EA026210B1

EA026210B1 - Производное бензодиоксола, способ его получения и его применение

Info

Publication number: EA026210B1
Application number: EA201590074A
Authority: EA
Inventors: Хуа Бай; Сюйян Чжао; Цзиньцин ЧЖУН; Юнсян ГУН; Цифэн ЧЖУ; Сяоюй ЛЮ; Сяохэ ЧЖЭН; Лифэй ЛЮ
Original assignee: Чжэцзян Хайсан Фармасьютикал Ко., Лтд.
Priority date: 2012-07-03
Filing date: 2013-07-03
Publication date: 2017-03-31
Also published as: AU2013286523B2; WO2014005421A1; CL2014003607A1; CN103524515B; NZ703549A; ZA201500692B; NO2871184T3; MX357774B; EP2871184B1; SG11201500007WA; US9346818B2; EP2871184A4; US20150191480A1; PH12015500012B1; KR101650776B1; KR20150034224A; PH12015500012A1; DK2871184T3; CN103524515A; PT2871184T

Abstract

В настоящем изобретении предложены новые производные бензодиоксола и способы их получения. Эти соединения, представленные формулой I, или их фармацевтически приемлемые соли обладают ингибиторной активностью в отношении ацетилхолинэстеразы, поэтому их можно применять при лечении или предупреждении болезни Альцгеймера. Обозначения R, Rи А формулы I приведены в описании.

Description

Изобретение относится к классу новых производных бензодиоксола. Эти соединения обладают ингибиторной активностью в отношении ацетилхолинэстеразы, следовательно, их можно применять при лечении или предупреждении болезни Альцгеймера. Настоящее изобретение также относится к способу получения этих соединений.

Предшествующий уровень техники

С увеличением численности пожилого населения быстро возрастает популяция людей, страдающих болезнью Альцгеймера. Болезнь Альцгеймера также называют деменцией альцгеймеровского типа или сенильной деменцией альцгеймеровского типа. В настоящее время, хотя частота встречаемости этого заболевания во всем мире неизвестна, согласно последнему сообщению Ассоциации болезни Альцгеймера США приблизительно 5,4 млн человек в США страдали болезнью Альцгеймера к 2011 году, и популяция страдающих этим заболеванием в США возрастет приблизительно до 13,5 млн к 2050 году. Следовательно, существует неотложная потребность в разработке новых лекарственных средств для лечения этого заболевания, обладающих повышенной эффективностью и меньшими побочными эффектами.

Болезнь Альцгеймера является самой распространенной сенильной деменцией, и стала 6-й по значимости причиной смерти американцев и 5-й по значимости причиной смерти американцев в возрасте 65 лет или старше. Хотя данное заболевание широко и глубоко исследовано учеными, точная причина, вызывающая это заболевание, все еще неизвестна. Болезнь Альцгеймера является прогрессирующим заболеванием, и оно непрерывно уничтожает нервные клетки и разрушает нейронные связи в головном мозге, приводя в результате к разрушению ткани в головном мозге, что, в свою очередь, приводит в результате к потере памяти, сознательности и способности к здравому рассуждению у пациентов, а также к эмоциональному расстройству и расстройству поведения у пациентов.

Болезнь Альцгеймера принадлежит к роду необратимых заболеваний и не существует лекарственного средства, способного предотвратить это заболевание, а также не существует лекарственного средства, способного лечить это заболевание или продлить его прогрессирование. В наше время лекарственные средства для лечения этого заболевания могут только облегчить или улучшить симптомы данного заболевания. Существует 5 лекарственных средств, одобренных Управлением по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США (от англ. Ροοά апб Эгид Абт1Ш81га1юп), причем 4 из них являются ингибиторами ацетилхолинэстеразы. Ацетилхолин представляет собой род нейротрансмиттеров и представляет собой химическое вещество, высвобождаемое нервами. Если разрушается система, генерирующая ацетилхолин в головном мозге, т.е. холинергическая система, возникает расстройство памяти, ассоциированные с болезнью Альцгеймера. В свою очередь, функция ацетилхолинэстеразы состоит в катализе гидролиза ацетилхолина, т.е. в распаде ацетилхолина. Поскольку болезнь Альцгеймера сопровождается ослаблением активности ацетилхолина, ингибирование ацетилхолинэстеразы, таким образом, представляет собой один из подходов к лечению этого заболевания. Как упомянуто выше, 4 из 5 лекарственных средств, применяемых в медицине для лечения болезни Альцгеймера, является ингибиторами ацетилхолинэстеразы. Эти ингибиторы ацетилхолинэстеразы включают донепезил, такрин, ривастигмин и галантамин, где донепезил является лекарственным средством первой линии для лечения болезни Альцгеймера (διίβίιηοίο е! а1. ИЗ 4895841 и 5100901; Ра1Ш е! а1. УО 2007077443; РагШакагабЫ е! а1. УО 2005003092; 1)иЬе\ е! а1. УО 2005076749; Ои1тап е! а1. УО 200009483; ЗиддаюЮ е! а1. 1. Меб. СЬет. 1995, 38, 4821). Тем не менее, донепезил и другие 4 лекарственных средства могут только улучшить состояние пациентов, и такое улучшение является только временным, т.е. может длиться только 6-12 месяцев, и, кроме того, частоты ответа пациентов на эти лекарственные средства составляют только приблизительно 50% (АКНеипег'к ΑκκοαπΟοπ. 2011 АКНеипег' Э|8еа8е Рас18 апб Идигек, АКНеипег'к & Эетепйа, 2011, 7(2), 208). В настоящем изобретении предложены новые ингибиторы ацетилхолинэстеразы, представляющие собой новые производные бензодиоксола, и являющиеся лекарственными средствами для лечения болезни Альцгеймера, обладающими повышенной эффективностью и меньшими побочными эффектами по сравнению с донепезилом.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Одним из объектов настоящего изобретения является разработка новых ингибиторов ацетилхолинэстеразы, представляющих собой производные бензодиоксола или их фармацевтически приемлемые соли.

Соединения по настоящему изобретению могут быть представлены формулой I

где К¹ и К² независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода, метила и этила;

К¹ и К² вместе могут представлять собой =О; также К¹ и К² вместе с атомом углерода, соединяю- 1 026210 щим их, могут образовать 3-членное углеродное кольцо;

А выбран из группы, состоящей из фенила, К³-замещенного фенила, пиридинила, К⁴-замещенного пиридинила, пиримидинила, К⁵-замещенного пиримидинила, пирролила, К⁶-замещенного пирролила, пиридазинила, К⁷-замещенного пиридазинила, пиразолила и К⁸-замещенного пиразолила;

К³ представляет собой от 1 до 5 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С₁-С₃)алкила, (С₂-С₃)алкенила, (С₃-С₄)циклоалкила, (С₁-С₃)алкокси, трифторметила и циано;

К⁴ представляет собой от 1 до 4 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С₁-С₃)алкила, (С₂-С₃)алкенила, (С₃-С₄)циклоалкила, (С₁-С₃)алкокси, трифторметила и циано;

К⁵ представляет собой от 1 до 3 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С₁-С₃)алкила, (С₂-С₃)алкенила, (С₃-С₄)циклоалкила, (С₁-С₃)алкокси, трифторметила и циано;

К⁶ представляет собой от 1 до 4 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из (С1С3)алкила, (С2-С3)алкенила и (С3-С4)циклоалкила;

К⁷ представляет собой от 1 до 3 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С₁-С₃)алкила, (С₂-С₃)алкенила, (С₃-С₄)циклоалкила, (С₁-С₃)алкокси, трифторметила и циано;

К⁸ представляет собой от 1 до 3 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из (С₁С3)алкила, (С2-С3)алкенила и (С3-С4)циклоалкила;

или их фармацевтически приемлемая соль.

В другом воплощении изобретения А предпочтительно выбран из фенила, К³-замещенного фенила, пиридинила, К⁴-замещенного пиридинила, пиримидинила или К⁵-замещенного пиримидинила.

В другом воплощении изобретения упомянутые выше К¹ и К² предпочтительно представляют собой атом водорода или метил; К¹ и К² вместе представляют собой =0; или К¹ и К² вместе с атомом углерода, соединяющим их, образуют 3-членное углеродное кольцо; более предпочтительно К¹ и К² вместе с атомом углерода, соединяющим их, образуют 3-членное углеродное кольцо.

В другом воплощении изобретения упомянутый выше А предпочтительно представляет собой фенил, К³-замещенный фенил, пиридинил, К⁴-замещенный пиридинил, пиримидинил, К⁵-замещенный пиримидинил, пирролил, К⁶-замещенный пирролил, пиридазинил, К⁷-замещенный пиридазинил, пиразолил или К⁸-замещенный пиразолил; где К³ представляет собой от 1 до 5 заместителей, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С1-С3)алкила, (С1-С3)алкокси, трифторметила и циано; К⁴ представляет собой от 1 до 4 заместителей, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С1-С₃)алкила, (С₁-С₃)алкокси, трифторметила и циано; К⁵ представляет собой от 1 до 3 заместителей, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С1-С3)алкила, (С1С3)алкокси, трифторметила и циано; К⁶ представляет собой от 1 до 4 заместителей, предпочтительно выбранных из (С1-С3)алкила; К⁷ представляет собой от 1 до 3 заместителей, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С1-С₃)алкила, (С₁-С₃)алкокси, трифторметила и циано; К⁸ представляет собой от 1 до 3 заместителей, предпочтительно выбранных из (С₁-С₃)алкила.

В другом воплощении изобретения упомянутый выше А более предпочтительно представляет собой фенил, К³-замещенный фенил, пиридинил, пиримидинил, пирролил, К⁶-замещенный пирролил, пиридазинил или пиразолил; где К³ представляет собой от 1 до 5 заместителей, предпочтительно выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С₁-С₃)алкила, (С₁-С₃)алкокси, трифторметила и циано; К⁶представляет собой от 1 до 4 заместителей, предпочтительно выбранных из (С1-С3)алкила.

Наиболее предпочтительно А представляет собой фенил, 2-фторфенил, 3-фторфенил, 4-фторфенил, 2,6-дифторфенил, 2-пиридинил, 3-пиридинил, пиримидин-2-ил, пиррол-2-ил, 5-метилпиррол-2-ил, пиридазин-3-ил или 1Н-пиразол-5-ил.

Более конкретно соединение формулы I выбрано из следующих соединений:

- 2 026210

6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]-[1,3]диоксоло[4,5-Г]изоиндол-5,7-диона (1-1); 6-[2-[1-[(2-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-[1,3]диоксоло[4,54]изоиндол5,7-диона (1-2);

6-[2-[1-[(3-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-[1,3]диоксоло[4,54]изоиндол5,7-диона (1-3);

6-[2-[1-[(4-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол5,7-диона (1-4);

6-(2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-7-она (1-5); 6-(2-(1-[(2-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7-она (1-6);

6-(2-(1-[(3-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7-она (1-7);

6-(2-(1-[(4-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7-она (1-8);

6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]-5-метил-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-(] изоиндол-7-она (1-9);

6-(2-(1-[(2-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-5-метил-5Н-[1,3]диоксоло[4,5

4]изоиндол-7-она (1-10);

6-(2-(1-[(3-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-5-метил-5Н-[1,3]диоксоло[4,5 -1]изоиндол-7-она (1-11);

6-(2-(1-[(4-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-5-метил-5Н-[1,3]диоксоло[4,5 -1]изоиндол-7-она (1-12);

6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]-7,7-диметил-[1,3]диоксоло[4,5-(] изоиндол-5-она (1-13);

6-(2-(1-[(2-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-7,7-диметил-[1,3]диоксоло[4, 54]изоиндол-5-она (1-14);

6-(2-(1-[(3-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-7,7-диметил-[1,3]диоксоло[4, 54]изоиндол-5-она (1-15);

6-(2-(1-[(4-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-7,7-диметил-[1,3]диоксоло[4, 54]изоиндол-5-она (1-16);

6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]5р1го[[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-7,1'циклопропан]-5-она (1-17);

6-[2-[1-|(2-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7,1 ’-циклопропан]-5-она (1-18);

6-(2-(1-[(3-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7,Г-циклопропан]-5-она (1-19);

- 3 026210

6-[2-[1-[(4-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7,1’-циклопропан]-5-она (1-20);

6-[2-[1-[(2-хлорфенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7,1’-циклопропан]-5-она (1-21);

6-[2-[1-[[2-(трифторметил)фенил]метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3] диоксоло[4,5-1]изоиндол-7,Г-циклопропан]-5-она (1-22);

6-[2-[1-(орто-толуилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,54] изоиндол-7,1’-циклопропан]-5-она (1-23);

6-[2-[1-[(2-цианофенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,54] изоиндол-7,1 ’-циклопропан]-5-она (1-24);

6-[2-[ 1 -[(2,6-дифторфен и л)метил]-4- пиперидил]этил]спиро[[ 1,3]д иоксоло[4,5-1] изоиндол-7,1’-циклопропан]-5-она (1-25);

6-[2-[1-[(2-метоксифенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7,1’-циклопропан]-5-она (1-26);

6-[2-[1-[(3-метоксифенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7,1’-циклопропан]-5-она (1-27);

6-[2-[1 - [(4-метоксифен ил) метил]-4- пиперидил] этил]спиро[[ 1,3]д иоксоло[4,5-1] изоиндол-7,1 '-циклопропан]-5-она (Ι-28);

6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7,1 '-циклопропан]-5-она (Ι-29);

6-[2-[1-(3-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7,1 '-циклопропан]-5-она (I-30);

6-[2-[1-(4-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7,1 '-циклопропан]-5-она (1-31);

6-[2-[1-(пиримидин-2-илметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7,1 '-циклопропан]-5-она (Ι-32);

6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7,1'-циклопропан]-5-она гидрохлорида (1-33);

6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-7,1'циклопропан]-5-она гидрохлорида (1-34);

6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1] изоиндол-7,1'-циклопропан]-5-она фосфата (1-35);

- 4 026210

6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]-[1,3]диоксоло[4,54]изоиндол-5,7диона (1-36);

6-[2-[1-(пиридазин-3-илметил)-4-пиперидил]этил]-[1,3]диоксоло[4,5-(] изоиндол-5,7-диона (1-37);

6-[2-[1-(пиридазин-3-илметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,54] изоиндол-7,1 '-циклопропан]-5-она {Ι-38);

6-[2-[1 -(1 Н-пиррол-2-илметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,54] изоиндол-7,1 '-циклопропан]-5-она {Ι-39);

6-[2-[1 -[(5-метил-1 Н-пиррол-2-ил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3] диоксоло[4,5-Т]изоиндол-7,1 ^г-циклопропан]-5-она (Ι-40);

6-[2-[1 -(1 Н-пиразол-5-илметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-Т] изоиндол-7,1 ^г-циклопропан]-5-она (1-41);

или их фармацевтически приемлемой соли.

Среди упомянутых выше соединений предпочтительным соединением является:

6-[2-[ 1 - (2-пиридилметил)-4-п иперидил] этил]спиро[[ 1,3]диоксоло[4,5-(] изои ндол7,Г-циклопропан]-5-он (1-29) или его фармацевтически приемлемая соль.

Среди упомянутых выше соединений предпочтительными соединениями являются следующие соединения:

6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,54] изоиндол-7,1 ’-циклопропан]-5-он (Ι-29);

6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,54] изоиндол-7,Г-циклопропан]-5-она гидрохлорид (1-33); или

6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,54] изоиндол-7,Г-циклопропан]-5-она фосфат (Ι-35).

Другой аспект настоящего изобретения также относится к промежуточным соединениям, т.е. к соединению формулы IV и к соединению формулы II, используемым при получении соединения формулы I, как показано в следующей формуле.

Соединение, представленное формулой IV

где К¹ и К² являются такими, как определено выше;

К⁹ представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил (Вое). Соединение, представленное формулой II, или его соль:

где К¹ и К² являются такими, как определено выше.

Данные соли относятся к солям, образованным с кислотами, где кислоты предпочтительно выбраны из соляной кислоты, серной кислоты, трифторуксусной кислоты и т.д.

Во втором аспекте настоящего изобретения раскрыто применение соединения общей формулы I и его фармацевтических композиций при получении лекарственного средства для лечения или предупреж- 5 026210 дения заболеваний, связанных с ингибиторами ацетилхолинэстеразы.

В следующем аспекте настоящего изобретения раскрыто применение соединения общей формулы I при получении лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера.

Другой аспект настоящего изобретения сосредоточен на фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество соединений согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемых солей. Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может также содержать фармацевтически приемлемые носители, совместимые с соединением формулы I. Соединение формулы I можно вводить в традиционных дозируемых формах, таких как пероральные формы и инъекционные формы, включающие капсулу, таблетку, порошок, крахмальную капсулу, суспензию и раствор, предпочтительно его вводят в пероральных формах, более предпочтительно среди пероральных форм в таблетке и капсуле. Дозируемые формы и фармацевтические композиции можно готовить с традиционными фармацевтически приемлемыми эксципиентами и добавками, как и традиционными методами. Данные фармацевтически приемлемые эксципиенты и добавки включают нетоксичные совместимые наполнители, связующие вещества, разрыхлители, буферы, консерванты, антиоксиданты, смазывающие вещества, корригенты, загустители, красящие вещества, эмульгаторы и т.д.

Вторым объектом настоящего изобретения является разработка способа получения этих производных бензодиоксола (формула I). Этот способ включает взаимодействие соединения, представленного формулой II, или его соли с соединениями, представленными формулой Ш-1 или Ш-2

где К¹, К² и А являются такими, как определено выше;

X представляет собой атом галогена или гидроксил;

Υ представляет собой формил или алкоксикарбонил.

Когда X представляет собой гидроксил, А представляет собой пирролил или замещенный пирролил, и реакцию проводят в основных условиях (алкоголят натрия, алкоголят калия или натрий/спирт); и, когда Υ представляет собой алкоксикарбонил, А представляет собой пирролил или замещенный пирролил, и реакцию ускоряют натрием/спиртом, где соединение формулы II или его соль могут быть получены в соответствии с приведенным ниже способом, включающим удаление аминозащитной группы в соединении, представленном формулой IV

К⁹ представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил (Вое).

Настоящее изобретение также относится к способу образования соли между соединением формулы I и кислотой, т.е. к смешиванию соединения формулы I и соответствующих кислот (таких как соляная кислота, серная кислота, фосфорная кислота и т.д.) полностью и к последующей обработке, и, таким образом, получают соответствующие соли, как, например, при получении соединения 033, соединения 034 и соединения 035.

Третьим объектом настоящего изобретения является разработка получения промежуточного соединения (формула IV).

Аспектом настоящего изобретения является разработка способа получения соединения формулы 0ν-1) путем использования соединения V в качестве исходного вещества (как показано на приведенной ниже схеме 1). Данный способ подходит для соединения формулы (IV), где К¹ и К² вместе представляют собой =0; где К⁹ представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил (Вое); К¹⁰ представляет собой атом галогена или тозилокси.

- 6 026210

Другим аспектом настоящего изобретения является разработка способа получения соединения формулы (ГУ-2) путем использования соединения ГУ-1 в качестве исходного вещества, включающего сначала восстановление соединения, представленного формулой ГУ-1, до спирта, а затем преобразование полученного в результате гидроксила в легко отщепляемую группу ацетокси, и, наконец, удаление группы ацетокси путем каталитического гидрогенолиза (как показано на приведенной ниже схеме 2). Данный способ подходит для соединения формулы (IV). где оба К¹ и К², каждый, представляет собой атом водорода; где К⁹ представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил (Вое).

Следующим аспектом настоящего изобретения является разработка способа получения соединения формулы ГУ-3 путем использования соединения ГУ-2 в качестве исходного вещества и проведения моноалкилирования в положении бензила (т.е. группы СН₂ в 5-членном лактаме) соединения, представленного формулой ГУ-2 (как показано на приведенной ниже схеме 3). Данный способ подходит для соединения формулы ГУ, где К¹ представляет собой метил или этил и К² представляет собой атом водорода; где К⁹представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил (Вое).

Следующим аспектом настоящего изобретения является разработка способа получения соединения формулы ГУ-4 путем использования соединения ГУ-3 в качестве исходного вещества и проведения алкилирования в положении бензила (т.е. атома углерода, связанного с К¹) соединения, представленного формулой ГУ-3 (как показано на приведенной ниже схеме 4). Данный способ подходит для соединения формулы ГУ, где К¹ и К², каждый независимо, представляют собой метил или этил; где К⁹ представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно трет-бутоксикарбонил (Вое).

Следующим аспектом настоящего изобретения является разработка способа получения соединения формулы ГУ-5 путем использования соединения ГУ-1 в качестве исходного вещества, и первоначального восстановления соединения, представленного формулой ГУ-1, метильным реагентом Гриньяра с образованием спирта, а затем дегидратации полученного в результате спирта до алкена в кислых условиях, и, наконец, преобразования образовавшейся двойной связи углерод-углерод в 3 -членное кольцо путем использования Е1₂2п/ТФУ/СН₂Г₂ (как показано на приведенной ниже схеме 5). Данный способ подходит для соединения формулы (ГУ), где К¹ и К² вместе с атомом углерода, соединяющим их, образуют 3членное углеродное кольцо; где К⁹ представляет собой аминозащитную группу, предпочтительно третбутоксикарбонил (Вое); и X представляет собой атом галогена.

- 7 026210

Ели не указано иное, термины, используемые в настоящем изобретении, имеют обычные значения, известные в данной области техники. Кроме того, значения некоторых терминов, используемых в настоящем изобретении, являются такими, как описано ниже.

Атом галогена относится к атому фтора, хлора, брома и йода.

Алкил при отнесении к группе означает нормальную или разветвленную насыщенную алифатическую углеводородную группу. (С1-Сз)алкил включает метил, этил, н-пропил и 2-пропил.

Алкенил при отнесении к группе означает алифатические углеводородные группы, содержащие двойную связь углерод-углерод, и может быть нормальным или разветвленным. (С₂-С₃)алкенил включает этенил, пропенил, изопропенил и аллил.

Циклоалкил относится к насыщенному углеродному кольцу. (С₃-С₄)циклоалкил включает циклопропил и циклобутил. 3-членное кольцо имеет то же значение, что и 3-членное углеродное кольцо, и оба из них относятся к циклопропильному кольцу, т.е. К¹ и К² оба представляют собой СН₂ и связаны простой связью углерод-углерод.

Алкокси относится к группе (алкил-О-), где алкил является таким, как определено выше. (С₁С₃)алкокси включает метокси, этокси, н-пропокси и изопропокси.

Кроме того, термин фармацевтически приемлемая соль относится к определенной соли упомянутых выше соединений, которая может сохранять его исходную биологическую активность и подходит для фармацевтических применений. Фармацевтически приемлемая соль соединения, представленного формулой I, может представлять собой соль, образованную с подходящей кислотой, где подходящая кислота включает неорганическую кислоту и органическую кислоту, такую как уксусная кислота, бензолсульфоновая кислота, бензойная кислота, камфорсульфоновая кислота, лимонная кислота, этилсульфоновая кислота, фумаровая кислота, глюконовая кислота, глутаминовая кислота, бромисто-водородная кислота, соляная кислота, изетионовая кислота, молочная кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, янтарная кислота, серная кислота, винная кислота, пара-толуолсульфоновая кислота и т.д. Наиболее предпочтительна соляная кислота, фосфорная кислота или серная кислота.

Авторы изобретения обнаружили, что соединения, предложенные в настоящем изобретении, являются ингибиторами ацетилхолинэстеразы, обладающими высокой активностью, обладают значимым эффектом улучшения обучения и памяти, и их можно применять при лечении болезни Альцгеймера.

Далее настоящее изобретение проиллюстрировано примерами. В этих примерах приведено получение репрезентативных соединений, представленных формулой I, и соответствующие идентификационные данные их структур. Следует отметить, что приведенные ниже примеры являются иллюстративными, но не ограничивающими.

В приведенных ниже примерах, если не указано иное, все значения температуры относятся к градусам по Цельсию, и, если не указано иное, каждые сырьевые материалы и реагенты приобретены из коммерческого источника. Сырьевые материалы и реагенты, приобретенные из коммерческого источника, используют непосредственно без дополнительной очистки, если не указано иное.

Стеклянную посуду высушивали в печи или путем нагревания. За реакцией следили на стеклянной пластине с силикагелем-60 Р254 (0,25 мм) (тонкослойная хроматография (ТСХ)). Аналитическую тонкослойную хроматографию проводили и проявляли растворителем в соответствующем соотношении (об/об). Окончание реакции определяли как время расходования сырьевых материалов на ТСХ.

Спектр ¹Н ЯМР определяли с помощью прибора Вгикег (400 МГц), и химический сдвиг представляли в миллионных долях (млн^-1). Использовали тетраметилсилановый внутренний стандарт (0,00 млн^-1). Выражения в спектрах ¹Н ЯМР имели следующие значения: 5 = синглет, 4 = дублет, I = триплет, т = мультиплет, Ьг = широкий и 44 = двойной дублет. Когда приводили константу спин-спинового взаимодействия, она представлена в единицах Гц.

Масс-спектры определяли с помощью приборов ЖХ/МС (жидкостной хроматографии с масс- 8 026210 спектрометрией), и способ ионизации может представлять собой электрораспыление (ИЭР) или химическую ионизацию при атмосферном давлении (ХИ АД).

Все температуры плавления являются не скорректированными.

Приведенные ниже примеры приведены только для иллюстрации синтезов конкретных соединений согласно настоящему изобретению, но не предназначены для ограничения этими способами синтеза. Соединения, перечисленные ниже, могут быть также получены с помощью тех же схем синтеза и способов синтеза, как представленные ниже, при необходимости с соответствующей хорошо известной модификацией условий реакции, путем выбора соответствующих исходных веществ.

Описание графических материалов

Фиг. 1 представляет собой кривую концентрации лекарственного средства в плазме крови по времени у крысы после перорального введения донепезила гидрохлорида, соединения Σ-33 и Ι-35 (абсцисса представляет собой время, представленное в единицах часах (ч); а ордината представляет собой концентрацию, представленную в единицах наномоль на литр (нмоль/л)).

Примеры осуществления изобретения

Пример 1. Получение трет-бутил-4-[2-(5,7-диоксо-[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-6ил)этил]пиперидин-1-карбоксилата (соединение XI)

В реакционный сосуд на 1 л добавляли 52 г (0,27 моль) [1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-5,7-диона (соединение У-1, синтезировано в соответствии со способом, описанным в следующих ссылках: 1. Ат. СНет. 8ос., 1951, 73, 1371 и 1. Ат. СНет. §ое, 1963, 85, 473) и 320 мл диметилсульфоксида (ДМСО), смесь перемешивали и нагревали до 60°С, после полного растворения твердого вещества добавляли 110 мл раствора 23,4 г (0,42 моль) гидроксида калия в этаноле, полученную в результате смесь перемешивали в течение 15 мин, а затем добавляли 160 мл раствора 117 г (0,31 моль) трет-бутил-4-[2(тозилокси)этил]пиперидин-1-карбоксилата (соединение ν-1, синтезировано согласно способу, раскрытому в заявке РСТ νΟ 2007082731) в диметилсульфоксиде, после добавления реакционную смесь поддерживали при 60°С в течение 5 ч до завершения реакции, добавляли 500 мл этилацетата и 300 мл воды, проводили экстракцию, органический слой собирали, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали, фильтрат концентрировали до сухого состояния и получили 102,2 г неочищенного продукта, продукт выделяли с помощью колоночной хроматографии, и было получено 72 г соединения XI при выходе 65,8%.

Ή ЯМР (ДМСО-й₆): δ 0.90-1.00 (т, 2Н), 1.36 (к, 10Н), 1.46 (щ 2Н, 1=7.0 Гц), 1.66 (й, 2Н, 1=11.9 Гц), 2.62 (Ьг к, 2Н), 3.51 (1, 2Н, 1=7.0 Гц), 3.88 (й, 2Н, 1=11.5 Гц), 6.24 (к, 2Н), 7.32 (к, 2Н).

МС (ИЭР): т/ζ 425 [М+Ыа]+.

Пример 2. Получение 6-[2-(4-пиперидил)этил]-[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-5,7-диона гидрохлорида (соединение ΙΙ-1)

В реакционный сосуд на 500 мл добавляли 20 г (0,05 моль) соединения XI и 400 мл 10% раствора хлорида водорода в этилацетате, реакционную смесь держали при комнатной температуре в течение 2 ч, фильтровали, промывали, высушивали в печи и получили 15,5 г соединения ΙΙ-1 при выходе 92,3%.

Ή ЯМР (Ό₂Θ): δ 1.40-1.64 (т, 5Н), 2.02 (й, 2Н, 1=13.4 Гц), 2.96-3.03 (т, 2Н), 3.45-3.50 (т, 4Н), 6.12 (к, 2Н), 6.79 (к, 2Н).

МС (ИЭР): т/ζ 303 [М-С1]+.

Пример 3. Получение 6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]-[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-5,7-диона (соединение Ι-1)

В реакционный сосуд добавляли 5 г (0,015 моль) соединения ΙΙ-1, 1,4 г (0,01 моль) карбоната калия, 100 мл ацетонитрила и 2,3 мл (0,02 моль) бензилхлорида, реакционную смесь нагревали до 50°С и дер- 9 026210 жали в течение 3-4 ч, добавляли 200 мл этилацетата и 100 мл воды, проводили экстракцию и органический слой собирали, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали, фильтрат концентрировали до сухого состояния, разделяли колоночной хроматографией и было получено 3,5 г соединения Σ-1 при выходе 60,4%.

¹Н ЯМР (ДМСО-а₆): δ 1.08-1.17 (т, 3Н), 1.48 (ц, 2Н, 1=6.6 Гц), 1.67 (ά, 2Н, 1=10.0 Гц), 1.85 (ί, 2Н, 1=10.8 Гц), 2.75 (ά, 2Н, 1=11.4 Гц), 3.41 (5, 2Н), 3.53 (ί, 2Н, 1=7.1 Гц), 6.27 (5, 2Н), 7.22-7.32 (т, 5Н), 7.37 (5, 2Н).

МС (ИЭР): т/ζ 393 [М+Н]+.

Следующие соединения были получены согласно способу в примере 3 путем использования соединения ΙΙ-1 в качестве исходного вещества и использования соответствующих реагентов:

Пример	Структура	Ή ЯМР(400 МГц) и МС (т/ζ)
4		Ή ЯМР (С0С1з): δ 1.24-1.32 (т, 3 Н), 1.58 (ц, 2 Н,1 = 7.5 Гц), 1.75 (0, 2 Η, 1 = 10.8 Гц), 2.00 ((, 2 Η, 1 = 11.0 Гц), 2.89 (а, 2 НМ = 11.5 Гц), 3.57 (5, 2 Н), 3.64 ((, 2 НМ = 7.4 Гц), 6.15 (з, 2 Н), 6.99-7.03 (т, 1 Н), 7.07-7.11 (т, 1 Н), 7.19(5, 2 Н), 7.21-7.23 (т, 1 Н), 7.37 (1, 1 Н, 1 = 7.1 Гц); МС (ИЭР): т/ζ 411 [М+Н]⁺.
5	° 1-3	Ή ЯМР (СОС1₃): δ 1.27-1.34 (т, 3 Н), 1.57-1.62 (т, 2 Н), 1.74 (а, 2 НМ = 9.4 Гц), 1.93 (1,2 НМ = 10.7 Гц), 2.84 (б, 2 НМ = 11-3 Гц), 3.46 (5, 2 Н), 3.65 (1, 2 НМ = 7.2 Гц), 6.15(5, 2 Н>, 6.89-6.94(т, 1 Н), 7.03-7.07 (т, 2 Н), 7.19 (5,2 Н), 7.21-7.27 (т, 1 Н); МС (ИЭР): т/ζ 411 [М+Н]*.
6	Ь „	Ή ЯМР (ДМСОМе): δ 1.08-1.20 (т, ЗН), 1.48 (я, 2 НМ = 6.7 Гц), I. 67 (а, 2 нм = 10.2 Гц), 1.84(1, 2 НМ = 11.0 Гц), 2.74 (а, 2 НМ = II. 4 Гц), 3.39 (5, 2 Н), 3.53 (1, 2 Н, 1 = 7.2 Гц), 6.27 (5, 2 Н), 7.09-7.14 (т, 2 Н), 7.28-7.31 (т, 2 Н), 7.37 (5, 2 Н); МС(ИЭР): т/ζ 411 [М+Н]⁺.

Пример 7. Получение трет-бутил-4-[2-(5-гидрокси-7-оксо-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-6ил)этил] пиперидин-1-карбоксилата (соединение VII-1)

В реакционный сосуд добавляли 92 г (0,23 моль) соединения XI, 250 мл метанола и 250 мл тетрагидрофурана при перемешивании, смесь охлаждали до температуры от 0 до примерно 10°С, добавляли 10 г (0,26 моль) боргидрида натрия, реакционную смесь держали при температуре от 0 до примерно 10°С в течение 20-30 мин, добавляли 100 мл воды, реакционную смесь концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении (при 45°С). К остатку добавляли 500 мл этилацетата и 300 мл воды и экстрагировали, органический слой собирали, высушивали над сульфатом натрия, концентрировали до небольшого количества, добавляли 300 мл петролейного эфира, твердое вещество осаждали, фильтровали, фильтрационный кек промывали петролейным эфиром, высушивали и было получено 64,7 г соединения νΐΙ-1 при выходе 70%.

Ή ЯМР (ДМСО-а₆): δ 0.95-1.04 (т, 2Н), 1.39 (8, 10Н), 1.51 (т, 2Н), 1.70 (άά, 2Н, 1=25.0, 12.4 Гц), 2.65 (Ьг 5, 2Н), 3.23-3.30 (т, 1Н), 3.54-3.61 (т, 1Н), 3.90 (ά, 2Н, 1=10.0 Гц), 5.67 (ά, 1Н, 1=8.9 Гц), 6.12 (5, 1Н), 6.13 (5, 1Н), 6.50 (ά, 1Н, 1=9.0 Гц), 7.08 (5, 1Н), 7.09 (5, 1Н).

МС (ИЭР): т/ζ 427 [М+Ыа]+.

- 10 026210

Пример 8. Получение трет-бутил-4-[2-(5-ацетокси-7-оксо-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-6ил)этил]пиперидин-1-карбоксилата (соединение УШ-1)

В реакционный сосуд на 500 мл добавляли 55 г (0,136 моль) соединения УП-1, 385 мл метилендихлорида, 43 мл (0,31 моль) триэтиламина и 1,8 г (0,015 моль) 4-диметиламинопиридина при перемешивании, добавляли 31 мл (0,33 моль) уксусного ангидрида, реакционную смесь держали при комнатной температуре в течение 1 ч, добавляли 200 мл воды, органический слой собирали, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали, фильтрат концентрировали до сухого состояния, и было получено приблизительно 79 г соединения УШ-1, которое использовали в следующей стадии непосредственно без дополнительной очистки.

Ή ЯМР (ДМСО-а₆): δ 0.94-1.02 (т, 2Н), 1.39 (5, 10Н), 1.43-1.54 (т, 2Н), 1.67 (ί, 2Н, 1=9.9 Гц), 2.14 (5, 3Н), 2.65 (Ьг5, 2Н), 3.17-3.24 (т, 1Н), 3.56-3.64 (т, 1Н), 3.90 (ά, 2Н, 1=10.6 Гц), 6.16 (ά, 1Н, 1=0.8 Гц),

6.18 (ά, 1Н, 1=0.6 Гц), 6.90 (5, 1Н), 7.14 (5, 1Н), 7.16 (5, 1Н).

МС (ИЭР): т/ζ 469 [М+Ыа]+.

Пример 9. Получение трет-бутил-4-[2-(7-оксо-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-6-ил)этил]пиперидин-1-карбоксилата (соединение XII)

В реакционный сосуд добавляли 79 г соединения УШ-1, 400 мл этилацетата и 17 г 5% палладия на углероде, содержащего 50% воды, проводили гидрогенизацию при 60°С при нормальном давлении в течение 7-8 ч до завершения реакции, фильтровали, фильтрат концентрировали до небольшого количества при пониженном давлении, добавляли по каплям петролейный эфир, смесь охлаждали, твердое вещество выпадало в осадок, его фильтровали, и было получено 33 г соединения XII при выходе приблизительно 62,5% (вычислен относительно соединения УП-1).

Ή ЯМР (ДМСО-ά^): δ 0.94-1.04 (т, 2Н), 1.39 (5, 10Н), 1.47-1.54 (т, 2Н), 1.69 (ά, 2Н, 1=11.6 Гц), 2.64 (Ьг 5, 2Н), 3.50 (1, 2Н, 1=7.0 Гц), 3.90 (ά, 2Н, 1=11.3 Гц), 4.32 (5, 2Н), 6.12 (5, 2Н), 7.08 (5, 1Н), 7.11 (5, 1Н).

МС (ИЭР): т/ζ 411 [М+Ыа]+.

Пример 10. Получение 6-[2-(4-пиперидил)этил]-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-7-он гидрохлорида (соединение П-2)

В реакционный сосуд добавляли 15 г (0,039 моль) соединения XII и 300 мл 10% раствора хлорида водорода в этилацетате, реакционную смесь держали при комнатной температуре в течение 30 мин до завершения реакции, концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении, перекристаллизовали смешанным раствором этанола и этилацетата, и было получено 10,5 г соединения П-2 при выходе 84,3%.

Ή ЯМР (Ό₂Θ): δ 1.38-1.49 (т, 2Н), 1.59-1.61 (т, 3Н), 1.98 (ά, 2Н, 1=13.5 Гц), 2.91-2.98 (т, 2Н), 3.42 (ά, 2Н, 1=12.8 Гц), 3.49 (1, 2Н, 1=7.0 Гц), 4.13 (5, 2Н), 5.97 (5, 2Н), 6.72 (5, 1Н), 6.76 (5, 1Н).

МС (ИЭР): т/ζ 289 [М-С1]+.

Пример 11. Получение 6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-7-она (соединение >5)

В реакционный сосуд добавляли 5 г (0,015 моль) соединения П-2, 1,4 г (0,01 моль) карбоната калия,

- 11 026210

100 мл ацетонитрила и 2,3 мл (0,02 моль) бензилхлорида, нагревали до 50°С и реакционную смесь держали в течение 3-4 ч до завершения реакции, добавляли 200 мл этилацетата и 100 мл воды, экстрагировали, органический слой собирали, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали, фильтрат концентрировали до сухого состояния и разделяли с помощью колоночной хроматографии, было получено 3,1 г соединения Σ-5 при выходе 53,4%.

¹Н ЯМР (СЭС1₃): δ 1.26-1.36 (т, 3Н), 1.57 (ц, 2Н, 1=7.5 Гц), 1.73 (ά, 2Н, 1=9.2 Гц), 1.93 (ί, 2Н, 1=10.6 Гц), 2.87 (ά, 2Н, 1=11.2 Гц), 3.48 (5, 2Н), 3.60 (ί, 2Н, 1=7.5 Гц), 4.23 (5, 2Н), 6.04 (5, 2Н), 6.83 (8, 1Н), 7.21 (5, 1Н), 7.22-7.26 (т, 1Н), 7.29-7.30 (т, 4Н).

МС (ИЭР): т/ζ 379 [М+Н]+.

Следующие соединения были получены согласно способу в примере 11 путем использования соединения ΙΙ-2 в качестве исходного вещества и использования соответствующих реагентов:

Пример	Структура	Ή ЯМР (400МГц) и МС (т/ζ)
12	1-6	¹Н ЯМР (СОС1₃): δ 1.29-1.34 (т,ЗН), 1.57 (ц, 2 Н, 1 = 5.4 Гц), 1.74(0, 2 Н, 1 = 3.3 Гц), 1.99(1, 2 Н, 1 = 10.2 Гц), 2.88 (ά, 2 Н, 1 = 10.7 Гц), 3.56(5, 2 Н), 3.59 (1, 2 Η, 1 = 7.2 Гц), 4.22 (5, 2 Н), 6.03 (5, 2 Н), 6.82 (5, 1 Н), 7.00 (1, 1 Η, 1 = 9.2 Гц), 7.08 (1,1 Η, 1 = 7.3 Гц), 7.20-7.22 (т, 2 Н), 7.35 (1, 1 Η, 1 = 7.1 Гц); МС (ИЭР)): т/ζ 397 [М+Н]*.
13	1-7	Ή ЯМР (ДМСО-а₆): δ 1.12-1.17 (т, 3 Н), 1.50 (ц, 2 Н, 1 = 5.4 Гц), 1.68 (ά, 2 Η, 1 = 8.5 Гц), 1.87 (1, 2 Η, 1 = 9.4 Гц), 2.75 (б, 2 Н, 1=10.6 Гц), 3.43 (8, 2 Н), 3.49 (1, 2 Η, 1 = 7.1 Гц), 4.31 (з, 2 Н), 6.12 (з, 2 Н), 7.03-7.12 (т, 5 Н), 7.32-7.37 (т, 1 Н); МС (ИЭР): т/ζ 397 [М+Н]*.
14	1-8	’Н ЯМР (СОС1₃): δ 1.26-1.32 (т,ЗН), 1.57 (я, 2 Н, 1 = 5.0 Гц), 1.72-1.74 (т, 2 Н), 1.92(1, 2 Н, 1=10.6 Гц), 2.83(0, 2 Н,1 = 10.9 Гц), 3.43 (з, 2 Н), 3.60 (1, 2 Η, 1 = 7.4 Гц), 4.23 (з, 2 Н), 6Ό4 (з, 2 Н), 6,83 (з, 1 Н), 6.96-7.00 (т, 2 Н), 7.21 (з, 1 Н), 7.24-7.27 (т, 2 Н); МС (ИЭР): т/ζ 397 [М+Н]*.

Пример 15. Получение трет-бутил-4-[2-(5-метил-7-оксо-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-6ил)этил]пиперидин-1-карбоксилата (соединение XIII)

В реакционный сосуд добавляли 30 г (0,077 моль) соединения XII и 300 мл тетрагидрофурана в атмосфере азота, смесь охлаждали до (-10)-(-15)°С, добавляли по каплям 78 мл (0,16 моль, 2 моль/л) раствора диизопропиламида лития (ЬЭЛ; от англ. Ιίΐΐιίιιιη йй5оргору1ат1йе) в н-гептане в течение приблизительно 30 мин, после завершения добавления реакционную смесь держали при этой температуре в течение 30 мин, добавляли по каплям 4,8 мл (0,077 моль) йодметана, после завершения добавления смесь подогревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч, добавляли 600 мл этилацетата и 300 мл воды, экстрагировали, органический слой собирали, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали, фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении, разделяли с помощью колоночной хроматографии, и было получено 14,5 г соединения XIII при выходе 46,7%.

Ή ЯМР (СЭС1₃): δ 1.07-1.21 (т, 2Н), 1.41 (ά, 3 Н, 1=6.7 Гц), 1.45 (5, 10Н), 1.55 (ц, 2Н, 1=7.4 Гц), 1.661.69 (т, 1Н), 1.80-1.83 (т, 1Н), 2.64-2.71 (т, 2Н), 3.17-3.24 (т, 1Н), 3.92-4.00 (т, 1Н), 4.06-4.09 (т, 2Н),

- 12 026210

4.41 (д, 1Н, 1=6.7 Гц), 6.05 (8, 2Н), 6.82 (5, 1Н), 7.20 (5, 1Н).

МС (ИЭР): т/ζ 403 [М+Н]+.

Пример 16. Получение 5-метил-6-[2-(4-пиперидил)этил]-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-7-он гидрохлорида (соединение ΙΙ-3)

XIII П-3

В реакционный сосуд добавляли 5 г (0,012 моль) соединения XIII, 30 мл этанола и 100 мл 10% раствора хлорида водорода в этилацетате, реакционную смесь держали при комнатной температуре в течение 1-1,5 ч, фильтровали, фильтрационный кек промывали этилацетатом, высушивали и было получено 3,4 г соединения ΙΙ-3 при выходе 81%.

Ή ЯМР (Ό₂Θ): δ 1.24 (ά, 3 Н, 1=7.0 Гц), 1.44-1.58 (т, 5Н), 1.98 (т, 2Н), 2.96 (т, 2Н), 3.21-3.25 (т, 1Н), 3.44 (ά, 2Н, 1=12.4 Гц), 3.64-3.72 (т, 1Н), 4.34 (д, 1 Н, 1=6.6 Гц), 5.94 (5, 2Н), 6.72 (5, 1Н), 6.79 (5, 1Н).

МС (ИЭР): т/ζ 303 [М+Н]+.

Пример 17. Получение 6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]-5-метил-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол7-она (соединение Ι-9)

В реакционный сосуд добавляли 2 г (0,006 моль) соединения ΙΙ-3 и 40 мл ацетонитрила, перемешивали, добавляли 2,4 г (0,017 моль) карбоната калия, 1,2 мл (0,0087 моль) триэтиламина и 1,5 мл (0,013 моль) бензилхлорида. Смесь нагревали до 50°С, реакционную смесь держали в течение 1,5 ч, добавляли 200 мл этилацетата и 100 мл воды, экстрагировали, органический слой собирали, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали, фильтрат концентрировали до сухого состояния, разделяли с помощью колоночной хроматографии, и было получено 1,1 г соединения Ι-9 при выходе 47,4%.

Ή ЯМР (СЭС1₃): δ 1.34-1.42 (т, 3Н), 1.46 (ά, 3 Н, 1=6.7 Гц), 1.59-1.64 (т, 2Н), 1.72-1.75 (т, 1Н), 1.86-1.89 (т, 1Н), 1.97-2.04 (т, 2Н), 2.94 (1, 2Н, 1=9.1 Гц), 3.21-3.28 (т, 1Н), 3.55 (5, 2Н), 3.97-4.05 (т, 1Н), 4.46 (д, 1Н, 1=6.7 Гц), 6.09 (5, 2Н), 6.87 (5, 1Н), 7.26 (5, 1Н), 7.29-7.32 (т, 1Н), 7.34-7.37 (т, 4Н).

МС (ИЭР): т/ζ 393 [М+Н]+.

Следующие соединения были получены согласно способу в примере 17 путем использования соединения ΙΙ-3 в качестве исходного вещества и использования соответствующих реагентов:

- 13 026210

Пример	Структура	Ή ЯМР (400МГц) и МС (т/ζ)
18	<0ХСО 1-10	Ή ЯМР (СЭС1₃): δ 1.36-1.42 (т, 3 Н), 1.46(0, ЗН, ϋ = 6.7 Гц), 1.58-1.63 (т, 2 Н), 1.73-1.76 (т, 1 Н), 1.87-1.89 (т, 1 Н), 2.05-2.10 (т, 2 Н), 2.95 (т, 2 Н), 3.20-3.27 (т, 1 Н), 3.63 (5, 2 Н), 3.98-4.05 (т, 1 Н), 4.46 (ц, 1 Η, ΰ = 6.6 Гц), 6.10(5, 2 Н), 6.87 (5, 1 Н), 7.07(1, 1 Η, ϋ = 9.1 Гц), 7.16(1,1 Η,ΰ = 7.4 Гц), 7.26-7.35 (т, 2 Н), 7.43 (1, 1 ни = 7.1 Гц); МС (ИЭР): т/ζ 411 [М+Н]⁺.
19	1-11	Ή ЯМР (СЭС1₃): δ 1.34-1.42 (т, 3 Н), 1.46(0, ЗН% = 6.8 Гц), 1.59-1.64 (т, 2 Н), 1.72-1.75 (т, 1 Н), 1.87-1.89 (т, 1 Н), 1.99-2.04 (т, 2 Н), 2.92 (1, 2 Η, ϋ = 8,9 Гц), 3.21-3.28 (т, 1 Н), 3.54(5, 2 Н), 3.97-4.05 (т, 1 Н), 4.47 (ς, 1 Η, 3 = 6.7 Гц), 6.10(5, 2 Н), 6.88(5, 1 Н), 6.96-7.01 (т, 1 Н), 7.10-7.15 (т, 2 Н), 7.26 (5, 1 Н), 7.30-7.34 (т, 1 Н); МС (ИЭР): т/ζ 411 [М+Н]⁺.
20	<Χ0θ'·Ο'· 1-12	Ή ЯМР (СЭС1₃): δ 1.32-1.40 (т, 3 Н), 1.46 (0,3 Η,ϋ = 6.7 Гц), 1.59-1.64 (т, 2 Н), 1.73-1.75 (т, 1 Н), 1.86-1.88 (т, 1 Н), 1.95-2.00 (т, 2 Н), 2.90 (1, 2 Η, ϋ = 8.2 Гц), 3.21-3.28 (т, 1 Н), 3.50 (5, 2 Н), 3.98-4.05 (т, 1 Н), 4.47 (ц, 1 Η, ΰ = 6.7 Гц), 6.10(5, 2 Н), 6.88(5, 1 Н), 7.02-7.06 (т, 2 Н), 7.26 (5, 1 Н), 7.31-7.34 (т, 2 Н); МС (ИЭР): т/ζ 411 [М+Н]-.

Пример 21. Получение трет-бутил-4-[2-(7,7-диметил-5-оксо-[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-6ил)этил]пиперидин-1-карбоксилата (соединение ХГУ)

XIII XIV

В реакционный сосуд добавляли 10 г (0,025 моль) соединения ХГГГ и 100 мл тетрагидрофурана, перемешивали в атмосфере азота, смесь охлаждали до (-10)-(-15)°С, добавляли по каплям 48 мл (0,096 моль, 2 моль/л) раствора диизопропиламида лития в н-гептане в течение приблизительно 30 мин, после завершения добавления реакционную смесь держали в течение 30 мин, а затем добавляли по каплям 1,6 мл (0,026 моль) йодметана, после завершения добавления смесь подогревали до комнатной температуры, а затем перемешивали в течение 1 ч, после завершения реакции добавляли 300 мл этилацетата и 150 мл воды, экстрагировали и промывали, органический слой собирали, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали, фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении, разделяли с помощью колоночной хроматографии, и было получено 5,6 г соединения ХГУ при выходе 54,2%.

МС (ИЭР): т/ζ 417 [М+Н]+.

Пример 22. Получение 7,7-диметил-6-[2-(4-пиперидил)этил]-[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-5-она гидрохлорида (соединение ГГ-4)

- 14 026210

В реакционный сосуд добавляли 2 г (0,0048 моль) соединения XIV, 10 мл этанола и 50 мл 10% раствора хлорида водорода в этилацетате, реакционную смесь держали при комнатной температуре в течение 1-1,5 ч, фильтровали, фильтрационный кек промывали этилацетатом, высушивали и было получено 1,2 г соединения П-4 при выходе 71%.

Ή ЯМР (Ό₂0): δ 1.27 (5, 6Н), 1.45 (т, 2Н), 1.56 (ц, 2Н, 1=6.9 Гц), 1.69 (Ьг 5, 1Н), 2.00 (ά, 2Н, 1=13.9 Гц), 3.00 (ί, 2Н, 1=12.6 Гц), 3.37 (ί, 2Н, 1=7.6 Гц), 3.45 (ά, 2Н, 1=12.3 Гц), 5.96 (5, 2 Н), 6.79 (5, 1Н), 6.86 (5, 1Н).

МС (ИЭР): т/ζ 317 [М-С1]+.

Пример 23. Получение 6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]-7,7-диметил-[1,3]диоксоло[4,5Р]изоиндол-5-она (соединение 013)

В реакционный сосуд добавляли 2,3 г (0,0065 моль) соединения П-4 и 46 мл ацетонитрила при перемешивании. Добавляли 6 г (0,043 моль) карбоната калия, 1,3 мл (0,0094 моль) триэтиламина и 1,7 мл (0,015 моль) бензилхлорида, смесь нагревали до 50°С, реакционную смесь держали в течение 2-3 ч, добавляли 200 мл этилацетата и 100 мл воды, экстрагировали и промывали, органический слой собирали, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали, фильтрат концентрировали до сухого состояния, разделяли с помощью колоночной хроматографии, и было получено 1,8 г соединения 013 при выходе 67,7%.

Ή ЯМР (ДМСО-а₆): δ 1.18-1.23 (т, 2Н), 1.26-1.33 (т, 1Н), 1.40 (5, 6Н), 1.50-1.56 (т, 2Н), 1.70 (ά, 2Н, 1=11.2 Гц), 1.89 (ί, 2Н, 1=10.4 Гц), 2.77 (ά, 2Н, 1=11.2 Гц), 3.35 (ί, 2Н, 1=7.8 Гц), 3.42 (5, 2Н), 6.12 (5, 2Н), 7.05 (5, 1Н), 7.21-7.25 (т, 2Н), 7.27-7.33 (т, 4Н).

МС (ИЭР): т/ζ 407 [М+Н]+.

Следующие соединения были получены согласно способу в примере 23 путем использования соединения П-4 в качестве исходного вещества и использования соответствующих реагентов:

Пример	Структура	’Н ЯМР (400МГц) И МС (ГЛ/Ζ)
24	сорт ' 1-14	Ή ЯМР (ДМСО-а₆): δ 1.13-1.22 (т,2Н), 1.23-1.28 (т, 1 Н), 1.39 (3, 6 Н), 1.48-1.54 (т,2Н), 1.70 (Р, 2 Н, 1=11.6 Гц), 1,94 (1, 2 Η, ϋ = 10.9 Гц), 2.78 (0, 2 НМ = 11.2 Гц), 3.33 (1, 2 НМ = 7.7 Гц), 3.48 (5, 2 Н), 6.10(3, 2 Н), 7.03 (3, 1 Н), 7.12-7.18 (т, 2 Н), 7.24 (з, 1 Н), 7.27-7.32 (т, 1 Н), 7.39 (1, 1 Н, ϋ = 7.4 Гц); МС (ИЭР): т/ζ 425 [М+Н]⁺.
25	со/-⁰''¹? ' 1-15	¹Н ЯМР (ДМСО-а₆): δ 1.15-1.24 (т, 2 Н), 1.25-1.31 (т, 1 Н), 1.40 (з, 6Н), 1.50-1.55 (т, 2 Н), 1.71 (0,2 НМ = 10.8 Гц), 1.91 (1,2 НМ = 11.2 Гц), 2.77 (а, 2 НМ = 11.5 Гц), 3.35 (1, 2 НМ = 8.2 Гц), 3.45 (з, 2 Н), 6.11 (з, 2 Н), 7.03-7.14 (т, 4 Н), 7.25 (3,1 Н), 7.32-7.38 (т, 1 Н); МС (ИЭР): т/ζ 425 [М+Н]⁺.
26	1-16	¹Н ЯМР (ДМСО-аГ 6 1.13-1.22 (т, 2 Н), 1.25-1.29 (т, 1 Н), 1.41 (з, 6 Н), 1.50-1.55 (т,2Н), 1.70 (а 2 НМ =11.2 Гц), 1.89 (1, 2 НМ = 10.7 Гц), 2.76 (а, 2 НМ = 11.2 Гц), 3.35 (1, 2 НМ = 7.7 Гц), 3.40 (3, 2 Н), 6.12(8, 2 Н), 7.04(5,1 Н), 7.12 (1,2 НМ = 8.9 Гц), 7.25 (з, 1 Н), 7.29-7.33 (т, 2 Н); МС (ИЭР): т/ζ 425 [М+Н]⁺.

- 15 026210

Пример 27. Получение трет-бутил-4-[2-(5-метилен-7-оксо-[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-6ил)этил]пиперидин-1-карбоксилата (соединение IX-!)

В реакционный сосуд добавляли 75 г (0,19 моль) соединения XI и 500 мл тетрагидро фурана при перемешивании в атмосфере азота. Смесь охлаждали до 0-10°С, в реакционный сосуд медленно добавляли 400 мл 1,2н. раствор метилмагния йодида/этилового эфира, реакционную смесь держали в течение 1 ч, добавляли небольшое количество воды до тех пор, пока пузырьки больше не образовывались, добавляли концентрированную соляную кислоту для доведения рН до кислого, реакционную смесь держали в течение 15 мин, добавляли 500 мл этилацетата и 300 мл воды, экстрагировали, промывали, органический слой собирали, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали, фильтрат концентрировали до небольшого количества, добавляли петролейный эфир, твердое вещество выпадало в осадок, его фильтровали, высушивали и было получено 47,6 г соединения ΙΧ-1 при выходе 63,8%.

¹Н ЯМР (ДМСО-б₆): δ 0.95-1.05 (т, 2Н), 1.38 (5, 10Н), 1.48 (φ 2Н, 1=7.0 Гц), 1.71 (ά, 2Н, 1=12.2 Гц), 2.65 (Ьг 5, 2Н), 3.70 (1, 2Н, 1=7.2 Гц), 3.90 (ά, 2Н, 1=11.6 Гц), 4.95 (5, 1Н), 5.34 (5, 1Н), 6.17 (5, 2Н), 7.15 (5, 1Н), 7.53 (5, 1Н).

МС (ИЭР): т/ζ 423 [М+Ыа]+.

Пример 28. Получение трет-бутил-4-[2-(5-оксоспиро[[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-7,Гциклопропан]-6-ил)этил]пиперидин-1-карбоксилата (соединение XV)

В реакционный сосуд добавляли 300 мл метилендихлорида и 300 мл (1 н.) раствора диэтилцинка в гексане в атмосфере азота. Смесь охлаждали до 0-10°С, добавляли по каплям 200 мл раствора, содержащего 23,1 мл (0,31 моль) трифторуксусной кислоты в метилендихлориде, в течение приблизительно 20 мин, после завершения добавления реакционную смесь держали в течение 20 мин, добавляли по каплям 200 мл раствора, содержащего 24 мл (0,3 моль) метилендийодида в метилендихлориде, после завершения добавления реакционную смесь держали в течение 20 мин, а затем добавляли по каплям 300 мл раствора 60 г (0,15 моль) соединения ΙΧ-1 в метилендихлориде, после завершения добавления смесь нагревали до 30°С, реакционную смесь держали в течение 3-4 ч, добавляли 500 мл воды, рН доводили до нейтрального 1н. хлоридом водорода, слои разделяли, органический слой собирали, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали, фильтрат концентрировали до сухого состояния при пониженном давлении и было получено соединение XV, это соединение повергали следующей реакции непосредственно.

¹Н ЯМР (СИС1₃): δ 1.08-1.19 (т, 2Н), 1.28 (άά, 2Н, 1=6.2, 7.4 Гц), 1.45 (5, 9Н), 1.48-1.57 (т, 5Н), 1.72 (ά, 2Н, 1=12.7 Гц), 2.69 (1, 2Н, 1=11.6 Гц), 3.20 (1, 2Н, 1=7.6 Гц), 4.07 (ά, 2Н, 1=13.1 Гц), 6.03 (5, 2Н), 6.43 (5, 1Н), 7.23 (5, 1Н).

МС (ИЭР): т/ζ 437 [М+Ыа]+.

Пример 29. Получение 6-[2-(4-пиперидил)этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-7,Гциклопропан]-5-она гидрохлорида (соединение ΙΙ-5)

В реакционный сосуд добавляли все соединение XV, полученное на вышеописанной стадии, и добавляли 750 мл этанола. Смесь нагревали до полного растворения, добавляли 36 мл концентрированной соляной кислоты, реакционную смесь держали приблизительно при 50-55°С в течение 5 ч, концентрировали приблизительно до 200 мл при пониженном давлении, добавляли по каплям 900 мл этилацетата, охлаждали и фильтровали, фильтрационный кек промывали и высушивали и было получено 24,3 г соединения ΙΙ-5 при выходе 46,2% (вычислен относительно соединения К-1).

¹Н ЯМР (Ό₂Θ): δ 1.06 (1, 2Н, 1=6.7 Гц), 1.32-1.46 (т, 6Н), 1.60 (т, 1Н), 1.91 (ά, 2Н, 1=13.5 Гц), 2.913.03 (т, 4Н), 3.39 (ά, 2Н, 1=12.8 Гц), 5.90 (5, 2Н), 6.18 (5, 1Н), 6.68 (5, 1Н).

МС (ИЭР): т/ζ 315 [М-С1]+.

- 16 026210

Пример 30. Получение 6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-7,Гциклопропан]-5-она (соединение 1-17)

В реакционный сосуд добавляли 2 г (0,006 моль) соединения ΙΙ-5 и 40 мл ацетонитрила при перемешивании, добавляли 1,2 г (0,008 моль) карбоната калия, 1 мл (0,007 моль) триэтиламина и 2 мл (0,017 моль) бензилхлорида. Смесь нагревали до 60°С, реакционную смесь держали в течение 2,5 ч, 200 мл этилацетата и 100 мл воды, экстрагировали, промывали, органический слой собирали, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали, фильтрат концентрировали до сухого состояния, разделяли с помощью колоночной хроматографии, и было получено 1,5 г соединения Ι-17 при выходе 65,2%.

¹Н ЯМР (СЭС1₃): δ 1.24-1.33 (т, 5Н), 1.49-1.57 (т, 4Н), 1.72 (4, 2Н, 1=9.6 Гц), 1.96 (ΐ, 2Н, 1=10.8 Гц), 2.87 (4, 2Н, 1=11.4 Гц), 3.19 (ΐ, 2Н, 1=7.8 Гц), 3.49 (8, 2Н), 6.03 (8, 2Н), 6.42 (5, 1Н), 7.22-7.25 (т, 2Н), 7.287.32 (т, 4Н).

МС (ИЭР): т/ζ 405 [М+Н]+.

Следующие соединения были получены согласно способу в примере 30 путем использования соединения ΙΙ-5 в качестве исходного вещества и использования соответствующих реагентов:

Пример	Структура	Ή ЯМР (400МГц) и МС (т/ζ)
31	1-18	Ή ЯМР (СОС1₃>: δ 1.23-1.31 (т, 5Н), 1.48-1.55 (т,4Н), 1.72 (4, 2 Η, ϋ = 9.2 Гц), 2.02(1, 2Н, 0= 10.3 Гц), 2.88(4, 2 НЩ = 11.2 Гц), 3.18(1, 2 Η, Э = 7.9 Гц), 3.56 (5, 2 Н), 6.02 (5, 2 Н), 6.41 (з, 1 Н), 6.99-7.03 (т, 1 Н), 7.07-7.11 (т, 1 Н), 7.19-7.25 (т, 2 Н), 7.35-7.39 (т, 1 Н); МС(ИЭР): т/ζ 423 [М+Н]⁺.
32	1-19	Ή ЯМР (СРСЬ): δ 1.24-1,32 (т, 5 Н), 1.49-1.56 (т, 4 Н>, 1.71 (4, 2 Η, ΰ = 10.2 Гц), 1.95 (1, 2 Н, Э = 10.7 Гц), 2.83 (4,2 Η, ΰ = 11.2 Гц), 3.19 (1, 2 Н, Э = 7.7 Гц), 3.45 (5, 2 Н), 6.02 (5, 2 Н), 6.41 (з, 1 Н), 6.89-6.93 (т, 1 Η), 7.03-7.07 (т, 2 Н), 7.21-7.27 (т, 2 Н); МС(ИЭР): т/ζ 423 [М+Н]⁺.
33	1-20	Ή ЯМР (СОС1₃): δ 1,24-1,32 (т, 5 Н), 1.49-1.56 (т, 4 Н>, 1,72 (4,2 Η, ΰ = 10.2 Гц), 1.94 (ί, 2 Н, Э = 10.7 Гц), 2.84 (4,2 Η, ΰ = 11.4 Гц), 3,18(1, 2 Н,Э = 7.9 Гц), 3.44 (5, 2 Н), 6.02 (в, 2 Н), 6,42(3,1 Н), 6.95-7,01 <т,2 Н), 7.24 (з, 1 Н), 7.25-7.28 (т, 2 Н); МС(ИЭР): т/ζ 423 [М+Н]⁺.
34	1-21	’Н ЯМР (С0С1з): δ 1,26-1,36 (т, 5 Н), 1.52-1.59 (т, 4 Н), 1,75 (4, 2 Η, ΰ = 9.9 Гц), 2.09 (1, 2 Н, Э = 10.3 Гц), 2.91 (4, 2 Η, ϋ = 11.2 Гц), 3.21 (1, 2 Η, ϋ = 7.9 Гц), 3.61 (5, 2 Н), 6.05 (5, 2 Н), 6.44(3,1 Н), 7.16-7.21 (т, 1 Н), 7.23-7.29 (т, 2 Н), 7.35 (44, 1 Η,ΰ = 7.8, 1.1Гц), 7,50 (4,1 Н, ϋ = 7.1 Гц); МС (ИЭР): т/ζ 439 [М+Н]⁺.

- 17 026210

35		Ή ЯМР (С0С1₃): δ 1.24-1.34 (ш,5Н), 1.50-1.58 (т, 4 Н), 1.72 {ά, 2 Η, 1 = 10.2 Гц), 2.04 {1, 2 Η, 1 = 10.8 Гц), 2,83 (0,2 Н, 1= 11.3 Гц), 3.19(1, 2 Н,1 = 7.9 Гц), 3.62 (з, 2 Н>, 6,02 (з, 2 Н), 6.42 (з, 1 Н), 7.24 (з, 1 Н), 7.30 (1, 1 Η, 1 = 7.6 Гц), 7.50 (1, 1 Н, Э = 7.5 Гц), 7.60 (б, 1 Η, ϋ = 7.9 Гц), 7.80 (ά, 1 Η, 1 = 7.7 Гц); МС(ИЭР): т/ζ 473 [М+Н]*.
36		Ή ЯМР (ΟϋΟΙ₃): δ 1.26-1.37 (т, 5Н), 1.51-1.58 (т, 4 Н), 1.71 (ά, 2 Н, 1 = 11.8 Гц), 1.99 (1, 2 Η, ΰ = 11.0 Гц), 2.37 {$, 3 Н), 2.87 (ά,2Η,1 = 11.0 Гц), 3.21 (1, 2 Η, 1 = 7.6 Гц), 3.43 (3, 2 Н), 6.04 (з, 2 Н), 6.44 (з, 1 Н), 7.16 (5, 3 Н), 7.26-7.29 (т, 2 Н); МС(ИЭР): т/ζ 419 [М+Н]⁺.
37	1-24	Ή ЯМР (СОС1₃): δ 1.25-1.33 (т,5Н), 1.49-1.57 (т, 4 Н), 1.72 (ά, 2 Н, 1 = 10.7 Гц), 2.09 (1, 2 Η, 1 = 10.8 Гц), 2.85 (0,2 Н, 1=11.1 Гц), 3.19(1, 2 Η, 1 = 7.8 Гц), 3.67 (з, 2 Н), 6.03 (з, 2 Н), 6.42 (з, 1 Н), 7.23 (5, 1 Н), 7.31-7.35 (т, 1 Н), 7.52-7.55 (т, 2 Н), 7.62 (ά, 1 Η, 1 = 7.7 Гц); МС(ИЭР): т/ζ 430 [М+Н]*.
38	щЧихб 1-25	Ή ЯМР (СОС1₃): δ 1.24-1.27 (т,5Н), 1.49-1.51 (т,4Н), 1.71 (ά, 2 Η, 1 = 9.0 Гц), 2.04 (1, 2 Н, 1= 10.4 Гц), 2,91 (0, 2 Η, 1 = 10.4 Гц), 3.17(1, 2 Н, 1 = 7.8 Гц), 3,68 (з, 2 Н), 6,02 (з, 2 Н), 6.41 (з, 1 Н), 6.87 (1, 2 Η, 1 = 7.5 Гц), 7.22 (т, 2 Н); МС(ИЭР): т/ζ 441 [М+Н]*.

- 18 026210

39	/--¹ 1-26	Ή ЯМР (ДМСО-б₆): 6 1.14-1.24 (т, ЗН), 1.33(1, 2 НМ = 7.2 Гц), 1.40(4, 2 НМ = 6.5 Гц), 1.57 (1, 2 НМ = 7.7 Гц), 1.66 (б, 2 НМ = 11-2 Гц), 1.86(1, 2 НМ = 10.8 Гц), 2.76 (б, 2 НМ = 11.1 Гц), 3.13(1,2 НМ = 7.6 Гц), 3.37 (δ, 2Н), 3.73 (з, 3 Н), 6.11 (5, 2 Н), 6.79-6.81 (т, 1 Н), 6.84-6.86 (т, 2 Н), 6.88 (з, 1 Н), 7.11 (з, 1 Н), 7.21 (1, 1 НМ = 7.9 Гц); МС(ИЭР): т/ζ 435 [М+Н]⁺.
40	«Хм?⁰?	’Н ЯМР (ДМСО-бб): δ 1.12-1.20 (т, ЗН), 1.33(1, 2 НМ =6.4 Гц), 1.40 (4,2 НМ = 6.4 Гц), 1.57 (1, 2 НМ = 7.7 Гц), 1.66 (б, 2 НМ = 11-0 Гц), 1.90(1, 2 НМ = 10.4 Гц), 2.78 (б, 2 НМ = 11-3 Гц), 3.13(1,2 НМ = 7.7 Гц), 3.41 (з, 2 Н), 3.76(3, ЗН), 6.10 (3,2Н), 6.88(3,1 Н), 6.91(6,1 НМ = 7.4 Гц), 6.95(3, 1 Н), 7.11 (5, 1 Н), 7.21 (1, 1 НМ = 7.3 Гц), 7.29(6,1 НМ = 7.4 Гц); МС(ИЭР): т/ζ 435 [М+Н]*.
41		¹Н ЯМР (ДМСО-б₆): 6 1.13-1.16 (т, 2Н), 1.23 (Ьг э, 1 Н), 1.39(1, 2 НМ = 6.9 Гц), 1.38 (4, 2 НМ = 6.6 Гц), 1.57(1, 2 НМ = 7.5 Гц), 1.65 (б,2НМ = 11-4 Гц), 1.83 (1,2 НМ = 11-0 Гц), 2.74(6, 2 НМ =11-1 Гц), 3.12(1, 2 НМ = 7.6 Гц), 3.34 (з, 2 Н), 3.73 (з, 3 Н), 6.10(3, 2 Н), 6.86(6, 2 НМ = 8.5 Гц), 6.88(3,1 Н), 7.10(3, 1 Н), 7.17(6, 2 НМ = 8.4 Гц); МС(ИЭР):т/г 435 [М+Н]*.

Пример 42. Получение 6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,51]изоиндол-7,1'-циклопропан]-5-она (соединение Σ-29)

В реакционный сосуд добавляли 24,3 г (0,069 моль) соединения П-5, 36,5 г (0,26 моль) карбоната калия, 243 мл этанола, 6,1 мл (0,044 моль) триэтиламина. Смесь нагревали приблизительно до 50°С, добавляли 31,5 г (0,049 моль) 2-хлорметилпиридина гидрохлорида, реакционную смесь держали при 50°С в течение 5 ч, добавляли 750 мл воды, твердое вещество выпадало в осадок, его фильтровали, фильтрационный кек промывали водой, высушивали и было получено 17,8 г соединения Σ-29 при выходе 63,4%.

Ή ЯМР (СЭС1₃): δ 1.26 (άά, 2Н, 1=6.1, 7.6 Гц), 1.35 (Ьг 5, 3Н), 1.49-1.57 (т, 4Н), 1.72 (ά, 2Н, 1=8.6 Гц), 2.08 (1, 2Н, 1=10.4 Гц), 2.89 (ά, 2Н, 1=10.7 Гц), 3.19 (1, 2Н, 1=7.9 Гц), 3.64 (5, 2Н), 6.03 (5, 2Н), 6.42 (5, 1Н), 7.15 (άά, 1Н, 1=5.2, 6.7 Гц), 7.24 (5, 1Н), 7.41 (ά, 1Н, 1=7.7 Гц), 7.64 (1ά, 1Н, 1=7.6, 1.8 Гц), 8.55 (ά, 1Н, 1=4.2 Гц).

МС (ИЭР): т/ζ 406 [М+Н]+.

Следующие соединения были получены согласно способу в примере 42 путем использования соединения ΙΙ-5 в качестве исходного вещества и использования соответствующих реагентов:

- 19 026210

Пример	Структура	¹Н ЯМР (400МГц) и МС (т/ζ)
43		’Н ЯМР {ССЮ1₃): δ 1.25-1.36 (т, 5 Н), 1.50-1.56 (т,4Н), 1.73(6,2 Н, б =11.8 Гц), 1.99 (1, 2 Η, 1 = 10.6 Гц), 2.84(6, 2 НМ =11.3 Гц), 3.19 (1, 2 НМ = 7.7 Гц), 3.49 (5, 2 Н), 6.03 (з, 2 Н), 6.43 (з, 1 Н), 7.23-7.29 (т, 2 Н), 7.67 (6, 1 НМ = 7.7 Гц), 8.50 (6, 1 НМ = 4.7 Гц), 8.52 (з, 1 Н); МС(ИЭР): т/ζ 406 [М+Н]⁺.

44		Ή ЯМР (СОС1₃): δ 1.25-1.34 (т, 5 Н), 1.50-1.57 (т, 4 Н), 1.73 (6, 2 НМ = 9.9 Гц), 1.99 (1, 2 НМ = 11.2 Гц), 2.82 (б, 2 НМ = 11.6 Гц), 3.19 (1,2 НМ = 7.8 Гц), 3.47 (з, 2 Н), 6.03 (з, 2 Н), 6.43 (з, 1 Н), 7.24(3, 1 Н), 7.26 (б, 2 НМ = 5.9 Гц), 8.53 (б, 2 НМ = 6.0 Гц); МС(ИЭР): т/ζ 406 [М+Н]⁺.
45		’Н ЯМР(СОС1₃): δ 1.27 (1, 2 НМ = 6.4 Гц), 1.32-1.40 (т, 3 Н), 1.43-1,57 (т, 4 Н), 1.72(6, 2 НМ = 10.0 Гц), 2.12(1, 2 нм = Ю.9 Гц), 2.95 (б, 2 НМ =11-4 Гц), 3.19(1, 2 НМ = 7.9 Гц), 3.79 (5,2 Н),6.03 (з, 2 Н), 6.42 (з, 1 Н), 7.19(1, 1 НМ = 4.9 Гц), 7.24 (з, 1 Н),8.73 (б, 2 НМ = 4.9 Гц); МС(ИЭР): т/ζ 407 [М+Н]⁺.

Пример 46. Получение 6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5Г]изоиндол-7,1'-циклопропан]-5-она гидрохлорида (соединение 1-33)

В реакционный сосуд добавляли 5 г (0,012 моль) соединения 1-29 и 25 мл этанола, нагревали при 50°С при перемешивании до полного растворения, добавляли 1 мл (0,012 моль) концентрированной соляной кислоты, 1 г активированного углерода и обесцвечивали в течение 20 мин, фильтровали, фильтрат охлаждали до комнатной температуры, добавляли по каплям 50 мл изопропилового эфира, твердое вещество выпадало в осадок, смесь перемешивали в течение 1 ч, фильтровали, фильтрационный кек промывали небольшим количеством изопропилового эфира, высушивали и было получено 5 г соединения 1-33 при выходе 91,7%. Это соединение может быть дополнительно очищено этанолом/изопропиловым эфиром при выходе приблизительно 90%.

Ή ЯМР (Э₂О): δ 1.14 (ΐ, 2Н, 1=7.0 Гц), 1.38-1.70 (т, 7Н), 1.96 (б, 2Н, 1=13.3 Гц), 2.99-3.14 (т, 4Н), 3.50 (б, 2Н, 1=11.0 Гц), 4.37 (к, 2Н), 5.93 (к, 2Н), 6.28 (к, 1Н), 6.75 (к, 1Н), 7.47 (бб, 1Н, 1=5.6, 7.5 Гц), 7.55 (б, 1Н, 1=7.8 Гц), 7.91 (!б, 1Н, 1=7.8, 1.7 Гц), 8.58 (б, 1Н, 1=4.4 Гц).

МС (ИЭР): т/ζ 406 [М-С1]+.

Пример 47. Получение 6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£|изоиндол-7,Гциклопропан]-5-она гидрохлорида высушивали, и было получено (соединение 1-34)

- 20 026210

Соединение Ι-34 было получено согласно способу в примере 46, используя 6-[2-(1-бензил-4пиперидил)этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,1'-циклопропан]-5-он (соединение Ι-17) в качестве исходного вещества.

Ή ЯМР (СЭС1₃): δ 1.27 (йй, 2Н, 1=6.2, 7.5 Гц), 1.48-1.66 (т, 5Н), 1.95-2.10 (т, 4Н), 2.62 (ййй, 2Н, 1=4.6, 12.4, 22.2 Гц), 3.25 (1, 2Н, 1=6.7 Гц), 3.43 (й, 2Н, 1=11.3 Гц), 4.11 (й, 2Н, 1=5.0 Гц), 6.04 (к, 2Н), 6.43 (к, 1Н), 7.21 (к, 1Н), 7.41-7.46 (т, 3Н), 7.62 (йй, 2Н, 1=2.3, 5.9 Гц), 12.31 (Ьг к, 1Н).

МС (ИЭР): т/ζ 405 [М-С1]+.

Пример 48. Получение 6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,51]изоиндол-7,1'-циклопропан]-5-она фосфата (соединение Ι-35)

В реакционный сосуд добавляли 2 г (0,0049 моль) соединения Ι-29 и 40 мл этанола, нагревали при 60°С при перемешивании до полного растворения, добавляли 0,57 г (0,0049 моль) 85% фосфорной кислоты, перемешивали, твердое вещество выпадало в осадок, добавляли по каплям 40 мл этилацетата, охлаждали до комнатной температуры, перемешивали в течение 1 ч, фильтровали, фильтрационный кек промывали небольшим количеством этилацетата, высушивали и было получено 2,1 г соединения Ι-35 при выходе 84,7%.

Ή ЯМР (Ό₂Θ): δ 1.10 (1, 2Н, 1=7.2 Гц), 1.33-1.64 (т, 7Н), 1.92 (й, 2Н, 1=13.4 Гц), 2.95-3.09 (т, 4Н), 3.46 (й, 2Н, 1=10.7 Гц), 4.34 (к, 2Н), 5.89 (к, 2Н), 6.20 (к, 1Н), 6.69 (к, 1Н), 7.45 (йй, 1Н, 1=5.2, 7.4 Гц), 7.53 (й, 1Н, 1=7.8 Гц), 7.88 (1й, 1Н, 1=7.7, 1.2 Гц), 8.54 (й, 1Н, 1=4.6 Гц).

Пример 49. Получение 6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]-[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол5,7-диона (соединение Ι-36)

Соединение Ι-36 было получено согласно способу в примере 3, используя 6-[2-(4-пиперидил)этил][1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-5,7-диона гидрохлорид (соединение ΙΙ-1) и 2-хлорметилпиридина гидрохлорид в качестве исходных веществ.

Ή ЯМР (ДМСО-й₆): δ 1.12-1.19 (т, 3Н), 1.48 (д, 2Н, 1=6.1 Гц), 1.67 (й, 2Н, 1=9.4 Гц), 1.94 (1, 2Н, 1=10.3 Гц), 2.76 (й, 2Н, 1=11.2 Гц), 3.54 (т, 4Н), 6.27 (к, 2Н), 7.24 (йй, 1Н, 1=6.8, 5.4 Гц), 7.38 (к, 2Н), 7.42 (й, 1Н, 1=7.8 Гц), 7.74 (1й, 1Н, 1=7.7, 1.4 Гц), 8.64 (й, 1Н, 1=4.2 Гц).

т/ζ 394 [М+Н]+.

Пример 50. Получение 6-[2-[1-(пиридазин-3-илметил)-4-пиперидил]этил]-[1,3]диоксоло[4,51]изоиндол-5,7-диона (соединение Ι-37)

Соединение Ι-37 было получено согласно способу в примере 3, используя 6-[2-(4-пиперидил)этил][1,3]диоксоло[4,5-Г]изоиндол-5,7-диона гидрохлорид (соединение ΙΙ-1) и 3-бромметилпиридазина гидробромид в качестве исходных веществ.

Ή ЯМР (СЭС1₃): δ 1.26-1.32 (т, 3Н), 1.58 (щ 2Н, 1=5.0 Гц), 1.75 (й, 2Н, 1=8.9 Гц), 2.12 (1, 2Н, 1=10.6 Гц), 2.81 (й, 2Н, 1=11.1 Гц), 3.65 (1, 2Н, 1=7.2 Гц), 3.84 (к, 2Н), 6.15 (к, 2Н), 7.19 (к, 2Н), 7.45 (йй, 1Н, 1=8.4, 4.9 Гц), 7.66 (йй, 1Н, 1=8.4, 1.2 Гц), 9.07 (йй, 1Н, 1=4.8, 1.6 Гц).

т/ζ 395 [М+Н]+.

Пример 51. Получение 6-[2-[1-(пиридазин-3-илметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,51]изоиндол-7,1'-циклопропан]-5-она (соединение Ι-38)

- 21 026210 пиперидил)этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-7,1'-циклопропан]-5-она гидрохлорид (соединение ΙΙ-5) и 3-бромметилпиридазина гидробромид в качестве исходных веществ.

Ή ЯМР (СОС1₃): δ 1.25-1.37 (т, 5Н), 1.49-1.58 (т, 4Н), 1.73 (ά, 2Н, 1=11.2 Гц), 2.14 (1, 2Н, 1=10.7 Гц), 2.82 (ά, 2Н, 1=11.6 Гц), 3.19 (1, 2Н, 1=7.8 Гц), 3.85 (5, 2Н), 6.03 (5, 2Н), 6.43 (5, 1Н), 7.23 (5, 1Н), 7.46 (άά, 1Н, 1=8.4, 4.9 Гц), 7.67 (ά, 1Н, 1=8.0 Гц), 9.08 (άά, 1Н, 1=4.8, 1.4 Гц).

т/ζ 407 [М+Н]+.

Пример 52. Получение 6-[2-[1-(1Н-пиррол-2-илметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,51]изоиндол-7,1'-циклопропан]-5-она (соединение Ι-39)

В реакционный сосуд добавляли 100 мл безводного этанола и 1,4 г (0,061 моль) натрия. После завершения реакции добавляли 4,2 г (0,043 моль) 1Н-пиррол-2-илметанола и 2,5 г (0,0071 моль) соединения М-5. Смесь нагревали до образования флегмы в течение 3 ч до завершения реакции, добавляли этилацетат и воду, экстрагировали, промывали, органический слой собирали, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, фильтрат концентрировали до сухого состояния, разделяли с помощью колоночной хроматографии, и было получено 1,5 г соединения Ι-39.

Ή ЯМР (ДМСОД₆): δ 1.10-1.19 (т, 3Н), 1.33-1.40 (т, 4Н), 1.57 (1, 2Н, 1=6.6 Гц), 1.64 (ά, 2Н, 1=11.7 Гц), 1.81 (1, 2Н, 1=11.1 Гц), 2.74 (ά, 2Н, 1=10.9 Гц), 3.13 (1, 2Н, 1=7.6 Гц), 3.34 (5, 2Н), 5.83 (5, 1Н), 5.90 (5, 1Н), 6.10 (5, 2Н), 6.61 (5, 1Н), 6.88 (5, 1Н), 7.10 (5, 1Н), 10.60 (5, 1Н).

т/ζ 394 [М+Н]+.

Примечание: 1Н-пиррол-2-илметанол может быть получен из 1Н-пиррол-2-карбоксальдегида путем восстановления боргидридом натрия.

Пример 53. Получение 6-[2-[1-[(5-метил-1Н-пиррол-2-ил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-1]изоиндол-7,1'-циклопропан]-5-она (соединение Ι-40)

В реакционный сосуд добавляли 300 мл безводного этанола, 10 г (0,029 моль) соединения ΙΙ-5, и добавляли 20 г (0,13 моль) этил-5-метил-1Н-пиррол-2-карбоксилата. Смесь перемешивали при комнатной температуре, добавляли порциями 30 г (1,30 моль) натрия, после завершения добавления смесь нагревали до 60-70°С, реакционную смесь держали в течение 5-6 ч, после завершения реакции добавляли этилацетат и воду, экстрагировали, промывали, органический слой собирали, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, фильтрат концентрировали до сухого состояния, разделяли с помощью колоночной хроматографии, и было получено 2 г соединения 1-40.

Ή ЯМР (ДМСОД₆): δ 1.08-1.22 (т, 3Н), 1.32-1.42 (т, 4Н), 1.57 (1, 2Н, 1=7.0 Гц), 1.65 (ά, 2Н, 1=11.5 Гц), 1.84 (1, 2Н, 1=9.1 Гц), 2.13 (8, 3Н), 2.78 (ά, 2Н, 1=10.2 Гц), 3.13 (1, 2Н, 1=7.5 Гц), 3.31 (5, 2Н), 5.57 (5, 1Н), 5.69 (5, 1Н), 6.10 (5, 2Н), 6.88 (5, 1Н), 7.10 (5, 1Н), 10.35 (5, 1Н).

т/ζ 408 [М+Н]+.

Пример 54. Получение 6-[2-[1-(1Н-пиразол-5-илметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,51]изоиндол-7,1'-циклопропан]-5-она (соединение 1-41)

В реакционный сосуд добавляли 10 г (0,029 моль) соединения ΙΙ-5, 3,4 г (0,035 моль) 1Н-пиразол-5карбальдегида и 150 мл безводного метанола при перемешивании, добавляли 3,6 мл (0,063 моль) уксусной кислоты, перемешивали в течение 30 мин, добавляли 2,5 г (0,040 моль) цианоборгидрида натрия, реакционную смесь держали при 50-60°С в течение 6 ч, охлаждали до комнатной температуры, добавляли 150 мл воды, рН реакционной смеси доводили до 8-9 гидроксидом натрия, а затем добавляли по каплям 300 мл воды, белое твердое вещество выпадало в осадок, его фильтровали и было получено 8,1 г соединения 1-41.

Ή ЯМР (ДМСОД₆): δ 1.09-1.21 (т, 3Н), 1.33 (1, 2Н, 1=7.1 Гц), 1.40 (д, 2Н, 1=7.8 Гц), 1.57 (1, 2Н, 1=7.5 Гц), 1.65 (ά, 2Н, 1=11.4 Гц), 1.89 (1, 2Н, 1=10.8 Гц), 2.77 (ά, 2Н, 1=10.4 Гц), 3.12 (1, 2Н, 1=7.6 Гц), 3.45

- 22 026210 (5, 2Н), 6.10 (5, 3Н), 6.88 (5, 1Н), 7.11 (5, 1Н), 7.56 (Ьг 5, 1Н), 12.58 (Ьг5, 1Н): т/ζ 395 [М+Н]+.

Фармакодинамический скрининг соединений согласно настоящему изобретению выполняли в соответствии с описанными ниже методами.

I. Фармакодинамический скрининг ίη νίίΓΟ.

В данном тесте использовали модифицированный метод Элмана (Αίνίη V. с1 а1. ί\νδ-υδί'.'-75-!Χ Ппргоуе5 [пГогтаОоп Ргосс551пд αηά СодшПуе Рипсйоп ίη Лтта1 Мοάе15 [ί]. ίοιιπκιΐ оГ РНагтасо1оду αηά ехрептеШа1 1Ьегареийс5, 2010, 336(3): 751) для тестирования ингибиторного эффекта серии соединений формулы I в отношении ацетилхолинэстеразы, и, таким образом, проводили скрининг активных ЛсЬЕ15, и их активность оценивали посредством значения КТ, ингибирования для серии соединений формулы I в отношении фермента. Результаты теста представлены в табл. 1.

Таблица 1

Данные ингибиторной активности соединения (I) в отношении ацетилхолинэстеразы

Соединение	Ю₅₀ <нМ)	Соединение	1С_Ю (нМ)
ДПГ	94	1-21	653
1-1	86	Ι-22	>2000
Ι-2	80	Ι-23	959
Ι-3	269	Ι-24	>2000
Ι-4	167	Ι-25	249
Ι-5	502	Ι-26	>2000
Ι-6	483	Ι-27	>2000
Ι-7	486	Ι-28	>2000
Ι-8	658	Ι-29	903
Ι-9	601	Ι-30	>2000
1-10	239	1-31	>2000
1-11	889	Ι-32	>2000
1-12	>2000	Ι-33	950
1-13	>2000	Ι-34	197
1-14	>2000	Ι-35	601
1-15	>2000	Ι-36	161
1-16	>2000	Ι-37	905
1-17	202	Ι-38	>2000
1-18	154	Ι-39	>2000
1-19	376	Ι-40	>2000
Ι-20	706	1-41	990

Донепезила гидрохлорид (ДПГ) использовали в фармакодинамическом скрининговом тесте ίη νίΐΐΌ в качестве положительного контрольного лекарственного средства, и результаты показали, что соединения Σ-1 и Σ-2 обладают несколько более высокой эффективностью, чем положительное контрольное лекарственное средство, на энзимологическом уровне; и Σ-3, Σ-4, 1-10, 1-17, 1-18, >25, >34 и >36 обладают несколько более низкой эффективностью, чем положительное контрольное лекарственное средство; Σ-5, Σ-6, Σ-7, Σ-8, Σ-9, Σ-11, 1-19, >20, Σ-21, >23, >29, >33, >35, Σ-37 и >41 обладают даже более низкой эффективностью; и Σ-12, Σ-13, Σ-14, Σ-15, Σ-16, Σ-22, Σ-24, Σ-26, Σ-27, Σ-28, Σ-30, Σ-31, Σ-32, Σ-38, Σ-39 и Σ-40 обладают относительно низкой активностью.

II. Фармакодинамический скрининг ίη νί\Ό.

А. Улучшение серией соединений формулы I расстройства обучения и памяти у мышей, индуцированного скополамином.

Скополамин является конкурентным антагонистом центрального холиноцептора М и может блокировать рецептор М1 и рецептор М2, вызывая расстройство памяти, и становится моделью сенильной деменции. Фармакодинамический скрининг серии соединений формулы Σ проводили путем использования донепезила гидрохлорида (ДПГ) в качестве положительного контрольного лекарственного средства. Тест Морриса в водном лабиринте проводили на животных после введения в течение 3-5 суток.

Материалы теста.

1. Подопытные животные.

Самцы мышей линии С57, 22±2 г. Животных содержали при цикле свет:темнота (10 ч/14 ч) при допустимом уровне чистоты для вивария при свободном доступе к воде и корму. Тесты проводили после 1 недели акклиматизации.

2. Инструменты теста: водный лабиринт Морриса.

3. Тестируемое лекарственное средство:

скополамин, донепезила гидрохлорид (ДПГ), серия соединений формулы Σ.

- 23 026210

Метод тестирования.

1. Группирование животных и схема дозирования.

Животных случайным образом делили на группы (15 животных на группу) по массе, включая нормальную группу, группу скополамина, группу донепезила гидрохлорида (ДПГ) и группы серии соединений формулы Ι. Животных дозировали внутрижелудочным путем (10 мл/кг). Нормальную группу и модельную группу дозировали равным объемом растворителя.

2. Тест Морриса в водном лабиринте.

2.1. Способ и метод теста.

Водный лабиринт Морриса состоит из округлого бассейна и автоматической системы снятия и обработки изображений. Устройство мониторинга начинало работать при входе животного в воду, регистрировало путь движения и анализировало и автоматически сообщало соответствующие параметры после завершения эксперимента.

Внутреннее пространство округлого бассейна в водном лабиринте Морриса было разделено на 4 квадранта равного размера. Платформу помещали в центр квадранта Ι, и положение платформы оставалось неизменным на протяжении всего поведенческого теста. За сутки до эксперимента добавляли соответствующее количество воды, так чтобы платформа была погружена под воду на 1 см. Перед экспериментом добавляли белый пищевой краситель (2 г/л), так что вода в бассейне становилась молочно-белой (воды в бассейне обновляли каждые сутки в течение эксперимента). Тренировочная стадия эксперимента длилась в течение 5 суток, два раза каждые сутки. В течение тренировки скополамин (1 мг/кг) инъецировали интраперитонеально за 30 мин до тренировки. Мышей помещали в бассейн, передом к стенке, в квадрант ΙΙΙ, время, требующееся мыши, чтобы найти скрытую платформу и встать на нее после помещения мыши в воду регистрировали как латентный период, выраженный в секундах (с). Мышей заставляли стоять на платформе в течение 10 с после нахождения платформы. Если мыши не находили платформу в течение 60 с после помещения в воду, латентный период регистрировали как 60 с, и мышей аккуратно втягивали на платформу и заставляли стоять в течение 10 с.

2.2. Проекты экспериментов.

1. Тест ориентирования на месте.

Этот тест применяли для проверки способности мышей приобретать знания и память о водном лабиринте. В этом тесте регистрировали период, требующийся мыши, чтобы найти платформу и влезть на нее, а также маршрут, т.е. регистрировали латентный период.

2. Тест на пространственный поиск.

Этот тест применяли для проверки способности мышей к запоминанию расположения платформы в пространстве после того, как мышь научилась находить платформу. После завершения теста на пространственный поиск платформу удаляли. Мышей помещали в воду в том же положении и регистрировали период, требующийся мыши, чтобы достичь исходного положения платформы в первый раз, а также число пересечений исходного положения платформы.

2.3. Определение биохимических показателей тканей головного мозга.

После завершения поведенческого теста мышей умерщвляли, ткани головного мозга собирали (работали на ледяной платформе) и получали 10% гомогената ткани с предварительно охлажденным физиологическим раствором, центрифугировали (3000 об/мин, 10 мин), и супернатант подвергали анализу с малоновым альдегидом (МДА) с помощью наборов.

Результаты теста.

(1) Терапевтические эффекты Ι-17, Ι-18 и Ι-19 на модели сенильной деменции мышей, индуцированной скополамином.

Подопытных животных делили на нормальную группу, группу скополамина (1 мг/кг), группу донепезила гидрохлорида (ДПГ) (5 мг/кг), группу Ι-17 (5 мг/кг), Ι-18 (5 мг/кг) и группу Ι-19 (5 мг/кг). Результаты теста Морриса в водном лабиринте представлены в табл. 2.

Таблица 2

Результаты теста Морриса в водном лабиринте Ι-17, Ι-18 и Ι-19 Латентный период (с)

Группа η _ число пересечении платформы

	сутки1	сугки2	сугкиЗ	Сугки4	СугкиБ
Нормальная 15	59,0+3,7	57,0+8,6	52,0+12,1	44,5+9,7	47,7+16,9	1,8+3,2
модельная	15	58,3+6,7	60+0	55,1+13,6	59,6+1,5	57,1+7,8	0,5+0,6
ДПГ	15	60+0	60+0	51,3+15,6	60+0	57,7+6,6	1,3+1,5*
1-17	15	56,8+8,6	60+0	48,7+15,7	56,7+8,1	47,2+13,4’	1,8+2,5’
1-18	15	60±0	60±0	53,1 ±10,4	56,9+8,2	56,8+8,6	0,5+0,6
1-19	15	60±0	60±0	55,2+11,8	57,3+10,4	53,9+12,4	0,8+1,4

* Р<0,05 по сравнению с модельной группой.

- 24 026210

Результаты показали, что по сравнению с модельной группой соединение Σ-17 значимо сокращало латентный период для влезания животных на платформу, в то же время, увеличивая число пересечений платформы животными. Это соединение может привести к улучшению расстройства памяти и обучения животных, индуцированного скополамином, и обладает преимуществом по сравнению с группой донепезила гидрохлорида. Соединения 018 и 019 могут привести к сокращению латентного периода для влезания животных на платформу, при этом увеличивая число пересечений платформы животными. Эти соединения могут привести к улучшению расстройства памяти и обучения животных, индуцированного скополамином.

(2) Терапевтические эффекты соединений Ь3 и 018 на модели сенильной деменции мышей, индуцированной скополамином.

Подопытных животных делили на нормальную группу, группу скополамина (1 мг/кг), группу донепезила гидрохлорида (ДПГ) (5 мг/кг), группу Ь3 (10 мг/кг), группу Ь3 (5 мг/кг), группу 1-18 (10 мг/кг) и группу 018 (5 мг/кг). Результаты тестирования в тесте Морриса в водном лабиринте представлены в табл. 3.

Таблица 3 (^Л +ЗЭ)

Результаты теста Морриса в водном лабиринте Σ-3 и Σ-18' ’

Латентный период (с)

Группа п число пересечений платформы сутки 1 сутки 2 сутки 3 сутки 4 сутки 5

нормальная	15	55,3+9,0	49,3+12,4	35,1+11,1	18,6+14,6	22,7+14,0	3,1+1,8
модельная	14	59,9+0,3	58,2+6,8	59,4+2,3	49,7+13,3	48,0+13,5	1,4±1,2
ДПГ	15	57,1+7,7	59,5+2,1	58,2+7,1	42,9+19,2	45,5+17,4	1,8+1,1
1-3 (10 мг/кг)	15	59,3+2,6	56,3+9,7	55,5+9,5	49,4+15,7	45,0+15,0	1,1+1,1
Ι-3 (5 мг/кг)	13	56,5+8,5	56,5+8,6	60+0	43,9+15,4	34,0+19,5”	1,9+1,5
1-18 (10 мг/кг)	14	56,0+9,9	52,4+12,4	60+0	48,8+15,4	49,2+15,9	1,5+1,2
1-18 (5 мг/кг)	15	55,0+10,3	55,9+9,0	60+0	51,8+15,6	35,6+15,4	1,5+1,7

* Р<0,05 по сравнению с модельной группой.

Результаты показали, что в тесте Морриса в водном лабиринте латентный период каждой группы имел склонность к уменьшению по времени, причем, по сравнению с модельной группой латентный период группы Ь3 снижается значимо, и его значение было приближено к группе донепезила гидрохлорида или выше. Соединение Σ-3 может обладать эффективностью, улучшающей расстройство обучения и памяти у мышей, индуцированное скополамином.

(3) Терапевтические эффекты соединений 014, 015, 023 и 029 в модели сенильной деменции мышей, индуцированной скополамином.

Подопытных животных делили на нормальную группу, группу скополамина (1 мг/кг), группу донепезила гидрохлорида (ДПГ) (5 мг/кг), группу 014 (5 мг/кг), группу 015 (5 мг/кг), группу 023 (5 мг/кг) и группу 029 (5 мг/кг). Результаты тестирования в тесте Морриса в водном лабиринте представлены в табл. 4, а результаты биохимических тестов представлены в табл. 5.

Таблица 4

Результаты теста Морриса в водном лабиринте 014, 015, 023 и 029 (^ХЛатентный период (с)

нормальная 15	57,5+5,8	50,3+18,0	47,4+15,1	43,1+16,9	36,0+18,5	2,4+2,6
модельная	15	59,7+1,2	57,5+6,9	56,8+8,4	53,5+12,2	55,6+12,5	0,8+0,9
ДПГ	15	60+0	59,6+1,4	57,0+8,0	57,2+7,5	53,7+11,5	1,6+1,7’
1-14	15	57,1+7,6	60+0	60+0	54,2+8,9	49,9+14,7	1,3+1,8
1-15	15	60+0	58,9+4,4	56,5+8,3	57,8+5,3	51,1+10,9	1,9+1,5’
Ι-23	13	57,8+5,4	57,7+7,1	55,5+8,8	43,9+14,1*	51,8+10,9	1,5+1,5*
Ι-29	15	59,3+2,7	54,6+12,5	48,0+15,8’	46,0+16,3	40,4+21,6*	1,5+1,4*

По сравнению с модельной группой, * Р<0,05.

- 25 026210

Таблица 5

Результаты биохимических тестов соединений Ι-14, Ι-15, Ι-23 и Ι-29
Г руппа	п	Доза (мг/кг)	МДА (нмоль/мг белка)
нормальная	15	—	7,85±2,3
модельная	15	—	10,12±4,7
дпг	15	5	8,44+3,09
1-14	15	5	7,36±1,3*
1-15	15	5	7,41 ±2,1*
Ι-23	13	5	6,53±2,3*
Ι-29	15	5	6,66+1,75*

* Р<0,05 по сравнению с модельной группой.

Результаты показали, что по сравнению с модельной группой в тесте Морриса в водном лабиринте латентный период каждой группы для влезания на платформу становился короче по времени, и пересечения платформы, особенно для группы Ι-29, были чаще, близко к группе донепезила гидрохлорида или значительно больше. В то же время в каждой группе могло снизиться содержание МДА в головном мозге животных. Среди прочего, соединение Ι-29 обладало значительным антиоксидантным эффектом и могло оказать влияние на улучшение расстройства обучения и памяти у мышей, индуцированное скополамином.

(4) Терапевтические эффекты соединений Ι-9 и Ι-17 в модели сенильной деменции мышей, индуцированной скополамином.

Подопытных животных делили на нормальную группу, группу скополамина (1 мг/кг), группу донепезила гидрохлорида (ДПГ) (5 мг/кг), группу Ι-9 (10 мг/кг), группу Ι-9 (5 мг/кг), группу Ι-17 (10 мг/кг) и группу Ι-17 (5 мг/кг). Результаты тестирования в тесте Морриса в водном лабиринте представлены в табл. 6.

Таблица 6

Результаты теста Морриса в водном лабиринте Ι-9 и Ι-17 (^Л±ЗО)

Латентный период (с)
Группа	п	сутки 1	сутки 2	сутки 3	сутки 4	ЧИСЛО пересечений платформы сутки 5
нормальная	15	55,7+6,2	45,0+18,8	44,6+15,0	35,9+16,8	28,0+16,6 2,60+2,10
модельная	15	58,4+5,5	59,7+1,3	55,3+8,3	52,8+10,3	50,6+16,0 1,33+1,23
Дпг	15	58,8+4,8	60+0	54,4+8,4	47,0+14,7	48,1+14,4 1,40+1,40
1-9 (10 мг/кг)	15	58,3+6,5	56,6+9,1	56,5+6,3	51,1 ±11,6	49,2+16,9 1,80+1,74
Ι-9 (5 мг/кг)	15	58,9+4,0	60+0	51,2+11,0	53,4+11,8	51,1+11,5 1,27+1,44
1-17 (10 мг/кг) 15	59,9+0,3	58,1+6,2	51,1 ±12,0	42,1+15,5*	39,3+16,7* 2,60+1,96
1-17 (5 мг/кг)	15	57,3+6,7	56,3+9,1	52,5+10,4	46,4+16,6	43,7+11,8 2,00+1,41

* Р<0,05 по сравнению с модельной группой.

Результаты показали, что по сравнению с модельной группой в тесте ориентирования на месте в водном лабиринте Морриса латентный период каждой группы для влезания на платформу имел склонность к уменьшению по времени. Причем, латентный период группы Ι-17 (10 мг/кг) был лучше по сравнению с группой донепезила гидрохлорида, и данное соединение обладало значимым эффектом. В тесте пространственного поиска в водном лабиринте Морриса число пересечений платформы группы Ι-9 (10 мг/кг), группы Ι-17 (10 мг/кг) и группы Ι-17 (5 мг/кг) было больше, чем в группе донепезила гидрохлорида. В тесте Морриса в водном лабиринте латентный период для влезания животных на платформу и число пересечений платформы в группе Ι-17 (10 мг/кг) были лучше, чем в группе донепезила гидрохлорида. Соединение Ι-17 обладает эффектом улучшения расстройства обучения и памяти у мышей, индуцированного скополамином.

В. Улучшение гидрохлоридом (Ι-33) соединения Ι-29 расстройства обучения и памяти у мышей, индуцированного интрацеребровентрикулярной инъекцией Αβ1-42.

Модельное расстройство обучения и памяти, индуцированное после интрацеребровентрикулярной инъекцией Αβ1-42, является наиболее распространенной моделью на животных для оценки, обладает ли соединение эффектом улучшения обучения и памяти. Данная модель на животных значительно разрушает способность к обучению и функцию памяти животного, и механизм ее влияния на память известен, результат является воспроизводимым, и она не обладает отличимым видоспецифическим эффектом. Тест Морриса в водном лабиринте и модель расстройства обучения и памяти, индуцированного интрацереб- 26 026210 ровентрикулярной инъекцией Αβ1-42, использовали в настоящем исследовании, и оценивали эффекты улучшения обучения и памяти у крыс соединением Ι-33 при различной концентрации (0,7 мг/кг, 3,5 мг/кг и 7 мг/кг).

Материалы теста и группирование.

1. Подопытные животные.

Животных, самцов крыс линии Спраг-Доули (СД) (220±20 г), содержали при цикле свет:темнота (12 ч/12 ч) при допустимом уровне чистоты для вивария при свободном доступе к воде и корму. Тесты проводили после 3 суток акклиматизации в виварии. Αβ1-42 готовили до 2 мкг/мкл согласно инструкции описания.

2. Группирование.

(1) Нормальная группа: интрацеребровентрикулярная инъекция физиологического раствора.

(2) Модельная группа интрацеребровентрикулярной инъекции Αβ1-42: интрацеребровентрикулярная инъекция Αβ1-42.

(3) Контрольная группа донепезила гидрохлорида: донепезила гидрохлорид (ДПГ) (3 мг/кг) + интрацеребровентрикулярная инъекция Αβ1-42.

(4) Ι-33 (группа низкой концентрации): Ι-33 (0,7 мг/кг) + интрацеребровентрикулярная инъекция Αβ1-42.

(5) Ι-33 (группа средней концентрации): Ι-33 (3,5 мг/кг) + интрацеребровентрикулярная инъекция Αβ1-42.

(6) Ι-33 (группа высокой концентрации): Ι-33 (7 мг/кг) + интрацеребровентрикулярная инъекция Αβ1-42.

3. Инструмент теста: водный лабиринт Морриса для крыс и стереотаксический аппарат головного мозга.

4. Реагенты теста: Αβ1-42, донепезил гидрохлорид (ДПГ) и Ι-33.

Способ теста.

Крыс линии СД случайным образом делили на нормальную контрольную группу, модельную группу с интрацеребровентрикулярной инъекцией Αβ1-42, положительную контрольную группу (донепезила гидрохлорид, 3 мг/кг) и группы тестируемого лекарственного средства Ι-33 (группы 0,7 мг/кг, 3,5 мг/кг и 7 мг/кг). Каждая крыса в нормальной контрольной группе получала интрацеребровентрикулярную инъекцию 5 мкл физиологического раствора, каждая крыса в других группах получала интрацеребровентрикулярную инъекцию 5 мкл Αβ1-42. После операции с крысами после 1 недели восстановительного периода проводили следующие тесты. Соответствующий растворитель вводили крысам в нормальной контрольной группе и в модельной группе с интрацеребровентрикулярной инъекцией Αβ1-42 в одно и то же время утром каждые сутки путем внутрижелудочного введения; и крысам в группе Ι-33 и в контрольной группе донепезила гидрохлорида вводили соответствующее количество лекарственных средств в зависимости от массы тела. Лекарственные средства вводили в течение 8 суток, тренировку в тесте в водном лабиринте начинали на 5е сутки, и тесте в водном лабиринте начинали формально начинали на 9е сутки.

Результаты теста: как показано в табл. 7.

(1) Статистически значимое различие скорости плавания крыс в каждой группе отсутствует, что указывает на то, что крысы находятся в одинаковом состоянии.

(2) После интрацеребровентрикулярной инъекции крысам Αβ1-42 (10 мкг/крыса) период, требующийся для достижения платформы в первый раз (латентный период) был значимо пролонгирован. Донепезила гидрохлорид (ДПГ) (3 мг/кг) может бороться против действия Αβ1-42 и значимо сокращает период, требующийся для достижения платформы в первый раз. Все различные протестированные дозы Ι-33 могут значимо сокращать период, требующийся для достижения платформы в первый раз (латентный период).

(3) После интрацеребровентрикулярной инъекции крысам Αβ1-42 (10 мкг/крыса) число пересечений платформы было значимо снижено. Донепезила гидрохлорид (ДПГ) (3 мг/кг) может бороться против действия Αβ1-42 и значимо увеличивает число пересечений платформы. Все различные протестированные дозы Ι-33 могут значимо увеличивать число пересечений платформы.

- 27 026210

Таблица 7

Улучшение соединением 1-33 расстройства обучения и памяти, индуцированного интрацеребровентрикулярной инъекцией Άβ1-42 ±30)

Группа	Скорость плавания	Период достижения платформы в первый раз (латентный период)	Время пересечения платформы
нормальная	32,95+1,56	20,03+4,16*	3,23+0,50*
Группа Ар	31,25+2,00	50,10+7,96	1,58+0,36
Группа ДПГ+Ар	30,07+2,48	23,94+4,84*	3,22+0,55*
Группа низкой концентрации ГЗЗ + Ар	27,27+3,63	21,37+3,64*	3,00+0,33*
Группа средней концентрации 1-33 + Ар	32,13+2,06	18,10+6,54*	3,40+0,43*
Группа высокой концентрации 1-33 + Ар	34,07+2,93	14,87+3,62*	3,20+0,36*

* Р<0,05 по сравнению с группой Άβ.

Результаты показали, что в тесте Морриса в водном лабиринте все различные протестированные дозы 1-33 могут значимо улучшать расстройство обучения и памяти у крыс, индуцированное интрацеребровентрикулярной инъекцией Άβ1-42, и это улучшение является дозозависимым.

Тест острой токсичности.

Предварительный тест острой токсичности проводили на белых мышах для тестирования гидрохлорида (1-33) репрезентативного соединения согласно настоящему изобретению, т.е. соединения 1-29, и гидрохлорида (1-34) репрезентативного соединения согласно настоящему изобретению, т.е. соединения I17, со ссылкой на Основополагающие принципы метода тестирования острой токсичности химических лекарственных средств (от англ. Ошйшд ΡπηοίρΙοδ оп Аси1е ΤοχίοίΙν Тек! Теекше о£ Скст1са1 Эгидк).

Способы тестирования.

Перед началом официального тестирования сначала проводили предварительные тесты с целью определения концентрации каждого соединения при точно 0% смертности или точно 100% смертности. Животных делили на группы по массе, вводили различные дозы лекарственных средств от 0% до 100%. Объем дозы составлял 10 мл/кг. Способ дозирования представлял собой внутривенную инъекцию или внутрижелудочное введение.

Ά. Тест острой токсичности донепезила гидрохлорида.

1. Внутривенная инъекция.

Животных делили на 6 групп по 5 животных на группу. Дозы для 6 групп были следующими: 4,00 мг/кг, 3,60 мг/кг, 3,24 мг/кг, 2,92 мг/кг, 2,62 мг/кг и 2,36 мг/кг соответственно. Каждое животное инъецировали однократно в хвостовую вену и наблюдали в течение 1 недели.

2. Внутрижелудочное введение.

Животных делили на 6 групп по 5 животных на группу. Дозы для 6 групп были следующими: 64,80, 58,32, 42,51, 38,27, 34,44 и 30,99 мг/кг соответственно. Каждое животное голодало в течение 12 ч до введения. Каждое животное получало внутрижелудочное введение один раз, и его наблюдали в течение 1 недели.

B. Тест острой токсичности соединения 1-33.

1. Внутривенная инъекция.

Животных делили на 6 групп по 5 животных на группу. Дозы для 6 групп были следующими: 50,00, 40,00, 32,00, 25,60, 20,48 и 16,18 мг/кг соответственно. Каждое животное инъецировали однократно в хвостовую вену и наблюдали в течение 1 недели.

2. Внутрижелудочное введение.

Животных делили на 6 групп по 5 животных на группу. Дозы для 6 групп были следующими: 500,00, 450,00, 295,25, 265,72, 239,15 и 215,23 мг/кг соответственно. Каждое животное голодало в течение 12 ч до введения. Каждое животное получало внутрижелудочное введение один раз, и его наблюдали в течение 1 недели.

C. Тест острой токсичности соединения 1-34.

1. Внутривенная инъекция.

Животных делили на 5 групп по 5 животных на группу. Дозы для 5 групп были следующими: 25,60, 23,04, 20,25, 18,23 и 16,40 мг/кг соответственно. Каждое животное инъецировали однократно в хвостовую вену и наблюдали в течение 1 недели.

2. Внутрижелудочное введение.

Животных делили на 5 групп по 5 животных на группу. Дозы для 5 групп были следующими: 300,00 мг/кг, 240,00, 192,00, 153,60 и 122,88 мг/кг соответственно. Каждое животное голодало в течение 12 ч до введения. Каждое животное получало внутрижелудочное введение один раз, и его наблюдали в течение 1 недели.

- 28 026210

Наблюдаемые показатели.

Наблюдали токсическую реакцию и гибель животных после введения и считали смертность. Результаты анализировали с помощью программы данных ЛД50 (50% летальной дозы).

Результаты теста: как показано в табл. 8.

Таблица 8

Результаты тестирования в тестах острой токсичности соединений Ι-33 и Ι-34

Соеди- нение	Путь введения	Доза (мг/кг)	Число живот- ных	Число погиб- ших	Смерт- ность (%)	Средняя смергель ная доза ЛД50 (мг/кг)	95% доверитель ный интервал ЛД50(мг/кг)
донепези л гидрохлорид	Внутривен ная инъекция	4,00	5	5	100	3,07	3,02 < ЛД50 <3,13
3,60	5	4	60
3,24	5	3	60
2,92	5	2	40
2,62	5	1	20
2,36	5	0	0
Внутри желудочное введение	64,80	5	5	100	42,52	30,13 < ЛД50< 60,00
58,32	5	4	80
42,51	5	3	60
38,27	5	2	40
34,44	5	1	40
30,99	5	0	0
1-33	Внутривен ная инъекция	50,00	5	5	100	31,30	8,77 < ЛД50 < 111,69
40,00	5	4	80
32,00	5	3	60
25,60	5	1	20
20,48	5	0	0
16,18	5	0	0
Внутри желудочное введение	500,00	5	5	100	303,13	176,25 < ЛД50< 521,34
450,00	5	4	80
295,25	5	3	60
265,72	5	2	40
239,15	5	1	0
215,23	5	0	0
1-34	Внутривен ная инъекция	25,60	5	5	100	20,14	8,06 < ЛД50 <50,51
23,04	5	4	80
20,25	5	3	60
18,23	5	1	20
16,40	5	0	0
Внутри желудочное введение	300,00	5	5	100	171,20	96,23 < ЛД50< 304,59
240,00	5	4	80
192,00	5	3	60
153,60	5	2	40
122,88	5	0	0

Результаты предварительных тестов показали, что средняя смертельная доза Ι-33 путем перорального введения и внутривенного введения была в 8-10 раз выше соответствующей дозы донепезила гидрохлорида; и средняя смертельная доза Ι-34 путем перорального введения и внутривенного введения была в 4-7 раз выше соответствующей дозы донепезила гидрохлорида. Оба соединения Ι-33 и Ι-34 проявляли более низкую токсичность, чем донепезила гидрохлорид, и обладали большей безопасностью.

Исследования фармакокинетики.

Исследования пероральной фармакокинетики в плазме гидрохлорида (Ι-33) репрезентативного соединения согласно настоящему изобретению, т.е. соединения Ι-29, и его фосфата (Ι-35) проводили на крысах со ссылкой на Основополагающие принципы доклинических исследований фармакокинетики (от англ. 'Όιιίάίηβ Ргтар1е5 оп Ргес11тса1 Рс5сагсНс5 оп Ркагтасокшейс5).

Способы и результаты теста.

Крысам перорально вводили различные лекарственные средства, включающие: группу, дозируемую донепезила гидрохлоридом, группу, дозируемую Ι-35, и группу, дозируемую Ι-33 соответственно, где

- 29 026210 доза составляла 5 мг/кг, и объем дозы составлял 10 мл/кг. Венозную кровь крыс собирали из венозного сплетения, расположенного позади глаз через 0,083, 0,167, 0,333, 0,666, 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 6,0, 8,0, 12, 24, 36, 48, 72 и 96 ч после введения, использовали 6 крыс на каждый момент времени. В соответствующий момент времени собирали 0,3 мл цельной крови, добавляли антикоагулянт гепарин, центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 мин, плазму отделяли, собирали 50 мкл образца плазмы, добавляли 100 мкл ацетонитрила (содержащего 0,1% муравьиную кислоту), перемешивали на вортексе в течение 1 мин, центрифугировали (12000 об/мин) в течение 10 мин, супернатант собирали, анализировали с помощью жидкостного хроматографа с масс-спектрометром, регистрировали площади пиков и использовали для вычисления концентрации лекарственного средства, и строили кривую концентрация лекарственного средства - время. В то же время, эти данные автоматически приводили в соответствие с помощью программы фармакокинетики ΌΆδ 2.0 Китайского фармакологического общества, соответствующие фармакокинетические параметры представлены в табл. 9 и на фиг. 1.

Таблица 9

Результаты теста фармакокинетики в плазме крыс после перорального введения соединений Г-33 и Г-35

Параметры	Донепезил гидрохлорид (5 мг/кг)	Ι-33 (5 мг/кг)	1-35 (5 мг/кг)
дис<о-1)	1370,709+311,367	4933,099+1397,72	5165,211+441,415
А11С{0-«)	1415,126+337,151	4990,306+1423,91	5222,6841433,165
ΜΗΤ(Ο-Ι)	2,73410,251	2,21210,389	2,34310,206
МКТ(0-»)	3,11910,404	2,35210,373	2,483+0,265
11/2Ζ	2,473+0,449	2,085+0,392	1,96510,296
Ттах	0,38910,136	0,30510,068	0,555+0,172
Стах	638,51127,792	2463,333+385,73	2111,6671331,748

Эти результаты показали, что при одинаковой дозе по сравнению с донепезила гидрохлоридом степень абсорбции (ЛИС) и пиковая концентрация (С_тах) соединений Г-33 и Г-35 были значимо выше, чем для донепезила гидрохлорида.

В заключение, среди соединений, предложенных в настоящем изобретении, Г-1, Г-2, Г-4 и Г-17 или его гидрохлорид (Г-34) обладают ингибиторной активностью в отношении ацетилхолинэстеразы, сравнимой с активностью донепезила гидрохлорида. По сравнению с донепезила гидрохлоридом в водном лабиринте Морриса соединения Г-17 и Г-29 или его гидрохлорид (Г-33) проявляли более сильные эффекты улучшения обучения и памяти, и проявляли лучшую эффективность ίπ утуо. Особого внимания заслуживает соединение Г-29 или его гидрохлорид (Г-33); хотя ингибиторная активность этого соединения в отношении ацетилхолинэстеразы является относительно слабым ίπ νίΙΐΌ, т.е. приблизительно 10% активности донепезила гидрохлорида, оно обладает значительно более высокой эффективностью ίπ γί\Ό, чем донепезила гидрохлорид, и обладает более сильным антиоксидантным эффектом по сравнению с донепезила гидрохлоридом, что указывает на то, что эффект улучшения обучения и памяти Г-29 может быть индуцирован другими путями в дополнение к его действию на ацетилхолинэстеразу. Другим неожиданным результатом тестирования является то, что в предварительных тестах острой токсичности на белых крысах гидрохлорид (Г-33) соединения Г-29 проявлял значительно более низкую токсичность, даже ниже одной десятой токсичности донепезила гидрохлорида, и, следовательно, данное соединение обладает высоким потенциалом, и боли, вызванные токсическими и нежелательными эффектами, вызываемыми современными лекарственными средствами, можно значительно уменьшить, что показывает многообещающую перспективу соединения Г-29.

Все ссылки, упомянутые в настоящем изобретении, цитируются посредством ссылки, как каждая ссылка по отдельности цитируется посредством ссылки. Должно быть понятно, что после прочтения приведенного выше содержания настоящего изобретения специалист в данной области техники может осуществлять различные изменения или модификации настоящего изобретения, и такие эквиваленты также входят в объем настоящего изобретения, определенный сопроводительной формулой изобретения.

формула изобретения

1. Соединение, представленное формулой Г

или его фармацевтически приемлемая соль, где

К¹ и К² независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода, метила и этила;

- 30 026210

К¹ и К² вместе могут представлять собой =0; также К¹ и К² вместе с атомом углерода, соединяющим их, могут образовать 3-членное углеродное кольцо;

К³ представляет собой от 1 до 5 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С1-С₃)алкила, (С₂-С₃)алкенила, (С₃-С₄)циклоалкила, (С1-С₃)алкокси, трифторметила и циано;

К⁴ представляет собой от 1 до 4 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С1-С₃)алкила, (С₂-С₃)алкенила, (С₃-С₄)циклоалкила, (С1-С₃)алкокси, трифторметила и циано;

К⁵ представляет собой от 1 до 3 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С1-С₃)алкила, (С₂-С₃)алкенила, (С₃-С₄)циклоалкила, (С1-С₃)алкокси, трифторметила и циано;

К⁶ представляет собой от 1 до 4 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из (С₁С3)алкила, (С2-С3)алкенила и (С3-С4)циклоалкила;

К⁷ представляет собой от 1 до 3 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С1-С₃)алкила, (С₂-С₃)алкенила, (С₃-С₄)циклоалкила, (С1-С₃)алкокси, трифторметила и циано;

К⁸ представляет собой от 1 до 3 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из (С₁С3)алкила, (С2-С3)алкенила и (С3-С4)циклоалкила.

2. Соединение по п.1, где А выбран из фенила, К³-замещенного фенила, пиридинила, К⁴замещенного пиридинила, пиримидинила или К⁵-замещенного пиримидинила.

3. Соединение по п.1 или 2, где К¹ и К² независимо выбраны из атома водорода или метила; К¹ и К²вместе представляют собой =0 или К¹ и К² вместе с атомом углерода, соединяющим их, образуют 3членное углеродное кольцо.

4. Соединение по п.3, где К¹ и К² вместе с атомом углерода, соединяющим их, образуют 3-членное углеродное кольцо.

Claims

5. Соединение по любому из пп.1-4, где А выбран из фенила, К³-замещенного фенила, пиридинила, К⁴-замещенного пиридинила, пиримидинила, К⁵-замещенного пиримидинила, пирролила, К⁶замещенного пирролила, пиридазинила, К⁷-замещенного пиридазинила, пиразолила или К⁸-замещенного пиразолила; где К³ представляет собой от 1 до 5 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С1-С3)алкила, (С1-С3)алкокси, трифторметила и циано; К⁴ представляет собой от 1 до 4 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С1С3)алкила, (С1-С₃)алкокси, трифторметила и циано; К⁵ представляет собой от 1 до 3 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С1-С3)алкила, (С1-С3)алкокси, трифторметила и циано; К⁶ представляет собой от 1 до 4 заместителей, независимо выбранных из (С1-С3)алкила; К⁷представляет собой от 1 до 3 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С1-С3)алкила, (С1-С₃)алкокси, трифторметила и циано; К⁸ представляет собой от 1 до 3 заместителей, независимо выбранных из (С₁-С₃)алкила.

6. Соединение по п.5, где А выбран из фенила, К³-замещенного фенила, пиридинила, пиримидинила, пирролила, К⁶-замещенного пирролила, пиридазинила или пиразолила; где К³ представляет собой от 1 до 5 заместителей, независимо выбранных из группы, состоящей из атома галогена, (С1-С3)алкила, (С1С3)алкокси, трифторметила и циано; К⁶ представляет собой от 1 до 4 заместителей, независимо выбранных из (С1-С₃)алкила.

7. Соединение по п.6, где А выбран из фенила.

8. Соединение по п.6, где А выбран из К³-замещенного фенила.

9. Соединение по п.6, где А выбран из пиридинила.

10. Соединение по п.6, где А выбран из пиримидинила.

11. Соединение по п.6, где А выбран из пирролила.

12. Соединение по п.6, где А выбран из К⁶-замещенного пирролила.

13. Соединение по п.6, где А выбран из пиридазинила.

14. Соединение по п.6, где А выбран из пиразолила.

15. Соединение по п.6, где А выбран из
2-фторфенила,
3-фторфенила, 4-фторфенила, 2,6дифторфенила, 2-пиридинила, 3-пиридинила, пиримидин-2-ила, пиррол-2-ила, 5-метилпиррол-2-ила, пиридазин-3-ила или 1Н-пиразол-5-ила.

16. Соединение по п.1, где соединение формулы I выбрано из следующих соединений:

6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]-[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-5,7-диона ^-1);

6-[2-[1-[(2-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-[1,3]диоксоло[4,5-Г]изоиндол-5,7-диона 0>2);

6-[2-[1-[(3-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-[1,3]диоксоло[4,5-Г]изоиндол-5,7-диона 0>3);

6-[2-[1-[(4-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-[1,3]диоксоло[4,5-Г]изоиндол-5,7-диона ^-4);

6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7-она ^-5);

- 31 026210

6-[2-[1-[(2-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7-она (1-6); 6-[2-[1-[(3-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7-она (1-7); 6-[2-[1-[(4-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7-она (1-8); 6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]-5-метил-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7-она (1-9); 6-[2-[1-[(2-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-5-метил-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7-она (I10);

6-[2-[1-[(3-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-5-метил-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7-она (I11);

6-[2-[1-[(4-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-5-метил-5Н-[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7-она (I12);

6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]-7,7-диметил-[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-5-она Д-13); 6-[2-[1-[(2-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-7,7-диметил-[1,3]диоксоло[4,5-Г]изоиндол-5-она

Д-14);

6-[2-[1-[(3-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-7,7-диметил-[1,3]диоксоло[4,5-Г]изоиндол-5-она

Д-15);

6-[2-[1-[(4-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]-7,7-диметил-[1,3]диоксоло[4,5-Г]изоиндол-5-она

Д-16);

6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,1'-циклопропан]-5-она (I17);

6-[2-[1-[(2-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,Гциклопропан]-5-она 0-18);

6-[2-[1-[(3-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,Гциклопропан]-5-она 0-19);

6-[2-[1-[(4-фторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,Гциклопропан]-5-она 0-20);

6-[2-[1-[(2-хлорфенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,Гциклопропан]-5-она 0-21);

6-[2-[1-[[2-(трифторметил)фенил]метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-Г]изоиндол7,1'-циклопропан]-5-она 0-22);

6-[2-[1-(орто-толуилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-Г]изоиндол-7,Гциклопропан]-5-она 0-23);

6-[2-[1-[(2-цианофенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,Гциклопропан]-5-она Д-24);

6-[2-[1-[(2,6-дифторфенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-Дизоиндол-7,Гциклопропан]-5-она 0-25);

6-[2-[1-[(2-метоксифенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,Гциклопропан]-5-она 0-26);

6-[2-[1-[(3-метоксифенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,Гциклопропан]-5-она 0-27);

6-[2-[1-[(4-метоксифенил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,Гциклопропан]-5-она 0-28);

6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,1'-циклопропан]5-она Д-29);

6-[2-[1-(3-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,1'-циклопропан]5-она 0-30);

6-[2-[1-(4-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,1'-циклопропан]5-она 0-31);

6-[2-[1-(пиримидин-2-илметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,Гциклопропан]-5-она 0-32);

6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,1'-циклопропан]5-она гидрохлорида 0-33);

6-[2-(1-бензил-4-пиперидил)этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-Г]изоиндол-7,1'-циклопропан]-5-она гидрохлорида 0-34);

6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,1'-циклопропан]5-она фосфата 0-35);

6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]-[1,3]диоксоло[4,5-Г]изоиндол-5,7-диона 0-36); 6-[2-[1-(пиридазин-3-илметил)-4-пиперидил]этил]-[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-5,7-диона Д-37); 6-[2-[1-(пиридазин-3-илметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,Гциклопропан]-5-она 0-38);

6-[2-[1-(1Н-пиррол-2-илметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-Дизоиндол-7,Гциклопропан]-5-она 0-39);

6-[2-[1-[(5-метил-1Н-пиррол-2-ил)метил]-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол- 32 026210

7,1'-циклопропан]-5-она (040);

6-[2-[1-(1Н-пиразол-5-илметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,1'циклопропан]-5-она (041);

или их фармацевтически приемлемой соли.

17. Соединение по п.1, где соединение представляет собой 6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,1'-циклопропан]-5-он (029) или его фармацевтически приемлемую соль.

18. Соединение по п.17, где соединение представляет собой

6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,1'-циклопропан]5-он (Σ-29);

6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,1'-циклопропан]5-она гидрохлорид (033) или

6-[2-[1-(2-пиридилметил)-4-пиперидил]этил]спиро[[1,3]диоксоло[4,5-£]изоиндол-7,1'-циклопропан]5-она фосфат (035).

19. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения, представленного формулой I, или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-18 и фармацевтически приемлемые носители.

20. Применение соединения по любому из пп.1-18 для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения заболеваний, связанных с ингибиторами ацетилхолинэстеразы.

21. Применение соединения по любому из пп.1-18 для лечения или предупреждения заболеваний, связанных с ингибиторами ацетилхолинэстеразы.

22. Применение соединения по любому из пп.1-18 для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения болезни Альцгеймера.

23. Применение соединения по любому из пп.1-18 для лечения или предупреждения болезни Альцгеймера.

24. Способ получения соединения формулы I по п.1, включающий взаимодействие соединения, представленного формулой II, или его соли с соединением, представленным формулой Ш-1 или Ш-2:

где К¹, К² и А являются такими, как определено в п.1;

X представляет собой атом галогена или гидроксил;

Υ представляет собой формил или алкоксикарбонил.

25. Способ по п.24, где соединение формулы II или его соль получают согласно следующему способу, включающему удаление аминозащитной группы в соединении, представленном формулой IV где К¹ и К² являются такими, как определено в п.1;

К⁹ представляет собой аминозащитную группу.

26. Способ по п.25, где соединение формулы IV представляет собой соединение формулы 0-1, где К¹ и К² вместе означают =0, получают согласно следующему способу, включающему взаимодействие соединения, представленного формулой V, и соединения, представленного формулой VI

- 33 026210 где К¹ и К² вместе представляют собой =0;

К⁹ представляет собой аминозащитную группу;

К¹⁰ представляет собой атом галогена или тозилокси.

27. Способ по п.25, где соединение формулы IV представляет собой соединение формулы Ш-2, где К¹ и К², каждый, означают атом водорода, получают согласно следующему способу, включающему восстановление соединения формулы ΐν-1 до спирта формулы VII, ацилирование соединения формулы VII с образованием соединения формулы VIII и удаление ацетоксигруппы путем каталитического гидрогенолиза с образованием соединения формулы Ш-2 где К¹ и К², каждый, представляют собой атом водорода;

К⁹ представляет собой аминозащитную группу.

28. Способ по п.25, где соединение формулы IV представляет собой соединение формулы Ш-3, где

- 34 026210

К¹ представляет собой метил или этил и К² представляет собой атом водорода, получают согласно следующему способу, включающему проведение моноалкилирования метиленовой группы в 5-членном лактаме в соединении, представленном формулой ΙΥ-2 где К¹ представляет собой метил или этил;

К² представляет собой атом водорода;

К⁹ представляет собой аминозащитную группу.

29. Способ по п.25, где соединение формулы IV представляет собой соединение формулы 1У-4, где К¹ и К², каждый независимо, представляют собой метил или этил, получают согласно следующему способу, включающему проведение дополнительного алкилирования атома углерода, связанного с К¹ в соединении, представленном формулой ГУ-3 где К¹ и К², каждый независимо, представляют собой метил или этил;

К⁹ представляет собой аминозащитную группу.

30. Способ по п.25, где соединение формулы IV представляет собой соединение формулы ГУ-5, где К¹ и К² вместе с атомом углерода, соединяющим их, образуют 3-членное углеродное кольцо, получают согласно следующему способу, включающему сначала взаимодействие соединения, представленного формулой ГУ-1, с метильным реагентом Гриньяра с образованием спирта, а затем дегидратацию полученного в результате спирта до алкена в кислых условиях, наконец, преобразование образовавшейся двойной связи углерод-углерод в 3-членное кольцо путем использования Εΐ₂Ζη/ΤΦΥ/ΟΗ₂Ι₂:

где К¹ и К² вместе с атомом углерода, соединяющим их, образуют 3-членное углеродное кольцо; К⁹ представляет собой аминозащитную группу;

X представляет собой атом галогена.

31. Способ по любому из пп.25-30, где К⁹ представляет собой трет-бутоксикарбонил (Вое).

32. Соединение, представленное формулой II, или его соль где К¹ и К² являются такими, как определено в п.1.

33. Соединение, представленное формулой IV

- 35 026210 где К¹ и К² являются такими, как определено в п.1;

К⁹ представляет собой аминозащитную группу.

34. Соединение по п.33, где К⁹ представляет собой трет-бутоксикарбонил (Вое).
4^^ Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2