EA007254B1

EA007254B1 - Соединения, специфические к аденозиновому а, аи арецептору, и их применение

Info

Publication number: EA007254B1
Application number: EA200300628A
Authority: EA
Inventors: Арлиндо Л. Кастэлано; Брайан МакКиббен; Дэвид Дж. Уиттер
Original assignee: Оси Фармасьютикалз, Инк.
Priority date: 2000-12-01
Filing date: 2001-11-30
Publication date: 2006-08-25
Also published as: HUP0400692A3; MEP35308A; PL363245A1; NZ525885A; NO20032482L; HUP0400692A2; AP1893A; NO20032482D0; CA2430577A1; WO2002057267A1; EA200300628A1; ZA200303729B; EP1347980A4; JP4579497B2; AU2002248151B2; OA13295A; AP2003002807A0; CN1489590A; NO327207B1; MXPA03004717A

Abstract

Данное изобретение относится к соединениям, которые специфически ингибируют A, Aи Арецепторы, и применению данных соединений для лечения заболеваний, связанных с A, Aи Ааденозиновыми рецепторами у субъектов, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества соединений.

Description

Данная заявка является частичным продолжением и по ней испрашивается приоритет на основании заявок на патент США №№ 09/728316, поданной 1 декабря 2000 г., 09/728607, поданной 1 декабря 2000 г., и 09/728616, поданной 1 декабря 2000 г., каждая из которых включена в настоящее описание в качестве ссылки во всей своей полноте.

В данной заявке упоминаются соединения, которые специфически связываются с ί) А₁ аденозиновыми рецепторами (как например, помимо прочего, стр.4-76, 130-175 и 257-287);

ίί) А_2а аденозиновыми рецепторами (как например, помимо прочего, стр.176-201 и стр.288-293) и А₃аденозиновыми рецепторами (как например, помимо прочего, стр. 202-256 и 294-300).

Предпосылки создания изобретения

Аденозин представляет собой широко распространенный модулятор многочисленных видов физиологической активности, в частности в сердечно-сосудистой и нервной системах. Оказывается, что действие аденозина опосредуется специфическими рецепторными белками поверхности клетки. Аденозин модулирует различные физиологические функции, включая индуцирование седативного действия, расширение сосудов, подавление частоты сердечных сокращений и сокращаемости сердца, ингибирование агрегации тромбоцитов, стимулирование глюконеогенеза и ингибирование липолиза. Было показано, что в дополнение к его действию на аденилатциклазу, аденозин открывает калиевые каналы, уменьшает ток через кальциевые каналы и ингибирует или стимулирует фосфоинозитидный оборот с помощью рецептор-опосредованных механизмов (смотри, например, С.Е.Ми11ег апб В.81еш Абепокше Кесер1ог Ап1адошк1к: БйисШтек апб Ро1епйа1 Тйегареийс Аррйсайопк, Сиггеп! Рйаттасеийса1 Оек1дп 2:501 (1996) и С.Е.Ми11ег АгАбепокше РесерЮг АйидопЫк, Ехр. ОршТЬет. Ра1еп18 7(5) : 419 (1997)).

Аденозиновые рецепторы принадлежат к надсемейству пуриновых рецепторов, которые в настоящее время подразделяют на Р₁ (аденозин) и Р₂ (АТФ, АДФ и другие нуклеотиды) рецепторы. До настоящего времени из различных видов, включая человека, было клонировано четыре подтипа рецепторов для аденозинового нуклеозида. Два подтипа рецепторов (А₁ и А_2а) проявляют сродство к аденозину в наномолярном диапазоне, тогда как два других известных подтипа А_2Ь и А₃ являются рецепторами с низким сродством к аденозину в нижнем микромолярном диапазоне. Активация А₁ и А₃ аденозинового рецептора может приводить к ингибированию активности аденилатциклазы, тогда как активация А_2а и А_2Ь вызывает стимуляцию аденилатциклазы.

Для лечения нарушения познавательной способности, почечной недостаточности и сердечной аритмии было разработано несколько А1 антагонистов. Было высказано предположение, что А2а антагонисты могут оказаться благоприятными для пациентов, страдающих от паркинсонизма (болезнь Паркинсона). В частности, принимая во внимание способность к местной доставке, антагонисты аденозинового рецептора могут оказаться ценными для лечения аллергического воспаления и астмы. Доступная информация (например, Ыусе & Ме1хдег ΌΝΑ апйкепке Тйетару £от Акбппа ш ап Ашша1 Мобе1, №1Шге (1997) 385: 721-5) указывает, что в данном патофизиологическом контексте А₁ антагонисты могут блокировать сокращение гладкой мускулатуры, лежащей под дыхательным эпителием, тогда как антагонисты А_2Ь или А₃ рецептора могут блокировать дегрануляцию тучных клеток, уменьшая высвобождение гистамина и других воспалительных медиаторов. А_2Ь рецепторы были обнаружены в желудочно-кишечном тракте, особенно в эпителии прямой кишки и тонкого кишечника. Было высказано предположение, что А_2Ь рецепторы опосредуют цАМФ ответную реакцию (81тойше1ег е1 а1., ЕВю.Сйеш. (1995) 270:2387-94).

Также было показано, что аденозиновые рецепторы существуют на сетчатке различных видов млекопитающих, включая крупный рогатый скот, свинью, обезьяну, крысу, морскую свинку, мышь, кролика и человека (смотри, В1ахупк1й е1 а1., 0|ксге1е ЭЩпЬийопк о£ Абепокше РесерЮгк ш ташшайап Кейпа, 1оита1 о£ №игосйет1к11у, уойппе 54, радек 648-655 (1990); ХУообк е1 а1., СйагасЮпхайоп о£ Абепокше А₁РесерЮг Ьшбшд Бйек ш Вогте Ре1та1 МетЬтапек, Ехрегппеп1а1 Еуе Рекеатсй, уо1ите 53, радек 325-331 (1991); и Вгаак е1 а1., Епбодепоик абепокше апб абепокше гесерЮгк 1осаНхеб 1о дапдНоп се11к о£ 111е тейпа, Ртосеебшдк о£ 111е №Шопа1 Асабету о£ БОенсе, уо1пте 84, радек 3906-3910 (1987)). Недавно сообщалось о результатах наблюдений аденозиновых транспортных сайтов в культивированной клеточной линии сетчатки человека (^ййатк е1 а1., Шскойбе ТгапкроП Бйек ш а Сийигек Нитап Кейпа1 се11 Ьше Ек1аЬйкйеб Ьу 8У-40 Т АпЦдеп депе, Сштеп! Еуе Кекеатсй, гойиие 13, радек 109-118 (1994)).

Соединения, которые регулируют поглощение аденозина, ранее были предложены в качестве потенциальных терапевтических агентов для лечения повреждения сетчатки и головного зрительного нерва. В патенте США № 5780450, выданном Бйабе, автор обсуждает применение ингибиторов поглощения аденозина для лечения глазных заболеваний. Бйабе не описывает применение специфических ингибиторов А₃ рецептора. Полное содержание патента США № 5780450 включено в настоящее описание в качестве ссылки.

В качестве фармакологических инструментов необходимы дополнительные антагонисты аденозиновых рецепторов, и они представляют существенный интерес как лекарственные средства для упомянутых выше болезненных состояний и/или заболеваний.

Краткое изложение сущности изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям, которые селективно связываются с А₁ -адено зиновым рецептором, излечивая таким образом заболевание, связанное с А1-аденозиновым рецептором, у

- 1 007254 субъекта при введении субъекту терапевтически эффективного количества таких соединений. Заболевание, подвергаемое лечению, связано с нарушением познавательной способности, почечной недостаточностью, сердечной аритмией, дыхательным эпителием, высвобождением трансмиттеров, седативным действием, сужением кровеносных сосудов, брадикардией, отрицательной сердечной инотропией и дромотропией, бронхостенозом, нейтрофильным хемотаксисом, рефлюксом или язвенным заболеванием.

Настоящее изобретение основано, по крайней мере частично, на том факте, что некоторые N-6 замещенные 7-дезазапурины, описанные ниже, можно использовать для лечения болезненного состояния, дающего ответную реакцию на N-6 замещенный 7-дезазапурин. Примеры таких состояний включают те, в которых повышена активность аденозиновых рецепторов, например, бронхит, желудочно-кишечные заболевания или астма. Такие состояния могут быть охарактеризованы тем, что активация аденозинового рецептора может вести к ингибированию или стимуляции активности аденилатциклазы. Композиции и способы изобретения включают энантиомерно или диастереомерно чистые N-6 замещенные 7дезазапурины. Предпочтительные N-6 замещенные 7-дезазапурины включают те, которые содержат фрагменты ацетамида, карбоксамида, замещенного циклогексила, например, циклогексанол, или мочевины, присоединенные к N-6 азоту через алкиленовую цепь.

Настоящее изобретение относится к способам модулирования аденозинового рецептора(ов) у млекопитающего путем введения млекопитающему терапевтически эффективного количества N-6 замещенного 7-дезазапурина таким образом, что происходит модуляция активности аденозинового рецептора. Подходящие аденозиновые рецепторы включают семейство А_ь А₂ и А₃. В предпочтительном варианте осуществления N-6 замещенный 7-дезазапурин является антагонистом аденозинового рецептора.

Кроме того, изобретение относится к способам лечения заболеваний, дающих ответную реакцию на N-6 замещенные 7-дезазапурины, например, астмы, бронхита, аллергического ринита, хронического обструктивного заболевания легких, почечных заболеваний, желудочно-кишечных заболеваний и глазных заболеваний у млекопитающего путем введения млекопитающему терапевтически эффективного количества N-6 замещенного 7-дезазапурина, таким образом, что происходит лечение заболевания у млекопитающего. Подходящие N-6 замещенные 7-дезазапурины включают те, которые проиллюстрированы общей формулой I:

(I) и их фармацевтически приемлемые соли. Каждый из Κι и К₂ независимо представляет собой атом водорода или замещенный или незамещенный алкильный, арильный или алкиларильный фрагмент, или они вместе образуют замещенное или незамещенное гетероциклическое кольцо. К₃ представляет собой замещенный или незамещенный алкильный, арильный или алкиларильный фрагмент. К₄ представляет собой атом водорода или замещенный или незамещенный алкильный, арильный или алкиларильный фрагмент. Каждый из К₅ и Κ₆, независимо, представляет собой атом галогена, например, хлор, фтор или бром, атом водорода или замещенный или незамещенный алкильный, арильный или алкиларильный фрагмент, или К₅ представляет собой карбоксил, сложные эфиры карбоксила или карбоксамиды, или К₄ и Κ₅, или К₅ и К₆ вместе образуют замещенное или незамещенное гетероциклическое или карбоциклическое кольцо.

В некоторых вариантах осуществления каждый из Κι и Κ₂, независимо, может представлять собой замещенные или незамещенные циклоалкильные или гетероарилалкильные фрагменты. В других вариантах осуществления К₃ представляет собой атом водорода или замещенный или незамещенный гетероарильный фрагмент. Еще в других вариантах осуществления каждый из К₄, К₅ и К,, независимо, может представлять собой гетероарильный фрагмент. В предпочтительном варианте осуществления Κι представляет собой атом водорода, К₂ представляет собой циклогексанол, например, транс-циклогексанол, К₃представляет собой фенил, К₄ представляет собой атом водорода, К₅ представляет собой метильную группу и К<5 представляет собой метильную группу. В другом варианте осуществления К представляет собой атом водорода,

К₂ представляет собой

К₃ представляет собой фенил, К₄ представляет собой атом водорода, К₅ и К представляют собой метильные группы.

- 2 007254

Изобретение дополнительно относится к фармацевтическим композициям для лечения состояний, дающих ответную реакцию на N-6 замещенные 7-дезазапурины, у млекопитающих, например, астмы, бронхита, аллергического ринита, хронического обструктивного заболевания легких, почечных заболеваний, желудочно-кишечных заболеваний и глазных заболеваний. Фармацевтическая композиция включает терапевтически эффективное количество N-6 замещенного 7-дезазапурина и фармацевтически приемлемый носитель.

Настоящее изобретение также относится к упакованным фармацевтическим композициям для лечения состояний, дающих ответную реакцию на N-6 замещенные 7-дезазапурины, у млекопитающих. Упакованные фармацевтические композиции включают контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество по крайней мере одного N-6 замещенного 7-дезазапурина, и инструкции по использованию N-6 замещенного 7-дезазапурина для лечения состояний, дающих ответную реакцию на N-6 замещенные 7-дезазапурины, у млекопитающих.

Далее изобретение относится к соединениям формулы I, где

Κ₁ представляет собой водород;

К₂ представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный алкил, или Κ₁ и К₂ вместе образуют замещенное или незамещенное гетероциклическое кольцо;

К₃ представляет собой незамещенный или замещенный арил;

К₄ представляет собой водород; и каждый из К₅ и Κ5 независимо представляет собой водород или алкил, и их фармацевтически приемлемым солям. Дезазапурины данного варианта осуществления могут преимущественно быть селективными антагонистами А₁ рецептора. Данные соединения могут оказаться полезными для множества терапевтических применений, как, например, лечение астмы, почечной недостаточности, связанной с сердечной недостаточностью, и глаукомы. В особенно предпочтительном варианте осуществления дезазапурин представляет собой растворимое в воде пролекарство, которое способно метаболизировать ίη νίνο в активное лекарственное средство, например, посредством гидролиза, катализируемого эстеразой.

Еще в одном варианте осуществления, изобретение относится к способу ингибирования активности аденозинового рецептора (например, А₃) в клетке, путем контактирования клетки с N-6 замещенным 7дезазапурином (например, предпочтительно антагонистом аденозинового рецептора).

В другом аспекте изобретение относится к способу лечения повреждения глаза у млекопитающего (например, человека) путем введения животному эффективного количества N-6 замещенного 7дезазапурина формулы I. Предпочтительно N-6 замещенный 7-дезазапурин является антагонистом А₃аденозиновых рецепторов в клетках млекопитающих. Повреждение относится к сетчатке или зрительному головному нерву и может быть острым или хроническим. Повреждение может быть результатом, например, глаукомы, отека, ишемии, гипоксии или травмы.

Изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей N-6 замещенное соединение формулы I. Предпочтительно фармацевтический препарат представляет собой офтальмологическую композицию (например, композицию для периокулярной, ретробульбарной или внутриглазной инъекции, системную композицию и хирургический орошающий раствор).

где X представляет собой N или СВ^ каждый из В! и К₂ независимо представляет собой водород или замещенный или незамещенный алкокси, аминоалкил, алкил, арил или алкиларил, или вместе они образуют замещенное или незамещенное гетероциклическое кольцо, при условии, что оба Κ₁ и К₂ не являются водородом; К₃ представляет собой замещенный или незамещенный алкил, арилалкил или арил; К^Л представляет собой водород или замещенный или незамещенный С_ГС₆ алкил; Б представляет собой водород, замещенный или незамещенный алкил, или В₄ и Б вместе образуют замещенное или незамещенное гетероциклическое или карбоциклическое кольцо; Κ6 представляет собой водород, замещенный или незамещенный алкил, или галоген; Ω представляет собой СН₂, О, 8 или ИВ₇, где К₇ представляет собой водород или замещенный или незамещенный С₁-С₆ алкил; и представляет собой незамещенный или замещенный алкил, циклоалкил, арил, арилалкил, биарил, гетероарил, замещенный карбонил, замещенный тиокарбонил или замещенный сульфонил; при условии, что если Κ3 представляет собой пирролидино, то Κ4 не является метилом. Изобретение также включает фармацевтически приемлемые соли и пролекарства соединений по изобретению.

- 3 007254

В преимущественном варианте осуществления X представляет собой СК₆, и Р представляет собой СН₂, О, 8 или ΝΗ в формуле II, где К₆ является таким, как определено выше.

В другом варианте осуществления формулы II, X представляет собой Ν.

Изобретение дополнительно относится к способу ингибирования активности аденозинового рецептора (например, Л_2Ь-аденозинового рецептора) в клетке при контактировании клетки с соединением по изобретению. Предпочтительно соединение является антагонистом рецептора.

Изобретение также относится к способу лечения желудочно-кишечного заболевания (например, диареи) или заболевания дыхательных путей (например, аллергического ринита, хронического обструктивного заболевания легких) у животного путем введения животному эффективного количества соединения формулы II (например, антагониста Л_2Ь). Предпочтительно животное представляет собой человека.

Отличительной особенностью изобретения также является соединение, имеющее структуру:

Н

IV где К₁ представляет собой транс-4-гидроксициклогексил, 2-метиламинокарбониламиноциклогексил, 2-метиламинокарбониламиноциклогексил, ацетамидоэтил или метиламинокарбониламиноэтил;

где К₃ представляет собой замещенное или незамещенное четырех-шестичленное кольцо;

где К₅ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил, арилалкил, амино, замещенный арил, где указанный замещенный алкил представляет собой -С(К₇) (Κ₈)ΧΚ₉, где X представляет собой О, 8 или ΝΚ₁₀, где каждый из К₇ и К₈ независимо представляет собой Н или алкил, где каждый из К₉ и К₁₀ независимо представляет собой алкил или циклоалкил, или К₉, К₁₀ и азот вместе образуют замещенное или незамещенное кольцо, содержащее 4-7 членов;

где К₆ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, циклоалкил; или фармацевтически прием лемая соль, или пролекарственное производное, или биологически активный метаболит; при условии, что когда К₁представляет собой ацетиламиноэтил, К₃ не является 4-пиридилом.

В одном варианте осуществления соединения К₃ представляет собой фенил, пиррол, тиофен, фуран, тиазол, имидазол, пиразол, 1,2,4-триазол, пиридин, 2(1Н)-пиридон, 4(1Н)-пиридон, пиразин, пиримидин, пиридазин, изотиазол, изоксазол, оксазол, тетразол, нафталин, тетралин, нафтиридин, бензофуран, бензотиофен, индол, 2,3-дигидроиндол, 1Н-индол, индолин, бензопиразол, 1,3-бензодиоксол, бензоксазол, пурин, кумарин, хромон, хинолин, тетрагидрохинолин, изохинолин, бензимидазол, хиназолин, пиридо[2,3Ь]пиразин, пиридо[3,4-Ь]пиразин, пиридо[3,2-с]пиридазин, пиридо[3,4-Ь] пиридин, 1Н-пиразол [3,2-6] пиримидин, птеридин, 2(1Н)-хинолон, 1(2Н)-изохинолон, 1,4-бензизоксазин, бензотиазол, хиноксалин, хинолин-№оксид, изохинолин-№-оксид, хиноксалин-№оксид, хиназолин^-оксид, бензоксазин, фталазин, циннолин или имеет структуру:

где Υ представляет собой углерод или азот;

где К₂ и К₂' независимо представляют собой Н, замещенный или незамещенный алкил, замещенный или незамещенный арил, галоген, метокси, метиламино или метилтио.

Данное изобретение также относится к соединению, имеющему структуру:

V где К₃ представляет собой арил, замещенный арил или гетероарил;

- 4 007254 где Кб представляет собой Н, алкил, замещенный алкил или циклоалкил; где В₅ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил, арилалкил, амино, замещенный арил, где указанный замещенный алкил представляет собой -С(К₇) (Κ₈)ΝΚ₉Κ₁₀, где каждый из К₇ и К₅ представляет собой Н или алкил, где каждый из К.₉ и К₁₀ представляет собой алкил или циклоалкил, или К₉, К₁₀ и азот вместе образуют кольцевую систему, содержащую 4-7 членов.

Данное изобретение также относится к способу ингибирования активности Л₁-аденозинового рецептора в клетке, включающему контактирование указанной клетки с вышеуказанными соединениями.

Подробное описание

Отличительные особенности и другие подробности изобретения теперь будут описаны более конкретно и отражены в формуле изобретения. Следует понимать, что конкретные варианты осуществления изобретения приведены в качестве иллюстрации, а не ограничения изобретения. Принципиальные отличительные особенности данного изобретения могут быть использованы в различных вариантах осуществления, не отступая от объема изобретения.

Настоящее изобретение относится к способам лечения состояний, дающих ответную реакцию на Ν-

6- замещенный 7-дезазапурин у млекопитающего. Способы включают введение млекопитающему терапевтически эффективного количества Ν-б замещенного 7-дезазапурина, описанного ниже, так что происходит лечение состояния у млекопитающего, дающего ответную реакцию на Ν-б-замещенный 7дезазапурин.

Выражение «состояние, дающее ответную реакцию на Ν-б-замещенный 7-дезазапурин», предназначено для обозначения болезненного состояния или заболевания, отличающегося ответной реакцией на лечение Ν-б замещенным 7-дезазапурином по изобретению, как описано ниже, например, лечение включает значительное уменьшение по крайней мере одного симптома или последствия болезненного состояния, достигаемое с использованием Ν-б замещенного 7-дезазапурина по изобретению. Обычно такие состояния связаны с увеличением количества аденозина у хозяина, так что хозяин часто переживает физиологические симптомы, которые включают, но не ограничиваются этим, высвобождение токсинов, воспаление, кому, задержку воды, набор веса или потерю веса, панкреатит, эмфизему, ревматоидный артрит, остеоартрит, множественное поражение органов, детский или взрослый респираторный дистресссиндром, аллергический ринит, хроническое обструктивное заболевание легких, глазные заболевания, желудочно-кишечные заболевания, стимулирование кожных новообразований, иммунодефицит и астму (смотри, например, С.Е. Ми11ег апб В. 81ст Лбепо81ие ВессрЮг ЛпЦщопЩх 81гис1игс5 апб Ро1сп(1а1 Тйсгарсибс Лррйсабощ, СиггсгИ Рйагтассибса1 Ос^щп. 2:501 (199б) и С.Е.Ми11сг Л|-Лбспо5тс ВессрЮг Лп1адош515. Ехр.Орт.Тйст. Ра1сп15 7(5):419 (1997), и I. Есок1Ыоус, В. Ро1о§а, 8.Т. Но1да1с и I. В1аддюш Абспоьтс Л_2Ь гессрЮгх а поус1 Шегарсибс 1агдс1 ш ЛкШта Т1Р8 19: 148 (1998)). Действие, часто связанное с такими симптомами, включает, но не ограничивается этим, жар, недостаток дыхания, тошноту, диарею, слабость, головную боль и даже смерть. В одном варианте осуществления болезненное состояние, дающее ответную реакцию на Ν-б замещенный 7-дезазапурин, включает те заболевания, которые опосредованы стимуляцией аденозиновых рецепторов, например, А!, Л_2а, Л_2Ь, А₃ и т.д., таких, при которых модулируется концентрация кальция в клетках и/или активация РЬС (фосфолипазы С). В предпочтительном варианте осуществления болезненное состояние, дающее ответную реакцию на Ν-б замещенный

7- дезазапурин, связано с аденозиновым(ыми) рецептором(ами), например, Ν-б замещенный 7дезазапурин действует в качестве антагониста. Примеры подходящих дающих ответную реакцию состояний, которые можно лечить с помощью соединений по изобретению, например, подтипов аденозиновых рецепторов, которые опосредуют биологическое действие, включают действие на центральную нервную систему (ЦНС), сердечно-сосудистое действие, почечное действие, дыхательное действие, иммунологическое действие, желудочно-кишечное действие и метаболическое действие. Относительное количество аденозина у субъекта может быть связано с перечисленным ниже действием; то есть повышенные уровни аденозина могут инициировать действие, например, нежелательную физиологическую ответную реакцию, например, приступ астмы.

Действие на ЦНС включает пониженное высвобождение трансмиттера (Л!), седативное действие (А!), пониженную двигательную активность (Л_2а), противосудорожную активность, стимуляцию хеморецептора (Л₂) и гипералгезию. Терапевтическое применение соединений изобретения включает лечение слабоумия, болезни Альцгеймера и улучшение памяти.

Сердечно-сосудистое действие включает расширение сосудов (Л_2а), (Л_2Ь) и (А₃), сужение сосудов (Л₁), брадикардию (Л₁), ингибирование тромбоцитов (Л_2а) отрицательную сердечную инотропию и дромотропию, аритмию, тахикардию и ангиогенез. Терапевтическое применение соединений изобретения включает, например, профилактику индуцированного ишемией повреждения сердца и стимуляцию деятельности сердца, защиту тканей миокарда и восстановление функции сердца.

Почечное действие включает пониженную скорость клубочковой фильтрации (Л1), мезангиальное сокращение клеток (Л₁), антидиурез (Л₁) и ингибирование высвобождение ренина (Л₁). Подходящие терапевтические применения соединений по изобретению включают применение предлагаемых соединений в качестве диуретиков, натрийуретиков, препаратов при калиевой недостаточности, для защиты по

- 5 007254 чек/профилактики острой почечной недостаточности, антигипертензивного, противоотечного и противонефритного агентов.

Респираторное действие включает расширение бронхов (А₂), сужение бронхов (Αι), хроническое обструктивное заболевание легких, аллергический ринит, слизистые выделения и угнетение дыхания (А₂). Подходящие терапевтические применения соединений по изобретению включают противоастматические применения, лечение заболевания легких после трансплантации и респираторных заболеваний.

Иммунологическое действие включает подавление иммунитета (А₂), нейтрофильный хемотаксис (А₁), нейтрофильное генерирование супероксида (А_2а) и дегрануляцию тучных клеток (А_2Ь и А₃). Терапевтическое применение антагонистов включает аллергическое и неаллергическое воспаление, например, высвобождение гистамина и других воспалительных медиаторов.

Желудочно-кишечное действие включает ингибирование выделения кислоты (А₁), терапевтическое применение может включать рефлюкс и язвенные заболевания. Желудочно-кишечное действие также включает заболевания прямой кишки, тонкого кишечника и диарею, например, диарею, связанную с воспалением кишечника (А_2Ь).

Глазные заболевания включают заболевания, связанные с повреждением и травмой сетчатки и головного зрительного нерва (А₃). В предпочтительном варианте осуществления глазное заболевание представляет собой глаукому.

Другие терапевтические применения соединений по изобретению включают лечение ожирения (липолитические свойства), повышенного давления, лечение депрессии, седативное, нейролептическое действие, и действие в качестве противолепрозных и слабительных средств, например, воздействующих на подвижность, но не вызывающих диарею.

Подразумевается, что термин «болезненное состояние» включает те состояния, которые вызваны или связаны с нежелательными уровнями аденозина, активностью аденилилциклазы, повышенной физиологической активностью, связанной с аномальной стимуляцией аденозиновых рецепторов и/или повышением цАМФ. В одном варианте осуществления болезненное состояние представляет собой, например, астму, хроническое обструктивное заболевание легких, аллергический ринит, бронхит, почечные заболевания, желудочно-кишечные заболевания или глазные заболевания. Дополнительные примеры включают хронический бронхит и циститный фиброз. Подходящие примеры воспалительных заболеваний включают нелимфоцитную лейкемию, ишемию миокарда, стенокардию, инфаркт, церебральноваскулярную ишемию, перемежающуюся хромоту, критическое малокровие конечностей, венозную гипертензию, варикозное заболевание вен, язвенное заболевание вен и артериосклероз. Ухудшенные реперфузионные состояния включают, например, любую постхирургическую травму, как например при восстановительной хирургии, тромболизе и ангиопластике.

Подразумевается, что выражение «лечение состояния, дающего ответную реакцию на N-6 замещенный 7-дезазапурин», или «проведение курса лечения состояния, дающего ответную реакцию на N-6 замещенный 7-дезазапурин», включает такие изменения в заболевании или болезненном состоянии, как описано выше, что физиологические симптомы у млекопитающего могут быть значительно уменьшены или сведены к минимуму. Выражение также включает контролирование, профилактику или ингибирование физиологических симптомов или действий, связанных с аномальным количеством аденозина. В одном предпочтительном варианте осуществления, контролирование заболевания или болезненного состояния заключается в искоренении заболевания или болезненного состояния. В другом предпочтительном варианте осуществления, контролирование является селективным таким образом, что контролируются аномальные уровни активности аденозинового рецептора, тогда как другие физиологические системы и параметры не затрагиваются.

Подразумевается, что термин «N-6 замещенные 7-дезазапурины» является общепринятым в данной области и включает соединения, которые имеют формулу I:

«Ν-замещенный 7-дезазапурин» включает его фармацевтически приемлемые соли и в одном варианте осуществления также включает некоторые описанные здесь Ν-6 замещенные пурины.

В некоторых вариантах осуществления Ν-6 замещенный 7-дезазапурин не является Ν-6 бензил или Ν-6 фенилэтил замещенным. В других вариантах осуществления К4 не является бензил или фенилэтил замещенным. В предпочтительных вариантах осуществления оба К₁ и К₂ не являются атомами водорода. Еще в других предпочтительных вариантах осуществления К₃ не является атомом водорода.

- 6 007254

Выражение «терапевтически эффективное количество» N-6 замещенного 7-дезазапурина, описанного ниже, представляет собой такое количество терапевтического соединения, которое является необходимым или достаточным для выполнения предназначенной функции в организме млекопитающего, например, для лечения состояния, дающего ответную реакцию на №6-замещенный 7-дезазапурин, или заболевания у млекопитающего. Эффективное количество терапевтического соединения может изменяться в соответствии с такими факторами как количество возбудителя заболевания, уже присутствующего в млекопитающем, возраст, пол и вес млекопитающего и способность терапевтических соединений по настоящему изобретению воздействовать на состояние, дающее ответную реакцию на N-6замещенный 7-дезазапурин, у млекопитающего.

Обычный специалист в данной области будет способен исследовать вышеуказанные факторы и определить эффективное количество терапевтического соединения без чрезмерного экспериментирования. Для определения «эффективного количества» описанных выше терапевтических соединений также можно использовать анализ ίη νίίτο или ίη νίνο. Обычный специалист выберет подходящее количество терапевтического соединения для использования в вышеуказанном анализе или в качестве терапевтического лечения.

Терапевтически эффективное количество предпочтительно уменьшает по крайней мере один симптом или действие, связанное с состоянием, дающим ответную реакцию на N-6 замещенный 7дезазапурин, или с заболеванием, подвергаемым лечению, по крайней мере примерно на 20% (более предпочтительно по крайней мере примерно на 40%, еще более предпочтительно по крайней мере примерно на 60% и еще более предпочтительно по крайней мере примерно на 80%) по сравнению с субъектом, не подвергаемым лечению. Специалистом в данной области могут быть разработаны анализы для измерения снижения таких симптомов и/или действий. Подразумевается, что любой известный в данной области анализ, способный измерять такие параметры, включен как часть данного изобретения. Например, если астма является состоянием, подвергаемым лечению, то объем воздуха, расходуемого легкими субъекта, может быть измерен до и после лечения для измерения увеличения объема с использованием известных методик в данной области. Аналогично, если воспаление является состоянием, подвергаемым лечению, то площадь, которая воспалена, может быть измерена до и после лечения для измерения уменьшения воспаленной площади с использованием известных методик в данной области.

Термин «клетка» включает как прокариотические, так и эукариотические клетки.

Термин «животное» включает любой организм, содержащий аденозиновые рецепторы, или любой организм, восприимчивый к состоянию, дающему ответную реакцию на N-6 замещенный 7-дезазапурин. Примеры животных включают дрожжи, млекопитающих, рептилий и птиц. Термин также включает трансгенных животных.

Термин «млекопитающее» является общепринятым в данной области, и, подразумевается, что он включает животное, более предпочтительно теплокровное животное, наиболее предпочтительно крупный рогатый скот, овец, свиней, лошадей, собак, кошек, крыс, мышей и людей. Млекопитающие, восприимчивые к состоянию, дающему ответную реакцию на N-6 замещенный 7-дезазапурин, например, к воспалению, эмфиземе, астме, заболеванию центральной нервной системы или острому респираторному дистресс-синдрому, включены как часть данного изобретения.

В другом аспекте настоящее изобретение охватывает способы модулирования аденозинового рецептора(ов) у млекопитающего путем введения млекопитающему терапевтически эффективного количества N-6 замещенного 7-дезазапурина, таким образом, что происходит модулирование аденозинового рецептора у млекопитающего. Подходящие аденозиновые рецепторы включают семейство А1, А2 или А3. В предпочтительном варианте осуществления N-6 замещенный 7-дезазапурин является антагонистом аденозинового рецептора.

Подразумевается, что выражение «модулирование аденозинового рецептора» включает те случаи, где соединение взаимодействует с аденозиновым рецептором(ами), вызывая повышенную, пониженную или аномальную физиологическую активность, связанную с аденозиновым рецептором или последующими каскадными эффектами, являющимися результатом модулирования аденозинового рецептора.

Физиологическая активность, связанная с аденозиновыми рецепторами, включает индуцирование успокоения, расширение сосудов, подавление частоты сердечных сокращений, ингибирование агрегации тромбоцитов, стимуляцию глюконеогенеза, ингибирование липолиза, раскрытие кальциевых каналов, уменьшение потока через кальциевые каналы и т.д.

Подразумевается, что термин «модулировать», «модулирующий» и «модулирование» включают предотвращение, коррекцию или ингибирование полученного возрастания нежелательной физиологической активности, связанной с аномальной стимуляцией аденозинового рецептора, например, в контексте терапевтических способов по изобретению. В другом варианте осуществления термин «модулирование» включает антагонистические эффекты, например, уменьшение активности или продуцирования аллергических медиаторов и аллергического воспаления, которое возникает при сверхстимуляции аденозинового рецептора(ов). Например, терапевтические дезазапурины по изобретению могут взаимодействовать с аденозиновым рецептором для ингибирования, например, активности аденилатциклазы.

- 7 007254

Подразумевается, что выражение «состояние, характеризуемое аномальной активностью рецептора» включает те заболевания, нарушения или болезненные состояния, которые связаны с аномальной стимуляцией аденозинового рецептора, в которых стимуляция рецептора вызывает биохимическую или физиологическую цепь событий, которые непосредственно или косвенно связаны с заболеванием, нарушением или болезненным состоянием. Такая стимуляция аденозинового рецептора не должна быть единственной причиной заболевания, нарушения или болезненного состояния, но является только ответственной за вызов некоторых симптомов, типично связанных с заболеванием, нарушением или болезненным состоянием, подвергаемым лечению. Аномальная стимуляция рецептора может быть единственным фактором или по меньшей мере один другой агент может быть включен в состояние, подвергаемое лечению. Примеры состояний включают те заболевания, которые перечислены ранее, включая воспаление, желудочно-кишечные заболевания и те симптомы, которые проявляются из-за повышенной активности аденозинового рецептора. Предпочтительные примеры включают те симптомы, которые связаны с астмой, аллергическим ринитом, хроническим обструктивным заболеванием легких, эмфиземой, бронхитом, желудочно-кишечными заболеваниями и глаукомой.

Подразумевается, что выражение «проведение курса лечения или лечение состояния, характеризуемого аномальной активностью аденозинового рецептора» включает ослабление или уменьшение проявления по крайней мере одного симптома, связанного с заболеванием. Лечение также включает облегчение или уменьшение проявления больше, чем одного симптома. Предпочтительно, лечение излечивает, например, по существу исключает симптомы, связанные с заболеванием.

Настоящее изобретение относится к соединения, N-6 замещенным 7-дезазапуринам, имеющим формулу I:

где каждый из Κ1 и Κ2 независимо представляет собой атом водорода или замещенный или незамещенный алкильный, арильный или алкиларильный фрагмент, или они вместе образуют замещенное или незамещенное гетероциклическое кольцо; Κ3 представляет собой атом водорода или замещенный или незамещенный алкильный, арильный или алкиларильный фрагмент; Κ4 представляет собой атом водорода или замещенный или незамещенный алкильный, арильный или алкиларильный фрагмент. Каждый из Κ5 и Κ6, независимо, представляет собой атом галогена, например, хлор, фтор или бром, атом водорода или замещенный или незамещенный алкильный, арильный или алкиларильный фрагмент, или Вд и В₅, или Κ5 и Κ6 вместе образуют замещенное или незамещенное гетероциклическое или карбоциклическое кольцо. Также включены фармацевтически приемлемые соли N-6 замещенных 7-дезазапуринов.

В некоторых вариантах осуществления каждый из В₁ и В₂, независимо, может представлять собой замещенный или незамещенный циклоалкильный или гетероарилалкильный фрагмент. В другом варианте осуществления В₃ представляет собой атом водорода или замещенный или незамещенный гетероарильный фрагмент. Еще в других вариантах осуществления каждый из Вд, В₅ и Вб может независимо представлять собой гетероарильный фрагмент.

В одном варианте осуществления В1 представляет собой атом водорода, В2 представляет собой замещенный или незамещенный циклогексановый, циклопентильный, циклобутильный или циклопропановый фрагмент, В3 представляет собой замещенный или незамещенный фенильный фрагмент, В4 представляет собой атом водорода, и оба В5 и В6 представляют собой метил.

В другом варианте осуществления В2 представляет собой циклогексанол, циклогександиол, циклогексилсульфонамид, циклогексанамид, циклогексиловый сложный эфир, циклогексен, циклопентанол или циклопентандиол, и В3 представляет собой фенильный фрагмент.

Еще в одном варианте осуществления В1 представляет собой атом водорода, В2 представляет собой циклогексанол, В3 представляет собой замещенный или незамещенный фенильный, пиридиновый, фурановый, циклопентановый или тиофеновый фрагмент, В4 представляет собой атом водорода, замещенный алкильный, арильный или арилалкильный фрагмент, каждый из В5 и В6, независимо, представляет собой атом водорода или замещенный или незамещенный алкильный, арильный или алкиларильный фрагмент.

Еще в одном варианте осуществления В1 представляет собой атом водорода, В2 представляет собой замещенный или незамещенный алкиламин, ариламин или алкилариламин, замещенный или незамещенный алкиламид, ариламид или алкилариламид, замещенный или незамещенный алкилсульфонамид, арилсульфонамид или алкиларилсульфонамид, замещенную или незамещенную алкилмочевину, арилмочевину или алкиларилмочевину, замещенный или незамещенный алкилкарбамат, арилкарбамат или алкиларилкарбамат, замещенную или незамещенную алкилкарбоновую кислоту, арилкарбоновую кислоту

- 8 007254 или алкиларилкарбоновую кислоту, К₃ представляет собой фенильный фрагмент, К₄ представляет собой атом водорода, и К₅ и К₆ представляют собой метильные группы.

В следующем варианте осуществления К₂ представляет собой гуанидин, модифицированный гуанидин, цианогуанидин, тиомочевину, тиоамид или амидин.

В одном варианте осуществления К₂ может представлять собой

где К_2а-К_2с, каждый независимо, представляют собой атом водорода или насыщенный или ненасыщенный алкильный, арильный или алкиларильный фрагмент, и Κ_2ά представляет собой атом водорода или насыщенный или ненасыщенный алкил, арильный или алкиларильный фрагмент, ΝΚ_2εΚ_2£ или ОК_2д, где К_2е-К_2д, каждый независимо, представляет собой атом водорода или насыщенный или ненасыщенный алкильный, арильный или алкиларильный фрагменты. Альтернативно, К_2а и К_2Ь могут вместе образовывать карбоциклическое или гетероциклическое кольцо, имеющее размер кольца от 3 до 6 членов, например, циклопропильную, циклопентильную, циклогексильную группы.

В одном аспекте изобретения оба К₅ и К₆ не являются метильными группами, предпочтительно один из К₅ и К₆ представляет собой алкильную группу, например, метильную группу, а другой является атомом водорода.

В другом аспекте изобретения, когда К₄ представляет собой 1-фенилэтил, и Κι представляет собой атом водорода, тогда К₃ не является фенилом, 2-хлорфенилом, 3-хлорфенилом, 4-хлорфенилом, 3,4дихлорфенилом, 3-метоксифенилом или 4-метоксифенилом, или когда К₄ и Κ₁ представляют собой 1фенилэтил, тогда К₃ не является атомом водорода, или когда К₄ представляет собой атом водорода, и К₃представляет собой фенил, тогда Κ₁ не является фенилэтилом.

В другом аспекте изобретения, когда К₅ и К₆ вместе образуют карбоциклическое кольцо, например,

или пиримидо [4,5-6] индол, тогда К₃ не является фенилом, когда К₄ представляет собой 1-(4-метилфенил) этил, фенилизопропил, фенил или 1-фенилэтил, или К₃ не является атомом водорода, когда К₄ представляет собой 1-фенилэтил. Карбоциклическое кольцо, образованное К₅ и Κ₆, может быть либо ароматическим, либо алифатическим и может содержать от 4 до 12 атомов углерода, например, нафтил, фенилциклогексил и т.д., предпочтительно от 5 до 7 атомов углерода, например, циклопентил или циклогексил. Альтернативно, К₅ и К₆ вместе могут образовывать гетероциклическое кольцо, такое как обсуждаемые ниже. Типичные гетероциклические кольца включают от 4 до 12 атомов углерода, предпочтительно от 5 до 7 атомов углерода и могут быть либо ароматическим, либо алифатическим. Гетероциклическое кольцо может быть дополнительно замещенным, включая замещение у одного или нескольких атомов углерода кольцевой структуры, содержащей один или несколько гетероатомов.

Еще в одном аспекте изобретения, Κ₁ и К₂ образуют гетероциклическое кольцо. Иллюстративные примеры включают, но не ограничиваются этим, перечисленные ниже гетероциклические кольца, такие как морфолино, пиперазин и тому подобные, например, 4-гидроксипиперидины, 4-аминопиперидины. Когда Κ₁ и К₂ вместе образуют пиперазино группу, «г

то К₇ может представлять собой атом водорода или замещенный или незамещенный алкильный, арильный или алкиларильный фрагмент.

Еще в одном аспекте изобретения, К₄ и К₅ вместе могут образовывать гетероциклическое кольцо, например,

- 9 007254 где гетероциклическое кольцо может быть или ароматическим, или алифатическим и могут образовывать кольцо, содержащее от 4 до 12 атомов углерода, например, нафтил, фенилциклогексил и т.д. и может быть либо ароматическим, либо алифатическим, например, циклогексил, циклопентил.

Гетероциклическое кольцо может быть дополнительно замещенным, включая замещение у атомов углерода кольцевой структуры, содержащей один или несколько гетероатомов. Альтернативно, К4 и К₅вместе могут образовывать гетероциклическое кольцо, такое как обсуждаемые ниже.

В некоторых вариантах осуществления N-6 замещенный 7-дезазапурин не является №6-бензил или №6-фенилэтилзамещенным. В других вариантах осуществления К₄ не является бензил- или фенилэтилзамещенным. В предпочтительных вариантах осуществления оба К1 и К2 не являются атомами водорода. Еще в других предпочтительных вариантах осуществления К₃ не является Н.

Соединения изобретения могут включать водорастворимые пролекарства, которые описаны в ν099/33815, Международной заявке на патент № РСТ/И8 98/04595, поданной 9 марта, 1998 г. и опубликованной 8 июля 1999 г. Полное содержание XV0 99/33815 специально включено в данное описание в качестве ссылки. Водорастворимые пролекарства метаболизируют ίη νίνο до активного лекарственного средства, например, с помощью катализируемого эстеразой гидролиза. Примеры потенциальных пролекарств включают дезазапурины, в которых, например, К2 представляет собой циклоалкил, замещенный -С(О)^)№Н₂, где Ζ является боковой цепью природной или синтетической аминокислоты или ее аналога, α-, β-, γ- или ω-аминокислот или дипептида. Предпочтительные боковые цепи включают боковые цепи глицина, аланина, валина, лейцина, изолейцина, лизина, α-метилаланина, аминоциклопропанкарбоновой кислоты, азетидин-2-карбоновой кислоты, β-аланина, γ-аминобутановой кислоты, аланин-аланина или глицин-аланина.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к дезазапуринам формулы (I), где К₁представляет собой водород; К₂ представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный алкил, или К1 и К2 вместе образуют замещенное или незамещенное гетероциклическое кольцо; К3 представляет собой незамещенный или замещенный арил; К4 представляет собой водород, и каждый из К5 и К6, независимо, представляет собой водород или алкил, и их фармацевтически приемлемым солям. Дезазапурины данного варианта осуществления потенциально могут быть селективными антагонистами А3 рецептора.

В одном варианте осуществления К₂ представляет собой замещенный (например, гидроксизамещенный) или незамещенный циклоалкил. В преимущественном варианте осуществления К₁ и К₄ представляют собой водород, К₃ представляет собой незамещенный или замещенный фенил, и каждый из К₅и К6 представляет собой алкил. Предпочтительно К2 представляет собой моно-гидроксициклопентил или моно-гидроксициклогексил. К₂ также может быть замещен группой -№Н-С(0)Е, где Е представляет собой замещенный или незамещенный С1-С4 алкил (например, алкиламин, например, этиламин).

Также К1 и К2 вместе могут образовывать замещенное или незамещенное гетероциклическое кольцо, которое может быть замещено амином или ацетамидо группой.

В другом аспекте, К₂ может представлять собой -А-№Н-С(0)В, где А представляет собой незамещенный С1-С4 алкил (например, этил, пропил, бутил), и В представляет собой замещенный или незамещенный С1-С4 алкил (например, метил, аминоалкил, например, аминометил или аминоэтил, алкиламино, например, метиламино, этиламино), предпочтительно, когда К₁ и К₄ представляют собой водород, К₃представляет собой незамещенный или замещенный фенил, и каждый из К₅ и К₆ представляет собой алкил. В может представлять собой замещенный или незамещенный циклоалкил, например, циклопропил или 1-аминоциклопропил.

В другом варианте осуществления К₃ может представлять собой замещенный или незамещенный фенил, предпочтительно, когда каждый из К5 и К6 представляет собой алкил. Предпочтительно К3 может содержать один или несколько заместителей (например, о-, м- или п-хлорфенил, о-, м- или п-фторфенил).

Преимущественно, К3 может представлять собой замещенный или незамещенный гетероарил, предпочтительно, когда каждый из К5 и К6 представляет собой алкил. Примеры гетероарильных групп включают пиридил, пиримидил, пиридазинил, пиразинил, пирролил, триазолил, тиоазолил, оксазолил, оксадиазолил, фуранил, метилендиоксифенил и тиофенил. Предпочтительно К₃ представляет собой 2пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, 2-пиримидил или 3-пиримидил.

Предпочтительно в одном варианте осуществления каждый из К₅ и К₆ представляет собой водород. В другом варианте осуществления каждый из К₅ и К₆ представляет собой метил.

В особенно предпочтительном варианте осуществления дезазапурины по изобретению представляют собой растворимые в воде пролекарства, которые могут метаболизировать ίη νίνο до активного лекарственного средства, например, с помощью катализируемого эстеразой гидролиза. Предпочтительно пролекарство включает К₂ группу, которая замещена в циклоалкиле -ОС(О)^)ЫН₂, где Ζ представляет боковую цепь природной или синтетической аминокислоты, ее аналога, α-, β-, γ- или ω-аминокислоты или дипептида. Примеры предпочтительных боковых цепей включают боковые цепи глицина, аланина, валина, лейцина, изолейцина, лизина, α-метилаланина, аминоциклопропанкарбоновой кислоты, азетидин-2карбоновой кислоты, β-аланина, γ-аминобутановой кислоты, аланин-аланина или глицин-аланина.

- 10 007254

В особенно предпочтительном варианте осуществления Ζ представляет собой боковую цепь глицина, К₂ представляет собой циклогексил, К₃ представляет собой фенил, и К₅ и Кб представляют собой метил.

В другом варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(цис-3-гидроксициклопентил) амино -5,6-диметил-2-фенил-7Н -пирроло [2,3-6] пиримидин.

В другом варианте осуществления дезазапурин представляет собой соль трифторуксусной кислоты

4- (цис-3-(2-аминоацетокси)циклопентил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидина.

В другом варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(3-ацетамидо)пиперидинил-

5,6-диметил-2-фенил-7Н -пирроло [2,3-6] пиримидин.

В другом варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(2-Ы'-метилуреапропил)амино -5,6 -диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-6] пиримидин.

В другом варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(2-ацетамидобутил)амино-5,6диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин.

В другом варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(2-Ы'-метилуреабутил)амино-

5,6-диметил-2-фенил-7Н -пирроло [2,3-6] пиримидин.

В другом варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(2-аминоциклопропилацетамидоэтил)амино-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин.

В другом варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(транс-4-гидроксициклогексил)амино-2-(3-хлорфенил)-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин.

В другом варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(транс-4-гидроксициклогексил)амино-2-(3 -фторфенил)-7Н-пирроло [2,3-6] пиримидин.

В другом варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(транс-4-гидроксициклогексил)амино-2-(4-пиридил)-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин.

Еще в одном варианте осуществления изобретение относится к способу ингибирования активности аденозинового рецептора (например, А₁, А_2а, А_2Ь или предпочтительно А₃) в клетке контактированием клетки с Ν-6 замещенным 7-дезазапурином (например, предпочтительно, с антагонистом аденозинового рецептора).

В другом аспекте изобретение относится к способу лечения повреждения глаза у животного (например, человека) введением животному эффективного количества Ν-6 замещенного 7-дезазапурина. Предпочтительно Ν-6 замещенный 7-дезазапурин является антагонистом А₃ аденозиновых рецепторов в клетках животных. Повреждение относится к сетчатке или головному зрительному нерву и может быть острым или хроническим. Повреждение может быть результатом, например, глаукомы, отека, ишемии, гипоксии или травмы.

В предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к дезазапурину, имеющему формулу II, см. выше, где X представляет собой Ν или СК₆; каждый из К₁ и К₂ независимо представляет собой водород или замещенный или незамещенный алкокси, аминоалкил, алкил, арил или алкиларил, или вместе они образуют замещенное или незамещенное гетероциклическое кольцо, при условии, что оба К₁ и К₂ не являются водородом; К₃ представляет собой замещенный или незамещенный алкил, арилалкил или арил; К₄ представляет собой водород или замещенный или незамещенный С₁-Сб алкил; Ь представляет собой водород, замещенный или незамещенный алкил, или К₄ и Ь вместе образуют замещенное или незамещенное гетероциклическое или карбоциклическое кольцо; К₆ представляет собой водород, замещенный или незамещенный алкил, или галоген; О представляет собой СН₂, О, 8 или ΝΚ₇, где К₇ представляет собой водород или замещенный или незамещенный С₁-С₆ алкил; и представляет собой незамещенный или замещенный алкил, циклоалкил, алкинил, арил, арилалкил, биарил, гетероарил, замещенный карбонил, замещенный тиокарбонил или замещенный сульфонил, при условии, что если К₃представляет пирролидино, то К₄ не является метилом.

В одном варианте соединения формулы II, X представляет собой СК₆, и О представляет собой СН₂, О, 8 или ΝΗ. В другом варианте осуществления X представляет собой Ν.

В следующем варианте соединений формулы II, представляет собой замещенный или незамещенный арил, 5- или 6-членный гетероарил или биарил. может быть замещен одним или несколькими заместителями. Примеры заместителей включают: галоген, гидрокси, алкокси, амино, аминоалкил, аминокарбоксиамид, СН СЕ₃, СО₂К₈, ί.ΌΝΗΗ_χ. СОК₈К₉, 8ОК₈ и 8Ο₂ΝΚ₈Κ₉, где каждый из К₈ и К₉ независимо представляет собой водород или замещенный или незамещенный алкил, циклоалкил, арил или арилалкил. Предпочтительно, может представлять собой замещенный или незамещенный фенил, например, метилендиоксифенил. также может представлять собой замещенное или незамещенное 5-членное гетероарильное кольцо, например, пиррол, пиразол, оксазол, имидазол, триазол, тетразол, фуран, тиофен, тиазол и оксадиазол. Предпочтительно может представлять собой 6-членное гетероарильное кольцо, например, пиридил, пиримидил, пиридазинил, пиразинил и тиофенил. В предпочтительном варианте осуществления представляет собой 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, 2-пиримидил, 4-пиримидил или

5- пиримидил.

- 11 007254

В одном преимущественном варианте соединений формулы II, О представляет собой ΝΗ, и представляет 3-пиразольное кольцо, которое является незамещенным или Ν-замещенным или не замещенным алкилом, циклоалкилом, арилом или арилалкилом.

В другом варианте соединений формулы II, О представляет собой кислород, и представляет собой 2-тиазольное кольцо, которое является незамещенным или замещенным или не замещенным алкилом, циклоалкилом, арилом или арилалкилом.

В другом варианте соединений формулы II представляет собой замещенный или незамещенный алкил, циклоалкил, например, циклопентил или арилалкил. Примеры заместителей включают галоген, гидрокси, замещенный или незамещенный алкил, циклоалкил, арил, арилалкил или ΝΗΚ₁₀, где К₁₀ представляет собой водород или замещенный или незамещенный алкил, циклоалкил, арил или арилалкил. Еще в одном варианте осуществления изобретение относится к дезазапурину формулы II, где представляет собой -(СН₂)_а-С(=О^ или -(СН₂)_а ^-С(=8^, и а представляет собой целое число от 0 до 3, Υ представляет собой арил, алкил, арилалкил, циклоалкил, гетероарил, алкинил, ΝΗΚ₁₁Κ₁₂, или, при условии, что О представляет собой ΝΗ, ОК₁₃, где каждый из К₁₁, К₁₂ и К₁₃ независимо представляет собой водород или незамещенный или замещенный алкил, арил, арилалкил или циклоалкил. Предпочтительно Υ представляет собой 5- или 6-членное гетероарильное кольцо.

Кроме того, может представлять собой -(СН₂)_Ь-8(=О^, гдеравно 1 или 2, Ь равно 0, 1, 2 или 3, Υ представляет собой арил, алкил, арилалкил, циклоалкил, алкинил, гетероарил, ΝΗΚ₁₄Κ₁₅ или, при условии, что когда Ь равно 1, О представляет С1Е, и где каждый из К₁₄, К₁₅ и К₁₆ независимо представляет собой водород или незамещенный или замещенный алкил, арил, арилалкил или циклоалкил.

В другом варианте осуществления, Κ3 выбирают из группы, включающей замещенный или незамещенный фенил, пиридил, пиримидил, пиридазинил, пиразинал, пирролил, триазолил, тиазолил, оксазолил, оксадиазолил, пиразолил, фуранил, метилендиоксифенил и тиофенил. Когда Κ3 представляет собой фенил, он может быть замещенным, например, гидроксилом, алкокси (например, метокси), алкилом (например, толил) и галогеном (например, о-, м- или п-фторфенил или о-, м- или п-хлорфенил). Преимущественно К₃ может представлять собой 2-, 3- или 4-пиридил или 2- или 3-пиримидил.

Изобретение также включает дезазапурин, в котором К₆ представляет собой водород или С₁-С₃ алкил. Предпочтительно Κ₆ представляет собой водород.

Изобретение также включает дезазапурины, в которых Κ1 представляет собой водород, и Κ2 представляет собой замещенный или незамещенный алкил или алкокси, замещенный или незамещенный алкиламин, ариламин или алкилариламин, замещенный или незамещенный аминоалкил, аминоарил или аминоалкиларил, замещенный или незамещенный алкиламид, ариламид или алкилариламид, замещенный или незамещенный алкилсульфонамид, арилсульфонамид или алкиларилсульфонамид, замещенную или незамещенную алкилмочевину, арилмочевину или алкиларилмочевину, замещенный или незамещенный алкилкарбамат, арилкарбамат или алкиларилкарбамат, или замещенную или незамещенную алкилкарбоновую кислоту, арилкарбоновую кислоту или алкиларилкарбоновую кислоту.

Предпочтительно, Κ₂ представляет собой замещенный или незамещенный циклоалкил, например, моно- или дигидроксизамещенный циклогексил или циклопентил (предпочтительно моногидроксизамещенный циклогексил или моногидроксизамещенный циклопентил).

Преимущественно К₂ может иметь одну из следующих формул:

О О

или

В ^17 где Л представляет собой С₁-С₆ алкил, С₃-С₇ циклоалкил, цепь из одного-семи атомов или кольцо из трех-семи атомов, необязательно замещенное С₁-С₆ алкилом, галогенами, гидроксилом, карбоксилом, тиолом или аминогруппами; где В представляет собой метил, Ν(Μθ)₂, Ν(Εΐ)₂, ΝΗΜθ, ΝΗΕΐ, (ΕΗ₂)₂ΝΗ₃ ⁺, ΝΗ(^2^Η3, (^2ΕΝΗ2, (^/ΝΗΜθ, (СЩ/ОЩ СЩСЧ №Κ18Κ19 или

СНМеОН, где г является целым числом от 0 до 2, т равен 1 или 2, К₁₈ представляет собой алкил, К₁₉представляет собой ΝΗ₃ ⁺ или СО₂Н, или К₁₈ и К₁₉ вместе представляют собой:

--СН--ΝΗ \/ (СН₂)р где р равно 2 или 3; и К₁₇ представляет собой С₁-С₆ алкил, С₃-С₇ циклоалкил, цепь из одного-семи атомов или кольцо из трех-семи атомов, необязательно замещенное С₁-С₆ алкилом, галогенами, гидроксилом, карбоксилом, тиолом или аминогруппами.

Преимущественно, Л представляет собой незамещенный или замещенный С₁-С₆ алкил. В может представлять собой незамещенный или замещенный С₁-С₆ алкил.

В предпочтительном варианте осуществления К₂ имеет формулу -Л-ЖСрО^. В особенно преимущественном варианте осуществления Л представляет собой -СН₂СН₂-, и В представляет собой метил.

- 12 007254

Соединения по изобретению могут включать растворимые в воде пролекарства, которые метаболизируют ίη νίνο в активное лекарственное средство, например, с помощью гидролиза, катализируемого эстеразой. Примеры потенциальных пролекарств включают дезазапурины, в которых, например, К₂ находится в виде циклоалкила, замещенного -Θί.'(ϋχΖ)ΝΗ₂. где Ζ представляет собой боковую цепь существующей в природе или не существующей в природе аминокислоты или ее аналога, α-, β-, γ- или ωаминокислоты или дипептида. Предпочтительные боковые цепи аминокислот включают цепи глицина, аланина, валина, лейцина, изолейцина, лизина, α-метилаланина, аминоциклопропанкарбоновой кислоты, азетидин-2-карбоновой кислоты, β-аланина, γ-аминомасляной кислоты, аланин-аланина или глициналанина.

В другом варианте осуществления Κι и К₂ вместе представляют собой

где η равен 1 или 2, и где кольцо необязательно может быть замещенным одним или несколькими гидроксилом, амино, тиолом, карбоксилом, галогеном, СН₂ОН, СΗ₂NΗС(=Ο)алкильной или ΟΗ₂ΝΗΟ (=Ο)ΝΗ алкильной группами. Предпочтительно η равен 1 или 2, и указанное кольцо замещено ΝΗί.'(=Ο) алкилом.

В одном преимущественном варианте осуществления Κ₁ представляет собой водород, К₂ представляет собой замещенный или незамещенный С₁-С₆ алкил, К₃ представляет собой замещенный или незамещенный фенил, Κ4 представляет собой водород, Ь представляет собой водород или замещенный или незамещенный С₁-С₆ алкил, представляет собой Θ, 8 или ΝΚ₇, где К₇ представляет собой водород или замещенный или незамещенный С₁-С₆ алкил, и представляет собой замещенный или незамещенный арил.

Предпочтительно К₂ представляет собой -Α-ΝΗΠ(=Ο)Β, где каждый из А и В независимо представляет собой незамещенный или замещенный С₁-С₄ алкил. Например, А может представлять собой СН₂СН₂. В может представлять собой, например, алкил (например, метил) или аминоалкил (например, аминометил). Предпочтительно, К₃ представляет собой незамещенный фенил, и Ь представляет собой водород. Кб может представлять собой метил или, предпочтительно, водород. Предпочтительно, представляет собой Θ, 8 или ΝΚ₇, где К₇ представляет собой водород или замещенный или незамещенный С₁С₆ алкил, например, метил. представляет собой незамещенный или замещенный фенил (например, алкокси-, галоген-замещенный). Предпочтительно, представляет собой п-фторфенил, п-хлорфенил или п-метоксифенил. также может представлять собой гетероарил, например, 2-пиридил.

В особенно предпочтительном варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(2ацетиламиноэтил)амино-6-феноксиметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин.

В особенно предпочтительном варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(2ацетиламиноэтил)амино-6-(4-фторфенокси)метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин.

В особенно предпочтительном варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(2ацетиламиноэтил)амино-6-(4-хлорфенокси)метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин.

В особенно предпочтительном варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(2ацетиламиноэтил)амино-6-(4-метоксифенокси)метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин.

В особенно предпочтительном варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(2ацетиламиноэтил)амино-6-(2-пиридилокси)метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин.

В особенно предпочтительном варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(2ацетиламиноэтил)амино-6-(Ы-фениламино)метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин.

В особенно предпочтительном варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(2ацетиламиноэтил)амино-6-(К-метил-М-фениламино)метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин.

В особенно предпочтительном варианте осуществления дезазапурин представляет собой 4-(2-Ν'метилуреаэтил)амино-6-феноксиметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин.

Далее изобретение относится к способу ингибирования активности аденозинового рецептора (например, А₂ь аденозинового рецептора) в клетке контактированием клетки с соединением по изобретению. Предпочтительно соединение является антагонистом аденозинового рецептора.

Изобретение также относится к способу лечения желудочно-кишечного заболевания (например, диареи) у животного путем введения животному эффективного количества соединения по изобретению (например, антагониста А₂ь). Предпочтительно животное представляет собой человека.

В другом варианте осуществления изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей Ν-6 замещенный 7-дезазапурин по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.

Изобретение также относится к способу лечения болезненного состояния, дающего ответную реакцию на Ν-6 замещенный 7-дезазапурин у животного путем введения млекопитающему терапевтически эффективного количества дезазапурина по изобретению, таким образом, что происходит лечение состояния, дающего ответную реакцию на Ν-6 замещенный 7-дезазапурин у животного. Преимущественно за

- 13 007254 болевание может представлять собой нарушение, опосредованное аденозином. Примеры предпочтительных болезненных состояний включают: нарушения центральной нервной системы, сердечно-сосудистые заболевания, почечные заболевания, воспалительные заболевания, аллергические заболевания, желудочно-кишечные заболевания, глазные заболевания и заболевания дыхательных путей.

Термин «алкил» относится к радикалу насыщенных алифатических групп, включая линейные алкильные группы, разветвленные алкильные группы, циклоалкильные (алициклические) группы, алкилзамещенные циклоалкильные группы и циклоалкилзамещенные алкильные группы. Термин алкил дополнительно включает алкильные группы, которые могут дополнительно включать атомы кислорода, азота, серы или фосфора, замещающие один или несколько углеродов в основной углеводородной цепи, например, атомы кислорода, азота, серы или фосфора. В предпочтительных вариантах осуществления алкил с линейной или разветвленной цепью содержит 30 или меньше атомов углерода в основной цепи (например, С₁-С₃₀ для линейной цепи, С₃-С₃₀ для разветвленной цепи) и, более предпочтительно, 20 или меньше. Аналогично, предпочтительные циклоалкилы имеют 4-10 атомов углерода в своей кольцевой структуре и, более предпочтительно, имеют 5, 6 или 7 углеродов в кольцевой структуре.

Более того, подразумевается, что термин алкил, как он использован в описании и формуле изобретения, включает как «незамещенные алкилы», так и «замещенные алкилы», последние относятся к алкильным фрагментам, имеющим заместители, заменяющие водород у одного или нескольких углеродов в основной углеводородной цепи. Такие заместители могут включать, например, галоген, гидроксил, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, алкилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкилтиокарбонил, алкоксил, фосфат, фосфонато, фосфинато, циано, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, сульфонато, сульфамоил, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, азидо, гетероциклил, алкиларил или ароматический или гетероароматический фрагмент. Специалистам в данной области следует понимать, что фрагменты, расположенные в качестве заместителей в углеводородной цепи, сами могут быть замещенными, если это возможно. Циклоалкилы дополнительно могут быть замещенными, например, описанными выше заместителями. «Алкиларильные фрагмент» представляет собой алкил, замещенный арилом (например, фенилметил (бензил)). Термин «алкил» также включает ненасыщенные алифатические группы, аналогичные по своей длине и возможному замещению описанным выше алкилам, но также содержащие по крайней мере одну двойную или тройную связь, соответственно.

Термин «арил», как он использован в данном описании, относится к арильному радикалу, включая 5- и 6-членные ароматические группы, состоящие из одного кольца, которые могут включать от нуля до четырех гетероатомов, например, бензол, пиррол, фуран, тиофен, имидазол, бензоксазол, бензотиазол, триазол, тетразол, пиразол, пиридин, пиразин, пиридазин и пиримидин и тому подобные. Арильные группы также включают полициклические конденсированные ароматические группы, такие как нафтил, хинолил, индолил и тому подобные. Те арильные группы, которые имеют гетероатомы в кольцевой структуре, также могут упоминаться как «арильные гетероциклы», «гетероарилы» или «гетероароматические» группы. Ароматическое кольцо может быть замещенным в одном или нескольких положениях кольца такими заместителями, как описано выше, как например, галоген, гидроксил, алкокси, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, алкилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкилтиокарбонил, фосфат, фосфонато, фосфинато, циано, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, сульфонато, сульфамоил, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, азидо, гетероциклил, алкиларил или ароматический или гетероароматический фрагмент. Арильные группы также могут быть конденсированными или связаны мостиками с алициклическими или гетероциклическими кольцами, которые не являются ароматическими, таким образом что образуют полицикл (например, тетралин).

Термин «алкенил» и «алкинил» относится к ненасыщенным алифатическим группам, аналогичным по своей длине и возможному замещению описанным выше алкилам, но также содержащим по крайней мере одну двойную или тройную связь, соответственно. Например, в изобретении рассматриваются циано и пропаргильные группы.

Если число атомов углерода не указано иначе, «низший алкил», как использовано в данном описании означает алкильную группу, как определено выше, но содержащую от одного до десяти углеродов, более предпочтительно от одного до шести углеродов в структуре основной цепи, еще более предпочтительно от одного до трех атомов углерода в структуре своей основной цепи. Аналогично, «низший алкенил» и «низший алкинил» имеют аналогичную длину цепи.

Термины «алкоксиалкил», «полиаминоалкил» и «тиоалкоксиалкил» относятся к алкильным группам, как описано выше, которые дополнительно включают атомы кислорода, азота или серы, замещающие один или несколько углеродов в углеводородной основной цепи, например, атомы кислорода, азота или серы.

- 14 007254

Термины «полициклил» или «полициклические радикалы» относятся к радикалам, состоящим из двух или более циклических колец (например, циклоалкилы, циклоалкенилы, циклоалкинилы, арилы и/или гетероциклилы), в которых два или несколько углеродов являются общими для двух смежных колец, например, кольца являются «конденсированными кольцами». Кольца, которые соединены посредством несмежных атомов, называются «мостиковыми» кольцами. Каждое из колец полицикла может быть замещено такими заместителями, как описано выше, такими как, например, галоген, гидроксил, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, алкилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкилтиокарбонил, алкоксил, фосфат, фосфонато, фосфинато, циано, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), амидино, имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, сульфонато, сульфамоил, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, азидо, гетероциклил, алкил, алкиларил или ароматический или гетероароматический фрагмент.

Термин «гетероатом», как он использован в данном описании, означает атом любого элемента, отличающегося от углерода или водорода. Предпочтительными гетероатомами являются азот, кислород, сера и фосфор.

Термин «аминокислоты» включает природные и синтетические аминокислоты, обнаруживаемые в белках, такие как глицин, аланин, валин, цистеин, лейцин, изолейцин, серин, треонин, метионин, глутаминовая кислота, аспартамовая кислота, глутамин, аспарагин, лизин, аргинин, пролин, гистидин, фенилаланин, тирозин и триптофан. Аналоги аминокислот включают аминокислоты с удлиненными или укороченными боковыми цепями или отличающимися боковыми цепями с подходящими функциональными группами. Аминокислоты также включают Ό и Ь стереоизомеры аминокислот, когда структура аминокислоты допускает существование стереоизомерных форм. Термин «дипептид» включает две или несколько аминокислот, связанных вместе. Предпочтительно, дипептиды представляют собой две аминокислоты, связанные пептидной связью. Особенно предпочтительные дипептиды включают, например аланин-аланин или глицин-аланин.

Следует отметить, что структура некоторых соединений по данному изобретению включает асимметрические атомы углерода, и таким образом они существуют в виде рацематов и рацемических смесей, отдельных энантиомеров, диастереомерных смесей и индивидуальных диастереомеров. Все такие изомерные формы данных соединений включены в данное изобретение. Каждый стереогенный углерод может иметь Κ или 8 конфигурацию. Соответственно, следует понимать, что изомеры, возникающие при такой асимметрии (например, все энантиомеры и диастереомеры) включены в объем данного изобретения, если не указано другого. Такие изомеры могут быть получены по существу в чистой форме с помощью классических способов разделения и путем стереохимически селективного синтеза.

Изобретение дополнительно относится к фармацевтическим композициям для лечения состояний, дающих ответную реакцию на Ν-6 замещенные 7-дезазапурины у млекопитающих, например, респираторных заболеваний (например, астма, бронхит, хроническое обструктивное заболевание легких и аллергический ринит), почечных заболеваний, желудочно-кишечных заболеваний и глазных заболеваний. Фармацевтическая композиция включает терапевтически эффективное количество Ν-6 замещенного 7дезазапурина, описанного выше, и фармацевтически приемлемый носитель. Следует понимать, что все описанные выше дезазапурины включены для терапевтического лечения. Дополнительно следует понимать, что дезазапурины по изобретению можно использовать по отдельности или в сочетании с другими дезазапуринами по изобретению, или в сочетании с дополнительными терапевтическими соединениями, такими, например, как антибиотики, противовоспалительные или противораковые агенты.

Термин «антибиотик» является общепринятым в данной области, и, предполагается, что он включает те вещества, продуцируемые растущими микроорганизмами, и их синтетические производные, которые исключают или ингибируют рост патогенов и являются селективно токсичными к патогенам, оказывая минимальное или не оказывая вредного воздействия на инфицированного субъекта-хозяина. Подходящие примеры антибиотиков включают, но не ограничиваются этим, принципиальные классы аминогликозидов, цефалоспоринов, хлорамфениколов, фусциновых кислот, макролидов, пенициллинов, полимиксинов, тетрациклинов и стрептомицинов.

Термин «противовоспалительный» является общепринятым в данной области, и, предполагается, что он включает те агенты, которые воздействуют на механизмы тела без прямого антагонизирования агента, являющегося причиной воспаления, такие как глюкокортикоиды, аспирин, ибупрофен, НСПВС (нестероидные противовоспалительные средства) и т. д.

Термин «противораковый агент» является общепринятым в данной области, и, предполагается, что он включает те агенты, которые уменьшают, искореняют или предотвращают рост раковых клеток, предпочтительно без отрицательного воздействия на другие физиологические функции. Иллюстративные примеры включают цисплатин и циклофосфамид.

Когда соединения по настоящему изобретению вводят в виде лекарственных средств людям и млекопитающим, их можно давать в чистом виде или в виде фармацевтической композиции, содержащей,

- 15 007254 например, от 0,1 до 99,5% (более предпочтительно от 0,5 до 90%) активного ингредиента в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем.

Выражение «фармацевтически приемлемый носитель», как оно использовано в данном описании, означает фармацевтически приемлемое вещество, композицию или носитель, такое как жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, эксципиент, растворитель или инкапсулирующее вещество, включенное в доставку или транспортировку соединения(ий) по изобретению внутри субъекта или к субъекту таким образом, что соединение выполняет предназначенную функцию. Обычно такие соединения доставляют или транспортируют от органа или части тела к другому органу или части тела. Каждый носитель должен быть «приемлемым» в смысле совместимости с другими ингредиентами рецептуры и не наносить вреда пациенту. Некоторые примеры веществ, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают: сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлозу и ее производные, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, этилцеллюлоза и ацетат целлюлозы; порошкообразные камеди; солод; желатин; тальк; эксципиенты, такие как масло какао и воски для суппозиториев; масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, подсолнечное масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; гликоли, такие как пропиленгликоль; многоатомные спирты, такие как глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; агар; буферные агенты, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; альгиновую кислоту; апирогенную воду; изотонический физиологический раствор; раствор Рингера; этиловый спирт; фосфатные буферные растворы и другие нетоксичные совместимые вещества, используемые в фармацевтических препаратах.

Как указано выше, некоторые варианты осуществления настоящих соединений могут содержать основные функциональные группы, такие как амино или алкиламино, и поэтому способны образовывать фармацевтически приемлемые соли с фармацевтически приемлемыми кислотами. Термин «фармацевтически приемлемые соли» в данном отношении относится к относительно нетоксичным кислотноаддитивным солям соединений по настоящему изобретению с неорганическими или органическими кислотами. Данные соли могут быть получены ίη δίΐιι при конечном выделении и очистке соединений по изобретению или путем отдельного взаимодействия очищенного соединения по изобретению в форме его свободного основания с подходящей органической или неорганической кислотой и выделения образованной таким образом соли. Иллюстративные соли включают гидробромид, гидрохлорид, сульфат, бисульфат, фосфат, нитрат, ацетат, валерат, олеат, пальмитат, стеарат, лаурат, бензоат, лактат, фосфат, тозилат, цитрат, малеат, фумарат, сукцинат, тартрат, нафтилат, мезилат, глюкогептонат, дактобионат и лаурилсульфонатные соли и тому подобные (смотри, например, Вегде с1 а1. (1977) Раттасеи11са1 8а118, 1. РНагт. 8с1., 66:1-19).

В других случаях соединения по настоящему изобретению могут содержать одну или несколько кислотных функциональных групп и таким образом способны образовывать фармацевтически приемлемые соли с фармацевтически приемлемыми основаниями. Термин «фармацевтически приемлемые соли» в таких случаях относится к относительно нетоксичным основно-аддитивным солям соединений по настоящему изобретению с неорганическими или органическими основаниями. Такие соли могут быть получены аналогичным образом ίη δίΐιι во время конечного выделения и очистки соединений или путем отдельного взаимодействия очищенного соединения в форме его свободной кислоты с подходящим основанием, таким как гидроксид, карбонат или бикарбонат фармацевтически приемлемого катиона металла, с аммиаком или с фармацевтически приемлемыми органическими первичными, вторичными или третичными аминами. Иллюстративные щелочные или щелочно-земельные соли включают соли лития, натрия, калия, кальция, магния и алюминия и тому подобные. Иллюстративные органические амины, полезные для образования основно-аддитивных солей, включают этиламин, диэтиламин, этилендиамин, этаноламин, диэтаноламин, пиперазин и тому подобные.

Термин «фармацевтически приемлемые сложные эфиры» относится к относительно нетоксичным этерифицированным продуктам соединений по настоящему изобретению. Данные сложные эфиры могут быть получены ίη δίΐιι во время конечного выделения и очистки соединений или путем отдельного взаимодействия очищенного соединения в форме его свободной кислоты или гидроксила с подходящим этерифицирующим реагентом. Карбоновые кислоты могут быть превращены в сложные эфиры при обработке спиртом в присутствии катализатора. Гидроксилсодержащие производные могут быть преобразованы в сложные эфиры при обработке этерифицирующим агентом, таким как алканоилгалогениды. Кроме того, подразумевается, что термин включает низшие углеводородные группы, способные к сольватации в физиологических условиях, например, алкиловые сложные эфиры, метиловые, этиловые и пропиловые сложные эфиры (смотри, например, Вегде е1 а1., см. выше).

В изобретении дополнительно рассматривается применение пролекарств, которые превращаются ίη νίνο в терапевтические соединения по изобретению (смотри, например, КВЕЖеттащ 1992, ТНе Отдашс СНетЫгу о£ Эгид Оейод аоб Эгид ЛсОои. Лсабетю Ргекк, СНарГег 8). Такие пролекарства могут использоваться для изменения биораспределения (например, чтобы сделать возможными соединения, которые не будут обычным образом вступать в реакционноспособные сайты протеазы) или для фармакокинетики терапевтического соединения. Например, группа карбоновой кислоты может быть этерифицирована, на

- 16 007254 пример, метильной группой или этильной группой с получением сложного эфира. Когда сложный эфир вводят субъекту, сложный эфир расщепляется под действием ферментов или неферментативно, восстановительно или гидролитически, высвобождая анионную группу. Анионная группа может этерифицироваться фрагментами (например, ацилоксиметильные сложные эфиры), которые расщепляются, высвобождая промежуточное соединение, которое впоследствии разлагается, давая активное соединение. В другом варианте осуществления пролекарство представляет собой восстановленную форму сульфата или сульфоната, например, тиол, который окисляется ш у1уо до терапевтического соединения. Кроме того, анионный фрагмент может быть этерифицирован до группы, которая активно транспортируется ίπ у1уо, или которая селективно поглощается органами-мишенями. Сложный эфир может быть выбран так, чтобы дать возможность специфически нацеливать терапевтические фрагменты на конкретные реакционноспособные сайты, как описано далее для фрагментов-носителей.

Смачивающие агенты, эмульгаторы и смазывающие агенты, такие как лаурилсульфат натрия и стеарат магния, а также красители, высвобождающие агенты, агенты покрытия, подсластители, вкусовые агенты и отдушки, консерванты и антиоксиданты также могут присутствовать в композициях.

Примеры фармацевтически приемлемых антиоксидантов включают водорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, гидрохлорид цистеина, бисульфат натрия, метабисульфит натрия, сульфит натрия и тому подобные; растворимые в масле антиоксиданты, такие как аскорбил пальмитат, бутилированный гидроксианизол (ВНА), бутилированный гидрокситолуол (ВНТ), лецитин, пропилгаллат, альфа-токоферол и тому подобные; и хелатирующие металл агенты, такие как лимонная кислота, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА), сорбит, винная кислота, фосфорная кислота и тому подобные.

Композиции по настоящему изобретению включают составы, подходящие для перорального, назального, местного, чрескожного, буккального, сублингвального, ректального, вагинального и/или парентерального введения. Препараты могут удобным образом существовать в виде единичных дозированных лекарственных форм и могут быть получены любыми способами, хорошо известными в области фармацевтики. Количество активного ингредиента, которое можно объединять с носителем для получения единичной дозированной формы, обычно будет таким количеством соединения, которое оказывает терапевтическое действие. Обычно, исключая сто процентов, данное количество будет колебаться от примерно 1% до примерно девяносто девяти процентов активного ингредиента, предпочтительно от примерно 5% до примерно 70%, наиболее предпочтительно от примерно 10% до примерно 30%.

Способы получения данных композиций или составов включают стадию объединения соединения по настоящему изобретению с носителем и, необязательно, одним или несколькими вспомогательными ингредиентами. Обычно композиции получают путем однородного и тщательного смешивания соединения по настоящему изобретению с жидкими носителями или тонко измельченными твердыми носителями, или обоими, а затем, при необходимости, формования продукта.

Композиции по изобретению, подходящие для перорального введения, могут быть представлены в виде капсул, облаток, пилюль, таблеток, лепешек (с использованием вкусовой основы, обычно сахарозы и гуммиарабика или трагаканта), порошков, гранул или в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости, или виде жидкой эмульсии масло-в-воде или вода-в-масле, или в виде эликсира или сиропа, или в виде пастилок (с использованием инертной основы, такой как желатин и глицерин, или сахарозы и гуммиарабика), и/или в виде полосканий для рта и тому подобного, каждый из которых содержит предварительно определенное количество соединения по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента. Соединение по настоящему изобретению также можно вводить в виде болюса, электуария или пасты.

В твердых препаративных лекарственных формах по изобретению для перорального введения (капсулы, таблетки, пилюли, драже, порошки, гранулы и тому подобное) активный ингредиент смешивают с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, такими как цитрат натрия или дикальфций фосфат, и/или любым из следующих агентов: наполнители или заполнители, такие как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и/или кремневая кислота; связующие вещества, такие как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и/или гуммиарабик; увлажнители, такие как глицерин; дезинтегрирующие агенты, такие как агар-агар, карбонат кальция, картофельный или маисовый крахмал, альгиновая кислота, некоторые силикаты и карбонат натрия; замедляющие растворение агенты, такие как парафин; ускорители всасывания, такие как четвертичные аммонийные соединения; смачивающие агенты, такие как, например, цетиловый спирт и глицерин моностеарат; абсорбенты, такие как каолин и бентонитовая глина; смазочные вещества, такие как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и их смеси; и красители. В случае капсул, таблеток и пилюль, фармацевтические композиции также могут содержать буферные агенты. Твердые композиции аналогичного типа также могут использоваться в качестве наполнителя в мягких и твердых наполняемых желатиновых капсулах с использованием таких эксципиентов, как лактоза или молочные сахара, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли и тому подобное.

Таблетка может быть получена прессованием или формованием, необязательно с использованием одного или нескольких дополнительных ингредиентов. Прессованные таблетки могут быть получены с

- 17 007254 использованием связующего вещества (например, желатина или гидроксипропилметилцеллюлозы), смазочного вещества, инертного разбавителя, консерванта, дезинтегранта (например, крахмалгликолята натрия или сшитой карбоксиметилцеллюлозы натрия), поверхностно-активного или диспергирующего агента. Формованные таблетки могут быть получены формованием в подходящем устройстве смеси порошкообразного соединения, увлажненного инертным жидким разбавителем.

Таблетки и другие твердые препаративные лекарственные формы фармацевтических композиций по настоящему изобретению, такие как драже, капсулы, пилюли и гранулы, необязательно могут иметь насечки или быть получены с использованием покрытий или оболочек, таких как растворимые в кишечнике покрытия и другие покрытия, хорошо известные в области получения фармацевтических рецептур. Они также могут быть составлены таким образом, чтобы обеспечить медленное или контролируемое высвобождение из них активного ингредиента с использованием, например, гидроксипропилметилцеллюлозы в различных пропорциях для создания желаемого профиля высвобождения, других полимерных матриц, липосом и/или микросфер. Они могут быть стерилизованы, например, через удерживающий бактерии фильтр, или с помощью включения стерилизующих агентов в форме стерильных твердых композиций, которые могут быть растворены в стерильной воде или некоторых других стерильных инъекционных средах непосредственно перед употреблением. Данные композиции также необязательно могут содержать агенты для придания мутности и могут представлять собой композицию, которая высвобождает активный ингредиент(ы) только или предпочтительно в определенной части желудочно-кишечного тракта, необязательно, замедленным образом. Примеры имплантируемых композиций, которые могут использоваться, включают полимерные вещества и воски. Активный ингредиент также может быть в микроинкапсулированной форме, если это подходит, с одним или несколькими описанными выше эксципиентами.

Жидкие дозированные лекарственные формы для перорального введения соединений по изобретению включают фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. В дополнение к активному ингредиенту жидкие дозированные лекарственные формы могут содержать инертные разбавители, обычно используемые в данной области, такие как, например, вода или другие растворители, солюбилизирующие агенты и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное, масло проростков, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры сорбита и жирных кислот и их смеси.

Помимо инертных разбавителей пероральные композиции также могут включать вспомогательные агенты, такие как смачивающие агенты, эмульгирующие и суспендирующие агенты, подсластители, вкусовые добавки, красители, отдушки и консерванты.

Суспензии, в дополнение к активным соединениям, могут содержать суспендирующие агенты, например, такие как этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленовый сорбит и сложные эфиры сорбита, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант, и их смеси.

Рецептуры фармацевтических композиций по изобретению для ректального или вагинального введения могут быть представлены в виде суппозитория, который может быть получен смешиванием одного или нескольких соединений по изобретению с одним или несколькими подходящими нераздражающими эксципиентами или носителями, включающими, например, масло какао, полиэтиленгликоль, воск для суппозиториев или салицилат, которые являются твердыми при комнатной температуре, но жидкими при температуре тела и следовательно будут расплавляться в прямой кишке или вагинальной полости и высвобождать активное соединение.

Рецептуры по настоящему изобретению, которые являются подходящими для вагинального введения, также включают пессарии, тампоны, кремы, гели, пасты, пенистые или распыляемые препараты, содержащие такие носители, которые известны в данной области, как подходящие для данного применения.

Препаративные лекарственные формы для местного или чрескожного введения соединения по данному изобретению включают порошки, спреи, мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, растворы, пластыри и ингаляторы. Активное соединение может быть смешано в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем и с любым требуемым консервантом, буфером или пропеллентом.

Мази, пасты, кремы и гели могут содержать, в дополнение к активному соединению по данному изобретению, эксципиенты, такие как животные и растительные жиры, масла, воски, парафины, крахмал, трагакант, производные целлюлозы, полиэтиленгликоли, силиконы, бентониты, кремниевая кислота, тальк и оксид цинка, или их смеси.

Порошки и спреи могут содержать, в дополнение к соединению по данному изобретению, эксципиенты, такие как лактоза, тальк, кремниевая кислота, гидроксид алюминия, силикаты кальция и полиамидный порошок, или смеси данных веществ. Спреи дополнительно могут содержать обычные пропелленты, такие как хлорфторуглеводороды и летучие незамещенные углеводороды, такие как бутан и пропан.

- 18 007254

Чрескожные пластыри имеют дополнительное преимущество в обеспечении контролируемой доставки соединения по настоящему изобретению к телу. Такие препаративные лекарственные формы могут быть получены путем растворения или диспергирования соединения в подходящей среде. Для увеличения проникновения вещества через кожу могут быть добавлены усилители всасывания. Скорость такого потока через кожу можно контролировать либо с помощью скорость-контролирующей мембраны, или при диспергировании активного соединения в полимерной матрице или геле.

Офтальмологические препараты, глазные мази, порошки, растворы и тому подобное также рассматриваются как попадающие в объем данного изобретения. Предпочтительно, фармацевтический препарат представляет собой офтальмологическую композицию (например, препарат для периокулярной, ретробульбарной или внутриглазной инъекции, системный препарат или хирургический орошающий раствор).

Офтальмологические препараты по настоящему изобретению могут включать один или несколько дезазапуринов и фармацевтически приемлемый носитель. Можно использовать различные типы носителей. Носитель обычно будет водным по своей природе. Обычно предпочитают водные растворы, основываясь на типе композиции, а также способности пациента легко вводить такие композиции, закапывая одну или две капли раствора в пораженный глаз. Однако дезазапурины по настоящему изобретению также легко могут быть введены в другие типы композиций, такие как суспензии, вязкие или полувязкие гели или другие типы твердых или полутвердых композиций. Офтальмологические композиции по настоящему изобретению также могут включать различные типы ингредиентов, такие как буферы, консерванты, сорастворители и создающие вязкость агенты.

Подходящая буферная система (например, фосфат натрия, ацетат натрия или борат натрия) может быть добавлена для предотвращения изменения рН в условиях хранения.

Офтальмологические продукты обычно упаковываются в виде множества дозированных форм. Таким образом, для предотвращения микробного загрязнения во время использования требуются консерванты. Подходящие консерванты включают: хлорид бензалкония, тимерозал, хлорбутанол, метилпарабен, пропилпарабен, фенилэтиловый спирт, эдетат динатрия, сорбиновую кислоту, поликватерний-1 или другие агенты, известные специалистам в данной области. Такие консерванты обычно используются на уровне от 0,001 до 1,0% вес/объем (% вес/об).

Когда дезазапурины по настоящему изобретению вводят во время внутриглазной хирургической процедуры, например, с помощью ретробульбарной или периокулярной инъекции и внутриглазного введения или инъекции, наиболее предпочтительным является использование сбалансированных солевых орошающих растворов в качестве носителей. Примерами физиологически сбалансированных внутриглазных орошающих растворов являются В88® стерильный орошающий раствор и В88 Р1и§® Стерильный внутриглазной орошающий раствор (А1соп ЬаЬогаЮпек, Шс., Еой \Уог111. Техак, И8А). Последний тип раствора описан в патенте США 4550022 (СагаЬеФап е! а1.), полное содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки. Ретробульбарные и периокулярные инъекции известны специалистам в данной области и описаны в многочисленных публикациях, включая, например, ОрЫМшю 8шдегу: Ргтс1р1е§ о£ РгасИсе (Офтальмологическая хирургия: принципы практики) Еб., 6.Ь.8рае1й, \У.В.8апбег5 Со., РЫ1абе1рЫа Ра., И8А, страницы 85-87 (1990).

Как указано выше, применение дезазапуринов для профилактики или уменьшения повреждения тканей сетчатки или головного зрительного нерва на клеточном уровне представляет собой особенно важный аспект одного варианта осуществления изобретения. Офтальмологические заболевания, которые можно лечить, включают, но не ограничиваются этим, ретинопатию, дегенерацию желтого пятна, ишемию глаза, глаукому и повреждения, связанные с повреждением тканей глаза, такие как ишемические реперфузионные повреждения, фотохимические повреждения и повреждения, связанные с хирургией глаза, в особенности повреждения сетчатки или головного зрительного нерва, вызванные действием света или хирургическими инструментами. Соединения также можно использовать в качестве сопутствующего лечения в офтальмологической хирургии, например, в качестве инъекции внутрь сетчатки или надконъюнктивной инъекции после офтальмологической хирургии. Соединения можно использовать для кратковременного лечения временно возникающих заболеваний, или их можно вводить постоянно, особенно в случае дегенеративного заболевания. Соединения также можно использовать профилактически, особенно перед глазным хирургическим вмешательством или неинвазивными офтальмологическими процедурами, или другими типами хирургического вмешательства.

Фармацевтические композиции по данному изобретению, подходящие для парентерального введения, включают одно или несколько соединений по изобретению в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми стерильными изотоническими водными или неводными растворами, дисперсиями, суспензиями или эмульсиями, или в виде стерильных порошков, влагосодержание которых восстанавливается непосредственно перед применением в стерильных растворах или дисперсиях для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатические агенты, растворимые вещества, придающие рецептуре изотонические свойства с кровью предполагаемого реципиента, или суспендирующие или загущающие агенты.

- 19 007254

Примеры подходящих водных и неводных носителей, которые можно использовать в фармацевтических композициях по изобретению, включают воду, этанол, многоатомные спирты (такие как глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и тому подобные) и их подходящие смеси, растительные масла, такие как оливковое масло, и инъецируемые органические сложные эфиры, такие как этилолеат. Надлежащая текучесть может поддерживаться, например, за счет использования материалов покрытий, таких как лецитин, поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсий и применения поверхностно-активных веществ.

Данные композиции также могут содержать вспомогательные агенты, такие как консерванты, смачивающие агенты, эмульгирующие агенты и диспергирующие агенты. Предотвращение действия микроорганизмов можно гарантировать при включении в состав композиции различных противомикробных и противогрибковых агентов, например, парабена, хлорбутанола, фенолсорбиновой кислоты и тому подобных. Также может оказаться желательным включать в состав композиций изотонические агенты, такие как сахара, хлорид натрия и тому подобные. Кроме того, пролонгированное всасывание инъецируемой фармацевтической формы может достигаться путем введения агентов, которые замедляют всасывание, таких как моностеарат алюминия и желатин.

В некоторых случаях для достижения длительного действия лекарственного средства желательно замедлить всасывание лекарственного средства при подкожной или внутримышечной инъекции. Это может достигаться за счет применения жидкой суспензии кристаллического или аморфного вещества, обладающего низкой растворимостью в воде. Скорость всасывания лекарственного средства тогда зависит от скорости его растворения, что, в свою очередь, может зависеть от размера кристалла и кристаллической формы. Альтернативно, замедленное всасывание парентерально вводимой препаративной лекарственной формы осуществляют путем растворения или суспендирования лекарственного средства в масляном носителе.

Инъецируемые депо-формы получают путем образования микроинкапсулированных матриц обсуждаемых соединений в биоразрушаемых полимерах, таких как полилактид-полигликолид. В зависимости от соотношения лекарственного средства и полимера и природы конкретного используемого полимера, можно контролировать скорость высвобождения лекарственного средства. Примеры других биоразрушаемых полимеров включают поли(орто-сложные эфиры) и поли(ангидриды). Инъецируемые депоформы также получают путем захвата лекарственного средства липосомами или микроэмульсиями, которые совместимы с тканями тела.

Препараты по настоящему изобретению можно вводить перорально, парентерально, место или ректально. Конечно, их вводят в виде форм, подходящих для каждого пути введения. Например, их вводят в виде таблеток или капсул, путем инъекции, ингаляции, в виде глазного лосьона, мази, суппозитория и т.д., осуществляют введение с помощью инъекции, вливания или ингаляции; местно с использованием лосьона или мази; и ректально с использованием суппозиториев. Предпочтительным является пероральное введение.

Выражения «парентеральное введение» и «вводят парентерально», как они используются в данном описании, означают способы введения, отличные от энтерального и местного введения, обычно путем инъекции, и включают, без ограничений, внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, внутриоболочечную, внутрикапсульную, внутриглазничную, внутрисердечную, внутрикожную, внутрибрюшинную, транстрахейную, подкожную, подкутикулярную, внутрисуставную, подкапсульную, субарахноидальную, интраспинальную и внутригрудинную инъекцию и инфузию.

Выражения «системное введение» и «вводят системно», «периферическое введение» и «вводят периферически», как они использованы в данном описании, означают введение соединения, лекарственного средства или другого вещества другим путем, нежели непосредственное введение в центральную нервную систему, так что оно поступает в систему пациента и таким образом подвергается метаболизму и другим подобным процессам, например, при подкожном введении.

Данные соединения можно вводить людям и другим животным для лечения с помощью любого подходящего пути введения, включая пероральное, назальное, например, с помощью спрея, ректальное, внутривагинальное, парентеральное, интрацистернальное и местное введение, например, с помощью порошков, мазей и капель, включая буккальное и сублингвальное введение.

Вне зависимости от выбранного пути введения, соединения по настоящему изобретения, которые могут использоваться в подходящей гидратированной форме, и/или фармацевтические композиции по настоящему изобретению получают в виде фармацевтически приемлемых препаративных лекарственных форм обычными способами, известными специалистам в данной области.

Фактические уровни дозировки активных ингредиентов в фармацевтических композициях по данному изобретению могут изменяться так, чтобы получать количество активного ингредиента, которое является эффективным для достижения желательной терапевтической ответной реакции для конкретного пациента, композиции и способа введения, не являясь токсичным для пациента.

Выбранные уровни дозировки будут зависеть от множества факторов, включая активность конкретного используемого соединения по настоящему изобретению, или его сложного эфира, соли или амида, путь введения, время введения, скорость выведения из организма конкретного используемого со- 20 007254 единения, продолжительность лечения, другие лекарственные средства, соединения и/или вещества, используемые в сочетании с конкретным используемым соединением, возраст, пол, вес, заболевание, общее состояние здоровья и предшествующую историю болезни пациента, подвергаемого лечению, и аналогичные факторы, хорошо известные в медицине.

Лечащий врач или ветеринар, являющийся обычным специалистом в данной области, легко может определить и прописать эффективное количество требуемой фармацевтической композиции. Например, лечащий врач или ветеринар могут начать с применения доз соединений, используемых в фармацевтической композиции, на уровнях, более низких, чем требуется для достижения желаемого терапевтического действия, и постепенно увеличивать дозировку до тех пор, пока не будет достигнут желательный эффект.

Обычно, подходящая дневная доза соединения по изобретению будет таким количеством соединения, которое представляет собой наименьшую дозу, эффективную для оказания терапевтического действия. Такая эффективная доза обычно будет зависеть от описанных выше факторов. Обычно внутривенные и подкожные дозы соединений по данному изобретению для пациента, когда их используют для оказания указанного анальгетического действия, будут колебаться от примерно 0,0001 до примерно 200 мг на килограмм веса тела в сутки, более предпочтительно от примерно 0,01 до примерно 150 мг на кг в сутки и еще более предпочтительно от примерно 0,2 до примерно 140 мг на кг в сутки.

При желании эффективную дневную дозу активного соединения можно водить в виде двух, трех, четырех, пяти, шести или более под-доз, вводимых по отдельности с подходящими промежутками в течение дня, необязательно в виде единичных дозированных лекарственных форм.

Хотя соединение по настоящему изобретению возможно вводить само по себе, предпочтительно введение соединения в виде фармацевтической композиции.

Настоящее изобретение также относится к упакованным фармацевтическим композициям для лечения болезненных состояний, дающих ответную реакцию на Ν-6 замещенный 7-дезазапурин, например, при нежелательной повышенной активности аденозинового рецептора у млекопитающего. Упакованные фармацевтические композиции включают контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество по крайней мере одного дезазапурина, как описано выше, и инструкции по использованию дезазапурина для лечения состояния, дающего ответную реакцию на дезазапурин.

Дезазапурины данного изобретения могут быть получены с использованием стандартных способов органического синтеза. Дезазапурины могут быть очищены ВЭЖХ с обращенной фазой, хроматографией, перекристаллизацией и т.д. и их структуры подтверждены с помощью масс-спектрального анализа, элементного анализа, ИК и/или ЯМР спектроскопии.

Обычно синтез промежуточных соединений, а также дезазапуринов по изобретению осуществляют в растворе. Присоединение и удаление одной или нескольких защитных групп также является обычным на практике и известно специалистам.

Типичные схемы синтеза промежуточных соединений для получения дезазапуринов по изобретению представлены ниже на схеме I.

Данное изобретение дополнительно относится к соединению, имеющему структуру (IV):

где Κ₁ представляет собой транс-4-гидроксициклогексил, 2-метиламинокарбониламиноциклогексил, ацетиламиноэтил или метиламинокарбониламиноэтил;

где К₃ представляет собой замещенное или незамещенное четырех-шестичленное кольцо; фенил, пиррол, тиофен, фуран, тиазол, имидазол, пиразол, 1,2,4-триазол, пиридин,

2(1 Н)-пиридон, 4(1 Н)-пиридон, пиразин, пиримидин, пиридазин, изотиазол, изоксазол, оксазол, тетразол, нафталин, тетралин, нафтиридин, бензофуран, бензотиофен, индол, 2,3-дигидроиндол, 1Ниндол, индолин, бензопиразол, 1,3-бензодиоксол, бензоксазол, пурин, кумарин, хромон, хинолин, тетрагидрохинолин, изохинолин, бензимидазол, хиназолин, пиридо[2,3-Ь] пиразин, пиридо[3,4-Ь] пиразин, пиридо[3,2-с]пиридазин, пиридо[3,4-Ь]пиридин, 1Н-пиразол[3,4-б]пиримидин, птеридин, 2(1Н)-хинолон, 1(2Н)-изохинолон, 1,4-бензизоксазин, бензотиазол, хиноксалин, хинолин-^оксид, изохинолин-^оксид, хиноксалин-^оксид, хиназолин-^оксид, бензоксазин, фталазин, циннолин, или имеет структуру:

где Υ представляет собой углерод или азот;

- 21 007254 где К₂ и К₂', независимо, представляют собой Н, замещенный или незамещенный алкил, замещенный или незамещенный арил, галоген, метокси, метиламино или метилтио; где К₅ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил, арилалкил, амино, замещенный арил, где указанный замещенный алкил представляет собой -С(К₇) (К₈)ХК₉, где X представляет собой О, 8 или ΝΚ₁₀, где каждый из К₇ и К₈, независимо, представляет собой Н или алкил, где каждый из К₉ и К₁₀, независимо, представляет собой алкил или циклоалкил, или ΝΚ₉Κι₀ представляет собой замещенное или незамещенное кольцо, содержащее от 4 до 7 членов;

где К₆ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, циклоалкил; или к его фармацевтически приемлемой соли, производному пролекарству или биологически активному метаболиту, при условии, что когда Κι представляет собой ацетиламиноэтил, К₃ не является 4-пиридилом.

В одном варианте осуществления соединения, имеющего структуру IV, ΝΚ₉Κι₀ представляет собой замещенное или незамещенное кольцо, содержащее от 4 до 7 членов, которое выбрано из группы состоящей из:

где т равен 0, 1 или 2,

где η равен 0, 1, 2 или 3; где К₈' представляет собой водород, -ОН, -СН₂ОН, -С (=О) ΝΚ₉Κι₀, ΝΗΚ_π; где Кп представляет собой -С(=О)СН₃ или -8О₂Ме, или

где К представляет собой Н, алкил или арил.

При другом варианте осуществления соединения, имеющего структуру IV, К₃ имеет структуру

где Υ представляет собой углерода или азот; где К₂ представляет собой Н или галоген, Оалкильную группу, аминогруппу или сульфидную группу;

где К5 представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил, арилалкил, амино, замещенный арил, где указанный замещенный алкил представляет собой -С(К₇) (Κ₈)Κ₉Κι₀, где каждый из К₇ и К₈, независимо представляет собой Н или алкил, где каждый из К₉ и К₁₀, независимо, представляет собой алкил или циклоалкил, или К₉, К₁₀ и азот вместе образуют замещенное или незамещенное кольцо, состоящее из 4-7 членов.

В другом варианте осуществления соединения Υ представляет собой углерод.

В другом варианте осуществления соединения К₂ представляет собой водород.

В другом варианте осуществления соединения К₆ представляет собой водород.

В другом варианте осуществления соединения К₅ представляет собой водород.

В другом варианте осуществления соединения каждый из К₅ и К₆ представляет собой метил.

В другом варианте осуществления соединения К₅ представляет собой -С(К₇) (Κ₈)ΝΚ₉Κι₀, где каждый из К₇ и К₈, независимо, представляет собой Н или алкил, где каждый из К₉ и К₁₀, независимо, представляет собой алкил или циклоалкил, или К9, К10 и азот вместе образуют замещенное или незамещенное кольцо, состоящее из 4-7 членов.

В другом варианте осуществления соединения К₂ представляет собой галоген.

В другом варианте осуществления соединения Υ представляет собой азот.

Еще в одном варианте осуществления соединения К₂ представляет собой водород.

В следующем варианте осуществления соединения каждый из К₅ и К₆ представляет собой водород.

Данное изобретение также относится к соединению, имеющему структуру (V):

- 22 007254

где К₃ представляет собой арил, замещенный арил или гетероарил;

где К₆ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил или циклоалкил; где К₅ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил, арилалкил, амино, замещенный арил, где указанный замещенный алкил представляет собой -С(К₇) (Κ₈)ΝΚ₉Κ₁₀, где каждый из К₇ и К₈, независимо, представляет собой Н или алкил, где каждый из К₉ и К₁₀ представляет собой алкил или циклоалкил, или К₉, К₁₀ и азот вместе образуют кольцевую систему, состоящую из 4-7 членов.

В одном варианте осуществления соединения, имеющего структуру V, каждый из К₇ и К₈ представляет собой Н; где К₉ представляет собой Н, и К₁₀ представляет собой -К₁₂С (=0) К₁₃.

В другом варианте осуществления соединения, имеющего структуру V, каждый из К₇ и К₈ представляет собой Н; где кольцевая система представляет морфолино, тиоморфолино, Ν-4-замещенный пиперазино, 2-замещенный пиперизин или К₈' замещенный пирролидино, пиперидин, где К₈' представляет собой Н, ОН, СН₂0Н, -С (=Ο)ΝΚ₉Κ₁₀, ΝΚ₁₁, где К₁₁ представляет собой -С(=0)СН₃, -80₂Ме.

В другом варианте осуществления соединения, соединение имеет следующую структуру:

(Соединение 706)

В другом варианте осуществления соединения, соединение имеет структуру:

(Соединение 1318-а)

(Соединение 1318-Ь)

- 23 007254

(Соединение 1319)

(Соединение 1320)

(Соединение 1321)

Соединение имеет структуру

где К₃ представляет собой 5-б-членное ароматическое кольцо; где К₅ и К_б независимо представляют собой Н или алкил.

В одном варианте осуществления соединения, соединение имеет структуру:

(Соединение 1500)

- 24 007254

В другом варианте осуществления соединения 1500, соединение имеет структуру:

В следующем воплощении соединения, соединение имеет структуру:

где К₃ представляет собой 5-6-членное ароматическое кольцо; где К₅ и Кб независимо представляют собой Н или алкил; при условии, что К₃ не является 4-пиридилом.

- 25 007254

(Соединение 1501)

Данное изобретение дополнительно относится к соединению, имеющему структуру:

где Р₃ представляет собой замещенное 5-6-членное ароматическое кольцо; где Р₅ и В₆ независимо представляют собой Н или алкил.

(Соединение 1520)

где Р₃ представляет собой 5-6-членное ароматическое кольцо; где X представляет собой кислород или серу.

“К

(Соединение 1503)

- 26 007254 где К₃ представляет собой 5-6-членное ароматическое кольцо; где X представляет собой кислород или серу.

(Соединение 1504)

Данное изобретение также относится к способу лечения заболевания, связанного с А₁ аденозиновым рецептором у субъекта, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения, имеющего формулу IV, V, VI, VI, VII, VIII, IX или X.

В одном варианте осуществления способа субъект представляет собой млекопитающее. В другом варианте осуществления способа млекопитающее является человеком.

В следующем варианте осуществления способа, А₁ аденозиновый рецептор связан с нарушением познавательной способности, почечной недостаточностью, сердечной аритмией, эпителием дыхательных путей, высвобождением трансмиттера, седативным действием, сужением кровеносных сосудов, брадикардией, отрицательной сердечной инотропией и дромотропией, бронхостенозом, нейтрофильным хемотаксисом, состоянием рефлюкса или язвенным заболеванием.

Данное изобретение также относится к комбинированной терапии астмы, включающей соединения IV и V, и стероид, β2-агонист, глюкокортикоид, антагонист люкотриена или антихолинергический агонист. Заболевания, связанные с А_ь А_2а, А₂ь и А₃ аденозиновыми рецепторами, описаны в №0 99/06053 и №0-09822465, №0-09705138, №0-09511681, №0-09733879, 1Р-09291089, РСТ/И8 98/16053 и патенте США № 5516894, полное содержание которых во всей своей полноте включено в данное описание в качестве ссылки.

Данное изобретение также относится к водорастворимому пролекарству соединений, имеющих структуру IV, V, VI, VI, VII, VIII, IX или X, где указанное водорастворимое пролекарство метаболизирует ίη νίνο до активного лекарственного средства, которое селективно ингибирует А! аденозиновый рецептор.

В одном варианте осуществления пролекарства, указанное пролекарство метаболизирует ίη νίνο посредством катализируемого эстеразой гидролиза.

Данное изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей пролекарство и фармацевтически приемлемый носитель.

Данное изобретение дополнительно относится к способу ингибирования активности А1 аденозинового рецептора в клетке, который включает контактирование указанной клетки с соединением, имеющим структуру IV, V, VI, VI, VII, VIII, IX или X.

В одном варианте осуществления способа соединение является антагонистом указанного А₁ аденозинового рецептора.

Данное изобретение также относится к способу лечения желудочно-кишечного заболевания у субъекта, включающему введение терапевтически эффективного количества соединения, имеющего структуру IV, V, VI, VI, VII, VIII, IX или X.

В одном варианте осуществления способа указанное заболевание представляет диарею.

В другом варианте осуществления способа субъект является человеком.

В другом варианте осуществления способа соединение является антагонистом А₁ аденозиновых рецепторов.

Данное изобретение также относится к способу лечения заболевания дыхательных путей у субъекта, включающему введение субъекту эффективного количества соединения, имеющего структуру IV, V, VI, VI, VII, VIII, IX или X.

В одном варианте осуществления способа указанное заболевание представляет астму, хроническое обструктивное заболевание легких, аллергический ринит или заболевание верхних дыхательных путей.

В другом варианте осуществления способа указанное соединение является антагонистом А! аденозиновых рецепторов.

Данное изобретение также относится к способу лечения повреждения глаза у субъекта, включающему введение указанному субъекту эффективного количества соединения, имеющего структуру IV, V, VI, VI, VII, VIII, IX или X.

В одном варианте осуществления способа указанное повреждение включает повреждение сетчатки или зрительного головного нерва.

- 27 007254

В другом варианте осуществления способа указанное повреждение является острым или хроническим.

В другом варианте осуществления способа указанное повреждение является результатом глаукомы, отека, ишемии, гипоксии или травмы.

В другом варианте осуществления способа соединение является антагонистом Αι аденозиновых рецепторов.

Данное изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей терапевтически эффективное количество соединения, имеющего структуру IV, V, VI, VI, VII, VIII, IX или X, и фармацевтически приемлемый носитель.

В другом варианте осуществления фармацевтической композиции указанное терапевтически эффективное количество является эффективным для лечения заболевания дыхательных путей или желудочно-кишечного заболевания.

В другом варианте осуществления фармацевтической композиции указанное желудочно-кишечное заболевание представляет собой диарею.

В другом варианте осуществления фармацевтической композиции указанное заболевание дыхательных путей представляет собой астму, аллергический ринит или хроническое обструктивное заболевание легких.

В другом варианте осуществления фармацевтической композиции указанная фармацевтическая композиция представляет собой офтальмологический препарат.

В другом варианте осуществления фармацевтической композиции указанная фармацевтическая композиция представляет собой препарат для периокулярной, ретробульбарной или внутриглазной инъ екции.

Еще в одном варианте осуществления фармацевтической композиции, данная фармацевтическая композиция представляет собой системный препарат.

В дополнительном варианте осуществления фармацевтического препарата, указанная фармацевтическая композиция представляет собой хирургический орошающий раствор.

Данное изобретение также относится к упакованной фармацевтической композиции для лечения заболевания, связанного с А_гаденозиновым рецептором у субъекта, включающей: (а) контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество А_гаденозин специфического соединения, и (Ъ) инструкции для использования указанного соединения для лечения указанного заболевания у субъекта.

Как использовано в данном описании, выражение «соединение является Αι селективным» означает, что соединение имеет константу связывания с А_гаденозиновым рецептором по крайней мере в десять раз выше, чем аналогичная константа для А_2а, А_2Ъ или А₃ аденозина.

Данное изобретение также относится к способу получения соединения, имеющего структуру (IV), включающему стадии:

а) взаимодействия

Р с получением

Р где Р представляет собой удаляемую защитную группу;

Ъ) обработки продукта стадии а) в условиях циклизации с получением

с) обработки продукта стадии Ъ) в подходящих условиях с получением

- 28 007254

ά) обработки хлорированного продукта стадии с) ΝΗ₂Κ₁ с получением

где Кд представляет собой транс-4-гидроксициклогексил, 2-метиламинокарбониламиноциклогексил, ацетиламиноэтил или метиламинокарбониламиноэтил;

где К₅ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил, арилалкил, амино, замещенный арил, где указанный замещенный алкил представляет собой -С(К₇) (К₈)ХК₉, где X представляет собой О, 8 или ΝΚ₁₀, где каждый из К₇ и К₈, независимо, представляет собой Н или алкил, где каждый из К₉ и К₁₀, независимо, представляет собой алкил или циклоалкил, или ΝΚ₉Κ₃₀ представляет собой замещенное или незамещенное кольцо, содержащее от 4 до 7 членов;

где К₆ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, циклоалкил; или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарственного производного или биологически активного метаболита; при условии, что когда Кд представляет собой ацетиламиноэтил, К₃ не является 4-пиридилом.

Данное изобретение также относится к способу получения соединения, имеющего структуру V, включающему стадии а) взаимодействия

с получением где Р представляет собой удаляемую защитную группу; Ь) обработки продукта стадии а) в условиях циклизации с получением

с) обработки продукта стадии Ь) в подходящих условиях с получением

- 29 007254 где К₃ представляет собой арил, замещенный арил, гетероарил;

где В_б представляет собой Н, алкил, замещенный алкил или циклоалкил; где В₅ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил, арилалкил, амино, замещенный арил, где указанный замещенный алкил представляет -С(В₇) (Β₈)ΝΒ₉Β₁₀, где каждый из В₇ и К₈ представляет собой Н или алкил, где каждый из В₉ и В₁₀ представляет собой алкил или циклоалкил, или ΝΒ₉Β₁₀ представляет собой кольцевую систему, содержащую от 4 до 7 членов.

Соединения, представленные формулами VI, VII и VIII, могут быть синтезированы по любой из схем ΕνΗ! Соединения, представленные формулой IX и X, могут быть получены по схеме IX.

Изобретение далее проиллюстрировано следующими примерами, которые никоим образом не следует рассматривать как дополнительное ограничение. Содержание всех ссылок, ожидающих решения заявок на патенты и опубликованных заявок на патенты, процитированных в данной заявке, включая процитированные в разделе «Предпосылки создания изобретения», включено в данное описание в качестве ссылки. Следует понимать, что модели, использованные в примерах, являются общепринятыми моделями, и демонстрирование эффективности на данных моделях предсказывает эффективность на людях.

Данное изобретение будет лучше понятно из приведенных далее экспериментальных подробностей. Однако, специалисту в данной области будет без труда понятно, что конкретные способы и обсуждаемые результаты являются только иллюстрацией изобретения, как описано более подробно в следующей далее формуле изобретения.

Экспериментальные подробности

Дезазапурины по изобретению могут быть получены стандартными способами органического синтеза. Дезазапурины могут быть очищены ВЭЖХ с обращенной фазой, хроматографией, перекристаллизацией и т.д., и их структуры подтверждены масс-спектральным анализом, элементным анализом, ИК и/или ЯМР спектроскопией.

Обычно синтез промежуточных соединений, а также дезазапуринов по изобретению проводят в растворе. Добавление и удаление одной или нескольких защитных групп также типично для практического осуществления и известно специалистам в данной области. Типичные схемы синтеза для получения промежуточных продуктов дезазапуринов по изобретению представлены ниже на схеме I.

где К₃, В₅ и В_б являются такими, как определено выше.

В общем, защищенный 2-амино-3-циано-пиррол может быть обработан ацилгалогенидом с образованием карбоксамидо-3-цианопиррола, который может быть обработан подкисленным метанолом для осуществления замыкания кольца в пирроло[2,3б]пиримидин-4-(3Н)-он (Ми11сг С.Е. с! а1., I. Меб.. СНст. 40:439б (1997)). Удаление защитной группы пиррола с последующей обработкой хлорирующим реагентом, например, оксихлоридом фосфора, приводит к замещенным или незамещенным 4-хлор-7Нпирроло[2,3б]пиримидинам. Обработка хлорпиримидина аминами давала 7-дезазапурины.

Например, как показано на схеме I, ^(1-б1-фенилэтил)-2-амино-3-цианопиррол обрабатывали ацилгалогенидом в пиридине и дихлорметане. Полученный №(1-б1-фенилэтил)-2-фенилкарбоксамидо-3цианопиррол обрабатывали смесью метанол/серная кислота в соотношении 10:1 для проведения замыкания кольца, приводящего к б1-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-ону. Удаление фенилэтиленой группы при обработке пиримидина полифосфорной кислотой (РРА) с последующей обработкой РОС13, давало ключевое промежуточное соединение 4-хлор-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин.

Последующая обработка 4-хлор-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина различными аминами, перечисленными в таблице 1, дает соединения формулы (I) и (II).

- 30 007254

Таблица 1

К	М'+ н	К	М' + н
Лэ	343,2	о Д/Ч/Г	351,27
	343,18	жсЛ	430,35
	337,21		359,44
А,	364,19	XX..	404,32
+Ό	330,18	' *М	330,45
V^м алаа	347,22	* у\| от	339,47
1 >ζνν>* 1	350,28	Ла/ч. 9””'**^$\ 1	353,41

- 31 007254

А/М” и	344,19	0 ____Υ ι 1 н	324,45
	394,16		359,38
СО~“ ΝΗ---	371,12	Аж х ^ΑΥ А	379,40
‘АЭ он	359,39	0Υ+	387,41
н ^Υν Ζχ\ ι 1	403,33		344,48
σΖ	351,49	гл	337,53
сг^А	330,37	Αγ	295,2
н	407,23	н	321,2
СО—*	355,45	Υ ^ζ0Η	337,53

- 32 007254

ААО	441,33
	413,24
Л/АС/О N Н	372,48

,Х) * н	350,2
Х1	343,2
н	373,2
А	307,2

Общий подход к получению 6-замещенных пирролов изображен на следующей схеме (схема II).

Схема II

- 33 007254 где Κι-Κ₅ являются такими, как определено выше.

Переэтерификация и алкилирование этилцианоацетата α-галогенкетоном приводят к кетометиловому сложному эфиру. Защита кетона с последующей обработкой гидрохлоридом амидина (например, алкил, арил или алкиларил) приводит к конечному пиримидину защищенному кеталем. Удаление защитной группы с последующей циклизацией и обработкой оксихлоридом фосфора приводит к хлорсодержащему промежуточному соединению, которое далее может быть обработано амином с получением амин-6-замещенного пиррола. Дополнительно может быть осуществлено алкилирование азота пиррола в условиях, известных в данной области.

Общий подход к синтезу 5-замещенных пирролов изображен на следующей схеме (схема III).

где К₁-К₆ являются такими, как определено выше, и Р представляет собой удаляемую защитную группу.

Конденсация малононитрила и избытка кетона с последующим бромированием продукта приводит к смеси исходного вещества, монобромированного и дибромированного продуктов, которые были обработаны алкиламином, ариламином или алкилариламином.

Полученный аминный продукт ацилировали хлорангидридом кислоты и моноацилированный пиррол циклизовали в присутствии кислоты с получением соответствующего пиримидина. Защитную группу пиррола удаляли полифосфорной кислотой и обрабатывали оксихлоридом фосфора с получением хлорированного продукта. Хлорированный пиррол впоследствии мог быть обработан амином, давая амино-5-замещенный пиррол. Алкилирование азота пиррола может быть осуществлено в условиях, известных в данной области.

На схемах IV и V изображены способы получения дезазапуринов 1 и 2 по изобретению

2

- 34 007254 где В₅ и В₆ являются такими, как описано выше, например, СН₃.

Конкретное получение 6-метилпирролопиримидинов

Ключевой реакцией для получения 6-метилпирролопиримидинов (1) [В₅=СН₃] была циклизация цианоацетата с бензамидином в пиримидин.

Предполагали, что метилцианоацетат будет циклизоваться с бензамидином в пиримидин более эффективно, чем соответствующий этиловый сложный эфир. Поэтому, переэтерификация и алкилирование этилцианоацетата в присутствии №ОМе и избытка α-галогенацетильного фрагмента, например, хлорацетона, давала желаемый метиловый сложный эфир (3) с выходом 79% (схема IV). Сложный кетоэфир (3) защищали в виде ацеталя (4) с выходом 81%. Новый способ циклизации в пиримидин (5) осуществляли с использованием гидрохлорида амидина, например, гидрохлорида бензамидина, с использованием 2 эквивалентов ДБУ, получая 5 с выходом выделенного продукта 54%. Данный способ позволяет улучшить выход с 20% в соответствии с опубликованными условиями, где во время циклизации с гуанидином используется №ОМе. Циклизацию в пиррол-пиримидин (6) проводили снятием ацетальной защиты в водной НС1 с 78% выходом. Взаимодействие (6) с оксихлоридом фосфора при кипении с обратным холодильником давало соответствующее 4-хлорпроизводное (7). Сочетание с транс-4-аминоциклогексанолом в диметилсульфоксиде при 135°С давало (1) с выходом 57% из (7). Специалисту в данной области будет очевидно, что выбор реагентов допускает большую гибкость при выборе желаемого заместителя В5.

Схема IV

Конкретное получение 5-метилпирролопиримидинов

Конденсация Кневенагеля малонитрила и избытка кетона, например, ацетона в кипящем бензоле приводила к 8 с выходом 50% после перегонки. Бромирование 8 Х-бромсукцинимидом в присутствии перекиси бензоила в хлороформе давало смесь исходного вещества, моно- (9), и ди-бромированного продуктов (5/90/5) после перегонки (70%). Смесь подвергали взаимодействию с α-метилалкиламином или а -метилариламином, например, α-метилбензиламином, получая аминопиррол (10). После пропускания через короткую колонку с силикагелем, частично очищенный амин (выход 31%) ацилировали хлорангидридом кислоты, например, бензоилхлоридом, получая моно- (11) и диацилированные (12) пирролы, которые разделяли флэш-хроматографией. Кислотный гидролиз дизамещенного пиррола (12) давал общий выход в 29% для ацилпиррола (11). Циклизация в присутствии концентрированной серной кислоты

- 35 007254 и ДМФ давала (13) (23%), в котором снимали защиту полифосфорной кислотой, получая (14). Взаимодействие (14) с оксихлоридом фосфора при кипении с обратным холодильником давало соответствующее 4-хлорпроизводное (15). Сочетание с транс-4-аминоциклогексанолом в диметилсульфоксиде при 135°С давало (2) [К₆=СН₃] с выходом 30% из (14) (смотри схему V). Специалисту в данной области будет очевидно, что выбор реагентов допускает большую гибкость при выборе желаемого заместителя К₆.

Схема V

9

Альтернативный путь синтеза К_б-замещенных пирролов, например, 5-метилпирролопиримидинов

Данный альтернативный путь к К₆-замещенным пирролам, например, 5-метилпирролопиримидинам, включает переэтерификацию и алкилирование этилцианоацетата с образованием (16) (схема VI). Конденсация (16) с гидрохлоридом бензамидина с использованием 2 эквивалентов ДБУ давала пиримидин (17). Циклизацию в пиррол-пиримидин (14) будут проводить путем снятия ацетальной защиты в водной НС1. Взаимодействие (14) с оксихлоридом фосфора при кипении с обратным холодильником давало соответствующее 4-хлорпроизводное (15). Сочетание с транс-4-аминоциклогексанолом в диметилсульфоксиде при 135°С давало (2). По данной методике число синтетических реакций для целевого соединения (2) уменьшается с 9 до 4 стадий. Кроме того, выход резко улучшается. Опять же, специалисту в данной области будет очевидно, что выбор реагентов допускает большую гибкость при выборе желаемого заместителя К₆.

- 36 007254

Общий подход к получению дез-метилпиррола изображен на следующей схеме (схема VII).

где Κι-Κ₃ являются такими, как определено выше.

- 37 007254

Алкилирование алкилцианоацетата диэтилацеталем в присутствии основания давало цианодиэтилацеталь, который обрабатывали солью амидина, получая предшественник метилпирролопиримидина.

Предшественник хлорировали и обрабатывали амином с образованием целевого дез-метилпирролопиримидина, как показано выше.

Например, на схеме VIII изображен синтез соединения (18).

Схема VIII

Коммерчески доступный метилцианоацетат алкилировали диэтилацеталем бромацетальдегида в присутствии карбоната калия и ЖД получая (19). Циклизацию в пиримидин (20) проводили в две стадии. Первоначально, образовывался пиримидин-ацеталь при реакции (19) с гидрохлоридом бензамидина с использованием 2 эквивалентов ДБУ. В полученном пиримидин-ацетале без очистки снимали защитную группу водной 1н. НС1 и полученный альдегид циклизовали в пирроло-пиримидин (20), который выделяли фильтрованием. Взаимодействие (20) с оксихлоридом фосфора при кипении с обратным холодильником приводило к соответствующему 4-хлорпроизводному (21). Связывание хлорпроизводного с транс-4аминоциклогексанолом в ДМСО при 135°С давало соединение (18) из соединения (21).

На схемах П^Ш продемонстрировано, что можно функционализировать 5- и 6-положение пирролопиримидинового кольца. С использованием различных исходных реагентов и незначительных модификаций вышеуказанных реакционных схем различные функциональные группы могут быть введены в 5- и 6-положения в формуле (I) и (II). Некоторые примеры проиллюстрированы в табл. 2.

- 38 007254

Квалифицированному специалисту известно, что метаболизм описанных здесь соединений у субъекта будет приводить к некоторым биологически активным метаболитам, которые служат в качестве лекарственных средств.

Иллюстративные примеры

Получение 1. Использовали модификацию способа алкилирования 8ее1а и Бирке¹. К охлаждаемому льдом (0°С) раствору этилцианоацетата (6,58 г, 58,1 ммоль) в МеОН медленно добавляли раствор №ЮМе (25% вес/об; 58,1 ммоль). Через 10 мин медленно добавляли хлорацетон (5 мл; 62,8 ммоль). Через 4 ч растворитель удаляли. Коричневое масло разбавляли ЕЮАс (100 мл) и промывали Н2О (100 мл). Органическую фракцию сушили, фильтровали и концентрировали, получая коричневое масло (7,79 г; 79%). Масло (3) (схема IV) представляло собой смесь продуктов метилового/этилового сложных эфиров (9/1) и его использовали без дополнительной очистки. ¹Н-ЯМР (200 МГц, ί.Όί.Ί3) δ 4,24 (кв, 1=7,2 Гц, ОСН₂), 3,91 (дд, 1Н, 1=7,2, 7,0 Гц, СН), 3,62 (с, 3Н, ОСН₃), 3,42 (дд, 1Н, 1=15,0, 7,1 Гц, 1 х СН₂); 3,02 (дд, 1Н, 1=15,0, 7,0 Гц, 1 х СН₂); 2,44 (с, 3Н, СН₃), 1,26 (т, 1=7, 1 Гц, сложноэфирный-СН₃).

¹ 8ее1а К; Бирке и. СБет.Вег. 1977, 110, 1462-1469.

Получение 2. Использовали метод 8ее1а и Бирке¹. Таким образом, защита кетона (3) (схема IV; 5,0 г,

32,2 ммоль) этиленгликолем (4 мл, 64,4 ммоль) в присутствии ТЮН (100 мг) давала 4 в виде масла (схема IV; 5,2 г, 81,0) после флэш-хроматографии (8Ю₂; 3/7 ЕЮАс/гексаны, К, 0,35). Продукт все еще содержит 5% этилового сложного эфира: ¹Н-ЯМР (200 МГц, СБС1₃) δ 4,24 (кв, 1=7,2 Гц, ОСН₂), 3, 98 (с, 4Н, 2 х ацетальный-СН₂), 3,79 (с, 3Н, ОСН₃), 3,62 (дд, 1Н, 1=7,2, 7,0 Гц, СН), 2,48 (дд, 1Н, 1=15,0, 7,1 Гц, 1 х СН₂), 2,32 (дд, 1Н, 1=15,0, 7,0 Гц, 1 х СН₂); 1,35 (с, 3Н, СН₃), 1,26 (т, 1=7,1 Гц, сложноэфирный-СН₃); масс-спектр (Е8 -электрораспыление): 200,1 (М⁺+1).

¹ 8ее1а К; Бирке и. СБет.Вег. 1977, 110, 1462-1469.

Получение 3. Раствор ацеталя (4) (схема IV; 1,0 г, 5,02 ммоль), бензамидина (786 мг, 5,02 ммоль) и ДБУ (1,5 мл, 10,04 ммоль) в сухом ДМФ (15 мл) нагревали при 85°С в течение 15 ч. Смесь разбавляли СНС1₃ (30 мл) и промывали 0,5н. №ЮН (10 мл) и Н₂О (20 мл). Органическую фракцию сушили, фильтровали и концентрировали, получая коричневое масло. Была предпринята попытка флэш-хроматографии (81О₂; 1/9 ЕЮАс/СН₂С1₂, К 0,35), но вещество кристаллизовалось на колонке. Силикагель промывали МеОН. Фракции, содержащие продукт (5) (схема IV) концентрировали и использовали без дополнительной очистки (783 мг, 54,3%): ¹Н-ЯМР (200 МГц, СОСБ) δ 8,24 (м, 2Н, Аг-Н), 7,45 (м, 3Н, Аг-Н), 5,24 (ушир.с, 2Н, ΝΉ₂), 3,98 (с, 4Н, 2 х ацетальный-СН₂), 3,60-3,15 (м, 2Н, СН₂), 1,38 (с, 3Н, СН₃); масс-спектр (Е8) : 288,1 (М⁺+1).

Получение соединения (20) (схема VIII): Раствор ацеталя (19) (4,43 г, 20,6 ммоль) 1, гидрохлорида бензамидина (3,22 г, 20,6 ммоль) и ДБУ (6,15 мл, 41,2 ммоль) в безводном ДМФ (20 мл) нагревали при 85°С в течение пятнадцати часов. Смесь разбавляли СНС1₃ и промывали Н₂О (2x50 мл). Органическую фракцию сушили, фильтровали и концентрировали, получая темно-коричневое масло. Темно-коричневое масло перемешивали в 1н. НС1 (100 мл) в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию фильтровали, получая НС1 соль соединения (20) в виде золотисто-коричневого твердого вещества (3,60 г, 70,6%); ¹Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-4₆) 11,92 (с 1Н), 8,05 (м, 2Н, Аг-Н), 7,45 (м, 3Н, Аг-Н), 7,05 (с, 1Н, пиррол-Н); масс-спектр (Е8): 212,1 (М⁺+1).

Получение 4. Раствор ацеталя (5) (700 мг, 2,44 ммоль) в 1н НС1 (40 мл) перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученную суспензию фильтровали, получая НС1 соль 2-фенил-6-метил7Н-пирроло[2,3-4]пиримидин-4(3Н)-она в виде золотисто-коричневого твердого вещества (498 мг, 78,0%); ¹Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-4₆) δ 11,78 (с, 1Н), 8,05 (м, 2Н, Аг-Н), 7,45 (м, 3Н, Аг-Н), 6,17 (с, 1Н, пиррол-Н), 2,25 (с, 3Н, СН₃); масс-спектр (Е8) : 226,1 (М+1).

Получение 5. Использовали модификацию способа циклизации СБеп е! а1.¹. К охлаждаемому льдом (0°С) раствору бромида (9) (схема V; 20,0 г, 108 ммоль, 90% чистота) в изопропиловом спирте (60 мл) медленно добавляли раствор α-метилбензиламина (12,5 мл, 97,3 ммоль). Черный раствор оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 ч. Смесь разбавляли ЕЮАс (200 мл) и промывали 0,5н. №ЮН (50 мл). Органическую фракцию сушили, фильтровали и концентрировали, получая черную смолу (19,2 г; 94%). Остаток частично очищали флэш-хроматографией (8Ю₂; 4/96 МеОн/СН₂С1₂, К, 0,35), получая черное твердое вещество (6,38 г, 31%), представляющее собой 41-1-(1фенилэтил)-2-амино-3-циано-4-метилпиррол: Масс- спектр (Е8): 226,1 (М⁺+1).

¹ СБеп ΥΤ.; МапкЬасй К.8.; \Ут1ег 8.М.; Вгоокк Е.; СоШпк 1.; Согтап М.Б.; ΟυηηίκΚίκ А.К.; Еагас1 №.8.; СаИаксБип К..Б; 8сЬт141 А.; ЗсЬик Ό.№. БМе4.СБет., 1997, 40, 1749-1754.

- 39 007254

Получение 6. К раствору 61-1-(1-фенилэтил)-2-амино-3-циано-4,5-диметилпиррола (14,9 г, 62,5 ммоль) и пиридина (10,0 мл) в дихлорметане (50,0 мл) добавляли хлористый бензоил (9,37 г, 66,7 ммоль) при 0°С. После перемешивания при 0°С в течение 1 ч добавляли гексан для облегчения кристаллизации продукта. Растворитель удаляли в вакууме и твердое вещество перекристаллизовывали из смеси Е1ОН/Н₂О, получая 13,9 г (65%) 61-1-(1-фенилэтил)-2-фенилкарбониламино-3-циано-4,5-диметилпиррола, т.пл. 218-221°С; ’Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 1,72 (с, 3Н), 1,76 (д, 1=7,3 Гц, 3Н), 1,98 (с, 3Н),

5.52 (кв, 1=7,3 Гц, 1Н), 7,14-7,54 (м, 9Н), 7,68-7,72 (дд, 1=1,4 Гц, 6,9 Гц, 2Н), 10,73 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 344,4 (М⁺+1).

¹ ЫеЫдк Апп.Сйет., 1986, 1485-1505.

Аналогичным образом получали следующие соединения.

Получение 6А. 61-1-(1-Фенилэтил)-2-(3-пиридил)карбониламино-3-циано-4,5-диметилпиррол. ’НЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 1,83 (д, 1=6,8 Гц, 3Н), 2,02 (с, 3Н), 2,12 (с, 3Н), 5,50 (кв, 1=6,8 Гц, 1Н), 7,14-7,42 (м, 5Н), 8,08 (м, 2Н), 8,75 (м, 3Н); масс-спектр (Е8): 345,2 (М⁺+1).

61-1-(1-Фенилэтил)-2-(2-фурил)карбониламино-3-циано-4,5-диметилпиррол. ’Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 1,84 (д, 1=7,4 Гц, 3Н), 1,92 (с, 3Н), 2,09 (с, 3Н), 5, 49 (кв, 1=7,4 Гц, 1Н), 6,54 (дд, 1=1,8 Гц, 3,6 Гц, 1Н), 7,12-7,47 (м, 7Н); масс-спектр (Е8): 334,2 (М⁺+1), 230,1.

61-1-(1-Фенилэтил)-2-(3-фурил)карбониламино-3-циано-4,5-диметилпиррол. ’Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 1,80 (д, 1=7 Гц, 3Н), 1,89 (с, 3Н), 2,05 (с, 3Н), 5,48 (кв, 1=7 Гц, 1Н), 6,59 (с, 1Н), 7,12-7,40 (м, 6Н), 7,93 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 334,1 (М⁺+1), 230,0.

61-1-(1-Фенилэтил)-2-циклопентилкарбониламино-3-циано-4,5-диметилпиррол. ’Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 1,82 (д, 1=7,4 Гц, 3Н), 1,88 (с, 3Н), 2, 05 (с, 3Н), 1,63-1,85 (м, 8Н), 2,63 (м, 1Н), 5,43 (кв, 1=7,4 Гц, 1Н), 6,52 (с, 1Н), 7,05-7,20 (м, 5Н); масс-спектр (Е8): 336,3 (М+1).

61-1-(1-Фенилэтил)-2-(2-тиенил)карбониламино-3-циано-4,5-диметилпиррол. ’Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 1,82 (д, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,96 (с, 3Н), 2,09 (с, 3Н), 5,49 (кв, 1=6,8 Гц, 1Н), 7,05-7,55 (м, 8Н); массспектр (Е8): 350,1 (М⁺+1), 246,0.

61-1-(1-Фенилэтил)-2-(3-тиенил)карбониламино-3-циано-4,5-диметилпиррол. ’Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 1,83 (д, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,99 (с, 3Н), 2,12 (с, 3Н), 5,49 (кв, 1=7,0 Гц, 1Н), 6,90 (м, 1Н), 7,18-7,36 (м, 6Н), 7,79 (м, 1Н); масс-спектр (Е8): 350,2 (М⁺+1), 246,1.

61-1-(1-Фенилэтил)-2-(4-фторфенил)карбониламино-3-циано-4,5-диметилпиррол. ’Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 1,83 (д, 1=7,4 Гц, 3Н), 1,96 (с, 3Н), 2,08 (с, 3Н), 5, 51 (кв, 1=7,4 Гц, 1Н), 7,16-7,55 (м, 9Н); масс-спектр (Е8): 362,2 (М⁺+1), 258,1.

61-1-(1-Фенилэтил)-2-(3-фторфенил)карбониламино-3-циано-4,5-диметилпиррол. ’Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 1,83 (д, 1=7,4 Гц 3Н), 1,97 (с, 3Н), 2,10 (с, 3Н), 5,50 (кв, 1=7,4 Гц, 1Н), 7,05-7,38 (м, 7Н), 7,67-7,74 (м, 2Н); масс-спектр (Е8): 362,2 (М⁺+1), 258,1.

61-1-(1-Фенилэтил)-2-(2-фторфенил)карбониламино-3-циано~4,5-диметилпиррол. ’Н-ЯМР (200

МГц, СПС1₃) δ 1,85 (д, 1=7,2 Гц, 3Н), 1,94 (с, 3Н), 2,11 (с, 3Н), 5,50 (кв, 1=7,2 Гц, 1Н), 7,12-7,35 (м, 6Н),

7.53 (м, 1Н), 7,77 (м, 1Н), 8,13 (м, 1Н); масс-спектр (Е8) : 362,2 (М⁺+1), 258,0.

61-1-(1-Фенилэтил)-2-изопропилкарбониламино-3-циано-4,5-диметилпиррол. ’Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 1,19 (д, 1=7,0 Гц, 6Н), 1,82 (д, 1=7,2 Гц, 3Н), 1,88 (с, 3Н), 2,06 (с, 3Н), 2,46 (м, 1Н), 5,39 (м, 1=7,2 Гц, 1Н), 6,64 (с, 1Н), 7,11-7,36 (м, 5Н); масс-спектр (Е8): 310,2 (М⁺+1), 206,1.

При ацилировании 61-1-(1-фенилэтил)-2-амино-3-циано-4-метилпиррола получали моноацилированный 61-1-(1-фенилэтил)-2-бензоиламино-3-циано-4-диметилпиррола и диацилированный пиррол 61-1(1-фенилэтил)-2-дибензоиламино-3-циано-4-метилпиррола. Моноацилированный пиррол: ’Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 7,69 (д, 2Н, 1=7,8 Гц, Аг-Н), 7,58-7,12 (м, 8Н, Аг-Н), 6,18 (с, 1Н, пиррол-Н), 5,52 (кв, 1Н, 1=7,2 Гц, СН-СН₃), 2,05 (с, 3Н, пиррол-СН₃), 1,85 (д, 3Н, 1=7,2 Гц, СН-СН₃); масс-спектр (Е8): 330,2 (М⁺+1); Диацилированный пиррол: ’Н-ЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 7,85 (д, 2Н, 1=7,7 Гц, Аг-Н), 7,74 (д, 2Н, 1=7,8Гц, Аг-Н), 7,52-7,20 (м, 9Н, Аг-Н), 7,04 (м, 2Н, Аг-Н), 6,21 (с, 1Н, пиррол-Н), 5,52 (кв, 1Н, 1=7,2 Гц, СН-СН₃), 1,77 (д, 3Н, 1=7,2 Гц, СН-СН₃), 1,74 (с, 3Н, пиррол-СН₃); масс-спектр (Е8): 434,1 (М⁺+1).

Получение 7. К раствору 61-1-(1-фенилэтил)-2-фенилкарбоксиамино-3-циано-4,5-диметилпиррола (1,0 г, 2,92 ммоль) в метаноле (10,0 мл) добавляли концентрированную серную кислоту (1,0 мл) при 0°С. Полученную смесь нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 15 ч и охлаждали до комнатной температуры. Осадок отфильтровывали, получая 0,48 г (48%) 61-5,6-диметил-2-фенил-7Н-7(1-фенилэтил)пирроло[2,3-6]пиримидин-4(3Н)-он. ’Н-ЯМР (200 МГц, СЭСЕ) δ 2,02 (д, 1=7,4 Гц, 3Н), 2,04 (с, 3Н), 2,41 (с, 3Н), 6,25 (кв, 1=7,4 Гц, 1Н), 7,22-7,50 (м, 9Н), 8,07-8,12 (дд, 1=3,4 Гц, 6,8 Гц, 2Н), 10,51 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 344,2 (М⁺+1). Следующие соединения получали способом, аналогичным описанному в получении 7.

61-5,6-Диметил-2-(3-пиридил)-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-6]пиримидин-4(3Н)-он. ’Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 2,03 (д, 1=7,2 Гц, 3Н), 2,08 (с, 3Н), 2,42 (с, 3Н), 6,24 (кв, 1=7,2 Гц, 1Н), 7,09-7,42 (м, 5Н), 8,48 (м, 2Н), 8,70 (м, 3Н); масс-спектр (Е8): 345.1 (М+1).

- 40 007254 б1-5,6-Диметил-2-(2-фурил)-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, СИСЬ) δ 1,98 (д, 1=7, 8 Гц, 3Н), 1,99 (с, 3Н), 2,37 (с, 3Н), 6,12 (кв, 1=7,8 Гц, 1Н), 6,48 (дд, 1=1,8 Гц, 3,6 Гц, 1Н), 7,17-7,55 (м, 7Н), 9,6 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 334,1 (М+1).

б1-5,6-Диметил-2-(3-фурил)-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, СИСЬ) δ 1,99 (д, 1=7 Гц, 3Н), 2,02 (с, 3Н), 2,42 (с, 3Н), 6,24 (кв, 1=7 Гц, 1Н), 7,09 (с, 1Н), 7,18-7,32 (м, 5Н), 7,48 (с, 1Н), 8,51 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 334,2 (М+1).

б1-5,6-Диметил-2-циклопентил-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. ¹Н-ЯМР (200 МГц, СИСЬ) δ 1,95 (д, 1=7,4 Гц, 3Н), 2,00 (с, 3Н), 2,33 (с, 3Н), 1,68-1,88 (м, 8Н), 2,97 (м, 1Н), 6,10 (кв, 1=7,4 Гц, 1Н), 7,16-7,30 (м, 5Н), 9,29 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 336,3 (М⁺+1).

б1-5,6-Диметил-2-(2-тиенил)-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-б] пирамидин-4(3Н)-он. ¹Н-ЯМР (200 МГц, С1)С1_;) δ 2,02 (д, 1=7,2 Гц, 3Н), 2,06 (с, 3Н), 2,41 (с, 3Н), 6,13 (кв, 1=7,2 Гц, 1Н), 7,12 (дд, 1=4,8, 2,8 Гц, 1Н), 7,26-7,32 (м, 5Н), 7,44 (д, 1=4,8 Гц, 1Н), 8,01 (д, 1=2,8 Гц, 1Н) 11,25 (с, 1Н); масс-спектр (Е8):

350.2 (М⁺+1).

б1-5,6-Диметил-2-(3-тиенил)-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. ¹Н-ЯМР (200 МГц, СИСЬ) δ 2,00 (д, 1=7,4 Гц, 3Н), 2,05 (с, 3Н), 2,43 (с, 3Н), 6,24 (кв, 1=7,4 Гц, 1Н), 7,24-7,33 (м, 5Н), 7,33-7,39 (м, 1Н), 7,85 (м, 1Н), 8,47 (м, 1Н), 12,01 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 350,2 (М⁺+1).

б1-5,6-Диметил-2-(4-фторфенил)-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, СИСЬ) δ 2,01 (д, 1=6,8 Гц, 3Н), 2,05 (с, 3Н), 2,42 (с, 3Н), 6,26 (кв, 1=6,8 Гц, 1Н), 7,12-7,36 (м, 7Н), 8,23-8,30 (м, 2Н), 11,82 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 362,3 (М⁺+1).

б1-5,6-Диметил-2-(3-фторфенил)-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. 'Н-ЯМР (200 МГц, СИСЬ) δ 2,02 (д, 1=7,4 Гц, 3Н), 2,06 (с, 3Н), 2,44 (с, 3Н), 6,29 (кв, 1=7,4 Гц, 1Н), 7,13-7,51 (м, 7Н), 8,00-8,04 (м, 2Н), 11,72 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 362,2 (М⁺+1).

б1-5,6-Диметил-2-(2-фторфенил)-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-б] пиримидин-4(3Н)-он. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, СИСЬ) δ 2,00 (д, 1=7,2 Гц, 3Н), 2,05 (с, 3Н), 2,38 (с, 3Н), 6,24 (кв, 1=7,2 Гц, 1Н), 7,18-7,45 (м, 8Н), 8,21 (м, 1Н), 9,54 (с, 1Н); масс-спектр (Е8) : 362,2 (М⁺+1).

б1-5,6-Диметил-2-изопропил-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. ¹Н-ЯМР (200 МГц, СИСЬ) δ 1,30 (д, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,32 (д, 1=7,0 Гц, 3Н), 2,01 (с, 3Н), 2,34 (с, 3Н), 2,90 (м, 1Н), 6,13 (м, 1Н), 7, 17-7,34 (м, 5Н), 10,16 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 310,2 (М⁺+1).

Получение 8. Раствор б1-1-(1-фенилэтил)-2-бензоиламино-3-циано-4-метилпиррола (785 мг, 2,38 ммоль) с концентрированной Н₂8О₄ (1 мл) в ДМФ (13 мл) перемешивали при 130°С в течение 48 ч. Черный раствор разбавляли СНС1₃ (100 мл) и промывали 1н. №1ОН (30 мл) и насыщенным раствором соли (30 мл). Органическую фракцию сушили, фильтровали, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (81О₂; 8/2 ЕЮЛс/гексаны, К_£ 0,35), получая коричневое твердое вещество (6,38 г, 31%), представляющее собой б1-5-метил-2-фенил-7Н-7- (1-фенилэтил) пирроло [2,3-ά] пиримидин-4(3Н)-он. ¹НЯМР (200 МГц, СИСЬ) δ 8,18 (м, 2Н, Аг-Н), 7,62-7,44 (м, 3Н, Аг-Н), 7,40-7,18 (м, 5Н, Аг-Н), 6,48 (с, 1Н, пиррол-Н), 6,28 (кв, 1Н, 1=7,2 Гц, СН-СН₃), 2,18 (с, 3Н, пиррол-СН₃), 2,07 (д, 3Н, 1=7,2 Гц, СН-СН₃); масс-спектр (Е8) : 330,2 (М⁺+1).

Получение 9. Смесь б1-1-(1-фенилэтил)-2-амино-3-циано-4,5-диметилпиррола (9,60 г, 40,0 ммоль) и муравьиной кислоты (50,0 мл, 98%) нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 5 ч. После охлаждения до комнатной температуры и потирания боковых сторон колбы образовывался обильный осадок, который отфильтровывали. Вещество промывали водой до тех пор, пока промывные воды не показывали нейтрального значения рН, получая б1-5,6-диметил-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. ^!Н -ЯМР (200 МГц, СИСЬ) δ 1,96 (д, 1=7,4 Гц, 3Н), 2,00 (с, 3Н), 2,38 (с, 3Н), 6,21 (кв, 1=7,4 Гц, 1Н), 7,11-7,35 (м, 5Н), 7,81 (с, 1Н), 11,71 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 268,2 (М⁺+1).

Получение 10. б1-5,6-Диметил-2-фенил-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он (1,0 г, 2,91 ммоль) суспендировали в полифосфорной кислоте (30,0 мл). Смесь нагревали при 100°С в течение 4 ч. Горячую суспензию выливали в ледяную воду, интенсивно перемешивали для диспергирования суспензии и подщелачивали твердым КОН до рН 6. Полученное твердое вещество отфильтровывали и выделяли, получая 0,49 г (69%) 5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. ¹Н -ЯМР (200 МГц, ДМСО-б₆) δ 2,17 (с, 3Н), 2,22 (с, 3Н), 7,45 (ушир., 3Н), 8,07 (ушир., 2Н,), 11,49 (с, 1Н), 11,82 (с, 1Н); масс-спектр (Е8) : 344,2 (М⁺+1).

Следующие соединения получали способом, аналогичным описанному в получении 10: 5-метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. Масс-спектр (Е8) : 226,0 (М^+1);

5.6- диметил-2-(3-пиридил)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. Масс-спектр (Е8): 241,1 (М⁺+1);

5.6- диметил-2-(2-фурил)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. ¹Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-б₆) δ

2.13 (с, 3Н), 2,18 (с, 3Н), 6,39 (дд, 1=1,8, 3,6 Гц, 1Н), 6,65 (дд, 1=1,8 Гц, 3,6 Гц, 1Н), 7,85 (дд, 1=1,8, 3,6 Гц, 1Н,), 11,45 (с, 1Н), 11,60 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 230,1 (М⁺+1);

5.6- диметил-2-(3-фурил)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. ¹Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-б₆) δ

2.14 (с, 3Н), 2,19 (с, 3Н), 6,66 (с, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 8,35 (с, 1Н), 11,3 (с, 1Н), 11,4 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 230,1 (М⁺+1);

- 41 007254

5.6- диметил-2-циклопентил-7Н-пирроло[2,3-а]пиримидин-4(3Н)-он. ¹Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-ώ·,) δ 1,57-1,91 (м, 8 Н), 2,12 (с, 3Н), 2,16 (с, 3Н), 2,99 (м, 1Н), 11,24 (с, 1Н), 11,38 (с, 1Н); масс-спектр (Е8):

232,2 (М⁺+1);

5.6- диметил-2-(2-тиенил)-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4(3Н)-он. ¹Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-0₆) δ

2,14 (с, 3Н), 2,19 (с, 3Н), 7,14 (дд, 1=3,0, 5,2 Гц, 1Н), 7,70 (д, 1=5,2 Гц, 1Н), 8,10 (д, 1=3,0 Гц, 1Н), 11,50 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 246,1 (М⁺+1);

5.6- диметил-2-(3-тиенил)-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4(3Н)-он. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, ДМС0-б₆) δ

2.17 (с, 3Н), 2,21 (с, 3Н), 7,66 (м, 1Н), 7,75 (м, 1Н), 8,43 (м, 1Н), 11,47 (с, 1Н), 11,69 (с, 1Н); масс-спектр (Е8) : 246,1 (М⁺+1);

5.6- диметил-2-(4-фторфенил)-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4(3Н)-он. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-й₆) δ 2,17 (с, 3Н), 2,21 (с, 3Н), 7,31 (м, 2Н), 8,12 (м, 2Н), 11,47 (с, 1Н); масс-спектр (Е8) : 258,2 (М⁺+1);

5.6- диметил-2-(3-фторфенил)-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4(3Н)-он. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-й₆) δ 2,18 (с, 3Н), 2,21 (с, 3Н), 7,33 (м, 1Н), 7,52 (м, 1Н), 7,85-7,95 (м, 2Н), 11,56 (с, 1Н), 11,80 (с, 1Н); массспектр (Е8): 258,1 (М⁺+1);

5.6- диметил-2-(2-фторфенил)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, ДМС0-б₆) δ 2,18 (с, 3Н), 2,22 (с, 3Н), 7,27-7,37 (м, 2Н), 7,53 (м 1Н), 7,68 (м, 1Н), 11,54 (с, 1Н), 11,78 (с, 1Н); массспектр (Е8): 258,1 (М⁺+1);

5.6- диметил-2-изопропил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4(3Н)-он. ¹Н-ЯМР (200 МГц, ДМС0-б₆) δ

1.17 (д, 1=6, 6 Гц, 6Н), 2,11 (с, 3Н), 2,15 (с, 3Н), 2,81 (м, 1Н), 11,20 (с, 1Н), 11,39 (с, 1Н); масс-спектр (Е8) : 206,1 (М⁺+1);

5.6- диметил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4(3Н)-он. ¹Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-й₆) δ 2,13 (с, 3Н),

2.17 (с, 3Н), 7,65 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 164,0 (М⁺+1).

Получение 11. Раствор 5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4(3Н)-она (1,0 г, 4,2 ммоль) в оксихлориде фосфора (25,0 мл) нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 6 ч, а затем концентрировали в вакууме досуха. К остатку добавляли воду для индуцирования кристаллизации и полученное твердое вещество отфильтровывали и собирали, получая 0,9 г (83%) 4-хлор-5,6диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-й₆) δ 2,33 (с, 3Н), 2,33 (с, 3Н), 7,46-7,49 (м, 3Н), 8,30-8,35 (м, 2Н), 12,20 (с, 1Н); масс-спектр (Е8) : 258,1 (М⁺+1).

Следующие соединения получали способом, аналогичным описанному в получении 11:

4-хлор-5-метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин, масс-спектр (Е8): 244,0 (М⁺+1); 4-хлор-6-метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин, масс-спектр (Е8): 244,0 (М⁺+1);

4-хлор-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. ¹Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-б₆) δ 8,35 (2,2Н), 7,63 (ушир.с, 1Н), 7,45 (м, 3Н), 6,47 (ушир.с, 1Н); масс-спектр (Е8): 230,0 (М⁺+1);

4-хлор-5,6-диметил-2-(3-пиридил)-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин, масс-спектр (Е8): 259,0 (М⁺+1);

4-хлор-5,6-диметил-2-(2-фурил)-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин, ¹Н -ЯМР (200 МГц, ДМСО-й₆) δ 2,35 (с, 3Н), 2,35 (с, 3Н), 6,68 (дд, 1=1,8, 3,6 Гц, 1Н), 7,34 (дд, 1=1,8 Гц, 3,6 Гц, 1Н), 7,89 (дд, 1=1,8, 3,6 Гц, 1Н); масс-спектр (Е8): 248,0 (М⁺+1).

4-хлор-5,6-диметил-2-(3-фурил)-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-й₆) δ 2,31 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н), 6,62 (с, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 8,18 (с, 1Н), 12,02 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 248,1 (М⁺+1).

4-хлор-5,6-диметил-2-циклопентил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. ¹Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-б₆) δ 1,61-1,96 (м, 8Н), 2,27 (с, 3Н), 2,27 (с, 3Н), 3,22 (м, 1Н), 11,97 (с, 1Н); масс-спектр (Е8) : 250,1 (М⁺+1).

4-хлор-5,6-диметил-2-(2-тиенил)-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин.

Ή-ЯМР (200 МГц, ДМСО-а₆) δ 2,29 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н), 7,14 (дд, 1=3,1 Гц, 4,0 Гц, 1Н), 7,33 (д, 1=4,9 Гц, 1Н), 7,82 (д, 1=3,1 Гц, 1Н), 12,19 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 264,1 (М⁺+1).

4-хлор-5,6-диметил-2-(3-тиенил)-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин. Ή-ЯМР (200 МГц, ДМСО-й₆) δ 2,32 (с, 3Н), 2,32 (с, 3Н), 7,62 (дд, 1=3,0, 5,2 Гц, 1Н), 7,75 (д, 1=5,2 Гц, 1Н), 8,20 (д, 1=3,0 Гц, 1Н); масс-спектр (Е8): 264,0 (М⁺+1).

4-хлор-5,6-диметил-2-(4-фторфенил)-7Н-пирроло[2,3-й] пиримидин. Ή-ЯМР (200 МГц, ДМСО-0₆) δ 2,33 (с, 3Н), 2,33 (с, 3Н), 7,30 (м, 2Н), 8,34 (м, 2Н), 12,11 (с, 1Н); масс-спектр (Е8) : 276,1 (М⁺+1).

4-хлор-5,6-диметил-2-(3-фторфенил)-7Н-пирроло[2,3-й] пиримидин. Ή-ЯМР (200 МГц, ДМСО-0₆) δ 2,31 (с, 3Н), 2,33 (с, 3Н), 7,29 (м, 1Н), 7,52 (м, 1Н), 7,96 (м, 1Н), 8,14 (м, 1Н), 11,57 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 276,1 (М⁺+1).

4-хлор-5,6-диметил-2-(2-фторфенил)-7Н-пирроло[2,3-й] пиримидин. Ή-ЯМР (200 МГц, ДМСО-0₆) δ 2,34 (с, 3Н), 2,34 (с, 3Н), 7,33 (м, 2Н), 7,44 (м, 1Н), 7,99 (м, 1Н), 12,23 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 276,1 (М⁺+1).

4-хлор-5,6-диметил-2-изопропил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-ώ·,) δ 1,24 (д, 1=6,6 Гц, 6Н), 2,28 (с, 3Н), 2,28 (с, 3Н), 3,08 (кв, 1=6,6 Гц, 1Н), 11,95 (с, 1Н); масс-спектр (Е8) : 224,0 (М⁺+1).

4-хлор-5,6-диметил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-ώ·,) δ 2,31 (с, 3Н), 2,32 (с, 3Н), 8,40 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 182,0 (М⁺+1).

- 42 007254 ά1-4-xлορ-5,6-диметил-2-фенил-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-ά]пиримидин.

Получение 12. К раствору 41-диаминопропана (1,48 г, 20,0 ммоль) и карбоната натрия (2,73 г, 22,0 ммоль) в диоксане (100,0 мл) и воде (100,0 мл) добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (4,80 г, 22,0 ммоль) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали в течение 14 ч. Диоксан удаляли в вакууме. Осадок отфильтровывали и фильтрат концентрировали в вакууме досуха. Остаток растирали с Е10Ас и затем отфильтровывали. Фильтрат концентрировали в вакууме досуха, получая смесь 41-1-амино-2(1,1-диметилэтокси) карбониламинопропана и 41-2-амино-1-(1,1-диметилэтокси)карбониламинопропана, которые не удалось разделить обычными методами хроматографии. Смесь использовали для реакции в примере 8.

Получение 13. К раствору Бтοс-β-А1а-ΟН (1,0 г, 3,212 ммоль) и оксалилхлорида (0,428 г, 0,29 мл, 3,373 ммоль) в дихлорметане (20,0 мл) добавляли несколько капель ^№диметилформамида при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч с последующим добавлением циклопропилметиламина (0,229 г, 0,28 мл, 3,212 ммоль) и триэтиламина (0,65 г, 0,90 мл, 6,424 ммоль). Через 10 мин смесь обрабатывали 1М гидрохлоридом (10,0 мл) и водную смесь экстрагировали дихлорметаном (3x30,0 мл). Органический раствор концентрировали в вакууме досуха. Остаток растирали с 20%-ным раствором пиперидина в ^^диметилформамиде (20,0 мл) в течение 0,5 ч. После удаления растворителя в вакууме остаток растирали с 1М хлористым водородом (20,0 мл) и этилацетатом (20,0 мл). Смесь разделяли и водный слой подщелачивали твердым гидроксидом натрия до рН 8.

Осадок удаляли фильтрованием и водный слой подвергали ионообменной колоночной хроматографии, элюируя 20% пиридином, получая 0,262 г (57%) амида N-циклопропилметил-β-аланина. ¹Н-ЯМР (200 МГц, (Ό_;0Ι)) δ 0,22 (м, 2Н), 0,49 (м, 2Н), 0,96 (м, 2Н), 2,40 (т, 2Н), 2,92 (т, 2Н), 3,05 (д, 2Н); массспектр (Е8): 143,1 (М⁺+1).

Получение 14. №трет-Бутоксикарбонил-транс-1,4-диаминоциклогексан. Транс-1,4- диаминоциклогексан (6,08 г, 53,2 ммоль) растворяли в дихлорметане (100 мл). Через канюлю добавляли раствор дитрет-бутил-дикарбоната (2,32 г, 10,65 ммоль в 40 мл дихлорметана). Через 20 ч реакционную смесь распределяли между СНС1₃ и водой. Слои разделяли и водный слой экстрагировали СНС1₃ (3х). Объединенные органические слои сушили над Мд80₄, фильтровали и концентрировали, получая 1,20 г белого твердого вещества (53%). ’Н-ЯМР (200 МГц, С1)(Ъ) δ 1,0-1,3 (м, 4Н), 1,44 (с, 9Н), 1,8-2,1 (м, 4Н), 2,62 (ушир.м, 1Н), 3,40 (ушир.с, 1Н), 4,37 (ушир.с, 1 НО); масс-спектр (Е8): 215,2 (М+1).

4-(№Ацетил)-Н-трет-бутоксикарбонил-транс-1,4-диаминоциклогексан.

№трет-Бутоксикарбонил-транс-1,4-диаминоциклогексан (530 мг, 2,47 ммоль) растворяли в дихлорметане (20 мл). Добавляли по каплям уксусный ангидрид (250 мг, 2,60 ммоль). Через 16 ч реакционную смесь разбавляли водой и СНС1₃. Слои разделяли и водный слой экстрагировали СНС1₃ (3х). Объединенные органические слои сушили над Мд80₄, фильтровали и концентрировали. Перекристаллизация (Е10Н/Н₂0) давала 190 мг белых кристаллов (30%). ’Н-ЯМР (200 МГц, СОС1_;) δ 0,9-1,30 (м, 4Н), 1,43 (с, 9Н), 1,96-2,10 (м, 7Н), 3,40 (ушир.с, 1Н), 3,70 (ушир.с, 1Н), 4,40 (ушир.с, 1Н), 4, 40 (ушир.с, 1Н); массспектр (Е8) : 257,2 (М⁺ + 1), 242.1 (М⁺-15), 201,1 (М⁺-56).

4-(4-транс-Ацетамидоциклогексил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-(1-фенилэтил)пирроло[2,3-4] пиримидин.

4-(№Ацетил)-Н-трет-бутоксикарбонил-транс-1,4-диаминоциклогексан (190 мг, 0,74 ммоль) растворяли в дихлорметане (5 мл) и разбавляли ТФУК (6 мл). Через 16 ч реакционную смесь концентрировали. Неочищенное твердое вещество, ДМСО (2 мл), NаНС0₃ (200 мг, 2,2 ммоль) и 4-хлор-5,6-диметил-2фенил-7Н-пирроло[2,3-4]пиримидин (35 мг, 0,14 ммоль) объединяли в колбе и нагревали до 130°С. Через 4,5 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли Е10Ас и водой. Слои разделяли и водный слой экстрагировали Е10Ас (3х). Объединенные органические слои сушили над Мд80₄, фильтровали и концентрировали. Хроматография (препаративная пластина с силикагелем; 20:1, СНС1₃:Е10Н) давала 0,3 мг золотисто-коричневого твердого вещества (1% выход). Масс-спектр (Е8):

378.2 (М⁺+1).

4-(№Метансульфонил)-И-трет-бутоксикарбонил-транс-1,4-диаминоциклогексан.

Транс-1,4-диаминоциклогексан (530 мг, 2,47 ммоль) растворяли в дихлорметане (20 мл) и разводили пиридином (233 мг, 3,0 ммоль). Добавляли по каплям метансульфонилхлорид (300 мг, 2,60 ммоль). Через 16 ч реакционную смесь разбавляли водой и СНС13. Слои разделяли и водный слой экстрагировали СНС1₃ (3х). Объединенные органические слои сушили над Мд80₄, фильтровали и концентрировали. Перекристаллизация (Е10Н/Н₂0) давала 206 мг белых кристаллов (29%). ’Н-ЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,101,40 (м, 4Н), 1,45 (с, 9Н), 2,00-2,20 (м, 4Н), 2,98 (с, 3Н), 3,20-3,50 (ушир.с, 2Н), 4,37 (ушир.с, 1Н); массспектр (Е8) : 293,1 (М⁺ + 1), 278,1 (М⁺-15), 237,1 (М⁺-56).

4-(4-транс-Метансульфамидоциклогексил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-(1-фенилэтил)пирроло [2,3-ά] пиримидин.

4-(№Сульфонил)-Н-трет-бутоксикарбонил-транс-1,4-диаминоциклогексан (206 мг, 0,71 ммоль) (5 мл) и разбавляли ТФУК (6 мл). Через 16 ч реакционную смесь концентрировали. Неочищенную реакционную смесь, ДМСО (2 мл), NаНС0₃ (100 мг, 1,1 ммоль) и 4-хлор-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3

- 43 007254

б]пиримидин (35 мг, 0,14 ммоль) объединяли в колбе и нагревали до 130°С. Через 15 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли ЕЮАс (3х). Объединенные органические слои сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали. Хроматография (препаративная пластина с силикагелем; 20:1, СНС1₃:ЕЮН) давала 2,6 мг золотисто-коричневого твердого вещества (5% выход). Массспектр (Е8): 414,2 (М⁺+1).

Пример 1. Раствор 4-хлор-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина (0,50 г, 1,94 ммоль) и 4-транс-гидроксициклогексиламина (2,23 г, 19,4 ммоль) в метилсульфоксиде (10,0 мл) нагревали при 130°С в течение 5 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли воду (10,0 мл) и полученный водный раствор экстрагировали ЕЮАс (3x10,0 мл). Объединенный ЕЮАс раствор сушили (Мд8О₄), фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме досуха, остаток хроматографировали на силикагеле, получая 0,49 г (75%) 4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б] пиримидина. Т.пл. 197-199°С; ^!Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 1,25-1,59 (м, 8Н), 2,08 (с, 3Н), 2,29 (с, 3Н), 3,68-3,79 (м, 1Н), 4,32-4,38 (м, 1Н), 4,88 (д, 1=8 Гц, 1Н), 7,26-7,49 (м, 3Н), 8,40-8,44 (дд, 1=2,2, 8 Гц, 2Н), 10,60 (с, 1Н); масс-спектр (Е8) : 337,2 (М⁺+1).

Следующие соединения были получены способом, аналогичным описанному в примере 1:

4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-6-метил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-ά] пиримидин. ¹Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 11,37 (с, 1Н, пиррол-ПН), 8,45 (м, 2Н, Аг-Н), 7,55 (м, 3Н, Аг-Н), 6,17 (с, 1Н, пирролН), 4,90 (ушир.д, 1Н, ΝΉ), 4,18 (м, 1Н, СН-О), 3,69 (м, 1Н, СН-Ν), 2,40-2,20 (м, 2Н), 2,19-1,98 (м, 2Н), 2,25 (с, 3Н, СН₃), 1,68-1,20 (м, 4Н); масс-спектр (Е8): 323,2 (М⁺+1);

4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-5-метил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-ά] пиримидин. ¹Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) δ 11,37 (с, 1Н, пиррол-ΝΉ), 8,40 (м, 2Н, Аг-Н), 7,45 (м, 3Н, Аг-Н), 5,96 (с, 1Н, пирролН), 4,90 (ушир.д, 1Н, N4), 4,18 (м, 1Н, СН-О), 3,69 (м, 1Н, СН-Ν), 2,38-2,20 (м, 2Н), 2,18-1,98 (м, 2Н) 2,00 (с, 3Н, СН₃), 1,68-1,20 (м, 4Н); масс-спектр (Е8): 323,1 (М⁺+1);

4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина. Т.пл. 245,5246,5°С; ^!Н-ЯМР (200 МГц, СП₃0П) δ 8,33 (м, 2Н, Аг-Н), 7,42 (м, 3Н, Аг-Н), 7,02 (д, 1Н, 1=3,6 Гц, пиррол-Н), 6,53 (д, 1Н, 1=3,6 Гц, пиррол-Н), 4,26 (м, 1Н, СН-О), 3,62 (м, 1Н, СН-Ν), 2,30-2,12 (м, 2Н), 2,121,96 (м, 2Н), 1,64-1,34 (м, 4Н); масс-спектр М+1=309,3; Элементный анализ (С^гоЩО) С, Н, Ν;

4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-(3-пиридил)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. ^!Н -ЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,21-1,54 (м, 8Н); 2,28 (с, 3Н); 2,33 (с, 3Н); 3,70 (м, 1Н), 4,31 (м, 1Н), 4,89 (д, 1Н), 7,40 (м, 1Н), 8,61 (м, 2Н), 9,64 (м, 1Н); масс-спектр (Е8): 338,2 (М⁺+1);

4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-(2-фурил)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. ¹НЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,26-1,64 (м, 8Н), 2,22 (с, 3Н), 2,30 (с, 3Н), 3,72 (м, 1Н), 4,23 (м, 1Н), 4,85 (д, 1Н), 6,52 (м, 1Н), 7,12 (м, 1Н), 7,53 (м, 1Н), 9,28 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 327,2 (М⁺+1);

4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-(3-фурил)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. ¹НЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,25-1,63 (м, 8 Н), 2,11 (с, 3Н), 2,27 (с, 3Н), 3,71 (м, 1Н), 4,20 (м, 1Н), 4,84 (д, 1Н), 7,03 (м, 1Н), 7,45 (м, 1Н), 8,13 (м, 1Н), 10,38 (м, 1Н); масс-спектр (Е8): 327,2 (М+1);

4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-циклопентил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. ^!Н -ЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,26-2,04 (м, 16 Н), 2,26 (с, 3Н), 2, 27 (с, 3Н), 3,15 (м, 1Н), 3,70 (м, 1Н), 4,12 (м, 1Н), 4,75 (д, 1Н); масс-спектр (Е8) : 329,2 (М+1);

4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-5, 6-диметил-2-(2-тиенил)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4амин. ^!Н-ЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,28-1,59 (м, 8Н), 2,19 (с, 3Н), 2,29 (с, 3Н), 3,74 (м, 1Н), 4,19 (м, 1Н), 4,84 (д, 1Н), 7,09 (м, 1Н), 7,34 (м, 1Н), 7,85 (м, 1Н), 9,02 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 343,2 (М⁺+1);

4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-(3-тиенил)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. ¹Н -ЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,21-1,60 (м, 8Н), 1,98 (с, 3Н), 2,23 (с, 3Н), 3,66 (м, 1Н), 4,22 (м, 1Н), 7,27 (м, 1Н), 7,86 (м, 1Н), 8,09 (м, 1Н), 11,23 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 343,2 (М⁺+1);

4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-(4-фторфенил)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. ^!Н-ЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,26-1,66 (м, 8Н), 1,94 (с, 3Н), 2,28 (с, 3Н), 3,73 (м, 1Н), 4,33 (м, 1Н), 4,92 (д, 1Н), 7,13 (м, 2Н), 8,41 (м, 2Н), 11,14 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 355,2 (М⁺+1);

4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-(3-фторфенил)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. '11 -ЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,26-1,71 (м, 8Н), 2,06 (с, 3Н), 2,30 (с, 3Н), 3,72 (м, 1Н), 4,30 (м, 1Н), 4,90 (д, 1Н), 7,09 (м, 1Н), 7,39 (м, 1Н), 8,05 (м, 1Н), 8,20 (м, 1Н), 10,04 (с. 1Н); масс-спектр (Е8): 355,2 (М⁺+1);

4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-(2-фторфенил)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. Ίί-ЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,30-1,64 (м, 8Н), 2,17 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н), 3,73 (м, 1Н), 4,24 (м, 1Н), 4,82 (д, 1Н), 7,28 (м, 2Н), 8,18 (м, 1Н), 9,02 (м, 1Н), 12,20 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 355,3 (М⁺+1);

4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-изопропил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. ^!Н -ЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,31 (д, 1=7,0 Гц, 6Н), 1,30-1,65 (м, 8Н), 2,27 (с, 3Н), 2,28 (с, 3Н), 3,01 (м, 1=7,0 Гц, 1Н), 3,71 (м, 1Н), 4,14 (м, 1Н), 4,78 (д, 1Н); масс-спектр (Е8): 303,2 (М+1);

б1-4-(2-транс-гидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-изопропил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин.

¹ Н-ЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,31-1,42 (ушир., 4Н), 1,75-1,82 (ушир., 4Н), 2,02 (С, 3Н), 2,29 (с, 3Н), 3,53 (м, 1Н), 4,02 (м, 1Н), 5,08 (д, 1Н), 7,41-7,48 (м, 3Н), 8,30 (м, 2Н), 10,08 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 337,2

- 44 007254 (М⁺+1). 4-(3,4-транс-дигидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3Ш]пиримидин. Масс-спектр (Е8): 353,2 (М⁺+1);

4-(3,4-цис-дигидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин. Масс-спектр (Е8): 353,2 (М⁺+1);

4-(2-ацетиламиноэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-ά] пиримидин. Т.пл. 196-199°С; ¹Н -ЯМР (200 МГц, СОС1_;) δ 1,72 (с, 3Н), 1,97 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н), 3,59 (м, 2Н), 3,96 (м, 2Н), 5,63 (ушир., 1Н), 7,44-7,47 (м, 3Н), 8,36-8,43 (дд, 1=1 Гц, 7 Гц, 2Н), 10,76 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 324,5 (М⁺+1);

й1-4-(2-транс-гидроксициклопентил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-ά] пиримидин. ¹Н -ЯМР (200 МГц, С1)С1₃) δ 1,62 (м, 2Н), 1,79 (ушир., 4Н), 1,92 (с, 3Н), 2,29 (с, 3Н), 4,11 (м, 1Н), 4,23 (м, 1Н), 5,28 (д, 1Н), 7,41-7,49 (м, 3Н), 8,22 (м, 2Н), 10,51 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 323,2 (М⁺+1).

Для получения 2-транс-гидроксициклопентиламина смотри РСТ 9417090. 01-4-(3-трансТидроксициклопентил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин.

Ή-ЯМР (200 МГц, С1)С1₃) δ 1,58-1,90 (ушир., 6Н,), 2,05 (с, 3Н), 2,29 (с, 3Н), 4,48-4,57 (м, 1Н), 4,91-5,01 (м, 2Н), 7,35-7,46 (м, 3Н), 8,42-8, 47 (м, 2Н), 10,11 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 323,2 (М⁺+1).

Для получения 3-транс-гидроксициклопентиламина смотри ЕР-А-322242. 01-4-(3-цисТидроксициклопентил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин.

Ή-ЯМР (200 МГц, С1)С1₃) δ 1,82-2,28 (Ьг, 6Н), 2,02 (с, 3Н), 2,30 (с, 3Н), 4,53-4,60 (м, 1Н), 4,95-5,08 (м, 1Н), 5,85-5,93 (д, 1Н), 7,35-7,47 (м, 3Н), 8,42-8,46 (м, 2Н), 10,05 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 323,2 (М⁺+1).

Для получения 3-цис-гидроксициклопентиламина смотри ЕР-А-322242. 4-(3,4-транс-Дигидроксициклопентил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин. Ή-ЯМР (200 МГц, СОС1_;) 6 1,92-1,99 (ушир., 2Н), 2,14 (с, 3Н), 2,20 (ушир., 2Н), 2,30 (с, 3Н), 2,41-2,52 (ушир., 2Н), 4,35 (м, 2Н), 4,98 (м, 2Н), 7,38-7,47 (м, 3Н), 8,38-8,42 (м, 2Н), 9,53 (с, 1Н); масс-спектр (Е8):

339,2 (М⁺+1).

Для получения 3,4-транс-дигидроксициклопентиламина смотри РСТ 9417090.

4-(3-Амино-3-оксопропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин. ¹Н -ЯМР (200 МГц, С1)С1₃) δ 2,02 (с, 3Н), 2,29 (с, 3Н), 2,71 (т, 2Н), 4,18 (м, 2Н), 5,75-5,95 (м, 3Н), 7,38-7,48 (м, 3Н), 8,378,41 (м, 2Н), 10,42 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 310,1 (М⁺+1).

4-(3-Ы-Циклопропилметиламино-3-оксопропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3Ш]пиримидин. ¹Н -ЯМР (200 МГц, С1)С1₃) δ 0,51 (кв, 2Н), 0,40 (кв, 2Н), 1,79-1,95 (ушир., 1Н), 2,36 (с, 3Н), 2,40 (с, 3Н), 2,72 (т, 2Н), 2,99 (д, 2Н), 4,04 (т, 2Н), 7,58-7,62 (м, 3Н), 8,22-8,29 (м, 2Н); масс-спектр (Е8): 364,2 (М⁺+1).

4-(2-Амино-2-оксоэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин. Ή-ЯМР (200 МГц, С1)С1₃) δ 2,31 (с, 3Н), 2,38 (с, 3Н), 4,26 (с, 2Н), 7,36 (м, 3Н), 8,33 (м, 2Н); масс-спектр (Е8): 396,1 (М⁺+1).

4-(2-Ы-Метиламино-2-оксоэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3Ш]пиримидин. Ή-ЯМР (200 МГц, С1)С1₃) δ 1,99 (с, 3Н), 2,17, (с, 3Н), 2,82 (д, 3Н), 4,39 (д, 2Н), 5, 76 (т, 1Н), 6,71 (ушир., 1Н),

7,41-7,48 (м, 3Н), 8,40 (м,-4Н), 1-0,66 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 310,1 (М⁺+1).

4-(3-трет-Бутилоксил-3-оксопропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3Ш]пиримидин. Ή-ЯМР (200 МГц, С1)С1₃) δ 1,45 (с, 9Н), 1,96 (с, 3Н), 2,29 (с, 3Н), 2,71 (т, 2Н), 4,01 (кв, 2Н), 5,78 (т, 1Н),

7,41-7,48 (м, 3Н), 8,22-8,29 (м, 2Н); масс-спектр (Е8) : 367,2 (М⁺+1).

4-(2-Гидроксиэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-ά] пиримидин. Ή-ЯМР (200 МГц, С0С1_;) δ 1,92 (с, 3Н), 2,29 (с, 3Н), 3,81-3,98 (ушир., 4Н), 5, 59 (т, 1Н), 7,39-7,48 (м, 3Н), 8,37 (м, 2Н), 10,72 (с, 1Н); масс-спектр (Е8) : 283,1 (М⁺+1).

4-(3-Гидроксипропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3Ш]пиримидин. Ή-ЯМР (200 МГц, С0С1_;) δ 1,84 (м, 2Н), 1,99 (с, 3Н), 2,32 (с, 3Н), 3,62 (т, 2Н), 3,96 (м, 2Н), 3,35 (т, 1Н), 7,39-7,48 (м, 3Н), 8,36 (м, 2Н), 10,27 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 297,2 (М⁺+1).

4-(2-гидроксибутил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3Ш]пиримидин. Ή-ЯМР (200 МГц, С1Х'1₃) δ 1,71-1,82 (м, 4Н), 1,99 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н), 3,68-3,80 (м, 4Н), 5,20 (т, 1Н), 7,41-7,49 (м, 3Н), 8,41 (м, 2Н), 10,37 (с, 1Н); масс-спектр (Е8) : 311,2 (М⁺+1).

4-(4-транс-Ацетиламиноциклогексил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3Ш]пиримидин.

4-(4-транс-Метилсульфониламиноциклогексил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3Ш]пиримидин.

4-(2-Ацетиламиноэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3Ш]пиримидин.

4-(4-транс-Гидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-(1-фенилэтил)пирроло[2,3Ш]пиримидин.

4-(3-Пиридилметил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3Ш]пиримидин. 4-(2-Метилпропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-7-(1-фенилэтил)пирроло[2,3Ш]пиримидин.

Пример 2. К перемешиваемой суспензии трифенилфосфина (0,047 г, 0,179 ммоль) и бензойной кислоты (0,022 г, 0,179 ммоль) в ТГФ (1,0 мл), охлажденной до 0°С, добавляли 4-(4-транс-гидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3Ш]пиримидин (0,05 г, 0,149 ммоль) при 0°С. Затем добавляли по каплям в течение 10 мин диэтилазодикарбоксилат (0,028 мл, 0,179 ммоль). Реакци

- 45 007254 онную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры. После завершения реакции по ТСХ реакционную смесь гасили водным раствором бикарбоната натрия (3,0 мл). Водную фазу отделяли и экстрагировали эфиром (2х5,0 мл). Органические экстракты объединяли, сушили и концентрировали в вакууме досуха. К остатку добавляли эфир (2,0 мл) и гексан (5,0 мл), после чего объемный осадок трифенилфосфиноксида отфильтровывали. Концентрирование фильтрата давало вязкое масло, которое очищали колоночной хроматографией (гексан:этилацетат=4:1), получая 5,0 мг (7,6%) 4-(4-цис-бензоилоксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина. Масс-спектр (ЕБ): 441,3 (М⁺+1). Реакция также давала 50,0 мг (84%) 4-(3-циклогексенил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-б]пиримидина. Масс-спектр (ЕБ) : 319,2 (М⁺+1).

Пример 3. К раствору 4-(4-цис-бензоилоксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-б] пиримидина (5,0 мг, 0,0114 ммоль) в этаноле (1,0 мл) добавляли 10 капель 2М гидроксида натрия. Через 1 ч реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (3 х 5,0 мл) и органический слой сушили, фильтровали и концентрировали в вакууме досуха. Остаток подвергали колоночной хроматографии (гексан:этилацетат=4:1), получая 3,6 мг (94%) 4-(4-цис-гидроксициклогексил)амино-5,6-диметил-2-фенил7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина. Масс-спектр (ЕБ): 337,2 (М⁺+1).

Следующие соединения получали способом, аналогичным описанному в примере 3: 4-(3-^№диметил-3-оксопропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин.

¹ Н-ЯМР (200 МГц, СНС1_;) δ 2,01 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н), 2,73 (т, 2Н), 2,97 (с, 6Н), 4,08 (м, 2Н), 6,09 (т, 1Н),

7,41-7,48 (м, 3Н), 8,43 (м, 2Н), 10,46 (с, 1Н); масс-спектр (ЕБ): 338,2 (М⁺+1).

4-(2-Формиламиноэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-б] пиримидин. ¹Н-ЯМР (200 МГц, СИС1₃) δ 2,26 (с, 3Н), 2.37 (с, 3Н), 3,59-3,78 (м, 2Н), 3,88-4,01 (м, 2Н), 5,48-5,60 (м, 1Н), 7,38-7,57 (м, 3Н), 8,09 (с, 1Н), 8,30-8,45 (м, 2Н), 8,82 (с, 1Н); масс-спектр (ЕБ): 310,1 (М⁺+1).

4-(3-Ацетиламинопропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. Масс-спектр (ЕБ): 338,2 (М⁺+1).

Пример 4. 4-(3-трет-Бутилокси-3-оксопропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин (70,0 мг, 0,191 ммоль) растворяли в смеси трифторуксусная кислота:дихлорметан (1:1, 5,0 мл). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, а затем нагревали при кипении с обратным холодильником в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь концентрировали в вакууме досуха. Остаток подвергали препаративной тонкослойной хроматографии (ЕЮАс:гексан:АсОН=7:2,5:0,5), получая 40,0 мг (68%) 4-(3-гидрокси-3-оксопропил)амино-5,6-диметил2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, СО₃ОЭ) δ 2,32 (с, 3Н), 2.38 (с, 3Н), 2,81 (т, 2Н), 4,01 (т, 2Н), 7,55 (м, 3Н), 8,24 (м, 2Н); масс-спектр (ЕБ): 311,1 (М⁺+1).

Следующее соединение получали способом, аналогичным описанному в примере 4: 4-(3-аминопропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-3]пиримидин. Масс-спектр (ЕБ) : 296,1 (М⁺+1), 279, 1 (^-N43).

Пример 5. 4-(3-Гидрокси-3-оксопропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин (50,0 мг, 0,161 ммоль) растворяли в смеси Ν,Ν-диметилформамида (0,50 мл), диоксана (0,50 мл) и воды (0,25 мл). К этому раствору добавляли метиламин (0,02 мл, 40 вес.% в воде, 0,242 ммоль), триэтиламин (0,085 мл) и тетрафторборат Ν,Ν,Ν',Ν'-тетраметилурония (61,2 мг, 0,203 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 10 мин раствор концентрировали и остаток подвергали препаративной тонкослойной хроматографии (ЕЮАс), получая 35,0 мг (67%) 4-(3-№метил-3-оксопропил)амино-

5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина. ¹Н-ЯМР (200 МГц, СЭзОЭ) δ 1,92 (с, 3Н), 2,30 (с, 3Н), 2,65 (т, 2Н), 4,08 (т, 2Н), 5,90 (т, 1Н), 6,12 (м, 1Н), 7,45 (м, 3Н), 8,41 (м, 2Н), 10,68 (с, 1Н); массспектр (ЕБ): 311,1 (М⁺+1).

Следующие соединения получали способом, аналогичным описанному в примере 5: 4-(2-циклопропанкарбониламиноэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. Масс-спектр (ЕБ): 350,2 (М+1);

4-(2-изобутириламиноэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. Масс-спектр (ЕБ): 352,2 (М+1);

4-(3-пропиониламинопропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-б] пиримидин. ¹Н -ЯМР (200 МГц, СНС1_;) δ 1,00-1,08 (т, 3Н), 1,71-2,03 (м, 4Н), 2,08 (с, 3Н), 2,37 (с, 3Н), 3,26-3,40 (м, 2Н), 3,793,96 (м, 2Н), 5,53-5,62 (м, 1Н), 6,17-6,33 (м, 1Н), 7,33-7,57 (м, 3Н), 8,31-8,39 (м, 2Н), 9,69 (с, 1Н); массспектр (ЕБ): 352,2 (М+1);

4-(2-метилсульфониламиноэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-б] пиримидин. ¹Н ЯМР (200 МГц, СН_;С1) δ 2,18 (с, 3Н), 2,27 (с, 3Н), 2,92 (с, 3Н), 3,39-3,53 (м, 2Н), 3,71-3,88 (м, 2Н), 5,315,39 (м, 1Н), 6,17-6,33 (м, 1Н), 7,36-7,43 (м, 3Н), 8,20-8,25 (м, 2Н), 9,52 (с, 1Н); масс-спектр (ЕБ): 360,2 (М⁺+1).

Пример 6. Смесь 4-хлор-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина (0,70 г, 2,72 ммоль) и 1,2-диаминоэтана (10,0 мл, 150 ммоль) нагревали при кипении с обратным холодильником в инертной атмосфере в течение 6 ч. Избыток амина удаляли в вакууме, остаток промывали последовательно эфиром

- 46 007254 и гексаном, получая 0,75 г (98%) 4-(2-аминоэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина. Масс-спектр (Е8) : 265,1 (М'-НН₃).

Пример 7. К раствору 4-(2-аминоэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина (70,0 мг, 0,249 ммоль) и триэтиламина (50,4 мг, 0,498 ммоль) в дихлорметане (2,0 мл) добавляли пропионилхлорид (25,6 мг, 0,024 мл, 0,274 ммоль) при 0°С. Через 1 ч смесь концентрировали в вакууме и остаток подвергали препаративной тонкослойной хроматографии (Е!ОАс), получая 2,0 мг (26%) 4-(2пропиониламиноэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина. Масс-спектр (Е8):

338.2 (М⁺+1).

Следующие соединения получали способом, аналогичным описанному в примере 7:

4-(2-№-метилуреаэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-б] пиримидин. ¹Н-ЯМР (200 МГц, СОС1_;) δ 2,13 (с, 3Н), 2,32 (с, 3Н), 3,53 (д, 3Н), 3,55 (м, 2Н), 3,88 (м, 2Н), 4,29 (м, 1Н), 5,68 (т, 1Н), 5,84 (м, 1Н), 7,42 (м, 3Н), 8,36 (дд, 2Н), 9,52 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 339,3 (М⁺+1);

4-(2-№-этилуреаэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. Масс-спектр (Е8):

353.2 (М⁺+1).

Пример 8. К раствору гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (41,1 мг, 0,215 ммоль), диметиламинопиридина (2,4 мг, 0,020 ммоль) и пировиноградной кислоты (18,9 мг, 0,015 мл, 0,215 ммоль) в дихлорметане (2,0 мл) добавляли 4-(2-аминоэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Нпирроло[2,3-б]пиримидин (55,0 мг, 0,196 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Обычная обработка и колоночная хроматография (Е!ОАс) затем давали 10,0 мг (15%) 4-(2'пирувиламидоэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина. Масс-спектр (Е8): 352,2 (М⁺+1).

Пример 9. К раствору 4-(2-аминоэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина (60,0 мг, 0,213 ммоль) в дихлорметане (2,0 мл) добавляли №триметилсилилизоцианат (43,3 мг, 0,051 мл, 0,32 0 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч с последующим добавлением водного раствора бикарбоната натрия. После фильтрования через небольшое количество силикагеля фильтрат концентрировали в вакууме досуха, получая 9,8 мг (14%) 4-(2-уреаэтил)амино-5,6-диметил2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина. Масс-спектр (Е8): 325,2 (М⁺+1).

Следующие соединения получали способом, аналогичным описанному в примере 9:

б1-4-(2-ацетиламинопропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, СОС1_;) δ 1,28-1,32 (д, 1=8 Гц,3 Н), 1,66 (с, 3Н), 1,96 (с, 3Н), 2,30 (с, 3Н) 3,76-3,83 (м, 2Н), 4,104,30 (м, 1Н), 5,60-5,66 (т, 1=6 Гц, 1Н), 7,40-7,51 (м, 3Н), 8,36-8,43 (м, 2Н), 10,83 (с, 1Н); масс-спектр (Е8) :

338.2 (М⁺+1).

(В)-4-(2-ацетиламинопропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, СОС1_;) δ 1,31 (д, 3Н), 1,66 (с, 3Н) 1,99 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н), 3,78-3,83 (м, 2Н), 4,17-4,22 (м, 1Н), 5,67 (т, 1Н), 7,38-7,5 (м, 3Н), 8,39 (м, 2Н), 10,81 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 338,2 (М⁺+1).

(В)-4-(1-метил-2-ацетиламиноэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. ¹НЯМР (200 МГц, СОС1_;) δ 1,41 (д, 3Н), 1,68 (с, 3Н), 2,21 (с, 3Н), 2,34 (с, 3Н), 3,46-3,52 (ушир. м, 2Н), 4,73 (м, 1Н), 5,22 (д, 1Н), 7,41-7,46 (м, 3Н), 8,36-8,40 (м, 2Н), 8,93 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 338,2 (М⁺+1).

(8)-4-(2-ацетиламинопропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, СОС1_;) δ 1,31 (д, 3Н), 1.66 (с, 3Н) 2,26 (с, 3Н), 2,35 (с, 3Н), 3,78-3,83 (м, 2Н), 4,17-4,22 (м, 1Н), 5,67 (т, 1Н), 7,38-7,5 (м, 3Н), 8,39 (м, 2Н), 8.67 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 338,2 (М⁺+1).

(8)-4-(1-метил-2-ацетиламиноэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. ¹НЯМР (200 МГц, СОС1_;) δ 1,41 (д, 3Н), 1,68 (с, 3Н), 2,05 (с, 3Н), 2,32 (с, 3Н), 3,46-3,52 (м, 2Н), 4,73 (м, 1Н), 5,22 (д, 1Н), 7,41-7,46 (м, 3Н), 8,36-8, 40 (м, 2Н), 10,13 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 338,2 (М⁺+1).

Пример 10. Взаимодействие 4-хлор-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина со смесью б1-1-амино-2-( 1,1-диметилэтокси)карбониламинопропана и б1-2-амино-1 -(1,1-диметилэтокси)карбониламинопропана проводили способом, аналогичным описанному в примере 1. Реакция давала смесь б1-4-(1метил-2-(1,1-диметилэтокси)карбониламино)этиламино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидина и б1-4-(2-метил-2-(1,1-диметилэтокси)карбониламино)этиламино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-б] пиримидина, которые разделяли колоночной хроматографией (Е!ОАс:гексаны=1:3). Первая фракция представляла собой б1-4-(1-метил-2-(1,1-диметилэтокси)карбониламиноэтил)амино-5,6-диметил-2фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин. 'Н-ЯМР (200 МГц, СОС1_;) δ 1,29-1,38 (м, 12Н), 1,95 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н) 3,34-3,43 (м, 2Н), 4,62-4,70 (м, 1Н), 5,36-5,40 (д, 1=8 Гц, 1Н), 5,53 (ушир., 1Н), 7,37-7, 49 (м, 3Н), 8,378,44 (м, 2Н), 10,75 (с, 1Н). Масс-спектр (Е8): 396,3 (М⁺+1). Вторая фракция представляла собой б1-4-(2(1,1 -диметилэтокси)карбониламинопропил) амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3 -б] пиримидин. ¹ Н-ЯМР (200 МГц, СНС1_;) δ 1,26-1,40 (м, 12 Н), 2,00 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н) 3,60-3,90 (м, 2Н), 3,95-4,10 (м, 1Н), 5,41-5,44 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 5,65 (ушир., 1Н), 7,40-7,46 (м, 3Н), 8,37-8,44 (м, 2Н), 10,89 (с, 1Н); массспектр (Е8): 396,2 (М⁺+1).

Следующие соединения получали способом, аналогичным описанному в примере 10:

- 47 007254 (8,8)-4-(2-ацетиламиноциклогексил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-6] пиримидин. ¹НЯМР (200 МГц, СЭСЕ) δ 1,43 (м, 4Н), 1,60 (с, 3Η), 1,83 (м, 2Н), 2,18 (с, 3Η), 2,30 (м, 2Н), 2,32 (с, 3Η), 3,73 (ушир., 1Н), 4,25 (ушир., 1Н), 5,29 (д, 1Н), 7,43-7,48 (м, 3Η), 8,35-8,40 (м, 2Н), 9,05 (с, 1Н).

4-(2-метил-2-ацетиламинопропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-6] пиримидин. ¹НЯМР (200 МГц, СЕС1_;) δ 1,51 (с, 6Н), 1,56 (с, 3Η), 2,07 (с, 3Η), 2,36 (с, 3Η), 3,76 (д, 2Н), 5,78 (т, 1Н), 7,417,48 (м, 3Η), 7,93 (с, 1Н), 8,39 (м, 2Н), 10,07 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 352,3 (М+1).

Пример 11. 61-4-(1-Метил-2-(1,1-диметилэтокси)карбониламиноэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин (60,6 мг, 0,153 ммоль) обрабатывали трифторуксусной кислотой (0,5 мл) в дихлорметане (2,0 мл) в течение 14 ч. Органический растворитель удаляли в вакууме досуха. Остаток растворяли в Ν,Ν-диметилформамиде (2,0 мл) и триэтиламине (2,0 мл). К раствору при 0°С добавляли уксусный ангидрид (17,2 мг, 0,169 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 ч, а затем концентрировали в вакууме досуха. Остаток подвергали препаративной тонкослойной хроматографии (ЕЮАс), получая 27,0 мг (52%) 61-4-(1-метил-2-ацетиламиноэтил)амино-5,6диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6] пиримидин. ’Н-ЯМР (200 МГц, СЭСЕ) δ 1,38-1,42 (д, ί=8 Гц, 3Η),

1,69 (с, 3Н), 2,01 (с, 3Н), 2,32 (с, 3Н) 3,38-3,60 (м, 2Н), 4,65-4,80 (м, 1Н), 5,23-5,26 (д, 1=6 Гц, 1Н), 7,407,51 (м, 3Н), 8,37-8,43 (м, 2Н), 10,44 (с, 1Н); масс-спектр (Е8) : 338,2 (М⁺+1).

Пример 12. (К,К)-4-(2-Аминоциклогексил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин, полученный способом, аналогичным описанному в примере 1, из 4-хлор-5,6-диметил-2-фенил-7Нпирроло[2,3-6]пиримидина (0,15 г, 0,583 ммоль) и (1К,2К)-(-)-1,2-диаминоциклогексана (0,63 г, 5,517 ммоль), обрабатывали триэтиламином (0,726 г, 7,175 ммоль) и уксусным ангидридом (0,325 г, 3,18 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (10,0 мл) при комнатной температуре в течение 2 ч. После удаления растворителя в вакууме к остатку добавляли этилацетат (10,0 мл) и воду (10,0 мл). Смесь разделяли и водный слой экстрагировали этилацетатом (2x10,0 мл). Объединенный раствор в этилацетате сушили (Мд8О₄) и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме досуха и остаток подвергали колоночной хроматографии (ЕЮАс:гексан=1:1), получая 57,0 мг (26%) (К,К)-4-(2-ацетиламиноциклогексил)амино-

5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6] пиримидин. ’Н-ЯМР (200 МГц, СЭСЕ) δ 1,43 (м, 4Н), 1,60 (с, 3Н), 1,84 (м, 2Н), 2,22 (с, 3Н), 2,30 (м, 2Н), 2,33 (с, 3Н), 3,72 (ушир., 1Н), 4,24 (ушир., 1Н), 5,29 (д, 1Н), 7,43-7,48 (м, 3Н), 8,35-8,39 (м, 2Н), 8,83 (с, 1 Н); масс-спектр (Е8): 378,3 (М⁺+1).

Пример 13. К раствору 4-(2-гидроксиэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидина (40,0 мг, 0.141 ммоль) в пиридине (1,0 мл) добавляли уксусный ангидрид (0,108 г, 1,06 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч и растворитель удаляли в вакууме. Остаток подвергали препаративной тонкослойной хроматографии (ЕЮАс:гексан=1:1), получая 32,3 мг (71%) 4-(2-ацетилоксиэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-6] пиримидина. ’Н-ЯМР (200 МГц, СЕС1_;) δ 1,90 (с, 3Н), 2,08 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н), 4,05 (м, 2Н), 4,45 (т, 2Н), 5,42 (м, 1Н), 7,41-7,49 (м, 3Н), 8,42 (м, 2Н), 11,23 (с, 1Н).

Пример 14. Раствор Ешос-Р-А1а-ОН (97,4 мг, 0,313 ммоль) и оксалилхлорида (39,7 мг, 27,3 мкл, 0,313 ммоль) в дихлорметане (4,0 мл) с одной каплей Ν,Ν-диметилформамида перемешивали при 0°С в течение 1 ч с последующим добавлением 4-(2-аминоэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6] пиримидина (80,0 мг, 0,285 ммоль) и триэтиламина (57,6 мг, 79,4 мкл, 0,570 ммоль) при 0°С. Через 3 ч смесь концентрировали в вакууме и остаток растирали с 20%-ным раствором пиперидина в Ν,Νдиметилформамиде (2,0 мл) в течение 0,5 ч. После удаления растворителя в вакууме остаток промывали смесью диэтиловый эфир:гексан (1:5), получая 3,0 мг (93%) 4-(6-амино-3-аза-4-оксогексил)амино-5,6диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидина. Масс-спектр (Е8): 353,2 (М⁺+1).

Пример 15. Раствор 4-(2-аминоэтил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидина (70,0 мг, 0,249 ммоль) и янтарного ангидрида (27,0 мг, 0,274 ммоль) в дихлорметане (4,0 мл) с 1 каплей Ν,Ν-диметилформамида перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь экстрагировали 20%-ным гидроксидом натрия (3x5,0 мл). Водный раствор подкисляли 3М хлористым водородом до рН 7,0. Смесь целиком экстрагировали этилацетатом (3x10 мл). Объединенные органический раствор сушили (Мд8О₄) и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме досуха, получая 15,0 мг (16%) 4-(7-гидрокси-3-аза-4,7-диоксогептил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,36]пиримидина. Масс-спектр (Е8) : 382,2 (М⁺+1).

Пример 16. К 10 мл диметилформамида (ДМФ) при комнатной температуре добавляли 700 мг 4(цис-3-гидроксициклопентил)амино-2-фенил-5,6-диметил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидина с последующим добавлением 455 мг Ν-Вос глицина, 20 мг Ν,Ν-диметиламинопиридина (ОМАР), 293 мг гидроксибензотриазола (НОВТ) и 622 мг гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (ЕЭС1). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение ночи. ДМФ затем удаляли при пониженном давлении и реакционную смесь распределяли между 20 мл этилацетата и 50 мл воды. Водную часть экстрагировали дополнительно 2x20 мл этилацетата и объединенные органические части промывали насыщенным раствором соли, сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Очистка на силикагеле, при элюировании смесью этилацетат/гексан давала 410 мг целевого продукта: 4(цис-3-(N-трет-бутоксикарбонил-2-аминоацетокси)циклопентил)амино-2-фенил-5,6-диметил-7Н-пирроло

- 48 007254 [2,3-д]пиримидина. Масс-спектр (Е8): (М⁺+1)=480,2. Сложный эфир затем обрабатывали 5 мл 20%-ной трифторуксусной кислоты в дихлорметане при комнатной температуре, оставляли на ночь и затем концентрировали. Растирание с этилацетатом давало 300 мг не совсем белого твердого вещества; соли трифторуксусной кислоты 4-(цис-3-(2-аминоацетокси)циклопентил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-д]пиримидина. Масс-спектр (Е8): (М⁺+1)=380,1.

Специалисту в данной области будет понятно, что следующие соединения могут быть синтезированы с помощью описанных выше способов.

4-(цис-3-Гидроксициклопентил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-д]пиримидин. Массспектр (Е8): (М⁺+1)=323,1.

Соль трифторуксусной кислоты 4-(цис-3-(2-аминоацетокси)циклопентил)амино-5,6-диметил-2фенил-7Н-пирроло[2,3-д]пиримидина. Масс-спектр (Е8): (М⁺+1)=380,1.

4-(3-Ацетамидо)пиперидинил-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-д]пиримидин. Масс-спектр (Е8): (М⁺+1)=364,2.

4-(2-№-Метилуреапропил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-д]пиримидин. Масс-спектр (Е8): (М⁺+1)=353,4.

4-(2-Ацетамидобутил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-3]пиримидин. Масс-спектр (Е8): (М⁺+1)=352,4.

4-(2-№-Метилуреабутил)амино-5,6-диметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-д]пиримидин. Масс-спектр (Е8): (М⁺+1)=367,5.

4-(2-Аминоциклопропилацетамидоэтил)амино-2-фенил-7Н-пирроло [2,3-д]пиримидин. Масс-спектр (Е8): (М⁺+1)=309,1.

4-(транс-4-Гидроксициклогексил)амино-2-(3-хлорфенил)-7Н-пирроло[2,3-д]пиримидин. Массспектр (Е8) : (М⁺+1) =342,8.

4-(транс-4-Гидроксициклогексил)амино-2-(3-фторфенил)-7Н-пирроло[2,3-д]пиримидин. Массспектр (Е8): (М⁺+1)=327,2.

4-(транс-4-Гидроксициклогексил)амино-2-(4-пиридил)-7Н-пирроло[2,3-д]пиримидин. Масс-спектр (Е8): (М⁺+1)=310,2.

Пример 17.

Схема IX

Азот пиррола (7) (схема IX) защищали ди-трет-бутилдикарбонатом в щелочной среде, получая соответствующий карбамат (22). Радикальное бромирование (22) протекало региоселективно, давая бромид (23). Обычно, соединение (23) служит ключевым электрофильным промежуточным соединением для различных нуклеофильных партнеров в реакциях сочетания. Замещение алкилбромида тригидратом фенолята натрия давало соединение (24). Последующее замещение арилхлорида и удаление третбутилкарбаматной защитной группы происходило в одну стадию, давая целевое соединение (25).

Подробный синтез соединений (22)-(25) в соответствии со схемой IX.

- 49 007254

Ди-трет-бутилдикарбонат (5,37 г, 24,б ммоль) и диметиламинопиридин (1,13 г, 9,2 ммоль) добавляли к раствору, содержащему (7) (1,50 г, б.15 ммоль) и пиридин (30 мл). Через 20 ч реакционную смесь концентрировали и остаток распределяли между СН₂С1₂ и водой. Слой, содержащий СН₂С1₂, отделяли, сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали, получая черное твердое вещество. Флэшхроматография (81О₂; 1/9 ЕЮЛс/гексаны, К_£ 0,40) давала 1,70 г (80%) белого твердого вещества. ¹Н-ЯМР (200 МГц, СБС^) б 8,50 (м, 2Н, Лг-Н), 7,45 (м, 3Н, Лг-Н), б,39 (с, 1Н, пиррол-Н), 2,бб (с, 3Н, пирролСН₃), 1,7б (с, 9Н, карбамат-СН₃); масс-спектр, М+1 =344,1; Т.пл .=175-177°С.

©

Ν-бромсукцинимид (508 мг, 2,8 б ммоль) и АIΒN (азобисизобутиронитрил) (112 мг, 0,б8 ммоль) добавляли к раствору, содержащему (22) (935 мг, 2,71 ммоль) и СС14 (50 мл). Раствор нагревали при кипении с обратным холодильником. Через 2 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме, получая белое твердое вещество. Флэш-хроматография (8Ю₂; 1/1 СН₂С1₂/гексаны, К_£ 0,30) давала 9б0 мг (84%) белого твердого вещества (23). ¹Н-ЯМР (200 МГц, СБС1₃) δ 8,52 (м, 2Н, Лг-Н), 7,48 (м, 3Н, Лг-Н), б,7б (с, 1Н, пиррол-Н), 4,93 (с, 2Н, пиррол-СН2Вг), 1,79 (с, 9Н, кар-

Тригидрат феноксида натрия (173 мг, 1,02 ммоль) добавляли в один прием к раствору бромида (23) (410 мг, 0,97 ммоль), растворенного в СН2С12 (5 мл) и ДМФ (10 мл). Через 2 часа реакционный раствор распределяли между СН₂С1₂ и водой. Водный слой экстрагировали СН₂С1₂. Объединенные СН₂С1₂ слои промывали водой, сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали, получая желтое твердое вещество. Флэш-хроматография (8Ю₂); 1/б

ЕЮЛс/гексаны, К_£ 0,30) давала 210 мг (50%) белого твердого вещества (24). ¹Н-ЯМР (200 МГц, СБС13) δ 8,53 (м, 2Н, Лг-Н), 7,48 (м, 3Н, Лг-Н), 7,34 (м, 2Н, Лг-Н), 7,03 (м, 3Н, Лг-Н), б,83 (с, 1Н, пирролН), 5, 45 (с, 2Н, АГСН2О), 1,7б (с, 9Н, карбамат-СН); масс-спектр, М⁺=43б,2.

Раствор, содержащий (24) (85 мг, 0,20 ммоль), Ν-ацетилэтилендиамин (201 мг, 1,95 ммоль) и ДМСО (3 мл) нагревали при 100°С. Через 1 ч температуру поднимали до 130°С. Через 3 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и распределяли между Е!ОЛс и водой. Водный слой экстрагировали ЕЮЛс (2х). Объединенные ЕЮЛс слои промывали водой, сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали. Флэш-хроматография (8Ю₂; 1/10 ЕЮН/СНС1₃, К_£ 0,25) давала 73 мг (93%) белого пенообразного твердого вещества (25). ¹Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-б_б) δ 11,81 (ушир.с, 1Н, Ν-Н), 8,39 (м, 2Н, ЛгН), 8,03 (ушир. т, 1Н, Ν-Н), 7,57 (ушир. т, 1Н, Ν-Н), 7,20-7,50 (м, 5Н, Лг-Н), б,89-7,09 (м, 3Н, Лг-Н), б,59 (с, 1Н, пиррол-Н), 5,12 (с, 2Н, ЛВСН2О), 3,б1 (м, 2Н, ΝΜ), 3,3б (м, 2Н, ΝΜ), 1,79 (с, 3Н, СОСН3); массспектр, М+1= 402,б

Следующие соединения получали способом, аналогичным описанному в примере 17.

- 50 007254

4-(2-Лцетиламиноэтил)амино-6-феноксиметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин.Т.пл. 196197°С. Масс-спектр (Е8): 401,6 (М⁺+1).

4-(2-Лцетиламиноэтил)амино-6-(4-фторфенокси)метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин. Масс-спектр (Е8): 420,1 (М⁺+1).

4-(2-Лцетиламиноэтил)амино-6-(4-хлорфенокси)метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин. Масс-спектр (Е8) : 436,1 (М⁺+1).

4-(2-Лцетиламиноэтил)амино-6-(4-метоксифенокси)метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин. Масс-спектр (Е8): 432,1 (М⁺+1).

4-(2-Лцетиламиноэтил)амино-6-(№пиридин-2-он)метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин. Масс-спектр (Е8): 403,1 (М⁺+1).

4-(2-Лцетиламиноэтил)амино-6-(№фениламино)метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин. Масс-спектр (Е8): 400,9 (М⁺+1).

4-(2-Лцетиламиноэтил)амино-6-(№метил-№фениламино)метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин. Масс-спектр (Е8): 414,9 (М⁺+1).

4-(2-Х'-метилуреаэтил)амино-6-феноксиметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин. Масс-спектр (Е8): 416,9 (М⁺+1).

Пример 18. Синтез антагонистов А₁ аденозина.

Соединение 1319 и соединение 1320 (таблица 13 ниже) могут быть синтезированы с использованием описанных здесь общих способов.

С1

Соединение 26 Х=Р

Соединение 27 Х=С1

Соединение 1319

Соединение 1320

Соединение 1319 (81%). ¹Н -ЯМР (ДМСО-6₆) δ 1,37 (м, 4Н), 1,93 (м, 2Н), 2,01 (м, 2Н), 4,11 (ушир.с, 1Н), 4,61 (д, 1Н, 1=4,4 Гц), 6,59 (м, 1Н), 7,09 (м, 1Н), 7,21 (м, 2Н), 7,49 (дд, 1Н, >8Гц, 14Гц), 8,03 (м, 1Н), 8,18 (д, 1Н, 1=8 Гц), 11,55 (ушир.с, 1Н). Масс-спектр (Е8): 327,0 (М⁺+1).

Соединение 1320 (31%). Масс-спектр (Е8): 343,1 (М⁺+1).

Пример 19. Синтез антагониста Л₁ аденозина.

Соединение 1321 (таблица 13, ниже) может быть синтезировано с использованием приведенных далее общих способов.

Соединение 1321

Соединение 28 (10,93 г, 50,76 ммоль) растворяли в ДМФ (67 мл). Последовательно добавляли гидрохлорид 4-амидинопиридина (8,0 г, 50,76 ммоль) и ДБУ (15,4 г, 101,5 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 85°С. Через 22 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и ДМФ удаляли в вакууме. Темное масло разбавляли 2М 11С1 (80 мл). Реакционную смесь оставляли. Через 2 ч раствор охлаждали до 10°С и фильтровали. Твердое вещество промывали холодной водой и сушили, получая 7,40 г желтого твердого вещества. Соединение 29 (69%). ¹Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО-ф) δ 6,58 (с, 1Н), 7,27 (с, 1Н), 8,53 (д, 2Н, 1=5,6), 9,00 (д, 2Н, 1=5,2 Гц), 12,35 (ушир.с, 1Н). Масс-спектр (Е8): 212,8 (М⁺+1).

Соединение 29 (7.4 ммоль, 29,8 ммоль) разбавляли РОС1₃ и нагревали до 105°С. Через 18 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и РОС1₃ удаляли в вакууме. Густое темное масло разбавляли МеОН (75 мл) с последующим добавлением эфира (120 мл). Лморфное красное твердое вещество отфильтровывали и промывали эфиром, получая 3,82 г красного твердого вещества. Неочищенное твердое вещество имеет приблизительно 80%-ную чистоту и его используют без дополнительной очистки в следующей реакции. Масс-спектр (Е8): 230,7 (М⁺+1).

Соединение 1321. ¹Н-ЯМР (15%) (200 МГц, ДМСО-6₆) δ 1,38 (м, 4Н), 1,92 (ушир.с, 2Н), 2,02 (ушир.с, 2Н), 3,44 (ушир.с, 1Н), 4,14 (ушир.с, 1Н), 4,56 (д, 1Н, 1=4 Гц), 6,63 (м, 1Н), 7,15 (м, 1Н), 7,32 (д, 1Н, 1=6,2 Гц), 8,20 (д, 2Н, 1=4,4 Гц), 8,65 (д, 2Н, 1=4, 4Гц), 11,67 (ушир.с, 1Н). Масс-спектр (Е8) : 310,2 (М⁺+1).

- 51 007254

Соединение 1501 (таблица 15 ниже). ¹Н-ЯМР (70%) (2 00 МГц, СОЮО) δ 1,84 (с, 3Η), 3,52 (т, 2Н, 1=6,0 Гц), 3,83 (т, 2Н, 1=6 Гц), 6,51 (д, 1Н, 1=3,4 Гц), 7,06 (д, 1Н, 1=3,8 Гц), 7,42 (м, 3Η), 8,36 (м, 2Н). Масс-спектр (Е8): 296,0 (М⁺+1).

Соединение 1502 (таблица 15 ниже). Масс-спектр (Е8) : 345,0 (М⁺+1).

Соединение 1500 (таблица 15 ниже). ¹Η -ЯМР (70%) (200 МГц, СПС1₃) δ 1,40-1,80 (м, 6Н), 1,85-2,10 (м, 2Н), 2,18 (с, 3Η), 2,33 (с, 3Η), 2,50 (д, 3Η), 3,90-4,10 (м, 2Н), 4,76 (м, 1Н), 5,50 (д, 1Н), 6,03 (м, 1Н), 7,40 (м, 3Η), 8,37 (м, 2Н), 9,15 (ушир.с, 1Н). Масс-спектр (Е8) : 393,3 (М⁺+1).

Пример 20. Синтез антагониста Αχ аденозина.

Соединение 1504 (таблица 15 ниже) может быть синтезировано по общим методикам, приведенным далее.

Соединение 31 (200 мг, 0.47 ммоль) растворяли в ДХМ (4 мл). Добавляли последовательно триэтиламин (51 мг, 0,5 ммоль) и тиоморфолин (52 мг, 0,5 ммоль). Раствор перемешивали в течение нескольких минут, затем оставляли на 72 ч. Реакционную смесь разбавляли ДХМ и Η₂Ο и слои отделяли. Водный слой экстрагировали ДХМ. Объединенные ДХМ слои сушили над Μ§8Ο₄, фильтровали и концентрировали. К неочищенному образцу добавляли диэтиловый эфир и полученное твердое вещество отфильтровывали, получая 100 мг белого твердого вещества 32 (62%). ¹Н-ЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,76 (с, 9Н), 2,66 (ушир.с, 2Н), 2,79 (ушир.с, 2Н), 3,86 (с, 2Н), 7,46 (м, 3Η), 8,50 (м, 2Н).

Соединение 32 объединяли с ДМСО (3 мл) и транс-4-аминоциклогексанолом (144 мг, 1,25 ммоль) и нагревали при 130°С в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли ΕΐΟΑο и Η₂Ο. Слои разделяли и водный слой экстрагировали ΕΐΟΑο (2х) Объединенные органические слои промывали Η₂Ο и насыщенным раствором соли, сушили над Μ§8Ο₃, фильтровали и концентрировали. Хроматография (диоксид кремния, 8:1 СΗС1₃/ЕΐОН) давала 32 мг золотисто-коричневого масла. Добавляли диэтиловый эфир и полученное твердое вещество отфильтровывали, получая 5 мг белого твердого вещества (9%). Ο8Κ'-148265: Ή-ЯМР (200 МГц, СЭ^Э) δ 1,44 (ушир.м, 4Н), 2,03 (ушир.м, 2Н), 2,21 (ушир.м, 2Н), 2,70 (ушир.м, 8Н), 3,63 (м, 4Н), 3,92 (м, 1Н), 4,26 (ушир.с, 1Н), 6,42 (с, 1Н), 7,42 (м, 3Η), 8,33 (м, 2Н).

Пример 21. Синтез антагониста Α1 аденозина.

Соединение 1503 (таблица 15 ниже) может быть синтезировано по общим методикам, приведенным ниже.

С1 ЙОС *	С1	^н0/а ~ Ла (У- = о
31	33	Соединение 1503

Бромид, соединение 31 (220 мг, 0.47 ммоль) растворяли в смеси 1:1 ДМФ:дихлорметан (5 мл). К этому раствору добавляли К₂СО₃ (71 мг, 0,52 ммоль) и морфолин (0,047 мл, 0,47 ммоль). Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Растворители удаляли в вакууме и остаток распределяли между Η₂Ο и дихлорметаном. Органический слой сушили над Μ§8Ο₄, фильтровали и концентрировали, получая не совсем белое твердое вещество, которое при растирании со смесью эфир/гексаны давало 175 мг белого твердого вещества 33 (84%). Ή-ЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,9 (9Н, с), 2,54 (4Н, с), 3,65 (4Н, с), 3,85 (1Н, с), 6,59 (1Н, с), 7,45 (3Η, м), 8,5 (2Н, м).

Соединение 33 (50 мг, 0,11 ммоль) и транс-4-аминоциклогексанол (105 мг, 0,91 ммоль) помещали в ДМСО (2 мл). Полученный раствор продували Ν₂, а затем нагревали до 100°С на масляной бане и перемешивали в течение ночи. Неочищенную реакционную смесь выливали в воду и дважды экстрагировали этилацетатом (50 мл). Объединенные органические слои промывали Η₂Ο. После сушки Μ§8Ο₄ и фильтрования органический слой концентрировали в вакууме, получая оранжевое твердое вещество. Хроматография (диоксид кремния, 10% СН₃ΟН в СЩС1₂) давала 15 мг (33%). ¹Η -ЯМР (200 МГц, СЭС1₃) δ 1,241,62 (4Н, м), 1,85 (2Н, м), 2,10 (2Н, м), 2,26 (4Н, м), 3,53 (4Н, м), 4,22 (1Н, м), 4,73 (1Η, м), 5,85 (1Η, д), 6,15 (1Η, с), 7,25 (3Η, м), 8,42 (2Н, М), 10,0 (1Н, с). Масс-спектр (Е8): 408,0 (М⁺+1).

- 52 007254

Соединения 1500, 1501 и 1502 могут быть синтезированы с использованием тех же стадий получения примера 20 при обработке соединения 32 подходящим замещенным амином.

Анализ Αι и А_2а аденозинового рецептора человека с использованием репортерного гена β-галактозидазы дрожжей

Штаммы дрожжей (8.ссгсуЫас) трансформировали аденозином Л₁ (Л₁В; СЛЭи8 штамм СУ12 бб0) человека или аденозином А_2а (А_2а; СЛПИ8 штамм СУ83б2) человека и дополняли 1ас2 (β-галактозидаза) репортерным геном для использования в качестве функционального вывода данных. Полное описание трансформаций перечислено ниже (смотри Штаммы дрожжей). В качестве лиганда для всех анализов использовали ИБСЛ (5'-Ы-этилкарбоксамидоаденозин), представляющий собой эффективный агонист аденозинового рецептора с аналогичной аффинностью к Л1 и А2а рецепторам. Тестируемые соединения исследовали в 8 концентрациях (0,1-10000 нМ) на их способность ингибировать ХЕСЛ-индуцированную активность β-галактозидазы СУ12бб0 или СУ83б2.

Получение исходных культур дрожжей: каждый из соответствующих дрожжевых штаммов, СУ12бб0 или СУ83б2, наносили полосами на агаровые пластины и инкубировали при 30°С до тех пор, пока не наблюдали образование колоний. Дрожжи этих колоний добавляли к ЬТ жидкости (рН б,8) СУ83б2 и выращивали в течение ночи при 30°С. Каждый дрожжевой штамм затем разводили до ОП_б0о=1,0-2,0 (приблизительно 1-2х10⁷ клеток/мл), как определено спектрофотометрически (Мо1сси1аг Эсуюсь VМАX). Из расчета на каждые б мл жидкой дрожжевой культуры добавляли 4 мл 40% глицерина (1:1,5 об/об) («дрожжевой/глицериновый исходный препарат»). Из этого дрожжевого/глицеринового исходного препарата готовили десять аликвот по 1 мл и хранили при -80°С до проведения анализа.

Дрожжевой Л₁В°С и Л_2аВ анализ: размораживали одну ампулу каждого из СУ83б2 и СУ12бб0 дрожжевого/глицеринового исходного препарата и использовали для инокулирования дополненной ЬТ жидкой среды, рН б,8 (92 мл жидкой ЬТ, к которой добавляли: 5 мл 40% глюкозы, 0,45 мл 1М КОН и 2,5 мл Р1рс8, рН б,8). Жидкие культуры выращивали в течение 1б-18 ч (в течение ночи) при 30°С. Аликвоты культур, полученных в течение ночи, затем разводили в ЬТ среде, содержащей 4М.Е./мл аденозиндезаминазы (тип VI или VII из бычьей слизистой кишечника, 81дта), для достижения ОП_б00=0,15 (1,5х10^бклеток/мл) для СУ83б2 (Л2аВ) и ОПб00=0,50 (5х10^б клеток/мл) для СУ12бб0 (Л1В).

Анализы проводили при конечном объеме 100 мкл в 9б-луночных микротитровальных планшетах при конечной концентрации ДМСО 2%, достигаемой во всех лунках. Для первичного скрининга использовали 1-2 концентрации тестируемых соединений (10 мкМ, 1 мкМ). Для профилирования соединения исследовали 8 концентраций (10000, 1000, 500, 50, 10, 1 и 0,1 нМ). В каждый планшет для микротитрования добавляли 10 мкл 20%-ного ДМСО в «контрольные» и «общие» лунки, тогда как 10 мкл тестируемого соединения (в 20% ДМСО) добавляли в «неизвестные» лунки. Впоследствии в «контрольные» и «общие» лунки добавляли 10 мкл ХЕСЛ (5 мкл для ЛЩ, 1 мкл для Л_2аВ); 10 мкл РВ8 (забуференного фосфатом физиологического раствора) добавляли в «контрольные» лунки. При конечном добавлении во все лунки добавляли 80 мкл дрожжевого штамма, СУ83б2 или СУ12бб0. Затем все планшеты встряхивали в течение короткого промежутка времени (ЕаЬЬшс орбитальный шейкер, 2-3 мин) и оставляли инкубироваться в течение 4 ч при 30°С в сушильной печи.

Активность β-галактозидазы может быть количественно оценена с использованием либо колориметрического (например, О№С, СРВС), люминесцентного (например, 6а1ас1оп-81аг) или флуориметрического субстратов (например, ЕЭС, КезогиГт). В настоящее время флуоресцентная регистрация является предпочтительной на основе лучшего соотношения сигнал: шум, относительной свободы от интерференции и низкой стоимости. Флуоресцеин дигалактопиранозид (ЕЭС, Мо1сси1аг РгоЬсз или Магксг Оспе ТесЕпо^щсЦ флуоресцентный субстрат β-галактозидазы, добавляли во все лунки при концентрации 20 мкл/лунку (конечная концентрация = 80 мкМ).

Планшеты встряхивали в течение 5-б с (ЬаЬЬтс орбитальный шейкер), а затем инкубировали при 37°С в течение 90 мин (95% О₂/5% СО₂ инкубатор). В конце 90-минутного периода инкубации активность β-галактозидазы останавливали с использованием 20 мкл/лунку 1М №ьСО₃ и все планшеты встряхивали в течение 5-б с. Планшеты затем встряхивали в течение б с и определяли относительную интенсивность флуоресценции с использованием флуориметра (Тссап 8рсс1га£1иог; возбуждение = 485 нм, испускание = 535 нм).

Расчеты: Значения относительной флуоресценции для «контрольных» лунок интерпретировали как фон и вычитали из «общих» и «неизвестных» значений. Профили соединений анализировали с помощью логарифмического преобразования (ось х: концентрация соединения) с последующей одноузловой конкурентной кривой, соответствующей расчету значение Κ.’₅₀ (СгарНРаб Рпзт).

Штаммы дрожжей: использовали штаммы 8ассйаготусс5 ссгсу181ас СУ 12бб0 [£аг1*1442 1Ы1-1 £из1Ш83 сап1 81с14::1гр1::ЬУ82 81с3*115б дра1 (41)-6αί3 1уз2 ига3 1си2 1гр1: Ыз3; ЬЕИ2 РСКр-МЕаКсабегйЛ1В-РНО51сгт 2ти-огщ КЕР3 Лтрг] и СУ83б2 [дра1р-г6оЕ10К £аг1*1442 1Ы-1 £и81-Ш83 сап1 81с14:: 1гр1:ЬУ82 81с3*115б 1уз2 ига3 1си2 1гр1 Ыз3; ЬЕИ2 Р6Кр-йЛ₂аК 2ти-ог1 КЕР3 Лтрг].

ЬТ среда: ЬТ (Ьси-Тгр дополненная) среда состоит из 100 г ЭКСО дрожжевого азотистого основания, дополненного следующим: 1,0 г валина, 1,0 г аспарагиновой кислоты, 0,75 г фенилаланина, 0,9 г

- 53 007254 лизина, 0.4 5 г тирозина, 0,45 г изолейцина, 0,3 г метионина, 0,6 г аденина, 0,4 г урацила, 0,3 г серина, 0,3 г пролина, 0,3 г цистеина, 0.3 г аргинина, 0,9 г гистидина и 1,0 г треонина.

Конструирование штаммов дрожжей, экспрессирующих А! аденозиновый рецептор человека

В данном примере описано конструирование штаммов дрожжей, экспрессирующих А₁ аденозиновый рецептор человека, функционально интегрированный в путь дрожжевой феромоновой системы.

Конструирование вектора эспрессии

Для конструирования дрожжевого вектора экспрессии А₁ аденозинового рецептора человека получали кДНК А₁ аденозинового рецептора с помощью ПЦР обратной транскриптазы мРНК гиппокампа человека с использованием праймеров, разработанных на основе опубликованной последовательности А₁аденозинового рецептора человека, и стандартных методик. Продукт ПЦР субклонировали в ХсоТ и ХМ сайты дрожжевой плазмиды экспрессии рМР15.

РМР15 плазмиду создавали из ρΚΡΧΐ следующим образом: ХМ сайт УЕР51 (Вгоасй Ι.Β. е! а1., (1983) Уес!ог§ Гог Ыдй-1еуе1, тдис1Ь1е ехргезыоп оГ с1опед депез ΐη Уеа§1 р.83-117 в МТпоиуе (ед.) Ехрег1шеп1а1 Машри1а1юп оГ бепе Ехргезыоп. АсадешМ Ргезз, Να Уогк) ликвидировали расщеплением, заполнением конца и повторным лигированием для создания Уер5ШсоЭХЬа. Другой сайт ХМ создавали на ВашШ сайте сжиганием с помощью ВашШ, заполнением конца, линкерным (Να Епд1апд Вю1аЬ§, # 1081) лигированием, ХЬаТ расщеплением и повторным лигированием для генерирования Уер5ШсоХ1. Эту плазмиду разлагали с помощью Езр31 и ХсоТ и лигировали к Ьеи2 и РСКр фрагментам, генерированным ПЦР. Продукт ПЦР 1,еи2, размером 2 тысячи оснований, генерировали амплификации из Уер5Шсо с использованием праймеров, содержащих сайты Езр31 и Вд1П. Продукт ПЦР РСКр из 660 пар оснований генерировали амплификацией из рРСКаз (Капд Υ.-8. е! а1., (1990), Мо1.Се11.Вю1. 10:25822590) с помощью ПЦР праймеров, содержащих сайты Вд1П и ХсоР Полученную плазмиду называют рЬРХЕ Р1.РХ! модифицировали вставкой кодирующей области рге-рго лидера α-фактора в сайт ΝαΜ Вставку рге-рго лидера проводили таким образом, что Να)1 клонирующий сайт поддерживали на 3' конце лидера, но не регенерировали на 5'конце. Таким образом рецепторы могут клонироваться расщеплением плазмиды с помощью Να4 и ХЬаТ Полученную плазмиду называют рМР15, рге-рго лидера а-фактора.

рМР15 плазмиду, в которую вставляли кДНК аденозинового рецептора А₁ человека, обозначали как р5095. В этом векторе кДНК рецептора конденсирована с 3' концом рге-рго лидера α-фактора дрожжей. Во время созревания белка рге-рго пептидные последовательности расщепляются, генерируя зрелый рецептор с полной длинной. Это происходит во время обработки рецептора на секреторном пути дрожжей. Данную плазмиду поддерживают Реи селекцией (т.е. рост на среде с недостатком лейцина). Определяли последовательность клонированной области кодирования и было установлено, что она эквивалентна опубликованной в литературе (присвоенные номера в СепВапк 845235 и 856143).

II. Конструирование дрожжевого штамма.

Для создания штамма дрожжей, экспрессирующего А1 аденозиновый рецептор человека, в качестве исходного родительского штамма использовали штамм дрожжей СУ7967. Генотип СУ7967 следующий:

МАТа дра Ό1163 дра1(41)Оа13 1агЮ1442 1Ы-1 Ρυ81-ΗI83 сап 1 §1е14::1гр1::ЬУ82 §1е3Э1156 1уз2 ига3 1еи2 1гр1 Ы§3

Генетические маркеры рассмотрены ниже._______________________

МАТа ' ^: '

Спаривающий тип а драЮНбЗ

Эндогенный дрожжевой С-белок СРА-1 был удален дра!(41)СагЗ дра!(41)-Са13

Этот химерный интегрировали в геном дрожжей.

£'агЮ1442

ЪЬС-1

Еи31-Н133 сап!

збе14::Ъгр1::ЬУ32 аминокислот

Са белок состоит из первых 41 эндогенной субъединицы СРА1, слитой с млекопитающих, в котором дрожжевой

С-белком имеющие происхождение Ν-концевые аминокислоты удалены

Са.

СагЗ общее были

ЕАК.1 ген (ответственный за остановку клеточного цикла) удаляли (предотвращая таким образом остановку клеточного цикла при активации пути ответа на феромон штамм с высокой эффективностью трансформации с помощью электропорации слияние между Еи31 промотором и ΗΙ33 кодирующей областью (таким образом создавая индуцибельный ΗΙ33 ген феромона) аргинин/канавинин пермеаза генное разрушение ЗТЕ14,

- 54 007254

	С-фарнезилметилтрасферазы (таким образом понижая основной сигнал через путь феромона
зЪеЗО1156	эндогенный дрожжевой ЗТН, фактор феромонового рецептора (ЗТЕЗ) разрушали
1уз2	дефект 2-аминоадипатредуктазы, дрожжам необходим лизин для роста
игаЗ	дефект оротидин-5'-фосфат декарбоксилазы, дрожжам необходим урацил для роста
1еи2	дефект Ь-изопропилмалат дегидрогеназы, дрожжам необходим лейцин для роста
Бгр1	дефект фосфорибозилантранилата, дрожжам необходим триптофан для роста
МзЗ	дефект имидазолглицеролфосфат дегидрогеназы, дрожжам необходим гистидин для роста

Две плазмиды трансформировали в штамм СУ7967 электропорацией: плазмида р5095 (кодирующая А₁ аденозиновый рецептор человека; описанная выше) и плазмида р1584, которая является плазмидой ЕиБ1-р-галактозидазного репортерного гена. Плазмиду р1584 получали из плазмиды рРБ426 (Сйпкпапкоп Т.^. е! а1. 91992) Оепе 110:119-1122. Плазмида рРБ426 содержит полилинкерный сайт на нуклеотидах 2004-2016. Проводили инсерцию слияния ЕИБ1 промотора и β-галактозидазного гена в сайты рестрикции Еад! и Х1ю1 для создания плазмиды р1584. Плазмиду з1584 поддерживали Тгр селекцией (то есть рост на среде с недостатком лейцина).

Полученный штамм, несущий р5095 и р 1584, упоминаемый как СУ12 660, экспрессирует А₁ аденозиновый рецептор человека. Для роста данного штамма в жидкости или на агаровых пластинах использовали минимальную среду с недостатком лейцина и триптофана. Для осуществления анализа роста на планшетах (анализирование Γϋδ 1^83), планшеты находились при рН 6,8 и содержали 0,5-2,5 мМ 3амино-1,2,4-триазола и недостаток лейцина, триптофана и гистидина. В качестве контроля специфичности во все эксперименты включали сравнение с одним или несколькими другими семью трансмембранными рецепторными отборами на основе дрожжей.

Конструирование штаммов дрожжей, экспрессирующих А_2а аденозиновый рецептор человека

В данном примере описано конструирование штаммов дрожжей, экспрессирующих А_2а аденозиновый рецептор человека, функционально интегрированный в путь дрожжевой феромоновой системы.

Конструирование вектора экспрессии

Для конструирования дрожжевого вектора экспрессии А2а аденозинового рецептора человека получали кДНК А₂ аденозинового рецептора от Όγ. РЫ1 МигрКу (ΝΜ). При получении данного клона секвенировали А_2а рецепторную вставку, и было установлено, что она идентична опубликованной последовательности (присвоенный номер в ОепВапк # Б46950). КДНК рецептора вырезали из плазмиды ПЦР с помощью νΡ^ полимеразы и клонировали в плазмиду рБВХ, которая стимулировала экспрессию рецептора с помощью составного промотора фосфоглицерат киназы (РОК) в дрожжах. Еще раз определяли последовательность аминокислот целой вставки и установили, что она идентична опубликованной последовательности. Однако в силу использованной здесь стратегии клонирования три аминокислоты были добавлены к карбоксильному концу рецептора, О1уБе^а1.

Конструирование штамма дрожжей

Для создания штамма дрожжей, экспрессирующего А_2а аденозиновый рецептор человека, в качестве исходного родительского штамма использовали штамм дрожжей СУ8342. Генотип СУ8342 следующий:

МАТа 1агЮ1442 1Ы1-1 1ук2 ига3 1еи2 1гр1 Ык3 ГикЕН^ сап1 к!е3Э1156 §раВ1163 к1е14::1гр1::БУБ2 дра1р-гО_акЕ10К (или дра1р-гО_акО229Б или дра1р-гО_акЕ10К+ О229Б)

Генетические маркеры являются такими, как описано выше, за исключением маркера для варьирования О-белка. Для экспрессии А₂а рецептора человека использовали штаммы дрожжей, в которых был удален эндогенный дрожжевой О-белок ОРА1 и заменен на О_ак млекопитающего. Использовали три крысиных О_ак мутанта. Такие варианты содержат одну или две точки мутации, которые превращают их в белки, которые рационально сшиваются с βγ-дрожжей. Они были идентифицированы как О_акЕ10К (в которых глутаминовая кислота в десятом положении заменена на лизин), О_акО229Б (в котором аспартамовая кислота в положении 229 заменена на серии) и О_акЕ10К+О229Б (который содержит обе точки мутации).

Штамм СУ8342 (несущий один из трех мутантных крысиных О_ак белков) трансформировали с помощью либо родительского вектора рБРВХ (Рецептор^-) или с помощью рБРВХ-А_2а (Рецептор⁺). Добавляли плазмиду с ЕИБ1 промотором, слитым с кодирующими последовательностями β-галактозидазы (описанными выше) для оценки величины активации пути феромонового ответа.

- 55 007254

Функциональный анализ с использованием штаммов дрожжей, экспрессирующих

Αχ аденозиновый рецептор

В данном примере описана разработка анализа функционального скрининга модуляторов А_х аденозинового рецептора человека в дрожжах

I. Лиганды, используемые в анализе.

Для разработки данного анализа использовали аденозин, природный агонист данного рецептора, а также два других синтетических агониста. В подмножестве экспериментов использовали аденозин, имеющий по опубликованным данным ЕС₅₀, составляющее приблизительно 75 нМ, и (-)-Ν6-(2- фенилизопропил)аденозин (ЛА) с опубликованной аффинностью приблизительно 50 нМ. Во всех анализах роста использовали 5'-Х-этилкарбоксамидоаденозин (ХЕСА). Для предотвращения передачи сигналов из-за присутствия аденозина в среде для роста во всех анализах добавляли аденозиндеаминазу (4МЕ/мл).

II. Биологическая ответная реакция в дрожжах.

Способность А₁ аденозинового рецептора функционально связываться с гетерологичной системой дрожжей оценивали путем введения вектора экспрессии А_х рецептора (р5095, описано выше) в ряд дрожжевых штаммов, которые экспрессируют различные субъединицы белка О. Большинство таких трансформантов экспрессировало О_а субъединицы О_а; или О_ао подтипа. Дополнительные О_а белки также были протестированы для возможной идентификации неоднородности их связывания рецептор-Οα белок. В различных штаммах 8ТЕ18 или химерный 8ТЕ18-Оу конструкт интегрировали в геном дрожжей.

Штаммы дрожжей скрывали дефективный Ю83 ген и интегрированную копию Ευ81-НI83, давая таким образом возможность для отбора в селективной среде, содержащей 3-амино-1,2,4-триазол (протестированный при 0,2, 0,5 и 1,0 мМ) и не имеющей гистидина. Трансформанты выделяли и готовили монослои на среде, содержащей 3-амино-1,2,4-триазол, 4МЕ/мл аденозиндеаминазы и не содержащей гистидина. Использовали пять микролитров различных концентраций лиганда (например, NЕСА в концентрации 0, 0,1, 1,0 и 10 мМ). Рост контролировали в течение 2 дней. Таким образом в различных штаммах дрожжей исследовали лиганд-зависимую ответную реакцию роста. Результаты суммированы ниже в таблице 1. Символ (-) указывает, что лиганд-зависимая активация рецептора не определялась, тогда как (+) обозначает лиганд-зависимый ответ. Термин «БШМА» указывает на лиганд-независимую активацию, опосредованную рецептором.

Таблица 3

Штамм дрожжей	С_а субъединица	Су сллбъе пинит та	Варианты штамма	Результат

СУ1316	СРА1	5ТЕ18		-
	СРА41-Сщ1			+
	СРА41-С_а12			+
	ΟΡΑ41-Ο_αΐ3			+
	6РА41-Ο_αί2-Ο_αοΒ			ЫКМА
	ΘΡΑ41-(3_α5Εΐοκ			-
	СРА41~С_азо229з			-

СУ7967	СРА41-Са1зинтегрированный	5ТЕ18		+++

СУ2120	С РА!	5ТЕ18	33Ε2Δ	+
	СРА41-6_аи			+
	СРА41-С_а1₂			+

- 56 007254

	СРА41-С_а1з СРА41-<З_а12-Сссов СРА41-СаЗЕЮк СРА4 1~С_а302293			+ ЫКМА
СУ9438	СРА1 СРА41-С_аи СРА41-С_а12 СРА41-Са1з СРА41 ^_С_а12-Саов	ЗТЕ18-Су2		+ + + ЫКМА
	<ЗРА41-(3_α3Εΐοκ			-
	СРА41-<З_азо229з			-

СУ10560	СРА1- интегрированный	5ТЕ18-Су2	33Γ2Δ	++

Как указано в табл. 3, было установлено, что наиболее сильная передача сигналов происходила в штамме дрожжей, экспрессирующем ОРА’ (41) -О_а;₃ химерный белок.

III. 1из1 Гас-Ζ анализ.

Чтобы более полно охарактеризовать активацию пути феромоновой ответной реакции, измеряли синтез β-галактозидазы посредством ίи81^асΖ в ответ на агонистическую стимуляцию. Для осуществления β -галактозидазного анализа повышенные концентрации лиганда добавляли к т16-1о§ культуре А’ аденозинового рецептора человека, экспрессируемого в штамме дрожжей, соэкспрессирующем 8(е18-Су2 химеру и ОРА’ (41)-О_а;₃. Выделяли трансформанты и выращивали в течение ночи в присутствии гистидина и 4МЕ/мл аденозиндезаминазы. Через пять часов инкубирования с 4МЕ/мл аденозиндезаминазы и лигандом измеряли индукцию β-галактозидазы с использованием СРКО в качестве субстрата для βгалактозидазы. Для анализа использовали 5х10⁵ клеток.

Результаты, полученные с NЕСΑ стимуляцией, указывали, что при концентрации NЕСΑ 10^-8М достигается приблизительно 2-х кратная стимуляция активности β-галактозидазы. Кроме того, приблизительно 10-кратный индекс стимуляции наблюдался при концентрации NЕСΑ, составляющей 10^-5М.

Применение данного анализа расширяли для оценки активности антагонистов на данном штамме. Два известных антагониста аденозина, ХАС и ^РСРX, исследовали на их способность конкурировать с NЕСΑ (при 5 мМ) на активность в анализе β-галактозидазы. В данных анализах индуцирование βгалактозидазы измеряли с использованием ЕЭС в качестве субстрата и 1,6х10⁵ клеток на анализ. Результаты показывают, что как ХАС, так и ^РСРX служат эффективными антагонистами экспрессируемого дрожжами А’ аденозинового рецептора при значениях ГС₅₀ 44 нм и 49 нМ, соответственно.

Для определения, является ли это ингибирующее действие специфическим для А’ подтипа, был проведен ряд дополняющих экспериментов с помощью анализа А_2а рецептора на основе дрожжей. Результаты, полученные в анализе А_2а рецептора на основе дрожжей, указывали, что ХАС был относительно эффективным антагонистом А_2а рецептора, согласуясь с опубликованными данными. Напротив, ^РСРX был относительно инертным для данного рецептора, как ожидалось из опубликованных сообщений.

IV. Радиолигандное связывание.

Анализ А’ аденозинового рецептора дополнительно охарактеризовывали измерением параметров радиолигандного связывания рецептора. Анализировали заместительное связывание [³Н]СРХ с несколькими ссылочными соединениями рецептора аденозина, ХАС, ^РСРX и СО8 с использованием мембран, полученных из дрожжей, экспрессирующих А1 аденозиновый рецептор человека. Результаты для дрожжевых мембран, экспрессирующих А1 аденозиновый рецептор человека, сравнивали с результатами для дрожжевых мембран, экспрессирующих А2а аденозиновый рецептор человека или А3 рецептор человека, для оценки специфичности связывания. Для проведения данного анализа пятьдесят миллиграмм мембран инкубировали с 0,4 нМ [³Н]СРХ и увеличивающимися концентрациями лигандов аденозинового рецептора. Инкубирование проводили в 50 мМ Тпз-НС1, рН 7,4, 1мМ ЕЭТА, 10 мМ МдС12, 0,25% БСА и 2МЕ/мл аденозиндеаминазы в присутствии ингибиторов протеазы в течение 60 мин при комнатной температуре. Связывание останавливали путем добавления охлажденного льдом 50 мМ Тпз-НС1, рН 7,4,

- 57 007254 плюс 10 мМ МдС1₂, с последующим быстрым фильтрованием через ОЕ/В, фильтры предварительно промытые 0,5% полиэтиленимином с использованием 96-луночного харвестера Раскагб. Данные анализировали методом подбора нелинейной кривой по методу наименьших квадратов с использованием программного обеспечения Рпзт2.02. Полученные в данном эксперименте значения IС5₀ суммированы ниже в табл. 4:

Таблица 4

		1С₅₀ (нМ)
Соединение	ЕА1К	ЕА2аК	КАЗН
ХАС	б, б	11,7	53,1
РРСРХ	8,5	326, 4	1307,0
СС5-15943	13, 1	15,8	55,5
ΝΕΟΑ	215,5	294,9	34,9
Κ-ΡΙΑ	67, б	678,1	23, 6
1В-МЕСА	727,7	859,4	3,1
Аллоксозин	1072,0	1934,0	8216,0

Эти данные указывают, что ссылочные соединения обладали аффинностью, соответствующей опубликованной в литературе. Данные дополнительно показывают, что анализы на основе дрожжей имеют достаточную чувствительность для распознавания специфичности подтипа рецептора.

А2а аденозиновый рецептор

В данном примере описана разработка анализа функционального скрининга модуляторов А! аденозинового рецептора человека в дрожжах

I. Лиганды, используемые в анализе.

Природный лиганд аденозин, а также другие тщательно охарактеризованные и коммерчески доступные лиганды использованы для изучения А2а рецептора человека, функционально экспрессируемого дрожжами. При создании данного анализа использовали три лиганда. Они вкл ючают:___________

Лиганд	Учтенные Κι	\| Функция
Аденозин	500 нМ	агонист
5' -Ν- этилкарбоксамидоаденозин (ΝΕΟΑ)	10-15 нМ	агонист
(-)-Ν6-(2фенилизопропиладенозин (ΡΙΑ)	100-125 нМ	агонист

Для предотвращения передачи сигналов из-за присутствия аденозина в среде для роста во всех анализах добавляли аденозиндезаминазу (4МЕ/мл).

Агонисты А2а рецептора исследовали на их способность стимулировать путь феромоновой ответной реакции в дрожжах, трансформированных плазмидой экспрессии А2а рецептора и экспрессирующих либо О_а8Е10К, О_а8Э2298 или О_а8Е10К+Э2298. На способность лиганда стимулировать путь феромоновой ответной реакции рецептор-зависимым образом указывало изменение фенотипа дрожжей. Активация рецептора модифицировала фенотип от гистидиновой ауксотрофии на гистидиновую прототрофию (активация 1и81-Ш83). Выделяли три независимых трансформанта и выращивали в течение ночи в присутствии гистидина. Клетки промывали для удаления гистидина и разводили из расчета 2х10⁶ клеток/мл. По 5 мкл каждого трасформанта наносили в виде пятна на неселективную среду (включающую гистидин) или селективную среду (1 мМ АТ) в отсутствие или в присутствии 4 МЕ/мл аденозиндеаминазы. Планшеты выращивали при 30°С в течение 24 ч. В присутствии гистидина как Рецептор (В ), так и Рецептор (В^-) штаммы были способны к росту. Однако в отсутствии гистидина росли только клетки В⁺. Поскольку в данные планшеты не добавляли лиганд, возможно два объяснения данного результата. Одно возможное объяснение заключается в том, что содержащие рецептор дрожжи имели преимущество в росте благодаря лиганд-независимой рецептор-опосредованной активации (ЫВМА).

Альтернативно дрожжи могли оказаться способными синтезировать аденозин. Для того, чтобы различить эти две возможности к растущим дрожжам и планшетам добавляли фермент, который разрушает лиганд, аденозиндезаминазу (АЭА). В присутствии аденозиндеаминазы В клетки больше не росли в отсутствие гистидина, указывая на то, что дрожжи действительно синтезировали лиганд.

Данная интерпретация была подтверждена анализом А2а роста в жидкости. В данном эксперименте дрожжи (штамм О_а8Е10К, экспрессирующий А2а рецептор) инокулировали при трех плотностях (1х10⁶клеток/мл; 3х10⁵ клеток/мл или 1х10⁵ клеток/мл) в присутствии или в отсутствие аденозиндезаминазы (4

- 58 007254

МЕ/мл). Убедительность анализа повышали с помощью увеличения концентраций (0, 0,1, 0,2 или 0,4 мМ) 3-амино-1,2,4-триазола (АТ), конкурентного антагониста имидазолглицерол-Р дегидратазы, белкового продукта Ш83 гена. В присутствии аденозиндеаминазы и 3-амино-1,2,4-триазола дрожжи росли менее интенсивно. Однако, в отсутствие 3-амино-1,2,4-триазола аденозиндеаминаза оказывала незначительное действие. Таким образом, сама аденозиндеаминаза не оказывает непосредственного действия на путь феромоновой ответной реакции.

Альтернативный подход к измерению роста, такой, который можно сделать миниатюрным для высокопроизводительного скрининга, представляет собой спот-анализ А2а рецепторного лиганда. С_ааЕ10К штамм, экспрессирующий А2а рецептор (А2аК⁺) или не имеющий рецептор (К^-), выращивали в течение ночи в присутствии гистидина и 4МЕ/мл аденозиндеаминазы. Клетки промывали для удаления гистидина и разводили до 5х10⁶ клеток/мл. На отборочные планшеты, содержащие 4МЕ/мл аденозиндеаминазы и от 0,5 до 1,0 мМ 3-амино-1,2,4-триазола (АТ), наносили 1х10⁶ клеток и оставляли сохнуть в течение 1 ч. На монослой наносили следующие реагенты: 10 мМ аденозина, 38,7 мМ гистидина, диметилсульфоксид (ДМСО), 10 мМ РТА или 10 мМ НЕСА. Клетки выращивали в течение 24 ч при 30°С. Результаты продемонстрировали, что клетки без рецептора могли расти только при добавлении к среде гистидина. Напротив, К⁺ клетки могут расти только на площадях, куда были нанесены в виде пятна А2а рецепторные лиганды РТА или ХЕСА. Поскольку планшеты содержали аденозиндеаминазу, недостаток роста, там где в виде пятна был нанесен аденозин, подтверждал, что аденозиндеаминаза была активной.

III. Ги§1 Ε;κΖ анализ.

Для количественной активации пути скрещивания дрожжей измеряли синтез β-галактозидазы через Γι.ΐ51Ε;κΖ. Штаммы дрожжей, экспрессирующие С_ааЕ10К, С_ааЭ2298 или С_ааЕ10К+П2298, трансформировали плазмидой, кодирующей А_2а рецептор человека (К⁺) или плазмидой, не имеющей рецептора (К^-). Трансформанты выделяли и выращивали в течение ночи в присутствии гистидина и 4МЕ/мл аденозиндеаминазы. 1х10⁷ клеток разводили до 1х10⁷ клеток/мл и подвергали действию повышающейся концентрации NЕСА в течение 4 ч с последующим образованием активности β-галактозидазы в клетках. Результаты показали, что по существу активность β-галактозидазы не обнаруживалась в К^- штаммах, тогда как повышенные количества активности β-галактозидазы обнаруживались в К⁺ штаммах, экспрессирующих или С_ааЕ10К, С_ааЭ2298, или С_ааЕ10К+П2298, по мере увеличения концентрации №ЕСА, указывая на доза-зависимое увеличение в единицах β-галактозидазы, обнаруженной в качестве ответной реакции на действие повышенной концентрации лиганда. Такая зависимость от дозы наблюдалась только в клетках, экспрессирующих А2а рецептор. Кроме того, наиболее эффективным С_а8 конструктом длА2а рецептора оказалась С_ааЕ10К. Конструкт С_ааЭ2298 оказался вторым наиболее эффективным С_а8 конструктом длА2а рецептора, тогда как С_ааЕ10К+П2298 конструкт был наименее эффективным из трех протестированных С_а8 конструктов, хотя даже конструкт С_ааЕ10К+П2298 стимулировал легко обнаруживаемые количества активности β-галактозидазы.

Для дополнительного описания указанных анализов смотри публикацию заявки на патент США № И8-2002-0015967-А1, опубликованную 7 февраля 2002 г., озаглавленную «Ει.ιικΙίοηη1 Β.χρίΌδδίοη οΓ Айе^^те КесерФга ίη Уеай, сейчас ликвидированную, полное содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки.

Фармакологическая характеристика подтипов аденозинового рецептора человека Материалы и методы

Материалы. [³Н] ^РСРX [циклопентил-1,3-дипропилксантин, 8-[дипропил-2,3-³Н(Ы)] (120,0

Ки/ммоль); [³Н]-СС8 21680, [карбоксиэтил^Н^)] (30 Ки/ммоль); и [¹²⁵Σ ]-АВ-МЕСА ([¹²⁵Σ]-4аминобензил-5'-Ы-метилкарбоксамидоаденозин) (2200 Ки/ммоль) были получены от №\ν ЕпДаий Кис1еаг (Βοκΐοη, МА). XАС (относящийся к классу ксантинамина); ЯЕСА (5-Ы-этилкарбоксамидоаденоизн) и ΣΒМЕСА получены от Кекеагсй Вюсйеткак [Щеп·^^··^ (ЕВЕ №1^, МА). Смешанные таблетки аденозиндеаминазы и полного ингибитора протеазы закупали в Βοейπηде^ Мапйе1т Ε’οΓρ. (Ση^^ρο^, ГЫ). Мембраны НЕК-293 клеток стабильно экспрессирующие А2 аденозин [КВ-НА2а], 2Ь 1 аденозин [КВНА2Ь] или аденозин 3 [КВ-НА3] подтипы рецепторов человека, соответственно, были получены от Кесерйг Βίο1ο§γ (ВеИетШе, МО). Реагенты клеточных культур получены от ЫГе ТесНηο1οβ^е5 (Сгаий Шаий, КТ) за исключением сыворотки, полученной от Нус^е (^οдаη, ИТ).

Штаммы дрожжей: использовали штаммы Зассйаготусек сегеуыае СУ 12660 [Гаг1*1442 1Ы1-1 Γι.ΐ51Ш83 сан1 51е14::1гр1::ЕУ82 §1е3*1156 дра1 (41)-Οαί3 1у§2 ига3 1еи2 1гр1: Ы§3; ЬЕИ2 РбКр-МЕаШеайегЬА1К-РН051егт 2ти-ο^^д КЕР3 Атрг] и СУ8362 [дра1р-гСаЕ10К Гаг1*1442 1Ы-1 Ги51-Н!83 сан1 51е14::1гр1::ЕУ82 §1е3*1156 1у§2 ига3 1еи2 1гр1 Ы§3; ЬЕИ2 РСКр-НА₂аК 2ιηι.ι-οπ КЕР3 Атрг], как описано выше.

Культура дрожжей: трансформированные дрожжи выращивали в Ьеи-Тгр (ЬТ) среде (рН 5,4), дополненной 2% глюкозы. Для получения мембран 250 мл ЬТ среды инокулировали при исходном титре 12х10⁶ клеток/мл 30 мл культуры, полученной в течение ночи, и инкубировали при 30°С при постоянном снабжении кислородом за счет вращения. После 16 ч роста клетки собирали центрифугированием и получали мембраны, как описано ниже.

- 59 007254

Культура ткани человека: НЕК-293 клетки, стабильно экспрессирующие подтип 2а аденозинового рецептора человека (клон Саби8 #5), выращивали в минимальной незаменимой среде Дульбекко (ЭМЕМ), дополненной 10% фетальной телячьей сывороткой и смесью IX пенициллин/стрептомицин при выбранном давлении с использованием 500 мг/мл С418 антибиотика при 37°С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% СО₂.

Получение мембран дрожжевых клеток: 250 мл культуры собирали после инкубирования в течение ночи центрифугированием при 2000д в центрифуге 8огуа11 ВТ6000. Клетки промывали охлажденной льдом водой, центрифугировали при 4°С и осадок от центрифугирования повторно суспендировали в 10 мл охлажденного льдом лизисного буфера [5 мМ Тгщ-НС1, рН 7,5; 5 мМ ΕΌΤΆ и 5 мМ ЕСТА], дополненного смешанными таблетками ингибитора протеазы (1 таблетка на 25 мл буфера). Стеклянные бусины (17 г; 400-600 меш; 8щша) добавляли к суспензии и клетки разрушали путем интенсивного вихревого перемешивания при 4°С в течение 5 мин. Гомогенат разводили дополнительно 30 мл лизисного буфера плюс ингибиторы протеазы и центрифугировали при 3000д в течение 5 мин. Впоследствии мембраны осаждали при 36000д (8огуа1 ВС5В ротор типа 8834) в течение 45 мин. Полученный осадок мембран повторно суспендировали в 5 мл мембранного буфера [50 мМ Тг18-НС1, рН 7,5; 0,6 мМ ΕΌΤΑ и 5 мМ МдС1₂], дополненного смешанными таблетками ингибитора протеазы (1 таблетка на 50 мл буфера) и хранили при -80°С для последующих экспериментов.

Получение мембран клеток млекопитающих: мембраны клеток НЕК-293 получали, как описано ранее (Όιιζχ Е. Е1 а1., ГВюЕСйет., 267, 9844-9851, 1992). Кратко, клетки промывали забуференным фосфатом физиологическим раствором (РВ8) и собирали с помощью резинового сборщика. Клетки осаждали при 4°С и 200д в центрифуге 8огуа11 ВТ6000. Осадок от центрифугирования повторно суспендировали в 5 мл на чашку лизисного буфера при 4°С [5 мМ Тг18-НС1, рН 7,5; 5 мМ ЕОТА; 5 мМ ЕСТА; 0,1 мМ фенилметилсульфонилфторида, 10 мг/мл пепстатина А и 10 мг/мл апротинина], и гомогенизировали в гомогенизаторе Эоннсе. Клеточный лизат затем центрифугировали при 36000д (8огуа1 ВС5В ротор типа 8834) в течение 45 мин и полученный при центрифугировании осадок повторно суспендировали в 5 мл мембранного буфера [50 мМ Тгщ-НС1, рН 7,5; 0,6 мМ ЕОТА; 5 мМ МдС1₂; 0,1 мМ фенилметилсульфонилфторида, 10 мг/мл пепстатина А и 10 мг/мл апротинина] и хранили при -80°С для последующих экспериментов.

Наборы для протеинового анализа Вю-ВаД на основе методики Бредфорда связывания с красителем (ВгаДЕогД М., АиаЕВюсйеш. 72:248 (1976)) использовали для определения общей концентрации белка в мембранах дрожжей и млекопитающих.

Насыщение и конкурентное радиолигандное связывание подтипа 1 аденозинового рецептора: Насыщение и конкурентное связывание на мембранах дрожжевых клеток, трансформированных А1 подтипом рецептора человека, проводили с использованием антагониста [³Н]ОРСРХ в качестве радиоактивного лиганда. Мембраны разводили в буфере для связывания [50 мМ Тг18-НС1, рН 7,4; содержащий 10 мМ МдС1₂; 1,0 мМ ЕОТА; 0,25% БСА; 2 МЕ/мл аденозиндеаминазы и 1 смешанную таблетку ингибитора протеазы/50 мл] при концентрациях 1,0 мг/мл.

При насыщенном связывании мембраны (50 мкг/лунку) инкубировали с увеличивающимися концентрациями [³Н]ОРСРХ (0,05-25 нМ) в конечном объеме 100 мкл буфера для связывания при 25°С в течение 1 ч в отсутствие или в присутствии 10 мкМ немеченого ХАС в 96-луночном планшете для микротитрования.

При конкурентном связывании мембраны (50 мкг/лунку) инкубировали с [³Н]ОРСРХ (1,0 нМ) в конечном объеме 100 мкл буфера для связывания при 25°С в течение 1 ч в отсутствие или в присутствии 10 мкМ немеченого ХАС или увеличивающихся концентраций конкурирующих соединений в 96-луночном планшете для микротитрования.

Конкурентное радиолигандное связывание подтипа 2а аденозинового рецептора: Конкурентное связывание на мембранах НЕК293 клеток, стабильно экспрессирующих А2а подтип рецептора человека, проводили с использованием агониста [³Н] СС8-21680 в качестве радиоактивного лиганда. Мембраны разводили в буфере для связывания [50 мМ Тг18-НС1, рН 7,4; содержащий 10 мМ МдС1₂; 1,0 мМ ЕОТА; 0,25% БСА; 2 МЕ/мл аденозиндеаминазы и 1 смешанную таблетку ингибитора протеазы/50 мл] при концентрациях 0,2 мг/мл. Мембраны (10 мкг/лунку) инкубировали с [³Н] СС8-21680 (100 нМ) в конечном объеме 100 мкл буфера для связывания при 25°С в течение 1 ч в отсутствие или в присутствии 50 мкМ немеченого МЕСА или увеличивающихся концентраций конкурирующих соединений в 96-луночном планшете для микротитрования.

Конкурентное радиолигандное связывание подтипа 3 аденозинового рецептора: Конкурентное связывание на мембранах НЕК293 клеток, стабильно экспрессирующих А3 подтип рецептора человека, проводили с использованием агониста [¹²⁵1] АВ-МЕСА в качестве радиоактивного лиганда. Мембраны разводили в буфере для связывания [50 мМ Тг18-НС1, рН 7,4; содержащий 10 мМ МдС1₂; 1,0 мМ ЕОТА; 0,25% БСА; 2 МЕ/мл аденозиндеаминазы и 1 смешанную таблетку ингибитора протеазы/50 мл] при концентрациях 0,2 мг/мл. Мембраны (10 мкг/лунку) инкубировали с [¹²⁵1] АВ-МЕСА (0,75 нМ) в конечном объеме 100 мкл буфера для связывания при 25°С в течение 1 ч в отсутствие или в присутствии 50 мкМ

- 60 007254 немеченого Ш-МЕСА или увеличивающихся концентраций конкурирующих соединений в 96-луночном планшете для микротитрования.

При окончании инкубирования анализы радиолигандного связывания А_1б А_2а и А₃ подтипов рецептора заканчивали с помощью добавления охлажденного льдом 50 мМ Тг18-НС1 (рН 7,4), дополненного ’0 мМ МдС1₂ с последующим быстрым фильтрованием через фильтры со стеклянным волокном (96-лунок, СЕ/В ИшЕШегз, Раскагб), предварительно промытые 0,5% полиэтиленимином в харвестере клеток Е111егта!е ’96 (Раскагб). Фильтровальные планшеты сушили, покрывали из расчета 50 мкл/лунку сцинтилляционной жидкостью (М1сгозс1п1-20, Раскагб) и обсчитывали в ТорСоип! (Раскагб). Анализы проводили в трех последовательностях. Неспецифическое связывание составляло 5,6±0,5%, ’0,8±’,4% и ’5,’±2,6% от общего связывания в анализах связывания А’К, А2аК и А3К, соответственно.

Конкурентное радиолигандное связывание подтипа 2Ъ аденозинового рецептора: Конкурентное связывание на мембранах НЕК293 клеток, стабильно экспрессирующих А2Ъ подтип рецептора человека, проводили с использованием антагониста А’ рецептора [³Н]ОРСРХ в качестве радиоактивного лиганда. Мембраны разводили в буфере для связывания [’0 мМ Нерез-КОН, рН 7,4; содержащий ’,0 мМ ЕОТА; 0,1 мМ бензамидина и 2 МЕ/мл аденозиндеаминазы] при концентрациях 0,3 мг/мл. Мембраны (15 мкг/лунку) инкубировали с [³Н] ОРСРХ (’5 нМ) в конечном объеме ’00 мкл буфера для связывания при 25°С в течение ’ ч в отсутствие или в присутствии ’0 мкМ немеченого ХАС или увеличивающихся концентраций конкурирующих соединений в 96-луночном планшете для микротитрования. При окончании инкубирования анализ заканчивали добавлением охлажденного льдом ’0 мМ Нерез-КОН (рН 7,4) буфера с последующим быстрым фильтрованием через фильтры со стеклянным волокном (96-лунок, СЕ/В ИшЕШегз, Раскагб), предварительно промытые 0,5% полиэтиленимином в харвестере клеток Е111егта!е ’96 (Раскагб). Фильтровальные планшеты сушили, покрывали из расчета 50 мкл/лунку сцинтилляционной жидкостью (М1сгозс1п1-20, Раскагб) и обсчитывали в ТорСоип! (Раскагб). Анализы проводили в трех последовательностях. Неспецифическое связывание составляло 14,3+2,3% от общего связывания.

Специфическое связывание [³Н] ОРСРХ, [³Н] СС8-21680 и [’²⁵Σ] АВ-МЕСА определяли как разницу между общим связыванием и неспецифическим связыванием. Процент ингибирования соединениями рассчитывали относительно общего связывания. Конкурентные данные анализировали с помощью итеративной кривой, соответствующей односайтовой модели, и значения К рассчитывали из значений КЕч (СЕепд апб РгизоГ, ВюсЕет.РЕагтасо1.22, 3099-3’09, ’973) с использованием программного обеспечения Рп/т 2.0’.

Результаты

Первичной функцией некоторых рецепторов поверхности клеток является распознавание подходящих лигандов. Соответственно, авторами данного изобретения определена аффинность лигандного связывания для установления функциональной целостности подтипа 1 аденозинового рецептора, экспрессируемого дрожжами. Неочищенные мембраны, полученные от 8ассЕаготусез сегеу181ае, трансформированных конструктом подтипа 1 аденозинового рецептора человека, проявляли специфическое насыщенное связывание [³Н] ОРСРХ с К_о 4,00,19 нМ. Значения К_о и В_тах рассчитывали из изотермы насыщения и преобразования данных по Скатчарду, указывающих один класс сайтов связывания. Плотности сайтов аденозинового связывания в препаратах дрожжевых мембран оценивали как 7’6,8±43,4 фмоль/мг мембранного белка.

Фармакологические характеристики подтипа рекомбинантных дрожжевых клеток, трансформированных подтипом А! рецептора, исследовали с помощью подтип-селективных аденозиновых лигандов (ХАС, ОРСРХ, СС8-15943; Соединение 600; Соединение ’002; №СА, (К)-Р!А, Ш-МЕСА и аллоксазин), которые конкурировали с [³Н] ОРСРХ в ожидаемом ранговом порядке. Кривые замещения, зарегистрированные для данных соединений, показали типичную крутизну для всех лигандов, и данные для каждого лиганда можно было моделировать с помощью односайтового подхода. Видимые константы диссоциации, оцененные из кривых для отдельного соединения (таблица 5), соответствуют опубликованному значению для рецептора, полученного из других источников.

Таблица 5. Значения К! для мембран дрожжевых клеток, трансформированных подтипом А! рецептора человека

- 6’ 007254

В табл. 6-12 показаны профили эффективности и структурной активности дезазапуринов по изобретению. В таблицах 13-14 показана селективность, которая может быть достигнута для сайтов аденозиновых рецепторов человека путем модулирования функциональных групп около дезазапуриновой структуры. В таблице 14 также показано то неожиданное открытие, что соединения, указанные в данном описании, обладают субнаномолярной активностью и более высокой селективностью к А₂ь рецептору по сравнению с соединениями в таблице 13.

- 62 007254

608	____...А •ьО«	29, 1
609	ЛЭН	193, 9
610	Ό ί ω §Η	411,5
611	ο	785, 6	>10000
612	X БНАс Транс (3,3)	64,8
613	£) ΝΗΑο Транс (К,К)	6726,0
614	^нч (Ш)	32,1
615	хО ⁴ (<И)	816, 9	2577,0
616	Ζ^0Η * >он	34,3

- 63 007254

Таблица 7. Влияние С₂-заместителя

н

		А1
Соединение	К	Связывание Κι (нМ)	Дрожжи 1С50 (нМ)
700		604,5	>10000
701	0	157,7	763, 1
702	А	198,5	2782,5
703		443, 6	>10000
704	О 5	61,1	297,0
705	<>\|	30,1	194,7
706	у Г	19, 9
707		62,8
708	>+	2145
709	с	48,7

- 64 007254

Таблица 8. Влияние заместителя пиррольного кольца

- 65 007254

Таблица 9

		А1
Соединение	К	Связывание К₄ (нМ)	Дрожжи 1С50 (нМ)
900	А	863,1
901		4512
902		8451
903	γ	35,3

Таблица 10. Влияние ^-заместителя

- 66 007254

1008		93,1	3217
1009	. ό	475,3	>10000
1010		674,9	9376,0
1011		121, 9	2067,5
1012		233, 9	3462
1013	^У Η	270,1	3009,5
1014	ν\^^0Η	384,9	2005
1015		179,3	3712
1016		176, 1	5054

Таблица 11. Влияние ^-заместителя

		Α1
Соединение	Κ	Связывание (нМ)	Κί	Дрожжи 1С50 (нМ)
1100		9,8		115,4
1101	0	53, 9		551, 0

- 67 007254

1102		10,3	101,3
1103		71,1	3217
1104	Μ 1 Ме 0 _(<)	6, 5	58,7
1105	Η ΑΑΑ Μ· 0	<*»	105,4	472,1
1106	ме Η ΑΑ'ά ⁰ (*)	27,8	162,4
1107	Μ» Η ο	(*)	126, 5	1297,0
1108	^Х*	2,3
1109	Л^ИАе ⁷ 5	9,0
1110	νγ;^ΝΗΑ0	17,3
1111	5 К-	2,5
1112		213

- 68 007254

Таблица 12. «Ретроамидные» аналоги

		А1
Соединение	К	Связывание Ку (нМ)	Дрожжи 1С50 (нМ)
1200	О	16,5	189, 4
1201	хА А Г1НМе	7,4	45,7
1202	А/ и	95,8	3345,0
1203		529,1	4040,0
1204	О	1060,0	>10000
1205	О	1272	>10000
1206	О	50,8	4028
1207	О	48,5	701,5

- 69 007254

Таблица 13

Профиль селективных аденозиновых антагонистов

ΝΗΗ .. \| Ме О ^н	Связывание Κι (нМ)
Соединение	К.	А1	А2а	А2Ь	АЗ
1300	Λ^\/-^ΝΗΑο	9,8- 25,1	18,0- 48, б	80,3	513,0
1301	Ме	27,8	50,7	84,6	429,8
1302	Η ^·^Ν\ /^ΝΗΜβγ τ 0	20,2	75, б	20,1	4,3
1303	гА А ЛЧНМе	17,4	111,3	120, 6	44,6
1304	У	13, 9- 30, 9	933,7	138,0	21,5
1305¹	>^он	46,6	730, 9	30%	9,9

- 70 007254

1306²		16,4	766, 3	168,3	71,7
1307	(άΐ)	29,1	190,6	1143,0	3,1
1308	(±)	180	230	670	1,0
1309	н /'ν/’γ* 1 ллгчъ 1	40	109	109	0,3
1310	1 Χ._Ν·^ ^ΝΗΜβ Η	255	76%	275	<2,6
1311	α. Λ ι	531	981	736	5, 3
1312	χ 1 1снщ. Α. \_Ν-^ ^ΝΗΜβ [	443	2965	375	<6,2
1313³	ι	30%	65%	515	24
1314	χ 1 (СН_г), Α. \_Ν-< ^ΝΗΕ( 1	87	204	30	0,02
1315	0 1 Η	75,000	720,000	3,400	507

- 71 007254

1316	I	333	710,000	710,000	97
1317			710,000	710,000	720,000	369
1318⁴	Λ	,>^он	3,7±0,5	63О±56,4	2307±926	630±76
3319⁴⁷³	«с	>^он	1,8	206	802	270
1320⁴'⁶	А		8, 0	531	530	419
1321⁴'⁷	<0	л™	8,0	131	1031	54%⁸
^х2-тиенил-2	-ил; ²С₅-Н;	^Зводорастворимый	; ⁴Б<5 и	Кб представляют
водород; '	К₃ представляет 3-	фторфенил; ⁶К₆ представляет 3-
хлорфенил;	⁷Н₃ представляет 4-пиридил; ⁸%	активности @ 10 мкМ

Таблица 14. Профиль селективности А_2Ь антагонистов

Соединение	ΧΚι	к₂	Данные Αι	связывания Κι	(нМ) Аз
А₂а	А₂в
1400	-О-РИ	Ме	41,7	21	10,3	14,6
1401	-О-РИ(Р)г	Ме	33	58	8,8	18
1402	-О-РЬ(р)С1	Ме	825	591	22	60
1403	-Ы-пиридин-2-он	Ме	60	41	18	48
1404	-ΝΗ-ΡΓ	Ме	49	31	4,6

- 72 007254

Таблица 15. Соединения, селективные к А_гаденозиновому рецептору * по крайней мере в 10 раз более селективен, чем другие три подтипа

- 73 007254

1501	^•нн	*
1502	НМ--\н-СН
1503	'а	*
1504	Τι оЛ	★

Страницы 176-201 относятся к соединениям, специфическим к А_2а рецептору

Краткое изложение сущности изобретения

Настоящее изобретение также относится к соединениям, которые селективно связываются с А_2ааденозиновым рецептором, излечивая таким образом заболевание, связанное с А_2а-аденозиновым рецептором, у субъекта при введении субъекту терапевтически эффективного количества таких соединений. Заболевание, подвергаемое лечению, связано, например, с заболеванием центральной нервной системы, сердечно-сосудистым заболеванием, почечным заболеванием, воспалительным заболеванием, желудочно-кишечным заболеванием, глазным заболеванием, аллергическим заболеванием или заболеванием дыхательных путей.

А,\

VI где ΝΚ₁Κ₂ представляет собой замещенное или незамещенное 4-8-членное кольцо;

где К3 представляет собой замещенное или незамещенное четырех-шестичленное кольцо;

где К5 представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил, арилалкил, амино, замещенный арил, где указанный замещенный алкил представляет собой С(К₇) (Κ₈)ΧΚ₉, где X представляет собой О, 8 или ΝΚιο, где каждый из К₇ и К₈, независимо, представляет собой Н или алкил, где каждый из К₉ и К₁₀, независимо, представляет собой алкил или циклоалкил, или К₉, К₁₀ и азот вместе образуют замещенное или незамещенное кольцо, содержащее от 4 до 7 членов;

где К6 представляет собой Н, алкил, замещенный алкил или циклоалкил;

- 74 007254 при условии, что ΝΚ₁Κ₂ не является 3-ацетамидопиперидино, 3-гидроксипирролидино, 3-метоксикарбонилметилпирролидино,

3-аминокарбонилметил или пирролидино; при условии, что ΝΚ₁Κ₂ представляет собой 3-гидроксиметилпиперидино только в том случае, если К₃ представляет собой 4-пиридил.

Данное изобретение также относится к способу ингибирования активности А_2а аденозинового рецептора в клетке, который включает контактирование указанной клетки с вышеуказанными соединения ми.

где ΝΚ₁Κ₂ представляет собой замещенное или незамещенное 4-8-членное кольцо;

где К₅ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил, арилалкил, амино, замещенный арил, где указанный замещенный алкил представляет собой -С(К₇) (К₈)ХК₉, где X представляет собой О, 8 или ΝΚ₁₀, где каждый из К₇ и К₈, независимо, представляет собой Н или алкил, где каждый из К₉ и К₁₀, независимо, представляет собой алкил или циклоалкил, или К₉, К₁₀ и азот вместе образуют замещенное или незамещенное кольцо, содержащее от 4 до 7 членов;

где Кб представляет собой Н, алкил, замещенный алкил или циклоалкил;

при условии, что ΝΚ₁Κ₂ не является 3-ацетамидопиперидино, 3-гидроксипирролидино, 3-метоксикарбонилметилпирролидино, 3-аминокарбонилметил или пирролидино; при условии, что ΝΚ₁Κ₂ представляет собой 3-гидроксиметилпиперидино только в том случае, если К₃ представляет собой 4-пиридил.

В одном варианте осуществления соединения К₃ представляет собой замещенное или незамещенное четырех-шестичленное кольцо, фенил, пиррол, тиофен, фуран, тиазол, имидазол, пиразол, 1,2,4триазол, пиридин, 2(1Н)-пиридон, 4(1Н)-пиридон, пиразин, пиримидин, пиридазин, изотиазол, изоксазол, оксазол, тетразол, нафталин, тетралин, нафтиридин, бензофуран, бензотиофен, индол, 2,3-дигидроиндол, 1Н-индол, индолин, бензопиразол, 1,3-бензодиоксол, бензоксазол, пурин, кумарин, хромон, хинолин, тетрагидрохинолин, изохинолин, бензимидазол, хиназолин, пиридо[2,3-Ь]пиразин, пиридо[3,4-Ь]пиразин, пиридо[3,2-с]пиридазин, пиридо[3,4-Ь]пиридин, 1Н-пиразол[3,4-б]пиримидин, птеридин, 2(1Н)-хинолон, 1(2Н)-изохинолон, 1,4-бензизоксазин, бензотиазол, хиноксалин, хинолин-№-оксид, изохинолин-^оксид, хиноксалин-№-оксид, хиназолин-^оксид, бензоксазин, фталазин, циннолин, или имеет структуру:

где Υ представляет собой углерод или азот;

где К₃' представляет собой Н, замещенный или незамещенный алкил, замещенный или незамещенный арил, галоген, метокси, метиламино, метилтио.

В другом варианте осуществления соединения, соединение имеет структуру: Κ₈\(/)πί \Υα

где т равен 1 или 2; где К_А и К_в, каждый, независимо представляет собой Н, -ОН, -СН₂ОН, -СН₂СН₂ОН, -С(=0^Н₂, гетероатом или -С (=0) ΝΚ₁₁Κ₁₁'; где К₁₁ представляет собой арил, замещенный арил, или гетероарил; где К₁₁' представляет собой алкил или ХК₁₁, где X представляет собой 0 или Ν, и Кп представляет собой замещенный алкил или арил.

В другом варианте осуществления соединения Κ₁Κ₂Ν представляет собой (Э)-2-аминокарбонилпирролидино, (Э)-2-гидроксиметилпирролидино, (Э)-2-гидроксиметил-транс-4-гидроксипирролидино, пиперазино или 3-гидроксиметилпиперидино.

- 75 007254

где т равен 0, 1, 2 или 3; где Υ представляет собой О, 8 или ΝΚ, где К представляет собой К_А или К_в; где К_А и К_в, каждый независимо, представляет собой Н, -ОН, -СН₂ОН, -СН₂СН₂ОН, -С(=О^Н₂, гетероатом или -С(=О)КК₁₁К₁₁’; где К₁₁ представляет собой арил, замещенный арил, или гетероарил; где Кп’ представляет собой алкил или ХК₁₁, где X представляет собой 0 или Ν, и К₁₁ представляет собой замещенный алкил или арил.

(Соединение 1600)

(Соединение 1601)

(Соединение 1602)

О.....

(Соединение 1603)

N

(Соединение 1604)

- 76 007254

(Соединение 1605)

О-/

(Соединение 1606)

(Соединение 1607)

Еще в одном варианте осуществления соединения, соединение имеет структуру:

В следующем варианте осуществления соединения, соединение имеет структуру:

Данное изобретение дополнительно относится к соединению, имеющему структуру (V):

где К₅ представляет собой Н или метил.

В одном варианте осуществления соединения V, соединение имеет структуру

- 77 007254

(Соединение 1608)

В другом варианте осуществления соединения V, соединение имеет структуру:

Данное изобретение также относится к способу лечения заболевания, связанного с А_2а аденозиновым рецептором, у субъекта, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества любого из соединений IV или V.

В одном варианте осуществления способа соединение излечивает указанные заболевания путем стимулирования аденилатциклазы.

В другом варианте осуществления способа субъект представляет собой млекопитающее.

В другом варианте осуществления способа млекопитающее является человеком.

В другом варианте осуществления способа указанный А_2а аденозиновый рецептор связан с болезнью Паркинсона и заболеваниями, связанными с двигательной активностью, расширением сосудов, ингибированием тромбоцитов, нейтрофильным генерированием супероксида, нарушением способности к познанию или старческим слабоумием.

Заболевания, связанные с А₁, А_2а, А_2Ь и А₃ аденозиновыми рецепторами, описаны в №О- 99/06053 и №0-09822465, №0-09705138, №0-09511681, №0-09733879, ΙΡ-09291089, РСТ/И8 98/16053 и патенте США № 5516894, полное содержание которых во всей своей полноте включено в данное описание в качестве ссылки.

Данное изобретение также относится к водорастворимому пролекарству соединений IV или V, где указанное водорастворимое пролекарство метаболизирует ΐη νΐνο до активного лекарственного средства, которое селективно ингибирует А2а аденозиновый рецептор.

В одном варианте осуществления пролекарства указанное пролекарство метаболизирует ΐη νΐνο посредством катализируемого эстеразой гидролиза.

Данное изобретение также относится к способу ингибирования активности А_2а аденозинового рецептора в клетке, который включает контактирование клетки с соединением IV или V.

В одном варианте осуществления способа соединение является антагонистом указанного А_2а аденозинового рецептора.

В другом варианте осуществления фармацевтической композиции указанная фармацевтическая композиция представляет собой препарат для периокулярной, ретробульбарной или внутриглазной инъекции.

В другом варианте осуществления фармацевтической композиции указанная фармацевтическая композиция представляет собой системный препарат.

Данное изобретение также относится к способу лечения желудочно-кишечного заболевания у субъекта, включающему введение эффективного количества соединений IV или V.

В одном варианте осуществления способа указанное заболевание представляет собой диарею.

В другом варианте осуществления способа соединение является антагонистом А_2а аденозиновых рецепторов.

- 78 007254

Данное изобретение, кроме того, относится к способу лечения заболевания дыхательных путей у субъекта, включающему введение субъекту эффективного количества соединения IV или V.

В одном варианте осуществления способа указанное заболевание представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких, аллергический ринит или заболевание верхних дыхательных путей.

Данное изобретение также относится к способу лечения повреждения глаза у субъекта, который включает введение указанному субъекту эффективного количества соединения IV или V.

Данное изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей терапевтически эффективное количество соединений IV или V и фармацевтически приемлемый носитель.

В одном варианте осуществления фармацевтической композиции указанное терапевтически эффективное количество является эффективным для лечения болезни Паркинсона и заболеваний, связанных с двигательной активностью, расширением сосудов, ингибированием тромбоцитов, нейтрофильным генерированием супероксида, нарушением способности к познанию или старческим слабоумием.

В другом варианте осуществления фармацевтической композиции указанная фармацевтическая композиция представляет собой хирургический орошающий раствор.

Данное изобретение также относится к комбинированной терапии болезни Паркинсона, включающей соединение IV или V и любой из допаминовых усилиливающих агентов.

Данное изобретение также относится к комбинированной терапии рака, включающей соединение IV или V и любой из цитотоксических агентов.

Данное изобретение также относится к комбинированной терапии глаукомы, включающей соединение IV или V и агонист простагландина, мускариновый агонист или β-2 антагонист.

Данное изобретение также относится к упакованной фармацевтической композиции для лечения у субъекта заболевания, связанного с А_2а аденозиновым рецептором, включающей: (а) контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество соединений IV или V; и (Ь) инструкции для использования указанного соединения для лечения указанного заболевания у субъекта.

Данное изобретение также относится к способу получения соединения IV, включающему стадии а) взаимодействия

циклизации с получением

- 79 007254

где ΝΚ’Κ₂ представляет собой замещенное или незамещенное 4-8 членное кольцо;

где Κ5 представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил, арилалкил, амино, замещенный арил, где указанный замещенный алкил представляет собой -С (Κ₇) (К₈)ХК₉, где Х представляет собой О, 8 или ΝΚ₁₀, где каждый из К₇ и Κ₈, независимо, представляет собой Н или алкил, где каждый из К₉ и Κ₁₀, независимо, представляет собой алкил или циклоалкил, или Κ₉, Κ₁₀ и атом азота вместе образуют кольцевую систему из 4-7 членов;

где представляет собой Н, алкил, замещенный алкил или циклоалкил;

при условии, что ΝΚ’Κ₂ не является 3-ацетамидопиперидино, 3-гидроксипирролидино, 3-метоксикарбонилметилпирролидино, 3-аминокарбонилметил или пирролидино; при условии, что ΝΚ’Κ₂ представляет собой 3-гидроксиметилпиперидино только в том случае, если К₃ представляет собой 4-пиридил.

Данное изобретение также относится к способу получения соединения V, включающему стадии

а) взаимодействия

с получением где Р представляет собой удаляемую защитную группу; Ъ) обработки продукта стадии а) в условиях циклизации с получением

6) обработки хлорированного продукта стадии с) первоначально диметиламином и формальдегидом, затем Ν-метилбензиламином и, наконец, N11₂1<| с получением

- 80 007254

где В₁ представляет собой ацетамидоэтил; где В₃ представляет собой 4-пиридил, где В₅ представляет собой Н или метил; где Кб представляет собой Ν-метил-К-бензиламинометил.

Как использовано в данном описании выражение «соединение является А_2а селективным» означает, что соединение имеет константу связывания с А_2а аденозиновым рецептором по крайней мере в десять раз превышающую константу для А_ь А_2Ь или А₃ аденозиновых рецепторов.

Данное изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими примерами, которые никоим образом не следует рассматривать как являющиеся дополнительными ограничениями. Содержание всех ссылок, ожидающих решения заявок на патенты и опубликованных заявок на патенты, процитированных в данной заявке, включая процитированные в разделе «Предпосылки создания изобретения», включено в данное описание в качестве ссылки. Следует понимать, что модели, использованные в примерах, являются общепринятыми моделями, и демонстрирование эффективности на данных моделях предсказывает эффективность на людях.

Данное изобретение будут лучше понятно из следующих далее экспериментальных подробностей. Однако, специалист в данной области легко поймет, что конкретные способы и обсуждаемые результаты являются только иллюстрацией изобретения, как описано более подробно в следующей далее формуле изобретения

Пример 22. Синтез антагонистов А_2а аденозина, соединений 1601, 1602 и 1603.

соединение 26 соединение 27 соединение 28 соединение 1601

Соединение 26 (10,93 г, 50,76 ммоль) растворяли в ДМФ (67 мл). Последовательно добавляли гидрохлорид 4-амидинопиридина (8,0 г, 50,76 ммоль) и ДБУ (15,4 г, 101,5 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 85°С. Через 22 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и ДМФ удаляли в вакууме. Темное масло разбавляли 2М НС1 (80 мл). Реакционную смесь оставляли для прохождения реакции. Через 2 ч раствор охлаждали до 10°С и фильтровали. Твердое вещество промывали холодной водой и сушили, получая 7,40 г желтого твердого вещества, соединение 27 (69%). Ή-ЯМР (200 МГц, б₆ДМСО) б 6,58 (с, 1Н), 7,27 (с, 1Н), 8,53 (д, 2Н, 1=5,6 Гц), 9,00 (д, 2Н, 1=5,2 Гц), 12,35 (ушир.с, 1Н). Массспектр (Е8): 212,8 (М⁺+1).

Соединение 27 (7,4 ммоль, 29,8 ммоль) разбавляли РОС13 и нагревали до 105°С. Через 18 ч реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и РОС1₃ удаляют в вакууме. Густое темное масло разбавляют МеОН (75 мл) с последующим добавлением эфира (120 мл). Аморфное красное твердое вещество отфильтровывают и промывают эфиром, получая 3,82 г красного твердого вещества. Неочищенное твердое вещество, соединение 28, имеет приблизительно 80%-ную чистоту и используется без дополнительной очистки в следующей реакции. Ή-ЯМР (200 МГц, б₆-ДМСО) б 6,58 (с, 1Н), 7,27 (с, 1Н), 8,53 (д, 2Н, 1=5,6 Гц), 9,00 (д, 2Н, 1=5,2 Гц), 12,35 (ушир.с, 1Н). Масс-спектр (е8): 212,8 (М⁺+1).

Соединение 1601: ДМСО (5 мл) и Ό-пролинол (500 мг, 4,94 ммоль) добавляли к соединению 28 (500 мг, 2,17 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 120°С. Через 18 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли ЕЮ Ас и Н₂О. Слои разделяли и водный слой экстрагировали ЕЮАс (2х). Объединенные органические слои промывали Н₂О (2х), насыщенным раствором соли, сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали, получая 200 мг золотисто-коричневого твердого вещества. Твердое вещество перекристаллизовывали из ЕЮАс, получая 82 мг золотисто-желтого твердого вещества. Ή-ЯМР (200 МГц, 66-ДМСО) б 2,05 (м, 4Н), 3,43 (м, 1Н), 3,70-4,00 (м, 3Н), 4,50 (ушир.с, 1Н), 4,92 (ушир.с, 1Н), 6,62 (м, 1Н), 7,22 (м, 1Н), 8,22 (д, 2Н, 1=6,0 Гц), 6,64 (д, 2Н, 1=6,2 Гц); масс-спектр (Е8) 296,0 (М⁺+1), т.пл .=210-220°С (разложение).

Соединение 1602: Хроматография (диоксид кремния, 9:1, СНС1₃/МеОН) давала 10 мг золотистокоричневого твердого вещества (2%). ¹Н-ЯМР (200 МГц, б6-ДМСО) б 2,00-2,50 (м, 4Н), 4,05 (м, 1Н), 4,21 (м, 1Н), 6,71 (д, 1Н, 1=3,2 Гц), 7,18 (д, 1Н, 1=3,2 Гц), 8,37 (д, 2Н, 1=4,8 Гц), 8,56 (д, 2Н, 1=5,0 Гц). Массспектр (Е8) : 309,1 (М⁺+1).

Соединение 1603: Хроматография (диоксид кремния, 20:1, гексаны/ЕЮАс) давала 135 мг золотисто-коричневого твердого вещества (53%). ¹Н-ЯМР (200 МГц, б6-ДМСО) б 2,00-2,50 (м, 4Н), 4,05 (м, 1Н),

- 81 007254

4,21 (м, 1Н), 6,71 (д, 1Н, 1=3,2 Гц), 7,18 (д, 1Н, 1=3,2 Гц), 8,37 (д, 2Н, 1=4,8 Гц), 8,56 (д, 2Н, 1=5,0 Гц). Масс-спектр (Е8): 309, 1 (М⁺+1).

Соединение 1605: В круглодонной колбе емкостью 50 мл растворяли 60 мг НС1 соли 2-(4'-пиридил)4-хлорпиримидинопиррола в 2 мл безводного ДМСО. К раствору добавляли соль трифторуксусной кислоты 3-(К)-гидрокси-(О)-пролинола (380 мг) и 500 мг бикарбоната натрия. Затем смесь продували током газообразного азота в течение 5 мин и нагревали до 130°С. Через 2 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и ДМСО удаляли в вакууме. Остаток распределяли между Е!ОАс (15 мл) и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (15 мл). Органический слой отделяли и промывали насыщенным раствором соли (15 мл) и сушили над Па₂8О₄. После удаления растворителя неочищенный продукт очищали препаративной ТСХ (СН₂С1₂/МеОН=95/5), получая 35 мг (50 %).¹Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) 2,3-2,5 (1Н), 3,4-3,8 (3Н), 4,4-4,6 (2Н), 6,4 (1Н), 7,1 (1Н), 8,2 (д, 2Н), 8,7 (д, 2Н), 11,0 (1Н). Массспектр (Е8): 312 (М⁺+1).

Пример 23. Синтез антагониста А_2а аденозина, соединения 1606.

Соединение 28 (200 мг) обрабатывали ДМФ (30 мл), метиловым эфиром 2,2-диметилглицина (73 мг НС1 соли в 2 мл воды) и 500 мг бикарбоната натрия. Через 18 ч ДМФ удаляли в вакууме. Остаток распределяли между Е1ОАс (30 мл) и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (15 мл). Органический слой промывали насыщенным раствором соли (15 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Хроматография (диоксид кремния, 10:4, гексаны/Е!ОАс) давала 150 мг чистого продукта, соединения 29 (69%). ¹Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) 1,4 (с, 6Н); 3,8 (с, 3н); 3,9 (с, 2Н); 6,4 (с, 1Н); 7,4-7,5 (м, 3Н); 8,4 (м, 2Н); 9,8 (с, 1Н).

Соединение 1606: Способ получения такой же, как для соединения 1605 (72%).¹Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) 1,3 (с, 6Н), 1,7-1,9 (м, 2Н); 2,05-2,30 (м, 2Н); 3,6-4,1 (м, 11Н); 4,80-4,95 (м, 1Н); 6,4 (с, 1Н); 7,4-7,6 (м, 3Н); 8,3-8,4 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 10 (с, 1Н). Масс-спектр (Е8): 424,0 (м⁺+1).

Следующие соединения могут быть синтезированы аналогичным образом.

Соединение 1600: (51%), масс-спектр (Е8) 326,0 (М⁺+1).

Соединение 1607: ¹Н-ЯМР (200 МГц, СПС1₃) 1,40-1,80 (м, 5Н), 2,80-3,50 (м, 3Н), 4,60-4,80 (м, 3Н), 6,66 (д, 1Н, 1=6,2 Гц), 7,26 (м, 1Н), 8,21 (д, 2Н, 1=6,3 Гц), 8, 65 (д, 2Н, 1=5,8 Гц), 11,90 (с, 1Н). М8 (Е8): 310,1 (М⁺+1).

Соединение 1608: (64%) ¹Н-ЯМР (200 МГц, д₆-ДМСО) 1,75 (с, 3Н), 2,11 (с, 3Н), 2,29 (с, 3Н), 3,56 (м, 6Н), 7,23-7,41 (м, 5Н), 8,00 (ушир.с, 1Н), 8,23 (д, 2Н, 1=6,0 Гц), 8,63 (д, 2Н, 1=5,4 Гц), 8,82 (ушир.с, 1Н), 11,56 (ушир.с, 1Н). Масс-спектр (Е8): 444,0 (М⁺+1).

Соединение 1609: ¹Н-ЯМР (200 МГц, СП₃ОП) 3,40 (м, 4Н), 4,29 (м, 4Н), 6,99 (с, 1Н), 7,5-7,2 (м, 3Н), 7,90 (д, 2Н), 8,39 (д, 2Н), 8,61 (д, 2Н). М8 (Е8): 357,0 (М⁺+1).

Таблица 16. Соединения, селективные к А_2а-аденозиновому рецептору

* по крайней мере в 5 раз более селективен, чем другие три подтипа
Соеди нение	Структура	Соотв етств ующий Κϊ-Α!	К₄-А_2а	Соотв етств ующий к₄-а_2Ь	Соответству ющий Κχ-Аз
1600	ζ“^! γγ а/кАА/ ^{Ν Н}		*

- 82 007254

1601	О Ν	··..,,,ζ^0Η		*
			Γ5
	ίΤ^Ί	' Ν	Η
	\Ζ
1602		ο	ΝΗ_}		*
		\χ	Ύ
		I
		11С	5
	II Ί		Η
	II 1
1603		Ο	/^0Η ν/Ζ		*
		^Μ^1ί
	ο		''‘'•Ν Η

- 83 007254

- 84 007254

Страницы 202-256 относятся к соединениям, специфическим к А₃ рецептору.

Краткое изложение сущности изобретения

Настоящее изобретение также основано на соединениях, которые селективно связываются с А₃ аденозиновым рецептором, таким образом оказывая лечение заболевания, связанного с А₃ аденозиновым рецептором у субъекта путем введения субъекту терапевтически эффективного количества таких соединений. Заболевание, подвергаемое лечению, относится, например, к астме гиперчувствительности, риниту, сенной лихорадке, сывороточной болезни, аллергическому васкулиту, атопическому дерматиту, дерматиту, псориазу, экземе, идиопатическому фиброзу легких, эозинофильному холециститу, хроническому заболеванию дыхательных путей, гиперэозинофильным синдромам, эозинофильному гастроэнтериту, отеку, крапивнице, эозинофильному заболеванию миокарда, периодическому ангионевротическому отеку с эозинофилией, воспалительному заболеванию кишечника, язвенному колиту, аллергическому грануломатозу, карциноматозу, эозинофильной гранулеме, наследственному гистиоцитозу, гипертензии, дегрануляции тучных клеток, опухоли, сердечной гипоксии, церебральной ишемии, диурезу, почечной недостаточности, неврологическому заболеванию, психическому нарушению, нарушению способности к познанию, ишемии миокарда, бронхостенозу, артриту, аутоиммунному заболеванию, болезни Крона, болезни Граве, диабету, рассеянному склерозу, анемии, псориазу, нарушениям способности воспроизведения потомства, системной красной волчанке, реперфузионному повреждению, диаметру артериол мозга, высвобождению аллергических медиаторов, склеродерме, инсульту, общей ишемии, нарушению центральной нервной системы, сердечно-сосудистому заболеванию, почечному заболеванию, воспалительному заболеванию, желудочно-кишечному заболеванию, глазному заболеванию, аллергическому заболеванию, заболеванию дыхательных путей или иммунологическому заболеванию.

где К1 представляет собой Н, и К2 представляет собой циклопропилметиламинокарбонилэтил, цис3-гидроксициклопентил, ацетамидобутил, метиламинокарбониламинобутил, зтиламинокарбониламинопропил, метиламинокарбониламинопропил, 2-ацетиламино-3-метилбутил, Ν,Ν-диэтиламинокарбониламиноэтил, тиоацетамидоэтил, 3-аминоацетилоксициклопентил, 3-гидроксициклопентил, 2-пирролилкарбониламиноэтил, 2-имидазолидинонэтил, 1-аминокарбонил-2-метилпропил, 1-аминокарбонил-2фенилэтил, 3-гидроксиазетидино, 2-имидазолилэтил, ацетамидоэтил, 1-(К)-фенил-2-гидроксиэтил, Νметиламинокарбонилпиридил-2-метил, или Кд, К₂ и азот вместе представляют собой 3-ацетамидопиперидино, 3-гидроксипирролидино, 3-метилоксикарбонилметилпирролидино, 3-аминокарбонилметилпирролидино или 3-гидроксиметилпиперидино, где К₃ представляет собой замещенное или незамещенное четырех-шести членное кольцо, пиррол, тиофен, фуран, тиазол, имидазол, пиразол, 1,2,4триазол, пиридин, 2 (1 Н)-пиридон, 4(1 Н)-пиридон, пиразин, пиримидин, пиридазин, изотиазол, изоксазол, оксазол, тетразол, нафталин, тетралин, нафтиридин, бензофуран, бензотиофен, индол, 2,3дигидроиндол, 1Н-индол, индолин, бензопиразол, 1,3-бензодиоксол, бензоксазол, пурин, кумарин, хромон, хинолин, тетрагидрохинолин, изохинолин, бензимидазол, хиназолин, пиридо[2,3-Ь]пиразин, пиридо[3,4-Ь] пиразин, пиридо[3,2-с]пиридазин, пиридо[3,4-Ь]пиридин, 1Н-пиразол[3,4-б]пиримидин, птеридин, 2(1Н)-хинолон, 1(2Н) -изохинолон, 1,4-бензизоксазин, бензотиазол, фталазин или циннолин, где К5 представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил или замещенный арил, где К6 представляет собой Н, алкил, замещенный алкил или циклоалкил.

Данное изобретение также относится к способу ингибирования активности А3 аденозинового рецептора в клетке, который включает контактирование клетки с вышеуказанными соединениями.

Типичные схемы синтеза для получения промежуточных соединений дезазапурина по изобретению представлены в общих чертах ниже на схеме I.

Данное изобретение также относится к способу получения соединения IV, включающему стадии

а) взаимодействия с получением

- 85 007254 где Р представляет собой удаляемую защитную группу; Ь) обработки продукта стадии а) в условиях циклизации с получением

с) обработки продукта со стадии Ь) в подходящих условиях с получением

с) обработки хлорированного продукта стадии с) NНΚ₁Κ₂ с получением

где Κι представляет собой Н, и К₂ представляет собой циклопропилметиламинокарбонилэтил, цис3-гидроксициклопентил, ацетамидобутил, метиламинокарбониламинобутил, этиламинокарбониламинопропил, метиламинокарбониламинопропил, 2-ацетиламино-3-метилбутил, Ν,Ν-диэтиламинокарбониламиноэтил, тиоацетамидоэтил, 3-аминоацетилоксициклопентил, 3-гидроксициклопентил, 2-пирролилкарбониламиноэтил, 2-имидазолидинонэтил, 1-аминокарбонил-2-метилпропил, 1-аминокарбонил-2фенилэтил, 3-гидроксиазетидино, 2-имидазолилэтил, ацетамидоэтил, 1-(К)-фенил-2-гидроксиэтил, Νметиламинокарбонилпиридил-2-метил, или Κι, К₂ и азот вместе представляют собой 3-ацетамидопиперидино, 3-гидроксипирролидино, 3-метилоксикарбонилметилпирролидино, 3-аминокарбонилметилпирролидино или 3-гидроксиметилпиперидино, где К₃ представляет собой замещенное или незамещенное четырех-шестичленное кольцо;

где К₅ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил или циклоалкил;

где Κ6 представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил или замещенный арил.

а) взаимодействия

с получением

где Р представляет собой удаляемую защитную группу;

Ь) обработки продукта стадии а) в условиях циклизации с получением ОН

с) обработки хлорированного продукта стадии с)

- 86 007254

где К₁ представляет собой циклопропилметил, метил, метиламино или аминометил;

где К₃ представляет собой арил, замещенный арил, гетероарил;

где К₅ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил, арилалкил, амино, замещенный арил, где указанный замещенный алкил представляет собой -С(К₇)(К₈)К₉К₁₀, где каждый из К₇ и К₈ представляет собой Н или алкил, где каждый из К₉ и К₁₀ представляет собой алкил или циклоалкил, или К₉, К₁₀ и атом азота вместе образуют кольцевую систему из 4-7 членов, где К₆ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил или циклоалкил.

Данное изобретение дополнительно относится к способу получения соединения VI, включающему а) взаимодействия

Р с получением

с) обработки продукта со стадии Ъ) в подходящих условиях с получением

с получением

где К₃ представляет собой незамещенный арил,

- 87 007254 где Κ₆ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил или циклоалкил;

где К₅ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил, арилалкил, амино, замещенный арил, где указанный замещенный алкил представляет собой -С(К₇) (Κ₈)ΝΚ₉Κι₀, где каждый из К₇ и К₈ представляет собой Н или алкил, где каждый из К₉ и Κ₁₀ представляет собой алкил или циклоалкил, или Κ₉, Κ₁₀ и атом азота вместе образуют кольцевую систему из 4-7 членов.

IV где Κι представляет собой Н, и К₂ представляет собой циклопропилметиламинокарбонилэтил, цис3-гидроксициклопентил, ацетамидобутил, метиламинокарбониламинобутил, этиламинокарбониламинопропил, метиламинокарбониламинопропил, 2-ацетиламино-3-метилбутил, Ν,Ν-диэтиламинокарбониламиноэтил, тиоацетамидоэтил, 3-аминоацетилоксициклопентил, 3-гидроксициклопентил, 2пирролилкарбониламиноэтил, 2-имидазолидинонэтил, 1-аминокарбонил-2-метилпропил, 1-аминокарбонил-2-фенилэтил, 3-гидроксиазетидино, 2-имидазолилэтил, ацетамидоэтил, 1-(К)-фенил-2-гидроксиэтил, №метиламинокарбонилпиридил-2-метил, или

Κι, К₂ и атом азота вместе представляют собой 3-ацетамидопиперидино, 3-гидроксипирролидино, 3метилоксикарбонилметилпирролидино, 3-аминокарбонилметилпирролидино или 3-гидроксиметилпипе ридино, где Р3 представляет собой замещенный или незамещенный бензол, пиррол, тиофен, фуран, тиазол, имидазол, пиразол, 1,2,4-триазол, пиридин, 2(1Н)-пиридон, 4(1Н)-пиридон, пиразин, пиримидин, пиридазин, изотиазол, изоксазол, оксазол, тетразол, нафталин, тетралин, нафтиридин, бензофуран, бензотиофен, индол, 2,3-дигидроиндол, 1Н-индол, индолин, бензопиразол, 1,3-бензодиоксол, бензоксазол, пурин, кумарин, хромон, хинолин, тетрагидрохинолин, изохинолин, бензимидазол, хиназолин, пиридо[2,3Ь]пиразин, пиридо[3,4-Ь]пиразин, пиридо[3,2-с]пиридазин, пиридо[3,4-Ь]пиридин, 1Н-пиразол[3,4-б]пиримидин, птеридин, 2(1Н)-хинолон, 1(2Н)-изохинолон, 1,4-бензизоксазин, бензотиазол, хиноксалин, хиполипА-оксид, изохинолин-^оксид, хиноксалин-^оксид, хиназолин-^оксид, бензоксазин, фталазин или циннолин, где Р5 представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил или замещенный арил;

где Р6 представляет собой Н, алкил, замещенный алкил или циклоалкил.

В другом варианте осуществления соединения К₃ представляет собой фенил.

В другом варианте осуществления соединения Р6 представляет собой водород или метил.

В другом варианте осуществления соединения К₅ представляет собой водород, метил, фенил, 3хлорфенилоксиметил или транс-2-фениламинометилпирролидинометил.

Данное изобретение далее относится к соединению, имеющему структуру:

- 88 007254 где т равно 0, 1 или 2;

где К₅ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил, арилалкил, амино, замещенный арил, где указанный замещенный алкил представляет собой -С(К₇) (К₈) ΝΚ₉Κ₁₀, где каждый из К₇ и К₈ представляет собой Н или алкил, где каждый из К₉ и К₁₀ представляет собой алкил или циклоалкил, или К₉, К₁₀ и азот вместе образуют кольцевую систему, содержащую от 4 до 7 членов;

где К₆ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил или циклоалкил.

В одном варианте осуществления соединения V, т равен 0, и К₃ представляет фенил.

В другом варианте осуществления соединения V, т равен 1, и К₃ представляет фенил.

В другом варианте осуществления соединения V, т равен 2, и К₃ представляет фенил.

В другом варианте осуществления соединения V, К₅ и К₆ являются метилами.

(Соединение 1316)

(Соединение 1311)

(Соединение 1202)

’ΝΗ (Соединение 1310)

- 89 007254

Изобретение далее относится к соединению, имеющему структуру: н^.

ЫН

(Соединение 609)

Изобретение также относится к соединению, имеющему структуру:

где К₃ представляет собой незамещенный арил;

где К₆ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил или циклоалкил;

где К₅ представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, арил, арилалкил, амино, замещенный арил, где указанный замещенный алкил представляет собой ^(Κ₇)(Κ₈)ΝΚ₉Κ₁₀, где каждый из К₇ и К₈ представляет собой Н или алкил, где каждый из К₉ и К₁₀ представляет собой алкил или циклоалкил, или К₉, К₁₀ и азот вместе образуют кольцевую систему, содержащую от 4 до 7 членов.

В одном варианте осуществления соединения VI, соединение имеет структуру:

(Соединение 1309)

В одном варианте осуществления соединения 1309, соединение имеет структуру:

В другом варианте осуществления соединения 1309, соединение имеет структуру:

- 90 007254

где К₁ представляет собой

3-гидроксициклопентилэтиламинокарбониламинопропил, Ν,Ν-диэтиламинокарбониламиноэтил, тиоацетамидоэтил, 3-аминоацетилоксициклопентил, 3-гидроксициклопентил, 2-пирролилкарбониламиноэтил, 2-имидазолидинонэтил, 1-аминокарбонил-2-метилпропил, 1-аминокарбонил-2-фенилэтил, 3гидроксиазетидино, 2-имидазолилэтил, ацетамидоэтил, 1-(К)-фенил-2-гидроксиэтил или Ν-метиламинокарбонилпиридил-2-метил;

где К₅ и К₆ независимо представляют собой Н, замещенный или незамещенный алкил или арил.

(Соединение 1700)

(Соединение 1702)

- 91 007254

ΝΗ

(Соединение ’704)

(Соединение 1705)

(Соединение 1706)

В другом варианте осуществления соединения, соединение имеет структуру: ^нч

- 92 007254

В (Соединение 1707) другом варианте осуществления соединения, соединение имеет структуру:

(Соединение 1708) другом варианте осуществления соединения, соединение имеет структуру:

(Соединение 1709) другом варианте осуществления соединения, соединение имеет структуру:

- 93 007254

(Соединение 1710)

(Соединение 1712)

(Соединение 1713)

(Соединение 1714)

- 94 007254

(Соединение 1715)

К’\ /

где В_ь В₂ и атом азота вместе представляют собой 3-гидроксипирролидино, 3-метилоксикарбонилметилпирролидино, 3-аминокарбонилметилпирролидино или 3-гидроксиметилпиперидино;

где В₅ и Вб независимо представляют собой Н, замещенный или незамещенный алкил или арил.

(Соединение 1711)

- 95 007254

(Соединение 1703)

(Соединение 1716)

В другом варианте осуществления соединения, соединение имеет структуру: Н₃С

- 96 007254

(Соединение 1717)

(Соединение 1718)

- 97 007254

Данное изобретение также относится к способу лечения заболевания, связанного с А3 аденозиновым рецептором у субъекта, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества любого из соединений IV, V, VII или VIII.

В одном варианте осуществления способа субъект представляет собой млекопитающее.

В другом варианте осуществления способа указанный А3 аденозиновый рецептор связан с заболеванием центральной нервной системы, сердечно-сосудистым заболеванием, астмой, гиперчувствительностью, ринитом, сенной лихорадкой, сывороточной болезнью, аллергическим васкулитом, атопическим дерматитом, дерматитом, псориазом, экземой, идиопатическим фиброзом легких, эозинофильным холециститом, хроническим заболеванием дыхательных путей, гиперэозинофильным синдромом, эозинофильным гастроэнтеритом, отеком, крапивницей, эозинофильным заболеванием миокарда, периодическим ангионевротическим отеком с эозинофилией, воспалительным заболеванием кишечника, язвенным колитом, аллергическим грануломатозом, карциноматозом, эозинофильной гранулемой, наследственным гистиоцитозом, гипертензией, дегрануляцией тучных клеток, опухолью, сердечной гипоксией, церебральной ишемией, диурезом, почечной недостаточностью, неврологическим заболеванием, психическим нарушением, нарушением познавательной способности, ишемией миокарда, бронхостенозом, артритом, аутоиммунным заболеванием, болезнью Крона, болезнью Граве, диабетом, рассеянным склерозом, анемией, псориазом, нарушениями способности воспроизведения потомства, системной красной волчанкой, реперфузионным повреждением, диаметром артериол мозга, высвобождением аллергических медиаторов, склеродермой, инсультом, общей ишемией, нарушением центральной нервной системы, сердечнососудистым заболеванием, почечным заболеванием, воспалительным заболеванием, желудочно-кишечным заболеванием, глазным заболеванием, аллергическим заболеванием, заболеванием дыхательных путей или иммунологическим заболеванием.

Заболевания, связанные с Л1, А2а, А2Ь и А3 аденозиновыми рецепторами описаны в №0 99/06053 и №0-09822465, №0-09705138, №0-09511681, №0-09733879, ΙΡ-09291089, РСТ/и8 98/16053 и патенте СШЛ № 5516894, полное содержание которых во всей своей полноте включено в данное описание в качестве ссылки.

Данное изобретение также относится к водорастворимому пролекарству любого из соединений IV,

V, VI, VII или VIII; где указанное водорастворимое пролекарство метаболизирует ίη νίνο до активного лекарственного средства, которое селективно ингибирует А3 аденозиновый рецептор.

В одном варианте осуществления пролекарства указанное пролекарство метаболизирует ίη νίνο посредством катализируемого эстеразой гидролиза.

Данное изобретение также относится к способу ингибирования активности А3 аденозинового рецептора в клетке, который включает контактирование указанной клетки с любым из соединений IV, V,

VI, VII или VIII.

В одном варианте осуществления способа соединение является антагонистом указанного А3 адено зинового рецептора.

- 98 007254

Данное изобретение также относится к способу лечения желудочно-кишечного заболевания у субъекта, включающему введение эффективного количества любого из соединений IV, V, VI, VII или VIII.

В другом варианте осуществления способа соединение является антагонистом А3 аденозиновых рецепторов.

Данное изобретение, кроме того, относится к способу лечения заболевания дыхательных путей у субъекта, включающему введение субъекту эффективного количества любого из соединений IV, V, VI, VII или VIII.

Данное изобретение также относится к способу лечения повреждения глаза у субъекта, который включает введение указанному субъекту эффективного количества любого из соединений IV, V, VI, VII или VIII.

Данное изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей терапевтически эффективное количество любого из соединений IV, V, VI, VII или VIII и фармацевтически приемлемый носитель.

В одном варианте осуществления фармацевтической композиции указанное терапевтически эффективное количество является эффективным для лечения заболевания дыхательных путей или желудочнокишечного заболевания.

Данное изобретение также относится к упакованной фармацевтической композиции для лечения заболевания, связанного с А3 аденозиновым рецептором, у субъекта, включающей: (а) контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество любого из соединений IV, V, VI, VII или VIII; и (Ъ) инструкции для использования указанного соединения для лечения указанного заболевания у субъекта.

Соединения, представленные формулами IV, V, VI, VII или VIII могут быть синтезированы в соответствии со схемами ЫХ.

Как использовано в данном описании, выражение «соединение является А₃ селективным» означает, что соединение имеет константу связывания с А3 аденозиновым рецептором, по крайней мере в десять раз превышающую константу для А’, А_2а или А_2Ъ аденозиновых рецепторов.

- 99 007254

Данное изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими примерами, которые никоим образом не следует рассматривать как являющиеся дополнительными ограничениями. Содержание всех ссылок, ожидающих решения заявок на патенты и опубликованных заявок на патенты, процитированных в данной заявке, включая процитированные в разделе «Предпосылки создания изобретения», включено в данное описание в качестве ссылки. Следует понимать, что модели, использованные в примерах, являются общепринятыми моделями, и демонстрация эффективности на данных моделях предсказывает эффективность на людях.

Специалист в данной области будет знать, что метаболизм описанных здесь соединений у субъекта продуцирует определенные биологически активные метаболиты, которые могут служить в качестве лекарственных средств.

Пример 24. Экспериментальные Л3 аденозиновые антагонисты.

Соединение 1700 (таблица 17, ниже): масс-спектр (Е8) 3бб,1 (М⁺+1).

Соединение 1710 (таблица 17, ниже): масс-спектр (Е8) 381,1 (М⁺+1).

Соединение 131б (таблица 17, ниже): масс-спектр (Е8) 353,2 (М⁺+1).

Соединение 1703 (таблица 17, ниже): масс-спектр (Е8) 357,1 (М⁺+1).

Соединение 1719 (таблица 17, ниже): ¹Н-ЯМР (200 МГц, бе-ДМСО) 1,75 (м, 2Н), 3,11 (м, 2Н), 3,35 (с, 3Н), 3,59 (м, 2Н), 5,72 (м, 1Н), 5,9б (м, 1Н), б,55 (с, 1Н), 7,15 (с, 1Н), 7,49 (м, 2Н), 8,32 (м, 2Н).

Соединение 1704 (таблица 17, ниже): масс-спектр (Е8) 3б7,0 (М⁺+1).

Соединение 170б (таблица 17, ниже): ¹Н -ЯМР (200 МГц, СИСЕ) б 1,22 (м, 2Н), 1,б0-2,40 (м, 4Н), 4,53 (м, 1Н), 4,94 (м, 1Н), 5,70 (д, 1Н, 1=8,2 Гц), б,35 (д, 1Н, 1=2,8 Гц), б,97 (д, 1Н, 1=2,0 Гц), 7,50 (м, 3Н), 8,40 (м, 2Н), 10,83 (ушир.с, 1Н).

Соединение 1707 (таблица 17, ниже): масс-спектр (Е8) 347,0 (М⁺+1).

Соединение 1708 (таблица 17, ниже): масс-спектр (Е8) 399,0 (М⁺+1).

Соединение 1709 (таблица 17, ниже): масс-спектр (Е8) 385,9 (М⁺+1).

Соединение 1710 (таблица 17, ниже): масс-спектр (Е8) 434,0 (М⁺+1).

Соединение 1711 (таблица 17, ниже) : ¹Н-ЯМР (200 МГц, С1ЖОО) б 3,95 (д, 2Н, 1=5,8 Гц), 4,23-4,31 (м, 2Н), 4,53 (т, 2Н, 1=8,8 Гц), б,30 (д, 1Н, 1=3,0 Гц), б,98 (д, 1Н, 1=3,0 Гц), 7,45-7,48 (м, 3Н), 7,83-8,42 (м, 2Н), 9,70 (ушир.с, 1Н). Масс-спектр (Е8) 281,1 (М⁺+1).

Соединение 1712 (таблица 17, ниже) : ¹Н -ЯМР (200 МГц, С1)_;О1)) б 3,02 (м, 2Н), 3,92 (м, 2Н), 5,09 (2,2Н), б,53 (с, 1Н), б,90-7,04 (ушир.с, 1Н), б,92 (м, 2Н), 7,02 (м, 1Н), 7,21 (дд, 1Н, 1=8,2 Гц), 7,40 (м, 3Н), 7,50-7,80 (ушир.с, 1Н), 8,33 (м, 2Н). Масс-спектр (Е8) 445,1 (М⁺+1).

Соединение 1713 (таблица 17, ниже) : ¹Н-ЯМР (200 МГц, б 1,б5-1,80 (м, 7Н), 1,88-2,00 (м,

1Н), 2,10-2,40 (м, 1Н), 2,70-3,05 (м, 3Н), 3,09-3,14 (м, 2Н), 3, 1б-3,38 (м, 1Н), 3,45 (д, 1Н, 1=14 Гц), 3,533,б0 (м, 2Н), 3.84-3,92 (м, 2Н), 3,97 (д, 1Н, 1=14 Гц), 5,55 (т, 1Н, 1=5,8 Гц), б,17 (с, 1Н), б,55-б,59 (м, 2Н), б,б4-б,71 (м, 1Н), 7,11-7,19 (м, 2Н), 7,43-7,4б (м, 3Н), 8,38-8,42 (м, 2Н). Масс-спектр (Е8) 484,0 (М⁺+1).

Соединение 1714 (таблица 17, ниже): Масс-спектр (Е8) 471,0 (М⁺+1).

Соединение 1715 (таблица 17, ниже): Масс-спектр (Е8) 505,0 (М⁺+1).

Соединение 171б (таблица 17, ниже) : ¹Н-ЯМР (200 МГц, С1ЖОО) б 1,б5 (м, 1Н), 2,18 (м, 1Н), 2,49 (ушир.д, 2Н, 1=б,2 Гц), 2,б4 (м, 1Н), 3,38 (м, 1Н), 3,б9 (с, 3Н), 3,72 (м, 1Н), 3,93 (м, 1Н), 4,10 (м, 1Н), 5,0б (2,2Н), б,58 (с, 1Н), б,92 (м, 2Н), 7,02 (м, 1Н), 7,23 (дд, 1Н, 1=8,1 Гц), 7,39 (м, 3Н), 8,32 (м, 2Н).

Соединение 1717 (таблица 17, ниже) : ¹Н -ЯМР (200 МГц, С1)_;О1)) б 1,б9 (м, 1Н), 2,2б (м, 1Н), 2,42 (д, 2Н, 1=7,4Гц), 2,72 (м, 1Н), 3,53 (м, 1Н), 3,83 (м, 1Н), 4,02 (м, 1Н), 4,14 (дд, 1Н, 1=10,б, 7,0Гц), 5,14 (2,2Н), б,б9 (с, 1Н), б,9б (м, 2Н), 7,0б (м, 1Н), 7,25 (дд, 1Н, 1=8,0т), 7,39 (м, 3Н), 8,35 (м, 2Н). Массспектр (Е8) 4б2,2 (М⁺+1).

Соединение 1718 (таблица 17, ниже): ¹Н-ЯМР (200 МГц, С1)_;О1)) б 1,40-2,00 (м, 5Н), 3,52 (д, 2Н, 7,б Гц), 3,80-4,00 (м, 1Н), 4,00-4,20 (м, 3Н), 4,50 (м, 2Н), б,3б-б.50 (м, 2Н), б,54 (с, 1Н), б,84-б,92 (м, 1Н), 7,05 (т, 1Н, 1=8,2 Гц), 7,30-7,45 (м, 3Н), 8,24 (д, 2Н, 1= 9,8Гц). Масс-спектр (Е8) 449,0 (М⁺+1).

- 100 007254

Таблица 17. Соединения, селективные к А₃-аденозиновому рецептору * по крайней мере в 10 раз более селективен, чем другие три подтипа

Соединение	Структура	Κι-Αχ	К1-А_2а	Кх-А_2Ь	Κχ-Аз
1202	X 1					*
	А
		См,
		'у——см.
	сУ-	Н
1700	V г


		2 Сн,
	сУ-	Н
1309	О					★
	о	л
	Аг 1	СН» ί
	1Ϊ	Л-^
		н
	и

- 101 007254

1701	н>с		*
	/ ^н,с\/^н\^о ΝΗ 1	Сн>
	Λ А	ΧΥ Η
1311	0=0 ΗΝ		*
	^ΝΗ Ο	Α Η
1312	/^сн>		*
	ΗΝ ΗΝ _
	θΛ	Сн, У-сн. Η

- 102 007254

1310	н,с. ΝΗ 0^<:!ί!!ί^·ΝΗ Α сА	СН, Γ>-«· Η	*
1316	Η_?Ν О'^!!##:::*^^ХчНН I		*
	V Γ	СН,
	οΑ	Η
1702	^Η’^ςη^⁵ΗΝ *		★
	α_νμ	Λ’
	^α0·	2 СН_а
	0^х	Η

- 103 007254

1703	ъ КА'у--'	х/л			*
σ	-Л	/Л И
1704	г						*
	Чн 0<Ά	V	Сн₅
		1		·>
	АГ	ЧЛ	*^Ν М

1705	ΝΜ,					*
	у.	= 0
	0 с	к НН I	Сн,
		ό	У	—Сн,
	О'		н
1706	но	л	’ιΜ	>			*
	ΓΊ		·/ н

- 104 007254

1707	А ΗΝ .. о-ч»	*
1708	.0 Х^^м\ ^ΝΗ	*
1709	^СМ> у—*\ θΛ,Α-йк-/	*
1710	οχ θΧ/Ο~ΧΙ^	*

- 105 007254

1711	н° ό Ν	*
1712	0—	к
1713	сн »^4 θ ’^ιΛ—^Η\ γ	к
1714	од	к

- 106 007254

- 107 007254

Данное изобретение относится к соединению, имеющему структуру:

1505

1506

Данное изобретение кроме того относится к соединению, имеющему структуру:

1507

1508

1509

- 108 007254

1510

1511

1512

1513

1514

Данное изобретение кроме того относится к соединению, имеющему структуру: ОН

ΗΝ

1515

- 109 007254

Данное изобретение также относится к соединению, имеющему структуру: ОН

1516

ОН

ΗΝ

1517

1518

ΗΝ

1520

В следующем варианте осуществления изобретение относится к способу лечения заболевания, связанного с А₁ аденозиновым рецептором у субъекта, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества соединений 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 или 1520.

- 110 007254

В следующем варианте осуществления изобретение относится к вышеуказанному способу, где субъект представляет собой млекопитающее.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к вышеуказанному способу, где млекопитающее является человеком.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к вышеуказанному способу, где указанный А1 аденозиновый рецептор связан с нарушением способности к познанию, почечной недостаточностью, сердечной аритмией, эпителием дыхательных путей, высвобождением трансмиттера, седативным действием, сужением кровеносных сосудов, брадикардией, отрицательной сердечной инотропией и дромотропией, бронхостенозом, нейтрофильным хемотаксисом, рефлюксом или язвенным заболеванием.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к водорастворимому пролекарству соединения 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 или 1520, где водорастворимое пролекарство метаболизирует ίη νίνο, давая активное лекарственное средство, которое селективно ингибирует А₁ аденозиновый рецептор.

В следующем варианте осуществления изобретения указанное пролекарство метаболизирует ίη νίνο посредством катализируемого эстеразой гидролиза.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей вышеуказанное пролекарство и фармацевтически приемлемый носитель.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к способу ингибирования активности А1 аденозинового рецептора в клетке, который включает контактирование клетки с соединениями 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 или 1520.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к вышеуказанному способу ингибирования активности А1 аденозинового рецептора в клетке, где соединение является антагонистом А1 аденозинового рецептора.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к вышеуказанному способу ингибирования активности А₁ аденозинового рецептора в клетке, где клетка является клеткой человека.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к вышеуказанному способу ингибирования активности А! аденозинового рецептора в клетке человека, где соединение является антагонистом А1 аденозинового рецептора.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к способу лечения у субъекта заболевания, связанного с А1 аденозиновым рецептором, где указанное заболевание представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких, аллергический ринит или заболевание верхних дыхательных путей.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к способу лечения у субъекта заболевания, связанного с А1 аденозиновым рецептором, где указанное заболевание представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких, аллергический ринит или заболевание верхних дыхательных путей, и где субъект является человеком.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к способу лечения вышеуказанного заболевания, где указанное соединение является антагонистом А₁ аденозиновых рецепторов.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к комбинированной терапии астмы, включающей соединение 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 или 1520 и стероид, β2 агонист, глюкокортикоид, антагонист люкотриена или антихолинергический агонист.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей терапевтически эффективное количество соединения 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 или 1520 и фармацевтически приемлемый носитель.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к способу лечения заболевания дыхательных путей с использованием соединения 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 или 1520, где указанное заболевание представляет собой астму, аллергический ринит или хроническое обструктивное заболевание легких.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к вышеуказанной фармацевтической композиции(ям), где указанная фармацевтическая композиция представляет собой препарат для периокулярной, ретробульбарной или внутриглазной инъекции.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к вышеуказанной фармацевтической композиции(ям), где указанная фармацевтическая композиция представляет собой системный препарат.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к вышеуказанной фармацевтической композиции(ям), где указанная фармацевтическая композиция представляет собой хирургический орошающий раствор.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к упакованной фармацевтической композиции для лечения заболевания, связанного с А1 аденозиновым рецептором, у субъекта, включающей:

(а) контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество соединений 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 или 1520, и

- 111 007254 (Ь) инструкции для использования указанного соединения для лечения указанного заболевания у субъекта.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к фармацевтически приемлемой соли соединения 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 или 1520.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к вышеуказанной фармацевтически приемлемой соли, где фармацевтически приемлемая соль соединения 1509, 1511, 1518 или 1519 содержит катион, выбранный из группы, состоящей из натрия, кальция и аммония.

Еще в одном следующем варианте осуществления изобретение относится к способу лечения заболевания, связанного с А₁ аденозиновым рецептором у субъекта, где А₁ аденозиновый рецептор связан с застойной сердечной недостаточностью.

Иллюстративный пример

Пример 21. Синтез амида 1-[6-(4-гидрокси-4-фенилпиперидин-1-илметил)-2-фенил-7Н-пирроло[2,3й]пиримидин-4-ил]пирролидин-2-карбоновой кислоты (1505).

Соединение 1505 синтезировали способом, аналогичным способу примера 17, с использованием схемы синтеза IX и Ь-пролинамида и 4-фенилпиперидин-4-ола, получая:

’Н -ЯМР (й₆-ДМСО) й 1,53 (с, 1Н), 1,60 (с, 1Н), 1,84-2,30 (м, 6Н), 2,66 (м, 2Н), 3,60 (с, 2Н), 3,88 (м, 1Н), 4,02 (м, 1Н), 4,66 (д, 1Н, 1=6,8 Гц), 4,73 (с, 1Н), 6,44 (с, 1Н), 6,94 (с, 1Н), 7,12-7,50 (м, 10Н), 8,35 (м, 2Н), 11,6 (ушир.с, 1Н); масс-спектр (Е8) : 305,1 (М⁺+1); т.пл.=234-235°С.

Пример 22. Синтез [N-(2-фенил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)]-(^)-пролинамида (1506).

Соединение 1506 синтезировали с использованием схемы синтеза VII и Р-пролинамида, получая:

1506 ’Н -ЯМР (й₆-ДМСО) й 2,05 (м, 4Н), 3,85 (м, 1Н), 4,05 (м, 1Н), 4,70 (д, 1Н, 1=8,0 Гц), 6,58 (ушир.с, 1Н), 6,95 (ушир.с, 1Н), 7,15 (д, 1Н, 1=3,4 Гц), 7,40 (м, 3Н), 7,50 (ушир.с, 1Н), 8,40 (м, 2Н), 11,6 (ушир.с, 1Н); масс-спектр (Е8): 308,3 (м⁺+1). Т.пл.=236-238° С.

Пример 23. Синтез [N-(2-фенил-6-метоксиметил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-4-ил)]-(^)-пролинамида (1507).

Соединение 1507 получали с использованием соединения 23 в качестве синтеза IX, получая:

предшественника по схеме

Бромид 23 (4,23 г, 10 ммоль) растворяли в безводном метаноле (60 мл) и ДХМ (120 мл) и обрабатывали А§0₂ССР₃ в атмосфере N2 при комнатной температуре в течение 1 ч. Твердое вещество удаляли фильтрованием и промывали ДХМ (2x20 мл). Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток повторно растворяли в ДХМ (80 мл). Полученный раствор затем промывали насыщенным раствором NаНС0₃ и насыщенным раствором соли, сушили над Мд80₄, фильтровали и концентрировали, получая 3,71 г (4, 99%) не совсем белого твердого вещества. ’Н-ЯМР (СЭС1_з) й 1,75 (с, 9Н), 3,51 (с, 3Н), 4,83 (с, 2Н), 6,70 (с, 1Н), 7,47 (м, 3Н), 8,52 (м, 2Н).

- 112 007254

1507

Арилхлорид 4 (2,448 г, 6,55 ммоль), ДМСО (15 мл), Ь-пролинамид (4,0 г, 35,0 ммоль) и №НСО₃ (2,9 г) объединяли и нагревали до 120°С в атмосфере азота. Через 4 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой (60 мл). Полученную суспензию экстрагировали ДХМ (10х). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором №НСО₃ и насыщенным раствором соли, сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали, получая 2,4 8 г коричневого твердого вещества. Чистый продукт (1,86 г, 81 %) получали после флэш-хроматографии в виде белого твердого вещества. Белые кристаллы получены из смеси ТГФ/гексан. Т.пл.=213-215°С. ¹Н -ЯМР (СЭС1₃) 4 2,15 (м, 3Н), 2,52 (м, 1Н), 3,26 (с, 3Н), 3,92 (м, 1Н), 4,10 (м, 1Н), 4,42 (с, 2Н), 5,08 (д, 1Н, 1=8,2 Гц), 5,49 (ушир.с, 1Н), 6,48 (с, 1Н), 7,08 (ушир.с, 1Н), 7,42 (м, 3Н), 8,38 (м, 2Н), 9,78 (ушир.с, 1Н); масс-спектр (Е8): 352,2 (М⁺+1).

Пример 24. Синтез амида 4-гидрокси-1-(2-фенил-7Н-пирроло[2,3-4]пиримидин-4-ил)пирролидин-2карбоновой кислоты (1508).

Соединение 1508 получали гидроксипролинамида, получая:

с использованием цис-

¹Н -ЯМР (4₆-ДМСО) 4 1,90 (м, 1Н), 3,85 (д, 1Н, 1=9,2 Гц), 4,08 (м, 1Н), 4,37 (с, 1Н), 4,67 (дд, 1Н, 1=8,8, 4,0 Гц), 5,30 (с, 1Н), 6,55 (с, 1Н), 7,15 (с, 2Н), 7,37 (м, 3Н), 7,64 (с, 1Н), 8,37 (м, 2Н), 11,65 (ушир.с, 1Н); масс-спектр (Е8): 324,2 (М⁺+1); т.пл.=268-271°С.

Пример 25. Синтез 3-[4-((8)-2-карбамоил-пирролидин-1-ил)-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-4]пиримидин-

6-ил]пропионовой кислоты (1509).

Соединение 1509 получали с использованием в качестве предшественника соединения 23 по схеме синтеза IX, получая:

Трет-Бутоксикарбонилзащищенный, арилбромид 23 (4,0 г, 9,5 ммоль), сухой ДМСО (25 мл), №Н₂РО₄ (454 мг, 3,79 ммоль) и №Н₂РО₄ (1,62 г, 11,4 ммоль) объединяли и нагревали при 50°С в атмосфере аргона в течение приблизительно 3,5 ч. Смесь затем выливали в воду (200 мл) и экстрагировали тремя порциями по 100 мл Е!ОАс. Объединенные органические слои тщательно промывали водой, насыщенным раствором соли, сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали, получая желтое твердое вещество, которое очищали растиранием его с этанолом, получая 1,55 г бледно-желтого твердого вещества (7). Маточный раствор очищали флэш-хроматографией (10% Е!ОАс в гексане), получая дополнительно 454 мг (60%). ¹Н-ЯМР (СОС1₃) 4 1,77 (с, 9Н), 7,25 (с, 1Н), 7,48 (м, 3Н), 8,52 (м, 2Н) 10,39 (с, 1Н); т.пл.=156°С (разл.).

- 113 007254

Альдегид 7 (600 мг, 1,7 ммоль) растворяли в безводном ТГФ (20 мл) и охлаждали до 0°С в атмосфере аргона. К нему добавляли по каплям через канюлю охлажденный до 0°С раствор трет(бутоксикарбонилметилен)трифенилфосфорана (694 мг, 1,8 ммоль) в 10 мл сухого ТГФ. Через 3 ч смесь концентрировали и очищали растиранием с этанолом, получая 565 мг (73%) белого твердого вещества (8). ¹Н -ЯМР (СПС1₃) б 1,58 (с, 9Н), 1,79 (с, 9Н), 6,46 (д, 1Н), 6,95 (с, 1Н), 7,48 (м, 3Н), 8,09 (д, 1Н), 8,56 (м, 2Н).

Раствор соединения 8 (565 мг, 1,2 ммоль) в 5 мл ТГФ разбавляли до 100 мл ЕЮАс. После добавления 600 мг катализатора (5 вес.% Рб, 50% Н₂О) и продувки аргоном смесь гидрировали при атмосферном давлении. Через 8 ч смесь фильтровали, концентрировали и очищали флэш-хроматографией (10% ЕЮАс в гексане), выделяя 200 мг (35%) 9 в виде прозрачного масла, которое закристаллизовывалось при стоянии. ¹Н-ЯМР (СБС1з) б 1,42 (с, 9Н), 1,75 (с, 9Н), 2,65 (т, 2Н), 3,32 (т, 2Н), 6,41 (с, 1Н) 7,45 (м, 3Н), 8,51 (м, 2Н).

Арилхлорид 9 (200 мг, 0,44 ммоль), ДМСО (10 мл) и Е-пролинамид (440 мг, 4,4 ммоль) объединяли и нагревали до 85 °С в аргоне. Через 14 ч смесь охлаждали до комнатной температуры и распределяли между водой и этилацетатом. Слои разделяли и водный слой промывали ЕЮАс (3х). Объединенные органические слои тщательно промывали водой, насыщенным раствором соли, сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали, получая 10 в виде желтой пленки, которую очищали флэш-хроматографией (2,5% МеОН в СН2С12).

185 мг (97%). Масс-спектр (Е8): 435,8 (М⁺+1).

1509

Сложный эфир 10 (30 мг, ммоль) в 5 мл диоксана гидролизовали добавлением 0,5 мл концентрированной НС1. Через 3 часа смесь концентрировали в вакууме и перекристаллизовывали из смеси ЕЮН/ЕЮАс, получая 1509 в виде белого твердого вещества (20 мг, 61%). Масс-спектр (Е8): 380 (М⁺+1).

Пример 26. Синтез [Х-(2-фенил-6-аминокарбонилметоксиметил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4ил)-(Е)]-пролинамида (1510).

Соединение 1510 получали с использованием соединения 23 в качестве предшественника по схеме

- 114 007254

Бромид 23 (’,27 г, 3 ммоль) и молекулярные сита (5 г) перемешивали в безводном метилгликоляте (5,8 г, 60 ммоль) и ДХМ (40 мл). Раствор обрабатывали АаОТГ в атмосфере Ν₂ и оставляли перемешиваться в течение 3 ч. Твердое вещество удаляли фильтрованием и промывали ДХМ (2хмл). Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток повторно растворяли в ДХМ (80 мл). Полученный раствор затем промывали водой, насыщенным раствором NаНСОз и насыщенным раствором соли, сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали, получая ’,35 г (99%) не совсем белого твердого вещества (’2). ’Н -ЯМР (СБС1₃) 6 ’,75 (с, 9Н), 3,80 (с, 3Н), 5,0 (с, 2Н), 6,78 (с, ’Н), 7,47 (м, 3Н), 8,52 (м, 2Н).

Арилхлорид ’2 (’77 мг, 0,4’ ммоль), ДМСО (’0 мл), Ь-пролинамид (466 мг, 4 ммоль) и \а11СО₃(500 мг) объединяли и нагревали до ’20°С в атмосфере аргона. Через 4 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой (60 мл). Полученную суспензию экстрагировали ДХМ (5x30 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором NаНСОз и насыщенным раствором соли, сушили над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали, получая коричневое твердое вещество. Чистый продукт (’54 мг, 92%) получали после флэш-хроматографии в виде белого твердого вещества (’3). ’Н -ЯМР (ΟϋΟ1₃) 6 2,’5 (м, 3Н), 2,52 (м, ’Н), 3,55 (с, 3Н), 4,58 (с, 2Н), 5,08 (с, ’Н, ), 5,85 (ушир.с, ’Н), 6,48 (с, ’Н), 7,08 (ушир.с, ’Н), 7,42 (м, 3Н), 8,40 (м, 2Н), ’0,58 (ушир.с, ’Н); массспектр (Е8): 4’0,’ (М⁺+’).

Метиловый сложный эфир 13 (124 мг, 0,3 ммоль) растворяли в НОСН₃ (15 мл). Аммиак барботировали через раствор в течение 0,5 ч. Реакционную смесь затем перемешивали еще в течение 3 ч при комнатной температуре. После удаления растворителя получали 111 мг белого твердого вещества (1510, 93%). ’Н-ЯМР (ΟϋΟ1₃) 6 ’,82 (м, 3Н), 2,20 (м, ’Н), 2,80 (м, ’Н), 3,’0 (м, ’Н), 3,63 (дд, 2Н, 1’=’3,8Гц,

1₂=’9,4Гц), 3,87 (м, ’Н), 4,07 (м, ’н), 4,97 (м, ’Н), 5,96 (м, 2н), 6,35 (с, ’Н), 6,86 (ушир.с, ’Н), 7,’’ (ушир.с, ’Н), 7,37 (м, 3Н), 8,28 (м, 2Н), ’’,46 (ушир.с, ’Н); масс-спектр (Е8): 394,8 (М⁺+’).

Пример 27. Синтез [4-(2-карбамоилпирролидин-1-ил)-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин-6]карбоновой кислоты (1511).

Соединение 1511 получали с использованием соединения 15 в качестве предшественника по синтетической схеме VII, получая:

К суспензии гидрида натрия (780 мг 60%-ной суспензии в масле, ’9,5 ммоль) в безводном ДМФ (20 мл), охлаждаемой на бане лед/вода, в токе азота добавляли раствор пирролопиримидина 15 (2,00 г, 7,52 ммоль) в ДМФ (10 мл) в течение 5 мин. Через 15 мин добавляли бензолсульфонилхлорид (1,2 мл, 9,40 ммоль), затем удаляли охлаждающую баню. Через 4 ч реакционную смесь выливали в смесь льда и насыщенного раствора \а11СО₃, выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывали и растирали с ацетоном (3) и метанолом (2), получая 2,37 г бежевого твердого вещества. Данное твердое вещество содержит приблизительно ’0 мол.% ДМФ (на этом основании выход составил 83%) и может быть использовано на следующей стадии; чистый образец можно получить хроматографической очисткой на силикагеле с использованием ацетона в качестве элюента. ’Н-ЯМР (СОС1₃) 6 6,70 (д, 1=4,2Гц, ’Н), 7,47-7,68 (м, 6Н),

- ’’5 007254

7,76 (д, 1=4,2 Гц, 1Н), 8,24-8,32 (м, 2Н), 8,48-8,56 (м, 2Н); ИК (твердый): п = 3146 см^-1, 1585, 1539, 1506, 1450, 1417, 1386, 1370, 1186, 1176, 1154, 1111, 1015, 919, 726, 683, 616, 607; Масс-спектр (ЕБ): 372/370 (МН⁺); т.пл.=226-227°С.

К раствору Ν-сульфонилзамещенного соединения 16 (337 мг, 0,911 ммоль) в сухом ТГФ (34 мл), охлажденному смесью сухой лед/ацетон, добавляли БЭА· ТГФ (1,0 мл, 1,5 М раствор в циклогексане, 1,5 ммоль). Через 45 мин диоксид углерода барботировали в раствор в течение 5 мин, затем удаляли охлаждающую баню. Когда раствор достигал температуры окружающей среды, растворители упаривали, получая 398 мг соли 17, содержащей приблизительно 0,5 эквив. (1Рг)^СО₂Б1, в виде желтого твердого вещества. Соль использовали без очистки на следующей стадии. ¹Н-ЯМР (б₆-ДМСО) б 6,44 (с, 1Н), 7,50-7,75 (м, 6Н), 8,33-8,40 (м, 2Н), 8,53 (дд, 6=8,0, 1,6Гц, 2Н).

Раствор литиевой соли 17 (50 мг) и Б-пролинамида (122 мг, 1,07 ммоль) в ДМСО (1,5 мл) нагревали в токе азота при 80°С в течение 15,5 ч. К охлажденному раствору добавляли 4%-ную водную уксусную кислоту (10 мл) и смесь экстрагировали ЕЮАс (5x10 мл). Объединенные органические слои промывали 4%-ной водной уксусной кислотой (10 мл), водой (10 мл) и насыщенным раствором соли (10 мл) и сушили над МдБО₄. Фильтрование и концентрирование давали 40 мг 18 в виде желтоватого твердого вещества, которое использовали без очистки на следующей стадии. ¹Н-ЯМР (СП₃ОЭ) б 1,95-2,36 (м, 4Н), 3,853,95 (м, 1Н), 3,95-4,17 (м, 1Н), 4,72 (ушир.с, 1Н), 7,14 (с, 1Н), 7,35-7,45 (м, 3Н), 7,45-7,70 (м, 3н), 8,338,50 (м, 4Н).

Раствор гидроксида натрия в метаноле (1,5 мл, 5М, 7,5 ммоль) добавляли к раствору пирролопиримидина 18 (40 мг, 0.081 ммоль) в метаноле (2 мл). Через 2 ч рН доводили до 5, большую часть метанола упаривали, смесь экстрагировали ЕЮАс (5x10 мл), объединенные органические слои промывали насыщенным раствором соли и сушили над МдБО₄. Фильтрование и концентрирование давали 24 мг бледножелтого твердого вещества, которое растирали со смесью толуол/Е!ОАс/МеОН, получая 15,6 мг (55%) кислоты 1511 в виде слегка желтоватого твердого вещества. ¹Н-ЯМР (СО₃ОП) б 2,05-2,20 (м, 4Н), 3,954,10 (м, 1Н), 4, 15-4,25 (м, 1Н), 4,85 (ушир.с, 1Н), 7,14 (с, 1Н), 7,35-7,42 (м, 3Н), 8,38-8,45 (м, 2Н); ИК (твердый): п = 3192 см^-1, 2964, 2923, 2877, 1682, 1614, 1567, 1531, 1454, 1374, 1352, 1295, 1262, 1190, 974, 754, 700; масс-спектр (ЕБ): 352 (М⁺+1); т.пл.=220°С (разлож.).

Пример 28. Синтез амида (1-(6-метил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил))-(Б)пирролидин-2-карбоновой кислоты (1512).

Соединение 1512 синтезировали с использованием следующих стадий:

- 116 007254

Арилхлорид 20 (3 г, 10,7 ммоль), ДМСО (50 мл) и (8)-пролинамид объединяли и нагревали при 85°С в атмосфере аргона. После перемешивания в течение ночи (14 часов) смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали в 800 мл воды. Эту смесь экстрагировали три раза порциями по 200 мл ЕЮЛс.

Объединенные органические слои тщательно промывали водой (3x300 мл), насыщенным раствором соли, сушили над Мд80₄, фильтровали и концентрировали, получая темно-коричневое твердое вещество. Твердое вещество перекристаллизовывали дважды из ЕЮЛс, получая 1,95 г (57%) золотисто-рыжего твердого вещества (1512). ¹Н-ЯМР /₆-ДМСО) ά 1,8-2,2 (м, 4Н), 2,3 (с, 3Н), 3,8 (м, 1Н), 4,0 (м, 1Н), 4,6 (д, 1Н) 6,2 (с, 1Н), 6,9 (с, 1Н), 7,2 (м, 3Н), 7,3 (с, 1Н), 8,4 (м, 2Н), 11,5 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 322 (М⁺+1).

Пример 29. Синтез амида 1-[6-(2-гидроксиэтоксиметил)-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-4ил]пирролидин-2-карбоновой кислоты (1513).

Соединение 1513 синтезировали способом, аналогичным способу примера 17, в соответствии с синтетической схемой IX с использованием Ь-пролинамида и этан-1,2-диола, получая:

1513

Масс-спектр (Е8) 382 (М⁺+1).

Пример 30. Синтез 4-(6-имидазол-1-илметил-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-4-иламино) циклогексанола (1514).

Соединение 1514 синтезировали способом, аналогичным способу примера 17, в соответствии с синтетической схемой IX с использованием Ν-6-аминоциклогексанола и имидазола, получая:

Масс-спектр (Е8) 389 (М⁺+1).

Пример 31: Синтез 4-(4-гидроксициклогексиламино)-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-6-карбоновой кислоты (1515).

Соединение 1515 синтезировали способом, аналогичным способу примера 27, в соответствии с синтетической схемой IX с использованием Ν-6-аминоциклогексанола, получая:

ОН

ΗΝ

Масс-спектр (Е8) 353 (М⁺+1)

Пример 32. Синтез 4-[6-(2-гидроксиэтоксиметил)-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-0]пиримидин-4-иламино]циклогексанола (1516).

- 117 007254

Соединение 1516 синтезировали способом, аналогичным способу получения соединения 1513, в соответствии с синтетической схемой !Х с использованием Ν-6-аминоциклогексанола, получая:

Пример 33. Синтез метилового эфира 4-(4-гидроксициклогексиламино)-2-фенил-7Н-пирроло[2,3д]пиримидин-6-карбоновой кислоты (1517).

Раствор литиевой соли 17 (0,13 ммоль) в безводном ДМФ (4 мл) перемешивают с йодистым метилом (0,1 мл, 1,6 ммоль) при 20°С в атмосфере аргона в течение 3 ч. ДМФ упаривают и добавляют водный раствор хлорида аммония (15 мл). Смесь экстрагируют Е!ОАс (3x15 мл), объединенные органические слои промывают водой (2x10 мл) и насыщенным раствором соли (10 мл) и сушат над Мд8О₄. Фильтрование и концентрирование дают 21 мг (38%) метилового сложного эфира 22.

Раствор метилового сложного эфира 22 (24,5 мг, 0,057 ммоль) и 4-транс-аминоциклогексанола (66 мг, 0,57 ммоль) в ДМСО (1,5 мл) нагревают в атмосфере азота при 80°С в течение 5 часов, затем нагревание прекращают и перемешивание при 20°С продолжают в течение 13,5 ч. К охлажденному раствору добавляют 4%-ную водную уксусную кислоту (10 мл) и смесь экстрагируют Е!ОАс (3x10 мл). Объединенные органические слои промывают 4%-ной водной уксусной кислотой (10 мл), водой (10 мл), 2н. ХаОН (10 мл), водой (10 мл), и насыщенным раствором соли (10 мл) и сушат над Мд8О₄. К раствору неочищенного вещества, полученного после фильтрования и концентрирования (¹Н ЯМР указывает на примерно 50%-ное удаление бензолсульфонильной группы) в ТГФ (2 мл) добавляют раствор ХаОН в МеОН (0,5 мл 5М раствора, 2,5 ммоль) при температуре окружающей среды. Через 20 мин добавляют воду и насыщенный раствор ХаНСО₃ (по 5 мл каждого) и смесь экстрагируют Е!ОАс (4x15 мл). Объединенные органические слои промывают 2н ХаОН (10 мл), водой (10 мл), и насыщенным раствором соли (10 мл) и сушат над Мд8О₄. Хроматография неочищенного вещества, полученного после фильтрования и концентрирования, на силикагеле при элюировании смесью гексаны/Е!ОАс 1:1 1:2 дает 8,6 мг (41%)

1517 в виде белого твердого вещества, т.пл. 225-227°С. ¹Н-ЯМР (СО₃ОП) д 1,38-1,62 (м, 4Н), 1,95-2,10 (м, 2Н), 2,10-2,25 (м, 2Н), 3,55-3,70 (м, 1Н), 3,91 (с, 3Н), 4,20-4,35 (м, 1Н), 7,32 (с, 1Н), 7,35-7,47 (м, 3Н), 8,358,42 (м, 2Н); ИК (твердый): η = 3352 см^-1, 3064, 2935, 2860, 1701, 1605, 1588, 1574, 1534, 1447, 1386, 1333, 1263, 1206, 1164, 1074, 938, 756, 705; масс-спектр (Е8) : 367 (МН⁺).

Пример 34. Синтез метилового эфира [4-(2-карбамоилпирролидин-1-ил)-2-фенил-7Н-пирроло[2,3д]пиримидин-6-илметокси]уксусной кислоты (1518).

Соединение 1518 синтезировали способом, аналогичным способу пример 26, с использованием в качестве предшественника соединения 12, получая:

- 118 007254

Масс-спектр (Е8) 410 (М⁺+1).

Пример 35. Синтез [4-(2-карбамоилпирролидин-1-ил)-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-6илметокси]уксусной кислоты (1519).

Соединение 1519 синтезировали способом, аналогичным способу получения соединения 1518, где сложноэфирную метильную группу гидролизовали с помощью основания, получая:

Масс-спектр (Е8) 396 (М⁺+1).

Пример 36. Синтез амида 4-(4-гидроксициклогексиламино)-2-фенил-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-

6-карбоновой кислоты (1520)

Газообразный аммиак конденсируют в раствор пирролопиримидина 23 (7,8 мг, 0,021 ммоль) в метаноле (6 мл), охлаждаемый смесью сухой лед/ацетон, до тех пор пока не достигается общий объем 12 мл, после перемешивания в течение 10 дней при 20°С растворители упаривают и остаток очищают препаративной ТСХ на силикагеле, элюируя смесью 5% МеОН в СН₂С1₂. Полученное таким образом вещество растирают с простым эфиром, получая 6.5 мг (88%) амида 1520 в виде белого твердого вещества, т.пл. 225-227°С (разлож.). ¹Н-ЯМР (СВ30В) ά 1,40-1,60 (м, 4Н), 2,00-2,15 (м, 2Н), 2,15-2,25 (м, 2Н), 3,55-

3,70 (м, 1Н), 4,20-4,35 (м, 1Н), 7,16 (с, 1Н), 7,35-7,47 (м, 3Н), 8,34-8,40 (м, 2Н); ИК (твердый): η = 3358 см¹, 3064, 3025, 2964, 2924, 2853, 1652, 1593, 1539, 1493, 1452, 1374, 1326, 1251, 1197, 1113, 1074, 1028, 751, 699; масс-спектр (Е8) : 352 (МН⁺).

Активность соединений

Насыщение и конкурентное радиолигандное связывание подтипа 1 аденозинового (А!) рецептора проводили для соединений 1505, 1506, 1507, 1508, 1509, 1510, 1511, 1512, 1513, 1514, 1516, 1517, 1518, 1519 и 1520, как описано здесь и наряду с другим на стр.152-153 данного описания. Все вышеупомянутые соединения равны или превосходят аффинность связывания с А1 рецептором ссылочных соединений 1318 или 1319, как описано здесь и наряду с другим в таблице 13, на стр. 171 данного описания.

Предполагается, что растворимость в воде вышеуказанных соединений, перечисленных в таблице 18, будет лучше, чем ссылочных соединений 1318 или 1319 вследствие их значений сЕодР, которые были рассчитаны с использованием компьютерной программы С8 СИешИгаА, СИешИгаА Е’Ега, усг.6.0 ®1999, разработанной СашЬпйде8ой Согрогайоп, 100 СашЬпйде рагк Игтуе, СашЬпйде, МА 021140.

Перечисленные в таблице 18 соединения, специфические к А1 рецептору, имели более низкие значения сйодР, между примерно 1,5 и примерно 3,4, по сравнению со ссылочными соединениями 1318 или 1319, имеющими значения сйодР около 3,8. Нельзя было прогнозировать, что более полярные А! рецепторные соединения, перечисленные в таблице 18 и имеющие более низкие значения сЕодР, чем ссылочные соединения 1318 или 1319 все еще будут сохранять эффективность и селективность связывания А1 рецептора по сравнению с этими ссылочными соединениями.

- 119 007254

Страницы 288-293 относятся к дополнительным соединениям, специфическим к А_2а рецептору. Данное изобретение относится к соединению, имеющему структуру:

1609

<

1610

В следующем варианте осуществления изобретение относится к способу лечения заболевания у субъекта, связанного с А_2а аденозиновым рецептором, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества соединений 1609 или 1610.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к способу лечения заболевания, связанного с А_2а аденозиновым рецептором у субъекта, где А_2а аденозиновый рецептор связан с двигательной активностью, расширением сосудов, ингибированием тромбоцитов, нейтрофильным генерированием супероксида, нарушениями способности к познанию, старческим слабоумием или болезнью Паркинсона.

Изобретение относится к вышеуказанному способу, где соединение лечит заболевание посредством стимулирования аденилатциклазы.

- 120 007254

Изобретение также относится к водорастворимому пролекарству соединения 1609 или 1610, где водорастворимое пролекарство метаболизирует ΐη νίνο, давая активное лекарственное средство, которое селективно ингибирует А_2а аденозиновый рецептор.

Изобретение также относится к водорастворимому пролекарству соединения 1609 или 1610, где пролекарство метаболизирует ΐη νίνο посредством катализируемого эстеразой гидролиза.

Изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей водорастворимое пролекарство соединения 1609 или 1610 и фармацевтически приемлемый носитель.

Изобретение также относится к способу ингибирования активности А_2а аденозинового рецептора в клетке, который включает контактирование клетки с соединениями 1609 или 1610.

Изобретение также относится к способу ингибирования активности А2а аденозинового рецептора в клетке, который включает контактирование клетки с соединениями 1609 или 1610, где соединение является антагонистом указанного А2а аденозинового рецептора.

Изобретение также относится к вышеуказанному способу, где клетка является клеткой человека.

Изобретение также относится к вышеуказанному способу, где клетка является клеткой человека, и соединение является антагонистом А_2а аденозиновых рецепторов.

Изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей терапевтически эффективное количество соединения 1609 или 1610 и фармацевтически приемлемый носитель.

Изобретение также относится к вышеуказанной фармацевтической композиции, где терапевтически эффективное количество является эффективным для лечения болезни Паркинсона и заболевания, связанного с двигательной активностью, расширением сосудов, ингибированием тромбоцитов, нейтрофильным генерированием супероксида, нарушениями способности к познанию или старческим слабоумием.

Изобретение также относится к вышеуказанной фармацевтической композиции, где фармацевтическая композиция является офтальмологическим препаратом.

Изобретение также относится к вышеуказанной фармацевтической композиции, где фармацевтическая композиция представляет собой препарат для периокулярной, ретробульбарной или внутриглазной инъекции.

Изобретение также относится к вышеуказанной фармацевтической композиции, где фармацевтическая композиция является системным препаратом.

Изобретение также относится к вышеуказанной фармацевтической композиции, где фармацевтическая композиция представляет собой хирургический орошающий раствор.

Изобретение также относится к комбинированной терапии болезни Паркинсона, включающей соединения 1609 или 1610 и любой из допаминовых усиливающих агентов.

Изобретение также относится к комбинированной терапии рака, включающей соединения 1609 или 1610 и любой из цитотоксических агентов.

Изобретение также относится к комбинированной терапии глаукомы, включающей соединения 1609 или 1610 и агонист простагландина, мускариновый агонист или β-2 антагонист.

Изобретение также относится к упакованной фармацевтической композиции для лечения у субъекта заболевания, связанного с А₂ аденозиновым рецептором, включающей:

(a) контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество соединений 1609 или 1610, и (b) инструкции для использования указанного соединения для лечения указанного заболевания у субъекта.

Иллюстративный пример

Пример 41. Синтез амида 1-(6-фенил-2-пиридин-4-ил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил]пирролидин-2-карбоновой кислоты (1609).

Соединение 1609 синтезировали взаимодействием Ь-пролинамида с подходящим хлоридным промежуточным соединением, описанным на схеме II на стр.82, с получением:

1609 ¹Н-ЯМР (ά6-ДМСО) ά 1,95-2,15 (м, 4Н), 4,00 (ушир.с, 1Н), 4,15 (ушир.с, 1Н), 4,72 (ушир.с, 1Н), 6,90 (ушир.с, 1Н), 7,19 (ушир.с, 1Н), 7,30 (т, 1Н, 1=7,0 Гц), 7,44 (т, 2Н, 1=7,0 Гц), 7,59 (с, 1Н), 7,92 (ушир.с, 2н), 8,26 (д, 2Н, 1=6,2 Гц), 8,65 (д, 2Н, 1=6,2 Гц); масс-спектр (Е8) : 384,9 (М+1); т.шт.=280-316°С (разлож.).

Пример 42. Синтез амида 1-[6-(3-метоксифенил)-2-пиридин-4-ил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4ил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (1610).

- 121 007254

Соединение 1610 синтезировали взаимодействием Ь-пролинамида с подходящим хлоридным промежуточным соединением, описанным на схеме II на стр.82, с получением:

1610

Ή-ЯМР (66-ДМСО) б 2,07 (м, 4Н), 3,85 (с, 3Н), 4,02 (м, 1Н), 4,17 (м, 1Н), 4,75 (м, 1Н), 6,89 (м, 1Н), 7,00 (с, 1Н), 7,23 (с, 1Н), 7, 35 (т, 1Н, 1=8,2 Гц), 7,53 (с, 2Н), 7,60 (с, 1Н), 8,28 (д, 2Н, 1=5,8 Гц), 8,67 (д, 2Н, 1=5,8 Гц), 12,37 (с, 1Н); масс-спектр (Е8): 415,0 (М⁺+1).

Активность соединений

Конкурентное радиолигандное связывание подтипа 2а аденозинового (А_2а) рецептора проводили для соединений 1609 и 1610, как описано здесь и, наряду с другим, на стр.153 данного описания. Установлено, что соединения 1609 и 1610 обладают аффинностью и селективностью связывания с А₂ рецеп тором.

Страницы 294-300 относятся к дополнительным соединениям, специфическим к А₃ рецептору. Данное изобретение также относится к соединению, имеющему структуру:

1720

В следующем варианте осуществления изобретение относится к способу ингибирования активности А₃ аденозинового рецептора в клетке, который включает контактирование клетки с соединением 1720.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к способу ингибирования активности А₃ аденозинового рецептора в клетке, где соединение является антагонистом А₃ аденозинового рецепто ра.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к вышеуказанному способу ингибирования активности А₃ аденозинового рецептора в клетке, где клетка является клеткой человека.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к способу ингибирования активности А₃ аденозинового рецептора в клетке, где клетка является клеткой человека, и где соединение является антагонистом А₃ аденозинового рецептора.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к способу лечения повреждения глаза у субъекта, включающему введение субъекту композиции, включающей терапевтически эффективное количество соединения 1720.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к вышеуказанному способу, где повреждение включает повреждение сетчатки или зрительного головного нерва.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к терапии глаукомы, включающей введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения 1720.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к терапии глаукомы, включающей один или несколько антагонистов аденозинового рецептора, предпочтительно включающей антагонист А₃ аденозинового рецептора (предпочтительно N-6 замещенный 7-дезазапурин, наиболее предпочтительно [2-(3Н-имидазол-4-ил)этил]-(2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)амин).

В альтернативном варианте осуществления изобретение относится к комбинированной терапии глаукомы, включающей антагонист А₃ аденозинового рецептора (предпочтительно N-6 замещенный 7дезазапурин, наиболее предпочтительно [2-(3Н-имидазол-4-ил)этил]-(2-фенил-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-4-ил)амин) и одно или несколько других соединений, выбранных из группы, состоящей из антагонистов бета-адреносептора (т.е. бета-адренергических антагонистов или бета-блокаторов) (например, тимолол малеат, бетаксолол, картеолол, левобунолол, метипранолол, к-653328 (ацетат к-652698), антагонистов бета-1-адреноцептора), агонистов альфа-2-адреноцептора (например, аплаклонидин, бримони

- 122 007254 дин, Λ6Ν-195795, Λ6Ν-190837 (аналог Вау-а-6781)), ингибиторов карбоновой ангидразы (бринзоламид, дорзоламид, МК-927 (ингибитор изофермента карбоновой ангидразы II человека), ингибиторы изофермента карбоновой ангидразы IV), холинергических агонистов (например, мускариновые холинергические агонисты, карбахол, пилокарпин НС1, пилокарпин нитрат, пилокарпин, пролекарства пилокарпина (например, ПП-22А), простагландинов и агонистов простагландинового рецептора (например, латанопрост, унопростон изопропил, агонисты РСР2 альфа, агонисты простаноид-селективного РК рецептора, РС агонисты, такие как гипотензивные простамиды), ингибиторов ангиотензин-конвертирующего фермента (АСЕ) (например, спираприл, спираприлат), антагонистов АМРА рецептора, 5-НТ агонистов (например, селективный агонист 5-НТ 1А рецептора, такой как МКС-242 (5-[3-((28)-1,4-бензодиоксан-2илметил)амино]пропокси-1,3-бензодиоксол НС1), ингибиторов ангиогенеза (например, стероид анекортав), ХМЭА антагонистов (например, НИ-211, мемантин, агонист каннабиноидного ММЭА-рецептора дексанабинол, пролекарства и аналоги дексанабинола, ΝΚ2 В-селективные антагонисты (например, элипродил (8Б-82.0715)), ингибиторов ренина (например, ССР-38560, 8К-43845), агонистов каннабиноидного рецептора (например, тетрагидроканнабинол (ТНС) и аналоги ТНС, селективные агонисты СВ2 каннабиноидного рецептора (например, Ь-768242, Ь-759787), соединения такие как анандамид, которые связываются как с мозг-специфическими СВ1 рецепторами, так и периферическими СВ2 рецепторами), антагонистов ангиотензинового рецептора (например, антагонисты ангиотензин II рецептора (например, С8-088), селективные антагонисты ангиотензин II АТ4 рецептора, такие как лосартан калия, гидрохлортиазида (НСТ2), агонистов соматостатина (например, непептидный агонист соматостатина ΝΝΕ-269100), глюкокортикоидных антагонистов, ингибиторов дегрануляции тучных клеток (например, недокромил), блокаторов альфа-адренергического рецептора (например, дапипразол, антагонисты альфа-2адреноцептора, антагонисты альфа-1-адреноцептора (например, буназозин)), антагонистов альфа-2адреноцептора, миметиков тромбоксана А₂, ингибиторов протеинкиназы (например, Н7), производных простагландина Р (например, 8-1033), антагонистов простагландин-2 альфа (например, РйХА-34), агонистов допамина Ό1 и 5-НТ2 (фенольдопам), агентов, высвобождающих окись азота (например, ЫСХ-904 или ЫСХ-905, высвобождающие окись азота производные тимолола), антагонистов 5-НТ2 (например, сарпогрелат), ЫМЭА антагонистов (например, пролекарства и аналоги дексанабинола), антагонистов альфа-1-адреноцептора (например, буназозин), ингибиторов циклооксигеназы (например, диклофенак или нестероидное соединение непафенак), инозина, агонистов допаминового Ό2 рецептора и альфа 2 адреноцептора (например, талипексол), антагониста допаминового Ό1 рецептора и агонистов Ό2 рецептора (например, 8О2-СБС-756), антагонистов вазопрессинового рецептора (например, антагонисты вазопрессин V2 рецептора (например, 8К-121463)), эндотелиальных антагонистов (например, ТВС-2576), 1(3-гидрокси-2-фосфонилметоксипропил)цитозина (НРМРС) и родственных аналогов и пролекарств, лигандов рецептора тироидного гормона (например, КВ-130015), мускариновых М1 агонистов, антагонистов ХМОА-рецептора (например, дексанабинол-антагонист каннабиноидного ХМОА-рецептора), РС агонистов, таких как гипотензивные липиды, простамидов, блокаторов натриевых каналов, ХМЭА антагонистов, блокаторов ионных каналов смешанного действия, комбинаций антагонистов бета адреноцептора и РСР2 альфа агонистов (например, латанопрост и тимодол), активаторов гуанилатциклазы (например, относящийся к предсердию натрийуретический пептид (АКР) или непептидные миметики), ингибиторов А№ нейтральной эндопептидазы, нитровазодилаторов (например, нитроглицерин, гидралазин, нитропруссид натрия), модуляторов энотелинового рецептора (например, ЕТ-1 или непептидные миметики, сарафотоксин-86с), этакриновой кислоты, других аналогов феноксиуксусной кислоты (например, индакринон, тикринафен), разрушителей актина (например, латрункулин), блокаторов кальциевых каналов (например, верапамил, нифедипин, бровинкамин, нивалдипин) и нейтрозащитных агентов.

Комбинированная терапия глаукомы, включающая соединение 1720 и одно или несколько соединений, выбранных из группы, состоящей из антагонистов бета-адреноцептора, агонистов альфа-2-адреноцептора, ингибиторов карбоновой ангидразы, холинергических агонистов и агонистов простагландинового рецептора.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей терапевтически эффективное количество соединения 1720 и фармацевтически приемлемый носитель.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к упакованной фармацевтической композиции для лечения заболевания, связанного с А3 аденозиновым рецептором у субъекта, включающей:

(a) контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество соединения 1720; и (b) инструкции для использования указанного соединения для лечения указанного заболевания у субъекта.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к способу получения композиции, которая включает соединение 1720, данный способ включает смешивание соединения 1720 с подходящим носителем.

- 123 007254

В следующем варианте осуществления изобретение относится к фармацевтически приемлемой соли соединения 1720, где фармацевтически приемлемая соль содержит анион, выбранный из группы, состоящей из малеата, фумарата, тартрата, ацетата, фосфата и мезилата.

Иллюстративный пример.

Пример 43. Синтез [2-(3Н-имидазол-4-ил)этил]-(2-фенил-7Н-пирроло[2,3-6]пиримидин-4-ил)амина (1720).

Соединение 1720 синтезировали с использованием в качестве предшественника соединения 1 по синтетической схеме VII, получая:

Арилхлорид 1 (400 мг, 1,50 ммоль), ДМСО (10 мл) и гистамин (1,67 г, 15,0 ммоль) объединяют и нагревают до 120°С в токе азота. Через 6,5 ч реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и распределяют между ЕЮАс и водой. Слои разделяют и водный слой экстрагируют ЕЮАс (3х). Объединенные органические слои промывают насыщенным раствором соли (2х), сушат над Мд8О₄, фильтруют и концентрируют, получая 494 мг коричневого твердого вещества. Твердое вещество промывают холодным МеОН и перекристаллизовывают из МеОН, получая 197 мг (43%) не совсем белого твердого вещества (1720). ’Н-ЯМР (СП3ОП) 6 3,05 (т, 2Н, 1=7,0 Гц), 3,94 (т, 2Н, 1=7,0 Гц), 6,50 (д, 1Н, 1=3,5 Гц), 6,88 (ушир.с, 1Н), 7,04 (д, 1Н, 1=3,5 Гц), 7,42 (м, 3Н), 7,57 (с, 1Н), 8,34 (м, 2Н); масс-спектр (Е8): 305,1 (М⁺+1); т.пл .=234-235°С.

Активность соединений

Конкурентное радиолигандное связывание аденозин-3 (А₃) рецептора проводили для соединения 1720, как описано здесь и, наряду с другим, на страницах 153-154 данного описания. Установлено, что соединение 1720 обладает аффинностью связывания А3 рецептора, в 10 раз превышающей таковую для ссылочного соединения 1308, как описано в данном описании и, помимо прочего, в таблице 13 на странице 169 описания.

Включение в качестве ссылки

Все патенты, опубликованные заявки на патенты и другие приведенные здесь ссылки специально включены в данное описание в качестве ссылки.

Эквиваленты

Специалисты в данной области распознают или смогут удостовериться, используя не более чем рутинные эксперименты, в существовании многих эквивалентов конкретных вариантов осуществления изобретения, специально описанных здесь.

Подразумевается, что такие эквиваленты охватываются объемом следующей формулы изобретения. Данное изобретение кроме того относится к соединениям, имеющим формулу:

где Κ’ΝΚ₂ вместе образуют кольцо, имеющее структуру:

- 124 007254

или Кд представляет собой Н, и К₂ представляет

К₅ представляет Н или замещенный или незамещенный алкил или алкиларил.

Claims

1. Соединение, имеющее структуру или Кд представляет собой Н и К₂ представляет собой

-(СН2)2С(0)ОН, -С М )С1 ΙΓ(0)ΝΊ К -С(О)ОН, -СН3, -СН20(СН2)2ОН, -СН2ОСН2С(0)ОСН3 или -СН2ОСН2С(О)ОН;

или если Кд представляет собой Н и К₂ представляет собой он /

то К5 представляет собой -С1 Ν'ΝΉΛΙ 1_;), -С(О)ОН, -СН20(СН2Ь0Н, -С(0)ОСН3 или -С(0№, или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п.1, имеющее структуру

- 125 007254

3. Соединение по п.1, имеющее структуру

4. Соединение по п.1, имеющее структуру

5. Соединение по п.1, имеющее структуру

6. Соединение по п.1, имеющее структуру

7. Соединение по п.1, имеющее структуру

8. Соединение по п.1, имеющее структуру

- 126 007254

9. Соединение по п.1, имеющее структуру

10. Соединение по п.1, имеющее структуру

11. Соединение по п.1, имеющее структуру

12. Соединение по п.1, имеющее структуру

ОН

ΗΝ

13. Соединение по п.1, имеющее структуру

14. Соединение по п.1, имеющее структуру

- 127 007254

15. Соединение по

16. Соединение по

17. Соединение по

18. Применение соединения по п.1 для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с А₁ аденозиновым рецептором, у субъекта.

19. Применение по п.18, где указанный А₁ аденозиновый рецептор связан с нарушением познавательной способности, почечной недостаточностью, сердечной аритмией, дыхательным эпителием, высвобождением трансмиттеров, седативным действием, сужением кровеносных сосудов, брадикардией, отрицательной сердечной инотропией и дромотропией, бронхостенозом, нейтрофильным хемотаксисом, рефлюксом или язвенным заболеванием.

20. Водорастворимое пролекарство соединений по п.1, где водорастворимое пролекарство метаболизирует ίη νίνο, давая активное лекарственное средство, которое селективно ингибирует А₁ аденозиновый рецептор.

21. Применение соединения по п.1 для изготовления лекарственного средства для ингибирования активности А₁ аденозинового рецептора в клетке.

22. Применение по п.18, где указанное заболевание представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких, аллергический ринит или заболевание верхних дыхательных путей.

23. Фармацевтическая композиция, включающая соединение по п.1, фармацевтически приемлемый носитель и по меньшей мере один стероид, в2-агонист, глюкокортикоид, антагонист люкотриена или антихолинергический агонист.

24. Фармацевтическая композиция, включающая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.

25. Применение по п.18, где указанное заболевание представляет собой астму, аллергический ринит или хроническое обструктивное заболевание легких.

- 128 007254

26. Упакованная фармацевтическая композиция для лечения заболевания, связанного с А’аденозиновым рецептором у субъекта, включающая:

(a) контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество соединения по п.1; и (b) инструкции для использования указанного соединения для лечения указанного заболевания у субъекта.

27. Фармацевтически приемлемая соль соединения по пп.6, 8, 12, 15 или 16, где указанная соль содержит катион, выбранный из группы, включающей натрий, кальций и аммоний.

28. Применение по п.18, где А’ аденозиновый рецептор связан с застойной сердечной недостаточностью.

29. Соединение, имеющее структуру

30. Соединение, имеющее структуру

31. Применение соединения по п.29 или 30 для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с А_2а аденозиновым рецептором, у субъекта.

32. Применение по п.18 или 31, где субъект является человеком.

33. Применение по п.32, где указанный А_2а аденозиновый рецептор связан с двигательной активностью, расширением сосудов, ингибированием тромбоцитов, нейтрофильным генерированием супероксида, нарушением познавательной способности, старческим слабоумием или болезнью Паркинсона.

34. Применение по п.31, где соединение лечит указанное заболевание посредством стимулирования аденилатциклазы.

35. Водорастворимое пролекарство соединений по п.29 или 30, где указанное водорастворимое пролекарство метаболизирует ίη νίνο, давая активное лекарственное средство, которое селективно ингибирует А2а аденозиновый рецептор.

36. Пролекарство по п.35, где указанное пролекарство метаболизирует ίη νίνο посредством катализируемого эстеразой гидролиза.

37. Фармацевтическая композиция, включающая пролекарство по п.35 и фармацевтически приемлемый носитель.

38. Применение соединения по п.29 или 30 для изготовления лекарственного средства для ингибирования активности А2а аденозинового рецептора в клетке.

39. Фармацевтическая композиция, включающая терапевтически эффективное количество соединения по п.29 или 30 и фармацевтически приемлемый носитель.

40. Фармацевтическая композиция по п.39, где указанное терапевтически эффективное количество является эффективным для лечения болезни Паркинсона и заболеваний, связанных с двигательной активностью, расширением сосудов, ингибированием тромбоцитов, нейтрофильным генерированием супероксида, нарушения познавательной способности или старческого слабоумия.

41. Фармацевтическая композиция по п.39, где указанная фармацевтическая композиция является офтальмологическим препаратом.

42. Фармацевтическая композиция по п.24 или 39, где указанная фармацевтическая композиция представляет собой препарат для периокулярной, ретробульбарной или внутриглазной инъекции.

43. Фармацевтическая композиция по п.24 или 39, где указанная фармацевтическая композиция представляет собой системный препарат.

44. Фармацевтическая композиция по п.24 или 39, где указанная фармацевтическая композиция представляет собой хирургический орошающий раствор.

45. Фармацевтическая композиция, включающая соединения по п.29 или 30, фармацевтически приемлемый носитель и любой из допаминовых усиливающих агентов.

- 129 007254

46. Фармацевтическая композиция, включающая соединение по п.29 или 30, фармацевтически приемлемый носитель и любой из цитотоксических агентов.

47. Фармацевтическая композиция, включающая соединение по п.29 или 30, фармацевтически приемлемый носитель и по меньшей мере один агонист простагландина, мускариновый агонист или β2антагонист.

48. Упакованная фармацевтическая композиция для лечения заболевания, связанного с А_2а аденозиновым рецептором, у субъекта, включающая:

(a) контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество соединения по п.29 или 30; и (b) инструкции для использования указанного соединения для лечения указанного заболевания у субъекта.

49. Фармацевтически приемлемая соль соединения по п.29 или 30.

50. Соединение, имеющее структуру

N

ΝΗ или его фармацевтически приемлемая соль.

51. Применение соединения по п.50 для изготовления лекарственного средства для ингибирования активности А₃ аденозинового рецептора в клетке.

52. Применение по пп.21, 38 или 51, где клетка является клеткой человека.

53. Применение соединения по п.50 для изготовления лекарственного средства для лечения повреждения глаза у субъекта.

54. Применение по п.53, где повреждение включает повреждение сетчатки или зрительного головного нерва.

55. Применение соединения по п.50 для изготовления лекарственного средства для лечения глаукомы у субъекта.

56. Применение по п.55, где лекарственное средство дополнительно включает одно или несколько соединений, выбранных из группы, состоящей из антагонистов бета-адреносептора, агонистов альфа-2адреноцептора, ингибиторов карбоновой ангидразы, холинергических агонистов, простагландинов и агонистов простагландинового рецептора, ингибиторов ангиотензин-конвертирующего фермента (АСЕ), антагонистов АМРА рецептора, 5-НТ агонистов, ингибиторов ангиогенеза, ΝΜΌΑ антагонистов, ингибиторов ренина, агонистов каннабиноидного рецептора, антагонистов ангиотензинового рецептора, гидрохлортиазида (НСТ2), агонистов соматостатина, глюкокортикоидных антагонистов, ингибиторов дегрануляции тучных клеток, блокаторов альфа-адренергических рецепторов, антагонистов альфа-2адреноцептора, миметиков тромбоксана А₂, ингибиторов протеинкиназы, производных простагландина Р, антагонистов простагландин-2 альфа, агонистов допамина Όι и 5-НТ2, агентов, высвобождающих окись азота, антагонистов 5-НТ2, ингибиторов циклооксигеназы, инозина, агонистов допаминового Ό₂рецептора и альфа 2 адреноцептора, антагониста допаминового Όι рецептора и агонистов Ό₂ рецептора, антагонистов вазопрессинового рецептора, эндотелиальных антагонистов, 1-3-гидрокси-2фосфонилметоксипропилцитозина (НРМРС) и родственных аналогов и пролекарств, лигандов рецептора тироидного гормона, мускариновых М1 агонистов, блокаторов натриевых каналов, блокаторов ионных каналов смешанного действия, антагонистов бета адреноцептора и комбинации РОР2 альфа агонистов, активаторов гуанилатциклазы, нитровазодилаторов, модуляторов эндотелинового рецептора, этакриновой кислоты, других аналогов феноксиуксусной кислоты, разрушителей актина, блокаторов кальциевых каналов и нейтрозащитные агентов.

57. Применение по п.55, где лекарственное средство дополнительно включает одно или несколько соединений, выбранных из группы, состоящей из антагонистов бета-адреносептора, агонистов альфа-2адреноцептора, ингибиторов карбоновой ангидразы, холинергических агонистов и агонистов простагландинового рецептора.

58. Фармацевтическая композиция, включающая терапевтически эффективное количество соединения по п.50 и фармацевтически приемлемый носитель.

59. Упакованная фармацевтическая композиция для лечения заболевания, связанного с А3 аденозиновым рецептором у субъекта, включающая:

(a) контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество соединения по п.50; и (b) инструкции для использования указанного соединения для лечения указанного заболевания у субъекта.

- 130 007254

60. Способ получения композиции, включающей соединение по п.50, указанный способ включает смешивание соединения с подходящим носителем.

61. Фармацевтически приемлемая соль соединения по пп.29, 30 или 50, где фармацевтически приемлемая соль содержит анион, выбранный из группы, включающей малеат, фумарат, тартрат, ацетат, фосфат и мезилат.

62. Фармацевтическая композиция по п.58, дополнительно включающая одно или несколько соединений, выбранных из группы, состоящей из антагонистов бета-адреносептора, агонистов альфа-2адреноцептора, ингибиторов карбоновой ангидразы, холинергических агонистов, простагландинов и агонистов простагландинового рецептора, ингибиторов ангиотензин-конвертирующего фермента (АСЕ), антагонистов АМРА рецептора, 5-НТ агонистов, ингибиторов ангиогенеза, Ν\-1Ι)Λ антагонистов, ингибиторов ренина, агонистов каннабиноидного рецептора, антагонистов ангиотензинового рецептора, гидрохлортиазида (НСТ/), агонистов соматостатина, глюкокортикоидных антагонистов, ингибиторов дегрануляции тучных клеток, блокаторов альфа-адренергических рецепторов, антагонистов альфа-2адреноцептора, миметиков тромбоксана А₂, ингибиторов протеинкиназы, производных простагландина Г, антагонистов простагландин-2 альфа, агонистов допамина Όι и 5-НТ2, агентов, высвобождающих окись азота, антагонистов 5-НТ2, ингибиторов циклооксигеназы, инозина, агонистов допаминового Ό₂рецептора и альфа 2 адреноцептора, антагониста допаминового Όι рецептора и агонистов Ό₂ рецептора, антагонистов вазопрессинового рецептора, эндотелиальных антагонистов, 1-3-гидрокси-2фосфонилметоксипропилцитозина (НРМРС) и родственных аналогов и пролекарств, лигандов рецептора тироидного гормона, мускариновых М₁ агонистов, блокаторов натриевых каналов, блокаторов ионных каналов смешанного действия, антагонистов бета адреноцептора и комбинации РОГ2 альфа агонистов, активаторов гуанилатциклазы, нитровазодилаторов, модуляторов эндотелинового рецептора, этакриновой кислоты, других аналогов феноксиуксусной кислоты, разрушителей актина, блокаторов кальциевых каналов и нейтрозащитные агентов.

63. Фармацевтическая композиция по п.58, дополнительно включающая одно или несколько соединений, выбранных из группы, состоящей из антагонистов бета-адреносептора, агонистов альфа-2адреноцептора, ингибиторов карбоновой ангидразы, холинергических агонистов и агонистов простагландинового рецептора.

64. Применение соединения по п.50 для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с А₃ аденозиновым рецептором, у субъекта, где указанное заболевание, связанное с А₃аденозиновым рецептором, представляет собой астму, бронхит, хроническое обструктивное заболевание легких или бронхостеноз.

65. Способ получения соединения по п. 50, включающий стадии:

(а) взаимодействия соединения с гистамином в присутствии диметилсульфоксида;

(b) нагревания реакционной смеси в инертной атмосфере;

(c) охлаждения реакционной смеси и отделения органического слоя от водного слоя;

(б) промывки органического слоя насыщенным раствором соли, осушения и фильтрования с получением целевого соединения.

66. Способ по п.65, в котором на стадии (Ь) реакционную смесь нагревают в атмосфере азота.

67. Способ по п.65, в котором на стадии (б) органический слой осушают МдБО₄.

68. Применение соединения по п.1 для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с А! аденозиновым рецептором, у субъекта, где заболевание представляет собой задержку воды, брадикардию, бронхит, бронхоспазм, болезнь Альцгеймера, сердечные аритмии, сердечную гипоксию, гипертензию, воспаление, отрицательную сердечную инотропию и дромотропию, почечную недостаточность, заболевание, связанное с седативным действием или высвобождением трансмиттера, дыхательным эпителием, сокращением гладкой мускулатуры под дыхательным эпителием, сужением кровеносных сосудов или дегрануляцией тучных клеток.

69. Применение соединения по п.1 для улучшения памяти у субъекта.

70. Применение соединения по п.29 или 30 для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с А_2а аденозиновым рецептором, у субъекта, где заболевание, связанное с А_2ааденозиновым рецептором, представляет собой болезнь Паркинсона или глаукому.

71. Применение соединения по п.50 для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с А3 аденозиновым рецептором, у субъекта, где заболевание, связанное с А3 аденозиновым рецептором, представляет собой ишемию миокарда, бронхит или бронхоспазм.

- 131 007254

72. Применение соединения по п.50 для изготовления лекарственного средства для лечения глазного воспаления, связанного с А₃ аденозиновым рецептором у субъекта.

73. Применение соединения по п.50 для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с А₃ аденозиновым рецептором, у субъекта, где заболевание, связанное с А₃ аденозиновым рецептором, связано с дегрануляцией тучных клеток.

74. Применение соединения по п.50 для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с А3 аденозиновым рецептором, у субъекта, где заболевание, связанное с А3 аденозиновым рецептором, представляет собой астму, глаукому, ретинопатию, повреждение глаза в результате ишемии или дегенерацию желтого пятна.