EA002353B1 - Лептин как ингибитор пролиферации опухолевых клеток - Google Patents
Лептин как ингибитор пролиферации опухолевых клеток Download PDFInfo
- Publication number
- EA002353B1 EA002353B1 EA199900981A EA199900981A EA002353B1 EA 002353 B1 EA002353 B1 EA 002353B1 EA 199900981 A EA199900981 A EA 199900981A EA 199900981 A EA199900981 A EA 199900981A EA 002353 B1 EA002353 B1 EA 002353B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- leptin
- cell proliferation
- use according
- growth
- active agent
- Prior art date
Links
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 title claims abstract description 128
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 title claims abstract description 125
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 title claims abstract description 125
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 title claims abstract description 122
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 title claims abstract description 61
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 44
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 24
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 78
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims abstract description 39
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims abstract description 39
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims abstract description 37
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 36
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 30
- 108010019813 leptin receptors Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 102100031775 Leptin receptor Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 27
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 23
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 23
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 claims abstract description 19
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 claims abstract description 19
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 15
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 12
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 11
- 108091005682 Receptor kinases Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 10
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 3
- 102100036721 Insulin receptor Human genes 0.000 claims abstract 2
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 claims abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 47
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 26
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 19
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 9
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 4
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 19
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 abstract description 10
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 abstract description 10
- 230000008747 mitogenic response Effects 0.000 abstract description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 7
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 abstract description 6
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 abstract description 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract description 4
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 abstract description 2
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 abstract 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 abstract 3
- 101100205088 Caenorhabditis elegans iars-1 gene Proteins 0.000 abstract 1
- 101150030450 IRS1 gene Proteins 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 23
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 13
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 13
- 101001063890 Mus musculus Leptin Proteins 0.000 description 12
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 12
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 241001070947 Fagus Species 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 7
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 7
- 235000010099 Fagus sylvatica Nutrition 0.000 description 6
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 6
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 4
- -1 as noted above Substances 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical class [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 3
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 3
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 3
- 210000004293 human mammary gland Anatomy 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102200158977 rs116107386 Human genes 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001063991 Homo sapiens Leptin Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M N,N,N-Trimethylmethanaminium chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)C OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 102000049953 human LEP Human genes 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MWRBNPKJOOWZPW-GPADLTIESA-N 1,2-di-[(9E)-octadecenoyl]-sn-glycero-3-phosphoethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-GPADLTIESA-N 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010034219 Insulin Receptor Substrate Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 102100025087 Insulin receptor substrate 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 101100261999 Rattus norvegicus Tpsab1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100129592 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) mcp7 gene Proteins 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000001621 anti-mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000002987 choroid plexus Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000001400 expression cloning Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000014101 glucose homeostasis Effects 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 229940118526 interleukin-9 Drugs 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004592 isopropanol Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 102000005861 leptin receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108700010839 phage proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000012868 site-directed mutagenesis technique Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035924 thermogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/33—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/2264—Obesity-gene products, e.g. leptin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
Раскрыто применение лептина и молекул, родственных лептину, в онкологии.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к лептину, цитокину, продуцируемому адипоцитами и оказывающему воздействие на различные типы клеток и тканей. В более частном плане это изобретение относится к принципиально новым применениям лептина в области онкологии.
Предпосылки создания изобретения
Лептин, продуцируемый адипоцитом цитокин, регулирующий массу тела, был идентифицирован позиционным клонированием мышиного ой гена (УЕапд и др., 1994), и было обнаружено его действие как на потребление пищи, так и на термогенез (СатрйеИ и др., 1995; СоШпк и др., 1996; На1аак и др., 1995; Ре11еушоиШет и др., 1995; \Уещ1е и др., 1995). Участки, обладающие высоким сродством к связыванию лептина, локализуются в хориоидальном сплетении; экспрессионное клонирование кДНК из этой ткани дает лептиновый рецептор (ОВ-Я) (ТаПадЕа и др., 1995). Известные активности лептина передаются через его рецептор в гипоталамус. Лептиновые рецепторы тем не менее экспрессируют еще и в другие органы, особенно в почку, легкое и печень (Сюй! и др., 1996; Ьее и др., 1996; ТаПадЕа и др., 1995). Кроме того, другая роль лептиновых рецептор-сплайсинговых вариантов, различающихся своим цитоплазматическим доменом, заключается в специфическом действии на ткань мыши (Ьее и др., 1996). Поэтому в дополнение к контролю за потреблением пищи и температурой тела, лептин может оказывать влияние и на другие физиологические функции.
Несмотря на то, что лептин продуцируется адипоцитами, недавний вывод о зависимости между избытком жира и высокими уровнями лептина в сыворотке крови находится в противоречии с представлением о том, что лептин понижает потребление пищи и массу тела (Сопыбше и др., 1996; ЕтебепсЕ и др., 1995; йопщущ! и др., 1995; Майе1 и др., 1995). Эта зависимость и твердо установленная связь между ожирением и резистентностью к инсулину (ЕетЬет и Оо1ау, 1995), подтверждают, что лептин способен модулировать инсулинрегулируемые ответы. Действительно, недавно было опубликовано, что лептин значительно уменьшает базальное и инсулин-индуцированное тирозин-фосфорилирование субстрата-1 инсулинового рецептора (1Я8-1). Это действие лептина на 1Я8-1 фосфорилирование является специфическим, поскольку не уменьшается тирозин-фосфорилирование β-цепи инсулинового рецептора (1Я) (СоЕеп и др., 1996).
Тирозин-фосфорилирование 1Я8-1 с помощью 1Я киназы является ключевой стадией в рецепторной сигнальной системе инсулина, что приводит ко многим из известных инсулиновых активностей (Агак1 и др., 1994; СЕеа!Еат и КаЕп, 1995; Муегк и др., 1994; Муегк и др., 1994;
Муегк и ^ЕЕе, 1993; Яоке и др., 1994; Татето!о и др., 1994; ^ЕЕе и КаЕп, 1994). Передача сигнала 1Я8-1 в прямом направлении по ходу транскрипции опосредуется несколькими ассоциированными белками, один из которых является связывающим белком-2, ассоциированным с рецептором фактора роста (ОЯВ2) (СЕеа!Еат и КаЕп, 1995).
Инсулиновый рецептор (1Я) рассматривают в качестве метаболического рецептора, передающего действие инсулина на гомеостаз глюкозы. Как таковой, он экспрессируется на терминационно дифференцируемые (1етт1иа11у άίί£етеп11а1е6) ткани, такие как жировая ткань, печень и мышечная ткань. Однако многие исследования показали, что 1Я является потенциально митогенным рецептором ш уйто и ш у1уо, когда экспрессируется в опухолевые клетки. Например, функциональные инсулиновые рецепторы (1Як) были обнаружены в нескольких клеточных линиях рака молочной железы, как было установлено тирозин-фосфорилированием 1Я в ответе на лечение инсулином. Кроме того, 1Я передает митогенный ответ в эти клетки, что установлено введением [3Н]-тимидина (МПаххо и др., 1997; МШаххо и др., 1992).
До сих пор не было описано использование лептина в области онкологии в общем плане; лептин до сих пор не был описан как полезное начало для ингибирования пролиферации клеток, особенно пролиферирующих раковых клеток.
Краткое изложение сущности изобретения
Целью настоящего изобретения является использование лептина в качестве ингибитора клеточной пролиферации, например, использование лептина как ингибитора пролиферации раковых клеток.
Другой целью настоящего изобретения является использование одного лептина или лептина в сочетании с другими терапевтическими агентами для лечения различных злокачественных образований.
Еще одной целью настоящего изобретения является использование лептина, слитых с лептином белков, лептиновых мутеинов, агонистов лептинового рецептора, любых их активных фрагментов или фракций, любых их активных аналогов или производных, любых их солей и их смесей, для лечения различных злокачественных образований.
И еще одной целью настоящего изобретения является использование фармацевтических композиций, содержащих один или более из вышеуказанных лептинов, белков, слитых с лептином, лептиновых мутеинов, агонистов лептинового рецептора, любых их активных фрагментов или фракций, любых их активных аналогов или производных, и любых их солей для лечения различных злокачественных образований.
Другие цели настоящего изобретения будут указаны ниже или они будут очевидны из нижеследующего раскрытия.
Настоящее изобретение предлагает использовать лептин в качестве ингибитора клеточной пролиферации. Лептин может быть использован для лечения различных злокачественных образований либо сам по себе, либо в сочетании с другими терапевтическими агентами или способами. Предпочтительное воплощение настоящего изобретения заключается в использовании лептина для ингибирования клеточной пролиферации карциномы молочной железы человека. Пролиферация многих типов опухолевых клеток увеличивается в присутствии различных факторов роста, таких как инсулин и инсулиноподобные факторы роста (ΙΟΕ-Ι). Стимулирующее рост действие инсулина и ЮЕI на клетки опосредуется, по крайней мере, частично 1Я8-1/СЯВ2 каскадом реакций (Муегк и др., 1993). Этот каскад реакций ингибируется лептином. Кроме того, ΙΚ.8-1 является субстратом рецепторных киназ добавочных факторов роста и цитокинов, включающих 1Ь-4 (ИЛ-4, интерлейкин-4) и 1Ь-9 (ИЛ-9, интерлейкин-9) (Ретищ и др., 1995; Υίη и др., 1995; Υίη и др., 1994). Поэтому лептин может ингибировать митогенные ответы некоторых или всех вышеупомянутых факторов роста и цитокинов, также как и других факторов роста, тем самым ингибируя пролиферацию различных типов опухолевых клеток. Представленные примеры включают ингибирование ЮР-1-индуцированной пролиферации и инсулин-индуцированной пролиферации линий Τ-47Ό и МСЕ7 клеток рака молочной железы человека. Настоящее изобретение также предлагает использование для лечения различных злокачественных образований лептина, лептин-слитых белков, лептиновых мутеинов, агонистов лептинового рецептора или любых их активных фрагментов или фракций, и любых их солей, также как и фармацевтических композиций, содержащих лептин, лептинслитые белки, лептиновые мутеины, агонисты лептинового рецептора, их любые активные фрагменты или фракции, или их любые соли.
Более конкретно настоящее изобретение предлагает в качестве ингибиторов пролиферации опухолевых клеток использование активного агента, выбранного из группы, состоящей из лептина, лептин-слитых белков, лептиновых мутеинов, агонистов лептинового рецептора, любых их активных фрагментов или фракций, любых их активных аналогов или производных, любых их солей и любых их смесей.
Примеры осуществления вышеуказанных аспектов настоящего изобретения включают:
(1) применение указанного активного агента в качестве ингибитора клеточной пролиферации для лечения злокачественных образований у млекопитающих;
(2) применение вышеуказанного активного агента в качестве ингибитора опухолей, зависимых от фактора роста;
(3) применение вышеуказанного активного агента в качестве ингибитора клеточной пролиферации карциномы молочной железы человека;
(4) применение указанного активного агента для лечения карциномы молочной железы человека;
(5) применение указанного активного агента для ингибитора стимулирующего рост действия инсулина и ΙΟΕ-Ι на опухолевые клетки, как опосредованное, по крайней мере частично, каскадом реакций связывающего белка-2, рецептор-ассоциированного с субстратом-1 инсулинового рецептора (1КБ-1)/ростовым фактором (6ΚΌ2);
(6) применение для лечения опухолей вышеуказанного активного агента в качестве ингибитора митогенных ответов в опухолевых клетках на одну или более рецепторные киназы, факторы роста и цитокины групп, состоящих из ИЛ-4 и ИЛ-9, для которых ΙΚ.8-1 является субстратом;
(7) применение вышеуказанного активного агента в качестве ингибитора базальной, ΙΟΕ-Ιиндуцированной и инсулин-индуцированной пролиферации опухолевых клеток для лечения злокачественных заболеваний молочной железы человека;
(8) применение указанного активного агента, в котором указанным активным ингредиентом является лептин и в котором указанный лептин используют в качестве названного выше ингибитора или для указанного лечения.
Подобным же образом, настоящее изобретение также предлагает в качестве активного агента, выбранного из группы, состоящей из лептина, лептин-слитых белков, лептиновых мутеинов, агонистов лептинового рецептора, любых их активных фрагментов или фракций, любых их активных аналогов или производных, любых их солей и любых их смесей для использования в приготовлении лекарственного средства для ингибирования пролиферации опухолевых клеток.
Примеры осуществления этого аспекта изобретения включают:
(1) активный агент, как указано выше, для применения в приготовлении лекарственного средства для лечения злокачественных образований у млекопитающих;
(2) активный агент, как указано выше, для использования в приготовлении лекарственного средства для ингибирования опухолей, зависимых от фактора роста;
(3) активный агент, как указано выше, для применения в приготовлении лекарственного средства для ингибирования клеточной пролиферации карциномы молочной железы человека;
(4) активный агент, как указано выше, для применения в приготовлении лекарственного средства для лечения карцином молочной железы человека;
(5) активный агент, как указано выше, для применения в приготовлении лекарственного средства для ингибирования ростстимулирующего действия ЮЕ-Ι и инсулина на клетки опухоли, как опосредованного, по крайней мере частично, каскадом реакций ΙΚ8-1/ΟΚΒ2;
(6) активный агент, как указано выше, для применения в получении лекарственного средства для ингибирования митогенных ответов в опухолевых клетках на одну или более рецепторную киназу, ростовые факторы и цитокины группы, состоящей из ЮЕ-Ι, ИЛ-4 и ИЛ-9, для каждого из которых ΙΚ8-1 является субстратом, для лечения опухолей;
(7) активный агент, как указано выше, для применения в получении лекарственного средства для ингибирования базальной ЮЕ-Ιиндуцированной и инсулин-индуцированной пролиферации опухолевых клеток, для лечения злокачественных заболеваний молочной железы человека;
(8) активный агент, как указано выше, в котором указанным активным агентом является лептин, и указанный лептин используется для приготовления указанного лекарственного средства.
Подобным же образом в другом аспекте настоящее изобретение предлагает фармацевтическую композицию, включающую в качестве активного ингредиента активный агент, как отмечено выше, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель, для ингибирования пролиферации опухолевых клеток.
Предпочтительные примеры этого аспекта настоящего изобретения включают:
(1) фармацевтическую композицию для лечения злокачественных заболеваний у млекопитающих;
(2) фармацевтическую композицию для ингибирования опухолей, зависимых от факторов роста (3) фармацевтическую композицию для ингибирования клеточной пролиферации карциномы молочной железы человека и, тем самым, для лечения карциномы молочной железы человека (4) фармацевтическую композицию для ингибирования стимулирующего рост действия ЮЕ-Ι и инсулина на клетки опухолей, как опосредованного, по крайней мере частично, каскадом реакций ΙΚ8-1/6ΚΒ2 (5) фармацевтическую композицию для ингибирования митогенных ответов в опухолевых клетках на одну или более рецепторные киназы, ростовые факторы и цитокины группы, состоящей из ИЛ-4 и ИЛ-9, для каждого из которых ΙΚ8-1 является субстратом, и, тем самым, для лечения опухолей;
(6) фармацевтическую композицию для ингибирования базальной ЮЕ-1-индуцированной и инсулин-индуцированной пролиферации опухолевых клеток и, тем самым, для лечения злокачественных заболеваний молочной железы человека;
(7) фармацевтическую композицию, в которой указанным активным ингредиентом является лептин.
Настоящее изобретение также предлагает способ для лечения опухолей у млекопитающих или для ингибирования пролиферации опухолевых клеток у млекопитающих, включающий введение пациенту фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению, как это отмечено выше, в подходящей лекарственной форме и с помощью подходящего пути введения. Такие лекарственные формы и пути введения обычно определяются врачами после обследования пациента.
Другие аспекты и предпочтительные примеры настоящего изобретения представлены ниже или будут очевидны из нижеследующего детального описания настоящего изобретения.
Описание фигур
Фиг. 1 иллюстрирует зависимость Τ-47Ό клеточной пролиферации от инсулина, что определено МТТ-окрашиванием;
фиг. 2 - зависимость Τ-47Ό клеточной пролиферации от ЮЕ-Ι, что определено МТТокрашиванием;
фиг. 3 - ингибирование инсулин-индуцированной Τ-47Ό клеточной пролиферации в 10% фетальной сыворотке коровы мышиным лептином, что определено МТТ-окрашиванием;
фиг. 4 - ингибирование инсулин-индуцированной Τ-47Ό клеточной пролиферации в 2% фетальной сыворотке коровы (ЕВ8) мышиным лептином, что определялось по окрашиванию кристаллвиолетом;
фиг. 5 - ингибирование ЮЕ-1-индуцированной Τ-47Ό клеточной пролиферации в 10% фетальной сыворотке коровы (ЕВ8) мышиным лептином, что определялось МТТ-окрашиванием;
фиг. 6 - ингибирование ЮЕ-1-индуцированной Τ-47Ό клеточной пролиферации в 2% фетальной сыворотке коровы (ЕВ8) мышиным лептином, что определялось по окрашиванию кристаллвиолетом;
фиг. 7 - ингибирование ЮЕ-1-индуцированной Τ-47Ό клеточной пролиферации в 2% фетальной сыворотке коровы (ЕВ8) лептином человека, что определялось по окрашиванию кристаллвиолетом;
фиг. 8 - ингибирование инсулин-индуцированной МСЕ7 клеточной пролиферации в среде, свободной от сыворотки, мышиным лептином, что определялось по окрашиванию кристаллвиолетом;
фиг. 9 - ингибирование ЮЕ-1-индуцированной МСЕ7 клеточной пролиферации в среде, свободной от сыворотки, мышиным лептином, что определялось по окрашиванию кристаллвиолетом.
Детальное описание изобретения
Настоящее изобретение касается использования лептина в качестве ингибитора пролиферации опухолевых клеток. Обычно клеточные линии человеческого происхождения, полученные из различных опухолей, могут быть выращены на культуре в присутствии ростовой среды, дополненной фетальной сывороткой теленка в концентрации примерно 10% по объему. Клеточная пролиферация в этих условиях здесь и далее определяется как базальная клеточная пролиферация. Рост клеточных линий многих опухолевых клеток значительно увеличивается при добавлении различных факторов роста, таких как инсулин, эпидермальный фактор роста или инсулиноподобный фактор-1 роста (ЮЕ-Ι) к вышеуказанной культивируемой среде дополненной сывороткой. Включение лептина в ростовую среду с концентрациями в области от 3 до 600 нМ снижает как базальную клеточную пролиферацию, так и клеточную пролиферацию, зависящую от фактора роста.
Результаты экспериментов на клеточной культуре, приведенные ниже на примерах, показывают, что лептин может быть полезным для ингибирования роста различных опухолей. Следовательно, лептин может быть полезен для лечения различных злокачественных образований.
В предпочтительном примере осуществления настоящего изобретения лептин используют для ингибирования клеточной пролиферации рака молочной железы. Когда лептин добавляют к культурам Т-47И клеток карциномы протоков молочной железы (Ашепсап Туре СиИите Со11ес1юи, КоскуШе, МИ; штамм № АТСС НТВ 133), распространение их пролиферации понижается. Подобным же образом, при добавлении лептина к культурам МСЕ7 клеток аденокарциномы молочной железы человека (Ашепсаи Туре СиИите СоИесИои, КоскуШе, ΜΌ; штамм № АТСС НТВ 22), распространение их пролиферации уменьшается. Лептин ингибирует как базальную, ЮЕ-1-индуцированную, так и инсулин-индуцированную пролиферацию Т-47Э и МСЕ7 клеток. Поэтому лептин может быть особенно полезен для лечения карциномы молочной железы.
Ростовое стимулирующее действие инсулина и ΙΕΙ-Ι на клетки опосредовано, по крайней мере, частично тирозин-фосфорилированием ΙΚ8-1 и последующей ассоциацией ΙΚ8-1 с ОКВ2, приводящей к митогенному ответу. Анти-митогенное действие лептина вызвано его способностью уменьшать базальное, инсулининдуцированное и ЮЕ-1-индуцированное тирозин-фосфорилирование ΙΚ8-1, приводящее к связыванию ОКВ2 с ЮЕ-Ι. Кроме того, ΙΚ8-1 является субстратом рецепторных киназ других ростовых факторов и цитокинов, включая ИЛ-4 и ИЛ-9 (Ретшк и др., 1995; Υίη и др., 1994). Поэтому лептин может ингибировать митогенные ответы некоторых или всех вышеупомянутых ростовых факторов и цитокинов, так же как и других митогенов, тем самым ингибируя пролиферацию различных типов опухолевых клеток.
Далее настоящее изобретение относится к производным лептина и его аналогам, включая лептин-слитые белки, лептиновые мутеины, агонисты лептинового рецептора, или их активные фрагменты или фракции, или соли их всех и фармацевтические композиции, содержащие лептин, лептин-слитые белки, лептиновые мутеины, агонисты лептинового рецептора, их активные фракции или соли их всех для лечения различных типов онкологических заболеваний.
При использовании в тексте настоящего изобретения, термин мутеин относится к аналогам лептина, в котором один или более из аминокислотных остатков замещен другими аминокислотными остатками, или исключен один или более аминокислотный остаток, или один или более аминокислотный остаток добавлен к первоначальной лептиновой последовательности без значительного изменения активности полученных в результате продуктов по сравнению с базовым типом лептина или его активными фрагментами или фракциями. Эти мутеины получают известным синтезом и/или с помощью сайт-направленной техники мутагенеза или с помощью какого-либо другого подходящего для этого способа, известного в данной области техники.
Любой такой мутеин предпочтительно имеет последовательность аминокислот, удовлетворительно дубликатную последовательности такого лептина, который обладает по существу одинаковой активностью с лептином или его активными фрагментами или фракциями. Таким образом, можно определить, обладает ли любой данный мутеин в значительной мере той же самой активностью как и лептин, обычными экспериментальными методиками, объектами которого является такой мутеин, например, при анализе простой клеточной пролиферации, какой обладает мутеин, который блокирует клеточную пролиферацию, сохраняя значительную активность лептина, и поэтому имеет, по крайней мере, одно из раскрытых применений лептина, и таким образом обладает в значительной мере одинаковой с ним активностью.
В предпочтительных вариантах настоящего изобретения, любой такой мутеин обладает, по крайней мере, 40%-ной идентичностью или гомологичностью в последовательности одного из лептинов. Более предпочтительно, чтобы он обладал, по крайней мере, 50%-ной, по крайней мере, 60%-ной, по крайней мере, 70%-ной, по крайней мере, 80%-ной или, более предпочти тельно, по крайней мере, 90%-ной идентичностью или гомологичностью.
Мутеины лептина или его активных фрагментов или фракций, которые могут использоваться в соответствии с настоящим изобретением, или кодирующие нуклеиновые кислоты, включают конечный набор в значительной мере соответствующих последовательностей в виде пептидов замещения или полинуклеотидов, которые могут быть, как правило, получены одним из общепринятых в данной области способов без использования дополнительных способов эксперимента, основанных на способах и руководстве, представленных в настоящем изобретении. Для детального описания химии и структуры протеинов см. Монографии 8с1ш1х. 6.Е. и др., Рппар1ек о! Рго!еш 8!гис!иге. 8ргшдег-Уег1ад. №\ν Уогк. 1978; и СгещЮп Т.Е., Рго!е1ик: 81гис1иге аий Мо1еси1аг РгорегНек. А.Н. Егеетаи & Со.. 8аи Егаишксо. 1983. которые включены в данное изобретение в качестве ссылки. Для представления нуклеотидных последовательных замещений, таких как кодоновые последовательности, см. монографии АикиЬе1 и др., кирга. в §§ А.1.1-А.1.24, и 8атЬгоок и др., Сиггеи! Рго1осо1к ίη Мо1еси1аг Вю1оду. 1п1егкс1еисе Ν.Υ. §§ 6.3 и 6.4 (1987. 1992) в разделе Арреийюек С и Ό.
Предпочтительными изменениями для мутеинов в соответствии с настоящим изобретением являются изменения, известные как консервативные замещения. Консервативные аминокислотные замещения лептиновых полипептидов или белков или его активных фрагментов или фракций могут включать в пределах группы синонимические аминокислоты, которые обладают достаточно сходными физикохимическими свойствами, и такое замещение между членами этой группы будет сохранять биологическую функцию молекулы, Сгаи!йат. 8с1еисе. Уо1.185. рр.862-864 (1974). Ясно, что инсерции и делеции аминокислот могут быть также сделаны в определенной выше последовательности без изменения их функций, особенно, если инсерции или делеции включают только несколько аминокислот, например, до тридцати, и особенно, до десяти и не удаляют или заменяют аминокислоты, которые являются существенными в отношении функциональной конформации, например, цистеиновых остатков, Аийикеи. Рппар1ек Т1а! Соуегп Т1е Ео1йшд о! Рго!еш Сйашк. 8аеисе. Уо1. 181. рр. 223-230 (1973). Белки и мутеины, полученные такими делециями и/или инсерциями, включены в объем границы настоящего изобретения.
Предпочтительно, чтобы синонимические аминокислотные группы были теми группами, которые указаны в таблице I. Более предпочтительными синонимическими аминокислотными группами являются группы, указанные в таблице II. и более предпочтительно, чтобы синонимические аминокислотные группы были теми, которые указаны в таблице III.
Таблица I. Предпочтительные группы синонимических аминокислот
| Аминокислота | Синонимическая группа |
| 8ег | 8ег. Т11Г. 61у. Аки |
| Агд | Агд. 61и. Бук. 61и. Н1к |
| Ьеи | Не. Р1е. Туг. Ме!. Уа1. Беи |
| Рго | 61у. А1а. Т1п. Рго |
| Тйг | Рго. 8ег. А1а. 61у. Н1к. С1и. Т1г |
| А1а | 61у. Т1п. Рго. А1а |
| Уа1 | Ме!. Туг. Р1е. Не. Беи. Уа1 |
| О1у | А1а. Т11Г. Рго. 8ег. 61у |
| Не | Ме!. Туг. Р1е. Уа1. Беи. Не |
| Р1е | Тгр. Ме!. Туг. Не. Уа1. Беи. Р1е |
| Туг | Тгр. Ме!. Р1е. Не. Уа1. Беи. Туг |
| Сук | 8ег. Т1п. Сук |
| Н15 | 61и. Бук. 61и. Т11Г. Агд. Н1к |
| О1и | 61и. Бук. Аки. Н1к. Т1п. Агд. 61и |
| Аки | 61и. Акр. 8ег. Аки |
| Бук | 61и. С1и. Н1к. Агд. Бук |
| Акр | 61и. Аки. Акр |
| О1и | Акр. Бук. Аки. 61и. Н1к. Агд. 61и |
| Ме! | Р1е. Не. Уа1. Беи. Ме! |
| Тгр | Тгр |
Таблица II. Более предпочтительные группы синонимических аминокислот
| Аминокислота | Синонимическая группа |
| 8ег | 8ег |
| Агд | Н1к. Бук. Агд |
| Беи | Беи. Не. Р1е. Ме! |
| Рго | А1а. Рго |
| Тйг | Тйг |
| А1а | Рго. А1а |
| Уа1 | Уа1. Ме!. Не |
| О1у | О1у |
| Не | Не. Ме!. Р1е. Уа1. Беи |
| Р1е | Ме!. Туг, 11е, Беи. Р1е |
| Туг | Р1е. Туг |
| Сук | Сук. 8ег |
| Н1к | Н1к. 61и. Агд |
| 61и | 61и. 61и. Н1к |
| Аки | Акр. Аки |
| Бук | Бук. Агд |
| Акр | Акр. Аки |
| Аминокислота | Синонимическая группа |
| О1и | 61и. 61и |
| Ме! | Ме!. Р1е. Не. Уа1. Беи |
| Тгр | Тгр |
Таблица III. Наиболее предпочтительные группы синонимических аминокислот
| Аминокислота | Синонимическая группа |
| 8ег | 8ег |
| Агд | Агд |
| Беи | Беи. Не. Ме! |
| Рго | Рго |
| Тйг | Тйг |
| А1а | А1а |
| Уа1 | Уа1 |
| С1у | С1у |
| 11е | 11е, Ме!, Беи |
| Рйе | Р11е |
| Туг | Туг |
| Сук | Сук, 8ег |
| Ηίκ | Н1к |
| С1п | С1п |
| Акп | Акп |
| Бук | Бук |
| Акр | Акр |
| С1и | С1и |
| Ме! | Ме!, 11е, Беи |
| Тгр | Ме! |
Примеры осуществления аминокислотных замещений в белках, которые могут быть использованы для получения мутеинов лептина или его активных фракций для применения в настоящем изобретении, включают любые известные стадии способов, такие как представленные в патентах США ЯЕ 33653, 4959314, 4588585 и 4737462, Магк и др.; 5116943, Койк и др.; 4965195, Матеи и др.; 4879111, Сйопд и др.; и 5017691, Ьее и др.; и лизинзамещенные белки, представленные в патенте США № 4904584 (8йате и др.).
В другом предпочтительном примере осуществления настоящего изобретения любой мутеин лептина или его активные фракции для использования в настоящем изобретении обладают аминокислотной последовательностью, по существу соответствующей аналогичной последовательности в лептине.
Термин по существу соответствующий предназначен для включения в описание белков с незначительными изменениями в аминокислотной последовательности природного белка, которые не влияют на основные свойства природных белков, особенно не влияют на их способность, касающуюся ингибирования клеточной пролиферации. Тип изменений, которые обычно подразумеваются и включаются в выражение соответствующие по существу, являются теми типами изменений, которые могут быть достигнуты с использованием обычных методов мутагенеза ДНК, кодирующей лептин, что приводит к некоторым небольшим изменениям и к сохранению нужной активности способом, который обсуждался выше.
В соответствии с настоящим изобретением мутеины включают белки, кодированные нуклеиновой кислотой, такой как ДНК или РНК, которая гибридизируется с ДНК или РНК, которая кодирует лептин в соответствии с настоящим изобретением при обязательных условиях. Такая нуклеиновая кислота должна являться основным кандидатом для того, чтобы определить, кодирует ли она полипептид, у которого сохраняется функциональная активность лепти на, описанного в настоящем изобретении. Термин обязательные условия относится к условиям гибридизации и последующим условиям промывки, которые, как это принято в данной области техники, обозначаются как обязательные. См. АнкнЬе1 и др., Сиггеп! Рго!осо1к ίη Мо1еси1аг Вю1оду, кирга, 1п!егкс1епсе, ΝΥ, §§6.3 и 6.4 (1987, 1992), и 8атЬгоок и др., кирга. Без ограничения, примеры обязательных условий включают условия промывки на 12-20°С ниже рассчитанной Тт гибрида при исследовании, например, в растворе 2 х 88С (растворе цитрата и хлорида натрия) и 0,5%-ном растворе 8Ό8 (растворе додецилсульфата натрия) в течение 5 мин, в растворе 2 х 88С и 0,1%-ном растворе 8Ό8 в течение 15 минут; в растворе 0,1 х 88С и 0,5%-ном растворе 8Ό8 при 37°С в течение 3060 мин и затем в растворе 0,1 х 88С и 0,5%-ном растворе 8Ό8 при 68°С в течение 30-60 мин. Для специалистов в данной области техники ясно, что обязательные условия также зависят от длины ДНК последовательностей, олигонуклеотидных зондов (таких зондов, которые включают 10-40 оснований) или смешанных олигонуклеотидных зондов. При использовании смешанных зондов предпочтительно применять тетраметиламмоний хлорид (ТМАС) вместо 88С. См. АикиЬе1, кирга.
Термин лептин-слитые белки или просто слитые белки означает полипептид, включающий лептин или его активные фракции или его мутеин, слитый с другим белком, который обладает, например, продолжительным временем пребывания в жидкостях организма. Лептин или его активные фракции могут быть таким образом слиты с другим белком, полипептидом или им подобными образованиями.
В настоящем контексте термин соли относится как к солям карбоксильных групп, так и к солям присоединения кислот аминогрупп лептина, его активных фракций, мутеинов или их лептин-слитых белков. Соли карбоксильной группы могут быть получены с использованием известных в данной области техники приемов, и включают неорганические соли, например, соли натрия, кальция, аммония, железа или цинка и им подобные соли, а также соли с органическими основаниями, как например соли, образованные аминами, такими как триэтаноламин, аргинин или лизин, пиперидин, прокаин и им подобные. Соли присоединения кислот включают, например, соли, образованные минеральными кислотами, такими как, например, хлористоводородная (соляная) кислота или серная кислота, и соли, образованные органическими кислотами, такими как, например, уксусная кислота или щавелевая кислота. Безусловно, любые такие соли должны обладать по существу одинаковой активностью по отношению к лептину или его активным фракциям.
Термин функциональные производные, как он используется в настоящем контексте, охватывает производные лептина или его активные фрагменты или фракции, и его мутеины и лептин-слитые белки, которые могут быть получены из функциональных групп, присутствующих как боковые цепи на аминокислотных остатках или в Ν- или С-терминальных группах, способами, известными в данной области техники, и эти производные включаются в настоящее изобретение до тех пор, пока они остаются фармацевтически пригодными, то есть до тех пор, пока они не нарушают активность белка, которая является по существу равной активности лептина, и не придают токсических свойств композициям, содержащим их. Эти производные могут, например, включать полиэтиленгликольные боковые цепи, которые могут маскировать антигенные сайты и увеличивать пребывание лептина или его активных фракций в жидкостях организма. Другие производные включают алифатические сложные эфиры карбоксильных групп, амиды карбоксильных групп, полученных реакцией с аммиаком или с первичными или вторичными аминами, Νацилпроизводные свободных аминогрупп аминокислотных остатков, образованные ацильными фрагментами (например, алканоильными или карбоциклическими ароильными группами) или О-ацильные производные свободных гидроксильных групп (например таких, как серилили треонил аминокислотные остатки), образованные ацильными фрагментами.
При использовании термина активные фрагменты или фракции лептина, лептиновых мутеинов и лептин-слитых белков настоящее изобретение охватывает любой фрагмент или любые предшественники полипептидной цепи лептина, или слитых белков, содержащих любой такой фрагмент лептина, сам по себе или вместе с ассоциированными молекулами или связанными с ними остатками, например остатками сахаров или фосфатными остатками, или агрегатами любых из указанных производных, при условии что указанная фракция по существу имеет ту же активность, как и активность лептина.
Далее настоящее изобретение относится к применению природных и синтетических агонистов лептинового рецептора, которые по существу подобны лептину в их способности ингибировать клеточную пролиферацию. Такие агонисты могут быть выбраны из библиотеки пептидов, из библиотеки аналогов пептидов или из случайной (рандомизированной) библиотеки органических молекул. Выбор осуществляется способами, известными в данной области техники, фактически по способности выбранных агонистов связываться лептиновым рецептором. Например, библиотека случайных пептидов может быть получена как прохроматическая (ргокатуоДс) экспрессия плазмид, осуществляющих ДНК кодирование для случайного пептида, слитого с белком-носителем. Другим примером является система фагового фенотипа, в которой фенотип экспрессии является фагом, включающим ДНК-кодирование случайного пептида, и которая включена в один из внешних фаговых белков. Фаги, кодирующие агонисты или антагонисты слитых пептидов, выделяют из фаговых библиотек, например, пэннингом на подложках, покрытых лептиновым рецептором. Сочлененные (ЬоииД) фаги выделяют и затем амплификируют в бактериях. Требуется, как правило, несколько повторов процедуры (прохождений) - пэннинг-амплификация, для того, чтобы получить фаги, экспрессирующие слитые пептиды (ехртеккшд Гикеб рерббек), обладающие высоким сродством к лептиновому рецептору. Затем выделенный фаг подвергают амплификации и определяют последовательность ДНК, кодирующую пептид. Альтернативно, библиотеки случайных пептидов или библиотеки других молекул получают твердофазным синтезом на полимерных матрицах с использованием способов, известных в данной области техники. Матрицы, несущие пептид или другую молекулу, обладающую сродством к лептиновому рецептору, выбирают из библиотеки, например, путем связывания (фиксации) меченого лептинового рецептора, например, флуоресцентно меченного лептинового рецептора. Затем отбирают положительные матрицы и определяют структуру пептида или другой молекулы, присутствующей на матрице. Если матрица несет пептид, последовательность в пептиде определяют анализом последовательности (аминокислотной) белка. Если матрица является обычной органической молекулой из библиотеки (случайной), то молекулу отделяют от матрицы и определяют ее структуру способами, известными в данной области техники, такими как массспектрометрия, ядерный магнитный резонанс и им подобные. Затем выбранные пептиды, идентифицированные по сродству к лептиновому рецептору, далее отбирают вышеописанным способом по их способности ингибировать клеточную пролиферацию.
В соответствии с этим лептин, его активные фракции, лептиновые мутеины, лептиновые слитые белки, агонисты лептинового рецептора и их соли, их функциональные производные и их активные фрагменты или фракции предлагают для лечения различных злокачественных образований, предпочтительно для лечения опухолей, зависимых от ростового фактора, и более предпочтительно, для лечения карцином молочной железы.
Кроме того, настоящее изобретение относится к применению фармацевтических композиций, включающих фармацевтически приемлемый носитель и лептин настоящего изобретения, или его активные мутеины, слитые протеины, агонисты лептинового рецептора и их соли, их функциональные производные или их активные фракции.
Фармацевтические композиции настоящего изобретения получают для введения в качестве лекарственного средства смешением лептина или его производных, или агонистов лептинового рецептора с физиологически приемлемыми носителями и/или стабилизаторами, и/или наполнителями, и их получают в лекарственных формах, например, лиофилизацией в дозировочных флаконах. Метод введения может быть выбран из любых приемлемых способов введения для подобных агентов, что будет зависеть от нарушений, которые следует лечить, например, внутривенно, внутримышечно, подкожно, посредством локальной инъекции или местного нанесения или посредством непрерывного вливания, и т.д. Количество введенного активного соединения будет зависеть от способа введения, болезни, которую лечат, и состояния пациента. Локальное введение, например, требует более низкого количества белка по отношению к массе тела, чем внутривенное введение. Типичные активные количества лептина для инъекции составляют 0,1-1000 мкг/кг массы тела и предпочтительно составляют от 1 до 10 мкг/кг. Активные количества производных лептина и агонистов лептинового рецептора могут быть по существу теми же, которые применяются в случае лептина в расчете на моли.
Лептин может вводиться больным раком, например, путем инъекций, либо отдельно, либо в сочетании с другими терапевтическими агентами или в сочетании с другими терапевтическими подходами.
Далее настоящее изобретение проиллюстрировано следующими неограничивающими его примерами.
Пример 1. Определение клеточной пролиферации МТТ-окрашиванием.
Реагенты.
МТТ-раствор: бромид 3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия, 5 мг/мл в растворе хлорида натрия с фосфатным буфером. До использования хранится при -20°С.
Растворитель: Конц. НС1 (450 мкл) в 2пропаноле (100 мл).
Методика.
Выращивают клетки на 96 луночных планшетах в присутствии различных стимуляторов роста и ингибиторов роста. В определенное время в каждую лунку прибавляют МТТраствор (10 мкл). Инкубируют 2,5-3 ч при 37°С. Супернатант отсасывают в вакууме, используя иглу с точной калибровкой. Прибавляют растворитель (100 мкл) и снимают показатели, характеризующие поглощение, с помощью микропланшетного считывающего устройства, используя 570 нМ фильтр, с вычетом фона при 630 нм.
Пример 2. Определение клеточной пролиферации окрашиванием кристаллвиолетом.
Методика.
Выращивают клетки на 96 луночных планшетах в присутствии различных стимуляторов роста и ингибиторов роста. В определенное время в каждую лунку прибавляют 12,5%ный раствор глутарового альдегида (40 мкл). Инкубируют 30 мин при комнатной температуре. Затем промывают микропланшет водой, сушат и прибавляют в каждую лунку водный раствор кристаллвиолета (0,1%, 0,1 мл). Затем микропланшет инкубируют в течение 30 мин, промывают водой и снимают показатели при 540 нм с вычетом фона при 630 нм.
Пример 3. Определение инсулинзависимой Τ-47Ό клеточной пролиферации.
Τ-47Ό клетки человека (Атепсап Туре СиНиге Со11ес11оп, КоскуШе, ΜΌ; штамм № АТСС НТВ 133), были высеяны в 96 луночные планшеты, 3 х 105 клеток на мл в ΌΜΕΜ (в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла) и в 1 0%-ную фетальную сыворотку коровы (РВ8), 0,1 мл на лунку. В различные лунки прибавляли человеческий инсулин в увеличивающихся концентрациях, планшеты инкубировали в течение 72 ч и затем определяли число клеток МТТ-окрашиванием (фиг. 1). Приведены средние результаты из 8 репликаций. Для дальнейших исследований, основываясь на степени клеточной пролиферации, приведенной на фиг.
1, была использована концентрация инсулина, равная 50 нМ.
Пример 4. Определение ЮР-1-зависимой Τ-47Ό клеточной пролиферации.
Τ-47Ό клетки человека были высеяны в 96 луночные планшеты, 3 х 105 клеток на мл в ΌΜΕΜ и в 10%-ную фетальную сыворотку коровы (РВ8), 0,1 мл на лунку. В различные лунки прибавляли человеческий ЮР-1 в увеличивающихся концентрациях, планшеты инкубировали в течение 3-х дней, и затем определяли число клеток МТТ-окрашиванием (фиг. 2). Приведены средние результаты из 8 репликаций. Для дальнейших исследований, основываясь на степени клеточной пролиферации, приведенной на фиг.
2, была использована концентрация ЮР-1, равная 50 нг/мл.
Пример 5. Ингибирование лептином инсулин-индуцированной Τ-47Ό клеточной пролиферации.
Τ-47Ό клетки (3 х 105 клеток на мл) в ΌΜΕΜ с 10%-ной РВ8 были высеяны в 96 луночные планшеты (0,1 мл на лунку). Клетки обрабатывались инсулином (50 нМ) в присутствии или в отсутствие определенных концентраций мышиного лептина. Планшеты инкубировались при 37°С в 5%-ном СО2 в течение 48 ч. Затем клетки окрашивались МТТ. Полученные данные приведены с учетом (±) стандартной ошибки опыта (8Ε, п=8). Результаты показывают, что лептин значительно ингибирует инсулин-индуцированную клеточную пролиферацию (фиг. 3).
Τ-47Ό клетки (3 х 105 клеток на мл) в ΌΜΕΜ дополненной 10%-ной ЕВ8 высеивались в 96 луночные планшеты (0,1 мл на лунку). Через день среда заменялась ΌΜΕΜ, дополненной 2%-ной ЕВ8, и через день была проведена обработка инсулином (50 нМ) в присутствии и в отсутствие определенных концентраций мышиного лептина в ΌΜΕΜ-2%ΕΒ8. Планшеты инкубировались при 37°С в 5% СО2 в течение 48 ч. Затем клетки окрашивались кристаллвиолетом. Данные приведены с учетом стандартной ошибки опыта, ±8Ε, (η=8). Результаты показывают, что лептин значительно ингибирует инсулининдуцированную клеточную пролиферацию (фиг. 4).
Пример 6. Ингибирование лептином ЮЕ-Ιиндуцированной Τ-47Ό клеточной пролиферации.
Τ-47Ό клетки (3 х 105 клеток на мл) в ΌΜΕΜ, дополненной 10%-ной ЕВ8, были высеяны в 96 луночные планшеты (0,1 мл на лунку). Клетки обрабатывались ЮЕ-Ι (50 нг/мл) в присутствии или в отсутствие определенных концентраций мышиного лептина. Планшеты инкубировались при 37°С в 5%-ном СО2 в течение 48 ч. Затем клетки окрашивались МТТ. Полученные данные приведены с учетом (±) стандартной ошибки опыта (8Ε, п=8). Результаты показывают, что лептин значительно ингибирует ЮР-1-индуцированную клеточную пролиферацию (фиг. 5).
Τ-47Ό клетки (3 х 105 клеток на мл) в ΌΜΕΜ, дополненной 10%-ной ЕВ8, высеивались в 96 луночные планшеты (0,1 мл на лунку). Через день среда заменялась ΌΜΕΜ, дополненной 2%-ной ЕВ 8, и через день была проведена обработка ЮЕ-Ι (50 нг/мл) в присутствии и в отсутствие определенных концентраций мышиного лептина в ΌΜΕΜ-2% ЕВ 8. Планшеты инкубировались при 37°С в 5% СО2 в течение 48 ч. Затем клетки окрашивались кристаллвиолетом. Данные приведены с учетом стандартной ошибки опыта, (±8Ε, η=8). Результаты показывают, что лептин значительно ингибирует ЮЕ-Ιиндуцированную клеточную пролиферацию (фиг. 6).
Τ-47Ό клетки (3 х 105 клеток на мл) в ΌΜΕΜ, дополненной 10%-ной ЕВ8, высеивались в 96 луночные планшеты (0,1 мл на лунку). Через день среда заменялась ΌΜΕΜ с 2%-ной ЕВ8 и через день была проведена обработка ЮЕ-Ι (50 нг/мл) в присутствии и в отсутствие определенных концентраций человеческого лептина в ^ΜΕΜ-2%ΕВ8. Планшеты инкубировались при 37°С в 5% СО2 в течение 48 ч. Затем клетки окрашивались кристаллвиолетом. Данные приведены с учетом стандартной ошибки опыта, (±8Ε, η=8). Результаты показывают, что лептин значительно ингибирует ЮЕ-Ιиндуцированную клеточную пролиферацию (фиг. 7).
Пример 8. Ингибирование лептином ΜСΕ7 клеточной пролиферации.
ΜСΕ7 клетки аденокарциномы молочной железы человека (3 х 105 клеток на мл, АтеНсаи Τуρе СиИиге Εο^Μίοΐ! ЯоскуШе, ΜΌ; штамм № АТСС ΗΤΌ 22), дополненной 6%-ной ЕВ 8, были высеяны в 96 луночные планшеты (0,1 мл на лунку). Через день среда была заменена свободной от ΌΜΕΜ и еще через день клетки были обработаны инсулином (50 нМ) в присутствии или в отсутствие определенных концентраций мышиного лептина в свободной от сыворотки среде. Планшеты инкубировались при 37°С в 5%-ном СО2 в течение 48 ч. Затем клетки окрашивались кристаллвиолетом. Полученные данные приведены с учетом ± 8Ε (п=8). Результаты показывают, что лептин значительно ингибирует инсулин-индуцированную клеточную пролиферацию (фиг. 8).
Пример 9. Ингибирование лептином ЮЕ-Ιиндуцированной МСР7 клеточной пролиферации.
ΜСΕ7 клетки аденокарциномы молочной железы человека в ΌΜΕΜ с 10%-ной ЕВ 8 были высеяны в 96 луночные планшеты (3 х 104 клеток на мл, 0,1 мл на лунку). Через день среда была заменена свободной от сыворотки средой. Еще через день клетки были обработаны ЮЕ-Ι (50 нг/мл) в присутствии или в отсутствие определенных концентраций мышиного лептина в свободной от сыворотки среде.
Планшеты инкубировались при 37°С в 5%ном СО2 в течение 96 ч. Затем клетки окрашивались кристаллвиолетом. Полученные данные приведены с учетом ± 8Ε (п=8). Результаты показывают, что лептин значительно ингибирует инсулин-индуцированную клеточную пролиферацию (фиг. 9).
Литературные ссылки
АгаИ, Ε., Ырек, Μ.Α., Рай1, М.Е., Вгинтд, ЕС., Наад, В. г., ίοΐιηκοιτ Я.8., апб Καίιη. С.Я. (1994). Айетайуе раШтау οί ίηκιι1ίη ίη тюе \νί11ι 1агде1еб άίκπψΐίοη οί (Не ΙΡ8-1 деве [кее сοттепί8]. ЫаШге 372, р186-90.
Аи8иЬе1, ЕМ. е( а1., ебк., СиггеШ Ρτοΐο^ΐκ Ιη Μο^αιΕίΓ Вюкду.
СатрйеИ, Ь.А., 81111111, Е.Е, Сикех, Υ., Оеνοκ, Я., апб Вит. Р. (1995). ЯетотЬтай тοи8е ОВ рго1ет: й^эбеисе ίοτ а репр11ега1 К1дг1а1Никтд аб^рο8^(у апб сегИга1 аеига1 ιΜ\\όγ1<κ. 8с1еасе 269, 546-549.
С11еа111ат. В., апб Каки С.Я. (1995). Ιηκπίίη ;κΙίοη апб (Не тки1т κί^ηηΐίыд ικΙ\\όγ1<. Εηάο^ Яеν 16, р117-42.
^οίίΐ, ЕА., 8каГег, А.XV., Σίφ^ιά^ Τ.Ε, 8тйй-6Ьиг. 1., ΜΠάκ-πί А., Р1айка, Ό., апб 8ηο6дгакк, Н.Я. (1996). Nονе1 В219/ОВ гесерЮг ίκοΓοπηκ: Ρο88^Ь1е га1е οί 1ер1т ίη кетаЮрο^еκ^κ апб ι^τού^!^. №11иге Μеб^с^пе 2, 585-589.
Εοΐ^η, В., ΝονΚΕ Ό., апб ЯиЬт81ет, Μ. (1996). ΜοάιιΕιΙίοη οί 1П8и11п ас1Юбек Ьу 1ер1т. 8степсе 274, 1185-1188.
СоШпк, 8., КиЕп, С.М., Ре!го, А.Е., 8текк, А.С., СЕгипук, В.А., апб 8игтей, Я.8. (1996). го1е оί 1ерЛч 1п На! геди1айоп. №йиге 380, 677.
Сопкчбте, Я.У., 8тЕа, М.К., Нечтап, М.Ь., Кпаисшпак, А., 81ерЕеп5, Т.У., Ыусе, М.Я., ОЕаииеκ^аи, ЕР., Магсо, С.С., Мскее. Ь.Е, Ваиег, Т.Ь., апб Саго, ЕЕ. (1996). 8егит чттипогеасйуе 1ер!т сопсейгайопк ш погта1-теечдЕ! апб оЬеке Еитапк. N Епд1 ί Меб 334, 292-295.
Ее1Ьег, ЕР., апб Со1ау, А. (1995). Яеди1а!юп оί пийкп! текЬоЕкт апб епегду ехрепбйиге. Ме!аЬоЕкт 44, 8ирр1 2, р. 4-9.
ЕгебегкЕ, Я.С., Натапп, А., Апбегкоп, 8., ЬоИтапп, В., Ьотее11, В.В., апб ЕЕег, 1.8. (1995). Ьербп 1еуе1к гейес! Ьобу Ир1б соп(еп( т тке: Еучбепсе Ног бкМпбисеб гекк!апсе (о 1ербп ас!юп. №11иге Меб I, 1311-1314.
На1аак, ЕЬ., Са]|^а1а. К.8., МаНЫ, М., СоЕеп, 8.Ь., СЕай, В.Т., ЯаЬтотей/, Ό., Ьа11опе, Я.Ь., Виг1еу, 8.К., апб Егкбтап, ЕМ. (1995). УечдЕкгебистд еННес!к оН !Ее р1акта рго!ет епсобеб Ьу !Ее оЬеке депе [кее соттейк]. 8скпсе 269, р. 543-6.
Ьее, С.Н., Ргоепса, Я., Мойе/, ЕМ., Сагго11, К.М., Оагччккхабей ЕС., Ьее, ЕЕ, апб Егкбтап ЕМ. (1996). АЬпогта1 кр1ктд оН Ле 1ерйп гесер!ог ш бчаЬебс тке. Мчйчге 379, 632-635.
Бопп^й, Е., Агпег, Р., №гбНогк, Ь., апб 8сЕаШпд, М. (1995). Оуегехргекккп оН Ле оЬеке (оЬ) депе т абчроке бккие оН Еитап оЬеке киЬ_)ес!к. №йиге Меб I, 950-953.
МаННеч, М., На1аак, Е, Яауиккт, Е., Рга!1еу, Я.Е., Ьее, С.Н., /Напу Υ., Ееч, Н., Кчт, 8., Ьа11опе, Я., ЯапдапаЛап, 8., Кегг, Р.А., апб Епебтап, ЕМ. (1995). Ьербп 1еуе1к т Еитап апб гобеп(: Меакигетей оН р1акта 1ербп апб оЬ ЯNА т оЬеке апб теечдЕйгебисеб кпЬ|ес(к. №йиге Меб I, 1155-1161.
МПаххо, С., 8счайа, Ь., Рара, V., Со1бйпе, Ι.Ό., апб ^дпей, Я. (1997). А8РВ-10 ткиЕп тбисйоп оН тсгеакеб тйодейс гекропкек апб рЕепо(урк сЕапдек т Еитап Ьгеак! ерЕЕеЕа1 се11к: еучбепсе Ног епЕапсеб т!егас!юпк тейЕ !Ее ЕчкиЛч11ке дготеЛ Найог-Ι гесер!ог. Мо1ес. Сагстодепе818 18, 19-25.
МШаххо, С., Сюгдто, Е., Оатайе, С., 8ипд, С., 8!атрНег, М.Я., ^дпей, Я., Со1бйпе, I., апб ВеЛоге, А. (1992). ЛкиЕп гесер!ог ехргеккюп т Еитап Ьгеак! сапсег се11 Епек. Сапсег Яек. 52, 3924-3930.
Муегк, М.С., Л, 8ип, Х.Е, СЕеаЛат, В., 1асЕпа, В.Я., С1акЕееп, Е.М., Васкег, ЕМ., апб УЕйе, М.Е. (1993). Л8-1 чк а соттоп е1етей т ткиЕп апб ткиЕпЛке дготеЛ Найогй кчдпаЕпд (о Ле рЕокрЕайбуйпокйо1 3'-к1паке. Епбосппо1оду 132, р. 1421-30.
Муегк, М.С., 1г., 81.111 Х.Е, апб УЕйе, М.Е. (1994). ТЕе Л8-1 бдпаЛчд кук!ет. Тгепбк ВчосЕет 8а 19, р. 289-93.
Муегк, М.С., 1г., Уапд, Ь.М., 8ип, Х.Е, 2Еапд, Υ., ΥепикЕ, Ь., 8сЕ1екктдег, Е, Ркгсе, ЕН., апб УНпе, М.Е. (1994). Яо1е оН ЖБй-СЯВ сотр1ехек т тки1т кчдпаИпд. Мо1 Се11 Вю1 14, р. 3577-87.
Муегк, М.С., ίτ., апб УНпе, М.Е. (1993). ТЕе пете е1етейк оН ткиЕп бдпаЕпд. ЛкиЕп гесер!ог киЬк(га(е-1 апб рго!етк тейЕ 8Н2 ботаичк. ОчаЬекк 42, р643-50.
Ре11еутоийег, М.А., ^1Κ^ М.Е, Вакег, М.В., НесЕ!, Я., У1п!егк, Ό., Воопе, Т., апб СоШпк, Е. (1995). ЕНес!к оН Ле оЬеке депе ргобпс( оп Ьобу теечдЕ! геди1а!юп т оЬ/оЬ тке [кее соттейк]. 8скпсе 269, р540-3.
Регшк, А., УйЕиЕп, В., Кеедап, А.О., №1тк, К., СагНет. Е., Л1е, ΕΝ., Раи1, У.Е., Ркгсе, ЕН., апб ЯоЛтап, Р. (1995). [п(ег1еик1п 4 кчдпа1к ЛгоидЕ !тео ге1а!еб раЛтеаук. Ргос №111 Асаб 8с1 И8А 92, 7971-7975.
Яоке, Ό.ν., 8аЕк1, А.Я., Ма_)итбаг, М., Оескег, 8.Е, апб О1еНкку, ЕМ. (1994). ЛкиЕп гесер!ог киЬкййе 1 чк гесцчкеб Ног 1пкпНп-теб1йеб тйодейс к1дпа1 (гапкбисИоп. Ргос №а!1 Асаб 8а И8А 91, р. 797-801.
8атЬгоок е! а1., (1989) Мо1еси1аг с1ошпд: А 1аЬога!огу Мапиа1, Со1б 8рппд НагЬог ЬаЬога!огу Ргекк, Со1б 8рйпд НагЬог, Ν.Υ.
Татето!о, Н., Каботеакч, Т., ТоЬе, К., Уадк Т., 8акига, Н., Науакатеа, Т., ТегаисЕч, Υ., Иекч, К., КаЬигадч, Υ., 8а!оЕ, 8., апб е! а1. (1994). Лки1т гекчйапсе апб дготеЛ ге!агбайоп т тке 1асктд тки1т гесер!ог киЬк!га!е-1 [кее соттейк]. №а!иге 372, р. 182-6.
ТайадЕа, Ь.А., ОетЬккН М., Уепд, X., Оепд, №.Н., Си1реррег, Е, Эсуок, Я., ЯкЕагбк, С. Е, Сатрйе1б, Ь.А., С1агк, Е.Т., Эеебк, Е, Мшг, С., 8апкег, 8., Мойайу, А., Мооге, К.Е, 8ти!ко, Е8., Маук, С.С., Уоо1Н, Е.А., Мотое, С.А., апб Террег, Я.Е (1995). [бепбПсйюп апб ехргеккюп с1ошпд оН а 1ерйп гесер!ог, ОВ-Я. Се11 83, 12631271.
^е1д1е, Ό.8., Викотекк1, Т.Я., Еок!ег, Ό.Ο, Но1бегтап, 8., Кгатег, ЕМ., Ьаккег, С., Ьойопбау, С.Е., Ргипкагб, Э.Е., Яаутопб, С., апб Кш|рег, ЕЬ. (1995). ЯесотЫпай оЬ рго!ет гебисек Неебтд апб Ьобу теечдЕ! т !Ее оЬ/оЬ тоике. 1 СЕп Луек! 96, 2065-2070.
УбИе, М.Е., апб КаЕп, С.Я. (1994). ТЕе ткиЕп к1дпа11пд кук!ет. 1 Вю1 СЕет 269, р. 1-4.
Υώ, Т.С., Ке11ег, 8.Я., 0ие11е, Е.У., УйЛиЕп, В.А., Ткапд, М.Б.8., ЫепЕагб, С.Е., ЕЫе, ΕΝ., апб Υηι^, Υ.Ο. (1995). ЛкгкиктЛ тбисек [угокиче рЕокрЕогу1айоп оН 1пки11п гесер!ог киЬк!га!е-1 уча 1АК (угокиче кчпакек. 1 Вчо1 СЕет 270, 20497-20502.
ΥΛ, Т.С., Ткапд, М.Б.8., апб Υ.Ο.
(1994). 1АК1 кίпаке Ногтк сотр1ехек тейЕ чп!ег1еикт-4 гесер!ог апб 4Р8/тки1т гесер!ог киЬк!га!е-1-1чке рго!ет апб чк ас!чуа!еб Ьу т!ег1еикчп-4 апб т!ег1еикт-9 т Т1утрЕосу!ек. 1 Вчо1 СЕет 269, 26614-26617.
2Еапд, Υ., Ргоепса, Я., МаНеЕ М., Вагопе, М., Ьеоро1б, Ь., апб Егкбтап, ЕМ. (1994). Рокйюпа1 с1оп1пд оН !Ее тоике оЬеке депе апб йк Еитап Еото1одие. Мчйчге 372, 425-432.
Claims (26)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Применение активного агента, выбранного из группы, состоящей из лептина, лептинслитых белков, лептиновых мутеинов, агонистов лептинового рецептора, активных фрагментов или фракций любого из них и любых их смесей, в качестве ингибиторов пролиферации опухолевых клеток.
- 2. Применение по п.1, отличающееся тем, что опухолевые клетки представляют собой клетки злокачественных образований млекопитающих.
- 3. Применение по п. 1 или 2, отличающееся тем, что пролиферация опухолевых клеток зависима от фактора роста.
- 4. Применение по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что опухолевые клетки представляют собой клетки карциномы молочной железы человека.
- 5. Применение по п.1 или 3, отличающееся тем, что стимулирующее рост действие фактора роста на опухолевые клетки опосредовано, по крайней мере частично, субстратом-1 рецептора инсулина (1К.8-1)/каскада реакций связывающего белка-2 (ОВК.2), рецептор-ассоциированного с ростовым фактором.
- 6. Применение по п.1 или 3, отличающееся тем, что фактор роста выбран из группы, состоящей из рецепторных киназ, ростовых факторов и цитокинов (ЮЕ-1, ИЛ-4, ИЛ-9), субстратом для которых является ΙΚ.8-1.
- 7. Применение по любому из пп. 1-6, отличающееся тем, что пролиферация опухолевых клеток злокачественных образований молочной железы человека индуцирована инсулином.
- 8. Применение по любому из пп.1-7, отличающееся тем, что указанный активный агент является лептином.
- 9. Применение активного агента, выбранного из группы, состоящей из лептина, лептинслитых белков, мутеинов лептина, агонистов лептинового рецептора, активных фрагментов или фракций каждого из них, активного аналога или производного каждого из них, солей каждого из них, а также смесей каждого из них, для приготовления лекарственного средства для ингибирования клеточной пролиферации опухоли.
- 10. Применение по п.9, отличающееся тем, что опухолевые клетки представляют собой клетки злокачественных образований млекопитающих.
- 11. Применение по п.9 или 10, отличающееся тем, что пролиферация опухолевых клеток зависима от фактора роста.
- 12. Применение по любому из пп.9-11, отличающееся тем, что опухолевые клетки представляют собой клетки карциномы молочной железы человека.
- 13. Применение по любому из пп.9-1 2, отличающееся тем, что стимулирующее рост дей ствие фактора роста на опухолевые клетки опосредовано, по крайней мере частично, каскадом реакций 1К.8-1ЮВВ2.
- 14. Применение по п.9 или 11, отличающееся тем, что фактор роста выбран из группы, состоящей из рецепторных киназ, ростовых факторов и цитокинов (ЮЕ-1, ИЛ-4, ИЛ-9), субстратом для которых является ΙΚ.8-1.
- 15. Применение по любому из пп.9-14, отличающееся тем, что пролиферация опухолевых клеток злокачественных образований молочной железы человека является инсулин-индуцированной.
- 16. Применение по любому из пп.9-15, отличающееся тем, что указанный активный агент является лептином.
- 17. Фармацевтическая композиция для ингибирования пролиферации опухолевых клеток, включающая в качестве активного ингредиента агент, выбранный из группы, состоящей из лептина, лептин-слитых белков, лептиновых мутеинов, агонистов лептинового рецептора, активных фрагментов или фракций любого из них, и любых их смесей, а также фармацевтический носитель, разбавитель или наполнитель.
- 18. Применение фармацевтической композиции по п. 17 для лечения злокачественных образований у млекопитающих.
- 19. Применение фармацевтической композиции по п. 17 для ингибирования опухолей, зависящих от фактора роста.
- 20. Применение фармацевтической композиции по п. 17 для ингибирования клеточной пролиферации карцином молочной железы человека.
- 21. Применение фармацевтической композиции по п. 17 для лечения карцином молочной железы человека.
- 22. Применение по п.19, отличающееся тем, что стимулирующее рост действие фактора роста на опухолевые клетки опосредовано, по крайней мере частично, каскадом реакций ΙΚ.81/ОВВ2.
- 23. Применение по п. 19 или 22, отличающееся тем, что фактор роста выбран из группы, состоящей из рецепторных киназ, ростовых факторов и цитокинов (ЮЕ-1, ИЛ-4, ИЛ-9), субстратом для которых является ΙΚ.8-1.
- 24. Применение по любому из пп. 17-23, отличающееся тем, что указанный активный агент является лептином.
- 25. Способ лечения опухолей, включающий введение пациенту фармацевтической композиции по п. 17 в подходящей дозировочной форме и подходящим способом введения.
- 26. Способ ингибирования пролиферации опухолевых клеток у млекопитающих, включающий введение пациенту фармацевтической композиции по п.17 в подходящей дозировочной форме и подходящим способом введения.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL12073397A IL120733A0 (en) | 1997-04-29 | 1997-04-29 | Leptin as an inhibitor of cell proliferation |
| PCT/IL1998/000196 WO1998048831A1 (en) | 1997-04-29 | 1998-04-26 | Leptin as an inhibitor of tumor cell proliferation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA199900981A1 EA199900981A1 (ru) | 2000-04-24 |
| EA002353B1 true EA002353B1 (ru) | 2002-04-25 |
Family
ID=11070075
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA199900981A EA002353B1 (ru) | 1997-04-29 | 1998-04-26 | Лептин как ингибитор пролиферации опухолевых клеток |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7109159B1 (ru) |
| EP (1) | EP0981365B1 (ru) |
| JP (1) | JP4330662B2 (ru) |
| KR (1) | KR100507731B1 (ru) |
| CN (1) | CN1168497C (ru) |
| AR (1) | AR012626A1 (ru) |
| AT (1) | ATE283702T1 (ru) |
| AU (1) | AU742927B2 (ru) |
| BG (1) | BG63490B1 (ru) |
| CA (1) | CA2288238A1 (ru) |
| CZ (1) | CZ299872B6 (ru) |
| DE (1) | DE69827942T2 (ru) |
| EA (1) | EA002353B1 (ru) |
| EE (1) | EE04801B1 (ru) |
| ES (1) | ES2232944T3 (ru) |
| HK (1) | HK1028350A1 (ru) |
| HU (1) | HUP0002427A3 (ru) |
| IL (2) | IL120733A0 (ru) |
| NO (1) | NO322304B1 (ru) |
| NZ (1) | NZ500589A (ru) |
| PL (1) | PL195275B1 (ru) |
| PT (1) | PT981365E (ru) |
| SK (1) | SK284848B6 (ru) |
| UA (1) | UA66793C2 (ru) |
| WO (1) | WO1998048831A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA983608B (ru) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7208572B2 (en) | 1998-08-21 | 2007-04-24 | Albany Medical College | Leptin-related peptides |
| US6777388B1 (en) | 1998-08-21 | 2004-08-17 | Clf Medical Technology Acceleration Program, Inc. | Leptin-related peptides |
| US20050272652A1 (en) | 1999-03-29 | 2005-12-08 | Gault Victor A | Peptide analogues of GIP for treatment of diabetes, insulin resistance and obesity |
| IL132312A0 (en) * | 1999-09-05 | 2001-03-19 | Yeda Res & Dev | Use of leptin in inhibition of endothelial cell proliferation |
| US8076288B2 (en) | 2004-02-11 | 2011-12-13 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides having glucose lowering activity |
| BRPI0507594A (pt) | 2004-02-11 | 2007-07-03 | Amylin Pharmaceuticals Inc | polipetìdeos hìbridos com propriedades selecionáveis |
| US8969291B2 (en) | 2004-10-08 | 2015-03-03 | Enzo Therapeutics, Inc. | Methods for decreasing leptin levels or activity for treating inflammation |
| US7863240B2 (en) * | 2004-10-08 | 2011-01-04 | Enzo Therapeutics, Inc. | Methods and uses of leptin in hepatocellular carcinoma |
| WO2006086769A2 (en) | 2005-02-11 | 2006-08-17 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Gip analog and hybrid polypeptides with selectable properties |
| WO2007022123A2 (en) | 2005-08-11 | 2007-02-22 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides with selectable properties |
| US8263545B2 (en) | 2005-02-11 | 2012-09-11 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties |
| EP2330125A3 (en) | 2005-08-11 | 2012-12-12 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides with selectable properties |
| US8227408B2 (en) * | 2005-09-07 | 2012-07-24 | Neurotez, Inc. | Leptin as an anti-amyloidogenic biologic and methods for delaying the onset and reducing Alzheimer's disease-like pathology |
| US8497240B2 (en) | 2006-08-17 | 2013-07-30 | Amylin Pharmaceuticals, Llc | DPP-IV resistant GIP hybrid polypeptides with selectable properties |
| JP5702150B2 (ja) | 2008-02-08 | 2015-04-15 | アンブルックス, インコーポレイテッドAmbrx, Inc. | 修飾されているレプチンポリペプチドおよびそれらの使用 |
| AU2009248914A1 (en) * | 2008-05-21 | 2009-11-26 | Neurotez, Inc. | Methods for Treating Neurodegenerative Disorders Related to Neurofibrillary Tangles |
| AU2009313562B2 (en) * | 2008-11-04 | 2012-11-15 | Neurotez, Inc. | Leptin compositions and methods for treating progressive cognitive function disorders resulting from accumulation of neurofibrillary tangles and amlyoid beta |
| US20100316639A1 (en) | 2009-06-16 | 2010-12-16 | Genentech, Inc. | Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy |
| TWI824372B (zh) | 2015-10-12 | 2023-12-01 | 美商再生元醫藥公司 | 活化瘦素受體的抗原結合蛋白 |
| JP7042816B2 (ja) | 2016-11-08 | 2022-03-28 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | レプチン受容体をアンタゴナイズする抗原結合性タンパク質 |
| CA3084385A1 (en) | 2017-12-18 | 2019-06-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Bispecific antigen binding molecules that bind leptin receptor and/or gp130, and methods of use thereof |
| AU2019249273A1 (en) | 2018-04-06 | 2020-10-15 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treatment using a leptin receptor agonist antibody |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997027286A1 (en) * | 1996-01-23 | 1997-07-31 | Progenitor, Inc. | Methods for using the obese gene and its gene product to stimulate hematopoietic development |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0836479A2 (en) * | 1995-06-30 | 1998-04-22 | Eli Lilly And Company | Methods for treating diabetes |
| EP0764722A2 (en) * | 1995-09-19 | 1997-03-26 | Eli Lilly And Company | DNA encoding primate leptins as medicinal proteins |
-
1997
- 1997-04-29 IL IL12073397A patent/IL120733A0/xx unknown
-
1998
- 1998-04-26 DE DE69827942T patent/DE69827942T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-26 SK SK1471-99A patent/SK284848B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 EE EEP199900510A patent/EE04801B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 CN CNB988066920A patent/CN1168497C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 AU AU70762/98A patent/AU742927B2/en not_active Ceased
- 1998-04-26 CZ CZ0384899A patent/CZ299872B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 WO PCT/IL1998/000196 patent/WO1998048831A1/en active IP Right Grant
- 1998-04-26 ES ES98917580T patent/ES2232944T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-26 PL PL98336582A patent/PL195275B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 EA EA199900981A patent/EA002353B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 HU HU0002427A patent/HUP0002427A3/hu unknown
- 1998-04-26 AT AT98917580T patent/ATE283702T1/de active
- 1998-04-26 UA UA99116415A patent/UA66793C2/ru unknown
- 1998-04-26 JP JP54678798A patent/JP4330662B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 EP EP98917580A patent/EP0981365B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-26 CA CA002288238A patent/CA2288238A1/en not_active Abandoned
- 1998-04-26 US US09/403,897 patent/US7109159B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 PT PT98917580T patent/PT981365E/pt unknown
- 1998-04-26 NZ NZ500589A patent/NZ500589A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 KR KR10-1999-7009705A patent/KR100507731B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-04-29 ZA ZA983608A patent/ZA983608B/xx unknown
- 1998-04-29 AR ARP980102003A patent/AR012626A1/es unknown
-
1999
- 1999-10-25 BG BG103832A patent/BG63490B1/bg unknown
- 1999-10-28 NO NO19995267A patent/NO322304B1/no not_active IP Right Cessation
- 1999-10-28 IL IL132633A patent/IL132633A/en not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-12-07 HK HK00107866A patent/HK1028350A1/xx not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997027286A1 (en) * | 1996-01-23 | 1997-07-31 | Progenitor, Inc. | Methods for using the obese gene and its gene product to stimulate hematopoietic development |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| RUBINSTEIN M., BARKAN D. ET AL.: "Leptin inhibits growth factor induced cell proliferation", FIFTH ANN. CONFERENCE OF THE INT. CYTOKINE SOC. LAKE TAHOE, vol. cytokine 9, no. 11, 9 - 13 November 1997, NEVADA, USA, page 953 XP002074549, *cf. abstract* * |
| ZACHOW R.J., MAGOFFIN D.A.: "Direct intraovarian effects of leptin: Impairment of the synergistic action of insulin-like growth factor I on folicle-stimulating hormone dependent estradiol-17.beta production by rat ovarian granulosa cells", ENDOCRINOLOGY, vol. 138, no. 2, February 1997, pages 847-850, XP002074550, *cf. abstract* * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA002353B1 (ru) | Лептин как ингибитор пролиферации опухолевых клеток | |
| RU2477287C2 (ru) | Стабилизированные полипептиды инсулиноподобного фактора роста | |
| EP0597503B1 (en) | ECK receptor ligands | |
| JP2003505075A5 (ru) | ||
| Yoshida et al. | Induction of growth factor‐receptor and metalloproteinase genes by epidermal growth factor and/or transforming growth factor‐α in human gastric carcinoma cell line MKN‐28 | |
| JPH0341096A (ja) | インシュリン様成長因子類の結合蛋白 | |
| CN101300269A (zh) | 机械生长因子肽及其用途 | |
| KR20120082909A (ko) | 합성 마이오스타틴 펩티드 길항제 | |
| EP3845550A1 (en) | Composition for accelerating cell proliferation comprising erythropoietin-derived peptide | |
| ES2229679T3 (es) | Utilizacion de heregulina como factor de crecimiento de celulas epiteliales. | |
| Sharples et al. | Novel applications of recombinant erythropoietin | |
| CA1341530C (en) | Inhibitors of angiogenin | |
| CA2464529A1 (en) | Method of treating estrogen responsive breast cancer | |
| CA2601227A1 (en) | Mecano growth factor peptides and their use | |
| US20060153884A1 (en) | Peptide fragments of the harp factor inhibiting angiogenesis | |
| JP2004533235A5 (ru) | ||
| KR100361717B1 (ko) | 조골세포증식인자 | |
| AU759409B2 (en) | Preventives and/or remedies for obesity | |
| EP4324841A1 (en) | Cell-penetrating peptide, anti-cancer peptide, and pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, comprising same | |
| JP4583763B2 (ja) | 切断型２４ｋＤａ塩基性線維芽細胞成長因子 | |
| WO1995015177A2 (en) | Improved efficacy of alpha-helical cytokines |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |