BG63490B1 - Използване на лептин като инхибитор на пролиферацията на туморни клетки - Google Patents
Използване на лептин като инхибитор на пролиферацията на туморни клетки Download PDFInfo
- Publication number
- BG63490B1 BG63490B1 BG103832A BG10383299A BG63490B1 BG 63490 B1 BG63490 B1 BG 63490B1 BG 103832 A BG103832 A BG 103832A BG 10383299 A BG10383299 A BG 10383299A BG 63490 B1 BG63490 B1 BG 63490B1
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- leptin
- active agent
- cell proliferation
- inhibiting
- treatment
- Prior art date
Links
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 title claims abstract description 54
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 21
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title claims description 32
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 43
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 21
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 3
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 claims description 121
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 claims description 121
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 claims description 120
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 claims description 116
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 76
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 38
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 38
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 38
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 claims description 32
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 claims description 32
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 32
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 28
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 26
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 25
- 102100031775 Leptin receptor Human genes 0.000 claims description 24
- 108010019813 leptin receptors Proteins 0.000 claims description 24
- 102100025087 Insulin receptor substrate 1 Human genes 0.000 claims description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 22
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 18
- 101710201824 Insulin receptor substrate 1 Proteins 0.000 claims description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 16
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 claims description 14
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 claims description 14
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 claims description 13
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 11
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 11
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 11
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000008747 mitogenic response Effects 0.000 claims description 10
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 8
- 108091005682 Receptor kinases Proteins 0.000 claims description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 8
- 108010034219 Insulin Receptor Substrate Proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 claims description 6
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 claims description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 claims 3
- 101100205088 Caenorhabditis elegans iars-1 gene Proteins 0.000 claims 2
- 101150030450 IRS1 gene Proteins 0.000 claims 2
- 101100232738 Gallus gallus IFNL3 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101000668058 Infectious salmon anemia virus (isolate Atlantic salmon/Norway/810/9/99) RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit Proteins 0.000 claims 1
- 239000000565 sealant Substances 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 20
- 239000000556 agonist Substances 0.000 abstract description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 abstract 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 abstract 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 abstract 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 57
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 22
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 22
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 18
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 15
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 12
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 9
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 8
- 101001063890 Mus musculus Leptin Proteins 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 7
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 7
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 7
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 6
- 238000003235 crystal violet staining Methods 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Chemical class 0.000 description 3
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 3
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical class [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 3
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 DNA or RNA Chemical class 0.000 description 2
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M N,N,N-Trimethylmethanaminium chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)C OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000007952 growth promoter Substances 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 2-(3,5-diphenyl-1h-tetrazol-1-ium-2-yl)-4,5-dimethyl-1,3-thiazole;bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1N1N(C=2C=CC=CC=2)N=C(C=2C=CC=CC=2)[NH2+]1 NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- GMRGSBAMMMVDGG-GUBZILKMSA-N Asn-Arg-Arg Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)CN=C(N)N GMRGSBAMMMVDGG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- APHUDFFMXFYRKP-CIUDSAMLSA-N Asn-Asn-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N APHUDFFMXFYRKP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FBODFHMLALOPHP-GUBZILKMSA-N Asn-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FBODFHMLALOPHP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- XAJRHVUUVUPFQL-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O XAJRHVUUVUPFQL-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- KPENUVBHAKRDQR-GUBZILKMSA-N Cys-His-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KPENUVBHAKRDQR-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- KASDBWKLWJKTLJ-GUBZILKMSA-N Glu-Glu-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O KASDBWKLWJKTLJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- XEKAJTCACGEBOK-KKUMJFAQSA-N Glu-Met-Phe Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N XEKAJTCACGEBOK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 1
- 101001063991 Homo sapiens Leptin Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- MJWVXZABPOKJJF-ACRUOGEOSA-N Leu-Phe-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O MJWVXZABPOKJJF-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N Leu-Pro-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- UIIMIKFNIYPDJF-WDSOQIARSA-N Leu-Trp-Met Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)=CNC2=C1 UIIMIKFNIYPDJF-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- QUYCUALODHJQLK-CIUDSAMLSA-N Lys-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QUYCUALODHJQLK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- OVIVOCSURJYCTM-GUBZILKMSA-N Lys-Asp-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O OVIVOCSURJYCTM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- XIGAHPDZLAYQOS-SRVKXCTJSA-N Met-Pro-Pro Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 XIGAHPDZLAYQOS-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- UYDDNEYNGGSTDW-OYDLWJJNSA-N Met-Trp-Trp Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC3=CNC4=CC=CC=C43)C(=O)O)N UYDDNEYNGGSTDW-OYDLWJJNSA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 1
- IPVPGAADZXRZSH-RNXOBYDBSA-N Phe-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O IPVPGAADZXRZSH-RNXOBYDBSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- AIOWVDNPESPXRB-YTWAJWBKSA-N Pro-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2)O AIOWVDNPESPXRB-YTWAJWBKSA-N 0.000 description 1
- IOVBCLGAJJXOHK-SRVKXCTJSA-N Ser-His-His Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 IOVBCLGAJJXOHK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- TYVAWPFQYFPSBR-BFHQHQDPSA-N Thr-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O TYVAWPFQYFPSBR-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 1
- NDZYTIMDOZMECO-SHGPDSBTSA-N Thr-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NDZYTIMDOZMECO-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WJKJJGXZRHDNTN-UWVGGRQHSA-N Tyr-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 WJKJJGXZRHDNTN-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N Tyr-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000001621 anti-mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001400 expression cloning Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000014101 glucose homeostasis Effects 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 102000044162 human IGF1 Human genes 0.000 description 1
- 102000049953 human LEP Human genes 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 102000005861 leptin receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- TWXDDNPPQUTEOV-FVGYRXGTSA-N methamphetamine hydrochloride Chemical compound Cl.CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 TWXDDNPPQUTEOV-FVGYRXGTSA-N 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108700010839 phage proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000012868 site-directed mutagenesis technique Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035924 thermogenesis Effects 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/33—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/2264—Obesity-gene products, e.g. leptin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретението се отнася до употребата на лептин ипроизводни на лептин молекули в онкологията като инхибитор на пролиферацията на туморни клетки.
Description
Настоящото изобретение се отнася до лептин, цитокин, продуциран от адипоцити и засягащ разнообразни клетки и тъкани. По-конкретно това изобретение се отнася до нови приложения на лептина в областта на онкологията.
ПРЕДШЕСТВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА
Лептин, цинокин. производен на адипоцита, който регулира телесното тегло, беше идентифициран чрез позиционално клониране на мишия оЬ ген (Zhang et al., 1994) и беше показано, че засяга както приемането на храна, така и термогенезата (Campfield et al., 1995; Collins et al., 1996; Halaas et al., 1995; Pelleymounter et al., 1995; Weigle et al., 1995). В хлоридния възел бяха локализирани високо ефективни места за свързване на лептин; експресионното клониране на кДНК от тази тъкан осигури лепгиновия рецептор (OB-R) (Tartaglia et al., 1995). Известните активности на лептина се опосредстват от неговия рецептор в хипоталамуса. Рецептори на лептин се появяват освен това и в допълнителни органи, особено в бъбреците, белия дроб и черния дроб (Cioffi et al., 1996; Lee et al., 1996; Tartaglia et al., 1995). Нещо повече, различна комбинация на сплайс варианти на лептиновия рецептор, различаващи се по техния цитоплазмен домен, се експресира по тъканно специфичен начин в мишката (Lee et al., 1996). Следователно, в допълнение към контрола на приемане на храна и телесното тегло лептинът може да проявява други физиологични функции.
Въпреки че лептинът се продуцира от адипоцити, неотдавнашното откриване на корелация между излишната мазнина и високите нива на лептин в серума беше в противоречие с мнението, че лептинът намалява приемането на храна и телесното тегло (Considine et al., 1996; Frederich et al., 1995; Lonnqvist et al., 1995; Maffei et al., 1995). Тази корелация, както и добре изследваната връзка между затлъстяването и устойчивостта на инсулин (Felber и Golay, 1995) предполагаха, че лептинът може да модулира отговорите по отношение на регулирането на инсулина. Всъщност неотдавна беще докладвано, че лептинът намалява значително базалното и индуцирането от инсулина фосфорилиране на тирозина на инсулиновия рецептор субстрат-1 (IRS1). Това въздействие на лептина върху фосфорилирането на IRS-1 беше специфично, тъй като не беше намалено фосфорилирането на тирозина на β-веригата на инсулиновия рецептор (IR) (Cohen et al., 1996).
Фосфорилирането на тирозина на IRS-1 от IR киназата е ключова стъпка в сигналната каскада на инсулиновия рецептор, водеща до много от познатите активности на инсулина (Агаю et al., 1994; Cheatham и Kahn, 1995; Myers et al., 1994; Myers et al., 1994; Myers White, 1993; Rose et al., 1994; Tamemoto et al., 1994; White и Kahn, 1994). Последователното предаване на сигнали от IRS-1 е опосредствано от няколко свързани белтъка, един от които е асоциираният с рецептора на растежния фактор свързващ белтьк-2 (GRB2) (Cheatham и Kahn, 1995).
Инсулиновият рецептор (IR) се разглежда като метаболитен рецептор, опосредстващ въздействията на инсулина върху глюкозната хомеостаза. Като такъв той се експресира в крайно диференцирани тъкани, такива като мастната тъкан, черния дроб и мускулите. Много изследвания са показали обаче, че IR е мощен митогенен рецептор in vitro и in vivo, когато се експресира в туморни клетки. Например, в няколко клетъчни линии на рак на гърдата бяха идентифицирани функционални IRs, както беше определено чрез фосфорилиране на тирозина на IR в отговор на третиране с инсулин. Нещо повече, IR опосредства митогенен отговор в тези клетки, както е определено чрез инкорпориране на [3Н]-тимидин (Milazzo et al., 1997; Milazzo et al., 1992).
До^сега не е била описана най-общо употребата на лептин в областта на онкологията; в частност, лептинът не е бил описан като полезен за инхибиране на пролиферацията на клетки, по-специално на делящи се ракови клетки.
СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Обект на настоящото изобретение е да осигури използването на лептин като инхибитор на клетъчната пролиферация, например използване на лептин като инхибитор на пролиферацията на ракови клетки.
Друга цел на изобретението е да осигури използването на лептин самостоятелно или в комбинация с други терапевтични агенти за третирането на различни злокачествени образования.
По-нататък обект на настоящото изобретение е осигуряване използването на лептин, слети с лептин белтъци, лептинови мутеини, агонисти на лептиновия рецептор, активни фрагменти или фракции от всеки един от горепосочените, активни аналози или производни на всеки един от горепосочените, соли на всеки един от горепосочените и смеси от всеки от горепосочените за третиране на различни злокачествени образования.
Още един обект на настоящото изобретение е осигуряването на фармацевтични препарати, съдържащи един или повече от горните лептин, слети с лептин белтъци, лептинови мутеини, агонисти на лептиновия рецептор, активни фрагменти или фракции от всеки един от горепосочените, активни аналози или производни на всеки един от горепосочените, соли на всеки един от горепосочените, за третиране на различни злокачествени образования.
Други предмети на настоящото изобретение ще бъдат изложени по-надолу или лесно ще бъдат открити в изложението, което следва.
Настоящото изобретение осигурява използването на лептин като инхибитор на клетъчната пролиферация. Лептинът може да бъде полезен или самостоятелно, или в комбинация с други терапевтични агенти или подходи за третирането на различни злокачествени образования. Предпочитан обхват на изобретението е използването на лептин за инхибирането на пролиферацията на клетки от рак на гърдата при човек. Пролиферацията на много типове туморни клетки се повишава в присъствие на различни растежни фактори^ такива като инсулин и IGF-I. Стимулиращият растежа ефект на инсулина и IGF-I върху клетки е опосредстван, поне частично, по пътя на IRS-1/GRB2 (Myers et al., 1993). Този път се инхибира от лептина. Нещо повече, IRS-1 е субстрат на рецепторни кинази на допълнителни растежни фактори и цитокини, включващи IL-4 и EL-9 (Pemis et al., 1995; Yin et al., 1995; Yin et al., 1994). Следователно лептинът може да инхибира митогенните отговори на някои или всички от гореспоменатите растежни фактори и цитокини, както и на други растежни фактори, като по този начин инхибира пролиферацията на множество туморни клетки. Дадените примери включват инхибиране на индуцираната от IGF-I пролиферация и индицираната от инсулина пролиферация на човешки клетъчни линии на рак на гърдата T-47D и MCF7. Настоящето изобретение осигурява също и използването на лептин, слеги с лептин белтъци, лептинови мутеини. агонисти на лептиновия рецептор, активни фрагменти или фракции от всеки един от горепосочените, или соли на всеки един от горепосочените за третиране на различни злокачествени образования.
По-специално настоящото изобретение осигурява използването на активен агент, избран от групата, състояща се от лептин, слети с лептин белтъци, лептинови мутеини, агонисти на лептиновия рецептор, активни фрагменти или фракции от всеки един от горепосочените, активни аналози или производни на всеки един от горепосочените, соли на всеки един от горепосочените, и смеси от всеки от горепосочените, като инхибитор на пролиферация на туморни клетки.
Обхватът на горния аспект на настоящото изобретение включва.
(I) използването на горния активен агент като инхибитор на клетъчна пролиферация за третирането на злокачествени образования при бозайници;
(II) използването на горния активен агент като инхибитор на зависими от растежни фактори тумори;
(Ш) използването на горния активен агент като инхибитор на ; пролиферацията на клетки от рак на гърдата при човека;
(IV) използването на горния активен агент за третиране на ’ карциноми на гърдата при човека;
(V) използването на горния активен агент като инхибитор на · стимулиращия растежа ефект на инсулина и IGF-I върху туморни клетки, като опосредстван, поне частично, чрез пътя на инсулиновия рецептор субстрат-1(Ж8-1)/асоциирания с рецептора на растежния фактор свързващ белтък-2 (GRB2);
(VI) използването на горния активен агент като инхибитор на митогенните отговори в туморни клетки на една или повече рецепторни кинази, растежни фактори и цитокини от групата, състояща се от IL-4 и IL-7, за всеки от които IRS-1 е субстрат, за третиране на тумори;
(VII) използването на горния активен агент като инхибитор на базална, индуцирана от IGF-I и индуцирана от инсулин пролиферация на туморни клетки’за третирането на рак на гърдата при човека.
(VIII) използването на горния активен агент, в който въпросният активен инградиент е лептин, и въпросният лептин е използван като въпросния инхибитор или за въпросното третиране.
По същия начин настоящото изобретение осигурява и активен агент, избран от групата, състояща се от лептин, лептинови мутеини, агонисти на лептиновия рецептор, активни фрагменти или фракции от всеки един от горепосочените, активни аналози или производни на всеки един от горепосочените, соли на всеки един от горепосочените и смеси от всеки от горепосочените, за употреба в приготвянето на лекарство за инхибирането на пролиферация на туморни клетки.
Обхватът на този аспект на изобретението включва:
(i) активен агент като горния за използване в приготвянето на лекарство за третирането на злокачествени образования при бозайници;
(ii) активен агент като горния за използване в приготвянето на лекарство за инхибирането на зависими от растежни фактори тумори;
(iii) активен агент като горния за използване в приготвянето на лекарство за инхибирането на пролиферацията на клетки от рак на гърдата при човека;
(iv) активен агент като горния за използване в приготвянето на лекарство за третирането на рак на гърдата при човека;
(v) активен агент като горния за използване в приготвянето на лекарство за инхибиране на стимулиращия растежа ефект на IGF-1 и инсулина върху туморни клетки, като опосредстван, поне частично, по пътя на IRS-1/GRB2;
(vi) активен агент като горния за използване в приготвянето на лекарство за инхибирането на митогенните отговори в туморни клетки на една или повече рецепторни кинази, растежни фактори и цитокини от групата, състояща се от IGF-I, IL-4 и IL-9, за всеки от които IRS-1 е субстрат, за третирането на тумори;
(vii) активен агент като горния за използване в приготвянето на лекарство за инхибирането на базална, индуцирана от IGF-I и индуцирана от инсулин пролиферация на туморни клетки, за третирането на рак на гърдата при човека;
(viii) активен агент като горния, в който въпросният активен агент е лептин, и въпросният лептин е използван за приготвянето на въпросното лекарство.
По подобен начин, в друг аспект, настоящото изобретение включва фармацевтичен препарат, съдържащ като активна съставка активен агент като отбелязания по-горе и фармацевтично приемлив носител или разредител, за инхибирането на пролиферация на туморни клетки.
Обхватът на този аспект на изобретението включва: ь (i) фармацевтичен препарат за третирането на злокачествени образования в бозайници; s (ii) фармацевтичен препарат за инхибирането на зависими от' растежни фактори тумори;
(iii) фармацевтичен препарат за инхибирането на пролиферацията на клетки от рак на гърдата при човека и следователно за третирането на карцином на гърдата при човека;
(iv) фармацевтичен препарат за инхибирането на стимулиращия растежа ефект на IGF-I и инсулина върху туморни клетки, като опосредстван, поне частично, по пътя на IRS-1/GRB2;
(ν) фармацевтичен препарат за инхибирането на митогенните отговори в туморни клетки на една или повече рецепторни кинази, растежни фактори и цитокини от групата, състояща се от IL-4 и IL-9, за всеки от които IRS-1 е субстрат, и следователно за третирането на тумори;
(vi) фармацевтичен препарат за инхибирането на базална, индуцирана от IGF-I и индуцирана от инсулин пролиферация на туморни клетки и следователно за третирането на рак на гърдата при човека:, (vii) фармацевтичен препарат, за която въпросната активна съставка е лептин.
Настоящото изобретение осигурява още метод за третиране на тумори при бозайници или за инхибиране на пролиферация на туморни клетки при бозайници, характеризиращ се с това, че включва даването на пациент на фармацевтичен препарат съгласно изобретението, както е отбелязано по-горе, в подходяща форма на дозиране и чрез подходящ начин на прилагане на лекарството. Такива форми на дозиране и начини на прилагане на лекарството обикновено се определят от професионално практикуващите лекари след техния преглед на пациента.
Други аспекти и обхвати на настоящото изобретение са изложени по-надолу или лесно ще бъдат открити в следващото детайлно описание на изобретението.
ОПИСАНИЕ НА ФИГУРИТЕ
Фигура 1 показва зависимостта на пролиферация на T-47D клетките от инсулин, както е определено чрез МТТ оцветяване.
Фигура 2 показва зависимостта на пролиферация на T-47D клетките от IGF-I, както е определено чрез МТТ оцветяване.
Фигура 3 показва инхибирането на индуцираната от инсулин пролиферация на T-47D клетките в 10% зародишен говежди серум (FBS) от миши лептин, както е определено чрез МТТ оцветяване.
Фигура 4 показва инхибирането на индуцираната от инсулин пролиферация на T-47D клетките в 2% FBS от миши лептин, както е определено чрез оцветяване с кристал виолет.
Фигура 5 показва инхибирането на индуцираната от IGF-I пролиферация на T-47D клетките в 10% FBS от миши лептин, както е определено чрез МТТ оцветяване.
Фигура 6 показва инхибирането на индуцираната от IGF-I пролиферация на T-47D клетките в 2% FBS от миши лептин, както е определено чрез оцветяване с кристал виолет.
Фигура 7 показва инхибирането на индуцираната от IGF-I пролиферация на T-47D клетките в 2% FBS от човешки лептин, както е определено чрез оцветяване с кристал виолет.
Фигура 8 показва инхибирането на индуцираната от инсулин пролиферация на MCF7 клетките в среда без серум от миши лептин, както е определено чрез оцветяване с кристал виолет.
Фигура 9 показва инхибирането на индуцираната от IGF-I пролиферация на MCF7 клетките в среда без серум от миши лептин, както е определено чрез оцветяване с кристал виолет.
ДЕТАЙЛНО ОПИСАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Настоящото изобретение се отнася до използването на лептин като инхибитор на пролиферация на туморни клетки. Обикновено клетъчни линии с човешки произход, получени от различни тумори, могат да бъдат отглеждани в култури в присъствието на хранителна среда с добавка на зародишен говежди серум в концентрация от около 10% обемни. Клетъчната пролиферация при тези условия се определя оттук нататък като “базална клетъчна пролиферация”. Растежът на много туморни клетъчни линии значително се усилва, когато към горната хранителна среда с добавка на серум се прибавят различни растежни фактори като инсулин, епидермален растежен фактор или подобен на инсулин растежен фактор-I (IGF-I). Включването на лептин в растежната среда в диапазона на концентрации от 3 до 600 наномола намалява както базалната клетъчна пролиферация, така и зависимата от растежни фактори клетъчна пролиферация.
Резултатите от експериментите с клетъчни култури, посочени в примерите по-долу, показват, че лептинът е полезен за инхибиране на растежа на различни тумори. Следователно лептинът може да бъде полезен при третирането на различни злокачествени образования.
В предпочитания обхват на настоящото изобретение лептин се използва за инхибиране на клетъчната пролиферация при рак на гърдата. Когато към културите от човешки T-47D клетки от карцином на гръдния канал (American Type Culture Collection, Rockville, MD, щам N ATCC HTB 133) се добави лептин, тяхната степен на пролиферация се намалява. По подобен начин, когато към култури от човешки MCF7 клетки от аденокарцином на гърдата (American Type Culture Collection, Rockville, MD, щам N ATCC HTB 22) се добави лептин, тяхната степен на пролиферация се намалява. Лептинът инхибира както базалната, така и индуцираната от IGF-1 и индуцираната от инсулин пролиферация на T-47D и MCF7 клетките. Следователно лептинът може да бъде полезен специфично за третирането на карциноми на гърдата.
Стимулиращият растежа ефект на инсулина и IGF-I върху клетки е опосредстван, поне частично, чрез фосфорилиране на тирозина на
IRS-1 и последваща асоциация на IRS-1 с GRB2, което води до митогенен отговор. Анти-митогенният ефект на лептина може да произтича от неговата способност да намалява базалното, индуцирано от инсулин и индуцирано от IGF-I фосфорилиране на тирозина на IRS1, което води до намаляване на свързването на GRB2 към IRS-1. Нещо повече, IRS-1 е субстрат на рецепторни кинази на други растежни фактори и цитокини, включващи IL-4 и IL-9 (Pemis et al., 1995; Yin et al., 1995; Yin et al., 1994). Следователно лептинът може да инхибира митогенните отговори на някой или всички от гореспоменатите растежни фактори и цитокини, както и на други митогени, като по този начин инхибира пролиферацията на разнообразни туморни клетки.
Настоящото изобретение се отнася по-нататък до производни и аналози на лептина, включително слети с лептин белтъци, лептинови мутеини, агонисти на лептиновия рецептор, или активни фрагменти или у фракции на горепосочените, и соли на всички или някои, и : фармацевтични препарати, съдържащи лептин, слети с лептин белтъци, г лептинови мутеини, агонисти на лептиновия рецептор, активни. t фракции на горепосочените, или соли на всички или някои, за;, третирането на различни раков е. 1 ;
Както е употребен тук, терминът “мутеини” се отнася до аналози на лептина, в които един или повече аминокиселинни остатъка са заменени с различни аминокиселинни остатъци, или са отстранени, или един или повече аминокиселинни остатъка са добавени към оригиналната последователност на лептина, без да се промени по същество активността на получените продукти в сравнение с дивия тип лептин или неговите активни фрагменти или фракции. Тези мутеини са приготвени чрез позната синтеза и/или чрез техники на сайт насочен мутагенез, или всяка друга известна техника, подходяща за това.
Всеки такъв мутеин за предпочитане има последователност от аминокиселини, достатъчно дублираща тази на лептина, така че да има по същество подобна активност на лептина или негови активни фрагменти или фракции. Така може да бъде определено дали всеки даден мутеин има по същество същата активност като лептина посредством рутинно изследване, сравняващо използването на такъв мутеин, напр. в прост опит на клетъчна пролиферация, като мутеин, който блокира клетъчната пролиферация и запазва достатъчно активност на лептин и следователно има поне една от разкритите ползи на лептина и по този начин има по същество подобна на него активност.
В предпочитания обхват всеки такъв мутеин има поне 40% идентичност или хомоложност с последователността на един от лептините. За предпочитане е дори да има поне 50%, поне 60%, поне 70%, поне 80% или най-предпочитано поне 90% идентичност или хомология с него.
Мутеини на лептин или негови активни фрагменти или фракции, които могат да бъдат използвани в съответствие с настоящото изобретение, или кодиращите ги нуклеинови киселини, включват ограничен набор от съответствуващи по същество аминокиселини като заместващи пептиди или полинуклеотиди, които могат да бъдат получени рутинно чрез един от обикновените начини, без прекадено експериментиране, на основата на представените тук техники и указания. За по-детайлно описание на химията и структурата на белтъка, виж Schulz, G.E. et al., Principles of Protein Structure, SpringerVerlag, New York, 1978; и Creighton, T.E., Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, 1983, които са включени в настоящата справка за литературата. За представяне на заместванията на нуклеотидна последователност, такива като референции на кодони, виж Ausubel et al, supra, at §§ A. 1.1-A. 1.24, и
Sambrook et al, Current Protocols in Molecular Biology. Interscience N.Y. §§6.3 и 6.4 (1987,1992), Приложения В и Γ.
Предпочитани промени за мутеини в съответствие с настоящото изобретение са тези, които са известни като “консервативни” замени. Консервативни аминокиселинни замествания на лептинови полипептиди или белтъци или техни активни фрагменти или фракции могат да включват еднозначни аминокиселини в рамките на група, които имат достатъчно подобни физикохимични свойства, така че заместването между членове на групата да запази биологичната функция на молекулата, Grantham, Science, Т. 185, стр. 862-864 (1974). Ясно е, че могат да бъдат направени още инсерции и делеции на аминокиселини в горе определените последователности, без да се променя тяхната функция, особено ако инсерциите или делециите . включват само няколко аминокиселини, т.е. под тридесет, за предпочитане под десет, и не отстраняват или заместват аминокиселини, които имат критично значение за функционалната: конформация, т.е. цистеинови остатъци, Anfmsen, “Priciples That Govern s The Folding of Protein Chains”, Science, T. 181, стр. 223-230 (1973). B текста на настоящото изобретение се включват белтъци и мутеини, . получени чрез такива делеции и/или инсерции.
За предпочитане е еднозначните аминокиселинни групи да са тези, които са определени в Таблица I. По за предпочитане са еднозначните аминокиселинни групи, които са определени в Таблица II; а най за предпочитане са еднозначните аминокиселинни групи, които са определени в Таблица Ш.
Примери на получаване на аминокиселинни замествания в белтъци, които могат да бъдат използвани за получаване на мутеини на лептина или негови активни фракции за използване в настоящото изобретение, включват всички известни методологични стъпки, така както е показано в US патентите RE 33,653, 4,959,314, 4,588,585 и 4,737,462 на Mark et al; 5,116,943 на Koths et al., 4,965,195 на Namen et al; 4,879,111 на Chong et al; 5,017,691 на Lee et al; и лизин заместени белтъци, представени в US патент No. 4,904,584 (Shaw et al).
В друг предпочитан обхват на настоящото изобретение всеки мутеин на лептин или негови активни фракции за използване в настоящото изобретение има аминокиселинна последователност, съответстваща по същество на тази на лептина. Терминът “съответстващ по същество на” е въведен да обхване белтъци с много малки промени в последователността на естествения белтък, които не засягат основните характеристики на природните белтъци, в частност до такава степен да не засегне тяхната способност да инхибират клетъчната пролиферация. Типът промени, които най-общо се счита, че се включват в понятието “съответстващи по същество на” са онези, които биха произлезли от традиционните техники на мутагенеза на ДНК, кодираща лептин, водещи до няколко много малки модификации, и скрининг по отношение на желаната активност по описания по-горе начин.
В съответствие с настоящото изобретение мутеините включват белтъци, кодирани от нуклеинова киселина като ДНК или РНК, която хибридизира с ДНК или РНК, която кодира лептин съгласно настоящото изобретение при строги условия. Такава нуклеинова киселина би била първи кандидат за определяне, дали тя кодира полипетид, който запазва функционалната активност на лептина от настоящото изобретение. Терминът “строги условия” се отнася до хибридизация и условията на последващо промиване като тези, които при обичайната практика в специалността обикновено се наричат “строги”. Виж Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, supra. Interscience, NY, §§6.3 и6.4(1987,1992), и Sambrook et al., supra.
ТАБЛИИА ЕПпедпочитани групи на еднозначни аминокиселини
| Аминокиселини | Еднозначни групи |
| Ser | Ser, Thr, Gly, Asn |
| Arg | Arg, Gin, Lys, Glu, His |
| Leu | He, Phe, Tyr, Met, Vai, Leu |
| Pro | Gly, Ala, Thr, Pro |
| Thr | Pro, Ser, Ala, Gly, His, Gin, Thr |
| Ala | Gly, Thr, Pro, Ala |
| Vai | Met, Tyr, Phe, He, Leu, Vai |
| Gly | Ala, Thr, Pro, Ser, Gly |
| lie | Met, Tyr, Phe, Vai, Leu, Пе |
| Phe | Tip, Met, Tyr, Пе, Vai, Leu, Phe |
| Tyr | Trp, Met, Phe, He, Vai, Leu, Tyr |
| Cys | Ser, Thr, Cys |
| His | Glu, Lys, Gin, Thr, Arg, His |
| Gin | Glu, Lys, Asn, His, Thr, Arg, Gin |
| Asn | Gin, Asp, Ser, Asn |
| Lys | Glu, Gin, His, Arg, Lys |
| Asp | Glu, Asn, Asp |
| Glu | Asp, Lys, Asn, Gin, His, Arg, Glu |
| Met | Phe, He, Vai, Leu, Met |
| Trp | Trp |
ТАБЛИЦА II. По-предпочитани групи на еднозначни аминокиселини
Аминокиселини
Ser
Arg
Leu
Pro
Thr
Ala
Vai
Gly lie
Phe
Tyr
Cys
His
Gin
Asn
Lys
Asp
Glu
Met
Trp
Еднозначни групи
Ser
His, Lys, Arg
Leu, lie, Phe, Met
Ala, Pro
Thr
Pro, Ala
Vai, Met, He
Gly
He, Met, Phe, Vai, Leu,
Met, Tyr, He, Leu, Phe
Phe, Tyr
Cys, Ser
His, Gin, Arg
Glu, Gin, His
Asp, Asn
Lys, Arg
Asp, Asn
Glu, Gin
Met, Phe, He, Vai, Leu
Tip
ТАБЛИЦА IIL Най-предпочитани групи на еднозначни аминокиселини
| Аминокиселини | Еднозначни групи |
| Ser | Ser |
| Arg | Arg |
| Leu | Leu, He, Met |
| Pro | Pro |
| Thr | Thr |
| Ala | Ala |
| Vai | Vai |
| Gly | Gly |
| lie | lie, Met, Leu |
| Phe | Phe |
| Tyr | Tyr |
| Cys | Cys, Ser |
| His | His |
| Gin | Gin |
| Asn | Asn |
| Lys | Lys |
| Asp | Asp |
| Glu | Glu |
| Met | Met, He, Leu |
| Trp | Met |
Без ограничения примери за строги условия включват условия на промиване при 12-20°С под изчислената Тт на изследвания хибрид, т.е. 2 х SSC и 0.5% SDS за 5 минути, 2 х SSC и 0.1% SDS за 15 минути; 0.1 х SSC и 0.5% SDS при 37°С за 30-60 минути и след това 0.1 х SSC и 0.5% SDS при 68°С за 30-60 минути. Специалистите в областта при този случаи разбират, че строгостта на условията зависи и от дължината на ДНК последователността, олигонуклеотидните сонди (като например 10-40 бази) или смесени олигонуклеотидни сонди. Ако са използвани смесени сонди, се препоръчва използването на тетраметил амониев хлорид (ТМАС) вместо SSC. Виж Ausubel supra.
Терминът “слети с лептин белтъци” или просто “слети белтъци” се отнася до полипептид, съдържащ лептин или негови активни фракции или мутеин от тях, слят с друг белтък, който, например, има удължено време на задържане в телесните течности. Лептин или негови активни фракции могат по този начин да бъдат слети с друг белтък, полипептид или друго подобно.
Терминът “соли” тук се отнася както до соли на карбоксилови групи, така и до киселинно добавени соли на аминогрупи на лептин, негови активни фракции, мутеини или слети с лептин белтъци. Соли на карбоксилови групи могат да се образуват с известни средства в тази област и включват неорганични соли, например натриеви, калциеви, амониеви, железни или цинкови соли и подобни, и соли с органични основи като тези, образувани например с амини като триетаноламин, аргинин или лизин, пиперидин, прокаин и други подобни. Киселинно добавени соли включват например соли с минерални киселини като например оцетна киселина или оксалова киселина. Разбира се всички подобни соли трябва да имат по същество подобна активност на лептин или негови активни фракции.
“Функционални производни”, както се използва тук, покрива производни на лептин или негови активни фрагменти или фракции и техни мутеини и слети с лептин белтъци, които могат да бъдат приготвени от функционалните групи, които се появяват като странични вериги на остатъците или от N- или С-крайните групи с известни средства в тази област, и се включват в изобретението, докато те остават приемливи за фармацевтиката, т.е. те не разрушават активността на белтъка, която по същество е подобна на активността на лептин, и не показват токсични свойства върху препаратите, които ги съдържат. Тези производни могат, например, да включват странични вериги на полиетилен гликол, които могат да маскират антигенни места и да удължат задържането на лептин или негови активни фракции в телесните течности. Други производни включват алифатни естери или карбоксилни групи, амиди на карбоксилните групи при взаимодействие с амоняк или с първични или вторични амини, N-ацил производни на 4 свободни аминогрупи на аминокиселинните остатъци, образувани с .
ацилни остатъци (напр. алканоил или карбоциклични арилни групи); или О-ацил производни на свободни хидроксилни групи (например тези « на серинови или треонинови остатъци), образувани с ацилни остатъци, д ?
Като “активни фрагменти или фракции” на лептин, лептинови- j мутеини или слети с лептин белтъци настоящото изобретение обхваща всеки фрагмент или предшественици на пептидната верига на лептина или слети белтъци, съдържащи някакъв подобен фрагмент на лептин, самостоятелно или заедно с асоциирани молекули или остатъци, свързани с него, например захарни или фосфатни остатъци или агрегати на някой от горните производни, осигуряващи спомената фракция да има по същество подобна на лептина активност.
По-нататък настоящото изобретение е свързано с използването на естествени и синтетични агонисти на лептиновия рецептор, които са по същество подобни на лептина в своята способност да инхибират клетъчна пролиферация. Такива агонисти могат да бъдат подбрани от библиотека с пептиди, библиотека с пептидни аналози или случайна библиотека с органични молекули. Подборът е направен по известните начини, по същество по способността на избраните агонисти да се свързват с лептиновия рецептор. Например библиотека на случайни пептиди може да бъде изготвена като прокариотни експресионни плазмиди, носещи ДНК, кодираща случаен пептид, се слеят с носещ белтък. Друг пример е фаг проявяваща система, в която експресионната система е фаг, съдържащ ДНК, кодираща случаен пептид, включен в един от външните протеини на фага. Фагите, кодиращи слети пептидни агонисти или антагонисти, се изолират от фаговата библиотека чрез напр. промиване през повърхности, покрити с лептиновия рецептор. Свързаните фаги се изолират и след това се амплифицират в бактерии.
*
Няколко повторения на операциите на промиване-амплификация обикновено са необходими, за да се получат фаги, експресиращи слети пептиди, които имат висок афинитет към лептиновия рецептор. След това изолираният фаг се амплифицира и се определя ДНК последователността, кодираща пептида. Библиотеки на случайни пептиди или библиотеки на други молекули алтернативно се подготвят чрез твърдофазова синтеза върху полимерни перли по известни начини. Перлите, носещи пептид или друга молекула, имаща афинитет към лептиновия рецептор, се подбират от библиотеката, напр. чрез свързване на маркиран лептинов рецептор, напр. флуоресцентно маркиран лептинов рецептор. Положителните перли след това се събират и се определя структурата на наличния в перлите пептид или друга молекула. Ако перлата носи пептид, пептидната последователност се определя чрез секвенционен анализ на белтък. Ако перлата е представител на случайна библиотека на органични молекули, тогава молекулата се отделя от перлата и нейната структура се определя по известни за тази цел начини, като мас-спектрометрия, ядрен магнитен резонанс и други. Подходящи пептиди, идентифицирани по техния афинитет към лептиновия рецептор, след това се подбират по тяхната способност да инхибират клетъчна пролиферация по горепосочения начин.
В съответствие с това лептин, негови активни фракции, лептинови мутеини, слети с лептин белтъци, агонисти на лептиновия рецептор и техни соли, функционални производни и активни фрагменти или фракции на тях са посочени за третиране на различни злокачествени образования, с предпочитание на зависещи от растежни фактори тумори или още по за предпочитане на карциноми на гърдата.
Настоящото изобретение по-нататък е свързано с използването на фармацевтични препарати, съдържащи фармацевтично приемлив 1 носител и лептин от изобретението или негови активни мутеини, слети белтъци, агонисти на лептиновия рецептор и техни соли, функционални % производни или активни фракции на тях.
Фармацевтичните препарати на изобретените са подготвени за ‘ приемане от пациента чрез смесване на лептин или негови производни, *· или агонисти на лептиновия рецептор с физиологично приемлив г. носител, и/или стабилизатори и/или разтворители, и приготвени в f дозирана форма, напр. чрез лиофилизация в дозиращи шишенца. Методът на приемане на лекарството може да бъде по всеки от приетите начини на прилагане на подобни агенти и ще зависи от състоянията, които трябва да се третират, напр. интравенозно, интрамускулно, подкожно, чрез местна инжекция или повърхностно приложение, или непрекъснато чрез преливане и т.н. Количеството на активния компонент, който трябва да се приеме, ще зависи от начина на приемане на лекарството, болестта, която трябва да се третира, и състоянието на пациента. Например локална инжекция ще изисква по малко количество от белтъка за единица тегло, отколкото интравенозното преливане. Обикновено активни количества лептин, които се инжектират, са 0,1-1000 microgram/kg телесно тегло и обикновено 1 до 10 microgram/kg. Активни количества на лептинови производни и агонисти на лептиновия рецептор могат да бъдат по същество същите като тези на лептина, преизчислени на моларна основа.
Лептин може да се дава на пациенти, болни от рак, напр. чрез инжектиране или самостоятелно, или в комбинация с други терапевтични агенти, или в комбинация с други терапевтични подходи.
Сега изобретението ще бъде илюстрирано чрез следващите неограничаващи примери:
ПРИМЕР 1: Определяне на клетъчната пролиферация чрез оцветяване с МТТ
Реагенти:
МТТ сток разтвор: (3-[4,5-диметилтиазол-2-ил])-2,5-дифенилтетразолиев бромид 5 mg/ml в солеви фосфатен буфер. Съхранява се на -20°С преди употреба.
Разтворител: конц. НС1 (450 микролитра) в 2-пропанол (100 ml)
Процедура: Клетките се култивират в плаки с 96 гнезда в присъствие на различни растежни стимулатори и растежни инхибитори. След определено време към всяко гнездо се добавя от сток разтвора на МТТ (10 микролитра). Сместа се инкубира 2,5 - 3 часа при 37°С. Супернатантата се изсмуква чрез вакуум с помощта на фина градуирана игла. Добавя се разтворител (100 микролитра) и се отчита абсорбцията с помощта на ридер за микроплаки, използвайки 570 пМ филтър с автоматично анулиране на фона при 630 nm.
ПРИМЕР 2: Определяне на клетъчната пролиферация чрез оцветяване с кристал виолет
Процедура:
Клетките се култивират в плаки с 96 гнезда в присъствие на различни растежни стимулатори и растежни инхибитори. След определено време към всяко гнездо се добавя 12,5 % глутаралдехид (40 микролитра). Сместа се инкубира 30 минути при стайна температура. След това микроплаката се промива с вода, изсушава се и към всяко гнездо се добавя воден кристал виолет (0;1 % , 0;1 ml). Микроплаката се инкубира за нови 30 минути, промива се с вода и се отчита при 570 nm с автоматично анулиране на фона при 630 nm.
ПРИМЕР 3: Определяне на инсулин-зависимата T-47D клетъчна пролиферация
Човешки T-47D клетки (American Type Culture Collection, Rockville, MD; щам № ATCC HTB 133) се посяват в плаки c 96 гнезда при 3 х 105 cells/ml в DMEM и 10 % зародишен говежди серум (FBS), 0,1 ml за гнездо. Към отделните гнезда се добавя човешки инсулин в нарастващи концентрации, плаките се инкубират за 72 часа и след това се определя броят на клетките чрез оцветяване с МТТ (Фигура 1). Резултатите са средни стойности от 8 повторения. Въз основа на степента на клетъчна пролиферация, като е показано на Фигура 1, за последващите изследвания е използвана 50 пМ концентрация на инсулин.
ПРИМЕР 4; Определяне на IGF-зависимата T-47D клетъчна пролиферация
Човешки T-47D клетки се посяват в плаки с 96 гнезда при 3 х 105 cells/ml в DMEM и 10 % FBS, 0,1 ml за гнездо. Към отделните гнезда се добавя човешки IGF-I в нарастващи концентрации, плаките се инкубират за 3 дни и след това се определя броягна клетките чрез оцветяване с МТТ (Фигура 2). Резултатите са средни стойности от 8 повторения. Въз основа на степента на клетъчна пролиферация, като е показано на Фигура 2, за последващите изследвания е използвана 50 пМ концентрация на IGF-I.
ПРИМЕР 5: Инхибиране на инсулин-индуцираната T-47D клетъчна пролиферация от лептин
T-47D клетки (3 χ 105 cells/ml) в DMEM с 10 % FBS се посяват в плаки с 96 гнезда (0,1 ml за гнездо). Клетките се третират с инсулин (50 пМ) с или без посочените концентрации на миши лептин. Плаките се инкубират при 37°С в 5 % СО2 за 48 часа. След това клетките се оцветяват с МТТ. Резултатите са средни стойности + стандартна грешка (SE, п=8). Резултатите показват, че лептин инхибира значително инсулин - индуцираната клетъчна пролиферация (Фигура 3).
T-47D клетки (3 х Ю3 cells/ml) в DMEM с 10 % FBS се посяват в плаки с 96 гнезда (0,1 ml за гнездо). След един ден средата се замества с DMEM с 2 % FBS и след един ден клетките се третират с инсулин (50 пМ) с или без посочените концентрации на миши лептин в DMEM - 2 % FBS. Плаките се инкубират при 37°С в 5 % СО2 за 48 часа. След това клетките се оцветяват с кристал виолет. Резултатите са средни стойности + SE, (п=8). Резултатите показват, че лептин инхибира значително инсулин - индуцираната клетъчна пролиферация (Фигура 4).
ПРИМЕР 6: Инхибиране на IGF-I-индуцираната T-47D клетъчна пролиферация от лептин
T-47D клетки (3 х 105 cells/ml) в DMEM с 10 % FBS се посяват в плаки с 96 гнезда (0,1 ml за гнездо). Клетките се третират с IGF-I (50 ng/ml) с или без посочените концентрации на миши лептин. Плаките се инкубират при 37°С в 5 % СО2 за 48 часа. След това клетките се оцветяват с МТТ. Резултатите са средни стойности + стандартна грешка (SE, п=8). Резултатите показват, че лептин инхибира значително IGF-I - индуцираната клетъчна пролиферация (Фигура 5).
T-47D клетки (3 х 105 cells/ml) в DMEM с 10 % FBS се посяват в плаки с 96 гнезда (0,1 ml за гнездо). След един ден средата се замества с DMEM с 2 % FBS и след един ден клетките се третират с IGF-I (50 ng/ml) с или без посочените концентрации на миши лептин в DMEM - 2 % FBS. Плаките се инкубират при 37°С в 5 % СО2 за 48 часа. След това клетките се оцветяват с кристал виолет. Резултатите са средни стойности + стандартна грешка (SE, п=8). Резултатите показват, че лептин инхибира значително IGF-I - индуцираната клетъчна пролиферация (Фигура 6).
T-47D клетки (3 х 105 cells/ml) в DMEM с 10 % FBS се посяват в плаки с 96 гнезда (0,1 ml за гнездо). След един ден средата се замества с DMEM с 2 % FBS и след един ден клетките се третират с IGF-I (50 ng/ml) с или без посочените концентрации на миши лептин в DMEM - 2 % FBS. Плаките се инкубират при 37°С в 5 % СО2 за 48 часа. След това клетките се оцветяват с кристал виолет. Резултатите са средни стойности + стандартна грешка (SE, п=8). Резултатите показват, че лептин инхибира значително IGF-I - индуцираната клетъчна пролиферация (Фигура 7).
ПРИМЕР 8: Инхибиране на инсулин-индуцираната MCF7 клетъчна пролиферация от лептин
Клетки от аденокарцином на гърдата при човек MCF7 (3 х 104 cells/ml, American Type Culture Collection, Rockville, MD; щам № ATCC HTB 22), c добавен 6 % FBS се посяват в плаки c 96 гнезда (0Д ml за гнездо). След един ден средата се замества със свободен от серум DMEM и след още един ден клетките се третират с инсулин (50 пМ) с или без посочените концентрации на миши лептин в свободна от серум среда. Плаките се инкубират при 37°С в 5 % СО2 за 48 часа. След това клетките се оцветяват с кристал виолет. Резултатите са средни стойности + SE, (п=8). Резултатите показват, че лептин инхибира значително инсулин - индуцираната клетъчна пролиферация (Фигура 8).
ПРИМЕР 9; Инхибиране на IGF-I-индуцираната MCF7 клетъчна пролиферация от лептин
Клетки от аденокарцином на гърдата при човек MCF7 в DMEM с 10 % FBS, се посяват в плаки с 96 гнезда (3 х 104 cells/ml, 0,1 ml за гнездо). След един ден средата се замества със свободна от серум среда. След един ден клетките се третират с IGF-I (50 ng/ml) с или без посочените концентрации на миши лептин в свободна от серум среда. Плаките се инкубират при 37°С в 5 % СО2 за 96 часа. След това клетките се оцветяват с кристал виолет. Резултатите са средни стойности + SE, п=8). Резултатите показват, че лептин инхибира значително инсулин - индуцираната клетъчна пролиферация (Фигура 9).
Claims (26)
- Патентни претенции1. Използване на активен агент, подбран от група, състояща се от лептин, слети с лептин белтъци, лептинови мутеини, агонисти на лептинов рецептор, активни фрагменти или фракции от всеки такъв, активни аналози или производни от тях, техни соли и смеси, като инхибитор на пролиферация на туморни клетки.
- 2. Използване на активен агент съгласно претенция 1 като инхибитор на клетъчната пролиферация за лечение на злокачествени образования при бозайници.
- 3. Използване на активен агент съгласно претенция 1 или 2 като инхибитор на зависими от растежен фактор тумори.
- 4. Използване на активен агент съгласно всяка една от претенции от 1 до 3 като инхибитор на клетъчната пролиферация при карцином на гърдата при човек.
- 5. Използване на активен агент съгласно претенция 4 за лечение на карцином на гърдата при човек.
- 6. Използване на активен агент съгласно претенция 1 или 3 като инхибитор на стимулиращия растежа ефект на инсулина върху туморните клетки, опосредстван, поне частично, от метаболитния път на инсулиновия рецепторен субстрат-1 (1И8-1)/растежен фактор, асоцииран с рецептор свързващ белтък-1 (GRB2).
- 7. Използване на активен агент съгласно претенция 1 или 3 като инхибитор на митогенните отговори в туморни клетки на една или повече рецепторни кинази, растежни фактори и цитокини от групата, съдържаща IGF-1, IL-4 и IL289, за всеки от които IRS-1 е субстрат, за лечението на тумори.
- 8. Използване на активен агент съгласно всяка една от претенции от 1 до 7 като инхибитор на базална и инсулин индуцирана туморна клетъчна пролиферация за лечение на рак на гърдата при човек.
- 9. Използване на активен агент съгласно всяка една от претенции от 1 до 8, където активната съставка е лептин и въпросният лептин се използва като инхибитор или за въпросното лечение.
- 10. Активен агент, подбран от група, състояща се от лептин, свързани с лептин белтъци, лептинови мутеини, агонисти на лептинов рецептор, активни фрагменти или фракции от всеки такъв, активни аналози или производни от тях, техни соли и смеси, за употреба в изготвянето на медикамент за инхибиране на пролиферация на туморни клетки.
- 11. Активен агент съгласно претенция 10 за третиране на злокачествени образования при бозайници.
- 12. Активен агент съгласно претенция 10 или 11 за инхибиране на зависими от растежен фактор тумори.
- 13. Активен агент съгласно всяка една от претенции от 10 до 12 за инхибиране на клетъчната пролиферация при карцином на гърдата при човек.
- 14. Активен агент съгласно претенция 13 за лечение на карциноми на гърдата при човек.
- 15. Активен агент съгласно претенция 10 или 12 за инхибиране на стимулиращия растежа ефект на инсулина върху туморни клетки, опосредстван поне частично от метаболитния път IBS-1/GRB2.
- 16. Активен агент съгласно претенция 10 или 12 за инхибиране на митогенните отговори в туморни клетки на една или повече рецепторни кинази, растежни фактори и цитокини от групата, съдържаща IGF-1, IL-4 и IL-9, за всеки от които IRS-1 е субстрат, за лечението на тумори.
- 17. Активен агент съгласно всяка една от претенции от 10 до 16 за инхибиране на базална и инсулин индуцирана туморна клетъчна пролиферация за лечение на рак на гърдата при човек.
- 18. Активен агент съгласно всяка една от претенции от 10 до 17, където активният агент е лептин и се използва за изготвяне на фармацевтичен препарат.
- 19. фармацевтичен препарат, характеризиращ се с това, че съдържа като активна съставка активния агент съгласно претенция 1 или 10, фармацевтично приемлив носител, разредител или уплътнител, за инхибиране на пролиферация на туморни клетки.
- 20. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 19 за лечение на злокачествени образования при бозайници.
- 21. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 19 или 20 за инхибиране на зависими от растежен фактор тумори.
- 22. Фармацевтичен препарат съгласно всяка една от претенции от 19 до 21 за инхибиране на клетъчната пролиферация при карцином на гърдата при човек и следователно за лечение на карцином на гърдата при човек.
- 23. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 19 или 21 за инхибиране на стимулиращия растежа ефект на инсулина върху туморни клетки, опосредстван поне частично от метаболитния път IRS-1/GRB2.
- 24. фармацевтичен препарат съгласно претенция 19 или 21 за инхибиране на митогенните отговори в туморни клетки на една или повече рецепторни кинази, растежни фактори и цитокини от групата, съдържаща IGF-1, IL-4 и IL-9, за всеки от които IRS-1 е субстрат, и следователно за лечението на тумори.
- 25. Фармацевтичен препарат съгласно всяка една от претенции от 19 до 21 за инхибиране на базална и инсулин индуцирана туморна клетъчна пролиферация и следователно за лечение на рак на гърдата при човек.
- 26. Фармацевтичен препарат съгласно всяка една от претенции от 19 до 25, където активният агент е лептин.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL12073397A IL120733A0 (en) | 1997-04-29 | 1997-04-29 | Leptin as an inhibitor of cell proliferation |
| PCT/IL1998/000196 WO1998048831A1 (en) | 1997-04-29 | 1998-04-26 | Leptin as an inhibitor of tumor cell proliferation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG103832A BG103832A (bg) | 2000-10-31 |
| BG63490B1 true BG63490B1 (bg) | 2002-03-29 |
Family
ID=11070075
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG103832A BG63490B1 (bg) | 1997-04-29 | 1999-10-25 | Използване на лептин като инхибитор на пролиферацията на туморни клетки |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7109159B1 (bg) |
| EP (1) | EP0981365B1 (bg) |
| JP (1) | JP4330662B2 (bg) |
| KR (1) | KR100507731B1 (bg) |
| CN (1) | CN1168497C (bg) |
| AR (1) | AR012626A1 (bg) |
| AT (1) | ATE283702T1 (bg) |
| AU (1) | AU742927B2 (bg) |
| BG (1) | BG63490B1 (bg) |
| CA (1) | CA2288238A1 (bg) |
| CZ (1) | CZ299872B6 (bg) |
| DE (1) | DE69827942T2 (bg) |
| EA (1) | EA002353B1 (bg) |
| EE (1) | EE04801B1 (bg) |
| ES (1) | ES2232944T3 (bg) |
| HK (1) | HK1028350A1 (bg) |
| HU (1) | HUP0002427A3 (bg) |
| IL (2) | IL120733A0 (bg) |
| NO (1) | NO322304B1 (bg) |
| NZ (1) | NZ500589A (bg) |
| PL (1) | PL195275B1 (bg) |
| PT (1) | PT981365E (bg) |
| SK (1) | SK284848B6 (bg) |
| UA (1) | UA66793C2 (bg) |
| WO (1) | WO1998048831A1 (bg) |
| ZA (1) | ZA983608B (bg) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7208572B2 (en) | 1998-08-21 | 2007-04-24 | Albany Medical College | Leptin-related peptides |
| US6777388B1 (en) | 1998-08-21 | 2004-08-17 | Clf Medical Technology Acceleration Program, Inc. | Leptin-related peptides |
| US20050272652A1 (en) | 1999-03-29 | 2005-12-08 | Gault Victor A | Peptide analogues of GIP for treatment of diabetes, insulin resistance and obesity |
| IL132312A0 (en) * | 1999-09-05 | 2001-03-19 | Yeda Res & Dev | Use of leptin in inhibition of endothelial cell proliferation |
| US8076288B2 (en) | 2004-02-11 | 2011-12-13 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides having glucose lowering activity |
| BRPI0507594A (pt) | 2004-02-11 | 2007-07-03 | Amylin Pharmaceuticals Inc | polipetìdeos hìbridos com propriedades selecionáveis |
| US8969291B2 (en) | 2004-10-08 | 2015-03-03 | Enzo Therapeutics, Inc. | Methods for decreasing leptin levels or activity for treating inflammation |
| US7863240B2 (en) * | 2004-10-08 | 2011-01-04 | Enzo Therapeutics, Inc. | Methods and uses of leptin in hepatocellular carcinoma |
| WO2006086769A2 (en) | 2005-02-11 | 2006-08-17 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Gip analog and hybrid polypeptides with selectable properties |
| WO2007022123A2 (en) | 2005-08-11 | 2007-02-22 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides with selectable properties |
| US8263545B2 (en) | 2005-02-11 | 2012-09-11 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties |
| EP2330125A3 (en) | 2005-08-11 | 2012-12-12 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides with selectable properties |
| US8227408B2 (en) * | 2005-09-07 | 2012-07-24 | Neurotez, Inc. | Leptin as an anti-amyloidogenic biologic and methods for delaying the onset and reducing Alzheimer's disease-like pathology |
| US8497240B2 (en) | 2006-08-17 | 2013-07-30 | Amylin Pharmaceuticals, Llc | DPP-IV resistant GIP hybrid polypeptides with selectable properties |
| JP5702150B2 (ja) | 2008-02-08 | 2015-04-15 | アンブルックス, インコーポレイテッドAmbrx, Inc. | 修飾されているレプチンポリペプチドおよびそれらの使用 |
| AU2009248914A1 (en) * | 2008-05-21 | 2009-11-26 | Neurotez, Inc. | Methods for Treating Neurodegenerative Disorders Related to Neurofibrillary Tangles |
| AU2009313562B2 (en) * | 2008-11-04 | 2012-11-15 | Neurotez, Inc. | Leptin compositions and methods for treating progressive cognitive function disorders resulting from accumulation of neurofibrillary tangles and amlyoid beta |
| US20100316639A1 (en) | 2009-06-16 | 2010-12-16 | Genentech, Inc. | Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy |
| TWI824372B (zh) | 2015-10-12 | 2023-12-01 | 美商再生元醫藥公司 | 活化瘦素受體的抗原結合蛋白 |
| JP7042816B2 (ja) | 2016-11-08 | 2022-03-28 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | レプチン受容体をアンタゴナイズする抗原結合性タンパク質 |
| CA3084385A1 (en) | 2017-12-18 | 2019-06-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Bispecific antigen binding molecules that bind leptin receptor and/or gp130, and methods of use thereof |
| AU2019249273A1 (en) | 2018-04-06 | 2020-10-15 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treatment using a leptin receptor agonist antibody |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0836479A2 (en) * | 1995-06-30 | 1998-04-22 | Eli Lilly And Company | Methods for treating diabetes |
| EP0764722A2 (en) * | 1995-09-19 | 1997-03-26 | Eli Lilly And Company | DNA encoding primate leptins as medicinal proteins |
| ATE320479T1 (de) * | 1996-01-23 | 2006-04-15 | Indevus Pharmaceuticals Inc | Process zur verwendung des obese-gens und seines genprodukts zur stimulierung der entwicklung von haemotopoietischen zellen |
-
1997
- 1997-04-29 IL IL12073397A patent/IL120733A0/xx unknown
-
1998
- 1998-04-26 DE DE69827942T patent/DE69827942T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-26 SK SK1471-99A patent/SK284848B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 EE EEP199900510A patent/EE04801B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 CN CNB988066920A patent/CN1168497C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 AU AU70762/98A patent/AU742927B2/en not_active Ceased
- 1998-04-26 CZ CZ0384899A patent/CZ299872B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 WO PCT/IL1998/000196 patent/WO1998048831A1/en active IP Right Grant
- 1998-04-26 ES ES98917580T patent/ES2232944T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-26 PL PL98336582A patent/PL195275B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 EA EA199900981A patent/EA002353B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 HU HU0002427A patent/HUP0002427A3/hu unknown
- 1998-04-26 AT AT98917580T patent/ATE283702T1/de active
- 1998-04-26 UA UA99116415A patent/UA66793C2/uk unknown
- 1998-04-26 JP JP54678798A patent/JP4330662B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 EP EP98917580A patent/EP0981365B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-26 CA CA002288238A patent/CA2288238A1/en not_active Abandoned
- 1998-04-26 US US09/403,897 patent/US7109159B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 PT PT98917580T patent/PT981365E/pt unknown
- 1998-04-26 NZ NZ500589A patent/NZ500589A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 KR KR10-1999-7009705A patent/KR100507731B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-04-29 ZA ZA983608A patent/ZA983608B/xx unknown
- 1998-04-29 AR ARP980102003A patent/AR012626A1/es unknown
-
1999
- 1999-10-25 BG BG103832A patent/BG63490B1/bg unknown
- 1999-10-28 NO NO19995267A patent/NO322304B1/no not_active IP Right Cessation
- 1999-10-28 IL IL132633A patent/IL132633A/en not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-12-07 HK HK00107866A patent/HK1028350A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| BG63490B1 (bg) | Използване на лептин като инхибитор на пролиферацията на туморни клетки | |
| EP3062881B1 (en) | Cancer models and associated methods | |
| EP0597503B1 (en) | ECK receptor ligands | |
| KR100898765B1 (ko) | 성장인자 복합체 | |
| HUT53936A (en) | Process for producing carrier proteins for insulin-like growth factors | |
| KR20120082909A (ko) | 합성 마이오스타틴 펩티드 길항제 | |
| US20060211606A1 (en) | Peptides | |
| JP4094814B2 (ja) | 血管新生抑制剤 | |
| EP0580752A1 (en) | Human bone derived insulin like growth factor binding protein | |
| KR20080021588A (ko) | 메카노 성장 인자 펩티드 및 이들의 용도 | |
| KR20220145870A (ko) | 뉴레귤린, 및 조성물을 사용함으로써 심부전을 예방, 치료 또는 지연시키기 위한 방법 | |
| JP2004533235A5 (bg) | ||
| MXPA99009972A (en) | Leptin as an inhibitor of tumor cell proliferation | |
| AU2003223506B2 (en) | Truncated 24 kDa basic fibroblast growth factor |