EA025110B1 - Синергичные противовоспалительные композиции, содержащие экстракты boswellia serrata - Google Patents

Abstract

Изобретение раскрывает синергичные нутрицевтические или фармацевтические противовоспалительные композиции или противовоспалительные композиции диетических добавок, содержащие терапевтически эффективную комбинацию экстракта, избирательно обогащенного 3-О-ацетил-11-кето-β-босвеллиевой кислотой (AKBA), полученного из Boswellia serrata, и экстракта некислотной смолы Boswellia serrata (BNRE). Композиция(и) может быть использована для предотвращения, контроля и лечения воспаления и некоторых заболеваний, связанных с воспалением, включая следующие: астма, остеоартрит, ревматоидный артрит, эндотелиальная дисфункция и подобное. Изобретение дополнительно раскрывает уменьшение интенсивности провоспалительных биомаркерных белков или молекул, чья экспрессия/продукция изменяется в ходе воспалительных заболеваний.

Description

Данное изобретение обеспечивает синергичные нутрицевтические, фармацевтические композиции и композиции диетических добавок, содержащие экстракт ВоктеШа кеггаЩ избирательно обогащенный 3-О-ацетил-11-кето-3-босвеллиевой кислотой (АКВА), и экстракт некислотной смолы ВоктеШа кегга1а (ΒΝΚΕ). Композиция(и) может быть использована для предотвращения, контроля и лечения воспаления и болезненных состояний, относящихся к или связанных с воспалением, включая астму, артрит, эндотелиальную дисфункцию и подобное.

Изобретение дополнительно включает уменьшение интенсивности провоспалительных биомаркерных белков или молекул, чья экспрессия/продукция изменяется в ходе воспалительных заболеваний.

Предпосылки изобретения

Природная смола растения ВоктеШа кетга!а (Вигкегасеае) длительное время используется для лечения ревматоидного артрита и подагры врачами, практикующими аювердические медикаменты, в индийской системе медицины. Различные экстракты природной смолы показали сильную противовоспалительную и противоатерогенную активность у лабораторных животных |Сиа/-РегоПп е1 а1., Апетюкс1ет ТЬтотЬ Уаке Вю1 РеЬ 2008]. Было доказано, что выделенное из Вок^еШа соединение инценсолацетат является ΝΡΚΒ-ингибитором, пригодным в качестве противовоспалительного соединения |Моикка1еГГ е1 а1., Мо1 РЬагтасо1 72,1657-1664, 2007]. Ранее наблюдалось, что спиртовой экстракт природной смолы В. кегга1а ингибирует образование лейкотриена В4 в перитонеальных нейтрофилах крысы. Лейкотриен В4 является одним из важных медиаторов воспалительных реакций [Аттоп Н.Р.Т. е1 а1., Р1ап1а Мебюа, 57, 203 (1991)]. Обнаружено, что экстракт Вок^еШа является сильным противоартритным средством [К1тта1каг е1 а1; РЬу1отебюше. 2003 1ап;10(1):3-7] и иммуномодулирующим средством [Рипд1е е1 а1.; 1пб1ап 1 Ехр Вю1. 2003 Иес;41(12):1460-1462]. Также было доказано гипохолестеринемическое действие Вок^еШа кетга!а. [2и1кП и. е1 а1, 1пб1ап 1 РЬаттас. 18, 182, 183, 1986.]. Фактически, рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое перекрестное клиническое исследование с экстрактом Вок^еШа на группе пациентов с остеоартритом колена показало статистически значимые значения улучшений относительно уменьшения боли, уменьшенного отека и увеличенного сгибания в коленном суставе [Кшта!каг Ν. е1. а1., РЬу1отебюше 2003; 10:3-7]. В открытом нерандомизированном эквивалентном исследовании 30 пациентам с хроническим колитом вводили либо камедь Вок^еШа (300 мг трижды в день), либо сульфасалазин (1 г трижды в день), и терапевтические эффекты, демонстрируемые Вок^еШа, были сравнимы с эффектами, проявляемыми сульфасалазином [Сир!а I. е1. а1., Р1ап1а Меб. 2001; 67: 391-395]. В другом эквивалентном исследовании стандартизированный экстракт Вок^еШа проявлял терапевтические улучшения, сравнимые с, или лучше чем, месалазин в рандомизированном двойном слепом исследовании на пациентах с активной болезнью Крона [СетЬатб! Н., е1. а1., Ζ Сак1тоеп1ето1 2001; 39: 11-17]. Природная смола Вок^еШа также показывала статистически значимое улучшение у пациентов с бронхиальной астмой в шестинедельном двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании [Сир1а I., е1. а1., Еиг 1 Меб Кек 1998; 3: 511-51].

Патенты также описывают различные активности Вок^еШа. Некоторые указаны ниже:

РСТ патентная публикация νΟ 03074063А1 и выданный патент Индии № 205269 относятся к способу получения фракции, обогащенной до 100% 3-О-ацетил-11-кето-3-босвеллиевой кислоты. Экстракт в органическом растворителе природной смолы из вида Вок^еШа вначале подвергался окислению, а затем ацетилированию или наоборот. Это превращает менее сильные босвеллиевые кислоты, присутствующие во фракции, в АКВА. Эта обработанная фракция затем подвергается дополнительной очистке и разделению с помощью методик хроматографического разделения для усиления ее чистоты и для удаления из нее примесей. Этот способ обеспечивает доступ к фракции, обогащенной 10-100% АКВА для терапевтических применений.

Европейская патентная публикация ЕР 1637153А1 относится к соединению экстракта Вок^еШа кегга1а с растительным противофиброзным средством в качестве медикамента, особенно против воспалительных и фиброзных заболеваний. В таком соединении Вок^еШа 8егга1а присутствует как сухой экстракт в количестве от 5 до 50 вес.%, и растительный противофиброзный агент - как сухой экстракт в количестве от 50 до 95 вес.%.

Патент США И8 5629351 относится к новой фракции, содержащей смесь босвеллиевых кислот, где фракция проявляет противовоспалительные и противоульцерогенные активности. Также раскрывается новое соединение босвеллиевой кислоты, проявляющее противовоспалительные, противоартритные и противоульцерогенные активности. Также раскрывается способ выделения фракции босвеллиевой кислоты и отдельных босвеллиевых кислот из нее.

Патент США И8 5720975 относится к применению ладана (олибанума), экстрактов ладана, веществ, содержащихся в ладане, их физиологически приемлемых солей, их производных и их физиологических солей, чистой босвеллиевой кислоты, физиологически приемлемых солей, производного, соли производного для получения медикамента для предотвращения или лечения болезни Альцгеймера.

Патент США И8 5888514 относится к композиции для лечения млекопитающего, имеющего состояние, характеризующееся воспалением кости или сустава, где экстракт Вок^еШа кегга1а используется

- 1 025110 как один из ингредиентов.

РСТ патентная публикация \УО 08036932 А2 относится к композициям и способам создания композиций, полученных из видов ВокгееШа (франкинсенс или олибанум), имеющих уникальным образом повышенное количество эфирного масла, босвеллиевых кислот и полисахаридных соединений, в частности к составам для пероральной доставки человеку и способам использования таких композиций, пригодных, например, для лечения/предотвращения артрита, воспалительных нарушений, остеоартрита ревматоидных заболеваний и поясничной боли.

Тем не менее, не существует уровня техники, насколько известно изобретателям, относящегося к композициям, содержащим экстракт ВокгееШа, особенно АКВА обогащенный экстракт вместе с экстрактом некислотной смолы ВокгееШа кегга(а (ΒΝΚΕ) для предотвращения, контроля и лечения воспалительных состояний.

Краткое описание изобретения

Главной целью данного изобретения является обеспечить синергичные нутрицевтические или фармацевтические композиции или композиции пищевых добавок, содержащие терапевтически эффективную комбинацию экстракта или фракции ВокгееШа кегга(а, избирательно обогащенную 3-О-ацетил-11кето-З-босвеллиевой кислотой (АКВА), и экстракт некислотной смолы ВокгееШа кегга(а ΟΝΡΕ) для предотвращения, контроля или лечения воспаления и/или болезненных состояний, связанных с или относящихся к воспалению, включая астму, атеросклероз, эндотелиальную дисфункцию, остеоартрит, ревматоидный артрит и подобное.

В еще одном аспекте изобретение обеспечивает синергичные композиции, содержащие обогащенный АКВА экстракт и экстракт некислотной смолы ВокгееШа кегга(а для предотвращения, контроля и лечения одного или более компонентов воспаления и связанных или родственных заболеваний, включая, но не ограничиваясь следующим: астма, атеросклероз, эндотелиальная дисфункция, остеоартрит, ревматоидный артрит, аллергический ринит, дерматит, псориаз, фиброзно-кистозная дегенерация, воспалительные заболевания кишечника, рассеянный склероз, диабет, нарушения познавательной способности, неврологические нарушения, нарушения синтеза коллагена, замедление старения, метаболические нарушения, системная красная волчанка, увеит, постангиопластический рестеноз, гломерулонефрит, желудочно-кишечные аллергии, нефрит, конъюктивит, хроническое обструктивное заболевание легких, профессиональная бронхиальная астма, экзема, бронхит, поллиноз, сыпь, аллергические нарушения и для состояний, подобных следующим: свистящее дыхание, одышка, непродуктивный кашель, сдавленность в груди, напряжение шейных мышц, учащенное сердцебиение, боль в груди, боль в суставах, и некоторых других состояниях, связанных с ними, у млекопитающих.

В еще одном аспекте изобретение обеспечивает синергичные композиции, содержащие обогащенный АКВА экстракт ВокгееШа кегга(а и экстракт некислотной смолы ВокгееШа кегга(а ΟΝΡΕ) для предотвращения, контроля и лечения одного или более компонентов других воспалительных заболеваний, включая артрит или ревматоидный артрит. Неограничивающие примеры артрита включают ревматоидный (такой как ревматизм мягких тканей и несуставной ревматизм, фибромиалгия, фиброзит, мышечный ревматизм, миофасциальная боль, эпикондилит плеча, плечелопаточный периартрит, синдром Титце, фасцит, тендинит, теносиновит, бурсит), ювенильные хронические нарушения суставов, спондилоартропатии (анкилозирующий спондилит), остеоартрит, гиперурикемия и артрит, связанный с острой подагрой, хронической подагрой и системной красной волчанкой и дегенеративный артрит.

Дополнительной целью данного изобретения является обеспечить синергичные композиции для уменьшения интенсивности экспрессии и/или продукции биомолекул или биомаркеров, связанных с воспалением и/или болезненными состояниями, связанными с воспалением, остеоартритом, ревматоидным артритом, разрушением хряща, которые включают, но не ограничиваются следующим: 5-липоксигеназа (5-ЬОХ), белок, активирующий 5-липоксигеназу (РЬАР), белок-2, связывающий жирные кислоты, макрофагов/адипоцитов (аР2/РАВР), гамма-интерферон (ΙΡΝ-γ), интерлейкин-4 (1Ь-4), молекула межклеточной адгезии (1САМ)-1, молекула адгезии сосудистого эндотелия (УСАМ)-1, матриксная металлопротеиназа (ММР)-3, ΤΝΡ-α и Ш-1 β у млекопитающих.

Краткое описание фигур

Фиг. I показывает структурные формулы 1-9, представляющие основные соединения экстракта некислотной смолы ВокгееШа кегга!а ^ΝΚΕ).

Фиг. II показывает НРЬС (высокоэффективная жидкостная хроматография) хроматограмму, иллюстрирующую фитохимический профиль экстракта некислотной смолы ВокгееШа кегга!а ^ΝΚΕ).

Фиг. III иллюстрирует репрезентативные иммуноблоты, показывающие ВЕ 30%-индуцированное ингибирование экспрессии 5-липоксигеназы (А) и РЬАР (В) в ТНР4 клетках моноцитов человека. На каждой репрезентативной панели гистограмма представляет нормированные денситометрические значения (в произвольных единицах). Столбцы а, Ь и с представляют контроль, обработанные ЬР8 (липополисахаридом) и обработанные ЬР8+ВЕ 30% клетки соответственно.

Фиг. IV показывает сравнительную ингибирующую активность в отношении 5-липоксигеназы экстракта ВокгееШа кеггаЩ избирательно обогащенного 3-О-ацетил-11-кето-З-босвеллиевой кислотой

- 2 025110 (АКВА) [ВЕ 30%], экстракта некислотной смолы ВозтеШа зегга1а (ΒΝΚΕ) и композиции 2.

Столбцы представляют процентное ингибирование фермента 5-липоксигеназы, демонстрируемое ВЕ 30%, ΒΝΚΕ и композиции 2 в концентрации 25 мкг/мл.

Фиг. V показывает ингибирование продукции матриксной металлопротеиназы-3 (ММР-3) Воз^еШа зетга!а экстрактом, избирательно обогащенным 3-О-ацетил-11-кето-3-босвеллиевой кислотой (АКВА) [ВЕ 30%], экстрактом некислотной смолы Воз^еШа зетга!а ^ΝΚΕ) и композицией-2. Столбцы представляют концентрации, обеспечивающие 50% ингибирование (1С50) для ВЕ 30%, ΒNКΕ и композиции 2 в ΤΝΕ-α-индуцированных 8^982 синовиальных клетках человека. Значения на столбцах представляют соответствующие 1С₅₀ значения.

Фиг. VI показывает гистограммные изображения процентного ингибирования объема отека лапы у крыс линии Спраг-Доули, индуцированного полным адъювантом Фрейнда, экстрактом Воз^еШа зетга!а, избирательно обогащенным 3-О-ацетил-11-кето-3-босвеллиевой кислотой до 30% (ВЕ30%, 100 мг/кг) и экстрактом некислотной смолы Воз^еШа зепа1а ^ΝΚΕ) (100 мг/кг), композицией 1 (100 мг/кг) и композицией 2 (100 мг/кг), содержащей ВЕ 30% и ВМКЬ в соотношении 1:1 и 2:1 соответственно и преднизолоном (10 мг/кг).

Фиг. VII показывает гистограммные изображения концентраций сывороточных ΤΝΕ-α (А) и Ш-1Ц (В) в различных группах животных. Через 14 дней после введения РСА (полного адъюванта Фрейнда) сывороточные ΤΝΡ-α и Ш-1 β были количественно измерены с помощью набора для иммуноферментного анализа (К&И 8уз!етз, США). Столбцы от а до ί представляют уровни цитокинов в группах, получавших контроль, преднизолон (10 мг/кг), ВЕ 30% (100 мг/кг), ВЯКР (100 мг/кг), композицию 1 (100 мг/кг) и композицию 2 (100 мг/кг) соответственно. Каждый столбец представляет среднее±СО (стандартное отклонение). Ν=6, * Р<0,05 и ** Р<0,005 (по сравнению с контролем).

Детальное описание изобретения

Воспаление представляет собой ответ сосудистых тканей на стимулы, такие как патогены, разрушенные клетки или аллергены, которые проникают в организм. Это защитный механизм организма для удаления вредных патогенов или средств и защиты тканей. Провоспалительные цитокины, такие как ΤΝΕ-α, Ш-1 β, 1Ь-6, СМ-С8Е (гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор) и 1Ь-4, 1Ь-5 и Ш-13 лимфокины, полученные от СЭ4+, ΤΗ2 субпопуляции, рассматриваются как ключевые факторы иммунопатогенеза воспалительных заболеваний [КшдЫ Э.А. е1. А1., 1. А11егду СНп. 1ттипо1. 2001; 108: 797-803]. 5-липоксигеназа представляет собой фермент, крайне необходимый для синтеза лейкотриенов из арахидоновой кислоты, ключевого этапа в воспалительном процессе. Лейкотриены представляют собой ключевые медиаторы воспалительного заболевания.

Активация и экспрессия гена 5-липоксигеназы (5-ЬОХ) отвечает за болезненное состояние. Белок, активирующий 5-липоксигеназу (ЕЬАР) является 18 кДа интегральным мембранным белком, который активирует 5-липоксигеназу с помощью специфического связывания арахидоновой кислоты и переноса ее на фермент [Мапаш е1. а1., 1993]. ЕЬАР, таким образом, отвечает за продукцию лейкотриенов. Следовательно, блокирование или регуляция в сторону уменьшения 5-ЬОХ и ЕЬАР является новым терапевтическим подходом для лечения и контроля воспалительного состояния.

Атеросклероз является также воспалительным заболеванием, характеризующимся образованием повреждений артерий в течение нескольких десятилетий в местах дисфункции эндотелиальных клеток. Воспаление играет важную роль на многих стадиях формирования атеросклеротических бляшек. [К.К. Вегд е! а1., 8сапбша\аап 1оитпа1 о! 1ттипо1оду, 69, 36-42].

Матриксные металлопротеиназы (ММР) представляют собой цинкависимые эндопептидазы, которые способны к разрушению всех видов белков внеклеточного матрикса, таких как коллаген, которые в норме обнаруживаются в пространствах между клетками в тканях. ММР делят в первую очередь на три основные группы, коллагеназы, образованные фибробластной коллагеназой-1 (ММР-Ι), желатиназы, включающие желатиназу А (ММР-2) и желатиназу В (ММР-9), и стромелизины, включающие стромелизин-1 (ММР-3) и матрилизин (ММР-7). Избыток металлопротеиназы ведет к разрушению биомолекул, таких как коллаген, протеогликан и желатин, что может иметь губительные последствия для эпидермиса и может также вызывать заболевания хрящей, воспаление и т. п.

Экстракт Воз^еШа зегга!а, избирательно обогащенный АКВА (ВЕ30%).

Смола и экстракты Воз^еШа применялись для лечения воспалительных заболеваний на протяжении многих лет. Было установлено, что босвеллиевые кислоты являются активными соединениями, которые отвечают за благоприятные эффекты, приписываемые Воз^еШа зетга!а. Установлено, что минорное соединение 3-О-ацетил-11-кето^-босвеллиевая кислота (АКВА) является наиболее сильным ингибитором 5-липоксигеназы из всех босвеллиевых кислот [8аЛет Ε.Κ. е!. а1., ВгЩзН 1 РНагтасо1оду. 1996, 117(4): 6158]. В связи с этим предполагается, что экстракты или фракции, обогащенные содержанием АКВА, демонстрируют лучшую эффективность по сравнению с натуральными экстрактами. Изобретатели в их РСТ заявке РСТ/ΙΝ 05/000074, датированной 7 марта 2005 года, и РСТ патентной публикации \УО 03074063А1 и выданном патенте Индии № 205269 продемонстрировали способ получения экстракта Воз^еШа зетга!а, избирательно обогащенного 30-100% АКВА по сравнению с коммерческими экстрак- 3 025110 тами ВокгееШа кетга1а, которая содержит около 85% общих босвеллиевых кислот с помощью титриметрического метода анализа и около 3% АКВА (ВЕ 30%) в помощью НРЬС метода анализа. Указанный обогащенный ВокгееШа экстракт является уникальной композицией, характеризующейся отсутствием значительных количеств тритерпеновых компонентов, обычно присутствующих в стандартных экстрактах ВокгееШа кетга1а, за исключением АКВА, который является минорным компонентом (до 3%) в стандартных экстрактах ВокгееШа, но он является основным компонентом в обогащенном экстракте. Компоненты, присутствующие в стандартных экстрактах ВокгееШа, представляют собой следующие: 1) βбосвеллиевая кислота, 2) 3-О-ацетил-(Абосвеллиевая кислота, 3) 11-кето-(Абосвеллиевая кислота, 4) 3-Оацетил-11-кето-(Абосвеллиевая кислота, 5) 9-ен-(Абосвеллиевая кислота, 6) 3а-гидроксиурс-9,11-диен24-оевая кислота, 7) 2а,3а-гидроксиурс-12-ен-24-оевая кислота. Основные компоненты уникального экстракта ВокгееШа кетга!а, обогащенного АКВА, используемого в данной композиция согласно изобретению, представляют собой следующие: 1) 3-О-ацетил-(Абосвеллиевая кислота, 2) 3-О-ацетил-9(11)дегидро-(Абосвеллиевая кислота, 3) 3-О-ацетил-11-кето-(Аамирин. 4) 3-О-ацетил-11-кето-а-босвеллиевая кислота.

Указанный экстракт ВокгееШа кетга!а, содержащий 30% АКВА (ВЕ 30%), испытывали в нескольких ίη νίΙΐΌ анализах, и было обнаружено, что он превосходит коммерческий экстракт ВокгееШа кетга1а, содержащий 3% АКВА (ВЕ 30%) [Коу 8. Каппа, ей а1, ИИА апб Се11 Вю1о§у, 2005, 24(4): 244-255]. В экспериментах прямого сравнения указанный обогащенный экстракт ВокгееШа кегга1а (ВЕ30%) также показывал существенно более высокое ингибирование индуцированного адъювантом воспалительного ответа у белых крыс линии Вистар по сравнению с натуральным экстрактом ВокгееШа, содержащим 3% АКВА [Коу 8., е1 а1., АпОохШаШк & Кебох 81дпа1тд, 8, 3 & 4, 2006]. Экстракт ВокгееШа кетга1а, избирательно обогащенный до 30% АКВА (ВЕ 30%), использован для демонстрации данного изобретения.

Экстракт некислотной смолы ВокгееШа кегга1а (ВИКЕ).

Смола ВокгееШа кегга1а содержит кислотные соединения, некислотные соединения и сахара. В ходе выполнения коммерческого способа для стандартного экстракта ВокгееШа кегга1а (85% общих босвеллиевых кислот, ВЕ 30%), кислотную фракцию, которая содержит преимущественно тритерпеновые кислоты, включая босвеллиевые кислоты, отделяют от остальных компонентов смолы. Сахара и другие полимерные материалы также отделяют в водной фазе в ходе обогащения общих босвеллиевых кислот. Оставшиеся не смешивающиеся с водой некислотные малополярные соединения выделяют в виде масляной фракции/экстракта ВокгееШа. Эти некислотные или нейтральные малополярные соединения либо отсутствуют, либо присутствуют в очень низкой концентрации как в коммерческих экстрактах ВокгееШа, так и АКВА обогащенных экстрактах ВокгееШа. Присутствие этих некислотных компонентов становится даже меньшим с увеличением обогащения АКВА.

Указанное некислотное масло ВокгееШа являлось существенным компонентом природной смолы ВокгееШа кегга1а. Тем не менее, оно имело очень ограниченное коммерческое применение, и его главным образом отбраковывали как отходы производства. Возможность применения этой фракции давно назрела. Изобретатели обнаружили неожиданное применение для масла ВокгееШа кегга1а для создания синергичных композиций. Экстракт некислотной смолы ВокгееШа кегга1а (ВИКЕ), фракция, полученная после удаления летучих соединений из масла ВокгееШа кетга!а, был использован в данном изобретении. Экстракт некислотной смолы ВокгееШа кегга1а (ВИКЕ) был получен следующим образом:

a) природную смолу ВокгееШа кегга1а диспергировали в растворителе метилизобутилкетоне (М1ВК), и нерастворимые материалы камеди отделяли с помощью фильтрации,

b) раствор М1ВК экстрагировали многократно с 2%-ным раствором КОН для удаления кислотных соединений,

c) слой М1ВК затем отмывали последовательно водой и солевым раствором,

б) слой М1ВК испаряли при пониженном давлении при 60-70°С, и летучие компоненты затем удаляли из маслянистого остатка под действием вакуума при 75-85°С для получения вязкого масла, которое далее в данном документе называется экстрактом некислотной смолы ВокгееШа кегга1а или ВИКЕ.

Альтернативно, ВИКЕ может быть приготовлен с помощью

a) получения спиртового экстракта смолы ВокгееШа кегга1а с последующим

b) разделением спиртового экстракта между водным щелочным раствором и не смешивающимся с водой органическим растворителем,

c) отделением слоя органического растворителя с последующим испарением растворителя для получения некислотного масляного экстракта ВокгееШа,

б) удалением летучих соединений при высокой температуре и при действии вакуума для получения экстракта некислотной смолы ВокгееШа кегга1а (ВИКЕ).

Было неожиданно обнаружено, что вышеописанный экстракт некислотной смолы ВокгееШа кегга1а (ВИКЕ) имеет уникальный состав. Изобретатели провели экстенсивное выделение ВИКЕ, используя многократную колоночную хроматографию и высокоэффективную жидкостную хроматографию и выделили некоторые дитерпеноидные и тритерпеноидные соединения. Структуры соединений были точно определены с использованием 'Н ЯМР (ядерно-магнитный резонанс), ¹³С ЯМР, ИЕРТ (неискаженное

- 4 025110 усиление переносом поляризации), Н5>ОС (гетероядерная одноквантовая корреляция) и НМВС (гетероядерная многополосная корреляция), данных масс-спекторметрии. Идентифицированные соединения представляют собой следующие: гуиол (§шо1) (1), нефтенол (2), серратол (3), дитерпен X (4), лупеол (5), олеан-12-ен-33-ол (6), олеан-12-ен-3а-ол (7), ланоста-8,24-диен-3а-ол (8) и урс-12-ен-3а-ол (9), как показано на фиг. I. Чистые соединения, полученные таким образом, использовали как фитохимические маркеры, чтобы стандартизировать экстракт некислотной смолы ВокуеШа кепйа (ВИКЕ). Результаты фитохимического анализа подытожены в табл. 1, и хроматограмма, изображающая фотохимический профиль ВИКЕ, представлена на фиг. II.

Синергичные композиции, содержащие экстракты ВокуеШа.

Изобретатели провели несколько клеточных ίη νίίτο противовоспалительных исследований на широком спектре экстрактов Вок\уеШа и экстрактов Вок\уеШа кеггаЩ избирательно обогащенных АКВА. Эти исследования показали неожиданно, что экстракт Вок\уеШа кетгай, избирательно обогащенный 30%ной 3-О-ацетил-11-кето-3-босвеллиевой кислотой (АКВА) [ВЕ 30%] сильно подавляет ЬР§индуцированную экспрессию 5-ЬОХ и РЬАР в ТНР-Ι клетках моноцитов-макрофагов человека ίη νίΙΐΌ (фиг. III).

Указанные экстракты В. кепйа, избирательно обогащенные АКВА, затем объединяли с несколькими выбранными ингредиентами для получения композиций, имеющих лучшую противовоспалительную активность. Отдельные экстракты и композиции испытывали на их эффективность в ингибировании фермента 5-липоксигеназы (5-ЬОХ). Очень неожиданно обнаружено, что композиция, содержащая экстракт природной смолы ВокуеШа кетгай, избирательно обогащенный 30% АКВА (ВЕ 30%), и экстракт некислотной смолы ВокуеШа кегга1а (ВИКЕ), показала синергичное ингибирование 5-ЬОХ. Композиция 2, содержащая ВЕ30% и ΒNΚΕ в соотношении 2:1, показала 37,7% ингибирование в концентрации 25 мкг/мл по сравнению с 31,8 и 20,6% ингибированиями, демонстрируемыми ВЕ 30% и ΒNΚΕ соответственно при тех же концентрациях. Сравнительное ингибирование 5-липоксигеназы, показанное композицией 2 и ее отдельными ингредиентами, представлено на фиг. IV.

Экстракт ВокуеШа кетгай, обогащенный 30% АКВА (ВЕ 30%), экстракт некислотной смолы ВокуеШа кеггай (ВИКЕ) и композицию 2 затем испытывали на их эффективность в ингибировании продукции матриксной металлопротеиназы-3 (ММР-3) в ΤΝΕ-α индуцированных 8А982 синовиальных клетках человека. Продукцию ММР-3 в бесклеточных супернатантах культуры оценивали с помощью набора для проведения ЕЫ8А (иммуноферментный анализ) (К&И §уйет, М1ппеаройк, МИ, США). Неожиданно, композиция 2 проявляла лучшее ингибирование продукции ММР-3 в синовиальных клетках, чем ингибирования, показанные в отдельности как ВЕ 30%, так и ВИКЕ, подтверждая синергичные эффекты, показанные против 5-ЬОХ. Композиция 2, ВЕ 30% и ВИКЕ показывали концентрации, обеспечивающие 50% ингибирование, ОСТ,) при 46,78, 58,75 и 119,32 мкг/мл соответственно. Синергичное ингибирование ММР-3, показанное композицией 2 по сравнению с таковым, показанным ее отдельными ингредиентами ВИКЕ и ВЕ 30%, подытожено на фиг. V.

Синергичные эффекты, показанные композицией 2 ίη νίίΐΌ, затем подвергали испытанию ίη νί\Ό в модели артрита, индуцированного полным адъювантом Фрейнда, у крыс линии Спраг-Доули. Противовоспалительные эффективности композиции 1 и композиции 2, содержащих экстракт ВокуеШа кеггай, избирательно обогащенный 3-О-ацетил-11-кето-3-босвеллиевой кислотой до 30% (ВЕ 30%), и экстракт некислотной смолы ВокуеШа кегга1а (ВИКЕ) в соотношении 1:1 и 2:1 соответственно, оценивали с помощью ίη νί\Ό исследования модели артрита, индуцированного полным адъювантом Фрейнда, у крыс линии Спраг-Доули и сравнивали их эффективность с эффективностью, показанной отдельными ингредиентами, ВЕ 30% и ВИКЕ. Крысы из группы лечения получали 100 мг/кг массы тела экстракта Вокуе1На, избирательно обогащенного до 30% АКВА (ВЕ 30%), или экстракта некислотной смолы ВокуеШа кеггай (ВИКЕ) или композиции 1, или композиции 2 в течение 14 дней. Группа положительного контроля получала преднизолон в концентрации 10 мг/кг массы тела. На 14-й день полный адъювант Фрейнда (РСА) вводили инъекцией подкожно в субплантарную область левой задней лапы каждого животного. Эксперимент прекращали на 28-й день. Образцы крови собирали от каждого животного с регулярными интервалами, и объемы лап измеряли с помощью оборудования для плетизмографии в день инъекции РСА и через 13 дней после прививки РСА. Разницу в объеме отека лапы принимали за воспалительный ответ. Ш νί\Ό противовоспалительные ответы ВЕ 30%, ВИКЕ, композиции 1, композиции 2 и преднизолона оценивали путем вычисления процентного соотношения ингибирования отека лапы по сравнению с контролем, получавшим СМС (карбоксиметилцеллюлозу).

Группы лечения, получавшие экстракт ВокуеШа кегга1а 30% АКВА (ВЕ 30%) и экстракт некислотной смолы ВокуеШа кегга1а (ВИКЕ) показали 37 и 10% уменьшение отека лапы соответственно. Тем не менее, группы лечения, получавшие композицию 1 и композицию 2 при таком же уровне дозы, показали лучшее уменьшение отека лапы и достигали 44 и 54% снижений объемов лапы соответственно. Группа положительного контроля, получавшая преднизолон, показывала 53% ингибирование при уровне дозы 10 мг/кг. Результаты, подытоженные на фиг. VI, подтверждают синергичные эффекты, наблюдаемые ίη νίΙΐΌ для композиций 1 и 2 согласно изобретению.

- 5 025110

Дополнительно, оценивали уровни биомаркеров, фактора некроза опухоли-альфа (ΤΝΡ-α) и интерлейкина-1бета, (1Ь-1 β) в сыворотке групп лечения и группы контроля. Группы лечения, получавшие композицию 1 и композицию 2, показали существенно лучшее снижение уровня биомаркеров в сыворотке, ΤΝΡ-α и ГБ-1 β по сравнению с уровнями, которые проявляли группы лечения, получавшие отдельные ингредиенты ВЕ 30% и ΒΝΚΕ, как показано на фиг. VII (А и В).

Таким образом, вышеприведенные данные показывают, что композиции, содержащие АКВА обогащенный экстракт ВокетеШа и экстракт некислотной смолы ВокетеШа кегга!а (ΒΝΚΕ), являются более сильными в качестве противовоспалительных средств по сравнению с эффективностью, полученной с отдельными компонентами при таком же уровне дозы, обнаруживая неожиданную синергичную ассоциацию между этими экстрактами.

Экстракт ВокетеШа кегга!а, избирательно обогащенный так, что он содержит 30% 3-О-ацетил-11кето^-босвеллиевой кислоты (АКВА), используется, чтобы продемонстрировать данное изобретение. Тем не менее, любой другой экстракт ВокетеШа кегга!а, избирательно обогащенный содержанием АКВА от 10 до 100 вес.%, может также использоваться для создания синергичной композиции(й) в комбинации с экстрактом некислотной смолы ВокетеШа кегга!а ^ΝΤΕ).

Экстракт ВокетеШа кегга!а, обогащенный содержанием АКВА от 10 до 100%, может быть получен, используя один или более следующих способов, которые включают, но не ограничиваются следующим: (1) превращение других β-босвеллиевых кислот в коммерческом экстракте ВокетеШа кегга!а в 35-45% АКВА экстракт, используя способы, о которых изобретатели сообщали ранее в их РСТ заявке № Ρί’Τ/ΙΝ05/000074. датированной 7 марта 2005 и РСТ патентной публикации \УО 03074063А1 и выданном патенте Индии № 205269, (2) с последующим разведением продукта превращения до 10-45% АКВА экстракта, используя фармацевтически или диетически приемлемый носитель или разбавитель, или (3) очищение вышеуказанного продукта превращения до 90-99% АКВА, используя комбинацию этапов, которые включают, но не ограничиваются колоночной хроматографией, разделениями, кристаллизацией и подобным и затем разведение чистого АКВА до необходимой концентрации АКВА (20-99%) с использованием фармацевтически или диетически приемлемого носителя, или разбавителя, или коммерческого экстракта ВокетеШа кегга!а низкого качества, (4), альтернативно, очищение существующего в природе АКВА в природной смоле до необходимой концентрации в диапазоне 10-99% АКВА, используя комбинацию этапов, которые включают, но не ограничиваются экстракцией, колоночной хроматографией, разделениями, кристаллизацией и подобным, и затем разведение фракции с более высокой процентной концентрацией до необходимой концентрации с использованием фармацевтически или диетически приемлемого носителя, или разбавителя, или коммерческого экстракта ВокетеШа кегга!а низкого качества.

Различные варианты осуществления данного изобретения являются такими, как изложено ниже.

В одном аспекте данное изобретение обеспечивает синергичные противовоспалительные композиции, содержащие экстракт ВокетеШа, избирательно обогащенный 3-О-ацетил-11-кето^-босвеллиевой кислотой (АКВА), и экстракт некислотной смолы ВокетеШа кегга!а ^ΝΚΕ). Композиции могут быть использованы для предотвращения, или терапии, или лечения воспаления и/или одного или более болезненных состояний, относящихся к или связанных с воспалением.

В другом аспекте изобретения было обнаружено, что существует синергичный противовоспалительный эффект, когда терапевтически эффективные количества экстракта ВокетеШа кегга!а, избирательно обогащенного АКВА, и экстракта некислотной смолы ВокетеШа кегга!а ^ΝΤΕ) объединяют при определенном конкретном соотношении, и эффект является лучшим, чем тот, который получают, когда компоненты дают отдельно, а также наблюдалось синергичное уменьшение интенсивности экспрессии или продукции провоспалительных биомолекул/белковых маркеров.

В дополнительном аспекте изобретение обеспечивает синергичные композиции, содержащие экстракты ВокетеШа кегга!а, избирательно обогащенные АКВА экстрактом, и экстракт некислотной смолы ВокетеШа кегга!а ^ΝΤΕ), для уменьшения интенсивности экспрессии или продукции биомолекул/биомаркеров/определенных редокс-чувствительных провоспалительных генов, имеющих отношение к или связанных с воспалением, которые включают, но не ограничиваются следующим: 5-липоксигеназа (5-ЬОХ), белок, активирующий 5-липоксигеназу (ЕЬАР), белок, связывающий жирные кислоты, макрофагов/адипоцитов (аР2/РАВР), ΙΡΝ-γ, 1Ь-4, 1САМ, νΟΛΜ, матриксные металлопротеиназы (ММР), такие как ММР-3 и ММР-1, ОТКВ, ΤΝΡ-α и ГБ-1 β, у млекопитающих, которые в этом нуждаются.

В еще одном аспекте изобретение обеспечивает синергичные композиции, содержащие экстракты ВокетеШа кегга!а, избирательно обогащенные АКВА, и экстракт некислотной смолы ВокетеШа кегга!а ^ΝΤΕ), для предотвращения, контроля и лечения одного или более болезненных состояний, относящихся к, связанных с воспалением, которые включают, но не ограничиваются следующим: астма, атеросклероз, эндотелиальная дисфункция, аллергический ринит, дерматит, псориаз, фиброзно-кистозная дегенерация, воспалительные заболевания кишечника, интерстициальный цистит, мигрени, ангина, хронический простатит, солнечный ожег, периодонтальное заболевание, рассеянный склероз, увеит, постангиопластический рестеноз, гломерулонефрит, желудочно-кишечные аллергии, нефрит, конъюктивит, хроническое обструктивное заболевание легких, профессиональная бронхиальная астма, экзема, бронхит, пол- 6 025110 линоз, сыпь, аллергические нарушения, и для состояний, подобных свистящему дыханию, одышке, непродуктивному кашлю, сдавленности в груди, напряжению шейных мышц, учащенному сердцебиению, боли в груди, боли в суставах, деградации коллагена УФ-излучением, морщинистости кожи и старению кожи и некоторым другим состояниям, связанным с ними, у млекопитающих.

В еще одном аспекте изобретение дополнительно обеспечивает синергичные композиции, содержащие экстракты ВоктееШа кетга!а, избирательно обогащенные АКВА экстрактом, и экстракт некислотной смолы ВоктееШа кетга!а (ВИКЕ), для предотвращения, контроля и лечения одного или более компонентов следующего: воспаление, артрит, нарушения познавательной способности, неврологические нарушения, болезнь Альцгеймера, деградация коллагена, старение кожи, снижение холестерина, метаболические нарушения и рак. Неограничивающие примеры артрита включают ревматоидный (такой как ревматизм мягких тканей и несуставной ревматизм, фибромиалгия, фиброзит, мышечный ревматизм, миофасциальная боль, эпикондилит плеча, плечелопаточный периартрит, синдром Титце, фасцит, тендинит, теносиновит, бурсит), ювенильные хронические нарушения суставов, спондилоартропатии (анкилозирующий спондилит), остеоартрит, гиперурикемия и артрит, связанный с острой подагрой, хронической подагрой и системной красной волчанкой, и дегенеративный артрит.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретение дополнительно обеспечивает способ получения экстракта некислотной смолы ВоктееШа кетга!а (ΒΝΚΕ), который включает экстракцию природной смолы ВоктееШа кетга!а с не смешивающимся с водой органическим растворителем с последующей отмывкой экстракта органического растворителя водным щелочным раствором, таким как водный гидроксид калия, с последующей отмывкой водой и солевым раствором, и затем, в заключение, испарение органического слоя под действием вакуума с последующим удалением летучих соединений под действием высокого вакуума и температуры для получения ВИКЕ. Не смешивающийся с водой органический растворитель может быть выбран из следующего: гексан, хлороформ, дихлорметан, этилацетат, метилизобутилкетон или любой другой не смешивающийся с водой растворитель или их смеси.

В дополнительном варианте осуществления неподвергнутое никакому воздействию масло ВоктееШа кетга!а может быть также использовано вместо ВИКЕ для создания синергичных композиций.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретение дополнительно обеспечивает способ получения композиций, включающий этапы, которые включают:

(a) экстракцию природной смолы ВоктееШа кетга!а с не смешивающимся с водой органическим растворителем, тщательное фильтрование экстракта для удаления нерастворенного материала смолы и затем отмывку экстракта органического растворителя многократно с водным щелочным раствором, таким как водный гидроксид калия, с последующей отмывкой водой и солевым раствором, и затем, в заключение, испарение органического слоя под действием вакуума и повышенной температуры для удаления растворителя, с последующим удалением летучих соединений из маслянистого остатка под действием высокого вакуума и температуры для получения экстракта некислотной смолы ВоктееШа кетга!а (ВИКЕ), (b) избирательное обогащение кислотного экстракта ВоктееШа кетга!а природной смолы для получения экстракта ВоктееШа кетга!а, избирательно обогащенного до 10-100% АКВА (ВЕ), (c) объединение экстракта некислотной смолы ВоктееШа кетга!а (ВИКЕ) и АКВА обогащенного экстракта ВоктееШа кетга!а в необходимом соотношении(ях) для получения композиции(й) по данному изобретению, (ά) факультативно, смешивание композиций с одним или более ингредиентами, выбранными из биологически или фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, разбавителей и добавки.

Не смешивающийся с водой органический растворитель в описанном выше способе может быть выбран из следующего: гексан, хлороформ, дихлорметан, этилацетат, метилизобутилкетон, трет-бутанол или любой другой не смешивающийся с водой растворитель.

Кислотный экстракт природной смолы ВоктееШа кетга!а, который необходимо обогатить АКВА, может быть приготовлен из природной смолы, используя известную процедуру, или выбран из группы коммерчески доступных экстрактов ВоктееШа кетга!а, стандартизированных по босвеллиевым кислотам, предпочтительно экстракта, стандартизированного до около 85% общих кислот с помощью титриметрического способа анализа.

В другом варианте осуществления изобретение дополнительно обеспечивает способ определения экстракта некислотной смолы ВоктееШа кетга!а (ВИКЕ), который включает этапы, на которых:

a) определяют основные соединения ВИКЕ в качестве маркеров и выделяют их до более 98% чистоты, далее характеризуют их подробно, используя спектральные данные;

b) вводят известное количество каждого из маркерных соединений отдельно на аналитическую колонку Рйепотепех Ьииа Рйепу1-Неху1 (4,6x250 мм, 5 мкм), устанавливают на НРЬС системе с детектором с фотодиодной матрицей, где колонку поддерживают при 30°С и элюируют с двухкомпонентной смесью растворителей, содержащей 0,1% об./об. ортофосфорной кислоты в воде и ацетонитрил в концентрации 27 и 73% соответственно при скорости потока 1,5 мл/мин, и измеряют время удерживания и площадь пика для каждого маркера, используя УФ-детектирование при 210 и 248 нм; и затем

c) анализируют известное количество образца ВИКЕ при таких же условиях и определяют маркеры в смеси на основании сравнения времен удерживания пиков в образце с таковыми стандартов и, факуль- 7 025110 тативно, с помощью совместного введения образца вместе с каждым маркером, и затем оценивают процент каждого маркера в образце путем сравнения его площади пика с площадью пика, соответствующего стандарту при известной концентрации, и затем

Л) получают состав ΒΝΚΕ путем выражения процентных соотношений всех маркеров вместе, которые включают, но не ограничиваются следующим: нефтенол, серратол, дитерпен X, лупеол, олеан-12-енββ-ол, олеан-12-ен-3а-ол, ланоста-8,24-диен-3а-ол, урс-12-ен-3а-ол и гуиол (дшо1), и затем используют указанный состав для сравнения с другими образцами ΒΝΚΕ.

В еще одном аспекте данного изобретения синергичные противовоспалительные композиции, содержащие экстракты ВоктееШа кеггаЕт избирательно обогащенные АКВА, и экстракт некислотной смолы ВоктееШа кегцЦа (ΒΝΚΕ), содержат факультативно одно или более фармацевтически, или нутрицевтически, или диетически приемлемое вспомогательное вещество(а), или разбавители, или соль(и), или добавку(и).

Другие варианты осуществления данного изобретения дополнительно обеспечивают применение указанных синергичных композиций как есть, или в измельченной форме, и/или в немодифицированной форме в виде гранул, или порошка, или пасты, или активные ингредиенты составляют в твердой, полутвердой или жидкой лекарственной форме путем добавления общепринятой биологически или фармацевтически приемлемой соли(ей), или добавки(ок), или вспомогательного вещества(в).

В дополнительном варианте осуществления изобретение обеспечивает то, что терапевтически эффективное количество новых композиций данного изобретения может быть введено в специфической лекарственной форме, например перорально, местно, трансдермально, парентерально или в форме набора субъекту или пациенту, нуждающемуся в этом. Конкретная лекарственная форма для составления композиций данного изобретения включает, но не ограничивается следующим: пероральные средства, такие как таблетки, мягкие капсулы, твердые капсулы, пилюли, гранулы, порошки, инфузионный раствор, раствор для инъекции, крем, гель, эмульсии, мазь, клизма, медицинский компресс, пищевая добавка, эмульсии, суспензии, сиропы, шарики, ингаляторы, спреи для ротовой полости и подобное; и парентеральные средства, такие как инъекции, капли, суппозитории и подобное.

Другой вариант осуществления изобретения обеспечивает набор, содержащий композицию(и) экстракта ВоктееШа, избирательно обогащенного 3-О-ацетил-11-кето-3-босвеллиевой кислотой (АКВА), и экстракта некислотной смолы ВоктееШа кегга1а (ΕΝΕΕ). Набор может дополнительно включать инструкции для применения композиции(й) для контроля, предотвращения и лечения воспаления и воспалительных состояний, включая, но не ограничиваясь астмой, артритом и атеросклерозом.

В дополнительном варианте осуществления данного изобретения композиции могут дополнительно включать эффективные количества одного или более фармацевтически, или нутрицевтически, или диетически приемлемых средств, включая, но не ограничиваясь следующим: антиоксидант(ы), адаптоген(ы), противовоспалительное средство(а), потиводиабетическое средство(а), средство(а) против ожирения, портивоатеросклеротическое средство(а), биопротекторы, и/или усилитель(и) биодоступности, и микроэлементы, или вспомогательное вещество(а), или фармацевтически приемлемая соль(и), или добавка(и) и композиции или их смеси для образования состава(ов), вводимых с использованием любого из способов, описанных выше.

Примеры фармацевтически приемлемых противовоспалительных средств, используемых в данном изобретении, включают, но не ограничиваются следующим: преднизолон, гидрокортизон, метотрексат, сульфасалазин, напроксен, диклофенак и ибупрофен.

Примеры биологически или фармацевтически приемлемых носителей, используемых в данном изобретении, включают, но не ограничиваются следующим: поверхностно-активные вещества, вспомогательные вещества, связующие вещества, разбавители, средства, обеспечивающие распад, смазывающие вещества, консерванты, стабилизаторы, буферы, суспензии и системы доставки лекарственного средства.

Предпочтительные примеры твердых носителей, или разбавителей, или вспомогательных веществ включают, но не ограничиваются следующим: глюкоза, фруктоза, сахароза, мальтоза, желтый декстрин, белый декстрин, аэрозоль, микрокристаллическая целлюлоза, стеарат кальция, стеарат магния, сорбит, стевиозид, кукурузная патока, лактоза, лимонная кислота, винная кислота, яблочная кислота, янтарная кислота, молочная кислота, Ь-аскорбиновая кислота, Л1-альфа-токоферол, глицерин, пропиленгликоль, сложный эфир глицерина и жирных кислот, сложный эфир полиглицерина и жирных кислот, сложный эфир сахарозы и жирных кислот, сложный эфир сорбитана и жирных кислот, сложный эфир пропиленгликоля и жирных кислот, аравийская камедь, каррагинан, казеин, желатин, пектин, агар, витамин группы В, никотинамид, пантотенат кальция, аминокислоты, соли кальция, пигменты, корригенты и консерванты.

Предпочтительные примеры жидких носителей (разбавителей) включают следующие: дистиллированная вода, солевой раствор, водный раствор глюкозы, спирт (например, этанол), пропиленгликоль и полиэтиленгликоль; и масляные носители, такие как различные животные и растительные масла, белый мягкий парафин, парафин и воск.

В альтернативном аспекте изобретения композиции по данному изобретению доставляются в форме

- 8 025110 таблеток контролируемого высвобождения, используя оболочки контролируемого высвобождения на основе полимеров с помощью методик, включая нанотехнологию, микроинкапсулирование, коллоидные системы-носители и другие системы доставки лекарственного средства, известные из уровня техники. Указанный состав может быть разработан для введения один раз в день или многократных введений в течение дня.

Согласно данному изобретению композиции данного изобретения могут также быть составлены в или добавлены к существующей или новой форме(ам) пищевого продукта или напитка, таким как твердые пищевые продукты, например каши, детское питание, шоколад или питательные батончики, полутвердый продукт питания, например крем, или джем, или гель, освежающий напиток, кофе, чай, напиток, содержащий молоко, молочные продукты, напиток с молочно-кислыми бактериями, суп, драже, конфета, жевательная резинка, шоколад, жевательная конфета, йогурт, мороженое, пудинг, мягкое желе из адзуки, желе, печенье, хлебобулочные продукты и подобное. Эти различные композиции, или препараты, или продукты питания и напитки пригодны в качестве здоровой пищи для лечения и/или предотвращения воспаления и/или одного или более болезненных состояний, связанных с или относящихся к воспалению, включая, но не ограничиваясь следующим: астма, артрит воспалительное заболевание кишечника, ревматоидный артрит, ювенильный ревматоидный артрит, псориатический артрит, остеоартрит, рефрактерный ревматоидный артрит, хронический неревматоидный артрит, остеопороз/резорбция кости, коронарная болезнь сердца, атеросклероз, васкулит, язвенный колит, псориаз, респираторный дистресс-синдром взрослых, диабет, метаболические нарушения, гиперчувствительность замедленного типа в кожных нарушениях и болезнь Альцгеймера.

Различные типичные варианты осуществления изобретения обеспечивают то, что количество данных синергичных композиций, подлежащее введению или снабжению им людей или млекопитающих, может не быть одинаковым и варьирует в зависимости от природы состава и рекомендуемой для человека или животного дозировки экстракта или фракций, но предпочтительно в пределах диапазона от 0,1 до 750 мг/кг массы тела в день, более предпочтительно около 0,5-500 мг/кг массы тела.

Другой вариант осуществления изобретения обеспечивает то, что количество композиций данного изобретения в вышеупомянутых различных составах, композициях продуктов питания и напитков может не быть одинаковым и варьирует в зависимости от природы состава и рекомендуемой для человека или животного дозировки композиций, например от около 0,001 до 99%, более предпочтительно от около 0,001 до 90 вес.%.

В одном из важных вариантов осуществления концентрация АКВА в избирательно обогащенном экстракте ВоктееШа кегга!а варьирует в диапазоне от 10 до 100 вес.%.

В другом варианте осуществления концентрация АКВА в избирательно обогащенном экстракте ВоктееШа кегга!а предпочтительно варьирует в диапазоне 25-95% и более предпочтительно 25-45%.

В еще одном варианте осуществления синергичная композиция может содержать 10-90 вес.% экстракта ВоктееШа кегга!а, избирательно обогащенного 3-О-ацетил-11-кето-3-босвеллиевой кислотой (АКВА), и 90-10 вес.% экстракта некислотной смолы ВоктееШа кегга!а (ВИКЕ).

В еще одном варианте осуществления синергичная композиция может содержать 30-70 вес.% экстракта ВоктееШа кегга!а, избирательно обогащенного 3-О-ацетил-11-кето-3-босвеллиевой кислотой (АКВА), и 70-30 вес.% экстракта некислотной смолы ВоктееШа кегга!а (ВИКЕ).

Другой вариант осуществления изобретения представляет собой продукт питания или напиток для охраны здоровья, содержащий любой из ингредиентов вышеуказанных синергичных композиций до 0,001-80 вес.%, предпочтительно 0,001-50 вес.% в пересчете на общий вес продукта питания или напитка.

Дополнительный вариант осуществления изобретения обеспечивает то, что количество данной синергичной композиции(й) варьирует в диапазоне от 1 до 100 вес.% в пересчете на общий вес состава.

В другом варианте осуществления изобретение дополнительно включает смешивание композиций данного изобретения с различными компонентами, используемыми в корме для животных с целью лечения, предотвращения или терапии воспаления и некоторых связанных с или относящихся к воспалению заболеваний, включая астму, атеросклероз и артрит и подобное.

Форма композиции или состава, подлежащего добавлению в корм для животных, не является специфически ограниченной и может быть добавлена как есть или в виде композиции(й) к различным приготовленным и обработанным продуктам питания. Количество может быть таким же, как то, которое используют в случае продуктов питания. Аналогично, ингредиенты могут также быть добавлены в ходе или после приготовления кормов для животных.

Следующие примеры, которые включают предпочтительные варианты осуществления, будут служить для иллюстрации практического применения данного изобретения, и следует понимать, что подробные данные показаны для примера и с целью иллюстративного обсуждения предпочтительных вариантов осуществления изобретения, и они не являются ограничивающими объем изобретения.

Пример 1. Получение экстракта некислотной смолы ВоктееШа кегга!а (ВИКЕ).

Природную смолу ВоктееШа кегга1а (100 г) диспергировали в 600 мл растворителя метилизобутилке- 9 025110 тона (ΜΙΒΚ) и перемешивали при комнатной температуре в течение 60 мин. Нерастворимые материалы камеди отделяли с помощью фильтрации. ΜΙΒΚ раствор экстрагировали многократно с 2%-ным раствором КОН (3x200 мл) для удаления кислотных соединений. Слой ΜΙΒΚ затем отмывали последовательно водой (400 мл) и солевым раствором (200 мл). Слой ΜΙΒΚ испаряли при пониженном давлении при 6070°С и летучие компоненты удалили из маслянистого остатка под действием вакуума при 75-85°С для получения экстракта некислотной смолы Βο5\\ό1Π;ι 5егга1а или ΒΝΚΕ в виде вязкого масла (12 г).

Альтернативно, природную смолу (250 г), собранную из Βο5\\ό1Π;ι 5сгга1а. экстрагировали с метанолом (300 млх3), и объединенный метаноловый экстракт концентрировали. Остаток (50 г) растворили в этилацетате (400 мл) и экстрагировали трижды с 2Ν КОН (3x100 мл). Органический слой отмывали водой (2x200 мл) и солевым раствором (200 мл) и испаряли для получения масла Βο5\\ό1Π;·ι. Летучие соединения испаряли из масла под действием вакуума при 75-85°С для получения 22 г экстракта некислотной смолы Βο5\\ό1Π;·ι 5сгга1а (ΒΝΚΕ).

ΒΝΚΕ подвергали колоночной хроматографии на стандартном силикагеле. Идентичные фракции собирали на основании ТЬС (тонкослойная хроматография), и объединенные фракции подвергали отдельно пропусканию через последовательные колонки на силикагеле, используя смеси гексан/этилацетат или гексан/ацетон в качестве элюентов для получения чистых соединений. Некоторые из фракций с примесями дополнительно подвергали препаративной НРЬС, используя кварцевую колонку с С18 обращенной фазой для получения чистых соединений. Структуры устанавливали с помощью проведения анализов ¹Н ЯМР, ¹³С ЯМР, ИЕРТ, Н5>ОС и НМВС и данных масс-спектрометрии и последующего сравнения данных с данными для известных соединений. Девять из основных соединений идентифицировали как гуиол (дшо1) (1), нефтенол (2), серратол (3), дитерпен X (4), лупеол (5), олеан-12-ен-33-ол (6), олеан-12ен-3а-ол (7), ланоста-8,24-диен-3а-ол (8) и урс-12-ен-3а-ол (9), как показано на фиг. I. Чистые соединения затем использовали для стандартизации некислотного экстракта Βο5\\ό1Π;ι 5сгга1а (ΒΝΚΕ), используя способ НРЬС. Новый состав ΒΝΚΕ, который оценивали на основании способа аналитической НРЬС, и времена удерживания (Κ,) суммированы в табл. 1, и НРЬС хроматограмма показана на фиг. II.

Способ НРЬС для анализа экстракта некислотной смолы Βο5\\ό1Π;ι 5сгга1а (ΒΝΚΕ)

Таблица 1

Состав экстракта некислотной смолы Βο5\\ό1Π;ι 5сгга1а (ΒΝΚΕ)

№ п/п	анализируемое вещество	Κι в мин	Процент
1	Гуиол (§ιιϊο1) (1)	4,5	0,96
2	Нефтенол (2)	7,087	2,01
3	Серратол(3)	8,027	13,32
4	Дитерпен X (4)	15,777	0,12
5	Лупеол (5)	26,901	0,06
6	Олеан-12-ен-Зр-ол (6)	31,460	1,29
7	Олеан-12-ен-За-ол (7)	33,718	5,36
8	Ланоста-8,24-диен-За-ол (8)	35,371	1,34
9	Урс-12-ен-За-ол (9)	37,207	4,55

Пример 2. Способ определения экстракта некислотной смолы Βο5\\ό1Π;·ι 5сгга1а (ΒΝΚΕ).

Способ определения ΒΝΚΕ включает оценку его состава, который включает известные соединения

ΒΝΚΕ, с помощью следующего способа НРЬС. Градиент растворителя подытожен в табл. 2. Известное количество каждого из маркерных соединений анализировали отдельно, и времена удерживания и площади пиков каждого стандартного соединения записали. Известное количество образца ΒΝΚΕ затем анализировали при таких же условиях, и каждый маркер определяли на основании сравнения времен удерживания пиков в образце с таковыми у стандартов и, дополнительно, путем совместного введения образца вместе с каждым из маркеров. Процент каждого маркера в образце оценивали путем сравнения его площади пика с площадью пика, соответствующего стандартному соединению при известной концентрации, как показано ниже. Состав ΒΝΚΕ подытожен в табл. 3.

Условия НРЬС:

Колонка Ркеиогаеиех Ьииа Ркеиу1-Неху1, (4,6x250 мм) 5 мкм.

Длина волны 248 и 210 нм.

Скорость потока 1,50 мл/мин.

Объем введения 20 мкл.

Температура 30°С.

- 10 025110

Система градиент.

Подвижная фаза: насос А: 0,1% об./об. ортофосфорной кислоты в воде, насос В: ацетонитрил.

Где 0,1% об./об. ортофосфорной кислоты получили путем разведения 1 мл ортофосфорной кислоты до 1000 мл водой.

Стандарты: известные соединения ΒΝΚΕ выбрали в качестве маркеров и выделили их до больше 98% чистоты, используя комбинацию методик выделения. Эти чистые стандарты, полученные таким образом, подробно охарактеризованы как гуиол (дшо1) (1), нефтенол (2), серратол (3), дитерпен X (4), лупеол (5), олеан-12-ен-33-ол (6), олеан-12-ен-3а-ол (7), ланоста-8,24-диен-3а-ол (8) и урс-12-ен-3а-ол (9) с использованием комбинации спектральных данных.

Таблица 2

Программа градиента

Время	Насос-А	Насос-В	Скорость потока
(в мин)	(%)	(%)	(мл/мин)
0,01	27,0	73,0	1,50
40,0	27,0	73,0	1,50
45,0	0,0	100,0	1,50
50,0	0,0	100,0	1,50
52,0	27,0	73,0	1,50
60,0	27,0	73,0	1,50

Таблица 3

Состав ΒΝΒΕ

№ п/п Название Время	удерживания	Длина волны	Состав
		(в мин)	(нм)	(%)
1	Гуиол (§шо1) 0,96		4,5	210
2	Нефтенол	7,0	210	2,01
3	Серратол	8,0	210	13,32
4	Дитерпин-Х	15,8	252	0,12
5	Лупеол	26,9	210	0,06
6	Олеан-12-ен-Зр-ол	31,6	210	1,29
7	Олеан- 12-ен-За-ол	33,9	210	5,36
8	Ланоста-8,24-диен-За-ол	35,5	210	1,34
9	Урс-12-ен-За-ол	37,5	210	4,55

Получение стандарта.

Точно взвесили около 10,0 мг внутреннего стандартного образца в 50 мл мерной колбе, растворили и довели до метки метанолом.

Получение образца.

Точно взвесили около 250,0 мг образца в 50 мл мерной колбе, растворили и довели до метки метанолом.

Процедура.

Отфильтровали как растворы стандарта, так и образца через 0,45 мкм мембранный фильтр и ввели. Расчет:

- 11 025110

Площадь пика образца х концентрация стандарта х чистота стандарта =------------------------------------------------------------------------------------------- = %

Площадь пика стандарта х концентрация образца

Пример 3. Получение экстракта Вок\уе1Па кеггай. обогащенного до 10-100% АКВА.

Коммерчески доступный экстракт ВоктееШа кеггай. стандартизированный до 85% общих босвеллиевых кислот титриметрическим способом и содержащий 3% 3-О-ацетил-11-кето-3-босвеллиевой кислоты (АКВА). использовали в способе избирательного обогащения АКВА до 10-100%. Смесь содержала общие β-босвеллиевые кислоты [3-О-ацетил-11-кетоф-босвеллиевая кислота. β-босвеллиевая кислота. 3-О-ацетилф-босвеллиевая кислота. 11-кетоф-босвеллиевая кислота. 3-О-ацетил-11-кетоф-босвеллиевая кислота] в диапазоне 45-50% с помощью НРЬС способа анализа. Смесь избирательно обогащали до содержания АКВА 35-45%. используя одну из процедур. описанных в РСТ заявках РСТ/ΕΝ 02/00034. поданной 5 марта 2002. и РСТ/ΕΝ 05/000074. поданной 7 марта 2005. Дополнительно ее обогащали до 45100% АКВА путем добавления этапа хроматографии. или кристаллизации. или обоих этапов к процессу обогащения. Обогащенный экстракт. содержащий 10-35% 3-О-ацетил-11-кетоф-босвеллиевой кислоты (АКВА). получали путем разведения обогащенного экстракта. имеющего АКВА в диапазоне 35-100% с вспомогательным веществом. предпочтительно белым декстрином. Экстракт ВоктееШа кегга1а. обогащенный до 30% АКВА (ВЕ30%). использован в данном изобретении.

Пример 4. Композиция 1.

Композицию 1 получали путем смешивания унифицированных доз следующих компонентов: одна часть экстракта ВоктееШа кеггай. обогащенного до 30% АКВА (ВЕ 30%). (1 г) и одна часть экстракта некислотной смолы ВоктееШа кеггай (ВИКЕ) (1 г).

Пример 5. Композиция 2.

Композицию 2 получали путем смешивания унифицированных доз следующих компонентов: две части экстракта ВоктееШа кеггай. обогащенного до 30% АКВА (ВЕ 30%). (2 г) и одна часть экстракта некислотной смолы ВоктееШа кеггай (ВИКЕ) (1 г).

Пример 6. Композиция 3.

Композицию 3 получали путем смешивания унифицированных доз следующих компонентов: одна часть экстракта ВоктееШа кеггай. обогащенного до 30% АКВА (ВЕ 30%). (1 г) и две части экстракта некислотной смолы ВоктееШа кеггай (ВИКЕ) (2 г).

Пример 7. Композиция 4.

Композицию 4 получали путем смешивания унифицированных доз следующих компонентов: 3 части экстракта ВоктееШа кепай. обогащенного до 40% АКВА (ВЕ 40%). (3 г) и две части экстракта некислотной смолы Вок^еШа кепай (ВИКЕ) (2 г). и одна часть белого декстрина (1 г).

Пример 8. Ингибирование 5-ЬОХ и РЬАР экстрактом ВоктееШа кеггай. обогащенным до 30% АКВА (ВЕ 30%).

Влияние ВЕ 30% на ключевые белки-посредники воспалительного пути. опосредованного арахидоновой кислотой. оценивали в ЬР§-индуцированных ТНР-Е клетках моноцитов-макрофагов человека ίη νΐΐΐΌ. Кратко. ТНР-Е клетки моноцитов-макрофагов человека предварительно обрабатывали 10 мкг/мл ВЕ30% в течение 1 ч. и затем клетки примировали с ЬР8 в течение 2 ч для индукции воспалительного ответа. Клеточные белки экстрагировали с помощью буфера лизиса клеток и подвергали вестерниммуноблоттингу для обнаружения модуляции экспрессии 5-липоксигеназы (5-ЬОХ) и РЬАР. ВЕ 30% существенно ингибировал экспрессию 5-ЬОХ и РЬАР в ЬР§-индуцированных ТНР-Е клетках моноцитовмакрофагов человека. как подытожено на фиг. ЕЕЕ.

Пример 9. Ингибирующая активность по отношению к 5-липоксигеназе 30% АКВА экстракта ВоктееШа (ВЕ30%). экстракта некислотной смолы ВоктееШа кеггай СВИКЕ) и композиции 2.

Ингибирующую активность по отношению к ферменту 5-липоксигеназе измеряли. используя способ 8еке\уе е1 а1. (Λύν Еп/уто1. Уо1 58. 191-272. 1986). модифицированный Кеббаппа е1. а1. (Мебюбк о! Еп/уто1оду. νо1 187. 268-277. 1990). Анализируемая смесь содержала 80 мкмоль линолевой кислоты и достаточное количество 5-липоксигеназы картофеля в 50 ммоль фосфатного буфера (рН 6.3). Реакцию начинали путем добавления ферментной буферной смеси к линолевой кислоте. и активность фермента отслеживали как увеличение поглощения при 234 нм. Реакцию отслеживали в течение 120 с. и ингибирующий потенциал для анализируемых веществ ВЕ30%. ВИКЕ и композиции-2 измерили путем инкубации различных концентраций анализируемых веществ в течение 2 мин до добавления линолевой кислоты. Все анализы проводили три раза. Процент ингибирования рассчитывали путем сравнения угла наклона касательной к кривой. полученной для анализируемых веществ. с таковым для контроля. Процент ингибирования ВЕ 30%. ВИКЕ и композиции 1 подытожены в табл. 4 и показаны на фиг. IV.

- 12 025110

Таблица 4

Ингибирующая активность по отношению к 5-липоксигеназе

№ п/п	Анализируемое вещество	Ингибирование 5-ЬОХ при 25 мкг/мл
1	Экстракт Во8\\еШа §егга1а с 30% АКВА (ВЕ30%)	31,8%
2	Экстракт некислотной смолы Во$\уеШа хеггака (ΒΝΚΕ)	20,6
3	Композиция-2	37,7

Пример 10. Ингибирование продукции матриксной металлопротеиназы-3 (ММР-3) экстрактом Воз^еШа зегта!а с 30% АКВА (ВЕ 30%), экстрактом некислотной смолы Воз^еШа зегта!а (ВИКЕ) и композицией 2.

ММР-3 оценивали в ΤΝΕ-α индуцированных 8^982 синовиальных клетках человека. Кратко, 8\\''982 клетки культивировали в ΏΜΕΜ (среда Игла модификации Дюльбекко) с 2 ммоль глутамина, 100 ед/мл пенициллина, 100 мг/мл стрептомицина и 10%-ной фетальной бычьей сыворотки (Нус1опе, Логан, Юта). Произвели посев пяти тысяч клеток на лунку в 96-луночный планшет для клеточной культуры (Согшпд, США) за день до эксперимента. Культуральную среду заменяли свежей ΏΜΕΜ, содержащей 1% фетальной бычьей сыворотки. Экстракт Воз^еШа с 30% АКВА (ВЕ 30%), экстракт некислотной смолы Воз^еШа зегга!а (ВИКЕ) и композицию 2 стерильно разводили в среде в концентрациях в диапазоне от 5 до 100 нг/мл и предварительно инкубировали с клетками в течение 2 ч при 5% СО2 при 37 С и затем стимулировали с 10 нг/мл человеческого рекомбинантного ΤΝΕ-α (К&Б 8уз1еш, Миннеаполис, Миннесота) в течение 24 ч. Супернатант культуры собирали и использовали для измерения продукции ММР-3 с помощью набора для проведения ЕЕ18А (К&Б 8уз1еш, Миннеаполис, Миннесота, США). Концентрацию ММР-3 в бесклеточном супернатанте культуры оценивали количественно путем интерполяции оптических плотностей на стандартную кривую, созданную из известных концентраций ММР-3. Ингибирующую концентрацию для 50% ингибирования (1С50) ММР-3 рассчитывали из графика, построенного путем нанесения на график процента ингибирования в зависимости от концентрации. ВЕ 30 %, ВИКЕ и композиция 2 показали значения 1С₅0 58,75, 119,32, и 46,78 мкг/мл соответственно. Их сравнительные ингибирования показаны на фиг. V.

Пример 11. Синергичная противовоспалительная активность ίη у1уо композиции 1 и композиции 2, содержащих экстракт Воз^еШа, избирательно обогащенный 3-О-ацегил-11-кето-р-босвеллиевой кислотой (АКВА) до 30%, а именно ВЕ 30%, и экстракт некислотной смолы Воз^еШа зегга!а (ВИКЕ) в соотношении 1:1 и 2:1 соответственно.

Противовоспалительные эффективности композиции 1 и композиции 2, содержащих экстракт Воз^е1Еа зегга!а, избирательно обогащенный 3-О-ацетил-11-кето-р-босвеллиевой кислотой до 30% (5локсин), и экстракт некислотной смолы Воз^еШа зегга!а (ВИКЕ) в соотношении 1:1 и 2:1 соответственно оценивали с помощью исследования ίη У1Уо в модели артрита, индуцированного полным адъювантом Фрейнда, у крыс линии Спраг-Доули. Крыс любого пола случайно выбрали и разделили на пять групп, содержащих пять животных в каждой группе. Крысы группы лечения получали 100 мг/кг массы тела экстракта Воз^еШа, избирательно обогащенного до 30% АКВА (ВЕ 30%), или экстракта некислотной смолы Воз^еШа зегта!а (ВИКЕ), или композиции 1, или композиции 2, которые содержат ВЕ 30% и ВИКЕ в соотношении 1:1 и 2:1 соответственно в течение 14 дней. Группа положительного контроля получала преднизолон в концентрации 10 мг/кг массы тела. Все добавки разводили в 10 мл 1% СΜС для введения. Животные группы контроля получали такое же количество 1% СΜС. На 14-й день полный адъювант Фрейнда (ЕСА) вводили инъекцией подкожно в субплантарную область левой задней лапы каждого животного. В конце эксперимента животных умерщвляли и образцы ткани печени вырезали и хранили в аликвотной пробе при -80°С. Образцы крови собирали от каждого животного с регулярным интервалом и объемы лап измеряли с помощью оборудования для плетизмографии в день инъекции ЕСА и через 13 дней после введения ЕСА. Разницу в объеме отека в день инъекции ЕСА и на 13-й день после индукции рассматривали как воспалительный ответ. Ιη у1уо противовоспалительные ответы ВЕ 30%, ВИКЕ, композиции 1, композиции 2 и преднизолона оценивали путем расчета процента ингибирования отека лапы по сравнению с контролем, который получал СΜС.

Группы лечения, которые получали экстракт Воз^еШа зегга!а, избирательно обогащенный до 30% АКВА (ВЕ30%), и экстракт некислотной смолы Воз^еШа зегга!а (ВИКЕ) достигали 37 и 10% уменьшения отека лапы соответственно по сравнению с 53% ингибированием, которое демонстрировала группа лечения, которая получала преднизолон, как показано на фиг. VI. Тем не менее, группы лечения, которые получали композицию 1 и композицию 2 при таком же уровне дозы, показали 44 и 54% уменьшения в объеме лап соответственно, как показано на фиг. VI. Синергичная эффективность была дополнительно

- 13 025110 подтверждена путем оценки биомаркеров, фактора некроза опухоли-альфа (ΤΝΡ-α) и интерлейкина1бета (ГБ-1 β). Группы лечения, которые получали композицию 1 и композицию 2, показали существенно лучшее снижение концентрации в сыворотке биомаркеров, ΤΝΡ-α и !И-1 β, по сравнению с уровнями, демонстрируемыми группами лечения, которые получали отдельные ингредиенты ВЕ 30% и ВИКЕ, как показано на фиг. VII.

Специалистам в данной области техники следует понимать, что могут быть произведены изменения вариантов осуществления, описанных выше без отклонения от общей идеи изобретения. Понятно, таким образом, что данное изобретение не ограничивается конкретными вариантами осуществления или раскрытыми примерами, но предназначено, чтобы охватывать модификации в пределах целей и объема данного изобретения, как определено приложенной формулой изобретения.

Claims (17)

1. Композиция, обладающая ингибирующей активностью по отношению к 5-липоксигеназе, содержащая терапевтически эффективную комбинацию экстракта ВокгееШа кегга1а, избирательно обогащенного 3-О-ацетил-11-кето-З-босвеллиевой кислотой (АКВА), и экстракта некислотной смолы ВокгееШа кегга1а (ВИКЕ).

2. Композиция по п.1, где концентрация АКВА в избирательно обогащенном экстракте ВокгееШа кегга1а находится в диапазоне 10-99 вес.%.

3. Композиция по п.1, где концентрация АКВА в избирательно обогащенном экстракте ВокгееШа кегга1а находится предпочтительно в диапазоне 25-95%, более предпочтительно 25-45 вес.%.

4. Композиция по п.1, где экстракт некислотной смолы ВокгееШа кегга1а (ВИКЕ) является малополярным нейтральным экстрактом природной смолы ВокгееШа кегга1а, полученным после избирательного удаления кислотных соединений.

5. Композиция по п. 1, где композиция содержит 10-90 вес.% экстракта ВокгееШа кепШа, избирательно обогащенного 3-О-ацетил-11-кето-З-босвеллиевой кислотой (АКВА), и 90-10 вес.% экстракта некислотной смолы ВокгееШа кегга1а (ВИКЕ).

6. Композиция по п.1, где композиция предпочтительно содержит 30-70 вес.% экстракта ВокгееШа кегга1а, избирательно обогащенного 3-О-ацетил-11-кето-З-босвеллиевой кислотой (АКВА), и 70-30 вес.% экстракта некислотной смолы ВокгееШа кегга1а (ВИКЕ).

7. Композиция по п.1, где композиция дополнительно содержит одно или более нутрицевтически, или фармацевтически, или диетически приемлемых вспомогательных веществ, или разбавителей, или добавок.

8. Композиция по п.7, где нутрицевтически, или фармацевтически, или диетически приемлемые вспомогательные вещества, или разбавители, или добавки включают следующее: дистиллированную воду, солевой раствор, водный раствор глюкозы, спирт, выбранный из этанола, пропиленгликоля и полиэтиленгликоля; и масляные носители, выбранные из группы, включающей различные животные и растительные масла, белый мягкий парафин, парафин, воск, глюкозу, фруктозу, сахарозу, мальтозу, желтый декстрин, белый декстрин, аэрозоль, микрокристаллическую целлюлозу, стеарат кальция, стеарат магния, сорбит, стевиозид, кукурузную патоку, лактозу, лимонную кислоту, винную кислоту, яблочную кислоту, янтарную кислоту, молочную кислоту, Ь-аскорбиновую кислоту, Ш-альфа-токоферол, глицерин, пропиленгликоль, сложный эфир глицерина и жирных кислот, сложный эфир полиглицерина и жирных кислот, сложный эфир сахарозы и жирных кислот, сложный эфир сорбитана и жирных кислот, сложный эфир пропиленгликоля и жирных кислот, аравийскую камедь, каррагинан, казеин, желатин, пектин, агар, витамин группы В, никотинамид, пантотенат кальция, аминокислоты, соли кальция, пигменты, корригенты и консерванты.

9. Композиция по п.1 или 7, где композиция дополнительно объединена с одним или более известным фармакологически приемлемым антиоксидантом(ами), адаптогеном(ами), противовоспалительным средством(ами), противодиабетическим средством(ами), средством(ами) против ожирения или противоатеросклеротическим средством(ами).

10. Композиция по любому из пп.1-9, где композиция вводится перорально, местно, или парентерально, или путем ингаляции субъекту, который в этом нуждается, для лечения воспалительного нарушения и введения в форме раствора для инфузии, раствора для инъекции, таблетки, капсулы, крема, геля, гранул, мази, клизмы, медицинского компресса или пищевой добавки.

11. Композиция по любому из пп.1-10, где композиция может быть составлена в виде пероральных средств, выбранных из группы, включающей таблетки, капсулы, мягкие капсулы, твердые капсулы, пилюли, гранулы, порошки, эмульсии, суспензии, сиропы, шарики; парентеральных средств, выбранных из группы, включающей раствор для инъекции, капли, суппозитории; и трансдермальных средств, выбранных из группы, включающей пластыри, местные кремы и гели, и ингредиентов продуктов питания или напитков.

12. Способ получения композиции, указанной в п.1, включающий этапы, на которых:

(а) экстрагируют природную смолу ВокгееШа кеггаЮ с не смешивающимся с водой органическим

13. Способ получения композиции по п.12, где водным щелочным раствором для отмывания экстракта органического растворителя является водный гидроксид калия.

14. Способ лечения воспалительного заболевания посредством ингибирования 5-липоксегиназы и ΤΝΡ-α, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества композиции по п.1.

- 14 025110 растворителем, фильтруют экстракт для удаления нерастворенного материала смолы и затем отмывают экстракт органического растворителя многократно водным щелочным раствором с последующей отмывкой органического слоя водой и солевым раствором, и затем испаряют органический слой под действием вакуума и при 60-70°С для удаления органического растворителя с последующим удалением летучих соединений из маслянистого остатка под действием вакуума и при 75-85°С для получения экстракта некислотной смолы ВоктееШа кегга1а (ВИКЕ), (b) избирательно обогащают кислотный экстракт природной смолы ВоктееШа кегга!а до экстракта ВоктееШа кегга1а, содержащего АКВА (ВЕ) в диапазоне 10-99 вес.%, (c) объединяют экстракт некислотной смолы ВоктееШа кегга1а (ВИКЕ) и обогащенный АКВА экстракт ВоктееШа кегга1а (ВЕ) в желательном соотношении для получения композиций по п.1.

(Л) дополнительно смешивают композицию с одним или более ингредиентами, выбранными из вспомогательных веществ, разбавителей и добавок.

- 15 025110

А: хроматограмма при 252 нм

ΑίΙ (произвольные единицы) минуты

В: хроматограмма при 210 нм Фиг. 2

Фиг. 3

15. Способ лечения воспалительного заболевания по п.14, при котором заболевание выбрано из группы, включающей воспалительное заболевание кишечника, ревматоидный артрит, остеоартрит, остеопороз/резорбцию кости, язвенный колит, псориаз, респираторный дистресс-синдром взрослых, астму, эндотелиальную дисфункцию, морщинистость кожи и старение кожи.

- 16 025110

ΒΝΚΕ ΒΕ30% (25 мкг/мл) (25 мкг/мл) композиция-2 (25 мкг/мл)

Фиг. 4

Фиг. 6

- 17 025110