EA010484B1 - Новые соединения, фармацевтические композиции, содержащие их, и способы их использования - Google Patents

Новые соединения, фармацевтические композиции, содержащие их, и способы их использования Download PDF

Info

Publication number
EA010484B1
EA010484B1 EA200500122A EA200500122A EA010484B1 EA 010484 B1 EA010484 B1 EA 010484B1 EA 200500122 A EA200500122 A EA 200500122A EA 200500122 A EA200500122 A EA 200500122A EA 010484 B1 EA010484 B1 EA 010484B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
group
compound
alkyl
subject
pharmaceutical composition
Prior art date
Application number
EA200500122A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200500122A1 (ru
Inventor
Фрэнсис П. Кухаджа
Сьюзен М. Медгалчи
Джаган Н. Тхупари
Крэйг А. Таунсенд
Джилл М. Макфэдден
Original Assignee
Фасджен, Ллс.
Дзе Джонс Хопкинс Юниверсити
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Фасджен, Ллс., Дзе Джонс Хопкинс Юниверсити filed Critical Фасджен, Ллс.
Publication of EA200500122A1 publication Critical patent/EA200500122A1/ru
Publication of EA010484B1 publication Critical patent/EA010484B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/26—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D307/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/32—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/26—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D307/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/32—Oxygen atoms
    • C07D307/33—Oxygen atoms in position 2, the oxygen atom being in its keto or unsubstituted enol form
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/56—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/58—One oxygen atom, e.g. butenolide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/56—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Furan Compounds (AREA)

Abstract

Предложенное изобретение относится к новым соединениям формулы Iв которой Rозначает C-Салкил или группу =СН; Rозначает C-Салкил; Xозначает NHR, где Rпредставляет собой C-Салкил, Салкенил и необязательно содержит карбоксильную группу, спиртовую группу, или когда Rозначает группу =СНи Rозначает Салкил, Xозначает группу -NHCHCOOMe или группу -NHCHCOOtrBu. Кроме того, предложенное изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей фармацевтический разбавитель и соединение формулы IX, в которой Rозначает C-Салкил или группу =СН; Rозначает C-Салкил; Xозначает группу ОН или -NHR, где Rпредставляет собой C-Салкил, Салкенил и необязательно содержит карбоксильную группу или спиртовую группу, или когда Rозначает группу =СНи Rозначает Салкил, Xозначает группу -NHCHCOOMe. Описаны также способы индуцирования потери веса у животного или человека; ингибирования роста раковых клеток у животного или человека; стимулирования активности СРТ-1 у животного или человека; ингибирования активности нейропептида-Y у животного или человека; ингибирования роста инвазивных микробных клеток у животного или человека, предусматривающие введение указанному субъекту эффективного количества фармацевтической композиции.

Description

Жирные кислоты играют три первостепенные роли в физиологии клеток. Во-первых, они являются строительными блоками биологических мембран. Во-вторых, производные жирных кислот служат в качестве гормонов и внутриклеточных переносчиков. В-третьих, особую важность для настоящего изобретения представляет то, что жирные кислоты являются топливными молекулами, которые могут храниться в адипозной ткани в виде триацилглицеринов, которые также известны как нейтральные жиры.
Имеются четыре первостепенных фермента, включенных в синтетический путь жирной кислоты, синтаза жирной кислоты (РА8), ацетил СоА карбоксилаза (АСС), яблочный фермент и лимонная лиаза. Главный фермент ЕА8 катализирует ΝΑΌΡΗ-зависимую конденсацию предшественников малонил-СоА и ацетил-СоА для продуцирования жирных кислот. ΝΑΌΡΗ (никотинамид-адениндинуклеотид фосфат НАДФ) является восстанавливающим агентом, который обычно служит как донор неотъемлемых электронов в двух точках реакционного цикла ЕА8. Другие три фермента (т.е. АСС, яблочный фермент и лимонная лиаза) продуцируют необходимые предшественники. Другие ферменты, например, которые продуцируют ΝΑΌΡΗ, также включены в синтез жирных кислот.
ЕА8 имеет номер Ферментной Комиссии (Е.С.) № 2.3.1.85 и также известен как синтетаза жирных кислот, лигаза жирных кислот, также как его систематическое наименование ацил-СоА: малонил-СоА Сацилтрансфераза (декарбоксилирующий, оксоацил- и эноилвосстанавливающий и тиоэфиргидролизующий). Имеются семь отчетливых ферментов или каталитических доменов, включенных в ЕА8 катализируемый синтез жирных кислот: ацетилтрансацилазы, малонил-трансацилазы, бетакетоацилсинтетазы (конденсирующего фермента), бета-кетоацилредуктазы, бета-гидроксиацилдегидразы, эноилредуктазы и тиоэстеразы. (\УакП. 8.1., ВюскеткИгу, 28: 4523-4530, 1989). Все семь этих ферментов вместе образуют ЕА8.
Хотя ЕА8 катализируемый синтез жирных кислот сходен в низших организмах, таких как, например, бактерии, и в более высших организмах, таких как, например, микобактерии, дрожжи и люди, имеет несколько важных отличий. В бактериях семь ферментных реакций осуществляются с помощью семи отдельных полипептидов, которые являются неассоциированными. Это классифицируется как тип II ЕА8. В противоположность этому, ферментные реакции в микобактериях, дрожжах и человеческих организмах осуществляются с помощью многофункциональных полипептидов. Например, дрожжи имеют комплекс, составленный из двух отдельных полипептидов, тогда как в микобактериях и человеческих организмах все семь реакций осуществляются с помощью единственного полипептида. Они классифицируются как тип I РА8.
РА8 ингибиторы
Различные соединения были показаны для ингибирования синтазы жирных кислот (РА8). РА8 ингибиторы могут идентифицироваться по способности соединений ингибировать ферментную активность очищенной РА8. РА8 активность может оцениваться с помощью измерения включения радиомеченного предшественника (например, ацетил-СоА или малонил-СоА) в жирных кислотах или с помощью спектрофотометрического измерения окисления NΑ^ΡΗ. (Όίΐδ, и др. Ме11юЙ5 Епхуток 35:74-83).
В таблице, представленной ниже, перечислены несколько РА8 ингибиторов.
Представители ингибиторов ферментов путей синтеза жирных кислот
Ингибиторы синтазы жирных
кислот церуленин
1,3-дибромопропанон фениоцеруленин
реагент Эллмана (5,5'-дитио- меларсопрол
бис-(2-нитробензойная кислота). йодацетат
ϋΤΝΒ) фениларсиноксид
- 1 010484
4™(4г-хлорбензилокси)бензил никотинат (КСЭ-232) 4-(41-хлорбензилокси)бензойная кислота (МП) 2(5(4-хлорфенил)пентил)оксиран™ 2-карбоксилат (РОСА) и его СоА производное этоксимуравьиный ангидрид пентостам мелиттин тиолактомицин
Ингибиторы для цитрат-лиазы Ингибиторы для яблочного
(-)гидроксицитрат (К,5)-5™(3,4-дикарбокси-З- гидрокси-3-метилбутил)-СоА 5-карбоксиметил-СоА фермента динуклеотид фосфат оксидированного перйодат 3аминопиридин аденина 5/5'-дитио-бис-(2нитробензойная кислота) п-гидроксимеркурийбензоат Ν-Этилмалеимид оксалил тиоловые эфиры такие/ как 5-оксалил- глутатион госсипол фенилглиоксал 2,3™бутандион бромпируват прегненолон
Ингибиторы для ацетил СоА 9-деценил-1-пентендиовая кислота деканил-2-пентендиовая кислота деканил-1-пентендиовая кислота (£)-ибупрофенил-СоА (Н) -ибупрофенил-СоА флуазифоп и его СоА эфир
карбоксилазы сетоксидим галоксифоп и его СоА эфир диклофоп и его СоА эфир клетодим аллоксидим трифоп клофибриновая кислота 2/4-0 мекопроп
далапон 2-алкилглютарат 2-тетрадеканилглютарат (ТБС) 2-октилглютаровая кислота циклический 3',5'-монофосфат N6,02-дибутирил аденозина циклический 3',5'-монофосфат N2,02-дибутирил гуанозина СоА производное от 5- (тетрадецилокси)-2фуранкарбоновой кислоты (ТОГА) 2,3,7/8-тетрахлордибензо-лдиоксин клофоп 5- (тетрадециклокси)-2фуранкарбоновая кислота бета, бета'- тетраметилгексадекандиовая кислота тралоксидим свободный или монотиоэфир бета, бета прайм-метил- замещенной гексадекандиовой кислоты (ΜΕΏΙΟΑ 16) альфа-циано-4гидроксициннамат 3-(4-бром-2,3-диоксобутил)СоА п-гидроксимеркурийбензсат (РНМВ) циклический 3', 5'-монофосфат N6, 02-дибутирил аденозина
- 2 010484
Из четырех ферментов в пути синтеза жирных кислот БАБ является предпочтительной целью для ингибирования, потому что данный фермент действует только в пути получения жирных кислот, в то время как другие три фермента вовлечены в другие клеточные функции. Следовательно, более вероятно, что ингибирование одного из трех других ферментов воздействует на нормальные клетки. Из семи ферментных стадий, осуществляемых с помощью БАБ, стадия, катализируемая конденсирующим ферментом, (т.е. бета-кетоацилсинтетазой) и эноилредуктаза оказались наиболее обычными кандидатами для ингибирования, которые уменьшают или останавливают синтез жирных кислот. Конденсирующий фермент БАБ комплекса хорошо охарактеризован с точки зрения структуры и функции. Активный сайт или участок конденсирующего фермента содержит крайне важный цистеинтиол, который является целью антилипидемических реагентов, таких как, например, ингибитор церуленин.
Предпочтительные ингибиторы конденсирующего фермента включают широкий ряд химических соединений, включающих алкилирущие агенты, оксиданты и реагенты, способные к подвержению дисульфидного обмена. Связующая группа фермента предпочитает длинную цепь, Е,Е, диены.
В принципе, реагент, содержащий в боковой цепи диен и группу, которая проявляет реакционноспособность с тиолатными анионами, мог бы быть хорошим ингибитором конденсирующего фермента. Примером является церуленин [(2Б,3В)-2,3-эпокси-4-оксо-7,10-додекадиеноиламид]
Церуленин ковалентно связывается с существенной цистеинтиольной группой в активном сайте конденсирующего фермента синтазы жирной кислоты, инактивирующей данную ключевую ферментную стадию (ИтаЬакЫ, е! а1, 1. Вюсйет., 105:751-755, 1989). Хотя отмечалось, что церуленин обладает другими активностями, они или имеют место в микроорганизмах, которые могут быть нерелевантными моделями человеческих клеток (например, ингибирование синтеза холестерина в грибках, Отита (1976), Вас!етю1. Веу., 40:681-697; или синтеза уменьшенной РНК в вирусах, Рете/, е! а1. (1991), ЕЕВБ, 280: 129133), имеют место при существенно более высоких концентрациях лекарства (ингибирование вирусной Ηΐν протеазы при 5 мг/мл, МоеШпд, е! а1. (1990), ЕЕВБ, 261:373-377) или могут быть непосредственным результатом ингибирования синтеза эндогенной жирной кислоты (ингибирование переработки антигена в В лимфоцитах и макрофагах, Еа1о, е! а1. (1987), 1. 1ттипо1., 139:3918-3923). По некоторым данным предполагают, что церуленин не ингибирует специфически миристоилирование белков (Б1топ, е! а1., 1. Вю1. СНет., 267:3922-3931, 1992).
Еще несколько БАБ ингибиторов описываются в патентной заявке США № 08/096908 и ее частичном продолжении, поданных 24 января 1994 г., содержание которых приводится здесь для сведения. Они включают ингибиторы синтазы жирной кислоты, цитратлиазу, СоА-карбоксилазу и яблочный фермент.
Томода с коллегами (Тотоба е! а1., ВюсНет. Вюрйуз. Ас! 921:595-598 1987; Отита е! а1., 1. АпйЬю!1С8 39:1211-1218 1986) описывают триаксин С (называемый иногда термином ^Б-1228А), встречающийся в природе ингибитор ацил-СоА-синтетазы, который является продуктом Б1гер!отусез ер. БК-1894. Химическая структура Триаксина С представляет 1-гидрокси-3-(Е,Е,Е-2',4',7'-ундекатриенилиден)триазин. Триаксин С вызывает 50% ингирование ацил-СоА-синтетазы печени крыс при 8,7 мкМ; родственное соединение, Триаксин А, ингибирует ацил-СоА-синтетазу с помощью механизма, который является конкурентным с длинноцепочечными жирными кислотами. Ингибирование ацил-СоА-синтетазы является токсичным для животных клеток. Томода и др. (Тотоба е! а1., 1. Вю1. СНет. 266:4214-4219, 1991) сообщают, что Триаксин С вызывает ингибирование роста в Вар клетках при 1,0 мкМ, и было также показано, что он ингибирует рост Vе^о и Не1а клеток. Томода и др. далее сообщают, что ацил-СоА-синтетаза является существенной в животных клетках и что ингибирование данного фермента вызывает летальные эффекты.
В патенте США № 5981575 (содержание которого приводится здесь для сведения) было показано, что семейство соединений (гамма-замещенных-альфа-метилен-бета-карбокси-гамма-бутиролактонов) ингибирует синтез жирных кислот, ингибирует рост опухолевых клеток и вызывает потерю веса. Соединения, описанные в патенте '575, имеют несколько преимуществ над природным продуктом церуленином вследствие терапевтических применений: [1] они не содержат высокореактивную эпоксидную группу церуленина, [2] они являтся стабильными и растворимыми в водном растворе, [3] они могут получаться с помощью двухстадийной реакции синтеза и таким образом получаться в больших количествах, и [4] они легко тритируются до высокой специфической активности для биохимических и фармакологических анализов. Синтез данного семейства соединений, которые являются ингибиторами синтазы жирных кислот, описывается в патенте '575, как и их использование в качестве средств для лечения экспрессирования ЕАБ в опухолевых клетках, и их использование в качестве средств для снижения веса тела. Патент '575 раскрывает также использование любых ингибиторов синтазы жирных кислот для системного снижения адипоцитной массы (числа или размера адипоцитных клеток) как средства снижения веса тела.
Первичными областями для синтеза жирных кислот у мышей и людей являются печень (см. Воп
- 3 010484 сап, Сап. 1. ВюсНет., 52:221-230, 1974; Тпксап е! а1., 1985, Ме!аЬо11кт, 34:580-7; Вагака! е! а1., 1991, Ме1аЬоБкт, 40:280-5), лактирующие молочные железы (см. ТНотркоп е! а1., Рей1а1т. Кек., 19:139-143, 1985) и адипозная ткань (Со1йпск е! а1., 1974, СНп. 8с1. Мо1. Мей., 46:469-79).
Ингибиторы синтеза жирных кислот как противомикробные агенты
Церуленин был первоначально выделен в качестве потенциального противогрибкового антибиотика из культурального бульона Серйа1окропит саеги1епк. В структурном отношении церуленин был охарактеризован как амид (2К,38)-эпокси-4-оксо-7,10-транс,транс-додекановой кислоты. Было показано, что его механизмом действия является ингибирование, через необратимое связывание, бета-кетоацил-АСР синтазы, конденсирующего фермента, требуемого для биосинтеза жирных кислот. Церуленин был охарактеризован как противогрибковый агент, прежде всего против Сапй1йа и 8ассНаготусек кр. Кроме того, некоторая ίη У11то активность была показана против некоторых бактерий, актиномицетов и микобактерий, хотя не было найдено никакой активности против МусоЬас!епит !иЬегси1ок1к. Активность ингибиторов синтеза жирных кислот и, в частности, церуленина оценивалась против простейших, таких как Тохор1акта допйп, или других инфекционных эукариотных патогенов, таких как Рпеитосукйк саппл, С1атй1а 1атЬНа, Р1актойшт кр., ТпсНотопак уадшаЛк, Сгур!окропйшт, Тгурапокота, Ье1кНтап1а, 8сЫк!окота.
Инфекционными заболеваниями, которые особенно восприимчивы к лечению, являются заболевания, которые вызывают повреждения на внешне доступных поверхностях зараженного животного. Внешне доступные поверхности включают все поверхности, которые можно достичь неинвазивными средствами (без пореза или пунктирования кожи), включая кожную поверхность саму по себе, слизистые мембраны, такие как мембраны, покрывающие носовую, ротовую, желудочно-кишечную или урогенитальную поверхности, и легочные поверхности, такие как альвеолярные мешочки. Восприимчивые заболевания включают: (1) кожные микозы или грибковые инфекционные заболевания волос, особенно вызываемые грибками Мютокротшт, ТпсНорНу!оп, Ер1йегторНу!оп или Мисоси!апеоик сапй1й1ак1к; (2) мукотический кератит, особенно вызываемый АкретдШик, Еикатшт или Сапй1йа; (3) амебный кератит, особенно вызываемый АсапШашоеЬа; (4) желудочно-кишечное заболевание, особенно вызываемое С1атй1а 1атЬ11а, Еп!атоеЬа, Стур!окропйшт, Мютокропйшт или Сапй1йа (наиболее обычное у иммунологически скомпрометированных животных); (5) урогенитальную инфекцию, особенно вызываемую Сапй1йа а1Ь1сапк или ТпсНотопак уафпаНк; и (6) легочное заболевание, особенно вызываемое МусоЬас!етшт !иЬегси1ок1к, АкретдШик или Рпеитосукйк саппл. Инфекционные организмы, которые являются восприимчивыми к лечению ингибиторами синтеза жирных кислот, включают МусоЬас!епит !иЬегси1ок1к, особенно штаммы, резистентные к множеству лекарств, и простейшие, такие как Тохор1акта.
Любое соединение, которое ингибирует синтез жирных кислот, может применяться для ингибирования роста микробных клеток. Однако соединения, даваемые пациенту, не должны быть в равной степени токсичными по отношению и к пациенту, и к целевым микробным клеткам. Соответственно, благоприятным является выбор ингибиторов, которые поражают только или преимущественно целевые микробные клетки.
Эукариотные микробные клетки, которые являются зависимыми от их собственных эндогенно синтезированных жирных кислот, экспрессируют Тип I ЕА8. Это показано как тем фактом, что ЕА8 ингибиторы являются ингибиторными к росту, так и тем фактом, что экзогенно добавляемые жирные кислоты могут защищать нормальные клетки пациента, но не микробные клетки, от ЕА8 ингибиторов. Следовательно, агенты, которые предотвращают синтез жирных кислот с помощью клеток, могут применяться для лечения инфекций. В эукариотах жирные кислоты синтезируются с помощью типа I ЕА8 с использованием субстратов ацетил-СоА, малонил-СоА и ЫАЭРН. Таким образом, другие ферменты, которые могут быть подходящими для субстратов в данном пути синтеза, могут также воздействовать на степень синтеза жирных кислот и таким образом быть важными в микробах, которые зависят от эндогенно синтезируемых жирных кислот. Ингибирование экспрессии или активности любых из этих ферментов будет воздействовать на рост микробных клеток, которые являются зависимыми от эндогенно синтезируемой жирной кислоты.
Продукт типа I ЕА8 отличается в различных организмах. Например, у грибка 8. сетеу1К1ае продуктами являются преимущественно пальмитат и стерат, стерифицированный по отношению к коферменту А. У МусоЬас!епит ктедтайк продуктами являются СоА сложные эфиры насыщенных жирных кислот с длиной, варьирующейся от 16 до 24 атомов углерода. Данные липиды часто далее перерабатываются для удовлетворения потребности в клетках для различных липидных компонентов.
Можно ожидать, что ингибирование ключевых стадий при переработке в нисходящем потоке или утилизация жирных кислот будет ингибировать клеточную функцию, зависит ли клетка от эндогенной жирной кислоты или утилизирует жирную кислоту, поставляемую извне клетки, и поэтому ингибиторы данных стадий в нисходящем потоке могут не быть достаточно селективными для микробных клеток, которые зависят от эндогенной жирной кислоты. Однако было обнаружено, что введение ингибитора синтеза жирной кислоты типа I таким микробам делает их более чувствительными к ингибированию ингибиторами переработки в нисходящем потоке и/или утилизации. Из-за данного синергизма введение ингибитора синтеза жирных кислот в сочетании с одним или более ингибиторами стадий, проходящих в
- 4 010484 нисходящем потоке в биосинтезе липидов, и/или утилизации будет селективно воздействовать на микробные клетки, которые зависят от эндогенно синтезируемой жирной кислоты. Предпочтительные сочетания включают ингибитор ЕА8 и ацетил-СоА-карбоксилазу, или ЕА8 и ингибитор МА8.
Когда было найдено, что млекопитающие инфицируются клетками организма, который экспрессирует ЕА8 типа I, или, если ЕА8 найден в биологической жидкости, взятой у пациента, млекопитающее или пациента можно лечить введением ингибитора синтеза жирных кислот (патент № 5614551).
Ингибирование нейропептида-Υ для подавления аппетита и стимулирования потери веса описывается в международной патентной заявке № РСТ/И8 01/05316, содержание которой приводится здесь для сведения. В данной заявке, однако, не описываются и не раскрываются какие-либо из соединений, раскрытых в настоящей заявке.
Стимулирование карнитин-пальмитоил-трансферазы-1 (СРТ-1) для стимуляции потери веса описано в патентной заявке США № 60/354480, содержание которой приводится здесь для сведения. Указанная заявка также не раскрывает и не описывает какие-либо из соединений, описанных в настоящей заявке.
Использование ингибиторов РА8 для ингибирования роста раковых клеток описывается в патенте США № 5759837, содержание которого включено в настоящую заявку для сведения. Указанная заявка не описывает и не раскрывает какое-либо из соединений, раскрытых в данном описании.
Краткое содержание изобретения
Обнаружены новые классы соединений, которые обладают большим разнообразием терапевтически ценных свойств, например, проявляют РА8-ингибирование, ΝΡΥ-ингибирование, СРТ-1 стимулирование, способность вызывать потерю веса и противораковые и противомикробные свойства.
Еще одной целью данного изобретения является предоставление способа вызывания потери веса у животных и людей путем введения фармацевтических композиций, включающих фармацевтический разбавитель и соединение формулы I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII или IX, которые подробно описаны ниже.
Следующей целью изобретения является предоставление способа стимулирования активности СРТ1 путем введения людям или животным фармацевтических композиций, включающих фармацевтический разбавитель и соединение формулы I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII или IX.
Еще одной целью данного изобретения является предоставление способа ингибирования синтеза нейропептида-Υ у людей или животных путем введения фармацевтических композиций, включающих фармацевтический разбавитель и соединение формулы I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII или IX.
Еще одной целью данного изобретения является предоставление способа ингибирования синтазы жирной кислоты у людей или животных путем введения фармацевтических композиций, включающих фармацевтический разбавитель и соединение формулы I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII или IX.
Еще одной целью данного изобретения является предоставление способа лечения рака у людей и животных путем введения фармацевтических композиций, включающих фармацевтический разбавитель и соединение формулы I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII или IX.
Дальнейшей целью данного изобретения является предоставления способа предотвращения роста раковых клеток у животных и людей с помощью введения фармацевтических композиций, включающих фармацевтический разбавитель и соединение формулы I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII или IX.
Еще одной целью данного изобретения является предоставление способа ингибирования роста инвазивных клеток микробов путем введения фармацевтической композиции, включающей фармацевтический разбавитель и соединение формулы I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII или IX.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 показывает синтетическую схему получения некоторых соединений согласно изобретению; фиг. 2 - схему синтеза для получения некоторых соединений согласно изобретению;
фиг. 3 - результаты испытания ίη νίνο противоопухолевых свойств некоторых соединений согласно изобретению;
фиг. 4 - результаты испытания ίη νίΐτο противоопухолевых свойств различных соединений согласно изобретению;
фиг. 5 - результаты испытания ίη νίνο на потерю веса с помощью некоторых соединений согласно изобретению.
Подробное описание изобретения
Соединения изобретения могут быть получены с помощью общепринятых средств. Синтез ряда соединений описывается в примерах. Соединения могут быть полезными для лечения ожирения, рака или основанных на микробных организмах инфекций.
Одним из воплощений изобретения являются соединения формулы I
- 5 010484
алкенил, арил, арилалкил, или алкиларил, =СНК3, в которой К1 = Н или С1-Сгоалкил, циклоалкил, -С(О)ОК3, -С(О)К3, -СН2С(О)ОК3, -СН;С(О)\Н1Г.
где К3 представляет Н или С1-С10алкил, циклоалкил или алкенил;
К2 = С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил;
X1 = ΝΗΚ4, где К4 представляет Н, С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил, причем, К4 группа дополнительно содержит карбонильную группу, карбоксильную группу, карбоксамидную группу, спиртовую группу или простую эфирную группу, далее К4 группа необязательно содержит один или более атомов галогена.
Согласно предпочтительному воплощению К1 представляет С1-С10алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил; или =СН2.
В еще более предпочтительно воплощении К1 представляет -СН3 или =СН2.
Согласно еще одному предпочтительному воплощению К4 представляет -СН2С(О)ОК5 или -СН2С(О)NНК5, где К5 представляет С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил.
Еще одним из воплощений изобретения являются соединения формулы II
и в которой К6 = Н, или С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил, -С(О)ОК8, -С(О)К8, -СН2С(О)ОК8, СН2С(О^НК8, где К8 представляет Н или С1-С10алкил, циклоалкил или алкенил;
К7 = С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил;
X2 = ΝΉ^, где К9 представляет Н, С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил, причем К9 группа дополнительно содержит карбонильную группу, карбоксильную группу, карбоксамидную группу, спиртовую группу или простую эфирную группу, далее К9 группа дополнительно содержит один или более атомов галогена;
при условии, что когда К6 представляет -СН3, и К7 представляет н-С13Н27, X2 не является группой -МНС2Н5.
Согласно предпочтительному воплощению К6 представляет С1-С10алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил.
В еще более предпочтительном воплощении К6 представляет -СН3.
Согласно еще одному предпочтительному воплощению К9 представляет -СН2С(О)ОК10 или СН2С(О)NΉК10, где К10 представляет С1-С10алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил.
Еще одним из воплощений изобретения являются соединения формулы III
Ш в которой К11 = Н, или С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил, =СНК13, -С(О)ОК13, -С(О)К13, -СН2С(О)ОК13, -СН2С(О)NΉК13, где К13 представляет Н или С1-С10алкил, циклоалкил или алкенил;
К12 = С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил;
X3 = ОК14, где К14 представляет С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил, причем
К14 группа необязательно содержит карбонильную группу, карбоксильную группу, карбоксамидную группу, спиртовую группу или простую эфирную группу, далее К14 группа дополнительно содержит
- 6 010484 один или более атомов галогена.
Согласно предпочтительному воплощению Я11 представляет С|-С|0алкил. циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил; или =СН2.
В еще более предпочтительном воплощении Я11 представляет -СН3 или =СН2.
Согласно еще одному предпочтительному воплощению Я14 представляет -СН2С(О)ОЯ15 или -СН2С(О)ЫНЯ15, где Я15 представляет С1-С10алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил.
Еще одним из воплощений изобретения являются соединения формулы IV
О
к17 'у-X*
IV в которой Я16 = Н, или С^С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил, -С(О)ОЯ18, -С(О)Я18, -СН2С(О)ОЯ18, СН2С(О)ХНЯ18, где Я18 представляет Н или С1-С10алкил, циклоалкил или алкенил;
Я17 = С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил;
X4 = ОЯ19, где Я19 представляет С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил, причем
Я19 группа необязательно содержит карбонильную группу, карбоксильную группу, карбоксамидную группу, спиртовую группу или простую эфирную группу, далее Я19 группа дополнительно содержит один или более атомов галогена, при условии, что, когда Я16 представляет -СН3 и Я19 представляет -СН3, тогда Я17 не является замещенным или незамещенным фенилом, Н-С3Н7, н-С5Н11 или н-С13Н27, и при дополнительном условии, что, когда Я16 представляет Н и Я19 представляет -СН3, тогда Я17 не является замещенным или незамещенным фенилом или группой -СН3, и, когда Я16 представляет Н и Я19 представляет -СН2СН3, тогда Я17 не является группой изо-С3Н7 или замещенным или незамещенным фенилом.
Согласно предпочтительному воплощению Я16 представляет С1-С10алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил.
В еще более предпочтительном воплощении Я16 представляет -СН3.
Согласно еще одному предпочтительному воплощению Я19 представляет -СН2С(О)ОЯ20 или -СН2С(О)ЫНЯ20, где Я20 представляет С1-С10алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил.
Еще одним из воплощений изобретения являются соединения формулы V
в которой Я21 = С2-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил, =СНЯ23, -С(О)ОЯ23, -С(О)Я23, -СН2С(О)ОЯ23, -СН2С(О)ЫНЯ23, где Я23 представляет Н или С1-С10алкил, циклоалкил или алке21 23 23 нил за исключением того, что, когда Я21 представляет =СНЯ23, Я23 не может быть Н;
Я22 = С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил;
при условии, что, когда Я21 представляет -СООН, тогда Я22 не является группой -СН3, н-С5Н11 или Н-С13Н27, и при дополнительном условии, что, когда Я21 представляет -СН2СООН, тогда Я22 не является группой -СН3, -СН2СН3 или группой изо-С5Н11, и при следующем условии, что, когда Я21 представляет =СНСН3, тогда Я22 не является группой н-С5Н11.
Согласно предпочтительному воплощению Я21 представляет С2-С10алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил.
Еще одним из воплощений изобретения являются соединения формулы VI
- 7 010484
в которой К24 = С2-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил, -С(О)ОК26, -С(О)К26, -СН2С(О)ОК26, -СН2С(О)ХНК26, где К26 представляет Н или С1-С10алкил, циклоалкил или алкенил;
К25 = С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил;
при условии, что, когда К24 представляет -СООН, тогда К25 не является группой -СН3, н-С5Н11 или С13Н27, и при дополнительном условии, что, когда К24 представляет -СН2СООН, тогда К25 не является группой -СН3, -СН2СН3 или группой изо-С5Н11.
Согласно предпочтительному воплощению К21 представляет С2-С10алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил.
Следующим воплощением изобретения являются соединения формулы VII
в которой К27 = С3-С4алкил, С6-С10алкил, С12алкил, С14алкил, С1б-С2оалкил.
Еще одно воплощение изобретения составляют соединения формулы VIII
в которой К28 = С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил, при условии, что К28 не является группой -СН3, н-С3Н7, н-С11Н23 или н-С13Н27.
Еще одно воплощение изобретения составляют фармацевтические композиции, включающие фармацевтический разбавитель или носитель и соединение формулы I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII или IX
О
IX в которой К29 = Н, или С|-С20алкил. циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил, =СНК31, -С(О)ОК31, -С(О)К31, -СН2С(О)ОК31, -СН2С(О)ХНК31, где К31 представляет Н или С1-С10алкил, циклоалкил или алкенил;
К30 = С1-С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил;
32 32 32
X = -ОК или -ННК , где К представляет Н, С1 -С20алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил, причем К32 группа необязательно содержит карбонильную группу, карбоксильную группу, карбоксамидную группу, спиртовую группу или простую эфирную группу, далее К32 группа необязательно содержит один или более атомов галогена;
при условии, что когда К29 представляет =СН2, тогда X5 не является группой -ОН.
Согласно предпочтительному воплощению К29 представляет С1-С10алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил; или =СН2.
В еще более предпочтительном воплощениии К29 представляет -СН3 или =СН2.
Согласно еще одному предпочтительному воплощению К32 представляет -СН2С(О)ОК33 или -СН2С(О)ЫНК33, где К33 представляет С1-С10алкил, циклоалкил, алкенил, арил, арилалкил или алкиларил.
Композиции настоящего изобретения могут быть представлены для назначения людям и животным
- 8 010484 в форме дозированных единиц, таких как таблетки, капсулы, пилюли, порошки, гранулы, стерильные парэнтеральные растворы или суспензии, оральные растворы или суспензии, эмульсии масло в воде и вода в масле, содержащие подходящие количества соединения, суппозитории, и в форме текучих суспензий или растворов. В используемом здесь смысле термины «фармацевтический разбавитель» и «фармацевтический носитель» имеют одно и то же значение. Для орального назначения могут приготавливаться или твердые, или жидкие единичные дозированные формы. Для приготовления твердых композиций, таких как таблетки, соединение может смешиваться с общепринятыми ингредиентами, такими как тальк, стеарат магния, дикальцийфосфат, магний-алюминиевый силикат, сульфат кальция, крахмал, лактоза, камедь акации, метилцеллюлоза и функционально сходные материалы, в качестве фармацевтических разбавителей или носителей. Капсулы приготавливаются с помощью смешения соединения с инертным фармацевтическим разбавителем и заполнения смесью твердых желатиновых капсул соответствующего размера. Мягкие желатиновые капсулы приготавливаются путем механического инкапсулирования суспензии соединения с приемлемым растительным маслом, легким жидким петролатумом или другим инертным маслом.
Могут приготавливаться текучие единичные дозированные формы для орального назначения, такие как сиропы, эликсиры или суспензии. Данные формы могут растворяться в водном носителе вместе с сахаром, ароматическими ароматизирующими или вкусовыми агентами и антикоагулянтами или консервирующими агентами с образованием сиропа. Суспензии могут приготавливаться с водным носителем с помощью суспендирующего агента, такого как камедь акации, трагакант, метилцеллюлоза и аналогичные.
Для парэнтерального назначения текучие формы дозированных единиц могут приготавливаться с использованием соединения и стерильного носителя. При приготовлении растворов соединение может растворяться в воде для инъекций и стерилизоваться с фильтром перед заполнением ими подходящих сосудов или ампул и герметизацией. В носителе могут растворяться адъюванты, такие как местные анестетики, консервирующие и буферирующие агенты. После заполнения сосудов композиция может замораживаться, а вода удаляется под вакуумом. Лиофилизированный порошок может затем масштабироваться в сосуде и подвергаться реконституции перед использованием.
Клинические терапевтические показания, предусматриваемые для соединений изобретения, включают: (1) инфекции, являющиеся следствием инвазивных микроорганизмов, таких как стафилококки и энтерококки; (2) раковые опухоли, возникающие во многих тканях, клетки которых сверхэкспрессированы синтазой жирной кислоты, и (3) ожирения вследствие потребления избыточных калорий. Доза и длительность лечения зависит от разнообразия факторов, включающих: (1) возраст пациента, вес тела и функцию органа (например, функция печени и почек); (2) характер и степень развития заболевания, подлежащего лечению, при этом учитываются также любая существующая значительная распространенность заболевания и применяемые сопутствующие методы лечения, и (3) параметры, связанные с лекарством, такие как путь введения, частота и длительность приема доз для достижения эффекта лечения, и терапевтический показатель или индекс лекарства. В основном выбираются параметры для достижения уровней в сыворотке от 1 до 100 нг/мл с целью достижения эффективных концентраций в участке, который является целью, приблизительно от 1 до 10 мкг/мл.
Примеры
Изобретение далее иллюстрируется, но не ограничивается следующими примерами.
Ряд соединений согласно изобретению синтезировались, как описано ниже. Биологическая активность некоторых соединений проверялась следующим образом. Соединения испытывались на (1) ингибирование очищенной человеческой ΡΆ8, (2) ингибирование активности синтеза жирных кислот в целых клетках, (3) цитотоксичность против культивированных МСР-7 раковых клеток молочной железы человека, о которых известно, что они обладают высокими уровнями ΡΆ8 и активностью синтеза жирных кислот, с использованием анализов с фиолетовыми кристаллами и ХТТ, и (4) антимикробную активность. Выбранные соединения с низкими уровнями цитотоксичности затем испытывались на потерю веса на Ва1Ь/С мышах. Кроме того, характерное соединение из группы, которая обнаруживала значительную потерю веса и низкие уровни цитотоксичности, испытывалось на их действие на окисление жирных кислот и на активность карнитин-пальмитоилтрансферазы-1 (СРТ-1), а также на гипоталамическую ΝΡΥ экспрессию с помощью анализа ΝοΠίιοη на Ва1Ь/С мышах. Некоторые соединения испытывались также на активность против грамположительных и/или -отрицательных бактерий. Некоторые соединения испытывались также ίη νίνο на противоопухолевую активность.
Получение соединений
(±)-а-Метилен-у-буатиролактон-5-октил-4-аллил амид (1).
- 9 010484
К раствору (±)-а-метилен-у-бутиролактон-5-октил-4-карбоновой кислоты (С75), (40 мг, 0,16 ммоль) в СН3СЫ (0,9 мл) добавлялся трис(2-оксо-3-оксазолинил)фосфин оксид1 (91,7 мг, 0,2 ммоль), аллиламин (12 мкл, 0,2 ммоль) и ΝΕΐ3 (0,04 мл, 0,3 ммоль) и раствору давалась возможность перемешиваться в течение 30 мин при комнатной температуре. Смесь вливалась в раствор NН4С1(насыщ)/1N НС1 (10 мл, 3:1) и экстрагировалась ЕьО (3x15 мл). Объединенные органические вещества сушились (Мд§О4), фильтровались, выпаривались и подвергались хроматографии (35% ЕЮАс/гексан), давая чистый продукт (1) (26,2 мг, 54%); т.пл. 66-68°С.
1Н ЯМР (300 МГц, СИС13) δ 0,84 (т, 1=6 Гц, 3Н), 1,23 (м, 11Н), 1,34-1,47 (м, 1Н), 1,60-1,71 (м, 2Н), 3,43-3,46 (м, 1Н), 3,87 (дт, 1=1,4, 5,7 Гц, 2Н), 4,74 (дт, 1=5,7 Гц, 1Н), 5,12 (д, 1=10,6 Гц, 1Н), 5,16 (д, 1=17,3 Гц, 1Н), 5,72-5,85 (м, 1Н), 5,76 (д, 1=2,6 Гц, 1Н), 6,34 (д, 1=2,6 Гц, 1Н), 6,50 (шир.с, 1Н).
13С ЯМР (75 МГц, СИС13) δ 14,0, 22,6, 24,9, 29,1, 29,2, 29,4, 31,8, 35,9, 42,3, 52,2, 80,5, 117,0, 124,3,
133,5, 135,4, 168,6, 168,6.
ИК (№С1) 2922, 1771, 1756, 1642, 1557 см-1.
Анализ. Вычислено для ^7Η27ΝΟ3: С, 69,5; Н, 9,28; Найдено: С, 69,5; Н, 9,09.
(±)-а-Метилен-у-бутиролактон-5-гексил-4-аллил амид (2).
Из (±)-а-метилен-у-бутиролактон-5-гексилил-4-карбоновой кислоты (60 мг, 0,27 ммоль) и аллил амина (33 мкл, 0,29 ммоль), следуя вышеописанной процедуре, после флэш-хроматографии (30-40% ЕЮАс/гексан) получали соединение 2 (51,8 мг, 74%).
1Н ЯМР (300 МГц, СИС13) δ 0,86 (т, 1=6 Гц, 3Н), 1,26-1,52 (м, 8Н), 1,63-1,77 (м, 2Н), 3,40-3,43 (м, 1Н), 3,91 (каж. тт, 1=5,76, 1,44 Гц, 2Н), 4,72-4,78 (м, 1Н), 5,14-5,20 (м, 2Н), 5,75-5,87 (м, 1Н), 5,78 (д, 1=2,4 Гц, 1Н), 5,93 (шир.т, 1Н), 6,41 (д, 1=2,9 Гц, 1Н);
13С ЯМР (75 МГц, СИС13) δ 13,7, 22,3, 24,7, 28,8, 31,5, 35,9, 42,3, 52,4, 80,3, 116,9, 123,9, 133,5, 135,6, 168,4, 168,5.
ИК (№С1) 2923, 1755, 1641, 1557 см-1.
Анализ. Вычислено для С15Н23ЫО3: С, 67,9; Н, 8,74; Найдено: С, 67,8; Н, 8,67.
(±)-а-Метилен-у-бутиролактон-5-бутил-4-аллил амид (3).
Из (±)-а-метилен-у-бутиролактон-5-бутил-4-карбоновой кислоты (100 мг, 0,50 ммоль) и аллил амина (41 мкл, 0,55 ммоль), следуя вышеописанной процедуре, после флэш-хроматографии (30-40% ЕЮАс/гексан) получали соединение 3 (68 мг, 57%).
1Н ЯМР (300 МГц, СИС13) ± 0,87 (т, 1=6 Гц, 3Н), 1,28-1,50 (м, 4Н), 1,66-1,74 (м, 2Н), 3,41-3,45 (м, 1Н), 3,90 (каж. тт, 1=5,7, 1,4 Гц, 2Н), 4,72-4,78 (м, 1Н), 5,14-5,20 (м, 2Н), 5,74-5,87 (м, 1Н), 5,78 (д, 1=2,5 Гц, 1Н), 6,12 (шир.т, 1Н), 6,39 (д, 1=2,8 Гц, 1Н);
13С ЯМР (75 МГц, СИС13) δ 13,6, 22,2, 26,8, 35,5, 42,3, 52,5, 80,3, 117,0, 123,9, 133,5, 135,5, 168,3,
168,5.
ИК (№С1) 2958, 1768, 1652, 1548 см-1.
Анализ. Вычислено для ^3Η!9ΝΟ3: С, 65,8; Н, 8,07; Найдено: С, 65,8; Н, 8,07.
(±)-а-Метилен-у-бутиролактон-5-октил-4-карбокси-метил глицинат (4).
Из С75 (39 мг, 0,15 ммоль) и метилглицинатгидрохлорида (20 мг, 0,16 ммоль), следуя вышеописанной процедуре, после флэш-хроматографии (35% ЕЮАс/гексан) получали соединение 4 (28 мг, 56%); т.пл. 94,5-95,5°С.
1Н ЯМР (300 МГц, СИС13) δ 0,85 (т, 1=6, 9 Гц, 3Н), 1,23 (с, 11Н), 1,41-1,49 (м, 1Н), 1,63-1,74 (м, 2Н), 3,46-3,49 (м, 1Н), 3,75 (с, 3Н), 3,97-4,14 (дд, 1=5,4, 8 Гц, 2Н), 4,75 (дт, 1=5,7, 7 Гц, 1Н), 5,88 (д, 1=2 Гц, 1Н), 6,41 (д, 1=2 Гц, 1Н), 6,55 (шир.с, 1Н);
13С ЯМР (75 МГц, СИС13) δ 14,1, 22,6, 24,8, 29,2, 29,2, 29,4, 31,8, 35,8, 41,4, 52,0, 52,6, 80,2, 124,8,
- 10 010484
134,9, 168,6, 169,0, 169,9.
ИК (ЫаС1) 2915, 1768, 1737, 1644 см-1.
Анализ. Вычислено для С17Н2^О5: С, 62,7; Н, 8,36; Найдено: С, 62,7; Н, 8,27.
(±)-а-Метилен-у-бутиролактон-5-октил-4-карбокси-трет-бутилглицинат (5).
Из С75 (100 мг, 0,39 ммоль) и трет-бутилглицинатгидрохлорида (66 мг, 0,4 ммоль), следуя вышеописанной процедуре, после флэш-хроматографии (35% Е1 20-30% ЕЮАс/гексан) получали соединение 5 (108 мг, 75%).
Ή ЯМР (300 МГц, ГОСТ) δ 0,84 (т, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,25 (с, 12Н), 1,44 (с, 9Н), 1,65-1,73 (м, 2Н), 3,443,48 (м, 1Н), 3,92-3,95 (дд, 1=3,6, 5 Гц, 2Н), 4,76 (дт, 1=5,7, 7 Гц, 1Н), 5,88 (д, 1=2 Гц, 1Н), 6,41 (д, 1=2 Гц, 1Н), 4,47 (шир.т, 1Н).
13С ЯМР (75 МГц, С12СН) δ 13,9, 22,5, 24,8, 28,0, 29,1, 29,2, 29,3, 31,7, 35,8, 42,2, 51,9, 80,2, 82,6,
124,6, 135,1, 168,5, 168,6, 168,8.
Анализ. Вычислено для С20Н3^О6: С, 65,4; Н, 9,05; Найдено: С, 65,3; Н, 9,02.
ОН (±)-а-Метилен-у-бутиролактон-5-октил-4-карбоксиглицинат (6).
Из соединения 5 (100 мг, 0,27 ммоль) в СН2С12 (2,0 мл) добавлялась трифторуксусная кислота (ТГА) (1,3 мл) и раствору давалась возможность перемешиваться в течение 3 ч при комнатной температуре. После выпаривания растворителей, хроматографии на колонке (50% ЕЮАс/2% СН3СО2Н/гексан) получалось чистое вещество 6 (61 мг, 73%).
Ή ЯМР (300 МГц, МеОЭ) δ 0,82 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,22 (с, 10Н), 1,28-1,38 (м, 2Н), 1,57-1,69 (м, 2Н), 3,55-3,59 (м, 2Н), 3,78-3,95 (кв (аЬ), 1=17 Гц, 2Н), 4,63 (каж. кв, 1=6,4 Гц, 1Н), 4,88 (шир.с, 1Н), 5,87 (д, 1=2,6 Гц, 1Н), 6,19 (д, 1=2,6 Гц, 1Н).
13С ЯМР (75 МГц, МеОЭ) 5 14,6, 23,8, 26,1, 30,5, 30,5, 30,6, 33,2, 36,6, 42,2, 52,8, 81,7, 124,8, 137,4, 170,8, 172,6, 172,5.
ИК (№С1) 2915, 1769, 1731, 1644 см-1.
Анализ. Вычислено для ^6Η25ΝΟ5: С, 61,7; Н, 8,09; Найдено: С, 61,7; Н, 8,05.
Этаноламид (±)-а-метилен-у-бутиролактон-5-октил-4-карбоновой кислоты (7).
Из С75 (30 мг, 0,12 ммоль) и этаноламина (7,8 мкл, 0,13 ммоль), следуя вышеописанной процедуре, после флэш-хроматографии (50% ЕЮАс/гексан-100% ЕЮАс/2% СН3СО2Н) получали соединение 7 (32 мг, 91%).
Ή ЯМР (300 МГц, СОС1;) δ 0,86 (т, 1=6, 9 Гц, 3Н), 1,24 (с, 10Н), 1,35-1,48 (м, 2Н), 1,64-1,75 (м, 2Н), 3,40-3,57 (м, 3Н), 3,74 (т, 1=5 Гц, 2Н), 4,73-4,79 (дт, 1=5,7, 7 Гц, 1Н), 5,82 (д, 1=2 Гц, 1Н), 6,42 (д, 1=2 Гц, 1Н).
10, Незначительный побочный продукт (8, 9) К раствору С75 (100 мг, 0,39 ммоль) в ЕЮАс (3,0 мл) добавлялся Ρά (30 мг, 10% на углероде) и Н2 (50 фунт./кв.дюйм) в течение 2 ч. Смесь фильтровалась через целит и выпаривалась, давая смесь диастереомеров (1,8:1 для транс 9:цис 8). Хроматография на колонке (20% ЕЮАс/2% СН3СО2Н/гексан) давала отдельный транс дистереомер с неотделимым изомеризованным побочным продуктом (9:10, 3,8:1, 59,5 мг); и чистый цис изомер (8, 32,7 мг), (общий выход 92%).
(±)-а-Метил-у-бутиролактон-5-октил-4-карбоновая кислота (транс-диастереомер) (9).
Ή ЯМР (300 МГц, С12СН) δ 0,85 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,23 (с, 10Н), 1,31 (д, 1=7 Гц, 3Н), 1,41-1,50 (м, 2Н),
- 11 010484
1,64-1,69 (м, 2Н), 2,62-2,69 (дд, 1=9,6, 11,3 Гц, 1Н), 2,91-3,0 (дкв, 1=11,3, 7 Гц, 1Н), 4,42-4,49 (тд, 1=4,9 Гц, 1Н).
13С ЯМР (75 МГц, СИС13) δ 13,9, 14,5, 22,6, 25,2, 29,1, 29,2, 29,3, 31,8, 32,7, 39,9, 53,9, 79,5, 176,0,
176,9. (Масс-спектр высокого разрешения) - НВМ8 (Е8) т/ζ вычислено для С14Н24О4Иа+ (Μ+Να') 279,1566; наблюдалось 279,1562.
(±)-а-Метил-у-бутиролактон-5-октил-4-карбоновая кислота (цис-диастереомер) (8).
Ή ЯМР (300 МГц, СИСЬ) δ 0,86 (т, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,25 (шир.с, 10Н), 1,29 (д, 1=7,4 Гц, 3Н), 1,36-1,49 (м, 2Н), 1,63-1,71 (м, 2Н), 3,14 (дд, 1=6,9 Гц, 1Н), 3,02 (д кв, 1=7,9 Гц, 1Н), 4,69 (каж. кв, 1=6,3 Гц, 1Н).
13С ЯМР (75 МГц, С12С13) δ 11,8, 14,0, 22,6, 25,3, 29,1, 29,2, 29,3, 31,8, 34,7, 37,0, 49,9, 79,5, 175,4, 177,3.
НВМ8 (Е8) т/ζ вычислено для С14Н24О4Иа+ (Μ+Να') 279,1566; наблюдалось 279,1568.
Аллиламид (±)-а-метил-у-бутиролактон-5-октил-4-карбоновой кислоты (11).
Из соединения 9 (52 мг, 0,2 0 ммоль) и аллиламина (16 мкл, 0,22 ммоль), следуя вышеописанной процедуре, после флэш-хроматографии (40% Е12О/гексан - 30% ЕЮАс/гексан) получали соединение 11 (30 мг, 51%).
Ή ЯМР (300 МГц, С12С13) δ 0,86 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,23-1,30 (м, 13Н), 1,38-1,49 (м, 2Н), 1,61-1,69 (м, 2Н), 2,29-2,36 (дд, 1=9,3, 11,3 Гц, 1Н), 3,00-3,09 (дкв, 1=7, 11 Гц, 1Н, 3,92 (тт, 1=1,5, 5,7 Гц, 2Н), 4,45-4,52 (м, 1Н), 5,15-5,22 (дд, 1=10, 17 Гц, 2Н), 5,76-5,88 (м, 2Н).
13С ЯМР (75 МГц, С12СЕ) 5 13,9, 14,0, 22,6, 25,4, 29,1, 29,3, 29,3, 31,8, 34,7, 40,5, 42,2, 57,4, 80,4,
116,9, 133,5, 169,3, 177,4.
НВМ8 (Е8) т/ζ вычислено для С17Н29NО3Nа+ (М+№') 318,2039; наблюдалось 318,2040.
Аллиламид (±)-а-метил-у-бутиролактон-5-октил-4-карбоновой кислоты (12).
Из соединения 8 (32 мг, 0,12 ммоль) и аллиламина (10 мкл, 0,13 ммоль), следуя вышеописанной процедуре, после флэш-хроматографии (40% Е12О/гексан-30% ЕЮАс/гексан) получали соединение 12 (20 мг, 53%).
Ή ЯМР (300 МГц, С12СЕ) α 0,86 (т, 1=7 Гц, 3Н), 1,21-1,25 (м, 13), 1,41-1,47 (м, 2Н), 1,58-1,67 (м, 2Н), 2,81-2,91 (м, 2Н), 3,83-3,96 (тт, 1=1,5, 5 Гц, 2Н), 4,71-4,77 (м, 1Н), 5,13-5,21 (дд, 1=10, 17 Гц, 2Н), 5,75-5,87 (м, 2Н).
13С ЯМР (75 МГц, С12СЕ) δ 11,5, 14,0, 22,6, 25,4, 29,1, 29,2, 29,4, 31,8, 34,8, 37,4, 42,0, 51,2, 80,3,
116,9, 133,8, 169,1, 177,9.
НВМ8 (Е8) т/ζ вычислено для С17Н29NО3Nа+ (М+№') 318,2039; наблюдалось 318,2041.
Аллиламид 3-метил-5-октил-5-оксо-2,5-дигидрофуран-3-карбоновой кислоты (13).
Из 3-метил-5-октил-2-оксо-2,5-дигидрофуран-4-карбоновой кислоты (46 мг, 0,18 ммоль) и аллиламина (14 мкл, 0,19 ммоль), следуя вышеописанной процедуре, после флэш-хроматографии (40% ЕЮАс/гексан) получали соединение 13 (30 мг, 55%).
Ή ЯМР (300 МГц, СИСЬ) δ 0,85 (т, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,22 (с, 10Н), 1,46-1,55 (м, 2Н), 1,90-1,95 (м, 2Н), 2,04 (с, 3Н), 4,02 (тд, 1=1,4, 5,7 Гц, 2Н), 5,13-5,15 (м, 1Н), 5,18-5,25 (дд, 1=10,6, 17,3 Гц, 2Н), 5,80-5,92 (дат, 1=10,3, 17, 5,7 Гц, 1Н), 6,07 (т, 1=1,4 Гц, 1Н).
13С ЯМР (75 МГц, С12СЕ) 5 10,3, 14,0, 22,6, 24,8, 29,1, 29,2, 29,3, 31,8, 32,7, 42,0, 81,7, 117,5, 128,8, 133,1, 153,7, 162,1, 173,3.
НВМ8 (Е8) т/ζ вычислено для С17Н27NО3Nа+ (М+Να') 316,1883; наблюдалось 316,1895.
Ссылки:
1. Кишеба, Т; Ыадата15и, Т; ШдисЫ, Т; НпоЬе, М. Тейайебгои Ьей. 1988, 29, 2203-2206.
Биологические и биохимические методы
- 12 010484
Очистка ЕА8 от ΖΚ-75-1 раковых клеток молочной железы человека.
Человеческая ЕА8 очищалась от культивированных ΖΚ-75-1 раковых клеток молочной железы человека, полученных из Американской Коллекции Типовых Культур. Процедура, примененная из Ьши е( а1., 1981, и Ки11а)ба е( а1., 1994, использует гипотонический лизис, последовательные осаждения полиэтиленгликоля (РЕО) и анионообменную хроматографию. ΖΚ-75-1 клетки культивировались при 37°С с 5% СО2 в ΚРΜI культуральной среде с 10% фетальной бычьей сывороткой, пенициллином и стрептомицином.
Сливающиеся клетки в десяти Т150 колбах лизируются с помощью 1,5 мл лизисного буфера (20 мМ трис-НС1, рН 7,5, 1 мМ ΕΌΤΑ (этилендиаминтетрауксусной кислоты), 0,1 мМ фенилметансульфонил фторида (РМ8Е), 0,1 % 1дера1 СА-630) и гомогенизируются на льду 20 тактами в Иоипсе-гомогенизаторе. Лизат центрифугируется в 1А-20 роторе (Весктап) при 20000 об./мин в течение 30 мин при 4°С, и супернатант (плавающий сверху слой) переносится в 42 мл лизисного буфера. К супернатанту медленно добавляется раствор 50% РЕО 8000 (полиэтиленгилколь) в лизисном буфере до конечной концентрации 7,5%. После встряхивания в течение 60 мин при 4°С раствор центрифугируется в 1А-20 роторе (Весктап) при 15000 об./мин в течение 30 мин при 4°С. Затем к супернатанту добавляется твердый РЕО 8000 (полиэтиленгликоль) до конечной концентрации 15%. После встряхивания центрифугирование повторяется, как описано выше, гранула повторно суспендируется на протяжении ночи при 4°С в 10 мл буфера А (20 мМ К2НРО4, рН 7,4). После 0,45 мкМ фильтрования раствор белка наносится на Мопо О 5/5 анионообменную колонку (Рйаттас1а). Колонка промывается в течение 15 мин буфером А при 1 мл/мин и связанный материал элюируется линейным 60-мл градиентом на протяжении 60 мин до 1 М КС1. ЕА8 (Мн примерно 270 кДа) обычно элюирует при 0,25 М КС1 в трех 0,5 мл фракциях, идентифицируемых с использованием 4-15% δΌδ-РАОЕ с красителем Соота881е О250 (Βίο-Раб). Концентрация ЕА8 белка определяется с использованием аналитического реагента Соота881е Плюс Белок (Р1егсе) согласно инструкциям производителя с использованием бычьего сывороточного альбумина (БСА) в качестве стандарта. Данная процедура дает в результате по существу чистые препараты ЕА8 (>95%), о чем судят по Соота881е-окрашенным гелям.
Измерение ЕА8 ферментативной активности и определение 1С50 соединений.
ЕА8 активность измеряется с помошью мониторинга малонил-СоА зависимого окисления ИАЭРН спектрофотометрически при ОП340 (оптическая плотность) на 96-луночных пластинках (Όί1δ е( а1. и АШашап е( а1., 1975). Каждая лунка содержит 2 мкг очищенной ЕА8, 100 мМ К2НРО4, рН 6,5, 1 мМ дитиотреитол (81дта), и 187,5 мкМ р-ЫАЭРН (81§та). Исходные растворы ингибиторов приготавливаются в ДМСО при 2,1 и 0,5 мг/мл, что дает в результате концентрации 20, 10 и 5 мкг/мл, когда в каждую лунку добавляется 1 мкл исходного раствора. Для каждого эксперимента пропускается церуленин (81§та) в качестве положительного контроля наряду с ДМСО контролями, ингибиторами и холостыми веществами (без ЕА8 фермента) все с двукратным повторением.
Анализ проводится на Мо1еси1аг Оеу1се8 8рес!гаМах Р1и8 8рес!горйо!оте!ег. Пластинка, содержащая ЕА8, буферы, ингибиторы и контроли, помещается в спектрофотометр, нагретый до 37°С. При использовании кинетического протокола проводится эксперимент с применением двух контрольных лунок, содержащих 100 мкл 100 мМ К2НРО4, рН 6,5, и пластинка считывается при ОП340 с 10 с интервалами в течение 5 мин для измерения любого малонил-СоА-независимого окисления ИАЭРН. Пластинка удаляется из спектрофотометра, и в каждую лунку, за исключением холостых опытов, добавляются малонил-СоА (67,4 мкМ, конечная концентрация на лунку) и ацетил-СоА (61,8 мкМ, конечная концентрация на лунку). Пластинка снова считывается, как описано выше, с кинетическим протоколом для измерения малонилСоА-зависимого окисления ИАЭРН. Разница между Δ ОП340 для малонил-СоА-зависимого и немалонилСоА-зависимого окисления ИАЭРН представляет специфическую активность ЕА8. Вследствие чистоты ЕА8 препарата немалонил-СоА-зависимого окисления ИАЭРН является незначительным и не принимается в расчет.
1С50 для соединений против ЕА8 определяется с помощью графического изображения Δ ОП340 для каждой испытанной концентрации ингибитора, выполнения линейной регрессии и компьютерного вычисления данных наилучшей эмпирической кривой, значений г2 и 95% доверительных интервалов. Концентрация соединения, дающая 50% ингибирование ЕА8, представляет 1С50. Графические показатели ΔОП340 в зависимости от времени наносятся на график с помощью 8ОЕТтах РКО программного обеспечения (Мо1еси1аг Оеуюев) для каждой концентрации соединения. Компьютерные вычисления линейной регрессии, наилучшей эмпирической кривой, г2 и 95% доверительных интервалов осуществляются с использованием Рп8т Уегзюп (Огарй Раб 8оГ(\саге).
Анализ роста клеток с кристаллическим фиолетовым.
С помощью анализа с кристаллическим фиолетовым измеряется рост клеток, но не цитотоксичность. В данном анализе применяется окрашивание кристаллическим фиолетовым фиксированных клеток на 96-луночных пластинках с последующей солюбилизацией и измерением ОП490 на спектрофотометре. Показатель ОП490 соответствует росту клеток, измеренному в единицу времени. Клетки обрабатываются интересуемыми соединениями или контрольными носителями и вычисляется 1С50 каждого соеди- 13 010484 нения.
Для измерения цитотоксичности конкретных соединений против раковых клеток в лунки на 24луночных пластинках помещается 5х104 МСР-7 раковых клеток молочной железы человека, полученных из Американской Коллекции Типовых Культур, в ΌΜΕΜ среде с 10% фетальной бычьей сывороткой, пенициллином и стрептомицином. После культивирования на протяжении ночи при 37°С и 5% СО2 соединения, подвергаемые испытанию, растворенные в ДМСО, добавляются в лунки в объеме 1 мкл в следующих концентрациях: 50, 40, 30, 20 и 10 мкг/мл трехкратно. Если требуется, испытываются дополнительные концентрации. В трехкратные лунки в качестве контрольного носителя добавляется 1 мкл ДМСО. В качестве положительных контролей трехкратно пропускается С75 в количестве 10 и 5 мкг/мл.
После 72-часового инкубирования клетки окрашиваются 0,5 мл кристаллического фиолетового красителя (0,5% в 25% метаноле) в каждой лунке. Спустя 10 мин, лунки споласкиваются, сушатся на воздухе, а затем солюбилизируются 0,5 мл 10% додецилсульфата натрия со встряхиванием в течение 2 ч. После переноса 100 мкл из каждой лунки на 96-луночные пластинки, пластинки считываются при ОП490 на Мо1еси1аг Όβνίοβδ 8рес1гаМах Р1и8 8рес1горко1оте1ег. Средние значения ОП490 вычисляются с использованием 8ОРТшах Рго программного обеспечения (Мо1еси1аг Оетюе5). и величины Κ’50 определяются с помощью анализа линейной регрессии с использованием Ргщт Уетаюп 3.02 (Огарй Раб 8оГЩаге, Сан Диего).
XТТ анализ на цитотоксичность.
ХТТ анализ представляет нерадиоактивную альтернативу анализа на цитотоксичность с высвобождением [51Сг]. ХТТ представляет соль тетразолия, которая восстанавливается до формазанового красителя только метаболически активными жизнеспособными клетками. Восстановление ХТТ измеряется спектрофотометрически в виде ОП490-ОП650.
Для измерения цитотоксичности конкретных соединений против раковых клеток в лунки на 96луночных пластинках помещается 9х103 МСР-7 раковых клеток молочной железы человека, полученных из Американской Коллекции Типовых Культур, в ЭМЕМ среде с 10% фетальной бычьей сывороткой, инсулином, пенициллином и стрептомицином. После культивирования на протяжении ночи при 37°С и 5% СО2, соединения, подвергаемые испытанию, растворенные в ДМСО, добавляются в лунки в объеме 1 мкл в следующих концентрациях: 80, 40, 20, 10, 5, 2,5, 1,25 и 0,625 мкг/мл с трехкратным повторением. Если требуется, испытываются дополнительные концентрации. В трехкратные лунки в качестве контрольного носителя добавляется 1 мкл ДМСО. В качестве положительных контролей трехкратно пропускается С75 в количестве 40, 20, 10, 15, 12,5, 10 и 5 мкг/мл.
После 72-часовой инкубации клетки инкубируются в течение 4 ч с ХТТ реагентом в соответствии с инструкциями производителя (Се11 РгокйгаНоп Κίΐ II (КТТ) Коске). Пластинки считываются при ОП490 и при ОП650 на Мо1еси1аг Ое\зсе5 8рес1гаМах Р1и§ 8рес1горко1оше1ег. Три лунки, содержащие реагент ХТТ без клеток, служат в качестве контроля. Данные ХТТ сообщаются в виде ОП490-ОП650. Средние значения и стандартная ошибка от среднего вычисляются с использованием 8ОРТтах Рго программного обеспечения (Мо1еси1аг Эупат1с5).
Показатель Κ.'50 для соединений определяется как концентрация лекарства, приводящая к 50% снижению ОП490-ОП650 по сравнению с контролями. Значения ОП490-ОП650 вычисляются для каждой концентрации соединения с использованием 8ОРТтах Рго программного обеспечения (Мо1еси1аг Оетюе5). Показатель ^50 вычисляется с помощью линейной регрессии с графическим изображением активности РА8 в виде процента от контроля в зависимости от концентраций лекарства. Линейная регрессия, наилучшая эмпирическая кривая, г2 и 95% доверительные интервалы определяются с использованием Ргщт Уетаюп 3.0 (Сгарк Раб 8оП\уаге).
Измерение влючения [14С] ацетата в общие липиды и определение показателя Κ.'50 соединений.
В данном испытании измеряется включение [14С] ацетата в общие липиды и это является мерой активности в пути синтеза жирной кислоты ίη νίΐΐΌ. Данный анализ используется для измерения ингибирования синтеза жирных кислот ίη νίΐΐΌ.
МСР-7 раковые клетки молочной железы человека, культивированные, как описано выше, помещаются в количестве 5х104 клеток в лунку на 24-луночные пластинки. После инкубирования на протяжении ночи соединения, подвергаемые испытанию, солюбилизированные в ДМСО, добавляются трехкратно при 5, 10 и 20 мкг/мл, с испытанием, если необходимо, более низких концентраций. В трехкратные лунки в качестве контрольного носителя добавляется ДМСО. С75 пропускается при 5 и 10 мкг/мл трехкратно в качестве положительных контролей. После 4-часового инкубирования в каждую лунку добавляется 0,25 мкКи [14С] ацетата.
После дополнительного инкубирования в течение 2 ч среда удаляется из лунок и в каждую лунку добавляется 800 мкл смеси хлороформ-метанол (2:1) и 700 мкл 4 мМ МдС12. Содержимое каждой лунки переносится в 1,5 мл пробирки или трубки ЕррепбогГ и подвергается вращению на полной скорости в течение 2 мин в высокоскоростной микроцентрифуге ЕррепбогГ 5415Ό. После удаления водного (верхнего) слоя в каждую пробирку добавляются дополнительные 700 мкл смеси хлороформ-метанол (2:1) и 500 мкл 4 мМ МдС12 и центрифугируются в течение 1 мин, как описано выше. Водный слой удаляется пипет
- 14 010484 кой Рак1иег и отбрасывается. В каждую пробирку добавляются дополнительные 400 мкл смеси хлороформ-метанол (2:1) и 200 мкл 4 мМ МдС12, затем центрифугируются, и водный слой отбрасывается. Более низкая (органическая) фаза переносится в сцинтилляционную колбу и сушится при 40°С в атмосфере азотного газа. После сушки добавляется 3 мл сцинтиллята (АРВ #ΝΒί.'5104) и колбы подвергаются подсчету на 14С. С помощью сцинтилляционного счетчика Весктап вычисляют средние срт величины для трехкратных повторов.
Показатель Κ.'50 для соединений определяется как концентрация лекарства, приводящая к 50% снижению включения [14С] ацетата в липиды по сравнению с контролями. Он определяется с помощью графического изображения среднего срт для каждой концентрации испытываемого ингибитора, выполнения линейной регрессии и компьютерного вычисления наилучшей эмпирической кривой, величин г2 и 95% доверительных интервалов. Средние значения срт вычисляются с помощью сцинтилляционного счетчика Бекмана (Мобе1 Й86500) для каждой концентрации соединения. Вычисление линейной регрессии, наилучшей эмпирической кривой, г2 и 95% доверительных интервалов вычисляются с использованием Рпкш Уегкюп 3.0 (Сгарй Раб 8ой^аге).
Карнитин пальмитоилтрансферазный-1 (СРТ) анализ.
СРТ-1 катализирует АТФ (аденозинтрифосфат) зависимый перенос длинно-цепочечных жирных кислот с ацил-СоА на ацил-карнитин, который ингибируется малонил-СоА. Так как СРТ-1 требует для активности митохондриальные мембраны, ферментная активность измеряется в пермеабилизованных клетках или митохондриях. Данный анализ использует пермеабилизированные клетки для измерения переноса [метил-14С]Ь-карнитина на органически растворимое производное ацил-карнитина.
МСР-7 клетки помещаются в ΌΜΕΜ с 10% фетальной бычьей сывороткой в количестве 106 клеток на 24-луночные пластинки в трехкратном повторении для контролей, лекарств и малонил-СоА. За два часа до начала анализа добавляются лекарства в указанных концентрациях, приготовленных из исходных растворов при 10 мг/мл в ДМСО, контрольные носители состоят из ДМСО без лекарств. Поскольку малонил-СоА не может входить в интактные клетки, он добавляется только в аналитическом буфере к клеткам, которые не подвергались предварительной инкубации с лекарством. После инкубирования на протяжении ночи при 37°С среда удаляется и заменяется 700-мкл аналитического буфера, содержащего 50 мМ имидазол, 70 мМ КС1, 80 мМ сахарозу, 1 мМ ЭГТК (этиленгликолевая тетрауксусная кислота), 2 мМ МдС12, 1 мМ ДТТ (дитиотреитол), 1 мМ КСН 1 мМ АТФ, 0,1 % свободный от жирной кислоты бычий сывороточный альбумин, 70 мкМ пальмитоил-СоА, 0,25 мкКи [метил-14С]Ь-карнитин, 40 мкг дигитонина с лекарством, контрольный ДМСО носитель или 20 мкМ малонил-СоА. Концентрации лекарств и ДМСО в аналитическом буфере являются теми же, что используются при 2-часовой предварительной инкубации. После инкубации в течение 6 мин при 37°С реакция останавливается добавлением 500 мкл охлажденной льдом 4М перхлорной кислоты. Клетки затем собираются и центрифугируются при 13000хд в течение 5 мин. Осадок промывается 500 мкл-ми охлажденной льдом 2 мМ перхлорной кислоты и снова центрифугируется. Получающийся осадок повторно суспендируется в 800 мкл бН20О и экстрагируется 150 мкл бутанола. Бутанольная фаза анализируется с помощью сцинтилляционной жидкости и представляет производное ацилкарнитина.
Скрининг потери веса под действием новых ингибиторов РЛ8.
Для скрининга потери первоначального веса используются мыши Ва1Ь/С (1асккоп ЬаЬк). Животных содержат в помещениях при комнатной температуре с 12-часовым световым циклом дня и ночи и кормят мышиным кормом и дают воду без ограничений. На эксперимент используют по три мыши для каждого испытываемого соединения с контрольными носителями в трехкратном повторении.
Для экспериментов мышей содержат отдельно для каждого испытываемого соединения по три мыши на клетку. Соединения разбавляют в ДМСО при 10 мг/мл, когда их дают в дозе 30/кг, и 30 мг/мл, когда дают в дозе 60 мг/кг, и мышей инъецируют интраперитонально 60 мг/кг лекарства в приблизительно 100 мкл ДМСО или только носителем. Мышей наблюдают и взвешивают ежедневно, средние веса и стандартные ошибки вычисляют с помощью Ехсе1 (Мюгокой). Эксперименты продолжают до тех пор, пока подвергнутые обработке или лечению животные не достигнут их веса до обработки. Выбранные соединения испытываются на животных, которых содержат в метаболических клетках.
На фиг. 5 показаны результаты некоторых испытаний ίη у1уо на потерю веса. Дозы, вводимые животным, идентичны скрининговым экспериментам с тремя животными на одну метаболическую клетку. Веса животных, потребление воды и пищи и выделение мочи и фекалий измеряются ежедневно. Трех тощих мышей Ва1Ь/С (Наг1ап), содержавшихся на мышином корме, обрабатывают соединениями в дозах, указанных на 0 день или носителем-контролем (ДМСО) равного объема. Соединение 6 солюбилизировалось в 40 мкл ДМСО, тогда как соединение 8 солюбилизировалось в 60 мкл ДМСО. Все животные инъекцировались интраперитонально. Веса измерялись в указанные дни. Показатели ошибки представляют стандартную ошибку среднего значения.
Антимикробные свойства.
Для оценки антимикробной активности соединений используется анализ с микроразведением бульона. Соединения испытываются при двухкратных серийных разведениях, и концентрация, которая инги
- 15 010484 бирует видимый рост (ОП60о при 10% контроля), определяется как М1С (минимальная ингибирующая концентрация). Испытываемые микроорганизмы включают 81арйу1ососси8 аигеиз (АТСС # 29213), Еп1егососсиз ГаесаНз (АТСС # 29212), Рзеиботопаз аегидшоза (АтСс # 27853) и ЕзсйепсЫа со11 (Есой) (АТСС # 25922). Анализ проводится в двух ростовых средах, бульоне Мие11ег Нш1оп и Триптиказа соевом бульоне (Тзоу).
Агаровая пластинка с кровью (Тзоу/5% овечья кровь) инокулируется из замороженных исходных растворов (маточные или сток-растворы), содержавшихся в Тзоу бульоне, содержащем 10% глицерин, и инкубируется на протяжении ночи при 37°С. Колонии суспендируются в стерильном бульоне так, чтобы мутность соответствовала мутности 0,5 МсЕаг1аиб стандарта. Инокулюм разводится 1:10 в стерильном бульоне (Мие11ег Нш1оп или Триптиказа соевом) и вводится по 195 мкл на лунку 96-луночной пластины. Подвергаемые испытанию соединения, растворенные в ДМСО, добавляются в лунки в объеме 5 мкл в следующих концентрациях: 25, 12,5, 6,25, 3,125, 1,56 и 0,78 мкг/мл в двух повторах. Если требуется, испытываются дополнительные концентрации. 5 мкл ДМСО, добавляемые в две лунки, являются контрольным носителем. В каждый прогон включаются серийные разведения положительных контрольных соединений, ванкомицина (Е. Гаесайз и 8. аигеиз) и тобрамицина (Е. Сой и Р. аегидшоза).
После 24-часовой инкубации при 37°С пластинки считываются при ОП600 на Мо1еси1аг Оеуюез 8рес1гаМах Р1из 8рес1горйо1оте1ег. Средние ОП600 величины вычисляются с использованием 8ОЕТтах Рго 8оП\уаге (Мо1еси1аг Оеуюез) и величины М1С определяются с помощью анализа линейной регрессии с использованием Рпзт Уегзюп 3.02 (Сгарй Раб 8ой^аге, Сан Диего). М1С определяется как концентрация соединения, требуемая для ОП600 показания, эквивалентного показанию 10% контрольного носителя.
Испытание ш у1уо на противоопухолевую активность.
Для изучения противоопухолевых эффектов соединения 1 ш у1уо используются подкожные боковые ксенотрансплантаты раковой клеточной линии толстой кишки человека, НСТ-116 на пи/пи самках мышей (Наг1ап). Все эксперименты с животными соответствовали установленным правилам заботы о животных. 107 НСТ-116 клеток (примерно 0,1 мл уплотненных клеток) ксенотрансплантировались из культуры в ИМЕМ с добавлением в нее 10% ЕВ8 (фетальная бычья сыворотка) 20 атимичным мышам. Обработка начиналась, когда развивались измеримые опухоли, примерно спустя 3 дня после инокуляции. Соединение 1 (10 мг/кг) разбавлялось в 40 мкл ДМСО, и обработанные интраперитонально (1.р.) 11 животных получали 1ММ-Ш-231 10 мг/кг, 1.р. в дни, указанные стрелками, а 11 животных получали ДМСО контроль. Опухоли измерялись в указанные дни. Одна мышь, обработанная соединением 1, умирала на 10 день после повторной 1.р. инъекции. Результаты показаны на фиг. 4. Показатели ошибки представляют стандартную ошибку среднего значения.
Для изучения противоопухолевых эффектов соединения 7 и соединения 3 ш у1уо используются подкожные боковые ксенотрансплантаты раковой клеточной линии толстой кишки человека, НСТ-116 на пи/пи самках мышей (Наг1ап). Все эксперименты с животными соответствовали установленным правилам заботы о животных. 107 НСТ-116 клеток (примерно 0,1 мл уплотненных клеток) ксенотрансплантировались из культуры в ИМЕМ с добавлением в нее 10% ЕВ8 (фетальная бычья сыворотка) 15 атимичным мышам. Обработка начиналась, когда развивались измеримые опухоли, примерно спустя 4 дня после инокуляции. И соединение 7, и соединение 3 (10 мг/кг) разбавлялись в 20 мкл ДМСО для интраперитональной (1.р.) инъекции. 5 животных получали лекарства 1.р. в дни, указанные стрелками, и 5 животных получали ДМСО контроль. Опухоли измерялись в указанные дни. Результаты показаны на фиг. 3. Показатели ошибки представляют стандартную ошибку среднего значения.
Результаты биологических испытаний.
О'·· « ГАЗ (1С50) ,4С(1С5в) ХТТ(1С50) Кр.ФиолетОСвд)
Отриц. 31 мкг/мл >80 мкг/мл >50 мкг/мл
СРТ I 8ΐίτη Потеря веса
Не испыт. 60 мг/кг: 8,6%(день 3); 30 мг/кг: 5,4%(день 2)
5А/МН(М1С) 5А/Тзду( М1С) Р5АЕ/МН(М1С) Р8АЕ/Таоу(М1С)
Не испыт. Не испыт. Не испыт. Не испыт.
ЕР/МН(М1С) ЕЕ/Ткоу (М1С) Есо11/МН(М1С) Есо11/Таоу(М1С)
Не испыт. Не испыт. Не испыт. Не испыт.
- 16 010484
РА8(1С») ИС(1С5о) хттас») Кр.Фиолет(1Ся>)
Отриц. Отриц >80 мкг/мл 49,0 мкг/мл
9 СРТI Зйт Потеря веса
ч-£На Не испыт. Не испыт.
НэСЧчД СОгН
9 ЗА/МН(М1С) 8А/Т$оу( М1С) Р8АЕ/МН(М1С) РЗАЕ/Тзоу(М1С)
43 мкг/мл 60 мкг/мл Отриц. Отриц
ЕР/МН(М1С) ЕР/Тзоу (М1С) Есо11/МН(М1С) Есо1|/Тзоу(М1С)
109 мкг/мл 94 мкг/мл Отриц. Отриц. |
РАЗ (1С») 14С(1С;о) ХТТ(1С50) Кр.Фиолет(1С5о)
Отриц. 0,75+0,4 мкг/мл 0,81+0,01 мкг/мл 0,9+0,5 мкг/мл
(±)
СРТ150ш Потеря веса
Л * 400%контр./МСР 60 мг/кг;3 из 3 гибелЦдень 3); ЗОмг/кг: 10% (день2)
НтС(НгСЪ> 1° при 10мкг/мл 20мг/кг:11%(день6); 10мг/кг:8,3%(деиь7); 5мг/кг:4,6%(деш.1)
ЗА/МН(М1С) 5А/Тзоу( М1С) Р8АЕ/МН(М1С) РЗАЕ/Тзоу(М1С)
9,1+1,9мкг/мл 12,0+0,5мкг/мл Отриц. Отриц.
ЕР/МН(М1С) ЕР/Тзоу (М1С) Есо11/МН(М1С) Есо11/Т5оу(М1С)
36 мкг/мл 25 мкг/мл Не испыт. Не испыт.
РАЗ (1СЯ) 14С(1СЯ) ХТТ(1СИ) Кр.Фиолет(1С5о)
Отриц. 25,7мкг/мл 59,4+6,4мкг/мл 43,9+4,8 мкг/мл
(±)
СРТ I 8ϋιη Потеря веса
1 СН3 Не испыт. ЗОмг/кг: 2% (день!)
η
ί—ι
НэЧНгС)т ; 8А/МН(М1С) 8А/Тзоу( М1С) Р8АЕ/МН(М1С) Р8АЕ/Тзоу(М1С)
12 107мкг/мл Отриц. Отриц. Отриц.
ЕР/МН(М1С) ЕГ/Тзоу (М1С) Есо11/МН(М1С) ЕсоИ/Т5оу(М1С)
91 мкг/мл 114 мкг/мл 108мкг/мл Отриц.
РАЗ (ГС») сас,») ХТТ(1С50) Кр.ФиолетПСзо)
133мкг/мл Ото иц. 20,8+7,1 мкг/мл 30,0 мкг/мл
ω ί ) СРТIЗйт Потеря веса
х„.сн3 Не испыт. Не испыт.
УЧ 11
ЗА/МН(М1С) ЗА/Тзоу( М1С) Р8АЕ/МН(М1С) РЗАЕ/Т5оу(М1С)
80мкг/мл 193 мкг/мл 218мкг/мл 160м кг/мл
ЕР/МН(М1С) ЕР/Тзоу (М1С) Есо11/МН(М1С) Есо11/Т5оу(М1С)
84мкг/мл Отриц. Отриц. 155м кг/мл
- 17 010484
РА8 ([С») иС(1Сю) ХТТ(1С50) Кр.ФиолетОСя,)
93мкг/мл Отриц.(5Йт) 27,8+3,8 мкг/мл 23,7 мкг/мл
9 СРТ 1 8ιίηι Потеря веса
«О'0”’ Не испыт. Не испыт.
ПзС(НгС)/
ϋ 13 8А/МН(М1С) 8А/Тзоу( М1С) Р8АЕ/МН(М1С) Р8АЕ/Тзоу(М1С)
79мкг/мл $7 мкг/мл 280мкг/мл 137мкг/мл
ЕР/МН(М1С) ЕР/Тзоу (М1С) Есо1ЕМН(М1С) Есо11/Т&оу(М1С)
115 мкг/мл 203 мкг/мл Отриц. 199 мкг/мл
РАЗ (1СИ) |4С(ГСда) ХТТ(1СИ) Кр.Фиолет(1Си)
81мкг/мл 3,3мкг/мл 1,6±0,1 мкг/мл 0,85±0,08 мкг/мл
(±)
СРТI8йт Потеря веса
Не испыт. ЗОмг/кг: 1 изЗ гибель (день 1); 10мг/кг: 6,7%(день4)
8А/МН(М1С) 8А/Тзоу(М1С) Р8АЕ/МН(М1С) Р8АЕ/Тзоу(М!С)
2° 49мкг/мл 47мкг/мл Отриц. Отриц.
ЕР/МН(М1С) ЕР/Тзоу (М1С) ЕсоН /МН(М1С) ЕсоЕТзоу(М1С)
103мкг/мл 38мкг/мл Отриц. Отриц.
ω Λ- НзС^сьуН''-'''^ 3° РАЗ (1С50) ''С(1СИ) ХТТ(1СИ) Кр.Фиолет(1Сю)
107мкг/мл 1,8+0,Змкг/мл 2,4+0,2 мкг/мл 2,2+0,3 мкг/мл
СРТ 1 8Кш Потеря веса
Не испыт. 30мг/кг: 3 из 3 гибель (день2); 10мг/кг: 4,4% (день4)
8А/МН(М1С) 8А/ Тзоу (М1С) Р8АЕ/МН(М1С) Р8АЕ/Тзоу(М1С)
65мкг/мл 96м кг/мл Отриц. Отриц.
ЕР/МН(М1С) ЕР/Тзоу (М1С) Есо11/МН(М1С) Есо1иТзоу(М1С)
190мкг/мл 67мкг/мл Отриц. Отриц.
(±) Дх. НэСОЪОГ РАЗ (1СЯ) сасю) ХТТ(1С50) Кр.Фиолет(1Ся)
Отриц. 2,2+1,3 мкг/мл 4,1+2,2 мкг/мл 2,2+1,0 мкг/мл
СРТ I 311т Потеря веса
Не испыт. ЗОмг/кг: 5,9%(день2); 10мг/кг. 1,7%(день2)
8А/МН(М]С) 8А/Тзоу(М1С) Р8АЕ/МН(М1С) Р8АЕ/Тзоу(М1С)
44мкг/мл 48 мкг/мл Отриц. Отриц.
ЕР/МН(М1С) ЕР/Тзоу (М1С) Есо11/МН(М1С) Есо11/Таоу(М1С)
Отриц. 77мкг/мл Отриц. Отриц.
- 18 010484
(±) Н3С(НгС)ГуМ''''%Н О 6 ГАЗ (1С50) ХТТ(1С50) Кр.ФиолетЦС®)
Отриц. >80 мкг/мл >50 мкг/мл
СРТI ЗОт Потеря веса
Не испыт. 60мг/кг:9%(день2), 1гиб(деньЗ)/9,2%(дснь2), 1гиб(деньЗ)
30мг/кг:6.2%(день1), 1гибель(деньб)/10мг/кг: 2,6%(день2)
8А/МН(М1С) 8А/Тзоу(М1С) Р5АЕ/МН(М1С) РЗАЕ/Тзоу(М1С)
72м к г/мл 52 мкг/мл Отриц. Отриц.
ЕР/МН(М1С) Ер/Тзоу (М1С) ЕсоП /МН(М1С) Есо||/Тзоу(М1С)
219м кг/мл 215мкг/мл Отриц. 235мкг/мл
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (45)

1. Соединения формулы I в которой К1 означает С1-С20алкил или группу =СН2;
К2 означает С1-С20алкил;
X1 означает ΝΗΚ4, где К4 представляет собой С1-С20алкил, С3алкенил и необязательно содержит карбоксильную группу, спиртовую группу, или когда К1 означает группу =СН2, и К2 означает С8алкил, X1 означает группу -ΝΗί.’Η2ί.ΌΘΜο или группу -МНСН2СОО1гВи.
2. Соединения по п.1, в которых К1 представляет С1-С10алкил или группу =СН2.
3. Соединения по п.2, в которых К1 представляет -СН3 или =СН2.
4. Соединения по п.3, в которых соединение выбрано из группы, состоящей из
“Л? *ОЧ«
5. Соединения по п.1, в которых соединение выбрано из группы, состоящей из
- 19 010484
6. Соединения формулы II в которой Я6 означает С1-С20алкил;
Я7 означает С1-С20алкил;
X2 означает ЯНЯ9, где Я9 представляет собой С3алкенил.
7. Соединения по п.6, в которых Я1 представляет собой С1-С10алкил.
8. Соединения по п.7, в которых Я6 представляет -СН3.
9. Соединения формулы VII в которой Я27 означает С6-С10алкил.
10. Соединения по п.9, выбранные из группы, состоящей из
11. Фармацевтическая композиция, включающая фармацевтический разбавитель и соединение формулы IX в которой Я29 означает С1-С20алкил или группу =СН2;
Я30 означает С1-С20алкил;
X5 означает группу ОН или -ННЯ32, где Я32 представляет собой С1-С20алкил, С3алкенил и необязательно содержит карбоксильную группу или спиртовую группу, или когда Я1 означает группу =СН2, и Я2 означает С8алкил, X5 означает группу -ННСН2СООМе.
12. Фармацевтическая композиция по п.11, в которой Я29 представляет собой С1-С10алкил или группу =СН2.
13. Фармацевтическая композиция по п.12, в которой Я29 представляет -СН3 или =СН2.
14. Фармацевтическая композиция по п.11, в которой Я29 представляет -С6Н13 или -С8Н17.
15. Фармацевтическая композиция по п.11, в которой соединение выбрано из группы, состоящей из
- 20 010484
(Л-СН» о --------δ----------- м Л* « Л-
16. Фармацевтическая композиция, включающая фармацевтический разбавитель и соединение по п.1.
17. Фармацевтическая композиция, включающая фармацевтический разбавитель и соединение по п.6.
18. Фармацевтическая композиция, включающая фармацевтический разбавитель и соединение по п.9.
19. Способ индуцирования потери веса у животного или человека, предусматривающий введение указанному субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п.11.
20. Способ по п.19, в котором субъектом является человек.
21. Способ по п.19, в котором субъектом является животное.
22. Способ по п.20, в котором фармацевтическая композиция включает соединение, выбранное из группы, состоящей из
Лоо
23. Способ по п.21, в котором фармацевтическая композиция включает соединение, выбранное из группы, состоящей из
24. Способ ингибирования роста раковых клеток у животного или человека, предусматривающий введение указанному субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п.11.
25. Способ по п.24, в котором субъектом является человек.
26. Способ по п.24, в котором субъектом является животное.
27. Способ по п.25, в котором фармацевтическая композиция включает соединение, выбранное из группы, состоящей из
ω 0” » Л- ..
28. Способ по п.26, в котором фармацевтическая композиция включает соединение, выбранное из группы, состоящей из
4» τχ
29. Способ стимулирования активности СРТ-1 у животного или человека, предусматривающий вве- 21 010484 дение указанному субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п.11.
30. Способ по п.29, в котором субъектом является человек.
31. Способ по п.29, в котором субъектом является животное.
33. Способ по п.31, в котором соединение представляет
34. Способ ингибирования активности нейропептида-Υ у животного или человека, предусматривающий введение указанному субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п.11.
35. Способ по п.34, в котором субъектом является человек.
36. Способ по п.34, в котором субъектом является животное.
37. Способ ингибирования активности синтазы жирной кислоты у животного или человека, предусматривающий введение указанному субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п.11.
38. Способ по п.37, в котором субъектом является человек.
39. Способ по п.37, в котором субъектом является животное.
40. Способ по п.38, в котором соединение, выбрано из группы, состоящей из
------3-------------- 0* -----ъ--------- Ж* -¾. ж °_ * •Ж.. н>с<>уъ
41. Способ по п.39, в котором соединение выбрано из группы, состоящей из
-----д-------- сгУ-оь 0 V ус •Д^грц* « оV “Уж, о о \апй м Л“УЖ».
42. Способ ингибирования роста инвазивных микробных клеток у животного или человека, предусматривающий введение указанному субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п.11.
43. Способ по п.42, в котором субъектом является человек.
44. Способ по п.42, в котором субъектом является животное.
45. Способ по п.43, в котором соединение выбрано из группы, состоящей из
- 22 010484
46. Способ по п.44, в котором соединение выбрано из группы, состоящей из
EA200500122A 2002-07-01 2003-07-01 Новые соединения, фармацевтические композиции, содержащие их, и способы их использования EA010484B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US39280902P 2002-07-01 2002-07-01
PCT/US2003/020960 WO2004006835A2 (en) 2002-07-01 2003-07-01 Novel compounds, pharmaceutical compositions containing same, and methods of use for same

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200500122A1 EA200500122A1 (ru) 2005-12-29
EA010484B1 true EA010484B1 (ru) 2008-10-30

Family

ID=30115535

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200500122A EA010484B1 (ru) 2002-07-01 2003-07-01 Новые соединения, фармацевтические композиции, содержащие их, и способы их использования

Country Status (15)

Country Link
US (1) US20060241177A1 (ru)
EP (1) EP1534263A4 (ru)
JP (1) JP2005533107A (ru)
KR (1) KR20050072670A (ru)
CN (2) CN101633650A (ru)
AU (1) AU2003248810B2 (ru)
BR (1) BRPI0312413A2 (ru)
CA (1) CA2491183A1 (ru)
EA (1) EA010484B1 (ru)
HK (1) HK1086485A1 (ru)
IL (1) IL166054A0 (ru)
MX (1) MXPA05000152A (ru)
SG (1) SG170620A1 (ru)
WO (1) WO2004006835A2 (ru)
ZA (1) ZA200500203B (ru)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9018737D0 (en) * 1990-08-28 1990-10-10 Goodfellow John W Phosphetic patellar components
EA007029B1 (ru) 2002-02-08 2006-06-30 Джон Хопкинс Юниверсити Скул Оф Медсин Стимуляция срт-1 как средство уменьшения веса
CA2491573A1 (en) * 2002-07-09 2004-01-15 Fasgen, Llc Methods of treating microbial infections in humans and animals
CN101007796A (zh) * 2006-01-27 2007-08-01 北京摩力克科技有限公司 新型五元杂环化合物及其制备方法和医疗用途
CN101190904A (zh) * 2006-11-23 2008-06-04 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 脂肪酸合成酶抑制剂及其制药用途
EP2581081A3 (en) 2007-06-01 2013-07-31 The Trustees Of Princeton University Treatment of viral infections by modulation of host cell metabolic pathways
WO2010118324A2 (en) 2009-04-09 2010-10-14 Nuclea Biotechnologies, LLC Antibodies against fatty acid synthase
FR2957078B1 (fr) * 2010-03-05 2012-05-04 Centre Nat Rech Scient Acides paraconiques comme activateurs de pigmentation
WO2011140296A1 (en) 2010-05-05 2011-11-10 Infinity Pharmaceuticals Triazoles as inhibitors of fatty acid synthase
EP2566853B1 (en) 2010-05-05 2017-01-25 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Tetrazolones as inhibitors of fatty acid synthase
EP2892892B1 (en) * 2012-09-07 2017-05-31 Janssen Pharmaceutica NV Imidazolin-5-one derivatives useful as fatty acid synthase (fasn) inhibitors for the treatment of cancer
CN103145662B (zh) * 2013-02-18 2014-07-16 深圳万和制药有限公司 N-取代的氨基丁内酯衍生物及其用途
CN103864731B (zh) * 2014-02-19 2016-01-20 成都中医药大学 含季碳手性中心的呋喃内酯环类化合物的合成方法
CN104530018B (zh) * 2014-12-12 2017-04-12 郑州大学 含α‑亚甲基‑γ‑丁内酯结构的吲哚类化合物、制备方法及其应用
JP6626113B2 (ja) * 2015-02-05 2019-12-25 デルミラ インコーポレーテッド ２−（（２−エトキシ−２−オキソエチル）（メチル）アミノ）−２−オキソエチル５−テトラデシルオキシ）フラン−２−カルボキシレートを製造するための合成方法
KR102038971B1 (ko) * 2018-03-12 2019-11-26 주식회사 엔지켐생명과학 디아실글리세롤락톤 화합물, 그 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 면역증진제
KR20220159831A (ko) 2021-05-26 2022-12-05 울산과학기술원 미토콘드리아 표적화 뉴클레오펩티드 및 이를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3472878A (en) * 1969-01-27 1969-10-14 American Home Prod N-(hydroxyaryl)aconamides
US3496187A (en) * 1967-03-20 1970-02-17 American Home Prod N-(heterocyclyl)aconamides

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4753871A (en) * 1986-12-12 1988-06-28 Eastman Kodak Company Cyan dye-forming couplers and photographic materials containing same
JPS63169848A (ja) * 1987-01-07 1988-07-13 Nec Corp デジタルデ−タ通信におけるデ−タ端末収容方式
JP2524760B2 (ja) * 1987-07-10 1996-08-14 テイカ株式会社 新規抗生物質
JPH04199148A (ja) * 1990-11-29 1992-07-20 Konica Corp ハロゲン化銀写真感光材料
JPH05246822A (ja) * 1992-03-07 1993-09-24 Nippon Paint Co Ltd 抗菌剤
JPH07112931A (ja) * 1993-08-27 1995-05-02 Nippon Paint Co Ltd エプスタイン−バーウイルス活性化抑制剤
ATE303144T1 (de) * 1995-11-17 2005-09-15 Univ Johns Hopkins Hemmung der fettsäuresynthase als mittel zur verminderung der adipozytenmenge
ATE330598T1 (de) * 1999-11-12 2006-07-15 Univ Johns Hopkins Behandlung von krebs durch erhöhung des malonyl- coa-spiegels
AU2001238515A1 (en) * 2000-02-16 2001-08-27 The John Hopkins University School Of Medicine Weight loss induced by reduction in neuropeptide y level

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3496187A (en) * 1967-03-20 1970-02-17 American Home Prod N-(heterocyclyl)aconamides
US3472878A (en) * 1969-01-27 1969-10-14 American Home Prod N-(hydroxyaryl)aconamides

Also Published As

Publication number Publication date
EA200500122A1 (ru) 2005-12-29
HK1086485A1 (en) 2006-09-22
WO2004006835A2 (en) 2004-01-22
JP2005533107A (ja) 2005-11-04
KR20050072670A (ko) 2005-07-12
BRPI0312413A2 (pt) 2016-08-02
CN100482219C (zh) 2009-04-29
CA2491183A1 (en) 2004-01-22
CN1705478A (zh) 2005-12-07
AU2003248810A1 (en) 2004-02-02
SG170620A1 (en) 2011-05-30
ZA200500203B (en) 2009-09-30
AU2003248810B2 (en) 2009-08-20
US20060241177A1 (en) 2006-10-26
CN101633650A (zh) 2010-01-27
WO2004006835A3 (en) 2004-07-22
EP1534263A2 (en) 2005-06-01
MXPA05000152A (es) 2005-10-24
EP1534263A4 (en) 2006-10-11
IL166054A0 (en) 2006-01-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA010484B1 (ru) Новые соединения, фармацевтические композиции, содержащие их, и способы их использования
US7649012B2 (en) Compounds, pharmaceutical compositions containing same, and methods of use for same
US7652065B2 (en) Tellurium compounds and their use as immunomodulators
JP2019537599A (ja) Ｍａｌｔ１分解のための化合物
KR20120087878A (ko) 1,3-프로판디설포닉 애시드의 수송을 위한 방법, 화합물 및 조성물
JP2018531987A (ja) Ｍａｌｔ１阻害剤およびその使用
KR20070095754A (ko) 신규 화합물, 그것을 함유하는 약학 조성물, 및 그것을사용하는 방법
US6040444A (en) Process for preparing furan nitrone compounds
KR890001488B1 (ko) 미토마이신 c 유도체의 제조방법
Smelcerovic et al. Cyclodidepsipeptides with a promising scaffold in medicinal chemistry
US20100168176A1 (en) Novel compounds, pharmaceutical compositions containing same, and methods of use for same
US6242478B1 (en) Five member ring sulfenate esters and thiosulfinate esters
US20100029761A1 (en) Novel compounds, pharmaceutical compositions containing same, and methods of use for same
US4999366A (en) Isoxazolidine-3,5-diones, pharmaceutical compositions and method of treatment
CA2212237A1 (en) Novel antineoplastic agents
US20090124562A1 (en) Versipelostatin derivative, anti-cancer agent and processes for production of the derivative and agent
WO2021263072A1 (en) Methods of treating disease
WO2024044751A2 (en) Peroxiredoxin 3 inhibitors and methods of use for treating cancer

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU