EA024695B1

EA024695B1 - Гуманизированные антитела с противоопухолевой активностью

Info

Publication number: EA024695B1
Application number: EA201171133A
Authority: EA
Inventors: Норберт Александер Кинцле; Адам Уилльям Кларк; Энтони Джерард Дойл; Филип Энтони Дженнингз; Мэттью Поллард
Original assignee: Сефалон Острэйлиа Пти Лтд.
Priority date: 2009-03-16
Filing date: 2010-03-16
Publication date: 2016-10-31
Also published as: MX2011009704A; CN102395604B; UA108349C2; TN2011000417A1; CA2769276A1; EP2408820A4; EP2433967A3; KR20110129935A; EP2433967A2; WO2010105290A1; BRPI1009460A2; AU2010225448A1; AU2010225448B2; IL214840A0; SG173577A1; MA33194B1; NZ600915A; EP2408820A1; NZ594668A; JP2012520329A

Abstract

Настоящее изобретение относится к гуманизированным антителам и их связывающим доменам с противоопухолевой активностью. В частности, гуманизированные антитела обладают специфичным связыванием и непосредственно вызывают гибель клеток опухолей ободочной кишки человека и проявляют высокую иммунно-опосредованную цитотоксическую активность против злокачественных клеток ободочной кишки человека in vitro в анализах зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксичности (ADCC) и зависимой от комплемента цитотоксичности (CDC) и in vivo в моделях опухолей у мышей.

Description

Настоящая заявка связана и притязает на приоритет на основании заявки на выдачу патента Австралии № 2009901129, поданной 16 марта 2009 г., заявки на выдачу патента США № 61/160682, поданной 16 марта 2009 г., и заявки на выдачу патента США № 61/258517, поданной 5 ноября 2009 г., полное содержание каждой из указанных заявок включено в настоящее описание в виде ссылки.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к гуманизированным антителам с высокой противоопухолевой активностью. В частности, гуманизированные антитела обладают специфичным связыванием и непосредственно вызывают гибель клеток опухолей ободочной кишки человека и проявляют высокую иммунно-опосредованную цитотоксическую активность против злокачественных клеток ободочной кишки человека в анализах зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксичности (АОСС) и зависимой от комплемента цитотоксичности (СЭС). Кроме того, настоящее изобретение относится к применению таких гуманизированных антител в терапии и диагностике.

Уровень техники

Углеводные структуры могут представлять собой специфичные для опухоли или ассоциированные с опухолями антигены и, таким образом, находятся в центре внимания многих методик иммунизации, направленных на генерирование антител. Однако генерирование специфичных противоуглеводных антител является сложной задачей, так как они могут не обладать специфичностью, аффинностью или относятся только к классу 1дМ (СЬт181еп8еп е! а1., 2009). Кроме того, сложной задачей является образование гуманизированных противоуглеводных антител, которые обладают способностью убивать злокачественные клетки, такой факт отражается в очень малом количестве отвечающих на такие антитела. Имеется только один пример противогликолипидного антитела, которое было успешно гуманизировано; антитело узнает ганглиозид СМ2 и убивает опухолевые клетки человека ίη νίΐτο и ίη νίνο (патенты США 6423511 и 6872392). Хотя два других примера связывающих углеводы антител, которые были сконструированы для введения человеку, являются негуманизированными. Во-первых, противоуглеводное антитело КАУ-12 является химерным Щ мыши-человека, которое эффективно ίη νίΐτο и ίη νίνο против клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека (Εοο е! а1., 2007). Во-вторых, было показано, что противоуглеводное антитело НММС-1 эффективно ίη νίΐτο против злокачественной опухоли яичника человека. НММС-1 является полностью человеческим антителом, образуемым у трансхромосомных мышей КМ (№/а\\а е! а1., 2004).

В международной заявке на выдачу патента № АО 2005/108430 раскрыто мышиное моноклональное антитело против злокачественных опухолей, которое названо 8С104. Описание указанной заявки включено в настоящее описание в виде ссылки. Точная природа антигена, с которым связывается 8С104, не ясна, но в АО 2005/108430 указано, что антиген является сиалилтетраозилуглеводом. Также описано, что 8С104 способно непосредственно индуцировать гибель клеток без необходимости в иммунных эффекторных клетках.

Сущность изобретения

В первом аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену ν_Η антитела, при этом связывающий домен содержит последовательно первую каркасную область (РК1), первую СОК (СОК1), вторую каркасную область (РК2), вторую СОК (СОК2), третью каркасную область (РК3), третью СОК (СОК3) и четвертую каркасную область (РК4), при этом последовательность РК1 представляет собой последовательность

X1V^^^ΕδСΡС^VКΡ8ΕΤ^8^ΤСТVX₂СΥδXзX₄ (8ЕЦ ГО N0: 95), где

Х₁ означает О или Е,

Х₂ означает δ или Т,

Х₃ означает I, Ь или V,

Х₄ означает δ или Т, или последовательность, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную указанной последовательности;

последовательность СОК1 представляет собой δСΥδАΗ (δΕφ ГО N0: 96) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

последовательность РК2 представляет собой А1РОХ₅РСКСЕХ₆АХ-С (δΕφ ГО N0: 97), где

Х₅ означает δ или Р,

Х₆ означает О или Е,

Х₇ означает М или I, или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность СОК2 представляет собой Н1НХ^СРРТХХ<^Е-Х1> (δΕφ ГО N0: 98), где

Х₈ означает Р, Υ или А,

Х₉ означает N или О,

- 1 024695

Χίο означает К, Ь, Η, Р, К или 8, или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность РКЗ представляет собой

ΚΧ₁₁Χ₁2ΐ8Χ₁3Χ₁4ΤΛΚΝρΡ8ΡΚΡΤ8ΜΤΛΛΌΤΛν¥ΥΟΑΚ (81+) ΙΌ N0: 99), где

Х₁₁ означает V или I,

Χ₁₂ означает Т или 8,

Χ₁₃ означает К или К,

Χ₁₄ означает Е или И, или последовательность, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную указанной последовательности, при условии, что остаток в положении 6 должен быть К или К;

последовательность СИКЗ представляет собой ΚΟΚΟ8ΠΠΟΡΝΥ (8ЕЦ 1И N0: 100) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность РК4 представляет собой \νθΟΟΤΡντν88 (8ЕЦ ГО N0: 101) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности.

Во втором аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену ν_Η антитела, при этом связывающий домен содержит каркасную последовательность и первую, вторую и третью СИК, расположенные в каркасной последовательности, при этом последовательность каркасных областей по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95% идентична последовательности ^V^^^Е8СΡС^VΚΡ8ЕΤ^8^ΤСΤV8СΥ8X₃8VIК^ΡΡСΚС^^VIСКVΤI8X₁₃ЕΤΑΚN^Р8^Κ^Τ8ΜΤΑΑ^ ΤΑνΥΥ+ΑΗν+ιΟαΤΙΛΊΛ^ (81+) ГО N0: 102);

где Х₃ означает I, Ь или V,

Х₁₃ означает К или К;

и последовательность СИК1 представляет собой 8ΟΥ8νΗ (8ЕЦ ГО N0: 96) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

последовательность СИК2 представляет собой ΗΙΗΧ₈8ΟΡΡΤΥΧ₉,Ρ8Ρ·Χ₁₀8 (8ЕЦ ГО N0: 98), где

Х₈ означает Р, Υ или V,

Χ₉ означает N или И,

Χ₁₀ означает К, Ь, Η, Р, К или 8, или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности; и последовательность СИКЗ представляет собой ΚСΚС8^^С^NΥ (8ЕЦ ГО N0: 100) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности.

В третьем аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену V антитела, при этом связывающий домен содержит последовательно первую каркасную область (РК1), первую СИК (СИК1), вторую каркасную область (РК2), вторую СИК (СИК2), третью каркасную область (РКЗ), третью СИК (СИКЗ) и четвертую каркасную область (РК4), при этом последовательность РК1 представляет собой ЕX₁₅V^Τ^8ΡСΤ^8^8X₁₆СЕКΑΤ^8С (8ЕЦ ГО N0: 187), где

Χ₁₅ означает I или N

Χ₁₆ означает А или Р, или последовательность, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную указанной последовательности;

последовательность СИК1 представляет собой 8Α888Ρ8ΥΙΗ (8ЕЦ ГО N0: 188) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность РК2 представляет собой \νΥ00Ι<ΡΟ0ΑΡΒΡ+ΙΥ (8ЕЦ ГО N0: 189) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность СИК2 представляет собой ^Τ8N^Α8 (8ЕЦ ГО N0: 190) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

последовательность РКЗ представляет собой СIΡ^КР8С8С8СX₁₇^РΤ^ΤI8КVЕΡЕ^РΑVΥΥС (8ЕЦ ГО N0: 191), где

Χ₁₇ означает Т или N или последовательность, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% сходную, предпоч- 2 024695 тительно по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную указанной последовательности;

последовательность СГОРЗ представляет собой ЕОСЗЕУРЬТ (8ЕО ГО N0: 192) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

последовательность ЕР4 представляет собой ЕСОСТКЕЕ1КР (8Е0 ГО N0: 193) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности.

В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену У_ъ антитела, при этом связывающий домен содержит каркасную последовательность и первую, вторую и третью СОР, расположенные в каркасной последовательности, при этом последовательность каркасных областей по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95% идентична последовательности

Е1УЕ¥О8ЕС¥Е8Е8ЕСЕРА¥Е8СА¥00КЕС0АЕРЕЕ1¥С1ЕПРЕ8С8С8С1ГОЕ¥Е¥18Р¥ЕЕЕПЕАУ¥¥СЕ С.С)С.ТКЕЕ1КР (8ЕС) ГО N0: 194);

и последовательность СГОР1 представляет собой 8Α888Ρ8ΥΙΗ (8Е0 ΙΌ N0: 188) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность СГОР2 представляет собой ЭТ8ХЕА8 (8Е0 ГО N0: 190) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности; и последовательность СГОРЗ представляет собой Р^08ЕΥΡ^Т (8Е0 ГО N0: 192) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности.

В пятом аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену У_н антитела, при этом связывающий домен содержит последовательно первую каркасную область (ЕР1), первую СОР (СЭР1). вторую каркасную область (РР2), вторую СОР (СЭР2), третью каркасную область (ЕРЗ), третью СОР (СГОРЗ) и четвертую каркасную область (РР4), при этом последовательность РР1 представляет собой ЕV^^^^\VСΑС^^I<Ρ8ЕТ^8^ТСΑVΥСΥ8X|₈X|₉, (8ЕС) ГО N0: 201), где

Х₁₈ означает I, Ь или У,

Х₁₉ означает 8 или Т, или последовательность, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную указанной последовательности;

последовательность СГОР1 представляет собой 8ΟΥ8ΑΗ (8Е0 ГО N0: 96) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

последовательность РР2 представляет собой \¥1РОРРСКСЕЕ\¥Х₂₀С (8Е0 ГО N0: 202), где

Х₂₀ означает М или I, или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность СГОР2 представляет собой ΗIΗX₂₁8ΟРΡТΥX₂₂Ρ8^X₂₃8 (8Е0 ГО N0: 98), где

Х₂₁ означает Е, Υ или V,

Х₂₂ означает N или Ό,

Х₂₃ означает К, Ь, Η, Е, Р или 8, или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность ЕРЗ представляет собой РX₂₄X₂₅I8X₂₆^Т8КN^Р8^К^88УТΑΑ^ТΑУΥΥСΑР (8ЕС) ГО N0: 20З), где

Х₂₄ означает У или I,

Х₂₅ означает 8 или Т,

Х₂₆ означает Р или К, или последовательность, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную указанной последовательности, при условии, что остаток в положении 6 должен быть Р или К;

последовательность СГОРЗ представляет собой КОКО8ППОРКУ (8Е0 ГО N0: 100) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность ЕР4 представляет собой АСОСТЕУТУ88 (8Е0 ГО N0: 101) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности.

В шестом аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену У_н антитела, при этом связывающий домен содержит каркасную последовательность и первую, вторую и третью ЕГОР, расположенные в каркасной последовательности, при этом последовательность каркасных областей по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, идентична последовательности ЕУРЬРРАОАОЬЬКР8ЕТЕ8ЕТСАУ¥О¥8Х₁₈8А1КРРРОКОЬЕА1ОКУТ18Х₂₆ПТ8КМРР8ЕКЕ88УТАА ПТАУУУСАКАОРОТЬУТУЗЗ (81 ГО) ГО N0: 204), где Х₁₈ означает I, Ь или V и Х₂₆ означает К или К;

и последовательность СГОР1 представляет собой 8ΟΥ8ΑΗ (8ЕЦ ГО N0: 96) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

последовательность СГОР2 представляет собой ΗIΗX₂₁8ΟКРТΥX₂₂Р8^X₂з8 (8ЕЦ ГО N0: 98), где

Х₂₁ означает Ρ, Υ или А,

Х₂₂ означает N или Ό,

Х₂₃ означает К, Ь, Η, Ρ, К или 8, или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности; и последовательность СИКЗ представляет собой КОКО8ППОЕКГ (8ЕЦ ГО N0: 10) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности.

В седьмом аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену ν антитела, при этом связывающий домен содержит последовательно первую каркасную область (РК1), первую СЭР (СИК1), вторую каркасную область (РК2), вторую СЭР (СИК2), третью каркасную область (РКЗ), третью СЭР (СИКЗ) и четвертую каркасную область (РК4), при этом последовательность РК1 представляет собой ЕX₂7V^Т^8РАТ^8^8РΟЕКАТ^8С (8ЕЦ ГО N0: 211), где

Х₂₇ означает I или N или последовательность, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную указанной последовательности;

последовательность СГОР1 представляет собой 8Λ888Ε8ΥΙΗ (8ЕЦ ГО N0: 188) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность РР2 представляет собой АΥ^^КРΟ^ΛРК^^IΥ (8ЕЦ ГО N0: 189) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность СГОР2 представляет собой ПТ8ХЪА8 (8ЕЦ ГО N0: 190) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность РРЗ представляет собой ΟIР^КΡ8Ο8Ο8ΟX₂₈^ΡТ^ТI8К^ЕРЕ^ΡАVΥΥС (8ЕЦ ГО N0: 212), где

Х₂₈ означает Т или N или последовательность, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную указанной последовательности;

последовательность СГОРЗ представляет собой Ρ^08ЕΥР^Т (8ЕЦ ГО N0: 192) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

последовательность РР4 представляет собой ΡΟΟΟТКVЕIКК (8ЕЦ ГО N0: 19З) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности.

В восьмом аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену ν антитела, при этом связывающий домен содержит каркасную последовательность и первую, вторую и третью СИР, расположенные в каркасной последовательности, при этом последовательность каркасных областей по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95% идентична последовательности ΡIV^Т^8РΛТ^8^8РСЕРΛТ^8САΥ^^I<РС^ΛРР^^I ΥСIР^РΡ8С8С8СТ^ΡТ^ТI8Р^ЕРЕ ^ΡАVΥΥСΡΟΟΟТКVЕIКК (81 ГО) ГО N0: 21З), и последовательность СГОР1 представляет собой 8А888^8ΥIΗ (8ЕЦ ГО N0: 188) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность СГОР2 представляет собой ПТ8ХЪА8 (8ЕЦ ГО N0: 190) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности; и последовательность СГОРЗ представляет собой Ρ^С8ЕΥР^Т (8ЕЦ ГО N0: 192) или последователь- 4 024695 ность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности.

Связывающие домены согласно настоящему изобретению в том случае, когда они представлены в виде части антитела, будут связывать линию клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека Со1о205. Будет понятно, что антитело будет состоять из двух тяжелых цепей, каждая из которых содержит вариабельные и константные области, и двух легких цепей, каждая из которых содержит вариабельные и константные области. В том случае, когда заявленный связывающий домен представляет собой связывающий домен ν_Η, антитело, которое связывает линию клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека Со1о205, будет состоять из двух заявленных связывающих доменов ν_Η, двух легких цепей §ЕЦ ГО N0: 7 и двух константных доменов тяжелой цепи §ЕЦ ГО N0: 92 или §ЕЦ ГО N0: 52. Подобным образом, когда заявленный связывающий домен представляет собой связывающий домен антитело, которое связывает линию клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека Со1о205, будет состоять из двух заявленных связывающих доменов ν^ двух константных доменов §ЕЦ ГО N0: 93 и двух тяжелых цепей §ЕЦ ГО N0: 94 или §ЕЦ ГО N0: 50.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 - связывающие активности (панели слева) и активности, непосредственно вызывающие гибель (панели справа) мышиного 8С104 (вариабельные домены, указанные в §ЕЦ ГО N0: 3/8ЕЦ ГО N0: 1) и химерного 8С104 (8ЕЦ ГО N0: 4/8ЕЦ ГО N0: 2) антител и контроля изотипа 1дС1 человека по отношению к позитивным по антигену 8С104 (С170, Со1о205) и негативным по антигену 8С104 (НСТ-116) линиям клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека, которые показаны с использованием проточной цитометрии; идентификационные номера последовательностей относятся к номерам, указанным в списке последовательностей. Химерное 8С104 и мышиное 8С104 антитела проявляют сравнимое избирательное связывание и активность, непосредственно вызывающую гибель позитивных по антигену линий клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека. Оба антитела не связываются и не вызывают прямую гибель негативных по антигену линий клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека. Каждая точка представляет среднее ±§Ό для трех повторов образцов.

Фиг. 2 - гуманизация 8С104 на акцепторном каркасе человека 1И6Л или 10БК включающая СЭКΗ1 согласно определению Кабата ^| < дает нефункциональные варианты антитела, которые не связываются с позитивной по антигену 8С104 линией клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека С170. Связывающие активности вариантов 8С104, гуманизированных с использованием СГОК-Н1 согласно определению Кабата, привитой либо в акцептор человека 1И6Л (8ЕЦ ГО N0: 7/8ЕЦ ГО N0: 9, панель А), либо 10БР (8ЕЦ ГО N0: 8/8ЕЦ ГО N0: 10, панель В), оценивали с помощью проточной цитометрии, используя позитивную по антигену линию клеток С170. Химерное антитело 8С104 (8ЕЦ ГО N0: 4/8ЕО ГО N0: 2) показано в качестве сравнительного наряду с негативным контролем изотипа 1дС] человека. Каждая точка представляет среднее ±8Ό для трех повторов образцов.

Фиг. 3 - гуманизация 8С104 на акцепторном каркасе человека 1И6А или 10БК. включающая СГОРΗ1 (-А-) согласно определению АЬМ, создает варианты антител, которые связываются с позитивной по антигену 8С104 линией клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека С170. Активности связывания гуманизированных вариантов 8С104, включающих СЭК-Ш согласно определению АЬМ, привитую либо в акцептор человека 1И6А (8ЕЦ ГО N0: 7/8ЕЦ ГО N0: 11, панель А), либо в 1ЦЬК (8ЕЦ ГО N0: 8/8ЕО ГО N0: 12, панель В), оценивали с помощью проточной цитометрии, используя позитивную по антигену линию клеток С170. Химерное антитело 8С104 (8ЕЦ ГО N0: 4/8ЕО ГО N0: 2) показано в качестве сравнительного наряду с негативным контролем изотипа 1дС] человека. Каждая точка представляет среднее ±8Ό для трех повторов образцов.

Фиг. 4 - анализ аминокислотной замены (замен) в легкой цепи и тяжелой цепи в отношении усиления связывающей активности 1И6А-гуманизированного 8С104. Влияние замен в каждой цепи анализировали в анализах активности связывания с позитивной по антигену линией клеток С170, используя проточную цитометрию. Химерное антитело 8С104 (8ЕЦ ГО N0: 4/8ЕО ГО N0: 2) показано в качестве сравнительного наряду с негативным контролем изотипа 1дС] человека. Каждая точка представляет среднее ±8Ό для трех повторов образцов.

А: прививки, содержащие СЭК-Ш согласно определению Кабата; последовательность 8Е0 ГО N0: 9 представляет собой незамещенную ν_Η, последовательность 8Е0 ГО N0: 15 содержит замены в ν_Η: 01Е, О46Е, 148М, ν67Ι, Τ68δ, ν71Κ и Е72О, последовательность §ЕЦ ΙΌ N0: 7 относится к ν^ включающей в себя одну замену А15Р, тогда как последовательность 8Е0 ГО N0: 16 относится к У^ содержащей три замены Ι2Κ, А15Р и Τ69Ν

В: прививки, содержащие ΕΌΡ-Η1 согласно определению АЬМ; последовательность §ЕЦ ГО N0: 11 относится к ν_Η, не содержащей замен, последовательность 8Е0 ГО N0: 13 содержит замены в ν_Η: Ц1Е, О46Е, 148М, ν67Ι, Τ68δ, ν71Κ и Е72О, последовательность §ЕЦ ΙΌ N0: 7 относится к ν_Σ, включающей в себя одну замену А15Р, и последовательность 8Е0 ГО N0: 16 относится к ν^ содержащей три замены: ЕЫ, А15Р и Τ69ν

Аминокислотная замена(ы) в тяжелой цепи или -о-) усиливают биологическую активность

- 5 024695

ШбЛ-гуманизированных вариантов антитела ЗС104 по отношению к позитивной по антигену линии клеток С170. В сравнении аминокислотные замены в легкой цепи, по-видимому, менее важны для усиления связывающей активности гуманизированного ЗС104.

Фиг. 5 - анализ шести отдельных замен У_Н, включенных в ШбА-гуманизированные антитела, содержащие СГОР-Н1 согласно определению АЬМ. Влияние замен анализировали в анализах активности связывания с позитивной по антигену линией клеток С170, используя проточную цитометрию. Такие изменения представляли собой либо 04бЕ. либо 148М, либо Уб7ф либо Тб8З, либо У71К, либо Ε72Ό, и они описаны в 8ΕΟ ГО N0: 19-24 соответственно. Замена К71 (8Ε0 ГО N0: 23) была наиболее успешной в усилении эффективности связывания гуманизированного ЗС104. Химерное антитело ЗС104 (8Ε0 ГО N0: 4/8ΕΟ ГО N0: 2) показано в качестве сравнительного наряду с изотипом 1дС₁ человека в качестве негативного контроля. Каждая точка представляет среднее ±δΌ для трех повторов образцов.

Фиг. б - VIι-замена К71 (^{_п_ или _} А-) усиливает активность связывания обоих вариантов антитела с СГОР-Н1 согласно определениям АЬМ- и Кабата с позитивной по антигену линией клеток С170, судя по определению с использованием проточной цитометрии. Химерное антитело ЗС104 (8Ε0 ГО N0: 4/8ΕΟ ГО N0: 2) показано в качестве сравнительного, и изотип Ι§Οι человека использован в качестве негативного контроля. Каждая точка представляет среднее ±δΌ для трех повторов образцов.

А: основанные на ЩЬИ варианты ЗС104 ± замена У71К; прививки СГОР-Н1 согласно определению АЬМ: 8Ε0 ГО N0: 12 (-К) и 8Ε0 ГО N0: 2б (+К); прививки СГОР-Н1 согласно определению Кабата: 8Ε0 ГО N0: 10 (-К) и 8ΕΟ ГО N0: 27 (+К).

В: основанные на 1ИбА варианты ЗС104 ± замена У71К. Прививки СОК-Н1 согласно определению АЬМ: 8Ε0 ГО N0: 11 (-К) и 8Ε0 ГО N0: 25 (+К); прививка СГОР-Н1 согласно определению Кабата: 8Ε0 ГО N0: 9 (-К) и 8ΕΟ ГО N0: 28 (+К).

Фиг. 7 - влияние на активность связывания У_Н-замены Ο27Υ в ЩЬИ-гуманизированных вариантах ЗС104 с СГОР-Н1 согласно определению Кабата. Такая замена не усиливает активность связывания ЮЬК-гуманизированного ЗС104 (8Ε0 ГО N0: 27 (+К) и 8Ε0 ГО N0: 29 (+К +Υ) ''^{_п_ или} по сравнению с АЬМ-СОК-Н1-содержащей последовательностью ν_Η 8Ε0 ΙΌ N0: 2б) при исследовании в анализах связывания на основе проточной цитометрии с позитивной по антигену ЗС104 линией клеток С170. Для сравнения показан ЩЬИ-гуманизированный вариант, включающий в себя СГОВ-Н1 согласно определению Кабата без К71, 8Ε0 ГО N0: 10. Химерное антитело ЗС104 (8Ε0 ГО N0: 4/8ΕΟ ГО N0: 2) показано в качестве сравнительного, и изотип Ι§Οι человека использован в качестве негативного контроля. Каждая точка представляет среднее ±δΌ для трех повторов образцов.

Фиг. 8 - основанный на проточной цитометрии анализ связывания, показывающий влияние на связывающую активность после удаления предполагаемой сильной связывающей МНС класса II пептидной последовательности на границе каркас 2:СГОК-Н2 посредством замены Р53 в СГОК-Н2 химерного ЗС104. Переход от Р53 к другому ароматическому остатку, такому как V (8Ε0 ГО N0: 30) или Υ (8Ε0 ГО N0: 31) (или -о-) оказывает ничтожное влияние на активность связывания, тогда как замена на предпочтительный остаток Р (8Ε0 ГО N0: 32) сильно снижает активность связывания с позитивной по антигену ЗС104 линией клеток С170. Химерное антитело ЗС104 (8Ε0 ГО N0: 4/8ΕΟ ГО N0: 2) показано в качестве сравнительного наряду с негативным контролем изотипа ΙβΟ₁ человека. Каждая точка представляет среднее ±δΌ для трех повторов образцов.

Фиг. 9 - гуманизированные варианты ЗС104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью (1ИбА Υ /\У 8ΕΟ ΙΌ N0: ΥδΕΟ ΙΌ N0: 50; ЮЕК Υ /\У 8ΕΟ ΙΌ N0: 8/8ΕΟ ΙΌ N0: 38) сравнимы с гуманизированными вариантами антитела с более высокой предполагаемой иммуногенностью (1ИбА Υ /Υ.. 8ΕΟ ГО N0: УЗНО ГО N0: 25; ЮЕК Υ /\У 8ΕΟ ГО N0: 8/8ΕΟ ГО N0: 2б) в отношении специфичности и активности связывания с позитивной по антигену (С170, Со1о205) или негативной по антигену (НСТ-11б) линиями клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека, судя по определению с использованием проточной цитометрии. Химерное антитело ЗС104 (8Ε0 ГО N0: 4/8ΕΟ ГО N0: 2) показано в качестве сравнительного наряду с негативным контролем изотипа ΙβΟ₁ человека. Каждая точка представляет среднее ±δΌ для трех повторов образцов.

Фиг. 10 - основанный на проточной цитометрии анализ связывания, показывающий, что остатки Ι (- ⁰ - ) (8ΕΟ ГО N0: 50) и Ь () (8ΕΟ ГО N0: б2), но не С ( - А -) (3ΕΟ ΙΌ N0: 55) положении 29 в каркасе 1 1ИбА вариабельной области тяжелой цепи придает более высокую активность связывания гуманизированных вариантов антитела ЗС104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью с позитивной по антигену ЗС104 линией клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека С170. Химерное антитело ЗС104 (8Ε0 ГО N0: 4/8ΕΟ ГО N0: 2) показано в качестве сравнительного наряду с негативным контролем изотипа ΙβΟ₁ человека. Каждая точка представляет среднее ±3Ό для трех повторов образцов.

Фиг. 11 - основанный на проточной цитометрии анализ связывания, показывающий, что положительно заряженные остатки К (8Ε0 ГО N0: 50) (“□“) , но не отрицательно заряженный остаток Ό (8Ε0 ГО N0: 75) (-А-) или нейтральный остаток V (8Ε0 ГО N0: 90) (^_·^_) в положении 71 в каркасе 3 1ИбА вариабельной области тяжелой цепи придает более высокую активность связывания гуманизированных вариантов антитела ЗС104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью с позитивной по антигену

8С104 линией клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека С170. Химерное антитело 8С104 (8ЕС ГО N0: 4/8ЕС ГО N0: 2) показано в качестве сравнительного наряду с негативным контролем изотипа 1дС] человека. Каждая точка представляет среднее ±8Ό для трех повторов образцов.

Фиг. 12 - варианты антитела 8С104, содержащие каркас 1ибА (У_ь/У_н 8Е0 ГО N0: 7/8ЕС ГО N0: 50 и 8Е0 ГО N0: 7/8ЕО ГО N0: 25) (“□- или --), обладают более высокой активностью, непосредственно вызывающей гибель клеток, по сравнению с соответствующими вариантами 8С104, полученными на основе ЮЕК (У_ъ/У_н 8ЕС ГО N0: 8/8ЕС ГО N0: 38 и 81®) ГО N0: 8/8ЕС ГО N0: 2б), судя по определению с помощью проточной цитометрии с использованием позитивной по антигену 8С104 линии клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека С170. Химерное антитело 8С104 (8Е0 ГО N0: 4/8 ЕО ГО N0: 2) показано в качестве сравнительного наряду с негативным контролем изотипа 1дС] человека. Каждая точка представляет среднее ±8Ό для трех повторов образцов.

Фиг. 13 - гуманизированные варианты антитела 8С104, содержащие каркас 1ИбА (У_ь/У_н 8Е0 ГО N0: 7/8ЕО ГО N0: 50 и 8Е0 ГО N0: 7/8ЕО ГО N0: 25) (“О” ^или ) < обладают более высокой зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксической активностью по сравнению с соответствующими полученными на основе ЮБК вариантами 8С104 (У_ъ/У_н 8Е0 ГО N0: 8/8ЕО ГО N0: 38 и 8Е0 ГО N0: 8/8ЕО ГО N0: 2б), как определено в анализах высвобождения БОИ с использованием позитивной по антигену 8С104 линии клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека С170. Химерное антитело 8С104 (8Е0 ГО N0: 4/8ЕО ГО N0: 2) показано в качестве сравнительного, и изотип 1дС] человека использован в качестве негативного контроля. Каждая точка представляет среднее ±8Ό для трех повторов образцов.

Фиг. 14 - варианты антитела 8С104, содержащие каркас 1ИбА (У_ь/У_н 8Е0 ГО N0: 7/8ЕО ГО N0: 50 и 8Е0 ГО N0: 7/8ЕО ГО N0: 25) (^{или _и_}) < обладают более высокой зависимой от комплемента цитотоксичностью по сравнению с соответствующими полученными на основе ЮБК вариантами антитела 8С104 (У_ъ/У_н 81®) ГО N0: 8/8ЕС ГО N0: 38 и 81®) ГО N0: 8/8ЕС ГО N0: 2б), как определено в анализах жизнеспособности клеток с использованием позитивной по антигену 8С104 линии клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека Со1о205. Химерное антитело 8С104 (8Е0 ГО N0: 4/8ЕО ГО N0: 2) показано в качестве сравнительного наряду с негативным контролем в виде изотипа 1дС] человека. Каждая точка представляет среднее ±8Ό для трех повторов образцов.

Фиг. 15 - обработанное кифунензином гуманизированное антитело 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью (8Е0 ГО N0: 7/8ЕО ГО N0: 50) (^_0_) обладает более высокой зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксической активностью по сравнению с необработанным антителом ® ^{А _}) г как определено в анализах высвобождения БЭн с использованием позитивной по антигену 8С104 линии клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека \®ГОг. Каждая точка представляет среднее ±8Ό для трех повторов образцов.

Фиг. 1б - сконструированное способом Ро1с1ПдсШ® гуманизированное антитело 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью (8Е0 ГО N0: 7/8ЕО ГО N0: 94) обладает более высокой зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксической активностью по сравнению с необработанным антителом (8Е0 ГО N0: 7/8ЕО ГО N0: 50), как определено в анализах высвобождения ЬОн с использованием позитивной по антигену 8С104 линии клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека Со1о201. Каждая точка представляет среднее ±8Ό для трех повторов образцов.

Фиг. 17 - обработка мышей, несущих ксенотрансплантат опухоли нТ29, гуманизированным антителом 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью <^-θ-> (8Εζ) ГО N0: 7/8Εζ) ГО N0: 50) приводит к значимо пониженному росту по сравнению с контрольной обработкой наполнителем. Верхняя панель: среднее значение ±8ЕМ объема опухоли в группах по б-10 мышей. Звездочками указаны значимые различия между группами обработки, р<0,05, критерий Манна-Уитни. Нижняя панель: средние и индивидуальные массы опухолей в конце исследования. Р-значение на основе критерия Манна-Уитни.

Фиг. 18 - обработка мышей, несущих ксенотрансплантат опухоли Со1о201, сконструированным способом Ро1с1ПдсШ® гуманизированным антителом 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью (^_о_) (8Е0 ГО N0: 7/8ЕО ГО N0: 94) приводит к значимо уменьшенному объему опухолей по сравнению с контрольной обработкой наполнителем. Среднее ±8ЕМ в группах по 10 мышей. Звездочками указаны значимые различия между группами обработки, р<0,05, ΐ-критерий.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к гуманизированным связывающим доменам против злокачественных опухолей. Такие связывающие домены основаны на мышином антителе 8С104 (\®0 2005/108430) и содержат модифицированные каркасные последовательности человека для увеличения связывающей активности и снижения предполагаемой иммуногенности. Как будет понятно специалистам в данной области, последовательности, разработанные и описанные в настоящей публикации, могут быть дополнительно модифицированы посредством созревания аффинности, чтобы повысить связывание и чтобы увеличить Рс-опосредованную эффекторную функцию. Связывающие домены, описанные в настоящей публикации, можно применять либо по отдельности, либо в сочетании для диагностики и/или лечения злокачественных опухолей человека, например рака прямой и ободочной кишки, поджелудочной желе- 7 024695 зы, яичника и легкого.

В первом аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену Ун антитела, при этом связывающий домен содержит последовательно первую каркасную область (РВ1), первую СОВ (СЭВ1). вторую каркасную область (РВ2), вторую СОК (СЭВ2). третью каркасную область (РВ3), третью СОК (СОВ3) и четвертую каркасную область (РВ4), при этом последовательность РВ1 представляет собой Х₁УОЕОЕ8СРСЕУКР8ЕТЕ8ЕТСТУХ₂СУ8Х₃Х.₁ (δΕφ Ш N0: 95), где

X_I означает О или Е,

Х₂ означает δ или Т,

Х₃ означает I, Ь или У,

Х₄ означает δ или Т, или последовательность, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% сходную, предпочтительно по меньшей мере 90% или по меньшей мере на 95% идентичную указанной последовательности;

последовательность ί'ΌΒΙ представляет собой δΟΥδΑΗ (δΕφ ΙΌ N0: 96) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

последовательность РВ2 представляет собой А1В0Х₅РОКОЕХ₆АХ-О (δΕφ ΙΌ N0: 97), где

Х₅ означает δ или Р,

Х₆ означает О или Е,

последовательность ί'ΌΒ2 представляет собой ΗIΗX₈δΟΒΡТΥX₉Ρδ^X_1οδ (δΕφ ΙΌ N0: 98), где

Х₈ означает Р, Υ или Α,

Х₉ означает N или Ό,

Х₁₀ означает К, Ь, Η, Р, В или δ, или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность РВ3 представляет собой ΒX₁₁X₁₂IδX₁₃,X₁.₁ΤΑΚN^Рδ^Κ^ΤδΜΤΑΑ^ΤΑУУ ΥСΑΒ (δΕΟ ΙΌ N0: 99), где

X_II означает У или I,

Х₁₂ означает Т или δ,

Х₁₃ означает В или К,

Х₁₄ означает Е или Ό, или последовательность, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную указанной последовательности при условии, что остаток в положении 6 должен быть В или К;

последовательность СЭВ3 представляет собой ΚΟΚΟδΌΠΟΡΚΥ (δΕφ ΙΌ N0: 100) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность РВ4 представляет собой ΑΟΟΟΤΕντνδδ (δΕφ ΙΌ N0: 101) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности.

Во втором аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену Ун антитела, при этом связывающий домен содержит каркасную последовательность и первую, вторую и третью СЭВ, расположенные в каркасной последовательности, при этом последовательность каркасных областей по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95% идентична последовательности ^У^^^ΕδΟΡΟ^УΚΡδΕΤ^δ^ΤСΤУδΟΥδX₃δΑIΒ^ΡΡΟΚΟ^^ΑIΟΒУΤIδX₁₃ΕΤΑΚN^Рδ^Κ^ΤδΜΤ ΑΑ^ΤΑУΥΥСΑΒΑΟ^ΟΤ^УΤУδδ (δΕΟ ΙΌ N0: 102);

где Х₃ означает Ι, Ь или У,

Х₁₃ означает В или К;

и последовательность СОВ1 представляет собой δΟΥδΑΗ (δΕφ ΙΌ N0: 96) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

последовательность СОВ2 представляет собой ЖНХ^ОВРТУХ.-^ЕХнБ (δΕφ ΙΌ N0: 98), где

Х₈ означает Р, Υ или Α,

Х₉ означает N или Ό,

Х₁₀ означает К, Ь, Η, Р, В или δ, или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности; и последовательность СОВ3 представляет собой ΚΟΚΟδ^^Ο^NΥ (δΕφ ΙΌ N0: 100) или последова- 8 024695 тельность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности.

Предпочтительными в случае РР1, СЭР1, РР2, СЭР2. РК3, СЭР3 и РР4 являются следующие последовательности:

РР1 выбрана из группы, состоящей из 0Уф1Х)Е8ОРОЬУКР8ЕТЬЗЬТСТУ8О¥818 (ЗЕ<2 Ιϋ ΝΟ: 103), ОУОЕОЕЗОРОЕУКРЗЕТЕЗЕТСТУЗОУЗГГ (ЗЕ<) ГО ΝΟ: 104), фУфЕфЕЗОРОЬУКРЗЕТЕЗЕТСТУЗСУЗЕЗ (ЗЕф ГО ΝΟ: 105), □УрЕрЕЗОРСИ.УКРЗЕТЕЗЕТСТУЗОУЗЕТ (3Εί) ГО ΝΟ: 106), фУфЕЦЕЗОРОЬУКРЗЕТЕЗЕТСТУЗОУЗУЗ (ЗЕЦ ГО ΝΟ: 107), РУРЕРЕЗОРОЬУКРЗЕТЕЗЬТСТУЗОУЗУТ (ЗР.р ГО ΝΟ: 108), ОУфЕфЕЗОРОЕУКРЗЕТЕЗЬТСТУТОУЗга (ЗЕф ГО ΝΟ: 109), рурРрРЗОРСтРУКРЗЕТРЗРТСТУТОУЗГТ (ЗЕЦ ГО ΝΟ: 110), рУфЕфЕЗОРОЕУКРЗЕТЕЗЬТСТУТОУЗЬЗ (ЗЕф ГО ΝΟ: 111), □УрРрРЗОРОГУКРЗЕТРЗРТСТУТОУЗГТ (ЗЕЦ ГО ΝΟ: 112), ОУОЕОЕЗОРОЕУКРЗЕТЬЗЬТСТУТОУЗУЗ (ЗЕрГО ΝΟ: 113), Е)У01.рЕ8С1РО1.УКР8ЕТ1.31.ТСТУТС1У8УТ (ЗЕф ГО ΝΟ: 114), ЕУОЕЦЕЗОРОЕУКРЗЕТЕЗЬТСТУЗОУЗГЗ (ЗЕОГО ΝΟ: 115), ЕУ(2Е<2Е5СРСЕУКРЗЕТЕ5ЕТСТУЗСУ51Т (ЗЕф ГО ΝΟ: 116), ЕУОЕЦЕЗОРОЕУКРЗЕТЕЗЬТСТУЗОУЗЕЗ (ЗЕОГО ΝΟ: 117), ЕУ(2Е<2Е5СРСЕУКРЗЕТЕ5ЕТСТУЗСУ5ЕТ (ЗЕф ГО ΝΟ: 118), ЕУОЕЦЕЗОРОЕУКРЗЕТЕЗЕТСТУЗОУЗУЗ (5Е<2 ГО ΝΟ: 119), ЕУ(2Е<2Е5СРСЕУКРЗЕТЕ5ЕТСТУЗСУ5УТ (ЗЕф ГО N0: 120), ЕУОЬОЕЗОРОЕУКРЗЕТЬЗЬТСТУТОУЗК (ЗЕЦ ГО ΝΟ: 121), ЕУрЕрПЗСРСЕУКРЗЕТЬЗЕТСТУТСУЗП (ЗЕф ГО N0: 122), ЕУОЬОЕЗОРОЕУКРЗЕТЬЗЬТСТУТСУ8ЬЗ (ЗЕф ГО ΝΟ: 123), ЕУ(2Е<2Е5СРСЕУКР5ЕТЕ5ЕТСТУТСУ5ЕТ (ЗЕф ГО N0: 124), ЕУОЬОЕЗОРОЕУКРЗЕТЕЗЬТСТУЗТСУЗУЗ (ЗЕф ГО N0: 125), И ЕУрЕрЕЗОРОЕУКРЗЕТЬЗЕТСТУТСУЗУТ (5Е<2 ГО ΝΟ: 126);

СГОР1 представляет собой последовательность δΟΥδΑΗ (δΕΟ ГО N0: 96); РР2 выбрана из группы, состоящей из А1КР8РОКОЬРА1О (δΕ(') ГО N0:127),

А1КР8РОКОЬРАМО (δΕ(') ГО N0: 128),

ΑΙΚρδΡΟΚΟΡΕΑΙΟ (δΕ(') ГО N0: 129),

ΑΙΚρδΡΟΚΟΡΕΑΜΟ (δΕ(') ГО N0: 130), \\'1Р(')РРОКС,1.(')\\'1С. (δΕ(') ГО N0: 131), \\'1Р(')РРОКС,1.(')\\'\1С. (δΕ(') ГО N0: 132),

А1КРРРОКОЬЕА1О (δΕ(') ГО N0: 133) и А1КРРРОКОЬЕАМО (δΕ(') ГО N0: 134);

СГОР2 выбрана из группы, состоящей из ΗIΗΡδΟΡΡТΥNΡδ^δδ (δΕ(') ГО N0: 135),

ΗIΗΡδΟΡΡТΥNΡδ^Κδ (δΕ(') ГО N0: 136),

ΗIΗΡδΟΡΡТΥNΡδ^^δ (δΕ(') ГО N0: 137),

ΗIΗΡδΟΡΡТΥNΡδ^Ηδ (δΕ(') ГО N0: 138),

ΗIΗΡδΟΡΡТΥNΡδ^Ρδ (δΕ(') ГО N0: 139),

ΗIΗΡδΟΡΡТΥNΡδ^Ρδ (δΕ(') ГО N0: 140),

IIII 1\\УОРРТУ\1У1 ,δδ (δΕ(') ГО N0: 141),

IIII 1\\УОРРТУ\1У1К (δΕ(') ГО N0: 142),

IIII 1\\УОРРТУМУ1.1У (δΕ(') ГО N0: 143),

IIII 1\\УОРРТУМУ1.1 Ιδ (δΕ(') ГО N0: 144),

IIII 1\\УОРРТУМУ1.1У (δΕ(') ГО N0: 145),

IIII 1\\УОРРТУ\1У1 ,Ρδ (δΕ(') ГО N0: 146),

ΗIΗΥδΟΡΡТΥNΡδ^δδ (δΕ(') ГО N0: 147),

IIII1УУОРРТУМУ1К (δΕ(') ГО N0: 148),

IIII 1УУОРРТУМУ1.1У (δΕ(') ГО N0: 149),

IIII 1УУОРРТУМУ1.1 Ιδ (δΕ(') ГО N0: 150),

IIII 1УУОРРТУМУ1.1У (δΕ(') ГО N0: 151),

ΗIΗΥδΟΡΡТΥNΡδ^Ρδ (δΕ() ГО N0: 152),

IIIIПУОРРТУШУ!^ (δΕ(') ГО N0: 153),

- 9 024695

ΗΙΗΡ8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΡΚ8 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 154),

ΗΙΗΡδΟΚΡΤΎΏΡδΡΡδ (8ΕΕ) ΙΌ N0: 155),

ΗΙΗΡ8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΡΗ8 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 156),

ΗΙΗΡ8ΟΚΡΤΎΏΡ8ΡΡ8 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 157),

ΗΙΗΡ8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΡΚ8 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 158),

ΗΙΗ^8ΟΚΡΤΥΌΡ8Ρ88 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 159),

ΗΙΗ^8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΡΚ8 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 160),

I ΙΙΙ Ι\ν8(.ΡΡΤΥΙ)Ρ81,1,8 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 161),

I ΙΙΙ Ι\ν8(.ΡΡΤΥΙ)Ρ81,118 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 162),

ΗΙΗ\8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΡΡ8 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 163),

I ΙΙΙ Ι\ν8(.ΡΡΤΥΙ)Ρ8Ι ,Ρ8 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 164),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΌΡ8Ρ88 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 165),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΕΙ<8 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 166),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΕΕ8 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 167),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΕΗ8 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 168),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΕΕ8 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 169) и

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΕΡ8 (8ΕΕ) ΙΌ N0: 170);

ΡΡ3 выбрана из группы, состоящей из

ΚνΤΚΚΕΤΑΚΝΟΡδΕΚΕΤδΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (8Г.(,) ГО ΝΟ: 171),

ΚνΤΒΚΟΤΑΚΝΟΡδΕΚΕΤδΜΤΑΑϋΤΑνΥΥΕΑΚ (ЗЕр ГО ΝΟ: 172),

ΕνΤΙδΚΕΤΑΚΝ(3Ρ8ΕΚΕΤ5ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥ€ΑΚ <ЗЕр ГО N0: 173),

ΚνΤΙ5ΚΟΤΑΚΝΟΡ5ΕΚΕΤ5ΜΤΑΑϋΤΑνΥΥΟΑΙΐ (ЗЕр ГО ΝΟ: 174),

Κν5Ι5ΚΕΤΑΚΝ<2ΡδΕΚΕΤ5ΜΤΑΑϋΤΑνΥΥΟΑΚ (5Ер ГО N0: 175),

ΚνδΙδΚϋΤΑΚΝΟΡδΕΚΕΓδΜΤΑΑϋΤΑνΥΥΡΑΚ (5Ер ГО N0: 176),

К νδΙδΚΓ.ΤΑΚΝρΓδΙ.ΚΙ.ΤδΜΤΑ ΑΟΤΑΥΥΥίΑΚ (ЗГ.р ГО ΝΟ: 177),

ΚνδΙδΚϋΤΑΚΝΟΡδΕΚΕΤδΜΤΑΑϋΤΑνΥΥΟΑΕ (ЗЕр ГО ΝΟ: 178),

ΕΤΤΙ5ΚΕΤΑΚ\ΟΓ8[.ΚΤ.Τ5ΜΤΑ ΑΟΤΑνΥΥ6 ΑΚ (ЗЕр ГО N0: 179),

ΕΓΠδΚϋΤΑΚΝΟΡδΕΚΕΤδΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΕ (ЗЕр ГО ΝΟ: 180),

ΚΠΊ5ΚΕΤΑΚΝρΡ5ΕΚΕΤ5ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕр ГО ΝΟ: 181),

ΕΓΓΙ5ΚϋΤΑΚΝρΡ5ΕΚΕΤ5ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥ€ΑΕ (ЗЕр ГО N0: 182),

ΚΙ.8Ι8ΚΓ.ΤΑ[<Ν0Γ8ΕΚΕΤ8ΜΤΑΑΟΤΑ\·ΎΥΕΑΚ (ЗГ.р ГО ΝΟ: 183),

ΚΙδΙδΚΟΤΑΚΝρΡδΕΚΕΤδΜΤΑΑϋΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕр ГО ΝΟ: 184),

ΚΙ8Ι8ΚΓ.ΤΑΚ\ρΓ8[.ΚΕΤ8ΜΤΑ ΑΟΤΑ\·ΎΥΕΑΚ (ЗЕр ГО ΝΟ: 185), И

ΚΙ3Ι3ΚϋΤΑΚΝΡΡ3ΕΚΕΤ3ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΡΑΕ (ЗЕр ГО N0: 186);

ί'.’ΌΡ3 представляет собой Κ0Κ08^^0^NV (8Ε0 ΙΌ N0: 100); и ΡΡ4 представляет собой \0ρ0ΤΡνΤν88 (81%) ΙΌ N0: 101).

В третьем аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену V антитела, при этом связывающий домен содержит последовательно первую каркасную область (ΕΡ1), первую ί',ΌΡ (ΡΌΡ1). вторую каркасную область (ΡΡ.2), вторую ΕΌΡ (0ΌΚ2), третью каркасную область (ΡΡ.3), третью ΕΌΡ (ΕΌΡ3) и четвертую каркасную область (РК4), при этом последовательность РК1 представляет собой ΕΧ₁₅νΕΤ08ΡΟΤΕ8Ε8Χ₁₆ΟΕΡΑΤΕ8Ε (8Ε0 ΙΌ N0: 187), где

Χ₁₅ означает Ι или N

последовательность ΕΌΡ1 представляет собой 8Α888Ρ8νΙΗ (8Ε0 ΙΌ N0: 188) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность ΕΡ2 представляет собой νΥΟΟΚΡΟΟΑΡΡΕΡΙΥ (8Ε0 ΙΌ N0: 189) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность ΕΌΡ2 представляет собой ^Τ8N^Α8 (8Ε0 ΙΌ N0: 190) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

последовательность ΕΡ3 представляет собой ΟΙΡΌΡΕ8Ο8Ο8ΟΧ₁-ΌΕΤΕΤΙ8ΡνΕΡΕΌΕΑνΥΥΕ (8Ε0 ΙΌ N0: 191), где

Χ₁₇ означает Т или N или последовательность, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% сходную, предпоч- 10 024695 тительно по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную указанной последовательности;

последовательность СИКЗ представляет собой РООЗЕУРЬТ (8Е0 ГО N0: 192) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

последовательность РК4 представляет собой РОрОТКЬЕ1КК (5>Е0 ГО N0: 193) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности.

В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену Уь антитела, при этом связывающий домен содержит каркасную последовательность и первую, вторую и третью СГОК, расположенные в каркасной последовательности, при этом последовательность каркасных областей, по меньшей мере, на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95% идентична последовательности

Н1\1/т51ГОТ1.51.51ГО11КЛТ1.5С\\У(Х)1КГООЛ1ГО111¥С.11ГО1КУС.5С.5С.ТГО1^;Т1.Т15К\1Т1ГО1^;ЛУ¥¥ СТ¥,С)С.ТК1.Н1кК (δΗΟ ГО N0: 194);

и последовательность СГОК1 представляет собой δΑδδδΕδΥΙΗ (5>Е0 ГО N0: 188) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность СГОК2 представляет собой ОТЗНЕАЗ (8Е0 ГО N0: 190) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности; и последовательность СИКЗ представляет собой Р^ΟδЕΥΡ^Т (8Е0 ГО N0: 192) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности.

Предпочтительными в случае РК1, СИК1, РК2, СИК2, РКЗ, СИКЗ и РК4 являются следующие последовательности:

РК1 выбрана из группы, состоящей из

Е1УЕТР§РОТЬ§Е§РОЕКАТЕ§С (δί ГО) ГО N0: 195),

Е1УЕТР§РОТЬ§Е§АОЕКАТЕ§С (δί ГО) ГО N0: 196),

ЕН¥ЕТО8РСТЕ8Е8РСЕКАТЕ8С (δί ГО) ГО N0: 197) и

ЕН¥ЕТО8РСТЕ8Е8АСЕКАТЕ8С (δί ГО) ГО N0: 198).

СГОК1 представляет собой δΑδδδΕδΥΙΗ (δί ГО) ГО N0: 188);

РК2 представляет собой \\'¥С)С)КРС,С¥\РКЕЕ1¥ (δί ГО) ГО N0: 189);

СГОК2 представляет собой ИТЗИРАЗ (8Е0 ГО N0: 190);

РКЗ представляет собой ΟIΡ^КРδΟδΟδΟТ^РТ^ТIδКVЕΡЕ^РАVΥΥС (δί ГО) ГО N0: 199) или ΟΙΡ ^КРδΟδΟδΟN^РТ^ТIδКVЕΡЕ^РАVΥΥС (δί ГО) ГО N0: 200);

СИКЗ представляет собой Р^ΟδЕΥΡ^Т (8Е0 ГО N0: 192); и

РК4 представляет собой РСОСТКЕЕГКК (δί ГО) ГО N0: 19З).

В пятом аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену У_н антитела, при этом связывающий домен содержит последовательно первую каркасную область (РК1), первую СГОК (СПК1), вторую каркасную область (РК2), вторую СГОК (СИК2), третью каркасную область (РКЗ), третью СГОК (СИКЗ) и четвертую каркасную область (РК4), при этом последовательность РК1 представляет собой ЕV^^^^\VСАС^^I<ΡδЕТ^δ^ТСАVΥСΥδX|₈X|₉, (δί ГО) ГО N0: 201), где

Х₁₈ означает I, Ь или V,

Х₁₉ означает δ или Т, или последовательность, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную указанной последовательности;

последовательность СГОК1 представляет собой δΟΥδ\Η (δΞΟ ΙΌ N0: 96) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

последовательность РК2 представляет собой \¥1КОРРСКСЕЕ\¥Х₂₀С (δΞΟ ΙΌ N0: 202), где

Х₂₀ означает М или Ι, или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность СГОК2 представляет собой ΗIΗX₂|δСКΡТΥX₂₂Ρδ^X₂₃δ (δΞΟ ΙΌ N0: 98), где

Х21 означает Р, Υ или \,

Х₂₂ означает N или Ό,

Х_2З означает К, Ь, Η, Р, К или δ, или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность РКЗ представляет собой КX₂₄X₂₅IδX₂₆^ТδКN^Рδ^К^δδVТАА^ТАVΥΥСАК

- 11 024695 (δΕΕ) ΙΌ N0: 203), где

Χ₂₄ означает V или I,

Х₂₅ означает δ или Т,

Х₂₆ означает К или К, или последовательность, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную указанной последовательности при условии, что остаток в положении 6 должен быть К или К;

последовательность СЭКЗ представляет собой ΚΟΚΟδΌΌΟΕΝΥ (δΕΟ ΙΌ N0: 100) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность РК4 представляет собой νΟΟΟΤΕνΤνδδ (δΕΟ ΙΌ N0: 101) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности.

В шестом аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену ν_Η антитела, при этом связывающий домен содержит каркасную последовательность и первую, вторую и третью СОК, расположенные в каркасной последовательности, при этом последовательность каркасных областей по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95% идентична последовательности ΕV^^^^VΟΑΟ^^ΚΡδΕΤ^δ^ΤСΑVΥΟΥδX₁₈δVIК^ΡΡΟΚΟ^ΕVIΟКVΤIδX₂₆^ΤδΚN^Рδ^Κ^δδVΤΑ ΑΌΤΑ’νΥ^ΑΡνΟρΟΤΕνΤνδδ (δΕΕ) ΙΌ N0: 204), где Χ₁₈ означает I, Ь или V и Χ₂₆ означает К или К;

и последовательность ί',ΌΡΙ представляет собой δΟΥδνΗ (δΕΟ ΙΌ N0: 96) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

последовательность СЭР2 представляет собой ΗΙΗΧ₂₁δΟΡΡΤΥΧ₂₂ΡδΕΧ₂₃δ (δΕΟ ΙΌ N0: 98), где

Χ₂₁ означает Р, Υ или V,

Х₂₂ означает N или Ό,

Х₂₃ означает К, Ь, Η, Р, К или δ, или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности; и последовательность СОКЗ представляет собой ΚΟΚΟδ^^Ο^NΥ (δΕΟ ΙΌ N0: 100) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности.

Предпочтительными в случае РК1, СОК1, РК2, СОК2, РКЗ, СОКЗ и РК4 являются следующие последовательности:

РК1 выбрана из группы, состоящей из

ЕУОЬООУУОАОЬЕКРЗЕТЕЗЕТСАУУСУЗЬ (ЗЕф ГО ΝΟ: 205),

ΕνΌΕΌΌν№ΑΟΙΧΚΡ5ΕΤΕ5ΕΤΟΑνΥΟΥ5ΓΓ (ЗЕф ГО ΝΟ: 206),

ЕУРЬООУУОАОЕЕКРЗЕТЕЗЕТСАУУОУЗЕЗ (ЗЕф ГО N0: 207),

ЕУрЕОр\УС1АОТ.ЕКРЗЕТЕ5ЕТСАУ’УС.У8ЕТ ( ЗЕС) ГО N0: 208),

ЕУ0Ь00УУОАО1ЖКР5ЕТЕ5ЕТСАУУОУ8У5 (ЗЕф ГО N0: 209), и

ЕУОЕОО\УС1АС.Т.ЕКР.8ЕТЕ5ЕТСАУЛ’С.У5\’Т (ЗЕф ГО ΝΟ: 210);

СОК1 представляет собой δΟΥδνΗ (δΕΟ ГО N0: 96);

РК2 представляет собой νΐΗΟΡΡΟΡΟΡΕνίΟ (δΕΕ) ГО N0: 133) или \νΐΡΕ)ΡΡΟΡΟΕΕ\ν\1Ο (δΕΕ) ГО N0: 134);

СОК2 выбрана из группы, состоящей из

ΗIΗРδΟКΡΤΥNΡδ^δδ (δΕΕ) ГО N0: 135),

ΗΙ^δΟΕΡΤΥ^δΌ^ (δΕΕ) ГО N0: 136),

ΗΙ^δΟΕΡΤΥ^δΕΌδ (δΕΕ) ГО N0: 137),

ΗΙ^δΟ^ΤΥ^δΕΗδ (δΕΕ) ГО N0: 138),

ΗIΗРδΟКΡΤΥNΡδ^Рδ (δΕΕ) ГО N0:139),

ΗIΗРδΟКΡΤΥNΡδ^Кδ (δΕΕ) ГО N0: 140),

ΗIΗVδΟКΡΤΥNΡδ^δδ (δΕΕ) ГО N0: 141),

ΗIΗVδΟКΡΤΥNΡδ^Κδ (δΕΕ) ГО N0: 142),

ΗIΗVδΟКΡΤΥNΡδ^^δ (δΕΕ) ГО N0: 143),

ΗIΗVδΟКΡΤΥNΡδ^Ηδ (δΕΕ) ГО N0: 144),

ΗIΗVδΟКΡΤΥNΡδ^Рδ (δΕΕ) ГО N0: 145),

ΗIΗVδΟКΡΤΥNΡδ^Кδ (δΕΕ) ГО N0: 146),

ΗIΗΥδΟКΡΤΥNΡδ^δδ (δΕΕ) ГО N0: 147),

ΗΜΥδΟ^ΤΥ^δΙ^δ (δΕΕ) ГО N0: 148),

ΗIΗΥδΟКΡΤΥNΡδ^^δ (δΕΕ) ГО N0: 149),

ΗΜΥδΟ^ΤΥ^δΕΗδ (δΕΕ) ГО N0: 150),

- 12 024695

ΗΙΗΥ8ΟΚΡΤΥΝΡ8ΕΡ8 (8ЕЦ ΙΌ N0: 151),

ΗΙΗΥ8ΟΚΡΤΥΝΡ8ΡΚ8 (8ЕЦ ΙΌ N0: 152),

ΗΙΗΡδΟΚΡΤΥΌΡδΌδδ (8ЕЦ ΙΌ N0: 153),

ΗΙΗΡ8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΕΚ8 (8ЕЦ ΙΌ N0: 154),

ΗΙΗΡ8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΕΕ8 (8ЕЦ ΙΌ N0: 155),

ΗΙΗΡ8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΕΗ8 (8ЕЦ ΙΌ N0: 156),

ΗΙΗΡδΟΚΡΤΥΌΡδΌΡδ (8ЕЦ ΙΌ N0: 157),

ΗΙΗΡ8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΕΚ8 (8ЕЦ ΙΌ N0: 158),

ΗΙΗ^δΟΚΡΤΥΌΡδΌδδ (8ЕЦ ΙΌ N0: 159),

IΙΙΙ Ι\\Υ(..ΗΡΤΥυΡ8Ι.Κ8(8ΙΤ) ΙΌ N0: 160),

ΗΙΗ\8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΕΕ8 (8ЕЦ ΙΌ N0: 161),

ΗΙΗ\8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΕΗ8 (8ЕЦ ΙΌ N0: 162),

ΗΙΗ\8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΕΡ8 (8ЕЦ ΙΌ N0: 163),

ΗΙΗ\8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΕΚ8 (8ЕЦ ΙΌ N0: 164),

ΗΙΗΥδΟΡΡΤΥΌΡδΌδδ (8ЕЦ ΙΌ N0: 165),

ΗΙΗΥδΟΡΡΤΥΌΡδΌΚδ (8ЕЦ ΙΌ N0: 166),

ΗΙΗΥδΟΡΡΤΥΌΡδΡΌδ (8ЕЦ ΙΌ N0: 167),

ΗΙΗΥδΟΡΡΤΥΌΡδΌΗδ (8ЕЦ ΙΌ N0: 168),

ΗΙΗΥ8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΕΡ8 (8ЕЦ ΙΌ N0: 169) и

ΗΙΗΥ8ΟΚΡΤΥΌΡ8ΕΚ8 (8ЕЦ ΙΌ N0: 170);

ΡΡ3 выбрана из группы, состоящей из

ΚνΤΙ8ΚΟΤ8ΚΝΌΡ5ΕΚΕ55νΤΑΑΟΤΑνΥΥεΑ& (δΕζ> ГО N0: 218),

ΚνΤΙ5ΚΟΤ8ΚΝΌΡ5ΕΚΕ55νΤΑΑϋΤΑνΥΥΕΑΚ (ЗЕЦ ГО ΝΟ: 219),

ΚνδΤδΚΟΤδΚΥζίΕδΕΚΕδδνΤΑΑΕΤΑνΥΥΕΑΚ (8ЕЦ ГО N0: 220),

ΚνδΙδΚϋΤδΚΝΌΡδΕΚΕδδνΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (5ЕЦ ГО N0: 221),

ΚΤΤΤ8ΚΟΤ3ΚΝΕ)Ρ5ΕΙ<Ε88νΤΑ ΑΓΙΤΑΥΎΥΕΑΡ (δΕζ) ГО N0: 222),

ΚΓΠδΚΟΤδΚΝΌΡδΕΚΕδδνΤΑΑϋΤΑνΥΥΓΑΚ (ЗЕЦ ГО ΝΟ: 223),

ΚΙ8Ι8ΚΟΤ8ΚΝΟΕ8ΕΚΕ83νΤΑΑΟΤΑνΥΥΕΑΚ (ЗЕф ГО ΝΟ: 224),

ЫЗККОТЗКИфРЗЕКЕЗЗУТААОТАУУУСАК. (3Εζ> ГО ΝΟ: 225).

ΕΌΡ3 представляет собой КОКОБОООи^ (8ЕЦ ΙΌ N0: 100).

ΡΡ4 представляет собой \\'(.,(')(.ιΤΕ\ΊΎ88 (8ЕЦ ΙΌ N0: 101).

В седьмом аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену У_ъ антитела, при этом связывающий домен содержит последовательно первую каркасную область (ΡΡ1), первую Ε'ΌΡ (ΕΌΡ1). вторую каркасную область (ΡΡ2), вторую Ε’ΌΡ (ΕΌΡ2). третью каркасную область (ΡΡ3). третью Ε’ΌΡ (ΕΌΡ3) и четвертую каркасную область (ΡΡ4), при этом последовательность ΡΡ1 представляет собой ΡX₂-У^Τ^8ΡΑΤ^8^8ΡСΡΡΑΤ^8С (8ЕЦ ΙΌ N0: 211), где

Х₂₇ означает Ι или N или последовательность, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную указанной последовательности;

последовательность ΕΌΡ1 представляет собой δΑδδδΌδΥΙΗ (8ЕЦ ΙΌ N0: 188) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность ΡΡ2 представляет собой ΧΥΥΟΟΚΡΕΟΑΡΡΕΕΙΥ (8ЕЦ ΙΌ N0: 189) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность СОК2 представляет собой ^Τ8N^Α8 (8ЕЦ ΙΌ N0: 190) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность ΡΡ3 представляет собой СIΡ^ΡΡδСδСδСX₂₈^ΡΤ^ΤIδΡ^ЕΡЕ^ΡΑУΥΥС (8ЕЦ ΙΌ N0: 212), где

последовательность СОК3 представляет собой Ρ^С8ЕΥΡ^Τ (8ЕЦ ΙΌ N0: 192) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

последовательность ΡΡ4 представляет собой ΡΟΟΟΤΚνΡΙΚΚ (8ЕЦ ΙΌ N0: 193) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную

- 13 024695 указанной последовательности.

В восьмом аспекте настоящее изобретение относится к связывающему домену У_ъ антитела, при этом связывающий домен содержит каркасную последовательность и первую, вторую и третью СЭК. расположенные в каркасной последовательности, при этом последовательность каркасных областей по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95% идентична последовательности

Ηΐ\ττοδΐ%τι.δΐ.δΐ%ΐΊυ\τι.δη\Ύ(χ)κι%θΆΐΨΐ.ι.ιναιΐΡ)κΐγαδαδατυι·ΊΊ.ΊΊδκι.ΗΡΗυι^;Ά\ΎΥ(· РСОСТКУЕКК. ХУ) ΙΌ N0: 213), и последовательность ί'ΌΚ1 представляет собой δΑδδδΕδΥΙΗ (8ЕЦ ΙΌ N0: 188) или последовательность, по меньшей мере на 90% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

последовательность ί'.’ΌΚ2 представляет собой ΌΤδΝΕΆδ (8ЕЦ ΙΌ N0: 190) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности; и последовательность СЭК3 представляет собой ΡΟΟδΕΥΡΕΊ (8ЕЦ ΙΌ N0: 192) или последовательность, по меньшей мере на 80% сходную, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности.

Предпочтительными в случае РК1, СЭКЕ РК2, СОК2, РК3, СЭК3 и РК4 являются следующие последовательности:

РК1 выбрана из группы, состоящей из

ΕIV^Τ^δΡΑΤ^δ^δΡΟΕКΑΤ^δС XV) ΙΌ N0: 214) или

ΕNV^Τ^δΡΑΤ^δ^δΡΟΕКΑΤ^δС ^ЕЦ ΙΌ N0: 215).

СОК1 представляет собой δΑδδδΕδΥΙΗ ΧΥ) ΙΌ N0: 188).

РК2 представляет собой ΑΥΟΟΚΡΟΟΑΡΡΕΕΙΥ ХУ) ΙΌ N0: 189).

СОК2 представляет собой ΌΊδΗΣΑδ ^ЕЦ ΙΌ N0: 190).

РК3 представляет собой ΟIΡ^КΡδΟδΟδΟΤ^ΡΤ^ΤIδК^ΕΡΕ^ΡΑVΥΥС XV) ΙΌ N0: 216) или ΟΙΡ ^КΡδΟδΟδΟN^ΡΤ^ΤIδК^ΕΡΕ^ΡΑVΥΥС XV) ΙΌ N0: 217).

СОК3 представляет собой Ρ^ΟδΕΥΡ^Τ ΧΎ) ΙΌ N0: 192).

РК4 представляет собой РОООТКУЕЖК XV) ΙΌ N0: 193).

В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения связывающие домены У_н и У_ъ антитела согласно настоящему изобретению дополнительно содержат константный домен. Константный домен может быть человеческим или доменом примата, отличного от человека, предпочтительно константной областью человека. В одном варианте последовательностью константного домена тяжелой цепи является последовательность

Α3ΤΚΝΡ0νΡΡΕΑΡ33Κ8Τ300ΤΑΑΕ00ΕνΚ0ΥΡΡΕΡντν3\νΝ30ΑΕΤ30ν

ΗΤΡΡΑνΕ055ΟΕΥ5Ε55νντνΡ555ΕΟΤρΤΥΚΝνΝΗΚΡ5ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ

ЗСОКТНТСРРСРАРЕЕЬООРЗУРЬЕРРКРКОТЕМВКТРЕУТСУУУОУЗНЕ

ΟΡΓΛΤΤΝΑνΥνηΟνΓ.νΗΝΑΚΤΚΡΡΓΓ.ΟΥΝδΤΥΚννδνΕΤνΕΗΟΟν,Τ.ΝΟΚ

ΕΥΚεκνδΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ8ΚΑΚΟ0ΡΕΕΡ0νΥΤΕΡΡδΚΟΕΕΤΚΝ0ν8ΕΤ€Ε νΚΟΓΥΡ8Γ)ΙΑνΡ\νΕ8ΝΟ0ΡΓΝΝΥΚΤΤΡΡνΤΤ>5Γ)Ο3ΓΓΕΥ8Ι<ΕΤνηΚ5Κ\ν0 (ΧΙΝΥΡδΟδ νΜΗΕΛίΗΝΗ ΥΤ0Κ8Ε3Ε3ΡΟΚ (3Ε0 ГО N0: 52); или

Α8ΤΚΟΡ8νΡΡΕΑΡ88Κ8Τ8ΟΟΤΑΑΕΟΟΕνΚΟΥΡΡΕΡντν8\νΝ8ΟΑΕΤ8θν

ΗΤΓΡΑνΕρ55ΟΕΥ$Ε$8νντνΡ555ΕστςΤΥΙΕ\Λ'’ΝΗΕ4<3ΝΤΚνΕ>ΚΚνΕΡΚ

ЗСОКТНТСРРСРАРЕЕЕОСРЗУРЕРРРКРКОТЬМВКТРЕУТСУУУОУЗНЕ

0ΡΕνΚΡΝ\νΥν00νΕνΗΝΑΚΤΚΡΚ.ΕΕςΥΝ5ΤΥΕ.νν5νΕΤνΕΗς0\νΕΝ0Κ

ΕΥΚΙ~Κν3ΝΚΑΙ_ΡΑΡΤΕΚΤΙ3 ΚΑΚΟζΙΡΚΕ РС>УУТЕРР8Т<ОЕЕТКХС>У8ЕТСЕ νΚ(.ίΓΥΡ8Γ)ίΑ\’ΤΛνΓ.8Ν(_ΐ(_ν)ΡΓ.Ν\ΎΚΤΤΡΡν[.Γ)8Γ)(38ΓΠ.Υ8Κ[.ΤνΓ)Κ8Ρ\ν(.)

ΟΟΝ\Ψ305νΜΗΕΛΕΗΝΗΥΤΟΚ3Ε3Ε3ΡΟΚ (ЗЕ<2 ГО ΝΟ; 92); или

ΑδΤΚΝΡΟνΡΡΕΑΡδδΚδΤδΟΟΤΑΑΕΟΟΕνΚΟΥΡΡΕΡντνδΧνΝδΟΑΕΤδσν

ΗΤΡΡΑνΕ<238ΟΕΥ3Ε38νντνΡ333ΕΟΤ<2ΤΥΐαΝνΝΗΚΡ8ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ

ЗСОКТНТСРРСРАРЕЕЕОСРОУРЕРРРКРКОТЬМККТРЕУТСУУУОУЗНЕ

ΟΡΕνΚΡΝ\νΥνΓ)Ο\ΈνΗΝΑΚΤΚΡΓ<ΕΕζ»ΥΝΑΤΥΓ<νν5νΕΤνΕΗζ>Γ)Ά^ΓΕΝΟ

КР.УКСК νδΝΚΑί.ΡΑΡΡ.Ρ.ΚΤίδΚΑΚΤτ(.)ΡΡΕΡΤ)νΥΤΙ.ΡΡδΡΓ)Ρ.ί.ΤΚΝΤ)νδί.Τ

ΟΕνΚΟΕΥΡ8Γ)ΙΛνΕ'ΛΈ3ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΓ>$Γ>Ο3ΡΕΙ_Υ3ΚΙ_ΤνΕ)ΚδΚ \ν(,)(.ΚτΝνΡ8(.ΥννΐΗΡ,Α[.ΗΝΗ ΥΤΟΚδΙ,δΕδΡΟΚ (δΡΥ) ГО ΝΟ: 53); И и последовательностью константного домена легкой цепи является последовательность

ΤνΑΑΡδνΡΙΡΡΡ3ΟΕ0ΕΚ3ΟΤΑ3ννθΕΕΝΝΡΥΡΚΕΑΚν<2\νκνθΝΑΕ<23ΟΝ δΟΓ.δνΤΓ.ΟΓ)δ«Γ)δΤΥδί.δδΤΙ .ΤΙ .δΚΑΟΥΓ.ΚΙ ΙΚνΥΑΡΓ.νΤΙ 1(.)(31.δδΡνΤΚδΡ ХКС.ЕС (8Ε<2 ГО N0: 93).

В следующем предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения предлагается антитело, содержащее У_н согласно первому аспекту и У_ъ согласно второму аспекту или У_н согласно третьему аспекту и У_ъ согласно четвертому аспекту.

- 14 024695

Связывающие домены и антитела согласно настоящему изобретению специфично связывают злокачественные клетки, которые экспрессируют антиген, связываемый δΟ104. в частности колоректальныую злокачественную опухоль и неколоректальные злокачественные опухоли, такие как злокачественная опухоль яичника, поджелудочной железы, предстательной железы и легкого. Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к способу лечения злокачественной опухоли у субъекта, при этом злокачественная опухоль выбрана из опухолей прямой и ободочной кишки, яичника, поджелудочной железы, предстательной железы и легкого, и при этом способ включает в себя введение субъекту терапевтически эффективного количества связывающего домена или антитела согласно настоящему изобретению.

Настоящее изобретение также относится к способу выявления присутствия злокачественных клеток в образце, при этом способ включает в себя осуществление контакта образца клеток со связывающим доменом или антителом согласно настоящему изобретению и выявление связывания связывающего домена или антитела согласно настоящему изобретению с клетками.

Как будет понятно, последовательности, разработанные и описанные в настоящем изобретении, могут быть модифицированы с применением способов, хорошо известных в данной области, чтобы повысить связывание, например, с использованием созревания аффинности, или чтобы понизить иммуногенность посредством удаления предполагаемых мотивов связывания МНС класса II. Терапевтическая применимость последовательностей, разработанных и описанных в настоящей публикации, может быть дополнительно увеличена в результате модулирования их функциональных свойств, таких как зависимая от антител опосредованная клетками цитотоксичность (АОСС), зависимая от комплемента цитотоксичность (СОС), время полужизни в сыворотке, биораспределение и связывание с Рс-рецепторами или сочетание любых из указанных свойств. Такое модулирование может быть осуществлено в результате белковой инженерии, гликоинженерии или химических способов. В зависимости от требуемого терапевтического применения может быть полезным либо повышение, либо снижение любой из указанных активностей.

В данной области известны многочисленные способы созревания аффинности антител. Многие из них основаны на общей методике создания панелей или библиотек вариантов белков в результате мутагенеза с последующей селекцией и/или скринингом в отношении повышенной аффинности. Мутагенез часто осуществляют на уровне ДНК, например, используя склонную к ошибкам ПЦР (ТЫе, ^еб18ск е! а1. 2009), перетасовку генов (ΚοΙΚιηαη апб δ!етте^ 2001), применяя мутагенные химические средства или облучение, используя мутаторные штаммы со склонным к ошибкам аппаратом репликации (Сгеепег, 1996) или способы соматического гипермутирования, в которых используют природный механизм созревания аффинности (Ре1еб, Киапд е! а1. 2008). Мутагенез также можно осуществлять на уровне РНК, например, используя φβ-репликазу (Кορδ^баδ, Ρο^Πδ е! а1. 2006). Основанные на создании библиотек способы, позволяющие проводить скрининг в отношении улучшенных вариантов белков, могут быть основаны на различных методиках дисплея, такого как дисплей на основе фага, дрожжей, рибосомы, бактериальных клеток или клеток млекопитающих, и хорошо известны в данной области (ВепНаг, 2007). Созревание аффинности можно осуществить более прямыми/прогнозируемыми способами, например, с использованием сайт-направленного мутагенеза или синтеза генов, руководствуясь данными 30моделирования белков (см., например, Онеен δсНηе^бе^ е! а1. 1989, или патент США 6180370, или патент США 5225539).

Способы повышения АОСС описаны в следующих публикациях: Ретгата, Вгипкег е! а1. 2006; Ы, δебшгатап е! а1. 2006; δίаνепЬадеη, ^ΗπΙον е! а1. 2007; δЫе1бδ, Штепик е! а1. 2001; δ1ιίη1<;·ι\γ;·ι, Шкапина е! а1. 2003 и А0 2008/006554. В предпочтительной форме антитела согласно настоящему изобретению имеют сниженный уровень фукозы.

Способы увеличения СОС описаны в следующих публикациях: Миессе, Αοη§ е! а1. 2001; ОаП'Асциа, Сοοк е! а1. 2006; МюНаеНеп, Аахе е! а1. 1990; Вгекке, Вгетпех е! а1. 1993; Тап, δЬορеδ е! а1. 1990; Мгбеткаид, Вгекке е! а1. 1991.

Публикации, описывающие способы увеличения АОСС и СОС, включают Ш!8ите, Ш е! а1. 2008. Описание каждой из приведенных публикаций включено в настоящее описание посредством перекрестной ссылки.

Ряд способов модулирования времени полужизни антитела в сыворотке и биораспределения основаны на модификации взаимодействия между антителом и неонатальным Рс-рецептором (РсКп), рецептором, играющим ключевую роль в защите ЦС от катаболизма и поддержании высокой концентрации антител в сыворотке. В публикации Оа1ГАсс|иа с соавторами описаны замены в Рс-области ЦСЕ которые повышают аффинность связывания с РсКп, тем самым увеличивая время полужизни в сыворотке (ОаКАсциа, Αοο6δ е! а1. 2002), и дополнительно показана повышенная биодоступность и модулирование АОСС-активности с использованием тройной замены М252Υ/δ254Т/Т256Ε (ОаПАсциа, К1епет е! а1. 2006). Также см. патенты США №№ 6277375, 6821505 и 7083784. Ηίη!οη с соавторами описали аминокислотные замены в константном домене в положениях 250 и 428, которые придают увеличенное время полужизни ίη νίνο (Ηίη!οη, ίοΙιΙΓδ е! а1. 2004). (Ηίη!οη, Хюпд е! а1. 2006). Также см. патент США № 7217797. Реίкονа с соавторами описали аминокислотные замены в константном домене в положениях 307, 380 и 434, которые придают увеличенное время полужизни ίη νίνο (Реίкονа, Акбехк е! а1. 2006). Также см. публикацию δк^е1бδ с соавторами (δ^16δ, Штепик е! а1. 2001) и АО 2000/42072. Другие при- 15 024695 меры аминокислотных замен в константном домене, которые модулируют связывание с Рс-рецепторами и последующую функцию, опосредованную такими рецепторами, включая связывание РсКп и время полужизни в сыворотке, описаны в заявках на выдачу патента США №№ 20090142340, 20090068175 и 20090092599.

Известно, что гликаны, связанные с молекулами антител, влияют на взаимодействие антитела с Рсрецепторами и рецепторами гликанов и таким образом влияют на активность антител, включая время полужизни в сыворотке (Капеко, №ттст)айп с1 а1. 2006; 1опс5. Рарас с1 а1. 2007; и Капйа, Υатаάа с1 а1. 2007). Поэтому некоторые гликоформы, которые модулируют требуемые активности антитела, могут иметь терапевтические преимущества. Способы создания сконструированных гликоформ известны в данной области и включают без ограничения способы, описанные в патентах США №№ 6602684, 7326681, 7388081 и ν0 2008/006554.

Увеличение времени полужизни добавлением полиэтиленгликоля (ПЭГ) широко применяют для увеличения времени полужизни белков в сыворотке; обзор см., например, в публикации РЫЪигп (Р18ЙЪит 2008).

Как будет понятно, можно осуществлять консервативные аминокислотные замены в последовательностях согласно настоящему изобретению. Консервативная замена означает замену аминокислотами, обладающими сходными свойствами. В используемом в настоящем описании смысле следующие группы аминокислот следует считать консервативными заменами:

Н, К и К;

И, Е, N и ^;

V, I и Ь;

С и М;

8, Τ, Р, А и С;

Р, Υ и V.

Можно будет увидеть, что в настоящем описании термины на п% сходная и на п% идентичная используют для описания ряда последовательностей. Как будет понятно, термин на п% идентичная означает, что при сравнении двух последовательностей на протяжении конкретной области такие две последовательности имеют определенное количество идентичных остатков в одном и том же положении. Термин на % сходная имеет подобное значение, но кроме определенного количества идентичных аминокислот в двух последовательностях также необходимо учесть наличие аминокислот, которые не идентичны, но представляют собой консервативные замены, которые определены.

На протяжении описания следует понимать, что слово содержат или его варианты, такие как содержит или содержащий, означает включение указанного элемента, целого числа или стадии или группы элементов, целых чисел или стадий, но не исключение любого другого элемента, целого числа или стадии или группы элементов, целых чисел или стадий.

Все публикации, упоминаемые в настоящем описании, включены в виде ссылки. Любое обсуждение документов, актов, материалов, устройств, статей или тому подобного, которое включено в настоящее описание, приведено только в целях формирования контекста настоящего изобретения. Не следует считать, что любой или все такие материалы составляют часть основы известного уровня техники или представляли собой общедоступные известные данные в области, относящейся к настоящему изобретению, которые имелись в Австралии или в любом ином месте до даты приоритета каждого пункта формулы изобретения, приведенного в настоящей заявке.

Для лучшего понимания природы настоящего изобретения далее будут описаны его предпочтительные формы посредством обращения к следующим примерам.

Пример 1. Создание химерного антитела 8С104.

Вариабельную область тяжелой цепи (ν_Η) 8С104 мыши, 8ЕЦ ГО N0: 1, форматировали ш 81Йсо в остове ЦС1 человека (домены СШ, шарнир, СИ2 и СН3 тяжелой цепи ЦС1 человека, например, из NСΒI с номером доступа ААН72419 и его производные), получая химерную тяжелую цепь 8С104, 8ЕЦ ГО N0: 2. Подобным образом вариабельную область легкой цепи (ν_Σ) 8С104, 8ЕЦ ГО N0: 3, форматировали ш йПсо в остове ЦС1 человека (например, из NСΒI с номером доступа Р01834 и его производных) с образованием соответствующей химерной легкой цепи 8С104, 8ЕЦ ГО N0: 4.

Форматирование и получение конструкций ДНК.

Полученные аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи обратно транслировали в последовательности ДНК. 5'-^-специфичный сайт рестрикции АкЛ вводили выше по ходу транскрипции в нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальную полипептидную последовательность тяжелой цепи, 8ЕЦ ГО N0: 5. Сайт рестрикции Τΐ111Π вводили в полинуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислоты 3'-^-области Τν88. 5'-^-специфичный сайт рестрикции Βδ^VI вводили выше нуклеотидной последовательности, кодирующей сигнальную полипептидную последовательность легкой цепи, 8ЕЦ ГО N0: 6. Сайт рестрикции КкгП вводили на 3'-конце последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислоты ΒΤ, расположенные на С-конце ^-области. Затем такие последовательности оптимизировали для экспрессии в клетках СНО, используя методику Сспс0рйιηί/сг® (Сспс Ατί, Ссгтапу).

- 16 024695

Затем вариабельные области синтезировали Де ηονο путем сборки синтетических олигонуклеотидов (Оеие Ай, Оеттапу). Добавленные сайты рестрикции использовали для клонирования вариабельных областей в векторах основанной на клетках яичника китайского хомячка глутаминсинтазной (08) системы генной экспрессии (Εοη/а. ИК), содержащих подходящие константные области 1дО1. Полученные содержащие тяжелую цепь и содержащие легкую цепь векторы использовали для котрансфекции клеток СНО-К18У с целью получения антител.

Культура клеток и временная экспрессия конструкций антител.

Клетки СНО-К18У (Ьоп/а. ИК) культивировали при плотности 2х10⁵ - 4х10⁶ клеток/мл в химически определенной среде для роста клеток СНО Ргеев1у1е™ (1тйтодеи™) и в культуры добавляли Ьглутамин (1тйтодеи™) до конечной концентрации 6 мМ. Клетки культивировали при 36,5°С, 10% СО₂ и 140 об./мин. За день до трансфекции высевали культуры объемом 100 мл по 5х10⁵ клеток/мл в вентилируемых колбах Эрленмейера объемом 500 мл (Сотшид®). На следующий день готовили 4 мл ОрйРКО™ 8РМ (1пу|1годеп™) в пробирке Сотшид® объемом 15 мл и смешивали с 100 мкг каждой цепи антитела. Полученную смесь фильтровали через фильтрующую насадку на шприц 13 мм с диаметром пор 0,2 мкм (МЛйроте®) в новую пробирку Сотшид® объемом 15 мл, содержащую 200 мкл реагента Ргеев1у1е™ Мах (1пу|1годеп™). Полученную смесь инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре, затем добавляли к клеткам СНО-К18У, посеянным заранее. Через 7 дней надосадок собирали центрифугированием при 3000 д в течение 10 мин, затем фильтровали через 0,2 мкм-мембрану в стерильную емкость (фильтрующий элемент Сотшид®).

Очистка антител.

Значение рН надосадков, собранных из трансфицированных клеток СНО, доводили до рН 7,4, затем наносили на колонку с белком А НГГтар™ (1 мл, ОЕ® НеаИйсате). Колонку промывали 30 мл 1Х РВ8 (рН 7,4). Элюирование осуществляли, используя 0,1 М лимонную кислоту с рН 3. Элюированное антитело обессоливали, используя колонки для обессоливания 2еЪа™ (Р1егсе®) в 1Х РВ8 (рН 7,4). Концентрацию антител определяли по значению А₂₈₀. Основанные на проточной цитометрии анализы связывания Жизнеспособные опухолевые клетки и контрольные клетки (2х10⁵, судя по исключению при окрашивании трипановым синим) инкубировали в трех повторах с мышиным 8С104, химерным 8С104 или гуманизированными вариантами и изотипом 1дО1 человека (81дта-А1Дт1сЬ®) в разных концентрациях в 100 мкл буфера (РВ8 плюс 1% РС8) в 96-луночных планшетах с У-образными лунками (ЕрреиДогГ) в течение 20 мин на льду в темноте. Клетки дважды промывали буфером перед инкубацией в течение 20 мин в 100 мкл буфера, содержащего антитело козы против 1дО человека (Рс-специфичным, 81дта-А1Дт1сЬ®, конъюгированным с ФИТЦ) или антителом козы против 1дО мыши (Рс-специфичным, 81дта-А1Дпсй®, конъюгированным с ФИТЦ) для выявления химерных или мышиных антител соответственно. После промывки клетки ресуспендировали в буфере и анализировали в отношении связывания антител проточной цитометрией на приборе Се11 ЬаЪ ОиаШа™ 8С МРЬ (Весктаи СоиИет), используя ЕУ, боковое светорассеяние и пропускание РЬ-1; во время регистрации клетки в 96-луночном планшете охлаждали лежащим снизу охлаждающим блоком (ЕрреиДогГ). Результаты выражали в виде средней интенсивности флуоресценции (МР1); значения наклона кривой вычисляли, используя анализ нелинейной регрессии с помощью компьютерной программы ОтарИРаД РгИт®.

Основанные на проточной цитометрии анализы прямой гибели.

Жизнеспособные опухолевые клетки (2х10⁵, судя по исключению при окрашивании трипановым синим) инкубировали в трех повторах с мышиным 8С104, химерным 8С104 или гуманизированными вариантами и изотипом 1дО1 человека (81дта-А1Дг1сй®) в разных концентрациях в 80 мкл буфера (РВ8 плюс 1% РС8) в 96-луночных планшетах с У-образными лунками (ЕрреиДогГ) в течение 2,5-3 ч при комнатной температуре в темноте. В каждую лунку добавляли 0,15 г 7ААО (ВО® Вювшеисев) в 20 мкл буфера и клетки инкубировали еще в течение 20 мин и затем анализировали жизнеспособность клеток проточной цитометрией на приборе Се11 ЬаЪ ОиаШа™ 8С МРЬ (Весктаи СоиИет), используя ЕУ, боковое светорассеяние и пропускание РЬ-3; во время регистрации клетки в 96-луночном планшете охлаждали лежащим снизу охлаждающим блоком (ЕрреиДогГ). Результаты выражали в виде процентного содержания 7ААО⁺-клеток; значения наклона кривой вычисляли, используя анализ нелинейной регрессии с помощью компьютерной программы ОтарИРаД РгИт®.

Химерное антитело 8С104 проявляет эффективное и специфичное связывание и активность, непосредственно вызывающую гибель клеток опухоли ободочной кишки человека.

Химерные и исходные мышиные антитела 8С104 тестировали в отношении связывания с линиями клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека С170 (ЕСАСС, номер доступа 97071507) и Со1о205 (АТСС номер доступа ССЬ-222); ранее с использованием проточно-цитометрических анализов было показано, что мышиное антитело 8С104 прочно связывается с такими линиями клеток (Онггат НатДшд е1 а1. 2006). На фиг. 1 (панели слева) показано связывание антител 8С104, но отсутствие связывания контрольного изотипа 1дО1 человека с С170 и Со1о205 как в случае мышиного, так и в случае химерного антитела 8С104, которые при этом проявляют сходную эффективность связывания во всем диа- 17 024695 пазоне концентраций антител. Напротив, ни одно из антител не связывалось с линией клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека НСТ-116 (АТСС, номер доступа ССЬ-247), которая таким образом была определена как негативная по антигену 8С104.

Известно, что мышиное антитело 8С104 индуцирует прямую гибель клеток опухоли ободочной кишки без необходимости участия иммунных эффекторных клеток или комплемента (Рштап1, Нагйшд с1 а1. 2006). Действительно и мышиные, и химерные антитела 8С104, но не контрольный изотип 1§О₄ человека, вызывали эффективную прямую гибель позитивных по антигену клеток С170 и Со1о205; напротив, антитела не вызывали превышающую фон гибель негативных по антигену клеток НСТ-116 (фиг. 1, панели справа).

Другие эксперименты с разными негативными по антигену клетками опухоли прямой и ободочной кишки человека (НСТ15, номер доступа АТСС ССЬ-225), неопухолевыми клетками человека (МРС5, АТСС, номер доступа ССЬ-171) или мононуклеарными клетками периферической крови здоровых людей доноров показали отсутствие связывания и отсутствие активностей, вызывающих непосредственную гибель, в случае мышиных и/или химерных антител 8С104 (данные не показаны). Вместе взятые данные свидетельствуют, что химерное антитело 8С104 имеет сходную эффективность и специфичность при сравнении с исходным мышиным антителом 8С104. И поэтому химерное антитело 8С104 использовали в качестве эталона при тестировании активности созданных затем гуманизированных вариантов антитела 8С104.

Пример 2. Гуманизация 8С104.

Отбор подходящих акцепторных каркасов человека с помощью ЗИ-моделирования.

Конструировали независимые ЗИ-модели вариабельной области тяжелой цепи (У_н) и вариабельной области легкой цепи (У_ъ) 8С104 мыши, используя базу данных кристаллических структур (см., например, банк данных о белках РекеатсЬ Со11аЬога1огу £ог 81гис1ига1 ВюшГоттайск (РС8В),

Ьйр://№№№.гс8Ъ.огд/рДЪ/Ьоте/ЬотеДо; часть Всемирного банка белков, 1Шр://\у\у\у.\у\ур0Ь.оге) и пакет компьютерных программ О18соуегу 81иФо ν1.7 (Лссе1гу5®, И8А). Коротко, осуществляли запрос в базе данных банка белков, используя средство поиска основного локального выравнивания (ВЬА8Т) и либо вариабельную область тяжелой цепи, либо вариабельную область легкой цепи мышиного 8С104, чтобы идентифицировать антитела со сходной полипептидной последовательностью с сопровождающей информацией о структуре. Затем такие структуры использовали для построения моделей гомологии, основанных на гомологии аминокислотных последовательностей, общих для вариабельных областей мышиного 8С104 и идентифицированных кристаллических структур. Используя такие модели мышиных У_ни У_ъ, независимо идентифицировали подходящие акцепторные каркасы У_н и У_ъ человека в банке данных о белках, которые имеют структурную гомологию каркаса с мышиным антителом. Чтобы гарантировать правильное спаривание тяжелых и легких цепей, в процессе гуманизации использовали акцепторные каркасы человека для У_н и У_ъ из одной и той же кристаллической структуры антитела. Акцепторные антитела человека с более высокой структурной гомологией каркасных областей тяжелых цепей мышичеловека были предпочтительнее по сравнению с акцепторными антителами человека с более высокой гомологией каркасов легких цепей мыши-человека. Такими антителами являются антитела с кодами доступа рДЪ 1И6А и 1ОЬР. Оценивали акцепторные каркасы человека, чтобы проверить, способны ли такие структуры соответствующим образом поддерживать СИР 8С104.

Форматирование конструкций гуманизированных антител.

Сначала определяли области, определяющие комплементарность (СИР) мышиного 8С104 согласно способу Кабата (см. (КаЪа1 1991)), учитывая, что методики прививок СИР (см., например, (Оиееп, 8сЬпеМет е1 а1. 1989) или патент США 6180З70 или патент США 52255З9) основаны на такой классификации. При более поздних попытках гуманизации СИР1 тяжелой цепи (СИР-Ш) определяли, используя номенклатуру АЪМ (см., например, (ГОиЬе1 2007) и ссылки, приведенные в указанной работе), табл. 1. СИР форматировали ίη мПсо в выбранные каркасы человека, используя пакет компьютерных программ ОКА81аг® (версия 8; Ьакетдепе®, И8А). Области У_н форматировали в тяжелую цепь 1дС₁ человека, содержащую домены Сн1, шарнир, Сн2 и СНЗ (например, из NСВI с номером доступа ААн72419 и ее производные). Одновременно форматировали У[-области, используя соответствующую константную область легкой цепи 1дС₁ человека (например, из NСВI с номером доступа Р018З4 и ее производные).

Гуманизированные варианты 8С104, содержащие определенную согласно Кабату СИР-Ш, неожиданно дают нефункциональное антитело.

Акцепторные каркасы человека 1И6А и 1ОЬР использовали для гуманизации 8С104. СИР легкой цепи мышиного 8С104 форматировали в каркасные области легких цепей 1И6А и 1ОЬР. Редко встречающийся остаток аланина в положении 15 в каркасной последовательности 1И6А удаляли, заменяя его пролином (А15Р) и получая последовательность 8ЕО ГО N0: 7. Основанную на 1ОЬР гуманизированную легкую цепь 8С104 форматировали, как описано выше, получая 8Е0 ГО N0: 8. Соответствующие основанные на 1И6А тяжелые цепи 8С104 форматировали, включая СИР-Ш согласно определению Кабата, 8Е0 ГО N0: 9. Одновременно форматировали основанные на 10ЬР тяжелые цепи 8С104, включая СИРн1 согласно определению Кабата, 8Е0 ГО N0: 10. Сочетания основанных на 1И6А легких и тяжелых

- 18 024695 цепей δΕΟ ΙΌ N0: 7 и δΕΟ ΙΌ N0: 9 коэкспрессировали в клетках СНО. Сочетания основанных на 1фЬВ легких и тяжелых цепей δΕΟ Ш N0: 8 и δΕΟ Ш N0: 10 также коэкспрессировали в клетках СНО. Полученные антитела очищали аффинной хроматографией на белке А и тестировали в отношении активности связывания живых клеток, используя проточную цитометрию. Неожиданно такие варианты гуманизированных антител, которые содержали СПВ-Н1 согласно определению Кабата, не могли связывать позитивные по антигену δί'Ί04 клетки (фиг. 2).

Гуманизированные варианты δί'Ί04, содержащие СПВ-Н1 согласно определению АЬМ, неожиданно давали функциональное антитело.

После неожиданной неудачи гуманизации с включением СПВ-Н1 согласно определению Кабата использовали номенклатуру СПВ-Н1 согласно определению АЬМ (табл. 1). Затем форматировали основанные на 1И6А и 1фЬВ тяжелые цепи δί'Ί04 так, чтобы они включали СПВ-Н1 согласно определению АЬМ, δΕΟ Ш N0: 11 и 12 соответственно. Сочетания основанных на 1И6А легких и тяжелых цепей δΕΟ ГО N0: 7 и δΕΟ ГО N0: 11 коэкспрессировали в клетках СНО. Сочетания основанных на 1фЬВ легких и тяжелых цепей δΕΟ ГО N0: 8 и δΕΟ ГО N0: 12 также коэкспрессировали в клетках СНО. Полученные антитела очищали аффинной хроматографией на белке А и тестировали в отношении активности связывания живых клеток, используя проточную цитометрию. Неожиданно такие гуманизированные варианты антитела, содержащие СПВ-Н1 согласно определению АЬМ, связывались с позитивными по антигену δΟ04 клетками (фиг. 3).

Повышение активности связывания гуманизированного δί'Ί04.

На фиг. 3 показано, что гуманизированные антитела δί'Ί04 обладают субоптимальной связывающей активностью по сравнению с активностью, наблюдаемой в случае химерного δί'Ί04. Полученные данные свидетельствуют, что одна или несколько аминокислотных замен в каркасе важны для того, чтобы гуманизировать δί'Ί04 с небольшой потерей связывающей активности в результате этого. Чтобы решить указанную проблему, сравнивали полипептидные последовательности каркасов мышиного δί'Ί04 и 1И6А. Выделили различия в аминокислотах между каркасами и тщательно исследовали ίη δίΐίοο, используя 3О-модели вариабельных областей мышиного δί'Ί04. Идентифицировали шесть аминокислот У_Н и три аминокислоты У_ъ (включая замену А15Р, чтобы удалить редко встречающийся остаток аланина в данном положении, найденный в акцепторном каркасе 1И6А) для дальнейшего исследования ίη νίίτο, чтобы проверить их вклад в связывающую активность гуманизированных антител. Сходный анализ осуществляли, используя 1фЬВ-гуманизированное δΟ04, при этом было выделено четыре аминокислоты У_Н и две аминокислоты У_ъ для тестирования ίη νίίτο. Все положения, выделенные для исследования ίη νίίτο, в 1фЬВ-гуманизированном δί'Ί04 были идентичны положениям, уже идентифицированным в 1И6А-гуманизированном δί'Ί04. Затем попытки были сфокусированы на идентификации остатка (остатков), необходимых для повышения эффективности гуманизированного δΟ04, с использованием только акцептора 1И6А.

Предполагаемая замена(ы), необходимая в гуманизированных каркасах УН, более важна для повышения активности связывания, чем замены, предполагаемые в гуманизированных У_ь.

Гены, кодирующие варианты С0В-Н1 согласно определениям АЬМ и Кабата основанных на 1И6А тяжелых цепей δΟ04, вновь синтезировали так, чтобы они содержали всего шесть замен аминокислотных остатков - Ο46Ε, И8М, У67£ Τ68δ, У71В, Ε72Ό (нумерация согласно Кабату). При этом получали последовательности δΕΟ ΙΌ N0: 13 (СИВ-Н1 АЬМ) и 15 (СВК-Р1 по Кабату) соответственно. Две дополнительных аминокислотных замены - 01Ε и δ25Τ -, отмеченные как менее приоритетные, чем вышеупомянутые шесть замен, способами, описанными выше, также вводили в последовательность δΕΟ ГО N0: 13, получая δΕΟ ГО N0: 14, вариант СИВ-Н1 согласно определению АЬМ, содержащий всего восемь аминокислотных замен. Соответствующие последовательности тяжелых цепей с прививками согласно АЬМ и Кабату - δΕΟ ГО N0: 11 и 9 соответственно использовали в качестве контролей, не содержащих замен.

Основанную на 1И6А легкую цепь форматировали, включая три замены - КИ, А15Р, Τ69N (нумерация согласно Кабату), создавая последовательность δΕΟ ГО N0: 16. Соответствующую последовательность легкой цепи δΕΟ ГО N0: 7 использовали в качестве контроля с минимальными заменами. Сочетания тяжелых и легких цепей с заменами и без замен или с минимальными заменами коэкспрессировали и оценивали их активность в основанных на проточной цитометрии анализах связывания с клетками. В случае прививок, содержащих СИВ-Н1 согласно определению Кабата, оба гуманизированных варианта антитела δί'Ί04 δΕΟ ΙΌ N0: 7/δΕφ ΙΌ N0: 15 и δΕΟ ΙΌ N0: 16/δΕφ ΙΌ N0: 15 имели одну и ту же тяжелую цепь (δΕΟ ГО N0: 15), содержащую вышеупомянутые шесть аминокислотных замен. Такие антитела проявляли сходную позитивную связывающую активность, независимо от спаривания либо с содержащими замены (δΕΟ ГО N0: 16), либо с содержащими минимальные замены (δΕΟ Ш N0:7) легкими цепями. Напротив, изменение тяжелой цепи на цепь, содержащую СИВ-Н1 согласно определению Кабата и не содержащую аминокислотных замен, такую как последовательность δΕΟ ГО N0: 9, отменяло связывание независимо от того, использовали ли легкую цепь δΕΟ ГО N0: 7 или δΕΟ ГО N0: 16, фиг. 4А. Подобным образом, легкие цепи, содержащие либо одну, либо все три замены (δΕΟ ГО N0: 7 и 16 соответственно) заметно не влияли на эффективную связывающую активность гуманизированных вариантов

- 19 024695 антитела 8С104 при спаривании с тяжелой цепью, содержащей С.ГОР-Н1 согласно определению АЬМ (см., например, 8ЕЦ ГО N0: 11 и 1З, представляющие не содержащую замен и содержащую замены тяжелые цепи соответственно), фиг. 4В. Сходную с показанной на фиг. 4В тенденцию наблюдали, когда использовали переключение тяжелой цепи 8ЕЦ ГО N0: 1З на тяжелую цепь 8ЕЦ ГО N0: 14 и осуществляли идентичный основанный на проточной цитометрии анализ связывания с химерным 8С104 (8ЕЦ ГО N0: 4/8ЕС ГО N0: 2), результаты не показаны. Полученные данные показали, что замены Ц1Е и 825Т не являются ответственными за эффективную связывающую активность, проявляемую в последовательности 8 ЕС ГО N0: 1З и 14 тяжелой цепи по сравнению с их аналогом без замен, 8ЕЦ ГО N0: 11. Далее замены 01Е и 825Т больше не исследовали.

Кроме того, полученные данные показывают важность одной или нескольких замен в тяжелой цепи 1И6А для создания гуманизированного варианта 8С104 с повышенной активностью связывания.

Замены в тяжелой цепи Ш6А-гуманизированного 8С104 вводили в последовательность тяжелой цепи 10ЕР с прививкой согласно определению Кабату (8ЕЦ ГО N0: 10) в положениях Ι48Μ, ν67Ι, Т688 и ν71^ получая последовательность 8ЕЦ ГО N0: 17. Подобным образом осуществляли замены в легкой цепи 10ЕР-гуманизированного 8С104, Ι2Κ и Т69К получая последовательность 8ЕЦ ГО N0: 18. Активность антител, содержащих СИР-Ш согласно определению АЬМ (8ЕЦ ГО N0: 12), значимо не изменялась при экспрессии либо без содержащей замен (8ЕЦ ГО N0: 8), либо с содержащей замены (8ЕЦ ГО N0: 18) легкой цепью. Экспрессия варианта 1РЕР-8С104 с СЭР-Н1 согласно определению Кабата, содержащей вышеупомянутые замены (8ЕЦ ГО N0: 17) с партнером 10ЕР, не содержащим замены, 8ЕЦ ГО N0: 8, давала гуманизированный вариант с низкой активностью связывания. Незначительная активность связывания, наблюдаемая в случае антитела, полученного при коэкспрессии последовательности 8Е0 ГО N0: 17 с содержащей полностью все замены легкой цепью 8ЕЦ ГО N0: 18, свидетельствует, что замены в легкой цепи вредны для связывающей активности 1СЕР-гуманизированного 8С104. Данные о связывании таких вариантов антител наряду с данными, описанными ранее, суммированы в табл. 2.

Присутствие Р71 в каркасе ν_Η важно для получения высоко активного гуманизированного 8С104.

Форматировали отдельные замены в каркасе вариабельной области тяжелой цепи 1И6А Ц46Е, Ι48Μ, ν67Ι, Т688, ν71Ε. и Е72Э наряду с 01Е в последовательности 8ЕЦ ГО N0: 11, получая последовательности 8Е0 ГО N0: 19-24. Полученные тяжелые цепи коэкспрессировали с последовательностью 8ЕЦ ГО N0: 7 легкой цепи, и полученные гуманизированные варианты 8С104 сравнивали, используя основанные на проточной цитометрии анализы связывания. Гуманизированные варианты антитела 8С104 с заменами Ц46Е, Ι48Μ, ν67Ι, Т688 и Е72Э проявляли сходную друг с другом активность связывания, но заметно более низкую активность по сравнению с химерным антителом 8С104, фиг. 5. Напротив, гуманизированный вариант антитела 8С104, несущий замену ν7^ (кодируемый последовательностью 8ЕЦ ГО N0: 2З), проявлял повышенную активность связывания, сходную с активностью химерного антитела 8С104. Полученные данные показывают, что Р71 в добавление к СГОР-Н1 согласно определению АЬМ важна для получения высокоэффективных гуманизированных форм 8С104. Повторное форматирование Р71-содержащей тяжелой цепи так, чтобы она содержала замену Е1ф, 8ЕЦ ГО N0: 25, не изменяла высокие уровни активности связывания полученного антитела после коэкспрессии с легкой цепью 8ЕЦ ГО N0: 7 (не показано).

Р71 повышает активность связывания гуманизированных вариантов 8С104, содержащих СЭР-Н1 как согласно определению АЬМ, так и согласно определению Кабата.

Замену ν71^ идентифицированную как необходимая для эффективной связывающей активности 8С104, гуманизированного с использованием акцептора 1И6А человека, вводили в основанные на 10ЕР варианты 8С104, содержащие СЭР-Н1 либо согласно определению АЬМ, либо согласно определению Кабата, которые подробно указаны в последовательностях 8ЕЦ ГО N0: 26 и 27 соответственно. Для сравнения ν7^ также вводили в основанный на 1И6А вариант 8С104, 8ЕЦ ГО N0: 10, который содержит СГОР-Н1 согласно определению Кабата, с образованием последовательности 8ЕЦ ГО N0: 28. Сочетания основанных на 10ЕР легкой и тяжелой цепей 8ЕЦ ГО N0: 8 и 8ЕЦ ГО N0: 26 или 8ЕЦ ГО N0: 27 коэкспрессировали в клетках СНО. Сочетание основанных на 1И6А легкой и тяжелой цепей 8ЕЦ ГО N0: 7 и 8Е0 ГО N0: 28 также коэкспрессировали в клетках СНО. Полученные антитела очищали аффинной хроматографией на белке А и тестировали в отношении активности связывания с живыми клетками, используя позитивную по антигену линию клеток С170, с помощью проточной цитометрии. Замена ν7ΕΕ значимо повышает активность связывания с живыми клетками позитивной по антигену линии клеток С170 основанного на 10ЕР антитела 8С104, содержащего СЭР-Н1 согласно определению АЬМ, и в меньшей степени соответствующего привитого антитела согласно определению Кабата, судя по измерению способом проточной цитометрии, фиг. 6А. При сравнении показано, что замена ν71Ε. значимо повышает активность связывания с живыми клетками основанных на 1И6А вариантов 8С104, содержащих СЭР-Н1 как согласно определению Кабата, так и согласно определению АЬМ, в случае позитивной по антигену линии клеток С170, судя по измерению способом проточной цитометрии, фиг. 6В.

Идентификация аминокислотных замен, которые повышают активность связывания гуманизированных вариантов 8С104, в области, в которой отличаются СГОР-Н1 согласно определению АЬМ и определению Кабата СЭР1 тяжелой цепи согласно определению АЬМ содержит пять дополнительных донор- 20 024695 ных аминокислотных остатка на аминоконце СОК по сравнению с ее прививаемым аналогом согласно Кабату, табл. 1. Соответствующая повышенная эффективность вариантов 8С104, содержащих СЭК-н1 согласно определению АЬМ, по сравнению с их аналогами с прививками согласно Кабату, является неожиданной. В табл. 3 приведено сравнение таких пяти аминокислот из донорной (включенной в прививки СГОК-Ш согласно АЬМ) и акцепторных последовательностей ШбА и 1ОЬК. При сравнении донорной последовательности и последовательности ШбА видно, что неконсервативное отличие Ο27Υ наиболее вероятно ответственно за повышение эффективности гуманизированных вариантов, содержащих СГОКн1 согласно определению АЬМ, по сравнению с химерой, так как Т308 является консервативным изменением. Такую замену, Ο27Υ, включали в вариант 8С104 на основе 1ОЬК с прививкой согласно определению Кабата 8Е0 ГО N0: 27 (+К) с получением последовательности 8Е0 ГО N0: 29 (+К +Υ). Такую тяжелую цепь вместе с основанной на 10ЬК легкой цепью 8Е0 ГО N0: 8 коэкспрессировали в клетках СНО и полученное антитело очищали как описано ранее. Для сравнения ^ЬК-гуманизированное антитело, содержащее СГОК-Ш согласно определению Кабата без К71 (8Е0 ГО N0: 10), и второй вариант, содержащий СГОК-Ш согласно определению АЬМ с К71 (8Е0 ГО N0: 2б), включали в сравнительный анализ активности связывания с живыми клетками позитивной по антигену клеточной линии С170 с использованием проточной цитометрии, фиг. 7. Неожиданно гуманизированный вариант антитела, полученный в результате сочетания легкой и тяжелой цепей 8Е0 ГО N0: 8 и 8Е0 ГО N0: 29, не обладал активностью связывания.

Пример 3. Варианты 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью.

Проводили скрининг ίη кШсо аминокислотных последовательностей вариабельной области мышиного 8С104 в отношении предполагаемых Т-клеточных эпитопов (ЕрЛаке®, А1допотюк, Вс1дшт). Идентифицировали два предполагаемых пептида, связывающих молекулы главного комплекса гистосовместимости класса II (МНС класса II). Пептиды локализованы в тяжелой цепи на границах каркас (ЕК) 2:СОК-н2 и СЭК-н2:РК3. Пептиды представляли особый интерес, поскольку расчеты показывают, что их удаление предполагает замену аминокислотных остатков СОК, которые могут изменять эффективность связывания антитела.

Удаление предполагаемых пептидов, связывающих МНС класса II У_н-области тяжелой цепи.

Расчеты свидетельствуют, что эффективность пептида, связывающего МНС класса II, на границе РК2:СГОК-н2 в мышиной У_н-области может быть снижена заменой остатка фенилаланина в положении 4 последовательности СГОК-Ш н!нР8СКРТУХР8Р88 триптофаном (8Е0 ГО N0: 30), или тирозином (8Е0 ГО N0: 31), или предпочтительно пролином (8Е0 ГО N0: 32). Такие тяжелые цепи коэкспрессировали в клетках СНО с легкой цепью 8Е0 ГО N0: 4 и полученные антитела очищали хроматографией на белке А, как описано ранее. Неожиданно сравнительные основанные на проточной цитометрии анализы связывания с использованием химерного 8С104 показали, что замены Ε53\ν и Р53У оказывали очень незначительное влияние на высокую активность связывания, наблюдаемую в случае химерного 8С104, тогда как замена Ε53Ρ существенно снижала эффективность связывания полученного в результате антитела, фиг. 8.

Дополнительные расчеты иммуногенности ίη кШсо (расчеты с использованием компьютерной программы РгоРгеД, 8ίη§Η. н. апД КадНауа, С.Р.8.(2001) РгоРтеД: РтеДюНоп оГ нЬАГОК ЬшДшд кПек. ВюшГоттаИск, 17(12), 123б-37.

Ы1р://ууулт1есЬ.геклп/гадкауа/ргоргеД/) и/или 8УΕΡЕТΗI (Каттепкее, ВасНтапп е! а1. 1999);

11ир://\у\у\у.5уГреП1й.Де/8спр15/МнС8егуег.Д11/ЕрПореРгеД1с1юп .Ыт) свидетельствуют, что эффективность такого предполагаемого пептида, связывающего МНС класса II, снижается после прививки СГОК-Ш 8С104 в акцепторный остов ШбА или ^ЬК человека.

Рассчитано, что второй предполагаемый пептид, связывающий МНС класса II, присутствует на границе СГОР-н2:ЕР3 как в последовательности мышиного, так и в последовательности гуманизированного антитела 8С104.

Варианты 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью.

На основе акцепторных каркасов были созданы основанные на ШбА и ЮБК новые гуманизированные варианты 8С104, из которых были удалены потенциальные последовательности, связывающие молекулы главного комплекса гистосовместимости класса II. Коротко, теоретически рассчитано, что гуманизированные вариабельные области легкой цепи имеют только толерантные (т.е. зародышевой линии) последовательности связывания МНС класса II, тогда как вариабельные области тяжелой цепи ЮБВ и ШбА, как было рассчитано, содержат одну и две сильно связывающие главный комплекс гистосовместимости класса II последовательности соответственно. Еще одна более слабо связывающая предполагаемая последовательность связывания МНС класса II также теоретически найдена непосредственно перед СГОР-Ш, определяемой способом Кабата. Разработана методика замены с целью удаления таких предполагаемых эпитопов, связывающих МНС класса II.

Конструировали панель основанных на ЮБК вариантов вариабельной области тяжелой цепи 8С104 с предполагаемой более низкой иммуногенностью, которые указаны в 8Е0 ГО Х0:33-8ЕО ГО N0: 38. Также конструировали панель основанных на ШбА вариантов вариабельной области тяжелой цепи 8С104 с предполагаемой более низкой иммуногенностью, которые подробно описаны в 8Е0 ГО N0: 3950. Осуществляли коэкспрессию основанной на ЮБК легкой цепи 8Е0 ГО N0: 8 с каждым из вариантов

- 21 024695 §ЕЦ ΙΌ N0: 33-8ЕЦ ΙΌ N0: 38 в клетках СНО и полученные антитела очищали, как подробно описано ранее. Подобным образом осуществляли коэкспрессию основанной на 1И6А легкой цепи §ЕЦ ΙΌ N0: 7 с каждым из вариантов §ЕЦ ΙΌ N0: 39-8ЕЦ ΙΌ N0: 50 в клетках СНО и полученные в результате антитела очищали, как подробно описано ранее.

Гуманизированные варианты антитела 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью сравнивали в отношении активности связывания с клетками злокачественной опухоли ободочной кишки человека, которые экспрессируют антиген 8С104 (С170, Со1о205) с химерным 8С104 в анализах связывания с живыми клетками на основе проточной цитометрии. В каждом случае наблюдали активность связывания, сравнимую с активностью химерного антитела. Связывание антитела 8С104 также было специфичным для типа клеток, так как варианты 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью не связывались с негативными по антигену 8С104 клетками злокачественной опухоли ободочной кишки человека ΗСΤ116; примеры эффективного и специфичного связывания вариантов 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью показаны на фиг. 9.

Идентификация особенно важных остатков в вариабельной области тяжелой цепи, которые придают оптимальную активность связывания вариантам 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью.

Последовательность ΟΥ₂₇δΙ₂₉δ, охватывающая положения аминокислот 26-30 в каркасной области непосредственно перед СОК-И1 согласно определению Кабата, придавала высокую активность связывания вариантам 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью при введении в акцепторный каркас 1И6А или 1ЦЬК (фиг. 9). Напротив, последовательность ΟΥ₂₇δΡ₂₉δ неожиданно приводила к плохой связывающей активности при введении в конструкции, основанные на акцепторном каркасе 1ЦЬК (фиг. 7), свидетельствуя о том, что Υ27 является не единственным остатком, вовлеченным в обеспечение высокой активности связывания. Затем исследовали влияние разных аминокислотных остатков в положении 29 на связывающую активность, варьируя аминокислотный остаток, присутствующий в данном положении в Ш6А-гуманизированной тяжелой цепи ЗЕЦ ΙΌ N0: 50. Варианты тяжелой цепи коэкспрессировали в клетках СНО с легкой цепью ЗЕЦ ΙΌ N0: 7, очищали аффинной хроматографией на белке А и тестировали с использованием проточной цитометрии, как описано выше. Типичные результаты связывания показаны на фиг. 10, в то время как в табл. 4 суммированы данные об активности связывания в случае всех тестированных замен. Неожиданно обнаружено, что только остатки Ι (ЗЕО ΙΌ N0: 50), Ь (ЗЕЦ ΙΌ N0: 62) или ν (ЗЕО ΙΌ N0: 70) в положении 29 обеспечивали оптимальную связывающую активность гуманизированных вариантов антитела ЗС104 с низкой предполагаемой иммуногенностью, тогда как большинство замен, включая Ι29Ρ (ЗЕО ΙΌ N0: 58), приводило к плохой активности связывания с позитивными по антигену ЗС104 злокачественными клетками человека С170.

Ранее было показано важное значение К71 в каркасе 3 вариабельной области тяжелой цепи для получения гуманизированного варианта, обладающего оптимально высокой связывающей активностью, фиг. 6. Чтобы дополнительно повысить связывающую активность основанных на 1И6А вариантов ЗС104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью, заменяли остаток в положении 71, создавая панель вариантов тяжелой цепи. Затем такие варианты коэкспрессировали в клетках СНО с легкой цепью ЗЕЦ ΙΌ N0: 7, очищали аффинной хроматографией на белке А и тестировали с использованием проточной цитометрии, как описано ранее. Типичные результаты связывания показаны на фиг. 11. В табл. 5 суммированы активности связывания в случае всех тестированных замен. Неожиданно обнаружено, что только положительно заряженные остатки К и К (ЗЕО ΙΌ N0: 50 и 81 соответственно) в положении 71 придают гуманизированным вариантам антитела ЗС104 самую высокую активность связывания с позитивной по антигену ЗС104 линией клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека С170.

Модификация мотива И-Χ-δ в Ε’ΌΡ-Η2.

Известно, что ^связанное гликозилирование вносит вклад в гетерогенность белковых продуктов и потенциально влияет на иммуногенность. Осуществляли анализ мышиных вариабельных областей в отношении потенциальных сайтов ^связанного гликозилирования (см., например, (Υβ 2007) или компьютерный алгоритм прогнозирования №Ш01ус 1Шρ://\γ\γ\γ.сЬ8/бιи/бк/8е^γ^се8/NеιNΟ1ус/. К. Онр1а, Е. Лтд апб δ. Вгипак). Используя указанный анализ, идентифицировали мотив Μ-Χ-δ, ΧΡδ, в последовательности Ε'ΌΡ-Η2. Обычно мотив И-Χ-δ является показателем присутствия предполагаемого сайта N связанного гликозилирования, однако исключением из такого правила является случай, когда Χ означает остаток пролина, как в данном случае (см., например, Оауе1 апб уоп Иецпе 1990). Тем не менее, проводили анализ, чтобы посмотреть, допускает ли такой остаток N в Ε'ΌΡ-Η2 изменение в отношении сохранения связывающей активности. Последовательность ΧΡδ в химерной последовательности δΕΊ04 изменяли на ΌΡδ, получая последовательность δΞρ ΙΌ N0: 51. Осуществляли коэкспрессию легкой цепи δΞρ ΙΌ N0: 4 с тяжелой цепью δΞρ ΙΌ N0: 51 в клетках СНО и последующую очистку полученного продукта (как описано ранее). Полученное антитело сравнивали в основанных на проточной цитометрии анализах связывания с позитивной по антигену δΕΊ04 линией клеток С170. Удаление мотива И-Χ-δ заменой N Ό в СОК-И2 оказывала очень небольшое влияние на эффективность связывания полученного в результате антитела по сравнению с химерным δΕΊ04.

- 22 024695

Пример 4. Основанные на проточной цитометрии анализы прямой гибели.

Жизнеспособные опухолевые клетки (2х 10⁵, судя по исключению при окрашивании трипановым синим) анализировали, используя химерное δί.Ί04, гуманизированные варианты антитела δί.Ί04 или изотип Ι§θ! человека ^дта-АИпсЬ®), как описано в примере 1. Основанные на 1И6А гуманизированные варианты антитела δί.Ί04, состоящие из сочетаний легкой и тяжелой цепей δΞΟ ΙΌ N0: 7/δΞΟ ΙΌ N0: 25 и δΞΟ ΙΌ N0: 7/δΞΟ ΙΌ N0: 50, отбирали для дальнейших исследований дополнительно к основанным на 10БК вариантам с сочетаниями δΞΟ ΙΌ N0: 8/δΞΟ ΙΌ N0: 26 и δΞΟ ΙΌ N0: 8/δΞΟ ΙΌ N0: З8.

Новые гуманизированные варианты антитела δί.Ί04 с более низкой предполагаемой иммуногенностыо обладают высокой активностью, непосредственно вызывающей гибель клеток, направленной против клеток опухоли ободочной кишки человека.

Гуманизированные варианты антитела δί.Ί04 с более низкой предполагаемой иммуногенностью проявляли высокую активность, непосредственно вызывающую гибель клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека без необходимости в иммунных эффекторных клетках. На фиг. 12 показан пример прямой гибели, вызванной такими гуманизированными вариантами антитела δί.Ί04, химерным антителом δί.Ί04 и контролем изотипа человека, в случае использования опухолевых клеток С170. Сходные результаты были получены при тестировании с использованием опухолевых клеток-мишеней Со1о205 (данные не показаны). Неожиданно показано, что полученные на основе Ш6А варианты антитела δί.Ί04 (ЬЕО ΙΌ N0: 7/δΞΟ ΙΌ N0: 25 и δΞΟ ΙΌ N0: 7/δΞΟ ΙΌ N0: 50) обладали более высокой активностью, непосредственно вызывающей гибель клеток, по сравнению с полученными на основе каркаса 1ОЕК вариантами антитела δϋ104 (δΗΟ ΙΌ N0: 8/δΗΟ ΙΌ N0: 28 и δΗΟ ΙΌ N0: 8/δΗΟ ΙΌ N0: З8). Такое различие в активности, непосредственно приводящей к гибели клеток, было неожиданным при наличии сходной связывающей активности таких вариантов антитела δί.Ί04 (фиг. 9).

Пример 5. Анализ зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксичности (АОСС).

Эффекторные клетки (мононуклеарные клетки периферической крови) очищали из лейкоцитарной пленки, полученной от здоровых людей-доноров (Аи81га11аи Кеб Сто88 Βίοοά δβτνίοβδ), используя ЬутрЬоргер™ согласно протоколу производителя (Α.χί5-δ1Χ1ά РоС Αδ). Жизнеспособные эффекторные клетки (5х10⁶/мл) инкубировали в течение ночи в КРМГ 1640 (О1Ьсо®) плюс 10% РСδ при З7°С и 10% СО2. Опухолевые клетки-мишени и эффекторные клетки промывали в ΡΒδ, затем средой (КРМП640 без фенолового красного, ОЛсо®, плюс 0,5% РСδ), ресуспендировали в среде и инкубировали с антителом в разных концентрациях (химерным δΟ04, гуманизированным δί.Ί04 или изотипом Ι§04 человека, δίβΐηαАИпсЬ®, № Ι5154) в трех повторах в 96-луночных планшетах с И-образными лунками (Сотшпд®) в объеме для анализа 200 мкл, содержащем следующие конечные концентрации: клетки-мишени: 1х10⁵ клеток/мл; эффекторные клетки: 2,5х10⁶ клеток/мл; диапазон антител от 10 до 0,001 мкг/мл. В качестве контролей инкубировали только клетки-мишени в отсутствие (минимум мишени) или присутствии (максимум мишени) 1% тритона-Х ^дта-АИпсЬ®), и клетки-мишени и эффекторные клетки (фон) инкубировали в отсутствие антитела. Планшеты центрифугировали в течение 2 мин при 160 хд и инкубировали в увлажненной атмосфере, содержащей СО2, при З7°С в течение 4 ч. Гибель клеток измеряли, используя анализ высвобождения лактатдегидрогеназы. Коротко, планшеты центрифугировали в течение 5 мин при 250хд и 100 мкл надосадка клеток анализировали в отношении высвобождения лактатдегидрогеназы, используя набор для определения цитотоксичности (КосЬе) согласно инструкциям производителя. Чтобы минимизировать загрязнение примесью клеток, надосадок фильтровали, используя 96-луночный планшет с диаметром пор 0,2 мкм АсгоРгер™ (Ра11). Высвобождение ΌΌΗ количественно оценивали, регистрируя оптическую плотность при 492 нм, и цитотоксичность в процентах вычисляли, используя следующую формулу: 100х [образец - среднее (фон)]/среднее (максимум мишени - минимум мишени); значения ЕС₅₀ вычисляли, используя анализ нелинейной регрессии с помощью компьютерной программы ОгарЬРаб Рт18т®.

Анализ зависимой от комплемента цитотоксичности (СОС).

Жизнеспособные опухолевые клетки-мишени инкубировали в среде (КРМГ 1640 без фенолового красного, ОЛсо®, плюс 5% РСδ) с комплементом сыворотки человека ^дта-АИпсЬ® №δ1764) и различными концентрациями антитела (химерного δίΊ04, гуманизированного δί.Ί04 или изотипа ГдО] человека, δ^дта-Α1ά^^сЬ®, № Ι5154) в трех повторах в 96-лучноных планшетах с плоским дном (Сотшпд®) в объеме для анализа 150 мкл, содержащем следующие конечные концентрации: клетки-мишени: 1З,Зх 10⁴ клеток/мл; комплемент: 15%; диапазон антител от 10 до 0,01 мкг/мл. Для контролей инкубировали только клетки-мишени в отсутствие (фон мишени) или присутствии (фон мишени и комплемента) комплемента и инкубировали только комплемент (фон комплемента) в среде. Планшеты центрифугировали в течение 2 мин при 160хд и инкубировали в увлажненной атмосфере, содержащей СО₂, при З7°С в течение 2-З ч. Гибель клеток измеряли, используя набор Се11ТПег 96® (Рготеда®) согласно инструкциям производителя, включая дополнительный период инкубации З-4 ч. Гибель клеток-мишеней количественно оценивали, регистрируя оптическую плотность при 492 нм, и цитотоксичность в процентах вычисляли, используя следующую формулу: 100х [образец - среднее (фон мишени и комплемента)]/[среднее (фон

- 2З 024695 комплемента) - среднее (фон мишени и комплемента)]; значения ЕС₅₀ вычисляли, используя анализ нелинейной регрессии с помощью компьютерной программы СгарЬРай Ргйт®.

Новые гуманизированные варианты антитела 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностыо обладают высокой цитотоксичностыо против клеток опухоли ободочной кишки человека.

Цитотоксичность гуманизированных вариантов 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью, направленную против клеток опухоли ободочной кишки человека, тестировали в анализе зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксичности и в анализе зависимой от комплемента цитотоксичности. Гуманизированные варианты антитела 8С104 и химерное антитело 8С104, но не контрольный изотип человека, обладали высокой зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксической активностью против опухолевых клеток С170 в случае использования мононуклеарных клеток периферической крови здоровых доноров (фиг. 13). Сходные результаты получали, используя мононуклеарные клетки периферической крови от других людей-доноров (данные не показаны). На фиг. 14 показано, что такая же панель гуманизированных вариантов антитела 8С104 и химерное антитело 8С104, но не контрольный изотип человека, обладали высокой зависимой от комплемента цитотоксической активностью против опухолевых клеток Со1о205 в случае использования комплемента человека. Кроме того, все другие гуманизированные варианты антитела 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью обладали высокой зависимой от антитела опосредованной клетками цитотоксичностью и зависимой от комплемента цитотоксической активностью против опухолевых клеток Со1о205 (данные не показаны). В соответствии с данными о разной активности, вызывающей прямую гибель клеток, полученные на основе 1υ6Α варианты антитела 8С104 проявляли более высокую зависимую от антител опосредованную клетками цитотоксичность и зависимую от комплемента цитотоксическую активность по сравнению с полученными на основе 1ЦЬК вариантами антитела 8С104. Такая иерархия в опосредованной иммунитетом цитотоксической активности была неожиданной с учетом сходной связывающей активности разных вариантов антитела 8С104 (табл. 6).

Пример 6. Протокол иммуногистохимии.

Микроматрицу множества опухолевых тканей человека, содержащую образцы каждого типа опухоли от 10-12 разных доноров, подвергали скринингу в отношении связывания с биотинилированными гуманизированными вариантами антитела 8С104, используя иммуногистохимию. Биотинилированный изотип Щ человека использовали для негативного контрольного окрашивания. Участки микроматрицы тканей подвергали обработке серией разных методик демаскировки антигена, включая модификацию температуры, давления и рН. Кроме того, осуществляли серию разведений первого антитела, чтобы получить наилучшее возможное отношение сигнала к шуму. Иммунореактивность антитела оценивали с помощью визуального наблюдения по четырехступенчатой шкале на основе интенсивности окрашивания и процентного содержания позитивных клеток.

Гуманизированный вариант антитела 8С104 связывается с различными типами злокачественных опухолей человека.

Несколько разных типов злокачественных опухолей от разных пациентов анализировали в отношении связывания с гуманизированным антителом 8С104, обладающим более низкой предполагаемой иммуногенностью (8ЕЦ ГО N0: 7/8ЕЦ ГО N0: 50). Гуманизированное антитело 8С104, но не контрольный изотип человека, связывалось с тканями злокачественных опухолей ободочной кишки человека, проявляя специфичность в используемых условиях связывания (данные не показаны). В табл. 7 суммированы данные, показывающие, что позитивное окрашивание мембран обнаружено в злокачественной опухоли ободочной кишки (75%). Неожиданно обнаружено позитивное окрашивание в злокачественной опухоли поджелудочной железы (70%) и в более низкой степени в злокачественных опухолях яичника (25%) и злокачественных опухолях легкого (16,7%). Напротив, не обнаружено окрашивания в злокачественных опухолях почек в анализируемом образце ограниченного размера. Полученные результаты показывают, что гуманизированное антитело 8С104 с низкой предполагаемой иммуногенностью применимо для диагностики опухолей в случае признаков злокачественных новообразований прямой и ободочной кишки, поджелудочной железы, яичника и легкого. Кроме того, можно предполагать, что гуманизированное антитело 8С104 с низкой предполагаемой иммуногенностью применимо для терапевтического лечения злокачественной опухоли прямой и ободочной кишки, поджелудочной железы, яичника и легкого у человека. Такую противоопухолевую эффективность можно оценить ш У1уо в моделях ксенотрансплантатов опухолей у мышей.

Пример 7. Усиление эффекторной функции антител 8С104.

Эффекторная функция антител может быть усилена благодаря повышению зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксичности или зависимой от комплемента цитотоксичности или сочетания зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксичности и зависимой от комплемента цитотоксичности.

Усиление ΑΩί®.

Конструировали варианты антитела 8С104 и химерное 8С104 для получения повышенной зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксической (ΑΩί®) активности, используя стандартные модификации Рс-области антитела. Стандартные способы включают, например, белковую инженерию

- 24 024695 или гликоинженерию Рс-области антитела.

В качестве примера белковой инженерии создавали мутации в последовательностях константных областей тяжелой цепи, как описано Ба/ат с соавторами, 2006 (Ьа/аг Эанд е1 а1. 2006). В частности, мутации 8122Ό, 8181А, 1215Е вводили в Рс-последовательность 8ЕО ГО ЫО: 52 с образованием последовательности 8ЕО ГО ЫО: 53. Несколько гуманизированных антител наряду с химерным антителом, обладающим усиленной Рс-областью 8ЕО ГО ЫО: 52, тестировали в анализах АЭСС после их экспрессии в клетках СНО и очистки хроматографией на белке А, как описано в примере 2. Функцию АЭСС измеряли, как описано в примере 5.

В качестве примера гликоинженерии клетки СНО, продуцирующие гуманизированные варианты антитела 8С104 или химерное антитело 8С104, инкубировали в течение 8-10 дней с кифунензином (0,25 мкг/мл) согласно способу 21юи с соавторами (2Ьои, 8Ьаиката е1 а1. 2008). Затем антитело очищали, как описано в примере 2, и функцию АЭСС измеряли, как описано в примере 5.

В другом примере гликоинженерии использован способ Ро1еШдеи1®, который описан 81ннка\уа Т. с соавторами, 2003 (I. Вю1. С1ет. 278: 3466-73). Вариабельные области легких и тяжелых цепей гуманизированных вариантов антитела экспрессировали в виде 1дО1 в стандартном остове константной области. Последовательность константной области тяжелой цепи представляла собой последовательность из ОеиВаик Р01857.1 и последовательность константной области легкой цепи представляла собой последовательность из ЫСВ1 с номером доступа Р01834. Функцию АЭСС измеряли, как описано в примере 5.

Варианты антитела 8С104 с повышенной эффекторной функцией и химерное антитело 8С104 обладают повышенной зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксичностыо.

В серии экспериментов применяли белковую инженерию или гликоинженерию для увеличения зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксичности химерного антитела 8С104 и вариантов антитела 8С104 с низкой предполагаемой иммуногенностью. По сравнению с немодифицированными антителами, Рс-сконструированные (8ЕО ГО ЫО: 53) или обработанные кифунензином гуманизированные варианты антитела 8С104 и химерное антитело 8С104 проявляли повышенную зависимую от антител опосредованную клетками цитотоксичность против опухолевых клеток Со1о205. На фиг. 15 показан пример заметно повышенной гибели злокачественных клеток ободочной кишки человека ^ГОт (АТСС, номер доступа ССЬ-218), вызываемой обработанным кифунензином гуманизированным антителом 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью (8ЕО ГО ЫО: 7/8ЕО ГО ЫО: 50). На фиг. 16 показан пример заметно повышенной гибели злокачественных клеток ободочной кишки человека Со1о201 (АТСС, номер доступа ССЬ-224), вызываемой Ро1еШдей®-обработанным гуманизированным антителом 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью (8ЕО ГО ЫО: 7/8ЕО ГО ЫО: 94, последовательность константной области тяжелой цепи и последовательность константной области легкой цепи представляли собой последовательности ОеиВаик Р01857.1 и ЫСВ1 с номером доступа Р01834 соответственно).

Пример 8. Мышиная модель профилактики опухолевого ксенотрансплантата НТ29.

Самкам мышей ВАЬВ/с ииДе подкожно инокулировали 2х10⁶ клеток НТ29 злокачественной опухоли ободочной кишки человека (АТСС, номер доступа НТВ-38). В тот же день, когда инокулировали опухолевые клетки (0 день), мышей рандомизированно распределяли на основе массы тела на две группы обработки (и=10 на группу). Каждую группу обрабатывали внутрибрюшинно либо контрольным наполнителем (РВ8, 10 мл/кг), либо гуманизированным антителом 8С104 (10 мг/кг). Контрольный наполнитель и гуманизированное антитело 8С104 вводили дважды в неделю в течение четырех недель. Объем опухолей определяли три раза в неделю, используя следующую формулу:

объем (мм³) = длинахдиаметр²хп/6.

В ходе исследования некоторых мышей приходилось отбраковывать вследствие чрезмерной потери массы тела, что привело к меньшему количеству мышей в группах обработки контрольным наполнителем (и=6) и антителом (и=9). После окончания исследования (27 день) и вскрытия опухоли вырезали из всех мышей, очищали от кожи и взвешивали.

Мышиная модель терапии опухолевого ксенотрансплантата Со1о201.

Самкам бестимусных мышей ииДе подкожно инокулировали 5х10⁶ клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека Со1о201 (АТСС, номер доступа ССЬ-224). После достижения определенного размера опухолей ~110 мм³ (0 день), мышей рандомизированно распределяли на две группы обработки (и=10 на группу). Каждую группу обрабатывали внутрибрюшинно либо контрольным наполнителем (РВ8, 10 мл/кг) либо гуманизированным сконструированным способом Ро1е1ПдеШ® (как описано в примере 7) антителом 8С104 (10 мг/кг). Контрольный наполнитель и гуманизированное сконструированное способом Ро1е1ПдеШ® антитело 8С104 вводили дважды в неделю в течение 38 дней. Объем опухоли определяли два раза в неделю, используя следующую формулу:

объем (мм³)=1/2(а²хЪ), где а означает наименьший диаметр, и Ъ означает наибольший диаметр.

Высокая противоопухолевая эффективность гуманизированного антитела 8С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью ш νί\Ό.

- 25 024695

Лечение мышей, несущих опухоли, гуманизированным антителом 3С104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью (3Ε0 ГО N0: 7/3ΕΟ ГО N0: 50) приводило к значимо меньшим объему опухолей и массе опухолей по сравнению с обработкой контрольным наполнителем в модели профилактики опухолей НТ29 (фиг. 17). Кроме того, в модели терапевтического лечения Со1о201 гуманизированное Ро!еШдеи1®-сконструированное антитело ЗС104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью (3Ε0 ГО N0: 7/3ΕΟ ГО N0: 94) проявляло значимую противоопухолевую активность (фиг. 18).

Можно предполагать, что гуманизированные варианты антитела ЗС104 с низкой предполагаемой иммуногенностью применимы для лечения рака прямой и ободочной кишки у людей либо в виде монотерапии, либо в сочетании с другими терапевтическими противоопухолевыми средствами, например химиотерапевтическими средствами, малыми молекулами или биологическими препаратами.

Таблица 1

СГОК-последовательности 3С104

Вариабельная область	Номер СЭЕ	Последовательность СОК
ν_Η	1	ΞΗΥΞΗΗ (Кабат) ΗΥ3ΙΤ3ΗΥ3ΜΗ (АЬМ)
ν_Η	2	ΗΙΗΓΞΒΕΡΤΥΝΡΞ1ΞΞ
ν_Η	3	КбКСЗООСЬЫУ
VI,	1	ΞΑΞΞΞΙ,ΞΥΙΗ
V,,	2	ИТЗЫЬАЗ
VI,	3	РОСЗЕУРЬТ

Таблица 2

Несколько исходных вариантов гуманизированного антитела ЗС104 сохраняли активность связывания с позитивной по антигену ЗС104 линией клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека С170 выраженную в виде связывания в процентах по сравнению со связыванием химерного ЗС104; при тестировании в других экспериментах получали сходные данные.

Форма антитела 5С104	V!, (ЗЕ2 Ю ΝΟ)/ν_Η (ЗЕС Ю N0)	С170
гуманизированное	ЗЕО Ю ΝΟ:18/ΞΕ<2 Ю N0:10	<1
гуманизированное	ЗЕ2 Ю ΝΟ:18/5Ε<2 Ю N0:17	<1
гуманизированное	ЗЕО Ю ΝΟ:7/ΞΕ0 Ю N0:9	<1
гуманизированное	ЗЕО ΙΌ ΝΟ:16/3Ε0 ΙΌ N0:9	<1
гуманизированное	ЗЕС Ιϋ ΝΟ:8/3Ε0 Ιϋ N0:10	<1
гуманизированное	3Ε0 Ιϋ ΝΟ:8/3Ε<2 ΙΌ N0:17	11,0
гуманизированное	3Ε<2 Ιϋ ΝΟ:7/3Ε<2 Ιϋ N0:15	23,4
гуманизированное	3Ε0 Ю ΝΟ:16/5Ε£> Ю N0:15	29, 4
гуманизированное	ΞΕζ) Ю ΝΟ:18/ΞΕ<2 Ю N0:12	64,5
гуманизированное	3Ε2 Ю ΝΟ:16/5Ε<2 Ю N0:11	73,9
гуманизированное	3Ε<2 Ιϋ ΝΟ:8/3Ε<2 Ιϋ N0:12	74, 6
гуманизированное	3Ε0 ΙΌ ΝΟ:7/3Ε0 ΙΌ N0:11	81,9
гуманизированное	3Ε0 Ю ΝΟ:16/5Ε£> Ю N0:13	91,0
гуманизированное	3Ε0 Ιϋ ΝΟ:7/5Ε<2 Ю N0:13	96,1
химерное	ΞΕΟ Ю ΝΟ:4/8ΕΟ ΙΏ N0:2	100

- 2б 024695

Таблица 3

Сравнение последовательностей каркасной области непосредственно перед СОК-Ш согласно определению Кабата

Источник аминокислотной	Пять аминокислот перед СРЕ-Н1
последовательности	согласно определению Кабата
Мышиная донорная	СУ51Т
последовательность
Акцепторная последовательности	33515
1ибА
Акцепторная последовательность	В35Е5
№к

Таблица 4

Остатки I, Ь и V в положении 29 в сочетании с остатком Υ в положении 27 в Ш6А-каркасе 1 вариабельной области тяжелой цепи придают гуманизированным вариантам антитела δΟ104 с более низкой предполагаемой иммуногенностью наиболее высокую активность связывания с позитивной по антигену δί'Ί04 линией клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека С170.

Форма антитела 5С104	Замена остатка в положении 29	ν_Ε (5Е2 Ю ΝΟ)/ν_Η	С170
(ЗЪО	Ю N0)
химерное	I	5Е0 Ю Ιϋ	N0:4/5Е0 N0:2	100, 0
гуманизированное	I	5Е0 Ю Ιϋ	N0:7/5Е0 N0:50	96, 5
гуманизированное	ь	5Е0 Ιϋ Ιϋ	N0:7/5Е0 N0:62	79, 4

- 27 024695

гуманизированное	V	5Е0 Ιϋ ΝΟ:7/5Ε0 Ю N0:70	71,4
гуманизированное	Т	5Е0 Ю ΝΟ:7/3Ε0 Ю N0:69	20, 3
гуманизированное	м	5Е0 Ιϋ ΝΟ:7/3Ε0 Ю N0:63	15, 1
гуманизированное	N	5Е0 Ю ΝΟ:7/5Ε0 Ю N0:64	8, 4
гуманизированное	Ϊ	3Ε0 Ιϋ ΝΟ:7/3Ε0 Ιϋ N0:72	3, 3
гуманизированное	Н	ΞΕΟ Ю ΝΟ:7/ΞΕ0 10 N0:60	2,5
гуманизированное	К	ΞΕΟ Ιϋ ΝΟ:7/3Ε0 Ю N0:67	1,7
гуманизированное	0	ΞΕΟ Ιϋ ΝΟ:7/ΞΕ0 10 N0:66	1,4
гуманизированное	Р	3Ε0 ΙΏ ΝΟ:7/5Ε<2 Ю N0:65	1,4
гуманизированное	тс	5Ε0 Ю Ν0:7/3Ε<2 Ю N0:71	1,4
гуманизированное	А	ΞΕΟ ΙΏ ΝΟ:7/ΞΕ0 Ю N0:54	<1
гуманизированное	5	ΞΕΟ Ιϋ ΝΟ:7/ΞΕ0 Ю N0:68	<1
гуманизированное	Г	ΞΕΟ Ιϋ ΝΟ:7/ΞΕ0 10 N0:58	<1
гуманизированное	С	5Ε0 ΙΏ ΝΟ:7/5Ε0 Ю N0:55	<1
гуманизированное	с	ЗЕО Ю ΝΟ:7/5Εζ) Ю N0:59	<1
гуманизированное	ϋ	ΞΕΟ Ю ΝΟ:7/ΞΕ0 10 N0:56	<1
гуманизированное	Е	5Ε0 10 ΝΟ:7/5Ε0 ΙΌ N0:57	<1
гуманизированное	К	5Ε0 Ю ΝΟ:7/3ΕΟ Ю N0:61	<1

Выражено в виде средней активности в процентах по сравнению с химерным δί'.Ί04. вычисленной на основе 2 экспериментов.

- 28 024695

Таблица 5

Положительно заряженные остатки В и К в положении 71 в 1И6А-каркасе 3 вариабельной области тяжелой цепи придают гуманизированным вариантам антитела δί'Ί04 с более низкой предполагаемой иммуногенностью наивысшую активность связывания с позитивной по антигену δί'Ί04 линией клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека С170.

Форма антитела 5С104	Замена остатка в положении 71	ν_Σ (ЗЕО Ю Ы0)/7_н (5Еф 1Б N0)	С170
химерное	К	ЗЕО Ιϋ N0:4/ ЗЕО Ю N0:2	100, 0
гуманизированное	К	5Е0 ΙΟ ΝΟ:7/5ΕΟ Ιϋ N0:50	95,7
гуманизированное	К	5Е0 Ю ΝΟ:7/3Ε0 Ш N0:81	115,7
гуманизированное	н	ЗЕО Ιϋ ΝΟ:7/5Εφ Ιϋ N0:7 9	83,1
гуманизированное	м	ЗЕО Ю ΝΟ:7/3Ε0 Ιϋ N0:8 3	82, 9
гуманизированное	Е	5Е0 Ю ΝΟ:7/5Ε0 Ιϋ N0:77	79, 6
гуманизированное	А	5Ε0 ΙΟ ΝΟ:7/5ΕΟ Ιϋ N0:7 3	70,8
гуманизированное	Р	ΞΕΟ Ю ΝΟ:7/5Ε0 Ιϋ N0:85	58,4
гуманизированное	Υ	5Ε0 Ιϋ ΝΟ:7/5Εφ Ιϋ N0:91	60,7
гуманизированное	3	3Ε0 Ιϋ ΝΟ:7/3Ε0 Ιϋ N0:87	52,1
гуманизированное	0	5Ε0 Ιϋ ΝΟ:7/5Ε<2 Ю N0:86	60,1
гуманизированное	с	5Ε0 Ιϋ ΝΟ:7/8Εφ Ιϋ N0:74	47, 3
гуманизированное	ϋ	5Ε<2 Ιϋ ΝΟ:7/5Ε<2 Ιϋ N0:75	48,2
гуманизированное	е	3Ε0 Ιϋ ΝΟ:7/3Ε0 Ιϋ N0:78	54,1
гуманизированное	т	5Ε0 Ιϋ ΝΟ:7/5Ε<3 Ιϋ N0:88	43,5
гуманизированное	I	ΞΕΟ ΙΏ ΝΟ:7/5Ε<2 Ю N0:80	23, 5
гуманизированное	ь	ΞΕΟ ΙΏ ΝΟ:7/3Εζ) Ιϋ N0:82	31,9
гуманизированное	N	5Ε0 Ιϋ ΝΟ:7/5Ε0 ТО N0:84	25, 6
гуманизированное	V	5Ε0 Ιϋ ΝΟ:7/ΞΕ0 ТО N0:89	36, 4
гуманизированное	И	ΞΕΟ Ιϋ Ν0:7/ΞΕβ ТО N0:90	25, 3
гуманизированное	Е	3Ε0 Ιϋ ΝΟ:7/ΞΕ0 Ιϋ N0:76	22, 6

Выражено в виде средней активности в процентах по сравнению с химерным δΟ04, вычисленной на основе 2-3 экспериментов.

- 29 024695

Таблица 6

Гуманизированные варианты антитела 8С104 с низкой предполагаемой иммуногенностью неожиданно проявляют функциональные различия в активности, непосредственно вызывающей гибель клеток, зависимой от антител опосредованной клетками цитотоксической активности (АГОСС) и зависимой от комплемента цитотоксической активности (СГОС)· несмотря на, по существу, идентичные активности связывания, направленные против позитивных по антигену 8С104 клеток злокачественной опухоли ободочной кишки человека.

		Связывание	Прямая гибель	АОСС	С ОС
Форма антитела 5С104	(ЗЕ£ 10 Ν0)/ν_Η (8Εζ) Ю ΝΟ)	С170	Со1о205	С170	С170	Со1о205	Со1о205
химерное	3Εζ> Ю Ν0:4/3Εζ) Ιϋ N0:2	ιοο	100	ιοο	юо	100	100
гуманизированное	5Ε0 Ιϋ ΝΟ:7/3Ε0 10 N0:25	101,4	104,8	98,9	154,2	120,3	54,1
гуманизированное	3Ε0 Ю Ν0:7/5Ε0 Ю N0:50	106,8	112,0	89, 4	162,5	203, 5	136, 0
гуманизированное	3Ε0 Ю ΝΟ:8/5ΕΟ Ю N0:26	99,0	95,8	48,7	32,3	84,4	9, 9
гуманизированное	3Ε0 ΙΟ ΝΟ:8/3ΕΟ Ιϋ N0:38	103,5	104,3	50,3	47,3	ηά	20,1

Выражено в виде активности в процентах по сравнению с химерным 8С104; пй, не определяли; при тестировании в других экспериментах получали сходные данные.

Таблица 7

Гуманизированный вариант антитела 8С104 с низкой предполагаемой иммуногенностью связывается с различными типами опухолей человека

		Процент иммуноокрашивания мембран
Тип опухоли	Анализируемое количество	Отрицательное	Слабое	Умеренное	Сильное
Ободочная кишка	12	25	41,7	16, 7	16,7
Поджелудочная железа	10	30	10	30	30
Яичник	12	75	16, 7	8,3	0
Легкое	12	83, 3	16, 7	0	0
Почка	12	100	0	0	0

Библиография

ВепНаг, I. (2007). Пе51дп оГ купФеЛс апИЪойу НЪтапек. Ехрег! 0ρίη ВФ1 ТНег 7(5): 76З-79.

Вгекке, О.Н., Вгетпек, В. е! а1. (199З). нитап !дСЗ сап айор! Фе ФкиНМе Ъопй райегп сНагасЮпзНс

Гог !дС1 \\1Фои! текетЫшд Н т сотр1етеп! теФа!ей се11 1у515. Мо1 Iттиηο1 З0(16): 1419-25.

СНпкФпкеп, Р.А., Оатек/ук, А. е! а1. (2009). МоФГуФд апНЪойу кресШсйу Ъу сНаш кНиГГНпд оГ У/У

ЪеБуееп апНЪоФек \\ίΦ ге1а!ей зресФсФез. 8сапй 1. Iттиηο1 69(1): 1-10.

□аПАссрит А.Е., Соок, К.Е. е! а1. (2006). Мойи1аНоп оГ Фе еГГесЮг ГипсНопк оГ а Нитап фС1 ФтоидН епдшееттд оГ Нз Фпде тедюп. 1. Iттиηο1 177(2): 1129-З8.

ПаП'Асдиа, А.Е., К1епег, Р.А. е! а1. (2006). РторетНек оГ Нитап фСЬ епдтеегей Гог епНапсей ЪФФпд

Ф Фе пеопа!а1 Ес гесерФг (ЕсРп). 1. Вю1. СНет. 281(ЗЗ): 2З514-24.

□аНАсциа, А.Е., Аоойк, Р.М. е! а1. (2002). Фстеактд Фе айгпЛу оГ а Нитап фС1 Гог Фе пеопа!а1 Ес гесерФг: Ъю1одка1 сопкециепсек. I Iттиηο1 169(9): 5171-80.

ПиЪе1, 8. (2007). напйЪоок оГ ТНегареиНс АпНЪоФек, АПеу-УСн, АеиФеип.

- З0 024695

Ииггап!, Ь.О., Нагйшд, 8.1. е! а1. (2006). А пе\у апИсапсег д1усокр|й топос1опа1 апйЬойу, 8С104, \ν1ιίο1ι ФгесИу тйисе8 (итог се11 арор!о818. Сапсег Рек 66(11): 5901-9.

Реггага, С., Вгипкег, Р. е! а1. (2006). Мойи1акоп оГ (кегареийс апйЬойу еГГес!ог Гипсйопк Ьу д1усоку1аПоп епдтеегтд: 1пйиепсе оГ Со1д| еп/уте 1осаПхаПоп йотат апй со-ехргеккюп оГ ке!его1одои8 Ье!а1, 4-Касе1у1д1исо8аттукгап8Гега8е ΙΙΙ апй Со1д| а1рка-таппо81йа8е ΙΙ. В1о!ескпо1 Вюепд 9З(5): 851-61.

р18ЬЬигп, С.8. (2008). Тке ркагтасо1оду оГ РЕОу1айоп: Ьа1апстд РЭ \\кк РК !о депега!е поуе1 1кегареийс8. 1. Ркагт. 8сГ 97(10): 4167-8З.

Оауе1, Υ. апй О. уоп Неупе (1990). 8еупепсе й|ГГегепсе8 Ье1\\сеп д1усо8у1а!ей апй поп-д1усо8у1а!ей А8п-Х-Ткг/8ег ассер!ог 8йе8: 1трксакоп8 Гог рго!ет епдтеегтд. Рго!еш Епд З(5): 4ЗЗ-42.

Огеепег, А., Са11акап, М. апй 1егр8с1к В (1996). Ιπ νίΙΐΌ Ми!адепе818 Рго1осо18, Нитапа рге88, N1.

Нт!оп, Р.Р., 1оЫГ8, М.О. е! а1. (2004). Епдтеегей китап Ι§Ο апкЬой1С8 \\кк 1опдег 8егит ка1Г-Нуе8 ш рпта!е8. 1. Вю1. Скет. 279(8): 621З-6.

Нт!оп, Р.Р., Хюпд, 1.М. е! а1. (2006). Ап епдтеегей китап Ι§Ο1 апйЬойу \νί(1ι 1опдег 8егит ка1Г-кГе. 1. Iттиπο1 176(1): З46-56.

Ии8од1е, Е.Е., Аопд, Р/Υ. е! а1. (2001). Епдтеегей апИЬой1е8 \\кк тсгеа8ей аскуку !о гесгш! сотр1етеп!. 1. Iттиπο1 166(4): 2571-5.

1опе8, А.к, Рарас, Ό.Ι. е! а1. (2007). 8е1ес!1уе с1еагапсе оГ д1усоГогт8 оГ а сотр1ех д1усорго!еш ркагтасеийса1 саи8ей Ьу !егтта1 Н-асе1у181исо8ат1пе 18 8ти1аг ш китап8 апй супото1ди8 топкеу8. О1усоЫо1оду 17(5): 529-40.

КаЬа!, Е.А.А., Т.Т; Репу, Н., Оо!!е8тап, К., Рое11ег, С. (1991). 8еуиепсе8 оГ Рго!е1п8 оГ Иптипо^дюк Исгсб!, №Н риЬксайоп по. 91-З242, Ве!ке8йа, МО.

Капйа, Υ., Υатайа, Т. е! а1. (2007). С'отрап8оп оГ Ыо1од1са1 асйуйу атопд попГпсо8у1а1ей !кегареикс ЦС1 ап1|ЬоФе8 \\кк 1кгее йГТегеп! К-кпкей Рс окдо8асскапйе8: !ке Ыдк-таппо8е, куЬпй, апй сотр1ех !уре8. О1усоЫо1оду 17(1): 104-18.

Капеко, Υ., №ттег)акп, Р. е! а1. (2006). Апй-1пйатта!огу аскуку оГ 1ттипод1оЬикп О ге8иктд Ггот Рс 81а1у1акоп. 8с1епсе З1З(5787): 670-З.

Ко1ктап, кА. апй А.Р. 8!еттег (2001). Окес1ей еуо1ийоп оГ рго!ете Ьу ехоп 8киГйшд. №1 ВюГсскпо1 19(5): 42З-8.

Кор81йа8, О., РоЬегК А.8. е! а1. (2006). 'Тп укго тергоуетеп! оГ а 8кагк IдNΛК апйЬойу Ьу ЦЬе!а геркса8е ти1акоп апй йЬо8оте й18р1ау т1тк8 ш у1уо аГйпку та!ига!юп. Iттиπο1 Ье!! 107(2): 16З-8.

Ьа/аг, О.А., Иапд, А. е! а1. (2006). Епдтеегей апйЬойу Рс уапапй \\кк епкапсей еГГес!ог Гипсйоп. Ргос ЫаИ Асай 8οΐ И8А 10З(11): 4005-10.

Ы, Н., 8е!кигатап, N. е! а1. (2006). 0р1тп/айоп оГ киташ/ей ЦО8 т д1усоепдшеегей РкЫа ра81оп8. №11 В1о!ескпо1 24(2): 210-5.

Ьоо, Ό., Ргуег, N. е! а1. (2007). Тке д1усо!оре-8рес1йс ^νπ топос1опа1 апйЬойу шйисе8 опсо818 ш укго апй ка8 апй!итог асйуку адате! да81гош!е8!ша1 айепосагсшота !итог хеподгаГ!8 т у1уо. Мо1 Сапсег Ткег 6(З): 856-65.

Мккаекеп, Т.Е., Аа8е, А. е! а1. (1990). Епкапсетеп! оГ сотр1етеп! асйуакоп апй су!о1у818 оГ китап ЦСЗ Ьу йе1екоп оГ ктде ехоп8. 8сапй 1. Iттиπο1 З2(5): 517-28.

^йите, А., Ш, М. е! а1. (2008). Епдтеегей апйЬой1е8 оГ ^ОЫдОЗ т1хей 18о1уре \\кк епкапсей су!о!ох1с асйук1е8. Сапсег Ре8 68(10): З86З-72.

^гйегкаид, Ь., Вгекке, О.Н. е! а1. (1991). СЫтейс тои8е китап ЦСЗ апйЬой1е8 \\кк ап IдО4-кке ктде гедюп шйисе сотр1етеп!-тей1а!ей 1у818 тоге еГйс1еп!1у !кап ЦСЗ \\кк погта1 ктде. Еиг. 1. Iттиπο1 21(10): 2З79-84.

Но/а^а, 8., Аокд Ό. е! а1. (2004). НММС-1: а киташ/ей топос1опа1 апйЬойу \\кк !кегареийс ро!епИа1 адате! Ми11ейап йис!-ге1а!ей сагстота8. С1т Сапсег Ре8 10(20): 7071-8.

Ре1ей, П>, Киапд, Р.Ь. е! а1. (2008). Тке Ыоскет18!гу оГ 8отайс курегти!акоп. Аппи Рсу Iттиπο1 26: 481-511.

Ре1коуа, 8.В., Λк^1е8к, 8. е! а1. (2006). Епкапсей ка1Г-кГе оГ депекса11у епдтеегей китап ЦС1 апйЬой1е8 ш а киташ/ей РсРп тои8е тойе1: ро!епйа1 аррксакоп ш китога11у тей1а!ей аи!о1ттипе й18еа8е. Ιϋί Iттиπο1 18(12): 1759-69.

фиееп, С., 8скпе1йег, А.Р. е! а1. (1989). А киташ/ей апйЬойу !ка! Ьшй8 !о !ке т!ег1еикш 2 гесер!ог. Ргос. ЫаИ. Асай. 8οΐ. И8А 86(24): 10029-ЗЗ.

Ратте^ее, Н., Васктапп, 1. е! а1. (1999). 8¥РРЕГГНк йа!аЬа8е Гог МНС Идапй8 апй реркйе тойй. Iттиποдеπе!^с8 50(З-4): 21З-9.

8Ые1й8, Р.Ь., ^тешк, А.К. е! а1. (2001). Шдк ге8о1ийоп тарршд оГ !ке Ьшйшд 8ке оп китап ЦС1 Гог Рс датта ΗΙ, Рс датта ΗΙΙ, Рс датта РПк апй РсРп апй йе81дп оГ ЦС1 уайап!8 νίώ кпргоусй Ьтйтд !о !ке Рс датта Р. 1. Вю1. Скет. 276(9): 6591-604.

8к1пка№а, Т., Хакатига, К. е! а1. (200З). Тке аЬ8епсе оГ Гисо8е Ьи! по! !ке рге8епсе оГ да1ас!о8е ог Ы8ескпд №асе1у1д1исо8ат1пе оГ китап ЦС1 сотр1ех-!уре оИдо8асскаййе8 8ко\\'8 !ке сйкса1 го1е оГ епкапсшд апкЬойу-йерепйеп! се11и1аг су!о!ох1ску. 1. Вю1. Скет. 278(5): З466-7З.

8!ауепкадеп, ГВ., Оог1а!оу, 8. е! а1. (2007). Рс орйпк/акоп оГ !кегареикс апйЬой1е8 епкапсе8 1ке1г аЫ1- З1 024695 ίΐν !ο 1611 !итο^ се11а ίη νί!το апб ^ηίΓοΙδ !итο^ ехрапзюп ίη νίνο νί;·ι 1ο\\-;·ιΓΠηίΙν аскуакпд Рсдатта гесер!οΓδ. Сапсег Ке8 67(18): 8882-90.

Тап, Ь.К., δЬοре8, К.1. е! а1. (1990). 'ЧпПиепсе οΓ !ке Ыпде гедюп οη тотрктеп! асШа!юп, С1с] Ыпб1пд, апб 8едтеп!а1 ЙеХЪПку ίη сНппепс Нитап ^ттиηοд1οЪи1^η8. Ргос. №Й. Асаб. δα. ^А 87(1): 162-6.

ТЫе, Η., ^еб18ск, В. е! а1. (2009). АЛшИу та!ига!юп Ъу рНаде б18р1ау. Мебюбх Мο1. Βίο1. 525: 30922, χν.

Υе, δ.ρ. (2007). В^ο^πΓο^таί^с8: А Ргасйса1 АрргоасН, СНартап & №11/^0.

ΖΗοιι, О., δНаηка^а. δ. е! а1. (2008). Эеуекртет οΓ а 81тр1е апб гар1б тебюб Γογ ргобистд ηοηίисο8у1а!еб ο^οιικιηηοί^ ^η!απί^ аηί^Ъοб^е8 νίΐΐι шсгеазеб еЛссЮг Ыпс!юп. Вю1ес111то1 Вюепд 99(3): 652-65.

Патентные публикации

АО 2005/108430,

А0 2008/006554,

США 5225539,

США 6423511,

США 6872392,

США 6180370,

США 6277375,

США 6821505,

США 6602684,

США 6180370,

США 7083784,

США 7217797,

США 7326681,

США 7388081,

США 20090142340,

США 20090068175,

США 20090092599.

- 32 024695

5Е<2 Ю

5Е0 Ю

ЗЕО Ю

ЗЕО Ιϋ

ЗЕО Ю ЗЕО Ιϋ ЗЕО Ю

Краткий список последовательностей

N0:1: Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи мышиного 5С104.

N0:2: Аминокислотная последовательность тяжелой цепи химерного ЗС104 с мышиной вариабельной областью и остовом 1дС1 человека (домены СН1, шарнир, СН2 и СНЗ тяжелой цепи 1дС1 человека).

N0:3: Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи мышиного ЗС104.

N0:4: Аминокислотная последовательность легкой цепи химерного ЗС104 с мышиной вариабельной областью и константной областью легкой цепи человека.

N0:5: Сигнальная последовательность тяжелой цепи.

N0:6: Сигнальная последовательность легкой цепи.

N0:7: Полипептидная последовательность основанной на

ЮбА легкой цепи 8С104, содержащая замену А15Р.

ЗЕО Ю ЗЕО Ю

ЗЕО Ю

5Е<2 Ю

ЗЕО Ю

ЗЕС Ю

N0:8: Основанная на 10ЬЕ легкая цепь 5С104.

N0:9: Полипептидная последовательность основанной на

ЮбА тяжелой цепи 5С104 с прививкой согласно определению Кабату.

N0:10: Полипептидная последовательность основанной на

10ЬК тяжелой цепи 8С104 с прививкой согласно определению Кабату.

N0:11: Полипептидная последовательность основанной на

ЮбА тяжелой цепи 5с104 с прививкой ΟϋΕ-Η1 согласно определению АЫ4, СБК-Н2 и СБК-НЗ согласно определению Кабата.

N0:12: Полипептидная последовательность основанной на

10ЬК тяжелой цепи 5С104 с прививкой ΟϋΕ-Η1 согласно определению АЫ4, С0К-Н2 и СОК-НЗ согласно определению Кабата.

N0:13: Полипептидная последовательность основанной на

ЮбА тяжелой цепи 5С104 с прививкой С0Е-Н1 согласно определению АЫ4, ΟϋΚ-Η2 и ΟϋΚ-Η3 согласно определению Кабата, содержащая шесть замен.

- 33 024695

5Εζ) Ю N0:14:

5Εζ) Ιϋ N0:15:

5Е0 Ю N0:16:

5Е0 Ю N0:17:

5Е0 Ю N0:18:

8Е0 Ю N0:19:

ЗЕО Ю N0:20:

ЗЕО Ю N0:21:

ЗЕО Ю N0:22:

ЗЕО Ю N0:23:

ЗЕО ΙΒ N0:24:

ЗЕО Ю N0:25:

ЗЕО Ю N0:26:

ЗЕО Ю N0:27:

ЗЕО Ю N0:28:

ЗЕО Ю N0:29:

ЗЕО Ю N0:30:

Полипептидная последовательность основанной на ΙϋβΑ тяжелой цепи ЗС104 с прививкой ΟϋΚ-ΗΙ согласно определению АЬМ, С0Е-Н2 и СОЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая восемь замен.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи 5С104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая шесть замен. Полипептидная последовательность основанной на ΙϋβΑ легкой цепи ЗС104, содержащая три замены. Полипептидная последовательность основанной на 1ζ)ΣΚ тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая четыре замены. Полипептидная последовательность основанной на 1ζ)ΣΚ легкой цепи ЗС104, содержащая две замены. Полипептидная последовательность основанной на ΙϋβΑ тяжелой цепи ЗС104 с прививкой ΟϋΕ-ΗΙ согласно определению АЬМ, С0Е-Н2 и СОЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 01Е и 04 6Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи 5С104 с прививкой С0Е-Н1 согласно определению АЬМ, С0Е-Н2 и СБЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 01Е и Ι48Μ.

Полипептидная последовательность основанной на ΙϋβΑ тяжелой цепи ЗС104 с прививкой ΟϋΕ-ΗΙ согласно определению АЬМ, ΟϋΕ-Η2 и ΟϋΕ-Η3 согласно определению Кабата, содержащая замены 01Е и У671.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи 5С104 с прививкой С0Е-Н1 согласно определению АЬМ, С0Е-Н2 и СБЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 01Е и Т683.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой СБК-Н! согласно определению АЬМ, СЬЕ-Н2 и 0ϋΕ-Η3 согласно определению Кабата, содержащая замены 01Е и ν?1Ε.

Полипептидная последовательность основанной на 1Ь6А тяжелой цепи 5С104 с прививкой ΟϋΕ-ΗΙ согласно определению АЬМ, ΟϋΚ-Η2 и СБК-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 01Е и Е72Ь.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой СБК-Н! согласно определению АЬМ, С0Е-Н2 и ΟϋΕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замену ν71Κ.

Полипептидная последовательность основанной на 1£>ЬК тяжелой цепи ЗС104 с прививкой ΟϋΚ-Ηΐ согласно определению АЬМ, С0Е-Н2 и 0ϋΕ-Η3 согласно определению Кабата, содержащая замену ν?1Ε.

Полипептидная последовательность основанной на 1£>ЬК тяжелой цепи 5С104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замену У71К. Полипептидная последовательность основанной на 1Ь6А тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замену ν71Κ. Полипептидная последовательность основанной на 1£)ЬЕ тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены 227Υ и ν?1Ε.

Аминокислотная последовательность химерной тяжелой цепи 5С104 с мышиной вариабельной областью и остовом 1дС1 человека (домены СН1, шарнира, СН2 и СНЗ тяжелой цепи 1дС1 человека), содержащая замену в СЭЕ-Н2 Г53И.

- 34 024695

5Εζ) Ю N0:31: Аминокислотная последовательность химерной тяжелой цепи ЗС104 с мышиной вариабельной областью и остовом 1дС1 человека (домены СН1, 1дС1

5Εζ) Ю N0:32:

шарнира, СН2 и СНЗ тяжелой цепи человека), содержащая замену в С0Е-Н2 Ε53Υ. Аминокислотная последовательность химерной мышиной вариабельной

5Е<2 Ю N0:33:

5Е<2 Ю N0:34:

5Εζ) Ю N0:35:

5Е<2 Ю N0:36:

5Εζ) Ю N0:37:

5Е0 ТС N0:33:

ЗЕО Ю N0:39:

8Е£) Ю N0:40:

ЗЕ£> Ю N0:41:

5Е0 ТС N0:42:

8Е£) Ю N0:43:

ЗЕО ТС N0:44:

тяжелой цепи 5С104 областью и остовом 1дС1 человека (домены СН1, тяжелой цепи ТдС1 шарнира, СН2 и СНЗ человека), содержащая замену в С0Е-Н2 Г53Р. Полипептидная последовательность основанной на 1£>ЬК тяжелой цепи ЗС104 с прививкой ΟϋΚ-ΗΙ согласно определению АЪМ, ССЕ-Н2 и ССЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 364К и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1£>ЬК тяжелой цепи ЗС104 с прививкой ΟϋΚ-ΗΙ согласно определению АЪМ, ССЕ-Н2 и ССЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 564Ъ и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1фЬЕ тяжелой цепи 5С104 с прививкой С0Е-Н1 согласно определению АЪМ, С0Е-Н2 и СБЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 364Н и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1ζ)ΣΕ тяжелой цепи ЗС104 с прививкой С0Е-Н1 согласно определению АЪМ, С0Е-Н2 и СОЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 564Е и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1фЬЕ тяжелой цепи 5С104 с прививкой С0Е-Н1 согласно определению АЪМ, С0Е-Н2 и СБЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 364Е и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1<2ЬК тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены С27У, Ε29Ι, Т305, 564К и У71К.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой СЪЕ-Н1 согласно определению АЪМ, С0Е-Н2 и СЪЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 364К и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой С0Е-Н1 согласно определению АЪМ, 0ΏΕ-Η2 и СЪЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены Зб4Ь и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1ϋ6Α тяжелой цепи 5С104 с прививкой ΟϋΕ-Η1 согласно определению АЪМ, ΟϋΕ-Η2 и СЪЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 564Н и У71К.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой 0ΏΕ-Η1 согласно определению АЪМ, С0Е-Н2 и 0ΌΕ-Η3 согласно определению Кабата, содержащая замены 364Е и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой С0Е-Н1 согласно определению АЪМ, 0ΏΕ-Η2 и СЪЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 364К и У71К.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой ΟϋΕ-Η1 согласно определению АЪМ, 6ΌΕ-Η2 и 6ΌΕ-Η3 согласно определению Кабата, содержащая замены 340Р и У71Е.

- 35 024695

3Εζ) Ю N0:45:

5Εζ) Ιϋ N0:46:

3Εζ) Ю N0:47:

5Е<2 Ю N0:48:

5Εζ) Ю N0:49:

3Εζ) Ю N0:50:

3Εζ) Ю N0:51:

ЗЕО Ю N0:52:

ЗЕО Ю N0:53:

5Е<2 ΙΌ N0:54:

5Е<2 ΙΌ N0:55:

ЗЕО Ю N0:56:

5Е0 Ю N0:57:

ЗЕО Ю N0:58:

ЗЕО Ю N0:59:

ЗЕО Ю N0:60:

Полипептидная последовательность основанной на 1ϋ6Α тяжелой цепи ЗС104 с прививкой ΟΌΚ-ΗΙ согласно определению АЬМ, СРЕ-Н2 и СРЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 540Р, 564К и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи 5С104 с прививкой СРЕ-Н1 согласно определению АЬМ, СРЕ-Н2 и СРЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 340Р, 364Ь и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1ϋ6Α тяжелой цепи ЗС104 с прививкой СРЕ-Н1 согласно определению АЬМ, СРЕ-Н2 и СРЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 340Р, 364Н и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1ϋ6Α тяжелой цепи ЗС104 с прививкой СРЕ-Н1 согласно определению АЬМ, СРЕ-Н2 и СРЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 540Р, 564Е и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой СРЕ-Н1 согласно определению АЬМ, СРЕ-Н2 и СРЕ-НЗ согласно определению Кабата, содержащая замены 340Р, 364Е и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1ϋ6Α тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены 327Υ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71Е.

Аминокислотная последовательность химерной тяжелой цепи ЗС104 с мышиной вариабельной областью и остовом 1дС1 человека (домены СН1, шарнира, СН2 и СНЗ тяжелой цепи 1дС1 человека), содержащая замену Ν60Ρ.

Константная область тяжелой цепи, содержащая шарнир, домены СН1, СН2 и СНЗ.

Константная область тяжелой цепи, содержащая шарнир, домены СН1, СН2 и СНЗ и содержащая аминокислотные замены 51220, 5181А, Ι215Ε. Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи 5С104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены С27У, Ι29Α, ТЗОЗ, 540Р, 364К и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены С27У, 129С, ТЗОЗ, 540Р, 364К и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1ϋ6Α тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, Ι29Ρ, ТЗОЗ, 540Р, 364К и У71К.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, Ι29Ε, ТЗОЗ, 540Р, 364К и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1Ч6А тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, Ι29Ε, ТЗОЗ, 540Р, 364К и У71Е.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены С27У, 129С, ТЗОЗ, 540Р, 364К и У71К.

Полипептидная последовательность основанной на 1Ч6А тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, Ι29Η, ТЗОЗ, 540Р, 364К и У71Е.

- 36 024695

ЗЕО Ю N0:61:

ЗЕО Ю N0:62:

ЗЕО Ю N0:63:

ЗЕО Ю N0:64:

5Е<2 Ιϋ N0:65:

5Е<2 Ιϋ N0:66:

5Е<2 Ιϋ N0:67:

5Е<2 Ιϋ N0:68:

ЗЕО Ю N0:69:

ЗЕО Ю N0:70:

ЗЕО Ю N0:71:

ЗЕО Ю N0:72:

5Е<2 Ιϋ N0:73:

5Е<2 Ιϋ N0:74:

5Е<2 Ιϋ N0:75:

5Е<2 Ιϋ N0:76:

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, Ι29Κ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71К.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, 129Ь, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71К.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, Ι29Μ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71К.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, Ι29Ν, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71Р.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, Ι29Ρ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71Р.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, 1290, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71Р.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, 1293, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71Р.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, Ι29Τ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71К.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, 129У, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71К.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, Ι29Ν, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71К.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, Ι29Υ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71Р.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71А.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71С.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У7Ю.

Полипептидная последовательность основанной на 1ибА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению КаОата, содержащая замены С27У, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71Е.

- 37 024695

5Ε<2 Ιϋ N0:77: Полипептидная последовательность основанной на ΐυβΑ тяжелой цепи 5С104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, Т305, 540Р, 364К и У71Г.

5Е<2 Ιϋ N0:78: Полипептидная последовательность основанной на ΐυβΑ тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71С.

5Е<2 Ιϋ N0:79: Полипептидная последовательность основанной на ΐυβΑ тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71Н.

5Е<2 Ιϋ N0:80: Полипептидная последовательность основанной на ΐυβΑ тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У711.

ЗЕО Ю N0:81: Полипептидная последовательность основанной на ΐυβΑ тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71К.

ЗЕО Ю N0:82: Полипептидная последовательность основанной на ΐυβΑ тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71Ь.

ЗЕО Ю N0:83: Полипептидная последовательность основанной на ΐυβΑ тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71М.

ЗЕО Ю N0:84: Полипептидная последовательность основанной на ΐυβΑ тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и ν71Ν.

$Εζ) Ю N0:35: Полипептидная последовательность основанной на ΙϋδΑ тяжелой цепи 5С104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены 027Υ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и ν71Ρ.

ЗЕО Ю N0:86: Полипептидная последовательность основанной на

1ϋ6Α тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены 027Υ, ТЗОЗ, 840Р, 364К и ν710.

5Е£> Ю N0:87: Полипептидная последовательность основанной на 1ϋ6Α тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены 027Υ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и ν713.

ЗЕО Ю N0:33: Полипептидная последовательность основанной на ЮЗА тяжелой цепи $0104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, ТЗОЗ, 540Р, 864К и ν71Τ.

5Εζ> Ю N0:89: Полипептидная последовательность основанной на

ЮбА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, ТЗОЗ, 540Р, 564К и ν?ΐν.

3Εζ) Ιϋ N0:90: Полипептидная последовательность основанной на ЮбА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, ТЗОЗ, 540Р, 564К и ν?1Μ.

5Εζ) Ю N0:91: Полипептидная последовательность основанной на ЮбА тяжелой цепи 5С104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены Ο27Υ, ТЗОЗ, 540Р, 564К и ν71Υ.

5Εζ) Ιϋ N0:92: Константная область тяжелой цепи, содержащая шарнир, домены СН1, СН2 и СНЗ.

5Е<2 ΙΏ N0:93: Константный домен легкой цепи.

ЗЕО Ю N0:94: Полипептидная последовательность основанной на ЮбА тяжелой цепи ЗС104 с прививкой согласно определению Кабата, содержащая замены 027Υ, ТЗОЗ, 340Р, 364К и У71К.

- 38 024695

Список последовательностей <110> СерЬа1оп АизЬгаЫа РЬу ЬЬб <120> ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИТЕЛА С ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ <130> 30917337/ΝσΡ <140> из 12/725,192 <141> 2010-03-16 <150> из 61/160,682 <151> 2009-03-16 <150> АО 2009901129 <151> 2009-03-16 <150> из 61/258,517 <151> 2009-11-05 <160> 225 <170> РаЬепЫп νβτβίοη 3.5 <210> 1 <211> 120 <212> БЕЛОК <213> Миз тизси1из <400> 1

Азр Уа1 С1п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго Азр Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п 15 10 15

Зег Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 ТЬг О1у Туг Зег Не ТЬг Зег О1у 20 25 30

Туг Зег Тгр ΗΪ5 Тгр Уа1 Агд С1п РЬе Рго С1у Азп Ьуз МеЬ С1и Тгр 35 40 45

МеЕ О1у ΗΪ3 11е Шз РЬе Зег О1у Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

Зег Зег Агд 11е Зег 11е ТЬг Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе Ьеи 65 70 75 80

Ьеи С1п Ьеи Ьуз РЬе Уа1 ТЬг ТЬг С1и Азр ТЬг Зег ТЬг Туг РЬе Суз 85 90 95

А1а Агд Ьуз О1у Ьуз О1у Зег Азр Азр О1у Ьеи Азп Туг Тгр О1у О1п 100 105 110

С1у 11е Зег Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 120 <210> 2 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 2

Зег Ьеи Зег Леи ТЬг Суз ТЬг Уа1 ТЬг О1у Туг Зег 11е ТЬг Зег С1у 20 25 30

МеЬ С1у ΗΪ5 11е ΗΪ5 РЬе Зег С1у Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи

55 60

2ег Зег Агд 11е Зег 11е ТЬг Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе Ьеи 65 70 75 80

Ьеи С1п Ьеи Ьуз РЬе 1/а1 ТЬг ТЬг С1и Азр ТЬг Зег ТЬг Туг РЬе Суз 85 90 95

А1а Агд Ьуз О1у Ьуз 01у Зег Азр Азр О1у Ьеи Азп Туг Тгр С1у С1п 100 105 110

С1у 11е Зег Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз Азл Рго Азр \/аХ 115 120 125

РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а 130 135 140

Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 ΗΪ5 ТЬг РЬе Рго А1а \/а1 165 170 175

Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп 1/а1 Азп Шз Ьуз 195 200 205

Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр 210 215 220

З9

Ьуз ТЬг ΗΪ5 ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи С1у С1у 225 230 235 240

Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ Не 245 250 255

Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Ηί5 С1и 260 265 270

Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи ΗΪ5 С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз 305 310 315 320

Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг 340 345 350

ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1п Уа1 Зег Ьеи 355 360 365

ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 С1и Тгр 370 375 380

С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 385 390 395 400

Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр 405 410 415

Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ ΗΪ5 420 425 430

С1и А1а Ьеи Шз Азп Шз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

С1у Ьуз 450 <210> 3 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Миз тизси1из <400> 3

С1и Азп Уа1 Ьеи ТЬг С1п Зег Рго Уа1 11е МеЬ Зег А1а Зег Рго С1у

С1и Ьуз Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг Суз Зег А1а Зег Зег Зег Ьеи Зег Туг 11е

ΗΪ5 Тгр Туг С1п С1п Ьуз Зег Агд ТЬг Зег Рго Ьуз Ьеи Тгр 11е Туг

Азр ТЬг Зег Азп Беи А1а Зег С1у Уа1 Рго С1у Агд РЬе Зег С1у Зег

61у Зег 61у Азп Зег Туг Зег Ьеи ТЬг 11е Зег Зег МеЬ (31и А1а С1и

Азр Уа1 А1а ТЬг Туг Туг Суз РЬе С1п С1у Зег С1и Туг Рго Беи ТЬг

РЬе С1у С1у С1у ТЬг Буз Беи С1и МеЬ ТЬг Агд 100 105 <210> 4 <211> 213 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 4

С1и Азп Уа1 Беи ТЬг С1п Зег Рго Уа1 11е МеЬ Зег А1а Зег Рго С1у

С1и Буз Уа1 ТЬг МеЬ ТЬг Суз Зег А1а Зег Зег Зег Беи Зег Туг 11е

Шз Тгр Туг С1п С1п Буз Зег Агд ТЬг Зег Рго Буз Беи Тгр 11е Туг

Азр ТЬг Зег Азп Беи А1а Зег 61у Уа1 Рго 61у Агд РЬе Зег 61у Зег

С1у Зег С1у Азп Зег Туг Зег Беи ТЬг 11е Зег Зег МеЬ <31и А1а СБи

- 40 024695 <210> 5 <211> 19 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 5

МеС. С1и Тгр 5ег Тгр Уа1 РЬе Беи РЬе РЬе Беи 5ег Уа1 ТЬг ТЬг С1у

Уа1 ΗΪ3 Бег <210> 6 <211> 20 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 6

МеС. 5ег Уа1 Его ТЪг С1п Уа1 Беи С1у Беи Беи Беи Беи Тгр Беи ТЪг

- 41 024695

Суз С1и Ча1 ТЬг НЬз С1п С1у Ьеи Зег Зег Рго Ча1 ТЬг Ьуз Зег РЬе 195 200 205 <210> 8 <211> 213 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 8

С1и Не Ча1 Ьеи ТЬг С1п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у

СЬи Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суз Зег А1а Зег Зег Зег Ьеи Зег Туг 11е

ΗΪ3 Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи 11е Туг

Азр ТЬг Зег Азп Ьеи А1а Зег С1у 11е Рго Азр Агд РЬе Зег С1у Зег

СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Агд Ьеи СЬи Рго СЬи

Азр РЬе А1а Ча1 Туг Туг Суз РЬе С1п С1у Зег С1и Туг Рго Ьеи ТЬг

РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз Ча1 СЬи 11е Ьуз Агд ТЬг Ча1 А1а А1а Рго 100 105 110

Зег Ча1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр СЬи СЬп Ьеи Ьуз Зег СЬу ТЬг 115 120 125

Зег Ча1 ТЬг С1и С1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег 165 170 175

ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз АЬа Азр Туг СЬи Ьуз Шз Ьуз Ча1 Туг АЬа 180 185 190

Суз СЬи Уа1 ТЬг Шз СЬп СЬу Ьеи Зег Зег Рго Ча1 ТЬг Ьуз Зег РЬе 195 200 205

Азп Агд СЬу СЬи Суз 210 <210> 9 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело

С1п Ча! С1п Ьеи С1п СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи Ча! Ьуз Рго Зег СЬи 15 10 15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Ча1 Зег СЬу СЬу Зег Не Зег Зег СЬу 20 25 30

Туг Зег Тгр ΗΪ5 Тгр 11е Агд СЬп Зег Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи С1п Тгр

11е СЬу Шз 11е Шз РЬе Зег СЬу Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи

Зег Зег Агд Ча1 ТЬг 11е Зег Ча1 С1и ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе Зег

Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг АЬа АЬа Азр ТЬг А1а Ча! Туг Туг Суз

А1а Агд Ьуз СЬу ьуз СЬу Зег Азр Азр С1у ьеи Азп Туг Тгр СЬу СЬп 100 105 110

СЬу ТЬг Ьеи Ча1 ТЬг Ча1 Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз Азп Рго Азр Ча1 115 120 125

РЬе Рго Ьеи АЬа Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег СЬу СЬу ТЬг АЬа АЬа 130 135 140

Ьеи СЬу Суз Ьеи Ча1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго СЬи Рго Ча1 ТЬг Ча1 Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег СЬу А!а Ьеи ТЬг Зег СЬу Ча1 НЬз ТЬг РЬе Рго А!а Ча1 165 170 175

- 42 024695

- 43 024695

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп ΗΪ5 Ьуз 195 200 205

Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег №з С1и 260 265 270

Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Шз 275 280 285

Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и <31п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд 290 295 300

Уа1 1/а1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Ηί5 С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз 305 310 315 320

Ьуз ТЬг Не Зег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Уа1 Туг 340 345 350

ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е АЬа Уа1 СЬи Тгр 370 375 380

Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Ηί5 420 425 430 <210> 11 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 11

С1п Уа1 С1п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1и

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Зег С1у Туг Зег 11е ТЬг Зег <31у

Туг Зег Тгр ΗΪ5 Тгр 11е Агд С1п Зег Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1п Тгр 35 40 45

II© 01у Н1§ 11е Ήί§ РЬе Зег СЬу Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

Зег Зег Агд νβΐ ТЬг 11е Зег Уа1 С1и ТЬг А1а Ьуз Азл 61п РЬе Зег

Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз

АЬа Агд Ьуз 01у Ьуз 01у Зег Азр Азр 01у Ьеи Азп Туг Тгр (31у <31п 100 105 110

С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз Азп Рго Азр Уа1 115 120 125

РЬе Рго Ьеи АЬа Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у О1у ТЬг АЬа АЬа 130 135 140

Ьеи 61у Суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго УаЬ ТЬг Уа1 Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег С1у АЬа Ьеи ТЬг Зег СЬу Уа1 ΗΪ5 ТЬг РЬе Рго АЬа 7а1 165 170 175

Ьеи С1п Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег \/а1 7а1 ТЬг УаЬ Рго 180 185 190

- 44 024695

Бег Бег Бег Беи СБу ТЪг СБп ТЪг Туг Не Суз Азп УаБ Азп НБз Буз 195 200 205

Рго Бег Азп ТЪг Буз УаБ Азр Буз Буз УаБ СБи Рго Буз Бег Суз Азр

210 215 220

Буз ТЪг НБз ТЪг Суз Рго Рго Суз Рго АБа Рго СБи Беи Беи СБу СБу 225 230 235 240

Рго Бег УаБ РЪе Беи РЪе Рго Рго Буз Рго Буз Азр ТЪг Беи Ме£ 1Бе 245 250 255

Бег Агд ТЪг Рго СБи УаБ ТЪг Суз УаБ УаБ УаБ Азр УаБ Бег ΗΪ3 СБи

260 265 270

Азр Рго СБи УаБ Буз РЪе Азп Тгр Туг УаБ Азр СБу УаБ СБи УаБ НБз 275 280 285

Азп АБа Буз ТЪг Буз Рго Агд СБи СБи СБп Туг Азп Бег ТЪг Туг Агд

290 295 300

УаБ УаБ Бег УаБ Беи ТЪг УаБ Беи НБз СБп Азр Тгр Беи Азп СБу Буз 305 310 315 320

СБи Туг Буз Суз Буз УаБ Бег Азп Буз АБа Беи Рго АБа Рго 11е СБи 325 330 335

Буз ТЪг Не Бег Буз А1а Буз СБу СБп Рго Агд СБи Рго СБп УаБ Туг 340 345 350

ТЪг Беи Рго Рго Бег Агд Азр СБи Беи ТЪг Буз Азп СБп УаБ Бег Беи 355 360 365

ТЪг Суз Беи УаБ Буз СБу РЪе Туг Рго Бег Азр 11е АБа УаБ СБи Тгр 370 375 380

СБи Бег Азп СБу СБп Рго СБи Азп Азп Туг Буз ТЪг ТЪг Рго Рго УаБ

385 390 395 400

Беи Азр Зег Азр СБу Зег РЪе РЪе Беи Туг Зег Буз Беи ТЪг УаБ Азр 405 410 415

Буз Зег Агд Тгр СБп СБп СБу Азп УаБ РЪе Зег Суз Зег УаБ МеС. НБз 420 425 430

СБи АБа Беи НБз Азп НБз Туг ТЪг СБп Буз 5ег Беи Зег Беи Зег Рго 435 440 445

СБу Буз 450 <210> 12 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 12

СБи УаБ СБп Беи СБп СБп Тгр СБу АБа СБу Беи Беи Буз Рго Зег СБи 15 10 15

ТЪг Беи Зег Беи ТЪг Суз АБа УаБ Туг СБу Туг Зег Не ТЪг Зег СБу 20 25 30

Туг Зег Тгр НБз Тгр Не Агд СБп Рго Рго СБу Буз СБу Беи СБи Тгр 35 40 45

Не СБу НБз Не НБз РЪе Зег СБу Агд Рго ТЪг Туг Азп Рго Зег Беи 50 55 60

Зег Зег Агд УаБ ТЪг Не Зег УаБ Азр ТЪг Зег Буз Азп СБп РЪе Зег 65 70 75 80

Беи Буз Беи Зег Зег УаБ ТЪг АБа АБа Азр ТЪг АБа УаБ Туг Туг Суз 85 90 95

АБа Агд Буз СБу Буз СБу Зег Азр Азр СБу Беи Азп Туг Тгр СБу СБп 100 105 110

СБу ТЪг Беи УаБ ТЪг УаБ Зег Зег АБа Зег ТЪг Буз Азп Рго Азр УаБ 115 120 125

РЪе Рго Беи АБа Рго Зег Зег Буз Зег ТЪг Зег СБу СБу ТЪг АБа АБа 130 135 140

Беи СБу Суз Беи УаБ Буз Азр Туг РЪе Рго СБи Рго УаБ ТЪг УаБ Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег СБу АБа Беи ТЪг Зег СБу УаБ НБз ТЪг РЪе Рго АБа УаБ 165 170 175

Беи СБп Зег Зег СБу Беи Туг Зег Беи Зег Зег УаБ УаБ ТЪг УаБ Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Беи СБу ТЪг СБп ТЪг Туг Не Суз Азп УаБ Азп НБз Буз 195 200 205

- 45 024695

Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго ОЬи Ьеи Ьеи ОЬу ОЬу

225 230 235 240

Рго Зег УаЬ РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеС Не 245 250 255

Зег Агд ТЬг Рго ОЬи УаЬ ТЬг Суз УаЬ УаЬ УаЬ Азр УаЬ Зег НЬз ОЬи 260 265 270

Азр Рго ОЬи УаЬ Ьуз РЬе Азп Тгр Туг УаЬ Азр ОЬу УаЬ ОЬи УаЬ ΗΪ3 275 280 285

Азп АЬа Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд ОЬи ОЬи ОЬп Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд 290 295 300

УаЬ ФаЬ Зег УаЬ Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи НЬз ОЬп Азр Тгр Ьеи Азп ОЬу Ьуз 305 310 315 320

ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр ОЬи Ьеи ТЬг Ьуз Азп ОЬп УаЬ Зег Ьеи 355 360 365

ОЬи Зег Азп ОЬу ОЬп Рго ОЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ 385 390 395 400

Ьеи Азр Зег Азр ОЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Азр 405 410 415

Ьуз Зег Агд Тгр ОЬп ОЬп ОЬу Азп УаЬ РЬе Зег Суз Зег УаЬ МеЬ НЬз 420 425 430

ОЬи АЬа Ьеи ΗΪ3 Азп ΗΪ3 Туг ТЬг ОЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445 <210> 13 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 13

Οίη УаЬ Οίη Ьеи ОЬп ОЬи Зег ОЬу Рго ОЬу Ьеи УаЬ Ьуз Рго Зег ОЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ Зег ОЬу Туг Зег 11е ТЬг Зег ОЬу

Туг Зег Тгр НЬз Тгр 11е Агд ОЬп Зег Рго С1у Ьуз ОЬу Ьеи СЬи Тгр

МеЬ ОЬу НЬз 1Ье НЬз РЬе Зег ОЬу Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи

Зег Зег Агд 11е Зег 11е Зег Агд Азр ТЬг А1а Ьуз Азп ОЬп РЬе Зег

Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг АЬа АЬа Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа Агд Ьуз ОЬу Ьуз О1у Зег Азр Азр ОЬу Ьеи Азп Туг Тгр ОЬу ОЬп 100 105 110

РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег О1у О1у ТЬг А1а А1а 130 135 140

Ьеи ОЬу Суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Туг РЬе Рго СЬи Рго УаЬ ТЬг Фа1 Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег О1у АЬа Ьеи ТЬг Зег О1у УаЬ Низ ТЬг РЬе Рго АЬа УаЬ 165 170 175

Ьеи ОЬп Зег Зег ОЬу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЬг УаЬ Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Ьеи ОЬу ТЬг ОЬп ТЬг Туг 1Ье Суз Азп УаЬ Азп Низ Ьуз 195 200 205

- 46 024695

Ьуз ТЬг ΗΪ5 ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи С1у С1у

225 230 235 240

Зег Агд ТЬг Рго С1и Ча1 ТЬг Суз Ча1 Уа1 Уа1 Азр Ча1 Зег ΗΪ5 С1и 260 265 270

Азр Рго С1и Ча1 Ьуз РЬе Азп Ггр Туг Ча1 Азр С1у Ча1 С1и Ча1 ΗΪ5 275 280 285

Ча1 Ча1 Зег Ча1 Ьеи ТЬг Ча1 Ьеи ΗΪ5 С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз 305 310 315 320

С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е 61и 325 330 335

ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз 61у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1 61и Тгр 370 375 380

Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Ча1 РЬе Зег Суз Зег Ча1 МеЬ ΗΪ5 420 425 430

С1и А1а Ьеи ΗΪ5 Азп ΗΪ5 Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

- 47 024695

Ьуз ТЬг ΗΪ3 ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи СЬу С1у

225 230 235 240

Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр СЬу Уа1 С1и Уа1 ΗΪ3 275 280 285

Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд 290 295 300

Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи ΗΪ3 С1п Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз 305 310 315 320

СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго Не СЬи 325 330 335

Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз СЬу С1п Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Туг 340 345 350

СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ 385 390 395 400

Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Азр 405 410 415

СЬи А1а Ьеи ΗΪ3 Азп ΗΪ3 Туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

СЬу Ьуз 450 <210> 15 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 15

СЬп УаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи УаЬ Ьуз Рго Зег СЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ Зег СЬу СЬу Зег Не Зег Зег СЬу

Туг Зег Тгр ΗΪ3 Тгр Не Агд СЬп Зег Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр

МеЬ СЬу НЬз 11е НЬз РЬе Зег СЬу Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи

Зег Зег Агд ЬЬе Зег Не Зег Агд Азр ТЬг А1а Ьуз Азп СЬп РЬе Зег

А1а Агд Ьуз СЬу Ьуз СЬу Зег Азр Азр СЬу Ьеи Азп Туг Тгр СЬу СЬп 100 105 110

СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз Азп Рго Азр УаЬ 115 120 125

РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег СЬу СЬу ТЬг А1а А1а 130 135 140

Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Туг РЬе Рго СЬи Рго УаЬ ТЬг УаЬ 2ег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьеи ТЬг Зег СЬу УаЬ Ηί5 ТЬг РЬе Рго АЬа УаЬ 165 170 175

Ьеи СЬп Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЬг УаЬ Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг СЬп ТЬг Туг Не Суз Азп УаЬ Азп Низ Ьуз 195 200 205

Рго Зег Азп ТЬг Ьуз УаЬ Азр Ьуз Ьуз УаЬ СЬи Рго Ьуз Зег Суз Азр 210 215 220

- 48 024695

- 49 024695

- 50 024695 <220>

<223> Антитело <400> 18

С1и Азп Ча1 Ьеи ТЬг С1п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у 15 10 15

С1и Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суз 5ег А1а 5ег 5ег 5ег Ьеи Зег Туг Не 20 25 30

ΗΪ5 Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи 11е Туг 35 40 45

Азр ТЬг Зег Азп Ьеи А1а Зег С1у 11е Рго Азр Агд РЬе Зег С1у Зег 50 55 60

С1у Зег С1у Азп Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Агд Ьеи С1и Рго С1и 65 70 75 30

Азр РЬе А1а Ча! Туг Туг Суз РЬе С1п С1у Зег С1и Туг Рго Ьеи ТЬг 85 90 95

РЬе 01у 01у 01у ТЬг Ьуз Ча1 01и 11е Ьуз Агд ТЬг Ча1 А1а А1а Рго 100 105 110

Зег Ча1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег С1у ТЬг 115 120 125

А1а Зег Ча1 Ча1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и А1а Ьуз 130 135 140

Ча1 С1л Тгр Ьуз Ча1 Азр Азл А1а Ьеи С1л Зег С1у Азл Зег С1л С1и 145 150 155 160

Зег Ча1 ТЬг С1и С1л Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег Зег 165 170 175

ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг С1и Ьуз Шз Ьуз Ча1 Туг А1а 180 185 190

Суз С1и Ча1 ТЬг Шг С1л С1у Ьеи Зег Зег Рго Ча1 ТЬг Ьуз Зег РЬе 195 200 205

Азп Агд С1у С1и Суз 210 <210> 19 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 19

С1и Ча1 С1п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1и 15 10 15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Зег С1у Туг Зег 11е ТЬг Зег С1у 20 25 30

Туг Зег Тгр ΗΪ3 Тгр 11е Агд С1п Зег Рго С1у Ьуз 51у Ьеи С1и Тгр 35 40 45

11е С1у ΗΪ3 11е Шз РЬе Зег С1у Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

Зег Зег Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Уа1 С1и ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе Зег 65 70 75 80

Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а Агд Ьуз С1у Ьуз С1у Зег Азр Азр С1у Ьеи Азп Туг Тгр С1у С1п 100 105 110

РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у 01у ТЬг А1а А1а 130 135 140

Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго 7а1 ТЬг Уа1 Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 Низ ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 165 170 175

Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 7а1 ТЬг 7а1 Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп 7а1 Азп Шз Ьуз 195 200 205

Рго Зег Азп ТЬг Ьуз 7а1 Азр Ьуз Ьуз 7а1 С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр 210 215 220

- 51 024695

- 52 024695

- 53 024695

- 54 024695

Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег ΗΪ3 С1и 260 265 270

Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Ηίδ 275 280 285

Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и 61и 61п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд 290 295 300

Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Ηίδ 01п Азр Тгр Ьеи Азп 01у Ьуз 305 310 315 320

С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго Не С1и 325 330 335

Ьуз ТЬг 11е 5ег Ьуз А1а Ьуз С1у С1п Рго Агд 61и Рго С1п Уа1 Туг 340 345 350

ТЬг Суз Ьеи УаЬ Ьуз 61у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а УаЬ 61и Тгр 370 375 380

01и Зег Азп 01у 01п Рго 01и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 385 390 395 400

Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг УаХ Азр 405 410 415

Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Ηίδ 420 425 430

С1и А1а Ьеи Низ Азп Низ Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

С1у Ьуз 450 <210> 23 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 23

С1и Уа1 С1п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1и 15 10 15

Туг Зег Тгр ΗΪ3 Тгр 11е Агд С1п Зег Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1п Тгр 35 40 45

11е С1у ΗΪ5 11е Ηίδ РЬе Зег С1у Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

Зег Зег Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Агд С1и ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе Зег 65 70 75 80

Ьеи С1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 Ηίδ ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 165 170 175

Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Ηίδ Ьуз 195 200 205

Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е 245 250 255

- 56 024695

Азр Рго Θΐυ Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 ΗΪ3 275 280 285

Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд

290 295 300

Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Шз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз 305 310 315 320

Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе 8ег Суз Зег Уа1 МеЬ Ηίδ 420 425 430

С1и А1а Ьеи ΗΪ3 Азп ΗΪ3 Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

С1у Ьуз 450 <210> 25 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 25

С1п Уа1 С1п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1и 15 10 15

11е О1у ΗΪ3 11е ΗΪ8 РЬе Зег С1у Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

90 95

С1у ТЬг Ьеи 1/а1 ТЬг 5/а1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз Азп Рго Азр 1/а1

115 120 125

Ьеи 61у Суз Ьеи 1/а1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго 61и Рго Уа1 ТЬг \7а1 Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у 1/а1 Ηί5 ТЬг РЬе Рго А1а Да1 165 170 175

Ьеи С1п Зег Зег <31у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг 17а1 Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп 1/а1 Азп Ηίδ Ьуз 195 200 205

Рго Зег 1/а1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е 245 250 255

Зег Агд ТЬг Рго С1и Ча1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Ηίδ С1и 260 265 270

- 57 024695

Азр Рго СЬи Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр СЬу Уа1 ОЬи Уа1 Ηίδ 275 280 285

Азп АЬа Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд 290 295 300

УаЬ Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи НЬз ОЬп Азр Тгр Ьеи Азп ОЬу Ьуз 305 310 315 320

С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуг А1а Ьеи Рго АЬа Рго Не СЬи 325 330 335

Ьуз ТЬг Не Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд ОЬи Рго СЬп Уа1 Туг 340 345 350

ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр ОЬи Ьеи ТЬг Ьуз Азп ОЬп Уа1 Зег Ьеи 355 360 365

ТЬг Суз Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр 11е АЬа ЧаЬ С1и Тгр 370 375 380

ОЬи Зег Азп ОЬу ОЬп Рго ОЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 385 390 395 400

Ьеи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг УаЬ Азр 405 410 415

Ьуз Зег Агд Тгр С1п ОЬп С1у Азп УаЬ РЬе Зег Суз Зег Ча1 МеЬ НЬз 420 425 430

ОЬи А1а Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг ОЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

С1у Ьуз 450 <210> 26 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело

ОЬи Уа1 СЬп Ьеи СЬп ОЬп Тгр ОЬу АЬа ОЬу Ьеи Ьеи Ьуз Рго Зег ОЬи 15 10 15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз АЬа УаЬ Туг СЬу Туг Зег Не ТЬг Зег СЬу 20 25 30

Туг Зег Тгр НЬз Тгр 11е Агд СЬп Рго Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр

11е СЬу НЬз 11е НЬз РЬе Зег СЬу Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи

Зег Зег Агд УаЬ ТЬг 11е Зег Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп СЬп РЬе Зег

Ьеи Ьуз Ьеи Зег Зег УаЬ ТЬг АЬа АЬа Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз

АЬа Агд Ьуз СЬу Ьуз СЬу Зег Азр Азр СЬу Ьеи Азп Туг Тгр СЬу СЬп 100 105 110

Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Туг РЬе Рго СЬи Рго УаЬ ТЬг УаЬ Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьеи ТЬг Зег СЬу Уа1 НЬз ТЬг РЬе Рго АЬа Уа1 165 170 175

Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг СЬп ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп НЬз Ьуз 195 200 205

Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Уа1 СЬи Рго Ьуз Зег Суз Азр 210 215 220

Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго СЬи Ьеи Ьеи СЬу СЬу 225 230 235 240

Зег Агд ТЬг Рго СЬи УаЬ ТЬг Суз УаЬ УаЬ УаЬ Азр УаЬ Зег НЬз СЬи 260 265 270

Азр Рго СЬи Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр СЬу Уа1 СЬи Уа1 НЬз 275 280 285

- 58 024695

- 59 024695 <210> 28 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 28

С1п Ча! С1п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи Ча1 Ьуз Рго Зег С1и

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Ча! Зег О1у О1у Зег 11е Зег Зег О1у

Туг Зег Тгр ΗΪ5 Тгр 11е Агд С1п Зег Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1п Тгр

- б0 024695

- 61 024695

- 62 024695

СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз УаБ Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго АЬа Рго 11е СЬи ’ 325 330 335

Ьуз ТЪг Не Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаБ Туг 340 345 350

ТЪг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр СБи Ьеи ТЪг Ьуз Азп С1п УаБ Зег Ьеи 355 360 365

ТЪг Суз Ьеи УаБ Ьуз СБу РЪе Туг Рго Зег Азр 1Бе АЬа УаБ СБи Тгр 370 375 380

СБи Зег Азп СБу СБп Рго СБи Азп Азп Туг Ьуз ТЪг ТЪг Рго Рго УаБ 385 390 395 400

Ьеи Азр Зег Азр СБу Зег РЪе РЪе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЪг УаБ Азр 405 410 415

Ьуз Зег Агд Тгр СБп СБп СБу Азп УаБ РЪе Зег Суз Зег УаБ МеЬ НБз 420 425 430

СБи А1а Ьеи НБз Азп НБз Туг ТЪг СБп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

СЬу Ьуз 450 <210> 31 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 31

Азр УаБ СБп Ьеи СБп СБи Зег СБу Рго Азр Ьеи УаБ Ьуз Рго Зег СБп 15 10 15

Зег Ьеи Зег Ьеи ТЪг Суз ТЪг УаБ ТЪг СЬу Туг Зег 1Бе ТЪг Зег СЬу 20 25 30

Туг Зег Тгр НБз Тгр УаБ Агд СЬп РЪе Рго СЬу Азп Ьуз МеЬ СЬи Тгр 35 40 45

МеЬ СЬу НБз 1Бе НБз Туг Зег СЬу Агд Рго ТЪг Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

Зег Зег Агд Не Зег Не ТЪг Агд Азр ТЪг Зег Ьуз Азп СБп РЪе Ьеи 65 70 75 80

Ьеи СБп Ьеи Ьуз РЪе УаБ ТЪг ТЪг СБи Азр ТЪг Зег ТЪг Туг РЪе Суз 85 90 95

АБа Агд Ьуз СБу Ьуз СБу Зег Азр Азр СБу Ьеи Азп Туг Тгр СБу СБп 100 105 110

СБу 11е Зег УаБ ТЪг УаБ Зег Зег АБа Зег ТЪг Ьуз Азп Рго Азр УаБ 115 120 125

РЪе Рго Ьеи АБа Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЪг Зег СБу СБу ТЪг АБа АБа 130 135 140

Ьеи СБу Суз Ьеи УаБ Ьуз Азр Туг РЪе Рго СБи Рго УаБ ТЪг УаБ Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег СБу АБа Ьеи ТЪг Зег СБу УаБ НБз ТЪг РЪе Рго АБа УаБ 165 170 175

Ьеи СБп Зег Зег СБу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаБ УаБ ТЪг УаБ Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Ьеи СБу ТЪг СБп ТЪг Туг Не Суз Азп УаБ Азп НБз Ьуз 195 200 205

Рго Зег Азп ТЪг Ьуз УаБ Азр Ьуз Ьуз УаБ СБи Рго Ьуз Зег Суз Азр 210 215 220

Ьуз ТЪг НБз ТЪг Суз Рго Рго Суз Рго АБа Рго СБи Ьеи Ьеи СБу СБу 225 230 235 240

Рго Зег УаБ РЪе Ьеи РЪе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЪг Ьеи МеЬ 11е 245 250 255

Зег Агд ТЪг Рго СБи УаБ ТЪг Суз УаБ УаБ УаБ Азр УаБ Зег НБз СБи 260 265 270

Азр Рго СБи УаБ Ьуз РЪе Азп Тгр Туг УаБ Азр СБу УаБ СБи УаБ НБз 275 280 285

Азп АБа Ьуз ТЪг Ьуз Рго Агд СБи СБи СБп Туг Азп Зег ТЪг Туг Агд 290 295 300

УаБ УаБ Зег УаБ Ьеи ТЪг УаБ Ьеи НБз СБп Азр Тгр Ьеи Азп СБу Ьуз 305 310 315 320

- 64 024695 <210> 33 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 33

С1и Уа1 С1п Ьеи С1п С1п Тгр С1у А1а С1у Ьеи Ьеи Ьуз Рго Зег С1и

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Уа1 Туг О1у Туг Зег 11е ТЬг Зег О1у

Туг Зег Тгр ΗΪ5 Тгр 11е Агд С1п Рго Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр

11е С1у ΗΪ5 11е ΗΪ5 РЬе Зег С1у Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи

Ьуз Зег Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе Зег

Ьеи Ьуз Ьеи Зег Зег Уа1 ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а ΥθΙ Туг Туг Суз

Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Ча1 С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр

- 65 024695 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 34

ОЬи Уа1 01п Ьеи 01η 01п Тгр 01у А1а <31у Ьеи Ьеи Ьуз Рго Зег ОЬи

Туг Зег Тгр Низ Тгр 11е Агд О1п Рго Рго О1у Ьуз 61у Ьеи С1и Тгр

11е <31у Нйз 11е Нйз РЬе Зег О1у Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи

Ьеи Зег Агд Уай ТЬг 11е Зег Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе Зег

Ьеи Ьуз Ьеи Зег Зег Уай ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уай Туг Туг Суз

Зег Агд ТЬг Рго С1и Уай ТЬг Суз Уай Уай Уай Азр Уай Зег Нйз С1и 260 265 270

- 66 024695

- 67 024695

- 68 024695

- 69 024695

Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 Мей ΗΪ5 420 425 430

С1и А1а Ьеи ΗΪ5 Азп ΗΪ5 Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445 <210> 38 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 38

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз А1а Уа1 Туг С1у Туг Зег Не Зег Зег С1у

Ьеи Ьуз Ьеи Зег Зег Уа1 ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз

Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 Шз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 165 170 175

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп НЬз Ьуз 195 200 205

Ьуз ТЬг ΗΪ3 ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи С1у С1у 225 230 235 240

Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 НЬз 275 280 285

Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Нхз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз 305 310 315 320

С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е С1и 325 330 335

ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр О1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи 355 360 365

- 70 024695

- 71 024695

- 72 024695

- 73 024695

Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг

Зег Ьуз Ьеи ТЬг

Ча1 415

Азр

405

410

Ьуз Зег

Агд Тгр

С1п

С1у

Азп

Ча!

РЬе

Зег

Суз

Зег

Ча1

МеЬ

Шз

420

425

430

СЬи АЬа

Ьеи Ηίδ

Азп

ΗΪ3

Туг

ТЬг

СЬп

Ьуз

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи

Зег

Рго

435

440

445

С1у Ьуз

450

<210>

42

<211>

450

<212>

БЕЛОК

<213>

Искусственная последовательность

<220> <223>

Антитело

<40 0>

42

С1п Ча1

С1п Ьеи

С1п

С1и

Зег

С1у

Рго

С1у

Ьеи

Ча!

Ьуз

Рго

Зег

С1и

1

5

10

15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг ЧаЬ Зег СЬу Туг Зег 11е ТЬг Зег СЬу 20 25 30

Туг Зег Тгр Ηίδ Тгр 11е Агд СЬп Зег Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬп Тгр 35 40 45

Не СЬу

НЬз

11е Низ

РЬе Зег СЬу 55

Агд Рго ТЬг

Туг Азп Рго 60

Зег

Ьеи

50

РЬе

Зег

Агд

Ча1

ТЬг

11е

Зег

Агд

С1и

ТЬг

А1а

Ьуз

Азп

С1п

РЬе

Зег

65

70

75

80

Ьеи

Ьуз

Ьеи

ТЬг

Зег

МеЬ

ТЬг

А1а

Азр

ТЬг

А1а

Ча!

Туг

Суз

85

90

95

С1у ТЬг Ьеи Ча1 ТЬг Ча1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз Азп Рго Азр Ча1 115 120 125

Ьеи С1у Суз Ьеи Ча1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Ча1 ТЬг Ча! Зег

145

150

155

160

Тгр

Азп

Зег

С1у

А1а

Ьеи

ТЬг

Зег

СЬу

Ча1

НЬз

ТЬг

РЬе

Рго

АЬа

ЧаЬ

165

170

175

Ьеи

С1п

Зег

С1у

Ьеи

Туг

Зег

Ьеи

Зег

ЧаЬ

ТЬг

ЧаЬ

Рго

180

185

190

Зег

Ьеи

СЬу

ТЬг

С1п

ТЬг

Туг

Не

Суз

Азп

ЧаЬ

Азп

НЬз

Ьуз

195

200

205

Рго

Зег

Азп

ТЬг

Ьуз

ЧаЬ

Азр

Ьуз

Ча1

СЬи

Ргс

Ьуз

Зег

Суз

Азр

210

215

220

Ьуз

ТЬг

ΗΪ5

ТЬг

Суз

Рго

Суз

Рго

А1а

Рго

СЬи

Ьеи

СЬу

225

230

235

240

Рго

Зег

Ча1

РЬе

Ьеи

РЬе

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТЬг

Ьеи

МеЬ

11е

245

250

255

Зег

Агд

ТЬг

Рго

СЬи

Ча1

ТЬг

Суз

Ча1

ЧаЬ

Азр

ЧаЬ

Зег

НЬз

СЬи

260

265

270

Азр

Рго

С1и

Ча1

Ьуз

РЬе

Азп

Тгр

Туг

Ча1

Азр

СЬу

Ча1

СЬи

Ча1

Низ

275

280

285

Азп

А1а

Ьуз

ТЬг

Ьуз

Рго

Агд

СЬи

С1и

С1п

Туг

Азп

Зег

ТЬг

Туг

Агд

290

295

300

Ча1

Зег

Ча1

Ьеи

ТЬг

Ча1

Ьеи

Низ

СЬп

Азр

Тгр

Ьеи

Азп

СЬу

Ьуз

305

310

315

320

СЬи

Туг

Ьуз

Суз

Ьуз

Ча1

Зег

Азп

Ьуз

АЬа

Ьеи

Рго

АЬа

Рго

11е

СЬи

325

330

335

Ьуз

ТЬг

11е

Зег

Ьуз

А1а

Ьуз

СЬу

С1п

Рго

Агд

СЬи

Рго

СЬп

Ча1

Туг

340

345

350

ТЬг

Ьеи

Рго

Зег

Агд

Азр

СЬи

Ьеи

ТЬг

Ьуз

Азп

СЬп

Ча1

Зег

Ьеи

355

360

365

ТЬг

Суз

Ьеи

Ча1

Ьуз

СЬу

РЬе

Туг

Рго

Зег

Азр

11е

АЬа

Ча1

СЬи

Тгр

370

375

380

СЬи

Зег

Азп

СЬу

СЬп

Рго

СЬи

Азп

Туг

Ьуз

ТЬг

Рго

ЧаЬ

385

390

395

400

Ьеи

Азр

Зег

Азр

С1у

Зег

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

Ьуз

Ьеи

ТЬг

ЧаЬ

Азр

405

410

415

Буз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Ча1 РЬе Зег Суз Зег Ча1 МеЬ ΗΪ5 420 425 430

С1и А1а Беи ΗΪ5 Азп ΗΪ5 Туг ТЬг С1п Буз Зег Беи Зег Беи Зег Рго 435 440 445

С1у Буз 450 <210> 43 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 43

С1п Ча! С1п Беи С1п С1и Зег С1у Рго С1у Беи Ча! Буз Рго Зег С1и

ТЬг Беи Зег Беи ТЬг Суз ТЬг Ча! Зег С1у Туг Зег 11е ТЬг Зег С1у

Туг Зег Тгр ΗΪ5 Тгр 11е Агд С1п Зег Рго С1у Буз С1у Беи С1п Тгр

11е С1у ΗΪ5 11е ΗΪ5 РЬе Зег С1у Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Беи

Агд Зег Агд Ча! ТЬг 11е Зег Агд С1и ТЬг А1а Буз Азп С1п РЬе Зег

Беи Буз Беи ТЬг Зег МеЬ ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Ча! Туг Туг Суз

С1у ТЬг Беи Ча! ТЬг Ча! Зег Зег А1а Зег ТЬг Буз Азп Рго Азр Ча! 115 120 125

РЬе Рго Беи А1а Рго Зег Зег Буз Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а 130 135 140

Тгр Азп Зег С1у А1а Беи ТЬг Зег С1у Ча1 Шз ТЬг РЬе Рго А1а Ча1 165 170 175

Беи С1п Зег Зег С1у Беи Туг Зег Беи Зег Зег Ча1 Ча1 ТЬг Ча1 Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Беи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Ча1 Азп Наг Буг 195 200 205

Рго Зег Азп ТЬг Буг Ча1 Азр Буз Буз Ча1 С1и Рго Буз Зег Суз Азр 210 215 220

Буз ТЬг Н1з ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и Беи Беи С1у С1у 225 230 235 240

Рго Зег Ча1 РЬе Беи РЬе Рго Рго Буз Рго Буз Азр ТЬг Беи МеЬ 11е 245 250 255

Зег Агд ТЬг Рго С1и Ча1 ТЬг Суз Ча1 Ча1 Ча1 Азр Ча1 Зег ΗΪ3 С1и 260 265 270

Азр Рго С1и Ча1 Буз РЬе Азп Тгр Туг Ча1 Азр С1у Ча1 С1и Ча1 Шз 275 280 285

Азп А1а Буз ТЬг Буз Рго Агд С1и С1и С1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд 290 295 300

Ча1 Ча1 Зег Ча1 Беи ТЬг Ча1 Беи ΗΪ3 С1п Азр Тгр Беи Азп С1у Буз 305 310 315 320

С1и Туг Буз Суз Буз Ча1 Зег Азп Буз А1а Беи Рго А1а Рго 11е С1и 325 330 335

Буз ТЬг 11е Зег Буз А1а Буз С1у С1п Рго Агд С1и Рго С1п Ча1 Туг 340 345 350

ТЬг Беи Рго Рго Зег Агд Азр С1и Беи ТЬг Буз Азп С1п Ча1 Зег Беи 355 360 365

ТЬг Суз Беи Ча1 Буз С1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Ча1 С1и Тгр 370 375 380

С1и Зег Азп С1у С1п Рго С1и Азп Азп Туг Буз ТЬг ТЬг Рго Рго Ча1 385 390 395 400

Беи Азр Зег Азр С1у Зег РЬе РЬе Беи Туг Зег Буз Беи ТЬг Ча1 Азр 405 410 415

- 75 024695

- 76 024695

- 77 024695

- 78 024695 <210> 47 <211> 450 <2Ь2> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 47

С1п УаЬ С1п Ьеи С1п СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи УаЬ Ьуз Рго Зег СЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ Зег СЬу Туг Зег 1Ье ТЬг Зег СЬу

Туг Зег Тгр НЬз Тгр 11е Агд С1п Рго Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи С1п Тгр

1Ье СЬу НЬз 1Ье НЬз РЬе Зег СЬу Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи

НЬз Зег Агд УаЬ ТЬг 11е Зег Агд СЬи ТЬг АЬа Ьуз Азп С1п РЬе Зег

Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг АЬа АЬа Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз

- 79 024695 <210> 48 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 48

С1п Уай С1п Ьеи С1п С1и Зег Сйу Рго Сйу Ьеи Уай Ьуз Рго Зег С1и

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уай Зег Сйу Туг Зег 11е ТЬг Зег Сйу

Туг Зег Тгр Нйз Тгр 11е Агд Сйп Рго Рго Сйу Ьуз Сйу Ьеи Сйп Тгр

11е Сйу Нйз 11е Нйз РЬе Зег Сйу Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи

РЬе Зег Агд Уай ТЬг 11е Зег Агд Сйи ТЬг Айа Ьуз Азп Сйп РЬе Зег

Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг Айа Айа Азр ТЬг Айа Уай Туг Туг Суз

- 80 024695 <210> 49 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 49

С1п Уа1 С1п Ьеи С1п С1и Зег СЬу Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1и

10 15

ТЬг Ьеи 8ег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 5ег С1у Туг Зег 11е ТЬг Зег С1у 20 25 30

Туг Зег Тгр Шз Тгр 11е Агд СЬп Рго Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬп Тгр 35 40 45

11е С1у Н:з 11е НЬз РЬе Зег СЬу Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

Агд Зег Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Агд О1и ТЬг АЬа Ьуз Азп С1п РЬе Зег 65 70 75 80

Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег МеЪ ТЬг АЬа АЬа Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз

90 95

АЬа Агд Ьуз С1у Ьуз С1у Зег Азр Азр С1у Ьеи Азп Туг Тгр С1у С1п 100 105 110

СЬу ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз Азп Рго Азр Уа1 115 120 125

Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго ОЬи Рго Уа1 ТЬг УаЬ Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 НЬз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 165 170 175

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп УаЬ Азп Н:з Ьуз 195 200 205

Ьуз ТЬг ΗΪ3 ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго С1и Ьеи Ьеи СЬу СЬу 225 230 235 240

Рго Зег УаЬ РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ Не 245 250 255

Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег НЬз С1и 260 265 270

Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр СЬу Уа1 С1и Уа1 НЬз 275 280 285

Азп АЬа Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и СЬп Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд 290 295 300

Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи НЬз СЬп Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз 305 310 315 320

С1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз АЬа Ьеи Рго АЬа Рго 11е С1и 325 330 335

Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд С1и Рго СЬп Уа1 Туг 340 345 350

ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр С1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп СЬп Уа1 Зег Ьеи 355 360 365

ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр Не АЬа Уа1 С1и Тгр 370 375 380

С1и Зег Азп СЬу СЬп Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 385 390 395 400

Ьуз Зег Агд Тгр СЬп СЬп СЬу Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ НЬз 420 425 430

С1и АЬа Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

СЬу Ьуз 450

- 82 024695 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 51

Азр Уа1 01п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго Азр Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1п

Зег Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 ТЬг С1у Туг Зег 11е ТЬг Зег С1у

Туг Зег Тгр ΗΪ3 Тгр Уа1 Агд С1п РЬе Рго С1у Азп Ьуз МеС. С1и Тгр

МеЬ С1у Шз 11е Шз РЬе Зег С1у Агд Рго ТЬг Туг Азр Рго Зег Ьеи

Зег Зег Агд 11е Зег 11е ТЬг Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе Ьеи

Ьеи С1п Ьеи Ьуз РЬе Уа1 ТЬг ТЬг С1и Азр ТЬг Зег ТЬг Туг РЬе Суз

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп ΗΪ3 Ьуз 195 200 205

Ьуз ТЬг НЬз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи С1у С1у 225 230 235 240

Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Нтз С1и 260 265 270

Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 ΗΪ3 275 280 285

Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд С1и С1и 61п Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд

290 295 300

Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЕ Шз 420 425 430

С1и А1а Ьеи ΗΪ3 Азп Нтз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

С1у Ьуз 450 <210> 52 <211> 330 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз

- 8З 024695 <400> 52

АЬа Зег ТЬг Ьуз Азп Рго Азр УаЬ РЬе Рго Ьеи АЬа Рго Зег Зег Ьуз

Зег ТЬг Зег СЬу СЬу ТЬг АЬа АЬа Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Туг

РЬе Рго СЬи Рго УаЬ ТЬг УаЬ Зег Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьеи ТЬг Зег

СЬу УаЬ НЬз ТЬг РЬе Рго АЬа УаЬ Ьеи СЬп Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег

Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЬг УаЬ Рго Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг СЬп ТЬг

Туг 11е Суз Азп УаЬ Азп НЬз Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз УаЬ Азр Ьуз

Ьеи ТЬг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг

- 84 024695 <210> 54 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 54

СЬп Уа1 СЬп Ьеи СЬп СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег СЬи

- 85 024695

Азп АЬа Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд СЬи СЬи СЬп Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд 290 295 300

Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи НЬз С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз 305 310 315 320

СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго Не СЬи 325 330 335

Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз А1а Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп Уа1 Туг 340 345 350

ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр 11е АЬа Уа1 СЬи Тгр 370 375 380

Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр 405 410 415

Ьуз Зег Агд Тгр СЬп СЬп СЬу Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Ηίδ 420 425 430

С1и А1а Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

СЬу Ьуз 450 <210> 55 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 55

10 15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Зег СЬу Туг Зег Суз Зег Зег СЬу 20 25 30

Туг Зег Тгр ΗΪ5 Тгр 11е Агд С1п Рго Рго С1у Ьуз СЬу Ьеи С1п Тгр 35 40 45

11е 61у ΗΪ5 11е Ηίδ РЬе Зег С1у Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи

55 60

Ьуз Зег Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Агд СЬи ТЬг А1а Ьуз Азп СЬп РЬе Зег 65 70 75 80

Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег Мер ТЬг А1а АЬа Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа Агд Туз СЬу Ьуз СЬу Зег Азр Азр СЬу Ьеи Азп Туг Тгр СЬу СЬп 100 105 110

С1у ТЬг Ьеи \/а1 ТЬг 1/а1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуэ Азп Рго Азр 7а1

115 120 125

РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег С1у С1у ТЬг АЬа АЬа 130 135 140

Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Туг РЬе Рго СЬи Рго 17а1 ТЬг Уа1 Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег С1у АЬа Ьеи ТЬг Зег СЬу Уа1 Ыз ТЬг РЬе Рго АЬа УаЬ Ь65 Ь70 Ь75

Ьеи СЬп Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ 77аЬ ТЬг \ГаЬ Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Ьеи 61у ТЬг СЬп ТЬг Туг 11е Суз Азп УаЬ Азп НЬз Ьуз 195 200 205

Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Мер 11е 245 250 255

Зег Агд ТЬг Рго СЬи УаЬ ТЬг Суз УаЬ УаЬ УаЬ Азр Уа1 Зег НЬз СЬи 260 265 270

Азр Рго СЬи Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 СЬи Уа1 Ηίδ 275 280 285

- 86 024695 <210> 56 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 56

СЬп Уа1 СЬп Ьеи СЬп СЬи 5ег СЬу Рго СЬу Ьеи Уа1 Ьуз Рго 5ег СЬи

ТЪг Ьеи 5ег Ьеи ТЪг Суз ТЪг Уа1 5ег СЬу Туг 5ег Азр 5ег 5ег СЬу

- 87 024695

- 88 024695

Ьеи

Зег

СуЗ

С1п

Уай

А1а

Зег

160

Уа1

Рго

Ьуз

Азр

Сйу

240

Не

С1и

Нйз

Агд

- 89 024695

- 90 024695

- 91 024695

СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз АЬа Ьеи Рго АЬа Рго 11е СЬи 325 330 335

Ьуз ТЬг ЬЬе Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Туг 340 345 350

ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр СЬи Ьеи ТЬг Ьуз Азп СЬп 7аЬ Зег Ьеи 355 360 365

ТЬг Суз Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр ЬЬе АЬа УаЬ СЬи Тгр 370 375 380

Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг 7аЬ Азр 405 4Ь0 4Ь5

Ьуз Зег Агд Тгр СЬп СЬп СЬу Азп '/аЬ РЬе Зег Суз Зег УаЬ МеЬ НЬз 420 425 430

СЬи АЬа Ьеи НЬз Азп НЬз Туг ТЬг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

СЬу Ьуз 450 <2Ь0> 6Ь <2ЬЬ> 450 <212> БЕЛОК <2ЬЗ> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 6Ь

СЬп УаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи УаЬ Ьуз Рго Зег СЬи Ь 5 ЬО Ь5

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг 7аЬ Зег СЬу Туг Зег Ьуз Зег Зег СЬу 20 25 30

Туг Зег Тгр НЬз Тгр ЬЬе Агд СЬп Рго Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬп Тгр 35 40 45

ЬЬе СЬу НЬз ЬЬе НЬз РЬе Зег СЬу Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

Ьуз Зег Агд УаЬ ТЬг ЬЬе Зег Агд СЬи ТЬг АЬа Ьуз Азп СЬп РЬе Зег 65 70 75 80

Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг АЬа АЬа Азр ТЬг АЬа 7аЬ Туг Туг Суз 85 90 95

АЬа Агд Ьуз 61у Ьуз 61у Зег Азр Азр 61у Ьеи Азп Туг Тгр 61у 61п 100 105 110

СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг УаЬ Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз Азп Рго Азр УаЬ 115 120 125

РЬе Рго Ьеи АЬа Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег СЬу СЬу ТЬг АЬа АЬа ЬЗО Ь35 Ь40

Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьеи ТЬг Зег СЬу 7аЬ НЬз ТЬг РЬе Рго АЬа 7аЬ Ь65 Ь70 Ь75

Ьеи СЬп Зег Зег СЬу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег 7аЬ 7аЬ ТЬг 7аЬ Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг СЬп ТЬг Туг 1Ье Суз Азп УаЬ Азп НЬз Ьуз 195 200 205

Рго Зег Азп ТЬг Ьуз 7аЬ Азр Ьуз Ьуз 7аЬ СЬи Рго Ьуз Зег Суз Азр 2Ь0 2Ь5 220

Рго Зег 7аЬ РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 1Ье 245 250 255

Зег Агд ТЬг Рго СЬи 7аЬ ТЬг Суз 7аЬ 7аЬ 7аЬ Азр 7аЬ Зег НЬз СЬи 260 265 270

Азр Рго СЬи УаЬ Ьуз РЬе Азп Тгр Туг УаЬ Азр СЬу УаЬ СЬи УаЬ НЬз 275 280 285

УаЬ УаЬ Зег УаЬ Ьеи ТЬг УаЬ Ьеи НЬз СЬп Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз 305 310 315 320

СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз 7аЬ Зег Азп Ьуз АЬа Ьеи Рго АЬа Рго 1Ье СЬи 325 330 335

- 92 024695 <210> 62 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 62

С1п Уа1 С1п Ьеи С1п СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег СЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ Зег СЬу Туг Зег Ьеи Зег Зег СЬу

Туг Зег Тгр НЬз Тгр 11е Агд СЬп Рго Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬп Тгр

Ьуз Зег Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Агд СЬи ТЬг АЬа Ьуз Азп СЬп РЬе Зег 65 70 75 30

Ьеи ьуз ьеи ТЬг зег Ме1; ТЬг АЬа АЬа Азр ТЬг АЬа УаЬ туг туг Суз

СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг \Га1 Зег Зег АЬа Зег ТЬг Ьуз Азп Рго Азр УаЬ 115 120 125

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг СЬп ТЬг Туг 11е Суз Азп УаЬ Азп НЬз Ьуз 195 200 205

Зег Агд ТЬг Рго 61и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег НЬз 61и 260 265 270

Азр Рго С1и УаЬ Ьуз РЬе Азп Тгр Туг УаЬ Азр 61у УаЬ СЬи УаЬ НЬз 275 280 285

- 93 024695

- 94 024695

- 95 024695

- 96 024695

ТЬг Суз

Ьеи

УаЬ Ьуз

СЬу РЬе 375

Туг Рго Зег

Азр

1Ье АЬа 380

Уа1 СЬи Тгр

370

СЬи

Зег

Азп

СЬу

СЬп

Рго

СЬи

Азп

Туг

Ьуз

ТЬг

Рго

УаЬ

335

390

395

400

Ьеи

Азр

Зег

Азр

СЬу

Зег

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

Ьуз

Ьеи

ТЬг

УаЬ

Азр

405

410

415

Ьуз

Зег

Агд

Тгр

СЬп

СЬу

Азп

УаЬ

РЬе

Зег

Суз

Зег

Уа1

МеЬ

НЬз

420

425

430

СЬи

АЬа

Ьеи

НЬз

Азп

НЬз

Туг

ТЬг

СЬп

Ьуз

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи

Зег

Рго

435 440 445

СЬу Ьуз 450 <210> 66 <211> 450 <212> БЕЛОК

<213> Искусственная

: последовательность

<220>

<223> Антитело

<400> 66

СЬп УаЬ СЬп

Ьеи

СЬп

СЬи

Зег

СЬу

Рго

СЬу

Ьеи

УаЬ

Ьуз

Рго

Зег

СЬи

1

5

10

15

ТЬг Ьеи Зег

Ьеи

ТЬг

Суз

ТЬг

УаЬ

Зег

СЬу

Туг

Зег

СЬп

Зег

СЬу

20

25

30

Туг Зег Тгр

НЬз

Тгр

11е

Агд

СЬп

Рго

СЬу

Ьуз

СЬу

Ьеи

СЬп

Тгр

35

40

45

Не СЬу НЬз

Не

НЬз

РЬе

Зег

еьу

Агд

Рго

ТЬг

Туг

Азп

Рго

Зег

Ьеи

50

55

60

Ьуз Зег Агд

УаЬ

ТЬг

Не

Зег

Агд

СЬи

ТЬг

АЬа

Ьуз

Азп

СЬп

РЬе

Зег

65

70

75

80

Ьеи Ьуз Ьеи

ТЬг

Зег

МеЬ

ТЬг

АЬа

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Суз

85

90

95

АЬа Агд Ьуз

СЬу

Ьуз

СЬу

Зег

Азр

СЬу

Ьеи

Азп

Туг

Тгр

СЬу

СЬп

100

105

110

СЬу ТЬг Ьеи

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

АЬа

Зег

ТЬг

Ьуз

Азп

Рго

Азр

УаЬ

115

120

125

РЬе Рго Ьеи

АЬа

Рго

Зег

Ьуз

Зег

ТЬг

Зег

СЬу

ТЬг

АЬа

ьзо

135

140

Ьеи СЬу Суз

Ьеи

УаЬ

Ьуз

Азр

Туг

РЬе

Рго

СЬи

Рго

УаЬ

ТЬг

УаЬ

Зег

Ь 4 5

150

155

160

Тгр Азп Зег

СЬу

АЬа

Ьеи

ТЬг

Зег

СЬу

Уаь

НЬз

ТЬг

РЬе

Рго

АЬа

УаЬ

165

170

175

Ьеи СЬп Зег

Зег

СЬу

Ьеи

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Уаь

ТЬг

Уаь

Рго

180

185

190

Зег Зег Зег

Ьеи

СЬу

ТЬг

СЬп

ТЬг

Туг

Не

Суз

Азп

УаЬ

Азп

НЬз

Ьуз

195

200

205

Рго Зег Азп

ТЬг

Ьуз

УаЬ

Азр

Ьуз

Уаь

СЬи

Рго

Ьуз

Зег

Суз

Азр

210

215

220

Ьуз ТЬг НЬз

ТЬг

Суз

Рго

Суз

Рго

АЬа

Рго

СЬи

Ьеи

СЬу

225

230

235

240

Рго Зег УаЬ

РЬе

Ьеи

РЬе

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТЬг

Ьеи

МеЬ

Не

245

250

255

Зег Агд ТЬг

Рго

СЬи

УаЬ

ТЬг

Суз

Уаь

Азр

Уаь

Зег

НЬз

СЬи

260

265

270

Азр Рго СЬи

УаЬ

Ьуз

РЬе

Азп

Тгр

Туг

УаЬ

Азр

СЬу

УаЬ

СЬи

УаЬ

НЬз

275

280

285

Азп АЬа Ьуз

ТЬг

Ьуз

Рго

Агд

СЬи

СЬп

Туг

Азп

Зег

ТЬг

Туг

Агд

290

295

300

УаЬ УаЬ Зег

УаЬ

Ьеи

ТЬг

УаЬ

Ьеи

НЬз

СЬп

Азр

Тгр

Ьеи

Азп

СЬу

Ьуз

305

310

315

320

СЬи Туг Ьуз

Суз

Ьуз

УаЬ

Зег

Азп

Ьуз

АЬа

Ьеи

Рго

АЬа

Рго

Не

СЬи

325

330

335

Ьуз ТЬг 11е

Зег

Ьуз

АЬа

Ьуз

СЬу

СЬп

Рго

Агд

СЬи

Рго

СЬп

Уаь

Туг

340

345

350

ТЬг Ьеи Рго

Рго

Зег

Агд

Азр

СЬи

Ьеи

ТЬг

Ьуз

Азп

СЬп

УаЬ

Зег

Ьеи

355

360

365

- 98 024695

- 99 024695

- 100 024695

Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЪе РЪе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЪг УаЬ Азр 405 410 415

Ьуз Зег Агд Тгр С1п СЬп СЬу Азп УаБ РЪе Зег Суз Зег УаБ МеЪ НБз 420 425 430

СЬи А1а Ьеи НБз Азп НБз Туг ТЪг СЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

СЬу Ьуз 450 <210> 70 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 70

СЬп УаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи УаЬ Ьуз Рго Зег СЬи 15 10 15

ТЪг Ьеи Зег Ьеи ТЪг Суз ТЪг УаЬ Зег С1у Туг Зег УаЬ Зег Зег СЬу 20 25 30

Туг Зег Тгр НБз Тгр 11е Агд СЬп Рго Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬп Тгр 35 40 45

11е СЬу НБз Не НБз РЪе Зег СЬу Агд Рго ТЪг Туг Азл Рго Зег Ьеи 50 55 60

Ьуз Зег Агд УаБ ТЬг 11е Зег Агд СЬи ТЬг АЬа Ьуз Азп СЬп РЪе Зег 65 70 75 80

Ьеи Ьуз Ьеи ТЪг Зег МеЪ ТЪг АЬа АЬа Азр ТЪг АЬа УаБ Туг Туг Суз 85 90 95

СЬу ТЪг Ьеи УаБ ТЬг УаБ Зег Зег АЬа Зег ТЪг Ьуз Азп Рго Азр УаБ 115 120 125

РЪе Рго Ьеи АЬа Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЪг Зег СЬу СЬу ТЪг АЬа АЬа 130 135 140

Ьеи СЬу Суз Ьеи УаЬ Ьуз Азр Туг РЪе Рго СЬи Рго УаЬ ТЪг УаЬ Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьеи ТЪг Зег СЬу УаЬ НБз ТЪг РЪе Рго АЬа УаЬ 165 170 175

Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег УаЬ УаЬ ТЪг УаЬ Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЪг СЬп ТЪг Туг 11е Суз Азп УаЬ Азп НБз Ьуз 195 200 205

Рго Зег Азп ТЪг Ьуз УаЬ Азр Ьуз Ьуз УаЬ СЬи Рго Ьуз Зег Суз Азр 210 215 220

Ьуз ТЪг НБз ТЪг Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго СЬи Ьеи Ьеи СЬу СЬу 225 230 235 240

Рго Зег УаЬ РЪе Ьеи РЪе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЪг Ьеи МеЪ Не 245 250 255

Зег Агд ТЪг Рго СЬи УаЬ ТЪг Суз УаЬ УаЬ УаЬ Азр УаЬ Зег НБз СБи 260 265 270

Азр Рго СБи УаЬ Ьуз РЪе Азп Тгр Туг УаЬ Азр СЬу УаЬ СЬи УаЬ НБз 275 280 285

Азп АЬа Ьуз ТЪг Ьуз Рго Агд СЬи СЬи СЬп Туг Азп Зег ТЪг Туг Агд 290 295 300

УаЬ УаЬ Зег УаЬ Ьеи ТЪг УаЬ Ьеи НБз СЬп Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз 305 310 315 320

СЬи Туг Ьуз Суз Ьуз УаЬ Зег Азп Ьуз АЬа Ьеи Рго АЬа Рго Не СЬи 325 330 335

Ьуз ТЪг Не Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Туг 340 345 350

ТЪг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр СЬи Ьеи ТЪг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег Ьеи 355 360 365

ТЪг Суз Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЪе Туг Рго Зег Азр Не АЬа УаЬ СЬи Тгр 370 375 380

СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЪг ТЪг Рго Рго УаЬ 385 390 395 400

- 101 024695

- 102 024695

Ьуз 5ег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Ηίδ 420 425 430

С1и А1а Ьеи Ηίδ Азп Ηίδ Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445 (?1у Ьуз 450 <210> 72 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 72

С1п Уа1 61п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго О1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1и

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Зег С1у Туг Зег Туг Зег Зег С1у

Туг Зег Тгр Ηίδ Тгр Не Агд С1п Рго Рго С1у Ьуэ С1у Ьеи С1п Тгр

11е С1у Ηίδ 11е Ηίδ РЬе Зег С1у Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи

Ьуз Зег Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Агд С1и ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе Зег

А1а Агд Ьуз С1у Ьуз С1у Зег Азр Азр С1у Ьеи Азп Туг Тгр С1у <31п 100 105 110

Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 Ηί5 ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 165 170 175

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Ηί5 Ьуз 195 200 205

Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег Ηίδ С1и 260 265 270

- 103 024695

- 104 024695

- 105 024695

С1и А1а Ьеи Шз Азп Шз Туг ТЬг Сйп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445 <210> 75 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 75

Сйп УаЬ Сйп Ьеи Сйп Сйи Зег Сйу Рго Сйу Ьеи УаЬ Ьуз Рго Зег Сйи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уай Зег Сйу Туг Зег 1йе Зег Зег Сйу

Туг Зег Тгр Нйз Тгр 1йе Агд Сйп Рго Рго Сйу Ьуз Сйу Ьеи Сйп Тгр

Ьуз Зег Агд Уай ТЬг 1йе Зег Азр Сйи ТЬг Айа Ьуз Азп Сйп РЬе Зег

Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег Мей ТЬг Айа Айа Азр ТЬг Айа Уай Туг Туг Суз

Ьеи Сйп Зег Зег Сйу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уай Уай ТЬг Уай Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Ьеи Сйу ТЬг Сйп ТЬг Туг 1йе Суз Азп Уай Азп Нйз Ьуз 195 200 205

Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уай Азр Ьуз Ьуз Уай Сйи Рго Ьуз Зег Суз Азр 210 215 220

Ьуз ТЬг Нйз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго Айа Рго Сйи Ьеи Ьеи Сйу Сйу 225 230 235 240

Рго Зег Уай РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 11е 245 250 255

Зег Агд ТЬг Рго Сйи Уай ТЬг Суз Уай Уай Уай Азр Уай Зег Нйз Сйи 260 265 270

Азр Рго Сйи Уай Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уай Азр Сйу Уай Сйи Уай Нйз 275 280 285

Азп Айа Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд Сйи Сйи Сйп Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд 290 295 300

Уай Уай Зег Уай Ьеи ТЬг Уай Ьеи Нйз Сйп Азр Тгр Ьеи Азп Сйу Ьуз 305 310 315 320

Сйи Туг Ьуз Суз Ьуз Уай Зег Азп Ьуз Айа Ьеи Рго Айа Рго 11е Сйи 325 330 335

Ьуз ТЬг 11е Зег Ьуз Айа Ьуз Сйу Сйп Рго Агд Сйи Рго Сйп Уай Туг 340 345 350

ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр Сйи Ьеи ТЬг Ьуз Азп Сйп Уай Зег Ьеи 355 360 365

ТЬг Суз Ьеи Уай Ьуз Сйу РЬе Туг Рго Зег Азр 11е Айа Уай Сйи Тгр 370 375 380

Ьеи Азр Зег Азр Сйу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уай Азр 405 410 415

Сйи Айа Ьеи Нйз Азп Нйз Туг ТЬг Сйп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

- 106 024695

- 107 024695 <210> 77 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 77

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Зег О1у Туг Зег 11е Зег Зег О1у

Туг Зег Тгр ΗΪ5 Тгр 11е Агд С1п Рго Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1п Тгр

11е С1у ΗΪ5 11е Ηίδ РЬе Зег С1у Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи

Ьуз Зег Агд Уа1 ТЬг 11е Зег РЬе О1и ТЬг А1а Ьуз Азп О1п РЬе Зег

Ьуз ТЬг ΗΪ3 ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго 01и Ьеи Ьеи ОЬу ОЬу 225 230 235 240

Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Ηίδ ОЬп Азр Тгр Ьеи Азп ОЬу Ьуз 305 310 315 320

С1и А1а Ьеи Ηίδ Азп Ηίδ Туг ТЬг ОЬп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445

- 108 024695

- 109 024695

- 110 024695 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 80

01п Уа1 С1п Ьеи СЬп <31и Зег С1у Рго 01у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег ОЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Зег С1у Туг Зег 11е Зег Зег С1у

Туг Зег Тгр Низ Тгр 11е Агд С1п Рго Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1п Тгр 35 40 45

11е ОЬу Низ 11е Низ РЬе Зег О1у Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи

Ьуз Зег Агд Уа! ТЬг 11е Зег 11е С1и ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе Зег

Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег МеЪ ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а 17а1 Туг Туг Суз

С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг 7а1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуг Азп Рго Азр νπΐ 115 120 125

Ьеи С1у Суз Ьеи 5/а1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЬг Зег С1у Уа1 ΗΪ3 ТЬг РЬе Рго А1а 57а1 165 170 175

Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 7а1 ТЬг Уа1 Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп 1/а1 Азп Низ Ьуз 195 200 205

Зег Агд ТЬг Рго С1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 7а1 Уа1 Азр Уа1 Зег Низ С1и 260 265 270

Азр Рго С1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Ча1 Азр С1у Уа1 С1и Уа1 Низ 275 280 285

Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п С1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеЬ Низ 420 425 430

С1и А1а Ьеи Низ Азп Низ Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445 <210> 81 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

- 111 024695 <220>

<223> Антитело <400> 81

СЬп Уа1 С1п Ьеи СЬп СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи УаЬ Ьуз Рго Зег СЬи 15 10 15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ Зег СЬу Туг Зег Не Зег Зег СЬу 20 25 30

Туг Зег Тгр НЬз Тгр Не Агд СЬп Рго Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬп Тгр 35 40 45

Не СЬу НЬз 1Ье НЬз РЬе Зег СЬу Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

Ьуз Зег Агд УаЬ ТЬг 11е Зег Ьуз СЬи ТЬг АЬа Ьуз Азп СЬп РЬе Зег 65 70 75 80

Тгр Азп Зег СЬу АЬа Ьеи ТЬг 5ег СЬу УаЬ НЬз ТЬг РЬе Рго АЬа УаЬ 165 170 175

Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Фа1 ТЬг УаЬ Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг СЬп ТЬг Туг Не Суз Азп Уа1 Азп НЬз Ьуз 195 200 205

Рго Зег Азп ТЬг Ьуз УаЬ Азр Ьуз Ьуз УаЬ С1и Рго Ьуз Зег Суз Азр 210 215 220

Ьуз ТЬг Не Зег Ьуз АЬа Ьуз СЬу СЬп Рго Агд СЬи Рго СЬп УаЬ Туг 340 345 350

ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр СЬи Ьеи ТЬг Ьуз Азп СЬп Уа1 Зег Ьеи 355 360 365

ТЬг Суз Ьеи УаЬ Ьуз СЬу РЬе Туг Рго Зег Азр Не АЬа УаЬ СЬи Тгр 370 375 380

СЬи Зег Азп СЬу СЬп Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 385 390 395 400

Ьеи Азр Зег Азр СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг ЦаЬ Азр 405 410 415

Ьуз Зег Агд Тгр СЬп СЬп СЬу Азп ЦаЬ РЬе Зег Суз Зег ЦаЬ МеЬ НЬз 420 425 430

СЬу Ьуз 450 <210> 82 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

112

Уа1 Ьуз Рго 5ег С1и 15

Зег 11е Зег Зег О1у 30

Ьуз С1у Ьеи С1п Тгр 45

Туг Азп Рго Зег Ьеи 60

Ьуз Азп О1п РЬе Зег 80

А1а Уа1 Туг Туг Суз 95

Азп Туг Тгр С1у С1п 110

Ьуз Азп Рго Азр \/аЬ 125

С1у С1у ТЬг А1а А1а 140

Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег 160

ТЬг РЬе Рго А1а УаЬ 175

УаЬ Уа1 ТЬг Уа1 Рго 190

Азп УаЬ Азп ΗΪ5 Ьуз

205

Рго Ьуз Зег Суз Азр 220

СЬи Ьеи Ьеи С1у С1у 240

Азр ТЬг Ьеи Меб 11е 255

Азр Уа1 Зег ΗΪ5 С1и 270

С1у Уа1 С1и Уа1 НЬз 285

Азп 5ег ТЬг Туг Агд 300

Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз 320

Рго А1а Рго 11е С1и 335

С1и Рго С1п Уа1 Туг

350

Азп С1п Уа1 Зег Ьеи 365

11е А1а Уа1 С1и Тгр

380

ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1

400

Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр 415

Суз Зег Уа1 Меб ΗΪ5 430

Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 445

- 113 024695 <400> 83

Οίη Ча1 01η Беи ΐ

01п 01и Зег 01у Рго С1у

Беи Ча1 Буз Рго Зег С1и 15

ТЬг Беи Зег Беи 20

ТЬг Суз ТЬг Ча1 Зег О1у

Туг Зег 11е Зег Зег <31у 30

Туг Зег Тгр ΗΪ3 35

Тгр 11е Агд С1п Рго Рго

С1у Буз С1у Беи С1п Ггр 45

Не 01у Ηί§ Не 50

Ηί§ РЬе Зег 01у Агд Рго

ТЬг Туг Азп Рго Зег Беи 60

Буз Зег Агд Ча1 65

ТЬг 11е Зег МеЬ С1и ТЬг

А1а Буз Азп С1п РЬе Зег 75 80

Беи Буз Беи ТЬг

Зег МеЬ ТЬг А1а А1а Азр

ТЬг А1а Ча1 Туг Туг Суз 95

А1а Агд Буз О1у

100

Буз 01у Зег Азр Азр С1у

Беи Азп Туг Тгр 01у <31п 110

О1у ТЬг Беи Ча1 115

ТЬг Ча1 Зег Зег А1а Зег

ТЬг Буз Азп Рго Азр Ча1 125

РЬе Рго Беи А1а 130

Рго Зег Зег Буз Зег ТЬг

Зег С1у С1у ТЬг А1а А1а 140

Беи С1у Суз Беи 145

Ча1 Буз Азр Туг РЬе Рго

С1и Рго Ча1 ТЬг Ча1 Зег 155 160

Тгр Азп Зег О1у

А1а Беи ТЬг Зег С1у Уа1

Низ ТЬг РЬе Рго А1а Ча1 175

Беи 01п Зег Зег 180

С1у Беи Туг Зег Беи Зег

Зег Ча1 Ча1 ТЬг Ча1 Рго 190

Зег Зег Зег Беи 195

С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е

Суз Азп Ча1 Азп Ηί5 Буз 205

Рго Зел Азп ТЬг 210

Буз Ча1 Азр Буз Буз Уа1

С1и Рго Буз Зег Су§ Азр 220

Буз ТЬг ΗΪ5 ТЬг

225

Суз Рго Рго Суз Рго А1а

Рго С1и Беи Беи С1у С1у 235 240

Рго Зег Ча1 РЬе

Беи РЬе Рго Рго Буз Рго

Зег Агд ТЬг Рго 260

С1и Ча1 ТЬг Суз Ча1 Ча1

Буз Азр ТЬг Беи МеЬ Не 255

Ча1 Азр Ча1 Зег Низ 61и 270

Азр Рго О1и Ча1 275

Буз РЬе Азп Тгр Туг Ча1

Азр 61у Ча1 С1и Ча1 Низ 285

Азп А1а Буз ТЬг 290

Буз Рго Агд С1и С1и С1п

Туг Азп Зег ТЬг Туг Агд 300

Ча1 Ча1 Зег Ча1 305

Беи ТЬг Ча1 Беи Низ 61п

Азр Тгр Беи Азп С1у Буз 315 320

С1и Туг Буз Суз

Буз Ча! Зег Азп Буз А1а

Беи Рго А1а Рго 11е С1и 335

Буз ТЬг Не Зег 340

Буз А1а Буз 61у 61п Рго

Агд С1и Рго 61п Ча1 Туг 350

ТЬг Беи Рго Рго 355

Зег Агд Азр 61и Беи ТЬг

Буз Азп С1п Ча1 Зег Беи 365

ТЬг Суз Беи Ча1 370

Буз С1у РЬе Туг Рго Зег

Азр 11е А1а Ча1 С1и Тгр

380

О1и Зег Азп О1у 385

С1п Рго 61и Азп Азп Туг

Буз ТЬг ТЬг Рго Рго Ча1 395 400

Беи Азр Зег Азр

С1у Зег РЬе РЬе Беи Туг

Зег Буз Беи ТЬг Ча1 Азр 415

Буз Зег Агд Тгр 420

С1п С1п С1у Азп Ча1 РЬе

Зег Суз Зег Ча1 МеЬ Низ 430

О1и А1а Беи Низ 435

Азп Низ Туг ТЬг С1п Буз

Зег Беи Зег Беи Зег Рго 445

С1у Буз 450 <210> 84 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 84

- 114 024695

С1и

С1у

Тгр

Ьеи

Зег

Суз

С1п

Уа1

А1а

Зег

160

Уа1

Рго

Ьуз

Азр

С1у

240

11е

С1и

Нтз

Агд

Ьуз

320

С1и

Туг

Ьеи

Тгр νβΐ

400

Азр

Нтз

Рго

С1п Уа1 С1п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Зег С1у Туг Зег 11е Зег Зег

Туг Зег Тгр Нтз Тгр 11е Агд С1п Рго Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1п

11е С1у Нтз 11е Нтз РЬе Зег С1у Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег

Ьуз Зег Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Азп С1и ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе

Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг

А1а Агд Ьуз С1у Ьуз С1у Зег Азр Азр С1у Ьеи Азп Туг Тгр С1у 100 105 110

С1у ТЬг Ьеи Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз Азп Рго Азр 115 120 125

Ьеи С1п Зег Зег С1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг Уа1 130 135 190

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Нтз 195 200 205

Ьуз ТЬг ΗΪ3 ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи С1у 225 230 235

Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеЬ 245 250 255

- 115 024695

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Зег С1у Туг Зег Не Зег Зег С1у 20 25 30

Туг Зег Тгр Шз Тгр 11е Агд С1п Рго Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1п Тгр 35 40 45

11е С1у ΗΪ5 11е Шз РЬе Зег С1у Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи 50 55 60

Ьуз Зег Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Рго С1и ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе Зег 65 70 75 80

Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а 1/а1 Туг Туг Суз 85 90 95

Зег Зег Зег Ьеи С1у ТЬг С1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп Шз Ьуз 195 200 205

Ьуз ТЬг Шз ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго С1и Ьеи Ьеи С1у С1у 225 230 235 240

1/а1 1/а1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи ΗΪ5 С1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз 305 310 315 320

С1у Ьуз 450 <210> 86 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 86

116

- 117 024695

ЬЬе СЬу НЬз ЬЬе НЬз РЬе Зег СЬу Агд Рго ТЬг Туг Азп Рго Зег Ьеи

Ьуз Зег Агд УаЬ ТЬг ЬЬе Зег Зег СЬи ТЬг АЬа Ьуз Азп СЬп РЬе Зег

Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг АЬа АЬа Азр ТЬг АЬа ч/аЬ Туг Туг Суз

Зег Зег Зег Ьеи СЬу ТЬг СЬп ТЬг Туг 1Ье Суз Азп 7аЬ Азп НЬз Ьуз Ь95 200 205

Азр Рго СЬи 7аЬ Ьуз РЬе Азп Тгр Туг 7аЬ Азр СЬу 7аЬ СЬи 7аЬ НЬз 275 280 285

- 118 024695

Туг Зег Тгр НБз Тгр 11е Агд СБп Рго Рго СБу Ьуз СБу Ьеи СБп Тгр

11е СБу НБз 11е НБз РЪе Зег СБу Агд Рго ТЪг Туг Азп Рго Зег Ьеи

Ьуз Зег Агд УаБ ТЪг 11е Зег ТЪг СБи ТЪг АБа Ьуз Азп СБп РЪе Зег

Ьеи Ьуз Ьеи ТЪг Зег Мер ТЪг АБа АБа Азр ТЪг АБа УаБ Туг Туг Суз

СБу ТЪг Ьеи УаБ ТЪг УаБ Зег Зег АБа Зег ТЪг Ьуз Азп Рго Азр УаБ 115 120 125

Ьеи СБу Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЪе Рго СБи Рго Уа1 ТЪг УаБ Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег С1у А1а Ьеи ТЪг Зег С1у Уа1 НБз ТЪг РЪе Рго АБа УаБ 165 170 175

Ьеи СБп Зег Зег СБу Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЪг УаБ Рго 180 185 190

Зег Зег Зег Ьеи СБу ТЪг СБп ТЪг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп НБз Ьуз 195 200 205

Рго Зег УаБ РЪе Ьеи РЪе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЪг Ьеи МеЪ 11е 245 250 255

ТЪг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр СБи Ьеи ТЪг Ьуз Азп СБп УаБ Зег Ьеи 355 360 365

ТЪг Суз Ьеи УаБ Ьуз СБу РЪе Туг Рго Зег Азр 11е АБа УаБ СБи Тгр 370 375 380

Ьуз Зег Агд Тгр СБп СБп СБу Азп УаБ РЪе Зег Суз Зег УаБ МеС НБз 420 425 430

СБи АБа Ьеи НБз Азп НБз Туг ТЪг СБп Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 435 440 445 <210> 89 <211> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 89

СБп УаБ СБп Ьеи СБп СБи Зег СБу Рго СБу Ьеи УаБ Ьуз Рго Зег СБи

ТЪг Ьеи Зег Ьеи ТЪг Суз ТЪг УаБ Зег СБу Туг Зег 11е Зег Зег СБу

- 119 024695

- 120 024695

- 121 024695

Ьуз 5ег Агд Уай ТЬг 11е 5ег Туг С1и ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе 5ег

Айа Агд Ьуз Сйу Ьуз Сйу Зег Азр Азр Сйу Ьеи Азп Туг Тгр Сйу Сйп 100 105 110

Ьеи Сйу Суз Ьеи Уай Ьуз Азр Туг РЬе Рго Сйи Рго Уай ТЬг Уай Зег 145 150 155 160

Тгр Азп Зег Сйу Айа Ьеи ТЬг Зег Сйу Уай Нйз ТЬг РЬе Рго Айа Уай 165 170 175

Зег Зег Зег Ьеи Сйу ТЬг Сйп ТЬг Туг 11е Суз Азп Уай Азп Нйз Ьуз 195 200 205

Уай Уай 5ег Уай Ьеи ТЬг Уай Ьеи Нйз Сйп Азр Тгр Ьеи Азп Сйу Ьуз 305 310 315 320

- 122 024695

Туг 11е Суз Азп Уа1

Азп

Ηίδ Ьуз

Рго

Зег Азп ТЬг Ьуз νβΐ Азр Ьуз

85

90

95

Ьуз Уа1

ОЬи

Рго

Ьуз

Зег

Суз

Азр

Ьуз

ТЬг

ΗΪ3

ТЬг

Суз

Рго

Суз

100

105

но

Рго АЬа

Рго

СЬи

Ьеи

СЬу

Рго

Зег

УаЬ

РЬе

Ьеи

РЬе

Рго

115

120

125

Ьуз Рго

Ьуз

Азр

ТЬг

Ьеи

МеЬ

11е

Зег

Агд

ТЬг

Рго

ОЬи

УаЬ

ТЬг

Суз

130

135

140

УаЬ УаЬ

Уа1

Азр

УаЬ

Зег

Ηίδ

СЬи

Азр

Рго

СЬи

УаЬ

Ьуз

РЬе

Азп

Тгр

145

150

155

160

Туг УаЬ

Азр

СЬу

УаЬ

СЬи

УаЬ

Ηίδ

Азп

АЬа

Ьуз

ТЬг

Ьуз

Рго

Агд

СЬи

165

170

175

С1и СЬп

Туг

Азп

Зег

ТЬг

Туг

Агд

Уа1

Зег

Уа1

Ьеи

ТЬг

Уа1

Ьеи

180

185

190

ΗΪ5 СЬп

Азр

Тгр

Ьеи

Азп

СЬу

Ьуз

СЬи

Туг

Ьуз

Суз

Ьуз

УаЬ

Зег

Азп

195

200

205

Ьуз АЬа

Ьеи

Рго

АЬа

Рго

11е

ОЬи

Ьуз

ТЬг

11е

Зег

Ьуз

АЬа

Ьуз

ОЬу

210

215

220

СЬп Рго

Агд

СЬи

Рго

СЬп

УаЬ

Туг

ТЬг

Ьеи

Рго

Зег

Агд

Азр

СЬи

225

230

235

240

Ьеи ТЬг

Ьуз

Азп

СЬп

УаЬ

Зег

Ьеи

ТЬг

Суз

Ьеи

УаЬ

Ьуз

СЬу

РЬе

Туг

245

250

255

Рго Зег

Азр

Не

АЬа

УаЬ

ОЬи

Тгр

ОЬи

Зег

Азп

СЬу

ОЬп

Рго

ОЬи

Азп

260

265

270

Азп Туг

Ьуз

ТЬг

Рго

УаЬ

Ьеи

Азр

Зег

Азр

СЬу

Зег

РЬе

275

280

285

Ьеи Туг

Зег

Ьуз

Ьеи

ТЬг

Уа1

Азр

Ьуз

Зег

Агд

Тгр

СЬп

ОЬп

СЬу

Азп

290

295

300

Уа1 РЬе

Зег

Суз

Зег

УаЬ

МеЬ

Ηί5

СЬи

АЬа

Ьеи

ΗΪ5

Азп

ΗΪ5

Туг

ТЬг

305

310

315

320

СЬп Ьуз

Зег

Ьеи

Зег

Ьеи

Зег

Рго

СЬу

Ьуз

325

330

<210>

93

<211>

106

<212>

БЕЛОК

<213>

Ното

зарЬепз

<400>

93

ТЬг УаЬ

АЬа

Рго

Зег

УаЬ

РЬе

Не

РЬе

Рго

Зег

Азр

СЬи

СЬп

1

5

10

15

Ьеи Ьуз

Зег

СЬу

ТЬг

АЬа

Зег

УаЬ

Суз

Ьеи

Азп

РЬе

Туг

20

25

30

Рго Агд

СЬи

АЬа

Ьуз

УаЬ

СЬп

Тгр

Ьуз

УаЬ

Азр

Азп

АЬа

Ьеи

СЬп

Зег

35

40

45

СЬу Азп

Зег

СЬп

СЬи

Зег

УаЬ

ТЬг

СЬи

СЬп

Азр

Зег

Ьуз

Азр

Зег

ТЬг

50

55

60

Туг Зег

Ьеи

Зег

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Ьеи

Зег

Ьуз

АЬа

Азр

Туг

СЬи

Ьуз

65

70

75

80

ΗΪ3 Ьуз

УаЬ

Туг

АЬа

Суз

СЬи

УаЬ

ТЬг

ΗΪ3

СЬп

СЬу

Ьеи

Зег

Рго

85

90

95

УаЬ ТЬг

Ьуз

Зег

РЬе

Азп

Агд

СЬу

СЬи

Суз

100 105 <210> 94 <2Ы> 450 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> ,

Антитело

<400>

94

СЬп

УаЬ

СЬп

Ьеи

СЬп

СЬи

Зег

СЬу

Рго

СЬу

Ьеи

УаЬ

Ьуз

Рго

Зег

СЬи

1

5

10

15

ТЬг

Ьеи

Зег

Ьеи

ТЬг

Суз

ТЬг

УаЬ

Зег

СЬу

Туг

Зег

11е

Зег

СЬу

20

25

30

Туг

Зег

Тгр

НЬз

Тгр

11е

Агд

СЬп

Рго

СЬу

Ьуз

СЬу

Ьеи

СЬп

Тгр

35

40

45

Не

СЬу

ΗΪ3

11е

ΗΪ3

РЬе

Зег

СЬу

Агд

Рго

ТЬг

Туг

Азп

Рго

Зег

Ьеи

50

55

60

Ьуз

Зег

Агд

УаЬ

ТЬг

Не

Зег

Агд

СЬи

ТЬг

АЬа

Ьуз

Азп

СЬп

РЬе

Зег

65

70

75

80

123

Ьеи СЬу Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго СЬи Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег 145 150 155 160

Ьуз ТЬг Ηίδ ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго АЬа Рго СЬи Ьеи Ьеи СЬу СЬу 225 230 235 240

Азр Рго СЬи Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр СЬу Уа1 СЬи Уа1 Ηίδ 275 280 285

ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз ОЬу РЬе Туг Рго Зег Азр 11е АЬа Уа1 О1и Тгр 370 375 380

С1и Зег Азп СЬу С1п Рго С1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ 385 390 395 400

Ьеи Азр Зег Азр ОЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр 405 410 415

Ьуз Зег Агд Тгр С1п С1п СЬу Азп УаЬ РЬе Зег Суз Зег УаЬ МеЬ Ηί5 420 425 430

СЬи АЬа Ьеи Ηίδ Азп Ηίδ Туг ТЬг С1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ргс· 435 440 445

ОЬу Ьуз 450 <210> 95 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (1) .. (1) <223> Хаа означает С1п или С1и <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (25)..(25) <223> Хаа означает Зег или ТЬг <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (29)..(29) <223> Хаа означает Не, Ьеи или УаЬ <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (30) . . (30) <223> Хаа означает Зег или ТЬг <400> 95

- 124 024695

Хаа λ/аЬ СЬп Ьеи СЬп СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи УаЬ Ьуз Рго Зег СЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ Хаа СЬу Туг Зег Хаа Хаа <2Ь0> 96 <211> 6 <2Ь2> БЕЛОК <2ЬЗ> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 9$

Зег СЬу Туг Зег Тгр НЬз <210> 97 <211> 14 <212> <2ЬЗ>

БЕЛОК

Искусственная последовательность <220>

<223>

<220> <221> <222>

ВАРИАНТ (5) .. (5) <223> Хаа означает Зег или Рго <220>

<221>

<222>

ВАРИАНТ (Ы) . . (11) <22 3> Хаа означает СЬп или СЬи <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (13)..(13) <223> Хаа означает МеЬ или Не <400> 97

Тгр Не Агд СЬп Хаа Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи Хаа Тгр Хаа СЬу <210> 98 <21Ь> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело

Хаа означает РЬе, Туг или Тгр <220> <221> <222> <223>

<220> <221> <222> <223>

ВАРИАНТ (1Ь).. (1Ь)

Хаа означает Азп или Азр

ВАРИАНТ (15)..(15)

Хаа означает Ьуз, Ьеи, НЬз, РЬе, Агд или Зег <400> 98

НЬз Не НЬз Хаа Зег СЬу Агд Рго ТЬг Туг Хаа Рго Зег Ьеи Хаа Зег <210> 99 <21Ь> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (2) .. (2) <223> Хаа означает УаЬ или 1Ье <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (3) .. (3) <223> Хаа означает ТЬг или Зег <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (6) .. (6) <223> Хаа означает Агд или Ьуз <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (7) .. (7) <223> Хаа означает СЬи или Азр <400>

Агд Хаа Хаа Не Зег Хаа Хаа ТЬг АЬа Ьуз Азп СЬп РЬе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг АЬа АЬа Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа Агд <210> 100 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

- 125 024695 <223> Антитело <400> 100

Ьуз С1у Ьуз С1у Зег Азр Азр Сйу Ьеи Азп Туг 1 5 10 <210> 101 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 101

Тгр С1у С1п С1у ТЬг Ьеи Уай ТЬг УаЬ Зег Зег <210> 102 <211> 87 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (29).. (29) <223> Хаа означает Не, Ьеи или Уа1 <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (50) . . (50) <223> Хаа означает Агд или Ьуз <400> 102

Сйп Уай Сйп Ьеи Сйп Сйи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи УаЬ Ьуз Рго Зег СЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Су§ ТЬг Уа1 Зег Сйу Туг Зег Хаа Зег Тгр 11е

Агд ОЬп Рго Рго ОЬу Ьуз Сйу Ьеи Сйп Тгр 11е Сйу Агд Уай ТЬг 11е

Зег Хаа Сйи ТЬг Айа Ьуг Азп Сйп РЬе Зег Ьеи Ьуз Ьеи ТЬг Зег Мер

ТЬг Айа Айа Азр ТЬг Айа Уай Туг Туг Суз Айа Агд Тгр Сйу Сйп Сйу

ТЬг Ьеи Уай ТЬг Уай Зег Зег <210> 103 <2Ы> 30 <212> БЕЛОК <2йЗ> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 103

Сйп Уай Сйп Ьеи Сйп Сйи Зег Сйу Рго Сйу Ьеи Уай Ьуз Рго Зег Сйи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уай Зег Сйу Туг Зег 1йе Зег <210> 104 <21й> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 104

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ Зег Сйу Туг Зег 11е ТЬг <210> 105 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 105

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ Зег Сйу Туг Зег Ьеи Зег <210> 106 <21й> 30 <2й2> БЕЛОК <2йЗ> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело

- 126 024695 <400> 106

С1п Уа1 С1п Ьеи С1п С1и Зег СЬу Рго СЬу Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1и

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Зег С1у Туг Зег Ьеи ТЬг <2Ь0> 107 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 107

С1п УаЬ С1п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1и

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ Зег СЬу Туг Зег УаЬ Зег <210> 103 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 108

С1п УаЬ С1п Ьеи С1п С1и Зег СЬу Рго СЬу Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег СЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ Зег СЬу Туг Зег УаЬ ТЬг <210> 109 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 109

С1п УаЬ С1п Ьеи С1п СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег СЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ ТЬг СЬу Туг Зег Не Зег 20 25 30 <2Ь0> 110 <2Ь1> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ ТЬг СЬу Туг Зег 1Ье ТЬг <210> 111 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 111

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ ТЬг СЬу Туг Зег Ьеи Зег <210> 112 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг УаЬ ТЬг СЬу Туг Зег Ьеи ТЬг <210> 113 <2ЬЬ> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело

- 127 024695

С1п Ча1 С1п Ьеи С1п С1и Зег СЬу Рго СЬу Ьеи Ча1 Ьуз Рго Зег СЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Ча! ТЬг С1у Туг Зег Ча! Зег <210> 114 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 114

С1п Ча1 С1п Ьеи С1п С1и Зег СЬу Рго СЬу Ьеи ЧаЬ Ьуз Рго Зег СЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг ЧаЬ ТЬг СЬу Туг Зег ЧаЬ ТЬг <210> 115 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 115

СЬи Ча1 С1п Ьеи С1п С1и Зег СЬу Рго СЬу Ьеи ЧаЬ Ьуз Рго Зег СЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг ЧаЬ Зег СЬу Туг Зег Не Зег <210> 116 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 116

С1и ЧаЬ С1п Ьеи С1п С1и Зег СЬу Рго СЬу Ьеи ЧаЬ Ьуз Рго Зег СЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг ЧаЬ Зег СЬу Туг Зег 11е ТЬг <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

СЬи ЧаЬ СЬп Ьеи СЬп СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи ЧаЬ Ьуз Рго Зег СЬи 15 10 15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг ЧаЬ Зег СЬу Туг Зег Ьеи Зег <210> 113 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 118

С1и ЧаЬ С1п Ьеи С1п С1и Зег СЬу Рго СЬу Ьеи Ча1 Ьуз Рго Зег СЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Ча1 Зег СЬу Туг Зег Ьеи ТЬг <210> 119 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 119

СЬи Ча1 СЬп Ьеи СЬп СЬи Зег С1у Рго С1у Ьеи ЧаЬ Ьуз Рго Зег С1и

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг ЧаЬ Зег СЬу Туг Зег Ча1 Зег <210> 120 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 120

СЬи Ча1 СЬп Ьеи СЬп СЬи Зег СЬу Рго СЬу Ьеи ЧаЬ Ьуз Рго Зег СЬи

- 128 024695

10 15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг 57а1 Зег С1у Туг Зег Уа1 ТЬг 20 25 30 <210> 121 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220 <223> Антитело <400> 121

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Ча1 ТЬг С1у Туг Зег 11е Зег 20 25 30 <210> 122 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 122

01и Уа1 01п Ьеи ОЬп 01и Зег О1у Рго 01у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег <31и 15 10 15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Ча1 ТЬг С1у Туг Зег 11е ТЬг 20 25 30 <210> 123 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <40 0 123

О1и Уа1 С1п Ьеи ОЬп О1и Зег О1у Рго О1у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег С1и 15 10 15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Ча1 ТЬг С1у Туг Зег Ьеи Зег 20 25 30 <210> 124 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 124

С1и Уа1 О1п ьеи Ы1п С1и Зег 61у Рго 61у Ьеи Уа1 Ьуз Рго Зег 61и 15 10 15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 ТЬг С1у Туг Зег Ьеи ТЬг 20 25 30 <210> 125 <211> 31 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 125

С1и Уа1 С1п Ьеи С1п С1и Зег С1у Рго С1у Ьеи УаЬ Ьуз Рго Зег С1и 15 10 15

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 Зег ТЬг С1у Туг Зег Уа1 Зег 20 25 30 <210> 126 <211> 30 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 126

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз ТЬг Уа1 ТЬг С1у Туг Зег Уа1 ТЬг 20 25 30 <210> 127 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 127

Тгр Не Агд С1п Зег Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1п Тгр 11е С1у 15 10

129

130 024695

- 131 024695

- 132 024695

- 133 024695

- 134 024695 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 173

Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Ьуз С1и ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд <210> 174 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 174

Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Ьуз Азр ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе Зег Ьеи Ьуз 15 10 15

Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд 20 25 30 <210> 175 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<400> 175

Агд Уа1 Зег 11е Зег Агд С1и ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе Зег Ьеи Ьуз 15 10 15

Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд <210> 176 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 176

Агд Уа1 Зег 11е Зег Агд Азр ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд <210> 177 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 177

Агд Уа1 Зег 11е Зег Ьуз С1и ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд <210> 178 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 178

Агд Уа1 Зег 11е Зег Ьуз Азр ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд <210> 179 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 179

Агд 11е ТЬг 11е Зег Агд С1и ТЬг А1а Ьуз Азп С1п РЬе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи ТЬг Зег МеЬ ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд <210> 180 <211> 32 <212> БЕЛОК

- 135 024695 <213> Искусственная последовательность <400> 180

Агд Не ТЪг Не Зег Агд Азр ТЪг АБа Ьуз Азп СБп РЪе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи ТЪг Зег Мер ТЪг АБа АБа Азр ТЪг АБа УаБ Туг Туг Суз АБа Агд <210> 181 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 181

Агд 11е ТЪг 11е Зег Ьуз СБи ТЪг АБа Ьуз Азп СБп РЪе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи ТЪг Зег Меб ТЪг АБа АБа Азр ТЪг АБа УаБ Туг Туг Суз АБа Агд <210> 182 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 182

Агд 11е ТЪг 11е Зег Ьуз Азр ТЪг АБа Ьуз Азп СБп РЪе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи ТЪг Зег Меб ТЪг АБа АБа Азр ТЪг АБа УаБ Туг Туг Суз АБа Агд <210> 183 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 183

Агд Не Зег 11е Зег Агд СБи ТЪг АБа Ьуз Азп СБп РЪе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи ТЪг Зег Мер ТЪг АБа АБа Азр ТЪг АБа УаБ Туг Туг Суз АБа Агд <210> 184 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 184

Агд 11е Зег Не Зег Агд Азр ТЪг АБа Ьуз Азп СБп РЪе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи ТЪг Зег МеЬ ТЪг АБа АБа Азр ТЪг АБа УаБ Туг Туг Суз АБа Агд <210> 185 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 185

Агд 11е Зег 11е Зег Ьуз СБи ТЪг АБа Ьуз Азп СБп РЪе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи ТЪг Зег МеЬ ТЪг АБа АБа Азр ТЪг АБа Уа1 Туг Туг Суз АБа Агд <210> 186 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 186

Агд 11е Зег 11е Зег Ьуз Азр ТЪг АБа Ьуз Азп СБп РЪе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи ТЪг Зег Меб ТЪг АБа АБа Азр ТЪг АБа УаБ Туг Туг Суз АБа Агд <210> 187 <211> 23 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

- 136 024695

<220> <223>

Антитело

<220> <221> <222> <223>

ВАРИАНТ (2) .. (2) Хаа означает Не или Азп

<220> <221> <222> <223>	ВАРИАНТ (15)..(15) Хаа означает АЬа или Рго
<400>	137

С1и Хаа Уа1 Ьеи ТЬг С1п Зег Рго СЬу ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Хаа СЬу 15 10 15

СЬи Агд АЬа ТЬг Ьеи Зег Суз 20

<210> <211> <212> <213>

183 10 БЕЛОК Искусственная последовательность

<220> <223>	Антитело
<400>	188

Зег АЬа Зег Зег Зег Ьеи Зег Туг Не НЬз 1 5 10

<210> <211> <212> <213>

189 15 БЕЛОК Искусственная последовательность

<220> <223>	Антитело
<400>	189

Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу СЬп АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи Не Туг 15 10 15

<210> <211> <212> <213>

190 7 БЕЛОК Искусственная последовательность

<220> <223>	Антитело
<400>	190

Азр ТЬг Зег Азп Ьеи АЬа Зег 1 5

<210> <21 Ь> <212> <213>

191 32 БЕЛОК Искусственная последовательность

<220> <223>

Антитело

<220> <221>	ВАРИАНТ
<223>	(13)..(13) Хаа означает ТЬг или Азп
<400>	191

СЬу Не Рго Азр Агд РЬе Зег СЬу Зег С1у Зег С1у Хаа Азр РЬе ТЬг 15 10 15

Ьеи ТЬг Не Зег Агд УаЬ СЬи Рго СЬи Азр РЬе АЬа УаЬ Туг Туг Суз 20 25 30

<210> <211> <212> <213>

192 9 БЕЛОК Искусственная последовательность

<220> <223>	Антитело
<400>	192

РЬе С1п С1у Зег С1и Туг Рго Ьеи ТЬг 1 5

<210> <211> <212> <213>

193 11 БЕЛОК Искусственная последовательность

<220> <223>	Антитело
<400>	193

РЬе СЬу СЬп СЬу ТЬг Ьуз Ьеи С1и Не Ьуз Агд 15 10

<210> <211> <212> <213>

194 81 БЕЛОК Искусственная последовательность

<220> <223>	Антитело
<400>	194

- 137 024695

- 138 024695

Ьеи ТЬг 11е Зег Агд Уа1 СЬи Рго СЬи Азр РЬе АЬа УаЬ Туг Туг Суз <210> 201 <211> 30 <212> БЕЛОК

213> Искусственная последовательность <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (30)..(30) <223> Хаа означает Зег или ТЬг <400> 201

С1и \Га1 С1п Ьеи С1п С1п Тгр С1у А1а С1у Ьеи Ьеи Ьуз Рго Зег С1и

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз АЬа Уа1 Туг СЬу Туг Зег Хаа Хаа <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (13)..(13) <223> Хаа означает Мер или 11е <400> 202

Тгр 11е Агд СЬп Рго Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр Хаа СЬу <210> 203 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (3)..(3) <223> Хаа означает Зег или ТЬг <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (6)..(б) <223> Хаа означает Агд или Ьуз <400> 203

Агд Хаа Хаа 11е Зег Хаа Азр ТЬг Зег Ьуз Азп СЬп РЬе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи Зег Зег Уа1 ТЬг АЬа АЬа Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз АЬа Агд <210> 204 <211> 87 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (29)..(29) <223> Хаа означает 11е, Ьеи или Уа1 <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (50) . . (50) <223> Хаа означает Агд или Ьуз <400> 204

СЬи Уа1 СЬп Ьеи СЬп СЬп Тгр СЬу АЬа СЬу Ьеи Ьеи Ьуз Рго Зег СЬи

ТЬг Ьеи Зег Ьеи ТЬг Суз АЬа Уа1 Туг СЬу Туг Зег Хаа Зег Тгр Не

Агд СЬп Рго Рго СЬу Ьуз СЬу Ьеи СЬи Тгр 11е СЬу Агд УаЬ ТЬг 11е

Зег Хаа Азр ТЬг Зег Ьуз Азп СЬп РЬе Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Зег УаЬ

ТЬг АЬа АЬа Азр ТЬг АЬа УаЬ Туг Туг Суз АЬа Агд Тгр СЬу СЬп СЬу

- 139 024695

- 140 024695

С1и Хаа Ча1 Беи ТЬг С1п Зег Рго А1а ТЬг Беи Зег Беи Зег Рго С1у

С1и Агд А1а ТЬг Беи Зег Суз <210> 212 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<221> ВАРИАНТ <222> (13)..(13) <223> Хаа означает ТЬг или Азп <400> 212

С1у 11е Рго Азр Агд РЬе Зег С1у Зег С1у Зег С1у Хаа Азр РЬе ТЬг 15 10 15

Беи ТЬг 11е Зег Агд Беи С1и Рго С1и Азр РЬе А1а Ча1 Туг Туг Суз <210> 213 <211> 81 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 213

С1и 11е Ча! Беи ТЬг С1п Зег Рго А1а ТЬг Беи Зег Беи Зег Рго С1у

С1и Агд А1а ТЬг Беи Зег Суз Тгр Туг Θΐη Θΐη Буз Рго С!у Θΐη А1а

Рго Агд Беи Беи Не Туг С1у Не Рго Азр Агд РЬе Зег С1у Зег С1у

Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Беи ТЬг Не Зег Агд Беи С1и Рго С1и Азр

РЬе А1а Ча! Туг Туг Суз РЬе О!у О!у О!у ТЬг Буз Ча! <3!и Не Буз

- 141 024695 <400> 217

С1у Не Рго Азр Агд РЬе Зег С1у Зег С1у Зег С1у Азп Азр РЬе ТЬг

Ьеи ТЬг Не Зег Агд Ьеи С1и Рго С1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суз <210> 218 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 218

Агд Уа1 ТЬг Не Зег Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи Зег Зег Уа1 ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд <210> 219 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <400> 219

Агд Уа1 ТЬг 11е Зег Ьуз Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи Зег Зег Уа1 ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд <210> 220 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 220

Агд Уа1 Зег Не Зег Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе Зег Ьеи Ьуз

Ьеи Зег Зег Уа1 ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд <210> 221 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 221

Агд Уа1 Зег 11е Зег Ьуз Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе Зег Ьеи Ьуз 15 10 15

Ьеи Зег Зег Уа1 ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд <210> 222 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 222

Агд Не ТЬг Не Зег Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп <31п РЬе Зег Ьеи Ьуз 15 10 15

Ьеи Зег Зег Уа1 ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а \/а1 Туг Туг Суз А1а Агд <210> 223 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 223

Агд Не ТЬг 11е Зег Ьуз Азр ТЬг Зег Ьуз Азп С1п РЬе Зег Ьеи Ьуз 15 10 15

Ьеи Зег Зег Уа1 ТЬг А1а А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд 20 25 30 <210> 224 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело

142 024695

Агд 11е Зег 11е Зег Агд Азр ТЬг Зег Ьуз Азп ОЬп РЬе Зег Ьеи Ьуз 15 10 15

Ьеи Зег Зег Уа1 ТЬг АЬа А1а Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз А1а Агд 20 25 30 <210> 225 <211> 32 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Антитело <400> 225

Агд 11е Зег 11е Зег Ьуз Азр ТЬг Зег Ьуз Азп О1п РЬе Зег Ьеи Ьуз 15 10 15

Ьеи Зег Зег УаЬ ТЬг АЬа АЬа Азр ТЬг АЬа Уа1 Туг Туг Суз АЬа Агд 20 25 30

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Антитело, которое связывается с клетками Со1о205, где антитело содержит связывающий домен ν_Η и связывающий домен У_ь, где указанный связывающий домен ν_Η содержит последовательно первую каркасную область (РР1), первую СЭР (СИР1), вторую каркасную область (РР2), вторую СЭР (СЭР2). третью каркасную область (РР3), третью СИР (СИР3) и четвертую каркасную область (РР4), где (ϊ) последовательность РР1 представляет собой

Χ₁νρρρΕ8ΟΡΟΕνΚΡ8ΕΤΡ8ΡΤΟΤνΧ₂ΟΥ8Χ₃Χ₄ (8ΕΟ ГО N0: 95), где

Χ₁ означает б или Е,

Х₂ означает 8 или Т,

Х₃ означает I, Ь или V,

Х4 означает 8 или Т, или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(ίί) последовательность СГОР1 представляет собой 80Υ8νΗ (8ΕΟ ΙΌ N0: 96) или последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

(ίίί) последовательность РР2 представляет собой νΐΡ6Χ₅ΡΟΚΟΡΧ₆νΧ₇Ο (8ΕΟ ΙΌ N0: 97), где

Х₅ означает 8 или Р,

Х₆ означает б или Е,

Х₇ означает М или I, или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(ίν) последовательность СГОР2 представляет собой ΗIΗX₈8СΡΡΤΥX₉,Ρ8^X_|08 (8Ε0 ГО N0: 98), где

Х₈ означает Р, Υ или V,

Х₉ означает N или Ό,

Χ₁₀ означает Κ, Ь, Η, Р, Р или 8, или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(ν) последовательность РР3 представляет собой

ΡX11X1₂I8X1₃X1₄ΤΑΚN^Р8^Κ^Τ8ΜΤΑΑ^ΤΑVΥΥСΑΡ (8ΕΟ ГО N0: 99), где

Х₁₁ означает V или I,

Χ₁₂ означает Т или 8,

Х13 означает Р или Κ,

Χ₁₄ означает Е или Ό, или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности, при условии, что остаток в положении 6 должен быть Р или Κ;

(νί) последовательность СГОР3 представляет собой 1<СКС8ООСЬХХ (8Ε0 ГО N0: 100) или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(νίί) последовательность РР4 представляет собой \УСОСТЬУЮ88 (8Ε0 ГО N0: 101) или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности; и где указанный связывающий домен ν₉ содержит последовательно первую каркасную область (РР1), первую СИР (СИР1), вторую каркасную область (РР2), вторую СИР (СИР2), третью каркасную область (РР3), третью СИР (СИР3) и четвертую каркасную область (РР4), где (ϊ) последовательность РР1 представляет собой

ΕX₁₃V^Τ^8Ρ0Τ^8^8X₁₄0ΕΡΑΤ^8С (8ΕΟ ГО N0: 187), где

Х₁₃ означает I или N

Χ14 означает А или Р, или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(ίί) последовательность СГОР1 означает 8Λ888Ε8Υ!Η (8Ε0 ГО N0: 188) или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(ίίί) последовательность РР2 представляет собой ХУХООКРСОАРРЕЫХ (8Ε0 ГО N0: 189) или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

- 143 024695 (ίν) последовательность СЭР2 представляет собой ΌΤδΝΡΆδ (8ЕЦ ΙΌ N0: 190) или последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

(ν) последовательность РК3 представляет собой С1РОРР8С8С8СХ₁₅ОРТЬТ18РУЕРЕОРАУУУС (8ЕУ) ГО N0: 191), где

Х₁₅ означает Т или Ν, или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(νί) последовательность СГОР3 представляет собой Е0С8ЕУРЕТ (8ЕЦ ГО N0: 192) или последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

(νίί) последовательность РК4 представляет собой ЕСОСТКУРПУР (8ЕЦ ГО N0: 193) или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности.
2. Антитело по п.1, в котором последовательность РК1 У_н выбрана из группы, состоящей из

ОУОЕОЕЗСРСЬУКРЗЕТЕЗЬТСТУЗСУЗК, (ЗЕС) ΙΌ ΝΟ: 103)

ОУЕ^ЕрЕЗОРСЕУКРЗЕТЕЗЕТСТУЗСЛ’ЗГТ, (5Е<3 ГО ΝΟ: 104)

9У()1У)Е5С1РСЕУКРЗЕТЕ5ЕТСТУ8СУ8Е8, (8Εζ>ΙΕ)Ν0; 105)

0У<ЭЕ<2Е8ОРОЕУКР5ЕТЕ5ЕТСТУ5ОУ5ЕТ, (8ЕС) ГО ΝΟ: 106)

0\'0Е0Е8ОРСЕУКР8ЕТ1 АЕТСТУЗОУЗУЗ, (5Ε<2 ГО ΝΟ: 107) <3ν<2Ε<2Ε3ΟΡΟΕνΚΡ5ΕΤΕ8ΕΤΟΤν5ΟΥ5νΤ, (3Εζ> ГО ΝΟ: 108) <3ν<2Ε<2Ε5ΟΡΟΕνΚΡ3ΕΤΕ8ΕΤσΓνταΥ5Ι3, <3Εζ> ГО ΝΟ: 109)

0ν0Ε0Ε8ΟΡΕ1ΕνΚΡ8ΕΤΕ$ΕΤΕ·ΤνΤΟΥ8ΙΤ, (8ΕΓ) ГО ΝΟ: 110)

ОУСгЕОЕЗОРСЕУКРЗЕТЕЗЕТСТУТОУЗЕЗ, (5Ε<5 ГО ΝΟ: 111)

0У()Е0Е8СРСЕУКР8ЕТ1_8ЕТСТУТСУ8ЕТ, (3Ε(2 ГО ΝΟ: 112)

ОУОкОЕЗОРСЕУКУЗЕТЕЗЫСТУТСУЗУЗ. (3Ε<2 ГО ΝΟ: 113) (ЭУОКРЗЕЗОРОЕУКРЗЕТЕЗЬТСТУТСУЗУТ, !'3Ε0 ГО ΝΟ: 114)

ЕУ()Е9ЕЗОРСЕУКР8ЕГЕЗЕТСТУЗСУ813, (ЗЕф ГО ΝΟ: 115)

ЕУОИЗЕЗОРОЕУКРЗЕТЕЗЬТСТУЗСУЗГГ, (5Ε<2 ГО ΝΟ: 116)

Е\'’ОЕ()ЕЗОРС1ЕУКР5ЕТЕ8ЕТСТУ8СУЗЕ8, (3Ε0 ГО ΝΟ: 117)

ЁУ()Е()ЕЗОРОЕУКР8ЕТЕ8ЕТСТУ80У5ЕТ. ι3Ε0 ГО ΝΟ: 118)

ЕУ0Е9Е8ОРОЕУКР8ЕТЕ8ЕТСТУ5СУ8У8, ι8Ε(₂ Ю ΝΟ: 119)

Εν0Ε9Ε5ΟΡΟΕνΚΡ8ΕΤΕ5ΕΤ0Τν3ΟΥ5νΤ, (5Ε<2 ГО ΝΟ: 120)

ЕУОЬОЕЗОРОЕУКРЗЕТЕЗЕТСТУТОУЗК, (5Ε0 ГО ΝΟ: 121)

ΕνρΕρΕ5ΟΡΟΕνΚΡ5ΕΤΕ5ΕΤΟΤνΤΟΥ5ΐτ, (8Ε0 ГО ΝΟ: 122)

ЕУуЕОЕЗОРСЩУКРЗЕТЕЗЕТСТУТОУЗЕЗ. ( 8Ε0 ΙΟ ΝΟ: 123)

ЕУОЬСЕЗОРОЬУКРЗЕТЕЗЕТСТУТОУЗЕТ, (5Ε(2 ГО ΝΟ: 124)

Е\'’ОЕУЕ8СтР(ЗЕ\''КР8ЕТЕ8ЕТ((ТУ8ТОУ8\'’.8, (5Е(Э ГО ΝΟ: 125) и Ενς>Ε0Ε5ΟΡΟΕνΚΡ3ΕΤΙ_5ΕΤ0ΤνΤΟΥ5νΤ (3Εζ> ГО ΝΟ: 126).
3. Антитело по п.1 или 2, в котором последовательность СГОР1 У_н представляет собой 8СУ8\УН (8ЕУ) ГО N0: 96).
4. Антитело по любому из пп.1-3, в котором последовательность РК2 У_н выбрана из группы, состоящей из \\'1Н(')8РС.КС.1.(')\\'1С. (81 ХА ГО N0: 127), \\'1Н(')8РС.КС.1.(')\\Л1С. (81 ХА ГО N0: 128), \1КР8РСКСЬЕ\1С (81 У) ГО N0: 129), \\'1Р(')8РС.РС.ЕЕ\\А1С. (81 У) ГО N0: 130), \У1Р(')РРС.РС.Е(')\\'1С (81 У) ГО N0: 131), \\'1Р(')РРС.РС.Е(')\\А1С (81 У) ГО N0: 132), \1КРРРСКСЬЕ\1С (81 У) ГО N0: 133) и \\'1Р(')РРС.РС.ЕЕ\\А1С. (81 У) ГО N0: 134).
5. Антитело по любому из пп.1-4, в котором последовательность СГОР2 У_н выбрана из группы, состоящей из н1нР8ОКРТУ№8Ь88 (8ЕХ) ГО N0: 135), нШР8ОКРТ¥№8ЬК8 (8ЕХ) ГО N0: 136), нЩР8ОКРТ¥№8ЬЬ8 (8ЕХ) ГО N0: 137), нШР8ОКРТ¥№8Ьн8 (8ЕХ) ГО N0: 138), нГОР8СРРТУЖ8ЕР8 (8ЕХ) ГО N0: 139),

IIII 1Е8С.РРТАХР8ЕР8 (81 У) ГО N0: 140), нШ\8ОКРТ¥№8Ь88 (8ЕХ) ГО N0: 141), нШ\8ОКРТ¥№8ЬК8 (8ЕХ) ГО N0: 142), нЩ\8ОКРТ¥№8ЬЬ8 (8ЕХ) ГО N0: 143), н1н\8ОКРТУ№8Рн8 (8ЕХ) ГО N0: 144), нШ\8ОКРТ¥№8ЬР8 (8ЕХ) ГО N0: 145), нШ\8ОКРТ¥№8ЬК8 (81 У) ГО N0: 146),

- 144 024695

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΝΡ8Ε88 (81 Υ) ΙΌ N0: 147),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΝΡ8ΕΚ8 (81 У) ΙΌ N0: 148),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΝΡ8ΕΕ8 (81 У) ΙΌ N0: 149),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΝΡ8ΕΗ8 (81 Υ) ΙΌ N0: 150),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΝΡ8ΕΡ8 (81 Υ) ΙΌ N0: 151),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΝΡ8ΕΡ8 (81 Υ) ΙΌ N0: 152),

ΗΙΗΡ8ΟΡΡΤΥΌΡ8Ό88 (81 Υ) ΙΌ N0: 153),

ΗΙΗΡ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΌΚ8 (81 Υ) ΙΌ N0: 154),

ΗΙΗΡ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΕΕ8 (81 Υ) ΙΌ N0: 155),

ΗΙΗΡ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΌΗ8 (81 Υ) ΙΌ N0: 156),

ΗΙΗΡ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΌΡ8 (81 Υ) ΙΌ N0: 157),

ΗΙΗΡ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΕΡ8 (81 Υ) ΙΌ N0: 158),

ΗΙΗ\8ΟΡΡΤΥΌΡ8Ό88 (81 Υ) ΙΌ N0: 159),

I ΙΙΙ Ι\\'8(.ιΡΡΤΥΊ)Ρ8Ι ,Κ8 (8ΡΥ) ΙΌ N0: 160),

ΗΙΗ\8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΌΕ8 (81 Υ) ΙΌ N0: 161),

ΗΙΗ\8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΌΗ8 (81 Υ) ΙΌ N0: 162),

ΗΙΗ\8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΌΡ8 (81 Υ) ΙΌ N0: 163),

I ΙΙΙ Ι\\'8(.ιΡΡΤΥΊ)Ρ8Ι,Ρ8 (81 Υ) ΙΌ N0: 164),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΌΡ8Ό88 (8ΡΥ) ΙΌ N0: 165),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΌΚ8 (8ΡΥ) ΙΌ N0: 166),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΕΌ8 (8ΡΥ) ΙΌ N0: 167),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΌΗ8 (8ΡΥ) ΙΌ N0: 168),

ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΌΡ8 (8ΡΥ) ΙΌ N0: 169) и ΗΙΗΥ8ΟΡΡΤΥΌΡ8ΕΡ8 (8ΡΥ) ΙΌ N0: 170).
6. Антитело по любому из пп.1-5, в котором последовательность ΡΡ3 ν_Η выбрана из группы, состоящей из

ΚνΤΙ5ΚΕΤΑΚΝΟΡ5ΕΚΕΤ5ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕО ГО N0; 171),

ΚνΤΙ3ΚΟΤΑΚΝ<3Ρ8ΕΚί,Τ8ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕО ГО ΝΟ: 172),

ΚνΤΙδΚΕΤΑΚΝΟΡδΕΚΕΤδΜΤΑΑϋΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕО ГО ΝΟ: 173),

ΚνΤ15ΚΟΤΑΚΝΟΡ8ί.ΚΕΤ8ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕО ГО N0: 174), κνδΙ8ΚΕΤΑΚΝ<2Ρ3ΕΚΕΤ5ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕО ГО N0: 175),

Ε.ν8Ι8ΚϋΤΑΚΝ(3Ρ8ΕΚΕΤ8ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕО ГО ΝΟ: 176),

1<ν8Ι8ΚΕΤΛΚΝ0Ρ8ΕΚΕΊ 8ΜΤΑЛОТА\ΎУСАР (ЗЕО ГО N0: 177),

ΚνδΙΞΚϋΤΑΚΝΟΡδΕΚΕΤδΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕО ГО N0: 178),

ΜΤΙ5ΚΕΤΑΚΝΟΡ5ΕΚΕΤ5ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕО ГО N0: 179),

ΚΙΓΙ8ΚίΥΙ'ΛΚΝ0Ρ3ΕΚΕΓ8ΜΊΛΛΤ)ΤΑνΥΥ€ΛΚ (ЗЕО ГО N0: 180),

ΚΙΤΙ8ΚΕΤΑΚΝΟΡ3ΕΚΕΤ8ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕО ГО ΝΟ: 181),

ΚΤΠ8ΚΟΤΑΚΝς>Ρ3ΕΚΕΤ5ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥ0ΑΚ (ЗЕО ГО ΝΟ: 182),

ΚΙ5Ι5ΚΕΤΑΚΝΟΡ5ΕΚΙ_Τ5ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕО ГО N0: 183),

Μ515ΚΟΤΑΚΝ0Ρ3ΕΚΕΤ5ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕО ГО N0: 184),

ЫЗВКЕТАКЧОРЗЬКЬТЗМТААОТАУУУСАК (ЗЕО ГО N0: 185) и Μ5Ι5ΚΟΤΑΚΝΟΡ5ΕΚΕΤ5ΜΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕО ГО N0: 186).
7. Антитело по любому из пп.1-6, в котором последовательность Ε'ΌΡ3 ν_Η представляет собой Κ0Κ08ΌΌ0ΕΝΥ (8ΡΥ) ГО N0:100).
8. Антитело по любому из пп.1-7, в котором последовательность ΡΡ4 νΗ представляет собой \\ΥΥ)(.,ΤΙ ΛΊΎ88 (8ΡΥ) ΙΌ N0: 101).
9. Антитело по любому из пп.1-8, дополнительно содержащее константный домен ν_Η.
10. Антитело по п.9, в котором константный домен имеет последовательность Α8ΤΚΝΡΕνΡΡΕΑΡ85Κ3Τ8(30ΤΑΑΕ00ΕνΚΌΥΡΡΕΡντνδν/Ν50ΑΕΤ50ν ΗΤΡΡΑνΕ955σΕΥ5Ε5δνντνΡ555ΕΟΤ<2ΤΥΚ3ΝνΝΗΚΡ8ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ 8СОКТНТСРРСРАРЕЕЕООР8УРЕРРРКРКОТЕМ15КТРЕУТСУУУОУ8НЕ ΟΡΕνΚΡΝλνΥνΟΟνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕςίΥΝδΤΥΚννδνΕΤνΕΗΟΟΑΥΕΝΟΚ ΕΥΚΟΚν8ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ3ΚΑΚΟ<2ΡΚΕΡ(2νΥΤΕΡΡ3ΚΌΕΕΤΚΝ(3ν3ΕΤΟΕ νΚΐ3ΡΥΡδΌΙΑνΕ\\ΈδΝΟΌΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΌδΌϋδΡΡΕΥ8ΚΕΤνΌΚδΚ\νφ ζ)ΟΝνΡ808νΜΡΙΕΑΕΗΝΡΙΥΤ(2Κ3Ε3Ε3ΡΟΚ (3Ε<3 ΙΟ ΝΟ: 52); или

- 145 024695

А8ТКСР5УРРЕАР55КЗТ8ССТААЕССЬУКОУРРЕРУТУ8\УМЗСАЕТЗОУ

НТРРАУЬрЗЗСЕУЗЬЗЗ ννΊ'νΡ885Ε€ϊΊφΊΎΙ0ΝνΝΗΚΡ3ΝΤΚν0ΚΚνΕΡΚ

ЗСОКТНТСРРСРАРЕиХЗСРЗУРЬРРРКРКОТЕМККТРЕУТСУУУОУЗНЕ

0ΡΕνΚΡΝ\νΥν00νΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕς>ΥΝ5ΤΥΚνν5νΕΤνΕΗς>0\νΕΝ0Κ

ΕΥΚΕΚν5ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ3ΚΑΚΟ9ΡΚΕΡς>νΥΤΕΡΡ5ΚϋΕΕΤΚΝ<3ν5ΕΤ€Ε νΚΟΡΥΡ3ΌΙΑνΕ\νΕ3ΝΟ<3ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΌ5ΕΟ3ΡΡΕΥ5ΚΕΤνϋΚ3ΚΛν9 (ЗОЫУРЗСЗУМНЕАЕНМНУТЦКЗЕЗЕЗРОК (ЗЕЦ ГО N0: 92); или

Α3ΤΚΝΡΌνΡΡΕΑΡ88Κ5Τ5Ο0ΤΑΑΕΟ€ΕνΚΌΥΕΡΕΡντν3\νΝ5ΟΑΕΤ5θν

ΗΤΡΡΑνΕ058ϋΕΥ8Ι_Λ88ννΤνΡ388ΕΟΤΌΤΥ[ΕΝνΝΗΚΡ3\ΤΚνθΚΚνΕΡΚ

8СОКТНТСРРСРАРЕЕЕООРОУРЕРРРКРКОТЕМ15КТРЕУТСУУУОУ5НЕ

ΟΡΕνΚΡΝΑνγνϋθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ<3ΥΝΑΤΥΚνν5νΕΤνΕΗ(3Ο\νΕΝΟ

ΚΕΥΚΕΚν5ΝΚΑΕΡΑΡΕΕΚΤΙ5ΚΑΚ0ς>ΡΚΕΡ<3νΥΤΕΡΡ5Κ0ΕΕΤΚΝ(3ν5ΕΤ υΕνΚΟΡΥΡ5ΟΙΑνΕλΥΕ5ΝΟ<2ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΌ5ΟΟ5ΡΡΕΥ5ΚΕΤνϋΚ5Κ

УЕЗСЗ ΥΜΗΕΑΕΗΝΗ УТЦКЗЕЗЕЗРСК (8Εζ> ГО N0; 53).
11. Антитело по любому из пп.1-10, в котором последовательность ЕК1 У_ъ выбрана из группы

Е1УЕТРЗРСТЕЗЕЗРСЕКАТЕЗС (ЗЕО ГО N0: 195),

Е1УЕТРЗРСТЕЗЕЗАСЕКАТЕЗС (ЗЕО ГО N0: 196),

ЕХУЕТОЗРОТЕЗЕЗРОЕКАТЕЗС (ЗЕО ГО N0: 197) и

Е\¥ЕТОЗРС.ТЕЗЕЗАС.ЕКАТЕЗС (ЗЕО ГО N0: 198).
12. Антитело по любому из пп.1-11, в котором последовательность СГОР1 У_ъ представляет собой ЗАЗЗЗЬЗУГО (ЗЕО ГО N0: 188).
13. Антитело по любому из пп.1-12, в котором последовательность ЕК2 У_ъ представляет собой ^УОРКРСрАРКЬЫУ (ЗЕО ГО N0: 189).
14. Антитело по любому из пп.1-13, в котором последовательность СГОР2 У_ъ представляет собой ОТЗЯБАЗ (ЗЕО ГО N0: 190).
15. Антитело по любому из пп.1-14, в котором последовательность ЕК3 У_ъ представляет собой С1РОКЕЗСЗСЗСТОРТЕТ1ЗКУЕРЕОРАУУУС (ЗЕО ГО N0: 199) или С.1Р1)КЕЗС.ЗС.ЗС.\1)ЕТЕТ1ЗК¥Е РЕЭЕАУУУС (ЗЕО ГО N0: 200).
16. Антитело по любому из пп.1-15, в котором последовательность СГОР3 У_ъ представляет собой ЕЦСЗЕУРЬТ (ЗЕО ГО N0: 192).
17. Антитело по любому из пп.1-16, в котором последовательность ЕК4 У_ъ представляет собой ЕОООТКЕЕЕКК (ЗЕО ГО N0: 193).
18. Антитело по любому из пп.1-17, дополнительно содержащее константный домен У_ь.
19. Антитело по п.18, в котором константный домен имеет последовательность

ΤνΑΑΡ8νΚΙΕΡΡ30Ε(χΚ8ΕΕΓΑ8νν0ΕΕΝΝΕΥΡΚΕΑΚν(2\νκνΌΝΑΕ<>80Ν3 (2Ε5νΤΕ<2Ο5Κϋ5ΤΥ5Ε55ΤΕΤΕ5ΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑ€ΕνΤΗς>σΕ55ΡνΤΚ5ΡΝ

КСЕС (ЗЕЦ ГО ΝΟ: 93).
20. Антитело, которое связывается с клетками Со1о205, где антитело содержит связывающий домен У_н и связывающий домен У_ъ, где указанный связывающий домен У_н содержит последовательно первую каркасную область (ЕК1), первую СОК (СЭР1). вторую каркасную область (ЕК2), вторую СОК (СГОР2). третью каркасную область (ЕК3), третью СОК (СГОК3) и четвертую каркасную область (ЕК4), где (ί) последовательность ЕК1 представляет собой

Е\ПЕ(Х)\\У,АС.ЕЕКРЗЕТЕЗЕТСАУ¥С,¥З.\-₈.\ (ЗЕО ГО N0: 201), где

Х₁₈ означает I, Ь или У,

Х₁₉ означает З или Т, или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(ίί) последовательность СГОК1 представляет собой ЗСУЗХН (ЗЕЦ ГО N0: 96) или последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

(ш) последовательность ЕК2 представляет собой \1КрРРСКСЬЕ\Х₂₀С (ЗЕЦ ГО N0: 202), где

Х₂₀ означает М или I, или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(ίν) последовательность СГОР2 представляет собой Н1НХ₂₁ЗСКРТ¥Х₂₂РЗЕХ₂₃З (ЗЕЦ ГО N0: 98), где

Х₂₁ означает Е, Υ или \,

Х₂₂ означает N или Ό,

Х₂₃ означает К, Ь, Н, Е, К или З, или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(ν) последовательность ЕК3 представляет собой

- 146 024695

ΚΧ₂₄Χ₂5ΐ8Χ₂₆ΠΤ8ΚΝρΡ8ΕΚΓ88νΤΛΛΌΤΛν¥ΥΟΑΚ (81+) ΙΌ N0: 203), где

Х₂₄ означает V или I,

Х₂₅ означает 8 или Т,

Х₂₆ означает К или Κ, или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности, при условии, что остаток в положении 6 должен быть К или Κ;

(νί) последовательность СГОКЗ представляет собой ΚΟΚΟ8ΌΌΟΕΝΥ (8ЕЦ ГО N0: 100) или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(νίί) последовательность РК4 представляет собой \νθΟΟΤΩντν88 (8ЕЦ ΙΌ N0: 101) или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности; и указанный связывающий домен ν₉ содержит последовательно первую каркасную область (РК1), первую СОК (СЭК1). вторую каркасную область (РК2), вторую СОК (СГОК2). третью каркасную область (РКЗ), третью СОК (СГОКЗ) и четвертую каркасную область (РК4), где (ί) последовательность РК1 представляет собой ЕX₂₃V^Τ^8ΡΑΤ^8^8ΡСЕКΑΤ^8С (8ЕЦ ГО N0: 211), где Х₂₃ означает I или N или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(ίί) последовательность СГОК1 представляет собой 8Α888Ρ8ΥΙΗ (8ЕЦ ГО N0: 188) или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(ш) последовательность РК2 представляет собой νΥΟΟΚΡΟΟΑΡΡΡΡΙΥ (8ЕЦ ΙΌ N0: 189) или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(ίν) последовательность СГОК2 представляет собой ^Τ8N^Α8 (8ЕЦ ГО N0: 190) или последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

(ν) последовательность РКЗ представляет собой СIΡ^КР8С8С8СX₂₄^РΤ^ΤI8К^ЕΡЕ^РΑVΥΥС (8ЕЦ ГО N0: 212), где Χ₂₄ означает Т или N или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности;

(νί) последовательность СГОКЗ представляет собой Ρ008ΗΥΡΡΤ (8ЕЦ ΙΌ N0: 192) или последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную указанной последовательности;

(νίί) последовательность РК4 представляет собой ΡΟΟΟ^νΈ^^. (8ЕЦ ΙΌ N0: 19З) или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанной последовательности.
21. Антитело по п.20, в котором последовательность РК1 ν_Η выбрана из группы, состоящей из

ЕУбРбрХУСАСРРКРЗЕТиЗЬТСАУУСУЗК (ЗЕ(2 ГО ΝΟ: 205),

ΕνρΕ6Ρ4ΌΑΟΕΕΚΡ3ΕΤΕ3ΕΤΓΑ\'ΎΟΥ8ΓΓ (8 Ер ГО N0: 206),

ЕУбЬббЧ®1АСЕЕКТ5ЕТ1ЮТСАУУОУ5Е5 (ЗЕЦ ГО N0: 207),

ЕУбЕЦбУ/ОАСЕЕКРЗЕТЕЗЕТСАУУСУЗЕТ (8ЕЦ ГО ΝΟ: 208),

ЕУрЕЦрХУСЛСуЕЕКРЗЕТЬЗЕТСЛУУС.УЙУЗ (8ЕЦ ГО ΝΟ: 209) и

ЕУОЕОО^САСЕЕКРЗЕТЕЗЬТСАУУСУЗУТ ($Е<2 ГО N0: 210).
22. Антитело по п.20 или 21, в котором последовательность СГОК1 ν_Η представляет собой 8ΟΥ8νΗ (81+) ΙΌ N0: 96).
23. Антитело по любому из пп.20-22, в котором последовательность РК2 ν_Η представляет собой А1КС)РРС.кС.1+А1С. (81+) ГО N0: 1ЗЗ) или А1КС)РРС.кС.РРА\1С. (81+) ГО N0: 1З4).
24. Антитело по любому из пп.20-2З, в котором последовательность СГОК2 ν_Η выбрана из группы, состоящей из

ΗΙΗΡ8ΟΚΡΤΥΝΡ5Ε83 (ЗЕф ГО N0: 135), ΗΙΗΡ3ΟΚΡΤΥΝΡ3ΕΚ3 (ЗЕО ГО

N0: 136), ΗΙΗΡδΟΚΡΤΥΝΡδΠδ (ЗЕО ГО ΝΟ: 137), ΗΙΗΡ3ΟΚΡΤΥΝΡ5ΕΗ3 (ЗЕО ГО ΝΟ: 138), ΗΙΗΡ3ΟΚΡΤΥΝΡ3ΕΡ3 (ЗЕО ГО ΝΟ: 139),

ΗΙΗΡ3ΟΕΡΤΥΝΡ3ΕΚ.3 (ЗЕО ГО N0: 140), ΗΙΗ\ν3ΟΚΡΤΥΝΡ3Ε33 (ЗЕО ГО

N0: 141), ΗΪΗ\ν3ΟΚΡΤΥΝΡ8ΕΚ8 (ЗЕО ГО N0: 142), ΗΙΪΙ\ν3ΟΕΡΤΥΝΡ8ΕΕ5 (ЗЕО ГО ΝΟ: 143), ΗΙΗ\ν5ΟΚΡΤΥΝΡ3ΕΗ3 (ЗЕО ГО ΝΟ: 144),

ΗΙΗ\ν3ΟΚΡΤΥΝΡ3ΕΡ3 (ЗЕО ГО ΝΟ: 145), ΗΙΗ\Υ3ΟΚΡΤΥΝΡ3ΕΚ8 (ЗЕО ГО

N0: 146), ΗΙΗΥ5ΟΚΡΤΥΝΡ3Ε33 (ЗЕО ГО N0: 147), ΗΙΗΥ3ΟΚΡΤΥΝΡ31.Κ3 (ЗЕО ГО ΝΟ: 148), ΗΙΗΥ8ΟΚΡΤΥΝΡ3ϋ3 (ЗЕО ГО ΝΟ: 149),

- 147 024695

ΗΙΗΥ5ΟΚΡΤΥΝΡ3ΕΗ5 (5Ε0 ГО N0: 150), ΗΙΗΥ5ΟΚ.ΡΤΥΝΡ5ΕΡ5 (5Εζ> ΙΌ N0: 151), ΗΙΗΥ3ΟΚΡΤΥΝΡ3ΕΕ3 (ЗЕО ГО N0: 152), НМРЗОЕРТУОРЗБЗЗ (3Ε<2 ГО N0: 153), ΗΙΗΡ5ΟΚΡΤΥϋΡ5ΕΚ5 (ЗЕО ГО N0: 154),

НШРЗСЕРТУОРЗЬЬЗ (ЗЕО ГО N0: 155), Η5ΗΡ3ΟΡΡΤΥΟΡ8ΕΗ5 (ЗЕО ГО N0: 156), ΗΙΗΡ8ΟΚΡΤΥΟΡ8Ι_Ρ8 (ЗЕО ГО N0: 157), Н1НР8СКРТУОР5БК.5 (ЗЕО Е> ΝΟ: 158), ШНЗУЗСКРТУОРЗЬЗЗ (ЗЕО ГО ΝΟ: 159),

Н1Н\У5ОКРТУОРЗБК8 (ЗЕО ГО ΝΟ: 160), НШХУЗОКРТУОРЗЕБЗ (ЗЕО ГО ΝΟ: 161), ΗΙΗ\ν$ΟΚΡΤΥϋΡ8ΕΗ8 (ЗЕО Π) ΝΟ: 162), НТН\\'8ОКРТУПРЗЕР8 (ЗЕО Ιθ ΝΟ: 163), НПЛУЗОРРТУОРЗЬКЗ (ЗЕО ГО N0: 164),

ΗΙΗΥ80ΚΡΤΥΟΡ3Ε83 (ЗЕО ГО N0: 165), ΗΙΗΥ3ΟΕΡΤΥΟΡ3ΕΚ3 (ЗЕО ГО N0: 166), ΗΙΗΥ5ΟΕΡΤΥΟΡ3ΕΕ3 (ЗЕО ГО N0: 167), ΗΙΗΥ3ΟΚΡΤΥΟΡ5ΕΗ5 (ЗЕО ГО ΝΟ: 168), ШНУЗОКРТУОРЗБРЗ (ЗЕО ГО N0: 169) и ΗΙΗΥ3ΟΚΡΤΥΟΡ8ΕΚ.8 (ЗЕО ГО ΝΟ: 170).
25. Антитело по любому из пп.20-24, в котором последовательность ΡΚ3 Ун выбрана из группы, состоящей из

ΡνΤΙ3ΚΟΤ3ΚΝ(2Ρ3ΕΚΕ3δνΤΑΑΟΤΑνΥΥ€ΑΚ (3Εζ) ГО ΝΟ: 218), РУТ15КОТ5КИ()Р5ЕКЕ35УТААОТАУУУСАК (5Εζ) ГО N0: 219), РУ313РОТЗКИ<)Р5ЕКЕЗЗУТААОТАУУУСАР (5Εζ> ГО N0: 220), Κν5Ι5ΚΟΤ5ΚΝ(5Ρ5ΕΚΕ55νΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (3Εζ> ГО N0: 221), ΕΓΠδΚϋΤδΚΝρΡδΕΚΕδδνΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ <5Ε<3 ГО ΝΟ: 222), ΚΙΤΙδΚϋΤδΚΝί^ΡδΕΚΕδδνΤΑΑΌΤΑνΥΥΟΑΚ (8Ер ГО N0: 223), ΚΙ3Ι3ΚΟΤ5ΚΝ<2Ρ3ΕΚΕδδνΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (3Εζ) ГО ΝΟ: 224), ΚΙδΙδΚϋΤδΚΝΟΡδΕΚΕδδνΤΑΑΟΤΑνΥΥΟΑΚ (ЗЕ<3 ГО N0: 225).
26. Антитело по любому из пп.20-25, в котором последовательность СГОР3 У_н представляет собой ΚΟΚΟδΌΌΟΕΝΥ (81®) ГО N0: 100).
27. Антитело по любому из пп.20-2б, в котором последовательность ΡΚ4 У_н представляет собой \\®®)С,ТРУТУЗЗ (ЗР®) ГО N0: 101).
28. Антитело по любому из пп.20-27, дополнительно содержащее константный домен У_н.
29. Антитело по п.28, в котором константный домен имеет последовательность

Λ5ΤΚΝΡΟ УРРБА РЗЗ КЗТЗООТА АБОСЪ V КО ΥΡΡΕΡντν5λνΝ5Ο АБТЗО УН

ΤΡΡΑνΕ055ΟΕΥ3Ι-35ννΤνΡ855ΕΟΤ0ΤΥΙ0ΝνΝΗΚΡ5ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ50

ОКТНТСРРСРАРЕЕЕООРЗУРБРРРКРКВТЕМ15ЕТРЕУТСУУУОУ5НЕОРЕ νΚΡΝ\νΥνθθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΕΕΕ0ΥΝ3ΤΥΚνν5νΕΤνΕΗ0ϋλνΕΝΟΚΕΥΚ

С К УЗ ΝΚ АЬР ΑΡΙΕΚΤΙ3Κ А КСОРКЕРО V ΥΤΈΡΡ5 К υΕΙ/ίΚΝΟ УЗ ЬТСЬ V КОР

ΥΡ5ΟΙΑνΕ\νΕ5ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟ5θα5ΡΡΙ_Υ5ΚΕΤνθΚ5Κ\ν00ΟΝν РЗСЗУМНЕАЕНМНУТОКЗБЗБЗРОК (ЗЕО ГО N0: 52); или АЗТКОРЗУРРБАРЗЗКЗТЗООТААБОСБУКОУРРЕРУТУЗХУНЗОАБТЗОУН ΤΡΡΑνΕ0550ΕΥ8Ε53νντνΡ355Ε0Τ0ΤΥΙΟΝνΝΗΚΡ8ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ3Ο ОКТНТСРРСРАРЕББООРЗУРЬРРРКРКОТЕМККТРЕУТСУУУОУЗНЕОРЕ νΚΡΝ’Λ'ΎνίΤΟνΡ.νΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕΟΥΝίΤΥΚννβνΐ.ΤνΕΗΟΡΥ/Ι,ΝΟΚΡ.ΥΚ ΟΚν3ΝΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤΙ3ΚΑΚΟ0ΡΚ.ΕΡ0νΥΤΕΡΡ3ΚϋΕΕΤΚΝ0ν3ΕΤΟΕνΚΟΡ ΥΡ3ΡΙΑ V Е\У Ε3 ΝΟΟΡΕΝΝ Υ К'ПРРУЕОЗООЗРРБУЗК Τ ,ΤνηΚδΡννΌΟΟΝ V РЗСЗУМНЕАБНЫНУТОКЗБЗБЗРОК (ЗЕО ГО N0: 92); ИЛИ

Α5ΤΚΝΡ0νΡΡΕΑΡ55Κ5Τ500ΤΑΑΕ0<ΧνΚϋΥΡΡΕΡντν5\νΝ50ΑΕΤ50νΗ

ΤΡΡΑνΕ053ΟΕΥ5Ε55νντνΡ555ΕΟΤ0ΤΥΙ0ΝνΝΗΚΡ5ΝΤΚνθΚΚνΕΡΚ5Ο

ОКТНТСРРСРАРЕБЕОСРРУРБРРРКРКРТБМ13КТРЕУТСУУУОУ5НЕОРЕ νΚΡΝ\νΥνϋθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΚΕΕ0ΥΝΑΤΥΚνν3νΕΤνΕΗ0ϋ\νΕΝΟΚΕΥΚ ΟΚν5ΝΚΑΕΡΑΡΕΕΚΤΙ5ΚΑΚΟΟΡΚΕΡθνΥΤΕΡΡ5ΚΏΕΕΤΚΝθν5ΕΤΟΕνΚΟ ΡΥΡ8Ο]ΑνΕ\νΕ5ΝΟ0ΡΕΝΝΥΚΤΤΡΡνΕΟ5Ο08ΡΡΕΥ8ΚΕΤν0Κ8ΚΛν00ΟΝ УРЗСЗУМНЕАБНТУНУТОКЗЕЗЕЗРОК (ЗЕО ГО N0: 53).
30. Антитело по любому из пп.20-29, в котором последовательность ΡΚ1 У_ъ выбрана из группы, состоящей из Е1УБТОЗРАТБЗБЗРСЕРАТБЗС (ЗЕО ГО N0: 214) или РЛ'\®ТОЗРАТРЗРЗРС.РРАТРЗС (ЗЕО ГО N0: 215).
31. Антитело по любому из пп.20-30, в котором последовательность СОК.1 У_ъ представляет собой 3Α333Ε3ΥΙΗ (ЗЕО ГО N0: 88).
32. Антитело по любому из пп.20-31, в котором последовательность ΡΚ2 У_ъ представляет собой

- 148 024695

VΥ^^КРС^АРР^^IΥ (8ЕЕ) 10 N0: 189).
33. Антитело по любому из пп.20-З2, в котором последовательность СГОК2 У_ъ представляет собой ПТ8ИЪА8 (8ЕГО ГО N0: 190).
34. Антитело по любому из пп.20-ЗЗ, в котором последовательность ЕРЗ У_ъ представляет собой СIР^РР8С8С8СТ^РТ^ТI8Р^ЕРЕ^РАVΥΥС (8ЕГО 10 N0: 216) или С.1ЕОИЕ8С.8С.8С.ХОЕТЕТ1 8Р^ЕРЕ^РАVΥΥС (8ЕЕ) 10 N0: 217).
35. Антитело по любому из пп.20-З4, в котором последовательность СГОРЗ У_ъ представляет собой ЕЕ)С,8Е¥ЕЕТ (8ЕГО ГО N0: 192).
36. Антитело по любому из пп.20-З5, в котором последовательность ЕР4 У_ъ представляет собой ЕОООТКУЫКР (8ЕО ГО N0: 19З).
37. Антитело по любому из пп.20-З6, дополнительно содержащее константный домен У_ъ.
38. Антитело по п.З7, в котором константный домен имеет последовательность

ΤνΑΑΡ8νΡΙΡΡΡ$ΟΕ0ΕΚ5αΤΑ3ννσΕΙ_ΝΧΡΥΡΡΕΑΚνς>\νκνθΝΑΕζ>3ΟΝ3 ς>Ε5νΤΕ<3Ο5Κϋ5ΤΥ5Ε55ΤΕΤΕ5ΚΑΟΥΕΚΗΚνΥΑ€ΕνΤΗ9ΟΕ55ΡνΤΚ5ΡΝ

КОЕС (5Е<2 Ю N0: 93 ).
39. Антитело по п.1, в котором последовательность легких цепей представляет собой последовательность, указанную в 8Е0 ГО N0: 7, и последовательность тяжелых цепей представляет собой последовательность, указанную в 8Е0 ГО N0: 50.
40. Антитело по п.1, в котором последовательность легких цепей представляет собой последовательность, указанную в 8Е0 ГО N0: 7, и последовательность тяжелых цепей представляет собой последовательность, указанную в 8Е0 ГО N0: 94.
41. Антитело по любому из пп.1-40, в котором антитело имеет пониженный уровень фукозы.
42. Способ лечения злокачественной опухоли у субъекта, где злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из опухолей прямой и ободочной кишки, яичника, поджелудочной железы, предстательной железы и легкого, причем способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества связывающего домена или антитела по любому из пп.1-41.
43. Способ выявления присутствия злокачественных клеток в образце, причем способ включает приведение образца клеток в контакт со связывающим доменом или антителом по любому из пп.1-41 и определение связывания связывающего домена или антитела с клетками.