EA015672B1 - Тканезащитные пептиды и их применения - Google Patents
Тканезащитные пептиды и их применения Download PDFInfo
- Publication number
- EA015672B1 EA015672B1 EA200800536A EA200800536A EA015672B1 EA 015672 B1 EA015672 B1 EA 015672B1 EA 200800536 A EA200800536 A EA 200800536A EA 200800536 A EA200800536 A EA 200800536A EA 015672 B1 EA015672 B1 EA 015672B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- peptide
- tissue
- amino acid
- tissue protective
- peptides
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 494
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 257
- 230000002669 organ and tissue protective effect Effects 0.000 title abstract description 268
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 122
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 claims abstract description 119
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 claims abstract description 118
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 claims abstract description 118
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 78
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 60
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 52
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims abstract description 32
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 27
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 192
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 174
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 129
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 92
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 67
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 42
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 33
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 claims description 32
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 28
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 24
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 22
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 21
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 20
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 20
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 20
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 16
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 claims description 15
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 13
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 13
- 230000002633 protecting effect Effects 0.000 claims description 12
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 claims description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims description 11
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 claims description 10
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 8
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 claims description 8
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 claims description 7
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 7
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 claims description 7
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 claims description 7
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 claims description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 6
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 claims description 5
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 claims description 5
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 5
- 210000001736 capillary Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 claims description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 3
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 claims description 3
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 3
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 claims description 3
- 210000000515 tooth Anatomy 0.000 claims description 3
- 201000006306 Cor pulmonale Diseases 0.000 claims description 2
- 208000017701 Endocrine disease Diseases 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000030172 endocrine system disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 claims description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000017443 reproductive system disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014001 urinary system disease Diseases 0.000 claims description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 claims 1
- 210000001759 blood-nerve barrier Anatomy 0.000 claims 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 claims 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 abstract description 58
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 abstract description 58
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 47
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 46
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 42
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 30
- 238000009739 binding Methods 0.000 abstract description 30
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 24
- 239000003446 ligand Substances 0.000 abstract description 23
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 abstract description 10
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 abstract description 10
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 abstract description 9
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000004807 localization Effects 0.000 abstract description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 189
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 188
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 74
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 44
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 35
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 35
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 33
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 33
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 30
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 27
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 27
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 26
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 23
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 22
- 230000000913 erythropoietic effect Effects 0.000 description 20
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 19
- 230000006870 function Effects 0.000 description 19
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 19
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 17
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 17
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 17
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 16
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 16
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 14
- -1 norleucine Chemical class 0.000 description 14
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 14
- 210000003497 sciatic nerve Anatomy 0.000 description 14
- PCFGFYKGPMQDBX-FEKONODYSA-N 78355-50-7 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 PCFGFYKGPMQDBX-FEKONODYSA-N 0.000 description 13
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 13
- 108010069653 peptide E (adrenal medulla) Proteins 0.000 description 13
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 12
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 12
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 11
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 11
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 11
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 10
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 10
- 230000034994 death Effects 0.000 description 10
- VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N dicarbon monoxide Chemical group [C]=C=O VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 10
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 10
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 10
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 10
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 9
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 9
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 9
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 9
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 9
- COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O Chemical compound CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N 0.000 description 8
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 8
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 8
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 8
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 8
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 8
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 8
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 8
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 8
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 8
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 8
- ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N cocaine Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N 0.000 description 8
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 8
- 229960003699 evans blue Drugs 0.000 description 8
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 8
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 7
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 7
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 7
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 7
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 7
- 108700001003 carbamylated erythropoietin Proteins 0.000 description 7
- 230000002612 cardiopulmonary effect Effects 0.000 description 7
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 7
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 7
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 7
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 7
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 7
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 7
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 7
- 230000031998 transcytosis Effects 0.000 description 7
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 description 6
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 description 6
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 6
- 108010075944 Erythropoietin Receptors Proteins 0.000 description 6
- 102100036509 Erythropoietin receptor Human genes 0.000 description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 6
- 208000005374 Poisoning Diseases 0.000 description 6
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 6
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 108091006116 chimeric peptides Proteins 0.000 description 6
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 6
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 6
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 210000003657 middle cerebral artery Anatomy 0.000 description 6
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 6
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 6
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 6
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 6
- 108010005636 polypeptide C Proteins 0.000 description 6
- 208000032253 retinal ischemia Diseases 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 6
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010002329 Aneurysm Diseases 0.000 description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010003497 Asphyxia Diseases 0.000 description 5
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 5
- 208000032131 Diabetic Neuropathies Diseases 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 5
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 5
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 5
- 101800005149 Peptide B Proteins 0.000 description 5
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 5
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 5
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 5
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 239000012707 chemical precursor Substances 0.000 description 5
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 5
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 5
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 description 5
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 5
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 description 5
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 5
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 5
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 5
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 5
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 5
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 75976-10-2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](C)N)C(C)C)[C@@H](C)O)C1=CC=C(O)C=C1 HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 0.000 description 4
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 4
- 101800002011 Amphipathic peptide Proteins 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 4
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 208000031229 Cardiomyopathies Diseases 0.000 description 4
- 206010063094 Cerebral malaria Diseases 0.000 description 4
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 4
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 4
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 4
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 4
- 208000010496 Heart Arrest Diseases 0.000 description 4
- 101000987586 Homo sapiens Eosinophil peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 4
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 4
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 4
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 241000237852 Mollusca Species 0.000 description 4
- 208000019022 Mood disease Diseases 0.000 description 4
- 206010061876 Obstruction Diseases 0.000 description 4
- 102000018886 Pancreatic Polypeptide Human genes 0.000 description 4
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 4
- 208000033626 Renal failure acute Diseases 0.000 description 4
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 4
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 4
- 101000983124 Sus scrofa Pancreatic prohormone precursor Proteins 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 4
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 4
- 229960003920 cocaine Drugs 0.000 description 4
- 208000018631 connective tissue disease Diseases 0.000 description 4
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 4
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 4
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 4
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 4
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 4
- 102000044890 human EPO Human genes 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 4
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 4
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 4
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 4
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 4
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 4
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 206010065040 AIDS dementia complex Diseases 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 description 3
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 3
- 244000291564 Allium cepa Species 0.000 description 3
- 235000002732 Allium cepa var. cepa Nutrition 0.000 description 3
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 3
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 3
- 206010003805 Autism Diseases 0.000 description 3
- 208000020706 Autistic disease Diseases 0.000 description 3
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 3
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 3
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 101000920686 Homo sapiens Erythropoietin Proteins 0.000 description 3
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 3
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 208000026139 Memory disease Diseases 0.000 description 3
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 102100035411 Neuroglobin Human genes 0.000 description 3
- 108010026092 Neuroglobin Proteins 0.000 description 3
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 3
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 3
- 208000037658 Parkinson-dementia complex of Guam Diseases 0.000 description 3
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 3
- 108010043958 Peptoids Proteins 0.000 description 3
- 208000004210 Pressure Ulcer Diseases 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 3
- ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N Streptozotocin Natural products O=NN(C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 201000011040 acute kidney failure Diseases 0.000 description 3
- 208000012998 acute renal failure Diseases 0.000 description 3
- 210000004404 adrenal cortex Anatomy 0.000 description 3
- 210000001943 adrenal medulla Anatomy 0.000 description 3
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 208000013968 amyotrophic lateral sclerosis-parkinsonism-dementia complex Diseases 0.000 description 3
- 208000014450 amyotrophic lateral sclerosis-parkinsonism/dementia complex 1 Diseases 0.000 description 3
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 3
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 3
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 3
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 206010008129 cerebral palsy Diseases 0.000 description 3
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 3
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 3
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 3
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 3
- 210000003194 forelimb Anatomy 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 208000010726 hind limb paralysis Diseases 0.000 description 3
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 3
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 229940076264 interleukin-3 Drugs 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 3
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 3
- 230000006984 memory degeneration Effects 0.000 description 3
- 208000023060 memory loss Diseases 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 3
- 210000003007 myelin sheath Anatomy 0.000 description 3
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- 108010091867 peptide P Proteins 0.000 description 3
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 3
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 3
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 3
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 3
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 208000009174 transverse myelitis Diseases 0.000 description 3
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-5-amino-2-(aminomethyl)-6-[(2r,3s,4r,5s)-5-[(1r,2r,3s,5r,6s)-3,5-diamino-2-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-hydroxycyclohexyl]oxy-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl]oxyoxane-3,4-diol;sulfuric ac Chemical compound OS(O)(=O)=O.N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)O[C@@H]1CO LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N 0.000 description 2
- YZHUEWSKBUJPDC-UHFFFAOYSA-N 2-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)-3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)benzoic acid Chemical compound O=C1CCC(=O)N1C=1C(C(=O)O)=CC=CC=1N1C(=O)C=CC1=O YZHUEWSKBUJPDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 description 2
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 2
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 2
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 2
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 2
- 206010007558 Cardiac failure chronic Diseases 0.000 description 2
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 2
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 2
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 2
- 102100034126 Cytoglobin Human genes 0.000 description 2
- 108010053020 Cytoglobin Proteins 0.000 description 2
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 description 2
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- 208000018478 Foetal disease Diseases 0.000 description 2
- 102000003869 Frataxin Human genes 0.000 description 2
- 108090000217 Frataxin Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 208000007465 Giant cell arteritis Diseases 0.000 description 2
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010019345 Heat stroke Diseases 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 2
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 description 2
- VLSMHEGGTFMBBZ-OOZYFLPDSA-M Kainate Chemical compound CC(=C)[C@H]1C[NH2+][C@H](C([O-])=O)[C@H]1CC([O-])=O VLSMHEGGTFMBBZ-OOZYFLPDSA-M 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 2
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 2
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000021642 Muscular disease Diseases 0.000 description 2
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 2
- 201000009623 Myopathy Diseases 0.000 description 2
- 206010028885 Necrotising fasciitis Diseases 0.000 description 2
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 2
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 description 2
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 2
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 102100021010 Nucleolin Human genes 0.000 description 2
- 208000021384 Obsessive-Compulsive disease Diseases 0.000 description 2
- 208000003435 Optic Neuritis Diseases 0.000 description 2
- 206010031252 Osteomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 208000024777 Prion disease Diseases 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 2
- 102100024819 Prolactin Human genes 0.000 description 2
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 2
- 206010037437 Pulmonary thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 2
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 201000007737 Retinal degeneration Diseases 0.000 description 2
- 206010038848 Retinal detachment Diseases 0.000 description 2
- 206010038926 Retinopathy hypertensive Diseases 0.000 description 2
- 206010040642 Sickle cell anaemia with crisis Diseases 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 208000032851 Subarachnoid Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 208000002847 Surgical Wound Diseases 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 208000011341 adult acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 2
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 206010063452 arteriosclerotic retinopathy Diseases 0.000 description 2
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 102000012740 beta Adrenergic Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010079452 beta Adrenergic Receptors Proteins 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 2
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 2
- 230000002281 colonystimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000003890 endocrine cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 210000003013 erythroid precursor cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 208000012997 experimental autoimmune encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 2
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 2
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 201000001948 hypertensive retinopathy Diseases 0.000 description 2
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 2
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 201000001881 impotence Diseases 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 2
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 2
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N lipoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 2
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940091250 magnesium supplement Drugs 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000003818 metabolic dysfunction Effects 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 208000012268 mitochondrial disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 201000007970 necrotizing fasciitis Diseases 0.000 description 2
- 230000007830 nerve conduction Effects 0.000 description 2
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007658 neurological function Effects 0.000 description 2
- 239000002581 neurotoxin Substances 0.000 description 2
- 231100000618 neurotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 230000000508 neurotrophic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 108010044762 nucleolin Proteins 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 2
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 2
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 2
- 229960001639 penicillamine Drugs 0.000 description 2
- 108010091748 peptide A Proteins 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 2
- 210000001927 retinal artery Anatomy 0.000 description 2
- 230000004264 retinal detachment Effects 0.000 description 2
- 210000001957 retinal vein Anatomy 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 description 2
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 208000019116 sleep disease Diseases 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 2
- 206010043207 temporal arteritis Diseases 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 150000003568 thioethers Chemical group 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012549 training Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FXYPGCIGRDZWNR-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-[[3-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy-3-oxopropyl]disulfanyl]propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O FXYPGCIGRDZWNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GKSPIZSKQWTXQG-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[1-(pyridin-2-yldisulfanyl)ethyl]benzoate Chemical compound C=1C=C(C(=O)ON2C(CCC2=O)=O)C=CC=1C(C)SSC1=CC=CC=N1 GKSPIZSKQWTXQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N (4s)-5-[[(2s)-6-amino-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2r)-1-[[2-[[2-[[(1s)-3-amino-1-carboxy-3-oxopropyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-1-oxo-3-sulfanylpropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]a Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN)CC1=CC=C(O)C=C1 KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BLTRCTCTKKJRIC-UHFFFAOYSA-N 1-(cyclohexylmethyl)pyrrole-2,5-dione Chemical compound O=C1C=CC(=O)N1CC1CCCCC1 BLTRCTCTKKJRIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 1
- VHYRLCJMMJQUBY-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)CCCC1=CC=C(N2C(C=CC2=O)=O)C=C1 VHYRLCJMMJQUBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHWDSEPNZDYMNF-UHFFFAOYSA-N 1H-indol-2-amine Chemical class C1=CC=C2NC(N)=CC2=C1 IHWDSEPNZDYMNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AEQDJSLRWYMAQI-UHFFFAOYSA-N 2,3,9,10-tetramethoxy-6,8,13,13a-tetrahydro-5H-isoquinolino[2,1-b]isoquinoline Chemical compound C1CN2CC(C(=C(OC)C=C3)OC)=C3CC2C2=C1C=C(OC)C(OC)=C2 AEQDJSLRWYMAQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 2-(ethylamino)ethanol Chemical compound CCNCCO MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dithiobis(6-nitrobenzoic acid) Chemical group C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(SSC=2C=C(C(=CC=2)[N+]([O-])=O)C(O)=O)=C1 KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHXWCVYOXRDMCX-UHFFFAOYSA-N 3,4-methylenedioxymethamphetamine Chemical compound CNC(C)CC1=CC=C2OCOC2=C1 SHXWCVYOXRDMCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 4',5'-Dihydropsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OCC2 VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMHFFDIMOUKDCZ-NTXHZHDSSA-N 61214-51-5 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 JMHFFDIMOUKDCZ-NTXHZHDSSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 108091006112 ATPases Proteins 0.000 description 1
- 206010000117 Abnormal behaviour Diseases 0.000 description 1
- NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N Acrylonitrile Chemical group C=CC#N NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032194 Acute haemorrhagic leukoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 102000057290 Adenosine Triphosphatases Human genes 0.000 description 1
- 208000017194 Affective disease Diseases 0.000 description 1
- 208000000884 Airway Obstruction Diseases 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 102400000068 Angiostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010079709 Angiostatins Proteins 0.000 description 1
- 206010002961 Aplasia Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010003662 Atrial flutter Diseases 0.000 description 1
- 208000030016 Avascular necrosis Diseases 0.000 description 1
- 239000012583 B-27 Supplement Substances 0.000 description 1
- 206010061688 Barotrauma Diseases 0.000 description 1
- 102400000748 Beta-endorphin Human genes 0.000 description 1
- 101800005049 Beta-endorphin Proteins 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 241000283725 Bos Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010049765 Bradyarrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 206010006458 Bronchitis chronic Diseases 0.000 description 1
- BGPFPAQYFRWCCA-UHFFFAOYSA-L CS(=S(=O)([O-])[O-])CC1=CC=CC=C1.[Na+].[Na+] Chemical compound CS(=S(=O)([O-])[O-])CC1=CC=CC=C1.[Na+].[Na+] BGPFPAQYFRWCCA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 1
- 235000012766 Cannabis sativa ssp. sativa var. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 235000012765 Cannabis sativa ssp. sativa var. spontanea Nutrition 0.000 description 1
- UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N Carbon monoxide Chemical compound [O+]#[C-] UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001408 Carbon monoxide poisoning Diseases 0.000 description 1
- 206010048610 Cardiotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 206010008874 Chronic Fatigue Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 241000270272 Coluber Species 0.000 description 1
- 102000012289 Corticotropin-Releasing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010022152 Corticotropin-Releasing Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000055 Corticotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 208000020406 Creutzfeldt Jacob disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003407 Creutzfeldt-Jakob Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000010859 Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 1
- 244000163122 Curcuma domestica Species 0.000 description 1
- 235000003392 Curcuma domestica Nutrition 0.000 description 1
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- MQJKPEGWNLWLTK-UHFFFAOYSA-N Dapsone Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MQJKPEGWNLWLTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 description 1
- 206010011951 Decompression Sickness Diseases 0.000 description 1
- 206010011985 Decubitus ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000031124 Dementia Alzheimer type Diseases 0.000 description 1
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 description 1
- 208000020401 Depressive disease Diseases 0.000 description 1
- 208000007342 Diabetic Nephropathies Diseases 0.000 description 1
- 206010012667 Diabetic glaucoma Diseases 0.000 description 1
- 206010012688 Diabetic retinal oedema Diseases 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000021866 Dressler syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000003870 Drug Overdose Diseases 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 102400001047 Endostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010079505 Endostatins Proteins 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 208000010228 Erectile Dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 206010056474 Erythrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000003241 Fat Embolism Diseases 0.000 description 1
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 210000000712 G cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 1
- 244000194101 Ginkgo biloba Species 0.000 description 1
- 206010018341 Gliosis Diseases 0.000 description 1
- 102400000321 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 108010007979 Glycocholic Acid Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010018498 Goitre Diseases 0.000 description 1
- 102000009165 Gonadoliberin Human genes 0.000 description 1
- 108050000048 Gonadoliberin Proteins 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 206010056438 Growth hormone deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000035895 Guillain-Barré syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000013875 Heart injury Diseases 0.000 description 1
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- 208000002972 Hepatolenticular Degeneration Diseases 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N Heroin Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)OC(C)=O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4OC(C)=O GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N 0.000 description 1
- 101100321817 Human parvovirus B19 (strain HV) 7.5K gene Proteins 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- 206010060378 Hyperinsulinaemia Diseases 0.000 description 1
- 201000002980 Hyperparathyroidism Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010020850 Hyperthyroidism Diseases 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 241000371980 Influenza B virus (B/Shanghai/361/2002) Species 0.000 description 1
- 208000009773 Insulin Coma Diseases 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 1
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UETNIIAIRMUTSM-UHFFFAOYSA-N Jacareubin Natural products CC1(C)OC2=CC3Oc4c(O)c(O)ccc4C(=O)C3C(=C2C=C1)O UETNIIAIRMUTSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 208000034693 Laceration Diseases 0.000 description 1
- 208000006136 Leigh Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 1
- 208000001344 Macular Edema Diseases 0.000 description 1
- 206010025415 Macular oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010026749 Mania Diseases 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027530 Meniere disease Diseases 0.000 description 1
- 208000029725 Metabolic bone disease Diseases 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 206010049567 Miller Fisher syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010027727 Mitral valve incompetence Diseases 0.000 description 1
- 206010068871 Myotonic dystrophy Diseases 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFDAIACWWDREDC-UHFFFAOYSA-N Na salt-Glycocholic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)NCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 RFDAIACWWDREDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N Naproxen Natural products C1=C(C(C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010051606 Necrotising colitis Diseases 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 208000031264 Nerve root compression Diseases 0.000 description 1
- 206010058119 Neurogenic shock Diseases 0.000 description 1
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 1
- 102000003797 Neuropeptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 1
- 101710138657 Neurotoxin Proteins 0.000 description 1
- 206010057852 Nicotine dependence Diseases 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 description 1
- 206010031264 Osteonecrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010049088 Osteopenia Diseases 0.000 description 1
- 206010033296 Overdoses Diseases 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 208000000114 Pain Threshold Diseases 0.000 description 1
- 206010033885 Paraparesis Diseases 0.000 description 1
- 208000009182 Parasitemia Diseases 0.000 description 1
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 1
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- 208000007542 Paresis Diseases 0.000 description 1
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 208000018262 Peripheral vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000017343 Phosphatidylinositol kinases Human genes 0.000 description 1
- 108050005377 Phosphatidylinositol kinases Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035742 Pneumonitis Diseases 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 206010037180 Psychiatric symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 206010037779 Radiculopathy Diseases 0.000 description 1
- 241000722267 Regulus satrapa Species 0.000 description 1
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 description 1
- 206010063897 Renal ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 206010039020 Rhabdomyolysis Diseases 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- 206010059594 Secondary hypogonadism Diseases 0.000 description 1
- 108010086019 Secretin Proteins 0.000 description 1
- 102100037505 Secretin Human genes 0.000 description 1
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 201000001880 Sexual dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 206010040576 Shock hypoglycaemic Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 208000002667 Subdural Hematoma Diseases 0.000 description 1
- 208000007271 Substance Withdrawal Syndrome Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102000003691 T-Type Calcium Channels Human genes 0.000 description 1
- 108090000030 T-Type Calcium Channels Proteins 0.000 description 1
- 206010049447 Tachyarrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 208000001871 Tachycardia Diseases 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric Acid Chemical class [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000491 Tendinopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010043255 Tendonitis Diseases 0.000 description 1
- 244000277583 Terminalia catappa Species 0.000 description 1
- 235000009319 Terminalia catappa Nutrition 0.000 description 1
- KLBQZWRITKRQQV-UHFFFAOYSA-N Thioridazine Chemical compound C12=CC(SC)=CC=C2SC2=CC=CC=C2N1CCC1CCCCN1C KLBQZWRITKRQQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010036928 Thiorphan Proteins 0.000 description 1
- 201000008982 Thoracic Aortic Aneurysm Diseases 0.000 description 1
- 208000009205 Tinnitus Diseases 0.000 description 1
- YTGJWQPHMWSCST-UHFFFAOYSA-N Tiopronin Chemical compound CC(S)C(=O)NCC(O)=O YTGJWQPHMWSCST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000025569 Tobacco Use disease Diseases 0.000 description 1
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 1
- 208000000323 Tourette Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 1
- 102000011117 Transforming Growth Factor beta2 Human genes 0.000 description 1
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 101800000304 Transforming growth factor beta-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000056172 Transforming growth factor beta-3 Human genes 0.000 description 1
- 108090000097 Transforming growth factor beta-3 Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000026911 Tuberous sclerosis complex Diseases 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010053648 Vascular occlusion Diseases 0.000 description 1
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 1
- 208000018839 Wilson disease Diseases 0.000 description 1
- 206010048010 Withdrawal syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 102100033220 Xanthine oxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010093894 Xanthine oxidase Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003815 abdominal wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000000159 acid neutralizing agent Substances 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036982 action potential Effects 0.000 description 1
- 208000002552 acute disseminated encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 239000011717 all-trans-retinol Substances 0.000 description 1
- 235000019169 all-trans-retinol Nutrition 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 1
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 description 1
- VLSMHEGGTFMBBZ-UHFFFAOYSA-N alpha-Kainic acid Natural products CC(=C)C1CNC(C(O)=O)C1CC(O)=O VLSMHEGGTFMBBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000002266 amputation Methods 0.000 description 1
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 206010068168 androgenetic alopecia Diseases 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000004960 anterior grey column Anatomy 0.000 description 1
- 230000003160 anti-catabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940065524 anticholinergics inhalants for obstructive airway diseases Drugs 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 239000003430 antimalarial agent Substances 0.000 description 1
- 229940033495 antimalarials Drugs 0.000 description 1
- 229940121357 antivirals Drugs 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 1
- 208000007474 aortic aneurysm Diseases 0.000 description 1
- 210000001765 aortic valve Anatomy 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N aspergillomarasmine B Natural products OC(=O)CNC(C(O)=O)CNC(C(O)=O)CC(O)=O FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 210000001992 atrioventricular node Anatomy 0.000 description 1
- 229940090047 auto-injector Drugs 0.000 description 1
- 230000037424 autonomic function Effects 0.000 description 1
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 229940125388 beta agonist Drugs 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 208000006218 bradycardia Diseases 0.000 description 1
- 230000007177 brain activity Effects 0.000 description 1
- 229940077737 brain-derived neurotrophic factor Drugs 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 1
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical group N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 1
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- 210000001043 capillary endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000021235 carbamoylation Effects 0.000 description 1
- 150000001716 carbazoles Chemical class 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003683 cardiac damage Effects 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010007625 cardiogenic shock Diseases 0.000 description 1
- 231100000259 cardiotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000001326 carotid sinus Anatomy 0.000 description 1
- 208000003295 carpal tunnel syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 201000008191 cerebritis Diseases 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 1
- 239000000812 cholinergic antagonist Substances 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 208000007451 chronic bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- DCSUBABJRXZOMT-IRLDBZIGSA-N cisapride Chemical compound C([C@@H]([C@@H](CC1)NC(=O)C=2C(=CC(N)=C(Cl)C=2)OC)OC)N1CCCOC1=CC=C(F)C=C1 DCSUBABJRXZOMT-IRLDBZIGSA-N 0.000 description 1
- 229960005132 cisapride Drugs 0.000 description 1
- DCSUBABJRXZOMT-UHFFFAOYSA-N cisapride Natural products C1CC(NC(=O)C=2C(=CC(N)=C(Cl)C=2)OC)C(OC)CN1CCCOC1=CC=C(F)C=C1 DCSUBABJRXZOMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009194 climbing Effects 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 229940124301 concurrent medication Drugs 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- KLVRDXBAMSPYKH-RKYZNNDCSA-N corticotropin-releasing hormone (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(N)=O)[C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CNC=N1 KLVRDXBAMSPYKH-RKYZNNDCSA-N 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 229940111134 coxibs Drugs 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 235000003373 curcuma longa Nutrition 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 239000003255 cyclooxygenase 2 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000021953 cytokinesis Effects 0.000 description 1
- 229960000860 dapsone Drugs 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 208000033679 diabetic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 201000011190 diabetic macular edema Diseases 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229960002069 diamorphine Drugs 0.000 description 1
- 230000003205 diastolic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001991 dicarboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960001259 diclofenac Drugs 0.000 description 1
- DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N diclofenac Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1NC1=C(Cl)C=CC=C1Cl DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N disuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- 230000009189 diving Effects 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 231100000725 drug overdose Toxicity 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 208000024732 dysthymic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000002296 eclampsia Diseases 0.000 description 1
- 230000003073 embolic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940079360 enema for constipation Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical group 0.000 description 1
- 230000003492 excitotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000063 excitotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000004060 excitotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 201000007089 exocrine pancreatic insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 208000003457 familial thoracic 1 aortic aneurysm Diseases 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007387 gliosis Effects 0.000 description 1
- 102000034238 globular proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005896 globular proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001434 glomerular Effects 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- UHUSDOQQWJGJQS-UHFFFAOYSA-N glycerol 1,2-dioctadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC UHUSDOQQWJGJQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002333 glycines Chemical class 0.000 description 1
- RFDAIACWWDREDC-FRVQLJSFSA-N glycocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 RFDAIACWWDREDC-FRVQLJSFSA-N 0.000 description 1
- 229940099347 glycocholic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 201000003872 goiter Diseases 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 125000004997 halocarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 231100001261 hazardous Toxicity 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000010370 hearing loss Effects 0.000 description 1
- 231100000888 hearing loss Toxicity 0.000 description 1
- 208000016354 hearing loss disease Diseases 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005986 heart dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000003709 heart valve Anatomy 0.000 description 1
- 208000018578 heart valve disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 210000004295 hippocampal neuron Anatomy 0.000 description 1
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- 201000008298 histiocytosis Diseases 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- XXSMGPRMXLTPCZ-UHFFFAOYSA-N hydroxychloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CCO)CC)=CC=NC2=C1 XXSMGPRMXLTPCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004171 hydroxychloroquine Drugs 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 230000037417 hyperactivation Effects 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000003451 hyperinsulinaemic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008980 hyperinsulinism Diseases 0.000 description 1
- 230000002727 hyperosmolar Effects 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000001631 hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 201000003368 hypogonadotropic hypogonadism Diseases 0.000 description 1
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 1
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000642 iatrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 150000002475 indoles Chemical class 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 206010022498 insulinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 102000002467 interleukin receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010093036 interleukin receptors Proteins 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 208000023569 ischemic bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLSMHEGGTFMBBZ-OOZYFLPDSA-N kainic acid Chemical compound CC(=C)[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)[C@H]1CC(O)=O VLSMHEGGTFMBBZ-OOZYFLPDSA-N 0.000 description 1
- 229950006874 kainic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003350 kerosene Substances 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 238000002357 laparoscopic surgery Methods 0.000 description 1
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 1
- 208000036546 leukodystrophy Diseases 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 208000018769 loss of vision Diseases 0.000 description 1
- 231100000864 loss of vision Toxicity 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 201000010230 macular retinal edema Diseases 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014380 magnesium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001755 magnesium gluconate Substances 0.000 description 1
- 229960003035 magnesium gluconate Drugs 0.000 description 1
- 235000015778 magnesium gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- IAKLPCRFBAZVRW-XRDLMGPZSA-L magnesium;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate;hydrate Chemical compound O.[Mg+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O IAKLPCRFBAZVRW-XRDLMGPZSA-L 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000006371 metabolic abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000006609 metabolic stress Effects 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000000110 microvilli Anatomy 0.000 description 1
- 230000027939 micturition Effects 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000004065 mitochondrial dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000006677 mitochondrial metabolism Effects 0.000 description 1
- 210000004115 mitral valve Anatomy 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000002324 mouth wash Substances 0.000 description 1
- 208000029766 myalgic encephalomeyelitis/chronic fatigue syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 230000023105 myelination Effects 0.000 description 1
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-M naproxen(1-) Chemical compound C1=C([C@H](C)C([O-])=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-M 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000002956 necrotizing effect Effects 0.000 description 1
- 208000004995 necrotizing enterocolitis Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003757 neuroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 210000005044 neurofilament Anatomy 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 1
- 230000003961 neuronal insult Effects 0.000 description 1
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 1
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000003557 neuropsychological effect Effects 0.000 description 1
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100001223 noncarcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000414 obstructive effect Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940005483 opioid analgesics Drugs 0.000 description 1
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000004279 orbit Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 230000037040 pain threshold Effects 0.000 description 1
- 230000009996 pancreatic endocrine effect Effects 0.000 description 1
- 210000004923 pancreatic tissue Anatomy 0.000 description 1
- 208000019906 panic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 1
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 1
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 230000009518 penetrating injury Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 108010011903 peptide receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000014187 peptide receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000003516 pericardium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003668 pericyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000006195 perinatal necrotizing enterocolitis Diseases 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091008695 photoreceptors Proteins 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 235000017807 phytochemicals Nutrition 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 229930000223 plant secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 231100000857 poor renal function Toxicity 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000009117 preventive therapy Methods 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 230000002947 procoagulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 201000002212 progressive supranuclear palsy Diseases 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 208000002815 pulmonary hypertension Diseases 0.000 description 1
- 239000003379 purinergic P1 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 210000002254 renal artery Anatomy 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004994 reproductive system Anatomy 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000020874 response to hypoxia Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 1
- 210000004116 schwann cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960002101 secretin Drugs 0.000 description 1
- OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N secretin human Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N 0.000 description 1
- 239000000932 sedative agent Substances 0.000 description 1
- 230000001624 sedative effect Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 208000026775 severe diarrhea Diseases 0.000 description 1
- 231100000872 sexual dysfunction Toxicity 0.000 description 1
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 description 1
- 108091006024 signal transducing proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034285 signal transducing proteins Human genes 0.000 description 1
- 229920000260 silastic Polymers 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001013 sinoatrial node Anatomy 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 101150106357 slc32a1 gene Proteins 0.000 description 1
- 201000002859 sleep apnea Diseases 0.000 description 1
- 208000022925 sleep disturbance Diseases 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000000176 sodium gluconate Substances 0.000 description 1
- 235000012207 sodium gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 229940005574 sodium gluconate Drugs 0.000 description 1
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 description 1
- 208000005198 spinal stenosis Diseases 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 210000003699 striated muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N sulfasalazine Chemical compound C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(\N=N\C=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NC=2N=CC=CC=2)=C1 NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N 0.000 description 1
- 229960001940 sulfasalazine Drugs 0.000 description 1
- NCEXYHBECQHGNR-UHFFFAOYSA-N sulfasalazine Natural products C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(N=NC=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NC=2N=CC=CC=2)=C1 NCEXYHBECQHGNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008054 sulfonate salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 238000011521 systemic chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 201000004415 tendinitis Diseases 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008542 thermal sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000007944 thiolates Chemical class 0.000 description 1
- 229960002784 thioridazine Drugs 0.000 description 1
- 231100000886 tinnitus Toxicity 0.000 description 1
- 229960004402 tiopronin Drugs 0.000 description 1
- 230000019432 tissue death Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 229940099456 transforming growth factor beta 1 Drugs 0.000 description 1
- 229940072041 transforming growth factor beta 2 Drugs 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008736 traumatic injury Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 201000002311 trypanosomiasis Diseases 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 208000009999 tuberous sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 210000005233 tubule cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013976 turmeric Nutrition 0.000 description 1
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021331 vascular occlusion disease Diseases 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000025033 vasoconstriction Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 238000002689 xenotransplantation Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
- A61P33/06—Antimalarials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/505—Erythropoietin [EPO]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
Настоящее изобретение относится к новым тканезащитным пептидам. Тканезащитные пептиды согласно изобретению могут связываться с тканезащитным рецепторным комплексом. В частности, настоящее изобретение относится к тканезащитным пептидам, полученным из частей лигандов рецепторов цитокинов, включая эритропоэтин (ЕРО), или имеющим с ними общие консенсусные последовательности, при этом такие части не вовлечены в связывание лиганда с рецепторным комплексом, например с гомодимером рецептора ЕРО. Соответственно, тканезащитные пептиды согласно изобретению получают из аминокислотных последовательностей областей лигандов рецепторов цитокинов, которые обычно расположены в области белка лиганда, которая находится на противоположной стороне от рецепторного комплекса, т.е. обычно получают из аминокислотных последовательностей областей белка лиганда, которые повернуты в другую сторону от рецепторного комплекса в то время, когда лиганд связан с рецептором. Кроме того, изобретение относится к консенсусным последовательностям для применения в конструировании синтетического тканезащитного пептида. Указанные тканезащитные пептиды также включают фрагменты, химеры, а также пептиды, сконструированные для имитации пространственной локализации ключевых аминокислотных остатков в лигандах тканезащитных рецепторов, например ЕРО. В объем изобретения также входят способы лечения или профилактики заболевания или расстройства с использованием тканезащитных пептидов согласно настоящему изобретению. Изобретение также охватывает способы усиления функции возбудимой ткани с использованием тканезащитных пептидов
Description
Настоящее изобретение относится к новым тканезащитным пептидам. Тканезащитные пептиды согласно изобретению могут связываться с тканезащитным рецепторным комплексом. В частности, настоящее изобретение относится к тканезащитным пептидам, полученным из частей лигандов рецепторов цитокинов, включая эритропоэтин (ЕРО), или имеющим с ними общие консенсусные последовательности, при этом такие части не вовлечены в связывание лиганда с рецепторным комплексом, например с гомодимером рецептора ЕРО. Соответственно, тканезащитные пептиды согласно изобретению получают из аминокислотных последовательностей областей лигандов рецепторов цитокинов, которые обычно расположены в области белка лиганда, которая находится на противоположной стороне от рецепторного комплекса, т. е. получают из аминокислотных последовательностей областей белка лиганда, которые повернуты в другую сторону от рецепторного комплекса в то время, когда лиганд связан с рецептором. Кроме того, изобретение относится к консенсусным последовательностям для применения в конструировании синтетического тканезащитного пептида. Указанные тканезащитные пептиды также включают в себя фрагменты, химеры, а также пептиды, сконструированные для имитации пространственной локализации ключевых аминокислотных остатков в лигандах тканезащитных рецепторов, например ЕРО.
В объем изобретения также входят способы лечения, профилактики или улучшения состояния при заболевании или расстройстве и/или способы лечения, регенерации или уменьшения повреждения ткани с использованием тканезащитных пептидов согласно настоящему изобретению. Изобретение также охватывает способы усиления функции возбудимой ткани с использованием тканезащитных пептидов согласно настоящему изобретению.
2. Уровень техники
Эритропоэтин (ЕРО) является гликопротеидным гормоном, который обычно связывают с поддержанием гематокрита, а в последнее время - с защитой тканей. Зрелый белок ЕРО человека содержит 165 аминокислот и имеет молекулярную массу 34 кД, при этом гликозильные остатки составляют около 40 мас.% молекулы. Молекула ЕРО содержит четыре спирали, которые взаимодействуют посредством своих гидрофобных доменов с образованием преимущественно глобулярной структуры в водном окружении (С11сс111аш с1 а1., 1998, №11. 81гис1. ΒίοΙ. 5:861-866, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Изобретение осуществлено на основании открытия того, что некоторые аминокислоты, направленные в сторону водной оболочки (т. е. в сторону от гидрофобного центрального ядра глобулы), опосредуют защиту ткани. Пептиды могут быть получены или сконструированы на основании сведений о тканезащитных областях, которые были идентифицированы заявителями.
Как указано выше, ЕРО является плюрипотентным. При осуществлении своей гормональной функции ЕРО регулирует гематокрит благодаря той роли, которую он играет в созревании эритроидных клеток-предшественников в эритроциты. ЕРО действует в качестве противоапоптозного агента в ходе процесса созревания эритроидных клеток-предшественников, обеспечивая возможность созревания клетокпредшественников в эритроциты. Пониженные уровни кислорода в тканях (гипоксия) запускают повышенную продукцию эритропоэтина почками, что приводит к усилению эритропоэза. Поскольку почки в норме продуцируют большую часть эритропоэтина сыворотки, нарушение функции почек, такое как хроническая почечная недостаточность, приводит к пониженной продукции ЕРО и часто приводит к анемии. Подобным образом, анемия может возникать в результате других хронических состояний, таких как злокачественная опухоль, или способов лечения, связанных с такими заболеваниями, например, в результате химиотерапии, которая непосредственно подавляет продукцию ЕРО. Имеется коммерчески доступный рекомбинантный эритропоэтин торговых марок РК.ОСК1Т, доступный из Ог11ю Вю1есй. 1пс., Вагйаи, N1, и ΕΡΟΟΕΝ, доступный из Атдеп, 1пс., Тйоикапб Оакк, СА, и такой эритропоэтин использовали для лечения анемии, возникающей на конечной стадии заболевания почек, в результате лечения ΑΖΤ (зидовудином) ВИЧ-инфицированных пациентов, онкологических больных и в результате химиотерапии. В настоящее время имеется гипергликозилированный эритропоэтин, ΑΚΑ.ΝΕ8Ρ™ (Атдеп, Тйоикапб Оакк, СА), для лечения анемии. Кроме того, указанные соединения использовали для повышения гематокрита у пациентов, подвергаемых хирургическим операциям, чтобы уменьшить потребность в переливаниях аллогенной крови.
Недавно полученные данные показали, что ЕРО также функционирует локально паракриноаутокринным путем, минимизируя повреждение ткани. Например, ЕРО улучшает микроокружение клеток при гипоксии и снижает запрограммированную гибель клеток, вызванную метаболическим стрессом. Обе указанные активности частично опосредованы взаимодействием ЕРО со специфическим рецептором клеточной поверхности, в состав которого входит белок рецептора эритропоэтина (ЕРОВ). ЕРОВ является белком с молекулярной массой около 66 кД и является представителем семейства рецепторов цитокинов типа 1. Данное семейство включает в себя рецепторы, которые сгруппированы вместе на основе общей гомологии их внеклеточных доменов, и включает рецепторы интерлейкина 1Ь-2, 1Ь-3, 1Ь-4, 1Ь-5, 1Ь-6, 1Ь-7, 1Ь-9, 1Ь-11, колониестимулирующего фактора гранулоцитов и макрофагов (СМ-С8Е), колониестимулирующего фактора гранулоцитов (С-С8Е), ингибирующего лейкоз фактора (ЫЕ), цилиарного нейротрофического фактора (ί'ΝΤΡ). тромбопоэтина, гормона роста и пролактина. Консервативный внеклеточный домен указанных рецепторов имеет длину примерно 200 аминокислот, содержит четыре кон
- 1 015672 сервативных по своему положению остатка цистеина в аминоконцевой области (Су8 294, Суз 283, Суз 248 и Су8 238, которые, по-видимому, важны для поддержания и структурной целостности рецепторов (Миггау, 1996, Нагрегз Вюсйет181ту, 24'1' еб. р. 524-526, Άρρίΐίοη аиб Ьаиде, Пб.; Сагауе11а е! а1., 1996, Рго!еш: 81гис!. Риис!. Сел. 24:394-401, каждая публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме)) и мотив Тгр-8ег-Х-Тгр-8ег (8ЕО ΙΌ N0:58), расположенный вблизи трансмембранного домена.
В связи с эритропоэзом ЕРОВ функционирует подобно другим рецепторам в семействе рецепторов цитокинов типа 1. Во-первых, лиганд рецептора, например ЕРО, связывается с предварительно образуемым димером ЕРОВ, (ЕРОВ)2. Было определено, что ЕРО взаимодействует с внеклеточным доменом классического гомодимерного рецептора (ЕРОВ)2 посредством двух отдельных областей на поверхности лиганда: высокоаффинный участок связывания с рецептором (участок 1) и низкоаффинный участок связывания с рецептором (участок 2). Аминокислотные последовательности ЕРО, связанные с участком ,1 представляют собой последовательность ΤΚνΝΡΥ, 8Е0 ΙΌ N0:2, соответствующую аминокислотам 4449 в 8Е0 ΙΌ N0:1, и последовательность 8№ЬВС, 8Е0 ΙΌ N0:3, соответствующую аминокислотам 146-151 в 8Е0 ΙΌ N0:1; последовательности, связанные с участком 2, представляют собой последовательность νΕΡΒΥ. 8Е0 ΙΌ N0:4, соответствующую аминокислотам 11-15 в 8Е0 ΙΌ N0:1, и 8СБВ8, 8Е0 ΙΌ N0:5, соответствующую аминокислотам 100-104 в 8Е0 ΙΌ N0:1 (СйееШат е! а1., 1998, №1Шге 81гис!ига1 Вю1оду, 5:861-866, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Активация гомодимера ЕР0В приводит к фосфорилированию тирозина сигнальных белков, которые связаны с ЕР0В, например тирозинкиназ 1ак2, которые, в свою очередь, могут активировать несколько разных путей, включая, например, путь киназы фосфатидилинозитола (ΓΙ) 3, путь Ваз/МАР-киназы и/или путь 8ТАТ. Указанные пути запускают противоапоптозные функции, необходимые для эритропоэза, которые опосредованы эритропоэтином (Кш!о е! а1., 2002, В1ооб. 99:102-110; Ыуиай е! а1., 1999, 8с1еисе. 283:987-990; №гаиба е! а1., 2002, Еибосгшо1о§у. 143:2293-2302; Вету е! а1., 1999, 8с1еисе. 283:990-993 и Υοδίιίιηιιπι е! а1., 1996, Тйе 0исо1од18!. 1:337-339, каждая публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме).
Недавно авторы изобретения обнаружили, что тканезащитные свойства ЕРО опосредованы рецептором, который содержит не только ЕР0В, но также другой белок рецептора, общий рецептор бета (вс). Рецептор ЕР0В/[% в отличие от гомодимера (ЕР0В)2 является гетерокомплексом (см. ниже) и, как известно, играет роль в защите возбудимых тканей. См., например, XV0 2004/096148 и РСТ № РСТ/и801/49479, поданную 28 декабря 2001 г., заявку на выдачу патента США № 09/753132, поданную 29 декабря 2000 г., и заявку 10/188905, поданную 3 июля 2002 г., каждая публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме. Хотя авторы изобретения установили, что вс-рецептор является центральным рецептором путей тканевой защиты таких возбудимых тканей, структура активирующих лигандов для рецепторов еще неизвестна.
3. Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к изолированным полипептидам, которые обладают по меньшей мере одной защищающей клетки активностью в отношении чувствительной клетки, ткани или органа, и такие полипептиды содержат аминокислотные мотивы, включающие в себя консенсусную последовательность (а) ^-^-(Х^-^-Н^ где и равно 0, 1, 2, 3, 4 или 5; (Ь) Н^^ДХ^-^-Ь!, где и равно 0, 1, 2, 3, 4 или 5; (с) Б^^ДХ^-^-^, где и равно 0, 1, 2, 3, 4 или 5; (б) Н^^ДБ^-Р^Н^ где и равно 0 или 1; или (е) Н1-Р1-(Ь)и-Н1-Н2, где и равно 0 или 1, и где Н1 и Н2 означают гидрофобные аминокислоты, N1 и N означают отрицательно заряженные аминокислоты, X означает любую аминокислоту, Б1 означает полярную аминокислоту и Р1 означает положительно заряженную аминокислоту. В некоторых вариантах пептиды согласно изобретению также не обладают эритропоэтической активностью, например не повышают содержание гемоглобина или гематокрит у реципиента. В следующих вариантах изолированные полипептиды согласно изобретению состоят не более чем из 10, не более чем из 15, не более чем из 20 или не более чем из 30 аминокислот. В других вариантах изолированный пептид обладает менее чем 90%, менее чем 85%, менее чем 80%, менее чем 75%, менее чем 70%, менее чем 65%, менее чем 60%, менее чем 55%, менее чем 50%, менее чем 45%, менее чем 40%, менее чем 35%, менее чем 30% или менее чем 20%-ной идентичностью последовательности с любой частью аминокислотной последовательности зрелого эритропоэтина (ЕРО) человека, указанной в 8Е0 ΙΌ N0:1, при этом указанная часть ЕРО содержит такое же количество аминокислотных остатков, что и указанный пептид.
В некоторых вариантах осуществления изобретения, описанных выше, в которых изолированный полипептид содержит структурный мотив (а) Н1-Н1-(Х)и-Н2-Н2, где и равно 0, 1, 2, 3, 4 или 5 (указанный последовательностями с идентификационными номерами 6-11 соответственно, которые обсуждаются ниже); (Ь) Н1-Н1-(Е)и-Р1-Н2, где и равно 0 или 1 (указанный последовательностями с идентификационными номерами 24-25 соответственно, которые обсуждаются ниже); или (е) Н1-Р1-(Е)и-Н1-Н2, где и равно 0 или 1 (указанный последовательностями с идентификационными номерами 26-27 соответственно, которые обсуждаются ниже), Н1 и Н2 могут быть одной и той же гидрофобной аминокислотой. В других вариантах осуществления изобретения, описанных выше, в которых изолированный полипептид содержит
- 2 015672 структурные мотивы (а) Η1-Ν1-(Χ)η-Ν2-Η2, где η равно 0, 1, 2, 3, 4 или 5; (ά) Η1-Ν1-(Ε)η-Ρ1-Η2, где η равно 0 или 1; или (е) Η1-Ρ1-(Ε)η-Ν1-Η2, где η равно 0 или 1, Η1 и Н2 могут представлять собой разные гидрофобные аминокислоты. В других вариантах изобретение относится к изолированному полипептиду, содержащему аминокислотный мотив (а) Η1Ν1-(Χ)η-Ν2-Η2, где η равно 0, 1, 2, 3, 4 или 5; (Ь) Η1-Ν1-(Χ)η-Ν2Ь1, где η равно 0, 1, 2, 3, 4 или 5; (с) Ε1-Ν1-(Χ) η-Ν2-Η1, где η равно 0, 1, 2, 3, 4 или 5, и где Ν1 и Ν2 могут означать одну и ту же или разные отрицательно заряженные аминокислоты.
Изобретение относится к изолированным полипептидам, содержащим аминокислотные мотивы, описанные выше, при этом указанные мотивы образованы следующими друг за другом аминокислотами в аминокислотной последовательности указанного полипептида. В конкретных примерах согласно данному варианту изобретение относится к изолированному полипептиду, содержащему аминокислотный мотив
Η1-Ν1-Ν2-Η2 (ЗЕ<2 ТО N0:6), Ηχ-Νχ-Χ-Ν2-Н2 (3Εζ) ТО N0:7), Ηχ-Νχ-Χ-Χ-Ν2-Η2 (ЗЕ<Э ТО N0:8), Ηχ-Νχ-Χ-Χ-Χ-Ν2-Η2 (3ΕΩ ТО N0:9), Ηχ-Νχ-Χ-Χ-Χ-Χ-Ν2-Η2 (ЗЕО ТО ΝΟ: 10) , Ηχ-Νχ-Χ-Χ-Χ-Χ-Χ-Ν2-Η2 (ЗЕ<2 ТО N0:11) , Ηχ-Νχ-Ν2-Εχ (5Е0 ТО N0:12) , Ηχ-Νχ-Χ-Ν2-Εχ (ЗЕ<2 ΙΌΝΟ:13), Ηχ-Νχ-Χ-Χ-Ν2-Ει (ЗЕО ТО N0:14), Ηχ-Νχ-Χ-Χ-Χ-Ν2-Βχ (ЗЕ<2 ТО N0:15), Ηχ-Νχ-Χ-Χ-Χ-Χ-^-Σχ (ЗЕО ТО N0:16), Н1-Ы1-Х-Х-Х-Х-Х-И2-Ь1(ЗЕ0 ТО N0 :17), Εχ-Νχ-Ν2-Η2 (ЗЕО ТО N0:18) , Εχ-Νχ-Χ-Ν2-Η2 (3Εζ) ТО N0 :19), Ь1-Ых-Х-Х-И2-Н2 (ЗЕ<2 ТО N0:20), Εχ-Νχ-Χ-Χ-Χ-Ν2-Η2 (ЗЕ<2 ТО N0:21), Εχ-Νχ-Χ-Χ-Χ-Χ-Ν2-Η2 (ЗЕ<2 ТО N0: 22), 1ιχ-Νχ-Χ-Χ-Χ-Χ-Χ-Ν2-Η2 (ЗЕ<2 ТО N0:23), Ηχ-Νχ-Ρχ-Η2 (3ΕΩ ТО N0 : 24 ), Ηχ-Νχ-Ι>ι-Ρχ-Η2 (ЗЕ<2 ТО N0:24), Ηχ-Νχ-Ι>χ-Ρχ-Η2 (ЗЕО ТО N0: 25) , Ηχ-Ρχ-Νχ-Η2 ( ЗЕ<2 10 N0 : 26) или Ηχ-Ρχ-Εχ-Νχ-Η;, (ЗЕО ТО N0: 27), где Η1 и Н2 означают гидрофобные аминокислоты;
Ν1 и Ν2 означают отрицательно заряженные аминокислоты;
Χ означает любую аминокислоту;
Ь1 означает полярную аминокислоту;
Р1 означает положительно заряженную аминокислоту.
В некоторых аспектах, соответствующих данному варианту, в которых изолированный полипептид содержит мотив, имеющий аминокислотные остатки Η1 и Н2, Η1 и Н2 могут быть одинаковыми или могут быть разными гидрофобными аминокислотами. В других аспектах, соответствующих данному варианту, в которых изолированный полипептид содержит мотив, имеющий аминокислотные остатки Ν1 и Ν2, Ν1 и Ν2 могут быть одинаковыми или могут быть разными отрицательно заряженными аминокислотами.
В других вариантах осуществления изобретение относится к изолированным полипептидам, в которых аминокислотный мотив образован благодаря пространственной организации аминокислот в третичной структуре полипептида, т.е. аминокислоты, образующие мотив, пространственно близки друг другу в трехмерной структуре, т. е. в третичной структуре, полипептида, но могут быть разделены одной или несколькими аминокислотами в первичной аминокислотной последовательности полипептидной цепи. В конкретном примере согласно данному варианту аминокислотный мотив, содержащий аминокислотные остатки Η1, Ν1, Ν2 и Н2, аналогичный последовательности 8ЕО ΙΌ Ν0:6, обсуждаемой выше, может образоваться в результате формирования третичной структуры, принимаемой, например, благодаря белковой укладке пептидов, содержащих, например, последовательности 8 ЕЕ) ГО Ν0:7, 8ЕО ГО Ν0:8, 8ЕО ГО Ν0:9, 8ЕО ГО Ν0:10 или 8ЕО ГО Ν0:11, в которых аминокислотные остатки между Ν1 и Ν2, например (Х)п, подвергаются укладке таким образом, что Ν1 и Ν2 становятся линейно близкими. Соответственно, изобретение охватывает изолированные пептиды, содержащие аминокислотный мотив Η1Ν1Ν2Η2; Η1Ν1Ν2Ε1; Ε1Ν1Ν2Η1; Η1Ν1(Ε)ηΡ1Η2, где η равно 0 или 1; или Η1Ρ1(Ε)ηΝ1Η2, где η равно 0 или 1, и указанные мотивы образуются в результате формирования третичной структуры указанного полипептида. В родственных вариантах, в которых аминокислотный мотив содержит Ν1 и Ν2, третичные структуры образуются так, что расстояние между карбонильными атомами углерода Ν1 и Ν2 составляет примерно от 3 до 5 А, предпочтительно примерно от 4 до 5 А и более предпочтительно примерно от 4,4 до 4,8 А. В других вариантах осуществления, в которых аминокислотный мотив содержит Ν1 и Ν2, третичные структуры образуются так, что расстояние между Ν1 и Ν2 пространственно ограничено, так что расстояние, разделяющее заряды, например заряженные боковые цепи двух аминокислот, составляет примерно от 6,5 до 9 А. В родственном варианте Ν1 и Ν2 соответственно пространственно ограничены в результате того, что они находятся в аминокислотной последовательности, которая образует всю или часть альфа-спирали, и могут быть разделены 1, 2 или более чем 2 аминокислотами в последовательности указанных аминокислот, образующей указанную спираль. В других родственных вариантах, в которых аминокислотный мотив содержит Ν1 и Ρ1, третичные структуры образуются так, что расстояние между карбонильными атомами углерода Ν1 и Р1 составляет примерно от 3 до 5 А, предпочтительно примерно от 4 до 5 А и более предпочтительно примерно от 4,4 до 4,8 А. В других вариантах, в которых аминокислотный мотив содержит Ν1 и Ρ1, третичные структуры образуются так, что расстояние между Ν1 и Ρ1 пространственно ограничено, так что расстояние, разделяющее заряды, например заряженные боковые цепи
- 3 015672 двух аминокислот, составляет примерно от 6,5 до 9 А. В родственном варианте N1 и Р1 пространственно ограничены в результате того, что они находятся в аминокислотной последовательности, которая образует всю или часть α-спирали, и могут быть разделены 1, 2, или более чем 2 аминокислотами в последовательности указанных аминокислот, образующих указанную спираль. В некоторых вариантах аминокислоты, образующие мотив в третичной структуре указанного полипептида, отделены друг от друга одинаковым количеством промежуточных аминокислотных остатков в линейной аминокислотной последовательности указанного полипептида. В других вариантах аминокислоты, образующие мотив в третичной структуре указанного полипептида, отделены друг от друга разным количеством промежуточных аминокислотных остатков в линейной аминокислотной последовательности указанного полипептида. В некоторых вариантах изолированный полипептид согласно изобретению образует регулярную третичную структуру, например α-спираль или β-складчатый слой, так что поверхность указанной структуры представлена аминокислотами, составляющими указанный мотив, и таким образом мотив как таковой направлен к границе раздела структуры белка и водного окружения, т.е. представлена мотивом на поверхности подвергнутого укладке полипептида. В предпочтительных вариантах третичные структуры полипептидов согласно изобретению образуются в водной среде в физиологических условиях, например в РВ8 (13 мМ ΝαΗ2ΡΟ4, 137 мМ №С1, рН 7,4) при 37°С.
В конкретных вариантах изобретение относится к изолированным полипептидам, содержащим аминокислотные мотивы, описанные выше, например пептид А (АРРВЬ1СП8ВУЬЕВУЬЕЕАКЕАЕ, 8ЕО ΙΌ N0:32);
пептид С (МТ\Т1)ТК\Л'Е¥А\\'КК\1ЕУС1. 8ЕЕ) ΙΌ N0:29);
пептид Ό (00А¥Е¥АО6ЕАЕЕ8ЕА¥ЕЕ6ОАЕЕ¥. 8ЕЕ) ΙΌ N0:30);
пептид Е (С1САЕНС8ЕМ'ЛТТ¥Р1)ТК\Л'. 8ЕЕ) ΙΌ N0:31);
пептид Е (К¥ЕЕЕМТТС,С. 8ЕЕ) ΙΌ N0:33);
пептид 6 (0Е0ЕЕКАЕЖ8. 8ЕЕ) ΙΌ N0:40);
пептид Ι (С’8^NЕNI^Е^^ЕКА^N88. 8ЕЕ) ΙΌ N0:43);
пептид 1 ((>Е)ЕЕ1КМЛ'88Е1Ш¥М\1ЕТЕТК. 8ЕЕ) ΙΌ N0:41);
пептид К (^ЕНУт^ЕАВВБЬ, 8ЕЕ) ΙΌ N0:35) или пептид Б (КП^ЕЕТАЕТЕ^АЗК Е 8ЕЕ) ΙΌ N0:37).
В некоторых вариантах изобретение относится к изолированным полипептидам, содержащим 1 или более, 2 или более, 3 или более, 4 или более, 5 или более, 6 или более или более чем 6 аминокислотных мотивов, описанных в данной публикации. В конкретных аспектах изобретения в соответствии с данным вариантом, в которых изолированный полипептид содержит по меньшей мере два аминокислотных мотива, описанных выше, указанные по меньшей мере два мотива могут быть одинаковыми мотивами или могут быть разными мотивами.
В некоторых аспектах изобретение относится к изолированным полипептидам, не обладающим эритропоэтической активностью, например не увеличивающим уровень гемоглобина у реципиента. Предпочтительно изолированные полипептиды не обладают другими активностями, включая без ограничения вазоактивное действие (например, сужение кровеносных сосудов), гиперактивацию тромбоцитов, прокоагулянтные активности и стимуляцию пролиферации и/или продукции тромбоцитов и/или зависимых от эритропоэза клеток (см. Со1етап с1 а1., 2006, ΡNА8, 103:5965-5970, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). В других аспектах изобретение относится к изолированным полипептидам, которые обладают по меньшей мере одной защитной в отношении клеток активностью. Такая защитная в отношении клеток активность включает без ограничения защиту, сохранение, усиление или восстановление функции или жизнеспособности чувствительной клетки, ткани или органа млекопитающего. Соответственно, в одном аспекте настоящее изобретение относится к применению изолированного полипептида, охарактеризованного в данном описании, для получения фармацевтических композиций для защиты, сохранения, усиления или восстановления функции или жизнеспособности чувствительных клеток, тканей или органов млекопитающих. В родственных вариантах композиции предназначены для введения нуждающемуся в таком введении субъекту. В предпочтительных вариантах указанным субъектом является млекопитающее и предпочтительно человек.
В других аспектах настоящее изобретение относится к применению изолированного полипептида, охарактеризованного в данном описании, для получения фармацевтической композиции для защиты и/или предотвращения повреждения чувствительной ткани, для восстановления или для обновления чувствительной ткани и/или чувствительной функции ткани у нуждающегося в этом субъекта. В одном конкретном аспекте чувствительные клетки млекопитающих и связанные с ними клетки, ткани или органы являются дистальными в отношении сосудистой сети из-за плотного барьера, состоящего из эндотелиальных клеток. В другом конкретном аспекте клетки, ткани, органы или другие части тела выделены от организма млекопитающего, например предназначены для трансплантации. В качестве не ограничивающих примеров чувствительная клетка или ткань может представлять собой нейронную клетку или ткань, клетку или ткань глаза (например, сетчатки), жировую, соединительную, клетку или ткань волоса, зубов, слизистой оболочки, поджелудочной железы, эндокринную, уха, эпителиальную, кожи, мышц, сердца,
- 4 015672 легкого, печени, почки, кишечника, надпочечника (например, коры надпочечников, мозгового вещества надпочечников), капилляров, эндотелия, семенников, яичника, костей, кожи или эндометрия. Кроме того, не ограничивающие примеры чувствительных клеток включают фоторецепторы (палочки и колбочки), клетки нервного узла, биполярные, горизонтальные, амакринные, Мюллеровские, Пуркинье, миокарда, водителя ритма, синусно-предсердного узла, синусового узла, соединительной ткани, атриовентрикулярного узла, пучка Гиса, гепатоциты, звездчатые, Купфера, мезангиальные, эпителиальные клетки почек, тубулярные интерстициальные, бокаловидные, кишечных крипт, эндокринные клетки кишечника, клетки клубочковой зоны, клетки пучковой зоны, ретикулярные, хромаффинные, перициты, Лейдига, Сертоли, сперматозоиды, Граафовых пузырьков, примордиальных фолликулов, островков Лангерганса, α-клетки, β-клетки, γ-клетки, Г-клетки, остеогенные клетки-предшественники, остеокласты, остеобласты, стромы эндометрия, эндометриальные, стволовые и эндотелиальные клетки. Указанные примеры чувствительных клеток являются только иллюстративными. В одном аспекте чувствительные клетки или связанные с ними клетки, ткани или органы представляют собой возбудимые клетки, ткани или органы или преимущественно включают возбудимые клетки или ткани. В некоторых аспектах изобретения возбудимой тканью является ткань центральной нервной системы, ткань периферической нервной системы, ткань сердца или ткань сетчатки. В другом аспекте чувствительная клетка или связанные с ней клетки, ткани или органы являются невозбудимыми клетками, тканями или органами либо они преимущественно не содержат возбудимых клеток или тканей.
Эритропоэтическая и/или защищающая клетки активность изолированного полипептида согласно изобретению в отношении чувствительных клеток можно оценить и/или определить любым способом, охарактеризованным в данном описании и/или известным в данной области. В некоторых вариантах эритропоэтическую и/или защищающую клетки активность определяют в анализе ίη νίίτο. В других вариантах эритропоэтическую и/или защищающую клетки активность определяют в анализе ίη νίνο. В родственном варианте, в котором защищающая клетки активность представляет собой нейропротекцию, изобретение относится к способу оценки указанной активности ίη νίίτο посредством (а) осуществления контакта тестируемой культуры первичных нейронов гиппокампа с Ν-метил-Э-аспартатом и указанным пептидом и (Ь) определения жизнеспособности клеток через 48 ч после указанного контакта, при этом если жизнеспособность клеток, определяемая на стадии (Ь), выше, чем в контрольной культуре в отсутствие указанного пептида, то пептид обладает защищающей клетки активностью.
В конкретном варианте клетка, ткань или орган млекопитающего, в отношении которых применяют указанный выше изолированный пептид, представляют собой клетку, ткань или орган, которые в течение определенного периода времени подверглись или будут подвергаться воздействию по меньшей мере одного состояния, неблагоприятного для жизнеспособности клетки, ткани или органа. В соответствии с данным вариантом изолированные пептиды согласно изобретению обеспечивают защиту и/или предотвращают повреждение ткани, возникающее в результате таких состояний, обеспечивают восстановление или обеспечивают обновление ткани и/или функции ткани у нуждающегося в этом субъекта до, во время или после возникновения таких состояний. Такие состояния включают вызванную травмой гипоксию ίη Щи или метаболическую дисфункцию, индуцированную хирургическим вмешательством гипоксию ίη 511и или метаболическую дисфункцию или воздействие токсина ίη 5ΐίη. последнее может быть связано с химиотерапией или лучевой терапией. В других вариантах изолированные пептиды согласно изобретению обеспечивают защиту и/или предотвращают повреждение ткани, возникающее в результате заболевания или расстройства, обеспечивают восстановление или обеспечивают обновление ткани и/или функции ткани у нуждающегося в этом субъекта до, во время или после возникновения таких состояний. В родственных вариантах указанное повреждение вызвано эпилепсией, рассеянным склерозом, инсультом, гипертонией, остановкой сердца, ишемией, инфарктом миокарда, воспалением, связанной с возрастом потерей когнитивной функции, радиационным поражением, церебральным параличом, нейродегенеративным заболеванием, болезнью Альцгеймера, болезнью Паркинсона, митохондриальным заболеванием, связанной со СПИДом деменцией, потерей памяти, боковым амиотрофическим склерозом, алкоголизмом, расстройством настроения, тревожным расстройством, синдромом нарушения внимания, аутизмом, болезнью Крейтцфельда-Якоба, травмой или ишемией головного или спинного мозга, искусственным кровообращением, хронической сердечной недостаточностью, дегенерацией желтого пятна, диабетической нейропатией, диабетической ретинопатией, гепатитом, панкреатитом, глаукомой, ишемией сетчатки, травмой сетчатки, сердечно-сосудистым заболеванием, сердечно-легочным заболеванием, респираторным заболеванием, болезнью почек, болезнью мочевой системы, заболеванием репродуктивной системы, заболеванием костей, кожной болезнью, заболеванием соединительной ткани, желудочнокишечным заболеванием, эндокринным нарушением, метаболическим нарушением или заболеванием или расстройством центральной или периферической нервной системы. В других вариантах неблагоприятные состояния являются результатом применения экстракорпорального кровообращения (аппарата искусственного кровообращения), которое используют при некоторых хирургических операциях. В других вариантах указанное повреждение представляет собой когнитивную дисфункцию. В конкретном варианте клетка, ткань или орган млекопитающего, в отношении которого применяют указанный выше
- 5 015672 изолированный пептид, экспрессируют (С-рсцсптор.
В некоторых вариантах изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные выше изолированные полипептиды для введения субъекту, нуждающемуся в таком введении. В конкретных аспектах данного варианта фармацевтическая композиция согласно изобретению дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель. Такие фармацевтические композиции могут быть приготовлены для орального, интраназального, глазного, ингаляционного, трансдермального, ректального, подъязычного, вагинального или парентерального введения или в форме перфузируемого раствора для поддержания жизнеспособности клеток, тканей или органов ех νίνο. В родственных вариантах осуществления изобретения субъектом является млекопитающее, предпочтительно человек.
В других аспектах изобретение относится к способу облегчения трансцитоза молекулы через барьер из эндотелиальных клеток у нуждающегося в этом субъекта, который включает в себя введение указанному субъекту композиции, содержащей указанную молекулу, связанную с изолированным пептидом согласно изобретению, описанным выше. В родственном варианте связь представляет собой лабильную ковалентную связь, стабильную ковалентную связь или нековалентное связывание с участком связывания для указанной молекулы.
Согласно другому аспекту изобретения изолированный пептид согласно изобретению, описанный выше, способен преодолевать барьер эндотелиальных клеток. В родственном варианте барьер эндотелиальных клеток включает в себя гематоэнцефалический барьер, гематоофтальмический барьер, гематотестикулярный барьер, гематоовариальный барьер, гематоплацентарный барьер, барьер кровь-сердце, кровь-почки, кровь-нервы или кровь-спинной мозг.
Согласно одному аспекту изобретения предлагается изолированная молекула нуклеиновой кислоты, которая содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид, содержащий описанный выше изолированный полипептид.
В другом варианте осуществления изобретения предлагается изолированная молекула нуклеиновой кислоты, которая содержит нуклеотидную последовательность (т.е. кДНК, нуклеотидную последовательность, прерываемую интронами или непрерываемую интронами), которая кодирует полипептид, содержащий или состоящий из изолированного полипептида согласно изобретению, который описан выше. В одном варианте нуклеотидную последовательность, кодирующую изолированный полипептид согласно изобретению, синтезируют, используя предпочтительные кодоны, которые способствуют оптимальной экспрессии в конкретной клетке-хозяине. Такие предпочтительные кодоны могут быть оптимальными для экспрессии в клетках определенного вида растений, бактерий, дрожжей, млекопитающих, грибов или насекомых.
Изобретение также относится к вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты. Изобретение также относится к экспрессирующему вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты и по меньшей мере одну регуляторную область, оперативно связанную с молекулой нуклеиновой кислоты. В другом варианте изобретение относится к клетке, содержащей экспрессирующий вектор. В еще одном варианте предлагается генетически сконструированная клетка, которая содержит молекулу нуклеиновой кислоты.
В другом варианте изобретение относится к способу рекомбинантного получения изолированного пептида согласно изобретению, который описан выше, включающему в себя культивирование в среде клетки-хозяина, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, которая содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид согласно изобретению, в условиях, подходящих для экспрессии указанного пептида, и извлечение и/или выделение экспрессированного полипептида из указанной среды.
3.1. Терминология.
В используемом в данном описании смысле термины около или примерно при использовании в сочетании с числом относятся к любому числу в пределах 1, 5 или 10% от указанного числа.
Термин вводимый в сочетании с в контексте способов согласно изобретению означает введение соединения до, одновременно и/или после начала заболевания, расстройства или состояния.
Подразумевается, что термин аминокислота или любое указание конкретной аминокислоты включают встречающиеся в природе протеогенные аминокислоты, а также не встречающиеся в природе аминокислоты, такие как аналоги аминокислот. Специалистам в данной области будет понятно, что такое определение, если не оговорено особо, включает встречающиеся в природе протеогенные (Ь)-аминокислоты, их оптические (О)-изомеры, химически модифицированные аминокислоты, включая аналоги аминокислот, такие как пеницилламин (3-меркапто-О-валин), встречающиеся в природе непротеогенные аминокислоты, такие как норлейцин, и химически синтезированные белки, которые обладают свойствами, которые, как известно в данной области, характерны для аминокислоты.
В используемом в данном описании смысле аминокислоты будут обозначены либо трехбуквенным сокращением, либо однобуквенным символом следующим образом: аланин = А1а или А, аргинин = Агд или В, аспарагин = Акп или Ν, аспарагиновая кислота = Акр или Ό, цистеин = Сук или С, глутаминовая кислота = С1и или Е, глутамин = С1п или О. глицин = С1у или С, гистидин = Ηίκ или Н, изолейцин = Не или I, лейцин = Ьеи или Ь, лизин = Ьук или К, метионин = Ме1 или М, фенилаланин = Р11С или Е, пролин = Рго или Р, серин = Бег или 8, треонин = ТНг или Т, триптофан = Тгр или ^, тирозин = Туг или Υ и валин
- 6 015672 = Уа1 или V.
Кроме того, термин эквивалент аминокислоты относится к соединениям, которые отличаются по структуре от встречающихся в природе аминокислот, но которые, по существу, имеют структуру аминокислоты, так что ими можно заменить аминокислоту в пептиде, который при этом сохраняет свою биологическую активность, несмотря на замену. Таким образом, например, эквиваленты аминокислот могут включать аминокислоты, имеющие модификации или замещения боковых цепей, а также включают родственные органические кислоты, амиды или т.п. Подразумевается, что термин аминокислота включает эквиваленты аминокислот. Термин остатки относится как к аминокислотам, так и к эквивалентам аминокислот. Аминокислоты также могут быть отнесены к следующим группам, которые общеизвестны в данной области:
(1) гидрофобные аминокислоты: Н1к, Тгр, Туг, РНе, Ме1, Леи, 11е, να1, А1а;
(2) нейтральные гидрофильные аминокислоты: Сук, 8ег, Тйг;
(3) полярные аминокислоты: 8ег, Тйг, Аки, С1и;
(4) кислый/отрицательно заряженные аминокислоты: Акр, С1и;
(5) заряженные аминокислоты: Акр, С1ц, Агд, Лук, Ηίκ;
(6) положительно заряженные аминокислоты: Агд, Лук, Н1к и (7) основные аминокислоты: Н1к, Лук, Агд.
В используемом в данном описании смысле возбудимая ткань означает ткань, которая содержит возбудимые клетки. Возбудимые клетки представляют собой клетки, которые активно отвечают на электрический стимул и имеют электрический заряд, который отличается с разных сторон их клеточных мембран. Возбудимые клетки обычно способны подвергаться потенциалу действия. Такие клетки обычно экспрессируют каналы, такие как потенциалозависимые, лигандозависимые и зависимые от натяжения каналы, которые позволяют проходить ионам (калия, натрия, кальция, хлорида и т.д.) через мембрану. Возбудимые ткани включают нервную ткань, мышечную ткань и железистую ткань. К возбудимым тканям относятся без ограничения нервные ткани, такие как ткань периферической нервной системы (уха и сетчатки) и центральной нервной системы (головного и спинного мозга); сердечно-сосудистая ткань, такая как клетки сердца и связанных нервов; и железистая ткань, такая как ткань поджелудочной железы, в которой кальциевые каналы Т-типа вместе с щелевидными межклеточными контактами принимают участие в секреции инсулина. Иллюстративный список возбудимых тканей включает органы и ткани, которые включают нервы, скелетные мышцы, гладкую мускулатуру, сердечную мышцу, матку, центральную нервную систему, спинной мозг, головной мозг, сетчатку, обонятельную систему, слуховую систему и т. д.
Термин клетка-хозяин в используемом в данном описании смысле относится к конкретной клетке субъекта, трансфицированной молекулой нуклеиновой кислоты, и к потомству или потенциальному потомству такой клетки. Потомство такой клетки может быть не идентичным родительской клетке, трансфицированной молекулой нуклеиновой кислоты, вследствие мутаций или влияния окружающей среды, которые могут возникать в следующих поколениях, или вследствие интеграции молекулы нуклеиновой кислоты в геном клетки-хозяина.
Изолированный или очищенный полипептид, по существу, не содержит клеточных веществ или других загрязняющих белков из клеточного или тканевого источника, из которого белок или полипептид получают, или, по существу, не содержит химических предшественников или других химических веществ в случае химического синтеза. Формулировка по существу, не содержит клеточных веществ относится к препаратам полипептида, в которых полипептид отделен от клеточных компонентов клеток, из которых его выделяют или в которых его рекомбинантно получают. Таким образом, полипептид, который, по существу, не содержит клеточных веществ, включает препараты полипептидов, имеющие менее чем примерно 30, 20, 10 или 5% (сухой массы) гетерологичного белка (также называемого в данном описании загрязняющим белком). В том случае, когда полипептид получают рекомбинантно, он также предпочтительно, по существу, не содержит культуральной среды, т. е. культуральная среда составляет менее чем примерно 20, 10 или 5% объема препарат белка. В том случае, когда полипептид получают в результате химического синтеза, он предпочтительно, по существу, не содержит химических предшественников или других химических веществ, т. е. отделен от химических предшественников или других химических веществ, которые были использованы в синтезе белка. Соответственно такие препараты полипептида имеют менее чем примерно 30, 20, 10, 5% (сухой массы) химических предшественников или других соединений, отличных от представляющего интерес антитела. В предпочтительном варианте полипептиды согласно изобретению являются изолированными или очищенными.
Изолированная молекула нуклеиновой кислоты представляет собой молекулу, которая отделена от других молекул нуклеиновой кислоты, которые присутствуют в природном источнике молекулы нуклеиновой кислоты. Кроме того, изолированная молекула нуклеиновой кислоты, такая как молекула кДНК, по существу, может не содержать других клеточных веществ или культуральной среды в том случае, если ее получают рекомбинантными способами, или, по существу, не содержать химических предшественников или других химических веществ в случае химического синтеза. В конкретном варианте молекула(лы) нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид согласно изобретению, является изолиро
- 7 015672 ванной или очищенной.
В используемом в данном описании смысле при указании структуры в пределах полипептида термин мотив относится или к набору следующих друг за другом аминокислот в аминокислотной последовательности полипептидной цепи и/или к набору линейно близко расположенных аминокислот в третичной структуре указанного полипептида. Поскольку мотив целиком или частично может быть образован в результате фолдинга белка, то аминокислоты, которые являются соседними в описанном мотиве, могут быть разделены 0, 1 или более, 5 или более, 10 или более, 15 или более или 20 или более аминокислотами в линейной аминокислотной последовательности полипептида.
В используемом в данном описании смысле термины пептид, полипептид и белок используют взаимозаменяемо, и в широком смысле они относятся к ограниченным (т.е. имеющим некоторый элемент структуры, например наличие аминокислот, которые инициируют β-виток или β-складчатый слой, или, например, циклизованным вследствие присутствия связанных дисульфидной связью остатков Сук) или неограниченным (например, линейным) аминокислотным последовательностям. В некоторых вариантах пептид согласно изобретению состоит менее чем из 30 аминокислот. Однако при чтении данного описании специалисту в данной области будет понятно, что не длина конкретного пептида, а его способность связывать тканезащитный рецепторный комплекс и/или конкурировать за связывание с пептидом, охарактеризованным в данном описании, является отличительным признаком пептида согласно изобретению. Термины пептид, полипептид и белок также относятся к соединениям, содержащим эквиваленты аминокислот или другие неаминокислотные группы, но при этом еще сохраняющим требуемую функциональную активность пептида. Эквиваленты пептидов могут отличаться от обычных пептидов заменой одной или нескольких аминокислот родственными органическими кислотами (такими как РАВА), аминокислотами или т.п. или заменой или модификацией боковых цепей или функциональных групп.
Термин профилактика заболевания, расстройства или состояния относится к задержке начала, задержке прогрессирования, задержке проявления, защите, подавлению или исключению возникновения или уменьшению частоты такого заболевания, расстройства или состояния. Использование термина профилактика не означает, что имеется в виду, что у всех пациентов в популяции пациентов, которым проводят профилактическую терапию, никогда не разовьется заболевание, расстройство или состояние, которое является целью профилактики, но в популяции пациентов будет уменьшена частота встречаемости заболевания, расстройства или состояния.
Например, многие вакцины против гриппа не на 100% эффективны для профилактики гриппа у пациентов, которым вводят вакцину. Специалист в данной области легко может идентифицировать пациентов и ситуации, при которых профилактическое лечение может быть полезным, например, но не ограничивая указанным, может идентифицировать людей, которые намереваются осуществлять деятельность, которая может привести к травме и повреждению (например, солдаты, участвующие в военных действиях, водители гоночных автомобилей и т.д.), пациентов, которым запланирована операция, пациентов, для которых существует риск появления наследственных болезней, расстройств или состояний, пациентов, для которых существует риск возникновения заболеваний, расстройств или состояний, обусловленных факторами окружающей среды, или частей популяции, для которых существует риск развития конкретных заболеваний, расстройств или состояний, таких как пожилые люди, новорожденные или люди с ослабленной иммунной системой, или пациенты с генетическими или другими факторами риска развития заболевания, расстройства или состояния.
В используемом в данном описании смысле термины субъект и пациент используют взаимозаменяемо. В используемом в данном описании смысле термины субъект и субъекты относятся к животному, предпочтительно млекопитающему, включая животного, отличного от приматов (например, корова, свинья, лошадь, кошка, собака, крыса и мышь) и примата (например, обезьяна или человек), и более предпочтительно к человеку.
В используемом в данном описании смысле термины защитная по отношению к ткани активность или защита ткани относятся к эффекту ингибирования или отсрочивания повреждения или гибели клетки, ткани или органа. Если не оговорено особо, отсрочивание повреждения или гибели клетки, ткани или органа оценивают по сравнению с контрольными условиями в отсутствие пептида согласно изобретению. Защитная по отношению к ткани активность применима для различных состояний, заболеваний и повреждений клетки, органа и/или ткани, которые, например, описаны в разделе 5.3. Защитная в отношении ткани активность специфична для ткани, клеток и/или органов, экспрессирующих тканезащитный рецепторный комплекс (т.е. для чувствительной ткани, клетки и/или органа соответственно), таких как, без ограничения, ткани центральной нервной системы. В конкретных вариантах чувствительные клетки не являются клетками-предшественниками эритроцитов.
Термин тканезащитный рецепторный комплекс в используемом в данном описании смысле означает комплекс, содержащий по меньшей мере одну субъединицу рецептора эритропоэтина и по меньшей мере одну общую β-субъединицу рецептора. Тканезащитный рецепторный комплекс может содержать несколько субъединиц рецептора эритропоэтина и/или общих бета-субъединиц рецептора, а также дру
- 8 015672 гие типы рецепторов или белков. См. XVО 2004/096148, которая включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме.
Чтобы определить процент идентичности двух аминокислотных последовательностей, последовательности выравнивают в целях оптимального сравнения. Затем сравнивают аминокислотные остатки в соответствующих положениях аминокислот. Если положение в первой последовательности занято таким же аминокислотным остатком, что и соответствующее положение во второй последовательности, то молекулы идентичны по данному положению. Идентичность в процентах между двумя последовательностями является функцией количества идентичных положений в последовательностях (т.е. % идентичности = количество идентичных совпадающих положений/общее количество положений х 100%). В одном варианте две последовательности имеют одинаковую длину. В альтернативном варианте последовательности имеют разную длину, и соответственно идентичность в процентах относится к сравнению более короткой последовательности с частью более длинной последовательности, при этом указанная часть имеет такую же длину, как и указанная более короткая последовательность.
4. Краткое описание чертежей
На фиг. 1 изображены результаты, полученные на модели повреждения седалищного нерва ίη νίνο при сравнении эффективности пептида 1 (ЗЕО ΙΌ N0:41) с тканезащитной молекулой карбамилированного ЕРО (СЕРО), при этом пептид 1 (ЗЕО ΙΌ N0:41) является химерным пептидом, состоящим из аминокислот, расположенных на наружной поверхности спирали В ЕРО (т.е. пептид О, ЗЕО ΙΌ N0:40), объединенных с амфипатической спиралью из панкреатического полипептида (ΕΚΚ.ΥΙΝΜΕΤΚΡ, ЗЕО ΙΌ N0:28).
На фиг. 2 изображено тканезащитное влияние пептидов согласно изобретению, которые тестировали в модели повреждения седалищного нерва ίη νίνο. В анализе повреждали правый седалищный нерв у крыс (η=6 на группу) и животному немедленно вводили дозы РВЗ или РВЗ, содержащего равные молярные концентрации карбамилированного ЕРО, пептида А ЕРО (ЗЕО ΙΌ N0:32, соответствующего аминокислотам 1-23 последовательности ЗЕО ΙΌ N0:1), пептида Ό (ЗЕО ΙΌ N0:30, соответствующего аминокислотам 58-82 последовательности ЗЕО ΙΌ N0:1) или пептида О (ЗЕО ΙΌ N0:40). Пептид О (ЗЕО ΙΌ N0:40) основан на аминокислотах в пределах спирали В ЕРО, которые направлены в наружную сторону от глобулярного центра молекулы ЕРО в гидрофобную среду, т. е. находятся на поверхности полипептида. Кроме того, в качестве негативного контроля включали 20-мер, сконструированный из области фактора, полученного из пигментного эпителия, который, как известно, является тканезащитным, действуя посредством другого рецептора. Восстановление после повреждения в течение следующих 4 суток показывает, что пептид О (ЗЕО ΙΌ N0:40) и пептид Ό (ЗЕО ΙΌ N0:30) оказывают тканезащитное действие в указанном анализе на модели ίη νίνο, которое эквивалентно или лучше, чем действие карбамилированного ЕРО (СЕРО).
На фиг. 3 изображено эритропоэтическое действие пептида Ό (ЗЕО ΙΌ N0:30) и СЕРО, у которого, как известно, отсутствует эритропоэтическая активность, которые тестировали в ϋΤ-7-анализе эритропоэтической активности. Результаты указанного анализа ίη νίίτο показывают, что ни пептид Ό (ЗЕО ΙΌ N0:30), ни СЕРО не обладают эритропоэтической активностью в дозах до 10000 пМ.
На фиг. 4 изображены результаты анализа ίη νίνο для определения того, являются ли пептид Р (ЗЕО ΙΌ N0:33, соответствующий аминокислотам 14-29 ЗЕО ΙΌ N0:1), и пептид О (ЗЕО ΙΌ N0:40) эритропоэтическими и не вызывают ли нейтрализацию антител против ЕРО. Результаты показывают, что ни один из белков не повышает уровни гемоглобина у крыс при введении в дозе 0,8 мкг/кг 3 дня/неделю подкожно (п/к) в течение курса продолжительностью 130 дней. Кроме того, ни один из пептидов не вызывал гуморального ответа, в отличие от введения ЕРО.
На фиг. 5 изображены результаты исследований ίη νίίτο, которые показывают, что пептид Ό (ЗЕО ΙΌ N0:30) защищает мотонейроны от индуцированной каинатом гибели.
На фиг. 6 показано, что пептид Ό (ЗЕО ΙΌ N0:30, в дозах 0,1 и 1 нг/мл защищает клетки Р-19 от апоптоза, связанного с лишением клеток сыворотки.
На фиг. 7А, 7В изображены результаты анализа окклюзии средней мозговой артерии у крыс.
На фиг. 7А изображен график, показывающий, что пептид Ό (ЗЕО ΙΌ N0:30) соответствующий аминокислотам 58-82 последовательности ЗЕО ΙΌ N0:1) в однократной дозе 4,4 мкг/кг способен уменьшать объем инфаркта головного мозга также эффективно, как четыре дозы 4,4 мкг/кг, вводимые с 2-часовыми интервалами.
На фиг. 7В изображены результаты анализа промахов стопы, чтобы определить расстройство поведения, вызванное окклюзией средней мозговой артерией. На фиг. 7В показано, что крысы демонстрировали исправление поведения при введении пептида Ό (ЗЕО ΙΌ N0:30) как при схеме с использованием однократной дозы (1х4,4 мкг/кг), так и при схеме с многократными дозами (4х4,4 мкг/кг).
- 9 015672
На фиг. 8А, 8В изображены результаты анализа ίη νίνο диабетической невропатии. Диабет индуцируют у крыс, используя стрептозотоцин. После подтверждения индуцированного диабета крыс лечили пептидом Ό (8ЕО ГО N0:30) или РВ8 пять раз в неделю в дозе 4 мкг/кг массы тела в/б в течение двух недель. Регистрировали скорость проводимости нерва и задержку между стимулом и реакцией на горячую пластинку у крыс.
На фиг. 8А показано, что у крыс, обработанных пептидом Ό (8Е0 ГО N0:30) наблюдаются повышенные скорости проводимости по сравнению с необработанными крысами.
На фиг. 8В показано, что задержка между стимулом и реакцией на горячую пластинку у обработанных крыс была уменьшена по сравнению с необработанными крысами, что дополнительно свидетельствует о повышении скорости проводимости.
На фиг. 9А, 9В изображены результаты лечения индуцированной цисплатином невропатии химерой спирали В ЕРО.
На фиг. 9А показано, что у животных, обработанных пептидом О (ЪЕО ГО N0:40), химера спирали В) наблюдаются улучшенные результаты при тестировании в анализе задержки между сигналом и реакцией на горячую пластинку.
На фиг. 9В показано, что мочеотделение, являющееся мерой почечной функции, сохранялось на уровне нормы у животных, обработанных пептидом О (δΕΟ ГО N0:40).
На фиг. 10 изображено влияние пептида Ό (8Е0 ГО N0:30) на просачивание в сетчатке, связанное с диабетической ретинопатией. На фигуре показано, что пептид Ό (8Е0 ГО N0:30) способен значительно снижать просачивание в сетчатке у обработанных животных.
На фиг. 11 изображены результаты, полученные при использовании пептида Е (8Е0 ГО N0:33) или пептида О (δΕΟ ГО N0:40) в модели ишемии-реперфузии почек. На фигуре показано, что оба пептида уменьшали оценку в баллах повреждения, возникающего в результате 60-минутной ишемиирепурфионного повреждения, определяемую через 72 ч.
На фиг. 12 показано, что введение пептида Е (δΕΟ ГО N0:33) защищает мышей от экспериментальной церебральной малярии.
Фиг. 13. Клинический показатель в мышиной модели ЕАЕ после обработки пептидом Е (δΕΟ ГО N0:31). На фиг. 13 изображено клиническое течение неврологической функции у мышей с экспериментальным аутоиммунным энцефаломиелитом. 4,4 мкг/кг пептида Е вводили в/б ежедневно. Введение пептида Е значимо улучшало неврологическую функцию по сравнению с контролем. Клинические стадии: 1 - поникший хвост; 2 - атаксия и/или паралич задних конечностей или медленный рефлекс выпрямления; 3 - паралич задних конечностей и/или паралич передних конечностей; 4 - парез передних конечностей; 5 - агония или гибель.
5. Подробное описание изобретения
5.1. Тканезащитные пептиды.
Эритропоэтическая активность эритропоэтина (ЕРО) хорошо охарактеризована в данной области (см., например, СЕееФат е! а1., 1998, №11. δίιυοΐ. ΒίοΙ. 5:861-866, публикация включена в виде ссылки в полном объеме). ЕРО инициирует эритропоэз посредством связывания с внеклеточной частью предварительно образованного гомодимера рецептора эритропоэтина (ЕР0К.) (т.е. (ЕР0К.)2) таким образом, что он образует мостик между специфичными положениями на отдельных субъединицах ЕР0К.. Когда ЕРО связывается с (ЕР0К)2, крупные части глобулярного лиганда удаляются от областей связывания и поворачиваются наружу, в сторону от комплекса ЕРО и (ЕР0К.)2 в водную среду. Авторы изобретения определили, что защита ткани, в отличие от эритропоэза, опосредована другим рецептором, отличным от (ЕР0К.)2, который состоит из мономера ЕР0Р. связанного с другим рецептором, СО 131 (также известным как общая β-субъединица рецепторов (β0)). ЕР0К. и β0 взаимодействуют с образованием рецепторного гетеродимера, ЕР0К.-вс. В настоящее время не известно, вовлечены ли другие белки в указанное взаимодействие. Настоящее изобретение относится к тканезащитным пептидам, полученным из трехмерной структуры ЕРО, и, в частности, из частей ЕРО, направленных в сторону от участков связывания ЕР0К, т.е. не взаимодействующих с классическим эритропоэтическим гомодимером ЕР0К. (ЕР0К)2. Не имея намерения быть связанными с какой-либо конкретной теорией, авторы изобретения полагают, что указанная часть молекулы ЕРО взаимодействует с тканезащитным рецептором и, тем самым, опосредует защиту ткани.
Общепринята трехмерная структура ЕРО, которая описана в СЕее1Еат е! а1., 1998, N11. δίπκΐ. Βίο1. 5:861-866, включенной в данном описании в виде ссылки в полном объеме, и указана в виде последовательности δΒ<3 ГО N0:1 (также доступна в виде данных, депонированных в банке данных о белках №Юопа1 СеШег £ог Вю1есЕпо1о§у 1п£огтайоп, доступ ΙΒυΥ). Части молекулы ЕРО, которые направлены в сторону от проксимальной по отношению к мембране части гомодимера ЕР0К. при связывании с указанным рецептором (т.е. в сторону от клеточной мембраны, когда гомодимер (ЕР0К)2 экспрессирован на поверхности клетки), состоят из следующих вторичных структур: петля АВ (соответствующая аминокислотам 29-55 последовательности δΗρ ГО N0:1), спираль В (соответствующая аминокислотам 56-82 последовательности δΗρ ГО N0:1), петля ВС (соответствующая аминокислотам 83-92 последовательно
- 10 015672 сти БЕР ΙΌ N0:1) и петля СЭ (соответствующая аминокислотам 112-138 последовательности БЕР ΙΌ N0:1). В одном варианте осуществления изобретения тканезащитные пептиды состоят из аминокислотных последовательностей, соответствующих последовательностям различных структур молекулы ЕРО.
Не имея намерения быть связанными с какой-либо теорией, авторы изобретения полагают, что тканезащитный рецептор образуется заранее, т.е. что белковые субъединицы ЕРОВ и функционально связываются до их взаимодействия с ЕРО. ЕРО является членом надсемейства цитокинов типа I. Члены ветви надсемейства цитокинов типа Ι характеризуются наличием четырех спиралей, которые гидрофобно взаимодействуют, образуя глобулярный белок, наружная поверхность которого взаимодействует с водной средой, и ее называют направленной наружу. Неожиданно авторы изобретения обнаружили, что не один, а несколько пептидов, полученных из направленной наружу части молекулы ЕРО, являются тканезащитными. Следующее неожиданное открытие заключается в том, что пептиды, полученные из частей молекулы ЕРО, которые погружены в комплекс ЕРО:(ЕРОВ)2, и пептиды, которые также могут содержать части участков 1 или 2 связывания при эриптропоэзе, также являются высокоэффективными в защите ткани. Чтобы объяснить указанные открытия, авторы изобретения предположили, что успешная активация тканезащитного рецептора обусловлена подходящей пространственно компактной конфигурацией зарядов в пептидном лиганде. Кроме того, такая компактная конфигурация зарядов формируется двумя различными структурными мотивами: (1) двумя отрицательно заряженными аминокислотами, расположенными рядом друг с другом и фланкированными гидрофобными аминокислотами; или (2) положительно и отрицательно заряженными (т.е. основной и кислотной) аминокислотами, расположенными непосредственно рядом друг с другом и фланкированными одним гидрофобным или полярным аминокислотными остатками. Близость таких зарядов может возникать благодаря линейной структуре, обусловленной образованием пептидных связей, т. е. структура может быть образована следующими друг за другом аминокислотами в полипептидной цепи, или альтернативно близость также может возникать в результате пространственной взаимосвязи между различными частями молекулы ЕРО (или других молекул, родственных цитокину типа I), обусловленной третичной структурой белка, т.е. трехмерной структурой. Не имея намерения быть связанными с какой-либо конкретной теорией, авторы изобретения полагают, что, в общем, такое требование предполагает, что тканезащитный пептид будет иметь определенную третичную структуру (например, спирали или складчатые слои), которая обеспечивает требуемую пространственную локализацию пары заряженных аминокислот (т.е. двух отрицательно заряженных аминокислот и/или положительно и отрицательно заряженных аминокислот). Простым исключением является линейный пептид, в котором аминокислоты в паре расположены непосредственно рядом друг с другом, имеющий требуемую жесткость, придаваемую пептидным остовом. Соответственно, структурный мотив (1) подпадает под линейную последовательность аминокислотных остатков, например Η1-Ν1-Ν1-Η2 (БЕр ΙΌ N0:6), или линейную последовательность аминокислотных остатков, в которой N1 и N разделены 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более промежуточными остатками, например Н1-^-Х-Х-Х-Х-Х-^-Н2 (БЕР ΙΌ N0:11).
Для защиты ткани пара заряженных аминокислот должна быть пространственно ориентирована так, чтобы карбонильные атомы углерода находились на расстоянии друг от друга примерно от 3 до 5 А, предпочтительно примерно от 4 до 5 А друг от друга и более предпочтительно примерно от 4,4 до 4,8 А друг от друга. Это может быть достигнуто несколькими путями, например за счет соседних заряженных аминокислот в простом линейном пептиде (см., например, пример 2 и пептид О, БЕР ΙΌ N0:40, в табл. 1) или в случае пептидов, которые могут образовывать альфа-спираль, за счет заряженных аминокислот, разделенных промежуточным аминокислотным остатком (см., например, пример 2 и пептид Е, БЕр ΙΌ N0:33, в табл. 1). Необходимо отметить, что третичная структура (например, альфа-спираль в амфипатических пептидах) также может быть образована в том случае, когда пептид находится в специфичном микроокружении, таком как на границе раздела внеклеточного пространства и мембраны клеточной поверхности (см., БсдгсЧ. 1990, Рго1ет8. 8:103-117, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме).
Кроме того, защитная в отношении ткани активность прогнозируется для пептидов, которые содержат пары заряженных аминокислот, так, что заряженные боковые цепи (либо положительно и отрицательно заряженные, либо две отрицательно заряженные) находятся в пространстве в ограниченных пределах примерно от 6,5 до 9 А друг от друга. Это может быть в условиях альфа-спирали благодаря тому, что заряженные члены пары разделены одной или двумя аминокислотами, что обеспечит нахождение зарядов более или менее на одной и той же стороне спирали на требуемом разделяющем их расстоянии примерно от 6,5 до 9 А. Не ограничивающим примером такого пептида является пептид Е (см. пример 2, БЕр ΙΌ N0:33 в табл. 1). Специалист в данной области может определить третичную структуру пептида, которая, в общем, требуется для получения подходящего трехмерного положения заряженных аминокислот, а также конструкцию небольших молекул для имитации разделения зарядов в пептиде.
Расстояния в пространстве между карбонильными атомами углерода любых двух аминокислот или между боковыми цепями любых двух аминокислот можно рассчитать любым способом, известным в данной области или описанным в данной публикации. Например, когда известна трехмерная структура
- 11 015672 белка, разделение зарядов двух боковых цепей или расстояние в пространстве между двумя карбонильными атомами углерода в представляющей интерес части указанного белка могут быть рассчитаны на основании опубликованных или иначе принятых в данной области трехмерных координат аминокислотных остатков в указанной представляющей интерес части. В том случае, когда трехмерная структура белка, и поэтому представляющей интерес части, неизвестна или когда конструируют полностью синтетический пептид на основе приведенного в данном описании руководства, трехмерная структура которого неизвестна, разделение зарядов двух боковых цепей или расстояние в пространстве между двумя карбонильными атомами углерода в указанном пептиде можно оценить с использованием трехмерной структуры, рассчитанной с помощью компьютерной программы моделирования белков, которая известна в данной области. Не ограничивающими примерами такой компьютерной программы являются МОЕ™, СЬет1са1 СотрнИпц Огоир (РиеЬес, Сапаба) и Мобе1ег Ьу Ассе1гуз (8ап О1едо, СаШогта). Подобным образом в данной области также известна компьютерная программа для прогнозирования, также доступная от указанных выше компаний, для конструирования малых молекул, и соответственно специалист в данной области на основании приведенных в данном описании инструкций мог бы получить небольшие молекулы, которые имитируют описанные структурные мотивы.
Могут быть сконструированы не встречающиеся в природе или химерные пептиды, которые имитируют необходимую пространственную близость, описанную выше, посредством линейной последовательности аминокислот. Поэтому настоящее изобретение относится к новым тканезащитным пептидам, включая пептиды, которые имеют указанные структурные мотивы, которые приводят в действие защиту ткани.
Настоящее изобретение также относится к применению тканезащитных фрагментов других цитокинов типа I, включая без ограничения, колониестимулирующий фактор гранулоцитов и макрофагов (ОМ-С8Е), интерлейкин-3 (1Ь-3), тромбопоэтин (ТРО), цилиарный нейротрофический фактор ^ΝΤΓ) и ингибирующий лейкоз фактор (ЫЕ), которые структурно гомологичны указанным выше направленным наружу аминокислотным последовательностям ЕРО и/или содержат описанные выше структурные мотивы.
Кроме того, тканезащитные пептиды могут представлять собой химерные соединения, основанные на структурных мотивах, описанных выше, объединяющие структурные элементы, которые не являются соседними, и только аминокислоты, представленные на поверхности. В частности, авторы изобретения определили, что добавление амфипатической пептидной спирали к указанным выше последовательностям увеличивает эффективность пептида.
Кроме того, тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению включают слитые пептиды, образованные в результате объединения двух или более указанных выше пептидов или объединения с родственной или неродственной макромолекулой для специфичного транспорта, такой как нативный ЕРО, инсулин или лептин.
5.1.1. Фрагменты.
А. Полученные из ЕРО пептидные фрагменты.
Настоящее изобретение относится к новым тканезащитным пептидам, которые в одном варианте состоят из фрагментов аминокислотных последовательностей ЕРО, полученных на основании трехмерной структуры белка ЕРО, и, в частности, получены из таких областей ЕРО, которые направлены в сторону от участков связывания лиганда и/или внутренней части гомодимера ЕРОК. Указанные фрагменты получают из следующих структур ЕРО:
(1) петля АВ и Ν-концевая часть спирали В (\'1ТУРОТКУ\'ЕУААККМЕУС, 8ЕР ГО NΟ:29, соответствующая аминокислотам 38-57 последовательности 8ЕР ГО NΟ:1);
(2) С-концевая часть спирали В ((ЭСЭ.АУЕААУСЭСтЕ/АЛАЕ.АУЕКСКЭ.АЕЕУ, 8ЕР ГО NΟ:30, соответствующая аминокислотам 58-82 последовательности 8ЕР ГО NΟ:1) и (3) часть петли А-В, состоящая из небольшой цистеиновой петли и β-складчатого слоя (ОСΑΕΗС8^NΕNIΤУΡ^ΤКУN, 8ЕР ГО NΟ:31, соответствующая аминокислотам 28-47 последовательности 8Е(Э ГО ^:1).
Все указанные пептидные фрагменты, как описано в примере 2 (см. фиг. 1 и табл. 1), обладают тканезащитными свойствами.
Неожиданно некоторые пептиды, полученные из других областей молекулы ЕРО, которые скрыты, и другие пептиды, которые содержат части участков связывания с (ЕРОК)2, также являются тканезащитными. Например, пептид, состоящий из Ν-концевой части спирали А (ЛРРКЪ1СРЗКУЕЕКУЬЬЕАКЕАЕ, 8ЕР ГО NΟ:32, соответствующая аминокислотам 1-23 последовательности 8ЕР ГО NΟ:1), которая содержит часть участка 2 связывании ЕРОК (подчеркнута), является тканезащитным (см. пример 2 и табл. 1). Однако присутствие аминокислот участка 2 не объясняет защитной в отношении ткани активности, так как пептид, состоящий из аминокислот 14-19 последовательности 8ЕР ГО NΟ:1 (К УЕЕЕ.АКЕ.АЕУ'ЕТТОС, 8ЕР ГО NΟ:33) и не содержащий аминокислот 11-13 последовательности 8ЕР ГО NΟ:1 (т.е. УЬЕ; аминокислоты участка 2, которые необходимы для связывания ЕРО с димером ЕРОК, (ЕРОК)2), также является тканезащитным (см. пример 2 и табл. 1, также ЕИюК е! а1., 1997, В1ооб
- 12 015672
89:493, публикация включена в данное описание в виде сслыки в полном объеме). Авторы изобретения ранее показали, что мутации в участках связывания при эритропоэзе, которые аннулируют эритропоэз, не модифицируют тканезащитные свойства ЕРО (Εβίδΐ е! а1. 8е1епее (2004), 305:239, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме).
Специалисту в данной области будет понятно, что тканезащитный пептид могут образовывать фрагменты разной длины, хотя предпочтительно фрагмент имеет длину менее 30 аминокислот. Кроме того, тщательный отбор других молекул для включения, например Ώ-аминокислот или полиэтиленгликоля, также позволит получить тканезащитные пептиды, но с увеличенным биологическим временем полужизни.
В. Структурные мотивы.
В частности, были идентифицированы следующие структурные мотивы, которые приводят в действие тканезащитный рецепторный комплекс.
(a) Конфигурация отрицательных зарядов (структурный мотив А).
В данном структурном мотиве пептид имеет две отрицательно заряженные аминокислоты, которые могут быть разделены 5 аминокислотами, фланкированные гидрофобными аминокислотами. Структурно мотив можно представить в виде:
(а1) ΗΝΝΗ;
(а2) ΗΝΧΝΗ;
(аЗ) ΗΝΧΧΝΗ;
(а4) ΗΝΧΧΧΝΗ;
(а5) ΗΝΧΧΧΧΝΗ; или (аб) ΗΝΧΧΧΧΧΝΗ, где Н означает гидрофобные аминокислоты (например, умеренно гидрофобные аминокислоты: глицин, пролин, цистеин, тирозин и триптофан и предпочтительно высокогидрофобные аминокислоты: аланин, валин, изолейцин, метионин, лейцин, фенилаланин);
N означает отрицательно заряженные аминокислоты, такие как глутамат или аспартат;
X означает любую аминокислоту, хотя предпочтительно гидрофильную аминокислоту.
В некоторых вариантах фланкирующие гидрофобные аминокислоты являются одинаковыми. В других вариантах фланкирующие аминокислоты являются разными.
Вариант указанного структурного мотива включает пептид, в котором одна из фланкирующих гидрофобных аминокислот была заменена полярной аминокислотой, такой как серин, треонин, аспарагин или глутамин.
В качестве альтернативы пептидным связям, создающим взаимную близость двух отрицательных зарядов в линейной последовательности, необходимая близость зарядов также может быть создана благодаря трехмерной структуре, которая обсуждается выше (раздел 5.1). Например, отрицательно заряженные аминокислоты могут непосредственно соседствовать в пространстве на внешней поверхности спирали, но будут разделены дополнительными аминокислотами в линейной последовательности пептида. Например, в спирали А ЕРО (соответствующей аминокислотам 10-28 в последовательности 8Ε^ ГО N0:1), Е18 и Е21 находятся рядом в трехмерной структуре, но между ними имеются две промежуточные аминокислоты в линейной пептидной последовательности. В качестве дополнительного примера в спирали В (пептид I) (8Ε^ ГО N0:30; соответствующий аминокислотам 58-82 последовательности 8Ε^ ГО N0:1) Е62 и Е72 разделены двумя аминокислотами ^65 и Е69) на поверхности спирали, но между ними имеется 9 аминокислот в линейном пептиде. Пептиды, сконструированные из спирали А или спирали В, являются тканезащитными (см. пример 2 и табл. 1 ниже). В отличие от этого, пептид В (Ы1ТТССАЕНСЗШЕ, щ N0:34), пептид со сдвоенными отрицательными зарядами (подчеркнуты) на соответствующем расстоянии, но не имеющий фланкирующих гидрофобных аминокислот, не является тканезащитным (см. пример 2 и табл. 1 ниже).
(b) Конфигурация отрицательной/положительной аминокислот (структурный мотив В).
В данном структурном мотиве пептид имеет положительно заряженную аминокислоту вблизи отрицательно заряженной аминокислоты, и обе заряженные аминокислоты фланкированы одной и той же гидрофобной аминокислотой. Структурно мотив можно представить в виде:
(Ы) ΗΝΡΗ; или (Ь2) ΗΡΝΗ, где Р означает положительно заряженную аминокислоту, такую как аргинин, лизин или гистидин;
N означает отрицательно заряженную аминокислоту - глутамат или аспартат.
Как и в первом мотиве, взаимная близость двух противоположных зарядов может быть создана благодаря трехмерной структуре. Например, положительно и отрицательно заряженные аминокислоты могут быть пространственно близки на поверхности спирали, но будут разделены одной или несколькими аминокислотами в линейной пептидной последовательности. Например, в спирали В (соответствующей аминокислотам 58-82 в последовательности 8Ε^ ГО N0:1) Е72 и К76 непосредственно соседствуют друг с другом на внешней поверхности спирали, и пептид, сконструированный из такой спирали, является
- 13 015672 тканезащитным (см. пример 2 и табл. 1).
В варианте такого конкретного мотива отрицательно и положительно заряженные аминокислоты могут быть разделены полярной аминокислотой, например (ЬЗ) ΗΝΊιΡΗ;
(Ь4) НР1ЛН, где Е означает полярную аминокислоту, такую как серин, треонин, аспарагин или глутамин.
Примером такого мотива является пептид Е (ЕСАЕНС8ЪЫЕК1ТУРртКУЫ, щ νο:34)5 который является тканезащитным (см. пример 2 и табл. 1).
Учитывая, что ядро указанного выше структурного мотива имеет длину, равную четырем аминокислотам, пептид с ядром в виде такого структурного мотива может приводить в действие тканезащитный рецептор. В некоторых вариантах полипептиды согласно изобретению содержат 1 структурный мотив. В альтернативных вариантах полипептиды согласно изобретению содержат более 1, более 2, более 3 или более 4 структурных мотивов. В некоторых вариантах, в которых полипептид содержит по меньшей мере два структурных мотива, мотивы являются одинаковыми. В альтернативных вариантах, в которых полипептид содержит по меньшей мере два структурных мотива, мотивы являются разными. Предпочтительно множество пептидов согласно настоящему изобретению, которые специалист в данной области может создать, имеют длину менее 30 аминокислот.
Специалисту в данной области будет понятно, что указанные выше структурные мотивы, в противоположность реальной аминокислотной последовательности ЕРО, являются важными для настоящего изобретения. Таким образом, специалисту в данной области будет понятно, что изолированный пептид может иметь менее чем 90, менее чем 85, менее чем 80, менее чем 75, менее чем 70, менее чем 65, менее чем 60, менее чем 55, менее чем 50, менее чем 45, менее чем 40, менее чем 35, менее чем 30 или менее чем 20%-ную идентичность последовательности с любой частью аминокислотной последовательности зрелого эритропоэтина (ЕРО) человека, указанной в 8ЕЕ) ΙΌ N0:1, при этом указанная часть ЕРО содержит такое же количество аминокислотных остатков, что и указанный пептид.
Кроме того, в патенте США № 5700909, О'Впеп е1 а1. (который включен в данное описание в виде ссылки в полном объеме) описана 17-аминокислотная пептидная последовательность ЕРО (8ЕР ΙΌ N0:11, О'Впеп), которая индуцирует биологическую активность в клетках Ν820Υ, 8Κ-Ν-Μ0 и РС12, включая прорастание, дифференцировку, нейрозащиту и предотвращение гибели нейронов. Последовательность 8ЕЕ) ΙΌ N0:11 согласно О'Впеп (названная эпопептидом АВ), хотя и заявлена как последовательность, предположительно обладающая эритропоэтической активностью, в действительности не обладает такой эритропоэтической активностью и, как было обнаружено позже, не обладает активностью ΐπ νΐνο. Когда эпопептид АВ инъецировали в мышцу мышей, частота прорастания концевой пластинки двигательного нерва в расположенные рядом мышцы возрастала подобно тому, как это происходит при индукции цилиарным нейротрофическим фактором. Полученные данные объяснимы в рамках представления о том, что нейронные (но не гематологические) клетки отвечают на пептидную последовательность в пределах ЕРО и что ЕРО может иметь отдельные домены для нейротрофической и гематотрофической активности (Сатрапа е! а1., Ιπΐ. 1. Μο1. Меб. (1998), 1(1):235-241; 1.8. О'Впеп в патенте США № 5700909, выданном 23 декабря 1997 г.; 1.8. О'Впеп в патенте США № 5571787, выданном 5 ноября 1996 г.; 1.8. О'Впеп в патенте США № 5714459, выданном 3 февраля 1998 г.; и 1.8. О'Впеп апб Υ. Ка§Ъ1то1о в патенте США № 5696080, выданном 9 декабря 1997 г.). Однако О'Впеп не рассматривал структурные мотивы, предлагаемые в настоящем изобретении, основанные на близости заряженных аминокислот в третичной структуре пептида.
С. Фрагменты цитокина типа 1.
Учитывая пространственно компактную конфигурацию зарядов, способную активировать тканезащитный рецептор, авторы изобретения обнаружили, что некоторые фрагменты цитокинов типа 1 предположительно перекрестно взаимодействуют с тканезащитным рецептором. Такое семейство цитокинов включает без ограничения интерлейкин Ш-2, Ш-3, Ш-4, Ш-5, Ш-6, Ш-7, Ш-9, 1Ш-10,Ш-11, колониестимулирующий фактор гранулоцитов и макрофагов (СМ-С8Е), лептин, колониестимулирующий фактор гранулоцитов (С-С8Е), ингибирующий лейкоз фактор (ΕΙΕ), цилиарный нейротрофический фактор ^ΝΤΕ), тромбопоэтин (ТРО), гормон роста, колониестимулирующий фактор макрофагов (М-С8Е), эритропоэтин (ЕРО) и пролактин.
Рассмотрение вторичной структуры ЕРО является руководством для получения кандидата тканезащитных пептидов с помощью пространственного расположения аминокислот, полученных на основе гомологичных аминокислот, локализованных в гомологичных вторичных структурах в других лигандах рецепторов цитокинов типа 1: например, было показано, что среди прочих СМ-С8Е и Ш-3 (Каппап, 2000, №иго1ттипотоб. 8:132-141, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме) обладают высокими нейротрофическими и нейрозащитными активностями, в основном, как полагают авторы изобретения, вследствие стимуляции тканезащитного рецептора. Например, при рассмотрении спирали В цитокинов типа I видно: гомологичные аминокислоты в тромбопоэтине (ТРО; Рго1ет 1)а1а Вапк (ΡϋΒ), доступ 1Υ7Μ) включают (365, Т68, Е69, А76 и (^)80, при этом указанные амино- 14 015672 кислоты находятся в пространстве рядом друг с другом в линейном расположении; гомологичные аминокислоты в ингибирующем лейкоз факторе (ΕΙΕ; ΡΌΒ, доступ 1ЕМК) включают К64, Υ68, 872, N75 и Ι2Ζ2; гомологичные аминокислоты в цилиарном нейротрофическом факторе (ΟΝΤΕ; ΡΌΒ, доступ 1ΟΝΤ) включают Ε71, Все примеры являются примерами мотива А, описанного выше (раздел
5.1.1), где подчеркнутые аминокислоты являются отрицательно заряженными.
Примеры пептидов, полученных из цитокинов типа 1, которые являются примером структурного мотива В, охарактеризованного в данном описании выше (раздел 5.1.1), включают без ограничения
Фрагмент А-спирали см~сзр' (зео ιυ ко: з5). фрагмент А_спирали ТРО,
ЪЗКЬЬКРЗНУЬН (ЗЕО Ю КТКЗРЬТАЪТЕ 3 УУКН (3 Е<2 цр, ЕТЕКАКЬУЕЬУНТУУУЬ
N0:36). фрагмент В-спирали ТРО: Е56, К59; фрагмент А-спирали ΟΝΤΕ, Ю N0:37) . фрагмент В-спирали ΟΝΤΕ: К.89, Е92, фрагмент В-спирали (ЗЕ(2 ю N0:38) и фрагмент А-спирали интерлейкина 3 (ΙΣ-3)
51М1РЕ11ННЬКРРРЫРЬ (5ЕО ΙΌ N0:39)
Указанные выше аминокислоты являются только примерами из нескольких членов надсемейства цитокинов, которые передают сигнал через рецепторы цитокинов типа 1, и специалист в данной области легко сможет идентифицировать гомологичные области в других членах надсемейства цитокинов.
5.1.2. Химеры.
Химерные тканезащитные пептиды - линейные аминокислотные последовательности, которые содержат нелинейные структурные элементы направленных наружу аминокислот молекулы ЕРО и имеют указанные выше структурные мотивы, - также входят в объем настоящего изобретения. Химерные тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению могут состоять из объединенных в одном пептиде структурных элементов отдельных аминокислотных последовательностей. Другими словами, химерный тканезащитный пептид может состоять из аминокислотных последовательностей, полученных из нелинейных, но расположенных рядом структурных элементов, таких как фрагмент, полученный из аминокислотных последовательностей 110-115, 133-136 и 160-165 последовательности ВЕР ΙΌ N0:1, который может обеспечить возможность контактирования структурных элементов С-концевой части спирали С и Ν-концевой части петли С-Ό, β-складчатого слоя в петле С-Ό и С-концевой части ЕРО в одном пептиде. Кроме того, химерные тканезащитные пептиды могут быть использованы для отбора важных характерных признаков конкретной структуры, например направленных наружу аминокислот конкретной третичной структуры. Таким образом, химерный тканезащитный пептид может состоять из фрагмента, состоящего из аминокислот спирали В 58, 62, 65, 69, 72, 76, 79, 80, 83, 84 и 85 (например, пептид О, ΟΕΟΕΕΚΛΕΝ88, ВЕО ΙΌ N0:40) или, другими словами, из всех представленных с наружной стороны аминокислот спирали В ЕРО. Данный пептид является тканезащитным, как показано в примере 2 ниже (см. табл. 1).
Кроме того, эффективность тканезащитных пептидов согласно изобретению может быть увеличена посредством связывания амфипатической пептидной спирали. Амфипатические пептидные спирали хорошо известны в данной области, например спирали из пептидов, которые передают сигнал через сопряженные с О-белком рецепторы класса В (например, Ведгез! е! а1., 1990, Рго1ешз. 8:103, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме), служащие для локализации пептидного лиганда на клеточной мембране. Примеры таких спиралей включают без ограничения высокогидрофобные области из кальцитонина (АЕВП.УЕЕрАСВ, ВЕО ΙΌ N0:48); кортиколиберина (УАЕЕРСРРСКА, ВЕр ΙΌ N0:49); бета-эндорфина ^АПКтУККС, ВЕр ΙΌ N0:50); глюкагона (СВУ ШВЕС1 )ТЕ, ВЕР ΙΌ N0:51); секретина (ССВААКРАРР, ВЕР ΙΌ N0:52); вазоинтестинального полипептида (NА^АЕN^ΤРΥΥ, ВЕр ΙΌ N0:53); нейропептида Υ (ОАЛАЕАУРВКР, ВЕр ΙΌ N0:54); гонадолиберина 1ССВВС1АУВУСЕ. ВЕр ΙΌ N0:55); паратиреоидного гормона (УМГУМЬАСЕЬ, ВЕр ΙΌ N0:56); панкреатического полипептида (Е1К1К УШМЕТКР, ВЕР ΙΌ N0:28) и пептида, ассоциированного с геном кальцитонина (ЕАЕВЕЕУЕУРА, ВЕР ΙΌ N0:57) (описанного в Огасе е! а1., 2004, РNАВ. 101:12836, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Например, химерный пептид, полученный из пептида с поверхностным мотивом зарядов спирали В ЕРО (ОЕОЕЕКАЕСВВ, ВЕР ΙΌ N0:40), связанным на карбоксильном конце с амфипатической спиралью панкреатического полипептида (ЕККУШМЕТКР, ВЕР ΙΌ N0:28) для получения химерного пептида. Могут быть осуществлены дополнительные модификации на карбоксильном конце амфипатической спирали, не влияющие на тканезащитные свойства. Таким образом, в следующем примере замена концевого пролина указанного выше химерного пептида последовательностью ТК (РЕРЕЕКАЕСВВЕККУШМЕ'ПК'ПК, ВЕР ΙΌ N0:41) создает молекулу, обладающую высокой тканезащитной активностью, которая показана в анализе седалищного нерва (см. фиг. 1).
Кроме того, вместо указанных выше спиралей с тканезащитными пептидами могут быть связаны другие третичные структуры. Например, представленные с наружной стороны аминокислоты спирали В могут быть связаны с β-складчатым слоем (СВЕСЕАЕ ВЕР ΙΌ N0:42), обнаруженным в АВ-петле ЕР0, с образованием химерного пептида, имеющего последовательность СВЕМ-АИОЕрЕЕКАЕСВВ (ВЕР ΙΌ N0:43), который является тканезащитным (см. пример 2 и табл. 1). Кроме того, наружные ами
- 15 015672 нокислоты концевой части спирали С (АЬСКА, 8ЕЦ ΙΌ N0:44, соответствующие аминокислотам 111, 112, 113, 116 и 118 последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0:1) могут быть объединены во всей или с частью неполной петли СО (ЕСЛОКЕА^РРОЛЛБАЛРЕВТЕ 8ЕЦ ΙΌ N0:45, соответствующей аминокислотам 112-133 последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0:1). Предпочтительно между слитыми пептидами будет присутствовать связывающее плечо, чтобы обеспечить гибкость, так чтобы связанные пептиды могли принять надлежащую структурную ориентацию, чтобы связаться с тканезащитным рецепторным комплексом. Такие слитые пептиды могут обладать синергетическим действием, совместно давая больший тканезащитный эффект, чем при их действии по отдельности, вероятно благодаря усиленному связыванию с тканезащитным рецепторным комплексом или увеличенным биологическим временем полужизни.
Специалисту в данной области будет понятна польза объединения различных требуемых структурных элементов в одном пептиде для максимизации тканезащитных эффектов таких соединений. Такие химеры могут содержать состоящие из аминокислот пептиды и неаминокислотные элементы, такие как линкеры или образующие мостики атомы или остатки.
5.1.3. Слитые пептиды.
Настоящее изобретение дополнительно предполагает, что два или более из указанных выше тканезащитных пептида, полученных фрагментов или химер, могут быть связаны с родственным или неродственным белком, таким как эритропоэтин, альбумин и т.д.
5.1.4. Производство тканезащитных пептидов.
Тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению могут быть получены с использованием способов рекомбинации или синтеза, хорошо известных в данной области. В частности, твердофазный синтез белков хорошо подходит для относительно коротких тканезащитных пептидов и может давать более высокие выходы с более постоянными результатами. Кроме того, твердофазный синтез белков может обеспечивать дополнительную гибкость производства тканезащитных пептидов. Например, требуемые химические модификации могут быть введены в тканезащитный пептид на стадии синтеза: в синтезе можно использовать гомоцитруллин вместо лизина, тем самым устраняя необходимость карбамилировать пептид после синтеза.
Синтез.
При твердофазном синтезе пептида аминокислоты с защитой α-аминогруппы и защитой боковой цепи иммобилизуют на смоле. См., например, №1ззоп, В., 8ое11пег, М., апб Ватез, В. Сбетюа1 8уп1без1з оГ Рго!етз, Аппи. Веу. Вюто1. 81гис1. 2005, 34:91-118; Ме1ба1 М. 1997. Ргорегбез оГ зобб зирройз. Ме1бобз Епхуто1. 289:83-104 и 8опдз!ег М.Е., Вагапу С. 1997. Напб1ез Гог зобб-рбазе зуп1без1з. Ме!бобз Епхуто1. 289:126-74. Обычно используют два типа защитных групп α-аминогруппы: чувствительную к кислотам трет-бутоксикарбонильную (Вос) группу или чувствительную к основаниям 9-флуоренилметилоксикарбонильную (Етос) группу. \е1бпдз О.А., А(бейоп Е. 1997. 81апбагб Етос рго1осо1з. Ме1бобз Епхуто1. 289:44-67. После быстрого и полного удаления указанных защитных групп α-аминогруппы другие защищенные аминокислоты с активированной карбоксильной группой могут быть связаны с незащищенным связанным со смолой амином. Использование избытка активированных растворимых аминокислот приводит к полному завершению реакций связывания. Цикл удаления защиты и связывания повторяют до получения полной последовательности. После удаления защиты боковых цепей и отщепления от смолы получают требуемый пептид. Сиу С.А., Е1е1бз С.В. 1997. Тпйиогоасебс ас1б с1еауаде апб берго!есбоп оГ гезт-Ьоипб рерббез Го11о\\й1д зуп!без1з Ьу Етос сбет1з!гу. Мебюбз Епхуто1. 289:67-83 и 8(ехуаП ЕМ. 1997. С1еауаде тебюбз Го11о\\й1д Вос-Ьазеб зобб-рбазе зуп(без1з. Ме1бобз Епхуто1. 289:29-44. Дополнительные способы осуществления твердофазного синтеза белка описаны в Вапд, Ό. апб Кеп1, 8. 2004. А 0пе-Ро1 То1а1 8уп1без1з оГ СгатЬт. Апдете. Сбет. Ιπΐ. Еб. 43:2534-2538; Вапд, Ό., Сборга, К, апб Кеп1, 8. 2004. То1а1 Сбетюа1 8уп(без1з оГ СгатЬт. I. Ат. Сбет. 8ос. 126:13771383; Эа^зоп, Р. е1 а1. 1994. 8уп1без1з оГ Рго!етз Ьу №Шуе Сбетюа1 Е1дабоп. 8с1епсе. 266:776-779; КосбепбоегГег е1 а1. 2003. Оез1дп апб Сбетюа1 8уп(без1з оГ а Нотодепоиз Ро1утег-МобШеб Егу(бгоро1ез1з Рго!ет. 8с1епсе. 299:884-887. (Каждая цитированная в данном абзаце публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме).
При необходимости меньшие по размеру пептиды, полученные в результате твердофазного синтеза пептидов, могут быть объединены посредством связывания пептидов, например, с помощью естественных химических связей. В данном способе тиолат Мконцевого остатка цистеина одного пептида воздействует на С-концевой тиоэфир второго пептида, приводя к транстиоэтерификации. Амидная связь образуется после быстрого ацильного переноса 8^М См. Эа^зоп, Р. е1 а1. 1994. 8уп(без1з оГ Рго!етз Ьу №Шуе Сбетюа1 бадаНом. 8с1епсе. 266:776-779, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме.
Кроме того, специалисту в данной области будет понятно, что тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению могут включать пептидомиметики, пептиды, содержащие как встречающиеся в природе, так и не встречающиеся в природе аминокислоты, такие как пептоиды. Пептоиды являются олигомерами Мзамещенных глицинов, гликохолевой кислоты, тиопронина, саркозина и тиорфана. Указанные структуры имеют тенденцию к образованию общей структуры (-(С=Ο)-СΗ2-NВ-)π, при этом
- 16 015672
Я-группа действует в качестве боковой цепи. Такие пептоиды могут быть синтезированы с использованием твердофазного синтеза согласно протоколам 8ίιηοη с1 а1., Ρβρίοίά5: А то1еси1аг арргоасй ίο бгид άί5ϋον€Γγ, Ргос. Νη11. Асаб. 8с1. И8А, 89:9367-9371 (1992) и Ы еί а1., Р1юЮ1Н1юдгар1ис 8νη11κ5ΐ5 о£ РерФ1б5, 1. АМ. СНЕМ. 5ОС. 2004, 126, 4088-4089, каждая публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме.
Кроме того, настоящее изобретение относится к применению пептидомиметиков или миметиков пептидов, непептидных лекарственных средств, обладающих свойствами, аналогичными свойствам матричных пептидов (Еаисйеге, 1. (1986), Абν. Эгид Яе5. 15:29; УеЬег аиб Епебтдег (1985), ΤΙΝ5, р. 32 и Еνаη5 еί а1. (1987), 1. Меб. С1ет. 30:1229, публикации включены в виде ссылки). Обзор синтеза различных типов пептидомиметиков можно найти, например, в Ме11юб5 о£ Огдашс С11ет151гу (Ηοπ^η-^γ1), 8νηΐ1κ5ΐ5 о£ Рерббе5 апб Рерббот1тебс5 - ХУогкЬемсН ЕбНют Уо1ите Е22с (Еббог-ш-СЫе£ 6οοбтаи М.), 2004 (Оеогде ТЫете Уег1ад δΙπΟβηΓΐ, Νον Уогк, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме).
Способы рекомбинации.
Можно использовать различные системы хозяин-экспрессирующего вектора, чтобы получить тканезащитные пептиды согласно изобретению. Такие системы экспрессии в хозяине представляют собой векторы, посредством которых представляющий интерес тканезащитный пептид может быть получен и затем очищен, но также представляют собой клетки, в которых при трансформации или трансфекции подходящими кодирующими нуклеотидными последовательностями можно обнаружить модифицированный продукт гена эритропоэтина ίη 5ΐΙι.ι. Такие системы включают без ограничения системы хозяев: бактерии, насекомые, растения, млекопитающие, включая человека, такие как, без ограничения, система клеток насекомых, инфицированных рекомбинантными вирусными экспрессирующими векторами (например, бакуловирусами), содержащими последовательности, кодирующие тканезащитный пептид; системы клеток растений, инфицированных рекомбинантными вирусными экспрессирующими векторами (например, вирусом мозаики цветной капусты, СаМУ; вирусом табачной мозаики, ТМУ) или трансформированных рекомбинантными плазмидными экспрессирующими векторами (например, Τί-плазмидой), содержащими последовательности, кодирующие родственные эритропоэтину молекулы; или системы клеток млекопитающих, включая системы клеток человека, например НТ1080, СО5, СНО, ВНК, 293, 3 Т3, несущих рекомбинантные экспрессирующие конструкции, содержащие промоторы, полученные из генома клеток млекопитающих, например промотор металлотионеина, или из вирусов млекопитающих, например поздний промотор аденовируса; промотор 7.5К вируса вакцинии.
Кроме того, может быть выбран штамм клетки-хозяина, который модулирует экспрессию встроенных последовательностей или модифицирует и процессирует генный продукт специфичным требуемыми образом. Такие модификации и процессинг белковых продуктов могут быть важными для функционирования белка. Как известно специалистам в данной области, разные клетки-хозяева имеют специфичные механизмы посттрансляционного процессинга и модификации белков и генных продуктов. Могут быть выбраны подходящие линии клеток или системы хозяев, чтобы обеспечить правильную модификацию и процессинг чужеродного экспрессированного белка. С этой целью можно использовать эукариотические клетки-хозяева, которые имеют клеточный аппарат для правильного процессинга первичного транскрипта, гликозилирования и фосфорилирования генного продукта. Такими клетками-хозяевами млекопитающих, включая клетки-хозяева человека, являются без ограничения НТ1080, СНО, УЕЯО, ВНК, НеЬа, СО5, МОСК, 293, 3Т3 и №138.
Для долговременной, высокопроизводительной продукции рекомбинантных пептидов предпочтительна стабильная экспрессия.
Например, могут быть сконструированы линии клеток, которые стабильно экспрессируют продукт рекомбинантного гена тканезащитной родственной цитокину молекулы. Вместо использования экспрессирующих векторов, которые содержат вирусные начала репликации, клетки-хозяева могут быть трансформированы ДНК под контролем подходящих элементов регуляции экспрессии, например промотора, энхансера, последовательностями терминации транскрипции, сайтами полиаденилирования и т.п., и селектируемым маркером. После введения чужеродной ДНК сконструированным клеткам дают возможность расти в течение 1-2 дней в обогащенных средах и затем переводят на селективные среды. Селектируемый маркер в рекомбинантной плазмиде придает резистентность к селекции и позволяет клеткам стабильно интегрировать плазмиду в их хромосомы и расти с образованием очагов, которые, в свою очередь, можно клонировать и размножать до получения линий клеток. Такой способ преимущественно можно использовать, чтобы сконструировать линии клеток, которые экспрессируют тканезащитный продукт. Такие сконструированные линии клеток могут быть особенно применимы для скрининга и оценки соединений, которые влияют на эндогенную активность продукта гена родственной ЕРО молекулы.
- 17 015672
Дополнительные модификации.
Могут быть осуществлены дополнительные модификации тканезащитных пептидов. Например, пептид может быть синтезирован с одной или несколькими (О)-аминокислотами. Выбор включения (Ь)- или (О)-аминокислоты в пептид согласно настоящему изобретению отчасти зависит от требуемых характеристик пептида. Например, включение одной или нескольких (О)-аминокислот может обеспечить повышенную стабильность пептида ίη νΐΐΓο или ίη νίνο. Включение одной или нескольких (Ώ)аминокислот также может увеличивать или уменьшать активность связывания пептида, которую определяют, например используя биологические анализы, описанные в данной публикации, или другие способы, хорошо известные в данной области.
Замена всей или части последовательности (Ь)-аминокислот соответствующей последовательностью энантиомерных (О)-аминокислот создает оптически изомерную структуру в соответствующей части полипептидной цепи. Инверсия последовательности всей или части последовательности (Ь)-аминокислот создает обратный аналог пептида. Комбинация замены энантиомеров (Ь на Ώ или Ώ на Ь) и инверсии последовательности создает обратный инверсный аналог пептида. Специалистам в данной области известно, что энантиомерные пептиды, их обратные аналоги и их обратные инверсные аналоги сохраняют значительную топологическую взаимосвязь с исходным пептидом и часто получают особенно высокую степень сходства исходного пептида и его обратного инверсного аналога. Указанная взаимосвязь и сходство могут отражаться в биохимических свойствах пептидов, в частности высокой степени связывания соответствующих пептидов и аналогом с белком-рецептором. Синтез обратных инверсных аналогов с определенными свойствами обсуждается, например, в МеЧКодк оГ Огдашс Сйет181гу (НовЬеп-Шеу!), 8упШе818 оГ Рерйдек апд РерИдопптеИск - ШогкЬепсК Εάίΐίοη. Уо1ите Е22с (Едйог-т-сЫеГ Соодтап М.), 2004 (Сеогде ТЫете Уег1ад 81и11даг1, Ν'\ν Υ()γΙ\) и цитированных в указанных публикациях ссылках, которые все включены в данной описание в виде ссылки в полном объеме.
Модификация аминокислоты относится к изменению встречающейся в природе аминокислоты с получением не встречающейся в природе аминокислоты. Производные пептидов согласно настоящему изобретению с не встречающимися в природе аминокислотами могут быть созданы при химическом синтезе или посредством сайт-специфичного включения неприродных аминокислот в полипептиды во время биосинтеза, как описано в Сйг181орйег I. Жгеп, 8репсег I. Ап1Еопу-СаЫ11, Мюйае1 С. Сг1ЕЕт1Ь, Ре1ег С. 8сйи11/, 1989, 8с1епсе, 244:182-188, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме.
Миметики пептидов, которые сходны по структуре с терапевтически применимыми пептидами, можно использовать для получения эквивалентного терапевтического или профилактического действия. В общем, пептидомиметики структурно сходны с эталонным полипептидом (т.е. полипептидом, который обладает биохимическим свойством или фармакологической активностью), но в них одна или несколько пептидных связей необязательно заменены связью, выбранной из группы, состоящей из: --СН2-ЫН-~, --СН25--, --СН2-СН2--, --СН=СН-- (цис- и транс-), --СОСН2--,
--СН(ОН)СН2-- и --СН25О--, способами, известными в данной области и дополнительно описанными в следующих публикациях: Зра£о1а, А. Г. в «СЬештзЕгу и В1осЬет1з£гу о£ Аттпо АсШз, РербШез, апб. Рго£е1пз»,
В. ТлГетпзбетп, ейз. , Магсе1 Беккег, Νε\ν Уогк, р 267 (1983); ЗрабоЧа, А.Р., Уеда Бака (МагсЬ 1983), Уо1. 1. 1ззие 3, «РерРШе ВаскЬопе МосИ£1.са£1опз» (общий обзор);
Моге1у, Б.З., ТгепсЗз РНагта 3οί. (1980) рр. 463-468 (общий обзор); НисЗзоп, Б. е£ а1., (1979) 1п£. Б. Рер£. Рго£. Ре. 14:177-185 (--СН2-ЫН--, --СН2-СН2--) ; Зра£о1а, А.Р. е£ а1. , (1986) Ы£е ЗС1. 38: 1243-1249 (--СН2-3); Нагт, Μ. М. , (1982) Б. СЬет. Вос. Регктп Тгапз.
I 307-314 (--СН=СН--, цис- и транс-); АЬпдитзб, К. С. е£ а1. , (1980) Б. Μβά. 23: 1392 (--СОСН2--) ; Бепптпдз-ИЫСе, С е£ а1. , (1982) ТебгаНеЦгоп Бекк. 23: 2533 (--СОСН2--);
32е1ке, М е£ а1. , Еигореап Αρρίη. ЕР 45665 (1982) СА: 97:39405 (1982) (-- СН (ОН) СН2--) ; НоИадау, М.и. е£ а1., (1983) ТеРгаЬейгоп Ье££ 24: 4401-4404 (--С (ОН) СН2-- ) и НгиЬу, У.Б., (1982) Ы£е
3с1 31: 189-199 (--СН2-3--) ;
каждая из которых включена в данное описание в виде ссылки.
В другом варианте особенно предпочтительной непептидной связью является --СН^Н--. Такие миметики пептидов могут иметь существенные преимущества по сравнению с полипептидными вариантами, включая, например более экономичное получение, более высокую химическую стабильность, улучшенные фармакологические свойства (время полужизни, всасывание, активность, эффективность и т.д.), измененную специфичность (например, биологические активности широкого спектра действия), пониженную антигенность и др.
Возможны различные конструкции миметиков пептидов. Например, циклические пептиды, в которых необходимая конформация стабилизирована непептидными компонентами, специально рассмотрены в патенте США № 5192746, ЕоЫ, е! а1., патенте США № 5576423, Аνе^8а, е! а1., патенте США № 5051448,
- 18 015672
811ак1юиа и патенте США № 5559103, Сае!а, е1 а1., которые включены в данное описание в виде ссылки, в которых описано несколько способов создания таких соединений. Синтез непептидных соединений, которые имитируют пептидные последовательности, также известен в данной области. В публикации Е1йгей е1 а1., 1. Мей. С1ет. 37:3882 (1994) (включенной в данное описание в виде ссылки в полном объеме) описаны непептидные антагонисты, которые имитируют пептидную последовательность. В публикации Ыкетаке, Ки е1 а1., 1. Мей. С1ет. 38:9 (1995) (включенной в данное описание в виде ссылки в полном объеме) дополнительно описан синтез серии таких соединений.
После синтеза могут быть осуществлены дополнительные модификации. Например, тканезащитные пептиды могут быть дополнительно химически модифицированы, т.е. карбамилированы, ацетилированы, сукцинилированы и т.д., согласно заявке на выдачу патента США № 10/188905, которая опубликована как 20030072737-А1 17 апреля 2003 г. и описывает химически модифицированный ЕРО, и согласно заявке на выдачу патента США № 10/612665, поданной 1 июля 2003 г., и заявке на выдачу патента США № 09/753132, поданной 29 декабря 2000 г., которые включены в данное описание в виде ссылки в полном объеме.
Кроме того, тканезащитные пептиды могут состоять из рекомбинантных тканезащитных пептидовмутеинов. Обнаруженные мутации могут включать замены, делеции, включая внутренние делеции, присоединения, включая присоединения, которые дают слитые белки, или консервативные замены аминокислотных остатков в пределах и/или рядом с аминокислотной последовательностью, которые приводят к молчащему изменению, и неконсервативные аминокислотные замены и более крупные инсерции и делеции, которые описаны ранее в РСТ/Л803/20964, озаглавленной КесотЬтаЩ Т1ккие РгсйесБуе СуЮктек апй Еисойшд Ыис1е1с Ас1йк ТНегеоГ Гог Рго1есйои, Век1огайои, апй ЕпЕаисетеи! оГ Кекроикке Се11к, Т1ккиек, аий Огдаик (которая включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме).
Могут быть осуществлены либо консервативные, либо неконсервативные замены в одном или нескольких аминокислотных остатках. Могут быть осуществлены как консервативные, так и неконсервативные замены. Консервативными заменами являются замены, которые имеют место в пределах семейства аминокислот, которые являются родственными по своим боковым цепям. Генетически кодируемые аминокислоты могут быть разделены на четыре семейства: (1) кислые = аспартат, глутамат; (2) основные = лизин, аргинин, гистидин; (3) неполярные (гидрофобные) = цистеин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан, глицин, тирозин и (4) незаряженные полярные = аспарагин, глутамин, серин, треонин. Неполярные могут быть дополнительно разделены на сильно гидрофобные = аланин, валин, лейцин, изолейцин, метионин, фенилаланин и умеренно гидрофобные = глицин, пролин, цистеин, тирозин, триптофан. Альтернативным образом набор аминокислот можно сгруппировать в следующем виде: (1) кислые = аспартат, глутамат; (2) основные = лизин, аргинин, гистидин; (3) алифатические = глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, серин, треонин, при этом серин и треонин необязательно образуют отдельную группу алифатических, содержащих гидроксил аминокислот; (4) ароматические = фенилаланин, тирозин, триптофан; (5) амидные = аспарагин, глутамин и (6) серосодержащие = цистеин и метионин. (См., например, ВюсЬетЦйу, 411' ей., Ей. Ьу Ь. 81гуег, XV.Н. Ргеетаи аий Со., 1995, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме).
Альтернативно мутации могут быть введены случайным образом на протяжении всей или части кодирующей последовательности тканезащитного пептида, например посредством насыщающего мутагенеза, и может быть проведен скрининг полученных в результате мутантов в отношении биологической активности, чтобы идентифицировать мутанты, которые сохраняют активность. После мутагенеза кодируемый пептид может быть рекомбинантно экспрессирован и может быть определена активность рекомбинантного тканезащитного пептида.
В другом варианте тканезащитный пептид может быть дополнительно модифицирован посредством присоединения полимеров (таких как полиэтиленгликоль), сахара или дополнительных белков (например, в слитой конструкции), чтобы попытаться продлить время полужизни тканезащитного пептида и усилить тканезащитное действие пептида. Примеры таких модификаций описаны в νθ/04022577 А3 и νθ/05025606 А1, которые включены в данное описание в виде ссылки.
5.2. Анализы для тестирования тканезащитных пептидов.
5.2.1. Биологические скрининги или анализы.
Тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению можно тестировать в отношении тканезащитной активности, например в отношении защиты клеток, тканей или органов. Кроме того, защитные активности могут быть тестированы с использованием анализов 1и νίΙΐΌ и ш у1уо. Тесты 1и уйго, которые являются показателем тканезащитной активности, включают, например, анализы пролиферации клеток, анализы дифференцировки клеток или выявление присутствия белков или нуклеиновых кислот, активность которых подвергается повышающей регуляции тканезащитным рецепторным комплексом, например тканезащитным рецепторным комплексом цитокинов, например нуклеолин, нейроглобин, цитоглобин или фратаксин. Нейроглобин, например, может быть вовлечен в осуществление транспорта или кратковременного хранения кислорода. Поэтому анализы транспорта или хранения кислорода можно использовать в качестве анализа для идентификации или скрининга соединений, которые модулируют тканезащитную активность.
- 19 015672
Нейроглобин экспрессируется в клетках и тканях центральной нервной системы в ответ на гипоксию или ишемию и может обеспечивать защиту от повреждения (8нп е! а1. 2001, ΡΝΆ8, 98:15306-15311; 8с1шиб е! а1., 2003, 1. Βίο1. Скет. 276:1932-1935, каждая публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Цитоглобин может играть сходную роль в защите, но экспрессируется в различных тканях на разных уровнях (Рексе е! а1., 2002, ΕΜΒΟ, 3: 1146-1151, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). В одном варианте осуществления изобретения уровни подвергаемого повышающей регуляции белка в клетке могут быть измерены до и после контактирования тканезащитного пептида с клеткой. В некоторых вариантах присутствие подвергаемого повышающей регуляции белка, связанного с тканезащитной активностью в клетке, можно использовать для подтверждения тканезащитной активности пептида.
Нуклеолин может защищать клетки от повреждения. Он играет многочисленные роли в клетках, включая модулирование процессов транскрипции, специфичное для последовательности РНК связывания белка, цитокинеза, нуклеогенеза, сигнальной трансдукции, апоптоза, индуцированного Т-клетками, ремоделирования хроматина или репликации. Он также может функционировать в качестве ДНК/РНКгеликазы рецептора клеточной поверхности, ДНК-зависимой АТФазы, челночного белка, компонента фактора транскрипции или репрессора транскрипции (8ткак!ауа апб Ро11агб, 1999, ЕЛ8ЕВ 1.. 13:19111922 и СинкГу е! а1., 1999, 1. Се11 8ск, 112:761-772, каждая публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме).
Фратаксин представляет собой белок, который вовлечен в митохондриальный метаболизм железа и который, как было показано ранее, в значительной степени подвергается повышающей регуляции при действии ЕРО как ίη νίνο, так и ίη νίίτο (8!игт е! а1. (2005), Еиг. I С1т. 1пуек!. 35:711, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме).
Экспрессия подвергаемого повышающей регуляции белка может быть выявлена посредством регистрации уровней мРНК, соответствующей белку, в клетке. мРНК можно гибридизовать с зондом, который специфично связывает нуклеиновую кислоту, кодирующую белок, подвергаемый повышающей регуляции.
Гибридизация может представлять собой, например, нозерн-блот, саузерн-блот, гибридизацию на матрицах, аффинную хроматографию или гибридизацию ίη кби.
Тканезащитная активность полипептида согласно изобретению также может быть выявлена с использованием анализа нейрозащиты ίη νίίτο. Например, первичные культуры нейронов могут быть получены из гиппокампа новорожденных крыс трипсинизацией, и их можно культивировать любым способом, известным в данной области и/или описанным в данной публикации, например в ростовой среде ΜΕΜ-ΙΙ (I ηνίΐ годен), содержащей 20 мМ Ό-глюкозы, 2 мМ Ь-глутамина, 10% Νυ-сыворотки (бычья; ВесФп ΚτηηΚΙίη Ьакек, ΝΡ), 2% добавки В27 (Ιηνίίτο^η), 26,2 мМ NаΗСΟз, 100 ед./мл пенициллина и 1 мг/мл стрептавидина (см., например, Ье1к! е! а1., 2004, 8с1епсе. 305:239-242, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Через 1 день после посева добавляют 1 мкМ цитозинарабинофуранозида. Затем 13-дневные культуры предварительно инкубируют с возрастающими дозами ЕРО или СЕРО (3-3000 пМ) в течение 24 ч. На 14-й день среду удаляют и культуры стимулируют 300 мкМ ΝΜΌΆ в РВ8 при комнатной температуре. Через 5 мин ранее кондиционированную среду возвращают в культуры, и культуры возвращают в инкубатор на 24 ч. Клетки фиксируют в параформальдегиде, красят Ηοесйк! 33342 (ΜοΚα.ι1ηΓ РгоЬек, Еидепе, ОВ), затем можно подсчитать конденсированные апоптозные ядра. В качестве позитивных контролей включают ΝΟΕ (50 нг/мл) и ΜΚ801 (1 мкМ).
Модельные системы на животных можно использовать для демонстрации тканезащитной активности соединения или для демонстрации безопасности и эффективности соединений, идентифицированными способами скрининга согласно изобретению, описанными выше. Соединения, идентифицированные в анализах, затем можно тестировать в отношении биологической активности, используя модели на животных для представляющего интерес типа повреждения ткани, заболевания, состояния или синдрома. Модели включают животных, созданных так, чтобы они содержали тканезащитный рецепторный комплекс, связанный с функциональной индикаторной системой, таких как трансгенная мышь.
Модели на животных, которые можно использовать для тестирования эффективности защитной по отношению к клеткам или тканезащитной активности идентифицированного соединения, включают, например, защиту от появления острого экспериментального аллергического энцефаломиелита (ЕАЕ; см. пример 11) у крыс Ье^к, восстановление или защиту от понижения когнитивной функции у мышей после получения травмы головного мозга, ишемии головного мозга (инсульта; пример 5) или судороги, индуцированной эксцитотоксинами (Вппек е! а1., 2000, ΡΝΆ8, 97:10295-10672, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме), защиту от индуцированной ишемии сетчатки (КцкепЬаит е! а1., 1997, У1к. Век. 37:3443-51, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме), защиту от повреждения седалищного нерва (см. пример 2) и защиту от ишемическогореперфузионного повреждения сердца (исследования кардиомиоцитов ίη νί!το и ишемическогореперфузионного повреждения ίη νίνο, см., например, СаМШ е! а1., 2003, ΡΝΆ8, 100:4802-4806 и РютбаНбЮ е! а1., 2005, ΡΝΆ8, 102:2046-2051, каждая публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Такие анализы более подробно описаны в Стак^ е! а1. (2004), Μеб. 8ск Μοηί!.
- 20 015672
10:ВВ1-3 или в публикации РСТ № ν0 02/053580, каждая публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме. Описанные способы ш у1уо направлены на введение ЕРО, однако было показано, что тканезащитные белки, введенные вместо ЕРО, также проявляют сходную биологическую активность, например, БеМ е! а1. (2004), 8с1еисе, 305:239-242, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме. Пептиды для тестирования также могут иметь замены. Другие анализы для определения тканезащитной активности пептида хорошо известны специалистам в данной области.
5.2.2. Анализы связывания с клетками.
Альтернативно можно использовать анализы связывания клетками для оценки полипептидов согласно изобретению. Например, представляющий интерес тканезащитный пептид может быть связан с биологическим маркером, таким как флуоресцентный или радиоактивный маркер, для облегчения регистрации и затем тестирован в отношении связывания с трансфицированными клетками ВаР3, экспрессирующими ЕР0В и/или вс-рецептор. В 96-луночный планшет высевают восемь серийных разведений 1:2 представляющего интерес тканезащитного пептида в среде роста (ΒРМI 1640, 10% фетальная телячья сыворотка, 1 мМ пируват натрия, 2 мМ Ь-глютамин), так чтобы конечный объем в каждой лунке составлял около 100 мкл. Исходную линию ВаР3 и клетки ВаР3, трансфицированные ЕР0В и/или вс-рецептором, можно три раза промыть в среде роста (см. выше), осадки ресуспендировать в среде роста и клетки подсчитать и разбавить в среде роста до концентрации 5000 клеток/100 мкл. Затем добавляют 100 мкл разбавленных клеток к каждому разбавлению пептида. Затем анализируемый планшет инкубируют в инкубаторе при 37°С в течение 3-4 дней. Затем планшет/клетки промывают и планшет считывают в устройстве для регистрации флуоресценции с планшетов или другим подходящим способом, чтобы определить уровень биомаркера, связанного с биологической активностью представляющего интерес тканезащитного пептида.
Подобным образом можно использовать конкурентный анализ для определения того, является ли тканезащитный пептид тканезащитным. В конкурентном анализе соединение, известное как тканезащитное, включая без ограничения тканезащитные цитокины, такие как цитокины, описанные в заявках на выдачу патента США № 10/188905 и 10/185841 (каждая из которых включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме), могут быть связаны с подходящим биомаркером.
В 96-луночный планшет помещают восемь серийных разведений 1:2 известного тканезащитного соединения/биомаркера в подходящей среде роста и такую же серию разведений известного тканезащитного соединения/биомаркера и избыток представляющего интерес тканезащитного пептида. Конечный объем каждого разведения должен составлять около 100 мкл. Затем клетки ВаР3 высевают в планшеты, как описано выше, и инкубируют. Через определенный период времени клетки промывают и планшет считывают в устройстве для определения флуоресценции в планшетах или любым другим подходящим способом, известным в данной области для регистрации биомаркера. Если показания для планшетов и/или лунок, содержащих известное тканезащитное соединение/биомаркер и представляющий интерес тканезащитный пептид, меньше, чем показания для планшетов, содержащих только известное тканезащитное соединение/биомаркер, то представляющий интерес тканезащитный пептид является тканезащитным.
5.2.3. Цитокинная активность и активность в пролиферации/дифференцировке клеток.
Многие белковые факторы, обнаруженные до настоящего времени, включая все известные цитокины, проявляли активность в одном или нескольких анализах зависимой от факторов пролиферации клеток, и поэтому такие анализы служат для соответствующего подтверждения цитокинной активности.
Активность тканезащитного пептида может быть подтверждена любым из ряда обычных анализов зависимой от факторов пролиферации клеток для клеточных линий, включая без ограничения 32Ό, ΌΑ2, ИА1С, Т10, В9, В9/11, ВаР3, МС9/С, М+(ргеВ М+), 2Е8, ВВ5, ΌΑ1, 123, Т1165, НТ2, СТЬЬ2, ТР-1, Мо7е и СМК. Указанные клетки культивируют в присутствии или в отсутствие тканезащитного пептида и пролиферацию клеток регистрируют, например, измеряя включение меченного тритием тимидина или колориметрическим анализом, основанным на метаболическом расщеплении бромида 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия (МТТ) (Мозтаи, 1983, 1. Iттииο1. Ме111. 65:55-63, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме).
5.2.4. Другие анализы.
Если тканезащитный пептид проявляет тканезащитную активность, то специалисту в данной области будет понятно, что может быть полезной проверка результата с использованием одного из анализов нейрозащиты и защиты ткани, известных специалистам в данной области, таких как, без ограничения, анализы на клетках Р-19 и РС-12. Кроме того, различные модели 1и у1уо, такие как модели на животных, связанные с повреждением спинного мозга, ишемическим инсультом, повреждением периферического нерва, сердца, глаз, почек и т.д., могут быть применимы для дополнительной характеристики тканезащитного пептида. Подходящие анализы 1и ν 11го и 1и у1уо описаны в заявках на выдачу патентов США № 10/188905 и 10/185841, которые включены в данное описание в виде ссылки в полном объеме.
- 21 015672
5.3. Терапевтическое применение.
Специалисту в данной области будет понятно, что тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению применимы в качестве терапевтических средств для лечения или профилактики различных заболеваний, расстройств и состояний. Специалисту в данной области также будет понятно, что такие пептиды можно использовать для осуществления модулирования тканезащитного рецепторного комплекса, например тканезащитного цитокинного комплекса. Способы ίη νίίτο и ίη νίνο, которые можно использовать для оценки терапевтических показаний для применения соединений, идентифицированных в предлагаемых в изобретении и указанных выше анализах, описаны в заявке РСТ № РСТ/иБ01/49479, заявках на выдачу патента США № 10/188905 и 10/185841, включенных в данное описание в виде ссылки.
Указанные выше тканезащитные пептиды согласно изобретению в общем могут быть применимы для профилактики, терапевтического лечения или профилактического лечения заболеваний или расстройств центральной нервной системы или периферической нервной системы человека, при которых главным образом наблюдаются неврологические или психиатрические симптомы, глазных болезней, сердечно-сосудистых заболеваний, сердечно-легочных заболеваний, респираторных заболеваний, заболеваний почек, мочевой системы и репродуктивной системы, костных болезней, кожных болезней, заболеваний соединительной ткани, желудочно-кишечных заболеваний и эндокринных и метаболических нарушений. Примеры применения включают без ограничения защиту от повреждений и восстановление повреждений, возникающих в результате травмы и приводящих к воспалению головного мозга (ишемический инсульт, тупая травма, субарахноидальное кровоизлияние), спинного мозга (ишемия, травма от удара тупым предметом), периферических нервов (повреждение седалищного нерва, диабетическая нейропатия, синдром карпального канала), сетчатки (отек желтого пятна, диабетическая ретинопатия, глаукома) и сердца (инфаркт миокарда, хроническая сердечная недостаточность). В частности, такие заболевания, расстройства и состояния включают состояния гипоксии, которые неблагоприятно влияют на чувствительные ткани, такие как возбудимые ткани, например ткани центральной нервной системы, ткани периферической нервной системы, или ткани сердца, или ткани сетчатки, такие как, например, ткани головного мозга, сердца или сетчатки/глаза. Поэтому тканезащитные пептиды согласно изобретению могут быть использованы для лечения или профилактики повреждения чувствительной ткани в результате состояний гипоксии при различных состояниях и обстоятельствах. Не ограничивающие примеры таких состояний и обстоятельств указаны в таблице ниже.
Тканезащитные полипептиды также представляют интерес для модулирования активности стволовых клеток. Было установлено, что цитокины, проявляющие тканезащитную активность, например ЕРО, способны мобилизовать стволовые клетки, стимулируя миграцию в области повреждения и помогая процессу восстановления, например регенерации. Например, в случае экспериментального инсульта ЕРО опосредует миграцию нейробластов в область ишемического повреждения с регенерацией нейронов в ходе восстановительного периода (Т§а1 е1 а1., ί. №иго8С1 (2006), 26:1269-74, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). В качестве другого примера ЕРО и СЕРО мобилизуют эндотелиальные клетки-предшественники из костного мозга в кровообращение. Затем происходит хоминг указанных клеток в отдаленных областях, и они участвуют в образовании новых кровеносных сосудов (эффект ЕРО см. ВаЫтапп е1 а1., 2003, Клбпеу Ιηΐ. 64:1648-1652, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Не имея намерения быть связанными с какой-либо конкретной теорией, авторы полагают, что изолированные полипептиды, охарактеризованные в данном описании, оказывают подобное влияние на миграцию стволовых клеток.
В примере защиты от патологий нервной ткани, которые можно лечить и предотвращать с использованием тканезащитных пептидов согласно изобретению, такие патологии включают патологии, которые возникают в результате пониженной оксигенации нервных тканей. Любое состояние, которое уменьшает доступность кислорода в нервную ткань, приводящее к стрессу, повреждению и, наконец, гибели нервных клеток, можно лечить с применением тканезащитных пептидов согласно настоящему изобретению. В общем называемые гипоксией и/или ишемией такие состояния возникают в результате или включают без ограничения инсульт, окклюзию сосудов, пренатальную или постнатальную кислородную недостаточность, удушье, асфиксию, клиническую смерть, отравление оксидом углерода, вдыхание дыма, травму, включая хирургическую операцию и лучевую терапию, асфиксию, эпилепсию, гипогликемию, хроническое обструктивное легочное заболевание, эмфизему, респираторный дистресссиндром взрослых, гипотензивный шок, септический шок, анафилактический шок, инсулиновый шок, серповидноклеточный кризис, остановку сердца, аритмию, азотный наркоз и неврологические расстройства, вызванные процедурой искусственного кровообращения.
В одном варианте, например, тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению, идентифицированные с использованием предложенного в изобретении анализа, могут быть введены отдельно или в виде части композиции для профилактики травмы или повреждения ткани в случае существования риска травмы или повреждения ткани перед, во время или после хирургической операции или медицинской процедуры. Например, хирургические операции могут включать резекцию опухоли или реконструкцию при аневризме, и медицинские процедуры могут включать роды или родоразрешение. Другие патологии, вызванные или возникающие в результате гипогликемии, которые можно лечить с примене
- 22 015672 нием тканезащитных пептидов согласно настоящему изобретению, включают передозировку инсулина, также называемую ятрогенной гиперинсулинемией, инсулиному, недостаточность гормона роста, гипокортицизм, передозировку лекарственных средств и некоторые опухоли.
Другие патологии, возникающие в результате повреждения возбудимой нервной ткани, включают судорожные расстройства, такие как эпилепсия, конвульсии или хронические судорожные расстройства. Другие состояния и заболевания, которые можно лечить, включают без ограничения такие заболевания, как инсульт, рассеянный склероз, гипотонию, остановку сердца, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, церебральный паралич, травму головного или спинного мозга, связанную со СПИДом деменцию, возрастную потерю когнитивной функции, потерю памяти, боковой амиотрофический склероз, судорожные расстройства, алкоголизм, ишемию сетчатки, повреждение зрительного нерва в результате глаукомы и гибель нейронов.
Специфичные тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению можно применять для лечения или профилактики воспаления в результате патологических состояний или различных травм, например физически или химически индуцированного воспаления. Также предполагается применение тканезащитных пептидов для лечения и профилактики воспалительных состояний в одном или нескольких органах или тканях, включая без ограничения головной мозг, спинной мозг, соединительную ткань, сердце, легкое, почки и мочевыводящие пути, поджелудочную железу, глаза и простату. Не ограничивающие примеры такой травмы включают тендинит, ангиит, хронический бронхит, панкреатит, остеомиелит, ревматоидный артрит, гломерулонефрит, неврит зрительного нерва, височный артериит, энцефалит, менингит, поперечный миелит, дерматомиозит, полимиозит, некротизирующий фасцит, гепатит и некротизирующий энтероколит. Кроме того, тканезащитные цитокины можно применять для лечения или профилактики воспаления, возникающего в результате ишемических и неишемических состояний, включая без ограничения аллергии, ревматические заболевания, спортивные тренировки, инфекции, включая вирусные, грибковые и бактериальные. Воспаление может быть острым или хроническим. Дополнительные применения в области воспаления указаны в заявке РСТ/иЗ2004/031789, поданной 29 сентября 2004 г. и опубликованной как ν0 2005/032467, которая включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме.
Специфичные тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению могут быть использованы для лечения заболеваний центральной нервной системы и периферической нервной системы, возникающих в результате демиелинизации или повреждения миелиновой оболочки. Такие заболевания главным образом определяют как заболевания, в которые вовлечены воспалительные повреждения миелиновой оболочки неизвестного происхождения, за исключением заболеваний, связанных с недостаточностью миелинизации, таких как лейкодистрофия, и заболеваний вследствие очевидных причин. Рассеянный склероз (МЗ) является типичным заболеванием в группе демиелинизирующих заболеваний и патологически характеризуется изменениями, в основном, воспалительной демиелинизацией и глиозом. Так его этиология неизвестна, то диагноз осуществляют на основе клинических признаков, т.е. разнообразными в пространственном и временном отношении повреждениями центральной нервной системы. Кроме того, к демиелинизирующим заболеваниям относятся острый рассеянный энцефаломиелит (ΆΌΕΜ), воспалительный диффузный склероз, острый и подострый некротизирующий геморрагический энцефаломиелит и поперечный миелит. Также сохранение миелиновой оболочки периферических нервов основано на Шванновских клетках, и повреждение таких клеток вызывает периферическое демиелинизирующее заболевание.
Тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению можно применять для лечения или профилактики состояний и повреждения сердца, включая любое хроническое или острое патологическое явление, в которое вовлечено сердце и/или связанные с ним ткани (например, перикард, аорта и другие связанные кровеносные сосуды), включая ишемическое-реперфузионное повреждение; застойную сердечную недостаточность; остановку сердца; инфаркт миокарда; атеросклероз, нарушение герметичности митрального клапана, трепетание предсердий, кардиотоксичность, вызванную соединениями, такими как лекарственные средства (например, доксорубицин, герцептин, тиоридазин и цизаприд); повреждение сердца вследствие паразитарной инфекции (бактериями, грибами, риккетсиями и вирусами, например сифилис, хроническая инфекция Тгурагююта сги/ί); молниеносный амилоидоз сердца; операцию на сердце; трансплантацию сердца; ангиопластику, лапароскопическую операцию, повреждение сердца в результате травмы (например, проникающее или тупое повреждение сердца и разрыв клапанов аорты), хирургическое восстановление аневризмы грудной аорты; аневризму надпочечниковой артерии; кардиогенный шок вследствие инфаркта миокарда или сердечной недостаточности; нейрогенный шок и анафилаксию. Тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению также можно применять для лечения людей, для которых существует риск болезни сердца, такой как сердечная недостаточность (т.е. когда сердце не способно перекачивать кровь со скоростью, необходимой для метаболизирующих тканей, или когда сердце может выполнять эту задачу только при повышенном давлении наполнения). К таким пациентам группы риска могут относиться пациенты, имеющие инфаркт миокарда, или для которых существует риск развития инфаркта миокарда, имеющие болезнь коронарных артерий, миокардит, химиотерапию, кардиомиопатию, гипертонию, порок клапана сердца (наиболее часто митральную недостаточ
- 23 015672 ность и стеноз устья аорты) и индуцированную токсинами кардиомиопатию (например, этанолом, кокаином и т.д.) и т.п.
Тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению можно применять для лечения или профилактики состояний и повреждения глаз, например ткани сетчатки. Такие расстройства включают без ограничения ишемию сетчатки, дегенерацию желтого пятна, отслоение сетчатки, пигментную дегенерацию сетчатки, артериосклеротическую ретинопатию, гипертензивную ретинопатию, закупорку артерии сетчатки, закупорку вены сетчатки, гипотензию и диабетическую ретинопатию.
В другом варианте тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению и принципы осуществления изобретения можно применять для профилактики или лечения повреждения, возникающего в результате повреждения чувствительной ткани облучением. Дополнительным применением тканезащитных пептидов согласно настоящему изобретению является лечение отравления, такого как отравление нейротоксинами (например, отравление домоевой кислотой моллюсков), токсинами (этанолом, кокаином и т.д.), также как в результате воздействия химиотерапевтических средств и облучения; нейролатиризма; болезни Гуама; бокового амиотрофического склероза и болезни Паркинсона.
Как указано выше, настоящее изобретение также относится к тканезащитным пептидам согласно настоящему изобретению для применения при усилении функции ткани в случае отвечающих клеток, тканей и органов млекопитающего посредством периферического введения тканезащитного цитокина, который описан выше. Различные заболевания и состояния поддаются лечению с применением указанного способа. Например, данный способ применим для усиления функции возбудимых тканей, приводящего к повышению когнитивной функции даже в отсутствие какого-либо состояния или заболевания. Кроме того, тканезащитные цитокины применимы для улучшения качества заживления ран, уменьшения времени, необходимого для заживления, улучшения качества излеченных тканей и уменьшения частоты образования рубцов в результате ранения. См. заявку РСТ/^2004/031789, поданную 29 сентября 2004 г. и опубликованную как XV0 2005/032467, которая включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме. Указанные применения согласно настоящему изобретению более подробно описаны ниже и включают улучшение обучения и тренировки как у человека, так и у млекопитающих, отличных от человека.
Состояния и заболевания, которые можно лечить или предотвращать с использованием тканезащитных пептидов согласно настоящему изобретению, направленных на центральную нервную систему, включают без ограничения расстройства настроения, тревожные расстройства, депрессию, аутизм, гиперактивное расстройство с дефицитом внимания и когнитивную дисфункцию. При указанных состояниях полезно усиление функции нейронов. Другие расстройства, которые можно лечить согласно инструкциям, предлагаемым в настоящем изобретении, включают нарушение сна, например апноэ во сне, и расстройства, связанные с путешествиями; субарахноидальное кровоизлияние и кровоизлияние при аневризмах, гипотонический шок, повреждение при ударе, септический шок, анафилактический шок и осложнения при различных энцефалитидах и менингитидах, например, связанные с заболеванием соединительной ткани церебриты, например волчанку.
Другие применения включают профилактику или защиту от отравления нейротоксинами, такого как отравление домоевой кислотой моллюсков, нейролатиризма и болезни Гуама, бокового амиотрофического склероза, болезни Паркинсона; для послеоперационного лечения эмболического или ишемического повреждения; облучения всего головного мозга; серповидноклеточного кризиса и эклампсии.
Следующая группа состояний, которые можно лечить или предотвращать с применением тканезащитных пептидов согласно настоящему изобретению, включает митохондриальную дисфункцию либо наследственной природы, либо приобретенную, которая является причиной множества неврологических болезней, характеризуемых повреждением и гибелью нейронов. Например, болезнь Лейга (подострая некротизирующая энцефалопатия) характеризуется прогрессирующей потерей зрения и энцефалопатией вследствие утраты нейронов и миопатии. В таких случаях нарушенный метаболизм в митохондриях не может поставлять достаточно высокоэнергетические субстраты для подпитки метаболизма возбудимых клеток. Тканезащитный пептид оптимизирует поврежденную функцию при различных митохондриальных заболеваниях. Как указано выше, состояния гипоксии неблагоприятно влияют на возбудимые ткани. Возбудимые ткани включают без ограничения ткань центральной нервной системы, ткань периферической нервной системы и ткань сердца. Кроме описанных выше состояний, тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению применимы для лечения ингаляционного отравления, такого как вдыхание оксида углерода и дыма, тяжелой астмы, респираторного дистресс-синдрома взрослых и удушья, и клинической смерти. Кроме состояний, которые создают условия гипоксии, или другими путями индуцируют чувствительную ткань, например возбудимую ткань, повреждение включает гипогликемию, которая может возникать при введении несоответствующих доз инсулина или в случае продуцирующих инсулин неоплазм (инсулиномы).
Различные нейропсихологические расстройства, которые, как описано, возникают в результате повреждения возбудимой ткани, можно лечить с применением тканезащитных пептидов согласно настоящему изобретению. Хронические расстройства, в которые вовлечено повреждение нейронов и лечение или профилактика которых предлагается в настоящем изобретении, включают расстройства, связанные с
- 24 015672 центральной нервной системой и/или периферической нервной системой, включая возрастную потерю когнитивной функции и старческую деменцию, хронические судорожные расстройства, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, деменцию, потерю памяти, боковой амиотрофический склероз, рассеянный склероз, туберозный склероз, болезнь Вильсона, церебральный и прогрессирующий супрануклеарный паралич, болезнь Гуама, деменцию с тельцами Леви, прионные болезни, такую как губчатая энцефалопатия, например болезнь Якоба-Крейтцфельдта, болезнь Хантингтона, миотоническую дистрофию, атаксию Фрейдриха и другие атаксии, а также синдром Жиль де ля Туретта, судорожные расстройства, такие как эпилепсия и хроническое судорожное расстройство, инсульт, травму головного мозга или спинного мозга, связанную со СПИДом деменцию, алкоголизм, аутизм, ишемию сетчатки, глаукому, расстройства автономной функции, такие как гипертония и расстройства сна, и нейропсихиатрические расстройства, которые включают без ограничения шизофрению, шизофреноподобное аффективное расстройство, расстройство с дефицитом внимания, дистимическое расстройство, глубокое депрессивное расстройство, манию, обсессивно-компульсивное расстройство, расстройства вследствие применения психоактивных веществ, тревожность, паническое расстройство, а также монополярные и биполярные аффективные расстройства. Дополнительные нейропсихиатрические и нейродегенеративные расстройства включают, например, расстройства, перечисленные в Атенсам Р5ус1иа1пс А55ос1а1юг1'5 ^^адиο5ΐ^с аг1б 81а115Пса1 Маииа1 о£ МциЫ Э|5огбег5 (О§М), самая последняя версия которого включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме.
Следующая группа состояний, которые можно лечить или предотвращать с применением тканезащитных пептидов согласно настоящему изобретению, включает заболевания почек, такие как почечная недостаточность, острая и хроническая. Кровоснабжение почек может быть прервано вследствие нескольких причин, включая шок в результате инфекций, проникающих в кровоток (сепсис), внутренние или наружное кровотечение, потерю жидкости организмом в результате тяжелой диареи или ожогов, реакции на трансфузии, остановку сердца или аритмии, хирургическую травму и трансплантации почек. Уменьшенный поток крови в почки, возникающий в результате указанных выше состояний, может уменьшать поток крови до опасно низких уровней в течение достаточно большого периода времени, чтобы вызвать развитие острой почечной недостаточности. Пониженный поток крови также приводит к некрозу или гибели ткани в почке, повреждая почечные тубулярные клетки. Почечная недостаточность также может возникать в результате заболеваний (интерстициальных и диабетических) нефротических синдромов, инфекций, повреждения (СРВ-индуцированного), токсинов (индуцированная контрастными веществами, индуцированная химиотерапией, циклоспорином), аутоиммунного воспаления (например, волчанки, эритроза и т.д.). Тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению способствуют восстановлению или предотвращению такого повреждения, помогая уменьшить острую почечную недостаточность. В следующей таблице перечислены дополнительные иллюстративные не ограничивающие показания в отношении различных состояний и заболеваний, поддающихся лечению указанными выше тканезащитными пептидами.
- 25 015672
Клетка, ткань или орган Сердце | Дисфункция или патология Ишемия | Состояние или _ _ Тип заболевание Болезнь коронарных Острое, хроническое, артерий стабильное, нестабильное Инфаркт миокарда Синдром Дресслера Стенокардия Врожденный порок Вальвулярный сердца Кардиомиопатия Стенокардия Принцметала Разрыв сердца Аневризматический Перфорация перегородки | |
Ангиит | |||
Аритмия | Тахиаритмия, брадиаритмия, суправентрикулярная, вентрикулярная, нарушения проводимости | Стабильный, нестабильный Гипертензивный каротидный синусный узел | |
Застойная сердечная недостаточность | Левый, правый, оба желудочка, систолическая, диастолическая | Кардиомиопатии, такие как идиопатическая семейная, инфекционная, метаболическая, болезнь накопления, недостаточности, заболевание соединительной ткани, инфильтрация и гранулемы, нейроваскулярная | |
Миокардит | Аутоиммунный, инфекционный, идиопатич еский | ||
Легочное сердце | |||
Радиационное повреждение | |||
Тупая и проникающая травма | |||
Токсины | Токсичность кокаина, адриамицин | ||
Сосуды | Гипертензия | Легочная, вторичная | |
Декомпрессионная болезнь | |||
Фиброзно-мышечная гиперплазия | |||
Аневризма | Расслаивающая, с разрывом, расширяющаяся | ||
Легкие | Обструктивное | Астма Хронический бронхит, Эмфизема и обструкция дыхательных путей | |
Ишемическая болезнь легких | Легочная эмболия, Легочный тромбоз, жировая эмболия | ||
Болезни легких, обусловленные факторами среды | |||
Ишемическая болезнь легких | Легочная эмболия, Легочный тромбоз | ||
Интерстициальное заболевание легких | Идиопатический легочный фиброз |
- 26 015672
Врожденная | Кистозный фиброз | ||
Легочное сердце | |||
Травма | |||
Пневмония и пневмониты | Инфекционные, паразитарные, токсические, травматические, ожоговые, аспирационные | ||
Саркоидоз | |||
Поджелудочная железа | Эндокринные | Сахарный диабет типа I и II | Недостаточность бета-клеток, дисфункция, диабетическая нейропатия |
Другая недостаточность эндокринных клеток поджелудочной железы | |||
Экзокринные | Экзокринная недостаточность поджелудочной железы | Панкреатит | |
Кости | Остеопения | Первичная Вторичная | Гипогонадизм Иммобилизация Постменопаузная Возрастная Г иперпаратиреоидизм Г ипертиреоидизм Недостаточность кальция, магния, фосфора и/или витамина ϋ |
Остеомиелит | |||
Аваскулярный некроз | |||
Травма | |||
Болезнь Педжета | |||
Кожа | Алопеция | Очаговая Тотальная | Первичная Вторичная Облысение мужского типа |
Витилиго | Локализованное Г енерализованное | Первичное Вторичное | |
Образование язв | Диабетическое Пролежни | Пролежни, пролежневые язвы | |
Болезнь периферических сосудов |
- 27 015672
Хирургические раны, рваные раны | |||
Ожоговые повреждения | |||
Аутоиммунные заболевания | Системная красная волчанка, синдром Шегрена, ревматоидный артрит, гломерулонефрит, ангиит | ||
Гистиоцитоз Лангерганса | |||
Глаза | Неврит зрительного нерва | ||
Тупые и проникающие повреждения, инфекции, саркоид, серповидноклеточная болезнь, отслоение сетчатки, височный артериит | |||
Ишемия сетчатки, дегенерация желтого пятна, пигментная дегенерация сетчатки, артериосклеротическая ретинопатия, гипертензивная ретинопатия, закупорка артерии сетчатки, закупорка вены сетчатки, гипотензия, диабетическая ретинопатия, глаукома и отек желтого пятна | |||
Эмбриональные и фетальные расстройства | Асфиксия | ||
Ишемия | |||
ЦНС | Синдром хронической усталости, острый и хронический гипоосмолярный и гиперосмолярный синдромы, связанная со СПИДом деменция, смертельная электротравма | ||
Церебральная малярия | |||
Энцефалит | Бешенство, герпес | ||
Менингит | |||
Субдуральная гематома |
- 28 015672
Никотиновая зависимость | |||
наркомания и абстинентный синдром | Кокаин, героин, крэк, марихуана, ЛСД, РСР, употребление нескольких наркотиков, экстази, опиоиды, седативные снотворные, амфетамины, кофеин | ||
Обсессивнокомпульсивные расстройства | |||
Стеноз позвоночного канала, поперечный миелит, синдром Гийена-Барре, травма, компрессия корешков нервов, тепловой удар | |||
Ухо, нос, горло | Шум в ушах, синдром Меньера, потеря слуха | ||
Травматическое повреждение, баротравма | |||
Почки | Почечная недостаточность | Острая, хроническая | Васкулярная/ишемическая, интерстициальное заболевание, диабетическая болезнь почек, нефротические синдромы, инфекции, повреждение, индуцированное контрастными веществами, индуцированное химиотерапией, циклоспорином, СРВиндуцированное или профилактическое |
Радиационного повреждение | |||
Болезнь ШенлейнГеноха, | |||
Поперечнополосатая мышца | Аутоиммунные расстройства | Злокачественная миастения, дерматомиозит, полимиозит | |
Миопатии | Наследственная метаболическая, эндокринная и токсическая | ||
Тепловой удар | |||
Повреждение с раздавливанием ткани | |||
Рабдомиолиз |
- 29 015672
Митохондриальное заболевание | |||
Инфекция | Некротизирующий фасциит | ||
Половая дисфункция | Центральная и периферическая (например, эректильная дисфункция) | Вторичная импотенция в результате приема лекарств (диабет) | |
Печень | Гепатит | Вирусный, бактериальный, паразитарный | |
Ишемическая болезнь | |||
Цирроз, жировая печень | |||
Инфильтративные/ метаболические заболевания | |||
Желудочнокишечный тракт | Ишемическая болезнь кишечника | ||
Воспалительное заболевание кишечника | |||
Некротизирующий энтероколит | |||
Т рансплантация органов | Лечение донора и реципиента | ||
Репродуктивный тракт | Бесплодие | Васкулярное, аутоиммунное, аномалии матки, болезни, связанные с имплантацией | |
Эндокринная система | Гиперфункция и гипофункция желез | ||
Общие | Шок | Септический, гемодинамический | |
Паразитемия | Малярия, трипаносомоз, лейшманиоз |
Как указано выше, перечисленные заболевания, расстройства или состояния только иллюстрируют диапазон полезных применений тканезащитных пептидов согласно настоящему изобретению. Соответственно, настоящее изобретение в общем относится к превентивному, терапевтическому или профилактическому лечению последствий механической травмы или заболеваний человека. Предполагается превентивное, или терапевтическое, или профилактическое лечение заболеваний, расстройств или состояний ЦНС и/или периферической нервной системы. Предлагается превентивное, или терапевтическое, или профилактическое лечение заболеваний, расстройств или состояний, которые имеют психиатрический компонент. Предлагается превентивное, или терапевтическое, или профилактическое лечение заболеваний, расстройств или состояний, включая без ограничения заболевания, расстройства или состояния, которые имеют офтальмический, сердечно-сосудистый, сердечно-легочный, респираторный, почечный, связанный с мочевой системой, репродуктивный, желудочно-кишечный, эндокринный или метаболический компонент.
В одном варианте такая фармацевтическая композиция, содержащая тканезащитный пептид, может быть введена системно для защиты или усиления клеток, тканей или органов - мишеней. Такое введение может быть парентеральным, посредством ингаляции или через слизистую оболочку, например орально, назально, ректально, внутривагинально, подъязычно, глазным путем, под слизистую оболочку или трансдермально. Предпочтительно введение является парентеральным, например посредством внутривенной или внутрибрюшинной инъекции, а также, включая без ограничения, внутриартериальное, внутримышечное, интрадермальное и подкожное введение.
В случае других путей введения, таких как применение перфузата, инъекция в орган или другое локальное введение, будет приготовлена фармацевтическая композиция, которая создает уровни тканезащитного пептида, сходные с описанными выше уровнями. Предпочтителен уровень около 15-30 пМ.
- 30 015672
Фармацевтические композиции согласно изобретению могут содержать терапевтически эффективное количество соединения и фармацевтически приемлемый носитель. В конкретном варианте термин фармацевтически приемлемое означает одобренное контролирующим органом федерального правительства или правительства штата или указанное в списке Фармакопеи США или других общеизвестных фармакопейных списках других стран для применения на животных, более конкретно - на человеке. Термин носитель относится к разбавителю, адъюванту, эксципиенту или наполнителю, с которым вводят терапевтическое средство. Такие фармацевтические носители могут представлять собой стерильные жидкости, такие как растворы соли в воде и маслах, включая керосин, масла животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п. Физиологический раствор соли является предпочтительным носителем, когда фармацевтическую композицию вводят внутривенно. Растворы солей и водные растворы декстрозы и глицерина также можно использовать в качестве жидких носителей, особенно для инъекционных растворов.
Подходящие фармацевтические эксципиенты включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, моностеарат глицерина, тальк, хлорид натрия, обезжиренное сухое молоко, глицерин, пропиленгликоль, воду, этанол и т.п. Композиция при необходимости также может содержать небольшие количества увлажняющих средств или эмульгаторов или средств для рН-буферов. Указанные композиции могут иметь форму растворов, суспензий, эмульсии, таблеток, пилюль, капсул, порошков, препаратов длительного высвобождения и т.п. Композиция может быть приготовлена в виде суппозитория с традиционными связывающими веществами и носителями, такими как триглицериды. Соединения согласно изобретению могут быть приготовлены в виде нейтральных или солевых форм.
Фармацевтически приемлемые соли включают соли, образованные со свободными аминогруппами, например соли, полученные из хлористо-водородной, фосфорной, уксусной, щавелевой, винной кислот и т.д., и соли, образованные со свободными карбоксильными группами, такие как соли, полученные с использованием гидроксидов натрия, калия, аммония, кальция, железа, изопропиламина, триэтиламина, 2-этиламиноэтанола, гистидина, прокаина и т.д. Примеры подходящих фармацевтических носителей описаны в РеттДоп'х Рйагтасеийса1 8с1епсе§, Е.^. Майю, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме. Такие композиции будут содержать терапевтически эффективное количество соединения, предпочтительно в очищенной форме, вместе с подходящим количеством носителя, так чтобы получить форму для соответствующего введения пациенту. Препарат должен подходить для способа введения.
Препараты для повышения всасывания через слизистую оболочку пептидов, такие как тканезащитные пептиды длительного действия, также предлагаются в настоящем изобретении. Фармацевтические композиции, предназначенные для орального введения, могут быть приготовлены в виде капсул или таблеток; в виде порошков или гранул; в виде растворов, сиропов или суспензий (в водных или неводных жидкостях); в виде съедобной пены или вбитой массы или в виде эмульсий. Таблетки или твердые желатиновые капсулы могут содержать лактозу, крахмал или его производные, стеарат магния, сахарин натрия, целлюлозу, карбонат магния, стеариновую кислоту или ее соли. Мягкие желатиновые капсулы могут содержать растительные масла, воск, жиры, полутвердые или жидкие полиолы и т.д. Растворы и сиропы могут содержать воду, полиолы и сахара.
Активное средство, предназначенное для орального введения, может быть покрыто или смешано с веществом, которое замедляет распад и/или всасывание активного средства в желудочно-кишечном тракте (например, можно использовать моностеарат глицерина или дистеарат глицерина). Таким образом, можно достичь длительного высвобождения активного средства в течение нескольких часов, и, при необходимости, активное средство может быть защищено от разрушения в желудке. Фармацевтические композиции для орального введения могут быть приготовлены так, чтобы облегчить высвобождение активного средства в конкретном месте желудочно-кишечного тракта благодаря специфичному рН или состоянию ферментов.
Фармацевтические композиции, предназначенные для трансдермального введения, могут быть приготовлены в виде дискретных пластырей, предназначенных для поддержания тесного контакта с эпидермисом реципиента в течение длительного периода времени. Фармацевтические композиции, предназначенные для местного введения, могут быть приготовлены в виде мазей, кремов, суспензий, примочек, порошков, растворов, паст, гелей, спреев, аэрозолей или масел. Для местного введения на кожу, в ротовую полость, глаза или другие наружные ткани предпочтительно используют местную мазь или крем. В случае приготовления мази активный ингредиент можно использовать либо с парафиновой, либо с водорастворимой основой для мазей. Альтернативно активный ингредиент может быть приготовлен в виде крема с использованием основы типа масло-в-воде или основы типа вода-в-масле. Фармацевтические композиции, предназначенные для местного введения в глаза, включают глазные капли. В таких композициях активный ингредиент может быть растворен или суспендирован в подходящем носителе, например в водном растворителе. Фармацевтические композиции, предназначенные для местного введения в ротовую полость, включают лепешки, пастилки и растворы для полоскания полости рта.
- 31 015672
Фармацевтические композиции, предназначенные для назального и легочного введения, могут содержать твердые носители, такие как порошки (предпочтительно имеющие размер частиц в диапазоне от 20 до 500 мкм). Порошки можно вводить способом, при котором порошок нюхают, т.е. посредством быстрой ингаляции через нос из емкости с порошком, который держат близко к носу. Альтернативно, композиции, предназначенные для назального введения, могут содержать жидкие носители, например назальные спреи или назальные капли. Альтернативно, ингаляция соединений непосредственно в легкие может быть осуществлена путем глубокого вдыхания или введением через мундштук в ротовую часть глотки. Такие композиции могут содержать водные или масляные растворы активного ингредиента. Композиции для введения путем ингаляции могут поставляться в специально приспособленных устройствах, включая без ограничения аэрозоли под давлением, распылители или инсуффляторы, которые могут быть сконструированы так, чтобы давать предварительно определяемые дозы активного ингредиента. В предпочтительном варианте фармацевтические композиции согласно изобретению вводят непосредственно в носовую полость или в легкие через носовую полость или ротоглотку.
Фармацевтические композиции, предназначенные для ректального введения, могут быть приготовлены в виде суппозиториев или клизм. Фармацевтические композиции, предназначенные для вагинального введения, могут быть приготовлены в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или препаратов в виде спрея.
Фармацевтические композиции, предназначенные для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные инъекционные растворы или суспензии, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатические средства и растворенные вещества, которые делают композиции, по существу, изотоничными крови реципиента, для которого они предназначены. Другие компоненты, которые могут присутствовать в таких композициях, включают, например, воду, спирты, полиолы, глицерин и растительные масла. Композиции, предназначенные для парентерального введения, могут находиться в емкостях для однократной дозы или содержащими несколько доз, например в герметичных ампулах и флаконах, и могут храниться в высушенном замораживанием (лиофилизованном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например стерильного физиологического раствора для инъекций, непосредственно перед использованием. Приготовленные для немедленного приема инъекционные растворы и суспензии могут быть получены из стерильных порошков, гранул и таблеток. В одном варианте может быть предложен автоинжектор, содержащий инъекционный раствор тканезащитного пептида, для использования в крайнем случае в машинах скорой помощи, пунктах неотложной помощи и ситуациях в районе боевых действия и даже для самовведения в домашних условиях, особенно когда может возникать вероятность травматической ампутации, например при неосторожном обращении с газонокосилкой. Вероятность того, что клетки и ткани в отсеченной стопе или пальце будут служить после реплантации, может быть увеличена ведением тканезащитного пептида в несколько участков отсеченной части, как только это возможно, даже до прибытия медицинского персонала на место или доставки пострадавшего пациента с отрезанным пальцем в пункт неотложной помощи.
В предпочтительном варианте композицию готовят обычными способами приготовления фармацевтической композиции, предназначенной для внутривенного введения человеку. Обычно композиции для внутривенного введения представляют собой растворы в стерильном изотоничном водном буфере. При необходимости композиция также может содержать солюбилизирующий агент и местный анестетик, такой как лидокаин, для облегчения боли в месте инъекции. Как правило, ингредиенты поставляют либо по отдельности, либо смешанными вместе в стандартной лекарственной форме, например в виде сухого лиофилизованного порошка или не содержащего воды концентрата в герметично закрытой емкости, такой как ампула или пакетик, на котором указано количество активного средства. Когда композицию необходимо вводить путем инфузии, она может отпускаться вместе с бутылкой для инфузии, содержащей стерильную фармацевтически чистую воду или физиологический раствор. Когда композицию вводят путем инъекции, может предлагаться ампула со стерильным физиологическим раствором для того, чтобы можно было смешать ингредиенты перед введением.
Суппозитории в общем содержат активный ингредиент в диапазоне от 0,5 до 10 мас.%; оральные препараты предпочтительно содержат от 10 до 95% активного ингредиента.
Перфузионная композиция может быть предоставлена для применения в растворах для кювет с трансплантируемыми органами, для перфузии ίη δίΐιι или для введения в сосудистую систему донора органа перед выделением органа. Такие фармацевтические композиции могут содержать уровни тканезащитных пептидов или форму тканезащитных пептидов, не подходящую для острого или хронического, местного или системного введения человеку, но будут служить для указанных в данном описании функций при введении в труп, в кювету с органом, в качестве перфузата органа или перфузата ίη δίίυ, после которых осуществляют удаление или уменьшение уровней содержащегося в композициях тканезащитного пептида перед выделением или возращением обработанного органа или ткани в условия нормального кровообращения.
- 32 015672
Изобретение также относится к фармацевтической упаковке или набору, содержащему одну или несколько емкостей, наполненных одним или несколькими ингредиентами фармацевтических композиций согласно изобретению. Необязательно к такой емкости (емкостям) может прилагаться уведомление в форме, установленной правительственным органом, регулирующим производство, применение или продажу фармацевтических средств или биологических продуктов, и в уведомлении отражено одобрение ведомством по производству, применению или продаже в отношении введения человеку.
В другом варианте, например, тканезащитный пептид может быть доставлен в системе контролируемого высвобождения. Например, пептид может быть введен с использованием внутривенной инфузии, имплантируемого осмотического насоса, трансдермального пластыря, липосом или других способов введения. В одном варианте можно использовать насос (см. Баидег, выше; 8ейои, 1987, СВС Сгй. ВеГ. Вютеб. Еид. 14:201; Вис11\\'а1б е! а1., 1980, 8игдегу 88:507; 8аибек е! а1., 1989, N. Еид1. 1. Меб. 321:574, каждая публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). В другом варианте соединение может быть доставлено в везикуле, в частности в липосоме (см. Баидег, 8с1еисе. 249:15271533 (1990); Тгеа! е! а1., 1и Ырозотез т 111е ТБегару оГ БчГесРоиз О|зеазе аиб Саисег, Борех-Вегез1ет аиб Р1б1ег (ебз.), Ызз, №\ν Υο^к, р. 353-365 (1989); ν0 91/04014; патенте США № 4704355; Борех-Вегез!ет, там же, р. 317-327; в общем см. там же). В другом варианте можно использовать полимерные материалы (см. Меб1са1 Арр1юа!юиз оГ Сои!го11еб Ве1еазе, Баидег аиб \νί^ (ебз.), СВС Ргезз: Воса Ва!ои, Е1опба, 1974; Сои!го11еб Эгид ВюауайаЬПйу, Эгид Ргобис! Оез1ди аиб РегГогтаисе, 8то1еи аиб Ва11 (ебз.), νίΕν: №\ν Υο^к (1984); Ваидег аиб Рерраз, 1. Масгото1. 8сг Веу. Масгото1. СЕет. 23:61, 1953; см. также Беуу е! а1., 1985, 8с1еисе. 228:190; Биппд е! а1., 1989, Аии. №иго1. 25:351; Но\гагб е! а1., 1989, 1. №игозигд. 71:105 (каждая публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме).
В еще одном варианте система контролируемого высвобождения может быть помещена вблизи терапевтической мишени, т. е. клеток-мишеней, тканей-мишеней или органов-мишеней, при этом регуляции подвержена только часть системной дозы (см., например, Сообзои, р. 115-138 1и Меб1са1 АррЕсаЕоиз оГ Сои1го11еб Ве1еазе, уо1. 2, выше, 1984, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Другие системы контролируемого высвобождения обсуждаются в обзоре Баидег (1990, 8с1еисе. 249:1527-1533, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме).
В другом варианте тканезащитный пептид, приготовленный соответствующим образом, может быть введен посредством назального, орального, ректального, вагинального, глазного, трансдермального, парентерального или подъязычного введения.
В конкретном варианте может быть желательным введение тканезащитного пептида согласно изобретению местно в область, которую необходимо лечить; это может быть достигнуто, например и без ограничения, локальной инфузией во время хирургической операции, местным нанесением, например вместе с раневой повязкой после операции, путем инъекции, с помощью катетера, с помощью суппозитория или с помощью имплантата, при этом указанный имплантат состоит из пористого, непористого или гелеобразного материала, включая мембраны, такие как мембраны из силастика или волокна. Не ограничивающим примером такого варианта может быть коронарный стент, покрытый тканезащитным пептидом согласно настоящему изобретению.
Выбор предпочтительной эффективной дозы легко осуществит специалист в данной области на основании рассмотрения нескольких факторов, которые известны специалисту в данной области. Такие факторы включают конкретную форму тканезащитного пептида и его фармакокинетические параметры, такие как биодоступность, метаболизм, время полужизни и т.д., которые будут установлены во время обычных процедур в ходе разработки, как правило осуществляемых при получении одобрения контролирующего ведомства для фармацевтического соединения.
Дополнительные факторы, учитываемые при выборе дозы, включают состояние или заболевание, подвергаемое лечению, или пользу, которую необходимо достичь для здорового человека, массу тела пациента, путь введения, является ли введение острым или хроническим, сопутствующее лечение медикаментами и другие факторы, которые, как хорошо известно, влияют на эффективность вводимых фармацевтических средств. Таким образом, точная доза определяется решением лечащего врача и в зависимости от обстоятельств для каждого пациента, например в зависимости от состояния и иммунного статуса отдельного пациента, и в соответствии со стандартными клиническими способами.
В другом аспекте настоящего изобретения фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может содержать тканезащитный пептид, приготовленный в виде препарата по меньшей мере с одной малой молекулой, которая проявляет тканезащитную функцию. Подходящие малые молекулы включают без ограничения стероиды (например, лазароиды и глюкокортикоиды), антиоксиданты (например, коэнзим р10, альфа-липоевую кислоту и НАБН), антикатаболические ферменты (например, глутатионпероксидаза, супероксиддисмутаза, каталаза, синтетические каталитические ловушки, а также миметики), производные индола (например, индоламины, карбазолы и карболины), агенты, нейтрализующие азотную кислоту, аденозин/агонисты аденозина, фитохимические вещества (флавоноиды), растительные экстракты (гинко билоба и куркума), витамины (витамины А, Е и С), ингибиторы акцепторов электронов оксидаз (например, ингибиторы акцепторов электронов ксантиноксидазы), минералы (например, медь, цинк и магний), нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (напри
- 33 015672 мер, аспирин, напроксен и ибупрофен) и их комбинации. Дополнительные средства, включая без ограничения противовоспалительные средства (например, кортикостероиды, преднизон и гидрокортизон), глюкокортикоиды, стероиды, нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (например, аспирин, ибупрофен, диклофенак и ингибиторы СОХ-2), бета-агонисты, антихолинергические средства и метилксантины, иммуномодулирующие средства (например, малые органические молекулы, модуляторы Т-клеточных рецепторов, модуляторы рецепторов цитокинов, средства, истощающие Т-клетки, антагонисты цитокинов, антагонисты монокинов, ингибиторы лимфоцитов или противоопухолевые средства), инъекции золота, сульфасалазин, пеницилламин, антиангиогенные средства (например, ангиостатин), антагонисты ΤΝΓ-α (например, антитела против ΤΝΓ-α) и эндостатин, дапсон, псоралены (например, метоксален и триоксален), противомалярийные средства (например, гидроксихлорохин), противовирусные средства и антибиотики (например, эритромицин и пенициллин), могут быть использованы вместе с фармацевтическими композициями согласно настоящему изобретению.
В другом аспекте изобретения предлагается перфузат или перфузионный раствор для перфузии и хранения органов для трансплантации, при этом перфузионный раствор содержит количество тканезащитного пептида, эффективное для защиты чувствительных клеток и ассоциированных клеток, тканей или органов. Трансплантация включает без ограничения аллотрансплантацию, при которой орган (включая клетки, ткани или другую часть тела) берут из одного организма донора и трансплантируют в другой организм реципиента, при этом и донор, и реципиент относятся к одному и тому же виду; аутотрансплантацию, при которой орган берут из одной части тела и помещают в другую, включая хирургические процедуры на столе, при которых орган может быть извлечен и в состоянии ех νίνο подвергнут резекции, коррекции или другим манипуляциям, таким как удаление опухоли, и затем возвращен в исходное положение или использован для ксенотрансплантации, при этом трансплантацию тканей или органов осуществляют между представителями разных видов. В одном варианте перфузионный раствор представляет собой раствор из университета Висконсин (И№) (патент США № 4798824, включенный в данное описание в виде ссылки в полном объеме), который содержит примерно от 1 до 25 ед./мл (10 нг = 1 ед.) тканезащитного пептида, 5% гидроксиэтилкрахмала (имеющего молекулярную массу примерно от 200000 до 300000 и, по существу, не содержащего этиленгликоля, этиленхлоргидрина, хлорида натрия и ацетона); 25 мМ КН2РО4; 3 мМ глутатион; 5 мМ аденозин; 10 мМ глюкозу; 10 мМ НЕРЕ5-буфер; 5 мМ глюконат магния; 1,5 мМ СаС12; 105 мМ глюконат натрия; 200000 единиц пенициллина; 40 единиц инсулина; 16 мг дексаметазона; 12 мг фенолового красного; и имеет рН 7,4-7,5 и осмолярность примерно 320 мОсм/л. Раствор используют для поддержания трупных почек и поджелудочной железы перед трансплантацией. При использовании раствора сохранение можно продлить свыше 30-часового предела, рекомендуемого для сохранения трупной почки. Указанный конкретный перфузат является только иллюстративным для ряда таких растворов, которые могут быть адаптированы для применения согласно изобретению посредством включения эффективного количества тканезащитного пептида. В следующем варианте перфузионный раствор содержит примерно от 1 до 500 нг/мл тканезащитного пептида или примерно от 40 до 320 нг/мл тканезащитного пептида. Как указано выше, в данном аспекте изобретения можно использовать любую форму тканезащитного пептида.
Хотя предпочтительным реципиентом тканезащитного пептида для описанных целей является человек, предлагаемые способы в равной мере применимы по отношению к другим млекопитающим, особенно домашним животным, сельскохозяйственным животным, комнатным животным и животным в зоопарках. Однако изобретение не ограничено таким образом и может быть полезным для любого млекопитающего.
В следующих аспектах изобретения ех νίνο можно использовать любой тканезащитный пептид, такой как, без ограничения, описанные выше пептиды.
В другом аспекте изобретения предлагаются способы и композиции для усиления жизнеспособности клеток, тканей или органов, которые не отделены от сосудистой системы барьером из эндотелиальных клеток, при непосредственном воздействии на клетки, ткани или органы фармацевтической композицией, содержащей тканезащитный пептид, или введением или контактированием фармацевтической композиции, содержащей тканезащитный пептид, с сосудистой системой ткани или органа. Повышенная активность чувствительных клеток в обработанной ткани или органе ответственна за оказываемые позитивные эффекты.
Подобно другим тканезащитным соединениям, основанным на эритропоэтине, тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению вероятно могут быть транспортированы с поверхности просвета к поверхности базальной мембраны эндотелиальных клеток капилляров органов с плотными контактами эндотелиальных клеток, включая, например, головной мозг, сетчатку и семенники. Таким образом, отвечающие клетки вдоль барьера могут представлять собой чувствительные мишени для полезных эффектов тканезащитных пептидов, и другие типы клеток или ткани или органы, которые содержат и зависят в целом или частично от отвечающих клеток, могут быть мишенями в случае применения способов согласно изобретению. Не имея намерения быть связанными с какой-либо конкретной теорией, авторы полагают, что после трансцитоза тканезащитного пептида он может взаимодействовать с тканезащитным рецептором на отвечающей клетке, например нейроне, клетке глаза (например, сетчатки), жировой клет
- 34 015672 ке соединительной ткани, волос, зубов, слизистой оболочки, поджелудочной железы, эндокринной, уха, эпителиальной, кожи, мышц, сердца, легкого, печени, почек, тонкого кишечника, надпочечника (например, коры надпочечника, мозгового вещества надпочечника), капилляров, эндотелия, семенников, яичника или эндометрия, и связывание рецептора может инициировать каскад сигнальной трансдукции, приводящий к активации программы экспрессии генов в отвечающей клетке или ткани, что приводит к защите клетки, или ткани, или органа от повреждения, такого как повреждение токсинами, химиотерапевтическими средствами, лучевой терапией, гипоксией и т. д. В другом варианте тканезащитный пептид может быть поперечно сшит с соединением, которое может пересекать барьер, таким как карбамилированный эритропоэтин, чтобы его транспортировать через барьер согласно инструкциям заявки РСТ № РСТ/И801/49479, заявок на выдачу патента США № 10/188905 и 10/185841, включенных в данное описание в виде ссылки. Соответственно способы защиты ткани, содержащей отвечающие клетки, от повреждения или гипоксического стресса и усиления функции такой ткани подробно описаны ниже.
При практическом осуществлении одного варианта изобретения пациента-млекопитающего подвергают системной химиотерапии для лечения злокачественной опухоли, включая лучевую терапию, которая обычно оказывает неблагоприятное действие, например повреждает нервы, легкие, сердце, яичники или семенники. Введение фармацевтической композиции, содержащей тканезащитный пептид, которая описана выше, осуществляют перед или во время химиотерапии и/или лучевой терапии, чтобы защитить различные ткани и органы от повреждения химиотерапевтическим средством, например чтобы защитить семенники. Обработка может продолжаться до тех пор, пока циркулирующие уровни химиотерапевтического средства не упадут ниже уровня потенциально опасного для организма млекопитающего.
При практическом осуществлении другого варианта изобретения предполагают забор различных органов от пострадавшего в автомобильной катастрофе для трансплантации нескольким реципиентам, при этом некоторые органы необходимо транспортировать на большое расстояние и в течение длительного периода времени. Перед забором органов донора инфузируют фармацевтической композицией, содержащей тканезащитные пептиды, охарактеризованные в данном описании. Собранные для отправки органы перфузируют перфузатом, содержащим тканезащитные пептиды, охарактеризованные в данном описании, и хранят в кювете, содержащей тканезащитные пептиды. Некоторые органы перфузируют непрерывно с помощью устройства для пульсирующей перфузии, используя перфузат, содержащий тканезащитные пептиды согласно настоящему изобретению. Происходит минимальное ухудшение функционирования органов во время транспорта и при имплантации и реперфузии органов ш κίΐιι.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения человек, участвующий в опасной деятельности, может принимать дозу фармацевтической композиции, содержащей тканезащитный пептид, достаточную либо для предотвращения повреждения (т.е. замедления проявления, ингибирования или остановки), либо защиты от повреждения, либо уменьшения повреждения, возникающего в результате повреждения отвечающей клетки, ткани или органа. В частности, такой способ лечения может быть применим для людей разных профессий, при которых возможна травма, без ограничения, таких как профессиональные спортсмены (ныряльщики, гонщики, футболисты и т.д.), военные (солдаты, парашютистыдесантники), персонал служб экстренной помощи (полицейские, пожарные, работники неотложной медицинской помощи и работники служб по чрезвычайным ситуациям), каскадеры и рабочие-строители. Кроме того, профилактическое применение тканезащитных пептидов предполагается в таких видах отдыха, как, включая без ограничения, скалолазание, спускание по канату, затяжные прыжки с парашютом, гонки, езда на велосипеде, футбол, регби, бейсбол и дайвинг, при которых существует риск травмы.
В другом варианте осуществления изобретения хирургическая операция по восстановлению клапана сердца требует временной остановки сердца и окклюзии артерий. Перед операцией пациента инфузируют тканезащитным пептидом. Такая обработка предотвращает гипоксическое ишемическое повреждение клеток, особенно после реперфузии. Кроме того, фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению можно использовать профилактически, чтобы подготовить пациента к операции, пытаясь при этом ограничить травму, связанную с хирургической операцией, или помочь пациенту восстановиться после хирургической операции. Хотя данный способ лечения с использованием фармацевтических композиций, содержащих тканезащитные пептиды, имеет профилактическое применение в случае хирургических операций, он может быть особенно применим при операциях, которые вызывают временные ишемические явления, включая без ограничения, процедуры шунтирования (коронарного шунтирования), процедуры ангиопластики, ампутации и трансплантации, а также операции, осуществляемые непосредственно на чувствительных клетках, тканях или органах, таких как операции на головном и спинном мозге, и операции на открытом сердце. Такие операции могут проходить с применением искусственного кровообращения (сердечно-легочного шунта).
В другом варианте осуществления изобретения тканезащитный пептид согласно изобретению можно использовать при любой хирургической операции, такой как операция с сердечно-легочным шунтированием. В одном варианте введение фармацевтической композиции, содержащей тканезащитные пептиды, которые описаны выше, осуществляют до, во время и/или после процедуры шунтирования, чтобы защитить головной мозг, сердце и другие органы.
- 35 015672
В упомянутых выше примерах, в которых тканезащитный пептид согласно изобретению используют для применений ех νίνο или для применений ίη νίνο, чтобы обработать чувствительные клетки, такие как клетки нервные ткани, ткани сетчатки, сердца, легкого, печени, почки, тонкого кишечника, коры надпочечников, мозгового вещества надпочечников, эндотелиальных клеток капилляров, клетки или ткани семенников, яичника или эндометрия, изобретение относится к фармацевтической композиции в стандартной лекарственной форме, предназначенной для защиты или усиления чувствительных клеток, тканей или органов, расположенных дистально по отношению к сосудистой системе, которая содержит количество тканезащитного пептида в диапазоне примерно от 0,01 пг до 7,5 мг, от 0,5 пг до 6,5 мг, от 1 пг до 5 мг, от 500 пг до 5 мг, от 1 нг до 5 мг, от 500 нг до 5 мг, от 1 мкг до 5 мг, от 500 мкг до 5 мг или от 1 до 5 мг, и фармацевтически приемлемый носитель. В предпочтительном варианте количество тканезащитного пептида составляет примерно от 0,5 пг до 1 мг. В предпочтительном варианте препарат содержит тканезащитные пептиды, которые не являются эритропоэтическими.
В следующем аспекте изобретения введение тканезащитных пептидов можно применять для восстановления когнитивной функции у млекопитающих, которые были подвергнуты травме головного мозга. Введение тканезащитных пептидов либо с 5-дневной, либо 30-дневной задержкой должно восстанавливать функцию по сравнению с млекопитающими, обработанными плацебо, свидетельствуя о способности тканезащитного пептида регенерировать или восстанавливать активность головного мозга. Таким образом, изобретение также относится к применению тканезащитных пептидов для приготовления фармацевтической композиции для лечения травмы головного мозга и других когнитивных дисфункций, включая лечение значительно позже повреждения (например, через 3 дня, 5 дней, 1 неделю, 1 месяц или дольше). Изобретение также относится к способу лечения когнитивной дисфункции после повреждения посредством введения эффективного количества тканезащитных пептидов. В данном аспекте изобретения можно использовать любой тканезащитный пептид, охарактеризованный в данном описании.
Кроме того, указанный восстановительный аспект изобретения относится к применению любых тканезащитных пептидов, охарактеризованных в данном описании, получения фармацевтической композиции для восстановления дисфункции клеток, тканей или органов, при котором лечение начинают после и значительно позже начального поражения, ответственного за дисфункцию. Кроме того, лечение с использованием тканезащитных пептидов согласно изобретению может продолжаться на протяжении периода заболевания или состояния в острой фазе, а также в хронической фазе.
Тканезащитный пептид согласно изобретению можно вводить системно в дозе примерно от 1 нг до 100 мкг/кг массы тела, предпочтительно примерно 5-50 мкг/кг массы тела, наиболее предпочтительно примерно 10-30 мкг/кг массы тела на одно введение. Указанная эффективная доза должна быть достаточной для достижения уровней тканезащитных пептидов в сыворотке примерно более чем 80, 120 или 160 нг/мл сыворотки после введения. Такие уровни в сыворотке могут быть достигнуты примерно через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 ч после введения. Указанные дозы при необходимости можно повторять. Например, введение можно повторять ежедневно, пока это клинически необходимо, или через соответствующий интервал, например каждые 1-12 недель, предпочтительно каждые 1-3 недели. В одном варианте, эффективное количество тканезащитного пептида и фармацевтически приемлемого носителя может быть упаковано во флакон для однократной дозы или другую емкость. В другом варианте применяют тканезащитные пептиды, которые способны проявлять активности, охарактеризованные в данном описании, но не вызывающие повышения концентрации гемоглобина или гематокрита. Такие тканезащитные пептиды предпочтительны в случаях, когда способы согласно настоящему изобретению предполагается применять хронически.
5.4. Трансцитоз.
Молекула носителя и тканезащитный пептид.
Настоящее изобретение, кроме того, относится к способу облегчения транспорта тканезащитного пептида через барьер эндотелиальных клеток у млекопитающего посредством введения композиции, которая содержит тканезащитный пептид вместе с пептидом-носителем, при этом такой пептид способен преодолевать барьер эндотелиальных клеток, такой как эритропоэтин, как описано выше. Плотный контакт между эндотелиальными клетками в некоторых органах организма создает барьер для проникновения некоторых молекул. В случае лечения различных состояний в органе с таким барьером могут быть желательны средства для облегчения прохождения тканезащитного пептида.
Тканезащитный пептид в качестве молекулы носителя.
Тканезащитные пептиды согласно изобретению могут быть применимы в качестве носителей для доставки других молекул через гематоэнцефалический и другие сходные барьеры, через которые они могут проходить. Готовят композицию, содержащую молекулу, которую нужно перенести через барьер, с тканезащитным пептидом, и периферическое введение композиции приводит к трансцитозу композиции через барьер. Ассоциация между молекулой, которую нужно транспортировать через барьер, и тканезащитным пептидом может быть в виде лабильной ковалентной связи, и в данном случае молекула освобождается от связи с тканезащитным пептидом после пересечения барьера. Если требуемая фармакологическая активность молекулы сохраняется или не подвергается влиянию связывания с тканезащитными пептидами, то такой комплекс может быть введен.
- 36 015672
Специалисту в данной области будут известны различные способы связывания молекул с тканезащитными пептидами согласно изобретению и другими средствами, описанными выше, ковалентно, нековалентно и иным образом. Кроме того, оценку эффективности композиции можно легко осуществить в экспериментальной системе. Связывание молекул с тканезащитными пептидами можно осуществить любым способом, включая лабильное ковалентное связывание, поперечные сшивки и т.д. Можно использовать взаимодействия биотин/авидин; например, может быть образован комплекс биотинилированных тканезащитных пептидов согласно изобретению с лабильным конъюгатом авидина и молекулой, которую требуется транспортировать. Как указано выше, гибридная молекула может быть получена способами рекомбинации или синтеза, например слитый или химерный полипептид, который содержит и домен молекулы с требуемой фармакологической активностью, и домен, ответственный за модулирование активности тканезащитного рецептора пептидов. В молекулу могут быть включены сайты расщепления протеазами.
Молекула может быть конъюгирована с тканезащитным пептидом согласно изобретению посредством полифункциональной молекулы, т.е. полифункционального поперечно сшивающего агента. В используемом в данном описании смысле термин полифункциональная молекула охватывает молекулы, имеющие одну функциональную группу, которая может взаимодействовать более чем один раз подряд, такие как формальдегид, а также молекулы более чем с одной химически активной группой. В используемом в данном описании смысле термин химически активная группа относится к функциональной группе поперечно сшивающего агента, которая взаимодействует с функциональной группой на молекуле (например, пептиде, белке, углеводе, нуклеиновой кислоте, в частности гормоне, антибиотике или противоопухолевом средстве, которые необходимо доставить через эндотелиальный клеточный барьер), образуя при этом ковалентную связь между поперечно сшивающим агентом и данной молекулой. Термин функциональная группа сохраняет свое стандартное значение в органической химии. Полифункциональными молекулами, которые можно использовать, предпочтительно являются биосовместимые линкеры, т.е. они являются некарциногенными, нетоксичными и, по существу, неиммуногенными ίη νίνο. Полифункциональные поперечно сшивающие агенты, такие как агенты, известные в данной области и охарактеризованные в данном описании, легко можно тестировать в моделях на животных, чтобы определить их биосовместимость. Полифункциональная молекула предпочтительно является бифункциональной. В используемом в данном описании смысле термин бифункциональная молекула относится к молекуле с двумя химически активными группами. Бифункциональная молекула может быть гетеробифункциональной или гомобифункциональной.
Гетеробифункциональный поперечно сшивающий агент обеспечивает направленное сопряжение. Особенно предпочтительные полифункциональные молекулы в достаточной степени растворимы в воде для того, чтобы реакции поперечного связывания происходили в водных растворах, таких как водные растворы, забуференные при рН 6-8, и для того, чтобы полученный в результате конъюгат сохранял растворимость в воде для более эффективного биораспределения. Обычно полифункциональная молекула ковалентно связывается с аминогруппой или сульфгидрильной функциональной группой. Однако полифункциональные молекулы, взаимодействующие с другими функциональными группами, такими как группы карбоновых кислот или гидроксильные группы, также предполагаются в настоящем изобретении.
Гомобифункциональные молекулы имеют по меньшей мере две химически активные функциональные группы, которые являются одинаковыми. Химически активные функциональные группы гомобифункциональной молекулы включают, например, альдегидные группы и активные группы сложных эфиров. Гомобифункциональные молекулы, имеющие альдегидные группы, включают, например, глутаровый альдегид и пробковый альдегид. Применение глутарового альдегида в качестве поперечно сшивающего агента описано в ΡοζηαιΜςν с1 а1., 8с1епсе. 223, 1304-1306 (1984). Гомобифункциональные молекулы, имеющие по меньшей мере две единицы активного сложного эфира, включают сложные эфиры дикарбоновых кислот и Ν-гидроксисукцинимида. Некоторые примеры таких Ν-сукцинимидных сложных эфиров включают дисукцинимидилсуберат и дитио-бис-(сукцинимидилпропионат) и их растворимые соли бис-сульфоновой кислоты и бис-сульфонатные соли, такие как соли натрия и калия. Указанные гомобифункциональные реагенты доступны из Ρ^е^се, РоскГогб, ΙΙΙίηοίδ.
Гетеробифункциональные молекулы имеют по меньшей мере две разные химически активные группы. Химически активные группы взаимодействуют с разными функциональными группами, например, присутствующими на пептиде и молекуле. Две указанные разные функциональные группы, которые взаимодействуют с химически активной группой гетеробифункционального поперечно сшивающего агента, обычно представляют собой аминогруппу, например эпсион-аминогруппу лизина; сульфгидрильную группу, например тиольную группу цистеина; карбоновую кислоту, например карбоксилат на аспарагиновой кислоте; или гидроксильную группу, например гидроксильную группу серина.
Конечно, некоторые из многообразных тканезащитных пептидов согласно изобретению могут не иметь подходящих химически активных групп, доступных для использования с некоторыми поперечно сшивающими агентами; однако специалист в данной области достаточно осведомлен относительно того, как выбрать поперечно сшивающие агенты на основании имеющихся групп для поперечного связывания в тканезащитных пептидах согласно изобретению.
- 37 015672
Когда химически активная группа гетеробифункциональной молекулы образует ковалентную связь с аминогруппой, ковалентная связь обычно будет представлять собой амидную или имидную связь. Химически активная группа, которая образует ковалентную связь с аминогруппой, может, например, представлять собой активированную карбоксилатную группу, галогенкарбонильную группу или сложноэфирную группу. Предпочтительной галогенкарбонильной группой является группа хлоркарбонила. Сложноэфирные группы предпочтительно представляют собой химически активные сложноэфирные группы, такие как, например, №гидроксисукцинимидная сложноэфирная группа.
Другой функциональной группой обычно является либо тиольная группа, группа, которая может быть превращена в тиольную группу, или группа, которая образует ковалентную связь с тиольной группой. Ковалентная связь, как правило, будет представлять собой тиоэфирную связь или дисульфид. Химически активная группа, которая образует ковалентную связь с тиольной группой, может, например, представлять собой двойную связь, которая взаимодействует с тиольными группами или активированным дисульфидом. Химически активной группой, содержащей двойную связь и способной взаимодействовать с тиольной группой, является малеимидогруппа, хотя также возможны другие группы, такие как акрилонитрил. Химически активной дисульфидной группой, например, может быть 2-пиридилтиогруппа или группа 5,5'-дитио-бис-(2-нитробензойной кислоты). Некоторые примеры гетеробифункциональных реагентов, содержащих химически активные дисульфидные связи, включают №сукцинимидил-3-(2пиридилдитио)пропионат (СаЕккои, е! а1., 1978, ВюсЕет 1., 173:723-737), δ-4-сукцинимидилоксикарбонил-альфа-метилбензилтиосульфат натрия и 4-сукцинимидилоксикарбонил-альфа-метил-(2пиридилдитио)толуол. Предпочтительным является №сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат. Некоторые примеры гетеробифункциональных реагентов, содержащих химически активные группы, имеющие двойную связь, которые взаимодействуют с тиольной группой, включают сукцинимидил-4-(№ малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат и сукцинимидил-м-малеимидобензоат.
Другие гетеробифункциональные молекулы включают сукцинимидил-3-(малеимидо)пропионат, сульфосукцинимидил-4-(п-малеимидофенил)бутират, сульфосукцинимидил-4-(№малеимидометилциклогексан)-1-карбоксилат, малеимидобензоил-Ы-гидроксисукцинимидный сложный эфир. Предпочтительна натрий-сульфонатная соль сукцинимидил-м-малеимидобензоата. Многие из указанных выше гетеробифункциональных реагентов и их сульфонатных солей доступны от Р1егсе СЕет1са1 Со., Коск&гЕ, 1Шпо18 υδΑ.
Необходимость того, должны ли описанные выше конъюгаты быть обратимыми или лабильными, легко может определить специалист в данной области. Конъюгат может быть проверен ίη уЕго в отношении требуемой фармакологической активности. Если конъюгат сохраняет свойства (свойства конъюгированной молекулы и свойства тканезащитного пептида), то может быть проверена его пригодность ίη νί\Ό. Если конъюгированная молекула требует отделения от тканезащитного пептида для своей активности, то предпочтительной будет лабильная связь или обратимое связывание с длительно действующим эритропоэтином или длительно действующим тканезащитным цитокином. Характеристики лабильности также можно тестировать, используя стандартные способы ίη νίΙΐΌ перед тестированием ίη νί\Ό.
Дополнительную информацию в отношении того, как получить и как применять указанные, а также другие полифункциональные реагенты, можно найти в следующих публикациях или других публикациях, имеющихся в данной области:
С0г188оп, 1. е! а1., 1978, ВюсЕет. 1. 173:723-737;
СитЬег, кА. е! а1., 1985, Ме!ЕоЕк ίη Εηζутο1ο§у. 112:207-224;
1ие, К. е! а1., 1978, ВюсЕет. 17:5399-5405;
δυη, Т.Т. е! а1., 1974, ВюсЕет. 13:2334-2340;
В1ай1ег, ν.Α. е! а1., 1985, ВюсЕет. 24:1517-152;
Ьт, Е.Т. е! а1., 1979, ВюсЕет. 18:690-697;
Υοи1е, К.1. аЫ Ыем11е, Ό.Μ. 1г., 1980, Ргос. ЫаЙ. АсаЕ. 8οΐ. υ.δ.Α. 77:5483-5486;
Ьетег, К.А. е! а1., 1981, Ргос. №!1. АсаЕ. δα. υ.δ.Α. 78:3403-3407;
Лтд, δ.Μ. аий Мого1, Μ., 1983, ВюсЕет. ВюрЕук. Ас!а. 761:162;
Саи1йе1Е, М.Р. е! а1., 1984, ВюсЕет. 81:7772-7776;
Знаток, IV., 1982, ВюсЕет. 21:3950-3955;
ΥοкЕ^!аке, δ. е! а1., 1979, Еиг. 1. ВюсЕет. 101:395-399;
ΥοкЕ^!аке, δ. е! а1., 1982, 1. ВюсЕет. 92:1413-1424;
Р11сЕ, Р.Е. алЕ С/есЕ, М.Р., 1979, 1. Вю1. СЕет. 254:3375-3381;
№νκ^ Ό. е! а1., 1987, 1. Вю1. СЕет. 262:8483-8487;
Йотат А.1 ааЕ Еа^^Ьаηкκ, О., 1976, 1. Мо1. Вю1. 104:243-261;
НатаЕа, Н. авЕ Ткигио, Т., 1987, Апя1. ВюсЕет. 160:483-488 или
НакЕ1Еа, δ. е! а1., 1984, 1. АррЕеЕ ВюсЕет. 6:56-63, каждая публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме.
Кроме того, способы перекрестного сшивания приведены в обзоре Меаик аий Еее^у, 1990, В1осои)ида!е СЕет. 1:2-12, который включен в данное описание в виде ссылки в полном объеме.
- 38 015672
Барьеры, прохождение которых осуществляют описанными выше способами и с применением композиций согласно настоящему изобретению, включают без ограничения гематоэнцефалический барьер, гематоофтальмический барьер, гематотестикулярный барьер, гематоовариальный барьер, барьер кровьнервы, барьер кровь-спинной мозг и гематоплацентарный барьер.
Молекулы-кандидаты для транспорта через барьер эндотелиальных клеток включают, например, гормоны, такие как гормон роста, нейротрофические факторы, антибиотики, противовирусные средства или противогрибковые средства, такие как средства, в норме не входящие в головной мозг и другие органы, имеющие барьеры, пептидные радиофармацевтические средства, антисмысловые лекарственные средства, антибиотики и противовирусные средства против биологически активных агентов, фармацевтические средства и противоопухолевые средства. Не ограничивающие примеры таких молекул включают гормоны, такие как гормон роста, фактор роста нервов (ΝΟΡ), полученный из головного мозга нейротрофический фактор (ΒΌΝΡ), цилиарный нейротрофический фактор (ΟΝΤΡ), основной фактор роста фибробластов (ЬРОР), трансформирующий фактор роста β1 (Τ0Ρβ1), трансформирующий фактор роста β2 (Τ0Ρβ2), трансформирующий фактор роста β3 (Τ0Ρβ3), интерлейкин 1, интерлейкин 2, интерлейкин 3 и интерлейкин 6, ΑΖΤ, антитела против фактора некроза опухолей, и иммунодепрессанты, такие как циклоспорин. Кроме того, с тканезащитными пептидами согласно настоящему изобретению могут быть связаны красители или маркеры, чтобы визуализировать клетки, ткани или органы в случае головного мозга и других имеющих барьеры органах для диагностических целей. В качестве примера маркер, используемый для визуализации бляшки в головном мозге, может быть связан с тканезащитным пептидом, чтобы определить прогрессирование болезни Альцгеймера у пациента.
Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей молекулу, которую необходимо транспортировать посредством трансцитоза через барьер, образованный плотным контактом эндотелиальных клеток, и тканезащитный пептид, который описан выше. Изобретение, кроме того, относится к применению конъюгата молекулы и тканезащитного пептида цитокина, который описан выше в связи с получением фармацевтической композиции для доставки молекулы через барьер, который описан выше.
Различные модели на животных и тесты ίη νίίτο нейрозащиты и трансцитоза предлагаются в заявке РСТ/и801/49479 (включенной в данное описание в виде ссылки в полном объеме) для того, чтобы продемонстрировать эффективность тканезащитных пептидов согласно изобретению. Для трансцитоза модельные белки, конъюгированные с длительно действующими эритропоэтинами согласно изобретению, оценивают в отношении транспорта в головной мозг после парентерального введения. Указанные тесты в моделях ίη νίίτο и в моделях на животных являются прогностическими в отношении эффективности предлагаемых в изобретении соединений у других видов млекопитающих, включая человека.
Настоящее изобретение можно лучше понять при обращении к следующим не ограничивающим примерам, которые предложены для иллюстрации изобретения. Следующие примеры приведены для того, чтобы более полно проиллюстрировать предпочтительные варианты осуществления изобретения. Однако их никоим образом не следует считать ограничивающими широкий объем изобретения.
6. Примеры
Пример 1. Способ синтеза пептидов.
А. Синтез пептида Α (БЕР ΙΌ N0:32), соответствующего аминокислотной последовательности ЕРО 38-57 и пептида В (БЕР ΙΌ N0:34), соответствующего аминокислотной последовательности ЕРО 58-82.
Пептид Α (БЕР ΙΌ N0:32) и пептид В (БЕР ΙΌ N0:34), фрагменты ЕРО (см. табл. 1) синтезировали, используя ступенчатый твердофазный синтез пептидов с применением Вос-химии и нейтрализации ίη 8Йц, который описан в Вапб, Ό., Сйорга, N. апб Ксн1. Б., Τοί;·ι1 БупШешк οί СгатЬш, ί. ΑΜ. СНЕМ. Б0С. 2004, 126, 1377-1383 (публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Коротко, два фрагмента, соответствующих аминокислотной последовательности ЕРО 38-57 (пептид С, NIΤVР^ΤΚVNΡΥΑ^ΚΚΜЕV6, БЕр ΙΌ N0:29) и аминокислотной последовательности ЕРО 58-82 (пептид Ό, ^^ΑVЕV\V^^^Α^^БЕΑV^Β^^Α^^V. БЕр ΙΌ N0:30) синтезировали на -0СНЬ-Рат-смолах (пептиды, содержащие свободный “карбоксил) или на НБСН2СН2С0-Ьец-0СН2-Рат-смоле (пептиды, содержащие “тиоэфир). Во время синтеза боковые цепи различных аминокислот защищали следующим образом: Αγ§(Το8), Α8η(Xаη), Α8р(0сНеx), Су5(4-СН3,Вх1) или Су^ЛСМ), 01ц(0сНех), Ьу8(2-С1^), Бег(В/1), ΤΡγ(Βζ1), Τ\τ(Βγ-Ζ). После сборки пептидной цепи защиту пептидов удаляли и одновременно отщепляли от смолы-носителя обработкой безводным НР, содержащим п-крезол (90:10, об./об.) в течение 1 ч при 0°С. После выпаривания НР при пониженном давлении неочищенные продукты осаждали и растирали в охлажденном диэтиловом эфире и пептиды растворяли в 50% водном ацетонитриле, содержащем 0,1% ТФУ, и очищали, используя систему препаративной ВЭЖХ. Состав пептидов подтверждали, используя ЖХ-МС.
- 39 015672
Пример 2. Подтверждение опосредованной пептидами защиты тканей.
Тканезащитные пептиды тестировали в отношении любой тканезащитной активности, используя анализ седалищного нерва. Крыс 8ргадие-Оа^1еу (250-300 г) (шесть на группу, включая контроль) анестезировали, используя изофлуран (Вах!ег ΝΡί' 10019-773-60) и настольную лабораторную систему анестезии (флоуметр устанавливали на 2-3 л/мин, 55 фунтов на кв.дюйм), по меньшей мере в течение 3 мин. Затем крысу помещали на гомеотермическое одеяло, чтобы обеспечить поддержание внутренней температуры крысы 35-37°С во время операции. Внутреннюю температуру контролировали посредством ректального зонда. Правый седалищный нерв анестезированной крысы обнажали на середине бедра посредством рассечения четырехглавой мышцы; с помощью скальпеля с лезвием 15 делали разрез размером 2 см через кожу параллельно и над четырехглавой мышцей и четырехглавую мышцу разрезали, чтобы открыть седалищный нерв, используя пару анатомических ножниц. Затем седалищный нерв освобождали от окружающих пленок. Плетеную шелковую нить 2-0 (Ε!Ρκοη, 685-С) пропускали под нервом и концы нити пропускали через направитель, который поддерживали перпендикулярно к нерву. Затем конец нити привязывали к неэластичному шнуру, который затем накидывали на систему шкивов (шкив ΝΥΕ, несущий ΜΤΏ 1/4 В (РО номер 04174-01) со стабилизатором), и груз массой 100, прикрепленный к неэластичному шнуру медленно отпускали. Груз висел в течение 1 мин, затем шелковую нить отрезали, чтобы освободить от груза.
Затем дозу 289 пмоль/кг карбамилированного эритропоэтина, дозу 289 пмоль/кг одного пептида из серии Л-1 (см. табл. 1) или ΡΒ8 инъецировали в хвостовую вену, используя инсулиновый шприц объемом 1/2 см3. 20-мерный фрагмент (соответствующий аминокислотам 102-121) полученного из пигментного эпителия фактора роста (ΡΕΌΡ), который не следует из приведенного выше описания, использовали в качестве контроля.
Мышцу и хирургический разрез затем закрывали и крысам подкожно инъецировали 5 мл лактированного раствора Рингера. Внутреннюю температуру крысы поддерживали при 35-37°С, используя одеяло с подогревом в период восстановления.
В течение следующих 4 дней определяли разведение между пальцами задних конечностей крыс, помещая крысу в акриловую трубку диаметром 30 см на сканирующую поверхность сканера пальцев. После выжидания в течение 5 мин, чтобы прошла акклиматизация сканировали заднюю лапу крысы, на которой четко видны все 5 пальцев. Брали три приемлемых изображения для каждой крысы. На основе полученных при сканировании изображений измеряли расхождение пальцев (расстояние между подушечкой первого пальца и подушечкой пятого пальца) и расхождение между промежуточными пальцами (расстояние между подушечкой второго пальца и подушечкой четвертого пальца). Затем рассчитывали статистический индекс седалищного нерва согласно 8. Ε^Ьау^ак!а^ е! а1., 2003, Ργο^ Асаб. 8ск И8А, 100, 6741-6746 (публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме) и проводили статистический анализ.
Все пептиды, за исключением В (8ΕΟ ΙΌ ΝΟ:34), Н (8ΕΟ ΙΌ ΝΟ:47) и производного ΡΕΌΡ, в равной мере проявляли защитные свойства, давая статистический индекс седалищного нерва (88Ι) примерно -0,57 по сравнению с 88Ι примерно от -67 до -68 для ΡΒ8/фрагмента ΡΕΌΡ (фиг. 2). На фиг. 2 также показано, что эффективность позитивных пептидов, по меньшей мере, эквивалентна, если не повышена, по сравнению с эффективностью карбамилированного эритропоэтина.
В табл. 1 также представлено примерное расстояние между карбонильными атомами углерода для тестируемых пептидов. Расстояния рассчитывали, используя трехмерные координаты, предложенные в публикации С.’11ее111ат е! а1., 1998, №11. 8!гис!. Βίο1. 5:861-866, включенной в данное описание в виде ссылки. Каждый из пептидов, которые тестировали как позитивные в отношении тканезащитной активности, имел расстояние/разделение одного карбонильного атома углерода от другого карбонильного атома углерода примерно от 3 до 5 А.
- 40 015672
Таблица 1
Тканезащитная эффективность типичных пептидов, оцениваемая с использованием биоанализа ΐη νΐνο (модель повреждения седалищного нерва)
Класс пептидов | Пептид | Последовательность ЕРО | Структура | Примерное расстояние между карбонильными атомами углерода (ангстремы) | Доза [нмоль/кг массы тела] | Анализ седалищного нерва |
А) Фрагмент ЕРО | А | 1-23 | АРРКЫСББКУЬЕ^ЬЬЕАКЕАЕ (БЕЦ ГО N0:32) ΑΡΡΚΓΙΟϋ8ΚνΕΕΚΥΕΕΕΑΚΕΑΕ (БЕЦ ГО N0:32) | 4,6 4,4 | 29, 290,1450 | + |
В | 24-37 | МТТССАЕНСБЬПЕ (БЕЦ ГО N0:34) | 2,8 | 290 | - | |
С | 38-57 | ΝΙΤνΡϋΤΚνΝΓΥΑλνΚΚΜΕνΟ (БЕЦ ГО N0:29) | 4,6 | 290 | + | |
Б | 58-82 | ЦЦАУЕУАУЦОЕАЕЕБЕАУЬКСЦАЕЕУ (БЕЦ ГО N0:30) | 4,8 | 29,290,1450 | + ‘ | |
Е | 28-47 | ССАЕНСБЫЧЕМТУРБТКУП (БЕЦ ГО N0:31) | 4,4 | 290 | + | |
Г | 14-29 | КУЬЕЕАКЕАЕМТТСС (БЕЦ ГО N0:33) | 3,6 | 290 | + | |
В) Наружная поверхность спирали | О | 58, 62, 65, 69, 72, 76, 79, 80, 83, 84, 85 | ЦЕЦЬЕКАЬЖБ (БЕЦ ГО N0:40) | 3,6 | 290 | + |
Н | 71,72,75,76,77 | БЕЬКСЦ (БЕЦ ГО N0:47) | 7,2 | 290 | - | |
С) Химера | ||||||
I | Пептид О + βскладчатый слой (3339) | СБГЫЕМЦЕЦГЕКАГЖБ (БЕЦ ГО N0:43) | 290 | + | ||
I | Пептид О + спираль панкреатического полипептида | ЦЕЦЕЕКАЬМББиШУШМипиК (БЕЦ ГО N0:41) | 290 | + | ||
I)) Мотив цитокина типа 1 | к | Спираль А ОМ-С8Р (13-26) | ЖЕНУХА1ЦЕАКВЕЕ (БЕЦ ГО N0:35) ν/ΕΗνΝΑ^ΕΑΚΚΓΕ (БЕЦ ГО N0:35) λνΕΗνΝΑ^ΕΑΚΒΕΕ (БЕЦ ГО N0:35) | 3.6 4.6 4,6 | 290 | + |
ь | Спираль А СЫТР (26-41) | КЖЗОЬТАЬТЕБУУКН (БЕЦ ГО N0:37) | 4,7 | 290 | + |
Пример 3. Тканезащитные пептиды не являются эритропоэтическими.
А. Оценка. ΐη νΐΐτο.
иТ-7еро, зависимую от эритропоэтина линию лейкозных клеток человека, использовали для определения эритропоэтической активности пептидов. Клетки иТ-7еро клетки (Бе^зсЕе 8ашш1ип§ νοη М1кгоогдаш8шеп шк! 2е11ки11игеп (Ό8ΜΖ), каталожный номер АСС 363) выращивали в полной среде ΚΡΜΙ-1640 с 10% ЕВ8 и 5 нг/мл эритропоэтина. Ответ в виде пролиферации/жизнеспособности (= увеличения жизнеспособности) клеток на воздействие эритропоэтина опосредован классическим рецептором эритропоэтина эритроцитарного типа и является количественной мерой способности вариантов эритропоэтина стимулировать классический рецептор эритропоэтина.
Клетки иТ-7еро переносили в свежую полную среду ΚΡΜΙ-1640, содержащую 10% донорской сыворотки теленка, 4 мМ Т-глутамина, с добавлением 5 нг/мл рекомбинантного эритропоэтина человека. Клетки поддерживали во флаконах объемом 75 см2 с 20 мл среды/флакон в инкубаторе с увлажнением и 5% С02 при 37°С в течение 48 ч. На второй день анализа, т.е. через 48 ч, клетки переносили из флакона в коническую пробирку объемом 50 мл и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре. Надосадок отбрасывали и клетки два раза промывали 10 мл обедненной среды (3% донорской сыворотки теленка, 4 мМ Т-глутамин). Затем клетки ресуспендировали в обедненной среде, используя пипетирование вверх и вниз, чтобы получить суспензию отдельных клеток. Ресуспендированные клетки разбавляли обедненной средой до получения плотности 4х105 клеток/мл и высевали в общий объем культуры 10 мл во флакон объемом 25 см2. После 4-часовой инкубации клетки снова переносили в коническую пробирку объемом 50 мл. Контрольные клетки все время поддерживали с 5 нг/мл гЕи-эритропоэтина.
Клетки разбавляли до концентрации 200000 клеток/мл в обедненной среде, высевали по 100 мкл/лунку в 96-луночный планшет и воздействовали различными концентрациями эритропоэтина, карбамилированного эритропоэтина и пептида Ό (8Ε^ ΙΌ N0:30). Серию 10-кратных разбавлений в среде ΚΡΜΙ-1640, содержащей 3% сыворотку, использовали для получения концентраций тестируемых соединений от 0,2 пМ до 20 нМ. После дополнительной 48-часовой инкубации в каждую лунку добавляли 15 мл раствора реагента для выявления пролиферации клеток ^8Т-1 (КосИе) и инкубировали в течение 1 ч при 37°С в С02. После перемешивания в течение 1 мин планшет регистрировали в устройстве для считывания планшетов (поглощение при 450 нм, вычтенное из фонового поглощения при 650 нм).
- 41 015672
Пептид Ό не проявлял эритропоэтической активности в таких высоких дозах, как 10000 пМ (фиг. 3). Предпочтительно пептид не будет обладать эритропоэтической активностью в дозах ниже 1 мкг/мл и более предпочтительно в дозах ниже 10 мкг/мл.
В. Оценка ш у1уо.
Чтобы оценить эритропоэтическую активность тканезащитного пептида Р (8ЕР ΙΌ N0:33) или пептида С (8ЕР ΙΌ N0:40, как обсуждается выше, сконструированный пептид, представляющий остатки спирали В), пептиды вводили в дозе 0,8 мкг/кг подкожно три раза в неделю самцам крыс 8ргадие-ЭаМеу. Схема дозирования соответствовала схеме введения эквивалентной дозы (в молях) ЕРО, которая, как определено ранее, вызывает максимальный эритропоэз. Концентрацию гемоглобина определяли периодически, используя автоматизированный анализатор (Кекка Согрогайои).
Ни пептид В, ни пептид С не давали повышения гематокрита в ходе исследования (фиг. 4; для сравнения представлен ответ на эквимолярную дозу ЕРО). Уменьшение уровня гемоглобина, отмеченное для ЕРО через 3 недели, является следствием продуцирования нейтрализующих анти-ЕРО-антител, которые вызывают истинную эритроцитарную аплазию. В отличие от этого не наблюдали ответа в виде образования нейтрализующих антител в случае пептида С или пептида Р.
Пример 4. Пептид является тканезащитным в анализе ш νίΙΐΌ.
Пептиды можно легко оценить в отношении защиты тканей, используя любое количество анализов 1и уйго. Например, защиту от эксайтотоксичности можно определить, используя индуцированную каинитом гибель мотонейронов мыши. Спинной мозг получали из 15-дневных эмбрионов крыс 8ргадиеОаМеу, как описано ранее (81геи е1 а1., 2001, РNА8. 98:4044, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Вентральный рог обрабатывали трипсином и центрифугировали через подушку 4% БСА в течение 10 мин при 300хд. Клетки (представляющие собой смешанную культуру нейронов-глии) высевали при плотности 2000 клеток/см2 в планшеты с лунками 24 мм, предварительно покрытые поли-ЭЬ-орнитином и ламинином. Затем мотонейроны очищали посредством иммунного пэннинга и клетки высевали при низкой плотности (20000 клеток/см2) на планшеты с лунками 24 мм, предварительно покрытые поли-ЭЬ-орнитином и ламинином и содержащие полную культуральную среду [№игоЬака1/В27 (2%); 0,5 мМ Ь-глутамин; 2% сыворотка лошади; 25 мМ 2-меркаптоэтанол; 25 мМ глутамат; 1% пенициллин и стрептомицин; 1 нг/мл ΒΌΝΡ]. Среду (без глутамата) повторно добавляли к культурам на 4 и 6 день.
Гибель клеток в культуре индуцировали на 6 день посредством инкубации в течение 48 ч с каиновой кислотой (5 мМ для смешанных культур нейроны-глия; 50 мМ для очищенных культур). Пептид Ό (5 нг/мл) или наполнитель добавляли к культурам за 72 ч до индукции гибели клеток и обработку продолжали в течение 48 ч. Затем среду удаляли и клетки фиксировали 4% (об./об.) параформальдегидом в РВ8 в течение 40 мин, делали их проницаемыми с использованием 0,2% тритона Х-100, блокировали 10% (об./об.) РС8 в РВ8, инкубировали с антителами против нефосфорилированных нейрофиламентов (8ΜΙ-32; 1:9000) в течение ночи и визуализировали, используя способ на основе авидина-биотина с помощью диаминобензидина. Жизнеспособность мотонейронов оценивали морфологически, подсчитывая 8М1-32-позитивные клетки по всей площади покровного стекла и осуществляли окраску апоптозных телец, используя Н33258.
Пептид Ό (8ЕР ΙΌ N0:30), соответствующий аминокислотам 58-82 последовательности 8ЕР ΙΌ N0:1, полностью защищал мотонейроны от повреждения, вызываемого каинатом (фиг. 5).
Альтернативно защиту ткани, которую обеспечивают пептиды, можно определить, используя анализ, основанный на клетках Р19 мышей, которые являются нейроноподобными клетками и погибают вследствие апоптоза при удалении сыворотки. Защиту ткани пептидом Ό (8ЕР ΙΌ N0:30) сравнивали с защитой ЕРО, используя Р19-клон Р1981801А1, как опубликовано ранее (8йеи е! а1., 2001, РNА8. 98:4044, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Клетки поддерживали в недифференцированном состоянии в среде ЭМЕМ с добавлением 2 мМ Ь-глутамина; 100 единиц/мл пенициллина С; 100 мг/мл сульфата стрептомицина (СШС0); 10% (об./об.) РВ8 (НуС1оие), содержащей 1,2 г/л NаΗСОз и 10 мМ буфер Нерек, далее называемой полной средой. Бессывороточная среда содержала такие же компоненты, как указано выше, но без сыворотки и с добавлением 5 мг/мл инсулина; 100 мг/мл трансферрина; 20 нМ прогестерона; 100 мМ путресцина; 30 нМ №ь8е03, (81дта). Для экспериментов слитые в слой на 50% клетки предварительно обрабатывали в течение ночи ЕРО или наполнителем, диссоциировали обработкой трипсином, промывали в бессывороточной среде и высевали во флаконы для культуры ткани объемом 25 см2 с конечной плотностью 104 клеток/см2 в бессывороточной среде без добавки или с добавлением ЕРО. Жизнеспособность клеток определяли посредством исключения при окраске трипановым синим и с использованием гемоцитометра.
Пептид С (8ЕР ΙΌ N0:29), соответствующий аминокислотам 38-57 последовательности 8ЕР ΙΌ N0:1, по меньшей мере в 10 раз более эффективен в расчете на массу, чем ЕРО, в предотвращении апоптоза клеток р19 (фиг. 6).
- 42 015672
Пример 5. Модель окклюзии средней мозговой артерии.
(a) Самцов крыс Сг1:СО(8Э)ВВ массой 250-280 г получали от Сбаг1ез В1уег, Са1со, На1у. Операцию проводили согласно руководству Вппез е! а1., 2000, ΡNА8 И8А. 97:10526-10531 (публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Коротко, крыс анестезировали хлоралгидратом (400 мг/кг массы тела, в/б), визуализировали сонные артерии и правую сонную артерию перевязывали двумя лигатурами и перерезали. Трепанационное отверстие вблизи и в ростральном направлении по отношению к правой глазнице позволяло увидеть среднюю мозговую артерию (МСА), в которую вводили катетер дистально от носовой артерии. Чтобы получить зону пенумбры (переходную зону), окружающую указанное фиксированное повреждение МСА, контралатеральную сонную артерию также подвергали окклюзии в течение 1 ч, используя пережатие атравматическим пинцетом, и затем снова открывали.
Крыс 8ргадие-ОаМеу (8 на группу) подвергали операции согласно указанному выше протоколу МСАО. Крысам вводили РВ8, карбамилированный эритропоэтин (44 мкг/кг) или пептид Ό (аминокислоты 58-82; 4,4 мкг/кг) после снятия окклюзии. Кроме того, отдельной группе вводили четыре дозы пептида Ό (аминокислоты 58-82; 4,4 мкг/кг) с 2-часовыми интервалами после окклюзии. Для оценки повреждения тестировали поведение крыс или объем повреждения определяли при окрашивании тетразолием срезов головного мозга, полученных через 24 ч после операции согласно ранее указанному протоколу.
На фиг. 7А представлен график, демонстрирующий объем повреждений в результате осуществления протокола МСАО. Обработка пептидом Ό (8ЕЦ ΙΌ N0:30) либо в виде однократной дозы, либо многократными дозами уменьшала объем повреждения в результате операции МСАО примерно на 2/3: статистически эквивалентно тканезащитному действию карбамилированного эритропоэтина.
(b) Терапевтическое окно тканезащитных цитокинов.
Протокол МСАО, который описан выше, повторяли для данного примера. После процедуры окклюзии крысам вводили РВ8, карбамилированный эритропоэтин (44 мкг/кг, в/в) или пептид Ό (8ЕЦ ΙΌ N0:30) (4,4 мкг/кг) сразу после установления рециркуляции в сонной артерии (т.е. спустя 1 ч после начала ишемии). Кроме того, пептид Ό (8ЕЦ ΙΌ N0:30) вводили в четырех дозах (каждая по 4,4 мкг/кг массы тела) с 2-часовыми интервалами после окклюзии (8 крыс на группу).
(c) Тестирование поведения.
Отдельную группу крыс также тестировали, используя протокол анализа поведения на основании промахов стопы. Крыс тестировали на приподнятом решетчатом полу из нержавеющей стали 30x30 см с размером решетки 30 мм согласно протоколу МагкдгаГ е! а1., 1992, Вгат Везеагсб. 575:238-246 (публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). При помещении на решетку крыса попытается двигаться повсюду и иногда помещает стопу не на решетку, а сквозь отверстия решетки (промах стопы). Количество промахов стопы измеряли в течение 1 мин.
Крысы, обработанные пептидом Ό (8ЕЦ ΙΌ N0:30), после реперфузии имели меньше промахов стопы, чем крысы, обработанные РВ8 (фиг. 7В). Не наблюдали значимого дополнительного преимущества после введения многократных доз пептида Ό (8ЕЦ ΙΌ N0:30). Хотя среднее количество промахов стопы было меньше в группе, получавшей многократные дозы пептида, наблюдаемое отличие не было статистически значимым по сравнению с группой, получавшей однократную дозу.
Пример 6. Диабетическая невропатия.
Диабет индуцировали у самцов крыс 8ргадие-0аМеу (Сбаг1ез В1уег, Са1со, ГТ), используя стрептозоцин, вводимый в однократной дозе 60 мг/кг в/б голодным крысам, как описано ранее (В1апсЫ е! а1., 2004, Ргос. №111. Асаб. 8с1. И8А. 101, 823-828, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Диабет подтверждали по увеличению уровней глюкозы в сыворотке выше 300 мг/дл (мг %) (нормальные уровни <100 мг %). Затем животных с диабетом обрабатывали пептидом Ό (8ЕЦ ΙΌ N0:30; 4 мкг/кг) или наполнителем 5 раз в неделю внутрибрюшинно. Через 2 недели после индукции диабетического состояния определяли скорость проводимости нерва, используя хвостовой нерв.
Как показано на фиг. 8А, у диабетических животных наблюдали уменьшение скорости проводимости хвостового нерва примерно с 22 м/с (нормальная скорость) до примерно 19 м/с. Введение пептида Ό (8ЕЦ ΙΌ N0:30) было связано с увеличением скорости проводимости примерно до 23 м/с.
Кроме того, количественно оценивали болевой порог при термическом воздействии посредством измерения времени отдергивания лапы в тесте с горячей пластиной. Задержку отдергивания определяли как период времени между помещением на горячую пластину и временем отдергивания и облизывания задней лапы. Каждое животное тестировали дважды с 30-минутным интервалом покоя. Термический порог для задней лапы измеряли через 4 недели после индукции диабета. Пептид Ό (8ЕЦ ΙΌ N0:30) уменьшал время задержки на горячей пластине у диабетического животного (фиг. 8В).
- 43 015672
Пример 7. Защита седалищного нерва и почек от индуцированного цисплатиной повреждения.
Цисплатину (ί'ΌΩΤ) вводили внутрибрюшинно самцам крыс Бргадие-Оа^1еу в дозе 2 мг/кг дважды в неделю в течение 5 недель, как описано в публикации Βίηηοΐιί е1 а1., 2006, С1т. Саг1сег Век. 12:26072612, которая включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме. Животных делили на группы по 6 в каждой. В течение 5-недельного введения ί'ΌΩΤ животные также получали либо пептид О (БЕр ΙΌ N0:40) в дозе 0,4 мкг/кг массы тела, либо РВБ внутрибрюшинно три раза в неделю. Контрольная группа получала РВБ вместо ί'ΌΩΤ. Задержку на горячей пластине определяли, как описано в примере 6 выше.
У животных, которые получали СГОЭТ и только РВБ, не наблюдали увеличения задержки по сравнению с контролями: т.е. СЭЭТ связан с нарушенной тепловой чувствительностью. Напротив, у животных, которые получали пептид, наблюдали нормальную задержку на горячей пластине (фиг. 9А).
Обработка пептидом также предотвращала СГООТ-индуцированную полиурию (фиг. 9В). В частности, у животных, которые получали РВБ, наблюдали значимое увеличение суточной продукции мочи примерно от 30 до 47 мл/сутки. Напротив, животные, получавшие тканезащитный пептид, значимо не отличались от контрольных животных, которые получали РВБ вместо СГОЭТ.
Пример 8. Защита от индуцированного диабетом просачивания сосудов сетчатки.
Полезное влияние тканезащитных пептидов на индуцированное гипергликемией просачивание сосудов сетчатки можно определить, используя модель диабетической ретинопатии у крыс. В данной модели используют синий краситель Эванса, чтобы определить просачивание из кровеносного сосуда в ткани, как описано в Хи е1 а1., 2001, Ιη\Ό8ΐ. 0р11111а1. Υίκ. Бс1. 42:789-794 (публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Синий краситель Эванса прочно связывается с альбумином и поэтому удерживается в кровообращении, если не происходит просачивание через стенки сосудов, например, вызванное неконтролируемым сахарным диабетом.
В данной модели голодные самцы крыс Бргадие-ПаМеу получают однократную дозу стрептозотоцина (60 мг/кг, в/б). Через 2 дня после подтверждения развития сахарного диабета (уровень глюкозы в сыворотке натощак больше 300 мг %) животных делили на группы по 6 животных в каждой, а также использовали контрольную группу, которая не получала стрептозотоцина. В двух диабетических группах вводили либо пептид Ό (БЕр ΙΌ N0:30) в дозе 4 мкг/кг внутрибрюшинно 5 дней в неделю, либо РВБ по такой же схеме. После 3 недель неконтролируемого диабета животных анестезировали и внутривенно вводили синий краситель Эванса (30 мг/кг), которому давали возможность циркулировать в течение 2 ч. Затем, используя транскардиальную пункцию, животных перфузировали РВБ вплоть до тех пор, пока эффлюент не становился прозрачным, затем 4% параформальдегидом. Затем извлекали глаза и осторожно отсекали сетчатку от глазного яблока. Содержание в сетчатке синего красителя Эванса определяли посредством инкубации сетчатки в формамиде при 80°С в течение 18 ч. Затем надосадок извлекали и сохраняли для анализа и сетчатки полностью сушили и взвешивали. Концентрацию синего красителя Эванса в надосадке определяли с помощью спектрофотометра и полученной стандартной кривой для синего красителя Эванса, растворенного в формамиде.
Как показано на фиг. 10, животные, которым вводили пептид Ό (БЕр ΙΌ N0:30), не имели повышения синего красителя Эванса в сетчатке по сравнению с контролем. В отличие от этого, у диабетических животных, которые получали только РВБ, наблюдали увеличение содержания синего красителя Эванса в сетчатке, что свидетельствует о том, что произошло просачивание из сосудов.
Пример 9. Защита от острой почечной недостаточности.
Тканезащитные пептиды также эффективны для профилактики повреждения почек в условиях ишемии. Взрослых самцов крыс \М181аг анестезировали и делали разрез брюшной стенки, чтобы открыть обе почечные артерии. Используя атравматический зажим для сосудов, обе артерии сжимали в течение 60 мин, полностью задерживая поток крови в почки. Затем зажимы удаляли, восстанавливая кровообращение, и внутривенно вводили пептид Е (БЕр ΙΌ N0:33) или пептид О (БЕр ΙΌ N0:40) в дозе 290 пмоль/кг массы тела. Дополнительная группа, которую подвергали ишемии, получала только РВБ внутривенно.
Через 72 ч после реперфузии животных анестезировали и подвергали перфузионной фиксации, используя параформальдегид. После фиксации животных рассекали сагитально на половины и дополнительно фиксировали погружением в 10% формальдегид при комнатной температуре в течение 1 дня. Гистологическую оценку почек осуществляли согласно протоколу БЬагр1ек е1 а1., 2005, 1. Мег. Бос. №р1по1. 15:2115 (публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Коротко, после обезвоживания с использованием возрастающих концентраций этанола кусочки почки заливали в парафин, делали срезы толщиной 5 мкм и закрепляли на предметных стеклах. Парафин со срезов на стеклах удаляли, используя ксилен, контрастно красили гематоксилином и эозином и анализировали в световом микроскопе. Исследовали 100 полей для каждой почки и оценивали в баллах от 0 до 3 для каждого профиля канальцев: 0, нормальная гистология; 1, набухание клеток канальцев, утрата щеточной каемки и конденсация ядер с утратой ядер на 1/3; 2, как в случае оценки 1, но более чем в 1/3 части и менее чем в 2/3 частях профиля канальцев наблюдается утрата ядер; и 3, более чем в 1/3 профиля канальцев наблюдается утрата ядер. Гистологическую оценку для каждой почки вычисляли суммированием всех
- 44 015672 баллов, при этом максимальная оценка составляла 300.
Введение либо пептида Ε (8Е0 ΙΌ NО:33), либо пептида 6 (8Е0 ΙΌ NО:40) было связано со значимым уменьшением оценки повреждения (р<0,05) по сравнению с контролями.
Пример 10. Эффективность тканезащитных пептидов при церебральной малярии.
Модель церебральной малярии у грызунов создавали согласно КаЕег е! а1., 2006, 1. Ыес!. Όίδ. 193:987-995 (публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме). Самок мышей СВАЛ 7-недельного возраста делили на группы по 20 животных. Каждую группу инфицировали Р1азшобшт Ьегдйе1 Апка (РЬА), вводимым внутрибрюшинно в дозе 106 РЬА-инфицированных эритроцитов. Мыши получали либо РВ8, либо пептид Ε (8ЕЭ ΙΌ NО:33) на 4, 5 и 6 день в виде внутрибрюшинной инъекции в дозе 2,6 мкг/кг. Данные о клиническом состоянии и данные мазков крови собирали во время последующего наблюдения (конечная точка Ό30). Кумулятивную долговременную выживаемость рассчитывали способом Каплана-Мейера и группы сравнивали с помощью логарифмического рангового критерия. Время выживания являлось зависимой переменной. Значение р<0,05 считали значимым.
Как показано на фиг. 12, все мыши в контрольной группе (физиологический раствор) погибали на 8 день. В отличие от этого, у мышей, которые получали пептид Ε (8ЕЭ ΙΌ NО:33), наблюдали более длительную выживаемость, значимо отличающуюся от выживаемости в контрольной группе (р<0,005) на основании логарифмического рангового критерия.
Пример 11. Эффективность тканезащитных пептидов в модели ЕАЕ у мышей.
Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЕАЕ) индуцировали у самок мышей С57ВЬ/6 (6-8-недельного возраста) согласно 8атто е! а1., 2006, 1. №иго1тшипо1. 172:27-37, публикация включена в данное описание в виде ссылки в полном объеме. ЕАЕ индуцировали подкожной иммунизацией в бок, используя всего 200 мкг МОС35-55 (система нескольких пептидов, 8ап Э1едо, СА, И8А) в неполном адъюванте Фрейнда (8щта. 8!. Боше, МО, И8А) с добавлением 8 мг/мл МусоЬас!егшт !иЬегси1о818 (штамм Н37КА; ЭгТсо, Ое(го11, Мф И8А). Животных содержали в специальных, не содержащих патогенов условиях, обеспечивая доступ к корму и воде аб НЬПит. Мыши получали 500 нг коклюшного токсина (8щта) внутривенно во время иммунизации и через 48 ч. Массу и клиническую оценку регистрировали ежедневно (0 = здоровые, 1 = поникший хвост, 2 = атаксия и/или паралич задних конечностей или медленный рефлекс выпрямления, 28 С. 3 = паралич задних конечностей и/или паралич передних конечностей; 4 = парапарез передних конечностей; 5 = агония или гибель). Гранулы корма и питьевую воду помещали в чашки Петри на пол клетки, чтобы больные мыши могли есть и пить. Пептид Е (8ЕЭ ΙΌ NО:31) вводили ежедневно подкожно в дозе 4,4 мкг/кг массы тела начиная с 4 дня после иммунизации.
Введение пептида Е (8ЕЭ ΙΌ NО:31) значимо уменьшало как продолжительность, так и тяжесть клинической картины ЕАЕ у обработанных животных (р<0,01) (фиг. 13).
Изобретение не следует ограничивать объемом конкретных описанных вариантов, которые предназначены в качестве иллюстраций отдельных аспектов изобретения, и функционально эквивалентные способы и компоненты входят в объем изобретения. Несомненно различные модификации изобретения, кроме тех, которые показаны и описаны в данной публикации, будут очевидны для специалистов в данной области из приведенного выше описания и прилагаемых чертежей. Подразумевается, что такие модификации входят в объем прилагаемой формулы изобретения.
Все цитированные публикации включены в данное описание в виде ссылки в полном объеме для всех целей.
Claims (26)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Изолированный полипептид, состоящий не более чем из 30 аминокислотных остатков, содержащий 11 направленных наружу аминокислотных остатков спирали В эритропоэтина, где в одном из указанных аминокислотных остатков может быть осуществлена консервативная или неконсервативная замена, или его обратный инверсный аналог.
- 2. Изолированный полипептид по п.1, содержащий аминокислотный мотив:Н^-ЩУ-РЛ, где п равно 0-1;Н1 и Н2 означают гидрофобные аминокислоты;Νι означает отрицательно заряженную аминокислоту;Ь1 означает полярную аминокислоту иР1 означает положительно заряженную аминокислоту.
- 3. Изолированный полипептид по п.1, содержащий аминокислотную последовательность ЭЕЭЕЕЕΛΕΝ88 (8ЕЭ ΙΌ NО:40), где в одном из указанных аминокислотных остатков может быть осуществлена консервативная или неконсервативная замена, или его обратный инверсный аналог.
- 4. Изолированный полипептид по п.3, состоящий из аминокислотной последовательности ЭЕЭЕЕЕАЬ№8 (8ЕЭ ΙΌ NО:40), где в одном из указанных аминокислотных остатков может быть осуществлена консервативная или неконсервативная замена, или его обратный инверсный аналог.- 45 015672
- 5. Изолированный полипептид по п.3, состоящий из аминокислотной последовательности ОЕОЕЕРЛЬ№8 (ЗЕО ΙΌ N0:40), или его обратный инверсный аналог.
- 6. Обратный инверсный аналог изолированного полипептида по любому из пп.1-5.
- 7. Изолированный полипептид по п.1, содержащий аминокислотную последовательность ОЕОЕЕРЛЬ№8ЬКОТШМЬТКТК (ЗЕО ΙΌ N0:41), где в одном из указанных аминокислотных остатков может быть осуществлена консервативная или неконсервативная замена.
- 8. Изолированный полипептид по п.1, содержащий аминокислотную последовательность С8Ь№МрЕрЬЕКЛЬ№З (ЗЕО ΙΌ N0:43), где в одном из указанных аминокислотных остатков может быть осуществлена консервативная или неконсервативная замена.
- 9. Изолированный полипептид по любому из пп.1-4, 6 или 7, содержащий консервативную или неконсервативную замену аминокислотой или эквивалентом аминокислоты.
- 10. Изолированный полипептид по любому из пп.1-8, где указанный полипептид модифицирован добавлением полиэтиленгликоля.
- 11. Изолированный полипептид по любому из пп.1-10, где указанный полипептид не увеличивает уровень гемоглобина у реципиента.
- 12. Изолированный полипептид по любому из пп.1-10, который обладает защитной в отношении клеток активностью, такой как защита, сохранение, усиление или восстановление функции и/или жизнеспособности указанной клетки, ткани или органа, таких как клетки или ткани нервов, костей, глаза, жировой ткани, соединительной ткани, волос, зубов, слизистой оболочки, поджелудочной железы, эндокринных органов, уха, эпителия, кожи, мышц, сердца, легкого, печени, почки, кишечника, надпочечников, капилляров, эндотелия, семенников, яичника или эндометрия или стволовые клетки.
- 13. Изолированный полипептид по любому из пп.1-10, где указанный полипептид обладает защищающей клетки активностью в отношении возбудимой ткани, такой как ткань центральной нервной системы, ткань периферической нервной системы, ткань сердца или ткань сетчатки.
- 14. Изолированный пептид по любому из пп.1-10, где указанный пептид способен проходить через барьер эндотелиальных клеток, такой как гематоэнцефалический барьер, гематоофтальмический барьер, гематотестикулярный барьер, гематоовариальный барьер, барьер кровь-нервы или кровь-спинной мозг.
- 15. Фармацевтическая композиция, содержащая изолированный полипептид по любому из пп.1-10 и фармацевтически приемлемый носитель.
- 16. Фармацевтическая композиция по п.15, где указанная композиция приготовлена для орального, интраназального, глазного, ингаляционного, трансдермального, ректального, подъязычного или парентерального введения.
- 17. Фармацевтическая композиция по п.15, где указанная композиция приготовлена в виде перфузионного раствора.
- 18. Способ защиты, сохранения или усиления жизнеспособности чувствительной клетки, ткани или органа, выделенных из организма млекопитающего, включающий воздействие на указанную клетку, ткань или орган изолированным полипептидом по любому из пп.1-10 или фармацевтической композицией по любому из пп.15-17.
- 19. Способ по п.18, где организм млекопитающего представляет собой организм человека.
- 20. Применение изолированного пептида по любому из пп.1-10 для получения фармацевтической композиции для профилактики, терапевтического лечения или профилактического лечения сердечнососудистого заболевания, сердечно-легочного заболевания, респираторного заболевания, болезни почек, болезни мочевой системы, заболевания репродуктивной системы, заболевания костей, кожной болезни, желудочно-кишечного заболевания, эндокринного нарушения, метаболического нарушения, когнитивной дисфункции или заболевания или расстройства центральной или периферической нервной системы у нуждающегося в этом субъекта.
- 21. Применение по п.20, в котором субъект представляет собой человека.
- 22. Изолированная нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую изолированный пептид по любому из пп.1-10.
- 23. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.22.
- 24. Вектор по п.23, который является экспрессирующим вектором.
- 25. Клетка-хозяин, содержащая экспрессирующий вектор по п.24.
- 26. Способ рекомбинантного получения изолированного пептида, включающий в себя а) культивирование в среде клетки-хозяина по п.25 в условиях, подходящих для экспрессии указанного пептида, и Ь) извлечение и выделение указанного пептида из указанной среды.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US70574105P | 2005-08-05 | 2005-08-05 | |
US70627605P | 2005-08-08 | 2005-08-08 | |
US83173706P | 2006-07-18 | 2006-07-18 | |
PCT/US2006/031061 WO2007019545A2 (en) | 2005-08-05 | 2006-08-07 | Tissue protective peptides and uses thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA200800536A1 EA200800536A1 (ru) | 2009-02-27 |
EA015672B1 true EA015672B1 (ru) | 2011-10-31 |
Family
ID=37728020
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA200800536A EA015672B1 (ru) | 2005-08-05 | 2006-08-07 | Тканезащитные пептиды и их применения |
Country Status (26)
Country | Link |
---|---|
US (7) | US8071554B2 (ru) |
EP (5) | EP2594279B1 (ru) |
JP (6) | JP5274253B2 (ru) |
KR (7) | KR20200072568A (ru) |
CN (2) | CN103724418B (ru) |
AU (1) | AU2006278264B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0614529A8 (ru) |
CA (3) | CA2982909A1 (ru) |
DK (3) | DK2371855T3 (ru) |
EA (1) | EA015672B1 (ru) |
ES (3) | ES2653790T3 (ru) |
HK (1) | HK1127751A1 (ru) |
HU (3) | HUE035793T2 (ru) |
IL (3) | IL189287A (ru) |
IN (1) | IN2014CN02050A (ru) |
LT (2) | LT2540309T (ru) |
MX (3) | MX364100B (ru) |
NO (1) | NO20081112L (ru) |
NZ (1) | NZ565937A (ru) |
PL (3) | PL2594279T3 (ru) |
PT (3) | PT2594279T (ru) |
SG (2) | SG2014007868A (ru) |
SI (3) | SI2540309T1 (ru) |
UA (1) | UA100222C2 (ru) |
WO (1) | WO2007019545A2 (ru) |
ZA (1) | ZA201101890B (ru) |
Families Citing this family (35)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030072737A1 (en) * | 2000-12-29 | 2003-04-17 | Michael Brines | Tissue protective cytokines for the protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues and organs |
US9585932B2 (en) * | 2005-04-29 | 2017-03-07 | Peter C. Dowling | Use of EPO-derived peptide fragments for the treatment of neurodegenerative disorders |
US8653028B2 (en) | 2005-04-29 | 2014-02-18 | Rui Rong Yuan | Erythropoietin-derived short peptide and its mimics as immuno/inflammatory modulators |
US9345745B2 (en) | 2005-04-29 | 2016-05-24 | Bo Wang | Methods for treating inflammatory disorders and traumatic brain injury using stabilized non-hematopoietic EPO short peptides |
ES2653790T3 (es) | 2005-08-05 | 2018-02-08 | Araim Pharmaceuticals, Inc. | Péptidos protectores de tejido y usos de los mismos |
RU2008152746A (ru) * | 2006-06-07 | 2010-07-20 | Дзе Юниверсити Оф Токусима (Jp) | Лечение ишемических заболеваний с применением эритропоэтина |
WO2008058942A2 (en) * | 2006-11-13 | 2008-05-22 | Charite - Universitätsmedezin Berlin | Method of cell culture and method of treatment comprising a vepo protein variant |
AU2016203452B2 (en) * | 2008-01-22 | 2018-02-22 | Araim Pharmaceuticals, Inc. | Tissue protective peptides and peptide analogs for preventing and treating diseases and disorders associated with tissue damage |
AU2014203195B2 (en) * | 2008-01-22 | 2016-03-31 | Araim Pharmaceuticals, Inc. | Tissue protective peptides and peptide analogs for preventing and treating diseases and disorders associated with tissue damage |
MX2010008050A (es) * | 2008-01-22 | 2011-02-23 | Araim Pharmaceuticals Inc | Peptidos y analogos de peptidos protectores de los tejidos para evitar y tratar padecimientos y desordenes asociados con daño de los tejidos. |
US9566349B2 (en) * | 2010-10-14 | 2017-02-14 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Intestinal peptide targeting ligands |
US8791234B2 (en) * | 2010-10-14 | 2014-07-29 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Intestinal peptide targeting ligands |
CN102180948A (zh) * | 2011-03-03 | 2011-09-14 | 复旦大学附属中山医院 | 一种具有肾脏保护作用的短肽及其制备方法和应用 |
CN102212111B (zh) * | 2011-05-05 | 2014-04-30 | 中国人民解放军第三军医大学 | 小分子多肽和小分子多肽脂质体及其运用 |
EP2736530B1 (en) * | 2011-07-27 | 2018-06-06 | Neumedicines, Inc | Use of il-12 to generate endogenous erythropoietin |
WO2013042118A1 (en) * | 2011-09-20 | 2013-03-28 | A.A. Cash Technology Ltd | Methods and devices for occluding blood flow to an organ |
KR101148191B1 (ko) * | 2011-09-27 | 2012-05-23 | 김후정 | 에리스로포이에틴-유래 펩타이드 및 그 용도 |
WO2013158871A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Use of erythropoietin and derivatives for treating hypertension |
CA2918223A1 (en) * | 2013-07-17 | 2015-01-22 | Araim Pharmaceuticals, Inc. | Tissue protective peptides and peptide analogs for preventing and treating diseases and disorders associated with tissue damage |
CN104744593A (zh) * | 2013-12-25 | 2015-07-01 | 深圳先进技术研究院 | 一种抗肿瘤血管生成免疫复合肽及其制备方法和应用 |
US11039621B2 (en) | 2014-02-19 | 2021-06-22 | Corning Incorporated | Antimicrobial glass compositions, glasses and polymeric articles incorporating the same |
US11039620B2 (en) | 2014-02-19 | 2021-06-22 | Corning Incorporated | Antimicrobial glass compositions, glasses and polymeric articles incorporating the same |
US9622483B2 (en) | 2014-02-19 | 2017-04-18 | Corning Incorporated | Antimicrobial glass compositions, glasses and polymeric articles incorporating the same |
KR20150130616A (ko) * | 2014-05-13 | 2015-11-24 | (주)케어젠 | 피부상태 개선 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
CN105837664A (zh) * | 2014-06-22 | 2016-08-10 | 马恒标 | 组织保护活性多肽sl8及其应用 |
KR20180084782A (ko) | 2015-10-14 | 2018-07-25 | 엑스-써마 인코포레이티드 | 얼음 결정 형성을 감소시키기 위한 조성물 및 방법 |
CN109310741A (zh) | 2016-04-29 | 2019-02-05 | 阿拉伊姆药品公司 | 用于预防和治疗与组织损伤相关的疾病和障碍的组织保护肽 |
ES2952448T3 (es) | 2016-11-10 | 2023-10-31 | Asc Regenity Ltd | Formulaciones cosméticas para aplicaciones tópicas que contienen moléculas derivadas de eritropoyetina |
JP2020509011A (ja) * | 2017-02-27 | 2020-03-26 | テグ キョンブク インスティトゥート オブ サイエンス アンド テクノロジー | エリスロポエチン由来ペプチドの細胞損傷防止に対する効果を介した活用 |
WO2018157773A1 (zh) | 2017-02-28 | 2018-09-07 | 暨南大学 | 一种促进创伤后组织修复与再生的修复肽及其应用 |
CN108503690B (zh) * | 2017-02-28 | 2020-07-03 | 暨南大学 | 一种促进创伤后组织修复与再生的修复肽及其应用 |
TW202010513A (zh) * | 2018-04-08 | 2020-03-16 | 全福生物科技股份有限公司 | Pedf衍生之短肽在肌腱癒合中的應用 |
KR102300060B1 (ko) | 2018-06-12 | 2021-09-08 | 주식회사 엘지에너지솔루션 | 2열 터미널 구조의 pcb 다이렉트 커넥터 |
WO2020055768A1 (en) | 2018-09-10 | 2020-03-19 | Cold Spring Harbor Laboratory | Methods for treating pancreatitis |
CN112390877B (zh) * | 2019-08-16 | 2022-10-04 | 董红燕 | Pedf衍生多肽组合物及其在制备保护肺损伤药物中的应用 |
Family Cites Families (50)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NO812612L (no) | 1980-08-06 | 1982-02-08 | Ferring Pharma Ltd | Enzym-inhibitorer. |
US4558006A (en) * | 1983-02-04 | 1985-12-10 | Kirin-Amgen, Inc. | A.T.C.C. HB8209 and its monoclonal antibody to erythropoietin |
US5051448A (en) | 1984-07-24 | 1991-09-24 | The Mclean Hospital Corporation | GABA esters and GABA analog esters |
US4704355A (en) | 1985-03-27 | 1987-11-03 | New Horizons Diagnostics Corporation | Assay utilizing ATP encapsulated within liposome particles |
US4798824A (en) | 1985-10-03 | 1989-01-17 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Perfusate for the preservation of organs |
US5498694A (en) | 1989-05-25 | 1996-03-12 | La Jolla Cancer Research Foundation | Peptides of the cytoplasmic domain of integrin |
DE3924746A1 (de) * | 1989-07-26 | 1991-01-31 | Behringwerke Ag | Erythropoietin (epo)-peptide und dagegen gerichtete antikoerper |
CA2025907A1 (en) | 1989-09-21 | 1991-03-22 | Franklin D. Collins | Method of transporting compositions across the blood brain barrier |
US5192746A (en) | 1990-07-09 | 1993-03-09 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Cyclic cell adhesion modulation compounds |
US6140120A (en) * | 1993-02-12 | 2000-10-31 | Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University | Regulated transcription of targeted genes and other biological events |
US5559103A (en) | 1993-07-21 | 1996-09-24 | Cytel Corporation | Bivalent sialyl X saccharides |
US5700909A (en) | 1993-07-30 | 1997-12-23 | The Regents Of The University Of California | Prosaposin and cytokine-derived peptides |
US5571787A (en) | 1993-07-30 | 1996-11-05 | Myelos Corporation | Prosaposin as a neurotrophic factor |
WO1995021919A2 (en) * | 1994-02-14 | 1995-08-17 | Kirin Brewery Company, Limited | Protein having tpo activity |
ITFI940106A1 (it) * | 1994-05-27 | 1995-11-27 | Menarini Ricerche Sud Spa | Molecola ibrida di formula gm-csf-l-epo o epo-l-gm-csf per la stimolaz ione eritropoietica |
US5576423A (en) | 1994-12-02 | 1996-11-19 | Schering Corporation | Antibodies to the slam protein expressed on activated T cells |
JP4050314B2 (ja) * | 1995-06-07 | 2008-02-20 | オーソ ファーマシューティカル コーポレイション | エリトロポエチン受容体に結合する化合物およびペプチド |
AU4267297A (en) * | 1997-09-11 | 1998-09-22 | Regents Of The University Of California, The | Method of alleviating neuropathic pain |
US7153943B2 (en) * | 1997-07-14 | 2006-12-26 | Bolder Biotechnology, Inc. | Derivatives of growth hormone and related proteins, and methods of use thereof |
US7270809B2 (en) * | 1997-07-14 | 2007-09-18 | Bolder Biotechnology, Inc. | Cysteine variants of alpha interferon-2 |
TR200103785T2 (tr) * | 1999-04-13 | 2002-06-21 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Uyarılabilir doku işlevinin periferik olarak uygulanan eritropoietin vasıtasıyla düzenlenmesi |
WO2001083548A1 (fr) * | 2000-04-28 | 2001-11-08 | Effector Cell Institute | Nouveau derive de facteur chimiotactique cellulaire |
BR0116381A (pt) * | 2000-12-20 | 2004-02-25 | Hoffmann La Roche | Conjugado, composição farmacêutica que compreende o mesmo e sua utilização, processo para o tratamento profilático e/ou terapêutico de distúrbios, processo para a preparação de um conjugado, compostos e glicoproteìnas de eritropoetina |
PA8536201A1 (es) * | 2000-12-29 | 2002-08-29 | Kenneth S Warren Inst Inc | Protección y mejoramiento de células, tejidos y órganos que responden a la eritropoyetina |
US20030072737A1 (en) | 2000-12-29 | 2003-04-17 | Michael Brines | Tissue protective cytokines for the protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues and organs |
PL362396A1 (en) * | 2001-02-06 | 2004-11-02 | Merck Patent Gmbh | Modified erythropoietin (epo) with reduced immunogenicity |
EP1383927B1 (en) * | 2001-04-04 | 2009-07-08 | GenOdyssee | New polynucleotides and polypeptides of the erythropoietin gene |
KR100467751B1 (ko) * | 2001-12-03 | 2005-01-24 | 씨제이 주식회사 | 생체내 에리스로포이에틴 활성이 증진된 융합단백질 |
US7300915B2 (en) * | 2002-06-05 | 2007-11-27 | The Regents Of The University Of California | Use of erythropoietin and erythropoietin mimetics for the treatment of neuropathic pain |
KR20060019501A (ko) | 2002-07-01 | 2006-03-03 | 더 케네쓰 에스. 워렌 인스티튜트 인코포레이티드 | 응답 세포, 조직 및 기관을 보호, 회복 및 향상시키기위한 재조합 조직 보호 사이토카인 및 이를 코딩하는 핵산 |
KR100478455B1 (ko) | 2002-08-19 | 2005-03-22 | 삼성전자주식회사 | 전자렌지 |
JP2006511468A (ja) | 2002-09-09 | 2006-04-06 | ウォーレン ファーマシューティカルズ,インコーポレーテッド | 内因性エリスロポエチンの組織保護活性を維持する長期作用性エリスロポエチン |
WO2005025606A1 (en) | 2003-09-09 | 2005-03-24 | Warren Pharmaceuticals, Inc. | Long acting erythropoietins that maintain tissue protective activity of endogenous erythropoietin |
JP2006512300A (ja) * | 2002-10-03 | 2006-04-13 | エピミューン インコーポレイテッド | Hla結合ペプチド及びその使用 |
JP2004305006A (ja) * | 2003-04-01 | 2004-11-04 | Japan Science & Technology Agency | 人工調製肺サーファクタント |
US7718363B2 (en) | 2003-04-25 | 2010-05-18 | The Kenneth S. Warren Institute, Inc. | Tissue protective cytokine receptor complex and assays for identifying tissue protective compounds |
US9617516B2 (en) * | 2003-04-25 | 2017-04-11 | University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Muscle-derived cells (MDCs) for promoting and enhancing nerve repair and regeneration |
EP1670492A4 (en) | 2003-09-29 | 2009-07-08 | Warren Pharmaceuticals Inc | FABRIC PROTECTION CYTOKINES FOR THE TREATMENT AND PREVENTION OF SEPTICEMIA AND THE FORMATION OF ADHESIONS |
US20080227696A1 (en) * | 2005-02-22 | 2008-09-18 | Biosurface Engineering Technologies, Inc. | Single branch heparin-binding growth factor analogs |
WO2007010552A2 (en) | 2005-03-17 | 2007-01-25 | Serum Institute Of India Limited | N- terminal peg conjugate of erythropoietin |
US8653028B2 (en) | 2005-04-29 | 2014-02-18 | Rui Rong Yuan | Erythropoietin-derived short peptide and its mimics as immuno/inflammatory modulators |
US9345745B2 (en) | 2005-04-29 | 2016-05-24 | Bo Wang | Methods for treating inflammatory disorders and traumatic brain injury using stabilized non-hematopoietic EPO short peptides |
US8329652B2 (en) | 2005-05-10 | 2012-12-11 | Neoloch Aps | Neuritogenic peptides |
EP1736481A1 (en) | 2005-05-13 | 2006-12-27 | Charite Universitätsmedizin-Berlin | Erythropoietin variants |
WO2006127910A2 (en) | 2005-05-25 | 2006-11-30 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated erythropoietin formulations |
ES2653790T3 (es) | 2005-08-05 | 2018-02-08 | Araim Pharmaceuticals, Inc. | Péptidos protectores de tejido y usos de los mismos |
EP2960341B1 (en) | 2007-11-29 | 2018-06-27 | Molecular Health GmbH | Novel tissue protective erythropoietin receptor (nepor) and methods of use |
MX2010008050A (es) | 2008-01-22 | 2011-02-23 | Araim Pharmaceuticals Inc | Peptidos y analogos de peptidos protectores de los tejidos para evitar y tratar padecimientos y desordenes asociados con daño de los tejidos. |
WO2009134808A2 (en) * | 2008-04-28 | 2009-11-05 | President And Fellows Of Harvard College | Supercharged proteins for cell penetration |
WO2011022056A2 (en) | 2009-08-18 | 2011-02-24 | Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. | PEPTIDE MODULATORS OF THE δPKC INTERACTION WITH THE D SUBUNIT OF F1FO ATP SYNTHASE/ATPASE AND USES THEREOF |
-
2006
- 2006-08-07 ES ES12175366.9T patent/ES2653790T3/es active Active
- 2006-08-07 WO PCT/US2006/031061 patent/WO2007019545A2/en active Application Filing
- 2006-08-07 SI SI200632233T patent/SI2540309T1/en unknown
- 2006-08-07 ES ES12175352.9T patent/ES2653864T3/es active Active
- 2006-08-07 SI SI200631979T patent/SI2371855T1/sl unknown
- 2006-08-07 PL PL12175366T patent/PL2594279T3/pl unknown
- 2006-08-07 EP EP12175366.9A patent/EP2594279B1/en active Active
- 2006-08-07 HU HUE12175352A patent/HUE035793T2/en unknown
- 2006-08-07 LT LTEP12175352.9T patent/LT2540309T/lt unknown
- 2006-08-07 DK DK11163194.1T patent/DK2371855T3/en active
- 2006-08-07 EA EA200800536A patent/EA015672B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2006-08-07 MX MX2016004825A patent/MX364100B/es unknown
- 2006-08-07 CA CA2982909A patent/CA2982909A1/en not_active Abandoned
- 2006-08-07 SI SI200632230T patent/SI2594279T1/en unknown
- 2006-08-07 HU HUE12175366A patent/HUE035655T2/en unknown
- 2006-08-07 PL PL11163194T patent/PL2371855T3/pl unknown
- 2006-08-07 PT PT121753669T patent/PT2594279T/pt unknown
- 2006-08-07 DK DK12175366.9T patent/DK2594279T3/en active
- 2006-08-07 DK DK12175352.9T patent/DK2540309T3/en active
- 2006-08-07 CN CN201310529242.5A patent/CN103724418B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2006-08-07 MX MX2014011168A patent/MX339613B/es unknown
- 2006-08-07 PT PT121753529T patent/PT2540309T/pt unknown
- 2006-08-07 KR KR1020207016998A patent/KR20200072568A/ko not_active Application Discontinuation
- 2006-08-07 MX MX2008001509A patent/MX2008001509A/es active IP Right Grant
- 2006-08-07 UA UAA200802850A patent/UA100222C2/ru unknown
- 2006-08-07 KR KR1020177005579A patent/KR20170027868A/ko active Search and Examination
- 2006-08-07 KR KR1020087005373A patent/KR101626153B1/ko active IP Right Grant
- 2006-08-07 ES ES11163194.1T patent/ES2550055T3/es active Active
- 2006-08-07 IN IN2050CHN2014 patent/IN2014CN02050A/en unknown
- 2006-08-07 CN CN2006800348244A patent/CN101378772B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2006-08-07 AU AU2006278264A patent/AU2006278264B2/en not_active Ceased
- 2006-08-07 LT LTEP12175366.9T patent/LT2594279T/lt unknown
- 2006-08-07 BR BRPI0614529A patent/BRPI0614529A8/pt not_active Application Discontinuation
- 2006-08-07 JP JP2008525285A patent/JP5274253B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-08-07 PL PL12175352T patent/PL2540309T3/pl unknown
- 2006-08-07 HU HUE11163194A patent/HUE026444T2/en unknown
- 2006-08-07 EP EP06801051A patent/EP1924276A4/en not_active Withdrawn
- 2006-08-07 EP EP12175352.9A patent/EP2540309B1/en active Active
- 2006-08-07 NZ NZ565937A patent/NZ565937A/en not_active IP Right Cessation
- 2006-08-07 KR KR1020137016015A patent/KR101713368B1/ko active IP Right Grant
- 2006-08-07 KR KR1020187030050A patent/KR20180116475A/ko not_active Application Discontinuation
- 2006-08-07 KR KR1020197019568A patent/KR20190084136A/ko not_active Application Discontinuation
- 2006-08-07 KR KR1020187016750A patent/KR20180067735A/ko not_active Application Discontinuation
- 2006-08-07 EP EP11163194.1A patent/EP2371855B1/en active Active
- 2006-08-07 SG SG2014007868A patent/SG2014007868A/en unknown
- 2006-08-07 EP EP17202352.5A patent/EP3363451A1/en not_active Withdrawn
- 2006-08-07 PT PT111631941T patent/PT2371855E/pt unknown
- 2006-08-07 CA CA2618396A patent/CA2618396C/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-08-07 CA CA3079319A patent/CA3079319A1/en not_active Abandoned
- 2006-08-07 US US11/997,898 patent/US8071554B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-08-07 SG SG10201805825SA patent/SG10201805825SA/en unknown
-
2008
- 2008-02-05 IL IL189287A patent/IL189287A/en active IP Right Grant
- 2008-03-03 NO NO20081112A patent/NO20081112L/no not_active Application Discontinuation
-
2009
- 2009-08-21 HK HK09107682.9A patent/HK1127751A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-03-11 ZA ZA2011/01890A patent/ZA201101890B/en unknown
- 2011-10-20 US US13/278,131 patent/US8716245B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-04-16 US US13/448,345 patent/US8673861B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-02-15 JP JP2013027479A patent/JP5918155B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-04-08 US US14/248,030 patent/US9340598B2/en active Active
-
2015
- 2015-02-04 JP JP2015020020A patent/JP6158235B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2015-02-10 US US14/618,873 patent/US20150152156A1/en not_active Abandoned
- 2015-06-29 IL IL239695A patent/IL239695A0/en active IP Right Grant
-
2016
- 2016-05-05 US US15/147,848 patent/US10100096B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2016-06-08 JP JP2016114010A patent/JP6491621B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2018
- 2018-04-03 JP JP2018071318A patent/JP2018134084A/ja active Pending
- 2018-08-23 IL IL261346A patent/IL261346A/en unknown
- 2018-09-25 US US16/141,724 patent/US20190016769A1/en not_active Abandoned
-
2020
- 2020-01-30 JP JP2020013151A patent/JP2020078317A/ja active Pending
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
NOLI, N. Design, Synthesis and Conformational Analysis of hGM-CSF(13-31)-Gly-Pro-Gly-(103-116). Journal of Peptide Science. 1997, vol. 3, pages 323-335, especially page 324, column 2 * |
WOLFERT, M.A. Chloroquine and amphipathic peptide helices show synergistic transfection in vitro. Gene Therapy. 1998, Vol. 5, pages 409-411, figure 1 on page 410 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EA015672B1 (ru) | Тканезащитные пептиды и их применения | |
AU2015249144B2 (en) | Tissue protective peptides and uses thereof | |
AU2013201291B2 (en) | Tissue protective peptides and uses thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |