CN102111998A - 新化合物，含有它们的药物组合物及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明的一类化合物可以用式（I）表示，其中X可以是O、S或N。R¹和R²独立地是H、C₁-C₂₀烷基、环烷基、烯基、芳基、芳烷基、或烷芳基。R³和R⁴独立地是H、芳基、杂芳基、和有4至6个碳原子的杂环基团，其中所述的芳基、杂芳基和杂环部分可任选地被一个或多个本文中定义的第一取代基团取代。在另一实施方案中，R³和R⁴与它们连接的原子和键一起形成一个任选取代的5-7元环，环结构内有至少一个氮原子。

Description

新化合物,含有它们的药物组合物及其使用方法

优先权提出 

本申请要求源自2008年6月2日提交的美国临时申请No.61/129,044和2008年10月30日提交的美国临时申请No.61/193,127的优先权，上述二份申请均以参考引用的方式并入本申请。

技术领域

本发明涉及新化合物，含有它们的药物组合物，以及通过以脂肪酸合酶（FAS）为攻击目标抑制脂肪酸合成途径的使用方法。这些化合物、组合物和方法具有多种有治疗价值的用途，包括但不限于，治疗表达或超量表达FAS基因的癌细胞，治疗肥胖症和治疗表达或超量表达FAS基因或其同源物的侵袭性微生物。 

背景技术

众所周知，需要新的治疗癌症的化合物。作为用于化疗的药物使用的化合物必须满足各种标准。首先，它们必须有足够的细胞毒性，但对于非癌细胞是足够无毒的。它们还必须是可加工和可生物利用的。在一个无关联的方面，还需要新化合物协助治疗代谢性疾病和相关病症（例如肥胖症）。最后，还需要协助治疗侵袭性微生物的新化合物。本发明展示了以在各类靶细胞中发现的脂肪酸合成途径为目标的适合上述各类应用的化合物。 

脂肪酸在细胞生理学中起三种主要作用。首先，它们是生物膜的构筑单元。其次，脂肪酸衍生物起着激素和细胞内信史的作用。第三，并且对本发明特别重要，脂肪酸是燃料分子，它可以以也被称作中性脂肪的三酰甘油的形式储存在脂肪组织中。 

有四种主要的酶参与脂肪酸合成途径：脂肪酸合酶（FAS）、炔基辅酶A羧化酶（ACC）、苹果酸酶和柠檬酸裂合酶。主要酶FAS催化前体丙二酸单酰辅酶A和炔基辅酶A的NADPH依赖性缩合反应，生产脂肪酸。NADPH是一种还原剂，通常在FAS的反应周期中的两个位点起着主要的电子供体的作用。其它三种酶（即，ACC、苹果酸酶和柠檬酸裂合酶）产生必需的前体。另外的酶，例如产生NADPH的酶，也参与脂肪酸的合成。 

在脂肪酸合成途径中的四种酶中，FAS是优选的抑制目标，因为它只在合成脂肪酸的途径内起作用，而其它三种酶还牵涉到其它细胞功能。因此，抑制其它三种酶中的一种更可能影响正常细胞。 

FAS具有酶学委员会（E.C.）编号No.2.3.1.85，也被称作脂肪酸合成酶，脂肪酸连接酶及其系统命名酰基辅酶A：丙二酸单酰辅酶A C-酰基转移酶（脱羧基、氧代酰基和烯酰基还原和硫酯水解）。在FAS催化的脂肪酸合成中涉及7个不同的酶（或催化域）：炔基转酰基酶、丙二酸单酰转酰基酶、β-酮酰合成酶（缩合酶）、β-酮酰还原酶、β-羟基酰基脱水酶、烯酰还原酶和硫酯酶（Wakil, S. J., Biochemistry, 28: 4523-4530, 1989）。所有这七种酶合起来形成FAS。 

在由FAS进行的七个酶催化步骤中，由缩合酶（即β-酮酰合成酶）和烯酰还原酶进行的步骤对于减少或停止脂肪酸合成的抑制剂是最常用的选择对象。FAS复合体的缩合酶在结构和功能方面已被充分确定。缩合酶的活性位点包括一个关键的半胱氨酸硫醇，它是降血脂药例如抑制剂浅蓝菌素的攻击目标。 

FAS抑制剂可以通过化合物抑制纯化的FAS的酶催活性的能力来鉴定。FAS活性可通过本领域已知的许多方法来评价，例如，测定NADPH在丙二酸单酰辅酶A存在的氧化（Dils, R和Carey, E.M., “Fatty acid synthase from rabbit mammary gland”，Methods Enzymol, 35: 74-83, 1975）。关于确定化合物是否是FAS抑制剂的其它信息可以在美国专利5,981,575中找到，该专利的内容以参考引用的方式并入本文中。 

已知的缩合酶抑制剂包括范围很广的化合物，例如烷基化试剂、氧化剂和能进行二硫化物交换的试剂。该酶的结合口袋优选长链E,E,二烯。于是，在原则上，含有侧链二烯和对硫羟酸根阴离子具有反应活性的基团的试剂可以是好的缩合酶抑制剂。浅蓝菌素[(2S,3R)-2,3-环氧基-4-氧代-7,10-十二碳二烯酰胺]是这样一种化合物的实例，其具有以下结构： 

浅蓝菌素与脂肪酸合酶的缩合酶的活性位点中的关键的半胱氨酸硫醇基团共价键合，使这一关键的酶催化步骤失活（Funabashi等，J.Biochem., 105: 751-755, 1989）。虽然已注意到浅蓝菌素具有其它活性，但这些活性或是发生在可能不是人类细胞的相关模型的微生物上（例如抑制真菌中的胆固醇合成，Omura（1976），Bacteriol. Rev., 40: 681-697; 或减小病毒中的RNA合成，Perez等（1991），FEBS，280：129-133），发生在高得多的药物浓度（在5 mg/ ml下抑制HIV蛋白酶，Moelling等（1990），FEBS，261：373-377），或者可能是内源性脂肪酸合成的直接后果（抑制B淋巴细胞和巨噬细胞中的抗体加工，Falo等（1987），J.Immunol., 139: 3918-3923）。一些数据表明，浅蓝菌素不专门抑制蛋白质的十四烷酰化（Simon等，J.Biol.Chem., 267:3922-3931, 1992）。

各种其它化合物显示出抑制脂肪酸合酶（FAS）。FAS抑制剂可以通过化合物抑制纯化的FAS的酶催活性的能力来鉴定。FAS活性可以通过测定放射性标记的前体（即，炔基辅酶A或丙二酰单酰辅酶A）并入脂肪酸或者用光度法测定NADPH的氧化（Dils等，Methods Enzymol., 35: 74-83）来确定。优选的是，本发明抑制剂通过展示其关于抑制FAS的IC₅₀低于LD₅₀，表现出合适的治疗指数，安全性形象及效力；更优选LD₅₀比IC₅₀高至少一个数量级。 

下面陈述的表1列出了本领域已知的几种FAS抑制剂。 

FAS抑制剂还公开于美国专利申请No.08/096,908及1994年1月24日提交的其继续部分申请中，其公开内容以参考引用的形式并入本文。该申请中包括脂肪酸合酶、柠檬酸裂合酶、辅酶A羧化酶及苹果酸酶的抑制剂。 

Tomoda及其同事（Tomoda等，Biochem. Biophys. Act 921：595-598，1987；Omura等, J. Antibiotics 39: 1211-1218, 1986）也描述了一种天然存在的酰基-CoA合成酶抑制剂—Triacsin C（有时称作WS-1228A），它是链霉菌属SK-1894的产物。Triacsin C的化学结构是1-羟基-3-（E,E,E-2’,4’,7’-十一碳三烯亚基）三氮烯。Triassin C在8.7 μM下能抑制大鼠肝酰基-CoA合成酶50%；一种相关化合物Triacsin A通过与长链脂肪酸竞争的机制抑制酰基CoA合成酶。酰基-CoA合成酶的抑制对于动物细胞是有毒性的。Tomoda等（Tomoda等，J.Biol.Chem. 266:4214-4219, 1991）进一步提出，Triacsin C在Raji细胞内造成生长抑制，并且还显示出抑制Vero和Hela细胞的生长。Tomoda等还指出，酰基-CoA合成酶对于动物细胞是必不可少的，抑制该会有致死作用。 

γ-取代的α-亚甲基-β-羟基-γ-丁内酯作为脂肪酸合成的抑制剂公开于美国专利No.5,981,575和5,759,837（其内容以参考引用的方式并入本申请），它们可用来通过系统性地减少脂肪细胞质量和诱发减重来抑制肿瘤细胞的生长。还披露了这些化合物用于治疗比天然产物浅蓝菌素有以下好处：（1）它们不含有浅蓝菌素的高度反应活性的环氧基团，（2）它们在水溶液中稳定并且溶解，（3）它们能用一种两步合成反应制备，因此容易大量生产，和（4）它们容易氚化至高的比放射性，用于生物化学和药理学分析。 

在PCT申请出版物No.WO 2004/005277中也公开了可作为FAS抑制剂使用的具有以下一般结构的新类别的噻吩化合物，该申请的内容以参考引用的方式并入本文。 

然而，在每种示例化合物中，R²位置只限于某一部分实施方案，它们中没有一个披露了本申请中的化合物或与其部分重叠。 

可用于抑制FAS的新类别的噻吩还公开于PCT申请出版物No. WO 2008/057585（其内容以参考引用的方式并入本申请），它具有与以上相同的化学式。同样，示例化合物都没有披露本申请的化合物或与其部分重叠，特别是在R²位置。 

在PCT申请出版物No. WO 2007/014249、WO 2007/014247、WO 2005/117590、WO 2004/006835中公开了作为FAS抑制剂使用的其它类别的新化合物。同样，这些申请没有公开或者例示本申请公开的任何化合物。 

因此，本申请设法解决本领域关于可作为FAS抑制剂使用的新化合物的需要，这些化合物可用来治疗表达FAS的癌，治疗肥胖症，或治疗微生物感染。 

发明概要

本发明涉及可作为FAS抑制剂使用的新化合物。为此，本发明的新化合物抑制脂肪酸合成的一个或多个酶催化步骤。这些化合物具有多种有治疗价值的用途，包括但不限于，治疗表达或超量表达FAS基因的癌细胞，治疗肥胖症，和治疗表达或超量表达FAS基因或其同源物的侵袭性微生物。 

本发明的一类化合物可以用式I表示： 

其中X由杂原子构成，可以选自O、S或N中的任何一个。R¹和R²独立地选自H、C₁-C₂₀烷基、环烷基、烯基、芳基、芳烷基或烷芳基。R³和R⁴独立地是氢原子或是一个有4-6个碳原子的取代或未取代的环。在一项实施方案中，R³和R⁴不都是氢。在另一实施方案中，如果R³和R⁴都不是氢，则它们合起来形成一个任选取代的有4-6个碳原子的环。在又一实施方案中，R³是氢，R⁴由芳基、杂芳基或有4-6个碳原子的杂环基构成，它们均可任选地被以下基团取代：一个或多个卤原子，C₁-C₃烷基，C₁-C₃卤烷基，-OR⁵，-SR⁵，-CN，-CONH₂，-SO₂NH₂，-C(O)OR⁶，-CONHR⁷，或者5元或6元的环烷基或杂环基环。该5-或6-元环烷基或杂环基任选地是芳族基团，可任选地与相邻的R⁴原子稠合，并且/或者可任选地被R⁵取代。

R⁵由C₁-C₈烷基、C₁-C₈烷氧基、芳基、烷芳基、芳烷基中的任何一个构成，它们可以任选地被一个或多个卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃卤烷基或C₁-C₃卤代烷氧基取代。R⁶由C₁-C₈烷基构成。R⁷由C₁-C₈烷基、烯丙基、吗啉、哌嗪、被R⁵ N-取代的哌嗪或者含有N、O、S或其任何组合的5元或6元杂环构成。 

在进一步的实施方案中，R³和R⁴与它们所连接的原子和键一起，形成一个在环结构内有至少一个氮原子的5-7元环，它可以任选地被本文中定义的一个或多个取代基取代。 

根据上述，本发明的一种或多种化合物，单独地或是与其它活性组分相结合，可以被合成和作为治疗组合物采用本申请考虑的或者本领域已知的剂型和给药途径施用。剂量的确定和用药持续时间还依赖于本文提供的和本领域技术人员通常考虑的那些因素。为此，治疗有效量的确定是本领域技术人员完全能够作到的，尤其是借助本文提供的详细说明和实例。 

附图说明

图1表示本发明化合物（特别是C31）的制造方法的一个实施方案。 

图2是表示图1所示方法的替代步骤，用于制备化合物C157。 

图3表示本发明化合物（特别是C31）的S对映异构体的制备方法的一个实施方案。 

图4表示本发明化合物（特别是C31）的R对映异构体的制备方法的一个实施方案。 

图5表示本发明化合物（特别是C31）的制备方法的另一实施方案。 

图6表示本发明化合物的另一种纯化方法。 

发明详述 

定义

在本文中使用时，“烷基”表示有一个或多个碳原子的直链和支化碳链，但提到某个个别基团例如“丙基”时，则只包括直链基团，支链异构体例如“异丙基”则专门地只指该支链基团。

在本文中使用时，“取代的烷基”是如上定义的烷基基团，其中该烷基的一个或多个氢被一个或多个本文中另外定义的取代基取代。 

在本文中使用时，“卤烷基”是指如上定义的烷基，其中该烷基的一个或多个氢被一个或多个卤原子取代。 

在本文中使用时，“烷氧基”指化学式为烷基-O的基团，其中烷基如本文中的定义。 

在本文中使用时，“取代的烷氧基”指取代的烷基-O-基团，其中烷基是如上定义被取代的。 

在本文中使用时，“卤代烷氧基”是指如上定义的烷氧基，其中的烷基的一个或多个氢被一个或多个卤原子取代。 

在本文中使用时，“烯基”指含有一个或多个碳碳双键的本文中定义的饱和或不饱和的烷基。 

在本文中使用时，“芳基”代表从只含碳原子的芳香环衍生的结构。其实例包括，但不限于，苯基或苄基基团及其衍生物。 

在本文中使用时，“芳烷基”代表有一个或多个烷基的芳基基团，该烷基不处在所述芳基的连接点上。 

在本文中使用时，“烷芳基”代表在其连接点上有一个烷基的芳基基团。 

在本文中使用时，“杂芳基”包括单环的芳香环，环中含有5或6个由碳和至少一个非碳原子组成的环原子，该非碳原子可以是，但不限于，以下的一种或多种原子：氮，氧、硫，磷，硼，氯，溴或碘。 

在本文中使用时，“杂环”指一价的饱和或部分不饱和的非芳族碳环基团，其含有至少一个杂原子，在某些实施方案中，含有1-4个杂原子，所述杂原子可以是（但不限于）以下一种或多种原子：氮，氧，硫，磷，硼，氯，溴或碘。在进一步的非限制性实施方案中，杂环可以含有1-10个碳原子。 

在本文中使用时，“环烷基”指一价或多环的饱和或部分不饱和的非芳族环形基团，在其环结构中包含的都是碳原子，它可以被本文中定义的一个或多个取代基团取代。在一些非限制性实施方案中，组成环烷基的碳原子数可以是3-7。 

本发明涉及一类新的化合物，它们可用于抑制FAS蛋白的酶活性，从而抑制脂肪酸合成中的一个或多个酶催化步骤。这些化合物具有多种有治疗价值的用途，包括但不限于，治疗表达或超量表达FAS基因的癌细胞，治疗肥胖症，和治疗表达或超量表达FAS基因或其同源物的侵袭性微生物。 

在一项实施方案中，本发明的这类化合物可用式I表示： 

其中X由杂原子构成，它可以选自O、S或N中的任何一个。R¹和R²独立地选自H，C₁-C₂₀烷基，环烷基，烯基，芳基，芳烷基或烷芳基。R³和R⁴独立地是氢原子或者是有4-6个碳原子的取代或未取代的环。在一项实施方案中，R³和R⁴不都是氢。在另一实施方案中，如果R³和R⁴都不是氢，则它们合起来形成一个有4-6个碳原子的任选取代的环结构。

在进一步的实施方案中，R³是氢，R⁴是氢、芳基、杂芳基或有4-6个碳原子的杂环基团，其中R⁴的环部分任选地被一个或多个下述基团取代：卤原子，C₁-C₃烷基，C₁-C₃卤烷基，-OR⁵，-SR⁵，-CN，-CONH₂，-SO₂NH₂，-C(O)OR⁶，-CONHR⁷，或者5元或6元环烷基或杂环基。所述的5元或6元环烷基或杂环基任选地是芳族基团，可任选地与两个相邻的R⁴原子稠合，并且/或者任选地被一个或多个R⁵取代基取代。 

在另一项实施方案中，如下面将详细讨论的，R³和R⁴与它们所连接的原子和键一起，形成一个环结构中有至少一个氮原子的5-7元杂环。 

R⁵由C₁-C₈烷基、C₁-C₈烷氧基、芳基、烷芳基、芳烷基中的任何一个构成，它可任选地被一个或多个卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃卤烷基或C₁-C₃卤代烷氧基取代。 

R⁶是C₁-C₈烷基。R⁷是C₁-C₈烷基，烯丙基，吗啉，哌嗪，被R⁵ N-取代的哌嗪，或是含有N、O、S或其任何组合的5或6元杂环。 

在另一实施方案中，本发明化合物可以在式I中定义的X位置含有氧或硫。因此，这些实施方案可以用以下的式IIa和IIb定义： 

其中R¹至R⁴均在以上讨论的实施方案中定义。

在另一实施方案中，R³由氢构成。R⁴是如下面式III中所示的可任选被R⁸和/或R^8’取代的芳基： 

其中R¹和R²均如以上讨论的实施方案中的定义。R⁸和R^8’独立地或是在结构中不存在，或者是卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤烷基、-OR⁵，-SR⁵，-CN，-CONH₂，-SO₂NH₂，-C(O)OR⁶，-CONHR⁷或者5或6元环烷基或杂环基。该5或6元环烷基或杂环基可任选地是芳族基团，任选地与R⁴位置中的芳基的两个相邻碳原子稠合，以及/或者是任选地被R⁵取代。R⁵、R⁶和R⁷是本文中定义的任何实例。

在式III进一步的实施方案中，X可以如下地由S或O构成： 

其中R¹和R²，R⁸和R^8’如本文中的定义。

在另一实施方案中，R³和R⁴与它们连接的原子和键一起形成一个在环结构内有至少一个氮原子的5-7元环。在一些实施方案中，5-7元环可以有至少两个氮原子。在进一步的实施方案中，R³和R⁴与它们连接的原子和键一起形成一个有两个彼此处在对位的氮原子的6元环。在上述任何实施方案中，该杂环结构均可任选地被R⁵或本文中讨论的任何其它取代基取代。因此，上述的实施方案可以用以下的式IV结构表示： 

其中R¹、R²和R⁵是以上定义的任何实例。

在式IV的另一实施方案中，X可以如下所述由S或O构成： 

其中R¹、R²和R⁵是以上定义的任何实例。

在本发明的一些非限制性实施方案中，R¹由直链或支链的C₆-C₈烷基构成。在进一步的非限制性实施方案中，R¹由直链或直链的C₈烷基构成。在更进一步的非限制性实施方案中，R¹可以用式-(CH₂)₇CH₃表示。 

在本发明的一些非限制性实施方案中，R²由直链或支链的C₁-C₃烷基构成。在更进一步的非限制性实施方案中，R²由甲基构成。 

根据上述，式I、II、III和IV的结构可以改写如下： 

在一些实施方案中，本发明化合物可包括具有以下结构的化合物（以后称作“C31”）：

在一些实施方案中，本发明化合物可包括具有以下结构的化合物（以后称作“C157”）：

在一些实施方案中，本发明化合物可包括具有以下结构的化合物（以后称作“C144”）：

在一些实施方案中，本发明化合物可包括具有以下结构的化合物（以后称作“C145”）：

在一些实施方案中，本发明化合物可包括具有以下结构的化合物（以后分别称作“C193”、“C138”、“C139”、“C141”、“C142”、“C178”、和“C181”）：

在一些实施方案中，本发明化合物可以是以下化合物中的任何一种：

并非试图限制上述化合物的可能的使用范围，其预期的临床治疗适应症包括，但不限于，治疗各种类型的癌症，包括在很多其中的细胞超量表达脂肪酸合酶的组织中发生的癌症。本发明的一种或多种小分子，或其可药用的盐，可以被合成和以组合物的形式施用，以便通过攻击FAS活性和抑制脂肪酸合成治疗和/或预防肥胖症。最后，可以合成本发明的一种或多种化合物并以组合物的形式施用，用于治疗由于超量表达FAS蛋白或其同源物的侵袭性微生物造成的微生物感染。这类微生物包括，但不限于，葡萄球菌和肠球菌。本发明化合物可以用本领域已知的或本文中另外具体说明的方法合成。

除非另外指明，提到的本发明的具体化合物包括该化合物的所有异构形式，这包括其所有非对映体、互变异构体、对映体、外消旋混合物和/或其它混合物。除非另外指明，提到的具体化合物还包括其离子形式、盐、溶剂化物（例如水化物）、被保护形式和前药。为此，制备、纯化和/或处理活性化合物的相应的盐，例如可药用的盐，可能是方便和可取的。在Berge等，1977，“Pharmaceutically Acceptable Salts”，J. Pharm. Sci., Vol. 66, pp 1-19中讨论了可药用盐的实例，其内容以参考引用的方式并入本文。 

根据上述，可以合成和以治疗组合物的形式施用单独的或与其它活性成分联合的一种或多种本发明化合物。本发明的组合物可以以单位剂型的形式提供用于向人类和其它动物给药，例如片剂、胶囊、丸剂、粉剂、粒剂、无菌的肠道外溶液剂或混悬剂、口服溶液剂或混悬剂、含适量化合物的o/w和w/o乳剂、栓剂和流体混悬剂或溶液剂。为此，药物组合物可以被配制成适合选定的给药途径，并可含有对该给药途径特有的成分。这类药物组合物的给药途径通常分成五大类：吸入、口服、透皮、肠道外和栓剂。在一项实施方案中，本发明的药物组合物可以适合以注射方式肠道外给药，例如静脉内、皮内、肌内、鞘内或皮下注射。或者是，本发明组合物可以如本文中提供的或本领域已知的配制成用于口服给药。 

在本说明书中使用时，“药物稀释剂”和“药物载体”有相同的含义。对于口服给药，可以制备成固体或流体单位剂型。为制备固体组合物例如片剂，可以将化合物与作为药物稀释剂或载体的常规成分（例如滑石粉、硬脂酸镁、磷酸氢钙、硅酸铝镁、硫酸钙、淀粉、乳糖、阿拉伯胶、甲基纤维素及功能相似的物质）混合。胶囊剂可通过将化合物与惰性的药物稀释剂混合并将该混合物填入尺寸合适的硬明胶胶囊制备。软明胶胶囊通过将化合物与合格的植物油、轻质液体石蜡或其它惰性油的浆体用机械微胶囊化来制备。 

可以制备用于口服给药的流体单位剂型，例如糖浆剂、酏剂和混悬剂。这类剂型可以是与糖或其它甜味剂、芳香调味剂和防腐剂一起溶在水基载体中形成浆体。混悬剂可以用水基载体借助悬浮剂（例如阿拉伯胶、黄蓍胶、甲基纤维素等）来制备。 

对于肠道外给药的流体单位剂型，可以用化合物和无菌载液制备。在制备溶液剂时，可以将化合物溶在注射用水中并过滤灭菌，然后装入合适的小瓶或安瓿瓶中并密封。辅助剂，例如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂，可以溶在载液中。可以将组合物冷冻，然后装入小瓶，在真空下除去水。然后将冷冻干燥的粉末密封在小瓶中，使用前重新构建。 

治疗的剂量和持续时间取决于多种因素，包括（1）患者的年龄、体重和器官功能（M., 肝和肾功能）；（2）要治疗的疾病的本性和程度，以及任何现有的重要并发病和所采取的伴随药物治疗，和（3）与药物相关的参量，例如给药途径，实施治疗所必需的用药频率和持续时间，以及药物的治疗指数。通常，应选择剂量使血清浓度达到1-100 ng/ml，目标是在靶位处的有效浓度达到约1 gg/ml至10μg/ml。利用例如这样的因素，可以施用治疗有效数量以便缓解目标症状和/或治疗或预防癌细胞、肥胖症或侵袭性微生物感染或者与其有关的疾病。治疗有效量的确定是本领域技术人员完全能作到的，尤其是借助本文所提供的详细说明和实施例。 

实施例

实施例1—如图1所示的C31的合成

步骤A—三氟甲磺酸辛酯（1）。向冷却至-40℃的辛醇（4.6 g, 35.3 mmol）在CH₂Cl₂（212 ml）中的溶液加入吡啶（新近从CaH₂中馏出，3.28 ml, 40.6 mmol）和三氟甲磺酸酐（6.41 ml, 38.1 mmol），将溶液在-40℃搅拌20分钟。然后将反应混合物在3小时内慢慢温热至室温。经硅藻土滤出白色固体，用戊烷（2×70 ml）洗。蒸发走大部分溶剂，留下约5-10 ml，出现白色沉淀。加入热的戊烷（70 ml），将此混合物过滤以除去任何残留的吡啶盐。将滤液再次蒸发，得到透明的浅橙色油状物1（用TLC定量分析，rf = 0.64, 10% EtOAc/己烷），立即使用。

步骤B—2,2,4-三甲基-[1,3]氧硫杂环戊-5-酮（2）。向冷却到0℃的硫羟乳酸（14.0 g, 132.0 mmol）用加液漏斗逐滴加入2-甲氧基丙烯（50.5 ml, 528 mmol）。将该溶液温热至室温，然后加热回流48小时。冷却至室温后，加入乙醚（200 ml），并用Na₂CO₃（1N，3×150 ml）萃取此混合物，用盐水（2×100 ml）洗。将合并的有机层干燥（MgSO₄），过滤并蒸发得到粗制的黄色油状物，将其在80-95℃蒸馏（水泵压力，25-35托），得到纯的化合物2（9.9 g, 52%）。 

步骤C—2,2,5-三甲基-5-辛基-[1,3]-氧硫杂环戊-4-酮（3）。在-78℃向LiHMDS（31.7 ml, 31.7 mmol, 1M THF溶液）在THF（47 ml）中的混合物用导管逐滴加入化合物2（4.3 g, 29.4 mmol）在THF（47 ml）中的溶液，将形成的黄色溶液在-78℃搅拌30分钟。然后，在室温下经由导管慢慢加入三氟甲磺酸辛酯1（9.0 g，35 mmol）在戊烷（8 ml）中的溶液。在-78℃下搅拌2小时后，加入1N HCl（200 ml），该溶液用Et₂O（3×75 ml）萃取。将合并的有机层干燥（MgSO₄），过滤和蒸发。快速色谱分离（2% EtOAc/己烷）得到纯的化合物3（5.45 g, 72%） 

步骤D—2-乙酰硫烷基-2-甲基癸酸乙酯（4）。向化合物3（5.33 g, 20.6 mmol）在EtOH（无水，14.6 ml）中的溶液加入NaOEt（2.1M, 12.7 ml, 26.9 mmol）[新近由金属钠（1.24 g, 54 mmol）在乙醇（24 ml）中制得]，在室温下搅拌该溶液。30分钟后，将溶液倒入NH₄Cl_(饱和)/1N HCl（100 ml, 3:2）中，用乙醚（3×75 ml）萃取。合并的有机层用水充分洗，干燥（MgSO₄），过滤，蒸发，并重新溶于CH₂Cl₂（129 ml）。向预冷的此溶液（0℃）中加入NEt₃（4.3 ml, 30.9 mmol）和乙酰氯（3.2 ml, 41.2 mmol）。在0℃下40分钟后，加入NH₄Cl饱和溶液（200 ml），用CH₂Cl₂（3×70 ml）萃取。将合并的有机层干燥（MgSO₄），过滤和蒸发。快速色谱分离（5% EtOAc/己烷）得到纯的化合物4（3.1 g, 54%）。

步骤E—4-羟基-5-甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮（5）。在-78℃向化合物4（3.11 g, 10.8 mmol）在THF（155 ml）中的溶液加入LiHMDS（13.4 ml, 13.4 mmol，1.0 M THF溶液），将溶液于2小时内慢慢温热至-5℃，然后在-5℃下再保持20分钟。将溶液倒入1N HCl（200 ml）中，用Et₂O（3×100 ml）萃取。合并的有机层用MgSO₄干燥，过滤和蒸发。快速色谱分离（20% EtOAc/2% CH₃CO₂H/己烷）得到化合物5（1.2 g, 46%）。 

步骤F—（5-甲基-5-辛基-2-氧代噻吩-4-基氧）乙酸叔丁酯（7）。向冷却至-40℃的化合物5（1.4 g, 5.8 mmol）在DMF（23 ml）中的溶液加入NaH（326 mg, 8.15 mmol, 60%矿物油分散体），将溶液温热并在0℃搅拌30分钟。然后直接加入溴乙酸叔丁酯6（1.29 ml, 8.73 mmol），将混合物温热并在室温下搅拌3小时，加入NH₄Cl_(饱和)/1N HCl（6:1，100 ml），溶液用Et₂O萃取（3×70 ml）。合并的有机层用水洗，干燥（MgSO₄），过滤和蒸发。快速色谱法（15%乙酸乙酯/己烷）得到纯化合物7（1.7 g, 82%）。 

步骤G—（5-甲基-5-辛基-2-氧代噻吩-4-基氧）乙酸（8）。向化合物7（1.7 g, 4.7 mmol）在CH₂Cl₂（32 ml）中的溶液加入三氟乙酸（TFA）（9.1 ml），将该溶液在室温下搅拌4-5小时。蒸发溶剂，将粗产物色谱分离（40% EtOAc/2% CH₃CO₂H/己烷），得到纯化合物8（1.1 g, 77%）。 

步骤H—N-(4-氯苯基)-(5-甲基-5-辛基-2-氧代噻吩-4-基氧)乙酰胺（9）。向冷却至0℃的化合物8（1.165 g, 3.9 mmol, 1.0当量）在CH₂Cl₂中的溶液加入EDC（1.196 g, 6.24 mmol, 1.6当量）、DMAP（71.3 mg, 0.58 mmol，0.15当量）和4-氯苯胺（697 mg, 5.46 mmol, 1.4当量），将溶液在0℃搅拌1小时。将该反应混合物慢慢温热至室温并搅拌12小时，倒入饱和NH₄Cl水溶液：1N盐酸（4:1）中，用CH₂Cl₂萃取。将有机相合并，干燥（Na₂SO₄），过滤和蒸发。快速色谱分离（30%乙酸乙酯-40%乙酸乙酯/己烷）得到纯化合物（1.132 g, 产率71%），为白色粉末。然后将该化合物用乙醚：氯仿（9:1）重结晶，得到白色晶状固体。 

实施例2—C157的合成

为制备C157，可以使用如图1所示的用来制备C31的相同方法，只是在第二步中如图2中所示，用乳酸代替硫羟乳酸。

实施例3—化合物纯化的一般步骤

向化合物8（0.2 mmol, 1.0当量）在CH₂Cl₂（3.0 ml）中的冷却（0℃）溶液中加入1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐（EDC）（0.32 mmol, 1.6当量）、苯胺衍生物（0.22 mmol, 1.1当量）和DMAP（0.03 mmol, 0.15当量）。将该混合物在0℃搅拌30分，然后温热至室温并搅拌4小时。将溶液倒入NH₄Cl饱和水溶液（10 ml）中，用CH₂Cl₂（3×10 ml）萃取。将合并的有机层干燥（MgSO₄），过滤和蒸发，得到粗产物。快速色谱分离（用30% EtOAc/己烷）得到纯产物。

2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）-N-苯基乙酰胺（10）。对于化合物8（45.0 mg, 0.15 mmol）和苯胺（17.0μl, 0.18 mmol），按照一般步骤A，得到化合物10（50.0 mg, 67%），为油状物。 

2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）-N-对甲苯基乙酰胺（11）。对于化合物8（45.0 mg, 0.15 mmol）和4-甲基苯胺（19.2 mg, 0.18 mmol），按照一般步骤A，得到固体的化合物11（51.0 mg, 65%）。 

N-（2-三氟甲基苯基）-2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰胺（12）。对于化合物8（45.0 mg, 0.15 mmol）和2-三氟甲基苯胺（21.0μl, 0.16 mmol），按照一般步骤A，得到化合物12（30.0 mg, 45%）。 

N-（3-三氟甲基苯基）-2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰胺（13）。对于化合物8（45.0 mg, 0.15 mmol）和3-三氟甲基苯胺（21.0μl, 0.16 mmol），按照一般步骤A，得到化合物13（54.3 mg, 82%）。 

2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）-N-（4-三氟甲基苯基）乙酰胺（14）。对于化合物8（60.0 mg, 0.2 mmol）和4-三氟甲基苯胺（30.0μl, 0.24 mmol），按照一般步骤A，得到固体形式的化合物14（48.0 mg, 54%）。 

N-（2-三氟甲氧基苯基）-2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰胺（15）。对于化合物8（45.0 mg, 0.15 mmol）和2-三氟甲氧基苯胺（23.0μl, 0.17 mmol）按照一般步骤A，得到化合物15（40.0 mg, 58%）。 

N-（3-三氟甲氧基苯基）-2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰胺（16）。对于化合物8（45.0 mg, 0.15 mmol）和3-三氟甲氧基苯胺（22.0μl, 0.17 mmol），按照一般步骤A，得到化合物16（54.4 mg, 79%）。 

2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）-N-（4-三氟甲氧基苯基）乙酰胺（17）。对于化合物8（60.0 mg, 0.2 mmol）和4-三氟甲氧基苯胺（29.5μl, 0.24 mmol），按照一般步骤A，得到化合物17固体（62.0 mg, 68%）。 

N-（4-甲氧基苯基）-2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰胺（18）。对于化合物8（60.0 mg, 0.2 mmol）和4-甲氧基苯胺（29.5 mg, 0.24 mmol），按照一般步骤A，得到固体形式的化合物18（64.0 mg, 79%）。 

2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）-N-（4-辛氧基苯基）乙酰胺（19）。对于化合物8（60.0 mg, 0.2 mmol）和4-辛氧基苯胺（53.0 mg, 0.24 mmol），按照一般步骤A，得到固体形式的化合物19（76.0 mg, 75%）。 

2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）-N-（2-甲硫烷基苯基）乙酰胺（20）。对于化合物8（45.0 mg, 0.15 mmol）和2-甲硫基苯胺（20.0μl, 0.16 mmol），按照一般步骤A，得到化合物20（50.0 mg, 79%）。 

2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）-N-（4-甲硫烷基苯基）乙酰胺（21）。对于化合物8（45.0 mg, 0.15 mmol）和3-三氟甲氧基苯胺（22.0μl, 0.17 mmol），按照一般步骤A，得到化合物21（21.0 mg, 49%）。 

N-苯并[1,3]二氧杂环戊烯-5-基-2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰胺（22）。对于化合物8（45.0 mg, 0.15 mmol）和苯并[1,3]二氧杂环戊烯-5-基胺（24.7 mg, 0.18 mmol），按照一般步骤A，得到化合物22（51.0 mg, 61%），为固体形式。 

N-[4-（4-氯苯氧基）苯基]-2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰胺（23）。对于化合物8（60.0 mg, 0.2 mmol）和4-（4-氯苯氧基）苯胺（52.5 mg, 0.24 mmol），按照一般步骤A，得到固体形式的化合物23（81.0 mg, 81%）。 

2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）-N-（4-噻吩-2-基苯基）乙酰胺（24）。对于化合物8（60.0 mg, 0.2 mmol）和4-（2-噻吩基）苯胺（42.0 mg, 0.24 mmol），按照一般步骤A，得到固体形式的化合物24（82.0 mg, 90%）。 

2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）-N-（2-吗啉-4-基苯基）乙酰胺（25）。对于化合物8（45.0 mg, 0.15 mmol）和2-吗啉基苯胺（32.0 mg, 0.18 mmol），按照一般步骤A，得到油状的化合物25（62.0 mg, 67%）。 

N-（4-氯-2-三氟甲基苯基）-2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰胺（26）。对于化合物8（45.0 mg, 0.15 mmol）和4-氯-2-三氟甲基苯胺（26.0μl, 0.18 mmol），按照一般步骤A，得到化合物26（24.0 mg, 25%）。 

N-（4-氟苯基）-2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰胺（27）。对于化合物8（100.0 mg, 0.33 mmol）和4-氟苯胺（44.0μl, 0.47 mmol），按照一般步骤A，得到化合物27（127.0 mg, 98%）。 

4-[2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰氨基]苯甲酸甲酯（28）。对于化合物8（100.0 mg, 0.33 mmol）和4-氨基苯甲酸甲酯（70.0 mg, 0.46 mmol），按照一般步骤A，得到化合物28（98.0 mg, 69%）。 

N-（4-溴苯基）-2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰胺（32）。对于化合物8（300.0 mg, 1.0 mmol）和4-溴苯胺（172 mg, 1.0 mmol），按照一般步骤A，得到固体形式的化合物32（227.0 mg, 50%）。 

2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）-N-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]乙酰胺（33）。对于化合物8（600.0 mg, 2.0 mmol）和4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺（438 mg, 2.0 mmol），按照一般步骤A，得到化合物33（651.0 mg, 65%），为固体形式。 

4-[2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰氨基]苯甲酰胺（34）。对于化合物8（114.0 mg, 0.38 mmol）和4-氨基苯甲酰胺（52 mg, 0.38 mmol），按照一般步骤A，得到固体形式的化合物34（103.0 mg, 65%）。 

2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）-N-（4-氨磺酰苯基）乙酰胺（35）。对于化合物8（105.0 mg, 0.35 mmol）和4-氨基苯磺酰胺（60 mg, 0.35 mmol），按照一般步骤A，得到固体形式的化合物35（37.0 mg, 24%）。 

N-（4-氰基苯基）-2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰胺（36）。对于化合物8（107.0 mg, 0.35 mmol）和4-氨基苯甲腈（41 mg, 0.35 mmol），按照一般步骤A，得到固体形式的化合物36（106.0 mg, 76%）。 

5-甲基-5-辛基-4-{2-氧代-2-[4-(4-三氟甲基苯基)哌嗪-1-基]乙氧基}-5H-噻吩-2-酮（37）。对于化合物8（100.0 mg, 0.33 mmol）和1-（4-三氟甲基苯基）哌嗪（77 mg, 0.33 mmol），按照一般步骤A，得到固体形式的化合物37（66.0 mg, 39%）。 

4-{2-[4-（4-氯苯基）哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮（38）。对于化合物8（100.0 mg, 0.33 mmol）和1-（4-氯苯基）哌嗪（65 mg, 0.33 mmol），按照一般步骤A，得到固体形式的化合物38（73.0 mg, 46%）。 

4-{2-[4-（4-甲氧基苯基）哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮（39）。对于化合物8（105.0 mg, 0.35 mmol）和1-（4-甲氧基苯基）哌嗪（67 mg, 0.35 mmol），按照一般步骤A，得到固体形式的化合物39（113.0 mg, 68%）。 

4-{2-[4-（4-甲氧基苄基）哌嗪-1-基]-2-氧代乙氧基}-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮（40）。对于化合物8（116.0 mg, 0.38 mmol）和1-（4-甲氧基苄基）哌嗪（78 mg, 0.38 mmol），按照一般步骤A，得到固体形式的化合物40（137.0 mg, 74%）。 

N-（4-氯苯基）-2-（2,2-二己基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰胺（41）。对于化合物8（45.0 mg, 0.16 mmol）和2-溴-N-（4-氯苯基）乙酰胺（41 mg, 0.16 mmol），按照一般步骤B，得到固体形式的化合物41（48.0 mg, 67.4%）。 

实施例4—偶合反应：一般步骤

在一只火焰干燥的烧瓶中加入溴化合物32（1.0当量）及苯基硼酸（1.1当量）、Cs₂CO₃（1.5当量）和Pd(PPh₃)₄（0.2当量）在DMF中的溶液，在氩气下于100℃加热24小时。冷却后，将反应混合物倒入氯化铵饱和水溶液中用乙醚萃取，用水和盐水洗。粗产物随后作柱色谱分离，得到所要的产物。

2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）-N-（4’-三氯甲基联苯-4-基）乙酰胺（42）。（KS-II-94）：对于化合物33（130.0 mg, 0.25 mmol）及1-碘-4-三氟甲基苯（46μl, 0.31 mmol）、Cs₂CO₃（126 mg, 0.39 mmol）和Pd(PPh₃)₄（29 mg, 0.025 mmol），按照一般步骤C，得到固体形式的化合物42（94.0 mg, 73%）。 

2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）-N-（4’-三氟甲氧基联苯-4-基）乙酰胺（43）。（KS-II-95）：对于化合物33（116.0 mg, 0.23 mmol）和1-碘-4-三氟甲氧基苯（43μl, 0.27 mmol）、Cs₂CO₃（112 mg, 0.34 mmol）及Pd(PPh₃)₄（26.5 mg, 0.023 mmol），按照一般步骤C，得到固体形式的化合物43（80.0 mg, 65%）。 

N-联苯-4-基-2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰胺（40）。对于化合物32（110.0 mg, 0.24 mmol）和苯基硼酸（32 mg, 0.26 mmol）、Cs₂CO₃（126 mg, 0.39 mmol）及Pd(PPh₃)₄（55.4 mg, 0.052 mmol），按照一般步骤C，得到固体形式的化合物44（44.0 mg, 41%）。 

实施例5—制备C31的R-和S-对映体的方法

S-对映体的合成—如图3所示

步骤A—2-叔丁基-4-甲基-[1,3]-氧硫杂环戊-5-酮（1）。在氩气氛下向一只火焰干燥的烧瓶中装入（R）-硫羟乳酸（2.5 g, 23.5 mmol），接着加入戊烷（20 ml）和新戊醛（2.82 ml, 25.9 mmol）及几滴三氟乙酸。该反应系统装有Dean-Stark装置以去除水份。然后将溶液加热回流48小时（55℃），同时连续地去除水。冷却至室温后，将溶剂完全蒸发。粗产物自戊烷：乙醚（5:1）中于-78℃重结晶。经由过滤坩埚滤出白色固体物质，得到产物1²（1.04 g, 产率25.4%）。

步骤B—三氟甲酸辛酯（2）。向冷却至-40℃的辛醇（4.6 g, 35.3 mmol）在CH₂Cl₂（212 ml）中的溶液加入吡啶（新近从CaH₂中蒸馏得到，3.28 ml, 40.6 mmol）和三氟乙酸酐（6.41 ml, 38.1 mmol），将该溶液在-40℃搅拌20分钟，然后在3小时内慢慢温热至室温。经由硅藻土滤出白色固体，用戊烷（2×70 ml）洗。将大多数溶剂蒸发，留下约5-10 ml溶剂，出现白色沉淀。加入热的戊烷（70 ml），将此混合物过滤以除去任何残留的吡啶盐。将滤液再次蒸发，得到透明的橙色油状物2（用TLC定量，rf = 0.64, 10% EtOAc/己烷），立即使用。 

步骤C—2-叔丁基-4-甲基-4-辛-1,3,5,7-四炔基-[1,3]氧硫杂环戊-5-酮。在-78℃下向LiHMDS（13.8 ml, 13.8 mmol, 1M THF溶液）在THF（47 ml）中的溶液用导管滴加化合物1（2.09 g, 12.0 mmol）在THF（15 ml）中的溶液，将形成的黄色溶液在-78℃搅拌30分钟。然后在室温下经由导管将三氟甲磺酸辛酯2（3.48 g, 13.2 mmol）在戊烷（8 ml）中的溶液慢慢加到上述烯醇化物的-78℃的溶液中。在-78℃搅拌2小时后，加入1N HCl（200 ml），该溶液用乙醚（3×75 ml）萃取。将合并的有机层干燥（MgSO₄），过滤和蒸发。快速色谱分离（2% EtOAc/己烷）得到纯的化合物3（2.42 g, 75%）。 

步骤D—(S)-2-乙酰硫烷基-2-甲基癸-3,5,7,9-四炔酸乙酯（4）。向化合物3（1.43 g, 5.0 mmol）在乙醇（无水，14.6 ml）中的溶液加入NaOEt（12.5 mmol）[新近由金属钠（300 mg, 12.5 mmol）在乙醇（15 ml）中制备]，室温下搅拌该溶液。30分钟后，将溶液倒入饱和NH₄Cl/1N HCl（25 ml, 3:2），用Et₂O（3×25 ml）萃取。合并的有机层随后用水充分洗，干燥（MgSO₄），过滤，蒸发后得到中间体（1），将其重新溶在CH₂Cl₂（25 ml）中。向预冷至0℃的该溶液加入NEt₃（0.83 ml, 6.0 mmol）和乙酰氯（0.39 ml, 5.5 mmol）。在0℃下40分钟后，加入饱和NH₄Cl溶液（50 ml），用CH₂Cl₂（3×20 ml）萃取。将合并的有机层干燥（MgSO₄），过滤和蒸发。快速色谱分离（5% EtOAc/己烷）得到纯的化合物4（1.0 g, 70.6%）。 

步骤E—(S)-5-甲基-5-辛-1,3,5,7-四炔基噻吩-2,4-二酮（5）（KS-II-61）：向化合物4（0.922 g, 3.2 mmol）在THF（15 ml）中的-78℃溶液加入LiHMDS（4.8 ml, 4.8 mmol，1.0 M THF溶液），将该溶液在2小时内慢慢温热至-5℃，然后在-5℃再保持20分钟。将溶液倒入1N HCl（20 ml）中，用乙醚（3×20 ml）萃取。合并的有机层用MgSO₄干燥，过滤和蒸发。快速色谱分离（20% EtOAc/2% CH₃CO₂H/己烷）得到化合物5（0.51 g, 65.6%）。 

步骤F—(S)-N-(4-氯苯基)-2-(2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧)乙酰胺（7）（KS-II-62）：一只25 ml的圆底烧瓶在氮气氛下装入5-甲基-5-辛-1,3,5,7-四炔基噻吩-2,4-二酮（5）（85.0 mg, 0.35 mmol）、N-（4-氯苯基）-2-溴代乙酰胺（6）（91.0 mg, 0.36 mmol）、碳酸钾（97.0 mg, 0.7 mmol，火焰干燥并在氮气氛下冷却）和DMF（3.0 ml）。将此混合物在70℃加热2至3小时（用TLC监测）。滤出固体物质用乙醚洗。然后将溶液用乙醚（30 ml）稀释，依次用水（3×15 ml）、NH₄Cl饱和水溶液（2×10 ml）和盐水洗。将有机层干燥（MgSO₄），过滤和蒸发，得到半固态的粗产物。将该粗产物从乙醚：己烷（1:1）中重结晶，得到白色粉末（基本上粉碎）。将产物过滤并用乙醚：己烷（1:1）洗。将滤液浓缩，再次用乙醚：己烷（1:1）重结晶，得到白色粉末。将合并的白色粉末在真空下干燥，得到产物7，产率61.5%（88.0 g）。 

R-对映体的合成—如图4所示

步骤A—(S)-2-叔丁基-4-甲基-[1,3]氧硫杂环戊-5-酮（8）。在氩气氛下向一只火焰干燥的烧瓶中加入(S)-硫羟乳酸（4.17 g, 39.3 mmol），随后加入戊烷（80 ml）和新戊醛（4.48 ml, 41.3 mmol）及几滴三氟乙酸。此反应系统装有Dean-Stark装置以便除水。然后将溶液加热回流48小时（55℃），同时连续地去水。冷却至室温后，完全除去溶剂。粗产物自丙烷：乙醚（5:1）中在-78℃重结晶。经由过滤坩埚滤出白色固体物质，得到产物8²（3.23 g, 47.3%产率）。

步骤B—(R)-2-叔丁基-4-甲基-4-辛-1,3,5,7-四炔基-[1,3]氧硫杂环戊-5-酮（3）。在-78℃下通过导管向LiHMDS（16.0 ml, 16.0 mmol, 1M THF溶液）在THF（47 ml）中的混合物逐滴加入化合物8（2.42 g, 13.9 mmol）在THF（15 ml）中的溶液，将形成的黄色溶液在-78℃搅拌30分钟。然后在室温下经由导管将三氟甲磺酸辛酯（2）（3.85 g, 14.6 mmol）在戊烷（8 ml）中的溶液慢慢加到上述烯醇化物的-78℃溶液中。在-78℃下搅拌2小时后，加入1N HCl（200 ml），用乙醚（3×75 ml）萃取。将合并的有机层干燥（MgSO₄），过滤和蒸发。快速色谱分离（2% EtOAc/己烷）得到纯的化合物9（2.54 g, 64%）。 

步骤C—(R)-2-乙酰硫烷基-2-甲基癸-3,5,7,9-四炔酸乙酯（10）。向化合物9（1.43 g, 5.0 mmol）的乙醇（无水，14.6 ml）溶液加入NaOEt（12.5 mmol）[新近由金属钠（300 mg, 12.5 mmol）在EtOH（15 ml）中制备]，在室温下搅拌。30分钟后，将该溶液倒入饱和NH₄Cl/1N HCl（25 ml, 3:2）中，用乙醚（3×25 ml）萃取。合并的有机层用水充分洗，干燥（MgSO₄），过滤，蒸发，得到中间体（II），将其重新溶在CH₂Cl₂（25 ml）中。向预冷至0℃的此溶液中加入NEt₃（0.83 ml, 6.0 mmol）和乙酰氯（0.39 ml, 5.5 mmol）。在0℃下40分钟后，加入饱和NH₄Cl溶液（50 ml）。用CH₂Cl₂（3×20 ml）萃取。将合并的有机层干燥（MgSO₄），过滤和蒸发。快速色谱分离（5% EtOAc/己烷）得到纯的化合物10（1.29 g, 90.0%）。 

步骤D—(R)-5-甲基-5-辛-1,3,5,7-四炔基噻吩-2,4-二酮（11）。在-78℃下向化合物10（1.23 g, 4.27 mmol）在THF（15 ml）中的溶液加入LiHMDS（6.4 ml, 6.4 mmol，1.0M THF溶液），将溶液于2小时内慢慢温热至-5℃，然后在-5℃再保持20分钟。随后将溶液倒入1N HCl（20 ml）中，用乙醚（3×20 ml）萃取。合并的有机层用MgSO₄干燥，过滤和蒸发。快速色谱分离（20% EtOAc/2% CH₃CO₂H/己烷）得到化合物11（352.0 mg, 34%）。 

步骤E—(R)-N-(4-氯苯基)-2-(2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧)乙酰胺（7）（KS-II-62）：在氮气氛下向一只25 ml的圆底烧瓶中装入(R)-5-甲基-5-辛-1,3,5,7-四炔基噻吩-2,4-二酮11（195.0 mg, 0.80 mmol）、N-（4-氯苯基）-2-溴代乙酰胺6（209.0 mg, 0.85 mmol）、碳酸钾（220.0 mg, 1.6 mmol, 火焰干燥并在氮气氛下冷却）和DMF（3.0 ml）。将混合物在70℃加热2-3小时（用TLC监测）。滤出固体物质，用乙醚洗。溶液用乙醚（30 ml）稀释，依次用水（3×15 ml）、NH₄Cl饱和水溶液（2×10 ml）和盐水洗。将有机层干燥（MgSO₄），过滤和蒸发，得到半固态的粗产物。然后将该粗产物自乙醚：己烷（1:1）中重结晶，得到白色粉末（基本上粉碎）。将产物滤出，用乙醚：己烷（1:1）洗。将滤液浓缩，再次用乙醚：己烷（1:1）重结晶，得到白色粉末。将合并的白色粉末真空干燥，得到产物12，产率63.0%（206.0 g）。 

实施例6—合成带有O-乙酰肼的化合物的另外方法—如图5所示

步骤A—三氟甲磺酸辛酯（1）。一只干燥的3L三口圆底烧瓶装有机械搅拌器、温度计和氮气吹洗入口。在烧瓶中装入辛醇（150 g, 1.15 mol）在二氯甲烷（1050 ml）中的溶液，冷却至-40℃，随后加入吡啶（107 ml）。在-40℃至-20℃下于45分钟内向此冷溶液中加入三氟甲磺酸酐（209 ml, 1.08当量）。将反应混合物温热至室温。在室温下搅拌1.5小时后，经由硅藻土滤出白色固体，用戊烷（2×100 ml）洗。将滤液在低于30℃的温度减压浓缩以除去大部分溶剂。加入热的戊烷（1000 ml），将此混合物过滤以除去任何残余的吡啶盐。将滤液在低于30℃的温度减压浓缩至接近干燥，得到透明的油状物（257.7 g, 85.3%），立即使用。

步骤B—2,2,4-三甲基-[1,3]氧硫杂环戊-5-酮（2）。一只12升的三口圆底烧瓶装有机械搅拌器、温度计和在氮气吹洗气氛下的Dean-Stark装置。向烧瓶中加入硫羟乳酸（1000 g, 9.4 mol），随后加入丙酮（12.25 mol, 1.3当量）、对甲苯磺酸（17.9 g, 0.09 mol, 0.01当量）和苯（2400 ml）。将该混合物加热回流47小时并连续除水。共收集约190 ml水。将溶液冷却至室温，用乙醚稀释（3500 ml），用2N的Na₂CO₃（2×2000 ml）洗，随后用水（2000 ml）和饱和NaCl溶液（2000 ml）洗。将溶液用MgSO₄干燥，过滤并减压浓缩成油状物。然后将此粗产物减压蒸馏，得到产物2（967.6 g, 70.2%），为无色油状物，沸点 = 70.5℃-73℃（726 mmHg）。 

步骤C—2,2,4-三甲基-4-辛基-[1,3]氧硫杂环戊-5-酮（3）。一只干燥的5升三口圆底烧瓶装有机械搅拌器、温度计和氮气吹洗入口。在-78℃下向LiHMDS（831 ml, 1.0M THF溶液）在THF（350 ml）中的混合物于40分钟内逐滴加入化合物2（110.5 g, 0.76 mol）在四氢呋喃（221 ml）中的溶液。在-78℃搅拌该溶液1小时后，于50分钟内逐滴加入三氟甲磺酸辛酯（257.7 g, 0.98 mol, 1.3当量），保持温度低于-60℃。在-78℃搅拌4小时后（用TLC监测），加入2N HCl（800 ml），用乙酸乙酯（2×600 ml）萃取。合并的有机层用去离子水（3×1000 ml）洗，用硫酸镁干燥，过滤。将滤液减压蒸发，得到粗制的油状物。将此粗产物真空蒸馏，得到无色油状的化合物3（185.9 g, 95.3%）。沸点 = 110℃-116℃（726 mmHg）。 

步骤D—2-乙酰硫烷基-2-甲基癸酯乙酯（4）。一只3升的三口圆底烧瓶装有机械搅拌器和氮气吹洗入口。向此烧瓶中加入乙醇（370 ml），随后分批加入金属钠（21.5 g, 0.93 mol, 1.3当量）。将该透明溶液冷却至20-25℃，然后加入化合物3（185 g, 0.72 mol）的乙醇（315 ml）溶液。搅拌2小时后（用TLC监测），将溶液倒入饱和NH₄Cl/1N HCl（2200 ml, 3:2）中，用乙酸乙酯萃取（2×1000 ml）。合并的有机层用水（2×1000 ml）和盐水充分洗，干燥（MgSO₄），过滤，蒸发（182.1 g浅黄色油状物），并重新溶在CH₂Cl₂（1100 ml）中。向预冷至0℃的该溶液中加入NEt₃（137 g, 1.35 mol）和乙酰氯（84.3 g, 1.07 mol）。在0℃下1小时后（用TLC监测），加入饱和NH₄Cl溶液（2000 ml），用CH₂Cl₂（500 ml）萃取。合并的有机层用水洗，干燥（MgSO₄），过滤和蒸发。粗产物用真空蒸馏法纯化，得到化合物4（187.6 g, 90.7%），沸点 = 115℃-127℃（726 mmHg）。 

步骤E—4-羟基-5-甲基-5-辛基-5-H-噻吩-2-酮（5）。一只6升的三口圆底烧瓶装有机械搅拌器和氮气吹洗入口。向烧瓶中依次加入化合物4（187 g, 0.77 mmol）和四氢呋喃（1.870 ml），然后冷却至-78℃。在50分钟内向此冷溶液中逐滴加入LiHMDS（805 ml, 1.24当量）在四氢呋喃中的溶液。将反应混合物在-70℃至-50℃搅拌1小时，然后在-50℃至-40℃ 2小时，在-40℃ 1小时，随后慢慢温热至室温。用TLC监测反应。加入2N HCl（1000 ml）使反应猝停，用乙酸乙酯（1500 ml）萃取。水层用500 ml乙酸乙酯萃取。合并的有机相用去离子水（2×2000 ml）洗，干燥（MgSO₄），过滤和减压浓缩。将粗产物在冰箱中储存过夜。过滤分离晶体产物5（44 g）并用己烷洗。将滤液再放入冰箱，不除去溶剂。又分离出一些固体。重复操作直至不再结晶。总的分离出的化合物5的产率：65 g，41.4%。 

实施例7—另一纯化方法：

一旦完成萃取，将有机层用饱和碳酸钠溶液洗2次，然后用1N HCl将水层酸化至pH约3～4。该水层然后用乙醚萃取3次，用水、盐水洗，干燥并浓缩，得到干净的产物，由NMR得到证实。

原始的有机层（得自反应）用水和盐水洗，干燥和蒸发，得到硫烷基-2-甲基癸酸乙酯I。此物质随后再循环用于图6中所述的化合物4的合成中。 

实施例8—纯化步骤B

N-（4-氯苯基）-2-（2-甲基-2-辛基-5-氧代-2,5-二氢噻吩-3-基氧）乙酰胺（9）：在氮气氛下向一只250 ml圆底烧瓶中加入4-羟基-5-甲基-5-辛基-5H-噻吩-2-酮5（9.32 g, 38.5 mmol）、N-（4-氯苯基）-2-溴代乙酰胺27（9.98 g, 40.4 mmol）、碳酸钾（10.62 g, 77.0 mmol，火焰干燥并在氮气氛下冷却）和DMF（96.0 ml）。将混合物在70℃加热2-3小时（用TLC监测）。滤出固体物质，用乙醚洗。溶液则用乙醚（300 ml）稀释，依次用水（3×100 ml）、饱和NH₄Cl水溶液（2×100 ml）和盐水洗。将有机层干燥（MgSO₄），过滤和蒸发，得到半固态的粗产物。该粗产物从乙醚：己烷（1:1）中重结晶，得到白色粉末（基本上粉碎）。随后滤出产物，用乙醚：己烷（1:1洗）。将滤液浓缩，再次用乙醚：己烷（1:1）重结晶，得到白色粉末。将合并的白色粉末真空干燥，得到产物9，产率74%（11.66 g）。

实施例9：生物和生物化学方法

本发明化合物进行如下所述的各种生物试验：

从ZR-75-1人乳腺癌细胞中纯化FAS。人FAS由得自美国模式培养物保藏所的ZR-75-1人乳腺癌培养细胞中纯化。此步骤根据Linn等（1981）和Kuhajda等（1994）的方法修改，利用低渗裂解、连续的聚乙二醇（PEG）沉淀和阴离子交换色谱法。ZR-75-1细胞在37℃与5% CO₂下在含有10%胎牛血清、青霉素和链霉素的RPMI培养基中培养。

将10只T150烧瓶中的融合细胞用1.5 ml裂解缓冲液（20 mM Tris-HCl，pH 7.5，1mM EDTA, 0.1 mM苯基甲磺酰氟（PMSF），0.1% Igepal CA-630）裂解，并在冰上振动式均化20次。将裂解液在JA-20转子(Beckman)中于20000 rpm和4℃下离心30分钟，用裂解缓冲液将上清液补充至42 ml。向该上清液中慢慢加入PEG 8000在裂解缓冲液中的50%溶液，至最终浓度为7.5%。在4℃下摇动60分钟后，将溶液在JA-20转子（Beckman）中在4℃下于15000 rpm离心30分钟。然后向上清液中加入固体PEG 8000至最终浓度为15%。在重复以上的摇动和离心之后，将沉淀物在10 ml缓冲液A（20 mM K₂HPO₄, pH 7.4）中于4℃再悬浮过夜。在用0.45μM滤器过滤后，将蛋白质溶液施加在Mono Q 5/5阴离子交换柱（Pharmacia）上。该柱子用缓冲液A以1 ml/分的速度洗15分钟，结合物的洗脱使用线性的60 ml梯度洗脱，60分钟内至1M KCl。FAS（MW约270 KD）通常在0.25 M KCl下在三份0.5 ml级分中洗出，这由用Coomassie G250（Bio-Rad）染色的4-15% SDS-PAGE鉴定。FAS蛋白浓度使用Coomassie Plus

蛋白分析试剂（Pierce）按照制造商的说明用BSA作为标准来确定。这一步骤产生了根据考马斯染色凝胶判断为基本上纯的（>95%）FAS制剂。 

FAS酶活性和化合物的IC ₅₀ 的测定  FAS活性通过用光度法（OD₃₄₀）在96孔板中监测NADPH的丙二酸单酰辅酶A依赖性氧化（Dils等和Arslanian等，1975）来测定。每个孔中含2μg纯化的FAS，100 mM K₂HPO₄, pH 6.5, 1mM二硫苏糖醇（Sigma）和187.5μM的β-NADPH（Sigma）。抑制剂的储备液按2、1和0.5 mg/ml配制在DMSO中，使得当每孔中加入1μl储备液时，最终浓度为20、10和5μg/ml。对于每个实验，都和DMSO对照、抑制剂和空白（无FAS酶）一起还进行浅蓝菌素（Sigma）试验作为阳性对照，所有这些均以双份重复样进行。 

此试验在一台Molecular Devices SpectraMax Plus分光光度计上进行。将含FAS、缓冲液、抑制剂和对照样的板放入加热至37℃的分光光度计中。采用动态方案，空白孔一式两份，含有100μl的100 mM K₂PO₄，pH 6.5，按10秒的间隔在OD₃₄₀读板5分钟以测定NADPH的任何与丙二酸单酰辅酶A无关的氧化作用。从光度计中取出板，向各孔（除空白孔外）中加入丙二酸单酰辅酶A（每孔最终浓度67.4μM）和炔基辅酶A（每孔最终浓度61.8μM）。像以上一样按动态方案再次读板，以测定与丙二酸单酰辅酶A有关的NADPH氧化。与丙二酰辅酶A有关的和与丙二酰辅酶A无关的NADPH氧化的相应ΔOD₃₄₀之间的差是特异的FAS活性。由于FAS制剂的纯度，与丙二酸单酰辅酶A无关的NADPH氧化是可以忽略的。 

化合物对于FAS的IC₅₀确定如下：将ΔOD₃₄₀对于所试验的每种抑制剂浓度作图，进行线性回归处理，计算最佳拟合线，r²值和95%置信区间。产生对FAS抑制50%的化合物浓度是IC₅₀。利用SOFT_max PRO软件（Molecular Devices）对于每个化合物浓度以ΔOD₃₄₀对时间作图。使用Prism Version 3.0（Graph Pad Software）计算线性回归，最佳拟合线，r²和95%置信区间。 

结合到总脂质内的[¹⁴C]乙酸盐的测定和化合物的IC₅₀的测定。此试验测定[¹⁴C]乙酸盐在总脂质内的吸收，它是活体外脂肪酸合成途径的活性的量度，被用来测定对活体外脂肪酸合成的抑制作用。 

将如上培养的MCF-7人乳腺癌细胞按照每孔5×10⁴个细胞植入24孔板。经培养过夜后，将加溶在DMSO中的要试验的化合物一式三份以5、10和20μg/ml的浓度加入，如果需要，采用更低的试验浓度。向一式三份的孔中加入DMSO作为载体对照。按5和10μg/ml一式三份试验C75作为正对照。培养4小时后，向每个孔中加入0.25μCi的[¹⁴C]乙酸盐（10μl体积）。 

再培养2小时后，吸出孔中的培养基，向各孔中加入800μl的氯仿：甲醇（2:1）和700μl的4mM MgCl₂。将各孔中的内容物转移到1.5 ml Eppendorf离心管中，在高速Eppendorf Microcentrifuge 5415D中全速旋转2分钟。除去上面的水层后，向各管中再加700μl的氯仿：甲醇（2:1）和500μl的4mM MgCl₂，然后像上面一样地离心1分钟。用巴氏吸管移出水层丢弃。向各管中再加400μl的氯仿：甲醇（2:1）和200μl的4 mM MgCl₂，然后离心并丢弃水层。将下面的有机相转移到闪烁管中，在N₂气下于40℃干燥。一旦干燥完毕，立即加入3 ml闪烁剂（APB#NBC5104），对小管进行¹⁴C计数。用Beckman闪烁计数器计算三重试样的平均cpm值。 

化合物的IC₅₀定义为使结合到脂质中的[¹⁴C]乙酸盐比对照样减少50%的药物浓度。其测定方法是：将平均cpm对试验的每个抑制剂浓度作图，进行线性回归并计算最佳拟合线，r²值和95%置信区间。平均cpm值由Beckman闪烁计数器（型号LS6500）对每个化合物浓度计算得出。线性回归、最佳拟合线、r²和95%置信区间用Prism Version 3.0（Graph Pad Software）计算。 

脂肪酸氧化的测定和化合物的SC₁₅₀的确定  此试验测定[¹⁴C]棕榈酸盐降解成酸溶性产物，这是脂肪酸体外氧化途径活性的量度，被用来测量脂肪酸的活体外氧化。 

将如上培养的MCF-7人乳腺癌细胞按每孔2.5×10⁵个细胞植入24孔板。在培养过夜后，将加溶在DMSO中的试验化合物一式三份以0.98、0.39、1.56、6.25、25和100μg/ml加入，必要时可采用更低的浓度。将DMSO一式三份加入孔中作为载体对照。C75以5和10μg/ml的浓度一式三份作为阳性对照。培养1小时后，移除培养基，向各孔中加入100μM的[¹⁴C]棕榈酸盐/环葡聚糖和200μM浅蓝菌素/无血清培养基（体积250μl）。 

再次培养30分钟后，加入2.6 N HClO₄使反应停止。将每个孔中的内容物转移到1.5 ml Eppendorf离心管中，加入4N KOH。将管子在60℃培养30分钟。向各管中加入1M乙酸钠和3N H₂SO₄并涡动混合。将各管在室温下于1000 rpm离心5分钟。取250μl上清液转移到2 ml的Eppendorf离心管中。向每只管内加入：938μl的氯仿：甲醇（1:1）、468μl氯仿和281μl去离子水。将离心管涡动并在室温下于1000 rpm离心5分钟。取750μl上相转移到闪烁管中，加入5ml闪烁剂，计数¹⁴C一分钟。用Beckman闪烁计数器计算三重试样的平均cpm值。 

化合物的SC₁₅₀定义为造成[¹⁴C]棕榈酸盐的酸溶性产物比未处理的对照样增加150%时的药物浓度。其确定方法是对于所试验的每个抑制剂浓度的平均cpm作图，进行线性回归并计算最佳拟合线，r²值和95%置信区间。平均cpm值用Beckman闪烁计数器（型号LS6500）对每个化合物浓度计算。线性回归、最佳拟合线、r²和95%置信区间的计算用Prism Version 3.0（Graph Pad Software）进行。如果某种化合物不能达到这一150%阈值，则认为它是阴性的。还报道了达到的最大值（FAO Max）。 

XTT细胞毒性试验  XTT试验是用于[⁵¹Cr]释放细胞毒性分析的一种非放射性的替代方法。XTT是一种四唑

盐，它只被代谢活性的活细胞还原成甲

染料。XTT的还原用光度法作为OD₄₉₀-OD₆₅₀来测量。 

为测定特定化合物对于癌细胞的细胞毒性，将得自美国模式培养物保藏所的MCF-7人乳腺癌细胞（表中用“（M）”表示）按每孔9×10³个细胞植入96板内含有10%胎牛血清、胰岛素、青霉素和链霉素的DMEM培养基中。在37℃和5% CO₂培养过夜后，向各孔中加入体积1μl的溶在DMSO中的待试化合物，其浓度为：80、40、20、10、5、2.5、1.25和0.625μg/ml，一式三份。若有必要，还试验其它浓度。向一式三份的孔中加入1μl的DMSO作为载体对照样。C75按40、20、10、15、12.5、10和5μg/ml的浓度一式三份作为阳性对照。 

培养72小时后，将细胞按照制造商的说明（细胞增殖试剂盒II（XTT）Roche）与XTT试剂一起培养4小时。在一台Molecular Devices SpectraMax Plus Spectrophotometer上在OD₄₉₀和OD₆₅₀处读板。含有XTT试剂但不含细胞的三个孔作为该板的空白样。XTT数据以OD₄₉₀-OD₆₅₀的形式报告。使用SOFTmax Pro软件（Molecular Dynamics）计算平均值和平均值的标准偏差。 

化合物的IC₅₀定义为造成OD₄₉₀-OD₆₅₀比对照样减小50%的药物浓度。OD₄₉₀-OD₆₅₀用SOFTmax PRO软件（Molecular Devices）对每个化合物浓度进行计算。IC₅₀则以FAS活性作为对照样的百分数对药物浓度作图，利用线性回归计算。线性回归、最佳拟合线、r²和95%置信区间利用Prism Version 3.0（Graph Pad Software）确定。 

还对OVCAR3细胞（“OV”）和HCT116细胞（“H”）进行了试验。 

减重筛选  使用Balb/C小鼠（Jackson Labs）进行初始减重筛选。将动物圈养在恒温和12小时明/暗周期的房间里，供应鼠食，随意接近水。每种待试化合物用3只小鼠，以载体作为对照，每个实验一式三份。为进行实验，对每种待试化合物分别圈养小鼠，一只笼内3只。将化合物稀释在DMSO中至10 mg/ml，按60 mg/kg的剂量（在约100μl DMSO中）或只用载液对小鼠腹膜内注射。每日观察小鼠并称重，用Excel（Microsoft）计算平均重量和标准误差。继续此实验直至处理过的小鼠达到其治疗前重量。 

杀微生物性质  使用肉汤微量稀释法测定化合物的杀微生物活性。将化合物二倍系列稀释进行试验，将抑制可见生长的浓度（OD₆₀₀为对照样的10%）定义为MIC。试验的微生物包括金黄色葡萄球菌（ATCC#29213）、粪肠球菌（ATCC#29212）、铜绿假单孢菌（ATCC#27853）和大肠杆菌（ATCC#25922）。试验在两种生长培养基中进行：Mueller Hinton肉汤和胰酶解酪蛋白大豆肉汤。 

一只血液（胰酶解酪蛋白大豆/5%羊血）琼脂板从保持在胰酶解酪蛋白大豆肉汤（含10%甘油）中的冷冻的储备液中接种，在37℃培养过夜。将菌落悬浮在无菌的肉汤中使浊度与0.5麦氏比浊标准相匹配。将接种物按1:10稀释在无菌肉汤（Mueller Hinton或胰酶解酪蛋白大豆肉汤）中，在96孔板每孔中加195μl。待试化合物溶在DMSO中，按以下浓度向孔中加5μl：25、12.5、6.25、3.125、1.56和0.78μg/ml，一式两份。如果需要可试验其它浓度。向一式两份的孔中加5μl DMSO作为载体对照样。每轮试验都包括系列稀释的阳性对照化合物万古霉素（粪肠球菌和金黄色葡萄球菌）和妥布霉素（大肠杆菌和铜绿假单孢菌）。 

在37℃培养24小时后，在一台Molecular Devices SpectraMax Plus分光光度计上读板（OD₆₀₀）。使用SOFTmax Pro Software（Molecular Devices）计算平均OD₆₀₀值，MIC值利用Prism Version 3.02（Graph Pad Software, San Diego）通过线性回归分析确定。MIC定义为造成OD₆₀₀读数相当于载体对照样读数的10%所需的化合物浓度。 

生物试验结果 

Claims (77)

1.一种下式化合物：

其中X由选自O、S或N的杂原子构成；R¹和R²独立地选自H、C₁-C₂₀烷基、环烷基、烯基、芳基、芳烷基或烷芳基；和

R³和R⁴独立地是氢或是一个有4-6个碳原子的取代或未取代的环，条件是，R³和R⁴不都是氢，并且如果R³和R⁴都不是氢，则R³和R⁴是相同的有4-6个碳原子的取代或未取代的环。

2.权利要求1的化合物，其中X由氧或硫构成。

3.权利要求1的化合物，其中R³是氢，R⁴选自取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，和各有4-6个碳原子的取代或未取代的杂环基。

4.权利要求3的化合物，其中R⁴被一个或多个第一取代基团取代，该取代基团选自卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤烷基、-OR⁵、-SR⁵、-CN、-CONH₂、-SO₂NH₂、-C(O)OR⁶、-CONHR⁷以及环烷基或杂环基，其中该第一取代基团的环烷基或杂环基可任选地是芳族基团，并任选地与两个相邻的R⁴原子稠合，和任选地被至少一个R⁵构成的取代基取代，

其中R⁵选自C₁-C₈烷基，C₁-C₈烷氧基，芳基，烷芳基，芳烷基，并任选地被一个或多个第二取代基团取代，该取代基团选自卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基，C₁-C₃卤烷基和C₁-C₃卤代烷氧基，

其中R⁶是C₁-C₈烷基，R⁷选自C₁-C₈烷基、烯丙基、吗啉、哌嗪、被R⁵ N-取代的哌嗪，以及含N、O、S或其任何组合的5或6元杂环。

5.权利要求4的化合物，其中R³是氢，R⁴为任选被一个或多个第一取代基团取代的芳基。

6.权利要求1的化合物，其中R³和R⁴与它们连接的原子和键一起形成一个取代或未取代的5-7元杂环，在环结构内有至少一个氮原子。

7.权利要求6的化合物，其中所述的5-7元杂环被一个或多个选自下述基团的第一取代基团取代：卤原子，C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤烷基、-OR⁵、-SR⁵、-CN、-CONH₂、-SO₂NH₂、-C(O)OR⁶、-CONHR⁷，和环烷基或杂环基，其中该第一取代基团中的环烷基或杂环基任选地是芳族基团，可任选地与该5-7元杂环上的两个相邻原子稠合，并且任选地被至少一个由R⁵构成的取代基取代，

其中R⁵选自C₁-C₈烷基，C₁-C₈烷氧基，芳基，烷芳基，芳烷基，并任选地被一个或多个选自卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基，C₁-C₃卤烷基和C₁-C₃卤代烷氧基的第二取代基团取代，

其中R⁶是C₁-C₈烷基，R⁷选自C₁-C₈烷基、烯丙基、吗啉、哌嗪、被R⁵ N-取代的哌嗪，以及含N、O、S或其任何组合的5或6元杂环。

8.权利要求6的化合物，其中所述的5-7元杂环在其环结构内有至少两个氮原子。

9.权利要求6的化合物，其中该5-7元杂环由有两个氮原子的6元环构成。

10.权利要求9的化合物，其中两个氮原子彼此处在对位。

11.权利要求1的化合物，其中R¹由直链或支链的C₆-C₈烷基构成。

12.权利要求1的化合物，其中R¹由直链或支链的C₈烷基构成。

13.权利要求1的化合物，其中R²由直链或支链的C₁-C₃烷基构成。

14.权利要求1的化合物，其中R²由甲基构成。

15.权利要求1的化合物，选自：

。

16.一种下式化合物：

其中R¹和R²独立地选自H、C₁-C₂₀烷基，环烷基，烯基，芳基，芳烷基和烷基；

R³和R⁴独立地是氢或是一个有4-6个碳原子的取代或未取代的环，条件是R³和R⁴不都是氢，并且如果R³和R⁴都不是氢，则R³和R⁴是相同的有4-6个碳原子的取代或未取代的环。

17.权利要求16的化合物，其中R³是氢，R⁴选自取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、和各有4-6个碳原子的取代或未取代的杂环基。

18.权利要求17的化合物，其中R⁴被一个或多个第一取代基团取代，该取代基团选自卤原子，C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤烷基、-OR⁵、-SR⁵、-CN、-CONH₂、-SO₂NH₂、-C(O)OR⁶、-CONHR⁷和环烷基或杂环，其中该第一取代基团的环烷基或杂环任选地是芳族基团，任选地与两个相邻的R⁴原子稠合，并且任选地被至少一个由R⁵构成的取代基取代；

其中R⁵选自C₁-C₈烷基，C₁-C₈烷氧基，芳基，烷芳基，芳烷基，并且任选地被一个或多个第二取代基团取代，该取代基团选自卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基，C₁-C₃卤烷基和C₁-C₃卤代烷氧基；

其中R⁶由C₁-C₈烷基构成，R⁷选自C₁-C₈烷基、烯丙基、吗啉、哌嗪、被R⁵ N-取代的哌嗪，以及含N、O、S或其任何组合的5或6元杂环。

19.权利要求18的化合物，其中R³由氢构成，R⁴由任选被一个或多个第一取代基团取代的芳基构成。

20.权利要求16的化合物，其中R³和R⁴与它们连接的原子和键一起形成一个取代或未取代的5-7元杂环，在环结构中有至少一个氮原子。

21.权利要求20的化合物，其中所述的5-7元杂环被一个或多个第一取代基团取代，该取代基团选自卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤烷基、-OR⁵、-SR⁵、-CN、-CONH₂、-SO₂NH₂、-C(O)OR⁶、-CONHR⁷以及环烷基或杂环，其中该第一取代基团中的环烷基或杂环任选地是芳族基团，可任选地与该5-7元杂环的两个相邻原子稠合，并任选地被至少一个由R⁵构成的取代基取代；

其中R⁵选自C₁-C₈烷基，C₁-C₈烷氧基，芳基，烷芳基，芳烷基，可任选地被一个或多个第二取代基团取代，该取代基团选自卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基，C₁-C₃卤烷基、C₁-C₃卤代烷氧基；

其中R⁶由C₁-C₈烷基构成，R⁷选自C₁-C₈烷基、烯丙基、吗啉、哌嗪、被R⁵ N-取代的哌嗪，以及含有N、O、S或其任何组合的5或6元杂环。

22.权利要求20的化合物，其中R³和R⁴与它们连接的原子和键一起形成一个有两个氮原子的6元环。

23.权利要求22的化合物，其中的两个氮原子彼此处于对位。

24.权利要求16的化合物，其中R¹由直链或支链的C₆-C₈烷基构成。

25.权利要求16的化合物，其中R¹由直链或支链的C₈烷基构成。

26.权利要求16的化合物，其中R²由直链或支链的C₁-C₃烷基构成。

27.权利要求16的化合物，其中R²由甲基构成。

28.权利要求16的化合物，选自：

。

29.一种下式化合物：

其中R¹和R²独立地选自H、C₁-C₂₀烷基，环烷基，烯基，芳基，芳烷基和烷芳基；和

R³和R⁴独立地是氢或有4-6个碳原子的取代或未取代的环，条件是，R³和R⁴不都是氢，并且如果R³和R⁴都不是氢，则R³和R⁴是有4-6个碳原子的相同的取代或未取代的环。

30.权利要求29的化合物，其中R³是氢，R⁴选自取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，以及各有4至6个碳原子的取代或未取代的杂环基团。

31.权利要求30的化合物，其中R⁴被一个或多个第一取代基团取代，该取代基团选自卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤烷基、-OR⁵、-SR⁵、-CN、-CONH₂、-SO₂NH₂、-C(O)OR⁶、-CONHR⁷和环烷基或杂环基，其中第一取代基团的环烷基或杂环基任选地是芳族基团，可任选地与两个相邻的R⁴原子稠合，并且任选地被至少一个由R⁵构成的取代基取代；

其中R⁵选自C₁-C₈烷基，C₁-C₈烷氧基，芳基，烷芳基，芳烷基，并可任选地被一个或多个第二取代基团取代，该取代基团选自卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基，C₁-C₃卤烷基和C₁-C₃卤代烷氧基，其中R⁶由C₁-C₈烷基构成，R⁷选自C₁-C₈烷基、烯丙基、吗啉、哌嗪、被R⁵ N-取代的哌嗪，以及含有N、O、S或其任何组合的5或6元杂环。

32.权利要求31的化合物，其中R³由氢构成，R⁴由任选被一个或多个第一取代基团取代的芳基构成。

33.权利要求29的化合物，其中R³和R⁴与它们所连接的原子和键一起形成一个取代或未取代的5-7元杂环，在环结构内有至少一个氮原子。

34.权利要求33的化合物，其中的5-7元杂环被一个或多个第一取代基团取代，该取代基团选自卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤烷基、-OR⁵、-SR⁵、-CN、-CONH₂、-SO₂NH₂、-C(O)OR⁶、-CONHR⁷和环烷基或杂环基，其中该第一取代基团中的环烷基或杂环基任选地是芳族基团，可任选地与5-7元杂环的两个相邻原子稠合，并可任选地被一个R⁵构成的取代基取代；

其中R⁵选自C₁-C₈烷基，C₁-C₈烷氧基，芳基，烷芳基，芳烷基，并可任选地被一个或多个第二取代基团取代，该取代基团选自卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基，C₁-C₃卤原子和C₁-C₃卤代烷氧基；

其中R⁶由C₁-C₈烷基构成，R⁷选自C₁-C₈烷基、烯丙基、吗啉、哌嗪、被R⁵ N-取代的哌嗪，以及含有N、O、S或其任何组合的5或6元杂环。

35.权利要求33的化合物，其中R³和R⁴与它们连接的原子和键一起形成一个有两个氮原子的6元环。

36.权利要求35的化合物，其中所述的两个氮原子彼此处在对位。

37.权利要求29的化合物，其中R¹由直链或支链的C₆-C₈烷基构成。

38.权利要求29的化合物，其中R¹由直链或支链的C₈烷基构成。

39.权利要求29的化合物，其中R²由直链或支链的C₁-C₃烷基构成。

40.权利要求29的化合物，其中R²由甲基构成。

41.权利要求29的化合物，其中该化合物包括以下结构：

。

42.下式化合物：

其中X由O、S或N构成；

R¹和R²独立地选自H、C₁-C₂₀烷基、环烷基、烯基、芳基、芳烷基和烷芳基；和

R⁸和R^8’独立地在结构中不存在，或是由第一取代基团构成，该取代基团选自卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤烷基、-OR⁵、-SR⁵、-CN、-CONH₂、-SO₂NH₂、-C(O)OR⁶、-CONHR⁷和环烷基或杂环基，其中该第一取代基团中的环烷基或杂环基任选地是芳族基团，可任选地与芳基的两个相邻原子稠合，或者任选地被至少一个由R⁵构成的取代基取代；

其中R⁵选自C₁-C₈烷基，C₁-C₈烷氧基，芳基，烷芳基，芳烷基，并可任选地被一个或多个第二取代基团取代，该取代基团选自卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃卤烷基和C₁-C₃卤代烷氧基；

其中R⁶由C₁-C₈烷基构成，R⁷选自C₁-C₈烷基、烯丙基、吗啉、哌嗪、被R⁵ N-取代的哌嗪，及含有N、O、S或其任何组合的5或6元杂环。

43.权利要求42的化合物，其中X由氧或硫构成，形成下式化合物：

。

44.权利要求42的化合物，其中R^8’在结构中不存在，R⁸选自卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃卤烷基、-OR⁵、-SR⁵、-CN、-CONH₂、-SO₂NH₂、-C(O)OR⁶、-CONHR⁷以及环烷基或杂环基，其中该第一取代基团中的环烷基或杂环基任选地是芳族基团，可任选地与芳基的两个相邻原子稠合，并可任选地被至少一个由R⁵构成的取代基取代。

45.权利要求42的化合物，其中R^8’在结构中不存在，R⁸选自卤素、C₁-C₃卤烷基和OR⁵。

46.权利要求45的化合物，其中R⁸是OR⁵，R⁵是C₁-C₃卤烷基。

47.权利要求42的化合物，其中R¹由直链或支链的C₆-C₈烷基构成。

48.权利要求42的化合物，其中R¹由直链或支链的C₈烷基构成。

49.权利要求42的化合物，其中R²由直链或支链的C₁-C₃烷基构成。

50.权利要求42的化合物，其中R²由甲基构成。

51.权利要求42的化合物，选自：

。

52.下式化合物

其中X由O、S或N构成；

R¹和R²独立地选自H、C₁-C₂₀烷基，环烷基，烯基，芳基，芳烷基和烷芳基；和

其中R⁵选自C₁-C₈烷基、C₁-C₈烷氧基、芳基、烷芳基、芳烷基、任选地被一个或多个选自卤原子、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃卤烷基和C₁-C₃卤代烷氧基的取代基取代。

53.权利要求52的化合物，其中X由氧或硫构成，形成下式化合物：

。

54.权利要求52的化合物，选自：

。

55.一种药物组合物，其中含有药物稀释剂和权利要求1、16、29、42和52中任一项的化合物。

56.权利要求55的药物组合物，其中所述的化合物选自：

。

57.权利要求55的药物组合物，其中所述的化合物选自：

。

58.一种治疗受治疗者的癌症的方法，包括向受治疗者施用有效量的权利要求55的药物组合物。

59.权利要求58的方法，其中的受治疗者是动物。

60.权利要求58的方法，其中的受治疗者是人。

61.权利要求58的方法，其中的药物组合物包括选自以下的一种或多种化合物：

。

62.权利要求58的方法，其中的药物组合物包括选自以下的一种或多种化合物：

。

63.一种抑制受治疗者中脂肪酸合酶活性的方法，包括向受治疗者施用有效数量的权利要求55的药物组合物。

64.权利要求63的方法，其中受治疗者是动物。

65.权利要求63的方法，其中受治疗者是人。

66.权利要求63的方法，其中所述的药物组合物包含一种或多种选自以下的化合物：

。

67.权利要求63的方法，其中所述的药物组合物包含一种或多种选自以下的化合物：

。

68.一种造成受治疗者减重的方法，包括向受治疗者施用有效数量的权利要求55的药物组合物。

69.权利要求68的方法，其中的受治疗者是动物。

70.权利要求68的方法，其中受治疗者是人。

71.权利要求68的方法，其中所述的药物组合物包含一种或多种选自以下的化合物：

。

72.权利要求68的方法，其中所述的药物组合物包含一种或多种选自以下的化合物：

。

73.一种抑制受治疗者内侵袭性微生物细胞生长的方法，包括向受治疗者施用有效数量的权利要求55的组合物。

74.权利要求73的方法，其中的受治疗者是动物。

75.权利要求73的方法，其中的受治疗者是人。

76.权利要求73的方法，其中所述的药物组合物包含一种或多种选自以下的化合物：

。

77.权利要求73的方法，其中所述的药物组合物包含一种或多种选自以下的化合物：

。

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