CN1489590A - 特异于腺苷a1,a2a 和a3受体的化合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及特异抑制腺苷A1、A2A和A3受体的化合物，以及这些化合物治疗患者中与A1、A2A和A3腺苷受体相关的疾病的用途，包括给予患者治疗有效量的所述化合物。

Description

特异于腺苷A1，A2A和A3受体的化合物及其应用
本申请是申请日为2000年12月1日的美国系列No.09/728,316，申请日为2000年12月1日的美国系列09/728,607，申请日为2000年12月1日的美国系列09/728,616的部分继续申请并要求这些专利申请的优先权，这些专利申请在此以其全文并入参考。
在本申请中，提及了特异结合以下物质的化合物：i)腺苷A1受体(特别如英文第4-76、130-175和257-287页所述)，ii)腺苷A2a受体(特别如英文第176-201和288-293页所述)，及腺苷A3受体(特别如英文第202-256和294-300页所述)。
发明背景
腺苷是众多生理活性的一种遍在调节因子，特别在心血管和神经系统内。腺苷的作用表现为由特异的细胞表面受体蛋白介导。腺苷调节不同的生理功能，包括诱导镇静，血管舒张，降低心率和心肌收缩力，抑制血小板聚集，刺激葡糖异生及抑制脂解。除了其对腺苷酸环化酶的作用之外，腺苷还示出打开钾通道，减少钙通道流出量，及通过受体介导机制抑制或刺激磷酸肌醇周转(见例如C.E.Muller和B.Stein，“腺苷受体拮抗剂：结构和潜在治疗应用”，CurrentPharmaceutical Design，2：501(1996)及C.E.Muller，“A1-腺苷受体拮抗剂”，Exp.Opin.Ther.Patents 7(5)：419(1997))。
腺苷受体属于嘌呤受体超家族，其通常再分为P1(腺苷)和P2(ATP，ADP及其它核苷酸)受体。迄今为止已经从不同物种包括人体中克隆了核苷腺苷的四种受体亚型。两种受体亚型(A1和A2a)呈现与腺苷在纳摩尔范围亲和性，而其它两种已知亚型A2b和A3是低亲和性受体，与腺苷亲和性在低微摩尔范围。A1和A3腺苷受体激活可导致腺苷酸环化酶活性抑制，而A2a和A2b激活可刺激腺苷酸环化酶。
已经开发了少许A1拮抗剂治疗认知疾病，肾衰竭，和心律不齐。已经推测A2a拮抗剂也许对患有Morbus Parkinson(帕金森病)的患者有帮助。特别是考虑到局部给予的潜力，腺苷受体拮抗剂对过敏性炎症和哮喘也许有价值。可利用的资料(例如Nyce & Metzger，“在动物模型中对哮喘的DNA反义治疗”，自然(1997)385：721-5)表明在这种病理学关系中，A1拮抗剂可以阻碍呼吸道上皮下面的平滑肌收缩，而A2b或A3受体拮抗剂可以阻碍肥大细胞脱粒，减少组胺和其它炎症介质释放。已经发现A2b受体遍及于胃肠道，尤其在结肠和小肠上皮中。已有提示A2b受体介导cAMP应答(Strohmeier等，生物化学杂志(1995)270：2387-94)。
也已经示出腺苷受体存在于各种哺乳动物物种，包括牛，猪，猴子，大鼠，豚鼠，小鼠，兔和人的视网膜上(见Blazynski等，哺乳动物视网膜中腺苷受体的散在分布，神经化学杂志，第54卷，pp648-655(1990)；Woods等，牛视网膜中腺苷A1受体结合位点的鉴定，实验眼研究，第53卷，pp325-331(1991)；及Braas等，位于视网膜神经节细胞的内源腺苷和腺苷受体，美国科学院院报，第84卷，pp3906-3910(1987))。最近Williams报道了在培养的人视网膜细胞系中对腺苷转运位点的观测(Williams等，通过SV-40 T抗原基因建立的培养的人视网膜细胞系中核苷转运位点，当代视觉研究，第13卷，pp109-118(1994))。
先前已经推测调节腺苷吸收的化合物是治疗视网膜和视神经乳头损伤的潜在治疗剂。在Shade的美国专利No.5,780,450中，Shade论述了腺苷吸收抑制剂在治疗眼部疾病中的应用。Shade未揭示特异的A3受体抑制剂的应用。美国专利No.5,780,450的全部内容在此并入参考。
目前仍需要其它腺苷受体拮抗剂作为药物学工具，特别是可作为治疗上述疾病和/或病变的药物。
发明概述
本发明基于选择性结合腺苷A1受体的化合物，从而通过为治疗对象施用治疗有效量的这种化合物治疗与A1腺苷受体相关的疾病。所治疗的疾病与认知疾病，肾衰竭，心律不齐，呼吸道上皮，递质释放，镇静，血管收缩，心动过缓，心肌收缩力和传导减弱，支气管痉挛，嗜中性白细胞趋化，返流，或溃疡相关。
本发明至少部分基于这样的发现，即如下文所述某些N-6取代的7-脱氮嘌呤(deazapurine)可以用于治疗N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态(N-6 substituted 7-deazapurine responsive state)。这种状态例如包括其中腺苷受体活性提高的那些状态，如支气管炎，胃肠道疾病或哮喘。这些状态特征在于腺苷受体激活可以导致腺苷酸环化酶抑制或刺激。本发明的组合物和方法包括对映异构体或非对映异构体纯的N-6取代的7-脱氮嘌呤。优选的N-6取代的7-脱氮嘌呤包括那些具有通过亚烷基链附着于N-6氮的一个乙酰胺，氨甲酰，取代的环己基例如环己醇，或脲组分的N-6取代的7-脱氮嘌呤。
本发明涉及调节哺乳动物内腺苷受体的方法，通过为哺乳动物施用治疗有效量的N-6取代的7-脱氮嘌呤，从而调节腺苷受体活性。适当的腺苷受体包括A1，A2，或A3家族。在一个优选实施方案中，所述N-6取代的7-脱氮嘌呤是腺苷受体拮抗剂。
本发明还涉及治疗哺乳动物中N-6取代的7-脱氮嘌呤疾病的方法，例如治疗哮喘，支气管炎，过敏性鼻炎，慢性阻塞性肺部疾病，肾脏疾病，胃肠道疾病，和眼部疾病，通过为哺乳动物施用治疗有效量的N-6取代的7-脱氮嘌呤，从而治疗所述哺乳动物。适当的N-6取代的7-脱氮嘌呤包括通式I所例证的那些：
及其药物学可接受的盐。R1和R2各自独立地是一个氢原子或一个取代或未取代的烷基，芳基或烷基芳基组分，或一起形成一个取代的或未取代的杂环。R3是取代或未取代的烷基，芳基或烷基芳基组分。R4是一个氢原子或取代或未取代的烷基，芳基或烷基芳基组分。R5和R6各自独立地是一个卤族原子，例如氯，氟或溴，一个氢原子或取代或未取代的烷基，芳基或烷基芳基组分，或者R5是羧基，羧基酯，或氨甲酰，或者R4和R5或R5和R6一起形成一个取代的或未取代的杂环或碳环。
在一些实施方案中，R1和R2可以各自独立地是一个取代或未取代的环烷基或杂芳基烷基组分。在其它实施方案中，R3是一个氢原子或一个取代或未取代的杂芳基组分。在另一些实施方案中，R4，R5和R6可以各自独立地是杂芳基组分。在一个优选实施方案中，R1是一个氢原子，R2是一个环己醇，例如反式环己醇，R3是苯基，R4是一个氢原子，R5是甲基基团，R6是甲基基团。在又一个实施方案中，R1是一个氢原子，R2是
Figure A0182246000162
R3是苯基，R4是一个氢原子，R5和R6是甲基基团。
本发明还涉及药物组合物，其用于治疗哺乳动物中N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态，例如哮喘，支气管炎，过敏性鼻炎，慢性阻塞性肺部疾病，肾脏疾病，胃肠道疾病，和眼部疾病。所述药物组合物包含治疗有效量的N-6取代的7-脱氮嘌呤和药物学可接受的载体。
本发明还涉及包装的药物组合物，用于治疗哺乳动物中N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态。所述包装的药物组合物包含一个容器，其中装有治疗有效量的至少一种N-6取代的7-脱氮嘌呤嘌呤，另外还包含使用N-6取代的7-脱氮嘌呤治疗哺乳动物中N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态的说明书。
本发明还涉及式I所示化合物，其中R1是氢；R2是取代或未取代的环烷基，取代或未取代的烷基，或者R1和R2一起形成一个取代或未取代的杂环；R3是未取代或取代的芳基；R4是氢；R5和R6各自独立地是氢或烷基，及所述化合物的药物学可接受的盐。这一实施方案的脱氮嘌呤可以是选择性A1受体拮抗剂。这些化合物可以用于多种治疗应用，例如治疗哮喘，与心衰相关的肾衰，及青光眼。在一个特别优选的实施方案中，所述脱氮嘌呤是水溶性前体药物，其能在体内可代谢为活性药物，例如通过酯酶催化的水解。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种抑制细胞中腺苷受体(例如A3)活性的方法，通过将所述细胞与N-6取代的7-脱氮嘌呤(例如优选一种腺苷受体拮抗剂)接触而进行。
另一方面，本发明涉及一种治疗动物(例如人)眼部损伤的方法，通过为所述动物施用有效量的式I所示N-6取代的7-脱氮嘌呤进行治疗。优选地，所述N-6取代的7-脱氮嘌呤是所述动物细胞中A3腺苷受体的拮抗剂。所述损伤是视网膜或视神经乳头损伤，可以是急性或慢性的。所述损伤可以是例如青光眼，水肿，局部缺血，缺氧或外伤所致。
本发明还涉及一种药物组合物，其包含式I所示N-6取代的化合物。优选地，所述药物组合物是一种眼科配方(例如一种眼周，眼球后或眼内注射配方，一种系统配方，或一种外科灌注溶液)。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种式II所示化合物：
Figure A0182246000181
其中X是N或CR6；R1和R2各自独立地是氢，或取代或未取代的烷氧基，氨烷基，烷基，芳基，或烷基芳基，或一起形成一个取代或未取代的杂环，条件是R1和R2不同时是氢；R3是取代或未取代的烷基，芳基烷基，或芳基；R4是氢或取代或未取代的C1-C6烷基；L是氢，取代或未取代的烷基，或者R4和L一起形成一个取代或未取代的杂环或碳环；R6是氢，取代或未取代的烷基，或卤素；Q是CH2，O，S或NR7，其中R7是氢或取代或未取代的C1-C6烷基；及W是未取代或取代的烷基，烷基，芳基，芳基烷基，联芳基，杂芳基，取代的羰基，取代的硫代羰基，或取代的磺酰基；条件是如果R3是吡咯烷基，则R4不是甲基。本发明还涉及本发明化合物的药物学可接受的盐及前体药物。
在一个有利的实施方案中，式II中X是CR6，Q是CH2，O，S或NH，其中R6如上所述。
在式II的另一个实施方案中，X是N。
本发明还涉及一种抑制细胞中腺苷受体(例如A2b腺苷受体)活性的方法，通过将所述细胞与本发明化合物接触而进行。优选地，所述化合物是所述受体的拮抗剂。
本发明还涉及一种治疗动物胃肠道疾病(例如腹泻)或呼吸系疾病(例如过敏性鼻炎，慢性阻塞性肺部疾病)的方法，通过为动物施用有效量的式II所示化合物(例如A2b的拮抗剂)进行。优选地，所述动物是人。
本发明还涉及具有以下结构的化合物：
Figure A0182246000191
其中R1是反式-4-羟基环己基，2-甲基氨基羰基氨基环己基，乙酰氨基乙基，或甲基氨基羰基氨基乙基；其中Ar是一个取代或未取代的4-6元环。
在所述化合物的一个实施方案中，Ar是苯基，吡咯，噻吩，呋喃，噻唑，咪唑，吡唑，1，2，4-三唑，吡啶，2(1H)-吡啶酮，4(1H)-吡啶酮，吡嗪，嘧啶，哒嗪，异噻唑，异噁唑，唑，四唑，萘，1，2，3，4-四氢化萘，1，5-二氮杂萘，苯并呋喃，苯并噻吩，吲哚，2，3-二氢吲哚，1H-吲哚，二氢吲哚，苯并吡唑，1，3-苯并二唑，苯并噁唑，嘌呤，香豆素，色酮，喹啉，四氢喹啉，异喹啉，苯并咪唑，喹唑啉，吡唑并[2，3-b]吡嗪，吡唑并[3，4-b]吡嗪，吡唑并[3，2-c]哒嗪，purido[3，4-b]-嘧啶，1H-吡唑[3，4-d]嘧啶，蝶啶，2(1H)-喹诺酮，1(2H)-异喹诺酮，1，4-苯并异噁嗪，苯并噻唑，喹喔啉，喹啉-N-氧化物，异喹啉-N-氧化物，喹喔啉-N-氧化物，喹唑啉-N氧化物，苯并噁嗪，2，3-二氮杂萘，肉啉，或具有以下结构：
Figure A0182246000192
其中Y是碳或氮；其中R2和R2’独立地为氢，取代或未取代的烷基，取代或未取代的芳基，卤素，甲氧基，甲基氨基，或甲基硫；其中R3是H，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，氨基，取代的芳基，其中所述取代的烷基是-C(R7)(R8)XR5，其中X是O，S，或NR6，其中R7和R8各自独立地是H或烷基，其中R5和R6各自独立地是烷基或环烷基，或者R5，R6和氮一起形成取代或未取代的4-7元环；其中R4是H，烷基，取代的烷基，环烷基或药物学可接受的盐，或前体药物衍生物，或生物活性代谢物；条件是当R1是乙酰氨基乙基时，Ar不是4-吡啶基。
本发明还涉及具有以下结构的化合物：
其中R1是芳基，取代的芳基或杂芳基；其中R2是H，烷基，取代的烷基或环烷基，其中R3是H，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，氨基，取代的芳基，其中所述取代的烷基是-C(R6)(R7)NR4R5，其中R6和R7各自是H或烷基，其中R4和R5各自是烷基或环烷基，或者R4，R5和氮一起形成一个4-7元环状系统。
本发明还涉及一种抑制细胞中A1腺苷受体活性的方法，包括将所述细胞与上述化合物接触。
发明详述
现在对本发明的特点及其它细节加以更特别阐述，并在权利要求书中强调指出。应理解本发明的特殊实施方案是作为例证示出的，并无限制本发明之意。本发明原理特点在不偏离本发明范围内可以用于各种实施方案中。
本发明涉及治疗哺乳动物中N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态的方法。如下所述，所述方法包括为所述哺乳动物施用治疗有效量的N-6取代的7-脱氮嘌呤，从而治疗哺乳动物中发生的N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态。
术语“N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态(N-6 substituted7-deazapurine responsive state)”意在包括特征在于对用N-6取代的7-脱氮嘌呤治疗有反应的疾病状态或病变，例如所述治疗包括用本发明N-6取代的7-脱氮嘌呤达到所述状态的至少一个症状或作用明显减轻。典型地，这种状态与宿主内腺苷增加相关，由此所述宿主通常出现生理学症状，包括但非限于毒素释放，炎症，昏迷，水肿，体重增加或体重减轻，胰腺炎，肺气肿，风湿性关节炎，骨关节炎，多器官损伤，婴儿及成人呼吸困难综合征，过敏性鼻炎，慢性阻塞性肺部疾病，眼部疾病，胃肠道疾病，皮肤肿瘤，免疫缺陷，和哮喘(见例如C.E.Muller和B.Stein，“腺苷受体拮抗剂；结构和潜在治疗应用”，现代药物设计2：501(1996)，及C.E.Muller，“A1-腺苷受体拮抗剂”，Exp.Opin.Ther.Patents 7(5)：4′9(1997)，及I.Feoktistove，R.Polosa，S.T.Holgat和I.Biaggioni，“腺苷A2b受体；哮喘的一种新治疗目标？”，TiPS 19；148(1998))。与这样的症状通常相关的作用包括但非限于发热，气短，恶心，腹泻，乏力，及甚至死亡。在一个实施方案中，N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态包括那些疾病状态，其是通过刺激腺苷受体例如A1，A2a，A2b，A3等，从而调节细胞中钙离子浓度和/或PLC(磷酸酯酶C)激活而介导。在一个优选实施方案中，N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态与腺苷受体相关，例如N-6取代的7-脱氮嘌呤起拮抗剂作用。可以用本发明化合物例如介导生物学作用的腺苷受体亚型加以治疗的适当响应状态实例包括：中枢神经系统(CNS)功能，心血管功能，肾脏功能，呼吸功能，免疫功能，胃肠道功能及代谢功能。治疗对象中腺苷的相对数量可以与下文列出的作用相关；即腺苷水平提高可以触发一种作用，例如非所需的生理应答，例如哮喘发作。
CNS作用包括递质释放减少(A1)，镇静(A1)，降低的运动活性(A2a)，抗惊厥活性，化学受体刺激(A2)和痛觉过敏。本发明化合物的治疗应用包括治疗痴呆，Alzheimer′s病及增强记忆力。
心血管作用包括血管舒张(A2a)，(A2b)和(A3)，，血管收缩(A1)，心动过缓(A1)，血小板抑制(A2a)，心肌收缩力和心传导性降低(A1)，心律不齐，心动过速及血管发生。本发明化合物的治疗应用包括例如预防局部缺血引起的心脏损伤，及强心剂，保护心肌组织及恢复心脏功能。
肾脏作用包括降低的GFR(A1)，肾小球膜细胞紧缩(A2)，抗利尿(A1)及抑制肾素释放(A1)。本发明化合物的适当治疗应用包括本发明化合物作为利尿，促尿钠排泄，保钾，保护肾脏/预防急性肾脏损伤，抗高血压，抗水肿及抗肾炎制剂的应用。
呼吸道作用包括支气管舒张(A2)，支气管收缩(A1)，慢性阻塞性肺部疾病，过敏性鼻炎，粘液分泌和气短(A2)。本发明化合物的适当治疗应用包括抗哮喘应用，在移植后治疗肺部疾病，及呼吸疾病。
免疫学作用包括免疫抑制(A2)，嗜中性粒细胞趋化性(A1)，嗜中性粒细胞过氧化物产生(A2a)，及肥大细胞脱粒(A2b和A3)。拮抗剂的治疗应用包括过敏性和非过敏性炎症，例如释放组胺及其它炎症介质。
胃肠道作用包括抑制胃酸分泌(A1)，治疗应用可包括返流和溃疡病变。胃肠道作用还包括结肠病，小肠病和腹泻，例如与肠炎相关的腹泻(A2b)。
眼部病变包括视网膜和视神经乳头损伤及外伤相关的病变(A3)。在一个优选实施方案中，所述眼部病变是青光眼。
本发明化合物的其它治疗应用包括治疗肥胖(分解脂肪性质)，高血压，治疗抑郁，镇静，抗焦虑，antileptics，及松弛，例如不引起腹泻而实现能动性。
术语“疾病状态”意在包括由非所需水平腺苷，腺苷环化酶活性导致的或与其相关的那些病变，与腺苷受体异常刺激和/或在cAMP中增加相关的生理活性提高。在一个实施方案中，所述疾病状态例如是哮喘，慢性阻塞性肺部疾病，过敏性鼻炎，支气管炎，肾脏病变，胃肠道病变，或眼部病变。其它实例包括慢性支气管炎和囊肿性纤维化。适当的炎症疾病例如包括非淋巴细胞性白血病，心肌缺血，心绞痛，心肌梗塞，脑血管缺血，间歇性跛行，危急的肢体缺血，静脉高血压，静脉曲张，静脉溃疡和动脉硬化。损伤性再灌注状态包括例如任何手术后损伤，如重建手术，血栓溶解或血管成形术。
术语“治疗N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态”或“治疗N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态”意在包括改变上述疾病状态或病变，从而哺乳动物中生理症状明显减轻或最小化。该术语还包括控制，预防或抑制与腺苷数量异常相关的生理症状或作用。在一个优选实施方案中，对所述疾病状态或病变的控制是根除。在另一个优选实施方案中，所述控制是选择性的，由此控制腺苷受体活性的异常水平，而不影响其它生理系统和参数。
术语“N-6取代的7-脱氮嘌呤”是本领域熟知的，指包括那些具有式I的化合物：
“N取代的7-脱氮嘌呤”包括其药物学可接受的盐，而且在一个实施方案中，还包括本文所述的某些N-6取代的嘌呤。
在一些实施方案中，N-6取代的7-脱氮嘌呤不是N-6苄基或N-6苯乙基取代的。在其它实施方案中，R4不是苄基或苯乙基取代的。在优选的实施方案中，R1和R2不同时是氢原子。在其它优选实施方案中，R3不是氢原子。
下文所述的术语N-6取代的7-脱氮嘌呤的“治疗有效量”是治疗化合物在哺乳动物内进行其一定功能所必需或足够的数量，例如治疗哺乳动物中N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态，或疾病状态。所述治疗化合物的有效量可以根据一些因素加以变化，如哺乳动物中已经存在的病原体数量，年龄，性别，及哺乳动物体重，以及本发明治疗化合物影响哺乳动物中N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态的能力。
本领域技术人员可以对前述因素加以研究，并确定所述治疗化合物的有效量而不用进行不必要实验。也可以使用体外或体内分析确定所述治疗化合物的“有效量”。本领域技术人员可以选择适当数量的治疗化合物用于前述分析中或进行治疗处理。
治疗有效量优选使所治疗的与N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态或病变相关的至少一个症状或效应，与未治疗的对象相比减轻至少大约20％(更优选至少大约40％，还更优选至少大约60％，最优选至少大约80％)。本领域技术人员可以设计分析方法以测定这种症状和/或效应的消除情况。本发明包括能测定这种参数的本领域公认的任何分析。例如，如果所治疗的状态是哮喘，则可以在治疗之前和之后使用本领域公认的技术测定治疗对象肺中呼出气体体积，以测定所述体积增加。类似地，如果所治疗的状态是炎症，则在治疗之前和之后使用本领域公认的技术测定炎症面积，以测定所述面积缩小。
术语“细胞”包括原核细胞和真核细胞。
术语“动物”包括具有腺苷受体的任何生物体，或者易感N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态的任何生物体。所述动物例如包括酵母，哺乳动物，爬行动物和鸟类。还包括转基因动物。
术语“哺乳动物”是本领域公认的，包括一种动物，优选温血动物，最优选牛，绵羊，猪，马，狗，猫，大鼠，小鼠和人。本发明包括例如易感N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态，炎症，肺气肿，哮喘，中枢神经系统病变，或急性呼吸困难综合征的哺乳动物。
另一方面，本发明涉及调节哺乳动物中腺苷受体的方法，通过为所述哺乳动物施用治疗有效量的N-6取代的7-脱氮嘌呤，由此调节哺乳动物中腺苷受体。适当的腺苷受体包括A1，A2或A3家族。在一个优选实施方案中，N-6取代的7-脱氮嘌呤是腺苷受体拮抗剂。
术语“调节腺苷受体”意在包括那些情况，其中化合物与腺苷受体相互作用，引起与腺苷受体或随后得自腺苷受体调节的级联作用相关的生理活性提高，降低或异常。与腺苷受体相关的生理活性包括诱导镇静，血管舒张，降低心率和心肌收缩力，抑制血小板聚集，刺激葡糖异生，抑制脂解，打开钾离子通道，降低钙离子通道流量等。
术语“调节”意在包括防止，根除或抑制与腺苷受体异常刺激相关的非所需生理活性的提高，例如在本发明的治疗方法中的含义。在另一个实施方案中，术语“调节”包括拮抗作用，例如减轻由于腺苷受体过度刺激产生的过敏反应和过敏性炎症介质的活性和产生。例如，本发明的治疗性脱氮嘌呤可以与腺苷受体相互作用，以抑制例如腺苷酸环化酶活性。
术语“特征在于异常腺苷受体活性的病变”意在包括那些与腺苷受体异常刺激相关的那些疾病，功能失调或病变，其中受体受到刺激引起与所述疾病，功能失调或病变直接或间接相关一系列生物化学和生理学活动。腺苷受体的这一刺激不一定是所述疾病，功能失调或病变的唯一发生原因，其可以仅仅是导致与所治疗的疾病，功能失调或病变典型相关的一些症状发生的原因。受体的异常刺激可以是唯一因素或至少一种其它因素可以参与所治疗状态中。病变例如包括前述所列的那些疾病状态，包括炎症，胃肠道功能失调及由腺苷受体活性提高所表现的那些症状。优选的实例包括与哮喘，过敏性鼻炎，慢性阻塞性肺部炎症，肺气肿，支气管炎，胃肠道功能失调和青光眼相关的那些症状。
术语“特征在于腺苷受体活性异常的病变的治疗”意在包括缓和或减轻与所述病变典型相关的至少一个症状。所述治疗还包括缓和或减轻一个以上症状。优选地，所述治疗例如基本消除了与所述病变相关的症状。
本发明涉及具有式I的化合物，N-6取代的7-脱氮嘌呤：
其中R1和R2各自独立地是氢原子或取代或未取代的烷基，芳基，烷基芳基组分，或者一起形成一个取代或未取代的杂环；R3是氢原子或取代或未取代的烷基，芳基或烷基芳基组分；R4是氢原子或取代或未取代的烷基，芳基或烷基芳基组分。R5和R6各自独立地是卤素原子，例如氯，氟或溴，氢原子或取代或未取代的烷基，芳基或烷基芳基组分，或者R4和R5或R5和R6一起形成一个取代或未取代的杂环或碳环。本发明还包括N-6取代的7-脱氮嘌呤的药物学可接受的盐。
在一些实施方案中，R1和R2可以各自独立地是取代或未取代的环烷基或杂芳基烷基组分。在其它实施方案中，R3是氢原子或取代或未取代的杂芳基组分。在又一些其它实施方案中，R4，R5和R6可以各自独立地是杂芳基组分。
在一个实施方案中，R1是氢原子，R2是取代或未取代的环己烷，环戊基，环丁基或环丙烷组分，R3是取代或未取代的苯基组分，R4是氢原子及R5和R6是甲基基团。
在另一个实施方案中，R2是环己醇，环己烷二醇，环己基磺酰胺(cyclohexylsulfonamide)，环己酰胺(cyclohexanamide)，环己酯，环己烯，环戊醇或环戊二醇，R3是苯基组分。
在又一个实施方案中，R1是氢原子，R2是环己醇，R3是取代或未取代的苯基，嘧啶，呋喃，环戊烷，或噻吩组分，R4是氢原子，取代的烷基，芳基或芳基烷基组分，R5和R6各自独立地是氢原子，或取代或未取代的烷基，芳基或烷基芳基组分。
在另一个实施方案中，R1是氢原子，R2是取代或未取代的烷基胺，芳基胺，或烷基芳基胺，取代或未取代的烷基酰胺，芳基酰胺或烷基芳基酰胺，取代或未取代的烷基磺酰胺，芳基磺酰胺或烷基芳基磺酰胺，取代或未取代的烷基脲，芳基脲或烷基芳基脲，取代或未取代的烷基氨基甲酸酯，芳基氨基甲酸酯或烷基芳基氨基甲酸酯，取代或未取代的烷基羧酸，芳基羧酸或烷基芳基羧酸，R3是取代或未取代的苯基组分，R4是氢原子，R5和R6是甲基基团。
在再一个实施方案中，R2是胍，修饰的胍，氰基胍，硫脲，硫代酰胺或脒。
在一个实施方案中，R2可以是
Figure A0182246000271
其中R2a-R2c各自独立地是氢原子或饱和或未饱和的烷基，芳基或烷基芳基组分，R2d是氢原子或饱和或未饱和的烷基，芳基或烷基芳基组分，NR2eR2f或OR2g，其中R2e-R2f各自独立地是氢原子或饱和或未饱和的烷基，芳基，或烷基芳基组分。或者，R2a和R2b一起可形成一个碳环或杂环，所述环大小为大约3-6元环，例如环丙基，环戊基，环己基基团。
在本发明的一个方面中，R5和R6不同时是甲基基团，优选R5和R6之一是烷基，例如甲基基团，及另一个是氢原子。
在本发明的另一个方面中，当R4是1-苯基乙基及R1是氢原子时，R3不是苯基，2-氯苯基，3-氯苯基，4-氯苯基，3，4-二氯苯基，3-甲氧基苯基或4-甲氧基苯基，或者当R4和R1是1-苯基乙基时，R3不是氢原子，或者当R4是氢原子及R3是苯基时，R1不是苯基乙基。
在本发明的另一方面中，当R5和R6一起形成一个碳环，例如
或嘧啶并[4，5-6]吲哚时，R3不是苯基，当R4是1-(4-甲基苯基)乙基，苯基异丙基，苯基或1-苯基乙基时，或者当R3不是氢原子时，R4是1-苯基乙基。由R5和R6形成的碳环可以是芳香环或脂族环，而且可有4-12个碳原子，例如萘基，苯基环己基等，优选5-7个碳原子，例如环戊基或环己基。或者，R5和R6可一起形成一个杂环，如以下揭示的那些。典型的杂环包括4-12个碳原子，优选5-7个碳原子，而且可以是芳香环或脂族环。所述杂环可以进一步被取代，包括用一或多个杂环原子取代所述环的一或多个碳原子。
在本发明的再一方面，R1和R2形成一个杂环。代表性实例包括但非限于以下所列出的那些杂环，如吗啉，哌嗪等，例如4-羟基哌啶，4-氨基哌啶。其中R1和R2一起形成一个哌嗪基团，
Figure A0182246000291
其中R7可以是氢原子或取代或未取代的烷基，芳基或烷基芳基组分。
在本发明的又一方面中，R4和R5一起形成一个杂环，例如
其中所述杂环可以是芳香环或脂族环，而且可以形成一个具有4-12个碳原子的环，例如萘基，苯基环己基等，及可以是芳香环或脂族环，例如环己基，环戊基。
所述杂环可以进一步取代，用一或多个杂环原子取代所述环结构的碳原子。或者，R4和R5可一起形成一个杂环，如以下所揭示那些。
在一些实施方案中，N-6取代的7-脱氮嘌呤不是N-6苄基或N-6苯基乙基取代的。在其它实施方案中，R4不是苄基或苯基乙基取代的。在优选实施方案中，R1和R2不同时是氢原子。在另一些优选实施方案中，R3不是氢原子。
本发明的化合物可以包含水溶性前体药物，见WO 99/33815，国际申请PCT/US98/04595，申请日1998年3月9日，1999年7月8日公布。WO 99/33815的全部内容在此特别并入参考。所述水溶性前体药物例如通过酯酶催化的水解在体内代谢为活性药物。潜在的前体药物例如包括脱氮嘌呤，其中例如R2为用-OC(O)(Z)NH2取代的环烷基，其中Z是天然或非天然发生的氨基酸，或其类似物，α，β，γ或ω氨基酸，或二肽的侧链。优选的氨基酸侧链包括甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，赖氨酸，α-甲基丙氨酸，氨基环丙烷羧酸，铃兰氨酸，β-丙氨酸，γ-氨基丁酸，丙氨酸丙氨酸，或甘氨酸-丙氨酸的侧链。
在进一步的实施方案中，本发明特征在于式(I)的脱氮嘌呤，其中R1是氢原子；R2是取代或未取代的环烷基，取代或未取代的烷基，或者R1和R2一起形成一取代或未取代的杂环；R3是取代或未取代的芳基；R4是氢；R5和R6各自独立地是氢或烷基，及其药物学可接受的盐。这个实施方案的脱氮嘌呤可以是潜在的选择性A3腺苷受体拮抗剂。
在一个实施方案中，R2是取代(例如羟基取代的)或未取代的环烷基。在一个有利的实施方案中，R1和R4是氢，R3是未取代或取代的苯基，R5和R6是烷基。优选R2是单羟基环戊基或单羟基环己基。R2也可以用-NH-C(＝O)E取代，其中E是取代或未取代的C1-C4烷基(例如烷基胺，例如乙胺)。
R1和R2还可以一起形成一个取代或未取代的杂环，其可以用胺或乙酰胺基团取代。
另一方面，R2可以是-A-NHC(＝O)B，其中A是未取代的C1-C4烷基(例如乙基，丙基，丁基)，B是取代或未取代的C1-C4烷基(例如甲基，氨基烷基，例如氨甲基或氨乙基，烷基氨基，例如甲基氨基，乙基氨基)，优选当R1和R4是氢时，R3是未取代或取代的苯基，R5和R6是烷基。B可以是取代或未取代的环烷基，例如环丙基或1-氨基环丙基。
在另一个实施方案中，R3可以是取代或未取代的苯基，优选当R5和R6是烷基时。优选地，R3可以有一或多个取代(例如o-，m-或p-氯苯基，o-，m-或p-氟苯基)。
有利地，R3可以是取代或未取代的杂芳基，优选当R5和R6是烷基时。杂芳基基团例如包括吡啶基，嘧啶基，哒嗪基，吡嗪基，吡咯基，三唑基，硫唑基(thioazolyl)，噁唑基(oxazolyl)，噁二唑基，呋喃基，亚甲基二氧基苯基和硫代苯基。优选R3是2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基，2-嘧啶基或3-嘧啶基。
在一个实施方案中，优选R5和R6各自为氢。在另一个实施方案中，R5和R6各自为甲基。
在一个特别优选的实施方案中，本发明的脱氮嘌呤是水溶性前体药物，其例如通过酯酶催化的水解在体内代谢为活性药物。优选地，所述前体药物包含一个R2基团，其是用-OC(O)(Z)NH2取代的环烷基，其中Z是天然或非天然发生的氨基酸，其类似物，α，β，γ或ω氨基酸，或二肽的侧链。优选的侧链例如包括甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，赖氨酸，α-甲基丙氨酸，氨基环丙烷羧酸，铃兰氨酸，β-丙氨酸，γ-氨基丁酸，丙氨酸-丙氨酸，或甘氨酸-丙氨酸的侧链。
在一个特别优选的实施方案中，Z是甘氨酸侧链，R2是环己基，R3是苯基，R5和R6是甲基。
在另一个实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(顺式-3-羟基环戊基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在另一个实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(顺式-3-(2-氨乙酰氧基)环戊基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶三氟乙酸盐。
在另一个实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(3-乙酰氨基)哌啶基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在另一个实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(2-N′-甲基脲丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在另一个实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(2-乙酰氨基丁基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在另一个实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(2-N′-甲基脲丁基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在另一个实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(2-氨基环丙基乙酰氨基乙基)氨基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在另一个实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氯苯基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在另一个实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在另一个实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(4-吡啶基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在又一个实施方案中，本发明特征在于一种抑制细胞中腺苷受体(例如A1，A2A，A2B，或优选A3)活性的方法，通过将所述细胞与N-6取代的7-脱氮嘌呤(例如优选腺苷受体拮抗剂)接触而进行。
在另一方面，本发明特征在于一种治疗动物(例如人)眼部损伤的方法，通过为所述患者施用有效量N-6取代的7-脱氮嘌呤而进行。优选地，所述N-6取代的7-脱氮嘌呤是动物细胞中A3腺苷受体拮抗剂。所述损伤是视网膜或视神经乳头损伤，而且可以是急性或慢性的。所述损伤可以由例如青光眼，水肿，缺血，缺氧或外伤所致。
在一个优选的实施方案中，本发明的特征在于具有前述式II的脱氮嘌呤，其中X是N或CR6；R1和R2各自独立地是氢，或取代或未取代的烷氧基，氨基烷基，烷基，芳基或烷基芳基，或一起形成一个取代或未取代的杂环，条件是R1和R2不同时是氢；R3是取代或未取代的烷基，芳基烷基，或芳基；R4是氢或取代或未取代的C1-C6烷基；L是氢，取代或未取代的烷基，或R4和L一起形成取代或未取代的杂环或碳环；R6是氢，取代或未取代烷基，或卤素；Q是CH2，O，S或NR7，其中R7是氢原子或取代或未取代的C1-C6烷基；W是未取代或取代的烷基，环烷基，炔基，芳基，芳基烷基，二芳基，杂芳基，取代的羰基，取代的硫代羰基，或取代的磺酰基，条件是R3是吡咯烷基时，R4不是甲基。
在一个实施方案中，在式II的化合物中，X是CR6，Q是CH2，O，S或NH。在另一个实施方案中，X是N。
在式II化合物的另一个实施方案中，W是取代或未取代的芳基，5或6元杂芳基，或二芳基。W可以用一或多个取代基取代。取代基例如包括：卤素，羟基，烷氧基，氨基，氨基烷基，氨基羧基酰胺，CN，CF3，CO2R8，CONHR8，CONR8R9，SOR8，SO2R8和SO2NR8R9，其中R8和R9各自独立地是氢，或取代或未取代的烷基，环烷基，芳基或芳基烷基。优选地，W可以是取代或未取代的苯基，例如亚甲基二氧苯基。W也可以是取代或未取代的5元杂芳基环，例如吡咯，吡唑，唑，咪唑，三唑，四唑，呋喃，噻吩，噻唑，噁二唑。优选地，W可以是6元杂芳基环，例如吡啶基，嘧啶基，哒嗪基，吡嗪基，和硫代苯基。在一个优选实施方案中，W是2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基，2-嘧啶基，4-嘧啶基，或5-嘧啶基。
在式II化合物的一个有利实施方案中，Q是NH，W是3-吡唑环，其是未取代的或由取代或未取代的烷基，环烷基，芳基，或芳基烷基N-取代的。
在式II化合物的另一个实施方案中，Q是氧，W是2-噻唑并(thiazolo)环，其是未取代的或由取代或未取代的烷基，环烷基，芳基，或芳基烷基取代的。
在式II化合物的另一个实施方案中，W是取代或未取代的烷基，环烷基，例如环戊基，或芳基烷基。取代基例如包括卤素，羟基，取代或未取代的烷基，环烷基，芳基，芳基烷基，或NHR10，其中R10是氢，或取代或未取代的烷基，环烷基，芳基，或芳基烷基。
在另一个实施方案中，本发明特征在于式II的脱氮嘌呤，其中W是-(CH2)a-C(＝O)Y或-(CH2)a-C(＝S)Y，a是0-3的一个整数，Y是芳基，烷基，芳基烷基，环烷基，杂芳基，炔基，NHR11R12，或者条件是Q是NH，OR13，其中R11，R12和R13各自独立地是氢，或未取代或取代的烷基，芳基，芳基烷基，或环烷基，优选Y是5或6元杂环。
另外，W可以是-(CH2)b-S(＝O)jY，其中j是1或2，b是0，1，2或3，Y是芳基，烷基，芳基烷基，环烷基，炔基，杂芳基，NHR14R15条件是当b是1时，Q是CH2，而且其中R14，R15和R16各自独立地是氢，或取代或未取代的烷基，芳基，芳基烷基或环烷基。
在另一个实施方案中，R3选自以下基团：取代或未取代的苯基，吡啶基，嘧啶基，哒嗪基，吡嗪基，吡咯基，三唑基，thioazolyl，噁唑基，噁二唑基，吡唑基，呋喃基，亚甲基二氧基苯基和苯硫基。当R3是苯基时，其可以用例如羟基，烷氧基(例如甲氧基)，烷基(例如甲苯基)和卤素(例如o-，m-或p-氟苯基，或o-，m-或p-氯苯基)取代。有利地，R3可以是2-，3-或4-吡啶基或者2-或3-嘧啶基。
本发明还涉及一种脱氮嘌呤，其中R6是氢或C1-C3烷基。优选地，R6是氢。
本发明还包括脱氮嘌呤，其中R1是氢，R2是取代或未取代的烷基或烷氧基，取代或未取代烷基胺，芳基胺，或烷基芳基胺，取代或未取代的氨基烷基，氨基芳基，或氨基烷基芳基，取代的或未取代的烷基酰胺，芳基酰胺或烷基芳基酰胺，取代或未取代的烷基磺酰胺，芳基磺酰胺，或烷基芳基磺酰胺，取代或未取代的烷基脲，芳基脲，或烷基芳基脲，取代或未取代的烷基氨基甲酸酯，芳基氨基甲酸酯或烷基芳基氨基甲酸酯，或取代或未取代的烷基羧酸，芳基羧酸或烷基芳基羧酸。
优选地，R2是取代或未取代的环烷基，例如单或二羟基取代的环己基或环戊基(优选地，单羟基取代的环己基或单羟基取代的环戊基)。
有利地，R2可以是下式所示：
其中A是C1-C6烷基，C3-C7环烷基，1-7个原子的一个链，或一个3-7个原子的环，任选地用C1-C6烷基，卤素，羟基，羧基，硫醇，或氨基基团取代；其中B是甲基，N(Me)2，N(Et)2，NHMe，NHEt，(CH2)rNH3+，NH(CH2)rCH3，(CH2)rNH2，(CH2)rCHCH3NH2，(CH2)rNHMe，(CH2)rOH，CH2CN，(CH2)mCO2H，CHR18R19或CHMeOH，其中r是0-2的整数，m是1或2。R18是烷基，R19是NH3+或CO2H或者R18和R19一起是：
Figure A0182246000352
其中p是2或3；R17是C1-C6烷基，C3-C7环烷基，1-7个原子的一个链，或一个3-7个原子的环，任选地用C1-C6烷基，卤素，羟基，羧基，硫醇或氨基基团取代。
优选A是未取代的或取代的C1-C6烷基。B可以是未取代的或取代的C1-C6烷基。
在一个优选实施方案中，R2是-A-NHC(＝O)B。在一个特别优选实施方案中，A是-CH2CH2-及B是甲基。
本发明化合物可包含水溶性前体药物，其例如通过酯酶水解在体内代谢为活性药物。潜在的前体药物例如包括脱氮嘌呤，例如R2为用-OC(O)(Z)NH2取代的环烷基，其中Z是天然或非天然发生的氨基酸或其类似物，α，β，γ或ω氨基酸或二肽的侧链。优选氨基酸侧链包括甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，赖氨酸，甲基丙氨酸，氨基环丙烷，羧酸，铃兰氨酸，β-丙氨酸，γ-氨基丁酸，丙氨酸-丙氨酸，或甘氨酸-丙氨酸的侧链。
在另一个实施方案中，R1和R2在一起是：
其中n是1或2，且其中所述环可以任选地用一或多个羟基，氨基，硫醇，羧基，卤素，CH2OH，CH2NHC(＝O)烷基，或CH2NHC(＝O)NH烷基基团取代。优选地，n是1或2，而且所述环用-NHC(＝O)烷基取代。
在一个优选实施方案中，R1是氢，R2是取代或未取代的C1-C6烷基，R3是取代或未取代的苯基，R4是氢，L是氢或者取代或未取代的C1-C6烷基，Q是O，S或NR7，其中R7是氢或着取代或未取代的C1-C6烷基，W是取代或未取代的芳基。优选地，R2是-A-NHC(＝O)B，其中A和B各自独立地是未取代或取代的C1-C4烷基。例如A可以是CH2CH2；B可以是例如烷基(例如甲基)，或氨基烷基(例如氨甲基)。优选地，R3是未取代的苯基，L是氢。R6可以是甲基或优选是氢。优选地，Q是O，S或NR7，其中R7是氢或者取代或未取代的C1-C6烷基，例如甲基。W是未取代或取代的苯基(例如烷氧基，卤素取代的)。优选地，W是p-氟苯基，p-氯苯基，或p-甲氧基苯基。H也可以是杂芳基，例如2-吡啶基。
在一个特别优选的实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(2-乙酰氨乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在一个特别优选的实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(2-乙酰氨乙基)氨基-6-(4-氟苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在一个特别优选的实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(2-乙酰氨乙基)氨基-6-(4-氯苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在一个特别优选的实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(2-乙酰氨乙基)氨基-6-(4-甲氧基苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在一个特别优选的实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(2-乙酰氨乙基)氨基-6-(2-吡啶氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在一个特别优选的实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(2-乙酰氨乙基)氨基-6-(N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在一个特别优选的实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(2-乙酰氨乙基)氨基-6-(N-甲基-N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
在一个特别优选的实施方案中，所述脱氮嘌呤是4-(2-N’甲基脲乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
本发明还涉及一种抑制细胞中腺苷受体(例如A2b受体)活性的方法，通过将所述细胞与本发明化合物接触而进行。优选地，所述化合物是所述受体拮抗剂。
本发明还涉及一种治疗动物胃肠道功能失调(例如腹泻)的方法，通过为动物施用有效量的本发明化合物(例如A2b拮抗剂)而进行。优选地，所述动物是人。
在另一个实施方案中，本发明涉及一种药物组合物，其含有本发明的N-6取代的7-脱氮嘌呤和一种药物学可接受的载体。
本发明还涉及一种治疗动物体内N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态的方法，通过为哺乳动物施用治疗有效量的本发明的脱氮嘌呤，从而治疗动物体内出现的N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态。有利地，所述疾病状态可以是由腺苷介导的功能失调。优选疾病状态例如包括中枢神经系统疾病，心血管疾病，肾脏疾病，炎症疾病，过敏性疾病，胃肠道疾病，眼部疾病，和呼吸道疾病。
术语“烷基”是指饱和脂族基团，包括直链烷基，支链烷基，环烷基(脂环基)，烷基取代的环烷基，环烷基取代的烷基。术语烷基还包括这样的烷基，其可以进一步包括取代烃主链的一或多个碳的氧，氮，硫或磷原子，例如氧，氮，硫或磷原子。在优选的实施方案中，直链或支链烷基的主链有30个或更少个碳原子(例如直链C1-C30，支链C3-C30)，及更优选20或更少个碳原子。另外，优选的环烷基在其环状结构中有4-10个碳原子，及更优选有5，6或7个碳原子。
另外，本说明书和权利要求中使用的术语烷基意在包括“未取代的烷基”和“取代的烷基”，后者是指具有取代烃主链的一或多个碳原子上氢的取代基的烷基组分。这种取代基可包括例如卤素，羟基，烷基羰基氧基，芳基羰基氧基，烷氧基羰基氧基，芳氧基羰基氧基，羧酸酯，烷基羰基，烷氧基羰基，氨基羰基，烷基硫代羰基，烷氧基，磷酸酯，磷酸酯基，膦酸酯基，氰基，氨基(包括烷基氨基，二烷基氨基，芳基氨基，二芳香氨基，和烷基芳基氨基)，酰基氨基(包括烷基羰基氨基，芳基羰基氨基，氨甲酰基和脲基)，脒基，亚氨基，巯基，烷基硫，芳基硫，硫代羧酸酯，硫酸酯，磺酸酯基，氨磺酰，磺氨基，硝基，三氟甲基，氰基，叠氮基，杂环基，烷基芳基，或芳族或杂芳族组分。本领域技术人员意识到如果合适，烃链上取代可以是自身取代。环烷基可以例如用上述取代基进一步取代。“烷基芳基”组分是用芳基取代的烷基(例如苯甲基)。术语“烷基”还包括与上述烷基在长度和可能的取代方面相似的不饱和脂族基团类似物，但其分别含有至少一个双键或三键。
本文所用术语“芳基”是指芳基团自由基，包括5和6元单环芳基，其可包括0-4个杂环原子，例如苯，吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，苯并噁唑，苯并噻唑，三唑，四唑，吡唑，吡啶，吡嗪，哒嗪，和嘧啶等。芳基还包括多环稠环芳基，如萘基，喹啉基，吲哚基等。环状结构中具有杂原子的那些芳基也可以称为“芳香杂环”，“杂环芳基”或“杂环芳族化合物”。所述芳香环可以用上述取代基在一或多个环位置取代，例如卤素，羟基，烷氧基，烷基羰基氧基，芳基羰基氧基，烷氧基羰基氧基，芳香氧基羰基氧基，羧酸酯，烷基羰基，烷氧基羰基，氨基羰基，烷基硫代羰基，烷氧基，磷酸酯，磷酸酯基，膦酸酯基，氰基，氨基(包括烷基氨基，二烷基氨基，芳基氨基，二芳基氨基，和烷基芳基氨基)，酰基氨基(包括烷基羰基氨基，芳基羰基氨基，氨甲酰基和脲基)，脒基，亚氨基，巯基，烷基硫，芳基硫，硫代羧酸酯，硫酸酯，磺酸酯，氨磺酰，磺氨基，硝基，三氟甲基，氰基，叠氮基，杂环基，烷基芳基，或芳族或杂芳族组分。芳基还可以与脂环或杂环稠合或桥连以形成多环(例如1，2，3，4-四氢化萘)。
术语“炔基”是指长度与可能的取代与上述烷基相似的不饱和脂族基团类似物，但其分别含有至少一个双键或三键。例如，本发明涵盖了氰基和炔丙基。
除非特别指定碳原子数目，本文所用术语“较低烷基”是指上述烷基，但在其主链结构中有1-10个碳原子，更优选有1-6个碳原子，更优选1-3个碳原子。同样，“低级炔基”具有相似链长度。
术语“烷氧基烷基”，“聚氨基烷基”和“硫代烷氧基烷基”是指上述烷基，其进一步包括置换烃链的一或多个碳原子的氧，氮或硫原子，例如氧，氮或硫原子。
术语“多环基”是指两或多个环的基团(例如环烷基，环烯基，环炔基，芳基和/或杂环基)，其中两个相邻环有两或多个共同的碳原子，例如所述环是“稠环”。通过非相邻原子结合的环称为“桥连”环。多环的每个环均可以用上述取代基取代，例如卤素，羟基，烷氧基，烷基羰基氧基，芳基羰基氧基，烷氧基羰基氧基，芳氧基羰基氧基，羧酸酯，烷基羰基，烷氧羰基，氨基羰基，烷基硫代羰基，烷氧基，磷酸酯，磷酸酯基，膦酸酯基，氰基，氨基(包括烷基氨基，二烷基氨基，芳基氨基，二芳基氨基，和烷基芳基氨基)，酰氨基(包括烷基羰基氨基，芳基羰基氨基，氨甲酰基和脲基)，脒基，亚氨基，巯基，烷基硫，芳基硫，硫代羧酸酯，硫酸酯，磺酸酯基，氨磺酰，磺氨基，硝基，三氟甲基，氰基，叠氮基，杂环基，烷基芳基，或芳族或杂芳族组分。
本文所用术语“杂环原子”是指除了碳或氢之外的任何原子。优选的杂环原子是氮，氧，硫和磷。
术语“氨基酸”包括在蛋白质中天然和非天然存在的氨基酸如甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，半胱氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，甲硫氨酸，谷氨酸，天冬氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，赖氨酸，精氨酸，脯氨酸，组氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸。氨基酸类似物包括具有延长或缩短的侧链或具有合适官能团的变体侧链的氨基酸。当氨基酸结构允许立体异构体形成时，氨基酸还包括其D和L立体异构体。术语“二肽”包括连接在一起的两或多个氨基酸。优选地，二肽是通过肽键连接的两个氨基酸。特别优选的二肽包括例如丙氨酸-丙氨酸和甘氨酸-丙氨酸。
应注意本发明一些化合物的结构包括不对称的碳原子，并因此出现消旋体和消旋体混合物，单对映异构体和非对映异构体混合物和单独的非对映异构体。这些化合物的所有这种异构体形式均特别包括在本发明内。每个立体的碳原子可以是R或S构型。因此应知除非特别说明，由这种不对称产生的异构体(例如所有对映异构体和非对映异构体)包括在本发明内。这种异构体可以通过传统的分离技术及通过立体化学控制合成方法以基本纯化形式获得。
本发明还涉及治疗哺乳动物中N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态的药物组合物，例如治疗呼吸系统疾病(例如哮喘，支气管炎，慢性阻塞性肺部疾病，和过敏性鼻炎)，肾脏疾病，胃肠道疾病和眼部疾病。所述药物组合物包括前述一种治疗有效量的N-6取代的7-脱氮嘌呤，和一种药物学可接受的载体。应理解上述所有脱氮嘌呤均包括在本发明治疗剂中。还应理解本发明的脱氮嘌呤可单独使用或与本发明的其它脱氮嘌呤组合，或与额外的治疗化合物组合，如与抗生素，抗炎剂，或抗癌剂组合。
术语“抗生素”是本领域熟知的并包括由生长中的微生物产生的那些物质及其合成衍生物，其消除或抑制病原体生长，并对所述病原体有选择性毒性，而对感染的宿主的作用很小或无害。抗生素的适当实例包括但非限于氨基糖苷类，头孢菌素，氯霉素，镰孢菌酸，大环内酯类，青霉素，多粘菌素，四环素和链霉素。
术语“抗炎剂”是本领域熟知的，并包括那些作用于机体机制而不直接对抗炎症致病原因的制剂，例如糖皮质激素，阿斯匹林，布洛芬，NSAIDS等。
术语“抗癌剂”是本领域熟知的并包括减少，根除或防止癌细胞生长，及优选对其它生理功能无不利影响的那些制剂。代表性实例包括顺铂和环磷酰胺。
当本发明化合物作为药物施用于人和哺乳动物时，它们可以单独或作为药物组合物给予，所述组合物例如含有0.1-99.5％(更优选0.5-90％)的活性成分，组合一种药物学可接受的载体。
本文所用术语“药物学可接受的载体”是指在治疗对象内参与携带或转运本发明化合物的一种药物学可接受的物质、组合物或运载体，如液体或固体充填剂，稀释剂，赋形剂，溶剂或胶囊化原料，由此可进行其指定功能。典型地，这种化合物从一个器官或机体的一部分携带或转运至另一个器官或机体的另一部分。每个载体必须是“可接受的”是指与配方中其它成分相容而且对患者无害。可作为药物学可接受的载体的一些物质例如包括：糖如乳糖，葡萄糖，和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素纳，乙基纤维素和醋酸纤维素；粉末状黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂如可可油和蜡栓；油如花生油，棉花子油，红花油，芝麻油，橄榄油，玉米油，和大豆油；二醇如丙二醇；多元醇如甘油，山梨醇，甘露醇和聚乙二醇；酯如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂如氢氧化镁和氢氧化铝；褐藻酸；无热源水；等渗盐水；Ringer′s溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；及用于药物配制中的其它无毒相容物质。
如上所述，本发明的一些实施方案可以含有一个碱性官能团，如氨基或烷基氨基，及因此与药物学可接受的酸形成药物学可接受的盐。文中术语“药物学可接受的盐“是指本发明化合物的相对无毒的无机和有机酸盐。这些盐可以在最后分离和纯化本发明化合物期间原位制备，或通过单独将本发明纯化的化合物以其游离碱形式与适当的无机和有机酸反应，及分离因此形成的盐。代表性的盐包括氢溴酸盐，盐酸盐，硫酸盐，硫酸氢盐，磷酸盐，硝酸盐，乙酸盐，戊酸盐，油酸盐，棕榈酸盐，硬脂酸盐，月桂酸盐，安息香酸盐，乳酸盐，磷酸盐，甲苯磺酸盐，柠檬酸盐，马来酸盐，延胡索酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，napthylate，mesylate，葡庚糖酸盐，乳糖酸盐，和月桂基磺酸盐等(见例如Berge等(1977)，“药物盐”，药物学杂志66：1-19)。
在其它情况中，本发明化合物可以含有一或多个酸性官能团，及因此能与药物学可接受的碱形成药物学可接受的盐。在这些情况中术语“药物学可接受的盐”是指本发明化合物的相对无毒的无机和有机碱盐。这些盐同样可以在最后分离和纯化所述化合物期间原位制备，或通过单独将纯化的化合物以其游离酸形式与适当碱如药物学可接受的金属阳离子的氢氧化物，碳酸盐或碳酸氢盐，与氨水，或与药物学可接受的有机伯胺，仲胺，叔胺反应。代表性碱或碱土金属盐包括锂，钠，钾，钙，镁和铝盐等。用于形成碱盐的代表性有机胺包括乙胺，二乙胺，乙二胺，乙醇胺，二乙醇胺，哌嗪等。
术语“药物学可接受的酯”是指本发明化合物的相对无毒的酯化产物。这些酯可以在最后分离和纯化所述化合物期间原位制备，或通过单独将所述纯化化合物以其游离酸形式或羟基与适当酯化剂反应制备。羧酸可以通过在存在催化剂的情况下用乙醇处理转变为酯。含有羟基的衍生物可以通过用酯化剂如链烷酸处理而转变为酯。该术语的含义还包括在生理条件下能溶解的低级烃基，例如烷基酯，甲基酯，乙基酯和丙基酯(见例如Berge等，如前)。
本发明还涵盖了在体内转变为本发明治疗化合物的前体药物的应用(见例如R.B.Silverman，1992，“药物设计和药物作用的有机化学”，学术出版社，第8章)。这种前体药物可以用于改变所述治疗化合物的生物学分布(例如使化合物不典型地进入蛋白酶反应部位)或药物动力学。例如，羧基可以例如用甲基或乙基酯化产生酯。当所述酯施用于治疗对象时，所述酯经酶促或非酶促，还原性或水解性裂解，展示阴离子基团。阴离子基团可以用裂解的组分(例如酰氧甲基酯)酯化以展示中间化合物，其随后分解产生活性化合物。在另一个实施方案中，所述前体药物是硫酸盐或磺酸盐的还原形式，例如硫醇，其在体内氧化为所述治疗化合物。另外，阴离子组分可以酯化为这样的基团，其在体内活性转运，或由靶器官选择性摄取。可以对所述酯加以选择以使所述治疗组分特异性定位于特定反应部位，如以下关于载体组分的阐述。
本发明所述组合物中还可以存在增湿剂，乳化剂和润滑剂如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，以及色素，释放剂，包衣剂，甜味剂，调味和芳香剂，防腐剂和抗氧化剂。
药物学可接受的抗氧化剂例如包括：水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸，盐酸赖氨酸，硫酸氢钠，亚硫酸氢钠，亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸盐，丁化羟基苯甲醚(BHA)，2，6-二叔丁基对甲酚(BHT)，卵磷脂，丙基没食子酸，α-维生素E等；及金属鳌合剂，如柠檬酸，乙二胺四乙酸(EDTA)，山梨糖醇，酒石酸，磷酸等。
本发明的配方包括适于口服，鼻内，局部，经皮肤，口腔，舌下，直肠，阴道和/或肠道外施用的那些制剂。所述配方可以常规以单位剂量形式提供，并可以通过药物学领域熟知的任何方法制备。可以与载体组合以产生单一剂量形式的活性成分数量，一般是产生治疗作用的化合物数量。通常地，以百分率表示，活性成分数量在大约1％-大约99％之间，优选大约5％-70％之间，最优选在大约10％-30％之间。
制备这些配方或组合物的方法包括将本发明化合物与载体及任选一或多种附加成分缔合的步骤。通常地，所述配方通过将本发明化合物与液体载体或充分分开的固体载体或这二者均匀紧密缔合而制备，然后如果需要对产物定形。
适于口服的本发明配方可以是胶囊剂，扁囊剂，丸剂，片剂，糖浆(使用调味基，通常为蔗糖和阿拉伯树胶或黄芪胶)，粉末，颗粒，或在水相或非水相液体中的溶液或悬浮液，或水包油或油包水乳状液，或酏剂或糖浆，或锭剂(使用惰性基，如凝胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯树胶)和/或口腔洗剂等，每种配方均含有预定数量的本发明化合物作为活性成分。本发明化合物还可以作为大丸，干糖浆或糊剂施用。
在本发明口服施用的固体剂型中(胶囊，片剂，药丸，糖衣丸，粉末颗粒等)，活性成分与一或多种药物药物学可接受的载体，如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或以下物质混合：充填剂或添加剂，如淀粉，乳糖，蔗糖，甘露醇，和/或硅酸；结合剂例如羧甲基纤维素，藻酸盐，聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖和/或阿拉伯树胶；保湿剂如甘油；分解剂如琼脂-琼脂，碳酸钙，马铃薯或木薯淀粉，褐藻酸，某些硅酸盐，和乙酸钠；溶液阻滞剂，如石蜡；吸收加速剂如季胺化合物；增湿剂，如十六烷基醇和甘油一硬脂酸酯，吸收剂如高岭土和皂土；润滑剂，如滑石，硬脂酸钙，硬脂酸镁，固体聚乙二醇，十二烷基硫酸钠，及其混合物；及色素。在胶囊，片剂和药丸的情况中，所述药物组合物还可以包含缓冲剂。较小类型固体组合物还可以作为充填剂充填在软或硬明胶的胶囊而应用，使用这种赋形剂如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等。
片剂可以通过压制或成型制成，任选与一或多种附加成分组合。制备压制片剂可以使用结合剂(例如凝胶或羟丙甲基纤维素)，润滑剂，惰性稀释剂，防腐剂，分解质(例如乙醇酸钠或交联的羧甲基纤维素钠)，表面活性剂或分散剂。制成成型片剂可以通过在适当机器中将用惰性液体稀释剂湿润的所述粉末状化合物混合物成型。
本发明的片剂，及其它固体剂型的药物组合物，如糖衣丸，胶囊，药丸和颗粒，可以任选用糖衣和外壳制备，如肠衣及制药领域熟知的其它糖衣。还可以使用例如不同比例的羟丙甲基纤维素以提供所需释放图示，其它聚合物基质，脂质体和/或微球体进行配制，以使其中活性成分缓慢或控制释放。它们可以通过例如滤菌滤膜过滤，或者通过掺入可溶解于无菌水中的无菌固体组合物形式的杀菌剂，或在立即使用之前掺入一些其它无菌可注射培养基而灭菌。这些组合物还可以任选含有乳化剂，而且可以是这样的组合物，其只在或优先在胃肠道的一定部分释放所述活性成分，任选以定时方式释放。可以使用的埋入组合物例如包括聚合物和蜡。所述活性成分还可以是小胶囊形式，如果适当，可以组合一或多种上述赋形剂。
口服施用的本发明化合物的液体剂型包括药物学可接受的乳剂，微乳液，溶液，悬浮液，糖浆和酏剂。除了所述活性成分之外，液体剂型还可以含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，如乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苯甲醇，苯甲酸苄酯，丙二醇，1，3-丁二醇，油(尤其棉花子油，落花生油，玉米油，草叶油，橄榄油，海狸油和芝麻油)，甘油，四氢糠醇和山梨聚糖的脂肪酸酯，及其混合物。
除了惰性稀释剂，所述口服组合物还可以包括佐剂如增湿剂，乳化剂和悬浮剂，甜味剂，调味剂，色素，芳香剂和防腐剂。
除了所述活性化合物之外，悬浮液还可以包含悬浮剂，例如乙氧化异硬脂醇，聚氧化乙烯山梨糖醇和山梨聚糖酯，微晶纤维素，偏氢氧化铝，斑脱土，琼脂和黄芪胶，及其混合物。
直肠或阴道施用的本发明药物组合物的配方可以是栓剂，其可以通过将本发明的一或多种化合物与一或多种适当的无刺激性赋形剂或载体混合制备，所述赋形剂或载体包含例如可可油，聚乙二醇，栓剂蜡或水杨酸盐，其在室温是固体，但在体温是液体，及因此在直肠或阴道内融化并释放所述活性化合物。
适于阴道内施用的本发明配方还包括含有本领域已知的这种载体的阴道栓剂，棉塞，乳剂，凝胶，糊，泡沫或喷雾配方。
本发明化合物的局部或经皮施用剂型包括粉末，喷雾，药膏，糊，乳剂，洗剂，凝胶，溶液，贴膏和吸入剂。所述活性化合物可以在无菌条件下与药物学可接受的载体混合，及组合所需的任何防腐剂，缓冲剂或推进剂。
所述药膏，糊，乳剂和凝胶除了本发明化合物之外，可以含有赋形剂，如动物和植物脂肪，油，蜡，石蜡，淀粉，西黄芪胶，纤维素衍生物，聚乙二醇，硅氧烷，斑脱土，硅酸，滑石和氧化锌，或其混合物。
粉末和喷雾剂除了本发明化合物之外，可以含有赋形剂如乳糖，滑石，硅酸，氢氧化铝，硅酸钙和聚酰胺粉末，或这些物质的混合物。喷雾剂可以另外含有常规的推进物，如氯氟烃和挥发性非取代烃，如丁烷和丙烷。
经皮贴膏具有控制本发明化合物输送至机体的额外优势。这种剂型可以通过将所述化合物溶解或分散于适当介质中制成。还可以使用吸收增强剂以提高所述化合物穿经皮肤的通量。这种通量率可以通过提供一种控制膜速度或将所述活性化合物分散于聚合物基质或凝胶中而加以控制。
眼科配方，眼药膏，粉末，溶液等，也涵盖在本发明分为内。优选地，所述药物制品是眼科配方(例如眼周，眼球后或眼内注射配方，系统配方，或外科灌注配方)。
本发明的眼科配方可以包括一或多种脱氮嘌呤及药物学可接受的运载体。可以使用不同类型的运载体。
所述运载体通常本质上是水性的。基于配方以及便于在患者病变眼中滴入1-2滴这种组合物，优选是水溶液。然而，本发明的脱氮嘌呤也易于掺入其它类型组合物中，如悬浮液，粘性或半粘性凝胶或其它类型的固体或半固体组合物。本发明的眼科组合物还可以包括各种其它成分，如缓冲剂，防腐剂，辅助溶剂和粘性形成剂。
可以加入适当的缓冲系统(例如磷酸钠，乙酸钠或硼酸钠)以防止在贮存条件下pH发生偏差。
眼科制品典型地以多剂量形式包装。因此需要防腐剂以防止在使用期间微生物污染。适当的防腐剂包括：杀藻胺，硫柳汞，氯丁醇，甲基对羟基苯甲酸酯，丙基对羟基苯甲酸酯，苯乙醇，乙二胺四乙酸二钠，山梨酸，polyquaternium-1，或本领域已知的其它制剂。这种防腐剂典型以0.001-1.0％重/体积(“％w/v”)水平应用。
当本发明脱氮嘌呤在眼内手术期间施用时，如通过眼球后或眼内注射及眼内灌注或注射，最优选使用平衡盐灌注溶液作为运载体。例如BSS无菌灌注溶液和BSS Plus无菌眼内灌注溶液(AlconLaboratories，Inc.，Fort Worth，Texas，USA)是生理学平衡的眼内灌注溶液。后者见美国专利No.4,550,022(Garabedian等)所述，其全部内容在此并入参考。本领域已知眼球后和眼周注射剂，并见于许多出版物中所述，包括例如：眼外科学实践原理，Ed.，G.L.Spaeth.W.B.Sanders Co.，Philadelphia，Pa.，U.S.A.，pages 85-87(1990)。
如上所示，在细胞水平使用脱氮嘌呤预防或降低视网膜和视神经乳头组织损伤是本发明一个实施方案的一个尤为重要方面。可以治疗的眼部病变包括但非限于视网膜病变，黄斑变性，眼局部缺血，青光眼，及与眼部组织损伤相关的病变，如缺血再灌注损伤，光化学损伤，及与眼部手术相关的损伤，尤其暴露于光或手术器械所致视网膜或视神经损伤。所述化合物还可以用作眼部手术的辅助剂，如在眼部手术后通过玻璃体或角膜下(subconjunctival)注射。所述化合物可用于暂时病变的应急治疗，或长期施用，尤其在变性疾病的情况中。所述化合物还可以预防性应用，尤其在眼部手术或非侵入性眼部手术，或其它类型手术之前应用。
适于非肠道施用的本发明药物组合物包含一或多种本发明化合物，组合一或多种药物学可接受的无菌等渗水性或非水性溶液，分散液，悬浮液或乳状液，或可以在使用之前在无菌可注射溶液或分散液中重建的无菌粉末，其可以含有抗氧化剂，缓冲剂，抑菌剂，形成与指定受体血液等渗的溶质，或悬浮剂或增稠剂。
可以用于本发明药物组合物中的适当水性和非水性载体例如包括水，乙醇，多元醇(如甘油，丙二醇，聚乙二醇等)，及其适当混合物，植物油如丁香油，及可注射有机酯如乙基油酸酯。可以保持适当流动性，例如通过使用包被物如卵磷脂，在分散剂情况中保持所需颗粒大小，及使用表面活性剂。
这些组合物还可以含有佐剂如防腐剂，增湿剂，乳化剂和分散剂。防止微生物起作用可以通过包含各种抗菌和抗真菌剂而确保，例如对羟基苯甲酸酯，氯丁醇，酚山梨酸等。所述组合物中还需要包括等渗剂，如糖，氯化钠等。另外，通过包含延缓吸收的制剂如单硬脂酸铝和明胶可以延长可注射药物形式的吸收。
在一些情况中，为延长药物作用，需要延缓药物经皮下或肌内注射吸收。这可以通过使用低水溶性晶体或非晶态物质的液态悬浮液而实现。药物吸收速度依赖于其溶解速度，溶解速度又依赖于晶体大小和晶体形式。或者，延迟非肠道施用的药物形式吸收通过将所述药物溶解或悬浮于油性运载体中而实现。
可注射贮存形式通过在可生物降解的聚合物如聚交酯-聚糖酯中形成所述化合物的微胶囊基质而制成。根据药物与聚合物的比率及所用聚合物的性质，可以控制药物释放速度。其它可生物降解聚合物例如包括聚(正酯)和聚(酐)。可注射贮存配方也可以通过将药物包载入与机体组织相容的脂质体或微乳状液中而制备。
本发明的制品可以经口服，非肠道，局部或直肠给予。它们当然通过适于每种施用途径的形式给予。例如，以片剂或胶囊形式，通过注射，吸入，眼部洗剂，药膏，栓剂等，通过注射，灌注或吸入施用；通过洗剂或药膏局部施用；及通过栓剂经直肠施用。优选口服施用。
本文所用术语“非肠道施用”是指除了肠道和局部施用之外的施用模式，通常通过注射施用，包括但非限于静脉内，肌内，动脉内，鞘内，囊内，眼眶内，心内，皮内，腹膜内，经气管，皮下，表皮下，关节内，囊下，蛛网膜下，脊柱内和胸骨内注射及灌注。
本文所用术语“系统施用”，“外周施用”是指非直接将化合物，药物或其它物质非直接施用于中枢神经系统，由此其进入患者的系统中，并因此进行代谢及其它相似进程，例如皮下施用。
这些化合物可以施用于人及其它动物以通过任何适当施用途径进行治疗，包括口服，鼻内例如喷雾，直肠，阴道内，非肠道，池内，局部例如通过粉末，药膏或滴剂，包括口腔和舌下施用。
不管选择的施用途径如何，可以将以适当水合形式使用的本发明的化合物，和/或本发明药物组合物，通过本领域已知的常规方法配制成药物学可接受的剂型。
本发明药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以变化，以获得针对特殊患者，组合物，及施用模式有效达到所需治疗效果而对患者无毒性的活性成分数量。
选择剂量水平依赖许多因素，包括所用本发明特殊化合物或其酯，盐或酰胺的活性，施用途径，施用时间，所用特殊化合物的排泄速度，治疗持续时间，与所用化合物组合使用的其它药物，化合物和/或物质，年龄，性别，体重，状态，一般健康状态及所治疗患者的病史，及医学领域熟知的因素等。
本领域熟练医师或兽医可以易于确定及规定所需药物组合物的有效数量。例如，医师或兽医可以在低于所需水平的剂量开始在所述药物组合物中应用本发明化合物，以达到所需的治疗作用及逐步增加剂量直至达到所需作用。
通常地，本发明化合物的适当日剂量是有效产生治疗作用的最低剂量。这种有效剂量通常依赖于上述因素。通常地，当用于指定止痛作用时，本发明化合物的静脉内和皮下剂量为大约0.0001-200mg/kg体重/天，优选大约0.01-150mg/kg/天，最优选大约0.2-140mg/kg/天。
如果需要，所述活性化合物的有效日剂量可以在一天当中以适当间隔分2，3，4，5，6或更多次分别施用，任选以单位剂量形式。本发明化合物可以单独施用，优选作为药物组合物施用所述化合物。
本发明还涉及包装的药物组合物以治疗N-6取代的7-脱氮嘌呤响应状态，例如哺乳动物中腺苷受体活性的非所需提高。所述包装的药物组合物包括一个容器，其内装有治疗有效量的至少一种前述脱氮嘌呤，及使用所述脱氮嘌呤治疗哺乳动物中脱氮嘌呤响应状态的说明书。
本发明的脱氮嘌呤可以使用标准有机合成方法制备。脱氮嘌呤可以通过反相HPLC，层析，纯化再结晶等纯化，其结构通过质谱分析，元素分析，IR和/或NMR光谱分析证实。
典型地，中间产物以及本发明脱氮嘌呤的合成在溶液中进行。还要典型地进行添加或除去一或多个保护基团，这已经为本领域技术人员所已知。制备本发明脱氮嘌呤中间产物的典型合成方案在以下方案I中概述。
本发明还提供了具有以下结构(IV)的化合物：
其中R1是反式-4-羟基环己基，2-甲氨基羰基氨基环己基，乙酰氨基乙基或甲氨基羰基氨基乙基；其中Ar是取代或未取代的4-6元环，苯基，吡咯，噻吩，呋喃，噻唑，咪唑，吡唑，1，2，4-三唑，吡啶，2(1H)-吡啶酮，4(1H)-吡啶酮，吡嗪，嘧啶，哒嗪，异噻唑，异噁唑，唑，四唑，萘，1，2，3，4-四氢化萘，1，5-二氮杂萘，苯并呋喃，苯并噻吩，吲哚，2，3-二氢吲哚，1H-吲哚，二氢吲哚，苯并吡唑，1，3-苯并二唑，苯并噁唑，嘌呤，香豆素，色酮，喹啉，四氢喹啉，异喹啉，苯并咪唑，喹唑啉，吡唑并[2，3-b]吡嗪，吡唑并[3，4-b]吡嗪，吡唑并[3，2-c]哒嗪，purido[3，4-b]吡啶，1H-吡唑[3，4-d]嘧啶，蝶啶，2(1H)-喹啉，1(2H)-异喹啉，1，4-苯并异噁嗪，苯并噻唑，喹喔啉，喹啉-N-氧化物，异喹啉-N-氧化物，喹喔啉-N-氧化物，喹唑啉-N-氧化物，苯并噁嗪，2，3-二氮杂萘，肉啉，或者具有以下结构：
Figure A0182246000512
其中Y是碳或氮；其中R2和R2’，各自独立地是H，取代或未取代的烷基，取代或未取代的芳基，卤素，甲氧基，甲氨基或甲硫；其中R3是H，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，氨基，取代的芳基，其中所述取代的烷基是-C(R7)(R8)XR6，其中X是O，S或NR5，其中R7和R8各自独立地是H或烷基，其中R5和R6各自独立地是烷基或环烷基，或者NR5R6是4-7元取代或未取代环；
其中R4是H，烷基，取代的烷基，环烷基；或者药物学可接受的盐，前体药物衍生物，或生物活性代谢物，附带条件是当R1是乙酰氨乙基时，Ar不是4-吡啶基。
在具有IV结构的化合物的一个实施方案中，NR5R6是4-7元取代或未取代环，其选自：
Figure A0182246000521
其中m是0，1或2，
其中n是0，1，2或3；其中R8是H，-OH，-CH2OH，-C(＝O)NR9R10，NHR11；其中R11是-C(＝O)CH3，或-SO2Me，或者
其中R是H，烷基或芳基。
在具有IV结构的化合物的另一个实施方案中，Ar具有以下结构：
其中Y是碳或氮；其中R2是H，或卤素，-O-烷基，胺基团，或硫基团；
其中R3是H，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，氨基，取代的芳基，其中所述取代的烷基是-C(R7)(R8)NR5R6，其中R7和R8各自独立地是H或烷基，其中R5和R6各自独立地是烷基或环烷基，或者R5，R6和氮一起形成一个4-7元取代或未取代环。
在所述化合物的另一个实施方案中，Y是碳。
在所述化合物的另一个实施方案中，R2是氢。
在所述化合物的另一个实施方案中，R4是氢。
在所述化合物的另一个实施方案中，R3是氢。
在所述化合物的另一个实施方案中，R3和R4均是甲基。
在所述化合物的另一个实施方案中，R3是-C(R7)(R8)NR5R6，其中R7和R8各自独立地是H或烷基，其中R5和R6各自独立地是烷基或环烷基，或者R5，R6和氮一起形成一个取代或未取代的4-7元环。
在所述化合物的另一个实施方案中，R2是卤素。
在所述化合物的另一个实施方案中，Y是氮。
在所述化合物的另一个实施方案中，R2是氢。
在所述化合物的另一个实施方案中，R3和R4均是氢。
本发明还提供了具有以下结构(V)的化合物：
其中R1是芳基，取代的芳基或杂芳基；
其中R2是H，烷基，取代的烷基或环烷基；
其中R3是H，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，氨基，取代的芳基，其中所述取代的烷基是-C(R6)(R7)NR4R5，其中R6和R7是H或烷基，其中R4和R5是烷基或环烷基，或者R4，R5和氮一起形成一个4-7元环。
在具有结构V的化合物的一个实施方案中，R4和R5是H；其中R4是H，R5是R12C(＝O)R13。
在具有结构V的化合物的另一个实施方案中，R4和R5是H，其中所述环体系是吗啉代，硫代吗啉代，N-4-取代的哌嗪，2-取代的哌嗪，或R8取代的吡咯烷，其中R8是H，OH，CH2OH，-C(＝O)NR9R10，NR11，其中R11是-C(＝O)CH3，-SO2Me。
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
(化合物706)
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
(化合物1318-a)
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246000561
(化合物1318-b)
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
(化合物1319)
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
(化合物1320)
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
(化合物1321)
一种具有以下结构的化合物：
其中R2是5-6元芳香环；其中R3和R4是H或烷基。
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
(化合物1500)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
在所述化合物1500的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246000601
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246000602
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
Figure A0182246000611
其中R2是5-6元芳香环；其中R3和R4是H，或烷基；烷基；附带条件是R2不是4-吡啶基。
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246000612
(化合物1501)
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
其中R2是取代的5-6元芳香环；其中R3和R4是H或烷基。
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
(化合物1520)
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
其中R2是取代的5-6元芳香环；其中X是氧或硫。
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
(化合物1503)
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
其中R2是5-6元芳香环；其中X是氧或硫。
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246000642
(化合物1504)
本发明还提供了一种治疗与A1腺苷受体相关的疾病的方法，包括为治疗对象施用治疗有效量的具有式IV，V，VI，VII，VIII，IX或X的化合物。
在所述方法的一个实施方案中，所述对象是哺乳动物。在所述方法的另一个实施方案中，所述哺乳动物是人。
在所述方法的另一个实施方案中，A1腺苷受体与认知疾病，肾衰竭，心律不齐，呼吸道上皮，递质释放，镇静，血管收缩，心动过缓，心肌收缩和传导下降，支气管阻塞，中性粒细胞趋化性，返流，或溃疡相关。
本发明还提供了一种针对哮喘的组合疗法，包括化合物IV和V，及类固醇，β2兴奋剂，糖皮质激素，白三烯拮抗剂，或anticolinegic兴奋剂。与A1，A2a，A2b和A3受体相关的疾病见WO 99/06053和WO09822465，WO-09705138，WO-09511681，WO-09733879，JP-09291089，PCT/US98/16053和美国专利No.5,516,894所揭示，在此全部以其全文并入参考。
本发明还提供了具有结构IV，V，VI，VII，VIII，IX或X的化合物的一种水溶性前体药物，其中所述水溶性前体药物在体内代谢为活性药物，其选择性抑制A1腺苷受体。
在所述前体药物的一个实施方案中，所述前体药物通过酯酶催化的水解在体内代谢。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含所述前体药物和一种药物学可接受的载体。
本发明还提供了一种抑制细胞中A1腺苷受体活性的方法，包括将所述细胞与具有结构IV，V，VI，VII，VIII，IX或X的化合物接触而进行。
在所述方法的一个实施方案中，所述化合物是所述A1腺苷受体的拮抗剂。
本发明还提供了一种治疗胃肠道疾病的方法，包括为治疗对象施用有效量的具有结构IV，V，VI，VII，VIII，IX或X的化合物。
在所述方法的一个实施方案中，所述疾病是腹泻。
在所述方法的另一个实施方案中，所述治疗对象是人。
在所述方法的另一个实施方案中，所述化合物是A1腺苷受体的拮抗剂。
本发明还提供了一种治疗呼吸系统疾病的方法，包括为治疗对象施用有效量的具有结构IV，V，VI，VII，VIII，IX或X的化合物。
在所述方法的一个实施方案中，所述疾病是哮喘，慢性阻塞性疾病，过敏性鼻炎，或上呼吸道疾病。
在所述方法的另一个实施方案中，所述治疗对象是人。
在所述方法的另一个实施方案中，所述化合物是A1腺苷受体的拮抗剂。
本发明还提供了一种治疗眼部损伤的方法，包括为治疗对象施用有效量的具有结构IV，V，VI，VII，VIII，IX或X的化合物。
在所述方法的一个实施方案中，所述损伤是视网膜或视神经乳头损伤。
在所述方法的另一个实施方案中，所述损伤是急性或慢性的。
在所述方法的另一个实施方案中，其中所述损伤是青光眼，水肿，缺血，缺氧或外伤所致。
在所述方法的另一个实施方案中，所述治疗对象是人。
在所述方法的另一个实施方案中，所述化合物是A1腺苷受体拮抗剂。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的具有结构IV，V，VI，VII，VIII，IX或X的化合物，及一种药物学可接受的载体。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述治疗有效量是有效治疗呼吸系统疾病或胃肠道疾病的剂量。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述胃肠道疾病是痢疾。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述呼吸系统疾病是哮喘，过敏性鼻炎，或慢性阻塞性肺部疾病。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述药物组合物是一种眼科配方。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述药物组合物是一种眼周，眼球后或眼内注射配方。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述药物组合物是一种系统配方。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述药物组合物是一种手术灌注溶液。
本发明还提供了一种包装的药物组合物以治疗A1腺苷受体相关的疾病，所述组合物包含：(a)一个容器，其内装有治疗有效量的A1腺苷特异性化合物；和(b)使用所述化合物治疗所述疾病的说明书。
本文所用短语“一种化合物是A1选择性的”是指所述化合物与腺苷A1受体的结合常数是与腺苷A2a，A2b或A3结合常数的至少10倍。
本发明还提供了一种制备具有结构IV的化合物的方法，包括以下步骤：
a)            a)将
b)
c)
Figure A0182246000671
与
Figure A0182246000672
反应，
d)
e)            以提供
f)
g)
h)      其中P是一个可除去的保护基团；
i)      b)在环化条件下处理a)步骤的产物，以提供
j)
k)
l)
m)
n)
o)
Figure A0182246000681
p)      c)在适当条件下处理b)步骤的产物以提供
q)
r)
d)用NH2R1处理c)步骤的产物以提供
其中R1是反式-4-羟基环己基，2-甲氨基羰基氨基环己基，乙酰氨基乙基，或甲氨基羰基氨基乙基；其中Ar是取代或未取代的4-6元环；其中R4是H，烷基，取代的烷基，环烷基；或药物学可接受的盐，或前体药物衍生物，或生物活性代谢物；条件是当R4是乙酰氨基乙基时，Ar不是4-吡啶基。
本发明还提供了一种制备具有结构V的化合物的方法，包括以下步骤：
a)      a)将
b)
c)
Figure A0182246000691
与
Figure A0182246000692
反应
d)
e)      以提供
f)
g)
h)
i)
j)      其中P是一个可除去的保护基团；
k)      b)在环化条件下处理a)步骤的产物，以提供
Figure A0182246000694
l)      c)在适当条件下处理b)步骤的产物以提供
Figure A0182246000695
d)用
Figure A0182246000701
                处理c)步骤的氯化产物
以提供
Figure A0182246000702
其中R1是芳基，取代芳基，杂芳基；其中R2是H，烷基，取代的烷基或环烷基；其中R3是H，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，氨基，取代的芳基，其中所述取代的烷基是-C(R6)(R7)NR4R5，其中R6和R7是H或烷基，其中R4和R5是烷基或环烷基，或者NR4R5是一个4-7元环。
由VI，VII和VI式II表示的化合物可以通过I-VIII的任一方案合成。由IX，X式表示的化合物可以通过IX方案制备。
本发明通过以下实施例得以进一步例证，所述实施例无限制之意。本申请中引用的所有参考文献，待审的专利申请和公布的专利申请，包括发明背景章节中参考的那些文献，在此均并入参考。应理解实施例中使用的模型是公认的模型，而且在这些模型中的论证的效力可以推证在人体内的效力。
从以下实施例详述中可以更好理解本发明。然而，本领域技术人员易于意识到所揭示的具体方法和结果只是以下权利要求书中更充分描述的发明的举例说明。
实验细节：
本发明的脱氮嘌呤可以使用标准有机合成方法制备。脱氮嘌呤可以通过反相HPLC，层析，再结晶等纯化，其结构通过质谱分析，元素分析，IR和/或NMR光谱分析证实。
典型地，本发明的中间产物以及脱氮嘌呤的合成是在溶液中进行。也可以添加和除去一或多个保护基团，这已经为本领域技术人员所已知。制备本发明脱氮嘌呤中间产物的典型合成方案概述于以下方案I。
                            方案I
Figure A0182246000711
其中R3，R5和R6如上所述。
通常地，被保护的2-氨基-3-氰基-吡咯可以用酰卤处理以形成羧基酰氨基-3-氰基-吡咯，其可以用酸性甲醇处理使环闭合为吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮(Muller，C.E.等，医用化学杂志40：4396(1997))。除去吡咯保护基团随后用氯化试剂例如氯氧化磷处理，产生取代或未取代的4-氯-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。用胺处理氯嘧啶提供7-脱氮嘌呤。
例如，如方案I所示，N-(1-dl-苯乙基)-2-氨基-3-氰基-吡咯用嘧啶和二氯甲烷中酰基卤处理。所得N-(1-dl-苯乙基)-2-苯羧基氨基-3-氰基-吡咯用甲醇/硫酸的10∶1混合物处理作用于环的闭合，产生dl-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。通过用多磷酸(PPA)随后POCl3处理所述嘧啶除去苯乙基基团，提供一个关键的中间产物，4-氯-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。用表1所示各种胺进一步处理所述4-氯-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶，提供(I)和(II)式所示化合物。
表1
Figure A0182246000741
Figure A0182246000751
制备6-取代的吡咯的通用方案见以下方案(方案II)所述。
                      方案II
其中R1-R5如上所述。
用α-卤代酮对氰基乙酸乙酯进行转酯和烷化提供一种酮基甲酯。酮的保护随后用盐酸脒(例如烷基，芳基或烷基芳基)处理，产生缩酮保护的嘧啶。除去保护基团，随后环化及用磷酰氯处理，提供氯化物中间产物，其可以用胺进一步处理，以提供氨基-6-取代的吡咯。另外，吡咯氮的烷化可以在本领域公认的条件下实现。
制备5-取代的吡咯的通用方案见以下方案(方案III)所述。
                      方案III
Figure A0182246000771
其中R1-R6如上所述，及R是一个可除去的保护基团。
丙二腈与过量酮缩合，随后对所述产物溴化提供一种起始物，单溴化和二溴化产物的混合物，将其用烷基胺，芳基胺或烷基芳基胺处理。所得胺产物用酰基氯酰化，将单酰化的吡咯在酸性条件下环化，以提供相应的嘧啶。所述吡咯保护基团用磷酸除去并用磷酰氯处理以产生氯化物。氯化的吡咯随后可以用胺处理以产生氨基-5-取代的吡咯。吡咯氮的烷化可以在本领域公认的条件下实现。
方案IV和V阐述了制备本发明脱氮嘌呤1和2的方法。
其中R5和R6如上所述，例如是CH3。
特异制备6-甲基吡咯并嘧啶：
产生6-甲基吡咯并嘧啶(1)[R5＝CH3]的关键反应是氰基乙酸酯用苯甲脒环化为嘧啶。确信氰基乙酸甲酯比相应乙酯可以更有效用苯甲脒环化为嘧啶。因此，在存在NaOMe和过量α-酰卤组分例如氯丙酮的情况下，对氰基乙酸乙酯进行转酯和烷化，提供79％产量的所需甲酯(3)(方案IV)。所述酮酯(3)加保护为乙缩醛(4)，产量为81％。对嘧啶(5)的一种新环化方法用盐酸脒例如盐酸苯甲脒与两当量DBU实现，以提供54％分离产量的嘧啶(5)。这种方法改良了使用已知条件的20％产量，已知的条件是在用胍环化期间利用NaOMe。对吡咯-嘧啶(6)的环化通过在盐酸水溶液中对乙缩醛去保护而实现，产量78％。吡咯-嘧啶(6)与磷酰氯回流反应提供相应的4-氯衍生物(7)。在135℃在二甲基亚砜中与反式-4-氨基环己醇偶联从(7)中获得(1)，收率为57％。本领域技术人员能意识到对试剂进行选择以最大程度适应选择所需的取代基R5。
                       方案IV
Figure A0182246000791
特异制备5-甲基吡咯并嘧啶
丙二腈和过量酮例如丙酮在回流苯中缩合，蒸馏后得到8，收率为50％。8用溴琥珀酰亚胺在存在于氯仿中的过氧化苯甲酰的情况下溴化，蒸馏后产生一种起始物、单溴化产物(9)和二溴化产物(10)的混合物(5/90/5)(70％)。将所述混合物与α-甲基烷基胺或α-甲基芳基胺例如α-甲基苯基胺反应，以释放氨基吡咯(10)。在经过一个短硅胶柱后，部分纯化的胺(31％产量)用酰基氯例如苯甲酰氯酰化以释放单酰化吡咯(11)和二酰化吡咯(12)，其通过急骤层析分离。二取代的吡咯(12)的酸解产生29％的酰基吡咯(11)组合产量。在存在浓硫酸和DMF下环化，产生(13)(23％)，其用磷酸去保护为(14)。(14)与磷酰氯回流反应提供相应的4-氯衍生物(15)。在135℃与于二甲基亚砜中的反式-4-氨基环己醇偶联从(14)中提供收率为30％的(2)[R6＝CH3](见方案V)。本领域技术人员能意识到试剂的选择可以最大程度适应选择所需取代的R6。
                     方案V
Figure A0182246000811
R6取代的吡咯例如5-甲基吡咯并嘧啶的另一种合成途径：
R6取代的吡咯例如5-甲基吡咯并嘧啶的另一种合成途径，包括将氰基乙酸乙酯转酯及烷化为(16)(方案VI)。(16)与盐酸苯基脒用两当量DBU缩合提供嘧啶(17)。对吡咯-嘧啶(14)的环化通过在HCl水溶液中对乙缩醛去保护实现。(14)与回流的磷酰氯反应提供相应的4-氯衍生物(15)。在135℃与于二甲基亚砜中的反式-4-氨基环己醇偶联产生2。这个程序减少靶化合物(2)的合成反应数，从9步减少至4步。另外，产量显著增加。同样，本领域技术人员能意识到试剂的选择可以最大程度适应所需取代的R6的选择。
                        方案VI
制备去甲基吡咯
的一种通用方案见以下方案所述(方案VII)。
                       方案VII
其中R1-R3如上所述。
氰基乙酸烷基酯与二乙基乙缩醛在存在一种碱的情况下烷化，提供一种氰基二乙基乙缩醛，将其用脒盐处理产生甲基吡咯并嘧啶前体。将该前体氯化并用胺处理形成上述去甲基吡咯并嘧啶。
例如方案VIII阐述了化合物(18)的合成。
                       方案VIII
Figure A0182246000851
将可商购的氰基乙酸甲酯在存在碳酸钾和NaI的情况下，用溴化乙醛二乙基乙缩醛烷化产生(19)。在两个步骤中实现对嘧啶(20)的环化。最初，通过(19)与盐酸苯甲脒用两当量的DBU反应形成嘧啶-乙缩醛。所得嘧啶-乙缩醛不用纯化用1N HCl水溶液而去保护，并将所得醛环化为吡咯-嘧啶(20)，其通过过滤分离。(20)与回流的磷酰氯反应提供相应4-氯衍生物(21)。在135℃在DMSO中所述氯衍生物与反式-4-氨基环己醇偶联从化合物(21)中提供化合物(18)。
方案II-VIII表明可以对吡咯并嘧啶环的5-和6-位官能化。通过使用不同的起始试剂及对上述反应方案略加修改，可以在式(I)和式(II)的5-和6-位导入各种官能团。表2例证了一些实例。
表2：5-和6-取代的吡咯并嘧啶的选择列表
本领域技术人员已知本文所揭示的化合物在治疗对象体内代谢为具有一定生物活性代谢物，其可作为药物。
本发明通过以下非限制性实施例得以进一步例证。在本申请中引用的所有参考文献，待审的专利申请和公布的专利申请，均以其全文并入参考。应理解实施例所用模型是公认的模型，而且在这些模型中示出的效力可以用来推定在人体内的效力。
举例
制备1：
使用对Seela和Lupke所述烷化方法加以修改后的一种方法1。
在冰冷(0℃)的MeOH(20mL)中的氰基乙酸乙酯溶液中(6.58g，58.1mmol)缓慢加入一种NaOMe溶液(25kw/v；58.1mmol)。10分钟后，缓慢加入氯丙酮。4小时后，除去所述溶剂。将此褐色油用EtOAc(100mL)稀释并用水(100mL)洗涤。将有机成分干燥，过滤并浓缩为褐色油(7.79g；79％)。此油(3)(方案IV)是甲基/乙基酯产物的混合物(9/1)，不用进一步纯化而使用。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ4.24(q，J＝7.2Hz，OCH2)，3.91(dd，1H，J＝7.2，7.0Hz，CH)，3.62(s，3H，OCH3)，3.42(dd，1H，J＝15.0，7.1Hz，1xCH2)；3.02(dd，1H，J＝15.0，7.0Hz，1xCH2)；2.44(s，3H，CH3)，1.26(t，J＝7.1Hz，酯-CH3)。
1Seela，F.；Lupke，U.Chem.Ber.1977，110，1462-1469。
制备2：
使用Seela和Lupke所述方法1。从而在存在TsOH(100mg)的情况下用乙二醇(4mL，64.4mmol)对所述酮(3)(方案IV；5.0g，32.2mmol)加保护，在急骤层析后(SiO2；3/7 EtOAc/Hex，Rf 0.35)可以得到一种油(4)(方案IV；5.2g，81.0)。其仍含有5％乙酯：1H NMR(200MHz，CDCl3)δ_4.24(q，J＝7.2Hz，OCH2)，3.98(s，4H，2x乙缩醛-CH2)，3.79(s，3H，OCH3)，3.62(dd，1H，J＝7.2，7.0Hz，CH)，2.48(dd，1H，J＝15.0，7.1Hz，1xCH2)，2.32(dd，1H，J＝15.0，7.0Hz，1xCH2)；1.35(s，3H，CH3)，1.26(t，J＝7.1Hz，酯-CH3)；MS(ES)：200.1(M++1)。
1Seela，F.；Lupke，U.Chem.Ber.1977，110，1462-1469。
制备3：
将在无水DMF(15mL)中的乙缩醛(4)(方案IV，1g，5.02mmol)，盐酸苯甲脒(786mg，5.02mmol)，和DBU(1.5mL，10.04mmol)的溶液加热至85℃保持15小时。将此混合物用CHCl3(30mL)稀释并用0.5N NaOH(10mL)和水(20mL)洗涤。干燥有机成分，过滤并浓缩为褐色油。进行急骤层析(SiO2；1/9 EtOAc/CH2Cl2，Rf 0.35)，但物质结晶在层析柱上。将此硅胶用MeOH洗涤。将含有产物(5)(方案IV)的成分浓缩并不用进一步纯化而使用(783mg，54.3％)：1H NMR(200MHz，CDCl3)δ8.24(m，2H，Ar-H)，7.45(m，3H，Ar-H)，5.24(br s，2H，NH2)，3.98(s，4H，2x乙缩醛-CH2)，3.60-3.15(m，2H，CH2)，1.38(s，3H，CH3)；MS(ES)：288.1(M++1)。
化合物(20)(方案VIII)的制备：将在无水DMF(20mL)中的乙缩醛(19)(4.43g，20.6mmol)，盐酸苯甲脒(3.22g，20.6mmol)，和DBU(6.15mL，41.2mmol)的溶液加热至85℃保持15小时。将此混合物用CHCl3(100mL)稀释并用水(2×50mL)洗涤。干燥有机成分，过滤并浓缩为深褐色油。将此深褐色油在1N HCl(100mL)中在室温搅拌2小时。过滤所得浆液产生棕黑色固体即(20)的盐酸盐(3.60g，70.6k)；1H NMR(200MHz，DMSO-d6)11.92(s 1H)，8.05(m，2H，Ar-H)，7.45(m，3H，Ar-H)，7.05(s，1H，吡咯-H)；MS(ES)：212.1(M++1)。
制备4：
将在1N HCl(40mL)中的乙缩醛(5)(700mg，2.44mmol)溶液在室温搅拌2小时。将所得浆液过滤产生棕黑色固体即2-苯基-6-甲基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮的盐酸盐(498mg，78.0％)：1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ11.78(s，1H)，8.05(m，2H，Ar-H)，7.45(m，3H，Ar-H)，6.17(s，1H，吡咯-H)，2.25(s，3H，CH3)；MS(ES)：226.1(M++1)。
制备5：
使用对Chen等所述环化方法加以修改的方法1。向在异丙醇(60mL)中的溴化物(9)(方案V；20.0g，108mmol；90％纯度)的冰冷(0℃)溶液中缓慢加入α-甲基苯甲胺溶液(12.5mL，97.3mmol)。将此黑色溶液缓慢加温至室温，并搅拌15小时。将此混合物用EtOAc(200mL)稀释，并用0.5N NaOH(50mL)洗涤。干燥有机成分，过滤并浓缩为黑色焦油(19.2g；94％)。残渣通过急骤层析(SiO2；4/96MeOH/CH2Cl2，Rf 0.35)部分纯化为黑色固体(6.38g，31％)，该化合物是dl-1-(1-苯乙基)-2-氨基-3-氰基-4-甲基吡咯：MS(ES)：226.1(M++1)。
1Chen，Y.L.；Mansbach，R.S.；Winter，S.M.；Brooks，E.；Collins，J.；Corman，M.L.；Dunaiskis，A.R.；Faraci，W.S.；Gallaschun，R.J.；Schmidt，A.；Schulz，D.W.J.Med.Chem.1997，40，1749-1754。
制备6：
在0℃向二氯甲烷(50ml)中的dl-1-(1-苯乙基)-2-氨基-3-氰基-4，5-二甲基吡咯(14.9g，62.5mmol)和嘧啶(10.0mL)溶液中加入苯甲酰氯(9.37g，66.7mmol)。在0℃搅拌1小时后，加入己烷(10.0mL)以助于产物沉淀。真空除去溶剂并将所述固体从EtOH/H2O中再结晶以提供13.9g(65％)的dl-1-(1-苯乙基)-2苯基羰基氨基-3-氰基-4，5-二甲基吡咯。Mp 218-221℃；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.72(s，3H)，1.76(d，J＝7.3Hz，3H)，1.98(s，3H)，5.52(q，J＝7.3Hz，1H)，7.14-7.54(m，9H)，7.68-7.72(dd，J＝1.4Hz，6.9Hz，2H)，10.73(s，1H)；MS(ES)：344.4(M++1)。
1Liebigs Ann.Chem.1986，1485-1505。
以下化合物以相似方式获得。
制备6A：
dl-1-(1-苯乙基)-2-(3-吡啶基)羰基氨基-3-氰基-4，5-二甲基吡咯。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.83(d，J＝6.8Hz，3H)，2.02(s，3H)，2.12(s，3H)，5.50(q，J＝6.8Hz，1H)，7.14-7.42(m，5H)，8.08(m，2H)，8.75(m，3H)；MS(ES)：345.2(M++1)。
dl-1-(1-苯乙基)-2-(2-呋喃基)羰基氨基-3-氰基-4，5-二甲基吡咯。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.84(d，J＝7.4Hz，3H)，1.92(s，3H)，2.09(s，3H)，5.49(q，J＝7.4Hz，1H)，6.54(dd，J＝1.8Hz，3.6Hz，1H)，7.12-7.47(m，7H)；MS(ES)：334.2(M++1)，230.1。
dl-1-(1-苯乙基)-2-(3-呋喃基)羰基氨基-3-氰基-4，5-二甲基吡咯。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.80(d，J＝7Hz 3H)，1.89(s，3H)，2.05(s，3H)，5.48(q，J＝7Hz，1H)，6.59(s，1H)，7.12-7.40(m，6H)，7.93(s，1H)；MS(ES)：334.1(M++1)，230.0。
dl-1-(1-苯乙基)-2-环戊基羰基氨基-3-氰基-4，5-二甲基吡咯。1HNMR(200MHz，CDCl3)δ1.82(d，J＝7.4Hz，3H)，1,88(s，3H)，2.05(s，3H)，1.63-1.85(m，8H)，2.63(m，1H)，5.43(q，J＝7.4Hz，1H)，6.52(s，1H)，7.05-7.20(m，5H)；MS(ES)：336.3(M++1)。
dl-1-(1-苯乙基)-2-(2-噻吩基)羰基氨基-3-氰基-4，5-二甲基吡咯，1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.82(d，J＝6.8Hz，3H)，1.96(s，3H)，2.09(s，3H)，5.49(q，J＝6.8Hz，1H)，7.05-7.55(m，8H)；MS(ES)：350.1(M++1)，246.0。
dl-1-(1-苯乙基)-2-(3-噻吩基)羰基氨基-3-氰基-4，5-二甲基吡咯。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.83(d，J＝7.0Hz，3H)，1.99(s，3H)，2.12(s，3H)，5.49(q，J＝7.0Hz，1H)，6.90(m，1H)，7.18-7.36(m，6H)，7.79(m，1H)；MS(ES)：350.2(M++1)，246.1。
dl-1-(1-苯乙基)-2-(4-氟苯基)羰基氨基-3-氰基-4，5-二甲基吡咯。1HNMR(200MHz，CDCl3)δ1.83(d，J＝7.4Hz，3H)，1.96(s，3H)，2.08(s，3H)，5.51(q，J＝7.4Hz，1H)，7.16-7.55(m，9H)；MS(ES)：362.2(M++1)，258.1。
dl-1-(1-苯乙基)-2-(3-氟苯基)羰基氨基-3-氰基-4，5-二甲基吡咯。1HNMR(200MHz，CDCl3)δ1.83(d，J＝7.4Hz 3H)，1.97(s，3H)，2.10(s，3H)，5.50(q，J＝7.4Hz，1H)，7.05-7.38(m，7H)，7.67-7.74(m，2H)；MS(ES)：362.2(M++1)，258.1。
dl-1-(1-苯乙基)-2-(2-氟苯基)羰基氨基-3-氰基-4，5-二甲基吡咯。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.85(d，J＝7.2Hz，3H)，1.94(s，3H)，2.11(s，3H)，5.50(q，J＝7.2hz，1H)，7.12-7.35(m，6H)，7.53(m，1H)，7.77(m，1H)，8.13(m，1H)；MS(ES)：362.2(M++1)，258.0。
dl-1-(1-苯乙基)-2-异丙基羰基氨基-3-氰基-4，5-二甲基吡咯。1HNMR(200MHz，CDCl3)δ1.19(d，J＝7.0Hz，6H)，1.82(d，J＝7.2Hz，3H)，1.88(s，3H)，2.06(s，3H)，2.46(m，1H)，5.39(m，J＝7.2Hz，1H)，6.64(s，1H)，7.117.36(m，5H)；MS(ES)：310.2(M++1)，206.1。
在dl-1-(1-苯乙基)-2-氨基-3-氰基-4-甲基吡咯的酰化的情况中，获得单酰化的dl-1-(1-苯乙基)-2-苯甲酰氨基-3-氰基-4-二甲基吡咯和二酰化的吡咯dl-1-(1-苯乙基)-2-二苯甲酰氨基-3-氰基-4-甲基吡咯。单酰化的吡咯：1H NMR(200MHz，CDCl3)δ7.69(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.58-7.12(m，8H，Ar-H)，6.18(s，1H，吡咯-H)，5.52(q，1H，J＝7.2Hz，CH-CH3)，2.05(s，3H，吡咯-CH3)，1.85(d，3H，J＝7.2Hz，CH-CH3)；MS(ES)：330.2(M++1)；二酰化的吡咯：1H NMR(200MHz，CDCl3)δ7.85(d，2H，J＝7.7Hz，Ar-H)，7.74(d，2H，J＝7.8Hz，Ar-H)，7.52-7.20(m，9H，Ar-H)，7.04(m，2H，Ar-H)，6.21(s，1H，吡咯-H)，5.52(q，1H，J＝7.2Hz，CH-CH3)，1.77(d，3H，J＝7.2Hz，CH-CH3)，1.74(s，3H，吡咯-CH3)；MS(ES)：434.1(M++1)。
制备7：
在0℃向甲醇(10.0mL)中的dl-1-(1-苯乙基)-2-苯基羧基氨基-3-氰基-4，5-二甲基吡咯(1.0g，2.92mmol)中加入浓硫酸(1.0mL)。所得混合物回流15小时并冷却至室温。过滤沉淀得到0.48g(48％)dl-5，6-二甲基-2-苯基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.02(d，J＝7.4Hz，3H)，2.04(s，3H)，2.41(s，3H)，6.25(q，J＝7.4Hz，1H)，7.22-7.50(m，9H)，8.07-8.12(dd，J＝3.4Hz，6.8Hz，2H)，10.51(s，1H)；MS(ES)：344.2(M++1)。
以下化合物以与制备7相似方式获得：
dl-5，6-二甲基-2-(3-吡啶基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.03(d，J＝7.2Hz，3H)，2.08(s，3H)，2.42(s，3H)，6.24(q，J＝7.2Hz，1H)，7.09-7.42(m，5H)，8.48(m，2H)，8.70(m，3H)；MS(ES)：345.1(M++1)。
dl-5，6-二甲基-2-(2-呋喃基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.98(d，J＝7.8Hz，3H)，1.99(s，3H)，2.37(s，3H)，6.12(q，J＝7.8Hz，1H)，6.48(dd，J＝1.8Hz，3.6Hz，1H)，7.177.55(m，7H)，9.6(s，1H)；MS(ES)：334.2(M++1)。
dl-5，6-二甲基-2-(3-呋喃基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200 MHz，CDCl3)δ1.99(d，J＝7Hz，3H)，2.02(s，3H)，2.42(s，3H)，6.24(q，J＝7Hz，1H)，7.09(s，1H)，7.18-7.32(m，5H)，7.48(s，1H)，8.51(s，1H)；MS(ES)：334.2(M++1)。
dl-5，6-二甲基-2-环戊基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.95(d，J＝7.4Hz，3H)，2.00(s，3H)，2.33(s，3H)，1.681.88(m，8H)，2.97(m，1H)，6.10(q，J＝7.4Hz，1H)，7.167.30(m，5H)，9.29(s，1H)；MS(ES)：336.3(M++1)。
dl-5，6-二甲基-2-(2-噻吩基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3 d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.02(d，J＝7.2Hz，3H)，2.06(s，3H)，2.41(s，3H)，6.13(q，J＝7.2Hz，1H)，7.12(dd，J＝4.8，2.8Hz，1H)，7.26-7.32(m，5H)，7.44(d，J＝4.8Hz，1H)，8.01(d，J＝2.8Hz，1H)11.25(s，1H)；MS(ES)：350.2(M++1)。
dl-5，6-二甲基-2-(3-噻吩基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.00(d，J＝7.4Hz，3H)，2.05(s，3H)，2.43(s，3H)，6.24(q，J＝7.4Hz，1H)，7.24-7.33(m，5H)，7.33-7.39(m，1H)，7.85(m，1H)，8.47(m，1H)，12.01(s，1H)；MS(ES)：350.2(M++1)。
dl-5，6-二甲基-2-(4-氟苯基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.01(d，J＝6.8Hz，3H)，2.05(s，3H)，2.42(s，3H)，6.26(q，J＝6.8Hz，1H)，7.12-7.36(m，7H)，8.23-8.30(m，2H)，11.82(s，1H)；MS(ES)：362.3(M++1)。
dl-5，6-二甲基-2-(3-氟苯基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.02(d，J＝7.4Hz，3H)，2.06(s，3H)，2.44(s，3H)，6.29(q，J＝7.4Hz，1H)，7.13-7.51(m，7H)，8.00-8.04(m，2H)，11.72(s，1H)；MS(ES)：362.2(M++1)。
dl-5，6-二甲基-2-(2-氟苯基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.00(d，J＝7.2Hz，3H)，2.05(s，3H)，2.38(s，3H)，6.24(q，J＝7.2Hz，1H)，7.18-7.45(m，8H)，8.21(m，1H)，9.54(s，1H)；MS(ES)：362.2(M++1)。
dl-5，6-二甲基-2-异丙基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，CDCl3)1.30(d，J＝6.8Hz，3H)，1.32(d，J＝7.0Hz，3H)，2.01(s，3H)，2.34(s，3H)，2.90(m，1H)，6.13(m，1H)，7.17-7.34(m，5H)，10.16(s，1H)；MS(ES)：310.2(M++1)。
制备8：
将浓H2SO4(1ml)与dl-1-(1-苯乙基)-2-苯甲氨基-3-氰基-4-二甲基吡咯(785mg，2.38mmol)在DMF(13ml)中的溶液在130℃搅拌48小时。将此黑色溶液用CHCl3(100mL)稀释并用1N NaOH(30mL)和盐水(30mL)洗涤。干燥有机成分，过滤，浓缩，及通过急骤层析(SiO2；8/2 EtOAc/Hex，Rf0.35)纯化为褐色固体(184mg，24％)，其是dl-5-甲基-2-苯基-7H-7-(苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ8.18(m，2H，Ar-H)，7.62-7.44(m，3H，Ar-H)，7.407.18(m，5H，Ar-H)，6.48(s，1H，pyrrole-H)，6.28(q，1H，J＝7.2Hz，CH-CH3)，2.18(s，3H，吡咯-CH3)，2.07(d，3H，J＝7.2Hz，CH-CH3)；MS(ES)：330.2(M++1)。
制备9：
将dl-1-(1-苯乙基)-2-氨基-3-氰基-4，5-二甲基吡咯(9.60g，40.0mmol)和甲酸(50.0mL，98％)的混合物回流5小时。在冷却至室温及对烧瓶侧壁刮擦后，形成大量沉淀，对其进行过滤。将该物质用水洗涤直至示出中性pH，得到dl-5，6-二甲基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.96(d，J＝7.4hz，3H)，2.00(s，3H)，2.38(s，3H)，6.21(q，J＝7.4Hz，1H)，7.11-7.35(m，5H)，7.81(s，1H)，11.71(s，1H)；MS(ES)：268.2(M++1)。
制备10：
将dl-5，6-二甲基-2-苯基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮(1.0g，2.91mmol)悬浮于多磷酸中(30.0mL)。将此混合物在100℃加热4小时。将此热悬浮液倾泻至冰水上，用力搅拌以分散悬浮液，及用固体KOH碱化为pH6。过滤所得固体并收集，提供0.49g(69％)的5，6-二甲基1-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1HNMR(200MHz，DMSO-d)δ2.17(s，3H)，2.22(s，3H)，7.45(br，3H)，8.07(br，2H，)，11.49(s，1H)，11.82(s，1H)；MS(ES)：344.2(M++1)。
以下化合物以与制备10相似方式获得：
5-甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。MS(ES)：226.0(M+1)。
5，6-二甲基-2-(3-吡啶基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。MS(ES)：241.1(M++1)。
5，6-二甲基-2-(2-呋喃基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1HNMR(200MHz，DMSO-d6)δ2.13(s，3H)，2.18(s，3H)，6.39(dd，J＝1.8，3.6Hz，1H)，6.65(dd，J＝1.8Hz，3.6Hz，1H)，7.85(dd，J＝1.8，3.6Hz，1H，)，11.45(s，1H)，11.60(s，1H)；MS(ES)：230.1(M++1)。
5，6-二甲基-2-(3-呋喃基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1HNMR(200MHz，DMSO-d6)δ2.14(s，3H)，2.19(s，3H)，6.66(s，1H)，7.78(s，1H)，8.35(s，1H)，11.3(s，1H)，11.4(s，1H)；MS(ES)：230.1(M++1)。
5，6-二甲基-2-环戊基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ1.57-1.91(m，8H)，2.12(s，3H)，2.16(s，3H)，2.99(m，1H)，11.24(s，1H)，11.38(s，1H)；MS(ES)：232.2(M++1)。
5，6-二甲基-2-(2-噻吩基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1HNMR(200MHz，DMSO-d.)δ2.14(s，3H)，2.19(s，3H)，7.14(dd，J＝3.0，5.2Hz，1H)，7.70(d，J＝5.2Hz 1H)，8.10(d，J＝3.0Hz，1H)，11.50(s，1H)；MS(ES)：246.1(M++1)。
5，6-二甲基-2-(3-噻吩基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1HNMR(200MHz，DMSO-d6)δ2.17(s，3H)，2.21(s，3H)，7.66(m，1H)，7.75(m，1H)，8.43(m，1H)，11.47(s，1H)，11.69(s，1H)；MS(ES)：246.1(M++1)。
5，6-二甲基-2-(4-氟苯基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1HNMR(200 MHz，DMSO-d6)δ2.17(s，3H)，2.21(s，3H)，7.31(m，2H)，8.12(m，2H)，11.47(s，1H)；MS(ES)：258.2(M++1)。
5，6-二甲基-2-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1HNMR(200MHz，DMSO-d6)δ2.18(s，3H)，2.21(s，3H)，7.33(m，1H)，7.52(m，1H)，7.85-7.95(m，2H)，11.56(s，1H)，11.80(s，1H)；MS(ES)：258.1(M++1)。
5，6-二甲基-2-(2-氟苯基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1HNMR(200MHz，DMSO-d6)δ2.18(s，3H)，2.22(s，3H)，7.27-7.37(m，2H)，7.53(m 1H)，7.68(m，1H)，11.54(s，1H)，11.78(s，1H)；MS(ES)：258.1(M++1)。
5，6-二甲基-2-异丙基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ1.17(d，J＝6.6Hz，6H)，2.11(s，3H)，2.15(s，3H)，2.81(m，1H)，11.20(s，1H)，11.39(s，1H)；MS(ES)：206.1(M++1)。
5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ2.13(s，3H)，2.17(s，3H)，7.65(s，1H)；MS(ES)：164.0(M++1)。
制备11：
将于磷酰氯(25.0mL)中的5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4(3H)-酮(1.0g，4.2mmol)溶液回流6小时，然后真空浓缩干燥。在残渣中加入水以产生结晶，并将所得固体过滤及收集，得到0.90g(83％)的4-氯-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ 2.33(s，3H)，2.33(s，3H)，7.46-7.49(m，3H)，8.30-8.35(m，2H)，12.20(s，1H)；MS(ES)：258.1(M++1)。
以下化合物以与制备11相似方式获得：
4-氯-5-甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：244.0(M++1)。
4-氯-6-甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3 d]嘧啶。MS(ES)：244.0(M++1)。
4-氯-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)8.35(2，2H)，7.63(br s，1H)，7.45(m，3H)，6.47(br s，1H)；MS(ES)：230.0(M++1)。
4-氯-5，6-二甲基-2-(3-吡啶基)-7H-吡咯并[2，3 d]嘧啶。MS(ES)：259.0(M++1)。
4-氯-5，6-二甲基-2-(2-呋喃基)-7H-吡咯并[2，3 d]嘧啶。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ2.35(s，3H)，2.35(s，3H)，6.68(dd，J＝1.8，3.6Hz，1H)，7.34(dd，J＝1.8Hz，3.6Hz，1H)，7.89(dd，J＝1.8，3.6Hz，1H)；MS(ES)：248.0(M++1)。
4-氯-5，6-二甲基-2-(3-呋喃基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ2.31(s，3H)，2.31(s，3H)，6.62(s，1H)，7.78(s，1H)，8.18(s，1H)，12.02(s，1H)；MS(ES)：248.1(M++1)。
4-氯-5，6-二甲基-2-环戊基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)51.61-1.96(m，8H)，2.27(s，3H)，2.27(s，3H)，3.22(m，1H)，11.97(s，1H)；MS(ES)：250.1(M++1)。
4-氯-5，6-二甲基-2-(2-噻吩基)-7H-吡咯(2，3d)嘧啶。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ2.29(s，3H)，2.31(s，3H)，7.14(dd，J＝3.1Hz，4.0Hz，1H)，7.33(d，J＝4.9Hz，1H)，7.82(d，J＝3.1Hz，1H)，12.19(s，1H)；MS(ES)：264.1(M++1)。
4-氯-5，6-二甲基-2-(3-噻吩基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ2.32(s，3H)，2.32(s，3H)，7.62(dd，J＝3.0，5.2Hz，1H)，7.75(d，J＝5.2Hz，1H)，8.20(d，J＝3.0Hz，1H)；MS(ES)：264.0(M++1)。
4-氯-5，6-二甲基-2-(4-氟苯基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ2.33(s，3H)，2.33(s，3H)，7.30(m，2H)，8.34(m，2H)，12.11(s，1H)；MS(ES)：276.1(M++1)。
4-氯-5，6-二甲基-2-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ2.31(s，3H)，2.33(s，3H)，7.29(m，1H)，7.52(m，1H)，7.96(m，1H)，8.14(m，1H)，11.57(s，1H)；MS(ES)：276.1(M++1)。
4-氯-5，6-二甲基-2-(2-氟苯基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)52.34(s，3H)，2.34(s，3H)，7.33(m，2H)，7.44(m，1H)，7.99(m，1H)，12.23(s，1H)；MS(ES)：276.1(M++1)。
4-氯-5，6-二甲基-2-异丙基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ1.24(d，J＝6.6Hz，6H)，2.28(s，3H)，2.28(s，3H)，3.08(q，J＝6.6Hz，1H)，11.95(s，1H)；MS(ES)：224.0(M++1)。
4-氯-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ2.31(s，3H)，2.32(s，3H)，8.40(s，1H)；MS(ES)：182.0(M++1)。
dl-4-氯-5，6-二甲基-2-苯基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶。
制备12：
在室温向二噁烷(100.0mL)和水(100.0mL)中的d1-1，2-二氨基丙烷(1.48g，20.0mmol)和碳酸钠(2.73g，22.0mmol)溶液中加入二-叔丁基二碳酸酯(4.80g，22.0mmol)。将所得混合物搅拌14小时。真空除去二噁烷。将沉淀物滤出并真空浓缩至干燥。残渣用EtOAc磨碎，然后过滤。将滤物真空浓缩至干燥，获得dl-1-氨基-2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基氨基丙烷和dl-2-氨基-1-(1，1-二甲基乙氧基)羰基氨基丙烷的混合物，其通过常规层析方法不可分离。将该混合物用于实施例8的反应中。
制备13：
在0℃向于二氯甲烷(20.0mL)中的Fmoc-β-Ala-OH(1.0g，3.212mmol)和草酰氯(0.428g，0.29mL，3.373mmol)溶液中加入几滴N，N-二甲基甲酰胺。将此混合物在室温搅拌1小时，随后加入环丙甲胺(0.229g，0.28mL，3.212mmol)和三乙胺(0.65g，0.90mL，6.424mmol)。10分钟后，将此混合物用1M盐酸(10.0mL)处理，并将此水相混合物用二氯甲烷提取(3×30.0mL)。将此有机溶液真空浓缩至干燥。残渣用N，N-二甲基甲酰胺(20.0mL)中20％哌啶溶液处理0.5小时。真空除去溶剂后，残渣用1M盐酸(20.0mL)和乙酸乙酯(20.0mL)处理。将所述混合物分离并将水相层用固体氢氧化钠碱化为pH＝8。通过过滤除去沉淀，并将水溶液用20％哌啶进行离子交换层析柱洗脱，得到0.262g(57％)N-环丙基甲基-β-丙氨酰胺。1H NMR(200MHz，CD3CD)δ0.22(m，2H)，0.49(m，2H)，0.96(m，2H)，2.40(t，2H)，2.92(t，2H)，3.05(d，2H)；MS(ES)：143.1(M++1)。
制备14：
N-叔丁氧基羰基-反式-1，4-环己基二胺。
将反式-1，4-环己基二胺(6.08g，53.2mmol)溶解于二氯甲烷中(100mL)。通过插管加入二叔丁基二碳酸酯溶液(2.32g，10.65mmol，在40ml二氯甲烷中)。20小时后，反应物在CHCl3和水之间分隔。分离各层，并将水相层用CHCl3提取(3×)。将组合的有机层经过MgSO4干燥，过滤并浓缩产生1.20g白色固体(53％)。1H-NMR(200MHz，CDCl3)：δ1.0-1.3(m，4H)，1.44(s，9H)，1.8-2.1(m，4H)，2.62(brm，1H)，3.40(brs，1H)，4.37(brs，1HO；MS(ES)：215.2(M++1)。
4-(N-乙酰基)-N-叔丁氧基羰基-反式-1，4-环己基二胺。
将N-叔丁氧基羰基-反式-1，4-环己基二胺(530mg，2.47mmol)溶解于二氯甲烷中(20mL)中。滴加入乙酐(250mg，2.60mmol)。16小时后，将反应物用水和CHCl3稀释。分离各层并将水相层用CHCl3(3×)提取。组合的有机层经过MgSO4干燥，过滤并浓缩。再结晶(EtOH/H2O)产生190mg白色晶体(30％)。1H NMR(200MHz，CDCl3)：δ0.9-1.30(m，4H)，1.43(s，9H)，1.96-2.10(m，7H)，3.40(brs，1H)，3.70(brs，1H)，4.40(brs，1H)，4.40(brs，1H)；MS(ES)：257.2(M++1)，242.1(M+-15)，201.1(M+-56)。
4-(4-反式-乙酰氨基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基7H-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶。
将4-(N-乙酰基)-N-叔丁氧基羰基-反式-1，4-环己基二胺(190mg，0.74mmol)溶解于二氯甲烷中(5mL)并用TFA(6ml)稀释。16小时后，将反应物浓缩。将粗提的固体，DMSO(2mL)，NaHCO3(200mg，2.2mmol)和4-氯-5，6-二甲基-2-苯基-7H吡咯并[2，3d]嘧啶(35mg，0.14mmol)组合在烧瓶中，并加热至130℃。4.5小时后，将反应物冷却至室温，并用EtOAc和水稀释。分离各层，并将水相层用EtOAc提取(3×)。将组合的有机层经过MgSO4干燥，过滤并浓缩。层析(硅石制备平板；20∶1 CHCl3∶EtOH)产生0.3mg棕褐色固体(1％产量)。MS(ES)：378.2(M++1)。
4-(N-甲磺酰基)-N-叔丁氧基羰基-反式-1，4-环己基二胺。
将反式-1，4-环己基二胺(530mg，2.47mmol)溶解于二氯甲烷中(20ml)，并用嘧啶(233mg，3.0mmol)稀释。滴加入甲磺酰氯(300mg，2.60mmol)。16小时后，将反应物用水和CHCl3稀释。分离各层并将水相层用提取(3×)。将组合的有机层经过MgSO4干燥，过滤并浓缩。再结晶(EtOH/H2O)产生206mg白色晶体(29％)。1H-NMR(200MHz，CDCl3)：61.10-1.40(m，4H)，1.45(s，9H)，2.00-2.20(m，4H)，2.98(s，3H)，3.20-3.50(brs，2H)，4.37(brs，1H)；MS(ES)293.1(M++1).278.1(M+-15)，237.1(M+-56)。
4-(4-反式-甲磺酰氨基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶。
将4-(N-磺酰基)-N-叔丁氧基羰基-反式-1，4-环己基二胺(206mg，0.71mmol)溶解于二氯甲烷中(5ml)并用TFA(6ml)稀释。16小时后，浓缩反应物。将粗提的反应混合物，DMSO(2ml)，NaHCO3(100mg，1.1mmol)和1-氯-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶组合在烧瓶中，并加热至130℃。15小时后，将反应物冷却至室温，并用EtOAc稀释(3×)。将组合的有机层经过MgSO4干燥，过滤并浓缩。层析(硅石制备板，20∶1 CHCl3/EtOH)产生2.6mg棕褐色固体(5％产量)。MS(ES)：414.2(M++1)。
实施例1：
将4-氯-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶(0.50g，1.94mmol)和4-反式-羟基环己胺(2.23g，19.4mmol)在甲基亚砜(10.0mL)中的溶液在130℃加热5小时。在冷却至室温后，加入水(10.0mL)并将所得水溶液用EtOAc(3×10.0mL)萃取。将组合的EtOAc溶液干燥(MgSO4)并过滤，真空浓缩滤物至干燥，残渣在硅胶上层析，得到0.49g(75％)4-(4-反式-羟基环己基)-氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。mp 197-199℃；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ_1.25-1.59(m，8H)，2.08(s，3H)，2.29(s，3H)，3.68-3.79(m，1H)，4.32-4.3 8(m，1H)，4.88(d，J＝8Hz，1H)，7.26-7.49(m，3H)，8.40-8.44(dd，J＝2.2，8Hz，2H)，10.60(s，1H)；MS(ES)：337.2(M++1)。
以下化合物以与实施例1相似方式获得：
4-(4-反式-羟基环己基)氨基-6-甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ_11.37(s，1H，吡咯-NH)，8.45(m，2H，Ar-H)，7.55(m，3H，Ar-H)，6.17(s，1H，吡咯-H)，4.90(br d，1H，NH)，4.18(m，1H，CH-O)，3.69(m，1H，CH-N)，2.40-2.20(m，2H)，2.19-1.98(m，2H)，2.25(s，3H，CH3)1.68-1.20(m，4H)；MS(ES)：323.2(M++1)。
4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5-甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ_11.37(s，1H，吡咯-NH)，8.40(m，2H，Ar-H)，7.45(m，3H，Ar-H)，5.96(s，1H，吡咯-H)，4.90(br d，1H，NH)，4.18(m，1H，CH-O)，3.69(m，1H，CH-N)，2.38-2.20(m，2H)，2.18-1.98(m，2.00(s，3H，CH3)1.68-1.20(m，4H)；MS(ES)：323.2(M++1)。
4-(4-反式-羟基环己基)氨基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。mp245.5-246.5℃；1H NMR(200MHz，CD3OD)δ_8.33(m，2H，Ar-H)，7.42(m，3H，Ar-H)，7.02(d，1H，J＝3.6Hz，吡咯-H)，6.53(d，1H，J＝3.6Hz，吡咯-H)，4.26(m，1H，CH-O)，3.62(m，1H，CH-N)，2.30-2.12(m，2H)，2.12-1.96(m，2H)，1.64-1.34(m，4H)；MS，M+1＝309.3；Anal C19H20N4O)C，H，N。
4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-(3-吡啶基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200 MHz，CDCl3)δ_1.21-1.54(m，8H)；2.28(s，3H)；2.33(s，3H)；3.70(m，1H)，4.3 1(m，1H)，4.89(d，1H)，7.40(m，1H)，8.61(m，2H)，9.64(m，1H)；MS(ES)：338.2(M++1)。
4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-(2-呋喃基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ_1.26-1.64(m，8H)，2.22(s，3H)，2.30(s，3H)，3.72(m，1H)，4.23(m，1H)，4.85(d，1H)，6.52(m，1H)，7.12(m，1H)，7.53(m，1H)，9.28(s，1H)；MS(ES)：327.2(M++1)。
4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-(3-呋喃基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.25-1.63(m，8H)，2.11(s，3H)，2.27(s，3H)，3.71(m，1H)，4.20(m，1H)，4.84(d，1H)，7.03(m，1H)，7.45(m，1H)，8.13(m，1H)，10.38(m，1H)；MS(ES)：327.2(M++1)。
4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-环戊基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.26-2.04(m，16H)，2.26(s，3H)，2.27(s，3H)，3.15(m，1H)，3.70(m，1H)，4.12(m，1H)，4.75(d，1H)；MS(ES)：329.2(M++1)。
4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-(2-噻吩基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4-胺。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.28-1.59(m，8H)，2.19(s，3H)，2.29(s，3H)，3.74(m，1H)，4.19(m，1H)，4.84(d，1H)，7.09(m，1H)，7.34(m，1H)，7.85(m，1H)，9.02(s，1H)；MS(ES)：343.2(M++1)。
4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-(3-噻吩基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.21-1.60(m，8H)，1.98(s，3H)，2.23(s，3H)，3.66(m，1H)，4.22(m，1H)，7.27(m，1H)，7.86(m，1H)，8.09(m，1H)，11.23(s，1H)；MS(ES)：343.2(M++1)。
4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-(4-氟苯基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.26-1.66(m，8H)，1.94(s，3H)，2.28(s，3H)，3.73(m，1H)，4.33(m，1H)，4.92(d，1H)，7.13(m，2H)，8.41(m，2H)，11.14(s，1H)；MS(ES)：355.2(M++1)。
4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.26-1.71(m，8H)，2.06(s，3H)，2.30(s，3H)，3.72(m，1H)，4.30(m，1H)，4.90(d，1H)，7.09(m，1H)，7.39(m，1H)，8.05(m，1H)，8.20(m，1H)，10.04(s，1H)；MS(ES)：355.2(M++1)。
4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-(2-氟苯基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.30-1.64(m，8H)，2.17(s，3H)，2.31(s，3H)，3.73(m，1H)，4.24(m，1H)，4.82(d，1H)，7.28(m，2H)，8.18(m，1H)，9.02(m，1H)，12.20(s，1H)；MS(ES)：355.3(M++1)。
4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-异丙基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.31(d，J＝7.0Hz，6H)，1.30-1.65(m，8H)，2.27(s，3H)，2.28(s，3H)，3.01(m，J＝7.0Hz，1H)，3.71(m，1H)，4.14(m，1H)，4.78(d，1H)；MS(ES)：303.2。
dl-4-(2-反式-羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-异丙基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)d 1.31-1.42(br，4H)，1.75-1.82(br，4H)，2.02(S，3H)，2.(s，3H)，3.53(m，1H)，4.02(m，1H)，5.08(d，1H)，7.41-7.48(m，3H)，8.30(m，2H)，10.08(s，1H)；MS(ES)：337.2(M++1)。
4-(3，4-反式-二羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：353.2(M++1)。
4-(3，4-顺式-二羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：353.2(M++1)。
4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。mp 196-199℃；1H NMR(200MHz，CDCl3)δ_1.72(s，3H)，1.97(s，3H)，2.31(s，3H)，3.59(m，2H)，3.96(m，2H)，5.63(br，1H)，7.44-7.47(m，3H)，8.36-8.43(dd，J＝1Hz，7Hz，2H)，10.76(s，1H)；MS(ES)：324.5(M++1)。
dl-4-(2-反式-羟基环戊基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ_1.62(m，2H)，1.79(br，4H)，1.92(s，3H)，2.29(s，3H)，4.11(m，1H)，4.23(m，1H)，5.28(d，1H)，7.41-7.49(m，3H)，8.22(m，2H)，10.51(s，1H)；MS(ES)：323.2(M++1)。
2-反式-羟基环戊基胺的制备见PCT 9417090所述。
dl-4-(3-反式-羟基环戊基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ_1.58-1.90(br，6H，)，2.05(s，3H)，2.29(s，3H)，4.48-4.57(m，1H)，4.91-5.01(m，2H)，7.35-7.46(m，3H)，8.42-8.47(m，2H)，10.11(s，1H)；MS(ES)：323.2(M++1)。
3-反式-羟基环戊基胺的制备见EP-A-322242所述。
dl-4-(3-顺式-羟基环戊基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ_1.82-2.28(br，6H)，2.02(s，3H)，2.30(s，3H)，4.53-4.60(m，1H)，4.95-5.08(m，1H)，5.85-5.93(d，1H)，7.35-7.47(m，3H)，8.42-8.46(m，2H)，10.05(s，1H)；MS(ES)：323.2(M++1)。
3-顺式-羟基环戊基胺的制备见EP-A322242所述。
4-(3，4-反式-二羟基环戊基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3 d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ_1.92-1.99(br，2H)，2.14(s，3H)，2.20(br，2H)，2.30(s，3H)，2.4 1-2.52(br，2H)，4.35(m，2H)，4.98(m，2H)，7.38-7.47(m，3H)，8.38-8.42(m，2H)，9.53(s，1H)；MS(ES)：339.2(M++1)。
3，4-反式-二羟基环戊基胺的制备见PCT 9417090所述。
4-(3-氨基-3-氧代丙基(oxopropyl))氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ_2.02(s，3H)，2.29(s，3H)，2.71(t，2H)，4.18(m，2H)，5.75-5.95(m，3H)，7.38-7.48(m，3H)，8.37-8.41(m，2H)，10.42(s，1H)；MS(ES)：310.1(M++1)。
4-(3-N-环丙基甲基氨基-3-氧代丙基)氨基-5，6-二甲基2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CD3OD)δ_0.51(q，2H)，0.40(q，2H)，1.79-1.95(br，1H)，2.36(s，3H)，2.40(s，3H)，2.72(t，2H)，2.99(d，2H)，4.04(t，2H)，7.58-7.62(m，3H)，8.22-8.29(m，2H)；MS(ES)：364.2(M++1)。
4-(2-氨基-2-氧代乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CD3OD)δ2.31(s，3H)，2.38(s，3H)，4.26(s，2H)，7.36(m，3H)，8.33(m，2H)；MS(ES)：396.1(M++1)。
4-(2-N-甲基氨基-2-氧代乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ_1.99(s，3H)，2.17.(s，3H)，2.82(d，3H)，4.39(d，2H)，5.76(t，1H)，6.71(br，1H)，7.41-7.48(m，3H)，8.40(m，2H)，10.66(s，1H)；MS(ES)：310.1(M++1)。
4-(3-叔丁氧基-3-氧代丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)81.45(s，9H)，1.96(s，3H)，2.29(s，3H)，2.71(t，2H)，4.01(q，2H)，5.78(t，1H)，7.41-7.48(m，3H)，8.22-8.29(m，2H)；MS(ES)：367.2(M++1)。
4-(2-羟乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1HNMR(200MHz，CDCl3)δ1.92(s，3H)，2.29(s，3H)，3.81-3.98(br，4H)，5.59(t，1H)，7.39-7.48(m，3H)，8.37(m，2H)，10.72(s，1H)；MS(ES)：283.1(M++1)。
4-(3-羟丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1HNMR(200MHz，CDCl3)δ1.84(m，2H)，1.99(s，3H)，2.32(s，3H)，3.62(t，2H)，3.96(m，2H)，3.35(t，1H)，7.39-7.48(m，3H)，8.36(m，2H)，10.27(s，1H)；MS(ES)：297.2(M++1)。
4-(4-羟丁基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1HNMR(200MHz，CDCl3)δ1.71-1.82(m，4H)，1.99(s，3H)，2.31(s，3H)，3.68-3.80(m，4H)，5.20(t，1H)，7.41-7.49(m，3H)，8.41(m，2H)，10.37(s，1H)；MS(ES)：311.2(M++1)。
4-(4-反式-乙酰氨基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
4-(4-反式-甲基磺酰基氨基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。
4-(2-乙酰氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶。
4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶。
4-(3-吡啶基甲基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶。
4-(2-甲基丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2，3d]嘧啶。
实施例2：
向冷却至0℃的三苯膦(0.047g，0.179mmol)和安息香酸(0.022g，0.179mmol)于THF(1.0mL)中的搅拌悬浮液中，加入4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶(0.05g，0.149mmol)。然后在10分钟内滴加二乙基偶氮二羧酸酯(0.028ml，0.179mmol)。然后将反应物加温至室温。在通过TLC完成反应后，将反应混合物用碳酸氢钠水溶液(3.0mL)猝灭。分离水相并用乙醚萃取(2×5.0mL)。组合所述有机萃取物，干燥，并真空浓缩干燥。在残渣中加入乙醚(2.0mL)和己烷(5.0mL)，滤掉三苯膦氧化物。浓缩滤液得到一种粘性油，其通过柱层析纯化(己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)得到5.0mg(7.6％)的4-(4-顺式-苯甲酸基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：441.3(M++1)。此反应还产生50.0mg(84％)的4-(3-环己烯基)氨基-5，6二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：319.2(M++1)。
实施例3：
向4-(4-顺式-苯甲酸基环己基)氨基-5，6二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶(5.0mg，mmol)于乙醇(1.0mL)中的溶液中加入10滴2M氢氧化钠。1小时后，将反应混合物用乙酸乙酯萃取(3×5.0mL)并将有机层干燥，过滤，并真空浓缩干燥。残渣进行柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)，得到3.6mg(94％)的4-(4-顺式-羟基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：337.2(M++1)。
以下化合物以与实施例3所述相似方式获得：
4-(3-N，N-二甲基-3-氧代丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.01(s，3H)，2.31(s，3H)，2.73(t，2H)，2.97(s，6H)，4.08(m，2H)，6.09(t，1H)，7.41-7.48(m，3H)，8.43(m，2H)，10.46(s，1H)；MS(ES)：338.2(M++1)。
4-(2-甲酰氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.26(s，3H)，2.37(s，3H)，3.59-3.78(m，2H)，3.88-4.01(m，2H)，5.48-5.60(m，1H)，7.38-7.57(m，3H)，8.09(s，1H)，8.30-8.45(m，2H)，8.82(s，1H)；MS(ES)：310.1(M++1)。
4-(3-乙酰氨丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：338.2(M++1)。
实施例4：
将4-(3-叔丁氧基-3-氧代丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶(70.0mg，0.191mmol)溶解于三氟乙酸∶二氯甲烷(1∶1，5.0mL)中。将所得溶液在室温搅拌1小时，然后回流2小时。在冷却至室温后，将混合物真空浓缩干燥。残渣进行制备薄层层析(EtOAc∶己烷∶AcOH＝7∶2.5∶0.5)，得到40.0mg(68％)的4-(3-羟基-3-氧代丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CD3OD)δ2.32(s，3H)，2.38(s，3H)，2.81(t，2H)，4.01(t，2H)，7.55(m，3H)，8.24(m，2H)；MS(ES)：311.1(M++1)。
以下化合物以与实施例4相似方式获得：
4-(3-氨丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：296.1(M++1)，279.1(M+-NH3)。
实施例5：
将4-(3-羟基-3-氧代丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶(50.0mg，0.161mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(0.50mL)、二噁烷(0.50mL)和水(0.25mL)的混合物中。向此溶液中加入甲胺(0.02mL，40％wt于水中，0.242mmol)、三乙胺(0.085mL)和N，N，N′N′-四甲基脲四氟硼酸盐(61.2mg，0.203mmol)。在室温搅拌10分钟后，将所述溶液浓缩，并将残渣进行制备薄层层析(EtOAc)，得到35.0mg(67％)的4-(3-N-甲基3-氧代丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-]吡咯并[2，3 d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.92(s，3H)，2.30(s，3H)，2.65(t，2H)，4.08(t，2H)，5.90(t，1H)，6.12(m，1H)，7.45(m，3H)，8.41(m，2H)，10.68(s，1H)；MS(ES)：311.1(M++1)。
以下化合物以与实施例5相似方式获得：
4-(2-环丙烷羰基氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：350.2(M++1)。
4-(2-异丁酰氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：352.2(M++1)。
4-(3-丙酰氨丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.00-1.08(t，3H)，1.71-2.03(m，4H)，2.08(s，3H)，2.37(s，3H)，3.263.40(m，2H)，3.79-3.96(m，2H)，5.53-5.62(m，1H)，6.17-6.33(m，1H)，7.33-7.57(m，3H)，8.31-8.39(m，2H)，9.69(s，1H)；MS(ES)：352.2(M++1)。
4-(2-甲磺酰氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.18(s，3H)，2.27(s，3H)，2.92(s，3H)，3.39-3.53(m，2H)，3.71-3.88(m，2H)，5.31-5.39(m，1H)，6.17-6.33(m，1H)，7.36-7.43(m，3H)，8.20-8.25(m，2H)，9.52(s，1H)；MS(ES)：360.2(M++1)。
实施例6：
将4-氯-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶(0.70g，2.72mmol)和1，2-二氨基乙烷(10.0mL，150mmol)的混合物在惰性气氛下回流6小时。真空除去过量的胺，残渣相继用乙醚和己烷洗涤，得到0.75g(98％)的4-(2-氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)；282.2(M+1)，265.1(M+-NH3)。
实施例7：
在0℃向4-(2-氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶(70.0mg，0.249mmol)和三乙胺(50.4mg，0.498mmol)于二氯甲烷(2.0mL)中的溶液中加入丙酰氯(25.6mg，0.024mL，0.274mmol)。1小时后，将混合物真空浓缩，并将残渣进行制备薄层层析(EtOAc)，得到22.0mg(26％)的4-(2-丙酰氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：338.2(M++1)。
以下化合物以与实施例7相似方式获得：
4-(2-N′-甲脲乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ2.13(s，3H)，2.32(s，3H)，3.53(d，3H)，3.55(m，2H)，3.88(m，2H)，4.29(m，1H)，5.68(t，1H)，5.84(m，1H)，7.42(m，3H)，8.36(dd，2H)，9.52(s，1H)；MS(ES)：339.3(M++1)。
4-(2-N′-乙脲乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：353.2(M++1)。
实施例8：
向1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(41.1mg，0.215mmol)，二甲基氨基吡啶(2.4mg，0.020mmol)和丙酮酸(18.9mg，0.015mL，0.215mmol)于二氯甲烷(2.0mL)中的溶液中，加入4-(2-氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶(55.0mg，0.196mmol)。将所述混合物在室温搅拌4小时。然后常规进行柱层析(EtOAc)，得到10.0mg(15％)的4-(2-丙酮酰氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：352.2(M++1)。
实施例9：
向4-(2-氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶(60.0mg，0.213mmol)于二氯甲烷(2.0mL)中的溶液中加入N-三甲基甲硅烷基异氰酸酯(43.3mg，0.051mL，0.320mmol)。将混合物在室温搅拌3小时，随后加入碳酸氢钠水溶液。通过少量硅胶过滤后，将滤液真空浓缩干燥，得到9.8mg(14％)的4-(2-脲乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：325.2(M++1)。
以下化合物以与实施例9相似方式获得：
dl-4-(2-乙酰氨丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.28-1.32(d，J＝8Hz，3H)，1.66(s，3H)，1.96(s，3H)，2.30(s，3H)3.76-3.83(m，2H)，4.10-4.30(m，1H)，5.60-5.66(t，J＝6Hz，1H)，7.40-7.51(m，3H)，8.36-8.43(m，2H)，10.83(s，1H)；MS(ES)：338.2(M++1)。
(R)-4-(2-乙酰氨丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.31(d，3H)，1.66(s，3H)1.99(s，3H)，2.31(s，3H)，3.78-3.83(m，2H)，4.17-4.22(m，1H)，5.67(t，1H)，7.38-7.5(m，3H)，8.39(m，2H)，10.81(s，1H)；MS(ES)：338.2(M++1)。
(R)-4-(1-甲基-2-乙酰氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.41(d，3H)，1.68(s，3H)，2.21(s，3H)，2.34(s，3H)，3.463.52(br，m，2H)，4.73(m，1H)，5.22(d，1H)，7.41-7.46(m，3H)，8.36-8.40(m，2H)，8.93(s，1H)；MS(ES)：338.2(M++1)。
(S)-4-(2-乙酰氨丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.31(d，3H)，1.66(s，3H)2.26(s，3H)，2.35(s，3H)，3.78-3.83(m，2H)，4.17-4.22(m，1H)，5.67(t，1H)，7.38-7.5(m，3H)，8.39(m，2H)，8.67(s，1H)；MS(ES)：338.2(M++1)。
(S)-4-(1-甲基-2-乙酰氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.41(d，3H)，1.68(s，3H)，2.05(s，3H)，2.32(s，3H)，3.46-3.52(m，2H)，4.73(m，1H)，5.22(d，1H)，7.41-7.46(m，3H)，8.36-8.40(m，2H)，10.13(s，1H)；MS(ES)：338.2(M++1)。
实施例10：
以与实施例1相似方式进行4-氯-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶与dl-1-氨基-2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基氨基丙烷和dl-2-氨基-1-(1，1-二甲基乙氧基)羰基氨基丙烷混合物的反应。该反应得到dl-4-(1-甲基-2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基氨基)乙基氨基-5，6二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶与dl-4-(2-甲基-2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基氨基)乙基氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶的一种混合物，将其通过柱层析分离(EtOAc∶己烷＝1∶3)。第一个级分是dl-4-(1-甲基-2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3 d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.29-1.38(m，12H)，1.95(s，3H)，2.31(s，3H)3.34-3.43(m，2H)，4.62-4.70(m，1H)，5.36-5.40(d，J＝8Hz，1H)，5.53(br，1H)，7.37-7.49(m，3H)，8.37-8.44(m，2H)，10.75(s，1H).MS 396.3(M++1)；第二个级分是dl-4-(2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基氨丙基)氨基-5，6-二甲基-2苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.26-1.40(m，12 H)，2.00(s，3H)，2.31(s，3H)3.60-3.90(m，2H)，3.95-4.10(m，1H)，5.41-5.44(d，J＝6.0Hz，1H)，5.65(br，1H)，7.40-7.46(m，3H)，8.37-8.44(m，2H)，10.89(s，1H)；MS(ES)：396.2(M++1)。
以下化合物以与实施例10相似方式获得：
(S，S)-4-(2-乙酰氨基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ_1.43(m，4H)，1.60(s，3H)，1.83(m，2H)，2.18(s，3H)，2.30(m，2H)，2.32(s，3H)，3.73(br，1H)，4.25(br，1H)，5.29(d，1H)，7.43-7.48(m，3H)，8.35-8.40(m，2H)，9.05(s，1H)。
4-(2-甲基-2-乙酰氨丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ_1.51(s，6H)，1.56(s，3H)，2.07(s，3H)，2.36(s，3H)，3.76(d，2H)，5.78(t，1H)，7.41-7.48(m，3H)，7.93(s，1H)，8.39(m，2H)，10.07(s，1H)；MS(ES)：352.3(M++1)。
实施例11：
将dl-4-(1-甲基-2-(1，1-二甲基乙氧基)羰基氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶(60.6mg，0.153mmol)用三氟乙酸(0.5mL)于二氯己烷(2.0mL)中处理14小时。真空除去有机溶剂以干燥。残渣溶解于N，N-二甲基甲酰胺(2.0mL)和三乙胺(2.0mL)中。在0℃向该溶液中加入乙酐(17.2mg，0.016，0.169mmol)。将所得混合物在室温搅拌48小时，然后真空浓缩以干燥。残渣进行制备薄层层析(EtOAc)，得到27.0mg(52％)的dl-4-(1-甲基-2-乙酰氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.38-1.42(d，J＝8Hz，3H)，1.69(s，3H)，2.01(s，3H)，2.32(s，3H)3.38-3.60(m，2H)，4.65-4.80(m，1H)，5.23-5.26(d，J＝6Hz，1H)，7.40-7.51(m，3H)，8.37-8.43(m，2H)，10.44(s，1H)；MS(ES)：338.2(M++1)。
实施例12：
将以与实施例1相似方式从4-氯-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶(0.15g，0.583mmol)和(1R，2R)-(-)-1，2-二氨基环己胺(0.63g，5.517mmol)中制备的(R，R)-4-(2-氨基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶，用三乙胺(0.726g，7.175mmol)和乙酐(0.325g，3.18mmol)于N，N-二甲基甲酰胺(10.0mL)中在室温处理2小时。真空除去溶剂后，在残渣中加入乙酸乙酯(10.0mL)和水(10.0mL)。分离此混合物并将水相层用乙酸乙酯(2×10.0mL)萃取。将此乙酸乙酯溶液干燥(MgSO4)并过滤。真空浓缩以干燥，并将残渣进行柱层析(EtOAc∶己烷＝1∶1)，得到57.0mg(26％)的(R，R)-4-(2-乙酰氨基环己基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.43(m，4H)，1.60(s，3 H)，1.84(m，2H)，2.22(s，3H)，2.30(m，2H)，2.33(s，3H)，3.72(br，1H)，4.24(br，1H)，5.29(d，1H)，7.43-7.48(m，3H)，8.35 8.39(m，2H)，8.83(s，1 H)；MS(ES)：378.3(M++1)。
实施例13：
在0℃向4-(2-羟乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶(40.0mg，0.141mmol)于嘧啶(1.0mL)中的溶液中加入乙酐(0.108g，1.06mmol)。将该混合物在室温搅拌4小时，真空除去溶剂。将残渣进行制备薄层层析(EtOAc∶乙烷＝1∶1)，得到32.3mg(71％)of4-(2-乙酰氧基乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ1.90(s，3H)，2.08(s，3H)，2.31(s，3H)，4.05(m，2H)，4.45(t，2H)，5.42(m，1H)，7.41-7.49(m，3H)，8.42(m，2H)，11.23(s，1H)。
实施例14：
将具有1滴N，N-二甲基甲酰胺的Fmoc-β-Ala-OH(97.4mg，0.313mmol)和草酰氯(39.7mg，27.3L，0.313mmol)于二氯甲烷(4.0mL)中的溶液在0℃搅拌1小时，随后在0℃加入4-(2-氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶(80.0mg，0.285mmol)和三乙胺(57.6mg，79.4L，0.570mmol)。3小时后，真空浓缩此混合物，并将残渣用20％哌啶于N，N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中处理0.5小时。真空除去溶剂后，将残渣用二乙醚∶己烷(1∶5)洗涤，得到3.0mg(3％)的4-(6-氨基-3-氮杂-4-氧己基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：353.2(M++1)。
实施例15：
将具有一滴N，N-二甲基甲酰胺的4-(2-氨乙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶(70.0mg，0.249mmol)和琥珀酸酐(27.0mg，0.274mmol)于二氯甲烷(4.0mL)中的溶液在室温搅拌4小时。用20％氢氧化钠溶液萃取此反应混合物(3×5.0mL)。将此水溶液用3M盐酸酸化为pH＝7.0。将全部混合物用乙酸乙酯萃取(3×10mL)。干燥组合的有机溶液(MgSO4)并过滤。将滤液真空浓缩干燥，得到15.0mg(16％)的4-(7-羟基-3-氮杂-4，7-二氧庚基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：382.2(M+1)。
实施例16：
在室温向10mL二甲基甲酰胺(DMF)中加入700mg的4-顺式-3-羟基环戊基)氨基-2-苯基-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶，随后加入455mg的N-Boc甘氨酸，20mg的N，N-二甲基氨基嘧啶(DMAP)，293mg的羟基苯并三唑(HOBT)和622mg的1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCl)。将此反应混合物搅拌过夜。然后在减压下除去DMF，而且此反应混合物分隔为20mL乙酸乙酯和50mL水。将水相部分用2×20mL乙酸乙酯萃取，并将组合的有机部分用盐水洗涤，经过无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。在硅胶上纯化，用乙酸乙酯/己烷洗脱，得到410mg所需产物：4-(顺式-3-(N-t-丁氧羰基-2-氨基乙酰氧基)环戊基)氨基-2-苯基-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)＝480.2。然后将该酯用于5mL二氯甲烷中的20％三氟乙酸在室温下处理，放置过夜然后浓缩。用乙酸乙酯研碎得到300mg白色固体：4-(顺式-3-(2-氨基乙酰氧基)环戊基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶三氟乙酸盐，MS(ES)(M++1)＝380.1。
本领域技术人员意识到以下化合物可以通过上述方法合成：
4-(顺式-3-羟基环戊基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)＝323.1。
4-(顺式-3-(2-氨基乙酰氧基)环戊基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶三氟乙酸盐，MS(ES)(M++1)＝380.1。
4-(3-乙酰胺)哌啶基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)＝364.2。
4-(2-N′-甲基脲丙基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)＝353.4。
4-(2-乙酰氨基丁基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)＝352.4。
4-(2-N′-甲基脲丁基)氨基-5，6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)＝367.5。
4-(2-氨基环丙基乙酰氨基乙基)氨基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)＝309.1。
4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氯苯基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)＝342.8。
4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)＝327.2。
4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(4-吡啶基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)＝310.2。
实施例17：
                            方案IX
Figure A0182246001161
Figure A0182246001171
将(7)(方案IX)的吡咯氮在碱性条件下用二叔丁基二碳酸酯加保护，以产生相应的氨基甲酸酯(22)。对(22)进行区域选择性自由基溴化以产生溴化物(23)。通常，化合物(23)是各种亲核性偶联配体的关键亲电子中间体。用苯酚钠三水合物置换烷基溴产生化合物(24)。随后在一个步骤中置换芳基氯化物及除去t-丁基氨基甲酸保护基团，产生所需化合物(25)。
化合物(22)-(25)的详细合成根据方案IX进行。
Figure A0182246001172
将二-叔丁基二碳酸酯(5.37g，24.6mmol)和二甲基氨基嘧啶(1.13g，9.2mmol)加入含有(7)(1.50g，6.15mmol)和嘧啶(30mL)的溶液中。20小时后，将反应物浓缩，残渣在CH2Cl2和水之间分隔。分离CH2Cl2层，经过MgSO4干燥，过滤并浓缩产生黑色固体。急骤(flash)层析(SiO2；1/9 EtOAc/己烷，Rf0.40)产生1.70g(80％)白色固体(22)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ8.50(m，2H，Ar-H)，7.45(m，3H，Ar-H)，6.39(s，1H，吡咯-H)，2.66(s，3H，吡咯-CH3)，1.76(s，9H，氨基甲酸酯-CH3)；MS，M+1＝344.1；Mpt＝175-177℃。
Figure A0182246001181
将N-溴化琥珀酰亚胺(508mg，2.86mmol)和AIBN(112mg，0.66mmol)加入含有(22)(935mg，2.71mmol)和CCl4(50mL)的溶液中。将所述溶液加热至回流。2小时后将反应物冷却至室温并真空浓缩产生白色固体。急骤层析(SiO2；1/1 CH2Cl2/己烷，Rf 0.30)产生960mg(84％)白色固体(23)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ8.52(m，2H，Ar-H)，7.48(m，3H，Ar-H)，6.76(s，1H，吡咯-H)，4.93(s，2H，吡咯-CH2Br)，1.79(s，9H，氨基甲酸酯-CH3)；MS，M+1＝423.9；Mpt＝155-157℃。
Figure A0182246001182
将苯酚钠三水合物(173mg，1.02mmol)以一个部分加入溴化物(23)(410mg，0.97mmol)溶解于CH2Cl2(5mL)和DMF(10mL)中的溶液中。2小时后，反应溶液在CH2Cl2和水之间分隔。将水层用CH2Cl2萃取。组合的CH2Cl2层用水洗涤，经过MgSO4干燥，过滤并浓缩产生黄色固体。急骤层析(SiO2；1/6 EtOAc/己烷，Rf 0.30)产生210mg(50％)白色固体(24)。1H NMR(200MHz，CDCl3)58.53(m，2H，Ar-H)，7.48(m，3H，Ar-H)，7.34(m，2H，Ar-H)，7.03(m，3H，Ar-H)，6.83(s，1H，吡咯-H)，5.45(s，2H，ArCH2O)，1.76(s，9H，氨基甲酸酯-CH3)；MS，M+＝436.2。
Figure A0182246001191
将含有(24)(85mg，0.20mmol)，N-乙酰乙二胺(201mg，1.95mmol)和DMSO(3mL)的溶液加热至100℃。1小时后，将温度提高至130℃。3小时后，将反应物冷却至室温并在EtOAc和水之间分隔。将水层用EtOAc萃取(2×)。组合的EtOAc层用水洗涤，经过MgSO4干燥，过滤并浓缩。急骤层析(SiO2；1/10 EtOH/CHCl3，Rf 0.25)产生73mg(93％)白色泡沫固体(25)。1H NMR(200MHz，DMSO-d6)δ11.81(br s，1H，N-H)，8.39(m，2H，Ar-H)，8.03(br t，1H，N-H)，7.57(br t，1H，N-H)，7.20-7.50(m，5H，Ar-H)，6.89-7.09(m，3H，Ar-H)，6.59(s，1H，吡咯-H)，5.12(s，2H，ArCH2O)，3.61(m，2H，NCH2)，3.36(m，2H，NCH2)，1.79(s，3H，COCH3)；MS，M+1＝402.6。
以下化合物以与实施例17相似方式获得：
4-(2-乙酰氨乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。mp 196-197℃；MS(ES)：401.6(M++1)。
4-(2-乙酰氨乙基)氨基-6-(4-氟苯氧基)甲基-2苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：420.1(M+1)。
4-(2-乙酰氨乙基)氨基-6-(4-氯苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：436.1(M++1)。
4-(2-乙酰氨乙基)氨基-6-(4-甲氧苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：432.1(M++1)。
4-(2-乙酰氨乙基)氨基-6-(N-吡啶-2-酮)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：403.1(M++1)。
4-(2-乙酰氨乙基)氨基-6-(N-苯氨基)甲基-2-苯-7H-吡咯并[2，3]嘧啶。MS(ES)：400.9(M++1)。
4-(2-乙酰氨乙基)氨基-6-(N-甲基-N-苯氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：414.8(M++1)。
4-(2-N′-甲基脲乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶。MS(ES)：416.9(M++1)。
实施例18：腺苷A1拮抗剂的合成
化合物1319和1320(下表13)可以通过本文所述的常规方法合成。
Figure A0182246001201
    Compound 26 X＝F                Compound 1319
    Compound 27 X＝Cl               Compound 1320
化合物1319(81％)1H-NMR(d6-DMSO)d 1.37(m，4H)，1.93(m，2H)，2.01(m，2H)，4.11(brs，1H)，4.61(d，1H，J＝4.4Hz)，6.59(m，1H)，7.09(m，1H)，7.21(m，2H)，7.49(dd，1H，J＝8Hz，14Hz)，8.03(m，1H)，8.18(d，1H，J＝8 Hz)，11.55(brs，1H).MS(ES)：327.0(M++1)。
化合物1320(31％)MS(ES)：343.1(M++1)。
实施例19：腺苷A1拮抗剂的合成
化合物1321(下表13)可以通过以下所示常规方法合成。
Figure A0182246001211
                                  Compound  1321
将化合物28(10.93g，50.76mmol)溶解于DMF(67mL)中。相继加入4-脒基盐酸吡啶(8.0g，50.76mmol)和DBU(15.4g，101.5mmol)，并将反应加热至85℃。22小时后，将反应冷却至室温并真空除去DMF。将此黑色油用2M HCl(80mL)稀释。维持反应。2小时后，将此溶液冷却至10℃并过滤。将固体用冷水洗涤并干燥，产生7.40g黄色固体化合物29(69％)。1H-NMR(200MHz，d6-DMSO)d 6.58(s，1H)，7.27(s，1H)，8.53(d，2H，J＝5.6)，9.00(d，2H，J＝5.2Hz)，12.35(brs，1H).MS(ES)：212.8(M++1)。
将化合物29(7.4mmol，29.8mmol)用POCl3稀释，并加热至105℃。18小时后，将反应冷却至室温并真空除去POCl3。将稠厚的黄色油用MeOH(75mL)稀释，随后用乙醚(120mL)稀释。过滤无定形的红色固体并用乙醚洗涤，产生3.82g红色固体。该粗制的固体为大约80％纯度，而且在随后的反应中不用进一步纯化。MS(ES)：230.7(M++1)。
化合物1321：1H-NMR(15％)(200MH，d6-DMSO)d 1.38(m，4H)，1.92(brs，2H)，2.02(brs，2H)，3.44(brs，1H)，4.14(brs，1H)，4.56(d，1H，J＝4Hz)，6.63(m，1H：，15(m，1H)，7.32(d，1H，J＝6.2Hz)，8.20(d，2H，J＝4.4Hz)，8.65(d，2H，J＝4.4Hz)，11.67(brs，1H).MS(ES)：310.2(M++1)。
化合物1501(下表15)：1H-NMR(70％)(200MHz，CD3OD)d 1.84(s，3H)，3.52(t，2H，J＝6.0Hz)，3.83，t，2H，J＝6Hz)，6.51(d，1H，J＝3.4Hz)，7.06(d，1H，J＝3.8Hz)，7.42(m，3H)，8.36(m，2H).MS(ES)：296.0(M++1)。
化合物1502(下表15)：MS(ES)：345.0(M++1)。
化合物1500(下表15)：1H-NMR(200MHz，CDCl3)d 1.40-1.80(m，6H)，1.85-2.10(m，2H)，2.18(s，3H)，2.33(s，3H)，2.50(d，3H)，3.90-4.10(m，2H)，4.76(m，1H)，5.50(d，1H)，6.03(m，1H)，7.40(m，3H)，8.37(m，2H)，9.15(brs，1H).MS(ES)：393.3(M++1)。
实施例20：腺苷A1拮抗剂的合成
化合物1504(下表15)可以通过以下所示常规方法合成。
Figure A0182246001221
                                   Compound 1504
将化合物31(200mg，0.47mmol)溶解于DCM(4mL)中。相继加入三乙胺(51mg，0.5mmol)和硫代吗啉(52mg，0.5mmol)。将此溶液混合几分钟并维持72小时。将反应物用DCM和水稀释并分离各层。水相层用DCM萃取。组合的DCM层经过MgSO4干燥，过滤并浓缩。在粗制样品中加入乙醚并将所得固体过滤产生100mg白色固体32(62％)。1H NMR(200MHz，CDCl3)d 1.76(s，9H)，2.66(brs，2H)，2.79(brs，2H)，3.86(s，2H)，7.46(m，3H)，8.50(m，2H)。
将化合物32与DMSO(3mL)与反式-4-氨基环己醇(144mg，1.25mmol)组合，并加热至130℃反应4小时。将反应冷却至室温，用EtOAc和水稀释。分离各层，并将水相层用EtOAc(2×)萃取。组合的有机层用水和盐水洗涤，经过MgSO4干燥，过滤并浓缩。层析(SiO2，8∶1 CHCl3/EtOH)产生32mg褐色油。加入乙醚并将所得固体过滤产生5mg白色固体(9％).OSIC-148265：1H-NMR(200MHz，CD3OD)：d 1.44(brm，4H)，2.03(brm，2H)，2.21(brm，2H)，2.70(brm，8H)，3.63(m，4H)，3.92(m，1H)，4.26(brs，1H)，6.42(s，1H)，7.42(m，3H)，8.33(m，2H)。
实施例21：腺苷A1拮抗剂的合成
化合物1503(下表15)可以通过以下所示常规方法合成。
Figure A0182246001231
                                        Compound 1503
将溴化物化合物31(220mg，0.47mmol)溶解于1∶1 DMF∶二氯甲烷(5mL)中。向其中加入K2CO3(71mg，0.52mmol)和吗啉(0.047mL，0.47mmol)。将此混合物在室温搅拌过夜。真空除去溶剂，残渣在水和二氯甲烷之间分隔。有机层用MgSO4干燥，过滤并浓缩，产生米色固体，将其用乙醚/己烷研碎，产生175mg白色固体33(84％)。1H-NMR(200MHz，CDCl3)：(1.9(9H，s)，2.54(4H，s)，3.65(4H，s)，3.85ts)，6.59(1H，s)，7.45(3H，m)，8.5(2H，m)。
将化合物33(50mg，0.11mmol)和反式-4-氨基环己醇(105mg，0.91mmol)溶解于DMSO(2mL)中。所得溶液用N2喷射，然后在油浴中加热至100℃并搅拌过夜。将粗制的反应混合物倒入水中并用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。组合的有机层用水洗涤。在用MgSO4干燥及过滤后，真空浓缩有机层产生橙色固体。层析(SiO2，CH2Cl2中10％CH4OH)产生15mg(33％)。1H-NMR(200MHz，CDCl3)：(1.24-1.62(4H，m)，1.85(2H，m)，2.10(2H，m)，2.26(4H，m)，3.53(4H，m)，4.22(1H，m)，4.73(1H，m)，5.85(1H，d)，6.15(1H，s)，7.25(3H，m)，8.42(2H，M)，10.0(1H，s).MS(ES)：408(M++1)。
化合物1500，1501和1502可以使用与实施例20相似的制备步骤，通过用适当取代的胺处理化合物32而合成。
针对人腺苷A1和A2受体的酵母β-半乳糖苷酶报道基因分析：
将酵母株(S.cerevisiae)用人腺苷A1(A1R；CADUS株CY12660)或人腺苷A2a(A2a；CADUS株CY8362)转化，并加入lacZ(β-半乳糖苷酶)报道基因以用作功能读出物。以下列出了关于所述转化的全部阐述(见酵母株)。将NECA(5′-N-乙基酰胺基腺苷)，一种与A2和A2a受体具有相似亲和性的潜在腺苷受体兴奋剂，在所有分析中用作配体。在8种浓度(0.1-10,000nM)检测测试化合物通过CY12660或CY8362抑制NECA诱导的β-半乳糖苷酶活性的能力。
酵母原种培养物的制备：将代表性酵母株CY12660和CY8362在LT琼脂平板上划线，并在30℃温育直至观测到集落。将得自这些集落的酵母加入LT液体中(pH6.8)，并在30℃生长过夜。然后将每个酵母株稀释为OD600＝1.0-2.0(大约1-2×107个细胞/ml)，通过分光光度分析测定(分子设备VMAX)。针对每6ml酵母液体培养物，加入4ml的40％甘油(1∶1.5体积∶体积)(＂酵母/甘油原液＂)。从该酵母/甘油原液中，制备10份1ml等份并贮存于-80℃直至需要进行分析。
酵母A1R和A2aR分析：将一小瓶CY8362和CY12660酵母/甘油原液解冻，并用于接种补加的LT液体培养基，pH6.8(92ml LT液体，向其中加入5ml的40％葡萄糖，0.45ml的1M KOH和2.5ml的Pipes，pH6.8)。将液体培养物在30℃生长16-18小时(过夜)。然后将得自过夜培养物的等份在含有4U/ml腺苷脱氨酶(VI或VII型，来自小牛肠粘膜的，Sigma)的LT培养基中稀释，针对CY8362(A2aR)，获得OD50＝0.15(1.5×106细胞/ml)，及针对CY12660(A1R)，OD50＝0.50(5×106细胞/ml)。
用终体积100ul在96孔微滴定平板中进行分析，这样在所有孔中达到终浓度为2％DMSO。针对初级筛选，利用1-2种测试化合物浓度(10uM，1M)。针对化合物分布图，测试8个浓度(10000，1000，500，100，50，10，1和0.1nM)。向每个微滴定平板中，将10ul的20％DMSO加入“对照”和“全部”孔中，而将10ul测试化合物(在20％DMSO中)加入“未知”孔中。随后，将10ul的NECA(针对A1R加入5uM，针对A2aR加入1uM)加入“全部”和“未知”孔中；将10ul的PBS加入“对照”孔中。最后，将80ul酵母株CY8362或CY12660加入所有孔中。然后将所有平板简单摇动(LabLine轨道摇动器，2-3分钟)，并在干燥烘箱中在30℃温育4小时。
β-半乳糖苷酶活性可以使用生色底物(例如ONPG，CPRG)，发光底物(例如Galacton Star)或荧光底物(例如FDG，Resorufin)测定。通常地，荧光检测优选基于上好的信号：噪声比，相对无干扰及低成本。将荧光双吡喃半乳糖苷(FDG，分子探针或标记基因技术)，一种荧光半乳糖苷酶底物，以20ul/孔加入所有孔中(终浓度＝80uM)。将平板摇动5-6秒(LabLine轨道摇动器)，然后在37℃温育90分钟(95％O2/5％CO2温育器)。在90分钟温育期末，使用20ul/孔的1M Na2CO3中止β-半乳糖苷酶活性，并将所有平板摇动5-6秒。然后将平板搅拌6秒，使用荧光计测定相对荧光强度(Tecan Spectrafluor；兴奋＝485nm，发射＝535nm)。
计算：“对照”孔的相对荧光数值认为是背景数值，并从“全部”和“未知”数值中减去。通过对数变换(X轴：化合物浓度)，随后适于计算IC50数值的一个部位竞争曲线(GraphPad Prism)，分析化合物分布图。
酵母株：开发了Saccharomyces cerevisiae株CY12660〔far1*1442tbt1-1 fus1-HIS3 can1 ste14∷trp1∷LYS2 ste3*1156 gpa1(41)-Gαi3 lys2ura3 leu2 trp1：his3；LEU2 PGKp-MfαlLeader-hA1R-PHO5term2mu-orig REP3 Ampr〕及CY8362[gpalp-rGαsElOK far1*1442 tbt1-1fus1-HIS3 can1 ste14∷trp1：LYS2 ste3*1156 lys2 ura3 leu2 trp1 his3；LEU2 PGKp-hA2aR 2mu-ori REP3 Ampr]。
LT培养基：LT(补加的Leu-Trp)培养基包含100g DIFCO酵母氮基，补加了以下物质：1.0g缬氨酸，1.0g天冬氨酸，0.75g苯丙氨酸，0.9g赖氨酸，0.45g酪氨酸，0.45g异亮氨酸，0.3g甲硫氨酸，0.6g腺嘌呤，0.4g尿嘧啶，0.3g丝氨酸，0.3g脯氨酸，0.3g胱氨酸，0.3g精氨酸，0.9g组氨酸，和1.0g苏氨酸。
表达人A1腺苷受体的酵母株的构建：
在这个实施例中，阐述了表达功能性整合入酵母信息素系统途径内的人A1腺苷受体的酵母株的构建。
I.表达载体构建
为构建人A1腺苷受体的酵母表达载体，通过对人海马mRNA进行逆转录酶PCR获得A1腺苷受体cDNA，使用基于人A1腺苷受体的公布序列和标准技术设计的引物。将PCR产物亚克隆入酵母表达质粒pMP15的NcoI和XbaI位点。
pMP15质粒如下自pLPXt中产生：将YEP51的XbaI位点(Broach，J.R.等(1983)，“在酵母中高水平可诱导表达克隆的基因的载体“，p.83-117，M.Inouye(编辑)，实验性操纵基因表达，学术出版社，纽约)通过消化消除，末端补平并再连接产生Yep51NcoDXba。
另一个XbaI位点在BamHI位点通过用BamHI消化产生，末端补平，接头(New England Biolabs，&num；10erz连接，Xba消化及再连接以产生YEP51NcoXt。将这个质粒用Esp31和NcoI消化并连接于通过PCR产生的Leu2和PGKp片段。2kb的Leu2 PCR产物通过从YEP51Nco中扩增产生，使用含有Esp31和BglII位点的引物。660bp的PGKp PCR产物通过从pPGKas(Kang，Y-S.等(1990)，分子细胞生物学Q：2582-2590)中扩增产生，使用含有BglII和NcoI位点的PCR引物。所得质粒称为pLPXt。PLPXt通过将前α-因子原前导序列的编码序列插入NcoI位点而修饰。插入所述前原前导序列以便NcoI克隆位点保持在前导序列的3’末端，但在5’末端不再生。以这种方式，受体可以通过用NcoI和XbaI消化所述质粒而克隆。所得质粒称为pMP15。
将其中插入人A1腺苷受体cDNA的pMP15质粒称为p5095。在这个载体中，将受体cDNA融合于酵母α因子前原前导序列的3′末端。在蛋白质成熟期间，切割所述前原肽序列产生成熟全长受体。这发生在受体经过酵母分泌途径的加工期间。这个质粒通过Leu选择(即在无亮氨酸的培养基上生长)加以保持。确定克隆的编码区序列并发现与公布的文献中所示序列相同(GenBank登记号S45235和S56143)。
II.酵母株构建
为产生表达人A1腺苷受体的酵母株，将酵母株CY7967用作起始亲代菌株。CY7967的基因型如下：
MATα gpaD1163 gpa1(41)Gαi3 far1D1442 tbt-1 FUS1-HIS3 can1ste14∷trp1∷LYS2 ste3D1156 lys2 ura3 leu2 trp1 his3。
遗传标记如下：
MATa               ——交配型a
gpa1(41)Gαi3      ——将gpa1(41)Gαi3整合入酵母基因组中。这个
                       嵌合的Ga蛋白由融合于哺乳动物G-蛋白Gai3
                       的内源酵母Ga亚单位GPA1的前41个氨基酸组
                       成，其中关联N-末端氨基酸已经缺失。
far1D1442          ——FAR1基因(可应答细胞周期停滞)已经缺
                       失(从而防止基于信息素应答途径激活上细胞周
                       期停滞。
tbt-1              ——通过电穿孔具有高转化效力的菌株。
FUS1-HIS3          ——在FUS1启动子和HIS3编码区之间的融合
                   (从而产生一种信息素可诱导HIS3基因)。
can1               ——精氨酸/刀豆氨酸通透酶。
ste14∷trp1∷LYS2  ——STE14基因的破坏，一种C-法尼基甲基转
                       移酶(从而通过信息素途径降低基本信号)
ste3D1156          ——内源性酵母STR，一种破坏信息素受体
                   (STE3)的因子
lys2               ——2-氨基apidate还原酶中缺乏，酵母需要赖
                       氨酸以生长。
ura3               ——乳清酸核苷-5’-磷酸脱羧酶中缺乏，酵母需
                       要尿嘧啶以生长。
leu2               ——b-异丙基苹果酸脱氢酶中缺乏，酵母需要亮
                       氨酸以生长。
trp1               ——磷酸核糖邻氨基苯甲酸中缺乏，酵母需要色
                       氨酸以生长。
his3               ——咪唑甘油磷酸酯脱氢酶中缺乏，酵母需要组
                       氨酸以生长。
将两个质粒通过电穿孔转化入菌株CY7967中：质粒p5095(编码人A1腺苷受体；上述)，和质粒p1584，其是一种FUS1-α-半乳糖苷酶报道基因质粒。质粒1584得自质粒pRS426(Christianson，T.W.等(1992)，基因110：119-1122)。质粒pRS426在2004-2016位核苷酸含有一个多接头。将在FUS1启动子和α-半乳糖苷酶基因之间的一个融合体在限制位点EagI and XhoI插入，产生质粒p1584。该p1584质粒通过Trp选择(即在无亮氨酸的培养基上生长)保持。
携带p5095和p1584的所得菌株，称为CY12660，其表达人A1腺苷受体。为将该菌株在液体或琼脂平板上生长，使用无亮氨酸和色氨酸的基本培养基。为在平板上进行生长分析(分析FUS1-HIS3)，平板为pH6.8及含有0.5-2.5mM 3-氨基-1，2，4-三唑及没有亮氨酸，色氨酸和组氨酸。作为特异性对照，在所有实验中均包含与一或多种其它基于酵母的7个跨膜受体筛选相对比。
表达人A2a腺苷受体的酵母株的构建：
在这个实施例中，阐述了表达功能性整合入酵母信息素系统途径内的人A2a腺苷受体的酵母株的构建。
I.表达载体构建
为构建人A2a腺苷受体的酵母表达基因，人A2a受体cDNA得自Dr.Phil Murphy(NIH)。在获得这个克隆的基础上，对A2a受体插入体测序并发现与公布的序列相同(GenBank登记号S46950)。受体cDNA通过PCR用VENT聚合酶从所述质粒中切离并克隆入质粒pLPBX中，其在酵母中通过组成型磷酸甘油酸激酶(PGK)启动子驱动受体表达。对全部插入体序列再次测序并发现与公布序列相同。然而，根据所用克隆策略，在受体羧基端附加三个氨基酸，即GlySerVal。
II.酵母株构建
为产生表达人A2a腺苷受体的酵母株，将酵母株CY8342用作起始亲代菌株。CY8342的基因型如下：MATa far1D1442 tbt1-1 lys2 ura3leu2 trp1 his3 fus1-HIS3 can1 ste3D1156 gpaD1163 ste14∷trp1∷LYS2gpalp-rGαsE10K(或gpalprGαsD229S或gpalp-rGαsE10K+D229S)。
遗传标记如实施例1所述，除了G蛋白变化。针对人A2a受体表达，所用酵母株其中内源性激酶G蛋白GPA1已经缺失并由哺乳动物Gαs置换。利用三个大鼠Gαs突变体。这些变体含有一或两个点突变，这将其转变为有效偶联酵母βγ的蛋白质。它们经鉴别为GαsEIOK(其中在第10位的谷氨酸置换为赖氨酸)，GαsD229S(其中在第229位的天冬氨酸置换为丝氨酸)及GαsE10K+D229S(其含有这两个点突变)。
将菌株CY8342(携带三种大鼠突变Gαs蛋白之一)用亲代载体pLPBX(受体-)或pLPBX-A2a(受体+)转化。加入具有融合于β-半乳糖苷酶编码序列的FUS1启动子的质粒，以确定信息素应答途径的激活水平。
使用表达人A1腺苷受体的酵母株的功能分析
在这个实施例中，阐述了酵母中人A1腺苷受体的调节子的功能筛选分析。
I.分析中所用配体
腺苷，这个受体的一种天然兴奋剂，以及两种其它合成的兴奋剂，用于进行此分析。在亚系列实验中使用的是据报道具有大约75nM的Ec50的腺苷，及据报道具有大约50nM亲和性的(-)-N6-(2-苯基异丙基)-腺苷(PIA)。在所有生长分析中使用5′-N-乙基酰胺基腺苷(NECA)。为防止由于生长培养基中存在腺苷而发生的信号，在所有分析中均加入腺苷脱氨酶(4U/ml)。
II.酵母中的生物应答
A1腺苷受体在异源酵母系统中功能性偶联的能力，通过将A1受体表达载体(p5095，上述)导入表达不同G蛋白亚单位的一系列酵母株中而确定。大部分这些转化体表达Gα1或Gα0亚型的Gα亚单位。对另外的Gα蛋白也测试了混杂受体-Gα蛋白偶联的可能鉴别。在不同菌株中，将STE18或嵌合的STE18 Gγ2构建体整合入酵母的基因组中。
所述酵母株包含一个缺陷的HIS3基因，和一个FUS1-HIS3的整合拷贝，从而可以在含有3-氨基-1，2,4-三唑(在0.2，0.5和1.0mM测试)及没有组氨酸的选择性培养基中选择。分离转化体，并在含有3-氨基-1，2，4-三唑，4U/ml腺苷脱氨酶及没有组氨酸的培养基上制备单层。使用5ul不同浓度的配体(例如NECA，0，0.1，1.0和10mM)。监测两天的生长情况。在不同的酵母株中均以这种方式测试配体依赖性生长应答。结果概括于下表1。符号(-)表示未检测到配体依赖性受体激活，而(+)表示配体依赖性应答。术语“LIRMA”表示配体非依赖性受体介导的激活。
                           表3
Figure A0182246001311
如表3所示，发现最强的信号出现在表达GPA2(41)-Gαi3嵌合体的酵母株中III.fus1-LacZ分析
为更充分定性信息素应答途径的激活，测定通过fus1LacZ应答兴奋剂刺激β-半乳糖苷酶的合成。为进行β-半乳糖苷酶分析，将增加浓度的配体加入在联合表达Ste18-Gγ2嵌合体和GPA41-Gαi3的酵母株中表达的人A1腺苷受体的对数中期培养物中。分离转化体，并在存在组氨酸和4U/ml腺苷脱氨酶的情况下生长过夜。在用腺苷脱氨酶和配体温育5小时后，使用CPRG作为β-半乳糖苷酶的底物测定β-半乳糖苷酶的诱导情况。在每个分析中均使用5×105个细胞。
用NECA刺激获得的结果表明10-8M浓度的NECA达到大约2倍刺激的半乳糖苷酶活性。另外，在10-5M浓度的NECA观测到大约10倍的刺激指数。
该分析的效用通过确认拮抗剂对这个菌株的活性而扩大。测试两种已知的腺苷拮抗剂XAC和DPCPX在β-半乳糖苷酶分析中竞争性抗NECA(5mM)活性的能力。在这些分析中，使用FDG作为底物测定β半乳糖苷酶诱导情况，在每个分析中使用1.6×105个细胞。结果表明XAC和DPCPX均是酵母表达的A1腺苷受体的潜在拮抗剂，IC50值分别为44nM和49nM。
为确定这种抑制作用是否特异于A1亚型，用基于酵母的A2a受体分析(实施例4所述)进行一系列互补实验。用A2a基于酵母的分析获得的结果表明XAC是相对有效的A2a受体拮抗剂，与公布的报道一致。相反，DPCPX对这个受体相对惰性，与公布的报道一致。
IV.放射性配体结合
A1腺苷受体分析通过测定受体的放射性结合参数而进一步定性。
使用制备自表达人腺苷受体的酵母的膜，分析[3H]CPX由一些腺苷受体参考化合物XAC，DPCPX和CGS的置换结合。将用表达人A1腺苷受体的酵母膜的结果与表达人A2a腺苷受体或人A3受体的酵母膜的结果相对比，以检测结合的特异性。为进行分析，将50mg膜用0.4nM[3H]CPX和增加浓度的腺苷受体配体温育。温育是在50mM Tris HCl，pH7.4，1mM EDTA，10mM MgCl2，0.25％BSA和2U/ml腺苷脱氨酶中，在存在蛋白酶抑制剂的情况下，在室温温育60分钟。加入冰冻的50mM Tris-HCl，pH7.4加上10mM MgCl2结束结合反应，随后用预先在0.5％聚乙烯亚胺中浸湿的GF/B滤膜过滤，使用Packard 96-孔收获仪。使用Prism 2.01软件通过非线性最小平方曲线适宜程序分析数据。
在这个实验中获得的IC50值概括示于下表4：
                         表4
    IC50[nM]
  化合物     hA1R     HA2aR     HA3R
  XAC     6.6     11.7     53.1
  DPCPX     8.5     326.4     1307.0
  CGS-15943     13.1     15.8     55.5
  NECA     215.5     294.9     34.9
  R-PIA     67.6     678.1     23.6
  IB-MECA     727.7     859.4     3.1
  Alloxozine     1072.0     1934.0     8216.0
这些数据表明所述参考化合物与文献中报道的那些化合物的亲和性一致。数据还表明基于酵母的分析对区别受体亚型特异性具有足够敏感性。
使用表达人A2a腺苷受体的酵母株的功能分析：
在这个实施例中，阐述了在酵母中功能性筛选人A1腺苷受体的调节子的分析。
I.分析中所用配体
使用天然配体腺苷，以及其它彻底定性及可商购的配体，研究在酵母中功能表达的人A2a受体。在这个分析中使用三种受体。包括：
配体                            报道的K i        功能
腺苷                             500nM             兴奋剂
5’-N-乙基酰胺基腺苷(NECA)       10-15nM           兴奋剂
(-)-N6-(2-苯基异丙基)-腺苷(PIA)  100-125nM         兴奋剂
为防止由于生长培养基中存在腺苷而发生信号，在所有分析中均加入腺苷脱氨酶(4U/ml)。
II.酵母中生物应答
测试A2a受体兴奋剂在酵母中刺激信息素应答途径的能力，所述酵母用A2a受体表达质粒转化并表达GαSE10K，GαSD229S或GαSE10K+D229S。配体以受体依赖性方式刺激信息素应答途径的能力通过酵母表型中的变化表明。受体激活将表型从组氨酸营养缺陷型修饰为组氨酸原养型(fus1-HIS3的激活)。分离三个独立的转化体，并在存在组氨酸的情况下生长过夜。洗涤细胞以除去组氨酸并稀释为2×106个细胞/ml，将5μl每种转化体在有或无4U/ml腺苷脱氨酶的情况下，点滴于非选择性培养基(包括组氨酸)或选择性培养基(1mM AT)上。将平板在30℃生长24小时。在存在组氨酸的情况下，受体+(R+)和受体-(R-)菌株均能生长。然而，在没有组氨酸的情况下，只有R+细胞生长。因为在这些平板中无配体加入，因此对这个结果可以有两种解释。一是携带受体的酵母有利生长是因为配体非依赖性受体介导的激活(LIRMA)。另一种解释是酵母可以合成配体腺苷。为区别这两种可能性，在生长酵母和平板中加入降解配体的酶，腺苷脱氨酶(ADA)。在存在腺苷脱氨酶的情况中，R+细胞在没有组氨酸的情况下不再生长，表明酵母确实合成配体。
这种解释通过在液体中A2a生长分析加以证实。在这个实验中，将R+酵母(表达A2a受体的GαSE10K菌株)在有或无腺苷脱氨酶(4U/ml)的情况下，以3种密度接种(1×106细胞/ml；3×105个细胞/ml；或1×105个细胞/ml)。分析的严格性用增加浓度(0，0.1，0.2或0.4mM)的3-氨-1，2，4-三唑(AT)增强，这是咪唑甘油-P脱水酶的竞争性拮抗剂，HIS3基因的蛋白质产物。在存在腺苷脱氨酶和3-氨基-1，2，4-三唑的情况下，酵母生长不明显。然而在没有3-氨基-1，2，4-三唑，腺苷脱氨酶作用较小。因此腺苷脱氨酶自身对信息素应答途径没有直接作用。
测定生长及可以使高生产率筛选小型化的一种可供选择的方法是A2a受体配体点滴分析。将表达A2a受体(A2aR+)或没有该受体(R-)的GαSE10K菌株，在存在组氨酸和4U/ml腺苷脱氨酶的情况下生长过夜。洗涤细胞以除去组氨酸，并稀释为5×106个细胞/ml。将1×106个细胞涂布于含有4U/ml腺苷脱氨酶和0.5或1.0mM 3-氨基-1，2，4-三唑(AT)的选择性平板上，干燥1小时。将5μl以下试剂应用于该单层：10mM腺苷，38.7mM组氨酸，二甲基亚砜(DMSO)，10mMPIA或10mM NECA。将细胞在30℃生长24小时。结果示出当在培养基中加入组氨酸时，只有没有受体的细胞生长。相反，R+细胞只生长于点滴A2a受体配体PIA和NECA的区域。因为平板含有腺苷脱氨酶，因此在点滴腺苷之处不生长证实腺苷脱氨酶是活性的。
III.fus1 LacZ分析
为定量酵母杂交途径的激活，测定通过fus1LacZ合成的β-半乳糖苷酶。
将表达GαSE10K，GαSD229S或GαsE10K+D229S的酵母株用编码人A2a受体的质粒(R+)或用无此受体的质粒(R-)转化。
分离转化体并在存在组氨酸和4U/ml腺苷脱氨酶的情况下生长过夜。将1×107个细胞/ml稀释为1×106个细胞/ml，并暴露于增加浓度的NECA下4小时，随后确定细胞中β-半乳糖苷酶活性。结果表明在R-菌株中，基本检测不到β-半乳糖苷酶活性，而在表达GαsE10K，GαsD229S或GαsE10K+D229S的R+菌株中，随着NECA浓度增加，β-半乳糖苷酶活性提高，表明应答暴露于配体浓度的增加，检测的β半乳糖苷酶的单位中剂量依赖性提高。这种剂量依赖性只在表达A2a受体的细胞中观测达到。另外，针对A2a的最强GαS构建体是GαSE10K。GαSD229S构建体是A2a受体的第二强GαS构建体，而GαSE10K+D229S构建体是测试的三种GαS构建体中最弱的，尽管甚至GαSE10K+D229S刺激相对可检测数量的β-半乳糖苷酶活性。
关于该分析的进一步阐述见美国专利申请系列No.09/088985，题目为“腺苷受体在酵母中的功能表达”，1998年6月2日提请(Attorney Docket No.CPI-093)，在此以其全文并入参考。
人腺苷受体亚型的药物学鉴定
材料及方法
材料：[3H]-DPCPX[环戊基-1，3-二丙基黄嘌呤，8[二丙基-2，3-3H(N)](120.0Ci/mmol)；[3H]-CGS 21680，[羧乙基-3H(N)](30Ci/mmol)和[125I]-AB-MECA([125I]-4-氨基苯甲基-5′-N-甲基氨甲酰腺苷)(2,200Ci/mmol)购自New England Nuclear(Boston，MA)。XAC(Xantine胺同类物)；NECA(5′-N-乙基酰胺基腺苷)；和IB-MECA购自Research Biochemicals Intemational(RBI，Natick，MA)。腺苷脱氨酶和完全蛋白酶抑制剂混合片剂购自Boehringer Mannheim Corp.(Indianapolis，IN)。来自分别稳定表达人腺苷2a[RB-HA2a]，腺苷2b[RB-HA2b]或腺苷3[RB-HA3]受体亚型的HEK-293细胞的膜购自Receptor Biology(Beltsville，MD)。细胞培养试剂得自LifeTechnologies(Grand Island，NY)，血清得自Hyclone(Logan，UT)。
酵母株：上述Saccharomyces cerevisiae菌株CY12660[far1*1442tbt1-1 fus1-HIS3 can1 ste14∷trp1∷LYS2 ste3*1156 gpa1(41)-Gαi3 lys2ura3 leu2 trp1：his3；LEU2 PGKp-Mfα1Leader-hA1R-PHO5term2mu-orig REP3 Ampr]和CY8362[gpa1p-rGαSE10K far1*1442 tbt1-1fus1-HIS3 can1 ste14∷trp1：LYS2 ste3*1156 lys2 ura3 leu2 trp1 his3；LEU2 PGKp-hA2aR 2mu on REP3 Ampr]。
酵母培养：将转化的酵母在补加2％葡萄糖的Leu-Trp(LT)培养基(pH5.4)中生长。为制备膜，将250ml的LT培养基用得自30ml过夜培养物的1-2×106个细胞/ml的起始滴定接种，并在30℃在持续供氧下转动温育。在生长16小时后，通过离心收获细胞并如下述制备膜。
哺乳动物组织培养：将稳定表达人腺苷2a受体亚型的HEK-293细胞(Cadus克隆#5)，在补加10％胎牛血清和1×青霉素/链霉素的Dulbeco′s极限必需培养基(DMEM)中，在选择性压力下，使用500mg/ml G418抗生素，在37℃在增湿的5％CO2大气环境中生长。
酵母细胞膜制备：在过夜温育后在Sorvall RT6000离心器中以2,000×g离心收获250ml培养物。在冰冻的水中洗涤细胞，在4℃离心，并将沉淀再悬浮于补加蛋白酶抑制剂混合片剂(1片/25ml缓冲液)的10ml冰冻的裂解缓冲液[5mM Tris-HCl，pH7.5；5mM EDTA；和5mM EGTA]。
将玻珠(17g；Mesh 400-600；Sigma)加入该悬浮液中，并在4℃强力转动5分钟而破坏细胞。将匀浆用加上蛋白酶抑制剂的另外30ml裂解缓冲液稀释，在3,000×g离心5分钟。随后，将膜在36,000×g(Sorvall RC5B，SS34型转子)沉淀45分钟。将所得膜沉淀再悬浮于补加蛋白酶抑制剂混合片剂(1片/50ml缓冲液)的5ml膜缓冲液中[50mM Tris-HCl，pH7.5；0.6mM EDTA；和5mM MgCl2]，贮存于-80℃以进行进一步实验。
哺乳动物细胞膜制备：如先前所述制备HEK-293细胞膜(Duzic E等，生物化学267，9844-9852，2992)。简而言之，将细胞用PBS洗涤并用乳胶刮刷收获。将细胞在4℃在Sorvall RT6000离心机中以200×g离心沉淀。将沉淀物在4℃再悬浮于5ml/平皿裂解缓冲液中(5mM Tris-HCl，pH7.5；5mM EDTA；5mM EGTA；0.1mM苯甲基磺酰氟，10mg/ml胃酶抑制剂A；和10mg/ml抑酶肽)，在匀质器中匀浆。然后将细胞裂解物在36,000×g(Sorvall RC5B，type SS34 rotor)离心45分钟，并将沉淀再悬浮于5ml膜缓冲液中[50mM Tris-HCl，pH7.5；0.6mM EDTA；5mM MgCl2；0.1mM苯甲基磺酰氟，10mg/ml胃酶抑制剂A；和10mg/ml抑酶肽]，在-80℃贮存以进行进一步实验。
使用基于Bradford染料结合程序(Bradford，M.，分析生物化学72：248(1976))的Bio-Rad蛋白质分析试剂盒，确定酵母和哺乳动物细胞膜中总蛋白质浓度。
腺苷1受体亚型饱和及竞争放射性配体结合：使用拮抗剂[3H]DPCPX作为放射性配体进行在用人A1受体亚型转化的酵母细胞膜上的饱和及竞争结合。将膜在结合缓冲液中在1.0mg/ml浓度稀释[50mM Tris-HCl，pH7.4；含有10mM MgCl2；1.0mM EDTA；0.25％BSA；2U/ml腺苷脱氨酶和1片蛋白酶抑制剂混合片剂/50ml]。
在饱和结合中，将膜(50μg/孔)用增加浓度的[3H]DPCPX(0.05-25nM)，在终体积100ml的结合缓冲液中，在25℃，在有或无10μM未标记的XAC情况下，在96孔微滴定平板中温育1小时。
在竞争结合中，将膜(50μg/孔)用[3H]DPCPX(1.0nM)，在终体积100ml的结合缓冲液中，在25℃，在有或无10μM未标记的XAC或增加浓度的竞争化合物的情况下，在96孔微滴定平板中温育。
腺苷2a受体亚型竞争放射性配体结合：使用兴奋剂[3H]CGS-21680作为放射性配体进行在稳定表达人A2a受体亚型的HEK293细胞膜上的竞争结合。
将膜在结合缓冲液中在0.2mg/ml浓度稀释[50mM Tris-HCl，pH7.4；含有10mM MgCl2；1.0mM EDTA；0.25％BSA；2U/ml腺苷脱氨酶和1片蛋白酶抑制剂混合片剂/50ml]。将膜(10μg/孔)用[3H]CGS-21680(100nM)，在终体积100ml的结合缓冲液中，在25℃，在有或无50μM未标记的NECA或增加浓度的竞争化合物的情况下，在96孔微滴定平板中，温育1小时。
腺苷3受体竞争放射性配体结合：使用兴奋剂[125I]AB-MECA作为放射性配体进行在稳定表达人A3受体亚型的HEK293细胞膜上的竞争结合。将膜在结合缓冲液中在0.2mg/ml浓度稀释[50mMTris-HCl，pH7.4；含有10mM MgCl2；1.0mM EDTA；0.25％BSA；2U/ml腺苷脱氨酶和1片蛋白酶抑制剂混合片剂/50ml]。将膜(10μg/孔)用[125I]AB-MECA(0.75nM)，在终体积为100ml的结合缓冲液中，在25℃，在有或无10μM未标记的IB-MECA或增加浓度的竞争化合物的情况下，在96孔平板中温育1小时。
在温育末期，加入补加10mM MgCl2冰冻的50mM Tris-HCl(pH7.4)缓冲液中止A1，A2a和A3受体亚型放射性配体结合分析，随后经过预先在Filtre-maze 196细胞收获仪(Packard)中0.5％聚乙烯亚胺中浸湿的玻璃纤维滤膜(96-孔GF/B UniFilters，Packard)快速过滤。将滤膜平板用50μl/孔闪烁液(MicroScint-20，Packard)包被干燥，并在TopCount(Packard)中计数。一式三份进行分析。在A1R，A2aR和A3R结合分析中，非特异性结合分别为总结合的5.6±0.5％，10.8±1.4％及15.1±2.6％。
腺苷2b受体亚型竞争放射性配体分析：使用A1受体拮抗剂[3H]DPCPX作为放射性配体进行在稳定表达人A2b受体亚型的HEK293细胞膜上的竞争结合。
将膜在结合缓冲液中在0.3mg/ml浓度稀释[10mM Hepes-KOH，pH7.4；含有1.0mM EDTA；0.1mM苯甲脒和2U/ml腺苷脱氨酶]。将膜(15μg/孔)用[3H]DPCPX(15nM)，在终体积为100ml的结合缓冲液中，在25℃，在有或无10μM未标记的XAC或增加浓度的竞争化合物的情况下，在96孔平板中温育1小时。
在温育末期，加入10mM Hepes-KOH(pH7.4)缓冲液中止分析，随后经过预先在Filtre-maze 196细胞收获仪(Packard)中0.5％聚乙烯亚胺中浸湿的玻璃纤维滤膜(96-孔GF/B UniFilters，Packard)快速过滤。将滤膜平板用50μl/孔闪烁液(MicroScint-20，Packard)包被干燥，并在TopCount(Packard)中计数。一式三份进行分析。非特异性结合为总结合的14.3±2.3％。
[3H]DPCPX；[3H]CGS-21680与[125I]AB MECA的特异性结合解释为总结合与非特异性结合之间的不同。所述化合物的抑制百分率根据总结合计算。竞争数据通过适于一个位置模型的迭代曲线分析，KI值从IC50值中计算(Cheng and Prusof，Biochem.Pharmacol.22，3099-3109，1973)，使用GraphPad Prim 2.01软件。
结果
一些细胞表面受体的初级功能是识别适当配体。因此，我们测定配体结合亲和性以确定在酵母中表达的腺苷1受体亚型的功能整合。制备自用人腺苷1受体亚型构建体转化的Saccharomyces cerevisiae的粗制膜呈现特异性可饱和结合〔3H〕DPCPX，KD为4.0±0.19nM。该KD和Bmax值从饱和等温线中计算，数据的Scatchard转化表示一个单一类别的结合位点。酵母膜制品中腺苷结合位点的密度经估算为716.8±43.4fmol/mg膜蛋白。
人A1受体亚型转化的重组酵母细胞的药物学亚型特性，用以期望的级别与[3H]DPCPX竞争的亚型选择性腺苷配体(XAC，DPCPX；CGS-15943；化合物600；化合物1002；NECA，(R)-PIA；IB-MECA及Alloxazine)进行研究。用这些化合物记录的置换曲线示出所有配体的典型陡度，而且每个配体的数据可以通过单位点配合(one-site fit)而模型化。从曲线中评估各个化合物的表观解离常数(表5)与公布的得自其它来源的受体的该数值一致。
表5：人A1受体亚型转化的酵母细胞膜的Ki值
配体                                    K1(nM)
XAC                                     5.5
DPCPX                                   7.1
CGS-1594                                10.8
NECA                                    179.6
(R)-PIA                                 56.3
IB-MECA                                 606.5
Alloxazine                              894.1
化合物600                               13.9
化合物1002                              9.8
表6-12表明本发明脱氮嘌呤的效力和结构活性。表13和14表明人腺苷受体位点的选择性可以通过调节脱氮嘌呤结构的功能性而达到。表14还表明令人惊奇的发现，即本发明所述化合物具有亚纳摩尔活性，且与表13所示化合物相比具有较高的A2b受体选择性。
        表6：N6取代基的作用
Figure A0182246001431
        表7：C2取代基的作用
Figure A0182246001442
Figure A0182246001451
        表8：吡咯环取代基的作用
Figure A0182246001462
Figure A0182246001471
        表9
Figure A0182246001472
        表10：N6取代基的作用
Figure A0182246001481
Figure A0182246001482
Figure A0182246001491
        表11：N6取代基的作用
Figure A0182246001501
Figure A0182246001502
Figure A0182246001511
        表12：“逆(retro)-酰胺”类似物
Figure A0182246001521
Figure A0182246001522
Figure A0182246001531
        表13：选择性腺苷拮抗剂的概况图
Figure A0182246001532
Figure A0182246001561
12-噻吩基-2-基；2C5-H；3水溶性的；4R5和R6是氢；5R3是3-氟苯基；6R3是3-氯苯基；7R3是4-吡啶基；8在10μM的％活性。
        表14：选择性A2b拮抗剂的概况
Compound            XR1          R2       Binding    Data      K1        (nM)
                                            A1        A2A      A2B       A3
1400                -O-Ph         Me        41.7       21        10.3       14.6
1401                -O-Ph(p)F     Me        33         58        8.8        18
1402                -O-Ph(p)Cl    Me        825        591       22         60
1403                -N-pyridin-   Me        60         41        18         48
                    2-one
1404                -NH-Ph        Me        49          31       4.6        57
        表15：腺苷A1受体选择性化合物
       *比其它三种亚型的选择性至少高10倍
Figure A0182246001581
Figure A0182246001601
以下涉及特异于A2a受体的化合物
发明概述：
本发明也基于选择性结合腺苷A2a受体的化合物，从而治疗与A2a腺苷受体相关的疾病，通过为治疗对象施用治疗有效量的这种化合物而进行。所治疗的疾病与例如中枢神经系统疾病，心血管疾病，肾脏疾病，炎症疾病，胃肠道疾病，眼部疾病，过敏性疾病或呼吸系统疾病相关。
本发明还涉及一种具有以下结构的化合物：
Figure A0182246001611
其中NR1R2是一个取代或未取代的4-8元环；
其中Ar是一个取代或未取代的4-6元环；
其中R4是H，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，氨基，取代的芳基，其中所述取代的烷基是C(R8)(R9)XR6，其中X是O，S或NR7，其中R8和R9各自独立地是H或烷基，其中R6和R7各自独立地是烷基或环烷基，或者R6，R7和氮一起形成一个取代或未取代的4-7元环；
其中R5是H，烷基，取代的烷基，或环烷基；
条件是NR1R2不是3-乙酰氨基哌嗪，3-羟基吡咯烷，3-甲氧基羰基甲基吡咯烷，3-氨基羰基甲基，或吡咯烷；条件是仅当Ar是4-吡啶基时，NR1R2是3-羟甲基哌嗪。
本发明还涉及一种抑制细胞中A2a腺苷受体活性的方法，包括将所述细胞与上述化合物相接触。
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
Figure A0182246001621
其中NR1R2是取代或未取代的4-8元环；
其中Ar是取代或未取代的4-6元环；
其中R4是H，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，氨基，取代的芳基，其中所述取代的烷基是-C(R8)(R9)XR6，其中X是O，S或NR7，其中R8和R9各自独立地是H或烷基，其中R6和R7各自独立地是烷基或环烷基，或者R6，R7和氮一起形成取代或未取代的4-7元环，
其中R5是H，烷基，取代的烷基或环烷基；
条件是NR1R2不是3-乙酰氨基哌嗪，3-羟基吡咯烷，3-甲氧基羰基甲基吡咯烷，3-氨基羰基甲基，或吡咯烷；条件是仅当Ar是4-吡啶基时，NR1R2是3-羟甲基哌嗪。
在所述化合物的一个实施方案中，Ar是取代或未取代的4-6元环，苯基，吡咯，噻吩，呋喃，噻唑，咪唑，吡唑，1，2，4-三唑，嘧啶，2(1H)-吡啶酮，4(1H)-吡啶酮，吡嗪，嘧啶，哒嗪，异噻唑，异噁唑，唑，四唑，萘，1，2，3，4-四氢化萘，1，5-二氮杂萘，苯并呋喃，苯并噻吩，吲哚，2，3-二氢吲哚，1H-吲哚，二氢吲哚，苯并吡唑，1，3-苯并二唑，苯并噁唑，嘌呤，香豆素，色酮，喹啉，四氢喹啉，异喹啉，苯并咪唑，喹唑啉，吡唑并[2，3-b]吡嗪，吡唑并[3，4b]吡嗪，吡唑并[3，2-c]哒嗪，purido[3，4-b]-嘧啶，1H-吡唑[3，4-d]嘧啶，蝶啶，2(1H)-喹诺酮，1(2H)-异喹诺酮，1，4-苯并异噁嗪，苯并噻唑，喹喔啉，喹啉-N-氧化物，异喹啉-N-氧化物，喹喔啉-N-氧化物，喹唑啉-N-氧化物，苯并噁嗪，2，3-二氮杂萘，肉啉，或具有以下结构：
其中Y是碳或氮；其中R3是H，取代或未取代的烷基，取代或未取代的芳基，卤素，甲氧基，甲基氨基，甲基硫。
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
其中m是1或2；其中RA和RB各自独立地是H，-OH，-CH2OH，-CH2CH2OH，-C(＝O)NH2，杂原子，或-C(＝O)NR3R3’；其中R3是芳基，取代的芳基，或杂芳基；其中R3′是烷基，或XR3″，其中X是O，或者N和R″是取代的烷基或芳基。
在所述化合物的另一个实施方案中，R1R2N是(D)-2-氨基羰基吡咯烷，(D)-2-羟甲基吡咯烷，(D)-2-羟甲基-反式-4-羟基吡咯烷，哌嗪(piperazino)，或3-羟甲基piperadino。
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
其中m是0，1，2或3；其中Y是O，S或NR，其中R是RA或RB；其中RA和RB各自独立地是H，OH，-CH2OH，-CH2CH2OH，-C(＝O)NH2，杂原子，或-C(＝O)NR3R3′；其中R3是芳基，取代的芳基，或杂芳基；其中R3’烷基，或XR3″，其中X是O，或者N和R”是取代的烷基或芳基。
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246001642
                    (化合物1600)
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
                     (化合物1601)
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
                (化合物1602)
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
                (化合物1603)
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246001661
                (化合物1604)
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246001662
                (化合物1605)
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
                    (化合物1606)
在所述化合物的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246001672
                    (化合物1607)
在所述化合物的又一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
在所述化合物的再一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
本发明还提供了具有以下结构(V)的化合物：
其中R是H或甲基。
在化合物V的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
                    (化合物1608)
在化合物V的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
本发明还提供了一种治疗与A2a腺苷受体相关疾病的方法，包括为所述治疗对象施用治疗有效量的化合物IV或V。
在所述方法的一个实施方案中，所述化合物通过刺激腺苷酸环化酶治疗所述疾病。
在所述方法的另一个实施方案中，所述治疗对象是哺乳动物。
在所述方法的另一个实施方案中，所述哺乳动物是人。
在所述方法的另一个实施方案中，所述A2a腺苷受体与Parkinson′s病，及与运动能力，血管舒张，血小板抑制，中性粒细胞超氧化物产生，认知疾病或老年痴呆相关。
与腺苷A1，A2a，A2b和A3受体相关疾病见WO 99/06053和WO-09822465，WO-09705138，WO 09511681，WO-09733879，JP-09291089，P-T/US98/16053及美国专利No.5,516,894所述，在此以其全部内容并入参考。
本发明还提供了化合物IV或V的一种水溶性前体药物，其中所述水溶性前体药物在体内代谢产生一种活性药物，其选择性抑制A2a腺苷受体。
在所述前体药物的一个实施方案中，所述前体药物在体内通过酯酶催化的水解进行代谢。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含所述前体药物和一种药物学可接受载体。
本发明还提供了一种抑制细胞中A2a腺苷受体活性的方法，包括将所述细胞与化合物IV或V接触。
在所述方法的一个实施方案中，所述化合物是所述A2a腺苷受体拮抗剂。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述药物组合物是眼科配方。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述药物组合物是眼周，眼球后或眼内注射配方。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述药物组合物是系统应用配方。
本发明还提供了一种治疗胃肠道疾病的方法，包括施用有效量的化合物IV或V。
在所述方法的一个实施方案中，所述疾病是腹泻。
在所述方法的另一个实施方案中，所述治疗对象是人。
在所述方法的另一个实施方案中，所述化合物是A2a腺苷受体拮抗剂。
本发明还提供了一种治疗呼吸系统疾病的方法，包括为治疗对象施用有效量的化合物IV或V。
在所述方法的一个实施方案中，所述疾病是哮喘，慢性阻塞性肺部疾病，过敏性鼻炎，或上呼吸道疾病。
在所述方法的另一个实施方案中，所述治疗对象是人。
在所述方法的另一个实施方案中，所述化合物是A2a腺苷受体拮抗剂。
本发明还提供了一种治疗眼部疾病的方法，包括为治疗对象施用有效量的化合物IV或V。
在所述方法的一个实施方案中，所述疾病包括视网膜或视神经乳头损害。
在所述方法的另一个实施方案中，所述损害是急性或慢性的。
在所述方法的另一个实施方案中，所述损害是青光眼，水肿，缺血，缺氧或外伤所致。
在所述方法的另一个实施方案中，所述治疗对象是人。
在所述方法的另一个实施方案中，所述化合物是A2a腺苷受体拮抗剂。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的化合物IV或V，及一种药物学可接受载体。
在所述药物组合物的一个实施方案中，所述治疗有效量是有效治疗Parkinson′s病及与运动能力，血管舒张，血小板抑制，中性粒细胞过氧化物产生，认知疾病，或老年痴呆相关的疾病。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述药物组合物是眼科配方。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述药物组合物是一种，眼球后或眼内注射配方。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述药物组合物是系统应用配方。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述药物组合物是外科手术灌注溶液。
本发明还提供了一种组合治疗Parkinson′s病的方法，包含化合物IV或V，及任一种多巴胺增强剂。
本发明还提供了一种组合治疗癌症的方法，包含化合物IV或V，及任一种胞毒剂。
本发明还提供了一种组合治疗青光眼的方法，包含化合物IV或V，及一种前列腺素兴奋剂，一种muscrinic兴奋剂，或一种β-2拮抗剂。
本发明还提供了一种治疗与A2a腺苷受体相关疾病的包装的药物组合物，其包括：(a)一个装有治疗有效量化合物IV或V的容器，及(b)使用所述化合物治疗所述疾病的说明书。
本发明还提供了一种制备化合物IV的方法，包括如下步骤：
a)将
Figure A0182246001731
与
Figure A0182246001732
反应，以提供
其中P是一个可除去的保护基团；
b)在环化条件下处理a)步骤的产物，以提供
Figure A0182246001734
c)在适当条件下处理b)步骤的产物以提供
Figure A0182246001735
d)用NHR1R2处理c)步骤的氯化产物以提供
其中NR1R2是取代的或未取代的4-8元环；其中Ar是取代或未取代的4-6元环；其中R4是H，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，氨基，取代的芳基，其中所述取代的烷基是-C(R8)(R9)XR6，其中X是O，S或NR7，其中R8和R9各自独立地是H或烷基，其中R6和R7各自独立地是烷基或环烷基，或者R6，R7和氮一起形成一个取代或未取代的4-7元环；其中R5是H，烷基，取代的烷基，或环烷基；条件是NR1R2不是3-乙酰氨基哌嗪，3-羟基吡咯烷，3-甲氧基羰基甲基吡咯烷，3-氨基羰基甲基，或吡咯烷；条件是仅当Ar是4-吡啶时，NR1R2是3-羟甲基piperadino。
本发明还提供了一种制备化合物V的方法，包括如下步骤：
a)将 与
Figure A0182246001742
反应，以提供
Figure A0182246001743
其中P是一个可除去的保护基团；
b)在环化条件下处理a)步骤的产物，以提供
c)在适当条件下处理b)步骤的产物以提供
d)首先用二甲胺和甲醛处理c)步骤氯化产物，然后用N-甲基苄胺处理，最后用NH2R1处理，以提供
Figure A0182246001752
其中R1是乙酰氨基(acetomido)乙基；其中Ar是4-吡啶基；其中R是H，或甲基；其中R5是N-甲基-N-苯甲基氨甲基
本文所用短语“化合物是A2a选择性的”是指所述化合物与腺苷A2a受体的结合常数比与腺苷A1，A2b或A3的结合常数至少高5倍。
本发明还通过以下非限制性实施例得以进一步例证。本说明书中引用的所有参考文献，待审专利申请，及公布的专利申请的内容，包括在背景章节中引用的那些文献，在此均并入参考。应理解实施例中使用的模型是公认的模型，而且在这些模型中的效力可以推断在人体内的效力。
本发明通过以下实验详述得以更好说明。然而，本领域技术人员易于意识到在此所揭示的特殊方法和结果只是例证了本发明，在后文的权利要求书中更充分阐述了本发明。
实施例22：腺苷A2a拮抗剂化合物1601，1602和1603的合成
原文第194页
化合物26                       化合物27                     化合物28                       化合物1601
将化合物26(10.93g，50.76mmol)溶解于DMF(67mL)中。相继加入4-脒基嘧啶盐酸盐(8.0g，50.76mmol)和DBU(15.4g，101.5mmol)，并将反应加热至85℃。22小时后，将反应冷却至室温并真空除去DMF。将黑色油用2M HCl(80mL)稀释。保持反应。2小时后，将该溶液冷却至10℃并过滤。将固体用冷水洗涤并干燥，产生7.40g黄色固体化合物27(69％)，1H-NMR(200MHz，d6-DMSO)d6.58(s，1H)，7.27(s，1H)，8.53(d，2H，J＝5.6)，9.00(d，2H，J-＝5.2Hz)，12.35(brs，1H).MS(ES)：212.8(M++1)。
将化合物27(7.4mmol，29.8mmol)用POCl3稀释并加热至105℃。18小时后，将反应冷却至室温并真空除去POCl3。将稠厚的黑色油用MeOH(75mL)稀释，随后用乙醚(120mL)稀释。将无定形红色固体过滤并用乙醚洗涤，产生3.82g红色固体。该粗制的化合物28为大约80％纯度，在接下来的反应中不用进一步纯化而使用。1H-NMR(200MHz，d6-DMSO)d 6.58(s，1H)，7.27(s，1H)，8.53(d，2H，J＝5.6)，9.00(d，2H，J＝5.2Hz)，12.35(brs，1H).MS(ES)：212.8(M++1)。
化合物1601：将DMSO(5mL)和D-prolinol(500mg，4.94mmol)加入化合物28(500mg，2.17mmol)中。将反应加热至120℃。18小时后，将反应冷却至室温，并用EtOAc和H2O稀释。分离各层并将水相层用EtOAc萃取(2×)。组合的有机层用H2O洗涤(2×)，用盐水洗涤，经过MgSO4干燥，过滤并浓缩产生200mg褐色固体。将该固体从EtOAc中再结晶，产生82mg褐色固体(13％)。1H-NMR(200MHz，d6-DMSO)d 2.05(m，4H)，3.43(m，1 H)，3.70-4.00(m，3H)，4.50(brs，1H)，4.92(brs，1H)，6.62(m，1H)，7.22(m，1H)，8.22(d，2H，J＝6.0Hz)，6.64(d，2H，J-6.2Hz)，MS(ES)：296.0(M+1)，mp＝210-220℃(分解)。
化合物1602：层析(SiO2，9∶1 CHCl3/MeOH)产生10mg褐色固体(2％)。1H-NMR(d6-DMSO)d 2.00-2.50(m，4H)，4.05(m，1H)，4.21(m，1H)，6.71(d，1H，J＝3.2Hz)，7.18(d，1H，J＝3.2Hz)，8.37(d，2H，J＝4.8Hz)，8.56(d，2H，J＝5.0Hz).MS(ES)：309.1(M++1)。
化合物1603：层析(SiO2，20∶1己烷/EtOAc)产生135mg褐色固体(53％)。1H-NMR(d6-DMSO)d 2.00(m，4H)，3.43(brs，1H)，3.74(brs，2H)，3.87(brs，1H)，4.49(brs，1H)，4.93(m，1H)，6.56(m，1H)，7.12(m，1H)，7.40(m，3H)，8.34(m，2H)，11.62(brs，1H).MS(ES)：295.1(M++1)。
化合物1605：向50mL RBF中，将60mg的2-(4′-吡啶基)-4-氯嘧啶吡咯盐酸盐溶解于2mL无水DMSO中。向其中加入3-(R)-羟基-(D)-prolinol TFA盐(380mg)和500mg碳酸氢钠。然后将此混合物用氮气闪光5分钟，并加热至130℃。2小时后，将反应冷却至室温并真空除去DMSO。残渣在EtOAc(15mL)和饱和的碳酸氢钠水溶液(15mL)之间分隔。分离有机层并用盐水(15mL)洗涤，经过Na2SO4干燥。除去溶剂后，将粗制产物通过制备TLC(CH2Cl2/MeOH＝95/5)纯化，产生35mg产物(50％)。1H-NMR(200MHz，CDCl3)(2.3-2.5(1H)，3.4-3.8(3H)，4.4-4.6(2H)，6.4(1H)；7.1(1H)；8.2(d，2H)；8.7(d，2H)；11.0(1H).MS(ES)：3 12(M++1)。
实施例23：腺苷A2a拮抗剂化合物1606的合成
     化合物28                            化合物29                                  化合物1606
将化合物28(200mg)用DMF(30mL)，1，1-二甲基甘氨酸甲酯(2ml水中的73mg盐酸盐)和500mg碳酸氢钠处理。18小时后，真空除去DMF。残渣在EtOAc(30mL)和饱和的碳酸氢钠水溶液(15mL)之间分隔。有机层用盐水(15mL)洗涤，经过硫酸钠干燥，过滤并浓缩。层析(SiO2，10∶4己烷/EtOAc)产生150mg纯化产物—化合物29(69％)。1H-NMR(200MHz，CDCl3)，(1.4(s，6H)，3.8(s，3H)；3.9(s，2H)；6.4(s，1H)；7.4-7.5(m，3H)；8.4(m，2H)；9.8(s，1H)。
化合物1606：
程序同化合物1605(72％)。1H-NMR(200MHz，CDCl3)，(1.3(s，6H)，1.7-1.9(m，2H)；2.05-2.30(m，2H)；3.6-4.1(m，11H)；4.80-4.95(m，1H)；6.4(s，1H)；7.4-7.6(m，3H)；8.3-8.4(d，J＝8.5Hz，2H)，10(s，1H).MS(ES)：424.0(M++1)。
以下化合物可以用相同方式合成。
化合物1600：(51％).MS(ES)：326.0(M++1)。
化合物1607：1H-NMR(200MHz，CDCl3)，(1.40-1.80(m，5H)，2.80-3.50(m，3H)，4.60-4.80(m，3H)，6.66(d，1H，J＝6.2Hz)，7.26(m，1H)，8.21(d，2H，J＝6.3Hz)，8.65(d，2H，J＝5.8Hz)，11.90(s，1H).MS(ES)：310.1(M++1)。
化合物1608：(64％).1H-NMR(200MHz，d6-DMSO)，(1.75(s，3H)，2.11(s，3H)，2.29(s，3H)，3.56(m，6H)，7.23-7.41(m，5H)，8.00(brs，1H)，8.23(d，2H，J＝6.0Hz)，8.63(d，2H，J＝5.4Hz)，8.82(brs，1H)，11.56(brs，1H).MS(ES)：444.0(M++1)。
化合物1604：1H-NMR(200MHz，CD3OD)(3.40(m，4H)，4.29(m，4H)，6.99(s，1H)，7.5-7.2(m，3H)，7.90(d，2H)，8.39(d，2H)，8.61(d，2H).MS(ES)：357.0(M++1)。
表16：腺苷A2a受体选择性化合物
*是其它三种亚型选择性的至少5倍
Figure A0182246001791
Figure A0182246001821
以下涉及特异于A3受体的化合物
发明概述
本发明还基于选择性结合A3受体的化合物，从而治疗与A3腺苷受体相关的疾病，通过为治疗对象施用治疗有效量的这种化合物而进行。所治疗的疾病与例如哮喘，过敏性鼻炎，花粉热，血清病，过敏性脉管炎，遗传性过敏性皮炎，皮炎，银屑病，湿疹，先天肺纤维化，嗜酸细胞性膀胱炎，慢性呼吸道炎症，嗜碱细胞增多综合征，嗜碱细胞性胃肠炎，水肿，风疹，嗜碱细胞性心肌病，嗜碱细胞增多性发作性血管水肿，炎症性肠病，溃疡性结肠炎，过敏性肉芽肿病，癌扩散，嗜碱细胞性肉芽肿病，家族性组织细胞增多症，高血压，肥大细胞脱粒，肿瘤，心肌缺氧，脑缺血，多尿，肾衰竭，神经失调，精神失调，认知疾病，心肌缺血，支气管狭窄，关节炎，自身免疫系统疾病，Crohn′s病，Grave′s病，糖尿病，多发性硬化，贫血，银屑病，不育，红斑狼疮，再灌注损伤，脑动脉狭窄，过敏性递质释放，硬皮病，中风，全心缺血，中枢神经病变，心血管疾病，肾脏疾病，炎症疾病，胃肠道疾病，眼部疾病，过敏性疾病，呼吸系统疾病，或免疫学疾病。
本发明还涉及具有以下结构的一种化合物：
Figure A0182246001831
其中R1是H及R2是环丙基甲基氨基羰基乙基，顺式-3-羟基环戊基，乙酰氨基丁基，甲基氨基羰基氨基丁基，乙基氨基羰基氨丙基，甲基氨基羰基氨基丙基，2-乙酰氨基-3-甲基丁基，N，N-二乙基氨基羰基氨乙基，硫代乙酰氨基乙基，3-氨基乙酰氧基环戊基，3-羟基环戊基，2-吡咯基羰基氨乙基，2-咪唑酮乙基，1-氨基羰基-2-甲基丙基，1-氨基羰基-2-苯乙基，3-羟基氮杂环丁烷，2-咪唑乙基，乙酰氨基乙基，1-(R)-苯基-2-羟乙基，N-甲基氨基羰基吡咯基-2-甲基，或者R1，R2和氮一起是3-乙酰氨基piperadine，3-羟基吡咯烷，3-甲氧基羰基甲基吡咯烷，3-氨基羰基甲基吡咯烷，或3-羟甲基piperadino。
其中R3是取代或未取代4-6元环，吡咯，噻吩，呋喃，噻唑，咪唑，吡唑，1，2，4-三唑，嘧啶，2(1H)-吡啶，4(1H)-吡啶，吡嗪，嘧啶，哒嗪，异噻唑，异噁唑，唑，四唑，萘，1，2，3，4-四氢化萘，1，5-二氮杂萘，苯并呋喃，苯并噻吩，吲哚，2，3-二氢吲哚，1H-吲哚，二氢吲哚，苯并噁唑，1，3-苯并二唑，苯并噁唑，嘌呤，香豆素，色酮，喹啉，四氢喹啉，异喹啉，苯并咪唑，喹唑啉，吡啶并(pyrido)[2，3-b]吡嗪，吡啶并[3，4-b]吡嗪，吡啶并[3，2-c]哒嗪，purido[3，4-b]-嘧啶，1H吡唑[3，4-d]嘧啶，蝶啶，2(1H)-喹诺酮，1(2H)-异喹诺酮，1，4-苯并异噁嗪，苯并噻唑，喹喔啉，喹啉-N-氧化物，异喹啉-N-氧化物，喹喔啉-N-氧化物，喹唑啉-N-氧化物，苯并噁嗪，2，3-二氮杂萘，或肉啉；
其中R5是H，烷基，取代的烷基，或环烷基；其中R6是H，烷基，取代的烷基，芳基，或取代的芳基。
本发明还涉及一种抑制细胞内A3腺苷受体活性的方法，包括将所述细胞与上述化合物接触。
制备本发明脱氮嘌呤中间产物的典型合成方案见以下方案I所示。
本发明还提供了一种制备化合物IV的方法，包括：
a)将
Figure A0182246001851
与
Figure A0182246001852
  反应，以提供
Figure A0182246001853
其中P是一个可除去的保护基团；
b)在环化条件下处理a)步骤产物，以提供
c)在适当条件下处理b)步骤产物，以提供
d)用NHR1R2处理c)步骤氯化产物，以提供
Figure A0182246001856
其中R1是H及R2是环丙基甲基氨基羰基乙基，顺式-3-羟基环戊基，乙酰氨基丁基，甲基氨基羰基氨基丁基，乙基氨基羰基氨基丙基，甲基氨基羰基氨基丙基，2-乙酰氨基-3-甲基丁基，N，N-二乙基氨基羰基氨基乙基，硫代乙酰氨基乙基，3-氨基乙酰氧基环戊基，3-羟基环戊基，2-吡咯基羰基氨乙基，2-咪唑酮乙基，1-氨基羰基-2-甲基丙基，1氨基羰基-2-苯乙基，3-羟基氮杂环丁烷(azetidino)，2-咪唑基乙基，乙酰氨基乙基，1-(R)-苯基-2-羟乙基，N-甲基氨基羰基吡啶基-2-甲基，或者R1，R2和氮一起是3-乙酰氨基piperadino，3-羟基吡咯烷，3-甲氧基羰基甲基吡咯烷，3-氨基羰基甲基吡咯烷，或者3-羟甲基piperadino。
其中R3是取代或未取代的4-6元环；
其中R5是H，烷基，取代的烷基，或环烷基；
其中R6是H，烷基，取代的烷基，芳基或取代的芳基。
本发明还提供了一种制备化合物V的方法，包括如下步骤：
a)将
Figure A0182246001861
与 反应以提供
Figure A0182246001863
其中P是一个可除去的保护基团；
b)在环化条件下处理a)步骤产物，以提供
c)在适当条件下处理b)步骤产物，以提供
Figure A0182246001871
d)用NH2CH2(CH2)mCH2NHC(＝O)R1处理c)步骤氯化产物，以提供
其中m是0，1或2；
其中R1是环丙基甲基，甲基，甲基氨基，或氨基甲基；
其中R2是芳基，取代的芳基，杂芳基；
其中R5是H，烷基，取代的烷基，或环烷基；
其中R6是H，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，氨基，取代的芳基，其中所述取代的烷基是-C(R9)(R10)NR7R8，其中R9和R10是H或烷基，其中R7和R8各是烷基或环烷基，或者R7，R8和氮一起形成一个4-7元环。
本发明还提供了一种制备化合物VI的方法，包括：
a)将 与 反应以提供
其中P是一个可除去的保护基团；
b)在环化条件下处理a)步骤产物，以提供
c)在适当条件下处理b)步骤产物，以提供
Figure A0182246001885
d)用
Figure A0182246001886
处理c)步骤的氯化产物，以提供
其中R2是未取代的芳基，其中R5是H，烷基，取代的烷基，或环烷基；其中R6是H，烷基，取代的烷基，芳基，芳香烷基，氨基，取代的芳基，其中所述取代的烷基是-C(R9)(R10)NR7R8，其中R9和R10是H或烷基，其中R7和R8是烷基或环烷基，或者R7，R8和氮一起形成一个4-7元环。
本发明还提供了具有以下结构的一种化合物：
Figure A0182246001891
其中R1是H，R2是环丙基甲基氨基羰基乙基，顺式-3-羟基环戊基，乙酰氨基丁基，甲基氨基羰基氨基丁基，乙基氨基羰基氨基丙基，甲基氨基羰基氨基丙基，2-乙酰氨基3-甲基丁基，N，N-二乙基氨基羰基氨基乙基，硫代乙酰氨基乙基，3-氨基乙酰氧基环戊基，3-羟基环戊基，2-吡咯基羰基氨基乙基，2-咪唑酮乙基，1-氨基羰基-2-甲基丙基，1-氨基羰基-2-苯基乙基，3-羟基氮杂环丁烷，2-咪唑基乙基，乙酰氨基乙基，1-(R)-苯基-2-羟乙基，N-甲基氨基羰基吡啶基-2-甲基，或者R1，R2和氮一起是3-乙酰氨基piperadino，3-羟基吡咯烷，3-甲氧基羰基甲基吡咯烷，3-氨基羰基甲基吡咯烷，或3-羟甲基piperadino，其中R3是取代或未取代的苯，吡咯，噻吩，呋喃，噻唑，咪唑，吡唑，1，2，4-三唑，嘧啶，2(1H)-吡啶酮，4(1H)-吡啶酮，吡嗪，嘧啶，哒嗪，异噻唑，异噁唑，唑，四唑，萘，1，2，3，4-四氢化萘，1，5-二氮杂萘，苯并呋喃，苯并噻吩，吲
哚，2，3-二氢吲哚，1H吲哚，二氢吲哚，苯并吡唑，1，3-苯并
二唑，苯并噁唑，嘌呤，香豆素，色酮，喹啉，四氢喹啉，异
喹啉，苯并咪唑，喹唑啉，吡唑并[2，3-b]吡嗪，吡唑并
[3，4-b]吡嗪，吡唑并[3，2-c]哒嗪，purido[3，4-b]-嘧啶，1H
吡唑[3，4-d]嘧啶，蝶啶，2(1H)-喹诺酮，1(2H)-异喹诺酮，
1，4-苯并异噁嗪，苯并噻唑，喹喔啉，喹啉-N-氧化物，异喹
啉-N-氧化物，喹喔啉-N-氧化物，喹唑啉-N-氧化物，苯并噁
嗪，2，3-二氮杂萘，或肉啉，
其中R5是H，烷基，取代的烷基，或环烷基；其中R6是H，烷基，取代的烷基，芳基，或取代的芳基。在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
在所述化合物的另一个实施方案中，R3是苯基。
在所述化合物的另一个实施方案中，R5是H或甲基。
在所述化合物的另一个实施方案中，R6是H，甲基，苯基，3-氯苯氧基甲基，或反式-2-苯基氨基甲基吡咯烷甲基。
本发明还提供了具有以下结构的一种化合物：
其中m是0，1或2；
其中R1是环丙基甲基，甲基，甲基氨基，或氨基甲基；
其中R2是芳基，取代的芳基，或杂芳基；
其中R5是H，烷基，取代的烷基，或环烷基；
其中R6是H，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，氨基，取代的芳基，其中所述取代的烷基是-C(R9)(R10)NR7R8，其中R9和R10是H或烷基，其中R7和R8各自是烷基或环烷基，或者R7，R8和氮一起形成一个4-7元环。
在化合物V的一个实施方案中，m是0，R2是苯基。
在化合物V的另一个实施方案中，m是1，R2是苯基。
在化合物V的另一个实施方案中，m是2，R2是苯基。
在化合物V的另一个实施方案中，R5和R6是甲基。
在化合物V的另一个实施方案中，R5和R6是甲基。
在化合物V的另一个实施方案中，R5和R6是甲基。
在化合物V的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246001921
(化合物1316)
在化合物V的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246001922
(化合物1311)
在化合物V的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246001931
                     (化合物1202)
在化合物V的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246001932
                     (化合物1310)
在化合物V的另一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246001941
                     (化合物1312)
本发明还提供了具有以下结构的一种化合物：
                 (化合物609)
本发明还提供了具有以下结构的化合物VI：
Figure A0182246001951
其中R2是未取代的芳基，
其中R5是H，烷基，取代的烷基，或环烷基；
其中R6是H，烷基，取代的烷基，芳基，芳基烷基，氨基，取代的芳基，其中所述取代的烷基是-C(R9)(R10)NR7R8，其中R9和R10是H或烷基，其中R7和R8各自是烷基或环烷基，或者R7，R8和氮一起形成一个4-7元环。
在化合物VI的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246001952
                     (化合物1309)
在化合物1309的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
在化合物1309的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246001962
本发明还提供了一种具有以下结构的化合物：
Figure A0182246001971
其中R1是3-羟基环戊基乙基氨基羰基氨基丙基，N，N-二乙基氨基羰基氨基乙基，硫代乙酰胺乙基，3-氨基乙酰氧基环戊基，3-羟基环戊基，2-吡咯基羰基氨乙基，2一咪唑酮乙基，1-氨基羰基-2-甲基丙基，1氨基羰基-2-苯乙基，3-羟基氮杂环丁烷，2一咪唑基乙基，乙酰氨基乙基，1-(R)-苯基-2-羟乙基，或N-甲基氨基羰基吡唑基-2-甲基；其中R3和R4是H，取代或未取代的烷基，或芳基。
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246001972
                 (化合物1700)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246001981
                     (化合物1701)
  在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
                     (化合物1702)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
                     (化合物1704)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
                     (化合物1705)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
                     (化合物1706)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002002
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002021
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002022
                 (化合物1707)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
(化合物1708)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002032
(化合物1709)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002041
(化合物1710)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002042
(化合物1712)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002051
(化合物1713)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002061
(化合物1714)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002062
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002071
(化合物1715)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002072
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
本发明还提供了一种具有以下结构的化合物：
其中R1，R2和氮一起是3-羟吡咯烷，3-甲氧基羰基甲基吡咯烷，3-氨基羰基甲基吡咯烷，或3-羟甲基piperadino；
其中R3和R4各自独立地是H，取代或未取代的烷基，或芳基。
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002082
(化合物1711)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002091
(化合物1703)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002101
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
(化合物1716)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002112
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002121
(化合物1717)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002122
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002131
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002132
(化合物1718)
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
Figure A0182246002141
在所述化合物的一个实施方案中，所述化合物具有以下结构：
本发明还提供了一种治疗与A3腺苷受体相关疾病的方法，包括为治疗对象施用治疗有效量的任何化合物IV，V，VI，VII或VIII。
在所述方法的一个实施方案中，治疗对象是哺乳动物。
在所述方法的另一个实施方案中，所述哺乳动物是人。
在所述方法的另一个实施方案中，所述A3受体与以下疾病相关：中枢神经系统疾病，心血管疾病，哮喘，过敏性鼻炎，花粉热，血清病，过敏性脉管炎，遗传性过敏性皮炎，皮炎，银屑病，湿疹，先天肺纤维化，嗜酸细胞性膀胱炎，慢性呼吸道炎症，嗜碱细胞增多综合征，嗜碱细胞性胃肠炎，水肿，风疹，嗜碱细胞性心肌病，嗜碱细胞增多性发作性血管水肿，炎症性肠病，溃疡性结肠炎，过敏性肉芽肿病，癌扩散，嗜碱细胞性肉芽肿病，家族性组织细胞增多症，高血压，肥大细胞脱粒，肿瘤，心肌缺氧，脑缺血，多尿，肾衰竭，神经失调，精神失调，认知疾病，心肌缺血，支气管狭窄，关节炎，自身免疫系统疾病，Crohn′s病，Grave′s病，糖尿病，多发性硬化，贫血，银屑病，不育，红斑狼疮，再灌注损伤，脑动脉狭窄，过敏性递质释放，硬皮病，中风，全心缺血，中枢神经病变，心血管疾病，肾脏疾病，炎症疾病，胃肠道疾病，眼部疾病，过敏性疾病，呼吸系统疾病，或免疫学疾病。
与腺苷A1，A2a，A2b和A3受体相关的疾病见WO 99/06053和WO-09822465，WO-09705138，WO09511681，WO-09733879，JP-09291089，PCT/US98/16053及美国专利No.5,516,894所揭示，在此以其全文并入参考。
本发明还提供了化合物IV，V，VI，VII或VIII的一种水溶性前体药物；其中所述水溶性前体药物在体内代谢为活性药物，其选择性抑制A3腺苷受体。
在所述前体药物的一个实施方案中，所述前体药物通过酯酶催化的水解在体内代谢。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含所述前体药物和一种药物学可接受载体。
本发明还提供了一种抑制细胞内A3腺苷受体活性的方法，包括将所述细胞与任一种化合物IV，V，VI，VII或VIII接触。
在所述方法的一个实施方案中，所述化合物是所述A3腺苷受体拮抗剂。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述药物组合物是眼科配方。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述药物组合物是眼周，眼球后或眼内注射配方。
在所述药物组合物的另一个实施方案中，所述药物组合物是系统应用配方。
本发明还提供了抑制治疗胃肠道疾病的方法，包括为治疗对象施用治疗有效量的化合物IV，V，VI，VII或VIII。
在所述方法的一个实施方案中，所述疾病是腹泻。
在所述方法的另一个实施方案中，所述治疗对象是人。
在所述方法的另一个实施方案中，所述化合物是A3腺苷受体拮抗剂。
本发明还提供了一种治疗呼吸系统疾病的方法，包括为治疗对象施用治疗有效量的化合物IV，V，VI，VII或VIII。
在所述方法的一个实施方案中，所述疾病是哮喘，慢性阻塞性肺部疾病，过敏性鼻炎，或上呼吸道疾病。
在所述方法的另一个实施方案中，所述治疗对象是人。
在所述方法的另一个实施方案中，所述化合物是A3腺苷受体拮抗剂。
本发明还提供了一种治疗眼部损害的方法，包括为治疗对象施用治疗有效量的化合物IV，V，VI，VII或VIII。
在所述方法的一个实施方案中，所述损害包括视网膜或视神经乳头损害。
在所述方法的另一个实施方案中，所述损害是急性或慢性的。
在所述方法的另一个实施方案中，所述损害是青光眼，水肿，缺血，缺氧或外伤所致。
在所述方法的另一个实施方案中，所述治疗对象是人。
在所述方法的另一个实施方案中，所述化合物是A3腺苷受体拮抗剂。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的任一种化合IV，V，VI，VII或VIII，及一种药物学可接受载体。
在所述药物组合物的一个实施方案中，所述治疗有效量是有效治疗呼吸疾病或胃肠道疾病的数量。
在所述药物组合物的一个实施方案中，所述胃肠道疾病是腹泻。
在所述药物组合物的一个实施方案中，所述呼吸疾病是哮喘，过敏性鼻炎，或慢性阻塞性肺部疾病。
在所述药物组合物的一个实施方案中，所述药物组合物是眼科配方。
在所述药物组合物的一个实施方案中，所述是眼周，眼球后或眼内注射配方。
在所述药物组合物的一个实施方案中，所述药物组合物是系统应用配方。
在所述药物组合物的一个实施方案中，所述药物组合物是外科手术灌注溶液。
本发明还提供了一种治疗与A3腺苷受体相关疾病的包装的药物组合物，其包含：(a)一个装有治疗有效量的任一种化合物IV，V，VI，VII或VIII的容器；及(b)使用所述化合物治疗所述疾病的说明书。
以式IV，V，VI，VII和VIII表示的化合物可以通过方案I-IX合成。
本文所用短语“化合物是A3选择性的”是指该化合物与腺苷A3受体的结合常数是与腺苷A1，A2a或A2b结合常数的至少10倍。
本发明通过以下非限制性实施例得以进一步例证。
本说明书中引用的所有参考文献，待审专利申请，及公布的专利申请的内容，包括在背景部分中引用的那些文献，在此均并入参考。应理解实施例中使用的模型是公认的模型，而且在这些模型中的效力可以推断在人体内的效力。
本领域技术人员已知在此揭示的化合物在治疗对象体内代谢，产生可以作为药物的具有特定生物活性的代谢物。
本发明通过以下实验详述得以更好说明。然而，本领域技术人员易于意识到在此所揭示的特殊方法和结果只是例证了本发明，在后文的权利要求书中更充分阐述了本发明。
实施例24：腺苷A3拮抗剂实验
化合物1700(下表17)：MS(ES)：366.1(M++1)
化合物1710(下表17)：MS(ES；：381.1(M++1)
化合物1316(下表17)：MS(ES)：353.2(M++1)
化合物1703(下表17)：MS(ES)：357.1(M++1)
化合物1719(下表17)：1H-NMR(200MHz，de-DMSO)(1.75(m，2H)，3.11(m，2H)，3.35(s，3H)，3.59(m，2H)，5.72(m，1H)，5.96(m，1H)，6.55(s，1H)，7.15(s，1H)，7.49(m，2H)，8.32(m，2H)
化合物1704(下表17)：MS(ES)：367.0(M++1)
化合物1706(下表17)：1H-NMR(200MHz，CDCl3)d 1.22(m，2H)，1.60-2.40(m，4H)，4.53(m，1H)，4.94(m，1H)，5.70(d，1H，J＝8.2Hz)，6.35(d，1H，J＝2.8Hz)，6.97(d，1H，J＝2.0Hz)，7.50(m，3H)，8.40(m，2H)，10.83(brs，1H)
化合物1707(下表17)：MS(ES)：347.0(M++1)
化合物1708(下表17)：MS(ES)399.0(M++1)
化合物1709(下表17)：MS(ES)385.9(M++1)
化合物1710(下表17)：MS(ES)434.0(M++1)
化合物1711(下表17)：1H-NMR(200MHz，CD，OD)d 3.95(d，2H，J-5.8Hz)，4.23-4.31(m，2H)，4.53(t，2H，J＝8.8Hz)，6.30(d，1H，J＝3.OHz)，6.98(d，1H，J＝3.OHz)，7.45-7.48(m，3H)，7.83-8.42(m，2H)，9.70(brs，1H).MS(ES)：281.1(M++1)
OSIC-148313 1H-NMR(200MHz，CD3OD)d 3.02(m，2H)，3.92(m，2H)，5.09(2，2H)，6.53(s，1H)，6.90-7.04(br s，1H)，6.92(m，2H)，7.02(m，1H)，7.2 1(dd，1H，J＝8.2Hz)，7.40(m，3H)，7.50-7.80(br s，1H)，8.33(m，2H).MS(ES)：445.1(M++1)
化合物1713(下表17)：1H-NMR(200MHz，CDCl3)d 1.65-1.80(m，7H)，1.88-2.00(m，1H)，2.10-2.40(m，1H)，2.70-3.05(m，3H)，3.09-3.14(m，2H)，3.16-3.38(m，1H)，3.45(d，1H，J＝14Hz)，3.53-3.60(m，2H)，3.84-3.92(m，2H)，3.97(d，1H，J＝14Hz)，5.55(t，1H，J＝5.8Hz)，6.17(s，1H)，6.55-6.59(m，2H)，6.64-6.71(m，1H)，7.11-7.19(m，2H)，7.43-7.46(m，3H)，8.38-8.42(m，2H)，MS(ES)：484.0(M++1)
化合物1714(下表17)：MS(ES)：471.0(M++1)
化合物1715(下表17)：MS(ES)：505.0(M++1)
化合物1716(下表17)：1H-NMR(200MHz，CD3OD)d 1.65(m，1H)，2.18(m，1H)，2.49(br d，2H，J＝6.2Hz)，2.64(m，1H)，3.38(m，1H)，3.69(s，3H)，3.72(m，1H)，3.93(m，1H)，4.10(m，1H)，5.06(2，2H)，6.58(s，1H)，6.92(m，2H)，7.02(m，1H)，7.23(dd，1H，J＝8.1Hz)，7.39(m，3H)，8.32(m，2H).MS(ES)：477.1(M++1).
化合物1717(下表17)：1H-NMR(200MHz，CD3OD)d 1.69(m，1H)，2.26(m，1H)，2.42(d，2H，J＝7.4Hz)，2.72(m，1H)，3.53(m，1H)，3.83(m，1H)，4.02(m，1H)，4.14(dd，1H，J＝10.6，7.0Hz)，5.14(2，2H)，6.69(s，1H)，6.96(m，2H)，7.06(m，1H)，7.25(dd，1H，J＝8.0Hz)，7.39(m，3H)，8.35(m，2H).MS(ES)：462.2(M++1).
化合物1718(下表17)：1H-NMR(200MHz，CD3OD)d 1.40-2.00(m，5H)，3.52(d，2H，7.6Hz)，3.80-4.00(m，1H)，4.00-4.20(m，3H)，4.50(m，2H)，6.36-6.50(m，2H)，6.54(s，1H)，6.84-6.92(m，1H)，7.05(t，1 H，J＝8.2Hz)，7.30-7.45(m，3H)，8.24(d，2H，J＝9.8Hz).MS(ES)：449.0(M++1).
表17：腺苷A3受体选择性化合物
*比其它三种亚型选择性至少高10倍
Figure A0182246002221
Figure A0182246002241
Figure A0182246002251
Figure A0182246002271
Figure A0182246002281
Figure A0182246002301
本发明提供了具有以下结构的化合物：
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
Figure A0182246002332
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
Figure A0182246002333
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
Figure A0182246002341
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
Figure A0182246002343
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
Figure A0182246002352
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
Figure A0182246002353
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
Figure A0182246002362
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
Figure A0182246002371
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
Figure A0182246002372
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
Figure A0182246002373
本发明提供了具有以下结构的化合物：
Figure A0182246002381
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗与A1腺苷受体相关疾病的方法，包括为治疗对象施用治疗有效量的化合物1505，1506，1507，1508，1509，1510，1511，1512，1513，1514，1516，1517，1518，1519或1520。
在另一个实施方案中，本发明提供了上述方法，其中治疗对象是哺乳动物。
在另一个实施方案中，本发明提供了上述方法，其中所述哺乳动物是人。
在另一个实施方案中，本发明提供了上述方法，其中所述A1腺苷受体与以下疾病相关：认知疾病，肾衰竭，心律不齐，呼吸上皮，递质释放，镇静，血管收缩，心动过缓，心肌收缩和传导减弱，支气管狭窄，中性粒细胞趋化性，返流，或溃疡。
在另一个实施方案中，本发明提供了化合物1505，1506，1507，1508，1509，1510，1511，1512，1513，1514，1515，1516，1517，1518，1519或1520的一种水溶性前体药物，其中所述水溶性前体药物在体内代谢产生一种活性药物，其选择性抑制A1腺苷受体。
在另一个实施方案中，本发明提供了前体药物，其中所述前体药物通过酯酶催化的水解在体内代谢。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含上述前体药物和一种药物学可接受载体。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种抑制细胞中A1腺苷受体活性的方法，包括将所述细胞与化合物1505，1506，1507，1508，1509，1510，1511，1512，1513，1514，1515，1516，1517，1518，1519或1520接触。
在另一个实施方案中，本发明提供了上述抑制细胞中A1腺苷受体活性的方法，其中所述化合物是A1腺苷受体拮抗剂。
在另一个实施方案中，本发明提供了上述抑制细胞中A1腺苷受体活性的方法，其中所述细胞是人体细胞。
在另一个实施方案中，本发明提供了上述抑制细胞中A1腺苷受体活性的方法，其中所述化合物是A1腺苷受体拮抗剂。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种治疗与A1腺苷受体腺苷疾病的方法，其中所述疾病是哮喘，慢性阻塞性肺部疾病，过敏性鼻炎，或上呼吸道疾病。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种治疗与A1腺苷受体腺苷疾病的方法，其中所述疾病是哮喘，慢性阻塞性肺部疾病，过敏性鼻炎，或上呼吸道疾病，及其中所述治疗对象是人。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种治疗上述疾病的方法，其中所述化合物是A1腺苷受体拮抗剂。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种组合治疗哮喘的方法，包含化合物1505，1506，1507，1508，1509，1510，1511，1512，1513，1514，1515，1516，1517，1518，1519或1520，及类固醇，P2兴奋剂，，糖皮质激素，白三烯拮抗剂，或anticolinergic兴奋剂。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的化合物1505，1506，1507，1508，1509，1510，1511，1512，1513，1514，1515，1516，1517，1518，1519或1520，及一种药物学可接受载体。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种用化合物1505，1506，1507，1508，1509，1510，1511，1512，1513，1514，1515，1516，1517，1518，1519或1520治疗呼吸疾病的方法，其中所述呼吸呼吸疾病是哮喘，过敏性鼻炎，或慢性阻塞性肺部疾病。
在另一个实施方案中，本发明提供了上述药物组合物，其中所述药物组合物是眼周，眼球后或眼内注射配方。
在另一个实施方案中，本发明提供了上述药物组合物，其中所述药物组合物是系统应用配方。
在另一个实施方案中，本发明提供了上述药物组合物，其中所述药物组合物是外科手术灌注溶液。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗与A1腺苷受体相关疾病的包装的药物组合物，其包含：
(a)一个装有治疗有效量化合物1505，1506，1507，1508，1509，1510，1511，1512，1513，1514，1515，1516，1517，1518，1519或1520的容器；及
(b)使用所述化合物治疗所述疾病的说明书。
在另一个实施方案中，本发明提供了化合物1505，1506，1507，1508，1509，1510，1511，1512，1513，1514，1515，1516，1517，1518，1519或1520的一种药物学可接受盐。
在另一个实施方案中，本发明提供了上述药物学可接受盐，其中化合物1509，1511，1515，1518或1519的药物学可接受盐含有选自钠，钙和铵的阳离子。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种治疗与A1腺苷受体相关疾病的方法，其中A1腺苷受体与充血性心脏病相关。
实施例21：合成1-[6-(4-羟基-4-苯基-哌啶-1-基-甲基)-2-苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-吡咯烷-2-羧酸酰胺(1505)
化合物1505以与实施例17相似方式，使用合成方案IX用L-脯氨酰胺和4-苯基-哌啶-4-醇合成，获得：
Figure A0182246002411
1H-NMR(d6-DMSO)d 1.53(s，1H)，1.60(s，1H)，1.84-2.30(m，6H)，2.66(m，2H)，3.60(s，2H)，3.88(m，1H)，4.02(m，1H)，4.66(d，1H，J＝6.8Hz)，4.73(s，1H)，6.44(s，1H)，6.94(s，1H)，7.12-7.50(m，10H)，8.35(m，2H)，11.6(brs，1H)；MS(ES)：305.1(M++1)；mp＝234-235℃。
实施例22：合成[N-(2-苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)(L)-脯氨酸酰胺(1506)
化合物1506是使用合成方案VII用L-脯氨酸酰胺缓合成，获得：
Figure A0182246002412
1H-NMR(DMSO-d6)d 2.05(m，4H)，3.85{m，1H}，4.05(m，1H)，4.70(d，1H，J＝8.0Hz)，6.58(brs，1H)，6.95(brs，1H)，7.15(d，1H，J＝3.4Hz)，7.40(m，3H)，7.50(brs，1H)，8.40(m，2H)，11.6(brs，1H)；MS(ES)：308.3(M++1).mp＝236-238℃。
实施例23：合成[N-(2-苯基-6-甲氧基甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-(L)-脯氨酸酰胺(1507)
化合物1507使用合成方案IX的前体化合物23合成，以获得
Figure A0182246002421
将溴化物23(4.23g，10mmol)溶解于无水甲醇(60mL)和DCM(120mL)中，并用AgO2CCF3在N2下在室温处理1小时。过滤除去固体并用DCM(2×20mL)洗涤。真空浓缩滤物。残渣再溶解于DCM(80mL)中。然后将所得溶液用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，经过MgSO4干燥，过滤并浓缩，产生3.71g(4，99％)乳白色固体。1H-NMR(CDCl3)d 1.75(s，9H)，3.51(s，3H)，4.83(s，2H)，6.70(s，1H)，7.47(m，3H)，8.52(m，2H)。
Figure A0182246002422
将芳基氯4(2.448g，6.55mmol)，DMSO(15mL)，L-脯氨酸酰胺(4.0g，35.0mmol)和NaHCO3(2.9g)组合，并在氮气下加热至120℃。4小时后，将反应冷却至室温，并用水(60ml)稀释。所得浆液用DCM(10×)提取。组合的有机层用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，经过MgSO4干燥，过滤并浓缩，产生2.48g褐色固体。急骤层析后获得白色固体样纯化产物(1.86g，81％)。从THF/己烷中获得白色固体。M.p.＝213-215℃。1H-NMR(CDCl3)d 2.15(m，3H)，2.52(m，1H)，3.26(s，3H)，3.92(m，1H)，4.10(m，1H)，4.42(s，2H)，5.08(d，1H，J＝8.2Hz)，5.49(brs，1H)，6.48(s，1H)，7.08(brs，1H)，7.42(m，3H)，8.38(m，2H)，9.78(brs，1H)；MS(ES)：352.2(M++1)。
实施例24：合成4-羟基-1-(2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4-基)-吡咯烷-2-羧酸酰胺(1508)
化合物1508通过合成方案VII，使用顺式羟基脯氨酸酰胺合成，以获得：
Figure A0182246002431
1H-NMR(d6-DMSO)d 1.90(m，1H)，3.85(d，1H，J＝9.2Hz)，4.08(m，1H)，4.37(s，1H)，4.67(dd，1H，J＝8.8，4.0Hz)，5.30(s，1H)，6.55(s，1H)，7.1 5(s，2H)，7.37(m，3H)，7.64(s，1H)，8.37(m，2H)，11.65(brs，1H)；MS(ES)：324.2(M++1)；mp＝268-271℃。
实施例25：3-[4-((S)-2-氨基甲酰-吡啶-1-基)-2-苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基]-丙酸(1509)的合成
化合物1509使用合成方案IX的前体化合物23合成：
Figure A0182246002441
将叔丁氧基羰基保护的芳基溴23(4.0g，9.5mmol)，干DMSO(25ml)，NaH2PO4(454mg，3.79mmol)和Na2HPO4(1.62g，11.4mmol)组合，并在氩气下加热至50℃，保持大约3.5小时。然后将混合物倒入水(200ml)中，并用3份100ml的EtOAc萃取。组合的有机层用水和盐水彻底洗涤，经过MgSO4干燥，过滤并浓缩，产生黄色固体，将其研碎用乙醇纯化，产生1.55g淡黄色固体(7)。将母液通过急骤层析纯化(己烷中10％EtOAc)，产生另外454mg(60％)产物。1H-NMR(CDCl3)d 1.77(s，9H)，7.25(s，1H)，7.48(m，3H)，8.52(m，2H)10.39(s，1H)；m.p.＝156℃(dec)。
Figure A0182246002442
将乙醛7(600mg，1.7mmol)溶剂溶解于无水THF(20ml)中，并在氩气下冷却至0℃。向其中通过滴管滴加入0℃的于10ml无水THF中的叔丁氧基羰基亚甲基)-三苯基正膦(694mg，1.8mmol)。3小时后，浓缩该混合物并研碎用乙醇纯化，产生565mg(73％)白色固体(8)。1HNMR(CDCl3)d 1.58(s，9H)，1.79(s，9H)，6.46(d，1H)，6.95(s，1H)，7.48(m，3H)，8.09(d，1H)，8.56(m，2H)。
将5ml THF中化合物8溶液(565mg 1.2mmol)用EtOAc稀释为100ml。加入600mg催化剂(5％wt Pd，50％H2O)及用氩气吹洗后，将该混合物在大气压下氢化。8小时后，过滤该混合物，浓缩并用急骤层析纯化(于己烷中的10％EtOAc)，以分离200mg(35％)化合物9，其是在静置结晶的清澈油。1HNMR(CDCl3)d 1.42(s，9H)，1.75(s，9H)，2.65(t，2H)，3.32(t，2H)，6.41(s，1H)7.45(m，3H)，8.51(m，2H)。
Figure A0182246002452
组合芳基氯9(200mg，0.44mmol)，DMSO(10ml)和L-脯氨酸酰胺(prolinamide)(440mg，4.4mmol)，并在氩气下加热至85℃。14小时后，将该混合物冷却至室温并在水和乙酸乙酯之间分隔。分离各层，并用EtOAc洗涤水相层(3×)。组合的有机层用水(3×)和盐水彻底洗涤，经过MgSO4干燥，过滤并浓缩，产生黄色薄膜10，将其通过急骤层析纯化(CH2Cl2中2.5％MeOH)，获得185mg(97％)产物。MS(ES)：435.8(M++1)。
Figure A0182246002461
将5ml二噁烷中的酯10(30mg，mmol)通过加入0.5ml浓HCl进行水解。3小时后，将此混合物真空浓缩，并在EtOH/EtOAc中再结晶，获得白色固体1509(20mg，61％)。MS(ES)：380(M++1)。
实施例26：[N-(2-苯基-6-氨基羰基甲氧基甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-(L)-脯氨酸酰胺(1510)的合成
化合物1510使用合成方案IX的前体化合物23合成，以获得：
Figure A0182246002462
将溴化物23(1.27g，3mmol)和分子筛(5g)在无水乙醇酸甲酯(5.8g，60mmol)和DCM(40mL)中搅拌。将此溶液在N2下用AgOTf处理并搅拌3小时。过滤除去固体并用DCM(2×20mL)洗涤。真空浓缩滤物。将残渣再溶解于DCM(80mL)中。然后将所得溶液用水，饱和的NaHCO3溶液和盐水洗涤，经过MgSO4干燥，过滤并浓缩，产生1.35g(998)乳白色固体(12)。1H-NMR(CDCl3)d 1.75(s，9H)，3.80(s，3H)，5.0(s，2H)，6.78(s，1H)，7.47(m，3H)，8.52(m，2H)。
组合芳基氯12(177mg，0.41mmol)，DMSO(10mL)，L-脯氨酸酰胺(466mg，4mmol)和NaHCO3(500mg)，并在氮气下加热至120℃。4小时后，将反应冷却至室温并用水(60ml)洗脱。所得浆液用DCM萃取(5×30mL)。组合的有机层用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，经过MgSO4干燥，过滤并浓缩，产生褐色固体。急骤层析后获得白色固体(13)纯化产物(154mg，92％)。1H-NMR(CDCl3)d 2.15(m，3H)，2.52(m，1H)，3.55(s，3H)，4.58(s，2H)，5.08(s，1H，)，5.85(brs，1H)，6.48(s，1H)，7.08(brs，1H)，7.42(m，3H)，8.40(m，2H)，10.58(brs，1H)；MS(ES)：410.1 (M++1)。
将甲酯13(124mg，0.3mmol)溶解于HOCH3(15mL)中。将氨水鼓入该溶液0.5小时。然后将此反应混合物在室温另外搅拌3小时。除去溶剂后，获得白色固体(1510，93％)。1H-NMR(CDCl.，)d 1.82(m，3H)，2.20(m，1H)，2.80(m，1H)，3.10(m，1H)，3.63(dd，2H，Ja＝13.8Hz，J2＝19.4Hz)，3.87(m，1H)，4.07(m，1H)，4.97(m，1H)，5.96(m，2H)，6.35(s，1H)，6.86(brs，1H)，7.11(brs，1H)，7.37(m，3H)，8.28(m，2H)，11.46(brs，1H)；MS(ES)：394.8(M++1)。
实施例27：合成[4-(2-氨甲酰pyrrolidin-1-基)-2苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸](1511)
混合物1511使用合成方案VII的前体化合物15合成，以获得：
在氮气下，向通过冰浴冷却的无水DMF(20ml)中的氢化钠悬浮液(780mg的60％油状悬浮液，19.5mmol)中，在5分钟内加入于DMF(10ml)中的吡咯并嘧啶15(2.00g，7.52mmol)溶液。15分钟后，加入磺酰氯化苯9.40mmol)，然后除去冰浴。4小时后，将反应物倒入冰和饱和NaHCO3溶液混合物中，滤出沉淀物并用丙酮(3)和甲醇(2)研碎，产生2.37g米色固体。该固体(16)含有大约10mol-％DMF(基于83％产量)并可以用于接下来的步骤中；在二氧化硅凝胶上层析，使用丙酮作为洗脱液可以获得纯化样品。1H-NMR(CDCl3)：d 6.70(d，J＝4.2Hz，1H)，7.47-7.68(m，6H)，7.76(d，J＝4.2Hz，1H)，8.24-8.32(m，2H)，8.48-8.56(m，2H)；IR(固体)：n＝3146cm-1，1585，1539，1506，1450，1417，1386，1370，1186，1176，1154，1111，1015，919，726，683，616，607；MS(ES)：372/370(MH+)；mp＝226-227℃。
向通过干冰/丙酮冷却的无水THF(34ml)中的N-磺酰化合物16(337mg，0.911mmol)溶液中，加入LDA.THF(1.0mL，环己烷中1.5M溶液，1.5mmol)。45分钟后，将二氧化碳鼓入该溶液中5分钟，然后除去冷却浴。当溶液达到环境温度时，蒸发溶剂，产生398mg黄色固体盐17，其含有0.5当量的(iPr)2NCO2Li。此盐可以不用纯化而用于接下来的步骤中。1H-NMR(D6-DMSO)：d＝6.44(s，1H)，7.50-7.75(m，6H)，8.33-8.40(m，2H)，8.53(dd，J＝8.0，1.6Hz，2H)。
将DMSO(1.5ml)中锂盐17(50mg)和L-脯氨酸酰胺在氮气下加热至80℃，持续15.5小时。向冷却的溶液中加入4％乙酸水溶液(10mL)，并将此混合物用EtOAc萃取(5×10mL)。组合的有机层用4％乙酸饮水溶液(10mL)，水(10mL)和盐水(10mL)洗涤，并经过MgSO4干燥。过滤并浓缩产生40mg淡黄色固体18，其不用纯化用于接下来的步骤中。1H-NMR(CD3OD)：d＝1.95-2.36(m，4H)，3.85-3.95(m，1H)，3.95-4.17(m，1H)，4.72(brs，1H)，7.14(s，1H)，7.35-7.45(m，3H)，7.45-7.70(m，3H)，8.33-8.50(m，4H)。
Figure A0182246002501
将于甲醇中的氢氧化钠溶液(1.5mL，5M，7.5mmol)加入于甲醇(2ml)中的吡咯并嘧啶18(40mg，0.081mmol)溶液中。2小时后，将pH调节为5，蒸发大部分甲醇，将此混合物用EtOAc萃取(5×10mL)，组合的有机层用盐水洗涤并经过MgSO4干燥。过滤并浓缩产生24mg浅黄色固体，将其用甲苯/EtOAc/MeOH研碎，产生15.6mg(555)微黄色固体所述酸1511。1H-NMR(CD3OD)：d＝2.05-2.20(m，4H)，3.95-4.10(m，1H)，4.15-4.25(m，1H)，4.85(brs，1H)，7.14(s，1H)，7.35-7.42(m，3H)，8.38-8.45(m，2H)；IR(固体)：n＝3192cm-1，2964，2923，2877，1682，1614，1567，1531，1454，1374，1352，1295，1262，1190，974，754，700；MS(ES)：352(M++1)；m.p.＝220℃(分解)。
实施例28：1-(6-甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4-基)-(S)-吡咯烷-2-羧酸酰胺(1512)的合成
化合物1512通过以下步骤合成：
Figure A0182246002511
组合芳基氯20(3g，10.7mmol)，DMSO(50ml)和(S)脯氨酸酰胺，并在氩气下加热至85℃。搅拌过夜后(14小时)，将混合物冷却至室温，倒入800ml水中。将其用200ml EtOAc萃取3次。组合的有机层用水(3×300ml)，盐水彻底洗涤，经过MgSO4干燥，过滤并浓缩，产生黑褐色固体。将此固体从EtOAc中再结晶两次，产生1.95g(57％)棕褐色固体(1512)。1H NMR(DMSO-d6)d 1.8-2.2(m，4H)，2.3(s，3H)，3.8(m，1H)，4.0(m，1H)，4.6(d，1H)6.2(s，1H)，6.9(s，1H)，7.2(m，3H)，7.3(s，1H)，8.4(m，2H)，11.5(s，1H)；MS(ES)：322(M++1)。
实施例29：1-[6-(2-羟基-乙氧基甲基)-2-苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-吡咯烷-2-羧酸酰胺(1513)的合成
化合物1513以实施例17相似方式，使用合成方案IX，用L-脯氨酸酰胺和乙烷-1，2-二醇合成，以获得：
Figure A0182246002512
MS(ES)：382(M++1)。
实施例30：4-(6-咪唑-1-基甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基氨基)-环己醇(1514)的合成
化合物1514以实施例17相似方式，使用合成方案IX，用N-6氨基环己醇和咪唑合成，以获得：
MS(ES)：389(M++1)。
实施例31：4-(4-羟基-环己基氨基)-2-苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸(1515)的合成
化合物1515以与实施例27相似方式，使用合成方案IX，用N-6氨基环己醇合成，以获得：
Figure A0182246002522
MS(ES)：353(M++1)
实施例32：4-[6-(2-羟基-乙氧基甲基)-2-苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基氨基]-环己醇(1516)的合成
化合物1516以与化合物1513相似方式，使用合成方案IX，用N-6氨基环己醇合成，以获得：
Figure A0182246002531
MS(ES)：383(M++1)
实施例33：4-(4-羟基-环己基氨基)-2-苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸甲酯(1517)的合成
Figure A0182246002532
在20℃，在氩气下，搅拌具有甲基碘(0.1mL，1.6mmol)的无水DMF(4mL)中的锂盐17溶液(0.13mmol)。蒸发DMF并加入氯化铵水溶液(15mL)。将此混合物用EtOAc萃取(3×15mL)，组合的有机层用水(2×10mL)和盐水(10mL)洗涤，经过干燥。过滤并浓缩，产生21mg(38％)甲酯22。
Figure A0182246002541
将DMSO(1.5ml)中甲酯22(24.5mg，0.057mmol)和4-反式-氨基环己醇(66mg，0.57mmol)溶液在氮气下加热至80℃，然后停止加热，在20℃持续搅拌13.5小时。向冷却的溶液中加入4％乙酸水溶液(10mL)，并将此混合物用EtOAc萃取(3×10mL)。组合的有机层用4％乙酸水溶液(10mL)，水(10mL)，2N NaOH(10mL)，水(10mL)和盐水(10mL)洗涤，经过MgSO4干燥。在环境温度，向过滤和浓缩后获得的粗制物(1H NMR指示除去大约50％苯磺酰基团)在THF(2ml)的溶液中，加入NaOH在MeOH中的溶液(0.5mL的5M solution，2.5mmol)。20分钟后，加入水和饱和NaHCO3溶液(均5mL)，并将此混合物用EtOAc萃取(4×15mL)。组合的有机层用2N NaOH(10mL)，水(10mL)和盐水(10mL)洗涤，经过MgSO4干燥。将过滤及浓缩后获得的粗制物在二氧化硅凝胶上层析，用己烷/EtOAc 1∶11∶2洗脱，产生8.6mg(41％)白色固体1517，mp.225-227℃。1H-NMR(CD3OD)：d＝1.38-1.62(m，4H)，1.95-2.10(m，2H)，2.10-2.25(m，2H)，3.55-3.70(m，1H)，3.91(s，3H)，4.20-4.35(m，1H)，7.32(s，1H)，7.35-7.47(m，3H)，8.35-8.42(m，2H)；IR(固体)：n＝3352cm-1，3064，2935，2860，1701，1605，1588，1574，1534，1447，1386，1333，1263，1206，1164，1074，938，756，705；MS(ES)：367(MH+)。
实施例34：[4-(2-氨甲酰-吡咯烷-1-基)-2-苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲氧基]-乙酸甲酯(1518)的合成
化合物1518以与实施例26相似方式，使用前体化合物12合成，以获得：
Figure A0182246002551
MS(ES)：410(M++1)。
实施例35：[4-(2-氨甲酰-吡咯烷-1-基)-2-苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-基甲氧基]-乙酸(1519)的合成
化合物1519以与化合物1518相似方式合成，其中所述甲酯基团用碱水解以获得：
Figure A0182246002552
MS：396(M++1)
实施例36：4-(4-羟基-环己基氨基)-2-苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸酰胺(1520)的合成
Figure A0182246002561
将气态氨在通过干冰/丙酮冷却的于甲醇(6mL)中的吡咯并嘧啶23溶液(7.8mg，0.021mmol)中冷凝，直至达到总体积为12mL。在20℃搅拌10秒后，蒸发溶剂，残渣在二氧化硅凝胶上通过制备TLC纯化，用CH2Cl2中5％MeOH洗脱。将由此获得的物质用乙醚研碎，产生6.5mg(88％)白色固体酰胺1520，mp.210-220℃(分解)。1H-NMR(CD3OD)：d＝1.40-1.60(m，4H)，2.00-2.15(m，2H)，2.15-2.25(m，2H)，3.55-3.70(m，1H)，4.20-4.35(rr.，1H)，7.16(s，1H)，7.35-7.47(m，3H)，8.34-8.40(m，2H)；IR(固体)：n＝3358cm-1，3064，3025，2964，2924，2853，1652，1593，1539，1493，1452，1374，1326，1251，1197，1113，1074，1028，751，699；MS(ES)：352(MH+)。
化合物活性：
针对化合物1505，1506，1507，1508，1509，1510，1511，1512，1513，1514，1516，1517，1518，1519和1520，进行腺苷1(A1)受体亚型饱和及竞争放射性配体结合分析，如在此及本说明书p152-153所述。所有上述化合物均等于或超过参考化合物1318或1319与A1受体结合亲和性，见本说明书表13所示。
表18中所示上述化合物的水溶性由于其cLogP值而预期比参考化合物1318或1319更好，cLogP值使用由CambridgeSoft Corporation，100 Cambridge Park Drive，Cambridge，MA 02140提供的计算机程序CS ChemDraw，ChemDraw Ultra版本6.0@1999计算。
特异于表18所示A1受体的化合物与参考化合物1318或1319的大约3.8的cLogP值相比，具有较低cLogP值，在大约1.5-3.4之间。推测表18所示具有比参考化合物1318或1319低的cLogP值的更极性A1受体化合物，与参考化合物相比仍保持潜力及A1受体结合选择性。
表18：
    化合物     cLogP
    1505     4.1
    1506     3.0
    1507     2.88
    1508     2.1
    1509     2.9
    1510     1.5
    1511     2.7
    1512     3.37
    1513     2.4
    1514     2.8
    1515     3.1
    1516     2.8
    1517     3.4
    1518     2.4
    1519     2.2
    1520     2.4
以下涉及特异于A2a受体的另外的化合物
本发明提供了具有以下结构的化合物：
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
在另一个实施方案中，本发明提供了一种治疗与A2a腺苷受体相关疾病的方法，包括为治疗对象施用治疗有效量的化合物1609或1610。
本发明还提供了上述方法，其中所述治疗对象是哺乳动物。
本发明还提供了上述方法，其中所述哺乳动物是人。
本发明还提供了治疗与A2a腺苷受体相关疾病的方法，其中所述A2a腺苷受体与运动能力，血管舒张，血小板抑制，中性粒细胞超氧化物产生，认知疾病，老年痴呆或Parkinson′s病相关。
本发明提供了上述方法，其中所述化合物通过刺激腺苷酸环化酶治疗疾病。
本发明还提供了化合物1609或1610的一种水溶性前体药物，其中所述水溶性前体药物在体内代谢为活性药物，选择性抑制A2a相关受体。
本发明还提供了化合物1609或1610的一种水溶性前体药物，其中所述前体药物通过酯酶催化的水解在体内代谢。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含化合物1609或1610的一种水溶性前体药物，和一种药物学可接受载体。
本发明还提供了一种抑制细胞中A2a腺苷受体活性的方法，包括将所述细胞与化合物1609或1610相接触。
本发明还提供了一种抑制细胞中A2a腺苷受体活性的方法，包括将所述细胞与化合物1609或1610相接触，其中所述化合物是所述A2a腺苷受体拮抗剂。
本发明还提供了上述方法，其中所述细胞是人体细胞。
本发明还提供了上述方法，其中所述细胞是人体细胞，而且所述化合物是A2a腺苷受体拮抗剂。
本发明还提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的化合物1609或1610及一种药物学可接受载体。
本发明还提供了上述药物组合物，其中治疗有效量是有效治疗Parkinson′s病及与运动能力，血管舒张，血小板抑制，中性粒细胞超氧化物产生，认知疾病，或老年痴呆相关疾病的数量。
本发明还提供了上述药物组合物，其中所述药物组合物是眼科配方。
本发明还提供了上述药物组合物，其中所述药物组合物是眼周，眼球后或眼内注射配方。
本发明还提供了上述药物组合物，其中所述药物组合物是系统应用配方。
本发明还提供了上述药物组合物，其中所述药物组合物是外科手术灌注溶液。
本发明还提供了一种组合治疗Parkinson′s病的方法，包括化合物1609或1610，及任何多巴胺增强剂。
本发明还提供了一种组合治疗癌症的方法，包括化合物1609或1610，及任何胞毒剂。
本发明还提供了一种组合治疗青光眼的方法，包括化合物1609或1610，及一种前列腺素兴奋剂，一种muscrinic兴奋剂，或β-2拮抗剂。
本发明还提供了治疗与A2a腺苷受体相关疾病的一种包装的药物组合物，包括：
(a)一个装有治疗有效量化合物1609或1610的容器；及
(b)使用所述化合物治疗所述疾病的说明书。
实施例41：1-(6-苯基-2-吡啶-4-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-吡咯烷-2-羧酸酰胺(1609)的合成
化合物1609通过将L-脯氨酸酰胺与在英文第82页所述合成方案II中所述的合适氯化物中间体反应而合成，以获得：
Figure A0182246002601
1H-NMR(d6-DMSO)d 1.95-2.15(m，4H)，4.00(brs，1H)，4.15(brs，1H)，4.72(brs，1H)，6.90(brs，1H)，7.19(brs，1H)，7.30(t，1H，J＝7.0Hz)，7.44(t，2H，J＝7.0Hz)，7.59(s，1H)，7.92(brs，2H)，8.26(d，2H，J＝6.2Hz)，8.65(d，2H，J＝6.2Hz)；MS(ES)：384.9(M++1)；Mpt＝280-316℃(分解)。
实施例42：1-[6-(3-甲氧基-苯基)-2-吡啶-4-基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-吡咯烷-2-羧酸酰胺(1610)的合成
化合物1610通过将L-脯氨酸酰胺与在英文p82页所述合成方案II中所述的合适氯化物氯化物中间体反应而合成，以获得：
Figure A0182246002611
1H-NMR(d6-DMSO)d 2.07(m，4H)，3.85(s，3H)，4.02(m，1H)，4.17(m，1H)，4.75(m，1H)，6.89(m，1H)，7.00(s，1H)，7.23(s，1H)，7.35(t，1H，J＝8.2Hz)，7.53(s，2H)，7.60(s，1H)，8.28(d，2H，J＝5.8Hz)，8.67(d，2H，J＝5.8Hz)，12.37(s，1H)；MS(ES)：415.0(M++1)。
化合物活性：
针对化合物1609或1610进行腺苷2a(A2a)受体亚型竞争放射性配体结合分析，如在此及本说明书英文本第153页所述。发现化合物1609和1610具有A2a受体结合亲和性和选择性。
以下涉及特异于A3受体的另外的化合物
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
在另一个实施方案中，本发明提供了一种抑制细胞内A3腺苷受体活性的方法，包括将所述细胞与化合物1720相接触。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种一种细胞中A3腺苷受体活性的方法，其中所述化合物是A3腺苷受体拮抗剂。
在另一个实施方案中，本发明提供了抑制细胞中A3腺苷受体活性的上述方法，其中所述细胞是人体细胞。
在另一个实施方案中，本发明提供了抑制细胞中A3腺苷受体活性的上述方法，其中所述细胞是人体细胞及其中所述化合物是A3腺苷受体拮抗剂。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗眼部损害的方法，包括为治疗对象施用包含治疗有效量的化合物1720的组合物。
在另一个实施方案中，本发明提供了上述方法，其中所述损害包括视网膜和视神经乳头损害。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种治疗青光眼的方法，包括为治疗对象施用治疗有效量的化合物1720。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种治疗青光眼的方法，包含一或多种腺苷受体拮抗剂，优选包含一种腺苷受体A3拮抗剂优选N-6取代的7-脱氮嘌呤，最优选[2-(3H-咪唑-4-基)-乙基]-(2-苯基-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-4-基)-胺)。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种组合治疗青光眼的方法，包含腺苷受体A3拮抗剂(优选N-6取代的7-脱氮嘌呤，最优选[2-(3H-咪唑-4-基)-乙基]-(2-苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-胺))及一或多种选自以下的其它化合物：β-肾上腺素受体拮抗剂(即β-肾上腺素能拮抗剂或b-阻滞剂)(例如马来酸噻吗洛尔，倍他洛尔，卡替洛尔，布诺洛尔，美替洛尔，L-653328(L652698的乙酸乙酯)，β1-肾上腺素受体拮抗剂)，α-2肾上腺素受体兴奋剂(例如aplaclonidine，溴美尼定，AGN-195795，AGN190837(Bay-a-6781的类似物))，碳酸酐酶抑制剂(布林唑胺，多佐胺，MK-927(人碳酸酐酶II同工酶抑制剂)，碳酸酐酶IV同工酶抑制剂)，胆碱能兴奋剂(例如毒蕈碱胆碱能兴奋剂，卡巴胆碱，盐酸毛果芸香碱，硝酸毛果芸香碱，毛果芸香碱，毛果芸香碱前体药物(例如DD-22A))，前列腺素和前列腺素受体兴奋剂(例如拉坦前列素，乌诺前诺酮异丙酯，PGF2α兴奋剂，前列腺素选择性FP受体兴奋剂，PG兴奋剂如低血压性前列腺素)，血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂(例如螺普利，螺普利拉)，AMPA受体拮抗剂，5-HT兴奋剂(例如选择性5-HT 1A受体兴奋剂如MKC-242(5-3-[((2S)-1，4-苯并二噁烷-2-基甲基)氨基]丙氧基-1，3-benxodioxole HCl)，血管发生抑制剂(例如类固醇阿奈他弗)，NMDA拮抗剂(例如HU-211，美金刚，类大麻酚(cannabinoid)NMDA-受体兴奋剂dexanabinol，dexanabinol的前体药物和类似物，NR2B选择性拮抗剂(例如eliprodil(SL-82.0715))，肾素抑制剂(例如CGP-38560，SR-43845)，类大麻酚受体兴奋剂(例如四氢大麻酚(THC)及THC类似物，选择性CB2类大麻酚受体兴奋剂(例如L-768242，L759787)，结合中枢特异性CB1受体和外周CB2受体的化合物如anandamide)，血管紧张素受体拮抗剂(例如血管紧张素II受体拮抗剂(例如CS-088)，选择性血管紧张素II AT-I受体拮抗剂，如洛沙坦钾)，双氢克尿塞(HCTZ)，促生长素抑制素兴奋剂(例如非肽促生长素抑制素兴奋剂NNC-26-9100)，糖皮质激素拮抗剂，肥大细胞脱粒抑制剂(例如萘多罗米)，α-肾上腺素能受体阻滞剂(例如达哌唑，α-2肾上腺素受体拮抗剂，α-1肾上腺素受体拮抗剂(例如布那唑嗪))，α-2肾上腺素受体拮抗剂，凝血烷A2模拟物，蛋白激酶抑制剂(例如H7)，前列腺素F衍生物(例如S-1033)，前列腺素-2α拮抗剂(例如PhXA-34)，多巴胺D1和5-HT2兴奋剂(非诺多泮)，氮氧释放剂(例如NCX-904或NCX-905，噻吗洛尔的氧化氮释放衍生物)，5-HT 2拮抗剂(例如沙格雷酯)，NMDA拮抗剂(例如dexanabinol的前体药物和类似物)，α1肾上腺素受体拮抗剂(例如bunazosin)，cyclooxygenase抑制剂(例如diclofenac，或非类固醇化合物尼帕芬酸)，肌苷，多巴胺D2受体和α2肾上腺素受体兴奋剂(例如他利克索)，多巴胺D1受体拮抗剂和D2受体兴奋剂(例如SDZ-GLC-756)，抗利尿激素受体拮抗剂(例如抗利尿激素V2受体拮抗剂(例如SR-121463))，内皮缩血管肽拮抗剂(例如TBC-2576)，1-(3-羟基-2-膦酰甲氧基丙基)胞嘧啶(HPMPC)及相关类似物和前体药物，甲状腺激素受体配体(例如KB130015)，毒蕈碱(毒蕈碱)M1兴奋剂，NMDA-受体拮抗剂(例如类大麻酚NMDA-受体拮抗剂dexanabinol)，PG兴奋剂如低血压性脂质，prostamides，钠通道阻滞剂，NMDA拮抗剂，混合作用离子通道阻滞剂，β-肾上腺素受体拮抗剂和PGF2α兴奋剂组合(例如拉坦前列素和噻吗洛尔)，鸟苷酸环化酶激活物(例如心房肽(ANP)或非肽模拟物，ANP中性内切酶抑制剂，硝基血管扩张剂(例如硝酸甘油，肼苯哒嗪，硝普钠)，内皮缩血管肽受体调节因子(例如ET-1或非肽模拟物，sarafotoxin-S6c)，利尿酸，其它苯氧乙酸类似物(例如茚达利酮，替尼酸)，肌动蛋白阻断剂(例如latrunculin)，钙通道阻滞剂(例如异搏定，硝苯地平，布酚宁，nivaldipine)及神经保护剂。
一种组合治疗青光眼的方法，包括化合物1720，及选自以下的一或多种化合物：β-肾上腺素受体拮抗剂，α-2肾上腺素受体兴奋剂，碳酸酐酶抑制剂，胆碱能兴奋剂和前列腺素受体兴奋剂。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的化合物1720和一种药物学可接受载体。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗与A3腺苷受体相关疾病的一种包装的药物组合物，其包括：(a)一个装有治疗有效量化合物1720的容器；及(b)使用所述化合物治疗所述疾病的说明书。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种生产包含化合物1720的组合物的方法，所述方法包括将化合物1720与一种适当载体混合。
在另一个实施方案中，本发明提供了化合物1720的一种药物学可接受盐，其中所述药物学可接受盐含有选自马来酸，延胡索酸，酒石酸，乙酸，磷酸和甲磺酸盐的一个阴离子。
实施例43：[2-(3H-咪唑-4-基)-乙基]-(2-苯基-7H-吡咯并[2，3-d吡咯烷-4-基]-胺(1720)的合成
化合物1720使用合成方案VII的前体化合物1合成，以获得
Figure A0182246002651
将芳基氯1(400mg，1.50mmol)，DMSO(10mL)和组氨酸(1.67g，15.0mmol)组合，并在氮气下加热至120℃。6.5小时后，将反应冷却至室温及在EtOAc和水之间分隔。分离各层，将水相层用EtOAc萃取(3×)。组合的有机层用盐水洗涤(2×)，经过MgSO4干燥，过滤并浓缩，产生494mg褐色固体。将此固体用冷MeOH洗涤，并从MeOH中再结晶，产生197mg(43％)乳白色固体(1720)。1H-NMR(CD，OD)d3.05(t，2H，J＝7.OHz)，3.94(t，2H，J＝7.0Hz)，6.50(d，1H，J＝3.5Hz)，6.88(brs，1H)，7.04(d，1H，J＝3.5Hz)，7.42(m，3H)，7.57(s，1H)，8.34(m，2H)；MS(ES)：305.1(M++1)；Mpt＝234-235℃。
化合物活性
如在此所述及本说明书英文本第153-154页所述进行腺苷3(A3)受体竞争放射性配体与化合物1720的结合分析。发现化合物1720与A3受体的结合亲和性比参考化合物1308高10倍，见表13所述。
文献的引入
所有专利，公布的专利申请及其它在此揭示的参考文献，在此均并入参考。等价物
本领域技术人员意识到或者只是使用常规实验就能确定本文特别阐述的本发明特殊实施方案的许多等价物。这种等价物也涵盖在随后权利要求的范围内。
本发明还提供了具有下式的化合物：
其中
R1NR2一起形成一个具有以下结构的环：
或
或者R1是H，R2是
R5是H，或取代或未取代的烷基或烷基芳基。

Claims (82)

1.一种具有以下结构的化合物：
其中R1NR2一起形成一个具有以下结构的环：
或
或者R1是H，R2是
R5是H，或取代或非取代的烷基或烷基芳基。
2.权利要求1的化合物，具有以下结构：
Figure A0182246000025
3.权利要求1的化合物，具有以下结构：
4.权利要求1的化合物，具有以下结构：
5.权利要求1的化合物，具有以下结构：
Figure A0182246000033
6.权利要求1的化合物，具有以下结构：
7.权利要求1的化合物，具有以下结构：
Figure A0182246000041
8.权利要求1的化合物，具有以下结构：
Figure A0182246000042
9.权利要求1的化合物，具有以下结构：
10.权利要求1的化合物，具有以下结构：
Figure A0182246000044
11.权利要求1的化合物，具有以下结构：
Figure A0182246000051
12.权利要求1的化合物，具有以下结构：
Figure A0182246000052
13.权利要求1的化合物，具有以下结构：
14.权利要求1的化合物，具有以下结构：
Figure A0182246000061
15.权利要求1的化合物，具有以下结构：
Figure A0182246000062
16.权利要求1的化合物，具有以下结构：
17.权利要求1的化合物，具有以下结构：
Figure A0182246000064
18.一种治疗患者与A1腺苷受体相关的疾病的方法，包括为患者施用治疗有效量的权利要求1的化合物。
19.权利要求18的方法，其中所述患者是哺乳动物。
20.权利要求19的方法，其中所述哺乳动物是人。
21.权利要求18的方法，其中所述A1相关受体与认知疾病，肾衰竭，心律不齐，呼吸上皮，递质释放，镇静，血管收缩，心动过缓，心肌收缩和传导减弱，支气管狭窄，中性粒细胞趋化性，返流，或溃疡相关。
22.权利要求1的化合物的一种水溶性前体药物，其中所述水溶性前体药物在体内代谢产生一种活性药物，其选择性抑制A1腺苷受体。
23.权利要求22的前体药物，其中所述前体药物通过酯酶催化的水解在体内代谢。
24.一种药物组合物，其包含权利要求22的前体药物和一种药物学可接受的载体。
25.一种抑制细胞中A1腺苷受体活性的方法，包括将所述细胞与权利要求1的化合物接触。
26.权利要求25的方法，其中所述化合物是A1腺苷受体的拮抗剂。
27.权利要求25的方法，其中所述细胞是人体细胞。
28.权利要求27的方法，其中所述化合物是A1腺苷受体的拮抗剂。
29.权利要求18的方法，其中所述疾病是哮喘，慢性阻塞性肺部疾病，过敏性鼻炎，或上呼吸道疾病。
30.权利要求29的方法，其中所述患者是人。
31.权利要求30的方法，其中所述化合物是A1腺苷受体的拮抗剂。
32.哮喘的一种组合治疗法，包括权利要求1的化合物，和一种类固醇，β2-兴奋剂，糖皮质激素，lucotriene拮抗剂，或anticolinergic兴奋剂。
33.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1的化合物，和一种药物学可接受载体。
34.权利要求29的方法，其中所述呼吸系统疾病是哮喘，过敏性鼻炎，或慢性阻塞性肺部疾病。
35.权利要求33的药物组合物，其中所述药物组合物是眼周，眼球后或眼内注射配方。
36.权利要求33的药物组合物，其中所述药物组合物是系统应用配方。
37.权利要求33的药物组合物，其中所述药物组合物是外科手术灌注配方。
38.一种治疗与A1腺苷受体相关疾病的包装的药物组合物，包含
(a)一个装有治疗有效量权利要求1的化合物的容器；及
(b)使用所述化合物治疗所述疾病的说明书。
39.权利要求1的化合物的药物学可接受盐。
40.权利要求39的药物学可接受盐，其中权利要求6，8，12，15或16的化合物的药物学可接受盐含有选自钠，钙和铵的阳离子。
41.权利要求18的方法，其中所述A1腺苷受体与充血性心力衰竭相关。
42.具有以下结构的一种化合物：
43.具有以下结构的一种化合物：
44.一种治疗患者与A2a腺苷受体相关疾病的方法，包括为患者施用治疗有效量的权利要求42或43的化合物。
45.权利要求44的方法，其中所述患者是哺乳动物。
46.权利要求45的方法，其中所述哺乳动物是人。
47.权利要求46的方法，其中所述A2a腺苷受体与运动能力，血管舒张，血小板抑制，中性粒细胞超氧化物产生，认知疾病，老年痴呆，或Parkinson′s病相关。
48.权利要求44的方法，其中所述化合物通过刺激腺苷酸环化酶治疗所述疾病。
49.权利要求42或43的化合物的一种水溶性前体药物，其中所述水溶性前体药物在体内代谢为活性药物，其选择性抑制A2a腺苷受体。
50.权利要求49的前体药物，其中所述前体药物在体内通过酯酶催化的水解进行代谢。
51.一种药物组合物，其包含权利要求49的前体药物和一种药物学可接受载体。
52.一种抑制细胞中A2a腺苷受体活性的方法，包括将所述细胞与权利要求42或43的化合物接触。
53.权利要求52的方法，其中所述化合物是所述A2a腺苷受体的拮抗剂。
54.权利要求53的方法，其中所述细胞是人体细胞。
55.权利要求53的方法，其中所述化合物是A2a腺苷受体的拮抗剂。
56一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求42或43的化合物和一种药物学可接受载体。
57.权利要求56的药物组合物，其中所述治疗有效量是有效治疗Parkinson′s病，及与运动能力，血管舒张，血小板抑制，中性粒细胞超氧化物产生，认知疾病，或老年痴呆相关的疾病的量。
58.权利要求56的药物组合物，其中所述药物组合物是眼科配方。
59.权利要求56的药物组合物，其中所述药物组合物是眼周，眼球后或眼内注射配方。
60.权利要求56的药物组合物，其中所述药物组合物是系统应用配方。
61.权利要求56的药物组合物，其中所述药物组合物是外科手术灌注配方。
62.一种Parkinson′s病的组合治疗法，包含权利要求42或43的化合物，及任一种多巴胺增强剂。
63.一种癌症的组合治疗法，包含权利要求42或43的化合物，及任一种胞毒剂。
64.一种青光眼的组合治疗法，包含权利要求42或43的化合物，及一种前列腺素兴奋剂，一种muscrinic兴奋剂，或一种β-2拮抗剂。
65.一种治疗与A2a腺苷受体相关疾病的包装的药物组合物，包含
(a)一个装有治疗有效量权利要求42或43的化合物的容器；及
(b)使用所述化合物治疗所述疾病的说明书。
66.权利要求41或42的化合物的一种药物学可接受盐。
67.权利要求66的药物学可接受盐，其中权利要求41或42的药物学可接受盐包含选自马来酸，延胡索酸，酒石酸，乙酸，磷酸和甲磺酸的阴离子。
68.一种具有以下结构的化合物：
Figure A0182246000111
69.一种抑制细胞内A3腺苷受体活性的方法，包括将所述细胞与权利要求68的化合物接触。
70.权利要求69的方法，其中所述化合物是A3腺苷受体的拮抗剂。
71.权利要求69的方法，其中所述细胞是人体细胞。
72.权利要求71的方法，其中所述化合物是A3腺苷受体拮抗剂。
73.一种治疗患者眼部损伤的方法，包括为患者施用包含治疗有效量的权利要求68的化合物的一种组合物。
74.权利要求73的方法，其中所述损伤包括视网膜或视神经乳头损伤。
75.一种青光眼治疗法，包括为患者施用治疗有效量的权利要求68的化合物。
76.一种青光眼的组合治疗法，包含权利要求68的化合物，及一或多种选自以下一组的化合物：β-肾上腺素受体拮抗剂，α-2肾上腺素受体兴奋剂，碳酸酐酶抑制剂，胆碱能兴奋剂，前列腺素和前列腺素受体兴奋剂，血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂，AMPA受体拮抗剂，5-HT兴奋剂，血管生成抑制剂，NMDA拮抗剂，肾素抑制剂，类大麻酚受体兴奋剂，血管紧张素受体拮抗剂，双氢克尿塞(HCTZ)，促生长素抑制素兴奋剂，糖皮质激素拮抗剂，肥大细胞脱粒抑制剂，α-肾上腺素能受体阻滞剂，α-2肾上腺素受体拮抗剂，凝血烷A2模拟物，蛋白激酶抑制剂，前列腺素F衍生物，前列腺素-2α拮抗剂，多巴胺D1和5-HT2兴奋剂，氧化氮释放剂，5-HT2拮抗剂，环加氧酶抑制剂，肌苷，多巴胺D2受体和α-2肾上腺素受体兴奋剂，多巴胺D1受体拮抗剂和D2受体兴奋剂，抗利尿素受体拮抗剂，内皮缩血管肽拮抗剂，1-(3-羟基-2-膦酰甲氧基丙基)胞嘧啶(HPMPC)及相关的类似物和前体药物，甲状腺激素受体配体，毒蕈碱M1兴奋剂，钠通道阻滞剂，混合作用离子通道阻滞剂，β-肾上腺素受体拮抗剂和PGF2α兴奋剂组合，鸟苷酸环化酶激活物，血管扩张剂，内皮缩血管肽受体调节因子，利尿酸，其它苯氧乙酸类似物，肌动蛋白破坏因子，钙通道阻滞剂及神经保护剂。
77.一种青光眼的组合治疗法，包含权利要求68的化合物，及一或多种选自以下的化合物：β-肾上腺素受体拮抗剂，α-2肾上腺素受体兴奋剂，碳酸酐酶抑制剂，胆碱能兴奋剂，和前列腺素受体兴奋剂。
78.一种药物组合物，包含治疗有效量的权利要求68的化合物，及一种药物学可接受载体。
79.一种治疗与A3腺苷受体相关疾病的包装的药物组合物，包括
(a)一个装有治疗有效量权利要求68化合物的容器；及
(b)使用所述化合物治疗疾病的说明书。
80.一种生产包含权利要求68化合物的组合物的方法，所述方法包括将权利要求68化合物与一个适当载体混合。
81.权利要求68化合物的一种药物学可接受盐。
82.权利要求81的药物学可接受盐，其中所述药物学可接受盐包含选自以下一组的一种阴离子：马来酸，延胡索酸，酒石酸，乙酸，磷酸和甲磺酸。
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