EA018447B1

EA018447B1 - Применение комбинации 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1н-пиррол-3-ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-(1-пиперидинилкарбонил)пирроло[3,2,1-jk][1,4]бензодиазепина с химиотерапевтическим агентом для лечения злокачественных опухолей

Info

Publication number: EA018447B1
Application number: EA201070085A
Authority: EA
Inventors: Актхам Абуруб; Марсио Чедид; Томас Альберт Энглер; Венкатрагхаван Васудеван
Original assignee: Эли Лилли Энд Компани
Priority date: 2007-07-02
Filing date: 2008-06-20
Publication date: 2013-08-30
Also published as: CA2691587C; WO2009006043A3; JP5551589B2; ES2561202T3; JP2010532364A; AR067112A1; TW200911272A; EP2173348A2; US20100166884A1; ZA200908725B; CL2011003046A1; CA2691587A1; JP2014114297A; US8318713B2; IL202237A0; EA201201155A1; BRPI0813789A2; PE20090838A1; AU2008270732B2; HK1141236A1

Abstract

Описано применение комбинации 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-a]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1H-пиррол-3-ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-(1-пиперидинилкарбонил)пирроло[3,2,1-jk][1,4]бензодиазепина с химиотерапевтическим агентом для лечения рака яичников, немелкоклеточного рака легкого или рака ободочной и прямой кишки.

Description

Эффективность химиотерапии любого ракового заболевания ограничена чувствительностью конкретных раковых опухолей к определенному лечению. Даже в случае, когда опухоль реагирует на конкретную химиотерапию, острое и хроническое токсическое действие, связанное с химиотерапией, часто вынуждают снижать дозу или совсем прекращать лечение. Один из подходов к лечению раковых опухолей, не реагирующих на терапию, или к преодолению ограничивающей дозу токсичности заключается в комбинировании агентов, которые действуют по различным механизмам действия. Несмотря на то, что были открыты некоторые эффективные химиотерапевтические комбинации, идентификация комбинаций агентов, демонстрирующих повышенную эффективность при конкретном раковом заболевании или лучше переносимых пациентом, остается, по существу, эмпирической.

Киназа-3 β гликогенсинтетазы (Ο8Κ3β) представляет собой серин/треонинкиназу, вовлеченную в различные сети передачи сигнала, которые регулируют ряд функций клеток. Роль Ο8Κ3β в лечении рака неясна. Существуют данные о том, что рапамицин (гаратуст), например, значительно потенцирует действие паклитаксела (рас1йахе1), винорелбина (ушоге1Ьше) и карбоплатина (сагЬор1абп) в клетках раковой опухоли молочной железы путем активации Ο8Κ3β, но не действие доксорубицина (бохогиЫсш) или гемцитабина (дешсйаЬте). Указанное потенцирование ингибировали с помощью хорошо известных ингибиторов Ο8Κ3β - хлорида лития, 8В216763 и 8В415286 (Эопд, е! а1., Сапсег Кекеагсб, 65(5), 1961-1972 (2005)). В отличие от этого, было показано, что хлорид лития и 8В216763, ингибиторы Ο8Κ3β, значительно потенцируют противоопухолевое действие родственного фактору некроза опухоли лиганда, индуцирующего апоптоз (ТКА1Ь), как в р53-положительных, так и в р53-отрицательных раковых клетках предстательной железы в субтоксических концентрациях (Ыао, е! а1., Мо1еси1аг Сапсег Тбегареибск, 2, 1215-1222 (2003)). Аналогично было показано, что хлорид лития сенсибилизирует клетки опухоли на фактор некроза опухоли (ΤΝΡ) в клетках рабдомиосаркомы человека и в клетках фибросаркомы мышей, а ингибиторы Ο8Κ3β - Ко31-8220, вальпроевая кислота и индирубин-3'-моноксим не потенцировали такой эффект (8сбое!!е, е! а1., Тбе 1оитиа1 о! Вю1одса1 Сбетщбу, 276(28), 25939-25945 (2001)). Наконец, существуют данные о том, что ингибиторы Ο8Κ3β - хлорид лития и ЬУ2119301, потенцируют действие адриамицина (аббатусш), этопозида (е!ороббе) и 5-фторурацила (5-йиогоигасй) в р53-положительных клетках опухоли толстой кишки, но ни 8В216763, ни 8В415286 не потенцировали действие ни одного из исследованных агентов, и ни один из исследованных ингибиторов Ο8Κ3β не продемонстрировал желаемое потенцирование в линиях р53-отрицательных клеток опухоли толстой кишки (Таи, е! а1., Сапсег Кекеатсб, 65(19), 9012-9020 (2005)).

Существует необходимость в конкретных комбинациях агентов, проявляющих повышенную эффективность в лечении онкологического пациента с конкретным раковым заболеванием или обеспечивающих лучшую переносимость химиотерапии пациентом с раковым заболеванием. Ингибитор Ο8Κ3β 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3-ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2(1-пиперидинилкарбонил)пирроло[3,2,1-]к][1,4]бензодиазепин потенцирует действие некоторых агентов химиотерапии при конкретных раковых заболеваниях.

Краткое описание сущности настоящего изобретения

В настоящем изобретении предложено применение комбинации 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2а]пиридин-3 -ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3 -ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло[3,2,1-]к][1,4]бензодиазепина или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения с химиотерапевтическим агентом, выбранным из группы, состоящей из СРТ-11, пеметрекседа, гемцитабина, этопозида, доксорубицина, цисплатина и карбоплатина для получения лекарственного средства для лечения рака яичников, немелкоклеточного рака легкого или рака ободочной и прямой кишки.

Кроме того, в настоящем изобретении предложено применение комбинации 7-(2,5-дигидро-4имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3-ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-(1-пиперидинилкарбонил)пирроло[3,2,1-]к][1,4]бензодиазепина или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения с пеметрекседом и химиотерапевтическим агентом, выбранным из группы, состоящей из цисплатина или карбоплатина, для получения лекарственного средства для лечения рака яичников, немелкоклеточного рака легкого или рака ободочной и прямой кишки.

Подробное описание настоящего изобретения

Соединение СРТ-11 также известно как иринотекан (птпо!есап) и продается под торговым названием КАМПТОСАР® (САМРТО8АК®). СРТ-11 является средством химиотерапии, применяемым для лечения пациентов с распространенным раком толстого кишечника и толстой кишки. Его вводят периодически посредством болюсных инъекций или инфузии в дозировке 120-180 мг/м² в течение шестинедельных циклов лечения. Как правило, СРТ-11 вводят в сочетании с 5-фторурацилом (5-ФУ) и лейковорином (ЛВ) (1еисоуобп, ЬУ).

Соединение пеметрексед (ретебехеб) продается под торговым названием АЛИМТА® (АЫМТА®). Пеметрексед (ретебехеб) является химиотерапевтическим препаратом, применяемым для лечения пациентов с местнораспространенным или метастатическим немелкоклеточным раком легкого после предше

- 1 018447 ствующей химиотерапии. Пеметрексед (ретейехей) в сочетании с цисплатином (οίκρίαΐίη) показан для лечения пациентов со злокачественной мезотелиомой плевры в неоперабельном состоянии или тех пациентов, которые не могут подвергаться оперативному вмешательству по иным причинам. Как правило, пациенту вводят 500 мг/м² пеметрекседа (ретейехей) посредством инфузии в течение 10 мин каждый 21 день после предварительного введения фолиевой кислоты, витамина В₁₂ и дексаметазона (йехашеШакоие).

Термин платиносодержащий химиотерапевтический агент обозначает противораковый химиотерапевтический агент, содержащий платину. Конкретные платиносодержащие химиотерапевтические агенты, предусмотренные способом согласно настоящему изобретению, включают цисплатин (οίκρίαΐίη). карбоплатин (сагЬор1айи) и оксалиплатин (οχαΐίρίαΐίη). Предпочтительным является применение цисплатина (с1кр1а11и) или карбоплатина (сагЬор1а!ш).

Соединение цисплатин (с1кр1а1ш) продается под торговым названием ПЛАТИНОЛ®-ЛО (РЬЛТ1ΝΟΕ®-ΑΟ). Цисплатин (с1кр1айи) применяют для лечения пациентов с метастатическими опухолями яичников, которые уже прошли соответствующие хирургические и/или радиотерапевтические процедуры. Как отдельный агент, цисплатин (с1кр1а11и), как правило, вводят в дозе 100 мг/м² внутривенно один раз за цикл, один раз каждые четыре недели. Цисплатин (с1кр1айи) также можно вводить в сочетании с ЦИТОКСАНОМ® (ΟΥΤΟΧΑΝ®).

Соединение карбоплатин (сагЬор1а!ш) продается под торговым названием ПАРАПЛАТИН® (ΡΑΚΑΡΕΑΤΙΝ®). Карбоплатин (сагЬор1айи) применяют для лечения пациентов с карциномой яичников. Как отдельный агент, карбоплатин (сагЬор1айи) вводят, как правило, в дозе 360 мг/м² внутривенно один раз за цикл, один раз каждые четыре недели. Карбоплатин (сагЬор1айи) также можно вводить в сочетании с циклофосфамидом (сус1орйокрйат1йе).

Соединение оксалиплатин (оха11р1а!ш) продается под торговым названием ЭЛОКСАТИН® (ΕΤΘΧΑΤΙΝ®). Оксалиплатин (оха11р1айи) применяют для лечения пациентов с раком ободочной и прямой кишки. Его вводят, как правило, в дозе 85 мг/м² внутривенно один раз за цикл, один раз каждые две недели в сочетании с 5-ФУ (5-ЕИ) и ЛВ (ЬУ).

Соединение доксорубицин (йохогиЫст) продается под торговыми названиями АДРИАМИЦИН® (ΑΟΚΙΑΜΥΟΙΝ®) и РУБЕКС® (ΚΠΒΕΧ®). Доксорубицин (йохогиЫст) успешно применяли для достижения регрессии при диссеминированных неопластических заболеваниях, таких как острый лимфобластный лейкоз, острый миелобластный лейкоз, опухоль Вильмса, нейробластома, саркомы мягких тканей и костей, карцинома молочной железы, карцинома яичников, переходно-клеточная карцинома мочевого пузыря, рак щитовидной железы, карцинома желудка, болезнь Ходжкина, злокачественная лимфома и бронхогенная карцинома. Его вводят, как правило, в дозе 60-75 мг/м² внутривенно с 21-дневными интервалами.

Соединение этопозид (еФрокке) продается под торговыми названиями ЭТОПОФОС® (ΕΤΟΡΟΡΗΟ8®), ТОПОСАР® (ΤΟΡΟ8ΑΚ®) и ВЕПЕЗИД® (УЕРЕ81Э®). Этопозид (еФроыйе) применяют для лечения пациентов с раком яичка или легкого. Его, как правило, вводят посредством инъекции в дозе 5100 мг/м².

Соединение 5-фторурацил (5-ФУ) продается под торговым названием АДРУЦИЛ® (ΑΟΚΠΟΙΕ®). Его применяют для лечения пациентов с карциномой толстой кишки, прямой кишки, молочной железы, желудка и поджелудочной железы. 5-ФУ вводят, как правило, внутривенно в дозе 12 мг/кг один раз в день в течение четырех дней подряд.

Гемцитабин (детсйаЬше) продается под торговым названием ГЕМЗАР® (6ΕΜΖΑΚ®). Его чаще всего применяют для лечения немелкоклеточного рака легкого, рака поджелудочной железы, рака мочевого пузыря и рака молочной железы. Его вводят, как правило, посредством внутривенной инфузии в дозировке 1000 мг/м² в течение 30 мин еженедельно из 4 недель в течение 3 недель подряд.

Специалисту в данной области техники очевидно, что точную дозу и количество циклов лечения любым из вышеописанных агентов, необходимых для лечения пациента, определяет врач с учетом стадии и тяжести заболевания, а также конкретных потребностей и реакции конкретного пациента.

В \νΟ 03/076442 указано, что соединение 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо1Н-пиррол-3 -ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло [3,2,1 -)к| [ 1,4]бензодиазепин, которое в данном источнике называют 3-(9-фтор-6-(пиперидин-1-ил)карбонил)-6,7-дигидро-6Н- [1,4]диазепино-[6,7,1-Ы]индол-1-ил)-4-(имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил)-2,5-диоксопиррол (пример 365, стр. 113), является ингибитором Ο8Κ-3β. Принято, что два указанных названия являются синонимами, и каждое название обозначает следующую структуру:

- 2 018447

Соединение I является основанием и, следовательно, может реагировать с любой из неорганических и органических кислот с образованием фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей. Предпочтительными фармацевтически приемлемыми солями являются соли, образованные с НС1, НВг, серной кислотой или метансульфокислотой.

Соединение I образует сольваты, например, с водой, метанолом и этанолом. Предпочтительным сольватом является сольват, образованный с этанолом.

Несмотря на то, что соединение I само по себе не обладает полезной противоопухолевой активностью, его введение в сочетании с СРТ-11, пеметрекседом (рете!гехеб), гемцитабином (детсйаЬше), этопозидом (сЮромбс). доксорубицином (бохогиЫст) или платиносодержащими химиотерапевтическими агентами обеспечивает значительное терапевтическое преимущество в лечении рака яичников, немелкоклеточного рака легкого или рака ободочной и прямой кишки по сравнению с лечением только СРТ-11, пеметрекседом (рете!гехеб), гемцитабином (детсйаЫие), этопозидом (еЫроыбе), доксорубицином (бохогиЫст) или платиносодержащими химиотерапевтическими агентами. Одно из преимуществ данной комбинации заключается в том, что лечебное действие СРТ-11, пеметрекседа (рете!гехеб), гемцитабина (детсйаЬше), этопозида (еЫроыбе), доксорубицина (бохогиЫст) или платиносодержащих химиотерапевтических агентов потенцируют совместным введением с соединением I. То есть более низкая доза СРТ-11, пеметрекседа (ретейехеб), гемцитабина (детсйаЬше), этопозида (еЫроыбе), доксорубицина (бохогиЫст) или платиносодержащих химиотерапевтических агентов по сравнению с той, которую вводят обычно, окажет аналогичное лечебное действие на пациента. Кроме того, пациент сможет ощутить более сильный лечебный эффект при введении обычной дозы СРТ-11, пеметрекседа (рете!гехеб), гемцитабина (детсйаЫие), этопозида (еЫроыбе), доксорубицина (бохогиЫст) или платиносодержащих химиотерапевтических агентов при типичной дозе, в случае, если указанные агенты введены совместно с соединением I. Этот способ лечения дает дополнительное преимущество удобства для пациента и врача, поскольку он позволяет водить соединение I по той же схеме лечения, что и СРТ-11, пеметрексед (рете!гехеб), гемцитабин (детсйаЫие), этопозид (еЫроыбе), доксорубицин (бохогиЫст) или платиносодержащие химиотерапевтические агенты.

Комбинированная терапия согласно настоящему изобретению представляет собой улучшенный способ лечения пациента, страдающего от рака яичников, немелкоклеточного рака легкого или рака ободочной и прямой кишки. Пациент представляет собой млекопитающее, а предпочтительное млекопитающее представляет собой человека.

Несмотря на то, что все описанные выше комбинации соединения I или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения и химиотерапевтических агентов являются полезными, некоторые комбинации являются предпочтительными. Одна предпочтительная комбинация представляет собой совместное введение 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3-ил)-9фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-(1-пиперидинилкарбонил)пирроло[3,2,1-_)к][1,4]бензодиазепина или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения и платиносодержащего химиотерапевтического агента. Другим вариантом реализации является совместное введение 7-(2,5-дигидро-4имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3-ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-(1-пиперидинилкарбонил)пирроло[3,2,1-_)к][1,4]бензодиазепина или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения и либо цисплатина (сщр1а!ш), либо карбоплатина (сагЬор1аби). Еще одним вариантом реализации настоящего изобретения является введение 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3-ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-(1-пиперидинилкарбонил)пирроло[3,2,1-]к] [1,4]бензодиазепина или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения с пеметрекседом (ретейехеб) и платиносодержащим химиотерапевтическим агентом. Предпочтительным является введение 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3-ил)-9-фтор1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло |3,2,1-|к| [1,4]бензодиазепина или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения с пеметрекседом (рете!гехеб) и карбоплатином (сагЬор1а!ш).

Фраза эффективное количество химиотерапевтического агента обозначает дозу конкретного химиотерапевтического агента, необходимую для того, чтобы либо разрушить раковые клетки-мишени,

- 3 018447 либо замедлить или остановить прогрессирование ракового заболевания у пациента при введении химиотерапевтического агента в сочетании с соединением I или фармацевтически приемлемой солью или сольватом указанного соединения.

Фраза эффективное количество 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Нпиррол-3 -ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло [3,2,1 -_)к] [ 1,4]бензодиазепина или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения обозначает дозу соединения I или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения, необходимую для потенцирования действия конкретной дозы конкретного химиотерапевтического агента, направленного либо на разрушение раковых клеток-мишеней, либо на замедление или остановку прогрессирования рака у пациента. Предполагаемые дозы соединения I или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения находятся в диапазоне от 5 до 600 мг/пациент/день. Предпочтительные дозы находятся в диапазоне от 50 до 400 мг/пациент/день. Еще более предпочтительные дозы находятся в диапазоне от 100 до 400 мг/пациент/день. Точную дозировку, необходимую для лечения пациента, определит врач с учетом стадии и тяжести заболевания, а также конкретных потребностей и реакции индивидуального пациента.

Фраза потенцировать действие конкретной дозы конкретного химиотерапевтического агента обозначает, что доза химиотерапевтического агента более низкая, чем та, которую вводят обычно, будет эффективной дозой или что пациент при обычной дозе ощутит более сильное лечебное действие химиотерапевтического агента в случае его введения совместно с соединением I или фармацевтически приемлемой солью или сольватом указанного соединения.

Термины вводимый совместно и совместное введение, а также фразы в комбинации с и введенный в комбинации с в настоящем описании означают, что с соединение I или фармацевтически приемлемую соль или сольват указанного соединения вводят пациенту в течение того же цикла лечения, что и СРТ-11, пеметрексед (ретеЧехеб) или платиносодержащий химиотерапевтический агент. То есть соединение I или фармацевтически приемлемую соль или сольват указанного соединения можно вводить перед, во время или после введения СРТ-11, пеметрекседа (ретеЧехеб) или платиносодержащего химиотерапевтического агента по усмотрению врача с учетом типа опухоли, стадии заболевания, конкретного применяемого химиотерапевтического агента, а также состояния и чувствительности пациента.

Следующие исследования ίη νίΐτο и ίη νίνο демонстрируют преимущества этих сочетаний.

Примеры эффективности ΐη νΐΐΓθ

Апоптоз или запрограммированная гибель клеток характеризуется рядом биохимических реакций, одной из которых является индукция каспаз. Активированные каспазы представляют собой протеазы, которые участвуют в каскаде процессов распада, блокирующих ключевые ферменты, ответственные за гомеостаз и восстановление клеток. Каспазы 3 и 7 выполняют роль ключевых эффекторов в апоптозе, их можно детектировать и определять их количество с помощью флуоресцентного биохимического анализа. Увеличение активности каспазы 3/7 в клетках напрямую связано с апоптотической активностью (Ό.\ν. ΝίοΙιοΚοη. е1 а1., №11иге. 376, 37-43 (1995)). Использовали набор реактивов Рготеда Аро-ΟΝΕ Нотодепеои8 Савразе-3/7 (каталог #67791). Буфер для анализа состоит из следующих составляющих: 30 мМ НЕРЕ8 (№(2-гидроксиэтил)пиперазин-№-(2-этансульфокислота) рН 7,4, 150 мМ №С1, 50 мМ КС1, 10 мМ МдС1₂, 0,4 мМ Ε6ΤΑ (этиленгликоль тетрауксусная кислота), 0,5% №шбе1 Р40 (октилфенолполи(этиленгликолевый эфир)), 0,1% СНАР8 (3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-1-пропансульфоната гидрат и 10% сахароза, которая лизирует/пермеабилизирует культивированные клетки и субстрат каспазы 3/7, Ζ-ΌΕνΌ (2-Асп(ОМе)-Глу(ОМе)-Вал-Асп(ОМе)), связанный с профлуоресцентным родамином 110. Когда смесь буфер-субстрат добавляют к исследуемой пробе, распад и последующее удаление пептидов ΌΕνΌ в результате активности каспазы 3/7 вызывает интенсивную флуоресценцию уходящей группы родамина 110, которую детектируют путем возбуждения при 499 нм. Количество флуоресцентного продукта пропорционально значению активности расщепления каспазы 3/7 в образце.

Для измерения апоптотического влияния исследуемых соединений опухолевые клетки высевают по 1 х 10⁴ клеток на лунку в 96-луночные планшеты и инкубируют в течение ночи при 37°С с 5% СО₂. Опухолевые клетки обрабатывают исследуемым соединением в необходимых концентрациях в трипликате, включая лунки без обработки/лунки отрицательного контроля. Планшеты для анализа повторно инкубируют в течение 48 ч. В конце периода инкубации в каждую лунку с образцом добавляют смесь буфера для анализа и субстрата. Величину флуоресценции в каждой лунке измеряют при длине волны возбуждения 485±20 нм и длине волны излучения 530±25 нм. Рассчитывают процентное увеличение активности каспазы в обработанных клетках относительно необработанных контрольных клеток.

НСТ-116 и οο1ο-205 являются карциномами ободочной и прямой кишки, А2780 и 8Κ0ν3 являются карциномами яичников, А549, Са1и-6 и N6! Н-460 являются немелкоклеточными карциномами легкого, а А68, ΚΑΤΟ III и ΜΚΝ 45 являются карциномами желудка. В следующих таблицах термин соединение I или соед. I обозначает 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3-ил)-9фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло [3,2,1-_)к][1,4]бензодиазепин.

Агенты химиотерапии тестировали при следующих концентрациях:

- 4 018447

Линия клеток	Цисплатин (С1зр1а£ίη}	Карбоплатин (СагЬор1аб1П)	СРТ-11	Пеметрексед (Ретебгехеб)

НСТ-116	5 мкМ	-	2 0 нМ	60 нМ
Со1о-205	5 мкМ	-	20 нМ	-
А2780	5 мкМ	-	2 0 нМ	60 нМ
А549	1 мкМ	10 мкН	-	-
ЙС1~Н46О	1 мкМ	10 мкМ	-	-
Са1и-6	-	-	-	60 нМ

Данные, представленные в табл. 1-12, выражены как процентное увеличение активности каспазы относительно необработанных контрольных клеток, если не указано иное.

Таблица 1

Цисплатин (с18р1а!т) в сочетании с соединением I

Линия клеток	Культурная среда	Соединение I*	цисплатин (С15р1аип)	Соединение 1*+ цисплатин <С1зр1аЪ1п)	Кратное увеличение по сравнению с цисплатином (С1зр1а1=1П)
НСТ-116	0	16	36	130	5
Со1о-205	0	12	8	85	10,6
А2330	0	0	1,5	93	62
А549	0	80	4	193	46
мсг-нио	0	99	47	379	8

*Концентрация соединения I была различной для разных линий клеток: НСТ-116 (300 нМ); Со1о-205 (110 нМ); А2780 (60 нМ); А549 (300 нМ); N0-4460 (300 нМ)

Таблица 2

Карбоплатин (сатЬор1а!ш) в сочетании с соединением I

Линия клеток	Кул ь турна я среда	Соединение I*	карбоплатин (са гЬор1апг1)	Соединение I* + карбоплатин (саг&ор1а71л?	Кратное увеличение по сравнению с карбоплатином (сагЬорТаМп)
А54 9	0	62	14	282	20,1
N€1-14460	0	122	16	299	18,7

*Концентрация соединения I была различной для разных линий клеток: А549 (300 нМ); ΝΠ-Η460 (100 нМ)

Таблица 3

СРТ-11 в сочетании с соединением I

Линия клеток	Культурная среда	Соединение I*	СРТ-11	Соединение 1*+ СРТ-11	Кратное увеличение по сравнению с СРТ-11
НСТ-116	4	53	50	263	5, 3
Со!с-205	Γι	45	38	254	6, Ί
А2780	1	1	153	450	2, 9

*Концентрация соединения I была различной для разных линий клеток: НСТ-116 (330 нМ); Со1о-205 (33 Нм); А2780 (330 нМ)

Таблица 4

Пеметрексед (ретейехеб) в сочетании с соединением I

Линия клеток	Культурная среда	Соединение I*	Пеметрексед (РетеЬгехес!)	Соединение I * + Пеметрексед ί РегпеЬгехесЗ)	Кратное увеличение по сравнению с Пеметрекседом (РетекгехеО!
НСТ-116	0	0	23	125	5, 4
Са1и-6	0	139	24	319	13, 3
А2 780	0	10	0	35	_ * *

*Концентрация соединения I составляла 30 нМ для всех линий клеток **невозможно рассчитать, нет измеренного действия одного пеметрекседа (ретейехеб)

- 5 018447

Таблица 5

НСТ-116

Лек. средство	Конц. Соед. I	Конц. лек. препарата	Соед. 1	Лек. препарат	Соед, 1 + лек . препарат	Кратное увеличение по сравнению с лек . препаратом
5-ги	12 нМ	5 мкМ	47	55	305	5, 5
Гемцитабин (СегпсхСаЬше)	60 нМ	30 нМ	0	324	595	1, 8

Таблица 6

А2780

Лек. средство	Конц. Соед. ΐ	Конц. лек. препарата	Соед, I	Лек. препарат	Соед. I + лек. препарат	Кратное увеличение по сравнению с лек. препаратом
Карбоплатин (СагЬор1аИ1п) *	300 нМ	5 мкМ	55	18	237	3

*Планшеты, инкубировали в течение 72 ч

8ΚΘΥ3

Таблица 7

Лек. средство	Конц ♦ Соед. I	Конц, лек. препарата	Соед, 1	Лек. препарат	Соединение I < лек. препарат?	Кратное увеличение по сравнению с лек. препаратом
Доксорубицин (СохогиЬиси η}	300 нМ	1 мкН	0	134	210	1,5

Са1и 6

Таблица 8

Лек, средство	Конц, Соед. I	Конц . лек. препарата	Соед, I	Лек. препарат	Соединение I н дек. препарат	Кратное увеличение по сравнению с лек. препаратом
Цисплатин (С г а р 1 а ΐ ι η)	33 нМ	2 мкМ	154	97	471	4,8

Таблица 9

ЫС1 Н-460

Лек. средство	Конц. Соед. I	Конц. лек. препарата	Соед. I	Лек. препарат	Соединение I 4 лек. препарат	Кратное увеличение по сравнению с лек. препаратом
Пеметрексед (РетеСгехеЦ)	300 нМ	500 нМ	38	185	872	4, 7
Гемцитабин (Сетей СаЫпе)	300 нМ	5 0 нМ	136	1187	1996	Ъ 7
Этопозид (ΕζοροΞ йс1е)	300 нН	1 мкМ	222	251	935	3,7

А68

Таблица 10

Лек. средство	Конц. Соед. 1	Конц, лек. препарата	Соед. I	Лек. препарат	Соединение Т + лек. препарат	Кратное увеличение по сравнению с лек. препаратом
Цисплатин (С1эр1аСйл)*	900 нМ	5 мкМ	0	147	208	1,4
5-ФУ (5-Ги)	900 нМ	3 мкМ	0	133	235	1, 7

*Планшеты, инкубировали в течение 72 ч

- 6 018447

Таблица 11

КАТО III

Лек. средство	Конц * Соед. I	Конц. лек. препарата	Соед. I	Лек. препарат	Соединение I + лек. препарат	Кратное увеличение по сравнению с лек. препаратом
Цисплатин (С13р1аР1п)	600 нМ	10 мкМ	48	389	631	1,6

Таблица 12

ΜΚΝ 45

Лек. средство	Конц. Соед. I	Конц. лек. препарата	Соед. I	Лек. препарат	Соединение I + лек, препарат	Кратное увеличение по сравнению с лек. препаратом
Цисплатин (С15р1а!1П)	600 нМ	10 мкМ	162	359	868	2, 4
5-ФУ (5-Е11) *	300 нМ	5 мкМ	105	415	777	1, 9

*Планшеты, инкубировали в течение 72 ч

Данные кратного увеличения, представленные в табл. 1-12, отражают потенцирование апоптоза, опосредуемого химиотерапевтическими препаратами, в клетках при совместном введении соединения I по сравнению с апоптотическим действием только химиотерапевтического препарата.

Эксперименты по определению эффективности ίη νίνο.

Клетки из культуры вводят подкожно в заднюю часть бока самок мышей линии СЭ-1 пи/пи, которых после получения от поставщика неделю содержали в виварии для адаптации. Мышей случайным образом делят на группы по 7 или 8 мышей на группу и начинают лечение, когда величина объема опухоли достигает 100 мм³. Соединение I вводят внутривенно, а химиотерапевтический агент вводят интраперитонеально. Когда эти агенты вводят в комбинации, химиотерапевтический агент вводят за 60 мин до соединения I. Опухоли измеряют два раза в неделю с помощью электронных циркулей и на основе полученных данных строят кривые роста. Задержка роста опухоли представляет собой увеличение среднего времени, необходимого для достижения объема опухоли 1000 мм³ по сравнению с контрольной группой. Животных также наблюдают на предмет появления изменений в массе тела и выживаемости.

Таблица 13. Цисплатин (СЦр1айп) в сочетании с соединением I в ксенотрансплантатах карциномы яичников человека А2780.

мг/кг цисплатина (сЦр1а!т) вводят интраперитонеально отдельно и в комбинации с 5 мг/кг соединения I (введенного внутривенно). Соединение I в дозировке 5 мг/кг (введенное внутривенно) также вводят отдельно в качестве контрольной группы. Животные получали подряд три цикла цисплатина (сХр1айп) и соединения I, перерыв между циклами составлял семь дней.

Таблица 13

Группа лечения	Задержка роста опухоли Среднее значение ± стандартная ошибка (Дни)	р-Значение* *
Основа Каптисол (Сарб Ϊ5Ο1)	0 ± 1,2	-
Основа физиологический раствор	0,5 ± 1,4	-
Соединение I (5 мг/кг)	-0,3 ± 1,4	-
Цисплатин (С1 з ρΐ а Ι. _ η ί (5 мг/кг)	5 + 1,6	-
Соединение I + цисплатин (с1зр1аЪ1п)*	23, 9+3,9	<0,001

*5 мг/кг каждого - цисллатина (сЦр1айп) и соединения I **Эффект комбинации, по сравнению с одним цисплатином (сЦр1айп)

Таблица 14. Цисплатин (СЦр1айп) в комбинации с соединением I в ксенотрансплантатах карциномы ободочной и прямой кишки человека НСТ-116.

мг/кг цисплатина (сЦр1айп) вводят интраперитонеально отдельно и в комбинации с 5 мг/кг соединения I (введенного внутривенно). Также отдельно вводят соединение I в дозе 5 мг/кг (введенное

- 7 018447 внутривенно) в качестве контрольной группы. Животные получали подряд три цикла цисплатина (С15р1а1ш) и ЬУ2090314, перерыв между циклами составлял семь дней.

Таблица 14

Группа лечения	Задержка роста опухоли Среднее значение + стандартная ошибка (дни)	р-Значение * *
Основа Каптиссл (Сар£18о1)	0 + 5,9	-
Основа физиологический раствор	3,8 + 4,5	-
Соединение I (5 мг/кг)	2 ± 2,2	-
Цисплатин (С1зр1аХ1П) (10 мг/кг)	23 ± 10,3	-
Соединение I + цисплатин (С1зр1а(:1п) *	40,7 + 8,3	<0,01

*5 мг/кг соединения I и 10 мг/кг цисплатина (С15р1а1ш) ** Эффект комбинации по сравнению с одним цисплатином (С15р1а11п)

Таблица 15. Цисплатин (С15р1а11п) в комбинации с соединением I в ксенотрансплантатах карциномы ободочной и прямой кишки человека Со1о-205.

мг/кг цисплатина (С18р1а1ш) вводят интраперитонеально отдельно и в комбинации с 5 мг/кг соединения I (введенного внутривенно). Также отдельно вводят соединение I в дозе 5 мг/кг (введенное внутривенно) в качестве контрольной группы. Животные получали подряд три цикла цисплатина (С+рйШп) и соединения I, перерыв между циклами составлял семь дней.

Таблица 15

Лечебная группа	Задержка роста опухоли Среднее значение ± стандартная ошибка (дни)	р-Значение **
Основа Каптисол {СарБ1эо1)	0 ± 1,4	-
Основа физиологический раствор	4,8 + 2,1	-
Соединение I (5 мг/кг)	10,9 ± 2,2	-
Цисплатин (Οί$ρ13ίίη) (5 мг/кг)	18 + 3, 5	-
Соединение I + цисплатин (с1зр1аГ1п)*	31,5 + 18,б	<0,001

*5 мг/кг каждого - цисплатина (С18р1а1ш) и соединения I ** Эффект сочетания по сравнению с одним цисплатином (С18р1а1ш)

Таблица 16. Карбоплатин (СатЬор1а1ш) в комбинации с соединением I в ксенотрансплантатах немелкоклеточной раковой опухоли легкого человека N0-4460.

Соединение I вводят внутривенно в дозировке 5 мг/кг отдельно и с 50 мг/кг карбоплатина (СагЬор1айп) интраперитонеально. Введение производят каждые 14 днейхЗ цикла. Для групп лечения, получающих и соединение I, и карбоплатин (СагЬор1аИп), карбоплатин (СагЬор1аИп) вводят за 60 мин до соединения I.

- 8 018447

Таблица 16

Лечебная группа	Задержка роста опухоли Среднее значение ± стандартная ошибка (дни)	р~3начение **
Основа Каптисол (Сарс1го1)	2,4 ± 0	-
Основа физиологический раствор	2,9 + 2,7	-
Соединение I (5 мг/кг}	3 ± 1,4	-
Карбоплатин (СагЬор1аХ.1п) (50 мг/кг)	2 + 2,9	-

Соединение I + карбоплатин (сагЬор1аЫп)*

8,6 ± 13,5 <0,01 *50 мг/кг карбоплатина (сатЬор1аДп) и 5 мг/кг соединения I **Эффект сочетания по сравнению с одним карбоплатином (сагЬор1аби)

Таблица 17. Карбоплатин (СатЬор1аДп) и пеметрексед (Рете(гехеб) в комбинации с соединением I в ксенотрансплантатах немелкоклеточной раковой опухоли легкого человека ЫС1-Н460.

Соединение I вводят внутривенно в дозировке 5 мг/кг отдельно, с 10 мг/кг карбоплатина (сагЬор1айп) интраперитонеально, с 300 мг/кг пеметрекседа (рете(гехеб) интраперитонеально и с 10 мг/кг карбоплатина (сатЬор1айп) интраперитонеально и 300 мг/кг пеметрекседа (рете(гехеб) интраперитонеально. Введение осуществляют каждые 14 дней в течение трех циклов. Для групп лечения, получающих и соединение I, и карбоплатин (сагЬор1аДп), карбоплатин (сагЬор1айп) вводят за 60 мин до соединения I. Для групп лечения, получающих и соединение I, и пеметрексед (рсшс1гсхсб). пеметрексед (рете(гехеб) вводят за 24 ч до введения соединения I. Для групп лечения, получающих соединение I, карбоплатин (сагЬор1айп) и пеметрексед (рете1гехеб), пеметрексед (рете(гехеб) вводят за 24 ч до соединения I, а карбоплатин (сатЬор1аДп) вводят за 60 мин до соединения I.

____ ______ Таблица 17

Лечебная группа	Задержка роста опухоли Среднее значение + стандартная ошибка (дни)	р-Значение *
Основа Каптисол (СарЫ5о1)	0 ± 3,4	-
Основа физиологический раствор	2,7 + 3,8	-
Соединение I (5 мг/кг)	1,4 ± 3,8	-
Пеметрексед (Рете+гехеб) (300 мг/кг) + Карбоплатин (СагЬор1аХ1п) (10 мг/кг)	2,8 + 2,8	-

1 Пеметрексед (Рете+гехесБ (300 мг/кг) + Соединение I (5 мг/кг)	3,1 ± 3,3	-
!Пеметрексед (Ретекгехес!) (300 мг/кг) + Карбоплатин (СагЬор1аЪ1П) (10 мг/кг)+ Соединение I \| (5 мг/кг)	10,5 ± 3,8	< 0,01

*Эффект пеметрекседа (ретейехеб), карбоплатина (сатЬор1а1ш) и соединения I по сравнению с карбоплатином (сагЬор1айп) + пеметрекседом (рете1гехеб)

Данные, представленные в табл. 13-17, демонстрируют, что потенцирование соединением I задержки роста опухоли, вызванной химиотерапевтическим препаратом, является статистически значимым по сравнению с задержкой роста опухоли, вызванной только химиотерапевтическими препаратами.

- 9 018447

Получение 1. 2-Имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-ацетамид.

Этиловый эфир 4,4-диметокси-бут-2-еновой кислоты.

Добавляли карбонат калия (16,5 г, 120 ммоль) к раствору диметоксиацетальдегида (мас.д. вещества в воде 60%) (15 мл, 100 ммоль) и триэтилфосфоноацетата (20 мл, 100 ммоль) в 210 мл тетрагидрофурана и 30 мл воды. Перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 4 ч. Вливали реакционную смесь в диэтиловый эфир (200 мл) и промывали насыщенным водным хлоридом натрия. Высушивали органическую фазу над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением необходимого соединения в виде желтого масла (15,8 г, 90%).

Ή-ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 6,77 (дд, 1=15,9, 4,0 Гц, 1Н), 6,13 (дд, 1=15,9, 1,4 Гц, 1Н), 4,95 (дд, 1=4,0, 1,4 Гц, 1Н), 4,22 (кв., 1=7,1 Гц, 2Н), 3,34 (с, 6Н), 1,30 (т, 1=7,1 Гц, 3Н).

Этиловый эфир имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-уксусной кислоты.

Нагревали смесь этилового эфира 4,4-диметокси-бут-2-еновой кислоты (43,5 г, 250 ммоль) и птолуолсульфоновой кислоты (4,75 г, 25 ммоль) в ацетонитриле (240 мл) и воде (15 мл) в колбе с обратным холодильником в течение 2 ч. Охлаждали реакционную смесь до комнатной температуры и добавляли 2-аминопиридин (18,8 г, 200 ммоль). Нагревали смесь в колбе с обратным холодильником в течение 16 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. Разбавляли реакционную смесь этилацетатом (1200 мл) и последовательно промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия (600 млх3) и насыщенным водным хлоридом натрия (600 млх2). Высушивали органическую фазу над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением необходимого соединения в виде коричневого масла (30 г, 73%).

Ή-ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 8,06 (д, 1=6,6 Гц, 1Н), 7,63 (д, 1=9,1 Гц, 1Н), 7,56 (с, 1Н), 7,20 (дд, 1=8,9, 6,8 Гц, 1Н), 6,84 (т, 1=6,7 Гц, 1Н), 4,17 (кв., 1=7,3 Гц, 2Н), 3,93 (с, 2Н), 1,25 (т, 1=7,3 Гц, 3Н).

Получение амида.

Нагревали раствор этилового эфира имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-уксусной кислоты (30 г, 147 ммоль) в НН₃/МеОН (7н. раствор, 250 мл) при 85°С в герметичной пробирке в течение 15 ч. Охлаждали реакционную смесь до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Обрабатывали остаток дихлорметаном, обрабатывали ультразвуком и фильтровали образующийся осадок с получением необходимого соединения в виде твердого вещества желтого цвета (8,9 г, 35%).

Ή-ЯМР (300 МГц, ΌΜ8Ο): δ 8,30 (д, 1=6,9 Гц, 1Н), 7,62 (ушир.с, 1Н), 7,54 (д, 1=9,0 Гц, 1Н), 7,42 (с, 1Н), 7,21 (дд, 1=7,7, 6,7 Гц, 1Н), 7,18 (ушир.с, 1Н), 6,91 (т, 1=6,8 Гц, 1Н), 3,81 (с, 2Н).

Получение 2. трет-Бутиловый эфир 9-фтор-7-метоксиоксалил-3,4-дигидро-1Н[1,4]диазепино[6,7,1Ы]индол-2-карбоновой кислоты.

2-Дибутоксиметил-4-фтор-1-нитробензол.

Нагревали раствор 5-фтор-2-нитробензальдегида (10 г, 59,17 ммоль), бутанола (20 мл, 219 ммоль) и п-толуолсульфоновой кислоты (600 мг, 3,15 ммоль) в толуоле (200 мл) в колбе с обратным холодильником в течение 2 ч в колбе с насадкой Дина-Старка. Охлаждали реакционную смесь до комнатной температуры, разбавляли этилацетатом (400 мл) и последовательно промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия (300 млх3) и насыщенным водным хлоридом натрия (300 млх2). Высушивали органическую фазу над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением необходимого соединения в виде бледно-желтого масла (17 г, 96%).

Ή-ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 7,91 (дд, 1=8,9, 4,9 Гц, 1Н), 7,53 (дд, 1=9,3, 2,9 Гц, 1Н), 7,15-7,09 (м, 1Н), 6,04 (с, 1Н), 3,67-3,50 (м, 4Н), 1,63-1,54 (м, 4Н), 1,44-1,32 (м, 4Н), 0,92 (т, 1=7,3 Гц, 6Н).

-Фтор-1Н-индол-7-карбальдегид.

Добавляли бромид винилмагния (1М в тетрагидрофуране, 85,2 мл, 85,2 ммоль) по каплям к раствору 2-дибутоксиметил-4-фтор-1-нитробензола (8,5 г, 28,4 ммоль) в тетрагидрофуране (250 мл) при -78°С. Нагревали реакционную смесь до -(45-50)°С в течение 30 мин, охлаждали до -78°С и по каплям добавляли бромид винилмагния (1М в тетрагидрофуране, 85,2 мл, 85,2 ммоль). Нагревали реакционную смесь до -(45-50)°С в течение 20 мин, затем добавляли насыщенный водный хлорид аммония (300 мл). Нагревали смесь до комнатной температуры и экстрагировали диэтиловым эфиром (200 млх2). Промывали смешанные органические фазы насыщенным водным хлоридом натрия (400 млх 2), высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Растворяли остаток в тетрагидрофуране (100 мл), добавляли 0,5Н НС1 (10 мл) и перемешивали в течение 20 мин. Разбавляли смесь диэтиловым эфиром (200 мл), последовательно промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия (200 млх3) и насыщенным водным хлоридом натрия (200 млх2). Высушивали органическую фазу над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя 5-10% этилацетатом в гексанах с получением необходимого соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (2,6 г, 56%).

Ή-НМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 10,07 (с, 1Н), 10,05 (ушир.с, 1Н), 7,62 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,42-7,39 (м, 2Н), 6,60 (д, 1=5,4 Гц, 1Н).

2-[(5-Фтор-1Н-индол-7-илметил)амино]этанол.

Добавляли 2-аминоэтанол (1,93 мл, 32,0 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты

- 10 018447 (2,01 мл, 48,0 ммоль) к раствору 5-фтор-1Н-индол-7-карбальдегида (2,6 г, 16,0 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (40 мл). Перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Порциями добавляли триацетоксиборгидрид натрия (4,07 г, 19,2 ммоль). Перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 3 ч. Медленно добавляли насыщенный водный бикарбонат натрия (100 мл) с последующим добавлением 1н. ΝαΟΗ до рН ~9. Экстрагировали этилацетатом (100 млх3). Промывали органическую фазу насыщенным водным хлоридом натрия (200 млх2), высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением необходимого соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (3,2 г, 96%).

Ή-ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 9,71 (ушир.с, 1Н), 7,24 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), 7,19 (дд, 1=9,5, 2,3 Гц, 1Н), 6,79 (дд, 1=9,8, 2,2 Гц, 1Н), 6,49 (дд, 1=3,1, 2,2 Гц, 1Н), 4,15 (с, 2Н), 3,77 (т, 1=5,2 Гц, 2Н), 2,84 (т, 1=5,2 Гц, 2Н).

трет-Бутиловый эфир (5-фтор-1Н-индол-7-илметил)-(2-гидроксиэтил)карбаминовой кислоты.

Добавляли по каплям раствор ди-трет-бутилдикарбоната (3,63 г, 16,65 ммоль) в тетрагидрофуране (40 мл) к раствору 2-[(5-фтор-1Н-индол-7-илметил)амино]этанол (3,15 г, 15,14 ммоль) в тетрагидрофуране (60 мл) при 0°С. Перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли этилацетат (200 мл) и промывали насыщенным водным хлоридом натрия. Высушивали органическую фазу над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением необходимого соединения в виде бледно-желтого масла (4,9 г, >100%).

Ή-ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 10,17 (ушир.с, 1Н), 7,27-7,23 (м, 2Н), 6,81 (дд, 1=9,4, 2,4 Гц, 1Н), 6,50 (дд, 1=2,9, 2,2 Гц, 1Н), 4,67 (с, 2Н), 3,72 (ушир.с, 2Н), 3,33 (т, 1=5,3 Гц, 2Н), 1,50 (с, 9Н).

2-[трет-Бутоксикарбонил-(5-фтор-1Н-индол-7-илметил)амино]этиловый эфир метансульфокислоты.

Добавляли триэтиламин (4,64 мл, 33,3 ммоль) с последующим добавлением метансульфохлорида (1,29 мл, 16,65 ммоль) к раствору трет-бутилового эфира (5-фтор-1Н-индол-7-илметил)-(2гидроксиэтил)карбаминовой кислоты (4,9 г, предположительно 15,14 ммоль) в дихлорметане (70 мл) при 0°С. Перемешивали реакционную смесь в течение 30 мин при 0°С. Разбавляли этилацетатом (200 мл), последовательно промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия (200 млх3) и насыщенным водным хлоридом натрия (200 млх2). Высушивали органическую фазу над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением необходимого соединения в виде желто-коричневого масла (5,9 г, >100%).

Ή-ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 10,07 (ушир.с, 1Н), 7,28-7,2 (м, 2Н), 6,83 (дд, 1=9,3, 2,3 Гц, 1Н), 6,50 (дд, 1=2,9, 2,2 Гц, 1Н), 4,67 (с, 2Н), 4,17 (т, 1=5,5 Гц, 2Н), 3,51 (т, 1=5,6 Гц, 2Н), 2,79 (с, 3Н), 1,51 (с, 9Н).

трет-Бутиловый эфир 9-фтор-3,4-дигидро-1Н-[1,4]диазепино[6,7,1-Ы]индол-2-карбоновой кислоты.

Добавляли гидрид натрия (60%) (666 мг, 16,65 ммоль) одной порцией к раствору 2-[третбутоксикарбонил-(5-фтор-1Н-индол-7-илметил)амино]этилового эфира метансульфокислоты (5,9 г, предположительно 15,14 ммоль) в диметилформамиде (40 мл) при 0°С. Перемешивали реакционную смесь при 0°С в течение 10 мин, а затем при комнатной температуре в течение 30 мин. Медленно добавляли воду (200 мл). Фильтровали и высушивали образующийся желтый осадок с получением необходимого соединения (4,14 г, 94%).

Ή-ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 7,15 (д, 1=9,1 Гц, 1Н), 7,07 (с, 1Н), 6,78 (дд, 1=14,7, 8,8 Гц, 1Н), 6,49 (д, 1=3,1 Гц, 1Н), 4,81 (с, 1Н), 4,76 (с, 1Н), 4,25-4,23 (м, 2Н), 3,94-3,83 (м, 2Н), 1,49 (с, 9Н).

трет-Бутиловый эфир 9-фтор-7-метоксиоксалил-3,4-дигидро-1Н[1,4]диазепино[6,7,1-Ы]индол-2карбоновой кислоты.

Добавляли оксалилхлорид (1,62 мл, 18,56 ммоль) к раствору трет-бутилового эфира 9-фтор-3,4дигидро-1Н[1,4]диазепино[6,7,1-Ы]индол-2-карбоновой кислоты (4,14 г, 14,28 ммоль) в метил-третбутиловом эфире (100 мл) при -5°С. Нагревали реакционную смесь до комнатной температуры в течение 1,5 ч, а затем охлаждали до -5°С. Добавляли метанол (11,6 мл, 286 ммоль) и перемешивали при -5°С в течение 30 мин. Добавляли насыщенный водный бикарбонат натрия (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 млх3). Последовательно промывали смешанную органическую фазу насыщенным водным бикарбонатом натрия (200 млх3) и насыщенным водным хлоридом натрия (200 млх2). Высушивали органическую фазу над сульфатом натрия, а затем концентрировали при пониженном давлении с получением соединения, указанного в названии, в виде твердого вещества желтого цвета (5,13 г, 93%).

Ή-ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ 8,38 (с, 1Н), 8,04 (д, 1=6,8 Гц, 1Н), 6,89 (дд, 1=19,7, 8,6 Гц, 1Н), 4,90 (с, 1Н), 4,81 (с, 1Н), 4,45-4,43 (м, 2Н), 4,05-3,93 (м, 2Н), 3,95 (с, 3Н), 1,42 (с, 9Н).

Получение 3. Дигидрохлорид 3-(9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-[1,4]диазепино[6,7,1-Ы]индол-7-ил)-4имидазо [1,2-а] пиридин-3 -ил-пиррол-2,5 -дио на.

Добавляли трет-бутоксид калия (4,58 г, 40,92 ммоль) одной порцией к раствору трет-бутилового эфира 9-фтор-7-метоксиоксалил-3,4-дигидро-1Н-[1,4]диазепино[6,7,1-Ы]индол-2-карбоновой кислоты (5,13 г, 13,64 ммоль) и 2-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-ацетамида (2,39 г, 13,64 ммоль) в диметилформамиде (80 мл). Перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 3 ч. Добавляли насыщенный водный хлорид аммония (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (200 млх3). Промывали смешанные органические фазы насыщенным водным хлоридом натрия (200 млх3), высушивали над

- 11 018447 сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Растворяли остаток в дихлорметане (20 мл) и по каплям добавляли 4н. НС1 в диоксане (40 мл), затем перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Фильтровали образующийся осадок и промывали диэтиловым эфиром с получением соединения, указанного в названии, в виде твердого вещества красного цвета (4,4 г, 68%).

М8 (АРС1): т/ζ = 402 [С₂₂Н₁₆РЫ₅О₂ + Н]⁺.

Пример 1. 7-(2,5-Дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3-ил)-9-фтор1,2,3,4-тетрагидро-2-(1-пиперидинилкарбонил)пирроло[3,2,1-_)к][1,4]бензодиазепин.

Добавляли пиперидин-1-карбонилхлорид (0,5 мл, 4,0 ммоль) к раствору 3-(9-фтор-1,2,3,4тетрагидро [ 1,4]диазепино [6,7,1 -Ы]индол-7-ил)-4-имидазо [ 1,2-а]пиридин-3 -ил-пиррол-2,5-диона (1,42 г, 3,0 ммоль) и триэтиламина (2,09 мл, 15,0 ммоль) в метаноле (80 мл). Перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли триэтиламин (1,04 мл, 7,5 ммоль) и пиперидин-1-карбонилхлорид (0,5 мл, 4,0 ммоль). Перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Добавляли этилацетат (500 мл) и последовательно промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия (300 млх3) и насыщенным водным хлоридом натрия (200 мл). Высушивали органическую фазу над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток подвергали хроматографии на силикагеле, элюируя 0-3% метанолом в этилацетате с получением необходимого соединения, указанного в названии, в виде твердого вещества красного цвета (700 мг, 45%).

Температура плавления = 188-190°С.

М8 (АРС1): т/ζ = 513 [С₂₈Н₂₅РЫ₆О₃ + Н]⁺.

Пример 2. Метансульфонат 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло [3,2,1-_)к][1,4]бензодиазепина.

Нагревали суспензию 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3-ил)-9фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-(1-пиперидинилкарбонил)пирроло[3,2,1-_)к][1,4]бензодиазепина (500 мг, 0,976 ммоль) в метаноле (2,5 мл) до 64°С. Добавляли раствор метансульфокислоты (64 мкл, 0,976 ммоль) в метаноле (1,0 мл) в течение 5 мин. Перемешивали смесь при 64°С в течение 15 мин, а затем добавляли изопропанол (5,0 мл) в течение 30 мин. Образующуюся суспензию оставляли охлаждаться до комнатной температуры в течение 1 ч, а затем перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Фильтровали суспензию, промывали изопропанолом и высушивали при пониженном давлении при 42°С с получением соединения, указанного в названии, в виде твердого вещества оранжевого цвета (478 мг, 88,5% (доведенное до 9,9% летучих компонентов в исходном веществе и 1,0% летучих компонентов в продукте)).

Температура плавления = 282,3°С (Ό8Ο).

Пример 3. Этанолат 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3-ил)-9фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло [3,2,1-_)к][1,4]бензодиазепина.

Нагревали суспензию 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3-ил)-9фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-(1-пиперидинилкарбонил)пирроло[3,2,1-_)к][1,4]бензодиазепина (2,0 г, 3,9 ммоль) в этаноле (30 мл) до 70°С. Добавляли 5М НС1 (0,73 мл) весь сразу. Перемешивали смесь при 70°С в течение 10 мин, а затем добавляли 1н. ЫаОН (3,63 мл) в течение 3 мин. Перемешивали смесь при 70°С в течение 2 ч. Образующуюся суспензию оставляли охлаждаться до комнатной температуры в течение 1 ч, а затем перемешивали при комнатной температуре в течение 3,5 ч. Фильтровали суспензию, промывали этанолом и высушивали при пониженном давлении при 42°С с получением соединения, указанного в названии, в виде твердого вещества оранжевого цвета (1,84 г, 92% (доведенное до 7,5% летучих компонентов в исходном веществе и 7,7% летучих компонентов в продукте)).

Температура плавления = 179,4°С (Ό8Ο).

Порошковые рентгеновские основные пики (углы 2Θ в градусах, интенсивность): 8,989°, 100%; 9,787°, 48,7%; 12,846°, 20,0% и 7,444°, 17,5%.

Пример 4. Гидрат I 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3-ил)-9фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло [3,2,1-_)к][1,4]бензодиазепина.

Нагревали суспензию этанолата 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Нпиррол-3 -ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло [3,2,1 -_)к] [ 1,4]бензодиазепина (198,5 мг) в воде (10 мл) до 80°С в течение 2,75 ч. Добавляли 3,11 мл 1н. НС1. Когда температура дошла до 80°С, быстро добавляли 3,11 мл 1н. ЫаОН. Поддерживали температуру на уровне 80°С в течение приблизительно 15 мин, затем оставляли суспензию охлаждаться до комнатной температуры. Собирали твердое вещество путем вакуумного фильтрования через ватманскую бумагу #1 и оставляли неплотно прикрытым сохнуть в течение ночи.

Порошковые рентгеновские основные пики (углы 2Θ в градусах, интенсивность): 12,089°, 100%; 10,485°, 83,6%; 13,227°, 56,0% и 7,660°, 8,0%.

Пример 5. Гидрат II 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3-ил)-9фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло [3,2,1-_)к][1,4]бензодиазепина.

Нагревали суспензию этанолата 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Нпиррол-3 -ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло [3,2,1-_)к][1,4]бензодиазепина (200,6 мг) в воде (25 мл) до 75°С в течение 0,5 ч. Добавляли 0,72 мл 1н. НС1 и продолжали нагревать в

- 12 018447 течение 0,75 ч. Быстро добавляли 0,72 мл 1н. №1ОН. Оставляли суспензию охлаждаться до комнатной температуры. Собирали твердое вещество путем вакуумного фильтрования через ватманскую бумагу #1, промывали 20 мл деионизованной воды и оставляли неплотно прикрытым сохнуть в течение двух дней.

Порошковые рентгеновские основные пики (углы 2Θ в градусах, интенсивность): 6,878°, 100%; 5,732°, 58,7%; 11,550°, 82,8%; 18,426°, 20,7% и 10,856°, 44,2%.

Пример 6. Дигидрат 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3-ил)-9фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло |3.2.1-)к||1,4]бензодиазепина.

Нагревали суспензию этанолата 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Нпиррол-3 -ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло [3,2,1 -|к| [ 1,4]бензодиазепина (200,8 мг) в воде (25 мл) до 75°С в течение 0,67 ч. Добавляли 0,72 мл 1н. НС1 и продолжали нагревать в течение 1,75 ч. Добавляли 0,1н. №1ОН, увеличивая количество на 1 мл каждые 5 мин, пока не было добавлено 7,2 мл. После последнего добавления поддерживали температуру суспензии на уровне 75°С в течение 0,67 ч, а затем оставляли суспензию охлаждаться до комнатной температуры. Собирали твердое вещество путем вакуумного фильтрования через ватманскую бумагу #1, промывали 20 мл деионизованной воды и оставляли неплотно прикрытым сохнуть в течение двух дней.

Порошковые рентгеновские основные пики (углы 2Θ в градусах, интенсивность): 5,498°, 100%; 22,149°, 100%; 14,921°, 32,9%; 11,399°, 36,7% и 11,019°, 20,5%.

Предпочтительно соединение I готовят в виде фармацевтической композиции перед введением пациенту. Полезные составы содержат соединение I или фармацевтически приемлемую соль или сольват указанного соединения и 5>ΒΕ7-β-ί.Ό. Соединение 5>ΒΕ7-β-ί.Ό представляет собой сульфобутиловый эфир β-циклодекстрина, описанный в патенте США № 5134127. Он продается под торговым названием КАПТИСОЛ® (САРТШОЬ®). Конкретные составы описаны в следующем разделе Примеры составов.

Полезная фармацевтическая композиция может быть получена путем растворения соединения I или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения (50 мг/мл) в 2-пирролидоне (СОЛУФОР®-Р (8ОЬиРНОВ®-Р)). Это раствор затем разбавляют водным раствором 5>ΒΕ7-β<.Ό (30 об.%) и полоксамером 188 (Лутрол®-Е 68 (Ьи1го1®-Р 68)) (10 об.%).

Пример состава 1.

Готовили первый раствор добавлением 30,0 г 8ВЕ7-в-СО к 71,25 мл воды и перемешивали или взбалтывали до полного растворения. Добавляли 10,0 г полоксамера 188 и продолжали перемешивать до полного растворения. Готовили второй раствор добавлением этанолата соединения I к 2-пирролидону согласно следующей формуле: мл 2-пирролидона = (фактическая масса этанолата соединения I (мг)/50 мг/мл)х0,5. Добавляли первый раствор к второму раствору. Фильтровали полученный раствор через 0,2 мкм фильтр СУПОР® (8ИРОК®) (гидрофильный полиэфирсульфон) (Ра11 СогрогаБоп) в очищенный от пыли контейнер.

Следующий вариант фармацевтической композиции получают смешиванием соединения I или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения в эквимолярном количестве фармацевтически приемлемой кислоты в воде. Затем эту смесь смешивают по меньшей мере с одним молярным эквивалентом 8ВЕ7-в-СЭ в виде водного раствора. Предпочтительные фармацевтически приемлемые соли включают НС1, НВг, серную кислоту и метансульфоновую кислоту. Особенно предпочтительным является применение НС1.

Пример состава 2.

Готовили первый раствор добавлением 20,0 г 8ΒΕ7-β<'Ό к 80 мл воды и перемешивали или взбалтывали до полного растворения. Добавляли этот раствор к этанолату соединения I, согласно следующей формуле: мл первого раствора = (фактическая масса этанолата соединения I (мг)/20 мг/мл) - (фактическая масса этанолата соединения I (мг)/1200 мг/мл) - (фактическая масса этанолата соединения I (мг)х 0,00195107 мл 1н. НС1/мг этанолата соединения I). Добавляли 1н. НС1 согласно следующему вычислению: добавление мл 1н. НС1 = (фактическая масса этанолата соединения I (мг)х0,00195107 мл 1н. НС1/мг этанолата соединения I). Перемешивали или обрабатывали ультразвуком до полного растворения соединения.

Предпочтительный вариант фармацевтической композиции получают добавлением 1 мол. экв. соединения I или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения к водному раствору 1 мол. экв. 8ΒΕ7-β<'Ό при значении рН меньше 5,5 (рН исходного раствора), возможно в присутствии фармацевтически приемлемого буфера и перемешиванием до растворения соединения I или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения. Затем значение рН доводят до 2,53,5 с помощью фармацевтически приемлемого основания (рН конечного раствора). Полученный состав в форме раствора можно сразу вводить пациенту или в предпочтительном случае этот раствор возможно лиофилизируют и полученный в результате твердый состав можно впоследствии растворять в воде.

8ВЕ7-в-СЭ может присутствовать в диапазоне от 1 мол. экв. до количества, необходимого для введения пациенту, не более 13,4 г 8ВЕ7-в-СЭ в день. Предпочтительным является количество 8ВЕ7-в-СЭ от 1,0 до 4,0 мол. экв., более предпочтительным является количество от 2,0 до 3,0 мол. экв., особенно предпочтительным является количество от 2,5 до 2,7 мол. экв. относительно соединения I.

- 13 018447

Несмотря на то, что приемлемым является любое значение рН исходного раствора меньше 5,5, предпочтительным является значение рН исходного раствора меньше 3,0, более предпочтительным является значение рН исходного раствора в диапазоне от 1,0 до 2,0, а еще более предпочтительным является значение рН исходного раствора от 1,2 до 1,4. Намеченного значения рН исходного раствора достигают добавлением любой фармацевтически приемлемой кислоты, которая может довести значение рН раствора до значения менее 5,5. Предпочтительным является применение соляной кислоты.

Состав, возможно, может содержать фармацевтически приемлемый буфер. Фармацевтически приемлемыми буферами являются соединения, используемые специалистом в области приготовления фармацевтических составов для стабилизации рН конечного раствора в конкретном диапазоне рН. Фармацевтически приемлемые буферы включают фосфатные буферы, а также лимонную кислоту, глицин, винную кислоту или их фармацевтически приемлемые соли. Фармацевтически приемлемые соли этих кислот включают соли натрия и калия. Предпочтительным является присутствие фармацевтически приемлемого буфера в составе. Предпочтительным фармацевтически приемлемым буфером является винная кислота.

Важно, что соединение I полностью растворяют до доведения значения рН до значения рН конечного раствора. Растворение можно осуществлять с помощью любых средств механического перемешивания или путем регулирования температуры раствора, если это необходимо или желательно. Предпочтительным является перемешивание раствора при комнатной температуре.

Значения рН конечного раствора достигают добавлением любого фармацевтически приемлемого основания, которое может довести значение рН раствора до значения рН в диапазоне от 2,5 до 3,5. Предпочтительным является применение гидроксида натрия. Значение рН конечного раствора может находиться в диапазоне от 2,5 до 3,5, но предпочтительным является значение в диапазоне от 2,5 до 3,1. Еще более предпочтительным является значение рН конечного раствора в диапазоне от 2,7 до 3,1. После достижения значения рН конечного раствора раствор может быть лиофилизирован, если это необходимо или желательно, в стандартных условиях лиофилизации с получением твердой фармацевтической композиции, подходящей для восстановления водой.

Пример состава 3.

Готовили раствор 0,15 г винной кислоты и 12 г (5,55 ммоль) 3ΒΕ7-β-ί.Ό в 70 мл воды. Добавляли 5 мл 1,0н. НС1 и перемешивали при комнатной температуре. Добавляли 1,1 г (2,15 ммоль) этанолата соединения I и перемешивали при комнатной температуре до растворения. Добавляли 1н. гидроксид натрия до значения рН около 2,9. Добавляли воду в количестве, достаточном для получения конечного объема 100 мл. Лиофилизировали этот раствор с получением аморфного твердого вещества оранжевокрасного цвета.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение комбинации 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло |3.2.1-)к||1,4]бензодиазепина или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения с химиотерапевтическим агентом, выбранным из группы, состоящей из СРТ-11, пеметрекседа, гемцитабина, этопозида, доксорубицина, цисплатина и карбоплатина, для получения лекарственного средства для лечения рака яичников, немелкоклеточного рака легкого или рака ободочной и прямой кишки.
2. Применение по п.1, в котором химиотерапевтическим агентом является цисплатин или карбоплатин.
3. Применение комбинации 7-(2,5-дигидро-4-имидазо[1,2-а]пиридин-3-ил-2,5-диоксо-1Н-пиррол-3- ил)-9-фтор-1,2,3,4-тетрагидро-2-( 1 -пиперидинилкарбонил)пирроло [3,2,1-)к][1,4]бензодиазепина или фармацевтически приемлемой соли или сольвата указанного соединения с пеметрекседом и химиотерапевтическим агентом, выбранным из группы, состоящей из цисплатина или карбоплатина, для получения лекарственного средства для лечения рака яичников, немелкоклеточного рака легкого или рака ободочной и прямой кишки.
4. Применение по п.3, в котором химиотерапевтическим агентом является карбоплатин.

Евразийская патентная организация, ЕАПВ

Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2