EA019357B1 - Алкилсульфонилзамещённые n-(тиазол-2-ил)бензамиды и их применение для лечения вирусной инфекции гепатита c - Google Patents

Abstract

В изобретении предложены алкилсульфонилзамещенные N-(тиазол-2-ил)бензамиды общей формулы (I)или его соль, где R-Rнезависимо выбраны из группы, включающей H, OH, (C-C)алкилтио, (C-C)алкилсульфонил, -O-CO-(C-C)алкил и -O-SO-(C-C)алкил; и Rи Rнезависимо выбраны из группы, состоящей из Н, (C-C)алкилтио, (C-C)алкилсульфонила и -O-SO-(С-С)алкила, при условии, что по меньшей мере один из R-Rили Rдолжен представлять собой (C-С)алкилсульфонил или -O-SO-(С-С)алкил. Указанные соединения демонстрируют высокую активность в отношении вируса гепатита.

Description

В заявке на настоящее изобретение испрашивается приоритет на основании предварительной заявки на патент США № 60/953758, поданной 3 августа 2007 г., предварительной заявки на патент США № 61/046956, поданной 22 апреля 2008 г., и предварительной заявки на патент США № 61/056369, поданной 27 мая 2008 г., полное содержание каждой из которых включено в настоящее описание посредством ссылки.

Положения относительно финансируемого из федерального бюджета исследования или разработки

Изобретение, описанное в настоящем патенте, было создано при поддержке Правительства на основании контракта ΝΙΑΙΌ Ν01-ΑΙ-30046 для медицинского центра Университета Джорджтауна (СеогдеΙο\νπ Ишуегвйу Мебюа1 СеШег). Соответственно, Правительство США может иметь определенные права на настоящее изобретение.

Уровень техники

В целом, настоящее изобретение относится к области тиазолидных соединений. В частности, изобретение относится к алкилсульфонилзамещенным тиазолидным соединениям.

Вирусы гепатита В (ИВУ) и гепатита С (ИСУ) являются причиной серьезных проблем в области здравоохранения, поскольку эти вирусы вызывают примерно более 500 миллионов случаев хронических инфекционных заболеваний по всему миру (Сйеп апб Могдап, 2006; Ьауапсйу, 2004). Оба вируса представляют собой причину серьезного прогрессирующего заболевания печени и являются основными факторами риска практически для всех случаев первичной печеночно-клеточной карциномы (Сйеп апб Могдап, 2006; Ьауапсйу, 2004; \Уопд апб Ьок, 2006). В то время как известные стандарты лечения обеих вирусных инфекций являются эффективными во многих случаях, они являются недостаточными и не приводят к вирусологическому или клиническому выздоровлению у большинства индивидуумов (\Уопд апб Ьок, 2006). Развитие резистентноети к лекарственным средствам у вируса НВУ, включая штаммы, обладающие резистентностью к многочисленным разрешенным к применению агентам, представляет собой все более серьезную клиническую проблему, при этом предполагают, что резистентность к лекарственным средствам будет являться серьезной клинической проблемой при лечении НСУ в будущем (Тоше1 е! а1., 2005; Топд е! а1., У1ш е! а1., 2006).

Тиазолидные соединения, такие как нитазоксанид (пбахохашбе) (ΝΤΖ), являются противоинфекционными и обладают активностью в отношении анаэробных бактерий, простейших и вирусов (Еох е! а1., 2005; Раикисй апб Арре1Ьаит, 2006; Во881дпо1 е! а1., 2006а; Во881дпо1 апб Е1-Сойагу, 2006). Изначально ΝΤΖ был разработан как средство для лечения кишечных протозойных инфекций, при этом противовирусные свойства ΝΤΖ были обнаружены в ходе его разработки для лечения криптоспоридиоза у пациентов с синдромом приобретённого иммунодефицита (СПИДом). ΝΤΖ продается в Соединенных Штатах для лечения диареи и энтерита, вызванного криптоспоридией (Сгур!обропбшт зрр) или лямблией кишечной (С1агб1а 1атЬ11а), у взрослых и детей вплоть до 12-месячного возраста (Айша®, Вотагк ЬаЬога!опех Татра, Е1опба И8А). Клинические исследования продемонстрировали эффективность ΝΤΖ при лечении диареи и энтерита, связанного с кишечными протозойными инфекциями, вызванными криптоспоридией (Сгур!обропбшт зрр), лямблией кишечной (С.1атЬ11а), амебой дизентерийной (Еп!атоеЬа Ыб!о1уйса) и В1аб!осу8Й8 Ьот1Ш8 (Атаб1 е! а1., 2002; Οη!ζ е! а1., 2001; Во881дпо1 е! а1., 2001, 2005, 2006Ь). Последние рандомизированные двойные слепые клинические исследования продемонстрировали эффективность ΝΤΖ при лечении псевдомембранозного колита, вызванного С1об!пбшт бййсбе, у взрослых, ротавирусного гастроэнтерита у маленьких детей и норовирусного гастроэнтерита у взрослых (Мибйег е! а1., 2006; Во881дпо1 е! а1., 2006а; Во881дпо1 апб Е1 Сойагу, 2006). Механизм действия ΝΤΖ в отношении анаэробных организмов объясняют нарушением протекания ферментзависимых реакций переноса электронов с участием пируват:ферредоксин оксидоредуктазы (РЕ0В), необходимых для анаэробного энергетического метаболизма (Нойшап е! а1., 2006). Механизм противовирусной активности указанного средства не полностью объяснен.

После перорального введения 500 мг таблетки ΝΤΖ частично абсорбируется из желудочнокишечного тракта и быстро гидролизуется в плазме с образованием активного циркулирующего метаболита, тизоксанида (ί^ζοxаη^бе) (ΤΙΖ). ΝΤΖ не обнаруживают в плазме. Максимальные концентрации ΤΙΖ в сыворотке достигают приблизительно 10 мкг/мл (37 мкМ) (8!оск18 е! а1., 2002) после перорального введения одной 500 мг таблетки ΝΤΖ (Айша®) с пищей. ΤΙΖ находится в глюкурон-конъюгированной форме в печени и выводится с мочой и желчью.

Приблизительно две трети пероральной дозы проходят через кишечный тракт и выводятся с калом в виде ΤΙΖ (Вгоекйиубеп е! а1., 2000). Период полувыведения ΤΙΖ из плазмы составляет приблизительно 1,5 ч. ΤΙΖ не ингибируют ферменты цитохрома Р450 и, следовательно, не предполагают взаимодействий между лекарственными средствами (Вгоекйиубеп е! а1., 2000; 8!оск18 е! а1., 2002). По имеющимся данным, самые частые побочные эффекты в клинических исследованиях включают слабую боль в области живота, головную боль, диарею и тошноту, которая встречается с той же частотой, что и у пациентов, получающих плацебо. В то время как большинство клинических опытов с использованием ΝΤΖ включало

- 1 019357

3-14 дней лечения, непрерывное применение лекарственного средства в течение 4 лет было оценено как не вызывающее у пациентов с криптоспоридиозом, связанным со СПИДом, каких-либо значительных побочных эффектов, связанных с лекарственным средством (Рох с1 а1., 2005; ВоЧдпок 2006).

В настоящем описании представлены результаты исследований, характеризующие активность ΝΤΖ, ΤΙΖ и других новых тиазолидов. В частности, продемонстрирована противовирусная активность 2-бензамидо-5-алкилсульфонилтиазолов.

Краткое описание изобретения

В настоящем изобретении предложены тиазолидные соединения или соли указанных соединений. В некоторых вариантах реализации предложенные соединения отвечают формуле (I)

где Я₁-К₅ независимо выбраны из группы, включающей Н, ОН, (С₁-С₆)алкилтио, (С₁-С₆)алкилсульфонил, -О-СО-(С₁-С₆)алкил и -О-8О₂-(С₁-С₆)алкил; и

К.₆ и Я₉ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, (С₁-С₆)алкилтио, (С₁-С₆)алкилсульфонила и -О-8О₂-(С₁-С₆)алкила, при условии, что по меньшей мере один из Я₁-К₆ или Я₉ должен представлять собой (С₁-С₆)алкилсульфонил или -О-8О₂-(С₁-С₆)алкил.

В некоторых вариантах реализации соединение формулы (I) представляет собой фармацевтически приемлемую соль соединения формулы (I).

В одном из вариантов реализации соединение отвечает следующей формуле:

Также предложены фармацевтические композиции, содержащие указанные соединения и носитель (например, разбавитель или наполнитель). Фармацевтическая композиция может содержать эффективное количество соединения для лечения инфекции НСУ.

Также предложено применение соединения согласно изобретению для лечения инфекции НСУ у пациента, нуждающегося в таком лечении. Например, у пациента может быть хроническая инфекция НСУ.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 представлены примеры анализа взаимодействий между интерферонами при комбинированном лечении.

Анализ комбинированных видов терапии осуществляли с использованием ПО Са1си8уп™ (ΒίοδοΓΐ, 1пс., СатЬпбде, иК). Графики А и В отражают виды лечения НВУ; графики С-Р отражают виды лечения НСУ. Представлены два типа оценки. На панелях А, С и Е представлены графики зависимости С1-Ра (комбинированный индекс - пораженная фракция (вируса)) (Ве1еп'ки апб 8с1ппахг 1994). Для указанных графиков комбинированный индекс [С1] более 1,0 указывает на антагонизм, а С1 менее 1,0 указывает на синергию. Оценка синергии, аддитивности (суммирования) или антагонизма на различных уровнях ингибирования вируса (например, 5% (Ра=0,5) - 99% (Ра=0,99)) представлена линиями и точками на графике. Пунктирные 5% (Ра=0,5) - 99% (Ра=0,99)) представлены линиями и точками на графике. Пунктирные линии на графике А показывают стандартные отклонения 1,96 (условно не показаны на графике С). На графиках В, Ό и Р представлены консервативные изоболограммы. Для указанных графиков значения ЕС₅₀, ЕС₇₅ и ЕС₉₀ (50%, 75% и 90% эффективные противовирусные концентрации) для комбинированных видов лечения показаны в виде одной точки. Три линии, исходящие из осей, означают предполагаемые (например, аддитивные) значения ЕС₅₀, ЕС₇₅ и ЕС₉₀ для комбинаций лекарственных средств, рассчитанные исходя из монотерапии. Значения ЕС₅₀, ЕС₇₅ и ЕС₉₀ для комбинаций, обозначенные на графике слева (например, меньше чем) от соответствующих линий, указывают на синергию, а значения, обозначенные на графике справа (например, больше чем) от соответствующих линий, указывают на антагонизм.

- 2 019357

Фиг. 2 иллюстрирует действие ΝΤΖ на уровни нуклеиновых кислот и белков в клетках 2.2.15.

Культуры клеток 2.2.15 обрабатывали согласно стандартным процедурам (КогЬа апб Оегш, 1992, Апбупа1 Кек. 19:55). Уровни нуклеиновых кислот НВУ определяли путем количественного анализа методом блот-гибридизации (КогЬа апб Сепп. 1992, Λπΐίνίπιΐ Кек. 19:55; 1995, 28:225). Уровни белков НВУ определяли путем полуколичественного ферментативного иммуноанализа (Е1А) (КогЬа апб Оегш, 1992, Апбу1га1 Кек. 19:55; 1995, 28:225). Образцы разбавляли (2-10-кратно), в результате чего приводили уровни в динамические диапазоны чувствительности Е1А. Вирионную ДНК НВУ, НВкАд и НВеАд анализировали из образцов культуральной среды. РНК НВУ, ИР НВУ (интермедиаты репликации ДНК НВУ) и НВсАд анализировали из внутриклеточных лизатов.

Подробное описание предпочтительных вариантов реализации

Если не указано иное, единственное число означает один или несколько.

Предложены тиазолидные соединения формулы (I)

где К1-К₆ имеют значения, приведенные выше.

В некоторых вариантах реализации Κι, К₂, К₃, Кд или К₅ представляет собой -О8(О₂)Кх, где Кх представляет собой алкил. В некоторых вариантах реализации К₁, К₂, К₃, Кд или К₅ представляет собой О8О2-СН3.

В некоторых вариантах реализации одна из групп К₆ или К₉ представляет собой Н, а другая представляет собой -8О₂-алкил, предпочтительно -8О₂СН₃, -8О₂Е1, -8ОДРг или -СН₂8О₂Ме.

Предложенные соединения включают 2-бензамидо-5-метилсульфонилтиазолиды, 2-бензамидо-4метилсульфонилтиазолиды и 2-(тиазол-2-илкарбамоил)фенилметансульфонаты.

Согласно некоторым вариантам реализации соединений формулы (I) К! выбран из Н, ОН, -О-СО-К_б, 8К_е и 8О₂СН₃; К₂-К₅, каждый независимо друг от друга, выбраны из Н, ОН, -О-СО-К_б; 8К_е, где К_б и К_е, каждый независимо друг от друга, представляют собой (С1-С₆)алкил; где К₆ представляет собой Н или 8О₂СН₃; и где в случае, если К1 представляет собой 8О₂СН₃, К₆ представляет собой Н; и в случае, если К₆ представляет собой 8О₂СН₃, К1 не представляет собой 8О₂СН₃.

Согласно другим вариантам реализации соединений формулы (I) указанные соединения отвечают формуле (I), в которой К1-К5, каждый независимо друг от друга, выбраны из Н, ОН, -О-СО-К_б, 8К_е; где К_б и Ке, каждый независимо друг от друга, представляют собой (С1-С₄)алкил; а К₆ представляет собой 8О2СН3.

Согласно другим вариантам реализации соединений формулы (I) указанные соединения отвечают формуле (I), в которой Ю-К5, каждый независимо друг от друга, представляют собой Н. Согласно другим вариантам реализации указанные соединения отвечают формуле (I), в которой К!-К₅, каждый независимо друг от друга, представляют собой Н; а К₆ представляет собой 8О₂СН₃.

Согласно другим вариантам реализации соединений формулы (I) указанные соединения отвечают формуле (I), в которой К1-К₅, каждый независимо друг от друга, выбраны из Н, -ОН, О-СО-К_б, 8Ке, где К_б и К_е, каждый независимо друг от друга, представляют собой (С1-С₆)алкил; а К₆ представляет собой 8О2СН3.

Согласно другим вариантам реализации соединений формулы (I) указанные соединения отвечают формуле (I), в которой К1 представляет собой -О8(О₂)Кх, где Кх представляет собой алкил; К₂-К₅, каждый независимо друг от друга, выбраны из Н, -ОН, -О-СО-К_б, 8К_е; Кб выбран из Н, -ОН, 8Ке, где К_б и Ке, каждый независимо друг от друга, представляют собой (С1-С₄)алкил.

Согласно другим вариантам реализации соединений формулы (I) указанные соединения отвечают формуле (I), в которой К! представляет собой -О8(О₂)СН₃; К₂-К₅, каждый независимо друг от друга, выбраны из Н, ОН, О-СО-К_б, 8Ке, где К_б и Ке, каждый независимо друг от друга, представляют собой (С1-С₄)алкил; а Кб представляет собой Н.

Согласно другим вариантам реализации соединений формулы (I) указанные соединения отвечают формуле (I), в которой К1 представляет собой -О8(О₂)СН₃; К₂-К₅, каждый независимо друг от друга, представляют собой Н; а К₆ представляет собой Н.

- 3 019357

Согласно другим вариантам реализации соединений формулы (I) указанные соединения отвечают формуле (I), в которой Κι представляет собой -08(0₂)СН₃; К₂-К₅, каждый независимо друг от друга, выбраны из Н, -ОН, 0-С0-К_б и 8К_е и где Κι и К_е, каждый независимо друг от друга, представляют собой (С1-С₆)алкил; а Кб представляет собой Н.

Предложенные соединения включают соединения формулы (I), соли и сольваты указанных соединений. Например, в некоторых вариантах реализации соединение согласно настоящему изобретению может представлять собой соль сольвата.

Термин соли используется в самом широком понимании этого слова. Например, термин соли включает водородсодержащие соли и гидроксидсодержащие соли с ионами настоящего соединения. В некоторых вариантах реализации термин соль может представлять собой подкласс под названием фармацевтически приемлемые соли, представляющие собой соли настоящих соединений, обладающие фармакологической активностью и не являющиеся биологически нежелательными или нежелательными в другом отношении. Во всех вариантах реализации соли могут быть образованы с помощью кислот, например, без ограничения, водород, ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, тиоцианат, тозилат и ундеканоат. Во всех вариантах реализации соли могут быть образованы с помощью оснований, например, без ограничения, гидроксид, соли аммония, соли щелочных металлов, такие как соли лития, натрия и калия, соли щелочно-земельных металлов, такие как соли кальция, магния, соли алюминия, соли с органическими основаниями, такими как аммиак, метиламин, диэтиламин, этаноламин, дициклогексиламин, Ν-метилморфолин, Ы-метил-0глюкамин, и соли с аминокислотами, такими как аргинин и лизин. Основные азотсодержащие группы могут быть кватернизированы агентами, включая низшие алкилгалогениды, такие как метил-, этил-, пропил- и бутилхлориды, бромиды и йодиды; диалкилсульфаты, такие как диметил-, диэтил-, дибутил- и диамилсульфаты; длинноцепочечные галогениды, такие как децил-, лаурил-, миристил- и стеарилхлориды, бромиды и йодиды; и аралкилгалогениды, такие как бензил- и фенетилбромиды.

В настоящем описании термин терапевтически приемлемая соль означает соли или цвиттерионные формы соединений согласно настоящему изобретению, которые являются водо- или жирорастворимыми или диспергируемыми, которые подходят для лечения заболеваний, не вызывая при этом неспецифической токсичности, раздражения и аллергической реакции, которые отвечают разумному соотношению польза-риск и которые являются эффективными для их предполагаемого применения. Указанные соли могут быть получены в ходе конечного выделения и очистки соединений или отдельно путем осуществления взаимодействия подходящего соединения в форме свободного основания с подходящей кислотой. Типичные соли присоединения кислот включают ацетат, адипат, альгинат, Ь-аскорбат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат (безилат), бисульфат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, цитрат, диглюконат, формиат, фумарат, гентизат, глутарат, глицерофосфат, гликолят, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гиппурат, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, 2-гидроксиэтансульфонат (изетионат), лактат, малеат, малонат, ОЬ-манделат, мезитиленсульфонат, метансульфонат, нафтиленсульфонат, никотинат, 2-нафталинсульфонат, оксалат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфонат, пикрат, пивалат, пропионат, пироглутамат, сукцинат, сульфонат, тартрат, Ь-тартрат, трихлорацетат, трифторацетат, фосфат, глутамат, бикарбонат, п-толуолсульфонат (п-тозилат) и ундеканоат. Также основные группы в соединениях согласно настоящему изобретению могут быть кватернизированы метил-, этил-, пропил- и бутилхлоридами, бромидами и иодидами; диметил-, диэтил-, дибутил- и диамилсульфатами; децил-, лаурил-, миристил- и стерилхлоридами, бромидами и иодидами и бензил- и фенетилбромидами. Примеры кислот, которые могут быть использованы для образования терапевтически приемлемых солей присоединения, включают неорганические кислоты, такие как соляная, бромисто-водородная, серная и фосфорная, и органические кислоты, такие как щавелевая, малеиновая, янтарная и лимонная. Соли могут быть также получены путем координации соединений с ионом щелочного или щелочно-земельного металла. Следовательно, настоящее изобретение включает натриевые, калиевые, магниевые и кальциевые соли соединений согласно настоящему изобретению и т.п.

Соли присоединения оснований могут быть получены в ходе конечного выделения и очистки соединений путем осуществления взаимодействия карбоксильной, фенольной или аналогичной группы с подходящим основанием, таким как гидроксид, карбонат или бикарбонат катиона металла, или с аммиаком или органическим первичным, вторичным или третичным амином. Катионы терапевтически приемлемых солей включают катионы лития, натрия, калия, кальция, магния и алюминия, а также катионы нетоксичных четвертичных аминов, такие как аммоний, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний, метиламин, диметиламин, триметиламин, триэтиламин, диэтиламин, этиламин, трибутиламин, пиридин, Ν,Ν-диметиланилин, Ν-метилпиперидин, Ν-метилморфолин, циклогексиламин, прокаин, дибензиламин, Ν,Ν-дибензилфенетиламин, 1-фенамин и Ν,Ν'-дибензилэтилендиамин. Другие типичные органические амины, подходящие для образования солей присоединения оснований, включают этилендиамин, этаноламин, диэтаноламин, пиперидин и пиперазин.

- 4 019357

Термин сольваты используется в самом широком понимании этого слова. Например, термин сольваты включает гидраты, образуемые, когда соединение согласно настоящему изобретению содержит одну или несколько связанных молекул воды.

В настоящем описании следующие термины имеют указанные значения.

В настоящем описании термин ацил отдельно или в комбинации относится к карбонильной группе, присоединенной к алкенильной, алкильной, арильной, циклоалкильной, гетероарильной, гетероциклической или любой другой группе, в случае, когда атом, присоединенный к карбонильной группе, представляет собой атом углерода. Термин ацетильная группа относится к группе -С(О)СН₃. Примеры ацильных групп включают формильные, алканоильные и ароильные радикалы.

Термин ациламино включает аминорадикал, содержащий в качестве заместителя ацильную группу. Примером ациламино радикала является ацетиламино (СН₃С(О)ИН-).

В настоящем описании термин алкоксикарбонил отдельно или в комбинации относится к алкоксигруппе, присоединенной к исходному молекулярному фрагменту посредством карбонильной группы. Примеры таких алкоксикарбонильных групп включают метоксикарбонил, этоксикарбонил, пропоксикарбонил, бутоксикарбонил и гексилоксикарбонил.

В настоящем описании термин алкил отдельно или в комбинации относится к линейному или разветвленному алкильному радикалу, содержащему от 1 до 20 (включительно), предпочтительно от 1 до 10 и более предпочтительно от 1 до 6 атомов углерода. Термин алкильные группы используется в самом широком понимании этого слова. Алкильные группы могут содержать заместители, как определено в настоящем описании. Примеры алкильных радикалов включают метил, этил, н-пропил, изопропил, нбутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изоамил, гексил, октил, ноил и т.п. Например, О(С1-С§)алкильные группы включают линейные О(С1-С₈)алкильные группы, а также разветвленные О(С1-С₈)алкильные группы. В качестве еще одного примера указанный термин включает циклоалкильные группы, как, например, (С₃-С₈)алкильные группы включают (С₃-С₈)циклоалкильные группы.

В настоящем описании термин алкилсульфонил отдельно или в комбинации относится к алкильной группе, присоединенной к исходному молекулярному фрагменту посредством сульфонильной группы. Примеры алкилсульфонильных групп включают метансульфонил, этансульфонил, третбутансульфонил и т.п.

В настоящем описании термин алкилтио отдельно или в комбинации относится к алкилтиоэфирному (В-8-) радикалу, при этом термин алкил является таким, как определено выше. Примеры подходящих алкилтиоэфирных радикалов включают метилтио, этилтио, н-пропилтио, изопропилтио, нбутилтио, изобутилтио, втор-бутилтио, трет-бутилтио, этоксиэтилтио, метоксипропоксиэтилтио, этоксипентоксиэтоксиэтилтио и т.п.

Термины карбокси или карбоксил, используемые либо отдельно, либо с другими терминами, как, например карбоксиалкил, означают -СО₂Н.

В настоящем описании термины бензо или бенз отдельно или в комбинации относятся к двухвалентному радикалу С₆Н₄=, полученному из бензола. Примеры включают бензотиофен и бензимидазол.

В настоящем описании термин С-связанный отдельно или в комбинации относится к любому заместителю, присоединенному к исходному молекулярному фрагменту посредством связи углеродуглерод.

В настоящем описании термин карбонат отдельно или в комбинации относится к группе -О-С(=О)ОВ, где В является таким, как определено в настоящем описании.

В настоящем описании термин карбонил при использовании отдельно включает формил [-С(О)Н], а в комбинации представляет собой группу -С(О)-.

В настоящем описании термин карбокси относится к -С(О)ОН или к соответствующему карбоксилату, такому как производное карбоновой кислоты в виде соли или сложного эфира. Термин О-карбоксигруппа относится к группе ВС(О)О-, где В является таким, как определено в настоящем описании. Термин С-карбоксигруппа относится к группам -С(О)ОВ, где В является таким, как определено в настоящем описании.

В настоящем описании термин сложный эфир отдельно или в комбинации относится к карбонилоксигруппе -(С=О)О, соединяющей (в качестве мостика) два фрагмента, которая связана с атомами углерода. Примеры включают этилбензоат, н-бутилциннамат, фенилацетат и т.п.

В настоящем описании термин эфир отдельно или в комбинации относится к оксигруппе, соединяющей (в качестве мостика) два фрагмента, которая связана с атомами углерода.

В настоящем описании термин галогено или галоген отдельно или в комбинации относится к фтору, хлору, брому или йоду.

В настоящем описании термин гидрокси отдельно или в комбинации относится к -ОН.

В настоящем описании термин гидроксиалкил отдельно или в комбинации относится к линейной или разветвленной алкильной группе, содержащей от одного до примерно десяти атомов углерода, любой из которых может содержать в качестве заместителя один или несколько гидроксильных радикалов. Примеры таких радикалов включают гидроксиметил, гидроксиэтил, гидроксипропил, гидроксибутил и гидроксигексил.

- 5 019357

В настоящем описании термин гидроксиалкил отдельно или в комбинации относится к гидроксигруппе, присоединенной к исходному молекулярному фрагменту посредством алкильной группы.

В настоящем описании термин низший отдельно или в комбинации означает содержащий от 1 до 6 (включительно) атомов углерода.

В настоящем описании термины сульфонат, сульфоновая кислота и сульфоновый отдельно или в комбинации относятся к группе -8О₃Н и аниону указанной группы, так как сульфоновая кислота используется при образовании соли.

В настоящем описании термин сульфанил отдельно или в комбинации относится к -8 и -8-.

В настоящем описании термин сульфонил отдельно или в комбинации относится к -8О₂-.

В настоящем описании термины тиа и тио отдельно или в комбинации относятся к группе -8или эфиру, в котором кислород замещен на серу. Окисленные производные тиогруппы, а именно сульфинил и сульфонил, включены в определение терминов тиа и тио.

В настоящем описании термин тиоэфир отдельно или в комбинации относится к тиогруппе, соединяющей (в качестве мостика) два фрагмента, которая связана с атомами углерода.

Термин алкил используется в самом широком понимании этого слова. Например, указанный термин относится к разветвленным, неразветвленным и циклическим насыщенным углеводородным цепям, содержащим указанное число атомов углерода. Например, термин О(С₁-С₈)алкил включает линейный О(С₁-С₈)алкил, а также разветвленный О(С₁-С₈)алкил. В качестве еще одного примера термин включает циклоалкил, как, например, (С₁-С₈)алкил включает (С₃-С₈)циклоалкил. Во всех вариантах реализации указанный термин включает, без ограничения, заместители, такие как метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, н-гексил и т.п., если не указано иное.

Во всех вариантах соединений формулы (I) группы К.₂-К.₅ могут быть одинаковыми, могут быть разными или некоторые из К.₂-К.₅ могут быть одинаковыми, в то время как другие являются разными. Возможна любая комбинация.

В любом варианте соединений формулы (I) либо К₁, либо К.₆ может представлять собой 8О₂СН₃. Однако если К₁ представляет собой 8О₂СН₃, то К₆ представляет собой Н. В другом варианте, если К₆ представляет собой 8О₂СН₃, то К₁ выбран из Н, -ОН, -О-С’О-Κ,ι и 8К_е.

В любом варианте соединений формулы (I), в котором К₆ представляет собой 8О₂СН₃, К₁ и/или К₅ может независимо представлять собой группу или атом, кроме атома водорода. Например, К₁ и/или К₅ может независимо быть выбран из -ОН, -О-СО-К._и. В некоторых вариантах реализации К₁ и/или К₅ может независимо быть выбран из ОН, -О-СО-СН₃, О-СО-СН₂СН₃. К,, представляет собой (С₁-С₆)алкил. В любом варианте К_и может представлять собой (С₁ -С₄)алкил. В любом варианте К_и может представлять собой (С₁-С₃)алкил.

Примеры соединений согласно настоящему изобретению могут включать, без ограничения, следующие соединения, перечисленные в табл. 1.

- 6 019357

Таблица 1

Νο.	Структура	Νο.	Структура
6	ОН О N---, ^5 ^ЗОгМе	7	^Х^йХХ^м,
11	0 II Ο'^'Ό 0 |у^	12	0 Ил — 0 Ν-% ν«Λ
13	О Ы-'Ъ о 0«уЛ>	14	0ХТ 0 0=$' <?
15	0 ί Γ\ν X	16	0 —3^° 0 Ν-% %0
17	0 Ν3\ «ζ° II и уЛ* /дД 8 4	18	0 Ν% ?νθ 0 ο=ε'
60	50а Ме	62	бОгМе ОАе 0 м---й ,,νη
69		70	Γ ϊ XX V %сн3

- 7 019357

71	Г 1 ΖΎ П З(снг|:,сн, и	72	ОН О N—л ϊ Ϊ /0 <νΓ-'^Ν'^£<'8(ΟΗ2)3ΟΗ,, и
73	Г 1 ГЛ и	74	Г Ϊ 70 Ч^| 'н Х£/ 5Ог1СНг1ЛНа
75	ОНа О пЧ>—3>0 (00 '	76	о Ν'0 о мл До-и -
77	ЖО О Ν-Λ °'0лал= 8'	78	0 Ν~Ά / аоХ0Л Г
79	Τχ0ί|0Τ°	80	0 Νν. / 0Л Г
81	70/0°	82	Э- О Ν 0 Ао
83	о/ 00 л	84	о0 А° V4

- 8 019357

85	δ— ο Ύ Υι/Χ	86	о,п ''5 — ° >Ύ γγ-Λ
87	оЗ? '3— о ν—\ η°ΎΎ	101	°Ас ? ϊΥ-3°2'РГ όϋ'
112	&О2Ме Т1 дЗ-50* Υ 8	124	ЗОзМе Г1 л>з0гМе όί
135	о Н —ЗО2Ме Η3·./Υ·ΝΛ5 и н	146	о 1|^-ЗО2Ме НОжА 5 Ψ н он
147	о £^8О2Ме Ас0 '-Ζΐν ' Ν 5 Vй	148	-А /9 О н А ОАс / 1
159	$02Ме О Ν—\ “Ύ»Α>	170	8О2Ме О Ν А γγΎ ОН
171	8О2Ме 0 “-0ν?	172	''Юас

- 9 019357

183	„ Ν\ о ή у—εο2Μθ х> =	195	г·, νΌ Π ί у—®О2Ме хЛ8 ΑεΟ'·Λ~''Ν
196	_ θ “ΝΟ ή АсО	207	ЗО^Ме 0 М'Ч „дУ8^
218	ЭО^Ме ο νΛχ Ν·4 ОН	219	6О2Ме О Ν-Λ АЛ ΑεΟ'^'Ν
220	°Νθ -с7Фг	255	О <Ό 0 Νλ
256	9 ЗОгМе <Ό 0 Ν—К ) АЛ Λ > С |Г^[ н 5	257	4 (ΧΌ 0 Ν-Χ
259	о \υ 0 Ν-^. I I £ 1 >-8О2Ме (У«5

- 10 019357

В табл. 2 указаны температуры плавления различных соединений.

Таблица 2

№ соединены я	Структура	Темпера тура плавлен ия (’С)
11	V Ό О Ν<\	185.5- 187.8
6	у-Ч	282-283
60	ОН О	223.5- 225.6
7	О 'Λί,ρ. Ν'-Х ?^О О О η С''	173-175
62	О До Ко о ’ιΙ'Νχ	175.6- 178.8

- 11 019357

69	μ/,ЛК»	145-147
70	(ΙρΛΚ.	225-226
71	,ух„	100-101
72	ОН О Ν—1 л и	180-181
73	Г I Гл и	138-140
74	Г ! ТУ	235-236
75	О№ О 1|Д>_8*° сУ“ 8	>300
76	ддУ«л '	193.5- 195.5
77	'Л'° 0 Ν-?., °'0ЛЙЛ8 8'	135.2- 136.2

- 12 019357

78	0 / ΐ-	279.6- 280.6
79	0 1 °т°'СгЛяЛ'	186.5 (с раэложе нием («ес))
80	О Ν-Ϊ. / дт л- ·	252.5- 255.5 (с раэложе нием (бес)}
81		271.1- 272.3
82	5 — О Ν-λ У’-·4 Аз	185.7- 188.7
83	5% 0 νΑ А А	242-246 (с раэложе нием (бес))
84	г/А	253-255 (с раэложе нием (бес))

86	0 ΟνΜ ·$— 0 νΑ Ύ°ΌΛ“Λ3	209-212
87	0 О-Л ^3ЛА4	258-259 (с раэложе нием (бес))

Для вышеуказанных соединений, содержащих метилсульфонил (-8О₂СН₃), авторами настоящего изобретения также предусмотрено, что вместо метилсульфонила может быть использована группа, выбранная из 8О2СН2СН3, -8О2СН2СН(СН3)2.

Соединение согласно настоящему изобретению, в котором К₆ представляет собой 8О₂СН₃, может быть получено путем осуществления взаимодействия ацилгалогенида с амином в подходящих условиях реакции. В некоторых вариантах реализации указанная реакция может быть в общем представлена следующим образом:

- 13 019357

Соединения согласно настоящему изобретению также могут быть получены в соответствии со следующей схемой реакции:

Соединение, представляющее собой 2-(тиазол-2-илкарбамоил)фенилметансульфонат (11), может быть синтезировано способом, описанным в примере 3.0.

Другие соединения согласно настоящему изобретению также могут быть получены в соответствии со следующей схемой реакции:

Соединения, представляющие собой 2-гидрокси-Ы-[4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамид (60) и 2-{[4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетат (62), могут быть синтезированы способом, описанным в примере 4.0.

Другие соединения согласно настоящему изобретению также могут быть получены в соответствии со следующей схемой реакции:

- 14 019357

Соединения, представляющие собой

4-{[4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетат (83), 4-гидрокси-Ы-[4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамид (84), 3-{ [4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетат (86) и 3 -гидрокси-Ы-[4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил] бензамид (87), могут быть синтезированы общими способами, описанными в примере 5.0.

Кроме того, соединения согласно настоящему изобретению также могут быть получены в соответствии со следующей схемой реакции:

Соединения, представляющие собой

4-{[5-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетат (78),

3- {[5-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетат (79),

4- гидрокси-Ы-[5-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамид (80) и 3 -гидрокси-Ы-[5-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил] бензамид (81), могут быть синтезированы общими способами, описанными в примере 6.0.

Другие соединения согласно настоящему изобретению также могут быть получены в соответствии со следующей схемой реакции:

Соединения, представляющие собой 2-(5-(метилсульфонил)тиазол-2-илкарбамоил)фенилацетат (7) и 2-гидрокси-Ы-(5-(метилсульфонил)тиазол-2-ил)бензамид (6), могут быть синтезированы способом, описанным в примере 7.0.

Настоящее изобретение также включает композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение согласно настоящему изобретению в носителе.

Термин носитель используется в самом широком понимании этого слова. Например, термин носитель относится к любым носителям, разбавителям, эксципиентам, смачивающим веществам, буферным веществам, суспендирующим средствам, смазывающим веществам, адъювантам, наполнителям, системам доставки, эмульгаторам, дезинтегрантам, абсорбентам, консервантам, поверхностно-активным веществам, красителям, ароматизаторам и подсластителям. В некоторых вариантах реализации носитель может представлять собой фармацевтически приемлемый носитель, более узкий термин, чем носитель,

- 15 019357 так как термин фармацевтически приемлемый носитель означает нетоксичный, подходящий для применения в фармацевтической композиции.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей в фармацевтически приемлемом носителе эффективное количество по меньшей мере одного из соединений согласно настоящему изобретению.

Термин эффективное количество используется в самом широком понимании этого слова. Указанный термин, например, относится к количеству, необходимому для достижения требуемого эффекта.

В некоторых вариантах реализации соединение согласно настоящему изобретению присутствует в фармацевтической композиции в эффективном количестве для лечения инфекции НСУ (например, хронической инфекции НСУ). Термин лечение инфекции НСУ может относиться к (1) предупреждению возникновения инфекции НСУ у животного, которое может быть предрасположено к инфекции НСУ, но у которого она еще не диагностирована; (ίί) ингибированию или замедлению инфекции НСУ, например приостановлению ее развития; (ш) ослаблению хронической инфекции, например достижению ремиссии; (ίν) улучшению симптома у субъекта с хронической инфекцией и/или (ν) продлению жизни субъекта с хронической инфекцией.

Композиции согласно настоящему изобретению могут быть получены в виде твердых или жидких лекарственных форм или в виде паст или мазей и могут содержать дополнительные активные компоненты.

Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит фармацевтически приемлемый носитель, который, в частности, не ограничен и включает широкий диапазон носителей, известных специалистам в данной области техники, включая смачивающие или диспергирующие вещества (патент США 5578621, включенный в настоящее описание посредством ссылки), производные крахмала (патент США 5578621, включенный в настоящее описание посредством ссылки), наполнители и т.п. Варианты таблеток могут содержать оболочку вещества, которая составляет энтеросолюбильную оболочку, т.е. оболочку, которая является, по существу, нерастворимой в желудочном соке, но, по существу, растворима в кишечных жидкостях.

Фармацевтические композиции, содержащие соединения согласно настоящему изобретению, в некоторых вариантах реализации получены для перорального введения и возможно находятся в форме жидкости, например эмульсии или раствора в воде или масле, таком как арахисовое масло, или другой жидкости. Составы неводных мицеллярных растворов могут быть получены согласно способу, описанному в патенте США 5169846, включенному в настоящее описание посредством ссылки. В качестве альтернативы таблетки могут быть получены, например, путем осуществления следующих стадий: влажное гранулирование, сушка и прессование. Нанесение пленочного покрытия может быть в общем случае осуществлено с помощью органических растворителей.

Настоящее изобретение представляет собой применение соединения согласно настоящему изобретению для лечения инфекции НСУ (например, хронической инфекции НСУ).

В некоторых вариантах реализации субъект выбран из животных. В некоторых вариантах реализации субъект выбран из млекопитающих. В некоторых вариантах реализации субъект выбран из домашних животных, таких как мыши, собаки, кошки и т.д. В некоторых вариантах реализации субъект выбран из людей.

В некоторых вариантах реализации противовирусное лечение или профилактические дозы соединения согласно настоящему изобретению могут зависеть от массы субъекта и могут быть предположены специалистом без проведения излишних исследований исходя из следующих примеров, приведенных в целях иллюстрации и не являющихся ограничивающими.

Соединения и композиции согласно настоящему изобретению могут быть введены локально или системно любыми способами, известными специалисту. Например, соединения и композиции согласно настоящему изобретению могут быть введены перорально, парентерально, с помощью спрея для ингаляции, местно, ректально, назально, буккально, вагинально или посредством имплантированного резервуара в дозированных составах, содержащих традиционные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и наполнители. В настоящем описании термин парентеральный включает подкожную, внутривенную, внутриартериальную, внутримышечную, интраперитонеальную, интратекальную, внутрижелудочковую, подложечную, интракраниальную или внутрикостную инъекцию и инфузионные способы. Точный протокол введения будет варьироваться в зависимости от различных факторов, включая возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и режим питания пациента; определение конкретных процедур введения является стандартной процедурой для специалиста.

Дозировки порядка от примерно 0,1 до примерно 100 мг/кг активного компонента (соединения) являются подходящими для лечения вышеуказанных состояний (например, 0,1 мг/кг-день). В некоторых вариантах реализации количества находятся в диапазоне от примерно 1 до примерно 10 мг/кг, а в других вариантах реализации количества находятся в диапазоне от примерно 2 до примерно 5 мг/кг. Конкретная дозировка для каждого конкретного пациента будет варьироваться в зависимости от ряда факторов, включая активность и возможную токсичность конкретного используемого соединения; возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и диету пациента; время введения; скорость выведения из организ

- 16 019357 ма; комбинацию лекарственных средств; тяжесть конкретного заболевания, подвергаемого лечению; и форму введения. Как правило, результаты исследования эффекта дозы ίη νίίτο дают представление о подходящих дозах для введения пациенту. Исследования на моделях заболеваний на животных также являются полезными. Принципы определения подходящих дозировок хорошо известны в данной области техники.

Любой режим введения для регулирования времени и последовательности доставки лекарственного средства может быть использован и повторен по мере необходимости для осуществления лечения. Указанный режим может включать многократное применение или предварительное введение и/или совместное введение и/или поствведение с пищей, жидкостью или водой.

В некоторых вариантах реализации соединение согласно настоящему изобретению может проявлять селективную противовирусную активность. В настоящем описании термин селективный противовирусный означает, что в дозировках, эффективных для предупреждения или лечения вирусного заболевания, активность носит больше противовирусный характер, чем антибактериальный, противогрибковый или антипаразитарный, и кишечная флора субъекта не разрушается до уровней, предполагаемых при использовании широкого спектра антибиотиков. Например, эффективная доза для противовирусного лечения (например, уменьшения вирусной нагрузки по меньшей мере примерно в два раза) может не снижать бактериальный, грибковый или паразитарный уровень в кишечнике (например, более чем примерно в два раза).

Другие варианты реализации настоящего изобретения очевидны специалистам в данной области техники исходя из настоящего описания и практического применения изобретения, охарактеризованного в настоящем описании. Описание и примеры приведены для пояснения изобретения, тогда как истинный объем изобретения определяется формулой изобретения.

Примеры

1. Материалы и способы.

1.1. Материалы.

Ламивудин (Ьатгуибше) (ЬМУ), адефовир диповоксил (абеГоуй άίρονοχίΐ) (АИУ) и 2'-С-метилцитидин приобретали у Могасеск ВюсйепнсаК 1пс. (Ьа Вгеа, СА И8А). Рекомбинантный интерферон человека альфа 2Ь (ΙΡΝ) приобретали у РВЬ Вютебюа1 ЬаЬогакпек (Р|5са1а\\ау. N1 И8А). Все остальные тестируемые соединения (фиг. 1) были предоставлены Ротагк ЬаЬогакпеу Ь.С., сыворотку человека (термоинактивированная, смешанная, партия ВРН125374) приобретали у Вюгес1ата1юп, 1пс. (НюкетШе, ΝΥ).

1.2. Исследования НВУ.

1.2.1. Противовирусные анализы.

Противовирусные анализы НВУ осуществляли, как описано ранее (КогЬа апб Сегт, 1992). Кратко, конфлюэнтные культуры клеток 2.2.15 выдерживали в 96-луночных плоскодонных планшетах для тканевой культуры (конфлюэнтность в данной культуре необходима для активных, высоких уровней репликации НВУ, эквивалентных уровням, наблюдаемым у хронически инфицированных индивидуумов (8е11у е1 а1., 1988; КогЬа апб Сели 1992). Культуры обрабатывали девятью последовательными ежедневными дозами тестируемых соединений. Уровни ДНК НВУ определяли методом количественной блотгибридизации через 24 ч после последнего воздействия. Цитотоксичность определяли по поглощению нейтрального красного красителя через 24 ч после последнего воздействия.

1.2.2. Активность в отношении резистентных к лекарственным средствам генетически модифицированных вариантов НВУ.

Активность в отношении резистентных к ЬМУ (А11еп е1 а1., 1998) и резистентных к АЭУ (Апдик е1 а1., 2003) генетически модифицированных вариантов НВУ определяли в ходе 5-дневного анализа с помощью способа временной трансфекции, как описано ранее (1уег е1 а1., 2004). Противовирусную активность определяли методом количественной Саузерн-блот-гибридизации (8он1йегп Ь1о1 ЬуЬг1б1ха11оп) внутриклеточных интермедиатов репликации ДНК НВУ (НВУ ИР).

1.2.3. Получение белков НВУ.

Культуры клеток 2.2.15 обрабатывали согласно стандартным процедурам и осуществляли полуколичественный ферментативный иммуноанализ белков НВУ, как описано ранее (КогЬа апб Сегт, 1995), за исключением того, что НВеАд анализировали с помощью ЕТ1-ЕВК Р1觮 (И1а8ог1п, 1пс., 81111^а(ег, ΜΝ И8А). Образцы разбавляли (2-10-кратно), в результате чего приводили уровни в динамические диапазоны чувствительности Е1А НВкАд и НВеАд анализировали из образцов культуральной среды, а НВеАд анализировали из внутриклеточных лизатов. Внутриклеточную РНК НВУ определяли методом количественной Нозерн-блот-гибридизации (№г111ет Ь1о1 ЬуЬг1б1ха(1оп) (КогЬа апб Сегт, 1995).

1.3. Исследования НСУ.

Противовирусную активность тестируемых соединений определяли в ходе 3-дневного анализа с использованием стабильно экспрессирующей репликон НСУ линии клеток, АУ А5 (субгеномный СОМ, генотип 1Ь) (В1щ1Ц е1 а1., 2000), поддерживаемой в виде субконфлюэнтных культур в 96-луночных планшетах, как описано ранее (Окике е1 а1., 2005). Противовирусную активность определяли с помощью анализа методом блот-гибридизации внутриклеточной РНК НСУ (приведенного к уровню клеточной РНК

- 17 019357

В-актина в каждом образце культуры), а цитотоксичность определяли по поглощению нейтрального красного красителя через 3 дня после лечения. Дополнительные исследования проводили с использованием клеток НиЕ7, содержащих другой репликон НСУ, Н/РЬ-Ыео, генотип 1, полноразмерная конструкция (В11§Ь1 е! а1., 2003). Для исследований с использованием сыворотки человека поддерживали стандартную культуральную среду (содержащую 10% фетальную бычью сыворотку) и условия анализа.

1.4. Оформление результатов.

Значения ЕС₅₀, ЕС₉₀ и СС₅₀ (± стандартные отклонения [8.Ό.]) рассчитывали с помощью линейного регрессионного анализа с использованием данных, полученных из всех обработанных культур (КогЬа апб Сепп, 1992; Окике е! а1., 2005). ЕС₅₀ и ЕС₉₀ представляют собой концентрации лекарственных средств, при которых наблюдали 2-кратное или 10-кратное подавление внутриклеточной ДНК НВУ или РНК НСУ (относительно средних уровней в необработанных культурах) соответственно. СС50 представляет собой концентрацию лекарственного средства, при которой наблюдали в два раза более низкий уровень поглощения красителя нейтрального красного (относительно средних уровней в необработанных культурах). Индекс селективности (8.Ι.) рассчитывали как соотношение СС₅₀/ЕС₉₀ для анализов НВУ и СС₅₀/ЕС₅₀ для анализов НСУ. Значения ЕС₉₀ использовали для расчета 8.Ι. в анализах НВУ, так как по меньшей мере 3-кратное подавление уровней ДНК НВУ, как правило, необходимо для достижения статистической значимости в данном анализе (КогЬа апб Сепп, 1992). Для комбинированных видов лечения ЕС₅₀, ЕС₉₀, СС₅₀ и 8.Ι. представлены для первого указанного соединения. Также указано молярное соотношение соединений в каждой комбинации.

2. Результаты.

2.1. Вирус гепатита В (НВУ).

2.1.1. Активности соединений и комбинаций в культурах клеток 2.2.15.

ΝΤΖ и его активный метаболит, ΤΙΖ, демонстрировали селективное ингибирование внутриклеточной репликации НВУ и образования внеклеточной формы вируса клетками 2.2.15 (табл. 3). Некоторые другие тиазолиды (см. табл. 3) также являлись эффективными ингибиторами репликации НВУ в данном анализе. Комбинации ΝΤΖ с одним из двух лекарственных средств, разрешенных для терапии НВУ, ламивудином (ЬМУ) и адефовир диповоксилом (АОУ), демонстрировали синергетические взаимодействия при использовании для обработки клеток 2.2.15 (табл. 3, фиг. 1А и 1В). Анализы анти-НВУ осуществляли при конфлюентности, так как это обеспечивает условия для оптимальной репликации НВУ (§е11з, е! а1., 1988; КогЬа апб Сепп, 1992). В то время как в условиях противовирусного анализа ΝΤΖ демонстрировал минимальную цитотоксичность (>100 мкМ, табл. 3), цитотоксичность ΝΤΖ в быстроделящихся культурах клеток 2.2.15 была выше (20±1,3 мкМ).

2.1.2. Активность ΝΤΖ и КМ4850 в отношении резистентных к лекарственным средствам мутантов НВУ.

ΝΤΖ и КМ4850 представляли собой эффективные ингибиторы некоторых резистентных к ЬМУ и одной резистентной к АЭУ конструкции НВУ в анализах методом временной трансфекции в клетках НиЕ7 (табл. 4). Не наблюдали существенных различий в активности указанных тиазолидов по сравнению с активностью, наблюдаемой для НВУ дикого типа для каждого из тестируемых вирусов, резистентных к лекарственным средствам.

2.1.3. Действие ΝΤΖ на образование белков НВУ.

В отличие от большинства вирусов (включая НСУ), транскрипция РНК НВУ и образование белков эффективно отделены от репликации вирусного генома за счет присутствия долгоживущей популяции ковалентно непрерывных вирусных матричных геномов в ядре клетки-хозяина (ковалентнонепрерывная кольцевая ДНК (сссДНК)) (см. Ьосатшш, 2004 для обзора). Внутриклеточная репликация НВУ осуществляется в вирусных нуклеокапсидах, расположенных в цитоплазме. В результате большинство соединений, ингибирующих репликацию ДНК НВУ (например, аналоги нуклеозидов), как правило, не меняют образование белков НВУ, особенно в клеточной культуре.

Исходя из предположения о новом механизме действия ΝΤΖ в отношении НВУ, были проведены исследования для того, чтобы определить, ингибирует ли лекарственное средство образование основных белков НВУ. По данным полуколичественного ΞΙΆ, ΝΤΖ понижал уровни внеклеточной поверхности НВУ и е-антигенов (НВкАд, НВеАд), а также уровни внутриклеточного нуклеокапсидного корового антигена НВУ (НВсАд) в зависимости от дозы (табл. 5, фиг. 2). Активность ΝΤΖ в отношении НВкАд и НВеАд была сходна с активностью, наблюдаемой в отношении образования вириона НВУ в том же эксперименте. Относительная активность ΝΤΖ в отношении внутриклеточного НВкАд была сходна с активностью, наблюдаемой для ингибирования внутриклеточной репликации ДНК НВУ. Количественное нарушение способности ΞΙΛ обнаруживать белки НВУ не наблюдали в образцах контрольных культур, к которым добавляли 10 мкМ ΝΤΖ (данные не показаны).

ΝΤΖ не вызывал уменьшение внутриклеточной РНК НВУ по данным нозерн-блот-гибридизации (табл. 5, фиг. 2). В том же эксперименте ЬМУ не влиял на уровни белков НВУ или РНК НВУ, несмотря на то, что вызывал значительное снижение образования вириона НВУ и внутриклеточной репликации ДНК НВУ (табл. 5).

- 18 019357

2.2. Вирус гепатита С (НСУ)

2.2.1. Активность соединения и комбинаций в клеточных культурах репликона НСУ.

ΝΤΖ и ΤΙΖ селективно уменьшали внутриклеточную репликацию НСУ в клетках АУА5 (табл. 6). Оба соединения обладали большей цитотоксичностью в данной линии клеток, по сравнению с клетками 2.2.15, но указанные соединения были также гораздо более активными в отношении репликации НСУ. Комбинации ΝΤΖ или ΤΙΖ либо с рекомбинантным человеческим интерфероном альфа 2Ь (ΙΕΝα), либо с ингибитором Ν85Β (полимераза НСУ), 2'-С-метилцитидином (2'СтеС, Р1егга, е1 а1., 2005) проявляли синергические взаимодействия в отношении репликации НСУ (табл. 6, фиг. 1С и 1Ό).

Только два из остальных тиазолидов, КМ4832 и КМ4863, проявляли активность в отношении НСУ (табл. 6). Противовирусная активность ΝΤΖ, ΤΙΖ и КМ4832 в отношении полноразмерного репликона генотипа 1а (Έ1ί§ΙιΙ, е1 а1., 2003) была эквивалентна активности, наблюдаемой для клеток АУА5 (генотип 1Ь) (табл. 6).

2.2.2. Действие предварительного лечения с использованием ΝΤΖ перед комбинированными видами лечения.

Исходя из наблюдений в ранних клинических исследованиях с использованием ΝΤΖ с пегилированным интерфероном был оценен ίη νότο эффект режима, включающего три дня лечения ΝΤΖ с последующим трехдневным лечением комбинацией ΝΤΖ с ΙΕΝα. Предварительное лечение ΝΤΖ (монотерапия) приблизительно в 3 раза усиливало эффективность комбинированного лечения ΝΤΖ плюс ΙΕΝα (табл. 7, фиг. 1Е и 1Ε). Однако предварительное лечение не влияло на эффективность комбинированного лечения с использованием 2'СтеС (табл. 7).

2.2.3. Действие сыворотки человека на активность в отношении НСУ и цитотоксичность ΤΙΖ в клетках.

ΝΤΖ и его циркулирующий метаболит, ΤΙΖ, в высокой степени связаны (>99%) с белками плазмы в сыворотке человека. Для оценки действия сыворотки человека на активность в отношении НСУ и цитотоксичность ΤΙΖ сыворотку человека добавляли к культурной среде в различных концентрациях (табл. 8). Значения СС₅₀, ЕС₅₀ и ЕС₉₀ ΤΙΖ возрастали по мере увеличения концентраций сыворотки человека до 20%. Значения ЕС₅₀ и ЕС₉₀ в присутствии 30% сыворотки человека были схожи со значениями в присутствии 20% сыворотки человека (эффект плато), что означало достижение максимальной степени связывания с белками. Уровни НСУ и РНК В-актина в необработанных культурах были схожи при различных концентрациях сыворотки человека до 30% (данные не показаны). Более высокие концентрации сыворотки человека значительно снижали жизнеспособность клеток (данные не показаны). В нижеприведенных таблицах КМ4863 представляет собой то же соединение, что и соединение 6 в табл. 1.

Таблица 3

Относительная активность (мкМ) тестируемых соединений в отношении репликации НВУ в культурах клеток 2.2.15

Сошроипй	СС;о	Ех!гасе11и1аг νΐποη ΟΝΑ	ЬпасеПЫагНВУВГ	8е1есйуйу Ьк!ех
ЕСй	ЕС«	ЕС<с	ЕС»	Утоп	ΚΙ
ЬМУ	2347 ±88	0.05 ±0.01	0.15 ±0.02	0.16 ±0.03	0.55 ±0.06	15646	4267
АПУ	>300*	1.0 ±0.2	3.0=0.3			>100
ΝΤΖ	>100	0 12 ±0.02	0.83 ±0.09	0.59 ±0.07	2.1 ±0.2	>121	>48
ΤΙΖ	>100	0.15 ±0.02	0.58 ±0.06	0.46 ±0.05	12 ±02	>172	>83
КМ4832	>100	1.2 ±0.1	4.0 ±0.3	2.9 ±0.3	8.7 ±1.0	>25	>12
КМ4848	>100	0.37 ±0.07	1.7 ±0.2			>58
КМ485О	>100	0.33 ±0.07	0.83 ±0.10	0.90=0.10	2.0 ±0.2	>120	>51
КМ4851	>100	>10*	>10*	>10*	>10*	-	-
КМ4852	>100	1.0 ±0.1	3.3 ±0.3	2.7 ±0.3	6.3 ±0.7	>30	>16
КМ4863	>100	>10	>10	>10	>10	-	-
ΝΤΖ±ΙΜν, 50:1	>100	0.06 ±0.005	0.16=0.02			>625
ΝΤΖ+Αϋν, 3:1	>100	0.03 ±0.004	0 11 ±0.02			>909

*ИР НВУ, интермедиаты внутриклеточной репликации РНК НВУ.

#Не наблюдали значительной цитотоксической или противовирусной активности в соответствии с указанной концентрацией.

В табл. 3:

Сотроипй - соединение;

Ех1гасе11и1аг νίηοη ^NА - внешнеклеточная вирионная ДНК;

ШгасеПЫаг НВУ ΚΙ* - внутриклеточная НВУ ΚΙ*;

8е1ес1М1у Ыйех - индекс селективности;

Утоп - вирион.

- 19 019357

Т аблица 4 Относительная активность (мкМ) тестируемых соединений в отношении резистентных к лекарственным средствам мутантов ΗΒν в культурах клеток

НВУ Ми1ап1	МйагохашФе	ЬатйтмКпе	Αάβίονίτ Λρονοχιΐ	ВМ4850
ЕСМ	ЕСэд	ЕСдэ	ЕС$9	ЕСЯ	ЕСМ	ЕСзв
5^11<1-(уре	0.21 ±0.03	0.77 ±0.09	0.2 ±0.1	0.9 ±0.2	2.0 ±0.2	7.0 ±0.8	0.73 ±0.08	2.0 ±0.3
М204У	0.15 ±0.02	0.70 ±0.08	>100*	>100’	1.5 ±0.2	7.2 ±0.8	0.80 ±0.10	2.1 ±0.3
Μ204Ι	0.31 ±0.05	1.0 ±0.2	>100	>100	2.5 ±0.3	8.5 ±1.0	1.0 ±0.2	2.4 ±0.3
Ы80М	0.23 ±0.03	0.80 ±0.09	16 ±2.0	46 ±5.6	2.6 ±0.3	7.3 ±0.8	0.83 ±0.09	2.2 ±0.2
1180№М204У	0.18 ±0.02	0.72 ±0.09	>100	>100	2.5 ±0.3	7.6 ±0.8	0.87 ±0.11	2.1 ±0.3
Ν236Τ	0.28 ±0.03	0.85 ±0.10	0.3 ±0.1	1.2 ±0.2	11 ±1.3	32 ±3.6	0.67 ±0.08	2.2 ±0.2

#Не наблюдали значительной противовирусной активности в соответствии с указанной концентрацией.

В табл. 4:

ΗΒν Ми1ап1 - генетически модифицированный вариант ΗΒν.

Таблица 5 Относительная активность (мкМ) ΝΤΖ и ламивудина в отношении уровней репликации и белков ΗΒν в культурах клеток 2.2.15.

	№1агохаш£1е	Ьаииуи&ие
ЕС 5о	ЕС$о	ЕС 5о	ЕС^о
νίποη ргобиейоп	0.19 ±0.02	0.58 ±0.04	0.05 ±0.01	0.15 ±0.02
НВУК1.	0.73 ±0.06	2.2 ±0.3	0.16 ±0.02	0.56 ±0.07
НВУ КМ А	-	-	-	-
НВ5А8	0.22 ±0.03	1.0 ±0.1	-	-
НВеАг	0.26 ±0.02	1.3 ±0.1	-	-
НВеАр	1.1 ±0.1	3.0 ±0.2	-	-

В табл. 5:

νίτίοη ргобиейоп - образование вириона.

Таблица 6 Относительная активность (мкМ) тестируемых соединений в отношении репликации ΗΒν в клетках

Сошроииб	сс50	ЕСзд	ЕСм	5>е1ес11УЙу 111<1ех
Оепо(уре 1Ъ гврНсоп ΙΕΝα	>10000**	1.9 ±0.2*	8.9 ±0.9*	>5263
2’СшеС	>300	1.6 ±0.2	8.3 ±0.7	>188
ΝΤΖ	38±1.8	0.21 ±0.03	0.93 ±0.11	181
ΊΊΖ	15± 1.2	0.15 ±0.02	0.81 ± 0.92	100
КМ4832	98 ± 3.2	4.9 ± 0.5	20 ±1.9	20
КМ4848	15 ±0.1	>20*	>20*	-
ЙМ4850	2.3 ±0.2	>20	>20	. -
КМ4851	5.6 ± 0.3	>20	>20	-
ВМ4852	6.7 ± 0.4	>20	>20	-
КМ4863	2.8 ±0.3	0.04 ±0.005	0.59 ± 0.07	74
2СшеС + ΙΕΝα. 1:1	>300	0.67 ±0.007	2.3 ± 0.3	>448
ΝΤΖ + ΙΕΝα, 1:10	33 ±1.3	0.06 ±0.008	0.25 ± 0.03	550
МТг-З’СтеС, 1:10	35±1.5	0.07 ±0.005	0.28 ± 0.02	500
ΤΙΖ-ΙΕΝα, 1:10	17±1.3	0.07 ± 0.01	0.22 = 0.03	245
ΤΙΖ-2'СтеС. 1:10	18 ±1.1	0.06 ±0.004	0.19 ±0.02	300
1а герИсоп ΙΕΝα	>10000	2.1 ± 0.2	9.4 ±0.9	>4762
2’СтеС	>300	1.8 ± 0.2	8.1 ± 0.8	>167
ΝΤΖ	49 ±1.5	0.33 ± 0.05	1.1 ±0.1	149
ΊΊΖ	14 ±0.2	0.25 ±0.03	1.0 ±0.1	56
КМ4832	88 ± 2.1	2.8 ± 0.3	9.4 ±1.1	31

*Концентрации для интерферона выражены в Ιϋ/мл.

#Не наблюдали значительной цитотоксической или противовирусной активности в соответствии с указанной концентрацией.

В табл. 6:

Сошроипб - соединение;

8е1ее11УЙу шбех - индекс селективности;

Сепо1уре 1Ь герйеоп - генотип 1Ь репликона;

Сепо1уре 1 а герйеоп - генотип 1 а репликона.

- 20 019357

Таблица 7

Действие предварительного лечения ΝΤΖ (монотерапия) на комбинированную терапию

Тгеайпеп! (б бауз бигайоп)	ЕС»)
ΙΓΝα	1.7 ±0.2	7.8 ±0.8
2 СшеС	1.3 ±0.2	5.8 ± 0.9
ΝΤΖ	0.20 ± 0.02	0.92 ± 0.10
ΝΤΖ + ΙΓΝα. 1:10	0.09 ±0.010	0.24 ±0.04
·. ΝΤΖ топгЬегару (3 бауз), 1Ьеп ΝΤΖ+ΙΕΝα (Збауз)	0.03 ± 0.004	0.09 ±0.011
ΝΤΖ+2'СтеС. 1:10	0.05 ±0.007	0.17 ±0.03
ΝΤΖ топШегар ν (3 бауз). Шен ЫТ2+2’СтеС (3 бау%)	0.06 ± 0.005	0.15 ±0.02

*Значения выражены в виде мкМ концентраций лекарственного средства (сначала указано лекарственное средство в случае комбинаций).

В табл. 7:

ТТеаИпеп! (6 бауз 1о1а1 бигаНон) - лечение (общая продолжительность - 6 дней).

Таблица 8

Относительная активность (мкМ) ΤΙΖ в отношении репликации НВУ в присутствии сыворотки человека

СопсепГгайоп о£ Ьитап Бегшп (%)	ЕС50	ЕС®®	сс;о
0	0.25 ±0.01	0.98 ±0.04	28 ±0.9
2.5	0.48 ±0.02	1.1 ±0.1	65 ±1.4
5	0.64 ±0.05	2.3 ±0.1	97 ±3.9
10	1.1 ±0.1	3.0 ±0.2	>100
15	2.7±0.3	15 ±2.0	>100
20	9.4 ±0.8	27 ±2.2	>100
30	9.3 ±0.9	32 ±3.0	>100

В табл. 8:

СопсепИ’аИоп о£ Питан зегит (%) - концентрация сыворотки человека (%).

В табл. 9 представлены данные первичного клеточного анализа репликона НСУ. Таблица 9

ПЕРВИЧНЫЙ АНАЛИЗ

№ соед.	СС50 (мкМ)	ЕС5О (мкМ)	ЕС90 (мкМ)	ИС
60		2.8		0.038		0.585		74.0
60		28.0		0.108		0.654		259.0
6		43.0		1.5		5.2		29.0
75		53.0		2.1		8.1		25.0
75 & 11 @10:1	>	100.0		1.3		5.0	>	77
7		20.0	>	10.0	>	10.0
62	>	100.0	>	10.0	>	10.0
11	>	100.0	>	10.0	>	10.0

В табл. 10 представлены данные вторичных клеточных анализов репликона НСУ с использованием генотипов 1В и 1А.

Таблица 10

	ВТОРИЧНЫЙ АНАЛИЗ, ГЕНОТИП 1В	ВТОРИЧНЫЙ АНАЛИЗ, ГЕНОТИП 1А
№ соед.	СС5О (мкМ)	ЕС5О (мкМ)	ЕС90 (мкМ)	ИС	СС50 (мкМ)	ЕС50 (мкМ)	ЕС90 (мкМ)	ИС
6	>	10.0		0.89		8.8	>	11.1	>	10.0		0.8		3.4	>	12.3
75		54.0		2.1		7.9		26.0		56.0		2.8		8.5		20.0

3.0. Синтез 2-(тиазол-2-илкарбамоил)фенилметансульфоната (11).

Соединение, представляющее собой 2-(тиазол-2-илкарбамоил)фенилметансульфонат (11), получали согласно следующей схеме синтеза:

- 21 019357

3.1. Синтез 2-(1,3-тиазол-2-илкарбамоил)фенилацетата (501).

2-(Ацетилокси)бензойную кислоту (500, 1,80 г, 10,0 ммоль) помещали в 250 мл круглодонную колбу, оснащенную магнитной мешалкой, вакуумным переходником и мембраной. Добавляли эфир (100 мл) и пиридин (1,00 мл, 12,4 ммоль) с получением прозрачного бесцветного раствора, который охлаждали до 0° на ледяной бане перед добавлением по каплям тионилхлорида (875 мкл, 12,0 ммоль) в течение приблизительно 30 с. Густой белый осадок образовывался при добавлении каждой капли. Реакционную смесь перемешивали в течение 90 мин при 0°С перед фильтрованием через бумагу и удалением растворителей под вакуумом. Бикарбонат натрия (3,42 г, 40,7 ммоль) и 1,3-тиазол-2-амин (1,00 г, 10,0 ммоль) помещали в 250 мл круглодонную колбу и добавляли воду (30 мл) и этилацетат (30 мл) с образованием бесцветной двухфазной жидкости, которую быстро перемешивали. Неочищенный хлорангидрид суспендировали в этилацетате (10 мл) и по каплям добавляли к быстро перемешиваемой двухфазной жидкости. Полученную двухфазную жидкость накрывали крышкой и быстро перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Две фазы разделяли и водную фазу дважды экстрагировали этилацетатом. Смешанные органические фазы промывали солевым раствором, сушили с помощью Мд8О₄, фильтровали и концентрировали с получением соединения 501 (1,36 г, 52%) в виде бесцветного порошка, который использовали без очистки.

Данные для соединения 501:

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 12,58 (Ьг 5, 1Н), 7,77 (бб, 1=7,4, 1,8 Гц, 1Н), 7,62 (ббб, 1=7,7, 7,7, 1,8 Гц, 1Н), 7,54 (б, 1=3,6 Гц, 1Н), 7,40 (ббб, 1=7,7, 7,7, 1,4 Гц, 1Н), 7,28 (б, 1=3,6 Гц, 1Н), 7,27 (бб, 1=7,7, 1,4 Гц) и 2,22 (5, 3Н) ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 263,2 (5), 221,2 (40), 163,1 (10), 143,1 (10), 121,1 (40), 101,0 (100) т/ζ.

3.2. Синтез 2-гидрокси-Ы-1,3-тиазол-2-илбензамида (502).

2-(1,3-Тиазол-2-илкарбамоил)фенилацетат (501, 663,3 мг, 2,53 ммоль) добавляли в 25 мл круглодонную колбу, оснащенную магнитной мешалкой и водяным холодильником. Воздушное пространство заполняли осушенным азотом и одной порцией добавляли концентрированную соляную кислоту (15,0 мл). Суспензию нагревали до 50°С и хорошо перемешивали. Суспендированные твердые вещества растворялись с образованием прозрачного бесцветного раствора перед выпадением твердых веществ в осадок из реакционной смеси, которую затем охлаждали на ледяной бане, а твердые вещества отфильтровывали через фритту средней пористости и промывали большой порцией воды. Осадок на фильтре промывали на фритте метанолом, собирали и растворитель удаляли под вакуумом с получением соединения 502 (481,5 мг, 86%) в виде бесцветного твердого вещества.

Данные для соединения 502:

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 12,07 (Ьг 5, 2Н), 7,99 (бб, 1=7,9, 1,5 Гц, 1Н), 7,55 (б, 1=3,8 Гц, 1Н), 7,45 (Ьг 1, 1=7,5 Гц), 7,27 (Ьг б, 1=2,7 Гц) и 6,9-7,05 (т, 2Н);

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 221,2 (15), 121,1 (50), 101,0 (100).

3.3. Синтез 2-(1,3-тиазол-2-илкарбамоил)фенилметансульфоната (11).

2-Гидрокси-Ы-1,3-тиазол-2-илбензамид (502, 267,1 мг, 1,21 ммоль) помещали в 10 мл круглодонную колбу, оснащенную магнитной мешалкой и мембраной с входным отверстием для сухого азота. Добавляли дихлорметан (5,0 мл) и триэтиламин (500 мкл, 3,59 ммоль) с образованием светло-розового раствора. Метансульфонилхлорид (100 мкл, 1,3 ммоль) в дихлорметане (приблизительно 1,0 мл) по каплям добавляли к перемешиваемому раствору в течение приблизительно 30 с и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение приблизительно 20 мин, перед тем как погасить насыщенным ЫаНСОз, и экстрагировали дихлорметаном. Смешанные органические фазы промывали солевым раствором, сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт перекристаллизовывали из смеси гексан/этилацетат с получением (284 мг, 78%) соединения 11 в виде бесцветного кристаллического твердого вещества. Пример 11 ((2-тиазол-2илкарбамоил)фенилметансульфонат) отвечает эмпирической формуле СцН1₀Ы₂О₄8 и имеет молекулярную массу 298,34.

Данные для соединения 11:

температура плавления=185,5-187,8°С;

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 12,63 (Ьг 5, 1Н), 7,76 (бб, 1=7,9, 1,7 Гц, 1Н), 7,67 (ббб, 1=7,8, 7,8, 1,7 Гц, 1Н), 7,55 (б, 1=3,5 Гц, 1Н), 7,48-7,53 (т, 1Н), 7,30 (б, 1=3,5 Гц, 1Н) и 3,35 (5, 3Н) ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 299,1 (90), 231,2 (20), 220,2 (100), 199,1 (20), 121,1 (10), 100,1 (20), 56,0 (40).

- 22 019357

4.0. Синтез 2-гидрокси-Ы-(4-(метилсульфонил)тиазол-2-ил)бензамида (60).

Соединение, представляющее собой 2-гидрокси-Ы-[4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамид (60), получали согласно следующей схеме синтеза:

А η₂ν νη₂

Вос₂О,

ЕЮН п

ΒοοΗΝ I νη₂

5ыЧ II 7 ВосНГГ ³ ЕЮН, 0 °С (503) (504)

НаЗМе, Си1, ϋΜΕ

ВоСгО, ТЕА

Н_гМ ^а (505) ϋΜΑΡ, СН_гС1_г (506)

Вг ыЧ. 1?

ТНР ВосНМ ⁵

Ι_ϋΑ (2.0 βηυίν) (507) (504)

(509) (508)

4.1. Синтез трет-бутил-4-(метилтио)тиазол-2-илкарбамата (504).

Ν-трет-Бутоксикарбонилтиомочевину (503, 0,841 г, 4,77 ммоль, полученную согласно 8сЫау1, В.; Абопб, А.; Роира!, С.; Ройег, Р. 8уп!й. Соттип. 2002, 32, 1671), суспендировали в этаноле (7,0 мл) и охлаждали на ледяной бане. Добавляли по каплям раствор 8-метилбромэтантиоата (1,371 г, 5,0582 ммоль, полученный согласно Ргауееп Вао, Р.К; Ат1ш, М.; Ь1, Н.; НаЬееЬ, А.С.; Кпаи8, Е.Е. I. Меб. Сбет. 2003, 46, 4872-82) в этаноле (7,0 мл) в течение 3 мин. Суспензия становилась гомогенной в конце добавления, баню убирали и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Удаляли растворитель и неочищенное вещество разделяли между дихлорметаном и водой. Органические фазы промывали водой и солевым раствором. Смешанные водные фазы снова экстрагировали дихлорметаном, а смешанные органические фазы сушили безводным Мд80₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением стеклообразного вещества оранжевого цвета (с неприятным запахом). Неочищенное вещество адсорбировали на силикагеле (приблизительно 5 г) с использованием этилацетата и пропускали через слой силикагеля, используя гексан (отбрасывали), а затем смесь гексан:этилацетат 9:1. Элюент выпаривали под вакуумом с получением соединения 504 (589 мг, 50%) в виде бесцветного твердого вещества.

Данные для соединения 504:

^!Н-ЯМР (400 МГц, СЭС1₃) δ 8,93 (Ьг 8, 1Н), 6,40 (8, 1Н), 2,45 (8, 3Н) и 1,47 (8, 9Н) ррт;

¹³С-ЯМР (100 МГц, СЭС1₃) δ 160,3, 151,3, 145,4, 105,7, 82,8 (Ьг), 28,2 и 16,2 ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 191,1 (100, М-(СН₃)₂С=СН₂ ⁺), 173,1 (20), 147,1 (70), 120,0 (10) и 105,0 (10) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 245,2 (15, М-Н^-), 171,1 (25), 145,1 (100), 103,0 (20) и 97,0 (20) т/ζ.

4.2. Синтез трет-бутил(5-бром-1,3-тиазол-2-ил)карбамата (506).

5-Бром-1,3-тиазол-2-амина гидробромид (505, 6,5150 г, 25,062 ммоль) и 4-диметиламинопиридин (69,9 мг, 0,572 ммоль) смешивали в атмосфере сухого Ν2 и добавляли тетрагидрофуран (40 мл) и

- 23 019357 триэтиламин (15 мл) с образованием густой суспензии грязно-белого цвета. Раствор ди-третбутилдикарбоната (6,0546 г, 27,742 ммоль) в тетрагидрофуране (24 мл) добавляли к вышеуказанной суспензии и полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Затем реакционную смесь вливали в воду (100 мл) и водный слой экстрагировали этилацетатом. Смешанные органические фазы промывали насыщенным раствором №1НСО₃. солевым раствором, сушили над Мд§0₄, фильтровали и удаляли растворитель под вакуумом. Неочищенный продукт адсорбировали на силикагеле и элюировали через слой силикагеля, используя смесь гексан:этилацетат 9:1. Элюент собирали и выпаривали с получением соединения 506 (5,42 г, 78%) в виде бесцветного кристаллического твердого вещества.

Данные для соединения 506:

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆) δ 12,75 (Ьг 8, 1Н), 7,44 (8, 1Н) и 1,48 (8, 9Н) ррт;

¹³С-ЯМР (100 МГц, ДМСО-й₆) δ 160,1, 152,9 (Ьг), 139,0, 100,5, 81,7 и 27,8 ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 225,1 (100, М⁸¹Вг-(СН3)2С=СН2⁺), 223,1 (100, М⁷⁹Вг-(СН3)₂С=СН₂ ⁺).

4.3 Синтез трет-бутил(4-бром-1,3-тиазол-2-ил)карбамата (507).

Тетрагидрофуран (160 мл) и Ν,Ν-диизопропиламин (14 мл, 97 ммоль) смешивали в 3-горлой 500 мл круглодонной колбе, оснащенной магнитной мешалкой, мембраной и внутренним термометром. Полученный раствор охлаждали до 0,8°С и медленно добавляли н-бутиллитий в гексане (2,50 М, 38 мл, 95 ммоль) в течение приблизительно 5 мин с получением светло-желтого раствора (Т_{внутр макс}=10°С), который перемешивали и снова оставляли охлаждаться примерно до 0°С. Раствор трет-бутил(5-бром-1,3тиазол-2-ил)карбамата, 506 (8,74 г, 31,3 ммоль) в тетрагидрофуране (30,0 мл) по каплям добавляли к вышеуказанному раствору в течение 16 мин (Т_внутр варьировали от 0,9°С до максимального значения 7°С). Полученную темно-коричневую реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин перед тем, как погасить водой (13 мл), а затем перемешивали еще в течение 5 мин. Добавляли насыщенный водный ΝΠ-Γ'Ί (250 мл) и этилацетат (250 мл) и разделяли фазы. Водную фазу экстрагировали этилацетатом, а смешанные органические фазы промывали солевым раствором, сушили с помощью Мд§0₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенное вещество адсорбировали на силикагеле с использованием этилацетата и элюировали через слой силикагеля, используя 2 л смеси гекс:Е10Ас 9:1. Элюент собирали, а растворители удаляли с получением соединения 507 (8,41 г, 96%) в виде бесцветного твердого вещества.

Данные для соединения 507:

' Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆) δ 12,75 (Ьг 8, 1Н), 7,24 (8, 1Н) и 1,48 (8, 9Н) ррт;

¹³С-ЯМР (400 МГц, СЭС1₃) δ 160,6, 152,7 (Ьг), 119,8, 110,6, 81,7 и 27,9 ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 225,1 (100, М⁸¹Вг-(СН3)2С=СН2⁺), 223,1 (100, М⁷⁹Вг-(СН3)2С=СН2⁺).

4.4. Альтернативный синтез трет-бутил(4-метилтио-1,3-тиазол-2-ил)карбамата (504).

трет-Бутил(4-бром-1,3-тиазол-2-ил)карбамат (507, 3,9575 г, 14,177 ммоль), иодид меди(1) (2,7718 г, 14,554 ммоль) и метилтиолат натрия (5,0242 г, 71,682 ммоль) смешивали в 100 мл колбе, оснащенной магнитной мешалкой и водяным холодильником и мембраной. Воздушное пространство заполняли сухим азотом и добавляли Ν,Ν-диметилформамид (26 мл). Реакционная смесь становилась ярко-желтой, а затем бледнела до тусклой серо-розовой суспензии. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение приблизительно 1 мин перед тем, как поместить на 136°С масляную баню, установленную на 140°С, и перемешиванием. В течение первых 5-10 мин нагревания цвет тускнел до светложелтого и реакционная смесь становилась гомогенной. Выделение газов/кипение наблюдали при прекращении перемешивания. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры после 15 ч при 140°С, и анализ методом ВЭЖХ показал, что исходное вещество полностью израсходовалось. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (приблизительно 200 мл) и фильтровали через слой целита, элюируя этилацетатом. Смешанные органические фазы промывали смесью 1 М НС1/насыщенный раствор ХН₄С1 1: 1 (250 мл), в результате чего получали густую эмульсию. Затем всю смесь фильтровали через аморфную целлюлозу и разделяли фазы. Затем органические фазы промывали 0,5 М НС1 и насыщенным раствором NаНС0₃. Другой очень мелкодисперсный порошок выпадал из раствора при действии основанием. Суспензию снова фильтровали через целит и полученный раствор промывали солевым раствором, сушили с помощью Мд§0₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением зеленого масла (3,17 г). Неочищенный продукт адсорбировали на силикагеле (приблизительно 15 г) ЕЮАс, сушили в вакууме и элюировали через слой силикагеля (приблизительно 80 г), используя 500 мл гексана (отбрасывали) и 2 л смеси гексан:этилацетат 9:1, который концентрировали в вакууме с получением соединения 504 (2,41 г, 69%) в виде твердого вещества грязно-белого цвета.

Данные для соединения 504 приведены выше.

- 24 019357

4.5. Синтез 4-(метилтио)-1,3-тиазол-2-амина (508).

трет-Бутил[4-(метилтио)-1,3-тиазол-2-ил]карбамат (504, 3,17 г, 12,9 ммоль) растворяли в метиленхлориде (130 мл) и добавляли трифторуксусную кислоту (54 мл) с получением ярко-желтого раствора. Раствор накрывали и перемешивали при комнатной температуре в течение 8 ч, что приводило к завершению реакции. Растворители удаляли под вакуумом и полученное густое масло суспендировали в 0,1 М НС1 (50 мл) и удаляли растворитель. Это повторяли один раз и полученные твердые вещества суспендировали в этилацетате (20 мл) и выпаривали с получением мелкодисперсного сыпучего розового твердого вещества (2,0 г). Твердые вещества ресуспендировали в этилацетате (20 мл), обрабатывали ультразвуком и фильтровали через фритту средней пористости, промывая этилацетатом (приблизительно 30 мл). Бледно-лиловые твердые вещества разделяли между насыщенным раствором №1НСО₃ (100 мл) и дихлорметаном (100 мл). Фазы разделяли и водную фазу один раз экстрагировали дихлорметаном. Затем смешанные органические фазы промывали солевым раствором, сушили безводным Мд8О₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением соединения 508 (1,33 г, 71%) в виде темного масла, которое затвердевало до кристаллического твердого вещества при охлаждении сухим льдом и отстаивании.

Данные для соединения 508:

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 7,06 (Ьг 8, 2Н), 6,11 (8, 1Н) и 2,36 (8, 3Н) ррт;

¹³С-ЯМР (100 МГц, ДМСО-б₆) δ 168,5, 144,7, 97,37 и 14,7 ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 147,1 (100, М+Н⁺), 132,0 (20) и 105,0 (40).

4.6. Синтез 2-{[4-(метилтио)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетата (509).

4-(Метилтио)-1,3-тиазол-2-амин (508, 672 мг, 4,60 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (10,0 мл) с получением раствора цвета арбуза и охлаждали до 0°С. По каплям добавляли раствор ацетилсалицилоилхлорида (0,9915 г) в тетрагидрофуране (1,4 мл) в течение 1 мин, баню убирали и реакционную смесь перемешивали, в то же время позволяя реакционной смеси нагреваться до комнатной температуры в течение приблизительно 40 мин. По каплям добавляли триэтиламин (0,670 мл, 4,81 ммоль) в течение 3 мин с получением темной суспензии, которую перемешивали в течение 15 ч. Твердые вещества удаляли из суспензии путем фильтрования через фритту средней пористости, твердые вещества промывали ТГФ (приблизительно 20 мл) и полученный раствор концентрировали, растворяли в этилацетате, фильтровали через слой магнезола с удалением полярных окрашенных примесей и концентрировали с получением кристаллического твердого вещества оранжевого цвета (1,35 г). Данное неочищенное вещество адсорбировали на силикагеле этилацетатом и очищали путем МРЬС (жидкостной хроматографии среднего давления) (элюируя 1 л смеси гекс:Е!ОЛс 6:1, 4:1, 3:1 и 2:1). Фракции объединяли и выпаривали с получением соединения 509 (660,8 мг, 47%) в виде почти бесцветного твердого вещества.

Данные для соединения 509:

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 12,69 (Ьг 8, 1Н), 7,77 (бб, 1=7,8, 1,4 Гц, 1Н), 7,62 (ббб, 1=7,8, 7,8, 1,4 Гц, 1Н), 7,40 (ббб, 1=7,8, 7,8, 1,4 Гц, 1Н), 7,27 (бб, 1=8,0, 1,4 Гц, 1Н), 6,87 (8, 1Н), 2,48 (8, 3Н) и 2,22 (8, 3Н) ррт;

¹³С-ЯМР (100 МГц, ДМСО-б₆) δ 168,8, 163,9, 158,3, 148,5, 145,2, 132,7, 129,5, 126,5, 125,8, 123,3, 105,4, 20,7 и 15,0 ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 331,2 (20, М+№1'). 309,3 (25, М+Н⁺), 267,3 (70), 189,2 (30), 147,2 (100), 121,1 (40), 100,1 (20) и 83,1 (65) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 265,3 (80, М-Н^-).

4.7. Синтез 2-{[4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетата (62).

2-{[4-(Метилтио)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетат (509, 201,1 мг, 0,6521 ммоль) растворяли в метиленхлориде (21 мл) и одной порцией добавляли м-хлорпербензойную кислоту (317,1 мг, 1,378 ммоль). Реакционную смесь накрывали и перемешивали при комнатной температуре в течение 100 мин, пока анализ смеси методом ВЭЖХ не показал полное превращение в целевой сульфон. Реакцию гасили 20% водным Ыа₂8₂О₃ (20 мл), перемешивали в течение 5 мин и разделяли фазы. Органические фазы промывали насыщенным раствором ЫаНСО₃ и солевым раствором, сушили безводным Мд8О₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением бесцветного белого твердого вещества (211,0 мг). Неочищенный продукт перекристаллизовывали из нагретой в колбе с обратным холодильником смеси этилацетат/гексан (5,0:2,0 мл), фильтровали, промывали гексаном и сушили под вакуумом с получением соединения 62 (133,4 мг, 61%) в виде бесцветного кристаллического твердого вещества.

Данные для соединения 62:

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 13,19 (Ьг 8, 1Н), 8,11 (8, 1Н), 7,82 (б, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,65 (бб, 1=7,8, 7,8 Гц, 1Н), 7,42 (бб, 1=7,8, 7,8 Гц, 1Н), 7,29 (б, 1=7,8 Гц, 1Н), 3,23 (8, 3Н) и 2,23 (8, 3Н) ррт;

¹³С-ЯМР (100 МГц, ДМСО-б₆) δ 168,8, 164,8, 160,1, 148,6, 148,3, 133,1, 129,6, 126,0, 125,9, 123,4,

120,2, 42,0 и 20,7 ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 341,1 (10, М+Н⁺), 299,1 (20), 163,2 (15), 121,1 (100), 100,1 (15) и 83,0 (50) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 339,2 (10, М-Н^-) т/ζ.

- 25 019357

4.8. Синтез 2-гидрокси-Ы-[4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамида (60).

2-{[4-(Метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетат (62, 118,2 мг, 0,3473 ммоль) суспендировали в концентрированной соляной кислоте (2,0 мл) и быстро перемешивали. Суспензия мгновенно становилась гомогенной, а затем снова происходило выпадение осадка. Суспензию быстро перемешивали при 50°С в течение 16 ч перед охлаждением и фильтрованием через пористую воронку небольшого размера. Твердые вещества промывали водой (приблизительно 5 мл) и сушили под вакуумом с получением соединения 60 в виде бесцветного порошка.

Данные для соединения 60:

температура плавления=231-235°С (запаянная трубка);

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 12,30 (Ьг β, 1Н), 11,64 (Ьг β, 1Н), 8,12 (в, 1Н), 7,96 (бб, 1=7,6, 1,6 Гц, 1Н), 7,65 (ббб, 1=7,6, 7,6, 1,6 Гц, 1Н), 7,07 (Ьг б, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,01 (Ьг бб, 1=7,6, 7,6 Гц, 1Н) и 3,25 (в, 3Н) ррт;

¹³С-ЯМР (100 МГц, ДМСО-б₆) δ 165,0, 159,4, 157,3, 148,3, 134,8, 130,3, 120,5, 119,8, 117,2, 116,4 и 42,0 ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 321,3 (30, Μ+Να'). 299,1 (10, М+Н⁺), 242,1 (10), 201,1 (30), 179,1 (20), 121,1 (100), 100,1 (20) и 56,0 (20) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 297,2 (100, М-Н^-) т/ζ.

5.0. Общие процедуры синтеза 4-гидрокси-№[4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамида (84) и 3 -гидрокси-№[4-(метилсульфонил) -1,3 -тиазол-2-ил] бензамида (87).

Соединения 4-гидрокси-№[4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамид (84) и 3-гидрокси-№[4(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамид (87) получали согласно следующей общей схеме синтеза:

5ОС!_г

(508)

ТНР/ТЕА

(82) рага (85) пле1а зтСРВА

СН_гС1_г <83>рага (84)рага (86) те1а (87) _те1а

5.1. Синтез 4-(хлоркарбонил)фенилацетата (510).

Тионилхлорид (11,1 мл, 15,3 ммоль) добавляли к 4-ацетоксибензойной кислоте (2,50 г, 13,9 ммоль) и реакционную смесь нагревали в колбе с обратным холодильником. Реакционную смесь охлаждали после нагревания в течение 3,5 ч и концентрировали под вакуумом с получением бесцветного масла. К остатку добавляли толуол и смесь концентрировали под вакуумом с удалением остаточного тионилхлорида. Данную процедуру повторяли еще два раза с получением соединения 510 (2,54 г, 92%) в виде бесцветного масла. Указанное вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Данные для соединения 510:

Ή-ЯМР (400 МГц, СБС1₃) δ 8,18 (б, 1=8,9 Гц, 2Н), 7,29 (б, 1=8,9 Гц, 2Н), 2,36 (в, 3Н) ррт.

5.2. Синтез 3-(хлоркарбонил)фенилацетата (511).

С использованием вышеуказанной процедуры в результате реакции тионилхлорида (11,1 мл, 15,3 ммоль) и 3-ацетоксибензойной кислоты (2,50 г, 13,9 ммоль) получали соединение 511 (2,72 г, 99%) в виде бесцветного масла. Данное вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очи стки.

Данные для соединения 511:

Ή-ЯМР (400 МГц, СБС1₃) δ 8,03 (ббб, 1=8, 2, 1 Гц, 1Н), 7,87 (ί, 1=2 Гц, 1Н), 7,52-7,60 (т, 1Н), 7,46 (ббб, 1=8, 2, 1 Гц, 1Н), 2,37 (в, 3Н) ррт.

5.3. Синтез 4-{[4-(метилтио)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетата (82).

К раствору соединения 510 (0,815 г, 4,10 ммоль) и сухого ТГФ (20,0 мл) добавляли раствор триэтиламина (0,572 мл, 4,10 ммоль) и сухого ТГФ (5,00 мл) с последующим добавлением раствора соединения 508 (0,500 г, 3,42 ммоль), растворенного в осушенном ТГФ (15,0 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. По окончании перемешивания в течение ночи реакционную

- 26 019357 смесь концентрировали под вакуумом. Остаток разделяли между насыщенным водным бикарбонатом натрия и дихлорметаном. Фазу дихлорметана промывали второй раз насыщенным раствором бикарбоната натрия, а затем дважды водной 1 М НС1. Фазу дихлорметана сушили над безводным сульфатом магния и концентрировали в вакууме с получением неочищенного соединения 82 (1,15 г, >100%) в виде коричневого твердого вещества. Неочищенный продукт суспендировали в диэтиловом эфире, перемешивали и фильтровали. Фильтрационную пластину несколько раз промывали эфиром и сушили в вакууме с получением соединения 82 (0,692 г, 63%) в виде светло-коричневого твердого вещества.

Данные для соединения 82:

температура плавления=185,7-188,7°С;

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 12,8 (к, 1Н), 8,14 (б, 1=8,9 Гц, 2Н), 7,32 (б, 1=8,9 Гц, 2Н), 6,89 (к, 1Н), 2,50 (к, 3Н), 2,31 (к, 3Н) ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 100,1 (37), 122,2 (98,3), 163,2 (49), 309,2 (100), 331,2 (29) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 111,0 (16), 203,2 (31), 307,2 (100).

5.4. Синтез 3-{[4-(метилтио)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетата (85).

К раствору соединения 511 (0,815 г, 4,10 ммоль) и осушенного ТГФ (25,0 мл) добавляли триэтиламин (0,572 мл, 4,10 ммоль) с последующим добавлением раствора соединения 508 (0,500 г,

3,42 ммоль), растворенного в осушенном ТГФ (10,0 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. По окончании перемешивания в течение ночи реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в этилацетате и один раз промывали водой, три раза насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и один раз солевым раствором. Раствор этилацетата сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом с получением неочищенного соединения 85 (1,28 г, >100%) в виде красной пены. Неочищенный продукт растворяли в дихлорметане. К раствору дихлорметана добавляли силикагель и суспензию концентрировали под вакуумом. Остаток помещали на 90 г картридж с силикагелем и пропускали через колонку, используя для элюирования раствор 20% этилацетата в гексане. Подходящие фракции основного продукта смешивали и концентрировали под вакуумом с получением соединения 85 (0,614 г, 58%) в виде твердого вещества рыжеватого цвета. Данное вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Данные для соединения 85:

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 12,8 (к, 1Н), 8,01 (б, 1=8 Гц, 1Н), 7,87 (ί, 1=2 Гц, 1Н), 7,60 (ί, 1=8 Гц, 1Н), 7,42 (ббб, 1=8, 2, 1 Гц, 1Н), 6,90 (к, 1Н), 2,50 (к, 3Н), 2,32 (к, 3Н) ррт.

5.5. Синтез 4-{[4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетата (83).

Раствор м-хлорпербензойной кислоты (1,0 г, 6,0 ммоль, максимум 77%), растворенной в дихлорметане (30 мл), добавляли к суспензии соединения 82 (0,63 г, 2,0 ммоль) в дихлорметане (60 мл). Реакционная смесь становилась гомогенной, и темно-коричневый раствор становился более светлым с течением времени. По прошествии 1,25 ч к реакционной смеси добавляли насыщенный водный тиосульфат натрия и реакционную смесь энергично перемешивали в течение 20 мин. Желтую смесь разбавляли водой и полученные фазы разделяли. Органическую фазу дважды промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия, один раз солевым раствором, сушили безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом с получением бежевого твердого вещества. Неочищенный продукт перекристаллизовывали из смеси 50% этилацетат/гексан (220 мл). По прошествии 4 дней суспензию фильтровали, фильтрационную пластину промывали гексаном, а затем диэтиловым эфиром и сушили под вакуумом при 55°С в течение ночи с получением соединения 83 (0,20 г, 30%) в виде твердого вещества светло-оранжевого цвета. В результате концентрирования фильтрата в вакууме с последующим осуществлением растирания полученного остатка с диэтиловым эфиром и отфильтровыванием полученного твердого вещества получали дополнительные 45 мг соединения 83 в виде рыжеватого твердого вещества.

Данные для соединения 83:

температура плавления=242-246°С (с разложением (бес));

’Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 13,2 (к, 1Н), 8,18 (б, 1=8,7 Гц, 2Н), 8,13 (к, 1Н), 7,34 (б, 1=8,7 Гц, 2Н),

3,25 (к, 3Н) и 2,32 (к, 3Н) ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 121,1 (40), 163,2 (50), 230,8 (10), 341,2 (100), 363,2 (70) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 339,3 (100).

5.6. Синтез 3-{[4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетата (86).

С использованием процедуры для примера 83, м-хлорпербензойной кислоты (1,0 г, 6,0 ммоль, максимум 77%), растворенной в дихлорметане (30 мл), и соединения 85 (0,61 г, 2,0 ммоль), растворенного в дихлорметане (30 мл), получали неочищенное соединение 86 в виде белого твердого вещества. Неочищенный продукт перемешивали в диэтиловом эфире (30 мл) в течение 30 мин, фильтровали и сушили на воздухе с получением соединения 86 (0,59 г, 87%) в виде белого твердого вещества.

Данные для соединения 86:

температура плавления=209-212°С;

- 27 019357

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 13,2 (8, 1Н), 8,13 (δ, 1Н), 8,05 (б, 1=8 Гц, 1Н), 7,91 (ΐ, 1=2 Гц, 1Н), 7,62 (ΐ, 1=8 Гц, 1Н), 7,45 (б, 1=8 Гц, 1Н), 3,26 (8, 3Н) и 2,32 (8, 3Н) ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 121,1 (20), 163,2 (20), 299,2 (25), 341,2 (100), 363,3 (40), 380,8 (10), 530,5 (10), 719,3 (5), 743,3 (5) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 339,3 (100).

5.7. Синтез 4-гидрокси-Ы-[4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамида (84).

М соляную кислоту (3,0 мл) добавляли к суспензии соединения 83 (0,12 г, 0,35 ммоль) в тетрагидрофуране (3,0 мл) и полученную суспензию нагревали в колбе с обратным холодильником. Реакционная смесь становилась гомогенной при нагревании. По окончании нагревания в колбе с обратным холодильником в течение 1,5 ч реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры, а затем разделяли между диэтиловым эфиром и водой. Фазу эфира промывали водой, насыщенным водным бикарбонатом натрия и солевым раствором. Фазу эфира сушили безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток растирали с этилацетатом, растворитель удаляли в потоке азота и полученное твердое вещество сушили под вакуумом при 55°С с получением соединения 84 (0,086 г, 82%) в виде светло-желтого твердого вещества.

Данные для соединения 84:

температура плавления=253-255°С (с разложением (бес));

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 12,9 (8, 1Н), 10,4 (8, 1Н), 8,07 (8, 1Н), 8,03 (б, 1=8,7 Гц, 2Н), 6,89 (б, 1=8,7 Гц, 2Н) и 3,24 (8, 3Н) ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 121,1 (100), 299,3 (40), 321,2 (25), 355,3 (5) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 297,3 (100).

5.8. Синтез 3-гидрокси-Ы-[4-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамида (87).

С использованием вышеуказанной процедуры для примера 84, соединения 86 (0,36 г, 1,0 ммоль), растворенного в тетрагидрофуране (10 мл), и 2 М соляной кислоты (10 мл) получали соединение 87 (0,29 г, 91%) в виде белого твердого вещества после концентрирования фазы эфира под вакуумом.

Данные для соединения 87:

температура плавления=258-259°С (с разложением (бес));

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 13,1 (8, 1Н), 9,88 (8, 1Н), 8,11 (8, 1Н), 7,59 (б, 1=8 Гц, 1Н), 6,47 (8, 1Н), 7,35 (ΐ, 1=8 Гц, 1Н), 7,05 (бб, 1=8, 2 Гц, 1Н) и 3,25 (8, 3Н) ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 218,3 (10), 299,3 (100), 321,2 (40) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 297,3 (100).

6.0. Общие процедуры синтеза 4-гидрокси-Ы-[5-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамида (80) и 3 -гидрокси-Ы-[5 -(метилсульфонил) -1,3 -тиазол-2-ил] бензамида (81).

Соединения 4-гидрокси-Ы-[5-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамид (80) и 3-гидрокси-Ы-[5(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамид (81) получали согласно следующей общей схеме синтеза:

(80) рага (81) те1а ⁰ тСРВА Д/А 2МНС1

----_ АсО-АД н -----

СН₂С1₂ (78) рага ^аЯ-^тнр (79) те(а

6.1. Синтез 5-(метилтио)-1,3-тиазол-2-амина (512).

Раствор тиометоксида натрия (1,09 г, 14,8 ммоль), растворенного в метаноле (18,0 мл), добавляли к суспензии 2-амино-5-бромтиазол моногидробромида 505 (2,50 г, 14,0 ммоль) в безводном этаноле (18,0 мл) в течение 5 мин. Реакционная смесь становилась гомогенной. К реакционной смеси добавляли второй раствор тиометоксида натрия (1,09 г, 14,8 ммоль), растворенного в метаноле (12,0 мл). Реакционную смесь нагревали до 45°С в течение 40 мин, затем нагревание прекращали и реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи, пока тонкослойная хроматография (ЕЮАс/гексан 1:1) не показала израсходование большей части исходного вещества наряду с образованием нового продукта. К реакционной смеси добавляли дополнительное количество тиометоксида натрия (0,20 г, 2,85 ммоль) и снова нагревали до 50°С. По окончании нагревания в течение 2 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в дихлорметане и три раза промывали водой, один раз солевым раствором, сушили над безводным сульфа

- 28 019357 том натрия и концентрировали под вакуумом с получением соединения 512 (1,12 г, 55%) в виде оранжевого твердого вещества.

Данные для соединения 512:

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 7,20 (8, 2Н), 6,97 (δ, 1Н), 2,29 (δ, 3Н) ррт.

6.2. Синтез 4-{[5-(метилсульфанил)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетата (76).

Согласно процедуре синтеза в примере 82, используя промежуточное соединение 510 (0,815 г, 4,10 ммоль), растворенное в осушенном ТГФ (25,0 мл), триэтиламин (0,572 мл, 4,10 ммоль) и соединение 512 (0,500 г, 3,42 ммоль), растворенное в сухом ТГФ (10,0 мл), получали соединение 76 (0,887 г, 84%) в виде рыжеватого твердого вещества.

Данные для соединения 76:

температура плавления= 193,3-195,5°С;

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 12,8 (Ьг 8, 1Н), 8,13 (б, 6=8,71 Гц, 2Н), 7,58 (δ, 1Н), 7,32 (б, 1=8,71 Гц, 2Н), 2,46 (8, 3Н), 2,31 (8, 3Н) ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 121,0 (100), 163,2 (48), 309,2 (34) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 292,2 (100), 307,3 (48).

6.3. Синтез 3-{[5-(метилсульфанил)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетата (77).

Согласно процедуре синтеза в примере 85, используя промежуточное соединение 511 (0,815 г, 4,10 ммоль), растворенное в осушенном ТГФ (25,0 мл), триэтиламин (0,572 мл, 4,10 ммоль) и соединение 512 (0,500 г, 3,42 ммоль), растворенное в сухом ТГФ (10,0 мл), получали соединение 77 (0,681 г, 65%) в виде рыжеватого твердого вещества.

Данные для соединения 77:

температура плавления= 135,2-136,2°С;

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 12,8 (δ, 1Н), 7,96-8,03 (т, 1Н), 7,86 (ί, 1=2 Гц, 1Н), 7,57-7,63 (т, 2Н),

7,43 (ббб, 1=8, 2, 1 Гц, 1Н), 2,47 (δ, 3Н), 2,32 (δ, 3Н) ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 121,0 (40), 163,2 (100), 309,2 (85), 331,2 (11) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 292,3 (100), 307,3 (49).

6.4. Синтез 4-{[5-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетата (78).

Раствор м-хлорпербензойной кислоты (0,611 г, 2,73 ммоль, максимум 77%), растворенной в дихлорметане (10,0 мл), по каплям добавляли к раствору соединения 76 (0,841 г, 2,73 ммоль), растворенного в дихлорметане (35,0 мл), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение

1,25 ч. Второй раствор м-хлорпербензойной кислоты (0,611 г, 2,73 ммоль), растворенной в дихлорметане (10,0 мл), добавляли к реакционной смеси в течение 15 мин и полученный раствор перемешивали в течение еще 2,5 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь разделяли между дихлорметаном и насыщенным водным тиосульфатом натрия. Органическую фазу промывали насыщенным водным тиосульфатом натрия, дважды насыщенным водным бикарбонатом натрия и один раз солевым раствором. Фазу дихлорметана концентрировали под вакуумом (без высушивания) с получением неочищенного соединения 78 (0,80 г, 86%). Неочищенный продукт перемешивали с хлороформом (250 мл) и фильтровали суспензию. Пластину один раз промывали хлороформом и сушили на воздухе с получением соединения 78 (0,559 г, 60%) в виде белого твердого вещества.

Данные для соединения 78:

температура плавления=279,6-280,6°С;

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 13,3 (Ьг δ, 1Н), 8,20 (δ, 1Н), 8,18 (б, 1=8,71 Гц, 2Н), 7,35 (б, 1=8,71 Гц, 2Н), 3,39 (δ, 3Н), 2,32 (δ, 3Н) ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 121,0 (100), 163,2 (72), 341,2 (63), 363,2 (59) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 259,3 (17), 339,3 (100).

6.5. Синтез 3-{[5-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]карбамоил}фенилацетата (79).

Раствор м-хлорпербензойной кислоты (0,458 г, 2,04 ммоль, максимум 77%), растворенной в дихлорметане (8,0 мл), по каплям добавляли к раствору соединения 77 (0,630 г, 2,04 ммоль), растворенного в дихлорметане (25,0 мл), в течение 15 мин. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,25 ч. Затем второй раствор м-хлорпербензойной кислоты (0,458 г, 2,04 ммоль), растворенной в дихлорметане (8,0 мл), добавляли к реакционной смеси в течение 10 мин и перемешивали в течение еще 4,5 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь разделяли между дихлорметаном и насыщенным водным тиосульфатом натрия. Органическую фазу снова промывали насыщенным водным тиосульфатом натрия, дважды насыщенным водным бикарбонатом натрия и один раз солевым раствором. Фазу дихлорметана сушили над сульфатом магния и концентрировали под вакуумом с получением неочищенного соединения 79 (0,704 г, >100%), загрязненного следами остаточной 3-хлорбензойной кислоты. Неочищенный продукт снова растворяли в этилацетате и три раза промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия, сушили сульфатом магния и концентрировали под вакуумом с получением рыжеватого твердого вещества. Остаток растворяли в ТГФ и светло-коричневый раствор фильтровали через слой магнезола.

- 29 019357

Фильтрационную пластину хорошо промывали ТГФ и бесцветный фильтрат концентрировали под вакуумом с получением соединения 79 (0,530 г, 76%) в виде белого твердого вещества.

Данные для соединения 79:

температура плавления=186,5°С (с разложением (бее));

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 13,4 (8, 1Н), 8,20 (8, 1Н), 8,04 (б,Д=8 Гц, 1Н), 7,91 (ΐ, 1=2 Гц, 1Н), 7,63 (ΐ, 1=8 Гц, 1Н), 7,47 (ааа, 6=8, 2, 1 Гц, 1Н), 3,40 (8, 3Н), 2,32 (8, 3Н) ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 121,0 (31), 163,2 (100), 341,2 (75), 363,2 (24) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 259,2 (22), 339,2 (100).

6.6. Синтез 4-гидрокси-Ы-[5-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамида (80).

М соляную кислоту (45,0 мл) добавляли к суспензии соединения 78 (0,439 г, 1,29 ммоль) в тетрагидрофуране (20,0 мл) и суспензию нагревали в колбе с обратным холодильником. Реакционная смесь становилась гомогенной при нагревании. По окончании нагревания в колбе с обратным холодильником в течение 4 ч реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и оставляли при комнатной температуре на ночь с последующим фильтрованием реакционной смеси. Фильтровальную пластину промывали водой, а затем сушили под вакуумом при 70°С с получением соединения 80 (0,2489 г, 64,6%) в виде белого кристаллического твердого вещества.

Данные для соединения 80:

температура плавления=приблизительно 242°С (с разложением (бес)). Разложившиеся твердые вещества затем плавятся при 252,5-255,5°С;

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 13,1 (Ьг. 8., 1Н), 10,5 (8, 1Н), 8,22 (8, 1Н), 8,09 (б, 1=8,71 Гц, 2Н), 6,96 (б, 1=8,71 Гц, 2Н), 3,43 (8, 3Н) ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 121,1 (100), 299,2 (10), 321,1 (4) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 177,2 (16), 217,2 (24), 297,2 (100).

6.7. Синтез 3-гидрокси-Ы-[5-(метилсульфонил)-1,3-тиазол-2-ил]бензамида (81).

М соляную кислоту (40,0 мл) добавляли к суспензии соединения 79 (0,370 г, 1,09 ммоль) в тетрагидрофуране (17,0 мл) и реакционную смесь нагревали в колбе с обратным холодильником. Реакционная смесь становилась гомогенной при нагревании. По окончании нагревания в колбе с обратным холодильником в течение 4 ч реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Остаток суспендировали в воде и фильтровали. Фильтровальную пластину промывали водой, сушили на воздухе, а затем снова растворяли в минимальном количестве теплого ТГФ. К теплому раствору ТГФ добавляли воду до получения мутного раствора и полученную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Добавляли дополнительное количество воды и при отстаивании образовывалось белое твердое вещество. Кристаллический продукт фильтровали и фильтровальную пластину промывали водой и сушили под вакуумом при 70°С с получением соединения 81 (0,182 г, 56%) в виде белого кристаллического твердого вещества.

Данные для соединения 81:

температура плавления=271,1-272,3°С;

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 13,2 (8, 1Н), 9,91 (8, 1Н), 8,19 (8, 1Н), 7,58 (б, 1=8 Гц, 1Н), 7,46 (ΐ, 1=2 Гц, 1Н), 7,37 (ΐ, 1=8 Гц, 1Н), 7,06 (бб, 1=8, 2 Гц, 1Н), 3,39 (8, 3Н) ррт;

МС (ИЭР+) т/ζ (относительная интенсивность): 100,1 (42), 121,1 (100), 299,2 (44), 321,1 (8) т/ζ;

МС (ИЭР-) т/ζ (относительная интенсивность): 217,2 (29), 297,2 (100).

- 30 019357

7.0. Синтез 2-гидрокси-Ы-(5-(метилсульфонил)тиазол-2-ил)бензамида (6).

Соединение, представляющее собой 2-гидрокси-Ы-(5-(метилсульфонил)тиазол-2-ил)бензамид (6) получали согласно следующей схеме синтеза:

1е

ОМе

, дийкеан

Вг

Щ31Ч, I η г

Ацегилсалици лоилхлорид.

I

Т иомочевина, ТГФ, НгО, кипячение с обратным холодильником

X/

ОСМ тСРВА (2.01 ед)

7.1. Альтернативный синтез 5-(метилтио)тиазол-2-амина (512).

Раствор брома (1,9 мл, 37,1 ммоль, 1,01 экв.) и диоксана (0,1 см³, 0,3 экв.) в ДХМ (20 мл) по каплям добавляли к раствору диметилацеталя (метилтио)ацетальдегида (5,00 г, 36,7 ммоль, 1,0 экв.) в ДХМ (80 мл) при перемешивании при 0°С в течение 3 ч. Данную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали при указанной температуре в течение 30 мин, пока анализ ЯМР не показал израсходование исходного вещества. ДХМ удаляли под вакуумом. Неочищенный бромид 513 растворяли в ТГФ (50 мл) с последующим добавлением раствора тиомочевины (5,58 г, 2,0 экв.) в ТГФ (100 мл) и воды (20 мл). Раствор нагревали в колбе с обратным холодильником в течение ночи. Растворитель удаляли под вакуумом и неочищенный продукт три раза экстрагировали ЕЮАс (50 мл). Смешанные органические фазы промывали солевым рассолом и сушили над безводным Мд§О₄. В результате очистки продукта путем колоночной флэш-хроматографии получали целевой продукт, 2-амино-5-метилтиотиазол 512 (1,35 г, выход 25,2%), в виде коричневого твердого вещества.

Данные для соединения 512:

ТСХ (силикагель) К.(=0,2 (гекс:ЕЮАс 1:1);

Ή-ЯМР (СОС1₃, 200 МГц) 2,35 (3Н, 8, СН₃), 5,46 (2Н, 8, ΝΗ₂), 7,06 (1Н, 8, СН);

'11 (ДМСО-а, 400 МГц) 2,29 (3Н, 8, СН₃), 6,96 (1Н, 8, СН), 7,16 (2Н, 8, ΝΗ₂);

¹³С-ЯМР (100 МГц, ДМСО-а), 22,6, 115,8, 144,9, 171,8;

т/ζ (С1+Н)⁺ 147;

НКМ8 (масс-спектрометрия высокого разрешения), обнаружено, т/ζ 147,00540, С₄Н₇^§₂ (МН⁺) необходимо т/ζ, 147,00507 (+2,4 ррт).

7.2. Синтез 2-(5-(метилтио)тиазол-2-илкарбамоил)фенилацетата (69).

В атмосфере азота раствор ацетилсалицилоилхлорида (1,237 г, 6,20 ммоль, 1,3 экв.) в ТГФ (40 мл) добавляли к перемешиваемому раствору 5-(метилтио)тиазол-2-амина (700,0 мг, 4,79 ммоль, 1,0 экв.) в осушенном ТГФ (мл). Затем добавляли триэтиламин (0,67 мл, 4,79 ммоль, 1,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре и ход реакции контролировали с помощью ТСХ. По прошествии 2 ч реакционную смесь фильтровали через пористую фильтрующую воронку и растворитель удаляли под вакуумом. Неочищенный продукт растворяли в ЕЮАс (150 мл) и дважды промывали 1 М НС1 и насыщенными водными растворами гидрокарбоната натрия. Органическую фракцию сушили над Мд§О₄ после удаления растворителя. В результате колоночной флэш-хроматографии получали чистый продукт 69 (1,450 г, 98%) в виде твердого вещества.

Данные для соединения 69:

температура плавления=145-147°С;

ТСХ (силикагель) В(=0,36 (гекс:ЕЮАс, 1:1);

Ή-ЯМР (ДМСО-а, 400 МГц) 2,23 (3Н, 8, СН₃), 2,47 (3Н, 8, СН₃), 7,28 (1Н, аа, 1=1,0, 8,0 Гц, АгН), 7,41 (1Н, 1а, 1=1,0, 7,6 Гц, АгН), 7,56 (1Н, 8, СН), 7,63 (1Н, 1а, 1=1,7, 8,0 Гц, АгН), 7,78 (1Н, аа, 1=1,7, 7,6 Гц, АгН), 12,70 (1Н, 8, ЫН);

¹³С-ЯМР (ДМСО-а, 100 МГц) 21,1, 22,0, 123,7, 124,6, 126,2, 126,9, 130,0, 133,1, 141,6, 148,9, 160,0, 164,5, 169,2;

- 31 019357 т/ζ (С1) 309 (МН⁴);

НКМ8, обнаружено 309,03654, С₁₃Н₁₃Н₂О₃8₂ необходимо 309,03677 (-0,8 ррт).

7.3. Синтез 2-(5-(метилсульфонил)тиазол-2-илкарбамоил)фенилацетата (7).

Раствор м-ХПБК (70-75%, 1,04 г, 4,2 ммоль, 1,2 экв.) в ДХМ (20 мл) по каплям добавляли к раствору соединения 69 (1,1 г, 3,57 ммоль, 1,0 экв.) в ДХМ (50 мл) при перемешивании в течение 30 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение еще 30 мин при комнатной температуре. По каплям добавляли вторую порцию м-ХПБК (70-75%, 1,04 г, ~4,2 ммоль, 1,18 экв.) в ДХМ (20 мл) в течение 30 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором тиосульфата натрия и органическую фазу два раза экстрагировали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и 1 М НС1 соответственно. Смешанные органические фазы промывали солевым раствором и сушили над безводным Мд8О₄. В результате удаления растворителя под вакуумом и колоночной флэш-хроматографии (ЕЮАс, Нех^ЕЮАс 1:1) получали содинение 7 (1,15 г 95%) в виде белого твердого вещества.

Данные для соединения 7:

температура плавления=173-175°С;

ТСХ (силикагель) Κ_Γ=0,27 (ЕЮАс);

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б) 2,25 (3Н, к, СН₃), 3,38 (3Н, к, СН₃), 7,31 (1Н, бб, 1=1,0, 8,0 Гц, АгН),

7,44 (1Н, !б, 1=1,0, 7,6 Гц, АгН), 7,67 (1Н, !б, 1=1,6, 7,6 Гц, АгН), 7,83 (1Н, бб, 1=1,6, 8,0 Гц, АгН), 8,17 (1Н, к, СН);

¹³С-ЯМР (100 МГц, ДМСО-б) 21,1, 46,2, 123,8, 122,2, 126,3, 130,1, 130,7, 133,6, 144,6, 149,0, 163,3,

165,3, 169,2;

МС т/ζ (С1+Н)⁺ 341, (100%), 299 (36%), 221 (83%).

7.3. Синтез 2-гидрокси-Ы-(5-(метилсульфонил)тиазол-2-ил)бензамида (6).

Раствор соединения 7 (1,0 г, 2,94 ммоль, 1,0 экв.), растворенного в ТГФ (20 мл), добавляли при перемешивании к 2 М НС1 (100 мл). Реакционную смесь нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 1 ч и оставляли охлаждаться при перемешивании в течение 1 ч. Продукт фильтровали с использованием воронки из спеченного стекла, промывали дистиллированной водой и ТГФ и сушили в высоком вакууме с получением 834 мг (95%) соединения 6 в виде бесцветного твердого вещества.

Данные для соединения 6:

температура плавления=282-283°С;

Ή-ЯМР (ДМСО-б, 400 МГц) 3,39 (3Н, к, СН₃8О₂), 7,01 (1Н, !, 1=7,5 Гц, АгН), 7,10 (1Н, б, 1=7,5 Гц, АгН), 7,52 (1Н, !, 1=7,5 Гц, АгН), 7,96 (1Н, б, 1=7,5 Гц, АгН) и 8,17 (1Н, к, 4'-Н);

¹³С-ЯМР (100 М, ДМСО-б) 46,2, 117,0, 117,6, 120,1, 130,5, 130,8, 135,2, 144,2, 157,7, 163,1 и 165,6;

МС (С1) т/ζ 299 (МН⁺) и 316 (\1\11);

НКМ8, обнаружено, т/ζ 299,01696, СцН1^₂О₄8₂ (МН⁺) необходимо т/ζ, 299,01602.

Несмотря на то что вышеизложенное относится к конкретным предпочтительным вариантам реализации, очевидно, что настоящее изобретение ими не ограничено. Специалисту в данной области техники очевидно, что возможны различные модификации описанных вариантов реализации и что указанные модификации также находятся в рамках настоящего изобретения.

Содержание всех публикаций, заявок на патент и патентов, приведенных в настоящем описании, полностью включено в настоящее описание посредством ссылки.

Claims (5)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы или его соль, где К4-К5 независимо выбраны из группы, включающей Н, ОН, (С_£-С₆)алкилтио, (С1-С₆)алкилсульфонил, -О-СО-(С_£-С₆)алкил и -О-8О₂-(С_£-С₆)алкил, и

   К.₆ и К₉ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, (С1-С₆)алкилтио, (С1-С₆)алкилсульфонила и -О-8О₂-(С1-С₆)алкила, при условии, что по меньшей мере один из Е-Е, или К₉ должен представлять собой (С1-С₆)алкилсульфонил или -О-8О₂-(С1-С₆)алкил.
2. 2. Соединение по п.1, где указанная соль является фармацевтически приемлемой.
3. 3. Соединение по п.1, выбранное из следующих соединений:

   № Структура 11 У О О Ν-λ (Υ=^Λ?

   6 он о _Ύ° 0^Λ’ 60 о Άζθ ОН О А (А⁷ 7 О А О ГЧ-°8*° ό^Λ= 62 у О / *0 ° ιΛ (А 73 ОАС 0 _Ν— ϊ I /Л ^Ν 2 Рг (СН₂ ь СН з и ^н 74 ОН О Ν~ АА У X < У N -5 ‘ЗС^СНгЬСНз II ! ^н 75 О№ О _V⁰ А '

   - 33 019357
4. 4. Фармацевтическая композиция для лечения вирусной инфекции гепатита С, содержащая эффективное количество соединения формулы (I) по любому из пп.1-3 и фармацевтически приемлемый носи тель.
5. 5. Применение соединения формулы где Κι представляет собой ОН или -О-С(О)-(С1-С₆)алкил, или его фармацевтически приемлемой соли для лечения вирусной инфекции гепатита С.

   - 34 019357

   Действие по фракциям

   ΝΤΖΉΕΝ

   Действие по фракциям

   δ 02- 0- ^α - ..... ----- е 00 с ) 02 0 4 06 06 Ю Действие по фракциям с. ΙΓΝα+ΝΤΖ 0. 1 2- -огсмес-ΝΤΖ 08- -о- ΙΡΝα+ 2*СМвС о 09- э0 6- О 06- ίθ<§ £02’ с 0- 0 3- 0- 1 ------------------------------------------------------------------ΐ----------------------------1-----------------------------1

   - нтглип ΙΓΝα+ΝΤΖ