EA013371B1 - Новые соединения, содержащие их фармацевтические композиции и способы их применения - Google Patents

Abstract

Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтический разбавитель и соединение формулы I, где R=H, C-C-алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил, -CHOR; -C(O)R, -CO(O)R, -C(O)NRR, -CHC(O)Rили -CHC(O)NHR, где каждый из Rи Rнезависимо представляет собой Н, C-C-алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил, необязательно содержащий один или более атомов галогена, R=-OH, -OR, -OCHC(O)R, -OCHC(O)NHR, -OC(O)R, -OC(O)OR, -OC(O)NHNH-Rили -OC(O)NRR, где каждый из Rи Rнезависимо представляет собой Н, C-C-алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил и каждый из Rи Rможет необязательно содержать атомы галогена; Rи Rявляются одинаковыми или отличаются друг от друга и представляют собой C-C-алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил. Раскрыты также способы применения таких композиций для лечения рака, снижения веса, лечения инфекций, вызванных микробами, для ингибирования нейропептида-Y и/или синтазы жирных кислот и для стимуляции СРТ-1.

Description

Существует четыре основных фермента, вовлеченных в путь синтеза жирных кислот: синтаза жирных кислот (ВАЗ), алкинил-КоА-карбоксилаза (АСС), малат-дегидрогеназа и цитрат-лиаза. Главный фермент РАЗ катализирует ΝΑΌΡΗ-зависимую конденсацию предшественников малонил-КоА и алкинил-КоА с продуцированием жирных кислот. NΑ^ΡΗ представляет собой восстановитель, который обычно служит в качестве важного донора электронов в двух точках реакционного цикла РАЗ. Три других фермента (т.е. АСС, малат-дегидрогеназа и цитрат-лиаза) продуцируют необходимые предшественники. В синтез жирных кислот вовлечены также другие ферменты, например ферменты, продуцирующие ΝΆΙΙΡΗ.

РАЗ имеет определенный Комиссией по ферментам (Е.С.) № 2.3.1.85 и известна также как синтетаза жирных кислот, лигаза жирных кислот, а также имеет ее систематическое название ацилКоА:малонил-КоА С-ацилтрансфераза (декарбоксилирование, оксоацил- и еноил-восстановление и гидролиз сложного тиоэфира). Существует семь различных ферментов, или каталитических доменов, вовлеченных в катализируемый РАЗ синтез жирных кислот: алкинилтрансацилаза, малонилтрансацилаза, бета-кетоацилсинтетаза (конденсирующий фермент), бета-кетоацилредуктаза, бета-гидроксиацилдегидраза, еноилредуктаза и тиоэстераза (\УакП. З. 1., ВюсйетщЦу, 28: 4523-4530, 1989).

Все семь из указанных ферментов вместе образуют РАЗ.

Хотя катализируемый РАЗ синтез жирных кислот подобен у низших организмов, например, таких как бактерии, и высших организмов, например, таких как микобактерии, дрожжи и люди, однако имеются некоторые существенные различия. У бактерий семь ферментативных реакций осуществляются семью отдельными полипептидами, которые являются несвязанными. Они относятся к классу РАЗ II типа. И наоборот, ферментативные реакции у микобактерии, дрожжей и людей осуществляются многофункциональными полипептидами. Так, например, дрожжи имеют комплекс, состоящий из двух отдельных полипептидов, тогда как у микобактерии и людей все семь реакций осуществляются одним полипептидом. Они относятся к классу РАЗ I типа.

Ингибиторы РАЗ.

Было показано, что различные соединения ингибируют синтазу жирных кислот (РАЗ). Ингибиторы РАЗ могут быть идентифицированы по способности соединения ингибировать ферментативную активность очищенной РАЗ. Активность РАЗ может быть определена измерением включения меченного радиоактивным изотопом предшественника (т.е. алкинил-КоА или малонил-КоА) в жирные кислоты или спектрофотометрическим измерением окисления NΑ^ΡΗ (Όίΐδ, е! а1., Ме1йоб§ ЕпхутоГ 35: 74-83).

В табл. 1 перечислены некоторые ингибиторы РАЗ.

Таблица 1

Типичные ингибиторы ферментов, участвующих в пути синтеза жирных кислот

- 1 013371

Ингибиторы цитрат-лиазы

Ингибиторы малат-дегидрогеназы (-) гидроксицитрат окисленный перйодатом 3-амино (К,5)-5-(3,4-дикарбокси-Зпиридинаденин динуклеотидфосфат гидрокси-3-метилбутил)-КоА

5,5'-дитиобис(2-нитробензойная

-карбоксиметил-КоА п-гидроксимеркурбензоат

Ν-этилмалеимид сложные эфиры оксалилтиола, такие как 5-оксалилглутатион госсипол фенилглиоксаль

2,3-бутандион бромпируват прегненолон

Ингибиторы алкинил КоА карбоксилазы

9-деценил-1-пентендиовая кислота сетоксидим деканил-2-пентендиовая кислота галоксифоп и его сложный КоА деканил-1-пентендиовая кислота эфир (5)-ибупрофенил-КоА диклофоп и его сложный КоА (К)-ибупрофенил-КоА эфир флуазифоп и его сложный

КоА эфир клетодим клофоп аллоксидим

5-(тетрадециклокси)-2трифоп фуранкарбоновая кислота клофибриновая кислота бета, бета' -тетраметил2,4-О-мекопроп гексадекандиовая кислота тр алкоксидим далапон

2 -алкилглутарат	свободная бета, бета прим-
2-тетрадеканилглутарат (ТОО)	метилзамещенная
2-октилглутаровая кислота	гексадекандиоЕая кислота
циклический 3' , 5' -монофосфат	(МЕЦ1СА 16) или ее сложный
N6,02-дибутириладенозина	монотиоэфир
циклический 3' , 5' -монофосфат	альфа-циано-4-гидроксициннамат
N2,02-дибутирилгуановина	5-(4-бром-2,3-диоксобутил)-КоА
КоА производное 5-	п-гидроксимеркурий-бензоат
(тетрадецилокси)-2-	(РНМВ)
фуранкарбоновой кислоты	циклический 3',5' монофосфат
(ТОРА)	N6,02-дибутириладеноэина
2,3,7,8-тетрахлордибензо-п-
ДИОКСИН

Из четырех ферментов, участвующих в пути синтеза жирных кислот, ΡΑ8 является предпочтительной мишенью для ингибирования вследствие того, что она действует только в пути синтеза жирных кислот, тогда как три других фермента вовлечены в другие клеточные функции. Поэтому ингибирование одного из трех других ферментов, вероятно, оказывает влияние на нормальные клетки. Из семи ферментативных стадий, осуществляемых ΡΑ8, стадия, катализируемая конденсирующим ферментом (т.е. бетакетоацил-синтетазой) и еноилредуктазой, является наиболее простым кандидатом для ингибиторов, которые замедляют или останавливают синтез жирных кислот. Конденсирующий фермент комплекса ΡΆ8 полностью охарактеризован с точки зрения структуры и функции. Активный центр конденсирующего фермента содержит критический цистеинтиол, который является мишенью антилипидемических реаген

- 2 013371 тов, например, таких как ингибитор церуленин.

Предпочтительные ингибиторы конденсирующего фермента включают широкий диапазон химических соединений, включающих алкилирующие реагенты, окислители и реагенты, способные подвергаться дисульфидному обмену. Связующий карман фермента предпочитает Е, Е диены с длинной цепью.

В принципе эффективным ингибитором конденсирующего фермента может быть реагент, содержащий диен в боковой цепи и группу, которая проявляет химическую активность к анионам тиолата. Примером такого соединения является церуленин [(2Б,3К)-2,3-эпокси-4-оксо-7,10-додекадиеноиламид]

Церуленин ковалентно связывается с критической цистеинтиольной группой в активном центре конденсирующего фермента синтазы жирных кислот, инактивируя указанную ключевую ферментативную стадию (ЕипаЬакЫ, е! а1., 1. Вюсйет., 105: 751-755, 1989). Хотя отмечалось, что церуленин обладает и другими активностями, однако они проявляются или у микроорганизмов, которые не могут быть релевантными моделями человеческих клеток (например, ингибирование синтеза холестерина в грибах, Отита (1976), Вас!епо1. Пет.. 40: 681-697, или ослабленный синтез РНК (ΒΝΑ) у вирусов, Рете/, е! а1. (1991), ЕЕВБ, 280: 129-133); происходят в основном при повышенных концентрациях лекарственного средства (ингибирование вирусной Ηΐν протеазы при 5 мг/мл, МоеШпд, е! а1. (1990), ЕЕВБ, 261: 373-377) или могут быть прямым результатом ингибирования эндогенного синтеза жирных кислот (ингибирование процессинга антигена в В-лимфоцитах и макрофагах, Еа1о е! а1. (1987), 1. 1ттипо1., 139: 3918-3923). В некоторых данных предполагается, что церуленин не ингибирует специфически миристоилирование белков (Б1топ, е! а1., 1. Вю1. Сйет., 267: 3922-3931, 1992).

Еще несколько ингибиторов ЕАБ раскрыты в заявке на патент США № 08/096908 и ее С1Р, поданной 24 января 1994 г., описания которых включены в данный патент посредством ссылки. Включены ингибиторы синтазы жирных кислот, цитрат-лиазы, КоА-карбоксилазы и малат-дегидрогеназы.

Тотойа и сотрудники (Тотойа е! а1., ВюсЫт. Вюрйук. Ас!. 921: 595-598, 1987; Отита е! а1., 1. АпйЬюйск 39:1211-1218, 1986) описывают триаксин С (иногда называемый ^Б-1228А), природный ингибитор ацил-КоА-синтетазы, который является продуктом Бйер!отусек кр. БК-1894. Химическая структура триаксина С: 1-гидрокси-3-(Е,Е,Е-2',4',7'-ундекатриенилидин)триазен. Триаксин С при концентрации 8,7 мкМ вызывает 50% ингибирование ацил-КоА-синтетазы печени крыс; родственное соединение триаксин А ингибирует ацил-КоА-синтетазу посредством механизма, который является конкурентным жирным кислотам с длинной цепью. Ингибирование ацил-КоА-синтетазы является токсичным для клеток животных. Тотойа е! а1. (Тотойа е! а1., 1. Вю1. Сйет. 266: 4212-4219, 1991) утверждают, что триаксин С при концентрации 1,0 мкМ вызывает ингибирование роста клеток Раджи (Кар) и, кроме того, как было показано, ингибирует рост клеток Веро ^ето) и Хела (Не1а). Тотойа е! а1. также утверждают, что ацил-КоА-синтетаза оказывает существенное влияние на клетки животных и что ингибирование фермента оказывает летальное действие.

В патенте США № 5981575 (описание которого включено в данное изобретение посредством ссылки) показано семейство соединений (гамма-замещенные-альфа-метилен-бета-карбокси-гамма-бутиролактоны), ингибирующих синтез жирных кислот и рост опухолевых клеток и вызывающих снижение веса. Соединения, раскрытые в патенте '575, имеют несколько преимуществ по сравнению с природным продуктом церуленином при терапевтических применениях: (1) не содержат высокоактивную эпоксидную группу церуленина; (2) являются стабильными и растворимыми в водном растворе; (3) могут быть получены двухстадийной реакцией синтеза и поэтому легко получаются в больших количествах и (4) легко метятся тритием для получения высокой специфической активности в биохимических и фармакологических анализах. Синтез данного семейства соединений, которые являются ингибиторами синтазы жирных кислот, их применение в качестве средств для лечения опухолевых клеток, экспрессирующих ЕАБ, и их применение в качестве средств для снижения веса описано в патенте США '575. В патенте '575 раскрыто также применение ингибиторов синтазы жирных кислот для системного снижения массы адипоцитов (числа адипоцитов или их размера) и в качестве средства для снижения веса.

Основными центрами синтеза жирных кислот у мышей и людей являются печень (см. Попсагг Сап. 1. Вюсйет., 52: 221-230, 1974; Тпксап е! а1., 1985, Ме!аЬойкт, 34: 580-7; Вагака! е! а1., 1991, Ме!аЬоШт, 40: 280-5), молочные железы (см. Тйотркоп, е! а1., Рей1а!г. Пек., 19: 139-143, 1985) и жировая ткань (Со1йпск е! а1., 1974, Сйп. Бск Мо1. Мей., 46-469-79).

Ингибиторы синтеза жирных кислот в качестве антимикробных средств.

Церуленин был первоначально выделен в качестве потенциального противогрибкового антибиотика из культурального бульона Серйа1окропит саеги1епк. Структурно церуленин охарактеризован как амид (2К,3Б)-эпокси-4-оксо-7,10-транс, трансдодекановой кислоты. Было показано, что механизм его действия включает ингибирование за счет необратимого связывания бета-кетоацил-АСР-синтазы, являющейся конденсирующим ферментом, необходимым для биосинтеза жирных кислот. Церуленин характеризуется, прежде всего, как противогрибковое средство, обладающее активностью против Сапй1йа и Бассйатотусек кр. Кроме того, была показана его активность ш уйто против бактерий, актиномицетов и

- 3 013371 микобактерий и отсутствие таковой против МусоЬас!етшт 1иЬегси1ок1к. Активность ингибиторов синтеза жирных кислот, и церуленина в частности, не оценивалась против простейших, таких как Тохор1акта доибп, или других инфекционных эукариотических патогенных организмов, таких как Риеитосукбк сапии, 01атб1а 1атЬйа, Р1актобшт кр., Тпсйотоиак уадтаНк, СгурЮкропбшт, Тгураиокота, Ье15Йташа и 8сЫк!окота.

Инфекционные заболевания, которые являются особенно восприимчивыми к лечению, представляют собой заболевания, вызывающие повреждения на наружных доступных поверхностях инфицированного животного. Наружные доступные поверхности включают все поверхности, которые могут быть достигнуты неинвазивными средствами (без разреза или прокола кожи), включающие саму кожную поверхность, слизистые оболочки, такие, которые покрывают назальную, ротовую, желудочно-кишечную или мочеполовую поверхности, и легочные поверхности, такие как альвеолярные мешочки. Восприимчивые к лечению заболевания включают: (1) кожные микозы или дерматомикозы, в особенности вызванные Мютокротит, Тпсйорйу1ои, Ер1бетторЬу1ои или МисосиГаиеоик саиб1б1ак1к; (2) грибковые кератиты, в особенности вызванные АкретдШик, Еикатшт или Саиб1ба; (3) амебоидный кератит, в особенности вызванный Асаи!йатое1а; (4) желудочно-кишечные заболевания, в особенности вызванные 01атб1а 1атЬ11а, Еи!атоеЬа, Сгур1окропбшт, Мкгокропбшт или Саиб1ба (наиболее часто у иммунологически «скомпрометированных» животных); (5) мочеполовые инфекции, в особенности вызванные Саиб1ба а1Ь1саик или Тпсйотоиак уадшайк, и (6) легочные заболевания, в особенности вызванные МусоЬас!етшта !иЬегси1ок1к, АкретдШик или Риеитосукбк салил. Вызывающие инфекцию микроорганизмы, которые являются восприимчивыми к обработке ингибиторами синтеза жирных кислот, включают МусоЬас!етшт 1иЬегси1ок1к, в особенности полирезистентные к лекарственным средствам штаммы и простейшие, такие как Тохор1акта.

Для ингибирования роста микробных клеток может быть использовано любое соединение, которое ингибирует синтез жирных кислот. Однако вводимые больному соединения не должны быть в равной степени токсичными для больного и целевых микробных клеток. Соответственно, выгодно выбрать ингибиторы, которые только или предпочтительно воздействуют на целевые микробные клетки.

Эукариотические микробные клетки, которые зависят от их собственных эндогенно синтезируемых жирных кислот, будут экспрессировать ЕА8 I типа. Это доказывается как тем фактом, что ингибиторы ЕА8 являются ингибиторами роста, так и тем фактом, что экзогенно добавленные жирные кислоты могут защищать от ингибиторов ЕА8 нормальные клетки больного, но не указанные микробные клетки. Поэтому для лечения инфекций могут быть использованы средства, предотвращающие синтез жирных кислот клетками. В эукариотах жирные кислоты синтезируются с участием ЕА8 I типа и с использованием в качестве субстратов алкинил-КоА, малонил-КоА и ΝΑΌΡΗ. Таким образом, другие ферменты, которые могут использовать субстраты на указанном пути, могут также оказывать влияние на скорость синтеза жирных кислот и поэтому являются значимыми для микробов, которые зависят от эндогенно синтезируемых жирных кислот. Ингибирование экспрессии или активности любого из указанных ферментов будет оказывать влияние на рост микробных клеток, зависимых от эндогенно синтезируемых жирных кислот.

Продукт ЕА8 I типа в различных организмах является разным. Так, например, в грибах 8.сетеу1К1ае продукты предпочтительно представляют собой пальмитат и стеарат, стереофицированные в кофермент А. В МусоЬас!етшт ктедтабк продукты представляют собой КоА эфиры насыщенных жирных кислот, углеродная цепь которых содержит от 16 до 24 атомов углерода. Указанные липиды часто дополнительно перерабатываются для пополнения клеток, нуждающихся в различных липидных компонентах.

Можно ожидать, что ингибирование ключевых стадий при последующей переработке или утилизации жирных кислот будет ингибировать клеточную функцию в любом случае: зависит ли клетка от эндогенных жирных кислот или утилизируется жирная кислота, поступающая с внешней поверхности клеток, и поэтому ингибиторы указанных последующих даунстрим стадий не могут быть достаточно избирательными для микробных клеток, зависимых от эндогенных жирных кислот. Однако было обнаружено, что введение ингибитора синтазы жирных кислот I типа в такие микробы делает их более восприимчивыми к ингибированию ингибиторами последующего процессинга и/или утилизации жирных кислот. Введение ингибитора синтеза жирных кислот в комбинации с одним или более ингибиторами последующих стадий биосинтеза липидов и/или утилизации будет оказывать, вследствие синергизма, избирательное действие на микробные клетки, зависимые от эндогенно синтезируемых жирных кислот. Предпочтительные комбинации включают ингибитор ЕА8 и алкинил-КоА-карбоксилазы или ЕА8 и ингибитор МА8.

Когда установлено, что млекопитающее инфицировано клетками организма, которые экспрессируют ЕА8 I типа или если ЕА8 найдена в биологической жидкости больного, млекопитающее или больной могут быть подвергнуты лечению введением ингибитора синтеза жирных кислот (патент США № 5614551).

Ингибирование нейропептида-Υ для подавления аппетита и стимуляции снижения веса раскрыто в международной патентной заявке № РСТ/и801/05316, описание которой включено в данный патент посредством ссылки. Однако в указанной заявке не описывается или не раскрывается какое-либо из соеди

- 4 013371 нений, раскрытых в настоящем изобретении.

Стимулирование карнитинпальмитоилтрансферазы-1 (СРТ-1) для стимуляции снижения веса раскрыто в заявке на патент США № 60/354480, которая включена в данное описание посредством ссылки. В указанной заявке не описывается или не раскрывается какое-либо из соединений, раскрытых в данной заявке.

Применение ингибиторов РА8 для ингибирования роста раковых клеток раскрыто в патенте США № 5759837, описание которого включено в данное изобретение посредством ссылки. В указанном патенте не описывается или не раскрывается какое-либо из соединений, раскрытых в данном описании.

Сущность изобретения

Обнаружены новые соединения - производные тиофен-2-она, имеющие множество терапевтически ценных свойств, включающих, например, ингибирование РА8, ингибирование ΝΡΥ, стимуляцию СРТ-1, способность вызывать снижение веса и проявляющих противораковые свойства.

Другой объект данного изобретения относится к фармацевтическим композициям, содержащим фармацевтический разбавитель и производное тиофен-2-она.

Еще один объект изобретения относится к способам лечения рака у животных и людей введением фармацевтической композиции, содержащей фармацевтический разбавитель и производное тиофен-2-она.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 показывает схему синтеза для получения тиолактамицина.

Фиг. 2 показывает схему синтеза для получения некоторых соединений в соответствии с изобретением.

Фиг. 3 показывает схему синтеза для получения некоторых соединений в соответствии с изобретением.

Фиг. 4 показывает схему синтеза для получения некоторых соединений в соответствии с изобретением.

Фиг. 5 показывает схему синтеза для получения некоторых соединений в соответствии с изобретением.

Фиг. 6 показывает схемы синтеза для получения некоторых соединений в соответствии с изобретением.

Фиг. 7 показывает схему синтеза для получения соединения в соответствии с изобретением.

Фиг. 8 показывает схему синтеза для получения некоторых соединений в соответствии с изобретением.

Фиг. 9 показывает две схемы синтеза для получения некоторых соединений в соответствии с изобретением.

Фиг. 10 показывает схему синтеза для получения некоторых соединений в соответствии с изобретением.

Фиг. 11 показывает результаты тестирования ίη νίνο некоторых соединений в соответствии с изобретением на их способность снижать вес.

Фиг. 12 показывает результаты тестирования ίη νίνο соединения в соответствии с изобретением на противораковую активность.

Подробное описание изобретения

Соединения изобретения могут быть получены традиционными способами. Синтез ряда соединений описан в примерах. Соединения могут быть применены для лечения рака.

Один вариант изобретения представлен соединениями, выбранными из следующей группы.

- 5 013371

Таблица 2

- 6 013371

X Нэсгуэг'-'Ч \ н 1 ' —--—< -со2ие .-ух/ 0	(V нянсгЧ \ н сн> 0 γ XX О	X νμΑ*Ί \ н •‘ • у·'· ''' О
ό Η^ίΗ^Γ-Ί \ // СН3 °'^\0Е(	л, Н,С(НгС)7-Ч \ Л сн>	0. N£(N^--4 \ // к \Х0/хХ
ό , *Н?Х	оХ сн, ОН	оХ’ сн, осн.
л НзСПНЬСф-^Ч \ СН3 ОН	Л1 НзСЦНгС},-'·^ \ СН, ОН	..у ΗίΡίΗϊΟ,-^Ί \ сн, он
! Н3С(Н1С)т-'''Т к СН, ОН	ХХХХюн, НзС(н/:)г- Ί к СН, ОН	η
л л о О—'	Л . ΉΛ/νκΑ «» ° Т й О	0
ό г ΗιΟίΗ,Οτ-η \ он, 0 ]] '''' О	Л лл н,С(Н^),·—1 / \ сн’ 0 \_х

- 7 013371

Другой вариант изобретения относится к соединению формулы

Следующий вариант изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей фармацевтический разбавитель и соединение формулы

Следующий вариант настоящего изобретения относится к способу лечения рака, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, вышеуказанной фармацевтической композиции.

Изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей фармацевтический разбавитель и соединение формулы

а также способу лечения рака, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, такой фармацевтической композиции.

Следующий вариант изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей фармацевтический разбавитель и соединение формулы

а также к способу лечения рака путем введения пациенту, нуждающемуся в этом, указанной фармацевтической композиции.

Другой вариант изобретения относится к соединению формулы I

где В¹ представляет собой Н;

В² представляет собой ОСН2С(О)ИНВ⁵, где В⁵ представляет собой С^С10-арил, содержащий атом галогена;

В³ представляет собой -СН₃;

В⁴ представляет собой -н-С₆-С₈-алкил.

Следующий вариант настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей фармацевтический разбавитель и соединение формулы I.

Кроме того, изобретение касается способа лечения рака, включающего введение пациенту, нуждающемуся в этом, фармацевтической композиции, содержащей фармацевтический разбавитель и соединение формулы I.

- 8 013371

Композиции настоящего изобретения могут быть представлены для введения людям и другим животным в виде единичных дозированных форм, таких как таблетки, капсулы, пилюли, порошки, гранулы, стерильные парентеральные растворы или суспензии, пероральные растворы или суспензии, эмульсии типа «масло-в-воде» и типа «вода-в-масле», содержащие подходящие количества соединения, суппозитории и суспензии или растворы в текучей среде. Используемые в данном описании термины «фармацевтический разбавитель» и «фармацевтический носитель» имеют одно и то же значение. Для перорального введения могут быть получены либо твердые, либо жидкие единичные дозированные формы. Для приготовления твердых композиций, таких как таблетки, соединение может быть смешано с традиционными ингредиентами, такими как тальк, стеарат магния, дикальцийфосфат, алюмосиликат магния, сульфат кальция, крахмал, лактоза, акация, метилцеллюлоза, и функционально подобными материалами, используемыми в качестве разбавителей или носителей. Капсулы получают смешиванием соединения с инертным фармацевтическим разбавителем и заполнением смеси в твердые желатиновые капсулы соответствующего размера. Мягкие желатиновые капсулы получают механическим включением суспензии соединения с приемлемым растительным маслом, вазелиновым маслом или другим инертным маслом в желатиновую капсулу.

Могут быть получены жидкие единичные дозированные формы для перорального введения, такие как сиропы, эликсиры и суспензии. Эти формы могут быть растворены в водном наполнителе вместе с сахаром, ароматическими корригентами и консервантами с образованием сиропа. Суспензии с водным наполнителем могут быть получены с помощью суспендирующего средства, такого как акация, трагакант, метилцеллюлоза и подобных соединений.

Жидкие единичные дозированные формы для парентерального введения могут быть получены с использованием соединения и стерильного наполнителя. При получении растворов соединение может быть растворено в воде для инъекций и затем стерилизовано с помощью фильтра перед заполнением раствора в подходящий сосуд или ампулу, которые герметически запаивают. В наполнителе могут быть растворены адъюванты, такие как местный анестетик, консервант и буферные вещества. После заполнения в сосуд композиция может быть заморожена, и под вакуумом удалена вода. Затем лиофилизованный порошок может быть отвешен в сосуд и восстановлен перед использованием.

Рассматриваемые для соединений изобретения клинические терапевтические показания включают (1) инфекции, обусловленные инвазивными микроорганизмами, такими как 81арйу1ососс1 и еи1егососс1;

(2) рак, возникающий во многих тканях, клетки которых избыточно экспрессируют синтазу жирных кислот; и (3) ожирение, обусловленное потреблением продуктов с избыточным количеством калорий. Определение доз и продолжительность лечения будут зависеть от множества факторов, включающих (1) возраст больного, массу тела и функционирование органов (например, функционирование печени и почек); (2) природу заболевания и степень распространения подвергаемого лечению болезненного процесса, а также любой имеющийся значимый сопутствующий патологический процесс и осуществляемую сопутствующую лекарственную терапию и (3) параметры, зависящие от лекарственного средства, такие как путь введения, частота и продолжительность дозирования, необходимые для осуществления лечения, и терапевтический индекс лекарственного средства. Обычно дозы выбирают таким образом, чтобы достичь уровней в сыворотке от 1 до 100 нг/мл с целью получения эффективных концентраций в целевом участке, равных примерно от 1 до 10 мкг/мл.

Примеры

Изобретение проиллюстрировано, но при этом не ограничено, следующими примерами.

Ряд соединений в соответствии с изобретением синтезировали, как описано ниже. Биологическую активность некоторых соединений профилировали следующим образом. Каждое соединение тестировали на (1) ингибирование очищенной человеческой РАЗ; (2) ингибирование активности синтеза жирных кислот в целых клетках и (3) цитотоксичность против культивируемых клеток карциномы человеческой молочной железы МСР-7, которые, как известно, обладают высокими уровнями РАЗ и активностью синтеза жирных кислот, с использованием кристаллического фиолетового и анализов ХТТ. Затем выбранные соединения с низкими уровнями цитотоксичности тестировали на снижение веса у мышей Ва1Ь/С. Кроме того, типичное соединение из группы, которая показывала значительное снижение веса и низкие уровни цитотоксичности, тестировали на его действие на окисление жирных кислот и активность в отношении карнитин-пальмитоилтрансферазы-1 (СРТ-1), а также гипоталамическую экспрессию ΝΡΥ нозернанализом мышей Ва1Ь/С. Некоторые соединения тестировали также на активность против грамположительных и/или грамотрицательных бактерий.

- 9 013371

Химический синтез соединений.

(28,5К)-2-трет-Бутил-5-метил-1,3-оксатиолан-4-он (1)¹

К раствору (8)-тиомолочной кислоты¹ (4,0 г, 37,7 ммоль) в пентане (24 мл) добавляли триметилалкинилальдегид (4,5 мл, 41,5 ммоль) и трифторуксусную кислоту (ТБА) (48 мкл). Раствор кипятили с обратным холодильником в течение 20 ч с использованием ловушки Дина-Старка. После охлаждения удаляли растворитель с получением смеси цис :транс-изомеров (2,5:1) соединений 1 и 2 (6,4 г, 99%). В результате перекристаллизации (смесь пентан/ЕьО (8:1), -78°С) получали чистое соединение 1.

[α]ο²⁴=-38 (с 0,4, СНС1з).

¹Н ЯМР (300 МГц, СБС1₃) цис-изомер: δ 0,99 (с, 9Н), 1,53 (д, 1=7 Гц, 3Н), 3,94 (кв., 1=7 Гц, 1Н), 5,17 (с, 1Н).

Рацемическое соединение 1 получали также из (±)-тиомолочной кислоты.

Общая методика А.

(2§,5В)-2-(трет-Бутил)-5-(1-гидрокси-2-метил-2-бутенил)-5-метил-1,3-оксатиолан-4-он (3)

К смеси диизопропиламина (0,6 мл, 4,6 ммоль) в ТГФ (ТНБ) (8,0 мл) при -78°С добавляли н-ВиЫ (3,3 мл, 1,4 М в н-гексане) и образовавшийся раствор перемешивали в течение 30 мин при 0°С и затем охлаждали до -78°С. Затем с помощью канюли при -78°С добавляли по каплям соединение 1 (800 мг, 4,6 ммоль) в ТГФ и полученный раствор перемешивали при -78°С в течение 30 мин. При -78°С добавляли через канюлю транс-2-метил-2-бутеналь (0,4 мл, 4,6 ммоль) в ТГФ (1,4 мл). После перемешивания при -78°С в течение 1,5 ч добавляли 1н. НС1 (25 мл) и раствор экстрагировали Е1₂О (3x30 мл). Объединенные органические слои сушили (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали. В результате флэш-хроматографии (смесь 10% ЕЮАс/гексан, г₍=0.1) получали соединение 3 (955 мг, 81%) в виде смеси диастереоизомеров 1,6:1.

¹Н ЯМР (300 МГц, СБС1₃) основной диастереоизомер: δ 0,99 (с, 9Н), 1,40 (с, 3Н), 1,63 (д, 1=6,7 Гц, 3Н), 1,69 (м, 3Н), 4,36 (с, 1Н), 5,25 (с, 1Н), 5,60-5,65 (м, 1Н); второстепенный диастереоизомер: 0,98 (с, 9Н), 1,59 (с, 3Н), 1,63 (д, 1=6,7 Гц, 3Н), 1,72 (м, 3Н), 4,25 (с, 1Н), 5,07 (с, 1Н), 5,60-5,64 (м, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃) основной диастереоизомер: δ 12,5, 13,2, 24,3, 24,8, 60,7, 81,8, 87,9, 126,3, 133,8, 178,3.

ИК (АТК) 3466, 1743 см^-1.

Вычислено для С1₃Н₂₂О₃8: С, 60,4; Н, 8,58. Найдено С, 60,4; Н, 8,60.

(±)-2-(трет-Бутил)-5-(1-гидрокси-2-октенил)-5-метил-1,3-оксатиолан-4-он (4)

Из (±) соединения 1 (800 мг, 4,59 ммоль) и 2-трансоктеналя (0,58 мл, 5,1 ммоль), следуя общей методике А, после флэш-хроматографии (смесь 10% ЕЮАс/гексан) получали соединение 4 (1,1 г, 81%) в виде смеси диастереоизомеров 1,2:1.

¹Н ЯМР (300 МГц, СБСЕ,) основной диастереоизомер: δ 0,85 (т, 1=7,2 Гц, 3Н), 0,97 (ш.с, 9Н), 1,181,35 (с, 6Н), 1,56 (с, 3Н), 2,00-2,08 (м, 2Н), 2,38 (д, 1=5 Гц, 1Н), 4,15-4,19 (м, 1Н), 5,13 (с, 1Н), 5,45-5,59 (дд, 1=7,14 Гц, 1Н), 5,72-5,77 (м, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃) δ 13,7, 22,3, 24,7, 28,5, 31,3, 32,1, 35,2, 60,6, 78,8, 87,4, 127,2, 136,5, 175,7;

¹Н ЯМР (300 МГц, СБС1₃) второстепенный диастереоизомер: δ 0,85 (т, 1=7,2 Гц, 3Н), 0,97 (с, 9Н), 1,18-1,35 (м, 6Н), 1,40 (с, 3Н), 2,00-2,07 (м, 2Н), 2,31 (д, 1=5 Гц, 1Н), 4,25-4,30 (м, 1Н), 5,27 (с, 1Н), 5,455,59 (дд, 1=7,14 Гц, 1Н), 5,79-5,83 (м, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃) δ 13,7, 22,3, 23,9, 24,8, 28,5, 31,2, 32,1, 35,3, 61,1, 78,3, 87,8, 127,2, 137,2, 177,0;

ИК (ЫаС1) 2959, 1765 см^-1.

Вычислено для С1₆Н₂₈О₃8: С, 63,9; Н, 9,39. Найдено С, 63,9; Н, 9,41.

(±)-2-(трет-Бутил)-5-(1-гидрокси-2-гексенил)-5-метил-1,3-оксатиолан-4-он (5)

- 10 013371

Из (±) соединения 1 (800 мг, 4,59 ммоль) и 2-трансгексеналя (0,58 мл, 5,1 ммоль), следуя общей методике А, после флэш-хроматографии (смесь 10% ЕЮАс/гексан) получали соединение 5 (813 мг, 65%) в виде смеси диастереоизомеров 2,4:1.

Ή ЯМР (300 МГц, СИС1₃) δ 0,87 (т, 1=7,3 Гц, 3Н), 0,99 (с, 9Н), 1,38-1,45 (м, 2Н), 1,41 (с, 3Н), 2,02 (кв., 1=7 Гц, 2Н), 4,26-4,31 (м, 1Н), 5,27 (с, 1Н), 5,45-5,63 (м, 1Н), 5,74-5,83 (м, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СИС1₃) δ 13,6, 21,6, 24,1, 24,9, 35,2, 37,2, 61,2, 78,5, 87,9, 127,3, 137,3, 179,1;

ИК (ИаС1) 2960, 1765 см^-1.

Вычислено для С_!4Н₂₄О₃8: С, 61,7; Н, 8,88. Найдено С, 61,74; Н, 8,89.

(±)-2-(трет-Бутил)-5-(1-гидрокси-2-метил-2-пентенил)-5-метил-1,3-оксатиолан-4-он (6)

Из (±) соединения 1 (800 мг, 4,59 ммоль) и 2-метил-2-пентеналя (0,58 мл, 5,0 ммоль), следуя общей методике А, после флэш-хроматографии (смесь 10% ЕЮАс/гексан) получали соединение 6 (884 мг, 71%) в виде смеси диастереоизомеров 1,8:1.

Ή ЯМР (300 МГц, СИС1₃) δ 0,93-0,99 (м, 12Н), 1,40 (с, 3Н), 1,68 (с, 3Н), 2,01-2,06 (м, 2Н), 4,33 (д, 1=6,9 Гц, 1Н), 5,24 (с, 1Н), 5,48-5,54 (м, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СИС1₃) δ 12,6, 13,8, 20,9, 21,1, 24,8, 35,4, 60,6, 81,8, 87,9, 132,6, 133,9, 178,3;

ИК (ИаС1) 2961, 1767 см^-1.

Вычислено для С1₄Н₂₄О₃8: С, 61,7; Н, 8,88. Найдено С, 61,6; Н, 8,90.

Общая методика В.

(28,5В)-2-(трет-Бутил)-5-(2-метил-бута-1,3-диенил)-5-метил-1,3-оксатиолан-4-он (7)

К раствору соединения 3 (3,23 г, 12,5 ммоль) в С1(СН₂)₂С1 (115 мл), охлажденному до 0°С, добавляли ΝΕΐ₃ (4,2 мл, 30 ммоль) и 2,4-динитробензилсульфенилхлорид (6,6 г, 28,2 ммоль). Раствор нагревали до комнатной температуры в течение 30 мин или до тех пор, пока ТСХ (смесь 10% ЕЮАс/гексан, Т(=0,55 основной, Г(=0.48 второстепенный) не покажет завершение образования диастереоизомерных сложных эфиров сульфеновой кислоты. Затем смесь кипятили с обратным холодильником при 90°С в течение 4 ч или до тех пор, пока ТСХ не покажет завершение конверсии сложного эфира сульфеновой кислоты. После охлаждения до 0°С добавляли пентан (50 мл) и образовавшуюся смесь фильтровали через рыхлый слой целита и выпаривали. В результате флэш-хроматографии (смесь 2% ЕЮАс/гексан, Т(=0,4) получали чистое соединение 7 (2,3 г, 75%).

[а]_с ²⁴=+237 (с 1,0, СНС1₃).

Ή ЯМР (300 МГц, СОСЕ) δ 1,98 (с, 9Н), 1,72 (с, 3Н), 1,86 (с, 3Н), 5,06 (д, 1=10,7 Гц, 1Н), 5,18 (с,

1Н), 5,24 (д, 1=17,3 Гц, 1Н), 5,70 (с, 1Н), 6,24-6,33 (дд, 1=10,7 Гц, 17,3 Гц, 1Н);

¹³С ЯМР (300 МГц, СОСЕ) δ 12,5, 25,1, 26,6, 34,9, 53,7, 87,4, 113,7, 132,6, 137,8, 140,9, 176,3.

Вычислено для С1₃Н₂₀О₂8: С, 64,9; Н, 8,38. Найдено С, 63,8; Н, 8,28.

(±)-2-(трет-Бутил)-5-(окта-1,3-диенил)-5-метил-1,3-оксатиолан-4-он (8)

Из (±) соединения 4 (306 мг, 1,00 ммоль), следуя общей методике В, после флэш-хроматографии (смесь 2% ЕЮАс/гексан) получали соединение 8 (212 мг, 75%, транс:цис 4:1).

Ή ЯМР (300 МГц, С12СЕ) транс-изомер: δ 0,84-0,89 (м, 3Н), 1,01 (с, 9Н), 1,22-1,38 (м, 4Н), 1,61 (с, 3Н), 2,04-2,11 (м, 2Н), 5,03 (с, 1Н), 5,58 (д, 1=15 Гц, 1Н), 5,64-5,78 (м, 1Н), 0,96-6,05 (м, 1Н), 6,19 (дд, 1=10,1, 15,1 Гц, 1Н).

¹³С ЯМР (75 МГц, С12СЕ) транс-изомер: δ 13,6, 22,0, 22,5, 25,2, 31,2, 32,1, 35,6, 55,9, 87,0, 128,5,

129,6, 130,2, 137,2, 174,7;

ИК (№С1) 2959, 1772 см^-1;

НВМ8 (Е1) т/ζ вычислено для С1бН₂₆О₂8 (М⁺) 282,1653, найдено 282,1681.

(±)-2-(трет-Бутил)-5-(гекса-1,3-диенил)-5-метил-1,3-оксатиолан-4-он (9)

Из (±) соединения 5 (690 мг, 2,53 ммоль), следуя общей методике В, после флэш-хроматографии (смесь 2% ЕЮАс/гексан) получали соединение 9 (461 мг, 72%, транс:цис 4:1).

- 11 013371 ¹Н ЯМР (300 МГц, С1)С1₃) δ 0,95-1,01 (м, 12Н), 1,61 (с, 3Н), 2,07-2,12 (м, 2Н), 5,05 (с, 1Н), 5,58 (д, 1=15 Гц, 1Н), 5,81 (дт, 1=6,15 Гц, 1Н), 6,00-6,05 (м, 1Н), 6,15-6,24 (дд, 1=10, 15,2 Гц, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, С1)С1₃) δ 13,3, 24,8, 25,3, 25,7, 34,5, 56,1, 87,2, 127,4, 129,4, 130,0, 138,9, 175,1;

ИК (ЫаС1) 2966, 1771 см^-1;

НВМ8 (Е8) т/ζ вычислено для С1₄Н₂₂О₂8Ыа⁺ (М+Ыа⁺) 277,1232, найдено 277,1237.

(±)-2-(трет-Бутил)-5-(2-метилпента-1,3-диенил)-5-метил-1,3-оксатиолан-4-он (10)

Из (±) соединения 6 (500 мг, 2,51 ммоль), следуя общей методике В, после флэш-хроматографии (смесь 2% ЕЮЛс/гексан) получали соединение 10 (342 мг, 73%, транс:цис 14:1).

Ή ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 1,00 (с, 9Н), 1,70 (с, 3Н), 1,75 (д, 1=6,6 Гц, 3Н), 1,85 (с, 3Н), 5,18 (с, 1Н), 5,57 (с, 1Н), 5,75 (д.кв., 1=6,6, 16 Гц, 1Н), 5,97 (д, 1=16 Гц, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, С1)С1₃) δ 13,0, 18,0, 25,2, 27,4, 34,8, 53,8, 87,4, 125,4, 129,3, 135,5, 137,8, 176,3;

ИК (ЫаС1) 2961, 1770 см^-1;

НВМ8 (Е1) т/ζ вычислено для С_!4Н₂₂О₂8 (М⁺) 254,1341, найдено 254,1309.

Общая методика С.

Сложный этиловый эфир 2-(В)-2,4-диметил-2-тиопропионилгекса-3,5-диеновой кислоты (12)

Непосредственно к раствору соединения 7 (250 мг, 1,0 ммоль) в Е(ОН (3,9 мл) добавляли карбонат цезия (332 мг, 1,0 ммоль). Через 20 мин смесь вливали в смесь ИН₄С1 (насыщенный)/1н. НС1 (15 мл, 3:1) и экстрагировали ЕьО (3x20 мл). Объединенные органические слои сушили (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали с получением неочищенного соединения 11. К соединению 11 добавляли СН2С12 (7,5 мл) и раствор охлаждали до 0°С. Добавляли ИЕ!₃ (0,14 мл, 1,0 ммоль) и пропионилхлорид (0,09 мл, 1,0 ммоль) и раствор перемешивали при 0°С. Через 40 мин добавляли ИН₄С1 (насыщенный) (20 мл) и образовавшуюся смесь экстрагировали СН₂С1₂ (3x15 мл). Объединенные органические слои сушили (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали. После флэш-хроматографии (смесь 5% ЕЮЛс/гексан, г₍=0.4) получали чистое соединение 12 (261 мг, 72%).

[α]ο²³=+4,2 (с 0,9, СНС1₃);

Ή ЯМР (300 МГц, ГОСТ) δ 1,11 (т, 1=7,4 Гц, 3Н), 1,23 (т, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,83 (с, 3Н), 1,85 (с, 3Н), 2,48 (кв., 1=7,5 Гц, 2Н), 4,18 (кв., 1=6,09 Гц, 2Н), 5,02 (д, 1=10,7 Гц, 1Н), 5,18 (д, 1=17,3 Гц, 1Н), 5,73 (с, 1Н), 6,24-6,34 (дд, 1=10,7, 17,3 Гц, 1Н);

¹³С ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 9,43, 12,9, 13,9, 26,1, 36,5, 55,2, 61,9, 113,1, 131,4, 138,2, 141,4, 172,1, 198,9;

ИК (ЫаС1) 2981, 1735, 1694 см^-1;

НВМ8 (Е1) т/ζ вычислено для С1₃Н₂₀О₃8 (М⁺) 256,1133, найдено 256,1127.

Сложный этиловый эфир (±)-2-тиоалкинил-2-метилдека-3,5-диеновой кислоты (13)

Из соединения 8 (200 мг, 0,71 ммоль) и алкинилхлорида (55 мкл, 0,78 ммоль), следуя общей методике С, после флэш-хроматографии (смесь 5% ЕЮЛс/гексан) получали соединение 13 (119 г, 59%).

Ή ЯМР (300 МГц, С1)С1₃) δ 0,84-0,89 (м, 3Н), 1,23 (т, 1=7,1 Гц, 3Н), 1,28-1,38 (м, 4Н), 1,71 (с, 3Н), 2,01-2,08 (м, 2Н), 2,23 (с, 3Н), 4,18 (кв., 1=7,1 Гц, 2Н), 5,66-5,76 (м, 2Н), 5,89-6,03 (м, 1Н), 6,20 (дд, 1=10,3, 15,3 Гц, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОС1_;) δ 13,8, 13,9, 22,2, 22,8, 29,9, 31,2, 32,3 56,1, 61,9, 128,4, 129,2, 132,2, 137,1,

171,6, 194,6;

ИК (ЯаС1) 2930, 1737, 1694 см^-1;

НВМ8 (Е8) т/ζ вычислено для С1₅Н₂₄О₃8Ма⁺ (М+Ыа⁺) 307,1338, найдено 307,1339.

Сложный этиловый эфир (±)-2-тиоалкинил-2-метилокта-3,5-диеновой кислоты (14)

Из соединения 9 (353 мг, 1,39 ммоль) и алкинилхлорида (98 мл, 1,39 ммоль), следуя общей методике С, после флэш-хроматографии (смесь 5% ЕЮЛс/гексан) получали соединение 14 (142 г, 40%).

Ή ЯМР (300 МГц, С1)С1₃) δ 0,83 (т, 1=7,3 Гц, 3Н), 1,24 (т, 1=7,1 Гц, 3Н), 1,72 (с, 3Н), 2,03-2,17 (м,

- 12 013371

2Н), 2,25 (с, 3Н), 4,17 (кв., 1=7,1 Гц, 2Н), 5,72-5,81 (м, 2Н), 5,95-6,04 (дд, 1=10, 15 Гц, 1Н) 6,18-6,27 (дд, 1=10, 15 Гц, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОСГ) δ 13,2, 13,9, 22,8, 25,6, 30,2, 56,1, 61,9, 128,2, 128,4, 132,1, 138,5, 171,6, 194,8;

ИК (ЫаС1) 2929, 1736, 1693 см^-1;

НКМ8 (Е8) т/ζ вычислено для С1₃Н₂₀О₃§Ыа⁺ (Μ+Να') 279,1025, найдено 279,1032.

Сложный этиловый эфир (±)-2-тиоалкинил-2,4-диметилгепта-3,5-диеновой кислоты (15)

Из соединения 10 (369 мг, 1,46 ммоль) и алкинилхлорида (103 мкл, 1,46 ммоль), следуя общей методике С, после флэш-хроматографии (смесь 5% ЕЮАс/гексан) получали соединение 15 (271 г, 77%).

'|| ЯМР (300 МГц, ТОСТ) δ 1,26 (т, 1=7,1 Гц, 3Н), 1,74 (д, 1=6,6 Гц, 3Н), 1,81 (с, 3Н), 1,85 (с, 3Н),

2,25 (с, 3Н), 4,17 (кв., 1=7,1 Гц, 2Н), 5,56 (с, 1Н), 5,65-5,73 (д.кв., 1=6,6, 16 Гц, 1Н), 5,99 (д, 1=16 Гц, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОСГ) δ 13,8, 14,1, 18,2, 26,2, 30,5, 55,6, 62,0, 125,2, 128,3, 135,7, 138,5, 172,2, 194,8;

ИК ЩаС1) 2926, 1737, 1694 см^-1;

НКМ8 (ΕΙ) т/ζ вычислено для С1₃Н₂₀О₃8 (Μ⁺) 256,1133, найдено 256,1118.

Сложный этиловый эфир (±)-2-тиоалкинил-2,4-диметилгекса-3,5-диеновой кислоты (16)

Из (±)-соединения 7 (380 мг, 1,56 ммоль) и алкинилхлорида (110 мкл, 1,56 ммоль), следуя общей методике С, после флэш-хроматографии (смесь 5% ЕЮАе/гексан) получали соединение 16 (230 г, 61%).

'|| ЯМР (300 МГц, СОСГ) δ 1,25 (т, 1=7,1 Гц, 3Н), 1,84 (с, 3Н), 1,87 (с, 3Н), 2,24 (с, 3Н), 4,21 (кв., 1=7,1 Гц, 2Н), 5,03 (д, 1=10,6 Гц, 1Н), 5,21 (д, 1=17,3 Гц, 1Н), 5,74 (с, 1Н), 6,26-6,35 (дд, 1=10,6, 17,3 Гц, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОСГ) δ 12,9, 13,9, 25,9, 30,1, 55,8, 62,0, 113,3, 131,3, 138,3, 141,3, 182,3, 194,6; ИК (№С1) 2982, 1735, 1692 см^-1.

Общая методика Ό.

5-(К)-4-Гидрокси-3,5-диметил-5-(2-метилбута-1,3-диенил)-5-Н-тиофен-2-он (17) (тиолактамицин)

К соединению 12 (315 мг, 1,23 ммоль) в ТГФ (18,5 мл) при -78°С добавляли ЫНМО§ (3,1 мл, 3,1 ммоль, 1,0 М в ТГФ) и раствору давали возможность медленно нагреваться до -5°С. Затем раствор вливали в 1н. НС1 (25 мл) и экстрагировали ЕЮАс (3x15 мл). Объединенные органические слои сушили (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали. Полученную неочищенную смесь переносили в NаΗСО₃ (насыщенный, 15 мл) и экстрагировали Е1₂О (3x10 мл). Затем водный слой подкисляли до рН 3 (рН бумаги) 1н. НС1 и экстрагировали Е1₂О (3x10 мл) и ЕЮАс (2x10 мл). Объединенные органические слои сушили (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали с получением чистого соединения 17 (182 мг, 70%, 96%, энант. избыток). После перекристаллизации из смеси гексан/ацетон (3:1) получали оптически обогащенное соединение 17.

[а]_с ²⁴=+174 (с 0,6, МеОН),

Т.пл. 119,5-121°С (лит. данные [а]_с ²⁰+176 (с 1,0, МеОН), Т.пл. 120°С)².

'Н ЯМР (300 МГц, СОСГ) δ 1,72 (с, 3Н), 1,76 (с, 3Н), 1,91 (с, 3Н), 5,05 (д, 1=10,7 Гц, 1Н), 5,23 (д, 1=17,3 Гц, 1Н), 5,58 (с, 1Н), 6,23-6,33 (дд, 1=10,7, 17,3 Гц, 1Н);

¹³С ЯМР (300 МГц, СОСГ) δ 7,60, 12,0, 29,8, 55,3, 110,6, 113,9, 129,1, 140,3, 140,7, 179,2, 196,7;

ИК ЩаС1) 3422, 1607 см^-1.

Вычислено для СцН1₄О₂8: С, 62,8; Н, 6,71. Найдено С, 62,1; Н, 6,71.

(±)-4-Гидрокси-5-метил-5-окта-1,3-диенил-5-Н-тиофен-2-он (18)

Из соединения 13 (62 мг, 0,22 ммоль), следуя общей методике Ό, получали соединение 18 (21 мг, 41%).

'Н ЯМР (300 МГц, ТОСТ) кетотаутомер: δ 0,88 (т, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,19-1,41 (м, 4Н), 1,75 (с, 3Н), 2,03

- 13 013371

2,19 (м, 2Н), 3,22 (д, 1=21 Гц, 1Н), 3,51 (д, 1=21 Гц, 1Η), 5,67 (д, 1=15 Гц, 1Η), 5,80 (дт, 1=7,17 Гц, 1Η), 6,02 (дд, 1=10, 15 Гц, 1Η), 6,37 (дд, 1=10, 15 Гц, 1Н);

Ή ЯМР (300 МГц, МеОЭ) енольный таутомер: δ 0,97-1,03 (м, 3Н), 1,36-1,53 (м, 4Н), 1,87 (с, 3Н), 2,15-2,22 (м, 2Н), 5,78 (д, 1=15 Гц, 1Н), 5,82-5,90 (м, 1Н), 6,10-6,19 (м, 1Н), 6,38 (дд, 1=10,3, 15,4 Гц, 1Н);

¹³С (75 МГц, МеОЭ) енольный таутомер: δ 14,4, 23,3 25,2, 32,6, 33,4, 60,9, 102,1 (т), 130,7, 131,7, 137,5, 188,9, 196,9;

ИК ЩаС1) 2927, 1588 см^-1;

ΗΚМЗ (ЕЗ) вычислено для С^Ц^З^' (М+Να') 261,0911, найдено 261,0912.

(±)-4-Гидрокси-5-метил-5-гекса-1,3-диенил-5-Н-тиофен-2-он (19)

1»

Из соединения 14 (364 мг, 0,46 ммоль), следуя общей методике Ό, получали соединение 19 (180 мг, 60%).

'Н (300 МГц, СЭС1₃ существует в виде смеси кето:енольный таутомер 2,3:1) кетотаутомер: δ 1,00 (т, 1=7,4 Гц, 3Н), 1,76 (с, 3Н), 2,09-2,16 (м, 2Н), 3,21 (д, 1=21 Гц, 1Н), 3,52 (д, 1=21 Гц, 1Η), 5,70 (д, 1=15 Гц, 1Н), 5,86 (дт, 1=15, 6 Гц, 1Н), 6,02 (дд, 1=10, 15 Гц, 1Н), 6,38 (дд, 1=15,10 Гц, 1Η);

Ή ЯМР (300 МГц, МеОЭ) енольный таутомер: δ 1,09 (т, 1=7,4 Гц, 3Н), 1,87 (с, 3Н), 2,14-2,29 (м, 2Н), 5,78 (д, 1=15 Гц, 1Н), 5,87 (дт, 1=15, 6,57 Гц, 1Н), 6,09-6,18 (м, 1Н), 6,38 (дд, 1=10,2, 15 Гц, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, МеОЭ) енольный таутомер: δ 14,1, 25,2, 26,9, 61,0, 101 (т), 129,7, 131,7, 132,7, 138,9, 188,9, 197,1;

ИК ЩаС1) 2965, 1592 см^-1;

ΗΚΜЗ (ЕЗ) т/ζ вычислено для СпЦ^З^' (М+Να') 233,0607, найдено 233,0626.

(±)-4-Гидрокси-5-метил-5-(2-метилпента-1,3-диенил)-5-Н-тиофен-2-он (20)

Из соединения 15 (226 мг, 0,9 ммоль), следуя общей методике Ό, получали соединение 20 (95 мг, 49%).

Ή ЯМР (300 МГц, СОСР) кетотаутомер: δ 1,75 (с, 3Н), 1,77 (д, 1=3,2 Гц, 3Н), 1,84 (с, 3Н), 3,42 (д, 1=1,5 Гц, 2Η), 5,43 (д, 1=21 Гц, 1Н), 5,66 (ш.с, 1Н), 5,78 (дд, 1=6,22 Гц, 1Η), 6,04 (д, 1=15 Гц, 1Η);

Ή ЯМР (300 МГц, МеОЭ) енольный таутомер: δ 1,80-1,85 (м, 6Н), 1,90 (с, 3Н), 5,59 (с, 1Н), 5,805,95 (м, 1Н), 6,17 (д, 1=15 Гц, 1Η);

¹³С ЯМР (75 МГц, МеОЭ) енольный таутомер: δ 13,4, 18,4, 30,7, 59,2, 101,2 (т), 126,2, 128,4, 136,9,

140,6, 190,2, 197,6;

ИК (№С1) 2929, 1593 см^-1;

ΗΚΜЗ (ЕЗ) т/ζ вычислено для Сп^^З^' (М+Να') 233,0607, найдено 233,0597.

(±)-4-Гидрокси-5-метил-5-(2-метилбута-1,3-диенил)-5-Н-тиофен-2-он (21)

Из соединения 16 (181 мг, 0,75 ммоль), следуя общей методике Ό, получали соединение 21 (66 мг, 45%).

Ή ЯМР (300 МГц, СОСР) кетотаутомер: δ 1,78 (с, 3Н), 1,86 (с, 3Н), 3,43 (д, 1=5,6 Гц, 2Η), 5,12 (д, 1=10,6 Гц, 1Η), 5,27 (д, 1=17,3 Гц, 1Н), 5,83 (с, 1Н), 6,27-6,37 (дд, 1=10,6, 17,3 Гц, 1Н);

Ή ЯМР (300 МГц, МеОЭ) енольный таутомер: δ 1,79 (с, 3Н), 1,84 (с, 3Н), 5,04 (д, 1=10,7 Гц, 1Н),

5,25 (д, 1=17,3 Гц, 1Н), 5,66 (с, 1Н), 6,36 (дд, 1=10,7, 17,3 Гц, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, МеОЭ) δ 12,6, 30,4, 59,0, 102 (т), 116,9, 131,4, 140,6, 142,3, 189,9, 197,3;

ΗΚΜЗ (Е1) т/ζ вычислено для СЩ^О^' (М') 196,0552, найдено 196,0552. (±)-5-Бензил-4-гидрокси-5-метил-5-Н-тиофен-2-он (22)

Из соединения 31 (1,4 мг, 5,0 ммоль), следуя общей методике Ό, получали соединение 22 (500 мг,

- 14 013371

45%).

'Н ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 1,71 (с, 3Н), 2,89 (аЬ кв., 1=22 Гц, 2Н), 3,17 (аЬ кв., 1=14 Гц, 2Н), 7,26 (м, 5Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, ϋϋα₃) δ 26,2, 46,6, 48,5, 67,9, 127,7, 128,6, 130,6, 134,9, 195,3, 207,3.

Общая методика Е.

(±)-2-трет-Бутил-5-метил-5 -октил-[1,3] -оксатиолан-4-он (23)

К смеси ΜΗΜΌδ (6,2 мл, 6,20 ммоль, 1 М в ТГФ) в ТГФ (9,7 мл) при -78°С добавляли по каплям с помощью канюли (±)-соединение 1 (1,00 г, 5,75 ммоль) в ТГФ (9,60 мл) и образовавшийся раствор перемешивали в течение 30 мин при -78°С. Затем при -78°С добавляли через канюлю октилтрифлат (1,63 г, 6,20 ммоль) в ТГФ (4 мл). После перемешивания при -78°С в течение 2 ч добавляли 1н. НС1 (10 мл) и раствор экстрагировали Е1₂О (3x15 мл). Объединенные органические слои сушили (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали. После флэш-хроматографии (смесь 2% Е1ОАс/гексан) получали чистое соединение 23 в виде смеси отдельных диастереоизомеров 2:1-6:1 (1,33 г, 81%).

'|| ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 0,86 (т, 1=6,5 Гц, 3Н), 0,99 (с, 9Н), 1,24-1,26 (м, 12Н), 1,54 (с, 3Н), 1,721,84 (м, 2Н), 5,13 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОС1_;) δ 13,9, 22,6, 24,9, 25,1, 25,9, 29,2, 29,3, 29,5, 31,8, 35,2, 41,2, 55,3, 86,7, 177,7;

ИК (№С1) 3443, 2929, 1829, 1769 см^-1.

Вычислено для С1₆Н₃₀О₂8: С, 67,0; Н, 10,6. Найдено С, 66,3; Н, 10,5.

НВМ8 (Е1) т/ζ вычислено для С1бН₃₀О₂8⁺ (М') 286,1967, найдено 286,1669.

(±)-2-трет-Бутил-5-метил-5 -гексил-[1,3] -оксатиолан-4-он (24)

и) р-/¹

Из (±)-соединения 1 (500 мг, 2,87 мл) и гексилтрифлата (738 мг, 2,87 ммоль), следуя общей методике Е, получали соединение 24 (557 мг, 75%) в виде смеси отдельных диастереоизомеров 2:1-6:1.

'|| ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 0,87 (т, 1=6,5 Гц, 3Н), 0,99 (0, 9Н), 1,24-1,29 (м, 8Н), 1,54 (с, 3Н), 1,721,80 (м, 2Н), 5,13 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОС1_;) δ 13,9, 22,5, 24,9, 24,9, 25,1, 25,9, 29,1, 31,6, 41,2, 55,3, 86,7, 177,8;

ИК (№С1).

Вычислено для С1₄Н₂₆О₂8: С, 65,1; Н, 10,1. Найдено С, 64,5; Н, 10,1.

НВМ8 (Е1) т/ζ вычислено для С1₄Н₂₆О₂8⁺ (М') 258,1654, найдено 286,1653.

Общая методика Е.

Сложный этиловый эфир (±)-2-алкинилсульфанил-2-метилдекановой кислоты (26)

К соединению 23 (650 мг, 2,27 ммоль) в ЕЮН (14,1 мл) добавляли №1ОЕ1 (2,1М) (2,16 мл, 4,54 ммоль) (свежеполученный с использованием металлического Να (200 мг, 8,3 ммоль) в Е1ОН (4,0 мл) и раствору давали возможность перемешиваться при комнатной температуре. Через 2 ч раствор вливали в N^01 (насыщенный)/1н. НС1 (25 мл, 3:1) и полученную смесь экстрагировали Е1₂О (3x20 мл). Затем объединенные органические слои промывали Н₂О (3x25 мл), сушили (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали с получением неочищенного соединения 25. К растворенному в СН2С12 (26 мл) соединению 25 при 0°С добавляли №1₃ (0,5 мл, 3,49 ммоль) и алкинилхлорид (0,3 мл, 3,49 ммоль). Через 40 мин при 0°С добавляли Ν^Ο (насыщенный) (30 мл) и раствор экстрагировали СН₂С1₂. Объединенные органические слои сушили (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали. После флэш-хроматографии (смесь 5% ЕЮАс/гексан) получали чистое соединение 26 (542 мг, 79%).

'Н ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 0,87 (т, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,22-1,27 (м, 15Н), 1,61 (с, 3Н), 1,75-1,84 (м, 2Н),

2,26 (с, 3Н), 4,18 (кв., 1=7,1 Гц, 2Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОС1_;) δ 13,9, 14,1, 22,6, 23,4, 24,4, 29,1, 29,2, 29,6, 30,3, 31,8, 38,3, 55,8, 61,5,

173,1, 195,8;

ИК (№С1) 3430, 1868, 1693, 1644 см^-1;

Вычислено для С1₅Н₂₈О₃8: С, 62,5; Н, 9,78. Найдено С, 62,6; Н, 9,83.

Сложный этиловый эфир (±)-2-алкинилсульфанил-2- метилоктановой кислоты (28)

- 15 013371

Из соединения 24 (940 мг, 3,63 ммоль) и алкинилхлорида (0,3 мл, 3,63 ммоль), следуя общей методике Р, после флэш-хроматографии (смесь 5% ЕЮАс/гексан) получали соединение 28 (727 мг, 77%).

'Н ЯМР (300 МГц, СИС1₃) δ 0,86 (т, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,22-1,27 (м, 11Н), 1,61 (с, 3Н), 1,75-1,79 (м, 2Н), 2,25 (с, 3Н), 4,17 (кв., 1=7 Гц, 2Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СИС1₃) δ 13,9, 14,1, 22,4, 23,4, 24,4, 29,3, 30,3, 31,5, 38,4, 55,7, 61,5, 173,0, 194,7; ИК (ИаС1) 3449, 1736, 1694 см^-1;

Вычислено для С1₃Н₂₄О₃8: С, 59,9; Н, 9,29. Найдено С, 60,6; Н, 9,44.

Сложный этиловый эфир (±)-2-метил-2-пропионилсульфанилдекановой кислоты (30)

Из соединения 23 (613 мг, 2,14 ммоль) и пропионилхлорида (0,19 мл, 2,14 ммоль), следуя общей методике Р, после флэш-хроматографии (смесь 5% ЕЮАс/гексан) получали соединение 30 (484 мг, 75%).

'Н ЯМР (300 МГц, СИС1₃) δ 0,84 (т, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,10 (т, 1=7,5 Гц, 3Н), 1,19-1,24 (м, 15Н), 1,58 (с, 3Н), 1,72-1,77 (м, 2Н), 2,48 (кв., 1=7,5 Гц, 2Н), 4,17 (кв., 1=7 Гц, 2Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СИС1₃) δ 9,45, 14,1, 14,1, 22,6, 23,5, 24,5, 29,1, 29,3, 29,7, 31,8, 36,9, 38,5, 55,5, 61,4, 173,2, 199,2.

Вычислено для С1₆Н₃₀О₃8: С, 63,5; Н, 10,0. Найдено С, 63,7; Н, 10,0.

Сложный этиловый эфир (±)-2-алкинилсульфанил-2-метил-3- фенилдекановой кислоты (31)

Из 5-бензил-2-трет-бутил-5-метил-[1,3]-оксатиолан-4-она¹ (1,2 г, 4,7 ммоль), следуя общей методике Р, после флэш-хроматографии (смесь 5% ЕЮАс/гексан) получали соединение 31 (954 мг, 76%).

'|| ЯМР (300 МГц, СИС1₃) δ 1,19 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,55 (с, 3Н), 2,26 (с, 3Н), 3,13 (кв., 1=13 Гц, 2Н), 4,13 (кв., 1=7 Гц, 2Н), 7,1 (м, 2Н), 7,2 (м, 3Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СИС1₃) δ 14,0, 23,1, 30,3, 43,6, 56,3, 61,7, 127,2, 128,1, 130,7, 135,4, 172,8, 194,8. Общая методика О.

(±)-4-Гидрокси-5-метил-5-октил-5-Н-тиофен-2-он (32)

К соединению 26 (500 мг, 1,7 ммоль) в толуоле (27 мл) при -78°С добавляли ЫНМИЗ (4,3 мл, 4,3 ммоль, 1,0 М в ТГФ) и раствору давали возможность медленно нагреваться до -5°С. Раствор затем вливали в 1н. НС1 (40 мл) и экстрагировали ЕЮАс (3x25 мл). Объединенные органические слои сушили (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали. После флэш-хроматографии (смесь 20% ЕЮАс/2% СН3СО2Н/гексан) получали соединение 32 (308 мг, 73%).

'Н ЯМР (300 МГц, СИС1₃) кетотаутомер: δ 0,86 (т, 1=6 Гц, 3Н), 1,19-1,24 (м, 10Н), 1,48-1,53 (м, 2Н), 1,65 (с, 3Н), 1,77-1,85 (м, 1Н), 1,94-2,01 (м, 1Н), 3,36 (с, 2Н);

'Н ЯМР (300 МГц, МеОИ) енольный таутомер: δ 0,87-0,89 (м, 3Н), 1,29 (м, 10Н), 3,29 (с, 3Н), 1,811,87 (м, 2Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, МеОИ) енольный таутомер: δ 14,7, 23,8, 26,4, 27,1, 30,5, 30,6, 30,8, 33,2, 39,8, 61,3, 103,1 (т), 189,8, 197,8;

ИК (ИаС1) 3422, 1593 см^-1;

Вычислено для С1₃Н₂₂О₂8: С, 64,4; Н, 9,15. Найдено С, 64,3; Н, 9,10.

(±)-4-Гидрокси-5-метил-5-гексил-5-Н-тиофен-2-он (33) ~^<СЧг>*1М5 он ³³

Из соединения 28 (715 мг, 2,75 ммоль), следуя общей методике О, после флэш-хроматографии (смесь 20% ЕЮАс/2% СН₃СО₂Н/гексан) получали соединение 33 (402 мг, 69%).

- 16 013371 'Н ЯМР (300 МГц, СИС1₃) кетотаутомер: δ 0,86 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,27 (ш.с, 8Н), 1,68 (с, 3Н), 1,94-2,26 (м, 2Н), 3,35 (с, 2Н);

¹Н ЯМР (300 МГц, МеОИ) енольный таутомер: δ 0,89 (т, 1=6,5 Гц, 3Н), 1,21-1,36 (м, 7Н), 1,46-1,54 (м, 1Н), 1,64 (с, 3Н), 1,80-1,90 (м, 2Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, МеОИ) δ 14,6, 23,8, 26,3, 27,1, 30,5, 32,9, 39,8, 61,3, 103,5 (т), 189,8, 197,8.

Вычислено для СцН1₈О₂8: С, 61,6; Н, 8,47. Найдено С, 61,7; Н, 8,67.

(±)-4-Гидрокси-3,5-диметил-5-октил-5-Н-тиофен-2-он (34)

Из соединения 30 (469 мг, 1,55 ммоль) и ИаНМИЗ (3,87 мл, 3,87 ммоль, 1,0 М в ТГФ), следуя общей методике С, получали соединение 34 (397 мг, 70%).

'Н ЯМР (300 МГц, СИС1₃) енольный таутомер: δ 0,86 (т, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,23 (с, 11Н), 1,30-1,45 (м, 1Н), 1,59 (с, 3Н), 1,74 (с, 3Н), 1,84-1,88 (м, 2Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СИС1₃) δ 7,48, 14,0, 22,6, 25,2, 25,9, 29,2, 29,4, 29,6, 31,8, 38,5, 58,2, 110,5, 180,9, 198,0;

ИК (ИаС1) 2927, 1601 см^-1.

Общая методика Н.

(±)-4-Метокси-5-метил-5-октил-5-Н-тиофен-2-он (35)

К соединению 32 (70 мг, 0,27 ммоль) в ДМФА (ЭМЕ) (1,1 мл), охлажденному до -40°С, добавляли ИаН (14 мг, 0,35 ммоль, 60% в минеральном масле) и раствору давали возможность нагреваться и перемешиваться при 0°С в течение 30 мин. Затем непосредственно добавляли диметилсульфат (50 мкл, 0,55 ммоль) и смеси давали возможность нагреваться и перемешиваться при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Добавляли смесь ИН₄С1 (насыщенный)/1н. НС1 (3:1, 10 мл) и раствор экстрагировали Е1₂О (3x10 мл). Объединенные органические слои промывали Н₂О (3x15 мл), сушили (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали. В результате флэш-хроматографии (смесь 15% ЕЮАс/гексан) получали чистое соединение 35 (59 мг, 80%).

'|| ЯМР (300 МГц, С12СЕ) δ 0,85 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,07-1,18 (м, 1Н), 1,23 (с, 10Н), 1,43-1,49 (м, 1Н),

1,61 (с, 3Н), 1,74-1,81 (м, 2Н), 3,81 (с, 3Н), 5,29 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, С12СЕ) δ 14,0, 22,6, 25,1, 26,4, 29,1, 29,3, 29,5, 31,8, 38,8, 59,3, 59,4, 101,3, 187,3,

193,8.

Вычислено для С1₄Н₂₄О₂8: С, 65,6; Н, 9,50. Найдено С, 65,8; Н, 9,50.

(±)-4-Метокси-5-метил-5-гексил-5-Н-тиофен-2-он (36)

Из соединения 33 (40,3 мг, 0,19 ммоль) и диметилсульфата (35 мкл, 0,37 ммоль), следуя общей методике Н, после флэш-хроматографии (смесь 15% ЕЮАс/гексан) получали соединение 36 (25 мг, 58%).

'|| ЯМР (300 МГц, С12СЕ) δ 0,86 (т, 1=6,7 Гц, 3Н), 1,08-1,13 (м, 1Н), 1,24 (с, 6Н), 1,35-1,39 (м, 1Н),

1,61 (с, 3Н), 1,75-1,82 (м, 2Н), 3,81 (с, 3Н), 5,30 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, (ИСТ) δ 14,0, 22,5, 25,1, 26,4, 29,2, 31,5, 38,9, 59,4, 101,3, 187,3, 193,8.

(±)-4-Метокси-3,5 -диметил-5 -октил-5 -Н-тиофен-2-он (37).

ω Кеч, '^<Ц'^СруГосн,

Из соединения 34 (40 мг, 0,16 ммоль), КН (27 мг, 0,20 ммоль, 30% в минеральном масле) и диметилсульфата (30 мкл, 0,31 ммоль), следуя общей методике Н, получали соединение 37 (30 мг, 71%).

'Н ЯМР (300 МГц, С12СК) δ 0,86 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,06-1,09 (м, 1Н), 1,24 (с, 10Н), 1,41-1,48 (м, 1Н), 1,55 (с, 3Н), 1,71-1,79 (м, 2Н), 1,98 (с, 3Н), 4,09 (с, 3Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, С12СК) δ 9,59, 14,1 22,6, 25,2, 26,5, 29,2, 29,4, 29,6, 31,8, 38,9, 58,7, 59,8, 111,3,

180,2, 195,7;

- 17 013371

ИК ЩаС1) 2927, 1676, 1631, 1582 см^-1.

Вычислено для С1₅Н₂₆О₂8: С, 66,6; Н, 9,69. Найдено С, 66,5; Н, 9,67. (±)-5-Бензил-4-метокси-5-метил-5-Н-тиофен-2-он (38)

Из соединения 22 (50 мг, 0,23 ммоль) и диметилсульфата (44 мкл, 0,45 ммоль), следуя общей методике Н, получали соединение 38 (38 мг, 74%).

'|| ЯМР (300 МГц, СЭСЕ) δ 1,65 (с, 3Н), 3,1 (кв., 1=7 Гц, 2Н), 3,84 (с, 3Н), 5,19 (с, 1Н), 7,21 (м, 5Н); ¹³С ЯМР (75 МГц, СОСЕ) δ 26,0, 45,0 59,3, 59,9, 101,9, 127,2, 128,0, 130,4, 135,9, 186,5, 192,9. Сложный этиловый эфир (±)-5-метил-5-октил-2-оксотиофен-4-илоксиуксусной кислоты (39)

Из соединения 32 (39 мг, 0,16 ммоль) и этилбромацетата (36 мкл, 0,32 ммоль), следуя общей методике Н, после флэш-хроматографии (смесь 15% ЕЮАс/гексан) получали соединение 39 (39 мг, 73%).

'|| ЯМР (300 МГц, СОСГ) δ 0,86 (т, 1=6 Гц, 3Н), 1,24 (с, 11Н), 1,29 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,47-1,48 (м, 1Н),

1,68 (с, 3Н), 1,85-1,88 (м, 2Н), 4,25 (кв., 1=7 Гц, 2Н), 4,54 (с, 2Н), 5,20 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОСЕ) δ 14,1, 14,1, 22,6, 25,1, 26,4, 29,2, 29,3, 29,5, 31,8, 38,8, 59,7, 61,9, 67,9,

102,3, 166,2, 185,3, 193,4;

ИК ЩаС1) 2928, 1762, 1682, 1612 см^-1.

Вычислено для С1₇Н₂₈О₄8: С, 62,2; Н, 8,59. Найдено С, 62,2; Н, 8,67.

Сложный этиловый эфир (±)-5-метил-5-гексил-2-оксотиофен-4-илоксиуксусной кислоты (40)

Из соединения 33 (20 мг, 0,09 ммоль) и этилбромацетата (20 мкл, 0,2 ммоль), следуя общей методике Н, после флэш-хроматографии (смесь 15% ЕЮАс/гексан) получали соединение 40 (18 мг, 67%).

'|| ЯМР (300 МГц, С17СЕ) δ 0,86 (т, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,24-1,27 (м, 7Н), 1,32 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,47-1,48 (м, 1Н), 1,68 (с, 3Н), 1,84-1,88 (м, 2Н), 4,25 (кв., 1=7 Гц, 2Н), 4,54 (с, 2Н), 5,21 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, С17СЕ) δ 14,1, 14,1, 22,5, 25,1, 26,4, 29,2, 31,6, 38,9, 59,7, 61,9, 68,0, 102,3, 166,2,

185,3, 193,3;

ИК ЩаС1) 2932, 1762, 1682, 1612 см^-1.

Вычислено для С1₅Н₂₄О₄8: С, 59,9; Н, 8,05. Найдено С, 59,9; Н, 8,08.

(±)-4-(4-Хлорбутокси)-5-метил-5-октил-5Н-тиофен-2-он (41)

Из соединения 32 (47 мг, 0,18 ммоль) и 3-йод-1-хлорбутана (40 мкл, 0,36 ммоль), следуя общей методике Н, после флэш-хроматографии (смесь 20% ЕЮАс/гексан) получали соединение 41 (46 мг, 85%).

'|| ЯМР (300 МГц, С17СЕ) δ 0,86 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,07-1,27 (м, 1Н), 1,24 (с, 10Н), 1,48-1,51 (м, 1Н),

1,62 (с, 3Н), 1,75-1,82 (м, 2Н), 1,89-1,98 (м, 4Н), 3,59 (т, 1=5,9 Гц, 2Н), 3,95-3,98 (м, 2Н), 5,28 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, С17СЕ) δ 14,1, 22,6, 25,1, 26,0, 26,5, 29,0, 29,2, 29,3, 29,5, 29,7, 31,8, 44,1, 59,6, 71,7, 101,6, 186,1, 193,8.

Вычислено для С1₇Н₂₉С1О₂8: С, 61,3; Н, 8,78. Найдено С, 61,9; Н, 9,01. (±)-4-(4-Хлорбутокси)-5-метил-5-гексил-5Н-тиофен-2-он (42)

Из соединения 33 (36 мг, 0,17 ммоль) и 3-йод-1-хлорбутана (40 мкл, 0,34 ммоль), следуя общей методике Н, после флэш-хроматографии (смесь 20% ЕЮАс/гексан) получали соединение 42 (32 мг, 75%).

'|| ЯМР (400 МГц, С17СЕ) δ 0,86 (т, 1=5,1 Гц, 3Н), 1,09-1,14 (м, 1Н), 1,25 (с, 6Н), 1,44-1,53 (м, 1Н),

1,63 (с, 3Н), 1,77-1,85 (м, 2Н), 1,90-2,00 (м, 4Н), 3,59 (т, 1=4,5 Гц, 2Н), 3,95-3,99 (м, 2Н), 5,28 (с, 1Н);

- 18 013371 ¹³С ЯМР (75 МГц, СИС1₃) δ 13,7, 22,3, 25,1, 26,1, 26,4, 29,1, 29,1, 31,5, 39,0, 43,9, 59,5, 71,6, 101,5,

185,9, 192,9;

ИК (ЯаС1) 2927, 1683, 1607 см'¹.

Вычислено для С₁₅Н₂₅С1О₂8: С, 59,1; Н, 8,27. Найдено С, 59,3; Н, 8,39.

(±)-4-Аллилокси-5-метил-5-октил-5Н-тиофен-2-он (43)

Из соединения 32 (31 мг, 0,12 ммоль) и аллилбромида (21 мкл, 0,25 ммоль), следуя общей методике

H, получали смесь соединений 43 и 44, 3:1 (26 мг, 74%), которая могла быть разделена и очищена с использованием флэш-хроматографии (смесь 15% ЕЮАе/гексан).

(43) О-алкилированный продукт.

'|| ЯМР (300 МГц, СИС1₃) δ 0,86 (т, 1=6,3 Гц, 3Н), 1,12-1,17 (м, 1Н), 1,24 (с, 10Н), 1,45-1,49 (м, 1Н),

I, 64 (с, 3Н), 1,77-1,84 (м, 2Н), 4,47 (д, 1=5,6 Гц, 2Н), 5,29 (с, 1Н), 5,31 (д, 1=11 Гц, 1Н), 5,39 (д, 1=17 Гц, 1Н), 5,90-5,99 (ддд, 1=5,6, 11, 17 Гц, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СИС1₃) δ 14,1, 22,6, 25,1, 26,4, 29,2, 29,3 29,5, 31,8, 38,9, 59,7, 72,8, 102,0, 119,5, 130,8, 185,8, 193,8;

ИК (ЯаС1) 3441, 1681, 1609 см^-1.

Вычислено для С_!6Н₂₆О₂8: С, 68,0; Н, 9,20. Найдено С, 68,1; Н, 9,34.

(44) С-алкилированный продукт.

'Н ЯМР (300 МГц, СИС1₃) δ 0,86 (т, 1=6,5 Гц, 3Н), 1,25 (м, 12Н), 1,54 (с, 3Н), 1,79-1,84 (м, 2Н), 2,432,47 (м, 2Н), 5,05-5,11 (м, 2Н), 5, 57-5,69 (1Н).

(±)-4-Аллилокси-5-метил-5-гексил-5Н-тиофен-2-он (45)

*

Из соединения 33 (270 мг, 1,3 ммоль) и аллилбромида (0,2 мл, 2,52 ммоль), следуя общей методике

H, получали смесь соединения 45 и соединения 46 2,3:1 (205 мг, 58%), которая могла быть разделена и очищена с использованием флэш-хроматографии (смесь 15% Е1ОАе/гексан).

(45) О-алкилирование.

'|| ЯМР (300 МГц, СИС1₃) δ 0,84 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,09-1, 17 (м, 1Н), 1,23 (с, 6Н), 1,40-1,51 (м, 1Н),

I, 62 (с, 3Н), 1,73-1,83 (м, 2Н), 4,46 (д, 1=5,6 Гц, 2Н), 5,33 (д, 1=10 Гц, 1Н), 5,38 (д, 1=17 Гц, 1Н), 5,28 (с, 1Н), 5,87-5,98 (ддд, 1=5,6, 10, 17 Гц, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СИС1₃) δ 14,0, 22,5, 25,1, 26,5, 29,2, 31,6, 38,9, 59,7, 72,8, 101,9, 119,6, 130,7, 185,8,

193,9.

Вычислено для С_ИН₂₂О₂8: С, 66,10; Н, 8,72. Найдено С, 66,04; Н, 8,72.

(46) С-алкилирование.

'|| ЯМР (300 МГц, СИС1₃) δ 0,86 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,24 (ш.с, 8Н), 1,54 (с, 3Н), 1,81-1,84 (м, 2Н), 2,422,48 (м, 2Н), 5,05-5,10 (м, 2Н), 5,56-5,67 (м, 1Н).

(±)-4-Аллилокси-3,5-диметил-5-октил-5Н-тиофен-2-он (47). (±)-Аллил-3,5-диметил-5-октилтиофен-2,4-дион (48).

4»

Из соединения 34 (70 мг, 0,27 ммоль) и аллилбромида (47 мкл, 0,55 ммоль), следуя общей методике Н, получали смесь соединений 47 и 48, 2,3:1 (данные С-алкилирования не показаны) (67 мг, 82%), которая могла быть разделена и очищена с использованием флэш-хроматографии (смесь 20% ЕЮАе/гексан).

(47) '11 ЯМР (300 МГц, СИС1₃) δ 0,86 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,06-1,48 (м, 12Н), 1,58 (с, 3Н), 1,71-1,82 (м, 2Н), 1,94 (с, 3Н), 4,80-4,82 (м, 2Н), 5,28-5,46 (м, 2Н), 5,89-5,03 (м, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СИС1₃) δ 9,65, 14,0, 22,6, 25,2, 26,6, 29,2, 29,3 29,6, 31,8, 39,2, 57,5, 72,5, 118,2,

119,5, 132,6, 179,4, 193,8;

ИК (ЯаС1) 2855, 1676, 1580 см^-1.

(48) '11 ЯМР (300 МГц, СИС1₃) δ 0,86 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,16-1,47 (м, 15Н), 1,57 (с, 3Н), 1,74-1,96 (м, 2Н), 2,42-2,46 (м, 2Н), 5,04-5,10 (м, 2Н), 5,53-5,67 (м, 1Н).

- 19 013371 (±)-5-Метил-5-гексил-4-проп-2-инилокси-5Н-тиофен-2-он (49)

Из соединения 33 (45 мг, 0,21 ммоль) и пропаргилбромида (37 мкл, 0,21 ммоль), следуя общей методике Н, получали соединение 49 (21 мг, 40%).

'Н ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 0,86 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,11-1,20 (м, 1Н), 1,24 (с, 6Н), 1,41-1,49 (м, 1Н),

1,63 (с, 3Н), 1,76-1,86 (м, 2Н), 2,59 (т, 1=2,5 Гц, 1Н), 4,62 (д, 1=3,7 Гц, 1Н), 4,63 (д, 1=3,7 Гц, 1Н), 5,43 (с, 1Н).

Сложный трет-бутиловый эфир (±)-5-метил-5-октил-2- оксотиофен-4-илоксиуксусной кислоты (50)

Из соединения 32 (60 мг, 0,25 ммоль) и трет-бутилбромацетата (73 мкл, 0,49 ммоль), следуя общей методике Н, после флэш-хроматографии (смесь 15% ЕЮАс/гексан) получали соединение 50 (62 мг, 70%).

'|| ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 0,86 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,24 (с, 12Н), 1,49 (с, 9Н), 1,68 (с, 3Н), 1,83-1,86 (м, 2Н), 4,43 (с, 2Н), 5,19 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОС1_;) δ 14,0, 22,6, 25,2, 26,3, 28,1, 29,2, 29,3 29,5, 31,8, 38,9, 59,7, 68,5, 83,4,

102,1, 165,2, 185,5, 193,4.

Вычислено для С1₉Н₃₂О₄8: С, 64,0; Н, 9,05. Найдено С, 64,1; Н, 9,08.

Сложный трет-бутиловый эфир (±)-5-метил-5-гексил-2-оксотиофен-4-илоксиуксусной кислоты (51)

Из соединения 33 (169 мг, 0,79 ммоль) и трет-бутилбромацетата (0,23 мл, 1,58 ммоль), следуя общей методике Н, после флэш-хроматографии (смесь 15% ЕЮАс/гексан) получали соединение 51 (206 мг, 80%).

'|| ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 0,82 (т, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,21 (с, 8Н), 1,47 (с, 9Н), 1,64 (с, 3Н), 1,78-1,83 (м, 2Н), 4,41 (с, 2Н), 5,15 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОС1_;) δ 14,0, 22,5, 25,1, 26,3, 28,0, 29,1, 31,5, 38,9, 59,6, 68,4, 83,4, 102,1, 165,2,

185,5, 193,4.

Сложный трет-бутиловый эфир (±)-5-фенил-5-метил-2- оксотиофен-4-илоксиуксусной кислоты (52)

Из соединения 22 (150 мг, 0,68 ммоль) и трет-бутилбромацетата (0,20 мл, 1,36 ммоль), следуя общей методике Н, после флэш-хроматографии (смесь 20% ЕЮАс/гексан) получали соединение 52 (159 мг, 74%).

'|| ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 1,49 (с, 9Н), 1,69 (с, 3Н), 3,17 (с, 2Н), 4,44 (кв., 1=8 Гц, 2Н), 5,13 (с, 1Н), 7,24 (м, 5Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОС1_;) δ 25,8, 28,1, 45,0, 60,1, 68,4, 83,6, 102,6, 127,2, 128,1, 130,5, 135,9, 165,3,

184,9, 192,8.

Общая методика I.

(±)-5-Метил-5-октил-2-оксотиофен-4-илоксиуксусная кислота (53)

К соединению 50 (65 мг, 0,18 ммоль), растворенному в СН₂С1₂ (1,4 мл), добавляли трифторуксусную кислоту (ΤΡΑ) (0,7 мл) и раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Выпаривали растворители и неочищенную смесь подвергали хроматографии (смесь 20% Е1ОАс/2% СН₃СО₂Н/гексан) с получением чистого соединения 53 (48 мг, 89%).

¹Н ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 0,86 (т, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,24 (с, 11Н), 1,47-1,48 (м, 1Н),1,68 (с, 3Н), 1,84- 20 013371

1,88 (м, 2Н), 4,62 (с, 2Н), 5,31 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃) δ 14,1, 22,6, 25,1, 26,1, 29,2, 29,3 29,5, 31,8, 38,9, 60,1, 67,7, 102,4, 169,8, 185,8, 195,4;

ИК (ЫаС1) 3442, 1645 см^-1.

Вычислено для С1₅Н₂₄О₄8: С, 59,9; Н, 8,05. Найдено С, 60,0; Н, 8,09.

(±)-5-Метил-5-гексил-2-оксотиофен-4-илоксиуксусная кислота (54)

Из соединения 51 (177 мг, 0,54 ммоль) и трифторуксусной кислоты (ТБА) (2,61 мл), следуя общей методике I, после флэш-хроматографии (смесь 20% ЕЮАс/2% СН₃СО₂Н/гексан) получали соединение 54 (144 мг, 98%).

Ή ЯМР (300 МГц, СБС1₃) δ 0,85 (т, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,24 (с, 7Н), 1,44-1,47 (м, 1Н), 1,68 (с, 3Н), 1,841,91 (м, 2Н), 4,62 (с, 2Н), 5,33 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃) δ 14,1, 22,6, 25,1, 26,1, 29,2, 31,6, 38,9, 60,3, 67,7, 102,4, 169,8, 185,9, 196,1.

(±)-5-Фенил-5-метил-2-оксотиофен-4-илоксиуксусная кислота (55)

Из соединения 52 (117 мг, 0,35 ммоль) и трифторуксусной кислоты (ТБА) (1,4 мл), следуя общей методике I, после флэш-хроматографии (смесь 30% ЕЮАс/2% СН₃СО₂Н/гексан) получали соединение 55 (68 мг, 70%).

Ή ЯМР (300 МГц, МеОБ) δ 1,63 (с, 3Н), 3,11 (дд, 1=6,8 Гц, 13,6 Гц, 2Н), 4,59 (с, 2Н), 5,21 (с, 1Н), 7,1 (м, 5Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, МеОБ) δ 26,7, 45,7, 61,9, 67,1, 103,9, 128,3, 129,1, 131,8, 137,5, 169,3, 187,3, 195,8.

(±)-Ы-аллил-(5-метил-5-октил-2-оксотиофен-4-илокси)ацетамид (56)

К охлажденному раствору (0°С) соединения 53 (64 мг, 0,21 ммоль) в СН₂С1₂ (1,1 мл) добавляли гидрохлорид 1-[3-диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимида (ЕЭС) (49 мг, 0,25 ммоль), БМАР (3 мг, 0,02 ммоль) и аллиламин (18 мкл, 0,25 ммоль) и смеси давали возможность нагреваться до комнатной температуры и перемешиваться в течение 12 ч. Раствор вливали в раствор 1н. НС1 (насыщенный) (1:3) и экстрагировали Е1₂О (3x10 мл). Объединенные органические слои сушили (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали с получением неочищенного соединения 56. После флэш-хроматографии (смесь 50% ЕЮАс/гексан) получали чистое соединение 56 (50 мг, 66%).

Ή ЯМР (300 МГц, СБС1₃) δ 0,86 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,12-1,22 (м, 1Н), 1,24 (с, 10Н), 1,41-1,51 (м, 1Н),

1,68 (с, 3Н), 1,82-1,87 (м, 2Н), 3,98 (каж.т, 1=6 Гц, 2Н), 4,50 (с, 2Н), 5,20 (д, 1=10 Гц, 1Н), 5,22 (д,

1=17,3 Гц, 1Н), 5,35 (с, 1Н), 5,80-5,90 (ддд, 1=6, 10, 17 Гц, 1Н), 6,19 (ш.с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СБС1₃) δ 14,0, 22,6, 25,3, 26,5, 29,2, 29,4, 29,5, 31,8, 39,1, 41,6, 59,3, 70,3, 103,4,

117,2, 133,2, 165,3, 183,9, 192,8.

Вычислено для С1₈Н₂₉О₃8: С, 63,7; Н, 8,61. Найдено С, 63,4; Н, 8,67.

Общая методика 1.

(±)-(5-Метил-5-гексил-2-оксотиофен-4-илокси)алкинилметилглицинат (57)

К раствору соединения 54 (42,4 мг, 0,15 ммоль) в СН₃СЫ (0,86 мл) добавляли трис-(2-оксо-3-оксазолинил)фосфиноксид³ (91 мг, 0,20 ммоль), гидрохлорид метилглицината (19,7 мг, 0,16 ммоль) и ΝΈΐ₃ (43 мкл, 0,31 ммоль) и раствору давали возможность перемешиваться при комнатной температуре в течение 20 мин, смесь вливали в раствор смеси ИН₄С1 (насыщенный)/1н. НС1 (10 мл) и экстрагировали Е1₂О (3x10 мл). Объединенные органические слои сушили (Мд8О₄), фильтровали, выпаривали и подвергали хроматографии (смесь 40-50% ЕЮАс/гексан) с получением чистого соединения 57 (43 мг, 80%).

- 21 013371 '|| ЯМР (300 МГц, ГОСТ) δ 0,85 (т, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,23-1,26 (м, 7Н), 1,49-1,55 (м, 1Н), 1,65 (с, 3Н), 1,84-1,90 (м, 2Н), 3,79 (с, 3Н), 4,11 (д, 1=5 Гц, 1Н), 4,12 (д, 1=5 Гц, 1Н), 4,47 (с, 2Н), 5,36 (с, 1Н), 6,76 (ш.с, 1Н).

(±)-(5-Метил-5-гексил-2-оксотиофен-4-илокси)алкинилглицинат (58)

К соединению 57 (22 мг, 0,06 ммоль), растворенному в смеси ТГФ/Н₂О (0,5 мл, 3:1) и охлажденному до 0°С, добавляли ЫОН (3 мг, 0,07 ммоль) и полученному раствору давали возможность перемешиваться в течение 45 мин. Затем смесь вливали в раствор НС1 (10 мл, 1н.) и экстрагировали Е!₂О (3x10 мл). Объединенные органические слои сушили (МдБО₄), фильтровали и выпаривали с получением неочищенного соединения 58. После флэш-хроматографии (смесь 50% Е!ОАс/2% СН3СО2Н/гексан) получали чистое соединение 58 (19 мг, 86%).

'|| ЯМР (300 МГц, СИСЕ) δ 0,85 (т, 1=6,7 Гц, 3Н), 1,25 (с, 7Н), 1,48-1,52 (м, 2Н), 1,68 (с, 3Н), 2,082,10 (м, 2Н), 4,05 (с, 2Н), 4,56 (с, 2Н), 5,41 (с, 1Н).

(±)-№(4-Бромбутил)-(5-метил-5-гексил-2-оксотиофен-4-илокси)ацетамид (59)

Из соединения 54 (61 мг, 0,22 ммоль) и гидробромида 1-аминопропанола (50 мг, 0,23 ммоль), следуя общей методике 1, после флэш-хроматографии (смесь 50% Е!ОАс/гексан) получали соединение 59 (65мг, 74%).

'|| ЯМР (300 МГц, СИС1₃) δ 0,86 (т, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,12-1,15 (м, 1Н), 1,23-1,28 (с, 6Н), 1,46-1,53 (м, 1Н), 1,69 (с, 3Н), 1,82-1,88 (14, 2Н), 2,14 (квинт. 1=6 Гц, 2Н), 3,42 (м, 2Н), 3,54 (кв., 1=6,3 Гц, 2Н), 4,43 (с, 2Н), 5,35 (с, 1Н), 6,45 (ш.с, 1Н).

(±)-№Аллил-(5-фенил-5-метил-2-оксотиофен-4-илокси)ацетамид (60)

Из соединения 55 (72 мг, 0,26 ммоль) и аллиламина (21 мкл, 0,28 ммоль), следуя общей методике 1, после флэш-хроматографии (градиент 10-50% Е!ОАс/гексан) получали соединение 60 (39 мг, 47%).

'|| ЯМР (300 МГц, ГОСТ) δ 1,73 (с, 3Н), 3,17 (с, 2Н), 3,93 (м, 2Н), 4,41 (с, 2Н), 5,22 (м, 2Н), 5,24 (с, 1Н), 5,80 (м, 1Н), 5,83 (с, 1Н), 7,24 (м, 5Н).

¹³С ЯМР (75 МГц, СОС1_;) δ 26,0, 41,6, 45,4, 59,7, 70,3, 103,9 117,1, 127,5, 128,3, 130,2, 133,3, 135,6,

165,3, 183,4, 192,0.

Общая методика К.

(±)-4-Оксикарбоксиэтил-5-метил-5-октил-5Н-тиофен-2-он (61)

К раствору соединения 32 (95 мг, 0,39 ммоль) в ТГФ (1,8 мл), охлажденному до -78°С, добавляли ЫНМИБ (0,58 мл, 0,58 ммоль, 1 М в ТГФ) и раствору давали возможность перемешиваться при -78°С в течение 30 мин. Затем добавляли этилхлорформиат (60 мкл, 0,62 ммоль) и смесь переносили в баню с льдом и давали возможность медленно нагреваться до комнатной температуры. Через 1 ч смесь вливали при комнатной температуре в раствор смеси НС1 (1н.)/NΗ₄С1 (насыщенный) (10 мл) и экстрагировали Е!₂О (3x10 мл). Объединенные органические слои сушили (МдБО₄), фильтровали, выпаривали и хроматографировали (смесь 20% Е!ОАс/гексан) с получением чистого соединения 61 (111 мг, 91%).

'|| ЯМР (300 МГц, ГОСТ) δ 0,85 (т, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,12-1,17 (м, 11Н), 1,38 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,42-1,50 (м, 1Н), 1,67 (с, 3Н), 1,82 (д, 1=9 Гц, 1Н), 1,85 (д, 1=9 Гц, 1Н), 4,33 (кв., 1=7 Гц, 2Н), 6,38 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, ГОСТ) δ 14,0, 14,0, 22,6, 25,2, 25,8, 29,1, 29,2, 20,4 31,8, 38,4, 60,1, 66,0, 112,8,

150,2, 175,6, 193,9;

ИК (№С1) 2928, 1782, 1690, 1625 см^-1.

Вычислено для С1₆Н₂₆О₄Б: С, 61,1; Н, 8,33. Найдено С, 61,5; Н, 8,32.

- 22 013371 (±)-4-Оксикарбоксиметил-5-метил-5-октил-5Н-тиофен-2-он (62)

Из соединения 32 (73 мг, 0,30 ммоль) и метилхлорформиата (37 мкл, 0,48 ммоль), следуя общей методике К, после флэш-хроматографии (смесь 20% ЕЮАс/гексан) получали соединение 62 (63 мг, 70%).

Ή ЯМР (300 МГц, СОСР) δ 0,85 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,15-1,21 (м, 1Н), 1,22 (с, 10Н), 1,41-1,51 (м, 1Н), 1,66 (с, 3Н), 1,81 (д, 1=9 Гц, 1Н), 1,83 (д, 1=9 Гц, 1Н), 3,92 (с, 3Н), 6,39 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОСР) δ 14,1, 22,6, 25,2, 25,9, 29,2, 29,3, 29,4, 31,8, 38,4, 56,2, 60,2, 112,9, 150,9,

175,5, 194,1;

ИК ЩаС1) 3382, 1626, 1560, 1542 см^-1.

Вычислено для С^ЫгдОдЗ: С, 59,9; Н, 8,05. Найдено С, 60,3; Н, 8,10.

(±)-4-Оксикарбоксиаллил-5-метил-5-октил-5Н-тиофен-2-он (63)

Из соединения 32 (51,5 мг, 0,21 ммоль) и аллилхлорформиата (33 мкл, 0,32 ммоль), следуя общей методике К, после флэш-хроматографии (смесь 15% ЕЮАс/гексан) получали соединение 63 (46,3 мг, 67%).

Ή ЯМР (300 МГц, С1)С1_;) δ 0,85 (т, 1=7,3 Гц, 3Н), 1,16-1,23 (ш.с, 10Н), 1,41-1,51 (м, 2Н), 1,67 (с, 3Н), 1,81-1,87 (м, 2Н), 4,74 (каж.дт, 1=6,13 Гц, 2Η), 5,37 (каж.д.кв., 1=10,3, 1,02 Гц, 1Н), 5,44 (каж.д.кв., 1=15,9, 1,02 Гц, 1Н), 5, 90-6,0 (м, 1Н), 6,39 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОСР) δ 14,0, 22,6, 25,2, 25,8, 29,1, 29,2, 29,4, 31,8, 38,4, 60,1, 70,2, 112,9, 120,6, 130,23, 150,0, 175,5, 193,7.

ИК ЩаС1) 2927, 1782, 1691, 1606 см^-1.

Вычислено для СпЫгвОдЗ: С, 62,5; Н, 8,03. Найдено С, 62,6; Н, 8,07. (±)-4-Пропионил-5-метил-5-октил-5Н-тиофен-2-он (64) м

Из соединения 32 (40 мг, 0,17 ммоль) и пропионилхлорида (20 мкл, 0,22 ммоль), следуя общей методике К, после флэш-хроматографии (смесь 15% ЕЮАс/гексан) получали соединение 64 (23,1 мг, 47%).

Ή ЯМР (300 МГц, СОСР) δ 0,85 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,12-1,25 (м, 13Н), 1,42-1,49 (м, 2Н), 1,64 (с, 3Н), 1,78-1,84 (м, 2Н), 2,57 (кв., 1=7,5 Гц, 2Н), 6,39 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОСР) δ 8,71, 14,0, 22,6, 25,1, 25,9, 27,9, 29,1, 29,3, 29,5, 31,8, 38,6, 60,4, 113,8, 169,1, 177,0, 179,9;

ИК ЩаС1) 2928, 1787, 1688 см^-1.

Вычислено для С^ЩЮ^: С, 64,4; Н, 8,78. Найдено С, 64,3; Н, 8,89.

(±)-4-Оксикарбоксиэтил-5-фенил-5-метил-5Н-тиофен-2-он (65)

Из соединения 22 (50 мг, 0,23 ммоль) и этилхлорформиата (35 мкл, 0,36 ммоль), следуя общей методике К, получали соединение 65 (67 мг, 88%).

Ή ЯМР (300 МГц, СОСР) δ 1,31 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,69 (с, 3Н), 3,15 (с, 2Н), 4,36 (кв., 1=7 Гц, 2Η), 6,33 (с, 1Н), 7,18-7,27 (м, 5Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОСР) δ 14,1, 25,3, 44,6, 60,6, 66,2, 113,2, 127,4, 128,2, 130,3, 135,4, 150,1, 175,1,

193,3.

4-Гидрокси-3-(1-гидроксиэтил)-5-метил-5-октил-5Н-тиофен-2-он (66, 67)

- 23 013371

К соединению 32 (247 мг, 1,02 ммоль), растворенному в гексане, добавляли триэтиламин (0,23 мл,

1,68 ммоль) и триметилсилилхлорид (0,21 мл, 1,64 ммоль) и раствору давали возможность перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 ч, смесь фильтровали через рыхлый слой целита и выпаривали с получением 5-метил-5-октил-4-триметилсиланилокси-5Н-тиофен-2-она. К раствору Т1С1₄ (0,7 мл, 0,7 ммоль) в СН₂С1₂ (1,95 мл) при -78°С добавляли ацетальдегид (54 мкл, 0,97 ммоль) и полученному раствору давали возможность перемешиваться при -78°С в течение 5 мин. Затем с помощью канюли в раствор смеси Т1С1₄/ацетальдегид добавляли 5-метил-5-октил-4-триметилсиланилокси-5Н-тиофен-2он, растворенный в СН2С12 (0,4 мл), с получением при этом смеси ярко-оранжевого цвета. Образовавшейся смеси давали возможность нагреваться и перемешиваться в течение 20 мин при 0°С, смесь вливали в ΝΉ₄α (насыщенный) (15 мл) и экстрагировали СН₂С1₂ (3x15 мл). Органические слои объединяли, сушили (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали. После флэш-хроматографии (смесь 10% ЕЮАс/гексан) получали чистые соединение 66 (34 мг) и соединение 67 (24 мг) (50%).

(66) Ή ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 0,86 (т, 1=6, 9 Гц, 3Н), 1,05-1,08 (м, 1Н), 1,24 (ш.с, 11Н), 1,49 (д, 1=6,5 Гц, 3Н, ротамер), 1,55 (д, 1=5,2 Гц, 3Н, ротамер), 1,62 (с, 3Н), 1,78-1,82 (м, 2Н), 4,68 (кв., 1=6,5 Гц, 1Н, ротамер), 5,04 (кв., 1=5,2, 1Н, ротамер).

НКМ8 (Е8) т/ζ вычислено для С₁₆Н₂₈О₃8№1' (Μ+ί.Ή₂+Ν;ί) 323,1660, найдено 323,1660.

(67) Ή ЯМР (300 МГц, СОСЕ) δ 0,85 (т, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,24 (ш.с, 12Н), 1,47 (д, 1=6,6 Гц, 3Н, ротамер), 1,54 (д, 1=5,4 Гц, 3Н, ротамер), 1,59 (с, 3Н), 1,76-1,82 (м, 2Н), 4,65 (кв., 1=6,3 Гц, 1Н), 5,06 (кв., 1=5,4 Гц, 1Н).

НКМ8 (Е8) т/ζ вычислено для С₁₆Н₂₈О₃8№1' (Μ+ί.Ή₃+Ν;ί) 323,1660, найдено 323,1660.

Общая методика Ь.

3-Алкинил-4-гидрокси-5-метил-5-октил-5Н-тиофен-2-он (68)

К соединению 32 (94 мг, 0,38 ммоль) в СН₂С1₂ (1,9 мл) при 0°С добавляли ΝΉΐ₃ (58 мкл, 0,42 ммоль), диметиламинопиридин (ОМАР) (19 мг, 0,15 ммоль) и уксусный ангидрид (43 мкл, 0,47 ммоль). Раствор перемешивали при 0° в течение 15 мин, затем давали возможность нагреваться и перемешиваться при комнатной температуре в течение 2-14 ч или до тех пор, пока ТСХ не покажет завершение реакции, смесь вливали в смесь ΝΉ₄α (насыщенный)/НС1 (1н.) (3:1, 8 мл) и экстрагировали СН₂С1₂ (3x10 мл). Органические слои объединяли, сушили (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали с получением неочищенного соединения 68. После флэш-хроматографии (смесь 30% ЕЮАс/2% АсОН/гексан) (Г{=0,44) получали чистое соединение 68 (83 мг, 78%).

Ή ЯМР (300 МГц, СИСЕ) δ 0,84 (м, 3Н), 1,22 (ш.с, 10Н), 1,48 (м, 2Н), 1,65 (с, 3Н), 1,77-1,92 (м, 2Н), 2,55 (с, 3Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОСЕ) δ 13,9, 22,6, 23,8, 25,1, 26,3, 29,1, 29,2, 29,5, 31,7, 39,4, 59,7, 109,7, 190,5, 195,5, 204,9.

НКМ8 (Е1) т/ζ вычислено для С1₅Н₂₄О₃8⁺ (М³) 284,1441, найдено 284,1414.

4-Гидрокси-5-метил-5-октил-3-(2,2,2-трифторалкинил)-5Н-тиофен-2-он (69)

Из соединения 32 (90 мг, 0,37 ммоль), ангидрида трифторуксусной кислоты (114 мкл, 0,81 ммоль), диметиламинопиридина (ОМАР) (18 мг, 0,15 ммоль) и ΝΉ1₃ (108 мкл, 0,77 ммоль), следуя общей методике Ь, после флэш-хроматографии (смесь 40% гексан/10% ТГФ/2% АсОН/ЕЮАс) получали соединение 69 (107 мг, 86%).

Ή ЯМР (300 МГц, МеОЭ) δ 0,85 (т, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,09 (м, 1Н), 1,21 (ш.с, 11Н), 1,38 (с, 3Н), 1,511,60 (м, 1Н), 1,65-1,71 (м, 1Н).

НКМ8 (Е1) т/ζ вычислено для С1₅Н₂1Е₃О₃8⁺ (М^) 338,1158, найдено 338,1171.

Сложный метиловый эфир 4-гидрокси-5-метил-5-октил-2-оксо-2,5-дигидротиофен-3-карбоновой кислоты (70)

- 24 013371

Из соединения 32 (91 мг, 0,37 ммоль), метилхлорформиата (63 мкл, 0,81 ммоль), диметиламинопиридина (ОМАР) (23 мг, 0,18 ммоль) и ΝΕΐ₃ (108 мкл, 0,77 ммоль), следуя общей методике Ь, после флэшхроматографии (30% ЕЮАс/2% АсОН/гексан - 10% ТТФ/2% АсОН/ЕЮАс) получали соединение 70 (66 мг, 59%, 79% в расчете на извлеченные исходные продукты).

'Н ЯМР (300 МГц, МеОН) δ 0,86 (т, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,20 (ш.с, 12Н), 1,35 (с, 3Н), 1,55 (м, 1Н), 1,711,75 (м, 1Н), 3,59 (с, 3Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, МеОН) δ 13,3, 21,8, 24,4, 27,0, 28,5, 28,6, 29,0, 30,2, 31,0, 50,4, 58,3, 124,6, 168,1, 187,7, 196,7.

НКМ8 (Е1) т/ζ вычислено для С1₅Н₂₄О₄8⁺ (М⁺) 300,1389, найдено 300,1375.

2-Метил-2-октил-5-оксо-2,5-дигидротиофен-3-иловый эфир изопропилкарбаминовой кислоты (71)

К соединению 32 (46 мг, 0,19 ммоль), растворенному в гексане, добавляли триэтиламин (43 мкл, 0,31 ммоль) и триметилсилилхлорид (36 мкл, 0,29 ммоль) и раствору давали возможность перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 ч, смесь фильтровали через рыхлый слой целита и выпаривали с получением 5-метил-5-октил-4-триметилсиланилокси-5Н-тиофен-2-она, который повторно растворяли в СН₂С1₂ (0,4 мл). К полученной смеси добавляли изопропилизоцианат (19,2 мл, 0,19 ммоль) и раствору давали возможность перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли N^01 (насыщенный) (5 мл) и смесь экстрагировали СН₂С1₂ (3x10 мл). Органические слои объединяли, сушили (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали с получением неочищенного соединения 71. После флэшхроматографии (смесь 20% ЕЮАс/2% АсОН/гексан) получали чистое соединение 71 (35 мг, 60%).

'Н ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 0,85 (т, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,14-1,24 (м, 17Н), 1,45 (м, 1Н), 1,63 (с, 3Н), 1,761,79 (м, 2Н), 3,81-3,88 (м, 1Н), 5,16 (д, 1=7 Гц, 1Н), 6,33 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОС1_;) δ 13,9, 20,4, 22,5, 22,8, 25,1, 25,9, 29,1, 29,3, 29,5, 31,8, 38,7, 44,0, 60,2,

111,6, 149,7, 176,2, 194,5.

Общая методика Μ.

№-(2-Фуранкарбонил)гидразид (±)-(5-метил-5-октил-2-оксотиофен-4-илокси)уксусной кислоты (72).

К охлажденному раствору (0°С) соединения 53 (100 мг, 0,33 ммоль) в СН₂С1₂ (1/61 мл) добавляли гидрохлорид 1-[3-диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимида (ЕЭС) (128 мг, 0,43 ммоль), ОМАР (6,0 мг, 0,05 ммоль) и гидразид 2-фуранкарбоновой кислоты (54 мг, 0,43 ммоль). Образовавшуюся смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин, затем ей давали возможность нагреваться до комнатной температуры и перемешиваться в течение 12 ч. Раствор вливали в Ν^Ο (10 мл, насыщенный) и экстрагировали СН₂С1₂ (3x10 мл). Объединенные органические слои сушили (№₂8О₄), фильтровали и выпаривали с получением неочищенного соединения 72. После флэш-хроматографии (смесь 10% Е1ОАс/гексан) получали чистое соединение 72 (91 мг, 68%).

'|| ЯМР (400 МГц, ГОСТ) δ 0,84 (т, 1=6,6 Гц, 3Н), 1,21 (м, 11Н), 1,43-1,47 (м, 1Н), 1,66 (с, 3Н), 1,81-

1,86 (м, 2Н), 4,64 (с, 2Н), 5,42 (с, 1Н), 6,47 (дд, 1=1,6, 3,6 Гц, 1Н), 7,16 (д, 1=4 Гц, 1Н), 7,45 (м, 1Н), 9,32 (д, 1=4 Гц, 1Н), 9,44 (д, 1=4 Гц, 1Н);

¹³С ЯМР (100 МГц, ГОСТ) δ 14,0, 22,6, 25,3, 26,0, 29,2, 29,3, 29,5, 31,7, 38,8, 59,7, 69,1, 103,0, 112,3, 116,5, 145,1, 145,4, 156,4, 164,2, 184,8, 193,9.

Ν'-Ацетилгидразид (±)-(5-метил-5-октил-2-оксотиофен-4-илокси)уксусной кислоты (73)

Из соединения 53 (100 мг, 0,33 ммоль) и уксусного гидразида (26,8 мг, 0,36 ммоль), следуя общей методике М, после флэш-хроматографии (смесь 2% АсОН/ЕЮАс) получали соединение 73 (70,4 мг, 60%).

Ίί ЯМР (400 МГц, ГОСТ) δ 0,85 (т, 1=7,2 Гц, 3Н), 1,23 (м, 11Н), 1,48-1,52 (м, 1Н), 1,67 (с, 3Н), 1,84-

1,86 (м, 2Н), 2,07 (с, 3Н), 4,64 (с, 2Н), 5,42 (с, 1н);

- 25 013371 ¹³С ЯМР (100 МГц, СЭС1₃) δ 14,1, 20,6, 22,6, 25,2, 26,0, 29,2, 29,3, 29,5, 31,8, 38,8, 59,8, 68,9, 102,9, 163,1, 168,1, 184,9, 194,2.

Ы'-(4-Хлорфенил)гидразид (±)-(5-метил-5-октил-2-оксотиофен-4-илокси)уксусной кислоты (74)

Из соединения 53 (100 мг, 0,33 ммоль) и гидрохлорида 4-хлорфенилгидразина (76,8 мг, 0,43 ммоль), следуя общей методике М, после флэш-хроматографии (смесь 50% ЕЮЛс/гексан) получали соединение 74 (74 мг, 53%).

Ή ЯМР (300 МГц, СЭС1₃) δ 0,86 (т, 1=6 Гц, 3Н), 1,24 (м, 11Н), 1,46-1,54 (м, 1Н), 1,71 (с, 3Н), 1,821,90 (м, 2Н), 4,57 (с, 2Н), 5,39 (с, 1Н), 6,75 (д, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,18 (д, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,38 (с, 1Н), 8,09 (с, 1Н);

¹³С ЯМР (100 МГц, СЭС1₃) δ 14,1, 22,6, 25,3, 26,1, 29,2, 29,3, 29,5, 31,8, 38,8, 59,7, 69,7, 103,2, 114,7,

126,4, 145,8, 129,2, 165,9, 184,3, 193,5;

ИК (ЫаС1) 2957, 1695, 1658, 1609 см^-1.

(±)-Ы-Аллил-Х-метил-(5-метил-5-октил-2-оксотиофен-4-илокси)ацетамид (75)

Из соединения 53 (83 мг, 0,28 ммоль) и Ы-метил-Ы-аллиламина (29 мкл, 0,30 ммоль), следуя общей методике М, после флэш-хроматографии (смесь 40% ЕЮЛс/гексан) получали соединение 75 (51 мг, 52%).

Ή ЯМР (300 МГц, СЭС1₃) δ 0,83 (т, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,22 (м, 11Н), 1,43-1,47 (м, 1Н), 1,67 (с, 3Н), 1,82-

1,86 (м, 2Н), ротамер 1: 2,91 (с, 3Н), ротамер 2: 2,95 (с, 3Н), ротамер 1: 3,84 (д, 1=4,8 Гц, 2Н), ротамер 2: 3,98 (д, 1=6 Гц, 2Н), ротамер 1: 4,62 (с, 2Н), ротамер 2: 4,65 (с, 2Н), 5,12-5,28 (м, 2Н), ротамер 1: 5,18 (с, 1Н), ротамер 2: 5,25 (с, 1Н), 5,65-5,81 (м, 1Н);

¹³С ЯМР (100 МГц, СЭС1₃) δ 14,0, 22,5, 25,1, 26,2, 29,1, 29,3, 29,4, 31,7, 33,4 (ротамер 2: 33,9), 38,8, 50,2 (ротамер 2: 51,0), 59,7, 69,0 (ротамер 2: 69,3), 102,3, 117,4 (ротамер 2: 118,2), 131,6 (ротамер 2: 131,8), 164,5 (ротамер 2: 164,9), 185,5 (ротамер 2: 185,6), 193,4.

(±)-4-Бензилокси-3,5-диметил-5-октил-5Н-тиофен-2-он (76)

Из соединения 32 (50 мг, 0,21 ммоль) и бензилбромида (37 мл, 0,31 ммоль), следуя общей методике Н, после флэш-хроматографии (смесь 15% ЕЮЛс/гексан) получали соединение 76 (49 мг, 75%).

Ή ЯМР (300 МГц, СЭС1₃) δ 0,86 (т, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,24 (м, 11Н), 1,41-1,48 (м, 1Н), 1,66 (с, 3Н), 1,79-

1,86 (м, 2Н), 4,98 (с, 2Н), 5,39 (с, 1Н), 7,31-7,42 (м, 5Н);

¹³С ЯМР (100 МГц, СЭС1₃) δ 14,1, 22,6, 25,0, 26,4, 29,1, 29,3, 29,4, 31,8, 38,8, 59,7, 74,0, 102,2, 127,6, 128,8, 128,8, 134,3, 185,8, 194,1;

ИК (ЫаС1) 2928, 1681, 1610 см^-1.

Ссылки

1. 8!гу!уееи, В.; Ке11одд, В.М. Тейайебгои, 1987, 43, 5039-5054.

2. 8а§ак1, Н.; О1§Ы, Н.; НауакЫ, Т.; МаЦиига, I.; Либо К.; 8а\уаба. М. 1. ЛибЫобск, 1982.

3. Кишеба, Т.; ЫадатаЦи, Т.; ШдисЫ, Т.; НпоЬе, М. Те!гайебгои ЬеП. 1988, 29, 2203-2206.

Биологические и биохимические методы

Очистка ЕЛ8 от клеток карциномы человеческой молочной железы ΖΡ-75-1.

Человеческую ЕЛ8 очищали от культивированных клеток карциномы человеческой молочной железы ΖВ-75-1, полученных из Коллекции американских типовых культур. В методике, применяемой Ыпп е! а1., 1981 и КиНа)ба е! а1., 1994, используется гипотонический лизис, последовательные осаждения полиэтиленгликолем (ПЭГ) и анионообменная хроматография. Клетки ΖВ-75-1 выращивали при 37°С в культуральной среде ВРМф содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки, пенициллин и стрептомицин, в атмосфере, содержащей 5% СО2.

- 26 013371

Десять колб Т150 со слитыми клетками лизировали с использованием 1,5 мл лизирующего буфера (20 мМ трис-НС1, рН 7,5, 1 мМ ЭДТК (ЕЭТА), 0,1 мМ фенилметансульфонилфторида (РМ8Г), 0,1% [дера1 Са-630) и образованную смесь гомогенизировали на льду, применяя 20 усилий. Лизат центрифугировали в роторе 1А-20 (Весктаи) со скоростью 20000 об/мин в течение 30 мин при 4°С и супернатант контактировали с 42 мл лизирующего буфера. К супернатанту медленно добавляли раствор 50% ПЭГ (РЕС) 8000 в лизирующем буфере до получения конечной концентрации 7,5%. После встряхивания в течение 60 мин при 4°С раствор центрифугировали в роторе 1А-20 (Бекман) со скоростью 15000 об/мин в течение 30 мин при 4°С. Затем к супернатанту добавляли твердый ПЭГ 8000 до получения конечной концентрации 15%. После повторения встряхивания и центрифугирования, как указывалось выше, осадок после центрифугирования ресуспендировали на протяжении ночи при 4°С в 10 мл буфера А (20 мМ К₂НРО₄, рН 7,4). После отфильтровывания 0,45 мкМ белковый раствор помещали на анионообменную колонку Моио 0 5/5 (РйагтаОа). Колонку промывали в течение 15 мин буфером А со скоростью 1 мл/мин и связанное вещество элюировали с 60 мл линейным градиентом в течение 60 мин до получения 1 М КС1. ГА8 (ММ (М\У) ~270 кЭ) обычно вымывается при концентрации КС1 0,25 М в трех 0,5 мл фракциях, как было установлено с использованием 4-15% δΌδ-РАСЕ и красителя Кумасси С-250 (В1о Раб). Концентрация белка в ГА8 определялась с использованием реагента для анализа белка + реагент Кумасси (Р1егсе) в соответствии с инструкциями производителя и использованием в качестве стандарта В8А (альбумина бычьей сыворотки). В результате осуществления данной методики получали, по существу, чистые препараты ГА8 (>95%), как было установлено с помощью окрашенных красителем Кумасси гелей.

Измерение ферментативной активности ГА8 и определение Κ'₅₀ соединений.

Активность ГА8 измеряли путем непрерывного спектрофотометрического контроля, зависимого от малонил-КоА окисления ЫАЭРН в 96-луночных планшетах при ΟΌ₃₄₀ (Όί1κ е! а1. и Агк1ашаи е! а1., 1975). Каждая лунка содержала 2 мкг очищенной ГА8, 100 мМ К₂НРО₄, рН 6,5, 1 мМ дитиотреита (81дта) и 187,5 мкМ З-ИАЭРН (81дта). Приготавливали исходные растворы ингибиторов в ДМСО с концентрациями 2, 1 и 0,5 мг/мл, которые обеспечивали конечные концентрации 20, 10 и 5 мкг/мл, когда в лунку добавляли 1 мкл исходного раствора. В каждом эксперименте использовали церуленин (8щта) в качестве положительного контроля, а также ДМСО контроль, ингибиторы и бланки (фермент ГА8 отсутствовал) (слепой опыт), причем все из них использовали в двух повторах.

Анализ осуществляли на масс-спектрометре и спектрофотометре фирмы Мо1еси1аг Эеу1сек. Планшет, содержащий ГА8, буферы, ингибиторы и контроли, помещали в спектрофотометр, нагретый до 37°С. С использованием протокола кинетики в лунки (в двух повторах) помещали бланки, содержащие 100 мкл 100 мМ К₂НРО₄, рН 6,5, и осуществляли считывание планшета при ΟΌ₃₄₀ в течение 5 мин с 10-секундными интервалами для измерения независимого от малонил-КоА окисления ЫАЭРН. Планшет удаляли из спектрофотометра и в каждую лунку, кроме бланков, добавляли малонил-КоА (конечная концентрация в лунке 67,4 мкМ) и алкинил-КоА (конечная концентрация в лунке 61,8 мкМ). Для измерения зависимого от малонил-КоА окисления ЫАЭРН планшет опять считывали, как указывалось выше, с использованием протокола кинетики. Разница между ΔΟΌ₃₄₀ для зависимого от малонил-КоА и независимого от малонил-КоА окисления ЫАЭРН представляла собой специфическую активность ГА8. Вследствие чистоты препарата ГА8, независимое от малонил-КоА окисление ЫАЭРН являлось незначительным.

ГС50 соединений изобретения против ГА8 определялась построением графика зависимости ΔΟΌ₃₄₀ от каждой тестируемой концентрации ингибитора, проведением линейной регрессии и вычислением линии наибольшего соответствия, значений г² и 95% доверительных интервалов. Концентрация соединения, дающая 50% ингибирование ГА8, представляла собой ^₅₀. Строили графики зависимости ΔΟΌ₃₄₀ от времени, используя компьютерное обеспечение 8ΟΡТ макс. ΡΒΟ (Мо1еси1аг Оеуюек), для каждой концентрации соединения. Компьютеризацию линейной регрессии, линии наибольшего соответствия, г² и 95% доверительных интервалов осуществляли с использованием версии 3.0 Рпкт (компьютерное обеспечение Сгарй Раб).

Анализ роста клеток с использованием кристаллического фиолетового.

Анализ с использованием кристаллического фиолетового определяет рост клеток, но не цитотоксичность. В данном анализе применялось окрашивание кристаллическим фиолетовым фиксированных в 96-луночных планшетах клеток с последующей солюбилизацией и измерением ΟΌ₃₄₀ на спектрофотометре. ΟΌ₃₄₀ соответствует росту клеток в единицу времени измерения. Клетки обрабатывали представляющими интерес соединениями или контрольным наполнителем и вычисляли Κ'₅₀ для каждого соединения.

Для измерения цитотоксичности отдельных соединений против клеток карциномы, 5х10⁴ клеток карциномы человеческой молочной железы МСГ-7, полученных из Коллекции американских типовых культур, высевали в ячейки 24-ячеечных пластин в ОМЕМ среду, содержащую 10% фетальную телячью сыворотку, пенициллин и стрептомицин. После инкубирования в течение ночи при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО₂, в ячейки (в трех повторах) объемом 1 мкл добавляли подлежащие тестированию соединения, растворенные в ДМСО, имеющие следующие концентрации: 50, 40, 30 20 и 10 мкг/мл. В

- 27 013371 случае необходимости тестировали дополнительные концентрации. В ячейки (в трех повторах) добавляли 1 мкл контрольного наполнителя ДМСО. В качестве положительных контролей использовали С75 с концентрациями 10 и 5 мкг/мл (в трех повторах).

Через 72 ч инкубирования клетки окрашивали 0,5 мл красителя кристаллического фиолетового (0,5% в 25% метаноле) в каждой ячейке. Через 10 мин ячейки промывали, сушили на воздухе и затем солюбилизировали с использованием 0,5 мл 10% додецилсульфата натрия при встряхивании в течение 2 ч. После переноса 100 мкл из каждой ячейки в 96-луночные планшеты осуществляли считывание планшета при ΘΌ₃₄ο на масс-спектрометре и спектрофотометре фирмы Мо1еси1аг Όονίοοδ. Вычисляли средние значения ΟΌ₃₄₀ с использованием компьютерного обеспечения 8ΟΡΤ макс. Рго (Мо1еси1аг Эеу1се5) и определяли значения 1С₅₀ методом линейной регрессии с использованием компьютерной версии 3.02 РгСш (компьютерное обеспечение СгарН Рай, Сан-Диего).

Анализ цитотоксичности ХТТ.

Анализ цитотоксичности ХТТ является нерадиоактивной альтернативой анализу цитотоксичности с высвобождением [⁵¹Сг]. ХТТ является тетразолиевой солью, которая восстанавливается до формазанового красителя под воздействием только метаболически активных, жизнеспособных клеток. Восстановление ХТТ определяли спектрофотометрически в виде ΟΌ₄₉₀-ΟΌ₆5₀.

Для измерения цитотоксичности отдельных соединений против клеток карциномы, 9х10³ клеток карциномы человеческой молочной железы МСР-7, полученных из Коллекции американский типовых культур, высевали в лунки 96-луночных планшетов в ΌΜΕΜ среду, содержащую 19% фетальную телячью сыворотку, инсулин, пенициллин и стрептомицин. После инкубирования при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО₂, в лунки (в трех повторах) объемом 1 мкл добавляли подлежащие тестированию соединения, растворенные в ДМСО, имеющие следующие концентрации: 80, 40, 20, 10, 5, 2,5, 1,25 и 0,625 мкг/мл. В случае необходимости тестировали дополнительные концентрации. В лунки (в трех повторах) добавляли 1 мкл ДМСО, который представлял собой контрольный наполнитель. В качестве положительных контролей использовали С75 с концентрациями 40, 20, 10, 15, 12,5, 10 и 5 мкг/мл в трех повторах. Через 72 ч инкубирования клетки инкубировали в течение 4 ч с ХТТ реагентом в соответствии с инструкциями производителя (комплект II (ХТТ) для пролиферации клеток, ЕосНе). Планшеты считывали при ΟΌ₄₉₀ и ΟΌ₆₅₀ на масс-спектрометре и спектрофотометре фирмы Мо1еси1аг Эеу1се5. Три лунки, содержащие ХТТ реагент без клеток, служили в качестве планшетного бланка. Данные представляли в виде ΟΌ₄₉₀-ΟΌ₆5₀. Средние значения и стандартную ошибку среднего вычисляли с использованием компьютерного обеспечения 8ΟΡΤ макс. Рго (Мо1еси1аг ОеСсеЦ.

1С₅₀ соединений определялась как концентрация лекарственного средства, приводящая к уменьшению ΟΌ490 - Ο^₆8о на 50% по сравнению с контролями. ΟΌ₄₉₀-ΟΌ₆5₀ вычисляли с использованием компьютерного обеспечения 8ΟΡΤ макс. Рго (Мо1еси1аг Эеу1се5) для каждой концентрации соединения. 1С₅₀ рассчитывали линейной регрессией, построением графика зависимости активности ΡΑ8, выраженной в виде процента относительно значения для контроля, от концентрации лекарственного средства. Линейную регрессию, линию наибольшего соответствия, значения г² и 95% доверительные интервалы определяли с использованием версии 3.0 РгБш (компьютерное обеспечение СгарН Рай).

Измерение включения [¹⁴С] ацетата в общие липиды и определение 1С₅₀ соединений.

В данном анализе определялось включение [¹⁴С] ацетата в общие липиды, которое является мерой активности пути синтеза жирных кислот ίη уйго. Он использовался для измерения ингибирования синтеза жирных кислот ίη νίΐΙΌ.

Культивированные, как указывалось выше, клетки карциномы человеческой молочной железы МСР-7 высевали в ячейки 24-ячеечных пластин при концентрации 5х10⁴ клеток в ячейке. После инкубирования в течение ночи подлежащие тестированию соединения, солюбилизированные в ДМСО, добавляли в ячейки при концентрациях 5, 10 и 20 мкг/мл, причем в трех повторах, при этом в случае необходимости тестировали более низкие концентрации. В лунки (в трех повторах) добавляли ДМСО, который представлял собой контрольный наполнитель. В качестве положительных контролей использовали С75 с концентрациями 5 и 10 мкг/мл в трех повторах. Через 4 ч инкубирования в каждую ячейку добавляли 0,25 мкКи [¹⁴С] ацетата (объем 10 мкл).

Через 2 ч дополнительного инкубирования из ячеек удаляли отсасыванием среду и в каждую ячейку добавляли 800 мкл смеси хлороформ:метанол (2:1) и 700 мкл 4 мМ МдС1₂. Содержимое каждой ячейки переносили в пробирки Эппендорфа объемом 1,5 мл и на полной скорости вращали в течение 2 мин в высокоскоростной микроцентрифуге Эппендорфа 5415Ό. После удаления водного (верхнего) слоя в каждую пробирку дополнительно добавляли 700 мкл смеси хлороформ: метанол (2:1) и 500 мкл 4 мМ МдС1₂ и затем центрифугировали, как указывалось выше, в течение 1 мин. Водный слой удаляли пипеткой Пастера и отбрасывали. В каждую пробирку дополнительно добавляли 400 мкл смеси хлороформ:метанол (2:1) и 200 мкл 4 мМ МдС1₂, затем центрифугировали и отбрасывали водный слой. Нижнюю (органическую) фазу переносили в сцинтилляционную пробирку и сушили при 40°С под Ν₂ газом. После сушки добавляли 3 мл сцинтиллятора (АРВ № NΒС 5104) и осуществляли количественное определение ¹⁴С в пробирках. С использованием сцинтилляционного счетчика Бекмана рассчитывали средние значения

- 28 013371 срт для трех повторов.

1С₅₀ соединений определялась как концентрация лекарственного средства, приводящая к 50% уменьшению включения [¹⁴С] ацетата в липиды по сравнению с контролями. Она определялась построением графика зависимости среднего значения срт от каждой тестируемой концентрации ингибитора, осуществлением линейной регрессии и вычислением линии наибольшего соответствия, значений г² и 95% доверительных интервалов. Средние значения срт вычисляли с помощью сцинтилляционного счетчика Бекмана (модель Ь8 6500) для каждой концентрации соединения. Компьютеризацию линейной регрессии, линии наибольшего соответствия, г² и 95% доверительных интервалов осуществляли с использованием версии 3.0 Рамп (компьютерное обеспечение СгарН Раб).

Анализ карнитинпальмитоилтрансферазы-1 (СРТ-1).

СРТ-1 катализирует АТФ-зависимый перенос длинноцепочечных жирных кислот из ацил-КоА в ацилкарнитин, который ингибируется малонил-КоА. Поскольку для активности СРТ-1 требуется митохондриальная мембрана, ферментативная активность измерялась в способных к пропусканию клетках или митохондриях. В данном анализе способные к пропусканию клетки использовались для измерения переноса [метил-¹⁴С] Ь-карнитина в органически растворимое производное ацилкарнитина.

Клетки МСЕ-7 высевали на 24-ячеечные пластины в ЭМЕМ среду с 10% фетальной телячьей сывороткой при концентрации 10⁶ клеток, взятые в трех повторах: для контролей, лекарственных средств и малонил-КоА. За 2 ч до завершения анализа добавляли лекарственные средства при указанных концентрациях, полученных из исходных растворов в ДМСО с концентрацией 10 мг/мл, контрольный наполнитель, состоящий из ДМСО и не содержащий лекарственного средства. Поскольку малонил-КоА не может поступать в интактные клетки, его добавляли к клеткам только в используемом для анализа буфере, которые не были предварительно инкубированы с лекарственными средствами. После инкубирования в течение ночи при 37°С среду удаляли и заменяли 700 мкл используемого в анализе буфера, состоящего из 50 мМ имидазола, 70 мМ КС1, 80 мМ сахарозы, 1 мМ Е6ТА, 2 мМ МдС12, 1 мМ ЭТТ, 1 мМ КСН 1 мМ АТФ, 0,1% бычьего сывороточного альбумина, не содержащего жирных кислот, 70 мкМ пальмитоил-КоА, 0,25 мкКи [метил-¹⁴С] Ь-карнитина, 40 мкг дигитонина с лекарственным средством, контрольного наполнителя ДМСО или 20 мкМ малонил-КоА. Концентрации лекарственных средств и ДМСО в используемом для анализа буфере являются такими же, как те, которые использовались при 2-часовом предварительном инкубировании. После инкубирования в течение 6 мин при 37°С реакцию прекращали добавлением 500 мкл охлажденной льдом 4 М перхлорной кислоты. Затем клетки собирали и центрифугировали при 13000хд в течение 5 мин. Осадок после центрифугирования опять промывали 500 мкл охлажденной льдом перхлорной кислоты и центрифугировали. Образованный осадок ресуспендировали в 800 мкл бН2О и экстрагировали 150 мкл бутанола. Бутанольную фазу, представляющую собой производное ацилкарнитина, определяли количественно с помощью жидкостной сцинтилляции.

Проверка новых ингибиторов ЕА8 на их способность к снижению веса.

Для проверки новых ингибиторов на их способность к снижению исходного веса использовали мышей Ва1Ь/С (1аск§оп ЬаЬз). Животных поселяли в отапливаемые помещения с 12-часовым циклом чередования дня и ночи и мышам давали корм и воду без ограничения. Для каждого тестируемого соединения с контрольным наполнителем в трех повторах в эксперименте использовали трех мышей. При проведении экспериментов трех мышей для каждого тестируемого соединения помещали отдельно в клетку. Соединения разбавляли в ДМСО до концентрации 10 мг/мл и вводили внутрибрюшинно дозу 60 мг/кг примерно в 100 мкл ДМСО или только наполнитель. Мышей наблюдали и ежедневно взвешивали; вычисляли средние массы и стандартные ошибки с использованием программного обеспечения Ехсе1 (М1сго§ой). Эксперимент продолжали до тех пор, пока обработанные животные достигали своего веса до обработки.

Выбранные соединения тестировали на животных, помещенных в метаболические клетки. Дозирование животным было идентично дозированию животным в экспериментах по проверке ингибиторов, в которых трех животных помещали в одну метаболическую клетку. Ежедневно измеряли вес животных, потребление ими пищи и воды и продуцирование мочи и фекалий. Результаты тестирования соединений 21 и 44 показаны на фиг. 11.

Антимикробные свойства.

Для оценки антимикробной активности соединений использовали анализ микроразбавления бульона. Соединения тестировали при двукратных последовательных разбавлениях и концентрации, ингибирующие видимый рост (ОЭ₆₀₀ при 10% контроля), определяли как М1С. Тестируемые микроорганизмы включали §!арйу1ососси8 аигеиз (АТСС № 29213), Еп!егососси§ ГаесаВз (АТСС № 29212), Рзеиботопаз аешдтока (АТСС № 27853) и ЕзсНепсЫа со11 (АТСС № 25922). Анализ осуществляли в двух питательных средах: бульон Мюллера-Хинтона и триптиказо-соевый бульон.

Чашку или пластину с кровяным агаром (Т-соя (Тзоу)/5% крови овцы) засевали замороженной биомассой, сохраняемой в Т-соевом бульоне, содержащем 10% глицерина, и инкубировали всю ночь при 37°С. Колонии суспендировали в стерильном бульоне с тем, чтобы помутнение соответствовало помутнению 0,5 стандарта Мс Еаг1апб. Инокулят разбавляли стерильным бульоном (Мюллер-Хинтон или

- 29 013371 триптиказо-соевый) при соотношении 1:10 и 195 мкл распределяли по лункам 96-луночных планшетов. Подлежащие тестированию соединения, растворенные в ДМСО, добавляли в лунки (в двух повторах) в объеме 5 мкл при следующих концентрациях: 25, 12,5, 6,25, 3,125, 1,56 и 0,78 мкл/мл. В случае необходимости тестировали дополнительные концентрации. В лунки (в двух повторах) добавляли 5 мкл ДМСО, который представлял собой контрольный наполнитель. В каждый опыт включали последовательные разбавления положительных контрольных соединений: ванкомицина (Е. £аеса115 и 8. аигеик) и тобрамицина (Е. сой и Р. аегидтока).

Через 24 ч инкубирования при 37°С осуществляли считывание пластин при ОЭ₆₀₀ на массспектрометре и спектрофотометре фирмы Мо1еси1аг Эеу1се5. Вычисляли средние значения ОЭ₆₀₀ с использованием компьютерного обеспечения 8ОРТ макс. Рго (Мо1еси1аг Эеу1се5) и определяли значения М1С методом линейной регрессии с использованием компьютерной версии 3.02 Рпкт (компьютерное обеспечение Сгарй Раб, Сан-Диего). М1С определялась как концентрация соединения, необходимая для получения показания ОЭ₆₀₀. эквивалентного показанию для 10% контрольного наполнителя.

Тестирование противоопухолевой активности ίη угуо.

Результаты данного эксперимента показаны на фиг. 12. Для исследования противоопухолевых действий соединения 36 ίη угуо использовали расположенные сбоку у мышей-самок (Наг1ап) подкожные ксенотрансплантаты линии человеческих клеток рака ободочной кишки НСТ-116. Все эксперименты, проводимые на животных, выполнялись в соответствии с руководством по уходу за животными, помещенными в ветеринарную лечебницу. 10⁷ Клеток НСТ-116 (~0,1 мл клеточной массы) ксенотрансплантировали из культуры в ЭМЕМ, дополненной 10% РВ8, 10 бестимусным мышам (не имеющим вилочковой железы). Обработка начиналась в то время, когда через 4 дня после инокуляции развивались поддающиеся измерению опухоли. Соединение 36 (10 мг/кг) разбавляли в 20 мкл ДМСО и вводили внутрибрюшинно (ί.ρ.). Пять животных получали 1ММ-П-265 внутрибрюшинно в дни, указанные стрелками на фиг. 11, и пять получали контрольный ДМСО. Опухоли измеряли в указанные дни. Отклонения в результатах представляли собой стандартную ошибку среднего.

Результаты биологического тестирования (табл. 3).

Таблица 3

- 30 013371

* Л-Н НсинккмГон 33	рлзас»)	испс^1 I χτταω	Кр.фиол.(!С™)
незначительный	163 +3«8мк1*/мл >80мкг/мл	>50 мкг/мл
СУП Стимул. | Снижение веса
Не тестировался 60хг/кг. 3 оГ 3 умерло <л«»4)
КА/МН (МКЛ	ЗАЛЗоуМКЛ	рзав/мшмю	Р5АЕ/Т*оу(М1С)
41 икг/ил	31 мкг/мл	незначительный	незначительный
тамнсмю	БЕГПюуОДа	всошмнлла	ВсоНЛГдаЛМЮ
98 мкг/мл	43 мкг/мп	незначительный	незначительный

РА8(Ю«,>	**С(1С«1 ] хтгасл | кр.фиол.аси
45 икг/мл	12.6 + 4.4 мкг/мл’ 17.6 ♦ 0.1мкг/мл 28.7 мкг/мп

СРТ1 Стимул .|	Снижение веса
Не тестировался'	60 кг/кг'2% и 03%(»ьы1 30ят/кт:4.8%<л«иьЗ)

ммнола	8Α/Γίθΐ1Μΐα	Р8АЕ/МН (М1С)	Ρ3ΑΒ/Τϊον(Μΐα
незначительный	47 мкг/мл	незначительный	незначительный

ВРЛЛКМКЛ	ΕΡΛΓ»ον(Μΐα	ВмШМНОПСЛ	ВсоН/Т5оу(М1О
16.9 мкг/ил	3+3 мкг/мл	незначительный	278икг/мл

	Елгаев	•гас»)	ХГГПСе) 1 кр.фиол.ПСиЗ
	49.2+1.9 мкг/мл	163 + 5.7мкг/мл	48.0+ 1,4мкг/мл'	29+4 + 43мкг/мл
, 1 1	СРТ1Стимул.	Снижение веса
<*> дА-сн,	Не тестировался	60мг/нг:0%(>*>ыХ ЗОмт/кт +1% (атЦ.
►ЪСЧНгС^Ме он	5А/МНСМ1С)	ЗА/ТгоуОЛЮ	РЗАВМНОЛО	ΚΛΕΠΤβονίΜία
	45 + 2 мкг/мл	233+04 икг/мл	незначительный	незначительный
34
	ЕР/МН(МКЛ	ер/тодмгс)	Есо1КМН(М1С)	Есо1|/ТМ)У(М10
	44мкг/мл	105 икг/мл	незначительный	290 мкг/мп

РАЗ (1&0	“СЛСк)....	χτταω	^.фиол.ДСа,)
незначительный	14.0 + 2.8 мкг/мл	94+1.5 мкг/мл	26*3 мкг/мл
СРП Стимул. |	Снижение веса
не тестировался бОит/кгЗ оГЗ умерло (л—·ι> ЭОиг/кг 1.7% (л*нь1)
Юнг/кгС»™»»·»·!: 1% (дяяьЗ)
5А/МНШЮ	ЯАГПкММЮ	ряАВМнаас	Р5АБ/Т$оу(М1С)
45 мкг/мл	4$мкг/нл	незначительный	незначительный
ΕΡ/ΜΗίΜία	ΕΡ/ΓϊονίΜΙΟ	ЕсоЕИЛНМГС»	Есой/Г мн4М1а
43 мкг/мл	126 икг/мл	незначительный	264 мкг/мл

- 31 013371

* Л-и НзС^СКмГоМо 35	РАЗ (XV)	спел	ХГГЯС»)	Кр.фмшт. ПС»)
1М»Н*Ш1!МЛЬМКЙ	11.0 мкг/мл	16Л + 23мкг/мл	21.4 мкг/мл
СРП Стимул.	Снижение веса |
Я* тестировался	60»/ккбЛ«(»«.Л, ,30кг/кг:0 И 5.7%<д«*е)
5А/МНОЛО I ЗАЛыМЬЯС)	РЗАЕ/МШМ1О	РЗАВ/Тку (ΜΙΟ
252 мкг/мл 1 67 мкг/мл	тмягояюдожмй	миилжпшш
ΕΓ/ΜΗ1ΜΙΟ	ЕР/Тяг4М1С)	Ем№МН№ПО	ЕсойГГюуГМС)
72 мкг/ил	меиееямлмшй	шмпшмяьжнй	жшеплмльаий

	РАЗ ПС»)	’ΐίΙΟ»)	ХТГПСвЪ	Кр.бхолм.ПСи)
		63.8 мкг/ил		15.9 +1 Эмкг/мл
я е 1	СРТ1 Стимул.	Снижение веса
(*) з-А-сн»	К* тестировало·	Н« теаппфсвалвя
	ЗА/МН(МЮ)	ЗА/Ъотч'МГС)	РЗАЕ/МНОДО	РЗАЕГЬоуОПО
	132 мкг/ил	108мкг/мл	МЗКАЧМФММНЙ	»»*-***«**Т ре. Т—
37
ερ/μηγμιο	врльотода	ВсЫШНЛЯО	ВсоЦ/ТтГМЮ)
	208 ист/мл	94 мкг/мл	каазсачзателвннй	шяминаяй

ю >ун 45	РАЗ ПС»)	-спад	хггасл	Кр. фкожп. (Юа)
н*>яаюсъелыа1б	эдмзвчмтелшкй	9.0 + 1.1мкг/мл	(.1 ККГ/мл
СРП Стимул.	Снижение веса
Ве тестировался	60»<т/кл-.2оГЗ умерло («—30хг/кг:8.8% <ж»на2)
5А/МН (ΜΙΟ	ЗАЛШЯЛО	РЗАЕЛЛНОЯО	РЗАЕ/ТготОЛС)
73 мкг/мл	Я мкг/мл	«ика’игоелмшй	тевжалпи · дь |<мй
ЕР/МШМЮ	Ερσ»ν(Μΐο	одшнода	ВссКГГмгу (МС)
езватюолышй	158 мкг/мл	Н*»М*ЧКФМЬВДЙ	ввввачмтелышй

43	РАЗ ПС»)	,4С(1С,)	хтгас»)	Кр. фмоап. (Кил)
хввкачнвелышй	яе&тчявмъцкй	14Л + 1.5 мкг/мл	11.0 мкг/мл
СРТ1 Стимул.	Снижение веса
Я« тестировался	60хг/кк3<43умерло(д~з);30хг/кк4.7%>< ЭК <лек*2)
15нг/«г1 23% <лежь1)
ЗА/МНОЛО	ЗА/ТаоИМС) ] РЗАЕ/МНГМЮ)	РЗАЁПЪоу(МО
127 мкг/мл	85 икг/МЛ | «еана^имльжый	еавжвдмаымЙ
ΒΡ/ΜΗίΜΚΤ)	ЕР/Тэоу(МЮ	Вм&МН(М1С)	ВсоНПЪотОДС)
----238 мкг/мл--	108 мкг/мл	ИВЭШ1ЧЯтеДЪШ<Ж	ΙΐΟΙΚΠΜΐη 1 КИЙ

- 32 013371

о-\^ 47	РАВЛСп)	‘’οαοώ	хггис»)	1ф. фиояео, (1Сп)
Не шесляфовала*	еэмачмвеяышй	Не тегировался	15.1 мкг/ил
СТТ1 Стимул.	Снижение веса
Ме ееотфовалож	И· яесгаэдомлс*
8А/МНАДО	8А/Т«от(М1С)	Р5АЕ/МН(М1О	ΡδΑΕΤβονίΜΙΟ
Не еаатфваался	Не ееотюевало*	Не тестировался	Не ееовярсважк
ЕРОДКШС)	ВР/ТюИМЮ	ВсЫШН&ПС)	ВсоК/Т®оу(М10
Не тестировался	Не ееспфевмея	Не еоапфовался	Не теовпфомлся

	. РА8ОС.)	“сас»)\	ХТТЛС»!	Кр. фиолеш. ПСл)
	яеавеиммльшнй	23.1 +174 мкг/мл 55.0+2.0мкг/мл	223 мкг/мл
> Г'*	СРТIСтимул.	Снижение веса
	125%кожтроль	60мг/кт·; 7.9% и 8.0% (день!)
Ал	гЧж2<|««г*«1(МС₽7)
НаСрЬСЬ'ЪеЪн	5А/МН(МКП	ЯА/ГнпАОО	рзавллносо	Р5АЕ7Гя>у(М1СЗ
	ВФМгаеелъкнй	98мкг/мл	жеахачмтельмиА	иа^иаш—ед!ммй
44
№МН(МЮ	НР/ЙотОЛС)	ЕоЫШНМКЭ	ЕсоН7Гя>у(М10
	жемшгопельвцй	149мкг/мл	1»ЛГММШШЙ	вмяалпоецышй

	РАЗНО»!	«сасвЛ	ХТТПС»)	Кр< фмодеф. ПСчл)
	жездатамлъмкй	14.9 мкг/мл	50.4+4.7мкг/мл	>50 мкг/мл
	СРТ {Стимул.	Снижение веса
Не тСДИгеттяся	Не тонировался
ΛΙ-ΓΎ-
	ЗА/МНОДС)	ЗА/Гюу(М1С)	РЗАЕ/МНСМ1С)	РЗАВ/ТятуОИС)
гпт|г»1гм»пдт|й	97 мкг/мл	яыкжшклмкй	кеыягаммяышй
48
	вр/мнлао	ΕΡ/ΤκγίΜΙΟ	ЕпШМНАЛО	Всо1№оу(М10
	133 мкг/мл	91 икг/ил	иеамачктлышй	немшчт—ал ιπ,ιϊϊ

« Λ·-Η 49	РАЗ ПС»)	всяь5	ХГГЯСе,)	Кр.фиоле». ПС»)
яохачммлыщй	21.94-14.4 мкг/иг	8.9+ 23 мкг/мл	12.1 +1.5 мкг/мл
СРТ1Стимул.	Снижение веса
Ме каецромася	бОкт/кгтЗ оГЗ умерло ί««*2 >: ЭОмг/кт: 53% (декьЗ)
шмнгмкэ	5А/Г»у(М1О	Р8АЕ/МН(М1О	РЗАЕ/Тя>у (ΜΙΟ
53 мкг/ил	80 мкг/мл	кезначиеелышМ	неФначютелыаки
ВИМН(МКЛ	ЕР7Гы>у(М1С)	ВсоШМНОПО	Всо1РТ8оу(М1С)
ка*ж&чмееА11мй	83 мкг/мл	203мкг/мл	ПЧПИТПГТГ МЪГПР~1

- 33 013371

РА5(1С»)	С (Юм)	ХТГаСм)| кр.фиол.(1См)
незначительный	8.6 мкг/мл	20.8 + 0.9 мкг/мл	163 мкг/мл
СРПстимул.		Снижение веса
не тестировался	не тестировался
8А/МН(МЮ)	5Α/Τβον(ΜΙΟ	ΡδΑΒΜΗίΜΙΟ	РЗАВ/Тзоу (МС)
164 мкг/мл	50 мкг/мл	незначительный	незначительным
ЕР/МНСМЮ)	ЕР/Лоу(М1С)	ВсоШМНОДС)	ЕсоН/Тзоу (МЮ)
117 мкг/мл	165 мкг/мл	незначительный	незначительный

БАЛиН (МЮ

115 мкг/мл

разпсм)	..... сосёТ
незначительный	6.8 мкг/мл

СРП стимул.)	Снижение веса
1 не тестировался	не тестировался

аАЛвеяВДС)

134 мкг/мл

Р8АЕ/МН(МЮ) Ρ5ΑΕ/Τ5ΟΥ (М1О незначительный незначительный

ЕР/МН(МЮ)	ЕР/ТтеуОЛО	ВсоН/МНГМЮ)	ΕϋρΗ/ΤβσνίΜΙΟ
64 мкг/мп	незначительный	незначительный	незначительный

«Хн н^с Сг'Х-оа 40 0	РАЗ (Юн)	СОС.) | ХТГОСи) | ко.лиол.ПСе)
незначительный	14.2 ±0.2 мкг/мл 39.6 ±Х2 мкг/мл 17.0 мкг/мл
СРП	Снижение веса
не тестировался	не тестировался
5А/МН(М1О	ΚΑ/ΓβννίΜΙΟ	РЗАЕ/ΜΗίΝΠΟ	РЗАВ/Тя>у(М1С)
незначительный	129 мкг/мл	незначительный	незначительный
ВРХМНАЛО	ВРЯжлЛОС)	ВсоШМНГМЮ)	ΕβοΗΖΛονίΜΚ)
213 мкг/мл	незначительный	незначительный	281 мкг/мл

... РАЗ(Юн).	ИС(1С») . | ХГГПС») | КО.ЛИОЛ.0С»)
незначительный	10.8+ 5.8 мкг/мл’ 353 +10.4 мкг/мл 17ЛН* 5.1 мкг/ил
СРП стимул.	Снижение веса
та тестировался	60мг/кгЭ.8% и 3.6%(демьЦ30мг/кг4.5%(день!)
8А/МН(МЮ)	ЗАЛкоММЮ)	РЗАЕ/МН(МЮ)	РХАЕ/ГзоуЩЮ)
незначительный	83 мкг/мл	незначительный	незначительный
ЕР/МН(МЮ)	ВРЛЪоуШЮ)	ЕсоК/МН(МЮ)	ЕсЫИвотГМЮ)
86 мкг/мл	незначительный	незначительный	незначительный

- 34 013371

РАЗ ПС»)	“СОС.)	ХГГПСеЗ	Кр.фиол.ПСи)
	13.8+1.1 мкг/мл	50.3+Х8 мкг/мл	33.7 мкг/мл
СРТ1стимул.	Снижение веса
не веотмрожажся	не тестировался

ЗА/МНОЛО	ЗАЛюЛЛО	Р8АЕ/МНОЛО	Ρ8ΑΕΓΓ»ν(Μ]Ο
98мкг/ил	60 МКГ/мл	незначительный	незначительный

ЕР/МН(МКЭ	ЕР/Тшу(М1О	ЕсоВТЛНОЛО	ЕсоВЛвоуОЛО
77 мкг/мл	164 мкг/мл	незначительный	незначительный

раз ас»)	“сас»)	ХТГПСя)	Кр.*иол,ПС„)
незначительный	мезначитальный	12.1 + ОЛмкг/мл

СРТ1 стимул.	Снижение веса
я* театфсвало*	30 мг/кг; 1.8%(дмь/У 15хг/кг:0% (Д*нь1)

ЗАЛШОЛО	ХАЛгоуОЛО	РЯАЕ/МНОЛО	Р5АВ/Тк>у(М1О
28 мкг/мл	31 мкг/мл	незначительный	навн а читальный

ВР/МНОЛО	ЕРЛюуОЛС)	ВсЫШШМГС)	δοοϋΠ-βονίΜΚΛ
не тестировался	не тесФмровала*	ме «ескфомло*	а· момфваюШ!

раз ас»)	“сас»)	ХТГОС»)	Крфиол.аСХ,)
	9.8 мкг/мл	403+ 5.1 мкг/мл	32.5+ И.Тмкг/мл1
СРТ1 стимул.	Снижение веса
ме «еатфемлод	ме меатфомлам

зА/мнала	&А/Гм>у(М1С)	РЗАЕ/МНОЛС)	Р5АВ/Тюу(М1С1
69 мкг/мл	Шмкг/мл	незначительный	.незначительный
вр/мнала	ЕРЛЮуОЛС)	ЕкШМНЛЛС)	ВсоЕЛЬотОЛС» |
незначительный	незначительный	156 мкг/ил	незначительный 1

о» дСн	раз ас»)	“СЯС®!	ХТГ ПС»)	Кр.фиол.ОС»)
незначительный	6.6 мкг/мл	>80 мкг/мл	>50 мкг/мл
СРТ1 стимул.	Снижение веса
не еесдофомле*	60 кт/кт :ЗЛ% (Д«кь2)
5А/МН(М1О	5А/Т»уОЛО	Ρ8ΑΒ/ΜΗ4ΜΙΟ	РЗАЕЛюу(М1С) 1
78мкг/мл	225 мкг/мл
НР/МНОЛО	ΕΡ/Τ$ον(ΜΙΟ	ВсоВ/МНОЛО	ЕсоП/Тяоу (М1О
121 мкг/мл	173 мкг/мл	незначительный.	235 мкг/мл

- 35 013371

РА80С.1	сас.) ..	хтгас.)	КО.ЛИол.ПСв)
иммачммоипг	¢.7 ккг/мл	21.2+1.1 мкг/мл	12.6 + 3.7мкг/мл
СТТI Стакул.	Спскеюм мс*
Н* твапрфовалая	И· теешфовиая
8А/МН(М1С)	ЗАДЬмАЛС»	Р5АЮМНАИО	ОДВГГгаЛМГС)
147 мкг/мл	237 мкг/мл	яыидедолыаш	—тп.и^
ВГ/МНАЯО	ЕР/ТдауАИО	ЕсоЕмнала	всои/тзотооа
99 мкг/мл	121 мкг/мл	ниниив^^^й	293МКГ/НЛ

'Аил» 61	РАЗ АС»)	‘к: ас.)	хтгас.)	Кр.фиол.ЛС.)
3.0+0.8	145+вЛ мкг/мл	15.1 + 2.6 мкг/мл	314 + 5.7мкг/мл
СУП Стимул.	Сюпесвм» жасж
130% Контрол»	бОиг/хг: ¢.9% И 5.7% («ьЭ30ит/кт: 1.3% (Д*кь<)
120 ·«·/< (МСР7)
3ΑΖΜΗΑΠΟ	8АЛГкгт(М1О	рзавынопс»	РЗΑΕΠκσν АИС» 1
45 мкг/ил	¢9 мкг/мл	не&вачмтехьнкй	мвЖнжчммшшй 1
ЕГ/МНАПО	ЕР/ГкММХС)	ЕсоШМНАЛС)	ВсоОТялгОЛС)
97 мкг/ил	62 мкг/мл	кмшктммжшый	кевввчктальвмй

раз ас,)	сас»,)	......хтгас.)	Ко.Фиол.аСи)
1.8 мкг/ил	10.7 мкг/мл	21.6 + 02 икг/мл	41.1 + 14.1МКГ/МЛ

СУТ1 Стимул.	Оимкм веса
К· колфомлая	60 мт/кт: 7.65% (Д«вь1)

3Α/ΜΗΑΠΏ	ЗА/ПотММГС)	РЗАЕ/МНАЛС)	РЗАЕ/Т «ПРАЙС»
64 мкг/мл	41 мкг/мл	М**Н*ЧЯТМкКМЙ	имвдеижмыахй

ВЕ/МНАИС)”	ВР/ТдотАДО	ВсоИ/МНАЛО	ВийУГ «иг АПО
73 мкг/ил	65 мкг/мл	296 мкг/мл	вмквтимлыаш

КАЗНС.)	йсас»)	хггас.) | кр.фиол.ПСи)
55 мкг/мл	14*2 мкг/мл	34Э + Ю.О икг/мл 35.8 мкг/мл
СТТ1 Стимул.	Свкяаиж мс*
И· «еоэтфомлоя	60 кт/кт: 6Ζ%(»»2):30μτ/χτ: 1% (двиь2)
КА/МН АПО	ЗАДРАЛО	РЗАЕ/МНАПО	РЗА&ТмуАПС)
57 мкг/мл	28 мкг/мл	нвзжатаклыых	мезплшссдыий
ЕР/МНАИС»	ВИГ»ПГМ!С1	ЕсоШМНАЛС)	ВсоЛ/Τβσγ (М1С)
79 мкг/мл	75 мкг/мл	82 мкг/мл	87 мкг/мл

- 36 013371

раз ас.)	**Са&«1	хттасм)	Кр.фиолЛС»)
ιαη'ι	22.6 мкг/мл	263+0.6мкг/мл	38.6 мкг/мл
СРП Стимул	Снмжвюс* *ес&
Не кайфовые*	Не гесеирввадая

ЗА/МН(М1С)	8А/Г8оу(М10	Р5АЕЛЛНОПО	ΡδΑΕ/Τίσγ (N00
88мкг/мл	62 мкг/мл	вемшмеельный	яее«а»а«лькмм
ЕР/МНГМ1С)	ИРЛЬуОПО	ЕсоЦ/МН (ΜΙΟ	Εεοίί/ΤδονίΜία
102 мкг/мл	147 мкг/мл	имум»ытиг ,„	единчмелкши

	РАЗ ПС.)	*СаС«)	хггас.)	К©. фиол ДСп)
			>80 мкг/мл	>50 мкг/мл
(ι) ί	О'! 1СТИИ71,	Сзосжежзм мса
Л-н	Не теепфавалаж	бОнг/кг; 1.6% (леяь2)
У/^мвон	ЗАЛИН (ΜΙΟ	ЗА/Тял<М1О	РЗАИМНМЮ	Р5АЕ/Твоу (ΜΙΟ
	57 мкг/мл	67мкг/мл	имнтачыиии
22
	ЕР/МН(М1С	ВРЛ&уООС)	ЕсоЪ/МН (М1С)	ЕсоБПЪоу ΓΜΙΟ
	128 мкг/мл	не»на-оггед.>ши _	тщуиттннй	299 мкг/мл

	раз ас»)	,4сас»)	хтгас.)	К». ФИО л ДСи)
	еадацмг»*·»***	К·	613 + 3.9 мкг/мл	203 мкг/мл
(±> И	СРТ1 Сгинул,	Сжижение веса
	Не •♦огировадоя	Не «еатофоважи
Ру~~Рле ОМе	8А/МН(МЮ	8А№ММГС>	Ρ5ΑΕΖΜΗ (ΜΙΟ	РЗАВ/ТёотОЛС)
	83 мкг/мл	129 мкг/мл		1И11Г»ям»е пьттц
38
ЕР/МНОЛ1С)	ЕР/ТГ»оу(МЮ	Всошмнапо	ЕсоО/ТзоуОИОО
	170 мкг/мл	189 мкг/мл		невнвчимшшй

раз ас.]	мСас.)	хтгасо)	Ко. Фиол .ОС»)
18 мкг/мл	21.7мкг/мл	21.0+ 23нкг/мл	233 мкг/мл

ΟΤΙ Стимул.	Сюсмихе веса
Не пшпвфсвался	30ю/кг:03% (яежь2)

3Α/ΜΗ1ΜΙΟ	8А7ГмММ1С)	РЗАИМНОЛС)	РЗ АЕ/Гкоу (ΜΙΟ I
53»0±2Л мкг/мл	163+3.8 мкг/мл	«еавачятедцши	аошхте&вш—1
ЕР/МНОЛЮ	ЕИТюу(М1С)	воошмнапс)	ЕсоИЛ&лИМЮ 1
77мкг/ил	25 мкг/мл	кеекачмеелывш	249икг/мл I

- 37 013371

	РАЗ ПС»)	сас-)	ХГГПС»)	Ю-ФмолЛСв)
33 МКГ/НЛ	17.6 мкг/мл	23.9+29 икг/мл	19.5 мкг/мл
СРП стимул	Свижевде вей*
Не тестфсваяск	Не йейФМроввявя
за/мноло	ЗА/ТигКМЮ	РЗАЕМШМКЛ	РВАЕ/ТаоуДЛС)
53.1 +0Э мкг/мл	12.0+0.5 мкг/ил	ве*в*шфсяы1нй	неввдемееявянн
ЕР/МНЛЛС)	ЕР/ПоуОЛС)	ЕсоН/МН(М1С)	ВсоКЛЪоу(МКЛ
бб мкг/мп	21 мкг/мл	вежжачпогеяышй	вевввиюелыши

днлЛ^он· Н3С он 68	раз ас»).	СПС·)	хтгася)	(ф.фиолДС'е)
И< 1ΤΪΤΠΠΓΓΊ тгыппг	121+0.1 мкр/мл	12-5+ОЛмкг/мл	8.4 мкг/мл
СРП Стимул.	Сваею» вес*
Не те иедр оа влаж	60 мг/кг: 82% (деиь2)
ЗА/МНОЛС)	ЗАЛПмМШО	Р5АЕЛЛПМКЛ	РЗАЕГГаотЙЛС)
3.4 мкг/мл	1.4 мкг/нл	шшчямлмый	МЗХД'ЛМЛИШ
нр/мнпло	РВ<Пм5(М1С>	ЕсоШМНМС)	ΕοοψΤίσγίΜία
25 мкг/мл.	2.0МКГ/ИЛ	вевжвчпжельмик	177 мкг/мл

ГАЗ ПС»)	сас.)	хтгас»)	кр-ФиолПСя»)
41.0	14.7 мкг/мл	18.4+ 27мкг/ил	453 мкг/мл

СРП стимул	Скхкежие веса
Не «*ииро»ии«	Не Фсоезфоввлся

54 мкг/мл	65 мкг/кл	* *№*4*+»* 1»иУГ ввыкататежмаш	4 49» Р ΊΛΤιΒ·* »р м*я*чмеелышм
ЕР/мнала	ВРД»оу(М1С)	всошмнма	£соКПЪоу(М1С)
Ке тестировался	Не еесехдовзлод	Ме еестфовжлся	Не тсошито»>пая

раз ас-)	сас-)	ЗСГГЛСи)	Кр.фИоЛ.ПС—)
Не веаюфовелал	Не тестировался	Не еесамфсвджся	Не «есеировалвя
СТТ {Стимул.	Сюскенме вес*
Не тестировался	Не тифоиды
ЗА/МНЛЯО	ЗАЛЬоуОЛС)	рзанолкмкэ	РЗАЕ/Тк>у (М1С)
Не тестировался	23 мкг/мл	ке*мамифе*ьнвд	яедеатательяки
ЕР/МН(М1О	ВР/ЬоЛЛО	Есбшмнаао	ЕеоШТюуМЮ
Не тестировался	Не тестировался	Не тестировался	Не тестировался

- 38 013371

раз ас,)	^СОС,) I ХГГПСЛ I к₽.»иол41СЛ
>0.6 мкг/мл	23.1+13.2мкг/мл' 45.7 + 25.9мкг/кл 22Эмкг/мл

СРПспиуж.	Свиежже вес*.
И· МОШфОВШКШ	Не веевфсвалоя

8АМН(МЮ	8АГ№ММ1О	Р8АВМН(МГС)	Р8АЕ/Ти»(М1С1
32 мкг/мл	39 мкг/мл	незначительный	незначительный

ερ/μηγμιο	ΕΡΓΓ»σν(Μ1Ο	ЕсоН/МН (МКЭ	ВеоИ/Тйу(МЮ>
бОикг/кл	64 мкг/мл	незначительный	незначительный

РАЗ ОС,)	,4С0Ся) '	ХТТПСЛ	кр.фиол.ЦСи)
незначительный	16.4 мкг/мл	26 А+ы«г(мл (М)	26.3 мкг/мл
	213 мкНмп (ОУ)

СРПСеикуа.	Сиявши иеоа
Не 1иоо«дро1пвпж	60 кт/кт: 6.3% (день4)

£А/МН(МЮ	£Α/ΤβονίΜΙΟ	МАИМНГМКЭ	РЗАЕ/Тигу (МКЭ
Не твстароилс11	Не весипфовалоя	ие мовффмлоя	Не веовфевалая
ΕΡ/ΜΗίΝΠΟ	ЫРЛеоММКЭ	ЕоЬМНГМКЭ	ЕсоЦ/Гхху (МКЭ
Не весвфсвалая	К* веотфовалоя	Не еасвфовалоя	Не весмфовалоя

НзЧН1съ'^о^^А 73	РАЗ ПС,)	’СОС,)	ХГГЛСЛ	Кр.фиол.ЛС,)
незначительный	1)3 мкг/ил	253+кх1>/>ш (М)	28Л мкг/мл
	16Лмкг/м4ОУ)
СРТ1 Сшмиул.	Спасете вес»
Не весвфовадоя	60>и/«:5Л4 (День4)
5А/МН(МКЭ	8А/Т«г»<МКЭ	Р5АЕМН(МКЭ	РХАВ/Т»оу(М1С)
Не тгсггвжпоаавггя	Не весвфовалая	Не веевфевался	Не гаЛ!йДх>вВ|ПЛ1>
ΕΡ/ΜΗΙΜΙΟ	ЕР/Т«ММ1С>	вобшмнмкэ	ЕсоК/ТюуСМКЭ
Не весвфевалая	Не еесммфовалм	На феввфэмдея	Не веоффемлаж

о ж	раз ас,)	сас,)	хтгасл	Кр .4>иолХ1С,)
незначительный	10.5+-2.6 мкг/мл	6.7+ м«г/мл(М)	<5мкг/ил
	8.8мкг/кп (Ον)
СРПСониуя.	Сжижение меха
Не Феовмревался	бОнт/кг: 1.4% (леиь2)
зА/мнола	ЗА/ТзочОЛС)	РЗАЕ/МН(М1СЭ	РЗАЕЛГсту(МКЭ
Не весвфовался	Не «еевфевалоя	Не веоффовался	Не Веомфовалоя
ЕР/МНЛЛО	БР/Г5ОУ(М1С)	БсоШМНОЛе)	ВсоЪ7Гиу(МКЭ
Не «шмфозмек	На мовфомяля	На веевфовалс*	Хе еасмвфовалм

о о 76	РАЗ (ЮЛ......	сас,)	хтглсл ι к», фиол.ас,)
незначительный	25.7 нкг/мл	Я2±2Э<кв/>ш(Й) 9.0мкг/мл
	I
СРТ1 Свику·.	Свижажме веса
Не веевфсвалая	60кт/кг: 1Л%(деньЗ)
яа/мнсмкэ	ЗАЛПмММКЭ	рза&мнооо	Р5АЬТ50у(М1О
Не Феавмровался	Не ФесФфовалол	Не нежщювма·	Не веатфовалая
вг/мнаяс)	ЕРЛЬоММГС)	ЕсоВЯЛММЮ	ЕсоК/Ттоу(МКЭ
Не веевфсмлая	Не васвфовался	На веевфевалая	Не ввевфовалеж

	РАЗЛС,)	сас,)	ХТГЛС,)	Кр.фисл.ЯСи)
о	незначительный	омич. (отииул.)	29Д±ккг/к«(М)	93 нкг/мл
I		27.8ккг/»и(ОУ>
	СРП Сиасу·.	Сюсвежие веса
Йе веевфоважзя	60«/кт: 5.2%<деньЗ)
Н»С(НгС)<и1О'^у^1
	ЗА/МН(МКЭ	ЗАГГкММКЭ	РЗАВМНОЛКЭ	РЗАВТэоуОЛО
	Не веевфевалел	Не	Не лтпг*·» тая	Не «еоффевалеж
76
	ЕР/МНГМКЭ	ЕР/ГэоММКЭ	ВсоШМШМКЭ	Есо1/Гзоу (МКЭ
	Не Весвфовалоя	Не ФССФфевался.	Не весффсваваж	Не веевфсвалоя

- 39 013371

Claims (13)

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение, выбранное из группы, включающей

- 40 013371

НаЦНгСХ А: СН₃ о ' X ?г Н1С(Н₂С)_Т-^П СН₅ . .01 НйССНгСЪ' ί й СН₃ 0 _х0Е1 Дх ί V ί V иуда/лХ Ч_т ^ОЕ( ЬС. ..он адн^Х СНз о О II 0 У V < •г 2 V н_аС(Н_гс>_в·'^-’ ί к _н о -.ССкМв Н^зОГ—Т СН 0 .СО-Н МЛН»СМ г СН» \ ^н 0 ---х'⁶' л л д ч А__Ц $ \ 0 Нз^НгОХ Н₃С(Н_гС>;,- н£(и£>,- Ί\ 1 СНз О'' '-'Ό''' сн₃ 0' ''ΟΕ» СИ, 0-- ОМе ά, ч^ч 5 хН 7/ .н НзСсн^Х тлЧ сн₃ о \ / СНз и он .___\ СНз 7/ осн₃

- 41 013371

о ЗН О он Я с \Υ ί# \// НзСИНгС^ сн₃ он НзС(Н_гС)₇- \__// сн₃ он НзС(НгС)7 СН, ОН сн_э он Хг_а Н5С<Н^Ь-- Ф СН₃ он л осн_г нЦ N--Н < Н,С(Н}СЙ- | СН] О -сн> ν-γО ч н д ί СН 4 г ‘'Ύ' О А н₁с(н₂сь'П X СНэ о Ό

2. Соединение формулы о

о

3. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтический разбавитель и соединение по п.2.

4. Способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, композиции по п.3.

5. Соединение формулы

6. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтический разбавитель и соединение по п.5.

7. Способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, композиции по п.6.

8. Соединение формулы

- 42 013371

9. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтический разбавитель и соединение по п.8.

10. Способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, композиции по п.9.

11. Соединение формулы I где К¹ представляет собой Н;

К² представляет собой -ОСΗ2С(О)NΗК⁵, где К⁵ представляет собой С1-С₁₀-арил, содержащий атом галогена;

К³ представляет собой -СН3;

К⁴ представляет собой -н-С6-С8-алкил.

12. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтический разбавитель и соединение по п.11.

13. Способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, композиции по п.12.

Схема 1

Асимметрический синтез 5-(К)-тиолактомицина