EA017322B1 - Способы обработки сред для культур клеток, применяемых в биореакторах - Google Patents

Способы обработки сред для культур клеток, применяемых в биореакторах Download PDF

Info

Publication number
EA017322B1
EA017322B1 EA201000020A EA201000020A EA017322B1 EA 017322 B1 EA017322 B1 EA 017322B1 EA 201000020 A EA201000020 A EA 201000020A EA 201000020 A EA201000020 A EA 201000020A EA 017322 B1 EA017322 B1 EA 017322B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
medium
cell culture
radiation
bioreactor
cell cultures
Prior art date
Application number
EA201000020A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201000020A1 (ru
Inventor
Джо Чжоу
Феликс М. Соламо
Original Assignee
Амген Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=39722676&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA017322(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Амген Инк. filed Critical Амген Инк.
Publication of EA201000020A1 publication Critical patent/EA201000020A1/ru
Publication of EA017322B1 publication Critical patent/EA017322B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
    • A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
    • A61L2/0011—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using physical methods
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
    • A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
    • A61L2/0011—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using physical methods
    • A61L2/0017—Filtration

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к способам обработки сред для культур клеток, предназначенных для применения в биореакторе, ультрафиолетовым излучением спектра С (УФ-С) и фильтрованием. Изобретение предлагает способ обработки сред для культур клеток, предназначенных для применения в биореакторе, включающий воздействие на среду для культур клеток коротковолнового ультрафиолетового С (УФ-С) излучения; пропускание среды для культур клеток через стерильный фильтр и введение среды для культур клеток в биореактор. Согласно изобретению также предложены способы обработки сред для культур клеток, предназначенных для применения в биореакторе, включающие воздействие на среду для культур клеток УФ-С-излучения; пропускание среды для культур клеток через объемный фильтр; пропускание среды для культур клеток через стерильный фильтр и введение среды для культур клеток в биореактор.

Description

Область техники
Изобретение относится к способам обработки сред для культур клеток, предназначенных для применения в биореакторе, ультрафиолетовым излучением спектра С (УФ-С) и фильтрованием.
Предпосылки создания изобретения
Загрязнение вирусами клеточных сред и супернатантов создает большие проблемы для производителей биофармацевтической продукции во всем мире. Для инактивации и/или удаления больших или малых, оболочечных и безоболочечных ДНК- или РНК-содержащих вирусных частиц из клеточных супернатантов применяли ряд методов. К таким методам относятся технология фильтрации через 20-нм фильтры, хроматография на О-мембране и технология на основе объемного фильтра. Однако указанные методы применялись прежде всего как средство для инактивации вирусов (т.е. элиминации вирусов) из сред и супернатантов, собранных с клеточных линий или тканей (т.е. после получения белка).
Такие способы элиминации вируса не применялись для обработки сред для культур клеток до выделения клеточных линий или тканей (т.е. до получения белка) по нескольким причинам. Во-первых, применение указанных способов для обработки сред большого объема (до 20000 л среды в сутки) затруднено вследствие больших затрат времени и высокой стоимости. Во-вторых, такие способы исторически применялись для удаления загрязнений из клеточных супернатантов большого объема в качестве начальной стадии очистки терапевтических белковых продуктов, полученных из таких клеточных супернатантов, прежде чем вводить терапевтические белковые продукты больным. В третьих, в отрасли отсутствует документированная необходимость инактивации или удаления вирусных частиц в предшествующих процессах продукции белка.
Наконец, биореакторы и ферментаторы часто не оборудованы механизмами, необходимыми для осуществления указанных технологий, а стоимость модернизации существующего оборудования для монтажа дополнительной аппаратуры может оказаться непомерно высокой.
Помимо упомянутых методов для обработки препаратов белков большого объема перед очисткой белков из клеточных супернатантов применяли ультрафиолетовое облучение. Однако, как и в случае других методов обработки клеточных супернатантов большого объема перед очисткой и выделением терапевтических белковых продуктов из клеточных супернатантов ультрафиолетовое облучение применялось прежде всего после производства белка. Другими словами, в уровне техники не существует способов, в которых ультрафиолетовое облучение (само по себе или в сочетании с другими способами очистки или обработки) применялось бы для воздействия на среду для культуры клеток перед введением указанной среды в биореактор. Таким образом, существует потребность в методах обработки сред для культур клеток, предназначенных для использования в биореакторе. Такие методы будут особенно полезны для защиты ценных клеточных линий от загрязнения вирусами, позволяя сэкономить потери средств на загрязненные или некондиционные среды и повышая эффективность продукции белка такими клеточными линиями. Следовательно, указанные способы найдут широкое применение в производстве биофармацевтических препаратов.
Сущность изобретения
В данном изобретении предложены способы обработки сред для культур клеток, предназначенных для применения в биореакторе, включающие действие на среду для культур клеток коротковолнового ультрафиолетового излучения (УФ-С); пропускание среды для культур клеток через стерильный фильтр и введение среды для культур клеток в биореактор.
В данном изобретении также предлагаются способы обработки сред для культур клеток, предназначенных для применения в биореакторе, включающие УФ-С-воздействие на среду для культур клеток; пропускание среды для культур клеток через объёмный фильтр; пропускание среды для культур клеток через стерильный фильтр и введение среды для культур клеток в биореактор.
Конкретные предпочтительные варианты осуществления данного изобретения поясняются ниже в более подробном описании и в формуле изобретения.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 приведена взаимосвязь между длиной волны света и повреждением вирусной ДНК/РНК.
На фиг. 2 - эффективность удаления вируса мышиной лейкемии (МиЬУ) либо минут-вируса мышей (ММУ) из сред для культур клеток с помощью двух типов объемных фильтров.
На фиг. 3 - эффективность удаления парвовируса свиньи (РВУ) и реовируса 3 (Вео-3) из сред для культур клеток с помощью двух типов объемных фильтров.
Подробное описание изобретения
Изобретение предлагает способ обработки сред для культур клеток, предназначенных для применения в биореакторе, включающий воздействие на среду для культур клеток коротковолнового ультрафиолетового С (УФ-С)-излучения; пропускание среды для культур клеток через стерильный фильтр и введение среды для культур клеток в биореактор. Согласно изобретению также предложены способы обработки сред для культур клеток, предназначенных для применения в биореакторе, включающие воздействие на среду для культур клеток УФ-С-излучения; пропускание среды для культур клеток через объемный фильтр; пропускание среды для культур клеток через стерильный фильтр и введение среды для культур клеток в биореактор.
- 1 017322
Согласно способам данного изобретения на среду для культур клеток воздействуют УФ-Сизлучением до введения указанной среды в биореактор. Термин ультрафиолетовое излучение относится к интервалу спектра электромагнитного излучения от границы рентгеновского диапазона (100 нм) до границы диапазона видимого света (400 нм). Конкретно ультрафиолетовое излучение обычно делится на четыре диапазона: (1) вакуумное ультрафиолетовое излучение с длиной волны 100-200 нм, (2) ультрафиолет С (УФ-С) с длиной волны 200-280 нм, (3) ультрафиолет В (УФ-В) с длиной волны 280-315 нм и (4) ультрафиолет А (УФ-А) с длиной волны 315-400 нм (см. фиг. 1).
Согласно одному из способов осуществления изобретения на среду для культур клеток воздействуют УФ-С-излучением с длиной волны от 200 до 280 нм перед введением среды для культур клеток в биореактор. Согласно еще одному способу осуществления изобретения на среду для культур клеток воздействуют УФ-С-излучением с длиной волны 254 нм до введения среды для культур клеток в биореактор. Согласно другим вариантам осуществления изобретения на среду для культур клеток воздействуют УФС излучением с длиной волны 254 нм +/- 1 нм, или с длиной волны 254 нм +/- 2 нм, или с длиной волны 254 нм +/- 3 нм, или с длиной волны 254 нм +/- 4 нм, или с длиной волны 254 нм +/- 5 нм, или с длиной волны 254 нм +/- 6 нм, или с длиной волны 254 нм +/- 7 нм, или с длиной волны 254 нм +/- 8 нм, или с длиной волны 254 нм +/- 9 нм, или с длиной волны 254 нм +/- 10 нм, или с длиной волны 254 нм +/- 15 нм, или с длиной волны 254 нм +/- 20 нм, или с длиной волны 254 нм +/- 25 нм.
Согласно способу настоящего изобретения УФ-С-излучение применяется для инактивации частиц безоболочечного вируса за счет повреждения вирусной ДНК или РНК. При повреждении нуклеиновых кислот вирусы инактивируются и их последующей репликации не происходит. В типовом аппарате или УФ-С-реакторе для УФ-С-облучения растворов применяется гидравлический спиральный поток вдоль источника излучения, генерирующего вихри Дина в потоке жидкости, что приводит к равномерному распределению дозы УФ-С-излучения по всему раствору. При использовании УФ-С-излучения для инактивации частиц безоболочечного вируса инактивация обычно происходит приблизительно после пяти минут облучения.
Как указывалось, способы элиминации вирусов, известные в отрасли, как правило, применяются после продукции белка. Помимо высокой стоимости и продолжительности применение указанных способов в основном после продукции белка связано с тем, что задачей при этом является инактивация и/или удаление вирусных частиц из клеточных супернатантов большого объема перед очисткой и выделением терапевтических белковых продуктов из клеточных супернатантов. В отношении применения УФ-С-излучения для инактивации вирусных частиц в биологических процессах больших масштабов одной из причин отсутствия в уровне техники технологий применения УФ-С-облучения, предшествующих продукции белка, является значительное поглощение УФ-С-излучения средой для культур клеток на длине волны 254 нм, а также влияние этого поглощения на способность такой среды обеспечивать эффективный рост клеток. Способы данного изобретения позволяют обойти эту проблему за счет повышения энергии используемого УФ-С-излучения.
Термин энергия относится к характеристике ультрафиолетового излучения, которым воздействуют на среду для культур клеток, выраженной в Дж/м2. В одном из осуществлений изобретения на среду для культур клеток воздействуют УФ-С-излучением с плотностью энергии 120-320 Дж/м2 перед введением среды для культур клеток в биореактор. Согласно еще одному варианту осуществления на среду для культур клеток воздействуют УФ-С-излучением с плотностью энергии 238 Дж/м2 перед введением среды для культур клеток в биореактор. Согласно другим способам осуществления изобретения на среду для культур клеток воздействуют УФ-С-излучением с плотностью энергии 238 Дж/м2 +/- 1 Дж/м2, или с плотностью энергии 238 Дж/м2 +/- 2 Дж/м2, или с плотностью энергии 238 Дж/м2 +/- 3 Дж/м2, или с плотностью энергии 238 Дж/м2 +/- 4 Дж/м2, или с плотностью энергии 238 Дж/м2 +/- 5 Дж/м2, или с плотностью энергии 238 Дж/м2 +/- 10 Дж/м2, или с плотностью энергии 238 Дж/м2 +/- 15 Дж/м2, или с плотностью энергии 238 Дж/м2 +/- 20 Дж/м2, или с плотностью энергии 238 Дж/м2 +/- 25 Дж/м2, или с плотностью энергии 238 Дж/м2 +/- 30 Дж/м2, или с плотностью энергии 238 Дж/м2 +/- 40 Дж/м2, или с плотностью энергии 238 Дж/м2 +/- 50 Дж/м2, или с плотностью энергии 238 Дж/м2 +/- 60 Дж/м2, или с плотностью энергии 238 Дж/м2 +/- 70 Дж/м2.
Способы в соответствии с данным изобретением пригодны для процессов инактивации стендовых масштабов, но в большей степени - для обработки сред для культур клеток большого объема перед введением среды для культур клеток в биореактор. В одном из способов осуществления изобретения на среду для культур клеток воздействуют УФ-С-излучением при скорости потока 1-12 л/ч перед введением указанной среды для культур клеток. Согласно еще одному способу осуществления изобретения на среду для культур клеток воздействуют УФ-С-излучением при скорости потока 6 л/ч перед введением указанной среды в биореактор. Согласно другим осуществлениям изобретения на среду для культур клеток воздействуют УФ-С-излучением при скорости потока 6 л/ч +/-1 л/ч, или при скорости потока 6 л/ч +/- 2 л/ч, или при скорости потока 6 л/ч +/- 3 л/ч, или при скорости потока 6 л/ч +/- 4 л/ч, или при скорости потока 6 л/ч +/- 5 л/ч.
Логарифмический показатель снижения (ЬКУ) - мера эффективности фильтрации, эквивалентная
- 2 017322 логарифму отношения концентрации контрольной среды к концентрации фильтрата (ЕКУ = Ьодюконтроль/фильтрат). Согласно настоящему изобретению концентрация контроля соответствует концентрации вирусного материала в среде для культур клеток. Для целей данного изобретения фильтрат (т.е. среда для культур клеток) считается стерильным, если его величина ЬУК составляет по меньшей мере 4,85, а предпочтительны фильтраты с величиной ЬВУ от 6 до 7. В одном осуществлении изобретения в результате обработки среды для культур клеток может быть достигнут логарифмический показатель снижения, превышающий или равный 4,85. Согласно еще одному способу осуществления в результате обработки среды для культур клеток может быть достигнут логарифмический показатель снижения от 6 до 7.
В способах согласно данному изобретению среда для культур клеток направляется на стадию фильтрации после воздействия УФ-С-излучения. Термин стерильная фильтрация или стерильный фильтр относится к удалению микроплазмы и других потенциальных загрязнений из сред для культур клеток при использовании стандартного биологического стерильного фильтра. Согласно одному из способов осуществления изобретения среду для культур клеток пропускают через стерильный фильтр с максимальным размером пор 200 нм перед введением среды для культур клеток в биореактор.
Согласно еще одному способу осуществления изобретения среду для культур клеток пропускают через объемный фильтр. Термин объемный фильтр относится к фильтру, имеющему множество фильтрационных слоев, каждый из которых пропускает частицы определенного размера и плотности. Процесс фильтрации данного типа аналогичен процессу эксклюзионной хроматографии с разделением частиц по размеру. Легкий материал оказывается в верху фильтрующего слоя. К нижним слоям среда оказывается более мелкой и плотной. Более крупные частицы суспензии удаляются в верхних слоях, а более мелкие частицы удаляются в нижних слоях.
Способность объемных фильтров удалять определенные типы вирусных частиц зависит от рН фильтруемого раствора. Например, при пропускании через объемный фильтр среды для культур клеток с низкой величиной рН происходит более эффективная элиминация безоболочечных вирусных частиц. Среда для культур клеток обычно имеет высокую электропроводность около 15-20 мСм/см и рН 7,4, что способствует захвату оболочечных вирусных частиц. Проведение фильтрации в условиях нейтральной величины рН, таким образом, приводит к более высоким ЬВУ для оболочечных вирусов с величинами ρί 6,0-7,8. В одном из способов осуществления осуществлении изобретения среду для культур клеток пропускают через объемный фильтр при кислотных величинах рН. Согласно еще одному способу осуществления изобретения, среду для культур клеток пропускают через объемный фильтр при рН 5,0. Согласно другим способам осуществления изобретения, среду для культур клеток пропускают через объемный фильтр при рН 4,0-5,0, или при рН 5,0-6,0, или при рН 6,0-7,0.
Способы настоящего изобретения пригодны для инактивации вирусных частиц, которые могут содержаться в среде для культур клеток, перед введением указанных сред в биореактор. Другие способы настоящего изобретения также могут служить для удаления вирусных частиц (в том числе вирусных частиц, которые не были инактивированы воздействием УФ-С-излучения). В одном из способов настоящего изобретения на среду для культур клеток воздействуют УФ-С-излучением с длиной волны, энергией или при скорости потока, достаточными для повреждения нуклеиновых кислот любых безоболочечных вирусов в среде для культур клеток. Согласно еще одному способу настоящего изобретения среду для культур клеток пропускают через объемный фильтр с размером пор, либо при скорости потока, достаточными для удаления любых оболочечных вирусов из среды для культур клеток.
В способах осуществления настоящего изобретения среду для культур клеток обрабатывают перед введением указанной среды в биореактор. Термин биореактор относится к аппаратуре или системе, предназначенной для крупномасштабного выращивания линий клеток или тканей для получения биофармацевтических препаратов. Например, в типовом биореакторе осуществляется генерирование 20020000 л клеточного супернатанта (содержащего целевой побочный продукт биопроцесса - биофармацевтический белок). Согласно одному из способов осуществления данного изобретения биореактор может обеспечить рост клеток для крупномасштабного производства, например, антител.
Данное изобретение предлагает способ инактивации и/или удаления вирусных частиц из сред для культур клеток перед введением указанных сред в биореактор. Одним из достоинств данного изобретения является то, что обработка среды для культур клеток перед ее введением в биореактор позволяет снизить риск загрязнения в момент инокуляции, что создает более благоприятные условия для максимального роста клеток и максимального образования белка (например, титра антител). Помимо этого настоящее изобретение позволяет снизить риск потерь в производственных затратах (например, связанных с остановкой биофармацевтического процесса на техническое обслуживание в связи с вирусным загрязнением).
Обработанная среда для культур клеток может служить для обеспечения роста ряда различных типов клеток. Согласно одному из способов осуществления изобретения обработанная среда для культур клеток применяется для обеспечения роста клеток млекопитающих. Согласно еще одному способу осуществления изобретения, клетки млекопитающих способны продуцировать антитела. Еще один способ
- 3 017322 осуществления изобретения предполагает применение обработанных сред для культур клеток для обеспечения роста клеток насекомых.
Приведенные ниже примеры иллюстрируют конкретные способы осуществления изобретения и их различное применение. Примеры служат только для пояснения и не должны считаться ограничивающими область применения изобретения.
Пример 1. Характеристики сред для культур клеток.
Способы осуществления настоящего изобретения могут служить для обработки сред для культур клеток, предназначенных для применения в биореакторе. Анализировали три типа сред для культур клеток, определяя осмотическое давление, электропроводность при 25°С и оптическую плотность на длине волны 254 нм (см. табл. I).
Таблица I
Тип среды Осмотическое давление (мОсм/кг) Электропроводность (мСм/см), 25°С Оптическая плотность при 254 им
А 296,33 12,19 4.8
В 296,67 11,05 11.7
С 854,67 12,11 64
Пример 2. Инактивация вирусов действием УФ-С-излучения.
Проводили исследования для определения инактивации нескольких вирусов под действием УФ-Сизлучения. В табл. II приведены модельные вирусы, выбранные для исследования: ксенотропный вирус мышиной лейкемии (х-МиЬУ), мышиный минут-вирус (ММУ), свиной парвовирус (РВУ) и реовирус 3 (Кео 3).
Таблица II
Модель Семейство Свойства ρΐ
х-МиЬУ Оболочечный, односпиральная РНК, 80-120 нм низкое сопротивление 6.0-6.7
ММУ РапжгМае Безоболочечный, односпиральная ДНК, 18-26 нм, высокое сопротивление 5.0
ρκν НегремппЛае Оболочечный, двухспиральная ДНК, 120-200 нм, сопротивление от низкого до среднего 7.4-7.8
Кео 3 КеотНЗае Безоболочечный, двухспиральная РНК, 50-70 нм, среднее сопротивление 3.9
Инактивацию вирусов ММУ(1) и ММУ(р) в продуцирующей среде проводили при различных скоростях потока. Достигалась инактивация с величиной ЬКУ более 4,85 в случае ММУ(р) (см. табл. III) и ЬКУ более 3,35 для ММУ(1) (см. табл. ГУ).
- 4 017322
Таблица III
Профиль инактивации ММУр под действием УФ-С излучения
А (254 нм) Скор, потока лаб. установка (л/ч) УФ-С закрытый источник (%) Ожидаемая плотность потока (дж/м2) Инакти- вация МУМр [ЬКУ] Скор, потока (мл/мин) Время сбора среды (мин/250мл) Масштаб процесса (л/ч)
12 10 0 143,1 3,93 4,09 4,09 166,7 1.5 1000- 2000
12 8 0 178,9 4,76 4,76 4,76 133,3 1,9 1000- 2000
12 6 0 238,5 >4,85 >4,85 >4,85 100 2,5 1000- 2000
Таблица IV
Профиль инактивации ΜΜΥί под действием УФ-С излучения
А (254 нм) Скор, потока лаб. установка (л/ч) УФ-С закрытый источник (%) Ожидаемая плотность потока (дж/м2) Инактивац ия МУМ1 [ЬКУ] Скор. потока (мл/мин) Время сбора среды (мин/250мл) Мас штаб про цесса (л/ч)
12 10 0 143,1 >3,35 >3,35 23,35 166,7 1,5 1000- 2000
12 8 0 178,9 >3,35 >3,35 >3,35 133,3 1,9 1000- 2000
12 6 0 238,5 >3,35 >3,35 >3,35 100 2,5 1000- 2000
Данные анализы повторяли для инактивации ΜυΤν как из продуцирующей, так и из питательной среды. Результаты анализов (т.е., величины ΕΚν менее 1) показывают, что дополнительная стадия инактивации или удаления может повысить эффективность способов в соответствии с настоящим изобретением (см. табл. V и VI).
- 5 017322
Таблица V
Профиль инактивации МиЬУ под действием УФ-С излучения (продуцирующая
среда)
А (254нт) Скор, потока лаб. установка (л/ч) УФ-С закрытый источник (%) Ожидаемая плотность потока (дж/м2) Инактивация МиЬУ [ЬКУ] Скор, потока (мл/мин) Время сбора среды (мин/250мл) Мас штаб про цесса (л/ч)
12 10 0 143,1 0,0,0 166,7 1.5 1000- 2000
12 8 0 178,9 0,0,0 133,3 1,9 1000- 2000
12 6 0 238,5 0,0,0 100 2,5 1000- 2000
Таблица VI
Профиль инактивации МиЬУ под действием УФ-С излучения (питательная
среда)
А (254нт) Скор, потока лаб. установка (л/ч) УФ-С закрытый источник (%) Ожидаемая плотность потока (дж/м2) Инактивация МиЬУ [ЬКУ] Скор, потока (мл/мин) Время сбора среды (мин/250мл) Мас штаб про цесса (л/ч)
64 2 0 62 0,0,0 33,3 7,5 1000- 2000
64 2 0 62 0,0,0 33,3 7,5 1000- 2000
64 2 0 62 0,0,0 33,3 7,5 1000- 2000
Пример 3. Удаление вирусов путем объемной фильтрации.
Проведены исследования по удалению оболочечных вирусных частиц, а также прочего нежелательного клеточного материала из сред для культур клеток с помощью объемного фильтра. В табл. VII приведены данные по инактивации для трех оболочечных вирусов, а также для безоболочечного вируса. На основании полученных величин ЬКУ можно заключить, что объемный фильтр обеспечивает эффективное удаление оболочечных вирусных частиц из сред для культур клеток.
Таблица VII
Метод удаления РКУ х-МиЬУ ММУ КеоЗ
Объемный фильтр 3,17 >4,23 4,13 >5,01
Фильтр 20 нм >5,04 >4,87 4,47 5,35
9-мембрана 3,89 >4,24 4,47 5,35
Проведены испытания двух типов объемных фильтров в отношении эффективности удаления вирусных частиц (см. фиг. 2 и 3).

Claims (13)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ обработки сред для культур клеток, предназначенных для применения в биореакторе, включающий следующие последовательно осуществляемые стадии:
    (a) воздействие на среду для культур клеток ультрафиолетовым излучением диапазона С (УФ-С) при плотности энергии 120-320 Дж/м2;
    (b) пропускание среды для культур клеток через стерилизующий фильтр, содержащий поры макси
    - 6 017322 мального размера 200 нм.
  2. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что среду перед пропусканием через стерилизующий фильтр пропускают через объемный фильтр.
  3. 3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что УФ-С-излучение имеет длину волны 254 нм.
  4. 4. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что на среду для культур клеток воздействуют УФ-Сизлучением при скорости потока 1-12 л/ч.
  5. 5. Способ по п.4, отличающийся тем, что на среду для культур клеток воздействуют УФ-Сизлучением при скорости потока 6 л/ч.
  6. 6. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что логарифмический показатель снижения вирусного материала в среде превышает или равен 4,85.
  7. 7. Способ по п.6, отличающийся тем, что логарифмический показатель снижения вирусного материала в среде составляет 6-7.
  8. 8. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что на среду для культур клеток воздействуют УФ-Сизлучением при плотности энергии 238 Дж/м2.
  9. 9. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что обработанная среда для культур клеток служит для обеспечения роста клеток млекопитающих или насекомых.
  10. 10. Способ по п.9, отличающийся тем, что клетки млекопитающих способны продуцировать антитела.
  11. 11. Способ по п.2, отличающийся тем, что среду для культур клеток пропускают через объемный фильтр при кислом рН.
  12. 12. Способ по п.11, отличающийся тем, что среду для культур клеток пропускают через объемный фильтр при рН 5,0.
  13. 13. Способ по п.2, отличающийся тем, что стадия пропускания среды для культур клеток через объемный фильтр обеспечивает удаление любого оболочечного вируса из среды для культур клеток.
EA201000020A 2007-06-15 2008-06-12 Способы обработки сред для культур клеток, применяемых в биореакторах EA017322B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US94446807P 2007-06-15 2007-06-15
PCT/US2008/066745 WO2008157247A1 (en) 2007-06-15 2008-06-12 Methods of treating cell culture media for use in a bioreactor

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201000020A1 EA201000020A1 (ru) 2010-06-30
EA017322B1 true EA017322B1 (ru) 2012-11-30

Family

ID=39722676

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201000020A EA017322B1 (ru) 2007-06-15 2008-06-12 Способы обработки сред для культур клеток, применяемых в биореакторах

Country Status (21)

Country Link
US (1) US9320816B2 (ru)
EP (1) EP2173861B2 (ru)
JP (1) JP5579599B2 (ru)
KR (1) KR101307697B1 (ru)
CN (1) CN101821381B (ru)
AT (1) ATE506432T2 (ru)
AU (1) AU2008266131B2 (ru)
BR (1) BRPI0813368A2 (ru)
CA (1) CA2690673C (ru)
CY (1) CY1111875T1 (ru)
DE (1) DE602008006410D1 (ru)
DK (1) DK2173861T4 (ru)
EA (1) EA017322B1 (ru)
ES (1) ES2362990T5 (ru)
HK (1) HK1143184A1 (ru)
IL (1) IL202542A0 (ru)
MX (1) MX2009013762A (ru)
PL (1) PL2173861T5 (ru)
PT (1) PT2173861E (ru)
WO (1) WO2008157247A1 (ru)
ZA (1) ZA201000144B (ru)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2690673C (en) 2007-06-15 2013-04-23 Amgen Inc. Methods of treating cell culture media for use in a bioreactor
CN102858961A (zh) * 2010-05-03 2013-01-02 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 新方法
WO2012115874A1 (en) * 2011-02-23 2012-08-30 Amgen Inc. Cell culture media for uvc exposure and methods related thereto
MX361039B (es) * 2011-10-26 2018-11-26 Amgen Inc Métodos para reducir o eliminar modificación de proteína y degradación que surge de la exposición a luz ultravioleta.
ITNA20120046A1 (it) * 2012-08-02 2014-02-03 No Self S R L Uso di acidi nucleici di sistemi biologici parassiti, patogeni e infestanti per l'inibizione e/o controllo degli stessi sistemi
SG10202113019XA (en) 2014-06-04 2021-12-30 Amgen Inc Methods for harvesting mammalian cell cultures
BR112017011652A2 (pt) 2014-12-01 2018-06-26 Amgen Inc. processo para manipulação do nível de teor de glicano de uma glicoproteína
CN107496950B (zh) * 2017-08-18 2021-02-02 广州市众为生物技术有限公司 一种紫外线照射灭活蛋白溶液中病毒的方法
EP3829668A2 (en) 2018-07-27 2021-06-09 Terumo BCT Biotechnologies, LLC Fluid flow-through
EP4139334B1 (en) 2020-04-20 2024-09-04 Vestaron Corporation Proteolytically stable u1-agatoxin-ta1b variant polypeptides for pest control
IL297738A (en) 2020-05-01 2022-12-01 Vestaron Corp Insecticide combinations
WO2022026451A1 (en) 2020-07-30 2022-02-03 Amgen Inc. Cell culture media and methods of making and using the same
CN116669558A (zh) 2020-09-28 2023-08-29 韦斯塔隆公司 用于害虫防治的mu-沙漠灌木蛛毒素-dc1a变体多肽
TW202304949A (zh) 2021-04-01 2023-02-01 美商韋斯塔隆公司 用於害蟲防治之ａｖ３突變多肽
WO2023122805A1 (en) 2021-12-20 2023-06-29 Vestaron Corporation Sorbitol driven selection pressure method
WO2023192924A1 (en) 2022-03-30 2023-10-05 Vestaron Corporation Combinations of av3 mutant polypeptides and bt toxins for pest control
TW202413392A (zh) 2022-05-18 2024-04-01 美商韋斯塔隆公司 殺蟲ａｃｔｘ肽變異體
WO2023245100A1 (en) 2022-06-17 2023-12-21 Vestaron Corporation Antimicrobial ncr13 variant peptides
WO2024026406A2 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Vestaron Corporation Next Generation ACTX Peptides

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996000237A1 (en) * 1994-06-23 1996-01-04 Pharmacia & Upjohn Ab Filtration
WO2004075931A2 (en) * 2003-02-27 2004-09-10 Baxter International Inc. Method for the validatable inactivation of pathogens in a biological fluid by irradiation
WO2005118000A1 (en) * 2004-05-27 2005-12-15 Baxter International Inc. Inactivation of a pathogen in a sample by a treatment with formalin and uv light

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6090588A (en) * 1997-05-02 2000-07-18 Board Of Regents Of University Of Nebraska Isolated melanin-like substance and method for producing the same
US6995006B2 (en) * 1997-09-05 2006-02-07 Targeted Genetics Corporation Methods for generating high titer helper-free preparations of released recombinant AAV vectors
US6214221B1 (en) * 1999-02-22 2001-04-10 Henry B. Kopf Method and apparatus for purification of biological substances
WO2002092806A1 (en) † 2001-05-15 2002-11-21 V.I. Technologies, Inc. Apparatus for the inactivation of pathogens in protein-containingfluids
CA2463422A1 (en) * 2001-10-10 2003-04-24 Koushi Yamaguchi Photocatalytic material selectively inactivating biologically harmful substance and utilization thereof
US20040214314A1 (en) * 2001-11-02 2004-10-28 Friedrich Srienc High throughput bioreactor
WO2003094978A1 (en) 2002-05-08 2003-11-20 Millipore Corporation Light decontamination of fermentation media
DE60313451T2 (de) * 2002-05-14 2008-01-03 Merck & Co., Inc. Verfahren zur reinigung von adenovirus
DE10312765A1 (de) * 2003-03-21 2004-09-30 Bayer Technology Services Gmbh Vorrichtung und Verfahren zur Sterilisation flüssiger Medien mittels UV-Bestrahlung und Kurzzeiterhitzung
EP1624950B1 (en) 2003-05-19 2007-07-11 Millipore Corporation Process for prefiltration of a protein solution
US20090130704A1 (en) * 2003-11-13 2009-05-21 Gyure Dale C Novel bioreactor
US8703467B2 (en) * 2004-05-27 2014-04-22 Baxter International Inc. Inactivation of a pathogen in a sample by a treatment with formalin and UV light
US7476885B2 (en) * 2006-02-22 2009-01-13 Oreck Corporation Disinfecting device utilizing ultraviolet radiation
SI2007883T1 (sl) * 2006-04-20 2012-02-29 Wyeth Llc Procesi äśiĺ äśenja za osamitev preäśiĺ äśenega virusa vezikularnega stomatitisa iz celiäśne kulture
CA2690673C (en) 2007-06-15 2013-04-23 Amgen Inc. Methods of treating cell culture media for use in a bioreactor

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996000237A1 (en) * 1994-06-23 1996-01-04 Pharmacia & Upjohn Ab Filtration
WO2004075931A2 (en) * 2003-02-27 2004-09-10 Baxter International Inc. Method for the validatable inactivation of pathogens in a biological fluid by irradiation
WO2005118000A1 (en) * 2004-05-27 2005-12-15 Baxter International Inc. Inactivation of a pathogen in a sample by a treatment with formalin and uv light

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DILEO A. J. ET AL.: "SIZE EXCLUSION REMOVAL OF MODEL MAMMALIAN VIRUSES USING A UNIQUE MEMBRANE SYSTEM, PART II: MODULE QUALIFICATION AND PROCESS SIMULATION", BIOLOGICALS, ACADEMIC PRESS LTD., LONDON, GB, vol. 21, no. 3, 1 September 1993 (1993-09-01), pages 287-296, XP000570924, ISSN: 1045-1056, the whole document *
SCHMIDT ET AL.: "An Integrated Concept for Robust and Efficient Virus Clearance and Contaminant Removal in Biotech Processes", BIOPROCESS INTL. (SPECIAL SUPPL.) - TRENDS IN INTEGRATED BIOMANUFACTURING, vol. 3, no. 9, 1 September 2005 (2005-89-01), pages 26-31, XP002495408, Westborough, MA, USA, the whole document *
TORRENTERA-BLANCO L. ET AL.: "UV STERILIZATION UNIT", INVESTIGACIONES MARINAS CICIMAR, vol. 5, no. SPEC. ISSUE 1, 1990, pages 19-28, XP009105650, ISSN: 0186-5102, the whole document *

Also Published As

Publication number Publication date
HK1143184A1 (en) 2010-12-24
CA2690673C (en) 2013-04-23
BRPI0813368A2 (pt) 2015-01-06
ES2362990T3 (es) 2011-07-18
EP2173861B2 (en) 2017-02-22
KR20100036319A (ko) 2010-04-07
PT2173861E (pt) 2011-05-13
PL2173861T3 (pl) 2011-09-30
CA2690673A1 (en) 2008-12-24
EP2173861B1 (en) 2011-04-20
ATE506432T2 (de) 2011-05-15
CN101821381B (zh) 2012-09-05
ZA201000144B (en) 2010-09-29
CN101821381A (zh) 2010-09-01
US20100203610A1 (en) 2010-08-12
MX2009013762A (es) 2010-03-01
CY1111875T1 (el) 2016-02-10
EA201000020A1 (ru) 2010-06-30
JP5579599B2 (ja) 2014-08-27
KR101307697B1 (ko) 2013-09-11
PL2173861T5 (pl) 2017-10-31
IL202542A0 (en) 2011-08-01
WO2008157247A1 (en) 2008-12-24
EP2173861A1 (en) 2010-04-14
AU2008266131B2 (en) 2011-10-20
AU2008266131A1 (en) 2008-12-24
DK2173861T3 (da) 2011-07-25
JP2010529856A (ja) 2010-09-02
DK2173861T4 (en) 2017-05-15
ES2362990T5 (es) 2017-07-20
US9320816B2 (en) 2016-04-26
DE602008006410D1 (de) 2011-06-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA017322B1 (ru) Способы обработки сред для культур клеток, применяемых в биореакторах
DE68924485T2 (de) UV Sterilisation, insbs. für Blutprodukte.
JP2007125554A5 (ru)
CN111770986A (zh) 用于制备生物分子（如病毒疫苗）的系统和方法
CN103910453A (zh) 一种水产养殖废水处理装置
CN107496950B (zh) 一种紫外线照射灭活蛋白溶液中病毒的方法
CN112316166B (zh) 一种生物液体样本中病原体的核黄素光化学灭活方法
AU745173C (en) Method for preventing replication in cryptosporidium parvum using ultraviolet light
Lazarova et al. Technical and sanitary aspects of wastewater disinfection by UV irradiation for landscape irrigation
DE602005019998D1 (de) Verfahren zur sterilisation von biologischen präparaten
CN107308515B (zh) 一种血液中循环肿瘤细胞的灭活系统及应用
CN210340586U (zh) 一种深度净化水处理系统
CN112194295A (zh) 一种天然矿泉水处理装置及工艺
Liu et al. Combination of UV radiation with 3D structure media filter for indoor air disinfection
CN110746041A (zh) 一种猪舍废水杀菌再利用处理方法及其设备
CN206298475U (zh) 一种生产车用尿素紫外线杀菌装置
CN221015124U (zh) 一种臭氧和颗粒物的协同控制装置
Jahan et al. Microalgae impact on inactivation of indicator virus in a large-scale wastewater treatment system using microalgae
Engohang-Ndong et al. Elimination of Potential Pathogenic Microorganisms in Sewage Sludge Using Electron Beam Irradiation
CN109133336A (zh) 一种紫外光-活性污泥体系处理水中残留药品的方法
RU1755580C (ru) Способ стерилизующей фильтрации вируссодержащего материала для получения культуральной антирабической вакцины
CN117030199A (zh) 一种光化学病毒灭活用光源筛选装置及方法
CN110104826A (zh) 一种压力容器生产的生活废水处理方法
US20040005694A1 (en) Light decontamination of fermentation media
Subbaraman et al. Qualitative Studies on Quartz Filters Used in Ultraviolet Sterilization System

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM