CZ299872B6 - Farmaceutický prostredek - Google Patents
Farmaceutický prostredek Download PDFInfo
- Publication number
- CZ299872B6 CZ299872B6 CZ0384899A CZ384899A CZ299872B6 CZ 299872 B6 CZ299872 B6 CZ 299872B6 CZ 0384899 A CZ0384899 A CZ 0384899A CZ 384899 A CZ384899 A CZ 384899A CZ 299872 B6 CZ299872 B6 CZ 299872B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- leptin
- insulin
- cells
- proliferation
- active
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title description 13
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 claims abstract description 104
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 claims abstract description 100
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 claims abstract description 100
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 claims abstract description 98
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 29
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 108010019813 leptin receptors Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 17
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 15
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 claims abstract description 9
- 102000005861 leptin receptors Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract 5
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 70
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 35
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 35
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 35
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 32
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 16
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 20
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 20
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 19
- 102000009433 Insulin Receptor Substrate Proteins Human genes 0.000 description 18
- 108010034219 Insulin Receptor Substrate Proteins Proteins 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 18
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 15
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 14
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 14
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 13
- 102100031775 Leptin receptor Human genes 0.000 description 12
- 101001063890 Mus musculus Leptin Proteins 0.000 description 11
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 10
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 10
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 8
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 7
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 7
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 7
- 230000008747 mitogenic response Effects 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 6
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 6
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 6
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003235 crystal violet staining Methods 0.000 description 6
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 6
- 229940118526 interleukin-9 Drugs 0.000 description 6
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 6
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 108091005682 Receptor kinases Proteins 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 3
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 3
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 3
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 3
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N Cys-Cys Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 2
- 101001063991 Homo sapiens Leptin Proteins 0.000 description 2
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 2
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N Met-Met Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCSC ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M N,N,N-Trimethylmethanaminium chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)C OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000007952 growth promoter Substances 0.000 description 2
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 2
- 102000049953 human LEP Human genes 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010085203 methionylmethionine Proteins 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000000972 4,5-dimethylthiazol-2-yl group Chemical group [H]C([H])([H])C1=C(N=C(*)S1)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N Ala-Gly Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O CXISPYVYMQWFLE-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- BNODVYXZAAXSHW-IUCAKERBSA-N Arg-His Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 BNODVYXZAAXSHW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N Asn-Asp Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N Asp-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FRYULLIZUDQONW-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- TUTIHHSZKFBMHM-WHFBIAKZSA-N Glu-Asn Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O TUTIHHSZKFBMHM-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 1
- BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)CC BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N 0.000 description 1
- TUYOFUHICRWDGA-CIUDSAMLSA-N Ile-Met Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCSC TUYOFUHICRWDGA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 229940122942 Leptin receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HGCNKOLVKRAVHD-RYUDHWBXSA-N Met-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- 101100181592 Mus musculus Lep gene Proteins 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- GKZIWHRNKRBEOH-HOTGVXAUSA-N Phe-Phe Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 GKZIWHRNKRBEOH-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- JMCOUWKXLXDERB-WMZOPIPTSA-N Phe-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 JMCOUWKXLXDERB-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 102220497176 Small vasohibin-binding protein_T47D_mutation Human genes 0.000 description 1
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVZABQIRMYTKCF-JSGCOSHPSA-N Trp-Met Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)=CNC2=C1 BVZABQIRMYTKCF-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- BMPPMAOOKQJYIP-WMZOPIPTSA-N Tyr-Trp Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C([O-])=O)C1=CC=C(O)C=C1 BMPPMAOOKQJYIP-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- ZEBRMWPTJNHXAJ-JYJNAYRXSA-N Val-Phe-Met Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N ZEBRMWPTJNHXAJ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- HOZAIQIEJTWWDG-HJOGWXRNSA-N Val-Trp-Trp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC3=CNC4=CC=CC=C43)C(=O)O)N HOZAIQIEJTWWDG-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 150000007933 aliphatic carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000001621 anti-mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 201000010983 breast ductal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000003161 choroid Anatomy 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000014101 glucose homeostasis Effects 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 1
- 108700010839 phage proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010083476 phenylalanyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000012868 site-directed mutagenesis technique Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000035924 thermogenesis Effects 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/33—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/2264—Obesity-gene products, e.g. leptin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
Použití úcinné látky ze skupiny leptin, fúzní proteiny leptinu, muteiny leptinu, agonisté receptoruleptinu, úcinné fragmenty nebo frakce kterékoliv z uvedených látek, úcinné analogy nebo deriváty kterékoliv z techto látek, jejich soli a jejich smesi pri výrobe léciva pro inhibici proliferace lidského karcinomu prsu.
Description
Oblast techniky
Předložený vynález se vztahuje na leptin, cytokin produkovaný adipocyty a ovlivňující různé druhy buněk a tkání. Vynález se zvláště týká nové aplikace leptinu v oblasti onkólogie.
Dosavadní stav techniky
Leptin, od adipocytů odvozený cytokin, regulující tělesnou hmotnost, byl identifikován pozičním klonováním myšího genu ob, (Zhang a další, 1994) a bylo prokázáno, že ovlivňuje jak příjem potravy, tak termogenezi, (Campfield a další, 1995, Collins a další, 1996, Halaas a další, 1995,
Pelleymounter a další, 1995, Weigle, 1995).
Místa pro vazbu leptinu s vysokou afinitou byla lokalizována v plexus choroides (cévnatka), expresním klonováním cDNA z uvedené tkáně byl získán receptor (OB-R), (Tartaglie a další, 1995).
Známé účinky leptinu jsou zprostředkovány jeho receptorem v hypothalamu. Exprese leptinových receptorů se vyskytuje i v dalších orgánech, zejména v ledvinách, plicích a játrech (Cioffi a další, 1996, Lee a další, 1996, Tartaglia a další, 1995). Kromě toho se různý repertoár variací receptorového sestřihu (receptor-splice), lišících se v jejich cytoplazmatické doméně umyší projevuje expresí ve specifických tkáních (Lee a další, 1996). Proto kromě kontroly příjmu potravy a tělesné teploty, může leptin vykazovat další fyziologické funkce.
I když je leptin produkován adipocyty, nedávné zjištění korelace mezi přebytkem tuku a vysokými hladinami leptinu v séru bylo v rozporu se zjištěním, že leptin snižuje příjem potravy a tělesnou hmotnost (Considin a další, 1996, Frederick a další, 1995, Lonnquist a další, 1995, Maffei a další, 1995). Tato korelace a spolehlivé doložení vztahů mezi obezitou a rezistencí vůči inzulínu (Felber a Golay, 1995) naznačily, že leptin může modulovat inzulínem regulované odpovědi.
Ve skutečnosti bylo ale nedávno oznámeno, že leptin významně snižuje bazální a inzulínem redukovanou tyrosinovou fosforylaci inzulínového receptorového substrátu-1 (IRS-1). Toto působení leptinu na ÍRS-1 fosfoiylaci bylo specifické, protože tyrosinová fosforylace betařetězce inzulínového reeeptoru (IR) nebyla potlačena (Cohen a další, 1996).
Tyrosinová fosforylace IRS-t s kinázou IR je klíčovým stupněm v rámci inzulínové receptorové signální kaskády, vedoucí k četným známým působením inzulínu (Araki a další, 1994, Cheatham a Kahn, 1995, Myers a další, 1994, Myers a White, 1993, Rose a další, 1994, Tamemoto a další, 1994, White a Kahn, 1994).
Směr signálního působení IRS-1 je zprostředkován několika asociovanými proteiny, z nichž jeden je GRB-2 = protein vázající se na receptor růstového faktoru-2 = growth-factor receptor associated binding protein-2 (Cheatham a Kahn, 1995),
Inzulínový receptor (IR) je považován za metabolický receptor, zprostředkující působení inzulínu na homeostázu glukózy a jako takový je vylučován na terminálně odlišných tkáních, jako je např. tuková tkáň, játra a svaly. Četné studie však prokázaly, že IR je silně účinný mitogenní receptor in vitro a in vivo v případě, kdy je vylučován v nádorových buňkách,
Funkční inzulínové reeeptory byly například identifikovány v několika liniích karcinomu prsu, jak bylo zjištěno tyrosinovou fosforylaci inzulínového reeeptoru, při reakci na léčbu inzulínem.
-1CZ 299872 B6
Kromě toho zprostředkovává inzulínový receptor v těchto buňkách mitogenní odpověď, jak bylo zjištěno inkorporací /3H/-thymidinu (Milazzo a další, 1997, Milazzo a další, 1992).
Až dosud nebylo popsáno použití leptinu v oblasti onkologie obecně a zejména leptin nebyl 5 popsán jako použitelný pro inhibici proliferace buněk, zejména proliferace rakovinných buněk.
Podstata vynálezu io Podstatu vynálezu tvoří úěinné látky ze skupiny leptin, fúzní proteiny leptinu, muteiny leptinu, agonisté receptorů leptinu, účinné fragmenty nebo frakce kterékoliv z uvedených látek, účinné analogy nebo deriváty kterékoliv z těchto látek, jejich soli a jejich směsi při výrobě léčiva pro inhibici proliferace lidského karcinomu prsu.
Předložený vynález se týká použití leptinu jako inhibitoru buněčné proliferace. Leptin může být použitelný buď samostatný, nebo v kombinaci s jinými terapeutickými látkami, nebo postupy.
Výhodné provedení vynálezu spočívá v použití leptinu pro inhibici proliferace buněk lidského karcinomu prsu. Proliferace mnohých typů tumorových buněk je zvýšena za přítomnosti různých růstových faktorů jako je například inzulín a IGF-1 (inzulinu podobný růstový faktor-1). Stimulační růstové působení inzulinu IGF-1 na buňky je zprostředkováno alespoň zčásti, prostřednictvím dráhy IRS-l/GRB-2 (Myers a další, 1993), Tato dráha je inhibována leptinem.
Kromě toho je ÍRS-1 substrátem pro receptorové kinázy dalších růstových faktorů a cytokinú včetně ÍT-4 (interleukin-4) a IL-9 (interleukin-9) (Pemis a další, 1995, Yin a další, 1995, Yin a další, 1994).
Leptin může tudíž inhibovat mitogenní odpovědi některých nebo všech zmíněných růstových faktorů a cytokinú, stejně jako ostatních růstových faktorů, a tedy inhibovat proliferaci nádoro30 vých buněk.
Příklady zahrnují inhibici proliferace indukované IGF—1 a inzulínem indukovanou proliferaci buněčných T-47D a MCF7 linií lidského karcinomu prsu.
Předložený vynález se také týká použití leptinu, leptinových fúzních proteinů, leptinových muteinů, agonistů leptinového receptorů nebo účinných fragmentů a frakcí jakékoliv ze zmíněných složek nebo solí jakékoliv ze zmíněných složek, stejně jako farmaceutických prostředků, obsahujících leptin, leptinové fúzní proteiny, leptinové muteiny, agonisty leptinového receptorů, účinné fragmenty nebo frakce jakékoliv ze zmíněných složek nebo soli jakékoliv ze zmíněných složek pro léčbu lidského karcinomu prsu.
Provedení výše zmíněných aspektů předloženého vynálezu zahrnuje:
i) Použití účinné látky jako inhibitoru buněčné proliferace pro léčbu maligního bujení u savců.
ii) Použití účinné látky jako inhibitoru nádorů, závislých na růstovém faktoru.
iii) Použití účinné látky jako inhibitoru proliferace buněk lidského karcinomu prsu.
iv) Použití účinné látky pro léčbu lidských karcinomů prsu.
v) Použití účinné látky jako inhibitoru růstového stimulačního působení inzulínu a IGF—1 na nádorové buňky, zprostředkované alespoň zčásti dráhou inzulínového receptorového substrátu 1 (IRS-l/GRB-2).
-2CZ 299872 B6 vi) Použití účinné látky jako inhibitoru mitogenních odpovědí v nádorových buňkách, vůči jedné nebo více receptorových kináz růstových faktorů a cytokinů ze skupiny obsahující IL-4 a IL-9, u kterých IRS-1 je substrátem pro léčbu nádorů.
vii) Použití účinné látky jako inhibitoru bazální, IGF—1 indukované a inzulínem indukované proliferace nádorových buněk pro léčbu lidského karcinomu prsu.
viii) Použití účinné látky, kde výše zmíněná účinná látka je leptin.
Podobně se předložený vynález týká také účinné látky, zvolené ze skupiny obsahující leptin, leptinové fúzní proteiny, leptinové muteiny agonisty leptinového receptorů, účinné fragmenty nebo frakce jakékoliv ze zmíněných složek, účinné analogy nebo deriváty jakékoliv ze zmíněných složek, soli jakékoliv ze zmíněných složek a směsí jakékoliv ze zmíněných složek, pro použití při výrobě léčiva, určeného pro inhibicí proliferace nádorových buněk.
Provedení tohoto aspektu vynálezu zahrnuje:
i) Použití účinné látky pro výrobu léčiva, určeného pro léčbu maligního bujení u savců.
ií) Použití účinné látky pro výrobu léčiva, určeného pro inhibicí nádorů závislých na růstovém faktoru.
iii) Použití účinné látky pro výrobu léčiva, určeného pro inhibicí proliferace buněk lidského karcinomu prsu.
iv) Použití účinné látky pro výrobu léčiva, určeného pro léčbu lidských karcinomů prsu.
v) Použití účinné látky pro výrobu léčiva, určeného pro inhibicí růstového stimulačního působení IGF—1 a inzulínu na nádorových buňkách, zprostředkovaných alespoň zčásti dráhou IRS-l/GRB-2.
vi) Použití účinné látky pro výrobu léčiva, určeného pro inhibicí mitogenních odpovědí v nádorových buňkách, vůči jedné nebo více receptorových kináz, růstových faktorů a cytokinů ze skupiny obsahující IGF-1, IL—4 a IL-9, u kterých je IRS-1 substrátem pro léčbu nádorů.
vii) Použití účinné látky, kde účinná složka je leptin.
Předložený vynález se rovněž týká farmaceutického prostředku, obsahujícího jako účinnou složku účinnou látku a farmaceuticky vhodný nosič, ředidlo nebo pomocnou látku, určeného pro inhibicí proliferace nádorových buněk. ·
Z tohoto aspektu provedení vynálezu zahrnuje:
i) Farmaceutický prostředek určený pro léčbu zhoubného bujení u savců.
ii) Farmaceutický prostředek určený pro inhibicí nádorů závislých na růstovém faktoru.
iii) Farmaceutický prostředek určený pro inhibicí proliferace buněk lidského karcinomu prsu a tudíž i pro léčbu lidského karcinomu prsu..
iv) Farmaceutický prostředek určený pro inhibicí růstového stimulačního působení IGF—1 a inzulínu na nádorové buňky a zprostředkovanou alespoň zčásti, dráhou IRS-l/GRB-2.
-3CZ 299872 B6
v) Farmaceutický prostředek určený pro inhibici mitogenních odpovědí v nádorových buňkách, vůči jedné nebo více receptorových kináz, růstových faktorů a cytokinů ze skupiny obsahující IL-4 a IL-9, u kterých je IRS-1 substrátem a tudíž i pro léčbu nádorů.
vi) Farmaceutický prostředek určený pro inhibici bazální a s IGF-1 indukované a inzulinem indukované přoliferace nádorových buněk a tudíž i pro léčbu lidského karcinomu prsu.
vii) Farmaceutický prostředek, ve kterém je účinná složka leptin.
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 demonstruje závislost přoliferace T-47D buněk na inzulínu, jak bylo zjištěno barvením s MTT = (3-/4,5-dimethylthiazol-2-yl/-2,3-difenyltetrazoIiumbromid).
Obr. 2 demonstruje závislost přoliferace T-47D buněk na IGF-1, jak bylo zjištěno barvením sMTT.
Obr. 3 demonstruje inhibici inzulinem indukované přoliferace T-47D buněk vl0%fetálním telecím séru (FBS) myším leptinem, jak bylo zjištěno barvením s MTT.
Obr. 4 demonstruje inhibici inzulinem indukované přoliferace T-47D buněk ve 2% FBS myším leptinem, jak bylo zjištěno barvením s krystalovou violetí.
Obr. 5 demonstruje inhibici přoliferace T-47D buněk v 10% FBS myším leptinem, jak bylo zjištěno barvením s MTT.
Obr.6 demonstruje inhibici IGF—1 indukované přoliferace T-47D buněk ve 2% FBS myším leptinem, jak bylo zjištěno barvením s krystalovou violetí.
Obr. 7 demonstruje inhibici IGF-1 indukované přoliferace T-47D buněk ve 2% FBS lidským leptinem, jak bylo zjištěno barvením s krystalovou violetí.
Obr, 8 demonstruje inhibici inzulinem indukované přoliferace MCF7 buněk v prostředí prostém séra myším leptinem, jak bylo zjištěno barvením s krystalovou violetí.
Obr. 9 demonstruje inhibici IGF-1 indukované přoliferace MCF7 buněk, v prostředí prostém séra myším leptinem, jak bylo zjištěno ^barvením s krystalovou violetí.
Předložený vynález se tedy týká použití leptinu jako inhibitoru přoliferace nádorových buněk.
Je charakteristické, že buněčné linie lidského původu odvozené od různých typů nádorů, mohou být kultivovány v kulturách za přítomnosti růstového média, doplněného fetálním telecím sérem (FBS) v objemové koncentraci cca 10%. Za uvedených podmínek je buněčná přoliferace dále definována jako „bazální buněčná přoliferace“. Růst četných nádorových linií je významně zvýšen v případě, kdy jsou k výše zmíněnému kultivačnímu médiu doplněnému sérem, přidány různé růstové faktory, jako například inzulín, epidermální růstový faktor nebo IGF-1.
Po přidání leptinu do růstového média , v rozmezí nanomolámích koncentrací od 3 do· 600 se snižuje bazální buněčná přoliferace a buněčná přoliferace závislá na růstovém faktoru.
Výsledky pokusů s buněčnými kulturami, uvedenými v rámci příkladů, publikovanými dále, naznačují použitelnost leptinu pro inhibici růstu různých typů nádorů a leptin může být tudíž použitelný pro léčbu různých typů maligního bujení.
-4CZ 299872 Β6
V rámci výhodného provedení předloženého vynálezu je leptin používán pro inhibici proliferace buněk karcinomu prsu. V případě, žeje leptin přidán ke kulturám T—47D buněk lidského karcinomu mléčných vývodů prsu (American typu Cultur Collection, Rockville, MD, kmen ě.ATCC RTB 133), je rozsah jejich proliferace potlačen.
Podobně i v případě, kdy je leptin přidán ke kulturám MCF7 buněk lidského adenokarcinomu prsu (American typu Cultur Collection, Rockville, MD, č.ATCC RTB 22), je rozsah jejich proliferace redukován. Leptin mhibuje jak bazální, tak i s IGF—1 indukovanou proliferaci, tak i inzulínem indukovanou proliferaci T-47D a MCF7 buněk,
Leptin může být tedy specificky použitelný pro léčbu karcinomu prsu.
Růstové stimulační působení inzulínu a IGF—1 na buňky, je zprostředkováno alespoň zčásti, prostřednictvím tyrosinové fosforylace IRS-1 a následnou asociací IRS-l s GRB-2, která má za následek mitogenní odpověď. Antimitogenní působení leptínu může být důsledkem jeho schopnosti redukovat bazální, inzulínem indukovanou a IGF-1 indukovanou tyrosinovou fosforylaci IRS-l, mající za následek snížení vazeb GRB-2 k IRS-l.
Kromě toho je IRS-l substrátem receptorových kináz ostatních růstových faktorů a cytokinů včetně IL-4 a IL-9 (Pemis a další, 1995, Yin a další, 1995, Yin a další, 1994).
Leptin může tudíž inhibovat mitogenní odpovědi některých nebo všech zmíněných růstových faktorů a cytokinů a stejně jako ostatních mitogenů a tím tedy i inhibovat proliferaci různých typů nádorových buněk.
Předložený vynález se dále vztahuje na leptinové deriváty a analogy, včetně leptinových fúzních proteinů, leptinových muteinů, agonistů leptinového receptorů, nebo účinných fragmentů nebo frakcí zmíněných složek a solí zmíněných složek a farmaceutických prostředků, obsahujících leptin, leptinové fůzní proteiny, leptinové muteiny, agonisty leptinového receptorů, účinné frakce zmíněných složek nebo všech zmíněných složek, pro léčbu různých typů zhoubných nádorů.
V předloženém textu používaný výraz „muteiny“ se vztahuje na analoga leptinu, ve kterých jeden nebo více zbytků aminokyseliny je nahrazen odlišnými zbytky aminokyseliny, nebojsou vypuštěny, nebo jeden nebo více zbytků aminokyseliny jsou připojeny k původní sekvenci leptinu, aniž dochází k významné změně účinnosti výsledných produktů, ve srovnání s divokými typy leptinu, nebo jeho účinných fragmentů, nebo frakcí.
Zmíněné muteiny jsou připravovány známými syntetickými postupy a/nebo polohově směrovanými technikami mutageneze nebo jinými známými vhodnými technikami.
Jakýkoliv z těchto muteinů má výhodnou sekvenci aminokyselin, dostatečně duplicitní k leptinu, takže v podstatě vykazuje podobné působení jako leptin, nebo jeho účinné fragmenty nebo frakce.
Lze tedy pomocí rutinního experimentování posoudit, zda nějaký určitý mutein (například jednoduchou metodou buněčné proliferace), který blokuje buněčnou proliferaci, vykazuje dostatečnou účinnost leptinu,
V rámci výhodného provedení je každý takový,mutein. alespoň ze 40 %-identický nebo homologický se sekvencí jednoho z leptinů.
Mnohem výhodněji vykazuje alespoň 50,0%, alespoň 60,0%, alespoň 70,0%, alespoň 80,0% nebo nej výhodněji alespoň 90,0% identitu nebo homologii.
-5CZ 299872 B6
Muteiny leptinu, nebo jeho účinné fragmenty nebo frakce mohou být proto použity dle předloženého vynálezu nebo kódové nukleové kyseliny včetně konečného uspořádání, odpovídajícího v podstatě sekvencím jako substituce peptidu, nebo nukleotidů, které mohou být rutinně získávány bez zbytečného experimentování jedním z běžných postupů v této oblasti, založeném na poznatcích a pokynech, uvedených v předloženém textu.
Podrobnější popis chemie proteinů a struktur je uveden v následujících odborných publikacích, citovaných dále v literárních odkazech, tj. SchulzG.E. a další, Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, New York, 1978 a Creighton T.E., Proteins Structure and Molecular Properties, io W.H. Freeman CO., San Francisco, 1983.
Popis substitucí sekvencí nukleotidů jako jsou např. preference kodonů viz Ausubel a další, § A. 1.1-1.24 (viz literární odkazy uvedené dále) a Sambrook a další, Current Protocols in Molecular Biology, Intersctence, N.Y., § 6.3 a 6.4 (1987, 1992) u dodatků C a D.
Výhodné změny muteinů týkající se předloženého vynálezu, jsou ty, které jsou známy jako „konzervativní“ substituce. Konzervativní substituce aminokyselin leptinových polypeptidů nebo proteinů, nebo jejich účinných fragmentů nebo frakcí, mohou zahrnovat synonymní aminokyseliny včetně skupin, které mají dostatečně podobné fyzikálně chemické vlastnosti, takže substituce mezi členy skupiny ochrání biologickou funkci molekuly. (Grantham, Science, sv. 185, str. 862864, 1974).
Je zřejmé, že zabudování nebo vypuštění aminokyseliny, může být také realizováno ve výše definovaných sekvencích, aniž dochází ke změnám jejich funkce, zejména když zabudování nebo vypuštění zahrnuje pouze malý počet aminokyselin, například méně než 30 a výhodně méně než 10 a není spojeno s vypuštěním nebo nahražením aminokyselin, které jsou kritické pro funkční konformaci, například zbytky cysteinu.
Anfinsen, Principles That Govem The Folding of Protein Chains, Science, sv. 181, str. 223-230,
1973.
Proteiny a muteiny produkované takovým vypuštěním nebo zabudováním jsou v rámci předloženého vynálezu uvedeny.
Výhodné jsou skupiny synonymních aminokyselin, uváděné dále v tabulce I.
Výhodnější jsou skupiny synonymních aminokyselin, uváděné dále v tabulce II.
Nej výhodnější jsou skupiny synonymních aminokyselin, uváděné dále v tabulce III.
-6CZ 299872 Bó
Tabulka I)
Výhodné skupiny synonymních aminokyselin:
Aminokyselina.: Synonymhí skupina:
| Ser | Ser>- | Thr, | Gly, | Asn, | |||
| Árg | Arg, | Gin, | Lys., | Glú:, | His, | ||
| Leu | Ile, | Phe, | Tyr., | Met, | Val, | Leu, | |
| Pro | Gly; | Ale, | Thr, | Pro, | |||
| Thr | Pro, | Ser, | Ala, | Gly, | His., | Gin, | Thr, |
| Ala | Gly, | Thr, | Pro , | ATa, | |||
| Val | Meť | Tyr; | Phe i | Ilet | Leu , | Val, | |
| Gly | Ala, | Thr, | Pro., | Ser,- | Gly, | ||
| Ile | Met, | Tyr, | Phe,; | Val | Leu, | Ilě, | |
| Phe | Trp, | Met, | Tyr, | Iler | Val, | Le.u, | Phe, |
| Tyr | Trp, | Met> | Phe, | Tle,· | Val, | ,Le.u, | Tyr, |
| Cýs | Ser, | Thr, | Čys, | ||||
| His· | Glu, | Lys, | Glh, | Thr, | Arg, | His,· | |
| Gin | Glu, | Lys, | Asn, | His, | Ťhr, | Arg, | Gin,. |
| Ásn | Gin, | Asp, | Ser, | Asn, | |||
| Lys | Glu, | Gin, | His, | Arg., | Lya, | ||
| Asp. | Glu | Asn, | Asp, | ||||
| G1;U | Asp, | Lys, | Ásn, | Gin, | His, | Arg, | Glu, |
| Met | Phe, | Ilé, | Val, | Leu, | Met,, |
Trp·- Trp,
-7CZ 299872 B6
Tabulka H)
Výhodnější skupiny synonymních aminokyselin:
| Aminokýs é Ϊ i ha; | Synonymní | Skupina: |
| Ser | Ser, | |
| Arg | His, Lys, | Arg, |
| Leu | Leu;, ilé. | Phe,. Met. |
| Pro^ | Ale',. Pro,, | |
| -Thr | Thr„ | |
| Ala | Val, Met, | Ile, |
| Val | Val.., Met,, | Ile; |
| Gly | Gly> | |
| ile | Ile, Met, | Phe, Vál |
| Phe | Met, Tyr.,. | Ile, Leu |
| Tyr . | Phe, Tyr, | |
| Cys | Cys, Ser, | |
| His | His, Gin, | Arg, |
| Gin | Glu, Gin, | His, |
| Asn | Asp, Asn, | |
| Lys | Lys, Arg, | |
| Asp | Ásp7 Asn, | |
| Glu | Glu, Gin-,. | |
| Met | Met, Phé, | Ile, Val |
| Trp | Trp, |
Leu,
Phe,
Leu,
-8CZ 299872 B6
Tabulka III)
Nej výhodnější skupiny synonymních aminokyselin:
| Aminokyselina: | Synóríymní | skupina: |
| Ser | Ser, | |
| Arg | Arg, | |
| Leu. | Leu, Ile, | Met; |
| Éro | Pro, | |
| Thr | Thr, | |
| Ala | Ala, | |
| Val, | Val.,? | |
| Gly | Gly,. | |
| Ilé | Ile, Met, | Leu, |
| Phe | Phe, | |
| Ťyr | Tyr, | |
| Cys | Cys, Ser, | |
| His | His, | |
| Gin | Gin, | |
| Asrl | Asn,, | |
| Lys | Lys, | |
| Asp | Asp, | |
| Glu | Glu, | |
| Met | Met,. Ile, | Leu, |
| Trp | Met, |
Příklady provádění substitucí aminokyselin v proteinech, které mohou být použity pro získání muteinů leptinu nebo jeho účinných frakcí v rámci použiti předloženého vynálezu, včetně jakýchkoliv známých metodických kroků, uvedených např. v US patentech RE 33 653, 4 959 314, 4 588 585 a 4 737 462 (Mark a další), 5 116 943 (Koths a další), 4 965 195 (Namen a další), 4 879 111 (Chang a další) a 5 017 691 (Lee a další), a lysinem substituované proteiny, uvedené io v US patentu 4 904 584 (Shaw a další).
V rámci jiného výhodného provedení předloženého vynálezu má jakýkoliv mutein leptinu, nebo jeho účinná frakce, určené pro použití dle předloženého vynálezu, sekvenci aminokyselin, v podstatě odpovídající sekvenci leptinu.
......_ .........
Výraz „v podstatě odpovídající“ je uvažován pro souhrnné proteiny s menšími změnami, vzhledem k sekvenci přirozeného proteinu, které neovlivňují základní charakteristiky přirozených proteinů, pokud jejich schopnost inhibovat buněčnou proliferací je zachována.
Typ změn, obecně uvažovaných a zahrnutých do výrazového vyjádření „v podstatě odpovídající“ jsou takové, které by mohly vyplývat z běžných technik mutageneze DNA kódující leptin a rezul-9CZ 299872 Bó tující do několika málo modifikací a prozkoumání (screeníng) žádané účinnosti způsobem diskutovaným výše.
Muteiny v souhlase s předloženým vynálezem se týkají proteinů zakódovaných s nukleovou kyselinou jako například s DNA nebo RNA, které hybridizují DNA nebo RNA, kódujících za striktních podmínek leptin v souhlase s předloženým vynálezem. Takový typ nukleové kyseliny by mohl být nejvhodnějším kandidátem pro určení, zda kóduje polypeptid, který vykazuje dle předloženého vynálezu funkční účinnost leptinu.
Výraz „omezující podmínky“ se vztahuje na hybridizací a následné podmínky promývání, které jsou v rámci odborné praxe konvenčně označovány jako „omezující“.
Viz také Ausubel a další, Current Protocols in Molecular Biology, Interscience, N.Y. § 6,3 a 6.4 (1987,1992) a Sambrook a další, viz výše.
Bez omezení zahrnují příklady „omezujících podmínek“ podmínky promývání při teplotách 12,0-20,0 °C, nižších než předpokládaná teplota studovaného hybridu, například 2xSSC a 0,5% SDS po dobu 5 minut, 2 x SSC 0,10% SDS po dobu 15 minut, 0,1 x SSC a 0,5% SDS při teplotě 37,0 °C po dobu 30 až 60 minut a poté 0,1 x SSC a 0,5% SDS při teplotě 68,0 °C po dobu 30 až 60 minut.
Běžný odborný přístup v této oblasti předpokládá, že „omezující podmínky“ záleží také na délce sekvence DNA, sond oligonukleotidů (například 10 až 40 bází), nebo smíšených sondách oligonukleotidú.
V případě použití smíšených sond je výhodné použít tetramethylamoniumchlorid (TMAC) místo SSC. Viz také Ausubel, citovaný výše.
Výraz „leptinové fúzní proteiny“ nebo jednodušeji „fúzní proteiny“ se vztahuje na polypeptid, obsahující leptin nebo jeho účinné frakce, nebo muteiny zmíněných složek, zfázované s jiným proteinem, který vykazuje delší dobu zádrže v tělních tekutinách. Leptin, nebo jeho účinné frakce mohou být fúzovány s jiným proteinem, polypeptidem nebo podobně.
Výraz „soli“, uváděný v předloženém textu se vztahuje jak na soli karboxylových skupin, tak kyselé adiční soli aminových skupin leptinu, jeho účinných frakcí, muteinů nebo jeho leptinových fúzních proteinů.
Soli karboxylové skupiny mohou být připraveny pomocí běžně známých postupů v této oblasti a zahrnují anorganické soli, například sodné, vápenaté, amonné, železité nebo zinečnaté soli a podobně, a soli s organickými bázemi, připravovanými např. s aminy jako je například triethanolamin, arginin nebo lysin, piperidin, prokain a podobně.
Adiční soli s kyselinami například soli s minerálními kyselinami, jako je například kyselina chlorovodíková nebo sírová a soli s organickými kyselinami, jako je například kyselina octová a šťavelová, Všechny takové soli musí vykazovat v podstatě podobnou účinnost jako leptin nebo jeho účinné frakce.
„Funkční deriváty“, výraz používaný v předloženém textu se vztahuje na deriváty leptinu nebo jeho účinné fragmenty nebo frakce a jeho muteiny a leptinové. fúzní-proteiny, které mohou být připraveny z funkčních skupin, které se vyskytují jako vedlejší řetězce na zbytcích nebo N- nebo C- terminálních skupinách, běžně známými postupy a jsou zahrnuty do předloženého vynálezu, pokud zůstávají stále farmaceuticky akceptovatelné, což například znamená, že nenarušují účinnost proteinu, který je v podstatě svou účinností podobný leptinu a nevykazují ve farmaceutickém prostředku, který jej obsahuje toxické působení.
-10CZ 299872 B6
Tyto deriváty mohou zahrnovat například polyethylanglykolové postranní řetězce, které mohou maskovat antigenní polohy a zvyšovat působení leptinu, nebo jeho účinných frakcí v tělesných tekutinách.
Jiné deriváty zahrnují alifatické estery karboxylových skupin, amidy karboxylových skupin, získané reakcí s amoniakem nebo s primárními nebo sekundárními aminy.
N-acylové deriváty volných aminoskupin zbytků aminokyselin se připraví s acylovými podíly (například alkanoylové nebo karbocyklické aroylové skupiny) nebo O-acylové deriváty volných hydroxylových skupin (například sérylové nebo threonylové zbytky), připravené s acylovými podíly.
„Aktivní fragmenty nebo frakce“ leptinu, leptinových muteinů, fúzních proteinů uváděných v předloženém vynálezu se týkají jakéhokoliv fragmentu nebo prekurzorů polypeptídového řetězíš ce leptinu nebo fúzních proteinů, obsahujících takový fragment samotného leptinu, nebo s asociovanými molekulami nebo zbytků, spojených s výše zmíněnými složkami jako jsou například cukerné nebo fosfátové zbytky nebo shluky, jakéhokoliv ze zmíněných derivátů za předpokladu, že frakce vykazuje významně podobnou účinnost s leptinem.
Předložený vynález se dále týká přirozených a syntetických agonistů leptinového receptoru, které jsou z hledisek svých vlastností schopné inhibovat buněčnou proliferaci, významně podobnou leptinu. Takový typ agonistů může být vybrán z knihovny peptidů, knihovny analogů peptidů nebo knihovny náhodných organických molekul. Výběr se provádí postupy, běžně známými odborníkům v příslušné oblasti, hlavně na základě vybraných agonistů vázat se k leptinovému receptoru.
Například knihovna náhodných peptidů může být připravena jako prokaryotická exprese plazmidů, vykazujících kódovou DNA pro náhodné peptidy, připojené k proteinu-nosiči.
Další příklad zahrnuje fágový systém, ve kterém expresivní systém představuje fág, obsahující DNA, kódující náhodný peptid, zabudovaný do jednoho z fágových proteinů. Fágy, kódující agonisty fúzních peptidů nebo jejich antagonisty, jsou izolovány z knihovny fágů, tj. panorámováním nad povrchy s leptinovými receptory. Vázané fágy jsou izolovány a poté amplifikovány v bakteriích.
Několik sérií pan orámování-amp lift kácí je obvykle zapotřebí pro získání fágů vylučujících fúzní peptidy, které mají vysokou afinitu pro leptinové receptory. Izolovaný fág je poté amplifikován aje úrěerfá sekvence kódující DNA pro peptid.
Alternativně lze běžnými postupy, známými odborníkům v příslušné oblasti, připravit knihovny náhodných peptidů, nebo knihovny jiných molekul, syntézou pevné fáze na polymemích perličkách. Perličky s peptidem nebo jinou molekulou, vykazující afinitu pro leptinový receptor, jsou vybrány z knihovny, například vazbou značeného leptinového receptoru, například fluorescencí značeného leptinového receptoru.
Kladně reagující perličky jsou shromážděny aje určena struktura peptidu, nebo jiné molekuly, zachycených na perličce. V případě, že perlička je nosičem peptidu, je stanovena sekvence peptidu analýzou sekvence proteinu.
V případě, že perlička je typická pro náhodné organické molekuly z knihovny, potom je tinolekula z perličky odštěpena, a její struktura je určena běžnými postupy, známými odborníkům v příslušné oblasti, jakoje například hmotnostní spektrometrie, nukleární magnetická rezonance a podobné.
_ I 1 .
Pro další studie jsou potom uvažovány peptidy, identifikované na základě jejich afinity k leptinovému receptorů a poté jsou dále tříděny na základě schopností inhibovat proliferace už výše zmíněným způsobem.
Leptin, jeho účinné frakce, leptinové muteiny, leptinové fúzní proteiny, agonisté leptinového receptorů ajejich soli, funkční deriváty a účinné fragmenty nebo frakce zmíněných sloučenin, indikované pro léčbu různých typů maligního bujení, jsou proto výhodné pro léčbu nádorů závislých na růstovém faktoru a ještě výhodnější pro léčbu karcinomu prsu.
Farmaceutické prostředky, týkající se vynálezu lze pro léčebnou aplikaci připravit smíšením leptinu, nebo jeho derivátů nebo agonistů leptinového receptorů s fyziologicky vhodnými nosiči a/nebo stabilizátory a/nebo pomocnými látkami, a připravenými v lékové formě například lyofitižací v ampulce.
Způsob aplikace může být realizován buď jakýmkoliv akceptovatelným postupem aplikace u podobných látek a bude záležet na podmínkách léčby, například intravenózně, subkutánně, lokální injekcí nebo povrchovou aplikací nebo kontinuální infuzí atd.
Množství účinné sloučeniny, která má být aplikována záleží na způsobu aplikace, nemoci, která má být léčena a stavu pacienta.
Například lokální injekce vyžaduje na základě tělesné hmotnosti menší množství proteinu než intravenózní infuze. Typická účinná množství leptinu, která mají být aplikována injekčně se pohybují v rozmezí 0,1 až 1000pg/kg tělesné hmotnosti a výhodně v rozmezí od 0,1 do 10,0pg/kg.
Účinná množství derivátů leptinu a agonistů leptinového receptorů mohou být na molámí bázi v podstatě stejná jako u leptinu.
Leptin může být aplikován pacientům trpícím rakovinou například injekčně a to buď samotný nebo v kombinaci s ostatními terapeutickými látkami nebo v kombinaci s ostatními terapeutickými postupy.
Vynález může být také demonstrován následujícími, neomezujícími příklady, publikovanými na dalších stranách.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Stanovení buněčné proliferace barvením s MTT
Reagens:
MTT zásobní roztok; (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-difenyltetrazolium bromid, 5,0 mg/ml ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku, který je uchováván před použitím při teplotě -20,0 °C.
Rozpouštědlo: koncentrovaná kyselina chlorovodíková (450 μΐ ve 100,0 ml 2-přopanolu,
Postup:
Kultura rostoucích buněk na plotnách opatřených 96 jamkami za přítomnosti růstových stimulátorů a růstových inhibitorů.
-12CZ 299872 B6
V požadovaném čase se přidá do každé z jamek plotny 10 μί roztoku MTT a inkubuje se 2,5 až 3,0 hodiny při teplotě 37,0 °C. Po odsátí supematantu z vakua pomocí čisté kalibrované jehly se přidá 100,0 μί rozpouštědla (jehož příprava je popsána výše) a odečte se absorbance pomocí odečítacího zařízení při použití filtru 570 nm a po odečtení pozadí při 630 nm.
Příklad 2: Stanovení buněčné proliferace barvením s krystalovou violetí
Postup:
Kultura rostoucích buněk v plotnách opatřených 96 jamkami za přítomnosti různých růstových stimulátorů a růstových inhibitorů.
V požadovaném čase se přidá do každé jednotlivé jamky 40 μί 12,5% glutaraldehydu (40 μί) a plotny se inkubují po dobu 30 minut při teplotě místnosti. Poté byly plotny promyty vodou, vysušeny a bylo přidáno 0,10 ml 0,1% roztoku (vodného) krystalové violeti. Mikrodestička byla poté dále inkubována po dobu 30 minut, promyta vodou a odečtena při 540 nm s odečteným pozadím při 630 nm.
Příklad 3: Stanovení na inzulínu závislé proliferace T47D buněk
Lidské buňky T-47D (Americká sbírka typových kultur = American Type Culture Collection, Rockville, MD, kmen číslo ATCC RTB 133) byly naočkovány do 96 jamek v koncentraci 3 x 105 buněk/ml v DMEM a 10% fetálního telecího séra (FBS) v množství 0,1 ml v každé jamce. Poté co byl do různých jamek přidán ve zvyšujících se koncentracích lidský inzulín, byly plotny inkubovány po dobu 72 hodin a počty buněk byly poté stanoveny barvením s MTT (viz obr. 1 publikovaný dále).
Výsledky jsou propočteny z průměru 8 replikací. Na základě rozsahu buněčné proliferace, jak je demonstrováno dále na obr. 1, byla pro další studia použita koncentrace 50nM/ml IGF-I.
Příklad 4: Stanovení na IGF-1 závislé proliferace T-47D buněk
Do ploten opatřených 96 jamkami byly naočkovány lidské T-47D buňky v koncentraci 3x 105 buněk/ml v DMEM a 10% fetálního telecího séra (FBS) v množství 0,1 ml v každé jamce. Poté co byl do různých jamek přidán ve zvyšujících se koncentracích IGF-I, byly destičky inkubovány po dobu 3 dnů a počet buněk byl stanoven barvením s MTT (viz také obr. 2, publikovaný dále).
Výsledky jsou propočteny z průměru 8 replikací. Na základě rozsahu buněčné proliferace, jak je demonstrováno dále na obr. 2, byla pro další studia použita koncentrace 50 ng/ml.
Příklad 5: Inhibice inzulínem indukované proliferace T-47D buněk leptinem
Buňky T-47D (3 x 105 buněk/ml) v DMEM doplněném 10% FBS byly naočkovány do ploten opatřených 96 jamkami (0,1 ml v každé jednotlivé jamce). Poté byly buňky smíchány s inzulínem (50 nm) buď za přítomnosti nebo absence určených koncentrací myšího leptinu. Poté byly destičky inkubovány při teplotě 37 °C v atmosféře 5% oxidu uhličitého po dobu 48 hodin. Poté byly buňky obarveny MTT, Údaje jsou vyjádřeny s průměrnou standardní ± chybou (SE, n = 8).
Z výsledků vyplývá, že leptin signifikantně inhibovat inzulínem indukovanou proliferaci. Viz obr. 3, publikovaný dále.
-13CZ 299872 B6
Buňky T-47D (3 x 105 buněk/ml) v DMEM, doplněném s 10% FBS byly naočkovány do ploten, opatřených 96 jamkami (0,1 ml v každé jednotlivé jamce). Po uplynutí jednoho dne bylo médium nahrazeno DMEM, doplněným s 2% FBS a po uplynutí dalšího dne.byly buňky smíchány s inzu5 linem (50 nm) buď za přítomnosti nebo absence určených koncentrací myšího leptinu ve směsi DMEM a 2% FBS. Poté byly plotny ínkubovány při teplotě 37 °C v atmosféře 5% oxidu uhličitého po dobu 48 hodin. Buňky byly poté obarveny krystalickou violetí. Údaje jsou vyjádřeny s průměrnou standardní ± chybou (± SE, n ~ 8).
ío Z výsledků vyplývá, že leptin signifikantně inhiboval s inzulínem indukovanou buněčnou proliferaci. Viz obr. 4, publikovaný dále.
Příklad 6: Inhibice a IGF-I indukované proliferace T-47D buněk leptinem 15
Buňky T-47D (3 x 105 buněk/ml) v DMEM, doplněném 10% FBS byly naočkovány do ploten opatřených 96 jamkami v množství 0,1 ml v každé jednotlivé jamce, a poté byly smíchány s 50 ng/ml IGF-1 za přítomnosti nebo absence určených koncentrací myšího leptinu. Poté byly plotny Ínkubovány při teplotě 37 °C v atmosféře 5% oxidu uhličitého po dobu 48 hodin. Poté byly buňky obarveny MTT. Údaje jsou vyjádřeny s průměrnou standardní chybou ± SE, (n = 8).
Z výsledků vyplývá, že leptin signifikantně inhiboval s IGF-I indukovanou proliferaci buněk. Viz obr. 5, publikovaný dále. ,
Buňky T-47D (3 x 105 buněk/ml) v DMEM doplněném 10% FBS byly naočkovány do ploten, opatřených 96 jamkami v množství 0,1 ml v každé jednotlivé jamce.
Po uplynutí jednoho dne bylo médium nahrazeno DMEM doplněným s 2% FBS a po uplynutí dalšího dne byly buňky smíchány s 50,0 ng/ml ÍGF-I buď za přítomnosti nebo absence určených koncentrací myšího leptinu ve směsi DMEM s 2% FBS.
Poté byly plotny ínkubovány při teplotě 37 °C v atmosféře 5% oxidu uhličitého po dobu 48 hodin. Poté byly buňky obarveny krystalickou violetí. Údaje jsou vyjádřeny s průměrnou standardní ± chybou (SE, n = 8).
35 .
Z výsledků vyplývá, že leptin signifikantně inhiboval IGF-I indukovanou buněčnou proliferaci. Viz obr. 6. ,
Buňky T-47D (3 x 105 buněk/ml) v DMEM doplněném s 10% FBS byly naočkovány do ploten 40 opatřených 96 jamkami v množství 0,1 ml v každé jednotlivé jamce. Po uplynutí jednoho dne bylo médium nahrazeno DMEM doplněným s 2% FBS a po uplynutí dalšího dne byly buňky smíchány s 50 ng/ml IGF-I za přítomnosti nebo absence určených koncentrací lidského leptinu ve směsi , DMEM 2% FBS. Poté byly destičky ínkubovány při teplotě 37 °C v atmosféře
5% oxidu uhličitého po dobu 48 hodin. Poté byly buňky obarveny krystalovou violetí. Údaje jsou 45 vyjádřeny s průměrnou standardní chybou ± SE (n = 8).
Z výsledků vyplývá, že leptin signifikantně inhiboval s IGF-I indukovanou buněčnou proliferaci. Viz obr. 7.
Příklad 8: Inhibice inzulínem indukované proliferace MCF-7 buněk leptinem
Buňky MCF-7 lidského adenokarcinomu prsu (3 x 104 buněk/ml) (Americká sbírka typových kultur = American Type Culture Collection, Rockville, MD, kmen č.HTB 22) doplněné 6% FBS byly naočkovány do ploten opatřených 96 jamkami v množství 0,1 ml v každé jednotlivé jamce.
-14CZ 299872 B6
Po uplynutí jednoho dne bylo médium nahraženo DMEM za absence séra. Po uplynutí dalšího dne byly buňky smíchány s 50 nm inzulínu buď za přítomnosti nebo absence určených koncentrací myšího leptinu v séru prostém médiu. Poté byly destičky inkubovány pří teplotě 37 °C v atmosféře 5% oxidu uhličitého po dobu 48 hodin. Poté byly buňky obarveny krystalovou violetí. Údaje jsou vyjádřeny s průměrnou standardní chybou + SE (n = 8).
Z výsledků vyplývá, že Íeptin signifikantně inhiboval s inzulínem indukovanou buněčnou proliferaci. Viz obr. 8.
Příklad 9: Inhibice IGF-I indukované proliferace MCF-7 buněk s leptinem
Buňky MCF-7 lidského adenokarcinomu prsu v DMEM doplněném 10% FBS byly naočkovány ' do ploten opatřených 96 jamkami (3 x 104 buněk/ml) v množství OJ ml v každé jednotlivé jamce.
Po uplynutí jednoho dne bylo médium nahraženo sérum prostým médiem a po uplynutí dalšího dne byly buňky smíchány s 50 ng/ml IGF—I buď za přítomnosti nebo absence určených koncentrací myšího leptinu v séru prostém médiu. Poté byly destičky inkubovány při teplotě 37 °C v atmosféře 5% oxidu uhličitého po dobu 96 hodin. Poté byly buňky obarveny krystalovou violetí. Údaje jsou vyjádřeny s průměrnou standardní chybou ± SE (n = 8).
Z výsledků vyplývá, že íeptin signifikantně inhiboval s inzulínem indukovanou buněčnou proliferaci. Viz obr. 9.
Odkazy na odbornou literaturu:
1) Arakí E.; Lipas M.A.; Patti M.E.; Bruning J.C.; Haag B.; Johnson R.S.; a Kahn C.R. Alternativě pathway of insulin signaling in mice with targeted disruption of the IRS-1 gene.
(viz komentář).
Nátuře, 372; strana 186-190; /1994/.
2) Ausubel F.M. se sp.
Edice Current Protocols in Molecular Biology
3) Campfield I.A.; Smith F.J.; Guisez Y,; Devos R; a Bum P.
Recombinant mouše OB protein. Evidence for a peripheral signál linkiňg adiposíty and centrál neural networks. ’ '
Science, 169, 546-549;/1995/.
4) Cheatham B, a Kahn C.R.
Insulin section and insulin signaling network.
Endocr. Rev.; 16; strana 117-1,42; /1995/.
5) CioffiJ.A,; ShaferA.W.; Zupancic T.J.; Smith-Gbur J.; Mikhail A.; PlatikaD.; aSnodgrass H.R.
Novel B219/0B receptor informs. Possible role of Íeptin in hematopoiesis and reproduction. Nátuře Medicine; 2; 585-589; /1996/.
6) Cohen B.; Novick D. a Rubinstein M.
Modulation of insulin activities by Íeptin.
Science; 274; 1 185-1 188;/1996/.
-15CZ 299872 B6
7) Collins S.; Kuhn C.M.; Petro A.E.; Swick A.G.; Chrunyk B.A.; a Surwit R.S.
Role of leptin in fat regulation.
Nátuře; 380; 677;/1996/.
8) Cinsidine R.V.; Sinhe M.K.; Heimman M.L.; Kriaucinas A.; Stephens T.W.; Nyce M.R.; Ohannesian J.P,; Mareo C.C.; Mckee L.J.; Bauer T.L.; a Caro J.F.
Sérum immunoreactive leptin concentrations in normálweight and obese humans.
N. Engl. J. Med.; 334; 292-295; /1996/.
io
9) Felber J.P.; a Golay A.
Regulation of nutrient metabolism and energy expenditure.
Metabolism; 44; Suppl. 2; str. 5-9; /1995/.
10) Frederích R.C.;, Hamann A,;, Anderson S.; Lollmann B.; Lowell B.B.; a Flier J.S.
Leptin levels reflect body lipid content in mice. Evidence for diet-induced resistance to leptin action.
Nátuře Med 1; 1311-1 314;/1995/.
11) Halaas J.L.; Gajiwala K.S.; Maffei M.; Cohen S.L.: Chait B.T.; Rabinowitz D; Lallone R.L.;
Burley S.K.; a Friedman J.M.
Weight-reducing effects of the plasma protein eneoded by the obese gene. Viz komentář. Science; 269; strana 543-546; /1995/.
12) LeeG.H.; ProencaR.; MontezJ.M.; CarrollK.M; Darvishzadeh J.G.; LeeJ.I.; a Friedman J.M.
Abnormal splicing of the leptin receptor in diabetic moce.
Nátuře; 379; 632-635;/1996/.
13) Lonnquist F.; Amer P.; Nordfors I. a Schalling M.
Overexpression of the obese (ob) gene in adipose tissue of human obese subjects.
Nátuře Med.; 1; 950-953; /1995/.
14) MeffeiM.; Halaas J.; Ravussin E.; PratleyR.E.; LeeG.H.; ZhangY.; Fei H.; Kim S.;
Lallone R.; Ranganathan S.;Kem P.A. a Friedman J.M.
Leptin levels in human and rodent. Messurement of plasma leptin and ob RNA in obese and weight-reduces subjects.
. Nátuře Med.;4; 1 155-1 161;/1995/. .....
15) Milazzo G.;, Sciatta L.; Papa V.; Goldfine LD. a Vignari R.
ASPB-10 insulin induction of inereaseed mitogenic responses and phenotypic changes in human breast epithelial cells*. Evidence for enhanced interaction with the insulinlike growth factor-1 receptor.
16) Milazzo G.; Giorgino F.; DamanteG.; SungC.; StampferM.R.; Vigneri R.; Goldfine I.;
a Belfiore A,
Insulin receptor expression in human breast cancer cell lineš.
Cancer, 52,3 924-3 930; /1992/.
17) Myers M.G.Jr.; Sun X.J.; Cheatham B.; JachnaB.R.; Glasheen E.M.; BackerJ.M.;
a White M.F.
IRS-l is a common element in insulin and insulin like growth factor-1 signál ing to the phosphatidylinositol 3'-kinase.
Endocrinology; 132; strana l 421-1 430;/1993/.
-16CZ 299872 B6
18) Myers M.G.Jr.; Sun X.J.; a White M.F.
The IRS-l signál ing systém.
Trends Biochem Sci,; 19; strana 289-293; /1994/.
19) Myers M.G.; Jr.; Wang L.M.; Sun X.J.; Zhang Y.; Yenush L.; Schlesšinger J.; Pierce J.,H.;
a White M.F,
Role of IRS-l/GRB-2 complexes in insulin signaling.
Mok Cell Biok; 14; strana 3 571-3 587; /1994/.
to 20) Myers M.G.Jr.; a White M.F.
The new elements of insulin signaling. Insulin reeeptor substrate-1 and proteins with SH2 domains.
Diabetes 42; strana 43-50; /1993/,
21) Pelleymounter M.A.; Cullen M.J.; Baker M.B.; Hecht R.; Winters D.; Boone T. a Collins F,
Effects of the obese gene product on body weight regulation in ob/ob mice. (Viz komentář). Science; 269; strana 540-543; /1995/.
22) PermisA.; Witthuhn S.; Keegan A.D.; NelmsK,; Garfein E.; Ihle J.N.; Paul W.E.; Pier20 ce J.H.; a Rothman P.
Interleukin 4 signals through two related pathways.
Proč, Nati. Acad. Sci. USA; 92; 7 971-7 975; /1995/.
23) Rose D.W.; Saltiel A.R.; Majumdar M.; Decker S.J.; a Olefsky J.M.
Insulin reeeptor substrate-1 is required for insulinmediated mitogenic signál transductíon.
Proč, Nati. Acad. Sek USA; 91; strana 797-801; /1994/.
24) Sambrook se sp.
Molecular cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor; N.Y.
25) Tamemoto H.; Kadowaki T.; Tobě K.; Yagi T.; Sakura H.; Hayakawa T.; Terauchi Y.; Uski K.; Aburagi Y.; Satoh S. se sp.
Insulin reststence and growth retardation in mice lacking insulin reeeptor substrate-1, (Viz komentář).
Nátuře; 372; strana 182-186; /1994/.
26) Tartaglia L.A.; Dembski M.; WengX,; DengN.H.; CulpepperJ.; Devos R.; Richards G.J.; Campfield L.A.; Clark F.T.; Deeds J.; Muir C.; Sanker S.; Moriarty A.; Moore K.J.; Šmutko J.S.; Mays G.G.; Woolf E. A.; Monroe C.A, a Tepper R.k
Identification and expression cloning of leptin reeeptor, OB-R.
Cell; 83; 1 263-1 271;/1995/, . 27) WeigIeD,S.; Bukowski T.R.; FosterD.C.; Holderman S.; KramerJ.M.; LasserG.; Loftonday C.E.; Prunkard D.E.; Raymond C. a Kuijper J.L.
Recombinant ob protein reduces feeding and body weight in the ob/ob mouše.
J. Clin. Invest.; 96; 2 065-2 070; /1995/.
28) White M.F. a Kahn C.R.
The insulin signaling systém. .. . . „ , . 50 J. Biok Chem.; 269; strana 1-4; /1994/.
-17CZ 299872 B6
29) Yin T.G,; Keller S.R.; Quelle F.W.; Witthuhn B.A.; Tsang M.L.S.; Lienhard G.E.; Ihle J.N.; aYang Y.C.
Interleukin-9 induces tyrosine phosphorylatíon on insulin receptor substrate-1 via JAK tyrosine kinases.
J. Biol. Chem.; 270; 20 497-20 503; /1995/.
30) Yin T.G.; Tsang M.L.S.; a Yang Y.C.
JAK-1 kinase fbrms complexes with interleukin-4 receptor and 4PS/insulin receptor substráte- 1-like protein and is activated by interleukin-4 and interleukin-9 in T-lymphocytes. J. Biol. Chem.; 269; 26 614-26 617; /1994/.
31) Zhang Y.; Proence R.; Maffei M,; Barone M.; Leopold L.; a Friedman J.M.
Positional cloníng of the mouše obese gene and its human homologue.
Nátuře; 372; 425-432;/1994/.
Claims (4)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Použití účinné látky ze skupiny leptin, fúzní proteiny leptinu, muteiny leptinu, agonisté receptorů leptinu, účinné fragmenty nebo frakce kterékoliv z uvedených látek, účinné analogy nebo deriváty kterékoliv z těchto látek, jejich soli ajejich směsi při výrobě léčiva pro inhibicí proliferace lidského karcinomu prsu.
- 2. Použití podle nároku 1 při výrobě léčiva pro léčení lidského karcinomu prsu.
- 3. Použití podle nároku 1 nebo 2 při přípravě léčiva pro inhibicí lidských zhoubných nádorů prsu, zejména pro inhibicí bazální a inzulínem indukované proliferace nádorových buněk,
- 4. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, při němž je látkou, použitou pro přípravu léčiva leptin.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL12073397A IL120733A0 (en) | 1997-04-29 | 1997-04-29 | Leptin as an inhibitor of cell proliferation |
| PCT/IL1998/000196 WO1998048831A1 (en) | 1997-04-29 | 1998-04-26 | Leptin as an inhibitor of tumor cell proliferation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ384899A3 CZ384899A3 (cs) | 2000-06-14 |
| CZ299872B6 true CZ299872B6 (cs) | 2008-12-17 |
Family
ID=11070075
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0384899A CZ299872B6 (cs) | 1997-04-29 | 1998-04-26 | Farmaceutický prostredek |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7109159B1 (cs) |
| EP (1) | EP0981365B1 (cs) |
| JP (1) | JP4330662B2 (cs) |
| KR (1) | KR100507731B1 (cs) |
| CN (1) | CN1168497C (cs) |
| AR (1) | AR012626A1 (cs) |
| AT (1) | ATE283702T1 (cs) |
| AU (1) | AU742927B2 (cs) |
| BG (1) | BG63490B1 (cs) |
| CA (1) | CA2288238A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ299872B6 (cs) |
| DE (1) | DE69827942T2 (cs) |
| EA (1) | EA002353B1 (cs) |
| EE (1) | EE04801B1 (cs) |
| ES (1) | ES2232944T3 (cs) |
| HU (1) | HUP0002427A3 (cs) |
| IL (2) | IL120733A0 (cs) |
| NO (1) | NO322304B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ500589A (cs) |
| PL (1) | PL195275B1 (cs) |
| PT (1) | PT981365E (cs) |
| SK (1) | SK284848B6 (cs) |
| UA (1) | UA66793C2 (cs) |
| WO (1) | WO1998048831A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA983608B (cs) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6777388B1 (en) | 1998-08-21 | 2004-08-17 | Clf Medical Technology Acceleration Program, Inc. | Leptin-related peptides |
| US7208572B2 (en) | 1998-08-21 | 2007-04-24 | Albany Medical College | Leptin-related peptides |
| US20050272652A1 (en) | 1999-03-29 | 2005-12-08 | Gault Victor A | Peptide analogues of GIP for treatment of diabetes, insulin resistance and obesity |
| IL132312A0 (en) * | 1999-09-05 | 2001-03-19 | Yeda Res & Dev | Use of leptin in inhibition of endothelial cell proliferation |
| US8076288B2 (en) | 2004-02-11 | 2011-12-13 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides having glucose lowering activity |
| IN2012DN03921A (cs) | 2004-02-11 | 2015-09-04 | Amylin Pharmaceuticals Inc | |
| US8969291B2 (en) | 2004-10-08 | 2015-03-03 | Enzo Therapeutics, Inc. | Methods for decreasing leptin levels or activity for treating inflammation |
| US7863240B2 (en) * | 2004-10-08 | 2011-01-04 | Enzo Therapeutics, Inc. | Methods and uses of leptin in hepatocellular carcinoma |
| US8263545B2 (en) | 2005-02-11 | 2012-09-11 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties |
| JP2008530130A (ja) | 2005-02-11 | 2008-08-07 | アミリン・ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド | Ｇｉｐ類似体および選択可能な特性を備えるハイブリッドポリペプチド |
| EP1922336B1 (en) | 2005-08-11 | 2012-11-21 | Amylin Pharmaceuticals, LLC | Hybrid polypeptides with selectable properties |
| EP2330125A3 (en) | 2005-08-11 | 2012-12-12 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides with selectable properties |
| US8227408B2 (en) * | 2005-09-07 | 2012-07-24 | Neurotez, Inc. | Leptin as an anti-amyloidogenic biologic and methods for delaying the onset and reducing Alzheimer's disease-like pathology |
| US8497240B2 (en) | 2006-08-17 | 2013-07-30 | Amylin Pharmaceuticals, Llc | DPP-IV resistant GIP hybrid polypeptides with selectable properties |
| JP5702150B2 (ja) * | 2008-02-08 | 2015-04-15 | アンブルックス, インコーポレイテッドAmbrx, Inc. | 修飾されているレプチンポリペプチドおよびそれらの使用 |
| CA2725143A1 (en) * | 2008-05-21 | 2009-11-26 | Neurotez, Inc. | Methods for treating progressive cognitive disorders related to neurofibrillary tangles |
| AU2009313562B2 (en) * | 2008-11-04 | 2012-11-15 | Neurotez, Inc. | Leptin compositions and methods for treating progressive cognitive function disorders resulting from accumulation of neurofibrillary tangles and amlyoid beta |
| US20100316639A1 (en) | 2009-06-16 | 2010-12-16 | Genentech, Inc. | Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy |
| TWI824372B (zh) | 2015-10-12 | 2023-12-01 | 美商再生元醫藥公司 | 活化瘦素受體的抗原結合蛋白 |
| AU2017359439B2 (en) | 2016-11-08 | 2024-11-28 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Antigen-binding proteins that antagonize leptin receptor |
| MX2020006508A (es) | 2017-12-18 | 2020-09-17 | Regeneron Pharma | Moleculas de union a antigeno biespecificas que se unen al receptor de leptina y/o gp130, y metodos para el uso de estas. |
| RS67121B1 (sr) | 2018-04-06 | 2025-09-30 | Regeneron Pharma | Antitelo agonist leptinskog receptora za upotrebu u povećanju koštane mase kod osobe koja pati od metaboličke disfunkcije ili hipoleptinemije |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997011192A1 (en) * | 1995-09-19 | 1997-03-27 | Eli Lilly And Company | Dna encoding medicinal proteins |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR19990028388A (ko) * | 1995-06-30 | 1999-04-15 | 피터 지. 스트링거 | 당뇨병 치료 방법 |
| ES2260784T3 (es) * | 1996-01-23 | 2006-11-01 | Indevus Pharmaceuticals, Inc. | Metodos de utilizacion del gen obese y su producto genico para estimular el desarrolo hematopoyetico. |
-
1997
- 1997-04-29 IL IL12073397A patent/IL120733A0/xx unknown
-
1998
- 1998-04-26 NZ NZ500589A patent/NZ500589A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 DE DE69827942T patent/DE69827942T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-26 EA EA199900981A patent/EA002353B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 JP JP54678798A patent/JP4330662B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 ES ES98917580T patent/ES2232944T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-26 AU AU70762/98A patent/AU742927B2/en not_active Ceased
- 1998-04-26 CZ CZ0384899A patent/CZ299872B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 AT AT98917580T patent/ATE283702T1/de active
- 1998-04-26 PL PL98336582A patent/PL195275B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 EP EP98917580A patent/EP0981365B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-26 EE EEP199900510A patent/EE04801B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 SK SK1471-99A patent/SK284848B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 CN CNB988066920A patent/CN1168497C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 PT PT98917580T patent/PT981365E/pt unknown
- 1998-04-26 US US09/403,897 patent/US7109159B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 KR KR10-1999-7009705A patent/KR100507731B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 CA CA002288238A patent/CA2288238A1/en not_active Abandoned
- 1998-04-26 HU HU0002427A patent/HUP0002427A3/hu unknown
- 1998-04-26 WO PCT/IL1998/000196 patent/WO1998048831A1/en active IP Right Grant
- 1998-04-26 UA UA99116415A patent/UA66793C2/uk unknown
- 1998-04-29 ZA ZA983608A patent/ZA983608B/xx unknown
- 1998-04-29 AR ARP980102003A patent/AR012626A1/es unknown
-
1999
- 1999-10-25 BG BG103832A patent/BG63490B1/bg unknown
- 1999-10-28 IL IL132633A patent/IL132633A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-10-28 NO NO19995267A patent/NO322304B1/no not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997011192A1 (en) * | 1995-09-19 | 1997-03-27 | Eli Lilly And Company | Dna encoding medicinal proteins |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Zachow R.J. and Magoffin D.A.: "Direct intraovarian effects of leptin: Impairment of the synergistic action of insulin-like growth factor I on follicle-stimulating hormone à", Endocrinology, vol.138(2), 847-850, 1997 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ299872B6 (cs) | Farmaceutický prostredek | |
| Altomonte et al. | Inhibition of Foxo1 function is associated with improved fasting glycemia in diabetic mice | |
| US5374620A (en) | Growth-promoting composition and its use | |
| RU2738158C2 (ru) | Состав препарата нейрегулина | |
| US5681814A (en) | Formulated IGF-I Composition | |
| US20080032932A1 (en) | Method of reducing mortality and morbidity associated with critical illnesses | |
| Moustaki et al. | Secondary diabetes mellitus in acromegaly | |
| JP2011521621A (ja) | アイソフォーム特異的インスリン類似体 | |
| JP2006502100A (ja) | 細胞の異常消失に関わる障害の治療のための、および／または、肥満の治療のためのｇｉｐ活性を有する化合物の使用 | |
| JPH08510443A (ja) | 生物学的に活性なＴＧＦ−β１およびＴＧＦ−β２ペプチド | |
| CN101678084A (zh) | 未酰基化的生长素释放肽作为治疗代谢紊乱中的治疗剂 | |
| Ye et al. | Long-lasting anti-diabetic efficacy of PEGylated FGF-21 and liraglutide in treatment of type 2 diabetic mice | |
| Gertler et al. | Novel superactive leptin antagonists and their potential therapeutic applications | |
| JPH09188630A (ja) | 膵臓機能改善剤 | |
| CA2106368A1 (en) | Methods and compositions for treatment of angiogenic disease | |
| MXPA99009972A (en) | Leptin as an inhibitor of tumor cell proliferation | |
| US20090088374A1 (en) | Novel use | |
| US20210163561A1 (en) | Nbp158 and uses thereof | |
| US20040151693A1 (en) | Use of mullerian inhibiting substance and interferon for treating tumors | |
| US20090137465A1 (en) | Novel use | |
| HK1028350B (en) | Leptin as an inhibitor of tumor cell proliferation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20130426 |