААСАССА
С6ССТССС6Т6СТ66АСТСССАС66СТССТТСТТССТСТАТА6САА6СТСАСС6Т66АСАА6А
ССАС6ТСССАССАССССААССТСТТСТСАТССТСССТСАТССАТСАСССТСТССАСААССАСТ
АСАСССАСААСАСССТСТСССТСТСТСССССТАААТСА
ЗЕО ГО N0:8
Нуклеотидная последовательность, кодирующая тяжелую цепь АЬ7
САССТССАССТССТССАСТСТСССССАССССТССТССАСССТСССАССТСССТСАСАС
ТСТССТСТССАСССТСТССАТТСАССТТСАСТАССТАТСССАТССАСТСССТСССССАСССТС
САСССААСесеСТСеАеТСССТСССАСТТАТАТССТАТСАТССААСТААТАААТАСТАТССАС
АСТСССТСААССССССАТТСАССАТСТССАСАСАСААТТССААСААСАСССТСТАТСТССААА
ТСААСАСССТСАСАССССАССАСАССССТСТСТАТТАСТСТСССАСАСАТААСАСТСАСТАСТ
АСТАСССТАТССАССТСТССССССААСССАССАСССТСАСССТСТССТСАССТАССАССААСС
6СССАТСС6ТСТТСССССТ6ССАСССТССТССААСАССАССТСТС6С6ССАСА6С6ССССТ6С
ССТСССТСеТСААСОАСТАСТТСССССААСССетеАССеТСТССТССААСТСАСССССССТСА
ССАССССССТССАСАССТТССССССТСТССТАСАСТССТСАССАСТСТАСТСССТСАССАССС
ТССТСАСССТССССТССАССАССТТССССАСССАСАССТАСАТСТССААССТСААТСАСААСС
ССАССААСАССААССТССАСААСАСАСТТСАССССАААТСТТСТСАСААААСТСАСАСАТССС
САСССТССССАССАССТСААСТССТССССССАСССТСАСТСТТССТСТТССССССААААСССА
АССАСАСССТСАТСАТСТСССССАССССТСАССТСАСАТСССТССТССТССАССТСАСССАСС
ААСАСССТСАССТСААСТТСААСТССТАССТССАСССССТССАССТССАТААТСССААСАСАА
АССССССССАССАССАОТАСААСАеСАССТАСССТСТСеТСАСССТССТСАСССТССТССАСС
АССАСТСССТСААТСССААССАСТАСААСТССААССТСТССААСАААССССТСССАССССССА
ТС6А6ААААССАТСТССААА6ССААА666СА6СССС6А6ААССАСА66Т6ТАСАСССТ6СССС
САТССССССАССАСАТСАССААСААССАССТСАСССТСАССТСССТССТСАААСССТТСТАТС
ССА6С6АСАТС6СС6Т66А6Т666А6А6СААТ666СА6СС66А6ААСААСТАСАА6АССАС6С
СТССС6Т6СТ66АСТСС6АС66СТССТТСТТССТСТАТА6САА6СТСАСС6Т66АСАА6А6СА
ССТСССАССАССССААССТСТТСТСАТССТСССТСАТССАТСАСССТСТССАСААССАСТАСА
С6СА6АА6А6ССТСТСССТ6ТСТСС666ТААА
ЗЕО ГО N0:9
Нуклеотидная последовательность, кодирующая тяжелую цепь АЬ8
- 54 027900
САестссАсстсетсеАстстесеесАсесстеетссАссстесеАсетссстеАСАс
ТСТССТСТССАСССТСТССАТТСАССТТСАСТАССТАТСССАТССАСТСССТСССССАСССТС
САСССААСССССТССАСТСССТСССАСТТАТАТССТАТСАТССААСТСАТАААТАСТТТССАС
АС Т С С С Т САА6 С С С С САТ Т САС САТ С Т С САСАСАСААТ Т С СААСААСАС ССТСТАТСТС СААА
ТСААСАСССТ6АСАССССАССАСАССССТСТСТАТТАСТСТСССАСАСАТСССАТАССАССАС
СТСССТАССТСТАСТТТСАСТАСТССССССАСССААСССТССТСАСССТСТССТСАССТАССА
ССААССССССАТСССТСТТСССССТСССАСССТССТССААСАССАССТСТССССССАСАСССС
СССТССССТСССТССТСААССАСТАСТТСССССААССССТСАСССТеТССТССААСТСАСССС
СССТСАССАССССССТССАСАССТТССССССТСТССТАСАСТССТСАССАСТСТАСТСССТСА
ССАСССТССТ6АСССТССССТССАССАССТТССССАСССАСАССТАСАТСТССААССТСААТС
АСААССССАССААСАССААССТССАСААСАААСТТСАССССАААТСТТСТСАСААААСТСАСА
САТССССАСС6Т6СССА6САССТСААСТССТ6С66СОАСССТСА6ТСТТССТСТТССССССАА
ААСССААССАСАСССТСАТСАТСТСССССАССССТСАССТСАСАТСССТССТССТССАССТСА
СССАССААСАСССТСАССТСААСТТСААСТССТАССТССАСССССТССАССТССАТААТСССА
АСАСАААССССССССАССАССАСТАСААСАССАССТАСССТСТССТСАСССТССТСАСССТСС
ТССАССАССАСТСССТСААТСССААССАСТАСААСТССААССТСТССААСАААССССТСССАС
СССССАТССА6ААААССАТСТССАААСССАААССССАССССССАСААССАСАССТСТАСАССС
ТССССССАТССССССАССАСАТСАССААСААССАССТСАСССТСАССТСССТССТСАААСССТ
ТСТАТСССАСССАСАТСССССТССАСТСССАСАССААТССССАСССССАСААСААСТАСААСА
ССАССССТССССТССТССАСТСССАССССТССТТСТТССТСТАТАССААССТСАСССТССАСА
АСАССАССТСССАССАССССААССТСТТСТСАТССТСССТСАТССАТСАСССТСТССАСААСС
АСТАСАСССАСААСАСССТСТСССТСТСТСССССТААА
8ЕО ГО N0:10
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи АЬ1 аМОЬОЕЗСРСЬУКРЗОТЬЗЬТСТУЗОСЗ 11 ЗСУУУИЗШКаНРСКСЪЕШСУ! ΥΥ3Ο3 ТЗУМРЗЬКЗНЬТМЗУОТЗКЫСЕЗЬКЬЗЗУТААОТАУУУСАНЗСУЗУАЬЕОУИСССТЬУТУЗЗА ЗТКСРЗУЕРЬАРЗЗКЗТЗССТААЬССЪУКОУЕРЕРУТУЗИЕЗСАЬТЗСУНТЕРАУЕОЗЗСЬУЗ ЕЗЗУУТУР533ЪСТ<2ТУ1СЖЖНКРЗЕТКУОККУЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕЬЪССРЗУЕЬЕР РКРКБТЪМ13КТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕУКЕШУУОСУЕУНЕАКТКРКЕЕ<2УЫЗТУКУУЗУЪТ УЪН0БИЪЕСКЕУКСКУЗЕКАЬРАР1ЕКТ13КАКС0РНЕР0УУТЪРРЗНЕЕМТКЫ0УЗЪТСЬУК СЕУРЗР1АУЕИЕЗЕС0РЕЕЕУКТТРРУЬЕЗРСЗЕЕЬУЗКЬТУРКЗНИ0аСЕУЕЗСЗАЖНЕАЬН ынутакзъзъзрск
81% ГО N0:11
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи АЬ2 □УаъоЕзереъукрзотъзътстузеозызееууизшконрекеъЕиюу^узез
ТОУЕРЗЪКЗКУТ13УОТЗКЕ<2ЕЗЪКЪЗЗУТААОТАУУУСАКЗСУЗУАЪЕОНИС<2СТЪУТУЗЗА
ЗТКСРЗУЕРЪАРЗЗКЗТЗееТААЪеСЪУКОУЕРЕРУТУЗШГЗСАЪТЗеУНТЕРАУЪСЗЗеЪУЗ
ЪЗЗУУТУРЗЗЗЪСТ<2ТУ1С£тгаКРЗЕТКУОККУЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕЪЪССРЗУЕЪЕР
ΡΚΡΚ0ΤΕΜΙ3ΚΤΡΕνΤ0ννν0ν3ΗΕ0ΡΕνΚΕΝΐΛΓΥν0σνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ<2ΥΝ3ΤΥΚνν3νΕΤ
УЪНСОМЪМСКЕУКСКУ5МКАЪРАР1ЕКТ15КАКС<2РКЕР<2УУТЪРР5КЕЕМТКМ<2У5ЪТС1Л/К
СЕУРЗО1АУЕИЕЗЕС0РЕЕЕУКТТРРУЪОЗОСЗЕЕЪУЗКЪТУОКЗНИ00СЫУЕЗСЗУМНЕАЪН
ЫНУТОКЗЬЗЪЗРСК
81% ГО N0:12
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи АЬ4
- 55 027900
0УСЪУЕ5СССУУ0РСК5ЪКЪ5САА5СГТГ5Ы¥С1НИУК<2АРСКСЪЕСТУАУ1И¥ОС5ЫК
ΥΥΑΌ3νΚ6ΚΕΤΙ3Κ0Ν3ΚΝΤΕΥΕζ)ΜΝ3ΕΚΑΕΌΤΑνΥΥ0ΑΒ.066Υ36Υϋ36ΕΌΥΐΛί6ζ)6ΤΕντν3
ЗАЗТКСРЗУЕРЕАРЗЗКЗТЗССТААЬССЬУКОУЕРЕРУТУЗИЕЗСАЬТЗСУНТЕРАУЬОЗЗСЬ
УЗЬЗЗУУТУРЗЗЗЬСТОТУТСЕУЫНКРЗЕТКУОККУЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕЬЕССРЗУЕЬ
ΕΡΡΚΡΚϋΤΕΜΙ3ΡΤΡΕνΤθνλΛ/ϋν3ΗΕΌΡΕνΚΕΝΜΥνϋσνΕνΗΝΑΚΤΚΡΡΕΕ0ΥΝ3ΤΥΡνν3ν
ЪТУЬН<2ОИЪЖЖЕ¥КСКУ5МКАЪРАР1ЕКТ15КАКС<2РРЕР<2У¥ТЪРР5РЕЕМТКЫ<2У5ЪТСЪ νκσΕΥΡ3ΌΙΑνΕΜΕ3Νσ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕϋ3ϋσ3ΕΕΕΥ3ΚΕΤνϋΚ3ΚΐΛί00σΝνΕ3Ο3νΜΗΕΑ
ЪНОТИТОКЗЪЗЬЗРСК
ЗЕО ΙΌ N0:13
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи АЬ5 <2У<2ЬУ<23 САЕ УККРСАЗ νκν3 СКАЗ СΥΤ ЕТ 3 ΥϋI ΝΚνΚζΧΆΤ СССЬЕИМеИМЫРЫЗ 6ΝΤ σΥΑ0ΚΕασκνΤΜΤΡΝΤ3Ι3ΤΑΥΜΕΕ33ΕΚ3ΕϋΤΑνΥΥΟΑΡΟΥϋΕΚ3σΥΥΥΥΥΥσΜϋνΚ30ΟΤΤ УТУЗЗАЗТКСРЗУЕРЬАРЗЗКЗТЗССТААЬССЕУКО¥ЕРЕРУТУЗИКЗСАЬТЗСУНТЕРАУЬа 33<3ΕΥ3Ε35νντνΡ333Ει6Τ(2ΤΥΙ0ΝνΝΗΚΡ3ΝΤΚνΌΚΒ.νΕΡΚ30ΟΚΤΗΤ0ΡΡ0ΡΑΡΕΕ.Ε66Ρ 3νΕΕΕΡΡΚΡΚϋΤΕΜΙ3ΚΤΡΕνΤθνννϋν3ΗΕϋΡΕνΚΕΝΚΥνϋσνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ0ΥΝ3ΤΥΚ νν5νΕΤνΕΗ<2ΌΜΕΝσΚΕΥΚΟΚν3ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ3ΚΑΚσ<2ΡΚΕΡ<2νΥΤΕΡΡ3ΚΕΕΜΤΚΝ<2ν5 ΕΤΟΕνΚΟΕΥΡ3ϋΙΑνΕΚΕ3ΝσαΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΌ3ϋσ3ΕΕΕΥ3ΚΕΤνϋΚ3ΚΚ00σΝνΕ3Ο3ν ΜΗΕΑΕ.ΗΝΗΥΤζ)Κ5Ε3Ε3Ρ6Κ
ЗЕО ΙΌ N0:14
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи АЬ6
0ναΕν03ΟΑΕνΚΚΡ(3Α3νκν3ΟΚΑ36ΥΤΕΤ3ΥΟΙ3ΐΛίνκαΑΡθα(3ΕΕΐΛίΜΟΚΙ3ΑΥΝ(3ΥΤ
ΗΥΑ0ΚΕ0ΟΚνΤΜΤΤΌΤ3Τ3ΤΑΥΜΕΕΡ3ΕΚ3ϋΌΤΑνΥΥΟΑΚϋΥσθΝϋΥΥσΜϋνΐΛίσ0ΟΤΤντν33
АЗТКСРЗУЕРЪАРЗЗКЗТЗееТААЬССЬУКЕАЕРЕРУТУЗККЗСАЪТЗеУНТЕРАУЬОЗЗеЪУ
5Ъ55УУТУР555ЪСТаТ¥1СКМЯНКР5КТКУЕККУЕРК5СОКТНТСРРСРАРЕЪЪССР5УЕЪЕ
ΡΡΚΡΚϋΤΕΜΙ5ΚΤΡΕνΤθνννθν5ΗΕΏΡΕνΚΕΝΐΛίΥνΌθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ<2ΥΝ3ΤΥΚνν5νΕ
ТУЬН<2ОМЬ№ЖЕ¥КСКУ5ККАЪРАР1ЕКТ15КАКСаРРЕР<2У¥ТЬРР5КЕЕМТКК<2У5ЪТСЪУ
ΚσΕΥΡ3ϋΙΑνΕΚΕ3ΝθαΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕϋ3Ό63ΕΕΕΥ3ΚΕΤνΌΚ3ΚΐΛίαθσΝνΕ303λΜΗΕΑΕ
ΗΝΗΥΤ<2Κ5Ε5Ε5ΡΟΚ
ЗЕО ΙΌ N0:15
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи АЬ7
0ν0ΕνΕ5ΟΟθνναΡΟΚ5ΕΚΕ5ΟΑΑ5ΟΕΤΕ5ΤΥΟΜΗΐΛίνΚ<2ΑΡΟΚΟΕΕΜνΑνΐ№ΥΌΟ5ΝΚ
ΥΥσθ3νκσΚΕΤΙ3ΚΟΝ3ΚΝΤΕΥΕ0ΜΝ3ΕΡΑ,ΕΏΤΑνΥΥΟΑΚΌΝ3ΗΥΥΥ6ΜθνΚ(30ΟΤΤντν33Α
ЗТКСРЗУЕРЕАРЗЗКЗТЗССТААЬССЬУКОУЕРЕРУТУЗСТЫЗСАЕТЗСУНТЕРАУПЭЗЗСТАЗ
Ь55УУТУР353ЬСТ<2Т¥1СЖЖНКРЗКТКУОККУЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕЬЬССРЗУЕЬЕР
ΡΚΡΚΏΤΕΜΙ5ΚΤΡΕνΤ3νννΌν3ΗΕΟΡΕνΚΕΝΐΛίΥνΌ(3νΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ<2ΥΝ3ΤΥΚνν5νΕΤ νΕΗ0ΏΜΕ№3ΚΕΥΚΟΚν5ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ3ΚΑΚσ<2ΡΚΕΡ<2νΥΤΕΡΡ3ΚΕΕΜΤΚΝ<2ν3ΕΤΟΕνΚ
ΟΕΥΡ3ΌΙΑνΕΚΕ3ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΌ3ΟΟ3ΕΕΕΥ3ΚΕΤνθΚ3ΚΚ0αθΝνΕ3Ο3νΜΗΕΑΕΗ
ΝΗΥΤ0Κ3Ε3Ε3ΡΟΚ
ЗЕО ΙΌ N0:16
Аминокислотная последовательность тяжелой цепи АЬ8
ОУОЬУЕЗСССАЛ/ОРСНЗЬНЬЗСЬАЗСЕТЕЗЗУСМНИУНОАРСКСЬЕИУАУПлГУОСЗОК
ΥΕΑΟ3νΚ6ΗΕΤΙ3ΗΟΝ3ΚΝΤΕΥΕ0ΜΝ3ΕΗΑΕΟΤΑνΥΥΟΑΗΟ6ΙΑ6ΑΗΥνΥΕΟΥΐΛί606ΤΕντν3
ЗАЗТКСРЗУЕРЬАРЗЗКЗТЗССТААЬССЬУКОУЕРЕРУТУЗИКЗСАЬТЗСУНТЕРАУЬОЗЗСЬ
УЗЬЗЗУУТУРЗЗЗЬСТОТУТСКУКНКРЗКТКУОККУЕРКЗСОКТНТСРРСРАРЕЬЬССРЗУЕЬ
ΕΡΡΚΡΚϋΤΕΜΙ3ΚΤΡΕνΤθνννθν3ΗΕΟΡΕνΚΕΝΐΛίΥνθσνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ<2ΥΝ3ΤΥΚνν3ν
ЬТУЬН0ОИЬЖЖЕ¥КСКУЗККАЬРАР1ЕКТ13КАКС<2РКЕР<2У¥ТЬРР5КЕЕМТКК<2УЗЬТСЬ νΚ6ΕΥΡ3ϋΙΑνΕ№Ε3Ν60ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕ03063ΕΕΕΥ3ΚΕΤνθΚ3Η№006ΝνΕ303λ/ΜΗΕΑ
ΡιΗΝΗΥΤζ)Κ5Ρι5Ρι3Ρ<ΞΚ
ЗЕО ΙΌ N0:17
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ1
- 56 027900 <2М<2ЪСЕ5СРСЬУКР5<2ТЬ5ЪТСТУ5ОС5115СУ¥¥№5К1К0НРСКСЬЕ№1С¥1¥¥5С5
Τ5ΥΝΡ5ΕΚ5ΚΡιΤΜ5νθΤ5ΚΝ£)Ε5ΡιΚΕ55νΤΑΑΌΤΑνΥΥ0ΑΚ50Υ5ΥΑΕΕΌΥ1/'ί0ζ)0ΤΙ3ντν55 δΡΠ ΙΌ N0:18
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ2 (2У(2Ъ(2Е5СРеЬУКР5<2ТЬ5ЬТСТУ5СР5115ееУУ№5И1К(2НРеКСЪЕШСУ1ЕУ5С5
ΤΌΥΝΡ5ΕΚ5ΚνΤΙ5νΌΤ5ΚΝ<2Ε5ΕΚΕ55νΤΑΑΌΤΑνΥΥ0ΑΚ50Υ5ΥΑΕΕΌΗΪΛΪ0α0ΤΕντν55 δΡΠ ΙΌ N0:19
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ3
ЕУ(2ЬЬЕ5еССЪУ(2Рее5ЬКЬ5САА5еЕТЕ55УАМ5КУК<2АРекеЬЕ1лА5У15Р5еСТТ
ΡΥΑΡ3νΚΟΚΕΤΙ5ΡΡΝ5ΚΝΤΕΥΕ<2ΜΝ5ΕΡΑΕϋΤΑνΥΥΟΑΡΗΡΥ5ΝΚΥΥΕΌΥΐΛίΟ<2σΤΕντν55 δΡΠ ΙΌ N0:20
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ4 аУ0ЬУЕ5СССУУаРСР5ЬНЪ5САА5СЕТЕ5ЖС1НКУН<2АРСКСЬЕ1лААУ11л/УРСЗЫК
УУАОЗУКСНЕТ13КОЫЗКЫТЬУЬ0МЫЗЬНАЕОТАУУУСАКОССУЗСУОЗСЕОУИС0СТЬУТУЗ δΡΠ ΙΌ N0:21
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ5
ОУОЪУОЗ САЕУККРСАЗνκν3 СКАЗ 6ΥΤ ЕТ 3 ΥϋIΝΜνΚΟΑΤ СОСЬЕИМСИМЫРЫЗ 6ΝΤ СУАСКЕССКУТМТКЫТ313ТАУМЕЬЗЗЪК5ЕОТАУУУСАКСУОЕ1лГЗСУУУУУУСМОУИС<2СТТ ντν33 δΡΠ ΙΌ N0:22
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ6
ОУаЪУОЗСАЕУККРСАЗУКУЗСКАЗСУТЕТЗУС13ИУК<2АРС<2СЪЕИМСИ15АУКСУТ
НУАОКЪОСКУТМТТОТЗТЗТАУМЕЪКЗЬКЗООТАУУУСАКОУССКОУУСМОУИСОСТТУТУЗЗ δΡΠ ΙΌ N0:23
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ7
0У0ЪУЕ5СССУУ0РСК5ЪКЪ5САА5СЕТЕ5ТУСМНКУК0АРСКСЪЕКУАУ11л4РС5Ж
УУСО5УКСКЕТ15КОК5ККТЪУЪ(2МК5ЪКАЕОТАУУУСАКОК5НУУУСМОУКС(2СТТУТУ55 δΡΠ ΙΌ N0:24
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ8
0У0ЪУЕЗСССУУ0РСКЗЪКЬЗСАА36ЕТЕЗЗУСМНИУК<2АРСКСЪЕИУАУ1И¥ОСЗОК
УЕАО5УКСКЕТ15КОК5ККТ1АЪ<2МК5ЪКАЕОТАУ¥УСАКОС1АСАРУУУЕОУКС<2СТЪУТУ5 δΡΠ ΙΌ N0:25
Аминокислотная последовательность С0К1 тяжелой цепи АЬ1
5σνΥΥ№5 δΡΠ ΙΌ N0:26
Аминокислотная последовательность С0К1 тяжелой цепи АЬ2
ЗССУУИЗ δΡΠ ΙΌ N0:27
Аминокислотная последовательность С0К1 тяжелой цепи АЬ3
3ΥΑΜ3 δΡΠ ΙΌ N0:28
Аминокислотная последовательность С0К1 тяжелой цепи АЬ4
ΝΥΟΙΗ δΡΠ ΙΌ N0:29
Аминокислотная последовательность С0К1 тяжелой цепи АЬ5
3Υ0ΙΝ δΡΠ ΙΌ N0:30
Аминокислотная последовательность С0К1 тяжелой цепи АЬ6
ЗУС13 δΡΠ ΙΌ N0:31
Аминокислотная последовательность С0К1 тяжелой цепи АЬ7
ΤΥΟΜΗ δΡΠ ΙΌ N0:32
Аминокислотная последовательность С0К1 тяжелой цепи АЬ8
3Υ0ΜΗ
- 57 027900
8Ер ΙΌ N0:33 Аминокислотная
8Ер ΙΌ N0:34 Аминокислотная
8Ер ΙΌ N0:35 Аминокислотная
8Ер ΙΌ N0:36 Аминокислотная
8Ер ΙΌ N0:37 Аминокислотная
8Ер ΙΌ N0:38 Аминокислотная
8Ер ΙΌ N0:39 Аминокислотная последовательность С1Ж2 тяжелой цепи АЬ 1
ΥΙΥΥ535Τ5ΥΝΡ5ΡιΚ5 последовательность С1Ж2 тяжелой цепи АЬ2
ΥΙΡΥ363Τ0ΥΝΡ3ΡΚ3 последовательность С1Ж2 тяжелой цепи АЬ3 νΐ5Ό5σσΤΤϋΥΑΌ5νΚ0 последовательность С1Ж2 тяжелой цепи АЬ4 νΐ№ΥϋΟ5ΝΚΥΥΑΌ5νΚΟ последовательность С1Ж2 тяжелой цепи АЬ5
ΪΑΜΝΡΝδΟΝΤΟΥΑΟΚΓΟΟ последовательность С1Ж2 тяжелой цепи АЬ6
Ш 5ΑΥΝΟΥΤΗΥΑ<2ΚΌ2Ο последовательность С1Ж2 тяжелой цепи АЬ7 νΐ№ΥΌ03ΝΚΥΥ0ϋ3νΚ3
8Ер ΙΌ N0:40
Аминокислотная последовательность С1Ж2 тяжелой цепи АЬ8 νΐ№ΥΌΟ3ΟΚΥΕΑΌ3νΚΟ
8Ер ΙΌ N0:41
Аминокислотная последовательность С1Ж3 тяжелой цепи АЬ 1
30Υ3ΥΑΣΕΌΥ
8Ер ΙΌ N0:42
Аминокислотная последовательность С1Ж3 тяжелой цепи АЬ2
ЗСУЗУАЬГРН
8Ер ΙΌ N0:43
Аминокислотная последовательность С1Ж3 тяжелой цепи АЬ3
Η0Υ3ΝΗΥΥΡΡΥ
8Ер ΙΌ N0:44
Аминокислотная последовательность С1Ж3 тяжелой цепи АЬ4
8Ер ΙΌ N0:45
Аминокислотная последовательность С1Ж3 тяжелой цепи АЬ5 σγοΡΜ3σγγγγγγσΜϋν
8Ер ΙΌ N0:46
Аминокислотная последовательность С1Ж3 тяжелой цепи АЬ6
ΡΥσΟΝΏΥΥΕΜΏν
8Ер ΙΌ N0:47
Аминокислотная последовательность С1Ж3 тяжелой цепи АЬ7
ΌΝ3ΗΥΥΥ3Μϋν
8Ер ΙΌ N0:48
Аминокислотная последовательность С1Ж3 тяжелой цепи АЬ8
ΌΟΙΑΟΑΚΥνΥΓΌΥ
8Ер ΙΌ N0:49
Нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь АЬ1
- 58 027900
САС АТ С С АСАТ САС С С АС ТСТССАТССТСССТСТСТССАТСТТТАС САСАСАСАС Т С А
ССАТСАСТТСССССССААСТСАСАСССТТСАСАСАТАТТТСААТТССТАТСАССАСАААССТС
ССАААСССССТААССТССТСАТСТТТССТССАТССАСТТТССАААСТССССТСССАТСААССТ
ТСССТСССАСТССАТСТСССАСАСАТТТСАСТСТСАССАТСАССАСТСТССААССТСААСАТТ
ТТССААСТТАСТАСТСТСААСАСАССТАСАСТАСССССТССАССТТСССССААСССАССААСС
ТССААСТСАААССТАСССТСССТССАССАТСТСТСТТСАТСТТССССССАТСТСАТСАССАСТ
ТСАААТСТССААСТСССТСТСТТСТСТСССТССТСААТААСТТСТАТСССАСАСАССССАААС
ТАСАСТССААССТССАТААСССССТССААТССССТААСТСССАССАСАСТСТСАСАСАССАСС
АСАССААССАСАССАССТАСАСССТСАССАССАСССТСАСССТСАССАААССАСАСТАССАСА
ААСАСАААСТСТАССССТСССААСТСАСССАТСАСССССТСАССТССССССТСАСАААСАССТ
ТСААСАССССАСАСТСТ
5ЕЦ ГО N0:50
Нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь АЬ2
САСАТССАСАТСАСССАСТССССАТССТСССТСТСТССАТСТСТАССАСАСАСАСТСА
ССАТСАСТТСССССССААСТСАСТТСАТТСССАСАТАТТТСААТТССТАТСАССАССААССАС
ССАААСССССТААССТССТСАТСТАТССТСААТССАСТТТССАААСТССССТСССАТСААСАТ
ТСАСТСССАСТССАТСТСССАСАСААТТСАСТСТСАССАТСАССАСТСТССААССТСААСАТТ
ТТССААСАТАСТАСТСТСААСАСАСТТАСАСТАСССССТССАССТТСССССААСССАССААСС
ТССАААТСАААССТАСССТСССТССАССАТСТСТСТТСАТСТТССССССАТСТСАТСАССАСТ
ТСАААТСТССААСТСССТСТСТТСТСТСССТССТСААТААСТТСТАТСССАСАСАССССАААС
ТАСАСТССААССТССАТААСССССТССААТССССТААСТСССАССАСАСТСТСАСАСАССАСС
АСАССААССАСАССАССТАСАСССТСАССАССАСССТСАСССТСАССАААССАСАСТАССАСА
ААСАСАААСТСТАССССТСССААСТСАСССАТСАСССССТСАССТССССССТСАСАААСАССТ
ТСААСАССССАСАСТСТ
5ЕЦ ГО N0:51
Нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь АЬ4
САТАТТСТСАТСАСТСАСТСТССАСТСТСССТСССССТСАССССТССАСАСССССССТ
ССАТСТССТССАССТСТАСТСАСАСССТССТСААТАСТААТССАТАСААСТАТТТССАТТССТ
АССТССАСААСССАССССАСТСТССАСАСТТССТСАТСТАТТТСССТТСТТАТССССССТССС
СССТСССТСАСАССТТСАСТСССАСТССАТСАСССАСАСАТТТТАСАСТСАСААТСАССАСАС
ТССАСССТСАССАТСТТССССТТТАТТАСТСТАТАСАААСТСТАСАААСТССАТТСАСТТТСС
ССССТСССАССАААСТССАТАТСАААССТАСССТСССТССАССАТСТСТСТТСАТСТТССССС
САТСТСАТСАССАСТТСАААТСТССААСТСССТСТСТТСТСТСССТССТСААТААСТТСТАТС
ССАСАСАССССАААСТАСАСТССААССТССАТААСССССТССААТССССТААСТСССАССАСА
СТСТСАСАСАССАССАСАССААССАСАССАССТАСАСССТСАССАССАСССТСАСССТСАССА
ААССАСАСТАССАСАААСАСАААСТСТАССССТСССААСТСАСССАТСАСССССТСАССТССС
СССТСАСАААСАССТТСААСАССССАСАСТСТТАС
5ЕЦ ГО N0:52
Нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь АЬ5
- 59 027900
САААТТСТСТТСАСССАСТСТССТСССАСССТСТСТТТСТСТССАССССАААСАСССА
СССТСТССТССАСССССАСТСАСАСТСТТАССАССАССТАСТТАСССТССТАССАССАСАСАС
СТССССАСССТСССАСССТССТСАТСТАТССТССАТССАССАСССССАСТСССАТСССАСАСА
ССТТСАСТСССАСТСССТСТСССАСАСАСТТСАСТСТСАССАТСАССАСТСТССАСССТСААС
АТТТТССАСТСТАТТАСТСТСТССАСТСТССТАССТСТСТСССССТСАСТТТССССССАСССА
ССААССТССАСАТСАААССТАСССТСССТССАССАТСТСТСТТСАТСТТССССССАТСТСАТС
АССАСТТСАААТСТССААСТСССТСТСТТСТСТСССТССТСААТААСТТСТАТСССАСАСАСС
ССАААСТАСАСТССААССТССАТААСССССТССААТССССТААСТСССАССАСАСТСТСАСАС
АССАССАСАССААССАСАССАССТАСАСССТСАССАССАСССТСАСССТСАССАААССАСАСТ
АССАСАААСАСАААСТСТАССССТСССААСТСАСССАТСАСССССТСАССТССССССТСАСАА
АСАССΤТСААСАССССАСАСТСТТАА
8ΕΟ ГО N0:53
Нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь АЬ6
САСТСТСТССТСАСТСАСССАСССТСАСССТСТСССАСССССССССАСАСССТСАССА
ТСТСТТСТТСТССААССАССТССААСАТСССААТТААТТАТСТАТАСТССТАССАССАССТСС
САССААССССССССАААСТССТСАТСТАТАССАСТСАТСАСССССССТСАССССТСССТСАСС
САТТСТСТСССТССААСТСТСССАССТСАСССТСССТСССССТСАСТССССТССССТСССАСС
АТСАСССТСАТТАТТАСТСТССАССАТСССАТСАСАСССТСАСТССТСТССТСТТССССССАС
ССАССААССТСАСССТССТАССССААСССАААСССССССССТСССТСАСТСТСТТСССССССТ
ССТСТСАССАССТТСААСССААСААССССАСАСТССТСТСТСТСАТААСТСАСТТСТАССССС
САССССТСАСАСТССССТССААСССАСАТАССАССССССТСААССССССАСТССАСАССАССА
САСССТССАААСАААССААСААСААСТАСССССССАССАССТАТСТСАСССТСАССССТСАСС
АСТССААСТСССАСАСААССТАСАССТСССАССТСАСССАТСААСССАССАСССТССАСААСА
САС Т С С С С С С ТАСА6ААТСΤ Т САТАС
8Ε0 ГО N0:54
Нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь АЬ7
САСТСТСТССТСАСССАСССССССТСАСТСТСТССССССССАССССАСАСССТСАССА тстсстссастсссассасстссаасатссссссассттатсатстаааттсстатсассаст
ТСССАССААСАССССССАААСТССТСАТСТАТСТТААСААСААТССССССТСАССАСТСССТС
АСССАТТСТСТСССТССАССТСТСССАССТСАСССТСССТССССАТСАСТССАСТССАСССТС
АССАТСАСССТСАТТАТТАСТСССАСТССТАТСАСАССАСССТСАСТССТТСССТАТТССССС
САСССАССАСАСТСАСССТССТАССССААСССАААСССССССССТСССТСАСТСТСТТССССС
ССТССТСТСАССАССТТСААСССААСААССССАСАСТССТСТСТСТСАТААСТСАСТТСТАСС
ССССАССССТСАСАСТССССТССААСССАСАТАССАССССССТСААССССССАСТССАСАССА
ССАСАСССТССАААСАААССААСААСААСТАСССССССАССАССТАТСТСАСССТСАССССТС
АССАСТССААСТСССАСАСААССТАСАССТСССАССТСАСССАТСААСССАССАСССТССАСА
АСАСАС Т С С С С С С ТАСАСААТ С Τ Т СА
8Ε0 ГО N0:55
Нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь АЬ8
- 60 027900
САСАТССАСАТСАСССАСТСТССАТССТСССТСТСТССАТСТСТАССАСАСАСАСТСА
ССАТСАСТТСТССеСССАСТСАСеССАТТАССААТТАТТТАСССТееТТТСАССАСАААССАС есАААесссстААетссстеАтстАтестесАтссАетттесААеетесеетсссАтсАААет
ТСАСССССАСТССАТСТСССАСАСАТТТСАСТСТСАССАТСАССАСССТССАСССТСААСАТТ
ТТССААСТТАТТАСТСССААСААТАТТАТААТТАСССАТТСАСТТТССССССТСССАССАСАС
ТССАТАТСАААССТАСССТСССТССАССАТСТСТСТТСАТСТТССССССАТСТСАТСАССАСТ
ТСАААТСТССААСТСССТСТСТТеТСТеССТССТСААТААСТТСТАТСССАСАСАееССАААС
ТАСАСТССААССТССАТААСССССТССААТССССТААСТСССАССАСАСТСТСАСАСАССАСС
АСАССААССАСАбСАССТАСАСССТСАССАССАСССТСАСССТСАССАААССАСАСТАССАСА
ААСАСАААСТСТАССССТСССААСТСАСССАТСАСССССТСАССТССССССТСАСАААСАССТ
ТСААСАССССАСАСТСТТАС
ЗЕО ΙΌ N0:56
Аминокислотная последовательность легкой цепи АЬ1
Ш (2МТ <25 Р5 5 Ъ8А5 БОБКУТIТСКА5 (28 νϋΚΥ ГШУООКРСКАРКУЫ ГААЗ 5 Ъ(25 ον Р5ИЕСС5С5СТВЕТБТ155Б(2РЕВЕАТ¥¥С(2(28¥5ТР1лГТЕС(2СТКУЕУККТУААР5УЕ1ЕРР5 ВЕ(2БК5СТА5УУСБББЕЕ¥РРЕАКУ(21л?КУВЫАБ(25СБ5<2Е5УТЕ(2В5КВ5Т¥5Б55ТБТБ5КА БУЕКНКУУАСЕУТНОСБЗЗРУТКЗЕБКСЕС
ЗЕО ΙΌ N0:57
Аминокислотная последовательность легкой цепи АЬ2
В1(2МТ(25Р55Б5А5УСВРУТ15СРА5(2Е1СВ.¥ЕЕПл?¥(2(2(2РСКАРКУЫ¥АЕ55Б<25СУ Р5КЕ5С5С5СТЕЕТБТ155Б(2РЕВЕАК¥¥С(2(25¥8ТРИТЕС(2СТКУЕ1ККТУААР5УЕ1ЕРР5 ВЕ<2БК5СТА5УУСБББМЕ¥РРЕАКУ<2ИКУВБАБ<25СБ5<2Е5УТЕ<2В5КВ5Т¥5Б58ТБТБ5КА ВУЕКНКУУАСЕУТНБСБЗ 3 РУТКЗ ЕБНСЕС
ЗЕО ΙΌ N0:58
Аминокислотная последовательность легкой цепи АЬ4
В1УМТ<25РБ5БРУТРеЕРА515СК55<25БББ5БС¥Б¥БВИ¥Б<2КРС<25Р<2ЕБ1¥БС5¥ НАЗСУРВНЕЗезеЗСТВЕТБЕ13НУЕАЕВУеУ¥¥С1СТБСТРЕТЕеРСТКУВ1КНТУААРЗУЕ 1ЕРР5ВЕ(2БК5СТА5УУСББЫБЕ¥РВЕАКУ(2ИКУВЕАБ(25еЫ5(2Е5УТЕ(2В5КВ5Т¥5Б55ТБ ТБЗКАВУЕКНКУУАСЕУТНОСБЗ 5 РУТКЗ ЕЫЕСЕС
ЗЕО ΙΌ N0:59
Аминокислотная последовательность легкой цепи АЬ5
Е1УБТ<25РСТБ5Б5РСЕЕАТБ5СЕА5<25У555¥БАИ¥<2<2ЕРС<2АРЕБЫ¥СА55ЕАТС 1РВЕЕ5С5С5СТВЕТБТ155БЕРЕВЕАУ¥¥СБ<25С55УРБТЕСССТКУЕ1КЕТУААР5УЕ1ЕР Р5ВЕ<2БК5СТА5УУСЫ¥ЖЕ¥РЕЕАКУ<2ИКУВЫАБ<25СК5<2Е5УТЕ<2В5КВ5Т¥5Б55ТБТБ5 КАВУЕКНКУУАСЕУТНОСБЗЗРУТКЗЕБЕСЕС
ЗЕО ΙΌ N0:60
Аминокислотная последовательность легкой цепи АЬ6 <25УБТ<2РР5А5СТРС<2ВУТ15С5С555ШС1Б¥У¥К¥<2<2БРСТАРКБЫ¥В5В<2ВР5С УРВВЕЗСЗКЗСТЗАЗБАБЗСБЕЗЕВЕАВУУСААКВВЗБЗСУУЕСССТКБТУБСОРКААРЗУТБ ЕР Р 5 5 Ε Е Ъ ΟΑΝΚΑΤ Ъ УС Ъ15 ϋ Ε Υ Р САУТ УАИКАР 5 5 Р УКАСУЕ Τ Τ Τ Р 5 К<2 5 ΝΝΚ ΥΑΑ5 5 ¥Ъ 5 Ъ ТРЕОИКЗННЗУЗСОУТНЕСЗТУЕКТУАРТЕСЗ
ЗЕО ΙΌ N0:61
Аминокислотная последовательность легкой цепи АЬ7 <25УБТ<2РР5У5САРС<2ВУТ15СТС555ШСАС¥ВУБК¥<2<2ЕРСТАРКБЫ¥УБББЕР5 СУРВЕЕЗСЗТЗСТЗАЗБАТТСБОАЕВЕАВУУСОЗУВТЗБЗАЗУЕСССТЕБТУБСОРКААРЗУТ Ъ ЕР Р 5 5 Ε Е Ь ΟΑΝΚΑΤ Ъ УС Ъ15 ϋ Ε Υ Р САУТ УАИКАБ 5 5 Р УКАСУЕ Τ Τ Τ Р 5 К<2 5 ΝΝΚ ΥΑΑ5 5 УЪ 5 БТРЕОИКЗННЗУЗСОУТНЕСЗТУЕКТУАРТЕСЗ
ЗЕО ΙΌ N0:62
Аминокислотная последовательность легкой цепи АЬ8
- 61 027900
О1(2МТ(25Р55Ь5А5УеБКУТ1ТСКА5(2е15Ы¥ЬА1лГГа<2КРеКАРК5Ы¥АА85Ь(2ееУ Ρ5ΚΡ5σ5Ο5σΤΌΡΤΡΤΙ55ΡΩΡΕΌΡΑΤΥΥΟ00ΥΥΝΥΡΡΤΡΟΡΟΤΤνϋΙΚΚΤνΑΑΡ5νΡΙΡΡΡ5 ВЕОВКЗСТАЗУУСВЪШЕУРНЕАКУаМКУВМАЬОЗСМЗОЕЗУТЕОВЗКВЗТУЗЬЗЗТЬТВЗКА ВУЕКНКУУАСЕУТНОСЬЗ 3РУТКЗ ЕЫКСЕС
5Ер ΙΌ N0:63
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ1
О10МТ05Р55Ь5А5ЬСОКУТ1ТСКА505УОК¥ЕШ¥00КРСКАРКУЫЕАА55Ъ05СУ
РЗКЕССЗСЗСТОЕТЬТ^ЗЬОРЕОЕАТУУСаОЗУЗТРкТЕСаСТКУЕУК
5Ер ΙΌ N0:64
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ2
ΒΙ0ΜΤ08Ρ85Β5Α5νθΒΚνΤΙ5ΟΚΑ50ΕΙΟΚΥΕΝΐΛίΥ£)ζ)£)ΡΟΚΑΡΚνΒΙΥΑΕ58Β(25(3ν
Р5КЕЗС5С5СТЕЕТЬТ155Ь<2РЕРЕАК¥¥С<2<25¥5ТРИТЕС(2СТКУЕ1К
5Ер ΙΌ N0:65
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ3
ΕΐνΡΤζ)5Ρ6ΤΡ.5Ρ5Ρ3ΕΒΑΤΡ.50ΒΑ3(25Ε53ΝΥΙΑ.ΐΛίΥ(2(2ΚΡ6(2ΑΡΚΡΕΙΥ3Α35ΒΑΤ6
1РРКЕЗСЗСЗСТРЕТЬТ13КЬЕРЕРЕАУУЕС0аУС13РСЗЕСаСТКЬЕ1К
5Ер ΙΌ N0:66
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ4
БТУМТОЗРЪЗЪРУТРСЕРАЗТЗСРЗЗОЗЬЬЫЗМСУМУЬРИУЬОКРСОЗРОЕЫУЬСЗУ
РАЗСУРРРЕЗСЗСЗСТОЕТЬР13ИУЕАЕРУСУУУС1аТЬ0ТРЕТЕСРСТКУР1К
5Ер ΙΌ N0:67
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ5
Е1УЬТСЗРСТЪЗЬ5РеЕВАТЪ5СВА8<25У355¥ЪА1/7¥<2<2КР<3<2АРКЪЪ1¥<ЗА35ВАТе
1РВНЕЗСЗСЗСТВЕТЪТ133ЬЕРЕВЕАУУУСЬаЗСЗЗУРВТЕСССТКУЕ1К
5Ер ΙΌ N0:68
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ6 <25νΡΤ<2ΡΡ5Α53ΤΡ3(2ΡνΤΙ8353553ΝΙ(3ΙΝΥνΥΚΥα<2ΡΡ3ΤΑΡΚΙΑΙΥΡ3Β<2ΡΡ53
УРВКЕЗСЗКЗСТЗАЗЬАЬЗСБКЗЕВЕАВУУСААИВВЗЬЗСУУЕСССТКБТУЪ
5Ер ΙΌ N0:69
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ7
03νΒΤ0ΡΡ3ν33ΑΡσ0ΗνΤΙ3ΟΤ3333ΝΙ3Α3ΥΒνΝΐΛίΥ00ΕΡσΤΑΡΚΒΒΙΥνΝΝΝΗΡ3
СУРВНЕЗСЗТЗСТЗАЗЬАТТСЬОАЕВЕАВУУСОЗУВТЗЬЗАЗУЕСбСТНЬТУВ
5Ер ΙΌ N0:70
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ8
ВЮМТОЗРЗЗЬЗАЗУСВКУЩТСКАЗОСЛЗЖВАКЕООКРСКАРКЗЫУААЗЗВОССУ
Ρ3ΚΕ363636ΤΒΕΤΒΤΙ33Β<2ΡΕΒΕΑΤΥΥ0ζ)(2ΥΥΝΥΡΕΤΕ6Ρ6ΤΤνΒΙΚ
5Ер ΙΌ N0:71
Аминокислотная последовательность С1Ж1 легкой цепи АЬ1
ΚΑ5ζ)5νΒΗΥΕΝ
5Ер ΙΌ N0:72
Аминокислотная последовательность С1Ж1 легкой цепи АЬ2 ΚΑ3<2ΕΙΟΚΥΕΝ 5Ер ΙΌ N0:73
Аминокислотная последовательность С1Ж1 легкой цепи АЬ3
КАЗОЗЕЗЗЫУЪА
5Ер ΙΌ N0:74
Аминокислотная последовательность С1Ж1 легкой цепи АЬ4
НЗЗОЗЪЪЫЗЫСУЫУЪВ
5Ер ΙΌ N0:75
Аминокислотная последовательность С1Ж1 легкой цепи АЬ5
ИАЗОЗУЗЗЗУЬА
5Ер ΙΌ N0:76
Аминокислотная последовательность С1Ж1 легкой цепи АЬ6
30333ΝΙ3ΙΝΥνΥ
5Ер ΙΌ N0:77
Аминокислотная последовательность С1Ж1 легкой цепи АЬ7
- 62 027900
Τ6333ΝΙ6Α6ΥϋνΝ + ) ΙΌ N0:78
Аминокислотная последовательность С1Ж1 легкой цепи АЬ8
КАЗ<2615ЖЬА
81+,) ΙΌ N0:79
Аминокислотная последовательность С1Ж2 легкой цепи АЬ1
ААЗЗЬОЗ
81+,) ΙΌ N0:80
Аминокислотная последовательность С1Ж2 легкой цепи АЬ2
81+,) ΙΌ N0:81 Аминокислотная
81+,) ΙΌ N0:82 Аминокислотная
81+,) ΙΌ Ж):8З Аминокислотная
81+,) ΙΌ N0:84 Аминокислотная
81+,) ΙΌ N0:85 Аминокислотная
81+,) ΙΌ N0:86 Аминокислотная
81+,) ΙΌ N0:87 Аминокислотная
81+,) ΙΌ N0:88 Аминокислотная
81+,) ΙΌ N0:89 Аминокислотная
81+,) ΙΌ N0:90 Аминокислотная
81+,) ΙΌ N0:91 Аминокислотная
81+,) ΙΌ N0:92 Аминокислотная
81+,) ΙΌ Ж):9З Аминокислотная
АЕЗЗЫ23 последовательность С1Ж2 легкой цепи АЬЗ
САЗ 3 КАТ последовательность С1Ж2 легкой цепи АЬ4
ЬСЗУКАЗ последовательность С1Ж2 легкой цепи АЬ5
САЗ3КАТ последовательность С1Ж2 легкой цепи
Κ3Ό0ΚΡ3 последовательность С1Ж2 легкой цепи АЬ7 νΝΝΝΚΡ3 последовательность С1Ж2 легкой цепи АЬ8
ААЗЗЪОС последовательность С1ЖЗ легкой цепи АЬ1 <2<23Υ5ΤΡ1/7Τ последовательность С1ЖЗ легкой цепи АЬ2
003Υ3ΤΡΜΤ последовательность С1ЖЗ легкой цепи АЬЗ
00УС13РСЗ последовательность С1ЖЗ легкой цепи АЬ4
ЮТЬОТРЕТ последовательность С1ЖЗ легкой цепи АЬ5
ЬОЗСЗЗУРЬТ последовательность С1ЖЗ легкой цепи АЬ6
ААИРРЗЬЗСУУ последовательность С1ЖЗ легкой цепи АЬ7
ОЗУРТЗЬЗАЗУ
81+,) ΙΌ N0:94
Аминокислотная последовательность С1ЖЗ легкой цепи АЬ8
ΟΟΥΥΝΥΡΕΤ
- 6З 027900
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> Делани, Джон М.
ФРАНСЛОУ III, Вильям Кристиан КИНГ, Чедвик Теренс <120> СВЯЗЫВАЮЩИЕ АНТИТИГЕН СБ27Ь БЕЛКИ <130> Α-1437-υΞ-ΝΡ <140> ХХ/ХХХ,ХХХ <141> 2012-09-19 <150> 61/538,024 <151> 2011-09-22 <160> 94 <170> РаЬепНп версия 3.5 <210> 1 <211> 193 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <223> СБ27Ь человека <400> 1
МеЕ 1 Рго О1и О1и О1у 5 Бег О1у Суз Бег Уа1 10 Агд Агд Агд Рго Туг 15 О1у
Суз Уа1 Ьеи Агд А1а А1а Ьеи Уа1 Рго Ьеи Уа1 А1а О1у Ьеи Уа1 11е
20 25 30
Суз Ьеи Уа1 Уа1 Суз 11е О1п Агд РЬе А1а О1п А1а О1п О1п О1п Ьеи
35 40 45
Рго Ьеи О1и Бег Ьеи О1у Тгр Азр Уа1 А1а О1и Ьеи О1п Ьеи Азп НЧз
50 55 60
ТЬг О1у Рго О1п О1п Азр Рго Агд Ьеи Туг Тгр О1п О1у О1у Рго А1а
65 70 75 80
Ьеи О1у Агд Бег РЬе Ьеи НЧз О1у Рго О1и Ьеи Азр Ьуз О1у О1п Ьеи
85 90 95
Агд 11е НЧз Агд Азр О1у 11е Туг МеЕ Уа1 НЧз 11е О1п Уа1 ТЬг Ьеи
100 105 110
А1а 11е Суз Бег Бег ТЬг ТЬг А1а Бег Агд Нтз Нтз Рго ТЬг ТЬг Ьеи
115 120 125
- 64 027900
А1а Уа1 О1у 11е Суз Зег Рго А1а Зег Агд Зег 11е Зег Ьеи Ьеи Агд
130 135 140
Ьеи Зег РЬе Нчз О1п О1у Суз ТЬг 11е А1а Зег О1п Агд Ьеи ТЬг Рго
145 150 155 160
Ьеи А1а Агд О1у Азр ТЬг Ьеи Суз ТЬг Азп Ьеи ТЬг О1у ТЬг Ьеи Ьеи
165 170 175
Рго Зег Агд Азп ТЬг Азр О1и ТЬг РЬе РЬе О1у Уа1 О1п Тгр Уа1 Агд
180 185 190
Рго
<210> 2
<211> 217
<212> БЕЛОК
<213> Ното зар1епз
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> предшественник СБ27 человека
<400> 2
МеЬ А1а Агд Рго Нчз Рго Тгр Тгр Ьеи Суз Уа1 Ьеи О1у ТЬг Ьеи Уа1
1 5 10 15
О1у Ьеи Зег А1а ТЬг Рго А1а Рго Ьуз Зег Суз Рго О1и Агд Нчз Туг
20 25 30
Тгр А1а О1п О1у Ьуз Ьеи Суз Суз О1п МеЬ Суз О1и Рго О1у ТЬг РЬе
35 40 45
Ьеи Уа1 Ьуз Азр Суз Азр О1п Нчз Агд Ьуз А1а А1а О1п Суз Азр Рго
50 55 60
Суз 11е Рго О1у Уа1 Зег РЬе Зег Рго Азр Нчз Нчз ТЬг Агд Рго Нчз
65 70 75 80
Суз О1и Зег Суз Агд Нчз Суз Азп Зег О1у Ьеи Ьеи Уа1 Агд Азп Суз
85 90 95
ТЬг 11е ТЬг А1а Азп А1а О1и Суз А1а Суз Агд Азп О1у Тгр О1п Суз
100 105 110
Агд Азр Ьуз О1и Суз ТЬг О1и Суз Азр Рго Ьеи Рго Азп Рго Зег Ьеи
115 120 125
- 65 027900
ТЬг А1а Агд 130 Бег Бег О1п А1а 135 Ьеи Бег Рго Нтз Рго 140 О1п Рго ТЬг Нтз
Ьеи Рго Туг Уа1 Бег О1и МеЕ Ьеи О1и А1а Агд ТЬг А1а О1у Нтз МеЕ
145 150 155 160
О1п ТЬг Ьеи А1а Азр РЬе Агд О1п Ьеи Рго А1а Агд ТЬг Ьеи Бег ТЬг
165 170 175
Нтз Тгр Рго Рго О1п Агд Бег Ьеи Суз Бег Бег Азр РЬе 11е Агд 11е
180 185 190
Ьеи Уа1 11е РЬе Бег О1у МеЕ РЬе Ьеи Уа1 РЬе ТЬг Ьеи А1а О1у А1а
195 200 205
Ьеи РЬе Ьеи Нтз О1п Агд Агд Ьуз Туг
210 215
<210> 3 <211> 1350 <212> ДНК <213> Ното зартепз <220>
<221> ттзс_ЕеаЕиге <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая тяжелую цепь АЫ <400> 3
садаЕдсадс ЕдсаддадЕс дддсссадда сЕддЕдаадс ссЕсасадас ссЕдЕсссЕс 60
ассЕдсасЕд ЕсЕсЕдаЕдд сЕссаЕсаЕс адЕддЕдЕЕЕ асЕасЕддад сЕддаЕссдс 120
садсасссад ддаадддссЕ ддадЕддаЕЕ ддаЕасаЕсЕ аЕЕасадЕдд дадсассЕсс 180
ЕасаасссдЕ сссЕсаадад ЕсдасЕЕасс аЕдЕсадЕад асасдЕсЕаа даассадЕЕс 240
ЕсссЕдаадс ЕдадсЕсЕдЕ дасЕдссдсд дасасддссд ЕдЕаЕЕасЕд ЕдсдаддадЕ 300
ддаЕасадсЕ аЕдсссЕсЕЕ ЕдасЕасЕдд ддссадддаа сссЕддЕсас сдЕсЕссЕса 360
дсЕадсасса адддсссаЕс сдЕсЕЕсссс сЕддсасссЕ ссЕссаадад сассЕсЕддд 420
ддсасадсдд сссЕдддсЕд ссЕддЕсаад дасЕасЕЕсс ссдаассддЕ дасддЕдЕсд 480
ЕддаасЕсад дсдсссЕдас садсддсдЕд сасассЕЕсс сддсЕдЕссЕ асадЕссЕса 540
ддасЕсЕасЕ сссЕсадсад сдЕддЕдасс дЕдсссЕсса дсадсЕЕддд сасссадасс 600
ЕасаЕсЕдса асдЕдааЕса саадсссадс аасассаадд Еддасаадад адЕЕдадссс 660
аааЕсЕЕдЕд асаааасЕса сасаЕдссса ссдЕдсссад сассЕдаасЕ ссЕдддддда 720
ссдЕсадЕсЕ ЕссЕсЕЕссс сссаааассс ааддасассс ЕсаЕдаЕсЕс ссддассссЕ 780
- 66 027900
даддЕсасаЕ дсдЕддЕддЕ ддасдЕдадс сасдаадасс сЕдаддЕсаа дЕЕсаасЕдд 840
ЕасдЕддасд дсдЕддаддЕ дсаЕааЕдсс аадасааадс сдсдддадда дсадЕасаас 900
адсасдЕасс дЕдЕддЕсад сдЕссЕсасс дЕссЕдсасс аддасЕддсЕ дааЕддсаад 960
дадЕасаадЕ дсааддЕсЕс саасааадсс сЕсссадссс ссаЕсдадаа аассаЕсЕсс 1020
ааадссааад ддсадссссд адаассасад дЕдЕасассс ЕдсссссаЕс ссдддаддад 1080
аЕдассаада ассаддЕсад ссЕдассЕдс сЕддЕсааад дсЕЕсЕаЕсс садсдасаЕс 1140
дссдЕддадЕ дддададсаа Едддсадссд дадаасаасЕ асаадассас дссЕсссдЕд 1200
сЕддасЕссд асддсЕссЕЕ сЕЕссЕсЕаЕ адсаадсЕса ссдЕддасаа дадсаддЕдд 1260
садсадддда асдЕсЕЕсЕс аЕдсЕссдЕд аЕдсаЕдадд сЕсЕдсасаа ссасЕасасд 1320
садаададсс ЕсЕсссЕдЕс ЕссдддЕааа 1350
<210> 4 <211> 1350 <212> ДНК <213> Ното заряепз <220>
<221> т1зс_ЕеаЕиге <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая тяжелую цепь АЬ2 <400> 4
саддЕдсадс ЕдсаддадЕс дддсссадда сЕддЕдаадс сЕЕсасадас ссЕдЕсссЕс 60
ассЕдсасЕд ЕсЕсЕддЕда сЕссаЕсаЕс адЕддЕддЕЕ асЕасЕддад сЕддаЕссдс 120
садсасссад ддаадддссЕ ддадЕддаЕЕ дддЕасаЕсЕ ЕЕЕасадЕдд дадсассдас 180
ЕасаасссдЕ сссЕсаадад ЕсдадЕЕасс аЕаЕсадЕад асасдЕсЕаа даассадЕЕс 240
ЕсссЕдаадс ЕдадсЕсЕдЕ дасЕдссдсд дасасддссд ЕаЕаЕЕасЕд ЕдсдаддадЕ 300
ддаЕасадсЕ аЕдсссЕсЕЕ ЕдассасЕдд ддссадддаа сссЕддЕсас сдЕсЕссЕса 360
дсЕадсасса адддсссаЕс сдЕсЕЕсссс сЕддсасссЕ ссЕссаадад сассЕсЕддд 420
ддсасадсдд сссЕдддсЕд ссЕддЕсаад дасЕасЕЕсс ссдаассддЕ дасддЕдЕсд 480
ЕддаасЕсад дсдсссЕдас садсддсдЕд сасассЕЕсс сддсЕдЕссЕ асадЕссЕса 540
ддасЕсЕасЕ сссЕсадсад сдЕддЕдасс дЕдсссЕсса дсадсЕЕддд сасссадасс 600
ЕасаЕсЕдса асдЕдааЕса саадсссадс аасассаадд Еддасаадад адЕЕдадссс 660
аааЕсЕЕдЕд асаааасЕса сасаЕдссса ссдЕдсссад сассЕдаасЕ ссЕдддддда 720
ссдЕсадЕсЕ ЕссЕсЕЕссс сссаааассс ааддасассс ЕсаЕдаЕсЕс ссддассссЕ 780
даддЕсасаЕ дсдЕддЕддЕ ддасдЕдадс сасдаадасс сЕдаддЕсаа дЕЕсаасЕдд 840
ЕасдЕддасд дсдЕддаддЕ дсаЕааЕдсс аадасааадс сдсдддадда дсадЕасаас 900
адсасдЕасс дЕдЕддЕсад сдЕссЕсасс дЕссЕдсасс аддасЕддсЕ дааЕддсаад 960
- 67 027900
дадЬасаадЬ дсааддЬсЬс саасааадсс сЬсссадссс ссаЬсдадаа аассаЬсЬсс 1020
ааадссааад ддсадссссд адаассасад дЬдЬасассс ЬдсссссаЬс ссдддаддад 1080
аЬдассаада ассаддЬсад ссЬдассЬдс сЬддЬсааад дсЬЬсЬаЬсс садсдасаЬс 1140
дссдЬддадЬ дддададсаа Ьдддсадссд дадаасаасЬ асаадассас дссЬсссдЬд 1200
сЬддасЬссд асддсЬссЬЬ сЬЬссЬсЬаЬ адсаадсЬса ссдЬддасаа дадсаддЬдд 1260
садсадддда асдЬсЬЬсЬс аЬдсЬссдЬд аЬдсаЬдадд сЬсЬдсасаа ссасЬасасд 1320
садаададсс ЬсЬсссЬдЬс ЬссдддЬааа 1350
<210> 5 <211> 1359 <212> ДНК <213> Ното заряепз <220>
<221> т1зс_£еаЬиге <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая тяжелую цепь АЬ4 <400> 5
саддЬдсадс ЬддЬддадЬс Ьдддддаддс дЬддЬссадс сЬдддаддЬс ссЬдадасЬс 60
ЬссЬдЬдсад сдЬсЬддаЬЬ сассЬЬсадЬ аасЬаЬддса ЬасасЬдддЬ ссдссаддсЬ 120
ссаддсаадд ддсЬддадЬд ддьддсадьь аЬаЬддЬаЬд аЬддаадЬаа ЬаааЬасЬаЬ 180
дсадасЬссд Ьдаадддссд аЬЬсассаЬс Ьссададаса аЬЬссаадаа сасдсЬдЬаЬ 240
сЬдсаааЬда асадссЬдад адссдаддас асддсЬдЬдЬ аЬЬасЬдЬдс дададаЬдда 300
ддаЬаЬадЬд дсЬасдаЬЬс ддддьььдас ЬасЬддддсс адддаасссЬ ддЬсассдЬс 360
ЬссЬсадсЬа дсассааддд сссаЬссдЬс ЬЬсссссЬдд сасссЬссЬс саададсасс 420
ЬсЬдддддса садсддсссЬ дддсЬдссЬд дЬсааддасЬ асЬЬссссда ассддЬдасд 480
дЬдЬсдЬдда асЬсаддсдс ссЬдассадс ддсдЬдсаса ссЬЬсссддс ЬдЬссЬасад 540
ЬссЬсаддас ЬсЬасЬсссЬ садсадсдЬд дЬдассдЬдс ссЬссадсад сЬЬдддсасс 600
садассЬаса ЬсЬдсаасдЬ дааЬсасаад сссадсааса ссааддЬдда саадааадЬЬ 660
дадсссаааЬ сЬЬдЬдасаа аасЬсасаса ЬдсссассдЬ дсссадсасс ЬдаасЬссЬд 720
дддддассдь садЬсЬЬссЬ сЬЬсссссса ааасссаадд асасссЬсаЬ даЬсЬсссдд 780
ассссЬдадд ЬсасаЬдсдЬ ддЬддЬддас дЬдадссасд аадасссЬда ддЬсаадЬЬс 840
аасЬддЬасд ЬддасддсдЬ ддаддЬдсаЬ ааЬдссаада сааадссдсд ддаддадсад 900
Ьасаасадса сдЬассдЬдЬ ддЬсадсдЬс сЬсассдЬсс Ьдсассадда сЬддсЬдааЬ 960
ддсааддадЬ асаадЬдсаа ддЬсЬссаас ааадсссЬсс садсссссаЬ сдадаааасс 1020
аЬсЬссааад ссааадддса дссссдадаа ссасаддЬдЬ асасссЬдсс сссаЬсссдд 1080
даддадаЬда ссаадаасса ддЬсадссЬд ассЬдссЬдд ЬсаааддсЬЬ сЬаЬсссадс 1140
- 68 027900
дасаЕсдссд ЕддадЕддда дадсааЕддд садссддада асаасЕасаа дассасдссЕ 1200
сссдЕдсЕдд асЕссдасдд сЕссЕЕсЕЕс сЕсЕаЕадса адсЕсассдЕ ддасаададс 1260
аддЕддсадс аддддаасдЕ сЕЕсЕсаЕдс ЕссдЕдаЕдс аЕдаддсЕсЕ дсасаассас 1320
Еасасдсада ададссЕсЕс ссЕдЕсЕссд ддЕаааЕда 1359
<210> 6 <211> 1371 <212> ДНК <213> Ното заряепз <220>
<221> т1зс_£еаЕиге <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая тяжелую цепь АЬ5 <400> 6
саддЕдсадс ЕддЕдсадЕс ЕддддсЕдад дЕдаадаадс сЕддддссЕс адЕдааддЕс 60
ЕссЕдсаадд сЕЕсЕддаЕа сассЕЕсасс адЕЕаЕдаЕа ЕсаасЕдддЕ дсдасаддсс 120
асЕддасаад ддсЕЕдадЕд даЕдддаЕдд аЕдаасссЕа асадЕддЕаа сасаддсЕаЕ 180
дсасадаадЕ Ессадддсад адЕсассаЕд ассаддааса ссЕссаЕаад сасадссЕас 240
аЕддадсЕда дсадссЕдад аЕсЕдаддас асддссдЕдЕ аЕЕасЕдЕдс дададддЕас 300
даЕЕЕЕЕдда дЕддЕЕаЕЕа сЕасЕасЕас ЕасддЕаЕдд асдЕсЕдддд ссаадддасс 360
асддЕсассд ЕсЕссЕсадс Еадсассаад ддсссаЕссд ЕсЕЕсссссЕ ддсасссЕсс 420
Ессаададса ссЕсЕддддд сасадсддсс сЕдддсЕдсс ЕддЕсаадда сЕасЕЕсссс 480
даассддЕда сддЕдЕсдЕд даасЕсаддс дсссЕдасса дсддсдЕдса сассЕЕсссд 540
дсЕдЕссЕас адЕссЕсадд асЕсЕасЕсс сЕсадсадсд ЕддЕдассдЕ дсссЕссадс 600
адсЕЕдддса сссадассЕа саЕсЕдсаас дЕдааЕсаса адсссадсаа сассааддЕд 660
дасаададад ЕЕдадсссаа аЕсЕЕдЕдас аааасЕсаса саЕдсссасс дЕдсссадса 720
ссЕдаасЕсс Еддддддасс дЕсадЕсЕЕс сЕсЕЕссссс саааасссаа ддасасссЕс 780
аЕдаЕсЕссс ддассссЕда ддЕсасаЕдс дЕддЕддЕдд асдЕдадсса сдаадасссЕ 840
даддЕсаадЕ ЕсаасЕддЕа сдЕддасддс дЕддаддЕдс аЕааЕдссаа дасааадссд 900
сдддаддадс адЕасаасад сасдЕассдЕ дЕддЕсадсд ЕссЕсассдЕ ссЕдсассад 960
дасЕддсЕда аЕддсаадда дЕасаадЕдс ааддЕсЕсса асааадсссЕ сссадссссс 1020
аЕсдадаааа ссаЕсЕссаа адссаааддд садссссдад аассасаддЕ дЕасасссЕд 1080
сссссаЕссс дддаддадаЕ дассаадаас саддЕсадсс ЕдассЕдссЕ ддЕсаааддс 1140
ЕЕсЕаЕссса дсдасаЕсдс сдЕддадЕдд дададсааЕд ддсадссдда даасаасЕас 1200
аадассасдс сЕсссдЕдсЕ ддасЕссдас ддсЕссЕЕсЕ ЕссЕсЕаЕад саадсЕсасс 1260
- 69 027900 дЕддасаада дсаддЕддса дсаддддаас дЕсЕЕсЕсаЕ дсЕссдЕдаЕ дсаЕдаддсЕ 1320 сЕдсасаасс асЕасасдса даададссЕс ЕсссЕдЕсЕс сдддЕаааЕд а 1371 <210> 7 <211> 1356 <212> ДНК <213> Ното заряепз <220>
<221> тязс_£еаЕиге <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая тяжелую цепь АЬ6 <400> 7
саддЕЕсадс ЕддЕдсадЕс ЕддадсЕдад дЕдаадаадс сЕддддссЕс адЕдааддЕс 60
ЕссЕдсаадд сЕЕсЕддЕЕа сассЕЕЕасс адсЕаЕддЕа ЕсадсЕдддЕ дсдасаддсс 120
ссЕддасаад ддсЕЕдадЕд даЕдддаЕдд аЕсадсдсЕЕ асааЕддЕЕа сасасасЕаЕ 180
дсасадаадс Ессадддсад адЕсассаЕд ассасадаса саЕссасдад сасадссЕас 240
аЕддадсЕда ддадссЕдад аЕсЕдасдас асддссдЕдЕ аЕЕасЕдЕдс дададасЕас 300
ддЕддЕаасд асЕасЕасдд ЕаЕддасдЕс Еддддссаад ддассасддЕ сассдЕсЕсс 360
ЕсадсЕадса ссаадддссс аЕссдЕсЕЕс ссссЕддсас ссЕссЕссаа дадсассЕсЕ 420
дддддсасад сддсссЕддд сЕдссЕддЕс ааддасЕасЕ Ессссдаасс ддЕдасддЕд 480
ЕсдЕддаасЕ саддсдсссЕ дассадсддс дЕдсасассЕ ЕсссддсЕдЕ ссЕасадЕсс 540
ЕсаддасЕсЕ асЕсссЕсад садсдЕддЕд ассдЕдсссЕ ссадсадсЕЕ дддсасссад 600
ассЕасаЕсЕ дсаасдЕдаа Есасаадссс адсаасасса аддЕддасаа дададЕЕдад 660
сссаааЕсЕЕ дЕдасаааас ЕсасасаЕдс ссассдЕдсс садсассЕда асЕссЕдддд 720
ддассдЕсад ЕсЕЕссЕсЕЕ ссссссаааа сссааддаса сссЕсаЕдаЕ сЕсссддасс 780
ссЕдаддЕса саЕдсдЕддЕ ддЕддасдЕд адссасдаад асссЕдаддЕ саадЕЕсаас 840
ЕддЕасдЕдд асддсдЕдда ддЕдсаЕааЕ дссаадасаа адссдсддда ддадсадЕас 900
аасадсасдЕ ассдЕдЕддЕ садсдЕссЕс ассдЕссЕдс ассаддасЕд дсЕдааЕддс 960
ааддадЕаса адЕдсааддЕ сЕссаасааа дсссЕсссад сссссаЕсда даааассаЕс 1020
Ессааадсса аадддсадсс ссдадаасса саддЕдЕаса сссЕдссссс аЕсссдддад 1080
дадаЕдасса адаассаддЕ садссЕдасс ЕдссЕддЕса ааддсЕЕсЕа Есссадсдас 1140
аЕсдссдЕдд адЕдддадад сааЕдддсад ссддадааса асЕасаадас сасдссЕссс 1200
дЕдсЕддасЕ ссдасддсЕс сЕЕсЕЕссЕс ЕаЕадсаадс ЕсассдЕдда саададсадд 1260
Еддсадсадд ддаасдЕсЕЕ сЕсаЕдсЕсс дЕдаЕдсаЕд аддсЕсЕдса саассасЕас 1320
асдсадаада дссЕсЕсссЕ дЕсЕссдддЕ аааЕда 1356
- 70 027900 <210> 8 <211> 1350 <212> ДНК <213> Ното зартепз <220>
<221> ттзс_£еаЕиге <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая тяжелую цепь АЬ7 <400> 8
саддЕдсадс ЕддЕддадЕс Едддддаддс дЕддЕссадс сЕдддаддЕс ссЕдадасЕс 60
ЕссЕдЕдсад сдЕсЕддаЕЕ сассЕЕсадЕ ассЕаЕддса ЕдсасЕдддЕ ссдссаддсЕ 120
ссаддсаадд ддсЕддадЕд ддЕддсадЕЕ аЕаЕддЕаЕд аЕддаадЕаа ЕаааЕасЕаЕ 180
ддадасЕссд Едаадддссд аЕЕсассаЕс Ессададаса аЕЕссаадаа сасдсЕдЕаЕ 240
сЕдсаааЕда асадссЕдад адссдаддас асддсЕдЕдЕ аЕЕасЕдЕдс дададаЕаас 300
адЕсасЕасЕ асЕасддЕаЕ ддасдЕсЕдд ддссааддда ссасддЕсас сдЕсЕссЕса 360
дсЕадсасса адддсссаЕс сдЕсЕЕсссс сЕддсасссЕ ссЕссаадад сассЕсЕддд 420
ддсасадсдд сссЕдддсЕд ссЕддЕсаад дасЕасЕЕсс ссдаассддЕ дасддЕдЕсд 480
ЕддаасЕсад дсдсссЕдас садсддсдЕд сасассЕЕсс сддсЕдЕссЕ асадЕссЕса 540
ддасЕсЕасЕ сссЕсадсад сдЕддЕдасс дЕдсссЕсса дсадсЕЕддд сасссадасс 600
ЕасаЕсЕдса асдЕдааЕса саадсссадс аасассаадд Еддасаадад адЕЕдадссс 660
аааЕсЕЕдЕд асаааасЕса сасаЕдссса ссдЕдсссад сассЕдаасЕ ссЕдддддда 720
ссдЕсадЕсЕ ЕссЕсЕЕссс сссаааассс ааддасассс ЕсаЕдаЕсЕс ссддассссЕ 780
даддЕсасаЕ дсдЕддЕддЕ ддасдЕдадс сасдаадасс сЕдаддЕсаа дЕЕсаасЕдд 840
ЕасдЕддасд дсдЕддаддЕ дсаЕааЕдсс аадасааадс сдсдддадда дсадЕасаас 900
адсасдЕасс дЕдЕддЕсад сдЕссЕсасс дЕссЕдсасс аддасЕддсЕ дааЕддсаад 960
дадЕасаадЕ дсааддЕсЕс саасааадсс сЕсссадссс ссаЕсдадаа аассаЕсЕсс 1020
ааадссааад ддсадссссд адаассасад дЕдЕасассс ЕдсссссаЕс ссдддаддад 1080
аЕдассаада ассаддЕсад ссЕдассЕдс сЕддЕсааад дсЕЕсЕаЕсс садсдасаЕс 1140
дссдЕддадЕ дддададсаа Едддсадссд дадаасаасЕ асаадассас дссЕсссдЕд 1200
сЕддасЕссд асддсЕссЕЕ сЕЕссЕсЕаЕ адсаадсЕса ссдЕддасаа дадсаддЕдд 1260
садсадддда асдЕсЕЕсЕс аЕдсЕссдЕд аЕдсаЕдадд сЕсЕдсасаа ссасЕасасд 1320
садаададсс ЕсЕсссЕдЕс ЕссдддЕааа 1350
<210> 9 <211> 1356 <212> ДНК <213> Ното зартепз
- 71 027900
<220>
<221> т1зс_беабиге <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая тяжелую цепь АЬ8 <400> 9 саддбдсадс бддбддадбс бдддддаддс дбддбссадс сбдддаддбс ссбдадасбс 60
бссбдбдсад сдбсбддабб сассббсадб адсбабддса бдсасбдддб ссдссаддсб 120
ссаддсаадд ддсбддадбд ддбддсадбб абабддбабд абддаадбда бааабасббб 180
дсадасбссд бдаадддссд аббсассабс бссададаса аббссаадаа сасдсбдбаб 240
сбдсааабда асадссбдад адссдаддас асддсбдбдб аббасбдбдс дададабддд 300
абадсаддад сбсдсбасдб сбасбббдас басбддддсс адддаасссб ддбсассдбс 360
бссбсадсба дсассааддд сссабссдбс ббсссссбдд сасссбссбс саададсасс 420
бсбдддддса садсддсссб дддсбдссбд дбсааддасб асббссссда ассддбдасд 480
дбдбсдбдда асбсаддсдс ссбдассадс ддсдбдсаса ссббсссддс бдбссбасад 540
бссбсаддас бсбасбсссб садсадсдбд дбдассдбдс ссбссадсад сббдддсасс 600
садассбаса бсбдсаасдб даабсасаад сссадсааса ссааддбдда саадааадбб 660
дадсссаааб сббдбдасаа аасбсасаса бдсссассдб дсссадсасс бдаасбссбд 720
дддддассдб садбсббссб сббсссссса ааасссаадд асасссбсаб дабсбсссдд 780
ассссбдадд бсасабдсдб ддбддбддас дбдадссасд аадасссбда ддбсаадббс 840
аасбддбасд бддасддсдб ддаддбдсаб аабдссаада сааадссдсд ддаддадсад 900
басаасадса сдбассдбдб ддбсадсдбс сбсассдбсс бдсассадда сбддсбдааб 960
ддсааддадб асаадбдсаа ддбсбссаас ааадсссбсс садсссссаб сдадаааасс 1020
абсбссааад ссааадддса дссссдадаа ссасаддбдб асасссбдсс сссабсссдд 1080
даддадабда ссаадаасса ддбсадссбд ассбдссбдд бсаааддсбб сбабсссадс 1140
дасабсдссд бддадбддда дадсаабддд садссддада асаасбасаа дассасдссб 1200
сссдбдсбдд асбссдасдд сбссббсббс сбсбабадса адсбсассдб ддасаададс 1260
аддбддсадс аддддаасдб сббсбсабдс бссдбдабдс абдаддсбсб дсасаассас 1320
басасдсада ададссбсбс ссбдбсбссд ддбааа 1356
<210> 10 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз
<220>
<221> М13С_БЕАТиКЕ
<223> Аминокислотная последовательность тяжелой цепи АЫ
<400> 10
- 72 027900
О1п 1 МеЕ О1п Ьеи О1п О1и 5 Зег О1у Рго О1у 10 Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег 15 С1п
ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Зег Азр О1у Зег 11е 11е Зег О1у
20 25 30
Уа1 Туг Туг Тгр Зег Тгр 11е Агд С1п Н1з Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и
35 40 45
Тгр 11е С1у Туг 11е Туг Туг Зег О1у Зег ТЬг Зег Туг Азп Рго Зег
50 55 60
Ьеи Ьуз Зег Агд Ьеи ТЬг МеЕ Зег Уа1 Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе
65 70 75 80
Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Зег Уа1 ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг
85 90 95
Суз А1а Агд Зег С1у Туг Зег Туг А1а Ьеи РЬе Азр Туг Тгр О1у С1п
100 105 110
О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз О1у Рго Зег Уа1
115 120 125
РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег О1у О1у ТЬг А1а А1а
130 135 140
Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег
145 150 155 160
Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег О1у Уа1 Н1з ТЬг РЬе Рго А1а Уа1
165 170 175
Ьеи О1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго
180 185 190
Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Н1з Ьуз
195 200 205
Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 О1и Рго Ьуз Зег Суз Азр
210 215 220
Ьуз ТЬг Н1з ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго О1и Ьеи Ьеи О1у О1у
225 230 235 240
Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЕ 11е
245 250 255
- 73 027900
Бег Агд ТЬг Рго 260 О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 265 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Бег 270 Няз О1и
Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Няз
275 280 285
Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п Туг Азп Бег ТЬг Туг Агд
290 295 300
Уа1 Уа1 Бег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Няз О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз
305 310 315 320
О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Бег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и
325 330 335
Ьуз ТЬг 11е Бег Ьуз А1а Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг
340 345 350
ТЬг Ьеи Рго Рго Бег Агд О1и О1и МеЕ ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Бег Ьеи
355 360 365
ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг Рго Бег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр
370 375 380
О1и Бег Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1
385 390 395 400
Ьеи Азр Бег Азр О1у Бег РЬе РЬе Ьеи Туг Бег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр
405 410 415
Ьуз Бег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЬе Бег Суз Бег Уа1 МеЕ Няз
420 425 430
О1и А1а Ьеи Няз Азп Няз Туг ТЬг О1п Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи Бег Рго
435 440 445
О1у Ьуз 450 <210> 11 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз <220>
<221> М1БС_ЕЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность тяжелой цепи АЬ2
- 74 027900 <400> 11
О1п 1 Уа1 О1п Ьеи О1п О1и 5 Бег О1у Рго О1у 10 Ьеи Уа1 Ьуз Рго Бег 15 О1п
ТЬг Ьеи Бег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Бег О1у Азр Бег 11е 11е Бег О1у
20 25 30
О1у Туг Туг Тгр Бег Тгр 11е Агд О1п Нтз Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и
35 40 45
Тгр 11е О1у Туг 11е РЬе Туг Бег О1у Бег ТЬг Азр Туг Азп Рго Бег
50 55 60
Ьеи Ьуз Бег Агд Уа1 ТЬг 11е Бег Уа1 Азр ТЬг Бег Ьуз Азп О1п РЬе
65 70 75 80
Бег Ьеи Ьуз Ьеи Бег Бег Уа1 ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг
85 90 95
Суз А1а Агд Бег О1у Туг Бег Туг А1а Ьеи РЬе Азр Нтз Тгр О1у О1п
100 105 110
О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег А1а Бег ТЬг Ьуз О1у Рго Бег Уа1
115 120 125
РЬе Рго Ьеи А1а Рго Бег Бег Ьуз Бег ТЬг Бег О1у О1у ТЬг А1а А1а
130 135 140
Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Бег
145 150 155 160
Тгр Азп Бег О1у А1а Ьеи ТЬг Бег О1у Уа1 Нтз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1
165 170 175
Ьеи О1п Бег Бег О1у Ьеи Туг Бег Ьеи Бег Бег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго
180 185 190
Бег Бег Бег Ьеи О1у ТЬг О1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Нтз Ьуз
195 200 205
Рго Бег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 О1и Рго Ьуз Бег Суз Азр
210 215 220
Ьуз ТЬг Нтз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго О1и Ьеи Ьеи О1у О1у
225 230 235 240
- 75 027900
Рго Зег Уа1 РЬе Ьей 245 РЬе Рго Рго Ьуз Рго 250 Ьуз Азр ТЬг Ьей Меб 255 11е
Зег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Нтз О1и
260 265 270
Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Нтз
275 280 285
Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд
290 295 300
Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьей ТЬг Уа1 Ьей Нтз О1п Азр Тгр Ьей Азп О1у Ьуз
305 310 315 320
О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьей Рго А1а Рго 11е О1и
325 330 335
Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг
340 345 350
ТЬг Ьей Рго Рго Зег Агд О1и О1и Меб ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьей
355 360 365
ТЬг Суз Ьей Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр
370 375 380
О1и Зег Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1
385 390 395 400
Ьей Азр Зег Азр О1у Зег РЬе РЬе Ьей Туг Зег Ьуз Ьей ТЬг Уа1 Азр
405 410 415
Ьуз Зег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 Меб Нтз
420 425 430
О1и А1а Ьей Нтз Азп Нтз Туг ТЬг О1п Ьуз Зег Ьей Зег Ьей Зег Рго
435 440 445
О1у Ьуз 450 <210> 12 <211> 452 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
- 76 027900 <221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность тяжелой цепи АЬ4 <400> 12
О1п 1 Уа1 О1п Ьеи Уа1 5 О1и Зег О1у О1у О1у 10 Уа1 Уа1 О1п Рго О1у 15 Агд
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Зег Азп Туг
20 25 30
О1у 11е Н1з Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Уа1 11е Тгр Туг Азр О1у Зег Азп Ьуз Туг Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр О1у О1у Туг Зег О1у Туг Азр Зег О1у РЬе Азр Туг Тгр
100 105 110
О1у О1п О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз О1у Рго
115 120 125
Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег О1у О1у ТЬг
130 135 140
А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг
145 150 155 160
Уа1 Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег О1у Уа1 Н1з ТЬг РЬе Рго
165 170 175
А1а Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг
180 185 190
Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи О1у ТЬг О1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп
195 200 205
Н1з Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 О1и Рго Ьуз Зег
210 215 220
Суз Азр Ьуз ТЬг Нтз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго О1и Ьеи Ьеи
225 230 235 240
- 77 027900
О1у О1у Рго Зег Уа1 245 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго 250 Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг 255 Ьеи
МеЬ 11е Зег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег
260 265 270
Н1з О1и Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и
275 280 285
Уа1 Н1з Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п Туг Азп Зег ТЬг
290 295 300
Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Нгз О1п Азр Тгр Ьеи Азп
305 310 315 320
О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго
325 330 335
11е О1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п
340 345 350
Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд О1и О1и МеЬ ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1
355 360 365
Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1
370 375 380
О1и Тгр О1и Зег Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго
385 390 395 400
Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр О1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг
405 410 415
Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1
420 425 430
МеЬ Нгз О1и А1а Ьеи Нгз Азп Нгз Туг ТЬг О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи
435 440 445
Зег Рго О1у Ьуз 450 <210> 13 <211> 456 <212> БЕЛОК <213> Ното заргепз
- 78 027900 <220>
<221> М1БС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность тяжелой цепи АЬ5 <400> 13
О1п 1 Уа1 О1п Ьеи Уа1 5 О1п Бег О1у А1а О1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у 15 А1а
Бег Уа1 Ьуз Уа1 Бег Суз Ьуз А1а Бег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Бег Туг
20 25 30
Азр 11е Азп Тгр Уа1 Агд О1п А1а ТЬг О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЕ
35 40 45
О1у Тгр МеЕ Азп Рго Азп Бег О1у Азп ТЬг О1у Туг А1а О1п Ьуз РЬе
50 55 60
О1п О1у Агд Уа1 ТЬг МеЕ ТЬг Агд Азп ТЬг Бег 11е Бег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЕ О1и Ьеи Бег Бег Ьеи Агд Бег О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд О1у Туг Азр РЬе Тгр Бег О1у Туг Туг Туг Туг Туг Туг О1у
100 105 110
МеЕ Азр Уа1 Тгр О1у О1п О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег А1а Бег
115 120 125
ТЬг Ьуз О1у Рго Бег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Бег Бег Ьуз Бег ТЬг
130 135 140
Бег О1у О1у ТЬг А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго
145 150 155 160
О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Бег Тгр Азп Бег О1у А1а Ьеи ТЬг Бег О1у Уа1
165 170 175
Няз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи О1п Бег Бег О1у Ьеи Туг Бег Ьеи Бег
180 185 190
Бег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго Бег Бег Бег Ьеи О1у ТЬг О1п ТЬг Туг 11е
195 200 205
Суз Азп Уа1 Азп Няз Ьуз Рго Бег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1
210 215 220
- 79 027900
О1и 225 Рго Ьуз Бег Суз Азр 230 Ьуз ТЬг Нтз ТЬг Суз 235 Рго Рго Суз Рго А1а 240
Рго О1и Ьеи Ьеи О1у О1у Рго Бег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго
245 250 255
Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЕ 11е Бег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1
260 265 270
Уа1 Азр Уа1 Бег Нтз О1и Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1
275 280 285
Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Нтз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п
290 295 300
Туг Азп Бег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Бег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Нтз О1п
305 310 315 320
Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Бег Азп Ьуз А1а
325 330 335
Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЬг 11е Бег Ьуз А1а Ьуз О1у О1п Рго
340 345 350
Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Бег Агд О1и О1и МеЕ ТЬг
355 360 365
Ьуз Азп О1п Уа1 Бег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг Рго Бег
370 375 380
Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Бег Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг
385 390 395 400
Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Бег Азр О1у Бег РЬе РЬе Ьеи Туг
405 410 415
Бег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Бег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЬе
420 425 430
Бег Суз Бег Уа1 МеЕ Нтз О1и А1а Ьеи Нтз Азп Нтз Туг ТЬг О1п Ьуз
435 440 445
Бег Ьеи Бег Ьеи Бег Рго О1у Ьуз
450 455
<210> 14 <211> 451 <212> БЕЛОК
- 80 027900 <213> Ното заряепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность тяжелой цепи АЬ6 <400> 14
О1п 1 Уа1 О1п Ьеи Уа1 5 О1п Зег О1у А1а О1и Уа1 10 Ьуз Ьуз Рго О1у 15 А1а
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Зег Туг
20 25 30
О1у 11е Зег Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЕ
35 40 45
О1у Тгр 11е Зег А1а Туг Азп О1у Туг ТЬг Няз Туг А1а О1п Ьуз Ьеи
50 55 60
О1п О1у Агд Уа1 ТЬг МеЕ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЕ О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Туг О1у О1у Азп Азр Туг Туг О1у МеЕ Азр Уа1 Тгр О1у
100 105 110
О1п О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз О1у Рго Зег
115 120 125
Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег О1у О1у ТЬг А1а
130 135 140
А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1
145 150 155 160
Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег О1у Уа1 Няз ТЬг РЬе Рго А1а
165 170 175
Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1
180 185 190
Рго Зег Зег Зег Ьеи О1у ТЬг О1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Няз
195 200 205
Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 О1и Рго Ьуз Зег Суз
210 215 220
- 81 027900
Азр 225 Ьуз ТЬг Нтз ТЬг Суз 230 Рго Рго Суз Рго А1а 235 Рго О1и Ьей Ьей О1у 240
О1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьей РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьей Меб
245 250 255
11е Зег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Нтз
260 265 270
О1и Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1
275 280 285
Нтз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п Туг Азп Зег ТЬг Туг
290 295 300
Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьей ТЬг Уа1 Ьей Нтз О1п Азр Тгр Ьей Азп О1у
305 310 315 320
Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьей Рго А1а Рго 11е
325 330 335
О1и Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1
340 345 350
Туг ТЬг Ьей Рго Рго Зег Агд О1и О1и Меб ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег
355 360 365
Ьей ТЬг Суз Ьей Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и
370 375 380
Тгр О1и Зег Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго
385 390 395 400
Уа1 Ьей Азр Зег Азр О1у Зег РЬе РЬе Ьей Туг Зег Ьуз Ьей ТЬг Уа1
405 410 415
Азр Ьуз Зег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 Меб
420 425 430
Нтз О1и А1а Ьей Нтз Азп Нтз Туг ТЬг О1п Ьуз Зег Ьей Зег Ьей Зег
435 440 445
Рго О1у Ьуз 450 <210> 15
- 82 027900 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Ното зарчепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность тяжелой цепи АЬ7 <400> 15
О1п Уа1 1 О1п Ьеи Уа1 5 О1и Зег О1у О1у О1у 10 Уа1 Уа1 О1п Рго О1у 15 Агд
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Зег ТЬг Туг
20 25 30
О1у МеЬ Н1з Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Уа1 11е Тгр Туг Азр О1у Зег Азп Ьуз Туг Туг О1у Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Азп Зег Н1з Туг Туг Туг О1у МеЬ Азр Уа1 Тгр О1у О1п
100 105 110
О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз О1у Рго Зег Уа1
115 120 125
РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег О1у О1у ТЬг А1а А1а
130 135 140
Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег
145 150 155 160
Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег О1у Уа1 Н1з ТЬг РЬе Рго А1а Уа1
165 170 175
Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго
180 185 190
Зег Зег Зег Ьеи О1у ТЬг О1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Нтз Ьуз
195 200 205
- 8З 027900
Рго Зег 210 Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр 215 Ьуз Агд Уа1 О1и Рго 220 Ьуз Зег Суз Азр
Ьуз ТЬг Нгз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго О1и Ьеи Ьеи О1у О1у
225 230 235 240
Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е
245 250 255
Зег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Нгз О1и
260 265 270
Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Нгз
275 280 285
Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд
290 295 300
Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Нгз О1п Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз
305 310 315 320
О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и
325 330 335
Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п Уа1 Туг
340 345 350
ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд О1и О1и МеЬ ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи
355 360 365
ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр
370 375 380
О1и Зег Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1
385 390 395 400
Ьеи Азр Зег Азр О1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр
405 410 415
Ьуз Зег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Нгз
420 425 430
О1и А1а Ьеи Нгз Азп Нгз Туг ТЬг О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго
435 440 445
О1у Ьуз 450
- 84 027900 <210> 16 <211> 452 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз <220>
<221> М1БС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность тяжелой цепи АЬ8 <400> 16
О1п 1 Уа1 О1п Ьеи Уа1 5 О1и Бег О1у
Бег Ьеи Агд Ьеи 20 Бег Суз А1а А1а
О1у МеЕ Няз 35 Тгр Уа1 Агд О1п А1а 40
А1а Уа1 50 11е Тгр Туг Азр О1у 55 Бег
Ьуз 65 О1у Агд РЬе ТЬг 11е 70 Бег Агд
Ьеи О1п МеЕ Азп Бег 85 Ьеи Агд А1а
А1а Агд Азр О1у 100 11е А1а О1у А1а
О1у О1п О1у 115 ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 120
Бег Уа1 130 РЬе Рго Ьеи А1а Рго 135 Бег
А1а 145 А1а Ьеи О1у Суз Ьеи 150 Уа1 Ьуз
Уа1 Бег Тгр Азп Бег 165 О1у А1а Ьеи
А1а Уа1 Ьеи О1п 180 Бег Бег О1у Ьеи
Уа1 Рго Бег 195 Бег Бег Ьеи О1у ТЬг 200
О1у О1у 10 Уа1 Уа1 О1п Рго О1у 15 Агд
Бег 25 О1у РЬе ТЬг РЬе Бег 30 Бег Туг
Рго О1у Ьуз О1у Ьеи 45 О1и Тгр Уа1
Азр Ьуз Туг РЬе 60 А1а Азр Бег Уа1
Азр Азп Бег 75 Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг 80
О1и Азр 90 ТЬг А1а Уа1 Туг Туг 95 Суз
Агд 105 Туг Уа1 Туг РЬе Азр 110 Туг Тгр
Бег Бег А1а Бег ТЬг 125 Ьуз О1у Рго
Бег Ьуз Бег ТЬг 140 Бег О1у О1у ТЬг
Азр Туг РЬе 155 Рго О1и Рго Уа1 ТЬг 160
ТЬг Бег 170 О1у Уа1 Няз ТЬг РЬе 175 Рго
Туг 185 Бег Ьеи Бег Бег Уа1 190 Уа1 ТЬг
О1п ТЬг Туг 11е Суз 205 Азп Уа1 Азп
- 85 027900
Нтз Ьуз 210 Рго Бег Азп ТЬг Ьуз 215 Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 220 О1и Рго Ьуз Бег
Суз Азр Ьуз ТЬг Нтз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго О1и Ьеи Ьеи
225 230 235 240
О1у О1у Рго Бег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи
245 250 255
МеЕ 11е Бег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Бег
260 265 270
Нтз О1и Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и
275 280 285
Уа1 Нтз Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п Туг Азп Бег ТЬг
290 295 300
Туг Агд Уа1 Уа1 Бег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Нтз О1п Азр Тгр Ьеи Азп
305 310 315 320
О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Бег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго
325 330 335
11е О1и Ьуз ТЬг 11е Бег Ьуз А1а Ьуз О1у О1п Рго Агд О1и Рго О1п
340 345 350
Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Бег Агд О1и О1и МеЕ ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1
355 360 365
Бег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг Рго Бег Азр 11е А1а Уа1
370 375 380
О1и Тгр О1и Бег Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго
385 390 395 400
Рго Уа1 Ьеи Азр Бег Азр О1у Бег РЬе РЬе Ьеи Туг Бег Ьуз Ьеи ТЬг
405 410 415
Уа1 Азр Ьуз Бег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЬе Бег Суз Бег Уа1
420 425 430
МеЕ Нтз О1и А1а Ьеи Нтз Азп Нтз Туг ТЬг О1п Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи
435 440 445
Бег Рго О1у Ьуз
- 86 027900
450 <210> 17 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Ното зар1епз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЫ <400> 17
О1п 1 Меб О1п Ьей О1п 5 О1и Зег О1у Рго О1у 10 Ьей Уа1 Ьуз Рго Зег 15 О1п
ТЬг Ьей Зег Ьей ТЬг Суз ТЬг Уа1 Зег Азр О1у Зег 11е 11е Зег О1у
20 25 30
Уа1 Туг Туг Тгр Зег Тгр 11е Агд О1п Н1з Рго О1у Ьуз О1у Ьей О1и
35 40 45
Тгр 11е О1у Туг 11е Туг Туг Зег О1у Зег ТЬг Зег Туг Азп Рго Зег
50 55 60
Ьей Ьуз Зег Агд Ьей ТЬг Меб Зег Уа1 Азр ТЬг Зег Ьуз Азп О1п РЬе
65 70 75 80
Зег Ьей Ьуз Ьей Зег Зег Уа1 ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг
85 90 95
Суз А1а Агд Зег О1у Туг Зег Туг А1а Ьей РЬе Азр Туг Тгр О1у О1п
100 105 110
О1у ТЬг Ьей Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 18 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Ното зар1епз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ2 <400> 18
О1п Уа1 О1п Ьей О1п О1и Зег О1у Рго О1у Ьей Уа1 Ьуз Рго Зег О1п 1 5 10 15
- 87 027900
ТЬг Ьеи Зег Ьеи 20 ТЪг Суз ТЪг Уа1 Зег 25 О1у Азр Зег 11е 11е 30 Зег О1у
О1у Туг Туг Тгр Зег Тгр 11е Агд О1п Няз Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и
35 40 45
Тгр 11е О1у Туг 11е РЬе Туг Зег О1у Зег ТЪг Азр Туг Азп Рго Зег
50 55 60
Ьеи Ьуз Зег Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Уа1 Азр ТЪг Зег Ьуз Азп О1п РЪе
65 70 75 80
Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Зег Уа1 ТЪг А1а А1а Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг
85 90 95
Суз А1а Агд Зег О1у Туг Зег Туг А1а Ьеи РЪе Азр Няз Тгр О1у О1п
100 105 110
О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 19 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз <220>
<221> М1ЗС_БЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ3 <400> 19
О1и 1 Уа1 О1п Ьеи Ьеи 5 О1и Зег О1у О1у О1у Ьеи 10 Уа1 О1п Рго О1у 15 О1у
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЪе ТЪг РЪе Зег Зег Туг
20 25 30
А1а МеЕ Зег Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
Зег Уа1 11е Зег Азр Зег О1у О1у ТЪг ТЪг Азр Туг А1а Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЪг Ьеи Туг
65 70 75 80
- 88 027900
Ьеи О1п Меб Азп Бег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Н1з Азр Туг Бег Азп Агд Туг Туг РЬе Азр Туг Тгр О1у О1п
100 105 110
О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 20 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз <220>
<221> М1БС_ЕЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ4 <400> 20
о1п να1 1 О1п Ьеи Уа1 5 О1и Бег О1у О1у О1у Уа1 10 Уа1 О1п Рго О1у 15 Агд
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз А1а А1а Бег О1у РЬе ТЬг РЬе Бег Азп Туг
20 25 30
С1у 11е Няз Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Уа1 11е Тгр Туг Азр О1у Бег Азп Ьуз Туг Туг А1а Азр Бег Уа1
50 55 60
Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп Бег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п Меб Азп Бег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр О1у О1у Туг Бег О1у Туг Азр Бег О1у РЬе Азр Туг Тгр
100 105 110
С1у О1п С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 21 <211> 126 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз
- 89 027900 <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ3 <400> 21
О1п 1 Уа1 О1п Ьеи Уа1 5 О1п Зег О1у А1а О1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у 15 А1а
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Зег Туг
20 25 30
Азр 11е Азп Тгр Уа1 Агд О1п А1а ТЬг О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЬ
35 40 45
О1у Тгр МеЬ Азп Рго Азп Зег О1у Азп ТЬг О1у Туг А1а О1п Ьуз РЬе
50 55 60
О1п О1у Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг Агд Азп ТЬг Зег 11е Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ О1и Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд О1у Туг Азр РЬе Тгр Зег О1у Туг Туг Туг Туг Туг Туг О1у
100 105 110
МеЬ Азр Уа1 Тгр О1у О1п О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120 125
<210> 22 <211> 121 <212> БЕЛОК <213> Ното зарчепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ6 <400> 22
О1п 1 Уа1 О1п Ьеи Уа1 5 О1п Зег О1у А1а О1и 10 Уа1 Ьуз Ьуз Рго О1у 15 А1а
Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег О1у Туг ТЬг РЬе ТЬг Зег Туг
20 25 30
О1у 11е Зег Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр МеЬ
35 40 45
- 90 027900
О1у Тгр 50 11е Зег А1а Туг Азп О1у Туг ТЬг Няз 55 Туг 60 А1а О1п Ьуз Ьеи
О1п О1у Агд Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
МеЬ О1и Ьеи Агд Зег Ьеи Агд Зег Азр Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Туг О1у О1у Азп Азр Туг Туг О1у МеЬ Азр Уа1 Тгр О1у
100 105 110
О1п О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 23 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ7 <400> 23
О1п Уа1 1 О1п Ьеи Уа1 5 О1и Зег О1у О1у О1у Уа1 10 Уа1 О1п Рго О1у 15 Агд
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЬе ТЬг РЬе Зег ТЬг Туг
20 25 30
О1у МеЬ Няз Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Уа1 11е Тгр Туг Азр О1у Зег Азп Ьуз Туг Туг О1у Азр Зег Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр Азп Зег Няз Туг Туг Туг О1у МеЬ Азр Уа1 Тгр О1у О1п
100 105 110
О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
- 91 027900 <210> 24 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз <220>
<221> М1БС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ8 <400> 24
О1п Уа1 1 О1п Ьеи Уа1 5 О1и Бег О1у О1у О1у Уа1 10 Уа1 О1п Рго О1у 15 Агд
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз А1а А1а Бег О1у РЬе ТЬг РЬе Бег Бег Туг
20 25 30
О1у МеЕ Няз Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Уа1 11е Тгр Туг Азр О1у Бег Азр Ьуз Туг РЬе А1а Азр Бег Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЬе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп Бег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеЕ Азп Бег Ьеи Агд А1а О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Азр О1у 11е А1а О1у А1а Агд Туг Уа1 Туг РЬе Азр Туг Тгр
100 105 110
О1у О1п О1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 25 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз <220>
<221> М1БС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность СВЕ1 тяжелой цепи АЫ <400> 25
Бег О1у Уа1 Туг Туг Тгр Бег
5
- 92 027900
<210> <211> <212> <213> 26 7 БЕЛОК Ното зартепз
<220> <221> <223> М1ЗС_РЕАТиКЕ Аминокислотная последовательность СВЕ1 тяжелой цепи АЬ2
<400> 26
Зег О1у О1у Туг Туг Тгр Зег 1 5
<210> <211> <212> <213> 27 5 БЕЛОК Ното зартепз
<220> <221> <223> М1ЗС_РЕАТиКЕ Аминокислотная последовательность СВЕ1 тяжелой цепи АЬ3
<400> 27
Зег Туг А1а Меб Зег 1 5
<210> <211> <212> <213> 28 5 БЕЛОК Ното зартепз
<220> <221> <223> М1ЗС_РЕАТиКЕ Аминокислотная последовательность СБЕ1 тяжелой цепи АЬ4
<400> 28
Азп Туг О1у 11е Нтз 1 5
<210> <211> <212> <213> 29 5 БЕЛОК Ното зартепз
<220> <221> <223> М1ЗС_РЕАТиКЕ ЗУБШ
<400> 29
Зег Туг Азр 11е Азп
5
- 9З 027900 <210> 30 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность СВЕ1 тяжелой цепи АЪ6 <400> 30
Зег Туг О1у 11е Зег
5 <210> 31 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность СВЕ1 тяжелой цепи АЪ7 <400> 31
ТЪг Туг О1у МеЕ Няз
5 <210> 32 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ
<223> Аминокислотная последовательность СБЕ1 тяжелой цепи АЬ8
<400> 32
Зег Туг О1у МеЕ Няз
1 5
<210> 33
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Ното заряепз
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ
<223> Аминокислотная последовательность СБЕ2 тяжелой цепи АЫ
<400> 33
Туг 11е Туг Туг Зег О1у Зег ТЪг Зег Туг Азп Рго Зег Ьеи Ьуз Зег
- 94 027900
5 10 15 <210> 34 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1БС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность СВЕ2 тяжелой цепи АЬ2 <400> 34
Туг 11е РЬе Туг Бег О1у Бег ТЬг Азр Туг Азп Рго Бег Ьеи Ьуз Бег
5 10 15 <210> 35 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1БС_ЬЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность СВЕ2 тяжелой цепи АЬ3 <400> 35
Уа1 11е Бег Азр Бег О1у О1у ТЬг ТЬг Азр Туг А1а Азр Бег Уа1 Ьуз
5 10 15
О1у <210> 36 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1БС_ЬЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность СБЕ2 тяжелой цепи АЬ4 <400> 36
Уа1 11е Тгр Туг Азр О1у Бег Азп Ьуз Туг
5 10
Туг А1а Азр Бег Уа1 Ьуз 15
О1у <210> 37 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз
- 95 027900 <220>
<221> М1БС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность СВЕ2 тяжелой цепи АЬ5 <400> 37
Тгр Меб Азп Рго Азп Бег О1у Азп ТЬг О1у Туг А1а О1п Ьуз РЬе О1п 1 5 10 15
О1у <210> 38 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1БС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность СВЕ2 тяжелой цепи АЬ6 <400> 38
Тгр 11е Бег А1а Туг Азп О1у Туг ТЬг Нтз Туг А1а О1п Ьуз Ьеи О1п 1 5 10 15
О1у <210> 39 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1БС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность СБЕ2 тяжелой цепи АЬ7 <400> 39
Уа1 11е Тгр Туг Азр О1у Бег Азп Ьуз Туг Туг О1у Азр Бег Уа1 Ьуз 1 5 10 15
О1у <210> 40 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
- 96 027900 <221> М1ЗС_РЕАТиЕЕ <223> Аминокислотная последовательность СЬК.2 тяжелой цепи АЬ8 <400> 40
Уа1 11е Тгр Туг Азр О1у Зег Азр Ьуз Туг РЬе А1а Азр Зег Уа1 Ьуз 1 5 10 15
О1у <210> 41 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиЕЕ
<223> <400> Аминокислотная 41 последовательность СЬЕ3 тяжелой цепи АЫ
Зег О1у Туг Зег Туг А1а Ьей РЬе Азр Туг
1 5 10
<210> 42
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Ното зартепз
<220> <221> М1ЗС_РЕАТиЕЕ
<223> Аминокислотная последовательность СЬЕ3 тяжелой цепи АЬ2
<400> 42
Зег О1у Туг Зег Туг А1а Ьей РЬе Азр Нтз
1 5 10
<210> 43
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Ното зартепз
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиЕЕ
<223> Аминокислотная последовательность СВЕ3 тяжелой цепи АЬ3
<400> 43
Нтз Азр Туг Зег Азп Агд Туг Туг РЬе Азр Туг
5 10 <210> 44 <211> 13
- 97 027900
<212> <213> БЕЛОК Ното зартепз
<220> <221> <223> М1ЗС_БЕАТиКЕ Аминокислотная последовательность СВЕЗ тяжелой цепи АЬ4
<400> 44
Азр О1у О1у Туг Зег О1у Туг Азр Зег О1у Рйе Азр Туг 1 5 10
<210> <211> <212> <213> 45 17 БЕЛОК Ното зартепз
<220> <221> <223> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ ОУБЕИЗОУУУУУУОМБУ
<400> 45
О1у Туг Азр Рйе Тгр Зег О1у Туг Туг Туг Туг Туг Туг О1у Мер Азр 1 5 10 15
Уа1
<210> <211> <212> <213> 46 12 БЕЛОК Ното зартепз
<220> <221> <223> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ Аминокислотная последовательность СЕЖ3 тяжелой цепи АЬ6
<400> 46
Азр Туг О1у О1у Азп Азр Туг Туг О1у Мер Азр Уа1 1 5 10
<210> <211> <212> <213> 47 11 БЕЛОК Ното зартепз
<220> <221> <223> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ Аминокислотная последовательность СЕЖ3 тяжелой цепи АЬ7
<400> 47
Азр Азп Зег Нтз Туг Туг Туг О1у Мер Азр Уа1
- 98 027900
5 10 <210> 48 <211> 13 <212> БЕЛОК <213> Ното зарчепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность СВЕЗ тяжелой цепи АЬ8 <400> 48
Азр О1у 11е А1а О1у А1а Агд Туг Уа1 Туг РЬе Азр Туг
5 10 <210> 49 <211> 642 <212> ДНК <213> Ното заргепз <220>
<221> т1зс_£еаЬиге <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь АМ
<400> 49 дасаЬссада ЬдасссадЬс ЬссаЬссЬсс сЬдЬсЬдсаЬ сЬЬЬаддада сададЬсасс 60
аЬсасЬЬдсс дддсаадЬса дадсдЬЬдас адаЬаЬЬЬса аЬЬддЬаЬса дсадааассЬ 120
дддааадссс сЬааддЬссЬ даЬсЬЬЬдсЬ дсаЬссадЬЬ ЬдсааадЬдд ддЬсссаЬса 180
аддЬЬсддЬд дсадЬддаЬс ЬдддасадаЬ ЬЬсасЬсЬса ссаЬсадсад ЬсЬдсаассЬ 240
даадаЬЬЬЬд саасЬЬасЬа сЬдЬсаасад адсЬасадЬа ссссдЬддас дЬЬсддссаа 300
дддассаадд ЬддаадЬсаа асдЬасддЬд дсЬдсассаЬ сЬдЬсЬЬсаЬ сЬЬсссдсса 360
ЬсЬдаЬдадс адЬЬдаааЬс ЬддаасЬдсс ЬсЬдЬЬдЬдЬ дссЬдсЬдаа ЬаасЬЬсЬаЬ 420
сссадададд ссааадЬаса дЬддааддЬд даЬаасдссс ЬссааЬсддд ЬаасЬсссад 480
дададЬдЬса сададсадда садсааддас адсассЬаса дссЬсадсад сасссЬдасд 540
сЬдадсааад садасЬасда дааасасааа дЬсЬасдссЬ дсдаадЬсас ссаЬсадддс 600
сЬдадсЬсдс ссдЬсасааа дадсЬЬсаас аддддададЬ дЬ 642
<210> 50 <211> 642 <212> ДНК <213> Ното зарчепз <220>
<221> т1зс_£еаЬиге <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь АЬ2
- 99 027900
<400> 50 дасаЕссада ЕдасссадЕс сссаЕссЕсс сЕдЕсЕдсаЕ сЕдЕаддада сададЕсасс 60
аЕсадЕЕдсс дддсаадЕса дЕЕсаЕЕддс адаЕаЕЕЕса аЕЕддЕаЕса дсадсаасса 120
дддааадссс сЕааддЕссЕ даЕсЕаЕдсЕ дааЕссадЕЕ ЕдсааадЕдд ддЕсссаЕса 180
адаЕЕсадЕд дсадЕддаЕс Едддасадаа ЕЕсасЕсЕса ссаЕсадсад ЕсЕдсаассЕ 240
даадаЕЕЕЕд саадаЕасЕа сЕдЕсаасад адЕЕасадЕа ссссдЕддас дЕЕсддссаа 300
дддассаадд ЕддаааЕсаа асдЕасддЕд дсЕдсассаЕ сЕдЕсЕЕсаЕ сЕЕсссдсса 360
ЕсЕдаЕдадс адЕЕдаааЕс ЕддаасЕдсс ЕсЕдЕЕдЕдЕ дссЕдсЕдаа ЕаасЕЕсЕаЕ 420
сссадададд ссааадЕаса дЕддааддЕд даЕаасдссс ЕссааЕсддд ЕаасЕсссад 480
дададЕдЕса сададсадда садсааддас адсассЕаса дссЕсадсад сасссЕдасд 540
сЕдадсааад садасЕасда дааасасааа дЕсЕасдссЕ дсдаадЕсас ссаЕсадддс 600
сЕдадсЕсдс ссдЕсасааа дадсЕЕсаас аддддададЕ дЕ 642
<210> 51 <211> 660 <212> ДНК <213> Ното заряепз <220>
<221> тязс_£еаЕиге <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь АЬ4 <400> 51
даЕаЕЕдЕда ЕдасЕсадЕс ЕссасЕсЕсс сЕдсссдЕса ссссЕддада дссддссЕсс 60
аЕсЕссЕдса ддЕсЕадЕса дадссЕссЕд ааЕадЕааЕд даЕасаасЕа ЕЕЕддаЕЕдд 120
ЕассЕдсада адссадддса дЕсЕссасад ЕЕссЕдаЕсЕ аЕЕЕдддЕЕс ЕЕаЕсдддсс 180
ЕссддддЕсс сЕдасаддЕЕ садЕддсадЕ ддаЕсаддса садаЕЕЕЕас асЕдадааЕс 240
адсададЕдд аддсЕдадда ЕдЕЕддддЕЕ ЕаЕЕасЕдЕа ЕасааасЕсЕ асааасЕсса 300
ЕЕсасЕЕЕсд дсссЕдддас сааадЕддаЕ аЕсааасдЕа сддЕддсЕдс ассаЕсЕдЕс 360
ЕЕсаЕсЕЕсс сдссаЕсЕда ЕдадсадЕЕд аааЕсЕддаа сЕдссЕсЕдЕ ЕдЕдЕдссЕд 420
сЕдааЕаасЕ ЕсЕаЕсссад ададдссааа дЕасадЕдда аддЕддаЕаа сдсссЕссаа 480
ЕсдддЕаасЕ сссаддадад ЕдЕсасадад саддасадса аддасадсас сЕасадссЕс 540
адсадсассс ЕдасдсЕдад сааадсадас Еасдадааас асааадЕсЕа сдссЕдсдаа 600
дЕсасссаЕс адддссЕдад сЕсдсссдЕс асааададсЕ Есаасадддд ададЕдЕЕад 660
<210> 52 <211> 651 <212> ДНК <213> Ното заряепз
- 100 027900 <220>
<221> тязс_£еаЕиге <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь АЪ5
<400> 52 даааЕЕдЕдЕ ЕдасдсадЕс ЕссЕддсасс сЕдЕсЕЕЕдЕ сЕссадддда аададссасс 60
сЕсЕссЕдса дддссадЕса дадЕдЕЕадс адсадсЕасЕ ЕадссЕддЕа ссадсадада 120
ссЕддссадд сЕсссаддсЕ ссЕсаЕсЕаЕ ддЕдсаЕсса дсадддссас ЕддсаЕссса 180
дасаддЕЕса дЕддсадЕдд дЕсЕдддаса дасЕЕсасЕс ЕсассаЕсад садЕсЕддад 240
ссЕдаадаЕЕ ЕЕдсадЕдЕа ЕЕасЕдЕсЕд садЕсЕддЕа дсЕсЕдЕссс дсЕсасЕЕЕс 300
ддсддаддда ссааддЕдда даЕсааасдЕ асддЕддсЕд сассаЕсЕдЕ сЕЕсаЕсЕЕс 360
ссдссаЕсЕд аЕдадсадЕЕ даааЕсЕдда асЕдссЕсЕд ЕЕдЕдЕдссЕ дсЕдааЕаас 420
ЕЕсЕаЕссса дададдссаа адЕасадЕдд ааддЕддаЕа асдсссЕсса аЕсдддЕаас 480
Есссаддада дЕдЕсасада дсаддасадс ааддасадса ссЕасадссЕ садсадсасс 540
сЕдасдсЕда дсааадсада сЕасдадааа сасааадЕсЕ асдссЕдсда адЕсасссаЕ 600
садддссЕда дсЕсдсссдЕ сасааададс ЕЕсаасаддд дададЕдЕЕа а 651
<210> 53 <211> 651 <212> ДНК <213> Ното заряепз <220>
<221> тязс_£еаЕиге <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь АЪ6 <400> 53
садЕсЕдЕдс ЕдасЕсадсс асссЕсадсд ЕсЕдддассс ссдддсадад ддЕсассаЕс 60
ЕсЕЕдЕЕсЕд даадсадсЕс саасаЕсдда аЕЕааЕЕаЕд ЕаЕасЕддЕа ссадсадсЕс 120
ссаддаасдд сссссааасЕ ссЕсаЕсЕаЕ аддадЕдаЕс адсддсссЕс аддддЕсссЕ 180
дассдаЕЕсЕ сЕддсЕссаа дЕсЕддсасс ЕсадссЕссс ЕддсссЕсад ЕдддсЕссдд 240
ЕссдаддаЕд аддсЕдаЕЕа ЕЕасЕдЕдса дсаЕдддаЕд асадссЕдад ЕддЕдЕддЕд 300
ЕЕсддсддад ддассаадсЕ дассдЕссЕа ддссаассда аадсддсдсс сЕсддЕсасЕ 360
сЕдЕЕсссдс ссЕссЕсЕда ддадсЕЕсаа дссаасаадд ссасасЕддЕ дЕдЕсЕсаЕа 420
адЕдасЕЕсЕ асссдддадс сдЕдасадЕд дссЕддаадд садаЕадсад ссссдЕсаад 480
дсдддадЕдд адассассас асссЕссааа сааадсааса асаадЕасдс ддссадсадс 540
ЕаЕсЕдадсс ЕдасдссЕда дсадЕддаад Есссасадаа дсЕасадсЕд ссаддЕсасд 600
саЕдааддда дсассдЕдда даадасадЕд дссссЕасад ааЕдЕЕсаЕа д 651
- 101 027900 <210> 54 <211> 651 <212> ДНК <213> Ното заряепз <220>
<221> т1зс_£еаЬиге <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь АЬ7 <400> 54
садЬсЬдЬдс Ьдасдсадсс дсссЬсадЬд ЬсЬддддссс садддсадад ддЬсассаЬс 60
ЬссЬдсасЬд ддадсадсЬс саасаЬсддд дсаддЬЬаЬд аЬдЬаааЬЬд дЬаЬсадсад 120
ЬЬсссаддаа садсссссаа асЬссЬсаЬс ЬаЬдЬЬааса асааЬсддсс сЬсаддадЬс 180
ссЬдассдаЬ ЬсЬсЬддсЬс сасдЬсЬддс ассЬсадссЬ сссЬддссаЬ сасЬддасЬс 240
саддсЬдадд аЬдаддсЬда ЬЬаЬЬасЬдс садЬссЬаЬд асассадссЬ дадЬдсЬЬсд 300
дЬаЬЬсддсд дадддассад асЬдассдЬс сЬаддссаас сдааадсддс дсссЬсддЬс 360
асЬсЬдЬЬсс сдсссЬссЬс ЬдаддадсЬЬ саадссааса аддссасасЬ ддЬдЬдЬсЬс 420
аЬаадЬдасЬ ЬсЬасссддд адссдЬдаса дЬддссЬдда аддсадаЬад садссссдЬс 480
ааддсдддад Ьддадассас сасасссЬсс ааасааадса асаасаадЬа сдсддссадс 540
адсЬаЬсЬда дссЬдасдсс ЬдадсадЬдд аадЬсссаса даадсЬасад сЬдссаддЬс 600
асдсаЬдаад ддадсассдЬ ддадаадаса дЬддссссЬа садааЬдЬЬс а 651
<210> 55 <211> 645 <212> ДНК <213> Ното заряепз <220>
<221> т1зс_£еаЬиге <223> Нуклеотидная последовательность, кодирующая легкую цепь АЬ8 <400> 55
дасаЬссада ЬдасссадЬс ЬссаЬссЬсс сЬдЬсЬдсаЬ сЬдЬаддада сададЬсасс 60
аЬсасЬЬдЬс дддсдадЬса дддсаЬЬадс ааЬЬаЬЬЬад ссЬддЬЬЬса дсадааасса 120
дддааадссс сЬаадЬсссЬ даЬсЬаЬдсЬ дсаЬссадЬЬ ЬдсааддЬдд ддЬсссаЬса 180
аадЬЬсадсд дсадЬддаЬс ЬдддасадаЬ ЬЬсасЬсЬса ссаЬсадсад ссЬдсадссЬ 240
даадаЬЬЬЬд саасЬЬаЬЬа сЬдссаасаа ЬаЬЬаЬааЬЬ асссаЬЬсас ЬЬЬсддсссЬ 300
дддассасад ЬддаЬаЬсаа асдЬасддЬд дсЬдсассаЬ сЬдЬсЬЬсаЬ сЬЬсссдсса 360
ЬсЬдаЬдадс адЬЬдаааЬс ЬддаасЬдсс ЬсЬдЬЬдЬдЬ дссЬдсЬдаа ЬаасЬЬсЬаЬ 420
сссадададд ссааадЬаса дЬддааддЬд даЬаасдссс ЬссааЬсддд ЬаасЬсссад 480
дададЬдЬса сададсадда садсааддас адсассЬаса дссЬсадсад сасссЬдасд 540
- 102 027900 сЕдадсааад садасЕасда дааасасааа дЕсЕасдссЕ дсдаадЕсас ссаЕсадддс сЕдадсЕсдс ссдЕсасааа дадсЕЕсаас аддддададЕ дЕЕад
600
645 <210> 56 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1БС_БЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность легкой цепи АЫ <400> 56
Азр 1 11е О1п МеЕ ТЬг 5 О1п Бег Рго Бег Бег 10 Ьеи Бег А1а Бег Ьеи 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Бег О1п Бег Уа1 Азр Агд Туг
20 25 30
РЬе Азп Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Уа1 Ьеи 11е
35 40 45
РЬе А1а А1а Бег Бег Ьеи О1п Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе О1у О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз О1п О1п Бег Туг Бег ТЬг Рго Тгр
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и Уа1 Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а
100 105 110
Рго Бег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Бег Азр О1и О1п Ьеи Ьуз Бег О1у
115 120 125
ТЬг А1а Бег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд О1и А1а
130 135 140
Ьуз Уа1 О1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи О1п Бег О1у Азп Бег О1п
145 150 155 160
О1и Бег Уа1 ТЬг О1и О1п Азр Бег Ьуз Азр Бег ТЬг Туг Бег Ьеи Бег
165 170 175
Бег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Бег Ьуз А1а Азр Туг О1и Ьуз Нтз Ьуз Уа1 Туг
180 185 190
- 103
А1а Суз О1и Уа1 ТЬг Н1з О1п О1у Ьеи Бег Бег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Бег 195 200 205
РЬе Азп Агд О1у О1и Суз 210 <210> 57 <211> 214 <212> БЕЛОК <213> Ното зар1епз <220>
<221> М1БС_РЕАТиЕЕ <223> Аминокислотная последовательность легкой цепи АЬ2 <400> 57
Азр 1 11е О1п Меб ТЬг 5 О1п Бег Рго Бег Бег 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е Бег Суз Агд А1а Бег О1п РЬе 11е О1у Агд Туг
20 25 30
РЬе Азп Тгр Туг О1п О1п О1п Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Уа1 Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а О1и Бег Бег Ьеи О1п Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг О1и РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а Агд Туг Туг Суз О1п О1п Бег Туг Бег ТЬг Рго Тгр
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а
100 105 110
Рго Бег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Бег Азр О1и О1п Ьеи Ьуз Бег О1у
115 120 125
ТЬг А1а Бег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд О1и А1а
130 135 140
Ьуз Уа1 О1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи О1п Бег О1у Азп Бег О1п
145 150 155 160
О1и Бег Уа1 ТЬг О1и О1п Азр Бег Ьуз Азр Бег ТЬг Туг Бег Ьеи Бег
165 170 175
- 104
Бег ТЬг Ьеи ТЬг 180 Ьеи Бег Ьуз А1а Азр 185 Туг О1и Ьуз Н1з Ьуз 190 Уа1 Туг
А1а Суз О1и Уа1 ТЬг Н1з О1п О1у Ьеи Бег Бег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Бег
195 200 205
РЬе Азп Агд О1у О1и Суз
210 <210> 58 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз <220>
<221> М1БС_ЕЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность легкой цепи АЬ4 <400> 58
Азр 1 11е Уа1 МеЬ ТЬг 5 О1п Бег Рго Ьеи Бег 10 Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго 15 О1у
О1и Рго А1а Бег 20 11е Бег Суз Агд Бег 25 Бег О1п Бег Ьеи Ьеи 30 Азп Бег
Азп С1у Туг 35 Азп Туг Ьеи Азр Тгр 40 Туг Ьеи О1п Ьуз Рго 45 О1у О1п Бег
Рго О1п 50 РЬе Ьеи 11е Туг Ьеи 55 О1у Бег Туг Агд А1а 60 Бег О1у Уа1 Рго
Азр 65 Агд РЬе Бег О1у Бег 70 О1у Бег О1у ТЬг Азр 75 РЬе ТЬг Ьеи Агд 11е 80
Бег Агд Уа1 О1и А1а 85 О1и Азр Уа1 О1у Уа1 90 Туг Туг Суз 11е О1п 95 ТЬг
Ьеи О1п ТЬг Рго 100 РЬе ТЬг РЬе О1у Рго 105 О1у ТЬг Ьуз Уа1 Азр 110 11е Ьуз
Агд ТЬг Уа1 115 А1а А1а Рго Бег Уа1 120 РЬе 11е РЬе Рго Рго 125 Бег Азр О1и
О1п Ьеи 130 Ьуз Бег О1у ТЬг А1а 135 Бег Уа1 Уа1 Суз Ьеи 140 Ьеи Азп Азп РЬе
Туг Рго Агд О1и А1а Ьуз Уа1 О1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи О1п
- 105
145 150 155 160
Зег О1у Азп Зег О1п О1и Зег Уа1 ТЬг О1и О1п Азр Зег Ьуз Азр Зег
165 170 175
ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг О1и
180 185 190
Ьуз Нчз Ьуз Уа1 Туг А1а Суз О1и Уа1 ТЬг Нчз О1п О1у Ьеи Зег Зег
195 200 205
Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег РЬе Азп Агд О1у О1и Суз
210 215
<210> 59
<211> 216
<212> БЕЛОК
<213> Ното заргепз
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ
<223> Аминокислотная последовательность легкой цепи АЬ5
<400> 59
О1и 11е Уа1 Ьеи ТЬг О1п Зег Рго О1у ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго О1у
1 5 10 15
О1и Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег О1п Зег Уа1 Зег Зег Зег
20 25 30
Туг Ьеи А1а Тгр Туг О1п О1п Агд Рго О1у О1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи
35 40 45
11е Туг О1у А1а Зег Зег Агд А1а ТЬг О1у 11е Рго Азр Агд РЬе Зег
50 55 60
О1у Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи О1и
65 70 75 80
Рго О1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суз Ьеи О1п Зег О1у Зег Зег Уа1
85 90 95
Рго Ьеи ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1
100 105 110
А1а А1а Рго Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр О1и О1п Ьеи Ьуз
115 120 125
- 106
Зег О1у 130 ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 135 Суз Ьей Ьей Азп Азп 140 РЬе Туг Рго Агд
О1и А1а Ьуз Уа1 О1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьей О1п Зег О1у Азп
145 150 155 160
Зег О1п О1и Зег Уа1 ТЬг О1и О1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег
165 170 175
Ьей Зег Зег ТЬг Ьей ТЬг Ьей Зег Ьуз А1а Азр Туг О1и Ьуз Нтз Ьуз
180 185 190
Уа1 Туг А1а Суз О1и Уа1 ТЬг Нтз О1п О1у Ьей Зег Зег Рго Уа1 ТЬг
195 200 205
Ьуз Зег РЬе Азп Агд О1у О1и Суз
210 215
<210> 60
<211> 216
<212> БЕЛОК
<213> Ното зартепз
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиЕЕ
<223> Аминокислотная последовательность легкой цепи АЬ6
<400> 60
О1п Зег Уа1 Ьей ТЬг О1п Рго Рго Зег А1а Зег О1у ТЬг Рго О1у О1п
1 5 10 15
Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Суз Зег О1у Зег Зег Зег Азп 11е О1у 11е Азп
20 25 30
Туг Уа1 Туг Тгр Туг О1п О1п Ьей Рго О1у ТЬг А1а Рго Ьуз Ьей Ьей
35 40 45
11е Туг Агд Зег Азр О1п Агд Рго Зег О1у Уа1 Рго Азр Агд РЬе Зег
50 55 60
О1у Зег Ьуз Зег О1у ТЬг Зег А1а Зег Ьей А1а Ьей Зег О1у Ьей Агд
65 70 75 80
Зег О1и Азр О1и А1а Азр Туг Туг Суз А1а А1а Тгр Азр Азр Зег Ьей
85 90 95
Зег О1у Уа1 Уа1 РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Ьей ТЬг Уа1 Ьей О1у О1п
100 105 110
- 107
Рго Ьуз А1а 115 А1а Рго Бег Уа1 ТЬг 120 Ьеи РЬе Рго Рго Бег 125 Бег О1и О1и
Ьеи О1п А1а Азп Ьуз А1а ТЬг Ьеи Уа1 Суз Ьеи 11е Бег Азр РЬе Туг
130 135 140
Рго О1у А1а Уа1 ТЬг Уа1 А1а Тгр Ьуз А1а Азр Бег Бег Рго Уа1 Ьуз
145 150 155 160
А1а О1у Уа1 О1и ТЬг ТЬг ТЬг Рго Бег Ьуз О1п Бег Азп Азп Ьуз Туг
165 170 175
А1а А1а Бег Бег Туг Ьеи Бег Ьеи ТЬг Рго О1и О1п Тгр Ьуз Бег Няз
180 185 190
Агд Бег Туг Бег Суз О1п Уа1 ТЬг Няз О1и О1у Бег ТЬг Уа1 О1и Ьуз
195 200 205
ТЬг Уа1 А1а Рго ТЬг О1и Суз Бег
210 215
<210> 61
<211> 217
<212> БЕЛОК
<213> Ното заряепз
<220>
<221> М1БС_ _РЕАТиЕЕ
<223> Аминокислотная последовательность легкой цепи АЬ7
<400> 61
О1п Бег Уа1 Ьеи ТЬг О1п Рго Рго Бег Уа1 Бег О1у А1а Рго О1у О1п
1 5 10 15
Агд Уа1 ТЬг 11е Бег Суз ТЬг О1у Бег Бег Бег Азп 11е О1у А1а О1у
20 25 30
Туг Азр Уа1 Азп Тгр Туг О1п О1п РЬе Рго О1у ТЬг А1а Рго Ьуз Ьеи
35 40 45
Ьеи 11е Туг Уа1 Азп Азп Азп Агд Рго Бег О1у Уа1 Рго Азр Агд РЬе
50 55 60
Бег О1у Бег ТЬг Бег О1у ТЬг Бег А1а Бег Ьеи А1а 11е ТЬг О1у Ьеи
65 70 75 80
О1п А1а О1и Азр О1и А1а Азр Туг Туг Суз О1п Бег Туг Азр ТЬг Бег
85 90 95
- 108
Ьеи Зег А1а Зег Уа1 100 РЪе О1у О1у О1у 105 ТЪг Агд Ьеи ТЪг Уа1 110 Ьеи О1у
О1п Рго Ьуз А1а А1а Рго Зег Уа1 ТЪг Ьеи РЪе Рго Рго Зег Зег О1и
115 120 125
О1и Ьеи О1п А1а Азп Ьуз А1а ТЪг Ьеи Уа1 Суз Ьеи 11е Зег Азр РЪе
130 135 140
Туг Рго О1у А1а Уа1 ТЪг Уа1 А1а Тгр Ьуз А1а Азр Зег Зег Рго Уа1
145 150 155 160
Ьуз А1а О1у Уа1 О1и ТЪг ТЪг ТЪг Рго Зег Ьуз О1п Зег Азп Азп Ьуз
165 170 175
Туг А1а А1а Зег Зег Туг Ьеи Зег Ьеи ТЪг Рго О1и О1п Тгр Ьуз Зег
180 185 190
Няз Агд Зег Туг Зег Суз О1п Уа1 ТЪг Няз О1и О1у Зег ТЪг Уа1 О1и
195 200 205
Ьуз ТЪг Уа1 А1а Рго ТЪг О1и Суз Зег
210 215
<210> 62
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Ното заряепз
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиЕЕ
<223> Аминокислотная последовательность легкой цепи АЪ8
<400> 62
Азр 11е О1п МеЕ ТЪг О1п Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1 О1у
1 5 10 15
Азр Агд Уа1 ТЪг 11е ТЪг Суз Агд А1а Зег О1п О1у 11е Зег Азп Туг
20 25 30
Ьеи А1а Тгр РЪе О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Зег Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а А1а Зег Зег Ьеи О1п О1у О1у Уа1 Рго Зег Ьуз РЪе Зег О1у
50 55 60
Зег О1у Зег О1у ТЪг Азр РЪе ТЪг Ьеи ТЪг 11е Зег Зег Ьеи О1п Рго
- 109
70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг 85 Туг Туг Суз О1п О1п 90 Туг Туг Азп Туг Рго 95 РЬе
ТЬг РЬе О1у Рго О1у ТЬг ТЬг Уа1 Азр 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а
100 105 110
Рго Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр О1и О1п Ьеи Ьуз Зег О1у
115 120 125
ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд О1и А1а
130 135 140
Ьуз Уа1 О1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи О1п Зег О1у Азп Зег О1п
145 150 155 160
О1и Зег Уа1 ТЬг О1и О1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег
165 170 175
Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг О1и Ьуз Нтз Ьуз Уа1 Туг
180 185 190
А1а Суз О1и Уа1 ТЬг Нтз О1п О1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег
195 200 205
РЬе Азп Агд О1у О1и Суз
210 <210> 63 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЫ <400> 63
Азр 1 11е О1п Мер ТЬг О1п 5 Зег Рго Зег Зег 10 Ьеи Зег А1а Зег Ьеи О1у 15
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Зег О1п Зег Уа1 Азр Агд Туг
20 25 30
РЬе Азп Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Уа1 Ьеи 11е
35 40 45
- 110
РЬе А1а А1а Зег Зег Ьеи О1п Зег О1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе О1у О1у
50 55 60
Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз О1п О1п Зег Туг Зег ТЬг Рго Тгр
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и Уа1 Ьуз
100 105
<210> 64 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ2 <400> 64
Азр 1 11е О1п МеЬ ТЬг 5 О1п Зег Рго Зег Зег 10 Ьеи Зег А1а Зег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Суз Агд А1а Зег О1п РЬе 11е О1у Агд Туг
20 25 30
РЬе Азп Тгр Туг О1п О1п О1п Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Уа1 Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а О1и Зег Зег Ьеи О1п Зег О1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег О1у
50 55 60
Зег О1у Зег О1у ТЬг О1и РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а Агд Туг Туг Суз О1п О1п Зег Туг Зег ТЬг Рго Тгр
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 65 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз
- 111 <220>
<221> М1БС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ3 <400> 65
О1и 1 11е Уа1 Ьеи ТЬг 5 О1п Бег Рго С1у ТЬг 10 Ьеи Бег Ьеи Бег Рго 15 О1у
О1и Агд А1а ТЬг Ьеи Бег Суз Агд А1а Бег О1п Бег РЬе Бег Бег Азп
20 25 30
Туг Ьеи А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго С1у О1п А1а Рго Агд Ьеи РЬе
35 40 45
11е Туг О1у А1а Бег Бег Агд А1а ТЬг С1у 11е Рго Азр Агд РЬе Бег
50 55 60
О1у Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Агд Ьеи О1и
65 70 75 80
Рго О1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг РЬе Суз О1п О1п Туг О1у 11е Бег Рго
85 90 95
Суз Бег РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 66 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Ното заргепз <220>
<221> М1БС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ4 <400> 66
Азр 1 11е Уа1 МеЬ ТЬг 5 О1п Бег Рго Ьеи Бег 10 Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго 15 О1у
О1и Рго А1а Бег 20 11е Бег Суз Агд Бег 25 Бег О1п Бег Ьеи Ьеи 30 Азп Бег
Азп О1у Туг 35 Азп Туг Ьеи Азр Тгр 40 Туг Ьеи О1п Ьуз Рго 45 О1у О1п Бег
Рго О1п РЬе Ьеи 11е Туг Ьеи О1у Бег Туг Агд А1а Бег О1у Уа1 Рго
55 60
- 112
Азр 65 Агд РЬе Бег О1у Бег 70 О1у Бег О1у ТЬг Азр 75 РЬе ТЬг Ьеи Агд 11е 80
Бег Агд Уа1 О1и А1а О1и Азр Уа1 О1у Уа1 Туг Туг Суз 11е О1п ТЬг
85 90 95
Ьеи О1п ТЬг Рго РЬе ТЬг РЬе О1у Рго О1у ТЬг Ьуз Уа1 Азр 11е Ьуз
100 105 110
<210> 67 <211> 109 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1БС_РЕАТиЕЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ5 <400> 67
О1и 1 11е Уа1 Ьеи ТЬг 5 О1п Бег Рго О1у ТЬг 10 Ьеи Бег Ьеи Бег Рго 15 О1у
О1и Агд А1а ТЬг Ьеи Бег Суз Агд А1а Бег О1п Бег Уа1 Бег Бег Бег
20 25 30
Туг Ьеи А1а Тгр Туг О1п О1п Агд Рго О1у О1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи
35 40 45
11е Туг О1у А1а Бег Бег Агд А1а ТЬг О1у 11е Рго Азр Агд РЬе Бег
50 55 60
О1у Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1и
65 70 75 80
Рго О1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суз Ьеи О1п Бег О1у Бег Бег Уа1
85 90 95
Рго Ьеи ТЬг РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Уа1 О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 68 <211> 110 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1БС_РЕАТиЕЕ
- 113 <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ6 <400> 68
О1п 1 Зег Уа1 Беи ТЬг 5 О1п Рго Рго Зег А1а 10 Зег О1у ТЬг Рго О1у 15 О1п
Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Суз Зег О1у Зег Зег Зег Азп 11е О1у 11е Азп
20 25 30
Туг Уа1 Туг Тгр Туг О1п О1п Беи Рго О1у ТЬг А1а Рго Буз Беи Беи
35 40 45
11е Туг Агд Зег Азр О1п Агд Рго Зег О1у Уа1 Рго Азр Агд РЬе Зег
50 55 60
О1у Зег Буз Зег О1у ТЬг Зег А1а Зег Беи А1а Беи Зег О1у Беи Агд
65 70 75 80
Зег О1и Азр О1и А1а Азр Туг Туг Суз А1а А1а Тгр Азр Азр Зег Беи
85 90 95
Зег О1у Уа1 Уа1 РЬе О1у О1у О1у ТЬг Буз Беи ТЬг Уа1 Беи
100 105 110
<210> 69 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Ното заргепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ7 <400> 69
О1п 1 Зег Уа1 Беи ТЬг 5 О1п Рго Рго Зег Уа1 10 Зег О1у А1а Рго О1у 15 О1п
Агд Уа1 ТЬг 11е 20 Зег Суз ТЬг О1у Зег 25 Зег Зег Азп 11е О1у 30 А1а О1у
Туг Азр Уа1 35 Азп Тгр Туг О1п О1п 40 РЬе Рго О1у ТЬг А1а 45 Рго Буз Беи
Беи 11е 50 Туг Уа1 Азп Азп Азп 55 Агд Рго Зег О1у Уа1 60 Рго Азр Агд РЬе
Зег О1у Зег ТЬг Зег О1у ТЬг Зег А1а Зег Беи А1а 11е ТЬг О1у Беи
70 75 80
- 114
О1п А1а О1и Азр О1и А1а Азр 85 Туг Туг Суз 90 О1п Бег Туг Азр ТЬг Бег 95
Ьеи Бег А1а Бег Уа1 РЬе О1у О1у О1у ТЬг Агд Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
100 105 110
<210> 70 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1БС_РЕАТиЕЕ <223> Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ8 <400> 70
Азр 1 11е О1п Меб ТЬг 5 О1п Бег Рго Бег Бег 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Агд А1а Бег О1п О1у 11е Бег Азп Туг
20 25 30
Ьеи А1а Тгр РЬе О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Бег Ьеи 11е
35 40 45
Туг А1а А1а Бег Бег Ьеи О1п О1у О1у Уа1 Рго Бег Ьуз РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз О1п О1п Туг Туг Азп Туг Рго РЬе
85 90 95
ТЬг РЬе О1у Рго О1у ТЬг ТЬг Уа1 Азр 11е Ьуз
100 105
<210> 71 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1БС_РЕАТиЕЕ <223> Аминокислотная последовательность СВЕ1 легкой цепи АЫ <400> 71
- 115 027900
Агд А1а Бег О1п Бег Уа1 Азр Агд Туг РЬе Азп 1 5 10 <210> 72 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Ното зарьепз <220>
<221> М1БС_РЕАТиКЕ
<223> Аминокислотная последовательность СЬК1 легкой цепи АЬ2
<400> 72
Агд А1а Бег О1п РЬе 11е О1у Агд Туг РЬе Азп
1 5 10
<210> 73
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Ното зарьепз
<220>
<221> М1БС_РЕАТиКЕ
<223> Аминокислотная последовательность СЬК1 легкой цепи АЬ3
<400> 73
Агд А1а Бег О1п Бег РЬе Бег Бег Азп Туг Ьеи А1а
1 5 10
<210> 74
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Ното зарьепз
<220>
<221> М1БС_РЕАТиКЕ
<223> Аминокислотная последовательность СЬК1 легкой цепи АЬ4
<400> 74
Агд Бег Бег О1п Бег Ьеи Ьеи Азп Бег Азп О1у Туг Азп Туг Ьеи Азр 1 5 10 15 <210> 75 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Ното зарьепз <220>
<221> М1БС_РЕАТиКЕ <223> Аминокислотная последовательность СВЕ1 легкой цепи АЬ5 <400> 75
- 116 027900
Агд А1а Зег О1п Зег Уа1 Зег Зег Зег Туг Ьей А1а 1 5 10 <210> 76 <211> 13 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиЕЕ <223> Аминокислотная последовательность СБК.1 легкой цепи АЬ6 <400> 76
Зег О1у Зег Зег Зег Азп 11е О1у 11е Азп Туг Уа1 Туг
5 10 <210> 77 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиЕЕ <223> Аминокислотная последовательность СБК.1 легкой цепи АЬ7 <400> 77
ТЬг О1у Зег Зег Зег Азп 11е О1у А1а О1у Туг Азр Уа1 Азп
5 10 <210> 78 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиЕЕ
<223> Аминокислотная последовательность СБЕ1 легкой цепи АЬ8
<400> 78
Агд А1а Зег О1п О1у 11е Зег Азп Туг Беи А1а
1 5 10
<210> 79
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Ното зартепз
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиЕЕ
<223> Аминокислотная последовательность СБЕ2 легкой цепи АЫ
- 117 027900 <400> 79
А1а А1а Зег Зег Ьеи О1п Зег 1 5 <210> 80 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиЕЕ
<223> Аминокислотная последовательность СЬЕ2 легкой цепи АЬ2
<400> 80
А1а О1и Зег Зег Ьеи О1п Зег
1 5
<210> 81
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Ното заряепз
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиЕЕ
<223> Аминокислотная последовательность СЬЕ2 легкой цепи АЬ2
<400> 81
О1у А1а Зег Зег Агд А1а ТЪг 1 5 <210> 82 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Ното заряепз <220>
<221> М1ЗС_РЕАТиЕЕ
<223> Аминокислотная последовательность СЬЕ2 легкой цепи АЬ4
<400> 82
Ьеи О1у Зег Туг Агд А1а Зег
1 5
<210> 83
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Ното заряепз
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиЕЕ
<223> Аминокислотная последовательность СЬЕ2 легкой цепи АЪ5
- 118 027900 <400> 83
О1у А1а Бег Бег Агд А1а ТЬг 1 5
<210> <211> <212> <213> 84 7 БЕЛОК Ното заряепз
<220> <221> <223> М1БС_РЕАТиЕЕ Аминокислотная последовательность СВЕ2 легкой цепи АЬб
<400> 84
Агд Бег Азр О1п Агд Рго Бег
1 5
<210> <211> <212> <213> 85 7 БЕЛОК Ното заряепз
<220> <221> <223> М1БС_РЕАТиЕЕ Аминокислотная последовательность СБЕ2 легкой цепи АЬ7
<400> 85
Уа1 Азп Азп Азп Агд Рго Бег
1 5
<210> <211> <212> <213> 8б 7 БЕЛОК Ното заряепз
<220> <221> <223> М1БС_РЕАТиЕЕ Аминокислотная последовательность СБЕ2 легкой цепи АЬ8
<400> 8б
А1а А1а Бег Бег Ьеи О1п О1у
1 5
<210> <211> <212> <213> 87 9 БЕЛОК Ното заряепз
<220> <221> <223> М1БС_РЕАТиЕЕ Аминокислотная последовательность СБЕ3 легкой цепи АЫ
- 119 027900 <400> 87
О1п О1п Зег Туг Зег ТЬг Рго Тгр ТЬг 1 5 <210> 88 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
<223> Аминокислотная последовательность СЬЕ3 легкой цепи АЬ2
<400> 88
О1п О1п Зег Туг Зег ТЬг Рго Тгр ТЬг
1 5
<210> 89
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Ното зартепз
<220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
<223> Аминокислотная последовательность СЬЕ3 легкой цепи АЬ3
<400> 89
О1п О1п Туг О1у 11е Зег Рго Суз Зег
1 5
<210> 90 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <220>
<221>
<223>
М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
Аминокислотная последовательность
СЬК3 легкой цепи АЬ4 <400> 90
11е О1п ТЬг Ьеи О1п ТЬг Рго РЬе ТЬг 1 5
<210> 91
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Ното зартепз
<220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
- 120 027900
<223> Аминокислотная последовательность СЬК3 легкой цепи АЬ5
<400> 91
Ьеи О1п Зег О1у Зег Зег Уа1 Рго Ьеи ТЬг
1 5 10
<210> 92
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Ното заряепз
<220>
<221> М1ЗС_РЕАТиКЕ
<223> Аминокислотная последовательность СЬК3 легкой цепи АЬ6
<400> 92
А1а А1а Тгр Азр Азр Зег Ьеи Зег О1у Уа1 Уа1
1 5 10
<210> 93
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Ното заряепз
<220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
<223> Аминокислотная последовательность СЬК3 легкой цепи АЬ7
<400> 93
О1п Зег Туг Азр ТЬг Зег Ьеи Зег А1а Зег Уа1
1 5 10
<210> 94
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Ното заряепз
<220>
<221> М1ЗС_ЕЕАТиКЕ
<223> Аминокислотная последовательность СЬК3 легкой цепи АЬ8
<400> 94

Claims (89)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Связывающий антиген СО27Б белок, включающий:
    a) вариабельную область легкой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 5>ЕС ГО N0:66;
    b) вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 90% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 5>ЕС ГО N0:20; или
    c) вариабельную область легкой цепи из а) и вариабельную область тяжелой цепи из Ь).
  2. 2. Связывающий антиген СО27Б белок по п.1, отличающийся тем, что вариабельная область легкой цепи характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 5>ЕС ГО N0:66.
  3. 3. Связывающий антиген СО27Б белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что вариабельная область тяжелой цепи характеризуется по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 5>ЕС ГО N0:20.
  4. 4. Связывающий антиген СО27Б белок, включающий:
    a) вариабельную область легкой цепи, включающую не более десяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в 5>ЕС ГО N0:66;
    b) вариабельную область тяжелой цепи, включающую не более десяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в 5>ЕС ГО N0:20; или
    c) вариабельную область легкой цепи из а) и вариабельную область тяжелой цепи из Ь).
  5. 5. Связывающий антиген СО27Б белок по п.4, отличающийся тем, что вариабельная область легкой цепи включает не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в 5>ЕС ГО N0:66.
  6. 6. Связывающий антиген СО27Б белок по п.4 или 5, обличающийся тем, что вариабельная область тяжелой цепи включает не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с аминокислотной последовательностью, представленной в 5>ЕС ГО N0:20.
  7. 7. Связывающий антиген СО27Б белок по пп.1-6, отличающийся тем, что вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, представленную в 5>ЕС ГО N0:66.
  8. 8. Связывающий антиген СО27Б белок по пп.1-7, отличающийся тем, что вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, представленную в 5>ЕС ГО N0:20.
  9. 9. Связывающий антиген СО27Б белок, включающий вариабельную область легкой цепи, включающую ЬСОКТ, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСОКТ, представленной в 5>ЕС ГО N0:74; ЬС0К2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСЭК2, представленной в 5>ЕС ГО N0:82; и БСГОРЗ. содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью БСГОРЗ, представленной в 5>ЕС ГО N0:90; и вариабельную область тяжелой цепи, включающую НСЭК.1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСЭК.1, представленной в 5>ЕС ГО N0:28; НСЭК2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСОК2, представленной в 5>ЕС ГО N0:36; и НСЭРЗ, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью НСЭРЗ, представленной в 5>ЕС ГО N0:44.
  10. 10. Связывающий антиген СО27Ь белок по п.9, отличающийся тем, что:
    a) вариабельная область легкой цепи включает БСГОР1, представленный в 5>ЕС ГО N0:74; Ε0ΌΚ2, представленный в 5>ЕС ГО N0:82; и ЬСЭКЗ, представленный в 5>ЕС ГО N0:90; и вариабельная область тяжелой цепи включает НСЭК1, представленный в 5>ЕС ГО N0:28; НСОК2, представленный в 5>ЕС ГО N076; и НСЭКЗ, представленный в 5>ЕС ГО N0:44;
    b) вариабельная область легкой цепи определена как в а), но содержит мутацию К24К-826О, и вариабельная область тяжелой цепи определена как в а), но содержит мутацию Ш15-ЕЗ4М;
    c) вариабельная область легкой цепи определена как в а), но содержит мутацию К24К-826О, и вариабельная область тяжелой цепи определена как в а);
    б) вариабельная область легкой цепи определена как в а), но содержит мутацию Ь551-У58Р, и вариабельная область тяжелой цепи определена как в а);
    е) вариабельная область легкой цепи определена как в а), но содержит мутацию С95Н-Т963, и вариабельная область тяжелой цепи определена как в а), но содержит мутацию Ш15-ЕЗ4М;
    £) вариабельная область легкой цепи определена как в а), но содержит мутацию С95Н-Т963, и вариабельная область тяжелой цепи определена как в а).
  11. 11. Связывающий антиген СГО27Е белок по любому из пп.1-10, отличающийся тем, что указанный
    - 122 027900 антигенсвязывающий белок специфично связывается с СО27Ь человека с аффинностью, меньшей или равной 2х10-11 М.
  12. 12. Связывающий антиген СЭ27Ь белок по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что указанный антигенсвязывающий белок ингибирует связывание СЭ27Ь с СО27.
  13. 13. Связывающий антиген СЭ27Ь белок по любому из пп.1-12, отличающийся тем, что указанный антигенсвязывающий белок представляет собой антитело.
  14. 14. Связывающий антиген СЭ27Ь белок по п.13, отличающийся тем, что указанное антитело представляет собой антитело человека.
  15. 15. Связывающий антиген СЭ27Ь белок по п.14, содержащий легкую цепь и тяжелую цепь, причем легкая цепь включает аминокислотную последовательность, представленную в 8Е0 ГО N0:58, и тяжелая цепь включает аминокислотную последовательность, представленную в 8Е0 ГО N0:12.
  16. 16. Связывающий антиген СЭ27Ь белок по любому из пп.1-15, отличающийся тем, что связывающий антиген СЭ27Ь белок является биспецифичным антителом.
  17. 17. Связывающий антиген СЭ27Ь белок по п.16, отличающийся тем, что биспецифичное антитело связывает СЭ27Ь и антиген эффекторной клетки человека, который представляет собой СГО3.
  18. 18. Связывающий антиген СЭ27Ь белок по любому из пп.1-17, отличающийся тем, что связывающий антиген СЭ27Ь белок является фрагментом антитела.
  19. 19. Связывающий антиген СЭ27Ь белок по п.18, отличающийся тем, что фрагмент антитела выбран из группы, состоящей из Р(аЬ), РаЬ-фрагментов, состоящих из доменов УЬ, УН, СЬ и СН1, Р(аЬ'), Р(аЬ')2, Рб-фрагментов, состоящих из доменов УН и СН1, Ρν-фрагментов, состоящих из доменов УЬ и УН одного антитела, бАЬ-фрагментов, одноцепочечных молекул Ρν (δοΡν); биспецифичных одноцепочечных димеров Ρν, диател и триател.
  20. 20. Связывающий антиген СО27Ь белок по любому из пп.1-19, отличающийся тем, что связывающий антиген СО27Ь белок конъюгирован с химиотерапевтическим агентом.
  21. 21. Связывающий антиген СО27Ь белок по п.20, отличающийся тем, что линкер связывает химиотерапевтический агент со связывающим антиген СО27Ь белком.
  22. 22. Связывающий антиген СО27Ь белок по п.21, отличающийся тем, что линкер представляет собой нерасщепляемый линкер.
  23. 23. Связывающий антиген СО27Ь белок по п.22, отличающийся тем, что линкер содержит МСС.
  24. 24. Связывающий антиген СО27Ь белок по любому из пп.20-23, отличающийся тем, что химиотерапевтический агент конъюгирован с одним или более лизинами, содержащимися в полипептиде связывающего антиген СО27Ь белка.
  25. 25. Связывающий антиген СО27Ь белок по любому из пп.20-24, отличающийся тем, что химиотерапевтический агент представляет собой ΌΜ1.
  26. 26. Композиция связывающих антиген СО27Ь белков по п.25, отличающаяся тем, что среднее число молекул ΌΜ1 на связывающий антиген СО27Ь белок составляет от 1 до 10.
  27. 27. Композиция связывающих антиген СО27Ь белков по п.26, отличающаяся тем, что среднее число молекул ΌΜ1 на связывающий антиген СО27Ь белок составляет от 3 до 7.
  28. 28. Композиция связывающих антиген СО27Ь белков по п.27, отличающаяся тем, что среднее число молекул ΌΜ1 на связывающий антиген СО27Ь белок равно от 4 до 6.
  29. 29. Композиция связывающих антиген СО27Ь белков по п.27, отличающаяся тем, что среднее число молекул ΌΜ1 на связывающий антиген СО27Ь белок составляет приблизительно 4,0, приблизительно
    4.1, приблизительно 4,2, приблизительно 4,3, приблизительно 4,4, приблизительно 4,5, приблизительно
    4.6, приблизительно 4,7, приблизительно 4,8, приблизительно 4,9, приблизительно 5,0, приблизительно
    5.1, приблизительно 5,2, приблизительно 5,3, приблизительно 5,4, приблизительно 5,5, приблизительно
    5.6, приблизительно 5,7, приблизительно 5,8, приблизительно 5,9 или приблизительно 6,0.
  30. 30. Композиция связывающих антиген СО27Ь белков по любому из пп.26-29, отличающаяся тем, что указанная композиция представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество связывающего антиген СО27Ь белка.
  31. 31. Композиция связывающих антиген СО27Ь белков по п.30, отличающаяся тем, что указанная фармацевтическая композиция лиофилизирована.
  32. 32. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, причем указанный полипептид включает:
    a) вариабельную область легкой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:66;
    b) вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:20;
    c) вариабельную область легкой цепи, включающую не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:66;
    б) вариабельную область тяжелой цепи, включающую не более пяти присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью, представленной в 8Е0 ГО N0:20;
    е) вариабельную область легкой цепи, включающую ЬСЭК1, содержащий не более трех присоеди- 123 027900 нений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСОК1, представленной в δΕρ ΙΌ N0:74; ЬСОК2, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСОК2, представленной в δΕρ ΙΌ N0:82; и ЬСОК3, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ЬСОК3, представленной в δΕρ ΙΌ N0:90;
    £) вариабельную область тяжелой цепи, включающую ΗС^К1, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ΗΕ'ΌΕΕ представленной в δΕρ ΙΌ N0:28; ΗΕΟΕΣ, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ΗΤΌ^, представленной в δΕρ ΙΌ N0:36; и ΗС^К3, содержащий не более трех присоединений, делеций или замен аминокислот по сравнению с последовательностью ΗΤΌ^, представленной в δΕρ ΙΌ N0:44;
    д) вариабельную область легкой цепи, включающую ЬСОК1, обладающую последовательностью, представленной в δΕρ ΙΌ N0:74, ЬСОК2, обладающую последовательностью, представленной в δΕρ ΙΌ N0:82 и ЬСОК3, обладающую последовательностью, представленной в δ3ρ ΙΌ N0:90;
    1) вариабельную область тяжелой цепи, включающую ΗС^К1, обладающую последовательностью, представленной в δΕρ ΙΌ N0:28, ΗΤΌ^, обладающую последовательностью, представленной в δΕρ ΙΌ N0:36 и ΗΤΌ^, обладающую последовательностью, представленной в δΕρ ΙΌ N0:44;
    ί) вариабельную область легкой цепи, как определено в д), но с мутацией К24К^26О, мутацией Ό55Ι-Υ58Ρ или мутацией ρ95^Τ96δ; или
    _)) вариабельную область тяжелой цепи, как определено в 1), но с мутацией Ю18-В4М.
  33. 33. Выделенная нуклеиновая кислота по п.32, отличающаяся тем, что полипептид содержит легкую цепь.
  34. 34. Выделенная нуклеиновая кислота по п.33, отличающаяся тем, что легкая цепь кодируется нуклеиновой кислотой, содержащей последовательность нуклеотидов, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности нуклеотидов, представленной в δΕρ ΙΌ N0:51.
  35. 35. Выделенная нуклеиновая кислота по п.34, отличающаяся тем, что легкая цепь кодируется нуклеиновой кислотой, содержащей последовательность нуклеотидов, которая по меньшей мере на 90% идентична последовательности нуклеотидов, представленной в δΕρ ΙΌ N0:51.
  36. 36. Выделенная нуклеиновая кислота по п.35, отличающаяся тем, что легкая цепь кодируется нуклеиновой кислотой, содержащей последовательность нуклеотидов, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности нуклеотидов, представленной в δΕρ ΙΌ N0:51.
  37. 37. Выделенная нуклеиновая кислота по п.36, отличающаяся тем, что легкая цепь кодируется нуклеиновой кислотой, содержащей последовательность нуклеотидов, представленную в δΕρ ΙΌ N0:51.
  38. 38. Выделенная нуклеиновая кислота по п.32, отличающаяся тем, что полипептид содержит тяжелую цепь антитела.
  39. 39. Выделенная нуклеиновая кислота по п.38, отличающаяся тем, что тяжелая цепь кодируется нуклеиновой кислотой, содержащей последовательность нуклеотидов, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности нуклеотидов, представленной в δΕρ ΙΌ N0:5.
  40. 40. Выделенная нуклеиновая кислота по п.39, отличающаяся тем, что тяжелая цепь кодируется нуклеиновой кислотой, содержащей последовательность нуклеотидов, которая по меньшей мере на 90% идентична последовательности нуклеотидов, представленной в δΕρ ΙΌ N0:5.
  41. 41. Выделенная нуклеиновая кислота по п.40, отличающаяся тем, что тяжелая цепь кодируется нуклеиновой кислотой, содержащей последовательность нуклеотидов, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности нуклеотидов, представленной в δΕρ ΙΌ N0:5.
  42. 42. Выделенная нуклеиновая кислота по п.41, отличающаяся тем, что тяжелая цепь кодируется нуклеиновой кислотой, содержащей последовательность нуклеотидов, представленную в δΕρ ΙΌ N0:5.
  43. 43. Экспрессионный вектор, содержащий выделенную нуклеиновую кислоту по любому из пп.3242.
  44. 44. Экспрессионный вектор по п.43, отличающийся тем, что выделенная нуклеиновая кислота кодирует легкую цепь антитела.
  45. 45. Экспрессионный вектор по п.43, отличающийся тем, что выделенная нуклеиновая кислота кодирует тяжелую цепь антитела.
  46. 46. Экспрессионный вектор по п.44, дополнительно содержащий выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую тяжелую цепь антитела.
  47. 47. Рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая выделенную нуклеиновую кислоту по любому из пп.32-42, функционально связанную с промотором.
  48. 48. Рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая экспрессионный вектор по п.44 или 45.
  49. 49. Рекомбинантная клетка-хозяин по п.48, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин содержит экспрессионный вектор по пп.44 и 45.
  50. 50. Рекомбинантная клетка-хозяин по п.49, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин секретирует антитело, которое связывает СО27Ь.
  51. 51. Рекомбинантная клетка-хозяин по любому из пп.47-50, отличающаяся тем, что указанная клетка
    - 124 027900 происходит из организма млекопитающего.
  52. 52. Рекомбинантная клетка-хозяин по п.51, отличающаяся тем, что указанная клетка принадлежит к линии клеток яичника китайского хомячка (СНО).
  53. 53. Способ получения конъюгата антитела к СИ27Ь с лекарственным соединением, причем указанный способ включает этапы:
    a) получения связывающего антиген СИ27Ь белка по любому из пп.1-19;
    b) конъюгирования связывающего антиген СИ27Ь белка с линкером; и
    c) конъюгирования лекарственного средства с указанным линкером.
  54. 54. Способ получения конъюгата антитела к СИ27Ь с лекарственным соединением, причем указанный способ включает этапы:
    a) получения связывающего антиген СИ27Ь белка по любому из пп.1-19; и
    b) конъюгирования линкера, ковалентно связанного с лекарственным соединением, с указанным связывающим антиген СИ27Ь белком.
  55. 55. Способ по п.53 или 54, отличающийся тем, что связывающий антиген СИ27Ь белок представляет собой антитело.
  56. 56. Способ по п.55, отличающийся тем, что антитело содержит аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:66, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:20.
  57. 57. Способ по п.56, отличающийся тем, что антитело представляет собой АЬ4.
  58. 58. Способ по любому из пп.53-57, отличающийся тем, что линкер содержит МСС.
  59. 59. Способ по любому из пп.53-58, отличающийся тем, что лекарственное соединение содержит
    ΌΜ1.
  60. 60. Способ лечения рака, причем указанный способ включает введение терапевтически эффективного количества связывающего антиген СИ27Ь белка по любому из пп.1-19 нуждающемуся в этом пациенту.
  61. 61. Способ по п.60, отличающийся тем, что связывающий антиген СИ27Ь белок представляет собой антитело.
  62. 62. Способ по п.61, отличающийся тем, что антитело содержит аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:66, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Е0 ГО N0:20.
  63. 63. Способ по п.62, отличающийся тем, что антитело представляет собой АЬ4.
  64. 64. Способ по любому из пп.61-63, отличающийся тем, что фармацевтическая композиция содержит антитело.
  65. 65. Способ по п.64, отличающийся тем, что антитело обладает повышенной эффекторной функцией.
  66. 66. Способ по п.64, отличающийся тем, что фармацевтическая композиция содержит популяцию конъюгатов антитела с лекарственным соединением.
  67. 67. Способ по п.66, отличающийся тем, что конъюгат антитела с лекарственным соединением содержит линкер МСС.
  68. 68. Способ по п.66 или 67, отличающийся тем, что конъюгат антитела с лекарственным соединением содержит ΌΜ1.
  69. 69. Способ по п.68, отличающийся тем, что среднее число молекул ΌΜ1 на антитело составляет от 1 до 10.
  70. 70.
    3 до 7.
  71. 71.
    4 до 6.
  72. 72.
    Способ по п.69, отличающийся тем, что среднее число молекул ΌΜ1 на антитело составляет от
    Способ по п.70, отличающийся тем, что среднее число молекул ΌΜ1 на антитело составляет от Способ по п.71, отличающийся тем, что среднее число молекул ΌΜ1 на антитело составляет приблизительно 4,2, приблизительно 4,7, приблизительно 5,2, приблизительно 5,7, приблизительно 4,3, приблизительно 4,8, приблизительно 5,3, приблизительно 5,8, приблизительно 4,4, приблизительно 4,9, приблизительно 5,4, приблизительно 5,9 приблизительно 4,0, приблизительно 4,1, приблизительно 4,5, приблизительно 4,6, приблизительно 5,0, приблизительно 5,1, приблизительно 5,5, приблизительно 5,6, или приблизительно 6,0.
  73. 73. Способ по любому из пп.60-72, отличающийся тем, что взятый у пациента образец исследуют на экспрессию СИ27Ь.
  74. 74. Способ по п.73, отличающийся тем, что образец исследуют на экспрессию мРНК СИ27Ь.
  75. 75. Способ по п.73, отличающийся тем, что образец исследуют на экспрессию белка СИ27Ь.
  76. 76. Способ по любому из пп.73-75, отличающийся тем, что образец представляет собой образец крови.
  77. 77. Способ по любому из пп.73-75, отличающийся тем, что образец представляет собой биоптат.
  78. 78. Способ по любому из пп.60-77, отличающийся тем, что рак представляет собой почечноклеточные карциномы (ПКК), светлоклеточную ПКК, рак головы и шеи, глиобластому, рак молочной
    - 125 027900 железы, опухоль мозга, назофарингеальную карциному, неходжкинскую лимфому (НХЛ), острый лимфоцитарный лейкоз (ОЛЛ), хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), лимфому Беркитта, анапластические крупноклеточные лимфомы (АБСБ), множественные миеломы, Т-клеточные лимфомы кожи, узелковые мелкоклеточные лимфомы с рассеченными ядрами, лимфоцитарные лимфомы, периферические Т-клеточные лимфомы, лимфомы Ленерта, иммунобластную лимфому, Т-клеточный лейкоз/лимфому (АТЬБ), Т-клеточный лейкоз взрослых (Т-АББ), энтробластную/центроцитарную (сЬ/сс) фолликулярную злокачественную лимфому, диффузную В-крупноклеточную лимфому, Т-клеточную лимфому по типу ангиоиммунобластной лимфаденопатии (А1ББ), ассоциированную с ВИЧ лимфому брюшной полости, эмбриональную карциному, недифференцированную карциному носоглотки, болезнь Кастлемана, саркому Капоши, множественные миеломы, макроглобулинемию Вальденстрема или другие В-клеточные лимфомы.
  79. 79. Способ по п.78, отличающийся тем, что рак представляет собой ПКК.
  80. 80. Способ по п.78, отличающийся тем, что рак представляет собой НХЛ.
  81. 81. Способ по п.78, отличающийся тем, что рак представляет собой ХЛЛ.
  82. 82. Способ лечения аутоиммунного или воспалительного нарушения, причем указанный способ включает введение терапевтически эффективного количества связывающего антиген СБ27Б белка по любому из пп.1-19 нуждающемуся в этом пациенту.
  83. 83. Способ по п.82, отличающийся тем, что связывающий антиген СБ27Б белок представляет собой антитело.
  84. 84. Способ по п.83, отличающийся тем, что антитело содержит аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, представленную в 8Ε^ ГО N0:66, и аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, представленную в 8Ε^ ГО N0:20.
  85. 85. Способ по п.84, отличающийся тем, что антитело представляет собой АЬ4.
  86. 86. Способ по п.82, отличающийся тем, что указанный антигенсвязывающий белок ингибирует связывание СО27 с СО27Б.
  87. 87. Способ по любому из пп.82-86, отличающийся тем, что аутоиммунное или воспалительное нарушение представляет собой системную красную волчанку (СКВ), инсулинозависимый сахарный диабет (ΙΏΏΜ), воспалительную болезнь кишечника (ВБК, ΙΒΏ), рассеянный склероз (РС), псориаз, аутоиммунный тироидит, ревматоидный артрит (РА) или гломерулонефрит.
  88. 88. Способ по любому из пп.82-86, отличающийся тем, что лечение подавляет или предотвращает отторжение трансплантата у пациента.
  89. 89. Способ по любому из пп.82-86, отличающийся тем, что лечение подавляет болезнь трансплантат против хозяина (ΘΥΗΌ, ТПХ).
    Эпитоп Βίη Аффинность Ни ЕЙасоге КомИ Нативные клетки Авидн, ЕС50нМ Супо Авидн. ЕС50НГ.1 АЗКЦ ЕСБОпМ АЗКФ ЕС50 иН кзц # ЕС50 нМ Интерналнсацин Т 'Л (часы) Химерное антитело мыши к СО271 человека 3 1.25 0.60 2.22 0.195 2.17 2,64 0,41 АЫ ' 1 ' . : .0.62 ' ' ' 0.3? ' - ' ОДЗ ' · ' - 0.021 ’ 2.; ' ~ ТО ' тоз ' ;' : АЬЗ ' 1 0.59 ' 0.24 · · · 0.24· · : ' 0.034 : · 1.19· ; , 1.17 · ; 0:69 - Ί ' АЬЗ 1 4 35 4.18 2.80 0.715 С4 3 10,6 0.49 АМ 3 3.03 0.25 0.48 0.332 1 55 1,54 0.30 АЬ5 2 10.4 0.66 1.40 0.422 2.36 5.28 0.75 АЬЬ 4 6.06 0.87 0.87 0.167 1.33 4,20 1,08 АЬ7 · · 4 . ‘ ' олч - . ; . ' •0.18 \ ' о.43 / ': ; 0,076 . · 0,80 ; ' _ 0.64 ' 0,43 : : : АЬ8 2 1С 8 0.09 0.34 >67 1.60 >67 1.81
EA201490677A 2011-09-22 2012-09-20 Связывающие антиген cd27l белки EA027900B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161538024P 2011-09-22 2011-09-22
PCT/US2012/056429 WO2013043933A2 (en) 2011-09-22 2012-09-20 Cd27l antigen binding proteins

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201490677A1 EA201490677A1 (ru) 2014-08-29
EA027900B1 true EA027900B1 (ru) 2017-09-29

Family

ID=46964100

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790757A EA201790757A1 (ru) 2011-09-22 2012-09-20 Связывающие антиген cd27l белки
EA201490677A EA027900B1 (ru) 2011-09-22 2012-09-20 Связывающие антиген cd27l белки

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790757A EA201790757A1 (ru) 2011-09-22 2012-09-20 Связывающие антиген cd27l белки

Country Status (28)

Country Link
US (3) US8987422B2 (ru)
EP (1) EP2758437B1 (ru)
JP (2) JP6251678B2 (ru)
KR (1) KR102007055B1 (ru)
CN (1) CN104136461B (ru)
AP (1) AP2014007588A0 (ru)
AR (1) AR093186A1 (ru)
AU (2) AU2012312274B2 (ru)
BR (1) BR112014006822B1 (ru)
CA (1) CA2849318C (ru)
CL (2) CL2014000699A1 (ru)
CO (1) CO7020862A2 (ru)
CR (1) CR20140169A (ru)
EA (2) EA201790757A1 (ru)
ES (1) ES2806146T3 (ru)
HK (1) HK1199042A1 (ru)
IL (1) IL231603B (ru)
JO (1) JO3625B1 (ru)
MX (1) MX353958B (ru)
MY (1) MY173865A (ru)
PE (1) PE20141151A1 (ru)
SG (2) SG11201400859SA (ru)
TN (1) TN2014000120A1 (ru)
TW (2) TWI579298B (ru)
UA (1) UA118332C2 (ru)
UY (1) UY34343A (ru)
WO (1) WO2013043933A2 (ru)
ZA (1) ZA201402258B (ru)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2686347T3 (en) 2011-03-16 2018-06-25 Argenx Bvba Antibodies against CD70
MX353958B (es) * 2011-09-22 2018-02-07 Amgen Inc Proteinas de union al antigeno cd27l.
TWI679019B (zh) * 2013-04-29 2019-12-11 法商賽諾菲公司 抗ｉｌ－４／抗ｉｌ－１３之雙特異性抗體調配物
US20170101466A1 (en) * 2014-06-03 2017-04-13 Masahisa Handa Anti-blys antibodies
US10391168B1 (en) 2014-08-22 2019-08-27 University Of Bern Anti-CD70 combination therapy
WO2016036861A1 (en) 2014-09-02 2016-03-10 Immunogen, Inc. Methods for formulating antibody drug conjugate compositions
KR20170128234A (ko) 2015-01-16 2017-11-22 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Ror1에 특이적인 항체 및 키메라 항원 수용체
TWI717375B (zh) * 2015-07-31 2021-02-01 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Ｃｄ７０及ｃｄ３抗體構築體
AU2017213844A1 (en) 2016-02-02 2018-08-02 Fred Hutchinson Cancer Center Anti-ROR1 antibodies and uses thereof
JOP20190055A1 (ar) 2016-09-26 2019-03-24 Merck Sharp & Dohme أجسام مضادة ضد cd27
EP4008728A1 (en) * 2017-02-14 2022-06-08 Kite Pharma, Inc. Cd70 binding molecules and methods of use thereof
GB201800649D0 (en) 2018-01-16 2018-02-28 Argenx Bvba CD70 Combination Therapy
MX2020008183A (es) 2018-02-01 2020-09-22 Pfizer Anticuerpos especificos para cd70 y sus usos.
JP2020019723A (ja) * 2018-07-30 2020-02-06 国立大学法人 鹿児島大学 抗ＣＤ７０抗体とＩｇＧ結合ペプチドの複合体
UY38511A (es) 2018-12-18 2020-07-31 Argenx Bvba Terapia de combinación cd70
US20220106398A1 (en) * 2019-02-08 2022-04-07 Igm Biosciences, Inc. Anti-gitr antigen-binding domains and uses thereof
JP7425459B2 (ja) * 2019-10-11 2024-01-31 株式会社シノテスト 安定化されたｈｍｇｂ１含有溶液
WO2022099317A1 (en) * 2020-11-06 2022-05-12 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Bacterial biomarker for rheumatoid arthritis and related materials and methods
CN113312790A (zh) * 2021-06-16 2021-08-27 中国医学科学院放射医学研究所 一种辐射剂量的分析方法、装置、存储介质及电子设备
CN113754769B (zh) * 2021-10-13 2023-06-06 宜明昂科生物医药技术（上海）股份有限公司 靶向cd70的抗体及其制备和用途
WO2023196947A2 (en) * 2022-04-07 2023-10-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for activation and expansion of engineered natural killer cells and combinations with antibodies
WO2024040194A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5573924A (en) * 1992-09-08 1996-11-12 Immunex Corporation CD27 ligand
WO2004073656A2 (en) * 2003-02-20 2004-09-02 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
WO2006044643A2 (en) * 2004-10-15 2006-04-27 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders
WO2006113909A2 (en) * 2005-04-19 2006-10-26 Seattle Genetics, Inc. Humanized anti-cd70 binding agents and uses thereof
WO2007038637A2 (en) * 2005-09-26 2007-04-05 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to cd70
WO2008051424A2 (en) * 2006-10-20 2008-05-02 University Of Southampton Human immune therapies using a cd27 agonist alone or in combination with other immune modulators
WO2008070593A2 (en) * 2006-12-01 2008-06-12 Seattle Genetics, Inc. Variant target binding agents and uses thereof
WO2008074004A2 (en) * 2006-12-14 2008-06-19 Medarex, Inc. Human antibodies that bind cd70 and uses thereof
WO2009126934A2 (en) * 2008-04-11 2009-10-15 Seattle Genetics, Inc. Detection and tratment of pancreatic, ovarian and other cancers

Family Cites Families (137)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US3691016A (en) 1970-04-17 1972-09-12 Monsanto Co Process for the preparation of insoluble enzymes
CA1023287A (en) 1972-12-08 1977-12-27 Boehringer Mannheim G.M.B.H. Process for the preparation of carrier-bound proteins
US3896111A (en) 1973-02-20 1975-07-22 Research Corp Ansa macrolides
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4195128A (en) 1976-05-03 1980-03-25 Bayer Aktiengesellschaft Polymeric carrier bound ligands
US4330440A (en) 1977-02-08 1982-05-18 Development Finance Corporation Of New Zealand Activated matrix and method of activation
CA1093991A (en) 1977-02-17 1981-01-20 Hideo Hirohara Enzyme immobilization with pullulan gel
US4151042A (en) 1977-03-31 1979-04-24 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for producing maytansinol and its derivatives
US4137230A (en) 1977-11-14 1979-01-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for the production of maytansinoids
US4229537A (en) 1978-02-09 1980-10-21 New York University Preparation of trichloro-s-triazine activated supports for coupling ligands
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4263428A (en) 1978-03-24 1981-04-21 The Regents Of The University Of California Bis-anthracycline nucleic acid function inhibitors and improved method for administering the same
US4265814A (en) 1978-03-24 1981-05-05 Takeda Chemical Industries Matansinol 3-n-hexadecanoate
JPS5562090A (en) 1978-10-27 1980-05-10 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS55164687A (en) 1979-06-11 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS5566585A (en) 1978-11-14 1980-05-20 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS55164685A (en) 1979-06-08 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4309428A (en) 1979-07-30 1982-01-05 Takeda Chemical Industries, Ltd. Maytansinoids
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US4563304A (en) 1981-02-27 1986-01-07 Pharmacia Fine Chemicals Ab Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides
US4475196A (en) 1981-03-06 1984-10-02 Zor Clair G Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system
US4447233A (en) 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
DE3374837D1 (en) 1982-02-17 1988-01-21 Ciba Geigy Ag Lipids in the aqueous phase
US4439196A (en) 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4447224A (en) 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
US4486194A (en) 1983-06-08 1984-12-04 James Ferrara Therapeutic device for administering medicaments through the skin
HUT35524A (en) 1983-08-02 1985-07-29 Hoechst Ag Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance
US4615885A (en) 1983-11-01 1986-10-07 Terumo Kabushiki Kaisha Pharmaceutical composition containing urokinase
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US4751180A (en) 1985-03-28 1988-06-14 Chiron Corporation Expression using fused genes providing for protein product
DE3675588D1 (de) 1985-06-19 1990-12-20 Ajinomoto Kk Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist.
US4935233A (en) 1985-12-02 1990-06-19 G. D. Searle And Company Covalently linked polypeptide cell modulators
WO1987005330A1 (en) 1986-03-07 1987-09-11 Michel Louis Eugene Bergh Method for enhancing glycoprotein stability
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5011912A (en) 1986-12-19 1991-04-30 Immunex Corporation Hybridoma and monoclonal antibody for use in an immunoaffinity purification system
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4965195A (en) 1987-10-26 1990-10-23 Immunex Corp. Interleukin-7
US4968607A (en) 1987-11-25 1990-11-06 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
WO1990005183A1 (en) 1988-10-31 1990-05-17 Immunex Corporation Interleukin-4 receptors
KR0184860B1 (ko) 1988-11-11 1999-04-01 메디칼 리써어치 카운실 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법)
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US6291158B1 (en) 1989-05-16 2001-09-18 Scripps Research Institute Method for tapping the immunological repertoire
US5683888A (en) 1989-07-22 1997-11-04 University Of Wales College Of Medicine Modified bioluminescent proteins and their use
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5292658A (en) 1989-12-29 1994-03-08 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Boyd Graduate Studies Research Center Cloning and expressions of Renilla luciferase
ATE356869T1 (de) 1990-01-12 2007-04-15 Amgen Fremont Inc Bildung von xenogenen antikörpern
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
AU651596B2 (en) 1990-06-05 1994-07-28 Immunex Corporation Type II interleukin-1 receptors
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
WO1992015673A1 (en) 1991-03-11 1992-09-17 The University Of Georgia Research Foundation, Inc. Cloning and expression of renilla luciferase
US5262522A (en) 1991-11-22 1993-11-16 Immunex Corporation Receptor for oncostatin M and leukemia inhibitory factor
DE69233745D1 (de) 1991-12-02 2008-10-23 Cambridge Antibody Tech Herstellung von Autoantikörpern auf Phagenoberflächen ausgehend von Antikörpersegmentbibliotheken
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US6239328B1 (en) 1992-10-05 2001-05-29 North Carolina State University Method for reducing expression variability of transgenes in plant cells
AU678787B2 (en) 1992-10-23 1997-06-12 Immunex Corporation Methods of preparing soluble, oligomeric proteins
DE69329974T2 (de) 1992-12-04 2001-07-19 Medical Research Council, London Multivalente und multispezifische bindungsproteine, deren herstellung und verwendung
US5457035A (en) 1993-07-23 1995-10-10 Immunex Corporation Cytokine which is a ligand for OX40
DE69435112D1 (de) 1993-09-10 2008-08-21 Univ Columbia Verwendung von grünem fluoreszenzprotein
WO1995021191A1 (en) 1994-02-04 1995-08-10 William Ward Bioluminescent indicator based upon the expression of a gene for a modified green-fluorescent protein
US5777079A (en) 1994-11-10 1998-07-07 The Regents Of The University Of California Modified green fluorescent proteins
US5874304A (en) 1996-01-18 1999-02-23 University Of Florida Research Foundation, Inc. Humanized green fluorescent protein genes and methods
US5804387A (en) 1996-02-01 1998-09-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University FACS-optimized mutants of the green fluorescent protein (GFP)
US5876995A (en) 1996-02-06 1999-03-02 Bryan; Bruce Bioluminescent novelty items
US5925558A (en) 1996-07-16 1999-07-20 The Regents Of The University Of California Assays for protein kinases using fluorescent protein substrates
US6037525A (en) 1996-08-01 2000-03-14 North Carolina State University Method for reducing expression variability of transgenes in plant cells
US5976796A (en) 1996-10-04 1999-11-02 Loma Linda University Construction and expression of renilla luciferase and green fluorescent protein fusion genes
EP2305027B1 (en) 1996-12-03 2014-07-02 Amgen Fremont Inc. Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and Vkappa regions and antibodies produced therefrom
CA2271717A1 (en) 1996-12-12 1998-06-18 Prolume, Ltd. Apparatus and method for detecting and identifying infectious agents
US6245974B1 (en) 1997-08-06 2001-06-12 North Carolina State University Matrix attachment regions
GB9722131D0 (en) 1997-10-20 1997-12-17 Medical Res Council Method
DE69938293T2 (de) 1998-03-27 2009-03-12 Bruce J. Beverly Hills Bryan Luciferase, gfp fluoreszenzproteine, kodierende nukleinsaüre und ihre verwendung in der diagnose
US6177612B1 (en) 1998-07-31 2001-01-23 Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Department Of Agriculture And Agri-Food Canada Matrix attachment regions
CA2343080A1 (en) 1998-09-29 2000-04-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Mar/sar elements flanking rsyn7-driven construct
US6833268B1 (en) 1999-06-10 2004-12-21 Abgenix, Inc. Transgenic animals for producing specific isotypes of human antibodies via non-cognate switch regions
EP1242401B1 (en) 1999-11-24 2006-12-27 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising taxanes and their therapeutic use
KR100408844B1 (ko) 2000-07-29 2003-12-06 한국산업기술평가원 동물세포 발현벡터
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
WO2002048379A1 (en) 2000-12-15 2002-06-20 Pangen Biotech Inc. Expression vector for animal cell containing nuclear matrix attachment region fo interferon beta
JP4307079B2 (ja) 2001-01-26 2009-08-05 セレキス エスアー マトリックス付着領域およびその使用方法
JP4303105B2 (ja) 2001-06-28 2009-07-29 ドマンティス リミテッド 二重特異性リガンドとその利用
AR039067A1 (es) * 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
NZ533240A (en) 2001-11-27 2007-12-21 Oxford Glycosciences Uk Ltd Use of polypeptide for the treatment of epithelial-derived cancer
US7261892B2 (en) 2001-11-27 2007-08-28 Celltech R&D Limited Methods for diagnosis and treatment of epithelial-derived cancers
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
ES2263984T3 (es) 2002-06-28 2006-12-16 Domantis Limited Ligandos doble-especificos con una vida media serica aumentada.
JP2006500364A (ja) 2002-08-16 2006-01-05 イムノージェン インコーポレーテッド 高い反応性と溶解度を有する架橋剤および小分子薬物の標的化送達用コンジュゲートの調製におけるそれらの使用
AU2003290330A1 (en) 2002-12-27 2004-07-22 Domantis Limited Dual specific single domain antibodies specific for a ligand and for the receptor of the ligand
US20080025989A1 (en) 2003-02-20 2008-01-31 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
US7755007B2 (en) 2003-04-17 2010-07-13 K&H Manufacturing, Inc Heated pet mat
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
WO2005047512A2 (en) 2003-11-12 2005-05-26 Shering Corporation Plasmid system for multigene expression
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
EP1725586B1 (en) 2004-03-02 2015-01-14 Seattle Genetics, Inc. Partially loaded antibodies and methods of their conjugation
CA2567520A1 (en) 2004-06-01 2005-12-15 Genentech, Inc. Maytansinoid-antibody conjugates
SV2006002258A (es) * 2004-10-08 2006-09-19 Wyeth Corp Inmunoterapia de trastornos autoinmunes
US7641903B2 (en) 2004-10-15 2010-01-05 Seattle Genetics, Inc. Anti-CD70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders
EP1817341A2 (en) 2004-11-29 2007-08-15 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibodies and immunoconjugates
CA2595610C (en) * 2004-12-21 2013-03-05 Astrazeneca Ab Antibodies directed to angiopoietin-2 and uses thereof
US7301019B2 (en) 2005-01-21 2007-11-27 Immunogen, Inc. Method for the preparation of maytansinoid esters
WO2006138181A2 (en) 2005-06-14 2006-12-28 Amgen Inc. Self-buffering protein formulations
CA2615122A1 (en) 2005-08-03 2007-02-15 Immunogen, Inc. Immunoconjugate formulations
AU2006280146B2 (en) 2005-08-09 2012-06-28 Immunogen, Inc. Method of acylating maytansinol with chiral amino acids
CN101395920A (zh) 2006-03-01 2009-03-25 汤姆森特许公司 生成媒体包的设备与方法
CN101605906A (zh) * 2006-12-14 2009-12-16 梅达雷克斯公司 结合cd70的人类抗体及其用途
TWI439286B (zh) 2007-07-16 2014-06-01 Genentech Inc 抗－ｃｄ７９ｂ抗體及免疫共軛物及使用方法
US7695963B2 (en) 2007-09-24 2010-04-13 Cythera, Inc. Methods for increasing definitive endoderm production
MX350962B (es) 2008-01-07 2017-09-27 Amgen Inc Metodo para fabricar moleculas heterodimericas de fragmentos cristalizables de anticuerpo, utilizando efectos electrostaticos de direccion.
SG187517A1 (en) 2008-01-31 2013-02-28 Genentech Inc Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
KR101892411B1 (ko) 2008-04-30 2018-08-27 이뮤노젠 아이엔씨 가교제 및 그 용도
AR071891A1 (es) * 2008-05-30 2010-07-21 Imclone Llc Anticuerpos humanos anti-flt3 (receptor tirosina cinasa 3 tipo fms humano)
US8192738B2 (en) * 2008-09-19 2012-06-05 Medimmune, Llc Targeted antibodies directed to DLL4
JO3246B1 (ar) * 2009-09-09 2018-03-08 Regeneron Pharma اجسام مضادة بشرية ذات ألفة تفاعل عالية مع مستقبل 2 المفعل بالبروتين البشري
MX353958B (es) * 2011-09-22 2018-02-07 Amgen Inc Proteinas de union al antigeno cd27l.
US9401875B2 (en) 2012-06-01 2016-07-26 Nippon Telegraph And Telephone Corporation Packet transfer processing method and packet transfer processing device
US9209965B2 (en) 2014-01-14 2015-12-08 Microsemi Semiconductor Ulc Network interface with clock recovery module on line card
US9300829B2 (en) 2014-04-04 2016-03-29 Canon Kabushiki Kaisha Image reading apparatus and correction method thereof

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5573924A (en) * 1992-09-08 1996-11-12 Immunex Corporation CD27 ligand
WO2004073656A2 (en) * 2003-02-20 2004-09-02 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
WO2006044643A2 (en) * 2004-10-15 2006-04-27 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders
WO2006113909A2 (en) * 2005-04-19 2006-10-26 Seattle Genetics, Inc. Humanized anti-cd70 binding agents and uses thereof
WO2007038637A2 (en) * 2005-09-26 2007-04-05 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to cd70
WO2008051424A2 (en) * 2006-10-20 2008-05-02 University Of Southampton Human immune therapies using a cd27 agonist alone or in combination with other immune modulators
WO2008070593A2 (en) * 2006-12-01 2008-06-12 Seattle Genetics, Inc. Variant target binding agents and uses thereof
WO2008074004A2 (en) * 2006-12-14 2008-06-19 Medarex, Inc. Human antibodies that bind cd70 and uses thereof
WO2009126934A2 (en) * 2008-04-11 2009-10-15 Seattle Genetics, Inc. Detection and tratment of pancreatic, ovarian and other cancers

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CARTER P J: "POTENT ANTIBODY THERAPEUTICS BY DESIGN", THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY, NATURE PUB. GROUP, GB, vol. 6, 7 April 2006 (2006-04-07), GB, pages 343 - 357, XP007901440, ISSN: 1474-1733, DOI: 10.1038/nri1837 *
DAVIES, J. RIECHMANN, L.: "Affinity improvement of single antibody VH domains: residues in all three hypervariable regions affect antigen binding", IMMUNOTECHNOLOGY., ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS BV., NL, vol. 2, no. 3, 1 September 1996 (1996-09-01), NL, pages 169 - 179, XP004070292, ISSN: 1380-2933, DOI: 10.1016/S1380-2933(96)00045-0 *
HOLT, L.J. HERRING, C. JESPERS, L.S. WOOLVEN, B.P. TOMLINSON, I.M.: "Domain antibodies: proteins for therapy", TRENDS IN BIOTECHNOLOGY., ELSEVIER PUBLICATIONS, CAMBRIDGE., GB, vol. 21, no. 11, 1 November 2003 (2003-11-01), GB, pages 484 - 490, XP004467495, ISSN: 0167-7799, DOI: 10.1016/j.tibtech.2003.08.007 *
WARK, K.L. ; HUDSON, P.J.: "Latest technologies for the enhancement of antibody affinity", ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 58, no. 5-6, 7 August 2006 (2006-08-07), AMSTERDAM, NL, pages 657 - 670, XP024892147, ISSN: 0169-409X, DOI: 10.1016/j.addr.2006.01.025 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20130078237A1 (en) 2013-03-28
TW201326197A (zh) 2013-07-01
EA201790757A1 (ru) 2017-07-31
WO2013043933A2 (en) 2013-03-28
SG11201400859SA (en) 2014-04-28
CA2849318C (en) 2019-11-12
KR102007055B1 (ko) 2019-08-02
US8987422B2 (en) 2015-03-24
BR112014006822B1 (pt) 2021-05-18
US20150218284A1 (en) 2015-08-06
AR093186A1 (es) 2015-05-27
WO2013043933A3 (en) 2013-05-30
AU2018200154B2 (en) 2019-10-31
CL2016002340A1 (es) 2017-06-02
EP2758437A2 (en) 2014-07-30
UY34343A (es) 2013-04-05
CN104136461B (zh) 2021-06-08
CN104136461A (zh) 2014-11-05
CA2849318A1 (en) 2013-03-28
NZ622711A (en) 2016-06-24
US9574008B2 (en) 2017-02-21
US10266604B2 (en) 2019-04-23
IL231603B (en) 2018-10-31
CO7020862A2 (es) 2014-08-11
MX353958B (es) 2018-02-07
CR20140169A (es) 2014-08-18
HK1199042A1 (en) 2015-06-19
AU2018200154A1 (en) 2018-02-01
MX2014003482A (es) 2015-01-12
BR112014006822A2 (pt) 2017-04-04
NZ717820A (en) 2020-02-28
ZA201402258B (en) 2021-05-26
ES2806146T3 (es) 2021-02-16
JP6251678B2 (ja) 2017-12-20
AU2012312274B2 (en) 2017-11-16
KR20140069208A (ko) 2014-06-09
TN2014000120A1 (en) 2015-07-01
MY173865A (en) 2020-02-25
AU2012312274A1 (en) 2014-04-10
JP2018021031A (ja) 2018-02-08
TWI646109B (zh) 2019-01-01
UA118332C2 (uk) 2019-01-10
AP2014007588A0 (en) 2014-04-30
TW201728601A (zh) 2017-08-16
US20170267775A1 (en) 2017-09-21
JO3625B1 (ar) 2020-08-27
SG10201800158XA (en) 2018-02-27
EA201490677A1 (ru) 2014-08-29
JP2015501134A (ja) 2015-01-15
PE20141151A1 (es) 2014-09-25
EP2758437B1 (en) 2020-06-03
IL231603A0 (en) 2014-05-28
TWI579298B (zh) 2017-04-21
CL2014000699A1 (es) 2014-09-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA027900B1 (ru) Связывающие антиген cd27l белки
JP6522517B2 (ja) Ｃｄｈ１９およびｃｄ３に対する抗体構築物
JP7474817B2 (ja) オンコスタチンｍ受容体抗原結合タンパク質
JP6437922B2 (ja) Ｂｃｍａ抗原結合タンパク質
UA126657C2 (uk) ОДНОЛАНЦЮГОВА КОНСТРУКЦІЯ АНТИТІЛА ДО BCMA І CD3&lt;font face=&#34;Symbol&#34;&gt;e&lt;/font&gt;
US20220233705A1 (en) Combined therapies of activatable immune checkpoint inhibitors and conjugated activatable antibodies
UA125717C2 (uk) Конструкція антитіла до flt3 і cd3
UA120247C2 (uk) Антитіло до ceacam5 і його застосування
EA016783B1 (ru) Антигенсвязывающие белки для il-18 рецептора и их применение
EA030182B1 (ru) Антитела, специфические для кадгерина-17
JP2021508465A (ja) Ｍｕｃ１７及びｃｄ３に向けられる二重特異性抗体コンストラクト
US20220119545A1 (en) Cdcp1-targeted therapies
BR112020013018B1 (pt) Construto de anticorpo biespecífico, seu uso e composição farmacêutica
EA041171B1 (ru) Антитела к рецептору онкостатина m и их применение
NZ622711B2 (en) Cd27l antigen binding proteins
NZ717820B2 (en) Cd27l antigen binding proteins

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KG TJ TM