EA014684B1

EA014684B1 - Способы лечения легочных заболеваний

Info

Publication number: EA014684B1
Application number: EA200400399A
Authority: EA
Inventors: Гленн Дж. Смитс; Фрэнсис Дж. Спайнэйл
Original assignee: Байоджен Айдек Ма Инк.; Маск Фаундейшн Фор Рисерч Дивелопмент
Priority date: 2001-09-06
Filing date: 2002-09-06
Publication date: 2010-12-30
Also published as: KR100979738B1; PL368935A1; ZA200401765B; NZ532083A; JP2009209156A; AU2002341618B2; US20040259889A1; HUP0401805A2; GEP20074132B; IL160715A0; JP2005501915A; KR20040040457A; CA2459533A1; MXPA04002135A; JP4388373B2; WO2003022284A1; YU20104A; CN1564688A; UA80258C2; BR0212329A

Abstract

Описаны способы уменьшения легочного ангиоспазма или улучшения легочной гемодинамики у пациента. Более конкретно, данное изобретение относится к введению антагонистов Aаденозиновых рецепторов для снижения легочного ангиоспазма и улучшения легочной гемодинамики.

Description

Настоящее изобретение относится к кардиологии, медицинской химии и фармакологии. Более конкретно, оно относится к антагонистам Л₃ аденозиновых рецепторов и уменьшению легочного ангиоспазма или улучшению легочной гемодинамики.

Легочные заболевания могут представлять опасность для жизни. К ним относятся такие два заболевания как отек легких и легочная гипертензия. Отек легких может быть вызван множеством физических состояний, например изменением проницаемости альвеолярно-капиллярной мембраны, острым респираторным дистресс-синдромом, повышенным легочным капиллярным давлением, сниженным онкотическим давлением и лимфатической недостаточностью. Причины легочной гипертензии включают в себя, но не ограничиваются, гипоксемию, нарушения дыхательной системы, болезни сердца, тромботическое заболевание и эмболическое заболевание.

Обычное лечение данных легочных заболеваний включает в себя лекарственные средства, такие как блокаторы кальциевых каналов, диуретики, сульфат морфина, вазодилататоры, такие как нитраты, положительные инотропные агенты, простациклин и антикоагулянты.

Аденозин представляет собой внутриклеточный и внеклеточный посредник, генерируемый всеми клетками тела. Кроме того, он генерируется внеклеточно путем ферментативного превращения. Аденозиновые рецепторы подразделяют на четыре известных подтипа (то есть А₃, А_2а, А_2Ь и А₃) в зависимости от их относительного сродства к различным лигандам аденозиновых рецепторов и по анализу последовательности генов, кодирующих данные рецепторы. Активация каждого из подтипов приводит к однозначным и, иногда, противоположным эффектам. Аденозин связан с коронарной и системной вазодилатацией. Наличие аденозиновых рецепторов и функция данных рецепторов в легочной сосудистой сети были показаны для нескольких видов, включая человека (см., например, КисикЕшеуш е! а1., 1. ВаЧс СЕп. РЬу8ю1. РЕагтасо1., 8(4), рр. 287-299 (1997); Нопд, 1.Б., е! а1., 1. РЕу8ю1., 508 (РН) , рр. 109-118 (1998)). Эти исследования указывают на то, что в легочной сосудистой сети присутствуют рецепторы как А₁, так и А2 подтипов. Активация рецепторов А2 приводит к расширению и расслаблению данных сосудов (см., например, МсСогтаск е! а1., Ат. 1. РЬ.у8ю1., 256(1 Р! 2), рр. Н41-Н46 (1989); 5>хеп11шк1о81 е! а1., Ыаипуп 8сЕт1ебеЬегд8 АгсЕ. РЕагтасок, 351(4), рр. 417-425 (1995); СЕепд е! а1., Ат. 1. РЬ.у8ю1., 270 (1 Р! 2), рр. Н₂00-Н₂07 (1996); №е1у е! а1., Ат. 1. РЬ.у8ю1., 270 (2 Р! 2), рр. Н610-Н619 (1996)). Напротив, данные исследования показали, что активация рецепторов А1 приводит к сужению и напряжению данных сосудов, что приводит к повышенному сопротивлению кровотоку (см. №е1у е! а1., 1. РЕагтасо1. Ехр. ТЕег., 258(3), рр. 753-761 (1991); Вгоаб1у е! а1., 1. Аи!оп. РЕагтасо1., 16(6), рр. 363-366 (1996); см. также 8хеп11шк1о81 (1995), СЕепд (1996) и №е1у (1996) выше).

Несмотря на доступность ряда лекарственных средств для лечения таких легочных заболеваний, как отек легких и легочная гипертензия, средняя продолжительность жизни после диагноза первичной легочной гипертензии составляет 2,8 лет (Р'А1опгю е! а1., Апп. 1п!егп. Меб., 115, рр. 343-349 (1991)). Большинство имеющихся на настоящий момент лечений включает в себя неспецифическую вазодилатацию и снижение периферического (системного) сосудистого сопротивления. Это снижение тонуса кровеносных сосудов в других частях тела может привестти к пониженному кровяному давлению, которое обострит клиническую ситуацию, вызвав гипоперфузию тканей. Таким образом, сохраняется потребность в новых фармацевтически приемлемых соединениях и композициях и улучшенных способах снижения ангиоспазмов и улучшения легочной гемодинамики у пациентов, страдающих отеком легких и легочной гипертензией.

Краткое описание изобретения

Заявители решили упомянутую выше проблему, обнаружив, что антагонисты А₁ аденозиновых рецепторов способны уменьшать легочный ангиоспазм и улучшать легочную гемодинамику без сопутствующего снижения периферического сопротивления сосудов.

Изобретение относится к способу уменьшения легочного ангиоспазма или улучшению легочной гемодинамики с использованием антагонистов А₁ аденозинового рецептора. Соединения, используемые в способах данного изобретения, проявляют желательные эффекты путем специфического антагонизирования или блокирования А₁ аденозинового рецептора.

В некоторых вариантах способы данного изобретения включают в себя введение пациенту фармацевтически эффективного количества антагониста А1 аденозинового рецептора.

В некоторых вариантах данного изобретения применяемый антагонист А1 аденозинового рецептора выбирают из группы, состоящей из:

а) соединения формулы I

- 1 014684

к₂ (I) где Κι и К₂ представляют собой С1_балкил;

Χι и Х₂ являются кислородом;

К₃ представляют собой трициклическую группу, выбранную из

каждая из которых необязательно замещена С₁_балкилом, который дополнительно замещен одним К₅; где К₅ представляет собой СН₂-СО₂Н;

Ζ представляет связь; и К₆ представляет собой Н.

В предпочтительных вариантах антагонист А₁ аденозинового рецептора выбирают из группы, включающей в себя

3-[4-(2,6-диоксо-1,3-дипропил-2,3,6,7-тетрагидро-1Н-пурин-8-ил)бицикло[2.2.2]окт-1-ил]пропионовую кислоту;

8-(3 -окса-трицикло [3.2.1.0^2,4]окт-6-ил)-1,3-дипропил-3,7-дигидропурин-2,6-дион.

В некоторых вариантах настоящего изобретения антагонист Αι аденозинового рецептора, используемый в способе настоящего изобретения, является антителом. Предпочтительно данное антитело направлено на лигандсвязывающий домен А1 аденозинового рецептора.

В некоторых вариантах настоящего изобретения антагонист А1 аденозинового рецептора вводят человеку.

В некоторых вариантах настоящего изобретения антагонист Αι аденозинового рецептора, используемый в способе настоящего изобретения, соединен с фармацевтически приемлемым носителем в фармацевтически приемлемую композицию.

Настоящее изобретение пригодно для лечения пациента, у которого проявляются признаки или симптомы легочных заболеваний. Примеры легочных заболеваний, которые можно лечить способами данного изобретения, включают в себя отек легких, легочную гипертензию и их сочетание.

В некоторых вариантах настоящего изобретения способ используют для лечения отека легких, сопровождаемого состоянием, выбранным из группы, включающей в себя дисбаланс старлинговых сил, изменение проницаемости альвеолярно-капиллярной мембраны, лимфатическую недостаточность.

В некоторых вариантах настоящего изобретения способ используют для лечения легочной гипертензии, сопровождаемой состоянием, выбранным из группы, включающей в себя легочную артериальную гипертензию, легочную гипертензию, связанную с нарушениями дыхательной системы, или гипоксемией, легочную венозную гипертензию, легочную гипертензию, возникшую вследствие хронического тромботического или эмболического заболевания, легочную гипертензию, возникшую вследствие нарушений, непосредственно затрагивающих легочную сосудистую сеть.

В некоторых вариантах настоящего изобретения способ используют для лечения пациента, у которого проявляются признаки или симптомы легочного заболевания, характеризующегося по меньшей мере одним из следующих состояний: общей легочной гипоксией, региональной легочной гипоксией, отеком легких, повышенным легочным артериальным давлением, повышенным легочным сосудистым сопротивлением, повышенным центральным венозным давлением, пониженным насыщением артериальным кислородом, одышкой, хрипами и треском.

Данное изобретение относится также к способу лечения пациента, у которого проявляются признаки или симптомы легочного заболевания, включающему в себя стадию введения пациенту фармацевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей А1 аденозиновый антагонист и фармацевтически приемлемый носитель.

В некоторых вариантах изобретения предлагается способ лечения пациента, у которого проявляются признаки или симптомы легочного заболевания, выбранного из группы, состоящей из отека легких, легочной гипертензии и их сочетания.

В некоторых вариантах изобретения предлагается способ лечения пациента, у которого проявляются признаки или симптомы отека легких, где отек легких сопровождается состоянием, выбранным из группы, включающей в себя дисбаланс старлинговых сил, нарушение проницаемости альвеолярнокапиллярной мембраны, лимфатическую недостаточность.

- 2 014684

В некоторых вариантах изобретения предлагается способ лечения пациента, у которого проявляются признаки или симптомы легочной гипертензии, где легочная гипертензия сопровождается состоянием, выбранным из группы, включающей в себя легочную артериальную гипертензию, легочную гипертензию, связанную с нарушениями дыхательной системы, или гипоксемией, легочную венозную гипертензию, легочную гипертензию, возникшую вследствие хронического тромботического или эмболического заболевания, легочную гипертензию, возникшую вследствие нарушений, непосредственно затрагивающих легочную сосудистую сеть.

В некоторых вариантах настоящего изобретения предлагается способ лечения пациента, у которого проявляются признаки или симптомы легочного заболевания, где данное легочное заболевание характеризуется по меньшей мере одним из следующих состояний: общей легочной гипоксией, региональной легочной гипоксией, отеком легких, повышенным легочным артериальным давлением, повышенным легочным сосудистым сопротивлением, повышенным центральным венозным давлением, пониженным насыщением артериальным кислородом, одышкой, хрипами и треском.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 изображено воздействие антагониста А₁ аденозинового рецептора (ВО9719, 1 мг/кг) на артериальное среднее давление (АСД) (МАР) и сердечный ритм (СР) (НК). После лечения ВС9719 не было замечено никакого изменения в сердечном ритме или артериальном среднем давлении.

На фиг. 2 изображено воздействие антагониста А₁ аденозинового рецептора (ВС9719, 1 мг/кг) на минутный сердечный выброс (МСВ) (СО), легочное артериальное давление (ЛАД) (РАР) и легочное капиллярное заклиненное давление (ЛКЗД) (РС^Р). После лечения ВО9719 не было замечено никакого изменения в минутном сердечном выбросе. Легочное артериальное давление снижалось через 30 мин после обработки ВО9719 и оставалось пониженным. Легочное капиллярное заклиненное давление снижалось через 90 мин после обработки ВО9719.

На фиг. 3 изображено измерение легочного сосудистого сопротивления (ЛСС) (РУК) в препаратах с кардиостимулируемой сердечной недостаточностью после внутривенного вливания антагониста А1 аденозинового рецептора (ВО9719, 1 мг/кг). ЛСС снижается на 38% от базисного уровня и возвращается к базисному уровню (+р<0,05 по сравнению с базисным уровнем).

Фиг. 4. Системное сосудистое сопротивление (ССС) (8УК) и легочное сосудистое сопротивление определяли в препаратах с кардиостимулируемой СН на базисном уровне и после внутривенного вливания антагониста А! аденозинового рецептора (3-[4-(2,6-диоксо-1,3-дипропил-2,3,6,7-тетрагидро-1Нпурин-8-ил)бицикло[2.2.2]окт-1-ил]пропионовой кислоты (ВО9928, 1 мг/кг). Результаты представлены в виде %-ного изменения относительно базисного уровня. Через 10 мин после обработки ВО9928 ЛСС снижается на 18% от исходного уровня, тогда как изменения в ССС не было (+р<0,05 по сравнению с базисным уровнем).

Подробное описание изобретения

Если не указано иначе, все использованные здесь технические и научные термины имеют то же значение, что и общепринятое для специалиста в области техники, которой принадлежит данное изобретение. В случае противоречия оно регулируется настоящей заявкой, включающей в себя определения. Все публикации, патенты и прочие упомянутые здесь ссылки включены ссылкой.

Несмотря на то, что на практике или при тестировании данного изобретения можно использовать способы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным здесь способам и материалам, подходящие способы и материалы описаны ниже. Данные материалы, способы и примеры являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения. Другие признаки и преимущества данного изобретения будут ясны из подробного описания и из формулы изобретения.

В целях дальнейшего определения изобретения здесь приведены следующие термины и определения.

Как использовано здесь, алкильная группа означает насыщенную алифатическую углеводородную группу. Алкильная группа может быть линейной или разветвленной и может содержать, например, от 1 до 6 атомов углерода в цепи. Примеры линейных алкильных групп включают в себя, но не ограничиваются, этильную и бутильную. Примеры разветвленных алкильных групп включают в себя, но не ограничиваются, изопропильную и трет-бутильную.

Как использовано здесь, алкенильная группа означает алифатическую углеводородную группу, которая содержит по меньшей мере одну двойную связь. Алкенильная группа может быть линейной или разветвленной и может содержать, например, от 3 до 6 атомов углерода в цепи и 1 или 2 двойные связи. Примеры алкенильных групп включают в себя, но не ограничиваются, аллильную и изопренильную.

Как использовано здесь, алкинильная группа означает алифатическую углеводородную группу, которая содержит по меньшей мере одну тройную связь. Алкинильная группа может быть линейной или разветвленной и может содержать, например, от 3 до 6 атомов углерода в цепи и от 1 до 2 тройных связей. Примеры алкинильных групп включают в себя, но не ограничиваются, пропаргильную и бутинильную.

Как использовано здесь, арильная группа означает фенильную или нафтильную группу, или их

- 3 014684 производные. Замещенная арильная группа представляет собой арильную группу, которая замещена одним или более заместителями, таким как алкил, алкокси, амино, нитро, карбокси, карбоалкокси, циано, алкиламино, диалкиламино, галоген, гидрокси, гидроксиалкил, меркаптил, алкилмеркаптил, тригалогеналкил, карбоксиалкил, сульфокси или карбамоил.

Как использовано здесь, аралкильная группа означает алкильную группу, которая замещена арильной группой. Примером аралкильной группы является бензильная.

Как использовано здесь, циклоалкильная группа означает алифатический цикл, содержащий, например, от 3 до 8 атомов углерода. Примеры циклоалкильных групп включают в себя циклопропильную и циклогексильную.

Как использовано здесь, ацильная группа означает линейную или разветвленную алкил-С(=О)группу или формильную группу. Примеры ацильных групп включают в себя алканоильные группы (например, содержащие от 1 до 6 атомов углерода в алкильной группе). Примерами ацильных групп являются ацетильная и пивалоильная. Ацильные группы могут быть замещенными или незамещенными.

Как использовано здесь, карбамоильная группа означает группу, имеющую структуру НА-СО₂-. Алкилкарбамоил и диалкилкарбамоил относятся к карбамоильным группам, в которых у азота имеется одна или две алкильные группы, находящиеся на месте водородов, соответственно. По аналогии арилкарбамоильная и арилалкилкарбамоильная группы содержат арильную группу на месте одного из водородов, а в последнем случае, алкильную группу на месте второго водорода.

Как использовано здесь, карбоксильная группа означает -СООН группу.

Как использовано здесь, алкоксильная группа означает алкил-О-группу, в которой алкил такой, как описан ранее.

Как использовано здесь, алкоксиалкильная группа означает описанную ранее алкильную группу, в которой водород замещен описанной ранее алкоксигруппой.

Как использовано здесь, галоген или галоидная группа означает фтор, хлор, бром или йод.

Как использовано здесь, гетероциклическая группа означает 5-10-членную циклическую структуру, в которой один или более атомов цикла является элементом, отличающимся от углерода, например Ν, О, 8. Гетероциклическая группа может быть ароматической или неароматической, то есть может быть насыщенной или может быть частично или полностью ненасыщенной. Примеры гетероциклических групп включают в себя пиридил, имидазолил, фуранил, тиенил, тиазолил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, морфолинил, тиоморфолинил, индолил, индолинил, изоиндолинил, пиперидинил, пиримидинил, пиперазинил, изоксазолил, изоксазолидинил, тетразолил и бензимидазолил.

Как использовано здесь, замещенная гетероциклическая группа означает гетероциклическую группу, в которой один или более водородов замещены заместителями, такими как алкокси, алкиламино, диалкиламино, карбоалкокси, карбамоил, циано, галоген, тригалогенметил, гидрокси, карбонил, тиокарбонил, гидроксиалкил или нитро.

Как использовано здесь, гидроксиалкильная группа означает алкильную группу, замещенную гидроксигруппой.

Как использовано здесь, сульфамоильная группа означает структуру -8(Ο)₂ΝΗ₂. Алкилсульфамоил и диалкилсульфамоил относятся к сульфамоильным группам, в которых с атомом азота вместо водородов связана одна или две алкильных группы, соответственно. Аналогично арилсульфамоильная и арилалкилсульфамоильная группы содержат арильную группу вместо одного из водородов, а в последнем случае, алкильную группу вместо второго водорода.

Как использовано здесь, антагонист означает молекулу, которая связывается с рецептором без активации данного рецептора или запуска трансдукции сигнала. Антагонист конкурирует с эндогенным лигандом за сайт связывания, мешая, таким образом, стимуляции или запуску рецептора эндогенным лигандом. Антагонисты включают в себя антитела, вырабатываемые против А₁ аденозинового рецептора, и которые блокируют аденозинсвязывающий сайт, или препятствуют связыванию аденозина с рецептором.

Как использовано здесь, селективный антагонист означает антагонист, который связывается со специфическим подтипом аденозинового рецептора с большим сродством, чем с остальными подтипами. Например, селективный антагонист А₁ аденозинового рецептора обладает высоким сродством к А₁ рецепторам и обладает а) наномолярным сродством к связыванию по отношению к подтипу рецептора А1 и Ь) по меньшей мере в 10 раз, более предпочтительно, в 50 раз и наиболее предпочтительно, в 100 раз большим сродством к подтипу рецептора А₁, чем к другому подтипу.

Как использовано здесь, антитело означает полипептид, кодируемый иммуноглобулиновым геном, генами, или их фрагментами. Иммуноглобулиновые гены включают в себя каппа, лямбда, альфа, гамма, дельта, эпсилон и мю константные области, а также многочисленный ряд переменных областей иммуноглобулина. Легкие цепи классифицируются либо как каппа, либо как лямбда. Тяжелые цепи классифицируются как гамма, мю, альфа, дельта или эпсилон, которые, в свою очередь, определяют иммуноглобулиновые классы 1§С. 1дМ, 1дА, 1дИ и 1дЕ, соответственно.

- 4 014684

Антитела существуют, например, в виде нетронутых иммуноглобулинов (состоящих из двух тяжелых цепей и двух легких цепей), или в виде ряда их хорошо охарактеризованных фрагментов. Такие фрагменты включают в себя, но не ограничиваются, фрагменты, полученные при расщеплении различными протеиназами, фрагменты, полученные при химическом расщеплении и/или химической диссоциации, и фрагменты, полученные рекомбинантным образом, при условии, что фрагмент сохраняет способность к специфическому связыванию с антигеном. В число этих фрагментов входят РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')₂ и одноцепные Ρν (ксРс) фрагменты. По поводу подробного описания эпитопов, антител и фрагментов антител см. Рипбатеи1а1 1штиио1оду, ТЫтб Εάίίίοη, А.Е. Раи1, еб. Расса Ргекк, N. Υ. (1993). Подобные РаЬ' фрагменты можно легко получить путем обычного химического синтеза или технологии рекомбинантной ДНК. Таким образом, как использовано здесь, термин «антитело» включает в себя фрагменты антител, полученные путем модификации целых антител, или вновь синтезированных антител. Антитела, используемые в настоящем изобретении, получают посредством выбора из библиотек рекомбинантных антител в виде фагов или аналогичных векторов (см., например, Нике е! а1., 8с1еисе, 246, рр. 1275-81 (1989); Аагб е! а1., МИиге. 341, рр. 544-46 (1989); УаидЬап е! а1., МИаге Вю!есй., 14, рр. 309-14 (1996), которые включены здесь ссылкой).

Как использовано здесь, фармацевтически эффективное количество означает количество, необходимое для снижения или сокращения тяжести ангиоспазма и/или улучшения легочной гемодинамики на некоторый период времени. Фармацевтически эффективное количество означает также количество, необходимое для улучшения клинических симптомов пациента.

Как использовано здесь, фармацевтически приемлемый носитель, или адъювант относится к нетоксичному носителю или адъюванту, который можно вводить пациенту вместе с соединением по изобретению, и которое не нарушит его фармакологической активности.

Как использовано здесь, отек легких означает состояние, при котором в легких накапливается жидкость. Клинические признаки и симптомы отека легких могут начаться в виде первичного проявления некоторой патологии, или как развитие существовавшего ранее заболевания. Пациенты имеют ряд симптомов, включающих одышку, учащенное дыхание, ортопноз, тахикардию, гипертензию, торакальную угнетенность, холодные конечности при наличии или в отсутствие цианоза, кашель с пенистой или розовой мокротой, экстенсивное использование дополнительных дыхательных мускулов, влажные хрипы при наличии или в отсутствие свистящего дыхания.

Как использовано здесь, легочная гемодинамика означает силы, или механизмы, участвующие в циркуляции крови через легкие. Улучшенная легочная гемодинамика или улучшение легочной гемодинамики включает в себя, но не ограничивается, уменьшение легочного сосудистого сопротивления, снижение легочного артериального давления, снижение легочного капиллярного заклиненного давления, повышение насыщения артериальным кислородом, уменьшение хрипов, улучшение одышки и повышение способности к физическим упражнениям, если они ограничены легочной функцией.

Как использовано здесь, легочная гипертензия означает аномально повышенное кровяное давление в легочном контуре (легочной артерии). Легочная гипертензия может быть вторичной по отношению к процессу другого заболевания, или происходить как процесс первичного заболевания, известный как первичная легочная гипертензия. Диагноз легочной гипертензии входит в рамки обычной квалификации в данной области техники.

Как использовано здесь, легочный ангиоспазм означает сужение просвета кровеносных сосудов в легких, в особенности, как результат вазомоторного действия. Легочный ангиоспазм приводит к уменьшению кровотока через легкие, или к увеличению сопротивления кровотоку по легочной сосудистой сети. Снижение легочного ангиоспазма включает в себя уменьшение сужения сосудов, или увеличение легочной вазодилатации. Легочная вазодилатация относится к расширению просвета кровеносных сосудов. Она представляет собой увеличение внутреннего диаметра кровеносного сосуда, которое происходит в результате расслабления гладкой мышцы внутри стенки сосуда. Это приводит к увеличению кровотока и/или снижению давления для легочного артериального давления.

Настоящее изобретение относится к способам снижения легочного ангиоспазма, или улучшения легочной гемодинамики у пациента. Эти способы включают в себя введение пациенту фармацевтически эффективного количества антагониста А₁ аденозинового рецептора.

Синтез соединений аденозиновых антагонистов

Соединения, используемые для изобретения, можно получить обычными методами, известными в данной области техники. Например, синтез соединений формулы I описан в международной публикации №№ АО 01/34604 и АО 01/34610.

Синтез соединений 8-(3 -окса-трицикло [3.2.1.0^2,4]окт-6-ил)- 1,3-дипропил-3,7-дигидропурин-2,6диона и 8-бицикло[2.2.1]гепт-5-ен-2-ил-1,3-дипропил-3,7-дигидропурин-2,6-диона описаны в патенте США 5446046.

Синтез соединений формулы II и III можно осуществить обычными методами, известными в данной области техники.

Конкретно, данные соединения можно получить методами, описанными у 8ιιζι.ι1<ί е! а1., 1. Меб.

- 5 014684

Скет., 35, рр. 3581-3583 (1992) и 8к1таба е! а1., Те!гакебгоп Ье!!., 33, рр. 3151-3154 (1992).

Синтез соединений 7,8-дигидро-8-этил-2-(3-норадамантил)-4-пропил-1Н-имидазо[2,1-1]пурин-5(4Н)-она, 8-(7-гидрокси-3-норадамантил)-1,3-дипропил-3,7-дигидропурин-2,6-диона и 8-(3норадамантил)-1,3-дипропил-3,7-дигидропурин-2,6-диона описан в международной публикации № νθ 95/31460 и ее европейской дополнительной заявке ЕР-619316 (1994).

Синтез соединения 5-{8-(изопропилметиламино)-9-метил-9Н-пурин-6-иламино]бицикло[2.2.1]гептан-2-ола описан в международной публикации № νθ 96/06845 (1996).

Синтез соединений 1 - [2-(2-гидроксиэтил)пиперидин-1-ил]-3 -(2-фенилпиразоло [1,5-а] пиридин-3ил)пропенона, 4-[6-оксо-3-(2-фенилпиразоло[1,5-а]пиридин-3-ил)-6Н-пиридазин-1-ил]масляной кислоты и 6-((2-фенилпиразоло)[1,5-а]пиридин-3-ил)-2-[2-(1Н-тетразол-5-ил)этил]-2Н-пиридазин-3-она описан в международных публикациях №№ \\'О 95/18128 (1995), νθ 96/33715 (1996) и νθ 98/41237 (1998).

8-Циклопентил-1,3-дипропил-3,7-дигидропурин-2,6-дион (ЭРСРХ) коммерчески доступен от Кекеагск Вюскетюа1к 1п!егпайопа1.

Синтез 8-(3-оксоциклопентил)-1,3-дипропил-3,7-дигидропурин-2,6-диона (Апаксифиллин) описан в международной публикации № νθ 94/09787.

Синтез 8-(1-аминоциклопентил)-1,3-дипропил-3,7-дигидропурин-2,6-диона описан у СессатеШ, 8. е! а1., Кек. Соттип. Мо1. Ра!ко1. Ркагтасо1., 87, рр. 101-102 (1995).

Синтез 8-дициклопропилметил-1,3-дипропил-3,7-дигидропурин-2,6-диона описан у 8к1таба 1., 8иζι.ι1<ί Е. е! а1., 1. Меб. Скет., 34, рр. 466-469 (1991).

В некоторых вариантах настоящего изобретения соединения могут быть в виде ахирального соединения, оптически активного соединения, чистого диастереомера, смеси диастереомеров, пролекарства или его фармакологически приемлемой соли.

Получение антител А₁ аденозинового рецептора

В объем изобретения входит также использование антител, вырабатываемых против А₁ аденозинового рецептора, как антагонистов данного рецептора. Такие антитела блокируют сайт связывания лиганда (например, аденозина) в А! аденозиновом рецепторе или препятствуют связыванию лиганда (например, аденозина) с рецептором.

А1 аденозиновый рецептор можно использовать для извлечения поликлональных или моноклинальных антител, которые связываются с А₁ аденозиновым рецептором с использованием большого числа способов, хорошо известных специалисту в данной области техники. Альтернативно, можно синтезировать белки, соответствующие конкретным областям А1 аденозинового рецептора, и использовать их для создания иммунологических реагентов в соответствии с известными способами.

Аденозиновый рецептор А₁ человека клонировали, а кодирующую рецептор последовательность ДНК, а также белковую последовательность для рецептора идентифицировали (см., например, ЫЬей е! а1., Вюскет Вюркук Кек Соттип, 187(2), рр. 919-926 (1992); Тотеп8епб-№ско1коп е! а1., Втат Кек Мо1 Вташ Кек, 16(3-4), рр. 365-370 (1992)).

Антитела, направленные против А₁ аденозинового рецептора, в данном изобретении представляют собой молекулы иммуноглобулина, или их части, которые иммунологически реакционноспособны по отношению к А₁ аденозиновому рецептору настоящего изобретения. Более предпочтительно антитела, используемые в способах данного изобретения, иммунологически реакционноспособны по отношению к связывающему лиганд домену А1 аденозинового рецептора.

Антитела, направленные против А1 аденозинового рецептора, можно генерировать путем иммунизации подходящего хозяина. Подобные антитела могут быть поликлональными или моноклональными. Предпочтительно они являются моноклональными. Получение поликлональных и моноклональных антител входит в рамки обычной квалификации в данной области техники. По поводу обзора способов, применимых для осуществления данного изобретения на практике, см., например, Наг1оте апб Ьапе (1998), Ап11Ьоб1ек, А ЬаЬога!огу Мапиа1, Уе1!оп, Ό.Ε. е! а1. (1981); Апп. Кеу. о! Вюскет., 50, рр. 657-80., и АикиЬе1 е! а1. (1989) ; Сиггеп! Рго!осо1к ίη Мо1еси1аг Вю1оду (Ыете Уогк: 1окп \УПеу & 8опк), ежегодно обновляемый.

Определение иммуннореакционноспособности по отношению к А! аденозиновому рецептору можно осуществить любым из нескольких методов, хорошо известных в данной области техники, включая, например, иммуноблот-анализ и ЕБ18А.

Обычно моноклональные антитела со сродством 10^-8 М^-1, или, предпочтительно от 10^-9 до 10^-10 М^-1или выше, получают по стандартным методикам, описанным, например, у Наг1оте апб Ьапе, (1988), см. выше. Вкратце, выбирают соответствующих животных и следуют необходимому протоколу иммунизации. После соответствующего промежутка времени у этих животных вырезают селезенку и проводят слияние индивидуальных клеток селезенки, как правило, с иммортализованными клетками миеломы в условиях соответствующего отбора. После этого клетки клонально разделяют, а надосадочную жидкость каждого клона тестируют на предмет выработки им соответствующего антитела, специфичного по отношению к желательной области антигена.

Другая подходящая методика включает в себя следующее: лимфоциты подвергаются ίη уйго действию антигенного А1 аденозинового рецептора, или, альтернативно, выбор библиотек антител в фаговых

- 6 014684 или аналогичных векторах. См. Нике с1 а1., 8с1епсе., 246, рр. 1275-81 (1989). Антитела, используемые в данном изобретении, могут быть модифицированы или нет. В антигены (в данном случае А₁ аденозиновый рецептор) и в антитела можно внести метку путем присоединения либо ковалентно, либо нековалентно соединения, которое обеспечит детектируемый сигнал. В данной области техники известны и могут быть использованы в настоящем изобретении различные метки. Подходящие метки включают в себя радионуклиды, ферменты, субстраты, кофакторы, ингибиторы, флуоресцентные вещества, хемилюминесцентные вещества, магнитные частицы и тому подобное. Патенты, в которых описано использование подобных меток, включают в себя патенты США 3817837; 3850752; 3939350; 3996345; 4277437; 4275149 и 4366241. Кроме того, можно получить рекомбинантные иммуноглобулины (см. патент США 4 816567).

Антитело в соответствии с данным изобретением может также представлять собой гибридную молекулу, полученную из последовательности иммуноглобулина от различных видов (например, мыши и человека), или из частей последовательностей иммуноглобулина с легкими и тяжелыми цепями от одного вида. Антитело может представлять собой одноцепочечное антитело, или гуманизированное антитело. Оно может представлять собой молекулу, имеющую множество специфичностей связывания, такую как бифункциональное антитело, полученное по любой из ряда методик, известных специалисту в данной области, включая получение гибридных гибридом, дисульфидный обмен, химическое сшивание, добавление пептидных линкеров между двумя моноклональными антителами, введение двух рядов иммуноглобулиновых тяжелых и легких цепей в конкретную клеточную линию и так далее.

Антитела настоящего изобретения могут также представлять собой моноклональные антитела человека, например антитела, выработанные иммортализованными клетками человека, мыши 8СШ-йи, или других животных, способными вырабатывать человеческие антитела, или путем экспрессирования клонированных иммуноглобулиновых генов человека. Получение гуманизированных антител описано в патентах США №№ 5777085 и 5789554.

Подводя итог, специалист в данной области техники, в соответствии с методиками настоящего изобретения, имеет в распоряжении большое число методов, которые можно использовать для видоизменения биологических свойств антител данного изобретения, включая методы, которые повысили, или снизили бы устойчивость, или полупериод, иммуногенность, токсичность, сродство, или выход, данной молекулы антитела, или для изменения ее любым другим образом, который способен перевести ее в состояние, более подходящее для конкретного применения.

Применения антагонистов А₁ аденозиновых рецепторов

Способы и композиции настоящего изобретения можно использовать для лечения легочных заболеваний. Легочные заболевания могут представлять собой, например, отек легких, или легочную гипертензию. Данные заболевания могут быть вызваны множеством физических травм.

В некоторых вариантах настоящего изобретения способы и композиции используют для лечения легочного заболевания, характеризующегося по меньшей мере одним состоянием, выбранным из группы, включающей в себя глобальную легочную гипоксию, региональную легочную гипоксию, отек легких, повышенное легочное артериальное давление, повышенное легочное сосудистое сопротивление, повышенное центральное венозное давление, пониженное насыщение артериальным кислородом, одышку, хрипы и треск.

Как использовано здесь, хрипы и треск означают необычные звуки, сопровождающие нормальные звуки дыхания при выслушивании грудной клетки.

Способы данного изобретения можно использовать для лечения отека легких, вызванного множеством состояний. Эти состояния включают в себя, но не ограничиваются, дисбаланс старлинговых сил, изменение проницаемости альвеолярно-капиллярной мембраны (острый респираторный дистресссиндром), лимфатическую недостаточность. Кроме того, отек легких может быть вызван рядом других состояний, включая высотный отек легких, нейрогенный отек легких, передозировку наркотика, легочную эмболию, эклампсию, последствие кардиостимуляции электрошоком, последствие анестезии, последствие искусственного кровообращения.

Способ данного изобретения можно использовать для лечения отека легких, вызванного дисбалансом старлинговых сил. Причины дисбаланса старлинговых сил включают в себя повышенное легочное капиллярное давление, пониженное плазменное онкотическое давление вследствие гипоальбуминемии и повышенную отрицательность внутритканевого давления. Повышенное легочное капиллярное давление имеет как кардиотонические, так и не кардиотонические причины. Кардиотонические причины включают в себя недостаточность левого желудочка, стеноз митрального клапана, или подострый бактериальный эндокардит. Не кардиотонические причины включают в себя легочный венозный фиброз, врожденный стеноз отхождения легочных венозных сосудов, или легочное веноокклюзионное заболевание. Повышенное легочное капиллярное давление может быть также вызвано сверхперфузией жидкостей.

Способы данного изобретения можно использовать для лечения отека легких, вызванного повышенной отрицательностью внутритканевого давления. Причины повышенной отрицательности внутритканевого давления включают в себя быстрое удаление пневмоторакса при большом приложенном отри

- 7 014684 цательном давлении или астму.

Способы данного изобретения можно использовать для лечения отека легких, вызванного изменением проницаемости альвеолярно-капиллярной мембраны. Причины изменения проницаемости альвеолярно-капиллярной мембраны включают в себя инфекционную пневмонию (вирусную или бактериальную), вдыхание токсинов, циркулирующие токсины, вазоактивные вещества (например, гистамин, кинины), диссеминированную внутрисосудистую коагуляцию, иммунологические реакции, радиационную пневмонию, уремию, состояние, близкое к утоплению, аспирационную пневмонию, ингаляцию дыма, взрослый респираторный дистресс-синдром.

Способы данного изобретения можно использовать для лечения отека легких, вызванного лимфатической недостаточностью. Причины лимфатической недостаточности включают в себя недостаточность после легочного трансплантата, лимфогенный карциноматоз легких, или фиброзирующее воспаление лимфатических узлов.

Способы данного изобретения можно использовать для лечения легочной гипертензии, вызванной множеством состояний. Эти состояния включают в себя легочную артериальную гипертензию, легочную гипертензию, связанную с нарушениями дыхательной системы и/или гипоксемией, легочную венозную гипертензию, легочную гипертензию, вызванную хроническим тромботическим и/или эмболическим заболеванием, легочную гипертензию, вызванную нарушениями, непосредственно затрагивающими легочную сосудистую сеть.

Способы данного изобретения можно использовать для лечения легочной гипертензии, вызванной легочной артериальной гипертензией. Ее причины включают в себя первичную легочную гипертензию (включая единичные и наследственные нарушения), родственные состояния, такие как коллагеновое сосудистое заболевание, врожденный системно-легочный сброс крови, портальную гипертензию, и инфекцию вируса иммунодефицита человека, индуцирование лекарственными препаратами и токсинами (например, анорексигенными агентами (препаратами для подавления аппетита)) и стойкую легочную гипертензию новорожденного.

Способы данного изобретения можно использовать для лечения легочной гипертензии, вызванной легочной гипертензией, связанной с нарушениями дыхательной системы и/или гипоксемией. Причины легочной гипертензии, связанной с нарушениями дыхательной системы и/или гипоксемией, включают в себя хроническое обструктивное легочное заболевание, внутритканевое заболевание легких, нарушаемое сном дыхание, альвеолярные гиповентиляционные нарушения, хроническое подвергание действию больших высот, неонатальная болезнь легких и альвеолярно-капиллярное нарушение роста.

Способы данного изобретения можно использовать для лечения легочной гипертензии, вызванной легочной венозной гипертензией. Причины легочной венозной гипертензии включают в себя левостороннее сердечное заболевание предсердия или желудочка, левостороннее вальвулярное заболевание сердца, внешнее сдавливание центральных легочных вен (например, фиброзирующий медиастинит, аденопатия и/или опухоли) и легочную вено-окклюзионную болезнь.

Способы данного изобретения можно использовать для лечения легочной гипертензии, вызванной хроническим тромботическим и/или эмболическим заболеванием. Причины легочной гипертензии, вызванной хроническим тромботическим и/или эмболическим заболеванием, включают в себя тромбоэмболическую непроходимость проксимальных легочных артерий, непроходимость периферических легочных артерий (например, легочную эмболию (тромб, опухоль, яйцеклетки и/или паразиты, чужеродный материал), ίη δίΐιι тромбоз, серповидно-клеточная болезнь).

Способы данного изобретения можно использовать для лечения легочной гипертензии, вызванной нарушениями, непосредственно затрагивающими легочную сосудистую сеть. Причины легочной гипертензии, вызванной нарушениями, непосредственно затрагивающими легочную сосудистую сеть, включают в себя воспалительные состояния (например, шистосомоз, саркоидоз) и легочный капиллярный гемангиоматоз.

Фармацевтические композиции

Из антагонистов А! аденозиновых рецепторов можно составить фармацевтические композиции для введения животным, включая человека. Подобные фармацевтические композиции предпочтительно содержат количество антагониста Αι аденозинового рецептора, эффективное для снижения ангиоспазма, или увеличения легочной гемодинамики, и фармацевтически приемлемый носитель.

Фармацевтически приемлемые носители, используемые в данных фармацевтических композициях, включают в себя, например, ионообменные смолы, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточный белок, такой как сывороточный альбумин человека, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновую кислоту, сорбат кальция, частичные смеси глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как сульфат протамина, гидрофосфат натрия, гидрофосфат калия, соли цинка, коллоидальный оксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, карбоксиметилцеллюлозу натрия, полиакрилаты, воски, полиэтилен-полиоксипропиленовые блоксополимеры, полиэтиленгликоль и ланолин.

Композиции настоящего изобретения можно вводить парентерально, перорально, путем ингаляции спрея, локально, ректально, назально, буккально, вагинально или через имплантированный резервуар.

- 8 014684

Использованный здесь термин парентерально включает в себя методы подкожной, внутривенной, внутримышечной, внутрисуставной, внутрисиновиальной, внутригрудинной, внутритекальной, внутрипеченочной, внутриочаговой и внутричерепной инъекции или вливания. Предпочтительно композиции вводят перорально, внутрибрюшинно или внутривенно.

Стерильные формы для инъекций композиций данного изобретения могут представлять собой суспензии в воде или в масле. Данные суспензии могут быть составлены в соответствии с методиками, известными в данной области техники, с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов. Стерильные препараты для инъекций могут также представлять собой стерильный раствор или суспензию для инъекций в нетоксичном парентерально-приемлемом разбавителе или растворителе, например как раствор в 1,3-бутандиоле. В число приемлемых носителей и растворителей, которые могут быть использованы, входят вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды обычно используют стерильные жирные масла. Для этих целей можно использовать любое мягкое жирное масло, включая синтетические моно- и диглицериды. Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, применимы для изготовления пригодных для инъекции препаратов, являясь природными фармацевтически приемлемыми маслами, такими как оливковое масло, или касторовое масло, особенно в виде полиоксиэтилированных производных. Подобные растворы или суспензии в масле могут также содержать разбавитель или диспергатор на основе длинноцепного спирта, такой как карбоксиметилцеллюлоза, или аналогичные диспергирующие агенты, используемые при составлении фармацевтически приемлемых разовых доз, включая эмульсии и суспензии. Для составления смеси можно также использовать другие обычно используемые поверхностно-активные вещества, такие как Т\уссп5. §раи8 и другие эмульгаторы или усилители биодоступности, которые обычно используют при производстве фармацевтически приемлемых твердых, жидких или иных разовых доз.

Парентеральные препараты могут представлять собой разовую форму болюса, вливания, или ударную болюсную дозу, за которой следует поддерживающая доза. Такие композиции можно вводить раз в день или по мере необходимости.

Фармацевтические композиции данного изобретения можно вводить перорально в виде любой перорально приемлемой разовой дозы, включая капсулы, таблетки, водные суспензии или растворы.

В случае таблеток для перорального применения носители обычно включают в себя лактозу и кукурузный крахмал. Кроме того, обычно добавляют смазывающие агенты, такие как стеарат магния. Для перорального применения в виде капсул применимые разбавители включают в себя лактозу и сухой кукурузный крахмал. Если для перорального введения требуются водные суспензии, активный ингредиент соединяют с эмульгирующими и суспендирующими агентами. При желании можно также добавить некоторые подслащивающие, ароматизирующие или окрашивающие агенты.

Альтернативно, фармацевтические композиции данного изобретения можно вводить в форме суппозиториев для ректального введения. Их можно изготовить путем смешивания агента с подходящим нераздражающим эксципиентом, который является твердым при комнатной температуре, но жидким при ректальной температуре и, следовательно, расплавится в прямой кишке, высвобождая лекарственное средство. Подобные вещества включают в себя масло какао, пчелиный воск и полиэтиленгликоли.

Фармацевтические композиции данного изобретения можно также вводить локально. Локальное введение можно осуществить при помощи препарата для ректального суппозитория (см. выше), или подходящего препарата для клизмы. Кроме того, можно использовать локально-чрескожные пластыри.

Для локального применения фармацевтические композиции можно составить в виде подходящей мази, содержащей активный компонент, растворенный или суспендированный в одном или более носителях. Носители для локального введения включают в себя минеральное масло, жидкий вазелин, медицинский вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтилен, полиоксипропиленовое соединение, эмульгирующий воск и воду. Альтернативно, фармацевтические композиции можно составить в виде подходящего лосьона или крема, содержащего активные компоненты, суспендированные или растворенные в одном или более фармацевтически приемлемых носителях. Подходящие носители включают в себя, но не ограничиваются, минеральное масло, моностеарат сорбита, полисорбат 60, воск цетиловых сложных эфиров, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду.

Для офтальмологического применения фармацевтические композиции можно составить в виде тонкоизмельченных суспензий в изотоническом стерильном физиологическом растворе с установленным рН, или предпочтительно в виде растворов в изотоническом стерильном физиологическом растворе с установленным рН, при наличии или без консерванта, такого как хлорид бензилалкония. Альтернативно для офтальмологического применения фармацевтические композиции можно составить в виде мази, такой как вазелиновая.

Фармацевтические композиции данного изобретения можно также вводить посредством назального аэрозоля или ингаляции. Подобные композиции изготавливают по методикам, хорошо известным в области фармацевтических препаратов, и могут быть приготовлены в виде растворов в физиологическом растворе, при использовании бензилового спирта или других подходящих консервантов, промоторов

- 9 014684 абсорбции для повышения биодоступности, фторуглеродов и/или других обычных солюбилизирующих или диспергирующих агентов.

Количество антагониста А₁ аденозинового рецептора, которое можно соединять с веществами носителя для получения единичной разовой дозы, будет изменяться в зависимости от хозяина, подвергаемого лечению, и конкретного способа введения. Композиции можно составить таким образом, чтобы пациенту, принимающему данные композиции, вводилась доза антагониста Άι аденозинового рецептора в интервале 0,01-100 мг/кг массы тела. В некоторых вариантах настоящего изобретения эта доза составляет 0,1-10 мг/кг массы тела. Композицию можно вводить в виде единичной дозы, многократных доз, или в течение установленного периода времени в виде вливания.

Конкретная доза и режим лечения для любого конкретного пациента будет зависеть от множества факторов, включая конкретный антагонист А₁ аденозинового рецептора, возраст пациента, массу тела, общее состояние здоровья, пол и диету, и время введения, скорость выведения, сочетание лекарственных средств и сложность конкретного заболевания, подлежащего лечению. Оценка этих факторов медицинскими кураторами входит в квалификацию специалиста в данной области. Количество антагониста будет также зависеть от индивидуального пациента, подлежащего лечению, способа введения, типа лекарственного препарата, характеристик используемого состава, сложности заболевания и требуемого эффекта. Количество антагонистов можно определить по фармакологическим и фармакокинетическим правилам, известным в данной области.

В соответствии с некоторыми вариантами в изобретении предлагаются способы снижения легочного ангиоспазма, или улучшения легочной гемодинамики, включая стадию введения пациенту одной из описанных выше фармацевтических композиций. Использованный здесь термин пациент означает животное, например человека.

Для того чтобы описанное здесь изобретение было более понятным, далее приведены следующие примеры. Следует понимать, что данные примеры предназначены лишь для иллюстративных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие изобретение каким-либо образом.

Пример 1. Животная модель

Девятнадцать йоркширских свиней (20-25 кг, самцы НатЬоие Раттк, 8С) были подвергнуты хирургической обработке для того, чтобы вызвать кардиостимулируемую сердечную недостаточность, как описано у Тотйа е! а1., С1тси1а1юп, 83, рр. 635-644 (1991). Вкратце, под изофлурановой анестезией (3% в 1,5 л/мин кислорода) и через левую торакотомию в левое предсердие вшивали экранированный электрод для электростимуляции, соединенный с модифицированным программируемым электрокардиостимулятором (8329 Меб1тошс, 1пс., М1ппеароЙ8, ΜΝ) и помещали в подкожный мешочек. В течение от десяти до четырнадцати дней после восстановления после хирургической операции проводили базисное эхокардиографическое исследование и начинали кардиостимуляцию при 240 уд./мин в течение 3 недель. Таким же образом наблюдали за дополнительной группой из 7 нормальных контрольных животных, за исключением протокола кардиостимуляции. По завершении 3-недельного периода кардиостимуляции электрокардиостимуляторы были дезактивированы и проводились эхокардиографические исследования. Для этих исследований животных приносили в лабораторию и дезактивировали электрокардиостимуляторы. Для отображения левого желудочка при правом парастернальном подходе использовали двухмерные и М-режимные эхокардиографические исследования (АТЬ И1тагк VI, преобразователь 2,25 ГМц, Во1ке11. \УА). После эхокардиографического исследования животных готовили к хирургической обработке и началу протокола исследования.

Хирургическая обработка

Свиней анестезировали при помощи внутривенных болюсов суфентанила 2,0 мкг/кг, этомидата 0,3 мг/кг и векурония 10 мг, после чего проводили трахеостомию. После измерения артериального давления вводили внутривенный болюс тубокурарина 12 мг. Анестезию поддерживали во время процедуры путем непрерывных внутривенных вливаний сульфата морфина 3 мг/кг/ч и тубокурарина 2 мг/ч. Кроме того, с 30-минутными интервалами давали внутривенно этомидат 0,1 мг/кг. На протяжении протокола поддерживали профилактическое вливание лактатного раствора Рингера 10 мл/кг/ч. Данный анестезирующий протокол привел к глубокой плоскости анестезии и устойчивым гемодинамическим профилям вплоть до 6 ч. В легочную артерию устанавливали мультипросветный термодилюционный катетер (7,5 Рт, Вах!ег НеаНйсате Согр., 1гуте, СА) через правую наружную яремную вену, а катетер большого диаметра (7 Рг) помещали в левую наружную яремную вену для введения жидкости. Сонную артерию открывали и канюлировали и вводили катетер (7 Рг) в корень аорты для измерения внутриаортального давления крови и отбора проб крови.

Определения гемодинамики и функции почек

После хирургической обработки и 15-минутного периода стабилизации базисные гемодинамические данные регистрировали и переводили в цифровую форму. Выведенный из термодилюции минутный сердечный выброс и фракцию выброса получали через катетер легочной артерии в трех экземплярах. Все измерения регистрировали одновременно при временно отключенном вентиляторе, чтобы исключить из данных дыхательный артефакт. Артериальную пробу передавали на электролитный анализ. Легочное и системное сосудистое сопротивление рассчитывали из минутного сердечного выброса термодилюции и

- 10 014684 измерений давления с использованием стандартных формул.

Протокол эксперимента

После хирургической обработки и сбора базисных измерений случайно выбранным животным назначали либо вливание носителя (полиэтиленгликоль, 3 мл внутривенно, п=10), либо антагониста Α₁ аденозинового рецептора (1 мг/кг, 1,8-(3-окса-трицикло[3.2.1.0^2,4]окт-6-ил)-1,3-дипропил-3,7-дигидропурин2, 6-дион (ВС9719); п=9). После вливания носителя или ВС9719 описанные в предыдущем разделе гемодинамические определения повторяли через 10, 30, 60, 90 и 120 мин после вливания.

Анализ данных

Изменения в гемодинамике первоначально изучали между группами контроля и группами, которым вводили антагонист Αι аденозинового рецептора (ВС9719). при помощи ΑΝΟνΑ. Сопоставление этих базисных величин после рандомизации осуществляли при помощи 2-ходовой ΑΝΟνΑ. Сопоставление данных параметров после вливания сравнивали с использованием многоходовой ΑΝΟνΑ для повторных измерений. Двуточечные сравнения осуществляли с использованием усовершествованной Бонферрони проверки по критерию Стьюдента. Все статистические анализы проводили при помощи статистического программного обеспечения (ВМИР 81айкйса1 8оП\таге 1пс. Ищуегкйу οί СаПГогп1а Ргекк, Бон Αη^βίβκ, СΑ). Результаты получали в виде среднего ± стандартная ошибка среднего (8ЕМ). Считали, что величины р<0,05 являются статистически значимыми.

Системная и легочная гемодинамика при сердечной недостаточности

В группе с кардиостимулируемой сердечной недостаточностью увеличивался конечный диастолический размер левого желудочка (5,68±0,15 по сравнению с 4,09±0,12 см; р<0,05) и уменьшалось фракционное сокращение (24±2 по сравнению с 42±2%; р<0,05) по сравнению с нормальными контрольными значениями. В группе с сердечной недостаточностью сердечный ритм, легочное артериальное давление и легочное капиллярное заклиненное давление повышались, а минутный сердечный выброс и среднее внутриаортальное давление снижались по сравнению с нормальными контрольными значениями. У случайно выбранных животных, которым предписали вливания антагониста Αι аденозинового рецептора, или носителя, не было различия ни для одного из базисных параметров. На протяжении исследования не было отмечено никакого изменения по сравнению с базисным уровнем в определениях гемодинамики для нормальной контрольной группы.

Системная и легочная гемодинамика - влияние антагонистов А₁ аденозинового рецептора на сердечную недостаточность

После обработки антагонистом Α₁ аденозинового рецептора ВС9719 не отмечалось никакого изменения в сердечном ритме (фиг. 1), среднем артериальном давлении (фиг. 1), минутном сердечном выбросе (фиг. 2) или системном сосудистом сопротивлении по сравнению с базисным уровнем. Среднее легочное артериальное давление понижалось по сравнению с базисом через 30 мин после обработки ВС9719 и оставалось пониженным (30±1 по сравнению с 23±3 мм рт. ст.; р<0,05) (фиг. 2). Легочное капиллярное заклиненное давление (ЛКЗД) понижалось через 90 мин после обработки ВС9719 (9±2 мм рт. ст.; р<0,05) (фиг. 2). Легочное сосудистое сопротивление снижалось на 38% по сравнению с базисом через 10 мин после обработки ВС9719 и возвращалось на базисный уровень (фиг. 3). В группе, которой вводили носитель, не отмечали никаких изменений в гемодинамике. Селективный антагонизм Αι аденозинового рецептора при использовании ВС9719 связывали с резким снижением свойств легочного сопротивления без уменьшения системного сосудистого тонуса или давления крови.

Пример 2. Животная модель

Четырем йоркширским свиньям (25-30 кг, самцы, Натйопе Баттк, 8С) имплантировали кардиостимулятор (8329, Ме±тошс, 1пс., Мшпеаройк, ΜΝ) с тем, чтобы вызвать кардиостимулируемую СН (СНБ), как описано выше. Спустя десять-четырнадцать дней после хирургической операции проводили базисное эхокардиографическое исследование (ΑΊΈ ИЙтататк VI, преобразователь 2,25 МГц, Во1йе11, \¥Л) и начинали кардиостимуляцию при 240 уд./мин в течение 3 недель. Таким же образом проводили наблюдения за дополнительной группой из 6 нормальных животных, за исключением протокола кардиостимуляции. К концу 3-недельного периода кардиостимуляции кардиостимуляторы дезактивировали и использовали эхокардиографические исследования, чтобы отобразить Εν при правом парастернальном подходе. После эхокардиографического исследования животных готовили для хирургической обработки и началу протокола исследования.

Хирургическая обработка

Свиней анестезировали (внутривенно суфентанил 2,0 г/кг, этомидат 0,3 мг/кг) и парализовали (векуроний 10 мг, тубокурарин 12 мг). На протяжении протокола поддерживали профилактическое вливание 10 мл/кг/ч лактатного раствора Рингера. В легочную артерию устанавливали мультипросветный термодилюционный катетер (7,5 Бт, Вах!ет Неаййсате Согр., Буше, СΑ) через правую наружную яремную вену, а катетер большого диаметра (7 Бг) помещали в левую наружную яремную вену для введения жидкости. Сонную артерию открывали и канюлировали и вводили катетер (7 Бг) в корень аорты для измерения внутриаортального давления крови и отбора проб крови.

- 11 014684

Измерение гемодинамической функции

После хирургической обработки и 10-минутного периода стабилизации базисные гемодинамические данные регистрировали и переводили в цифровую форму. Выведенный из термодилюции минутный сердечный выброс и фракцию выброса получали через катетер легочной артерии в трех экземплярах. Легочное и системное сосудистое сопротивление рассчитывали из. измерений давления и минутного сердечного выброса с использованием стандартных формул.

Протокол эксперимента

После хирургической обработки и сбора базисных измерений внутривенно вливали антагонист А₁аденозинового рецептора (3-[4-(2,6-диоксо-1,3-дипропил-2,3,6,7-тетрагидро-1Н-пурин-8-ил)бицикло[2.2.2]окт-1-ил]пропионовую кислоту (ВС9719), 1 мг/кг). После вливания описанные в предыдущем разделе гемодинамические определения повторяли через 10, 20, 30, 60, 90 и 120 мин после вливания.

Анализ данных

Сравнение базисных гемодинамических данных для контрольной и СН групп проводили с использованием критерия Стьюдента. Зависящие от времени изменения в гемодинамике после вливания А! блокады исследовали при помощи ΑΝΟνΑ. Двуточечные сравнения осуществляли с использованием усовершествованной Бонферрони проверки по критерию Стьюдента. Все статистические анализы проводили при помощи статистического программного обеспечения (ΒΜΌΡ δίαΐίδΐίοαΐ 8ой^аге 1пс. ишуегкйу οί СайГогша Ргекк, Бон Апде1ек, СА). Результаты получали в виде среднего ± стандартная ошибка среднего (8ΕΜ). Считали, что величины р<0,05 являются статистически значимыми. Результаты В группе с кардиостимулируемой сердечной недостаточностью увеличивался конечный диастолический размер левого желудочка (5,8±0,1 по сравнению с 4,1±0,3 см; р<0,05) и уменьшалось фракционное сокращение (20±1 по сравнению с 41±2%; р<0,05) по сравнению с нормальными контрольными значениями. Базисная функция левого желудочка и гемодинамика суммированы в табл. 1. В группе с сердечной недостаточностью сердечный ритм, легочное артериальное давление и легочное капиллярное заклиненное давление (ЛКЗД) повышались, а ударный объем сердца уменьшался по сравнению с нормальными контрольными значениями. Кроме того, в группе СН легочное сосудистое сопротивление повышалось по сравнению с нормальным. На протяжении исследования не было отмечено никакого изменения по сравнению с базисным уровнем в определениях гемодинамики для нормальной контрольной группы.

Системная и легочная гемодинамика: влияние антагониста А₁ аденозинового рецептора на сердечную недостаточность

После обработки антагонистом А! аденозинового рецептора ВС9928 не отмечалось никакого изменения сердечного ритма, среднего артериального давления или минутного сердечного выброса. Легочное сосудистое сопротивление снижалось на 18% по сравнению с базисом через 10 мин после обработки ВС9928 (р<0,05), в то время как в системном сосудистом сопротивлении изменения не было (фиг. 4). Селективный антагонизм А₁ аденозинового рецептора при использовании ВС9928 связывали с резким снижением свойств легочного сопротивления без уменьшения системного сосудистого тонуса или давКардиоКонтроль с тимули руема я ления крови.

Таблица 1. Базисная функция Εν и гемодинамики в нормальных препаратах по сравнению с СН

Функция ЬУ


Частичное сокращение	41±2	20 + 1*	<0,01
Конечный диастолический объем (см)	4,1±0,3	5,8+0,1+	<0,01
Гемодинамика
Сердечный ритм (ударов/мин)	94 + 3	126±17	0, 16
Среднее артериальное давление (мм рт. ст.)	103±8	92±3	0, 15
Среднее ЛА давление (мм рт. ст.)	14 + 3	28±4	0, 03
ЛКЗД (мм рт. ст.)	6+2	14+2	0, 04
Минутный сердечный выброс (л/мин)	4,15+0,25	3,54±0,31	0, 08

- 12 014684

Ударный объем (мл)	44,4 + 3,3	29,5±3,8	0,02
Сердечный индекс (л/мин/кг)	0,13+0,01	0,09±0,01	0,03
Индекс ударного объема (мл/кг)	1,41±0,09	0,76±0,09	<0,01
Сопротивление
Системное (дина.с.см-5)	2036+227	2107+148	0,80
Легочное (дина,с.см-5)	148129	328±50	0,04
Системное индексированное (Х102 дина. с. см-5. кг)	645+85	823181	0,07
Легочное (Х102 дина.с.см-5.кг)	47 + 10	126+18	<0,01
Размер пробы (н)	б	4
Значения представлены в виде Среднего ±5ЕМ. р-значения для сравнения между контрольными и СН, как указано. СН: быстрая кардиостимуляция при 240 ударах/мин в течение 3 недель. ЛКЗД: легочное капиллярное заклиненное давление.

Оценка А₁ селективных антагонистов - ингибиторов аденозин-опосредованного ангиоспазма легочных сосудов

Для оценки большого количества соединений была разработана модель, в которой получали легочные сосуды от грызунов (крыс) и поперечные кольца сосуда использовали в аппарате с баней для тканей ίη νίΐτο. Данная модель позволяет производить оценку соединений для определения того, уменьшают ли тестируемые соединения легочный ангиоспазм.

Самцов крыс 8ргадие Эап1еу анестезируют ВБ (ΙΡ) с использованием 90 мг/кг бревитала натрия. После достижения хирургической плоскости анестезии аортальную область бреют и открывают сердце и аортальный участок путем срединной стернотомии. Легочную артерию подготавливают путем удаления пищевода, резекции трахеи и открывания основных кровеносных сосудов, входящих на дорсальную поверхность сердца. Легочную артерию осторожно рассекают и извлекают. Изолированный сосуд хранят в открытом контейнере с холодным буфером Кребса-Хензеляйта, рН 7,4, содержащем Ό-глюкозу (2 г/л), М§80₄ (0,14 г/л), одноосновный сульфат калия (0,16 г/л), КС1 (0,35 г/л), ИаС1 (6,9 г/л), СаС1 (0,373 г/л) и гидрокарбонат натрия (2,1 г/л), до тех пор, пока она не будет готова к использованию. При помощи чашки Петри и стереомикроскопа сосуд очищают от адвентиций и режут на 3-мм кольцевые сегменты. После этого легочные кольца осторожно надевают на проволочные треугольники и помещают в предварительно нагретые до 37°С бани для органов, содержащие 10 мл буфера Кребса-Хензеляйта, через который барботируют 95% О₂/5% СО₂. Два куска 3-0 шелковой нити с опорой из проволочного треугольника на каждом конце используют для поддерживания легочных колец; один конец группы подвешивают на Ьобразный стеклянный стержень, а другой конец - на изометрический динамометрический датчик для определения силы в грам-натяжении. Устанавливают вручную предварительно натяжение и дают кольцам уравновеситься в течение 1 ч, при промывании и регулировкой предварительного натяжения каждые 15 мин, или как потребуется. После уравновешивания в легочные кольца делают инъекцию 60 мМ хлорида калия (КС1) и дают дойти до плато в течение 5 мин и промывают.

Реакционную способность данных сосудов определяют при использовании РОР_2а, фенилэфрина, или калия. После подтверждения реакционноспособности ткань промывают три раза и оставляют для стабилизации при натяжении 1 г. Затем получают кривую концентрация-отклик при использовании А₁селективного антагониста N-6 циклопентил аденозина (СРА) в условиях окисления. Затем ткань промывают три раза и уравновешивают при натяжении 1 г без окисления и при инкубировании при различных концентрациях испытываемого антагониста. После этого кривую концентрация СРА-отклик повторяют для подтверждения вазоконстрикторного отклика при гипоксии и для того, чтобы определить, вызывает ли антагонист направленный вправо параллельный сдвиг кривой концентрация агониста-опыт (что указывает на полный конкурентный антагонизм).

В описании и формуле изобретения подразумевается, что слово включать в себя, или модификации, такие как включает в себя, или включающий в себя означает включение указанного целого числа или группы целых чисел, но не исключения любого другого целого числа, или групп целых чисел.

Представленные варианты способов данного изобретения можно изменять для получения других вариантов данного изобретения. Поэтому понятно, что объем данного изобретения не ограничен конкретными вариантами, представленными в виде примера.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ уменьшения легочного ангиоспазма или улучшения легочной гемодинамики у пациента, включающий введение пациенту фармацевтически эффективного количества антагониста А₁ аденозинового рецептора, причем указанный антагониста А₁ аденозинового рецептора представляет собой соединение формулы (I) где К₁ и И₂ представляют собой С_1-6алкил;

Х₁ и Х₂ являются кислородом;

И₃ представляют собой трициклическую группу, выбранную из

Г

ИЛИ Г , каждая из которых необязательно замещена С_1-6алкилом, который дополнительно замещен одним Из;

где И₅ представляет собой СН₂-СО₂Н;

Ζ представляет связь и

И₆ представляет собой Н.
2. Способ по п.1, где антагонист А₁ аденозинового рецептора выбирают из группы, включающей в себя
3-[4-(2,6-диоксо-1,3-дипропил-2,3,6,7-тетрагидро-1Н-пурин-8-ил)бицикло[2.2.2]окт-1ил]пропионовую кислоту;

8-(3 -окса-трицикло [3.2.1.0^2,4]окт-6-ил)-1,3-дипропил-3,7-дигидропурин-2,6-дион.

3. Способ по п.1, где антагонист А₁ аденозинового рецептора представляет собой 8-(3-оксатрицикло[3.2.1.0^2,4]окт-6-ил)-1,3-дипропил-3,7-дигидропурин-2,6-дион.
4. Способ по п.1, где антагонист А₁ аденозинового рецептора представляет собой 3-[4-(2,6-диоксо1,3-дипропил-2,3,6,7-тетрагидро-1Н-пурин-8-ил)бицикло[2.2.2]окт-1-ил]пропионовую кислоту.
5. Способ по п.1 или 2, где пациент является человеком.
6. Способ по п.1 или 2, где антагонист А₁ аденозинового рецептора соединен с фармацевтически приемлемым носителем, составляя фармацевтически приемлемую композицию.
7. Способ по п.6, где пациент является человеком.
8. Способ по п.6, где у пациента проявляются признаки или симптомы легочного заболевания.
9. Способ по п.6, где легочное заболевание выбирают из отека легких, легочной гипертензии и их сочетания.
10. Способ по п.9, где отек легких сопровождается состоянием, выбранным из группы, включающей в себя дисбаланс старлинговых сил, изменение проницаемости альвеолярно-капиллярной мембраны, лимфатическую недостаточность.
11. Способ по п.9, где легочная гипертензия сопровождается состоянием, выбранным из группы, включающей в себя легочную артериальную гипертензию, легочную гипертензию, связанную с нарушениями дыхательной системы или гипоксемией, легочную венозную гипертензию, легочную гипертензию, вызванную хроническим тромботическим или эмболическим заболеванием, легочную гипертензию, вызванную расстройствами, непосредственно затрагивающими легочную сосудистую сеть.
12. Способ по п.6, где у пациента проявляются признаки или симптомы легочного заболевания, отличающегося по меньшей мере одним состоянием, выбранным из группы, включающей в себя общую легочную гипоксию, региональную легочную гипоксию, отек легких, повышенное давление в легочной артерии, повышенное легочное сосудистое сопротивление, повышенное центральное венозное давление, пониженное насыщение артериальным кислородом, одышку, хрипы и трески.
13. Способ по п.1 или 2, где у пациента проявляются признаки или симптомы легочного заболевания.
14. Способ по п.13, где легочное заболевание выбирают из отека легких и легочной гипертензии.
15. Способ по п.14, где отек легких сопровождается состоянием, выбранным из группы, включаю

- 14 014684 щей в себя дисбаланс старлинговых сил, изменение проницаемости альвеолярно-капиллярной мембраны, лимфатическую недостаточность.
16. Способ по п.14, где легочная гипертензия сопровождается состоянием, выбранным из группы, включающей в себя легочную артериальную гипертензию, легочную гипертензию, связанную с нарушениями дыхательной системы или гипоксемией, легочную венозную гипертензию, легочную гипертензию, вызванную хроническим тромботическим или эмболическим заболеванием, легочную гипертензию, вызванную расстройствами, непосредственно затрагивающими легочную сосудистую сеть.
17. Способ по п.1 или 2, где у пациента проявляются признаки или симптомы легочного заболевания, отличающегося по меньшей мере одним состоянием, выбранным из группы, включающей в себя общую легочную гипоксию, региональную легочную гипоксию, отек легких, повышенное давление в легочной артерии, повышенное легочное сосудистое сопротивление, повышенное центральное венозное давление, пониженное насыщение артериальным кислородом, одышку, хрипы и трески.
18. Способ лечения легочного заболевания, включающий в себя введение указанному пациенту фармацевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей антагонист А1 аденозинового рецептора по п.1 или 2 и фармацевтически приемлемый носитель.
19. Способ по п.18, где легочное заболевание выбирают из группы, включающей в себя отек легких, легочную гипертензию и их сочетание.
20. Способ по п.19, где отек легких сопровождается состоянием, выбранным из группы, включающей в себя дисбаланс старлинговых сил, изменение проницаемости альвеолярно-капиллярной мембраны, лимфатическую недостаточность.
21. Способ по п.19, где легочная гипертензия сопровождается состоянием, выбранным из группы, включающей в себя легочную артериальную гипертензию, легочную гипертензию, связанную с нарушениями дыхательной системы или гипоксемией, легочную венозную гипертензию, легочную гипертензию, вызванную хроническим тромботическим или эмболическим заболеванием, легочную гипертензию, вызванную расстройствами, непосредственно затрагивающими легочную сосудистую сеть.
22. Способ по п.18, где у пациента проявляются признаки или симптомы легочного заболевания, отличающегося по меньшей мере одним состоянием, выбранным из группы, включающей в себя общую легочную гипоксию, региональную легочную гипоксию, отек легких, повышенное давление в легочной артерии, повышенное легочное сосудистое сопротивление, повышенное центральное венозное давление, пониженное насыщение артериальным кислородом, одышку, хрипы и трески.